CN116832074B - 细辛木脂素部位及其细辛脂素在制备治疗肠炎药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了细辛木脂素部位及其主要成分细辛脂素在制备治疗肠炎药物中的应用。本发明通过实验结果表明，本发明提供的细辛木脂素部位和细辛脂素成分能显著降低肠炎诱导的小鼠疾病活动指数，治疗肠炎引起的小鼠体重下降，同时能抑制肠炎模型诱导的炎症因子表达升高。可将细辛木脂素部位或细辛脂素与药学上载体制备成高效、低毒的治疗肠炎的药物。
Description
技术领域
本发明涉及天然药物活性部位与成分，更具体而言，涉及一种细辛木脂素部位及主要成分细辛脂素在制备治疗肠炎药物中的用途。
背景技术
中药细辛，始载于《神农本草经》，列为上品。2010版《中国药典》规定细辛来源为马兜铃科植物北细辛Asarum Heterotropoids Fr.Schmidt var.mandshuricum(Maxim.)Kitag.、汉城细辛Asarum sieboldii Miq.var.seoulense Nakai或华细辛Asarumsieboldii Miq.的干燥根与根茎。细辛是传统的温里散寒中药，味辛、性温，具有祛风散寒、通窍止痛、止咳平喘、通利血脉的功效，可用于治疗风寒头痛、关节疼痛、鼻塞等症状。现代药理学表明，细辛具有解热、抗炎、镇静、抗心肌缺血、平喘祛痰、抗衰老等药理活性。在临床中被广泛用于治疗头痛、鼻渊、三叉神经痛及免疫疾病等。
目前关于细辛抗炎文献报道大多数集中在挥发油部位，挥发油在外周镇痛具有作用，中枢镇痛作用较弱(王冰冰,等.三种细辛挥发油的化学成分、镇痛作用及急性毒性实验的比较研究.Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences,2014,23(7):480-489)。已有文献报道挥发油主要成分之一甲基丁香酚在醋酸扭体实验、福尔马林急性炎性痛实验中可抑制小鼠的疼痛行为(杨华,等.甲基丁香酚镇痛抗炎作用及机制研究.中药新药与临床药理,2017,28(3):292-297)。
中国专利201410114814.8公开了细辛总木脂素提取物及其提取方法和在制备减轻或抑制咳嗽药物中的用途。细辛脂素是药典中检测细辛的指标性成分。在胶原诱导关节炎模型中，细辛脂素可以通过下调TLR9/NF-κB通路起到治疗作用。目前尚未见有关细辛木脂素部位及主要成分细辛脂素治疗急慢性肠炎的报道。
发明内容
发明目的：针对以上现有技术的不足，本发明首要目的在于提供一种由细辛木脂素部位及主要成分细辛脂素治疗肠炎的活性评价体系及其在制备治疗肠炎药物中的应用。
技术方案：细辛木脂素部位和细辛脂素治疗肠炎效应的评价：本发明通过肠炎模型评价细辛木脂素部位和细辛脂素降低肠炎模型小鼠疾病活动指数，抑制小鼠肠炎引起的体重下降以及抑制模型诱导的炎症因子表达升高的的功效。
所述细辛为北细辛、汉城细辛或华细辛，更加优选为北细辛。
上述细辛木脂素部位和细辛脂素在治疗肠炎药物中的用途，所述细辛木脂素部位和主要成分细辛脂素单独或与其他药物组合制备治疗肠炎药物。
1.本发明所述细辛木脂素部位是通过以下方法制备得到的：取北细辛、汉城细辛或华细辛的根茎，加入药材重量6～10倍体积的80％乙醇加热回流提取1～3次，每次0.5～2小时，合并提取液，提取液减压干燥，得提取物上大孔吸附树脂D101柱，先用3～6倍柱体积水洗脱去除杂质后，再用10～12倍柱体积50％乙醇水溶液洗脱，收集50％乙醇洗脱液，干燥得到细辛木脂素部位。
所述细辛木脂素部位和主要成分细辛脂素可用药物载体制成各种剂型。
所述剂型为颗粒剂、片剂、胶囊剂、丸剂、滴丸剂、泡腾片、软膏剂、糖浆剂、注射剂、口服液、合剂、酊剂、缓释剂、控释剂或靶向制剂。
药学上可接受的载体如：填充剂、粘合剂、润滑剂、崩解剂或润湿剂。填充剂包括乳糖、蔗糖、玉米淀粉、山梨醇；粘合剂包括糖浆、阿拉伯胶、明胶、山梨醇、羟丙基甲基纤维素或聚乙烯吡咯烷酮；润滑剂包括硬脂酸镁；崩解剂包括淀粉、聚乙烯吡咯烷酮、交聚维酮、微晶纤维素；润湿剂如十二烷基硫酸钠。
本发明具有治疗肠炎活性的木脂素部位有效剂量按照人的体重60kg计算，为0.12g-1.08g/人·天。所述细辛脂素分子式为C20H18O6，本发明具有治疗肠炎活性的细辛脂素有效剂量按照人的体重60kg计算，为0.06g-0.54g/人·天。
有益效果说明：
药理实验证明，本发明的细辛木脂素部位单独使用具有治疗肠炎功效，本发明的细辛主要成分细辛脂素单独使用也具有治疗肠炎功效。二者可用于预防或治疗各型急慢性肠炎。药效学试验结果表明：与空白对照组相比，细辛木脂素部位中、高剂量组可缓解小鼠肠炎引起的体重下降、降低肠炎模型诱导的小鼠疾病活动指数，细辛木脂素部位低、中、高剂量组均可抑制肠炎诱导的炎症因子表达升高。与空白对照组相比，细辛脂素中、高剂量组可缓解小鼠肠炎引起的体重下降，细辛脂素低、中、高剂量组均可降低肠炎模型诱导的小鼠疾病活动指数、并抑制肠炎诱导的炎症因子表达升高。
附图说明
图1为细辛木脂素部位对葡聚糖硫酸钠诱导的肠炎模型小鼠体重的影响。A细辛木脂素部位灌胃缓解模型诱导的小鼠体重降低(A：对照组+溶剂；B：模型组+溶剂；C：模型组+木脂素部位2mg/kg；D：模型组+木脂素部位6mg/kg；E：模型组+木脂素部位18mg/kg；每组小鼠n＝8)。B实验终点各组小鼠体重相对变化(A：对照组；B：模型组+溶剂；C：模型组+木脂素部位2mg/kg；D：模型组+木脂素部位6mg/kg；E：模型组+木脂素部位18mg/kg；#和B组比较；***和A组比较；每组小鼠n＝8)。#P<0.05，***P<0.001。
图2为细辛木脂素部位对葡聚糖硫酸钠诱导的肠炎模型小鼠疾病活动指数的影响。实验终点各组小鼠疾病活动指数变化(A：对照组；B：模型组+溶剂；C：模型组+木脂素部位2mg/kg；D：模型组+木脂素部位6mg/kg；E：模型组+木脂素部位18mg/kg；#和B组比较；##和B组比较；***和A组比较；每组小鼠n＝8)。#P<0.05，##P<0.01，***P<0.001。
图3为细辛木脂素部位对葡聚糖硫酸钠诱导的肠炎模型小鼠炎症因子表达的影响。A细辛木脂素部位灌胃抑制模型诱导的Tnf-α表达升高(A：对照组+溶剂；B：模型组+溶剂；C：模型组+木脂素部位2mg/kg；D：模型组+木脂素部位6mg/kg；E：模型组+木脂素部位18mg/kg；每组小鼠n＝3)。##和B组比较；###和B组比较；***和A组比较。B细辛木脂素部位灌胃抑制模型诱导的Il-1β表达升高(A：对照组+溶剂；B：模型组+溶剂；C：模型组+木脂素部位2mg/kg；D：模型组+木脂素部位6mg/kg；E：模型组+木脂素部位18mg/kg；每组小鼠n＝3)。#和B组比较；###和B组比较；***和A组比较。C细辛木脂素部位灌胃抑制模型诱导的Il-6表达升高(A：对照组+溶剂；B：模型组+溶剂；C：模型组+木脂素部位2mg/kg；D：模型组+木脂素部位6mg/kg；E：模型组+木脂素部位18mg/kg；每组小鼠n＝3)。###和B组比较；***和A组比较。#P<0.05，##P<0.01，###P<0.001，***P<0.001。
图4细辛脂素对葡聚糖硫酸钠诱导的肠炎模型小鼠体重的影响。A细辛脂素灌胃显著缓解模型诱导的小鼠体重减少(A：对照组+溶剂；B：模型组+溶剂；C：模型组+细辛脂素1mg/kg；D：模型组+细辛脂素3mg/kg；E：模型组+细辛脂素9mg/kg；每组小鼠n＝8)。B实验终点各组小鼠体重相对变化(A：对照组；B：模型组+溶剂；C：模型组+细辛脂素1mg/kg；D：模型组+细辛脂素3mg/kg；E：模型组+细辛脂素9mg/kg；#和B组比较；##和B组比较；***和A组比较；每组小鼠n＝8)。#P<0.05，##P<0.01，***P<0.001。
图5为细辛脂素对葡聚糖硫酸钠诱导的肠炎模型小鼠疾病活动指数的影响(A：对照组+溶剂；B：模型组+溶剂；C：模型组+细辛脂素1mg/kg；D：模型组+细辛脂素3mg/kg；E：模型组+细辛脂素9mg/kg；每组小鼠n＝8)。(##和B组比较，###和B组比较，***和A组比较，##P<0.01，###P<0.001，***P<0.001。
图6为细辛脂素对葡聚糖硫酸钠诱导的肠炎模型小鼠炎症因子表达的影响。A细辛脂素灌胃抑制模型诱导的Tnf-α表达升高(A：对照组+溶剂；B：模型组+溶剂；C：模型组+细辛脂素1mg/kg；D：模型组+细辛脂素3mg/kg；E：模型组+细辛脂素9mg/kg；每组小鼠n＝3)。##和B组比较；###和B组比较；***和A组比较。B细辛脂素灌胃抑制模型诱导的Il-1β表达升高(A：对照组+溶剂；B：模型组+溶剂；C：模型组+细辛脂素1mg/kg；D：模型组+细辛脂素3mg/kg；E：模型组+细辛脂素9mg/kg；每组小鼠n＝3)。#和B组比较；###和B组比较；***和A组比较。C细辛脂素灌胃抑制模型诱导的Il-6表达升高(A：对照组+溶剂；B：模型组+溶剂；C：模型组+细辛脂素1mg/kg；D：模型组+细辛脂素3mg/kg；E：模型组+细辛脂素9mg/kg；每组小鼠n＝3)。###和B组比较；***和A组比较。##P<0.01，###P<0.001，***P<0.001。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步详细描述，但不作为对本发明的限定。
实施例1细辛木脂素部位对葡聚糖硫酸钠(Dextran Sodium Sulfate，DSS)诱导的肠炎模型小鼠药理实验
(1)实验材料
实验动物：雄性C57BL/6N小鼠，SPF级，8周龄，体重22-26g，购于江苏集萃药康生物科技有限公司。小鼠饲养于南京中医药大学动物中心，恒温(20-24℃)环境，湿度50-60％，每日等时昼夜交替循环，配备专用无菌鼠笼、垫料和饲料，可自由进食和饮水。所有实验均于南京中医药大学动物保护与利用委员会批准的方案下执行。
细辛木脂素部位是通过以下方法制备得到的：取北细辛、汉城细辛或华细辛的根茎，加入药材重量10倍体积的80％乙醇加热回流提取3次，每次1小时，合并提取液，提取液减压干燥，得提取物上大孔吸附树脂D101柱，先用3倍柱体积水洗脱去除杂质后，再用10倍柱体积50％乙醇水溶液洗脱，收集50％乙醇洗脱液，干燥得到细辛木脂素部位。细辛脂素购于南京金益柏生物科技有限公司(JBZ-1319)。
试剂与仪器：0.5％羧甲基纤维素钠配制10mg/mL细辛木脂素部位储存液。双蒸水配置3.5％的葡聚糖硫酸钠。RNA提取试剂盒。实时荧光定量PCR试剂盒，实时荧光定量PCR仪。
(2)实验方法
①肠炎模型建立：3.5％葡聚糖硫酸钠连续自由饮水7天，继续观察4天。
②给药方式与实验分组：随机将小鼠分为对照+溶剂、模型+溶剂、模型+木脂素部位(2mg/kg，6mg/kg，18mg/kg)，共5组，每组8只小鼠。建模同时灌胃给药，每天记录小鼠体重，实验终点观察记录小鼠疾病活动指数并取肠道组织比较炎症相关基因表达变化。
③小鼠粪便隐血使用邻联甲苯胺法定性检测试剂盒测定。
④疾病活动指数测定标准：
⑤肠道组织RNA提取试剂盒。具体操作参照试剂盒说明完成。
⑥实时荧光定量PCR检测Tnf-α、Il-1β和Il-6基因表达活性。
(3)实验结果
如图1细辛木脂素部位对葡聚糖硫酸钠诱导的肠炎模型小鼠体重的影响，建立肠炎模型后，小鼠体重持续下降；中、高剂量细辛木脂素部位灌胃给药显著治疗肠炎模型诱导的小鼠体重降低。比较第10天小鼠体重发现：相对于建模之前，模型组小鼠体重下降9.4％。低剂量组和模型组相比体重没有显著性变化；中高剂量木脂素灌胃显著减少模型诱导的小鼠体重下降。
如图2细辛木脂素部位对葡聚糖硫酸钠诱导的肠炎模型小鼠疾病活动指数的影响，比较第10天小鼠疾病活动指数发现：相对于建模之前，模型组小鼠疾病活动指数显著升高(6.25±1.49B VS.0.25±0.16A)。低剂量组和模型组相比有所改善，但是没有显著性差异；相对于模型组，中剂量木脂素部位处理组疾病活动指数显著降低(3.75±0.59DVS.6.25±1.49B)，高剂量木脂素部位处理组疾病活动指数显著降低(3.50±0.50DVS.6.25±1.49B)，中高剂量木脂素灌胃显著减少模型诱导的疾病活动指数升高。
如图3细辛木脂素部位对葡聚糖硫酸钠诱导的肠炎模型小鼠肠道组织炎症因子表达的影响。比较实验终点各组小鼠肠道组织Tnf-α、Il-1β和Il-6基因表达活性发现：相对于建模之前，模型组小鼠三种基因表达均显著升高。低剂量组、中剂量组和高质量组木脂素部位处理后Tnf-α、Il-1β和Il-6基因表达活性发现显著降低。尤其是中、高剂量木脂素部位处理后Tnf-α、Il-1β和Il-6基因表达活性和对照组接近。结果表明木脂素部位能够呈剂量依赖的方式抑制肠炎模型引起的肠道组织Tnf-α、Il-1β和Il-6基因表达活性增强。
实施例2细辛脂素对葡聚糖硫酸钠诱导的肠炎模型小鼠药理活性实验
(1)实验材料
实验动物：雄性C57BL/6N小鼠，SPF级，8周龄，体重22-26g，购于江苏集萃药康生物科技有限公司。小鼠饲养于南京中医药大学动物中心，恒温(20-24℃)环境，湿度50-60％，每日等时昼夜交替循环，配备专用无菌鼠笼、垫料和饲料，可自由进食和饮水。所有实验均于南京中医药大学动物保护与利用委员会批准的方案下执行。
试剂与仪器：细辛脂素购于南京金益柏生物科技有限公司(JBZ-1319)。0.5％羧甲基纤维素钠配制10mg/mL细辛脂素储存液。双蒸水配置3.5％的葡聚糖硫酸钠。RNA提取试剂盒。实时荧光定量PCR试剂盒。实时荧光定量PCR仪。
(2)实验方法
①肠炎模型建立：3.5％葡聚糖硫酸钠连续自由饮水7天，继续观察4天。
②给药方式与实验分组：随机将小鼠分为对照+溶剂、模型+溶剂、模型+细辛脂素(1mg/kg，3mg/kg，9mg/kg)，共5组，每组8只小鼠。建模同时灌胃给药，每天记录小鼠体重，实验终点观察记录小鼠疾病活动指数并取肠道组织比较炎症相关基因表达变化。
③小鼠粪便隐血使用邻联甲苯胺法定性检测试剂盒测定。
④疾病活动指数测定标准：
⑤肠道组织RNA提取试剂盒。具体操作参照试剂盒说明完成。
⑥实时荧光定量PCR检测Tnf-α、Il-1β和Il-6基因表达活性。
(3)实验结果
如图4所示，细辛脂素对葡聚糖硫酸钠诱导的肠炎模型小鼠体重的影响，建立肠炎模型后，小鼠体重持续下降。中、高剂量细辛脂素灌胃给药显著治疗肠炎模型诱导的小鼠体重降低。比较第10天小鼠体重发现：相对于建模之前，模型组小鼠体重下降10.1％。低剂量组和模型组相比体重下降虽然得到缓解，但是没有显著性变化；而中高剂量细辛脂素灌胃显著减少模型诱导的小鼠体重下降。
如图5细辛脂素对葡聚糖硫酸钠诱导的肠炎模型小鼠疾病活动指数的影响，比较第10天小鼠疾病活动指数发现：相对于建模之前，模型组小鼠疾病活动指数显著升高(6.88±0.44B VS.0.25±0.16A)。低剂量组和模型组相比有显著改善改善(5.00±0.42DVS.6.88±0.44B)；相对于模型组，中剂量细辛脂素处理组疾病活动指数显著降低(4.13±0.54D VS.6.88±0.44B)，高剂量细辛脂素处理组疾病活动指数显著降低(3.38±0.42DVS.6.88±0.44B)，中高剂量细辛脂素灌胃显著减少模型诱导的疾病活动指数升高。
如图6细辛脂素对葡聚糖硫酸钠诱导的肠炎模型小鼠肠道组织炎症因子表达的影响。比较实验终点各组小鼠肠道组织Tnf-α和Il-6基因表达活性发现：相对于建模之前，模型组小鼠两种基因表达均显著升高。低剂量组、中剂量组和高质量组细辛脂素处理后Tnf-α和Il-6基因表达活性发现显著降低。比较实验终点各组小鼠肠道组织Il-1β基因表达活性发现：相对于建模之前，模型组小鼠Il-1β基因表达均显著升高。中剂量组和高质量组木脂素部位处理后Il-1β基因表达活性发现显著降低。结果表明细辛脂素呈剂量依赖的方式抑制肠炎模型引起的肠道组织Tnf-α、Il-1β和Il-6基因表达活性增强。
Claims (6)
1.细辛木脂素部位在制备治疗肠炎药物中的应用；
所述细辛木脂素部位是通过以下方法制备得到的：取北细辛、汉城细辛或华细辛的根茎，加入药材重量6~10倍体积的80%乙醇加热回流提取1~3次，每次0.5~2小时，合并提取液，提取液减压干燥，得提取物上大孔吸附树脂D101柱，先用3~6倍柱体积水洗脱去除杂质后，再用10~12倍柱体积50%乙醇水溶液洗脱，收集50%乙醇洗脱液，干燥得到细辛木脂素部位。
2.细辛脂素在制备治疗肠炎药物中的应用。
3.细辛脂素作为唯一活性成分在制备治疗肠炎药物中的应用。
4.根据权利要求1~3任一项所述的应用，其特征在于，所述的肠炎为急性肠炎或慢性肠炎。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述细辛木脂素部位或细辛脂素与可用药物载体制成各种剂型。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述剂型为颗粒剂、片剂、胶囊剂、丸剂、软膏剂、注射剂、口服液、酊剂、喷雾剂或糖浆剂。
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| CN116832074A (zh) | 2023-10-03 |
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