KR20120111535A - 조류 병원성 대장균 특이 박테리오파지 및 이를 포함하는 항균 조성물 - Google Patents
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Abstract
조류 병원성 대장균(avian pathogenic Escherichia coli) 특이적인 신규한 박테리오파지에 관한 것으로, 보다 구체적으로, 가금에서 봉와직염, 패혈증, 관절염, 다발성장막염 등을 일으키는 조류 병원성 대장균(avian pathogenic Escherichia coli), 특히 O78 항원형의 조류 병원성 대장균을 특이적으로 살균하는 박테리오파지, 이를 유효성분으로 하는 조류 병원성 대장균증 예방 및/또는 치료용 조성물, 상기 조성물을 포함하는 항생제, 소독제 및/또는 사료가 제공된다.
Description
본 발명은 조류 병원성 대장균(avian pathogenic Escherichia coli) 특이적인 신규한 박테리오파지에 관한 것으로, 보다 구체적으로, 가금에서 봉와직염, 패혈증, 관절염, 다발성장막염 등을 일으키는 조류 병원성 대장균(avian pathogenic Escherichia coli), 특히 O78 항원형의 조류 병원성 대장균을 특이적으로 살균하는 박테리오파지, 이를 유효성분으로 하는 조류 병원성 대장균증 예방 및/또는 치료용 조성물, 상기 조성물을 포함하는 항생제, 소독제 및/또는 사료가 제공된다.
가금의 대장균증은 조류 병원성 대장균 (Avian Pathogenic Escherichia coli, 이하 APEC)에 의해 발생하는 중요 세균성 질병으로 난각 오염에 의한 중지란, 어린 병아리 제대염, 기낭염, 두부 종창증 (swollen head syndrome), 봉와직염, 수란관염, 다발성 장막염, 간 포막염, 척추염, 급성 패혈증 등 다양한 병증을 초래하여 양계산업에서 항생제 사용의 주된 원인이며, 도계육 품질저하 및 폐기로 추가적인 경제 손실을 주고 있다.
대장균의 항원형은 O 항원형 173개, K 항원형 74개, H 항원형 53개, F 항원형 17개로 다양하나 전세계적으로 중요한 조류 병원성 대장균의 O 항원형은 O1, O2, O78이며, K 항원형은 K1, K80 이다 (Gross, 1994). 조류 병원성 대장균은 건강한 닭의 공생 세균 (commensal)으로 10-15%에서 분리되며, 뉴캐슬병바이러스, 전염성 기관지염바이러스, 전염성낭병바이러스 등의 일차 감염 후 이차 감염원으로서 병증을 초래하는 것으로 알려져 있다. 국외의 경우 육계 폐사의 주 원인은 대장균성 패혈증으로 57일령까지 평균 4.0%의 폐사를 초래하고, 도계장 검사에서 질병에 의해 불합격 판정을 받는 빈도는 평균 약 1.6% (3,365만수 중)로 이 중 대장균증의 전형적인 병변인 간포막염과 기낭염을 동반한 심외막염은 42.8%인 것으로 보고된 바 있다. 특정 혈청형의 APEC (O1:K1, O78:K80) 감염에 의한 봉와직염은 도계 시 품질저하 및 불합격 판정에 의해 경제적인 피해를 초래하는데 미국의 경우 매년 봉와직염에 의해 1,800-2,000만 달러의 피해를 입는 것으로 보고되었다 (Morris, 1991). 정상적인 산란계가 산란한 계란의 0.5-6%에서 대장균이 분리되나, 실험적으로 감염시키는 경우 그 빈도는 26%까지 증가하며, 발육계태아 및 초생추 폐사의 주 원인이 대장균인 점을 감안하면 그 경제적 피해는 매우 크다고 할 수 있다.
축산분야에서는 생산성 향상을 위해 사료에 다양한 항생물질을 첨가하여 왔으나 1988년 반코마이신 내성 장구균이 인체에서 분리되고, 이 장구균이 닭, 돼지 사료에 첨가하고 있는 아보파신 때문이라는 사실이 알려지면서, 1995년 덴마크를 시작으로 각 나라에서 아보파신의 사료 첨가가 금지되었고, 1998년 7월 EU는 사람의 치료약과 동일한 계통에 있는 버지니아마이신을 포함하여 4종 항생제와 모넨신을 포함하여 4종의 사료첨가를 금지하였다. 1986년 스웨덴에서는 성장촉진 목적의 항생제 투약을 전면 금지 하였으나, 발육 및 사료 요구율 악화로 생산비가 약 10% 상승하였으며, 치료용 항생제 사용 급증에 따라 사용금지 전보다 항생제 사용은 오히려 증가하였다.
국내 경제동물 유래 세균의 항생제 내성 수준은 심각한 수준이며, 항생제 내성 획득 기간 또한 매우 짧은 상황이다. 일례로 동물 제2종 법정전염병으로 분류되는 가금티푸스의 원인균인 Salmonella Gallinarum biotype Gallinarum은 1992년 국내에서 최초로 보고 된 후 1996년 class I integron에 의한 설파제 및 스트렙토마이신 내성 획득, 1999년 tetA에 의한 테트라사이클린 내성 획득, 2000년 gyrA 돌연변이에 의한 엔로플록사신 (퀴놀론계열 항생제) 내성 획득 및 앰피실린, 클로람페니콜, 스트렙토마이신, 설파멕톡사진, 테트라사이클린 (ACSSuT) 모두에 내성을 갖는 다약제 내성을 획득하였다. 국내 가금티푸스균이 내성을 획득한지 4년 만에 다약제 내성을 획득한 사실은 빈번한 항생제 사용에 의한 내성주 선택과 내성유전자의 수평전파가 야외에서 빈번하게 일어나고 있음을 의미하며, 이러한 항생제 내성은 조류 병원성 대장균의 경우도 마찬가지여서, 신종 다약제 내성 병원성세균에 대한 대책 수립이 시급한 실정이다 (Kwon 등, 2002, 2007). 따라서 축산분야의 생산성 향상을 위해서는 새로운 차원의 항생제 개발이 절실하다.
한편, 박테리오파지는 세균에 특이적으로 감염되는 바이러스로 Twort (1915)와 d'Herelle (1917)이 발견하였고, d'Herrelle은 박테리오파지를 세균성 질병 치료에 처음으로 적용하였다 (d'Herrelle, 1926). 박테리오파지를 이용한 치료법은 항균제 개발 이후 동유럽과 구 소련에서만 지속적으로 연구되어 왔으나, 최근 다약제 내성 세균 및 슈퍼박테리아 출현으로 항균제의 대안으로써 각광받고 있으며, 항균제 대비 개발비용이 낮고, 특이적이어서 부작용이 없고, 내성균 출현율이 낮으나 극복할 수 있는 변이주 개발이 용이하므로 기존 항균제 대체제로 각광을 받고 있다.
박테리오파지는 최근 송아지의 대장균성 설사증 (Smith et al , 1987), 어류의 다양한 질병 (Park et al., 2000), 반코마이신 내성 장구균 패혈증 (Biswas et al, 2002), 결핵균 (Broxmeyer et al, 2002), 닭의 파라티푸스 (Berchieri et al, 1991) 및 E. coli O157:H7 (Kudva et al, 1991)등 다양한 질병에 대해 성공적인 예방 및 치료사례가 보고 되고 있다. 또한, 박테리오파지를 직접 사용하는 방법뿐 아니라 박테리오파지가 숙주세균의 세포벽을 특이적으로 파괴하는데 작용하는 리신 (lysin)을 이용하여 탄저 (Schuch et al , 2002), 폐렴구균 (Loeffler et al , 2003)등에 특이적인 항생제 개발도 이루어지고 있으며, 그 효과는 그람 음성세균 보다는 그람 양성세균에서 좋으며, 동물용 예방 및 치료제로는 고가의 리신 보다는 박테리오파지가 실용적일 것으로 기대된다.
이러한 다양한 학문적 연구 이외에도 2002년 E. coli O157:H7 균을 살균하는 박테리오파지에 대한 미국특허등록(6,485,902) 이외 다수의 특허등록이 이루어지고 있고, 2007년 OmniLytics 사는 도축과정 중에 E. coli O157:H7 균의 도체 오염을 줄이기 위한 박테리오파지 제품을 개발하여 미국 농무성 FSIS(Food Safety and Inspection Service)의 승인을 받아 상업화 하였으며, 현재 다양한 용도의 제품들이 승인 심사중에 있고, 박테리오파지를 이용한 항균제 및 소독제 연구와 산업화 노력이 지속적으로 이루어지고 있다.
그러나, 조류 병원성 대장균에 대하여 항균 활성을 갖는 박테리오파지에 대해서는 보고된 바가 없다.
이에, 본 발명자들은 조류 대장균증의 주요 원인균인 O78 항원형 조류 병원성 대장균을 살균하는 새로운 박테리오파지(φWAO78-1)를 하수종말처리장의 배출수로부터 분리하고, 이 박테리오파지가 국내분리균주 및 표준 O78 대장균을 특이적으로 살균하는 것을 확인하였으며, O78 조류 병원성 대장균 감염된 시험계에 상기 박테리오파지를 주사하면 폐사와 병변을 감소시킬 뿐 아니라, 상기 박테리오파지만을 주사한 경우 임상증상, 병변 및 폐사가 관찰되지 않아 안전성도 우수함을 확인하여 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 일례는 조류 병원성 대장균에 대하여 항균 활성을 갖는 신규한 박테리오파지를 제공한다.
또 다른 예는 상기 박테리오파지를 유효성분으로 함유하는 항균제를 제공한다.
또 다른 예는 상기 박테리오파지를 유효성분으로 함유하는 소독제를 제공한다.
또 다른 예는 상기 박테리오파지를 포함하는 사료 첨가용 조성물을 제공한다.
또 다른 예는 상기 박테리오파지를 포함하는 사료를 제공한다.
또 다른 예는 상기 박테리오파지를 유효성분으로 포함하는 조류 병원성 대장균증 예방 및/또는 치료용 조성물, 및 이를 이용한 조류 병원성 대장균증의 예방 및/또는 치료 방법을 제공한다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명에 따른 신규한 박테리오파지는 조류 병원성 대장균, 특히, 조류 병원성 대장균증의 주요 원인균인 O78 항원형 조류 병원성 대장균에 대하여 특이적인 숙주 감수성을 나타내어, 조류 병원성 대장균에 특이적인 항균활성을 가지면서 특히 O78 조류 병원성 대장균에 특이적인 항균활성을 갖는 것을 특징으로 한다 (실시예 3 및 표 1 참조). 상기 박테리오파지는 서열번호 1의 게놈 서열을 가지며, 서열분석 결과, 기존의 박테리오파지와 다른 신규한 균주임이 확인되었다 (실시예 4 및 표 2 참조). 상기 박테리오파지는 기탁번호 KCCM10995P인 균주일 수 있다.
본 발명에 사용된 바로서, 조류 병원성 대장균은 조류에 감염되어 병원성을 나타내는 모든 대장균을 의미하는 것으로, 항원형에 따라서, O 항원형 (173개), K 항원형 (74개), H 항원형 (53개), F 항원형 (17개)로 다양하고, 중요한 조류 병원성 대장균으로 O 항원형의 O1, O2, O78, K 항원형의 K1, K80 등이 있다.
이러한 상기 박테리오파지의 항균 활성에 기초하여, 본 발명의 다른 예는 상기 박테리오파지의 조류 병원성 대장균에 대한 항균 용도를 제공한다.
보다 구체적으로, 상기 박테리오파지를 유효성분으로 함유하는 항균제가 제공된다. 상기 항균제는 조류 병원성 대장균에 대하여 특이적인 항균활성을 보이는 것일 수 있으며, 특히, O78 항원형 조류 병원성 대장균에 대하여 특이적인 항균활성을 보이는 것을 특징으로 한다. 상기 항균제 내의 박테리오파지의 함량은 소망하는 항균활성 및 적용 대상에 따라서 적절하게 조절 가능하며, 예컨대, 103pfu/ml 이상, 바람직하게는 103pfu/ml 내지 1010pfu/ml, 더욱 바람직하게는 106pfu/ml 내지 1010pfu/ml 정도일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 명세서에 사용된 'pfu (plaque forming unit)'는 박테리오파지가 플라그를 형성하는 것을 수치화한 단위로서, 박테리아의 경우의 cfu (colony forming unit)와 유사한 개념이다.
상기 항균제는 다양한 양태로 적용 가능하다.
구체적으로, 상기 박테리오파지는 상기와 같은 조류 병원성 대장균에 대한 항균 활성에 의하여 소독제로 적용될 수 있으며, 양계장, 축사 등의 건물, 축체, 음수, 깔집, 난좌, 운반차량, 식기 등의 각종 생육 용품의 소독 등에 사용될 수 있다. 따라서, 본 발명의 다른 예는 박테리오파지를 유효성분으로 함유하는 소독제를 제공한다. 상기 소독제 내의 박테리오파지의 함량은 소망하는 소독 효능 및 적용 대상에 따라서 적절하게 조절 가능하며, 예컨대, 103pfu/ml 이상, 바람직하게는 103pfu/ml 내지 1010pfu/ml, 더욱 바람직하게는 106pfu/ml 내지 1010pfu/ml 정도일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
또한, 상기 박테리오파지는 조류의 사료에 첨가됨으로써, 조류의 조류 병원성 대장균에 대한 저항성 및 감염증에 대한 치료 효과를 얻을 수 있다. 따라서, 본 발명의 다른 예는 상기 박테리오파지를 포함하는 사료 첨가용 조성물, 및 상기 사료 첨가용 조성물을 포함하는 사료를 제공한다.
상기 사료 첨가용 조성물은 상기 박테리오파지의 사료 제조에 사용될 수 있는 용도를 기재하기 위한 것으로, 상기 조성물 내의 박테리오파지의 함량은 아무런 제한이 없으며, 예컨대, 조성물 전체 중량을 기준으로 0.01 내지 100 중량%일 수 있다. 상기 사료 내의 박테리오파지 함량은 소망하는 효과와 적용 대상의 상태 등에 따라서 적절히 조절 가능하며, 사료 전체 중량 기준으로 0.1 내지 1 중량%일 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에 따른 사료 첨가용 조성물 및 사료의 적용 대상 동물은 사육 가능한 모든 종류의 조류를 포함하며, 예컨대, 닭, 오리, 꿩, 칠면조, 메추리, 타조, 거위 등으로 이루어진 군에서 선택된 것일 수 있다.
또한, 상기 박테리오파지를 조류 병원성 대장균, 특히 O78 항원형 조류 병원성 대장균 감염된 개체에 접종시 폐사율이 현저하게 낮아지고 생존 개체에서의 세균 분리율도 현저하게 낮아지는 것이 확인되었으며, 시험 개체의 피하에 접종하여도 특이적인 임상증상이나 병변을 보이지 않아 생체 적용시 안전성도 매우 우수함이 확인되었다 (실시예 5 및 표 3 참조). 보다 구체적으로, 상기 방법은 O78 조류 병원성 대장균을 단독으로 시험계의 피하에 접종한 경우 50%의 폐사율을 초래하고 생존계 50%의 심장에서 접종균이 분리되나 세균과 φWAO78-1을 혼합하여 접종한 경우 폐사율과 심장에서 세균 분리율이 0% 였고, 서로 다른 부위에 세균과 φWAO78-1을 접종한 경우 심장에서의 세균 분리율이 62.5% 였으나 폐사는 전혀 일어나지 않아 치료 효과가 탁월하였다.
이와 같은 상기 박테리오파지의 조류 병원성 대장균 감염에 대한 효과에 기초하여, 본 발명의 또 다른 예는 상기 박테리오파지를 유효성분으로 함유하는 조류 병원성 대장균증의 예방 및/또는 치료용 조성물을 제공한다. 또 다른 예에서, 본 발명은 상기 박테리오파지를 예방 및/또는 치료를 위한 유효량으로 조류에 투여하는 단계를 포함하는 조류 병원성 대장균증의 예방 및/또는 치료 방법을 제공한다.
본 명세서에 사용된 바로서, 조류 병원성 대장균증은 조류 병원성 대장균 감염에 의하여 나타나는 모든 병리학적 증상 및 질병, 및 이들 증상 및 질병에 의하여 파생되는 질병을 모두 의미하는 것으로, 제대염, 기낭염, 두부 종창증, 봉와직염, 수란관염, 관절염, 다발성 장막염, 간 포막염, 척추염, 패혈증 등을 모두 포함하는 의미이다.
상기 적용 대상 조류는 상기 조류 병원성 대장균의 감염에 의하여 병리학적 증상이 초래될 수 있는 모든 동물일 수 있으며, 예컨대, 닭, 오리, 꿩, 칠면조, 메추리, 타조, 거위 등으로 이루어진 군에서 선택된 것일 수 있다.
상기 투여 방법은 모든 통상적인 방법에 의할 수 있으며, 예컨대, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하 투여 등의 모든 경구 또는 비경구 투여에 의할 수 있다. 상기 예방 및/또는 치료를 위한 유효량은 투여 대상의 증상, 상태 및 목적하는 효과에 따라서 적절하게 조절 가능하며, 예컨대, 박테리오파지 함량 기준으로, 103pfu/200㎕/수 이상, 바람직하게는 106pfu/200㎕/수 이상, 예컨대, 103pfu/200㎕/수 내지 1012pfu/200㎕/수, 또는 106pfu/200㎕/수 내지 1012pfu/200㎕/수 일 수 있다.
상기 항균제, 소독제, 및 조류 병원성 대장균증의 예방 및/또는 치료용 조성물 등의 제제는 필요에 따라 담체, 기타 보조제 등을 포함할 수 있는데, 상기 담체는 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상적으로 사용되는 모든 담체일 수 있고, 예컨대, 생리식염수, 증류수, 사료, 박테리오파지용 배지(예컨대, Luria-Bertani 배지 등) 등이 될 수 있으며, 보조제는 pH 교정 등의 목적으로 완충액 등을 첨가하여 사용할 수 있다. 또한, 상기 제제는 액상, 반 고체상 또는 고체상으로 제제 형태는 분말제, 과립제, 정제 등의 고체상 제제, 현탁제 또는 주사액제 등의 액상 제제 및 크림, 로션, 젤, 페이스트 등의 반 고체상 제제 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기에서 살펴본 바와 같이, 본 발명의 신규 박테리오파지는 O78 조류 병원성 대장균을 특이적으로 살균하며 시험계의 피하 접종 시 병원성이 없고 병원성대장균과 함께 접종하는 경우 폐사를 막아 예방 및 치료용으로 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 본 발명에서 분리한 박테리오파지 KCCM10995P의 전자현미경 사진이다.
이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다.
단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.
실시예
1: 박테리오파지 분리
하수종말처리장 배수구의 배출수를 0.45㎛ 여과지로 여과하여 수집한 9ml에 10x Luria-Bertani 배지(이하 LB, DIFCO Co.) 1ml을 첨가하고, O78 조류 병원성 대장균(이하 E123, 서울대학교 수의과대학 조류질병학실) 105 CFU를 접종하여 5시간 이상 배양하였다. 얻어진 배양물을 5,000rpm에서 5분간 원심하여 상층액을 채취하였다. 숙주세균(E123) 108을 LB 한천배지(DIFCO Co.) 표면에 도포한 후 상기 채취한 상층액 10㎕를 점적하였다. 37℃에서 6시간 배양하여 용균이 일어나는 경우 10진 희석하여 역가를 측정하고, 플라크 모양(직경, 살균대의 투명도, 살균대 주변의 억제대)을 관찰하여 차이를 보이는 플라크를 yellow tip으로 채취하여 105 CFU의 E123을 함유한 5ml LB broth에 부유하여 종야 배양하였다. 상기와 같이 플라크를 분리하여 배양하는 방식으로 총 5회 반복하여 순수한 플라크를 분리 하였으며, 이를 φWAO78-1로 명명하고, 2009년 3월 26일자로 서울 서대문구 홍제동에 소재하는 한국미생물보존센터에 기탁하여 기탁번호 KCCM10995P를 부여받았다. φWAO78-1의 플라크는 직경 1.5mm로 투명한 플라크를 보였다. 순수배양액은 동결건조 후 -70℃에서 보관하며 실험에 사용하였다.
실시예
2: φ
WAO78
-
1 의
전자현미경 구조 관찰
상기 배양된 φWAO78-1 100ml (4.4x1010pfu/ml)을 18,000 x g로 1시간 원심분리 한 후 100,000 x g에서 1시간 원심분리 하여 박테리오파지를 정제하였고, hydration된 grid에 시료를 묻혀주고 증류수로 2번에 걸쳐 씻어준 후 2%(w/v) uranyl acetate로 5초간 염색하여 투과전자현미경으로 관찰하였다. 이와 같이 관찰된 결과를 도 1에 나타내었다. 도 1에서 확인되는 바와 같이, φWAO78-1는 구조상 Order Caudovirales의 Family Siphoviridae 혹은 Podoviridae에 속하는 것으로 판단되며, Head의 직경은 약 50nm이고 길이는 100nm 였다.
실시예
3: φ
WAO78
-1의 숙주범위
표준균주 ATCC11775(serotype O1:K1:H7), ATCC23525(serotype O35:K.:H10), ATCC43886 (KCCM40404; serotype O25:K98:NM; LT+), ATCC43896 (KCCM40405; 078:K80:H12; ST+)와 국내 분리 O78 조류 병원성 대장균(E123) 19주, O1 2주, O18 3주, O20 1주, O115 2주 (이상, 서울대학교 수의과대학 조류질병학교실 분리주) 2x108 cfu/ml 500ul를 각각 LB 한천배지에 점적 하여 도말 한 후, 4.4x1010pfu/ml의 φWAO78-1을 LB 육즙 배지에 10배 희석한 희석액 10ul를 상기 각각의 세균을 도말한 배지에 각각 점적하고 건조시켜 살균 능력(용균 여부)을 확인하여, 그 결과를 아래의 표 1에 나타내었다.
| Strain | Serotype | Lysis | Strain | Serotype | Lysis |
| ATCC11775 | O1:K1:H7 | - | E106 | 078 | + |
| ATCC43886 | O25:K98 | - | E107 | 078 | + |
| ATCC23525 | O35:K.:H10 | - | E108 | 078 | + |
| ATCC43896 | 078:K80:H12 | + | E114 | 078 | + |
| E28 | 078 | + | E115 | 078 | + |
| E30 | 078 | + | E123 | 078 | + |
| E31 | 078 | + | E125 | 078 | + |
| E36 | 078 | + | E129 | 01 | - |
| E43 | 078 | + | E144 | 01 | - |
| E49 | 078 | + | E22 | 018 | - |
| E61 | 078 | + | E35 | 018 | - |
| E75 | 078 | + | E127 | 018 | - |
| E102 | 078 | + | E79 | 020 | - |
| E103 | 078 | + | E26 | O115 | - |
| E104 | 078 | + | E146 | O115 | - |
| E105 | 078 | + |
상기 표 1에서 확인된 바와 같이, O78 표준주와 O78 국내 분리주들의 경우 세균의 증식이 일어나지 않아 투명한 원형대가 형성되었으나, 나머지 대장균들에서는 증식이 일어나는 것으로 나타났다. 이러한 결과는 φWAO78-1이 O78 조류 병원성 대장균을 특이적으로 살균하는 능력을 가짐을 보이는 것이다.
실시예
4:
박테리오파아지
게놈 염기서열 결정
정제한 φWAO78-1 1ml에 proteinase K 완충용액(30mM Tris-HCl) 4ml를 첨가하고, proteinase K (1mg/ml NEB Inc. EC 3.4.21.14) 50㎍/ml을 첨가하여 50℃에서 1시간 진탕배양하였다. 상기 얻어진 배양물에 동량의 페놀-클로로포름(5:5, pH8.0)을 첨가한 후, 12,000rpm으로 4℃에서 15분간 원심분리 한 후 상층액을 채취하고, 동량의 페놀-클로로포름(5:5, pH8.0)을 첨가하여 12,000xg에서 원심분리한 후, 상층액 부피와 동량의 이소프로판올(100% isopropanol)을 첨가하여 실온에 10분간 정치한 후 15,000rpm으로 4℃에서 15분간 원심분리하였다. 그 후 침전물을 제외한 용액을 제거하고, 냉장한 70% 에탄올을 10ml 첨가한 후 15,000rpm으로 4℃에서 5분간 원심분리 한 후, 용액을 제거하고 침전물을 건조시키고, 0.5ml의 멸균 3차증류수에 부유하였다.
φWAO78-1 게놈을 ApoI(NEB Inc.)으로 pCR-TOPO 2.1은 EcoRI(NEB Inc.)으로 소화한 후 ligation 하였고, insert를 가지고 있는 클론들을 집락-PCR 법으로 확인한 후 그 amplicon을 정제하여 염기서열 결정에 사용하였다(M13F, 5'-GTAAAACGACGGCCAG-3'(서열번호 2), 10pmol 0.5ul; M13R, 5'-CAGGAAACAGCTATGAC-3'(서열번호 3) 10pmol, 0.5ul; 10x PCR buffer 3ul, dNTPs 10mM 0.5ul, Taq polymerase 5U/ul 0.5ul Bioneer Co., 세균 집락 부유액 1ul, 멸균3차증류수 24ul). 또한 AluI(NEB Inc.)으로 파아지 게놈을 처리하고, EcoRV(NEB Inc.)로 클로닝 벡터(pBlueScript SK+, Stratagen Co.)를 처리하고, 클로닝하여 염기서열을 결정하였다(M13F, 5'-GTAAAACGACGGCCAG-3'(서열번호 2), 10pmol 0.5ul; M13R, 5'-CAGGAAACAGCTATGAC-3'(서열번호 3) 10pmol, 0.5ul; 10x PCR buffer 3ul, dNTPs 10mM 0.5ul, Taq polymerase 5U/ul 0.5ul Bioneer Co., 세균 집락 부유액 1ul, 멸균3차증류수 24ul). 결정된 염기서열들의 겹치는 부분을 연결하여 게놈서열(서열번호 1)을 얻었다.
결정된 φWAO78-1 게놈 염기서열을 BLAST 검색한 결과 대장균 파지인 φK1ind2 (GenBank accession no. GU196280)과 가장 유사하였고, 부위별 상동성을 아래의 표 2에 나타내었다
| φWAO78-1 | φK1ind2 | Identity |
| 53-3664 | 18396-22007 | 91.2% (3294/3613) |
| 6201-7628 | 24349-25768 | 83.9% (1202/1432) |
| 8306-8965 | 26692-27351 | 92.4% (610/660) |
| 9149-12317 | 27344-30508 | 91.1% (2889/3170) |
| 12485-14002 | 30506-32023 | 89.1% (1352/1518) |
| 14239-15224 | 32021-32954 | 85.2% (840/986) |
| 15486-17475 | 33243-35232 | 89.7% (1786/1992) |
| 24478-24970 | 41341-41832 | 89.5% (441/493) |
| 25133-25794 | 41970-42651 | 89.1% (608/682) |
| 26490-28615 | 604-2729 | 82.0% (1749/2134) |
| 29507-31032 | 2814-4339 | 89.1% (1360/1526) |
| 31364-34113 | 4257-7106 | 94.2% (2595/2754) |
| 34279-42746 | 7155-15635 | 87.9% (7463/8488) |
| 42939-44545 | 15827-17434 | 90.5% (1455/1608) |
표 2에서 확인되는 바와 같이, φWAO78-1의 게놈 염기서열은 φK1ind2와 부위 별로 82.0% 내지 92.4%의 상동성을 보였다.
실시예
5: φ
WAO78
-1의 조류 병원성 대장균증 치료 효과
병원성이 높은 E123 주를 6.4 x 109cfu/200㎕/수를 42일령 육계 각 10수에 피하 접종 한 E123 군, 2 x 109pfu/200㎕/수의 φWAO78-1만을 피하 접종한 φWAO78-1 군, φWAO78-1과 E123을 함께 섞어 피하 접종한 E123+φWAO78-1 군, 및 동일한 접종량으로 E123을 등과 φWAO78-1을 다리에 각각 접종한 E123/φWAO78-1 군을 7일간 관찰하여 그 결과를 표 3에 나타내었다.
| 시험군 | 폐사율 | 세균분리율 | 비고 |
| E123 | 40% | 50%(2/4) | 2수 사고사 |
| φWAO78-1 | 0% | 0% | 1수 사고사 |
| E123+ φWAO78-1 | 0% | 0% | 1수 사고사 |
| E123/ φWAO78-1 | 0% | 62.5% | 2수 사고사 |
표 3에 나타난 바와 같이, E123 군에서는 40% (4/10)의 폐사율을 보이고, 생존계 50% (2/4)에서 E123이 순수 배양된 반면, E123+φWAO78-1 군은 폐사와 병변이 없었고, E123 세균 또한 분리되지 않았다. E123/φWAO78-1 군은 0%의 폐사를 보였으나, 62.5% (5/8)에서 E123 세균이 분리되었고, 병변이 관찰되었으나 침울이나 운동실조 등의 임상증상은 관찰되지 않아 회복 중에 있었던 것으로 판단되었다. 또한, φWAO78-1만을 접종한 시험계는 침울이나 운동장애 등의 임상증상을 보이지 않았고, 폐사도 없었으며 부검결과 육안적인 병변이 관찰되지 않아 박테리오파지 자체로는 병원성이 전혀 없는 것으로 확인되었다.
<110> SNU R&DB FOUNDATION
<120> Avian pathogenic Escherichia coli-specific bacteriophage and
antibacterial compositions containing the same
<130> DPP20107228KR
<160> 3
<170> KopatentIn 1.71
<210> 1
<211> 44547
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Genome sequence of phiWAO78-1
<400> 1
aagcctacgg aactgcacaa tcaacgttcc cacgaatttg ggatccgatg caatgagcca 60
agaatcagta gaagccgcct atcgccgtaa actggcctca aaccccgacg gcgagatgga 120
ctacatcacg ttgcaaatca gccacccgct gttgtcgaag acgtattatc ttgtgcgtgg 180
gttgcaggag cttacggcga cactggagac gggcgaaaca atcacgttcg agccaacccc 240
gatggaagcg gcgggggccg ctaacaacag tgatatggac cagacgacga cgttcacttt 300
accggatatt ctcaatcaac tggacgatga gatggataaa atcccgatga gtaacactga 360
gttgccgaaa ttcgtcttcc gccgttatgt cagcaccgac ctgtcttacc cggctgacgg 420
ccctgtcgtg tatgagttgc aggctatcaa ccaggagaaa ggcgagttct ccgcggatgt 480
tggtacgcct atgctgaacc aacgaagcac tggtatactg atgacaccta aagagatacc 540
gttattacgc ggcctgttga ccacatgaat attaacgact acacgggcat accttacgac 600
tttcgtaaac gcaattgctg gcatcatgtg cgcattgtcc gcgcggatgc cgggttagat 660
acgccagcgt tcgacgttac aagcccaacg gcaattaacg acgcgtttga cgaaggacat 720
cgcaacacga aggggcttac aaaaattgat aagcctgaaa acttctgtgc tgtgcttatg 780
gggtatcgcc gtggtggtcg tatcgtgtgg cacgcaggag tttacttcga cgggatggtc 840
agccattgcg agcttgcgtc ccgtcaggta cggcttgaca ggctggcgga cctcagagac 900
acatacacgg agattgaatt ttggcgataa tcctgcacta cacgcgaaac gctgatggcg 960
ctttcgaccg tacaaaacac gtcgggatgc cgatggagtt tgtcgttaac cgtatcccgg 1020
acggcgtgcc ggtgcgcgtc tacctgggcg agattggcga tgatactgat gtcaccgacg 1080
acttcgacgc actcaaagac gaagacgccg tgtaccacat tattgagggc gcgggtagcg 1140
gggcgctcgg tgcagttagt aaggtgttcg gttttatcct taagccaatt gccaagttgt 1200
ttggtctgaa cacggccgcc aacgccaact acacggcgac taacaaccag acaacatcgc 1260
cgaataacag cctcacagac cgctccaaca agccgcgtcc ttacgagcgc tcttatgaca 1320
tctgcggtac tgtgcagaca atccctaatg acctgatgca gacgtacaag gcgttcaact 1380
ccacgggtgc tttgctggag tattcatact acgacgcagg gcgcggacat ctgcatattg 1440
aggcggatgg cgtcacagaa ggcgacaccc tgataagcga catcacaggc tcctctgttg 1500
ccgtgtatgc gccgtatact tccccgaaca acaccgcatc gcctcaacta caaatcggcg 1560
acgtcattga ccagaaactc tatgtgacat actccaacga cgacgttgat ggtattgtac 1620
tgaaggcgcc aaacgacatt ggggctaacc caagcgccgg cggcacagct aaacgtattt 1680
caaccacagg ctacatctac gacccgtcgg gcggctctgc tttttctgag tttcttagcg 1740
tcggtgatgt cgcggtgctt agcaacttcg atgttgctga cgtcactaac ctgaacggct 1800
cgtttgaggt tttatacgtt gacgactttg aggttcggtt gtacgtcggg gatataggta 1860
actggggcaa ccttaatagc ggagagactt acgcacttac agagcgttct gatacattca 1920
ttggcccaag caacacctat ggcgtatctc ttacggactg gtattacatg gttcgcggag 1980
aggttgaccg tgtgctcgct aacgtcgcgg ggcagaacgg cctctacaaa tacgacggcg 2040
gatataaccg caccagcgta accgtagaac tccagtacca gatgattgac tctcagcgta 2100
acccgttgag cgatatttac acggtacagg ccacaattac aggcaacaac acggactacg 2160
tcggcacgtc tatctacggt caactgccta ctgcatcgcg tttccgcgcc cgtatgcgtc 2220
gtataacgaa ttttgataaa gactacgacg gtacggtaag cgacgagata accttcatca 2280
acctgtacgg tcagtctctg gacacaaccc cgcactacgg caaccgaact accgtacatt 2340
gtgcccgtaa acagacgccg cgtgccgcca gtatcgacaa cccggaactg cgcatgattg 2400
caaccgagat gtgctacaaa tacctcggca atggggtatt cgataccgta atgacgccga 2460
atacgcaggc cgtgcaatct ctaatccgac tggcgcgtga cccggcggtt ggtaatctgg 2520
aactcacaac ggcaaacatg gataagttac tatccgtgca ggaagaaatt gagtcctatt 2580
tcggaagtga attggcgggg cagttctgct acacgttcga cgactacgac accacgatgc 2640
aggacatcgt tcagactata gcggaagccg tgttctgcac agcgtaccgt aaaggcgcgg 2700
atattatgtt gcgcttcgac cgtccagttg cggggcctga gatggtgttc acccaccgca 2760
gcaaaactac cggtacagag aaatggacgc gcacgttcaa cgattctact acctacgata 2820
gcctgtcgtt ctcatacatc gacccggata ctaacgtaca ggaaacgatt tatatcccgg 2880
aagaactcgg ggtaaataca gaggaatatg aatcgaaggg cgtgcgcaac taccagcaag 2940
cgtactggct ggcgtggcgt cgctaccagc gcaatgcgtt aagtaaagtt gtcgtagagt 3000
tcgaagctac ggaagaaggc gctctagcta ctcccggcgg cgtaatcagc gtggttaaag 3060
gctcccgcat tgccacgcag gatggctatg ttgttgccgt taatgggctt acacttacgt 3120
tatctcagcc ggttacattt acctctggcg acgaccactc catcatcctc aagaagcgcg 3180
acggctccgt acagagtatc tccgttatca aaggaagtca cgaccgcgaa gtgattatgc 3240
tctccgcgcc ggaggaggca atctatacgg ggaatagcgc actaaaaact gagttttcat 3300
tcggcaacga agcaaggcat aatgctcaga agatagttgt ttcttcaatc gacccgggcg 3360
acgaccgcac ggtcaagatt acaggctaca actatgacga cggattctat aaatacgacg 3420
gcgtcgcgcc atacggcagc ggtttctccg acggattcag caatggtttt aattaaagag 3480
gactctatat gtcaagcgga tgcggtgacg ttttaagcct ggcggatttg caaaccgcta 3540
agaaacacca gatttttgag gcagaggtta ttaccggtaa gtcgggtggg gtggctacag 3600
gggctggtat cgattacgcg accaaccctg ttacaggcca gacccaaaaa acgctccccg 3660
ccgtgttgcg tgacgttgga ttttctcccg tgtcgtggga cttttctacc ggcggtacgt 3720
taacagttaa tgaccgtgac aaagtggtgt acgacccggt tagcaaaaca tggtactcat 3780
acgcaggtac gctaccggtt acagttccgg caggctttag ccccgtcggt aacgccgact 3840
ggaaaccgca gaccgacccg gatttgagaa atgacctgtc tgcccaagac gggttaactt 3900
taattggtag cgttcctgat gtcttggcgt tagctacggt cagtgcttcg gagggggata 3960
gtattatcct cgattcttac gcgggcagta acttaggcgg cggcattatg gtggcggttt 4020
cgtcgacagt tgatgtcgat aatatcgtaa catttcccgg tgatggtgtt gtctggaaaa 4080
ggaaattctt cgatgggtgt gcaacagtgt atgacgcggg gtttaacggc acgggagatt 4140
tagccgcgta cattaataaa ataaatttgg caggttatga ctgtgtggtg cctatttctg 4200
gtgagataac aacaccgatt gttttagaca tagcaaaagg cgcacttatc ggaaaaaata 4260
aatgtacttt aacagaatct gcttccgtaa ctggtgacta ctacctaacc attattaact 4320
caaacacgga ctacactaat agagatgtaa ttaacgcaac tgcgttaatg actggagtgt 4380
catttgttgg aaaaggggcc aggaaattgg cgatcggtgg ttctaccagt ggggaagtct 4440
cagagttaag aatatctaat tgtgggttta tttcaacagc cggagtcgag ttccttgata 4500
atgcataccg cgtattgttt gataaatgta cgttgtccag aagtttcacg gactcggtta 4560
ttttcaattc tcctgctaac gctggtgagg ctattaagtt taatcactgt tggatggtgg 4620
ataacggcgg accatttacg ttaactaacg ggcaattcat ctttgatagt tgctcgctgc 4680
cggcgggtaa gagatcggga tactttgacc ctgtattggc actttctgat aacgcccacg 4740
tagtattcgc caacggtaat atagagtacc agccggggca aagtttcgtc ggattcacgg 4800
ttgcaggtag ctcacggctg agcataaaag actcgactgt ccttctgccg tctgattacg 4860
cttcggctcc tattgtatgt aatggcgacg gggttgtcag tcttagcaat tgctctttgc 4920
cgttatacgg cagcacctcc atcgccaccg ggttccctac ccggcagttg gtaggcggct 4980
tgagcaaaaa agttatgtca cgcggatgct accctagagc tggttttata tctagcaact 5040
ggaatttagg ggccatagta agcccataca taaacagtct aagcaatggc tcaggacagt 5100
tcttatcaat ttcaaactgg acgctatcgc aaactggtac aggcacggta actgtatctg 5160
taaacaatga cgtaccgaat actcaaatgt ttacgacagc gttttcagtc actaccccgg 5220
cgtcatctgc gagcgccaac ttcacacaga cttgtgaaga ttgcgagccg ggtcgatatt 5280
tccagttagg attttgggct aaagggttag tgcctgtgct tgcaagcatt aggtttttag 5340
ataaaagtgg taacgccgta gcgtcaagtt cggggtactc tatcccgcaa tcctctactt 5400
atgctttctt tgctttcgtg gacaccgtcc ctcctggggc cttaaccgct gaaataaatt 5460
ttgcgatagg ggggtcagct ggtagtttct ctttacataa cgtcatatac ggtttgattt 5520
aaataaaact aaggcccctt tcggggcctt ttctctactc ttctgataac ttctccagta 5580
caaacgccag ttgcgcatta gcggcgtctc tttgctgccg tagtcgcaga acctcttctt 5640
cgagttcctt gatacgtttt tgcaatgccg gaatcggggc tatgatgttc atctggtaaa 5700
tttcctcgca agatacgtta tttcttcttc acaaagttca tcaaggtcgt ttgacacaaa 5760
tcctctggtg aatgttttgc tgaactttaa gccagcttta tcattgtcgc ccgcgcacac 5820
ccagtcatac ggcaaaagtg ccatttgctg ccgtaggtcg gttggtatat ttgacccaag 5880
tgcgcttacg gcattgaacc cgcaattcat caaagcaaca gctttaaata tgctttcggt 5940
aacaaatacg gtcccgcttt ccggaaggta ttcgagcccc cataaacaag gtcttgttgt 6000
tctggtgaag taccgcgcgt ctttaggatt tttacagttc ttttcagcat gtggcttgta 6060
gtgctgatat ccgcgtagct taccgtcaaa cccccacagg taaaatgtag ctacaccggg 6120
ggctaagact actcgtaaac ggccggcgtc aaaaccacgt gacagcagat gtgccttaag 6180
tagaaactcc tcgccatcca tcatttctta cctctgcgct tcatataatt aagtagttcg 6240
tcctgtacag accttttctc gtctgtacgc gcggcgacaa cttcatcaag agtatctctg 6300
gctattattt ggtaaatgaa tacagaccgt ttgtacccag attgcatctg ccttactggc 6360
cctatgcgct cgataacctg caaatagtgt tccaggttcc acccctgact tataaatgcc 6420
atgtgatgcc cgccgtgttg tagtgacagc ccgtgacctg cggaggccgg gtgtatcagg 6480
agcataggta tttcaccgcg gttccacgct tccatctgct tattgccctt cgcgccttta 6540
gcaaacgcct gtgcctgcgg gaatcgctta aggatgcgct ccagttcgtg cttaaactga 6600
taggccacca gcaacggagc accctgtagc tcctcaacaa tggactcaag cgcatcaagc 6660
gcatcaagtt tcgtgtcgtg cactttctcc cattctttgg ttgcttcgcc gtctggtcct 6720
gacacatata cggcgccgga tgcaatctgc aaacacttag acgtcttcgc cgctgcgtta 6780
gccgcttcga cttctccgct ctccagttcc gcaaataact tttcctccat atcgatgtac 6840
gcctgtcgcg ctttcttcgg caggtcgatt tcaaccggta cgataatcgg cgcttcgcac 6900
ccgaaccact cggcggcgtc aatcgtgaga ctaatgtcct tcatcttctg gtgaatttca 6960
ttatccgcac cggggcgagc atgatactcg cgcgccattg ccgacttacc tttctgtacc 7020
gagttaaacc agcggtcggt gaatgctgtg tacgatgagc cgaggcgctc gccagcgtcg 7080
ataaaccagt tctgccccca caagtctttt aggccgtttg gtgatggtgt gcccgtcagg 7140
ttgatgaaac gcttaacctt accgaacgca actttgctaa gtgccttagc tctcttgcta 7200
ccaccagacc ggctgcggaa tgatttaagt ttcgtgctct catcggcaac gataacagta 7260
aaaggccagt catctttgcc gtagtagtca atcagccatt cgataacttc atagttagtg 7320
cacaccacat tagcgtctga ctccagagcc tcgatgcggc gcttctctga accggtcgca 7380
tctacgacac tcaggcatgg aaatcgccat ttctcttgtt ctgcgggcca tgtgccggat 7440
gcgacgcgca acggagcgag gattaacacg cggtcgtcgt ccgtaagctg cccgttgcgg 7500
aacaggcggt ttaatgccca cagtacgctg ccagtcttcc cggcacccat gcttgcccat 7560
atgttgcagc gatggtgccg caacatgaac gaggtcatga gcttctggta ctcgcgcctt 7620
tgaacttaga catgattagc ctcgtaaact gcttttgcga aaccccgcgg agtaaggctg 7680
cggattgttt ttgttctggc gctctttccg ccgagtttag cccaaccagg gttatctccg 7740
ctgcccacgg caacctcggc aacgtcgggc ataacaaacc catttccgac ccacaggcac 7800
gtctttttaa catatgcgtc ccgcgccggg ataacgtcag ggaacattgg atgggtgtcg 7860
tcttcgggta aatagccgcc gtattcgtac gggttgaacg cgtagtcagg cttacgccat 7920
aaagacgaaa gaacgctaac agggttctca atcatataag gtacgttgta ctttttagcc 7980
agacgcgccg ccactttgca tgtaatcacg gcctctacct ggaacgtcgg attcttcttc 8040
cgcttcgttt caaaatgcgc cgcgccgcta acggctaaat ctgtgcacgg agggaactcg 8100
aaaataatat ccggcgcgac ctcgaagtcg aatttattat caatccacgc gtttatatag 8160
tggatatttt catgttcaac ttttgcgccc aatcgtgcgt agtctccgtg gtcggcgccg 8220
tcgtagttga aacaatagca agtatggccc gcttctgccc acggttgggc cataaggccc 8280
gagccgtcaa acaatgacca gacaatcatt tcgccaccag caccaattct ttacgcccga 8340
acgctgtaac gttaccggtt acatcttcaa taaccagttt accgttcgac tcgacgtata 8400
ccgtatcaac ggcaacaggc cgacgggtct taacgttgaa aatcatgtcg tccggtacga 8460
ggtcacgtgc tggtttgcgg tcgtattcgt gtttcatttc tcaattcctt atattgttgg 8520
tgtgtgatta actataatag ttcgctatta ggtcgtcaac ttgtttaaac gatccgacga 8580
caaaaacatt tgcgccacgt ttacgcatac gctcatgttc tcgcagctgg tgcgggtcag 8640
gcttcgtgtt ttcgtctttc ttaacctcga cgaaccagat gatgccgccg gggaggatta 8700
ctagcaggtc aggagcgccg gagcgcccct cgaaggaaag tttacgaacg aggccaccaa 8760
tggcctcgaa tcgctctttt gcgtatttct gtacgcgccc ctctttagtc atgagcgcag 8820
aacccatgta aggaaagccc ctcctagaac ggcaacaccg acaaacttaa agaacaggcc 8880
gtaacagaac atcgcagcta ttcctgcacc gagtaacagt gcgagcatgg ttactatcgt 8940
ccaaaataca aacattgtca taacaaaggc tccgcatccg ggttacgcag gaagtacgct 9000
tgatagatgt cgtgttccga atagtaaaca cctttgtgtg tgcaccccgc acaaacgtca 9060
ctaaagaacc catcacccat taccatgata aattcccatt ccggcgtatc cactaacgcg 9120
gctagcttct tactaaatgg tttgttactc ataatacgca cccctcacgt ttcgtatgct 9180
caatatcaca gcgcgggcag attcgacagt cttcttcgta taaccagtat attttcattc 9240
cagcacccac aaataaattg cgatgaacat gcctaataca gcgacaatca tgccgtattg 9300
gccttcgtga cagtagacac cggcggcgaa tcccgccagt accgcgataa tcagtttact 9360
tggcataacg ttttaactcc tgaccttccg ctacaagagg gaacccctcg gcccactctg 9420
gtaattcgca catcaaccgt tccagttctg cgacattgta ttccggtgaa tctggtgtct 9480
cgcagataat ctcatcgtgt acgtgaagca caatcgggta gccgtttgct tcaacgttca 9540
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aactacagac gctacggata aatcaggaaa cacggcaacc ggaaacgcta caagtttcgt 36720
actgaaagcc accgactggc gcgagttcac gctgactaat aacctgccat atgcgcaacg 36780
gctggagtac ggttggtcgc aacaggcccc gcaaggtgtg gtaaggacta atatatcgcg 36840
tttccagcaa ctcattaacg aagaagccaa caaggtgaaa tgatgggcta ctttgaggac 36900
ttaacaaaag cgtttgatgt gccgctggta gccttcggaa ccaccaacgg catcaaggtt 36960
gcgcttgaaa acatcgacgc acctacatca accgatacgc cgtatctggc gagttacatg 37020
ttgctggcag atacggaaca ggcggatttg ttcttcacgg aacaacgctc tggtatttat 37080
caggtagaca ttaactacgc atcggtgaaa ggtagcgcgt caatcaataa aatggcagac 37140
ttacttaaca cggcattcaa agcaggtaag tcattttcac gtaacgacat ctgcgccgag 37200
gttcaatcgg ttagcctggg gccgctgatt gtagaaaacg gatgggccaa acgaccattg 37260
tcaattaact ttattgcatt caccaagagg ctgtgaatat ggctacaact ccttttaagg 37320
gcgcgaatac cgcgcaattc tatgtggcgg aaactacccc gggcgtaaca cctactaacc 37380
cggtctggtc gccattgcgt aacactggcg gtgttccagc ggtaacccgc gatgcgctga 37440
cttccaacga actcgacggc agccgagaaa ctacatccat ccgcaccggt aacaaacagg 37500
ttagcgggga gtacgccatc gaacttagct cacgtagcca ggatgatttc cttgcgggtg 37560
ctatgacttc tacgtggcag gatggggtag agattacggg tgccgaaatt acggtcgccc 37620
cagcaggtaa aacattcacc cgcgctgccg gtagcttcat tactgacggt gtagaagttg 37680
gcgacctgat tgcgttcacc gacttaaccg gcgacaacgc aaaaccgttt atcgttaccg 37740
ctgtttccga ccttgtagtt acgggggcgg gcattcagca cacgctgaca gcagagactg 37800
taaccaccga cgctaaaact ggcgataaac tggaaaccgg taacgcgtgt aagacgttct 37860
ccatcctgac atggttcaaa ggccagtgcg gcaacccaga cgcgtacatg ttgaccaaag 37920
gcgtggaaat ctccggtttc accattgaac aggccgtaaa cgcgatggtg acaggcagct 37980
tcccgttcat cggtctaagt caggaaattc tttccgaacc gccggcaggt tccgacttct 38040
ctcgggtcac attcactgac gagccgttct catctgtaga tgtgtctgtt ttcgacggtt 38100
ctacgccgtt gcgttgcgat actctgacca tcaccaacga caacagcgca tccgcgcagt 38160
tcgaacttgg caacagtagc gttgcgttcg tggaacgtgg ccgcgcggct aacaccttct 38220
ccatctccgg gaagctgtac gacatggcga tgattcagaa gtttatcgac gagcagcagg 38280
tagagattaa ctctattctg gcgggggtaa acggggctat gtctttcagt ttgaaacgtg 38340
cagagcttac ggcggttaca ccagagattg gcggacctga gtcaatcact cagtccattg 38400
aaggccaggc tactggcaac cagtaccagt cgtctattgt catccagcgt atcacctacg 38460
cataaaacta aggccccttt tggggccttt cttcttacaa acctaatttt aaagcaatgt 38520
ctataacgtt cgatttaacg tcacccggta tgatatatgt gtcgcaatct tttacaccat 38580
caacatcata caagtaacca cggctatccc cgtcaaacgt atagccgtct cggtgcaagc 38640
gaacaattcg cacttcatgc ccagcggcga cgataggagc cacttcactg gcgaacccac 38700
cgtcggacac tacaaaaact tcgtcgccgt cgggcaagtt ttcagcaaga tacttaccga 38760
aataatcatc gccgaatacc ggtttaatga attgttcaga gatagcaatc atgaattgac 38820
ggcgagacaa accattaagg aatccttctg gcttttcttt ccgcgcccgg tcgtcgtagc 38880
cgtcgagaaa ctcgtggtaa gcatccgggc ctaacgctgc cagagcgata ttgaacattg 38940
gattcttgaa actggtagtt cctttcgcaa agcccatttc taccagtgcc atagcaagtg 39000
tgtctttccc gcaacccgca gggccattaa gaataattac attagccatt atttatcgct 39060
cccatgtgat tttaagcgtg tagagttccc gttacagtcg tattcagtaa ccgcgtgcgt 39120
cgtgattcct aagccacgga aatgcttaat caccgctggc gagtcgtcga atgcacacaa 39180
gattctttcc agtccgatag cgcgcaacac ctcttcttta attacgatgt cttttctgtt 39240
gtcgtgtttg ctacgcatga ttaactgata aaattcgacg cggtggcgct gcagccacat 39300
tctggtttct ttttctgcat catcactgcg accggttaaa ataataacgg cgtatcgccg 39360
attaagggcg ttacatagtt cgatattatc tctaattggc tcatcgtctt tgcacgccat 39420
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atgtgtacca tctgctaatg tcccgtctaa atcgaaaatt acaatatctt tcatcccagc 39540
atctccggtg aaatagttaa acgcgcaacc tcgccatatt tggcgctata agtaattaca 39600
tttgcgctac ggcccgacat ccatccgccg cgggaggcgt aggcgtcttt agccgctaag 39660
gtgcggtgtt gctcaacaat catgttacgg ctttctacaa tcttctgatg gtgcaggtga 39720
cctacgtgtg cgtagctgta gacgctctcg ccgaacgctt tgcggaactt ggcaatcata 39780
actggttcga tagcgtcgaa tcgcgccttg tgtccgtggg taaagaacag cgtcgttttg 39840
ccgtgctgca ccatcttgta aacatccggc gacgtatcga cgaacacacg cggctcattg 39900
tcgtacagcg tactgaacat ctcagccaac caaatcatac ccgattcgtc gtggttccct 39960
tgcacgataa gcagtcggac gtttttatgt ttaacgagcg ccatatcaac aacacggcgt 40020
accatacgaa tcatgtagcg gacaagtttc tgataacggg tgtcggcgtc aagagcgtga 40080
ccgcttgcag gtgtaacggc aaccagacta tcgaagtgcg cgaagtcgcc tagcaggtta 40140
ataactccgg tcccagcgtc cggcgctttc tgaaacgcct cgtcgaacca tcgggagaac 40200
aggccctccg cgattttcat atcccagtcg tcgccgctct cgtcggccca ggccagcata 40260
ccgagatgga aatcagacac agtgtaaaga ttgagtagtt tatcgtcgcg tttggcgcga 40320
atggttttaa caggtgcaac gggggtaatc tctgacttca tgccttcaat tacggctttc 40380
atcaactcga cctgacgttc ggcgtcggtt tctgtcttaa cccattgcaa cttagtattg 40440
ccgagttcgt ccaccagaga cgacgtcccc ttaatcttgt agccgtccgg gacaaggtga 40500
ctaacgtcgc gaccgtgacc tacgcctttc ttggccagct cgctttcgga cacgaattac 40560
gcggtctgag atgccgtatt tacgggctat atcgatagtt ttaactccgg cgttcaattc 40620
ttcctgtaat tgttcgtcgg ttattttctt ctgggccatg cttacttcct cgtgtttagg 40680
atttgtccta tactagctca cttctcgtta acattcgagt tgcatgccca gattaaaata 40740
aagacccacg gcagcagaat ccaaccaaga aacagattgg ccatgaatat cgccaacttc 40800
gctttatggt tgcggaaata cgcaaccagg aaaggtgcga aataagcgag cagcgcaaat 40860
agaattaggg aaaccggtaa acttgacatt ttaaacccct tcgttgtcgg tgtaagtgaa 40920
tagtacccta ttatattggg gcgcgcaagt aatgtgatag aataattttg cgcctagtgt 40980
cgcacacgaa aagcgggtgg ttcccgtctg gcgcaacacc atcaaccagt aacctcttaa 41040
ccaaaggatt aaagaatgaa actttctgat ttttatttcg aagagaaagc actggtaggc 41100
aagaagatgc cgattctgct accaaacggc gaagactccg gtgagtggct taatgttgta 41160
ggccctgatg cggatgccgc cgttaaagcg gggcgggctt tcattatcgc gtaccgccgc 41220
gggttggcgc gttttgaaga actggaaaaa gccgccaaag aatccggcga ctatactgaa 41280
tataacctgg cggttaacga actggcggaa gacctcaacc gacaactcgc atcggaagtc 41340
gtaaacggct ggagctttga tgagcctttc tctaaggaag cgcttaacaa attgctggat 41400
cagttcaagg cattgggtac acaggtggcg gcgttccata acgacgagcg caaagcatta 41460
caggaaaagt agacgcgctg tacaggttcg ccacctacga gtttgtggat aagcataaaa 41520
tcagagagtt tgattctata gccgacggac acgaacaggc gcttatcgcg atgggtgtaa 41580
tcgataagaa aaaacgtgca gcgcgacggg gtgggccgga atgcccgccc ctttttatat 41640
ccacctttga gacgtattgc gacattaagt ttacgcgaca cgtgcgcgag gacgctgtag 41700
tattgtttgc aagagaatcc gttacgtggc aagacctgaa agcctatctc gatgttacgc 41760
aaaaacagct tagcctgttc gagatagaca ttatcatggg cttagaagca atctttgaag 41820
gtagaaatca tggctgatac cgctagcttg atagtacgag tatcatcgac cggcgtcgat 41880
aaaaccacat cacaactgaa cgggcttact aaggcggctg gggccgctgc tgctgccgtc 41940
gtcagtctgg aaaccgctaa gcaggtgttc agtgcgctgg tggactccca gcgcaacttc 42000
gataagctga attccggcct catcacgatg accgggagcg ctgagaacgc ggctaaggct 42060
ttcagcgtcc tgcaacagtt cgcaaaagaa accccatatg gtcttaacca ggcggtggaa 42120
ggctttacta agctggtggc cctcggcctg aaccccagca aagaggcgtt aatctcctac 42180
ggcaacaccg cggcagcgat gggtaaagac cttaatcaga tgattgaggc cgtggcggac 42240
gccagtacct ttgagtttga gcgactgaaa gagttcggta ttaagtcatc acagcaggcg 42300
gatacagttt cgttcacgtt ccgcggtgta acgaccacgg ttaagaagaa ctccgaagag 42360
attcagaaat accttctgaa tatcggtaac actgatttcg ccggggcgat ggagacgcgc 42420
tcgaagacat tagatggtca gttgtcgagc ctggcggact cctttgacgg ccttgtactt 42480
gcggtggcgc aatcaggttt cggcgacgcc gtaggcgagc aagctgcgac cgcggaagat 42540
gctatcacgg cgcttaccga cgccatcgcg tctaatgaga tagccgccac gctccaggat 42600
tgggcaacac tgttcaatga atcgttcaag tttatttctg atgccctgaa tgacctggca 42660
ttcgataccg aggacaaatc cgttgatatg tcagactcgc tgggggctat accggatgct 42720
attcgtgagt ggttgccgga gattcaaaga atagcgaagg atatgtatgt agagttccag 42780
gctatcgaca tgcaagcggc gcttctggcg cagtctatta agtcggcctt cactccggga 42840
gaaacagcgg agggtacatt tgccgcaggt caggccgcta ttcagttctt caaagacaca 42900
gaaagggcga aaaacaaggc tgaggcggac gggataaccc aacgctcgaa gcagcgtaag 42960
aaagaaattg aggaacagcg caagcagtac gacgagcgca agaagcaaga aatagactta 43020
gccagccttg ttaataaaaa tggcggaact ggtggggcgg gaaataccaa cgacaaagac 43080
gcgaaagccg ccgctaagaa agcggagcaa ttgcgtaaac aggcccaaga ttacctcgac 43140
actttggccc gtcagaacaa cgacgagtta aaggcgattg acgcgcagga aaagcagaaa 43200
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gataagtacc gtgagcaggg tctgattagc gagaagcagt atcaggctgc gcttaacgcc 43500
atcaacgagc agtacgccac aaagcgtgcc gacgcaacgg caaccgcctt tggtaacatg 43560
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gtgacacgta ttacgacgtg ttcccgataa gcgtaaccct ggttacatcg gcgctggggc 44280
ggcaggcgtt tctgtcgttc ctcgaaaaag tagacggcgg tgcttcaagt ttctggatgg 44340
cgcatgactt cggcatgggt atcgaggatt atcaggtaac tatcacgtca accatcgcag 44400
agtccacaga agatggcatt aactggacga ttactttcac ggcaaccgct gagaaatcgc 44460
cgttccagga cctcgagaat cagtgccttg ttaacaatct gcccgatttg tatggttgct 44520
atggtgatgg gctgggatgt ttcctca 44547
<210> 2
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> M13F primer
<400> 2
gtaaaacgac ggccag 16
<210> 3
<211> 17
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> M13R primer
<400> 3
caggaaacag ctatgac 17
Claims (11)
- 서열번호 1의 게놈 서열을 갖는 박테리오파지.
- 제1항에 있어서, 기탁번호 KCCM10995P인 박테리오파지.
- 제1항 또는 제2항의 박테리오파지를 유효성분으로 함유하는 조류 병원성 대장균증의 예방 또는 치료용 조성물.
- 제3항에 있어서, 상기 조류 병원성 대장균증은 O78 항원형의 조류 병원성 대장균 감염에 의한 것인, 조류 병원성 대장균증의 예방 또는 치료용 조성물.
- 제3항에 있어서, 상기 상기 조류 병원성 대장균증은 제대염, 기낭염, 두부 종창증, 봉와직염, 수란관염, 관절염, 다발성 장막염, 간 포막염, 척추염, 및 패혈증으로 이루어진 군에서 선택된 것인, 조류 병원성 대장균증의 예방 또는 치료용 조성물.
- 제1항 또는 제2항의 박테리오파지를 유효성분으로 함유하는 항균제.
- 제6항에 있어서, O78 항원형 조류 병원성 대장균(avian pathogenic Escherichia coli)에 대하여 특이적인 항균활성을 갖는 것을 특징으로 하는 항균제.
- 제1항 또는 제2항의 박테리오파지를 유효성분으로 함유하는 소독제.
- 제1항 또는 제2항의 박테리오파지를 포함하는 사료 첨가용 조성물.
- 제9항의 사료 첨가용 조성물을 포함하는 사료.
- 제1항 또는 제2항의 박테리오파지의 유효량을 조류에 투여하는 단계를 포함하는, 조류 병원성 대장균증의 예방 또는 치료 방법.
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