CN114929219A - 使用整联蛋白抑制剂组合治疗肝脏疾病 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种包括αvβ₁整联蛋白抑制剂和至少一种另外的治疗剂的药物组合，所述药物组合用于预防、延迟或治疗肝脏疾病或障碍。所述至少一种另外的治疗剂可以是法尼醇X受体(FXR)激动剂。例如，所述药物组合包括(S)‑2‑(4‑甲基四氢‑2H‑吡喃‑4‑甲酰胺基)‑9‑(5，6，7，8‑四氢‑1，8‑萘啶‑2‑基)壬酸(化合物1)和2‑[3‑({5‑环丙基‑3‑[2‑(三氟甲氧基)苯基]‑1，2‑噁唑‑4‑基}甲氧基)‑8‑氮杂双环[3.2.1]辛‑8‑基]‑4‑氟‑1，3‑苯并噻唑‑6‑甲酸(卓匹非索)。

Description

使用整联蛋白抑制剂组合治疗肝脏疾病

技术领域

本发明涉及用于治疗、预防或改善由纤维化整联蛋白和法尼醇X受体(FXR)介导的病症的组合疗法，该病症特别是肝脏疾病，该组合疗法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的整联蛋白抑制剂和FXR激动剂。此外，本发明涉及药物组合，其包含α_Vβ₁整联蛋白抑制剂和法尼醇X受体(FXR)激动剂卓匹非索(tropifexor)，任选地存在药学上可接受的载体，并且涉及包含它们的药物组合物。

背景技术

非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是西方世界慢性肝脏疾病最常见的原因。NAFLD是一种慢性肝脏疾病(CLD)，长期以来被认为是脂肪肝的一种非进行性形式。然而，最近的临床和临床前证据表明，NAFLD可进展为更严重的非酒精性脂肪性肝炎(NASH)，并因此患者可发展肝纤维化，其中在肝脏中存在持续炎症，从而导致在肝细胞及血管周围生成纤维瘢痕组织。最终，肝硬化会随着时间的推移而发展，其损害是永久性的并且可导致肝衰竭和肝癌(肝细胞癌)。因此，NAFLD的主要阶段为：1)单纯性脂肪肝(脂肪变性)；2)NASH；3)纤维化；和4)肝硬化。

肝移植是伴随肝衰竭的晚期肝硬化的唯一治疗方法。估计全世界NAFLD患病率的范围是从6.3％至33％，一般人群中位数为20％。NASH的估计患病率较低，范围从3％至5％(Younossi等人，Hepatology[肝脏病学]，第64卷，第1期，2016)。NASH是一个世界性的问题，在过去的几十年里发病率不断增长。在过去的十年中，在美国，NASH从肝移植的罕见适应症跃升为第二适应症。预期到2024年，它将成为移植的主要原因。NASH与代谢综合征和2型糖尿病高度相关。此外，心血管病死亡率是NASH患者死亡的重要原因。

NASH的发展涉及几种机制：肝脏中脂肪积聚(脂肪变性)、肝脏炎症、肝细胞气球样变性和纤维化。NAFLD活动度评分(NAS)被开发作为用于测量治疗试验期间NAFLD的变化的工具。以脂肪变性(0-3)、小叶炎症(0-3)和气球样变性(0-2)评分的未加权总和来计算评分。

在NASH等慢性肝脏疾病中，活化的肝脏星状细胞是驱动纤维发生的肌成纤维细胞的主要来源(Higashi等人2017)，而转化生长因子β(TGF-β)是肌成纤维细胞活化的主要驱动力。TGFβ1最初与使TGFβ1处于非活性状态的潜伏期相关肽(LAP)一起分泌。将TGF-β1转化为其活性形式的一种方法是通过LAP与α_V整联蛋白(包括α_Vβ₁)之间的相互作用。α_Vβ₁整联蛋白是在成纤维细胞上表达的RGD-结合整联蛋白，并且被认为对纤维化肝组织中的TGF-β1活化有显著贡献(Parola等人2008，Reed等人2015)。已证明，α_Vβ₁的药理学抑制可减少肝纤维化小鼠模型中的纤维化(Reed等人2015)。由于TGF-β1信号传导参与全身多种稳态过程，据信，针对纤维化组织的α_Vβ₁TGF-β1轴的抑制可允许局部且因此潜在更安全地靶向TGFβ1信号传导(Henderson等人2013，Henderson和Sheppard 2013，Reed等人2015)。

法尼醇X受体(FXR)是由胆汁酸活化的核受体，也称为胆汁酸受体(BAR)。FXR在胆汁酸代谢的主要部位(如肝脏、肠和肾脏)中表达，FXR在这些主要部位以组织特异性方式介导对多种代谢途径的作用。

FXR在肝脏和肠中的作用模式是众所周知的，并且例如在Calkin和Tontonoz(2012)(Nature Reviews Molecular Cell Biology[自然综述：分子细胞生物学]13，213-24)中有描述。FXR在肝脏和肠中负责通过多种机制来调节胆汁酸的产生、缀合和清除。在正常生理学中，FXR检测胆汁酸水平升高，并且响应方式是通过降低胆汁酸合成和胆汁酸摄取，同时增加肝脏中的胆汁酸的修饰和分泌。在肠中，FXR检测胆汁酸水平升高并降低胆汁酸吸收且增加FGF15/19的分泌。最终结果是胆汁酸的总体水平降低。在肝脏中，FXR激动作用增加小管和基底外侧胆汁酸流出和胆汁酸解毒酶中所涉及的基因的表达，同时抑制肝细胞对基底外侧胆汁酸的摄取并抑制胆汁酸合成。

此外，FXR激动剂降低肝脏甘油三酯合成以使得脂肪变性减少，抑制肝脏星状细胞活化以减少肝纤维化，并且刺激FGF15/FGF19表达(胆汁酸代谢的关键调节因子)以使得肝脏胰岛素敏感性提高。因此，FXR充当胆汁酸升高的传感器，并引发稳态反应以控制胆汁酸水平，这是一种据信在胆汁淤积中受损的反馈机制。在患有胆汁淤积障碍(Nevens等人，J.Hepatol.[肝脏病学杂志]60(1增刊1)：347A-348A(2014))、胆汁酸吸收不良性腹泻(Walters等人，Aliment Pharmacol.Ther.[营养药理学与治疗学]41(1)：54-64(2014))以及非酒精性脂肪性肝炎(NASH；Neuschwander-Tetri等人，2015)的受试者中，FXR激动作用已经显示临床益处。

FXR激动剂2-[3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲氧基)苯基]-1，2-噁唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-4-氟-1，3-苯并噻唑-6-甲酸(参见Tully等人，J MedChem[药物化学杂志]2017；60：9960-9973)目前在患有纤维化的NASH患者中进行了评估(参见NCT02855164研究)。在WO 2012/087519(实例1，第125页表中的化合物1-IB)中首次披露了该化合物，并且它以名称卓匹非索或LJN452为人所知。

因为NAFLD和NASH的病理生理学是复杂的，并且可能涉及多个冗余的途径，所以需要提供可以解决这些复杂病症的不同方面同时展示可接受的安全性和/或可容许性特性的针对NAFLD、NASH和纤维化/硬化的治疗。

发明内容

本发明提供了如下药物组合，该药物组合单独或一起包含至少一种α_Vβ₁整联蛋白抑制剂和至少一种另外的治疗剂，用于同时、顺序或单独施用。本发明进一步提供了包含该药物组合的药物。

在一方面，该α_Vβ₁整联蛋白抑制剂是(S)-2-(4-甲基四氢-2H-吡喃-4-甲酰胺基)-9-(5，6，7，8-四氢-1，8-萘啶-2-基)壬酸(化合物1，如下所示)、其立体异构体、互变异构体、对映异构体、药学上可接受的盐、前药、酯或其氨基酸缀合物。

在另一方面，该至少一种另外的治疗剂是非胆汁酸衍生的法尼醇X受体(FXR)激动剂。在另一方面，该非胆汁酸衍生的FXR激动剂是2-[3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲氧基)苯基]-1，2-噁唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-4-氟-1，3-苯并噻唑-6-甲酸(卓匹非索)、其药学上可接受的盐、前药和/或酯、和/或其氨基酸缀合物。

在另一方面，该组合是固定剂量组合。

在另一方面，该组合是自由组合。

在另一方面，该α_Vβ₁整联蛋白抑制剂和该至少一种另外的治疗剂能以一个组合单位剂量形式或以两个单独的单位剂量形式一起、依次、分别施用。单位剂型也可以是固定组合。

在另一方面，该药物组合在制造用于预防、延迟或治疗肝脏疾病或障碍的药物中使用。

在一方面，本发明涉及这样的药物组合，例如固定或自由组合，例如组合的单位剂量，用于预防、延迟或治疗纤维化或硬化疾病或障碍，例如肝脏疾病或障碍。在一些方面，这样的药物组合包含α_Vβ₁整联蛋白抑制剂(例如，化合物1)和至少一种另外的治疗剂，每一者的量是联合治疗有效的量。在另一方面，该至少一种另外的治疗剂是非胆汁酸衍生的法尼醇X受体(FXR)激动剂。该非胆汁酸衍生的FXR激动剂是卓匹非索。

本发明提供了α_Vβ₁整联蛋白抑制剂(例如，化合物1)与至少一种另外的治疗剂(例如，非胆汁酸衍生的FXR激动剂)组合(例如，固定或自由组合)用于制造用于预防或治疗肝脏疾病或障碍，例如慢性肝脏疾病或障碍，例如胆汁淤积、肝内胆汁淤积、雌激素诱发型胆汁淤积、药物诱发型胆汁淤积、妊娠胆汁淤积、胃肠外营养相关性胆汁淤积、原发性胆汁性肝硬化(PBC)、原发性硬化性胆管炎(PSC)、进行性家族性胆汁淤积(PFIC)、非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、药物诱发型胆管损伤、胆结石、肝硬化、酒精诱发型肝硬化、囊性纤维化相关性肝病(CFLD)、胆管阻塞、胆石症、肝纤维化、肾纤维化、血脂异常、动脉粥样硬化、糖尿病、糖尿病性肾病、结肠炎、新生儿黄疸、核黄疸的预防、静脉闭塞性疾病、门静脉高压症、代谢综合征、高胆固醇血症、肠道细菌过度生长、勃起功能障碍、由任何上述疾病或由传染性肝炎引起的肝脏进行性纤维化(例如，NAFLD、NASH、肝纤维化、肝性脂肪变性或PBC)的药物的用途。

在本发明的一些方面，本发明提供了预防、延迟或治疗有需要的患者的肝脏疾病或障碍的方法，该方法包括施用治疗有效量的1)α_Vβ₁整联蛋白抑制剂(例如，化合物1)和2)至少一种另外的治疗剂(例如，非胆汁酸衍生的FXR激动剂(例如卓匹非索))的步骤，其中该肝脏疾病或障碍是慢性肝脏疾病或障碍，例如胆汁淤积、肝内胆汁淤积、雌激素诱发型胆汁淤积、药物诱发型胆汁淤积、妊娠胆汁淤积、胃肠外营养相关性胆汁淤积、原发性胆汁性肝硬化(PBC)、原发性硬化性胆管炎(PSC)、进行性家族性胆汁淤积(PFIC)、非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、药物诱发型胆管损伤、胆结石、肝硬化、酒精诱发型肝硬化、囊性纤维化相关性肝病(CFLD)、胆管阻塞、胆石症、肝纤维化、肾纤维化、血脂异常、动脉粥样硬化、糖尿病、糖尿病性肾病、结肠炎、新生儿黄疸、核黄疸的预防、静脉闭塞性疾病、门静脉高压症、代谢综合征、高胆固醇血症、肠道细菌过度生长、勃起功能障碍、由任何上述疾病或由传染性肝炎引起的肝脏进行性纤维化(例如，NAFLD、NASH、肝纤维化、肝性脂肪变性或PBC)。

在本发明的一些方面，本发明提供了用于预防、延迟或治疗慢性肝脏疾病或障碍(例如，NAFLD、NASH、肝性脂肪变性、肝纤维化、肝硬化、PBC和脂肪变性)的药物组合，其中该组合包含1)α_Vβ₁整联蛋白抑制剂(例如，化合物1)和2)非胆汁酸衍生的FXR激动剂(例如，卓匹非索)。

在本发明的一些方面，本发明提供了包含1)α_Vβ₁整联蛋白抑制剂(例如，化合物1)和2)非胆汁酸衍生的FXR激动剂(例如，卓匹非索)的药物组合，其用于预防、延迟或治疗NASH。

在本发明的一些方面，本发明提供了包含1)α_Vβ₁整联蛋白抑制剂(例如，化合物1)和2)非胆汁酸衍生的FXR激动剂(例如，卓匹非索)的药物组合，其用于预防、延迟或治疗肝纤维化。

在本发明的一些方面，本发明提供了包含1)α_Vβ₁整联蛋白抑制剂(例如，化合物1)和2)非胆汁酸衍生的FXR激动剂(例如，卓匹非索)的药物组合，其用于预防、延迟或治疗肝性脂肪变性。

在本发明的一些方面，本发明提供了包含1)α_Vβ₁整联蛋白抑制剂(例如，化合物1)和2)非胆汁酸衍生的FXR激动剂(例如，卓匹非索)的药物组合，其用于预防、延迟或治疗肝细胞气球样变性。

在本发明的一些方面，本发明提供了包含1)α_Vβ₁整联蛋白抑制剂(例如，化合物1)和2)非胆汁酸衍生的FXR激动剂(例如，卓匹非索)的药物组合，其用于预防、延迟或治疗PBC。

本发明提供了预防、延迟或治疗有需要的患者的肝脏疾病或障碍的方法，该方法包括施用治疗有效量的本发明药物组合中的各活性成分。该药物组合包含1)α_Vβ₁整联蛋白抑制剂(例如，化合物1)和2)非胆汁酸衍生的FXR激动剂(例如，卓匹非索)。该肝脏疾病或障碍是纤维化或硬化肝脏疾病或障碍，例如肝脏疾病或障碍，例如慢性肝脏疾病或障碍，例如NAFLD、NASH、肝纤维化、肝硬化和PBC，例如NASH、肝纤维化或PBC。

一种在受试者中调节至少一种整联蛋白的方法，该至少一种整联蛋白包含α_V亚基，该方法包括向该受试者施用有效量的药物组合，该方法包括施用治疗有效量的本发明的药物组合。特别地，该受调节的整联蛋白是α_Vβ1。

本发明提供了作用于NASH病理生理学的两种或更多种不同模式的两种或更多种活性成分的组合。α_Vβ₁整联蛋白抑制剂(例如，化合物1)和非胆汁酸衍生的FXR激动剂(例如，卓匹非索)的组合可以解决NASH中涉及的代谢、抗炎和抗纤维化途径。如通过以下所证明的，α_Vβ₁整联蛋白抑制剂化合物1和非胆汁酸衍生的FXR激动剂卓匹非索影响不同靶标，这些靶标影响NASH病理生理学的不同模式：

-在移植时从5名NASH患者中获得的新鲜外植体的纤维化肝组织中，α_Vβ₁整联蛋白抑制剂化合物1显示出促纤维化基因的表达降低，这些促纤维化基因包括编码在纤维化中产生的最丰富的胶原蛋白类型的COL1A1和编码金属肽酶1型的组织抑制剂(TIMP-1)的TIMP1。TIMP-1是增强型肝纤维化(ELF)评分的三个组成部分之一，即一种非侵入性临床诊断测试，用于评估发生临床上显著的肝纤维化的可能性。

-化合物1在NASH(CDAHFD)和肝纤维化(CCl₄)的动物模型中显示出强效且剂量依赖性抗纤维化活性。

-不希望受理论的约束，从这些发现中据信化合物1对整联蛋白α_vβ₁的选择性抑制可为患有晚期纤维化的NASH患者提供抗纤维化益处。

-卓匹非索旨在解决NASH的几个特征，包括肝脏中的脂肪堆积、炎症和纤维化。

-化合物1和卓匹非索对于其各自的靶标而言都是强效和高度特异的。

-化合物1和卓匹非索的互补作用可以在某些患者群体中提供增强的纤维化减少和/或改善的临床益处。

本文描述了本发明的各种实施例。应认识到，每个实施例中指定的特征可以与其他指定特征组合以提供本发明的另外的实施例。

附图说明

图1是显示化合物1降低人肝硬化NASH精密切割肝切片中COL1A1和TIMP1的表达的图。

具体实施方式

本发明涉及具有不同作用机制(MoA)的两种或更多种活性成分的组合，该组合为改善治疗功效和反应率提供了另外的益处。

本披露涉及如下药物组合，该药物组合单独或一起包含至少一种α_Vβ₁整联蛋白抑制剂和至少一种另外的治疗剂，用于同时、顺序或单独施用。本发明进一步提供了包含这种组合的药物。

本披露涉及预防、延迟或治疗有需要的患者的肝脏疾病或障碍的方法，该方法包括施用治疗有效量的药物组合中的各活性成分。该药物组合包含1)α_Vβ₁整联蛋白抑制剂(例如，化合物1)和2)非胆汁酸衍生的FXR激动剂(例如，卓匹非索)。

本披露涉及在受试者中调节至少一种整联蛋白的方法，该至少一种整联蛋白包含α_V亚基，该方法包括向该受试者施用有效量的药物组合，该方法包括施用治疗有效量的本发明的药物组合。特别地，该受调节的整联蛋白是α_Vβ1。

在另一方面，本发明提供了用于在有需要的受试者中治疗由整联蛋白介导的病症，特别是肝脏疾病的方法，该方法包括向所述受试者施用药物组合，该药物组合包含：

1)α_Vβ₁整联蛋白抑制剂(例如，化合物1)，其中该α_Vβ₁整联蛋白抑制剂以治疗有效剂量施用，和

2)非胆汁酸衍生的FXR激动剂(例如，卓匹非索)。

本发明提供了作用于NASH病理生理学的两种或更多种不同模式的两种或更多种活性成分的组合。α_Vβ₁整联蛋白抑制剂(例如，化合物1)和非胆汁酸衍生的FXR激动剂(例如，卓匹非索)的组合可以解决NASH中涉及的代谢、抗炎和抗纤维化途径。如通过以下所证明的，α_Vβ₁整联蛋白抑制剂化合物1和非胆汁酸衍生的FXR激动剂卓匹非索影响不同靶标，这些靶标影响NASH病理生理学的不同模式：

·在移植时从5名NASH患者中获得的新鲜外植体的纤维化肝组织中，α_Vβ₁整联蛋白抑制剂化合物1显示出促纤维化基因的表达降低，这些促纤维化基因包括编码在纤维化中产生的最丰富的胶原蛋白类型的COL1A1和编码金属肽酶1型的组织抑制剂(TIMP-1)的TIMP1。TIMP-1是增强型肝纤维化(ELF)评分的三个组成部分之一，即一种非侵入性临床诊断测试，用于评估发生临床上显著的肝纤维化的可能性。

·化合物1在NASH(CDAHFD)和肝纤维化(CCl₄)的动物模型中显示出强效且剂量依赖性抗纤维化活性。

·不希望受理论的约束，从这些发现中据信化合物1对整联蛋白α_vβ₁的选择性抑制可为患有晚期纤维化的NASH患者提供抗纤维化益处。

·卓匹非索解决NASH的几个特征，包括肝脏中的脂肪堆积、炎症和纤维化。

·化合物1和卓匹非索对于其各自的靶标而言都是强效和高度特异的。

化合物1和卓匹非索的组合作用旨在在某些患者群体中提供增强的纤维化减少和/或改善的临床益处。

实施例(a)

1a.一种药物组合，所述药物组合用于同时、顺序或单独施用，其包含(i)α_Vβ₁整联蛋白抑制剂，例如化合物1；和(ii)非胆汁酸衍生的FXR激动剂，例如卓匹非索。

2a：一种药物组合，所述药物组合用于同时、顺序或单独施用，其包含(i)α_Vβ₁整联蛋白抑制剂，例如化合物1，其中α_Vβ₁整联蛋白抑制剂以治疗有效剂量施用；和(ii)非胆汁酸衍生的FXR激动剂，例如卓匹非索。

3a.如实施例1a或2a所述的药物组合，其中所述α_Vβ₁整联蛋白抑制剂，例如化合物1，处于游离形式或是其药学上可接受的盐、溶剂化物、前药、酯和/或氨基酸缀合物。

4a.如实施例3a所述的药物组合，其中卓匹非索处于其游离形式、药学上可接受的盐或结晶形式。

5a.如实施例4a所述的药物组合，其包含约0.01mg至约2mg的卓匹非索。

6a.如实施例5a所述的药物组合，其包含约0.01mg至约0.3mg的卓匹非索。

7a.如实施例5a所述的药物组合，其包含约0.01mg、约0.015mg、约0.03mg、约0.04mg、约0.06mg、约0.07mg、约0.075mg、约0.08mg、约0.09mg、约0.1mg、约0.14mg、约0.15mg、约0.2mg、约0.25mg、或约0.3mg的卓匹非索。

8a.一种药物组合，所述药物组合用于同时、顺序或单独施用，其包含：(i)化合物1；和(ii)卓匹非索。

9a.一种药物组合，所述药物组合用于同时、顺序或单独施用，其包含：(i)化合物1；和(ii)从约0.01mg至约2mg的卓匹非索，例如从约0.01mg至约1mg的卓匹非索、从约0.015mg至约0.3mg的卓匹非索、从约0.015mg至约0.15mg的卓匹非索、从约0.03mg至约0.2mg的卓匹非索、或从约0.03mg至约0.1mg的卓匹非索。

10a.如实施例1a至9a中任一项所述的药物组合，其包含处于游离形式的化合物1。

11a.如实施例1a至10a中任一项所述的药物组合，其包含处于两性离子形式的化合物1。

12a.如实施例1a至11a中任一项所述的药物组合，其中卓匹非索处于结晶形式。

13a.如实施例1a至12a中任一项所述的药物组合，其中卓匹非索处于游离形式。

14a.如实施例1a至13a中任一项所述的药物组合，其中所述组合是固定组合。

15a.如实施例1a至14a中任一项所述的药物组合，其中所述组合是自由组合。

16a.如实施例1a至15a中任一项所述的药物组合，其用于在预防、延迟或治疗由整联蛋白介导的病症，特别是肝脏疾病或肠道疾病中使用。

17a.一种预防、延迟或治疗有需要的受试者的肝脏疾病或障碍、或肠道疾病或障碍的方法，所述方法包括施用治疗有效量的如实施例1a至16a中任一项所述的药物组合。

18a.如实施例17a所述的方法，其中所述肝脏疾病或障碍是选自由以下组成的组的纤维化或硬化肝脏疾病或障碍：非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、肝硬化、酒精诱发型肝硬化、囊性纤维化相关性肝病(CFLD)、肝纤维化、和由任何上述疾病或由传染性肝炎引起的肝脏进行性纤维化。

19a.如实施例17a所述的方法，其中所述肝脏疾病或障碍是非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、原发性胆汁性肝硬化(PBC)、肝纤维化、或肝硬化。

20a.如实施例17a所述的方法，其中所述肝脏疾病或障碍是非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)。

21a.如实施例17a所述的方法，其中所述肝脏疾病或障碍是非酒精性脂肪性肝炎(NASH)。

22a.如实施例17a所述的方法，其进一步包括脂肪性肝炎的消退。

23a.如实施例17a所述的方法，其中所述肝脏疾病或障碍是肝纤维化。

24a.如实施例17a至23a中任一项所述的方法，其进一步包括肝纤维化的改善。

25a.如实施例17a至24a中任一项所述的方法，其进一步包括肝硬化的改善。

26a.如实施例17a至25a中任一项所述的方法，其中在晚上施用所述非胆汁酸衍生的FXR激动剂。

定义

出于解释本说明书的目的，将应用下面的定义，并且在适宜的情况下，以单数形式使用的术语还包括复数形式，并且反之亦然。

如本文所用，术语“一个/一种(a或an)”等是指一个/一种或多个/多种。

如本文所用，术语“约”相对于数值x，意指+/-10％，除非上下文另外规定。

如本文所用，术语“FXR激动剂”是指直接结合并上调FXR(可以称为胆汁酸受体(BAR)或NR1H4(核受体亚家族1，组H，成员4)受体)的活性的药剂。FXR激动剂可以充当FXR的激动剂或部分激动剂。例如，药剂可以是小分子、抗体或蛋白，优选是小分子。例如在使用荧光共振能量转移(FRET)无细胞测定的体外测定中，可以通过几种不同方法测量FXR激动剂的活性，如Pellicciari等人(Journal of Medicinal Chemistry[药物化学杂志]，2002卷15，第45期：3569-72)中所描述的。

如本文所用，术语“盐(salt或salts)”是指本发明化合物的酸加成盐或碱加成盐。“盐”特别包括“药学上可接受的盐”。

如本文所用，术语“氨基酸缀合物”是指化合物与任何合适的氨基酸的缀合物。优选地，化合物的此类合适的氨基酸缀合物将具有在胆汁或肠液中完整性增强的附加优点。合适的氨基酸包括但不限于甘氨酸、牛磺酸和酰基葡萄糖醛酸苷。因此，本发明涵盖，例如，FXR激动剂或α_Vβ₁整联蛋白抑制剂(即，化合物1或卓匹非索)的甘氨酸、牛磺酸和酰基葡萄糖醛酸苷缀合物。

如本文所用，术语“药学上可接受的”意指并不干扰一种或多种活性成分的生物活性的有效性的无毒性材料。

如本文所用，术语“前药”是指在体内转化成本发明化合物的化合物。前药是活性的或非活性的。在将前药施用给受试者后，前药通过体内生理作用(例如水解、代谢等)被化学改性成本发明的化合物。制备和使用前药中所涉及的适用性和技术是本领域技术人员所熟知的。合适的前药通常是药学上可接受的酯类衍生物。

如本文所用，术语“患者”或“受试者”可互换使用，并且是指人。

如本文所用，术语“治疗(treat、treating或treatment)”任何疾病或障碍在一个实施例中是指改善疾病或障碍(即减缓或阻止或减少疾病或其至少一种临床症状或病理特征的发展)。在另一个实施例中，“治疗”是指减轻或改善疾病的至少一种身体参数或病理特征，例如，包括不能被受试者辨别的那些。在又另一个实施例中，“治疗”是指在身体上(例如，稳定至少一种可辨别的或不可辨别的症状)或在生理上(例如，稳定身体参数)或在这两个方面调节疾病或障碍。在又另一个实施例中，“治疗”是指预防或延迟疾病或障碍，或与其相关联的至少一种症状或病理特征的发作或发展或进展。在又另一个实施例中，“治疗”是指预防或延迟疾病进展至更晚期或更严重的病症，例如肝硬化；或预防或延迟对肝移植的需求。例如，使用例如本文披露的任何组合治疗NASH可以指改善、减轻或调节与NASH相关联的至少一种症状或病理特征；例如肝性脂肪变性、肝细胞气球样变性、肝脏炎症和纤维化；例如可以指减缓进展，减少或终止与NASH相关联的至少一种症状或病理特征，例如肝性脂肪变性、肝细胞气球样变性、肝脏炎症和纤维化。还可以指预防或延迟肝硬化或对肝移植的需求。

如本文所用，术语“治疗有效量”是指本发明药物组合的整联蛋白抑制剂和/或至少一种另外的治疗剂单独或与例如FXR激动剂和/或α_Vβ₁整联蛋白抑制剂(例如，卓匹非索和/或化合物1)组合的量，该量足以实现各自所述效果。因此，FXR激动剂和/或α_Vβ₁整联蛋白抑制剂(例如，卓匹非索和/或化合物1)的用于治疗或预防如上文所定义的肝脏疾病或障碍的治疗有效量是足以单独或组合治疗或预防这种疾病或障碍的量。

“治疗方案”意指疾病的治疗的模式，例如在疾病或障碍的治疗期间使用的给药的模式。

如本文所用，如果受试者将在生物学上、在医学上或在生活质量上从治疗中受益，则此类受试者是“需要”此类治疗的。

如本文所用，术语“肝脏疾病或障碍”涵盖以下的一种、多种或全部：非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、药物诱发型胆管损伤、胆结石、肝硬化、酒精诱发型肝硬化、囊性纤维化相关性肝病(CFLD)、胆管阻塞、胆石症和肝纤维化。

如本文所用，术语NAFLD可涵盖疾病的不同阶段：肝性脂肪变性、NASH、纤维化和硬化。

如本文所用，术语NASH可涵盖脂肪变性、肝细胞气球样变性和小叶炎症。

如本文所定义，“组合”是指一个单位剂型(例如，胶囊、片剂或药囊)的固定组合、自由(即非固定)组合、或用于组合施用的成套试剂盒，其中本发明的α_Vβ₁整联蛋白抑制剂和一种或多种“组合伴侣”(即至少一种另外的治疗剂，例如非胆汁酸衍生的法尼醇X受体(FXR)激动剂或其药学上可接受的盐或溶剂化物，或也称为“共药剂”)可以在同一时间独立地或在时间间隔内单独地施用，尤其是在这些时间间隔允许组合伴侣显示合作作用(例如，协同作用)的情况下。

如本文所用的术语“共同施用”或“组合施用”等意在涵盖向有需要的单个受试者(例如患者)施用该至少一种另外的治疗剂，并且该至少一种另外的治疗剂旨在包括治疗方案，其中不需要通过相同的施用途径和/或在相同时间施用该α_Vβ₁整联蛋白抑制剂和该至少一种另外的治疗剂如FXR激动剂。本发明组合的每种组分可以同时或顺序以任意顺序施用。共同施用包括同时、顺序、重叠、间隔、连续施用及其任何组合。

如本文所用的术语“药物组合”意指由多于一种活性成分组合(例如混合)产生的药物组合物，并且包括活性成分的固定组合和自由组合两者。

术语“固定组合”意指活性成分，即1)α_Vβ₁整联蛋白抑制剂，例如化合物1(如本文所定义)和2)至少一种另外的治疗剂，例如非胆汁酸衍生的FXR激动剂，例如卓匹非索(如本文所定义)，两者都同时地以单个实体或剂量的形式施用于患者。

术语“自由组合”意指如本文定义的活性成分均作为单独实体同时、同步或顺序施用于患者，没有特定的时间限制，并且以任意顺序施用，其中此类施用在患者体内提供治疗有效水平的两种化合物。

“同时施用”意指在同一天施用1)α_Vβ₁整联蛋白抑制剂，例如化合物1(如本文所定义)和2)至少一种另外的治疗剂，例如FXR激动剂，例如卓匹非索(如本文所定义)。两种活性成分可以同时施用(对于固定或自由组合)或一次施用一种(对于自由组合)。

根据本发明，“顺序施用”可意指在两天或更多天的连续共同施用期间，在任一给定日仅施用1)α_Vβ₁整联蛋白抑制剂，例如化合物1(如本文所定义)和2)至少一种另外的治疗剂，例如FXR激动剂，例如卓匹非索(如本文所定义)中的一种。

“重叠施用”意指在两天或更多天的连续共同施用期间，至少一天进行同时施用以及至少一天仅施用1)α_Vβ₁整联蛋白抑制剂，例如化合物1(如本文所定义)和2)至少一种另外的治疗剂，例如FXR激动剂，例如卓匹非索(如本文所定义)中的一种。

“连续施用”意指没有任何空白日的共同施用的时期。如上所述，连续施用可以是同时的、顺序的或重叠的。

术语“卓匹非索”意指2-[3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲氧基)苯基]-1，2-噁唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-4-氟-1，3-苯并噻唑-6-甲酸(如下所示)。该术语包括其立体异构体、对映异构体(游离形式)、两性离子、多晶型物、药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、前药、酯或氨基酸缀合物；并且还旨在表示化合物的未标记形式以及同位素标记形式。

术语“化合物1”意指(S)-2-(4-甲基四氢-2H-吡喃-4-甲酰胺基)-9-(5，6，7，8-四氢-1，8-萘啶-2-基)壬酸(如下所示)。该术语包括其立体异构体、对映异构体(游离形式)、两性离子、多晶型物、药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、前药、酯或氨基酸缀合物；并且还旨在表示化合物的未标记形式以及同位素标记形式。

除非另有说明，否则化合物1或另外的治疗剂的量是指处于游离形式的各自的量。

α_Vβ₁整联蛋白抑制剂

根据本发明的实施例，α_Vβ₁整联蛋白抑制剂是化合物1。如上文所定义，术语“化合物1”还包括其立体异构体、对映异构体(游离形式，包括两性离子)、多晶型物、药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、前药、酯或氨基酸缀合物，例如HCl或TFA盐。

在一个实施例中，氨基酸缀合物是甘氨酸缀合物、牛磺酸缀合物或酰基葡萄糖醛酸苷缀合物。

在一个实施例中，化合物1还旨在表示化合物的未标记形式以及同位素标记形式。

另外的治疗剂或组合伴侣

术语“另外的治疗剂”和“组合伴侣”在本文中可互换使用。α_Vβ₁整联蛋白抑制剂和FXR激动剂的组合可以解决NASH中涉及的代谢、抗炎和抗纤维化途径。根据本发明的实施例，至少一种另外的治疗剂是非胆汁酸衍生的FXR激动剂，例如卓匹非索，该至少一种另外的治疗剂治疗或预防有需要的受试者的肝脏疾病或障碍、或肠道疾病或障碍。如上文所定义，术语“卓匹非索”还包括其立体异构体、对映异构体(游离形式)、两性离子、多晶型物、药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、前药、酯或氨基酸缀合物。

在一个实施例中，氨基酸缀合物是甘氨酸缀合物、牛磺酸缀合物或酰基葡萄糖醛酸苷缀合物。

药物组合物

α_Vβ₁整联蛋白抑制剂或至少一种另外的治疗剂各自可用作含有药学上可接受的载体的药物组合物。例如，除α_Vβ₁整联蛋白抑制剂或FXR激动剂之外，这种组合物还可以含有载体、各种稀释剂、填充剂、盐、缓冲液、稳定剂、增溶剂和本领域已知的其他材料。载体的特征将取决于施用途径。

用于所披露的方法的药物组合物可以是含有α_Vβ₁整联蛋白抑制剂(例如，化合物1)的药物组合物和含有非胆汁酸FXR激动剂(例如，卓匹非索)的药物组合物的自由组合，其各自如上所述。

用于所披露方法的药物组合物也可以是单个剂量单位中的组合药物组合物，其含有α_Vβ₁整联蛋白抑制剂和至少一种另外的治疗剂用于治疗特定靶向障碍。例如，药物组合物包括α_Vβ₁整联蛋白抑制剂和非胆汁酸衍生的FXR激动剂用于治疗或预防肝脏疾病或障碍、或肠道疾病或障碍。此类另外的治疗剂可以包括在组合药物组合物中以产生与α_Vβ₁整联蛋白抑制剂的协同作用。

施用模式

可以将本发明的药物组合物配制为与其预期施用途径相容(例如口服组合物通常包括惰性稀释剂或可食用载体)。施用途径的其他非限制性实例包括胃肠外(例如，静脉内)、皮内、皮下、口服(例如，吸入)、经皮(局部)、跨粘膜和直肠施用。

疾病

如上文所定义，纤维化或硬化疾病或障碍可以是肝脏疾病或障碍，或肾纤维化。

在本发明的一个实施例中，(如本文定义的)药物组合用于治疗或预防纤维化疾病或障碍，例如肝脏疾病或障碍，例如慢性肝脏疾病，例如选自下组的肝脏疾病或障碍，该组由以下组成：PBC、NAFLD、NASH、药物诱发型胆管损伤、胆结石、肝硬化、酒精诱发型肝硬化、囊性纤维化相关性肝病(CFLD)、胆管阻塞、胆石症、肝纤维化。在本发明的一个实施例中，(如本文定义的)药物组合用于治疗或预防纤维化，例如肾纤维化或肝纤维化。

根据本发明的一个实施例，肝脏疾病或障碍是指NAFLD，例如NAFLD的任何阶段，例如脂肪变性、NASH、纤维化和硬化中的任一种。

在本发明的一个实施例中，提供本发明的药物组合，用于改善肝纤维化而不使脂肪性肝炎恶化。

在本发明的另一个实施例中，提供本发明的药物组合，用于在不恶化的情况下获得脂肪性肝炎的完全消退，例如肝纤维化改善。

在本发明的另一个实施例中，提供本发明的药物组合，用于预防或治疗脂肪性肝炎和肝纤维化。

在本发明的又另一个实施例中，提供本发明的药物组合，用于减轻NAS评分的至少一个特征，即肝性脂肪变性、肝脏炎症和肝细胞气球样变性之一；例如NAS评分的至少两个特征，例如肝性脂肪变性和肝脏炎症，或肝性脂肪变性和肝细胞气球样变性，或肝细胞气球样变性和肝脏炎症。

在本发明的另一个实施例中，提供本发明的药物组合，用于减轻NAS评分和肝纤维化的至少一个或两个特征，例如用于减轻肝脏炎症和肝纤维化，或肝性脂肪变性和肝纤维化或肝细胞气球样变性和肝纤维化。

在本发明的又另一个实施例中，提供了药物组合，用于治疗或预防阶段3纤维化至阶段1纤维化，例如，阶段3和/或阶段2和/或阶段1纤维化。

在本发明的一个实施例中，(如本文定义的)药物组合用于治疗或预防肠道疾病或障碍。

患者受试者

根据本发明，接受本发明组合的患者可能受到影响或有纤维化疾病或障碍(例如，肝纤维化疾病或障碍)的风险。

给药方案

根据使用的化合物、目标疾病或障碍以及这种疾病或障碍的阶段，给药方案(即施用剂量和/或频率)可以变化。

给药频率将尤其取决于治疗方案的阶段。

根据本发明，卓匹非索(如上文定义的)以例如约0.01mg、约0.015mg、约0.03mg、约0.04mg、约0.06mg、约0.07mg、约0.075mg、约0.08mg、约0.09mg、约0.1mg、约0.14mg、约0.15mg、约0.2mg、约0.25mg、或约0.3mg的剂量施用。此类剂量可用于卓匹非索的口服施用。

用于治疗肝纤维化疾病或障碍的试剂盒

因此，提供了药物试剂盒，该药物试剂盒包含：a)α_Vβ₁整联蛋白抑制剂，例如化合物1；b)至少一种另外的治疗剂，例如FXR激动剂，例如非胆汁酸衍生的FXR激动剂，例如卓匹非索；和c)用于向受肝脏疾病或障碍影响的受试者施用该α_Vβ₁整联蛋白抑制剂和该至少一种另外的治疗剂的装置；以及任选的d)使用说明书。

在本发明的一个实施例中，提供了组合包装，该组合包装包含：a)α_Vβ₁整联蛋白抑制剂，例如化合物1；和b)至少一个单独剂量的如上文定义的至少一种另外的治疗剂，例如至少一个单独剂量的FXR激动剂，例如非胆汁酸衍生的FXR激动剂，例如卓匹非索。该组合包装还可以包含使用说明书。

实例

本文所述的实例和实施例仅用于举例说明目的，其各种修饰或改变对于本领域技术人员将是明了的，并包括在本申请的精神和范围内和所附权利要求书的范围内。本文引用的所有出版物、专利、和专利申请都出于所有目的，通过引用特此并入。

实例1-合成

(S)-2-(4-甲基四氢-2H-吡喃-4-甲酰胺基)-9-(5，6，7，8-四氢-1，8-萘啶-2-基)壬酸(化合物1)可根据以下方案A制备。

方案A

步骤1：

向(S)-2-氨基-9-(5，6，7，8-四氢-1，8-萘啶-2-基)壬酸甲酯在DMF中的溶液中添加DIPEA(10当量)，随后添加4-甲基四氢-2H-吡喃-4-甲酸(1.1当量)和HATU(1.1当量)。使反应在室温下搅拌，同时通过LCMS监测反应进程。当起始材料已被消耗完时，将反应用1NNaOH稀释，并用EA萃取，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩。将粗残余物通过硅胶色谱法纯化，以得到所示化合物。

步骤2：

向所示酯在适当的溶剂混合物(如THF/MeOH/H₂O或THF/EtOH/H₂O)中的溶液中添加LiOH(3-5当量)。使反应在室温下搅拌，同时通过LCMS监测反应进程。完成后，将反应浓缩并通过反相制备型HPLC纯化，以得到呈TFA盐的所示羧酸。LCMS理论值m/z＝432.2[M+H]+，实测值432.3。

实例2-固相整联蛋白α_Vβ₁或α_Vβ₆结合测定

将微板用在PBS(100μL/孔，25℃，过夜)中的重组人整联蛋白α_Vβ₁或α_Vβ₆(2μg/mL)涂覆。除去涂层溶液，将其用洗涤缓冲液(0.05％吐温20；0.5mM MnCl₂；在1x TBS中)洗涤。将板用200μL/孔的封闭缓冲液(1％BSA；5％蔗糖；0.5mM MnCl₂；在1x TBS中)在37℃封闭2h。添加化合物1和重组TGFβ1 LAP(0.67μg/mL)在结合缓冲液(0.05％BSA；2.5％蔗糖；0.5mM MnCl₂；在1x TBS中)中的稀释液。将板在25℃孵育2小时，洗涤，并与生物素-抗hLAP孵育1小时。通过过氧化物酶缀合的链霉亲和素检测结合抗体。通过四参数逻辑回归计算测试化合物的IC₅₀值。

实例3-基于邻近的整联蛋白α_Vβ₁或α_Vβ₆结合测定

如前所述(Ullman EF等人，Luminescent oxygen channeling immunoassay：Measurement of particle binding kinetics by chemiluminescence.[发光氧通道免疫测定：通过化学发光法测量粒子结合动力学]Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]，第91卷，第5426-5430页，1994年6月)，使用

(珀金埃尔默公司(Perkin Elmer)，沃尔瑟姆，马萨诸塞州)基于邻近的测定(一种基于珠粒的非放射性放大发光邻近均相测定)测试化合物1的α_Vβ₁或α_Vβ₆整联蛋白生化效力。遵循制造商的建议，为了测定抑制剂与人整联蛋白α_Vβ₁或α_vβ₆结合的效力，将抑制剂化合物和整联蛋白与重组TGFβ₁LAP和生物素化抗LAP抗体加受体和供体珠一起孵育。将供体珠用链霉亲和素涂覆。受体珠具有次氮基三乙酸镍螯合剂，用于与人整联蛋白α_Vβ₁或α_vβ₆上的6xHis-标签结合。所有孵育均在室温下于pH 7.5的50mM Tris-HCl，分别补充有1mM CaCl₂和MgCl₂的0.1％BSA中进行。试剂的添加顺序如下：1.将α_Vβ₁或α_Vβ₆整联蛋白、测试抑制剂化合物1、LAP、生物素化抗LAP抗体和受体珠均一起添加。2.2小时后，添加供体珠。再孵育30min后，读取样品。

实例4-α_Vβ₁或α_Vβ₆整联蛋白抑制的结果

针对实例2和3中获得的化合物1的α_Vβ₁和α_Vβ₆整联蛋白抑制所获得的IC₅₀值在下表1中：

表1

实例5-体内功效研究1

将成年雄性C57BL/6J小鼠圈养，它们可以任意获取水和食物。给小鼠饲喂HF/NASH饮食(40千卡％脂肪，2％胆固醇，40千卡％碳水化合物，Research Diets(研究饮食公司)D09100301或SSniff Special Diets(SSniff特殊饮食公司)，饮用水中补充有果糖-蔗糖溶液(42g/L，按重量计55％果糖和45％蔗糖))。年龄匹配的动物维持规则饮食(正常饮食(ND)，Kliba Nafag公司，3892)并且接受自来水。小鼠接受HF/NASH饮食共20周。

在HF/NASH饲喂的第8周，根据体重、总瘦肉和脂肪量以及通过MRI测量的肝脏脂肪，将HF/NASH动物随机分为治疗组和未治疗组。该研究包括四组小鼠：第1组：正常饮食/水(n＝7)；第2组：HF/NASH+卓匹非索(n＝9)；第3组：HF/NASH+化合物1(n＝9)；和第4组：HF/NASH+卓匹非索+化合物1(n＝9)。每周测量体重。使用小鼠身体组成核磁共振(NMR)分析仪，在HF/NASH饲喂的第0、4、7、14和20周测量脂肪和瘦肉量；并且使用磁共振成像(MRI)，在HF/NASH饲喂的第8、12、16和20周评估肝脏脂肪。

实例6-体内功效研究2

该研究涉及14天妊娠的C57BL/6小鼠。通过在出生后单次皮下注射200μg链脲菌素(美国西格玛公司(Sigma，USA))并在4周龄(第28±2天)后任意饲喂高脂饮食(HFD，57％千卡脂肪，CLEA日本公司(CLEA Japan)，日本)来建立NASH。分别在治疗开始前一天，将6周龄(第42±2天)的12只NASH小鼠随机分为六组，并将9周龄(第63±2天)的12只NASH小鼠随机分为六组。向NASH动物从6周龄至9周龄(研究1)或从9周龄至12周龄(研究2)给予以下：媒介物、卓匹非索、化合物1、卓匹非索+化合物1。研究1及研究2中均包括12只小鼠的非疾病媒介物-对照组。任意为这些动物饲喂正常饮食(CE-2；CLEA日本公司)。

收集PK样品并储存在≤-60℃下。根据下面的给药方案为动物给药。在研究治疗最后一天，在最后一个早间剂量后5小时处死每只动物。

给药：

-以具有1％

80的0.5％(w/v)甲基纤维素在无菌注射用水(USP)中制备卓匹非索。

-以含有0.5％(v/v)聚山梨醇酯80(NF)的0.5％(w/v)甲基纤维素(400cP)水溶液在反渗水中制备化合物1。

-通常，每天施用一次媒介物、单一疗法和联合疗法。

测量：

-每天测量或监测以下参数：小鼠的个体体重、存活、临床征象和行为。

-药代动力学测量：按每种化合物每个时间点从4只动物收集PK样品。对于单一疗法组和组合组两者，在第6天的第1小时和第10天的第24小时(每个时间点n＝4)采集化合物1的PK样品。每组使用前8只动物，每只动物仅收集一个PK样品。

治疗测量的终点：

在9周龄(研究1)或12周龄(研究2)处死小鼠。在第9周将未接受任何治疗或媒介物的8只NASH动物处死作为“基线”，以便比较经治疗的动物中观察到的任何纤维化消退事件。

收集以下样品：血浆、肝脏(对于每只动物，在最后一个剂量后5小时收集用于基因表达分析的新鲜肝脏样品)、粪便。测量器官重量。

进行以下生化测定：全血中的非空腹血糖，通过Life Check(日本艾迪尔公司(Eidia，Japan))测定；血清ALT，通过FUJI DRI-CHEM(日本富士胶片公司(Fujifilm，Japan))测定；血清甘油三酯；血清MCP-1、RANTES(CCL5)和MIP-1α/MIP-1定量，通过商业ELISA试剂盒测定；肝脏甘油三酯，通过甘油三酯E检测试剂盒(日本和光(Wako，Japan))测定；肝脏羟脯氨酸定量，通过水解法测定；肝脏切片的组织学分析；HE染色和NAFLD活动度评分估算；天狼星红染色和纤维化面积(扣除和不扣除血管周围间隙)估算；油红染色和脂肪沉积面积估算；F4/80免疫组织化学染色和炎症面积估算；α-SMA免疫组织化学染色和α-SMA阳性面积估计，使用来自肝脏的总RNA进行基因表达测定。

对以下进行实时RT-PCR分析：MCP-1、MIP-1α/β、RANTES、Emr1、CD68、TGF-β1、CCR2/5、TIMP-1、Co1a1A1、TNF、IL-10、MMP-9、α-SMA和CX3CR1/CX3CL1、SHP(小的异源二聚体伴侣)、BSEP(胆汁盐输出泵)、Cyp8b1。

使用单因素方差分析(one-way ANOVA)进行统计学检验，接着视情况进行邓尼特检验(Dunnett’s test)和曼-惠特尼检验(Mann-Whitney test)，进行多组比较。P值＜0.05被认为具有统计学意义。

实例7-化合物1抑制促纤维化基因表达

在使用来自NASH患者外植体和来自肝纤维化和NASH的啮齿动物模型的肝硬化肝组织产生的精密切割肝切片中，测量化合物1抑制促纤维化基因的表达和减少纤维化的生物标志物的能力。

在来自5名肝硬化NASH患者外植体的精密切割肝切片中，用化合物1治疗两天后，胶原蛋白1型α1(COL1A1)的基因表达显著降低了39％，并且金属蛋白酶抑制剂1(TIMP1)的基因表达也相应降低(错误！未找到参考源。)。数据为5名肝硬化NASH患者的平均值+/-标准偏差。在不同的组中，DMSO被用作溶剂并以恒定浓度(0.1％)使用。ALK5被用作阳性对照。化合物1还显著降低了培养基中的FBN-C(26％)，即纤连蛋白的C-末端片段(Bager等人2016)的水平。PRO-C1(34％)、PRO-C3(16％)和PRO-C4(15％)，即各个胶原蛋白亚型的片段(Leeming等人2010、Nielsen等人2013、Leeming等人2013)在用化合物1处理的培养基中也同样减少，但未达到统计学意义。

实例8-化合物1在肝纤维化小鼠模型中的抗纤维化活性

在简短的3周鼠肝CCl₄肝纤维化模型中建立了化合物1的抗纤维化活性。CCl₄是一种肝毒素，其注射到小鼠体内可导致肝纤维化(Constandinou 2005)。在损伤的最后一周给予化合物1。

使用所有剂量的化合物1，肝脏中磷酸化SMAD3(pSMAD3)/SMAD3的水平，即活性TGF-β信号传导的读数均显著降低，表明TGF-β信号传导的降低。基因表达分析表明，使用所有剂量的化合物1，肝脏Col1a1、Col1a2和Col3a1的表达均显著降低。使用所有剂量的化合物1，肝脏OHP浓度未显著变化。

总之，使用化合物1进行治疗性治疗可显著降低肝脏中pSMAD3/SMAD3的水平、肝脏胶原蛋白基因表达和肝脏OHP浓度。

实例9-化合物1在NASH小鼠模型中的抗纤维化活性

化合物1在CDAHFD NASH小鼠模型中也被证明是有效的抗纤维化剂。CDAHFD损伤是显示出肝脏脂肪堆积、炎症和纤维化的NASH啮齿动物模型(Matsumoto 2013)。进行了三种类型的研究：1)预防性，化合物1在简短的3周CDAHFD模型中；2)治疗性，化合物1在11-12周CDAHFD模型中持续6周；以及3)化合物1在10周CDAHFD模型中持续4周。

在两项独立研究中，化合物1在简短的3周CDAHFD模型中以低、中和高剂量进行了预防性测试。在高剂量下，肝脏中的pSMAD3水平降低了19％，表明TGF-β的活化减少。在两项研究中，在高剂量下，化合物1将肝脏OHP浓度显著降低了约30％。在研究之一中在高剂量下观察到胶原蛋白的基因表达显著降低，而在两项研究中在高剂量下Ehhadh(一种参与脂肪酸代谢的过氧化物酶体双功能酶的基因)的表达显著升高。

在3项独立研究中，化合物1在11至12周CDAHFD损伤研究中以中、高和最高剂量进行了治疗性测试。所有剂量均可使肝脏OHP显著降低至多38％，并且使pSMAD3水平降低至多57％。化合物1还导致OHP浓度的显著降低(24％)。胶原蛋白的基因表达(Col1a1和Col3a1)在高剂量和最高剂量下显著降低，而且结缔组织生长因子(Ctgf)、基质金属蛋白酶2(Mmp-2)、和Timp1的促纤维化标志物的基因表达也显著降低。参与脂肪酸代谢的过氧化物酶体酰基辅酶A氧化酶1(Acox1)和Ehhadh的基因表达显著增加。组织的组织学分析显示胶原蛋白面积显著减少，并且通过第二谐波生成成像确定的复合纤维化评分表明胶原蛋白纤维的数量和质量显著降低。

在10周CDAHFD研究中，将化合物1的功效与泛α_v抑制剂CWHM12(3S)-N-[3-羟基-5-[(1，4，5，6-四氢-5-羟基-2-嘧啶基)氨基]苯甲酰基]甘氨酰基-3-[3-溴-5-(1，1-二甲基乙基)苯基]-β-丙氨酸)的功效进行比较。使用化合物1和CWHM12，pSMAD3水平分别降低了40％和61％，并且OHP浓度分别降低了24％和30％。尽管使用CWHM12进行的泛α_v抑制可降低pSMAD和OHP水平，但选择性α_vβ₁抑制足以产生抗纤维化活性。

总之，在CDAHFD NASH小鼠模型中进行了组织学检查，使用化合物1(α_vβ₁的小分子拮抗剂)进行预防性或治疗性治疗可阻断SMAD3磷酸化，并显著降低OHP水平、胶原蛋白基因表达和胶原蛋白沉积。这些发现在多项研究中得到了重复。

实例10-化合物1的安全性、耐受性、PK和PD的首次人体研究

A部分(单次递增剂量研究)

该研究的A部分是针对最多50位健康男性和女性(无生育可能)参与者进行的关于化合物1的安全性、耐受性和PK的首次人体、随机、双盲、安慰剂对照、平行组、单次递增剂量研究。四十名参与者将被纳入至多5个连续群组。

B部分(多次递增剂量研究)

该研究的B部分正在进行中，并且是在该研究的A部分的前2个群组完成后开始的。B部分中的剂量由该研究的A部分确定，并且不高于在该研究的A部分中施用的最高剂量。

该研究的B部分是针对最多40位健康男性和女性(无生育可能)参与者进行的关于施用化合物1持续7天的PK、PD、安全性和耐受性的随机、双盲、安慰剂对照、平行组、多次递增剂量研究。

迄今为止，化合物1在所有健康志愿者中耐受性良好。

实例11-用于治疗非酒精性脂肪性肝炎的卓匹非索：来自阶段2b研究FLIGHT-FXR的基于基线体质指数的期中结果。

FLIGHT-FXR(NCT02855164)是阶段2、随机、双盲、多中心、安慰剂对照试验，具有适应性设计，以评估卓匹非索在NASH(非酒精性脂肪性肝炎)患者中的安全性、耐受性和功效。下文提供了来自卓匹非索60μg、卓匹非索90μg、和安慰剂臂的数据。

将患者分为两个亚组：更低BMI亚组(BMI＜30kg/m²(亚裔)或＜35kg/m²(非亚裔))和更高BMI亚组(BMI≥30kg/m²(亚裔)或≥35kg/m²(非亚裔))。

研究目标如下：

-为了通过BMI亚组，确定针对肠道中的FXR靶标接合的标志物(FGF19)的卓匹非索随时间的剂量反应关系。

-为了通过BMI亚组，确定针对肝脏炎症的标志物(丙氨酸氨基转移酶[ALT])、靶标接合和氧化应激的标志物(γ谷氨酰转移酶[GGT])，并且针对通过磁共振成像质子密度脂肪分数(MRI-PDFF)测量的肝脏脂肪含量(LFC)的变化，卓匹非索在12周时的剂量反应关系。

-为了通过BMI亚组确定脂质谱。

表2：研究群体

60μg卓匹非索、90μg卓匹非索、和安慰剂的结果和功效

表3(下文)显示了在每个治疗臂中观察到的结果。

表3：通过BMI亚组(其中N为总患者数)，功效的标志物的几何平均百分率变化(FGF19(在第6周，从给药前到给药后4小时)，和从基线到第12周的所有其他参数))

BMI＜30kg/m²(亚裔)或＜35kg/m²(非亚裔)；

BMI≥30kg/m²(亚裔)或≥35kg/m²(非亚裔)；^§通过MRI-PDFF测量

·卓匹非索对靶标接合的标志物的影响：FGF19：在第6周时进行FGF19的评估。在两个BMI亚组中，与给药前相比，给药后4小时观察到FGF19水平的剂量反应增加。在第6周，在更低BMI亚组中，从给药前的FGF19的几何平均百分率变化(60μg的卓匹非索＝360.2，并且90μg的卓匹非索＝585.8)高于在更高BMI亚组中的平均百分率变化(60μg的卓匹非索＝276.9，并且90μg的卓匹非索＝446.9)。

·卓匹非索对肝脏炎症的标志物的影响：ALT：在来自两个BMI亚组的患者中，用90μg的卓匹非索剂量观察到从基线的ALT水平的快速并且持续的下降，在具有更低BMI的组中更显著。

·卓匹非索对氧化应激的标志物GGT的影响：在两个BMI亚组中，用卓匹非索观察到GGT水平的剂量反应降低，在具有更低BMI的组中更显著。在第12周，相比在更高BMI亚组中，60μg的卓匹非索(-38.4)和90μg的卓匹非索(-48.7)，在更低BMI中，用60μg的卓匹非索(-47.0)和90μg的卓匹非索(-61.3)，GGT的几何平均百分率变化更高。

·卓匹非索对肝脏脂肪含量的影响：在第12周，与更高BMI亚组(安慰剂＝-5.5；卓匹非索60μg＝-12.9，并且卓匹非索90μg＝-11.4)相比，在更低BMI亚组中的所有臂中，平均百分率变化更大(安慰剂＝-13.1；卓匹非索60μg＝-19.9，并且卓匹非索90μg＝-18.8)。相比更高BMI亚组，在更低BMI亚组中，具有肝脏脂肪含量(LFC)的绝对降低＞5％的患者的比例更高。

·卓匹非索对C4的影响：在第12周，在所有卓匹非索治疗组中，观察到7-羟基-4-胆甾烯-3-酮(C4)的降低。在更高BMI亚组中，此降低更明显。然而，C4经历了日变化，因此BMI对C4的影响造成了进一步调查。

只要涉及包含卓匹非索的配制品的安全性，不良事件(包括瘙痒)的发生率就是臂之间可比较的。在两个BMI亚组中，脂质谱是可比较的。在两个BMI亚组中，来自此阶段2b研究的前两部分的期中结果提供了卓匹非索的靶标接合、抗炎、和抗脂肪变性效果的证据。然而，在更低BMI亚组中，卓匹非索对ALT、GGT、和LFC的影响更明显。研究还显示，在两个亚组中，脂质谱是可比较的，并且在研究中，跨越治疗臂，事件(包括瘙痒)的比率是可比较的。在更高BMI亚组中，按体重接受更低剂量，更低反应的一致趋势支持测试更高卓匹非索剂量(例如，140和200μg/天)。

所有参考文献，例如出版物、专利、专利申请和公布的专利申请通过引用以其全文并入本文。

尽管为了清楚理解的目的已经通过说明和举例的方式相当详细地描述了前述发明，但对于本领域技术人员显而易见的是，可实施某些微小的改变和修改。因此，该说明和实例不应当解释为限制本发明的范围。

Claims (10)

1.一种药物组合，所述药物组合包含1)αvβ₁整联蛋白抑制剂和2)至少一种另外的治疗剂，用于同时、顺序或单独施用。

2.如权利要求1所述的药物组合，其中所述αvβ₁整联蛋白抑制剂是(S)-2-(4-甲基四氢-2H-吡喃-4-甲酰胺基)-9-(5，6，7，8-四氢-1，8-萘啶-2-基)壬酸、其立体异构体、互变异构体、对映异构体、药学上可接受的盐、前药、酯或氨基酸缀合物。

3.如权利要求1或2所述的药物组合，其中所述至少一种另外的治疗剂是非胆汁酸衍生的FXR激动剂，该非胆汁酸衍生的FXR激动剂是2-[(1R，3r，5S)-3-({5-环丙基-3-[2-(三氟甲氧基)苯基]-1，2-噁唑-4-基}甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-4-氟-1，3-苯并噻唑-6-甲酸、其药学上可接受的盐、前药、酯或氨基酸缀合物。

4.如权利要求1至3中任一项所述的药物组合，其中所述药物组合是固定剂量组合。

5.如权利要求1至3中任一项所述的药物组合，其中所述药物组合是自由组合。

6.如权利要求1至5中任一项所述的药物组合在制造用于预防、延迟或治疗肝脏疾病或障碍的药物中的用途。

7.如权利要求6所述的用途，其中所述肝脏疾病或障碍是纤维化或硬化肝脏疾病或障碍。

8.一种预防、延迟或治疗有需要的患者的肝脏疾病或障碍的方法，所述方法包括施用治疗有效量的如权利要求1至5中任一项所述的药物组合。

9.如权利要求8所述的方法，其中所述肝脏疾病或障碍是选自由以下组成的组的纤维化或硬化肝脏疾病或障碍：非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、肝硬化、酒精诱发型肝硬化、囊性纤维化相关性肝病(CFLD)、肝纤维化、和由任何上述疾病或由传染性肝炎引起的肝脏进行性纤维化。

10.如权利要求8所述的方法，其中所述肝脏疾病或障碍是非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、肝纤维化、或肝硬化。

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