JP2017538676A - ミトコンドリア透過性遷移孔（ｍｔＰＴＰ）の小分子阻害剤 - Google Patents
ミトコンドリア透過性遷移孔（ｍｔＰＴＰ）の小分子阻害剤 Download PDFInfo
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Abstract
本技術は、本明細書に記載される式Ｉ、ＩＩ、ＩＩａ、ＩＩＩ、ＩＶ、及び／またはＶのうちのいずれか１つの化合物、ならびにそれらの互変異性体、及び／または薬学的に許容される塩、組成物、ならびにその使用方法に関する。
Description
政府権利の申告
本技術は、国立衛生研究所（ＮＩＨ）によって与えられた許可番号Ｒ０３−ＤＡ０３３９７８、Ｕ５４−ＨＧ００５０３１、及びＵ５４ ＨＧ００５０３１−０ＳＳ１のもとに米国政府からの援助により行われた。米国政府は、本技術において一定の権利を有する。
本技術は、国立衛生研究所（ＮＩＨ）によって与えられた許可番号Ｒ０３−ＤＡ０３３９７８、Ｕ５４−ＨＧ００５０３１、及びＵ５４ ＨＧ００５０３１−０ＳＳ１のもとに米国政府からの援助により行われた。米国政府は、本技術において一定の権利を有する。
関連出願の相互参照
本出願は、２０１４年１１月５日に出願された米国仮特許出願第６２／０７５，６４３号の優先権を主張し、この全開示は、任意及びすべての目的のために、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
本出願は、２０１４年１１月５日に出願された米国仮特許出願第６２／０７５，６４３号の優先権を主張し、この全開示は、任意及びすべての目的のために、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
分野
本技術は、ミトコンドリア透過性遷移孔（ｍｔＰＴＰ）阻害剤として有用な化合物に関する。いくつかの実施形態では、本技術は、ｍｔＰＴＰに関連する様々な疾患の治療、例えば、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、アルツハイマー病、ハンチントン病、パーキンソン病、インスリン誘発性低血糖症、脳虚血、癲癇または実験的外傷からの脳障害、ベスレムミオパチー、膵炎、肝炎、糖尿病性網膜症、筋ジストロフィー、心筋梗塞、及び卒中の治療を提供する。本技術はまた、概して、活性酸素種の過剰蓄積及び／または［Ｃａ２＋］の調節不全によって少なくとも部分的に抑制される障害の治療に対して適用可能である。
本技術は、ミトコンドリア透過性遷移孔（ｍｔＰＴＰ）阻害剤として有用な化合物に関する。いくつかの実施形態では、本技術は、ｍｔＰＴＰに関連する様々な疾患の治療、例えば、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、アルツハイマー病、ハンチントン病、パーキンソン病、インスリン誘発性低血糖症、脳虚血、癲癇または実験的外傷からの脳障害、ベスレムミオパチー、膵炎、肝炎、糖尿病性網膜症、筋ジストロフィー、心筋梗塞、及び卒中の治療を提供する。本技術はまた、概して、活性酸素種の過剰蓄積及び／または［Ｃａ２＋］の調節不全によって少なくとも部分的に抑制される障害の治療に対して適用可能である。
背景
ミトコンドリア透過性遷移孔（ｍｔＰＴＰ）チャネルは、ミトコンドリア機能障害に基づくという病態が共通している様々なヒト疾患状態に重要な役割を果たす。ミトコンドリア透過性遷移孔（ｍｔＰＴＰ）は、Ｃａ２＋放出を媒介し、電圧、ｐＨ、及びシクロスポリンＡ（ＣｓＡ）によって影響を受け、ミトコンドリアＣａ２＋の蓄積及び酸化的ストレスによって活性化される、ミトコンドリア内膜（ＩＭＭ）の高伝導性チャネルである。
ミトコンドリア透過性遷移孔（ｍｔＰＴＰ）チャネルは、ミトコンドリア機能障害に基づくという病態が共通している様々なヒト疾患状態に重要な役割を果たす。ミトコンドリア透過性遷移孔（ｍｔＰＴＰ）は、Ｃａ２＋放出を媒介し、電圧、ｐＨ、及びシクロスポリンＡ（ＣｓＡ）によって影響を受け、ミトコンドリアＣａ２＋の蓄積及び酸化的ストレスによって活性化される、ミトコンドリア内膜（ＩＭＭ）の高伝導性チャネルである。
ｍｔＰＴＰの活性に対する確固としたアッセイが構築されているが、小分子阻害剤の同定は、予想外に遅れている。
ｍｔＰＴＰの有効な阻害剤である化合物が依然として必要である。ｍｔＰＴＰの開口を防ぐ化合物は、細胞傷害、［Ｃａ２＋］の調節不全、及び／または酸化的ストレス関連障害と関連する活性酸素種を治療及び予防するのに有用である。
概要
ｍｔＰＴＰの活性化の小分子阻害剤が、本明細書で開示される。これらの化合物は、「目的にかなっており」、ヒト疾患、例えば、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、アルツハイマー病、筋ジストロフィー、膵炎、ＩＩ型糖尿病、心筋梗塞、及び卒中の治療に挑戦するのに有用である。
ｍｔＰＴＰの活性化の小分子阻害剤が、本明細書で開示される。これらの化合物は、「目的にかなっており」、ヒト疾患、例えば、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、アルツハイマー病、筋ジストロフィー、膵炎、ＩＩ型糖尿病、心筋梗塞、及び卒中の治療に挑戦するのに有用である。
ミトコンドリア透過性遷移孔（ｍｔＰＴＰ）は、Ｃａ２＋のミトコンドリア蓄積によって活性化されるミトコンドリア内膜の電位依存性の高伝導性チャネルである。ｍｔＰＴＰの正常な活性は、チャネルの一時開口によって定義されるが、ミトコンドリア内Ｃａ２＋及び細胞内Ｃａ２＋の両方における持続的な過負荷によって生じる持続的開口は、最終的に、細胞死及び非常に多くの疾患の状態をもたらす。ｍｔＰＴＰに基づく病態に対して、有効な治療を効果的に生じるのは、かなり限定的である。ｍｔＰＴＰを標的とする初期の薬理学的薬剤は、調節成分、サイクロフィリンＤに影響を及ぼす薬剤に限定されている。
本発明者らの入念な研究は、ｍｔＰＴＰ開口のための基礎としてのＦ−ＡＴＰ合成酵素の二量体のＣａ２＋依存性構造変化の形成と一致する結果を見出した。これらの二量体は、ジスルフィド結合の形成によって高エントロピー的に有利である。さらに、本発明者らは、Ｆ−ＡＴＰ合成酵素が、ＡＴＰを合成するＭｇ２＋依存性システムからミトコンドリア内膜（ＩＭＭ）の膜電位を低減するＣａ２＋依存性孔（ｍｔＰＴＰ）に転換することを見出した。ＩＭＭ電位の低下は、ｍｔＰＴＰの開口を刺激することが観察されている。したがって、理論により拘束されることなく、本発明者らは、Ｃａ２＋依存性Ｆ−ＡＴＰ合成酵素「ｍｔＰＴＰ」二量体の阻害剤が孔開口の阻害を誘発することを企図する。そのため、本明細書に開示される化合物はまた、［Ｃａ２＋］の調節不全及び／または酸化的ストレス関連障害と関連する活性酸素種によって引き起こされる細胞傷害も治療する。
一態様では、本技術は、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩を提供し、
式中、
Ｙ１及びＷ１が、それぞれ独立して、Ｏ、Ｎ、ＮＨ、ＮＲ６、Ｓ、ＣＨ、若しくはＣＲ７であるか、またはＹ１及びＷ１が、それぞれ独立して、ＣＲ８またはＮＲ８であり、ここで、Ｒ８がＹ１及びＷ１と結合して、アリール、ヘテロアリール、またはヘテロシクリル環を形成し、Ｚ１、Ｚ２、及びＺ３が、それぞれ独立して、ＣＨ、Ｃ−Ｒ９、またはＮであり、ｍが１または２であり、Ｇ１が、Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ、ＳＯ、またはＳＯ２であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ９が独立して、各出現時に、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルコキシ、アルキニル、アミノ、アミノスルフィニル、アミノスルホニル、スルフィニル、スルホニル、スルホニルオキシ、アミノスルホニルオキシ、アミノスルフィニルオキシ、アミノスルホニルアミノ、アシルアミノ、アミノカルボニルオキシ、アミノカルボニルアミノ、アミノチオカルボニルアミノ、アミノカルボニル、アシルオキシ、アリール、ヘテロアリール、シアノ、ニトロ、カルボキシル、カルボキシルエステル、（カルボキシルエステル）アミノ、（カルボキシルエステル）オキシ、アシル、若しくはホルミルであるか、または２つの隣接するＲ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ９が一緒になってアリール、ヘテテロアリール、またはヘテロシクリル環を形成し、Ｒ３が、水素、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、またはアルキニルである。
Ｙ１及びＷ１が、それぞれ独立して、Ｏ、Ｎ、ＮＨ、ＮＲ６、Ｓ、ＣＨ、若しくはＣＲ７であるか、またはＹ１及びＷ１が、それぞれ独立して、ＣＲ８またはＮＲ８であり、ここで、Ｒ８がＹ１及びＷ１と結合して、アリール、ヘテロアリール、またはヘテロシクリル環を形成し、Ｚ１、Ｚ２、及びＺ３が、それぞれ独立して、ＣＨ、Ｃ−Ｒ９、またはＮであり、ｍが１または２であり、Ｇ１が、Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ、ＳＯ、またはＳＯ２であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ９が独立して、各出現時に、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルコキシ、アルキニル、アミノ、アミノスルフィニル、アミノスルホニル、スルフィニル、スルホニル、スルホニルオキシ、アミノスルホニルオキシ、アミノスルフィニルオキシ、アミノスルホニルアミノ、アシルアミノ、アミノカルボニルオキシ、アミノカルボニルアミノ、アミノチオカルボニルアミノ、アミノカルボニル、アシルオキシ、アリール、ヘテロアリール、シアノ、ニトロ、カルボキシル、カルボキシルエステル、（カルボキシルエステル）アミノ、（カルボキシルエステル）オキシ、アシル、若しくはホルミルであるか、または２つの隣接するＲ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ９が一緒になってアリール、ヘテテロアリール、またはヘテロシクリル環を形成し、Ｒ３が、水素、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、またはアルキニルである。
一態様では、本技術は、式ＩＶの化合物またはその薬学的に許容される塩を提供し、
式中、
Ｙ２が、Ｏ、ＮＨ、ＮＲ２５、またはＳであり、
Ｗ２が、Ｎ、ＣＨ、またはＣＲ２６であり、Ｙ２がＮＲ２５であり、Ｗ２がＣＲ２６である場合、Ｒ２５及びＲ２６が、任意に、Ｙ２及びＷ２と結合して、アリール、ヘテロアリール、またはヘテロシクリル環を形成してもよく、
Ｚ４、Ｚ５、及びＺ６が、それぞれ独立して、ＣＨ、Ｃ−Ｒ２７、またはＮであり、
Ｒ２２、Ｒ２３、Ｒ２４、Ｒ２５、Ｒ２６、及びＲ２７が、独立して、各出現時に、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルコキシ、アルキニル、アミノ、アミノスルフィニル、アミノスルホニル、スルフィニル、スルホニル、スルホニルオキシ、アミノスルホニルオキシ、アミノスルフィニルオキシ、アミノスルホニルアミノ、アシルアミノ、アミノカルボニルオキシ、アミノカルボニルアミノ、アミノチオカルボニルアミノ、アミノカルボニル、アシルオキシ、アリール、ヘテロアリール、シアノ、ニトロ、カルボキシル、カルボキシルエステル、（カルボキシルエステル）アミノ、（カルボキシルエステル）オキシ、アシル、若しくはホルミルであるか、または２つのＲ２２、Ｒ２３、Ｒ２４、Ｒ２５、Ｒ２６、及びＲ２７が一緒になってアリール、ヘテテロアリール、またはヘテロシクリル環を形成する。
Ｙ２が、Ｏ、ＮＨ、ＮＲ２５、またはＳであり、
Ｗ２が、Ｎ、ＣＨ、またはＣＲ２６であり、Ｙ２がＮＲ２５であり、Ｗ２がＣＲ２６である場合、Ｒ２５及びＲ２６が、任意に、Ｙ２及びＷ２と結合して、アリール、ヘテロアリール、またはヘテロシクリル環を形成してもよく、
Ｚ４、Ｚ５、及びＺ６が、それぞれ独立して、ＣＨ、Ｃ−Ｒ２７、またはＮであり、
Ｒ２２、Ｒ２３、Ｒ２４、Ｒ２５、Ｒ２６、及びＲ２７が、独立して、各出現時に、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルコキシ、アルキニル、アミノ、アミノスルフィニル、アミノスルホニル、スルフィニル、スルホニル、スルホニルオキシ、アミノスルホニルオキシ、アミノスルフィニルオキシ、アミノスルホニルアミノ、アシルアミノ、アミノカルボニルオキシ、アミノカルボニルアミノ、アミノチオカルボニルアミノ、アミノカルボニル、アシルオキシ、アリール、ヘテロアリール、シアノ、ニトロ、カルボキシル、カルボキシルエステル、（カルボキシルエステル）アミノ、（カルボキシルエステル）オキシ、アシル、若しくはホルミルであるか、または２つのＲ２２、Ｒ２３、Ｒ２４、Ｒ２５、Ｒ２６、及びＲ２７が一緒になってアリール、ヘテテロアリール、またはヘテロシクリル環を形成する。
一態様では、本技術の化合物は、式Ｖの化合物またはその薬学的に許容される塩であり、
式中、Ｇ３が、Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ、またはＳＯ２であり、Ａ１及びＢ１が、それぞれ独立して、アルキル、シクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールである。
一関連態様では、本明細書に記載される式Ｉ、ＩＩ、ＩＩａ、ＩＩＩ、ＩＶ、及び／またはＶの１つ以上の化合物と薬学的に許容される賦形剤とを含む薬学的組成物が提供される。薬学的組成物は、Ｗｉｐｆ ｅｔ．ａｌ．“Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａ” Ａｃｃ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．２００８，４１，８７−９７及びその中に言及される参考文献（これらのそれぞれが、任意及びすべての目的のために、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）において記載されるミトコンドリア標的分子のうちの１つ以上を含むがこれらに限定されない１つ以上のミトコンドリア標的分子を含んでもよい。
一態様では、［Ｃａ２＋］の調節不全及び活性酸素種の蓄積によって少なくとも部分的に媒介される疾患を治療するための方法が提供され、本方法は、有効量の式Ｉ、ＩＩ、ＩＩａ、ＩＩＩ、ＩＶ、及び／またはＶのうちの１つ以上の化合物、または薬学的に許容される賦形剤と有効量の本明細書に記載される式Ｉ、ＩＩ、ＩＩａ、ＩＩＩ、ＩＶ、及び／またはＶのうちの１つ以上の化合物とを含む薬学的組成物を、患者に投与することを含む。
［Ｃａ２＋］の調節不全及び／または活性酸素種の蓄積によって少なくとも部分的に媒介される疾患としては、ハンチントン病及び他のポリグルタミン障害、虚血再灌流傷害、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、アルツハイマー病、ハンチントン病、パーキンソン病、インスリン誘発性低血糖症、脳虚血、癲癇または実験的外傷からの脳障害、ベスレムミオパチー、膵炎、肝炎、糖尿病性網膜症、筋ジストロフィー、外傷性脳損傷、ＩＩ型糖尿病、心筋梗塞、卒中、ウイルス、細菌、若しくは寄生虫等の一般的な中枢神経系（ＣＮＳ）感染症、例えば、急性灰白髄炎、ライム病（ボレリア・ブルグドルフェリ感染症）及びマラリア、大脳局在性を伴う癌、トゥレット症候群、肝性脳症、全身性狼瘡、痛覚消失及びオピエート禁断症候、摂食行動、統合失調症、慢性不安、抑うつ障害、発育または加齢の脳の障害、嗜癖の疾患、糖尿病、ならびにこれらの合併症からなる群から選択される疾患が挙げられる。
一態様では、ｍｔＰＴＰを阻害し、［Ｃａ２＋］の調節不全及び／または活性酸素種により少なくとも部分的に媒介される疾患を治療するために用いる製造物品が提供され、本製造物品は、本明細書に提供される式Ｉ、ＩＩ、ＩＩａ、ＩＩＩ、ＩＶ、及び／またはＶの化合物を含む組成物を含む。製造物品は、疾患の治療のために組成物を用いるための使用説明書を含むラベルをさらに含んでもよい。
これらの及び他の実施形態は、本明細書にさらなる詳細に記載される。
詳細な説明
本願において、本文は、本発明の化合物、組成物、及び方法の種々の実施態様に言及する。記載される種々の実施態様は、種々の例示の例を提供することを意味し、別種の記載と見なされるべきではない。特定の実施形態は、包括的な説明としてまたは本明細書で論じられるより広範な態様に対する限定として意図されない。特定の実施形態と共に記載されるある態様は、必ずしもその実施形態に限定されず、任意の他の実施形態（複数可）で行われ得る。
本願において、本文は、本発明の化合物、組成物、及び方法の種々の実施態様に言及する。記載される種々の実施態様は、種々の例示の例を提供することを意味し、別種の記載と見なされるべきではない。特定の実施形態は、包括的な説明としてまたは本明細書で論じられるより広範な態様に対する限定として意図されない。特定の実施形態と共に記載されるある態様は、必ずしもその実施形態に限定されず、任意の他の実施形態（複数可）で行われ得る。
１．定義
本明細書で使用される場合、特に示されない限り、以下の定義を適用すべきである。さらに、本明細書に使用されるいずれかの用語または記号が以下に示されるように定義されない場合、それは当業界で通常の意味を有するべきである。
本明細書で使用される場合、特に示されない限り、以下の定義を適用すべきである。さらに、本明細書に使用されるいずれかの用語または記号が以下に示されるように定義されない場合、それは当業界で通常の意味を有するべきである。
本明細書で使用される場合、「ａ」及び「ａｎ」及び「ｔｈｅ」等の単数形及び元素を記載する文脈において（特に、以下の請求項の文脈において）類似の指示対象は、特に本明細書で指示されないまたは文脈によって明確に相反しない限り、単数形及び複数形の両方を包含するものと解釈される。本明細書の値の範囲の記述は、特に指示されない限り、当該範囲内の各別個の値を個々に参照する簡潔な方法として機能することのみを意図するものであり、各別個の値は本明細書中に個々に列挙したかのように本明細書に組み込まれる。本明細書に記載されるすべての方法は、特に本明細書で指示されないまたは文脈によって明確に相反しない限り、任意の適切な順序で行われ得る。本明細書で提供される、任意の及びすべての実施例、または例示的な言葉（例えば、「等」）の使用は、実施形態をより良く示すことのみを意図し、特に主張されない限り、特許請求の範囲に限定をもたらさない。本明細書における言葉は、特許請求がなされていない任意の要素を不可欠なものとして示すものと解釈されるべきではない。
本明細書で使用される場合、「約」は、当業者によって理解され、かつそれが使用される文脈に応じてある程度変化するであろう。用語が使用される文脈が与えられた当業者に明確ではない用語の使用がある場合、「約」は、特定の用語の最大で＋または−１０％を意味するであろう。
概して、水素またはＨ等のある特定の元素への言及は、その元素のすべての同位体を含むことを意味する。例えば、Ｒ基は、水素またはＨを含むことが定義される場合、それはまた、重水素及びトリチウムも含む。それ故に、トリチウム、Ｃ１４、Ｐ３２、及びＳ３５等の放射性同位体を含む化合物は、本技術の範囲内である。かかる標識を本技術の化合物に挿入するための手順は、本明細書への開示に基づいて当業者には容易に明らかであろう。
概して、「置換された」とは、その中に含まれる水素原子への１つ以上の結合が、非水素原子または非炭素原子により置き換えられている、以下に定義されるようなアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、またはエーテル基（例えば、アルキル基）を指す。置換基はまた、炭素（複数可）または水素（複数可）原子への１つ以上の結合が、ヘテロ原子への二重結合または三重結合を含む１つ以上の結合により置き換えられている基も含む。それ故に、特に指定のない限り、置換基は、１つ以上の置換基で置換されるであろう。いくつかの実施形態では、置換基は、１、２、３、４、５、または６つの置換基で置換される。置換基の例としては、ハロゲン（すなわち、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＩ）；ヒドロキシル；アルキル、アリール、ヘテルシクリル、ヘテロアリール、アルコキシ、アルケノキシ、アルキノキシ、アリールオキシ、アラルキルオキシ、ヘテロシクリルオキシ、及びヘテロシクリルアルコキシ基；カルボニル（オキソ）、カルボキシル；エステル；ウレタン；オキシム；ヒドロキシルアミン；アルコキシアミン；アラルコキシアミン；チオール；スルフィド；スルホキシド；スルホン；スルホニル；スルホンアミド；アミン；Ｎ−オキシド；ヒドラジン；ヒドラジド；ヒドラゾン；アジド；アミド；尿素；アミジン；グアニジン；エナミン；イミド；イソシアネート；イソチオシアネート；シアネート；チオシアネート；イミン；ニトロ基；ニトリル（すなわち、ＣＮ）等が挙げられる。
本明細書で使用される場合、Ｃ１〜Ｃ１２、Ｃ１〜Ｃ８、またはＣ１〜Ｃ６等のＣｍ〜Ｃｎは、ある基の前に使用されるとき、ｍ〜ｎ個の炭素原子を含有する基を指す。
「アルキル」とは、１〜１０個の炭素原子、好ましくは１〜６個の炭素原子を有する、一価の飽和脂肪族ヒドロカルビル基を指す。アルキル基は、非置換、または非置換かつ直鎖または分岐鎖であってもよい。この用語は、例として、直鎖及び分岐鎖ヒドロカルビル基、例えば、メチル（ＣＨ３−）、エチル（ＣＨ３ＣＨ２−）、ｎ−プロピル（ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２−）、イソプロピル（（ＣＨ３）２ＣＨ−）、ｎ−ブチル（ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、イソブチル（（ＣＨ３）２ＣＨＣＨ２−）、ｓｅｃ−ブチル（（ＣＨ３）（ＣＨ３ＣＨ２）ＣＨ−）、ｔ−ブチル（（ＣＨ３）３Ｃ−）、ｎ−ペンチル（ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、及びネオペンチル（（ＣＨ３）３ＣＣＨ２−）を含む。好ましい置換アルキル基は、ハロゲン化アルキル基、特に、ハロゲン化メチル基、例えば、トリフルオロメチル、ジフルオロメチル、フルオロメチル等を含む。
「アルケニル」は、２〜６個の炭素原子、好ましくは２〜４個の炭素原子を有し、少なくとも１つ好ましくは１〜２つの不飽和部位を有する、直鎖または分岐鎖ヒドロカルビル基を指す。アルケニル基は、非置換であっても、置換されてもよい。かかる基は、例えば、ビニル、アリル、及びブタ−３−エン−１−イルによって例示される。シス及びトランス異性体またはこれらの異性体の混合物が、この用語内に含まれる。
「アルキニル」とは、２〜６個の炭素原子、好ましくは２〜３個の炭素原子を有し、少なくとも１つ、好ましくは１〜２つのアセチレン部位（−Ｃ≡Ｃ−）の不飽和を有する、直鎖または分岐鎖一価のヒドロカルビル基を指す。かかるアルキニル基の例は、アセチレニル（−Ｃ≡ＣＨ）、及びプロパルギル（−ＣＨ２Ｃ≡ＣＨ）を含む。アルキニル基は、非置換であっても、置換されてもよい。
「アルコキシ」は、アルキルが本明細書に定義されている基−Ｏ−アルキルを指す。アルコキシ基は、非置換であっても、置換されてもよい。アルコキシは、例としては、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ−ブトキシ、ｔ−ブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、及びｎ−ペントキシを含む。好ましい置換アルコキシ基（−Ｏ−（置換アルキル））は、ハロゲン化アルキル基、特にハロゲン化メチル基、例えば、トルフルオロメチル、ジフルオロメチル、フルオロメチル等を含む。
「アシル」は、基Ｈ−Ｃ（Ｏ）−、アルキル−Ｃ（Ｏ）−、アルケニル−Ｃ（Ｏ）−、アルキニル−Ｃ（Ｏ）−、シクロアルキル−Ｃ（Ｏ）−、アリール−Ｃ（Ｏ）−、ヘテロアリール−Ｃ（Ｏ）−、及びヘテロシクリル−Ｃ（Ｏ）−を指す。
「アシルアミノ」は、基−ＮＲ１３０Ｃ（Ｏ）アルキル、−ＮＲ１３０Ｃ（Ｏ）シクロアルキル、−ＮＲ１３０Ｃ（Ｏ）アルケニル、−ＮＲ１３０Ｃ（Ｏ）アルキニル、−ＮＲ１３０Ｃ（Ｏ）アリール、−ＮＲ１３０Ｃ（Ｏ）ヘテロアリール、及び−ＮＲ３０Ｃ（Ｏ）ヘテロシクリル（式中、Ｒ１３０は、独立して、各出現時に、水素またはアルキルである）を指す。
「アシルオキシ」とは、基アルキル−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、置換アルキル−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、アルケニル−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、置換アルケニル−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、アルキニル−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、置換アルキニル−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、アリール−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、置換アリール−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、シクロアルキル−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、置換シクロアルキル−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、ヘテロアリール−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、置換ヘテロアリール−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、複素環−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、及び置換複素環−Ｃ（Ｏ）Ｏ−を指す。
「アミノ」とは、−ＮＲ１３１Ｒ１３２（式中、Ｒ１３１及びＲ１３２が、それぞれ独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルコキシ、アルキニル、アリール、シクロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、またはスルホニルである）を指す。Ｒ１３１が水素であり、Ｒ１３２がアルキルである場合、置換アミノ基は、本明細書において、アルキルアミノと称される場合がある。Ｒ１３１及びＲ１３２がアルキルである場合、置換アミノ基は、本明細書において、ジアルキルアミノと称される場合がある。一置換アミノを指す場合、Ｒ１３１またはＲ１３２のいずれかが水素であるが、両方ではないことが意味される。二置換アミノを指す場合、Ｒ１３１またはＲ１３２のいずれも水素でないことが意味される。
「アミノカルボニル」とは、基−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１３３Ｒ１３４（式中、Ｒ１３３及びＲ１３４が、それぞれ独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルコキシ、アルキニル、アリール、シクロアルキル、ヘテロアリール、またはヘテロシクリルであり、式中、Ｒ１３３及びＲ１３４が、任意に、そこに結合されている窒素と一緒に結合して、複素環式基を形成する）を指す。
「アミノチオカルボニル」は、基−Ｃ（Ｓ）ＮＲ１３５Ｒ１３６（式中、Ｒ１３５及びＲ１３６が、独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルコキシ、アルキニル、アリール、シクロアルキル、ヘテロアリール、及びヘテロシクリルからなる群から選択され、式中、Ｒ１３５及びＲ１３６が、任意に、そこに結合されている窒素と一緒に結合して、複素環式または置換複素環式基を形成する）を指す。
「アミノカルボニルアミノ」とは、基−ＮＲ１３７Ｃ（Ｏ）ＮＲ１３８Ｒ１３９（式中、Ｒ１３７が水素またはアルキルであり、Ｒ１３８及びＲ１３９が、独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルコキシ、アルキニル、アリール、シクロアルキル、ヘテロアリール、及びヘテロシクリルからなる群から選択され、式中、Ｒ１３８及びＲ１３９が、任意に、そこに結合されている窒素と一緒に結合して、複素環式基を形成する）を指す。
「アミノチオカルボニルアミノ」とは、基−ＮＲ１４０Ｃ（Ｓ）ＮＲ１４１Ｒ１４２（式中、Ｒ１４０が水素またはアルキルであり、Ｒ１４１及びＲ１４２が、独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルコキシ、アルキニル、アリール、シクロアルキル、ヘテロアリール、及びヘテロシクリルからなる群から選択され、式中、Ｒ１４１及びＲ１４２が、任意に、そこに結合されている窒素と一緒に結合して、複素環式基を形成する）を指す。
「アミノカルボニルオキシ」とは、基−Ｏ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１４３Ｒ１４４（式中、Ｒ１４３及びＲ１４４が、独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルコキシ、アルキニル、アリール、シクロアルキル、ヘテロアリール、及びヘテロシクリルからなる群から選択され、式中、Ｒ１４３及びＲ１４４が、任意に、そこに結合されている窒素と一緒に結合して、複素環式基を形成する）を指す。
「アミノスルホニル」とは、基−ＳＯ２ＮＲ１４５Ｒ１４６（式中、Ｒ１４５及びＲ１４６が、独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルコキシ、アルキニル、アリール、シクロアルキル、ヘテロアリール、及びヘテロシクリルからなる群から選択され、式中、Ｒ１４５及びＲ１４６が、任意に、そこに結合されている窒素と一緒に結合して、複素環式基を形成する）を指す。
「アミノスルホニルオキシ」とは、基−Ｏ−ＳＯ２ＮＲ１４７Ｒ１４８（式中、Ｒ１４７及びＲ１４８が、それぞれ独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルコキシ、アルキニル、アリール、シクロアルキル、ヘテロアリール、及びヘテロシクリルからなる群から選択され、式中、Ｒ１４７及びＲ１４８が、任意に、そこに結合されている窒素と一緒に結合して、複素環式基を形成する）を指す。
「アミノスルホニルアミノ」とは、基−ＮＲ１４９−ＳＯ２ＮＲ１５０Ｒ１５１（式中、Ｒ１４９が水素またはアルキルであり、Ｒ１５０及びＲ１５１が、独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルコキシ、アルキニル、アリール、シクロアルキル、ヘテロアリール、及びヘテロシクリルからなる群から選択され、式中、Ｒ１５０及びＲ１５１が、任意に、そこに結合されている窒素と一緒に結合して、複素環式基を形成する）を指す。
「アミジノ」とは、基−Ｃ（＝ＮＲ１５２）ＮＲ１５３Ｒ１５４（式中、Ｒ１５２、Ｒ１５３、及びＲ１５４が、独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルコキシ、アルキニル、アリール、シクロアルキル、ヘテロアリール、及びヘテロシクリルからなる群から選択され、式中、Ｒ１５３及びＲ１５４が、任意に、そこに結合されている窒素と一緒に結合して、複素環式基を形成する）を指す。
「アリール」または「Ａｒ」とは、単環（例えば、フェニル（Ｐｈ））または複数の縮合環（例えば、ナフチルまたはアントリル）を有する、６〜１４個の炭素原子の一価の芳香族炭素環式基を指し、この縮合環は、結合点が芳香族炭素原子上にあれば、芳香族であってもよく、なくてもよい（例えば、２−ベンゾオキサゾリノン、２Ｈ−１，４−−ベンゾオキサジン−３（４Ｈ）−オン−７−イル等）。アリール基は、非置換であっても、置換されてもよい。好ましいアリール基は、フェニル及びナフチルを含む。置換アリールは、１〜５つ、好ましくは１〜３つ、またはより好ましくは１〜２つの置換基で置換されるアリール基を含む。
「アリールオキシ」とは、基−Ｏ−アリール（アリールは本明細書に定義された通りである）を指し、例としては、フェノキシ及びナフトキシが挙げられる。
「アリールチオ」とは、基−Ｓ−アリール（アリールは本明細書に定義された通りである）を指す。
「カルボニル」とは、二価の基−Ｃ（Ｏ）−を指し、これは−Ｃ（＝Ｏ）−と等価である。
「カルボキシ」または「カルボキシル」とは、−ＣＯＯＨまたはその塩を指す。
「カルボキシルエステル」または「カルボキシエステル」とは、基−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルケニル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキニル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−シクロアルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−ヘテロアリール、及び−Ｃ（Ｏ）Ｏ−ヘテロシクリルを指す。
「（カルボキシルエステル）アミノ」とは、基−ＮＲ１５５−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、−ＮＲ１５５−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルケニル、−ＮＲ１５５−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキニル、−ＮＲ１５５−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アリール、−ＮＲ１５５−Ｃ（Ｏ）Ｏ−シクロアルキル、−ＮＲ１５５−Ｃ（Ｏ）Ｏ−ヘテロアリール、及び−ＮＲ１５５−Ｃ（Ｏ）Ｏ−ヘテロシクリル（式中、Ｒ１５５が独立して、各出現時、アルキルまたは水素である）を指す。
「（カルボキシルエステル）オキシ」とは、基−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルケニル、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキニル、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アリール、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−シクロアルキル、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−ヘテロアリール、及び−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−ヘテロシクリルを指す。
「シアノ」とは、基−Ｃ≡Ｎを指す。
「シクロアルキル」とは、縮合環系、架橋環系、及びスピロ環系を含む単環式環または多環式環を有する、３〜１０個の環炭素原子の飽和または非飽和であるが、非芳香族環式アルキル基を指す。シクロアルキル基は、非置換であっても、置換されてもよい。「Ｃｘシクロアルキル」とは、ｘ個の環炭素原子を有するシクロアルキル基を指す。適切なシクロアルキル基の例としては、例えば、アダマンチル、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、及びシクロオクチルが挙げられる。
「シクロアルキルオキシ」とは、−Ｏ−シクロアルキルを指す。
「シクロアルキルチオ」とは、−Ｓ−シクロアルキルを指す。
「グアニジノ」とは、−ＮＲ１５６Ｃ（＝ＮＲ１５７）Ｎ（Ｒ１５８）２（式中、Ｒ１５６及びＲ１５７が、それぞれ独立して、水素、アルキル、アリール、ヘテロアリール、及びヘテロシクリルであり、Ｒ１５８が独立して、各出現時に、水素、アルキル、アリール、ヘテロアリール、及びヘテロシクリルであり、２つのＲ１５８基が、任意に、そこに結合されている窒素と一緒に結合して、ヘテロシクリル基を形成する）を指す。
「ハロ」または「ハロゲン」とは、フルオロ、クロロ、ブロモ、及びヨードを指し、好ましくは、フルオロまたはクロロである。
「ヒドロキシ」または「ヒドロキシル」とは、基−ＯＨを指す。
「ヘテロアリール」とは、環内に、１〜１０個の炭素原子、ならびに酸素、窒素、及び硫黄からなる群から選択される１〜４個のヘテロ原子の芳香族基を指す。かかるヘテロアリール基は、単環（例えば、ピリジニル若しくはフリル）または複数の縮合環（例えば、インドリジニル若しくはベンゾチエニル）を有することができ、この縮合環は、結合点がその芳香族ヘテロアリール基の原子を介してであれば、芳香族であっても芳香族でなくてもよく、かつ／あるいはヘテロ原子を含有していてもよく、含有していなくてもよい。ヘテロアリール基は、非置換であっても、置換されてもよい。ヘテロアリール基の窒素及び／または硫黄環原子（複数可）は、任意に酸化されて、Ｎ−オキシド（Ｎ→Ｏ）、スルフィニル、またはスルホニル部分を与えてもよい。好ましいヘテロアリールとしては、ピリジニル、ピロリル、インドリル、チオフェニル、及びフラニル等の５または６員のヘテロアリールが挙げられる。
「ヘテロアリールオキシ」とは、−Ｏ−ヘテロアリールを指す。
「ヘテロアリールチオ」とは、基−Ｓ−ヘテロアリールを指す。
「複素環」または「複素環式」または「ヘテロシクロアルキル」または「ヘテロシクリル」とは、１〜１０個の環炭素原子、ならびに窒素、硫黄、または酸素からなる群から選択される１〜４個の環ヘテロ原子を有する飽和または部分的に飽和されているが、芳香族ではない基を指す。ヘテロシクリル基は、非置換であっても、置換されてもよい。「Ｃｘヘテロシクリル」とは、環ヘテロ原子を含む、ｘ個の環原子を有するヘテロシクロアルキル基を指す。複素環は、縮合架橋及びスピロ環系を含む、単環または複数の縮合環を包含する。縮合環系では、１つ以上の環は、結合点が非芳香環を介してのものであれば、シクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり得る。複素環基の窒素及び／または硫黄原子（複数可）は、任意に酸化されて、Ｎ−オキシド、スルフィニル、スルホニル部分を与えてもよい。
「ヘテロシクリルオキシ」とは、基−Ｏ−ヘテロシクリルを指す。
「ヘテロシクリルチオ」とは、基−Ｓ−ヘテロシクリルを指す。
ヘテロシクリル及びヘテロアリールの例としては、アゼチジン、ピロール、イミダゾール、ピラゾール、ピリジン、ピラジン、ピリミジン、ピリダジン、インドリジン、イソインドール、インドール、ジヒドロインドール、インダゾール、プリン、キノリジン、イソキノリン、キノリン、フタラジン、ナフチルピリジン、キノキサリン、キナゾリン、シンノリン、プテリジン、カルバゾール、カルボリン、フェナントリジン、アクリジン、フェナントロリン、イソチアゾール、フェナジン、イソオキサゾール、フェノキサジン、フェノチアジン、イミダゾリジン、イミダゾリン、ピペリジン、ピペラジン、インドリン、フタルイミド、１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン、４，５，６，７−テトラヒドロベンゾ［ｂ］チオフェン、チアゾール、チアゾリジン、チオフェン、ベンゾ［ｂ］チオフェン、モルホリニル、チオモルホリニル（チアモルホリニルとも称される）、１，１−ジオキソチオモルホリニル、ピペリジニル、ピロリジン、及びテトラヒドロフラニルが挙げられるが、これらに限定されない。
「ニトロ」とは、基−ＮＯ２を指す。
「オキソ」とは、（＝Ｏ）または（Ｏ−）を指す。
「スピロ環系」とは、両環に共通の単一の環炭素原子を有する二環式環系を指す。
「スルフィニル」とは、二価の基−ＳＯ−を指す。
「スルホニル」とは、二価の基−Ｓ（Ｏ）２−を指し、「置換スルホニル」は、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−ＯＨ、−ＳＯ２−アルケニル、−ＳＯ２−シクロアルキル、−ＳＯ２−アリール、−ＳＯ２−ヘテロアリール、及び−ＳＯ２−ヘテロシクリルである。スルホニル基は、非置換であっても、置換されてもよい。置換スルホニルとは、メチル−ＳＯ２−、フェニル−ＳＯ２−、及び４−メチルフェニル−ＳＯ２−等の基が挙げられる。置換アルキル−ＳＯ２−上の好ましい置換アルキル基は、ハロゲン化アルキル基、特にハロゲン化メチル基、例えば、トルフルオロメチル、ジフルオロメチル、フルオロメチル等を含む。
「スルホニルオキシ」とは、−ＯＳＯ２−アルキル、−ＯＳＯ２−ＯＨ、−ＯＳＯ２−アルケニル、−ＯＳＯ２−シクロアルキル、−ＯＳＯ２−アリール、−ＯＳＯ２−ヘテロアリール、及び−ＯＳＯ２−ヘテロシクリルを指す。
「チオアシル」とは、Ｈ−Ｃ（Ｓ）−、アルキル−Ｃ（Ｓ）−、アルケニル−Ｃ（Ｓ）−、アルキニル−Ｃ（Ｓ）−、シクロアルキル−Ｃ（Ｓ）−、アリール−Ｃ（Ｓ）−、ヘテロアリール−Ｃ（Ｓ）−、及びヘテロシクリル−Ｃ（Ｓ）−を指す。
「メルカプト」または「チオール」とは、基−ＳＨを指す。
「ホルミル」とは、基−Ｃ（Ｏ）Ｈを指す。
「チオカルボニル」とは、二価の基−Ｃ（Ｓ）−を指し、これは−Ｃ（＝Ｓ）−と等価である。
「チオン」とは、原子（＝Ｓ）を指す。
「アルキルチオ」とは、基−Ｓ−アルキルを指す。
化合物の立体異性体（光学異性体としても知られている）には、特に特定の立体化学が明確に示されない限り、構造のすべてのキラル、ジアステレオマー、及びラセミ形態を含む。それ故に、本技術で使用される化合物は、描写から明らかであるため、あらゆるまたはすべての非対称性原子で濃縮されたまたは分解された光学異性体を含む。ラセミ及びジアステレオマーの混合物の両方、ならびに個別の光学異性体を、それらの鏡像異性またはジアステレオマーのパートナーを実質的には含まないように、単離するまたは合成することができ、これらの立体異性体はすべて、本技術の範囲内である。
本技術の化合物は、溶媒和物、特に水和物として存在してもよい。水和物は、化合物の製造中に形成することができる、または化合物を含む組成物または水和物は、化合物の吸湿性の性質のために時間と共に形成することができる。本技術の化合物は、特にＤＭＦ、エーテル、及びアルコール溶媒和物を含む、有機溶媒和物としても存在してもよい。任意の特定の溶媒和物の同定及び調製は、合成、有機、または医薬品化学の当業者の技術の範囲内である。
「互変異性体」とは、エノール−ケト及びイミン−エナミン互変異性体等のプロトンの一が異なる化合物の互いの型、またはピラゾール、イミダゾール、ベンズイミダゾール、トリアゾール、及びテトラゾール等の環−ＮＨ−部分及び環＝Ｎ−部分の両方に結合する環原子を含むヘテロアリール基の互変異性型を指す。
患者における疾患の「治療すること」または「治療」は、１）疾患に罹りやすい、若しくは疾患の症状をまだ示していない患者で疾患の発症を予防すること、２）疾患を阻害する、若しくはその発生を停止させること、または３）疾患を改善する、若しくは退行を引き起こすことを指す。
特に記載がない限り、本明細書において明確に定義されていない置換基の命名は、官能基の末端部分を命名し、続いて結合点に向かって隣接する官能基を命名することにより達成される。例えば、置換基「アルコキシカルボニルアルキル」とは、基（アルコキシ）−Ｃ（Ｏ）−（アルキル）−を指す。
上で定義されるすべての置換基において、それら自体へのさらなる置換基を有する置換基を定義することにより達成されるポリマー（例えば、置換基として置換アリール基を有する置換アリール基であって、その置換基はそれ自体置換アリール基で置換されている等）は、本明細書への包含が意図されていないことが理解される。そのような場合、そのような置換基の最大数は３である。すなわち、上記の定義のそれぞれは、例えば、置換アリール基が−置換アリール−（置換アリール）−置換アリールに限定されるという制限によって限定される。
上記の定義には、許容されない置換パターンを含むことを意図しないことは理解されるべきである（例えば、５個のフルオロ基で置換されたメチル）。このような許容されない置換パターンは、当業者に既知である。
本明細書に記載される化合物の薬学的に許容される塩は、本技術の範囲内であり、所望の薬理活性を保持し、生物学的に望ましくなくはない（例えば、塩が、不当に有毒、アレルゲン性、または刺激性ではなく、及び生物学的に利用可能である）酸または塩基添加塩を含む。本技術の化合物が、例えば、アミノ基等の塩基性基を有する場合、薬学的に許容される塩を、無機酸（塩酸、ヒドロホウ酸（ｈｙｄｒｏｂｏｒｉｃ ａｃｉｄ）、硝酸、硫酸、及びリン酸等）、有機酸（例えば、アルギン酸、ギ酸、酢酸、安息香酸、グルコン酸、フマル酸、シュウ酸、酒石酸、乳酸、マレイン酸、クエン酸、コハク酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸、及びｐ−トルエンスルホン酸）、または酸性アミノ酸（アスパラギン酸及びグルタミン酸等）で形成することができる。本技術の化合物が、例えば、カルボン酸基等の酸性基を有する場合、アルカリ及び土類アルカリ金属（例えば、Ｎａ＋、Ｌｉ＋、Ｋ＋、Ｃａ２＋、Ｍｇ２＋、Ｚｎ２＋）等の金属、アンモニア若しくは有機アミン（例えば、ジシクロヘキシルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、ピリジン、ピコリン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン）、または塩基性アミノ酸（例えば、アルギニン、リジン、及びオルニチン）で塩を形成することができる。かかる塩を、化合物の単離及び精製中に原位置で、または遊離塩基若しくは遊離酸形態にある精製された化合物を適切な酸若しくは塩基と、それぞれ別々に反応させて、このように生じた塩を単離することによって調製することができる。
２．本技術の化合物
本技術の化合物は、化合物、組成物、及びｍｔＰＴＰを阻害する際の当該化合物の使用方法を対象とする。本技術の化合物は、［Ｃａ２＋］の調節不全及び／または活性酸素種の蓄積によって少なくとも部分的に媒介されるもの等の様々な障害を治療するのに有用である。
本技術の化合物は、化合物、組成物、及びｍｔＰＴＰを阻害する際の当該化合物の使用方法を対象とする。本技術の化合物は、［Ｃａ２＋］の調節不全及び／または活性酸素種の蓄積によって少なくとも部分的に媒介されるもの等の様々な障害を治療するのに有用である。
一態様では、本技術は、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩を提供し、
式中、
Ｙ１及びＷ１が、それぞれ独立して、Ｏ、Ｎ、ＮＨ、ＮＲ６、Ｓ、ＣＨ、またはＣＲ７であるか、Ｙ１及びＷ１が、それぞれ独立して、ＣＲ８またはＮＲ８であり、ここで、Ｒ８がＹ１及びＷ１と結合して、アリール、ヘテロアリール、またはヘテロシクリル環を形成し、Ｚ１、Ｚ２、及びＺ３が、それぞれ独立して、ＣＨ、Ｃ−Ｒ９、またはＮであり、ｍが１または２であり、Ｇ１が、Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ、ＳＯ、またはＳＯ２であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ９が独立して、各出現時に、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルコキシ、アルキニル、アミノ、アミノスルフィニル、アミノスルホニル、スルフィニル、スルホニル、スルホニルオキシ、アミノスルホニルオキシ、アミノスルフィニルオキシ、アミノスルホニルアミノ、アシルアミノ、アミノカルボニルオキシ、アミノカルボニルアミノ、アミノチオカルボニルアミノ、アミノカルボニル、アシルオキシ、アリール、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、シアノ、ニトロ、カルボキシル、カルボキシルエステル、（カルボキシルエステル）アミノ、（カルボキシルエステル）オキシ、アシル、若しくはホルミルであるか、または２つの隣接するＲ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ９が一緒になってアリール、ヘテテロアリール、またはヘテロシクリル環を形成し、Ｒ３が、水素、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、またはアルキニルである。
Ｙ１及びＷ１が、それぞれ独立して、Ｏ、Ｎ、ＮＨ、ＮＲ６、Ｓ、ＣＨ、またはＣＲ７であるか、Ｙ１及びＷ１が、それぞれ独立して、ＣＲ８またはＮＲ８であり、ここで、Ｒ８がＹ１及びＷ１と結合して、アリール、ヘテロアリール、またはヘテロシクリル環を形成し、Ｚ１、Ｚ２、及びＺ３が、それぞれ独立して、ＣＨ、Ｃ−Ｒ９、またはＮであり、ｍが１または２であり、Ｇ１が、Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ、ＳＯ、またはＳＯ２であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ９が独立して、各出現時に、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルコキシ、アルキニル、アミノ、アミノスルフィニル、アミノスルホニル、スルフィニル、スルホニル、スルホニルオキシ、アミノスルホニルオキシ、アミノスルフィニルオキシ、アミノスルホニルアミノ、アシルアミノ、アミノカルボニルオキシ、アミノカルボニルアミノ、アミノチオカルボニルアミノ、アミノカルボニル、アシルオキシ、アリール、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、シアノ、ニトロ、カルボキシル、カルボキシルエステル、（カルボキシルエステル）アミノ、（カルボキシルエステル）オキシ、アシル、若しくはホルミルであるか、または２つの隣接するＲ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ９が一緒になってアリール、ヘテテロアリール、またはヘテロシクリル環を形成し、Ｒ３が、水素、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、またはアルキニルである。
当該式Ｉの化合物は、式ＩＩまたはＩＩＩの化合物またはその薬学的に許容される塩であってもよく、
式中、
Ｙ１が、Ｏ、ＮＨ、ＮＲ６、またはＳであり、
Ｗ１が、Ｎ、ＣＨ、またはＣＲ７であり、
Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、Ｒ４、及びＲ５が、上記に定義された通りであり、
Ｇ２が、Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ、ＳＯ、またはＳＯ２であり、
Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８、及びＲ１９が独立して、各出現時に、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルコキシ、アルキニル、アミノ、アミノスルフィニル、アミノスルホニル、スルフィニル、スルホニル、スルホニルオキシ、アミノスルホニルオキシ、アミノスルフィニルオキシ、アミノスルホニルアミノ、アシルアミノ、アミノカルボニルオキシ、アミノカルボニルアミノ、アミノチオカルボニルアミノ、アミノカルボニル、アシルオキシ、アリール、ヘテロシクリル，ヘテロアリール、シアノ、ニトロ、カルボキシル、カルボキシルエステル、（カルボキシルエステル）アミノ、（カルボキシルエステル）オキシ、アシル、若しくはホルミルであるか、または２つの隣接するＲ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８、及びＲ１９が一緒になってアリール、ヘテテロアリール、またはヘテロシクリル環を形成し、
Ｒ２０が、水素、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、またはアルキニルである。
Ｙ１が、Ｏ、ＮＨ、ＮＲ６、またはＳであり、
Ｗ１が、Ｎ、ＣＨ、またはＣＲ７であり、
Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、Ｒ４、及びＲ５が、上記に定義された通りであり、
Ｇ２が、Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ、ＳＯ、またはＳＯ２であり、
Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８、及びＲ１９が独立して、各出現時に、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルコキシ、アルキニル、アミノ、アミノスルフィニル、アミノスルホニル、スルフィニル、スルホニル、スルホニルオキシ、アミノスルホニルオキシ、アミノスルフィニルオキシ、アミノスルホニルアミノ、アシルアミノ、アミノカルボニルオキシ、アミノカルボニルアミノ、アミノチオカルボニルアミノ、アミノカルボニル、アシルオキシ、アリール、ヘテロシクリル，ヘテロアリール、シアノ、ニトロ、カルボキシル、カルボキシルエステル、（カルボキシルエステル）アミノ、（カルボキシルエステル）オキシ、アシル、若しくはホルミルであるか、または２つの隣接するＲ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８、及びＲ１９が一緒になってアリール、ヘテテロアリール、またはヘテロシクリル環を形成し、
Ｒ２０が、水素、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、またはアルキニルである。
本明細書における任意の実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８、及び／またはＲ１９が独立して、各出現時に、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ１〜Ｃ８アルケニル、Ｃ２〜Ｃ８アルキニル、アリール、シアノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシル、ホルミル、Ｃ３〜Ｃ７ヘテロアリール、若しくはＣ３〜Ｃ７ヘテロシクリルであり得るか、または２つの隣接するＲ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８、及び／若しくはＲ１９が一緒になってアリール、ヘテテロアリール、またはヘテロシクリル環を形成する。
当該式ＩＩの化合物は、式ＩＩａの化合物であってもよく、
式中、Ｒ２１が、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、またはアルコキシである。本明細書における任意の実施形態では、Ｒ２１は、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、またはメトキシであってもよい。本明細書における任意の実施形態では、Ｚ１は、ＣＨであってもよい。本明細書における任意の実施形態では、Ｙ１がＯでありかつＷ１がＮであるか、またはＹ１がＮＨでありかつＷ１がＮであってもよい。
一態様では、本技術は、式ＩＶの化合物またはその薬学的に許容される塩を提供し、
式中、
Ｙ２が、Ｏ、ＮＨ、ＮＲ２５、またはＳであり、
Ｗ２が、Ｎ、ＣＨ、またはＣＲ２６であり、Ｙ２がＮＲ２５であり、Ｗ２がＣＲ２６である場合、Ｒ２５及びＲ２６が、任意に、Ｙ２及びＷ２と結合して、アリール、ヘテロアリール、またはヘテロシクリル環を形成してもよく、
Ｚ４、Ｚ５、及びＺ６が、それぞれ独立して、ＣＨ、Ｃ−Ｒ２７、またはＮであり、
Ｒ２２、Ｒ２３、Ｒ２４、Ｒ２５、Ｒ２６、及びＲ２７が、独立して、各出現時に、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルコキシ、アルキニル、アミノ、アミノスルフィニル、アミノスルホニル、スルフィニル、スルホニル、スルホニルオキシ、アミノスルホニルオキシ、アミノスルフィニルオキシ、アミノスルホニルアミノ、アシルアミノ、アミノカルボニルオキシ、アミノカルボニルアミノ、アミノチオカルボニルアミノ、アミノカルボニル、アシルオキシ、アリール、ヘテロアリール、シアノ、ニトロ、カルボキシル、カルボキシルエステル、（カルボキシルエステル）アミノ、（カルボキシルエステル）オキシ、アシル、若しくはホルミルであるか、または２つのＲ２２、Ｒ２３、Ｒ２４、Ｒ２５、Ｒ２６、及びＲ２７が一緒になってアリール、ヘテテロアリール、またはヘテロシクリル環を形成する。
Ｙ２が、Ｏ、ＮＨ、ＮＲ２５、またはＳであり、
Ｗ２が、Ｎ、ＣＨ、またはＣＲ２６であり、Ｙ２がＮＲ２５であり、Ｗ２がＣＲ２６である場合、Ｒ２５及びＲ２６が、任意に、Ｙ２及びＷ２と結合して、アリール、ヘテロアリール、またはヘテロシクリル環を形成してもよく、
Ｚ４、Ｚ５、及びＺ６が、それぞれ独立して、ＣＨ、Ｃ−Ｒ２７、またはＮであり、
Ｒ２２、Ｒ２３、Ｒ２４、Ｒ２５、Ｒ２６、及びＲ２７が、独立して、各出現時に、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルコキシ、アルキニル、アミノ、アミノスルフィニル、アミノスルホニル、スルフィニル、スルホニル、スルホニルオキシ、アミノスルホニルオキシ、アミノスルフィニルオキシ、アミノスルホニルアミノ、アシルアミノ、アミノカルボニルオキシ、アミノカルボニルアミノ、アミノチオカルボニルアミノ、アミノカルボニル、アシルオキシ、アリール、ヘテロアリール、シアノ、ニトロ、カルボキシル、カルボキシルエステル、（カルボキシルエステル）アミノ、（カルボキシルエステル）オキシ、アシル、若しくはホルミルであるか、または２つのＲ２２、Ｒ２３、Ｒ２４、Ｒ２５、Ｒ２６、及びＲ２７が一緒になってアリール、ヘテテロアリール、またはヘテロシクリル環を形成する。
一態様では、本技術の化合物は、式Ｖの化合物またはその薬学的に許容される塩であり、
式中、Ｇ３が、Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ、またはＳＯ２であり、Ａ１及びＢ１が、それぞれ独立して、アルキル、シクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールである。
例えば、式Ｖに従う化合物は、式ＶＩ及びＶＩＩの化合物またはその薬学的に許容される塩を含み、
式中、
Ｚ７、Ｚ８、Ｚ９、Ｚ１０、Ｚ１１、及びＺ１２が、それぞれ独立して、ＣＨ、Ｃ−Ｒ３８、またはＮであり、
Ｒ３０、Ｒ３２、Ｒ３３、Ｒ３４、Ｒ３６、及びＲ３７が独立して、各出現時に、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルコキシ、アルキニル、アミノ、アミノスルフィニル、アミノスルホニル、スルフィニル、スルホニル、スルホニルオキシ、アミノスルホニルオキシ、アミノスルフィニルオキシ、アミノスルホニルアミノ、アシルアミノ、アミノカルボニルオキシ、アミノカルボニルアミノ、アミノチオカルボニルアミノ、アミノカルボニル、アシルオキシ、アリール、ヘテロアリール、シアノ、ニトロ、カルボキシル、カルボキシルエステル、（カルボキシルエステル）アミノ、（カルボキシルエステル）オキシ、アシル、若しくはホルミルであるか、または２つの隣接するＲ３２、Ｒ３３、Ｒ３６、及びＲ３７が一緒になってアリール、ヘテテロアリール、またはヘテロシクリル環を形成し、
Ｒ３１及びＲ３５が、それぞれ独立して、水素、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、またはヘテロアリールである。
Ｚ７、Ｚ８、Ｚ９、Ｚ１０、Ｚ１１、及びＺ１２が、それぞれ独立して、ＣＨ、Ｃ−Ｒ３８、またはＮであり、
Ｒ３０、Ｒ３２、Ｒ３３、Ｒ３４、Ｒ３６、及びＲ３７が独立して、各出現時に、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルコキシ、アルキニル、アミノ、アミノスルフィニル、アミノスルホニル、スルフィニル、スルホニル、スルホニルオキシ、アミノスルホニルオキシ、アミノスルフィニルオキシ、アミノスルホニルアミノ、アシルアミノ、アミノカルボニルオキシ、アミノカルボニルアミノ、アミノチオカルボニルアミノ、アミノカルボニル、アシルオキシ、アリール、ヘテロアリール、シアノ、ニトロ、カルボキシル、カルボキシルエステル、（カルボキシルエステル）アミノ、（カルボキシルエステル）オキシ、アシル、若しくはホルミルであるか、または２つの隣接するＲ３２、Ｒ３３、Ｒ３６、及びＲ３７が一緒になってアリール、ヘテテロアリール、またはヘテロシクリル環を形成し、
Ｒ３１及びＲ３５が、それぞれ独立して、水素、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、またはヘテロアリールである。
式Ｉ、ＩＩ、ＩＩａ、ＩＩＩ、ＩＶ、及び／またはＶの化合物は、以下に及び本明細書において表１及び２中に示される化合物のうちのいずれか１つ、及びそれらの薬学的に許容される塩であってもよい。
いくつかの実施形態では、本技術は、本明細書に開示される１つ以上の化合物と薬学的に許容される賦形剤とを含む薬学的組成物である。本明細書中の任意の実施形態の薬学的組成物は、経口、非経口、経鼻、または局所投与のために製剤化され得る。本明細書における任意の実施形態では、薬学的組成物は、有効量の本技術の任意の実施形態の化合物を含んでもよい。本技術の化合物は、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、虚血再灌流傷害、アルツハイマー病、ハンチントン病、パーキンソン病、インスリン誘発性低血糖症、脳虚血、癲癇または実験的外傷からの脳障害、ベスレムミオパチー、膵炎、肝炎（Ａ及び／若しくはＢ及び／若しくはＣ型）、ＩＩ型糖尿病、糖尿病性網膜症、筋ジストロフィー、外傷性脳損傷、心筋梗塞、ならびに／または卒中の治療のために有効な量で存在し得る。
本技術の文脈の中で「治療すること」は、全体または部分的に、障害若しくは疾患と関連する症状の緩和、またはそれらの症状のさらなる進行若しくは悪化の遅延、阻害、若しくは停止、または疾患若しくは障害を発症するリスクがある対象における疾患若しくは障害の防止若しくは予防を意味する。
本明細書で使用される場合、本技術の化合物の「有効量」とは、全体または部分的に、障害若しくは疾患と関連する症状を緩和する、またはそれらの症状のさらなる進行若しくは悪化を遅延若しくは停止する、または疾患若しくは障害を発症するリスクがある対象における疾患若しくは障害を防ぐ若しくは予防する化合物の量を指す。当業者は、有効量を容易に決定することができる。例えば、特定の病状に対する有効量を評価する１つの方法は、病状の進行が低下または停止するまで、患者に漸増で本技術の化合物を単に投与することによるものである。
本組成物は、例えば、経口、非経口、局所、注射、直腸、経鼻による、または埋め込みリザーバを介した様々な投与経路のために製剤化することができる。非経口または全身投与としては、皮下、静脈内、腹腔内、筋肉内、髄腔内、頭蓋内、及び脳室内注射が挙げられるが、これらに限定されない。以下の剤形は、例として与えられ、本技術を限定するものとして解釈されるべきではない。
経口、頬腔、及び舌下投与のためには、粉末剤、懸濁液剤、顆粒剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、ジェルキャップ剤、及びカプレット剤が、固形の剤形として許容される。これらは、例えば、本明細書に開示される１つ以上の化合物、またはその薬学的に許容される塩若しくは立体異性体を、デンプンまたは他の添加物等の少なくとも１つの添加物と混合することによって調製することができる。適切な添加物は、スクロース、ラクトース、セルロース糖、マンニトール、マルチトール、デキストラン、デンプン、寒天、アルギネート、キチン、キトサン、ペクチン、トラガカントガム、アラビアガム、ゼラチン、コラーゲン、カゼイン、アルブミン、合成若しくは反合成ポリマー、またはグリセリドである。任意選択で、経口の剤形は、例えば、不活性な希釈剤、またはステアリン酸マグネシウム等の潤滑剤、またはパラベン若しくはソルビン酸等の保存料、またはアスコルビン酸、トコフェロール、若しくはシステイン等の抗酸化剤、崩壊剤、結合剤、増粘剤、緩衝液、甘味料、矯味剤、若しくは香料のような、投与を補助するための他の成分を含むことができる。錠剤及び丸剤は、当技術分野において既知の適切なコーティング材料によってさらに処理することができる。
経口投与のための液状の剤形は、薬学的に許容されるエマルジョン剤、シロップ剤、エリキシル剤、懸濁液剤、及び溶液剤の剤形であり、水等の不活性な希釈剤を含み得る。薬学的製剤及び薬剤は、油、水、アルコール、及びこれらの組み合わせ等であるが限定されない滅菌液体を用いて、液体懸濁液または溶液として調製され得る。薬学的に適切な界面活性剤、懸濁化剤、乳化剤が、経口または非経口投与のために添加され得る。
上述のように、懸濁液は、油を含んでもよい。かかる油としては、ピーナッツ油、ゴマ油、綿実油、トウモロコシ油、及びオリーブ油が挙げられるが、これらに限定されない。懸濁液製剤はまた、オレイン酸エチル、ミリスチン酸イソプロピル、脂肪酸グリセリド、及びアセチル化脂肪酸グリセリド等の脂肪酸のエステルを含んでもよい。懸濁液製剤は、エタノール、イソプロピルアルコール、ヘキサデシルアルコール、グリセロール、及びプロピレングリコール等であるがこれらに限定されないアルコールを含んでもよい。ポリ（エチレングリコール）等であるが、これに限定されない、エーテル、鉱油及びワセリン等の石油炭化水素；ならびに水もまた、懸濁液製剤に使用されてもよい。
注射用剤形は、通常、適切な分散剤若しくは湿潤剤及び懸濁化剤を用いて調製され得る水性懸濁液または油性懸濁液を含む。注射用剤形は、溶媒または希釈剤を用いて調製される、溶液相または懸濁液の形態であり得る。許容される溶媒またはビヒクルとしては、滅菌水、リンガー溶液、または等張食塩水溶液が挙げられる。あるいは、滅菌油が溶媒または懸濁化剤として使用され得る。典型的には、油または脂肪酸は不揮発性であり、天然または合成の油、脂肪酸、モノ、ジ、若しくはトリグリセリドが挙げられる。
注射のために、薬学的製剤及び／または薬剤は、上述の適切な溶液による再調製に適した粉末であり得る。これらの例としては、凍結乾燥、回転乾燥、若しくは噴霧乾燥した粉末、非晶質粉末、顆粒、沈殿物、または微粒子が挙げられるが、これらに限定されない。注射のために、製剤は、任意に、安定化剤、ｐＨ調整剤、界面活性剤、生体利用性調整剤、及びこれらの組み合わせを含有し得る。
直腸投与用の投与単位は、物質の組成物を中性脂肪基剤との混合物中に含有し得る坐薬の形態で調製され得るか、またはそれらが活性物質を植物油若しくはパラフィン油との混合物中に含有するゼラチン直腸カプセル剤の形態で調製され得る。
本技術の化合物は、鼻または口による吸入によって肺に投与され得る。吸入用の適切な薬学的製剤としては、任意の適切な溶媒を含有する、溶液、スプレー、乾燥粉末、またはエアロゾル、ならびに安定剤、抗菌剤、抗酸化剤、ｐＨ調節剤、界面活性剤、生物学的利用能調節剤、及びこれらの組み合わせ等であるがこれらに限定されない任意の他の化合物が挙げられる。吸入投与用の製剤は、賦形剤として、例えば、ラクトース、ポリオキシエチレン−９−ラウリルエーテル、グリココール酸塩、及びデオキシコール酸塩を含有する。水性及び非水性エアロゾルは、典型的には、吸入による本発明の化合物の送達のために使用される。
通常、水性エアロゾルは、従来の薬学的に許容される担体及び安定剤と共に化合物の水溶液または懸濁液を製剤化することによって作製される。担体及び安定剤は、特定の化合物の必要によって異なるが、典型的には、非イオン性界面活性剤（トウィーン（Ｔｗｅｅｎ）、プルロニック（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ）、またはポリエチレングリコール）、血清アルブミンのような無害タンパク質、ソルビタンエステル、オレイン酸、レシチン、グリシン等のアミノ酸、緩衝液、塩、糖、または糖アルコールが挙げられる。エアロゾルは、一般に等張溶液から調製される。非水性懸濁液（例えば、フッ化炭素推進剤中の）はまた、本技術の化合物を送達するために使用することもできる。
本技術による使用のために化合物を含有するエアロゾルは、吸入器、噴霧器、加圧パック、またはネブライザー、及び適切な推進剤、例えば、これらに限定されないが、加圧ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、窒素、空気、または二酸化炭素を用いて、好都合に送達される。加圧エアロゾルの場合、投与単位は、計量された量を送達するためのバルブを提供することにより制御され得る。吸入器または注入器で使用するための、例えばゼラチンのカプセル及びカートリッジは、化合物とラクトースまたはデンプン等の適当な粉末基剤の粉末混合物を含むように製剤化され得る。音波ネブライザーを用いた本技術のエアロゾルの送達は、ネブライザーが、化合物の劣化を招き得る、薬剤が剪断を受けるのを最小限に抑えるため、有利である。
経鼻投与のために、薬学的製剤及び薬剤は、適当な溶媒（複数可）、ならびに任意に、安定剤、抗菌剤、抗酸化剤、ｐＨ調整剤、界面活性剤、生体利用性調整剤、及びこれらの組み合わせ等であるがこれらに限定されない他の化合物が含まれる、スプレー、点鼻薬、またはエアロゾルであってもよい。点鼻剤の形態で投与のために、化合物は、油性溶液中またはゲルとして製剤化されてもよい。鼻エアロゾルの投与のために、圧縮空気、窒素、二酸化炭素、または炭化水素ベースの低沸点溶剤を含む、任意の適切な推進剤が、使用されてもよい。
上述のこれらの代表的な剤形に加えて、薬学的に許容される賦形剤及び担体は、概して、当業者には周知であり、それ故に、本発明の技術に含まれている。かかる賦形剤及び担体は、例えば、“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ” Ｍａｃｋ Ｐｕｂ．Ｃｏ．，Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ（１９９１）（これは参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。
本技術の製剤は、下述のように短時間作用型、急速放出型、長時間作用型、及び持続放出型であるように設計され得る。それ故に、薬学的製剤はまた、制御放出または徐放のためにも製剤化され得る。
本組成物はまた、例えば、ミセル若しくはリポソームまたは他の何らかの封入形態を含み得るか、あるいは、長期の保存及び／または送達効果をもたらすために持続放出形態で投与され得る。したがって、薬学的製剤及び薬剤は、ペレットまたはシリンダー内に圧縮され、デポー注射として、若しくはステント等のインプラントとして筋肉内または皮下に埋め込まれ得る。かかるインプラントには、シリコーン及び生分解性ポリマー等の既知の不活性物質を使用し得る。
特定の投与量は、疾患の状態、対象の年齢、体重、一般的な健康状態、性別、及び食事、投与間隔、投与経路、排せつ率、ならびに薬物の組み合わせに応じて調整され得る。有効量を含有している上記の剤形のいずれも、十分に通常の実験の範囲内であり、したがって、十分に本技術の範囲内である。
治療有効量の本技術の化合物は、投与経路及び剤形に応じて異なり得る。有効量のかかる化合物は、典型的には、約０．０１〜約１００ｍｇ／ｋｇ／日、または約０．０５〜約５０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲内、及びより典型的には、約０．１〜５ｍｇ／ｋｇ／日の範囲内に入る。典型的には、本技術の化合物または組成物は、高い治療指数を示す製剤をもたらすように選択される。治療指数は、毒性効果と治療効果の間の用量比であり、ＬＤ５０とＥＤ５０の間の比として表すことができる。ＬＤ５０は、この集団の５０％を死に至らしめる用量であり、ＥＤ５０は、この集団の５０％において治療上有効な用量である。ＬＤ５０及びＥＤ５０は、動物細胞培養または実験動物における標準的な薬学的手順により決定される。
一態様では、ｍｔＰＴＰ開口を阻害するための方法が提供され、本方法は、細胞と、有効量の本明細書に開示される１つ以上の化合物とを接触させることを含む。
いくつかの実施形態では、本技術は、［Ｃａ２＋］の調節不全、及び／または活性酸素種により少なくとも部分的に媒介される状態を治療するための方法であり、本方法は、有効量の本明細書に開示される１つ以上の化合物を患者に投与することを含む。
いくつかの実施形態では、本技術は、虚血再灌流傷害、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、アルツハイマー病、ハンチントン病、パーキンソン病、インスリン誘発性低血糖症、脳虚血、癲癇または実験的外傷からの脳障害、ベスレムミオパチー、膵炎、肝炎（Ａ、及び／若しくはＢ、及び／若しくはＣ型）、糖尿病性網膜症、筋ジストロフィー、外傷性脳損傷、ＩＩ型糖尿病、心筋梗塞、及び卒中からなる群から選択される状態を治療するための方法であり、本方法は、有効量の本明細書に開示される１つ以上の化合物を患者に投与することを含む。
上述の実施形態のうちのいずれかでは、それは、本技術の化合物が以下のうちの１つではないものであってもよい：
３．本技術の組成物及び方法
式Ｉ、ＩＩ、ＩＩａ、ＩＩＩ、ＩＶ、及び／またはＶによって表される化合物、またはそれらの互変異性体及び／またはその薬学的に許容される塩は、ｍｔＰＴＰを有効に阻害し、［Ｃａ２＋］の調節不全及び／または活性酸素種により少なくとも部分的に媒介される状態を治療し得る。一態様では、本技術は、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩａ、ＩＩＩ、ＩＶ、及び／またはＶの１つ以上の化合物と薬学的に許容される賦形剤とを含む薬学的組成物を提供する。本技術の別の態様では、本技術は、有効量の本明細書で提供される式Ｉ、ＩＩ、ＩＩａ、ＩＩＩ、ＩＶ、及び／若しくはＶのうちの１つ以上の化合物を用いて、ｍｔＰＴＰを阻害するための方法、ならびに／または［Ｃａ２＋］の調節不全及び／若しくは活性酸素種の蓄積によって少なくとも部分的に媒介される疾患を治療するための方法を提供する。本技術の化合物は、ｍｔＰＴＰを阻害し、［Ｃａ２＋］の調節不全及び／または酸化的ストレスと関連する障害を治療するのに有用である。
式Ｉ、ＩＩ、ＩＩａ、ＩＩＩ、ＩＶ、及び／またはＶによって表される化合物、またはそれらの互変異性体及び／またはその薬学的に許容される塩は、ｍｔＰＴＰを有効に阻害し、［Ｃａ２＋］の調節不全及び／または活性酸素種により少なくとも部分的に媒介される状態を治療し得る。一態様では、本技術は、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩａ、ＩＩＩ、ＩＶ、及び／またはＶの１つ以上の化合物と薬学的に許容される賦形剤とを含む薬学的組成物を提供する。本技術の別の態様では、本技術は、有効量の本明細書で提供される式Ｉ、ＩＩ、ＩＩａ、ＩＩＩ、ＩＶ、及び／若しくはＶのうちの１つ以上の化合物を用いて、ｍｔＰＴＰを阻害するための方法、ならびに／または［Ｃａ２＋］の調節不全及び／若しくは活性酸素種の蓄積によって少なくとも部分的に媒介される疾患を治療するための方法を提供する。本技術の化合物は、ｍｔＰＴＰを阻害し、［Ｃａ２＋］の調節不全及び／または酸化的ストレスと関連する障害を治療するのに有用である。
その方法の一態様では、本技術は、ｍｔＰＴＰを阻害するための方法を対象とし、本方法は、細胞（ニューロン／ミクログリア／侵入マクロファージを含む）と、有効量の１つ以上の本明細書に記載される式Ｉ、ＩＩ、ＩＩａ、ＩＩＩ、ＩＶ、及び／またはＶの化合物とを接触させることを含む。
その方法の別の態様では、本技術は、［Ｃａ２＋］の調節不全及び／または活性酸素種により少なくとも部分的に媒介される疾患を治療するための方法を対象とし、本方法は、有効量の式Ｉ、ＩＩ、ＩＩａ、ＩＩＩ、ＩＶ、及び／若しくはＶのうちの１つ以上の化合物、または薬学的に許容される賦形剤と本明細書に記載される式Ｉ、ＩＩ、ＩＩａ、ＩＩＩ、ＩＶ、及び／若しくはＶのうちの１つ以上の化合物とを含む薬学的組成物を、患者に投与することを含む。
［Ｃａ２＋］の調節不全及び／または活性酸素種により少なくとも部分的に媒介される疾患は、ハンチントン病及び他のポリグルタミン障害、アルツハイマー病、ハンチントン病、パーキンソン病、インスリン誘発性低血糖症、脳虚血、癲癇または実験的外傷からの脳障害、ベスレムミオパチー、膵炎、肝炎、糖尿病性網膜症、虚血再灌流傷害、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、筋ジストロフィー、外傷性脳損傷、ＩＩ型糖尿病、心筋梗塞、卒中、癲癇、卒中、脳虚血、低酸素症、多発梗塞性認知症の影響、脳外傷若しくは損傷の影響、脊髄への損傷、エイズによる認知症、ウイルス若しくは細菌性髄膜炎、ウイルス、細菌、若しくは寄生虫等の一般的な中枢神経系（ＣＮＳ）感染症、例えば、急性灰白髄炎、ライム病（ボレリア・ブルグドルフェリ感染症）及びマラリア、大脳局在性を伴う癌、トゥレット症候群、肝性脳症、全身性狼瘡、痛覚消失及びオピエート禁断症候、摂食行動、統合失調症、慢性不安、抑うつ障害、発育または加齢の脳の障害、嗜癖の疾患、糖尿病、ならびにこれらの合併症からなる群から選択されるものが挙げられる。
本技術の化合物は、神経変性及び神経学的障害、卒中及び／または脳虚血、低酸素症、多発梗塞性認知症への影響、外傷への影響、及び大脳または脊髄への損傷、自己免疫疾患、ならびに精神病を含む、様々なヒト疾患の診断及び治療において有用である。例えば、本技術の化合物は、例えば、ハンチントン病及び他のポリグルタミン障害、虚血再灌流傷害、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、アルツハイマー病、ハンチントン病、パーキンソン病、インスリン誘発性低血糖症、脳虚血、癲癇または実験的外傷からの脳障害、ベスレムミオパチー、膵炎、肝炎、糖尿病性網膜症、筋ジストロフィー，外傷性脳損傷、ＩＩ型糖尿病、心筋梗塞、卒中、高圧神経学的症候群、筋失調症、オリーブ橋小脳萎縮症、前頭側頭認知症、筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症、癲癇、卒中、脳虚血、低酸素症、多発梗塞性認知症の影響、脳外傷若しくは損傷の影響、脊髄への損傷、エイズによる認知症、ウイルス若しくは細菌性髄膜炎、ウイルス、細菌、若しくは寄生虫等の一般的な中枢神経系（ＣＮＳ）感染症、例えば、急性灰白髄炎、ライム病（ボレリア・ブルグドルフェリ感染症）及びマラリア、大脳局在性を伴う癌、トゥレット症候群、肝性脳症、全身性狼瘡、痛覚消失及びオピエート禁断症候、摂食行動、統合失調症、慢性不安、抑うつ障害、発育または加齢の脳の障害、嗜癖の疾患、糖尿病、ならびにこれらの合併症のようなすべての末梢性兆候のような神経変性障害を治療するのに特に有用である。
本技術の化合物は、低ナノモル濃度でｍｔＰＴＰを阻害する可能性のような、改善された安全性及び可能性を有することが示されるか、または企図される。いくつかの実施形態では、化合物は、神経弛緩活性をほとんどまたは全く有さない。
投与された活性化合物の量は、治療される疾患、哺乳動物種、及び特定の投与モード等により異なるであろう。本技術の化合物に適切な用量は、例えば、１日当たり０．１ｍｇ〜約１０００ｍｇ、１ｍｇ〜約５００ｍｇ、１ｍｇ〜約３００ｍｇ、または１ｍｇ〜約１００ｍｇであり得る。かかる用量は、１日１回、または１日１回よりも多く、例えば、１日２、３、４、５、若しくは６回投与することができるが、好ましくは１日１または２回投与することができる。いくつかの実施形態では、７０ｋｇの成人に対する投与量の合計は、１投与当たり対象の体重１ｋｇ当たり０．００１〜約１５ｍｇまたは１投与当たり対象の体重１ｋｇ当たり０.０１〜約１.５ｍｇの範囲内であり、かかる治療は、数日間、数週間または数カ月間、場合によっては、数年間延長させることができる。しかしながら、当該分野における当業者によって十分理解されているように、使用される特定の化合物の活性；治療される個体の年齢、体重、一般的な健康状態、性別、及び食事；投与時間及び経路；排せつ率；これまでに投与された他の薬剤；ならびに治療を受けている特定の疾患の重篤度を含む、任意の特定の患者における特定の投与レベルは、様々な要因に応じて異なるであろうことが理解されよう。
４．一般的合成方法
本技術の化合物は、以下の一般的方法及び手順を用いて容易に入手可能な出発物質から調製され得る。典型的なまたは好ましいプロセス条件（すなわち、反応温度、時間、反応物質のモル比、溶媒、圧力等）が与えられた場合、他のプロセス条件もまた、特に記載のない限り、使用することができる。最適反応条件は、用いられる特定の反応物質または溶媒により異なり得るが、かかる条件は、当業者によって、通例の最適化手順により決定することができる。
本技術の化合物は、以下の一般的方法及び手順を用いて容易に入手可能な出発物質から調製され得る。典型的なまたは好ましいプロセス条件（すなわち、反応温度、時間、反応物質のモル比、溶媒、圧力等）が与えられた場合、他のプロセス条件もまた、特に記載のない限り、使用することができる。最適反応条件は、用いられる特定の反応物質または溶媒により異なり得るが、かかる条件は、当業者によって、通例の最適化手順により決定することができる。
さらに、当業者にとって明らかなように、従来の保護基は、特定の官能基が望ましくない反応を受けるのを防ぐために必要であり得る。様々な官能基のための適切な保護基、ならびに特定の官能基を保護及び脱保護するための適切な条件は、当技術分野で周知である。例えば、多数の保護基が、Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｔｈｉｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９９、及びその中に引用された参考文献において記載されている。
本技術の化合物が１つ以上のキラル中心を含む場合、かかる化合物は、純粋な立体異性体として、すなわち、個々のエナンチオマー若しくはジアステレオマーとして、または立体異性体が濃縮された混合物として調製または単離することができる。すべてのかかる立体異性体（及び濃縮された混合物）は、特に指示されない限り、本技術の範囲内に含まれる。純粋な立体異性体（または濃縮された混合物）は、例えば、光学活性の出発物質または当技術分野で周知である立体選択的試薬を用いて調製されてもよい。あるいは、かかる化合物のラセミ混合物は、例えば、キラルカラムクロマトグラフィー、キラル分割剤等を用いて分離することができる。
以下の反応のための出発物質は、概して、周知の化合物であるか、または周知の手順またはその明らかな変更によって調製することができる。例えば、出発物質の多くは、Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ，ＵＳＡ）、Ｂａｃｈｅｍ（Ｔｏｒｒａｎｃｅ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，ＵＳＡ）、Ｅｍｋａ−ＣｈｅｍｃｅまたはＳｉｇｍａ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｉｓｓｏｕｒｉ，ＵＳＡ）等の商業的供給業者から入手可能である。その他は、Ｆｉｅｓｅｒ ａｎｄ Ｆｉｅｓｅｒ’ｓ Ｒｅａｇｅｎｔｓ ｆｏｒ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｖｏｌｕｍｅｓ １−１５（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ，ａｎｄ Ｓｏｎｓ，１９９１）、Ｒｏｄｄ’ｓ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｃａｒｂｏｎ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ，Ｖｏｌｕｍｅｓ １−５，ａｎｄ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｌｓ（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，１９８９）、Ｏｒｇａｎｉｃ Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，Ｖｏｌｕｍｅｓ １−４０（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ，ａｎｄ Ｓｏｎｓ，１９９１）、Ｍａｒｃｈ’ｓ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ，ａｎｄ Ｓｏｎｓ，５ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，２００１）、及びＬａｒｏｃｋ’ｓ Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ（ＶＣＨ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ Ｉｎｃ．，１９８９）のような標準的な参照テキストに記載されている、手順またはその明らかな変更によって調製され得る。
本技術の代表的な化合物の合成
ある一般的な実施形態では、本方法は、ベンズアミドまたはベンゼンスルホンアミドを作製するために、適切なアニリン出発物質を、カルボン酸または対応するハロゲン化アシル等の求電子パートナーと反応させることを含む。アニリンの求核性成分が求電子成分のカルボニルに選択的に添加することが理解されよう。さらに、イソオキサゾリン化合物は、適切なジケト化合物をヒドロキシルアミンで濃縮した後に、環化によって作製される。次いで、単離した添加物は、さらに官能化され得る。
ある一般的な実施形態では、本方法は、ベンズアミドまたはベンゼンスルホンアミドを作製するために、適切なアニリン出発物質を、カルボン酸または対応するハロゲン化アシル等の求電子パートナーと反応させることを含む。アニリンの求核性成分が求電子成分のカルボニルに選択的に添加することが理解されよう。さらに、イソオキサゾリン化合物は、適切なジケト化合物をヒドロキシルアミンで濃縮した後に、環化によって作製される。次いで、単離した添加物は、さらに官能化され得る。
別の一般的な実施形態では、本方法は、上記から合成されるように、適切な官能化したアニリンまたはジケト化合物を、パートナーと反応させることを含む。このパートナーが、アニリンまたはジケト化合物の１つの官能基と選択的に反応することがさらに理解されよう。それ故に、このパートナーは、任意の他の官能基と反応し得るいかなる反応条件下においても添加されるべきではない。
例えば、一般式Ｉ、ＩＩ、ＩＩａ、ＩＩＩ、ＩＶ、及び／またはＶの化合物は、代表的なスキーム１に従って調製され得る。
Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｔｈｉｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９９において記載されているもののような、アミノ、ケト、チオ、ヒドロキシル、及び任意の他の必要な保護基、ならびにそれらの脱保護方法が当該技術分野で周知である。Ｐｒｔが水素である場合に、脱保護ステップを省略することができる。
５．投与及び薬学的組成物
本技術は、ｍｔＰＴＰ阻害活性を有する化合物を提供し、したがって、［Ｃａ２＋］の調節不全及び／または活性酸素種の蓄積によって（または少なくとも部分的に）媒介されるもの等の障害を治療するのに有用である。かかる疾患としては、例えば、ハンチントン病及び他のポリグルタミン障害、虚血再灌流傷害、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、アルツハイマー病、ハンチントン病、パーキンソン病、インスリン誘発性低血糖症、脳虚血、癲癇または実験的外傷からの脳障害、ベスレムミオパチー、膵炎、肝炎、糖尿病性網膜症、筋ジストロフィー、外傷性脳損傷、ＩＩ型糖尿病、心筋梗塞、卒中、高圧神経学的症候群、筋失調症、オリーブ橋小脳萎縮症、前頭側頭認知症、筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症、癲癇、卒中、脳虚血、低酸素症、多発梗塞性認知症の影響、脳外傷若しくは損傷の影響、脊髄への損傷、エイズによる認知症、ウイルス若しくは細菌性髄膜炎、ウイルス、細菌、若しくは寄生虫等の一般的な中枢神経系（ＣＮＳ）感染症、例えば、急性灰白髄炎、ライム病（ボレリア・ブルグドルフェリ感染症）及びマラリア、大脳局在性を伴う癌、トゥレット症候群、肝性脳症、全身性狼瘡、痛覚消失及びオピエート禁断症候、摂食行動、統合失調症、慢性不安、抑うつ障害、発育または加齢の脳の障害、嗜癖の疾患、糖尿病、ならびにこれらの合併症が挙げられる。
本技術は、ｍｔＰＴＰ阻害活性を有する化合物を提供し、したがって、［Ｃａ２＋］の調節不全及び／または活性酸素種の蓄積によって（または少なくとも部分的に）媒介されるもの等の障害を治療するのに有用である。かかる疾患としては、例えば、ハンチントン病及び他のポリグルタミン障害、虚血再灌流傷害、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、アルツハイマー病、ハンチントン病、パーキンソン病、インスリン誘発性低血糖症、脳虚血、癲癇または実験的外傷からの脳障害、ベスレムミオパチー、膵炎、肝炎、糖尿病性網膜症、筋ジストロフィー、外傷性脳損傷、ＩＩ型糖尿病、心筋梗塞、卒中、高圧神経学的症候群、筋失調症、オリーブ橋小脳萎縮症、前頭側頭認知症、筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症、癲癇、卒中、脳虚血、低酸素症、多発梗塞性認知症の影響、脳外傷若しくは損傷の影響、脊髄への損傷、エイズによる認知症、ウイルス若しくは細菌性髄膜炎、ウイルス、細菌、若しくは寄生虫等の一般的な中枢神経系（ＣＮＳ）感染症、例えば、急性灰白髄炎、ライム病（ボレリア・ブルグドルフェリ感染症）及びマラリア、大脳局在性を伴う癌、トゥレット症候群、肝性脳症、全身性狼瘡、痛覚消失及びオピエート禁断症候、摂食行動、統合失調症、慢性不安、抑うつ障害、発育または加齢の脳の障害、嗜癖の疾患、糖尿病、ならびにこれらの合併症が挙げられる。
概して、本技術の化合物は、類似の有用性で働く薬剤における許容される投与様式のうちのいずれかによって治療有効量で投与されよう。本技術の化合物、すなわち、活性成分の実際の量は、治療されるべき疾患の重篤度、対象の年齢及び相対的健康、使用される化合物の有効性、投与の経路及び形態、及び医師には周知である他の要因のような、多くの要因に応じて異なるであろう。薬物は、少なくとも１日１回、好ましくは１日１回または２回投与することができる。
有効量のかかる薬剤は、最も有効かつ都合のよい投与経路、及び最も適切な製剤を決定することができるように、日常の実験によって容易に決定することができる。様々な製剤及び薬物送達システムが当該技術分野で利用可能である。例えば、Ｇｅｎｎａｒｏ，Ａ．Ｒ．，ｅｄ．（１９９５）Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏを参照のこと。
治療有効量は、当技術分野で周知の様々な技術を用いて、初めに推定することができる。動物研究において使用される初期投与は、細胞培養アッセイにおいて確立された有効な濃度に基づき得る。ヒト対象に適切な投与量の範囲は、例えば、動物研究及び細胞培養アッセイから得られたデータを用いて決定することができる。
薬剤、例えば、本技術の化合物の有効量または治療有効量または用量とは、対象における症状の緩和または生存の延長をもたらす薬剤または化合物の量を指す。かかる分子の毒性及び治療効果は、細胞培養または実験動物における標準的な薬学的手順によって、例えば、ＬＤ５０（この集団の５０％を死に至らしめる用量）及びＥＤ５０（この集団の５０％において治療上有効な用量）を決定することによって決定することができる。毒性対治療効果の用量比は治療指数であり、これは比ＬＤ５０／ＥＤ５０として表記され得る。大きい治療指数を示す薬剤が好ましい。
有効量または治療有効量は、研究者、獣医、医師、または他の臨床医によって求められている、組織、系、動物、またはヒトの生物学的応答または医学的応答を誘発するであろう化合物または薬学的組成物の量である。投与量は、特に、ほとんど毒性を有さないかまたは全く毒性を有さない、ＥＤ５０を含む血中濃度の範囲内にある。投与量は、用いられる剤形及び／または使用される投与経路に応じてこの範囲内で変化し得る。的確な製剤、投与経路、投与量、及び投与間隔は、対象の状態の特質を考慮して、当該技術分野で基地である方法に従って選択されるべきである。
投与量及び投与間隔は、所望の効果を達成するのに十分な活性部分の血漿レベル、すなわち、最小有効濃度（ＭＥＣ）を提供するために、個別に調整され得る。ＭＥＣは、各化合物に対して変化するであろうが、例えばインビトロのデータ及び動物実験から見積もることができる。ＭＥＣを達成するために必要である投与量は、個体の特性及び投与経路に応じて異なるであろう。局所投与または選択的取り込みの場合は、薬物の有効局所濃度は、血漿濃度と関連しないかもしれない。
投与される薬剤または組成物の量は、治療される対象者の性別、年齢、及び体重、苦痛の重篤度、投与様式、ならびに処方医師の判断を含む様々な要因に応じて異なり得る。
要因に応じて異なり得るため、本技術は、いかなる特定の組成物または薬学的担体にも限定されるものではない。概して、本技術の化合物は、以下の経路：経口、全身（例えば、経皮、鼻腔内、または坐薬により）、または非経口（例えば、筋肉内、静脈内、または皮下）のうちのいずれか１つの投与によって薬学的組成物として投与されよう。好ましい投与方法は、苦痛の程度によって調節することができる簡便な日常の投与計画を用いる経口である。組成物は、錠剤、丸剤、カプセル剤、半固体、粉末剤、持続放出製剤、溶剤、懸濁剤、エリキシル剤、エアロゾル、または任意の他の適切な組成物の形態を取り得る。本技術の組成物を投与するための別の好ましい様式は、吸入である。
製剤の選択は、薬物投与様式及び原薬のバイオアベイラビリティ等の様々な要因に応じて異なる。吸入を介した送達のために、この化合物は、液体の溶液、懸濁液、エアロゾル推進剤、または乾燥粉末として製剤化され、投与に好適なディスペンサー中に充填され得る。数種類の薬学的吸入装置（ネブライザー吸入器、定量吸入器（ＭＤＩ）、及び乾燥粉末吸入器（ＤＰＩ））が存在する。ネブライザー装置は、患者の気道中に運ばれるミストとして治療薬（液体形態で製剤化される）を噴霧させる高速空気の流れを生成する。ＭＤＩは、通常、圧縮ガスと一緒に詰められた製剤である。作動の際に、この装置は、圧縮ガスにより一定量の治療薬を放出し、したがって、一定量の薬剤を投与する信頼できる方法を与える。ＤＰＩは、装置による呼吸の間に患者の吸入空気流に分散され得る自由に流れる粉末の形態で治療薬を投薬する。自由に流れる粉末を得るために、治療薬は、ラクトース等の賦形剤と共に製剤化される。一定量の治療薬は、カプセル形態で保存され、それぞれの作動で投薬される。
本技術の化合物の薬学的剤形は、例えば、従来の混合、篩分、溶解、融解、造粒、糖衣錠製造、打錠、懸濁、押出加工、噴霧乾燥、研和、乳化、（ナノ／マイクロ）カプセル化、封入、または凍結乾燥プロセスによるような当該技術分野で周知の方法のうちのいずれかによって製造され得る。上述のように、本技術の組成物は、薬学的用途のために調製物への活性分子の加工を容易にする１つ以上の生理学的に許容される不活性成分を含むことができる。
薬学的製剤は、特に、バイオアベイラビリティが表面積を増加させる、すなわち、粒径を減少させることによって増大させることができるという原理に基づいて、不良なバイオアベイラビリティを示す薬物のために開発されている。例えば、米国特許第４，１０７，２８８号は、活性材料が巨大分子の架橋マトリックス上に担持されている１０〜１，０００ｎｍの粒径範囲の粒子を有する薬学的製剤を記載している。米国特許第５，１４５，６８４号は、原薬を表面改質剤の存在下でナノ粒子（平均粒径４００ｎｍ）に微粉砕し、次いで、液体媒体に分散して、著しく高いバイオアベイラビリティを示す薬学的製剤を得る、薬学的製剤の製造を記載している。
組成物は、一般に、少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤と組み合わせて本技術の化合物からなる。許容される賦形剤は、無毒性であり、投与を助け、特許請求された化合物の治療的有用性に影響を及ぼさない。このような賦形剤は、任意の固体、液体、半固体とすることができるか、またはエアロゾル組成物の場合は、当業者が一般に利用可能なガス賦形剤とすることができる。
固体の薬学的賦形剤としては、デンプン、セルロース、タルク、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸ナトリウム、グリセロールモノステアレート、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク等が挙げられる。液体及び半固体賦形剤は、グリセロール、プロピレングリコール、水、エタノール、及び石油、動物、植物の油等の様々な油、または合成起源、例えば落花生油、大豆油、鉱油、ゴマ油等から選択してもよい。特に注射液に好ましい液体担体としては、水、生理食塩水、デキストロース水溶液、及びグリコールが挙げられる。
圧縮ガスを使用して、本技術の化合物をエアロゾルの形に分散してもよい。この目的に適したガスは、窒素、二酸化炭素等である。他の適切な薬学的賦形剤及びその製剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，ｅｄｉｔｅｄ ｂｙ Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎ（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，１８ｔｈ ｅｄ．，１９９０）に記載されている。
本発明の組成物は、所望により、活性成分を含む１つ以上の単位剤形を含むパック中またはディスペンサー装置中に存在し得る。そのようなパックまたは装置は、例えば、ブリスタパック等のように金属箔若しくはプラスチック箔を含んでもよく、またはバイアルにおけるようにガラス栓及びゴム栓を含んでもよい。パックまたはディスペンサー装置は、投与のための使用説明書が添付され得る。相溶性のある薬学的担体中に製剤化される本技術の化合物を含む組成物はまた、調製されて、適切な容器内に収納され、指示された状態の治療用にラベルされ得る。
製剤中の化合物の量は、当業者によって用いられる全範囲内で異なり得る。典型的には、製剤は、重量パーセント（重量％）の基準で、総製剤に基づいて本技術の化合物の約０．０１〜９９．９９重量％を含有し、その残りが１つ以上のより適切な薬学的賦形剤であるであろう。好ましくは、化合物は、約１〜８０重量％のレベルで存在する。代表的な薬学的製剤を以下に記載する。
製剤の実施例
製剤の実施例
以下のものは、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩａ、ＩＩＩ、ＩＶ、及び／またはＶの化合物を含む代表的な薬学的製剤である。
製剤の実施例１−錠剤製剤
以下の成分を緊密に混合し、単一の分割錠剤に押圧する。
以下の成分を緊密に混合し、単一の分割錠剤に押圧する。
製剤の実施例２−カプセル製剤
以下の成分を緊密に混合し、ハードシェルゼラチンカプセルに充填する。
以下の成分を緊密に混合し、ハードシェルゼラチンカプセルに充填する。
製剤の実施例３−懸濁液製剤
以下の成分を混合し、経口投与用の懸濁液を形成する。
以下の成分を混合し、経口投与用の懸濁液を形成する。
製剤の実施例４−注射製剤
以下の成分を混合し、注射製剤を形成する。
以下の成分を混合し、注射製剤を形成する。
製剤の実施例５−坐薬製剤
総重量２．５ｇの坐薬は、本技術の化合物をＷｉｔｅｐｓｏｌ（登録商標）Ｈ−１５（飽和植物脂肪酸のトリグリセリド；Ｒｉｃｈｅｓ−Ｎｅｌｓｏｎ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）と混合することによって調製され、これは以下の組成を有する：
総重量２．５ｇの坐薬は、本技術の化合物をＷｉｔｅｐｓｏｌ（登録商標）Ｈ−１５（飽和植物脂肪酸のトリグリセリド；Ｒｉｃｈｅｓ−Ｎｅｌｓｏｎ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）と混合することによって調製され、これは以下の組成を有する：
以下の合成及び生物学的実施例は、本技術を例示するために提供され、本技術の範囲を限定するように決して解釈されるものではない。特に記載されない限り、すべての温度は、摂氏温度である。
本技術は、純粋に本技術の例示であることが意図される以下の実施例を参照することによりさらに理解される。本技術は、例示的な実施形態による範囲に限定されるものではなく、これらは、本技術の単一の態様のみの例示として意図されている。機能的に同等である任意の方法は、本技術の範囲内である。本明細書に記載されるものに加えて本技術の様々な変更は、前述の説明及び添付の図から当業者には明らかになるであろう。そのような変更は、添付の特許請求の範囲内に含まれる。
以下の実施例では、以下の略語は以下の意味を有する。略語が定義されない場合、それはその一般に許容される意味を有する。
一般的実験の詳細：
すべての最終化合物の純度は、ＨＰＬＣ／ＭＳ分析によって確認され、≧９０％であると決定された。１Ｈ及び１３Ｃ ＮＭＲスペクトルは、ＣＤＣｌ３（残留内部標準物質ＣＨＣｌ３＝δ７．２６）、ＤＭＳＯ−ｄ６（残留内部標準物質ＣＤ３ＳＯＣＤ２Ｈ＝δ２．５０）、またはアセトン−ｄ６（残留内部標準物質ＣＤ３ＣＯＣＤ２Ｈ＝δ２．０５）において、Ｂｒｕｋｅｒ ＡＭ ４００分光計（それぞれ、４００及び１０１ＭＨｚで操作）またはＢｒｕｋｅｒ ＡＶＩＩＩ分光計（それぞれ、５００及び１２６ＭＨｚで操作）で記録された。報告された化学シフト（δ）は、百万分率（ｐｐｍ）で報告され、結合定数（Ｊ）はヘルツ（Ｈｚ）で報告される。スピン多重度は、ｓ＝一重線、ｂｓ＝幅広い一重線、ｂｍ＝幅広い多重線＝二重線、ｔ＝三重線、ｑ＝四重線、ｐ＝五重線、ｄｄ＝二重線の二重線、ｄｄｄ＝二重線の二重線の二重線、ｄｔ＝三重線の二重線、ｔｄ＝二重線の三重線、ｔｔ＝三重線の三重線、及びｍ＝多重線。
すべての最終化合物の純度は、ＨＰＬＣ／ＭＳ分析によって確認され、≧９０％であると決定された。１Ｈ及び１３Ｃ ＮＭＲスペクトルは、ＣＤＣｌ３（残留内部標準物質ＣＨＣｌ３＝δ７．２６）、ＤＭＳＯ−ｄ６（残留内部標準物質ＣＤ３ＳＯＣＤ２Ｈ＝δ２．５０）、またはアセトン−ｄ６（残留内部標準物質ＣＤ３ＣＯＣＤ２Ｈ＝δ２．０５）において、Ｂｒｕｋｅｒ ＡＭ ４００分光計（それぞれ、４００及び１０１ＭＨｚで操作）またはＢｒｕｋｅｒ ＡＶＩＩＩ分光計（それぞれ、５００及び１２６ＭＨｚで操作）で記録された。報告された化学シフト（δ）は、百万分率（ｐｐｍ）で報告され、結合定数（Ｊ）はヘルツ（Ｈｚ）で報告される。スピン多重度は、ｓ＝一重線、ｂｓ＝幅広い一重線、ｂｍ＝幅広い多重線＝二重線、ｔ＝三重線、ｑ＝四重線、ｐ＝五重線、ｄｄ＝二重線の二重線、ｄｄｄ＝二重線の二重線の二重線、ｄｔ＝三重線の二重線、ｔｄ＝二重線の三重線、ｔｔ＝三重線の三重線、及びｍ＝多重線。
ＨＰＬＣ／ＭＳ分析は、フォトダイオードアレイＵＶ検出器及びＡｇｉｌｅｎｔ ６２２４ ＴＯＦ質量分析計（高分解能質量スペクトルを生成するためにも使用される）を備えたＡｇｉｌｅｎｔ １２００ ＲＲＬＣ上で勾配溶離（５％ ＣＨ３ＣＮ〜１００％ ＣＨ３ＣＮ）で行われた。自動分取ＲＰ ＨＰＬＣ精製は、フォトダイオードアレイ検出器、Ａｇｉｌｅｎｔ ６１２０四重極質量分析計、及びＨＴＰＡＬ ＬＥＡＰ自動サンプラーを備えたＡｇｉｌｅｎｔ １２００装置上で、勾配溶離（狭いＣＨ３ＣＮの勾配が粗試料のＬＣＭＳ分析からの標的の保持時間に基づいて選択された）で質量指向分別により行われた。分画を、粗試料のＨＰＬＣ／ＭＳ分析によって決定された、ＭＳ及びＵＶ閾値を用いて引き起こした。２つのカラム／移動相の条件のうちの１つを、分析及び精製の両方のために選択し、標的物を中性状態に促した：Ｗａｔｅｒｓ Ａｔｌａｎｔｉｓ Ｔ３ ５ｕｍ、１９×１５０ｍｍ（分取スケール）、Ｗａｔｅｒｓ Ａｔｌａｎｔｉｓ Ｔ３ １．７ｕｍ、２．１×５０ｍｍ（Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｓｃａｌｅ）を含む０．０２％ ギ酸、Ｗａｔｅｒｓ ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８ ５ｕｍ、１９×１５０ｍｍ（分取スケール）、Ｗａｔｅｒｓ ＢＥＨ Ｃ−１８ １．７ｕｍ、２．１×５０ｍｍ（分析規模）を含むｐＨ９．８ ＮＨ４ＯＨ。中圧液体クロマトグラフィー（ＭＰＬＣ）は、標準的なＲｅｄｉＳｅｐ Ｒｆカラムを通して勾配溶離を用いてＴｅｌｅｄｙｎｅ Ｉｃｓｏ ＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ Ｒｆ精製システム上で行われた。マイクロ波照射反応は、Ｂｉｏｔａｇｅ Ｉｎｉｔｉａｔｏｒ Ｃｌａｓｓｉｃ ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒを用いて行われた。
以下は、中間体及び最終イソオキサゾール及びベンズアミド化合物を合成するために使用された実験反応である。
一般的手順（イソオキサゾールアミド）１：
４ドラムのバイタル中の乾燥ＴＨＦ（１．５ｍＬ）中のイソオキサゾールカルボン酸（０．３９０ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、塩化チオニル（０．５５８ｍｍｏｌ、１．４３当量）を添加し、還流で０．５時間撹拌した。約３５℃に冷却した後、乾燥ＴＨＦ（１ｍＬ）中の必要アニリン（０．３９０ｍｍｏｌ、１当量）及びトリエチルアミン（１．５６０ｍｍｏｌ、４当量）の溶液を滴加した。室温で２時間撹拌した後、反応混合物を１Ｎ ＨＣｌで反応停止し、酢酸エチル（３回）で抽出した。合わせた有機層を、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、乾燥するまで蒸発させた。得られた残渣を、本明細書に記載される分取ＲＰ−ＨＰＬＣ方法に従って精製した。
４ドラムのバイタル中の乾燥ＴＨＦ（１．５ｍＬ）中のイソオキサゾールカルボン酸（０．３９０ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、塩化チオニル（０．５５８ｍｍｏｌ、１．４３当量）を添加し、還流で０．５時間撹拌した。約３５℃に冷却した後、乾燥ＴＨＦ（１ｍＬ）中の必要アニリン（０．３９０ｍｍｏｌ、１当量）及びトリエチルアミン（１．５６０ｍｍｏｌ、４当量）の溶液を滴加した。室温で２時間撹拌した後、反応混合物を１Ｎ ＨＣｌで反応停止し、酢酸エチル（３回）で抽出した。合わせた有機層を、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、乾燥するまで蒸発させた。得られた残渣を、本明細書に記載される分取ＲＰ−ＨＰＬＣ方法に従って精製した。
一般的手順（イソオキサゾールアミド）２：
ＤＭＦ（０．１Ｍ、０．５ｍＬ）中の適切なアニリン（０．０４９ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、ＰｙＢＯＰ（０．０９７ｍｍｏｌ、２当量）、ヒューニッヒ塩基（０．１０７ｍｍｏｌ、２．２当量）、及び適切な安息香酸（０．０４９ｍｍｏｌ、１当量）を添加した。反応混合物を１２０℃で２０分間マイクロ波放射に曝露し、その後、得られた残渣を、本明細書に記載される分取ＲＰ ＨＰＬＣ方法に従って精製した。
ＤＭＦ（０．１Ｍ、０．５ｍＬ）中の適切なアニリン（０．０４９ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、ＰｙＢＯＰ（０．０９７ｍｍｏｌ、２当量）、ヒューニッヒ塩基（０．１０７ｍｍｏｌ、２．２当量）、及び適切な安息香酸（０．０４９ｍｍｏｌ、１当量）を添加した。反応混合物を１２０℃で２０分間マイクロ波放射に曝露し、その後、得られた残渣を、本明細書に記載される分取ＲＰ ＨＰＬＣ方法に従って精製した。
中間体の合成
ＫＳＣ−３９２−１３６
（Ｚ）−メチル４−ヒドロキシ−４−（３−（メチルスルホンアミド）フェニル）−２−オキソブタ−３−エノアート（ＫＳＣ−３９２−１３６）：Ｅｔ２Ｏ（９．４ｍＬ、０．２５Ｍ）中のＮ−（３−アセチルフェニル）メタンスルホンアミド（０．５ｇ、２．３４５ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、ナトリウムメトキシド（１．１２６ｍｌ、４．９２ｍｍｏｌ、２．１当量）を添加し、続いて、シュウ酸ジメチル（０．２７７ｇ、２．３４５ｍｍｏｌ、１当量）を添加し、混合物を室温で２４時間撹拌した。完了時、混合物を１Ｎ ＨＣｌで反応停止させ、ＥｔＯＡｃ（３回）で抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、乾燥するまで蒸発させた。得られた残渣をＭＰＬＣ（シリカ、１０〜１００％ ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）を介して精製して、淡黄色固体として（Ｚ）−メチル４−ヒドロキシ−４−（３−（メチルスルホンアミド）フェニル）−２−オキソブタ−３−エノアート（０．８４４ｇ、２．１１５ｍｍｏｌ、９０％収率）（ＫＳＣ−３９２−１３６）を得た。
ＫＳＣ−３９２−１３６
ＫＳＣ−３９２−１４７
メチル５−（３−ヒドロキシ−４−メトキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸塩（ＫＳＣ−３９２−１４７）：ＭｅＯＨ（４．８６ｍＬ、０．２Ｍ）中の（Ｚ）−メチル４−ヒドロキシ−４−（３−（メチルスルホンアミド）フェニル）−２−オキソブタ−３−エノアート（０．４００ｇ、１．３３６ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ヒドロキシルアミン塩酸塩（０．２０３ｇ、２．９１ｍｍｏｌ）を室温で添加した。次いで、得られた混合物を２４時間加熱還流した。完了時、反応混合物を減圧下で濃縮した。粗残渣を、ＥｔＯＡｃ中に溶解し、水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、乾燥するまで蒸発させた。得られた残渣を、ＭＰＬＣ（シリカ、１０〜１００％ ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）を介して精製して、オフホワイト色固体としてメチル５−（３−（メチルスルホンアミド）フェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸塩（０．３６８ｇ、１．２４２ｍｍｏｌ、９３％収率）（ＫＳＣ−３９２−１４７）を得た。
ＫＳＣ−３９２−１５２
５−（３−（メチルスルホンアミド）フェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸（ＫＳＣ−３９２−１５２）：ＥｔＯＨ（７．２３ｍｌ）：ＴＨＦ（３．６２ｍｌ）（２：１、０．１１２Ｍ）の混合物中のメチル５−（３−（メチルスルホンアミド）フェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸塩（０．３６０ｇ、１．２１５ｍｍｏｌ）に、１Ｍ ＮａＯＨ（２．０６５ｍｌ、２．０６５ｍｍｏｌ）を添加し、４時間加熱還流した。完了時、反応混合物を濃縮し、１Ｎ ＨＣｌで希釈した。水層を、ＥｔＯＡｃ（３回）で抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮して、オフホワイト色固体として５−（３−（メチルスルホンアミド）フェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸（０．３３２ｇ、１．１７６ｍｍｏｌ、９７％収率）（ＫＳＣ−３９２−１５２）を得た。
ＫＳＣ−３９２−１２２
メチル４−（３−ヒドロキシ−４−メトキシフェニル）−２，４−ジオキソブタノアート（ＫＳＣ−３９２−１２２）：Ｅｔ２Ｏ（７．６０ｍｌ、０．２５Ｍ）中の１−（３−ヒドロキシ−４−メトキシフェニル）エタノン（０．５３３ｇ、１．９０１ｍｍｏｌ）の溶液に、ナトリウムメトキシド（０．６５２ｍｌ、２．８５ｍｍｏｌ）を添加し、続いて、シュウ酸ジメチル（０．２２４ｇ、１．９０１ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で２４時間撹拌した。完了時、混合物を１Ｎ ＨＣｌで反応停止させ、ＥｔＯＡｃ（３回）で抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、乾燥するまで蒸発させた。得られた残渣をＭＰＬＣ（シリカ、１０〜１００％ ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）で精製して、黄色固体として４−（３−ヒドロキシ−４−メトキシフェニル）−２，４−ジオキソブタノアート（０．２５０ｇ、０．９９１ｍｍｏｌ、５２．２％収率）（ＫＳＣ−３９２−１２２）を得た。
ＫＳＣ−３９２−０８９
メチル５−（３−ヒドロキシ−４−メトキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸塩（ＫＳＣ−３９２−０８９）：ＭｅＯＨ（４．８６ｍｌ、０．２Ｍ）中の（Ｚ）−メチル４−ヒドロキシ−４−（３−ヒドロキシ−４−メトキシフェニル）−２−オキソブタ−３−エノアート（０．２４５ｇ、０．９７１ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ヒドロキシルアミン塩酸塩（０．２０３ｇ、２．９１ｍｍｏｌ）を室温で添加した。次いで、得られた混合物を２４時間加熱還流した。完了時、反応混合物を減圧下で濃縮した。粗残渣を、ＥｔＯＡｃ中に溶解し、水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、乾燥するまで蒸発させた。得られた残渣を、ＭＰＬＣ（シリカ、１０〜１００％ ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）を介して精製して、オフホワイト色固体としてメチル５−（３−ヒドロキシ−４−メトキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸塩（０．２２２ｇ、０．８９１ｍｍｏｌ、９２％収率）（ＫＳＣ−３９２−０８９）を得た。
ＫＳＣ−３９２−０９５
５−（３−ヒドロキシ−４−メトキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸（ＫＳＣ−３９２−０９５）：ＥｔＯＨ（５．３ｍＬ）：ＴＨＦ（２．７ｍＬ）（２：１、０．１１２Ｍ）の混合物中のメチル５−（３−ヒドロキシ−４−メトキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸塩（０．２２３ｇ、０．８９５ｍｍｏｌ）に、１Ｍ ＮａＯＨ（１．５ｍｌ、１．５２１ｍｍｏｌ）を添加し、４時間加熱還流した。完了時、反応混合物を濃縮し、１Ｎ ＨＣｌで希釈した。水層を、ＥｔＯＡｃ（３回）で抽出した。合わせた有機層を、ブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮して、オフホワイト色固体として５−（３−ヒドロキシ−４−メトキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸（０．２０８ｇ、０．８８４ｍｍｏｌ、９９％収率）を得た。
ＫＳＣ−３９２−０９７
メチル４−（４−フルオロ−３−ヒドロキシフェニル）−２，４−ジオキソブタノアート（ＫＳＣ−３９２−０９７）：Ｅｔ２Ｏ（３ｍｌ、０．２５Ｍ）中の１−（４−フルオロ−３−ヒドロキシフェニル）エタノン（０．１２０ｇ、０．７７９ｍｍｏｌ）の溶液に、ナトリウムメトキシド（０．２６７ｍｌ、１．１６８ｍｍｏｌ）を添加し、続いて、シュウ酸ジメチル（０．０９２ｇ、０．７７９ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で２４時間撹拌した。完了時、混合物を１Ｎ ＨＣｌで反応停止させ、ＥｔＯＡｃ（３回）で抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、乾燥するまで蒸発させた。得られた残渣を、ＭＰＬＣ（シリカ、１０〜１００％ ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）で精製して、冷却時に固化した淡黄色液体としてメチル４−（４−フルオロ−３−ヒドロキシフェニル）−２，４−ジオキソブタノアート（０．１３３ｇ、０．５５４ｍｍｏｌ、７１％収率）（ＫＳＣ−３９２−０９７）を得た。
ＫＳＣ−３９２−０８３
メチル５−（４−フルオロ−３−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸塩（ＫＳＣ−３９２−０８３）：ＭｅＯＨ（４ｍＬ、０．２Ｍ）中の（Ｚ）−メチル４−（４−フルオロ−３−ヒドロキシフェニル）−４−ヒドロキシ−２−オキソブタ−３−エノアート（０．１９８ｇ、０．８２４ｍｍｏｌ、１当量）の撹拌溶液に、ヒドロキシルアミン塩酸塩（０．１７２ｇ、２．４７３ｍｍｏｌ）を室温で添加した。次いで、得られた混合物を２４時間加熱還流した。完了時、反応混合物を減圧下で濃縮した。粗残渣を、ＥｔＯＡｃ中に溶解し、水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、乾燥するまで蒸発させた。得られた残渣を、ＭＰＬＣ（シリカ、１０〜１００％ ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）を介して精製して、オフホワイト色固体としてメチルメチル５−（４−フルオロ−３−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸塩（０．０８０ｇ、０．３３７ｍｍｏｌ、４１％収率）（ＫＳＣ−３９２−０８３）を得た。
ＫＳＣ−３９２−０８８
５−（４−フルオロ−３−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸（ＫＳＣ−３９２−０８８）：ＥｔＯＨ（２ｍＬ）：ＴＨＦ（１ｍＬ）（２：１、０．１１２Ｍ）の混合物中のメチル５−（４−フルオロ−３−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸塩（０．０８ｇ、０．３３７ｍｍｏｌ）に、１Ｍ ＮａＯＨ（０．５７３ｍｌ、０．５７３ｍｍｏｌ）を添加し、４時間加熱還流した。完了時、反応混合物を濃縮し、１Ｎ ＨＣｌで希釈した。水層を、ＥｔＯＡｃ（３回）で抽出した。合わせた有機層を、ブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮して、オフホワイト色固体として５−（４−フルオロ−３−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸（０．０７０ｇ、０．３１４ｍｍｏｌ、９３％収率）を得た。
ＫＳＣ−３３８−０１３
Ｎ−（２−ブロモ−４，６−ジフルオロフェニル）−５−プロピルイソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３３８−０１３）：
ＫＳＣ−３３８−０１４
Ｎ−（４−ブロモフェニル）−５−シクロプロピルイソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３３８−０１４）：
ＫＳＣ−３３８−０１５
Ｎ−（２，４−ジフルオロフェニル）−５−イソプロピルイソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３３８−０１５）：
ＫＳＣ−３３８−０１６
Ｎ−（４−ブロモフェニル）−５−プロピルイソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３３８−０１６）：
ＫＳＣ−３３８−０１８
５−（４−フルオロフェニル）−Ｎ−（５−メチルイソキサゾール−３−イル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３３８−０１８）：
ＫＳＣ−３３８−０２０
５−フェニル−Ｎ−（２−（トルフルオロメチル）フェニル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３３８−０２０）：
ＫＳＣ−３３８−０２１
Ｎ−（２，４−ジフルオロフェニル）−５−フェニルイソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３３８−０２１）：
ＫＳＣ−３３８−０２３
５−クロロ−Ｎ−エチル−２−メトキシ−Ｎ−フェニルベンンズアミド（ＫＳＣ−３３８−０１０）：
ＫＳＣ−３３８−０２４
Ｎ−（４−クロロフェニル）−５−フェニルイソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３３８−０２４）：
ＫＳＣ−３３８−０７４
Ｎ−（２−（ベンジルオキシ）フェニル）−５−（３−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３３８−０７４）：この化合物により、一般的手順に従って、５−（３−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸（１０ｍｇ、０．０４９ｍｍｏｌ）及び２−（ベンジルオキシ）アニリン（１０ｍｇ、０．０４９ｍｍｏｌ）を用いて、（イソオキサゾールアミド）２を調製した。収率：５ｍｇ（２５％）、１００％純度。
ＫＳＣ−３３８−０７５
Ｎ−（３−クロロ−４−メトキシフェニル）−５−（３−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３３８−０７５）：この化合物により、一般的手順に従って、５−（３−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸（１０ｍｇ、０．０４９ｍｍｏｌ）及び３−クロロ−４−メトキシアニリン（８ｍｇ、０．０４９ｍｍｏｌ）を用いて、（イソオキサゾールアミド）２を調製した。収率：３ｍｇ（１６％）、１００％純度。
ＫＳＣ−３３８−０９４
Ｎ−（４−クロロフェニル）−５−（３−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３３８−０９４）：この化合物により、一般的手順に従って、５−（３−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸（２０ｍｇ、０．０９７ｍｍｏｌ）及び４−クロロアニリン（１２ｍｇ、０．０９７ｍｍｏｌ）を用いて、（イソオキサゾールアミド）２を調製した。収率：９ｍｇ（２８％）、１００％純度。
ＫＳＣ−３３８−０９５
Ｎ−（３−フルオロフェニル）−５−（３−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３３８−０９５）：この化合物により、一般的手順に従って、５−（３−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸（２０ｍｇ、０．０９７ｍｍｏｌ）及び３−フルオロアニリン（１１ｍｇ、０．０９７ｍｍｏｌ）を用いて、（イソオキサゾールアミド）２を調製した。収率：７ｍｇ（２３％）、１００％純度。
ＫＳＣ−３３８−１００
Ｎ−（３−クロロ−４−メチルフェニル）−５−（３−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３３８−１００）：この化合物により、一般的手順に従って、５−（３−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸（２０ｍｇ、０．０９７ｍｍｏｌ）及び３−クロロ−４−メチルアニリン（１４ｍｇ、０．０９７ｍｍｏｌ）を用いて、（イソオキサゾールアミド）２を調製した。収率：１４ｍｇ（４５％）、１００％純度。
ＫＳＣ−３９２−００８
Ｎ−（３−クロロフェニル）−５−（４−クロロフェニル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３９２−００８）：この化合物により、一般的手順に従って、５−（４−クロロフェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸（３０ｍｇ、０．１３４ｍｍｏｌ）及び３−クロロアニリン（１７ｍｇ、０．１３４ｍｍｏｌ）を用いて、（イソオキサゾールアミド）２を調製した。収率：２８ｍｇ（６２％）、１００％純度。
ＫＳＣ−３９２−００９
Ｎ−（３−クロロ−４−メトキシフェニル）−５−（４−クロロフェニル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３９２−００９）：この化合物により、一般的手順に従って、５−（４−クロロフェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸（３０ｍｇ、０．１３４ｍｍｏｌ）及び３−クロロ−４−メトキシアニリン（２１ｍｇ、０．１３４ｍｍｏｌ）を用いて、（イソオキサゾールアミド）２を調製した。収率：８ｍｇ（１５％）、９８．９％純度。
ＫＳＣ−３９２−０１０
Ｎ−（３−クロロフェニル）−５−フェニルイソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３９２−０１０）：この化合物により、一般的手順に従って、５５−フェニルイソオキサゾール−３−カルボン酸（３０ｍｇ、０．１５９ｍｍｏｌ）及び３−クロロアニリン（２０ｍｇ、０．１５９ｍｍｏｌ）を用いて、（イソオキサゾールアミド）２を調製した。収率：３０ｍｇ（６３％）、１００％純度。
ＫＳＣ−３９２−０１１
Ｎ−（３−クロロフェニル）−５−（ｐ−トリル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３９２−０１１）：この化合物により、一般的手順に従って、５−（ｐ−トリル）イソオキサゾール−３−カルボン酸（３０ｍｇ、０．１４８ｍｍｏｌ）及び３−クロロアニリン（１９ｍｇ、０．１４８ｍｍｏｌ）を用いて、（イソオキサゾールアミド）２を調製した。収率：１５ｍｇ（３５％）、１００％純度。
ＫＳＣ−３９２−０１２
Ｎ−（４−（ベンジルオキシ）−３−クロロフェニル）−５−（３−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３９２−０１２）：この化合物により、一般的手順に従って、５−（３−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸（３０ｍｇ、０．１４６ｍｍｏｌ）及び４−（ベンジルオキシ）−３−クロロアニリン（３４ｍｇ、０．１４６ｍｍｏｌ）を用いて、（イソオキサゾールアミド）２を調製した。収率：１６ｍｇ（２５％）、９７．９％純度。
ＫＳＣ−３９２−０３２
Ｎ−（２，５−ジクロロフェニル）−５−（３−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３９２−０３２）：この化合物により、一般的手順に従って、５−（３−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸（２０ｍｇ、０．０９７ｍｍｏｌ）及び２，５−ジクロロアニリン（１６ｍｇ、０．０９７ｍｍｏｌ）を用いて、（イソオキサゾールアミド）２を調製した。収率：２ｍｇ（６％）、１００％純度；
ＫＳＣ−３９２−０３３
Ｎ−（３−クロロ−２−メトキシフェニル）−５−（３−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３９２−０３３）：この化合物により、一般的手順に従って、５−（３−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸（２０ｍｇ、０．０９７ｍｍｏｌ）及び３−クロロ−２−メトキシアニリン（１５ｍｇ、０．０９７ｍｍｏｌ）を用いて、（イソオキサゾールアミド）２を調製した。収率：４ｍｇ（１３％）、１００％純度。
ＫＳＣ−３９２−０３８
Ｎ−（５−クロロ−２−メチルフェニル）−５−（３−メトキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３９２−０３８）：この化合物により、一般的手順に従って、５−（３−メトキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸（２０ｍｇ、０．０９１ｍｍｏｌ）及び５−クロロ−２−メチルアニリン（１３ｍｇ、０．０９１ｍｍｏｌ）を用いて、（イソオキサゾールアミド）２を調製した。収率：１５ｍｇ（４７％）、１００％純度。
ＫＳＣ−３９２−０４１
Ｎ−（３−クロロフェニル）−５−（２−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３９２−０４１）：この化合物により、一般的手順に従って、５−（２−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸（３０ｍｇ、０．１４６ｍｍｏｌ）及び３−クロロアニリン（１９ｍｇ、０．１４６ｍｍｏｌ）を用いて、（イソオキサゾールアミド）２を調製した。収率：７ｍｇ（１６％）、９９．６％純度。
ＫＳＣ−３９２−０４２
Ｎ−（５−クロロ−２−メチルフェニル）−５−（２−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３９２−０４２）：この化合物により、一般的手順に従って、５−（２−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸（３０ｍｇ、０．１４６ｍｍｏｌ）及び５−クロロ−２−メチルアニリン（２１ｍｇ、０．１４６ｍｍｏｌ）を用いて、（イソオキサゾールアミド）２を調製した。収率：７ｍｇ（１５％）、９９％純度。
ＫＳＣ−３９２−０４８
Ｎ−（５−クロロ−２−メチルフェニル）−５−（２−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３９２−０４８）：この化合物により、一般的手順に従って、５−（２−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸（３０ｍｇ、０．１４６ｍｍｏｌ）及び５−クロロ−２−メチルアニリン（２１ｍｇ、０．１４６ｍｍｏｌ）を用いて、（イソオキサゾールアミド）２を調製した。収率：７ｍｇ（１５％）、１００％純度。
ＫＳＣ−３９２−０４９
Ｎ−（５−クロロ−２−メチルフェニル）−５−（３，４−ジメトキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３９２−０４９）：この化合物により、一般的手順に従って、５−（３，４−ジメトキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸（３０ｍｇ、０．１２０ｍｍｏｌ）及び５−クロロ−２−メチルアニリン（１７ｍｇ、０．１２０ｍｍｏｌ）を用いて、（イソオキサゾールアミド）２を調製した。収率：９ｍｇ（２０％）、１００％純度。
ＫＳＣ−３９２−０６５
Ｎ−（５−クロロ−２−メチルフェニル）−５−（３−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３９２−０６５）：この化合物により、一般的手順に従って、５−（３−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸（８０ｍｇ、０．３９０ｍｍｏｌ）及び５−クロロ−２−メチルアニリン（５５ｍｇ、０．３９０ｍｍｏｌ）を用いて、（イソオキサゾールアミド）１を調製した。収率：５５ｍｇ（４３％）、９９％純度。
ＫＳＣ−３９２−０６６
Ｎ−（３−クロロフェニル）−５−（３−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３９２−０６６）：この化合物により、一般的手順に従って、５−（３−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸（８０ｍｇ、０．３９０ｍｍｏｌ）及び３−クロロアニリン（５０ｍｇ、０．３９０ｍｍｏｌ）を用いて、（イソオキサゾールアミド）１を調製した。収率：２６ｍｇ（２１％）、９５％純度。
ＫＳＣ−３９２−０６７
Ｎ−（３，５−ジクロロフェニル）−５−（３−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３９２−０６７）：この化合物により、一般的手順に従って、５−（３−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸（１００ｍｇ、０．４８７ｍｍｏｌ）及び３，５−ジクロロアニリン（７９ｍｇ、０．４８７ｍｍｏｌ）を用いて、（イソオキサゾールアミド）１を調製した。収率：４８ｍｇ（２８％）、９６．２％純度。
ＫＳＣ−３９２−０６８
Ｎ−（５−クロロ−２−フルオロフェニル）−５−（３−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３９２−０６８）：この化合物により、一般的手順に従って、５−（３−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸（１００ｍｇ、０．４８７ｍｍｏｌ）及び５−クロロ−２−フルオロアニリン（７１ｍｇ、０．４８７ｍｍｏｌ）を用いて、（イソオキサゾールアミド）１を調製した。収率：４０ｍｇ（２４％）、９８．５％純度。
ＫＳＣ−３９２−０６９
Ｎ−（３−クロロ−２−メチルフェニル）−５−（３−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３９２−０６９）：この化合物により、一般的手順に従って、５−（３−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸（１００ｍｇ、０．４８７ｍｍｏｌ）及び３−クロロ−２−メチルアニリン（６９ｍｇ、０．４８７ｍｍｏｌ）を用いて、（イソオキサゾールアミド）１を調製した。収率：３５ｍｇ（２２％）、１００％純度。
ＫＳＣ−３９２−０７２
Ｎ−（２，３−ジクロロフェニル）−５−（３−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３９２−０７２）：この化合物により、一般的手順に従って、５−（３−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸（８０ｍｇ、０．３９０ｍｍｏｌ）及び２，３−ジクロロアニリン（６３ｍｇ、０．４８７ｍｍｏｌ）を用いて、（イソオキサゾールアミド）１を調製した。収率：３３ｍｇ（２４％）、１００％純度。
ＫＳＣ−３９２−０７３
Ｎ−（４−クロロフェニル）−５−フェニルイソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３９２−０７３）：この化合物により、一般的手順に従って、５−フェニルイソオキサゾール−３−カルボン酸（８０ｍｇ、０．４２３ｍｍｏｌ）及び４−クロロアニリン（５４ｍｇ、０．４２３ｍｍｏｌ）を用いて、（イソオキサゾールアミド）１を調製した。収率：７２ｍｇ（５７％）、９９．３％純度。
ＫＳＣ−３９２−０７４
Ｎ−（３−クロロフェニル）−５−（４−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３９２−０７４）：この化合物により、一般的手順に従って、５−（４−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸（８０ｍｇ、０．３９０ｍｍｏｌ）及び３−クロロアニリン（５０ｍｇ、０．３９０ｍｍｏｌ）を用いて、（イソオキサゾールアミド）１を調製した。収率：６７ｍｇ（５９％）、９８．９％純度。
ＫＳＣ−３９２−０７５
Ｎ−（５−クロロ−２−メチルフェニル）−５−（４−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３９２−０７５）：この化合物により、一般的手順に従って、５−（４−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸（８０ｍｇ、０．３９０ｍｍｏｌ）及び５−クロロ−２−メチルアニリン（５５ｍｇ、０．３９０ｍｍｏｌ）を用いて、（イソオキサゾールアミド）１を調製した。収率：４８ｍｇ（３８％）、９３．５％純度。
ＫＳＣ−３９２−０７７
Ｎ−（５−クロロ−２−シアノフェニル）−５−（３−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３９２−０７７）：この化合物により、一般的手順に従って、５−（３−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸（８０ｍｇ、０．３９０ｍｍｏｌ）及び２−アミノ−４−クロロベンゾニトリル（５９ｍｇ、０．３９０ｍｍｏｌ）を用いて、（イソオキサゾールアミド）１を調製した。収率：１０ｍｇ（７％）、９６．７％純度。
ＫＳＣ−３９２−０７８
Ｎ−（２−（ベンジルオキシ）−５−クロロフェニル）−５−（３−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３９２−０７８）：この化合物により、一般的手順に従って、５−（３−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸（８０ｍｇ、０．３９０ｍｍｏｌ）及び２−（ベンジルオキシ）−５−クロロアニリン（９１ｍｇ、０．３９０ｍｍｏｌ）を用いて、（イソオキサゾールアミド）１を調製した。収率：７３ｍｇ（４２％）、９４％純度。
ＫＳＣ−３９２−０８０
５−（３−ヒドロキシフェニル）−Ｎ−（ｏ−トリル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３９２−０８０）：この化合物により、一般的手順に従って、５−（３−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸（８０ｍｇ、０．３９０ｍｍｏｌ）及びｏ−トルイジン（４２ｍｇ、０．３９０ｍｍｏｌ）を用いて、（イソオキサゾールアミド）１を調製した。収率：４５ｍｇ（４０％）、９９．５％純度。
ＫＳＣ−３９２−１４１
Ｎ−（２−クロロ−５−メチルピリジン−４−イル）−５−（３−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３９２−１４１）：この化合物により、一般的手順に従って、５−（３−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸（２５ｍｇ、０．１２２ｍｍｏｌ）及び２−クロロ−５−メチルピリジン−４−アミン（１７ｍｇ、０．１２２ｍｍｏｌ）を用いて、（イソオキサゾールアミド）１を調製した。収率：３ｍｇ（７％）、９６．２％純度。
ＫＳＣ−３９２−１２５
Ｎ−（５−クロロ−２−メチルピリジン−３−イル）−５−（３−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３９２−１２５）：この化合物により、一般的手順に従って、５−（３−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸（２８ｍｇ、０．１３６ｍｍｏｌ）及び２ ５−クロロ−２−メチルピリジン−３−アミン（１９ｍｇ、０．１３６ｍｍｏｌ）を用いて、（イソオキサゾールアミド）１を調製した。収率：１６ｍｇ（３４％）、９６．２％純度。
ＫＳＣ−３９２−１４３
Ｎ−（３−クロロ−５−メチルフェニル）−５−（３−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３９２−１４３）：この化合物により、一般的手順に従って、５−（３−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸（２５ｍｇ、０．１２２ｍｍｏｌ）及び３−クロロ−５−メチルアニリン（１７ｍｇ、０．１２２ｍｍｏｌ）を用いて、（イソオキサゾールアミド）１を調製した。収率：９ｍｇ（２４％）、１００％純度。
ＫＳＣ−３９２−０８１
５−（４−ヒドロキシフェニル）−Ｎ−（ｏ−トリル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３９２−０８１）：この化合物により、一般的手順に従って、５−（４−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸（１２ｍｇ、０．０５８ｍｍｏｌ）及びｏ−トルイジン（６ｍｇ、０．０５８ｍｍｏｌ）を用いて、（イソオキサゾールアミド）１を調製した。収率：１２ｍｇ（６７％）、９９．５％純度。
ＫＳＣ−３９２−０８２
５−（２−ヒドロキシフェニル）−Ｎ−（ｏ−トリル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３９２−０８２）：この化合物により、一般的手順に従って、５−（２−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸（８０ｍｇ、０．３９０ｍｍｏｌ）及びｏ−トルイジン（４２ｍｇ、０．３９０ｍｍｏｌ）を用いて、（イソオキサゾールアミド）１を調製した。収率：４０ｍｇ（３５％）、９８％純度。
ＫＳＣ−３９２−０８６
Ｎ−（５−クロロ−２−メチルフェニル）−５−（３−ヒドロキシ−４−メトキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３９２−０８６）：この化合物により、一般的手順に従って、５−（３−ヒドロキシ−４−メトキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸（１１ｍｇ、０．０４７ｍｍｏｌ）及び５−クロロ−２−メチルアニリン（７ｍｇ、０．０４７ｍｍｏｌ）を用いて、（イソオキサゾールアミド）１を調製した。収率：８ｍｇ（４７％）、９９．８％純度。
ＫＳＣ−３９２−０８７
Ｎ−（３−クロロフェニル）−５−（３−ヒドロキシ−４−メトキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３９２−０８７）：この化合物により、一般的手順に従って、５−（３−ヒドロキシ−４−メトキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸（１０ｍｇ、０．０４３ｍｍｏｌ）及び３−クロロアニリン（５ｍｇ、０．０４３ｍｍｏｌ）を用いて、（イソオキサゾールアミド）１を調製した。収率：３ｍｇ（２３％）、９９．２％純度。
ＫＳＣ−３９２−０９９
Ｎ−（３，５−ジクロロフェニル）−５−（３−ヒドロキシ−４−メトキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３９２−０９９）：この化合物により、一般的手順に従って、５−（３−ヒドロキシ−４−メトキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸（２５ｍｇ、０．１０６ｍｍｏｌ）及び３，５−ジクロロアニリン（１７ｍｇ、０．１０６ｍｍｏｌ）を用いて、（イソオキサゾールアミド）１を調製した。収率：２ｍｇ（６％）、９３．９％純度。
ＫＳＣ−３９２−１０１
Ｎ−（２，３−ジクロロフェニル）−５−（３−ヒドロキシ−４−メトキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３９２−１０１）：この化合物により、一般的手順に従って、５−（３−ヒドロキシ−４−メトキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸（２５ｍｇ、０．１０６ｍｍｏｌ）及び２，３−ジクロロアニリン（１７ｍｇ、０．１０６ｍｍｏｌ）を用いて、（イソオキサゾールアミド）１を調製した。収率：７ｍｇ（１８％）、１００％純度。
ＫＳＣ−３９２−１２０−Ｐ１
Ｎ−（２，５−ジクロロフェニル）−５−（３−ヒドロキシ−４−メトキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３９２−１２０−Ｐ１）：この化合物により、一般的手順に従って、５−（３−ヒドロキシ−４−メトキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸（２５ｍｇ、０．１０６ｍｍｏｌ）及び２，５−ジクロロアニリン（１７ｍｇ、０．１０６ｍｍｏｌ）を用いて、（イソオキサゾールアミド）１を調製した。収率：１１ｍｇ（２６％）、９８％純度。
ＫＳＣ−３９２−１３９
Ｎ−（３−クロロ−２−メチルフェニル）−５−（３−ヒドロキシ−４−メトキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３９２−１３９）：この化合物により、一般的手順に従って、５−（３−ヒドロキシ−４−メトキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸（２５ｍｇ、０．１０６ｍｍｏｌ）及び３−クロロ−２−メチルアニリン（１５ｍｇ、０．１０６ｍｍｏｌ）を用いて、（イソオキサゾールアミド）１を調製した。収率：１３ｍｇ（３３％）、９５．７％純度。
ＫＳＣ−３９２−１４０
Ｎ−（２−クロロ−５−メチルピリジン−４−イル）−５−（３−ヒドロキシ−４−メトキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３９２−１４０）：この化合物により、一般的手順に従って、５−（３−ヒドロキシ−４−メトキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸（２５ｍｇ、０．１０６ｍｍｏｌ）及び２−クロロ−５−メチルピリジン−４−アミン（１５ｍｇ、０．１０６ｍｍｏｌ）を用いて、（イソオキサゾールアミド）１を調製した。収率：２ｍｇ（４％）、１００％純度。
ＫＳＣ−３９２−１４２
Ｎ−（５−クロロ−２−メチルピリジン−３−イル）−５−（３−ヒドロキシ−４−メトキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３９２−１４２）：この化合物により、一般的手順に従って、５−（３−ヒドロキシ−４−メトキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸（２５ｍｇ、０．１０６ｍｍｏｌ）及び５−クロロ−２−メチルピリジン−３−アミン（１５ｍｇ、０．１０６ｍｍｏｌ）を用いて、（イソオキサゾールアミド）１を調製した。収率：９ｍｇ（２３％）、９８．３％純度。
ＫＳＣ−３９２−１２１−Ｐ１
Ｎ−（５−クロロ−２−フルオロフェニル）−５−（３−ヒドロキシ−４−メトキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３９２−１２１−Ｐ１）：この化合物により、一般的手順に従って、５−（３−ヒドロキシ−４−メトキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸（２５ｍｇ、０．１０６ｍｍｏｌ）及び５−クロロ−２−フルオロアニリン（１５ｍｇ、０．１０６ｍｍｏｌ）を用いて、（イソオキサゾールアミド）１を調製した。収率：８ｍｇ（２０％）、９６％純度。
ＫＳＣ−３９２−１０６
Ｎ−（５−クロロ−２−メトキシフェニル）−５−（３−ヒドロキシ−４−メトキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３９２−１０６）：この化合物により、一般的手順に従って、５−（３−ヒドロキシ−４−メトキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸（２５ｍｇ、０．１０６ｍｍｏｌ）及び５−クロロ−２−メトキシアニリン（１７ｍｇ、０．１０６ｍｍｏｌ）を用いて、（イソオキサゾールアミド）１を調製した。収率：１３ｍｇ（３２％）、９９．７％純度。
ＫＳＣ−３９２−１０４
Ｎ−（２，３−ジクロロフェニル）−５−（４−フルオロ−３−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３９２−１０４）：この化合物により、一般的手順に従って、５−（４−フルオロ−３−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸（１２ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ）及び２，３−ジクロロアニリン（８．７ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ）を用いて、（イソオキサゾールアミド）１を調製した。収率：２ｍｇ（７％）、９８．３％純度。
ＫＳＣ−３９２−１５８
Ｎ−（３，５−ジクロロフェニル）−５−（４−フルオロ−３−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３９２−１５８）：この化合物により、一般的手順に従って、５−（４−フルオロ−３−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸（２５ｍｇ、０．１１２ｍｍｏｌ）及び３，５−ジクロロアニリン（１８ｍｇ、０．１１２ｍｍｏｌ）を用いて、（イソオキサゾールアミド）１を調製した。収率：８ｍｇ（２０％）、１００％純度。
ＫＳＣ−３９２−１０５
Ｎ−（２，５−ジクロロフェニル）−５−（４−フルオロ−３−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３９２−１０５）：この化合物により、一般的手順に従って、５−（４−フルオロ−３−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸（１７ｍｇ、０．０７６ｍｍｏｌ）及び２，５−ジクロロアニリン（１２ｍｇ、０．０７６ｍｍｏｌ）を用いて、（イソオキサゾールアミド）１を調製した。収率：６ｍｇ（１９％）、９４．７％純度。
ＫＳＣ−３９２−１１６
Ｎ−（３−クロロ−２−メチルフェニル）−５−（４−フルオロ−３−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３９２−１１６）：この化合物により、一般的手順に従って、５−（４−フルオロ−３−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸（２９ｍｇ、０．１３０ｍｍｏｌ）及び３−クロロ−２−メチルアニリン（１８ｍｇ、０．１３０ｍｍｏｌ）を用いて、（イソオキサゾールアミド）１を調製した。収率：１４ｍｇ（３０％）、９７．９％純度。
ＫＳＣ−３９２−１４９
Ｎ−（３−クロロフェニル）−５−（４−フルオロ−３−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３９２−１４９）：この化合物により、一般的手順に従って、５−（４−フルオロ−３−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸（２５ｍｇ、０．１１２ｍｍｏｌ）及び３−クロロアニリン（１４ｍｇ、０．１１２ｍｍｏｌ）を用いて、（イソオキサゾールアミド）１を調製した。収率：１０ｍｇ（２０％）、１００％純度。
ＫＳＣ−３９２−１５０
Ｎ−（５−クロロ−２−メチルフェニル）−５−（４−フルオロ−３−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３９２−１５０）：この化合物により、一般的手順に従って、５−（４−フルオロ−３−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸（２５ｍｇ、０．１１２ｍｍｏｌ）及び５−クロロ−２−メチルアニリン（１６ｍｇ、０．１１２ｍｍｏｌ）を用いて、（イソオキサゾールアミド）１を調製した。収率：７ｍｇ（１８％）、１００％純度。
ＫＳＣ−３９２−１５５
Ｎ−（３−クロロ−５−メチルフェニル）−５−（４−フルオロ−３−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３９２−１５５）：この化合物により、一般的手順に従って、５−（４−フルオロ−３−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸（２５ｍｇ、０．１１２ｍｍｏｌ）及び３−クロロ−５−メチルアニリン（１６ｍｇ、０．１１２ｍｍｏｌ）を用いて、（イソオキサゾールアミド）１を調製した。収率：１０ｍｇ（２５％）、９９．４％純度。
ＫＳＣ−３９２−１５６
Ｎ−（５−クロロ−２−メチルピリジン−３−イル）−５−（４−フルオロ−３−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３９２−１５６）：この化合物により、一般的手順に従って、５−（４−フルオロ−３−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸（２５ｍｇ、０．１１２ｍｍｏｌ）及び５−クロロ−２−メチルピリジン−３−アミン（１６ｍｇ、０．１１２ｍｍｏｌ）を用いて、（イソオキサゾールアミド）１を調製した。収率：５ｍｇ（１２％）、１００％純度。
ＫＳＣ−３９２−１５７
Ｎ−（２−クロロ−５−メチルピリジン−４−イル）−５−（４−フルオロ−３−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３９２−１５７）：この化合物により、一般的手順に従って、５−（４−フルオロ−３−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸（２５ｍｇ、０．１１２ｍｍｏｌ）及び２−クロロ−５−メチルピリジン−４−アミン（１６ｍｇ、０．１１２ｍｍｏｌ）を用いて、（イソオキサゾールアミド）１を調製した。収率：３ｍｇ（６％）、９１．２％純度。
ＫＳＣ−３９２−１５１
Ｎ−（５−クロロ−２−フルオロフェニル）−５−（４−フルオロ−３−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３９２−１５１）：この化合物により、一般的手順に従って、５−（４−フルオロ−３−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸（２５ｍｇ、０．１１２ｍｍｏｌ）及び５−クロロ−２−フルオロアニリン（１６ｍｇ、０．１１２ｍｍｏｌ）を用いて、（イソオキサゾールアミド）１を調製した。収率：３ｍｇ（７％）、９４．２％純度。
ＫＳＣ−３９２−１０７
Ｎ−（５−クロロ−２−メトキシフェニル）−５−（３−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３９２−１０７）：この化合物により、一般的手順に従って、５−（３−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸（２５ｍｇ、０．１２２ｍｍｏｌ）及び５−クロロ−２−メトキシアニリン（１９ｍｇ、０．１２２ｍｍｏｌ）を用いて、（イソオキサゾールアミド）１を調製した。収率：１３ｍｇ（３２％）、１００％純度。
ＫＳＣ−３９２−１０９
Ｎ−（５−クロロ−２−（ジメチルアミノ）フェニル）−５−（３−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３９２−１０９）：この化合物により、一般的手順に従って、５−（３−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸（２５ｍｇ、０．１２２ｍｍｏｌ）及び４−クロロ−Ｎ１，Ｎ１−ジメチルベンゼン−１，２−ジアミン（２２ｍｇ、０．１２２ｍｍｏｌ）を用いて、（イソオキサゾールアミド）１を調製した。収率：１３ｍｇ（２９％）、９８．２％純度。
ＫＳＣ−３９２−１２５
Ｎ−（５−クロロ−２−メチルピリジン−３−イル）−５−（３−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３９２−１２５）：この化合物により、一般的手順に従って、５−（３−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸（２８ｍｇ、０．１３６ｍｍｏｌ）及び５−クロロ−２−メチルピリジン−３−アミン（１９ｍｇ、０．１３６ｍｍｏｌ）を用いて、（イソオキサゾールアミド）１を調製した。収率：１６ｍｇ（３４％）、１００％純度。
ＫＳＣ−３９２−１０８
Ｎ−（５−クロロ−２−（ジメチルアミノ）フェニル）−５−（３−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３９２−１０８）：この化合物により、一般的手順に従って、５−（２−ヒドロキシフェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸（２５ｍｇ、０．１２２ｍｍｏｌ）及び５−クロロ−２−メトキシアニリン（１９ｍｇ、０．１２２ｍｍｏｌ）を用いて、（イソオキサゾールアミド）１を調製した。収率：３ｍｇ（７％）、９７．８％純度。
ＫＳＣ−３９２−１２５
Ｎ−（５−クロロ−２−メチルフェニル）−３’−ヒドロキシ−［１，１’−ビフェニル］−４−カルボキサミド（ＫＳＣ−３９２−１２５）：この化合物により、一般的手順に従って、３’−ヒドロキシ−［１，１’−ビフェニル］−４−カルボン酸（３０ｍｇ、０．１４０ｍｍｏｌ）及び５−クロロ−２−メチルアニリン（２０ｍｇ、０．１４０ｍｍｏｌ）を用いて、（イソオキサゾールアミド）１を調製した。収率：１０ｍｇ（２０％）、９５％純度。
ＫＳＣ−３９２−１２５
Ｎ−（５−クロロ−２−メチルフェニル）−３’−ヒドロキシ−［１，１’−ビフェニル］−４−カルボキサミド（ＫＳＣ−３９２−１２５）：この化合物により、一般的手順に従って、３’−ヒドロキシ−［１，１’−ビフェニル］−４−カルボン酸（３０ｍｇ、０．１４０ｍｍｏｌ）及び５−クロロ−２−メチルアニリン（２０ｍｇ、０．１４０ｍｍｏｌ）を用いて、（イソオキサゾールアミド）１を調製した。収率：１０ｍｇ（２０％）、９５％純度。
ＫＳＣ−３９２−１６２
Ｎ−（３−クロロフェニル）−５−（３−（メチルスルホンアミド）フェニル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３９２−１６２）：この化合物により、一般的手順に従って、５−（３−（メチルスルホンアミド）フェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸（２５ｍｇ、０．０８９ｍｍｏｌ）及び３−クロロアニリン（１１ｍｇ、０．０８９ｍｍｏｌ）を用いて、（イソオキサゾールアミド）１を調製した。収率：８ｍｇ（２３％）、１００％純度。
ＫＳＣ−３９２−１６３
Ｎ−（５−クロロ−２−メチルフェニル）−５−（３−（メチルスルホンアミド）フェニル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３９２−１６３）：この化合物により、一般的手順に従って、５−（３−（メチルスルホンアミド）フェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸（２５ｍｇ、０．０８９ｍｍｏｌ）及び５−クロロ−２−メチルアニリン（１３ｍｇ、０．０８９ｍｍｏｌ）を用いて、（イソオキサゾールアミド）１を調製した。収率：６ｍｇ（１６％）、９８．９％純度。
ＫＳＣ−３９２−１６４
Ｎ−（５−クロロ−２−フルオロフェニル）−５−（３−（メチルスルホンアミド）フェニル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３９２−１６４）：この化合物により、一般的手順に従って、５−（３−（メチルスルホンアミド）フェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸（２５ｍｇ、０．０８９ｍｍｏｌ）及び５−クロロ−２−フルオロアニリン（１３ｍｇ、０．０８９ｍｍｏｌ）を用いて、（イソオキサゾールアミド）１を調製した。収率：３ｍｇ（７％）、９７％純度。
ＫＳＣ−３９２−１６５
Ｎ−（２，５−ジクロロフェニル）−５−（３−（メチルスルホンアミド）フェニル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３９２−１６５）：この化合物により、一般的手順に従って、５−（３−（メチルスルホンアミド）フェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸（２５ｍｇ、０．０８９ｍｍｏｌ）及び２，５−ジクロロアニリン（１４ｍｇ、０．０８９ｍｍｏｌ）を用いて、（イソオキサゾールアミド）１を調製した。収率：８ｍｇ（２１％）、９５．７％純度。
ＫＳＣ−３９２−１６６
Ｎ−（３，５−ジクロロフェニル）−５−（３−（メチルスルホンアミド）フェニル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３９２−１６６）：この化合物により、一般的手順に従って、５−（３−（メチルスルホンアミド）フェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸（２５ｍｇ、０．０８９ｍｍｏｌ）及び３，５−ジクロロアニリン（１４ｍｇ、０．０８９ｍｍｏｌ）を用いて、（イソオキサゾールアミド）１を調製した。収率：６ｍｇ（１５％）、９２．９％純度。
ＫＳＣ−３９２−１６７
Ｎ−（３−クロロ−５−メチルフェニル）−５−（３−（メチルスルホンアミド）フェニル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３９２−１６７）：この化合物により、一般的手順に従って、５−（３−（メチルスルホンアミド）フェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸（２５ｍｇ、０．０８９ｍｍｏｌ）及び３−クロロ−５−メチルアニリン（１３ｍｇ、０．０８９ｍｍｏｌ）を用いて、（イソオキサゾールアミド）１を調製した。収率：８ｍｇ（２２％）、９８．３％純度。
ＫＳＣ−３９２−１７０
Ｎ−（３−クロロ−２−メチルフェニル）−５−（３−（メチルスルホンアミド）フェニル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３９２−１７０）：この化合物により、一般的手順に従って、５−（３−（メチルスルホンアミド）フェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸（２５ｍｇ、０．０８９ｍｍｏｌ）及び３−クロロ−２−メチルアニリン（１３ｍｇ、０．０８９ｍｍｏｌ）を用いて、（イソオキサゾールアミド）１を調製した。収率：８ｍｇ（２２％）、９８．３％純度。
ＫＳＣ−３９２−１６８
Ｎ−（５−クロロ−２−メチルピリジン−３−イル）−５−（３−（メチルスルホンアミド）フェニル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド（ＫＳＣ−３９２−１６８）：この化合物により、一般的手順に従って、５−（３−（メチルスルホンアミド）フェニル）イソオキサゾール−３−カルボン酸（２５ｍｇ、０．０８９ｍｍｏｌ）及び５−クロロ−２−メチルピリジン−３−アミン（１３ｍｇ、０．０８９ｍｍｏｌ）を用いて、（イソオキサゾールアミド）１を調製した。収率：２ｍｇ（６％）、１００％純度。
代表的なベンズアミド中間体の合成
ＫＳＣ−３９２−０２２
３−（ベンジルオキシ）−４−クロロ安息香酸（ＫＳＣ−３９２−０２２）：臭化ベンジル（０．７９３ｍｌ、６．６６ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（２．９ｍｌ）及び炭酸カリウム（０．８８１ｇ、６．３７ｍｍｏｌ）中の４−クロロ−３−ヒドロキシ安息香酸（０．５ｇ、２．９０ｍｍｏｌ）の溶液に滴加した。反応混合物を室温で一晩撹拌した。完了時、反応混合物を水と混合し、酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層を、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、乾燥するまで蒸発させた。この残渣を、ＭｅＯＨ（１．５ｍｌ １０Ｍ中に溶解し、ＫＯＨ（０．８６７ｍｌ、８．６７ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を５０℃で４時間撹拌した。赤みがかった溶液を水で希釈し、３Ｎ 水性塩酸で酸性化した。形成された沈殿物を酢酸エチルで抽出し、水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、乾燥するまで蒸発させた。得られた残渣を、一般的実験の項に記載される分取ＲＰ ＨＰＬＣ方法に従って精製した。白色固体として３−（ベンジルオキシ）−４−クロロ安息香酸（０．４５４ｇ、１．７２８ｍｍｏｌ、５９．６％収率）を単離した。
ＫＳＣ−３９２−０２２
ＫＳＣ−３９２−０２３
３−（ベンジルオキシ）−５−クロロ安息香酸（ＫＳＣ−３９２−０２３）：この化合物により、手順に従って、３−クロロ−５−ヒドロキシ安息香酸（１００ｍｇ、０．５７９ｍｍｏｌ）を用いて、ＫＳＣ−３９２−０２２を調製した。収率：８９ｍｇ（５９％）、９４．７％純度。
ＫＳＣ−３９２−０２４
５−（ベンジルオキシ）−２−クロロ安息香酸（ＫＳＣ−３９２−０２４）：この化合物により、手順に従って、２−クロロ−５−ヒドロキシ安息香酸（５００ｍｇ、２．９０ｍｍｏｌ）を用いて、ＫＳＣ−３９２−０２２を調製した。収率：１３１ｍｇ（１７％）、１００％純度。
一般的手順（ベンズアミド）１：
ＤＭＦ（０．３２Ｍ、０．８４０ｍＬ）中の適切なアニリン（０．２６８ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、ＰｙＢＯＰ（０．５３６ｍｍｏｌ、２当量）、ヒューニッヒ塩基（０．４２９ｍｍｏｌ、１．６当量）、及び適切な安息香酸（０．２６８ｍｍｏｌ、１当量）を添加した。反応混合物を１２０℃で１５分間マイクロ波放射に曝露し、その後、得られた残渣を、本明細書に記載される分取ＲＰ ＨＰＬＣ方法に従って精製した。
ＤＭＦ（０．３２Ｍ、０．８４０ｍＬ）中の適切なアニリン（０．２６８ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、ＰｙＢＯＰ（０．５３６ｍｍｏｌ、２当量）、ヒューニッヒ塩基（０．４２９ｍｍｏｌ、１．６当量）、及び適切な安息香酸（０．２６８ｍｍｏｌ、１当量）を添加した。反応混合物を１２０℃で１５分間マイクロ波放射に曝露し、その後、得られた残渣を、本明細書に記載される分取ＲＰ ＨＰＬＣ方法に従って精製した。
ＫＳＣ−３３８−０３２
５−クロロ−２−メトキシ−Ｎ−（４−（ピペリジン−１−イルメチル）フェニル）ベンズアミド（ＫＳＣ−３３８−０３２）：この化合物により、一般的手順に従って、４−（ピペリジン−１−イルメチル）アニリン（５１ｍｇ、０．２６８ｍｍｏｌ）及び５−クロロ−２−メトキシ安息香酸（５０ｍｇ、０．２６８ｍｍｏｌ）を用いて、（ベンズアミド）１を調製した。収率：６７ｍｇ（６９％）。
ＫＳＣ−３３８−０７１
３−（ベンジルオキシ）−Ｎ−（４−（ピペリジン−１−イルメチル）フェニル）ベンズアミド（ＫＳＣ−３３８−０７１）：
ＫＳＣ−３９２−０２９
３−（ベンジルオキシ）−４−クロロ−Ｎ−（４−（ピペリジン−１−イルメチル）フェニル）ベンズアミド（ＫＳＣ−３９２−０２９）：この化合物により、一般的手順に従って、４−（ピペリジン−１−イルメチル）アニリン（３６ｍｇ、０．１９０ｍｍｏｌ）及び３−（ベンジルオキシ）−４−クロロ安息香酸（５０ｍｇ、０．１９０ｍｍｏｌ）を用いて、（ベンズアミド）１を調製した。収率：４９ｍｇ（５９％）、１００％純度。
詳細なアッセイプロトコル
吸収アッセイ（Ｐｒｉｍａｒｙ Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ Ａｓｓａｙ，Ｓｉｎｇｌｅ Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ＡＩＤ Ｎｏ．６０２４４９）を介した、ミトコンドリア透過性遷移孔の小分子阻害剤のμＨＴＳの同定
試薬の一覧：
アッセイ緩衝液：２５０ｍＭ スクロース、１０ｍＭ ＭＯＰＳ−Ｔｒｉｓ、０．０１ｍＭ ＥＧＴＡ−Ｔｒｉｓ、１．０ｍＭ リン酸、ｐＨ７．４
溶液１：アッセイ緩衝液中の０．５ｍｇ／ｍＬのミトコンドリア
溶液２：溶液３中の２．０ｍＭ ＥＧＴＡ−Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．４
溶液３：ミトコンドリア活性に応じて８０〜２００μＭ ＣａＣｌ２、アッセイ緩衝液中の５．０ｍＭ グルタミン酸塩、２．５ｍＭ リンゴ酸塩。注釈：アッセイ中のカルシウムの濃度は、各ハイスループットスクリーニングバッチ直前にカルシウム滴定を介して決定される単離したミトコンドリアの活性に依存している。３０分間、２：１のウィンドウでの到達を可能にするカルシウム濃度が、使用される。
吸収アッセイ（Ｐｒｉｍａｒｙ Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ Ａｓｓａｙ，Ｓｉｎｇｌｅ Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ＡＩＤ Ｎｏ．６０２４４９）を介した、ミトコンドリア透過性遷移孔の小分子阻害剤のμＨＴＳの同定
試薬の一覧：
アッセイ緩衝液：２５０ｍＭ スクロース、１０ｍＭ ＭＯＰＳ−Ｔｒｉｓ、０．０１ｍＭ ＥＧＴＡ−Ｔｒｉｓ、１．０ｍＭ リン酸、ｐＨ７．４
溶液１：アッセイ緩衝液中の０．５ｍｇ／ｍＬのミトコンドリア
溶液２：溶液３中の２．０ｍＭ ＥＧＴＡ−Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．４
溶液３：ミトコンドリア活性に応じて８０〜２００μＭ ＣａＣｌ２、アッセイ緩衝液中の５．０ｍＭ グルタミン酸塩、２．５ｍＭ リンゴ酸塩。注釈：アッセイ中のカルシウムの濃度は、各ハイスループットスクリーニングバッチ直前にカルシウム滴定を介して決定される単離したミトコンドリアの活性に依存している。３０分間、２：１のウィンドウでの到達を可能にするカルシウム濃度が、使用される。
プロトコルの概要：
１．化合物は、アッセイ前の朝または夜にアッセイプレートに予めスポットする。ＬａｂＣｙｔｅ Ｅｃｈｏを介して、１６ｎＬの５ｍＭ 化合物を、Ｇｒｅｉｎｅｒ、１５３６ウェルの透明なアッセイプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ ７８２１０１）に移して、８μＬのアッセイ最終体積中で１０μＭを達成する。１〜４列の対照ウェルに、１６ｎＬのＤＭＳＯを移す。
２．試薬の項にあるレシピに従って、陽性及び陰性対照溶液、ミトコンドリア懸濁液及びカルシウム溶液の作業ストックを調製する。
３．活性の決定時、マウスからの新たに単離されたミトコンドリアを、アッセイ緩衝液（溶液１）中で懸濁させ、４μＬのこの溶液を、ＭｕｌｔｉＤｒｏｐ Ｃｏｍｂｉを有するアッセイプレートのすべてのウェルに添加する。ミトコンドリアの最終アッセイ濃度は、約０．２５ｍｇ／ｍＬ（作業ストック約０．５ｍｇ／ｍＬ）であろう。
４．ミトコンドリア懸濁液の添加後、アッセイ緩衝液（溶液２）中の２．０ｍＭ ＥＧＴＡ−Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．４）を含有する４μＬの陽性対照作業ストックを、１〜２列に添加する。最終アッセイ濃度＝１．０ｍＭ ＥＧＴＡ−Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．４）。
５．次に、４μＬのカルシウム溶液（溶液３）を、陰性対照及び試験化合物ウェル、３〜４８列に添加する。カルシウムの最終濃度は、４０〜１００μＭ（作業ストック中の８０〜２００μＭ）であろう。
６．アッセイプレートを、１０００ｒｐｍで約６０秒間直ちに回転させる。
７．プレートを室温で３０分間維持し、次いで、５４０ｎｍの吸収度を用いて、ＢＭＧ Ｐｈｅｒａｓｔａｒ上で読み込む。
１．化合物は、アッセイ前の朝または夜にアッセイプレートに予めスポットする。ＬａｂＣｙｔｅ Ｅｃｈｏを介して、１６ｎＬの５ｍＭ 化合物を、Ｇｒｅｉｎｅｒ、１５３６ウェルの透明なアッセイプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ ７８２１０１）に移して、８μＬのアッセイ最終体積中で１０μＭを達成する。１〜４列の対照ウェルに、１６ｎＬのＤＭＳＯを移す。
２．試薬の項にあるレシピに従って、陽性及び陰性対照溶液、ミトコンドリア懸濁液及びカルシウム溶液の作業ストックを調製する。
３．活性の決定時、マウスからの新たに単離されたミトコンドリアを、アッセイ緩衝液（溶液１）中で懸濁させ、４μＬのこの溶液を、ＭｕｌｔｉＤｒｏｐ Ｃｏｍｂｉを有するアッセイプレートのすべてのウェルに添加する。ミトコンドリアの最終アッセイ濃度は、約０．２５ｍｇ／ｍＬ（作業ストック約０．５ｍｇ／ｍＬ）であろう。
４．ミトコンドリア懸濁液の添加後、アッセイ緩衝液（溶液２）中の２．０ｍＭ ＥＧＴＡ−Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．４）を含有する４μＬの陽性対照作業ストックを、１〜２列に添加する。最終アッセイ濃度＝１．０ｍＭ ＥＧＴＡ−Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．４）。
５．次に、４μＬのカルシウム溶液（溶液３）を、陰性対照及び試験化合物ウェル、３〜４８列に添加する。カルシウムの最終濃度は、４０〜１００μＭ（作業ストック中の８０〜２００μＭ）であろう。
６．アッセイプレートを、１０００ｒｐｍで約６０秒間直ちに回転させる。
７．プレートを室温で３０分間維持し、次いで、５４０ｎｍの吸収度を用いて、ＢＭＧ Ｐｈｅｒａｓｔａｒ上で読み込む。
注釈：
対照と比較して≧５０％の補正した活性の割合を示した化合物は、アッセイにおける活性として定義される。
実験値は、各プレート中の中立対照ウェルと刺激物対照ウェルとの間の差によって正規化された。次いで、正規化データを補正して、分配チップの問題等のアーチファクトのため、系統的なプレートパターンを除去した。データ補正についてさらなる情報は、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｅｎｅｄａｔａ．ｃｏｍ／ｐｒｏｄｕｃｔｓ／ｓｃｒｅｅｎｅｒ．ｈｔｍｌで利用可能である。
一次スクリーニングの不活性と確認スクリーニング段階の不活性の違いを単純化するために、Ｔｉｅｒｅｄ Ａｃｔｉｖｉｔｙ Ｓｃｏｒｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍを開発し、実施した。
対照と比較して≧５０％の補正した活性の割合を示した化合物は、アッセイにおける活性として定義される。
実験値は、各プレート中の中立対照ウェルと刺激物対照ウェルとの間の差によって正規化された。次いで、正規化データを補正して、分配チップの問題等のアーチファクトのため、系統的なプレートパターンを除去した。データ補正についてさらなる情報は、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｅｎｅｄａｔａ．ｃｏｍ／ｐｒｏｄｕｃｔｓ／ｓｃｒｅｅｎｅｒ．ｈｔｍｌで利用可能である。
一次スクリーニングの不活性と確認スクリーニング段階の不活性の違いを単純化するために、Ｔｉｅｒｅｄ Ａｃｔｉｖｉｔｙ Ｓｃｏｒｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍを開発し、実施した。
活性スコアリング：
活性スコアリング規則は、化合物の有効性、データを得たアッセイ及びスクリーニング段階によるその干渉可能性を考慮に入れて考案された。スコアリングシステムの詳細は、他の箇所で刊行されるであろう。簡潔に言えば、アッセイのために用いられたスコアリングシステムの概要は、以下の通りである：
１）第１の段階（０〜４０の範囲）は、一次スクリーニングデータに確保されている。スコアは、アッセイにおいて活性の割合（％）と相関している：
ａ．一次スクリーニングの結果が不活性である場合、割り当てられたスコアは、０である
ｂ．一次スクリーニングの結果が不確定である場合、割り当てられたスコアは、１０である
ｃ．一次スクリーニングの結果が活性である場合、割り当てられたスコアは、２０である
単一濃度確認スクリーニングのためのスコアリングは、このアッセイに適用できない。
ｄ．単一濃度確認スクリーニングの結果が不活性である場合、割り当てられたスコアは、２１である
ｅ．単一濃度確認スクリーニングの結果が不確定である場合、割り当てられたスコアは、２５である
ｆ．単一濃度確認スクリーニングの結果が活性である場合、割り当てられたスコアは、３０である
このスコアリングシステムは、特定のＳＩＤの試験の段階の追跡に役立つ。確認に使用可能である一次ヒットについては、それらのスコアは、２０を上回るであろう。さらに確認されないものについては、それらのスコアは、２１を下回ったままであろう。
２）第２の段階（４１〜８０の範囲）は、用量反応確認データに確保されており、このアッセイに適用できない。
３）第３の段階（８１〜１００の範囲）は、再合成された真陽性及びそれらの類似体に確保されており、このアッセイに適用できない。
活性スコアリング規則は、化合物の有効性、データを得たアッセイ及びスクリーニング段階によるその干渉可能性を考慮に入れて考案された。スコアリングシステムの詳細は、他の箇所で刊行されるであろう。簡潔に言えば、アッセイのために用いられたスコアリングシステムの概要は、以下の通りである：
１）第１の段階（０〜４０の範囲）は、一次スクリーニングデータに確保されている。スコアは、アッセイにおいて活性の割合（％）と相関している：
ａ．一次スクリーニングの結果が不活性である場合、割り当てられたスコアは、０である
ｂ．一次スクリーニングの結果が不確定である場合、割り当てられたスコアは、１０である
ｃ．一次スクリーニングの結果が活性である場合、割り当てられたスコアは、２０である
単一濃度確認スクリーニングのためのスコアリングは、このアッセイに適用できない。
ｄ．単一濃度確認スクリーニングの結果が不活性である場合、割り当てられたスコアは、２１である
ｅ．単一濃度確認スクリーニングの結果が不確定である場合、割り当てられたスコアは、２５である
ｆ．単一濃度確認スクリーニングの結果が活性である場合、割り当てられたスコアは、３０である
このスコアリングシステムは、特定のＳＩＤの試験の段階の追跡に役立つ。確認に使用可能である一次ヒットについては、それらのスコアは、２０を上回るであろう。さらに確認されないものについては、それらのスコアは、２１を下回ったままであろう。
２）第２の段階（４１〜８０の範囲）は、用量反応確認データに確保されており、このアッセイに適用できない。
３）第３の段階（８１〜１００の範囲）は、再合成された真陽性及びそれらの類似体に確保されており、このアッセイに適用できない。
蛍光ベースのアッセイ（カウンタスクリーニングアッセイ、単一濃度、ＡＩＤ番号６２４５０４）を介したミトコンドリア透過性遷移孔のμＨＴＳ阻害剤ヒットの単一濃度確認
試薬の一覧：
アッセイ緩衝液：２５０ｍＭ スクロース、１０ｍＭ ＭＯＰＳ−Ｔｒｉｓ、０．０１ｍＭ ＥＧＴＡ−Ｔｒｉｓ、１．０ｍＭ リン酸−Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．４。
溶液１：アッセイ緩衝液中の０．５ｍｇ／ｍＬのミトコンドリア。
溶液２：０．８μＭ Ｒｈ１２３、アッセイ緩衝液中の５．０ｍＭ グルタミン酸塩、２．５ｍＭ リンゴ酸塩。
試薬の一覧：
アッセイ緩衝液：２５０ｍＭ スクロース、１０ｍＭ ＭＯＰＳ−Ｔｒｉｓ、０．０１ｍＭ ＥＧＴＡ−Ｔｒｉｓ、１．０ｍＭ リン酸−Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．４。
溶液１：アッセイ緩衝液中の０．５ｍｇ／ｍＬのミトコンドリア。
溶液２：０．８μＭ Ｒｈ１２３、アッセイ緩衝液中の５．０ｍＭ グルタミン酸塩、２．５ｍＭ リンゴ酸塩。
プロトコルの概要：
１．化合物は、アッセイ前の朝または夜にアッセイプレートに予めスポットする。ＬａｂＣｙｔｅ Ｅｃｈｏを介して、４０ｎＬの５ｍＭ 化合物を、Ｇｒｅｉｎｅｒ、３８４ウェルの黒色アッセイプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ ７８１０７６）に移して、２０μＬの最終アッセイ体積中で１０μＭを達成する。陽性対照ウェルに、４０ｎＬの０．２ｍＭ カルボニルシアン化物４−（トリフルオロメトキシ）フェニルヒドロゾン（ＦＣＣＰ）を移す。陰性対照ウェルに、４０ｎＬのＤＭＳＯを移す。
２．試薬の項にあるレシピに従って、アッセイ緩衝液、ローダミン１２３（Ｒｈ１２３）溶液及びミトコンドリア懸濁液作業ストックを調製する。
３．マウスからの新たに単離されたミトコンドリアを、アッセイ緩衝液（溶液１）中で懸濁させ、１０μＬのこの溶液を、ＭｕｌｔｉＤｒｏｐ Ｃｏｍｂｉを有するアッセイプレートのすべてのウェルに添加する。ミトコンドリアの最終アッセイ濃度は、ミトコンドリアの調製の相対活性に応じて、約０．２５ｍｇ／ｍＬ（作業ストック約０．５ｍｇ／ｍＬ）であろう。
４．ミトコンドリア懸濁液の添加後、１０μＬのＲｈ１２３溶液（溶液２）を、アッセイプレートの各ウェルに添加する。
５．アッセイプレートを、１０００ｒｐｍで約６０秒間直ちに回転させる。
６．プレートを室温で５分間維持し、次いで、４８０ｎｍの励起及び５２０ｎｍの発光波長の読み出しを可能にする蛍光強度光モジュールを用いて、ＢＭＧ Ｐｈｅｒａｓｔａｒ上で読み出す。
１．化合物は、アッセイ前の朝または夜にアッセイプレートに予めスポットする。ＬａｂＣｙｔｅ Ｅｃｈｏを介して、４０ｎＬの５ｍＭ 化合物を、Ｇｒｅｉｎｅｒ、３８４ウェルの黒色アッセイプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ ７８１０７６）に移して、２０μＬの最終アッセイ体積中で１０μＭを達成する。陽性対照ウェルに、４０ｎＬの０．２ｍＭ カルボニルシアン化物４−（トリフルオロメトキシ）フェニルヒドロゾン（ＦＣＣＰ）を移す。陰性対照ウェルに、４０ｎＬのＤＭＳＯを移す。
２．試薬の項にあるレシピに従って、アッセイ緩衝液、ローダミン１２３（Ｒｈ１２３）溶液及びミトコンドリア懸濁液作業ストックを調製する。
３．マウスからの新たに単離されたミトコンドリアを、アッセイ緩衝液（溶液１）中で懸濁させ、１０μＬのこの溶液を、ＭｕｌｔｉＤｒｏｐ Ｃｏｍｂｉを有するアッセイプレートのすべてのウェルに添加する。ミトコンドリアの最終アッセイ濃度は、ミトコンドリアの調製の相対活性に応じて、約０．２５ｍｇ／ｍＬ（作業ストック約０．５ｍｇ／ｍＬ）であろう。
４．ミトコンドリア懸濁液の添加後、１０μＬのＲｈ１２３溶液（溶液２）を、アッセイプレートの各ウェルに添加する。
５．アッセイプレートを、１０００ｒｐｍで約６０秒間直ちに回転させる。
６．プレートを室温で５分間維持し、次いで、４８０ｎｍの励起及び５２０ｎｍの発光波長の読み出しを可能にする蛍光強度光モジュールを用いて、ＢＭＧ Ｐｈｅｒａｓｔａｒ上で読み出す。
注釈：
対照と比較して平均≧２０％の活性の割合を示した化合物は、アッセイにおける活性として定義される。
一次スクリーニングの不活性と確認スクリーニング段階の不活性の違いを単純化するために、Ｔｉｅｒｅｄ Ａｃｔｉｖｉｔｙ Ｓｃｏｒｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍを開発し、実施した。
対照と比較して平均≧２０％の活性の割合を示した化合物は、アッセイにおける活性として定義される。
一次スクリーニングの不活性と確認スクリーニング段階の不活性の違いを単純化するために、Ｔｉｅｒｅｄ Ａｃｔｉｖｉｔｙ Ｓｃｏｒｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍを開発し、実施した。
活性スコアリング：
活性スコアリング規則は、化合物の有効性、データを得たアッセイ及びスクリーニング段階によるその干渉可能性を考慮に入れて考案された。スコアリングシステムの詳細は、他の箇所で刊行されるであろう。簡潔に言えば、アッセイのために用いられたスコアリングシステムの概要は、以下の通りである：
１）第１の段階（０〜４０の範囲）は、一次スクリーニングデータに確保されている。スコアは、アッセイにおいて活性の割合（％）と相関している。一次スクリーニングのためのスコアリングは、このアッセイに適用できない。
ａ．一次スクリーニングの結果が不活性である場合、割り当てられたスコアは、０である
ｂ．一次スクリーニングの結果が不確定である場合、割り当てられたスコアは、１０である
ｃ．一次スクリーニングの結果が活性である場合、割り当てられたスコアは、２０である
単一濃度確認スクリーニングのためのスコアリングは、このアッセイに適用できる。
ｄ．単一濃度確認スクリーニングの結果が不活性である場合、割り当てられたスコアは、２１である
ｅ．単一濃度確認スクリーニングの結果が不確定である場合、割り当てられたスコアは、２５である
ｆ．単一濃度確認スクリーニングの結果が活性である場合、割り当てられたスコアは、３０である
このスコアリングシステムは、特定のＳＩＤの試験の段階の追跡に役立つ。確認に使用可能である一次ヒットについては、それらのスコアは、２０を上回るであろう。さらに確認されない一次ヒットについては、それらのスコアは、２１を下回ったままであろう。
２）第２の段階（４１〜８０の範囲）は、用量反応確認データに確保されており、このアッセイに適用できない。
３）第３の段階（８１〜１００の範囲）は、再合成された真陽性及びそれらのアナログに確保されており、このアッセイに適用できない。
活性スコアリング規則は、化合物の有効性、データを得たアッセイ及びスクリーニング段階によるその干渉可能性を考慮に入れて考案された。スコアリングシステムの詳細は、他の箇所で刊行されるであろう。簡潔に言えば、アッセイのために用いられたスコアリングシステムの概要は、以下の通りである：
１）第１の段階（０〜４０の範囲）は、一次スクリーニングデータに確保されている。スコアは、アッセイにおいて活性の割合（％）と相関している。一次スクリーニングのためのスコアリングは、このアッセイに適用できない。
ａ．一次スクリーニングの結果が不活性である場合、割り当てられたスコアは、０である
ｂ．一次スクリーニングの結果が不確定である場合、割り当てられたスコアは、１０である
ｃ．一次スクリーニングの結果が活性である場合、割り当てられたスコアは、２０である
単一濃度確認スクリーニングのためのスコアリングは、このアッセイに適用できる。
ｄ．単一濃度確認スクリーニングの結果が不活性である場合、割り当てられたスコアは、２１である
ｅ．単一濃度確認スクリーニングの結果が不確定である場合、割り当てられたスコアは、２５である
ｆ．単一濃度確認スクリーニングの結果が活性である場合、割り当てられたスコアは、３０である
このスコアリングシステムは、特定のＳＩＤの試験の段階の追跡に役立つ。確認に使用可能である一次ヒットについては、それらのスコアは、２０を上回るであろう。さらに確認されない一次ヒットについては、それらのスコアは、２１を下回ったままであろう。
２）第２の段階（４１〜８０の範囲）は、用量反応確認データに確保されており、このアッセイに適用できない。
３）第３の段階（８１〜１００の範囲）は、再合成された真陽性及びそれらのアナログに確保されており、このアッセイに適用できない。
吸光度アッセイ（確認アッセイ、濃度−反応、ＡＩＤ番号６５１５６１）を介したミトコンドリア透過性遷移孔のμＨＴＳ阻害剤ヒットの用量反応確認
試薬の一覧：
アッセイ緩衝液：２５０ｍＭ スクロース、１０ｍＭ ＭＯＰＳ−Ｔｒｉｓ、０．０１ｍＭ ＥＧＴＡ−Ｔｒｉｓ、１．０ｍＭ リン酸−Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．４
溶液１：アッセイ緩衝液中の０．５ｍｇ／ｍＬのミトコンドリア
溶液２：溶液３中の２．０ｍＭ ＥＧＴＡ−Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．４
溶液３：ミトコンドリア活性に応じて８０〜２００μＭ ＣａＣｌ２、アッセイ緩衝液中の５．０ｍＭ グルタミン酸塩、２．５ｍＭ リンゴ酸塩。注釈：アッセイ中のカルシウムの濃度は、各ハイスループットスクリーニングバッチ直前にカルシウム滴定を介して決定される単離したミトコンドリアの活性に依存している。３０分間、２：１のウィンドウでの到達を可能にするカルシウム濃度が、使用される。
試薬の一覧：
アッセイ緩衝液：２５０ｍＭ スクロース、１０ｍＭ ＭＯＰＳ−Ｔｒｉｓ、０．０１ｍＭ ＥＧＴＡ−Ｔｒｉｓ、１．０ｍＭ リン酸−Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．４
溶液１：アッセイ緩衝液中の０．５ｍｇ／ｍＬのミトコンドリア
溶液２：溶液３中の２．０ｍＭ ＥＧＴＡ−Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．４
溶液３：ミトコンドリア活性に応じて８０〜２００μＭ ＣａＣｌ２、アッセイ緩衝液中の５．０ｍＭ グルタミン酸塩、２．５ｍＭ リンゴ酸塩。注釈：アッセイ中のカルシウムの濃度は、各ハイスループットスクリーニングバッチ直前にカルシウム滴定を介して決定される単離したミトコンドリアの活性に依存している。３０分間、２：１のウィンドウでの到達を可能にするカルシウム濃度が、使用される。
プロトコルの概要：
１．化合物は、アッセイ前の朝または夜にアッセイプレートに予めスポットする。ＬａｂＣｙｔｅ Ｅｃｈｏを介して、ＤＭＳＯ中の１０ｍＭ 試験化合物の変化する体積を、Ｇｒｅｉｎｅｒ、１５３６ウェルの透明なアッセイプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ ７８２１０１）に移して、適切な試験体積濃度及び範囲を達成する。ＤＭＳＯの変化する体積を、アッセイプレートのウェルに移して、１ウェル当たり６４ｎＬのＤＭＳＯの総体積または０．８％ 最終アッセイ濃度に対するウェル間でその濃度を平衡化する。陽性及び陰性対照ウェルもまた、６４ｎＬのＤＭＳＯを含有するであろう。
２．試薬の項にあるレシピに従って、陽性及び陰性対照溶液、ミトコンドリア懸濁液及びカルシウム溶液の作業ストックを調製する。
３．マウスからの新たに単離されたミトコンドリアを、アッセイ緩衝液（溶液１）中で懸濁させ、４μＬのこの溶液を、ＭｕｌｔｉＤｒｏｐ Ｃｏｍｂｉを有するアッセイプレートのすべてのウェルに添加する。ミトコンドリアの最終アッセイ濃度は、ミトコンドリアの調製の各バッチの相対活性に応じて、約０．２５ｍｇ／ｍＬ（作業ストック約０．５ｍｇ／ｍＬ）であろう。
４．ミトコンドリア懸濁液の添加後、アッセイ緩衝液（溶液２）中の２．０ｍＭ ＥＧＴＡ−Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．４）を含有する４μＬの陽性対照作業ストックを、１〜２列に添加する。最終アッセイ濃度＝１．０ｍＭ ＥＧＴＡ−Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．４）。
５．次に、４μＬのカルシウム溶液（溶液３）を、陰性対照及び試験化合物ウェル、３〜４８列に添加する。カルシウムの最終濃度は、ミトコンドリア活性に応じて、４０〜１００μＭ（作業ストック中の８０〜２００μＭ）であろう。
６．アッセイプレートを、１０００ｒｐｍで約６０秒間直ちに回転させる。
７．プレートを室温で３０分間維持し、次いで、５４０ｎｍの吸光度を用いて、ＢＭＧ Ｐｈｅｒａｓｔａｒ上で読み込む。
１．化合物は、アッセイ前の朝または夜にアッセイプレートに予めスポットする。ＬａｂＣｙｔｅ Ｅｃｈｏを介して、ＤＭＳＯ中の１０ｍＭ 試験化合物の変化する体積を、Ｇｒｅｉｎｅｒ、１５３６ウェルの透明なアッセイプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ ７８２１０１）に移して、適切な試験体積濃度及び範囲を達成する。ＤＭＳＯの変化する体積を、アッセイプレートのウェルに移して、１ウェル当たり６４ｎＬのＤＭＳＯの総体積または０．８％ 最終アッセイ濃度に対するウェル間でその濃度を平衡化する。陽性及び陰性対照ウェルもまた、６４ｎＬのＤＭＳＯを含有するであろう。
２．試薬の項にあるレシピに従って、陽性及び陰性対照溶液、ミトコンドリア懸濁液及びカルシウム溶液の作業ストックを調製する。
３．マウスからの新たに単離されたミトコンドリアを、アッセイ緩衝液（溶液１）中で懸濁させ、４μＬのこの溶液を、ＭｕｌｔｉＤｒｏｐ Ｃｏｍｂｉを有するアッセイプレートのすべてのウェルに添加する。ミトコンドリアの最終アッセイ濃度は、ミトコンドリアの調製の各バッチの相対活性に応じて、約０．２５ｍｇ／ｍＬ（作業ストック約０．５ｍｇ／ｍＬ）であろう。
４．ミトコンドリア懸濁液の添加後、アッセイ緩衝液（溶液２）中の２．０ｍＭ ＥＧＴＡ−Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．４）を含有する４μＬの陽性対照作業ストックを、１〜２列に添加する。最終アッセイ濃度＝１．０ｍＭ ＥＧＴＡ−Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．４）。
５．次に、４μＬのカルシウム溶液（溶液３）を、陰性対照及び試験化合物ウェル、３〜４８列に添加する。カルシウムの最終濃度は、ミトコンドリア活性に応じて、４０〜１００μＭ（作業ストック中の８０〜２００μＭ）であろう。
６．アッセイプレートを、１０００ｒｐｍで約６０秒間直ちに回転させる。
７．プレートを室温で３０分間維持し、次いで、５４０ｎｍの吸光度を用いて、ＢＭＧ Ｐｈｅｒａｓｔａｒ上で読み込む。
注釈：
２０μＭ以下のＥＣ５０を示した化合物は、このアッセイにおいて活性であると定義される。
一次スクリーニングの不活性と確認スクリーニング段階の不活性の違いを単純化するために、Ｔｉｅｒｅｄ Ａｃｔｉｖｉｔｙ Ｓｃｏｒｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍを開発し、実施した。
２０μＭ以下のＥＣ５０を示した化合物は、このアッセイにおいて活性であると定義される。
一次スクリーニングの不活性と確認スクリーニング段階の不活性の違いを単純化するために、Ｔｉｅｒｅｄ Ａｃｔｉｖｉｔｙ Ｓｃｏｒｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍを開発し、実施した。
活性スコアリング：
活性スコアリング規則は、化合物の有効性、データを得たアッセイ及びスクリーニング段階によるその干渉可能性を考慮に入れて考案された。スコアリングシステムの詳細は、他の箇所で刊行されるであろう。簡潔に言えば、アッセイのために用いられたスコアリングシステムの概要は、以下の通りである：
１）第１の段階（０〜４０の範囲）は、一次スクリーニングデータに確保されている。スコアは、アッセイにおいて活性の割合（％）と相関している。一次スクリーニングのためのスコアリングは、このアッセイに適用できない。
２）第２の段階（４１〜８０の範囲）は、用量反応確認データに確保されている。
ａ．確認段階の不活性化合物は、４１のスコア値が割り当てられる。
ｂ．スコアは、化合物の有効性と線形的に相関し、加えて、化合物が入手可能な情報に基づいてアーチファクトではないという一定の尤度を提供する。
ｃ．Ｈｉｌｌ係数は、さらなる倍率ＱＣを介してアッセイにおいて、化合物挙動の尺度として投与される：
ＱＣ＝２．６＊［ｅｘｐ（−０．５＊ｎＨ＾２）−ｅｘｐ（−１．５＊ｎＨ＾２）］
この実験的因子は、アッセイにおいて、標的または経路に特異的な化合物効果対その非特異的な挙動の尤度を割り当てる。この因子は、アッセイにおいて平衡を達成した単一の作用機序による化合物が、１のＨｉｌｌ係数値を実証するという期待値に基づいている。その挙動から逸脱している化合物は、それらの相違の度合いに比例的に罰せられる。
ｄ．上に論じられるすべての項目を考慮に入れる要約の方程式は、
スコア＝４４＋６＊（ｐＩＣ５０−３）＊ＱＣ、
式中、ｐＩＣ５０は、モル／Ｌの濃度単位で表されるＩＣ５０値の負の対数（１０）である。この方程式は、高力価及び予測可能な挙動を示す化合物について、５０を上回るスコア値をもたらす。アッセイにおいて不活性であるか、または濃度依存性挙動がそのアッセイのアーチファクトである可能性がある化合物は、概して低いスコア値を有するだろう。
３）第３の段階（８１〜１００の範囲）は、再合成された真陽性及びそれらのアナログに確保されており、このアッセイに適用できない。
活性スコアリング規則は、化合物の有効性、データを得たアッセイ及びスクリーニング段階によるその干渉可能性を考慮に入れて考案された。スコアリングシステムの詳細は、他の箇所で刊行されるであろう。簡潔に言えば、アッセイのために用いられたスコアリングシステムの概要は、以下の通りである：
１）第１の段階（０〜４０の範囲）は、一次スクリーニングデータに確保されている。スコアは、アッセイにおいて活性の割合（％）と相関している。一次スクリーニングのためのスコアリングは、このアッセイに適用できない。
２）第２の段階（４１〜８０の範囲）は、用量反応確認データに確保されている。
ａ．確認段階の不活性化合物は、４１のスコア値が割り当てられる。
ｂ．スコアは、化合物の有効性と線形的に相関し、加えて、化合物が入手可能な情報に基づいてアーチファクトではないという一定の尤度を提供する。
ｃ．Ｈｉｌｌ係数は、さらなる倍率ＱＣを介してアッセイにおいて、化合物挙動の尺度として投与される：
ＱＣ＝２．６＊［ｅｘｐ（−０．５＊ｎＨ＾２）−ｅｘｐ（−１．５＊ｎＨ＾２）］
この実験的因子は、アッセイにおいて、標的または経路に特異的な化合物効果対その非特異的な挙動の尤度を割り当てる。この因子は、アッセイにおいて平衡を達成した単一の作用機序による化合物が、１のＨｉｌｌ係数値を実証するという期待値に基づいている。その挙動から逸脱している化合物は、それらの相違の度合いに比例的に罰せられる。
ｄ．上に論じられるすべての項目を考慮に入れる要約の方程式は、
スコア＝４４＋６＊（ｐＩＣ５０−３）＊ＱＣ、
式中、ｐＩＣ５０は、モル／Ｌの濃度単位で表されるＩＣ５０値の負の対数（１０）である。この方程式は、高力価及び予測可能な挙動を示す化合物について、５０を上回るスコア値をもたらす。アッセイにおいて不活性であるか、または濃度依存性挙動がそのアッセイのアーチファクトである可能性がある化合物は、概して低いスコア値を有するだろう。
３）第３の段階（８１〜１００の範囲）は、再合成された真陽性及びそれらのアナログに確保されており、このアッセイに適用できない。
蛍光ベースのカウンタスクリーニングアッセイ（カウンタスクリーニングアッセイ、濃度−反応、ＡＩＤ番号６５１５６４）を介したミトコンドリア透過性遷移孔のμＨＴＳ阻害剤ヒットの用量反応確認
試薬の一覧：
アッセイ緩衝液：２５０ｍＭ スクロース、１０ｍＭ ＭＯＰＳ−Ｔｒｉｓ、０．０１ｍＭ ＥＧＴＡ−Ｔｒｉｓ、１．０ｍＭ リン酸−Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．４。
溶液１：アッセイ緩衝液中の０．５ｍｇ／ｍＬのミトコンドリア。
溶液２：０．８μＭ Ｒｈ１２３、アッセイ緩衝液中の５．０ｍＭ グルタミン酸塩、２．５ｍＭ リンゴ酸塩。
試薬の一覧：
アッセイ緩衝液：２５０ｍＭ スクロース、１０ｍＭ ＭＯＰＳ−Ｔｒｉｓ、０．０１ｍＭ ＥＧＴＡ−Ｔｒｉｓ、１．０ｍＭ リン酸−Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．４。
溶液１：アッセイ緩衝液中の０．５ｍｇ／ｍＬのミトコンドリア。
溶液２：０．８μＭ Ｒｈ１２３、アッセイ緩衝液中の５．０ｍＭ グルタミン酸塩、２．５ｍＭ リンゴ酸塩。
プロトコルの概要：
１．化合物は、アッセイ前の朝または夜にアッセイプレートに予めスポットする。ＬａｂＣｙｔｅ Ｅｃｈｏを介して、ＤＭＳＯ中の１０ｍＭ 試験化合物の変化する体積を、Ｇｒｅｉｎｅｒ、１５３６ウェルの透明なアッセイプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ ７８２１０１）に移して、適切な試験体積濃度及び範囲を達成する。ＤＭＳＯの変化する体積を、アッセイプレートのウェルに移して、１ウェル当たり６４ｎＬのＤＭＳＯの総体積または０．８％ 最終アッセイ濃度に対するウェル間でその濃度を平衡化する。陽性及び陰性対照ウェルもまた、６４ｎＬのＤＭＳＯを含有するであろう。
２．試薬の項にあるレシピに従って、アッセイ緩衝液、Ｒｈ１２３溶液及びミトコンドリア懸濁液作業ストックを調製する。
３．マウスからの新たに単離されたミトコンドリアを、アッセイ緩衝液（溶液１）中で懸濁させ、１０μＬのこの溶液を、ＭｕｌｔｉＤｒｏｐ Ｃｏｍｂｉを有するアッセイプレートのすべてのウェルに添加する。ミトコンドリアの最終アッセイ濃度は、ミトコンドリアの調製の相対活性に応じて、約０．２５ｍｇ／ｍＬ（作業ストック約０．５ｍｇ／ｍＬ）であろう。
４．ミトコンドリア懸濁液の添加後、１０μＬのＲｈ１２３溶液（溶液２）を、アッセイプレートの各ウェルに添加する。
５．アッセイプレートを、１０００ｒｐｍで約６０秒間直ちに回転させる。
６．プレートを室温で５分間維持し、次いで、４８０ｎｍの励起及び５２０ｎｍの発光波長の読み出しを可能にする蛍光強度光モジュールを用いて、ＢＭＧ Ｐｈｅｒａｓｔａｒ上で読み出す。
１．化合物は、アッセイ前の朝または夜にアッセイプレートに予めスポットする。ＬａｂＣｙｔｅ Ｅｃｈｏを介して、ＤＭＳＯ中の１０ｍＭ 試験化合物の変化する体積を、Ｇｒｅｉｎｅｒ、１５３６ウェルの透明なアッセイプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ ７８２１０１）に移して、適切な試験体積濃度及び範囲を達成する。ＤＭＳＯの変化する体積を、アッセイプレートのウェルに移して、１ウェル当たり６４ｎＬのＤＭＳＯの総体積または０．８％ 最終アッセイ濃度に対するウェル間でその濃度を平衡化する。陽性及び陰性対照ウェルもまた、６４ｎＬのＤＭＳＯを含有するであろう。
２．試薬の項にあるレシピに従って、アッセイ緩衝液、Ｒｈ１２３溶液及びミトコンドリア懸濁液作業ストックを調製する。
３．マウスからの新たに単離されたミトコンドリアを、アッセイ緩衝液（溶液１）中で懸濁させ、１０μＬのこの溶液を、ＭｕｌｔｉＤｒｏｐ Ｃｏｍｂｉを有するアッセイプレートのすべてのウェルに添加する。ミトコンドリアの最終アッセイ濃度は、ミトコンドリアの調製の相対活性に応じて、約０．２５ｍｇ／ｍＬ（作業ストック約０．５ｍｇ／ｍＬ）であろう。
４．ミトコンドリア懸濁液の添加後、１０μＬのＲｈ１２３溶液（溶液２）を、アッセイプレートの各ウェルに添加する。
５．アッセイプレートを、１０００ｒｐｍで約６０秒間直ちに回転させる。
６．プレートを室温で５分間維持し、次いで、４８０ｎｍの励起及び５２０ｎｍの発光波長の読み出しを可能にする蛍光強度光モジュールを用いて、ＢＭＧ Ｐｈｅｒａｓｔａｒ上で読み出す。
注釈：
８０μＭ以下のＥＣ５０を示した化合物は、このアッセイにおいて活性であると定義される。
一次スクリーニングの不活性と確認スクリーニング段階の不活性の違いを単純化するために、Ｔｉｅｒｅｄ Ａｃｔｉｖｉｔｙ Ｓｃｏｒｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍを開発し、実施した。
８０μＭ以下のＥＣ５０を示した化合物は、このアッセイにおいて活性であると定義される。
一次スクリーニングの不活性と確認スクリーニング段階の不活性の違いを単純化するために、Ｔｉｅｒｅｄ Ａｃｔｉｖｉｔｙ Ｓｃｏｒｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍを開発し、実施した。
活性スコアリング：
活性スコアリング規則は、化合物の有効性、データを得たアッセイ及びスクリーニング段階によるその干渉可能性を考慮に入れて考案された。スコアリングシステムの詳細は、他の箇所で刊行されるであろう。簡潔に言えば、アッセイのために用いられたスコアリングシステムの概要は、以下の通りである：
１）第１の段階（０〜４０の範囲）は、一次スクリーニングデータに確保されており、このアッセイに適用できない。
２）第２の段階（４１〜８０の範囲）は、用量反応確認データに確保されている。
ａ．確認段階の不活性化合物は、４１のスコア値が割り当てられる。
ｂ．スコアは、化合物の有効性と線形的に相関し、加えて、化合物が入手可能な情報に基づいてアーチファクトではないという一定の尤度を提供する。
ｃ．Ｈｉｌｌ係数は、さらなる倍率ＱＣを介してアッセイにおいて、化合物挙動の尺度として投与される：
ＱＣ＝２．６＊［ｅｘｐ（−０．５＊ｎＨ＾２）−ｅｘｐ（−１．５＊ｎＨ＾２）］
この実験的因子は、アッセイにおいて、標的または経路に特異的な化合物効果対その非特異的な挙動の尤度を割り当てる。この因子は、アッセイにおいて平衡を達成した単一の作用機序による化合物が、１のＨｉｌｌ係数値を実証するという期待値に基づいている。その挙動から逸脱している化合物は、それらの相違の度合いに比例的に罰せられる。
ｄ．上に論じられるすべての項目を考慮に入れる要約の方程式は、
スコア＝４４＋６＊（ｐＩＣ５０−３）＊ＱＣ、
式中、ｐＩＣ５０は、モル／Ｌの濃度単位で表されるＩＣ５０値の負の対数（１０）である。この方程式は、高力価及び予測可能な挙動を示す化合物について、５０を上回るスコア値をもたらす。アッセイにおいて不活性であるか、または濃度依存性挙動がそのアッセイのアーチファクトである可能性がある化合物は、概して低いスコア値を有するだろう。
３）第３の段階（８１〜１００の範囲）は、再合成された真陽性及びそれらのアナログに確保されており、このアッセイに適用できない。
活性スコアリング規則は、化合物の有効性、データを得たアッセイ及びスクリーニング段階によるその干渉可能性を考慮に入れて考案された。スコアリングシステムの詳細は、他の箇所で刊行されるであろう。簡潔に言えば、アッセイのために用いられたスコアリングシステムの概要は、以下の通りである：
１）第１の段階（０〜４０の範囲）は、一次スクリーニングデータに確保されており、このアッセイに適用できない。
２）第２の段階（４１〜８０の範囲）は、用量反応確認データに確保されている。
ａ．確認段階の不活性化合物は、４１のスコア値が割り当てられる。
ｂ．スコアは、化合物の有効性と線形的に相関し、加えて、化合物が入手可能な情報に基づいてアーチファクトではないという一定の尤度を提供する。
ｃ．Ｈｉｌｌ係数は、さらなる倍率ＱＣを介してアッセイにおいて、化合物挙動の尺度として投与される：
ＱＣ＝２．６＊［ｅｘｐ（−０．５＊ｎＨ＾２）−ｅｘｐ（−１．５＊ｎＨ＾２）］
この実験的因子は、アッセイにおいて、標的または経路に特異的な化合物効果対その非特異的な挙動の尤度を割り当てる。この因子は、アッセイにおいて平衡を達成した単一の作用機序による化合物が、１のＨｉｌｌ係数値を実証するという期待値に基づいている。その挙動から逸脱している化合物は、それらの相違の度合いに比例的に罰せられる。
ｄ．上に論じられるすべての項目を考慮に入れる要約の方程式は、
スコア＝４４＋６＊（ｐＩＣ５０−３）＊ＱＣ、
式中、ｐＩＣ５０は、モル／Ｌの濃度単位で表されるＩＣ５０値の負の対数（１０）である。この方程式は、高力価及び予測可能な挙動を示す化合物について、５０を上回るスコア値をもたらす。アッセイにおいて不活性であるか、または濃度依存性挙動がそのアッセイのアーチファクトである可能性がある化合物は、概して低いスコア値を有するだろう。
３）第３の段階（８１〜１００の範囲）は、再合成された真陽性及びそれらのアナログに確保されており、このアッセイに適用できない。
吸光度を介したミトコンドリア透過性遷移孔のμＨＴＳ阻害剤ヒットの乾燥粉末用量反応確認。ミトコンドリア膨張（ヒット妥当性、確認アッセイ、濃度反応、ＡＩＤ番号７２０７２２）
試薬の一覧：
アッセイ緩衝液：２５０ｍＭ スクロース、１０ｍＭ ＭＯＰＳ−Ｔｒｉｓ、０．０１ｍＭ ＥＧＴＡ−Ｔｒｉｓ、１．０ｍＭ リン酸−Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．４
溶液１．アッセイ緩衝液中の５．０ｍＭ グルタミン酸塩及び２．５ｍＭ リンゴ酸塩。
溶液２．溶液１中のミトコンドリア活性に応じて、８０〜１２０μＭ ＣａＣｌ２。注釈：アッセイ中のＣａ２＋の濃度は、各スクリーニングバッチ直前にカルシウム滴定を介して決定される単離したミトコンドリアの活性に依存している。２０分間、２：１のウィンドウでの到達を可能にするＣａ２＋濃度が、使用される。
溶液３．溶液２中の１％ ＤＭＳＯ。
溶液４．溶液３中の２．０ｍＭ ＥＧＴＡ−Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．４。
溶液５．アッセイ緩衝液中の０．５ｍｇ／ｍＬのミトコンドリア。
試薬の一覧：
アッセイ緩衝液：２５０ｍＭ スクロース、１０ｍＭ ＭＯＰＳ−Ｔｒｉｓ、０．０１ｍＭ ＥＧＴＡ−Ｔｒｉｓ、１．０ｍＭ リン酸−Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．４
溶液１．アッセイ緩衝液中の５．０ｍＭ グルタミン酸塩及び２．５ｍＭ リンゴ酸塩。
溶液２．溶液１中のミトコンドリア活性に応じて、８０〜１２０μＭ ＣａＣｌ２。注釈：アッセイ中のＣａ２＋の濃度は、各スクリーニングバッチ直前にカルシウム滴定を介して決定される単離したミトコンドリアの活性に依存している。２０分間、２：１のウィンドウでの到達を可能にするＣａ２＋濃度が、使用される。
溶液３．溶液２中の１％ ＤＭＳＯ。
溶液４．溶液３中の２．０ｍＭ ＥＧＴＡ−Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．４。
溶液５．アッセイ緩衝液中の０．５ｍｇ／ｍＬのミトコンドリア。
プロトコルの概要：
１．ミトコンドリアを新たに単離し、試薬の項にあるレシピに従って溶液を調製する。
２．１００μＬの溶液４を、９６ウェルの透明なアッセイプレート（Ｆａｌｃｏｎ ３５３０７２）の１〜２列に及び溶液３を１１〜１２列（それぞれ、陽性及び陰性対照）に分注する。
３．２００μＬの溶液１をＡ行３〜１０列に分注する。
４．次に、１００μＬの溶液３をＢ〜Ｈ行３〜１０列に分注する。
５．ＤＭＳＯ中の４μＬの５ｍＭ 試験化合物を、Ａ行３〜１０列に添加し、１：２の連続希釈をＡ〜Ｈ行３〜１０列に行う。
６．最終的に、すべてのウェル中の１００μＬの溶液５を分注する。反応を開始する。
７．室温で２０分間プレートを維持し、次いで、ＭｕｌｔｉＳｋａｎ ＥＸ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ上で５４０ｎｍの吸光度で読み込む。
１．ミトコンドリアを新たに単離し、試薬の項にあるレシピに従って溶液を調製する。
２．１００μＬの溶液４を、９６ウェルの透明なアッセイプレート（Ｆａｌｃｏｎ ３５３０７２）の１〜２列に及び溶液３を１１〜１２列（それぞれ、陽性及び陰性対照）に分注する。
３．２００μＬの溶液１をＡ行３〜１０列に分注する。
４．次に、１００μＬの溶液３をＢ〜Ｈ行３〜１０列に分注する。
５．ＤＭＳＯ中の４μＬの５ｍＭ 試験化合物を、Ａ行３〜１０列に添加し、１：２の連続希釈をＡ〜Ｈ行３〜１０列に行う。
６．最終的に、すべてのウェル中の１００μＬの溶液５を分注する。反応を開始する。
７．室温で２０分間プレートを維持し、次いで、ＭｕｌｔｉＳｋａｎ ＥＸ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ上で５４０ｎｍの吸光度で読み込む。
注釈：
２０μＭ以下のＥＣ５０を示した化合物は、このアッセイにおいて活性であると定義される。
一次スクリーニングの不活性化合物と確認スクリーニング段階の不活性化合物の違いを単純化するために、Ｔｉｅｒｅｄ Ａｃｔｉｖｉｔｙ Ｓｃｏｒｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍを開発し、実施した。
２０μＭ以下のＥＣ５０を示した化合物は、このアッセイにおいて活性であると定義される。
一次スクリーニングの不活性化合物と確認スクリーニング段階の不活性化合物の違いを単純化するために、Ｔｉｅｒｅｄ Ａｃｔｉｖｉｔｙ Ｓｃｏｒｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍを開発し、実施した。
活性スコアリング：
活性スコアリング規則は、化合物の有効性、データを得たアッセイ及びスクリーニング段階によるその干渉可能性を考慮に入れて考案された。スコアリングシステムの詳細は、他の箇所で刊行されるであろう。簡潔に言えば、アッセイのために用いられたスコアリングシステムの概要は、以下の通りである：
１）第１の段階（０〜４０の範囲）は、一次スクリーニングデータに確保されており、このアッセイに適用できない。
２）第２の段階（４１〜８０の範囲）は、用量反応確認データに確保されており、このアッセイに適用できない。
３）第３の段階（８１〜１００の範囲）は、再合成された真陽性及びそれらのアナログに確保されている。
ａ．乾燥粉末から再生し、２０Ｍ超のＩＣ５０を有することができない化合物は、不活性であり、８１のスコア値を割り当てる。
ｂ．スコアは、化合物の有効性と線形的に相関し、加えて、化合物が入手可能な情報に基づいてアーチファクトではないという一定の尤度を提供する。Ｈｉｌｌ係数は、さらなる倍率ＱＣを介してアッセイにおいて、化合物挙動の尺度として投与される：
ＱＣ＝２．６＊［ｅｘｐ（−０．５＊ｎＨ；２）−ｅｘｐ（−１．５＊ｎＨ；２）］
この実験的因子は、アッセイにおいて、標的または経路に特異的な化合物効果対その非特異的な挙動の尤度を割り当てる。この因子は、アッセイにおいて平衡を達成した単一の作用機序による化合物が、１のＨｉｌｌ係数値を実証し得るという期待値に基づいている。その挙動から逸脱している化合物は、それらの相違の度合いに比例的に罰せられる。
ｃ．スコアは、以下の方程式を用いて計算される：
スコア＝８２＋３＊（ｐＩＣ５０−３）＊ＱＣ、
式中、ｐＩＣ５０は、モル／Ｌの濃度単位で表されるＩＣ５０値の負の対数（１０）であり、ＱＣは、上述のように、Ｈｉｌｌ係数を用いて計算される。この方程式は、アッセイにおいて、高力価及び予測可能な挙動を示す化合物について、８５を上回るスコア値をもたらす。
活性スコアリング規則は、化合物の有効性、データを得たアッセイ及びスクリーニング段階によるその干渉可能性を考慮に入れて考案された。スコアリングシステムの詳細は、他の箇所で刊行されるであろう。簡潔に言えば、アッセイのために用いられたスコアリングシステムの概要は、以下の通りである：
１）第１の段階（０〜４０の範囲）は、一次スクリーニングデータに確保されており、このアッセイに適用できない。
２）第２の段階（４１〜８０の範囲）は、用量反応確認データに確保されており、このアッセイに適用できない。
３）第３の段階（８１〜１００の範囲）は、再合成された真陽性及びそれらのアナログに確保されている。
ａ．乾燥粉末から再生し、２０Ｍ超のＩＣ５０を有することができない化合物は、不活性であり、８１のスコア値を割り当てる。
ｂ．スコアは、化合物の有効性と線形的に相関し、加えて、化合物が入手可能な情報に基づいてアーチファクトではないという一定の尤度を提供する。Ｈｉｌｌ係数は、さらなる倍率ＱＣを介してアッセイにおいて、化合物挙動の尺度として投与される：
ＱＣ＝２．６＊［ｅｘｐ（−０．５＊ｎＨ；２）−ｅｘｐ（−１．５＊ｎＨ；２）］
この実験的因子は、アッセイにおいて、標的または経路に特異的な化合物効果対その非特異的な挙動の尤度を割り当てる。この因子は、アッセイにおいて平衡を達成した単一の作用機序による化合物が、１のＨｉｌｌ係数値を実証し得るという期待値に基づいている。その挙動から逸脱している化合物は、それらの相違の度合いに比例的に罰せられる。
ｃ．スコアは、以下の方程式を用いて計算される：
スコア＝８２＋３＊（ｐＩＣ５０−３）＊ＱＣ、
式中、ｐＩＣ５０は、モル／Ｌの濃度単位で表されるＩＣ５０値の負の対数（１０）であり、ＱＣは、上述のように、Ｈｉｌｌ係数を用いて計算される。この方程式は、アッセイにおいて、高力価及び予測可能な挙動を示す化合物について、８５を上回るスコア値をもたらす。
蛍光ベースのカウンタスクリーニングを介したミトコンドリア透過性遷移孔のμＨＴＳ阻害剤ヒットの乾燥粉末用量反応確認。Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ １２３の反応停止（ヒット妥当性、カウンタスクリーニングアッセイ、濃度−反応、ＡＩＤ番号７２０７２３）
試薬の一覧：
アッセイ緩衝液：２５０ｍＭ スクロース、１０ｍＭ ＭＯＰＳ−Ｔｒｉｓ、０．０１ｍＭ ＥＧＴＡ−Ｔｒｉｓ、１．０ｍＭ リン酸−Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．４
溶液１．アッセイ緩衝液中の５．０ｍＭ グルタミン酸塩及び２．５ｍＭ リンゴ酸塩。
溶液２．溶液１中の１％ ＤＭＳＯ。
溶液３．溶液１中の０．８μＭ ＦＣＣＰ（ＤＭＳＯ中のストック４０μＭ）。
溶液４．アッセイ緩衝液中の０．５ｍｇ／ｍＬのミトコンドリア及び０．８μＭ Ｒｈ１２３。
試薬の一覧：
アッセイ緩衝液：２５０ｍＭ スクロース、１０ｍＭ ＭＯＰＳ−Ｔｒｉｓ、０．０１ｍＭ ＥＧＴＡ−Ｔｒｉｓ、１．０ｍＭ リン酸−Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．４
溶液１．アッセイ緩衝液中の５．０ｍＭ グルタミン酸塩及び２．５ｍＭ リンゴ酸塩。
溶液２．溶液１中の１％ ＤＭＳＯ。
溶液３．溶液１中の０．８μＭ ＦＣＣＰ（ＤＭＳＯ中のストック４０μＭ）。
溶液４．アッセイ緩衝液中の０．５ｍｇ／ｍＬのミトコンドリア及び０．８μＭ Ｒｈ１２３。
プロトコルの概要：
１．ミトコンドリアを新たに単離し、試薬の項にあるレシピに従って溶液を調製する。
２．１００μＬの溶液３を、９６ウェルの黒色アッセイプレート（Ｆａｌｃｏｎ ３５３３７６）の１〜２行に、及び溶液２を１１〜１２行（それぞれ、陽性及び陰性対照）に分注する。
３．２００μＬの溶液１をＡ行３〜１０列に分注する。
４．次に、１００μＬの溶液２をＢ〜Ｈ行３〜１０列に分注する。
５．ＤＭＳＯ中の４μＬの１０ｍＭ 試験化合物をＡ行３〜１０列に添加し、１：２の連続希釈をＡ〜Ｈ行３〜１０列に行う。
６．最終的に、すべてのウェル中の１００μＬの溶液４を分注する。反応を開始する。
７．室温で５分間プレートを維持し、次いでＦｌｕｏｒｏｓｋａｎ Ａｓｃｅｎｔ ＦＬ，Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ上で、吸光度（励起４８５ｎｍ、発光５３８ｎｍ）で読み込む。
１．ミトコンドリアを新たに単離し、試薬の項にあるレシピに従って溶液を調製する。
２．１００μＬの溶液３を、９６ウェルの黒色アッセイプレート（Ｆａｌｃｏｎ ３５３３７６）の１〜２行に、及び溶液２を１１〜１２行（それぞれ、陽性及び陰性対照）に分注する。
３．２００μＬの溶液１をＡ行３〜１０列に分注する。
４．次に、１００μＬの溶液２をＢ〜Ｈ行３〜１０列に分注する。
５．ＤＭＳＯ中の４μＬの１０ｍＭ 試験化合物をＡ行３〜１０列に添加し、１：２の連続希釈をＡ〜Ｈ行３〜１０列に行う。
６．最終的に、すべてのウェル中の１００μＬの溶液４を分注する。反応を開始する。
７．室温で５分間プレートを維持し、次いでＦｌｕｏｒｏｓｋａｎ Ａｓｃｅｎｔ ＦＬ，Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ上で、吸光度（励起４８５ｎｍ、発光５３８ｎｍ）で読み込む。
注釈：
１００μＭ以下のＥＣ５０を示した化合物は、このアッセイにおいて活性であると定義される。
一次スクリーニングの不活性と確認スクリーニング段階の不活性の違いを単純化するために、Ｔｉｅｒｅｄ Ａｃｔｉｖｉｔｙ Ｓｃｏｒｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍを開発し、実施した。
１００μＭ以下のＥＣ５０を示した化合物は、このアッセイにおいて活性であると定義される。
一次スクリーニングの不活性と確認スクリーニング段階の不活性の違いを単純化するために、Ｔｉｅｒｅｄ Ａｃｔｉｖｉｔｙ Ｓｃｏｒｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍを開発し、実施した。
活性スコアリング：
活性スコアリング規則は、化合物の有効性、データを得たアッセイ及びスクリーニング段階によるその干渉可能性を考慮に入れて考案された。スコアリングシステムの詳細は、他の箇所で刊行されるであろう。簡潔に言えば、アッセイのために用いられたスコアリングシステムの概要は、以下の通りである：
１）第１の段階（０〜４０の範囲）は、一次スクリーニングデータに確保されており、このアッセイに適用できない。
２）第２の段階（４１〜８０の範囲）は、用量反応確認データに確保されており、このアッセイに適用できない。
３）第３の段階（８１〜１００の範囲）は、再合成された真陽性及びそれらのアナログに確保されている。
ａ．乾燥粉末から再生し、１００Ｍ超のＩＣ５０を有することができない化合物は、不活性であり、８１のスコア値を割り当てる。
ｂ．スコアは、化合物の有効性と線形的に相関し、加えて、化合物が入手可能な情報に基づいてアーチファクトではないという一定の尤度を提供する。Ｈｉｌｌ係数は、さらなる倍率ＱＣを介してアッセイにおいて、化合物挙動の尺度として投与される：
ＱＣ＝２．６＊［ｅｘｐ（−０．５＊ｎＨ；２）−ｅｘｐ（−１．５＊ｎＨ；２）］
この実験的因子は、アッセイにおいて、標的または経路に特異的な化合物効果対その非特異的な挙動の尤度を割り当てる。この因子は、アッセイにおいて平衡を達成した単一の作用機序による化合物が、１のＨｉｌｌ係数値を実証し得るという期待値に基づいている。その挙動から逸脱している化合物は、それらの相違の度合いに比例的に罰せられる。
ｃ．スコアは、以下の方程式を用いて計算される：
スコア＝８２＋３＊（ｐＩＣ５０−３）＊ＱＣ、
式中、ｐＩＣ５０は、モル／Ｌの濃度単位で表されるＩＣ５０値の負の対数（１０）であり、ＱＣは、上述のように、Ｈｉｌｌ係数を用いて計算される。この方程式は、アッセイにおいて、高力価及び予測可能な挙動を示す化合物について、８５を上回るスコア値をもたらす。
活性スコアリング規則は、化合物の有効性、データを得たアッセイ及びスクリーニング段階によるその干渉可能性を考慮に入れて考案された。スコアリングシステムの詳細は、他の箇所で刊行されるであろう。簡潔に言えば、アッセイのために用いられたスコアリングシステムの概要は、以下の通りである：
１）第１の段階（０〜４０の範囲）は、一次スクリーニングデータに確保されており、このアッセイに適用できない。
２）第２の段階（４１〜８０の範囲）は、用量反応確認データに確保されており、このアッセイに適用できない。
３）第３の段階（８１〜１００の範囲）は、再合成された真陽性及びそれらのアナログに確保されている。
ａ．乾燥粉末から再生し、１００Ｍ超のＩＣ５０を有することができない化合物は、不活性であり、８１のスコア値を割り当てる。
ｂ．スコアは、化合物の有効性と線形的に相関し、加えて、化合物が入手可能な情報に基づいてアーチファクトではないという一定の尤度を提供する。Ｈｉｌｌ係数は、さらなる倍率ＱＣを介してアッセイにおいて、化合物挙動の尺度として投与される：
ＱＣ＝２．６＊［ｅｘｐ（−０．５＊ｎＨ；２）−ｅｘｐ（−１．５＊ｎＨ；２）］
この実験的因子は、アッセイにおいて、標的または経路に特異的な化合物効果対その非特異的な挙動の尤度を割り当てる。この因子は、アッセイにおいて平衡を達成した単一の作用機序による化合物が、１のＨｉｌｌ係数値を実証し得るという期待値に基づいている。その挙動から逸脱している化合物は、それらの相違の度合いに比例的に罰せられる。
ｃ．スコアは、以下の方程式を用いて計算される：
スコア＝８２＋３＊（ｐＩＣ５０−３）＊ＱＣ、
式中、ｐＩＣ５０は、モル／Ｌの濃度単位で表されるＩＣ５０値の負の対数（１０）であり、ＱＣは、上述のように、Ｈｉｌｌ係数を用いて計算される。この方程式は、アッセイにおいて、高力価及び予測可能な挙動を示す化合物について、８５を上回るスコア値をもたらす。
カルシウム保持能力試験を介したミトコンドリア透過性遷移孔のμＨＴＳ阻害剤ヒットの乾燥粉末用量反応確認（ヒット妥当性、確認アッセイ、濃度反応、ＡＩＤ番号７２０７２８）
試薬の一覧：
アッセイ緩衝液：２５０ｍＭ スクロース、１０ｍＭ ＭＯＰＳ−Ｔｒｉｓ、０．０１ｍＭ ＥＧＴＡ−Ｔｒｉｓ、１．０ｍＭ リン酸−Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．４。
溶液１．アッセイ緩衝液中の１０ｍＭ グルタミン酸塩及び５ｍＭ リンゴ酸塩。
溶液２．溶液２中の１％ ＤＭＳＯ。
溶液３．アッセイ緩衝液中の０．５ｍｇ／ｍＬのミトコンドリア及び１．０μＭ Ｃａｌｃｉｕｍ Ｇｒｅｅｎ−５Ｎ。
溶液４．０．２５ｍＭ ＣａＣｌ２。
試薬の一覧：
アッセイ緩衝液：２５０ｍＭ スクロース、１０ｍＭ ＭＯＰＳ−Ｔｒｉｓ、０．０１ｍＭ ＥＧＴＡ−Ｔｒｉｓ、１．０ｍＭ リン酸−Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．４。
溶液１．アッセイ緩衝液中の１０ｍＭ グルタミン酸塩及び５ｍＭ リンゴ酸塩。
溶液２．溶液２中の１％ ＤＭＳＯ。
溶液３．アッセイ緩衝液中の０．５ｍｇ／ｍＬのミトコンドリア及び１．０μＭ Ｃａｌｃｉｕｍ Ｇｒｅｅｎ−５Ｎ。
溶液４．０．２５ｍＭ ＣａＣｌ２。
プロトコルの概要：
１．ミトコンドリアを新たに単離し、試薬の項にあるレシピに従って溶液を調製する。
２．１００μＬの溶液２を、９６ウェルの黒色アッセイプレート（Ｆａｌｃｏｎ ３５３３７６）の１〜２行（陰性対照）に分注する。
３．２００μＬの溶液１を、Ａ行３〜１２列に分注する。
４．次に、１００μＬの溶液２をＢ〜Ｈ行３〜１２列に分注する。
５．ＤＭＳＯ中の４μＬの５ｍＭ 試験化合物を、Ａ行３〜１２列に添加し、１：２の連続希釈をＡ〜Ｈ行３〜１２列に行う。
６．最終的に、すべてのウェル中の１００μＬの溶液３を分注する。
７．実験を開始する。Ｃａｌｃｉｕｍ Ｇｒｅｅｎ−５Ｎ蛍光（励起４８５ｎｍ、発光５３８ｎｍ）を読み込み、Ｆｌｕｏｒｏｓｋａｎ Ａｓｃｅｎｔ ＦＬ，Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃを用いて、一連の４μＬの溶液４の添加を行う。
１．ミトコンドリアを新たに単離し、試薬の項にあるレシピに従って溶液を調製する。
２．１００μＬの溶液２を、９６ウェルの黒色アッセイプレート（Ｆａｌｃｏｎ ３５３３７６）の１〜２行（陰性対照）に分注する。
３．２００μＬの溶液１を、Ａ行３〜１２列に分注する。
４．次に、１００μＬの溶液２をＢ〜Ｈ行３〜１２列に分注する。
５．ＤＭＳＯ中の４μＬの５ｍＭ 試験化合物を、Ａ行３〜１２列に添加し、１：２の連続希釈をＡ〜Ｈ行３〜１２列に行う。
６．最終的に、すべてのウェル中の１００μＬの溶液３を分注する。
７．実験を開始する。Ｃａｌｃｉｕｍ Ｇｒｅｅｎ−５Ｎ蛍光（励起４８５ｎｍ、発光５３８ｎｍ）を読み込み、Ｆｌｕｏｒｏｓｋａｎ Ａｓｃｅｎｔ ＦＬ，Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃを用いて、一連の４μＬの溶液４の添加を行う。
注釈：
１２．５μＭで１．１を上回るＣＲＣ／ＣＲＣ０を示した化合物は、このアッセイにおいて活性であると定義される。
１２．５μＭで１．１を上回るＣＲＣ／ＣＲＣ０を示した化合物は、このアッセイにおいて活性であると定義される。
ミトコンドリアの膨張（ＳＡＲアッセイＡＩＤ番号７４３３５９）を阻害する化合物を同定するための濃度−反応アッセイ
試薬の一覧：
アッセイ緩衝液：２５０ｍＭ スクロース、１０ｍＭ ＭＯＰＳ−Ｔｒｉｓ、０．０１ｍＭ ＥＧＴＡ−Ｔｒｉｓ、１．０ｍＭ リン酸、ｐＨ７．４
溶液１．アッセイ緩衝液中の５．０ｍＭ グルタミン酸塩及び２．５ｍＭ リンゴ酸塩。
溶液２．溶液１中のミトコンドリア活性に応じて、１００〜１２０μＭ ＣａＣｌ２。注釈：アッセイ中のＣａ２＋の濃度は、各スクリーニングバッチ直前にカルシウム滴定を介して決定される単離したミトコンドリアの活性に依存している。２０分間、２：１のウィンドウでの到達を可能にするＣａ２＋濃度が、使用される。
溶液３．溶液２中の１％ ＤＭＳＯ。
溶液４．溶液３中の２．０ｍＭ ＥＧＴＡ−Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．４。
溶液５．アッセイ緩衝液中の０．５ｍｇ／ｍＬのミトコンドリア。
試薬の一覧：
アッセイ緩衝液：２５０ｍＭ スクロース、１０ｍＭ ＭＯＰＳ−Ｔｒｉｓ、０．０１ｍＭ ＥＧＴＡ−Ｔｒｉｓ、１．０ｍＭ リン酸、ｐＨ７．４
溶液１．アッセイ緩衝液中の５．０ｍＭ グルタミン酸塩及び２．５ｍＭ リンゴ酸塩。
溶液２．溶液１中のミトコンドリア活性に応じて、１００〜１２０μＭ ＣａＣｌ２。注釈：アッセイ中のＣａ２＋の濃度は、各スクリーニングバッチ直前にカルシウム滴定を介して決定される単離したミトコンドリアの活性に依存している。２０分間、２：１のウィンドウでの到達を可能にするＣａ２＋濃度が、使用される。
溶液３．溶液２中の１％ ＤＭＳＯ。
溶液４．溶液３中の２．０ｍＭ ＥＧＴＡ−Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．４。
溶液５．アッセイ緩衝液中の０．５ｍｇ／ｍＬのミトコンドリア。
プロトコルの概要：
１．ミトコンドリアを新たに単離し、試薬の項にあるレシピに従って溶液を調製する。
２．１００μＬの溶液４を、９６ウェルの透明なアッセイプレート（Ｆａｌｃｏｎ ３５３０７２）の１〜２列に及び溶液３を１１〜１２列（それぞれ、陽性及び陰性対照）に分注する。
３．２００μＬの溶液１をＡ行３〜１０列に分注する。
４．次に、１００μＬの溶液３をＢ〜Ｈ行３〜１０列に分注する。
５．ＤＭＳＯ中の４μＬの５ｍＭ 試験化合物を、Ａ行３〜１０列に添加し、１：２の連続希釈をＡ〜Ｈ行３〜１０列に行う。
６．最終的に、すべてのウェル中の１００μＬの溶液５を分注する。反応を開始する。
７．室温で２０分間プレートを維持し、次いで、ＭｕｌｔｉＳｋａｎ ＥＸ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ上で５４０ｎｍの吸光度で読み込む。
１．ミトコンドリアを新たに単離し、試薬の項にあるレシピに従って溶液を調製する。
２．１００μＬの溶液４を、９６ウェルの透明なアッセイプレート（Ｆａｌｃｏｎ ３５３０７２）の１〜２列に及び溶液３を１１〜１２列（それぞれ、陽性及び陰性対照）に分注する。
３．２００μＬの溶液１をＡ行３〜１０列に分注する。
４．次に、１００μＬの溶液３をＢ〜Ｈ行３〜１０列に分注する。
５．ＤＭＳＯ中の４μＬの５ｍＭ 試験化合物を、Ａ行３〜１０列に添加し、１：２の連続希釈をＡ〜Ｈ行３〜１０列に行う。
６．最終的に、すべてのウェル中の１００μＬの溶液５を分注する。反応を開始する。
７．室温で２０分間プレートを維持し、次いで、ＭｕｌｔｉＳｋａｎ ＥＸ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ上で５４０ｎｍの吸光度で読み込む。
注釈：
２０μＭ以下のＥＣ５０を示した化合物は、このアッセイにおいて活性であると定義される。
一次スクリーニングの不活性と確認スクリーニング段階の不活性の違いを単純化するために、Ｔｉｅｒｅｄ Ａｃｔｉｖｉｔｙ Ｓｃｏｒｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍを開発し、実施した。
２０μＭ以下のＥＣ５０を示した化合物は、このアッセイにおいて活性であると定義される。
一次スクリーニングの不活性と確認スクリーニング段階の不活性の違いを単純化するために、Ｔｉｅｒｅｄ Ａｃｔｉｖｉｔｙ Ｓｃｏｒｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍを開発し、実施した。
活性スコアリング：
活性スコアリング規則は、化合物の有効性、データを得たアッセイ及びスクリーニング段階によるその干渉可能性を考慮に入れて考案された。スコアリングシステムの詳細は、他の箇所で刊行されるであろう。簡潔に言えば、アッセイのために用いられたスコアリングシステムの概要は、以下の通りである：
１）第１の段階（０〜４０の範囲）は、一次スクリーニングデータに確保されており、このアッセイに適用できない。
２）第２の段階（４１〜８０の範囲）は、用量反応確認データに確保されており、このアッセイに適用できない。
３）第３の段階（８１〜１００の範囲）は、再合成された真陽性及びそれらのアナログに確保されている。
ａ．乾燥粉末から再生し、２０Ｍ超のＩＣ５０を有することができない化合物は、不活性であり、８１のスコア値を割り当てる。
ｂ．スコアは、化合物の有効性と線形的に相関し、加えて、化合物が入手可能な情報に基づいてアーチファクトではないという一定の尤度を提供する。Ｈｉｌｌ係数は、さらなる倍率ＱＣを介してアッセイにおいて、化合物挙動の尺度として投与される：
ＱＣ＝２．６＊［ｅｘｐ（−０．５＊ｎＨ；２）−ｅｘｐ（−１．５＊ｎＨ；２）］
この実験的因子は、アッセイにおいて、標的または経路に特異的な化合物効果対その非特異的な挙動の尤度を割り当てる。この因子は、アッセイにおいて平衡を達成した単一の作用機序による化合物が、１のＨｉｌｌ係数値を実証し得るという期待値に基づいている。その挙動から逸脱している化合物は、それらの相違の度合いに比例的に罰せられる。
ｃ．スコアは、以下の方程式を用いて計算される：
スコア＝８２＋３＊（ｐＩＣ５０−３）＊ＱＣ、
式中、ｐＩＣ５０は、モル／Ｌの濃度単位で表されるＩＣ５０値の負の対数（１０）であり、ＱＣは、上述のように、Ｈｉｌｌ係数を用いて計算される。この方程式は、アッセイにおいて、高力価及び予測可能な挙動を示す化合物について、８５を上回るスコア値をもたらす。
活性スコアリング規則は、化合物の有効性、データを得たアッセイ及びスクリーニング段階によるその干渉可能性を考慮に入れて考案された。スコアリングシステムの詳細は、他の箇所で刊行されるであろう。簡潔に言えば、アッセイのために用いられたスコアリングシステムの概要は、以下の通りである：
１）第１の段階（０〜４０の範囲）は、一次スクリーニングデータに確保されており、このアッセイに適用できない。
２）第２の段階（４１〜８０の範囲）は、用量反応確認データに確保されており、このアッセイに適用できない。
３）第３の段階（８１〜１００の範囲）は、再合成された真陽性及びそれらのアナログに確保されている。
ａ．乾燥粉末から再生し、２０Ｍ超のＩＣ５０を有することができない化合物は、不活性であり、８１のスコア値を割り当てる。
ｂ．スコアは、化合物の有効性と線形的に相関し、加えて、化合物が入手可能な情報に基づいてアーチファクトではないという一定の尤度を提供する。Ｈｉｌｌ係数は、さらなる倍率ＱＣを介してアッセイにおいて、化合物挙動の尺度として投与される：
ＱＣ＝２．６＊［ｅｘｐ（−０．５＊ｎＨ；２）−ｅｘｐ（−１．５＊ｎＨ；２）］
この実験的因子は、アッセイにおいて、標的または経路に特異的な化合物効果対その非特異的な挙動の尤度を割り当てる。この因子は、アッセイにおいて平衡を達成した単一の作用機序による化合物が、１のＨｉｌｌ係数値を実証し得るという期待値に基づいている。その挙動から逸脱している化合物は、それらの相違の度合いに比例的に罰せられる。
ｃ．スコアは、以下の方程式を用いて計算される：
スコア＝８２＋３＊（ｐＩＣ５０−３）＊ＱＣ、
式中、ｐＩＣ５０は、モル／Ｌの濃度単位で表されるＩＣ５０値の負の対数（１０）であり、ＱＣは、上述のように、Ｈｉｌｌ係数を用いて計算される。この方程式は、アッセイにおいて、高力価及び予測可能な挙動を示す化合物について、８５を上回るスコア値をもたらす。
ＩＭＭ電位への干渉を介してミトコンドリアの膨張（ＳＡＲアッセイＡＩＤ番号７４３３６１）を防ぐ化合物を同定するための濃度−反応カウンタスクリーニングアッセイ
試薬の一覧：
アッセイ緩衝液：２５０ｍＭ スクロース、１０ｍＭ ＭＯＰＳ−Ｔｒｉｓ、０．０１ｍＭ ＥＧＴＡ−Ｔｒｉｓ、１．０ｍＭ リン酸−Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．４
溶液１．アッセイ緩衝液中、５．０ グルタミン酸塩及び２．５ｍＭ リンゴ酸塩。
溶液２．溶液１中の１％ ＤＭＳＯ。
溶液３．溶液１中の０．８μＭ ＦＣＣＰ（ＤＭＳＯ中のストック４０μＭ）。
溶液４．アッセイ緩衝液中の０．５ｍｇ／ｍＬのミトコンドリア及び０．８μＭ Ｒｈ１２３。
試薬の一覧：
アッセイ緩衝液：２５０ｍＭ スクロース、１０ｍＭ ＭＯＰＳ−Ｔｒｉｓ、０．０１ｍＭ ＥＧＴＡ−Ｔｒｉｓ、１．０ｍＭ リン酸−Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．４
溶液１．アッセイ緩衝液中、５．０ グルタミン酸塩及び２．５ｍＭ リンゴ酸塩。
溶液２．溶液１中の１％ ＤＭＳＯ。
溶液３．溶液１中の０．８μＭ ＦＣＣＰ（ＤＭＳＯ中のストック４０μＭ）。
溶液４．アッセイ緩衝液中の０．５ｍｇ／ｍＬのミトコンドリア及び０．８μＭ Ｒｈ１２３。
プロトコルの概要：
１．ミトコンドリアを新たに単離し、試薬の項にあるレシピに従って溶液を調製する。
２．１００μＬの溶液３を、９６ウェルの黒色アッセイプレート（Ｆａｌｃｏｎ ３５３３７６）の１〜２行に、及び溶液２を１１〜１２行（それぞれ、陽性及び陰性対照）に分注する。
３．２００μＬの溶液１をＡ行３〜１０列に分注する。
４．次に、１００μＬの溶液２をＢ〜Ｈ行３〜１０列に分注する。
５．ＤＭＳＯ中の４μＬの１０ｍＭ 試験化合物をＡ行３〜１０列に添加し、１：２の連続希釈をＡ〜Ｈ行３〜１０列に行う。
６．最終的に、すべてのウェル中の１００μＬの溶液４を分注する。反応を開始する。
７．室温で５分間プレートを維持し、次いでＦｌｕｏｒｏｓｋａｎ Ａｓｃｅｎｔ ＦＬ，Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ上で、吸光度（励起４８５ｎｍ、発光５３８ｎｍ）で読み込む。
１．ミトコンドリアを新たに単離し、試薬の項にあるレシピに従って溶液を調製する。
２．１００μＬの溶液３を、９６ウェルの黒色アッセイプレート（Ｆａｌｃｏｎ ３５３３７６）の１〜２行に、及び溶液２を１１〜１２行（それぞれ、陽性及び陰性対照）に分注する。
３．２００μＬの溶液１をＡ行３〜１０列に分注する。
４．次に、１００μＬの溶液２をＢ〜Ｈ行３〜１０列に分注する。
５．ＤＭＳＯ中の４μＬの１０ｍＭ 試験化合物をＡ行３〜１０列に添加し、１：２の連続希釈をＡ〜Ｈ行３〜１０列に行う。
６．最終的に、すべてのウェル中の１００μＬの溶液４を分注する。反応を開始する。
７．室温で５分間プレートを維持し、次いでＦｌｕｏｒｏｓｋａｎ Ａｓｃｅｎｔ ＦＬ，Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ上で、吸光度（励起４８５ｎｍ、発光５３８ｎｍ）で読み込む。
注釈：
１００μＭ以下のＥＣ５０を示した化合物は、このアッセイにおいて活性であると定義される。
一次スクリーニングの不活性と確認スクリーニング段階の不活性の違いを単純化するために、Ｔｉｅｒｅｄ Ａｃｔｉｖｉｔｙ Ｓｃｏｒｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍを開発し、実施した。
１００μＭ以下のＥＣ５０を示した化合物は、このアッセイにおいて活性であると定義される。
一次スクリーニングの不活性と確認スクリーニング段階の不活性の違いを単純化するために、Ｔｉｅｒｅｄ Ａｃｔｉｖｉｔｙ Ｓｃｏｒｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍを開発し、実施した。
活性スコアリング：
活性スコアリング規則は、化合物の有効性、データを得たアッセイ及びスクリーニング段階によるその干渉可能性を考慮に入れて考案された。スコアリングシステムの詳細は、他の箇所で刊行されるであろう。簡潔に言えば、アッセイのために用いられたスコアリングシステムの概要は、以下の通りである：
１）第１の段階（０〜４０の範囲）は、一次スクリーニングデータに確保されており、このアッセイに適用できない。
２）第２の段階（４１〜８０の範囲）は、用量反応確認データに確保されており、このアッセイに適用できない。
３）第３の段階（８１〜１００の範囲）は、再合成された真陽性及びそれらのアナログに確保されている。
ａ．乾燥粉末から再生し、１００Ｍ超のＥＣ５０を有することができない化合物は、不活性であり、８１のスコア値を割り当てる。
ｂ．スコアは、化合物の有効性と線形的に相関し、加えて、化合物が入手可能な情報に基づいてアーチファクトではないという一定の尤度を提供する。Ｈｉｌｌ係数は、さらなる倍率ＱＣを介してアッセイにおいて、化合物挙動の尺度として投与される：
ＱＣ＝２．６＊［ｅｘｐ（−０．５＊ｎＨ；２）−ｅｘｐ（−１．５＊ｎＨ；２）］
この実験的因子は、アッセイにおいて、標的または経路に特異的な化合物効果対その非特異的な挙動の尤度を割り当てる。この因子は、アッセイにおいて平衡を達成した単一の作用機序による化合物が、１のＨｉｌｌ係数値を実証し得るという期待値に基づいている。その挙動から逸脱している化合物は、それらの相違の度合いに比例的に罰せられる。
ｃ．スコアは、以下の方程式を用いて計算される：
スコア＝８２＋３＊（ｐＩＣ５０−３）＊ＱＣ、
式中、ｐＩＣ５０は、モル／Ｌの濃度単位で表されるＩＣ５０値の負の対数（１０）であり、ＱＣは、上述のように、Ｈｉｌｌ係数を用いて計算される。この方程式は、アッセイにおいて、高力価及び予測可能な挙動を示す化合物について、８５を上回るスコア値をもたらす。
活性スコアリング規則は、化合物の有効性、データを得たアッセイ及びスクリーニング段階によるその干渉可能性を考慮に入れて考案された。スコアリングシステムの詳細は、他の箇所で刊行されるであろう。簡潔に言えば、アッセイのために用いられたスコアリングシステムの概要は、以下の通りである：
１）第１の段階（０〜４０の範囲）は、一次スクリーニングデータに確保されており、このアッセイに適用できない。
２）第２の段階（４１〜８０の範囲）は、用量反応確認データに確保されており、このアッセイに適用できない。
３）第３の段階（８１〜１００の範囲）は、再合成された真陽性及びそれらのアナログに確保されている。
ａ．乾燥粉末から再生し、１００Ｍ超のＥＣ５０を有することができない化合物は、不活性であり、８１のスコア値を割り当てる。
ｂ．スコアは、化合物の有効性と線形的に相関し、加えて、化合物が入手可能な情報に基づいてアーチファクトではないという一定の尤度を提供する。Ｈｉｌｌ係数は、さらなる倍率ＱＣを介してアッセイにおいて、化合物挙動の尺度として投与される：
ＱＣ＝２．６＊［ｅｘｐ（−０．５＊ｎＨ；２）−ｅｘｐ（−１．５＊ｎＨ；２）］
この実験的因子は、アッセイにおいて、標的または経路に特異的な化合物効果対その非特異的な挙動の尤度を割り当てる。この因子は、アッセイにおいて平衡を達成した単一の作用機序による化合物が、１のＨｉｌｌ係数値を実証し得るという期待値に基づいている。その挙動から逸脱している化合物は、それらの相違の度合いに比例的に罰せられる。
ｃ．スコアは、以下の方程式を用いて計算される：
スコア＝８２＋３＊（ｐＩＣ５０−３）＊ＱＣ、
式中、ｐＩＣ５０は、モル／Ｌの濃度単位で表されるＩＣ５０値の負の対数（１０）であり、ＱＣは、上述のように、Ｈｉｌｌ係数を用いて計算される。この方程式は、アッセイにおいて、高力価及び予測可能な挙動を示す化合物について、８５を上回るスコア値をもたらす。
試験化合物濃度の関数としてｍｔＰＴＰ開口の傾向を評価する、カルシウム保持能力アッセイ（ＳＡＲアッセイＡＩＤ番号７４３３６０）
試薬の一覧：
アッセイ緩衝液：２５０ｍＭ スクロース、１０ｍＭ ＭＯＰＳ−Ｔｒｉｓ、０．０１ｍＭ ＥＧＴＡ−Ｔｒｉｓ、１．０ｍＭ リン酸−Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．４。
溶液１．アッセイ緩衝液中の１０ｍＭ グルタミン酸塩及び５ｍＭ リンゴ酸塩。
溶液２．溶液２中の１％ ＤＭＳＯ。
溶液３．アッセイ緩衝液中の０．５ｍｇ／ｍＬのミトコンドリア及び１．０μＭ Ｃａｌｃｉｕｍ Ｇｒｅｅｎ−５Ｎ。
溶液４．０．２５ｍＭ ＣａＣｌ２。
試薬の一覧：
アッセイ緩衝液：２５０ｍＭ スクロース、１０ｍＭ ＭＯＰＳ−Ｔｒｉｓ、０．０１ｍＭ ＥＧＴＡ−Ｔｒｉｓ、１．０ｍＭ リン酸−Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．４。
溶液１．アッセイ緩衝液中の１０ｍＭ グルタミン酸塩及び５ｍＭ リンゴ酸塩。
溶液２．溶液２中の１％ ＤＭＳＯ。
溶液３．アッセイ緩衝液中の０．５ｍｇ／ｍＬのミトコンドリア及び１．０μＭ Ｃａｌｃｉｕｍ Ｇｒｅｅｎ−５Ｎ。
溶液４．０．２５ｍＭ ＣａＣｌ２。
プロトコルの概要：
１．ミトコンドリアを新たに単離し、試薬の項にあるレシピに従って溶液を調製する。
２．１００μＬの溶液２を、９６ウェルの黒色アッセイプレート（Ｆａｌｃｏｎ ３５３３７６）の１〜２行（陰性対照）に分注する。
３．２００μＬの溶液１を、Ａ行３〜１２列に分注する。
４．次に、１００μＬの溶液２をＢ〜Ｈ行３〜１２列に分注する。
５．ＤＭＳＯ中の４μＬの５ｍＭ 試験化合物を、Ａ行３〜１２列に添加し、１：２の連続希釈をＡ〜Ｈ行３〜１２列に行う。
６．最終的に、すべてのウェル中の１００μＬの溶液３を分注する。
７．実験を開始する。Ｃａｌｃｉｕｍ Ｇｒｅｅｎ−５Ｎ蛍光（励起４８５ｎｍ、発光５３８ｎｍ）を読み込み、Ｆｌｕｏｒｏｓｋａｎ Ａｓｃｅｎｔ ＦＬ，Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃを用いて、一連の４μＬの溶液４の添加を行う。
１．ミトコンドリアを新たに単離し、試薬の項にあるレシピに従って溶液を調製する。
２．１００μＬの溶液２を、９６ウェルの黒色アッセイプレート（Ｆａｌｃｏｎ ３５３３７６）の１〜２行（陰性対照）に分注する。
３．２００μＬの溶液１を、Ａ行３〜１２列に分注する。
４．次に、１００μＬの溶液２をＢ〜Ｈ行３〜１２列に分注する。
５．ＤＭＳＯ中の４μＬの５ｍＭ 試験化合物を、Ａ行３〜１２列に添加し、１：２の連続希釈をＡ〜Ｈ行３〜１２列に行う。
６．最終的に、すべてのウェル中の１００μＬの溶液３を分注する。
７．実験を開始する。Ｃａｌｃｉｕｍ Ｇｒｅｅｎ−５Ｎ蛍光（励起４８５ｎｍ、発光５３８ｎｍ）を読み込み、Ｆｌｕｏｒｏｓｋａｎ Ａｓｃｅｎｔ ＦＬ，Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃを用いて、一連の４μＬの溶液４の添加を行う。
注釈：
１２．５μＭで１．１を上回るＣＲＣ／ＣＲＣ０を示した化合物は、このアッセイにおいて活性であると定義される。
１２．５μＭで１．１を上回るＣＲＣ／ＣＲＣ０を示した化合物は、このアッセイにおいて活性であると定義される。
透過化細胞のカルシウム保持能力
細胞成長及び透過化：
ＨｅＬａ及びＭＥＦ細胞を、１０％のウシ胎仔血清及び１％のペニシリン−ストレプトマイシンの存在下で、ダルベッコ改変イーグル培地（Ｇｉｂｃｏ）中で４８時間培養して、７０〜８０％のコンフルエンシーを得た。実験日に、細胞を収穫し、１３０ｍＭ ＫＣｌ、１０ ＭＯＰＳ−Ｔｒｉｓ、１ｍＭ リン酸−Ｔｒｉｓ、１ｍＭ ＥＧＴＡ−Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．４中で２０００万／ｍＬまで懸濁し、１００μＭ ジギトニン（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ）で１０分間氷上で処理して、細胞膜を透過化した。次いで、細胞を２回洗浄し、１００μＭ ＥＧＴＡ−Ｔｒｉｓを使用することを除いて、上の緩衝液中で再懸濁した。
細胞成長及び透過化：
ＨｅＬａ及びＭＥＦ細胞を、１０％のウシ胎仔血清及び１％のペニシリン−ストレプトマイシンの存在下で、ダルベッコ改変イーグル培地（Ｇｉｂｃｏ）中で４８時間培養して、７０〜８０％のコンフルエンシーを得た。実験日に、細胞を収穫し、１３０ｍＭ ＫＣｌ、１０ ＭＯＰＳ−Ｔｒｉｓ、１ｍＭ リン酸−Ｔｒｉｓ、１ｍＭ ＥＧＴＡ−Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．４中で２０００万／ｍＬまで懸濁し、１００μＭ ジギトニン（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ）で１０分間氷上で処理して、細胞膜を透過化した。次いで、細胞を２回洗浄し、１００μＭ ＥＧＴＡ−Ｔｒｉｓを使用することを除いて、上の緩衝液中で再懸濁した。
試薬の一覧：
アッセイ緩衝液：１３０ｍＭ ＫＣｌ、１０ ＭＯＰＳ−Ｔｒｉｓ、１ｍＭ リン酸−Ｔｒｉｓ、１０μＭ ＥＧＴＡ−Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．４
溶液１．アッセイ緩衝液中の１０ｍＭ グルタミン酸塩及び５ｍＭ リンゴ酸塩。
溶液２．溶液２中の１％ ＤＭＳＯ。
溶液３．アッセイ緩衝液中の８００万／ｍＬの細胞及び１．０μＭ Ｃａｌｃｉｕｍ Ｇｒｅｅｎ−５Ｎ。
溶液４．０．５ｍＭ ＣａＣｌ２。
アッセイ緩衝液：１３０ｍＭ ＫＣｌ、１０ ＭＯＰＳ−Ｔｒｉｓ、１ｍＭ リン酸−Ｔｒｉｓ、１０μＭ ＥＧＴＡ−Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．４
溶液１．アッセイ緩衝液中の１０ｍＭ グルタミン酸塩及び５ｍＭ リンゴ酸塩。
溶液２．溶液２中の１％ ＤＭＳＯ。
溶液３．アッセイ緩衝液中の８００万／ｍＬの細胞及び１．０μＭ Ｃａｌｃｉｕｍ Ｇｒｅｅｎ−５Ｎ。
溶液４．０．５ｍＭ ＣａＣｌ２。
プロトコルの概要：
１．上の取扱説明書に従って、細胞を収穫し、透過する。
２．１００μＬの溶液２を、９６ウェルの黒色アッセイプレート（Ｆａｌｃｏｎ ３５３３７６）の１〜２行（陰性対照）に分注する。
３．２００μＬの溶液１を、Ａ行３〜１２列に分注する。
４．次に、１００μＬの溶液２をＢ〜Ｈ行３〜１２列に分注する。
５．ＤＭＳＯ中の４μＬの５ｍＭ 試験化合物を、Ａ行３〜１２列に添加し、１：２の連続希釈をＡ〜Ｈ行３〜１２列に行う。
６．最終的に、すべてのウェル中の１００μＬの溶液３を分注する。
７．実験を開始する。Ｃａｌｃｉｕｍ Ｇｒｅｅｎ−５Ｎ蛍光（励起４８５ｎｍ、発光５３８ｎｍ）を読み込み、Ｆｌｕｏｒｏｓｋａｎ Ａｓｃｅｎｔ ＦＬ，Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃを用いて、一連の４μＬの溶液４の添加を行う。
１．上の取扱説明書に従って、細胞を収穫し、透過する。
２．１００μＬの溶液２を、９６ウェルの黒色アッセイプレート（Ｆａｌｃｏｎ ３５３３７６）の１〜２行（陰性対照）に分注する。
３．２００μＬの溶液１を、Ａ行３〜１２列に分注する。
４．次に、１００μＬの溶液２をＢ〜Ｈ行３〜１２列に分注する。
５．ＤＭＳＯ中の４μＬの５ｍＭ 試験化合物を、Ａ行３〜１２列に添加し、１：２の連続希釈をＡ〜Ｈ行３〜１２列に行う。
６．最終的に、すべてのウェル中の１００μＬの溶液３を分注する。
７．実験を開始する。Ｃａｌｃｉｕｍ Ｇｒｅｅｎ−５Ｎ蛍光（励起４８５ｎｍ、発光５３８ｎｍ）を読み込み、Ｆｌｕｏｒｏｓｋａｎ Ａｓｃｅｎｔ ＦＬ，Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃを用いて、一連の４μＬの溶液４の添加を行う。
ＨｅＬａ細胞生存アッセイ
ＨｅＬａ細胞を、９６ウェルプレート中で１８００個の細胞／ウェルで播種し、０．７８μＭ〜２００μＭの範囲で、９点の２倍希釈系列を上回って、化合物で７２時間処理した。処理の７２時間後、相対生存細胞数は、ＰｒｏｍｅｇａからのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ ９６（登録商標）ＡＱｕｅｏｕｓ Ｏｎｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ａｓｓａｙを用いて決定した。各化合物の処理を、８つの複製で行われ、１６の複製でＤＭＳＯを処理し、後者は、陽性対照として役立った。
ＨｅＬａ細胞を、９６ウェルプレート中で１８００個の細胞／ウェルで播種し、０．７８μＭ〜２００μＭの範囲で、９点の２倍希釈系列を上回って、化合物で７２時間処理した。処理の７２時間後、相対生存細胞数は、ＰｒｏｍｅｇａからのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ ９６（登録商標）ＡＱｕｅｏｕｓ Ｏｎｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ａｓｓａｙを用いて決定した。各化合物の処理を、８つの複製で行われ、１６の複製でＤＭＳＯを処理し、後者は、陽性対照として役立った。
生理化学アッセイ及びインビトロ薬物動態特性アッセイのための実験的手順
水溶解性：９６ウェル形式で直接ＵＶ動力学的溶解度法を用いて溶解分析を行った。すべての液体分注及び移動ステップは、Ｆｒｅｅｄｏｍ Ｅｖｏ自動化液体ハンドラー（Ｔｅｃａｎ ＵＳ）を用いて行われた。溶解度測定は、水性緩衝溶液（Ｓｙｓｔｅｍ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ、ｐＩＯＮ Ｉｎｃ，Ｐ／Ｎ １１０１５１）中で、ｐＨ５．０、６．２、及び７．４で二つ組で行った。試料を室温で最低１８時間インキュベートして、平衡を達成し、次いで、濾過し（フィルタプレート、ｐＩＯＮ Ｉｎｃ，Ｐ／Ｎ １１０３２２）、形成されたいかなる沈殿物も除去した。化合物の濃度は、Ｉｎｆｉｎｉｔｅ Ｍ２００（Ｔｅｃａｎ ＵＳ）を用いて、ＵＶ吸光度（２５０〜４９８ｎｍ）によって測定し、沈殿物のない参照溶液のスペクトルと比較した。分光的に純粋な１−プロパノール（Ｓｉｇｍａ Ｐ／Ｎ ２５６４０４）を共溶媒として使用して、参照溶液中の沈殿を抑えた。各化合物の溶解度は、μＳＯＬ Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ Ｐｌｕｓソフトウェアｖ３．２（ｐＩＯＮ Ｉｎｃ）を用いて決定され、飽和溶液中の溶質の濃度（μｇ／ｍＬ）として表される。
水溶解性：９６ウェル形式で直接ＵＶ動力学的溶解度法を用いて溶解分析を行った。すべての液体分注及び移動ステップは、Ｆｒｅｅｄｏｍ Ｅｖｏ自動化液体ハンドラー（Ｔｅｃａｎ ＵＳ）を用いて行われた。溶解度測定は、水性緩衝溶液（Ｓｙｓｔｅｍ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ、ｐＩＯＮ Ｉｎｃ，Ｐ／Ｎ １１０１５１）中で、ｐＨ５．０、６．２、及び７．４で二つ組で行った。試料を室温で最低１８時間インキュベートして、平衡を達成し、次いで、濾過し（フィルタプレート、ｐＩＯＮ Ｉｎｃ，Ｐ／Ｎ １１０３２２）、形成されたいかなる沈殿物も除去した。化合物の濃度は、Ｉｎｆｉｎｉｔｅ Ｍ２００（Ｔｅｃａｎ ＵＳ）を用いて、ＵＶ吸光度（２５０〜４９８ｎｍ）によって測定し、沈殿物のない参照溶液のスペクトルと比較した。分光的に純粋な１−プロパノール（Ｓｉｇｍａ Ｐ／Ｎ ２５６４０４）を共溶媒として使用して、参照溶液中の沈殿を抑えた。各化合物の溶解度は、μＳＯＬ Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ Ｐｌｕｓソフトウェアｖ３．２（ｐＩＯＮ Ｉｎｃ）を用いて決定され、飽和溶液中の溶質の濃度（μｇ／ｍＬ）として表される。
アッセイの詳細：
・ジクロフェナクナトリウム及びジピリダモールを標準物質として使用した。ジクロフェナクナトリウムは、高溶解性である。ジピリダモールは、低度から中等度の溶解性である。
・標準及び試験化合物ストックは、１００％ ＤＭＳＯ中で作製された
・標準物質のアッセイ濃度：５００μＭ、及び試験化合物のアッセイ濃度：３００μＭ
・沈殿物を抑えるために参照溶液中で使用された共溶媒：１−プロパノール
・アッセイＤＭＳＯ最終濃度：１％
・ジクロフェナクナトリウム及びジピリダモールを標準物質として使用した。ジクロフェナクナトリウムは、高溶解性である。ジピリダモールは、低度から中等度の溶解性である。
・標準及び試験化合物ストックは、１００％ ＤＭＳＯ中で作製された
・標準物質のアッセイ濃度：５００μＭ、及び試験化合物のアッセイ濃度：３００μＭ
・沈殿物を抑えるために参照溶液中で使用された共溶媒：１−プロパノール
・アッセイＤＭＳＯ最終濃度：１％
水及びチオール安定性：化合物は、１：１のＡＣＮ：ＰＢＳ中で、１０μＭで溶解し、陰性対照としてチオール源のない、５０μＭ グルタチオン（ＧＳＨ）、または５０μＭ ジチオスレイトール（ＤＴＴ）のいずれかで室温でインキュベートした。混合物を８時間毎時間、または８８時間毎８時間サンプル化し、ＲＰ ＨＰＬＣ／ＵＶ／ＨＲＭＳによって分析した。アッセイのために使用された分析的ＲＰ ＨＰＬＣＵＶ／ＨＲＭＳシステムは、ＵＶ検出及び質量検出（Ｗａｔｅｒｓ ＳＱＤ）を伴うＷａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙシステムであった。分析的方法条件は、Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＨＳＳ Ａｔｌａｎｔｉｓ Ｃ１８カラム（２．１×５０ｍｍ、１．８ｕｍ）を含み、９９％ 水から１００％ ＣＨ３ＣＮの線形勾配で０．６ｍＬ／分の流速で溶出した。２１４ｎｍのクロマトグラフでのピークを、Ｗａｔｅｒｓ ＯｐｅｎＬｙｎｘソフトウェアを用いて積分した。曲線下の絶対面積を各時点で比較して、残りの化合物の相対的パーセントを決定した。潜在的付加物の質量を最終試料中で検査して、何らかの検出可能な付加物が形成されたかどうかを判定した。すべての試料は、二つ組で調製し、平均をプロットした。既知のＭｉｃｈａｅｌアクセプターであるエタクリン酸は、陽性対照として使用された。
血漿安定性：ヒト血漿（ＢｉｏＣｈｅｍｅｄ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，Ｐ／Ｎ ７５２ＰＲ−ＥＫ３−ＰＭＧ）中の化合物の安定性を決定した。すべての液体分注及び移動ステップは、Ｆｒｅｅｄｏｍ Ｅｖｏ自動化液体ハンドラー（Ｔｅｃａｎ ＵＳ）を用いて行われた。血漿を、血漿：１Ｘ ＰＢＳ（１：１）のアッセイ溶液を調製する前に、室温で解凍した。アッセイ溶液を、化合物を添加する前に、３７℃まで加温した。化合物を添加した直後に、０分でのアリコートを直ちに収集し、冷アセトニトリルで混合した（内部標準物質でスパイクした）。反応体積の残りを振とうしながら３７℃でインキュベートした。さらなるアプリコートを、反応の開始から１８０分後に収集し、冷アセトニトリルで直ちに反応停止した（内部標準物質でスパイクした）。試料を３０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。上清中の化合物の量を、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｓｃｉｅｘ ＡＰＩ４０００ Ｑ−Ｔｒａｐ）によって決定し、１８０分後、残りの親化合物の割合を、以下の式によって計算した：
報告された結果は、二つ組の各反応の平均であり、内部標準物質に対して正規化し、インキュベーション時間後に、残りの化合物の割合として表される。
アッセイの詳細：
・Ｋ３ ＥＤＴＡ中のヒト血漿
・プロカイン及びプロカインアミドを標準物質として使用した。プロカインは、ヒト血漿中で高度に不安定であり、プロカインアミドは、ヒト血漿中で高度に安定である。
・標準物質及び試験化合物のアッセイ濃度：１μＭ
・インキュベーション時間：３時間
・反応ｐＨ：７．４
・アッセイＤＭＳＯ最終濃度：２．５％
・Ｋ３ ＥＤＴＡ中のヒト血漿
・プロカイン及びプロカインアミドを標準物質として使用した。プロカインは、ヒト血漿中で高度に不安定であり、プロカインアミドは、ヒト血漿中で高度に安定である。
・標準物質及び試験化合物のアッセイ濃度：１μＭ
・インキュベーション時間：３時間
・反応ｐＨ：７．４
・アッセイＤＭＳＯ最終濃度：２．５％
肝ミクロソーム安定性：代謝的安定性を、ヒト肝臓ミクロソーム（ＸｅｎｏＴｅｃｈ，Ｐ／Ｎ Ｈ０６３０）及びマウス肝臓ミクロソーム（ＸｅｎｏＴｅｃｈ，Ｐ／Ｎ Ｍ１０００）の存在下で評価した。すべての液体分注及び移動ステップは、Ｆｒｅｅｄｏｍ Ｅｖｏ自動化液体ハンドラー（Ｔｅｃａｎ ＵＳ）を用いて行われた。ＣＹＰ４５０代謝に必要とされる補因子であるＮＡＤＰＨは、ＮＡＤＰＨ再生系、溶液Ａ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｐ／Ｎ ４５１２２０）及びＢ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｐ／Ｎ ４５１２００）によって提供された。化合物ストック溶液を、初めに、１００％ ＤＭＳＯ中に調製し、続いて、アッセイのためにアセトニトリル中で希釈した。反応のｐＨを、リン酸カリウム緩衝液（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｐ／Ｎ ４５１２０１）を用いて約７．４で維持した。ミクロソーム及び化合物を含む反応プレートにＮＡＤＰＨを添加した後に、反応を開始し、０分でのアリコートを直ちに収集し、氷冷アセトニトリルで混合し（内部標準物質でスパイクし）、反応物を反応停止処理した。反応体積の残りを振とうしながら３７℃でインキュベートした。さらなるアプリコートを、反応の開始から６０分後に収集し、氷冷アセトニトリルで直ちに反応停止した（内部標準物質でスパイクした）。試料を３０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。上清中の化合物の量を、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｓｃｉｅｘ ＡＰＩ４０００ Ｑ−Ｔｒａｐ）によって決定し、６０分後、残りの親化合物の割合を、以下の方程式によって計算した：
単一反応として行われた陰性対照（ＮＡＤＰＨなし）を除いて、すべての反応は三つ組で実行された。報告された結果は、三つ組の各反応の平均であり、内部標準物質に対して正規化し、インキュベーション時間後に、残りの化合物の割合として表される。
アッセイの詳細：
・ヒト及びマウス肝臓ミクロソーム：０．５ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度
・ＮＡＤＰＨ再生系：１．５５ｍＭ ＮＡＤＰ＋、１．３３ｍＭ グルコース−６−リン酸塩、１．３３ｍＭ 塩化マグネシウム、及び０．４Ｕ／ｍＬ グルコース−６リン酸塩脱水素酵素
・インキュベーション温度：３７℃
・インキュベーション時間：６０分
・標準物質：ベラパミル−ＨＣｌ及びテストステロンをそれぞれ、２０μＭ及び５０μＭ
・１μＭで試験化合物
・アッセイＤＭＳＯ最終濃度：≦０．５％
・アッセイＡＣＮ最終濃度：≦１．２％
・ヒト及びマウス肝臓ミクロソーム：０．５ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度
・ＮＡＤＰＨ再生系：１．５５ｍＭ ＮＡＤＰ＋、１．３３ｍＭ グルコース−６−リン酸塩、１．３３ｍＭ 塩化マグネシウム、及び０．４Ｕ／ｍＬ グルコース−６リン酸塩脱水素酵素
・インキュベーション温度：３７℃
・インキュベーション時間：６０分
・標準物質：ベラパミル−ＨＣｌ及びテストステロンをそれぞれ、２０μＭ及び５０μＭ
・１μＭで試験化合物
・アッセイＤＭＳＯ最終濃度：≦０．５％
・アッセイＡＣＮ最終濃度：≦１．２％
細胞透過性：透過性を、９６ウェル形式で、並行人工膜透過性アッセイ（ＰＡＭＰＡ）を用いて評価した。すべての液体分注及び移動ステップは、Ｆｒｅｅｄｏｍ Ｅｖｏ自動化液体ハンドラー（Ｔｅｃａｎ ＵＳ）を用いて行われた。測定は、２０％ ＡＣＮ及び水性緩衝溶液（Ｓｙｓｔｅｍ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ，ｐＩＯＮ Ｉｎｃ，Ｐ／Ｎ １１０１５１）中で、ｐＨ５．０、６．２、及び７．４で二つ組で行った。ドナー底プレート及びアクセプターフィルタプレートからなる「サンドイッチ」プレート（ｐＩＯＮ Ｉｎｃ，Ｐ／Ｎ １１０２１２）を使用した。ドナーウェルは、１８０μｌのシステム溶液中に化合物、及び磁気撹拌棒を含んだ。各アクセプターウェルの底面のフィルタを、ＧＩＴ−０脂質（ｐＩＯＮ Ｉｎｃ，Ｐ／Ｎ １１０６６９）でコーティングし、界面活性剤を含む２００μｌのＡｃｃｅｐｔｏｒ Ｓｉｎｋ Ｂｕｆｆｅｒ、ｐＨ７．４（ｐＩＯＮ Ｉｎｃ，Ｐ／Ｎ １１０１３９）で充填して、血清タンパク質の機能を模倣した。透過時間は、３０分間であり、穏やかな撹拌（４０μｍの水性境界層の厚さに相当する）を、Ｇｕｔ−Ｂｏｘ（商標）（ｐＩＯＮ，Ｉｎｃ，Ｐ／Ｎ １１０２０５）を用いて適用した。透過時間後、このサンドイッチを分解し、ドナー及びアクセプターウェルの両方に存在する化合物の量を、Ｉｎｆｉｎｉｔｅ Ｍ２００（Ｔｅｃａｎ ＵＳ）を用いて、ＵＶ吸光度（２５０〜４９８ｎｍ）によって測定し、参照標準物質から得られたスペクトルと比較した。質量平衡を使用して、膜フィルタ中に埋め込まれた物質の量を決定した。有効透過率Ｐｅを、ソフトウェアＰＡＭＰＡ Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ Ｐｌｕｓ、バージョン３．２（ｐＩＯＮ Ｉｎｃ）を用いて計算した。
アッセイの詳細：
・ベラパミルＨＣｌ、メトプロロール、及びラニチジンを参照標準物質として使用した。
・ベラパミルＨＣｌは、高透過性であると見なされる。
・メトプロロールは、中等度の透過性であると見なされる。
・ラニチジンは、低透過性であると見なされる。
・透過時間：３０分
・穏やかな撹拌（４０μｍ ＡＢＬ（水性境界層）相当、不撹拌水層としても知られている）
・ドナー緩衝液のｐＨ：５．０、６．２、及び７．４
・Ｄｏｕｂｌｅ−Ｓｉｎｋ：ドナー区画とアクセプター区画との間のｐＨ勾配、アクセプター緩衝液は、化学的シンクを含有する
・アッセイＤＭＳＯ最終濃度：０．５％
・ベラパミルＨＣｌ、メトプロロール、及びラニチジンを参照標準物質として使用した。
・ベラパミルＨＣｌは、高透過性であると見なされる。
・メトプロロールは、中等度の透過性であると見なされる。
・ラニチジンは、低透過性であると見なされる。
・透過時間：３０分
・穏やかな撹拌（４０μｍ ＡＢＬ（水性境界層）相当、不撹拌水層としても知られている）
・ドナー緩衝液のｐＨ：５．０、６．２、及び７．４
・Ｄｏｕｂｌｅ−Ｓｉｎｋ：ドナー区画とアクセプター区画との間のｐＨ勾配、アクセプター緩衝液は、化学的シンクを含有する
・アッセイＤＭＳＯ最終濃度：０．５％
血液脳関門を通る膜透過性：透過性を、血液脳関門を通る受動輸送のためのインビトロモデルＢＢＢ−ＰＡＭＰＡを用いて評価した。このために、９６ウェル形式で、並行人工膜透過性アッセイ（ＰＡＭＰＡ）を使用した。すべての液体分注及び移動ステップは、Ｆｒｅｅｄｏｍ Ｅｖｏ自動化液体ハンドラー（Ｔｅｃａｎ ＵＳ）を用いて行われた。測定は、水性緩衝溶液（Ｓｙｓｔｅｍ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ，ｐＩＯＮ Ｉｎｃ，Ｐ／Ｎ １１０１５１）中で、ｐＨ７．４で四重に行った。ドナー底プレート及びアクセプターフィルタプレートからなる「サンドイッチ」プレート（ｐＩＯＮ Ｉｎｃ，Ｐ／Ｎ １１０２１２）を使用した。ドナーウェルは、１８０μｌのシステム溶液中に化合物、及び磁気撹拌棒を含む。各アクセプターウェルの底面のフィルタを、ＢＢＢ−１脂質溶液（ｐＩＯＮ Ｉｎｃ，Ｐ／Ｎ １１０６７２）でコーティングし、界面活性剤も含む２００μｌのＢｒａｉｎ Ｓｉｎｋ緩衝液、ｐＨ７．４（ｐＩＯＮ Ｉｎｃ，Ｐ／Ｎ １１０６７４）で充填する。透過時間は、６０分間である。穏やかな撹拌（４０μｍの水性境界層の厚さに相当する）を、Ｇｕｔ−Ｂｏｘ（商標）（ｐＩＯＮ，Ｉｎｃ，Ｐ／Ｎ １１０２０５）を用いて適用する。透過時間後、このサンドイッチを分解し、ドナー及びアクセプターウェルの両方に存在する化合物の量を、Ｉｎｆｉｎｉｔｅ Ｍ２００（Ｔｅｃａｎ ＵＳ）を用いて、ＵＶ吸光度（２５０〜４９８ｎｍ）で測定し、参照標準物質から得られたスペクトルと比較する。質量平衡を使用して、膜フィルタ中に埋め込まれた物質の量を決定する。有効透過率Ｐｅを、ソフトウェアＰＡＭＰＡ Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ Ｐｌｕｓ、バージョン３．２（ｐＩＯＮ Ｉｎｃ）を用いて計算する。計算された有効透過率Ｐｅは、動的パラメータ（センチメートル／秒）として表される。数が大きいほどより高速であることを示し、したがって、透過性が大きいことを示す。ＬｏｇＰｅは、しばしば、透過性を報告するために使用され、Ｐｅに反比例し、それ故に、ＬｏｇＰｅ値が小さいほど、透過性が大きいことを示す。
アッセイの詳細：
・ベラパミル−ＨＣｌ、コルチコステロン、及びテオフィリンを、参照標準物質として使用する：ベラパミル−ＨＣｌは、高透過性であると見なされ、コルチコステロンは、中等度の透過性であると見なされ、テオフィリンは、低透過性であると見なされる。
・透過時間：６０分
・穏やかな撹拌（４０μｍ ＡＢＬ（水性境界層）相当、不撹拌水層としても知られている）
・ドナー緩衝液ｐＨ：７．４、アクセプター緩衝液ｐＨ：７．４
・アッセイＤＭＳＯ最終濃度：０．５％
・ベラパミル−ＨＣｌ、コルチコステロン、及びテオフィリンを、参照標準物質として使用する：ベラパミル−ＨＣｌは、高透過性であると見なされ、コルチコステロンは、中等度の透過性であると見なされ、テオフィリンは、低透過性であると見なされる。
・透過時間：６０分
・穏やかな撹拌（４０μｍ ＡＢＬ（水性境界層）相当、不撹拌水層としても知られている）
・ドナー緩衝液ｐＨ：７．４、アクセプター緩衝液ｐＨ：７．４
・アッセイＤＭＳＯ最終濃度：０．５％
血漿タンパク質結合：Ｔｅｆｌｏｎ（登録商標）ベースのプレートウェルを、２０％ エタノールで１０分間すすいだ。次いで、エタノールを除去し、ウェルを超純水ですすぎ、乾燥させた。Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｐｉｅｒｃｅ）からのＲＥＤ挿入物を、ベースプレートのウェルに置いた（最終的には開口した）。すべての液体分注及び移動ステップは、Ｆｒｅｅｄｏｍ Ｅｖｏ自動化液体ハンドラー（Ｔｅｃａｎ ＵＳ）を用いて行われた。試料チャンバ（赤色環）は、血漿と化合物の混合物を３００μｌ含んだ。５００μｌの透析緩衝液（１Ｘ ＰＢＳ、ｐＨ７．４）を、この挿入物の緩衝液チャンバに添加した。試験した各濃度について、二つ組で挿入を行った。ベースプレートを、ガムテープで覆い、オービタルシェーカー上で、３７℃で３００ｒｐｍで４時間インキュベートした。インキュベーション時間後に、両チャンバから等体積を取り出し、血漿または緩衝液のいずれかを含む９６ウェルプレートに移した。タンパク質を沈殿し、化合物を放出するために、氷冷アセトニトリル（内部標準物質を有する）を添加した。試料を、３０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。上清中の化合物の量を、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｓｃｉｅｘ ＡＰＩ４０００ Ｑ−Ｔｒａｐ）によって決定した。遊離及び結合化合物の割合を、以下の方程式で計算した：
報告された結果は、二つ組の各反応の平均であり、内部標準物質に対して正規化し、インキュベーション時間後に、結合した化合物の割合として表される。
アッセイの詳細：
・Ｋ３ ＥＤＴＡ中のヒト血漿
・プロパノロール及びメトプロロールを標準物質として使用した。プロパノロールは、高度に結合し、メトプロロールは、低結合する。
・標準物質及び試験化合物のアッセイ濃度：１μＭ及び１０μＭ
・インキュベーション時間：４時間
・反応ｐＨ：７．４
・アッセイＤＭＳＯ最終濃度：１％
・Ｋ３ ＥＤＴＡ中のヒト血漿
・プロパノロール及びメトプロロールを標準物質として使用した。プロパノロールは、高度に結合し、メトプロロールは、低結合する。
・標準物質及び試験化合物のアッセイ濃度：１μＭ及び１０μＭ
・インキュベーション時間：４時間
・反応ｐＨ：７．４
・アッセイＤＭＳＯ最終濃度：１％
細胞毒性：不死化ヒト肝細胞、Ｆａ２Ｎ−４細胞（ＸｅｎｏＴｅｃｈ）を約５６，０００個の細胞／ウェルで播種し、ある濃度範囲（０．０１〜５０μＭ）の試験化合物と、３７℃で５％ ＣＯ２で２４時間、二つ組でインキュベートした。細胞生存率を、Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ ＡＴＰ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ａｓｓａｙ Ｓｙｓｔｅｍ（ＡＴＰｌｉｔｅ １ステップ、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ、番号＃６０１６７３１）及びＩｎｆｉｎｉｔｅ Ｍ２００プレートリーダー（Ｔｅｃａｎ）を用いて、細胞ＡＴＰレベルによって決定した。
アッセイの詳細：
・使用した細胞：Ｆａ２Ｎ−４、不死化ヒト肝細胞
・Ｆａ２Ｎ−４細胞のために使用した培地：ＭＦＥ Ｐｌａｔｉｎｇ及びＭＦＥ Ｓｕｐｐｏｒｔ（１％ ペニシリン、ストレプトマイシン、及びアンホテルシンの混合物を含む）
・アッセイＤＭＳＯ最終濃度＝０．５％
・処理時間：２４時間
・カンプトテシン及びテルフェナジンを標準物質として使用した。カンプトテシンは、高度に毒性であり、テルフェナジンは、高度に非毒性である。
・使用した細胞：Ｆａ２Ｎ−４、不死化ヒト肝細胞
・Ｆａ２Ｎ−４細胞のために使用した培地：ＭＦＥ Ｐｌａｔｉｎｇ及びＭＦＥ Ｓｕｐｐｏｒｔ（１％ ペニシリン、ストレプトマイシン、及びアンホテルシンの混合物を含む）
・アッセイＤＭＳＯ最終濃度＝０．５％
・処理時間：２４時間
・カンプトテシン及びテルフェナジンを標準物質として使用した。カンプトテシンは、高度に毒性であり、テルフェナジンは、高度に非毒性である。
生物学的結果
以下のものは、前述のアッセイから表にまとめた生物学的結果であり、値は、標準誤差（ＳＥＭ）を有する少なくとも３つの実験にわたる平均、すなわち、「平均±標準誤差」として得られる。
以下のものは、前述のアッセイから表にまとめた生物学的結果であり、値は、標準誤差（ＳＥＭ）を有する少なくとも３つの実験にわたる平均、すなわち、「平均±標準誤差」として得られる。
（表１）イソオキサゾール及びベンズアミドカルシウム保持能力、ミトコンドリアの膨張、及びローダミン１２３（Ｒｈ１２３）の取り込み
（表２）さらなる実施例におけるカルシウム保持能力、ミトコンドリアの膨張、及びローダミン１２３（Ｒｈ１２３）の取り込み
注釈：データは、３つを上回る実験の平均±標準誤差である。
エクソン９ ｃｏｌ６ａ１ モルファントゼブラフィッシュに存在する欠陥における本技術の化合物の効果
ゼブラフィッシュ及び胚の維持。成熟ゼブラフィッシュを、標準プロトコルに従って、通気した２８．５℃条件下の塩水を含む、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｐａｄｏｖａの施設において維持した。魚を１４時間の光−１０時間の暗サイクル下で保持した。交尾のために、雄及び雌を夕方前に分離し、それらを開放して、翌朝求愛行動を開始させ、産卵及び受精で終了した。卵を収集し、魚水（０．５ｍＭ ＮａＨ２ＰＯ４、０．５ｍＭ ＮａＨＰＯ４、０．２ｍｇ／Ｌ メチレンブルー、３ｍｇ／Ｌ ｉｎｓｔａｎｔ ｏｃｅａｎ）で洗浄し、胚を２８．５℃で維持した。ゼブラフィッシュについてのすべてのプロトコル及び操作は、Ｃ．Ｂ．Ｋｉｍｍｅｌ，Ｗ．Ｗ．Ｂａｌｌａｒｄ，Ｓ．Ｒ．Ｋｉｍｍｅｌ，Ｂ．Ｕｌｌｍａｎｎ，Ｔ．Ｆ．Ｓｃｈｉｌｌｉｎｇ，Ｄｅｖ．Ｄｙｎ．１９９５，２０３，２５３−３１０において記載されるように行われた。
ゼブラフィッシュ及び胚の維持。成熟ゼブラフィッシュを、標準プロトコルに従って、通気した２８．５℃条件下の塩水を含む、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｐａｄｏｖａの施設において維持した。魚を１４時間の光−１０時間の暗サイクル下で保持した。交尾のために、雄及び雌を夕方前に分離し、それらを開放して、翌朝求愛行動を開始させ、産卵及び受精で終了した。卵を収集し、魚水（０．５ｍＭ ＮａＨ２ＰＯ４、０．５ｍＭ ＮａＨＰＯ４、０．２ｍｇ／Ｌ メチレンブルー、３ｍｇ／Ｌ ｉｎｓｔａｎｔ ｏｃｅａｎ）で洗浄し、胚を２８．５℃で維持した。ゼブラフィッシュについてのすべてのプロトコル及び操作は、Ｃ．Ｂ．Ｋｉｍｍｅｌ，Ｗ．Ｗ．Ｂａｌｌａｒｄ，Ｓ．Ｒ．Ｋｉｍｍｅｌ，Ｂ．Ｕｌｌｍａｎｎ，Ｔ．Ｆ．Ｓｃｈｉｌｌｉｎｇ，Ｄｅｖ．Ｄｙｎ．１９９５，２０３，２５３−３１０において記載されるように行われた。
モルフォリノ注射。ゼブラフィッシュにおいてドミナントネガティブなＵＣＭＤまたはＢＭの表現型を再現するために、Ｗ．Ｒ．Ｔｅｌｆｅｒ，Ａ．Ｓ．Ｂｕｓｔａ，Ｃ．Ｇ．Ｂｏｎｎｅｍａｎｎ，Ｅ．Ｌ．Ｆｅｌｄｍａｎ，Ｊ．Ｊ．Ｄｏｗｌｉｎｇ，Ｈｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．２０１０，１９，２４３３−２４４４及びＡ．Ｚｕｌｉａｎ，Ｅ．Ｒｉｚｚｏ，Ｍ．Ｓｃｈｉａｖｏｎｅ，Ｅ．Ｐａｌｍａ，Ｆ．Ｔａｇｌｉａｖｉｎｉ，Ｂ．Ｂｌａａｕｗ，Ｌ．Ｍｅｒｌｉｎｉ，Ｎ．Ｍ．Ｍａｒａｌｄｉ，Ｐ．Ｓａｂａｔｅｌｌｉ，Ｐ．Ｂｒａｇｈｅｔｔａ，Ｐ．Ｂｏｎａｌｄｏ，Ｆ．Ａｒｇｅｎｔｏｎ，Ｐ．Ｂｅｒｎａｒｄｉ，Ｈｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．２０１４，２３，５３５３−５３６３において記載されるように、ゼブラフィッシュｃｏｌ６ａ１遺伝子のエクソン９を標的にするエクソン９モルフォリノを使用した。エクソン９、ｃｏｌ６ａ１：
（ＧｅｎｅＴｏｏｌｓ，Ｉｎｃ．）。ゼブラフィッシュゲノムにおける配列相同性がない、対照モルフォリノを使用した。野生型ゼブラフィッシュの対交配後に単離された胚に、ＷＰＩ 空気式ＰｉｃｏＰｕｍｐ ＰＶ８２０注射器を用いて、１〜２の細胞段階で注射した。モルフォリノを、胚当たり約４ｎｇに対応する０．１ｍＭの濃度で注射した。
化合物処理。モルファント胚を、２０ｈｐｆに脱コリオン化し、次いで、２１ｈｐｆに化合物６０（上にＫＳＣ−３９２−１１６と称される）で処理した。化合物６０を以下に例示する。
未処理モルファント及び野生型胚を対照として使用した。化合物６０を５及び１０μＭで使用し、１％ ＤＭＳＯを含む魚水中で溶解した。ビヒクル対照処理は、１％ ＤＭＳＯを含む魚水からなった。２４及び４８ｈｐｆに、胚における化合物効果の分析を、記載されるように行った。
運動活性。２４ｈｐｆに、光学顕微鏡検査法を用いて単一胚における１５秒間でのコイリング事象の数を観察することによって、自発性コイリング速度を記録した。４８ｈｐｆに、小さな先端で体に接触した後に幼生が逃避する能力を観察することによって、タッチ誘発逃避反応を測定した。逃避するそれらの能力に従って、胚を４つの群に再分類した：麻痺して運動する能力がない；コイリング事象のみを示す；軽度の運動障害を有する胚；または魚水中を泳ぐ正常な胚。これらは、それぞれ、０、１、２、または３のスコアを割り当てた。統計学的分析は、各実験的条件での平均スコアで行われた。
複屈折アッセイ。４８ｈｐｆにトリカイン麻酔胚において、筋繊維異方性を利用して筋肉の複屈折を測定した。それは、Ｌｅｉｃａ Ｍ１６５ＦＣ立体顕微鏡上で２つの偏光フィルタを用いて測定した。簡潔に言えば、麻酔胚を、スライドガラス上に置き、筋肉の光屈折を、２つの偏光フィルタを用いることによって分析した。第１のフィルタは、試料を照射するために偏光を生成し、分析器と呼ばれる第２の偏光フィルタは、筋繊維から屈折される光の角度を計算する。特に、上部の偏光フィルタは、筋肉を通して屈折する光が立体顕微鏡を通して見えるまで、９０°の角度に向きを変えられた。複屈折の統合面積を、Ｊ．Ｂｅｒｇｅｒ，Ｔ．Ｓｚｔａｌ，Ｐ．Ｄ．Ｃｕｒｒｉｅ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２０１２，４２３，７８５−７８８において開示される、ＩｍａｇｅＪソフトウェアを用いることによって計算した。２×１０６以上の複屈折値（野生型個体に典型的である）は、正常として評価され、１．９×１０６〜０．６×１０６の値は、軽度の疾患の兆候として考えられ、０．６×１０６以下の値は、重度のミオパチーの兆候として評価された。統計学的分析は、各実験的条件での平均複屈折値で行われた。
統計学的分析。対照と化合物処理試料との差は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ（Ｗｉｎｄｏｗｓについては、バージョン５．１）を用いてボンフェローニ補正を有する一元配置ＡＮＯＶＡ試験によって決定した。データは、少なくとも５つの独立した実験（各条件についてｎ＝５２）の平均を表す。ＳＥＭ；図１については、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１。図２については、異なる条件での群間の比較を、χ２試験及びボンフェローニ補正を有する一元配置ＡＮＯＶＡを用いて行った；＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１。図３については、使用した胚の総数は、各条件についてｎ＝３５である；χ２試験及びボンフェローニ補正を有する一元配置ＡＮＯＶＡによって決定されるように、＊ｐ＜０．０５、＊＊＊ｐ＜０．００１。
図１及び２に表されるように、エクソン９モルフォリノで注射された胚の８７％は、対照胚と比較して重度の運動障害を示した。対照的に、化合物６０で処理し、魚水に単に添加したエクソン９モルファントは、自発的コイリング事象（図１）またはタッチ誘発反応（図２）で示される運動機能において劇的な改善を示した。
構造筋肉組織を評価するために、４８ｈｐｆに筋肉の複屈折を評価した。この技法は、筋ジストロフィーのゼブラフィッシュモデルにおいて筋肉構造の欠陥を評価する。筋肉の複屈折は、筋繊維異方性を利用して分析された。図３中に見られ得るように、エクソン９モルファントは、対照と比較して重度の筋肉の欠陥を示し、これらの欠陥は、化合物６０による処理後に、大いに緩和した。実際には、複屈折スコアの合計は、化合物６０による処理が筋肉の欠陥の大幅な回復を生じたことを示した（ＡＮＯＶＡ、ｐ＜０．０５）。
ｍｔＰＴＰ依存性筋ジストロフィーのマウスモデルアッセイは、本技術の化合物の治療効果を示す
コラーゲンＶＩの欠如に関連し、持続的ｍｔＰＴＰ開口をもたらす、重度の遺伝学的筋肉障害は、オーソロガスコラーゲンＶＩ遺伝子の遺伝子除去を通してマウスにおいて有効に模倣され得る。重要なことには、ヒト及びマウスの両方において、欠陥は、シクロスポリンＡ（ＣｓＡ）、及びサイクロフィリンＤ（ＣｙＰＤ）を阻害するＣｓＡ誘導体、及びひいてはｍｔＰＴＰによる処理によって好転し得る。ここで、マウスにおける薬物動態研究後に、これらの筋ジストロフィーのマウスモデルは、本技術の化合物の治療効果を示すのに使用されるであろう。
コラーゲンＶＩの欠如に関連し、持続的ｍｔＰＴＰ開口をもたらす、重度の遺伝学的筋肉障害は、オーソロガスコラーゲンＶＩ遺伝子の遺伝子除去を通してマウスにおいて有効に模倣され得る。重要なことには、ヒト及びマウスの両方において、欠陥は、シクロスポリンＡ（ＣｓＡ）、及びサイクロフィリンＤ（ＣｙＰＤ）を阻害するＣｓＡ誘導体、及びひいてはｍｔＰＴＰによる処理によって好転し得る。ここで、マウスにおける薬物動態研究後に、これらの筋ジストロフィーのマウスモデルは、本技術の化合物の治療効果を示すのに使用されるであろう。
背景：細胞の表面での固着及び接着複合体は、細胞骨格を周辺の細胞外マトリックスに結合し、そのため、細胞完全性及び細胞シグナル変換を維持する。これらの接着構造は、骨格筋のような大規模な機械的ストレスを受けている組織において重要な役割を担う。それ故に、これらの接着複合体における遺伝子の欠陥が、ある特定のヒト筋ジストロフィーを引き起こすことは何ら驚くことではない。一例として、コラーゲンＶＩ（ＣｏｌＶＩ）は、筋原線維細胞外マトリックスの不可欠な要素であり、ＣｏｌＶＩにおける突然変異は、２つの主なヒト疾患である、ウルリッヒ型先天性筋ジストロフィー（ＵＣＭＤ）及びベスレムミオパチー（ＢＭ）１、２をもたらす。ＵＣＭＤは、重度の筋ジストロフィーであり、劣勢疾患１、３として区別される。ＢＭは、軽度のミオパチーであり、対照的に、通常、ドミナントネガティブ機構４、５を通して病状を生じる優性突然変異に関連している。マウスＣｏｌ６ａ１遺伝子６のノックアウトによって生じるマウスは、ＵＣＭＤ７の既知のモデルである。同型劣性動物は、ＵＣＭＤ患者７、８において観察される欠陥を綿密に模倣する表現型を示す。例えば、ヒト及びマウスの両方において、筋繊維は、刺激後に、それらの正常なプロトン勾配を損失する膨張／拡張したミトコンドリアを有し、これは正常な繊維のミトコンドリアには影響を及ぼさない。これらのミトコンドリア機能障害は、不適切なｍｔＰＴＰの活性化７、９が起源である欠陥を示す。これと一致して、ヒト及びマウスにおける薬学的な（ＣｓＡ及びＤｅｂｉｏ０２５またはＮＩＭ８１１等の非免疫抑制誘導体）１０〜１３ｍｔＰＴＰの阻害、またはＣｙＰＤをコードするマウス遺伝子の除去１４のｍｔＰＴＰの阻害は、ミトコンドリアの変化を改善し、筋原線維細胞死を低減することが示されている。
ｍｔＰＴＰ依存性筋ジストロフィーのマウスモデルにおける試験：本技術の化合物は、本技術の化合物の様々な濃度（例えば、５ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ等）に加えて、ビヒクルのＩＰ注射によって試験されるであろう。概して、使用される技法及び分析は、ＣｓＡのＩＰ注射、及びＣｓＡの非免疫抑制誘導体（例えば、ＮＩＭ８１１及びＤｅｂｉｏ０２５）が、これらの突然変異動物１０、１１に存在する筋肉の欠陥に有効に対抗することができる。いずれの場合にも、マウスは、最長５日間、阻害剤またはビヒクルを１日２回投与されるであろう。各アッセイにおいて、対照ＷＴ、ＣｏｌＶＩ−ヌル、及び各誘導体で処理されたＣｏｌＶＩ−ヌルマウスとの間の差が記録されるであろう。すべての場合において、データは少なくとも４匹の動物から生成されて平均±標準誤差として表され、不対スチューデントｔ−検定で分析されよう。
本技術の化合物による筋肉収縮力の奪還：上で概説されるマウス（Ｎ≧１５）の筋肉片［特に、横隔膜及び短指屈筋（ＦＤＢ）］における強縮（最大）、単収縮張力、及び緩和時間が評価されるであろう。典型的には、ＣｏｌＶＩの喪失は、ＷＴ対照と比較して、収縮力（ｍＮ／ｍｍ２として測定される）の劇的な喪失をもたらす。したがって、本技術の化合物による処理は、ＣｏｌＶＩ−ヌルマウスと比較した場合に、収縮力を著しく復元するか、または筋力を完全に復元するであろうと予想される。簡潔に言えば、細長片（幅１〜２ｍｍ）が調製され、酸素化クレブス溶液中で、力変換器と極微操作装置で制御されたシャフトとの間に２５℃で実装されよう。次いで、細長片の長さは、強縮時の力の発生が最大になるまで増加されるであろう。次いで、非融合または融合された強縮を生成する様々な速度での単一刺激（単収縮）または一連の刺激への反応が、記録されよう。断面積は、重量から計算されよう。
ＣｏｌＶＩ−ヌル筋繊維中のミトコンドリア機能障害における本技術の化合物の効果：処理されたＣｏｌＶＩ−ヌル動物におけるｍｔＰＴＰ機能の初期評価は、本技術の化合物を同定し、かつ特徴付けるために使用されるＣＲＣアッセイによるものであろう。最終の注射から５時間後、肝臓及び筋肉ホモジネートからミトコンドリアが調製され、ミトコンドリア調製物のＣＲＣは、Ｃａｌｃｉｕｍ Ｇｒｅｅｎ ５Ｎの存在下で、一連のＣａ２＋パルスの適用によって蛍光定量的に評価されよう。ｍｔＰＴＰの活性化における閾値は、ｍｔＰＴＰ開口に必要とされるパルスの数に基づいて決定され、ＣＲＣ／ＣＲＣｍａｘの評価によって統計学的に比較されよう。Ｄｅｂｉｏ０２５により処理された動物と同様に、本技術の化合物により処理されたＣｏｌＶＩ−ヌル肝臓及び筋肉ミトコンドリアにおけるｍｔＰＴＰ開口に対する閾値が、ビヒクルを注射した対照ＣｏｌＶＩ−ヌル動物１１と比較して、増加するであろうと予測される。ＣｏｌＶＩ−ヌル動物の処理における本技術の化合物の有効性を評価するために、分極ミトコンドリアにおいて蓄積し膜電位が低下すると放出されるプローブであるテトラメチルローダミンメチルエステル（ＴＭＲＭ）のミトコンドリア蛍光に基づいて、ミトコンドリア膜貫通電位（ΔΨｍ）がインサイチューで決定されよう。ＣｏｌＶＩ−ヌル動物からのＦＤＢ繊維への、Ｆ−ＡＴＰシンターゼの阻害剤であるオリゴマイシンの添加は、ＴＭＲＭミトコンドリア蛍光の劇的な減少をもたらすが、対照的に、ＷＴ動物から調製された繊維は、ＴＭＲＭ蛍光の急激な変化を示さないはずである。ＣｏｌＶＩ−ヌル筋繊維におけるオリゴマイシンによって明らかになったミトコンドリア機能障害が、ｍｔＰＴＰの不適切な活性化に基づくことが示されている７。ＣｏｌＶＩ−ヌル繊維中のこの異常な脱分極反応は、逆に作用するＦ−ＡＴＰシンターゼに起因し、ｍｔＰＴＰベースの表現型について予想されるように、ＣｓＡまたはＣｓＡ誘導体による処理によって補正されることが示されている７、８、１０、１１。したがって、ＣｏｌＶＩ−ヌル繊維中のこの筋肉ミトコンドリアの欠損の本技術の化合物による奪還が評価されよう。簡潔に言えば、ＦＤＢ筋原線維は、ガラス製カバースリップ上に置かれ、当該技術分野で記載されるように培養され、ミトコンドリアが２０ｎＭ ＴＭＲＭによるインキュベーションにより負荷され、ビヒクルまたは阻害剤の存在下で、オリゴマイシン（６μＭ）の適用に対する対照ＷＴ及びＣｏｌＶＩ−ヌル繊維の反応が記録されよう。オリゴマイシンの添加において脱分極する（少なくとも６匹のマウスからの）繊維の割合が、プールされ、統計的有意性が決定されよう。本技術の化合物による処理が、ＣｏｌＶＩ−ヌル繊維の大部分においてオリゴマイシンの適用における脱分極を正規化するであろうと予想される。
ミトコンドリア微細構造の欠陥及び筋肉細胞アポトーシスにおける本技術の化合物の効果−電子顕微鏡分析は、ＣｏｌＶＩ−ヌル動物からの筋原線維中のミトコンドリアが、ＷＴ筋原線維中のミトコンドリア及び（アポトーシス核の数によって評価されるように）アポトーシスレベルの増加と比較した場合に、ｍｔＰＴＰ開口の典型的な特徴である、著しい膨張を示すことを実証している。本技術の化合物による処理の効果が、当該技術分野で記載されるこれらのｍｔＰＴＰ反応の両方に観察されよう７、８、１０、１１。対照ＷＴ、ＣｏｌＶＩ−ヌル、及び処理されたＣｏｌＶＩ−ヌルマウスからのＦＤＢ繊維は、グルタルアルデヒドで固定され、Ｅｐｏｎ Ｅ８１２樹脂中に埋め込まれるであろう。極薄切片が調製され、酢酸ウラニル及びクエン酸鉛で染色され、電子顕微鏡によって観察されるであろう。ミトコンドリア構造が改変した繊維の割合（クリステの崩壊を有する膨張したミトコンドリア、少なくとも３匹のマウス及び３００の個々の切片からの平均）が、本技術の化合物で処理されたＣｏｌＶＩ−ヌル動物において著しく減弱するであろうことが予想される。同様に、アポトーシス核の数は、ビヒクルで処理されたＷＴ、ＣｏｌＶＩ−ヌル、及び本技術の化合物で処理されたＣｏｌＶＩ−ヌルマウスの横隔膜から調製された７ｕＭ厚さの切片のＴＵＮＥＬアッセイによって決定されよう。ＴＵＮＥＬ−陽性核の総数は、ランダムに選択された繊維中で市販のキット（例えば、ＡｐｏＴａｇ）によって決定され、核の総数は、Ｈｏｅｃｈｓｔ染色による染色後に、光源レベルの顕微鏡によって決定されよう。
参考文献：
再灌流傷害に対する心筋機能及び反応における本技術の化合物の効果
この実施例において、本技術の化合物の虚血／再灌流（ＩＲ）損傷を防ぐ能力が評価されよう。
この実施例において、本技術の化合物の虚血／再灌流（ＩＲ）損傷を防ぐ能力が評価されよう。
改変されたＬａｎｇｅｎｄｏｒｆｆモデル
Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆｆ齧歯動物心臓モデルは、損傷に対する心筋機能及び反応（例えば、虚血）の研究において幅広く使用される。全心臓研究のために、雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（７〜９週齢）に、ペントバルビタールを注射し（３５ｍ／ｋｇ、腹腔内注射）、正中線開胸術によって心臓を切除する。大動脈は、改変Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆｆ装置のカニューレ周辺に固定され、１１８ ＮａＣｌ、２４ ＮａＨＣＯ３、４．７５ ＫＣｌ、１．２ ＫＨ２ＰＯ４、１．２ ＭｇＳＯ４、２．０ ＣａＣｌ２、及び１０ グルコース（９５／５％ Ｏ２／ＣＯ２で麻酔）を（ｍＭ単位で）含有する改変Ｋｒｅｂｓ−Ｈｅｎｓｅｌｅｉｔ緩衝液を用いて、逆行的に灌流されよう（７５ｍｍ Ｈｇの灌流圧）。心臓は、実験の期間中、３７℃で維持された緩衝液が充填された灌流チャンバ中で水浴されよう。灌流の開始後、心臓は、機械的及び電気的機能の同時観察のために機器を装着されるであろう。デジタル圧力計を用いて、各日の開始時に較正された、緩衝液が充填されたラテックス製バルーン（サイズ５，Ｈａｒｖａｒｄ Ａｐｐａｒａｔｕｓ，Ｈｏｌｌｉｓｔｏｎ，ＭＡ，ＵＳＡ）が、左心室によって発生した圧力（ＬＶＤＰ）の測定のために、（僧帽弁を介して）左心室に挿入され、バルーン容量が５〜８ｍｍ Ｈｇの拡張期血圧を確立するように調節されるであろう。３つの電極は、体積伝導心電図（ＥＣＧ）の測定のために緩衝液が充填された灌流チャンバに設置されよう。冠状動脈の流量は、灌流ラインと直列に接続されるフロープローブ（Ｔｒａｎｓｃｏｎｉｃ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｔｈａｃａ，ＮＹ，ＵＳＡ）で常にモニタリングされ、各実験の終わりに心臓湿重量（グラム単位で）に正規化されるであろう。すべての生理学的パラメータは、市販のソフトウェア（例えば、Ｃｈａｒｔ，ＡＤ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｃｏｌｏｒａｄｏ Ｓｐｒｉｎｇｓ，ＣＯ，ＵＳＡ）を用いて、継続的にモニタリングされ、パソコンで保存されよう。心拍数は、ＬＶＤＰ出力を用いて計算され、収縮及び弛緩の最大速度（±ｄＰ／ｄｔ）は、ＬＶＤＰ出力の誘導体を用いて計算されるであろう。
Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆｆ齧歯動物心臓モデルは、損傷に対する心筋機能及び反応（例えば、虚血）の研究において幅広く使用される。全心臓研究のために、雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（７〜９週齢）に、ペントバルビタールを注射し（３５ｍ／ｋｇ、腹腔内注射）、正中線開胸術によって心臓を切除する。大動脈は、改変Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆｆ装置のカニューレ周辺に固定され、１１８ ＮａＣｌ、２４ ＮａＨＣＯ３、４．７５ ＫＣｌ、１．２ ＫＨ２ＰＯ４、１．２ ＭｇＳＯ４、２．０ ＣａＣｌ２、及び１０ グルコース（９５／５％ Ｏ２／ＣＯ２で麻酔）を（ｍＭ単位で）含有する改変Ｋｒｅｂｓ−Ｈｅｎｓｅｌｅｉｔ緩衝液を用いて、逆行的に灌流されよう（７５ｍｍ Ｈｇの灌流圧）。心臓は、実験の期間中、３７℃で維持された緩衝液が充填された灌流チャンバ中で水浴されよう。灌流の開始後、心臓は、機械的及び電気的機能の同時観察のために機器を装着されるであろう。デジタル圧力計を用いて、各日の開始時に較正された、緩衝液が充填されたラテックス製バルーン（サイズ５，Ｈａｒｖａｒｄ Ａｐｐａｒａｔｕｓ，Ｈｏｌｌｉｓｔｏｎ，ＭＡ，ＵＳＡ）が、左心室によって発生した圧力（ＬＶＤＰ）の測定のために、（僧帽弁を介して）左心室に挿入され、バルーン容量が５〜８ｍｍ Ｈｇの拡張期血圧を確立するように調節されるであろう。３つの電極は、体積伝導心電図（ＥＣＧ）の測定のために緩衝液が充填された灌流チャンバに設置されよう。冠状動脈の流量は、灌流ラインと直列に接続されるフロープローブ（Ｔｒａｎｓｃｏｎｉｃ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｔｈａｃａ，ＮＹ，ＵＳＡ）で常にモニタリングされ、各実験の終わりに心臓湿重量（グラム単位で）に正規化されるであろう。すべての生理学的パラメータは、市販のソフトウェア（例えば、Ｃｈａｒｔ，ＡＤ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｃｏｌｏｒａｄｏ Ｓｐｒｉｎｇｓ，ＣＯ，ＵＳＡ）を用いて、継続的にモニタリングされ、パソコンで保存されよう。心拍数は、ＬＶＤＰ出力を用いて計算され、収縮及び弛緩の最大速度（±ｄＰ／ｄｔ）は、ＬＶＤＰ出力の誘導体を用いて計算されるであろう。
虚血／再灌流プロトコル及び化合物処理
１０分のベースライン期間後、虚血／再灌流を開始するであろう。心臓は、再灌流を２０分間停止することによって全体的な無血流虚血（ｎｏ−ｆｌｏｗ ｉｓｃｈｅｍｉａ）に曝露されよう。インデックス虚血の終了時に、灌流ラインからの静的緩衝液を、（大動脈カテーテルの近位にあるアクセサリーポートを介して）洗い流し、再灌流が、Ｋｒｅｂｓ緩衝液のみ（対照）、または所定濃度の本技術の化合物を含有するＫｒｅｂｓ緩衝液のいずれかを用いて２時間続けられるであろう。再灌流の終了時に、左心室を切開し、５ｍｍの厚さの薄片にスライスし、１％ 塩化トリフェニルテトラゾリウム（ＴＴＣ）中で１０分間（３７℃）インキュベートし、その後の梗塞面積分析のためにデジタル写真処理した。梗塞面積は、左心室の割合（リスク領域（ＡＡＲ）の割合（％））（ＩｍａｇｅＪソフトウェア（ＮＩＨ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，ＵＳＡ）を用いて計算された）として表されるであろう。
１０分のベースライン期間後、虚血／再灌流を開始するであろう。心臓は、再灌流を２０分間停止することによって全体的な無血流虚血（ｎｏ−ｆｌｏｗ ｉｓｃｈｅｍｉａ）に曝露されよう。インデックス虚血の終了時に、灌流ラインからの静的緩衝液を、（大動脈カテーテルの近位にあるアクセサリーポートを介して）洗い流し、再灌流が、Ｋｒｅｂｓ緩衝液のみ（対照）、または所定濃度の本技術の化合物を含有するＫｒｅｂｓ緩衝液のいずれかを用いて２時間続けられるであろう。再灌流の終了時に、左心室を切開し、５ｍｍの厚さの薄片にスライスし、１％ 塩化トリフェニルテトラゾリウム（ＴＴＣ）中で１０分間（３７℃）インキュベートし、その後の梗塞面積分析のためにデジタル写真処理した。梗塞面積は、左心室の割合（リスク領域（ＡＡＲ）の割合（％））（ＩｍａｇｅＪソフトウェア（ＮＩＨ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，ＵＳＡ）を用いて計算された）として表されるであろう。
結果は、本技術の化合物による処理が、梗塞面積及びＬＶＤＰを著しく減少させ、かつ／または収縮及び弛緩の最大速度（±ｄＰ／ｄｔ）を増加させることを示すことが予想される。それ故に、結果は、本技術の化合物がそれを必要とする対象における心臓の虚血／再灌流を予防または治療するために有用であることを示すことが予想される。
いくつかの実施形態が例示され、記載されているが、当業者は、前述の明細書を読解した後、本明細書に記載される、本技術の化合物または塩、薬学的組成物、誘導体、プロドラッグ、代謝物、互変異性体、またはこれらのラセミ混合物に対する変化、同等物の置換、及び変更の他の種類に影響を及ぼし得る。上述の各態様及び実施形態はまた、いずれかの、またはすべての他の態様及び実施形態に関して開示されるように、このような変形または態様と共に含まれるか、または組み込むこともできる。
本技術はまた、本技術の個々の態様の１つの説明のみとして意図され、本明細書に記載される特定の態様に関して限定されるべきでない。当業者には明らかであるように、本技術の多くの修飾及び変形が、その精神及び範囲から逸脱することなく、なされ得る。本明細書に列挙されるものに加えて、本技術の範囲内の機能的に同等の方法は、前述の記載から、当業者には明らかであろう。かかる修飾及び変形は、添付の特許請求の範囲に含まれることが意図される。本技術が、特定の方法、試薬、化合物、組成物、標識化合物、または生物系に限定されるものではなく、当然のことながら、これらは、変更することができることを理解されよう。また、本明細書に使用される専門用語は、特定の態様のみを説明するためだけのものであり、限定を意図しないことも理解されよう。したがって、本明細書は、添付の特許請求の範囲、それらの中の定義、及びこれらのいずれの同等物のみによって示される、本技術の広がり、範囲、及び精神により例示のみとして見なされるべきであることが意図される。
本明細書に例示的に記載される実施形態は、本明細書に具体的には開示されない、任意の要素（複数可）、限定（複数可）の不在下で好適に実施され得る。それ故に、例えば、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」等の用語は、限定されることなく、広義に捉えられるものとする。さらに、本明細書で使用される用語及び表現は、限定ではなく、説明の観点から使用されており、そのような用語及び表現の使用において、図示及び説明される特徴またはその一部のいずれの同等物も除外することを意図するものではないが、様々な変更が特許請求された技術の範囲内で可能であることが理解される。さらに、「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」という語句は、具体的に言及された要素及び特許請求された技術の基本的及び新規の特徴に実質的に影響を与えないさらなる要素を含むことが理解されよう。「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」という語句は、特定されないいかなる要素も含まない。
さらに、本開示の特性または態様が、マーカッシュ群に関して説明される場合、本開示がまたマーカッシュ群の任意の個々の要素または要素の部分集合に関しても説明されることが、当業者には理解されよう。一般開示に含まれるより狭い種及び亜属のグループの各々もまた、本技術の一部を形成する。これは、切り出し材料が本明細書に具体的に記載されているか否かにかかわらず、属から任意の対象物を取り除く条件付きでまたは否定的限定を有する本技術の一般的な記述を含む。
当業者によって理解されるように、ありとあらゆる目的のために、特に書面による説明を提供することに関して、本明細書に開示されるすべての範囲はまた、ありとあらゆる可能性のある部分的な範囲及びその部分的な範囲の組み合わせを包含する。少なくとも均一の２分の１、３分の１、４分の１、５分の１、１０分の１等に分けられた同じ範囲を十分に説明し、可能にしているため、記載した範囲のいずれかを容易に認識することができる。限定されない例として、本明細書で論じられるそれぞれの範囲を、下位の３分の１、中央の３分の１、及び上位の３分の１等へ容易に分けることができる。当業者によってさらに理解されるように、「以下の」、「少なくとも」、「を超える」、「未満」等のすべての用語は、上記に論じた通り、列挙した数を含み、部分的な範囲へ後に分けることができる範囲を指す。最後に、当業者によって理解される通り、範囲はそれぞれの個別のメンバーを含む。
本明細書において言及される、すべての刊行物、特許出願、交付済み特許、及び他の文献（定期刊行物、論文、及び／または教科書）は、各個々の刊行物、特許出願、交付済み特許、及び他の文献が参照によりそれらの全体が組み込まれることを具体的かつ個別的に示されるかのように、参照により本明細書に組み込まれる。参照により組み込まれる本文中に含有される定義は、それらが本開示の定義と矛盾する限りでは除外される。
他の実施形態は、そのような特許請求の範囲により与えられる同等物の全範囲と共に、添付の特許請求の範囲に説明されている。
一態様では、本技術は、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩を提供し、
式中、
Ｙ１及びＷ１が、それぞれ独立して、Ｏ、Ｎ、ＮＨ、ＮＲ６、Ｓ、ＣＨ、若しくはＣＲ７であるか、またはＹ１及びＷ１が、それぞれ独立して、ＣＲ８またはＮＲ８であり、ここで、Ｒ８がＹ１及びＷ１と結合して、アリール、ヘテロアリール、またはヘテロシクリル環を形成し、Ｚ１、Ｚ２、及びＺ３が、それぞれ独立して、ＣＨ、Ｃ−Ｒ９、またはＮであり、ｍが１または２であり、Ｇ１が、Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ、ＳＯ、またはＳＯ２であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ９が独立して、各出現時に、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルコキシ、アルキニル、アミノ、アミノスルフィニル、アミノスルホニル、スルフィニル、スルホニル、スルホニルオキシ、アミノスルホニルオキシ、アミノスルフィニルオキシ、アミノスルホニルアミノ、アシルアミノ、アミノカルボニルオキシ、アミノカルボニルアミノ、アミノチオカルボニルアミノ、アミノカルボニル、アシルオキシ、アリール、ヘテロアリール、シアノ、ニトロ、カルボキシル、カルボキシルエステル、（カルボキシルエステル）アミノ、（カルボキシルエステル）オキシ、アシル、若しくはホルミルであるか、または２つの隣接するＲ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ９が一緒になってアリール、ヘテロアリール、またはヘテロシクリル環を形成し、Ｒ３が、水素、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、またはアルキニルである。
Ｙ１及びＷ１が、それぞれ独立して、Ｏ、Ｎ、ＮＨ、ＮＲ６、Ｓ、ＣＨ、若しくはＣＲ７であるか、またはＹ１及びＷ１が、それぞれ独立して、ＣＲ８またはＮＲ８であり、ここで、Ｒ８がＹ１及びＷ１と結合して、アリール、ヘテロアリール、またはヘテロシクリル環を形成し、Ｚ１、Ｚ２、及びＺ３が、それぞれ独立して、ＣＨ、Ｃ−Ｒ９、またはＮであり、ｍが１または２であり、Ｇ１が、Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ、ＳＯ、またはＳＯ２であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ９が独立して、各出現時に、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルコキシ、アルキニル、アミノ、アミノスルフィニル、アミノスルホニル、スルフィニル、スルホニル、スルホニルオキシ、アミノスルホニルオキシ、アミノスルフィニルオキシ、アミノスルホニルアミノ、アシルアミノ、アミノカルボニルオキシ、アミノカルボニルアミノ、アミノチオカルボニルアミノ、アミノカルボニル、アシルオキシ、アリール、ヘテロアリール、シアノ、ニトロ、カルボキシル、カルボキシルエステル、（カルボキシルエステル）アミノ、（カルボキシルエステル）オキシ、アシル、若しくはホルミルであるか、または２つの隣接するＲ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ９が一緒になってアリール、ヘテロアリール、またはヘテロシクリル環を形成し、Ｒ３が、水素、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、またはアルキニルである。
一態様では、本技術は、式ＩＶの化合物またはその薬学的に許容される塩を提供し、
式中、
Ｙ２が、Ｏ、ＮＨ、ＮＲ２５、またはＳであり、
Ｗ２が、Ｎ、ＣＨ、またはＣＲ２６であり、Ｙ２がＮＲ２５であり、Ｗ２がＣＲ２６である場合、Ｒ２５及びＲ２６が、任意に、Ｙ２及びＷ２と結合して、アリール、ヘテロアリール、またはヘテロシクリル環を形成してもよく、
Ｚ４、Ｚ５、及びＺ６が、それぞれ独立して、ＣＨ、Ｃ−Ｒ２７、またはＮであり、
Ｒ２２、Ｒ２３、Ｒ２４、Ｒ２５、Ｒ２６、及びＲ２７が、独立して、各出現時に、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルコキシ、アルキニル、アミノ、アミノスルフィニル、アミノスルホニル、スルフィニル、スルホニル、スルホニルオキシ、アミノスルホニルオキシ、アミノスルフィニルオキシ、アミノスルホニルアミノ、アシルアミノ、アミノカルボニルオキシ、アミノカルボニルアミノ、アミノチオカルボニルアミノ、アミノカルボニル、アシルオキシ、アリール、ヘテロアリール、シアノ、ニトロ、カルボキシル、カルボキシルエステル、（カルボキシルエステル）アミノ、（カルボキシルエステル）オキシ、アシル、若しくはホルミルであるか、または２つのＲ２２、Ｒ２３、Ｒ２４、Ｒ２５、Ｒ２６、及びＲ２７が一緒になってアリール、ヘテロアリール、またはヘテロシクリル環を形成する。
Ｙ２が、Ｏ、ＮＨ、ＮＲ２５、またはＳであり、
Ｗ２が、Ｎ、ＣＨ、またはＣＲ２６であり、Ｙ２がＮＲ２５であり、Ｗ２がＣＲ２６である場合、Ｒ２５及びＲ２６が、任意に、Ｙ２及びＷ２と結合して、アリール、ヘテロアリール、またはヘテロシクリル環を形成してもよく、
Ｚ４、Ｚ５、及びＺ６が、それぞれ独立して、ＣＨ、Ｃ−Ｒ２７、またはＮであり、
Ｒ２２、Ｒ２３、Ｒ２４、Ｒ２５、Ｒ２６、及びＲ２７が、独立して、各出現時に、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルコキシ、アルキニル、アミノ、アミノスルフィニル、アミノスルホニル、スルフィニル、スルホニル、スルホニルオキシ、アミノスルホニルオキシ、アミノスルフィニルオキシ、アミノスルホニルアミノ、アシルアミノ、アミノカルボニルオキシ、アミノカルボニルアミノ、アミノチオカルボニルアミノ、アミノカルボニル、アシルオキシ、アリール、ヘテロアリール、シアノ、ニトロ、カルボキシル、カルボキシルエステル、（カルボキシルエステル）アミノ、（カルボキシルエステル）オキシ、アシル、若しくはホルミルであるか、または２つのＲ２２、Ｒ２３、Ｒ２４、Ｒ２５、Ｒ２６、及びＲ２７が一緒になってアリール、ヘテロアリール、またはヘテロシクリル環を形成する。
[本発明1001]
式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩：
式中、
Ｙ 1 及びＷ 1 が、それぞれ独立して、Ｏ、Ｎ、ＮＨ、ＮＲ 6 、Ｓ、ＣＨ、若しくはＣＲ 7 であるか、またはＹ 1 及びＷ 1 が、それぞれ独立して、ＣＲ 8 またはＮＲ 8 であり、ここで、Ｒ 8 が、Ｙ 1 及びＷ 1 と結合して、アリール、ヘテロアリール、またはヘテロシクリル環を形成し、
Ｚ 1 、Ｚ 2 、及びＺ 3 が、それぞれ独立して、ＣＨ、Ｃ−Ｒ 9 、またはＮであり、
ｍが、1または2であり、
Ｇ 1 が、Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ、ＳＯ、またはＳＯ 2 であり、
Ｒ 1 、Ｒ 2 、Ｒ 4 、Ｒ 5 、Ｒ 6 、Ｒ 7 、及びＲ 9 が、独立して、各出現時に、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルコキシ、アルキニル、アミノ、アミノスルフィニル、アミノスルホニル、スルフィニル、スルホニル、スルホニルオキシ、アミノスルホニルオキシ、アミノスルフィニルオキシ、アミノスルホニルアミノ、アシルアミノ、アミノカルボニルオキシ、アミノカルボニルアミノ、アミノチオカルボニルアミノ、アミノカルボニル、アシルオキシ、アリール、ヘテロアリール、シアノ、ニトロ、カルボキシル、カルボキシルエステル、（カルボキシルエステル）アミノ、（カルボキシルエステル）オキシ、アシル、若しくはホルミルであるか、または2つの隣接するＲ 1 、Ｒ 2 、Ｒ 4 、Ｒ 5 、Ｒ 6 、Ｒ 7 、及びＲ 9 が一緒になってアリール、ヘテテロアリール、若しくはヘテロシクリル環を形成し、
Ｒ 3 が、水素、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、またはアルキニルである。
[本発明1002]
前記式Ｉの化合物が、式ＩＩまたはＩＩＩの化合物またはその薬学的に許容される塩である、本発明1001の化合物：
式中、
Ｙ 1 が、Ｏ、ＮＨ、ＮＲ 6 、またはＳであり、
Ｗ 1 が、Ｎ、ＣＨ、またはＣＲ 7 であり、
Ｇ 2 が、Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ、ＳＯ、またはＳＯ 2 であり、
Ｒ 10 、Ｒ 11 、Ｒ 12 、Ｒ 13 、Ｒ 14 、Ｒ 15 、Ｒ 16 、Ｒ 17 、Ｒ 18 、及びＲ 19 が、独立して、各出現時に、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルコキシ、アルキニル、アミノ、アミノスルフィニル、アミノスルホニル、スルフィニル、スルホニル、スルホニルオキシ、アミノスルホニルオキシ、アミノスルフィニルオキシ、アミノスルホニルアミノ、アシルアミノ、アミノカルボニルオキシ、アミノカルボニルアミノ、アミノチオカルボニルアミノ、アミノカルボニル、アシルオキシ、アリール、ヘテロアリール、シアノ、ニトロ、カルボキシル、カルボキシルエステル、（カルボキシルエステル）アミノ、（カルボキシルエステル）オキシ、アシル、若しくはホルミルであるか、または2つの隣接するＲ 10 、Ｒ 11 、Ｒ 12 、Ｒ 13 、Ｒ 14 、Ｒ 15 、Ｒ 16 、Ｒ 17 、Ｒ 18 、及びＲ 19 が一緒になってアリール、ヘテテロアリール、またはヘテロシクリル環を形成し、
Ｒ 20 が、水素、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、またはアルキニルである。
[本発明1003]
Ｒ 1 、Ｒ 2 、Ｒ 4 、Ｒ 5 、Ｒ 6 、Ｒ 7 、Ｒ 9 、Ｒ 10 、Ｒ 11 、Ｒ 12 、Ｒ 13 、Ｒ 14 、Ｒ 15 、Ｒ 16 、Ｒ 17 、Ｒ 18 、及びＲ 19 が、独立して、各出現時に、水素、Ｃ 1 −Ｃ 8 アルキル、Ｃ 3 −Ｃ 8 シクロアルキル、Ｃ 1 −Ｃ 8 アルケニル、Ｃ 2 −Ｃ 8 アルキニル、アリール、シアノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシル、ホルミル、Ｃ 3 −Ｃ 7 ヘテロアリール、若しくはＣ 3 −Ｃ 7 ヘテロシクリルであるか、または2つの隣接するＲ 1 、Ｒ 2 、Ｒ 4 、Ｒ 5 、Ｒ 6 、Ｒ 7 、Ｒ 9 、Ｒ 10 、Ｒ 11 、Ｒ 12 、Ｒ 13 、Ｒ 14 、Ｒ 15 、Ｒ 16 、Ｒ 17 、Ｒ 18 、及び／またはＲ 19 が一緒になってアリール、ヘテテロアリール、またはヘテロシクリル環を形成する、本発明1001または本発明1002の化合物。
[本発明1004]
前記式ＩＩの化合物が、式ＩＩａの化合物またはその薬学的に許容される塩である、本発明1002の化合物：
式中、Ｒ 21 が、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、またはアルコキシである。
[本発明1005]
Ｒ 21 が、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、またはメトキシである、本発明1004の化合物。
[本発明1006]
Ｙ 1 がＯでありかつＷ 1 がＮであるか、またはＹ 1 がＮＨでありかつＷ 1 がＮである、本発明1002〜1005のいずれかの化合物。
[本発明1007]
Ｚ 1 がＣＨである、本発明1002〜1006のいずれかの化合物。
[本発明1008]
本発明1001の化合物と薬学的に許容される賦形剤とを含む、薬学的組成物。
[本発明1009]
前記式Ｉの化合物が、式ＩＩまたはＩＩＩの化合物またはその薬学的に許容される塩である、本発明1008の薬学的組成物：
式中、
Ｙ 1 が、Ｏ、ＮＨ、ＮＲ 6 、またはＳであり、
Ｗ 1 が、Ｎ、ＣＨ、またはＣＲ 7 であり、
Ｇ 2 が、Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ、ＳＯ、またはＳＯ 2 であり、
Ｒ 10 、Ｒ 11 、Ｒ 12 、Ｒ 13 、Ｒ 14 、Ｒ 15 、Ｒ 16 、Ｒ 17 、Ｒ 18 、及びＲ 19 が、独立して、各出現時に、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルコキシ、アルキニル、アミノ、アミノスルフィニル、アミノスルホニル、スルフィニル、スルホニル、スルホニルオキシ、アミノスルホニルオキシ、アミノスルフィニルオキシ、アミノスルホニルアミノ、アシルアミノ、アミノカルボニルオキシ、アミノカルボニルアミノ、アミノチオカルボニルアミノ、アミノカルボニル、アシルオキシ、アリール、ヘテロアリール、シアノ、ニトロ、カルボキシル、カルボキシルエステル、（カルボキシルエステル）アミノ、（カルボキシルエステル）オキシ、アシル、若しくはホルミルであるか、または2つの隣接するＲ 10 、Ｒ 11 、Ｒ 12 、Ｒ 13 、Ｒ 14 、Ｒ 15 、Ｒ 16 、Ｒ 17 、Ｒ 18 、及びＲ 19 が一緒になってアリール、ヘテテロアリール、またはヘテロシクリル環を形成し、
Ｒ 20 が、水素、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、またはアルキニルである。
[本発明1010]
前記式ＩＩの化合物が、式ＩＩａの化合物またはその薬学的に許容される塩である、本発明1009の薬学的組成物：
式中、Ｒ 21 が、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、またはアルコキシである。
[本発明1011]
多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、アルツハイマー病、ハンチントン病、パーキンソン病、インスリン誘発性低血糖症、脳虚血、癲癇または実験的外傷からの脳障害、ベスレムミオパチー、膵炎、肝炎、糖尿病性網膜症、筋ジストロフィー、心筋梗塞、及び／または卒中の治療で用いるためのものである、本発明1008〜1010のいずれかの薬学的組成物。
[本発明1012]
前記化合物が、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、虚血再灌流傷害、アルツハイマー病、ハンチントン病、パーキンソン病、インスリン誘発性低血糖症、脳虚血、癲癇または実験的外傷からの脳障害、ベスレムミオパチー、膵炎、肝炎（Ａ及び／若しくはＢ及び／若しくはＣ型）、ＩＩ型糖尿病、糖尿病性網膜症、筋ジストロフィー、外傷性脳損傷、心筋梗塞、ならびに／または卒中の治療のために有効な量で存在する、本発明1008〜1011のいずれかの薬学的組成物。
[本発明1013]
対象における疾患を治療するための方法であって、有効量の本発明1001の化合物、または有効量の本発明1001の化合物と薬学的に許容される賦形剤とを含む薬学的組成物を、前記対象に投与することを含み、前記疾患が、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、虚血再灌流傷害、アルツハイマー病、ハンチントン病、パーキンソン病、インスリン誘発性低血糖症、脳虚血、癲癇または実験的外傷からの脳障害、ベスレムミオパチー、膵炎、肝炎（Ａ及び／若しくはＢ及び／若しくはＣ型）、ＩＩ型糖尿病、糖尿病性網膜症、筋ジストロフィー、外傷性脳損傷、心筋梗塞、ならびに／または卒中である、前記方法。
[本発明1014]
前記式Ｉの化合物が、式ＩＩまたはＩＩＩの化合物またはその薬学的に許容される塩である、本発明1013の方法：
式中、
Ｙ 1 が、Ｏ、ＮＨ、ＮＲ 6 、またはＳであり、
Ｗ 1 が、Ｎ、ＣＨ、またはＣＲ 7 であり、
Ｇ 2 が、Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ、ＳＯ、またはＳＯ 2 であり、
Ｒ 10 、Ｒ 11 、Ｒ 12 、Ｒ 13 、Ｒ 14 、Ｒ 15 、Ｒ 16 、Ｒ 17 、Ｒ 18 、及びＲ 19 が、独立して、各出現時に、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルコキシ、アルキニル、アミノ、アミノスルフィニル、アミノスルホニル、スルフィニル、スルホニル、スルホニルオキシ、アミノスルホニルオキシ、アミノスルフィニルオキシ、アミノスルホニルアミノ、アシルアミノ、アミノカルボニルオキシ、アミノカルボニルアミノ、アミノチオカルボニルアミノ、アミノカルボニル、アシルオキシ、アリール、ヘテロアリール、シアノ、ニトロ、カルボキシル、カルボキシルエステル、（カルボキシルエステル）アミノ、（カルボキシルエステル）オキシ、アシル、若しくはホルミルであるか、または2つの隣接するＲ 10 、Ｒ 11 、Ｒ 12 、Ｒ 13 、Ｒ 14 、Ｒ 15 、Ｒ 16 、Ｒ 17 、Ｒ 18 、及びＲ 19 が一緒になってアリール、ヘテテロアリール、またはヘテロシクリル環を形成し、
Ｒ 20 が、水素、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、またはアルキニルである。
[本発明1015]
前記式ＩＩの化合物が、式ＩＩａの化合物またはその薬学的に許容される塩である、本発明1014の方法：
式中、Ｒ 21 が、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、またはアルコキシである。
[本発明1016]
ミトコンドリア透過性遷移孔を阻害するための方法であって、細胞を、有効量の本発明1001〜1007のいずれかの化合物または本発明1008〜1012のいずれかの薬学的組成物と接触させることを含む、前記方法。
[本発明1017]
対象における状態を治療するための方法であって、有効量の本発明1001〜1007のいずれかの1つ以上の化合物または本発明1008〜1012のいずれかの薬学的組成物を、患者に投与することを含み、前記対象における前記状態が、［Ｃａ 2＋ ］の調節不全及び／または活性酸素種によって少なくとも部分的に媒介される、前記方法。
[本発明1018]
多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、虚血再灌流傷害、アルツハイマー病、ハンチントン病、パーキンソン病、インスリン誘発性低血糖症、脳虚血、癲癇または実験的外傷からの脳障害、ベスレムミオパチー、膵炎、肝炎（Ａ、及び／若しくはＢ、及び／若しくはＣ型）、ＩＩ型糖尿病、糖尿病性網膜症、筋ジストロフィー、外傷性脳損傷、心筋梗塞、ならびに／または卒中を治療するための方法であって、有効量の本発明1001〜1007のいずれかの1つ以上の化合物または本発明1008〜1012のいずれかの薬学的組成物を、患者に投与することを含む、前記方法。
[本発明1019]
式ＩＶの化合物、またはその薬学的に許容される塩：
式中、
Ｙ 2 が、Ｏ、ＮＨ、ＮＲ 25 、またはＳであり、
Ｗ 2 が、Ｎ、ＣＨ、またはＣＲ 26 であり、
ここで、Ｙ 2 がＮＲ 25 でありかつＷ 2 がＣＲ 26 である場合、Ｒ 25 及びＲ 26 が、任意に、Ｙ 2 及びＷ 2 と結合して、アリール、ヘテロアリール、またはヘテロシクリル環を形成してもよく、
Ｚ 4 、Ｚ 5 、及びＺ 6 が、それぞれ独立して、ＣＨ、Ｃ−Ｒ 27 、またはＮであり、
Ｒ 22 、Ｒ 23 、Ｒ 24 、Ｒ 25 、Ｒ 26 、及びＲ 27 が、独立して、各出現時に、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルコキシ、アルキニル、アミノ、アミノスルフィニル、アミノスルホニル、スルフィニル、スルホニル、スルホニルオキシ、アミノスルホニルオキシ、アミノスルフィニルオキシ、アミノスルホニルアミノ、アシルアミノ、アミノカルボニルオキシ、アミノカルボニルアミノ、アミノチオカルボニルアミノ、アミノカルボニル、アシルオキシ、アリール、ヘテロアリール、シアノ、ニトロ、カルボキシル、カルボキシルエステル、（カルボキシルエステル）アミノ、（カルボキシルエステル）オキシ、アシル、若しくはホルミルであるか、または2つのＲ 22 、Ｒ 23 、Ｒ 24 、Ｒ 25 、Ｒ 26 、及びＲ 27 が一緒になってアリール、ヘテテロアリール、またはヘテロシクリル環を形成する。
[本発明1020]
本発明1019の化合物と薬学的に許容される賦形剤とを含む、薬学的組成物。
[本発明1021]
多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、アルツハイマー病、ハンチントン病、パーキンソン病、インスリン誘発性低血糖症、脳虚血、癲癇または実験的外傷からの脳障害、ベスレムミオパチー、膵炎、肝炎、糖尿病性網膜症、筋ジストロフィー、心筋梗塞、及び／または卒中の治療で用いるためのものである、本発明1020の薬学的組成物。
[本発明1022]
前記化合物が、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、虚血再灌流傷害、アルツハイマー病、ハンチントン病、パーキンソン病、インスリン誘発性低血糖症、脳虚血、癲癇または実験的外傷からの脳障害、ベスレムミオパチー、膵炎、肝炎（Ａ及び／若しくはＢ及び／若しくはＣ型）、ＩＩ型糖尿病、糖尿病性網膜症、筋ジストロフィー、外傷性脳損傷、心筋梗塞、ならびに／または卒中の治療のために有効な量で存在する、本発明1020または本発明1021の薬学的組成物。
[本発明1023]
対象における疾患を治療するための方法であって、有効量の本発明1019の化合物、または有効量の本発明1020〜1022のいずれかの化合物と薬学的に許容される賦形剤とを含む薬学的組成物を、前記対象に投与することを含み、前記疾患が、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、虚血再灌流傷害、アルツハイマー病、ハンチントン病、パーキンソン病、インスリン誘発性低血糖症、脳虚血、癲癇または実験的外傷からの脳障害、ベスレムミオパチー、膵炎、肝炎（Ａ及び／若しくはＢ及び／若しくはＣ型）、ＩＩ型糖尿病、糖尿病性網膜症、筋ジストロフィー、外傷性脳損傷、心筋梗塞、ならびに／または卒中である、前記方法。
これらの及び他の実施形態は、本明細書にさらなる詳細に記載される。
式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩：
Ｙ 1 及びＷ 1 が、それぞれ独立して、Ｏ、Ｎ、ＮＨ、ＮＲ 6 、Ｓ、ＣＨ、若しくはＣＲ 7 であるか、またはＹ 1 及びＷ 1 が、それぞれ独立して、ＣＲ 8 またはＮＲ 8 であり、ここで、Ｒ 8 が、Ｙ 1 及びＷ 1 と結合して、アリール、ヘテロアリール、またはヘテロシクリル環を形成し、
Ｚ 1 、Ｚ 2 、及びＺ 3 が、それぞれ独立して、ＣＨ、Ｃ−Ｒ 9 、またはＮであり、
ｍが、1または2であり、
Ｇ 1 が、Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ、ＳＯ、またはＳＯ 2 であり、
Ｒ 1 、Ｒ 2 、Ｒ 4 、Ｒ 5 、Ｒ 6 、Ｒ 7 、及びＲ 9 が、独立して、各出現時に、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルコキシ、アルキニル、アミノ、アミノスルフィニル、アミノスルホニル、スルフィニル、スルホニル、スルホニルオキシ、アミノスルホニルオキシ、アミノスルフィニルオキシ、アミノスルホニルアミノ、アシルアミノ、アミノカルボニルオキシ、アミノカルボニルアミノ、アミノチオカルボニルアミノ、アミノカルボニル、アシルオキシ、アリール、ヘテロアリール、シアノ、ニトロ、カルボキシル、カルボキシルエステル、（カルボキシルエステル）アミノ、（カルボキシルエステル）オキシ、アシル、若しくはホルミルであるか、または2つの隣接するＲ 1 、Ｒ 2 、Ｒ 4 、Ｒ 5 、Ｒ 6 、Ｒ 7 、及びＲ 9 が一緒になってアリール、ヘテテロアリール、若しくはヘテロシクリル環を形成し、
Ｒ 3 が、水素、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、またはアルキニルである。
[本発明1002]
前記式Ｉの化合物が、式ＩＩまたはＩＩＩの化合物またはその薬学的に許容される塩である、本発明1001の化合物：
Ｙ 1 が、Ｏ、ＮＨ、ＮＲ 6 、またはＳであり、
Ｗ 1 が、Ｎ、ＣＨ、またはＣＲ 7 であり、
Ｇ 2 が、Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ、ＳＯ、またはＳＯ 2 であり、
Ｒ 10 、Ｒ 11 、Ｒ 12 、Ｒ 13 、Ｒ 14 、Ｒ 15 、Ｒ 16 、Ｒ 17 、Ｒ 18 、及びＲ 19 が、独立して、各出現時に、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルコキシ、アルキニル、アミノ、アミノスルフィニル、アミノスルホニル、スルフィニル、スルホニル、スルホニルオキシ、アミノスルホニルオキシ、アミノスルフィニルオキシ、アミノスルホニルアミノ、アシルアミノ、アミノカルボニルオキシ、アミノカルボニルアミノ、アミノチオカルボニルアミノ、アミノカルボニル、アシルオキシ、アリール、ヘテロアリール、シアノ、ニトロ、カルボキシル、カルボキシルエステル、（カルボキシルエステル）アミノ、（カルボキシルエステル）オキシ、アシル、若しくはホルミルであるか、または2つの隣接するＲ 10 、Ｒ 11 、Ｒ 12 、Ｒ 13 、Ｒ 14 、Ｒ 15 、Ｒ 16 、Ｒ 17 、Ｒ 18 、及びＲ 19 が一緒になってアリール、ヘテテロアリール、またはヘテロシクリル環を形成し、
Ｒ 20 が、水素、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、またはアルキニルである。
[本発明1003]
Ｒ 1 、Ｒ 2 、Ｒ 4 、Ｒ 5 、Ｒ 6 、Ｒ 7 、Ｒ 9 、Ｒ 10 、Ｒ 11 、Ｒ 12 、Ｒ 13 、Ｒ 14 、Ｒ 15 、Ｒ 16 、Ｒ 17 、Ｒ 18 、及びＲ 19 が、独立して、各出現時に、水素、Ｃ 1 −Ｃ 8 アルキル、Ｃ 3 −Ｃ 8 シクロアルキル、Ｃ 1 −Ｃ 8 アルケニル、Ｃ 2 −Ｃ 8 アルキニル、アリール、シアノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシル、ホルミル、Ｃ 3 −Ｃ 7 ヘテロアリール、若しくはＣ 3 −Ｃ 7 ヘテロシクリルであるか、または2つの隣接するＲ 1 、Ｒ 2 、Ｒ 4 、Ｒ 5 、Ｒ 6 、Ｒ 7 、Ｒ 9 、Ｒ 10 、Ｒ 11 、Ｒ 12 、Ｒ 13 、Ｒ 14 、Ｒ 15 、Ｒ 16 、Ｒ 17 、Ｒ 18 、及び／またはＲ 19 が一緒になってアリール、ヘテテロアリール、またはヘテロシクリル環を形成する、本発明1001または本発明1002の化合物。
[本発明1004]
前記式ＩＩの化合物が、式ＩＩａの化合物またはその薬学的に許容される塩である、本発明1002の化合物：
[本発明1005]
Ｒ 21 が、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、またはメトキシである、本発明1004の化合物。
[本発明1006]
Ｙ 1 がＯでありかつＷ 1 がＮであるか、またはＹ 1 がＮＨでありかつＷ 1 がＮである、本発明1002〜1005のいずれかの化合物。
[本発明1007]
Ｚ 1 がＣＨである、本発明1002〜1006のいずれかの化合物。
[本発明1008]
本発明1001の化合物と薬学的に許容される賦形剤とを含む、薬学的組成物。
[本発明1009]
前記式Ｉの化合物が、式ＩＩまたはＩＩＩの化合物またはその薬学的に許容される塩である、本発明1008の薬学的組成物：
Ｙ 1 が、Ｏ、ＮＨ、ＮＲ 6 、またはＳであり、
Ｗ 1 が、Ｎ、ＣＨ、またはＣＲ 7 であり、
Ｇ 2 が、Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ、ＳＯ、またはＳＯ 2 であり、
Ｒ 10 、Ｒ 11 、Ｒ 12 、Ｒ 13 、Ｒ 14 、Ｒ 15 、Ｒ 16 、Ｒ 17 、Ｒ 18 、及びＲ 19 が、独立して、各出現時に、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルコキシ、アルキニル、アミノ、アミノスルフィニル、アミノスルホニル、スルフィニル、スルホニル、スルホニルオキシ、アミノスルホニルオキシ、アミノスルフィニルオキシ、アミノスルホニルアミノ、アシルアミノ、アミノカルボニルオキシ、アミノカルボニルアミノ、アミノチオカルボニルアミノ、アミノカルボニル、アシルオキシ、アリール、ヘテロアリール、シアノ、ニトロ、カルボキシル、カルボキシルエステル、（カルボキシルエステル）アミノ、（カルボキシルエステル）オキシ、アシル、若しくはホルミルであるか、または2つの隣接するＲ 10 、Ｒ 11 、Ｒ 12 、Ｒ 13 、Ｒ 14 、Ｒ 15 、Ｒ 16 、Ｒ 17 、Ｒ 18 、及びＲ 19 が一緒になってアリール、ヘテテロアリール、またはヘテロシクリル環を形成し、
Ｒ 20 が、水素、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、またはアルキニルである。
[本発明1010]
前記式ＩＩの化合物が、式ＩＩａの化合物またはその薬学的に許容される塩である、本発明1009の薬学的組成物：
[本発明1011]
多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、アルツハイマー病、ハンチントン病、パーキンソン病、インスリン誘発性低血糖症、脳虚血、癲癇または実験的外傷からの脳障害、ベスレムミオパチー、膵炎、肝炎、糖尿病性網膜症、筋ジストロフィー、心筋梗塞、及び／または卒中の治療で用いるためのものである、本発明1008〜1010のいずれかの薬学的組成物。
[本発明1012]
前記化合物が、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、虚血再灌流傷害、アルツハイマー病、ハンチントン病、パーキンソン病、インスリン誘発性低血糖症、脳虚血、癲癇または実験的外傷からの脳障害、ベスレムミオパチー、膵炎、肝炎（Ａ及び／若しくはＢ及び／若しくはＣ型）、ＩＩ型糖尿病、糖尿病性網膜症、筋ジストロフィー、外傷性脳損傷、心筋梗塞、ならびに／または卒中の治療のために有効な量で存在する、本発明1008〜1011のいずれかの薬学的組成物。
[本発明1013]
対象における疾患を治療するための方法であって、有効量の本発明1001の化合物、または有効量の本発明1001の化合物と薬学的に許容される賦形剤とを含む薬学的組成物を、前記対象に投与することを含み、前記疾患が、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、虚血再灌流傷害、アルツハイマー病、ハンチントン病、パーキンソン病、インスリン誘発性低血糖症、脳虚血、癲癇または実験的外傷からの脳障害、ベスレムミオパチー、膵炎、肝炎（Ａ及び／若しくはＢ及び／若しくはＣ型）、ＩＩ型糖尿病、糖尿病性網膜症、筋ジストロフィー、外傷性脳損傷、心筋梗塞、ならびに／または卒中である、前記方法。
[本発明1014]
前記式Ｉの化合物が、式ＩＩまたはＩＩＩの化合物またはその薬学的に許容される塩である、本発明1013の方法：
Ｙ 1 が、Ｏ、ＮＨ、ＮＲ 6 、またはＳであり、
Ｗ 1 が、Ｎ、ＣＨ、またはＣＲ 7 であり、
Ｇ 2 が、Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ、ＳＯ、またはＳＯ 2 であり、
Ｒ 10 、Ｒ 11 、Ｒ 12 、Ｒ 13 、Ｒ 14 、Ｒ 15 、Ｒ 16 、Ｒ 17 、Ｒ 18 、及びＲ 19 が、独立して、各出現時に、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルコキシ、アルキニル、アミノ、アミノスルフィニル、アミノスルホニル、スルフィニル、スルホニル、スルホニルオキシ、アミノスルホニルオキシ、アミノスルフィニルオキシ、アミノスルホニルアミノ、アシルアミノ、アミノカルボニルオキシ、アミノカルボニルアミノ、アミノチオカルボニルアミノ、アミノカルボニル、アシルオキシ、アリール、ヘテロアリール、シアノ、ニトロ、カルボキシル、カルボキシルエステル、（カルボキシルエステル）アミノ、（カルボキシルエステル）オキシ、アシル、若しくはホルミルであるか、または2つの隣接するＲ 10 、Ｒ 11 、Ｒ 12 、Ｒ 13 、Ｒ 14 、Ｒ 15 、Ｒ 16 、Ｒ 17 、Ｒ 18 、及びＲ 19 が一緒になってアリール、ヘテテロアリール、またはヘテロシクリル環を形成し、
Ｒ 20 が、水素、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、またはアルキニルである。
[本発明1015]
前記式ＩＩの化合物が、式ＩＩａの化合物またはその薬学的に許容される塩である、本発明1014の方法：
[本発明1016]
ミトコンドリア透過性遷移孔を阻害するための方法であって、細胞を、有効量の本発明1001〜1007のいずれかの化合物または本発明1008〜1012のいずれかの薬学的組成物と接触させることを含む、前記方法。
[本発明1017]
対象における状態を治療するための方法であって、有効量の本発明1001〜1007のいずれかの1つ以上の化合物または本発明1008〜1012のいずれかの薬学的組成物を、患者に投与することを含み、前記対象における前記状態が、［Ｃａ 2＋ ］の調節不全及び／または活性酸素種によって少なくとも部分的に媒介される、前記方法。
[本発明1018]
多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、虚血再灌流傷害、アルツハイマー病、ハンチントン病、パーキンソン病、インスリン誘発性低血糖症、脳虚血、癲癇または実験的外傷からの脳障害、ベスレムミオパチー、膵炎、肝炎（Ａ、及び／若しくはＢ、及び／若しくはＣ型）、ＩＩ型糖尿病、糖尿病性網膜症、筋ジストロフィー、外傷性脳損傷、心筋梗塞、ならびに／または卒中を治療するための方法であって、有効量の本発明1001〜1007のいずれかの1つ以上の化合物または本発明1008〜1012のいずれかの薬学的組成物を、患者に投与することを含む、前記方法。
[本発明1019]
式ＩＶの化合物、またはその薬学的に許容される塩：
Ｙ 2 が、Ｏ、ＮＨ、ＮＲ 25 、またはＳであり、
Ｗ 2 が、Ｎ、ＣＨ、またはＣＲ 26 であり、
ここで、Ｙ 2 がＮＲ 25 でありかつＷ 2 がＣＲ 26 である場合、Ｒ 25 及びＲ 26 が、任意に、Ｙ 2 及びＷ 2 と結合して、アリール、ヘテロアリール、またはヘテロシクリル環を形成してもよく、
Ｚ 4 、Ｚ 5 、及びＺ 6 が、それぞれ独立して、ＣＨ、Ｃ−Ｒ 27 、またはＮであり、
Ｒ 22 、Ｒ 23 、Ｒ 24 、Ｒ 25 、Ｒ 26 、及びＲ 27 が、独立して、各出現時に、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルコキシ、アルキニル、アミノ、アミノスルフィニル、アミノスルホニル、スルフィニル、スルホニル、スルホニルオキシ、アミノスルホニルオキシ、アミノスルフィニルオキシ、アミノスルホニルアミノ、アシルアミノ、アミノカルボニルオキシ、アミノカルボニルアミノ、アミノチオカルボニルアミノ、アミノカルボニル、アシルオキシ、アリール、ヘテロアリール、シアノ、ニトロ、カルボキシル、カルボキシルエステル、（カルボキシルエステル）アミノ、（カルボキシルエステル）オキシ、アシル、若しくはホルミルであるか、または2つのＲ 22 、Ｒ 23 、Ｒ 24 、Ｒ 25 、Ｒ 26 、及びＲ 27 が一緒になってアリール、ヘテテロアリール、またはヘテロシクリル環を形成する。
[本発明1020]
本発明1019の化合物と薬学的に許容される賦形剤とを含む、薬学的組成物。
[本発明1021]
多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、アルツハイマー病、ハンチントン病、パーキンソン病、インスリン誘発性低血糖症、脳虚血、癲癇または実験的外傷からの脳障害、ベスレムミオパチー、膵炎、肝炎、糖尿病性網膜症、筋ジストロフィー、心筋梗塞、及び／または卒中の治療で用いるためのものである、本発明1020の薬学的組成物。
[本発明1022]
前記化合物が、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、虚血再灌流傷害、アルツハイマー病、ハンチントン病、パーキンソン病、インスリン誘発性低血糖症、脳虚血、癲癇または実験的外傷からの脳障害、ベスレムミオパチー、膵炎、肝炎（Ａ及び／若しくはＢ及び／若しくはＣ型）、ＩＩ型糖尿病、糖尿病性網膜症、筋ジストロフィー、外傷性脳損傷、心筋梗塞、ならびに／または卒中の治療のために有効な量で存在する、本発明1020または本発明1021の薬学的組成物。
[本発明1023]
対象における疾患を治療するための方法であって、有効量の本発明1019の化合物、または有効量の本発明1020〜1022のいずれかの化合物と薬学的に許容される賦形剤とを含む薬学的組成物を、前記対象に投与することを含み、前記疾患が、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、虚血再灌流傷害、アルツハイマー病、ハンチントン病、パーキンソン病、インスリン誘発性低血糖症、脳虚血、癲癇または実験的外傷からの脳障害、ベスレムミオパチー、膵炎、肝炎（Ａ及び／若しくはＢ及び／若しくはＣ型）、ＩＩ型糖尿病、糖尿病性網膜症、筋ジストロフィー、外傷性脳損傷、心筋梗塞、ならびに／または卒中である、前記方法。
これらの及び他の実施形態は、本明細書にさらなる詳細に記載される。
一態様では、本技術は、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩を提供し、
式中、
Ｙ１及びＷ１が、それぞれ独立して、Ｏ、Ｎ、ＮＨ、ＮＲ６、Ｓ、ＣＨ、またはＣＲ７であるか、Ｙ１及びＷ１が、それぞれ独立して、ＣＲ８またはＮＲ８であり、ここで、Ｒ８がＹ１及びＷ１と結合して、アリール、ヘテロアリール、またはヘテロシクリル環を形成し、Ｚ１、Ｚ２、及びＺ３が、それぞれ独立して、ＣＨ、Ｃ−Ｒ９、またはＮであり、ｍが１または２であり、Ｇ１が、Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ、ＳＯ、またはＳＯ２であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ９が独立して、各出現時に、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルコキシ、アルキニル、アミノ、アミノスルフィニル、アミノスルホニル、スルフィニル、スルホニル、スルホニルオキシ、アミノスルホニルオキシ、アミノスルフィニルオキシ、アミノスルホニルアミノ、アシルアミノ、アミノカルボニルオキシ、アミノカルボニルアミノ、アミノチオカルボニルアミノ、アミノカルボニル、アシルオキシ、アリール、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、シアノ、ニトロ、カルボキシル、カルボキシルエステル、（カルボキシルエステル）アミノ、（カルボキシルエステル）オキシ、アシル、若しくはホルミルであるか、または２つの隣接するＲ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ９が一緒になってアリール、ヘテロアリール、またはヘテロシクリル環を形成し、Ｒ３が、水素、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、またはアルキニルである。
Ｙ１及びＷ１が、それぞれ独立して、Ｏ、Ｎ、ＮＨ、ＮＲ６、Ｓ、ＣＨ、またはＣＲ７であるか、Ｙ１及びＷ１が、それぞれ独立して、ＣＲ８またはＮＲ８であり、ここで、Ｒ８がＹ１及びＷ１と結合して、アリール、ヘテロアリール、またはヘテロシクリル環を形成し、Ｚ１、Ｚ２、及びＺ３が、それぞれ独立して、ＣＨ、Ｃ−Ｒ９、またはＮであり、ｍが１または２であり、Ｇ１が、Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ、ＳＯ、またはＳＯ２であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ９が独立して、各出現時に、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルコキシ、アルキニル、アミノ、アミノスルフィニル、アミノスルホニル、スルフィニル、スルホニル、スルホニルオキシ、アミノスルホニルオキシ、アミノスルフィニルオキシ、アミノスルホニルアミノ、アシルアミノ、アミノカルボニルオキシ、アミノカルボニルアミノ、アミノチオカルボニルアミノ、アミノカルボニル、アシルオキシ、アリール、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、シアノ、ニトロ、カルボキシル、カルボキシルエステル、（カルボキシルエステル）アミノ、（カルボキシルエステル）オキシ、アシル、若しくはホルミルであるか、または２つの隣接するＲ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ９が一緒になってアリール、ヘテロアリール、またはヘテロシクリル環を形成し、Ｒ３が、水素、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、またはアルキニルである。
当該式Ｉの化合物は、式ＩＩまたはＩＩＩの化合物またはその薬学的に許容される塩であってもよく、
式中、
Ｙ１が、Ｏ、ＮＨ、ＮＲ６、またはＳであり、
Ｗ１が、Ｎ、ＣＨ、またはＣＲ７であり、
Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、Ｒ４、及びＲ５が、上記に定義された通りであり、
Ｇ２が、Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ、ＳＯ、またはＳＯ２であり、
Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８、及びＲ１９が独立して、各出現時に、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルコキシ、アルキニル、アミノ、アミノスルフィニル、アミノスルホニル、スルフィニル、スルホニル、スルホニルオキシ、アミノスルホニルオキシ、アミノスルフィニルオキシ、アミノスルホニルアミノ、アシルアミノ、アミノカルボニルオキシ、アミノカルボニルアミノ、アミノチオカルボニルアミノ、アミノカルボニル、アシルオキシ、アリール、ヘテロシクリル，ヘテロアリール、シアノ、ニトロ、カルボキシル、カルボキシルエステル、（カルボキシルエステル）アミノ、（カルボキシルエステル）オキシ、アシル、若しくはホルミルであるか、または２つの隣接するＲ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８、及びＲ１９が一緒になってアリール、ヘテロアリール、またはヘテロシクリル環を形成し、
Ｒ２０が、水素、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、またはアルキニルである。
Ｙ１が、Ｏ、ＮＨ、ＮＲ６、またはＳであり、
Ｗ１が、Ｎ、ＣＨ、またはＣＲ７であり、
Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、Ｒ４、及びＲ５が、上記に定義された通りであり、
Ｇ２が、Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ、ＳＯ、またはＳＯ２であり、
Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８、及びＲ１９が独立して、各出現時に、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルコキシ、アルキニル、アミノ、アミノスルフィニル、アミノスルホニル、スルフィニル、スルホニル、スルホニルオキシ、アミノスルホニルオキシ、アミノスルフィニルオキシ、アミノスルホニルアミノ、アシルアミノ、アミノカルボニルオキシ、アミノカルボニルアミノ、アミノチオカルボニルアミノ、アミノカルボニル、アシルオキシ、アリール、ヘテロシクリル，ヘテロアリール、シアノ、ニトロ、カルボキシル、カルボキシルエステル、（カルボキシルエステル）アミノ、（カルボキシルエステル）オキシ、アシル、若しくはホルミルであるか、または２つの隣接するＲ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８、及びＲ１９が一緒になってアリール、ヘテロアリール、またはヘテロシクリル環を形成し、
Ｒ２０が、水素、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、またはアルキニルである。
本明細書における任意の実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８、及び／またはＲ１９が独立して、各出現時に、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ１〜Ｃ８アルケニル、Ｃ２〜Ｃ８アルキニル、アリール、シアノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシル、ホルミル、Ｃ３〜Ｃ７ヘテロアリール、若しくはＣ３〜Ｃ７ヘテロシクリルであり得るか、または２つの隣接するＲ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８、及び／若しくはＲ１９が一緒になってアリール、ヘテロアリール、またはヘテロシクリル環を形成する。
一態様では、本技術は、式ＩＶの化合物またはその薬学的に許容される塩を提供し、
式中、
Ｙ２が、Ｏ、ＮＨ、ＮＲ２５、またはＳであり、
Ｗ２が、Ｎ、ＣＨ、またはＣＲ２６であり、Ｙ２がＮＲ２５であり、Ｗ２がＣＲ２６である場合、Ｒ２５及びＲ２６が、任意に、Ｙ２及びＷ２と結合して、アリール、ヘテロアリール、またはヘテロシクリル環を形成してもよく、
Ｚ４、Ｚ５、及びＺ６が、それぞれ独立して、ＣＨ、Ｃ−Ｒ２７、またはＮであり、
Ｒ２２、Ｒ２３、Ｒ２４、Ｒ２５、Ｒ２６、及びＲ２７が、独立して、各出現時に、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルコキシ、アルキニル、アミノ、アミノスルフィニル、アミノスルホニル、スルフィニル、スルホニル、スルホニルオキシ、アミノスルホニルオキシ、アミノスルフィニルオキシ、アミノスルホニルアミノ、アシルアミノ、アミノカルボニルオキシ、アミノカルボニルアミノ、アミノチオカルボニルアミノ、アミノカルボニル、アシルオキシ、アリール、ヘテロアリール、シアノ、ニトロ、カルボキシル、カルボキシルエステル、（カルボキシルエステル）アミノ、（カルボキシルエステル）オキシ、アシル、若しくはホルミルであるか、または２つのＲ２２、Ｒ２３、Ｒ２４、Ｒ２５、Ｒ２６、及びＲ２７が一緒になってアリール、ヘテロアリール、またはヘテロシクリル環を形成する。
Ｙ２が、Ｏ、ＮＨ、ＮＲ２５、またはＳであり、
Ｗ２が、Ｎ、ＣＨ、またはＣＲ２６であり、Ｙ２がＮＲ２５であり、Ｗ２がＣＲ２６である場合、Ｒ２５及びＲ２６が、任意に、Ｙ２及びＷ２と結合して、アリール、ヘテロアリール、またはヘテロシクリル環を形成してもよく、
Ｚ４、Ｚ５、及びＺ６が、それぞれ独立して、ＣＨ、Ｃ−Ｒ２７、またはＮであり、
Ｒ２２、Ｒ２３、Ｒ２４、Ｒ２５、Ｒ２６、及びＲ２７が、独立して、各出現時に、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルコキシ、アルキニル、アミノ、アミノスルフィニル、アミノスルホニル、スルフィニル、スルホニル、スルホニルオキシ、アミノスルホニルオキシ、アミノスルフィニルオキシ、アミノスルホニルアミノ、アシルアミノ、アミノカルボニルオキシ、アミノカルボニルアミノ、アミノチオカルボニルアミノ、アミノカルボニル、アシルオキシ、アリール、ヘテロアリール、シアノ、ニトロ、カルボキシル、カルボキシルエステル、（カルボキシルエステル）アミノ、（カルボキシルエステル）オキシ、アシル、若しくはホルミルであるか、または２つのＲ２２、Ｒ２３、Ｒ２４、Ｒ２５、Ｒ２６、及びＲ２７が一緒になってアリール、ヘテロアリール、またはヘテロシクリル環を形成する。
例えば、式Ｖに従う化合物は、式ＶＩ及びＶＩＩの化合物またはその薬学的に許容される塩を含み、
式中、
Ｚ７、Ｚ８、Ｚ９、Ｚ１０、Ｚ１１、及びＺ１２が、それぞれ独立して、ＣＨ、Ｃ−Ｒ３８、またはＮであり、
Ｒ３０、Ｒ３２、Ｒ３３、Ｒ３４、Ｒ３６、及びＲ３７が独立して、各出現時に、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルコキシ、アルキニル、アミノ、アミノスルフィニル、アミノスルホニル、スルフィニル、スルホニル、スルホニルオキシ、アミノスルホニルオキシ、アミノスルフィニルオキシ、アミノスルホニルアミノ、アシルアミノ、アミノカルボニルオキシ、アミノカルボニルアミノ、アミノチオカルボニルアミノ、アミノカルボニル、アシルオキシ、アリール、ヘテロアリール、シアノ、ニトロ、カルボキシル、カルボキシルエステル、（カルボキシルエステル）アミノ、（カルボキシルエステル）オキシ、アシル、若しくはホルミルであるか、または２つの隣接するＲ３２、Ｒ３３、Ｒ３６、及びＲ３７が一緒になってアリール、ヘテロアリール、またはヘテロシクリル環を形成し、
Ｒ３１及びＲ３５が、それぞれ独立して、水素、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、またはヘテロアリールである。
Ｚ７、Ｚ８、Ｚ９、Ｚ１０、Ｚ１１、及びＺ１２が、それぞれ独立して、ＣＨ、Ｃ−Ｒ３８、またはＮであり、
Ｒ３０、Ｒ３２、Ｒ３３、Ｒ３４、Ｒ３６、及びＲ３７が独立して、各出現時に、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルコキシ、アルキニル、アミノ、アミノスルフィニル、アミノスルホニル、スルフィニル、スルホニル、スルホニルオキシ、アミノスルホニルオキシ、アミノスルフィニルオキシ、アミノスルホニルアミノ、アシルアミノ、アミノカルボニルオキシ、アミノカルボニルアミノ、アミノチオカルボニルアミノ、アミノカルボニル、アシルオキシ、アリール、ヘテロアリール、シアノ、ニトロ、カルボキシル、カルボキシルエステル、（カルボキシルエステル）アミノ、（カルボキシルエステル）オキシ、アシル、若しくはホルミルであるか、または２つの隣接するＲ３２、Ｒ３３、Ｒ３６、及びＲ３７が一緒になってアリール、ヘテロアリール、またはヘテロシクリル環を形成し、
Ｒ３１及びＲ３５が、それぞれ独立して、水素、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、またはヘテロアリールである。
Claims (23)
- 式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩：
式中、
Ｙ１及びＷ１が、それぞれ独立して、Ｏ、Ｎ、ＮＨ、ＮＲ６、Ｓ、ＣＨ、若しくはＣＲ７であるか、またはＹ１及びＷ１が、それぞれ独立して、ＣＲ８またはＮＲ８であり、ここで、Ｒ８が、Ｙ１及びＷ１と結合して、アリール、ヘテロアリール、またはヘテロシクリル環を形成し、
Ｚ１、Ｚ２、及びＺ３が、それぞれ独立して、ＣＨ、Ｃ−Ｒ９、またはＮであり、
ｍが、１または２であり、
Ｇ１が、Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ、ＳＯ、またはＳＯ２であり、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ９が、独立して、各出現時に、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルコキシ、アルキニル、アミノ、アミノスルフィニル、アミノスルホニル、スルフィニル、スルホニル、スルホニルオキシ、アミノスルホニルオキシ、アミノスルフィニルオキシ、アミノスルホニルアミノ、アシルアミノ、アミノカルボニルオキシ、アミノカルボニルアミノ、アミノチオカルボニルアミノ、アミノカルボニル、アシルオキシ、アリール、ヘテロアリール、シアノ、ニトロ、カルボキシル、カルボキシルエステル、（カルボキシルエステル）アミノ、（カルボキシルエステル）オキシ、アシル、若しくはホルミルであるか、または２つの隣接するＲ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ９が一緒になってアリール、ヘテテロアリール、若しくはヘテロシクリル環を形成し、
Ｒ３が、水素、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、またはアルキニルである。 - 前記式Ｉの化合物が、式ＩＩまたはＩＩＩの化合物またはその薬学的に許容される塩である、請求項１に記載の化合物：
式中、
Ｙ１が、Ｏ、ＮＨ、ＮＲ６、またはＳであり、
Ｗ１が、Ｎ、ＣＨ、またはＣＲ７であり、
Ｇ２が、Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ、ＳＯ、またはＳＯ２であり、
Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８、及びＲ１９が、独立して、各出現時に、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルコキシ、アルキニル、アミノ、アミノスルフィニル、アミノスルホニル、スルフィニル、スルホニル、スルホニルオキシ、アミノスルホニルオキシ、アミノスルフィニルオキシ、アミノスルホニルアミノ、アシルアミノ、アミノカルボニルオキシ、アミノカルボニルアミノ、アミノチオカルボニルアミノ、アミノカルボニル、アシルオキシ、アリール、ヘテロアリール、シアノ、ニトロ、カルボキシル、カルボキシルエステル、（カルボキシルエステル）アミノ、（カルボキシルエステル）オキシ、アシル、若しくはホルミルであるか、または２つの隣接するＲ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８、及びＲ１９が一緒になってアリール、ヘテテロアリール、またはヘテロシクリル環を形成し、
Ｒ２０が、水素、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、またはアルキニルである。 - Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８、及びＲ１９ が、独立して、各出現時に、水素、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ１−Ｃ８アルケニル、Ｃ２−Ｃ８アルキニル、アリール、シアノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシル、ホルミル、Ｃ３−Ｃ７ヘテロアリール、若しくはＣ３−Ｃ７ヘテロシクリルであるか、または２つの隣接するＲ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８、及び／またはＲ１９が一緒になってアリール、ヘテテロアリール、またはヘテロシクリル環を形成する、請求項１または請求項２に記載の化合物。
- 前記式ＩＩの化合物が、式ＩＩａの化合物またはその薬学的に許容される塩である、請求項２に記載の化合物：
式中、Ｒ２１が、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、またはアルコキシである。 - Ｒ２１が、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、またはメトキシである、請求項４に記載の化合物。
- Ｙ１がＯでありかつＷ１がＮであるか、またはＹ１がＮＨでありかつＷ１がＮである、請求項２〜５のいずれか一項に記載の化合物。
- Ｚ１がＣＨである、請求項２〜６のいずれか一項に記載の化合物。
- 請求項１に記載の化合物と薬学的に許容される賦形剤とを含む、薬学的組成物。
- 前記式Ｉの化合物が、式ＩＩまたはＩＩＩの化合物またはその薬学的に許容される塩である、請求項８に記載の薬学的組成物：
式中、
Ｙ１が、Ｏ、ＮＨ、ＮＲ６、またはＳであり、
Ｗ１が、Ｎ、ＣＨ、またはＣＲ７であり、
Ｇ２が、Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ、ＳＯ、またはＳＯ２であり、
Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８、及びＲ１９が、独立して、各出現時に、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルコキシ、アルキニル、アミノ、アミノスルフィニル、アミノスルホニル、スルフィニル、スルホニル、スルホニルオキシ、アミノスルホニルオキシ、アミノスルフィニルオキシ、アミノスルホニルアミノ、アシルアミノ、アミノカルボニルオキシ、アミノカルボニルアミノ、アミノチオカルボニルアミノ、アミノカルボニル、アシルオキシ、アリール、ヘテロアリール、シアノ、ニトロ、カルボキシル、カルボキシルエステル、（カルボキシルエステル）アミノ、（カルボキシルエステル）オキシ、アシル、若しくはホルミルであるか、または２つの隣接するＲ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８、及びＲ１９が一緒になってアリール、ヘテテロアリール、またはヘテロシクリル環を形成し、
Ｒ２０が、水素、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、またはアルキニルである。 - 前記式ＩＩの化合物が、式ＩＩａの化合物またはその薬学的に許容される塩である、請求項９に記載の薬学的組成物：
式中、Ｒ２１が、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、またはアルコキシである。 - 多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、アルツハイマー病、ハンチントン病、パーキンソン病、インスリン誘発性低血糖症、脳虚血、癲癇または実験的外傷からの脳障害、ベスレムミオパチー、膵炎、肝炎、糖尿病性網膜症、筋ジストロフィー、心筋梗塞、及び／または卒中の治療で用いるためのものである、請求項８〜１０のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
- 前記化合物が、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、虚血再灌流傷害、アルツハイマー病、ハンチントン病、パーキンソン病、インスリン誘発性低血糖症、脳虚血、癲癇または実験的外傷からの脳障害、ベスレムミオパチー、膵炎、肝炎（Ａ及び／若しくはＢ及び／若しくはＣ型）、ＩＩ型糖尿病、糖尿病性網膜症、筋ジストロフィー、外傷性脳損傷、心筋梗塞、ならびに／または卒中の治療のために有効な量で存在する、請求項８〜１１のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
- 対象における疾患を治療するための方法であって、有効量の請求項１に記載の化合物、または有効量の請求項１に記載の化合物と薬学的に許容される賦形剤とを含む薬学的組成物を、前記対象に投与することを含み、前記疾患が、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、虚血再灌流傷害、アルツハイマー病、ハンチントン病、パーキンソン病、インスリン誘発性低血糖症、脳虚血、癲癇または実験的外傷からの脳障害、ベスレムミオパチー、膵炎、肝炎（Ａ及び／若しくはＢ及び／若しくはＣ型）、ＩＩ型糖尿病、糖尿病性網膜症、筋ジストロフィー、外傷性脳損傷、心筋梗塞、ならびに／または卒中である、前記方法。
- 前記式Ｉの化合物が、式ＩＩまたはＩＩＩの化合物またはその薬学的に許容される塩である、請求項１３に記載の方法：
式中、
Ｙ１が、Ｏ、ＮＨ、ＮＲ６、またはＳであり、
Ｗ１が、Ｎ、ＣＨ、またはＣＲ７であり、
Ｇ２が、Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ、ＳＯ、またはＳＯ２であり、
Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８、及びＲ１９が、独立して、各出現時に、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルコキシ、アルキニル、アミノ、アミノスルフィニル、アミノスルホニル、スルフィニル、スルホニル、スルホニルオキシ、アミノスルホニルオキシ、アミノスルフィニルオキシ、アミノスルホニルアミノ、アシルアミノ、アミノカルボニルオキシ、アミノカルボニルアミノ、アミノチオカルボニルアミノ、アミノカルボニル、アシルオキシ、アリール、ヘテロアリール、シアノ、ニトロ、カルボキシル、カルボキシルエステル、（カルボキシルエステル）アミノ、（カルボキシルエステル）オキシ、アシル、若しくはホルミルであるか、または２つの隣接するＲ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８、及びＲ１９が一緒になってアリール、ヘテテロアリール、またはヘテロシクリル環を形成し、
Ｒ２０が、水素、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、またはアルキニルである。 - 前記式ＩＩの化合物が、式ＩＩａの化合物またはその薬学的に許容される塩である、請求項１４に記載の方法：
式中、Ｒ２１が、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、またはアルコキシである。 - ミトコンドリア透過性遷移孔を阻害するための方法であって、細胞を、有効量の請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物または請求項８〜１２のいずれか一項に記載の薬学的組成物と接触させることを含む、前記方法。
- 対象における状態を治療するための方法であって、有効量の請求項１〜７のいずれか一項に記載の１つ以上の化合物または請求項８〜１２のいずれか一項に記載の薬学的組成物を、患者に投与することを含み、前記対象における前記状態が、［Ｃａ２＋］の調節不全及び／または活性酸素種によって少なくとも部分的に媒介される、前記方法。
- 多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、虚血再灌流傷害、アルツハイマー病、ハンチントン病、パーキンソン病、インスリン誘発性低血糖症、脳虚血、癲癇または実験的外傷からの脳障害、ベスレムミオパチー、膵炎、肝炎（Ａ、及び／若しくはＢ、及び／若しくはＣ型）、ＩＩ型糖尿病、糖尿病性網膜症、筋ジストロフィー、外傷性脳損傷、心筋梗塞、ならびに／または卒中を治療するための方法であって、有効量の請求項１〜７のいずれか一項に記載の１つ以上の化合物または請求項８〜１２のいずれか一項に記載の薬学的組成物を、患者に投与することを含む、前記方法。
- 式ＩＶの化合物、またはその薬学的に許容される塩：
式中、
Ｙ２が、Ｏ、ＮＨ、ＮＲ２５、またはＳであり、
Ｗ２が、Ｎ、ＣＨ、またはＣＲ２６であり、
ここで、Ｙ２がＮＲ２５でありかつＷ２がＣＲ２６である場合、Ｒ２５及びＲ２６が、任意に、Ｙ２及びＷ２と結合して、アリール、ヘテロアリール、またはヘテロシクリル環を形成してもよく、
Ｚ４、Ｚ５、及びＺ６が、それぞれ独立して、ＣＨ、Ｃ−Ｒ２７、またはＮであり、
Ｒ２２、Ｒ２３、Ｒ２４、Ｒ２５、Ｒ２６、及びＲ２７が、独立して、各出現時に、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルコキシ、アルキニル、アミノ、アミノスルフィニル、アミノスルホニル、スルフィニル、スルホニル、スルホニルオキシ、アミノスルホニルオキシ、アミノスルフィニルオキシ、アミノスルホニルアミノ、アシルアミノ、アミノカルボニルオキシ、アミノカルボニルアミノ、アミノチオカルボニルアミノ、アミノカルボニル、アシルオキシ、アリール、ヘテロアリール、シアノ、ニトロ、カルボキシル、カルボキシルエステル、（カルボキシルエステル）アミノ、（カルボキシルエステル）オキシ、アシル、若しくはホルミルであるか、または２つのＲ２２、Ｒ２３、Ｒ２４、Ｒ２５、Ｒ２６、及びＲ２７が一緒になってアリール、ヘテテロアリール、またはヘテロシクリル環を形成する。 - 請求項１９に記載の化合物と薬学的に許容される賦形剤とを含む、薬学的組成物。
- 多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、アルツハイマー病、ハンチントン病、パーキンソン病、インスリン誘発性低血糖症、脳虚血、癲癇または実験的外傷からの脳障害、ベスレムミオパチー、膵炎、肝炎、糖尿病性網膜症、筋ジストロフィー、心筋梗塞、及び／または卒中の治療で用いるためのものである、請求項２０に記載の薬学的組成物。
- 前記化合物が、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、虚血再灌流傷害、アルツハイマー病、ハンチントン病、パーキンソン病、インスリン誘発性低血糖症、脳虚血、癲癇または実験的外傷からの脳障害、ベスレムミオパチー、膵炎、肝炎（Ａ及び／若しくはＢ及び／若しくはＣ型）、ＩＩ型糖尿病、糖尿病性網膜症、筋ジストロフィー、外傷性脳損傷、心筋梗塞、ならびに／または卒中の治療のために有効な量で存在する、請求項２０または請求項２１に記載の薬学的組成物。
- 対象における疾患を治療するための方法であって、有効量の請求項１９に記載の化合物、または有効量の請求項２０〜２２のいずれか一項に記載の化合物と薬学的に許容される賦形剤とを含む薬学的組成物を、前記対象に投与することを含み、前記疾患が、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、虚血再灌流傷害、アルツハイマー病、ハンチントン病、パーキンソン病、インスリン誘発性低血糖症、脳虚血、癲癇または実験的外傷からの脳障害、ベスレムミオパチー、膵炎、肝炎（Ａ及び／若しくはＢ及び／若しくはＣ型）、ＩＩ型糖尿病、糖尿病性網膜症、筋ジストロフィー、外傷性脳損傷、心筋梗塞、ならびに／または卒中である、前記方法。
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