CN104610144A - 氘化的n-乙基-n-苯基-1,2-二氢-4-羟基-5-氯-1-甲基-2-氧代喹啉-3-甲酰胺、其盐和用途 - Google Patents

氘化的n-乙基-n-苯基-1,2-二氢-4-羟基-5-氯-1-甲基-2-氧代喹啉-3-甲酰胺、其盐和用途 Download PDF

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Abstract

本发明提供氘化的N-乙基-N-苯基-1,2-二氢-4-羟基-5-氯-1-甲基-2-氧代-喹啉-3-甲酰胺、其盐和用途。

Description

氘化的N-乙基-N-苯基-1,2-二氢-4-羟基-5-氯-1-甲基-2-氧代喹啉-3-甲酰胺、其盐和用途
本申请案主张2010年7月9日申请的美国临时申请案第61/399,297号的优先权，所述申请案的内容以引用的方式并入本文中。
在本申请案的全篇中，参考了各种公开案、已公开的专利申请案和专利。这些文件的公开内容在此以全文引用的方式并入本申请案中，以便更充分地描述与本发明有关的现有技术。
背景技术
拉喹莫德(Laquinimod)是一种已在急性实验性自身免疫性脑脊髓炎(aEAE)模型中展示有效的化合物(美国专利第6,077,851号)。其化学名称是N-乙基-N-苯基-1,2-二氢-4-羟基-5-氯-1-甲基-2-氧代喹啉-3-甲酰胺，并且其化学登记号是248281-84-7。拉喹莫德的合成工艺和其钠盐的制备公开于美国专利第6,077,851号中。拉喹莫德的另一合成工艺公开于美国专利第6,875,869号中。
包含拉喹莫德钠的医药组合物公开于PCT国际申请公开案第WO 2005/074899号中。
拉喹莫德钠是一种具有高口服生物可用性的新颖合成化合物，已提出将其作为口服调配物用于治疗多发性硬化症(MS)。(波尔曼C(Polman,C)等人,(2005)“用拉喹莫德治疗减少复发性MS中活动性MRI病变的发生(Treatment with laquinimod reducesdevelopment of active MRI lesions in relapsing MS)”,神经病学(Neurology).64:987-991；桑德伯格-沃尔海姆M(Sandberg-Wollheim M)等人(2005)“患者中使用高剂量口服拉喹莫德的48周开放安全性研究(48-week open safety study with high-doseoral laquinimod in patients)”,多发性硬化症(Mult Scler).11:S154)研究还展示拉喹莫德可减少复发性MS中活动性MRI病变的发生。(波尔曼C等人,(2005)“用拉喹莫德治疗减少复发性MS中活动性MRI病变的发生”,神经病学.64:987-991)。
PCT国际申请公开案第WO 2010/028015号提出拉喹莫德的氘富集变体。然而，WO2010/028015警示，“代谢转换可能产生不同比例的已知代谢物以及完全新颖代谢物”，并且所述“新颖代谢特征会赋予或多或少毒性”，所述毒性“对于任何药物种类都是不可先验预测的”。因此，WO 2010/028015至少未提供拉喹莫德的氘富集变体的投予剂量，并且未公开代谢特征。
发明内容
本发明提供一种治疗罹患自身免疫性疾病的人类个体的方法，所述方法包含每天向该人类个体投予0.2mg-2.0mg可有效治疗该个体的具有以下结构的氘富集化合物：
其中R1-R10中的每一者都独立地是H或D，并且R1-R10中的至少一者是D，或其医药学上可接受的盐。
本发明还提供一种诱导人类个体中任选氘化的5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧代-N-苯基-1,2-二氢喹啉-3-甲酰胺的形成减少的方法，所述方法包含向该人类个体投予治疗有效量的具有以下结构的氘富集化合物：
其中R1-R10中的每一者都独立地是H或D，并且R1-R10中的至少一者是D，或其医药学上可接受的盐，
其中形成减少是相对于在投予等摩尔量的非氘富集拉喹莫德后5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧代-N-苯基-1,2-二氢喹啉-3-甲酰胺的形成。
本发明进一步提供一种至少两种氘富集化合物的混合物，每一化合物都具有以下结构：
其中R1-R10中的每一者都独立地是H或D，并且至少两种氘富集化合物中的每一者都在不同R1-R10处含有D，
或其医药学上可接受的盐。
本发明进一步提供一种医药组合物，其包含本文所描述的混合物或其医药学上可接受的盐；和医药学上可接受的载体。
本发明进一步提供一种医药组合物，其包含以下的混合物：
a)氘富集拉喹莫德或其医药学上可接受的盐；
b)至少一种医药学上可接受的载体；以及
c)具有以下结构的化合物：
其以按化合物和氘富集拉喹莫德的组合重量计小于0.1％的量存在。
本发明进一步提供一种制备本文所描述的医药组合物的工艺，所述工艺包含：
a)获得一批次氘富集拉喹莫德或其医药学上可接受的盐；
b)通过装置测定存在于所述批次的氘富集拉喹莫德或其医药学上可接受的盐中的任选氘化的5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧代-N-苯基-1,2-二氢喹啉-3-甲酰胺的总量；以及
c)仅在所述批次经测定具有，按重量计，小于0.1％的任选氘化的5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧代-N-苯基-1,2-二氢喹啉-3-甲酰胺时，才使用所述批次制备所述医药组合物。
本发明进一步提供一种制造经验证的批次的本文所描述的医药组合物用于分发的工艺，所述工艺包含：
a)获得一批次医药组合物；
b)通过装置测定所述批次的样品中任选氘化的5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧代-N-苯基-1,2-二氢喹啉-3-甲酰胺的总量；以及
c)仅在所述批次的样品经测定含有，按重量计，相对于拉喹莫德和5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧代-N-苯基-1,2-二氢喹啉-3-甲酰胺的组合重量，小于0.1％的任选氘化的5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧代-N-苯基-1,2-二氢喹啉-3-甲酰胺时，才验证所述批次用于分发。
本发明进一步提供一种氘富集化合物，其具有以下结构：
其中R1-R10中的每一者都独立地是H或D，并且R1-R10中的至少一者是D，或其医药学上可接受的盐，
其以每天0.2mg-2mg的量用以治疗人类个体的自身免疫性疾病。
附图说明
图1展示由拉喹莫德相较于化合物2以0.2mg/kg向大鼠口服投予之后形成的DELAQ的平均血浆浓度-时间曲线。
图2展示拉喹莫德相较于化合物2以0.2mg/kg向大鼠口服投予之后的平均血浆浓度-时间曲线。
图3展示用两种剂量的拉喹莫德和各种剂量的化合物1、2和3处理的小鼠中的MOG诱导的EAE的组平均记分比较。
具体实施方式
本发明提供一种治疗罹患自身免疫性疾病的人类个体的方法，所述方法包含每天向该人类个体投予0.2mg-2.0mg可有效治疗该个体的具有以下结构的氘富集化合物：
其中R1-R10中的每一者都独立地是H或D，并且R1-R10中的至少一者是D，或其医药学上可接受的盐。
在方法的一个实施例中，该氘富集化合物是
或其医药学上可接受的盐。
在方法的另一个实施例中，该氘富集化合物是
或其医药学上可接受的盐。
在方法的另一个实施例中，该氘富集化合物是
或其医药学上可接受的盐。
在方法的另一个实施例中，该自身免疫性疾病是多发性硬化症、全身性红斑狼疮症、狼疮肾炎、狼疮关节炎、克罗恩氏病(Crohn's Disease)或类风湿性关节炎。
在方法的另一个实施例中，该自身免疫性疾病是多发性硬化症。
在方法的另一个实施例中，在治疗该自身免疫性疾病方面投予该氘富集化合物比投予等摩尔量的非氘富集拉喹莫德更有效。
在方法的另一个实施例中，与在向该人类个体投予等摩尔量的非氘富集拉喹莫德时形成的5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧代-N-苯基-1,2-二氢喹啉-3-甲酰胺的水平相比，在投予该氘富集化合物后在该人类个体中形成的任选氘化的5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧代-N-苯基-1,2-二氢喹啉-3-甲酰胺的水平降低。
在方法的另一个实施例中，任选氘化的5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧代-N-苯基-1,2-二氢喹啉-3-甲酰胺的水平降低至少50％。
在方法的另一个实施例中，任选氘化的5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧代-N-苯基-1,2-二氢喹啉-3-甲酰胺的水平降低至少90％。
本发明还提供一种诱导人类个体中任选氘化的5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧代-N-苯基-1,2-二氢喹啉-3-甲酰胺的形成减少的方法，所述方法包含向该人类个体投予治疗有效量的具有以下结构的氘富集化合物：
其中R1-R10中的每一者都独立地是H或D，并且R1-R10中的至少一者是D，或其医药学上可接受的盐，
其中该形成减少是相对于在投予等摩尔量的非氘富集拉喹莫德后5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧代-N-苯基-1,2-二氢喹啉-3-甲酰胺的形成。
在该方法的一个实施例中，与在向该人类个体投予等摩尔量的非氘富集拉喹莫德时形成的5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧代-N-苯基-1,2-二氢喹啉-3-甲酰胺的水平相比，任选氘化的5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧代-N-苯基-1,2-二氢喹啉-3-甲酰胺的水平降低至少50％。
在方法的另一个实施例中，任选氘化的5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧代-N-苯基-1,2-二氢喹啉-3-甲酰胺的水平降低至少90％。
本发明进一步提供一种至少两种氘富集化合物的混合物，每一化合物都具有以下结构：
其中R1-R10中的每一者都独立地是H或D，并且该至少两种氘富集化合物中的每一者都在不同R1-R10处含有D，
或其医药学上可接受的盐。
在混合物的一个实施例中，该至少两种氘富集化合物中的一者具有以下结构：
或其医药学上可接受的盐。
在混合物的另一个实施例中，该至少两种氘富集化合物中的一者具有以下结构：
或其医药学上可接受的盐。
在混合物的另一个实施例中，该至少两种氘富集化合物中的一者具有以下结构：
或其医药学上可接受的盐。
本发明进一步提供一种医药组合物，其包含本文所描述的混合物或其医药学上可接受的盐；和医药学上可接受的载体。
本发明进一步提供一种医药组合物，其包含以下的混合物：
a)氘富集拉喹莫德或其医药学上可接受的盐；
b)至少一种医药学上可接受的载体；以及
c)具有以下结构的化合物：
其以按该化合物和氘富集拉喹莫德的组合重量计小于0.1％的量存在。
在医药组合物的一个实施例中，该化合物以按该化合物和氘富集拉喹莫德的组合重量计小于3ppm或小于2ppm的量存在。
在医药组合物的另一个实施例中，该氘富集拉喹莫德具有以下结构：
其中R1-R10中的每一者都独立地是H或D，并且R1-R10中的至少一者是D，或其医药学上可接受的盐。
在医药组合物的另一个实施例中，在该氘富集拉喹莫德中，R1-R5中的每一者都是D并且R6-R10中的每一者都是H，或其医药学上可接受的盐。
在医药组合物的另一个实施例中，在该氘富集拉喹莫德中，R1-R5中的每一者都是H并且R6-R10中的每一者都是D，或其医药学上可接受的盐。
在医药组合物的另一个实施例中，在该氘富集拉喹莫德中，R1-R10中的每一者都是D，或其医药学上可接受的盐。
在医药组合物的另一个实施例中，该医药组合物呈片剂形式。
在该医药组合物的另一个实施例中，在由人类个体摄取时，相对于在等摩尔量的非氘富集拉喹莫德由人类个体摄取时形成的5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧代-N-苯基-1,2-二氢喹啉-3-甲酰胺的水平，该医药组合物提供降低水平的在人类个体中形成的任选氘化的5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧代-N-苯基-1,2-二氢喹啉-3-甲酰胺。
本发明进一步提供一种制备本文所描述的医药组合物的工艺，所述工艺包含：
a)获得一批次氘富集拉喹莫德或其医药学上可接受的盐；
b)通过装置测定存在于所述批次的氘富集拉喹莫德或其医药学上可接受的盐中的任选氘化的5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧代-N-苯基-1,2-二氢喹啉-3-甲酰胺的总量；以及
c)仅在所述批次经测定具有，按重量计，小于0.1％的任选氘化的5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧代-N-苯基-1,2-二氢喹啉-3-甲酰胺时，才使用所述批次制备所述医药组合物。
本发明进一步提供一种制造经验证的批次的本文所描述的医药组合物用于分发的工艺，所述工艺包含：
a)获得一批次医药组合物；
b)通过装置测定所述批次的样品中任选氘化的5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧代-N-苯基-1,2-二氢喹啉-3-甲酰胺的总量；以及
c)仅在所述批次的样品经测定含有，按重量计，相对于拉喹莫德和任选氘化的5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧代-N-苯基-1,2-二氢喹啉-3-甲酰胺的组合重量，小于0.1％的任选氘化的5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧代-N-苯基-1,2-二氢喹啉-3-甲酰胺时，才验证所述批次用于分发。
本发明进一步提供一种氘富集化合物，其具有以下结构：
其中R1-R10中的每一者都独立地是H或D，并且R1-R10中的至少一者是D，或其医药学上可接受的盐，
其以每天0.2mg-2mg的量用以治疗人类个体的自身免疫性疾病。
本文所公开的任何范围都意指所述范围内的所有百分之一、十分之一和整数单位量都作为本发明的一部分明确公开。因此，举例来说，0.01mg到50mg意指0.02mg、0.03mg……0.09mg；0.1mg、0.2mg……0.9mg；和1mg、2mg……49mg单位量作为本发明的实施例包括在内。
氘(D或2H)是氢的稳定非放射性同位素，并且具有2.0144的原子量。化合物中的氢原子以同位素1H(氢或氕)、D(2H或氘)和T(3H或氚)混合物形式天然存在。氘的天然丰度是0.0156％。因此，化合物中任何氢原子位点处的氘水平已经富集而大于其天然丰度0.0156％的化合物新颖优于其非富集对应物。
如本文所用，“氘富集(deuterium-enriched)”化合物意指在一定量的化合物中化合物的任何相关位点处的氘丰度大于那个位点处天然存在的氘丰度。如上文所用的化合物的相关位点是在非氘富集时在化合物的化学结构表示中指定为“H”的位点。如上文所用的天然存在的是指在无任何使氘丰度富集的确认步骤的情况下制备化合物时存在于化合物的相关位点处的氘丰度。因此，在“氘富集”化合物中，其相关位点中的任一者处的氘丰度都可能在大于0.0156％到100％的范围内。获得氘富集化合物的方法的实例是用氘交换氢或用氘富集起始物质合成化合物。
在毫克量或更多量的化合物的任何相关位点处获得100％氘化可能较困难。因此，应了解，即使氘原子明确展示于化学结构中，仍可能存在一些百分比的氢。因此，当化学结构含有“D”时，由所述结构表示的化合物在由“D”表示的位点处是氘富集的。
化合物特征是指化合物所展示的任何性质，例如通过1H核磁光谱法、质谱法、红外、紫外或荧光分光光度法、气相色谱法、薄层色谱法、高效液相色谱法、元素分析、艾姆斯试验(Ames test)测定的峰或保留时间，可通过分析方法测定的溶解、稳定性和任何其它性质。一旦已知化合物的特征，信息即可用于例如筛选或测试样品中化合物的存在。
如本文所用，“医药学上可接受的(pharmaceutically acceptable)”载体或赋形剂是适于供人类和/或动物使用而无过度不良副作用(例如毒性、刺激和过敏反应)并且与合理的效益/风险比相称的载体或赋形剂。
如本文所用，“原料药(drug substance)”是指药品中的活性成分，其在诊断、治愈、缓解、治疗或预防疾病中提供药理学活性或其它直接作用，或影响人类或动物身体的结构或任何功能。
如本文所用，“药品”是指成品剂型，其含有原料药以及至少一种医药学上可接受的载体。
如本文所用，“经分离的”化合物是按照确认的分离行为从粗反应混合物中分离的化合物。分离行为必然涉及使化合物与粗反应混合物的其它已知组分分离，其中允许粗反应混合物的某些杂质、未知副产物和剩余量的其它已知组分余留。纯化是确认的分离行为的一个实例。
如本文所用，“无”化学实体的组合物意指所述组合物含有(如果有的话)按照打算消除组合物中化学实体的存在的确认行为不能被避免的量的化学实体。
如本文所用，“稳定性测试”是指在具体时间间隔和各种环境条件(例如温度和湿度)下进行的测试，以查看药品在其指定的储存寿命内降解与否或达到什么程度。测试的具体条件和时间能够促进药品在其储存寿命内预期遭遇的条件。举例来说，用于成品药物的稳定性测试的具体要求编纂于21C.F.R§211.166中，其全部内容以引用的方式并入本文中。
如本文所用，“约”在数值或范围的情形下意指所叙述或所主张的数值或范围的±10％。
拉喹莫德是具有以下化学结构的小分子：
其是口服免疫调节剂，其已在各种实验性发炎性/自身免疫性动物模型中展示治疗性作用，所述模型例如为实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)、用于多发性硬化症(MS)的动物模型、用于发炎性肠道疾病的葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的结肠炎、用于I型糖尿病(IDDM)的非肥胖糖尿病(NOD)小鼠、用于格林-巴利综合症(Guillain-BarreSyndrome)、全身性红斑狼疮症(SLE)、狼疮肾炎、狼疮关节炎、克罗恩氏病和类风湿性关节炎的实验性自身免疫性神经炎(EAN)。拉喹莫德在这些模型中的治疗活性由多种机械作用引起，所述机械作用包括通过调节趋化因子介导的T细胞粘附而减少白细胞浸润到目标组织中、调节细胞因子平衡、使引起抗原呈递变化的MHC II类下调以及对树突状细胞亚群的作用。
拉喹莫德以及本文中氘化的化合物的医药学上可接受的盐包括锂盐、钠盐、钾盐、镁盐、钙盐、锰盐、铜盐、锌盐、铝盐和铁盐。拉喹莫德的盐调配物和其制备工艺描述于例如美国专利申请公开案第2005/0192315号和PCT国际申请公开案第WO2005/074899号中，所述公开案在此以引用的方式并入本申请案中。
剂量单位可包含单一化合物或其化合物的混合物。剂量单位可经制备用于口服剂型，例如片剂、胶囊、丸剂、散剂和颗粒剂。
拉喹莫德以及本文中氘化的化合物可与就预定投予形式来说适当选择并且与常规医药实践一致的适合的医药稀释剂、增量剂、赋形剂或载体(本文中统称为医药学上可接受的载体)混合投予。单位优选地呈适于口服投予的形式。拉喹莫德以及本文中氘化的化合物可单独投予，但通常与医药学上可接受的载体混合，并且以片剂或胶囊、脂质体的形式或以聚结粉末的形式共投予。适合的固体载体的实例包括乳糖、蔗糖、明胶和琼脂。胶囊或片剂可容易地调配，并且可被制成易于吞咽或咀嚼；其它固体形式包括颗粒和松散粉末。片剂可含有适合的粘合剂、润滑剂、崩解剂、着色剂、调味剂、流动诱导剂和熔融剂。举例来说，对于以片剂或胶囊的剂量单位形式口服投药，可将活性药物组分与口服无毒的医药学上可接受的惰性载体(例如乳糖、明胶、琼脂、淀粉、蔗糖、葡萄糖、甲基纤维素、磷酸二钙、硫酸鈣、甘露糖醇、山梨糖醇、微晶纤维素等)组合。适合的粘合剂包括淀粉、明胶、天然糖(例如葡萄糖或β-乳糖)、玉米淀粉、天然和合成胶(例如阿拉伯胶、黄蓍胶或海藻酸钠)、聚维酮(povidone)、羧甲基纤维素、聚乙二醇、蜡等。用于这些剂型的润滑剂包括油酸钠、硬脂酸钠、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠、硬脂酸、硬脂富马酸钠、滑石等。崩解剂包括(但不限于)淀粉、甲基纤维素、琼脂、膨润土(bentonite)、三仙胶(xanthan gum)、交联羧甲基纤维素钠、羟基乙酸淀粉钠等。
可用于调配本发明的口服剂型的技术、医药学上可接受的载体和赋形剂的具体实例描述于例如美国专利申请公开案第2005/0192315号、PCT国际申请公开案第WO2005/074899号、第WO 2007/047863号和第WO 2007/146248号中。
用于制造适用于本发明的剂型的一般技术和组合物描述于以下参考文献中：7现代制药学(7Modern Pharmaceutics),第9章和第10章(班克(Banker)和罗德斯(Rhodes)编,1979)；药物剂型：片剂(Pharmaceutical Dosage Forms:Tablets)(利伯曼(Lieberman)等人,1981)；安斯艾尔(Ansel),药物剂型引言(Introduction to Pharmaceutical DosageForms)第2版(1976)；雷明顿氏制药科学(Remington's PharmaceuticalSciences),第17版(宾夕法尼亚州伊斯顿的默克出版公司(Mack Publishing Company,Easton,Pa.),1985)；制药科学进展(Advances in Pharmaceutical Sciences)(戴维甘德顿(DavidGanderton),崔佛琼斯(Trevor Jones)编,1992)；制药科学进展第7卷(戴维甘德顿,崔佛琼斯,詹姆斯麦吉尼蒂(James McGinity)编,1995)；用于药物剂型的水性聚合包衣(药物和制药科学)(Aqueous Polymeric Coatings for Pharmaceutical Dosage Forms(Drugsand the Pharmaceutical Sciences)),36系列(詹姆斯麦吉尼蒂编,1989)；药物微粒载体：治疗应用：药物和制药科学(Pharmaceutical Particulate Carriers:Therapeutic Applications:Drugs and the Pharmaceutical Sciences),第61卷(阿伦罗兰德(Alain Rolland)编,1993)；药物向胃肠道的递送(Drug Delivery to the Gastrointestinal Tract)(生物科学中的埃利斯霍伍德丛书：制药技术系列(Ellis Horwood Books in the Biological Sciences.Series inPharmaceutical Technology)；J.G.哈迪(J.G.Hardy),S.S.戴维斯(S.S.Davis),克莱夫G.威尔逊(Clive G.Wilson)编)；现代制药学药物和制药科学(Modern PharmaceuticsDrugs and the Pharmaceutical Sciences),第40卷(吉尔伯特S.班克(Gilbert S.Banker),克里斯多夫T.罗德斯(Christopher T.Rhodes)编)。这些参考文献在此以全文引用的方式并入本申请案中。
来自化合物的代谢物，无论是固有的还是药用的，都作为降解和消除化合物的天然生物化学工艺的一部分形成。化合物的降解速率是其作用的持续时间和强度的重要决定因素。描绘医药化合物的代谢物的药物代谢是药物发现的重要部分，导致了解任何不合需要的副作用。
拉喹莫德的代谢
已展示拉喹莫德由CYP3A4(细胞色素P4503A4)缓慢代谢以形成数种微量代谢物，并且其中有些可能通过2期代谢反应进行进一步代谢。参见(例如)楚文森(Tuvesson)等人“细胞色素P4503A4是负责拉喹莫德(一种新颖免疫调节剂)代谢的主要的酶(Cytochrome P4503A4is the major enzyme responsible for the metabolism of laquinimod,anovel immunomodulator)”,药物代谢和处置(Drug Metabolism and Disposition),第33卷,第6期,第866-872页。具有以下化学结构的DELAQ(脱乙基拉喹莫德；5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧代-N-苯基-1,2-二氢喹啉-3-甲酰胺)是拉喹莫德的氧化代谢物之一。
此外，临床资料已显示，人体的DELAQ水平在或者Cmax或者AUC方面与拉喹莫德水平呈某一恒定比率。这种特性表明，代谢物DELAQ的形成是PK“形成率受限的”。
下文所述是展示拉喹莫德的氘化形式对代谢变化、尤其由细胞色素P450系统所介导的那些变化抵抗性更大的实验。待要氧化的C-H键的氘化可能改变药物代谢的路径(代谢转换)。以下代谢方案说明了用氘化的拉喹莫德较慢形成CYP3A4介导的DELAQ。
在乙基的-碳氧化之前苯基部分的氘化可能影响酰胺键相对于CYP催化中心的位置。这可以解释为什么在乙基和/或苯基部分具有各种氘化的氘化的拉喹莫德导致例如任选氘化的DELAQ的形成减少。
作为杂质的DELAQ
DELAQ也是拉喹莫德合成的不合需要的合成副产物。DELAQ的任何活性尚未充分表征。还通常优选的是使原料药和最终药品中杂质的量降到最低。
通过HPLC方法测试作为拉喹莫德钠原料药中杂质的DELAQ，并且此杂质的规格以不超过0.1％提供。拉喹莫德钠的GMP原料药批次已经测试，并且已发现这些批次中DELAQ的水平小于3ppm。因此提供相似参数用于含有本发明化合物的药品。
已开发用于测定任选氘化的DELAQ浓度的数种分析和生物分析方法。当前用于各种基质中任选氘化的DELAQ分析的生物分析方法是基于LC-MS，并且在低皮克/毫升血浆水平下具有灵敏性。
通过参考后续实验细节将更好地理解本发明，但所属领域的技术人员将易于了解所详述的具体实验仅说明如更充分地描述于其后随附权利要求书中的本发明。
实验细节：
实例1：制备氘化的拉喹莫德
步骤1：合成氘化的N-乙基-苯胺
N-乙基-D5-苯胺
N-D5-乙基-苯胺
N-D11-乙基-苯胺
将苯胺(0.01摩尔)溶解于甲苯(10ml)中，在氮气下冷却到0℃，并且整份添加乙酸酐(0.02摩尔)。去除冷却浴，并且搅拌混合物90分钟，并且然后在旋转蒸发器上蒸发。在真空中干燥中间物乙酰苯胺，并且然后将其溶解于THF(20ml)中，并且在氮气下冷却到0℃。在25分钟期间中添加氢化锂铝(0.025摩尔)。将混合物回流2小时，并且然后将其冷却。添加硅胶(3克)，接着添加1M NaOH溶液(1.8克)。搅拌混合物30分钟，并且然后通过硫酸钠垫过滤。用乙醚洗涤滤饼，并且在旋转蒸发器上浓缩有机相，得到标题化合物。
步骤2：合成氘化的拉喹莫德
N-乙基-N-D5-苯基-1,2-二氢-4-羟基-5-氯-1-甲基-2-氧代喹啉-3-甲酰胺(化合物1)
N-D5-乙基-N-苯基-1,2-二氢-4-羟基-5-氯-1-甲基-2-氧代喹啉-3-甲酰胺(化合物2)
N-D5-乙基-N-D5-苯基-1,2-二氢-4-羟基-5-氯-1-甲基-2-氧代喹啉-3-甲酰胺(化合物 3)
在二氯甲烷(32ml)中搅拌N-乙基-苯胺(0.01摩尔)和MCQCA(1,2-二氢-4-羟基-5-氯-1-甲基-2-氧代-喹啉-3-甲酸)(2.03克，0.008摩尔)，并且添加三乙胺(4.2ml)。在冰/水浴中在氮气下冷却混合物，并且在30分钟期间逐滴添加亚硫酰氯(1.33克)。再在0℃下搅拌混合物3小时，并且然后用冷1M硫酸水溶液萃取。用1M NaOH溶液萃取有机相，并且在旋转蒸发器上稍微浓缩水相以去除痕量有机溶剂。添加5M HCl到pH为1-1.5，并且搅拌所得悬浮液30分钟。过滤沉淀的产物，用水洗涤，并且在真空中干燥。然后获得氘化的拉喹莫德(86-93％产率)。
步骤3：制备氘化的拉喹莫德钠盐
将步骤2中制备的氘化的拉喹莫德悬浮于乙醇中，并且用20％NaOH水溶液进行处理。搅拌沉淀的钠盐3小时，过滤，并且用乙醇洗涤。在真空中干燥，得到氘化的拉喹莫德钠盐(92-94％产率)。通过NMR、MS和HPLC证明身份和纯度。
氘化的化合物1-3的同位素纯度和分析
化合物 同位素纯度(LC/MS/MS) 分析
1 100.0％ 94.0％
2 100.0％ 95.4％
3 100.0％ 95.6％
实例2：DELAQ的分析
DELAQ在投予拉喹莫德后在啮齿动物以及人体中作为代谢物形成。已开发用于测定DELAQ(作为代表性代谢物)浓度的数种分析和生物分析方法。当前用于各种基质中DELAQ分析的生物分析方法是基于LC-MS，并且在低皮克/毫升血浆水平下具有灵敏性。
以下条件用于测定人血浆中的DELAQ。通过在用LUDOXAS-40胶态二氧化硅溶液沉淀后的联机SPE来纯化血浆，接着用HPLC及MS/MS检测进行分析。
条件1：
条件2.
还在以下条件下测定大鼠血浆中的DELAQ。通过在用LUDOXAS-40胶态二氧化硅溶液沉淀后的联机SPE来纯化血浆，接着用HPLC及MS/MS检测进行分析。
实例3：药物动力学和部分代谢评估
此实例的主要目标是：
·使用LC/MS/MS生物分析方法定量大鼠血浆中的化合物1、化合物2、化合物3和拉喹莫德。
·表征化合物1、化合物2、化合物3和拉喹莫德在以0.2mg/kg的剂量口服(PO)投予之后的药物动力学特征。
·测量所收集的血浆样品中的DELAQ浓度。
此实例中所选的剂量水平已用于先前用拉喹莫德进行的药理学研究中。
一般设计
使用通过聚乙烯管在右颈总静脉处插管的大鼠。在生前部分中，用0.2mg/kg剂量的四种测试物品的每一者处理三只插管的雌性大鼠。
在五个不同时间点从大鼠中抽出血液用于制备血浆。使用可适用的LC/MS/MS方法测定这些血浆样品中化合物1、化合物2、化合物3、拉喹莫德和DELAQ的浓度。
材料
测试化合物
a.实例1中制备的N-乙基-N-D5-苯基-1,2-二氢-4-羟基-5-氯-1-甲基-2-氧代喹啉-3-甲酰胺钠盐(化合物1)：
分子量：383.8
外观：白色粉末
储存：2℃-8℃，避光保存
纯度：假设100％纯度。
b.实例1中制备的N-D5-乙基-N-苯基-1,2-二氢-4-羟基-5-氯-1-甲基-2-氧代喹啉-3-甲酰胺钠盐(化合物2)：
分子量：383.8
外观：白色粉末
储存：2℃-8℃，避光保存
纯度：假设100％纯度。
c.实例1中制备的N-D5-乙基-N-D5-苯基-1,2-二氢-4-羟基-5-氯-1-甲基-2-氧代喹啉-3-甲酰胺钠盐(化合物3)：
分子量：388.8
外观：白色粉末
储存：2℃-8℃，避光保存
纯度：假设100％纯度。
d.拉喹莫德钠盐
分子量：378.8
外观：白色粉末
储存：控制的室温(15℃-25℃)，避光保存
通过HPLC分析：100.8％
纯度：假设100％纯度。
媒剂
水，高纯度(Direct Q，实验室制造)
其它材料
用于麻醉的异氟烷(ABBOTT)
EDTA(乙二胺四乙酸二钠盐二水合物，西格玛奥德里奇(Sigma Aldrich)，产品号：E4884-100g)
肝素钠盐(来自猪肠粘膜，西格玛奥德里奇，产品号：H9399-25KU)
测试系统
动物规格
物种：大鼠
品系：SD(史泊格多利(Sprague Dawley)CD大鼠)
健康状态：SPF
年龄大小：8周
动物数目：20只插管的雌性
体重范围大小：200-225g
适应新环境：至少3天
在治疗起始时：
动物数目：12只插管的雌性
大概的年龄：9周
选择测试系统的理由
SD大鼠是适合用于药物动力学研究的啮齿动物物种和品系并且可为管理机构接受。此外，史泊格多利大鼠中拉喹莫德的药物动力学特征经充分表征。
标识系统
通过身体上去不掉的标记来标识每一动物。用指定品系、动物代码、组代码、药物投予的日期和时间、测试项目和研究代码的个别卡片标记各笼。
具体抚养计划
剂量投予前后的动物豢养
将动物在到达设施之后分组装笼地豢养于环境上受到控制的房间中。使大鼠在具有锯屑作为底板垫的个别聚碳酸酯或聚磺酸酯笼中适应。
环境条件
将控制器设定为维持21±3℃的温度和30-70％的相对湿度。自动地维持12小时亮/12小时暗的亮/暗循环。
饮用水
随意给予通过0.2μm过滤器过滤的自来水。常规地分析(每三个月一次)水的微生物总数和不存在绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa)、大肠杆菌(Escherichia coli)和梭菌种(Clostridium sps)。
喂食
在整个研究期间随意提供用于啮齿动物的Altromin VRF1热压处理过的食物。周期性地分析食物。
褥草
使用LIGNOCEL(SAWI，木刨花)热压处理过的褥草。褥草材料的品质得到制造商保证。
已知污染物不以可干扰研究目标的水平存在于食物、水或褥草中。
实验设计
适应新环境
由合格人员检查每一动物，并且通过动物接收后能够抽出血液样品来验证套管的开放。使经判断处于良好健康中的动物适应新环境至少3天。所有动物都在适应期的最后一天接受由可靠兽医进行的详细身体检查。
随机化
在适应期之后，将经判断处于良好健康中并且适用于测试的动物基于其体重分配到研究中。在随机化时，动物的体重在总平均值的±20％之内。
动物剂量水平和治疗方案的组织
表1.插管的动物分配到实验组
*剂量基于非氘化的拉喹莫德游离酸形式。
测试项目分子量比就化合物1和化合物2来说是1.0757。测试项目分子量比就化合物3来说是1.0898。测试项目分子量比就拉喹莫德钠来说是1.0616。应用这些校正因子来将浓度调节为与非氘化的拉喹莫德游离酸等效。
通过使用钝喂食不锈钢针(Popper&Sons，美国)以5ml/kg的剂量体积口服管饲来进行口服投药。在剂量投予之前测量体重，并且基于个别体重计算剂量。
选择剂量和投予途径的理由
此研究中所选的剂量水平已用于先前用拉喹莫德进行的药理学研究中。投予途径将为口服，这是因为其是人类暴露的预期途径。
制备调配物和测量所达到的浓度
制备给药溶液
称重适当量的测试项目，并且将其溶解于水(媒剂)中以达到所需浓度，所述浓度在每一情况下都与0.04mg/mL非氘化的拉喹莫德游离酸等效。
通过轻缓震荡、搅拌、低速涡旋或超声波仪来溶解测试项目。不应用校正因子调节纯度。
调配物的储存和稳定性
所有给药溶液都储存于2-8℃下紧密封闭的琥珀玻璃容器中，避光保存。在使用之前，从冰箱中取出调配物，并且然后使其达到环境室温(15-25℃)。基于类似拉喹莫德给药溶液的稳定性资料，假设给药溶液稳定至少48小时。
所达到的给药溶液浓度
在处理之前，一式两份从溶液中取出的样品通过经验证的HPLC方法和UV检测测定给药溶液中的拉喹莫德浓度。所达到的浓度在标称浓度的±10％之内。
临床观测
记录死亡率、疾病征象或对处理的严重反应。
血液取样，血浆制备
如下表中所详述，在以下时间点从动物抽出血液：给药之后1、2、4、8和24小时。记录实际取样时间。
表2.血液收集的时间点
动物代码 1小时 2小时 4小时 8小时 24小时
1-12 是 是 是 是 是
从插管的大鼠收集血液
稳固地钳制每一动物。在去除密封之后，用安放于含有PBS的注射器上的适当钝针进入套管口。在抽出约100μL血液之后，将注射器更换为清洁肝素化的注射器。收集约250μL血液用于制备血浆。将第一100μL部分的血液送回并且通过导管将250μL的PBS提供给动物。由通过将10ml储备肝素(200IU/ml)与10ml无菌甘油(d＝1.26g/mL)混合而制备的肝素化的甘油(100IU/ml)溶液填充导管。即刻混合血液标本并且将其置于水冰上。
制备血浆
一旦切实可行就进行离心，并且从收集到离心不超过40分钟。
在4℃下以2500g离心全血10分钟，并且将经分离的血浆转移到预标记的聚丙烯管中，并且在收集70分钟内将管冷冻于-70℃下。
将冷冻的样品转移到生物分析实验室用于测定拉喹莫德浓度，其中其储存于标称-70℃下直到分析。
血浆样品的生物分析
通过使用可靠的LC/MS/MS分析来测定血浆样品中测试项目(化合物1、化合物2、化合物3和拉喹莫德)的浓度和DELAQ的浓度。
药物动力学数据分析
计算药物动力学参数，并且评估平均血浆水平相较于时间曲线。
从化合物1、化合物2、化合物3和拉喹莫德的平均血浆浓度-时间数据(三只动物在每一时间点的平均值)测定以下药物动力学参数。
参数 定义
AUC(0-t) 从时间零点达到最后可侦测浓度的时间(tz)的血浆浓度-时间曲线下面积
AUC(0-∞) 从时间零点达到无穷大的血浆浓度-时间曲线下面积
Cmax 观测到的最大血浆浓度
tmax 观测到的最大血浆浓度的时间
t1/2 表观末端消除半衰期
结果概要
如以下表3-6和图2中所示，氘富集拉喹莫德的平均血浆浓度与非氘富集拉喹莫德的平均血浆浓度类似。
测试项目的浓度-时间曲线并不显著不同。最大平均浓度在投予之后1或2小时达到，并且在703与798纳克/毫升之间变化。平均浓度到给药后24小时时降低到194-227纳克/毫升。拉喹莫德、化合物1、化合物2和化合物3的AUC值分别是15506.0、13783.4、12289.8和15750.2，也表明在暴露方面没有显著差异。
表3.以0.2mg/kg口服投予之后大鼠中拉喹莫德的个别和平均PK参数
表4.以0.2mg/kg口服投予之后大鼠中化合物1的个别和平均PK参数
表5.以0.2mg/kg口服投予之后大鼠中化合物2的个别和平均PK参数
表6.以0.2mg/kg口服投予之后大鼠中化合物3的个别和平均PK参数
如以下表7和8和图1中所示，口服投予氘富集拉喹莫德之后形成的DELAQ的量低于投予非氘富集拉喹莫德之后形成的DELAQ的量。与用拉喹莫德处理的动物的血浆相比，观测到在化合物2处理的动物的血浆中测量的DELAQ浓度平均约十倍降低。在化合物2处理的群组中，平均DELAQ浓度在18.3与75.4皮克/毫升之间变化，并且在接受拉喹莫德的群组中，其在142与878皮克/毫升之间变化。在两个群组中，最低DELAQ浓度都在投予之后1小时测量到，并且DELAQ浓度增加直到在给药后24小时取得最后样品。
表7.以0.2mg/kg口服投予之后大鼠中由拉喹莫德形成的DELAQ的个别和平均PK参数
表8.以0.2mg/kg口服投予之后大鼠中由化合物2形成的DELAQ的个别和平均PK参数
测试结果显示，氘富集拉喹莫德使DELAQ的形成减少，同时维持与非氘化的拉喹莫德类似的血浆浓度-时间曲线。
实例4：评估氘化的拉喹莫德(化合物1、2和3)在MOG(髓磷脂-少突神经胶质细胞-糖蛋白)诱导的EAE(实验性自身免疫性脑脊髓炎)中的功效
此研究的目标是使用MOG诱导的EAE在C57BL/6小鼠中评估拉喹莫德的三种氘化的形式(即化合物1、2和3)与拉喹莫德相比的功效。
EAE是一种用于多发性硬化症的公认的动物模型，并且在C57BL/6中用MOG诱导是充分确立的模型。
一般设计
通过注射致脑炎的乳液在小鼠中诱导疾病。
从研究起始(第0天)直到结束(第30天)，以10mg/kg投予化合物1、2和3，以10和25mg/kg投予拉喹莫德，或投予媒剂。所有群组都每天口服处理。
材料：
如实例1中所述制备化合物1、2和3。
拉喹莫德，梯瓦(Teva)制造。
纯化水(Direct-Q，密理博(Millipore))。
百日咳(Pertussis)毒素：西格玛，代码号2980，批号044K1449。
MOG 35-55：Mnf诺瓦泰德(MnfNovatide)，批号90016-71-1。
完全弗氏佐剂(Complete Freund's Adjuvant，CFA)：西格玛，代码：F-5881，批号104K8930。
盐水：Mnf-DEMO S.A，代码号05029，批号0101610。
结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)H37RA(MT)：Mnf-蒂夫科(Mnf-Difco)。
物种、品系和供应商
2010年1月26日将获自以色列(Israel)哈伦动物育种中心(Harlan AnimalBreedingCenter)的C57BL/6品系的健康未产过仔的未怀孕雌性小鼠用于研究中。动物在到达时体重是15-22g，并且是约7-8周大。在交付当天记录动物的体重。在处理开始之前将明显健康的动物任意分配到研究组。通过使用耳标将小鼠个别地标识。每一笼上的颜色编码的卡片提供包括笼号、组号和身份的信息。维持动物豢养和护理条件。
EAE诱导
通过注射由MOG(150.0μg/小鼠)和富集有结核分枝杆菌的CFA(1mg/mL CFA)组成的致脑炎混合物(乳液)来诱导EAE。
皮下注射0.2ml体积的乳液到小鼠的胁腹。
在诱导当天和48小时后腹膜内注射百日咳毒素(总量是0.2ml剂量体积中的0.1+0.1＝0.200μg/小鼠)。
将小鼠分配到6个处理组：媒剂、拉喹莫德(25mg/kg和10mg/kg)和每一者10mg/kg的化合物1、2和3。
制备和投予致脑炎乳液
油部分：CFA(含有1mg/mL MT)
液体部分：将15.0mg MOG稀释于10.0ml生理盐水(Normal Saline)中，得到1.5mg/mL MOG储备溶液。由用Leur锁与彼此连接的两个注射器中的等份油和液体部分(1:1)制造乳液，将其转移到胰岛素注射器中，并且向每一小鼠的右胁腹注射0.2ml。
制备和投予百日咳毒素
添加55μL百日咳毒素(200微克/毫升)到21.945ml盐水中，得到500纳克/毫升。在致脑炎病毒注射当天和48小时后腹膜内投予百日咳毒素(100.0纳克/0.2毫升/小鼠×2＝200.0纳克/小鼠)。
制备和投予测试调配物
在纯化水中制备2.5mg/ml浓度拉喹莫德以达到剂量水平25.0mg/kg。将测试调配物储存于2到8℃下琥珀色瓶中直到使用。每天一次通过口服管饲以200微升/小鼠的体积剂量水平向25mg/kg拉喹莫德组的小鼠投予拉喹莫德(如表4b中所示)。
在纯化水中制备1.0mg/mL浓度拉喹莫德以达到常规的10.0mg/kg剂量水平拉喹莫德或化合物1、2和3。将测试调配物储存于2到8℃下琥珀色瓶中直到使用。
每天一次通过口服管饲以200微升/小鼠的体积剂量水平向拉喹莫德10mg/kg组的小鼠投予常规的拉喹莫德。以类似方式投予测试化合物。以类似方式向阴性对照组(组号1)投予媒剂(重蒸馏水)。
发病率和死亡率
每天一次检验所有动物以检测是否有垂死的。每周一次称重小鼠。
EAE临床征象
从EAE诱导后10天开始每天观测小鼠，并且将EAE临床征象记分。根据下表4a中所述的等级将记分记录在观测卡上。
表4a：评估EAE临床征象
记分 征象 描述
0 正常特性 无神经学征象。
1 无力的尾巴 部分或整个尾巴无力并且下垂。
2 翻正反射 动物在仰躺着时难以翻滚到脚着地。
3 后肢虚弱 摇摆的行走——当小鼠行走时，后肢不稳。
4 后肢麻痹 小鼠拖着其后肢但能够使用其前肢走动。
5 完全麻痹 小鼠不能走动，其看来变瘦并且憔悴起来。
6 垂死/死亡
记分是1和1以上的所有小鼠都视为患病。当第一临床征象出现时，向所有小鼠提供浸于水中的食物，其在笼的褥草上的不同位置处散布。为了进行计算，进行被处死或死亡的动物的记分(6)。
结果阐明
计算疾病发病率(疾病比率)
合计每一组中的患病动物的数目。疾病发病率经计算为
对应于发病率的抑制百分比经计算为
计算死亡/垂死率(死亡率)
合计每一组中的死亡或垂死的动物的数目。疾病死亡率经计算为
对应于死亡率的抑制百分比经计算为
计算疾病持续时间
以天为单位表示的疾病的平均持续时间经计算为
计算疾病发作的平均延迟
以天为单位表示的疾病的平均发作经计算为
通过从测试组减去疾病对照组的平均发作来计算以天为单位表示的疾病发作的平均延迟。
计算平均最大记分和抑制百分比
每一组的平均最大记分(MMS)经计算为
对应于MMS的抑制百分比经计算为
计算组平均记分和抑制百分比
合计测试组中每一小鼠的每天记分，并且个别平均每天记分(IMS)经计算为
平均组记分(GMS)经计算为
抑制百分比经计算为
每一组的发病率、死亡率、MMS、GMS、疾病持续时间、疾病发作和活性的概要展示于下表4b中。
表4b.与媒剂相比的死亡率、发病率、MMS、GMS、EAE活性的持续时间和发作
发病率和死亡率
在媒剂处理的对照组中14/15小鼠因EAE而患病。与用化合物2、3和1处理的组中分别是13/15、10/15和8/15相比，在用拉喹莫德(10mg/kg)处理的组中，9/15小鼠患病。在用25mg/kg拉喹莫德处理的阳性对照组中4/15小鼠患病。在处理组中的任一者中都没有观测到死亡。
在用拉喹莫德(10mg/kg)处理的所有组中临床征象出现都有延迟，其中与对照组(发作11.9±5.5天)相比发作在15.3与22.1天之间。这些处理组中的EAE临床征象的持续时间与媒剂处理的对照组相比(与对照组19.1±5.5天相比)在7.9与13.2天之间。
平均最大记分(MMS)和组平均记分(GMS)
媒剂处理的阴性对照组的MMS和GMS分别是3.2±1.3和2.2±1.0。阳性拉喹莫德(25mg/kg)对照组分别展示对应于MMS(记分1.3±1.8)和GMS(记分0.5±0.1)的59.4％和97.7％EAE抑制。
当用化合物1、2和3处理的组与拉喹莫德相比时，在活性方面没有观测到显著差异。然而，有趋势展示用化合物1、2和3处理的组比拉喹莫德组活性更大。
如图3中所示，在GMS标度上，与用化合物2、3和1处理的组中分别是64.3％、59.7％和66.5％的活性相比，拉喹莫德(10mg/kg)组展示48.4％活性。
讨论
测试结果显示，氘富集拉喹莫德使代谢物、特别是任选氘化的DELAQ的形成减少，同时维持与非氘化的拉喹莫德类似的血浆浓度-时间曲线。
测试结果还显示，氘富集拉喹莫德在抑制EAE临床征象方面的活性与拉喹莫德相比一样或更佳。研究结果使得可产生氘富集拉喹莫德的给药参数。
实例5：拉喹莫德和化合物2作为培养的人类肝细胞中的细胞色素P450表达的诱导剂的体外评估
1.引言
此研究的目标是研究用拉喹莫德或化合物2处理新鲜人类肝细胞的原代培养物对CYP酶表达的作用。
培养的肝细胞经证明是一种用于评估NCE的诱导作用的可靠测试系统。肝细胞可以从不可移植的人类肝脏中分离(布扬松(Bjornsson)等人,(2003),体外和体内药物间相互作用研究的实施：美国药物研究和制造商协会(PhRMA)展望(The conduct of in vitroand in vivo drug-drug interaction studies:a Pharmaceutical Research and Manufacturers ofAmerica(PhRMA)perspective).药物代谢和处置(DrugMetab Dispos)31:815-832；穆德拉(Mudra)和帕金森(Parkinson),(2001),肝细胞的制备(Preparation of hepatocytes),毒物学实验室指南(Current Protocols in Toxicology),第2卷(梅因斯MD(Maines MD)编)第14.2单元,第13页,约翰威立父子公司(John Wiley and Sons,Inc.),纽约(NewYork))，并且在融合的单层细胞中培养(乐克鲁伊斯(LeCluyse)等人,(1994),通过以胶原蛋白夹层形态培养的大鼠肝细胞形成广泛小管网络(Formation of extensivecanalicular networks by rat hepatocytes cultured in collagen-sandwich configuration).美国生理学杂志266(Am JPhysiol 266)(细胞生理学35(Cell Physiol.35)):C1764-C1774)。在培养物中两到三天之后，这些细胞恢复其形态完整性，并且用原型诱导剂处理导致适当CYP酶的诱导(乐克鲁伊斯等人,(1996),培养的大鼠肝细胞(Cultured rat hepatocytes),医药生物技术(Pharmaceutical Biotechnology.)第8卷,用于评估药物吸收和代谢的模型(ModelsforAssessingDrugAbsorption andMetabolism).(博查特RT(Borchardt RT),威尔逊G(Wilson G)和史密斯P(Smith P)编)第121-159页,普莱南出版社(PlenumPress),纽约；罗伯特森(Robertson)等人,(2000),通过莫达非尼对人类肝细胞色素P450酶的体外抑制和诱导(In vitro inhibition and induction of human hepatic cytochrome P450enzymes by modafinil).药物代谢和处置28:664-671；马登(Madan)等人,(2003),原型微粒体酶诱导剂对培养的人类肝细胞中的细胞色素P450表达的作用(Effects ofprototypical microsomal enzyme inducers on cytochrome P450expression in cultured humanhepatocytes).药物代谢和处置31:421-431)。为此，使用培养的人类肝细胞测定NCE导致CYP酶诱导的可能性是可接受的。
此研究经设计以使得可将测试物品的任何诱导作用针对两种机制不同并且临床上相关的CYP诱导剂(即奥美拉唑(omeprazole)(一种AhR活化剂和CYP1A2诱导剂)和利福平(rifampin)(一种PXR激动剂和CYP3A4诱导剂))归类(帕金森和奥格尔维(Ogilvie),(2008),异种生物质的生物转化(Biotransformation of xenobiotics),卡萨瑞特&道尔毒物学(Casarett&Doull's Toxicology),毒物基础科学(The Basic Science ofPoisons).第7版,(克拉森CD(Klaassen CD)编)第161-304页,麦格劳希尔公司(TheMcGraw Hill Companies,Inc.),纽约)。为此，连续三天每天一次用DMSO(0.1％v/v，媒剂对照)、五个浓度的拉喹莫德(0.01、0.05、0.1、1或10μM)或化合物2(0.01、0.05、0.1或10μM)中的一者处理来自一个肝脏的培养的人类肝细胞的一个制备物。
在处理之后，就地用标记底物培育细胞以供通过LC/MS/MS来分析非那西丁(phenacetin)O-脱烷基化(CYP1A2的标记)和咪达唑仑(midazolam)1'-羟基化(CYP3A4/5的标记)。在就地培育之后，用TRIzol从相同处理组收集相同肝细胞以分离RNA，通过qRT-PCR分析RNA以评估拉喹莫德和化合物2对CYP1A2和CYP3A4 mRNA水平的作用。用于此研究中的研究设计、测试系统和探针底物的选择和浓度是基于以下中的建议：FDA对药物相互作用研究——研究设计、数据分析和给药和加标记的含义的草拟指导文件和现行FDA评论文章(食品药物管理局(Food and Drug Administration),(2006),行业草拟指南：药物相互作用研究——研究设计、数据分析和给药和加标记的含义(DraftGuidance for Industry:Drug Interaction Studies-Study Design,Data Analysis,andImplications for Dosing and Labeling),第55页,美国卫生和公众服务部(U.S.Departmentof Health and Human Services),罗克维尔(Rockville),马里兰州(MD)；黄(Huang)等人,(2008),药物相互作用评估的新纪元：美国食品药物管理局关于CYP酶、转运体和指导工艺的更新(New Era in Drug Interactions Evaluation:US Food and DrugAdministration Update on CYP Enzymes,Transporters and the Guidance Process).临床药理学杂志(J Clin Pharmacol)48:662-670；张(Zhang)等人,(2009),预测药物间相互作用：FDA展望(Predicting Drug-Drug Interactions:An FDA Perspective).AAPS杂志(TheAAPS Journal)11:300-306)和PhRMA对酶诱导的展望(朱(Chu)等人,(2009),细胞色素P450的体外和体内诱导：现行实践和建议的调查：美国药物研究和制造商协会(PhRMA)展望(In vitro and in vivo induction of cytochrome P450:a survey ofthe currentpractices and recommendations:a Pharmaceutical Research and Manufacturers of America(PhRMA)perspectice).药物代谢和处置27029(第87页)doi:10.1124/dmd.109.0270)。
2.材料和方法
2.1材料
2.1.1酶活性分析
2.1.2其它分析
2.1.3其它试剂
2.2测试系统
在此研究中处理由位于16825西116号街,雷内克萨(Lenexa),堪萨斯州(KS)66219的泽诺技术有限责任公司(XenoTech,LLC)提供的新鲜分离的人类肝细胞(下文称为H971)的一个制备物。
2.2.1处理培养的人类肝细胞
连续三天每天处理肝细胞培养物，并且根据SOP L5021.01(泽诺技术有限责任公司)和先前描述的方法培养(罗伯特森等人,(2000),通过莫达非尼对人类肝细胞色素P450酶的体外抑制和诱导.药物代谢和处置28:664-671；马登等人,(2003),原型微粒体酶诱导剂对培养的人类肝细胞中的细胞色素P450表达的作用.药物代谢和处置31:421-431；帕里斯(Paris)等人,(2009),通过米那普仑对人类肝细胞色素P450(CYP)酶的体外抑制和诱导(In vitro inhibition and induction of human liver cytochrome P450(CYP)enzymesby milnacipran).药物代谢和处置37:2045-2054)。用含有0.1％DMSO(媒剂，阴性对照)、五个浓度的拉喹莫德(0.01、0.05、0.1、1或10μM)或化合物2(0.01、0.05、0.1、1或10μM)中的一者、米贝地尔(10μM)或两种已知人类CYP酶诱导剂(即奥美拉唑(100μM)和利福平(10μM))阳性对照中的一者的补充MCM(每一孔用0.2mL处理)处理培养物。
2.2.2从培养的人类肝细胞分离RNA、纯化和定量
在最后处理之后约24小时，在就地标记底物培育之后，将肝细胞溶解于TRIzol试剂中，并且将细胞溶解产物储存于-75±5℃下。就人类肝细胞制备物H971来说，每处理组从六个孔吸出培养基，并且添加约132μL TRIzol到每一孔中。通过重复吸取将细胞溶解产物混合。使用TRIzol方案(英杰)从细胞溶解产物分离总RNA，并且使用RNeasy迷你试剂盒(凯杰公司)根据SOP L6161.02纯化。通过在具有KC4信号(KC4Signature)软件(3.4版21修正(Rev 21)，伯腾仪器公司(BioTek Instruments,Inc.))的伯腾协作HT(BioTek Synergy HT)板式读取器(伯腾仪器公司)上根据SOP L6162.02测量260和280nm下的吸光度来测定RNA品质和浓度。用RNA 6000纳米分析试剂盒在安捷伦2100生物分析器(Agilent 2100Bioanalyzer)(安捷伦技术公司)上根据SOP L6162.02进行RNA完整性的分析。用RT混合物(RT Master Mix)使用AB 7300实时PCR系统热循环程序或AB 7900HT快速实时PCR系统热循环程序(应用生物系统)根据SOPL6160.04从RNA制备单链cDNA。RT混合物包含10X RT缓冲液、25X脱氧NTPs、10X无规六聚物、RNase抑制剂(20U/μL)、MultiScribe反转录酶(50U/μL)和不含RNase的水。将RT混合物添加到每一RNA样品中以使反应的组分完全。在分析中包括无模板对照(No template control，NTC)。就NTC反应来说，添加不含RNase的水代替RNA样品。在通过qRT-PCR分析之前，将cDNA制备样品储存于-20±5℃下。
2.3测试样品
根据美国专利第6,077,851号中所述的程序制备拉喹莫德钠，并且根据实例1中所述的程序制备化合物2。
通过将适当量的拉喹莫德或者化合物2溶解于高纯度无菌水中来制备拉喹莫德或化合物2的溶液(10mM高纯度无菌水溶液)。就拉喹莫德来说，用高纯度无菌水将10mM储备溶液稀释到2、1和0.1μM。此外，用高纯度无菌水将1μM溶液稀释到0.05和0.01mM。就化合物2来说，用高纯度无菌水将10mM储备溶液稀释到1和0.1μM。此外，用高纯度无菌水将1μM溶液稀释到0.05和0.01mM。将拉喹莫德和化合物2的溶液(所有mM浓度)分成充足数目的等分试样以个别用于研究中，并且用琥珀色玻璃器皿或铝箔避光保存，并且冷冻(-20±5℃)储存，有效期是两个月。
在每天处理之前，将等分试样的拉喹莫德和化合物2储备溶液调节到室温并且以低设定轻轻地震荡或涡旋。然后在两个小时稀释(约15分钟到65分钟)内，将拉喹莫德(0.01、0.05、0.1、1和10mM)和化合物2(0.01、0.05、0.1、1和10mM)的储备溶液稀释于细胞培养基(1:1000稀释)中，并且将所得工作给药溶液添加到肝细胞培养物中，得到最终浓度的拉喹莫德(0.01、0.05、0.1、1和10μM)和化合物2(0.01、0.05、0.1、1和10μM)。在应用到肝细胞之前进行储备和给药溶液的定性目测检查以便确定在测试系统中的溶解度。
在处理之前即刻、在每天处理时，和在培育标记底物之前即刻，从媒剂、拉喹莫德和化合物2处理组收集废弃培养基(废弃给药培养基)。从每一上述处理组的三个孔的每一者收集约150μL，并且对于每一样品汇合成约450μL的最终体积。分析这些废弃培养基样品的残余拉喹莫德、化合物2和脱乙基化的代谢物(DELAQ)。
2.4阳性对照和媒剂
以下化学品或媒剂用于向肝细胞给药。
a纯化合物的储存条件。
将奥美拉唑和利福平溶解于DMSO中以使得DMSO于培养基中的最终浓度是0.1％v/v。在高纯度无菌水中制备米贝地尔。根据SOP L5021.01(泽诺技术有限责任公司)，在每一处理日处理之前不到两小时(约15分钟到65分钟)从储备溶液新鲜制备媒剂和阳性对照的工作溶液。
2.5分析条件
2.5.1用培养的人类肝细胞对探针底物的就地培育
根据SOP L5041.02进行用探针底物对肝细胞的培育。在最后处理之后约24小时，从孔中吸出废弃培养基，并且用预加温的(37±2℃)新鲜培养基冲洗每一孔两次。从孔中吸出培养基，并且通过添加200μL含有探针底物的预加温的培养基到每一孔中使反应开始。将培养多孔板置于加湿培养腔(37±1℃，95％相对湿度下，95/5％空气/CO2)中，并且培育30分钟(表1)。在30分钟时，移出等分试样(150μL)的培育混合物，并且将其添加到含有300μL终止试剂(乙腈)和内标的96孔板的孔中(表2)。将混合物充分地混合，并且使其在2-8℃下静置至少15分钟。在2-8℃下以2000×g离心样品10分钟，并且通过LC/MS/MS分析上清液部分。在每一分析中，在表1中指示的条件下进行培育。
表1：测量微粒体CYP酶活性的分析条件的概要
培育体积＝200μL
表2：通过液体色谱串联质谱分析进行代谢物分析的概要
a.指示离子化的类型(即电喷雾离子化[ESI])和极性(+或-)。
b.值指示内标的储备浓度。当添加到终止培育混合物中时，将此浓度稀释16倍。
通过添加可信的代谢物标准物来类似地制备标准物和品质对照样品。
2.6分析方法
2.6.1 LC/MS/MS方法
所有分析都用经验证的LC/MS/MS方法来进行。用于分析每一代谢物的程序遵循可适用的LC/MS/MS分析方法SOPs并且概述于表2中。MS设备是具有岛津HPLC泵和自动取样器系统的ABI Sciex(应用生物系统/MDS SCTEX)API 4000或API 3000仪器。
a.来自应用生物系统/MDS SCIEX的LC/MS/MS系统的模型。
b.在所有HPLC柱前都加上菲罗门Luna C-8保护柱(4.0mm×2.0mm)。
使用可信的代谢物标准物，并且氘化的代谢物在所有分析中都用作内标。零时培育充当空白。分别根据SOP L8013.02、L8020.02和L8011.02(泽诺技术有限责任公司)进行样品分析、积分和报导。
通过参考标准校准曲线基于加权(1/x)线性最小二乘回归法的反算来定量代谢物。回归拟合是基于由校准标准样品计算得到的分析物与内标的峰比率，所述校准标准样品是从可信的代谢物标准物制备。用应用生物系统/MDS SCDEX分析器数据系统，1.4.2版求峰面积的积分。
2.6.2 mRNA分析
根据SOP L6160.04(泽诺技术有限责任公司)和应用生物系统方案进行定量RT-PCR。一式三份地进行每一PCR。制备引子混合物(Primer Mix)用于每一基因表达分析。典型引子混合物含有TaqMan通用混合物(IX)、基因表达分析(IX，900nM正反向引子)和不含RNase的水。通过将引子混合物添加到cDNA中来制备反应混合物。一定百分比的样品(不少于10％)包括NACs。(NACs是非反转录的RNA样品，并且用来展示mRNA，非基因组DNA是PCR的荧光信号的来源。)在应用生物系统实时PCR序列检测系统(AB 7300或AB 7900HT)上分析反应。通过ΔΔCt方法(应用生物系统用户公告2号)测定目标cDNA与对照cDNA(GAPDH)相比的相对量。相对定量测量测试样品中mRNA表达相对于对照样品(例如DMSO)中mRNA表达的变化。此方法假设目标扩增的效率与内源性对照扩增的效率近似相等。
2.7数据处理
处理数据，并且用计算机程序微软电子表格2003(Microsoft Excel 2003)(微软公司(Microsoft Inc.))绘图。将类似处理组的个别反应速率平均，并且对n≥3的那些组测定标准差。通过用每一处理组的酶促速率除以媒剂对照的酶促速率来测定增加倍数(foldincreases)。用以下方程式计算阳性对照百分比：
在qRT-PCR中，使用用于相对定量的序列检测系统(SDS)软件1.4版(应用生物系统)处理数据。此软体使用比较Ct方法(ΔΔCt)分析相对基因表达，其将目标转录物的PCR信号与未经处理的对照中的目标的PCR信号联系起来。针对内源性对照(GAPDH)正规化经处理的样品和未经处理的对照信号，所述内源性对照的表达不受处理的影响并且表达在整个受测试的组织中是恒定的。此方法的结果表示为表达相对于未经处理的对照中的目标转录物表达的变化倍数。计算如下：
1.ΔCt＝Ct(目标)-Ct(内源性对照)
2.ΔΔCt＝ΔCt(经处理的样品)-ΔCt(未经处理的对照)
3.表达的变化倍数＝2-ΔΔCt
软件内的算法自动地从分析中去除离群值。接收数据的准则是应用生物系统专有的。离群值被视为Ct值与相关一式多份孔显著不同的孔，并且典型地是不充分扩增(即使有的话)的孔。
如下计算mRNA表达相对于阳性对照的水平：
3.结果和讨论
用拉喹莫德和化合物2处理人类肝细胞对CYP酶活性和mRNA水平的作用展示于表3-7中。除非另作说明，否则图和表中的数据都以来自一个人类制备物的一式三份培育物的数据平均值±标准差形式呈现，四舍五入到三个有效数字(significant figure)。平均增加倍数概述于表4和6中。增加倍数以对照的分数形式或以超出对照的增加倍数形式呈现，其中对照是指相应媒剂处理的样品。将增加倍数四舍五入到三个有效数字。测试物品与原型诱导剂的比较(阳性对照百分比)展示于表5和7中，并且四舍五入到三个有效数字。
表3：CYP活性：用拉喹莫德、化合物2或原型诱导剂处理培养的人类肝细胞对就地细胞色素P450(CYP)酶活性的作用
a值是人类肝细胞制备物H971的一式三份测定数据的平均值±标准差(四舍五入到三个有效数字)。
表4：CYP活性增加倍数：用拉喹莫德、化合物2或原型诱导剂处理培养的人类肝细胞对就地细胞色素P450(CYP)酶活性的作用
a值是人类肝细胞制备物H971的结果(四舍五入到三个有效数字)。
表5：CYP活性阳性对照百分比：用拉喹莫德、化合物2或原型诱导剂处理培养的人类肝细胞对就地细胞色素P450(CYP)酶活性的作用
a值是人类肝细胞制备物H971的结果(四舍五入到三个有效数字)。
ND  未测定。
就CYP1A2来说，阳性对照是奥美拉唑并且媒剂对照是DMSO。
就CYP3A4/5来说，阳性对照是利福平并且媒剂对照是DMSO。
表6：mRNA增加倍数：用拉喹莫德、化合物2或原型诱导剂处理培养的人类肝细胞对微粒体细胞色素P450(CYP)mRNA水平(如通过qRT-PCR测定(就地培育后))的作用
a值是人类肝细胞制备物H971的结果(四舍五入到三个有效数字)。
NT未由研究设计测试。
表7：mRNA阳性对照百分比：用拉喹莫德、化合物2或原型诱导剂处理培养的人类肝细胞对微粒体细胞色素P450(CYP)mRNA水平(如通过qRT-PCR测定(就地培育后))的作用
a值是人类肝细胞制备物H971的结果(四舍五入到三个有效数字)。
ND  未测定。
就CYP1A2来说，阳性对照是奥美拉唑并且媒剂对照是DMSO。
就CYP3A4来说，阳性对照是利福平并且媒剂对照是DMSO。
3.1培养的人类肝细胞的生存力和形态
在分离时，人类肝细胞制备物的生存力是70.9％。在72小时的适应期期间和之后，每天通过光学显微术观测培养物，并且在融合对于用测试和对照物品进行处理足够的情况下判断为形态正常。在最后处理之后24小时内，将肝细胞拍照以记录其形态完整性和测试物品毒性的任何明显征象。将代表性显微照片保持在测试设施上。这些显微照片显示，一般来说，用媒剂(DMSO)、拉喹莫德和化合物2或已知CYP诱导剂处理的人类肝细胞展示正常肝细胞形态。在处理之前和期间，人类肝细胞培养物形成具有极少细胞间隙的融合的单层细胞；所述单层细胞是立方形的并且含有完整细胞膜和具有一或两个中心定位细胞核的颗粒细胞质。用拉喹莫德、化合物2或拉喹莫德和米贝地尔处理人类肝细胞培养物H971导致细胞形态无变化。
3.2拉喹莫德和化合物2对人类CYP1A2活性和mRNA水平的作用
测定非那西丁O-脱烷基酶(CYP1A2)活性
在培养的人类肝细胞中，通过CYP1A2来催化非那西丁O-脱烷基化，CYP1A2是主要奥美拉唑诱导性CYP酶。用拉喹莫德或化合物2处理培养的人类肝细胞对就地非那西丁O-脱烷基酶(CYP1A2)活性的作用展示于表3中并且概述于表4中。连续三天每天一次用奥美拉唑处理培养的人类肝细胞导致非那西丁O-脱烷基酶(CYP1A2)活性的平均28.4倍增加。
与媒剂对照相比，用拉喹莫德(达到10μM)处理肝细胞培养物H971导致CYP1A2活性达到61.0倍的浓度依赖性增加。在所测试的浓度(0.01μM到10μM)下，在诱导CYP1A2活性方面，拉喹莫德的有效性是阳性对照奥美拉唑的21.7％到291％。此外，连续三天每天一次单独用米贝地尔处理导致CYP1A2活性的3.76倍增加。
此外，与媒剂对照相比，用化合物2(达到10μM)处理肝细胞培养物H971导致CYP1A2活性达到60.2倍的浓度依赖性增加。在所测试的浓度(0.01μM到10μM)下，在诱导CYP1A2活性方面，化合物2的有效性是阳性对照奥美拉唑的23.3％到216％。
测定CYP1A2 mRNA水平
用拉喹莫德和化合物2处理培养的人类肝细胞对CYP1A2 mRNA表达的作用展示于表6中。连续三天每天一次用奥美拉唑处理培养的人类肝细胞导致CYP1A2 mRNA水平的平均8.58倍增加。
类似于CYP1A2活性，与媒剂对照相比，用拉喹莫德(达到10μM)处理肝细胞培养物H971导致CYP1A2 mRNA水平达到20.5倍的浓度依赖性增加。在所测试的浓度(0.01μM到10μM)下，在诱导CYP1A2 mRNA水平方面，拉喹莫德的有效性是阳性对照奥美拉唑的42.5％到257％。与CYP1A2活性相反，与媒剂对照相比，连续三天每天一次单独用米贝地尔处理导致CYP1A2 mRNA水平的57.7％降低。
此外，与媒剂对照相比，用化合物2(达到10μM)处理肝细胞培养物H971导致CYP1A2 mRNA水平达到24.3倍的浓度依赖性增加。在所测试的浓度(0.01μM到10μM)下，在诱导CYP1A2 mRNA水平方面，化合物2的有效性是阳性对照奥美拉唑的24.2％到307％。
3.3拉喹莫德和化合物2对人类CYP3A4/5活性和CYP3A4 mRNA水平的作用
测定咪达唑仑1'-羟化酶(CYP3A4/5)活性
在培养的人类肝细胞中，通过CYP3A4/5催化咪达唑仑1'-羟基化。CYP3A4是主要利福平诱导性CYP酶。用拉喹莫德和化合物2处理培养的人类肝细胞对就地咪达唑仑1'-羟化酶(CYP3A4/5)活性的作用展示于表3中并且概述于表4中。连续三天每天一次用利福平处理培养的人类肝细胞导致咪达唑仑1'-羟化酶活性的增加(4.82倍)。
与媒剂对照相比，用拉喹莫德(达到10μM)或化合物2(达到10μM)处理肝细胞培养物H971分别导致CYP3A4/5活性50.9％和48.2％的浓度依赖性降低。
测定CYP3A4 mRNA水平
用拉喹莫德和化合物2处理培养的人类肝细胞对CYP3A4 mRNA表达的作用展示于表6中。连续三天每天一次用利福平处理培养的人类肝细胞导致CYP3A4 mRNA水平的4.63倍增加。
类似于CYP3A4/5活性，与媒剂对照相比，用拉喹莫德(达到10μM)或化合物2(达到10μM)处理肝细胞培养物H971分别导致CYP3A4 mRNA水平36.4％和31.1％的浓度依赖性降低。
测定化合物2或拉喹莫德与DELAQ比率
测量在处理之前即刻、在每天处理时，和在培育标记底物之前即刻从培养基收集的废弃培养基等分试样中的化合物2、拉喹莫德和DELAQ的浓度。形成的DELAQ在拉喹莫德培养基中的浓度比在化合物2培养基中高约2倍。在10μM处理浓度的化合物2或拉喹莫德下，化合物2:DELAQ的比率平均是40.9，而拉喹莫德:DELAQ的比率平均是15.7。这表示与化合物2相比从拉喹莫德形成DELAQ约有3倍增加，并且由在乙基部分上存在氘(其导致较慢N-脱乙基)而得到解释。
4.结论
总之，在原型诱导剂导致CYP活性和mRNA水平预期和适当增加的条件下，用达到10μM拉喹莫德或化合物2(拉喹莫德的氘化类似物)处理导致类似的CYP1A2活性和mRNA水平的浓度依赖性增加和CYP3A4/5活性和CYP3A4 mRNA水平的浓度依赖性降低，但在化合物2:DELAQ与拉喹莫德:DELAQ比率方面观测到约3倍差异。

Claims (7)

1.具有以下结构的氘富集化合物：
其中R1-R10中的每一者都独立地是H或D，并且R1-R10中的至少一者是D，或其医药学上可接受的盐在制备用于治疗罹患自身免疫性疾病的个体的药物中的用途，其中所述药物经制备用于每天使用，并包括0.2mg-2.0mg单位剂量的所述氘富集化合物，
优选地，其中所述氘富集化合物是
或其医药学上可接受的盐，
更优选地，其中所述氘富集化合物是
以及
优选地，其中所述自身免疫性疾病是多发性硬化症、全身性红斑狼疮症、狼疮肾炎、狼疮关节炎、克罗恩氏病或类风湿性关节炎。
2.具有以下结构的氘富集化合物：
其中R1-R10中的每一者都独立地是H或D，并且R1-R10中的至少一者是D，或其医药学上可接受的盐在制备用于诱导人类个体中任选氘化的5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧代-N-苯基-1,2-二氢喹啉-3-甲酰胺的形成减少的药物中的用途，
其中所述形成减少是相对于使用等摩尔量的非氘富集拉喹莫德时5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧代-N-苯基-1,2-二氢喹啉-3-甲酰胺的形成。
3.一种至少两种不同的氘富集化合物的混合物，每一化合物都具有以下结构：
其中R1-R10中的每一者都独立地是H或D，并且R1-R10中的至少一者是D，
或其医药学上可接受的盐，
并且其中所述至少两种氘富集化合物中的每一者具有以下结构：
或其药学上可接受的盐，
优选地，其中所述至少两种氘富集化合物中的一者具有以下结构：
或其药学上可接受的盐。
4.一种医药组合物，其包含根据权利要求3所述的混合物或其医药学上可接受的盐；和医药学上可接受的载体。
5.一种医药组合物，其包含以下的混合物：
a)具有以下结构的氘富集拉喹莫德：
其中R1-R10中的每一者都独立地是H或D，并且R1-R10中的至少一者是D，
或其医药学上可接受的盐，或
其中R1-R5中的每一者都是D并且R6-R10中的每一者都是H，或其医药学上可接受的盐，或
其中R1-R5中的每一者都是H并且R6-R10中的每一者都是D，或其医药学上可接受的盐，或
其中R1-R10中的每一者都是D，或其医药学上可接受的盐，
优选地，其中R1-R5中的每一者都是D并且R6-R10中的每一者都是H，或其医药学上可接受的盐；
b)至少一种医药学上可接受的载体；以及
c)具有以下结构的化合物：
其以按所述化合物和氘富集拉喹莫德的组合重量计小于0.1％，或小于3ppm，或小于2ppm的量存在，
优选地，其中所述医药组合物呈片剂形式
6.一种制备根据权利要求4或5所述的医药组合物的工艺，所述工艺包含：
a)获得一批次氘富集拉喹莫德或其医药学上可接受的盐；
b)通过装置测定存在于所述批次的氘富集拉喹莫德或其医药学上可接受的盐中的任选氘化的5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧代-N-苯基-1,2-二氢喹啉-3-甲酰胺的总量；以及
c)仅在所述批次经测定具有，按重量计，小于0.1％的任选氘化的5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧代-N-苯基-1,2-二氢喹啉-3-甲酰胺时，才使用所述批次制备所述医药组合物。
7.一种制造经验证的批次的根据权利要求4或5所述的医药组合物用于分发的工艺，所述工艺包含：
a)获得一批次所述医药组合物；
b)通过装置测定所述批次的样品中任选氘化的5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧代-N-苯基-1,2-二氢喹啉-3-甲酰胺的总量；以及
c)仅在所述批次的样品经测定含有，按重量计，相对于拉喹莫德和任选氘化的5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧代-N-苯基-1,2-二氢喹啉-3-甲酰胺的组合重量，小于0.1％的任选氘化的5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧代-N-苯基-1,2-二氢喹啉-3-甲酰胺时，才验证所述批次用于分发。
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Families Citing this family (27)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007047863A2 (en) * 2005-10-19 2007-04-26 Teva Pharmaceutical Industries, Ltd. Crystals of laquinimod sodium, and process for the manufacture thereof
DK2035001T3 (da) 2006-06-12 2012-02-27 Teva Pharma Stabile laquinimod-tilberedninger
PT2682120T (pt) 2007-12-20 2016-11-07 Teva Pharma Preparações de laquinimod estáveis
HUE026406T2 (en) * 2009-06-19 2016-06-28 Teva Pharma Treatment of multiple sclerosis with laquinimod
PL2458992T3 (pl) * 2009-07-30 2016-07-29 Teva Pharma Leczenie choroby Leśniowskiego-Crohna z użyciem lakwinimodu
ME02495B (me) 2009-08-10 2017-02-20 Teva Pharma Tretman poremećaja koji su u vezi sa bdnf primenom lakvinimoda
SG183512A1 (en) * 2010-03-03 2012-09-27 Teva Pharma Treatment of lupus nephritis using laquinimod
AU2011223697B2 (en) * 2010-03-03 2016-07-14 Teva Pharmaceutical Industries Ltd. Treatment of rheumatoid arthritis with a combination of laquinimod and methotrexate
PL2542080T3 (pl) * 2010-03-03 2017-02-28 Teva Pharmaceutical Industries Ltd. Leczenie toczniowego zapalenia stawów z zastosowaniem lakwinimodu
SG10201505236YA (en) * 2010-07-09 2015-08-28 Teva Pharma Deuterated n-ethyl-n-phenyl-1,2-dihydro-4-hydroxy-5-chloro-1-methyl-2-oxoquinoline-3-carboxamide, salts and uses thereof
US8889627B2 (en) 2011-10-12 2014-11-18 Teva Pharmaceutical Industries, Ltd. Treatment of multiple sclerosis with combination of laquinimod and fingolimod
AR089862A1 (es) 2012-02-03 2014-09-24 Teva Pharma USO DE LAQUINIMOD PARA EL TRATAMIENTO DE PACIENTES CON ENFERMEDAD DE CROHN EN QUIENES FRACASO UNA TERAPIA ANTI-FACTOR DE NECROSIS TUMORAL a (ANTI-TNFa) DE PRIMERA LINEA
CA2863409A1 (en) 2012-02-16 2013-08-22 Teva Pharmaceutical Industries Ltd. N-ethyl-n-phenyl-1,2-dihydro-4,5-di-hydroxy-1-methyl-2-oxo-3-quinolinecarboxamide, preparation and uses thereof
TW201350467A (zh) 2012-05-08 2013-12-16 Teva Pharma Ｎ－乙基－４－羥基－１－甲基－５－（甲基（２，３，４，５，６－五羥基己基）胺基）－２－側氧－ｎ－苯基－１，２－二氫喹啉－３－甲醯胺
TW201400117A (zh) 2012-06-05 2014-01-01 Teva Pharma 使用拉喹莫德治療眼發炎疾病
TW201410244A (zh) 2012-08-13 2014-03-16 Teva Pharma 用於治療ｇａｂａ媒介之疾病之拉喹莫德（ｌａｑｕｉｎｉｍｏｄ）
MX2015005632A (es) 2012-11-07 2016-02-05 Teva Pharma Sales de amina de laquinimod.
WO2014086284A1 (zh) * 2012-12-04 2014-06-12 上海医药集团股份有限公司 一类氘代3-氰基喹啉类化合物、其药用组合物、制备方法及其用途
JP2016514162A (ja) 2013-03-14 2016-05-19 テバ ファーマシューティカル インダストリーズ リミティド ラキニモドナトリウムの結晶およびその製造のための改善された方法
MX2015010967A (es) 2013-03-14 2015-10-26 Teva Pharma Formulaciones transdermicas de laquinimod.
CN103145562B (zh) * 2013-03-18 2015-06-17 黄河三角洲京博化工研究院有限公司 一种n-乙基苯胺的制备方法
EA201692180A1 (ru) 2014-04-29 2017-08-31 Тева Фармасьютикал Индастриз Лтд. Лахинимод для лечения пациентов с рецидивирующе-ремиттирующим рассеянным склерозом (рррс) с высоким статусом инвалидизации
MX2017011978A (es) * 2015-03-20 2018-02-09 Anvyl Llc Analogos deuterados de etifoxina, sus derivados y usos de estos.
CN114467111B (zh) * 2019-08-28 2023-08-22 日产自动车株式会社 物体识别方法及物体识别装置
US11534434B2 (en) 2019-11-15 2022-12-27 Karuna Therapeutics, Inc. Xanomeline derivatives and methods for treating neurological disorders
JP2023509336A (ja) * 2019-12-19 2023-03-08 アクティブ バイオテック エービー 過剰血管新生に関連する眼疾患を治療する化合物
GB202006390D0 (en) * 2020-04-30 2020-06-17 Aqilion Ab Novel treatments

Family Cites Families (29)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IE52670B1 (en) 1981-03-03 1988-01-20 Leo Ab Heterocyclic carboxamides,compositions containing such compounds,and processes for their preparation
US6077851A (en) * 1998-04-27 2000-06-20 Active Biotech Ab Quinoline derivatives
SE9801474D0 (sv) 1998-04-27 1998-04-27 Active Biotech Ab Quinoline Derivatives
SE9802550D0 (sv) 1998-07-15 1998-07-15 Active Biotech Ab Quinoline derivatives
SE9802549D0 (sv) 1998-07-15 1998-07-15 Active Biotech Ab Quinoline derivatives
US6133285A (en) 1998-07-15 2000-10-17 Active Biotech Ab Quinoline derivatives
US6121287A (en) 1998-07-15 2000-09-19 Active Biotech Ab Quinoline derivatives
AU775995B2 (en) 1999-06-07 2004-08-19 Nycomed Gmbh Novel preparation and administration form comprising an acid-labile active compound
SE0201778D0 (sv) 2002-06-12 2002-06-12 Active Biotech Ab Process for the manufacture of quinoline derivatives
US7560557B2 (en) 2002-06-12 2009-07-14 Active Biotech Ag Process for the manufacture of quinoline derivatives
US6875869B2 (en) 2002-06-12 2005-04-05 Active Biotech Ab Process for the manufacture of quinoline derivatives
SE0400235D0 (sv) 2004-02-06 2004-02-06 Active Biotech Ab New composition containing quinoline compounds
US8314124B2 (en) 2004-02-06 2012-11-20 Active Biotech Ab Crystalline salts of quinoline compounds and methods for preparing them
US7514068B2 (en) 2005-09-14 2009-04-07 Concert Pharmaceuticals Inc. Biphenyl-pyrazolecarboxamide compounds
WO2007047863A2 (en) * 2005-10-19 2007-04-26 Teva Pharmaceutical Industries, Ltd. Crystals of laquinimod sodium, and process for the manufacture thereof
DK2035001T3 (da) 2006-06-12 2012-02-27 Teva Pharma Stabile laquinimod-tilberedninger
EP2148867B1 (en) 2007-04-19 2014-09-10 Concert Pharmaceuticals Inc. Deuterated morpholinyl compounds
PT2682120T (pt) 2007-12-20 2016-11-07 Teva Pharma Preparações de laquinimod estáveis
CN104311486A (zh) * 2008-09-03 2015-01-28 泰华制药工业有限公司 2-羰基-1,2-二氢喹啉免疫功能调节剂
HUE026406T2 (en) 2009-06-19 2016-06-28 Teva Pharma Treatment of multiple sclerosis with laquinimod
JP2011001308A (ja) * 2009-06-19 2011-01-06 Research Foundation Itsuu Laboratory 重水素化カルボスチリル化合物
PL2458992T3 (pl) 2009-07-30 2016-07-29 Teva Pharma Leczenie choroby Leśniowskiego-Crohna z użyciem lakwinimodu
ME02495B (me) 2009-08-10 2017-02-20 Teva Pharma Tretman poremećaja koji su u vezi sa bdnf primenom lakvinimoda
AU2011223697B2 (en) 2010-03-03 2016-07-14 Teva Pharmaceutical Industries Ltd. Treatment of rheumatoid arthritis with a combination of laquinimod and methotrexate
PL2542080T3 (pl) 2010-03-03 2017-02-28 Teva Pharmaceutical Industries Ltd. Leczenie toczniowego zapalenia stawów z zastosowaniem lakwinimodu
SG183512A1 (en) 2010-03-03 2012-09-27 Teva Pharma Treatment of lupus nephritis using laquinimod
EA201390074A1 (ru) 2010-07-09 2013-06-28 Тева Фармасьютикал Индастриз Лтд. 5-хлор-4-гидрокси-1-метил-2-оксо-n-фенил-1,2-дигидрохинолин-3-карбоксамид, его соли и применения
SG10201505236YA (en) 2010-07-09 2015-08-28 Teva Pharma Deuterated n-ethyl-n-phenyl-1,2-dihydro-4-hydroxy-5-chloro-1-methyl-2-oxoquinoline-3-carboxamide, salts and uses thereof
JP2013544887A (ja) 2010-12-07 2013-12-19 テバ ファーマシューティカル インダストリーズ リミティド 多発性硬化症患者において疲労を軽減し、機能状態を改善し、生活の質を改善するための、ラキニモド（ｌａｑｕｉｎｉｍｏｄ）の使用

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