KR20130113921A - 비알코올성 지방성 간염의 예방 및/또는 치료제 - Google Patents

비알코올성 지방성 간염의 예방 및/또는 치료제 Download PDF

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야수노부 요시나카
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Abstract

본 발명은 비알코올성 지방성 간염의 예방, 치료에 유용한 화합물을 제공한다. 2-[4-[2-(벤즈이미다졸-2-일티오)에틸]피페라진-1-일]-N-[2,4-비스(메틸티오)-6-메틸-3-피리딜]아세트아미드 혹은 그 산부가 염, 또는 이것들의 용매화물을 유효성분으로 하는 비알코올성 지방성 간염의 예방 및/또는 치료제.

Description

비알코올성 지방성 간염의 예방 및/또는 치료제{PROPHYLACTIC AND/OR THERAPEUTIC AGENT FOR NON-ALCOHOLIC STEATOHEPATITIS}
본 발명은 비알코올성 지방성 간염의 예방 및/또는 치료제에 관한 것이다.
2형 당뇨병 등 소위 생활 습관병의 개념으로서, 메타볼릭 신드롬(내장지방 증후군)이 주목 받고 있다. 메타볼릭 신드롬은 내장 지방형 비만에 부가해서, 고혈당, 고혈압, 지질이상 중 어느 2개 이상을 겸비하는 상태로 정의되며, 동맥경화를 진행시키고, 심근경색이나 뇌경색 등의 발병 위험성을 높이는 것으로 되어 있다.
비알코올성 지방성 간질병(nonalcoholic fatty liver disease, 이하 ‘NAFLD’로 표기하는 경우가 있다.)은 음주나 분명한 성인(成因)(바이러스나 자기면역 등)에 의하지 않는 지방성 간장애로서, 최근에는 메타볼릭 신드롬의 간에 있어서의 표현형으로 인식되고 있지만, 그 이외에도 지방대사나 미토콘드리아 대사를 장애하는 여러 가지의 병의 원인이 보고되고 있다. NAFLD는 추가로, 간세포의 지방 침착만에 의한 비교적 예후가 양호한 단순성 지방간(simple steatosis)과, 간조직의 섬유화, 간경변, 간세포암에 이르는 경우가 있는 비알코올성 지방성 간염(nonalcoholic steatohepatitis, 이하 ‘NASH’로 표기하는 경우가 있다.)으로 분류된다(비특허문헌 1).
NASH의 발생 메카니즘으로서, Day들의 「two hit theory」가 널리 알려져 있다(비특허문헌 2). 즉, 지방간의 형성과정(1st hit)에는 칼로리 섭취ㆍ소비 밸런스의 불균형이나, 인슐린 저항성을 기반으로 한 대사이상에 의한 간세포로의 지질저류가 관여하고 있다. 지방간이 NASH로 진행되기 위해서는, 추가로 2nd hit로서, 에너지대사 부하에 의거하는 산화스트레스의 증대와 그것에 동반하는 자연 면역계의 부활이 중요한 역할을 담당하고 있다. 또, NASH의 병태를 악화시키는 것으로서, 대표적인 염증성 사이토카인인 TNF-α가 알려져 있다. 간조직 중의 TNF-α발현을 조사한 보고에 의하면, NASH 이외의 비만환자(단순성 지방간을 포함한다.)에 비해서 NASH 환자의 TNF-α발현은 유의하게 상승한다고 하는 결과가 수득되고 있다. 또, NASH 환자 중에서도, 간섬유화를 동반하는 경우에는 동반하지 않는 경우와 비교해서 TNF-α 발현이 유의하게 상승하고 있었다. 이렇게, NASH 환자에 있어서, 주로 간조직에 침윤한 마크로퍼지나 활성화 T임파구가 분비되는 TNF-α과, 괴사성의 염증활성(necroinflammatory activity) 및 섬유화는 강한 상관을 나타내는 것이 보고되어 있다(비특허문헌 3).
또, NASH 모델 마우스의 간장에서는 마크로퍼지의 이상한 증가가 보여진다는 것이 보고되고 있다(비특허문헌 4).
NASH의 치료는 비만, 당뇨병, 지질 이상증, 고혈압과 같은 생활 습관병에 대한 식사ㆍ운동요법을 주체로 한 생활습관 개선이 기본이 된다. 그러나, 실제로는 생활습관의 개선은 어렵고, NASH의 진전에 중요한 인자라고는 여겨지고 있는, 인슐린 저항성, 산화스트레스, 지방질 대사이상, 고혈압 등을 표적으로 한 약물치료가 이루어지고 있다. 인슐린 저항성 개선약으로서는 인슐린 감수성의 증강 작용에 관계되는 핵내 수용체 PPARγ의 리간드인 티아졸리딘계 유도체(피오글리타존이나 로지글리타존(Rosiglitazone) 등), 혹은, 인슐린 저항성 개선약의 비구아니드계 약물(메트포르민 등)이, 항산화제로서는 비타민E가, 단독 혹은 비타민C와의 병용에 의해 치료약으로서 사용되고 있다.또 , 지방질 대사이상의 치료제로서는 PPARα 아고니스트인 피브레이트계 약물(페노피브레이트나 베자피브레이트 등), 스타틴계 제제, 프로부콜 등이, 고혈압치료제로서는 앤지오텐신II타입 1수용체 길항약(ARB)이 각각 치료약으로서 기대되고 있다. 특히, 피브레이트계 약제나 스타틴계 약제에 있어서는, 그들 약제가 가지는 항염증작용의 면으로부터도 기대되고 있다. 그러나, 에비던스 레벨이 높은 보고는 적고, 추천도가 높은 치료법은 확립되어 있지 않고 있다. 세계적으로 메타볼릭 신드롬의 이환자의 증가가 계속되고 있는 것에 의해, NASH의 환자 수도 향후 증가할 것이 예상되고, 치료법의 확립이 소망되고 있다(비특허문헌 1, 5).
한편, 특허문헌 1에는 하기 식(1)의 화합물, 이것들의 염 또는 이것들의 용매화물이 아실 코엔자임A 콜레스테롤 아시르트란스페라제(ACAT) 저해작용을 가지고 있으며, ACAT 저해제, 세포 내 콜레스테롤 수송 저해제, 혈중 콜레스테롤 저하제, 마크로퍼지 포말화 억제제로서 사용할 수 있어, 고지혈증, 동맥경화증, 경부 및 뇌동맥경화증, 뇌혈관 장애, 허혈성 심질환, 관상동맥 경화증, 신장경화증, 동맥경화성 신장경화증, 세동맥경화성 신장 경화증, 악성신장 경화증, 허혈성 장질환, 급성 장관막 혈관폐색증, 만성장관 안기나, 허혈성 대장염, 대동맥류, 폐색성 동맥경화증(ASO) 등의 질병의 치료제로서 유용함이 기재되어 있다.
Figure pct00001
또, 특허문헌 2에는 하기 식(2)의 2-[4-[2-(벤즈이미다졸-2-일티오)에틸]피페라진-1-일]-N-[2,4-비스(메틸티오)-6-메틸-3-피리딜]아세트아미드, 이것들 염 또는 이것들의 용매화물이 죽상 동맥경화병소의 병변인 불안정하고 파열하기 쉬운 지질-풍부-플라크(ripid rich plaque)를 안정화하는 것이 기재되고 있어, 지질-풍부-플라크의 파열에 따른 혈전형성의 방지, 급성관상 동맥증후군(ACS)의 예방 및/또는 치료, 급성 심근경색의 예방 및/또는 치료, 불안정 협심증의 예방 및/또는 치료, 말초동맥 폐색증의 예방 및/또는 치료에 유용하다는 것이 기재되어 있다. 그렇지만, 어느 쪽의 특허문헌에 있어서도, 이것들의 화합물이 NASH에 어떤 작용을 하는지에 대해서는 기재도 시사도 없다.
Figure pct00002
WO1998/054153호 팸플릿 WO2005/020996호 팸플릿
Nugent C et al., Nat. Clin. Pract. Gastroenterol. Hepatol., 8, 432-41(2007) Day CP, et al, Gastroenterology, 114, 842-845(1998) Crespo J, et al., Hepatology, 34, 1158-63(2001) Kudo H, et al., Liver Int., 29, 988-996(2009) 우토 히로후미 외, 최신의학, 97, 1683-87(2008)
세계적으로 메타볼릭 신드롬의 이환자의 증가가 계속되고 있고, NASH의 환자 수도 향후 증가될 것이 예상되고 있지만, NASH의 치료에 대해서는 에비던스 레벨이 높은 보고는 적고, 추천도가 높은 치료법은 확립되지 않고 있는 것이 현재의 상태이다.
본 발명의 과제는 비알코올성 지방성 간염(NASH)의 예방, 치료에 유용한 새로운 비알코올성 지방성 간염의 예방, 치료제를 제공하는 것에 있다.
본 발명자들은 비알코올성 지방성 간염(NASH)의 예방, 치료에 유용한 화합물을 찾아내기 위해, NASH의 모델 동물인 LDL수용체 녹아웃 마우스를 사용해서 그 예방, 치료에 유용한 화합물의 탐색을 실시한 바, 정말로 의외로도 2-[4-[2-(벤즈이미다졸-2-일티오)에틸]피페라진-1-일]-N-[2,4-비스(메틸티오)-6-메틸-3-피리딜]아세트아미드 또는 그 염이, 혈장지질에 영향을 주지 않고, 직접 간장에 작용하고, 간장 중의 콜레스테롤 및 트리글리세라이드를 특이적으로 저하시키고, NASH의 특징적 병태인 지방간과 간의 염증을 억제하는 것을 발견하고, 본 발명을 완성했다.
즉, 본 발명은 2-[4-[2-(벤즈이미다졸-2-일티오)에틸]피페라진-1-일]-N-[2,4-비스(메틸티오)-6-메틸-3-피리딜]아세트아미드 혹은 그 산부가 염, 또는 이것들의 용매화물을 유효성분으로 하는 비알코올성 지방성 간염의 예방 및/또는 치료제를 제공하는 것이다.
또, 본 발명은 2-[4-[2-(벤즈이미다졸-2-일티오)에틸]피페라진-1-일]-N-[2,4-비스(메틸티오)-6-메틸-3-피리딜]아세트아미드 혹은 그 산부가 염, 또는 이것들의 용매화물을 유효성분으로 하는 간장 중의 콜레스테롤의 저하제를 제공하는 것이다.
또, 본 발명은 2-[4-[2-(벤즈이미다졸-2-일티오)에틸]피페라진-1-일]-N-[2,4-비스(메틸티오)-6-메틸-3-피리딜]아세트아미드 혹은 그 산부가 염, 또는 이것들의 용매화물을 유효성분으로 하는 간장 중의 트리글리세라이드의 저하제를 제공하는 것이다.
또, 본 발명은 2-[4-[2-(벤즈이미다졸-2-일티오)에틸]피페라진-1-일]-N-[2,4-비스(메틸티오)-6-메틸-3-피리딜]아세트아미드 혹은 그 산부가 염, 또는 이것들의 용매화물을 유효성분으로 하는 간장 중의 TNF-α발현 억제제를 제공하는 것이다.
또, 본 발명은 2-[4-[2-(벤즈이미다졸-2-일티오)에틸]피페라진-1-일]-N-[2,4-비스(메틸티오)-6-메틸-3-피리딜]아세트아미드 혹은 그 산부가 염, 또는 이것들의 용매화를 유효성분으로 하는 간장 중의 마크로퍼지 저하제를 제공하는 것이다.
또, 본 발명은 필요한 환자에게 2-[4-[2-(벤즈이미다졸-2-일티오)에틸]피페라진-1-일]-N-[2,4-비스(메틸티오)-6-메틸-3-피리딜]아세트아미드 혹은 그 산부가 염, 또는 이것들의 용매화물의 유효량을 투여하는 것을 특징으로 하는 비알코올성 지방성 간염의 예방 및/또는 치료방법을 제공하는 것이다.
또, 본 발명은 비알코올성 지방성 간염의 예방 및/또는 치료제를 제조하기 위한, 2-[4-[2-(벤즈이미다졸-2-일티오)에틸]피페라진-1-일]-N-[2,4-비스(메틸티오)-6-메틸-3-피리딜]아세트아미드 혹은 그 산부가 염, 또는 이것들의 용매화물의 용도를 제공하는 것이다.
본 발명은 비알코올성 지방성 간염(NASH)의 새롭은 예방ㆍ치료제를 제공하는 것이다.
비알코올성 지방성 간염(NASH)은 에비던스 레벨이 높은 치료제의 보고는 적고, 추천도가 높은 치료법은 확립되고 있지 않고, 세계적으로도 환자수가 향후 증가될 것이 예상되고 있어, 치료법의 확립이 소망되고 있다. 본 발명은, 혈장지질에 영향을 주는 않고, 직접 간장에 작용하고, 간장 중의 콜레스테롤 및 트리글리세라이드를 특이적으로 저하시킬 수 있고, 추가로 간장 중의 TNF-α의 발현을 현저에 억제하고, 간장 중의 마크로퍼지를 현저에 감소시킬 수 있는 신규한 비알코올성 지방성 간염(NASH)의 예방ㆍ치료제를 제공하는 것이다.
도 1은 실시예 1에 있어서, 본 발명의 화합물A(3mg/㎏)를 투여했을 때의 혈장 중 총 콜레스테롤(TC)(도 1A), 및 혈장 중 트리글리세라이드(TG)(도 1B)를 각각 나타내는 도면이다.
도 2는 실시예 1에 있어서, 본 발명의 화합물A(3mg/㎏)를 투여했을 때의 간장 중의 총 콜레스테롤(TC)(도 2A), 및 간장 중의 트리글리세라이드(TG)(도 2B)를 나타내는 도면이다.
도 3은 실시예 1에 있어서, 본 발명의 화합물A(3mg/㎏)를 투여했을 때의 간장 중의 염증성의 M1마크로퍼지 마커(CD11c)의 유전자 발현량(도 3A), 및 간장 중의 염증성 사이토카인(TNF-α)의 유전자 발현량(도 3B)을 나타내는 도면이다.
도 4는 정상 마우스군, C57BL/6N-NASH 마우스(컨트롤군), 및 C57BL/6N-NASH 마우스에 화합물A를 투여한 군의 혈장 ALT값을 나타낸다.
도 5는 정상 마우스군, C57BL/6N-NASH 마우스(컨트롤군), 및 C57BL/6N-NASH 마우스에 화합물A를 투여한 그룹의 간장 중 TC함량을 나타낸다.
도 6은 정상 마우스군, C57BL/6N-NASH 마우스(컨트롤군), 및 C57BL/6N-NASH 마우스에 화합물A를 투여한 그룹의 간장 중 TG함량을 나타낸다.
도 7은 정상 마우스군, C57BL/6N-NASH 마우스(컨트롤군), 및 C57BL/6N-NASH 마우스에 화합물A를 투여한 그룹의 각각의 간장조직(HE염색)을 사진 촬영한 결과를 나타낸다. 원도는 칼라사진이다. 도 7 중의 →는 지방방울을 나타낸다.
도 8은 MCD식 부하 KKAy마우스의 컨트롤군, 및 MCD식 부하 KKAy 마우스에 화합물A를 투여한 그룹의 혈장 ALT값을 나타낸다.
도 9는 MCD식 부하 KKAy마우스의 컨트롤군, 및 MCD식 부하 KKAy 마우스에 화합물A를 투여한 그룹의 간 TC함량을 나타낸다.
도 10은 MCD식 부하 KKAy마우스의 컨트롤군, 및 MCD식 부하KKAy 마우스에 화합물A를 투여한 그룹의 간 TG함량을 나타낸다.
도 11은 MCD식 부하 KKAy마우스의 컨트롤군, 및 MCD식 부하 KKAy 마우스에 화합물A를 투여한 그룹의 간장조직(HE염색)을 사진촬영한 결과를 나타낸다. 원도는 칼라사진이다.
도 12는 MCD식 부하 KKAy마우스의 컨트롤군, 및 MCD식 부하 KKAy 마우스에 화합물A를 투여한 그룹의 간장조직(Azan염색)을 사진 촬영한 결과를 나타낸다. 원도는 칼라사진이다.
본 발명에 사용하는 2-[4-[2-(벤즈이미다졸-2-일티오)에틸]피페라진-1-일]-N-[2,4-비스(메틸티오)-6-메틸-3-피리딜]아세트아미드 혹은 그 산부가 염, 또는 이것들의 용매화는, 예를 들면, WO 1998/054153호 팸플릿, WO 2005/020996호 팸플릿, WO 2004/076441호 팸플릿 등에 기재된 방법에 따라서 제조할 수 있다. 또, 이것들의 문헌에 기재된 방법에 준해서 제제화할 수도 있다.
본 발명의 산부가 염을 형성하는 산으로서는 약학적으로 허용할 수 있는 것이라면 특별하게 제한은 없지만, 예를 들면, 황산, 염산, 질산, 인산, 브롬화 수소산 등의 무기산; 아세트산, 락트산, 숙신산, 타르타르산, 말릭산, 말레산, 시트르산, 푸마르산, 메탄설폰산, p-톨루엔설폰산 등의 유기산 등을 들 수 있다. 바람직한 산으로서는 무기산을, 더 바람직한 산으로서는 염산을 들 수 있다.
본 발명의 용매화물로서는 수화물, 알코올 합물(예를 들면, 에탄올화물) 등을 들 수 있다. 바람직하게는 수화물을 들 수 있다.
본 발명의 2-[4-[2-(벤즈이미다졸-2-일티오)에틸]피페라진-1-일]-N-[2,4-비스(메틸티오)-6-메틸-3-피리딜]아세트아미드 혹은 그 산부가 염, 또는 이것들의 용매화로서는 바람직하게는 예를 들면, 2-[4-[2-(벤즈이미다졸-2-일티오)에틸]피페라진-1-일]-N-[2,4-비스(메틸티오)-6-메틸-3-피리딜]아세트아미드의 1염산염을 들 수 있다.
비알코올성 지방성 간염(NASH)에 있어서는 간장 중의 TC 및 TG가 증가할 뿐만 아니라, 간장 중의 염증성 사이토카인 TNF-α의 발현량이 증가하고(비특허문헌3 참조), 또 간장 중의 마크로퍼지가 증가하는 것(비특허문헌 4 참조)이 알려져 있다.
후기하는 실시예에 나타내는 바와 같이, 본 발명의 2-[4-[2-(벤즈이미다졸-2-일티오)에틸]피페라진-1-일]-N-[2,4-비스(메틸티오)-6-메틸-3-피리딜]아세트아미드 혹은 그 산부가 염, 또는 이것들의 용매화는 NASH의 모델 동물인 웅성 LDL수용체 녹아웃 마우스에 있어서, 혈장 중 TC 및 TG에 유의한 영향을 끼치지 않는 용량에 있어서, 간장 중의 TC 및 TG의 유의한 저하, 간장 중의 염증성 사이토카인 TNF-α발현, 및 마크로퍼지 CD11c의 유의한 감소를 나타냈다. 특히, 혈장 중 TC 및 TG에 유의한 영향을 끼치지 않는 용량에 있어서, 간장 중의 TC 및 TG의 유의한 저하를 나타낸 것은(도 1 및 도 2 참조), 본 발명의 유효성분이 종래 보고되고 있는 작용과는 다른 작용에 의해, 간장에 직접 작용하고 있는 것임을 나타내는 것으로, 본 발명에 의해 처음으로 밝혀진 작용에 의거하는 것이라고 할 수 있다.
따라서, 2-[4-[2-(벤즈이미다졸-2-일티오)에틸]피페라진-1-일]-N-[2,4-비스(메틸티오)-6-메틸-3-피리딜]아세트아미드 혹은 그 산부가 염, 또는 이것들의 용매화는 인간을 포함하는 포유류의 비알코올성 지방성 간염의 예방 및/또는 치료제로서 유용하다.
본 발명은 2-[4-[2-(벤즈이미다졸-2-일티오)에틸]피페라진-1-일]-N-[2,4-비스(메틸티오)-6-메틸-3-피리딜]아세트아미드 혹은 그 산부가 염, 또는 이것들의 용매화를 유효성분으로 하는 것이고, 본 발명의 유효성분은 후기하는 실시예에 나타내는 바와 같이, 인간을 포함하는 포유류의 비알코올성 지방성 간염의 예방 및/또는 치료제로서 유용할 뿐만 아니라, 동시에 인간을 포함하는 포유류의 비알코올성 지방성 간질병(NAFLD)의 예방 및/또는 치료제로서도 유용하다.
또, 후기하는 실시예에 나타내는 바와 같이, 본 발명의 유효성분은 인간을 포함하는 포유류의 간장 중의 콜레스테롤의 저하제, 간장 중의 트리글리세라이드의 저하제, 간장 중의 TNF-α발현 억제제, 및 간장 중의 마크로퍼지 저하제로서도 유용하다.
본 발명의 의약은 단독 또는 다른 약학적으로 허용되는 용해제, 부형제, 결합제, 희석제 등의 담체를 사용해서, 정제, 캡슐제, 과립제, 분말제, 로션제, 연고제, 주사제, 좌제 등의 제형으로 할 수 있다. 이들 제제는 공지의 방법으로 제조할 수 있다. 예를 들면, 경구 투여용 제제로 하는 경우에는, 트랜건드검, 아라비아검, 자당 에스테르, 레시틴, 올리브유, 대두유, PEG400 등의 용해제; 전분, 만니톨, 락토오스 등의 부형제; 카르복시메틸셀룰로오스나트륨, 히드록시프로필셀룰로오스 등의 결합제; 결정 셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스 칼슘 등의 붕해제; 탈크, 스테아린산마그네슘 등의 활택제; 경질 무수 규산 등의 유동성 향상제; 옥수수 전분 등의 희석제 등을 적당하게 조합하고 처방하는 것에 의해 제조 할 수 있다.
본 발명의 의약은 경구투여 또는 비경구투여에 의해 투여된다. 본 발명의 의약의 투여량은 환자의 체중, 연령, 성별, 증상 등에 따라 다르며, 통상 성인의 경우, 2-[4-[2-(벤즈이미다졸-2-일티오)에틸]피페라진-1-일]-N-[2,4-비스(메틸티오)-6-메틸-3-피리딜]아세트아미드로서, 1일 0.01∼1000mg, 바람직하게는 0.1∼200mg을 1∼3회로 나누어서 투여하는 것이 바람직하다.
실시예
이하, 실시예에 의해 본 발명을 더 구체적으로 설명하지만, 본 발명은 이것들 실시예에 의해 전혀 한정되는 것은 아니다.
실시예 1 LDL 수용체 녹아웃 마우스 NASH 모델에 있어서의 작용
NASH의 특징적 병태인 지방간과 간의 염증을 발병하는 것이 알려져 있는 Western diet 부하 LDL 수용체 녹아웃 마우스(Yoshimatsu M. et al. Int J Exp Pathol., 85(6), 335-43(2004))에 있어서의 효과를 검토했다. 또, 본시험에 있어서는 2-[4-[2-(벤즈이미다졸-2-일티오)에틸]피페라진-1-일]-N-[2,4-비스(메틸티오)-6-메틸-3-피리딜]아세트아미드의 1염산염(이하, 화합물A라고 언급한다.)를 사용했다.
1) 사용동물:
웅성 LDL 수용체 녹아웃 마우스(B6.129S7-Ldlr<tm1Her>/J, Jackson Laboratories)를 실험에 사용했다. 8주령 전후부터 12주간 Western diet로서 Teklad Custom Research Diet(Harlan Teklad사, TD.88137)를 자유 섭취시키고, NASH을 발병시켰다.
2) 그룹구성:
그룹 간에서 체중에 차이가 없도록, 컨트롤군(염산 부가 정제수), 및 화합물A 3mg/㎏(유리체로서) 투여군으로 그룹 분류했다.
3) 약물투여:
투여 용량은 10mL/㎏ 체중으로 하고, 컨트롤군에는 염산 부가 정제수를, 화합물A 투여군에는 각각의 약액을, 6시간 이상의 간격으로 오전ㆍ오후 각 1회 경구 투여했다. 8주령 전후부터 Western diet를 부하함과 동시에 투여를 개시하고, 투여기간은 12주간으로 했다.
4) 관찰 및 검사방법:
투여 종료 후, 마우스를 하룻밤 절식하고, 펜토바르비탈 나트륨(50mg/㎏) 마취 하에 복부대정맥에서 채혈하고, 혈장을 분취했다. 채혈후 간장을 채취하고, 동결 보존했다. 일부는 유전자 발현의 해석을 위해서 ISOGEN(NIPPON GENE CO., LTD.) 중에서 동결 보존했다.
혈장 중의 총 콜레스테롤(TC) 및 트리글리세라이드(TG)는 각각 콜레스테롤 E테스트 와코 및 트리글리셀라이드 E테스트 와코(모두, Wako Pure Chemical Industries, Ltd.)를 사용해서 측정했다. 간지질의 측정은, 아래와 같이 실시했다. 동결보존한 간장에 클로로포름:메탄올(2:1)을 첨가하고, 균질화하고, 4℃에서 하룻밤이상 스탠딩한 후, 여과를 실시했다. 여과액의 일부를 분취해서 증발 건고한 후에, 이소프로판올로 용해해서 TC 및 TG농도를, 각각 콜레스테롤 E테스트 와코 및 트리글리셀라이드 E테스트 와코를 사용해서 측정했다.
간 유전자의 발현해석은 간장으로부터 RNA를 추출하고, 리얼타임 RT-PCR로 TNF-α의 유전자, 및 마크로퍼지의 인테그린 패밀리에 속하는 접착분자 중의 CD11c의 유전자의, 각각의 발현을 측정하는 것에 의해 실시했다. RNA 추출은 간장을 ISOGEN 중에서 균질화한 후, 설명서에 따라서 실시했다. RNA의 농도는 분광광도계(ND-1000, Nano Drop Technologies)을 사용해서 측정했다. Total RNA로부터 High Capacity cDNA Reverse Transcription Kit(Applied Biosystems)를 사용해서 mRNA를 역전사하고, cDNA를 합성했다. 유전자발현 해석은 SYBR green I를 사용한 Intercalator법, 또는 Taqman Probe를 사용한 방법에 의해 실시하고, 7900HT Fast리얼타임 PCR시스템(Applied Biosystems)을 사용해서, realtime RT-PCR를 실시했다. 내부표준으로서 β-actin을 사용하고, β-actin에 의한 보정을 실시하고, 각 유전자의 발현량을 비교했다. 사용한 프라이머 및 프로브의 서열은 이하에 나타내는 바와 같다.
β-actin:
forward (5'-AGCCATGTACGTAGCCATCCA-3'),
reverse (5'-TCACCGGAGTCCATCACAATG-3'),
probe (VIC5'-TGTCCCTGTATGCCTCTGGTCGTACCAC-3' TAMRA),
CD11c:
forward (5'-CTGGATAGCCTTTCTTCTGCTG-3'),
reverse (5'-GCACACTGTGTCCGAACTC-3'),
TNF-α :
forward (5'-CATCTTCTCAAAATTCGAGTGACAA-3'),
reverse (5'-TGGGAGTAGACAAGGTACAACCC-3').
통계처리는 Windows(등록상표)판 SAS전임상 패키지(SAS Institute Japan)를 사용해서 실시했다.
5) 결과
화합물A의 3mg/㎏ 투여군은 도 1에 나타나 있는 바와 같이, 혈장 중 TC 및 TG에 유의한 영향을 미치지 않았지만, 간장 중의 TC 및 TG의 유의한 저하(도 2), 간장 중의 염증성 사이토카인 TNF-α발현 및 마크로퍼지 CD11c의 유의한 감소(도 3)을 나타냈다. 즉, 본 발명의 화합물A는 혈장지질에 영향을 주지 않는 용량에 있어서도, 직접 간장에 작용하고, 간장 중의 콜레스테롤 및 트리글리세라이드를 저하시키고, 또, NASH의 특징적 병태인 지방간과 간의 염증을 억제했다. 이것으로 본 발명의 화합물A가 NASH의 예방ㆍ치료약으로서 유용한 것임이 분명하게 되었다.
실시예 2 NASH -간암 모델 마우스에 있어서의 작용
NASH-간암 모델 마우스(상품: C57BL/6N-NASH 마우스)는 Stelic Institute Co,.에서 개발되고(일본 공개특허공보 제2009-178143호 참조), CHARLES RIVER LABORATORIES JAPAN, INC.에서 판매되어 있는 마우스이다. 이 모델 마우스는 인슐린 저항성의 야기와 고지방식의 부하로 NASH를 발병한다. 또, 이 모델 마우스는 조직학적으로 인간NASH병태를 반영한 변화를 나타내고, 지방간(6주령 이전)로부터 NASH(7주령), 간경변(10주령 이후), 또한 간암(16주령 이후)으로 진행하기 때문에, NASH의 치료약의 연구 개발에 유용한 모델이라고 이야기되고 있다(STAM Mice C57BL/6N-NASH모델 마우스 자료(http://www.crj.co.jp/topics/pdf/69/6375030/B6N_ NASH_leaflet_091019.pdf) 참조).
그래서, 실시예 1에서 사용한 녹아웃 마우스보다도, 중증도가 더 높다고 되어 있는 이 NASH-간암 모델 마우스를 사용해서 화합물A의 작용을 검토했다.
1) 사용동물:
웅성 C57BL/6N-NASH 마우스(CHARLES RIVER LABORATORIES JAPAN, INC.)를 실험에 사용했다. 이 마우스는, 생후 1-2일령에 스트렙토조토신을 투여하고, 4주령부터 고지방식(D12492, ResearchDiet사)을 부하하고 있지만, 이 마우스를 6주령에서 구입하고, 이어서 동일한 고지방식으로 사육하였다(이하, 이 마우스를, C57BL/6N-NASH 마우스라고 한다.). 또, 정상 대조군으로서 정상 마우스(C57BL/6N, 6주령, CHARLES RIVER LABORATORIES JAPAN, INC.)를 동시에 구입하고, 보통 식(CE-2, 일본쿠레아사)으로 사육하였다(이하, 이 마우스를, 정상 마우스라고 한다.).
2) 그룹구성:
C57BL/6N-NASH 마우스를 컨트롤군, 및 화합물A 투여(100mg/㎏)군으로서 사용했다. 각 그룹 6마리로 했다. 또, 마우스의 정상 대조군으로서 정상 마우스(C57BL/6N마우스) 6마리를 사용했다.
3) 약물투여:
화합물A는 먹이에 혼합해서 투여했다. 투여는, 이미 NASH를 발병한 C57BL/6N-NASH 마우스 7주령부터 개시하고, 투여기간은 5주간으로 했다.
4) 관찰 및 검사 방법:
투여 종료후, 마우스를 4시간 절식시키고, 마취 하에, 복부대정맥에서 채혈하고, 혈장을 분취했다. 채혈 후 간장을 채취하고, 일부는 동결보존하고, 일부는 통상의 방법대로 파라핀 포매를 실시했다. 혈장지질ㆍ혈장 ALT는 자동분석장치(Labospect003, HITACHI사)를 사용해서 측정했다. 간지질의 측정은 아래와 같이 실시했다. 즉, 동결 보존한 간장의 일부에 클로로포름:메탄올(2:1)을 첨가해서 균질화하고, 4℃에서 하룻밤 이상 스탠딩한 후, 여과를 실시했다. 여과액의 일부를 분취해서 증발 건고한 후에, 이소프로판올로 용해해서 총 콜레스테롤(TC) 및 트리글리세라이드(TG) 농도를, 각각 콜레스테롤 E테스트 와코 및 트리글리셀라이드 E테스트 와코를 사용해서 측정했다. 또, 간조직 관찰을 위해서 파라핀 절편을 작성해 HE염색 표본을 제작했다.
5) 결과
이것들의 결과를 도 4에서 도 7에 나타낸다.
화합물A는 혈장지질에 영향을 미치지 않았다. 간장애의 지표인 혈장ALT는 정상 마우스에 비해 NASH-간암 모델 마우스 컨트롤군에서 높은 값을 나타냈지만, 이것을 화합물A의 100mg/㎏은 저하시켰다(도 4). 간 중 TC 및 TG도 정상 마우스에 비해 NASH-간암 모델 마우스의 컨트롤군에서 높은 값을 나타냈지만, 이것들을 화합물A는 저하시켰다(도 5 및 6). 또, NASH-간암 모델 마우스의 컨트롤군에서 인정되는 NASH의 특징적 병태인 간의 지방방울 침착(도 7중의 화살표로 나타낸다.)을 화합물A는 억제하였다(도 7). 즉, 본 발명의 화합물A는 NASH 발병 후에 투여를 개시해도, 혈장지질에 영향을 주지 않는 용량으로 직접 간장에 작용하고, 간장 중의 콜레스테롤 및 트리글리세라이드를 저하시켰다. 또, 간장애의 지표인 혈장 ALT를 저하시켰을 뿐만 아니라, NASH의 특징적 병태인 지방간을 억제했다. 이것으로, 본 발명의 화합물A가 NASH의 치료약으로서 유용한 것임이 분명하게 되었다.
실시예 3 MCD식 부하 KK - A y 마우스에 있어서의 작용
설치류에 메티오닌-콜린 결핍식(MCD식)을 부하한 모델은, NASH의 모델로서 범용 되고 있다(Hebbard L, George J. : Animal models of nonalcoholic fatty liver disease Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 2011 Jan; 8(1):35-44. Epub 2010 Nov 30. 참조). 그 중에서도, KK-Ay마우스를 사용한 모델은 저명한 지방간염과 섬유화가 발생하는 것이 알려지고 있으며 (Okumura K., Ikejima K., Kon K., Abe W., Yamashina S., Enomoto N., Takei Y. and Sato N. (2006) Exacerbation of dietary steatohepatitis and fibrosis in obese, diabetic KK-Ay mice Hepatology Research 20063 6:3 (217-228) 참조), NASH에 대한 약물의 작용을 검토하는데 뛰어난 모델이라고 생각된다.
그래서, 본 모델에 대한 화합물A의 작용을 검토했다.
1) 사용 동물:
웅성 KK-Ay 마우스(KK-Ay/TaJcl, 12주령, 일본쿠레아사에서 구입)을 실험에 사용했다. MCD 식을 7주간 부하해서 NASH를 발병시켰다.
2) 그룹구성:
컨트롤군, 화합물A의 30mg/㎏ 투여군, 및 200mg/㎏ 투여군으로 그룹 분류했다. 약물은 먹이에 혼합해서 투여했다. 투여기간은 7주로 했다.
3) 약물투여:
화합물A는 먹이에 혼합해서 투여했다. 투여는 MCD식 부하와 동시에 개시했다.
4) 관찰 및 검사방법:
실시예 2에 기재의 NASH-간암 모델 마우스와 동일하게 실시했지만, 간조직 관찰 HE염색 표본에 부가해, Azan 염색 표본도 제작했다.
5) 결과
이것들의 결과를 도 8에서 도 12에 나타낸다.
화합물A는 혈장지질에 영향을 미치지 않았다. 간장애의 지표인 혈장 ALT를 화합물A 200mg/㎏은 저명하게 저하시켰다(도 8 참조). 간 중 TC 및 TG를 화합물A는 저명하게 저하시켰다(도 9 및 도 10 참조). 또, NASH의 특징적 병태인 간의 지방방울 침착 및 섬유화를 화합물A는 억제하였다(도 11 및 도 12 참조). 즉, 본 발명의 화합물A는 혈장지질에 영향을 주지 않는 용량에 있어서, 직접 간장에 작용하고, 간장 중의 콜레스테롤 및 트리글리세라이드를 저하시켰다. 또, 간장애의 지표인 혈장ALT를 저하시켰을 뿐만 아니라, NASH의 특징적 병태인 지방간ㆍ간의 섬유화를 억제했다. 이것으로 본 발명의 화합물A가 NASH의 예방ㆍ치료약으로서 유용한 것임이 분명하게 되었다.
(산업상의 이용 가능성)
본 발명은 2-[4-[2-(벤즈이미다졸-2-일티오)에틸]피페라진-1-일]-N-[2,4-비스(메틸티오)-6-메틸-3-피리딜]아세트아미드 혹은 그 산부가 염, 또는 이것들의 용매화가 간장 선택적인 총 콜레스테롤 저하작용 및 트리글리세라이드 저하작용을 가지고 있는 것, 간장 중의 염증성 사이토카인의 발현억제 및 염증성 마크로퍼지의 감소작용을 가지고 있는 것임을 처음으로 발견하고, 저분자성의 비알코올성 지방성 간염의 예방 및/또는 치료제를 제공하는 것이다. 본 발명은 의약품 원체로서 이용 가능하기 때문에, 제약공업에 있어서 유용하고, 산업상 이용가능성을 가지고 있다.

Claims (6)

  1. 2-[4-[2-(벤즈이미다졸-2-일티오)에틸]피페라진-1-일]-N-[2,4-비스(메틸티오)-6-메틸-3-피리딜]아세트아미드 혹은 그 산부가 염, 또는 이것들의 용매화물을 유효성분으로 하는 비알코올성 지방성 간염의 예방 및/또는 치료제.
  2. 제 1 항에 있어서, 2-[4-[2-(벤즈이미다졸-2-일티오)에틸]피페라진-1-일]-N-[2,4-비스(메틸티오)-6-메틸-3-피리딜]아세트아미드 혹은 그 산부가 염, 또는 이것들의 용매화물이 2-[4-[2-(벤즈이미다졸-2-일티오)에틸]피페라진-1-일]-N-[2,4-비스(메틸티오)-6-메틸-3-피리딜]아세트아미드의 1염산염인 예방 및/또는 치료제.
  3. 제 1 항 또는 제 2 항에 기재된 화합물을 유효성분으로 하는 간장 중의 콜레스테롤의 저하제.
  4. 제 1 항 또는 제 2 항에 기재된 화합물을 유효성분으로 하는 간장 중의 트리글리세라이드의 저하제.
  5. 제 1 항 또는 제 2 항에 기재된 화합물을 유효성분으로 하는 간장 중의 TNF-α발현 억제제.
  6. 제 1 항 또는 제 2 항에 기재된 화합물을 유효성분으로 하는 간장 중의 마크로퍼지 저하제.
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Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP5571650B2 (ja) * 2011-12-27 2014-08-13 農業生産法人株式会社 熱帯資源植物研究所 非アルコール性脂肪性肝疾患および／または非アルコール性脂肪肝炎の治療薬
US20140274979A1 (en) * 2013-03-13 2014-09-18 Golden Biotechnology Corporation Method for the treatment of fatty liver disease
TWI696462B (zh) * 2013-07-10 2020-06-21 日商興和股份有限公司 非酒精性脂肪性肝疾病治療劑
TW201613936A (en) 2014-06-20 2016-04-16 Gilead Sciences Inc Crystalline forms of(2R,5S,13aR)-8-hydroxy-7,9-dioxo-n-(2,4,6-trifluorobenzyl)-2,3,4,5,7,9,13,13a-octahydro-2,5-methanopyrido[1',2':4,5]pyrazino[2,1-b][1,3]oxazepine-10-carboxamide
EP3278802A1 (en) * 2016-08-04 2018-02-07 Metabolys New treatment for the non alcoholic steatohepatitis and fibrosis

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0987254B1 (en) * 1997-05-26 2004-12-22 Kowa Co., Ltd. Novel cyclic diamine compounds and medicine containing the same
US6969711B2 (en) * 1997-05-26 2005-11-29 Kowa Company, Ltd. Cyclic diamine compounds and medicine containing the same
MY140618A (en) * 2003-02-28 2009-12-31 Kowa Co Method for preparing acid addition salts of polyacidic basic compounds
KR20060111898A (ko) * 2003-08-29 2006-10-30 교와 가부시키가이샤 지질-풍부-플라크의 안정화 방법 및 파열 예방방법
JP2010509247A (ja) * 2006-11-13 2010-03-25 クロノゲン・インコーポレイテッド Ａｃａｔ阻害剤及び線維症の予防又は治療におけるその使用
US20080176861A1 (en) * 2007-01-23 2008-07-24 Kalypsys, Inc. Sulfonyl-substituted bicyclic compounds as ppar modulators for the treatment of non-alcoholic steatohepatitis
CA2706768C (en) * 2007-11-30 2016-06-28 The Regents Of The University Of California Methods of treating non-alcoholic steatohepatitis (nash) using cysteamine products
JP2009178143A (ja) 2008-02-01 2009-08-13 Stelic Institute Of Regenerative Medicine 脂肪性肝炎−肝癌モデル動物
WO2010042292A1 (en) * 2008-10-08 2010-04-15 Trustees Of Dartmouth College Method for selectively inhibiting the activity of acat1 in the treatment of alzheimer's disease

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