KR20130081231A - 대두 단백질 가수 분해물 함유 항산화제 및 그 이용 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 음식품 또는 의약품에 이용 가능한, 높은 항산화 활성을 나타내는 항산화제를 제공한다. 분자량 500 미만의 펩티드의 함량이 펩티드 및 유리 아미노산의 합계량에 대하여 50 중량％ 이상인 대두 단백질 가수 분해물을 얻음으로써, 높은 항산화 활성을 나타내는 항산화제를 얻을 수 있다.
Description
본 발명은 대두 단백질 가수 분해물을 함유하는 항산화제, 및 대두 단백질 가수 분해물의 항산화제로서의 사용 방법에 관한 것이다.
인간을 포함하는 호기성 생물은 생존을 위해 호흡에 의해 산소를 취입하지만, 이때 체내에 취입된 산소의 일부는 에너지 대사 시에 수퍼옥사이드라디칼, 과산화수소, 히드록시라디칼 등의 활성 산소종으로 변한다. 이러한 활성 산소종은, 원래, 세균이나 바이러스의 감염 시에 있어서의 대식 세포의 병원체 제거 기구를 비롯한 생체 방어에 관련되는 등, 건강 유지에 중요한 역할을 하고 있다. 그러나, 대기 오염이나 자외선 등의 환경 요인이나 흡연 등의 생활 습관, 정신적 스트레스 등에 의해 생체 내에서의 밸런스가 무너져, 활성 산소종이 일단 과잉이 되면 생체 중의 단백질이나 지질, DNA 등과 반응하여, 단백질의 변성이나 과산화지질의 생성, 유전 손상 등을 일으켜, 생활 습관병의 발증이나 노화의 촉진을 가져온다고 생각되고 있다. 이상으로부터, 생체에 갖춰진 메커니즘에 더하여, 식사 유래의 항산화 활성 성분의 섭취가 건강 유지에 중요하다고 생각되게 되어, 항산화 물질은 7번째의 영양소로서 적극적인 섭취가 장려되어 오고 있다.
대두는 많은 생리 기능을 가지고 있는 것이 보고되어 있고, 항산화 활성에 대해서도 몇 가지인가 보고되어 있다. 예컨대, 대두 이소플라본은 다른 후라보노이드류와 마찬가지로 높은 항산화 활성을 가지고 있는 것이 확인되어 있다. 또한, 대두 단백질 가수 분해물의 항산화 활성에 관해서는, 항산화 활성을 나타내는 펩티드 서열에 대해서 인정되어 있다. 그러나, 대두 단백질 가수 분해물로부터 특정 펩티드를 대량으로 단리하여 항산화제로서 사용하는 것은 제조상 곤란하다. 그래서, 여러가지 펩티드의 혼합물인 대두 단백질 가수 분해물 자체를 항산화제로서 이용할 수 있으면 유용하다.
그 중에서, 특허문헌 1에는, 항산화력을 증대시킨 대두 단백질의 가수 분해물이 기재되고, 펩티드의 평균 분자량은 3 kDa∼30 kDa(3000∼30000)인 것이 기재되어 있다. 본 문헌은 지나치게 가수 분해하는 것에 따른 쓴맛의 발현을 회피하기 위해, 비교적 고분자량의 펩티드를 얻고 있다.
또한 특허문헌 2 및 3에도 항산화력을 나타내는 대두 단백질의 가수 분해물이 기재되어 있지만, 특허문헌 2에 기재되어 있는 펩티드의 평균 분자량은 500∼5000이며, 특허문헌 3의 펩티드의 평균 아미노산쇄 길이는 10∼100개이고, 이의 분자량은 대략 1200 이상에 상당한다.
또한, 특허문헌 4에는, 항산화 활성을 갖는 대두 단백질 가수 분해물로서, 바실루스 서브틸리스(Bacillus subtilis)나 아스퍼질러스 오리제(Aspergillus oryzae) 등 유래의 여러가지 프로테아제에 의한 가수 분해물이 기재되어 있고, 이 가수 분해물은 분자량이 2000 이하인 것을 여과 취득하는 것, 이 가수 분해물의 유리 아미노산의 함유 비율이 20∼30 중량％인 것이 기재되어 있다.
이들 대두 단백질 가수 분해물은 일정 항산화 활성을 갖는 것으로 인정되지만, 그 활성은 반드시 항산화제로서 실용화할 수 있는 레벨이 아니며, 더욱 높은 항산화 활성을 나타내는 대두 단백질 가수 분해물이 요구되고 있다.
비특허문헌 1: J. Agric. Food. Chem., 52, 4026-4037, 2004
본 발명은 음식품 또는 의약품에 이용 가능한, 높은 항산화 활성을 나타내는 항산화제를 제공하는 것을 과제로 하였다.
본 발명자는 본 과제에 대해서 예의 검토한 결과, 단백질 가수 분해물 중의 분자량 500 미만의 펩티드의 함량이 펩티드 및 유리 아미노산의 합계량에 대하여 50 중량％ 이상인 대두 단백질 가수 분해물을 얻음으로써, 종래보다 높은 항산화 활성을 나타내는 항산화제로 할 수 있는 것을 발견하여, 본 발명을 완성하기에 이르렀다.
즉 본 발명은, 이하의 (1)∼(13)을 제공한다.
(1) 생체의 산화가 가져오는 질병을 예방 또는 치료하는 방법에 있어서 유효 성분으로서 사용하기 위한 항산화 물질로서, 단백질 가수 분해물 중의 분자량 500 미만의 펩티드의 함량이 펩티드 및 유리 아미노산의 합계량에 대하여 50 중량％ 이상인 대두 단백질 가수 분해물을 포함하는 것을 특징으로 하는 항산화 물질,
(2) 생체의 산화가 가져오는 질병이 동맥 경화, 심근 경색, 암, 당뇨병, 알츠하이머, 또는 화분증인 상기 (1)에 기재된 항산화 물질,
(3) 상기 대두 단백질 가수 분해물은 가수 분해 후의 불용물이 제거된 것인, 상기 (1)에 기재된 항산화 물질,
(4) 비타민류, 폴리페놀류, 카로티노이드류, 사포닌류 및 알리신에서 선택되는 1종 이상의 항산화 물질을 더 포함하는, 상기 (1)에 기재된 항산화 물질,
(5) 생체의 산화가 가져오는 질병을 예방 또는 치료하기 위해 이용되는 음식품 또는 의약품의 제조에 있어서, 유효 성분인 항산화 물질로서 단백질 가수 분해물 중의 분자량 500 미만의 펩티드의 함량이 펩티드 및 유리 아미노산의 합계량에 대하여 50 중량％ 이상인 대두 단백질 가수 분해물을 첨가하는 것을 특징으로 하는, 상기 음식품 또는 의약품의 제조법,
(6) 비타민류, 폴리페놀류, 카로티노이드류, 사포닌류 및 알리신에서 선택되는 1종 이상의 항산화 물질을 병용하는, 상기 (5)에 기재된 음식품 또는 의약품의 제조법,
(7) 유효 성분으로서 단백질 가수 분해물 중의 분자량 500 미만의 펩티드의 함량이 펩티드 및 유리 아미노산의 합계량에 대하여 50 중량％ 이상인 대두 단백질 가수 분해물을 포함하는 항산화 물질을 사용하는 것을 특징으로 하는, 생체의 산화가 가져오는 질병의 예방 또는 치료 방법,
(8) 단백질 가수 분해물 중의 분자량 500 미만의 펩티드의 함량이 펩티드 및 유리 아미노산의 합계량에 대하여 50 중량％ 이상인 대두 단백질 가수 분해물을 함유하는 것을 특징으로 하는 항산화제,
(9) 상기 대두 단백질 가수 분해물은 가수 분해 후의 불용물이 제거되어 있는 대두 단백질 가수 분해물인 상기 (8)에 기재된 항산화제,
(10) 비타민류, 폴리페놀류, 카로티노이드류, 사포닌류 및 알리신에서 선택되는 1종 이상의 항산화 물질을 더 포함하는 상기 (8)에 기재된 항산화제,
(11) 상기 (8)에 기재된 항산화제가 첨가된 음식품,
(12) 상기 (8)에 기재된 항산화제를 유효 성분으로 하는 의약품,
(13) 항산화제의 제조에 있어서의, 단백질 가수 분해물 중의 분자량 500 미만의 펩티드의 함량이 펩티드 및 유리 아미노산의 합계량에 대하여 50 중량％ 이상인 대두 단백질 가수 분해의 사용 방법.
본 발명에 의해, 대두 단백질 가수 분해물로부터 특정 항산화 활성을 갖는 펩티드를 단리하는 것이 아니라, 대두 단백질 가수 분해물(펩티드 혼합물) 자체를 이용한 실용적인, 높은 항산화 활성을 나타내는 항산화제를 제공할 수 있고, 이에 의해 생체의 산화가 가져오는 동맥 경화 등의 질병의 예방 또는 치료에 유용하게 쓸 수 있다.
도 1은 단백질 가수 분해물 중의 분자량 500 미만의 펩티드의 함량과 ORAC값의 상관 관계를 나타내는 그래프이다.
본 발명의 항산화제, 본 발명의 생체의 산화가 가져오는 질병을 예방 또는 치료하는 방법에 있어서 유효 성분으로서 사용하기 위한 항산화 물질, 본 발명의 생체의 산화가 가져오는 질병을 예방 또는 치료하기 위해 이용되는 음식품 또는 의약품의 제조법, 혹은 본 발명의 생체의 산화가 가져오는 질병의 예방 또는 치료 방법은, 단백질 가수 분해물 중의 분자량 500 미만의 펩티드의 함량이 펩티드 및 유리 아미노산의 합계량에 대하여 50 중량％ 이상인 대두 단백질 가수 분해물을 함유하거나, 또는 유효 성분으로서 사용하는 것을 특징으로 한다. 이하, 본 발명에 대해서 구체적으로 설명한다.
(대두 단백질 원료)
본 발명에 따른 대두 단백질 가수 분해물은, 대두 단백질 원료를 프로테아제에 의해 가수 분해한 것이다. 여기서 대두 단백질 원료의 일례로서, 온전한 대두나 탈지 대두 등으로부터 단백질 성분을 물로 추출하고, 비지 성분을 제거한 전지 두유나 탈지 두유를 들 수 있다. 대두 단백질 원료의 다른 일례로서, 이들 두유로부터, 한외 여과막에 의한 처리나 산을 이용한 등전점 침전 등에 의해 단백질을 농축시킨 분리 대두 단백질을 들 수 있다. 대두 단백질 원료의 또 다른 예로서, 대두로부터 산 세정이나 에탄올 세정에 의해 훼이 성분을 제거하고 단백질을 농축한 농축 대두 단백질이나, 대두를 분쇄한 대두 가루를 들 수 있다. 이들 대두 단백질 원료는 살균·건조한 것이어도 좋다. 또한, 최종적으로 얻어지는 대두 단백질 원료는, 단백질을 건조 중량으로 80 중량％ 이상 포함하는 것이 바람직하고, 예컨대 분리 대두 단백질 등이 바람직하다.
분리 대두 단백질은 일반적으로는 이하와 같이 조제되는 것이다. 즉, 탈지 대두에 물을 부가하여, 중성 부근에서 추출을 행하고, 비지를 분리하여 두유를 얻는다. 다음에 두유를 pH 4.5 부근으로 조정하고, 등전점 침전물을 회수한다. 침전물에 물 및 알칼리제를 부가하여, 고형분 농도 5∼15 중량％, pH 5.7∼8.0 바람직하게는 pH 6.8∼7.5 부근의 수용액을 얻는다. 이렇게 하여 얻어진 분리 대두 단백질은, 용액을 그대로 이하의 공정에 이용하여도 좋고, 미살균인 것 또는 살균한 것을 건조 후에 재차 용해하여 이용하여도 좋다. 환원당을 미리 수용액으로 하고, 이것에 대두 단백질 원료를 용해시키는 것도 가능하다. 단, 분리 대두 단백질은 상기 제법에만 한정되는 것이 아니며, 상기 제법을 여러가지 개변한 것이어도 좋은 것은 물론이다.
(대두 단백질 가수 분해물)
본 발명에 따른 대두 단백질 가수 분해물은, 상기 대두 단백질 원료를 프로테아제 처리함으로써 얻어지는 펩티드 혼합물이다. 상기 단백질 가수 분해물은 분해도가 보다 높은 것이 바람직하고, 특히 가수 분해물 중에 있어서의 펩티드 및 유리 아미노산의 합계량에 차지하는 분자량 500 미만의 펩티드의 비율이 높은 것이 바람직하다. 구체적으로는, 단백질 가수 분해물 중의 분자량 500 미만의 펩티드의 함량이 펩티드 및 유리 아미노산의 합계량에 대하여 50 중량％ 이상인 것이 중요하고, 60 중량％ 이상인 것이 보다 바람직하다.
이 분자량 500 미만의 펩티드는, 아미노산이 2∼3분자 결합한 디펩티드 및 트리펩티드로 실질적으로 구성되는 것이다.
분자량 500 미만의 펩티드의 함량은, 펩티드용 겔 여과 크로마토그래피에 의해 단백질 가수 분해물에 있어서의 분자량 500 미만의 펩티드 및 유리 아미노산 분획의 비율을 측정한 후, 아미노산 분석에 의해 산출한 단백질 가수 분해물 중의 유리 아미노산 함량을 뺌으로써 산출하는 것으로 한다.
상기한 바와 같이 특정되는 대두 단백질 가수 분해물은 분자량 500 미만의 펩티드 이외의 펩티드 및 유리 아미노산의 비율을 될 수 있는 한 저감한 것이 바람직하다. 즉, 단백질 가수 분해물 중의 유리 아미노산 함량은 펩티드 및 유리 아미노산의 합계량에 대하여 12 중량％ 이하인 것이 바람직하고, 5 중량％ 이하인 것이 보다 바람직하며, 3 중량％ 이하가 보다 바람직하다. 또한, 상기 단백질 가수 분해물 중의 펩티드체는 보다 저분자인 것이 바람직하기 때문에, 단백질 가수 분해물 중의 분자량 500 이상의 분획 비율이 펩티드 및 유리 아미노산의 합계량에 대하여 40 중량％ 이하인 것이 바람직하고, 38 중량％ 이하인 것이 보다 바람직하며, 35 중량％ 이하가 보다 바람직하다.
(프로테아제)
본 발명에 따른 대두 단백질 가수 분해물을 얻기 위해 사용하는 프로테아제는, 동물 기원, 식물 기원 또는 미생물 기원을 불문하고, 프로테아제의 분류에 있어서 「금속 프로테아제」, 「산성 프로테아제」, 「티올 프로테아제」, 「세린 프로테아제」로 분류되는 프로테아제, 바람직하게는 「금속 프로테아제」, 「티올 프로테아제」, 「세린 프로테아제」로 분류되는 프로테아제 중에서 적절하게 선택할 수 있다. 특히 2종류 이상, 혹은 3종류 이상의 다른 분류에 속하는 효소를, 순차 혹은 동시에 작용시키는 분해 방법이 분자량 500 미만의 펩티드의 비율을 증가시킬 수 있어, 바람직하다.
이 프로테아제의 분류는, 효소 과학의 분야에서 통상 행해지고 있는 활성 중심의 아미노산의 종류에 따른 분류 방법이다. 각각의 대표로서 「금속 프로테아제」에는 바실러스(Bacillus) 유래 중성 프로테아제, 스트렙토마이세스(Streptomyces) 유래 중성 프로테아제, 아스퍼질러스(Aspergillus) 유래 중성 프로테아제, 『서모아제』 등을 들 수 있고, 「산성 프로테아제」에는 펩신, 아스퍼질러스(Aspergillus) 유래 산성 프로테아제, 『수미자임 FP』 등을 들 수 있으며, 「티올 프로테아제」에는 브로멜라인, 파파인 등을 들 수 있고, 「세린 프로테아제」에는 트립신, 키모트립신, 서브틸리신, 스트렙토마이세스(Streptomyces) 유래 알칼리 프로테아제, 『알칼라제』, 『비오프라제』 등을 들 수 있다. 이들 이외의 효소라도 작용 pH나 저해제와의 반응성에 의해, 그 분류를 확인할 수 있다. 활성 중심이 다른 효소 사이에서는, 기질에의 작용 부위가 크게 다르기 때문에, 「잔류물」을 줄여, 효율적으로 효소 분해물을 얻을 수 있다. 또한, 다른 기원(기원 생물)의 효소를 병용함으로써, 더욱 효율적으로 효소 분해물을 제조할 수 있다. 동분류라도 기원이 다르면, 기질인 단백질에의 작용 부위도 다르고, 결과로서 분자량 500 미만의 펩티드의 비율을 늘릴 수 있다. 이들 프로테아제는 엑소 프로테아제 활성이 적은 것이 바람직하다.
프로테아제 처리의 반응 pH나 반응 온도는, 이용하는 프로테아제의 특성에 맞추어 설정하면 좋고, 통상, 반응 pH는 최적 pH 부근에서 행하며, 반응 온도는 최적 온도 부근에서 행하면 좋다. 대략 반응 온도는 20∼80℃, 바람직하게는 40∼60℃이다. 반응 후는 효소를 실활시키는 데 충분한 온도(60∼170℃ 정도)까지 가열하여, 잔존 효소 활성을 실활시킨다.
프로테아제 처리 후의 반응액은, 그대로 또는 농축하여 이용할 수도 있지만, 통상, 살균하여, 분무 건조, 동결 건조 등에 의해 건조 분말의 상태로 이용한다. 살균은, 가열 살균이 바람직하고, 가열 온도는 110∼170℃가 바람직하며, 130∼170℃가 더욱 바람직하다. 가열 시간은 3∼20초간이 바람직하다. 또한, 반응액을 임의의 pH로 조정하여도 좋다. 프로테아제 처리 시나 pH 조정 시에 발생하는 불용물(침전물이나 현탁물)을 원심 분리나 여과 등에 의해 제거하여도 좋다. 불용물의 제거는, 대두 단백질 가수 분해물의 항산화 활성을 향상시킬 수 있기 때문에, 바람직하다. 또한 활성탄이나 흡착 수지에 의해 정제하여도 좋다.
(항산화 작용)
본 발명에 따른 단백질 가수 분해물 중의 분자량 500 미만의 펩티드의 함량이 펩티드 및 유리 아미노산의 합계량에 대하여 50 중량％ 이상인 대두 단백질 가수 분해물은, 높은 항산화 활성을 나타내어, 생체의 산화가 가져오는 질병을 예방 또는 치료하기 위한 유효 성분으로서 이용할 수 있다. 상기 가수 분해물이 갖는 항산화 활성에 대해서는, 비특허문헌 1에 기재된 방법으로 측정되는 「ORAC」(Oxygen Radical Absorbance Capacity: 활성 산소 흡수 능력)의 값(단위: μ㏖ TE/g)을 지표로 할 수 있다. 또한, 단위의 「TE」는 "Trolox equivalent"의 약칭이며, 「Trolox」는 표준 물질인 「6-히드록시-2,5,7,8-테트라메틸크로만-2-카르복실산」의 등록 상표이다. ORAC값이 높을수록 활성 산소 흡수 능력, 즉 항산화 활성이 높은 것을 나타내며, 본 발명에 따른 단백질 가수 분해물 중의 분자량 500 미만의 펩티드가 높은 대두 단백질 가수 분해물의 ORAC값은 350 μ㏖ TE/g 이상인 것이 바람직하고, 450 μ㏖ TE/g 이상이 보다 바람직하며, 500 μ㏖ TE/g 이상이 더 바람직하다.
(다른 항산화 물질과의 병용)
본 발명에 따른 단백질 가수 분해물 중의 분자량 500 미만의 펩티드의 함량이 펩티드 및 유리 아미노산의 합계량에 대하여 50 중량％ 이상인 대두 단백질 가수 분해물을 그 외의 항산화 활성을 나타내는 물질 또는 이들을 포함하는 엑기스를 1종 이상 병용함으로써, 항산화 활성을 상승적으로 높일 수 있다. 다른 항산화 물질을 병용하는 형태는 특별히 한정되지 않고, 미리 본 발명에 따른 대두 단백질 가수 분해물과 혼합하여, 혼합 제제화한 것을 사용할 수 있으며, 또한, 본 발명에 있어서 대두 단백질 가수 분해물을 사용할 때에 다른 항산화 물질을 별도 첨가하여 사용하는 것도 가능하다.
다른 항산화 물질로서는, 예컨대 비타민류, 폴리페놀류, 카로티노이드류, 사포닌류, 알리신 등을 들 수 있다. 비타민류로서는, 비타민 C, 비타민 A, 비타민 E 등을 들 수 있다. 폴리페놀류로서는, 이소플라본, 케르세틴, 미리세틴, 캠페롤, 헤스페리딘, 나린진, 안토시아닌, 카테킨, 크리신, 아피제닌, 루테올린 등의 후라보노이드류나, 세사민, 세사미놀, 세사미놀, 에피세사민, 세사몰, 세사몰린 등의 리그난류 외에, 피크노제놀, 커큐민, 클로로겐산, 몰식자산, 로즈마린산, 엘라그산, 쿠마린, 페룰산, 쇼가올, 카카오매스폴리페놀 등을 들 수 있다. 카로티노이드류로서는, 카로틴(α-,β-,γ-,δ-)이나 리코펜 등의 카로틴류, 혹은, 루테인, 아스타크산틴, 제아크산틴, 칸타크산틴, 푸코크산틴, 안테라크산틴, 비올라크산틴, 캡사이신 등의 크산토필류 등을 들 수 있다. 사포닌류로서는, 퀼라야사포닌 등의 생약 유래의 사포닌이나, 대두 사포닌, 차 사포닌 등을 들 수 있다. 이들 항산화 물질을 이용하는 경우, 이들이 포함되는 식물 엑기스를 대신에 이용할 수 있고, 예컨대 안토시아닌을 이용하는 경우는 블루베리 엑기스, 카시스 엑기스, 아사이 엑기스, 엘더베리 엑기스 등을 이용할 수 있다. 상기 항산화 활성을 나타내는 물질 또는 엑기스 중, 특히 비타민 C, 피크노제놀, 아사이 엑기스, 커큐민 또는 세사민을 병용하면 보다 상승 효과가 강하여 바람직하다.
(음식품에 있어서의 이용)
본 발명에 따른 단백질 가수 분해물 중의 분자량 500 미만의 펩티드의 함량이 펩티드 및 유리 아미노산의 합계량에 대하여 50 중량％ 이상인 대두 단백질 가수 분해물은, 이것을 유효 성분으로 하는 항산화제로서, 여러가지 음식품에 이용할 수 있다. 예컨대, 음식품 자체의 산화 방지를 목적으로 하여 음식품에 첨가할 수 있다. 또한, 본 발명에 따른 단백질 가수 분해물 중의 분자량 500 미만의 펩티드의 함량이 펩티드 및 유리 아미노산의 합계량에 대하여 50 중량％ 이상인 대두 단백질 가수 분해물을 첨가함으로써 섭취한 사람에게 생리 기능으로서의 항산화력이 발휘되어, 생체의 산화가 가져오는 하기의 질병을 예방할 수 있는 음료, 타블렛, 푸드 바, 샐러드용 드레싱, 육류 제품, 스낵 과자, 디저트, 과자류 및 영양 보조제 등을 얻을 수 있다.
(의약품에 있어서의 이용)
본 발명에 따른 단백질 가수 분해물 중의 분자량 500 미만의 펩티드의 함량이 펩티드 및 유리 아미노산의 합계량에 대하여 50 중량％ 이상인 대두 단백질 가수 분해물은, 의약품으로서도 이용할 수 있다. 생체의 산화가 가져오는 질병으로서 동맥 경화, 심근 경색, 암, 당뇨병, 알츠하이머, 화분증 등을 들 수 있는데, 이들 질병을 예방 및 치료하기 위한 의약품으로서 이용할 수 있다. 의약품의 형태로서 제공하는 경우는, 액체, 산제, 정제, 캡슐 등의 여러가지 형태로 사용할 수 있다.
실시예
이하, 실시예에 의해 본 발명을 보다 구체적으로 설명한다.
(측정 방법)
우선 실시예에서 이용한 각종 측정 방법에 대해서 이하에 정리한다.
<단백질 함량>
105℃, 12시간 건조시킨 대두 단백질 분획의 중량에 대하여, 켈달법에 따라 측정한 단백질량의 중량을, 건조물 중의 단백질 함량으로 하여 「％」로 나타내었다. 또한, 질소 환산 계수는 6.25로 하였다.
<유리 아미노산 및 펩티드의 함량>
대두 단백질 가수 분해물의 분자량 분포를, 이하의 겔 여과 컬럼을 이용한 HPLC법에 따라 측정하였다.
펩티드용 겔 여과 컬럼을 이용한 HPLC 시스템을 구성하여, 분자량 마커가 되는 기지의 펩티드를 충전하고, 분자량과 유지 시간의 관계에 있어서 검량선을 구하였다. 또한, 분자량 마커는, 옥타 펩티드로서 [β-Asp]-Angiotensin II의 β-Asp-Arg-Val-Tyr-Ile-His-Pro-Phe(분자량 1046), 헥사펩티드로서 Angiotensin IV의 Val-Tyr-Ile-His-Pro-Phe(분자량 775), 펜타펩티드로서 Leu-Enkephalin의 Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu(분자량 555), 트리펩티드로서 Glu-Glu-Glu(분자량 405), 유리 아미노산으로서 Pro(분자량 115)를 이용하였다. 단백질 가수 분해물(1％)을 10,000 rpm, 10분으로 원심 분리한 상청을, 겔 여과용 용매로 2배로 희석하여, 그 5 ㎕를 HPLC에 어플라이하였다.
단백질 가수 분해물 중의 유리 아미노산 및 분자량 500 미만의 펩티드 분획의 비율(％)은, 전체의 흡광도의 차트 면적에 대한, 분자량 500 미만의 범위(시간 범위)의 면적의 비율에 의해 구하였다(사용 컬럼: Superdex Peptide 7.5/300 GL(GE 헬스케어·재팬 가부시키가이샤 제조), 용매: 1％ SDS/10 mM 인산 완충액, pH 8.0, 컬럼 온도 25℃, 유속 0.25 ㎖/min, 검출 파장: 220 ㎚).
또한 단백질 가수 분해물 중의 분자량 500 이상의 펩티드 분획의 비율(％)은, 상기와 같이, 전체의 흡광도의 차트 면적에 대한, 분자량 500 이상의 범위의 면적의 비율에 의해 구하였다.
다음에, 아미노산 분석에 의해 단백질 가수 분해물 중의 유리 아미노산 함량의 측정을 행하였다. 단백질 가수 분해물(4 ㎎/㎖)을 등량의 3％ 술포살리실산에 부가하여, 실온에서 15분간 진탕하였다. 10,000 rpm으로 10분간 원심 분리하고, 얻어진 상등액을 0.45 ㎛ 필터로 여과하여, 아미노산 분석기 「JLC500V」(니혼덴시(주) 제조)로, 유리 아미노산을 측정하였다. 단백질 가수 분해물 중의 유리 아미노산 함량은 켈달법으로 얻어진 단백질 함량에 대한 비율로서 산출하였다.
이상으로부터 얻어진, 「유리 아미노산 및 분자량 500 미만의 펩티드 분획의 비율」로부터 「유리 아미노산 함량」을 뺀 값을, 단백질 분해물 중의 「분자량 500 미만의 펩티드의 함량」으로 하였다.
<ORAC값의 측정>
얻어진 샘플에 대해서 각각, 100 ㎎ 칭량하여 50％ 에탄올에 용해시켜 100 ㎖의 일정부피로 하여, 비특허문헌 1에 기재된 방법에 준하여 측정을 행하였다. 정량은 표준 물질로서 「Trolox」(등록 상표, 키시다카가쿠(주)로부터 구입)를 이용하며, 각 측정값을 이용하여 산출하였다.
(제조예 1) 분리 대두 단백질의 조제
저변성 탈지 대두로부터 이하와 같이 분리 대두 단백질을 조제하였다.
(1) 저변성 탈지 대두의 온수 추출 슬러리를 원심 분리기로 비지 분획을 제거하여 탈지 두유로 하였다.
(2) 얻어진 탈지 두유의 pH를 4.5로 조정하여 등전점 침전하고, 원심 분리기로 산침전 카드를 얻어 중화하였다.
(3) 얻어진 각 분획을 중화하여, 120℃에서 10초간 가열 살균을 행하였다.
(제조예 2) 대두 단백질 가수 분해물의 조제(대두 단백질 가수 분해물 A, B)
제조예 1에서 얻어진 분리 대두 단백질의 10％ 용액을 작성하고, 『알칼라제』(노보자임스재팬(주) 제조)를 0.2％, 혹은 0.5％ 첨가하여, 55℃, 15분간 효소 반응을 행하였다. 효소 반응 후에 90℃, 20분간의 가열 처리에 의해 반응을 정지시킨 후, 동결 건조를 행하여 시료로 하였다(대두 단백질 가수 분해물 A, B).
(제조예 3) 대두 단백질 가수 분해물의 조제(대두 단백질 가수 분해물 C, D)
제조예 1에서 얻어진 분리 대두 단백질의 3％ 용액을 작성하고, 금속 프로테아제 『서모아제』(기원; 바실러스 써모프로테오리티커스 로코(Bacillus thermoproteolyticus Rokko), 야마토카세이(주))를 단백질당 1％ 또는 2％ 부가하여, pH 9.0, 58℃에서 60분간 효소 반응을 행하였다.
다음에 세린 프로테아제 『비오프라제』(기원; 바실러스속(Bacillus sp .), 나가세켐텍스(주))를 단백질당 0.5％ 또는 1％ 부가하여, pH 7.5, 58℃에서 60분간 효소 반응을 행하였다.
다음에 금속 프로테아제 『수미자임 FP』(기원; 아스퍼질러스 오리제(Aspergillus oryzae), 신니혼카가쿠코교(주))를 단백질당 0.5％ 또는 1％ 부가하여, pH 7.5, 58℃에서 60분간 효소 반응을 행하였다.
이상의 효소 반응 후, 효소 반응액을 90℃, 20분간의 가열 처리에 의해 반응을 정지시킨 후, 동결 건조를 행하여 시료로 하였다(대두 단백질 가수 분해물 C, D).
(제조예 4) 대두 단백질 가수 분해물의 조제(대두 단백질 가수 분해물 E, F, G)
제조예 1에서 얻어진 분리 대두 단백질의 3％ 용액을 작성하고, 제조예 3과 동일한 『서모아제』를 단백질당 1％, 1.5％ 또는 2％ 부가하여, pH 9.0, 58℃에서 60분간 효소 반응을 행하였다.
다음에 제조예 3과 동일한 『비오프라제』를 단백질당 0.5％, 0.75％ 또는 1％ 부가하여, pH 7.5, 58℃에서 60분간 효소 반응을 행하였다.
다음에 제조예 3과 동일한 『수미자임 FP』를 단백질당 0.5％, 0.75％ 또는 1％ 부가하여, pH 7.5, 58℃에서 60분간 효소 반응을 행하였다.
이상의 효소 반응 후, 효소 반응액을 90℃, 20분간의 가열 처리에 의해 반응을 정지시키고, 또한 효소 반응에 의해 생긴 불용물을 원심 분리 및 구멍 직경 1.0 ㎛의 멤브레인 필터에 의한 여과로 제거하고, 동결 건조를 행하여 시료로 하였다(대두 단백질 가수 분해물 E, F, G).
(시험예 1)
제조예 2∼4에서 얻어진 대두 단백질 가수 분해물 A∼G에 대해서 단백질 함량(％), 펩티드 및 유리 아미노산의 합계량에 차지하는 분자량 500 미만의 펩티드 함량(％), 분자량 500 이상의 펩티드 함량 및 유리 아미노산 함량, 및, ORAC값(μ㏖ TE/g)을 측정하였다(비교예 1∼4, 실시예 1∼3). 각 단백질 가수 분해물의 조제 조건 및 분석 결과를 표 1 및 도 1에 정리하였다.
도 1에 나타내는 바와 같이, 분자량 500 미만의 펩티드 함량과 ORAC값에는 높은 상관이 보이며, 상관 계수는 0.92였다. 비교예 3과 비교예 4를 비교하면, 분자량 500 미만의 펩티드 함량에 대해서는 비교예 4가 8％ 정도 높음에도 불구하고, ORAC값에 차는 거의 보이지 않았다. 한편 비교예 3과 효소 반응 조건은 동일하지만, 효소 반응 후에 불용물을 제거한 실시예 1에서는, ORAC값이 크게 향상되었다.
(시험예 2) 대두 단백질 가수 분해물과 항산화 성분의 병용에 의한 상승 효과
다음에, 제조예 4에서 얻어진 대두 단백질 가수 분해물(G)과, 항산화 활성이 높은 것이 이미 알려진 항산화 물질 또는 이것을 포함하는 엑기스의 상승 효과에 대해서, ORAC값을 측정함으로써 검증하였다.
샘플은 비타민 C과, 각종 폴리페놀의 대표예로서 대두 이소플라본, 카테킨, 블루베리 엑기스, 카시스 엑기스, 피크노제놀, 아사이 엑기스, 커큐민, 세사민을 이용하였다. 방법은, 각각의 샘플 100 ㎎을 100 ㎖의 일정부피로 한 용액과 대두 단백질 가수 분해물(G) 100 ㎎을 100 ㎖의 일정부피로 한 용액을 1:1로 혼합하여, 규정의 희석 배율로 측정을 행하였다.
ORAC값의 측정의 결과를 하기 표 2에 나타내었다. 표 1에 따르면 대두 단백질 가수 분해물(G)은 단독으로의 ORAC값은 551 μ㏖ TE/g이지만, 각종 항산화 성분과 병용함으로써, 모두 각 성분이 단독으로 갖는 항산화성(무첨가(-) 데이터 참조)이 상승적으로 증강하고 있는 것이 확인되었다(첨가(+) 데이터 참조). 또한, 항산화성의 상승 효과는 대두 단백질 가수 분해물(G)과 식품 성분을 1:1로 혼합한 것의 값이기 때문에, 식품 성분의 첨가량을 절반으로 저감하여도 항산화 효과는 식품 성분 단독보다 높은 값을 나타내게 된다. 특히, 비타민 C, 피크노제놀, 아사이 엑기스, 커큐민, 세사민과 병용한 경우에는, 이들 단독의 항산화 활성의 2배 이상의 증강 효과를 나타내며, 높은 상승 효과를 나타내는 것이 확인되었다.
Claims (13)
- 생체의 산화가 가져오는 질병을 예방 또는 치료하는 방법에 있어서 유효 성분으로서 사용하기 위한 항산화 물질로서, 단백질 가수 분해물 중의 분자량 500 미만의 펩티드의 함량이 펩티드 및 유리 아미노산의 합계량에 대하여 50 중량％ 이상인 대두 단백질 가수 분해물을 포함하는 것을 특징으로 하는 항산화 물질.
- 제1항에 있어서, 생체의 산화가 가져오는 질병이 동맥 경화, 심근 경색, 암, 당뇨병, 알츠하이머, 또는 화분증인 항산화 물질.
- 제1항에 있어서, 상기 대두 단백질 가수 분해물은 가수 분해 후의 불용물이 제거된 것인 항산화 물질.
- 제1항에 있어서, 비타민류, 폴리페놀류, 카로티노이드류, 사포닌류 및 알리신에서 선택되는 1종 이상의 항산화 물질을 더 포함하는 항산화 물질.
- 생체의 산화가 가져오는 질병을 예방 또는 치료하기 위해 이용되는 음식품 또는 의약품의 제조에 있어서, 유효 성분인 항산화 물질로서 단백질 가수 분해물 중의 분자량 500 미만의 펩티드의 함량이 펩티드 및 유리 아미노산의 합계량에 대하여 50 중량％ 이상인 대두 단백질 가수 분해물을 첨가하는 것을 특징으로 하는 음식품 또는 의약품의 제조법.
- 제5항에 있어서, 비타민류, 폴리페놀류, 카로티노이드류, 사포닌류 및 알리신에서 선택되는 1종 이상의 항산화 물질을 병용하는 음식품 또는 의약품의 제조법.
- 유효 성분으로서 단백질 가수 분해물 중의 분자량 500 미만의 펩티드의 함량이 펩티드 및 유리 아미노산의 합계량에 대하여 50 중량％ 이상인 대두 단백질 가수 분해물을 포함하는 항산화 물질을 사용하는 것을 특징으로 하는, 생체의 산화가 가져오는 질병의 예방 또는 치료 방법.
- 단백질 가수 분해물 중의 분자량 500 미만의 펩티드의 함량이 펩티드 및 유리 아미노산의 합계량에 대하여 50 중량％ 이상인 대두 단백질 가수 분해물을 함유하는 것을 특징으로 하는 항산화제.
- 제8항에 있어서, 상기 대두 단백질 가수 분해물은 가수 분해 후의 불용물이 제거되어 있는 대두 단백질 가수 분해물인 항산화제.
- 제8항에 있어서, 비타민류, 폴리페놀류, 카로티노이드류, 사포닌류 및 알리신에서 선택되는 1종 이상의 항산화 물질을 더 포함하는 항산화제.
- 제8항에 기재된 항산화제가 첨가된 음식품.
- 제8항에 기재된 항산화제를 유효 성분으로 하는 의약품.
- 항산화제의 제조에 있어서의, 단백질 가수 분해물 중의 분자량 500 미만의 펩티드의 함량이 펩티드 및 유리 아미노산의 합계량에 대하여 50 중량％ 이상인 대두 단백질 가수 분해물의 사용 방법.
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