KR20140095096A - 항-c-met 항체의 정제 - Google Patents

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조세핀 퍼슨
마크 웡
제롬 조셉 주니어 빌
아릭 마이클 브라운
글렌 스캇 기스
주디 페이-첸 쉬
에이미 림
아샤 난디니 라다모한
마리셀 로드리게즈
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제넨테크, 인크.
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Abstract

항-c-met 항체를 정제하는 방법, 정제된 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 및 제약 제제, 및 그의 사용 방법이 본원에 제공된다.
[대표도]
도 5a

Description

항-c-met 항체의 정제{PURIFICATION OF ANTI-C-MET ANTIBODIES}
관련 출원
본원은 35 USC 119(e) 하에 2011년 11월 21일에 출원된 미국 특허 가출원 번호 61/562,429 및 2011년 11월 22일에 출원된 미국 특허 가출원 번호 61/562,925를 우선권 주장하며, 이들 내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
기술 분야
항-c-met 항체를 정제하는 방법, 정제된 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 및 제약 제제, 및 그의 사용 방법이 본원에 제공된다.
생물제제, 예컨대 치료 항체는 성분의 복합체 농축 혼합물을 포함하는 재조합 시스템으로 생산되고, 이에 따라 치료 항체를 제조하는데 이용되는 숙주 세포 시스템의 성분으로 오염될 수 있다. 빈번하게, 심지어는 다중 정제 단계 후에도, 유의한 수준의 이러한 오염물이 존재할 수 있다. 환자 안전성은 오염물이 안전성 및 효능 문제를 방지하기 위해 실시가능한 최저 수준으로 제거 또는 감소될 것을 요구한다. 오염물의 확인 및 충분한 제거에 실패하면 감소된 약물 효능 또는 환자 부작용, 예컨대 면역 부작용이 발생할 수 있다. 예를 들어, 에스케리키아 콜라이(Escherichia coli) (이. 콜라이(E. coli))의 외부 막은 리포폴리사카라이드 (LPS)를 포함하며, 이는 제거되지 않은 경우에 내독소로서 작용하여 강한 면역 반응, 고열을 일으킬 수 있다. 오염물의 제거는 약물 개발 및 제조 공정에 상당한 비용적 영향을 끼칠 수 있다.
이. 콜라이 배양된 치료 항체의 경우에, 오염물은 증식에 사용된 성장 배지 및/또는 숙주 세포, DNA 또는 RNA 벡터, 이. 콜라이 단백질 (ECP), 지질 및/또는 LPS의 성분일 수 있다. ECP, 인지질, 내독소 및 DNA/RNA (벡터 서열 포함)를 비롯한 다수의 오염물은 약물 효능 및/또는 안전성에 잠재적으로 직접 영향을 끼칠 뿐만 아니라, 소수성 상호작용, 금속 가교 및/또는 전하 복합화의 결과로서 치료 항체와 복합체를 형성할 수 있으며, 이는 치료 항체의 응집으로 이어질 수 있다. 또한, 이. 콜라이에서 생산된 치료 항체는 주변세포질에서 내부에 축적되고, 세포는 치료 항체를 단리하기 위해 파괴될 필요가 있다. 숙주 프로테아제 활성은 일반적으로 세포 파괴 동안 발생하고, 효율적인 정제 없이 치료 항체의 수율을 실질적으로 감소시키고 단백질분해를 발생시킬 수 있다. 다중 라운드의 크로마토그래피 및 정제 단계는 치료 항체로부터 성장 배지 및/또는 숙주 세포 오염물을 분리하는 것을 필요로 한다.
성장 배지 및/또는 숙주 세포 오염물 뿐만 아니라, 회수 및 정제 과정은 그 자체로 크로마토그래피 방법에 활용되는 흡착제의 유형에 따라 오염물을 도입할 수 있다. 예를 들어, 단백질 A 친화성 크로마토그래피 동안, 단백질 A 리간드는 치료 항체와 공동-용리할 수 있다. 또한, 단백질 A의 경우에, 단백질 A가 생리학적 역효과를 유발할 수 있다는 것을 시사하는 일부 증거가 존재한다. 문헌 [M. Gomez et al. Nat. Med. 10:842 (2004)]. 오염물 제거 공정은 광범위할 수 있고, 회수 및 정제의 모든 단계는 또한 수율의 유의한 손실 및 추가 오염물의 잠재적 도입을 발생시킨다.
오염물 제거의 중요성에도 불구하고, 모든 폴리펩티드에 효과적일 어떠한 보편적인 정제 방식도 존재하지 않는다. 폴리펩티드 특성, 예컨대 분자량, 등전점 (pI), 소수성, 프로테아제 감수성, 하전 특성 및 분포, 번역후 변형 및/또는 용해도는 폴리펩티드마다 상당히 다르다. 이러한 특성은 오염물을 제거하는 정제 방식 및 능력에 유의하게 영향을 끼칠 수 있다.
HGF/c-met 경로에서 표적화된 다수의 분자가 보고되어 있다. 이들 분자는 c-met 및 항-c-met 항체의 세포외 도메인의 일부, 예컨대 US 5,686,292, 문헌 [Martens, T. et al., Clin. Cancer Res. 12 (20 Pt. 1):6144 (2006)], US 6,468,529, WO2006/015371, WO2007/063816 및 WO2010/045345에 기재된 것을 포함한다. 항-c-met 항체의 2가 형태는 이량체화를 촉진하여, c-met를 활성화시키는 것 (효능작용 기능)으로 밝혀진 반면에, 1가 항체는 c-met 활성을 억제하는 것 (길항작용 기능)으로 밝혀졌다. 길항작용 기능을 요구하는 병리학적 상태의 치료에 있어서, 2가의 항-c-met 항체는 바람직하지 않은 효능작용 효과를 나타낼 수 있고, 이에 따라 병적 상태의 치료를 위한 표적에 대한 항-c-met 항체의 결합시에 길항 활성을 보장하기 위해 1가 특성이 요구된다. Fab 단편 및 1-아암 항체는 1가 항체의 예이다. 1-아암 항체는 일반적으로 Fab보다 더 긴 반감기를 갖는다. 그러나, 단일 경쇄 및 단일 중쇄 (뿐만 아니라 추가의 Fc 영역)를 포함하는 1-아암 항체를 활용하는데 있어서의 문제는 1-아암 항체 구조 유지의 잠재적 실패이다. 생산 및 정제 동안 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄를 갖는 2가 항체 보다는 오히려 1가 항체의 응집 (다량체 및 올리고머의 형성) 및/또는 1가 구조 유지의 실패가 바람직하지 않은 효능작용 효과로 이어질 수 있다. 따라서, 정제 동안 및 정제된 생성물에서 항-c-met 항체 응집의 최소화 및 1가 구조의 안정화가 특히 중요하다.
오나르투주맙은 항-c-met 항체이며, 이. 콜라이에서 생산될 첫번째 1-아암 항체이다. 다수의 통상적인 항체 정제 방법이 분리를 용이하게 하기 위해 항체와 숙주 세포 불순물/오염물 사이의 정전기적 특성의 차이에 의존하기 때문에, 오나르투주맙의 정제 공정은 오나르투주맙 및 숙주 세포 불순물/오염물의 매우 유사한 정전기적 특성에 의해 더 복잡해진다. 따라서, 일반적으로 생물제제의 생산 및 정제 및 HGF/c-met 경로를 표적화하는 분자의 개발에서의 유의한 진전에도 불구하고, 항-c-met 항체의 길항 활성은 유지하면서 오염물 및 불순물을 특히 1-아암 포맷으로 최소화하는 효율적인 정제 방법이 여전히 요구된다.
특허 출원 및 공개를 포함하는 본원에 인용된 모든 참고문헌은 그의 전체내용이 참조로 포함된다.
항-c-met 항체를 정제하는 방법 및 정제된 항-c-met 항체를 포함하는 조성물이 본원에 제공된다. 항-c-met 항체를 포함하는 조성물이 본원에 제공되며, 여기서 숙주 세포 단백질 (HCP)은 약 50 ng/mg 이하로 존재한다. 또한, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물의 로트 (예를 들어, 배치)가 본원에 제공되며, 여기서 HCP는 약 50 ng/mg 이하로 존재한다.
항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 28℃ 초과의 온도 및 약 pH 6 내지 약 pH 8의 pH에서 6시간 초과 동안 유지하는 것을 포함하는, 항-c-met 항체를 정제하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 방법은 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 원심분리하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 아가로스 매트릭스를 포함하는 단백질 A 수지 (예를 들어, 맵셀렉트 슈어(MabSelect SuRe)™ 수지) 상에 로딩하는 것 및 항-c-met 항체를 용리하는 것을 추가로 포함한다.
항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 아가로스 매트릭스를 포함하는 단백질 A 수지 (예를 들어, 맵셀렉트 슈어™ 수지) 상에 로딩하는 것 및 항-c-met 항체를 용리하는 것을 포함하는, 항-c-met 항체를 정제하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 방법은 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 약한 음이온 교환 수지 상에 로딩하는 것 및 통과액 중 항-c-met 항체를 회수하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 약한 음이온 교환 수지는 통과 모드로 구동된다.
항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 약한 음이온 교환 수지 상에 로딩하는 것 및 통과액 중 항-c-met 항체를 회수하는 것을 포함하는, 항-c-met 항체를 정제하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 약한 음이온 교환 수지는 통과 모드로 구동된다.
임의의 정제 방법의 일부 실시양태에서, 방법은 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 강한 양이온 교환 수지 상에 로딩하는 것 및 항-c-met 항체를 용리하는 것을 추가로 포함한다.
임의의 정제 방법의 일부 실시양태에서, 방법은 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 강한 음이온 교환 수지 상에 로딩하는 것 및 항-c-met 항체를 용리하는 것을 추가로 포함한다.
임의의 정제 방법의 일부 실시양태에서, 방법은 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 한외여과 및/또는 정용여과하는 것을 추가로 포함한다.
또한 상기 기재된 임의의 정제 방법에 의해 정제되거나 수득가능한 항-c-met 항체를 포함하는 조성물이 본원에 제공된다. 또한, 상기 기재된 임의의 정제 방법에 의해 정제되거나 수득가능한 항-c-met 항체를 포함하는 조성물의 로트 (예를 들어, 배치)가 본원에 제공된다.
또한 조성물 또는 상기 기재된 임의의 조성물의 로트를 포함하는 제약 제제가 제공된다. 일부 실시양태에서, 제약 제제는 액체 제약 제제이다. 일부 실시양태에서, 제약 제제는 개체 (예를 들어, 인간)에 대한 투여에 적합하다.
임의의 정제 방법, 조성물 및/또는 제약 제제의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 HCP는 약 50 ng/mg 이하이다. 임의의 정제 방법, 조성물 및/또는 제약 제제의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물의 로트 (예를 들어, 배치) 중 평균 HCP는 약 50 ng/mg 이하이다. 일부 실시양태에서, HCP 및/또는 평균 HCP는 약 34 ng/mg, 30 ng/mg, 25 ng/mg, 20 ng/mg, 19 ng/mg, 18 ng/mg, 17 ng/mg, 16 ng/mg, 15 ng/mg, 14 ng/mg, 13 ng/mg, 12 ng/mg, 11 ng/mg, 10 ng/mg 또는 9 ng/mg, 또는 그 미만이다. 일부 실시양태에서, HCP 및/또는 평균 HCP는 약 5 ng/mg 내지 20 ng/mg, 5 ng/mg 내지 25 ng/mg, 5 ng/mg 내지 15 ng/mg, 1 ng/mg 내지 30 ng/mg, 1 ng/mg 내지 25 ng/mg, 1 ng/mg 내지 20 ng/mg, 1 ng/mg 내지 15 ng/mg, 또는 1 ng/mg 내지 10 ng/mg이다. 일부 실시양태에서, HCP 및/또는 평균 HCP는 약 5, 5.5, 6.5, 7, 7.5, 8, 8.5, 9, 9.5, 10, 10.5, 11, 11.5, 12, 12.5, 13, 13.5, 14, 14.5, 15, 15.5, 16, 16.5, 17 또는 17.5 ng/mg이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 이. 콜라이에서 생산된다. 일부 실시양태에서, HCP 및/또는 평균 HCP는 이. 콜라이 세포 단백질 (예를 들어, ECP) 및/또는 평균 ECP이다.
임의의 정제 방법, 조성물 및/또는 제약 제제의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 DNA 수준은 약 0.3 pg/mg 이하이다. 임의의 정제 방법, 조성물 및/또는 제약 제제의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물의 로트 (예를 들어, 배치) 중 평균 DNA 수준은 약 0.3 pg/mg 이하이다. 일부 실시양태에서, DNA 수준 및/또는 평균 DNA 수준은 약 0.3 pg/mg, 0.25 pg/mg, 0.2 pg/mg, 0.15 pg/mg 또는 0.1 pg/mg, 또는 그 미만이다. 일부 실시양태에서, DNA 수준 및/또는 평균 DNA 수준은 약 0.001 pg/mg 내지 0.3 pg/mg, 0.001 pg/mg 내지 0.2 pg/mg, 0.001 pg/mg 내지 0.1 pg/mg, 0.01 pg/mg 내지 0.3 pg/mg, 0.01 pg/mg 내지 0.2 pg/mg, 또는 0.01 pg/mg 내지 0.1 pg/mg이다. 일부 실시양태에서, DNA 수준 및/또는 평균 DNA 수준은 약 0.3, 0.25, 0.2, 0.15 또는 0.1 pg/mg이다.
임의의 정제 방법, 조성물 및/또는 제약 제제의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물에서 침출된 단백질 A (즉, LpA)는 약 2 ng/mg 이하이다. 임의의 정제 방법, 조성물 및/또는 제약 제제의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물의 로트 (예를 들어, 배치) 중 평균 LpA는 약 2 ng/mg 이하이다. 일부 실시양태에서, LpA 및/또는 평균 LpA는 약 0.001 ng/mg 내지 2 ng/mg, 0.01 ng/mg 내지 2 ng/mg, 0.1 ng/mg 내지 2 ng/mg, 또는 1 ng/mg 내지 2 ng/mg이다. 일부 실시양태에서, LpA 및/또는 평균 LpA는 약 1, 1.25, 1.5, 1.75 또는 2 ng/mg이다.
임의의 정제 방법, 조성물 및/또는 제약 제제의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 리물루스(Limulus) 변형세포 용해물 (즉, LAL)은 약 0.01 EU/mg 이하이다. 임의의 정제 방법, 조성물 및/또는 제약 제제의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물의 로트 (예를 들어, 배치) 중 평균 LAL은 약 0.01 EU/mg 이하이다. 일부 실시양태에서, LAL 및/또는 평균 LAL은 약 0.007 EU/mg, 0.006 EU/mg, 0.005 EU/mg, 0.002 EU/mg 또는 0.001 EU/mg, 또는 그 미만이다. 일부 실시양태에서, LAL 및/또는 평균 LAL은 약 0.0001 EU/mg 내지 0.01 EU/mg, 0.0001 EU/mg 내지 0.007 EU/mg, 0.0001 EU/mg 내지 0.006 EU/mg, 또는 0.0001 EU/mg 내지 0.005 EU/mg이다. 일부 실시양태에서, LAL 및/또는 평균 LAL은 약 0.01, 0.007, 0.006, 0.005, 0.004, 0.003 또는 0.002 EU/mg이다.
임의의 정제 방법, 조성물 및/또는 제약 제제의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 응집체의 백분율은 약 0.3% 이하이다. 임의의 정제 방법, 조성물 및/또는 제약 제제의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물의 로트 (예를 들어, 배치) 중 응집체의 평균 백분율은 약 0.3% 이하이다. 일부 실시양태에서, 응집체의 백분율 및/또는 응집체의 평균 백분율은 약 0.2% 또는 0.1%, 또는 그 미만이다. 일부 실시양태에서, 응집체의 백분율 및/또는 응집체의 평균 백분율은 약 0.001% 내지 0.3%, 0.01% 내지 0.3%, 0.001% 내지 0.2%, 또는 0.01% 내지 0.2%이다. 일부 실시양태에서, 응집체의 백분율 및/또는 응집체의 평균 백분율은 약 0.3%, 0.25%, 0.2%, 0.15% 또는 0.1%이다.
임의의 정제 방법, 조성물 및/또는 제약 제제의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 단량체의 백분율은 약 99.5% 이상이다. 임의의 정제 방법, 조성물 및/또는 제약 제제의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물의 로트 (예를 들어, 배치) 중 단량체의 평균 백분율은 약 99.5% 이상이다. 일부 실시양태에서, 단량체의 백분율 및/또는 단량체의 평균 백분율은 약 99.6%, 99.7%, 99.8% 또는 99.9%, 또는 그 초과이다. 일부 실시양태에서, 단량체의 백분율 및/또는 단량체의 평균 백분율은 약 99.5% 내지 99.999%, 99.5% 내지 99.99%, 99.6% 내지 99.999%, 99.6% 내지 99.99%, 99.7% 내지 99.999%, 99.7% 내지 99.99%, 99.8% 내지 99.999%, 99.8% 내지 99.99%, 또는 99.9% 내지 99.999%, 99.9% 내지 99.99%이다. 일부 실시양태에서, 단량체의 백분율 및/또는 단량체의 평균 백분율은 약 99.5%, 99.6%, 99.7%, 99.8% 또는 99.9%이다.
임의의 정제 방법, 조성물 및/또는 제약 제제의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 단편의 백분율은 약 0.3% 이하이다. 임의의 정제 방법, 조성물 및/또는 제약 제제의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물의 로트 (예를 들어, 배치) 중 단편의 평균 백분율은 약 0.3% 이하이다. 일부 실시양태에서, 단편의 백분율 및/또는 단편의 평균 백분율은 약 0.2% 또는 0.1%, 또는 그 미만이다. 일부 실시양태에서, 단편의 백분율 및/또는 단편의 평균 백분율은 약 0.001% 내지 0.3%, 0.01% 내지 0.3%, 0.001% 내지 0.2%, 또는 0.01% 내지 0.2%이다. 일부 실시양태에서, 단편의 백분율 및/또는 단편의 평균 백분율은 약 0.3%, 0.25%, 0.2%, 0.15%, 0.1% 또는 0%이다. 일부 실시양태에서, 단편은 검출가능하지 않다.
임의의 정제 방법, 조성물 및/또는 제약 제제의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 산성 변이체의 백분율은 약 20% 이하이다. 임의의 정제 방법, 조성물 및/또는 제약 제제의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물의 로트 (예를 들어, 배치) 중 산성 변이체의 평균 백분율은 약 20% 이하이다. 일부 실시양태에서, 산성 변이체의 백분율 및/또는 산성 변이체의 평균 백분율은 약 20%, 18.5%, 17.5%, 15%, 12.5%, 또는 그 미만이다. 일부 실시양태에서, 산성 변이체의 백분율 및/또는 산성 변이체의 평균 백분율은 약 1% 내지 20%, 5% 내지 20%, 또는 10% 내지 20%이다. 일부 실시양태에서, 산성 변이체의 백분율 및/또는 산성 변이체의 평균 백분율은 약 20%, 18.5%, 17.5%, 15% 또는 12.5%이다.
임의의 정제 방법, 조성물 및/또는 제약 제제의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 주요 피크의 백분율은 약 75% 이상이다. 임의의 정제 방법, 조성물 및/또는 제약 제제의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물의 로트 (예를 들어, 배치) 중 주요 피크의 평균 백분율은 약 75% 이상이다. 일부 실시양태에서, 주요 피크의 백분율 및/또는 주요 피크의 평균 백분율은 약 77.5%, 80%, 82.5% 또는 85%, 또는 그 초과이다. 일부 실시양태에서, 주요 피크의 백분율 및/또는 주요 피크의 평균 백분율은 약 75% 내지 95%, 77.5% 내지 95%, 80% 내지 95%, 82.5% 내지 95%, 또는 85% 내지 95%이다. 일부 실시양태에서, 주요 피크의 백분율 및/또는 주요 피크의 평균 백분율은 약 75%, 77.5%, 80%, 82.5% 또는 85%이다.
임의의 정제 방법, 조성물 및/또는 제약 제제의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 염기성 변이체의 백분율은 약 2.0% 이하이다. 임의의 정제 방법, 조성물 및/또는 제약 제제의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물의 로트 (예를 들어, 배치) 중 염기성 변이체의 평균 백분율은 약 2.0% 이하이다. 일부 실시양태에서, 염기성 변이체의 백분율 및/또는 염기성 변이체의 평균 백분율은 약 1.5%, 1.25%, 1.1% 또는 1%, 또는 그 미만이다. 일부 실시양태에서, 염기성 변이체의 백분율 및/또는 염기성 변이체의 평균 백분율은 약 0.001% 내지 2%, 0.01% 내지 2%, 0.001% 내지 1.5%, 또는 0.01% 내지 1.5%, 0.001% 내지 1.0%, 또는 0.01% 내지 1.0%이다. 일부 실시양태에서, 염기성 변이체의 백분율 및/또는 염기성 변이체의 평균 백분율은 약 2%, 1.5%, 1.25%, 1.1% 또는 1%이다.
예를 들어, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 및/또는 이러한 조성물을 포함하는 로트 (예를 들어, 배치)가 제공되며, 여기서 HCP는 약 50 ng/mg 이하로 존재하고, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 DNA 수준은 약 0.3 pg/mg 이하이고, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 LpA는 약 2 ng/mg 이하이고, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 리물루스 변형세포 용해물 (LAL)은 약 0.01 EU/mg 이하이고, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 응집체의 백분율은 약 0.3% 이하이고, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 단량체의 백분율은 약 99.5% 이상이고, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 단편의 백분율은 약 0.3% 이하이고, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 산성 변이체의 백분율은 약 20% 이하이고, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 주요 피크의 백분율은 약 75% 이상이고, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 염기성 변이체의 백분율은 약 2.0% 이하이다. 또한, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 및/또는 이러한 조성물을 포함하는 로트 (예를 들어, 배치)가 본원에 제공되며, 여기서 HCP는 약 15 ng/mg 이하로 존재하고, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 DNA 수준은 약 0.3 pg/mg 이하이고, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 LpA는 약 2 ng/mg 이하이고, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 리물루스 변형세포 용해물 (LAL)은 약 0.01 EU/mg 이하이고, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 응집체의 백분율은 약 0.3% 이하이고, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 단량체의 백분율은 약 99.5% 이상이고, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 단편의 백분율은 약 0.3% 이하이고, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 산성 변이체의 백분율은 약 20% 이하이고, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 주요 피크의 백분율은 약 75% 이상이고, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 염기성 변이체의 백분율은 약 2.0% 이하이다.
임의의 정제 방법, 조성물 및/또는 제약 제제의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 섹션 IV에 기재된 항체이다. 임의의 정제 방법, 조성물 및/또는 제약 제제의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 약 100 kDa이다. 임의의 정제 방법, 조성물 및/또는 제약 제제의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 약 8.2, 약 8.3 및/또는 약 8.4의 pI를 갖는다. 임의의 정제 방법, 조성물 및/또는 제약 제제의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 c-met에 결합할 수 있는 단일 항원 결합 아암을 포함한다. 임의의 정제 방법, 조성물 및/또는 제약 제제의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 1가이다. 임의의 정제 방법, 조성물 및/또는 제약 제제의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 오나르투주맙이다.
임의의 정제 방법, 조성물 및/또는 제약 제제의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 서열 KSSQSLLYTSSQKNYLA (서열 1)를 포함하는 HVR-L1, 서열 WASTRES (서열 2)를 포함하는 HVR-L2, 서열 QQYYAYPWT (서열 3)를 포함하는 HVR-L3, 서열 GYTFTSYWLH (서열 4)를 포함하는 HVR-H1, 서열 GMIDPSNSDTRFNPNFKD (서열 5)를 포함하는 HVR-H2 및 서열 ATYRSYVTPLDY (서열 6)를 포함하는 HVR-H3을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 (a) 서열:
Figure pct00001
를 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 (b) 서열:
Figure pct00002
을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 1가이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 항-c-met 항체 단편이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 1-아암 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 단일 항원 결합 아암을 포함하며 Fc 영역을 포함하고, 여기서 Fc 영역은 제1 및 제2 Fc 폴리펩티드를 포함하고, 제1 및 제2 Fc 폴리펩티드는 복합체로 존재한다. 일부 실시양태에서, 제1 및 제2 Fc 폴리펩티드는 상기 항원 결합 아암을 포함하는 Fab 분자에 비해 상기 항체 단편의 안정성을 증가시키는 Fc 영역을 형성한다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 (a) 서열 19의 아미노산 서열, CH1 서열 및 제1 Fc 폴리펩티드를 포함하는 제1 폴리펩티드 및 (b) 서열 20의 아미노산 서열 및 CL1 서열을 포함하는 제2 폴리펩티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 (c) 제2 Fc 폴리펩티드를 포함하는 제3 폴리펩티드를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 Fc 폴리펩티드는 도 1에 도시된 Fc 서열 (서열 17)을 포함하고, 제2 Fc 폴리펩티드는 도 2에 도시된 Fc 서열 (서열 18)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 오나르투주맙이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 오나르투주맙과 동일한 에피토프에 결합한다.
또한, 세포 또는 조직을 유효량의 상기 기재된 조성물, 로트 및/또는 제약 제제와 접촉시키는 것을 포함하는, c-met 활성화 세포 증식을 억제하는 방법이 본원에 제공된다.
대상체에게 유효량의 본원에 기재된 조성물, 로트 및/또는 제약 제제를 투여하는 것을 포함하는, HGF/c-met 신호전달 축의 조절이상과 연관된 질환을 조절하는 방법이 본원에 제공된다.
또한, 증식성 장애를 갖는 대상체에게 유효량의 상기 기재된 조성물, 로트 및/또는 제약 제제를 투여하는 것을 포함하는, 증식성 장애를 갖는 대상체를 치료하는 방법이 본원에 제공된다.
임의의 방법의 일부 실시양태에서, 증식성 장애는 암이다. 일부 실시양태에서, 암은 폐암 (예를 들어, 비소세포 폐암 (NSCLC)), 교모세포종, 췌장암, 육종, 신세포 암종, 간세포성 암종, 위암, 결장직장암 및/또는 유방암이다. 임의의 방법의 일부 실시양태에서, 방법은 제2 치료제의 투여를 추가로 포함한다. 임의의 방법의 일부 실시양태에서, 세포, 조직, HGF/c-met 신호전달 축의 조절이상과 연관된 질환, 증식성 장애 및/또는 암은 c-met 발현 또는 활성을 특징으로 한다. 일부 실시양태에서, c-met 발현은 c-met 과다-발현이다.
또한, 상기 기재된 조성물, 로트 또는 제약 제제가 함유된 용기를 포함하는 제조품이 본원에 제공된다. 또한 제조품을 제조하는 방법이 본원에 제공된다.
항-c-met 항체를 포함하는 조성물이 본원에 제공되며, 여기서 숙주 세포 단백질 (HCP)은 약 50 ng/mg 이하로 존재하고, 항-c-met 항체는 서열 KSSQSLLYTSSQKNYLA (서열 1)를 포함하는 HVR-L1, 서열 WASTRES (서열 2)를 포함하는 HVR-L2, 서열 QQYYAYPWT (서열 3)를 포함하는 HVR-L3, 서열 GYTFTSYWLH (서열 4)를 포함하는 HVR-H1, 서열 GMIDPSNSDTRFNPNFKD (서열 5)를 포함하는 HVR-H2 및 서열 ATYRSYVTPLDY (서열 6)를 포함하는 HVR-H3을 포함하고, 항-c-met 항체는 단일 항원 결합 아암을 포함하며 Fc 영역을 포함하고, Fc 영역은 제1 및 제2 Fc 폴리펩티드를 포함하고, 제1 및 제2 Fc 폴리펩티드는 복합체로 존재한다.
또한 항-c-met 항체를 포함하는 조성물이 본원에 제공되며, 여기서 HCP는 약 50 ng/mg 이하로 존재하고, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 DNA 수준은 약 0.3 pg/mg 이하이고, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 LpA는 약 2 ng/mg 이하이고, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 리물루스 변형세포 용해물 (LAL)은 약 0.01 EU/mg 이하이고, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 응집체의 백분율은 약 0.3% 이하이고, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 단량체의 백분율은 약 99.5% 이상이고, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 단편의 백분율은 약 0.3% 이하이고, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 산성 변이체의 백분율은 약 20% 이하이고, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 주요 피크의 백분율은 약 75% 이상이고, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 염기성 변이체의 백분율은 약 2.0% 이하이고, 항-c-met 항체는 서열 KSSQSLLYTSSQKNYLA (서열 1)를 포함하는 HVR-L1, 서열 WASTRES (서열 2)를 포함하는 HVR-L2, 서열 QQYYAYPWT (서열 3)를 포함하는 HVR-L3, 서열 GYTFTSYWLH (서열 4)를 포함하는 HVR-H1, 서열 GMIDPSNSDTRFNPNFKD (서열 5)를 포함하는 HVR-H2 및 서열 ATYRSYVTPLDY (서열 6)를 포함하는 HVR-H3을 포함하고, 항-c-met 항체는 단일 항원 결합 아암을 포함하며 Fc 영역을 포함하고, Fc 영역은 제1 및 제2 Fc 폴리펩티드를 포함하고, 제1 및 제2 Fc 폴리펩티드는 복합체로 존재한다.
또한 항-c-met 항체를 포함하는 조성물이 본원에 제공되며, 여기서 HCP는 약 15 ng/mg 이하로 존재하고, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 DNA 수준은 약 0.3 pg/mg 이하이고, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 LpA는 약 2 ng/mg 이하이고, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 리물루스 변형세포 용해물 (LAL)은 약 0.01 EU/mg 이하이고, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 응집체의 백분율은 약 0.3% 이하이고, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 단량체의 백분율은 약 99.5% 이상이고, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 단편의 백분율은 약 0.3% 이하이고, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 산성 변이체의 백분율은 약 20% 이하이고, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 주요 피크의 백분율은 약 75% 이상이고, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 염기성 변이체의 백분율은 약 2.0% 이하이고, 항-c-met 항체는 서열 KSSQSLLYTSSQKNYLA (서열 1)를 포함하는 HVR-L1, 서열 WASTRES (서열 2)를 포함하는 HVR-L2, 서열 QQYYAYPWT (서열 3)를 포함하는 HVR-L3, 서열 GYTFTSYWLH (서열 4)를 포함하는 HVR-H1, 서열 GMIDPSNSDTRFNPNFKD (서열 5)를 포함하는 HVR-H2 및 서열 ATYRSYVTPLDY (서열 6)를 포함하는 HVR-H3을 포함하고, 항-c-met 항체는 단일 항원 결합 아암을 포함하며 Fc 영역을 포함하고, Fc 영역은 제1 및 제2 Fc 폴리펩티드를 포함하고, 제1 및 제2 Fc 폴리펩티드는 복합체로 존재한다.
또한 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 28℃ 초과의 온도 및 약 pH 6 내지 약 pH 8의 pH에서 6시간 초과 동안 유지하는 것을 포함하며, 여기서 항-c-met 항체는 서열 KSSQSLLYTSSQKNYLA (서열 1)를 포함하는 HVR-L1, 서열 WASTRES (서열 2)를 포함하는 HVR-L2, 서열 QQYYAYPWT (서열 3)를 포함하는 HVR-L3, 서열 GYTFTSYWLH (서열 4)를 포함하는 HVR-H1, 서열 GMIDPSNSDTRFNPNFKD (서열 5)를 포함하는 HVR-H2 및 서열 ATYRSYVTPLDY (서열 6)를 포함하는 HVR-H3을 포함하고, 항-c-met 항체는 단일 항원 결합 아암을 포함하며 Fc 영역을 포함하고, Fc 영역은 제1 및 제2 Fc 폴리펩티드를 포함하고, 제1 및 제2 Fc 폴리펩티드는 복합체로 존재하는 것인, 항-c-met 항체를 정제하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 방법은 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 원심분리하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 맵셀렉트 슈어 수지 상에 로딩하는 것 및 항-c-met 항체를 용리하는 것을 추가로 포함한다.
또한 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 맵셀렉트 슈어 수지 상에 로딩하는 것 및 항-c-met 항체를 용리하는 것을 포함하며, 여기서 항-c-met 항체는 서열 KSSQSLLYTSSQKNYLA (서열 1)를 포함하는 HVR-L1, 서열 WASTRES (서열 2)를 포함하는 HVR-L2, 서열 QQYYAYPWT (서열 3)를 포함하는 HVR-L3, 서열 GYTFTSYWLH (서열 4)를 포함하는 HVR-H1, 서열 GMIDPSNSDTRFNPNFKD (서열 5)를 포함하는 HVR-H2 및 서열 ATYRSYVTPLDY (서열 6)를 포함하는 HVR-H3을 포함하고, 항-c-met 항체는 단일 항원 결합 아암을 포함하며 Fc 영역을 포함하고, Fc 영역은 제1 및 제2 Fc 폴리펩티드를 포함하고, 제1 및 제2 Fc 폴리펩티드는 복합체로 존재하는 것인, 항-c-met 항체를 정제하는 방법이 본원에 제공된다.
일부 실시양태에서, 방법은 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 약한 음이온 교환 수지 상에 로딩하는 것 및 통과액 중 항-c-met 항체를 회수하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 약한 음이온 교환 수지는 통과 모드로 구동된다.
또한 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 약한 음이온 교환 수지 상에 로딩하는 것 및 통과액 중 항-c-met 항체를 회수하는 것을 포함하며, 여기서 항-c-met 항체는 서열 KSSQSLLYTSSQKNYLA (서열 1)를 포함하는 HVR-L1, 서열 WASTRES (서열 2)를 포함하는 HVR-L2, 서열 QQYYAYPWT (서열 3)를 포함하는 HVR-L3, 서열 GYTFTSYWLH (서열 4)를 포함하는 HVR-H1, 서열 GMIDPSNSDTRFNPNFKD (서열 5)를 포함하는 HVR-H2 및 서열 ATYRSYVTPLDY (서열 6)를 포함하는 HVR-H3을 포함하고, 항-c-met 항체는 단일 항원 결합 아암을 포함하며 Fc 영역을 포함하고, Fc 영역은 제1 및 제2 Fc 폴리펩티드를 포함하고, 제1 및 제2 Fc 폴리펩티드는 복합체로 존재하는 것인, 항-c-met 항체를 정제하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 약한 음이온 교환 수지는 통과 모드로 구동된다.
일부 실시양태에서, 방법은 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 강한 양이온 교환 수지 상에 로딩하는 것 및 항-c-met 항체를 용리하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 강한 음이온 교환 수지 상에 로딩하는 것 및 항-c-met 항체를 용리하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 한외여과 및/또는 정용여과하는 것을 추가로 포함한다.
또한 제4항 내지 제14항 중 어느 한 항의 방법에 의해 정제되거나 수득가능한 항-c-met 항체를 포함하며, 여기서 항-c-met 항체는 서열 KSSQSLLYTSSQKNYLA (서열 1)를 포함하는 HVR-L1, 서열 WASTRES (서열 2)를 포함하는 HVR-L2, 서열 QQYYAYPWT (서열 3)를 포함하는 HVR-L3, 서열 GYTFTSYWLH (서열 4)를 포함하는 HVR-H1, 서열 GMIDPSNSDTRFNPNFKD (서열 5)를 포함하는 HVR-H2 및 서열 ATYRSYVTPLDY (서열 6)를 포함하는 HVR-H3을 포함하고, 항-c-met 항체는 단일 항원 결합 아암을 포함하며 Fc 영역을 포함하고, Fc 영역은 제1 및 제2 Fc 폴리펩티드를 포함하고, 제1 및 제2 Fc 폴리펩티드는 복합체로 존재하는 것인 조성물이 본원에 제공된다.
본 발명의 조성물의 일부 실시양태에서, 숙주 세포 단백질 (HCP)은 약 50 ng/mg 이하로 존재한다. 일부 실시양태에서, HCP는 약 1 ng/mg 내지 15 ng/mg으로 존재한다. 일부 실시양태에서, HCP는 이. 콜라이 단백질 (ECP)이다.
본 발명의 조성물 및 방법의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 (a) 서열:
Figure pct00003
를 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 (b) 서열:
Figure pct00004
을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, Fc 영역은 상기 항원 결합 아암을 포함하는 Fab 분자에 비해 상기 항체 단편의 안정성을 증가시킨다. 일부 실시양태에서, 제1 Fc 폴리펩티드는 도 1에 도시된 Fc 서열 (서열 17)을 포함하고, 제2 Fc 폴리펩티드는 도 2에 도시된 Fc 서열 (서열 18)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 오나르투주맙이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 오나르투주맙과 동일한 에피토프에 결합한다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 약 8.0 내지 약 8.5의 pI를 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 1가이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 항-c-met 항체 단편이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 1-아암 항체이다.
도 1은 c-met의 짧은 반감기 및 긴 반감기 효능제 및 길항제의 일반적 구조를 도시한다.
도 2는 오나르투주맙 (MetMAb 또는 OA5D5.v2)의 프레임워크 (FR), 초가변 영역 (HVR), 제1 불변 도메인 (CL 또는 CH1) 및 Fc 영역 (Fc)의 아미노산 서열을 도시한다. 도시된 Fc 서열은 WO 2005/063816에 기재된 바와 같은 "홀(hole)" (함몰부) 돌연변이 T366S, L368A 및 Y407V를 포함한다.
도 3은 WO 2005/063816에 기재된 바와 같은 "노브(knob)" (돌출부) 돌연변이 T366W를 포함하는 Fc 폴리펩티드의 서열을 도시한다. 일부 실시양태에서, 이 서열을 포함하는 Fc 폴리펩티드는 도 1의 Fc 서열을 포함하는 Fc 폴리펩티드와 복합체를 형성하여 Fc 영역을 생성한다.
도 4는 구배 용리 조건 하에 구동된 강한 AE 수지 (Q 세파로스(Sepharose) FF) 상에 로딩된 오나르투주맙을 포함하는 약한 CE 수지 풀 (CM 세파로스 FF)의 크로마토그램을 도시한다.
도 5a는 캅토(Capto) DEAE 및 오나르투주맙 (MetMAb) 로그10 KPi에 대한 로봇 스크린의 컨투어 플롯 결과를 도시한다 (x-축 pH 및 y-축 이온 강도 및 윈도우 작동을 위한 박스). 도 5b는 캅토 DEAE 및 ECP ng/mL에 대한 로봇 스크린의 컨투어 플롯 결과를 도시한다 (x-축 pH 및 y-축 이온 강도 및 윈도우 작동을 위한 청색 박스).
도 6a 및 b는 (a) 트리스, NaCl 평형화/세척 완충제 및 (b) 글리신, 포스페이트, 트리스 (GPT) 평형화/세척 완충제를 사용하는 캅토 DEAE 평형화/세척 완충제의 크로마토그램을 도시한다.
도 7은 Q 세파로스 패스트 플로우(Fast Flow) 최종 크로마토그래피 단계에서 수행된 분획 계승 다중-변량 DOE를 도시한다 (x-축 전도도 mS/cm 및 y-축 pH).
항-c-met 항체를 정제하는 방법 및 정제된 항-c-met 항체를 포함하는 조성물이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 길항제 항-c-met 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 1가 항-c-met 항체 (예를 들어, 1-아암 항체)이다. 또한, 정제된 항-c-met 항체를 포함하는 제조품 및 정제된 항-c-met 항체를 포함하는 조성물의 용도가 제공된다.
I. 정의
본원에 사용된 용어 "오염물" 또는 "불순물"은 교환가능하게 사용되며, 바람직한 항체 단량체 생성물과 상이한 물질을 지칭한다. 불순물은 항체 변이체 (예를 들어, 산성 또는 염기성 항체 변이체), 항체 단편, 폴리에틸렌이민 (즉, PEI), 응집체 또는 바람직한 항체 단량체의 유도체, 침출된 단백질 A, 숙주 세포 불순물 (예를 들어, ECP), 지질, 핵산, 및/또는 내독소를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 용어 "숙주 세포 불순물" 또는 "숙주 세포 오염물"은 숙주 세포주, 세포 배양액 및/또는 세포 배양물에 의해 도입된 임의의 단백질성 오염물 또는 부산물을 지칭한다. 예는 차이니즈 햄스터 난소 단백질 (CHOP), 이. 콜라이 단백질 (ECP), 효모 단백질, 원숭이 COS 단백질 또는 골수종 세포 단백질 (예를 들어, NS0 단백질 (BALB/c 마우스로부터 유래된 마우스 모세포종 세포))을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, 숙주 세포 불순물은 ECP이다.
"숙주 세포"는 항체를 생산하기 위한 폴리뉴클레오티드 삽입체의 도입을 위해 벡터(들)의 수용자일 수 있거나 수용자였던 개별 세포 또는 세포 배양물을 포함한다. 숙주 세포는 단일 숙주 세포의 자손을 포함하고, 상기 자손은 천연적, 우연적 또는 계획적인 돌연변이로 인해 반드시 본래 모 세포에 완전하게 동일 (형태적으로 또는 게놈 DNA 보체에서)할 필요는 없을 수 있다. 일부 실시양태에서, 숙주 세포는 이. 콜라이이다.
본원에 사용된 용어 "단량체(들)"는 항체의 단일 유닛를 지칭한다. 예를 들어, 1-아암 항체의 경우에, 단량체는 a) 중쇄 및 제1 Fc 영역을 포함하는 폴리펩티드; b) 경쇄를 포함하는 폴리펩티드; 및 c) 제2 Fc 영역을 포함하는 폴리펩티드로 이루어진다.
본원에 사용된 용어 "응집체(들)"는 항체 또는 그의 단편의 임의의 다량체를 지칭한다. 예를 들어, 응집체는 이량체, 삼량체, 사량체, 또는 사량체보다 더 큰 다량체 등일 수 있다.
"완충제"는 그의 산-염기 접합체 성분의 작용에 의해 pH 변화에 저항하는 완충 용액이다. 예를 들어, 완충제의 원하는 pH에 따라 사용될 수 있는 다양한 완충제가 문헌 [Buffers. A Guide for the Preparation and Use of Buffers in Biological Systems, Mohan, C., Calbiochem Corporation (2007)]에 기재되어 있다.
용액의 "pH"는 물 샘플의 이온화와 관련하여 산성도 또는 알칼리도를 측정한다.
분자, 예컨대 항체의 "pI" 또는 "등전점"은 분자가 동일한 수의 양전하 및 음전하를 함유하는 pH를 지칭한다. pI는 분자 (예를 들어, 항체)의 아미노산 잔기의 순 전하로부터 계산될 수도 있거나, 또는 등전 포커싱에 의해 결정될 수 있다.
용어 "전도도"는 2개의 전극 사이에 전류를 전도시키는 용액의 능력을 지칭한다. 전도도의 기본 단위는 지멘스 (S)이고, 이전에는 모우(mho)라고 불렸다. 전도도는 일반적으로 mS/cm의 단위로 표시된다. 용액 중 이온 상의 전하는 전류의 전도를 용이하게 하기 때문에 용액의 전도도는 그의 이온 농도에 비례한다.
"유량"은 일반적으로 시간당 수지 부피 (CV/h)로 기재된다.
"로드 밀도"는 종종 수지의 리터당 처리된 조성물의 그램으로 표현된다.
수지에 대한 분자 (예를 들어, 항체 또는 오염물)의 "결합"은 분자 (예를 들어, 항체 또는 오염물)가 수지 내에 또는 수지 상에 가역적으로 고정화되도록 적절한 조건 (예를 들어, pH 및/또는 전도도) 하에 분자 (예를 들어, 항체 또는 오염물)를 수지에 노출시키는 것을 의미한다.
수지의 "세척"은 적절한 완충제를 수지를 통해 또는 수지 상에 통과시키는 것을 의미한다.
수지로부터 분자 (항체 또는 오염물)의 "용리"는 이로부터 분자를 제거하는 것을 의미한다.
"통과"는 제1 분자 (예를 들어, 항체 또는 오염물)는 수지에 결합하면서 제2 분자 (예를 들어, 항체 또는 오염물)는 유지되지 않는 것을 지칭한다.
본원에서 "평형화 완충제"는 관심 분자 (예를 들어, 항체)를 포함하는 조성물의 로딩을 위한 수지를 제조하는데 사용되는 것이다.
"세척 완충제"는 본원에서 관심 분자 (예를 들어, 항체)의 로딩 후에 및 그의 용리 전에 수지 상에서 통과하는 완충제를 지칭하는데 사용된다.
용어 "로드 밀도" 또는 "로딩 밀도"는 크로마토그래피 수지의 리터당 관심 분자 (예를 들어, 항체) (g)의 밀도 또는 막/필터 부피 (L)의 리터당 관심 분자 (예를 들어, 항체)의 밀도이다. 일부 실시양태에서, 로딩 밀도는 g/L로 측정된다.
어구 "이온 교환 크로마토그래피"는 화합물이 그의 순 전하에 기초하여 분리되는 분리 기술을 지칭한다.
항체 및 1종 이상의 오염물을 포함하는 조성물로부터 항체를 "정제"하는 것은, 상기 조성물로부터 1종 이상의 오염물을 제거 (완전 또는 부분 제거)함으로써 조성물 중 항체의 순도의 정도를 증가시키는 것을 의미한다.
"항-c-met 항체" 및 "c-met에 결합하는 항체"는 항체가 c-met를 표적화하는데 있어 진단제 및/또는 치료제로서 유용하도록 충분한 친화도로 c-met에 결합할 수 있는 항체를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 관련되지 않은 비-c-met 단백질에 대한 항-c-met 항체의 결합의 정도는, 예를 들어 방사성면역검정 (RIA)에 의해 측정시에 c-met에 대한 항체의 결합의 약 10% 미만이다. 일부 실시양태에서, c-met에 결합하는 항체는 ≤ 1μM, ≤ 100 nM, ≤ 10 nM, ≤ 1 nM, ≤ 0.1 nM, ≤ 0.01 nM 또는 ≤ 0.001 nM (예를 들어, 10-8 M 이하, 예를 들어 10-8 M 내지 10-13 M, 예를 들어, 10-9 M 내지 10-13 M)의 해리 상수 (Kd)를 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 상이한 종으로부터의 c-met 사이에서 보존된 c-met의 에피토프에 결합한다.
용어 "항체"는 가장 넓은 의미로 사용되고, 특히 모노클로날 항체 (전장 모노클로날 항체 포함), 폴리클로날 항체, 다중특이적 항체 (예를 들어, 이중특이적 항체), 1가 항체, 다가 항체, 및 이들이 원하는 생물학적 활성을 나타내는 한 항체 단편 (예를 들어, Fab 및/또는 단일-아암 항체)을 포함한다.
항체의 "부류"는 그의 중쇄에 의해 보유되는 불변 도메인 또는 불변 영역의 유형을 지칭한다. 5종의 주요 부류의 항체: IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM이 존재하고, 이들 중 몇몇은 하위부류 (이소형), 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2로 추가로 분류될 수 있다. 상이한 부류의 이뮤노글로불린에 상응하는 중쇄 불변 도메인은 각각 α, δ, ε, γ 및 μ로 불린다.
"항체 단편"은 무손상 항체가 결합하는 항원에 결합하는 무손상 항체의 일부를 포함하는, 무손상 항체 이외의 분자를 지칭한다. 항체 단편의 예는 Fv, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2; 디아바디; 선형 항체; 단일-쇄 항체 분자 (예를 들어, scFv); 및 항체 단편들로부터 형성된 다중특이적 항체를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
용어 "전장 항체", "무손상 항체" 및 "전체 항체"는 본원에서 교환가능하게 사용되며, 천연 항체 구조와 실질적으로 유사한 구조를 갖거나 또는 본원에 정의된 바와 같은 Fc 영역을 함유하는 중쇄를 갖는 항체를 지칭한다.
"차단" 항체 또는 "길항제" 항체는 그가 결합하는 항원의 생물학적 활성을 (부분적으로 또는 완전히) 유의하게 억제하는 것이다.
참조 항체와 "동일한 에피토프에 결합하는 항체"는 경쟁 검정에서 참조 항체의 그의 항원에 대한 결합을 50% 이상 차단하고, 반대로 경쟁 검정에서 참조 항체가 항체의 그의 항원에 대한 결합을 50% 이상 차단하는 항체를 지칭한다. 예시적인 경쟁 검정이 본원에 제공된다.
본원의 목적을 위해 "수용자 인간 프레임워크"는 하기 정의되는 바와 같이 인간 이뮤노글로불린 프레임워크 또는 인간 컨센서스 프레임워크로부터 유래된 경쇄 가변 도메인 (VL) 프레임워크 또는 중쇄 가변 도메인 (VH) 프레임워크의 아미노산 서열을 포함하는 프레임워크이다. 인간 이뮤노글로불린 프레임워크 또는 인간 컨센서스 프레임워크"로부터 유래된" 수용자 인간 프레임워크는 그의 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있거나, 또는 아미노산 서열 변화를 함유할 수 있다. 일부 실시양태에서, 아미노산 변화의 수는 10개 이하, 9개 이하, 8개 이하, 7개 이하, 6개 이하, 5개 이하, 4개 이하, 3개 이하, 또는 2개 이하이다. 일부 실시양태에서, VL 수용자 인간 프레임워크는 VL 인간 이뮤노글로불린 프레임워크 서열 또는 인간 컨센서스 프레임워크 서열과 서열이 동일하다.
용어 "가변 영역" 또는 "가변 도메인"은 항체의 항원에 대한 결합에 관여하는 항체 중쇄 또는 경쇄의 도메인을 지칭한다. 천연 항체의 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인 (각각 VH 및 VL)은 일반적으로 유사한 구조를 갖고, 각각의 도메인은 4개의 보존된 프레임워크 영역 (FR) 및 3개의 초가변 영역 (HVR)을 포함한다. (예를 들어, 문헌 [Kindt et al. Kuby Immunology, 6th ed., W.H. Freeman and Co., page 91 (2007)] 참조.) 단일 VH 또는 VL 도메인은 항원-결합 특이성을 부여하기에 충분할 수 있다. 또한, 특정한 항원에 결합하는 항체는 각각 상보적 VL 또는 VH 도메인의 라이브러리를 스크리닝하기 위해 항원에 결합하는 항체로부터의 VH 또는 VL 도메인을 사용하여 단리할 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Portolano et al., J. Immunol. 150:880-887 (1993); Clarkson et al., Nature 352:624-628 (1991)]을 참조한다.
본원에 사용된 용어 "초가변 영역" 또는 "HVR"은 서열이 초가변성이고/거나 구조적으로 한정된 루프 ("초가변 루프")를 형성하는 항체 가변 도메인의 각각의 영역을 지칭한다. 일반적으로, 천연 4-쇄 항체는 6개의 HVR; VH 내의 3개 (H1, H2, H3) 및 VL 내의 3개 (L1, L2, L3)를 포함한다. HVR은 일반적으로 초가변 루프로부터의 및/또는 "상보성 결정 영역" (CDR)으로부터의 아미노산 잔기를 포함하며, 후자는 서열 가변성이 가장 높고/거나 항원 인식과 관련된다. 예시적인 초가변 루프는 아미노산 잔기 26-32 (L1), 50-52 (L2), 91-96 (L3), 26-32 (H1), 53-55 (H2) 및 96-101 (H3)에서 발생한다. (문헌 [Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)]). 예시적인 CDR (CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3)은 L1의 아미노산 잔기 24-34, L2의 50-56, L3의 89-97, H1의 31-35B, H2의 50-65 및 H3의 95-102에서 발생한다. (문헌 [Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)].) VH 내의 CDR1을 제외하고, CDR은 일반적으로 초가변 루프를 형성하는 아미노산 잔기를 포함한다. CDR은 또한 항원에 접촉하는 잔기인 "특이성 결정 잔기" 또는 "SDR"을 포함한다. SDR은 단축-CDR 또는 a-CDR로 지칭되는 CDR의 영역 내에 함유된다. 예시적인 a-CDR (a-CDR-L1, a-CDR-L2, a-CDR-L3, a-CDR-H1, a-CDR-H2 및 a-CDR-H3)은 L1의 아미노산 잔기 31-34, L2의 50-55, L3의 89-96, H1의 31-35B, H2의 50-58 및 H3의 95-102에서 발생한다. (문헌 [Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)] 참조.) 달리 나타내지 않는 한, HVR 잔기 및 가변 도메인에서의 다른 잔기 (예를 들어, FR 잔기)는 본원에서 문헌 [Kabat et al., 상기 문헌]에 따라 넘버링된다.
"프레임워크" 또는 "FR"은 초가변 영역 (HVR) 잔기 이외의 다른 가변 도메인 잔기를 지칭한다. 가변 도메인의 FR은 일반적으로 4개의 하기 FR 도메인으로 이루어진다: FR1, FR2, FR3 및 FR4. 따라서, HVR 및 FR 서열은 일반적으로 VH (또는 VL)에서 하기 순서로 나타난다: FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4.
본원에 사용된 어구 "N-말단 절단된 중쇄"는 전장 이뮤노글로불린 중쇄의 전부가 아닌 부분을 포함하는 폴리펩티드를 지칭하며, 여기서 누락 부분은 통상적으로 중쇄의 N 말단 영역에 위치하는 것이다. 누락 부분은 가변 도메인, CH1, 및 힌지 서열의 부분 또는 전부를 포함할 수 있으나 이에 제한되지는 않는다. 일반적으로, 야생형 힌지 서열이 존재하지 않는 경우에, N-말단 절단된 중쇄에서 나머지 불변 도메인(들)은 또 다른 Fc 서열 (즉, 본원에 기재된 바와 같은 "제1" Fc 폴리펩티드)에 연결될 수 있는 성분을 포함할 것이다. 예를 들어, 상기 성분은 디술피드 연결을 형성할 수 있는 변형된 잔기 또는 첨가된 시스테인 잔기일 수 있다.
본원에 사용된 용어 "Fc 영역"은 일반적으로 이뮤노글로불린 중쇄의 C-말단 폴리펩티드 서열을 포함하는 이량체 복합체를 지칭하며, 여기서 C-말단 폴리펩티드 서열은 무손상 항체의 파파인 소화에 의해 수득가능한 것이다. Fc 영역은 천연 또는 변이체 Fc 서열을 포함할 수 있다. 이뮤노글로불린 중쇄의 Fc 서열의 경계는 달라질 수 있지만, 인간 IgG 중쇄 Fc 서열은 통상적으로 약 위치 Cys226의 아미노산 잔기로부터 또는 약 위치 Pro230의 아미노산 잔기로부터 Fc 서열의 카르복실-말단까지 이르는 스트레치로 정의된다. 그러나, Fc 서열의 C-말단 리신 (Lys447)은 존재할 수 있거나 존재하지 않을 수 있다. 이뮤노글로불린의 Fc 서열은 일반적으로 2개의 불변 도메인, CH2 도메인 및 CH3 도메인을 포함하고, 임의로 CH4 도메인을 포함한다. 본원에서 "Fc 폴리펩티드"는 Fc 영역을 구성하는 폴리펩티드들 중 하나를 의미한다. Fc 폴리펩티드는 임의의 적합한 이뮤노글로불린, 예컨대 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 하위유형, IgA, IgE, IgD 또는 IgM으로부터 수득될 수 있다. 일부 실시양태에서, Fc 폴리펩티드는 야생형 힌지 서열의 일부 또는 전부를 (일반적으로 그의 N 말단에서) 포함한다. 일부 실시양태에서, Fc 폴리펩티드는 기능적 또는 야생형 힌지 서열을 포함하지 않는다.
"Fc 수용체" 또는 "FcR"은 항체의 Fc 영역에 결합하는 수용체를 기재한다. 일부 실시양태에서, FcR은 천연 인간 FcR이다. 일부 실시양태에서, FcR은 IgG 항체에 결합하는 수용체 (감마 수용체)이고, FcγRI, FcγRII 및 FcγRIII 하위부류의 수용체를 포함하며, 이들은 이들 수용체의 대립유전자 변이체 및 대안적으로 스플라이싱된 형태를 포함한다. FcγRII 수용체는 FcγRIIA ("활성화 수용체") 및 FcγRIIB ("억제 수용체")를 포함하는데, 이들은 그의 세포질 도메인에서 주로 차이가 나는 유사한 아미노산 서열을 갖는다. 활성화 수용체 FcγRIIA는 그의 세포질 도메인에 면역수용체 티로신-기재 활성화 모티프 (ITAM)를 함유한다. 억제 수용체 FcγRIIB는 그의 세포질 도메인에 면역수용체 티로신-기재 억제 모티프 (ITIM)를 함유한다. (예를 들어, 문헌 [Daeron, Annu. Rev. Immunol. 15:203-234 (1997)] 참조). FcR은 예를 들어 문헌 [Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol 9:457-92 (1991); Capel et al., Immunomethods 4:25-34 (1994); 및 de Haas et al., J. Lab. Clin. Med. 126:330-41 (1995)]에서 검토된다. 추후로 확인될 것을 포함하여 다른 FcR이 본원에서의 용어 "FcR"에 포괄된다.
용어 "Fc 수용체" 또는 "FcR"은 또한 모체 IgG에서 태아로의 전달 (문헌 [Guyer et al., J. Immunol. 117:587 (1976) 및 Kim et al., J. Immunol. 24:249 (1994)]) 및 이뮤노글로불린의 항상성 조절을 담당하는 신생아 수용체 FcRn을 포함한다. FcRn에 대한 결합을 측정하는 방법은 공지되어 있다 (예를 들어, 문헌 [Ghetie and Ward., Immunol. Today 18(12):592-598 (1997); Ghetie et al., Nature Biotechnology, 15(7):637-640 (1997); Hinton et al., J. Biol. Chem. 279(8):6213-6216 (2004)]; WO 2004/92219 (Hinton et al.) 참조).
인간 FcRn 고친화도 결합 폴리펩티드의 인간 FcRn에 대한 생체내 결합 및 혈청 반감기는, 예를 들어 인간 FcRn을 발현하는 트랜스제닉 마우스 또는 형질감염된 인간 세포주에서, 또는 변이체 Fc 영역을 갖는 폴리펩티드를 투여한 영장류에서 검정할 수 있다. WO 2000/42072 (Presta)는 FcR에 대한 결합이 개선되거나 감소된 항체 변이체를 기재하고 있다. 또한, 예를 들어 문헌 [Shields et al. J. Biol. Chem. 9(2):6591-6604 (2001)]을 참조한다.
본원에 사용된 "힌지 영역", "힌지 서열" 및 그의 변형은 당업계에 공지된 의미를 포함하고, 이는 예를 들어 문헌 [Janeway et al., Immuno Biology: the immune system in health and disease, (Elsevier Science Ltd., NY) (4th ed., 1999); Bloom et al., Protein Science (1997), 6:407-415; Humphreys et al., J. Immunol. Methods (1997), 209:193-202]에 설명되어 있다.
달리 나타내지 않는 한, 표현 "다가 항체"는 본 명세서 전반에 걸쳐 3개 이상의 항원 결합 부위를 포함하는 항체를 나타내도록 사용된다. 다가 항체를 바람직하게는 3개 이상의 항원 결합 부위를 갖도록 조작되고, 일반적으로 천연 서열 IgM 또는 IgA 항체가 아니다.
"Fv" 단편은 완전한 항체 인식 및 결합 부위를 함유하는 항체 단편이다. 이러한 영역은 1개의 중쇄 및 1개의 경쇄 가변 도메인이 단단하게 회합된 이량체로 이루어지며, 이는 예를 들어 scFv에서 특성상 공유 결합일 수 있다. 이러한 배위에서, 각각의 가변 도메인의 3개의 HVR은 상호작용하여 VH-VL 이량체 표면의 항원 결합 부위를 규정한다. 총괄적으로, 6개의 HVR 또는 이것의 하위세트가 항체에 항원 결합 특이성을 부여한다. 그러나, 단일 가변 도메인 (또는 항원에 대해 특이적인 3개의 HVR만을 포함하는 Fv의 절반)일지라도 전체 결합 부위보다 친화도가 낮긴 하지만 항원을 인식하여 결합하는 능력을 갖는다.
"Fab" 단편은 경쇄의 가변 및 불변 도메인 및 중쇄의 가변 도메인 및 제1 불변 도메인 (CH1)을 함유한다. F(ab')2 항체 단편은 일반적으로 그들 사이에 힌지 시스테인에 의해 그의 카르복시 말단 근처에 공유 연결된 한 쌍의 Fab 단편을 포함한다. 항체 단편의 다른 화학적 커플링이 또한 당업계에 공지되어 있다.
본원에 사용된 어구 "항원 결합 아암"은 관심 표적 분자에 특이적으로 결합하는 능력을 갖는 항체 단편의 성분 부분을 지칭한다. 일반적으로 및 바람직하게는, 항원 결합 아암은 이뮤노글로불린 폴리펩티드 서열, 예를 들어 HVR 및/또는 이뮤노글로불린 경쇄 및 중쇄의 가변 도메인 서열의 복합체이다.
"단일-쇄 Fv" 또는 "scFv" 항체 단편은 단일 폴리펩티드에 존재하는 항체의 VH 및 VL 도메인을 포함한다. 일반적으로, Fv 폴리펩티드는 scFv가 항원 결합을 위한 바람직한 구조를 형성할 수 있도록 하는, VH 및 VL 도메인 사이의 폴리펩티드 링커를 추가로 포함한다. scFv의 검토를 위해 문헌 [Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, Vol 113, Rosenburg and Moore eds. Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994)]을 참조한다.
용어 "디아바디"는 2개의 항원-결합 부위를 갖는 작은 항체 단편을 지칭하고, 이들 단편은 동일한 폴리펩티드 쇄 (VH 및 VL) 내에 경쇄 가변 도메인 (VL)에 연결된 중쇄 가변 도메인 (VH)을 포함한다. 동일 쇄 상의 2개의 도메인 사이에서 쌍형성을 허용하기에는 너무 짧은 링커를 사용함으로써, 상기 도메인은 또 다른 쇄의 상보적 도메인과 쌍을 형성하게 되어 2개의 항원-결합 부위를 생성하게 된다. 디아바디는 예를 들어 EP 404,097; WO 93/11161; 및 문헌 [Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448 (1993)]에 보다 상세하게 기재되어 있다.
표현 "선형 항체"는 문헌 [Zapata et al., Protein Eng., 8(10):1057-1062 (1995)]에 기재된 항체를 지칭한다. 간략하게, 이들 항체는 상보적 경쇄 폴리펩티드와 함께 한 쌍의 항원 결합 영역을 형성하는 한 쌍의 탠덤 Fd 절편 (VH-CH1-VH-CH1)을 포함한다. 선형 항체는 이중특이적 또는 단일특이적일 수 있다.
본원에 사용된 용어 "모노클로날 항체"는 실질적으로 균질한 항체 집단으로부터 수득된 항체를 지칭하기 위해 사용되고, 즉 이러한 집단을 구성하는 개별 항체는 일반적으로 소량으로 존재할 수도 있는, 예를 들어 자연 발생 돌연변이를 포함하거나 모노클로날 항체 제제의 생산 동안 생성되는 가능한 변이체 항체를 제외하고는 동일하고/하거나, 동일한 에피토프에 결합한다. 전형적으로 상이한 결정기 (에피토프)에 대해 지시된 상이한 항체를 포함하는 폴리클로날 항체 제제와는 반대로, 모노클로날 항체 제제의 각각의 모노클로날 항체는 항원 상의 단일 결정기에 대해 지시된다. 따라서, 수식어 "모노클로날"은 항체의 실질적으로 균질한 집단으로부터 수득된 항체의 특성을 나타내고, 임의의 특정한 방법에 의한 항체 생산을 필요로 하는 것으로서 간주되지 않아야 한다. 예를 들어, 모노클로날 항체는 하이브리도마 방법, 재조합 DNA 방법, 파지-디스플레이 방법, 및 인간 이뮤노글로불린 로커스의 전부 또는 일부를 함유하는 트랜스제닉 동물을 활용하는 방법을 포함하나 이에 제한되지는 않는 다양한 기술에 의해 제조될 수 있고, 이러한 방법 및 모노클로날 항체를 제조하기 위한 다른 예시적인 방법이 본원에 기재된다.
용어 "키메라" 항체는 중쇄 및/또는 경쇄의 일부가 특정한 공급원 또는 종으로부터 유래된 반면, 중쇄 및/또는 경쇄의 나머지가 다른 공급원 또는 종으로부터 유래된 항체를 지칭한다.
"인간 컨센서스 프레임워크"는 인간 이뮤노글로불린 VL 또는 VH 프레임워크 서열의 선택시에 가장 흔히 발생하는 아미노산 잔기를 나타내는 프레임워크이다. 일반적으로, 인간 이뮤노글로불린 VL 또는 VH 서열의 선택은 가변 도메인 서열의 하위군으로부터 행한다. 일반적으로, 서열의 하위군은 문헌 [Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, NIH Publication 91-3242, Bethesda MD (1991), vols. 1-3]에서와 같은 하위군이다. 한 실시양태에서, VL의 경우에 하위군은 문헌 [Kabat et al., 상기 문헌]에서와 같은 하위군 카파 I이다. 한 실시양태에서, VH의 경우에 하위군은 문헌 [Kabat et al., 상기 문헌]에서와 같은 하위군 III이다.
"인간화" 항체는 비-인간 HVR로부터의 아미노산 잔기 및 인간 FR로부터의 아미노산 잔기를 포함하는 키메라 항체를 지칭한다. 특정 실시양태에서, 인간화 항체는 실질적으로 적어도 1개, 전형적으로 2개의 가변 도메인을 모두 포함할 것이며, 여기서 모든 또는 실질적으로 모든 HVR (예를 들어, CDR)은 비-인간 항체의 것에 상응하고, 모든 또는 실질적으로 모든 FR은 인간 항체의 것에 상응한다. 인간화 항체는 임의로 인간 항체로부터 유래된 항체 불변 영역의 적어도 일부를 포함할 수 있다. 항체, 예를 들어 비-인간 항체의 "인간화 형태"는 인간화를 거친 항체를 지칭한다.
"인간 항체"는 인간 또는 인간 세포에 의해 생산된 항체의 아미노산 서열에 상응하는 아미노산 서열을 보유하거나, 또는 인간 항체 레퍼토리 또는 다른 인간 항체-코딩 서열을 이용하여 비-인간 공급원으로부터 유래된 항체이다. 인간 항체의 이러한 정의에서 비-인간 항원-결합 잔기를 포함하는 인간화 항체는 명확하게 배제된다.
"네이키드 항체"는 이종 모이어티 (예를 들어, 세포독성 모이어티) 또는 방사성표지에 접합되지 않은 항체를 지칭한다. 네이키드 항체는 제약 제제에 존재할 수 있다.
"천연 항체"는 변화하는 구조를 갖는 자연 발생 이뮤노글로불린 분자를 지칭한다. 예를 들어, 천연 IgG 항체는 디술피드-결합된 2개의 동일한 경쇄 및 2개의 동일한 중쇄로 이루어진 약 150,000 달톤의 이종사량체 당단백질이다. N-말단으로부터 C-말단으로, 각각의 중쇄는 가변 영역 (VH) (또한 가변 중쇄 도메인 또는 중쇄 가변 도메인으로 지칭됨)에 이어 3개의 불변 도메인 (CH1, CH2 및 CH3)을 갖는다. 유사하게, N-말단으로부터 C-말단으로, 각각의 경쇄는 가변 영역 (VL) (또한 가변 경쇄 도메인 또는 경쇄 가변 도메인으로 지칭됨)에 이어 불변 경쇄 (CL) 도메인을 갖는다. 항체의 경쇄는 그의 불변 도메인의 아미노산 서열을 기반으로, 카파 (κ) 및 람다 (λ)로 지칭되는 2가지 유형 중 하나로 할당될 수 있다.
"친화도"는 분자 (예를 들어, 항체)의 단일 결합 부위와 그의 결합 파트너 (예를 들어, 항원) 사이의 비공유 상호작용의 총합의 강도를 지칭한다. 달리 나타내지 않는 한, 본원에 사용된 "결합 친화도"는 결합 쌍의 구성원들 (예를 들어, 항체 및 항원) 사이의 1:1 상호작용을 반영하는 내인성 결합 친화도를 지칭한다. 분자 X의 그의 파트너 Y에 대한 친화도는 일반적으로 해리 상수 (Kd)로 표시될 수 있다. 친화도는 본원에 기재된 방법을 포함하는 당업계에 공지된 통상의 방법으로 측정할 수 있다. 결합 친화도 측정을 위한 구체적인 예시적 및 대표적 실시양태를 하기 기재한다.
"친화도 성숙" 항체는 항원에 대한 항체의 친화도를 개선하는 변경을 갖지 않는 모 항체에 비해 하나 이상의 HVR 내의 하나 이상의 변경을 갖는 항체를 지칭한다.
지정된 항체의 "생물학적 특징"을 갖는 항체는 그를 동일한 항원과 결합하는 다른 항체와 구별하는 항체의 하나 이상의 생물학적 특징을 보유하는 것이다.
항체의 "기능적 항원 결합 부위"는 표적 항원과 결합할 수 있는 것이다. 항원 결합 부위의 항원 결합 친화도는 항원 결합 부위가 유래된 모 항체만큼 강할 필요는 없지만, 항원에 결합하는 능력은 항원에 대한 항체 결합의 평가에 대해 공지된 다양한 방법 중 어느 하나를 이용하여 측정가능해야 한다. 또한, 본원에서의 다가 항체의 항원 결합 부위 각각의 항원 결합 친화도가 정량적으로 동일할 필요는 없다. 본원에서의 다량체 항체의 경우에, 기능적 항원 결합 부위의 수는 미국 특허 출원 공개 번호 20050186208의 실시예 2에 기재된 바와 같은 초원심분리 분석을 이용하여 평가할 수 있다. 이러한 분석 방법에 따라, 다량체 항체에 대한 표적 항원의 상이한 비를 조합하고, 기능적 결합 부위의 상이한 수를 추정하여 복합체의 평균 분자량을 계산한다. 이러한 이론적 값을 기능적 결합 부위의 수를 평가하기 위해 수득된 실제 실험 값과 비교한다.
"종-의존성 항체"는 제2 포유동물 종으로부터의 항원의 동족체에 대한 것보다, 제1 포유동물 종으로부터의 항원에 대한 결합 친화도가 더 강한 항체이다. 통상적으로, 종-의존성 항체는 인간 항원에 "특이적으로 결합" (즉, 결합 친화도 (Kd) 값이 약 1 x 10-7 M 이하, 바람직하게는 약 1 x 10-8 M 이하, 가장 바람직하게는 약 1 x 10-9 M 이하)하지만, 제2의 비-인간 포유동물 종으로부터의 상기 항원의 동족체에 대한 결합 친화도는 인간 항원에 대한 결합 친화도보다 적어도 약 50배 또는 적어도 약 500배 또는 적어도 약 1000배 더 약하다. 종-의존성 항체는 상기 정의된 바와 같은 다양한 유형의 항체의 어느 것일 수 있다. 일부 실시양태에서, 종-의존성 항체는 인간화 또는 인간 항체이다.
본원에 사용된 용어 "실질적으로 유사한" 또는 "실질적으로 동일한"은 당업자가 수치 값 (예를 들어, Kd 값)에 의해 측정된 생물학적 특성의 맥락 내에서 2개의 수치 값 사이의 차이를 생물학적 및/또는 통계적 유의성이 거의 또는 전혀 없는 것으로 간주하도록 2개의 수치 값 (예를 들어, 하나는 항체와 연관되고, 다른 하나는 참조/비교 항체와 연관됨) 사이에 충분히 높은 정도의 유사성을 지칭한다.
본원에 사용된 어구 "실질적으로 감소된" 또는 "실질적으로 상이한"은 당업자가 수치 값 (예를 들어, Kd 값)에 의해 측정된 생물학적 특성의 맥락 내에서 2개의 수치 값 사이의 차이를 통계적 유의성을 갖는 것으로 간주하도록 2개의 수치 값 (일반적으로 하나는 분자와 연관되고, 다른 하나는 참조/비교 분자와 연관됨) 사이의 충분히 높은 정도의 차이를 지칭한다.
"이펙터 기능"은 항체 이소형에 따라 달라지는, 항체의 Fc 영역에 기인하는 생물학적 활성을 지칭한다. 항체 이펙터 기능의 예는 C1q 결합 및 보체 의존성 세포독성 (CDC); Fc 수용체 결합; 항체-의존성 세포-매개 세포독성 (ADCC); 식세포작용; 세포 표면 수용체 (예를 들어, B 세포 수용체)의 하향 조절; 및 B 세포 활성화를 포함한다.
용어 "제약 제제"는 활성 성분(들)의 생물학적 활성이 효과적이도록 허용하는 형태이고, 제제가 투여될 대상체에게 독성인 추가의 성분을 함유하지 않는 제제를 지칭한다. "제약상 허용되는" 부형제 (비히클, 첨가제)는 활성 화합물의 유효 용량을 제공하기 위해 대상체에게 타당하게 투여될 수 있는 것이다.
"제약상 허용되는 담체"는 대상체에게 비독성인, 활성 성분 이외의 제약 제제 내의 성분을 지칭한다. 제약상 허용되는 담체는 완충제, 부형제, 안정화제 또는 보존제를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
"장애"는 본원에 기재된 물질/분자 또는 방법을 사용한 치료로부터 이익을 얻는 임의의 상태이다. 이는 만성 및 급성 장애 또는 질환 (포유동물이 해당 장애에 걸리기 쉬운 병리학적 상태 포함)을 포함한다. 본원에서 치료할 장애의 비제한적 예는 악성 및 양성 종양; 비-백혈병 및 림프성 악성종양; 뉴런, 신경교, 성상세포, 시상하부 및 다른 선상, 대식세포, 상피, 기질 및 포배강 장애; 및 염증성, 면역학적 및 다른 혈관신생-관련 장애를 포함한다.
용어 "세포 증식성 장애" 및 "증식성 장애"는 어느 정도의 비정상 세포 증식과 연관된 장애를 지칭한다. 한 실시양태에서, 세포 증식성 장애는 암이다.
본원에 사용된 "종양"은 모든 신생물성 세포 성장 및 증식 (악성이든 또는 양성이든), 및 모든 전암성 및 암성 세포 및 조직을 지칭한다. 용어 "암", "암성", "세포 증식성 장애", "증식성 장애" 및 "종양"은 본원에 지칭된 바와 같이 상호 배타적이지 않다.
용어 "암" 및 "암성"은 전형적으로 비조절된 세포 성장/증식을 특징으로 하는 포유동물의 생리학적 상태를 지칭하거나 기재한다. 암의 예는 암종, 림프종 (예를 들어, 호지킨 및 비-호지킨 림프종), 모세포종, 육종 및 백혈병을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 이러한 암의 보다 특정한 예는 편평세포암, 소세포 폐암, 비소세포 폐암, 폐의 선암종 및 폐의 편평세포 암종, 복막암, 간세포성암, 위장암, 췌장암, 신경교종, 자궁경부암, 난소암, 간암, 방광암, 간세포암, 유방암, 결장암, 결장직장암, 자궁내막 또는 자궁 암종, 타액선 암종, 신장암, 간암, 전립선암, 외음부암, 갑상선암, 간 암종, 백혈병 및 다른 림프증식성 장애, 및 다양한 유형의 두경부암을 포함한다. 일부 실시양태에서, 암은 삼중-음성 (ER-, PR-, HER2-) 암이다. 일부 실시양태에서, 암은 예를 들어 국부 재발성 질환이 치유 의도를 갖는 절제로 다룰 수 없는 경우에 국부 재발성 또는 전이성 질환을 갖는 유방의 임의의 조직학적으로 확인된 삼중-음성 (ER-, PR-, HER2-) 선암종을 포함하는, 삼중-음성 전이성 유방암이다.
"전이"는 암이 그의 원발성 부위로부터 신체 내 다른 부위로 확산되는 것을 의미한다. 암 세포는 원발성 종양으로부터 분리되어, 림프 및 혈관 내로 침투하고, 혈류를 통해 순환하여 신체 내의 다른 정상 조직의 원위 중심에서 성장 (전이)할 수 있다. 전이는 국부 또는 원위일 수 있다. 전이는 원발성 종양으로부터의 종양 세포 분리가 우발적으로 발생하고 혈류를 통해 이동하여 원위 부위에서 중단되는 순차적 과정이다. 이러한 새로운 부위에서 상기 세포는 혈액 공급을 확립시키고 성장하여 생명을 위협하는 종괴를 형성할 수 있다. 종양 세포 내에서의 자극성 및 억제성 분자 경로 둘 다가 이러한 거동을 조절하고, 종양 세포와 원위 부위의 숙주 세포 사이의 상호작용이 또한 중요하다.
본원에 사용된 "치료" (및 "치료하다" 또는 "치료하는"과 같은 그의 문법적 변형)는 치료되는 개체의 자연적 과정을 변경시키려는 임상적 개입을 지칭하고, 임상 병리상태의 예방을 위해 또는 그 과정 동안 수행될 수 있다. 바람직한 치료 효과는 질환의 발생 또는 재발 예방, 증상의 완화, 질환의 임의의 직접적 또는 간접적 병리학적 결과의 축소, 전이의 예방, 질환 질행 속도의 감소, 질환 상태의 개선 또는 완화, 및 완화 또는 개선된 예후를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, 항체는 질환의 발생을 지연시키거나 또는 질환의 진행을 늦추기 위해 사용된다.
작용제, 예를 들어 제약 제제의 "유효량"은 필요한 투여량에서 필요한 기간 동안 목적하는 치료 또는 예방 결과를 달성하기에 유효한 양을 지칭한다.
"치료 유효량"은 포유동물에서 질환 또는 장애를 치료 또는 예방하기 위한 치료제의 양을 지칭한다. 암의 경우에, 치료제의 치료 유효량은 암 세포의 수를 감소시킬 수 있고/거나; 원발성 종양 크기를 감소시킬 수 있고/거나; 말초 기관 내로의 암 세포 침윤을 억제할 수 있고/거나 (즉, 어느 정도까지 느리게 하고, 바람직하게는 정지시킴); 종양 전이를 억제할 수 있고/거나 (즉, 어느 정도까지 느리게 하고, 바람직하게는 정지시킴); 종양 성장을 어느 정도까지 억제할 수 있고/거나; 장애와 연관된 하나 이상의 증상을 어느 정도까지 완화할 수 있다. 약물은, 기존 암 세포의 성장을 방지하고/거나 이를 사멸시킬 수 있는 정도까지 세포증식억제성 및/또는 세포독성일 수 있다. 암 요법의 경우에, 생체내 효능은 예를 들어 생존 기간, 질환 진행까지의 시간 (TTP), 반응률 (RR), 반응 지속기간 및/또는 삶의 질을 평가하여 측정될 수 있다.
"개체" 또는 "대상체"는 포유동물이다. 포유동물은 가축 (예를 들어, 소, 양, 고양이, 개 및 말), 영장류 (예를 들어, 인간 및 비-인간 영장류, 예컨대 원숭이), 토끼, 및 설치류 (예를 들어, 마우스 및 래트)를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 특정 실시양태에서, 개체 또는 대상체는 인간이다.
용어 "항암 요법"은 암을 치료하는데 유용한 요법을 지칭한다. 항암 치료제의 예는, 예를 들어 화학요법제, 성장 억제제, 세포독성제, 방사선 요법에 사용되는 작용제, 항혈관신생제, 아폽토시스성 작용제, 항-튜불린 작용제, 및 암을 치료하기 위한 다른 작용제, 항-CD20 항체, 혈소판 유래 성장 인자 억제제 (예를 들어, 글리벡(Gleevec)™ (이마티닙 메실레이트)), COX-2 억제제 (예를 들어, 셀레콕시브), 인터페론, 시토카인, 하기 표적 PDGFR-베타, BlyS, APRIL, BCMA 수용체(들) 중 하나 이상에 결합하는 길항제 (예를 들어, 중화 항체), TRAIL/Apo2, 및 다른 생물활성제 및 유기 화학적 작용제 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 그의 조합이 또한 포함된다.
"면역접합체"는 세포독성제를 포함하나 이에 제한되지는 않는 하나 이상의 이종 분자(들)에 접합된 항체이다.
본원에 사용된 용어 "세포독성제"는 세포 기능의 억제 또는 저해 및/또는 세포 사멸 또는 파괴를 유발하는 물질을 지칭한다. 세포독성제는 방사성 동위원소 (예를 들어, At211, I131, I125, Y90, Re186, Re188, Sm153, Bi212, P32, Pb212, 및 Lu의 방사성 동위원소); 화학요법제 또는 약물 (예를 들어, 메토트렉세이트, 아드리아미신, 빈카 알칼로이드 (빈크리스틴, 빈블라스틴, 에토포시드), 독소루비신, 멜팔란, 미토마이신 C, 클로람부실, 다우노루비신 또는 다른 삽입제); 성장 억제제; 효소 및 그의 단편, 예컨대 핵산분해 효소; 항생제; 독소, 예컨대 박테리아, 진균, 식물 또는 동물 기원의 소분자 독소 또는 효소 활성 독소 (그의 단편 및/또는 변이체 포함); 및 하기 개시되는 다양한 항종양제 또는 항암제를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
"화학요법제"는 암의 치료에 유용한 화학적 화합물을 지칭한다. 화학요법제의 예는 알킬화제, 예컨대 티오테파 및 시클로스포스파미드 (시톡산(CYTOXAN)®); 알킬 술포네이트, 예컨대 부술판, 임프로술판 및 피포술판; 아지리딘, 예컨대 벤조도파, 카르보쿠온, 메트우레도파 및 우레도파; 에틸렌이민 및 메틸아멜라민 (알트레타민, 트리에틸렌멜라민, 트리에틸렌포스포라미드, 트리에틸렌티오포스포라미드 및 트리메틸로멜라민 포함); 아세토게닌 (특히 불라타신 및 불라타시논); 델타-9-테트라히드로칸나비놀 (드로나비놀, 마리놀(MARINOL)®); 베타-라파콘; 라파콜; 콜키신; 베툴린산; 캄프토테신 (합성 유사체 토포테칸 (하이캄틴(HYCAMTIN)®) 포함), CPT-11 (이리노테칸, 캄프토사르(CAMPTOSAR)®), 아세틸캄프토테신, 스코폴렉틴, 및 9-아미노캄프토테신); 브리오스타틴; 칼리스타틴; CC-1065 (그의 아도젤레신, 카르젤레신 및 비젤레신 합성 유사체 포함); 포도필로톡신; 포도필린산; 테니포시드; 크립토피신 (특히 크립토피신 1 및 크립토피신 8); 돌라스타틴; 듀오카르마이신 (합성 유사체, KW-2189 및 CB1-TM1 포함); 엘레우테로빈; 판크라티스타틴; 사르코딕티인; 스폰지스타틴; 질소 머스타드, 예컨대 클로람부실, 클로르나파진, 클로로포스파미드, 에스트라무스틴, 이포스파미드, 메클로레타민, 메클로레타민 옥시드 히드로클로라이드, 멜팔란, 노벰비킨, 페네스테린, 프레드니무스틴, 트로포스파미드, 우라실 머스타드; 니트로소우레아, 예컨대 카르무스틴, 클로로조토신, 포테무스틴, 로무스틴, 니무스틴 및 라니무스틴; 항생제, 예컨대 에네디인 항생제 (예를 들어, 칼리케아미신, 특히 칼리케아미신 감마1I 및 칼리케아미신 오메가I1 (예를 들어, 문헌 [Nicolaou et al., Angew. Chem Intl. Ed. Engl., 33: 183-186 (1994)] 참조); CDP323, 경구 알파-4 인테그린 억제제; 디네미신 (디네미신 A 포함); 에스페라미신; 뿐만 아니라 네오카르지노스타틴 발색단 및 관련 색소단백질 에네디인 항생제 발색단), 아클라시노마이신, 악티노마이신, 아우트라마이신, 아자세린, 블레오마이신, 칵티노마이신, 카라비신, 카르미노마이신, 카르지노필린, 크로모마이신, 닥티노마이신, 다우노루비신, 데토루비신, 6-디아조-5-옥소-L-노르류신, 독소루비신 (아드리아마이신(ADRIAMYCIN)®, 모르폴리노-독소루비신, 시아노모르폴리노-독소루비신, 2-피롤리노-독소루비신, 독소루비신 HCl 리포솜 주사 (독실(DOXIL)®), 리포솜 독소루비신 TLC D-99 (미오세트(MYOCET)®), PEG화 리포솜 독소루비신 (케릭스(CAELYX)®) 및 데옥시독소루비신 포함), 에피루비신, 에소루비신, 이다루비신, 마르셀로마이신, 미토마이신, 예컨대 미토마이신 C, 미코페놀산, 노갈라마이신, 올리보마이신, 페플로마이신, 포르피로마이신, 퓨로마이신, 쿠엘라마이신, 로도루비신, 스트렙토니그린, 스트렙토조신, 투베르시딘, 우베니멕스, 지노스타틴, 조루비신; 항대사물, 예컨대 메토트렉세이트, 겜시타빈 (겜자르(GEMZAR)®), 테가푸르 (유프토랄(UFTORAL)®), 카페시타빈 (젤로다(XELODA)®), 에포틸론, 및 5-플루오로우라실 (5-FU); 폴산 유사체, 예컨대 데노프테린, 메토트렉세이트, 프테로프테린, 트리메트렉세이트; 퓨린 유사체, 예컨대 플루다라빈, 6-메르캅토퓨린, 티아미프린, 티오구아닌; 피리미딘 유사체, 예컨대 안시타빈, 아자시티딘, 6-아자우리딘, 카르모푸르, 시타라빈, 디데옥시우리딘, 독시플루리딘, 에노시타빈, 플록수리딘; 안드로겐, 예컨대 칼루스테론, 드로모스타놀론 프로피오네이트, 에피티오스타놀, 메피티오스탄, 테스토락톤; 항부신제, 예컨대 아미노글루테티미드, 미토탄, 트릴로스탄; 폴산 보충제, 예컨대 프롤린산; 아세글라톤; 알도포스파미드 글리코시드; 아미노레불린산; 에닐우라실; 암사크린; 베스트라부실; 비산트렌; 에다트렉세이트; 데포파민; 데메콜신; 디아지쿠온; 엘포르니틴; 엘립티늄 아세테이트; 에포틸론; 에토글루시드; 갈륨 니트레이트; 히드록시우레아; 렌티난; 로니다이닌; 메이탄시노이드, 예컨대 메이탄신 및 안사미토신; 미토구아존; 미톡산트론; 모피단몰; 니트라에린; 펜토스타틴; 페나메트; 피라루비신; 로속산트론; 2-에틸히드라지드; 프로카르바진; PSK® 폴리사카라이드 복합체 (JHS 내츄럴 프로덕츠(JHS Natural Products, 오레곤주 유진)); 라족산; 리족신; 시조피란; 스피로게르마늄; 테누아존산; 트리아지쿠온; 2,2',2'-트리클로로트리에틸아민; 트리코테센 (특히 T-2 독소, 베라큐린 A, 로리딘 A 및 안구이딘); 우레탄; 빈데신 (엘디신(ELDISINE)®, 필데신(FILDESIN)®); 다카르바진; 만노무스틴; 미토브로니톨; 미토락톨; 피포브로만; 가시토신; 아라비노시드 ("Ara-C"); 티오테파; 탁소이드, 예를 들어, 파클리탁셀 (탁솔(TAXOL)®), 파클리탁셀의 알부민-처리된 나노입자 제제 (아브락산(ABRAXANE)™), 및 도세탁셀 (탁소테레(TAXOTERE)®); 클로란부실; 6-티오구아닌; 메르캅토퓨린; 메토트렉세이트; 백금 유사체, 예컨대 시스플라틴, 옥살리플라틴 (예를 들어, 엘록사틴(ELOXATIN)®) 및 카르보플라틴; 빈블라스틴 (벨반(VELBAN)®), 빈크리스틴 (온코빈(ONCOVIN)®), 빈데신 (엘디신®, 필데신®), 및 비노렐빈 (나벨빈(NAVELBINE)®)을 비롯한, 튜불린 중합이 미세관을 형성하는 것을 방지하는 빈카; 에토포시드 (VP-16); 이포스파미드; 미톡산트론; 류코보린; 노반트론; 에다트렉세이트; 다우노마이신; 아미노프테린; 이반드로네이트; 토포이소머라제 억제제 RFS 2000; 디플루오로메틸오르니틴 (DMFO); 레티노이드, 예컨대 레티노산 (벡사로텐 (탈그레틴(TARGRETIN)®) 포함); 비스포스포네이트, 예컨대 클로드로네이트 (예를 들어, 보네포스(BONEFOS)® 또는 오스탁(OSTAC)®), 에티드로네이트 (디드로칼(DIDROCAL)®), NE-58095, 졸레드론산/졸레드로네이트 (조메타(ZOMETA)®), 알렌드로네이트 (포사맥스(FOSAMAX)®), 파미드로네이트 (아레디아(AREDIA)®), 틸루드로네이트 (스켈리드(SKELID)®), 또는 리세드로네이트 (악토넬(ACTONEL)®); 트록사시타빈 (1,3-디옥솔란 뉴클레오시드 시토신 유사체); 안티센스 올리고뉴클레오티드, 특히 이상 세포 증식에 관여하는 신호전달 경로에서 유전자의 발현을 억제하는 것, 예를 들어 PKC-알파, Raf, H-Ras, 및 표피 성장 인자 수용체 (EGF-R); 백신, 예컨대 테라토프(THERATOPE)® 백신 및 유전자 요법 백신, 예를 들어 알로벡틴(ALLOVECTIN)® 백신, 류벡틴(LEUVECTIN)® 백신, 및 박시드(VAXID)® 백신; 토포이소머라제 1 억제제 (예를 들어, 루르토테칸(LURTOTECAN)®); rmRH (예를 들어, 아바렐릭스(ABARELIX)®); BAY439006 (소라페닙; 바이엘(Bayer)); SU-11248 (수니티닙, 수텐트®, 화이자(Pfizer)); 페리포신, COX-2 억제제 (예를 들어, 셀레콕시브 또는 에토리콕시브), 프로테오솜 억제제 (예를 들어, PS341); 보르테조밉 (벨케이드(VELCADE)®); CCI-779; 티피파르닙 (R11577); 오라페닙, ABT510; Bcl-2 억제제, 예컨대 오블리메르센 나트륨 (게나센스(GENASENSE)®); 픽산트론; EGFR 억제제 (하기 정의 참조); 티로신 키나제 억제제 (하기 정의 참조); 세린-트레오닌 키나제 억제제, 예컨대 라파마이신 (시롤리무스, 라파뮨(RAPAMUNE)®); 파르네실트랜스퍼라제 억제제, 예컨대 로나파르닙 (SCH 6636, 사라사르(SARASAR)™); 및 상기 중 임의의 것의 제약상 허용되는 염, 산 또는 유도체; 뿐만 아니라 상기 중 2종 이상의 조합물, 예컨대 CHOP (시클로포스파미드, 독소루비신, 빈크리스틴, 및 프레드니솔론의 조합 요법에 대한 약어) 및 FOLFOX (5-FU 및 류코보린과 조합된 옥살리플라틴 (엘록사틴™)을 이용한 치료 요법에 대한 약어)를 포함한다.
본원에 정의된 바와 같은 화학요법제는 암의 성장을 촉진할 수 있는 호르몬의 효과를 조절, 감소, 차단 또는 억제하는 작용을 하는 "항호르몬 작용제" 또는 "내분비 치료제"를 포함한다. 이들은 혼합된 효능제/길항제 프로파일을 갖는 항에스트로겐, 예를 들어 타목시펜 (놀바덱스(NOLVADEX)®), 4-히드록시타목시펜, 토레미펜 (파레스톤(FARESTON)®), 이독시펜, 드롤록시펜, 랄록시펜 (에비스타(EVISTA)®), 트리옥시펜, 케옥시펜, 및 선택적 에스트로겐 수용체 조절제 (SERM), 예컨대 SERM3; 효능제 특성을 갖지 않는 순수한 항에스트로겐, 예컨대 풀베스트란트 (파슬로덱스(FASLODEX)®) 및 EM800 (이러한 작용제는 에스트로겐 수용체 (ER) 이량체화를 차단하고/거나, DNA 결합을 억제하고/거나, ER 턴오버를 증가시키고/거나 ER 수준을 저해할 수 있음); 아로마타제 억제제, 예를 들어 스테로이드성 아로마타제 억제제, 예컨대 포르메스탄 및 엑세메스탄 (아로마신(AROMASIN)®), 및 비스테로이드성 아로마타제 억제제, 예컨대 아나스트라졸 (아리미덱스(ARIMIDEX)®), 레트로졸 (페마라(FEMARA)®) 및 아미노글루테티미드, 및 다른 아로마타제 억제제, 예를 들어 보로졸 (리비소르(RIVISOR)®), 메게스트롤 아세테이트 (메가세(MEGASE)®), 파드로졸 및 4(5)-이미다졸; 황체화 호르몬-방출 호르몬 효능제, 예를 들어 류프롤리드 (루프론(LUPRON)® 및 엘리가드(ELIGARD)®, 고세렐린, 부세렐린 및 트립테렐린; 성별 스테로이드, 예를 들어 프로게스틴, 예컨대 메게스트롤 아세테이트 및 메드록시프로게스테론 아세테이트, 에스트로겐, 예컨대 디에틸스틸베스트롤 및 프레마린, 및 안드로겐/레티노이드, 예컨대 플루옥시메스테론, 모든 트랜스레티온산 및 펜레티니드; 오나프리스톤; 항프로게스테론; 에스트로겐 수용체 하향 조절제 (ERD); 항안드로겐, 예컨대 플루타미드, 닐루타미드 및 비칼루타미드; 및 상기 중 임의의 것의 제약상 허용되는 염, 산 또는 유도체; 뿐만 아니라 상기 중 2종 이상의 조합물을 포함하나 이에 제한되지는 않는 호르몬 그 자체일 수 있다.
본원에 사용된 용어 "전구약물"은 모 약물에 비해 종양 세포에 덜 세포독성이고, 보다 활성의 모 형태로 효소에 의해 활성화되거나 전환될 수 있는, 제약 활성 물질의 전구체 또는 유도체 형태를 지칭한다. 예를 들어, 문헌 [Wilman, "Prodrugs in Cancer Chemotherapy" Biochemical Society Transactions, 14, pp. 375-382, 615th Meeting Belfast (1986) 및 Stella et al., "Prodrugs: A Chemical Approach to Targeted Drug Delivery," Directed Drug Delivery, Borchardt et al., (ed.), pp. 247-267, Humana Press (1985)]을 참조한다. 전구약물은, 보다 활성의 세포독성 유리 약물로 전환될 수 있는, 포스페이트-함유 전구약물, 티오포스페이트-함유 전구약물, 술페이트-함유 전구약물, 펩티드-함유 전구약물, D-아미노산-개질된 전구약물, 글리코실화 전구약물, β-락탐-함유 전구약물, 임의로 치환된 페녹시아세트아미드-함유 전구약물 또는 임의로 치환된 페닐아세트아미드-함유 전구약물, 5-플루오로시토신 및 다른 5-플루오로우리딘 전구약물을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 사용하기 위한 전구약물 형태로 유도체화될 수 있는 세포독성 약물의 예는 상기 기재된 화학요법제를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 경우에 "성장 억제제"는 세포 (예를 들어, 시험관내 또는 생체내에서 그의 성장이 HGF/c-met 활성화에 의존하는 세포)의 성장을 억제하는 화합물 또는 조성물을 지칭한다. 따라서, 성장 억제제는 S 기에서 HGF/c-met-의존성 세포의 백분율을 유의하게 감소시키는 것일 수 있다. 성장 억제제의 예는 세포 주기 진행을 (S기 이외의 다른 단계에서) 차단하는 작용제, 예컨대 G1 정지 및 M-기 정지를 유도하는 작용제를 포함한다. 전통적인 M-기 차단제는 빈카 (빈크리스틴 및 빈블라스틴), 탁산, 및 토포이소머라제 II 억제제, 예컨대 독소루비신, 에피루비신, 다우노루비신, 에토포시드 및 블레오마이신을 포함한다. G1을 정지시키는 작용제, 예를 들어 DNA 알킬화제, 예컨대 타목시펜, 프레드니손, 다카르바진, 메클로레타민, 시스플라틴, 메토트렉세이트, 5-플루오로우라실 및 ara-C는 또한 S-기 정지로까지 이어진다. 추가의 정보는 문헌 [The Molecular Basis of Cancer, Mendelsohn and Israel, eds., Chapter 1, entitled "Cell cycle regulation, oncogenes, and antineoplastic drugs" by Murakami et al. (WB Saunders: Philadelphia, 1995)] (특히, p. 13)에서 찾아볼 수 있다. 탁산 (파클리탁셀 및 도세탁셀)은 둘 다 주목으로부터 유래된 항암 약물이다. 유럽 주목으로부터 유래된 도세탁셀 (탁소테레®, 롱-프랑 로러(Rhone-Poulenc Rorer))은 파클리탁셀 (탁솔®, 브리스톨-마이어스 스큅(Bristol-Myers Squibb))의 반합성 유사체이다. 파클리탁셀 및 도세탁셀은 튜불린 이량체로부터의 미세관 어셈블리를 촉진하고, 탈중합을 방지함으로써 미세관을 안정화시켜서 세포에서의 유사분열 억제를 유발한다.
"방사선 요법"은 정상적으로 기능하거나 세포를 파괴하는 능력이 완전히 제한되도록 세포에 대한 충분한 손상을 유도하기 위해 지정된 감마선 또는 베타선을 사용하는 것을 의미한다. 투여량 및 치료의 지속기간을 결정하기 위한 당업계에 공지된 수많은 방법이 있음을 이해할 것이다. 전형적인 치료는 1회 투여로 제공되며, 전형적인 투여량은 1일에 10 내지 200 유닛 (Gray)의 범위이다.
용어 "공동으로"는 2종 이상의 치료제의 투여가 적어도 일부의 투여 시간이 중첩되는 경우를 지칭하도록 본원에 사용된다. 따라서, 공동 투여는 1종 이상의 작용제(들)의 투여를 1종 이상의 다른 작용제(들)의 투여를 중단한 후에 계속하는 경우의 투여 요법을 포함한다.
"감소시키거나 또는 억제하는"은 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 그 초과의 전반적 감소를 발생시키는 능력을 의미한다. 감소 또는 억제는 치료할 장애의 증상, 전이물의 존재 또는 크기, 또는 원발성 종양의 크기를 지칭할 수 있다.
용어 "포장 삽입물"은 적응증, 용법, 투여량, 투여, 조합 요법, 금기 및/또는 이러한 치료 제품의 사용에 대한 경고에 대한 정보를 함유하는, 치료 제품의 상업용 패키지에 통상적으로 포함되는 지침서를 지칭하도록 사용된다.
본원에 기재된 본 발명의 측면 및 실시양태는 측면 및 실시양태로 "로 이루어지는" 및/또는 "로 본질적으로 이루어지는" 것을 포함하는 것으로 이해된다.
본원에 사용된 단수 형태는 달리 나타내지 않는 한 복수 언급대상을 포함한다.
당업자에 의해 이해되는 바와 같이, 본원에서 "약" 값 또는 파라미터에 대한 언급은 그 값 또는 파라미터 자체에 대한 실시양태를 포함(하고 이를 기재)한다. 예를 들어, "약 X"를 언급하는 기재는 "X"의 기재를 포함한다.
II. 정제 방법 및 정제된 조성물
항-c-met 항체를 정제하는 방법 및 정제된 항-c-met 항체를 포함하는 조성물이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 이. 콜라이에서 생산된다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 오나르투주맙이다.
특히, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 28℃ 초과의 온도 및 약 pH 6 내지 약 pH 8의 pH에서 6시간 초과 동안 유지하는 것을 포함하는, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 정제하는 방법이 본원에 제공된다. 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 28℃ 초과의 온도 및 약 pH 6 내지 약 pH 8의 pH에서 6시간 초과 동안 유지하는 것은 본원에서 "응집 단계"로 지칭된다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물은 양이온성 중합체를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 양이온성 중합체는 PEI이다. 일부 실시양태에서, PEI 농도 (조성물 중)는 0.1% (v/v), 0.1% (v/v), 0.2% (v/v), 0.25% (v/v), 0.3% (v/v), 0.35% (v/v), 0.4% (v/v), 0.45% (v/v) 또는 0.5% (v/v)이다. 일부 실시양태에서, PEI 농도는 약 0.1%-0.4% (v/v), 0.2%-0.6% (v/v), 0.2%-0.4% (v/v)이다. 일부 실시양태에서, PEI 농도는 약 0.2% (v/v)이다. 일부 실시양태에서, PEI 농도는 약 0.4% (v/v)이다. 예를 들어, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 28℃ 초과의 온도 및 약 pH 6 내지 약 pH 8의 pH에서 6시간 초과 동안 유지하는 것을 포함하는, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 및 PEI를 정제하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 방법은 a) 원심분리 및/또는 b) 희석 및 원심분리 및/또는 c) 희석, 원심분리 및 여과를 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 응집 단계에서 항-c-met 항체를 포함하는 조성물은 약 28℃-32℃, 28℃-31℃, 28℃-30℃, 29℃-32℃, 29℃-31℃, 28℃-34℃, 28℃-35℃, 30℃-34℃, 30℃-35℃의 온도에서 유지된다. 일부 실시양태에서, 응집 단계에서 항-c-met 항체를 포함하는 조성물은 약 28℃, 29℃, 30℃, 31℃, 32℃, 33℃, 34℃, 35℃ 또는 36℃의 온도에서 유지된다.
일부 실시양태에서, 응집 단계에서 항-c-met 항체를 포함하는 조성물은 약 6-7, 6-7.5, 6.5-8, 6.5-7.5 또는 6.5-7의 pH이다. 일부 실시양태에서, 응집 단계에서 항-c-met 항체를 포함하는 조성물은 약 6, 6.2, 6.4, 6.5, 6.6, 6.8, 7, 7.2, 7.4, 7.5, 7.6, 7.8 또는 8의 pH이다.
일부 실시양태에서, 응집 단계에서 항-c-met 항체를 포함하는 조성물은 상기 기재된 온도 및/또는 상기 기재된 pH에서 약 6.5, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20시간 초과 동안 유지된다. 일부 실시양태에서, 응집 단계에서 항-c-met 항체를 포함하는 조성물은 상기 기재된 온도 및/또는 상기 기재된 pH에서 약 6.5, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20시간 동안 유지된다. 일부 실시양태에서, 응집 단계에서 항-c-met 항체를 포함하는 조성물은 상기 기재된 온도 및/또는 상기 기재된 pH에서 약 6-48, 6-24, 6-20, 6-12, 6-15, 6-16, 6-18, 6-10 또는 6-8시간 동안 유지된다. 일부 실시양태에서, 응집 단계에서 항-c-met 항체를 포함하는 조성물은 상기 기재된 온도 및/또는 상기 기재된 pH에서 약 6.5, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20시간 동안 유지된다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물은 양이온성 중합체를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 양이온성 중합체는 PEI이다. 일부 실시양태에서, PEI 농도 (조성물 중)는 0.1% (v/v), 0.1% (v/v), 0.2% (v/v), 0.25% (v/v), 0.3% (v/v), 0.35% (v/v), 0.4% (v/v), 0.45% (v/v) 또는 0.5% (v/v)이다. 일부 실시양태에서, PEI 농도는 약 0.1%-0.4% (v/v), 0.2%-0.6% (v/v), 0.2%-0.4% (v/v)이다. 일부 실시양태에서, PEI 농도는 약 0.2% (v/v)이다. 일부 실시양태에서, PEI 농도는 약 0.4% (v/v)이다.
일부 실시양태에서, 응집 단계에서 항-c-met 항체를 포함하는 조성물은 약 28℃의 온도 및 약 6의 pH에서 약 12, 14, 16, 18, 20 또는 22시간 동안 유지된다. 일부 실시양태에서, 응집 단계에서 항-c-met 항체를 포함하는 조성물은 약 30℃의 온도 및 약 6의 pH에서 약 12, 14, 16, 18, 20 또는 22시간 동안 유지된다. 일부 실시양태에서, 응집 단계에서 항-c-met 항체를 포함하는 조성물은 약 34℃의 온도 및 약 6의 pH에서 약 12, 14, 16, 18, 20 또는 22시간 동안 유지된다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물은 양이온성 중합체를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 양이온성 중합체는 PEI이다. 일부 실시양태에서, PEI 농도 (조성물 중)는 0.1% (v/v), 0.1% (v/v), 0.2% (v/v), 0.25% (v/v), 0.3% (v/v), 0.35% (v/v), 0.4% (v/v), 0.45% (v/v) 또는 0.5% (v/v)이다. 일부 실시양태에서, PEI 농도는 약 0.1%-0.4% (v/v), 0.2%-0.6% (v/v), 0.2%-0.4% (v/v)이다. 일부 실시양태에서, PEI 농도는 약 0.2% (v/v)이다. 일부 실시양태에서, PEI 농도는 약 0.4% (v/v)이다. 일부 실시양태에서, 양이온성 중합체는 약 0.6% (v/v)의 농도의 PEI이다.
일부 실시양태에서, 응집 단계에서 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 및 양이온성 중합체는 약 28℃의 온도 및 약 6의 pH에서 약 12, 14, 16, 18, 20 또는 22시간 동안 유지된다. 일부 실시양태에서, 응집 단계에서 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 및 양이온성 중합체는 약 30℃의 온도 및 약 6의 pH에서 약 12, 14, 16, 18, 20 또는 22시간 동안 유지된다. 일부 실시양태에서, 응집 단계에서 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 및 양이온성 중합체는 약 34℃의 온도 및 약 6의 pH에서 약 12, 14, 16, 18, 20 또는 22시간 동안 유지된다. 일부 실시양태에서, 양이온성 중합체는 약 0.2% (v/v)의 농도의 PEI이다. 일부 실시양태에서, 양이온성 중합체는 약 0.4% (v/v)의 농도의 PEI이다. 일부 실시양태에서, 양이온성 중합체는 약 0.6% (v/v)의 농도의 PEI이다.
일부 실시양태에서, 응집 단계에서 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 및 양이온성 중합체는 약 28℃의 온도 및 약 6의 pH에서 약 16 또는 20시간 또는 그 초과 동안 유지된다. 일부 실시양태에서, 응집 단계에서 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 및 양이온성 중합체는 약 30℃의 온도 및 약 6의 pH에서 약 16 또는 20시간 또는 그 초과 동안 유지된다. 일부 실시양태에서, 응집 단계에서 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 및 양이온성 중합체는 약 34℃의 온도 및 약 6의 pH에서 약 16 또는 20시간 또는 그 초과 동안 유지된다. 일부 실시양태에서, 양이온성 중합체는 약 0.2% (v/v)의 농도의 PEI이다. 일부 실시양태에서, 양이온성 중합체는 약 0.4% (v/v)의 농도의 PEI이다. 일부 실시양태에서, 양이온성 중합체는 약 0.6% (v/v)의 농도의 PEI이다.
항-c-met 항체의 정제에서 응집 단계의 사용은 하기 제공된 하나 이상의 개선을 발생시킬 수 있다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 28℃ 초과의 온도 및 약 pH 6 내지 약 pH 8의 pH에서 6시간 초과 동안 유지하는 것은 (예를 들어, 응집 단계의 부재 항의 정제 방법에 비해) 응집 유효성을 개선한다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 28℃ 초과의 온도 및 약 pH 6 내지 약 pH 8의 pH에서 6시간 초과 동안 유지하는 것은 (예를 들어, 응집 단계의 부재 항의 정제 방법에 비해) 보다 우수한 원심분리로 이어진다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 28℃ 초과의 온도 및 약 pH 6 내지 약 pH 8의 pH에서 6시간 초과 동안 유지하는 것은 (예를 들어, 응집 단계의 부재 항의 정제 방법에 비해) 보다 우수한 센트레이트 및/또는 단백질 A 풀 안정성으로 이어진다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 28℃ 초과의 온도 및 약 pH 6 내지 약 pH 8의 pH에서 6시간 초과 동안 유지하는 것은 개선된 안정성을 발생시켜 센트레이트 및/또는 단백질 A 풀이 15℃-25℃ (예를 들어, 약 15℃, 20℃ 또는 25℃)에서 유지될 수 있도록 한다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 28℃ 초과의 온도 및 약 pH 6 내지 약 pH 8의 pH에서 6시간 초과 동안 유지하는 것은 (예를 들어, 응집 단계의 부재 항의 정제 방법에 비해) 센트레이트를 위한 여과, 단백질 A 로드 및/또는 이후의 크로마토그래피 단계를 개선한다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 28℃ 초과의 온도 및 약 pH 6 내지 약 pH 8의 pH에서 6시간 초과 동안 유지하는 것은 (예를 들어, 응집 단계의 부재 항의 정제 방법에 비해) DNA 및 HCP, 예컨대 ECP를 포함하나 이에 제한되지는 않는 불순물을 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 28℃ 초과의 온도 및 약 pH 6 내지 약 pH 8의 pH에서 6시간 초과 동안 유지하는 것은 (예를 들어, 응집 단계의 부재 항의 정제 방법에 비해) 고체 함량 퍼센트를 감소시키기 위한 추가의 희석(들)을 허용한다. 일부 실시양태에서, 추가의 희석(들)은 (예를 들어, 응집 단계의 부재 하의 동일한 방법에 비해) 원심분리 수율을 개선한다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 28℃ 초과의 온도 및 약 pH 6 내지 약 pH 8의 pH에서 6시간 초과 동안 유지하는 것은 (예를 들어, 응집 단계의 부재 하의 동일한 방법에 비해) 원심분리 유량을 증가시킨다. 일부 실시양태에서, 원심분리 유량의 증가는 (예를 들어, 응집 단계의 부재 하의 동일한 방법에 비해) 보다 짧은 공정 시간 및 실질적으로 동등한 분리를 허용한다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 28℃ 초과의 온도 및 약 pH 6 내지 약 pH 8의 pH에서 6시간 초과 동안 유지하는 것은 (예를 들어, 응집 단계의 부재 항의 정제 방법에 비해) 응집 유효성을 개선한다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물은 양이온성 중합체를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 양이온성 중합체는 PEI이다. 일부 실시양태에서, PEI 농도 (조성물 중)는 0.1% (v/v), 0.1% (v/v), 0.2% (v/v), 0.25% (v/v), 0.3% (v/v), 0.35% (v/v), 0.4% (v/v), 0.45% (v/v) 또는 0.5% (v/v)이다. 일부 실시양태에서, PEI 농도는 약 0.1%-0.4% (v/v), 0.2%-0.6% (v/v), 0.2%-0.4% (v/v)이다. 일부 실시양태에서, PEI 농도는 약 0.2% (v/v)이다. 일부 실시양태에서, PEI 농도는 약 0.4% (v/v)이다.
일부 실시양태에서, 항-c-met 항체의 정제에서 응집 단계의 이용은 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 30℃ 이상의 온도 및 약 pH 6의 pH에서 6시간 초과 동안, 예를 들어 약 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22 또는 24시간 동안 유지하였을 때 임의의 하나 이상의 개선을 발생시킬 수 있다. 일부 실시양태에서, 조성물은 30℃ 이상의 온도 및 약 pH 6의 pH에서 약 16시간 이상 동안 유지된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 30℃ 이상의 온도 및 약 pH 6의 pH에서 약 10시간 이상 동안 유지된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 30℃ 이상의 온도 및 약 pH 6의 pH에서 약 12시간 이상 동안 유지된다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물은 양이온성 중합체를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 양이온성 중합체는 PEI이다. 일부 실시양태에서, PEI 농도 (조성물 중)는 0.1% (v/v), 0.1% (v/v), 0.2% (v/v), 0.25% (v/v), 0.3% (v/v), 0.35% (v/v), 0.4% (v/v), 0.45% (v/v) 또는 0.5% (v/v)이다. 일부 실시양태에서, PEI 농도는 약 0.1%-0.4% (v/v), 0.2%-0.6% (v./v), 0.2%-0.4% (v/v)이다. 일부 실시양태에서, PEI 농도는 약 0.2% (v/v)이다. 일부 실시양태에서, PEI 농도는 약 0.4% (v/v)이다.
일부 실시양태에서, 방법은 원심분리를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 친화성 크로마토그래피 (예를 들어, 단백질 A 친화성 크로마토그래피), 예컨대 하기 기재된 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 하나 이상의 이온-교환 크로마토그래피 단계, 예컨대 하기 기재된 임의의 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 한외여과 및/또는 정용여과를 추가로 포함한다. 항-c-met 항체를 정제하는 방법의 단계는 임의의 순서로 완료될 수 있다. 일부 실시양태에서, 방법은 a) 응집 단계 및 원심분리 (예를 들어, 6000 rpm, 20 lpm, Q/σ=6x10-3 L/hr/m2), 이어서 b) 친화성 크로마토그래피 (예를 들어, 단백질 A 친화성 크로마토그래피)를 포함한다.
일부 실시양태에서, 방법은 여과 (예를 들어, 원심분리 후에)를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 여과는 심층 여과이다.
일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물은 세포 배양물의 균질환에 의해 생성된다. 일부 실시양태에서, 세포 배양물은 이. 콜라이 세포 배양물이다. 일부 실시양태에서, 세포 배양물은 균질화되며, 이에 의해 생성된 항-c-met 항체를 포함하는 조성물은 약 8-20 퍼센트 고체를 포함한다.
또한, 친화성 크로마토그래피 (예를 들어, 단백질 A 친화성 크로마토그래피)를 이용하여 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 정제하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 방법은 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 단백질 A 수지 상에 로딩하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 단백질 A 수지 상에 로딩하는 것 및 항-c-met 항체를 용리하는 것을 포함한다.
단백질 A 수지의 예는 맵셀렉트™, 맵셀렉트 슈어™, 프로셉(Prosep) vA, 프로셉 울트라-플러스(Ultra-Plus), 및/또는 포로스 맵캡처(POROS MabCapture) A를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, 단백질 A 수지는 아가로스 매트릭스를 포함한다. 일부 실시양태에서, 아가로스 매트릭스를 포함하는 단백질 A 수지는 맵셀렉트 슈어™ 및 맵셀렉트™이다. 일부 실시양태에서, 단백질 A 수지는 맵셀렉트 슈어™ 수지 (지이 헬스케어(GE Healthcare) (뉴저지주 피스카타웨이); 아가로스 매트릭스에 결합된 알칼리-허용성 단백질 A-유래 리간드를 포함하는 수지)이다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 방법은 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 맵셀렉트 슈어™ 수지 상에 로딩하는 것 및 항-c-met 항체를 용리하는 것을 포함한다.
일부 실시양태에서, 단백질 A 친화성 크로마토그래피를 위한 유량은 약 5-40 CV/시간, 15-40 CV/시간, 20-40 CV/시간 또는 25-40 CV/시간이다.
단백질 A 수지는 평형화 완충제로 평형화될 수 있고, 이어서 다양한 불순물 (예를 들어, 수확된 세포 단백질 (예를 들어, ECP))을 포함하는 정제되지 않은 및/또는 부분적으로 정제된 항-c-met 항체는 평형화된 수지 상에 로딩될 수 있다. 항-c-met 항체가 수지를 통과하면, 항-c-met 항체 및 다양한 불순물이 고정화된 단백질 A에 흡착된다. 세척 완충제를 사용하여 일부 불순물, 예컨대 숙주 세포 불순물을 제거할 수 있으나, 항-c-met 항체는 제거하지 않는다. 항-c-met 항체는 용리 완충제로 수지로부터 용리된다.
단백질 A 친화성 크로마토그래피를 위한 평형화 완충제는 트리스 및 염을 포함할 수 있다. 유용한 염의 예는 염화나트륨, 황산나트륨, 황산마그네슘 및/또는 염화칼륨을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, 염은 염화칼륨이다. 일부 실시양태에서, 염은 염화나트륨이다. 일부 실시양태에서, 평형화 완충제에서 트리스의 농도는 약 0.01 M 내지 약 0.1 M이다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 트리스의 농도는 약 0.01 M, 0.025 M, 0.05 M, 0.075 M 또는 0.1 M이다. 일부 실시양태에서, 염의 농도는 약 0.01 M 내지 약 0.1 M이다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 염의 농도는 약 0.01 M, 0.025 M, 0.05 M, 0.075 M 또는 0.1 M이다. 일부 실시양태에서, 평형화 완충제의 pH는 약 7.1, 7.3, 7.5, 7.7 또는 7.9이다.
단백질 A 친화성 크로마토그래피를 위한 세척 완충제는 완충제를 포함할 수 있다. 유용한 완충제의 예는 아르기닌 완충제, 아세테이트 완충제, 시트레이트 완충제 및/또는 포스페이트 완충제를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, 완충제는 포스페이트 완충제이다. 일부 실시양태에서, 포스페이트 완충제는 인산칼륨이다. 일부 실시양태에서, 포스페이트 완충제는 인산나트륨이다. 일부 실시양태에서, 포스페이트 완충제의 농도는 약 0.1 M 내지 약 1.0 M이다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 포스페이트 완충제의 농도는 약 0.2 M, 0.4 M, 0.6 M, 0.8 M 또는 0.1 M이다. 일부 실시양태에서, 세척 완충제의 pH는 약 7.0, 7.25, 7.5, 7.75 또는 8.0이다.
단백질 A 친화성 크로마토그래피를 위한 용리 완충제는 완충제를 포함할 수 있다. 유용한 완충제의 예는 아르기닌 완충제, 아세테이트 완충제, 시트레이트 완충제 및/또는 포스페이트 완충제를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, 완충제는 포스페이트 완충제이다. 일부 실시양태에서, 포스페이트 완충제는 인산칼륨이다. 일부 실시양태에서, 포스페이트 완충제는 인산나트륨이다. 일부 실시양태에서, 포스페이트 완충제는 글리신 포스페이트이다. 일부 실시양태에서, 포스페이트 완충제의 농도는 약 0.01 M 내지 약 0.1 M이다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 포스페이트 완충제의 농도는 약 0.01 M, 0.025 M, 0.05 M, 0.075 M 또는 0.1 M이다. 일부 실시양태에서, 용리 완충제의 pH는 약 3.1, 3.3, 3.5 또는 3.7이다. 일부 실시양태에서, 용리 완충제의 전도도는 약 0.9 mS/cm 내지 약 1.1 mS/cm이다. 일부 실시양태에서, 용리 완충제의 전도도는 약 0.9 mS/cm, 1.0 mS/cm 또는 1.1 mS/cm이다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 방법은 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 단백질 A 친화성 수지 (예를 들어, 맵셀렉트 슈어™ 수지) 상에 로딩하는 것 및 항-c-met 항체를 용리 완충제로 용리하는 것을 포함하며, 여기서 용리 완충제는 약 0.075 M의 농도 및 약 0.9 mS/cm 내지 약 1.1 mS/cm의 전도도의 글리신 포스페이트를 포함한다. 맵셀렉트 슈어™ 수지는 알칼리-허용성 재조합 단백질 A 리간드에 에폭시 활성화를 통해 커플링된 고도로 가교된 아가로스 매트릭스이다.
일부 실시양태에서, 방법은 응집 단계, 예컨대 상기 기재된 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 원심분리를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 하나 이상의 이온-교환 크로마토그래피 단계, 예컨대 본원에 기재된 임의의 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 한외여과 및/또는 정용여과를 추가로 포함한다. 항-c-met 항체를 정제하는 방법의 단계는 임의의 순서로 완료될 수 있다. 일부 실시양태에서, 방법은 a) 응집 단계 및 원심분리, 이어서 b) 단백질 A 친화성 크로마토그래피 (예를 들어, 맵셀렉트 슈어™ 수지), 이어서 c) 하나 이상의 이온-교환 크로마토그래피를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 이. 콜라이에서 생산된다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 오나르투주맙이다.
일부 실시양태에서, 방법은 a) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 28℃ 초과의 온도 및 약 pH 6 내지 약 pH 8의 pH에서 6시간 초과 동안 유지하는 것, b) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 원심분리하는 것, c) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 단백질 A 친화성 수지 (예를 들어, 맵셀렉트 슈어™ 수지) 상에 로딩하는 것, 및 d) 항-c-met 항체를 단백질 A 친화성 수지로부터 용리하는 것을 포함하며, 여기서 HCP (예를 들어, 평균 HCP)는 1,800 ng/mg 미만으로 감소한다. 일부 실시양태에서, HCP (예를 들어, 평균 HCP)는 약 1,700 ng/mg, 1,600 ng/mg, 1,500 ng/mg, 1,400 ng/mg, 1,300 ng/mg, 1,200 ng/mg, 1,100 ng/mg 또는 1,000 ng/mg 미만으로 감소한다. 일부 실시양태에서, HCP (예를 들어, 평균 HCP)는 약 800 ng/mg 내지 약 1,200 ng/mg 또는 약 900 ng/mg 내지 약 1,100 ng/mg으로 감소한다. 일부 실시양태에서, 방법은 a) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 28℃ 초과의 온도 및 약 pH 6 내지 약 pH 8의 pH에서 6시간 초과 동안 유지하는 것, b) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 원심분리하는 것, c) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 맵셀렉트 슈어™ 수지 상에 로딩하는 것, 및 d) 항-c-met 항체를 단백질 A 친화성 수지로부터 용리하는 것을 포함하며, 여기서 HCP (예를 들어, 평균 HCP)는 응집 단계의 부재 하의 동일한 정제 방법 및/또는 응집 단계 및 단백질 A 친화성 크로마토그래피 수지로서의 프로셉 vA의 부재 하의 동일한 정제 방법에 비해 약 40%, 35%, 30%, 25% 또는 20% 초과만큼 감소한다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 이. 콜라이에서 생산된다. 일부 실시양태에서, HCP 및/또는 평균 HCP는 ECP 및/또는 평균 ECP이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 오나르투주맙이다.
일부 실시양태에서, 방법은 a) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 28℃ 초과의 온도 및 약 pH 6 내지 약 pH 8의 pH에서 6시간 초과 동안 유지하는 것, b) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 원심분리하는 것, c) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 단백질 A 친화성 수지 (예를 들어, 맵셀렉트 슈어™ 수지) 상에 로딩하는 것, 및 d) 항-c-met 항체를 단백질 A 친화성 수지로부터 용리하는 것을 포함하며, 여기서 단백질 A 친화성 크로마토그래피 후의 PEI는 약 50 μg/mL, 45 μg/mL, 40 μg/mL, 35 μg/mL 또는 30 μg/mL 미만으로 감소한다. 일부 실시양태에서, 단백질 A 친화성 크로마토그래피 후의 PEI는 검출불가능하다. 일부 실시양태에서, 단백질 A 친화성 수지는 아가로스 매트릭스이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 이. 콜라이에서 생산된다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 오나르투주맙이다.
또한 하나 이상의 이온 교환 크로마토그래피 단계를 포함하는 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 정제하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 이온 교환 크로마토그래피는 음이온 교환 (AE) 크로마토그래피이다. 일부 실시양태에서, 이온 교환 크로마토그래피는 양이온 교환 (CE) 크로마토그래피이다.
예를 들어, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 약한 AE 수지 상에 로딩하는 것 및 통과액 중 항-c-met 항체를 회수하는 것을 포함하는, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 정제하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 약한 AE 수지는 통과 모드로 구동된다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 이. 콜라이에서 생산된다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 오나르투주맙이다.
약한 AE 수지는 일반적으로 3급 또는 2급 아민 관능기, 예컨대 DEAE (디에틸아미노에틸)를 함유한다. 약한 AE 수지의 예는 당업계에 공지되어 있고, DEAE 세파로스 패스트 플로우, 캅토 DEAE, 포로스 D, 토요피얼(Toyopearl) DEAE 650C, 토요피얼 DEAE 650M, 토요피얼 DEAE 650S, TSKgel DEAE 5PW 30 및/또는 TSKgel DEAE 5PW 20을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, 약한 AE 수지는 캅토 DEAE (화학적으로 변형된 고-유동 아가로스 매트릭스에 부탁된 약한 디에틸아미노에틸 음이온 교환체)이다. 일부 실시양태에서, 약한 AE 수지는 DEAE 세파로스 패스트 플로우이다.
일부 실시양태에서, 약한 AE 크로마토그래피를 위한 유량은 약 100 cm/시간, 125 cm/시간, 150 cm/시간, 175 cm/시간, 250 cm/시간, 500 cm/시간, 750 cm/시간, 1000 cm/시간, 1250 cm/시간 또는 1400 cm/시간이다.
약한 AE 수지는 평형화 완충제로 평형화될 수 있고, 이어서 다양한 불순물 (예를 들어, 수확된 세포 단백질 (예를 들어, ECP))을 포함하는 정제되지 않은 및/또는 부분적으로 정제된 항-c-met 항체는 평형화된 수지 상에 로딩될 수 있다. 항-c-met 항체가 수지를 통과하면, 불순물은 약한 AE 수지에 흡착되는 반면 항-c-met 항체는 통과액에 존재한다.
약한 AE 크로마토그래피를 위한 평형화 완충제는 트리스 완충제, 글리신 완충제, CAPSO, CAPS, CHES, TAPS 및/또는 포스페이트 완충제를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, 약한 AE 크로마토그래피를 위한 평형화 완충제는 트리스 및 염을 포함한다. 평형화 완충제에 유용한 염의 예는 염화나트륨, 황산나트륨, 황산마그네슘 및/또는 염화칼륨을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, 염은 염화칼륨이다. 일부 실시양태에서, 염은 염화나트륨이다. 일부 실시양태에서, 약한 AE 크로마토그래피를 위한 평형화 완충제는 글리신, 포스페이트 및 트리스이다. 일부 실시양태에서, 평형화 완충제에서 트리스의 농도는 약 0.01 M 내지 약 0.15 M 또는 약 0.01 M 내지 약 0.1M이다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 트리스의 농도는 약 0.01 M, 0.025 M, 0.05 M, 0.075 M 또는 0.1M이다. 일부 실시양태에서, 염의 농도는 약 0.001 M 내지 0.01 M이다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 염의 농도는 약 0.001 M, 0.0025 M, 0.005 M, 0.0075 M 또는 0.01 M이다. 일부 실시양태에서, 글리신의 농도는 약 25-100 mM이다. 일부 실시양태에서, 인산의 농도는 약 2.5 mM, 5.0 mM, 7.5 mM 또는 10.0 mM이다. 일부 실시양태에서, 인산의 농도는 약 2.5-10.0 mM이다. 일부 실시양태에서, 글리신의 농도는 약 25 mM, 50 mM, 75 mM 또는 100 mM이다. 일부 실시양태에서, 평형화 완충제의 pH는 관심 폴리펩티드 (예를 들어, 항-c-met 항체)의 pI보다 높다. 일부 실시양태에서, 평형화 완충제의 pH는 약 8.7 내지 약 9.1이다. 일부 실시양태에서, 평형화 완충제의 pH는 약 8.7, 8.8, 8.9 또는 9.0이다. 일부 실시양태에서, 관심 폴리펩티드 (예를 들어, 항-c-met 항체)의 pI보다 높은 pH는 관심 폴리펩티드 상에 순 음전하를 발생시킨다. 일부 실시양태에서, 관심 폴리펩티드 (예를 들어, 항-c-met 항체) 상의 순 음전하는 관심 폴리펩티드 및 약한 음이온 수지 사이에 인력을 발생시킨다. 일부 실시양태에서, 관심 폴리펩티드 (예를 들어, 항-c-met 항체)는 약 8.2 내지 8.4 (예를 들어, 약 8.2, 약 8.3 및/또는 약 8.4)의 pI를 갖는다.
일부 실시양태에서, 방법은 상기 기재된 바와 같은 응집 단계를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 원심분리를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 상기 기재된 바와 같은 단백질 A 친화성 크로마토그래피를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 하나 이상의 추가의 이온-교환 크로마토그래피 단계, 예컨대 본원에 기재된 임의의 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 한외여과 및/또는 정용여과를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 a) 응집 단계, b) 원심분리 단계, 이어서 c) 친화성 크로마토그래피 (예를 들어, 단백질 A 친화성 크로마토그래피), 이어서 d) 약한 음이온 교환 크로마토그래피를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, a) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 28℃ 초과의 온도 및 약 pH 6 내지 약 pH 8의 pH에서 6시간 초과 동안 유지하는 것, b) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 원심분리하는 것, c) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 단백질 A 친화성 수지 (예를 들어, 맵셀렉트 슈어™ 수지) 상에 로딩하는 것, 및 d) 항-c-met 항체를 단백질 A 친화성 수지로부터 용리하는 것, d) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 약한 AE 수지 (예를 들어, DEAE 세파로스 패스트 플로우 또는 캅토 DEAE) 상에 로딩하는 것 및 e) 통과액 중 항-c-met 항체를 약한 AE 수지로부터 회수하는 것을 포함하는, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 정제하는 방법이 본원에 제공된다. 항-c-met 항체를 정제하는 방법의 단계는 임의의 순서로 완료될 수 있다. 일부 실시양태에서, 단계는 순차적으로 수행된다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 이. 콜라이에서 생산된다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 오나르투주맙이다.
일부 실시양태에서, 방법은 a) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 28℃ 초과의 온도 및 약 pH 6 내지 약 pH 8의 pH에서 6시간 초과 동안 유지하는 것, b) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 원심분리하는 것, c) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 단백질 A 친화성 수지 (예를 들어, 맵셀렉트 슈어™ 수지) 상에 로딩하는 것, d) 항-c-met 항체를 단백질 A 친화성 수지로부터 용리하는 것, e) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 약한 AE 수지 (예를 들어, DEAE 세파로스 패스트 플로우 또는 캅토 DEAE) 상에 로딩하는 것 및 f) 통과액 중 항-c-met 항체를 약한 AE 수지로부터 회수하는 것을 포함하며, 여기서 HCP (예를 들어, 평균 HCP)는 약 200 ng/mg 미만으로 감소한다. 일부 실시양태에서, HCP (예를 들어, 평균 HCP)는 약 300 ng/mg, 275 ng/mg, 250 ng/mg, 225 ng/mg, 200 ng/mg, 190 ng/mg, 180 ng/mg 또는 170 ng/mg, 또는 그 미만으로 감소한다. 일부 실시양태에서, HCP (예를 들어, 평균 HCP)는 약 150 ng/mg 내지 약 190 ng/mg 또는 약 160 ng/mg 내지 약 180 ng/mg으로 감소한다. 일부 실시양태에서, 방법은 a) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 28℃ 초과의 온도 및 약 pH 6 내지 약 pH 8의 pH에서 6시간 초과 동안 유지하는 것, b) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 원심분리하는 것, c) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 단백질 A 친화성 수지 (예를 들어, 맵셀렉트 슈어™ 수지) 상에 로딩하는 것, d) 항-c-met 항체를 단백질 A 친화성 수지로부터 용리하는 것, e) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 약한 AE 수지 (예를 들어, DEAE 세파로스 패스트 플로우 또는 캅토 DEAE) 상에 로딩하는 것 및 f) 통과액 중 항-c-met 항체를 약한 AE 수지로부터 회수하는 것을 포함하며, 여기서 HCP (예를 들어, 평균 HCP)는 응집 단계, 단백질 A 친화성 크로마토그래피 수지로서의 프로셉 vA 및/또는 약한 CE 수지 (예를 들어, CM 세파로스)의 부재 하의 동일한 방법에 비해 약 75%, 70%, 65%, 60% 또는 55% 초과만큼 감소한다. 일부 실시양태에서, 단계는 순차적으로 수행된다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 이. 콜라이에서 생산된다. 일부 실시양태에서, HCP 및/또는 평균 HCP는 ECP 및/또는 평균 ECP이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 오나르투주맙이다.
일부 실시양태에서, 방법은 a) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 28℃ 초과의 온도 및 약 pH 6 내지 약 pH 8의 pH에서 6시간 초과 동안 유지하는 것, b) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 원심분리하는 것, c) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 단백질 A 친화성 수지 (예를 들어, 맵셀렉트 슈어™ 수지) 상에 로딩하는 것 d) 항-c-met 항체를 단백질 A 친화성 수지로부터 용리하는 것, e) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 약한 AE 수지 (예를 들어, DEAE 세파로스 패스트 플로우 또는 캅토 DEAE) 상에 로딩하는 것 및 f) 통과액 중 항-c-met 항체를 약한 AE 수지로부터 회수하는 것을 포함하며, 여기서 HCP (예를 들어, 평균 HCP)는 약 200 ng/mg 미만으로 감소한다. 일부 실시양태에서, HCP (예를 들어, 평균 HCP)는 약 300 ng/mg, 275 ng/mg, 250 ng/mg, 225 ng/mg, 200 ng/mg, 190 ng/mg, 180 ng/mg 또는 170 ng/mg, 또는 그 미만으로 감소한다. 일부 실시양태에서, HCP (예를 들어, 평균 HCP)는 약 150 ng/mg 내지 약 190 ng/mg 또는 약 160 ng/mg 내지 약 180 ng/mg으로 감소한다. 일부 실시양태에서, 방법은 a) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 28℃ 초과의 온도 및 약 pH 6 내지 약 pH 8의 pH에서 6시간 초과 동안 유지하는 것, b) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 원심분리하는 것, c) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 단백질 A 친화성 수지 (예를 들어, 맵셀렉트 슈어™ 수지) 상에 로딩하는 것 d) 항-c-met 항체를 단백질 A 친화성 수지로부터 용리하는 것, e) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 약한 AE 수지 (예를 들어, DEAE 세파로스 패스트 플로우 또는 캅토 DEAE) 상에 로딩하는 것, 및 f) 통과액 중 항-c-met 항체를 약한 AE 수지로부터 회수하는 것을 포함하며, 여기서 HCP (예를 들어, 평균 HCP)는 응집 단계, 단백질 A 친화성 크로마토그래피 수지로서의 프로셉 vA 및/또는 약한 CE 수지 (예를 들어, CM 세파로스)의 부재 하의 동일한 방법에 비해 약 75%, 70%, 65%, 60% 또는 55% 만큼 감소한다. 일부 실시양태에서, 단계는 순차적으로 수행된다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 이. 콜라이에서 생산된다. 일부 실시양태에서, HCP 및/또는 평균 HCP는 ECP 및/또는 평균 ECP이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 오나르투주맙이다.
기재된 임의의 정제 방법의 일부 실시양태에서, 방법은 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 강한 CE 수지 상에 로딩하는 것 및 항-c-met 항체를 용리하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 이. 콜라이에서 생산된다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 오나르투주맙이다.
강한 CE 교환 수지는 일반적으로 술포늄 이온을 함유한다. 강한 CE 수지의 예는 당업계에 공지되어 있으며, 미니(Mini) S PC 3.2/3, 미니 S 4.6/50 PE, 모노(Mono) S 5/50GL, 리소스(RESOURCE) S, 소스 15S, 소스 30S, SP 세파로스 패스트 플로우, 포로스 HS 50, 마크로캅(MacroCap) SP, 하이트랩(HiTrap) SPFF, 하이트랩 캅토 S, SP 세파로스 XL, 토요피얼 SP 550c, SP 세파로스 BB, TSKGel SP-5PW-HR20, 토요피얼 SP 650c, 토요피얼 메가캅(MegaCap) II SP-550EC, 토요피얼 SP-550C, 토요피얼 기가캅(GigaCap) S-650M, 토요피얼 SP-650M, 토요피얼 SP-650S, TSKgel SP-3PW 30, TSKgel SP 5P@ 30, TSKgel SP-5PW 20, 캅토 S 및/또는 프락토겔(Fractogel) SO3을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, 강한 CE 수지는 포로스 HS 50 (가교된 폴리(스티렌-디비닐벤젠) 지지 매트릭스에 기능적으로 부착된 술포프로필 표면)이다. 일부 실시양태에서, 강한 CE 수지는 SP 세파로스 패스트 플로우이다. 일부 실시양태에서, 강한 CE 수지는 토요피얼 SP 550c이다.
일부 실시양태에서, 강한 CE 크로마토그래피를 위한 유량은 약 50-500 cm/hr, 50-250 cm/hr, 및/또는 250-500 cm/시간이다. 일부 실시양태에서, 유량은 약 105 cm/시간, 125 cm/시간, 135 cm/시간, 145 cm/시간, 155 cm/시간, 165 cm/시간, 185 cm/hr 및/또는 250 cm/hr이다.
일부 실시양태에서, 강한 CE 크로마토그래피를 위한 전도도는 약 pH 8.9-9.0에서 약 1.9 mS/cm 미만 및/또는 pH 9.0 이상에서 약 2.4 mS/cm 미만이다. 일부 실시양태에서, 전도도는 약 pH 8.9-pH 9.0에서 약 1.4 mS/cm 내지 약 1.9 mS/cm 또는 약 pH 8.9-pH 9.5에서 약 1.4 mS/cm 내지 약 1.9 mS/cm이다.
강한 CE 수지는 평형화 완충제로 평형화될 수 있고, 이어서 다양한 불순물 (예를 들어, 수확된 세포 단백질 (예를 들어, ECP))을 포함하는 정제되지 않은 및/또는 부분적으로 정제된 항-c-met 항체는 평형화된 수지 상에 로딩될 수 있다. 항-c-met 항체가 수지를 통과하면, 항-c-met 항체 및 다양한 불순물은 고정화된 강한 CE 수지에 흡착된다. 세척 완충제를 사용하여 일부 불순물, 예컨대 숙주 세포 불순물을 제거할 수 있으나, 항-c-met 항체는 제거하지 않는다. 일부 실시양태에서, 평형화 완충제는 세척 완충제로서 활용된다. 항-c-met 항체는 용리 완충제로 수지로부터 용래된다.
강한 CE 크로마토그래피를 위한 평형화 완충제는 MOPS를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 평형화 완충제에서 MOPS의 농도는 약 0.01 M 내지 약 0.1 M이다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, MOPS의 농도는 약 0.01 M, 0.025 M, 0.05 M, 0.075 M 또는 0.1M이다. 일부 실시양태에서, 평형화 완충제의 pH는 약 7.0, 7.1, 7.2, 7.3 또는 7.4이다.
강한 CE 크로마토그래피를 위한 용리 완충제는 MOPS 및 아세테이트 염을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 염은 아세트산칼륨이다. 일부 실시양태에서, 염은 아세트산나트륨이다. 일부 실시양태에서, 평형화 완충제에서 MOPS의 농도는 약 0.01 M 내지 약 0.1 M이다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, MOPS의 농도는 약 0.01 M, 0.025 M, 0.05 M, 0.075 M 또는 0.1 M이다. 일부 실시양태에서, 아세테이트 염의 농도는 약 0.1 M, 0.15 M, 0.2 M, 0.25 M 또는 0.3 M이다. 일부 실시양태에서, 평형화 완충제의 pH는 약 7.0, 7.1, 7.2, 7.3 또는 7.4이다.
일부 실시양태에서, 방법은 상기 기재된 바와 같은 응집 단계를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 원심분리를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 상기 기재된 바와 같은 단백질 A 친화성 크로마토그래피를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 하나 이상의 추가의 이온-교환 크로마토그래피 단계, 예컨대 본원에 기재된 임의의 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 한외여과 및/또는 정용여과를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 a) 응집 단계, 이어서 b) 원심분리 단계, 이어서 c) 친화성 크로마토그래피 (예를 들어, 단백질 A 친화성 크로마토그래피), 이어서 d) 약한 음이온 교환 크로마토그래피, 이어서 e) 강한 양이온 교환 크로마토그래피를 포함한다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 정제하는 방법은 a) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 28℃ 초과의 온도 및 약 pH 6 내지 약 pH 8의 pH에서 6시간 초과 동안 유지하는 것, b) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 원심분리하는 것, c) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 단백질 A 친화성 수지 (예를 들어, 맵셀렉트 슈어™ 수지) 상에 로딩하는 것, d) 항-c-met 항체를 단백질 A 친화성 수지로부터 용리하는 것, e) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 약한 AE 수지 (예를 들어, DEAE 세파로스 패스트 플로우 또는 캅토 DEAE) 상에 로딩하는 것, f) 통과액 중 항-c-met 항체를 약한 AE 수지로부터 회수하는 것, g) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 강한 CE 수지 (예를 들어, SP 세파로스 패스트 플로우, 포로스 HS 50, 또는 토요피얼 SP 550c) 상에 로딩하는 것 및 h) 항-c-met 항체를 강한 CE 수지로부터 용리하는 것을 포함한다. 항-c-met 항체를 정제하는 방법의 단계는 임의의 순서로 완료될 수 있다. 일부 실시양태에서, 단계는 순차적으로 수행된다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 이. 콜라이에서 생산된다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 오나르투주맙이다.
일부 실시양태에서, 방법은 a) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 28℃ 초과의 온도 및 약 pH 6 내지 약 pH 8의 pH에서 6시간 초과 동안 유지하는 것, b) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 원심분리하는 것, c) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 단백질 A 친화성 수지 (예를 들어, 맵셀렉트 슈어™ 수지) 상에 로딩하는 것, d) 항-c-met 항체를 단백질 A 친화성 수지로부터 용리하는 것, e) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 약한 AE 수지 (예를 들어, DEAE 세파로스 패스트 플로우 또는 캅토 DEAE) 상에 로딩하는 것 및 통과액 중 항-c-met 항체를 약한 AE 수지로부터 회수하는 것, d) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 강한 CE 수지 (예를 들어, SP 세파로스 패스트 플로우, 포로스 HS 50, 또는 토요피얼 SP 550c) 상에 로딩하는 것 및 e) 항-c-met 항체를 강한 CE 수지로부터 용리하는 것을 포함하며, 여기서 HCP (예를 들어, 평균 HCP)는 약 70 ng/mg 미만으로 감소한다. 일부 실시양태에서, HCP (예를 들어, 평균 HCP)는 약 60 ng/mg, 55 ng/mg, 50 ng/mg, 45 ng/mg, 40 ng/mg, 35 ng/mg 또는 30 ng/mg, 또는 그 미만으로 감소한다. 일부 실시양태에서, HCP (예를 들어, 평균 HCP)는 약 30 ng/mg 내지 약 50 ng/mg 또는 약 35 ng/mg 내지 약 45 ng/mg로 감소한다. 일부 실시양태에서, 방법은 a) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 28℃ 초과의 온도 및 약 pH 6 내지 약 pH 8의 pH에서 6시간 초과 동안 유지하는 것, b) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 원심분리하는 것, c) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 단백질 A 친화성 수지 (예를 들어, 맵셀렉트 슈어™ 수지) 상에 로딩하는 것, d) 항-c-met 항체를 단백질 A 친화성 수지로부터 용리하는 것, e) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 약한 AE 수지 (예를 들어, DEAE 세파로스 패스트 플로우 또는 캅토 DEAE) 상에 로딩하는 것, f) 통과액 중 항-c-met 항체를 약한 AE 수지로부터 회수하는 것, g) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 강한 CE 수지 (예를 들어, SP 세파로스 패스트 플로우, 포로스 HS 50, 또는 토요피얼 SP 550c) 상에 로딩하는 것, 및 e) 항-c-met 항체를 강한 CE 수지로부터 용리하는 것을 포함하며, 여기서 HCP (예를 들어, 평균 HCP)는 응집 단계, 단백질 A 친화성 크로마토그래피 수지로서의 프로셉 vA 및/또는 약한 CE 수지 (예를 들어, CM 세파로스)의 부재 하의 동일한 정제 방법에 비해 약 85%, 80%, 75%, 70%, 65% 또는 60% 초과만큼 감소한다. 일부 실시양태에서, 단계는 순차적으로 수행된다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 이. 콜라이에서 생산된다. 일부 실시양태에서, HCP 및/또는 평균 HCP는 ECP 및/또는 평균 ECP이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 오나르투주맙이다.
일부 실시양태에서, 방법은 a) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 28℃ 초과의 온도 및 약 pH 6 내지 약 pH 8의 pH에서 6시간 초과 동안 유지하는 것, b) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 원심분리하는 것, c) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 단백질 A 친화성 수지 (예를 들어, 맵셀렉트 슈어™ 수지) 상에 로딩하는 것, d) 항-c-met 항체를 단백질 A 친화성 수지로부터 용리하는 것, e) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 강한 CE 수지 (예를 들어, SP 세파로스 패스트 플로우, 포로스 HS 50, 또는 토요피얼 SP 550c) 상에 로딩하는 것, f) 항-c-met 항체를 강한 CE 수지로부터 용리하는 것, g) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 약한 AE 수지 (예를 들어, DEAE 세파로스 패스트 플로우 또는 캅토 DEAE) 상에 로딩하는 것, 및 h) 통과액 중 항-c-met 항체를 약한 AE 수지로부터 회수하는 것을 포함하며, 여기서 HCP (예를 들어, 평균 HCP)는 약 70 ng/mg 미만으로 감소한다. 일부 실시양태에서, HCP (예를 들어, 평균 HCP)는 약 60 ng/mg, 55 ng/mg, 50 ng/mg, 45 ng/mg, 40 ng/mg, 35 ng/mg 또는 30 ng/mg, 또는 그 미만으로 감소한다. 일부 실시양태에서, HCP (예를 들어, 평균 HCP)는 약 30 ng/mg 내지 약 50 ng/mg 또는 약 35 ng/mg 내지 약 45 ng/mg로 감소한다. 일부 실시양태에서, 방법은 a) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 28℃ 초과의 온도 및 약 pH 6 내지 약 pH 8의 pH에서 6시간 초과 동안 유지하는 것, b) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 원심분리하는 것, c) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 단백질 A 친화성 수지 (예를 들어, 맵셀렉트 슈어™ 수지) 상에 로딩하는 것, d) 항-c-met 항체를 단백질 A 친화성 수지로부터 용리하는 것, e) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 강한 CE 수지 (예를 들어, SP 세파로스 패스트 플로우, 포로스 HS 50, 또는 토요피얼 SP 550c) 상에 로딩하는 것, f) 항-c-met 항체를 강한 CE 수지로부터 용리하는 것, g) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 약한 AE 수지 (예를 들어, DEAE 세파로스 패스트 플로우 또는 캅토 DEAE) 상에 로딩하는 것, 및 h) 통과액 중 항-c-met 항체를 약한 AE 수지로부터 회수하는 것을 포함하며, 여기서 HCP (예를 들어, 평균 HCP)는 응집 단계, 단백질 A 친화성 크로마토그래피 수지로서의 프로셉 vA 및/또는 약한 CE 수지 (예를 들어, CM 세파로스)의 부재 하의 동일한 정제 방법에 비해 약 85%, 80%, 75%, 70%, 65% 또는 60% 초과만큼 감소한다. 일부 실시양태에서, 단계는 순차적으로 수행된다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 이. 콜라이에서 생산된다. 일부 실시양태에서, HCP 및/또는 평균 HCP는 ECP 및/또는 평균 ECP이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 오나르투주맙이다.
기재된 임의의 정제 방법의 일부 실시양태에서, 방법은 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 강한 AE 수지 상에 로딩하는 것 및 항-c-met 항체를 용리하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 이. 콜라이에서 생산된다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 오나르투주맙이다.
강한 AE 교환 수지는 일반적으로 4급 암모늄 이온을 함유한다. 강한 AE 수지의 예는 당업계에 공지되어 있으며, 미니 Q PC 3.2/3, 미니 Q 4.6/50 PE, 모노 Q 5/50 GL, 모노 Q PC 1.6/5, 리소스 Q, 하이트랩 Q HP, 하이트랩 Q FF, 하이프렙(HiPrep) SP FF, Q 세파로스 패스트 플로우, 캅토 Q, 하이트랩 Q XL, 포로스 HQ 50, 토요피얼 슈퍼Q-650C, 토요피얼 QAE-550C, 토요피얼 Q-600CAR, 토요피얼 기가캅 Q-650M, 토요피얼 슈퍼Q-650M, 토요피얼 슈퍼 Q-650S, TSKgel 슈퍼Q-5PW 30, TSKgel 슈퍼Q-5PW 20 및/또는 프락토겔 TMAE를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, 강한 AE 수지는 Q 세파로스 패스트 플로우 (고도로 가교된 아가로스 지지 매트릭스에 기능적으로 부착된 -O-CH2CHOHCH2OCH2CHOHCH2N+(CH3)3 표면). 일부 실시양태에서, 강한 AE 수지는 캅토 Q이다. 일부 실시양태에서, 강한 AE 수지는 Q 세파로스 패스트 플로우이다.
일부 실시양태에서, 강한 AE 크로마토그래피를 위한 유량은 약 50-500 cm/hr, 50-250 cm/hr 및/또는 250-500 cm/시간이다. 일부 실시양태에서, 유량은 약 105 cm/시간, 125 cm/시간, 135 cm/시간, 145 cm/시간, 155 cm/시간, 165 cm/시간, 185 cm/hr 및/또는 250 cm/hr이다.
일부 실시양태에서, 강한 AE 크로마토그래피를 위한 전도도는 약 pH 8.9-9.0에서 약 1.9 mS/cm 미만 및/또는 pH 9.0 이상에서 약 2.4 mS/cm 미만이다. 일부 실시양태에서, 전도도는 약 pH 8.9-pH 9.0에서 약 1.4 mS/cm 내지 약 1.9 mS/cm 또는 약 pH 8.9-pH 9.5에서 약 1.4 mS/cm 내지 약 1.9 mS/cm이다.
강한 AE 수지는 예비-평형화 완충제에 이어 평형화 완충제로 평형화될 수 있고, 이어서 다양한 불순물 (예를 들어, 수확된 세포 단백질 (예를 들어, ECP))을 포함하는 정제된 또는 부분적으로 정제된 항-c-met 항체가 평형화된 수지 상에 로딩될 수 있다. 항-c-met 항체는 수지를 통과하고, 항-c-met 항체 및 다양한 불순물은 고정화된 강한 AE 수지 상에 흡착된다. 세척 완충제를 사용하여 일부 불순물, 예컨대 숙주 세포 불순물을 제거할 수 있으나 항-c-met 항체는 제거하지 않는다. 일부 실시양태에서, 평형화 완충제가 세척 완충제로 활용된다. 항-c-met 항체는 용리 완충제로 수지로부터 용리된다.
강한 AE 크로마토그래피를 위한 예비-평형화 완충제는 트리스 및 염을 포함할 수 있다. 예비-평형화 완충제에 유용한 염의 예는 염화칼륨, 염화나트륨, 황산마그네슘, 황산나트륨, 아세트산나트륨 및/또는 시트르산나트륨을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, 염은 염화칼륨이다. 일부 실시양태에서, 염은 염화나트륨이다. 일부 실시양태에서, 평형화 완충제에서 트리스의 농도는 약 0.01 M 내지 약 0.1 M이다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 트리스의 농도는 약 0.01 M, 0.025 M, 0.05 M, 0.075 M 또는 0.1 M이다. 일부 실시양태에서, 염의 농도는 약 0.1 M 내지 약 1.0 M이다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 염의 농도는 약 0.1 M, 0.25 M, 0.5 M, 0.75 M 또는 1.0 M이다. 일부 실시양태에서, 예비-평형화 완충제의 pH는 약 8.7, 8.8, 8.9, 9.0, 9.1 또는 9.2이다.
강한 AE 크로마토그래피를 위한 평형화 완충제는 트리스 및 염을 포함할 수 있다. 평형화 완충제에 유용한 염의 예는 염화칼륨, 염화나트륨, 황산마그네슘, 황산나트륨, 아세트산나트륨 및/또는 시트르산나트륨을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, 염은 염화칼륨이다. 일부 실시양태에서, 염은 염화나트륨이다. 일부 실시양태에서, 평형화 완충제에서 트리스의 농도는 약 0.01 M 내지 약 0.1 M이다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 트리스의 농도는 약 0.01 M, 0.025 M, 0.05 M, 0.075 M 또는 0.1 M이다. 일부 실시양태에서, 염의 농도는 약 0.01 M 내지 약 0.1 M이다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 염의 농도는 약 0.01M, 0.025 M, 0.05 M, 0.075 M 또는 0.1M이다. 일부 실시양태에서, 평형화 완충제의 pH는 약 8.7, 8.8, 8.9, 9.0, 9.1 또는 9.2이다.
강한 AE 크로마토그래피를 위한 세척 완충제는 트리스 및 염을 포함할 수 있다. 세척 완충제에 유용한 염의 예는 염화칼륨, 염화나트륨, 황산마그네슘, 황산나트륨, 아세트산나트륨 및/또는 시트르산나트륨을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, 염은 염화칼륨이다. 일부 실시양태에서, 염은 염화나트륨이다. 일부 실시양태에서, 평형화 완충제에서 트리스의 농도는 약 0.01 M 내지 약 0.1 M이다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 트리스의 농도는 약 0.01 M, 0.025 M, 0.05 M, 0.075 M 또는 0.1 M이다. 일부 실시양태에서, 염의 농도는 약 0.01 M 내지 0.1 M이다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 염의 농도는 약 0.01 M, 0.025 M, 0.05 M, 0.075 M 또는 0.1 M이다. 일부 실시양태에서, 세척 완충제의 pH는 약 8.7, 8.8, 8.9, 9.0, 9.1 또는 9.2이다.
강한 AE 크로마토그래피를 위한 용리 완충제는 트리스 및 염을 포함할 수 있다. 예비-평형화 완충제에 유용한 염의 예는 염화칼륨, 염화나트륨, 황산마그네슘, 황산나트륨, 아세트산나트륨 및/또는 시트르산나트륨을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, 염은 염화칼륨이다. 일부 실시양태에서, 염은 염화나트륨이다. 일부 실시양태에서, 평형화 완충제에서 트리스의 농도는 약 0.01 M 내지 약 0.1 M이다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 트리스의 농도는 약 0.01 M, 0.025 M, 0.05 M, 0.075 M 또는 0.1 M이다. 일부 실시양태에서, 염의 농도는 약 0.015 M 내지 0.15 M이다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 염의 농도는 약 0.015 M, 0.045 M, 0.075 M, 0.095 M 또는 0.115 M이다. 일부 실시양태에서, 세척 완충제의 pH는 약 8.7, 8.8, 8.9, 9.0, 9.1 또는 9.2이다.
일부 실시양태에서, 방법은 상기 기재된 바와 같은 응집 단계를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 원심분리를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 상기 기재된 바와 같은 단백질 A 친화성 크로마토그래피를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 하나 이상의 추가의 이온-교환 크로마토그래피 단계, 예컨대 본원에 기재된 임의의 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 한외여과 및/또는 정용여과를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 a) 응집 단계, 이어서 b) 원심분리 단계, 이어서 c) 친화성 크로마토그래피 (예를 들어, 단백질 A 친화성 크로마토그래피), 이어서 d) 약한 AE 크로마토그래피, 이어서 e) 강한 CE 크로마토그래피, 이어서 f) 강한 AE 크로마토그래피를 포함할 수 있다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 정제하는 방법은 a) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 28℃ 초과의 온도 및 약 pH 6 내지 약 pH 8의 pH에서 6시간 초과 동안 유지하는 것, b) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 원심분리하는 것, c) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 단백질 A 친화성 수지 (예를 들어, 맵셀렉트 슈어™ 수지) 상에 로딩하는 것, d) 항-c-met 항체를 단백질 A 친화성 수지로부터 용리하는 것, e) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 약한 AE 수지 (예를 들어, DEAE 세파로스 패스트 플로우 또는 캅토 DEAE) 상에 로딩하는 것, f) 통과액 중 항-c-met 항체를 약한 AE 수지로부터 회수하는 것, g) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 강한 CE 수지 (예를 들어, SP 세파로스 패스트 플로우, 포로스 HS 50, 또는 토요피얼 SP 550c) 상에 로딩하는 것, h) 항-c-met 항체를 강한 CE 수지로부터 용리하는 것, i) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 강한 AE 수지 (예를 들어, Q 세파로스 패스트 플로우, 캅토 Q, 또는 포로스 HQ 50) 상에 로딩하는 것, 및 j) 항-c-met 항체를 강한 AE 수지로부터 용리하는 것을 포함한다. 항-c-met 항체를 정제하는 방법의 단계는 임의의 순서로 완료될 수 있다. 일부 실시양태에서, 단계는 순차적으로 수행된다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 이. 콜라이에서 생산된다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 오나르투주맙이다.
일부 실시양태에서, 방법은 a) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 28℃ 초과의 온도 및 약 pH 6 내지 약 pH 8의 pH에서 6시간 초과 동안 유지하는 것, b) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 원심분리하는 것, c) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 단백질 A 친화성 수지 (예를 들어, 맵셀렉트 슈어™ 수지) 상에 로딩하는 것, d) 항-c-met 항체를 단백질 A 친화성 수지로부터 용리하는 것, e) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 약한 AE 수지 (예를 들어, DEAE 세파로스 패스트 플로우 또는 캅토 DEAE) 상에 로딩하는 것, f) 통과액 중 항-c-met 항체를 약한 AE 수지로부터 회수하는 것, g) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 강한 CE 수지 (예를 들어, SP 세파로스 패스트 플로우, 포로스 HS 50, 또는 토요피얼 SP 550c) 상에 로딩하는 것 h) 항-c-met 항체를 강한 CE 수지로부터 용리하는 것, i) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 강한 AE 수지 (예를 들어, Q 세파로스 패스트 플로우, 캅토 Q, 또는 포로스 HQ 50) 상에 로딩하는 것 및 j) 항-c-met 항체를 강한 AE 수지로부터 용리하는 것을 포함하며, 여기서 HCP (예를 들어, 평균 HCP)는 약 50 ng/mg 미만으로 감소한다. 일부 실시양태에서, HCP (예를 들어, 평균 HCP)는 약 34 ng/mg, 30 ng/mg, 25 ng/mg, 20 ng/mg, 15 ng/mg, 14 ng/mg, 13 ng/mg, 12 ng/mg, 11 ng/mg 또는 10 ng/mg, 또는 그 미만으로 감소한다. 일부 실시양태에서, HCP (예를 들어, 평균 HCP)는 약 1 ng/mg 내지 약 15 ng/mg 또는 약 5 ng/mg 내지 약 15 ng/mg으로 감소한다. 일부 실시양태에서, 방법은 a) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 28℃ 초과의 온도 및 약 pH 6 내지 약 pH 8의 pH에서 6시간 초과 동안 유지하는 것, b) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 원심분리하는 것, c) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 단백질 A 친화성 수지 (예를 들어, 맵셀렉트 슈어™ 수지) 상에 로딩하는 것, d) 항-c-met 항체를 단백질 A 친화성 수지로부터 용리하는 것, e) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 약한 AE 수지 (예를 들어, DEAE 세파로스 패스트 플로우 또는 캅토 DEAE) 상에 로딩하는 것, f) 통과액 중 항-c-met 항체를 약한 AE 수지로부터 회수하는 것, g) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 강한 CE 수지 (예를 들어, SP 세파로스 패스트 플로우, 포로스 HS 50, 또는 토요피얼 SP 550c) 상에 로딩하는 것 h) 항-c-met 항체를 강한 CE 수지로부터 용리하는 것, i) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 강한 AE 수지 (예를 들어, Q 세파로스 패스트 플로우, 캅토 Q, 또는 포로스 HQ 50) 상에 로딩하는 것 및 j) 항-c-met 항체를 강한 AE 수지로부터 용리하는 것을 포함하며, 여기서 HCP (예를 들어, 평균 HCP)는 응집 단계, 단백질 A 친화성 크로마토그래피 수지로서의 프로셉 vA 및/또는 약한 CE 수지 (예를 들어, CM 세파로스)의 부재 하의 동일한 정제 방법에 비해 약 55%, 50%, 45%, 40%, 35% 또는 30% 초과만큼 감소한다. 일부 실시양태에서, 단계는 순차적으로 수행된다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 이. 콜라이에서 생산된다. 일부 실시양태에서, HCP 및/또는 평균 HCP는 ECP 및/또는 평균 ECP이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 오나르투주맙이다.
본원에 기재된 임의의 방법의 일부 실시양태에서, 방법은 한외여과 및/또는 정용여과를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 a) 응집 단계, 이어서 b) 원심분리 단계, 이어서 c) 친화성 크로마토그래피 (예를 들어, 단백질 A 친화성 크로마토그래피), 이어서 d) 약한 AE 크로마토그래피, 이어서 e) 강한 CE 크로마토그래피, 이어서 f) 강한 AE 크로마토그래피, 이어서 g) 한외여과 및/또는 정용여과를 포함한다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 정제하는 방법은 a) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 28℃ 초과의 온도 및 약 pH 6 내지 약 pH 8의 pH에서 6시간 초과 동안 유지하는 것, b) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 원심분리하는 것, c) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 단백질 A 친화성 수지 (예를 들어, 맵셀렉트 슈어™ 수지) 상에 로딩하는 것, d) 항-c-met 항체를 단백질 A 친화성 수지로부터 용리하는 것, e) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 약한 AE 수지 (예를 들어, DEAE 세파로스 패스트 플로우 또는 캅토 DEAE) 상에 로딩하는 것, f) 통과액 중 항-c-met 항체를 약한 AE 수지로부터 회수하는 것, g) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 강한 CE 수지 (예를 들어, SP 세파로스 패스트 플로우, 포로스 HS 50, 또는 토요피얼 SP 550c) 상에 로딩하는 것 h) 항-c-met 항체를 강한 CE 수지로부터 용리하는 것, i) 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 강한 AE 수지 (예를 들어, Q 세파로스 패스트 플로우, 캅토 Q, 또는 포로스 HQ 50) 상에 로딩하는 것, j) 항-c-met 항체를 강한 AE 수지로부터 용리하는 것, 및 k) 항-c-met 항체를 포함하는 강한 AE 수지로부터의 용리액을 한외여과 (예를 들어, 10 KDa 재생된 셀룰로스 한외여과 막) 및/또는 정용여과에 적용하는 것을 포함한다. 항-c-met 항체를 정제하는 방법의 단계는 임의의 순서로 완료될 수 있다. 일부 실시양태에서, 단계는 순차적으로 수행된다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 이. 콜라이에서 생산된다.
임의의 정제 방법의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물에 존재하는 HCP는 약 50 ng/mg 이하이다. 임의의 정제 방법의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물의 로트 (예를 들어, 배치)에 존재하는 평균 HCP는 약 50 ng/mg 이하이다. 일부 실시양태에서, HCP 및/또는 평균 HCP는 약 34 ng/mg, 30 ng/mg, 25 ng/mg, 20 ng/mg, 19 ng/mg, 18 ng/mg, 17 ng/mg, 16 ng/mg, 15 ng/mg, 14 ng/mg, 13 ng/mg, 12 ng/mg, 11 ng/mg, 10 ng/mg 또는 9 ng/mg, 또는 그 미만이다. 일부 실시양태에서, HCP 및/또는 평균 HCP는 약 5 ng/mg 내지 20 ng/mg, 5 ng/mg 내지 25 ng/mg, 5 ng/mg 내지 15 ng/mg, 1 ng/mg 내지 30 ng/mg, 1 ng/mg 내지 25 ng/mg, 1 ng/mg 내지 20 ng/mg, 1 ng/mg 내지 15 ng/mg, 또는 1 ng/mg 내지 10 ng/mg이다. 일부 실시양태에서, HCP 및/또는 평균 HCP는 약 5, 5.5, 6.5, 7, 7.5, 8, 8.5, 9, 9.5, 10, 10.5, 11, 11.5, 12, 12.5, 13, 13.5, 14, 14.5, 15, 15.5, 16, 16.5, 17 또는 17.5 ng/mg이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 이. 콜라이에서 생산된다. 일부 실시양태에서, HCP 및/또는 평균 HCP는 ECP 및/또는 평균 ECP이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 섹션 IV에 기재된 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 약 100 kDa이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 약 8.2, 약 8.3 및/또는 약 8.4의 pI를 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 오나르투주맙이다.
임의의 정제 방법의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 DNA 수준은 약 0.3 pg/mg 이하이다. 임의의 정제 방법의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물의 로트 (예를 들어, 배치) 중 평균 DNA 수준은 약 0.3 pg/mg 이하이다. 일부 실시양태에서, DNA 수준 및/또는 평균 DNA 수준은 약 0.3 pg/mg, 0.25 pg/mg, 0.2 pg/mg, 0.15 pg/mg 또는 0.1 pg/mg, 또는 그 미만이다. 일부 실시양태에서, DNA 수준 및/또는 평균 DNA 수준은 약 0.001 pg/mg 내지 0.3 pg/mg, 0.001 pg/mg 내지 0.2 pg/mg, 0.001 pg/mg 내지 0.1 pg/mg, 0.01 pg/mg 내지 0.3 pg/mg, 0.01 pg/mg 내지 0.2 pg/mg, 또는 0.01 pg/mg 내지 0.1 pg/mg이다. 일부 실시양태에서, DNA 수준 및/또는 평균 DNA 수준은 약 0.3, 0.25, 0.2, 0.15 또는 0.1 pg/mg이다. 일부 실시양태에서, DNA 수준은 PCR에 의해 결정된다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 섹션 IV에 기재된 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 약 100 kDa이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 약 8.2, 약 8.3 및/또는 약 8.4의 pI를 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 오나르투주맙이다.
임의의 정제 방법의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물에서 침출된 단백질 A (LpA)는 약 2 ng/mg 이하이다. 임의의 정제 방법의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물의 로트 (예를 들어, 배치) 중 평균 LpA는 약 2 ng/mg 이하이다. 일부 실시양태에서, LpA 및/또는 평균 LpA는 약 0.001 ng/mg 내지 2 ng/mg, 0.01 ng/mg 내지 2 ng/mg, 0.1 ng/mg 내지 2 ng/mg, 또는 1 ng/mg 내지 2 ng/mg이다. 일부 실시양태에서, LpA 및/또는 평균 LpA는 약 1, 1.25, 1.5, 1.75 또는 2 ng/mg이다. 일부 실시양태에서, LpA의 백분율은 침출된 단백질 A 리간드 검정에 의해 결정된다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 섹션 IV에 기재된 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 약 100 kDa이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 약 8.2, 약 8.3 및/또는 약 8.4의 pI를 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 오나르투주맙이다.
임의의 정제 방법의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 리물루스 변형세포 용해물 (LAL)은 약 0.01 EU/mg 이하이다. 임의의 정제 방법의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물의 로트 (예를 들어, 배치) 중 평균 LAL은 약 0.01 EU/mg 이하이다. 일부 실시양태에서, LAL 및/또는 평균 LAL은 약 0.007 EU/mg, 0.006 EU/mg, 0.005 EU/mg, 0.002 EU/mg 또는 0.001 EU/mg, 또는 그 미만이다. 일부 실시양태에서, LAL 및/또는 평균 LAL은 약 0.0001 EU/mg 내지 0.01 EU/mg, 0.0001 EU/mg 내지 0.007 EU/mg, 0.0001 EU/mg 내지 0.006 EU/mg, 또는 0.0001 EU/mg 내지 0.005 EU/mg이다. 일부 실시양태에서, LAL 및/또는 평균 LAL은 약 0.01, 0.007, 0.006, 0.005, 0.004, 0.003 또는 0.002 EU/mg이다. 일부 실시양태에서, LAL의 백분율은 LAL 검정에 의해 결정된다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 섹션 IV에 기재된 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 약 100 kDa이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 약 8.2, 약 8.3 및/또는 약 8.4의 pI를 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 오나르투주맙이다.
임의의 정제 방법의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 응집체의 백분율은 약 0.3% 이하이다. 임의의 정제 방법의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물의 로트 (예를 들어, 배치) 중 응집체의 평균 백분율은 약 0.3% 이하이다. 일부 실시양태에서, 응집체의 백분율 및/또는 응집체의 평균 백분율은 약 0.2% 또는 0.1%, 또는 그 미만이다. 일부 실시양태에서, 응집체의 백분율 및/또는 응집체의 평균 백분율은 약 0.001% 내지 0.3%, 0.01% 내지 0.3%, 0.001% 내지 0.2%, 또는 0.01% 내지 0.2%이다. 일부 실시양태에서, 응집체의 백분율 및/또는 응집체의 평균 백분율은 약 0.3%, 0.25%, 0.2%, 0.15% 또는 0.1%이다. 일부 실시양태에서, 응집체의 백분율은 크기 배제 크로마토그래피 (SEC) 검정에 의해 결정된다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 섹션 IV에 기재된 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 약 100 kDa이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 약 8.2, 약 8.3 및/또는 약 8.4의 pI를 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 오나르투주맙이다.
임의의 정제 방법의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 단량체의 백분율은 약 99.5% 이상이다. 임의의 정제 방법의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물의 로트 (예를 들어, 배치) 중 평균 백분율 단량체는 약 99.5% 이상이다. 일부 실시양태에서, 단량체의 백분율 및/또는 단량체의 평균 백분율은 약 99.6%, 99.7%, 99.8% 또는 99.9%, 또는 그 초과이다. 일부 실시양태에서, 단량체의 백분율 및/또는 단량체의 평균 백분율은 약 99.5% 내지 99.999%, 99.5% 내지 99.99%, 99.6% 내지 99.999%, 99.6% 내지 99.99%, 99.7% 내지 99.999%, 99.7% 내지 99.99%, 99.8% 내지 99.999%, 99.8% 내지 99.99%, 또는 99.9% 내지 99.999%, 99.9% 내지 99.99%이다. 일부 실시양태에서, 단량체의 백분율 및/또는 단량체의 평균 백분율은 약 99.5%, 99.6%, 99.7%, 99.8% 또는 99.9%이다. 일부 실시양태에서, 단량체의 백분율은 SEC 검정에 의해 결정된다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 섹션 IV에 기재된 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 약 100 kDa이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 약 8.2, 약 8.3 및/또는 약 8.4의 pI를 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 오나르투주맙이다.
임의의 정제 방법의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 단편의 백분율은 약 0.3% 이하이다. 임의의 정제 방법의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물의 로트 (예를 들어, 배치) 중 단편의 평균 백분율은 약 0.3% 이하이다. 일부 실시양태에서, 단편의 백분율 및/또는 단편의 평균 백분율은 약 0.2% 또는 0.1%, 또는 그 미만이다. 일부 실시양태에서, 단편의 백분율 및/또는 단편의 평균 백분율은 약 0.001% 내지 0.3%, 0.01% 내지 0.3%, 0.001% 내지 0.2%, 또는 0.01% 내지 0.2%이다. 일부 실시양태에서, 단편의 백분율 및/또는 단편의 평균 백분율은 약 0.3%, 0.25%, 0.2%, 0.15%, 0.1% 또는 0%이다. 일부 실시양태에서, 단편은 검출가능하지 않다. 일부 실시양태에서, 단편의 백분율은 SEC 검정에 의해 결정된다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 섹션 IV에 기재된 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 약 100 kDa이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 약 8.2, 약 8.3 및/또는 약 8.4의 pI를 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 오나르투주맙이다.
임의의 정제 방법의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 산성 변이체의 백분율은 약 20% 이하이다. 임의의 정제 방법의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물의 로트 (예를 들어, 배치) 중 산성 변이체의 평균 백분율은 약 20% 이하이다. 일부 실시양태에서, 산성 변이체의 백분율 및/또는 산성 변이체의 평균 백분율은 약 20%, 18.5%, 17.5%, 15%, 12.5%, 또는 그 미만이다. 일부 실시양태에서, 산성 변이체의 백분율 및/또는 산성 변이체의 평균 백분율은 약 1% 내지 20%, 5% 내지 20%, 또는 10% 내지 20%이다. 일부 실시양태에서, 산성 변이체의 백분율 및/또는 산성 변이체의 평균 백분율은 약 20%, 18.5%, 17.5%, 15% 또는 12.5%이다. 일부 실시양태에서, 산성 변이체의 백분율은 HPIEC 검정에 의해 결정된다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 섹션 IV에 기재된 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 약 100 kDa이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 약 8.2, 약 8.3 및/또는 약 8.4의 pI를 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 오나르투주맙이다.
임의의 정제 방법의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 주요 피크의 백분율은 약 75% 이상이다. 임의의 정제 방법의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물의 로트 (예를 들어, 배치) 중 주요 피크의 평균 백분율은 약 75% 이상이다. 일부 실시양태에서, 주요 피크의 백분율 및/또는 주요 피크의 평균 백분율은 약 77.5%, 80%, 82.5% 또는 85%, 또는 그 초과이다. 일부 실시양태에서, 주요 피크의 백분율 및/또는 주요 피크의 평균 백분율은 약 75% 내지 95%, 77.5% 내지 95%, 80% 내지 95%, 82.5% 내지 95%, 또는 85% 내지 95%이다. 일부 실시양태에서, 주요 피크의 백분율 및/또는 주요 피크의 평균 백분율은 약 75%, 77.5%, 80%, 82.5% 또는 85%이다. 일부 실시양태에서, 주요 피크의 백분율은 HPIEC 검정에 의해 결정된다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 섹션 IV에 기재된 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 약 100 kDa이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 약 8.2, 약 8.3 및/또는 약 8.4의 pI를 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 오나르투주맙이다.
임의의 정제 방법의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 염기성 변이체의 백분율은 약 2.0% 이하이다. 임의의 정제 방법의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물의 로트 (예를 들어, 배치) 중 염기성 변이체의 평균 백분율은 약 2.0% 이하이다. 일부 실시양태에서, 염기성 변이체의 백분율 및/또는 염기성 변이체의 평균 백분율은 약 1.5%, 1.25%, 1.1% 또는 1%, 또는 그 미만이다. 일부 실시양태에서, 염기성 변이체의 백분율 및/또는 염기성 변이체의 평균 백분율은 약 0.001% 내지 2%, 0.01% 내지 2%, 0.001% 내지 1.5%, 또는 0.01% 내지 1.5%, 0.001% 내지 1.0%, 또는 0.01% 내지 1.0%이다. 일부 실시양태에서, 염기성 변이체의 백분율 및/또는 염기성 변이체의 평균 백분율은 약 2%, 1.5%, 1.25%, 1.1% 또는 1%이다. 일부 실시양태에서, 염기성 변이체의 백분율은 HPIEC 검정에 의해 결정된다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 섹션 IV에 기재된 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 약 100 kDa이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 약 8.2, 약 8.3 및/또는 약 8.4의 pI를 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 오나르투주맙이다.
또한 정제된 항-c-met 항체 및 정제된 항-c-met 항체를 포함하는 조성물이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 정제된 항-c-met 항체는 본원에 기재된 임의의 정제 방법에 의해 정제된다. 일부 실시양태에서, 정제된 항-c-met 항체는 본원에 기재된 임의의 정제 방법에 의해 수득가능하다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 정제 방법에 의해 정제된 및/또는 수득가능한 정제된 항-c-met 항체를 포함하는 조성물에 존재하는 HCP는 약 50 ng/mg 이하이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 정제 방법에 의해 정제된 및/또는 수득가능한 정제된 항-c-met 항체를 포함하는 조성물의 로트 (예를 들어, 배치) 중 평균 HCP는 약 50 ng/mg 이하이다. 일부 실시양태에서, HCP 및/또는 평균 HCP는 약 34 ng/mg, 30 ng/mg, 25 ng/mg, 20 ng/mg, 19 ng/mg, 18 ng/mg, 17 ng/mg, 16 ng/mg, 15 ng/mg, 14 ng/mg, 13 ng/mg, 12 ng/mg, 11 ng/mg, 10 ng/mg 또는 9 ng/mg, 또는 그 미만이다. 일부 실시양태에서, HCP 및/또는 평균 HCP는 약 5 ng/mg 내지 20 ng/mg, 5 ng/mg 내지 25 ng/mg, 5 ng/mg 내지 15 ng/mg, 1 ng/mg 내지 30 ng/mg, 1 ng/mg 내지 25 ng/mg, 1 ng/mg 내지 20 ng/mg, 1 ng/mg 내지 15 ng/mg, 또는 1 ng/mg 내지 10 ng/mg이다. 일부 실시양태에서, HCP 및/또는 평균 HCP는 약 5, 5.5, 6.5, 7, 7.5, 8, 8.5, 9, 9.5, 10, 10.5, 11, 11.5, 12, 12.5, 13, 13.5, 14, 14.5, 15, 15.5, 16, 16.5, 17 또는 17.5 ng/mg이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 이. 콜라이에서 생산된다. 일부 실시양태에서, HCP 및/또는 평균 HCP는 ECP 및/또는 평균 ECP이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 섹션 IV에 기재된 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 약 100 kDa이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 약 8.2, 약 8.3 및/또는 약 8.4의 pI를 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 오나르투주맙이다.
항-c-met 항체를 포함하는 조성물이 본원에 제공되며, 여기서 조성물에 존재하는 HCP는 약 50 ng/mg 이하이다. 또한 항-c-met 항체를 포함하는 조성물의 로트 (예를 들어, 배치)가 본원에 제공되며, 여기서 로트 (예를 들어, 배치)에 존재하는 평균 HCP는 약 50 ng/mg 이하이다. 일부 실시양태에서, HCP 및/또는 평균 HCP는 약 34 ng/mg, 30 ng/mg, 25 ng/mg, 20 ng/mg, 19 ng/mg, 18 ng/mg, 17 ng/mg, 16 ng/mg, 15 ng/mg, 14 ng/mg, 13 ng/mg, 12 ng/mg, 11 ng/mg, 10 ng/mg 또는 9 ng/mg, 또는 그 미만이다. 일부 실시양태에서, HCP 및/또는 평균 HCP는 약 5 ng/mg 내지 20 ng/mg, 5 ng/mg 내지 25 ng/mg, 5 ng/mg 내지 15 ng/mg, 1 ng/mg 내지 30 ng/mg, 1 ng/mg 내지 25 ng/mg, 1 ng/mg 내지 20 ng/mg, 1 ng/mg 내지 15 ng/mg, 또는 1 ng/mg 내지 10 ng/mg이다. 일부 실시양태에서, HCP 및/또는 평균 HCP는 약 5, 5.5, 6.5, 7, 7.5, 8, 8.5, 9, 9.5, 10, 10.5, 11, 11.5, 12, 12.5, 13, 13.5, 14, 14.5, 15, 15.5, 16, 16.5, 17 또는 17.5 ng/mg이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 이. 콜라이에서 생산된다. 일부 실시양태에서, HCP 및/또는 평균 HCP는 ECP 및/또는 평균 ECP이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 섹션 IV에 기재된 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 약 100 kDa이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 약 8.2, 약 8.3 및/또는 약 8.4의 pI를 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 오나르투주맙이다.
임의의 조성물의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 DNA 수준은 약 0.3 pg/mg 이하이다. 임의의 조성물의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물의 로트 (예를 들어, 배치) 중 평균 DNA 수준은 약 0.3 pg/mg 이하이다. 일부 실시양태에서, DNA 수준 및/또는 평균 DNA 수준은 약 0.3 pg/mg, 0.25 pg/mg, 0.2 pg/mg, 0.15 pg/mg 또는 0.1 pg/mg, 또는 그 미만이다. 일부 실시양태에서, DNA 수준 및/또는 평균 DNA 수준은 약 0.001 pg/mg 내지 0.3 pg/mg, 0.001 pg/mg 내지 0.2 pg/mg, 0.001 pg/mg 내지 0.1 pg/mg, 0.01 pg/mg 내지 0.3 pg/mg, 0.01 pg/mg 내지 0.2 pg/mg, 또는 0.01 pg/mg 내지 0.1 pg/mg이다. 일부 실시양태에서, DNA 수준 및/또는 평균 DNA 수준은 약 0.3, 0.25, 0.2, 0.15 또는 0.1 pg/mg이다. 일부 실시양태에서, DNA 수준은 PCR에 의해 결정된다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 섹션 IV에 기재된 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 약 100 kDa이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 약 8.2, 약 8.3 및/또는 약 8.4의 pI를 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 오나르투주맙이다.
임의의 조성물의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물에서 침출된 단백질 A (LpA)는 약 2 ng/mg 이하이다. 임의의 조성물의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물의 로트 (예를 들어, 배치) 중 평균 LpA는 약 2 ng/mg 이하이다. 일부 실시양태에서, LpA 및/또는 평균 LpA는 약 0.001 ng/mg 내지 2 ng/mg, 0.01 ng/mg 내지 2 ng/mg, 0.1 ng/mg 내지 2 ng/mg, 또는 1 ng/mg 내지 2 ng/mg이다. 일부 실시양태에서, LpA 및/또는 평균 LpA는 약 1, 1.25, 1.5, 1.75 또는 2 ng/mg이다. 일부 실시양태에서, LpA의 백분율은 침출된 단백질 A 리간드 검정에 의해 결정된다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 섹션 IV에 기재된 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 약 100 kDa이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 약 8.2, 약 8.3 및/또는 약 8.4의 pI를 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 오나르투주맙이다.
임의의 조성물의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 리물루스 변형세포 용해물 (LAL)은 약 0.01 EU/mg 이하이다. 임의의 조성물의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물의 로트 (예를 들어, 배치) 중 평균 LAL은 약 0.01 EU/mg 이하이다. 일부 실시양태에서, LAL 및/또는 평균 LAL은 약 0.007 EU/mg, 0.006 EU/mg, 0.005 EU/mg, 0.002 EU/mg 또는 0.001 EU/mg, 또는 그 미만이다. 일부 실시양태에서, LAL 및/또는 평균 LAL은 약 0.0001 EU/mg 내지 0.01 EU/mg, 0.0001 EU/mg 내지 0.007 EU/mg, 0.0001 EU/mg 내지 0.006 EU/mg, 또는 0.0001 EU/mg 내지 0.005 EU/mg이다. 일부 실시양태에서, LAL 및/또는 평균 LAL은 약 0.01, 0.007, 0.006, 0.005, 0.004, 0.003 또는 0.002 EU/mg이다. 일부 실시양태에서, LAL의 백분율은 LAL 검정에 의해 결정된다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 섹션 IV에 기재된 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 약 100 kDa이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 약 8.2, 약 8.3 및/또는 약 8.4의 pI를 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 오나르투주맙이다.
임의의 조성물의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 응집체의 백분율은 약 0.3% 이하이다. 임의의 조성물의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물의 로트 (예를 들어, 배치) 중 응집체의 평균 백분율은 약 0.3% 이하이다. 또한, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물이 본원에 제공되며, 여기서 조성물에 존재하는 응집체의 백분율은 약 0.3% 이하이다. 또한, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물의 로트 (예를 들어, 배치)가 본원에 제공되며, 조성물에 존재하는 응집체의 평균 백분율은 약 0.3% 이하이다. 일부 실시양태에서, 응집체의 백분율 및/또는 응집체의 평균 백분율은 약 0.2% 또는 0.1%, 또는 그 미만이다. 일부 실시양태에서, 응집체의 백분율 및/또는 응집체의 평균 백분율은 약 0.001% 내지 0.3%, 0.01% 내지 0.3%, 0.001% 내지 0.2%, 또는 0.01% 내지 0.2%이다. 일부 실시양태에서, 응집체의 백분율 및/또는 응집체의 평균 백분율은 약 0.3%, 0.25%, 0.2%, 0.15% 또는 0.1%이다. 일부 실시양태에서, 응집체의 백분율은 크기 배제 크로마토그래피 (SEC) 검정에 의해 결정된다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 섹션 IV에 기재된 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 약 100 kDa이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 약 8.2, 약 8.3 및/또는 약 8.4의 pI를 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 오나르투주맙이다.
임의의 조성물의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 단량체의 백분율은 약 99.5% 이상이다. 임의의 조성물의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물의 로트 (예를 들어, 배치) 중 평균 백분율 단량체는 약 99.5% 이상이다. 또한, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물이 본원에 제공되며, 여기서 조성물에 존재하는 단량체의 백분율은 약 99.5% 이상이다. 또한 항-c-met 항체를 포함하는 조성물의 로트 (예를 들어, 배치)가 본원에 제공되며, 여기서 조성물에 존재하는 단량체의 평균 백분율은 약 0.3% 이상이다. 일부 실시양태에서, 단량체의 백분율 및/또는 단량체의 평균 백분율은 약 99.6%, 99.7%, 99.8% 또는 99.9%, 또는 그 초과이다. 일부 실시양태에서, 단량체의 백분율 및/또는 단량체의 평균 백분율은 약 99.5% 내지 99.999%, 99.5% 내지 99.99%, 99.6% 내지 99.999%, 99.6% 내지 99.99%, 99.7% 내지 99.999%, 99.7% 내지 99.99%, 99.8% 내지 99.999%, 99.8% 내지 99.99%, 또는 99.9% 내지 99.999%, 99.9% 내지 99.99%이다. 일부 실시양태에서, 단량체의 백분율 및/또는 단량체의 평균 백분율은 약 99.5%, 99.6%, 99.7%, 99.8% 또는 99.9%이다. 일부 실시양태에서, 단량체의 백분율은 SEC 검정에 의해 결정된다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 섹션 IV에 기재된 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 약 100 kDa이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 약 8.2, 약 8.3 및/또는 약 8.4의 pI를 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 오나르투주맙이다.
임의의 조성물의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 단편의 백분율은 약 0.3% 이하이다. 임의의 조성물의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물의 로트 (예를 들어, 배치) 중 단편의 평균 백분율은 약 0.3% 이하이다. 또한, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물이 본원에 제공되며, 여기서 조성물에 존재하는 단편의 백분율은 약 0.3% 이하이다. 또한 항-c-met 항체를 포함하는 조성물의 로트 (예를 들어, 배치)가 본원에 제공되며, 여기서 조성물에 존재하는 단편의 평균 백분율은 약 0.3% 이하이다. 일부 실시양태에서, 단편의 백분율 및/또는 단편의 평균 백분율은 약 0.2% 또는 0.1%, 또는 그 미만이다. 일부 실시양태에서, 단편의 백분율 및/또는 단편의 평균 백분율은 약 0.001% 내지 0.3%, 0.01% 내지 0.3%, 0.001% 내지 0.2%, 또는 0.01% 내지 0.2%이다. 일부 실시양태에서, 단편의 백분율 및/또는 단편의 평균 백분율은 약 0.3%, 0.25%, 0.2%, 0.15%, 0.1% 또는 0%이다. 일부 실시양태에서, 단편은 검출가능하지 않다. 일부 실시양태에서, 단편의 백분율은 SEC 검정에 의해 결정된다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 섹션 IV에 기재된 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 약 100 kDa이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 약 8.2, 약 8.3 및/또는 약 8.4의 pI를 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 오나르투주맙이다.
임의의 조성물의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 산성 변이체의 백분율은 약 20% 이하이다. 임의의 조성물의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물의 로트 (예를 들어, 배치) 중 산성 변이체의 평균 백분율은 약 20% 이하이다. 또한, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물이 본원에 제공되며, 여기서 조성물에 존재하는 산성 변이체의 백분율은 약 20% 이하이다. 또한 항-c-met 항체를 포함하는 조성물의 로트 (예를 들어, 배치)가 본원에 제공되며, 여기서 조성물에 존재하는 평균 산성 변이체는 약 20% 이하이다. 일부 실시양태에서, 산성 변이체의 백분율 및/또는 산성 변이체의 평균 백분율은 약 20%, 18.5%, 17.5%, 15%, 12.5%, 또는 그 미만이다. 일부 실시양태에서, 산성 변이체의 백분율 및/또는 산성 변이체의 평균 백분율은 약 1% 내지 20%, 5% 내지 20%, 또는 10% 내지 20%이다. 일부 실시양태에서, 산성 변이체의 백분율 및/또는 산성 변이체의 평균 백분율은 약 20%, 18.5%, 17.5%, 15% 또는 12.5%이다. 일부 실시양태에서, 산성 변이체의 백분율은 HPIEC 검정에 의해 결정된다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 섹션 IV에 기재된 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 약 100 kDa이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 약 8.2, 약 8.3 및/또는 약 8.4의 pI를 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 오나르투주맙이다.
임의의 조성물의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 주요 피크의 백분율은 약 75% 이상이다. 임의의 조성물의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물의 로트 (예를 들어, 배치) 중 주요 피크의 평균 백분율은 약 75% 이상이다. 또한, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물이 본원에 제공되며, 여기서 조성물에 존재하는 주요 피크의 백분율은 약 75% 이상이다. 또한 항-c-met 항체를 포함하는 조성물의 로트 (예를 들어, 배치)가 본원에 제공되며, 여기서 조성물에 존재하는 주요 피크의 평균 백분율은 약 75% 이상이다. 일부 실시양태에서, 주요 피크의 백분율 및/또는 주요 피크의 평균 백분율은 약 77.5%, 80%, 82.5% 또는 85%, 또는 그 초과이다. 일부 실시양태에서, 주요 피크의 백분율 및/또는 주요 피크의 평균 백분율은 약 75% 내지 95%, 77.5% 내지 95%, 80% 내지 95%, 82.5% 내지 95%, 또는 85% 내지 95%이다. 일부 실시양태에서, 주요 피크의 백분율 및/또는 주요 피크의 평균 백분율은 약 75%, 77.5%, 80%, 82.5% 또는 85%이다. 일부 실시양태에서, 주요 피크의 백분율은 HPIEC 검정에 의해 결정된다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 섹션 IV에 기재된 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 약 100 kDa이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 약 8.2, 약 8.3 및/또는 약 8.4의 pI를 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 오나르투주맙이다.
임의의 조성물의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 염기성 변이체의 백분율은 약 2.0% 이하이다. 임의의 조성물의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물의 로트 (예를 들어, 배치) 중 염기성 변이체의 평균 백분율은 약 2.0% 이하이다. 또한, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물이 본원에 제공되며, 여기서 조성물에 존재하는 염기성 변이체의 백분율은 약 2.0% 이하이다. 또한 항-c-met 항체를 포함하는 조성물의 로트 (예를 들어, 배치)가 본원에 제공되며, 여기서 조성물에 존재하는 염기성 변이체의 평균 백분율은 약 2.0% 이하이다. 일부 실시양태에서, 염기성 변이체의 백분율 및/또는 염기성 변이체의 평균 백분율은 약 1.5%, 1.25%, 1.1% 또는 1%, 또는 그 미만이다. 일부 실시양태에서, 염기성 변이체의 백분율 및/또는 염기성 변이체의 평균 백분율은 약 0.001% 내지 2%, 0.01% 내지 2%, 0.001% 내지 1.5%, 또는 0.01% 내지 1.5%, 0.001% 내지 1.0%, 또는 0.01% 내지 1.0%이다. 일부 실시양태에서, 염기성 변이체의 백분율 및/또는 염기성 변이체의 평균 백분율은 약 2%, 1.5%, 1.25%, 1.1% 또는 1%이다. 일부 실시양태에서, 염기성 변이체의 백분율은 HPIEC 검정에 의해 결정된다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 섹션 IV에 기재된 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 약 100 kDa이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 약 8.2, 약 8.3 및/또는 약 8.4의 pI를 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 오나르투주맙이다.
임의의 조성물의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물에서 항-c-met 항체 (예를 들어, 오나르투주맙) 농도는 약 0.5 mg/mL, 1 mg/mL, 1.5 mg/mL 또는 2 mg/mL, 또는 그 초과이다. 임의의 조성물의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물의 로트 (예를 들어, 배치) 중 항-c-met 항체 (예를 들어, 오나르투주맙) 농도는 약 0.5 mg/mL, 1 mg/mL, 1.5 mg/mL 또는 2 mg/mL, 또는 그 미만이다.
HCP (예를 들어, ECP)의 수준은 당업계에 공지된 방법에 의해 측정될 수 있다. 예를 들어, 이. 콜라이 단백질을 위한 다중생성물 샌드위치 ELISA를 이용하여 ECP의 수준을 정량화할 수 있다. 친화도-정제된 염소 항-전체 ECP 항체가 마이크로타이터 플레이트 웰 상에 고정화된다. 풀 샘플의 희석물을 웰에서 인큐베이션한 후에, 양고추냉이 퍼옥시다제에 접합된 친화도-정제된 염소 항-전체 ECP와 인큐베이션한다. 양고추냉이 퍼옥시다제 효소적 활성은 o-페닐렌디아민 디히드로클로라이드로 검출된다. ECP는 마이크로타이터 플레이트 판독기에서 490 nm에서의 흡광도를 판독함으로써 정량화된다. 4-파라미터 컴퓨터 곡선 핏팅 프로그램을 이용하여 표준 곡선을 생성하고, 샘플 농도를 자동으로 계산한다. 검정 전에, 샘플을 검정 희석제로 희석한다. 검정 희석제에서의 일련의 2-배 희석은 흡광도 판독이 표준 곡선의 범위 내에 포함되도록 수행될 수 있다. ELISA를 위한 검정 범위는 전형적으로 1.56 ng/mL 내지 100 ng/mL이다.
또한, DNA 수준은 실시예에 기재된 PCR 또는 rtPCT를 포함하나 이에 제한되지는 않는 당업계에 공지된 방법에 의해 측정될 수 있다. LpA 수준은 실시예에 기재된 바와 같은 ELISA를 포함하나 이에 제한되지는 않는 당업계에 공지된 방법에 의해 측정될 수 있다. 동역학적 발색 방법 LAL 검정을 이용하여, 본원에서 실시예에 기재된 바와 같은 리물루스 변형세포 용해물 (LAL)로서 기재된 박테리아 내독소를 측정할 수 있다. 단량체, 응집체 및 단편의 백분율은 실시예에 기재된 바와 같은 크기 배제 크로마토그래피를 포함하나 이에 제한되지는 않는 당업계에 공지된 방법에 의해 측정될 수 있다. 주요 피크, 산성 변이체 및 염기성 변이체의 백분율은 실시예에 기재된 바와 같은 양이온-교환 크로마토그래피를 포함하나 이에 제한되지는 않는 당업계에 공지된 방법에 의해 측정될 수 있다.
III. 재조합 방법
정제된 항-c-met 항체 조성물 및/또는 본원에 기재된 정제 방법에 사용하기 위한 항-c-met 항체는 예를 들어 미국 특허 번호 4,816,567에 기재된 바와 같은 생산된 재조합 방법 및 조성물일 수 있다. 한 실시양태에서, 항체를 코딩하는 단리된 핵산이 제공된다. 이러한 핵산은 항체의 VL을 포함하는 아미노산 서열 및/또는 VH를 포함하는 아미노산 서열 (예를 들어, 항체의 경쇄 및/또는 중쇄)을 코딩할 수 있다. 추가 실시양태에서, 이러한 핵산을 포함하는 하나 이상의 벡터 (예를 들어, 발현 벡터)가 제공된다. 추가 실시양태에서, 이러한 핵산을 포함하는 숙주 세포가 제공된다. 이러한 한 실시양태에서, 숙주 세포는 (1) 항체의 VL을 포함하는 아미노산 서열 및 항체의 VH를 포함하는 아미노산 서열을 코딩하는 핵산을 포함하는 벡터, 또는 (2) 항체의 VL을 포함하는 아미노산 서열을 코딩하는 핵산을 포함하는 제1 벡터 및 항체의 VH를 포함하는 아미노산 서열을 코딩하는 핵산을 포함하는 제2 벡터를 포함한다 (예를 들어, 이들로 형질전환됨). 추가 실시양태에서, 숙주 세포는 (1) 항체의 VL을 포함하는 아미노산 서열 및 항체의 VH를 포함하는 아미노산 서열 및 Fc 영역을 포함하는 아미노산 서열을 코딩하는 핵산을 포함하는 벡터, 또는 (2) 항체의 VL을 포함하는 아미노산 서열을 코딩하는 핵산을 포함하는 제1 벡터 및 항체의 VH를 포함하는 아미노산 서열을 코딩하는 핵산을 포함하는 제2 벡터 및 Fc 영역을 포함하는 아미노산 서열을 코딩하는 핵산을 포함하는 제3 벡터를 포함한다 (예를 들어, 이들로 형질전환됨). 1-아암 항체의 생산은 예를 들어 WO2005/063816에 기재되어 있다.
항체-코딩 벡터의 클로닝 또는 발현에 적합한 숙주 세포는 본원에 기재된 원핵 또는 진핵 세포를 포함한다. 예를 들어, 특히 글리코실화 및 Fc 이펙터 기능이 필요하지 않을 경우, 항체를 박테리아에서 생산할 수 있다. 박테리아에서의 항체 단편 및 폴리펩티드의 발현에 대해, 예를 들어 미국 특허 번호 5,648,237, 5,789,199, 및 5,840,523, WO/05/063816을 참조한다. (또한, 이. 콜라이에서의 항체 단편의 발현이 기재되어 있는 문헌 [Charlton, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ, 2003), pp. 245-254] 참조.) 발현 후에, 가용성 분획에서 박테리아 세포 페이스트로부터 항체를 단리할 수 있고, 추가로 정제할 수 있다.
원핵생물 뿐만 아니라, 진핵 미생물, 예컨대 글리코실화 경로가 "인간화"되어 항체를 부분 또는 완전 인간 글리코실화 패턴으로 생산되게 하는, 진균 및 효모 균주를 비롯한 사상 진균 또는 효모가 항체-코딩 벡터에 적합한 클로닝 또는 발현 숙주이다. 문헌 [Gerngross, Nat. Biotech. 22:1409-1414 (2004), 및 Li et al., Nat. Biotech. 24:210-215 (2006)]을 참조한다.
글리코실화 항체의 발현에 적합한 숙주 세포는 또한 다세포 유기체 (무척추동물 및 척추동물)로부터 유래된다. 무척추동물 세포의 예는 식물 및 곤충 세포를 포함한다. 곤충 세포와 함께, 특히 스포도프테라 프루기페르다(Spodoptera frugiperda) 세포를 형질감염시키는데 사용될 수 있는 다수의 바큘로바이러스 균주가 확인되었다.
식물 세포 배양물이 또한 숙주로서 이용될 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 번호 5,959,177, 6,040,498, 6,420,548, 7,125,978, 및 6,417,429 (트랜스제닉 식물에서 항체를 생산하기 위한 플랜티바디스(PLANTIBODIES)™ 기술을 기재함)를 참조한다.
척추동물 세포를 또한 숙주로서 이용할 수 있다. 예를 들어, 현탁액 중에서 성장시키는데 적합한 포유동물 세포주가 유용할 수 있다. 유용한 포유동물 숙주 세포주의 다른 예는 SV40에 의해 형질전환된 원숭이 신장 CV1 세포주 (COS-7); 인간 배아 신장 세포주 (예를 들어, 문헌 [Graham et al., J. Gen Virol. 36:59 (1977)]에 기재된 바와 같은 293 또는 293 세포); 새끼 햄스터 신장 세포 (BHK); 마우스 세르톨리 세포 (예를 들어, 문헌 [Mather, Biol. Reprod. 23:243-251 (1980)에 기재된 바와 같은 TM4 세포); 원숭이 신장 세포 (CV1); 아프리카 녹색 원숭이 신장 세포 (VERO-76); 인간 자궁경부 암종 세포 (HELA); 개 신장 세포 (MDCK; 버팔로 래트 간 세포 (BRL 3A); 인간 폐 세포 (W138); 인간 간 세포 (Hep G2); 마우스 유방 종양 (MMT 060562); 예를 들어, 문헌 [Mather et al., Annals N.Y. Acad. Sci. 383:44-68 (1982)]에 기재된 바와 같은 TRI 세포; MRC 5 세포; 및 FS4 세포이다. 다른 유용한 포유동물 숙주 세포주는 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포, 예를 들어 DHFR- CHO 세포 (문헌 [Urlaub et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980)]); 및 골수종 세포주, 예컨대 Y0, NS0 및 Sp2/0을 포함한다. 항체 생산에 적합한 특정 포유동물 숙주 세포주의 검토를 위해, 예를 들어 문헌 [Yazaki and Wu, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ), pp. 255-268 (2003)]을 참조한다.
한 실시양태에서, 숙주 세포는 원핵세포, 예를 들어 이. 콜라이이다. 한 실시양태에서, 항-c-met 항체를 코딩하는 핵산을 포함하는 이. 콜라이 숙주 세포를 항-c-met 항체의 발현에 적합한 조건 하에 배양하는 것, 및 이. 콜라이 숙주 세포 (또는 숙주 세포 배양 배지)로부터 항-c-met 항체를 회수하는 것을 포함하는, 항체를 제조하는 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 오나르투주맙이다.
한 실시양태에서, 숙주 세포는 진핵세포, 예를 들어 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포 또는 림프성 세포 (예를 들어, Y0, NS0, Sp20 세포)이다. 한 실시양태에서, 항-c-met 항체를 코딩하는 핵산을 포함하는 숙주 세포를 항-c-met 항체의 발현에 적합한 조건 하에 배양하는 것, 및 숙주 세포 (또는 숙주 세포 배양 배지)로부터 항-c-met 항체를 상기 기재된 방법에 의해 회수하는 것을 포함하는, 항체를 제조하는 방법이 제공된다.
항체의 재조합 생산을 위해, 예를 들어 상기 기재된 바와 같은 항체를 코딩하는 핵산을 단리하고, 추가의 클로닝 및/또는 숙주 세포에서의 발현을 위해 하나 이상의 벡터에 삽입한다. 이러한 핵산은 통상의 절차를 이용하여 용이하게 단리하고 서열분석할 수 있다 (예를 들어, 항체의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오티드 프로브를 사용하는 것에 의함).
IV. 항-c-met 항체
정제된 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 및/또는 본원에 기재된 정제 방법에 사용하기 위한 항-c-met 항체가 본원에 제공된다. 유용한 항-c-met 항체는 c-met에 대해 충분한 친화도 및 특이성으로 결합하는 항체를 포함하고, 하나 이상의 c-met 활성을 감소시키거나 억제할 수 있다. 정제된 항-c-met 항체 조성물의 항-c-met 항체 및/또는 정제 방법에 사용하기 위한 항-c-met 항체를 사용하여, c-met 활성화, 하류 분자 신호전달 (예를 들어, 미토겐 활성화 단백질 키나제 (MAPK) 인산화), 세포 증식, 세포 이동, 세포 생존, 세포 형태발생 및 혈관신생을 포함하나 이에 제한되지는 않는 HGF/c-met-연관 효과의 하나 이상의 측면을 조절할 수 있다. 이러한 효과는 c-met에 대한 리간드 (예를 들어, HGF) 결합의 파괴, c-met 인산화 및/또는 c-met 다량체화를 포함하는 임의의 생물학적 관련 메카니즘에 의해 조절될 수 있다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 길항제 항-c-met 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 c-met/HGF 활성이 관련된 질환 또는 상태에 개입한다.
본원에 기재된 임의의 정제된 항-c-met 항체 조성물 및/또는 정제 방법의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 길항제 항-c-met 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 항-c-met 항체 단편이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 IgG1 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 IgG2 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 c-met에 특이적인 단일 항원 결합 아암을 갖는다.
일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 1가이다. 1가 항체는 또한 예를 들어 WO 2007/147901 (이온성 상호작용 기재), WO 2007/059782, WO 2007/048037, WO 2008/145137 (비글리코실화 1가 항체), WO 2009/089004 (정전기 스티어링 효과 기재), WO 2010/129304 (폴리펩티드 사이의 인터페이스에서 접촉된 아미노산에 치환을 도입함으로써 이종다량체 분자를 제조하는 방법 기재), WO 2010/063785, WO 2011/133886, 및/또는 WO 2005/063816 (그의 전문이 본원에 참조로 포함됨)을 포함하나 이에 제한되지는 않는 당업계에 공지된 방법에 의해 만들어질 수 있다.
일부 실시양태에서, 항-c-met 항체 단편은 단일 항원 결합 아암 및 Fc 영역을 포함할 수 있다. 항-c-met 항체 단편은 본원에 기재되어 있으며 당업계에 1-아암 포맷으로 공지되어 있다. 따라서, 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체 단편은 Fc 영역을 포함하는 1-아암 항체 (즉, 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인이 단일 항원 결합 아암을 형성함)이며, 여기서 Fc 영역은 제1 및 제2 Fc 폴리펩티드를 포함하고, 여기서 제1 및 제2 Fc 폴리펩티드는 복합체로 존재한다. 일부 실시양태에서, 제1 및 제2 Fc 폴리펩티드는 항-c-met 항체 상기 항원 결합 아암을 포함하는 Fab 분자와 비교하여 안정성을 증가시키는 Fc 영역을 형성한다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 (a) 서열 19의 아미노산 서열, CH1 서열 및 제1 Fc 폴리펩티드를 포함하는 제1 폴리펩티드 및 (b) 서열 20의 아미노산 서열 및 CL1 서열을 포함하는 제2 폴리펩티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 (c) 제2 Fc 폴리펩티드를 포함하는 제3 폴리펩티드를 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 정제된 항-c-met 항체 조성물의 항-c-met 항체 및/또는 정제 방법에 사용하기 위한 항-c-met 항체 단편은 2가 항체의 항원 결합 부위를 포함하며, 이에 따라 항원에 결합하는 능력을 보유한다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체 단편은 Fc 영역을 포함하고, 2가 항체로 존재하는 경우에 Fc 영역과 정상적으로 연관된 생물학적 기능, 예컨대 FcRn 결합, 항체 반감기 조절, ADCC 기능 및 보체 결합 중 적어도 하나를 보유한다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체 단편은 ADCC 기능 및/또는 보체 결합 활성을 갖지 않는다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체 단편은 2가 항체와 실질적으로 유사한 생체내 반감기를 갖는 1가 항체이다. 예를 들어, 이러한 항체 단편은 단편에 생체내 안정성을 부여할 수 있는 Fc 서열에 연결된 항원 결합 아암을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, Fc 폴리펩티드는 야생형 힌지 서열의 일부 또는 전부를 (일반적으로 그의 N 말단에서) 포함한다. 일부 실시양태에서, Fc 폴리펩티드는 기능적 또는 야생형 힌지 서열을 포함하지 않는다.
일부 실시양태에서, 항-c-met 항체 단편은 WO 2005/063816에 기재된 바와 같은 1-아암 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체의 Fc 영역은 제1 및 제2 Fc 폴리펩티드를 포함하며, 여기서 제1 및 제2 폴리펩티드는 각각 야생형 인간 Fc와 관련하여 하나 이상의 돌연변이를 포함한다. 일부 실시양태에서, 함몰부 돌연변이는 T366S, L368A 및/또는 Y407V이다. 일부 실시양태에서, 돌출부 돌연변이는 T366W이다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리펩티드는 도 1에 도시된 Fc 서열을 포함하고, 제2 폴리펩티드는 도 2에 도시된 Fc 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 항체 단편 내의 Fc 서열의 동종이량체화는 최소화하면서 이종이량체화를 촉진하는 적어도 하나의 특성을 포함할 수 있다.
본원에 기재된 임의의 정제된 항-c-met 항체 조성물 및/또는 정제 방법의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 길항제 항-c-met 항체이다. 일부 실시양태에서, 차단 항-c-met 항체 또는 길항제 항-c-met 항체는 항원의 생물학적 활성을 완전히 억제한다. 길항작용 기능을 필요로 하며, 2가의 항-c-met 항체가 표적 항원에 대한 결합시에 (이것이 Fab 단편으로서 길항작용 항-c-met 항체일지라도) 바람직하지 않은 효능작용 효과를 발생시키는 병리학적 상태를 치료하기 위해, 1-아암 항체 (즉, 단일 항원 결합 아암을 포함하는 항체)의 1가 특성은 항체의 표적 분자에 대한 항-c-met 항체의 결합시에 길항작용 기능을 발생시키고/거나 보장한다. 또한, Fc 영역을 포함하는 1-아암 항체는 유사한/실질적으로 동일한 항원 결합 특성을 갖는 Fab 형태와 비교하여 우수한 약동학 특성 (예컨대, 생체내에서 증진된 반감기 및/또는 감소된 제거율)을 특징으로 하며, 이에 따라 종래의 1가 Fab 항체를 사용하는데 있어서의 주요 문제점이 극복된다.
정제된 항-c-met 항체의 항-c-met 항체 및/또는 정제 방법에 사용하기 위한 항-c-met 항체 (1-아암 항체로 제공될 수 있음)는 당업계에 공지된 것을 포함한다 (예를 들어, 문헌 [Martens, T. et al., Clin. Cancer Res. 12 (20 Pt. 1):6144 (2006)]; US 6,468,529; WO2006/015371; WO2007/063816, 및 WO2010/045345 참조, 이들의 전문이 참조로 포함됨). 일부 실시양태에서, 정제된 항-c-met 항체의 항-c-met 항체 및/또는 정제 방법에 사용하기 위한 항-c-met 항체는 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션(American Type Culture Collection) (ATCC) 등록 번호 ATCC HB-11894 (하이브리도마 1A3.3.13) 또는 HB-11895 (하이브리도마 5D5.11.6) 하에 기탁된 하이브리도마 세포주에 의해 생산된 모노클로날 항체의 HVR 서열 중 하나 이상을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 ATCC 등록 번호 ATCC HB-11894 (하이브리도마 1A3.3.13) 또는 HB-11895 (하이브리도마 5D5.11.6)의 경쇄 가변 도메인의 HVR 중 하나 이상 및/또는 중쇄 가변 도메인의 HVR 중 하나 이상 및 Fc 폴리펩티드를 포함하는 1-아암 항체이다.
임의의 정제된 항-c-met 항체 조성물 및/또는 정제 방법의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 도 1에 도시된 HVR1-LC, HVR2-LC 및 HVR3-LC 서열 (서열 1-3) 중 하나 이상을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 도 1에 도시된 HVR1-HC, HVR2-HC 및 HVR3-HC 서열 (서열 4-6) 중 하나 이상을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 도 1에 도시된 HVR1-LC, HVR2-LC 및 HVR3-LC 서열 (서열 1-3) 중 하나 이상을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 도 1에 도시된 HVR1-HC, HVR2-HC 및 HVR3-HC 서열 (서열 4-6) 중 하나 이상을 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄 가변 도메인은 도 1에 도시된 HVR1-HC, HVR2-HC 및 HVR3-HC 서열 (서열 4-6) 중 하나 이상 및 도 1에 도시된 FR1-HC, FR2-HC, FR3-HC 및 FR4-HC 서열 (서열 11-14) 중 하나 이상을 포함한다. 일부 실시양태에서, 경쇄 가변 도메인은 도 1에 도시된 HVR1-LC, HVR2-LC 및 HVR3-LC 서열 (서열 1-3) 중 하나 이상 및 도 1에 도시된 FR1-LC, FR2-LC, FR3-LC 및 FR4-LC 서열 (서열 7-10) 중 하나 이상을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 경쇄 가변 도메인의 HVR (서열 1-3) 중 하나 이상 및/또는 중쇄 가변 도메인의 HVR (서열 4-6) 중 하나 이상 및 Fc 폴리펩티드를 포함하는 1-아암 항체이다.
본원에 기재된 임의의 정제된 항-c-met 항체 조성물 및/또는 정제 방법의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 (a) (i) 서열 A1-A17을 포함하는 HVR-L1 (여기서, A1-A17은 KSSQSLLYTSSQKNYLA (서열 23)임); (ii) 서열 B1-B7을 포함하는 HVR-L2 (여기서, B1-B7은 WASTRES (서열 24)임); (iii) 서열 C1-C9를 포함하는 HVR-L3 (여기서, C1-C9는 QQYYAYPWT (서열 25)임); (iv) 서열 D1-D10을 포함하는 HVR-H1 (여기서, D1-D10은 GYTFTSYWLH (서열 26)임); (v) 서열 E1-E18을 포함하는 HVR-H2 (여기서, E1-E18은 GMIDPSNSDTRFNPNFKD (서열 27)임); 및 (vi) 서열 F1-F11을 포함하는 HVR-H3 (여기서, F1-F11은 XYGSYVSPLDY (서열 28)이고, X는 R이 아님)으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4 또는 5개의 HVR 서열; 및 (b) 적어도 1개의 변이체 HVR (여기서, 변이체 HVR 서열은 서열 23, 24, 25, 26, 27 또는 28에 도시된 서열의 적어도 1개의 잔기에서의 변형을 포함함)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체의 HVR-L1은 서열 23의 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, HVR-L2는 서열 24의 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, HVR-L3은 서열 25의 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, HVR-H1은 서열 26의 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, HVR-H2는 서열 27의 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, HVR-H3은 서열 28의 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, HVR-H3은 TYGSYVSPLDY (서열 29)를 포함한다. 일부 실시양태에서, HVR-H3은 SYGSYVSPLDY (서열 30)를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 인간화 또는 인간의 이들 서열 (본원에 기재된 바와 같이 조합됨)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 경쇄 가변 도메인 (서열 23-25)의 HVR 중 하나 이상 및/또는 중쇄 가변 도메인 (서열 26-30)의 HVR 중 하나 이상 및 Fc 폴리펩티드를 포함하는 1-아암 항체이다.
또한, 각각의 HVR이 서열 23, 24, 25, 26, 27, 28 및 29로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 포함하거나, 이로 이루어지거나 또는 이로 본질적으로 이루어지며, 여기서 서열 23은 HVR-L1에 상응하고, 서열 24는 HVR-L2에 상응하고, 서열 25는 HVR-L3에 상응하고, 서열 26은 HVR-H1에 상응하고, 서열 27은 HVR-H2에 상응하고, 서열 26, 27 또는 28은 HVR-H3에 상응하는 것인, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개의 HVR을 포함하는, 정제된 항-c-met 항체 조성물의 및/또는 본원에 기재된 정제 방법에 사용하기 위한 항-c-met 항체가 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 각각 서열 23, 24, 25, 26, 27 및 29를 순서대로 포함하는 HVR-L1, HVR-L2, HVR-L3, HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 각각 서열 23, 24, 25, 26, 27 및 30을 순서대로 포함하는 HVR-L1, HVR-L2, HVR-L3, HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함한다.
변이체 HVR은 HVR 내에 1개 이상의 잔기의 변형을 가질 수 있다. 일부 실시양태에서, HVR-L2 변이체는 하기 위치: B1 (M 또는 L), B2 (P, T, G 또는 S), B3 (N, G, R 또는 T), B4 (I, N 또는 F), B5 (P, I, L 또는 G), B6 (A, D, T 또는 V) 및 B7 (R, I, M 또는 G)의 임의의 조합에서 1-5개 (1, 2, 3, 4 또는 5개)의 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, HVR-H1 변이체는 하기 위치: D3 (N, P, L, S, A, I), D5 (I, S 또는 Y), D6 (G, D, T, K, R), D7 (F, H, R, S, T 또는 V) 및 D9 (M 또는 V)의 임의의 조합에서 1-5개 (1, 2, 3, 4 또는 5개)의 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, HVR-H2 변이체는 하기 위치: E7 (Y), E9 (I), E10 (I), E14 (T 또는 Q), E15 (D, K, S, T 또는 V), E16 (L), E17 (E, H, N 또는 D) 및 E18 (Y, E 또는 H)의 임의의 조합에서 1-4개 (1, 2, 3 또는 4개)의 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, HVR-H3 변이체는 하기 위치: F1 (T, S), F3 (R, S, H, T, A, K), F4 (G), F6 (R, F, M, T, E, K, A, L, W), F7 (L, I, T, R, K, V), F8 (S, A), F10 (Y, N) 및 F11 (Q, S, H, F)의 임의의 조합에서 1-5개 (1, 2, 3, 4 또는 5개)의 치환을 포함한다. 각각의 위치 다음의 괄호 내의 문자(들)는 예시적인 치환 (즉, 대체) 아미노산을 나타내고; 당업자에게 명백한 바와 같이, 본원에 기재된 맥락에서 다른 아미노산의 치환 아미노산으로서의 적합성은 당업계에 공지된 및/또는 본원에서 기재된 기술을 사용하여 통상적으로 평가될 수 있다. 일부 실시양태에서, HVR-L1은 서열 23의 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 HVR-H3 내의 F1은 T이다. 일부 실시양태에서, 변이체 HVR-H3 내의 F1은 S이다. 일부 실시양태에서, 변이체 HVR-H3 내의 F3은 R이다. 일부 실시양태에서, 변이체 HVR-H3 내의 F3은 S이다. 일부 실시양태에서, 변이체 HVR-H3 내의 F7은 T이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 F1이 T 또는 S이고, F3이 R 또는 S이고, F7은 T인 변이체 HVR-H3을 포함한다.
일부 실시양태에서, 정제된 항-c-met 항체 조성물의 항-c-met 항체 및/또는 정제 방법에 사용하기 위한 항-c-met 항체는 F1이 T이고, F3이 R이고, F7이 T인 변이체 HVR-H3을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 F1이 S인 변이체 HVR-H3을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 F1이 T이고, F3이 R인 변이체 HVR-H3을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 F1이 S이고, F3이 R이고, F7이 T인 변이체 HVR-H3을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 F1이 T이고, F3이 S이고, F7이 T이고, F8이 S인 변이체 HVR-H3을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 F1이 T이고, F3이 S이고, F7이 T이고, F8이 A인 변이체 HVR-H3을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 변이체 HVR-H3 항체는 각각 서열 1, 2, 3, 4 및 5에 도시된 서열을 순서대로 포함하는 HVR-L1, HVR-L2, HVR-L3, HVR-H1 및 HVR-H2를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 이들 항체는 인간 하위군 III 중쇄 프레임워크 컨센서스 서열을 추가로 포함한다. 이들 항체의 일부 실시양태에서, 프레임워크 컨센서스 서열은 위치 71, 73 및/또는 78에서 치환을 포함한다. 이들 항체의 일부 실시양태에서, 위치 71은 A이고/거나, 73은 T이고/거나 78은 A이다. 이들 항체의 일부 실시양태에서, 이들 항체는 인간 κI 경쇄 프레임워크 컨센서스 서열을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 정제된 항-c-met 항체 조성물의 항-c-met 항체 및/또는 정제 방법에 사용하기 위한 항-c-met 항체는 B6이 V인 변이체 HVR-L2를 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 변이체 HVR-L2 항-c-met 항체는 각각 서열 23, 25, 26, 27 및 28에 도시된 서열을 순서대로 포함하는 HVR-L1, HVR-L3, HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 변이체 HVR-L2 항-c-met 항체는 각각 서열 23, 25, 26, 27 및 29에 도시된 서열을 순서대로 포함하는 HVR-L1, HVR-L3, HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 변이체 HVR-L2 항-c-met 항체는 각각 서열 23, 25, 26, 27 및 30에 도시된 서열을 순서대로 포함하는 HVR-L1, HVR-L3, HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 이들 항-c-met 항체는 인간 하위군 III 중쇄 프레임워크 컨센서스 서열을 추가로 포함한다. 이들 항-c-met 항체의 일부 실시양태에서, 프레임워크 컨센서스 서열은 위치 71, 73 및/또는 78에서의 치환을 포함한다. 이들 항-c-met 항체의 일부 실시양태에서, 위치 71은 A이고/거나, 73은 T이고/거나 78은 A이다. 이들 항-c-met 항체의 일부 실시양태에서, 이들 항체는 인간 κI 경쇄 프레임워크 컨센서스 서열을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 정제된 항-c-met 항체 조성물의 항-c-met 항체 및/또는 정제 방법에 사용하기 위한 항-c-met 항체는 E14가 T이고, E15가 K이고, E17이 E인 변이체 HVR-H2를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 E17이 E인 변이체 HVR-H2를 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 변이체 HVR-H3 항-c-met 항체는 각각 서열 23, 24, 25, 26 및 28에 도시된 서열을 순서대로 포함하는 HVR-L1, HVR-L2, HVR-L3, HVR-H1 및 HVR-H3을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 변이체 HVR-H2 항-c-met 항체는 각각 서열 23, 24, 25, 26 및 29에 도시된 서열을 순서대로 포함하는 HVR-L1, HVR-L2, HVR-L3, HVR-H1 및 HVR-H3을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 변이체 HVR-H2 항-c-met 항체는 각각 서열 23, 24, 25, 26 및 30에 도시된 서열을 순서대로 포함하는 HVR-L1, HVR-L2, HVR-L3, HVR-H1 및 HVR-H3을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 이들 항-c-met 항체는 인간 하위군 III 중쇄 프레임워크 컨센서스 서열을 추가로 포함한다. 이들 항-c-met 항체의 일부 실시양태에서, 프레임워크 컨센서스 서열은 위치 71, 73 및/또는 78에서의 치환을 포함한다. 이들 항-c-met 항체의 일부 실시양태에서, 위치 71은 A이고/거나, 73은 T이고/거나 78은 A이다. 이들 항체의 일부 실시양태에서, 이들 항-c-met 항체는 인간 κI 경쇄 프레임워크 컨센서스 서열을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 정제된 항-c-met 항체 조성물의 항-c-met 항체 및/또는 정제 방법에 사용하기 위한 항-c-met 항체는 (a) 서열:
Figure pct00005
를 포함하는 중쇄 가변 도메인 및/또는 (b) 서열:
Figure pct00006
을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 (a) 경쇄 가변 도메인 (서열 20) 및/또는 (b) 중쇄 가변 도메인 (서열 19); 및 (c) Fc 폴리펩티드를 포함하는 1-아암 항체이다.
일부 실시양태에서, 정제된 항-c-met 항체 조성물의 및/또는 정제 방법에 사용하기 위한 항-c-met 항체는 (a) 서열:
Figure pct00007
를 포함하는 중쇄 가변 도메인의 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3 및/또는 (b) 서열:
Figure pct00008
을 포함하는 경쇄 가변 도메인의 HVR-L1, HVR-L2 및 HVR-L3을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 (a) 경쇄 가변 도메인 (서열 20) 및/또는 (b) 중쇄 가변 도메인 (서열 19); 및 (c) Fc 폴리펩티드를 포함하는 1-아암 항체이다. 일부 실시양태에서, Fc 영역은 인간 IgG (예를 들어, IgG1, 2, 3 또는 4)의 것이다. 일부 실시양태에서, 제1 Fc 폴리펩티드는 도 1에 도시된 Fc 서열 (서열 17)을 포함하고, 제2 Fc 폴리펩티드는 도 2에 도시된 Fc 서열 (서열 18)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 Fc 폴리펩티드는 도 2에 도시된 Fc 서열 (서열 18)을 포함하고, 제2 Fc 폴리펩티드는 도 1에 도시된 Fc 서열 (서열 17)을 포함한다.
일부 실시양태에서, 정제된 항-c-met 항체 조성물의 항-c-met 항체 및/또는 정제 방법에 사용하기 위한 항-c-met 항체는 항-c-met 항체 단편이며, 여기서 항체 단편은 (a) 서열 19를 포함하는 중쇄 가변 도메인, CH1 서열 (예를 들어, 서열 16) 및 제1 Fc 폴리펩티드를 포함하는 제1 폴리펩티드; 및 (b) 서열 20을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 CL1 서열 (예를 들어, 서열 15)을 포함하는 제2 폴리펩티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, Fc 영역은 인간 IgG (예를 들어, IgG1, 2, 3 또는 4)의 것이다. 일부 실시양태에서, 제1 Fc 폴리펩티드는 도 1에 도시된 Fc 서열 (서열 17)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 Fc 폴리펩티드는 도 2에 도시된 Fc 서열 (서열 18)을 포함한다.
일부 실시양태에서, 정제된 항-c-met 항체 조성물의 항-c-met 항체 및/또는 정제 방법에 사용하기 위한 항-c-met 항체는 항-c-met 항체 단편이며, 여기서 항체 단편은 (a) 서열 19를 포함하는 중쇄 가변 도메인, CH1 서열 (예를 들어, 서열 16) 및 제1 Fc 폴리펩티드를 포함하는 제1 폴리펩티드; (b) 서열 20을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 CL1 서열 (예를 들어, 서열 15)을 포함하는 제2 폴리펩티드; 및 (c) 제2 Fc 폴리펩티드를 포함하는 제3 폴리펩티드를 포함하며, 여기서 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인은 복합체로 존재하며 단일 항원 결합 아암을 형성하고, 제1 및 제2 Fc 폴리펩티드는 복합체로 존재한다. 일부 실시양태에서, 제1 및 제2 Fc 폴리펩티드는 상기 항원 결합 아암을 포함하는 Fab 분자에 비해 상기 항체 단편의 안정성을 증가시키는 Fc 영역을 형성한다. 일부 실시양태에서, Fc 영역은 인간 IgG (예를 들어, IgG1, 2, 3 또는 4)의 것이다. 일부 실시양태에서, 제1 Fc 폴리펩티드는 도 1에 도시된 Fc 서열 (서열 17)을 포함하고, 제2 Fc 폴리펩티드는 도 2에 도시된 Fc 서열 (서열 18)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 Fc 폴리펩티드는 도 2에 도시된 Fc 서열 (서열 18)을 포함하고, 제2 Fc 폴리펩티드는 도 1에 도시된 Fc 서열 (서열 17)을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-c-met 항체 또는 그의 항-c-met 항체 단편에서, 항체는 (a) 서열 19를 포함하는 중쇄 가변 도메인, CH1 서열, 및 제1 Fc 폴리펩티드를 포함하는 제1 폴리펩티드; (b) 서열 20을 포함하는 경쇄 가변 도메인, 및 CL1 서열을 포함하는 제2 폴리펩티드; 및 (c) 제2 Fc 폴리펩티드를 포함하는 제3 폴리펩티드를 포함하고, 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인은 복합체로 존재하며 단일 항원 결합 아암을 형성하고, 제1 및 제2 Fc 폴리펩티드는 복합체로 존재하며, 상기 항원 결합 아암을 포함하는 Fab 분자에 비해 상기 항체 단편의 안정성을 증가시키는 Fc 영역을 형성한다. 일부 실시양태에서, Fc 영역은 인간 IgG (예를 들어, IgG1, 2, 3 또는 4)의 것이다. 일부 실시양태에서, 제1 Fc 폴리펩티드는 도 1에 도시된 Fc 서열 (서열 17)을 포함하고, 제2 Fc 폴리펩티드는 도 2에 도시된 Fc 서열 (서열 18)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 Fc 폴리펩티드는 도 2에 도시된 Fc 서열 (서열 18)을 포함하고, 제2 Fc 폴리펩티드는 도 1에 도시된 Fc 서열 (서열 17)을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 (a) 중쇄를 포함하는 제1 폴리펩티드 (상기 폴리펩티드는 서열:
Figure pct00009
를 포함함); (b) 경쇄를 포함하는 제2 폴리펩티드 (상기 폴리펩티드는 서열
Figure pct00010
를 포함함); 및 Fc 서열을 포함하는 제3 폴리펩티드 (상기 폴리펩티드는 서열
Figure pct00011
를 포함함)를 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인은 복합체로 존재하며 단일 항원 결합 아암을 형성하고, 제1 및 제2 Fc 폴리펩티드는 복합체로 존재한다. 일부 실시양태에서, 제1 및 제2 Fc 폴리펩티드는 상기 항원 결합 아암을 포함하는 Fab 분자에 비해 상기 항체 단편의 안정성을 증가시키는 Fc 영역을 형성한다.
일부 실시양태에서, 정제된 항-c-met 항체 조성물의 항-c-met 항체 및/또는 정제 방법에 사용하기 위한 항-c-met 항체는 1가 항체이다. 일부 실시양태에서, 정제된 항-c-met 항체 조성물의 항-c-met 항체 및/또는 정제 방법에 사용하기 위한 항-c-met 항체는 인간화, 인간 또는 키메라 항체이다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 항-c-met 항체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 항-c-met 항체가 생산되도록 발현된다. 일부 실시양태에서, 임의의 항-c-met 항체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 시험관내 또는 생체내 (예를 들어, CHO 세포 또는 이. 콜라이 세포)에서 발현된다.
일부 실시양태에서, 정제된 항-c-met 항체 조성물의 및/또는 본원에 기재된 정제 방법에 사용하기 위한 항-c-met 항체는 오나르투주맙 (교환가능하게 MetMAb로 명명됨)이며, 이는 Fc 영역을 포함하는 1-아암 항체이다. 오나르투주맙의 서열은 도 1 및 2에 도시된다. 오나르투주맙 (또한 OA5D5v2 및 MetMAb로 명명됨)은 또한 예를 들어, WO2006/015371; WO2010/04345; 및 문헌 [Jin et al., Cancer Res (2008) 68:4360]에 기재되어 있다. 오나르투주맙의 바이오시밀러 버전이 또한 제약 제제에 사용하기 위해 본원에서 고려되고 포괄된다.
일부 실시양태에서, 정제된 항-c-met 항체 조성물의 및/또는 본원에 기재된 정제 방법에 사용하기 위한 항-c-met 항체는 c-met Sema 도메인의 적어도 일부 또는 그의 변이체에 특이적으로 결합한다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 길항제이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 길항제 항체는 LDAQT (서열 31) (예를 들어, c-met의 잔기 269-273), LTEKRKKRS (서열 32) (예를 들어, c-met의 잔기 300-308), KPDSAEPM (서열 33) (예를 들어, c-met의 잔기 350-357) 및 NVRCLQHF (서열 34) (예를 들어, c-met의 잔기 381-388)로 이루어진 군으로부터 선택된 서열 중 적어도 하나에 특이적으로 결합한다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 길항제 항체는 LDAQT (서열 31) (예를 들어, c-met의 잔기 269-273), LTEKRKKRS (서열 32) (예를 들어, c-met의 잔기 300-308), KPDSAEPM (서열 33) (예를 들어, c-met의 잔기 350-357) 및 NVRCLQHF (서열 34) (예를 들어, c-met의 잔기 381-388)로 이루어진 군으로부터 선택된 서열 중 적어도 하나의 부분 또는 전부에 의해 형성된 입체형태 에피토프에 특이적으로 결합한다. 일부 실시양태에서, 길항제 항체는 서열 LDAQT (서열 31), LTEKRKKRS (서열 32), KPDSAEPM (서열 33) 및/또는 NVRCLQHF (서열 34)와 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98% 서열 동일성 또는 유사성을 갖는 아미노산 서열에 특이적으로 결합한다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 길항제 항-c-met 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 1-아암 항체이다. 관심 항체에 의해 결합된 항원 상의 에피토프에 결합하는 항체에 대한 스크리닝을 위해, 문헌 [Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Ed Harlow and David Lane (1988)]에 기재된 것과 같은 통상의 교차-차단 검정을 수행할 수 있다.
본 발명의 방법에 사용하기에 적합한 다른 항-c-met 항체가 본원에 기재되어 있으며 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, WO05/016382에 개시된 항-c-met 항체 (항체 13.3.2, 9.1.2, 8.70.2, 8.90.3을 포함하나 이에 제한되지는 않음); 제노바의 CBA에 ICLC 번호 PD 03001로 기탁된 하이브리도마 세포주에 의해 생산되거나, 또는 HGF 수용체의 β 쇄의 세포외 도메인 상의 에피토프를 인식하는 항-c-met 항체 (상기 에피토프는 모노클로날 항체에 의해 인식되는 것과 동일함)); WO2007/126799에 개시된 항-c-met 항체 (04536, 05087, 05088, 05091, 05092, 04687, 05097, 05098, 05100, 05101, 04541, 05093, 05094, 04537, 05102, 05105, 04696, 04682를 포함하나 이에 제한되지는 않음); WO2009/007427에 개시된 항 c-met 항체 (CNCM, 인스티튜트 파스퇴르(Institut Pasteur), 프랑스 파리)에 2007년 3월 14일에 번호 I-3731로, 2007년 3월 14일에 번호 I-3732로, 2007년 7월 6일에 번호 I-3786으로, 2007년 3월 14일에 번호 I-3724로 기탁된 항체를 포함하나 이에 제한되지는 않음); 20110129481에 개시된 항-c-met 항체; US20110104176에 개시된 항-c-met 항체; WO2009/134776에 개시된 항-c-met 항체; WO2010/059654에 개시된 항-c-met 항체; WO2011/020925에 개시된 항-c-met 항체 (CNCM, 인스티튜트 파스퇴르 (프랑스 파리)에 2008년 3월 12일에 번호 I-3949로 기탁된 하이브리도마 및 2010년 1월 14일에 번호 I-4273으로 기탁된 하이브리도마로부터 선택된 항체를 포함하나 이에 제한되지는 않음); WO 2011/110642에 개시된 항-c-met 항체; WO 2011/090754에 개시된 항-c-met 항체; WO2007/090807에 개시된 항-c-met 항체; WO2012059561A1에 개시된 항-c-met 항체.
일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 관심 항체의 중쇄의 가변 도메인을 포함하는 제1 단백질 쇄 및 IgG의 CH2 및 CH3 도메인 및 관심 항체의 경쇄의 가변 도메인을 포함하는 제2 단백질 쇄 및 상기 IgG의 CH2 및 CH3 도메인의 이종이량체를 포함하는 1가 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 가변 경쇄 영역 및 불변 경쇄 영역을 포함하는 경쇄를 포함하는 1가 항체이며, 여기서 불변 경쇄 영역은 이것이 디술피드 결합을 형성할 수 있는 아미노산을 함유하지 않도록 변형된다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 가변 중쇄 영역 및 불변 중쇄 영역을 포함하는 1가 항체이며, 여기서 불변 중쇄 영역은 이것이 디술피드 결합을 형성할 수 있는 아미노산을 함유하지 않도록 변형된다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 노브:홀-유형 돌연변이를 포함하는 1가 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 R238Q, R238Q, D239E, K292R, Q302E, P328L, R285Q, S314N, N322K, M327V, K339R, Q349E, I352V, R365H, F366Y 및 P375L로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 CH3 돌연변이를 포함하는 1가 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 경쇄-Fc 융합을 포함하는 1가 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 힌지 결실을 포함하는 1가 항체이다.
본원에 기재된 임의의 정제된 항-c-met 항체 조성물 및/또는 정제 방법의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 HGF/c-met 활성화를 방해 (c-met의 세포외 부분에 대한 HGF 결합 및 수용체 다량체화의 방해를 포함하나 이에 제한되지는 않음)할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 HGF/c-met 경로의 비정상적 또는 원치않는 신호전달과 연관된 병리학적 상태를 치료 또는 진단하는데 유용하다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 c-met 리간드 결합, c-met 이량체화, 활성화, 및 HGF/c-met 신호전달과 연관된 다른 생물학적/생리학적 활성의 조절을 포함하는 HGF/c-met 경로를 조절할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 HGF/c-met 신호전달 경로를 파괴할 수 있다. 본원에 기재된 임의의 항-c-met 항체의 일부 실시양태에서, c-met에 대한 항-c-met 항체의 결합은 HGF에 의한 c-met 활성화를 억제한다. 임의의 항-c-met 항체의 일부 실시양태에서, 세포에서 c-met에 대한 항-c-met 항체의 결합은 세포의 증식, 생존, 산란, 형태발생 및/또는 운동성을 억제한다.
일부 경우에, c-met에 대한 리간드 (예컨대 HGF)의 결합을 방해하지 않는 항-c-met 항체를 사용하는 것이 유리할 수 있다. 따라서, 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 c-met 상의 HGF 결합 부위에 결합하지 않는다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 c-met에 대한 HGF 결합을 실질적으로 억제하지 않는다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 c-met에 대한 결합에 대해 HGF와 실질적으로 경쟁하지 않는다. 한 예에서, 항-c-met 항체는 하나 이상의 다른 길항제와 함께 사용될 수 있으며, 여기서 길항제는 HGF/c-met 축 내에서 상이한 과정 및/또는 기능에서 표적화된다. 따라서, 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 또 다른 c-met 길항제 (예컨대 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션 등록 번호 ATCC HB-11894 (하이브리도마 1A3.3.13) 하에 기탁된 하이브리도마 세포주에 의해 생산된 모노클로날 항체의 Fab 단편)에 의해 결합된 에피토프와 구별되는 c-met 상의 에피토프에 결합한다. 또 다른 실시양태에서, 항-c-met 항체는 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션 등록 번호 ATCC HB-11894 (하이브리도마 1A3.3.13) 하에 기탁된 하이브리도마 세포주에 의해 생산된 모노클로날 항체의 Fab 단편과 구별된다 (즉, 이러한 단편이 아님).
일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 제1 동물 종의 c-met에 결합하고 제2 동물 종의 c-met에는 특이적으로 결합하지 않는다. 일부 실시양태에서, 제1 동물 종은 인간 및/또는 영장류 (예를 들어, 시노몰구스 원숭이)이고, 제2 동물 종은 뮤린 (예를 들어, 마우스) 및/또는 개이다. 일부 실시양태에서, 제1 동물 종은 인간이다. 일부 실시양태에서, 제1 동물 종은 영장류, 예를 들어 시노몰구스 원숭이이다. 일부 실시양태에서, 제2 동물 종은 뮤린, 예를 들어 마우스이다. 일부 실시양태에서, 제2 동물 종은 개이다.
일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 상기 대상체에서 면역원성 반응을 거의 내지 전혀 도출하지 않는다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 면역원성 반응을 임상적으로-허용되는 수준 이하로 도출한다.
임의의 정제된 항-c-met 항체 조성물 및/또는 정제 방법의 일부 실시양태에서, 변경된 항체는 일부 이펙터 기능을 보유하나 모든 이펙터 기능을 보유하지는 않는다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 보체 고갈 및/또는 ADCC 활성을 보유하지 않는다. 일부 실시양태에서, 생산된 이뮤노글로불린의 Fc 활성을 측정하여 오직 원하는 특성 (예를 들어, 반감기, 그러나 보체 고갈 및/또는 ADCC 활성은 아님)을 유지하는지 확인한다. CDC 및/또는 ADCC 활성의 감소/고갈을 확인하기 위해 시험관내 및/또는 생체내 세포독성 검정을 수행할 수 있다. 예를 들어, 항체에 FcγR 결합이 결손되어 있지만 (따라서, 아마도 ADCC 활성이 결손될 것임), FcRn 결합 능력은 보유하고 있는 것을 확인하기 위해서 Fc 수용체 (FcR) 결합 검정을 수행할 수 있다. ADCC를 매개하는 1차 세포인 NK 세포는 FcγRIII만을 발현하는 반면에, 단핵구는 FcγRI, FcγRII 및 FcγRIII를 발현한다. 조혈 세포 상에서의 FcR 발현은 문헌 [Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol 9:457-92 (1991)]의 페이지 464, 표 3에 요약되어 있다. 관심 분자의 ADCC 활성을 평가하기 위한 시험관내 검정의 예가 미국 특허 번호 5,500,362 또는 5,821,337에 기재되어 있다. 이러한 검정에 유용한 이펙터 세포는 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC) 및 자연 킬러 (NK) 세포를 포함한다. 대안적으로 또는 추가로, 관심 분자의 ADCC 활성은 생체내에서, 예를 들어 문헌 [Clynes et al. PNAS (USA) 95:652-656 (1998)]에 개시된 바와 같은 동물 모델에서 평가할 수 있다. 또한, C1q 결합 검정을 수행하여, 항체가 C1q에 결합할 수 없고, 따라서 CDC 활성이 결핍되었는지를 확인할 수 있다. 보체 활성화를 평가하기 위해, 예를 들어 문헌 [Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202:163 (1996)]에 기재된 바와 같은 CDC 검정을 수행할 수 있다. 또한, FcRn 결합 및 생체내 청소율/반감기 결정은 당업계에 공지된 방법을 이용하여 수행할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 글리코실화된다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 실질적으로 비-글리코실화된다.
정제된 항-c-met 항체 조성물의 및/또는 정제 방법에 사용하기 위한 항-c-met 항체는 당업계에 공지된 다양한 검정에 의해 그의 물리적/화학적 특성 및 생물학적 기능에 대해 특성화될 수 있다. 정제된 항-c-met 항체는 N-말단 서열분석, 아미노산 분석, 비-변성 크기 배제 고압 액체 크로마토그래피 (HPLC), 질량 분광측정법, 이온 교환 크로마토그래피 및 파파인 소화를 포함하나 이에 제한되지는 않는 일련의 검정에 의해 추가로 특성화될 수 있다.
본원에 기재된 임의의 정제된 항-c-met 항체 조성물 및/또는 정제 방법의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 (1) 로우리(Lowry) 방법에 의해 결정시에 항체의 95 중량%를 초과하는 정도, 가장 바람직하게는 99 중량%를 초과하는 정도로, (2) 스피닝 컵 서열분석기의 사용에 의해 N-말단 또는 내부 아미노산 서열의 적어도 15개의 잔기를 얻기에 충분한 정도로, 또는 (3) 쿠마시 블루 또는 은 염색을 이용하여 환원 또는 비환원 조건 하에 SDS-PAGE에 의해 균질한 것으로 나타날 정도로 정제될 수 있다.
또한, 본원에 기재된 임의의 정제된 항-c-met 항체 조성물 및/또는 정제 방법의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 하기 섹션 1-8에 기재된 바와 같은 임의의 특징을 단독으로 또는 조합하여 포함할 수 있다:
1. 항체 친화도
일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 ≤ 1μM, ≤ 100 nM, ≤ 10 nM, ≤ 1 nM, ≤ 0.1 nM, ≤ 0.01 nM 또는 ≤ 0.001 nM (예를 들어 10-8 M 이하, 예를 들어 10-8 M 내지 10-13 M, 예를 들어, 10-9 M 내지 10-13 M)의 해리 상수 (Kd)를 갖는다.
리간드의 그의 수용체에 대한 결합 친화도는 임의의 다양한 검정을 이용하여 결정되고 다양한 정량적 값에 의해 나타내어질 수 있다. 당업계에 공지되어 있으며 본원에서 이용될 수 있는 항원 결합 검정은 웨스턴 블롯, 방사성면역검정, 효소-연결 면역흡착 검정 (ELISA), "샌드위치" 면역검정, 표면 플라즈몬 공명 기반 검정 (예컨대, PCT 출원 공개 번호 WO2005/012359에 기재된 바와 같은 비아코어 검정), 면역침전 검정, 형광 면역검정 및 단백질 A 면역검정과 같은 기술을 이용하여 임의의 직접적 또는 경쟁적 결합 검정을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
따라서, 일부 실시양태에서, 결합 친화도는 Kd 값으로 표현되고, (예를 들어, 최소화된 결합력 효과와 함께) 내인성 결합 친화도를 반영한다. 선택된 항-c-met 항체는 통상적으로 c-met에 대해 충분히 강한 결합 친화도를 가질 것이고, 예를 들어 항체는 100 nM-1 pM의 Kd 값으로 인간 c-met에 결합할 수 있다.
2. 항체 단편
일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 항체 단편이다. 항체 단편은 Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2, Fv, 1-아암 항체 및 scFv 단편, 및 하기 기재된 다른 단편을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 특정 항체 단편의 검토를 위해, 문헌 [Hudson et al. Nat. Med. 9:129-134 (2003)]을 참조한다. scFv 단편의 검토를 위해, 예를 들어, 문헌 [Pluckthuen, in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., (Springer-Verlag, New York), pp. 269-315 (1994)]을 참조하고; 또한 WO 93/16185; 및 미국 특허 번호 5,571,894 및 5,587,458을 참조한다. 샐비지 수용체 결합 에피토프 잔기를 포함하고 증가된 생체내 반감기를 갖는 Fab 및 F(ab')2 단편의 논의에 대해, 미국 특허 번호 5,869,046을 참조한다. 다른 1가 항체 형태는 예를 들어 WO2007048037, WO2008145137, WO2008145138, 및 WO2007059782에 기재되어 있다. 1-아암 항체는 예를 들어 WO2005/063816에 기재되어 있다. 디아바디는 2가 또는 이중특이적일 수 있는 2개의 항원-결합 부위를 갖는 항체 단편이다. 예를 들어, EP 404,097; WO 1993/01161; 문헌 [Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003); 및 Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448 (1993)]을 참조한다. 트리아바디 및 테트라바디는 또한 문헌 [Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003)]에 기재되어 있다.
단일-도메인 항체는 항체의 중쇄 가변 도메인의 전부 또는 일부 또는 경쇄 가변 도메인의 전부 또는 일부를 포함하는 항체 단편이다. 일부 실시양태에서, 단일-도메인 항체는 인간 단일-도메인 항체이다 (도만티스, 인크.(Domantis, Inc.), 매사추세츠주 월섬; 예를 들어 미국 특허 번호 6,248,516 B1 참조).
항체 단편은 본원에 기재된 바와 같이 무손상 항체의 단백질분해적 소화 뿐만 아니라 재조합 숙주 세포 (예를 들어, 이. 콜라이 또는 파지)에 의한 생산을 포함하나 이에 제한되지는 않는 다양한 기술에 의해 제조될 수 있다.
3. 키메라 및 인간화 항체
일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 키메라 항체이다. 특정 키메라 항체는 예를 들어 미국 특허 번호 4,816,567; 및 문헌 [Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984))]에 기재되어 있다. 한 예에서, 키메라 항체는 비-인간 가변 영역 (예를 들어, 마우스, 래트, 햄스터, 토끼 또는 비-인간 영장류, 예컨대 원숭이로부터 유래된 가변 영역) 및 인간 불변 영역을 포함한다. 추가의 예에서, 키메라 항체는 부류 또는 하위부류가 부모 항체의 것으로부터 변화된 "부류 스위칭" 항체이다. 키메라 항체는 그의 항원-결합 단편을 포함한다.
일부 실시양태에서, 키메라 항체는 인간화 항체이다. 전형적으로, 비-인간 항체는 모 비-인간 항체의 특이성 및 친화도를 유지하면서 인간에 대한 면역원성이 감소하도록 인간화된다. 일반적으로, 인간화 항체는 HVR, 예를 들어 CDR (또는 그의 일부)이 비-인간 항체로부터 유래되고, FR (또는 그의 일부)이 인간 항체 서열로부터 유래된 1개 이상의 가변 도메인을 포함한다. 인간화 항체는 또한 임의로 인간 불변 영역의 적어도 일부를 포함할 것이다. 일부 실시양태에서, 인간화 항체의 일부 FR 잔기는, 예를 들어 항체 특이성 또는 친화도를 복원하거나 또는 증진시키기 위해, 비-인간 항체 (예를 들어, CDR 잔기가 유래된 항체)로부터의 상응하는 잔기로 치환된다.
인간화 항체 및 그의 제조 방법은 예를 들어 문헌 [Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)]에서 검토되었고, 예를 들어 문헌 [Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988); Queen et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 86:10029-10033 (1989)]; 미국 특허 번호 5,821,337, 7,527,791, 6,982,321, 및 7,087,409; [Kashmiri et al., Methods 36:25-34 (2005)] (SDR (a-HVR) 그라프팅 기재); [Padlan, Mol. Immunol. 28:489-498 (1991)] ("리서페이싱" 기재); [Dall'Acqua et al., Methods 36:43-60 (2005)] ("FR 셔플링" 기재); 및 [Osbourn et al., Methods 36:61-68 (2005) 및 Klimka et al., Br. J. Cancer, 83:252-260 (2000)] (FR 셔플링에 대한 "가이드 선택" 접근법 기재)에 추가로 기재되어 있다.
인간화에 사용될 수 있는 인간 프레임워크 영역은 "최적-적합" 방법을 사용하여 선택된 프레임워크 영역 (예를 들어, 문헌 [Sims et al. J. Immunol. 151:2296 (1993)] 참조); 경쇄 또는 중쇄 가변 영역의 특정한 하위군의 인간 항체의 컨센서스 서열로부터 유래된 프레임워크 영역 (예를 들어, 문헌 [Carter et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992); 및 Presta et al. J. Immunol., 151:2623 (1993)] 참조); 인간 성숙 (체세포 성숙) 프레임워크 영역 또는 인간 배선 프레임워크 영역 (예를 들어, 문헌 [Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)] 참조); 및 FR 라이브러리 스크리닝으로부터 유래된 프레임워크 영역 (예를 들어, 문헌 [Baca et al., J. Biol. Chem. 272:10678-10684 (1997) 및 Rosok et al., J. Biol. Chem. 271:22611-22618 (1996)] 참조)을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
4. 인간 항체
일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 인간 항체이다. 인간 항체는 다양한 당업계의 공지된 기술을 이용하여 생성될 수 있다. 인간 항체는 일반적으로 문헌 [van Dijk and van de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol. 5: 368-74 (2001) 및 Lonberg, Curr. Opin. Immunol. 20:450-459 (2008)]에 기재되어 있다.
인간 항체는 항원 접종에 반응하여 인간 가변 영역을 갖는 무손상 인간 항체 또는 무손상 항체를 생산하도록 변형된 트랜스제닉 동물에게 면역원을 투여하여 제조할 수 있다. 이러한 동물은 전형적으로 내인성 이뮤노글로불린 로커스를 대체하거나 또는 염색체외에 존재하거나 동물의 염색체로 무작위적으로 통합된 인간 이뮤노글로불린 로커스의 전부 또는 일부를 함유한다. 이러한 트랜스제닉 마우스에서, 내인성 이뮤노글로불린 로커스는 일반적으로 불활성화된다. 트랜스제닉 동물로부터 인간 항체를 수득하는 방법의 검토를 위해, 문헌 [Lonberg, Nat. Biotech. 23:1117-1125 (2005)]을 참조한다. 또한, 예를 들어 미국 특허 번호 6,075,181 및 6,150,584 (제노마우스(XENOMOUSE)™ 기술 기재); 미국 특허 번호 5,770,429 (HuMab® 기술 기재); 미국 특허 번호 7,041,870 (K-M 마우스(K-M MOUSE)® 기술 기재), 및 미국 특허 출원 공개 번호 US 2007/0061900 (벨로시마우스(VelociMouse)® 기술 기재)을 참조한다. 이러한 동물에 의해 생성된 무손상 항체로부터의 인간 가변 영역은 예를 들어 상이한 인간 불변 영역과 조합시켜 추가로 변형될 수 있다.
인간 항체는 또한 하이브리도마-기반 방법에 의해 제조될 수 있다. 인간 모노클로날 항체의 생산을 위한 인간 골수종 및 마우스-인간 이종골수종 세포주가 기재되어 있다. (예를 들어, 문헌 [Kozbor J. Immunol., 133: 3001 (1984); Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987); 및 Boerner et al., J. Immunol., 147: 86 (1991)] 참조.) 인간 B-세포 하이브리도마 기술을 통해 생성된 인간 항체는 또한 문헌 [Li et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103:3557-3562 (2006)]에 기재되어 있다. 추가의 방법은, 예를 들어 미국 특허 번호 7,189,826 (하이브리도마 세포주로부터의 모노클로날 인간 IgM 항체 생산 기재) 및 문헌 [Ni, Xiandai Mianyixue, 26(4):265-268 (2006)] (인간-인간 하이브리도마 기재)에 기재된 것을 포함한다. 인간 하이브리도마 기술 (트리오마(Trioma) 기술)은 또한 문헌 [Vollmers and Brandlein, Histology and Histopathology, 20(3):927-937 (2005) 및 Vollmers and Brandlein, Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology, 27(3):185-91 (2005)]에 기재되어 있다.
인간 항체는 또한 인간-유래 파지 디스플레이 라이브러리로부터 선택된 Fv 클론 가변 도메인 서열을 단리하여 생성될 수 있다. 이어서, 이러한 가변 도메인 서열은 바람직한 인간 불변 도메인과 조합될 수 있다. 항체 라이브러리로부터 인간 항체를 선택하기 위한 기술은 하기 기재된다.
5. 라이브러리-유래 항체
항-c-met 항체는 원하는 활성 또는 활성들을 갖는 항체에 대해 조합 라이브러리를 스크리닝하여 단리될 수 있다. 예를 들어, 파지 디스플레이 라이브러리를 생성하고, 원하는 결합 특성을 갖는 항체에 대하여 이러한 라이브러리를 스크리닝하는 다양한 방법이 당업계에 공지되어 있다. 이러한 방법은 예를 들어 문헌 [Hoogenboom et al. in Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, 2001)]에서 검토되고, 예를 들어 문헌 [McCafferty et al., Nature 348:552-554; Clackson et al., Nature 352: 624-628 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol. 222: 581-597 (1992); Marks and Bradbury, in Methods in Molecular Biology 248:161-175 (Lo, ed., Human Press, Totowa, NJ, 2003); Sidhu et al., J. Mol. Biol. 338(2): 299-310 (2004); Lee et al., J. Mol. Biol. 340(5): 1073-1093 (2004); Fellouse, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101(34): 12467-12472 (2004); 및 Lee et al., J. Immunol. Methods 284(1-2): 119-132(2004)]에 추가로 기재되어 있다.
일부 파지 디스플레이 방법에서, VH 및 VL 유전자의 레퍼토리는 개별적으로 폴리머라제 연쇄 반응 (PCR)에 의해 클로닝되고, 파지 라이브러리에 무작위적으로 재조합되며, 이는 이어서 문헌 [Winter et al., Ann. Rev. Immunol., 12: 433-455 (1994)]에 기재된 바와 같이 항원-결합 파지에 대해 스크리닝될 수 있다. 파지는 전형적으로 항체 단편을 단일-쇄 Fv (scFv) 단편 또는 Fab 단편으로 디스플레이한다. 면역화된 공급원으로부터의 라이브러리는 하이브리도마를 구축할 필요 없이 면역원에 대한 고-친화도 항체를 제공한다. 대안적으로, 나이브 레퍼토리를 클로닝 (예를 들어, 인간으로부터)하여, 문헌 [Griffiths et al., EMBO J, 12: 725-734 (1993)]에 기재된 바와 같이 어떠한 면역화도 없이 광범위한 비-자기 및 또한 자기 항원에 대한 항체의 단일 공급원을 제공할 수 있다. 최종적으로, 문헌 [Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227: 381-388 (1992)]에 기재된 바와 같이, 줄기 세포로부터의 재배열되지 않은 V-유전자 절편을 클로닝하고, 고도로 가변성인 CDR3 영역을 코딩하고 시험관내 재배열이 달성되도록 무작위 서열을 함유하는 PCR 프라이머를 사용함으로써, 나이브 라이브러리를 또한 합성적으로 제조할 수 있다. 인간 항체 파지 라이브러리를 기재하고 있는 특허 공개는 예를 들어 미국 특허 번호 5,750,373, 및 미국 특허 공개 번호 2005/0079574, 2005/0119455, 2005/0266000, 2007/0117126, 2007/0160598, 2007/0237764, 2007/0292936, 및 2009/0002360을 포함한다.
인간 항체 라이브러리로부터 단리된 항체 또는 항체 단편은 본원에서 인간 항체 또는 인간 항체 단편으로 여겨진다.
6. 다중특이적 항체
일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 다중특이적 항체, 예를 들어 이중특이적 항체이다. 다중특이적 항체는 2개 이상의 상이한 부위에 대해 결합 특이성을 갖는 모노클로날 항체이다. 일부 실시양태에서, 결합 특이성 중 하나는 항원에 대한 것이고, 다른 하나는 임의의 다른 항원에 대한 것이다. 일부 실시양태에서, 이중특이적 항체는 항원의 2개의 상이한 에피토프에 결합할 수 있다. 이중특이적 항체는 또한 항원을 발현하는 세포에 세포독성제를 위치시키는데 사용될 수 있다. 이중특이적 항체는 전장 항체 또는 항체 단편으로서 제조될 수 있다.
다중특이적 항체를 제조하기 위한 기술은 상이한 특이성을 갖는 2개의 이뮤노글로불린 중쇄-경쇄 쌍의 재조합 공-발현 (문헌 [Milstein and Cuello, Nature 305: 537 (1983))], WO 93/08829, 및 [Traunecker et al., EMBO J. 10: 3655 (1991))] 참조), 및 "노브-인-홀" 조작 (예를 들어, 미국 특허 번호 5,731,168 참조)을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 다중특이적 항체는 또한 항체 Fc-이종이량체 분자를 제조하기 위한 정전기 스티어링 효과의 조작 (WO 2009/089004A1); 2개 이상의 항체 또는 단편의 가교 (예를 들어, 미국 특허 번호 4,676,980, 및 문헌 [Brennan et al., Science, 229: 81 (1985)] 참조); 이중특이적 항체를 생산하기 위한 류신 지퍼의 사용 (예를 들어, 문헌 [Kostelny et al., J. Immunol., 148(5):1547-1553 (1992)] 참조); 이중특이적 항체 단편의 제조를 위한 "디아바디" 기술의 사용 (예를 들어, 문헌 [Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448 (1993)] 참조); 및 단일-쇄 Fv (scFv) 이량체의 사용 (예를 들어, 문헌 [Gruber et al., J. Immunol., 152:5368 (1994)] 참조); 및 예를 들어 문헌 [Tutt et al. J. Immunol. 147: 60 (1991)]에 기재된 바와 같은 삼중특이적 항체의 제조에 의해 제조될 수 있다.
"옥토퍼스 항체"를 포함하여, 3개 이상의 기능적 항원 결합 부위를 갖는 조작된 항체가 또한 본원에 포함된다 (예를 들어, US 2006/0025576A1 참조).
본원의 항체 또는 단편은 또한 c-met 뿐만 아니라 또 다른 상이한 항원에 결합하는 항원 결합 부위를 포함하는 "이중 작용 FAb" 또는 "DAF"를 포함한다 (예를 들어, US 2008/0069820 참조).
7. 항체 변이체
일부 실시양태에서, 항-c-met 항체의 아미노산 서열 변이체가 고려된다. 예를 들어, 항체의 결합 친화도 및/또는 다른 생물학적 특성을 개선하는 것이 바람직할 수 있다. 항체의 아미노산 서열 변이체는 항체를 코딩하는 뉴클레오티드 서열에 적절한 변경을 도입하거나 펩티드 합성에 의해 제조할 수 있다. 이러한 변형은 예를 들어 항체의 아미노산 서열 내 잔기의 결실 및/또는 삽입 및/또는 치환을 포함한다. 최종 구축물이 원하는 특성, 예를 들어 항원-결합을 보유하도록, 최종 구축물에 도달하기 위해 결실, 삽입 및 치환의 임의의 조합이 이루어질 수 있다.
a. 치환, 삽입 및 결실 변이체
일부 실시양태에서, 하나 이상의 아미노산 치환을 갖는 항-c-met 항체 변이체가 제공된다. 치환 돌연변이유발을 위한 관심 부위는 HVR 및 FR을 포함한다. 보존적 치환은 "보존적 치환"의 표제 하에 표 1에 제시된다. 보다 더 실질적인 변화는 "예시적인 치환"의 표제 하의 표 1에 아미노산 측쇄 부류에 관하여 하기 추가로 기재된 바와 같이 제공된다. 아미노산 치환은 관심 항체에 도입되고, 생성물은 원하는 활성, 예를 들어 유지/개선된 항원 결합, 감소된 면역원성 또는 개선된 ADCC 또는 CDC에 대해 스크리닝될 수 있다.
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아미노산은 공통적인 측쇄 특성에 따라 분류될 수 있다:
(1) 소수성: 노르류신, Met, Ala, Val, Leu, Ile;
(2) 중성 친수성: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln;
(3) 산성: Asp, Glu;
(4) 염기성: His, Lys, Arg;
(5) 쇄 배향에 영향을 미치는 잔기: Gly, Pro;
(6) 방향족: Trp, Tyr, Phe.
비-보존적 치환은 이들 부류 중의 하나의 구성원을 또 다른 부류로 교환하는 것을 수반할 것이다.
치환 변이체의 한 가지 유형은 모 항체 (예를 들어, 인간화 또는 인간 항체)의 1개 이상의 초가변 영역 잔기를 치환하는 것을 포함한다. 일반적으로, 추가의 연구를 위해 선택된 생성된 변이체(들)는 모 항체에 비해 특정 생물학적 특성 (예를 들어, 상승된 친화도, 감소된 면역원성)의 변형 (예를 들어, 개선)을 가질 것이고/거나 모 항체의 특정 생물학적 특성을 실질적으로 유지할 것이다. 예시적인 치환 변이체는 예를 들어 본원에 기재된 것과 같은 파지 디스플레이-기반 친화도 성숙 기술을 이용하여 편리하게 생성될 수 있는 친화도 성숙 항체이다. 간략하게, 1개 이상의 HVR 잔기가 돌연변이화되고, 변이체 항체가 파지 상에 디스플레이되고, 특정한 생물학적 활성 (예를 들어, 결합 친화도)에 대해 스크리닝된다.
변경 (예를 들어, 치환)은 예를 들어 항체 친화도를 개선하기 위해 HVR에서 이루어질 수 있다. 이러한 변경은 HVR "핫스팟", 즉 체세포 성숙 과정 (예를 들어, 문헌 [Chowdhury, Methods Mol. Biol. 207:179-196 (2008)] 참조), 및/또는 SDR (a-CDR) 동안 결합 친화도에 대해 시험된 생성된 변이체 VH 또는 VL로 높은 빈도에서 돌연변이화를 수행하는 코돈에 의해 코딩되는 잔기에서 이루어질 수 있다. 2차 라이브러리로부터의 구축 및 재선택에 의한 친화도 성숙은 예를 들어 문헌 [Hoogenboom et al. in Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, (2001)]에 기재되어 있다. 친화도 성숙의 일부 실시양태에서에서, 다양성은 임의의 다양한 방법 (예를 들어, 오류-유발 PCR, 쇄 셔플링, 또는 올리고뉴클레오티드-지정된 돌연변이유발)에 의한 성숙을 위해 선택된 가변 유전자로 도입된다. 이어서, 이차 라이브러리를 생성한다. 이어서, 원하는 친화도를 갖는 임의의 항체 변이체를 확인하게 위해 라이브러리를 스크리닝한다. 다양성을 도입하는 다른 방법은 HVR-지정된 접근법과 연관되며, 여기서 여러 HVR 잔기 (예를 들어, 한 번에 4-6개의 잔기)가 무작위화된다. 항원 결합과 연관된 HVR 잔기는 예를 들어 알라닌 스캐닝 돌연변이유발 또는 모델링을 이용하여 구체적으로 확인될 수 있다. 특히, CDR-H3 및 CDR-L3이 종종 표적화된다.
일부 실시양태에서, 치환, 삽입 또는 결실은 이러한 변경이 항원에 결합하는 항체의 능력을 실질적으로 감소시키지 않는 한, 하나 이상의 HVR 내에서 일어날 수 있다. 예를 들어, 결합 친화도를 실질적으로 감소시키지 않는 보존적 변경 (예를 들어, 본원에 제공된 바와 같은 보존적 치환)이 HVR에서 이루어질 수 있다. 이러한 변경은 HVR "핫스팟" 또는 SDR의 외부일 수 있다. 상기에서 제공된 변이체 VH 및 VL 서열의 일부 실시양태에서, 각각의 HVR은 변경되지 않거나, 또는 1, 2 또는 3개 이하의 아미노산 치환을 함유한다.
문헌 [Cunningham and Wells (1989) Science, 244:1081-1085]에 기재된 바와 같이, 돌연변이유발을 위해 표적화될 수 있는 항체의 잔기 또는 영역의 확인에 유용한 방법은 "알라닌 스캐닝 돌연변이유발"이라고 지칭된다. 이 방법에서, 잔기 또는 표적 잔기들의 군이 확인되고 (예를 들어, 하전된 잔기, 예컨대 arg, asp, his, lys 및 glu), 중성 또는 음으로 하전된 아미노산 (예를 들어, 알라닌 또는 폴리알라닌)으로 대체되어 항체와 항원과의 상호작용에 영향을 미치는지의 여부를 결정한다. 추가의 치환은 초기 치환에 대한 기능적 감수성을 입증하는 아미노산 위치에 도입될 수 있다. 대안적으로 또는 추가로, 항체와 항원 사이의 접촉점을 확인하기 위해 항원-항체 복합체의 결정 구조를 분석하는 것이 유익할 수 있다. 이러한 접촉 잔기 및 이웃하는 잔기는 치환을 위한 후보로 표적화되거나 또는 제거될 수 있다. 변이체는 그들이 원하는 특성을 함유하는지의 여부를 결정하기 위해 스크리닝될 수 있다.
아미노산 서열 삽입은 길이 범위가 1개의 잔기 내지 100개 이상의 잔기를 함유하는 폴리펩티드에 이르는 아미노- 및/또는 카르복실-말단 융합, 뿐만 아니라 단일 또는 다수 아미노산 잔기의 서열내 삽입을 포함한다. 말단 삽입의 예는 N-말단 메티오닐 잔기를 갖는 항체를 포함한다. 항체 분자의 다른 삽입 변이체는 효소 (예를 들어, ADEPT의 경우) 또는 항체의 혈청 반감기를 증가시키는 폴리펩티드가 상기 항체의 N- 또는 C-말단에 융합된 것을 포함한다.
b. 글리코실화 변이체
일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 항체가 글리코실화되는 정도를 증가시키거나 감소시키도록 변경된다. 항체에 대한 글리코실화 부위의 부가 또는 결실은 1개 이상의 글리코실화 부위가 생성되거나 제거되도록 아미노산 서열을 변경함으로써 편리하게 달성될 수 있다.
항체가 Fc 영역을 포함하는 경우, 이에 부착된 탄수화물이 변경될 수 있다. 포유동물 세포에 의해 생산된 천연 항체는 전형적으로 Fc 영역의 CH2 도메인의 Asn297에의 N-연결에 의해 일반적으로 부착되는 분지형 이중안테나 올리고사카라이드를 포함한다. 예를 들어, 문헌 [Wright et al. TIBTECH 15:26-32 (1997)]을 참조한다. 올리고사카라이드는 다양한 탄수화물, 예를 들어 만노스, N-아세틸 글루코사민 (GlcNAc), 갈락토스 및 시알산 뿐만 아니라 이중안테나 올리고사카라이드 구조의 "줄기" 내의 GlcNAc에 부착된 푸코스를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체 내의 올리고사카라이드의 변형은 특정 개선된 특성을 갖는 항체 변이체를 제조하기 위해 이루어질 수 있다.
일부 실시양태에서, Fc 영역에 (직접적으로 또는 간접적으로) 부착된 푸코스가 결핍된 탄수화물 구조를 갖는 항체 변이체가 제공된다. 예를 들어, 이러한 항체에서 푸코스의 양은 1% 내지 80%, 1% 내지 65%, 5% 내지 65% 또는 20% 내지 40%일 수 있다. 푸코스의 양은 예를 들어 WO 2008/077546에 기재된 바와 같이 MALDI-TOF 질량 분광측정법에 의해 측정된 Asn 297에 부착된 모든 당구조물 (예를 들어, 복합체, 하이브리드 및 고만노스 구조물)의 합에 비해 Asn297에서 당 쇄 내의 푸코스의 평균적인 양을 계산하여 결정된다. Asn297은 Fc 영역의 약 위치 297 (Fc 영역 잔기의 Eu 넘버링)에 위치한 아스파라긴 잔기를 나타내지만; Asn297은 또한 항체의 부가적 서열 변이에 의해 위치 297의 약 ± 3 아미노산 상류 또는 하류, 즉 위치 294 및 300 사이에 위치할 수 있다. 이러한 푸코실화 변이체는 개선된 ADCC 기능을 가질 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 공개 번호 US 2003/0157108 (Presta, L.); US 2004/0093621 (교와 핫코 고교 캄파니, 리미티드(Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd))을 참조한다. "탈푸코실화" 또는 "푸코스-결손" 항체 변이체에 대한 문헌의 예는 하기를 포함한다: US 2003/0157108; WO 2000/61739; WO 2001/29246; US 2003/0115614; US 2002/0164328; US 2004/0093621; US 2004/0132140; US 2004/0110704; US 2004/0110282; US 2004/0109865; WO 2003/085119; WO 2003/084570; WO 2005/035586; WO 2005/035778; WO2005/053742; WO2002/031140; 문헌 [Okazaki et al. J. Mol. Biol. 336:1239-1249 (2004); Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004)]. 탈푸코실화 항체를 생산할 수 있는 세포주의 예는 단백질 푸코실화가 결핍된 Lec13 CHO 세포 (문헌 [Ripka et al. Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986)]; 미국 특허 출원 번호 US 2003/0157108 A1 (Presta, L); 및 WO 2004/056312 A1 (Adams et al.) (특히 실시예 11)), 및 녹아웃 세포주, 예컨대 알파-1,6-푸코실트랜스퍼라제 유전자, FUT8, 녹아웃 CHO 세포 (예를 들어, 문헌 [Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004); Kanda, Y. et al., Biotechnol. Bioeng., 94(4):680-688 (2006)]; 및 WO2003/085107 참조)를 포함한다.
이등분된 올리고사카라이드를 갖는 항체 변이체가 추가로 제공되는데, 예를 들어 항체의 Fc 영역에 부착된 이중안테나 올리고사카라이드가 GlcNAc에 의해 이등분된다. 이러한 항체 변이체는 푸코실화가 감소될 수 있고/거나 ADCC 기능이 개선될 수 있다. 이러한 항체 변이체의 예가, 예를 들어 WO 2003/011878 (Jean-Mairet et al.); 미국 특허 번호 6,602,684 (Umana et al.); 및 US 2005/0123546 (Umana et al.)에 기재되어 있다. Fc 영역에 부착된 올리고사카라이드 내에 적어도 1개의 갈락토스 잔기를 갖는 항체 변이체가 또한 제공된다. 이러한 항체 변이체는 개선된 CDC 기능을 가질 수 있다. 이러한 항체 변이체는 예를 들어 WO 1997/30087 (Patel et al.); WO 1998/58964 (Raju, S.); 및 WO 1999/22764 (Raju, S.)에 기재되어 있다.
c. Fc 영역 변이체
일부 실시양태에서, 하나 이상의 아미노산 변형은 항-c-met 항체의 Fc 영역에 도입되어 Fc 영역 변이체가 생성될 수 있다. Fc 영역 변이체는 하나 이상의 아미노산 위치에서 아미노산 변형 (예를 들어, 치환)을 포함하는 인간 Fc 영역 서열 (예를 들어, 인간 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 Fc 영역)을 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 모든 이펙터 기능은 아니지만, 몇몇 이펙터 기능을 보유하고 있으므로, 생체내에서의 항체의 반감기가 중요하긴 하지만 특정의 이펙터 기능 (예컨대 보체 및 ADCC)이 불필요하거나 해로운 많은 적용 분야에 대한 바람직한 후보가 되는 항체 변이체가 고려된다. CDC 및/또는 ADCC 활성의 감소/고갈을 확인하기 위해 시험관내 및/또는 생체내 세포독성 검정을 수행할 수 있다. 예를 들어, 항체에 FcγR 결합이 결손되어 있지만 (따라서, 아마도 ADCC 활성이 결손될 것임), FcRn 결합 능력은 보유하고 있는 것을 확인하기 위해서 Fc 수용체 (FcR) 결합 검정을 수행할 수 있다. ADCC를 매개하는 1차 세포인 NK 세포는 FcγRIII만을 발현하는 반면에, 단핵구는 FcγRI, FcγRII 및 FcγRIII를 발현한다. 조혈 세포 상의 FcR 발현은 문헌 [Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9:457-492 (1991)]의 페이지 464, 표 3에 요약되어 있다. 관심 분자의 ADCC 활성을 평가하기 위한 시험관내 검정의 비제한적 예가 미국 특허 번호 5,500,362 (예를 들어, 문헌 [Hellstrom, I. et al. Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 83:7059-7063 (1986)) 및 Hellstrom, I et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 82:1499-1502 (1985)] 참조); 5,821,337 (문헌 [Bruggemann, M. et al., J. Exp. Med. 166:1351-1361 (1987)] 참조)에 기재되어 있다. 대안적으로, 비-방사성 검정 방법을 이용할 수 있다 (예를 들어, 유동 세포측정법을 위한 악티(ACTI)™ 비-방사성 세포독성 검정 (셀테크놀로지, 인크.(CellTechnology, Inc.), 캘리포니아주 마운틴 뷰); 및 시토톡스(CytoTox) 96® 비-방사성 세포독성 검정 (프로메가(Promega), 위스콘신주 매디슨) 참조). 이러한 검정에 유용한 이펙터 세포는 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC) 및 자연 킬러 (NK) 세포를 포함한다. 대안적으로 또는 추가로, 관심 분자의 ADCC 활성은 생체내에서, 예를 들어 문헌 [Clynes et al. Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 95:652-656 (1998)]에 기재된 바와 같은 동물 모델에서 평가할 수 있다. 또한, C1q 결합 검정을 수행하여, 항체가 C1q에 결합할 수 없고, 따라서 CDC 활성이 결핍되었는지를 확인할 수 있다. 예를 들어, WO 2006/029879 및 WO 2005/100402의 C1q 및 C3c 결합 ELISA를 참조한다. 보체 활성화를 평가하기 위해 CDC 검정을 수행할 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202:163 (1996); Cragg, M.S. et al., Blood 101:1045-1052 (2003); 및 Cragg, M.S. and M.J. Glennie, Blood 103:2738-2743 (2004)] 참조). FcRn 결합 및 생체내 제거율/반감기 결정은 또한 당업계에 공지된 방법을 이용하여 수행할 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Petkova, S.B. et al., Int'l. Immunol. 18(12):1759-1769 (2006)] 참조).
감소된 이펙터 기능을 갖는 항체는 Fc 영역 잔기 238, 265, 269, 270, 297, 327 및 329 중 하나 이상의 치환을 갖는 것을 포함한다 (미국 특허 번호 6,737,056). 이러한 Fc 돌연변이체는 아미노산 위치 265, 269, 270, 297 및 327 중 2개 이상에서 치환을 갖는 Fc 돌연변이체 (잔기 265 및 297의 알라닌으로의 치환을 갖는, 소위 "DANA" Fc 돌연변이체 포함)를 포함한다 (미국 특허 번호 7,332,581).
FcR에 대해 개선되거나 또는 감소된 결합을 갖는 특정 항체 변이체가 기재된다. (예를 들어, 미국 특허 번호 6,737,056; WO 2004/056312, 및 문헌 [Shields et al., J. Biol. Chem. 9(2): 6591-6604 (2001)] 참조.)
일부 실시양태에서, 항체 변이체는 ADCC를 개선하는 하나 이상의 아미노산 치환, 예를 들어 Fc 영역의 위치 298, 333 및/또는 334 (잔기의 EU 넘버링)에서의 치환을 갖는 Fc 영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, 예를 들어 미국 특허 번호 6,194,551, WO 99/51642, 및 문헌 [Idusogie et al. J. Immunol. 164: 4178-4184 (2000)]에 기재된 바와 같이, 변경된 (즉, 개선된 또는 감소된) C1q 결합 및/또는 보체 의존성 세포독성 (CDC)을 나타내는 변경들이 Fc 영역에서 만들어진다.
증가된 반감기, 및 모체 IgG를 태아에게 전달하는 것을 담당하는 신생아 Fc 수용체 (FcRn) (문헌 [Guyer et al., J. Immunol. 117:587 (1976) 및 Kim et al., J. Immunol. 24:249 (1994)])에 대한 개선된 결합을 갖는 항체가 US2005/0014934A1 (Hinton et al.)에 기재되어 있다. 이들 항체는 FcRn에 대한 Fc 영역의 결합을 개선하는 하나 이상의 치환을 갖는 Fc 영역을 포함한다. 이러한 Fc 변이체는 Fc 영역 잔기: 238, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424 또는 434 중 하나 이상에서의 치환, 예를 들어 Fc 영역 잔기 434의 치환을 갖는 것을 포함한다 (미국 특허 번호 7,371,826).
Fc 영역 변이체의 다른 예에 관하여 또한 문헌 [Duncan & Winter, Nature 322:738-40 (1988)]; 미국 특허 번호 5,648,260; 미국 특허 번호 5,624,821; 및 WO 94/29351을 참조한다.
d. 시스테인 조작된 항체 변이체
일부 실시양태에서, 항-c-met 항체의 1개 이상의 잔기를 시스테인 잔기로 치환시킨 시스테인 조작된 항체, 예를 들어 "티오MAb"를 제조하는 것이 바람직할 수 있다. 특정한 실시양태에서, 이와 같이 치환된 잔기는 항체의 접근가능한 부위에서 일어난다. 이들 잔기를 시스테인으로 치환함으로써 반응성 티올 기가 항체의 접근가능한 부위에 배치되게 되고, 이것을 이용하여 항체를 본원에 추가로 기재한 바와 같이 다른 모이어티, 예컨대 약물 모이어티 또는 링커-약물 모이어티에 접합시켜 면역접합체를 생성할 수 있다. 일부 실시양태에서, 임의의 1개 이상의 하기 잔기가 시스테인으로 치환될 수 있다: 경쇄의 V205 (카바트 넘버링); 중쇄의 A118 (EU 넘버링); 및 중쇄 Fc 영역의 S400 (EU 넘버링). 시스테인 조작된 항체는, 예를 들어 미국 특허 번호 7,521,541에 기재된 바와 같이 생성될 수 있다.
e. 항체 유도체
일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 당업계에 공지되고 용이하게 입수가능한 추가의 비단백질성 잔기를 함유하도록 추가로 변형될 수 있다. 항체의 유도체화에 적합한 모이어티는 수용성 중합체를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 수용성 중합체의 비제한적 예는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG), 에틸렌 글리콜/프로필렌 글리콜의 공중합체, 카르복시메틸셀룰로스, 덱스트란, 폴리비닐 알콜, 폴리비닐 피롤리돈, 폴리-1,3-디옥솔란, 폴리-1,3,6-트리옥산, 에틸렌/말레산 무수물 공중합체, 폴리아미노산 (단독중합체 또는 랜덤 공중합체), 및 덱스트란 또는 폴리(n-비닐 피롤리돈)폴리에틸렌 글리콜, 프로프로필렌 글리콜 단독중합체, 폴리프로필렌 옥시드/에틸렌 옥시드 공중합체, 폴리옥시에틸화 폴리올 (예를 들어, 글리세롤), 폴리비닐 알콜, 및 그의 혼합물을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 폴리에틸렌 글리콜 프로피온알데히드가 물에서의 안정성으로 인해 제조에 이점을 가질 수 있다. 중합체는 임의의 분자량을 가질 수 있고, 분지형 또는 비분지형일 수 있다. 항체에 부착되어 있는 중합체의 수는 달라질 수 있고, 하나 초과의 중합체가 부착되어 있는 경우에, 이들은 동일하거나 상이한 분자일 수 있다. 일반적으로, 유도체화에 사용되는 중합체의 수 및/또는 유형은 개선될 항체의 특정한 특성 또는 기능, 항체 유도체가 규정된 조건 하에 요법에서 사용될 것인지의 여부 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는 고려사항을 기반으로 결정될 수 있다.
또 다른 실시양태에서, 항-c-met 항체, 및 방사선 노출에 의해 선택적으로 가열될 수 있는 비단백질성 모이어티의 접합체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 비단백질성 모이어티는 탄소 나노튜브이다 (문헌 [Kam et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102: 11600-11605 (2005)]). 방사선은 임의의 파장일 수 있고, 통상적인 세포에는 해를 끼치지 않지만 항체-비단백질성 모이어티에 근접한 세포는 사멸시키는 온도로 비단백질성 모이어티를 가열하는 파장을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
8. 면역접합체
본원에 기재된 정제된 항-c-met 항체 조성물 및/또는 정제 방법에 사용하기 위한 하나 이상의 세포독성제, 예컨대 화학요법제 또는 약물, 성장 억제제, 독소 (예를 들어, 단백질 독소, 박테리아, 진균, 식물 또는 동물 기원의 효소 활성 독소 또는 그의 단편) 또는 방사성 동위원소에 접합된 항-c-met 항체를 포함하는 면역접합체가 고려된다.
일부 실시양태에서, 면역접합체는 항체가 메이탄시노이드 (미국 특허 번호 5,208,020, 5,416,064 및 유럽 특허 EP 0 425 235 B1 참조); 아우리스타틴, 예컨대 모노메틸아우리스타틴 약물 모이어티 DE 및 DF (MMAE 및 MMAF) (미국 특허 번호 5,635,483 및 5,780,588, 및 7,498,298 참조); 돌라스타틴; 칼리케아미신 또는 그의 유도체 (미국 특허 번호 5,712,374, 5,714,586, 5,739,116, 5,767,285, 5,770,701, 5,770,710, 5,773,001, 및 5,877,296; 문헌 [Hinman et al., Cancer Res. 53:3336-3342 (1993); 및 Lode et al., Cancer Res. 58:2925-2928 (1998))] 참조); 안트라시클린, 예컨대 다우노마이신 또는 독소루비신 (문헌 [Kratz et al., Current Med. Chem. 13:477-523 (2006); Jeffrey et al., Bioorganic & Med. Chem. Letters 16:358-362 (2006); Torgov et al., Bioconj. Chem. 16:717-721 (2005); Nagy et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97:829-834 (2000); Dubowchik et al., Bioorg. & Med. Chem. Letters 12:1529-1532 (2002); King et al., J. Med. Chem. 45:4336-4343 (2002)]; 및 미국 특허 번호 6,630,579); 메토트렉세이트; 빈데신; 탁산, 예컨대 도세탁셀, 파클리탁셀, 라로탁셀, 테세탁셀 및 오르타탁셀; 트리코테센; 및 CC1065를 포함하나 이에 제한되지는 않는 하나 이상의 약물에 접합된 항체-약물 접합체 (ADC)이다.
일부 실시양태에서, 면역접합체는 디프테리아 A 쇄, 디프테리아 독소의 비결합 활성 단편, 외독소 A 쇄 (슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa)로부터 유래됨), 리신 A 쇄, 아브린 A 쇄, 모데신 A 쇄, 알파-사르신, 알레우리테스 포르디이(Aleurites fordii) 단백질, 디안틴 단백질, 피토라카 아메리카나(Phytolaca americana) 단백질 (PAPI, PAPII 및 PAP-S), 모모르디카 카란티아(momordica charantia) 억제제, 쿠르신, 크로틴, 사파오나리아 오피시날리스(sapaonaria officinalis) 억제제, 겔로닌, 미토겔린, 레스트릭토신, 페노마이신, 에노마이신 및 트리코테센을 포함하나 이에 제한되지는 않는 효소 활성 독소 또는 그의 단편에 접합된 본원에 기재된 바와 같은 항-c-met 항체를 포함한다.
일부 실시양태에서, 면역접합체는 방사성접합체를 형성하기 위해 방사성 원자에 접합된 본원에 기재된 바와 같은 항-c-met 항체를 포함한다. 다양한 방사성 동위원소가 방사성접합체의 생산을 위해 이용가능하다. 그 예는 At211, I131, I125, Y90, Re186, Re188, Sm153, Bi212, P32, Pb212, 및 Lu의 방사성 동위원소를 포함한다. 방사성접합체는 검출용으로 사용되는 경우에 신티그래피 연구를 위한 방사성 원자, 예를 들어 tc99m 또는 I123을 포함하거나, 핵 자기 공명 (NMR) 영상화 (자기 공명 영상화, MRI로도 공지됨)용 스핀 표지, 예컨대 다시 아이오딘-123, 아이오딘-131, 인듐-111, 플루오린-19, 탄소-13, 질소-15, 산소-17, 가돌리늄, 망가니즈 또는 철을 포함할 수 있다.
항-c-met 항체 및 세포독성제의 접합체는 다양한 이관능성 단백질 커플링제, 예컨대 N-숙신이미딜-3-(2-피리딜디티오) 프로피오네이트 (SPDP), 숙신이미딜-4-(N-말레이미도메틸) 시클로헥산-1-카르복실레이트 (SMCC), 이미노티올란 (IT), 이미도에스테르의 이관능성 유도체 (예컨대, 디메틸 아디프이미데이트 HCl), 활성 에스테르 (예컨대, 디숙신이미딜 수베레이트), 알데히드 (예컨대, 글루타르알데히드), 비스-아지도 화합물 (예컨대, 비스 (p-아지도벤조일) 헥산디아민), 비스-디아조늄 유도체 (예컨대, 비스-(p-디아조늄벤조일)-에틸렌디아민), 디이소시아네이트 (예컨대, 톨루엔 2,6-디이소시아네이트) 및 비스-활성 플루오린 화합물 (예컨대, 1,5-디플루오로-2,4-디니트로벤젠)을 사용하여 제조할 수 있다. 예를 들어, 리신 면역독소는 문헌 [Vitetta et al., Science 238:1098 (1987)]에 기재된 바와 같이 제조될 수 있다. 탄소-14-표지된 1-이소티오시아네이토벤질-3-메틸디에틸렌 트리아민펜타아세트산 (MX-DTPA)은 항체에 방사성뉴클레오티드를 접합시키기 위한 예시적인 킬레이트화제이다. WO94/11026을 참조한다. 링커는 세포에서 세포독성 약물의 방출을 용이하게 하는 "절단가능한 링커"일 수 있다. 예를 들어, 산-불안정성 링커, 펩티다제-감수성 링커, 광불안정성 링커, 디메틸 링커 또는 디술피드-함유 링커 (문헌 [Chari et al., Cancer Res. 52:127-131 (1992)]; 미국 특허 번호 5,208,020)가 사용될 수 있다.
본원의 면역접합체 또는 ADC는 상업적으로 입수가능한 (예를 들어, 피어스 바이오테크놀로지, 인크.(Pierce Biotechnology, Inc.; 미국 일리노이주 록포드)로부터의) 가교-링커 시약 (BMPS, EMCS, GMBS, HBVS, LC-SMCC, MBS, MPBH, SBAP, SIA, SIAB, SMCC, SMPB, SMPH, 술포-EMCS, 술포-GMBS, 술포-KMUS, 술포-MBS, 술포-SIAB, 술포-SMCC 및 술포-SMPB, 및 SVSB (숙신이미딜-(4-비닐술폰)벤조에이트)를 포함하나 이에 제한되지는 않음)으로 제조된 이러한 접합체를 명백하게 고려하나 이에 제한되지는 않는다.
V. 제약 제제
또한 정제된 항-c-met 항체 조성물 및/또는 본원에 기재된 방법에 의해 정제된 항체를 포함하는 제약 제제가 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 제약 제제는 안정한 액체 제약 제제이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 길항제 항-c-met 항체이다. 일부 실시양태에서, 제약 제제는 액체 제약 제제이다. 일부 실시양태에서, 제약 제제는 개체 (예를 들어, 인간)에 대한 투여에 적합하다.
임의의 제약 제제의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 포함하는 제약 제제 중 HCP는 약 50 ng/mg 이하이다. 임의의 제약 제제의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 포함하는 제약 제제의 로트 (예를 들어, 배치) 중 평균 HCP는 약 50 ng/mg 이하이다. 일부 실시양태에서, HCP 및/또는 평균 HCP는 약 34 ng/mg, 30 ng/mg, 25 ng/mg, 20 ng/mg, 19 ng/mg, 18 ng/mg, 17 ng/mg, 16 ng/mg, 15 ng/mg, 14 ng/mg, 13 ng/mg, 12 ng/mg, 11 ng/mg, 10 ng/mg 또는 9 ng/mg, 또는 그 미만이다. 일부 실시양태에서, HCP 및/또는 평균 HCP는 약 5 ng/mg 내지 20 ng/mg, 5 ng/mg 내지 25 ng/mg, 5 ng/mg 내지 15 ng/mg, 1 ng/mg 내지 30 ng/mg, 1 ng/mg 내지 25 ng/mg, 1 ng/mg 내지 20 ng/mg, 1 ng/mg 내지 15 ng/mg, 또는 1 ng/mg 내지 10 ng/mg이다. 일부 실시양태에서, HCP 및/또는 평균 HCP는 약 5, 5.5, 6.5, 7, 7.5, 8, 8.5, 9, 9.5, 10, 10.5, 11, 11.5, 12, 12.5, 13, 13.5, 14, 14.5, 15, 15.5, 16, 16.5, 17 또는 17.5 ng/mg이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 이. 콜라이에서 생산된다. 일부 실시양태에서, HCP 및/또는 평균 HCP는 ECP 및/또는 평균 ECP이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 섹션 IV에 기재된 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 약 100 kDa이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 약 8.2, 약 8.3 및/또는 약 8.4의 pI를 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 오나르투주맙이다.
임의의 제약 제제의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 DNA 수준은 약 0.3 pg/mg 이하이다. 임의의 제약 제제의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물의 로트 (예를 들어, 배치) 중 평균 DNA 수준은 약 0.3 pg/mg 이하이다. 일부 실시양태에서, DNA 수준 및/또는 평균 DNA 수준은 약 0.3 pg/mg, 0.25 pg/mg, 0.2 pg/mg, 0.15 pg/mg 또는 0.1 pg/mg, 또는 그 미만이다. 일부 실시양태에서, DNA 수준 및/또는 평균 DNA 수준은 약 0.001 pg/mg 내지 0.3 pg/mg, 0.001 pg/mg 내지 0.2 pg/mg, 0.001 pg/mg 내지 0.1 pg/mg, 0.01 pg/mg 내지 0.3 pg/mg, 0.01 pg/mg 내지 0.2 pg/mg, 또는 0.01 pg/mg 내지 0.1 pg/mg이다. 일부 실시양태에서, DNA 수준 및/또는 평균 DNA 수준은 약 0.3, 0.25, 0.2, 0.15 또는 0.1 pg/mg이다. 일부 실시양태에서, DNA 수준은 PCR에 의해 결정된다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 섹션 IV에 기재된 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 약 100 kDa이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 약 8.2, 약 8.3 및/또는 약 8.4의 pI를 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 오나르투주맙이다.
임의의 제약 제제의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 침출된 단백질 A (LpA)는 약 2 ng/mg 이하이다. 임의의 제약 제제의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물의 로트 (예를 들어, 배치) 중 평균 LpA는 약 2 ng/mg 이하이다. 일부 실시양태에서, LpA 및/또는 평균 LpA는 약 0.001 ng/mg 내지 2 ng/mg, 0.01 ng/mg 내지 2 ng/mg, 0.1 ng/mg 내지 2 ng/mg, 또는 1 ng/mg 내지 2 ng/mg이다. 일부 실시양태에서, LpA 및/또는 평균 LpA는 약 1, 1.25, 1.5, 1.75 또는 2 ng/mg이다. 일부 실시양태에서, LpA의 백분율은 침출된 단백질 A 리간드 검정에 의해 결정된다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 섹션 IV에 기재된 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 약 100 kDa이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 약 8.2, 약 8.3 및/또는 약 8.4의 pI를 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 오나르투주맙이다.
임의의 제약 제제의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 리물루스 변형세포 용해물 (LAL)은 약 0.01 EU/mg 이하이다. 임의의 제약 제제의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물의 로트 (예를 들어, 배치) 중 평균 LAL은 약 0.01 EU/mg 이하이다. 일부 실시양태에서, LAL 및/또는 평균 LAL은 약 0.007 EU/mg, 0.006 EU/mg, 0.005 EU/mg, 0.002 EU/mg 또는 0.001 EU/mg, 또는 그 미만이다. 일부 실시양태에서, LAL 및/또는 평균 LAL은 약 0.0001 EU/mg 내지 0.01 EU/mg, 0.0001 EU/mg 내지 0.007 EU/mg, 0.0001 EU/mg 내지 0.006 EU/mg, 또는 0.0001 EU/mg 내지 0.005 EU/mg이다. 일부 실시양태에서, LAL 및/또는 평균 LAL은 약 0.01, 0.007, 0.006, 0.005, 0.004, 0.003 또는 0.002 EU/mg이다. 일부 실시양태에서, LAL의 백분율은 LAL 검정에 의해 결정된다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 섹션 IV에 기재된 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 약 100 kDa이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 약 8.2, 약 8.3 및/또는 약 8.4의 pI를 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 오나르투주맙이다.
임의의 제약 제제의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 응집체의 백분율은 약 0.3% 이하이다. 임의의 제약 제제의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물의 로트 (예를 들어, 배치) 중 응집체의 평균 백분율은 약 0.3% 이하이다. 또한, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 포함하는 제약 제제가 본원에 제공되며, 조성물에 존재하는 응집체의 백분율은 약 0.3% 이하이다. 또한 항-c-met 항체를 포함하는 조성물의 로트 (예를 들어, 배치)를 포함하는 제약 제제가 본원에 제공되며, 조성물에 존재하는 응집체의 평균 백분율은 약 0.3% 이하이다. 일부 실시양태에서, 응집체의 백분율 및/또는 응집체의 평균 백분율은 약 0.2% 또는 0.1%, 또는 그 미만이다. 일부 실시양태에서, 응집체의 백분율 및/또는 응집체의 평균 백분율은 약 0.001% 내지 0.3%, 0.01% 내지 0.3%, 0.001% 내지 0.2%, 또는 0.01% 내지 0.2%이다. 일부 실시양태에서, 응집체의 백분율 및/또는 응집체의 평균 백분율은 약 0.3%, 0.25%, 0.2%, 0.15% 또는 0.1%이다. 일부 실시양태에서, 응집체의 백분율은 크기 배제 크로마토그래피 (SEC) 검정에 의해 결정된다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 섹션 IV에 기재된 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 약 100 kDa이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 약 8.2, 약 8.3 및/또는 약 8.4의 pI를 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 오나르투주맙이다.
임의의 제약 제제의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 단량체의 백분율은 약 99.5% 이상이다. 임의의 제약 제제의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물의 로트 (예를 들어, 배치) 중 평균 백분율 단량체는 약 99.5% 이상이다. 또한, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 포함하는 제약 제제가 본원에 제공되며, 조성물에 존재하는 단량체의 백분율은 약 99.5% 이상이다. 또한 항-c-met 항체를 포함하는 조성물의 로트 (예를 들어, 배치)를 포함하는 제약 제제가 본원에 제공되며, 여기서 조성물에 존재하는 단량체의 평균 백분율은 약 0.3% 이상이다. 일부 실시양태에서, 단량체의 백분율 및/또는 단량체의 평균 백분율은 약 99.6%, 99.7%, 99.8% 또는 99.9%, 또는 그 초과이다. 일부 실시양태에서, 단량체의 백분율 및/또는 단량체의 평균 백분율은 약 99.5% 내지 99.999%, 99.5% 내지 99.99%, 99.6% 내지 99.999%, 99.6% 내지 99.99%, 99.7% 내지 99.999%, 99.7% 내지 99.99%, 99.8% 내지 99.999%, 99.8% 내지 99.99%, 또는 99.9% 내지 99.999%, 99.9% 내지 99.99%이다. 일부 실시양태에서, 단량체의 백분율 및/또는 단량체의 평균 백분율은 약 99.5%, 99.6%, 99.7%, 99.8% 또는 99.9%이다. 일부 실시양태에서, 단량체의 백분율은 SEC 검정에 의해 결정된다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 섹션 IV에 기재된 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 약 100 kDa이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 약 8.2, 약 8.3 및/또는 약 8.4의 pI를 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 오나르투주맙이다.
임의의 제약 제제의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 단편의 백분율은 약 0.3% 이하이다. 임의의 제약 제제의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물의 로트 (예를 들어, 배치) 중 단편의 평균 백분율은 약 0.3% 이하이다. 또한, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 포함하는 제약 제제가 본원에 제공되며, 여기서 조성물에 존재하는 단편의 백분율은 약 0.3% 이하이다. 또한 항-c-met 항체를 포함하는 조성물의 로트 (예를 들어, 배치)를 포함하는 제약 제제가 본원에 제공되며, 여기서 조성물에 존재하는 단편의 평균 백분율은 약 0.3% 이하이다. 일부 실시양태에서, 단편의 백분율 및/또는 단편의 평균 백분율은 약 0.2% 또는 0.1%, 또는 그 미만이다. 일부 실시양태에서, 단편의 백분율 및/또는 단편의 평균 백분율은 약 0.001% 내지 0.3%, 0.01% 내지 0.3%, 0.001% 내지 0.2%, 또는 0.01% 내지 0.2%이다. 일부 실시양태에서, 단편의 백분율 및/또는 단편의 평균 백분율은 약 0.3%, 0.25%, 0.2%, 0.15%, 0.1% 또는 0%이다. 일부 실시양태에서, 단편은 검출가능하지 않다. 일부 실시양태에서, 단편의 백분율은 SEC 검정에 의해 결정된다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 섹션 IV에 기재된 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 약 100 kDa이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 약 8.2, 약 8.3 및/또는 약 8.4의 pI를 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 오나르투주맙이다.
임의의 제약 제제의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 산성 변이체의 백분율은 약 20% 이하이다. 임의의 제약 제제의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물의 로트 (예를 들어, 배치) 중 산성 변이체의 평균 백분율은 약 20% 이하이다. 또한, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 포함하는 제약 제제가 본원에 제공되며, 여기서 조성물에 존재하는 산성 변이체의 백분율은 약 20% 이하이다. 또한 항-c-met 항체를 포함하는 조성물의 로트 (예를 들어, 배치)를 포함하는 제약 제제가 본원에 제공되며, 여기서 조성물에 존재하는 평균 산성 변이체는 약 20% 이하이다. 일부 실시양태에서, 산성 변이체의 백분율 및/또는 산성 변이체의 평균 백분율은 약 20%, 18.5%, 17.5%, 15%, 12.5%, 또는 그 미만이다. 일부 실시양태에서, 산성 변이체의 백분율 및/또는 산성 변이체의 평균 백분율은 약 1% 내지 20%, 5% 내지 20%, 또는 10% 내지 20%이다. 일부 실시양태에서, 산성 변이체의 백분율 및/또는 산성 변이체의 평균 백분율은 약 20%, 18.5%, 17.5%, 15% 또는 12.5%이다. 일부 실시양태에서, 산성 변이체의 백분율은 HPIEC 검정에 의해 결정된다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 섹션 IV에 기재된 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 약 100 kDa이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 약 8.2, 약 8.3 및/또는 약 8.4의 pI를 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 오나르투주맙이다.
임의의 제약 제제의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 주요 피크의 백분율은 약 75% 이상이다. 임의의 제약 제제의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물의 로트 (예를 들어, 배치) 중 주요 피크의 평균 백분율 약 75% 이상이다. 또한, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 포함하는 제약 제제가 본원에 제공되며, 여기서 조성물에 존재하는 주요 피크의 백분율은 약 75% 이상이다. 또한 항-c-met 항체를 포함하는 조성물의 로트 (예를 들어, 배치)를 포함하는 제약 제제가 본원에 제공되며, 여기서 조성물에 존재하는 주요 피크의 평균 백분율은 약 75% 이상이다. 일부 실시양태에서, 주요 피크의 백분율 및/또는 주요 피크의 평균 백분율은 약 77.5%, 80%, 82.5% 또는 85%, 또는 그 초과이다. 일부 실시양태에서, 주요 피크의 백분율 및/또는 주요 피크의 평균 백분율은 약 75% 내지 95%, 77.5% 내지 95%, 80% 내지 95%, 82.5% 내지 95%, 또는 85% 내지 95%이다. 일부 실시양태에서, 주요 피크의 백분율 및/또는 주요 피크의 평균 백분율은 약 75%, 77.5%, 80%, 82.5% 또는 85%이다. 일부 실시양태에서, 주요 피크의백분율은 HPIEC 검정에 의해 결정된다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 섹션 IV에 기재된 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 약 100 kDa이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 약 8.2, 약 8.3 및/또는 약 8.4의 pI를 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 오나르투주맙이다.
임의의 제제의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 염기성 변이체의 백분율은 약 2.0% 이하이다. 임의의 제약 제제의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물의 로트 (예를 들어, 배치) 중 염기성 변이체의 평균 백분율은 약 2.0% 이하이다. 또한, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 포함하는 제약 제제가 본원에 제공되며, 여기서 조성물에 존재하는 염기성 변이체의 백분율은 약 2.0% 이하이다. 또한 항-c-met 항체를 포함하는 조성물의 로트 (예를 들어, 배치)를 포함하는 제약 제제가 본원에 제공되며, 여기서 조성물에 존재하는 염기성 변이체의 평균 백분율은 약 2.0% 이하이다. 일부 실시양태에서, 염기성 변이체의 백분율 및/또는 염기성 변이체의 평균 백분율은 약 1.5%, 1.25%, 1.1% 또는 1%, 또는 그 미만이다. 일부 실시양태에서, 염기성 변이체의 백분율 및/또는 염기성 변이체의 평균 백분율은 약 0.001% 내지 2%, 0.01% 내지 2%, 0.001% 내지 1.5%, 또는 0.01% 내지 1.5%, 0.001% 내지 1.0%, 또는 0.01% 내지 1.0%이다. 일부 실시양태에서, 염기성 변이체의 백분율 및/또는 염기성 변이체의 평균 백분율은 약 2%, 1.5%, 1.25%, 1.1% 또는 1%이다. 일부 실시양태에서, 염기성 변이체의 백분율은 HPIEC 검정에 의해 결정된다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 섹션 IV에 기재된 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 약 100 kDa이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 약 8.2, 약 8.3 및/또는 약 8.4의 pI를 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 오나르투주맙이다.
제약 제제는 바람직한 정도의 순도를 갖는 이러한 항체를 하나 이상의 임의의 제약상 허용되는 담체, 예컨대 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences 18th edition, Gennaro, A. Ed. (1990)]에 기재된 것과 혼합하여 동결건조 제제 또는 수용액의 형태로 제조한다. 제약상 허용되는 담체는 사용되는 투여량 및 농도에서 수용자에게 비독성이고, 완충제, 예컨대 포스페이트, 시트레이트, 및 다른 유기 산; 항산화제, 예를 들어 아스코르브산 및 메티오닌; 보존제 (예컨대, 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드; 헥사메토늄 클로라이드; 벤즈알코늄 클로라이드, 벤제토늄 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질 알콜; 알킬 파라벤, 예컨대 메틸 또는 프로필 파라벤; 카테콜; 레조르시놀; 시클로헥산올; 3-펜탄올; 및 m-크레졸); 저분자량 (약 10개 미만의 잔기) 폴리펩티드; 단백질, 예컨대 혈청 알부민, 젤라틴 또는 이뮤노글로불린; 친수성 중합체, 예컨대 폴리비닐피롤리돈; 아미노산, 예컨대 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌 또는 리신; 모노사카라이드, 디사카라이드 및 다른 탄수화물, 예를 들어 글루코스, 만노스 또는 덱스트린; 킬레이트화제, 예컨대 EDTA; 당, 예컨대 수크로스, 만니톨, 트레할로스 또는 소르비톨; 염-형성 반대이온, 예컨대 나트륨; 금속 착체 (예를 들어, Zn-단백질 착체); 및/또는 비-이온성 계면활성제, 예컨대 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 본원에서 예시적인 제약상 허용되는 담체는 간질성 약물 분산액 작용제, 예컨대 가용성 중성-활성 히알루로니다제 당단백질 (sHASEGP), 예를 들어 인간 가용성 PH-20 히알루로니다제 당단백질, 예컨대 rHuPH20 (힐레넥스(HYLENEX)®, 백스터 인터내셔널, 인크.(Baxter International, Inc.))을 추가로 포함한다. rHuPH20을 포함하는, 특정의 예시적인 sHASEGP 및 사용 방법은 미국 특허 공개 번호 2005/0260186 및 2006/0104968에 기재되어 있다. 한 측면에서, sHASEGP는 하나 이상의 추가의 글리코사미노글리카나제, 예컨대 콘드로이티나제와 조합된다.
예시적인 동결건조 항체 제제는 미국 특허 번호 6,267,958에 기재되어 있다. 수성 항체 제제는 미국 특허 번호 6,171,586 및 WO2006/044908에 기재된 것을 포함하고, 후자의 제제는 히스티딘-아세테이트 완충제를 포함한다.
활성 성분은 예를 들어 콜로이드성 약물 전달 시스템 (예를 들어, 리포솜, 알부민 마이크로구체, 마이크로에멀젼, 나노입자 및 나노캡슐)에서 또는 마크로에멀젼에서 코아세르베이션 기술 또는 계면 중합에 의해 제조되는 마이크로캡슐, 예를 들어 각각 히드록시메틸셀룰로스 또는 젤라틴-마이크로캡슐 및 폴리-(메틸메타크릴레이트) 마이크로캡슐 내에 봉입될 수 있다. 이러한 기술은 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)]에 개시되어 있다.
지속-방출 제제를 제조할 수 있다. 지속-방출 제제의 적합한 예는 항체를 함유하는 고체 소수성 중합체의 반투과성 매트릭스를 포함하고, 이 매트릭스는 성형품, 예를 들어 필름 또는 마이크로캡슐의 형태이다.
생체내 투여를 위해 사용될 제약 제제는 멸균되어야 한다. 이는 제제의 제조 전에 또는 후에 멸균 여과 막을 통한 여과를 포함하는, 인간 대상체에 대한 투여에 적합한 멸균 제약 제제를 생성하기 위한 당업자에게 공지된 절차에 따라 달성될 수 있다.
제약 제제는 또한 치료할 특정한 적응증에 필요한, 바람직하게는 서로 유해한 효과를 미치지 않는 상보적 활성을 갖는, 하나 초과의 활성 화합물을 함유할 수 있다. 이러한 분자는 의도된 목적에 유효한 양으로 조합되어 적합하게 존재한다.
일부 실시양태에서, 제약 제제는 정제된 항-c-met 항체 및/또는 본원에 기재된 방법에 의해 정제된 항체, 폴리소르베이트, 사카라이드 및 완충제를 포함하는 조성물을 포함한다. 폴리소르베이트의 예는 폴리소르베이트 20 (폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄 모노라우레이트), 폴리소르베이트 40 (폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄 모노팔미테이트), 폴리소르베이트 60 (폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄 모노스테아레이트)및/또는 폴리소르베이트 80 (폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄 모노올레에이트)를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 사카라이드는 글루코스, 수크로스, 트레할로스, 락토스, 프룩토스, 말토스, 덱스트란, 글리세린, 덱스트란, 에리트리톨, 글리세롤, 아라비톨, 실리톨, 소르비톨, 만니톨, 멜리비오스, 멜레지토스, 라피노스, 만노트리오스, 스타키오스, 말토스, 락툴로스, 말툴로스, 글루시톨, 말티톨, 락티톨, 이소-말툴로스 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 히스티딘 완충제의 예는 히스티딘 클로라이드, 히스티딘 숙시네이트, 히스티딘 아세테이트, 히스티딘 포스페이트, 히스티딘 술페이트를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, 제약 제제는 (a) 정제된 항-c-met 항체 (예를 들어, 오나르투주맙) 및/또는 본원에 기재된 공정에 의해 정제된 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 (여기서, 항-c-met 항체는 약 50 mg/mL 내지 약 75 mg/mL의 농도로 존재함); (b) pH 5.0-5.4의 히스티딘 아세테이트 완충제 (여기서, 히스티딘 아세테이트 완충제는 약 1 mM 내지 약 20 mM의 농도임); (c) 수크로스 (여기서, 수크로스는 약 100 mM 내지 약 150 mM의 농도임); 및 (d) 폴리소르베이트 20 (여기서, 폴리소르베이트 20 농도는 0.02% w/v 초과임)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제약 제제는 (a) 정제된 항-c-met 항체 (예를 들어, 오나르투주맙) 및/또는 본원에 기재된 공정에 의해 정제된 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 (여기서, 항-c-met 항체는 약 60 mg/mL의 농도로 존재함); (b) pH 5.4의 히스티딘 아세테이트 완충제 (여기서, 히스티딘 아세테이트 완충제는 약 10 mM의 농도임); (c) 수크로스 (여기서, 수크로스는 약 120 mM의 농도임); 및 (d) 폴리소르베이트 20 (여기서, 폴리소르베이트 20 농도는 약 0.04% w/v임)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제약 제제는 투여 전에 희석된다 (예를 들어, 염수에서 1 mg/ml로 희석됨).
또한, 바이알 및 제약 제제를 포함하는 바이알을 충전하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 제약 제제는 시린지에 의해 관통가능한 마개를 갖는 바이알 내에, 바람직하게는 수성 형태로 제공된다. 바이알은 바람직하게는 약 2-8℃에서 뿐만 아니라 최고 30℃에서 24시간 동안 이를 필요로 하는 대상체에게 투여될 때까지 저장된다. 바이알은 예를 들어 15 cc 바이알 (예를 들어, 600 mg 용량의 경우) 또는 20 cc 바이알 (예를 들어, 900 mg 용량의 경우)일 수 있다.
VI. 용도 및 치료 방법
정제된 항-c-met 항체 조성물, 정제된 항-c-met 항체 조성물을 포함하는 제약 제제, 및/또는 본원에 제공된 방법에 의해 정제된 항-c-met 항체는 HGF/c-met 신호전달 축의 조절이상과 연관된 질환 상태를 조절하는데 유용하다. HGF/c-met 신호전달 경로는 예를 들어 세포 증식 및 혈관신생을 포함하는 다수의 생물학적 및 생리학적 기능에 연관된다.
세포 또는 조직을 유효량의 항-c-met 항체를 포함하는 정제된 항-c-met 항체 조성물, 정제된 항-c-met 항체 조성물을 포함하는 제약 제제, 및/또는 본원에 기재된 방법에 의해 정제된 항-c-met 항체와 접촉시키며, 이에 의해 c-met 활성화와 연관된 세포 증식이 억제되는 것을 포함하는, c-met 활성화 세포 증식을 억제하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 세포 증식성 장애는 c-met의 증가된 발현 또는 활성 또는 간세포 성장, 또는 둘 다와 연관된다. 일부 실시양태에서, 암은 c-met 양성이다 (예를 들어 면역조직화학에 의해 높은 수준의 c-met를 발현함). 일부 실시양태에서, 세포 증식은 암이다. 일부 실시양태에서, 암은 비소세포 폐암 (NSCLC), 교모세포종, 췌장암, 육종, 신세포 암종, 간세포성 암종, 위암, 결장직장암 또는 유방암이다. 일부 실시양태에서, 암은 IIIb기 및/또는 IV기이다. 일부 실시양태에서, 암은 국부 진행성 또는 전이성 암이다. 일부 실시양태에서, 요법은 2차 또는 3차 요법 (예를 들어, 2차 또는 3차 NSCLC 요법)이다. 일부 실시양태에서, 암은 EGFR 돌연변이체이다. 일부 실시양태에서, 암은 EGFR 야생형이다. 일부 실시양태에서, 암은 c-met 양성이다 (예를 들어 면역조직화학 (IHC)에 의해, 높은 수준의 c-met를 발현함).
대상체에게 유효량의 c-met 항체를 포함하는 정제된 항-c-met 항체 조성물, 정제된 항-c-met 항체 조성물을 포함하는 제약 제제, 및/또는 본원에 기재된 방법에 의해 정제된 항-c-met 항체를 투여하며, 이에 의해 c-met 활성화의 조절이상과 연관된 병리학적 상태를 치료하는 것을 포함하는, 대상체에서 상기 상태를 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 병리학적 상태는 암이다. 일부 실시양태에서, 암은 비소세포 폐암 (NSCLC), 교모세포종, 췌장암, 육종, 신세포 암종, 간세포성 암종, 위암, 결장직장암 또는 유방암이다. 일부 실시양태에서, 암은 IIIb기 및/또는 IV기 암이다. 일부 실시양태에서, 암은 국부 진행성 또는 전이성 암이다. 일부 실시양태에서, 요법은 2차 또는 3차 요법 (예를 들어, 2차 또는 3차 NSCLC 요법)이다. c-met 활성화 (및 이에 따른 신호전달)의 조절이상은 예를 들어 HGF (c-met의 동족 리간드) 및/또는 c-met 그 자체의 과다발현을 포함하는 다수의 세포 변화를 일으킬 수 있다. 일부 실시양태에서, 암은 EGFR 돌연변이체이다. 일부 실시양태에서, 암은 EGFR 야생형이다. 일부 실시양태에서, 암은 c-met 양성이다 (예를 들어 IHC에 의해, 높은 수준의 c-met를 발현함).
또한 c-met 또는 간세포 성장 인자, 또는 둘 다를 발현하는 세포를 항-c-met 항체를 포함하는 정제된 항-c-met 항체 조성물, 정제된 항-c-met 항체 조성물을 포함하는 제약 제제, 및/또는 본원에 기재된 방법에 의해 정제된 항체와 접촉시켜 상기 세포의 성장의 억제를 유발하는 것을 포함하는, c-met 또는 간세포 성장 인자, 또는 둘 다를 발현하는 세포의 성장을 억제하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 상기 세포의 성장은 적어도 부분적으로 c-met 또는 간세포 성장 인자 또는 둘 다의 성장 증강 효과에 의존한다. 일부 실시양태에서, 세포는 상이한 세포에 의해 발현된 HGF에 의해 (예를 들어, 주변분비 효과를 통해) 접촉된다.
또한 정제된 항-c-met 항체 (예를 들어, 오나르투주맙) 조성물, 정제된 항-c-met 항체 조성물을 포함하는 제약 제제, 및/또는 본원에 기재된 방법에 의해 정제된 항-c-met 항체를 투여하는 것을 포함하는, 암을 치료하거나 예방하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 암은 비소세포 폐암 (NSCLC), 교모세포종, 췌장암, 육종, 신세포 암종, 간세포성 암종, 위암, 결장직장암 또는 유방암이다. 일부 실시양태에서, 암은 IIIb기 및/또는 IV기 암이다. 일부 실시양태에서, 암은 국부 진행성 또는 전이성 암이다. 일부 실시양태에서, 요법은 2차 또는 3차 요법 (예를 들어, 2차 또는 3차 NSCLC 요법)이다. 일부 실시양태에서, 암은 EGFR 돌연변이체이다. 일부 실시양태에서, 암은 EGFR 야생형이다. 일부 실시양태에서, 암은 c-met 양성이다 (예를 들어 IHC에 의해, 높은 수준의 c-met를 발현함). 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체의 용량은 약 15 mg/kg이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체의 용량은 21일 사이클의 제1일에 투여되는 약 15 mg/kg이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체의 용량은 약 10 mg/kg이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체의 용량은 28일 사이클의 제1일 및 제15일에 투여되는 약 10 mg/kg이다.
임의의 방법의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 및/또는 정제된 항-c-met 항체 조성물을 포함하는 제약 제제 중 HCP는 약 50 ng/mg 이하이다. 임의의 방법의 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물의 로트 (예를 들어, 배치) 및/또는 정제된 항-c-met 항체 조성물을 포함하는 제약 제제의 로트 (예를 들어, 배치) 중 평균 HCP는 약 50 ng/mg 이하이다. 일부 실시양태에서, HCP 및/또는 평균 HCP는 약 34 ng/mg, 30 ng/mg, 25 ng/mg, 20 ng/mg, 19 ng/mg, 18 ng/mg, 17 ng/mg, 16 ng/mg, 15 ng/mg, 14 ng/mg, 13 ng/mg, 12 ng/mg, 11 ng/mg, 10 ng/mg 또는 9 ng/mg, 또는 그 미만이다. 일부 실시양태에서, HCP 및/또는 평균 HCP는 약 5 ng/mg 내지 20 ng/mg, 5 ng/mg 내지 25 ng/mg, 5 ng/mg 내지 15 ng/mg, 1 ng/mg 내지 30 ng/mg, 1 ng/mg 내지 25 ng/mg, 1 ng/mg 내지 20 ng/mg, 1 ng/mg 내지 15 ng/mg, 또는 1 ng/mg 내지 10 ng/mg이다. 일부 실시양태에서, HCP 및/또는 평균 HCP는 약 5, 5.5, 6.5, 7, 7.5, 8, 8.5, 9, 9.5, 10, 10.5, 11, 11.5, 12, 12.5, 13, 13.5, 14, 14.5, 15, 15.5, 16, 16.5, 17 또는 17.5 ng/mg이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 이. 콜라이에서 생산된다. 일부 실시양태에서, HCP 및/또는 평균 HCP는 ECP 및/또는 평균 ECP이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 섹션 IV에 기재된 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 약 100 kDa이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 약 8.2, 약 8.3 및/또는 약 8.4의 pI를 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 오나르투주맙이다.
본원에 기재된 방법은 임의의 적합한 병리학적 상태, 예를 들어 HGF/c-met 신호전달 경로의 조절이상과 연관된 세포 및/또는 조직에 영향을 미치는데 사용될 수 있다. 본원에 기재된 임의의 방법의 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 방법에서 표적화된 세포는 암 세포이다. 예를 들어, 암 세포는 유방암 세포, 결장직장암 세포, 폐암 세포, 유두상 암종 세포 (예를 들어, 갑상선의 유두상 암종 세포), 결장암 세포, 췌장암 세포, 난소암 세포, 자궁경부암 세포, 중추신경계암 세포, 골형성육종 세포, 신암종 세포, 간세포성 암종 세포, 방광암 세포, 위 암종 세포, 두경부 편평세포 암종 세포, 흑색종 세포 및 백혈병 세포로 이루어진 군으로부터 선택된 것일 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 방법에서 표적화된 세포는 과다증식성 및/또는 과형성 세포이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 방법에서 표적화된 세포는 이형성 세포이다. 또 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 방법에서 표적화된 세포는 전이성 세포이다.
임의의 방법의 일부 실시양태에서, 방법은 추가의 치료 단계를 추가로 포함한다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 방법은 표적화된 세포 및/또는 조직 (예를 들어, 암 세포)을 방사선 치료 또는 제2 치료제 (예를 들어, 화학요법제)에 노출시키는 단계를 추가로 포함한다. 예를 들어, (i) 정제된 항-c-met 항체 (예를 들어, 오나르투주맙) 조성물 및/또는 본원에 기재된 방법에 의해 정제된 항-c-met 항체 및 (ii) 제2 치료제를 투여하는 것을 포함하는 암을 치료하거나 예방하는 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 제2 치료제는 EGFR 억제제 (예를 들어, 에를로티닙), VEGF 억제제 (예를 들어, 베바시주맙), 또는 탁산 (예를 들어, 파클리탁셀)이다.
본원에 기재된 임의의 방법의 일부 실시양태에서, 방법은 유효량의 제2 치료제를 투여하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체의 용량은 약 15 mg/kg이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체의 용량은 약 10 mg/kg이다.
일부 실시양태에서, 제2 치료제는 EGFR 억제제이다. 일부 실시양태에서, EGFR 억제제는 에를로티닙 (N-(3-에티닐페닐)-6,7-비스(2-메톡시에톡시)-4-퀴나졸린아민)이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체의 용량은 21일 사이클의 제1일에 투여되는 약 15 mg/kg이다. 예를 들어, (i) 정제된 항-c-met 항체 (예를 들어, 오나르투주맙) 조성물 및/또는 본원에 기재된 방법에 의해 정제된 항-c-met 항체 (여기서, 항-c-met 항체는 3주마다 15 mg/kg의 용량으로 투여됨); 및 (ii) 에를로티닙 (N-(3-에티닐페닐)-6,7-비스(2-메톡시에톡시)-4-퀴나졸린아민) (여기서, 에를로티닙은 3주 사이클의 매일 150 mg의 용량으로 투여됨)을 투여하는 것을 포함하는, 암 (예를 들어, NSCLC)을 치료하는 방법이 제공된다.
일부 실시양태에서, 제2 치료제는 탁산 (예를 들어, 파클리탁셀)이다. 일부 실시양태에서, 암은 유방암이다. 일부 실시양태에서, 유방암은 ER-음성, PR-음성 및 HER2-음성 (ER-, PR- 및 HER2-; 또는 삼중-음성) 전이성 유방암이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체의 용량은 28-일 사이클의 제1일 및 제15일에 약 10 mg/kg이다. 예를 들어, (i) 정제된 항-c-met 항체 (예를 들어, 오나르투주맙) 조성물 및/또는 본원에 기재된 방법에 의해 정제된 항-c-met 항체 (여기서, 항-c-met 항체는 28-일 사이클의 제1일 및 제15일에 10 mg/kg의 용량으로 투여됨); 및 (ii) 파클리탁셀 (여기서, 파클리탁셀은 28-일 사이클의 제1일, 제8일 및 제15일에 90 mg/m2의 용량으로 IV 주입에 의해 투여됨)을 투여하는 것을 포함하는, 암 (예를 들어, 유방암)을 치료하는 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 방법은 환자의 생존을 증가시키고/거나 환자의 암 재발 위험을 감소시키고/거나 환자의 생존 가능성을 증가시킨다. 일부 실시양태에서, 방법은 항-VEGF 항체 (예를 들어, 베바시주맙)의 투여를 추가로 포함한다. 예를 들어, (i) 정제된 항-c-met 항체 (예를 들어, 오나르투주맙) 조성물 및/또는 본원에 기재된 방법에 의해 정제된 항-c-met 항체 (여기서, 항-c-met 항체는 28-일 사이클의 제1일 제15일에 10 mg/kg의 용량으로 투여됨); (ii) 항-VEGF 항체 (예를 들어, 베바시주맙) (여기서, 항-VEGF 항체는 28-일 사이클의 제1일 및 제15일에 10 mg/kg의 용량으로 투여됨); 및 (iii) 파클리탁셀 (여기서, 파클리탁셀은 28-일 사이클의 제1일, 제8일 및 제15일에 90 mg/m2의 용량으로 IV 주입에 의해 투여됨)을 투여하는 것을 포함하는, 암 (예를 들어, 유방암)을 치료하는 방법이 제공된다.
정제된 항-c-met 항체 (예를 들어, 오나르투주맙) 조성물 및/또는 본원에 기재된 방법에 의해 정제된 항-c-met 항체는 요법에서 단독으로 또는 다른 작용제와 조합하여 사용될 수 있다. 예를 들어, 정제된 항-c-met 항체 (예를 들어, 오나르투주맙) 조성물 및/또는 본원에 기재된 방법에 의해 정제된 항-c-met 항체는 제2 치료제 (예를 들어, 또 다른 항체, 화학요법제(들) (화학요법제의 칵테일 포함), 다른 세포독성제(들), 항-혈관신생제(들), 시토카인 및/또는 성장 억제제(들))와 공-투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 제2 치료제는 공동으로 또는 순차적으로 투여된다. 제2 치료제는 정제된 항-c-met 항체 (예를 들어, 오나르투주맙) 조성물 및/또는 방법에 의해 정제된 항-c-met 항체와 개별적으로, 그러나 동일한 치료 요법의 일부로서 투여될 수 있다. 정제된 항-c-met 항체 (예를 들어, 오나르투주맙) 조성물 및/또는 본원에 기재된 방법에 의해 정제된 항-c-met 항체가 종양 성장을 억제하는 경우에, 이는 종양 성장을 또한 억제하는 1종 이상의 다른 치료제(들)과 조합하는 것이 특히 바람직할 수 있다. 예를 들어, 정제된 항-c-met 항체 (예를 들어, 오나르투주맙) 조성물 및/또는 본원에 기재된 방법에 의해 정제된 항-c-met 항체는 치료 계획에서, 예를 들어 결장직장암, 전이성 유방암 및 신장암을 비롯하여 본원에 기재된 임의의 질환을 치료하는데 있어 EGFR 억제제, 항-VEGF 항체 및/또는 항-ErbB 항체와 조합될 수 있다.
상기 언급된 이러한 조합 요법은 조합 투여 (2종 이상의 작용제가 동일한 또는 개별 제제에 포함됨), 동시 및 개별 투여를 포괄하고, 이러한 경우에 제약 제제의 투여는 추가의 치료제 및/또는 아주반트의 투여 전에 및/또는 후에 수행될 수 있다.
따라서, 본원에 기재된 임의의 방법의 일부 실시양태에서, 방법은 동일한 조직 기원의 정상 세포와 비교하여 c-met 또는 간세포 성장 인자 또는 둘 다를 보다 풍부하게 발현하는 세포 (예를 들어, 암 세포)를 표적화하는 것을 포함한다. c-met-발현 세포는 다양한 공급원으로부터 HGF에 의해, 즉 자가분비 또는 주변분비 방식으로 조절될 수 있다. c-met 활성화 및/또는 신호전달은 또한 리간드에 관계없이 발생할 수 있다. 따라서, 일부 실시양태에서, 표적화 세포에서의 c-met 활성화는 리간드에 관계없이 발생한다.
정제된 항-c-met 항체 (예를 들어, 오나르투주맙) 조성물 및/또는 본원에 기재된 방법에 의해 정제된 항-c-met 항체는 치료 목적을 위해 인간 대상체에 투여될 수 있다. 또한, 정제된 항-c-met 항체 (예를 들어, 오나르투주맙) 조성물 및/또는 본원에 기재된 방법에 의해 정제된 항-c-met 항체는 수의학적 목적을 위해 또는 인간 질환의 동물 모델로서 이뮤노글로불린이 교차-반응하는 항원을 발현하는 비-인간 포유동물 (예를 들어, 영장류, 돼지 또는 마우스)에게 투여될 수 있다.
정제된 항-c-met 항체 (예를 들어, 오나르투주맙) 조성물 및/또는 본원에 기재된 방법에 의해 정제된 항-c-met 항체는 악성 및 양성 종양; 비-백혈병 및 림프성 악성종양; 뉴런, 신경교, 성상세포, 시상하부 및 다른 선상, 대식세포, 상피, 기질 및 포배강 장애; 및 염증성, 혈관신생 및 면역 장애를 포함하지만 이에 제한되지는 않는, 하나 이상의 항원 분자의 비정상적 발현 및/또는 활성과 연관된 질환, 장애 또는 상태의 치료, 억제, 진행 지연, 재발 예방/지연, 개선 또는 예방을 위해 사용될 수 있다.
임의의 방법의 일부 실시양태에서, 세포독성제와 접합된 정제된 항-c-met 항체 (예를 들어, 오나르투주맙) 조성물 및/또는 본원에 기재된 방법에 의해 정제된 항-c-met 항체를 포함하는 면역접합체는 환자에게 투여된다. 일부 실시양태에서, 면역접합체 및/또는 이것이 결합하는 항원이 세포에 의해 내재화되어, 면역접합체가 결합하는 표적 세포를 사멸시키는데 있어서 면역접합체의 치료 효능을 증가시킨다. 일부 실시양태에서, 세포독성제는 표적 세포 내의 핵산을 표적으로 하거나 방해한다.
정제된 항-c-met 항체 (예를 들어, 오나르투주맙) 조성물 및/또는 본원에 기재된 방법에 의해 정제된 항-c-met 항체 (및 임의의 추가의 치료제)는 비경구, 폐내, 및 비강내를 포함하고, 원하는 경우에는 국부 치료, 병변내 투여를 위한 임의의 적합한 수단에 의해 투여될 수 있다. 비경구 주입은 근육내, 정맥내, 동맥내, 복강내 또는 피하 투여를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 정맥내로 투여된다. 투여는 임의의 적합한 경로, 예를 들어 부분적으로는 투여가 단기적인지 장기적인지에 따라 정맥내 또는 피하 주사와 같은 주사에 의해 수행될 수 있다. 단일 투여 또는 다양한 시점에 걸친 다중 투여, 볼루스 투여 및 펄스 주입을 포함하나 이에 제한되지는 않는 다양한 투여 스케줄이 본원에서 고려된다.
정제된 항-c-met 항체 (예를 들어, 오나르투주맙) 조성물 및/또는 본원에 기재된 방법에 의해 정제된 항-c-met 항체는 우수한 의료 행위와 일치한 방식으로 투약 및 투여된다. 이와 관련하여 고려할 요인은 치료할 특정한 장애, 치료할 특정한 포유동물, 개별 환자의 임상적 상태, 장애의 원인, 작용제의 전달 부위, 투여 방법, 투여 스케줄링, 및 진료의에게 공지된 다른 요인을 포함한다. 정제된 항-c-met 항체 (예를 들어, 오나르투주맙) 조성물 및/또는 본원에 기재된 방법에 의해 정제된 항-c-met 항체는 반드시 그러한 것은 아니지만, 임의로 현재 해당 장애를 예방 또는 치료하기 위해 현재 사용되는 하나 이상의 작용제로 제제화된다. 이러한 다른 작용제의 유효량은 제제에서의 항체의 양, 장애 또는 치료의 유형, 및 상기 논의된 다른 요인에 따라 달라진다. 이는 일반적으로 상기 사용된 것과 동일한 투여량 및 투여 경로로 사용되거나, 또는 본원에 기재된 지금까지 사용된 투여량의 약 1 내지 99%로, 또는 실험적으로/임상적으로 적절한 것으로 결정된 임의의 투여량 및 임의의 경로에 의해 사용된다.
질환의 예방 또는 치료를 위해, 정제된 항-c-met 항체 (예를 들어, 오나르투주맙) 조성물 및/또는 본원에 기재된 방법에 의해 정제된 항-c-met 항체의 적절한 투여량은 (단독으로 또는 1종 이상의 추가의 치료제와 조합하여 사용되는 경우에) 치료할 질환의 유형, 항체의 유형, 질환의 중증도 및 경과, 정제된 항-c-met 항체 (예를 들어, 오나르투주맙) 조성물 및/또는 본원에 기재된 방법에 의해 정제된 항-c-met 항체가 예방 목적으로 투여되는지 또는 치료 목적으로 투여되는지의 여부, 선행 요법, 환자의 임상 병력 및 항-c-met 항체에 대한 반응, 및 담당의의 판단에 따라 달라질 것이다. 정제된 항-c-met 항체 (예를 들어, 오나르투주맙) 조성물 및/또는 본원에 기재된 방법에 의해 정제된 항-c-met 항체는 환자에게 한번에 또는 일련의 치료에 걸쳐 적합하게 투여된다. 질환의 유형 및 중증도에 따라, 항-c-met 항체의 약 10 mg/kg, 약 15 mg/kg 또는 그 초과 (예를 들어, 15-20 mg/kg)의 투여량이 예를 들어 1회 이상의 개별 투여에 의해서든 연속 주입에 의해서든 환자에게 투여된다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체의 용량은 약 15 mg/kg이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체의 용량은 21일 사이클의 제1일에 투여되는 약 15 mg/kg이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체의 용량은 약 10 mg/kg이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체의 용량은 28일 사이클의 제1일 및 제15일에 투여되는 약 10 mg/kg이다.
용량은 간헐적으로, 예를 들어 매주, 2주마다, 3주마다 또는 4주마다 투여될 수 있다.
수일 이상에 걸친 반복 투여의 경우에, 치료는 일반적으로 상태에 따라 질환 증상의 원하는 억제가 일어날 때까지 지속될 것이다. 그러나, 다른 투여 요법이 유용할 수 있다. 이러한 요법의 진행은 통상의 기술 및 검정에 의해 용이하게 모니터링된다.
VII. 제조품
정제된 항-c-met 항체 (예를 들어, 오나르투주맙) 조성물, 정제된 항-c-met 항체 조성물을 포함하는 제약 제제, 및/또는 본원에 기재된 방법에 의해 정제된 항-c-met 항체를 포함하는 제조품 및 장애의 치료, 예방 및/또는 진단을 위한 그의 용도가 제공된다. 제조품은 용기, 및 용기 상의 또는 용기와 연관된 라벨 또는 포장 삽입물을 포함한다. 적합한 용기는 예를 들어 병, 바이알, 시린지, IV 용액 백 등을 포함한다. 용기는 다양한 물질, 예컨대 유리 또는 플라스틱으로부터 형성될 수 있다. 용기는 정제된 항-c-met 항체 (예를 들어, 오나르투주맙) 조성물 및/또는 본원에 기재된 방법에 의해 정제된 항-c-met 항체를 그 자체로 또는 상태를 치료, 예방 및/또는 진단하는데 유효한 또 다른 조성물과 조합하여 보유하고, 멸균 접근 포트를 가질 수 있다 (예를 들어, 이 용기는 피하 주사 바늘에 의해 관통가능한 마개를 갖는 정맥내 용액 백 또는 바이알일 수 있음). 예를 들어, 정제된 항-c-met 항체 (예를 들어, 오나르투주맙) 조성물 및/또는 본원에 기재된 방법에 의해 정제된 항-c-met 항체를 갖는 용기를 포함하는 제조품 및 키트가 본원에 제공된다. 라벨 또는 포장 삽입물은 조성물이 선택된 상태, 예컨대 암을 치료하는데 사용된다는 것을 나타낸다. 일부 실시양태에서, 암은 비소세포 폐암 (NSCLC), 교모세포종, 췌장암, 육종, 신세포 암종, 위암, 결장직장암 또는 유방암이다. 일부 실시양태에서, 암은 IIIb기 및/또는 IV기 암이다. 일부 실시양태에서, 암은 국부 진행성 또는 전이성 암이다. 일부 실시양태에서, 요법은 2차 또는 3차 요법 (예를 들어, 2차 또는 3차 NSCLC 요법)이다. 일부 실시양태에서, 암은 EGFR 돌연변이체이다. 일부 실시양태에서, 암은 EGFR 야생형이다. 일부 실시양태에서, 암은 c-met 양성이다 (예를 들어 면역조직화학에 의해 높은 수준의 c-met를 발현함). 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체의 용량은 약 15 mg/kg이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체의 용량은 21일 사이클의 제1일에 투여되는 약 15 mg/kg이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체의 용량은 약 10 mg/kg이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체의 용량은 28일 사이클의 제1일 및 제15일에 투여되는 약 10 mg/kg이다.
항-c-met 항체를 포함하는 조성물 및/또는 정제된 항-c-met 항체 조성물을 포함하는 제약 제제를 첨가하는 것을 포함하는 제조품의 포장 방법이 제공되며, 여기서 조성물 및/또는 제약 제제 중 HCP는 약 50 ng/mg 이하이다. 또한, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물의 로트 (예를 들어, 배치) 및/또는 정제된 항-c-met 항체 조성물을 포함하는 제약 제제의 로트 (예를 들어, 배치)를 첨가하는 것을 포함하는 제조품의 포장 방법이 제공되며, 여기서 로트 중 평균 HCP는 약 50 ng/mg 이하이다. 일부 실시양태에서, HCP 및/또는 평균 HCP는 약 34 ng/mg, 30 ng/mg, 25 ng/mg, 20 ng/mg, 19 ng/mg, 18 ng/mg, 17 ng/mg, 16 ng/mg, 15 ng/mg, 14 ng/mg, 13 ng/mg, 12 ng/mg, 11 ng/mg, 10 ng/mg 또는 9 ng/mg, 또는 그 미만이다. 일부 실시양태에서, HCP 및/또는 평균 HCP는 약 5 ng/mg 내지 20 ng/mg, 5 ng/mg 내지 25 ng/mg, 5 ng/mg 내지 15 ng/mg, 1 ng/mg 내지 30 ng/mg, 1 ng/mg 내지 25 ng/mg, 1 ng/mg 내지 20 ng/mg, 1 ng/mg 내지 15 ng/mg, 또는 1 ng/mg 내지 10 ng/mg이다. 일부 실시양태에서, HCP 및/또는 평균 HCP는 약 5, 5.5, 6.5, 7, 7.5, 8, 8.5, 9, 9.5, 10, 10.5, 11, 11.5, 12, 12.5, 13, 13.5, 14, 14.5, 15, 15.5, 16, 16.5, 17 또는 17.5 ng/mg이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 이. 콜라이에서 생산된다. 일부 실시양태에서, HCP 및/또는 평균 HCP는 ECP 및/또는 평균 ECP이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 섹션 IV에 기재된 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 약 100 kDa이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 약 8.3, 약 8.4 또는 약 8.5의 pI를 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 오나르투주맙이다.
또한, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 및/또는 항-c-met 항체 조성물을 포함하는 제약 제제를 포함하는 용기 (예를 들어, 바이알)가 제공되며, 여기서 조성물 또는 제약 제제 중 HCP는 조성물에 약 50 ng/mg 이하로 존재한다. 또한, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물의 로트 (예를 들어, 배치) 및/또는 항-c-met 항체 조성물을 포함하는 제약 제제의 로트 (예를 들어, 배치)를 포함하는 용기 (예를 들어, 바이알)도 제공되며, 여기서 로트 중 평균 HCP는 약 50 ng/mg 이하이다. 일부 실시양태에서, HCP 및/또는 평균 HCP는 약 34 ng/mg, 30 ng/mg, 25 ng/mg, 20 ng/mg, 19 ng/mg, 18 ng/mg, 17 ng/mg, 16 ng/mg, 15 ng/mg, 14 ng/mg, 13 ng/mg, 12 ng/mg, 11 ng/mg, 10 ng/mg 또는 9 ng/mg, 또는 그 미만이다. 일부 실시양태에서, HCP 및/또는 평균 HCP는 약 5 ng/mg 내지 20 ng/mg, 5 ng/mg 내지 25 ng/mg, 5 ng/mg 내지 15 ng/mg, 1 ng/mg 내지 30 ng/mg, 1 ng/mg 내지 25 ng/mg, 1 ng/mg 내지 20 ng/mg, 1 ng/mg 내지 15 ng/mg, 또는 1 ng/mg 내지 10 ng/mg이다. 일부 실시양태에서, HCP 및/또는 평균 HCP는 약 5, 5.5, 6.5, 7, 7.5, 8, 8.5, 9, 9.5, 10, 10.5, 11, 11.5, 12, 12.5, 13, 13.5, 14, 14.5, 15, 15.5, 16, 16.5, 17 또는 17.5 ng/mg이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 이. 콜라이에서 생산된다. 일부 실시양태에서, HCP 및/또는 평균 HCP는 ECP 및/또는 평균 ECP이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 섹션 IV에 기재된 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 약 100 kDa이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 약 8.3, 약 8.4 또는 약 8.5의 pI를 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체는 오나르투주맙이다.
이러한 실시양태에서 제조품은 제1 및 제2 항체 조성물이 특정한 상태, 예를 들어 암을 치료하기 위해 사용될 수 있다는 것을 나타내는 포장 삽입물을 추가로 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 암은 비소세포 폐암 (NSCLC), 교모세포종, 췌장암, 육종, 신세포 암종, 위암, 결장직장암 또는 유방암이다. 일부 실시양태에서, 암은 IIIb기 및/또는 IV기이다. 일부 실시양태에서, 암은 국부 진행성 또는 전이성 암이다. 일부 실시양태에서, 요법은 2차 또는 3차 요법 (예를 들어, 2차 또는 3차 NSCLC 요법)이다. 일부 실시양태에서, 암은 EGFR 돌연변이체이다. 일부 실시양태에서, 암은 EGFR 야생형이다. 일부 실시양태에서, 암은 c-met 양성이다 (예를 들어 면역조직화학에 의해 높은 수준의 c-met를 발현함). 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체의 용량은 약 15 mg/kg이다. 일부 실시양태에서, 항-c-met 항체의 용량은 21일 사이클의 제1일에 투여되는 약 15 mg/kg이다.
대안적으로 또는 추가로, 임의의 제조품의 일부 실시양태에서, 제조품은 제약상 허용되는 완충제, 예컨대 정박테리아 주사용수 (BWFI), 포스페이트-완충 염수, 링거액 및 덱스트로스 용액을 포함하는 제2 (또는 제3) 용기를 추가로 포함할 수 있다. 이는 다른 완충제, 희석제, 필터, 바늘 및 시린지를 포함하여, 상업적 및 사용자 관점에서 바람직한 다른 물질을 추가로 포함할 수 있다.
또한, 제조품은 (a) 정제된 항-c-met 항체 (예를 들어, 오나르투주맙) 조성물 및/또는 본원에 기재된 방법에 의해 정제된 항-c-met 항체가 함유된 제1 용기; 및 (b) 조성물이 함유된 제2 용기를 포함할 수 있으며, 여기서 조성물은 추가의 세포독성제를 포함한다.
일부 실시양태에서, 제2 치료제는 EGFR 억제제이다. 일부 실시양태에서, EGFR 억제제는 에를로티닙 (N-(3-에티닐페닐)-6,7-비스(2-메톡시에톡시)-4-퀴나졸린아민)이다. 일부 실시양태에서, 제조품은 항-c-met 항체 제제의 21일 사이클의 제1일에 투여되는 약 15 mg/kg의 투여 및 에를로티닙의 3주 사이클의 매일에 150 mg의 투여에 대한 지침서를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제조품은 암 (예를 들어, NSCLC)의 치료를 위한 지침서를 포함한다.
일부 실시양태에서, 제2 치료제는 탁산 (예를 들어, 파클리탁셀)이다. 일부 실시양태에서, 제조품은 항-c-met 항체 제제의 28-일 사이클의 제1일 및 제15일에 약 10 mg/kg의 투여 및 파클리탁셀의 28-일 사이클의 제1일, 제8일 및 제15일에 IV 주입에 의한 90 mg/m2의 투여에 대한 지침서를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제조품은 제3 치료제를 포함하는 조성물이 함유된 제3 용기를 포함하며, 여기서 제3 치료제는 항-VEGF 항체 (예를 들어, 베바시주맙)이다. 일부 실시양태에서, 제조품은 항-c-met 항체 제제의 28-일 사이클의 제1일 및 제15일에 약 10 mg/kg의 투여, 파클리탁셀의 28-일 사이클의 제1일, 제8일 및 제15일에 IV 주입에 의한 90 mg/m2의 투여, 및 항-VEGF 항체 (예를 들어, 베바시주맙)의 28-일 사이클의 제1일 및 제15일에 10 mg/kg의 투여에 대한 지침서를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제조품은 암의 치료를 위한 지침서를 포함한다. 일부 실시양태에서, 암은 유방암 (예를 들어, ER-음성, PR-음성, 및 HER2-음성 (ER-, PR- 및 HER2-; 또는 삼중-음성) 전이성 유방암)이다. 일부 실시양태에서, 방법은 환자의 생존을 증가시키고/거나, 환가의 암 재발 위험을 감소시키고/거나 환자의 생존 가능성을 증가시킨다.
임의의 상기 제조품은 항-c-met 항체 대신에 또는 이에 더하여 정제된 항-c-met 항체 (예를 들어, 오나르투주맙) 조성물 및/또는 본원에 기재된 방법에 의해 정제된 항-c-met 항체의 면역접합체를 포함할 수 있는 것으로 이해된다.
본원에 기재된 임의의 제조품을 제조하는 방법이 본원에 추가로 제공된다.
다음은 정제된 항-c-met 항체 (예를 들어, 오나르투주맙) 조성물 및/또는 항 c-met-항체를 정제하는 방법의 예이다. 상기 제공된 일반적 설명에 따라 다양한 다른 실시양태를 실시할 수 있는 것으로 이해된다.
실시예
실시예 - 오나르투주맙 정제 공정
물질 및 방법
이. 콜라이 단백질 (ECP) 수준 검정
샌드위치 ELISA를 이용하여 생성물 샘플에 존재하는 경우에 이. 콜라이 단백질 (ECP)을 검출 및 정량화하였다. ECP에 특이적인 친화도-정제된 항체를 마이크로타이터 플레이트 웰 상에 고정화시켰다. ECP는 샘플에 존재하는 경우에 코팅된 항체에 결합한다. 결합된 ECP를 양고추냉이 퍼옥시다제 (HRP)에 접합된 항-ECP로 검출하였으며, 이는 기질 3,3',5,5'- 테트라메틸벤지딘 (TMB)과 반응하여 비색 신호를 생성한다. 항-ECP 시약을 이. 콜라이 단백질의 복합체 혼합물에 대해 인-하우스 개발하였다. 5-파라미터 곡선-핏팅 프로그램을 이용하여 표준 곡선을 생성하고, 샘플 농도를 표준 곡선으로부터 추정하였다.
DNA 수준 검정
생성물 샘플에서 이. 콜라이 DNA를 검출 및 정량화하기 위해, 샘플로부터의 DNA를 추출하고, PCR 프라이머 및 프로브를 사용하여 택맨(TaqMan) 실시간 폴리머라제 연쇄 반응 (PCR)에 적용하였다. 앰플리콘 (증폭된 생성물)을 DNA 증폭 동안 계속적으로 측정된 형광 방출의 증가에 정비례하여 측정하였다. 표준 곡선을 사용하여 샘플에서의 이. 콜라이 DNA의 양을 정량화하였다.
LpA 수준 검정
본 시험 절차는 생성물 샘플에 존재하는 경우에 단백질 A를 검출 및 정량화하기 위한 샌드위치 ELISA를 이용하여 수행하였다. 닭 항-스타필로코쿠스 단백질 A 항체를 마이크로타이터 웰에 고정화시켰다. 샘플, 표준물 및 대조군을 웰에서 인큐베이션하기 전에 예비-처리하였으며, 여기서 단백질 A는 코팅된 항체에 결합한다. 결합된 단백질 A를 HRP에 접합된 닭 항-단백질 A로 검출하였으며, 이는 기질 3,3',5,5'-TMB와 반응하여 비색 신호를 생성한다. 이러한 예비-처리는 단백질 A/IgG 복합체로부터 단백질 A의 해리에 기초하며, 단백질 A가 그의 검출 시약에 완전하게 접근가능하도록 만든다 (문헌 [Zhu-Shimoni et al., J. Immunol. Methods 341:59-67 (2009)]). 따라서, 단백질 A가 샘플에서 과도한 생성물 분자로부터 간섭받지 않고 검출되도록 허용된다. 단백질 A 칼럼 상에 고정화된 리간드에 상응하는 특이적 리간드 (예를 들어, 프로셉-vA 또는 맵셀렉트 슈어™)를 검정에서 표준물로 사용하였다. 5-파라미터 곡선-핏팅 프로그램을 이용하여 표준 곡선을 생성하였고, 샘플 농도를 표준 곡선으로부터 추정하였다.
LAL 수준 검정
박테리아 내독소는 미생물 세포의 파괴에 의해 또는 살아있는 세포로부터 살포에 의해 방출될 수 있는 그람-음성 박테리아의 세포벽의 리포폴리사카라이드 (LPS) 성분이다. 동역학적 발색 방법을 리물루스 변형세포 용해물 (LAL)에 의한 박테리아 내독소의 검출 및 정량화에 이용하였다. 본 검정은 USP 및 Ph. Eur. 요구사항에 따라 검증되었다.
동역학적 발색 방법은 박테리아 내독소의 존재에 의한 LAL 시약에서의 전구효소의 활성화에 기초하였다. 활성화시에, 효소는 발색단의 절단을 촉매하여 분광측정법으로 정량화되는 황색을 생성하였다. 색 변화의 비율은 존재하는 내독소의 양 및 반응 시간에 정비례하였다. 표준 곡선은 내독소 농도 및 유의한 양의 색을 생성하는데 필요한 반응 시간 사이의 로그/로그 상관관계로부터 생성되었다.
단량체, 단편 및 응집체 검정
오나르투주맙 고분자량 종 (응집체), 주요 피크 (단량체) 및 저분자량 종 (단편)을 분리하기 위한 TSK-GEL G3000SWXL 칼럼을 사용함으로써 본래 조건 하에 오나르투주맙의 크기 이질성을 모니터링하기 위해 크기-배제 크로마토그래피를 이용하였다.
주요 피크, 산성 변이체 및 염기성 변이체 검정
오나르투주맙을 산성 영역, 주요 피크 및 염기성 영역으로 분리하기 위한 디오넥스 프로팩(Dionex ProPac) 약한 양이온-교환 칼럼을 사용함으로써 전하 이질성을 정량적으로 모니터링하기 위해 양이온-교환 크로마토그래피를 이용하였다.
결과
오나르투주맙은 현재 에스케리키아 콜라이 (이. 콜라이)에서 생산되는 1-아암, 1가 항-c-met 항체이다. 1가 항체의 응집 (다량체 및 올리고머의 형성)을 최소화할 필요를 고려하여, (2개의 중쇄 및 2개의 경쇄를 갖는 효능제 2가 항체의 형성보다는) 1가 구조를 유지하기 위해, 및/또는 오나르투주맙 및 숙주 세포 불순물/오염물의 매우 유사한 정전기적 특성으로 인해, 표 2에 상세하게 기재된 바와 같은 다중 오나르투주맙 정제 공정이 논의되었다.
Figure pct00013
상기 기재된 바와 같은 공정은 표 3에 기재된 바와 같은 특성을 갖는 오나르투주맙을 포함하는 조성물의 배치를 생성하였다.
Figure pct00014
공정 A 및 공정 B의 비교에서, 차이는 표 4에 요약된 바와 같이 관찰된 오나르투주맙을 포함하는 조성물의 정제 공정 및/또는 순도의 유의한 개선을 발생시켰다.
Figure pct00015
표 4에 언급된 바와 같이, 공정 B에 비해 공정 A의 정제에서 한가지 차이는 강한 CE 칼럼으로부터 약한 CE 칼럼으로의 크로마토그래피 단계 2 (크롬 2)의 변화였다. 공정 B의 개발에서, 잠재적 CE 수지를 평가하였다. CE 수지 스크린을 CM 세파로스 FF (약한 CE 수지), SP 세파로스 FF (강한 CE 수지) 및 SP XL 수지 (강한 CE 수지)를 이용하여 수행하였다. 약한 CE 수지는 표 5에 나타난 바와 같이 SP 세파로스 FF (강한 CE 수지)에 비해 보다 우수한 ECP 제거를 입증하였다. 또한, 약한 CE 수지는 그의 본래 외양으로 다시 재생될 수 있는 반면 다른 수지는 염기 재생 후에 갈색빛 색으로 남아있었다. 또한, 0.5-0.5OD 풀링시에, 약한 CE 수지 및 강한 CE 수지 (SP 세파로스 FF) 구동으로부터의 마지막 분획은 50% 응집체를 갖는다. 대조적으로, 1-1OD 풀링시에, 이러한 응집체는 풀로부터 제거되었으며, 1% 미만의 응집체 수준이 생성물 수율에 유의하게 영향을 끼치지 않고 이들 풀에서 관찰되었다.
Figure pct00016
또한, 공정 B의 개발에서, 잠재적 소수성 상호작용 크로마토그래피 (HIC) 수지를 최종 크로마토그래피 단계를 위해 평가하였다. 표 6에 나타난 바와 같이, HIC 수지, 지이 헬스 사이언스(GE Health Science)로부터의 페닐 세파로스 FF 하이서브(HiSub) (수지 1), 도소(TOSOH)로부터의 토요피얼 페닐-650M (수지 2), 도소로부터의 토요피얼 헥실-650C (수지 3) 및 도소로부터의 토요피얼 부틸-650M (수지 4)를 AKTA 스카우팅 방법을 통해 평가하고, 하기 구동 조건을 이용하여 처리하였다: 모드: 통과, pH 7.0, 유량: 150 cm/hr, 및 최대 로드 밀도: 50 mg/ml. 수지는 5 칼럼 부피 (CV)의 완충제 (0.3 M Na2SO4, 50 mM Na3PO4, pH 7.0)에서 평형화되었다. 샘플, 조건화된 SP 세파로스 XL 풀 (0.6 M Na2SO4, 0.1 M Na3PO4, pH 7.0 완충제로 1:1 조건화됨; 출발 풀 기준: 0.5 OD)을 칼럼 상에 로딩하고, 관심 단백질 (오나르투주맙)을 0.5 OD의 종결 풀 기준으로 15-20 CV의 완충제 (0.3 M Na2SO4, 50 mM Na3PO4, pH 7.0)를 사용하여 용리하였다.
표 6에 나타난 바와 같은 결과에 기초하여, HIC 수지, 페닐 세파로스 하이서브는 하이프로필(HiPropyl)의 70%에 비해 82%의 단계 수율 및 121 ppm ECP 및 1.4% 응집체의 불순물 제거를 달성함으로써 가장 우수한 전체 성능을 나타내었다 (데이터는 나타내지 않음).
Figure pct00017
공정 B 및 공정 C의 비교에서, 차이는 표 7에 요약된 바와 같이 관찰된 오나르투주맙을 포함하는 조성물의 정제 공정 및/또는 순도의 유의한 개선을 발생시켰다.
Figure pct00018
공정 C의 개발에서, 강한 CE 수지 로드의 요구되는 pH 조정을 제거하기 위해, 약한 CE 및 강한 CE 칼럼에 사용되는 완충제를 MES로부터 MOPS로 변화시켰다. 이는 또한 공정의 용이성을 용이하게 하는 이점을 가졌다. 하기 표 8은 MOPS 및 MES를 비교하여 약한 CE 수지 상의 추가의 정제가 유사한 ECP 값을 생성한다는 것을 보여준다. 대등한 결과가 공정 B 조건 (25 mM MES, 60 mM NaOAc pH 6.5)으로부터 25 mM MOPS, 50 mM NaOAc pH 7.1로의 변화시에 관찰되었다.
Figure pct00019
또한, pH 6.5 또는 7.0에서의 로드로 강한 CE 수지를 구동시켰을 때, 표 9에 나타난 바와 같이 보다 높은 pH 로드가 보다 우수한 ECP 제거를 제공하는 것으로 나타났다. 또한, 수율은 표 9에 나타난 바와 같이 대등하였다.
Figure pct00020
도 4에 나타낸 바와 같은 구배 용리 조건 하의 강한 AE 수지 (Q 세파로스 FF) 구동은 ECP 및 응집체의 우수한 분할을 발생시켰다. 도 4의 크로마토그램은 ECP에 대한 트레이스 (ng/mL) 및 % 응집체를 포함한다 (도 4의 OA5D5가 오나르투주맙임에 주목함). ECP 및 응집체 분포는 강한 AE 수지가 적절하게 ECP를 제거할 것이며 최종 크로마토그래피 단계로서 HIC 수지를 대체할 수 있다는 것을 나타내었다. 또한 표 10을 참조한다.
Figure pct00021
하기 조건을 연구하여 파라미터 및 강한 AE 수지의 작동 범위가 생성물 순도 및 회수에 영향을 끼치지 않고 구동될 수 있는지를 결정하였다. 구동은 용리 완충제 중 40 mM, 45 mM 및 50 mM NaCl로 수행하였다. 용리 완충제의 pH는 8.7, 8.9 및 9.2에서 시험하였다. 세척 완충제의 염 농도는 10 mM, 25 mM 및 30 mM NaCl에서 시험하였다. 강한 AE 칼럼의 언더-로딩의 효과를 또한 15 g/L 로드 밀도로의 구동에 의해 시험하였다. 모든 구동은 표 11에 나타난 바와 같이 최종 강한 AE 수지 작동 조건의 강건성을 입증하였다.
Figure pct00022
공정 C 및 공정 D의 비교에서, 차이는 표 12에 요약된 바와 같이 관찰된 오나르투주맙을 포함하는 조성물의 정제 공정 및/또는 순도의 유의한 개선을 발생시켰다.
Figure pct00023
공정 C에 대한 비교에서, 공정 D의 단백질 A 풀 생성물 회수는 원심분리 전의 희석에서 10% 증가를 활용하는 경우에 대략 10% 증가하였다 (평균 단백질 A 풀 질량 (정규화됨): 공정 C-1X 및 공정 D-1.1X). 본 실시예에서, 원심분리 단계 상에서 생성물 회수의 순 개선은 단백질 A 상에서 생성물 회수의 순 증가로 하류 전환되었다.
공정 D 및 공정 E의 비교에서, 차이는 표 13에 요약된 바와 같이 관찰된 오나르투주맙을 포함하는 조성물의 정제 공정 및/또는 순도의 유의한 개선을 발생시켰다.
Figure pct00024
응집 단계를 공정 D에 부가하였다. 공정 E에서와 같이 연장된 기간 동안 표 14에 나타낸 바와 같이 승온에서 센트레이트를 유지하면 일부 불순물의 응집이 발생하였으며 이들은 다르게는 단백질 A 풀에서 용리된다. 그러나, 응집 단계는 단백질 A 로딩 공정을 방해하는 증가된 탁도를 발생시켰다. 상류 응집 단계를 유도하기 위해 이용된 다중 온도 및 시간을 시험함으로써, 임의의 부가된 탁도가 증진된 정제에 절충되지 않으면서 기존의 원심분리 및 여과 기술을 이용하여 최소화 및/또는 제거될 수 있었다.
Figure pct00025
또한, 단백질 A 수지를 상이한 단백질 A 수지의 스크리닝 후에 공정 D와 공정 E 사이에 변화시켰다. 표 15에 나타난 바와 같은 단백질 A 수지의 비교는 단백질 A 수지 2 (맵셀렉트 슈어™)가 단백질 A 수지 1 및 프로셉 울트라 (PUP)에 비해 유의하게 낮은 ECP를 발생시킨다는 것을 보여준다. 또한, 단백질 A 수지 2는 PEI를 검출가능한 수준 아래로 정화한 반면, 단백질 A 수지 1 및 PUP는 그렇지 않았다. 잔류 PEI는 하류 수지 상에서 결합 도메인에 대해 생성물을 능가할 수 있어, 생성물 결합 능력을 감소시키고 불규칙적인 거동을 발생시키기 때문에, 잔류 PEI가 문제가 될 수 있다. 매우 적은 농도의 잔류 PEI의 존재도 정제 효율에 해로울 수 있다. 단백질 A 수지로서 단백질 A 수지 1을 사용하는 공정 D에서, 생성물은 약한 CE 단계보다 먼저 처리되어 단백질 A 수지 2와 대등한 PEI의 수준을 달성해야 한다. 단백질 A 수지 2가 오나르투주맙을 포함하는 단백질 A 수지 로드로부터 잔류 양이온성 중합체 응집제 (PEI)를 정화하는 능력은 특유하며 놀라웠다. 단백질 A 수지 2의 효능은 이것이 제공하는 증진된 유연성 및 공정 강건성으로 인해 가치가 있다. 또한, 단백질 A 수지 2는 평균 21 ng/mg인 단백질 A 수지 1에 비해 단백질 A 리간드를 침출시키지 않았으며 (결과 < 2 ng/mg), 단백질 A 수지 2 풀은 프로셉 vA 및 PUP에 비해 감소된 색을 나타내었다 (데이터는 나타내지 않음).
Figure pct00026
또한, 단백질 A 용리 완충제 사이의 비교는 표 16에 나타난 바와 같이 글리신/인산이 아세테이트/아세트산 용리 완충제에 비해 보다 낮은 전도도를 갖는 조정된 풀 (하류 약한 AE 수지의 로딩을 위해 높은 pH로 조정한 후) 및 대등한 풀 부피, 풀 pH, 적정제 부피 및 수율을 발생시킨다는 것을 보여주었다. 글리신/인산 용리 완충제로 실현된 조정된 풀 전도도의 감소는 풀이 공정 D에 비해 로드 부피/로드 공정 시간을 50% 감소시키는 1:1 희석을 필요로 하지 않았으므로 유의하게 개선된 제조 효율을 나타내었다.
Figure pct00027
제2 크로마토그래피 단계 (크롬 2)는 또한 공정 D 및 공정 E 사이에서 변화시켰다. 약한 CE 수지 (크롬 2 단계)에 대한 보다 효과적인 대안을 확인하기 위한 노력으로 28개 수지의 고처리량 로봇 스크린을 수행하였다. 약한 CE 수지는 ECP를 제거하는데 가장 덜 효과적인 단계였으며, 이전에는 잔류 PEI를 다루는 그의 능력으로 인해 대체로 필요하였다. 잔류 PEI는 단백질 A 수지 2로 인해 더 이상 문제가 되지 않았으며, 보다 효과적인 크롬 2 수지가 바람직하였다. 초기에, 12개의 AE 수지, 8개의 CE 수지, 및 8개의 HIC 수지를 생성물 결합에 대해 스크리닝하였다. 이 스크린으로부터, 8개의 AE 수지, 8개의 CE 수지, 및 4개의 HIC 수지를 로드로서 단백질 A 수지 2 풀을 사용하여 ECP 결합에 대해 추가로 시험하였다. 각각의 수지에 대해, 48가지 조건을 시험하여 2300개 초과의 데이터를 수집하였다. 놀랍게도, 실질적으로 모든 시험된 수지의 경우에, 생성물과 및 ECP 흡착 사이에 강한 상관관계가 있었다. 이러한 관찰은, 최종 크로마토그래피 (최종 크롬) 풀에서 수행된 다른 분석의 결과와 함께 (데이터는 나타내지 않음), 문제가 되는 ECP (즉 공정 전반에 걸쳐 유지된 것)기 생성물과 유사한 정전기적 및 소수성 특성을 공유하여, 예외적으로 도전적인 분리에 기여한다는 것을 시사한다. 로봇 스크린으로부터, 오직 오나르투주맙 생성물과 ECP 사이의 구별가능한 차이를 나타내는 수지 유형은 약한 AE 수지였으며, 심지어 여기서 작동 윈도우는 도 5에 나타난 바와 같이 작았다 (캅토 DEAE에 대한 상기 그래프 및 작동 윈도우에 대한 청색 박스 참조).
공정 E 및 공정 F의 비교에서, 차이는 표 17에 요약된 바와 같이 관찰된 오나르투주맙을 포함하는 조성물의 정제 공정 및/또는 순도의 유의한 개선을 발생시켰다.
Figure pct00028
약한 AE 평형화/세척 완충제 사이의 비교는 글리신, 포스페이트, 트리스 (GPT) 완충제가 선단부 상의 굴절을 제거함으로써 보다 박스-유사한, 통과 단계를 발생시키고, 크로마토그램의 배면 상의 세척 피크를 분리한다는 것을 보여주었다. GPT는 공정 F에서 보다 효과적인 완충제였으며, 그의 사용 이익은 풀 및 완충제 부피의 25% 감소, 로드 pH의 작은 변동으로 인한 크로마토그램 형상의 감소된 가변성, 및 도 6에 나타난 바와 같이 부피 대신 광학 밀도에 기초한 강건한 최종-풀링을 포함하였다.
강한 AE 최종 크로마토그래피 단계에서 수행된 분획 계승 다중-변량 DOE는 도 7에 나타난 바와 같이 허용되는 범위의 보다 낮은 우측 코너에서 로드 전도도 및 로드 pH 사이의 불리한 상호작용을 밝혀내었다. 이 코너 부근에서의 작동은 다른 조건 (~90%)에 비해 유의하게 낮은 수율 (60-70%)을 나타내었다. 이 코너 부근에서, 및 수율의 손실과 일치하게, 오나르투주맙 단백질의 유의한 파과가 로드 상의 말단을 향한 크로마토그램 상의 흡광도 신호에서 관찰되었으며 (데이터는 나타내지 않음), 이는 생성물과 수지 사이의 불충분한 전하-전하 상호작용으로 인한 결합 능력의 감소를 시사한다. 조기 파과 및 이후의 수율 손실의 위험을 완화하기 위해, 전도도에 대한 표적 작동 조건이 공정 F에서 코너 부근을 피하기 위해 좌측-이동되었다.
부분 참고문헌 목록
Figure pct00029
Figure pct00030
Figure pct00031
상기 발명은 이해를 명확하게 하고자 하는 목적으로 예시 및 실시예로서 어느 정도 상세하게 기재되었지만, 상기 설명 및 실시예가 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 안 된다. 본원에 인용된 모든 특허 및 과학 문헌의 개시내용은 그의 전체내용이 명백하게 참조로 포함된다.
SEQUENCE LISTING <110> GENENTECH, INC. ET AL. <120> PURIFICATION OF ANTI-C-MET ANTIBODIES <130> P4807R1-WO <140> <141> <150> 61/562,925 <151> 2011-11-22 <150> 61/562,429 <151> 2011-11-21 <160> 34 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 1 Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Thr Ser Ser Gln Lys Asn Tyr Leu 1 5 10 15 Ala <210> 2 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 2 Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser 1 5 <210> 3 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 3 Gln Gln Tyr Tyr Ala Tyr Pro Trp Thr 1 5 <210> 4 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 4 Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Trp Leu His 1 5 10 <210> 5 <211> 18 <212> PRT 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Claims (33)

  1. 항-c-met 항체를 포함하는 조성물이며, 여기서 숙주 세포 단백질 (HCP)은 약 50 ng/mg 이하로 존재하고, 항-c-met 항체는 서열 KSSQSLLYTSSQKNYLA (서열 1)를 포함하는 HVR-L1, 서열 WASTRES (서열 2)를 포함하는 HVR-L2, 서열 QQYYAYPWT (서열 3)를 포함하는 HVR-L3, 서열 GYTFTSYWLH (서열 4)를 포함하는 HVR-H1, 서열 GMIDPSNSDTRFNPNFKD (서열 5)를 포함하는 HVR-H2 및 서열 ATYRSYVTPLDY (서열 6)를 포함하는 HVR-H3을 포함하고, 항-c-met 항체는 단일 항원 결합 아암을 포함하며 Fc 영역을 포함하고, Fc 영역은 제1 및 제2 Fc 폴리펩티드를 포함하고, 제1 및 제2 Fc 폴리펩티드는 복합체로 존재하는 것인 조성물.
  2. 항-c-met 항체를 포함하는 조성물이며, 여기서 HCP는 약 50 ng/mg 이하로 존재하고, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 DNA 수준은 약 0.3 pg/mg 이하이고, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 LpA는 약 2 ng/mg 이하이고, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 리물루스(Limulus) 변형세포 용해물 (LAL)은 약 0.01 EU/mg 이하이고, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 응집체의 백분율은 약 0.3% 이하이고, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 단량체의 백분율은 약 99.5% 이상이고, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 단편의 백분율은 약 0.3% 이하이고, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 산성 변이체의 백분율은 약 20% 이하이고, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 주요 피크의 백분율은 약 75% 이상이고, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 염기성 변이체의 백분율은 약 2.0% 이하이고, 항-c-met 항체는 서열 KSSQSLLYTSSQKNYLA (서열 1)를 포함하는 HVR-L1, 서열 WASTRES (서열 2)를 포함하는 HVR-L2, 서열 QQYYAYPWT (서열 3)를 포함하는 HVR-L3, 서열 GYTFTSYWLH (서열 4)를 포함하는 HVR-H1, 서열 GMIDPSNSDTRFNPNFKD (서열 5)를 포함하는 HVR-H2 및 서열 ATYRSYVTPLDY (서열 6)를 포함하는 HVR-H3을 포함하고, 항-c-met 항체는 단일 항원 결합 아암을 포함하며 Fc 영역을 포함하고, Fc 영역은 제1 및 제2 Fc 폴리펩티드를 포함하고, 제1 및 제2 Fc 폴리펩티드는 복합체로 존재하는 것인 조성물.
  3. 항-c-met 항체를 포함하는 조성물이며, 여기서 HCP는 약 15 ng/mg 이하로 존재하고, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 DNA 수준은 약 0.3 pg/mg 이하이고, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 LpA는 약 2 ng/mg 이하이고, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 리물루스 변형세포 용해물 (LAL)은 약 0.01 EU/mg 이하이고, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 응집체의 백분율은 약 0.3% 이하이고, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 단량체의 백분율은 약 99.5% 이상이고, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 단편의 백분율은 약 0.3% 이하이고, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 산성 변이체의 백분율은 약 20% 이하이고, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 주요 피크의 백분율은 약 75% 이상이고, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물 중 염기성 변이체의 백분율은 약 2.0% 이하이고, 항-c-met 항체는 서열 KSSQSLLYTSSQKNYLA (서열 1)를 포함하는 HVR-L1, 서열 WASTRES (서열 2)를 포함하는 HVR-L2, 서열 QQYYAYPWT (서열 3)를 포함하는 HVR-L3, 서열 GYTFTSYWLH (서열 4)를 포함하는 HVR-H1, 서열 GMIDPSNSDTRFNPNFKD (서열 5)를 포함하는 HVR-H2 및 서열 ATYRSYVTPLDY (서열 6)를 포함하는 HVR-H3을 포함하고, 항-c-met 항체는 단일 항원 결합 아암을 포함하며 Fc 영역을 포함하고, Fc 영역은 제1 및 제2 Fc 폴리펩티드를 포함하고, 제1 및 제2 Fc 폴리펩티드는 복합체로 존재하는 것인 조성물.
  4. 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 28℃ 초과의 온도 및 약 pH 6 내지 약 pH 8의 pH에서 6시간 초과 동안 유지하는 것을 포함하며, 여기서 항-c-met 항체는 서열 KSSQSLLYTSSQKNYLA (서열 1)를 포함하는 HVR-L1, 서열 WASTRES (서열 2)를 포함하는 HVR-L2, 서열 QQYYAYPWT (서열 3)를 포함하는 HVR-L3, 서열 GYTFTSYWLH (서열 4)를 포함하는 HVR-H1, 서열 GMIDPSNSDTRFNPNFKD (서열 5)를 포함하는 HVR-H2 및 서열 ATYRSYVTPLDY (서열 6)를 포함하는 HVR-H3을 포함하고, 항-c-met 항체는 단일 항원 결합 아암을 포함하며 Fc 영역을 포함하고, Fc 영역은 제1 및 제2 Fc 폴리펩티드를 포함하고, 제1 및 제2 Fc 폴리펩티드는 복합체로 존재하는 것인, 항-c-met 항체를 정제하는 방법.
  5. 제4항에 있어서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 원심분리하는 것을 추가로 포함하는 방법.
  6. 제4항 또는 제5항에 있어서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 맵셀렉트 슈어(MabSelect SuRe) 수지 상에 로딩하는 것 및 항-c-met 항체를 용리하는 것을 추가로 포함하는 방법.
  7. 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 맵셀렉트 슈어 수지 상에 로딩하는 것 및 항-c-met 항체를 용리하는 것을 포함하며, 여기서 항-c-met 항체는 서열 KSSQSLLYTSSQKNYLA (서열 1)를 포함하는 HVR-L1, 서열 WASTRES (서열 2)를 포함하는 HVR-L2, 서열 QQYYAYPWT (서열 3)를 포함하는 HVR-L3, 서열 GYTFTSYWLH (서열 4)를 포함하는 HVR-H1, 서열 GMIDPSNSDTRFNPNFKD (서열 5)를 포함하는 HVR-H2 및 서열 ATYRSYVTPLDY (서열 6)를 포함하는 HVR-H3을 포함하고, 항-c-met 항체는 단일 항원 결합 아암을 포함하며 Fc 영역을 포함하고, Fc 영역은 제1 및 제2 Fc 폴리펩티드를 포함하고, 제1 및 제2 Fc 폴리펩티드는 복합체로 존재하는 것인, 항-c-met 항체를 정제하는 방법.
  8. 제4항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 약한 음이온 교환 수지 상에 로딩하는 것 및 통과액 중 항-c-met 항체를 회수하는 것을 추가로 포함하는 방법.
  9. 제8항에 있어서, 약한 음이온 교환 수지가 통과 모드로 구동되는 것인 방법.
  10. 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 약한 음이온 교환 수지 상에 로딩하는 것 및 통과액 중 항-c-met 항체를 회수하는 것을 포함하며, 여기서 항-c-met 항체는 서열 KSSQSLLYTSSQKNYLA (서열 1)를 포함하는 HVR-L1, 서열 WASTRES (서열 2)를 포함하는 HVR-L2, 서열 QQYYAYPWT (서열 3)를 포함하는 HVR-L3, 서열 GYTFTSYWLH (서열 4)를 포함하는 HVR-H1, 서열 GMIDPSNSDTRFNPNFKD (서열 5)를 포함하는 HVR-H2 및 서열 ATYRSYVTPLDY (서열 6)를 포함하는 HVR-H3을 포함하고, 항-c-met 항체는 단일 항원 결합 아암을 포함하며 Fc 영역을 포함하고, Fc 영역은 제1 및 제2 Fc 폴리펩티드를 포함하고, 제1 및 제2 Fc 폴리펩티드는 복합체로 존재하는 것인, 항-c-met 항체를 정제하는 방법.
  11. 제10항에 있어서, 약한 음이온 교환 수지가 통과 모드로 구동되는 것인 방법.
  12. 제4항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 강한 양이온 교환 수지 상에 로딩하는 것 및 항-c-met 항체를 용리하는 것을 추가로 포함하는 방법.
  13. 제4항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 강한 음이온 교환 수지 상에 로딩하는 것 및 항-c-met 항체를 용리하는 것을 추가로 포함하는 방법.
  14. 제4항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 항-c-met 항체를 포함하는 조성물을 한외여과 및/또는 정용여과하는 것을 추가로 포함하는 방법.
  15. 제4항 내지 제14항 중 어느 한 항의 방법에 의해 정제되거나 수득가능한 항-c-met 항체를 포함하며, 여기서 항-c-met 항체는 서열 KSSQSLLYTSSQKNYLA (서열 1)를 포함하는 HVR-L1, 서열 WASTRES (서열 2)를 포함하는 HVR-L2, 서열 QQYYAYPWT (서열 3)를 포함하는 HVR-L3, 서열 GYTFTSYWLH (서열 4)를 포함하는 HVR-H1, 서열 GMIDPSNSDTRFNPNFKD (서열 5)를 포함하는 HVR-H2 및 서열 ATYRSYVTPLDY (서열 6)를 포함하는 HVR-H3을 포함하고, 항-c-met 항체는 단일 항원 결합 아암을 포함하며 Fc 영역을 포함하고, Fc 영역은 제1 및 제2 Fc 폴리펩티드를 포함하고, 제1 및 제2 Fc 폴리펩티드는 복합체로 존재하는 것인 조성물.
  16. 제15항에 있어서, 숙주 세포 단백질 (HCP)이 약 50 ng/mg 이하로 존재하는 것인 조성물.
  17. 제1항, 제2항 및 제16항 중 어느 한 항에 있어서, HCP가 약 1 ng/mg 내지 15 ng/mg으로 존재하는 것인 조성물.
  18. 제1항 내지 제3항, 제16항 및 제17항 중 어느 한 항에 있어서, HCP가 이. 콜라이(E. coli) 단백질 (ECP)인 조성물.
  19. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 항-c-met 항체가 (a) 서열:
    Figure pct00032
    를 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 (b) 서열:
    Figure pct00033
    을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 것인 조성물 또는 방법.
  20. 제19항에 있어서, Fc 영역이 상기 항원 결합 아암을 포함하는 Fab 분자에 비해 상기 항체 단편의 안정성을 증가시키는 것인 조성물 또는 방법.
  21. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 Fc 폴리펩티드가 도 1에 도시된 Fc 서열 (서열 17)을 포함하고, 제2 Fc 폴리펩티드가 도 2에 도시된 Fc 서열 (서열 18)을 포함하는 것인 조성물 또는 방법.
  22. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 항-c-met 항체가 오나르투주맙인 조성물 또는 방법.
  23. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 항-c-met 항체가 오나르투주맙과 동일한 에피토프에 결합하는 것인 조성물 또는 방법.
  24. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 항-c-met 항체가 약 8.0 내지 약 8.5의 pI를 갖는 것인 조성물 또는 방법.
  25. 제1항 내지 제3항 및 제15항 내지 제24항 중 어느 한 항의 조성물을 포함하는 제약 제제.
  26. 세포 또는 조직을 유효량의 제25항의 제약 제제와 접촉시키는 것을 포함하는, c-met 활성화 세포 증식을 억제하는 방법.
  27. 대상체에게 유효량의 제25항의 제약 제제를 투여하는 것을 포함하는, HGF/c-met 신호전달 축의 조절이상과 연관된 질환을 조절하는 방법.
  28. 증식성 장애를 갖는 대상체에게 유효량의 제25항의 제약 제제를 투여하는 것을 포함하는, 증식성 장애를 갖는 대상체를 치료하는 방법.
  29. 제28항에 있어서, 증식성 장애가 암인 방법.
  30. 제29항에 있어서, 암이 폐암, 교모세포종, 췌장암, 육종, 신세포 암종, 간세포성 암종, 위암, 결장직장암 및/또는 유방암인 방법.
  31. 제26항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 치료제를 투여하는 것을 추가로 포함하는 방법.
  32. 제25항의 제약 제제가 함유된 용기를 포함하는 제조품.
  33. 제32항의 제조품을 제조하는 방법.
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