KR20130092558A - 중수소화된 n-에틸-n-페닐-1,2-다이하이드로-4-하이드록시-5-클로로-1-메틸-2-옥소퀴놀린-3-카복스아마이드, 그의 염 및 용도 - Google Patents

중수소화된 n-에틸-n-페닐-1,2-다이하이드로-4-하이드록시-5-클로로-1-메틸-2-옥소퀴놀린-3-카복스아마이드, 그의 염 및 용도 Download PDF

Info

Publication number
KR20130092558A
KR20130092558A KR1020137003480A KR20137003480A KR20130092558A KR 20130092558 A KR20130092558 A KR 20130092558A KR 1020137003480 A KR1020137003480 A KR 1020137003480A KR 20137003480 A KR20137003480 A KR 20137003480A KR 20130092558 A KR20130092558 A KR 20130092558A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
laquinimod
deuterium
rich
compound
pharmaceutically acceptable
Prior art date
Application number
KR1020137003480A
Other languages
English (en)
Inventor
빅터 피리아틴스키
아비탈 랙서
Original Assignee
테바 파마슈티컬 인더스트리즈 리미티드
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=45439026&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=KR20130092558(A) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by 테바 파마슈티컬 인더스트리즈 리미티드 filed Critical 테바 파마슈티컬 인더스트리즈 리미티드
Publication of KR20130092558A publication Critical patent/KR20130092558A/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D215/00—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems
    • C07D215/02—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen atoms or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D215/16—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen atoms or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D215/48—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen
    • C07D215/54—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen attached in position 3
    • C07D215/56—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen attached in position 3 with oxygen atoms in position 4
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/455—Nicotinic acids, e.g. niacin; Derivatives thereof, e.g. esters, amides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/465—Nicotine; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A61K31/4704—2-Quinolinones, e.g. carbostyril
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/5545—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having eight-membered rings not containing additional condensed or non-condensed nitrogen-containing 3-7 membered rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/20—Pills, tablets, discs, rods
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/20—Pills, tablets, discs, rods
    • A61K9/2004—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/2013—Organic compounds, e.g. phospholipids, fats
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection

Abstract

본 발명은 중수소화된 N-에틸-N-페닐-1,2-다이하이드로-4-하이드록시-5-클로로-1-메틸-2-옥소퀴놀린-3-카복스아마이드, 그의 염 및 용도를 제공한다.

Description

중수소화된 N-에틸-N-페닐-1,2-다이하이드로-4-하이드록시-5-클로로-1-메틸-2-옥소퀴놀린-3-카복스아마이드, 그의 염 및 용도{DEUTERATED N-ETHYL-N-PHENYL-1,2-DIHYDRO-4-HYDROXY-5-CHLORO-1-METHYL-2-OXOQUINOLINE-3-CARBOXAMIDE, SALTS AND USES THEREOF}
본 출원은 미국 가특허 출원 제 61/399,297호(출원일: 2010년 7월 9일)의 우선권을 주장하며, 이 기초출원의 내용은 참조로 본 명세서에 병합된다.
본 출원 전반에 걸쳐 다양한 문헌, 공개된 특허 출원 및 특허 공보들이 인용되어 있다. 이들 문헌의 개시내용은 본 명세서에 참고로 그들의 전체 내용이 내포되는 데, 이는 본 발명이 속하는 당해 기술의 양상을 보다 충분히 설명하기 위한 것이다.
라퀴니모드(Laquinimod)는 급성의 실험적 자가면역 뇌척수염(aEAE: acute Experimental Autoimmune Encephalomyelitis) 모델에 효험이 있는 것으로 판명된 화합물이다(미국 특허 제 6,077,851호 공보). 상기 화합물의 화학명은 N-에틸-N-페닐-1,2-다이하이드로-4-하이드록시-5-클로로-1-메틸-2-옥소퀴놀린-3-카복스아마이드이며, 그의 화합물 등록 번호는 248281-84-7이다. 라퀴니모드의 합성방법 및 그의 나트륨염의 제조방법은 미국 특허 제6,077,851호 공보에 개시되어 있다. 라퀴니모드의 추가적인 합성방법은 미국 특허 제6,875,869호 공보에 개시되어 있다.
라퀴니모드 나트륨을 포함하는 약제학적 조성물은 PCT 국제 출원 공개 공보 제WO 2005/074899호에 개시되어 있다.
라퀴니모드 나트륨은 높은 경구 생체이용률을 지니는 신규한 합성 화합물로, 이는 다발성 경화증(multiple sclerosis: MS)의 치료를 위한 경구 제형으로서 제안되어 있었다(Polman, C. et al., (2005) "Treatment with laquinimod reduces development of active MRI lesions in relapsing MS", Neurology. 64:987-991; Sandberg-Wollheim M, et al. (2005) "48-week open safety study with high-dose oral laquinimod in patients", Mult Scler . 11:S154). 연구들은 또한 라퀴니모드가 MS 재발에 있어서 활성 MRI 병변의 발달을 감소시키는 것을 나타내고 있다(Polman, C. et al., (2005) "Treatment with laquinimod reduces development of active MRI lesions in relapsing MS", Neurology. 64:987-991).
PCT 국제 특허 출원 공보 제WO 2010/028015호는 라퀴니모드의 중수소-풍부 변형예를 제안하고 있다. 그러나, 제WO 2010/028015호는 "대사 전환이 공지의 대사산물뿐만 아니라 전적으로 새로운 대사산물의 상이한 비율을 초래할 수 있고" 또한 이러한 "새로운 대사 프로파일은 다소의 독성을 부여할 수 있으며" 이는 "임의의 약물 부류에 대한 선험성을 예측할 수 없다"는 것을 경고하고 있다. 따라서, 제WO 2010/028015호는 적어도 라퀴니모드의 중수소-풍부 변형체의 투여를 위한 용량을 제공하지 못하고 또한 대사 프로파일을 개시하고 있지 못하다.
본 발명은 자가면역 질환에 걸린 인간 대상체를 치료하는 방법을 제공하되, 해당 방법은 상기 대상체를 치료하는데 유효한, 이하의 구조를 지니는 중수소-풍부 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 1일당 0.2㎎ 내지 2.0㎎ 상기 인간 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다:
Figure pct00001
식 중, R1 내지 R10은 각각 독립적으로 H 또는 D이고, R1 내지 R10 중 적어도 하나는 D이다.
본 발명은 또한 인간 대상체에서 임의선택적으로 중수소화된 5-클로로-4-하이드록시-1-메틸-2-옥소-N-페닐-1,2-다이하이드로퀴놀린-3-카복스아마이드의 저감된 형성을 유도하는 방법을 제공하되, 해당 방법은 이하의 구조를 지니는 중수소-풍부 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염의 치료상 유효량을 인간 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다:
Figure pct00002
식 중, R1 내지 R10은 각각 독립적으로 H 또는 D이고, R1 내지 R10 중 적어도 하나는 D이다.
상기 저감된 형성은 비중수소-풍부 라퀴니모드(non-deuterium-enriched laquinimod)의 등몰량(equivalent molar amount)의 투여 시 5-클로로-4-하이드록시-1-메틸-2-옥소-N-페닐-1,2-다이하이드로퀴놀린-3-카복스아마이드의 형성과 비교된 것이다.
또, 본 발명은 이하의 구조를 지니는 적어도 2종의 중수소-풍부 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염의 혼합물을 제공한다:
Figure pct00003
식 중, R1 내지 R10은 각각 독립적으로 H 또는 D이고, 상기 적어도 2종의 중수소-풍부 화합물의 각각은 각기 다른 R1 내지 R10에서 D를 포함한다.
또한, 본 발명은 본 명세서에 기재된 혼합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염, 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.
또, 본 발명은
a) 중수소-풍부 라퀴니모드 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염;
b) 적어도 1종의 약제학적으로 허용가능한 담체; 및
c) 하기 구조를 지니는 화합물과 중수소-풍부 라퀴니모드를 합한 중량에 의거해서 0.1% 미만의 양으로 존재하는 상기 화합물
의 혼합물을 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다:
Figure pct00004
.
또, 본 발명은 본 명세서에 기재된 약제학적 조성물을 제조하는 방법을 제공하되, 해당 방법은,
a) 중수소-풍부 라퀴니모드 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염의 배취(batch)를 얻는 단계;
b) 상기 중수소-풍부 라퀴니모드 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염의 배취에 존재하는 임의선택적으로 중수소화된 5-클로로-4-하이드록시-1-메틸-2-옥소-N-페닐-1,2-다이하이드로퀴놀린-3-카복스아마이드의 총량을 장치에 의해 결정하는 단계; 및
c) 상기 배취가 0.1중량% 미만의 임의선택적으로 중수소화된 5-클로로-4-하이드록시-1-메틸-2-옥소-N-페닐-1,2-다이하이드로퀴놀린-3-카복스아마이드를 지니는 것으로 결정된 경우에만 상기 배취를 이용해서 상기 약제학적 조성물을 제조하는 단계를 포함한다.
또한, 본 발명은, 분배(distribution)용의, 본 명세서에 기재된 약제학적 조성물의 유효 배취(validated batch)를 제조하는 방법을 제공하되, 해당 방법은,
a) 상기 약제학적 조성물의 배취를 얻는 단계;
b) 상기 배취의 샘플 내 임의선택적으로 중수소화된 5-클로로-4-하이드록시-1-메틸-2-옥소-N-페닐-1,2-다이하이드로퀴놀린-3-카복스아마이드의 총량을 장치에 의해 결정하는 단계; 및
c) 상기 배취의 샘플이 라퀴니모드와 임의선택적으로 중수소화된 5-클로로-4-하이드록시-1-메틸-2-옥소-N-페닐-1,2-다이하이드로퀴놀린-3-카복스아마이드를 합한 중량에 대해서 0.1중량% 미만의 임의선택적으로 중수소화된 5-클로로-4-하이드록시-1-메틸-2-옥소-N-페닐-1,2-다이하이드로퀴놀린-3-카복스아마이드를 함유하는 것으로 결정된 경우에만 상기 배취를 분배용으로 인정하는 단계를 포함한다.
또, 본 발명은 인간 대상체에 있어서 자가면역 질환을 치료함에 있어서 1일당 0.2㎎ 내지 2㎎의 양으로 사용하기 위한, 이하의 구조를 지니는 중수소-풍부 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 제공한다:
Figure pct00005
.
도 1은 0.2 ㎎/㎏에서 래트에 경구 투여 후의 라퀴니모드로부터 형성된 DELAQ 대 화합물 2로부터 형성된 DELAQ 평균 혈장 농도-시간 프로파일을 도시한 도면;
도 2는 0.2 ㎎/㎏에서 래트에 경구 투여 후의 라퀴니모드 대 화합물 2에 대한 평균 혈장 농도-시간 프로파일을 도시한 도면;
도 3은 라퀴니모드의 2가지 용량과 화합물 1, 2 및 3의 각종 용량에 의해 치료된 마우스에서의 MOG 유도 EAE의 군 평균 점수 비교를 도시한 도면.
본 발명은 자가면역 질환에 걸린 인간 대상체를 치료하는 방법을 제공하되, 해당 방법은, 상기 대상체를 치료하는데 유효한, 이하의 구조를 지니는 중수소-풍부 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 1일당 0.2㎎ 내지 2.0㎎ 상기 인간 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다:
Figure pct00006
식 중, R1 내지 R10은 각각 독립적으로 H 또는 D이고, R1 내지 R10 중 적어도 하나는 D이다.
상기 방법의 일 실시형태에 있어서, 상기 중수소-풍부 화합물은,
Figure pct00007
또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이다.
상기 방법의 다른 실시형태에 있어서, 상기 중수소-풍부 화합물은,
Figure pct00008
또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이다.
상기 방법의 또 다른 실시형태에 있어서, 상기 중수소-풍부 화합물은,
Figure pct00009
또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이다.
상기 방법의 다른 실시형태에 있어서, 상기 자가면역 질환은 다발성 경화증, 전신 홍반 루푸스, 루푸스 신장염, 루푸스 관절염, 크론병 또는 류마티스 관절염이다.
상기 방법의 다른 실시형태에 있어서, 상기 자가면역 질환은 다발성 경화증이다.
상기 방법의 다른 실시형태에 있어서, 상기 중수소-풍부 화합물의 투여는 등몰량의 비중수소-풍부 라퀴니모드의 투여보다 상기 자가면역 질환을 치료하는데 더욱 효과적이다.
상기 방법의 다른 실시형태에 있어서, 상기 중수소-풍부 화합물의 투여 시 상기 인간 대상체에 형성되는 임의선택적으로 중수소화된 5-클로로-4-하이드록시-1-메틸-2-옥소-N-페닐-1,2-다이하이드로퀴놀린-3-카복스아마이드의 수준은, 등몰량의 비중수소-풍부 라퀴니모드가 상기 인간 대상체에 투여된 경우 형성되는 5-클로로-4-하이드록시-1-메틸-2-옥소-N-페닐-1,2-다이하이드로퀴놀린-3-카복스아마이드의 수준에 비해서 저감된다.
상기 방법의 다른 실시형태에 있어서, 임의선택적으로 중수소화된 5-클로로-4-하이드록시-1-메틸-2-옥소-N-페닐-1,2-다이하이드로퀴놀린-3-카복스아마이드의 수준이 적어도 50%만큼 저감된다.
상기 방법의 다른 실시형태에 있어서, 임의선택적으로 중수소화된 5-클로로-4-하이드록시-1-메틸-2-옥소-N-페닐-1,2-다이하이드로퀴놀린-3-카복스아마이드의 수준이 적어도 90%만큼 저감된다.
또, 본 발명은 인간 대상체에서 임의선택적으로 중수소화된 5-클로로-4-하이드록시-1-메틸-2-옥소-N-페닐-1,2-다이하이드로퀴놀린-3-카복스아마이드의 저감된 형성을 유도하는 방법을 제공하되, 해당 방법은, 이하의 구조를 지니는 중수소-풍부 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염의 치료상 유효량을 인간 대상체에게 투여하는 단계를 포함하며,
상기 저감된 형성은 비중수소-풍부 라퀴니모드의 등몰량의 투여 시 5-클로로-4-하이드록시-1-메틸-2-옥소-N-페닐-1,2-다이하이드로퀴놀린-3-카복스아마이드의 형성과 비교된 것이다:
Figure pct00010
식 중, R1 내지 R10은 각각 독립적으로 H 또는 D이고, R1 내지 R10 중 적어도 하나는 D이다.
상기 방법의 일 실시형태에 있어서, 상기 임의선택적으로 중수소화된 5-클로로-4-하이드록시-1-메틸-2-옥소-N-페닐-1,2-다이하이드로퀴놀린-3-카복스아마이드의 수준은, 등몰량의 비중수소-풍부 라퀴니모드가 상기 인간 대상체에 투여된 경우 형성되는 5-클로로-4-하이드록시-1-메틸-2-옥소-N-페닐-1,2-다이하이드로퀴놀린-3-카복스아마이드의 수준에 비해서 적어도 50% 저감된다.
상기 방법의 다른 실시형태에 있어서, 상기 임의선택적으로 중수소화된 5-클로로-4-하이드록시-1-메틸-2-옥소-N-페닐-1,2-다이하이드로퀴놀린-3-카복스아마이드의 수준은 적어도 90% 저감된다.
또한, 본 발명은 이하의 구조를 지니는 적어도 2종의 중수소-풍부 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염의 혼합물을 제공한다:
Figure pct00011
식 중, R1 내지 R10은 각각 독립적으로 H 또는 D이고, 상기 적어도 2종의 중수소-풍부 화합물의 각각은 각기 다른 R1 내지 R10에서 D를 포함한다.
상기 혼합물의 일 실시형태에 있어서, 상기 적어도 2종의 중수소-풍부 화합물 중 하나는 이하의 구조를 지니거나, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이다:
Figure pct00012
.
상기 혼합물의 다른 실시형태에 있어서, 상기 적어도 2종의 중수소-풍부 화합물 중 하나는 이하의 구조를 지니거나, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이다:
Figure pct00013
.
상기 혼합물의 또 다른 실시형태에 있어서, 상기 적어도 2종의 중수소-풍부 화합물 중 하나는 이하의 구조를 지니거나, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이다:
Figure pct00014
.
또, 본 발명은 본 명세서에 기재된 혼합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염, 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은
a) 중수소-풍부 라퀴니모드 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염;
b) 적어도 1종의 약제학적으로 허용가능한 담체; 및
c) 하기 구조를 지니는 화합물과 중수소-풍부 라퀴니모드를 합한 중량에 의거해서 0.1% 미만의 양으로 존재하는 상기 화합물
의 혼합물을 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다:
Figure pct00015
.
상기 약제학적 조성물의 일 실시형태에 있어서, 상기 화합물은 해당 화합물과 중수소-풍부 라퀴니모드를 합한 중량에 의거해서 3 ppm 미만 또는 2 ppm 미만의 양으로 존재한다.
상기 약제학적 조성물의 다른 실시형태에 있어서, 상기 중수소-풍부 라퀴니모드는 이하의 구조를 지니거나 또는 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이다:
Figure pct00016
식 중, R1 내지 R10은 각각 독립적으로 H 또는 D이고, R1 내지 R10 중 적어도 하나는 D이다.
상기 약제학적 조성물의 또 다른 실시형태에 있어서, 상기 중수소-풍부 라퀴니모드에 있어서, R1 내지 R5의 각각은 D이고, R6 내지 R10의 각각은 H이거나, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이다.
상기 약제학적 조성물의 다른 실시형태에 있어서, 상기 중수소-풍부 라퀴니모드에 있어서, R1 내지 R5의 각각은 H이고, R6 내지 R10의 각각은 D이거나, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이다.
상기 약제학적 조성물의 또 다른 실시형태에 있어서, 상기 중수소-풍부 라퀴니모드에 있어서, R1 내지 R10의 각각은 D이거나, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이다.
상기 약제학적 조성물의 다른 실시형태에 있어서, 상기 약제학적 조성물은 정제(tablet) 형태이다.
상기 약제학적 조성물의 또 다른 실시형태에 있어서, 상기 약제학적 조성물은, 인간 대상체에 의해 섭취된 경우, 등몰량의 비중수소-풍부 라퀴니모드가 상기 인간 대상체에 의해 섭취된 경우 형성되는 5-클로로-4-하이드록시-1-메틸-2-옥소-N-페닐-1,2-다이하이드로퀴놀린-3-카복스아마이드의 수준에 비해서, 인간 대상체에서 형성되는 임의선택적으로 중수소화된 5-클로로-4-하이드록시-1-메틸-2-옥소-N-페닐-1,2-다이하이드로퀴놀린-3-카복스아마이드의 저감된 수준을 제공한다.
또, 본 발명은 본 명세서에 기재된 약제학적 조성물을 제조하는 방법을 제공하되, 해당 방법은
a) 중수소-풍부 라퀴니모드 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염의 배취(batch)를 얻는 단계;
b) 상기 중수소-풍부 라퀴니모드 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염의 배취에 존재하는 임의선택적으로 중수소화된 5-클로로-4-하이드록시-1-메틸-2-옥소-N-페닐-1,2-다이하이드로퀴놀린-3-카복스아마이드의 총량을 장치에 의해 결정하는 단계; 및
c) 상기 배취가 0.1중량% 미만의 임의선택적으로 중수소화된 5-클로로-4-하이드록시-1-메틸-2-옥소-N-페닐-1,2-다이하이드로퀴놀린-3-카복스아마이드를 지니는 것으로 결정된 경우에만 상기 배취를 이용해서 상기 약제학적 조성물을 제조하는 단계를 포함한다.
본 발명은, 분배용의, 본 명세서에 기재된 약제학적 조성물의 유효 배취를 제조하는 방법을 제공하되, 해당 방법은,
a) 상기 약제학적 조성물의 배취를 얻는 단계;
b) 상기 배취의 샘플 내 임의선택적으로 중수소화된 5-클로로-4-하이드록시-1-메틸-2-옥소-N-페닐-1,2-다이하이드로퀴놀린-3-카복스아마이드의 총량을 장치에 의해 결정하는 단계; 및
c) 상기 배취의 샘플이 라퀴니모드와 임의선택적으로 중수소화된 5-클로로-4-하이드록시-1-메틸-2-옥소-N-페닐-1,2-다이하이드로퀴놀린-3-카복스아마이드를 합한 중량에 대해서 0.1중량% 미만의 임의선택적으로 중수소화된 5-클로로-4-하이드록시-1-메틸-2-옥소-N-페닐-1,2-다이하이드로퀴놀린-3-카복스아마이드를 함유하는 것으로 결정된 경우에만 상기 배취를 분배용으로 인정하는 단계를 포함한다.
또한, 본 발명은 인간 대상체에 있어서 자가면역 질환을 치료함에 있어서 1일당 0.2㎎ 내지 2㎎의 양으로 사용하기 위한, 이하의 구조를 지니는 중수소-풍부 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 제공한다:
Figure pct00017
.
본 명세서에 개시된 임의의 범위란, 그 범위 내의 모든 1/100, 1/10 및 정수 단위량이 본 발명의 부분으로서 구체적으로 개시되는 것을 의미한다. 이와 같이 해서, 예를 들어, 0.01㎎ 내지 50㎎이란, 0.02, 0.03 ... 0.09; 0.1, 0.2 ... 0.9; 및 1, 2 ... 49㎎ 단위량이 본 발명의 실시형태로서 포함된다.
중수소(D 또는 2H)는 수소의 안정한 비방사성 동위원소이고, 2.0144의 원자 중량을 지닌다. 화합물 중의 수소 원자는 동위원소 1H(수소 또는 프로튬), D(2H 또는 중수소) 및 T(3H 또는 삼중수소)의 혼합물로서 자연적으로 존재한다. 중수소의 자연 존재비(natural abundance)는 0.0156%이다. 이와 같이 해서, 0.0156%의 자연 존재비보다 크도록 풍부하게 있는 화합물 중의 수소 원자의 임의의 부위에서의 중수소의 수준을 지니는 화합물은, 그의 비풍부 상대에 비해서 신규하다.
본 명세서에서 이용되는 바와 같이, "중수소-풍부"란 화합물의 임의의 관련된 부위에서의 중수소의 존재비가 소정량의 화합물의 그 부위에서 자연적으로 존재하는 중수소의 존재비보다 많은 것을 의미한다. 위에서 이용되는 바와 같은 화합물 내의 관련된 부위는 중수소-풍부가 아닌 경우의 화합물의 화학 구조 표현에 있어서 "H"로 표시되는 중수소의 존재비를 지칭하는 것이다. 위에서 이용되는 자연적으로 존재하는이란 화합물이 중수소의 존재비를 풍부하게 하기 위하여 임의의 확정적인 단계 없이 제조되었다면 화합물 내 관련된 부위에서 존재할 것인 중수소의 존재비를 지칭한다. 이와 같이 해서, "중수소-풍부" 화합물에 있어서, 그의 관련된 부위들 중 어느 하나에서의 중수소의 존재비는 0.0156% 초과 내지 100%의 범위일 수 있다. 중수소-풍부 화합물을 얻기 위한 방법의 예는 수소를 중수소로 교환하거나 중수소-풍부 출발 물질을 이용해서 해당 화합물을 합성하는 것이다.
밀리그램량 이상의 화합물의 임의의 관련 부위에서 100% 중수소화를 얻는 것은 어려울 수 있다. 따라서, 중수소 원자가 화학 구조 내에 구체적으로 표시되어 있더라도, 수소의 일부 퍼센트는 여전히 존재할 수 있는 것으로 이해된다. 이와 같이 해서, 화학 구조가 "D"를 포함할 경우, 그 구조로 표시되는 화합물은 "D"로 표시되는 부위에서 중수소-풍부한 것이다.
화합물의 특징이란, 화합물이 1H 핵 자기 분광, 질량 분광, 적외선, 자외선 혹은 형광 분광측정, 기체 크로마토그래피, 박막 크로마토그래피, 고성능 액체 크로마토그래피, 원소 분석, 에임스 테스터(Ames test), 용해, 안정성에 의해 결정되는 바와 같은, 예컨대, 피크 혹은 체류 시간을 나타내는 품질, 및 및 분석법에 의해 결정될 수 있는 기타 임의의 품질이라면 어떠한 것이라도 지칭한다. 일단 화합물의 특징이 알려지면, 그 정보는 예를 들어 샘플 내 화합물의 존재를 위한 선별 혹은 테스트에 이용될 수 있다.
본 명세서에서 이용되는 바와 같이, "약제학적으로 허용가능한" 담체 혹은 부형제는 적절한 유익/유해비에 상응하는 과도한 부작용(독성, 자극 및 알레르기 반응 등) 없이 인간 및/또는 동물에 이용하기에 적합한 것이다.
본 명세서에서 이용되는 바와 같이, "약물 물질"이란, 질환의 진단, 치유, 경감, 치료 혹은 예방에 있어서 약리학적 활성 또는 기타 직접적인 효과를 제공하거나, 인간 혹은 동물의 신체의 구조 혹은 임의의 기능에 영향을 미치는, 약물 제품 내 활성 성분을 지칭한다.
본 명세서에서 이용되는 바와 같이, "약물 제품"이란 약물 물질뿐만 아니라 적어도 1종의 약제학적으로 허용가능한 담체를 함유하는 완성된 투약 형태를 지칭한다.
본 명세서에서 이용되는 바와 같이, "단리된" 화합물은 단리의 긍정적인 작용을 수반하는 조질의 반응 혼합물로부터 단리된 화합물을 지칭한다. 단리의 작용은 반드시 일부 불순물을 지니는 조질의 반응 혼합물의 기타 알려진 성분, 미지의 부수적인 생성물 및 남아 있도록 허용된 조질의 반응 혼합물의 기타 알려진 성분의 잔류량으로부터 화합물을 분리하는 것을 포함한다. 정제(purification)는 단리의 긍정적인 작용의 일례이다.
본 명세서에서 이용되는 바와 같이, 화학적 실체(chemical entity)가 "없는"(free) 조성물은, 해당 조성물이, 만약 있다면, 조성물 내 화학적 실체의 존재를 제거하도록 의도된 긍정적인 작용의 동반을 피할 수 없는 화학적 실체의 양을 함유하는 것을 의미한다.
본 명세서에서 이용되는 바와 같이, "안정성 테스트"란 약물 제품이 그의 표시된 보존 수명에 걸쳐서 분해되는지의 여부, 그리고 어느 정도로 진행되는지를 알기 위하여 특정 시간 간격 및 각종 환경 조건(예컨대, 온도 및 습도)에서 수행되는 테스트를 지칭한다. 이 테스트의 특정 조건 및 시간은, 약물 제품이 그의 보존 수명에 걸쳐서 접할 것으로 예상되는 조건을 가속시키는 것이다. 예를 들어, 완성된 약제의 안정성 테스트의 상세한 요건은 21 C.F.R §211.166에 성문화되어 있고, 그의 전체 함량은 본 명세서에 참조로 병합된다.
본 명세서에서 이용되는 바와 같이, 수치 혹은 그 범위의 맥락에서 "약"은, 인용되거나 청구된 수치 혹은 범위의 ±10%를 의미한다.
라퀴니모드는 이하의 화학 구조를 지니는 소분자이다:
Figure pct00018
.
이것은 실험적 자가면역 뇌수막염(EAE), 다발성 경화증(MS)용의 동물 모델, 염증성 장 질환용의 덱스트란 나트륨 설페이트(Dextran Sodium Sulphate: DSS) 유도 결장염, 제1형 당뇨병(IDDM)용의 비비만형 당뇨(Non-Obese Diabetic: NOD) 마우스, 길랭-바레증후군용의 실험적 자가면역 신경염(Experimental Autoimmune Neuritis: EAN), 전신 홍반 루푸스(Systemic Lupus Erythematosus: SLE), 루푸스 신장염, 루푸스 관절염, 크론병 및 루마티스성 관절염 등과 같은 각종 실험적 염증/자가면역 동물 모델에서 치료 효과가 입증된 경구 면역조절이다. 이들 모델에서의 라퀴니모드의 치료 활성은, 케모카인-매개 T-세포 유착의 조절, 사이토카인 균형의 조절, 항원 제시의 변경을 초래하는 MHC 제II류의 하향 조절 및 수지상 서브모집단에 대한 작용을 비롯하여 각종 기계론적 효과로부터 기인된다.
본 명세서에서 라퀴니모드의 약제학적으로 허용가능한 염뿐만 아니라 중수소화된 화합물로는 리튬, 나트륨, 칼륨, 마그네슘, 칼슘, 망간, 구리, 아연, 알루미늄 및 철을 들 수 있다. 라퀴니모드의 염 제형 및 이를 제조하기 위한 방법은, 예를 들어, 미국 특허 출원 공개공보 제2005/0192315호 및 PCT 국제 출원 공개공보 제WO 2005/074899호에 개시되어 있으며, 이들은 본 출원 내에 참고로 병합된다.
투약 단위는 단일 화합물 또는 그의 화합물의 혼합물을 포함할 수 있다. 투약 단위는 정제, 캡슐제, 환제, 산제 및 과립제와 같이 경구 투여 형태로 제조될 수 있다.
본 명세서에서 중수소화된 화합물뿐만 아니라 라퀴니모드는, 의도된 투여 형태에 관하여 적절히 선택되고 통상적인 약학적 관행과 일관된 적당한 약제학적 희석제, 증량제, 부형제 또는 담체(본원에서 약제학적으로 허용가능한 담체로서 통칭됨)와의 혼합물로서 투여될 수 있다. 상기 단위는 바람직하게는 경구 투여에 적합한 형태이다. 라퀴니모드는 단독으로 투여될 수 있지만, 일반적으로는 약제학적으로 허용가능한 담체와 혼합되어 정제, 캡슐제, 또는 리포솜의 형태로 동시 투여되거나, 응집된 산제로서 투여된다. 적당한 고체 담체의 예로는 락토스, 수크로스, 젤라틴 및 한천을 들 수 있다. 캡슐제 또는 정제는 용이하게 제형화될 수 있으며, 삼키거나 씹기 쉽게 제조될 수 있다. 그리고 기타 고체 형태로는 과립제 및 벌크형 산제를 들 수 있다. 정제는 적당한 결합제, 윤활제, 붕해제, 착색제, 풍미제, 유동 유도제 및 용융제를 함유할 수 있다. 예를 들어, 정제 또는 캡슐제의 투약 단위 형태에서 경구 투여를 위해, 활성 약물 성분은 락토스, 젤라틴, 한천, 전분, 수크로스, 글루코스, 메틸 셀룰로스, 인산이칼슘, 황산칼슘, 만니톨, 소비톨, 미정질 셀룰로스 등과 같은 경구용으로 비독성이면서 약제학적으로 허용가능한 불활성 담체와 조합될 수 있다. 적합한 결착제로는 전분, 젤라틴, 글루코스 또는 베타-락토스와 같은 천연 당, 옥수수 전분, 아카시아 고무, 트래거캔스(tragacanth)와 같은 천연 및 합성 고무, 또는 알긴산나트륨, 포비돈, 카복시메틸셀룰로스, 폴리에틸렌 글라이콜, 왁스 등을 들 수 있다. 이들 투약 형태로 사용되는 윤활제로는 올레산나트륨, 스테아르산나트륨, 벤조산나트륨, 아세트산나트륨, 염화나트륨, 스테아르산, 푸마르산스테아릴나트륨, 활석 등을 들 수 있다. 붕해제로는 전분, 메틸 셀룰로스, 한천, 벤토나이트, 잔탄 고무, 크로스카멜로스 나트륨(croscarmellose sodium), 나트륨 전분 글라이콜레이트 등을 들 수 있지만, 이들로 한정되지 않는다.
본 발명의 경구 투약 형태를 제형화하기 위해 사용될 수 있는 수법, 약제학적으로 허용가능한 담체 및 부형제의 구체적인 예는, 예를 들어, 미국 특허 출원 공개공보 제2005/0192315호, PCT 국제 출원 공개공보 제WO2005/074899호, 제WO 2007/047863호 및 제WO 2007/146248호에 개시되어 있다.
본 발명에 유용한 투약 형태를 제조하기 위한 일반적인 수법 및 조성물은 하기 참조문헌들에 개시되어 있다: 7 Modern Pharmaceutics, Chapters 9 and 10 (Banker & Rhodes, Editors, 1979); Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets (Lieberman et al., 1981); Ansel, Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms 2nd Edition (1976); Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th ed. (Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1985); Advances in Pharmaceutical Sciences (David Ganderton, Trevor Jones, Eds., 1992); Advances in Pharmaceutical Sciences Vol 7. (David Ganderton, Trevor Jones, James McGinity, Eds., 1995); Aqueous Polymeric Coatings for Pharmaceutical Dosage Forms (Drugs and the Pharmaceutical Sciences, Series 36 (James McGinity, Ed., 1989); Pharmaceutical Particulate Carriers: Therapeutic Applications: Drugs and the Pharmaceutical Sciences, Vol 61 (Alain Rolland, Ed., 1993); Drug Delivery to the Gastrointestinal Tract (Ellis Horwood Books in the Biological Sciences. Series in Pharmaceutical Technology; J. G. Hardy, S. S. Davis, Clive G. Wilson, Eds.); Modern Pharmaceutics Drugs and the Pharmaceutical Sciences, Vol. 40 (Gilbert S. Banker, Christopher T. Rhodes, Eds.). 이들 인용문헌들은 이들 전체가 본 출원 내에 참고로 병합된다.
화학적 화합물로부터의 대사산물은, 고유하든 약제학적이든지 간에, 화합물을 분해하고 제거하는 자연적인 생화학 과정의 일부로서 형성된다. 화합물의 분해 속도는 그의 작용의 기간 및 강도의 중요한 결정 인자이다. 약제학적 화합물의 대사산물의 프로파일링, 즉, 약물 대사는, 임의의 바람직하지 않은 부작용의 이해로 이어지는, 약물 발견의 중요한 부분이다.
라퀴니모드의 대사과정
라퀴니모드는 CYP3A4(사이토크롬 P450 3A4)에 의해 서서히 대사되어 수개의 미소한 대사산물을 형성하는 것으로 나타나 있고, 이들 중 일부는 2상 대사 반응에 의해 더욱 대사될 수 있다. 이에 대해서는, 예를 들어, 문헌[Tuvesson et al. "Cytochrome P450 3A4 is the major enzyme responsible for the metabolism of laquinimod, a novel immunomodulator", Drug Metabolism and Disposition, Vol. 33, No. 6, pages 866-872]을 참조할 수 있다. 이하의 화학 구조를 지니는 DELAQ(데스-에틸-라퀴니모드(des-ethyl-laquinimod); 5-클로로-4-하이드록시-1-메틸-2-옥소-N-페닐-1,2-다이하이드로퀴놀린-3-카복스아마이드)는 라퀴니모드의 산화적 대사산물들 중 하나이다:
Figure pct00019
.
또한, 임상 데이터는, 인체 내 DELAQ 수준이 Cmax 혹은 AUC로 환산하여 라퀴니모드에 대한 소정의 일정한 비인 것을 나타내고 있다. 이러한 거동은 대사산물인 DELAQ의 형성이 PK "제한된 형성 속도"인 것을 시사한다.
라퀴니모드의 중수소화된 형태가 대사 변화, 특히 사이토크롬 P450 시스템에 의해 대사된 변화에 더욱 내성이 있는 것을 나타내고 있는 실험에 대해서 이하에 설명한다. 산화될 C-H 결합의 중수소화는 약물 대사의 경로를 변화시킬 수 있다(대사 전환). 이하의 대사 반응식은 중수소화된 라퀴니모드에 의한 보다 느린 CYP3A4-매개된 DELAQ 형성을 예시한다:
Figure pct00020
페닐 모이어티(moiety)의 변성은 에틸기의
Figure pct00021
-탄소의 산화 전에 CYP 촉매 중심에 대한 아마이드-결합의 위치에 영향을 미칠 수 있다. 이것은 에틸 및/또는 페닐 모이어티에서 각종 변성을 지니는 중수소화된 라퀴니모드가 예를 들어 임의선택적으로 중수소화된 DELAQ의 저감된 형성으로 되는지 그 이유를 설명할 수 있다.
불순물로서의 DELAQ
DELAQ는 라퀴니모드 합성의 바람직하지 않은 합성 부산물이다. DELAQ의 어떠한 활성도 완전히 특성규명되어 있지 않다. 또한, 일반적으로 약물 물질 및 최종 약물 제품 내의 불순물의 양을 최소화하는 것이 바람직하다.
라퀴니모드 나트륨 약물 물질 중의 불순물로서의 DELAQ는 HPLC법에 의해 테스트되고, 이 불순물용의 상세는 0.1% 이하이다. 라퀴니모드 나트륨의 GMP 약물 물질 배취는 테스트된 바 있고, 이들 배취 중의 DELAQ의 수준은 3 ppm 미만인 것으로 판명되었다. 따라서, 유사한 파라미터가 본 발명의 화합물을 함유하는 약물 제품을 위하여 제공된다.
수 개의 분석 및 생분석 방법이 DELAQ 농도의 결정을 위하여 개발되어 있었다. 각종 기질에서의 DELAQ 분석을 위한 현재의 생분석 방법은 LC-MS에 의거하고, 낮은 pg/㎖ 혈장 수준에서 감도를 지닌다.
본 발명은 이하의 실험 상세를 참조하면 더욱 잘 이해될 것이지만, 당업자라면 설명된 특정 실험은 이후에 첨부된 특허청구범위에서 더욱 충분히 설명되는 바와 같은 본 발명의 예시에 불과하다는 것을 용이하게 이해할 것이다.
실험적 상세:
실시예 1: 중수소화된 라퀴니모드의 제조
단계 1: 중수소화된 N-에틸-아닐린의 합성
N-에틸-D5-아닐린
Figure pct00022
N-D5-에틸-아닐린
Figure pct00023
N-D11-에틸-아닐린
Figure pct00024
아닐린(0.01몰)을 톨루엔(10㎖) 중에 용해시키고, 질소 하 0℃까지 냉각시키고 나서 무수 아세트산(0.02몰)을 한번에 첨가하였다. 냉각욕을 제거하고, 이 혼합물을 90분 동안 교반하고 나서, 회전 증발기 위에서 증발시켰다. 중간체인 아세트아닐라이드를 진공 중 건조시키고 나서 THF(20㎖) 중에 용해시키고 질소 하에 0℃까지 냉각시켰다. 수소화알루미늄리튬(0.025몰)을 25분 동안 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 2시간 동안 환류시키고 나서 냉각시켰다. 실리카겔(3g)을 첨가하고 나서 1M NaOH 용액(1.8g)을 첨가하였다. 이 혼합물을 30분 동안 교반하고 나서, 황산나트륨의 패드를 통과시켜 여과시켰다. 필터 케이크를 다이에틸 에터로 세척하고, 유기상을 회전 증발기 상에서 농축시켜 표제의 화합물을 수득하였다.
단계 2: 중수소화된 라퀴니모드의 합성
N-에틸-N-D5-페닐-1,2-다이하이드로-4-하이드록시-5-클로로-1-메틸-2-옥소퀴놀린-3-카복스아마이드(화합물 1)
Figure pct00025
N-D5-에틸-N-페닐-1,2-다이하이드로-4-하이드록시-5-클로로-1-메틸-2-옥소퀴놀린-3-카복스아마이드(화합물 2)
Figure pct00026
N-D5-에틸-N-D5-페닐-1,2-다이하이드로-4-하이드록시-5-클로로-1-메틸-2-옥소퀴놀린-3-카복스아마이드(화합물 3)
Figure pct00027
N-에틸-아닐린(0.01몰) 및 MCQCA(1,2-다이하이드로-4-하이드록시-5-클로로-1-메틸-2-옥소-퀴놀린-3-카복실산)(2.03g, 0.008몰)를 다이클로로메탄(32㎖) 중에서 교반하고, 트라이에틸아민(4.2㎖)을 첨가하였다. 이 혼합물을 질소 하 빙/수조에서 속에서 냉각시키고, 염화티오닐(1.33g)을 30분 동안 적가하였다. 이 혼합물을 추가로 3시간 동안 0℃에서 교반하고 나서, 냉 수성 1M 황산으로 추출하였다. 유기상을 1M NaOH 용액으로 추출하고, 수상을 회전 증발기 상에서 약간 농축시켜 유기 용제의 흔적을 제거하였다. 5M HCl을 가하여 pH 1 내지 1.5로 조정하고, 얻어진 현탁액을 30분 동안 교반하였다. 침강된 생성물을 여과하고, 물로 세척 후, 진공 중 건조시켰다. 이어서 중수소화된 라퀴니모드를 수득하였다(수율 86 내지 93%).
단계 3: 중수소화된 라퀴니모드 나트륨염의 제조
단계 2에서 제조된 중수소화된 라퀴니모드를 에탄올 중에 현탁시키고 20% NaOH 수용액으로 처리하였다. 침강된 나트륨염을 3시간 동안 교반하고, 여과 후 에탄올로 세척하였다. 진공 중 건조시켜 중수소화된 라퀴니모드 나트륨염(수율 92 내지 94%)을 얻었다. 동질성 및 순도는 NMR, MS 및 HPLC에 의해 입증되었다.
Figure pct00028
실시예 2: DELAQ의 분석
DELAQ는 라퀴니모드의 투여 시 설치류뿐만 아니라 인간 체내에서 대사산물로서 형성된다. 수 개의 분석 및 생분석 방법이 대표적인 대사산물로서 DELAQ 농도의 결정을 위하여 개발되었다. 각종 기질에서의 DELAQ 분석을 위한 현재의 생분석 방법은 LC-MS에 기초하고 있고 낮은 pg/㎖ 혈장 수준에서 감도를 지닌다.
이하의 조건은 인간 혈장에서의 DELAQ의 결정에 이용되었다. 혈장은 LUDOX AS-40 콜로이드성 실리카 용액에 의한 침강 후 온라인 SPE에 의해 정제된 후 MS/MS 검출과 함께 HPLC에 의한 분석을 실시하였다.
조건 1:
Figure pct00029
조건 2:
Figure pct00030
래트 혈장 중 DELAQ는 또한 이하의 조건 하에 결정되었다. 혈장은 LUDOX AS-40 콜로이드성 실리카 용액에 의한 침강 후 온라인 SPE에 의해 정제된 후 MS/MS 검출과 함께 HPLC에 의한 분석을 실시하였다.
Figure pct00031
실시예 3: 약동학 및 부분적 대사 평가
본 실시예의 주된 목표는 다음과 같았다:
Figure pct00032
LC/MS/MS 생분석법을 이용한 래트 혈장 내의 화합물 1, 화합물 2, 화합물 3 및 라퀴니모드의 정량화.
Figure pct00033
0.2 ㎎/㎏ 용량에서의 경구(PO) 투여 후의 화합물 1, 화합물 2, 화합물 3 및 라퀴니모드의 약동학 프로파일의 특성규명.
Figure pct00034
수집된 혈장 샘플 내 측정 DELAQ 농도.
이 실시예에서 선택된 용량 수준은 라퀴니모드에서 이미 행해진 약동학적 연구에서 이용되었다.
일반적 설계
폴리에틸렌 튜브에 의해 우측 총 경정맥에서 캐뉼러 삽입된 래트를 이용하였다. 살아 있는 동안에, 3마리의 캐뉼러 삽입된 암컷 래트를 0.2 ㎎/㎏의 용량에서 4가지 테스트 물품의 각각으로 처치(혹은 치료)하였다.
혈액을 혈장의 제조를 위하여 5가지 다른 시점에서 래트로부터 채취하였다. 화합물 1, 화합물 2, 화합물 3, 라퀴니모드 및 DELAQ의 농도는, 적용가능한 LC/MS/MS 방법을 이용해서, 이들 혈장 샘플에서 결정되었다.
재료
화합물 테스트
a. 실시예 1에서 제조한 N-에틸-N-D5-페닐-1,2-다이하이드로-4-하이드록시-5-클로로-1-메틸-2-옥소퀴놀린-3-카복스아마이드 나트륨염(화합물 1):
분자량: 383.8
외관: 백색 분말
보존: 2℃ 내지 8℃, 차광됨
순도: 100% 순도가 가정되었다.
b. 실시예 1에서 제조된 N-D5-에틸-N-페닐-1,2-다이하이드로-4-하이드록시-5-클로로-1-메틸-2-옥소퀴놀린-3-카복스아마이드 나트륨염(화합물 2):
분자량: 383.8
외관: 백색 분말
보존: 2℃ 내지 8℃, 차광됨
순도: 100% 순도가 가정되었다.
c. 실시예 1에서 제조된 N-D5-에틸-N-D5-페닐-1,2-다이하이드로-4-하이드록시-5-클로로-1-메틸-2-옥소퀴놀린-3-카복스아마이드 나트륨염(화합물 3):
분자량: 388.8
외관: 백색 분말
보존: 2℃ 내지 8℃, 차광됨
순도: 100% 순도가 가정되었다.
d. 라퀴니모드 나트륨염
분자량: 378.8
외관: 백색 분말
보존: 제어된 실온(15℃ 내지 25℃), 차광됨
HPLC에 의한 분석평가: 100.8%
순도: 100% 순도가 가정되었다.
비히클
물, 고순도(Direct Q, 실험실에서 제조됨)
기타 재료
마취용 아이소플루란(FORANE(등록상표) ABBOTT)
EDTA(에틸렌다이아민테트라아세트산 다이나트륨염 2수화물, Sigma Aldrich, 제품 번호: E4884-100g)
헤파린 나트륨염(돼지 장점막으로부터, Sigma Aldrich, 제품 번호: H9399-25KU)
테스트 시스템
동물 사양
종: 래트
계통: SD(스프래그 다우리(Sprague Dawley) CD 래트)
건강 상태: SPF
주문 주령: 8주
동물의 수: 20마리의 캐뉼러 삽입된 암컷
주문 체중 범위: 200 내지 225g
순응: 적어도 3일
치료의 초기에:
동물의 수: 12마리의 캐뉼러 삽입된 암컷
대략의 주령: 9주
테스트 시스템의 선택의 타당성
SD 래트는 약동학 연구를 위한 적절한 설치류 종 및 계통이고, 규제 당국에서 용인되는 것이다. 또한, 스프래그 다우리 래트의 라퀴니모드의 약동학 프로파일은 잘 특성규명되어 있다.
확인 시스템
각 동물은 신체 상에 지워지지 않는 마크에 의해 식별되었다. 케이지는 계통, 동물 코드, 군(즉, 그룹) 코드, 약물 투여 데이터 및 시간, 테스트 항목 및 연구 코드를 특정하는 개별의 카드로 마킹되었다
특정 관리 스케쥴
용량 투여 전후의 동물의 거주
동물은 시설에 대한 도착 후 군 케이징 내에 환경적으로 제어된 룸에서 거주하였다. 래트는 바닥용의 매트로서 톱밥을 깐 개별의 폴리카보네이트 혹은 폴리설포네이트 케이지에 수용되었다.
환경 조건
21±3℃의 온도 및 30 내지 70%의 상대습도를 유지하도록 제어가 설정되었다. 12시간 조명/12시간 암흑의 조명/암흑 사이클이 자동적으로 유지되었다.
음용수
0.2㎛ 필터를 통해 여과된 수돗물은 임의로 부여되었다. 물은 총 미생물 계수치에 대해서 그리고 녹농균(Pseudomonas aeruginosa), 대장균(Escherichia coli) 및 클로스트리듐속균(Clostridium sps.)의 부재에 대해서 관례대로 분석되었다(3개월에 1번).
급식
설치류에 대해서 알트로민 VRF1 오토클레이브 처리된 사료가 연구를 통하여 임의로 제공되었다. 식이는 주기적으로 분석되었다.
베딩(Bedding)
LIGNOCEL(SAWI, 대팻밥) 오토클레이브 처리된 베딩이 이용되었다. 베딩 재료의 품질은 제조사에 의해 증명되어 있다.
어떠한 오염물도 연구 목적을 간섭할지도 모르는 수준에서 식이, 물 혹은 베딩에 존재하지 않는 것으로 알려졌다.
실험적 설계
새 환경 순응
각 동물은 유자격자에 의해 검사되었고, 캐뉼러의 개방성은 동물 인수 시 혈액 샘플을 채취하는 능력에 의해서 검증되었다. 건강이 양호한 것으로 판단된 동물은 적어도 3일간 순응되었다. 모든 동물은 새 환경 순응 기간의 마지막 날에 책임을 맡고 있는 수의사에 의해 상세한 물리적 검사를 받았다.
랜덤화
새 환경 순응 기간 후, 건강이 양호하고 테스트에 적합하다고 판단된 동물은 그들의 체중에 의거해서 연구에 할당되었다. 랜덤화 시, 동물의 체중은 전체 평균 ±20% 내였다.
동물 투약 수준 및 치료 요법의 조직화
Figure pct00035
테스트 항목 중 몰 중량비는 화합물 1 및 화합물 2에 대해서 1.0757이다. 테스트 항목 중 몰 중량비는 화합물 3에 대해서 1.0898이다. 테스트 항목 중 몰 중량비는 라퀴니모드 나트륨에 대해서 1.0616이다. 이들 상관 인자는 비중수소화된 라퀴니모드 유리산에 대해서 등가인 농도를 조정하도록 적용되었다.
경구 투여는 무딘 공급용 스테인레스강제 바늘(Popper & Sons, USA)을 이용해서 5 ㎖/㎏의 용량 부피로 경구 섭식에 의해 수행되었다. 체중은 용량 투여 전에 측정되었고, 개별의 체중에 의거해서 산출되었다.
투여 용량 및 경로의 선택에 대한 타당성
이 연구에서 선택된 용량 수준은 라퀴니모드에 의해 앞서 행해진 약동학적 연구에서 이미 이용된 바 있다. 투여 경로는 인간 노출의 의도된 경로이므로 경구일 것이다.
제제의 제조 및 얻어진 농도의 측정
투약 용액의 제조
테스트 항목 중 적절한 양을 계량하고, 물(비히클)에 용해시켜 필요로 되는 농도를 얻었으며, 이것은 각 경우에 비중수소화된 라퀴니모드 유리 산 0.04 ㎎/㎖에 상당하였다.
테스트 항목 중 용해는 온화한 진탕, 교반, 저속 소용돌이 혹은 초음파발생기에 의해 달성되었다. 어떠한 보정 인자도 순도에 대해서 조정하도록 적용되지 않았다.
제형의 보존 및 안정성
모든 투약 용액은 차광된 타이트하게 폐쇄된 호박색(amber) 유리제 용기에서 2 내지 8℃에서 보존되었다. 제형은 사용 전에 냉장고에서 꺼냈고, 그 후, 주위 실온(15 내지 25℃)에 도달하도록 방치하였다. 투약 용액은, 유사한 라퀴니모드 투약 용액의 안정성 데이터에 의거해서, 적어도 48시간 동안 안정한 것으로 가정되었다.
투약 용액에 대해 획득된 농도
투약 용액 중 라퀴니모드 농도는, 처치 전에, 용액으로6부터 취한 이중 샘플에서 UV 검출과 함께 유효한 HPLC 방법에 의해 결정되었다. 획득된 농도는 공칭 농도의 ±10% 내였다.
임상 관찰
사망률, 질환의 징후 혹은 치료에 대한 심한 반응이 문서화되었다.
혈액 샘플링, 혈장 제조
혈액은 이하의 표에 상세히 기재된 바와 같이 투약 후 이하의 시점, 즉, 1, 2, 4, 8 및 24시간에 동물로부터 채혈되었다. 실제 샘플링 시간이 기록되었다.
Figure pct00036
캐뉼러 삽입된 래트로부터의 채혈
각 동물은 확고하게 규제되었다. 봉입의 제거 후, 캐뉼러의 포트에는 PBS를 수용하고 있는 주사기 상에 장착된 적절한 무딘 바늘로 접근하였다. 대략 100㎕의 혈액을 빼낸 후, 주사기를 깨끗한 헤파린 첨가된 주사기로 바꾸었다. 대략 250㎕의 혈액을 혈장의 제조를 위하여 채혈하였다. 혈액의 첫번째 100㎕ 분획은 도로 넣고, PBS 250㎕를 카테터를 통해 동물에게 부여하였다. 스톡 헤파린(200 IU/㎖) 10㎖를 멸균 글라이세롤(d=1.26 g/㎖) 10㎖와 혼합하여 제조한 헤파린 첨가된 글라이세롤(100 IU/㎖) 용액을 카테터에 채웠다. 혈액 시료들을 즉시 혼합하고 얼음 위에 놓았다.
혈장의 준비
원심분리를 실시가능하자마자 하지만 채혈로부터 40분 이하에 수행하였다.
전혈을 4℃에서 10분 동안 2500g에서 원심분리하고, 분리된 혈장을 미리 표지된 폴리프로필렌 튜브로 옮기고, 해당 튜브를 채혈 70분 내에 -70℃에서 동결시켰다.
동결된 샘플을 분석 때까지 공칭 -70℃에서 보존하는 라퀴니모드 농도의 결정을 위하여 Bioanalytical Laboratory로 옮겼다.
혈장 샘플의 생분석
테스트 항목 중 농도(화합물 1, 화합물 2, 화합물 3 및 라퀴니모드) 및 DELAQ의 농도는 신뢰성 있는 LC/MS/MS 분석평가를 이용해서 혈장 샘플에서 결정하였다.
약동학 데이터 분석
약동학 파라미터를 산출하고, 평균 혈장 수준 대 시간 곡선을 평가하였다.
이하의 약동학 파라미터는 화합물 1, 화합물 2, 화합물 3 및 라퀴니모드의 평균 혈장 농도-시간 데이터(각 시점에서 3마리의 동물의 평균)로부터 결정하였다.
Figure pct00037
결과의 요약
이하의 표 3 내지 표 6 및 도 2에 도시된 바와 같이, 중수소-풍부 라퀴니모드의 평균 혈장 농도는 비중수소-풍부 라퀴니모드의 것과 견줄만하다.
테스트 항목 중 농도-시간 프로파일은 유의하게 상이하지 않았다. 최대 평균 농도는 투여 후 1 혹은 2시간에 도달되었고, 703 내지 798 ng/㎖에서 변하였다. 평균 농도는 투약 후 24시간에 194 내지 227 ng/㎖로 감소되었다. 라퀴니모드, 화합물 1, 화합물 2 및 화합물 3의 AUC값은 각각 15506.0, 13783.4, 12289.8 및 15750.2였는 바, 역시 유의한 노출 차이를 보이지 않았다.
Figure pct00038
Figure pct00039
Figure pct00040
Figure pct00041
이하의 표 7 및 표 8에 그리고 도 1에 표시된 바와 같이, 중수소-풍부 라퀴니모드의 경구 투여 후에 형성되는 DELAQ의 양은 비중수소-풍부 라퀴니모드 투여 후에 형성되는 양보다 낮다. 평균 약 10배 저감이 라퀴니모드로 처치된 동물의 혈장에 비해서 화합물 2로 처치된 동물의 혈장에서 측정된 DELAQ 농도에서 관찰되었다. 전자의 군에서는 평균 DELAQ 농도가 18.3 내지 75.4 pg/㎖에서 변하였고, 라퀴니모드를 받은 군에서는 142 내지 878 pg/㎖에서 변하였다. 두 군에 있어서, 가장 낮은 DELAQ 농도는 투여 후 1시간에 측정되었고, 투약 후 24시간에 마지막 샘플을 채취할 때까지 DELAQ 농도는 증가되었다.
Figure pct00042
Figure pct00043
테스트 결과는, 중수소-풍부 라퀴니모드가 DELAQ의 형성을 저감시키는 한편, 비중수소화된 라퀴니모드의 것과 유사한 혈장 농도-시간 프로파일을 유지하는 것으로 나타났다.
실시예 4: MOG-유도(미엘린-희소돌기아교세포 당단백질) EAE(실험적 자가면역 뇌척수염)에서의 중수소화된 라퀴니모드(화합물 1, 2 및 3)의 효능의 평가
이 연구의 목적은 C57BL/6 마우스에서 MOG 유도 EAE를 이용해서, 라퀴니모드와 비교해서, 라퀴니모드, 화합물 1, 2 및 3의 3가지 중수소화된 형태의 효능을 평가하기 위한 것이다.
EAE는 다발성 경화증에 대한 허용된 동물 모델이고, C57BL/6에서의 MOG에 의한 유도는 잘 확립된 모델이다.
일반적 설계
뇌염 유발성 에멀전의 주입에 의해 마우스에서 질환을 유도시켰다.
10 ㎎/㎏의 화합물 1, 2 및 3, 10 및 25 ㎎/㎏의 라퀴니모드 또는 비히클을 종료(30일) 때까지 연구 초기(0일)로부터 투여하였다. 모든 군은 매일 경구로 처치되었다.
재료:
화합물 1, 2 및 3은 실시예 1에 기재된 바와 같이 제조하였다.
라퀴니모드(Teva 제품)
정제수(Direct-Q, Millipore).
백일해 독소: Sigma, 코드 # 2980, 로트 044K1449.
MOG 35-55: Mnf Novatide, 로트 # 90016-71-1.
완전 프로인트 항원보강체(Complete Freund's Adjuvant: CFA): Sigma, 코드: F-5881, 로트 104K8930.
식염수: Mnf-DEMO S.A, 코드 05029, 로트 # 0101610.
결핵균(Mycobacterium tuberculosis) H37 RA (MT): Mnf-Difco.
종, 계통 및 공급사
2010년 1월 26일자로 이스라엘의 Harlan Animal Breeding Center로부터 얻어진 C57BL/6 계통의 건강한 비출산, 비임신 암컷 마우스가 이 연구에 이용되었다. 동물의 체중은 15 내지 22g이었고, 도착 시 대략 7 내지 8주령이었다. 동물의 체중은 분만일자에 기록되었다. 명백히 건강한 동물이 치료 개시 전에 임의의 연구 군에 할당되었다. 마우스는 귀 태그를 이용해서 개별적으로 식별되었다. 각 케이지 상의 컬러-코드화된 카드는 케이지 번호, 군 번호 및 신분증명을 포함하는 정보를 부여하였다. 동물 수용 및 케어 조건은 유지되었다.
EAE 유도
EAE는 MOG(150.0 ㎍/마우스), 및 결핵균이 풍부한 CFA(1 ㎎/㎖ CFA)로 이루어진 뇌염 유발성 혼합물(에멀전)을 주입함으로써 유도되었다.
에멀전 0.2㎖의 부피는 마우스의 옆구리 속으로 피하 주입되었다.
백일해 독소는 유도일 그리고 48일 후에 복강내로 주입되었다(총량은 0.2㎖ 용량 부피로 0.1 + 0.1=0.200 ㎍/마우스였다).
마우스는 6개의 치료군, 즉, 비히클, 라퀴니모드(25 ㎎/㎏ and 10 ㎎/㎏), 각각 10 ㎎/㎏의 화합물 1, 2 및 3으로 할당되었다.
뇌염 유발성 에멀전의 제조 및 투여
오일 부분: CFA(1 ㎎/㎖ MT를 함유함)
액체 부분: 15.0㎎ MOG를 생리 식염수 10.0 ㎖에 희석시켜 1.5 ㎎/㎖ MOG 스톡 용액을 수득하였다. 에멀전은 서로 로이 록(Leur lock)에 접속된 2개의 주사기 내에 오일 부분과 액체 부분(1:1)의 동일 부분으로 이루어져, 인슐린 주사기로 옮기고, 각 마우스의 우측 옆구리에 0.2㎖를 주입하였다.
백일해 독소의 제조 및 투여
55㎕ 백일해 독소(200 ㎍/㎖)를 식염수 21.945㎖에 가하고, 500 ng/㎖를 수득하였다. 백일해 독소를 뇌염 유발 물질 주입 일 및 48일 후에 복강내에 투여하였다(100.0 ng/0.2㎖/마우스 X 2 = 200.0 ng/마우스).
테스트 제형의 제조 및 투여
2.5㎎/㎖ 라퀴니모드의 농도는 용량 수준 25.0 ㎎/㎏을 위하여 정제수 중에 제조하였다. 테스트 제형은 호박색 병에서 사용 전까지 2 내지 8℃에서 보존되었다. 25㎎/㎏ 라퀴니모드 군의 마우스에는 (표 4b에 표시된 바와 같이) 경구 섭식에 의해 하루에 한번씩 200㎕/마우스의 부피 용량 수준에서 라퀴니모드를 투여하였다.
1.0 ㎎/㎖ 라퀴니모드의 농도는 용량 수준 10.0 ㎎/㎏을 위하여 종래의 라퀴니모드 또는 화합물 1, 2 및 3에 대해서 정제수 중에 제조하였다. 테스트 제형은 호박색 병에서 사용 전까지 2 내지 8℃에서 보존되었다.
마우스에게는 하루에 한번씩 라퀴니모드 10 ㎎/㎏군에게 경구 섭식에 의해 200㎕/마우스의 부피 용량 수준에서 종래의 라퀴니모드를 투여하였다. 테스트 화합물의 투여는 마찬가지 방식으로 수행되었다. 비히클(이중 증류수)은 마찬가지 방식으로 음성 대조군(군 번호 1)에게 투여되었다.
이환률 및 사망률
모든 동물은 어떠한 것이 빈사상태에 있는지를 검출하기 위하여 하루에 한번씩 조사되었다. 마우스는 1주에 한번 칭량되었다.
EAE 임상 증상
마우스는 EAE 유도 후 10일째로부터 매일 관찰되었고, EAE 임상 증상을 점수화하였다. 점수는 이하의 표 4a에 기재된 등급에 따라서 관찰 카드 상에 기록되었다.
[표 4a]
Figure pct00044
점수 1 및 그 이상을 지니는 모든 마우스는 병든 것으로 간주되었다. 제1임상 징후가 나타날 경우, 모든 마우스는 물 속에 담근 사료를 부여하였는데, 이 사료는 케이지의 베딩 상의 상이한 개소에 퍼뜨렸다. 계산 목적을 위하여, 희생되거나 사망한 동물의 점수(6)는 이월되었다.
결과의 해석
질환의 발병률(질환비)의 계산
각 군에서 병든 동물의 수가 합계되었다. 발병률은 다음과 같이 계산되었다:
Figure pct00045
발병에 따른 억제율은 다음과 같이 계산되었다:
Figure pct00046
사망률/빈사율(사망비)의 계산
각 군 내의 사망 혹은 빈사 동물의 수를 합하였다. 질환의 사망률은 다음과 같이 계산되었다:
Figure pct00047
사망률에 따른 억제율은 다음과 같이 계산되었다:
Figure pct00048
질환의 기간의 계산
일수로 표현되는 질환의 평균 기간은 다음과 같이 계산되었다:
Figure pct00049
질환의 개시의 평균 지연의 계산
일수로 표현되는 질환의 평균 개시는 다음과 같이 계산되었다:
Figure pct00050
일수로 표현되는 질환 개시의 평균 지연은 테스트 군으로부터 대조군의 질환의 평균 개시를 차감함으로써 계산되었다.
평균 최대 점소 및 억제율의 계산
각 군의 평균 최대 점수(mean maximal score: MMS)는 다음과 같이 계산되었다:
Figure pct00051
MMS에 따른 억제율은 다음과 같이 계산되었다:
Figure pct00052
군 평균 점수 및 억제율의 계산
테스트 군 내의 각 마우스의 1일 점수는 요약되어 있었고, 개체 평균 1일 점수(individual mean daily score: IMS)는 다음과 같이 계산되었다:
Figure pct00053
군 평균 점수(group mean score: GMS)는 다음과 같이 계산되었다:
Figure pct00054
억제율은 다음과 같이 계산되었다:
Figure pct00055
각 군의 발병률, 사망률, MMS, GMS, 질환 기간, 질환의 개시 및 활성의 요약은 이하의 표 4b에 표시되어 있다.
[표 4b]
Figure pct00056
발병률 및 사망률
비히클 처치된 대조군에서 EAE로 인해 14/15마리의 마우스가 병들었다. 라퀴니모드(10 ㎎/㎏)로 처치된 군에서는, 각각 화합물 2, 3, 1에 의한 처치군에서의 13/15, 10/15 및 8/15에 비해서 9/15마리의 마우스가 병들었다. 25 ㎎/㎏ 라퀴니모드로 처치된 양성 대조군에서는 4/15마리의 마우스가 병들었다. 어느 처치군에서도 사망률은 관찰되지 않았다.
대조군(개시 11.9±5.5일)에 비해서 15.3 내지 22.1일의 개시를 지니는 라퀴니모드(10 ㎎/㎏)로 처치된 모든 군에서 임상 증상의 표출에 지연이 있었다. 비히클 처치된 대조군에 비해서 이들 처치군에 있어서의 EAE 임상 증상 기간은 대조군의 19.1±5.5일에 비해서 7.9 내지 13.2일이었다.
평균 최대 점수(MMS) 및 군 평균 점수(GMS)
비히클 처치된 음성 대조군의 MMS 및 GMS는 각각 3.2±1.3 및 2.2±1.0이었다. 양성 라퀴니모드(25 ㎎/㎏) 대조군은 각각 MMS(점수 1.3±1.8) 및 GMS(점수 0.5±0.1)에 따라 EAE의 59.4% 및 97.7% 억제를 보였다.
화합물 1, 2 및 3로 처치된 군을 라퀴니모드에 대해서 비교할 때, 활성에 유의한 차이는 관찰되지 않았다. 그러나, 화합물 1, 2 및 3으로 처치된 군이 라퀴니모드 군보다 더욱 활성인 것을 나타내는 경향이 있었다.
도 3에 도시된 바와 같이, GMS 스케일 상에서, 라퀴니모드(10㎎/㎏) 군은 화합물 2, 3 및 1로 각각 처치된 군에서의 64.3%, 59.7% 및 66.5% 활성에 비해서 48.4% 활성을 보였다.
논의
이 테스트 결과는, 중수소-풍부 라퀴니모드가 대사산물, 특히 임의선택적으로 중수소화된 DELAQ의 형성을 저감시키는 한편, 비중수소화된 라퀴니모드의 것과 유사한 혈장 농도-시간 프로파일을 유지하는 것을 나타낸다.
상기 테스트 결과는 또한 중수소-풍부 라퀴니모드가 EAE 임상 증상의 억제에 있어서 라퀴니모드와 같은 정도로 혹은 그보다 양호하게 활성인 것을 나타낸다. 이 연구 결과는 중수소-풍부 라퀴니모드에 대한 투약 파라미터를 개발하는 것을 허용한다.
실시예 5: 배양된 인간 간세포 내 사이토크롬 P450 발현의 유도인자로서의 라퀴니모드 및 화합물 2의 시험관내 평가
1. 도입
본 연구의 목적은 CYP 효소의 발현에 대한 라퀴니모드 또는 화합물 2를 이용한 신선한 인간 간세포의 1차 배양물을 치료하는 효과를 연구하기 위한 것이었다.
배양된 간세포는 NCE의 유도 효과를 평가하기 위한 신뢰성 있는 테스트 시스템인 것으로 입증되어 있다. 간세포는 비이식가능한(non-transplantable) 인간 간으로부터 단리될 수 있고(Bjornsson et al., (2003), The conduct of in vitro and in vivo drug-drug interaction studies: a Pharmaceutical Research and Manufacturers of America (PhRMA) perspective. Drug Metab Dispos 31:815-832; Mudra and Parkinson, (2001), Preparation of hepatocytes, in Current Protocols s in Toxicology, Volume 2 (Maines MD ed) unit 14.2, 13 p, John Wiley and Sons, Inc., New York, New York), 합류식 단층에서 배양되었다(LeCluyse et al., (1994), Formation of extensive canalicular networks by rat hepatocytes cultured in collagen-sandwich configuration. Am J Physiol 266 (Cell Physiol. 35): C1764-C1774). 배양 2 내지 3일 후, 이들 세포는 그들의 형태 무결성을 되찾아, 원형 유도인자(prototypical inducer)에 의한 처치가 적절한 CYP 효소의 유도를 가져온다(LeCluyse et al., (1996), Cultured rat hepatocytes, in Pharmaceutical Biotechnology. Vol. 8, Models for Assessing Drug Absorption and Metabolism. (Borchardt RT, Wilson G and Smith P eds) pp 121-159, Plenum Press, New York; Robertson et al., (2000), In vitro inhibition and induction of human hepatic cytochrome P450 enzymes by modafinil. Drug Metab Dispos 28:664-671; Madan et al., (2003), Effects of prototypical microsomal enzyme inducers on cytochrome P450 expression in cultured human hepatocytes. Drug Metab Dispos 31:421-431). 이런 이유 때문에, 배양된 인간 간세포를 이용하여 NCE의 잠재성을 결정하여 CYP 효소의 유도를 초래하는 것이 허용가능하다.
이 연구는 테스트 물품의 임의의 유도적 효과가 기계론적으로 뚜렷하고 임상적으로 관련된 두 CYP 유도인자, 즉, 오메프라졸(AhR 활성자 및 CYP1A2 유도인자) 및 리팜핀(PXR 작용제 및 CYP3A4의 유도인자)에 대해서 분류될 수 있게 설계되었다(Parkinson and Ogilvie, (2008), Biotransformation of xenobiotics, in Casarett & Doull's Toxicology, The Basic Science of Poisons. Seventh Edition, (Klaassen CD ed) pp 161-304, The McGraw Hill Companies, Inc., New York). 이를 위하여, 하나의 간으로부터 배양된 인간 간세포의 하나의 제조는, DMSO(0.1% v/v, 비히클 대조군), 5가지 농도 중 하나의 라퀴니모드(0.01, 0.05, 0.1, 1 또는 10μM) 또는 화합물 2(0.01, 0.05, 0.1 또는 10μM)를 이용해서 연속 3일 동안 하루에 한번씩 처치되었다.
처치 후, 모든 세포는 LC/MS/MS에 의해 페나세틴 O-탈알킬화(CYP1A2용의 마커) 및 미다졸람 1'-하이드록실화(CYP3A4/5용의 마커)의 분석에 대한 마터 기질로 동소(in situ) 배양되었다. 동소 인큐베이션 후, 동일 처치군으로부터의 동일 간세포는 트리졸(TRIzol)에 의해 수확되어 RNA를 단리하였고, 이것은 CYP1A2 및 CYP3A4 mRNA 수준에 대한 라퀴니모드 및 화합물 2의 효과를 평가하기 위하여 qRT-PCR에 의해 분석되었다. 연구 설계, 테스트 시스템 및 본 연구에 이용된 프로브 기질의 선택과 농도는 약물 상호작용 연구-연구 설계, 데이터 분석 및 투약 및 표지화를 위한 영향에 대한 FDA의 드래프트 가이드 문서와 현재의 FDA 검토 논문들(Food and Drug Administration, (2006), Draft Guidance for Industry: Drug Interaction Studies-Study Design, Data Analysis, and Implications for Dosing and Labeling, pp 55, U.S. Department of Health and Human Services, Rockville, MD; Huang et al., (2008), New Era in Drug Interactions Evaluation: US Food and Drug Administration Update on CYP Enzymes, Transporters, and the Guidance Process. J Clin Pharmacol 48: 662-670; Zhang et al., (2009), Predicting Drug-Drug Interactions: An FDA Perspective. The AAPS Journal 11:300-306) 및 효소 유도에 대한 PhRMA 전망(Chu et al., (2009), In vitro and in vivo induction of cytochrome P450: a survey of the current practices and recommendations: a Pharmaceutical Research and Manufacturers of America (PhRMA) perspectice. Drug Metab Dispos 27029 (87pp) doi: 10.1124/dmd.109.0270)에서의 권장사항에 기초하고 있다.
2. 재료 및 방법
2.1 재료
2.1.1 효소 활성 분석평가
Figure pct00057
2.1.2 기타 분석평가
Figure pct00058
2.1.3 기타 시약
Figure pct00059
Figure pct00060
2.2 테스트 시스템
미국 캔서스주 66219 레넥스시 웨스트 116 스트리트 16825에 소재된 XenoTech, LLC에서 공급된 신선하게 단리된 인간 간세포(이하, "H971"라 지칭됨)의 하나의 프레파라트(preparation)가 이 연구에서 처치되었다.
2.2.1 배양된 인간 간세포의 치료
간세포 배양물을 연속 3일 동안 매일 처리하고, SOP L5021.01(XenoTech, LLC) 및 이미 설명된 방법(Robertson et al., (2000), In vitro inhibition and induction of human hepatic cytochrome P450 enzymes by modafinil. Drug Metab Dispos 28:664-671; Madan et al., (2003), Effects of prototypical microsomal enzyme inducers on cytochrome P450 expression in cultured human hepatocytes. Drug Metab Dispos 31:421-431; Paris et al., (2009), In vitro inhibition and induction of human liver cytochrome P450 (CYP) enzymes by milnacipran. Drug Metab Dispos 37:2045-2054)에 따라서 배양하였다. 배양물을, 0.1% DMSO(비히클, 음성 대조군), 5가지 농도 중 하나의 라퀴니모드(0.01, 0.05, 0.1, 1 또는 10μM) 또는 화합물 2(0.01, 0.05, 0.1, 1 또는 10μM), 미베프라딜(10μM) 또는 2종의 공지된 인간 CYP 효소 유도인자 중 하나, 즉, 오메프라졸(100μM) 및 리팜핀(10μM), 양성 대조군을 함유하는 보충 MCM(각 웰은 0.2㎖로 처리됨)으로 처리되었다.
2.2.2 배양된 인간 간세포로부터의 RNA 단리, 정제 및 정량화
최종 처치 후 대략 24시간에, 간세포를, 동소 마커 기질 인큐베이션 후의 트리졸 시약에 용해시키고, 세포 용해물을 -75±5℃에 보존하였다. 인간 간세포 프레파라트 H971에 대해서, 치료군당 6개의 웰로부터의 배지를 흡인해내고, 각 웰에 대략 132㎕ 트리졸을 가하였다. 세포 용해물을 반복된 피펫팅에 의해 혼합하였다. 트리졸 프로토콜(Invitrogen)을 이용해서 세포 용해물로부터 전체 RNA를 단리시키고, SOP L6161.02에 따른 RNeasy 미니 키트(Qiagen Inc.)를 이용해서 정제시켰다. SOP L6162.02에 따라서 KC4 Signature 소프트웨어(버전 3.4 Rev 21, BioTek Instruments, Inc.)를 구비한 BioTek Synergy HT 플레이트 리더(BioTek Instruments, Inc.) 상에서 260 및 280㎚에서 흡광도를 측정함으로써, RNA 품질 및 농도를 결정하였다. RNA 무결성의 분석은 SOP L6162.02에 따라서 Agilent 2100 Bioanalyzer(Agilent Technologies, Inc.) 상에서 RNA 6000 나노 분석평가 키트를 이용해서 수행하였다. SOP L6160.04에 따라서 AB 7300 실시간 PCR 시스템 열순환 프로그램 또는 AB 7900HT 고속 실시간 PCR 시스템 열순환 프로그램(Applied Biosystems)을 이용해서 RT 마스터 믹스(Master Mix)에 의해 RNA로부터 단일 가닥 cDNA를 제조하였다. RT 마스터 믹스는 10X RT 완충액, 25X deoxyNTPs, 10X 랜덤 헥사머, RNase 억제제(20 U/㎕), MultiScribe 역전사효소(50 U/㎕) 및 RNase-무함유 수로 구성되어 있다. RT 마스터 믹스를 각 RNA 샘플에 가하여 반응의 성분들을 완성하였다. NTC(no template control)가 분석에 포함되었다. NTC 반응을 위하여, RNase-무함유 수를 RNA 샘플 대신에 첨가하였다. cDNA 제조 샘플은 qRT-PCR에 의한 분석 전에 -20±5℃에서 보존하였다.
2.3 시험 제품
라퀴니모드 나트륨은 미국 특허 제6,077,851호에 기재된 절차에 따라서 제조되었고, 화합물 2는 실시예 1에 기재된 절차에 따라서 제조되었다.
Figure pct00061
라퀴니모드 또는 화합물 2(고순도 멸균수 중 10mM)의 용액을 고순도 멸균수 중 적절한 양의 라퀴니모드 또는 화합물 2를 용해시킴으로써 제조하였다. 라퀴니모드에 대해서, 10mM 스톡 용액을 고순도 멸균수로 2, 1 및 0.1μM로 희석하였다. 또, 상기 1μM 용액을 고순도 멸균수로 0.05 및 0.01mM로 희석하였다. 이어서, 화합물 2에 대해서, 10mM 스톡 용액을 고순도 멸균수로 1 및 0.1μM로 희석하였다. 또한, 1μM 용액을 고순도 멸균수로 0.05 및 0.01mM로 희석하였다. 라퀴니모드 및 화합물 2의 용액(모두 mM 농도)은 개별적으로 연구에 이용되도록 충분한 수의 분획으로 나누고, 호박색 유리제품 또는 알루미늄 박을 이용해서 차광하였으며, 2개월 유효기간으로 동결 보존하였다(-20±5℃).
각 처치일 전에, 라퀴니모드 및 화합물 2 스톡 용액의 분획은 실온으로 조절하고, 낮은 설정치 상에서 온화하게 진탕하거나 휘저었다. 이어서, 라퀴니모드(0.01, 0.05, 0.1, 1 및 10 mM) 및 화합물 2(0.01, 0.05, 0.1, 1 및 10 mM)를 세포 배양 배지(1:1000 희석)로 희석시키고, 얻어진 작업 용량 용액을 간세포 배양물에 가하여 2시간의 희석 내(대략 15분 내지 65분)에 라퀴니모드(0.01, 0.05, 0.1, 1 및 10μM) 및 화합물 2(0.01, 0.05, 0.1, 1 및 10μM)의 최종 농도를 얻었다. 테스트 시스템의 용해도를 결정하기 위하여 간세포에 적용하기 전에 스톡 및 투약 용액의 품질의 육안 검사를 수행하였다.
처치 직전, 각 처치일에, 그리고 마커 기질의 배양 직전에, 소비된 배양 배지(소비된 투여 배지)를 비히클, 라퀴니모드 및 화합물 2 처리군으로부터 수집하였다. 대략 150㎕를 상기 처치군의 각각으로부터, 3개의 웰의 각각으로부터 수집하고, 대략 450㎕의 최종 부피로 각 샘플에 대해서 풀링(pooling)하였다. 이들 소비된 배지 샘플은 잔류 라퀴니모드, 화합물 2 및 탈에틸화 대사산물(DELAQ)에 대해서 분석되었다.
2.4 양성 대조군 및 비히클
이하의 화학약품 또는 비히클이 간세포 투약에 이용되었다.
Figure pct00062
오메프라졸 및 리팜핀을 DMSO에 용해시켜 배양 배지 중 DMSO의 최종 농도를 0.1% v/v로 하였다. 미베프라딜을 고멸균 순도수 중에 제조하였다. SOP L5021.01(XenoTech, LLC)에 따르면, 비히클 및 양성 대조군의 작업 용액을 각 처치일에 처치 전 2시간 미만(대략 15분 내지 65분)에 스톡 용액으로부터 신선하게 제조하였다.
2.5 분석평가 조건
2.5.1 배양된 인간 간세포를 이용한 프로브 기질의 동소 인큐베이션
SOP L5041.02에 따라서 프로브 기질을 이용한 간세포의 인큐베이션을 행하였다. 최종 처치 후 대략 24시간에, 소비된 배지를 웰로부터 흡인해내고, 각 웰을 미리 가온된(37±2℃) 신선한 배양 배지로 2회 헹구었다. 배지를 웰로부터 흡인해내고, 각 웰에 프로브 기질을 함유하는 미리 가온된 배지 200㎕의 첨가에 의해 반응을 개시하였다. 배양 다수웰 플레이트를 가습 배양실(95% 상대 습도에서 37±1℃, 95/5% 공기/CO2) 내에 배치하였고, 30분 동안 인큐베이션을 행하였다(표 9). 30분째에, 인큐베이션 혼합물의 분획(150㎕)을 제거하여, 300㎕의 중지 시약(아세토나이트릴) 및 내부 표준(표 10)을 수용하는 96-웰 플레이트 중 하나의 웰에 가하였다. 이 혼합물을 철저하게 혼합하고, 2 내지 8℃에서 적어도 15분 동안 방치시켰다. 샘플을 2 내지 8℃에서 10분 동안 2000×g에서 원심분리하고, 상청 분획을 LC/MS/MS에 의해 분석하였다. 각 분석평가를 위하여, 표 9에 표시된 조건 하에서 인큐베이션을 수행하였다.
Figure pct00063
Figure pct00064
표준 및 품질 대조 샘플은 모사한 대사산물 표준의 첨가에 의해 마찬가지로 제조하였다.
2.6 분석 방법
2.6.1 LC/MS/MS 방법
모든 분석은 유효한 LC/MS/MS법으로 수행되었다. 각 대사산물의 분석에 대해서 이용된 절차는 적용가능한 LC/MS/MS 분석법 SOP에 따랐고, 표 10에 요약되어 있다. MS 장비는 Shimadzu HPLC 펌프 및 오토샘플러 시스템을 구비한 ABI Sciex(Applied Biosystems/MDS SCIEX) API 4000 또는 API 3000 기기였다.
Figure pct00065
모사한 대사산물 표준이 이용되었고, 중수소화된 대사산물은 모든 분석평가에서 내부 표준으로서 이용되었다. 제로-시간 인큐베이션은 블랭크로서 제공되었다. 샘플 분석, 적분 및 보고서 작성은 각각 SOP L8013.02, L8020.02 및 L8011.02(XenoTech, LLC)에 따라서 행하였다.
대사산물은 가중치부가된(1/x), 선형의 최소제곱 회귀(least-squares regression)의 역산(back calculation)에 기초한 표준 교정 곡선을 기준으로서 정량되었다. 회귀 적합도(regression fit)는 모사한 대사산물 표준으로부터 제조된 교정 표준 샘플로부터 계산된 내부 표준에 대한 분석치의 피크비에 의거하고 있다. 피크 면적은 Applied Biosystems/MDS SCIEX 애널리스트(Analyst) 데이터 시스템, 버전 1.4.2로 적분되었다.
2.6.2 mRNA 분석
정량적 RT-PCR은 SOP L6160.04(XenoTech, LLC) 및 Applied Biosystems 프로토콜에 따라서 수행하였다. 각 PCR은 3중으로 수행하였다. 프라이머 믹스(Primer Mix)는 각 유전자 발현 분석평가에 대해서 제조하였다. 전형적인 프라이머 믹스는 TaqMan 유니버셜 마스터 믹스(1X), 유전자 발현 분석평가(1X, 900nM 순방향 및 역방향 프라이머) 및 RNase-무함유 수를 함유하였다. 반응 믹스는 cDNA에 프라이머 믹스를 가함으로써 제조하였다. 샘플의 비율(10% 이상)은 NAC를 포함하였다. (NAC는 역전사되지 않고 게놈 DNA가 아니라 mRNA가 PCR의 형광 신호의 공급원인 것을 나타내는데 이용되는 RNA 샘플이다.) 반응은 Applied Biosystems 실시간 PCR 서열 검출 시스템(AB 7300 또는 AB 7900HT) 상에서 분석되었다. 대조군 cDNA(GAPDH)의 것과 비교된 표적 cDNA의 상대량은 ΔΔCt 방법(Applied Biosystems User Bulletin #2)에 의해 결정하였다. 상대 정량화는 대조 샘플(예컨대, DMSO)에 대한 테스트 샘플의 mRNA 발현의 변화를 평가한다. 이 방법은 표적 증폭의 효율 및 내인성 대조군 증폭의 효율이 대략 동일하다고 가정한다.
2.7 데이터 처리
데이터는 컴퓨터 프로그램 마이크로 엑셀 2003(Microsoft Inc.)으로 처리하고 그래프화하였다. 유사 치료군으로부터의 반응의 개별의 속도는 평균화하고, n = 3인 이들 군에 대해서, 표준 편차를 구하였다. 배수 증가는 각 치료군에 대한 효소 속도를 비히클 대조군의 효소 속도로 나눔으로써 구하였다. 양성 대조군 퍼센트는 다음과 같은 방정식으로 계산되었다:
Figure pct00066
qRT-PCR에 대해서, 데이터는 상대 정량화(Applied Biosystems)를 위하여 서열 검출 시스템(Sequence Detection System: SDS) 소프트웨어를 이용해서 처리하였다. 이 소프트웨어는 미처리 대조군에서의 표적의 PCR 신호에 대한 표적 전사의 PCR 신호에 관한 비교 Ct 방법(ΔCt)을 이용해서 상대 유전자 발현을 분석한다. 처리된 샘플 신호와 미처리 대조군 신호는 모두 내인성 대조군(GAPDH)에 대해서 정규화되고, 이를 위하여 발현은 처치에 의해 영향받지 않고 발현은 처치 중인 조직을 통해서 내내 일정하였다. 이 방법의 결과는 미처리 대조군의 표적 전사 발현에 대해서 발현의 배수 변수로서 표현된다.
계산은 다음과 같다:
1. ΔCt = Ct(표적) - Ct(내인성 대조군)
2. ΔΔCt = ΔCt(처리된 샘플) - ΔCt(미처리 대조군)
3. 발현 배수 변화 = 2-ΔΔCt
소프트웨어 내의 알고리즘은 분석으로부터 이상치(outlier)를 자동적으로 제거하였다. 데이터의 허용을 위한 기준은 Applied Biosystems에 독점권이 있다. 이상치는 전형적으로 만약 있다면 충분히 증폭되지 않은 웰이고 연관된 복제 웰로부처 유의하게 상이한 Ct값을 지니는 웰인 것으로 간주되었다.
양성 대조군에 대한 mRNA 발현의 수준은 다음과 같이 계산되었다:
Figure pct00067
3. 결과 및 논의
CYP 효소 활성 및 mRNA 수준에 대한 라퀴니모드 및 화합물 2를 이용한 인간 간세포의 치료 효과는 표 11 내지 표 15에 표시되어 있다. 달리 언급되어 있지 않는 한, 도면 및 표 내의 데이터는 3개의 유의한 수치까지 반올림된, 하나의 인간 프레파라트로부터 3개의 인큐베이션으로부터의 데이터의 평균±표준편차로서 제시된다. 평균 배수 증가는 표 12 및 표 14에 요약되어 있다. 배수 증가는 대조 분율로서 혹은 대조군에 대한 배수 증가로서 제시되고, 여기서 대조군은 대응하는 비히클-처리된 샘플에 관한 것이다. 배수 증가는 3개의 유의한 수치까지 반올림되었다. 원형 유도인자에 대한 테스트 물품의 비교(양성 대조군 퍼센트)는 표 13 및 표 15에 표시되고, 3개의 유의한 수치까지 반올림되었다.
Figure pct00068
Figure pct00069
Figure pct00070
Figure pct00071
Figure pct00072
3.1 배양된 인간 간세포의 생존력 및 형태
단리 시, 인간 간세포 프레파라트의 생존력은 70.9%였다. 72시간의 적응 기간 동안 혹은 후에, 배양물은 광 현미경으로 매일 관찰하여, 테스트 물품과 대조군 물품을 이용한 처치에 적합한 합류(confluency)를 지니는 형태학 상 정상인 것으로 판정되었다. 최종 처치 후 24시간 내에, 간세포를 촬영하여 그들의 형태 무결성 및 이 테스트 물품의 독성의 임의의 명백한 징후를 문서화하였다. 대표적인 사진은 테스팅 설비(Testing Facility)에 유지된다. 이들 현미경사진은, 일반적으로, 비히클(DMSO), 라퀴니모드 및 화합물 2 또는 공지된 CYP 유도인자로 처치된 인간 간세포가 정상 간세포 형태를 나타내는 것을 보여준다. 처치 전 및 동안, 인간 간세포 배양물은 수개의 세포간 공간을 지니는 합류 단층을 형성하였으며; 이들은 입방체였고, 하나 혹은 두 개의 중앙에 위치된 핵을 지니는 과립 세포 및 무손상 세포막을 포함하고 있었다. 라퀴니모드, 화합물 2 또는 라퀴니모드 및 미베프라딜을 이용한 인간 간세포 배양물 H971의 처치는 세포 형태에 어떠한 변화도 초래하지 않았다.
3.2 인간 CYP1A2 활성 및 mRNA 수준에 대한 라퀴니모드 및 화합물 2의 효과
페나세틴 O -데알킬라제(CYP1A2) 활성의 결정
배양된 인간 간세포에 있어서, 페나세틴 O-탈알킬화는 주된 오메프라졸-유도성 CYP 효소인 CYP1A2에 의해 촉매된다. 동소 페나세틴 O-데알킬라제(CYP1A2) 활성에 대한 라퀴니모드 또는 화합물 2에 의한 배양된 인간 간세포의 치료 효과는 표 11에 표시되어 있고, 표 12에 요약되어 있다. 오메프라졸을 이용하여 연속 3일 동안 하루에 한번씩 배양된 인간 간세포의 치료는 페나세틴 O-데알킬라제(CYP1A2) 활성의 평균 28.4배 증가를 초래하였다.
라퀴니모드(10μM까지)에 의한 간세포 배양물 H971의 치료는, 비히클 대조군에 비해서 CYP1A2 활성의 61.0배까지 농도-의존적 증가를 초래하였다. 테스트된 농도(0.01μM 내지 10μM)에서, 라퀴니모드는, CYP1A2 활성 유도 시, 21.7% 내지 291%로, 양성 대조군인 오메프라졸과 같은 정도로 효과적이었다. 또한, 미베프라딜 단독을 이용하여 연속 3일 동안 하루에 한번씩의 치료는 CYP1A2 활성의 3.76배 증가를 초래하였다.
또한, 화합물 2(10μM까지)를 이용한 간세포 배양물 H971의 치료는 비히클 대조군에 비해서 CYP1A2 활성의 60.2배까지 농도-의존적 증가를 초래하였다. 테스트된 농도(0.01μM 내지 10μM)에서, 화합물 2는, CYP1A2 활성 유도 시, 23.3% 내지 216%로, 양성 대조군인 오메프라졸과 같은 정도로 효과적이었다.
CYP1A2 mRNA 수준의 결정
CYP1A2 mRNA 발현에 대한 라퀴니모드 및 화합물 2에 의한 배양된 인간 간세포의 치료 효과는 표 6에 표시되어 있다. 오메프라졸을 이용하여 연속 3일 동안 하루에 한번씩 배양된 인간 간세포의 치료는 CYP1A2 mRNA 수준의 평균 8.58배 증가를 초래하였다.
CYP1A2 활성과 마찬가지로, 라퀴니모드(10μM까지)에 의한 간세포 배양물 H971의 치료는, 비히클 대조군에 비해서, CYP1A2 mRNA 수준의 20.5배까지 농도-의존적 증가를 초래하였다. 테스트된 농도(0.01μM 내지 10μM)에서, 라퀴니모드는, CYP1A2 mRNA 수준 유도 시, 42.5% 내지 257%로, 양성 대조군 오메프라졸과 같은 정도로 효과적이었다. CYP1A2 활성과 대조적으로, 미베프라딜 단독을 이용하여 연속 3일 동안 하루에 한번씩의 치료는, 비히클 대조군에 비해서, CYP1A2 mRNA 수준의 57.7% 감소를 초래하였다.
또한, 화합물 2(10μM까지)를 이용한 간세포 배양물 H971의 치료는 비히클 대조군에 비해서 CYP1A2 mRNA 수준의 24.3배까지 농도-의존적 증가를 초래하였다. 테스트된 농도(0.01μM 내지 10μM)에서, 화합물 2는, CYP1A2 mRNA 수준 유도 시, 24.2% 내지 307%로, 양성 대조군인 오메프라졸과 같은 정도로 효과적이었다.
3.3 인간 CYP3A4/5 활성 및 CYP3A4 mRNA 수준에 대한 라퀴니모드 및 화합물 2의 효과
미다졸람 1'-하이드록실라제(CYP3A4/5) 활성의 결정
배양된 인간 간세포에 있어서, 미다졸람 1'-하이드록실화는 CYP3A4/5에 의해 촉매된다. CYP3A4는 주된 리팜핀-유도성 CYP 효소이다. 동소 미다졸람 1'-하이드록실라제(CYP3A4/5) 활성에 대한 라퀴니모드 및 화합물 2에 의한 배양된 인간 간세포의 치료 효과는 표 11에 표시되어 있고, 표 12에 요약되어 있다. 리팜핀을 이용하여 연속 3일 동안 하루에 한번씩 배양된 인간 간세포의 치료는 미다졸람 1'-하이드록실라제 활성의 증가(4.82배)를 초래하였다.
라퀴니모드(10μM까지) 또는 화합물 2(10μM까지)에 의한 간세포 배양물 H971의 치료는, 비히클 대조군에 비해서, 각각 50.9% 및 48.2%만큼의 CYP3A4/5 활성의 농도-의존적 감소를 초래하였다.
CYP3A4 mRNA 수준의 결정
CYP3A4 mRNA 발현에 대한 라퀴니모드 및 화합물 2에 의한 배양된 인간 간세포의 치료 효과는 표 6에 표시되어 있다. 리팜핀으로 연속 3일 동안 하루에 한번 배양된 인간 간세포의 치료는 CYP3A4 mRNA 수준의 4.63배 증가를 초래하였다.
CYP3A4/5 활성과 마찬가지로, 라퀴니모드(10μM까지) 또는 화합물 2(10μM까지)에 의한 간세포 배양물 H971의 치료는, 각각 CYP3A4 mRNA 수준에 있어서, 비히클 대조군에 비해서 36.4% 및 31.1%만큼 농도-의존적 감소를 초래하였다.
화합물 2 또는 라퀴니모드/DELAQ 비의 결정
화합물 2, 라퀴니모드 및 DELAQ의 농도는, 처치 직전, 각 처치일에, 그리고 마커 기질의 배양 직전에 회수된 배지로부터 소비된 배지 분량 중에서 측정되었다. 형성된 DELAQ의 농도는 화합물 2 배지에 비해서 라퀴니모드 배지에서 대략 2배 높았다. 화합물 2 또는 라퀴니모드의 10μM 처치 농도에서, 화합물 2:DELAQ의 비는 평균 40.9인 반면 라퀴니모드:DELAQ의 비는 평균 15.7이었다. 이것은 화합물 2에 비해서 라퀴니모드로부터 DELAQ의 형성 시 대략 3배 증가를 나타내고, 에틸 모이어티 상의 중수소의 존재에 의해 설명되며, 이는 보다 느린 N-탈에틸화를 유발한다.
4. 결론
결론적으로, 원형 유도인자가 CYP 활성 및 mRNA 수준의 기대하던 적절한 증가를 초래하는 조건 하에, 10μM 라퀴니모드 또는 화합물 2(라퀴니모드의 중수소화된 유사체)에 의한 처치가 CYP1A2 활성 및 mRNA 수준의 유사한 농도-의존적 증가와 CYP3A4/5 활성 및 CYP3A4 mRNA 수준의 농도-의존적 감소를 유발하였지만, 화합물 2:DELAQ 대 라퀴니모드:DELAQ 비에 있어서 대략 3배의 차이가 관찰되었다.

Claims (30)

  1. 자가면역 질환에 걸린 인간 대상체를 치료하는 방법으로서, 상기 대상체를 치료하는데 유효한, 이하의 구조를 지니는 중수소-풍부 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 1일당 0.2㎎ 내지 2.0㎎ 상기 인간 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 자가면역 질환에 걸린 인간 대상체의 치료방법:
    Figure pct00073

    식 중, R1 내지 R10은 각각 독립적으로 H 또는 D이고, R1 내지 R10 중 적어도 하나는 D이다.
  2. 제1항에 있어서, 상기 중수소-풍부 화합물은
    Figure pct00074

    또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염인 것인 방법.
  3. 제2항에 있어서, 상기 중수소-풍부 화합물은
    Figure pct00075

    또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염인 것인 방법.
  4. 제3항에 있어서, 상기 중수소-풍부 화합물은
    Figure pct00076

    또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염인 것인 방법.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 자가면역 질환은 다발성 경화증, 전신 홍반 루푸스, 루푸스 신장염, 루푸스 관절염, 크론병 또는 류마티스 관절염인 것인 방법.
  6. 제5항에 있어서, 상기 자가면역 질환은 다발성 경화증인 것인 방법.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 중수소-풍부 화합물의 투여는 등몰량(equivalent molar amount)의 비중수소-풍부 라퀴니모드(non-deuterium-enriched laquinimod)의 투여보다 상기 자가면역 질환을 치료하는데 더욱 효과적인 것인 방법.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 중수소-풍부 화합물의 투여 시 상기 인간 대상체에 형성되는 임의선택적으로 중수소화된 5-클로로-4-하이드록시-1-메틸-2-옥소-N-페닐-1,2-다이하이드로퀴놀린-3-카복스아마이드의 수준은, 등몰량의 비중수소-풍부 라퀴니모드가 상기 인간 대상체에 투여된 경우 형성되는 5-클로로-4-하이드록시-1-메틸-2-옥소-N-페닐-1,2-다이하이드로퀴놀린-3-카복스아마이드의 수준에 비해서 저감되는 것인 방법.
  9. 제8항에 있어서, 상기 임의선택적으로 중수소화된 5-클로로-4-하이드록시-1-메틸-2-옥소-N-페닐-1,2-다이하이드로퀴놀린-3-카복스아마이드의 수준이 적어도 50% 저감되는 것인 방법.
  10. 제9항에 있어서, 상기 임의선택적으로 중수소화된 5-클로로-4-하이드록시-1-메틸-2-옥소-N-페닐-1,2-다이하이드로퀴놀린-3-카복스아마이드의 수준이 적어도 90% 저감되는 것인 방법.
  11. 인간 대상체에서 임의선택적으로 중수소화된 5-클로로-4-하이드록시-1-메틸-2-옥소-N-페닐-1,2-다이하이드로퀴놀린-3-카복스아마이드의 저감된 형성을 유도하는 방법으로서,
    이하의 구조를 지니는 중수소-풍부 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염의 치료상 유효량을 상기 인간 대상체에게 투여하는 단계를 포함하되,
    상기 저감된 형성은 비중수소-풍부 라퀴니모드의 등몰량의 투여 시 5-클로로-4-하이드록시-1-메틸-2-옥소-N-페닐-1,2-다이하이드로퀴놀린-3-카복스아마이드의 형성과 비교된 것인 방법:
    Figure pct00077

    식 중, R1 내지 R10은 각각 독립적으로 H 또는 D이고, R1 내지 R10 중 적어도 하나는 D이다.
  12. 제11항에 있어서, 상기 임의선택적으로 중수소화된 5-클로로-4-하이드록시-1-메틸-2-옥소-N-페닐-1,2-다이하이드로퀴놀린-3-카복스아마이드의 수준은, 등몰량의 비중수소-풍부 라퀴니모드가 상기 인간 대상체에 투여된 경우 형성되는 5-클로로-4-하이드록시-1-메틸-2-옥소-N-페닐-1,2-다이하이드로퀴놀린-3-카복스아마이드의 수준에 비해서 적어도 50% 저감되는 것인 방법.
  13. 제12항에 있어서, 상기 임의선택적으로 중수소화된 5-클로로-4-하이드록시-1-메틸-2-옥소-N-페닐-1,2-다이하이드로퀴놀린-3-카복스아마이드의 수준이 적어도 90% 저감되는 것인 방법.
  14. 이하의 구조를 지니는 적어도 2종의 중수소-풍부 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염의 혼합물:
    Figure pct00078

    식 중, R1 내지 R10은 각각 독립적으로 H 또는 D이고, 상기 적어도 2종의 중수소-풍부 화합물의 각각은 각기 다른 R1 내지 R10에서 D를 포함한다.
  15. 제14항에 있어서, 상기 적어도 2종의 중수소-풍부 화합물 중 하나는 이하의 구조를 지니거나, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염인 것인 혼합물:
    Figure pct00079
    .
  16. 제14항에 있어서, 상기 적어도 2종의 중수소-풍부 화합물 중 하나는 이하의 구조를 지니거나, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염인 것인 혼합물:
    Figure pct00080
    .
  17. 제14항에 있어서, 상기 적어도 2종의 중수소-풍부 화합물 중 하나는 이하의 구조를 지니거나, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염인 것인 혼합물:
    Figure pct00081
    .
  18. 제14항 내지 제17항 중 어느 한 항의 혼합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염, 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물.
  19. a) 중수소-풍부 라퀴니모드 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염;
    b) 적어도 1종의 약제학적으로 허용가능한 담체; 및
    c) 하기 구조를 지니는 화합물과 중수소-풍부 라퀴니모드를 합한 중량에 의거해서 0.1% 미만의 양으로 존재하는 상기 화합물
    의 혼합물을 포함하는 약제학적 조성물:
    Figure pct00082
    .
  20. 제19항에 있어서, 상기 화합물은 해당 화합물과 중수소-풍부 라퀴니모드를 합한 중량에 의거해서 3 ppm 미만의 양으로 존재하는 것인 약제학적 조성물.
  21. 제20항에 있어서, 상기 화합물은 해당 화합물과 중수소-풍부 라퀴니모드를 합한 중량에 의거해서 2 ppm 미만의 양으로 존재하는 것인 약제학적 조성물.
  22. 제19항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 중수소-풍부 라퀴니모드는 이하의 구조를 지니거나 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염인 것인 약제학적 조성물:
    Figure pct00083

    식 중, R1 내지 R10은 각각 독립적으로 H 또는 D이고, R1 내지 R10 중 적어도 하나는 D이다.
  23. 제22항에 있어서, 상기 중수소-풍부 라퀴니모드에 있어서, R1 내지 R5의 각각은 D이고, R6 내지 R10의 각각은 H이거나, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염인 것인 약제학적 조성물.
  24. 제22항에 있어서, 상기 중수소-풍부 라퀴니모드에 있어서, R1 내지 R5의 각각은 H이고, R6 내지 R10의 각각은 D이거나, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염인 것인 약제학적 조성물.
  25. 제22항에 있어서, 상기 중수소-풍부 라퀴니모드에 있어서, R1 내지 R10의 각각은 D이거나, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염인 것인 약제학적 조성물.
  26. 제18항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 정제(tablet)의 형태인 것인 약제학적 조성물.
  27. 제18항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 인간 대상체에 의해 섭취된 경우, 등몰량의 비중수소-풍부 라퀴니모드가 상기 인간 대상체에 의해 섭취된 경우 형성되는 5-클로로-4-하이드록시-1-메틸-2-옥소-N-페닐-1,2-다이하이드로퀴놀린-3-카복스아마이드의 수준에 비해서, 인간 대상체에서 형성되는 임의선택적으로 중수소화된 5-클로로-4-하이드록시-1-메틸-2-옥소-N-페닐-1,2-다이하이드로퀴놀린-3-카복스아마이드의 저감된 수준을 제공하는 것인 약제학적 조성물.
  28. 제18항 내지 제27항 중 어느 한 항에 기재된 약제학적 조성물을 제조하는 방법으로서,
    a) 중수소-풍부 라퀴니모드 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염의 배취(batch)를 얻는 단계;
    b) 상기 중수소-풍부 라퀴니모드 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염의 배취에 존재하는 임의선택적으로 중수소화된 5-클로로-4-하이드록시-1-메틸-2-옥소-N-페닐-1,2-다이하이드로퀴놀린-3-카복스아마이드의 총량을 장치에 의해 결정하는 단계; 및
    c) 상기 배취가 0.1중량% 미만의 임의선택적으로 중수소화된 5-클로로-4-하이드록시-1-메틸-2-옥소-N-페닐-1,2-다이하이드로퀴놀린-3-카복스아마이드를 지니는 것으로 결정된 경우에만 상기 배취를 이용해서 상기 약제학적 조성물을 제조하는 단계를 포함하는, 약제학적 조성물의 제조방법.
  29. 분배(distribution)용의, 제18항 내지 제27항 중 어느 한 항에 기재된 약제학적 조성물의 유효 배취(validated batch)를 제조하는 방법으로서,
    a) 상기 약제학적 조성물의 배취를 얻는 단계;
    b) 상기 배취의 샘플 내 임의선택적으로 중수소화된 5-클로로-4-하이드록시-1-메틸-2-옥소-N-페닐-1,2-다이하이드로퀴놀린-3-카복스아마이드의 총량을 장치에 의해 결정하는 단계; 및
    c) 상기 배취의 샘플이 라퀴니모드와 임의선택적으로 중수소화된 5-클로로-4-하이드록시-1-메틸-2-옥소-N-페닐-1,2-다이하이드로퀴놀린-3-카복스아마이드를 합한 중량에 대해서 0.1중량% 미만의 임의선택적으로 중수소화된 5-클로로-4-하이드록시-1-메틸-2-옥소-N-페닐-1,2-다이하이드로퀴놀린-3-카복스아마이드를 함유하는 것으로 결정된 경우에만 상기 배취를 분배용으로 인정하는 단계를 포함하는, 약제학적 조성물의 유효 배취를 제조하는 방법.
  30. 인간 대상체에 있어서 자가면역 질환을 치료함에 있어서 1일당 0.2㎎ 내지 2㎎의 양으로 사용하기 위한, 이하의 구조를 지니는 중수소-풍부 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염:
    Figure pct00084

    식 중, R1 내지 R10은 각각 독립적으로 H 또는 D이고, R1 내지 R10 중 적어도 하나는 D이다.
KR1020137003480A 2010-07-09 2011-07-08 중수소화된 n-에틸-n-페닐-1,2-다이하이드로-4-하이드록시-5-클로로-1-메틸-2-옥소퀴놀린-3-카복스아마이드, 그의 염 및 용도 KR20130092558A (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US39929710P 2010-07-09 2010-07-09
US61/399,297 2010-07-09
PCT/US2011/043383 WO2012006538A1 (en) 2010-07-09 2011-07-08 Deuterated n-ethyl-n-phenyl-1,2-dihydro-4-hydroxy-5-chloro-1-methyl-2-oxoquinoline-3-carboxamide, salts and uses thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20130092558A true KR20130092558A (ko) 2013-08-20

Family

ID=45439026

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020137003480A KR20130092558A (ko) 2010-07-09 2011-07-08 중수소화된 n-에틸-n-페닐-1,2-다이하이드로-4-하이드록시-5-클로로-1-메틸-2-옥소퀴놀린-3-카복스아마이드, 그의 염 및 용도

Country Status (19)

Country Link
US (3) US8580819B2 (ko)
EP (2) EP3213636A1 (ko)
JP (2) JP2013535437A (ko)
KR (1) KR20130092558A (ko)
CN (2) CN104610144A (ko)
AR (1) AR082150A1 (ko)
AU (1) AU2011274496B2 (ko)
BR (1) BR112013000599A2 (ko)
CA (1) CA2804986A1 (ko)
CL (1) CL2013000063A1 (ko)
EA (1) EA025377B1 (ko)
IL (1) IL251600A0 (ko)
MX (1) MX2013000333A (ko)
NZ (1) NZ606587A (ko)
PE (1) PE20130396A1 (ko)
SG (2) SG10201505236YA (ko)
UY (1) UY33504A (ko)
WO (1) WO2012006538A1 (ko)
ZA (1) ZA201300956B (ko)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20170137085A (ko) * 2015-03-20 2017-12-12 앤빌 엘엘씨 에티폭신의 중수소화 유사체, 이의 유도체 및 그의 용도

Families Citing this family (26)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
UA92761C2 (ru) * 2005-10-19 2010-12-10 Тева Фармасьютикл Индастриз, Лтд. Кристаллы лаквинимода натрия и способ их изготовления
AU2007258366B2 (en) 2006-06-12 2012-10-25 Active Biotech, Ab Stable laquinimod preparations
SI2234485T1 (sl) 2007-12-20 2014-03-31 Teva Pharmaceutical Industries Ltd. Stabilni lakvinimodni pripravki
NZ597378A (en) * 2009-06-19 2014-08-29 Teva Pharma Treatment of multiple sclerosis with laquinimod
ES2564931T3 (es) * 2009-07-30 2016-03-30 Teva Pharmaceutical Industries Ltd. Tratamiento de enfermedad de Crohn con laquinimod
DK2467372T3 (en) 2009-08-10 2016-08-22 Teva Pharma TREATMENT OF BDNF-RELATED DISEASES USING LAQUINIMOD
PT2542079E (pt) * 2010-03-03 2014-07-18 Teva Pharma Tratamento da artrite reumatoide com uma combinação de laquinimod e metotrexato
SG183515A1 (en) * 2010-03-03 2012-10-30 Teva Pharma Treatment of lupus arthritis using laquinimod
PE20130613A1 (es) * 2010-03-03 2013-06-23 Teva Pharma Tratamiento de lupus nefritis usando laquinimod
KR20130092558A (ko) * 2010-07-09 2013-08-20 테바 파마슈티컬 인더스트리즈 리미티드 중수소화된 n-에틸-n-페닐-1,2-다이하이드로-4-하이드록시-5-클로로-1-메틸-2-옥소퀴놀린-3-카복스아마이드, 그의 염 및 용도
US8889627B2 (en) 2011-10-12 2014-11-18 Teva Pharmaceutical Industries, Ltd. Treatment of multiple sclerosis with combination of laquinimod and fingolimod
WO2013116657A1 (en) * 2012-02-03 2013-08-08 Teva Pharmaceutical Industries Ltd. USE OF LAQUINIMOD FOR TREATING CROHN'S DISEASE PATIENTS WHO FAILED FIRST-LINE ANTI-TNFα THERAPY
US9284276B2 (en) 2012-02-16 2016-03-15 Teva Pharmaceutical Industries, Ltd. N-ethyl-N-phenyl-1,2-dihydro-4,5-di-hydroxy-1-methyl-2-oxo-3-quinolinecarboxamide, preparation and uses thereof
TW201350467A (zh) 2012-05-08 2013-12-16 Teva Pharma Ｎ－乙基－４－羥基－１－甲基－５－（甲基（２，３，４，５，６－五羥基己基）胺基）－２－側氧－ｎ－苯基－１，２－二氫喹啉－３－甲醯胺
TW201400117A (zh) 2012-06-05 2014-01-01 Teva Pharma 使用拉喹莫德治療眼發炎疾病
TW201410244A (zh) 2012-08-13 2014-03-16 Teva Pharma 用於治療ｇａｂａ媒介之疾病之拉喹莫德（ｌａｑｕｉｎｉｍｏｄ）
MX2015005632A (es) 2012-11-07 2016-02-05 Teva Pharma Sales de amina de laquinimod.
WO2014086284A1 (zh) * 2012-12-04 2014-06-12 上海医药集团股份有限公司 一类氘代3-氰基喹啉类化合物、其药用组合物、制备方法及其用途
NZ630427A (en) 2013-03-14 2017-06-30 Teva Pharma Crystals of laquinimod sodium and improved process for the manufacture thereof
EP2968203A1 (en) 2013-03-14 2016-01-20 Teva Pharmaceutical Industries Ltd. Transdermal formulations of laquinimod
CN103145562B (zh) * 2013-03-18 2015-06-17 黄河三角洲京博化工研究院有限公司 一种n-乙基苯胺的制备方法
AU2015253330A1 (en) 2014-04-29 2016-12-01 Teva Pharmaceutical Industries Ltd. Laquinimod for the treatment of relapsing-remitting multiple sclerosis (RRMS) patients with a high disability status
JP7226565B2 (ja) * 2019-08-28 2023-02-21 日産自動車株式会社 物体認識方法、及び、物体認識装置
WO2021097427A1 (en) 2019-11-15 2021-05-20 Karuna Therapeutics, Inc. Xanomeline derivatives and methods for treating neurological disorders
CA3157394A1 (en) * 2019-12-19 2021-06-24 Helena ERIKSSON Compounds for treatment of eye diseases associated with excessive vascularisation
GB202006390D0 (en) * 2020-04-30 2020-06-17 Aqilion Ab Novel treatments

Family Cites Families (29)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IE52670B1 (en) 1981-03-03 1988-01-20 Leo Ab Heterocyclic carboxamides,compositions containing such compounds,and processes for their preparation
SE9801474D0 (sv) 1998-04-27 1998-04-27 Active Biotech Ab Quinoline Derivatives
US6077851A (en) * 1998-04-27 2000-06-20 Active Biotech Ab Quinoline derivatives
SE9802550D0 (sv) 1998-07-15 1998-07-15 Active Biotech Ab Quinoline derivatives
US6133285A (en) 1998-07-15 2000-10-17 Active Biotech Ab Quinoline derivatives
SE9802549D0 (sv) 1998-07-15 1998-07-15 Active Biotech Ab Quinoline derivatives
US6121287A (en) 1998-07-15 2000-09-19 Active Biotech Ab Quinoline derivatives
EA005803B1 (ru) 1999-06-07 2005-06-30 Алтана Фарма Аг Новый препарат и форма для введения, включающие неустойчивое в кислой среде действующее вещество
US6875869B2 (en) 2002-06-12 2005-04-05 Active Biotech Ab Process for the manufacture of quinoline derivatives
SE0201778D0 (sv) 2002-06-12 2002-06-12 Active Biotech Ab Process for the manufacture of quinoline derivatives
US7560557B2 (en) 2002-06-12 2009-07-14 Active Biotech Ag Process for the manufacture of quinoline derivatives
SE0400235D0 (sv) 2004-02-06 2004-02-06 Active Biotech Ab New composition containing quinoline compounds
US8314124B2 (en) 2004-02-06 2012-11-20 Active Biotech Ab Crystalline salts of quinoline compounds and methods for preparing them
US7514068B2 (en) 2005-09-14 2009-04-07 Concert Pharmaceuticals Inc. Biphenyl-pyrazolecarboxamide compounds
UA92761C2 (ru) 2005-10-19 2010-12-10 Тева Фармасьютикл Индастриз, Лтд. Кристаллы лаквинимода натрия и способ их изготовления
AU2007258366B2 (en) 2006-06-12 2012-10-25 Active Biotech, Ab Stable laquinimod preparations
KR20100012031A (ko) 2007-04-19 2010-02-04 콘서트 파마슈티컬즈, 인크. 중수소화된 모르폴리닐 화합물
SI2234485T1 (sl) 2007-12-20 2014-03-31 Teva Pharmaceutical Industries Ltd. Stabilni lakvinimodni pripravki
EA021227B1 (ru) * 2008-09-03 2015-05-29 Тева Фармасьютикал Индастриз Лтд. 2-оксо-1,2-дигидрохинолиновые модуляторы иммунной функции
NZ597378A (en) 2009-06-19 2014-08-29 Teva Pharma Treatment of multiple sclerosis with laquinimod
JP2011001308A (ja) * 2009-06-19 2011-01-06 Research Foundation Itsuu Laboratory 重水素化カルボスチリル化合物
ES2564931T3 (es) 2009-07-30 2016-03-30 Teva Pharmaceutical Industries Ltd. Tratamiento de enfermedad de Crohn con laquinimod
DK2467372T3 (en) 2009-08-10 2016-08-22 Teva Pharma TREATMENT OF BDNF-RELATED DISEASES USING LAQUINIMOD
PT2542079E (pt) 2010-03-03 2014-07-18 Teva Pharma Tratamento da artrite reumatoide com uma combinação de laquinimod e metotrexato
PE20130613A1 (es) 2010-03-03 2013-06-23 Teva Pharma Tratamiento de lupus nefritis usando laquinimod
SG183515A1 (en) 2010-03-03 2012-10-30 Teva Pharma Treatment of lupus arthritis using laquinimod
KR20130092558A (ko) 2010-07-09 2013-08-20 테바 파마슈티컬 인더스트리즈 리미티드 중수소화된 n-에틸-n-페닐-1,2-다이하이드로-4-하이드록시-5-클로로-1-메틸-2-옥소퀴놀린-3-카복스아마이드, 그의 염 및 용도
US20120010239A1 (en) 2010-07-09 2012-01-12 Ulf Tomas Fristedt 5-chloro-4-hydroxy-1-methyl-2-oxo-n-phenyl-1,2-dihydroquinoline-3-carboxamide, salts and uses thereof
NZ611628A (en) 2010-12-07 2015-06-26 Teva Pharma Use of laquinimod for reducing fatigue, improving functional status, and improving quality of life in multiple sclerosis patients

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20170137085A (ko) * 2015-03-20 2017-12-12 앤빌 엘엘씨 에티폭신의 중수소화 유사체, 이의 유도체 및 그의 용도

Also Published As

Publication number Publication date
US20140051723A1 (en) 2014-02-20
AU2011274496A1 (en) 2013-02-28
SG10201505236YA (en) 2015-08-28
EA201390081A1 (ru) 2013-07-30
SG186948A1 (en) 2013-02-28
NZ606587A (en) 2015-03-27
WO2012006538A8 (en) 2013-05-23
BR112013000599A2 (pt) 2016-07-05
US20140343096A1 (en) 2014-11-20
AR082150A1 (es) 2012-11-14
UY33504A (es) 2012-02-29
US20120010238A1 (en) 2012-01-12
CA2804986A1 (en) 2012-01-12
EP2597954A1 (en) 2013-06-05
US8580819B2 (en) 2013-11-12
PE20130396A1 (es) 2013-04-19
CL2013000063A1 (es) 2013-05-03
EA025377B1 (ru) 2016-12-30
JP2013535437A (ja) 2013-09-12
EP3213636A1 (en) 2017-09-06
IL251600A0 (en) 2017-06-29
AU2011274496B2 (en) 2016-03-10
CN104610144A (zh) 2015-05-13
WO2012006538A1 (en) 2012-01-12
MX2013000333A (es) 2013-02-26
CN102984939A (zh) 2013-03-20
JP2017014238A (ja) 2017-01-19
ZA201300956B (en) 2014-04-30
US9102620B2 (en) 2015-08-11
EP2597954A4 (en) 2014-01-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR20130092558A (ko) 중수소화된 n-에틸-n-페닐-1,2-다이하이드로-4-하이드록시-5-클로로-1-메틸-2-옥소퀴놀린-3-카복스아마이드, 그의 염 및 용도
US20180140592A1 (en) 5-chloro-4-hydroxy-1-methyl-2-oxo-n-phenyl-1,2-dihydroquinoline-3-carboxamide, salts and uses thereof
EP3383372B1 (en) Solid dispersions comprising a sgc stimulator
JP2011529502A (ja) 抗マラリア化合物
JP2017538676A (ja) ミトコンドリア透過性遷移孔（ｍｔＰＴＰ）の小分子阻害剤
AU2013259779B2 (en) N-ethyl-4-hydroxyl-1-methyl-5- (methyl(2,3,4,5,6-pentahydroxyhexyl) amino) -2-oxo-N-phenyl-1,2-dihydroquinoline-3-carboxamide
JP2014534196A (ja) Ｒ（＋）−ｎ−ホルミル−プロパルギル−アミノインダン
CN103502219A (zh) 作为治疗剂的新型小分子
RU2522450C2 (ru) Соединения, оказывающие возбуждающее действие на рецептор активатора пролиферации пероксисом подтипа б, способ получения и применение указанных соединений
WO2017160156A1 (en) Synthetic capasaicin analogs as trpv1 agonists
Mumusoglu et al. The impact of a long-acting oral sphingosine-1-phosphate analogue on ovarian aging in a rat model
TW201840317A (zh) 氘代丁苯那嗪(deutetrabenazine)之類似物、其製備方法及用途
Jadon et al. Synthesis, spectral and biological evaluation of some phenyl acetic acid hydrazone derivatives
EP2269996A1 (en) Medicinal composition containing benzo[a]phenoxanthin compound as the active ingredient for preventing or treating protozoal disease
Carreño et al. Immunomodulatory actions of a kynurenine-derived endogenous electrophile
US20130324598A1 (en) Treating mycobacterial infection with cu+/++ boosting therapeutics
WO2023028091A1 (en) Deuterated empathogens
RU2316327C1 (ru) Ксимедон в качестве индуктора активности микросомальных оксидаз печени человека
US20240024325A1 (en) Methods of Managing Cocaine or Other Drug Addictions
EA044751B1 (ru) Способ получения 3-[4-(2-фторбензоил)пиперазин-1-карбонил]-n-[3-(трифторметил)фенил]бензамида
Trukhanova et al. Synthesis and antihypoxic activity of new diphenylguanidine derivatives
WO2023028092A2 (en) Fluorinated empathogens
CN117064900A (zh) 化合物(s)-sto021在制备抗衰老药物上的用途
Alberti Deferasirox (ICL670): from bench to bedside

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E601 Decision to refuse application