TW202135812A - 使用整聯蛋白抑制劑組合治療肝臟疾病 - Google Patents

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Abstract

本發明提供一種包括αVβ1整聯蛋白抑制劑和至少一種另外的治療劑的藥物組合，該藥物組合用於預防、延遲或治療肝臟疾病或障礙。該至少一種另外的治療劑可以是菌綠烯醇X受體(FXR)促效劑。例如，該藥物組合包括(S)-2-(4-甲基四氫-2H-哌喃-4-甲醯胺基)-9-(5,6,7,8-四氫-1,8-
Figure 109145129-A0202-11-0001-17
啶-2-基)壬酸(化合物1)和2-[3-({5-環丙基-3-[2-(三氟甲氧基)苯基]-1,2-

Description

使用整聯蛋白抑制劑組合治療肝臟疾病
本發明關於用於治療、預防或改善由纖維化整聯蛋白和菌綠烯醇X受體(FXR)介導的病症(特別是肝臟疾病)之組合療法，該組合療法包括向有需要的受試者投與治療有效量的整聯蛋白抑制劑和FXR促效劑。此外，本發明關於藥物組合，其包含αVβ1整聯蛋白抑制劑和菌綠烯醇X受體(FXR)促效劑卓匹非索(tropifexor)，視需要存在藥學上可接受的載體，並且關於包含它們的藥物組成物。
非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)係西方世界慢性肝臟疾病之最常見原因。NAFLD係一種慢性肝臟疾病(CLD)，長期以來被認為是脂肪肝的一種非進行性形式。然而，最近的臨床和臨床前證據表明，NAFLD可進展為更嚴重的非酒精性脂肪性肝炎(NASH)，並因此患者可發展肝纖維化，其中在肝臟中存在持續炎症，從而導致在肝細胞及血管周圍生成纖維瘢痕組織。最終，肝硬化會隨著時間的推移而發展，其損害係永久性的並且可導致肝衰竭和肝癌(肝細胞癌)。因此，NAFLD的主要階段為：1)單純性脂肪肝(脂肪變性)；2)NASH；3)纖維化；和4)肝硬化。
肝移植係伴隨肝衰竭的晚期肝硬化之唯一治療方法。估計全世界NAFLD患病率的範圍係從6.3%至33%，一般人群中位數為20%。NASH的估計患病率較低，範圍從3%至5%(Younossi等人，Hepatology[肝臟病學]，第64卷，第1期，2016)。NASH係一個世界性的問題，在過去的幾十年裡發病率不斷增長。在過去的十年中，在美國，NASH從肝移植的罕見適應症躍升為第二適應症。預期到2024年，它將成為移植的主要原因。NASH與代謝症候群和2型糖尿病高度相關。此外，心血管病死亡率係NASH患者死亡的重要原因。
NASH的發展涉及幾種機制：肝臟中脂肪積聚(脂肪變性)、肝臟炎症、肝細胞氣球樣變性和纖維化。NAFLD活動度評分(NAS)被開發作為用於測量治療試驗期間NAFLD的變化的工具。以脂肪變性(0-3)、小葉炎症(0-3)和氣球樣變性(0-2)評分的未加權總和來計算評分。
在NASH等慢性肝臟疾病中，活化的肝臟星狀細胞係驅動纖維發生的肌成纖維細胞的主要來源(Higashi等人2017)，而轉化生長因子β(TGF-β)係肌成纖維細胞活化的主要驅動力。TGFβ1最初與使TGFβ1處於非活性狀態的潛伏期相關肽(LAP)一起分泌。將TGF-β1轉化為其活性形式的一種方法係藉由LAP與αV整聯蛋白(包括αVβ1)之間的相互作用。αVβ1整聯蛋白係在成纖維細胞上表現的RGD-結合整聯蛋白，並且被認為對纖維化肝組織中的TGF-β1活化有顯著貢獻(Parola等人2008，Reed等人2015)。已證明，αVβ1的藥理學抑制可減少肝纖維化小鼠模型中的纖維化(Reed等人2015)。由於TGF-β1信號傳導參與全身多種穩態過程，據信，針對纖維化組織的αVβ1TGF-β1軸的抑制可允許局部且因此潛在更安全地靶向TGFβ1信號傳導(Henderson等人2013，Henderson和Sheppard 2013，Reed等人2015)。
菌綠烯醇X受體(FXR)係由膽汁酸活化的核受體，也稱為膽汁酸受體(BAR)。FXR在膽汁酸代謝的主要部位(如肝臟、腸和腎臟)中表現，FXR在該等主要部位以組織特異性方式介導對多種代謝途徑的作用。
FXR在肝臟和腸中的作用模式係眾所周知的，並且例如在Calkin和Tontonoz(2012)(Nature Reviews Molecular Cell Biology[自然綜述：分子細胞生物學]13,213-24)中有描述。FXR在肝臟和腸中負責藉由多種機制來調節膽汁酸的產生、軛合和清除。在正常生理學中，FXR檢測膽汁酸水平升高，並且響應方式係藉由降低膽汁酸合成和膽汁酸攝取，同時增加肝臟中的膽汁酸的修飾和分泌。在腸中，FXR檢測膽汁酸水平升高並降低膽汁酸吸收且增加FGF15/19的分泌。最終結果係膽汁酸的總體水平降低。在肝臟中，FXR激動作用增加小管和基底外側膽汁酸流出和膽汁酸解毒醇中所涉及的基因的表現，同時抑制肝細胞對基底外側膽汁酸的攝取並抑制膽汁酸合成。
此外，FXR促效劑降低肝臟甘油三酯合成以使得脂肪變性減少，抑制肝臟星狀細胞活化以減少肝纖維化，並且刺激FGF15/FGF19表現(膽汁酸代謝的關鍵調節因子)以使得肝臟胰島素敏感性提高。因此，FXR充當膽汁酸升高的感測器，並引發穩態反應以控制膽汁酸水平，這係一種據信在膽汁淤積中受損的回饋機制。在患有膽汁淤積障礙(Nevens等人，J.Hepatol.[肝臟病學雜誌]60(1增刊1)：347A-348A(2014))、膽汁酸吸收不良性腹瀉(Walters等人，Aliment Pharmacol.Ther.[營養藥理學與治療學]41(1)：54-64(2014))以及非酒精性脂肪性肝炎(NASH：Neuschwander-Tetri等人，2015)的受試者中，FXR激動作用已經顯示臨床益處。
FXR促效劑2-[3-({5-環丙基-3-[2-(三氟甲氧基)苯基]-1,2-
Figure 109145129-A0202-12-0004-34
唑-4-基}甲氧基)-8-氮雜雙環[3.2.1]辛-8-基]-4-氟-1,3-苯并噻唑-6-甲酸(參見Tully等人，J Med Chem[藥物化學雜誌]2017；60：9960-9973)目前在患有纖維化的NASH患者中進行了評估(參見NCT 02855164研究)。在WO 2012/087519(實例1，第125頁表中的化合物1-IB)中首次揭露了該化合物，並且它以名稱卓匹非索或LJN452為人所知。
Figure 109145129-A0202-12-0004-2
因為NAFLD和NASH的病理生理學係複雜的，並且可能涉及多個冗餘的途徑，所以需要提供可以解決該等複雜病症的不同方面同時展示可接受的安全性和/或耐受性特性的針對NAFLD、NASH和纖維化/硬化的治療。
本發明提供了如下藥物組合，該藥物組合單獨或一起包含至少一種αVβ1整聯蛋白抑制劑和至少一種另外的治療劑，用於同時、順序或單獨投與。本發明進一步提供了包含該藥物組合的藥物。
在一方面，該αVβ1整聯蛋白抑制劑係(S)-2-(4-甲基四氫-2H-哌喃-4-甲醯胺基)-9-(5,6,7,8-四氫-1,8-
Figure 109145129-A0202-12-0004-19
啶-2-基)壬酸(化合物1，如下所示)，其立體異構物、互變異構物、鏡像異構物、藥學上可接受的鹽、前驅藥、酯或其胺基酸軛合物(conjugate)。
Figure 109145129-A0202-12-0005-16
在另一方面，該至少一種另外的治療劑係非膽汁酸衍生的菌綠烯醇X受體(FXR)促效劑。在另一方面，該非膽汁酸衍生的FXR促效劑係2-[3-({5-環丙基-3-[2-(三氟甲氧基)苯基]-1,2-
Figure 109145129-A0202-12-0005-25
唑-4-基}甲氧基)-8-氮雜雙環[3.2.1]辛-8-基]-4-氟-1,3-苯并噻唑-6-甲酸(卓匹非索)，其藥學上可接受的鹽、前驅藥和/或酯，和/或其胺基酸軛合物。
在另一方面，該組合係固定劑量組合。
在另一方面，該組合係自由組合。
在另一方面，該αVβ1整聯蛋白抑制劑和該至少一種另外的治療劑能以一個組合單位劑量形式或以兩個單獨的單位劑量形式一起、依次、分別投與。單位劑型也可以是固定組合。
在另一方面，該藥物組合在製造用於預防、延遲或治療肝臟疾病或障礙的藥物中使用。
在一方面，本發明關於這樣的藥物組合，例如固定或自由組合，例如組合的單位劑量，用於預防、延遲或治療纖維化或硬化疾病或障礙，例如肝臟疾病或障礙。在一些方面，這樣的藥物組合包含αVβ1整聯蛋白抑制劑(例如，化合物1)和至少一種另外的治療劑，每一者的量係聯合治療有效的量。在另一方面，該至少一種另外的治療劑係非膽汁酸衍生的菌綠烯醇X受體(FXR)促效劑。該非膽汁酸衍生的FXR促效劑係卓匹非索。
本發明提供了αVβ1整聯蛋白抑制劑(例如，化合物1)與至少一種另外的治療劑(例如，非膽汁酸衍生的FXR促效劑)組合(例如，固定或自 由組合)用於製造用於預防或治療肝臟疾病或障礙，例如慢性肝臟疾病或障礙，例如膽汁淤積、肝內膽汁淤積、雌激素誘發型膽汁淤積、藥物誘發型膽汁淤積、妊娠膽汁淤積、胃腸外營養相關性膽汁淤積、原發性膽汁性肝硬化(PBC)、原發性硬化性膽管炎(PSC)、進行性家族性膽汁淤積(PFIC)、非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、藥物誘發型膽管損傷、膽結石、肝硬化、酒精誘發型肝硬化、囊性纖維化相關性肝病(CFLD)、膽管阻塞、膽石症、肝纖維化、腎纖維化、血脂異常、動脈粥樣硬化、糖尿病、糖尿病性腎病、結腸炎、新生兒黃疸、核黃疸的預防、靜脈閉塞性疾病、門靜脈高壓症、代謝症候群、高膽固醇血症、腸道細菌過度生長、勃起功能障礙、由任何上述疾病或由傳染性肝炎引起的肝臟進行性纖維化(例如，NAFLD、NASH、肝纖維化、肝性脂肪變性或PBC)的藥物之用途。
在本發明之一些方面，本發明提供了預防、延遲或治療有需要的患者的肝臟疾病或障礙之方法，該方法包括投與治療有效量的1)αVβ1整聯蛋白抑制劑(例如，化合物1)和2)至少一種另外的治療劑(例如，非膽汁酸衍生的FXR促效劑(例如卓匹非索))的步驟，其中該肝臟疾病或障礙係慢性肝臟疾病或障礙，例如膽汁淤積、肝內膽汁淤積、雌激素誘發型膽汁淤積、藥物誘發型膽汁淤積、妊娠膽汁淤積、胃腸外營養相關性膽汁淤積、原發性膽汁性肝硬化(PBC)、原發性硬化性膽管炎(PSC)、進行性家族性膽汁淤積(PFIC)、非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、藥物誘發型膽管損傷、膽結石、肝硬化、酒精誘發型肝硬化、囊性纖維化相關性肝病(CFLD)、膽管阻塞、膽石症、肝纖維化、腎纖維化、血脂異常、動脈粥樣硬化、糖尿病、糖尿病性腎病、結腸炎、新生兒黃疸、核黃疸的預防、靜脈閉塞性疾病、門靜脈高壓症、代謝症候群、高膽固醇血症、腸道細菌過度生長、勃 起功能障礙、由任何上述疾病或由傳染性肝炎引起的肝臟進行性纖維化(例如，NAFLD、NASH、肝纖維化、肝性脂肪變性或PBC)。
在本發明之一些方面，本發明提供了用於預防、延遲或治療慢性肝臟疾病或障礙(例如，NAFLD、NASH、肝性脂肪變性、肝纖維化、肝硬化、PBC和脂肪變性)的藥物組合，其中該組合包含1)αVβ1整聯蛋白抑制劑(例如，化合物1)和2)非膽汁酸衍生的FXR促效劑(例如，卓匹非索)。
在本發明之一些方面，本發明提供了包含1)αVβ1整聯蛋白抑制劑(例如，化合物1)和2)非膽汁酸衍生的FXR促效劑(例如，卓匹非索)的藥物組合，其用於預防、延遲或治療NASH。
在本發明之一些方面，本發明提供了包含1)αVβ1整聯蛋白抑制劑(例如，化合物1)和2)非膽汁酸衍生的FXR促效劑(例如，卓匹非索)的藥物組合，其用於預防、延遲或治療肝纖維化。
在本發明之一些方面，本發明提供了包含1)αVβ1整聯蛋白抑制劑(例如，化合物1)和2)非膽汁酸衍生的FXR促效劑(例如，卓匹非索)的藥物組合，其用於預防、延遲或治療肝性脂肪變性。
在本發明之一些方面，本發明提供了包含1)αVβ1整聯蛋白抑制劑(例如，化合物1)和2)非膽汁酸衍生的FXR促效劑(例如，卓匹非索)的藥物組合，其用於預防、延遲或治療肝細胞氣球樣變性。
在本發明之一些方面，本發明提供了包含1)αVβ1整聯蛋白抑制劑(例如，化合物1)和2)非膽汁酸衍生的FXR促效劑(例如，卓匹非索)的藥物組合，其用於預防、延遲或治療PBC。
本發明提供了預防、延遲或治療有需要的患者的肝臟疾病或障礙之方法，該方法包括投與治療有效量的本發明藥物組合中的各活性成分。該藥物組合包含1)αVβ1整聯蛋白抑制劑(例如，化合物1)和2)非膽汁酸衍生的FXR 促效劑(例如，卓匹非索)。該肝臟疾病或障礙係纖維化或硬化肝臟疾病或障礙，例如肝臟疾病或障礙，例如慢性肝臟疾病或障礙，例如NAFLD、NASH、肝纖維化、肝硬化和PBC，例如NASH、肝纖維化或PBC。
一種在受試者中調節至少一種整聯蛋白之方法，該至少一種整聯蛋白包含αV亞基，該方法包括向該受試者投與有效量的藥物組合，該方法包括投與治療有效量的本發明之藥物組合。特別地，該受調節的整聯蛋白係αVβ1。
本發明提供了作用於NASH病理生理學的兩種或更多種不同模式的兩種或更多種活性成分的組合。αVβ1整聯蛋白抑制劑(例如，化合物1)和非膽汁酸衍生的FXR促效劑(例如，卓匹非索)的組合可以解決NASH中涉及的代謝、抗炎和抗纖維化途徑。如藉由以下所證明的，αVβ1整聯蛋白抑制劑化合物1和非膽汁酸衍生的FXR促效劑卓匹非索影響不同靶標，該等靶標影響NASH病理生理學的不同模式：
- 在移植時從5名NASH患者中獲得的新鮮外植體的纖維化肝組織中，αVβ1整聯蛋白抑制劑化合物1顯示出促纖維化基因的表現降低，該等促纖維化基因包括編碼在纖維化中產生的最豐富的膠原蛋白類型的COL1A1和編碼金屬肽酶1型的組織抑制劑(TIMP-1)的TIMP1。TIMP-1係增強型肝纖維化(ELF)評分的三個組成部分之一，即一種非侵入性臨床診斷測試，用於評估發生臨床上顯著的肝纖維化的可能性。
- 化合物1在NASH(CDAHFD)和肝纖維化(CCl4)的動物模型中顯示出強效且劑量依賴性抗纖維化活性。
- 不希望受理論的約束，從該等發現中據信化合物1對整聯蛋白αvβ1的選擇性抑制可為患有晚期纖維化的NASH患者提供抗纖維化益處。
- 卓匹非索旨在解決NASH的幾個特徵，包括肝臟中的脂肪堆積、炎症和纖維化。
- 化合物1和卓匹非索對於其各自的靶標而言皆為強效和高度特異的。
- 化合物1和卓匹非索的互補作用可以在某些患者群體中提供增強的纖維化減少和/或改善的臨床益處。
本文描述了本發明之各種實施方式。應認識到，每個實施方式中指定的特徵可以與其他指定特徵組合以提供本發明之另外的實施方式。
[圖1]係顯示化合物1降低人肝硬化NASH精密切割肝切片中COL1A1和TIMP1的表現的圖。
本發明關於具有不同作用機制(MoA)的兩種或更多種活性成分的組合，該組合為改善治療功效和反應率提供了另外的益處。
本揭露關於如下藥物組合，該藥物組合單獨或一起包含至少一種αVβ1整聯蛋白抑制劑和至少一種另外的治療劑，用於同時、順序或單獨投與。本發明進一步提供了包含這種組合的藥物。
本揭露關於預防、延遲或治療有需要的患者的肝臟疾病或障礙之方法，該方法包括投與治療有效量的藥物組合中的各活性成分。該藥物組合包含1)αVβ1整聯蛋白抑制劑(例如，化合物1)和2)非膽汁酸衍生的FXR促效劑(例如，卓匹非索)。
本揭露關於在受試者中調節至少一種整聯蛋白之方法，該至少一種整聯蛋白包含αV亞基，該方法包括向該受試者投與有效量的藥物組合，該方 法包括投與治療有效量的本發明之藥物組合。特別地，該受調節的整聯蛋白係αVβ1。
在另一方面，本發明提供了用於在有需要的受試者中治療由整聯蛋白介導的病症，特別是肝臟疾病之方法，該方法包括向所述受試者投與藥物組合，該藥物組合包含：
1)αVβ1整聯蛋白抑制劑(例如，化合物1)，其中該αVβ1整聯蛋白抑制劑以治療有效劑量投與，和
2)非膽汁酸衍生的FXR促效劑(例如，卓匹非索)。
本發明提供了作用於NASH病理生理學的兩種或更多種不同模式的兩種或更多種活性成分的組合。αVβ1整聯蛋白抑制劑(例如，化合物1)和非膽汁酸衍生的FXR促效劑(例如，卓匹非索)的組合可以解決NASH中涉及的代謝、抗炎和抗纖維化途徑。如藉由以下所證明的，αVβ1整聯蛋白抑制劑化合物1和非膽汁酸衍生的FXR促效劑卓匹非索影響不同靶標，該等靶標影響NASH病理生理學的不同模式：
˙在移植時從5名NASH患者中獲得的新鮮外植體的纖維化肝組織中，αVβ1整聯蛋白抑制劑化合物1顯示出促纖維化基因的表現降低，該等促纖維化基因包括編碼在纖維化中產生的最豐富的膠原蛋白類型的COL1A1和編碼金屬肽酶1型的組織抑制劑(TIMP-1)的TIMP1。TIMP-1係增強型肝纖維化(ELF)評分的三個組成部分之一，即一種非侵入性臨床診斷測試，用於評估發生臨床上顯著的肝纖維化的可能性。
˙化合物1在NASH(CDAHFD)和肝纖維化(CCl4)的動物模型中顯示出強效且劑量依賴性抗纖維化活性。
˙不希望受理論的約束，從該等發現中據信化合物1對整聯蛋白αvβ1的選擇性抑制可為患有晚期纖維化的NASH患者提供抗纖維化益處。
˙卓匹非索解決NASH的幾個特徵，包括肝臟中的脂肪堆積、炎症和纖維化。
˙化合物1和卓匹非索對於其各自的靶標而言皆為強效和高度特異的。
化合物1和卓匹非索的組合作用旨在在某些患者群體中提供增強的纖維化減少和/或改善的臨床益處。
實施方式(a)
1a.一種藥物組合，該藥物組合用於同時、順序或單獨投與，其包含(i)αVβ1整聯蛋白抑制劑，例如化合物1；和(ii)非膽汁酸衍生的FXR促效劑，例如卓匹非索。
2a：一種藥物組合，該藥物組合用於同時、順序或單獨投與，其包含(i)αVβ1整聯蛋白抑制劑，例如化合物1，其中αVβ1整聯蛋白抑制劑以治療有效劑量投與；和(ii)非膽汁酸衍生的FXR促效劑，例如卓匹非索。
3a.如實施方式1a或2a所述之藥物組合，其中該αVβ1整聯蛋白抑制劑，例如化合物1，處於游離形式或係其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、前驅藥、酯和/或胺基酸軛合物。
4a.如實施方式3a所述之藥物組合，其中卓匹非索處於其游離形式、藥學上可接受的鹽或結晶形式。
5a.如實施方式4a所述之藥物組合，其包含約0.01mg至約2mg的卓匹非索。
6a.如實施方式5a所述之藥物組合，其包含約0.01mg至約0.3mg的卓匹非索。
7a.如實施方式5a所述之藥物組合，其包含約0.01mg、約0.015mg、約0.03mg、約0.04mg、約0.06mg、約0.07mg、約0.075mg、約0.08mg、約0.09mg、約0.1mg、約0.14mg、約0.15mg、約0.2mg、約0.25mg、或約0.3mg的卓匹非索。
8a.一種藥物組合，該藥物組合用於同時、順序或單獨投與，其包含：(i)化合物1；和(ii)卓匹非索。
9a.一種藥物組合，該藥物組合用於同時、順序或單獨投與，其包含：(i)化合物1；和(ii)從約0.01mg至約2mg的卓匹非索，例如從約0.01mg至約1mg的卓匹非索、從約0.015mg至約0.3mg的卓匹非索、從約0.015mg至約0.15mg的卓匹非索、從約0.03mg至約0.2mg的卓匹非索、或從約0.03mg至約0.1mg的卓匹非索。
10a.如實施方式1a至9a中任一項所述之藥物組合，其包含處於游離形式的化合物1。
11a.如實施方式1a至10a中任一項所述之藥物組合，其包含處於兩性離子形式的化合物1。
12a.如實施方式1a至11a中任一項所述之藥物組合，其中卓匹非索處於結晶形式。
13a.如實施方式1a至12a中任一項所述之藥物組合，其中卓匹非索處於游離形式。
14a.如實施方式1a至13a中任一項所述之藥物組合，其中所述組合係固定組合。
15a.如實施方式1a至14a中任一項所述之藥物組合，其中所述組合係自由組合。
16a.如實施方式1a至15a中任一項所述之藥物組合，其用於在預防、延遲或治療由整聯蛋白介導的病症，特別是肝臟疾病或腸道疾病中使用。
17a.一種預防、延遲或治療有需要的受試者的肝臟疾病或障礙、或腸道疾病或障礙之方法，該方法包括投與治療有效量的如實施方式1a至16a中任一項所述之藥物組合。
18a.如實施方式17a所述之方法，其中該肝臟疾病或障礙係選自由以下組成之群組的纖維化或硬化肝臟疾病或障礙：非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、肝硬化、酒精誘發型肝硬化、囊性纖維化相關性肝病(CFLD)、肝纖維化、和由任何上述疾病或由傳染性肝炎引起的肝臟進行性纖維化。
19a.如實施方式17a所述之方法，其中該肝臟疾病或障礙係非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、原發性膽汁性肝硬化(PBC)、肝纖維化、或肝硬化。
20a.如實施方式17a所述之方法，其中該肝臟疾病或障礙係非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)。
21a.如實施方式17a所述之方法，其中該肝臟疾病或障礙係非酒精性脂肪性肝炎(NASH)。
22a.如實施方式17a所述之方法，其進一步包括脂肪性肝炎的消退。
23a.如實施方式17a所述之方法，其中該肝臟疾病或障礙係肝纖維化。
24a.如實施方式17a至23a中任一項所述之方法，其進一步包括肝纖維化的改善。
25a.如實施方式17a至24a中任一項所述之方法，其進一步包括肝硬化的改善。
26a.如實施方式17a至25a中任一項所述之方法，其中在晚上投與該非膽汁酸衍生的FXR促效劑。
定義
出於解釋本說明書的目的，將應用下面的定義，並且在適宜的情況下，以單數形式使用的術語還包括複數形式，並且反之亦然。
如本文所用，術語「一個/一種(a或an)」等係指一個/一種或多個/多種。
如本文所用，術語「約」相對於數值x，意指+/- 10%，除非上下文另外規定。
如本文所用，術語「FXR促效劑」係指直接結合並上調FXR(可以稱為膽汁酸受體(BAR)或NR1H4(核受體亞家族1，組H，成員4)受體)的活性的藥劑。FXR促效劑可以充當FXR的促效劑或部分促效劑。例如，藥劑可以是小分子、抗體或蛋白，較佳的是小分子。例如在使用螢光共振能量轉移(FRET)無細胞測定的體外測定中，可以藉由幾種不同方法測量FXR促效劑的活性，如Pellicciari等人(Journal of Medicinal Chemistry[藥物化學雜誌]，2002卷15，第45期：3569-72)中所描述的。
如本文所用，術語「鹽(salt或salts)」係指本發明化合物的酸加成鹽或鹼加成鹽。「鹽」特別包括「藥學上可接受的鹽」。
如本文所用，術語「胺基酸軛合物」係指化合物與任何合適的胺基酸的軛合物。較佳的是，化合物的此類合適的胺基酸軛合物將具有在膽汁或腸液中完整性增強的附加優點。合適的胺基酸包括但不限於甘胺酸、牛磺酸和 醯基葡萄糖醛酸苷。因此，本發明涵蓋，例如，FXR促效劑或αVβ1整聯蛋白抑制劑(即，化合物1或卓匹非索)的甘胺酸、牛磺酸和醯基葡萄糖醛酸苷軛合物。
如本文所用，術語「藥學上可接受的」意指並不干擾一種或多種活性成分的生物活性的有效性的無毒性材料。
如本文所用，術語「前驅藥」係指在體內轉化成本發明化合物的化合物。前驅藥係活性的或非活性的。在將前驅藥投與給受試者後，前驅藥藉由體內生理作用(例如水解、代謝等)被化學改性成本發明之化合物。製備和使用前驅藥中所涉及的適用性和技術係熟悉該項技術者所熟知的。合適的前驅藥通常是藥學上可接受的酯類衍生物。
如本文所用，術語「患者」或「受試者」可互換使用，並且是指人。
如本文所用，術語「治療(treat、treating或treatment)」任何疾病或障礙在一個實施方式中是指改善疾病或障礙(即減緩或阻止或減少疾病或其至少一種臨床症狀或病理特徵的發展)。在另一個實施方式中，「治療」係指減輕或改善疾病的至少一種身體參數或病理特徵，例如，包括不能被受試者辨別的那些。在又另一個實施方式中，「治療」係指在身體上(例如，穩定至少一種可辨別的或不可辨別的症狀)或在生理上(例如，穩定身體參數)或在這兩個方面調節疾病或障礙。在又另一個實施方式中，「治療」係指預防或延遲疾病或障礙，或與其相關聯的至少一種症狀或病理特徵的發作或發展或進展。在又另一個實施方式中，「治療」係指預防或延遲疾病進展至更晚期或更嚴重的病症，例如肝硬化；或預防或延遲對肝移植的需求。例如，使用例如本文揭露的任何組合治療NASH可以指改善、減輕或調節與NASH相關聯的至少一種症狀或病理特徵；例如肝性脂肪變性、肝細胞氣球樣變性、肝臟炎症和纖維化；例如可以指減緩進展，減少或終止與NASH相關聯的至少一種症狀或病理特 徵，例如肝性脂肪變性、肝細胞氣球樣變性、肝臟炎症和纖維化。還可以指預防或延遲肝硬化或對肝移植的需求。
如本文所用，術語「治療有效量」係指本發明藥物組合的整聯蛋白抑制劑和/或至少一種另外的治療劑單獨或與例如FXR促效劑和/或αVβ1整聯蛋白抑制劑(例如，卓匹非索和/或化合物1)組合的量，該量足以實現各自所述效果。因此，FXR促效劑和/或αVβ1整聯蛋白抑制劑(例如，卓匹非索和/或化合物1)的用於治療或預防如上文所定義的肝臟疾病或障礙的治療有效量係足以單獨或組合治療或預防這種疾病或障礙的量。
「治療方案」意指疾病的治療的模式，例如在疾病或障礙的治療期間使用的給藥的模式。
如本文所用，如果受試者將在生物學上、在醫學上或在生活品質上從治療中受益，則此類受試者係「需要」此類治療的。
如本文所用，術語「肝臟疾病或障礙」涵蓋以下的一種、多種或全部：非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、藥物誘發型膽管損傷、膽結石、肝硬化、酒精誘發型肝硬化、囊性纖維化相關性肝病(CFLD)、膽管阻塞、膽石症和肝纖維化。
如本文所用，術語NAFLD可涵蓋疾病的不同階段：肝性脂肪變性、NASH、纖維化和硬化。
如本文所用，術語NASH可涵蓋脂肪變性、肝細胞氣球樣變性和小葉炎症。
如本文所定義，「組合」係指一個單位劑型(例如，膠囊、片劑或藥囊)的固定組合、自由(即非固定)組合、或用於組合投與的成套套組(kit)，其中本發明之αVβ1整聯蛋白抑制劑和一種或多種「組合伴侶」(即至少一種另外的治療劑，例如非膽汁酸衍生的菌綠烯醇X受體(FXR)促效劑或其藥學上可接 受的鹽或溶劑化物，或也稱為「共藥劑」)可以在同一時間獨立地或在時間間隔內單獨地投與，尤其是在該等時間間隔允許組合伴侶顯示合作作用(例如，協同作用)的情況下。
如本文所用的術語「共同投與」或「組合投與」等意在涵蓋向有需要的單個受試者(例如患者)投與該至少一種另外的治療劑，並且該至少一種另外的治療劑旨在包括治療方案，其中不需要藉由相同的投與途徑和/或在相同時間投與該αVβ1整聯蛋白抑制劑和該至少一種另外的治療劑如FXR促效劑。本發明組合的每種組分可以同時或順序以任意順序投與。共同投與包括同時、順序、重疊、間隔、連續投與及其任何組合。
如本文所用的術語「藥物組合」意指由多於一種活性成分組合(例如混合)產生的藥物組成物，並且包括活性成分的固定組合和自由組合兩者。
術語「固定組合」意指活性成分，即1)αVβ1整聯蛋白抑制劑，例如化合物1(如本文所定義)和2)至少一種另外的治療劑，例如非膽汁酸衍生的FXR促效劑，例如卓匹非索(如本文所定義)，兩者都同時地以單個實體或劑量的形式投與於患者。
術語「自由組合」意指如本文定義的活性成分均作為單獨實體同時、同步或順序投與於患者，沒有特定的時間限制，並且以任意順序投與，其中此類投與在患者體內提供治療有效水平的兩種化合物。
「同時投與」意指在同一天投與1)αVβ1整聯蛋白抑制劑，例如化合物1(如本文所定義)和2)至少一種另外的治療劑，例如FXR促效劑，例如卓匹非索(如本文所定義)。兩種活性成分可以同時投與(對於固定或自由組合)或一次投與一種(對於自由組合)。
根據本發明，「順序投與」可意指在兩天或更多天的連續共同投與期間，在任一給定日僅投與1)αVβ1整聯蛋白抑制劑，例如化合物1(如本文所 定義)和2)至少一種另外的治療劑，例如FXR促效劑，例如卓匹非索(如本文所定義)中的一種。
「重疊投與」意指在兩天或更多天的連續共同投與期間，至少一天進行同時投與以及至少一天僅投與1)αVβ1整聯蛋白抑制劑，例如化合物1(如本文所定義)和2)至少一種另外的治療劑，例如FXR促效劑，例如卓匹非索(如本文所定義)中的一種。
「連續投與」意指沒有任何空白日的共同投與的時期。如上所述，連續投與可以是同時的、順序的或重疊的。
術語「卓匹非索」意指2-[3-({5-環丙基-3-[2-(三氟甲氧基)苯基]-1,2-
Figure 109145129-A0202-12-0018-26
唑-4-基}甲氧基)-8-氮雜雙環[3.2.1]辛-8-基]-4-氟-1,3-苯并噻唑-6-甲酸(如下所示)。該術語包括其立體異構物、鏡像異構物(游離形式)、兩性離子、多晶型物、藥學上可接受的鹽、溶劑化物、水合物、前驅藥、酯或胺基酸軛合物；並且還旨在表示化合物的未標記形式以及同位素標記形式。
Figure 109145129-A0202-12-0018-4
術語「化合物1」意指(S)-2-(4-甲基四氫-2H-哌喃-4-甲醯胺基)-9-(5,6,7,8-四氫-1,8-
Figure 109145129-A0202-12-0018-20
啶-2-基)壬酸(如下所示)。該術語包括其立體異構物、鏡像異構物(游離形式)、兩性離子、多晶型物、藥學上可接受的鹽、溶劑化物、水合物、前驅藥、酯或胺基酸軛合物；並且還旨在表示化合物的未標記形式以及同位素標記形式。
Figure 109145129-A0202-12-0019-7
除非另有說明，否則化合物1或另外的治療劑的量係指處於游離形式的各自的量。
α V β 1 整聯蛋白抑制劑
根據本發明之實施方式，αVβ1整聯蛋白抑制劑係化合物1。如上文所定義，術語「化合物1」還包括其立體異構物、鏡像異構物(游離形式，包括兩性離子)、多晶型物、藥學上可接受的鹽、溶劑化物、水合物、前驅藥、酯或胺基酸軛合物，例如HCl或TFA鹽。
在一個實施方式中，胺基酸軛合物係甘胺酸軛合物、牛磺酸軛合物或醯基葡萄糖醛酸苷軛合物。
在一個實施方式中，化合物1還旨在表示化合物的未標記形式以及同位素標記形式。
另外的治療劑或組合伴侶
術語「另外的治療劑」和「組合伴侶」在本文中可互換使用。αVβ1整聯蛋白抑制劑和FXR促效劑的組合可以解決NASH中涉及的代謝、抗炎和抗纖維化途徑。根據本發明之實施方式，至少一種另外的治療劑係非膽汁酸衍生的FXR促效劑，例如卓匹非索，該至少一種另外的治療劑治療或預防有需要的受試者的肝臟疾病或障礙、或腸道疾病或障礙。如上文所定義，術語「卓匹非索」 還包括其立體異構物、鏡像異構物(游離形式)、兩性離子、多晶型物、藥學上可接受的鹽、溶劑化物、水合物、前驅藥、酯或胺基酸軛合物。
在一個實施方式中，胺基酸軛合物係甘胺酸軛合物、牛磺酸軛合物或醯基葡萄糖醛酸苷軛合物。
藥物組成物
αVβ1整聯蛋白抑制劑或至少一種另外的治療劑各自可用作含有藥學上可接受的載體的藥物組成物。例如，除αVβ1整聯蛋白抑制劑或FXR促效劑之外，這種組成物還可以含有載體、各種稀釋劑、填充劑、鹽、緩衝液、穩定劑、增溶劑和本領域已知的其他材料。載體的特徵將取決於投與途徑。
用於所揭露之方法的藥物組成物可以是含有αVβ1整聯蛋白抑制劑(例如，化合物1)的藥物組成物和含有非膽汁酸FXR促效劑(例如，卓匹非索)的藥物組成物的自由組合，其各自如上所述。
用於所揭露方法的藥物組成物也可以是單個劑量單位中的組合藥物組成物，其含有αVβ1整聯蛋白抑制劑和至少一種另外的治療劑用於治療特定靶向障礙。例如，藥物組成物包括αVβ1整聯蛋白抑制劑和非膽汁酸衍生的FXR促效劑用於治療或預防肝臟疾病或障礙、或腸道疾病或障礙。此類另外的治療劑可以包括在組合藥物組成物中以產生與αVβ1整聯蛋白抑制劑的協同作用。
投與模式
可以將本發明之藥物組成物配製為與其預期投與途徑相容(例如口服組成物通常包括惰性稀釋劑或可食用載體)。投與途徑的其他非限制性實例包括胃腸外(例如，靜脈內)、皮內、皮下、口服(例如，吸入)、經皮(局部)、跨黏膜和直腸投與。
疾病
如上文所定義，纖維化或硬化疾病或障礙可以是肝臟疾病或障礙，或腎纖維化。
在本發明之一個實施方式中，(如本文定義的)藥物組合用於治療或預防纖維化疾病或障礙，例如肝臟疾病或障礙，例如慢性肝臟疾病，例如選自以下群組的肝臟疾病或障礙，該群組由以下組成：PBC、NAFLD、NASH、藥物誘發型膽管損傷、膽結石、肝硬化、酒精誘發型肝硬化、囊性纖維化相關性肝病(CFLD)、膽管阻塞、膽石症、肝纖維化。在本發明之一個實施方式中，(如本文定義的)藥物組合用於治療或預防纖維化，例如腎纖維化或肝纖維化。
根據本發明之一個實施方式，肝臟疾病或障礙係指NAFLD，例如NAFLD的任何階段，例如脂肪變性、NASH、纖維化和硬化中的任一種。
在本發明之一個實施方式中，提供本發明之藥物組合，用於改善肝纖維化而不使脂肪性肝炎惡化。
在本發明之另一個實施方式中，提供本發明之藥物組合，用於在不惡化的情況下獲得脂肪性肝炎的完全消退，例如肝纖維化改善。
在本發明之另一個實施方式中，提供本發明之藥物組合，用於預防或治療脂肪性肝炎和肝纖維化。
在本發明之又另一個實施方式中，提供本發明之藥物組合，用於減輕NAS評分的至少一個特徵，即肝性脂肪變性、肝臟炎症和肝細胞氣球樣變性之一；例如NAS評分的至少兩個特徵，例如肝性脂肪變性和肝臟炎症，或肝性脂肪變性和肝細胞氣球樣變性，或肝細胞氣球樣變性和肝臟炎症。
在本發明之另一個實施方式中，提供本發明之藥物組合，用於減輕NAS評分和肝纖維化的至少一個或兩個特徵，例如用於減輕肝臟炎症和肝纖維化，或肝性脂肪變性和肝纖維化或肝細胞氣球樣變性和肝纖維化。
在本發明之又另一個實施方式中，提供了藥物組合，用於治療或預防階段3纖維化至階段1纖維化，例如，階段3和/或階段2和/或階段1纖維化。
在本發明之一個實施方式中，(如本文定義的)藥物組合用於治療或預防腸道疾病或障礙。
患者受試者
根據本發明，接受本發明組合的患者可能受到影響或有纖維化疾病或障礙(例如，肝纖維化疾病或障礙)的風險。
給藥方案
根據使用的化合物、目標疾病或障礙以及這種疾病或障礙的階段，給藥方案(即投與劑量和/或頻率)可以變化。
給藥頻率將尤其取決於治療方案的階段。
根據本發明，卓匹非索(如上文定義的)以例如約0.01mg、約0.015mg、約0.03mg、約0.04mg、約0.06mg、約0.07mg、約0.075mg、約0.08mg、約0.09mg、約0.1mg、約0.14mg、約0.15mg、約0.2mg、約0.25mg、或約0.3mg的劑量投與。此類劑量可用於卓匹非索的口服投與。
用於治療肝纖維化疾病或障礙的套組
因此，提供了藥物套組，該藥物套組包含：a)αVβ1整聯蛋白抑制劑，例如化合物1；b)至少一種另外的治療劑，例如FXR促效劑，例如非膽汁酸 衍生的FXR促效劑，例如卓匹非索；和c)用於向受肝臟疾病或障礙影響的受試者投與該αVβ1整聯蛋白抑制劑和該至少一種另外的治療劑的裝置；以及視需要的d)使用說明書。
在本發明之一個實施方式中，提供了組合包裝，該組合包裝包含：a)αVβ1整聯蛋白抑制劑，例如化合物1；和b)至少一個單獨劑量的如上文定義的至少一種另外的治療劑，例如至少一個單獨劑量的FXR促效劑，例如非膽汁酸衍生的FXR促效劑，例如卓匹非索。該組合包裝還可以包含使用說明書。
實例
本文所述之實例和實施方式僅用於舉例說明目的，其各種修飾或改變對於熟悉該項技術者將是明瞭的，並包括在本申請的精神和範圍內和所附申請專利範圍之範圍內。本文引用的所有出版物、專利、和專利申請都出於所有目的，藉由引用特此併入。
實例1-合成
(S)-2-(4-甲基四氫-2H-哌喃-4-甲醯胺基)-9-(5,6,7,8-四氫-1,8-
Figure 109145129-A0202-12-0023-21
啶-2-基)壬酸(化合物1)可根據以下方案A製備。
方案A
Figure 109145129-A0202-12-0024-8
步驟1：
Figure 109145129-A0202-12-0024-10
向(S)-2-胺基-9-(5,6,7,8-四氫-1,8-
Figure 109145129-A0202-12-0024-27
啶-2-基)壬酸甲酯在DMF中的溶液中添加DIPEA(10當量)，隨後添加4-甲基四氫-2H-哌喃-4-甲酸(1.1當量)和HATU(1.1當量)。使反應在室溫下攪拌，同時藉由LCMS監測反應進程。當起始材料已被消耗完時，將反應用1N NaOH稀釋，並用EA萃取，用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥並濃縮。將粗殘餘物藉由矽膠層析法純化，以得到所示化合物。
步驟2：
Figure 109145129-A0202-12-0024-11
向所示酯在適當的溶劑混合物(如THF/MeOH/H2O或THF/EtOH/H2O)中的溶液中添加LiOH(3-5當量)。使反應在室溫下攪拌，同時藉由LCMS監測反應進程。完成後，將反應濃縮並藉由反相製備型HPLC純化，以得到呈TFA鹽的所示羧酸。LCMS理論值m/z=432.2[M+H]+，實測值432.3。
實例2-固相整聯蛋白α V β 1 或α V β 6 結合測定
將微板用在PBS(100μL/孔，25℃，過夜)中的重組人整聯蛋白αVβ1或αVβ6(2μg/mL)塗覆。除去塗層溶液，將其用洗滌緩衝液(0.05%吐溫20；0.5mM MnCl2；在1 x TBS中)洗滌。將板用200μL/孔的封閉緩衝液(1% BSA；5%蔗糖；0.5mM MnCl2；在1 x TBS中)在37℃封閉2h。添加化合物1和重組TGFβ1 LAP(0.67μg/mL)在結合緩衝液(0.05% BSA；2.5%蔗糖；0.5mM MnCl2；在1 x TBS中)中的稀釋液。將板在25℃孵育2小時，洗滌，並與生物素-抗hLAP孵育1小時。藉由過氧化物酶軛合的鏈黴親和素檢測結合抗體。藉由四參數邏輯回歸計算測試化合物的IC50值。
實例3-基於鄰近的整聯蛋白α V β 1 或α V β 6 結合測定
如前所述(Ullman EF等人，Luminescent oxygen channeling immunoassay：Measurement of particle binding kinetics by chemiluminescence.[發光氧通道免疫測定：藉由化學發光法測量粒子結合動力學]Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美國國家科學院院刊]，第91卷，第5426-5430頁，1994年6月)，使用ALPHASCREEN®(珀金埃爾默公司(Perkin Elmer)，沃爾瑟姆，麻塞諸塞州)基於鄰近的測定(一種基於珠粒的非放射性放大發光鄰近均相測定)測試化合物1的αVβ1或αVβ6整聯蛋白生化效力。遵循製造商的建議，為了測定抑制劑與人整聯蛋白αVβ1或αvβ6結合的效力，將抑制劑化合物和整聯蛋白與重組TGFβ1 LAP 和生物素化抗LAP抗體加受體和供體珠一起孵育。將供體珠用鏈黴親和素塗覆。受體珠具有次氮基三乙酸鎳螯合劑，用於與人整聯蛋白αVβ1或αvβ6上的6 x His-標籤結合。所有孵育均在室溫下於pH 7.5的50mM Tris-HCl，分別補充有1mM CaCl2和MgCl2的0.1% BSA中進行。試劑的添加順序如下：1.將αVβ1或αVβ6整聯蛋白、測試抑制劑化合物1、LAP、生物素化抗LAP抗體和受體珠均一起添加。2.2小時後，添加供體珠。再孵育30min後，讀取樣本。
實例4-α V β 1 或α V β 6 整聯蛋白抑制的結果
針對實例2和3中獲得的化合物1的αVβ1和αVβ6整聯蛋白抑制所獲得的IC50值在下表1中：
Figure 109145129-A0202-12-0026-12
實例5-體內功效研究1
將成年雄性C57BL/6J小鼠圈養，它們可以任意獲取水和食物。給小鼠飼喂HF/NASH飲食(40千卡%脂肪，2%膽固醇，40千卡%碳水化合物，Research Diets(研究飲食公司)D09100301或SSniff Special Diets(SSniff特殊飲食公司)，飲用水中補充有果糖-蔗糖溶液(42g/L，按重量計55%果糖和45%蔗糖))。年齡匹配的動物維持規律飲食(正常飲食(ND)，Kliba Nafag公司，3892)並且接受自來水。小鼠接受HF/NASH飲食共20週。
在HF/NASH飼喂的第8週，根據體重、總瘦肉和脂肪量以及藉由MRI測量的肝臟脂肪，將HF/NASH動物隨機分為治療組和未治療組。該研究包 括四組小鼠：第1組：正常飲食/水(n=7)；第2組：HF/NASH+卓匹非索(n=9)；第3組：HF/NASH+化合物1(n=9)；和第4組：HF/NASH+卓匹非索+化合物1(n=9)。每週測量體重。使用小鼠身體組成核磁共振(NMR)分析儀，在HF/NASH飼喂的第0、4、7、14和20週測量脂肪和瘦肉量；並且使用磁共振成像(MRI)，在HF/NASH飼喂的第8、12、16和20週評估肝臟脂肪。
實例6-體內功效研究2
該研究涉及14天妊娠的C57BL/6小鼠。藉由在出生後單次皮下注射200μg鏈脲菌素(美國西格瑪公司(Sigma，USA))並在4週齡(第28±2天)後任意飼喂高脂飲食(HFD，57%千卡脂肪，CLEA日本公司(CLEA Japan)，日本)來建立NASH。分別在治療開始前一天，將6週齡(第42±2天)的12隻NASH小鼠隨機分為六組，並將9週齡(第63±2天)的12隻NASH小鼠隨機分為六組。向NASH動物從6週齡至9週齡(研究1)或從9週齡至12週齡(研究2)給予以下：媒介物、卓匹非索、化合物1、卓匹非索+化合物1。研究1及研究2中均包括12隻小鼠的非疾病媒介物-對照組。任意為該等動物飼喂正常飲食(CE-2；CLEA日本公司)。
收集PK樣本並儲存在
Figure 109145129-A0202-12-0027-22
-60℃下。根據下面的給藥方案為動物給藥。在研究治療最後一天，在最後一個早間劑量後5小時處死每隻動物。
給藥：
- 以具有1% Tween® 80的0.5%(w/v)甲基纖維素在無菌注射用水(USP)中製備卓匹非索。
- 以含有0.5%(v/v)聚山梨醇酯80(NF)的0.5%(w/v)甲基纖維素(400cP)水溶液在反滲水中製備化合物1。
- 通常，每天投與一次媒介物、單一療法和聯合療法。
測量：
- 每天測量或監測以下參數：小鼠的個體體重、存活、臨床徵象和行為。
- 藥物動力學測量：按每種化合物每個時間點從4隻動物收集PK樣本。對於單一療法組和組合組兩者，在第6天的第1小時和第10天的第24小時(每個時間點n=4)採集化合物1的PK樣本。每組使用前8隻動物，每隻動物僅收集一個PK樣本。
治療測量的終點：
在9週齡(研究1)或12週齡(研究2)處死小鼠。在第9週將未接受任何治療或媒介物的8隻NASH動物處死作為「基線」，以便比較經治療的動物中觀察到的任何纖維化消退事件。
收集以下樣本：血漿、肝臟(對於每隻動物，在最後一個劑量後5小時收集用於基因表現分析的新鮮肝臟樣本)、糞便。測量器官重量。
進行以下生化測定：全血中的非空腹血糖，藉由Life Check(日本艾迪爾公司(Eidia,Japan))測定；血清ALT，藉由FUJI DRI-CHEM(日本富士膠片公司(Fujifilm,Japan))測定；血清甘油三酯；血清MCP-1、RANTES(CCL5)和MIP-1α/MIP-1定量，藉由商業ELISA套組測定；肝臟甘油三酯，藉由甘油三酯E檢測套組(日本和光(Wako,Japan))測定；肝臟羥脯胺酸定量，藉由水解法測定；肝臟切片的組織學分析；HE染色和NAFLD活動度評分估算；天狼星紅染色和纖維化面積(扣除和不扣除血管周圍間隙)估算；油紅染色和脂肪沈積面積估算；F4/80免疫組織化學染色和炎症面積估算；α-SMA免疫組織化學染色和α-SMA陽性面積估計，使用來自肝臟的總RNA進行基因表現測定。
對以下進行即時RT-PCR分析：MCP-1、MIP-1α/β、RANTES、Emr1、CD68、TGF-β1、CCR2/5、TIMP-1、Cola1A1、TNF、IL-10、MMP-9、α-SMA 和CX3CR1/CX3CL1、SHP(小的異源二聚體伴侶)、BSEP(膽汁鹽輸出泵)、Cyp8b1。
使用單因素方差分析(one-way ANOVA)進行統計學檢驗，接著視情況進行鄧尼特檢驗(Dunnett’s test)和曼-惠特尼檢驗(Mann-Whitney test)，進行多組比較。P值<0.05被認為具有統計學意義。
實例7-化合物1抑制促纖維化基因表現
在使用來自NASH患者外植體和來自肝纖維化和NASH的齧齒動物模型的肝硬化肝組織產生的精密切割肝切片中，測量化合物1抑制促纖維化基因的表現和減少纖維化的生物標誌物的能力。
在來自5名肝硬化NASH患者外植體的精密切割肝切片中，用化合物1治療兩天后，膠原蛋白1型α1(COL1A1)的基因表現顯著降低了39%，並且金屬蛋白酶抑制劑1(TIMP1)的基因表現也相應降低(圖1)。數據為5名肝硬化NASH患者的平均值+/-標準差。在不同的組中，DMSO被用作溶劑並以恒定濃度(0.1%)使用。ALK5被用作陽性對照。化合物1還顯著降低了培養基中的FBN-C(26%)，即纖連蛋白的C-末端片段(Bager等人2016)的水平。PRO-C1(34%)、PRO-C3(16%)和PRO-C4(15%)，即各個膠原蛋白亞型的片段(Leeming等人2010、Nielsen等人2013、Leeming等人2013)在用化合物1處理的培養基中也同樣減少，但未達到統計學意義。
實例8-化合物1在肝纖維化小鼠模型中的抗纖維化活性
在簡短的3週鼠肝CCl4肝纖維化模型中建立了化合物1的抗纖維化活性。CCl4係一種肝毒素，其注射到小鼠體內可導致肝纖維化(Constandinou 2005)。在損傷的最後一週給予化合物1。
使用所有劑量的化合物1，肝臟中磷酸化SMAD3(pSMAD3)/SMAD3的水平，即活性TGF-β信號傳導的讀數均顯著降低，表明TGF-β信號傳導的降低。基因表現分析表明，使用所有劑量的化合物1，肝臟Col1a1、Col1a2和Col3a1的表現均顯著降低。使用所有劑量的化合物1，肝臟OHP濃度未顯著變化。
總之，使用化合物1進行治療性治療可顯著降低肝臟中pSMAD3/SMAD3的水平、肝臟膠原蛋白基因表現和肝臟OHP濃度。
實例9-化合物1在NASH小鼠模型中的抗纖維化活性
化合物1在CDAHFD NASH小鼠模型中也被證明係有效的抗纖維化劑。CDAHFD損傷係顯示出肝臟脂肪堆積、炎症和纖維化的NASH齧齒動物模型(Matsumoto 2013)。進行了三種類型的研究：1)預防性，化合物1在簡短的3週CDAHFD模型中；2)治療性，化合物1在11-12週CDAHFD模型中持續6週；以及3)化合物1在10週CDAHFD模型中持續4週。
在兩項獨立研究中，化合物1在簡短的3週CDAHFD模型中以低、中和高劑量進行了預防性測試。在高劑量下，肝臟中的pSMAD3水平降低了19%，表明TGF-β的活化減少。在兩項研究中，在高劑量下，化合物1將肝臟OHP濃度顯著降低了約30%。在研究之一中在高劑量下觀察到膠原蛋白的基因表現顯著降低，而在兩項研究中在高劑量下Ehhadh(一種參與脂肪酸代謝的過氧化物酶體雙功能酶的基因)的表現顯著升高。
在3項獨立研究中，化合物1在11至12週CDAHFD損傷研究中以中、高和最高劑量進行了治療性測試。所有劑量均可使肝臟OHP顯著降低至多38%，並且使pSMAD3水平降低至多57%。化合物1還導致OHP濃度的顯著降低(24%)。膠原蛋白的基因表現(Col1a1和Col3a1)在高劑量和最高劑量下顯著 降低，而且結締組織生長因子(Ctgf)、基質金屬蛋白酶2(Mmp-2)、和Timp1的促纖維化標誌物的基因表現也顯著降低。參與脂肪酸代謝的過氧化物酶體醯基輔酶A氧化酶1(Acox1)和Ehhadh的基因表現顯著增加。組織的組織學分析顯示膠原蛋白面積顯著減少，並且藉由第二諧波生成成像確定的複合纖維化評分表明膠原蛋白纖維的數量和品質顯著降低。
在10週CDAHFD研究中，將化合物1的功效與泛αv抑制劑CWHM12(3S)-N-[3-羥基-5-[(1,4,5,6-四氫-5-羥基-2-嘧啶基)胺基]苯甲醯基]甘胺醯基-3-[3-溴-5-(1,1-二甲基乙基)苯基]-β-丙胺酸)的功效進行比較。使用化合物1和CWHM12，pSMAD3水平分別降低了40%和61%，並且OHP濃度分別降低了24%和30%。儘管使用CWHM12進行的泛αv抑制可降低pSMAD和OHP水平，但選擇性αvβ1抑制足以產生抗纖維化活性。
總之，在CDAHFD NASH小鼠模型中進行了組織學檢查，使用化合物1(αvβ1的小分子拮抗劑)進行預防性或治療性治療可阻斷SMAD3磷酸化，並顯著降低OHP水平、膠原蛋白基因表現和膠原蛋白沈積。該等發現在多項研究中得到了重複。
實例10-化合物1的安全性、耐受性、PK和PD的首次人體研究
A部分(單次遞增劑量研究)
該研究的A部分係針對最多50位健康男性和女性(無生育可能)參與者進行的關於化合物1的安全性、耐受性和PK的首次人體、隨機、雙盲、安慰劑對照、平行組、單次遞增劑量研究。四十名參與者將被納入至多5個連續群組。
B部分(多次遞增劑量研究)
該研究的B部分正在進行中，並且是在該研究的A部分的前2個群組完成後開始的。B部分中的劑量由該研究的A部分確定，並且不高於在該研究的A部分中投與的最高劑量。
該研究的B部分係針對最多40位健康男性和女性(無生育可能)參與者進行的關於投與化合物1持續7天的PK、PD、安全性和耐受性的隨機、雙盲、安慰劑對照、平行組、多次遞增劑量研究。
迄今為止，化合物1在所有健康志願者中耐受性良好。
實例11-用於治療非酒精性脂肪性肝炎的卓匹非索：來自階段2b研究FLIGHT-FXR的基於基線體質指數的期中結果。
FLIGHT-FXR(NCT 02855164)係階段2、隨機、雙盲、多中心、安慰劑對照試驗，具有適應性設計，以評估卓匹非索在NASH(非酒精性脂肪性肝炎)患者中的安全性、耐受性和功效。下文提供了來自卓匹非索60μg、卓匹非索90μg、和安慰劑臂的數據。
將患者分為兩個亞組：更低BMI亞組(BMI<30kg/m2(亞裔)或<35kg/m2(非亞裔))和更高BMI亞組(BMI
Figure 109145129-A0202-12-0032-35
30kg/m2(亞裔)或
Figure 109145129-A0202-12-0032-36
35kg/m2(非亞裔))。
研究目標如下：
- 為了藉由BMI亞組，確定針對腸道中的FXR靶標接合的標誌物(FGF19)的卓匹非索隨時間的劑量反應關係。
- 為了藉由BMI亞組，確定針對肝臟炎症的標誌物(丙胺酸胺基轉移酶[ALT])、靶標接合和氧化應激的標誌物(γ穀胺醯轉移酶[GGT])，並且針對藉由磁共振成像質子密度脂肪分數(MRI-PDFF)測量的肝臟脂肪含量(LFC)的變化，卓匹非索在12週時的劑量反應關係。
- 為了藉由BMI亞組確定脂質譜。
Figure 109145129-A0202-12-0033-13
60μg卓匹非索、90μg卓匹非索、和安慰劑的結果和功效
表3(下文)顯示了在每個治療臂中觀察到的結果。
Figure 109145129-A0202-12-0033-14
Figure 109145129-A0202-12-0034-15
†BMI<30kg/m2(亞裔)或<35kg/m2(非亞裔)；‡BMI
Figure 109145129-A0202-12-0034-30
30kg/m2(亞裔)或
Figure 109145129-A0202-12-0034-31
35kg/m2(非亞裔)；§藉由MRI-PDFF測量
˙卓匹非索對靶標接合的標誌物的影響：FGF19：在第6週時進行FGF19的評估。在兩個BMI亞組中，與給藥前相比，給藥後4小時觀察到FGF19水平的劑量反應增加。在第6週，在更低BMI亞組中，從給藥前的FGF19的幾何平均百分率變化(60μg的卓匹非索=360.2，並且90μg的卓匹非索=585.8)高於在更高BMI亞組中的平均百分率變化(60μg的卓匹非索=276.9，並且90μg的卓匹非索=446.9)。
˙卓匹非索對肝臟炎症的標誌物的影響：ALT：在來自兩個BMI亞組的患者中，用90μg的卓匹非索劑量觀察到從基線的ALT水平的快速並且持續的下降，在具有更低BMI的組中更顯著。
˙卓匹非索對氧化應激的標誌物GGT的影響：在兩個BMI亞組中，用卓匹非索觀察到GGT水平的劑量反應降低，在具有更低BMI的組中更顯著。在第12週，相比在更高BMI亞組中，60μg的卓匹非索(-38.4)和90μg的卓匹非索(-48.7)，在更低BMI中，用60μg的卓匹非索(-47.0)和90μg的卓匹非索(-61.3)，GGT的幾何平均百分率變化更高。
˙卓匹非索對肝臟脂肪含量的影響：在第12週，與更高BMI亞組(安慰劑=-5.5；卓匹非索60μg=-12.9，並且卓匹非索90μg=-11.4)相比，在更低BMI亞組中的所有臂中，平均百分率變化更大(安慰劑=-13.1；卓匹非索60μg=-19.9， 並且卓匹非索90μg=-18.8)。相比更高BMI亞組，在更低BMI亞組中，具有肝臟脂肪含量(LFC)的絕對降低>5%的患者的比例更高。
˙卓匹非索對C4的影響：在第12週，在所有卓匹非索治療組中，觀察到7-羥基-4-膽甾烯-3-酮(C4)的降低。在更高BMI亞組中，此降低更明顯。然而，C4經歷了日變化，因此BMI對C4的影響造成了進一步調查。
只要涉及包含卓匹非索的配製物的安全性，不良事件(包括瘙癢)的發生率就是臂之間可比較的。在兩個BMI亞組中，脂質譜係可比較的。在兩個BMI亞組中，來自此階段2b研究的前兩部分的期中結果提供了卓匹非索的靶標接合、抗炎、和抗脂肪變性效果的證據。然而，在更低BMI亞組中，卓匹非索對ALT、GGT、和LFC的影響更明顯。研究還顯示，在兩個亞組中，脂質譜係可比較的，並且在研究中，跨越治療臂，事件(包括瘙癢)的比率係可比較的。在更高BMI亞組中，按體重接受更低劑量，更低反應的一致趨勢支持測試更高卓匹非索劑量(例如，140和200μg/天)。
所有參考文獻，例如出版物、專利、專利申請和公佈的專利申請藉由引用以其全文併入本文。
儘管為了清楚理解的目的已經藉由說明和舉例的方式相當詳細地描述了前述發明，但對於熟悉該項技術者顯而易見的是，可實施某些微小的改變和修改。因此，該說明和實例不應當解釋為限制本發明之範圍。
Figure 109145129-A0202-11-0002-1

Claims (10)

  1. 一種藥物組合，該藥物組合包含1)αVβ1整聯蛋白抑制劑和2)至少一種另外的治療劑，用於同時、順序或單獨投與。
  2. 如請求項1所述之藥物組合，其中該αVβ1整聯蛋白抑制劑係(S)-2-(4-甲基四氫-2H-哌喃-4-甲醯胺基)-9-(5,6,7,8-四氫-1,8-
    Figure 109145129-A0202-13-0001-23
    啶-2-基)壬酸，其立體異構物、互變異構物、鏡像異構物、藥學上可接受的鹽、前驅藥、酯或胺基酸軛合物。
  3. 如請求項1或2所述之藥物組合，其中該至少一種另外的治療劑係非膽汁酸衍生的FXR促效劑，該非膽汁酸衍生的FXR促效劑係2-[(1R,3r,5S)-3-({5-環丙基-3-[2-(三氟甲氧基)苯基]-1,2-
    Figure 109145129-A0202-13-0001-32
    唑-4-基}甲氧基)-8-氮雜雙環[3.2.1]辛-8-基]-4-氟-1,3-苯并噻唑-6-甲酸，其藥學上可接受的鹽、前驅藥、酯或胺基酸軛合物。
  4. 如請求項1至3中任一項所述之藥物組合，其中該藥物組合係固定劑量組合。
  5. 如請求項1至3中任一項所述之藥物組合，其中該藥物組合係自由組合。
  6. 如請求項1至5中任一項所述之藥物組合在製造用於預防、延遲或治療肝臟疾病或障礙的藥物中之用途。
  7. 如請求項6所述之用途，其中該肝臟疾病或障礙係纖維化或硬化肝臟疾病或障礙。
  8. 一種預防、延遲或治療有需要的患者的肝臟疾病或障礙之方法，該方法包括投與治療有效量的如請求項1至5中任一項所述之藥物組合。
  9. 如請求項8所述之方法，其中該肝臟疾病或障礙係選自由以下組成之群組的纖維化或硬化肝臟疾病或障礙：非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、肝硬化、酒精誘發型肝硬化、囊性纖維化相關性肝病(CFLD)、肝纖維化、和由任何上述疾病或由傳染性肝炎引起的肝臟進行性纖維化。
  10. 如請求項8所述之方法，其中該肝臟疾病或障礙係非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、肝纖維化、或肝硬化。
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