KR20130014659A

KR20130014659A - 혼합 생약제 추출물을 유효성분으로 함유하는 염증성 장질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물

Info

Publication number: KR20130014659A
Application number: KR1020110075798A
Authority: KR
Inventors: 신흥묵; 임경직; 김해란; 전은미; 양인준
Original assignee: 동국대학교 경주캠퍼스 산학협력단
Priority date: 2011-07-29
Filing date: 2011-07-29
Publication date: 2013-02-08
Also published as: KR101710730B1

Abstract

본원 발명은 매실, 오미자, 목과 추출물 및 백급, 옥죽(玉竹), 천문동(天門冬), 산약(山藥), 백지(白芷), 백질려, 동과자(冬瓜子), 세신(細辛), 자초(紫草)로 구성된 그룹에서 선택된 것의 추출물을 유효성분으로 포함하는 염증성 장질환 예방 및 치료용 약학적 조성물 및 건강기능식품에 관한 것이다.
본원 발명의 약학적 조성물은 높은 페놀 및 플라보노이드 합량, 항산화효과 및 항염증 효과를 발휘하는바, 염증성 장질환에 효과적인 약학 조성물 및 건강기능식품으로 사용될 수 있다.

Description

혼합 생약제 추출물을 유효성분으로 함유하는 염증성 장질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물 {Pharmaceutical composition comprising extract of herb mixture for treating or preventing inflammatory bowel disease}

본 발명은 염증성 장질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다. 보다 구체적으로 더욱 상세하게는 매실, 오미자, 목과 추출물 및 백급, 옥죽(玉竹), 천문동(天門冬), 산약(山藥), 백지(白芷), 백질려, 동과자(冬瓜子), 세신(細辛), 자초(紫草)로 구성된 그룹에서 선택된 것의 추출물을 유효성분으로 포함하는 염증성 장질환 예방 및 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.

궤양성 대장염(Ulcerative Colitis, UC)은 만성 장내 염증질환으로서 (Shanahan F :Inflammatory bowel disease : immunodiagnostics, immunoothera peutics and ecotherapeutics. Gastroenterol. 120:622-635.2001), 특정한 병인 없이 소화기계에 반복적으로 재발되는 염증과 관련이 있으며, 장강(腸腔)의 항체에 의한 세포벽의 장애나 대장 상피세포의 병원체 및 장내 세균총의 비정상적인 면역반응 등에 의해 촉진되어 소화기계에 염증이 발생하는 것을 의미한다. 임상에서 흔희 복통, 설사 및 농혈성 점액변이 주요 증상이며 병변은 주로 점막이나 점막 하층에서 나타난다 (Podolsky DK. Inflammatory bowel disease. The New England Journal of Medicine. 347:417-429. 2002; Adachi M, Kurotani R, Morimura K, Shah Y, Sanford M, Madison BB, Gumucio DL, Marin HE, Peters JM, Young HA, Gonzalez FJ. Peroxisome proliferator activated receptor gamma in colonic epithelial cells protects against experimental inflammatory bowel disease. Gut. 55:1104-1113.2006).

상기 궤양성 대장염의 발병 원인 및 치료에 있어 중요한 면역학적 요인으로는 선천적 면역성, 사이토카인(cytokine)의 생성, CD4⁺의 활성화 등이 포함된다. 궤양성 대장염의 발명과 연구에 있어서 사이토카인의 역할에 대한 증거는 명확하다. 사이토카인은 염증 및 면역반응 조절에 영향을 주는 중요한 요인으로, 최근 전염증성 사이토카인의 생성에 관한 연구가 이루어지고 있다. 또한 염증 부위에서 종양괴사인자(Tumor Nerosis Factor-α, TNF-α), 인터루킨(Interleukin, IL)-1, IL-6, IL-8 생성이 궤양성 대장염환자에게 현저하게 증가되는 것이 확인되었다. 환자들의 사이토카인 생산 조절에 대한 연구는 이들 질병에 있어서 병리 생리학적으로 매우 중요함을 시사한다 (Sartor RB, Bond TM, Schwab JH. Systemic uptake and intestinal inflammatory effects of luminal bacterial cell wall polymers in rats with acute colonic injury. Infection and Immunity. 56:2101-2108.1988).

IFN-γ, IL-2, IL-4, IL-10은 궤양성 대장염의 염증 시작, 조절기능에 있어 중요한 요인들이다 (Lin CC, Shieh DE. The anti-inflammatory activity of Scutellaria rivularis extracts and its active components, baicalin, baicalein and wogonin. The American Journal of Chinese Medicine. 24:31-36.1996; Kojouharoff G, Hans W, Obermeier F, Mannel DN, Andus T, Schlmerich J, Gross V, Falk W. Neutralization of tumour necrosis factor (TNF) but not of IL-1 reduces inflammation in chronic dextran sulphate sodium-induced colitis in mice. Clinical & Experimental Immunology. 107:353-358.1997). 이와 같이 면역학적 요인은 궤양성 대장염의 발병 원인 뿐 아니라 치료에 있어서도 중요시 되고 있다.

최근 여러 다양한 실험동물 모델의 개발, 새로운 연구 기술의 발전에 힘입어 유전적, 환경적 인자와 면역학적 이상이 궤양성 대장염에 복합적으로 작용한다는 가설이 받아들여지고 있다 (Fiocchi C. Infalmmaoty bowel disease: etiology and pathogenesis. Gastroenterology. 1998. 115:182-205). 궤양성 대장염 동물모델 확립 방법에는 여러 가지가 있으나, 5% dextran sulfate sodium (DSS)로 궤양성 대장염을 유발한 동물모델이 유효 성분에 대한 치료 효과를 연구하는데 있어서 가장 좋은 모델임이 보고되고 있다 (Elson CO, Sartor RB, Tennyson GS, Riddell RH. Experimental models of inflammatory bowel disease. Gastroenterology. 1995. 109:1344). 이러한 DSS 유도모델은 식수에 DSS를 섞어 투여할 때 투여 용량에 따라 일정 정도의 염증이 유발되는 비교적 간단하고 재현성이 높은 방법이기 때문에 대장염 조절을 위한 새로운 합성 화합물의 효능평가에 많이 사용되는 가장 오래된 실험 모델 중 하나이다 (Ohkusa T. Production of experimental ulcerative colitis in hamster by dextran sulfate sodium and changes in intestinal microflora. Jpn J Gastroenterol. 1985. 82:1327; Kitajima S, Takoma S, Morimoto M. Changes in colonic mucosal permeability mouse colitis induced with with dextran sulfate sodium. Exp. Animal. 1999. 48:137-143).

궤양성 대장염 치료 및 예방하기 위해서는 여러 가지 신호전달 물질과 성장인자, 사이토카인, 면역조절인자 및 염증인자들과의 상호 작용을 통하여 염증과의 상관관계를 분석하고 규명하는 것이 염증으로 인한 장 질환을 치료 및 예방할 수 있는 획기적인 치료제의 개발에 필수적이다.

본 발명에 주된 성분인 매실(Prumus mume)는 우리나라 전역에서 많이 생산되는 매화나무의 과실로 섬유소와 유리당, sitosterol과 칼슘, 철분 등 무기질 함량이 풍부할 뿐만 아니라 succinic, crtric, malic 및 tartaric acid등의 유기산이 많은 알칼리성 식품으로 피로회복이나 노화예방에 효과가 있다고 알려져 있다(Kang MY, Jeong YH, Eun JB. Physical and chemical characteristics of flesh and pomace of Japanese apricots. Korean J.Food Sci. Technol. 1999. 31: 1434-1439; Shim KH, Sung NK, Choi JS, Kang KS. Changes in major components of Japanese apricot during ripening. J. Korean Soc. Food Nutr. 1989. 18:101-108; Cha HS, Park YK, Park JS, Park MW, Jo JS. Chaonges in firmness, mineral composition and pectic substances of mume fruits during maturation. Korean J. Postharvest. Sci. Technol. 1999. 6:488-494). 매실의 생리활성에 대한 연구로 Han 등은 매실 물 추출물 및 메탄올 추출물의 항산화 활성을 조사하였고(Han JT, Lee SY, Kim KN, Beak NI. Rutin, antioxidant compound isolated from the fruit of Prunus mume. J. Korean Soc. Agric. Chem. Biotechnol. 2001. 44:35-37) Shirasaka 등은 매실주에서 항산화 물질을 분리 동정하였다(Shirasaka N, Kurematsu A, Kondo S, Ida M, Hase T, Yoshizumi H. Isolation and characterization of antioxidative compounds from Ume liqueur. J. Japanese Soc.Food Sci. Technol. 1999. 46:792-798). 또한, Yoshihiro 등은 일본산 매실 농축액이 혈액의 흐름을 촉진시킨다고 보고하였으며(Yoshihiro C, Hiroshi O, Mayumi OK, Kousai M, Tadahiro N, Yuji K. Mumefural, citric acid deravative improving blood fluidity from fruit-juice concentrate of Japanese apricot. J. Agric. Food Chem. 1999. 47:828-831), Choi 등은 매실의 섭취가 발암물질인 아질산염을 억제하는 효과가 있다고 보고하여 매실의 다양한 생리활성이 과학적으로 검증되었다(Choi SY, Chung MJ, Sung NY. Volatile N-nitrosamine inhibition after intake Korean green tea and Maesil extract with an amin-rich diet in subjects ingesting nitrate. Food Chemical Toxicology. 2002. 40:949-957).매실을 이용한 가공제품으로는 매실 농축액, 매실차, 매실음료, 매실주, 매실 식초 등이 있으며, 매실의 기능성분으로는 유기산과 flavonoid인 naringenin 및 항산화 성분인 rutin 등이 보고되고 있다(Kim BJ, Kim JH. Biological screening of 100 plant extracts for cosmetic use: antioxidative activity and free radical scavenging activity. Int. J. Cosmet. Sci..1997. 19:299-307; Hasegawa M. Flavonoid of various Prunus species. J. Org. Chem. 1999. 24:408-409). 오미자(Schizandra chinensis Baillon)는 목련과의 과실로 오래 전부터 수렴, 자양, 강장, 목마름 등의 약효를 가지고 있어 생약원료로 한방에서 사용해 오던 재료로 중추 억제 작용, 혈압 강하 작용 및 알콜 해독작용이 있을 뿐만 아니라 암 예방, 노화 억제 및 면역조절작용 등 다양한 생리적 기능성이 보고되고 있다(Ohtaki Y, Hida T, Hiramatsu K, Kanitani M, Ohshima T, Wakita H, Aburada M, Miyamoto KI. Deoxycholoc acid as an endogenous risk factor for hepatocarcinogenesis and effects of gomisin A, a lignan component of Schizandra fruits. Anticancer Res. 1996. 16:751-755). 세계 음료시장에서는 건강 기능성을 지닌 추출물을 이용한 음료가 차지하는 비중이 점차 커지는 추세이며, 위와 같은 특징으로 인하여 오미자는 상품성 높은 원료로서 새롭게 주목받고 있다(Lee WY, Choi SY, Lee BS, Park JS. Optimization of extraction conditions from Omija by response surface methodology. Korean J. Food Preserv. 2006. 13:252-258). 모과(Chaenomelis Fructus)는 장미과에 속한 원형 또는 타원형의 과실이며 그 효능으로는 감기나 기관지염의 기침, 가래의 완화제, 특히 류머티즘, 페렴 등에 좋다고 알려져 있으며, 이외에도 모과는 향기가 좋아서 방향제로도 많이 이용되고 있다(Park JH, Lee CK. The encyclopedia of medicinal plants. Shinibooks. 2000. p.133; Lee CB. Forest Economics-mokchoganagmok. Korean plant map. Hyangmunsa. 1982. p.29).

상기 종래의 문제점을 해결하기 위하여 본 출원의 발명자들은 효과적인 염증성 장질환 예방 및 치료를 위한 약학적 조성물 개발을 위하여 예의 노력한 결과 특정 혼합 생약제 추출물이 염증성 장질환에 효과가 있음을 확인하고 본 기술을 발명함에 이르렀다.

이에 따라, 본 발명의 목적은 혼합 생약제 추출물을 유효성분으로 함유하는 염증성 장질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공함에 있다.

또한 본 발명의 목적은 상기 조성물을 포함하는 염증성 장질환 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공함에 있다.

상기와 같은 목적을 달성하기 위하여 본원 발명은 매실, 오미자, 목과 추출물 및 백급, 옥죽(玉竹), 천문동(天門冬), 산약(山藥), 백지(白芷), 백질려, 동과자(冬瓜子), 세신(細辛), 자초(紫草)로 구성된 그룹에서 선택된 것의 추출물을 유효성분으로 포함하는 염증성 장질환 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 매실, 오미자, 목과 추출물 및 백급, 옥죽(玉竹), 천문동(天門冬), 산약(山藥), 백지(白芷), 백질려, 동과자(冬瓜子), 세신(細辛), 자초(紫草) 추출물을 유효성분으로 포함하는 염증성 장질환 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명은 또한, 매실, 오미자, 목과 추출물 및 백급, 옥죽(玉竹), 천문동(天門冬), 산약(山藥), 백지(白芷), 백질려, 동과자(冬瓜子), 세신(細辛), 자초(紫草)로 구성된 그룹에서 선택된 것의 추출물을 유효성분으로 포함하는 염증성 장질환 예방 및 개선용 건강기능 식품을 제공한다.

또한, 본 발명은 매실, 오미자, 목과 추출물 및 백급, 옥죽(玉竹), 천문동(天門冬), 산약(山藥), 백지(白芷), 백질려, 동과자(冬瓜子), 세신(細辛), 자초(紫草) 추출물을 유효성분으로 포함하는 염증성 장질환 예방 및 개선용 건강기능식품을 제공한다.

본원 발명의 약학적 조성물은 높은 페놀 및 플라보노이드 합량, 항산화효과 및 항염증 효과를 발휘하는바, 염증성 장질환에 효과적인 약학 조성물 및 건강기능식품으로 사용될 수 있다.

도 1은 DSS로 염증성 장질환이 유도된 동물모델에 관한 것이다.
도 2는 매실 및 혼합물의 phenol, flavonoid 함량에 관한 것이다.
도 3은 매실 및 혼합물의 DPPH radical 소거능 측정결과이다.
도 4는 매실 및 혼합물의 ABTS radical 소거활성 측정결과이다.
도 5는 매실 및 혼합물이 DSS로 유도된 동물모델의 체중과 식이섭취량에 미치는 영향을 비교한 결과이다. A: control B: 매실 C: 매실 혼합물 D: DSS E: DSS+매실 F: DSS+매실 혼합물 G: DSS+sulfasalazine
도 6은 매실 및 혼합물이 DSS로 유도된 동물모델 비장의 CD4, CD8 생성량을 측정한 결과이다. A: control B: 매실 C: 매실 혼합물 D: DSS E: DSS+매실 F: DSS+매실 혼합물 G: DSS+sulfasalazine
도 7은 매실 및 혼합물이 DSS로 유도된 동물모델 혈청에서 IgA, IgE의 생성량을 측정한 결과이다. A: control B: 매실 C: 매실 혼합물 D: DSS E: DSS+매실 F: DSS+매실 혼합물 G: DSS+sulfasalazine
도 8은 매실 혼합물이 DSS로 유도된 동물모델의 비장에서의 TNF-α, COX-2 의 생성량을 측정한 결과이다. A: control B: 매실 C: 매실 혼합물 D: DSS E: DSS+매실 F: DSS+매실 혼합물 G: DSS+sulfasalazine
도 9는 매실 및 혼합물의 장내 유해세균 억제 활성을 비교한 결과이다.

본원 발명은 매실, 오미자, 목과 추출물 및 백급, 옥죽(玉竹), 천문동(天門冬), 산약(山藥), 백지(白芷), 백질려, 동과자(冬瓜子), 세신(細辛), 자초(紫草)로 구성된 그룹에서 선택된 것의 추출물을 유효성분으로 포함하는 염증성 장질환 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

이하, 본 발명을 실시예에 의거하여 보다 구체적으로 설명한다. 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.

< 실시예1 > 재료 및 방법

1-1: 시약

DSS[dextran sodium sulfate]는 Sigma (St, Louis, USA)에서 구매하였다. IgA, IgE antibody는 Zymed Laboratory(San Francisco, USA), Folin-Ciocalteu's reagent, Griess reagent, potassium persulfate, 1,1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl(DPPH), potassium ferrixyanide, sodium nitrite, aluminium chloride, gallic acid는 Sigma Co.(St, Louis, Mo, USA)에서 구매 하였으며, Concanavalin A는 Wako Pure Chemical Industries, Ltd. (Osaka, Japan)에서 구매하였다. 이외 buffer 및 생화학 관련 시약들은 ACS급으로 sigma에서 구매하여 사용 하였다.

1-2: 추출물의 준비

매실, 오미자, 목과 혼합물을 1:1:1, 7:2:1, 5:3:2의 비율로 각각 10배수의 증류수를 용매로 하여 60℃에서 24시간 동안 추출하였으며 (이하 매실로 생략하여 지칭), “백급, 옥죽(玉竹), 천문동(天門冬), 산약(山藥), 백지(白芷), 백질려, 동과자(冬瓜子), 세신(細辛), 자초(紫草)를 각각 1:1:1:1:1:1:1:1:1 비율로 혼합한 후, 10배수의 증류수를 용매로 하여 60℃에서 24시간 동안 추출하여 매실, 오미자, 목과 혼합물인 액상 추출물의 10%로 첨가하여 실험에 사용하였다 (이하 혼합물로 지칭).

1-3: Phenol 함량 측정

총 페놀 함량은 gallic acid를 standard 물질로 사용한 Folin-Cicalteu 방법으로 측정했다. Standard 물질을 0.20, 0.15, 0.10, 0.05, 0 mg/ml의 농도로 실험해 y=0.575x-0.447, R²=0.997의 standard 곡선을 얻었다. 희석한 샘플 0.4ml을 1mol당 0.2mL/L Folin-Ciocalteu reagent와 0.6 mL의 Na2CO3(20%, w/v)와 섞은 후 암실에 30분간 둔다. 반응이 완료된 후, UV-visible spectrophotometer (Sunrise Basic Tecan, Austria)를 이용해 700nm에서 측정한다. 측정 후 얻어진 페놀 농도에 희석 배수를 곱해서 총 페놀 함량 값을 얻는다.

1-4: Flavonoid 함량 측정

총 플라보노이드 함량은 colorimetric 방법을 약간 변형해서 측정하였다.(Samad and others 2010) 요약하면, 0.025ml의 샘플 또는 카테킨 standard 용액(0.05에서 0.5mg/ml)을 96-well plate에 0.125ml의 증류수와 섞는다. 그 다음 5% sodium nitrite 용액 0.08ml을 첨가하고 5분간 실온에 둔 후 10% aluminium chloride 용액 0.015ml을 첨가한다. 잘 섞은 후 6분간 실온에 둔 후 1M sodium hydroxide 0.050ml를 첨가한다. 마지막으로 0.027ml의 증류수를 첨가한 후 잘 섞은 후 510nm에서 측정한다.

1-5: DPPH radical 소거능 측정 방법

standard로 쓰일 표준 합성산화방지제인 BHT (10 mg/ml)은 무수 에탄올에서 만들어졌다. 희석시켜 농도범위는 0.6에서 3.0mg/ml로 했다. 용해된 용액(0.08ml)은 0.24 M DPPH-에탄올 용액 0.08 ml과 섞는다. 이 용액을 실온에서 빛을 차단한 채 30분을 유지하면 반응이 일어난다. 용액의 자외선(UV) 흡광도는 517nm에서 분광광계도에 기록된다. free radical DPPH의 저해율(I%)은 다음과 같이 계산된다:

[(Ablank - Asample)/Ablank] × 100

A blank는 대조반응의 흡광도(test compound를 제외한 모든 reagent를 포함)이다. A sample은 test compound의 흡광도이다. 샘플은 저해도가 각기 다르고, 샘플의 농도에 따라 graph plotting inhibition percentage가 계산된다. 실험은 3번 반복하고 수치는 ± SD 로 작성한다.

1-6: ABTS radical 소거활성

1.0mM AAPH (2,2-azobis-(2-amidinopropane)HCl)와 2.5mM NaCl 더해진 100mM phosphate buffer(pH 7.4)와 함께 혼합하여 68℃ wather bath에서 30분 동안 열을 가하고 실온에서 10분 동안 식힌다. ABTS 용액은 734nm에서 흡광도 값이 0.650±0.020이 나오도록 buffer로 희석시켜 사용하였다. 시료용액 20㎕에 흡광도 값을 맞춘 ABTS 용액 980㎕를 혼합하여 37℃에서 10분간 반응시키고, 734nm에서 흡광도를 측정하였으며 아래의 식에 의해 라디칼 소거활성을 계산하였다.

Radical scavenging activity(%)=[대조구의 흡광도-시료의 흡광도/대조구의 흡광도]*100

1-7: DSS 로 유도된 염증성 장질환 모델

마우스의 식수에 5% DSS를 첨가하여 1주일간 자유 급식으로 투여하여 염증성 장질환 모델을 일으킨 후 보통의 음용수를 교체하였다. 그 후 마우스를 희생하여 DSS 처리군과 미처리군에서 혈청과 spleen, MLN, PP를 분리하여 효소 항체법을 이용하여 IgA와 IgE의 농도를 측정하였다.

1-8: Spleen 적출 및 배양

Mouse로부터 spleen을 적출하기 위해 4주령의 Balb/c mouse를 경추 탈골하였다. 희생시킨 mouse를 70% 알콜로 소독하고 복강주위의 표피를 벗겨낸 후, 복강중심부위를 1cm-2cm가량 절개하였다. 절개된 복강에서 spleen을 적츨하여 RPMI 1640 배지에서 세포를 분리해 내었다. 1,500rpm에서 4℃, 10min 3번씩 원심분리하였다. 원심분리한 spleen에는 간혹 소량의 혈액이 침전되어 있었으므로, 0.2% NaCl을 넣고 30초간 pipette으로 혼합시켜 적혈구를 용혈시킨후 1.6% NaCl을 넣어 등장액을 만들고 1,500rpm에서 4℃ 10min으로 원심분리하였다. 원심분리후 생성된 상층을 제거하였다. 세포의 pellet에 RPMI 1640 media에 세포가 하나씩 분리 될 수 있도록 pipetting 하였다. 96well plate에 세포를 분주한 후 Concanavaline A를 처리하여 항체의 변화량을 측정하였다.

1-9: TNF -α, COX -2 cytokine 을 Western blot 을 이용하여 측정

Anti-mouse cytokine의 항체를 coat한 96 well plate에 임파구의 배양상층을 50μl씩을 첨가하여, 2차 항체에 biotin화시킨 anti-cytokine등의 각 항체를 반응시킴. 1시간 동안 37°C에서 배양한 후 peroxidase 혹은 streptoavidin 등을 결합시킨 각 substrate를 100μl첨가한 후 1시간 실온에서 배양함. 각 스텝은 0.05% Tween 20 in PBS (TPBS)로 세척하며 마지막으로, 1.5% oxalic 산을 첨가하여 반응을 정지시킴. 동일한 과정을 통하여 Purified cytokine을 standard로 정한 후 비교 정량함.

1-10: 병원성 장내 미생물 생장억제를 Disc Diffusion 을 이용하여 측정

Tryptic Soy Broth Agar를 얇게 plate에 깔아서 준비한 후에, LB broth에 장내 미생물을 37℃에서 증식시켜준다. Tryptic Soy Broth + 0.8% agar 배지 10ml에 미생물 배양액을 100μl 넣고 잘 섞은 뒤, 앞의 plate에 붓고, 배지가 굳으면 그 위에 paper disc를 올려준 후, 농도별 샘플들을 각 disc에 25μl씩 접종한다. 37℃에 배양한 후 측정한다.

1-11: 통계분석

이 연구의 실험 및 분석 결과의 통계처리는 SPSS program (SPSS Inc., Version 12.0)을 사용하여 One-way ANOVA-test를 실시하여 Duncan's multiple range test (Duncan (1955) P < 0.05)로 평균간의 유의성을 검정하였다.

< 실시예2 > 결과

2-1: 매실 (매실, 오미자, 목과혼합물 ) 및 혼합물 (매실, 오미자, 목과 혼합물에 “ 백급 , 옥죽 ( 玉竹 ), 천문동 (天門冬), 산약( 山藥 ), 백지( 白芷 ), 백질려 , 동과자 ( 冬瓜子 ), 세신(細辛), 자초( 紫草 )를 각각 1:1:1:1:1:1:1:1:1 비율로 혼합한 액상 추출물)의 phenol , flavonoid 측정

매실 및 혼합물의 항산화 활성을 확립하고자 phenol, flavonoid를 측정하였다. 매실 및 혼합물의 phenol 측정결과 매실에서는 20.157±0.035, 매실 혼합물에서는 37.364±0.042로 모두 양호한 결과를 나타내었으며 매실 혼합물에서 보다 좋은 결과를 나타내었다. Flavonoid 측정결과도 매실 30.247±0.025, 매실 혼합물 56.146±0.021로 매실 혼합물에서 보다 좋은 결과를 나타내었다 (도2).

2-2: DPPH radical 소거능 측정

매실 및 혼합물의 항산화 활성을 확립하고자 DPPH radical 소거능을 측정하였다. 결과 매실과 혼합물 모두 농도 의존적으로 억제 활성을 나타내었고 특히 혼합물은 낮은 농도에서도 높은 활성을 나타냈다. (도3)

2-3: ABTS radical 소거활성

매실 및 혼합물의 항산화 활성을 확립하고자 ABTS radical 소거활성을 측정하였다 (도4). 측정결과 혼합물에서 더 높은 소거활성을 나타내었다.

2-4: 매실 및 혼합물이 염증성 장질환이 유도된 동물모델의 체중과 식이섭취량에 미치는 영향

도5에서는 매실 혼합물이 염증성 장질환이 유도된 동물모델에서 체중과 식이섭취량을 측정하였다. DSS로 유도된 군에 비하여 매실 혼합물을 투여한 군에서 체중이 증가하는 것을 확인하였고 식이 섭취량 역시 증가하는 것을 확인할 수 있었다.

2-5: Flow cytometer 를 이용한 CD4 , CD8 의 생성량 측정

도6에서는 매실 혼합물이 장질환 동물모델의 비장 임파구 T세포 집단에 미치는 영향을 측정해본 결과 DSS군에 비해 혼합물 투여군에서 CD8 T세포의 함량이 낮게 나타났고 CD4/CD8 비율은 DSS군보다 혼합물 투여군에서 높게 나타남으로써 혼합물을 섭취시킨 군에서 CD4 T세포의 활성화 및 CD8 T세포에 의한 TH2 세포의 면역기능이 저하되어 염증성 질환 증상이 완화된 것으로 사료된다.

2.6. 매실 및 혼합물이 염증성 장질환이 유도된 동물모델에서 혈청의 IgA 및 IgE 의 농도에 미치는 영향

도7에서는 혈청 내 IgE 및 IgA의 생성량을 확인하기 위하여 혈액을 안구 채취법에 의해 500ul 취하여 원심 분리기를 이용하여 형철과 혈구를 분리하여 혈청만을 사용하였다. 준비된 혈청의 IgE 및 IgA의 생성량을 ELISA assay로 확인 하였다. IgE 및 IgA의 생성량을 DSS로 유도한 군과 비교 하였을 때, IgA와 IgE의 농도 모두 유의적으로 감소시키는 것을 보아 이는 항염증 기전에 작용해 손상된 염증 등의 회복에 효과가 있음을 나타내는 것으로 사료된다.

2.7. 염증성 장질환이 유도된 동물모델 비장의 염증 전사인자 및 염증 사이토카인 발현에 미치는 효과

도 8은 비장 내 염증사이토카인인 TNF-α, COX-2 발현양을 확인하기 위하여 비장을 적출하여 homogenizer와 500ul Lysis buffer을 이용하여 조직을 분쇄하였다. 원심 분리기를 이용하여 lysate를 얻어 이들 염증 사이토카인의 생성량을 Western blot으로 확인 하였다. 결과 DSS군에 비해 매실 혼합물을 투여한 군에서 TNF-α, COX-2의 발현량이 감소하는 것을 확인하였고 특히 cox-2에서 발현량이 뚜렷이 감소하는 것으로 cox-2의 분비억제 효과를 나타내었습니다.

2.8. 개별시료 및 혼합물의 장내 유해세균 억제활성 - 디스크 확산법

매실 혼합물의 장내 유해 세균의 생장 억제능을 디스크 확산법을 이용하여 확인 하였다. 시료의 농도는 각각 0, 1, 2, 5, 10 mg씩 사용하였고 대조군은 ampicillin을 사용하였다. 매실 및 혼합물 모두 E.coli에서 억제 활성을 보였고 혼합물에서 보다 뚜렷한 변화를 관찰할 수 있었다 (도9).

Claims

매실, 오미자, 목과 추출물 및 백급, 옥죽(玉竹), 천문동(天門冬), 산약(山藥), 백지(白芷), 백질려, 동과자(冬瓜子), 세신(細辛), 자초(紫草)로 구성된 그룹에서 선택된 것의 추출물을 유효성분으로 포함하는 염증성 장질환 예방 및 치료용 약학적 조성물.
매실, 오미자, 목과 추출물 및 백급, 옥죽(玉竹), 천문동(天門冬), 산약(山藥), 백지(白芷), 백질려, 동과자(冬瓜子), 세신(細辛), 자초(紫草) 추출물을 유효성분으로 포함하는 염증성 장질환 예방 및 치료용 약학적 조성물.
매실, 오미자, 목과 추출물 및 백급, 옥죽(玉竹), 천문동(天門冬), 산약(山藥), 백지(白芷), 백질려, 동과자(冬瓜子), 세신(細辛), 자초(紫草)로 구성된 그룹에서 선택된 것의 추출물을 유효성분으로 포함하는 염증성 장질환 예방 및 개선용 건강기능 식품.
매실, 오미자, 목과 추출물 및 백급, 옥죽(玉竹), 천문동(天門冬), 산약(山藥), 백지(白芷), 백질려, 동과자(冬瓜子), 세신(細辛), 자초(紫草) 추출물을 유효성분으로 포함하는 염증성 장질환 예방 및 개선용 건강기능식품.