KR20120094061A - 폴리글루탐산의 제어된 합성법 - Google Patents

폴리글루탐산의 제어된 합성법 Download PDF

Info

Publication number
KR20120094061A
KR20120094061A KR1020127016061A KR20127016061A KR20120094061A KR 20120094061 A KR20120094061 A KR 20120094061A KR 1020127016061 A KR1020127016061 A KR 1020127016061A KR 20127016061 A KR20127016061 A KR 20127016061A KR 20120094061 A KR20120094061 A KR 20120094061A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
polyglutamic acid
kda
average molecular
molecular weight
weight average
Prior art date
Application number
KR1020127016061A
Other languages
English (en)
Inventor
하이 왕
웬디 다이앤 테일러
Original Assignee
닛토덴코 가부시키가이샤
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 닛토덴코 가부시키가이샤 filed Critical 닛토덴코 가부시키가이샤
Publication of KR20120094061A publication Critical patent/KR20120094061A/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G69/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a carboxylic amide link in the main chain of the macromolecule
    • C08G69/02—Polyamides derived from amino-carboxylic acids or from polyamines and polycarboxylic acids
    • C08G69/08—Polyamides derived from amino-carboxylic acids or from polyamines and polycarboxylic acids derived from amino-carboxylic acids
    • C08G69/10—Alpha-amino-carboxylic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/12—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length by hydrolysis, i.e. solvolysis in general

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Polyamides (AREA)

Abstract

본 명세서에서 폴리글루탐산을 얻는 방법이 개시된다. 본 명세서에서 개시된 상기 방법은 원하는 중량평균 분자량을 갖는 폴리글루탐산을 얻는 제어된 방법이다.

Description

폴리글루탐산의 제어된 합성법 {CONTROLLED SYNTHESIS OF POLYGLUTAMIC ACID}
본 명세서에서 폴리글루탐산을 얻는 방법이 일반적으로 개시되어 있다. 더욱 구체적으로, 원하는 중량평균 분자량을 갖는 폴리글루탐산을 얻는 제어된 방법이 개시되어 있다. 2009년 12월 16일에 출원된 US 가출원 제61/287,129호는 모두 본 명세서에서 도면을 포함한 그 전체로서 인용에 의해서 통합된다.
폴리글루탐산은 상업적으로 입수가능하다. 그러나, 그 가격이 대략 그램당 $350-$500 (Sigma Aldrich Chemical Company) 정도로 비싸다. 이러한 고가는 특정 분자량을 갖는 폴리글루탐산의 합성이 어렵다는 점과 관련이 있다. 폴리글루탐산은 종종 N-카르복시안하이드라이드의 중합을 개시하는 개시제를 사용하여 얻을 수 있다. 상기 중합 반응은 특정 분자량이 얻어진 것으로 보일 때 종료된다. 그러나, 언제 반응을 종료하여 특정 분자량의 폴리글루탐산이 제조되는지 예견하는 것이 어렵다. 또한, 낮은 다분산지수(polydispersity index)를 갖는 폴리글루탐산을 제조하는 것이 어렵다. 다량으로 폴리글루탐산을 제조하는 것 또한 어렵다.
본 명세서에서 개시된 일부 구현예는 좁은 범위의 킬로달톤 (kDa) 이내의 소정의 중량평균 분자량을 갖는 폴리글루탐산을 얻기 위하여 사용될 수 있는 폴리글루탐산을 제조하는 방법에 관한 것이다. 또한, 상대적으로 정확성을 갖는 원하는 중량평균 분자량을 갖는 폴리글루탐산을 얻는 방법에 더하여, 일부 구현예에서, 상기 방법은 현재 구현가능한 상업적인 방법들보다 덜 비싸다. 또한, 일부 구현예에서는, 상기 방법은 10g 내지 1000g 규모 수준의 폴리글루탐산을 얻는데 사용될 수 있다.
일부 구현예는 80 kDa 이상의 제1 중량평균 분자량을 갖는 출발 폴리글루탐산을 얻는 단계; 80 kDa 미만인 폴리글루탐산의 목표 제2 중량평균 분자량을 선택하는 단계; 상기 제1 중량평균 분자량의 상기 출발 폴리글루탐산을 상기 선택된 목표 제2 중량평균 분자량의 폴리글루탐산으로 바꾸는데 효과적인 가수분해 조건을 선택하는 단계; 및 상기 출발 폴리글루탐산을 상기 가수분해 조건 하에서 가수분해하여 그로부터 상기 선택된 목표 제2 중량평균 분자량의 약 +-10 kDa 이내의 중량평균 분자량을 갖는 폴리글루탐산 산물을 얻는 단계를 포함할 수 있다.
일부 구현예는 185 kDa 이상의 제1 중량평균 분자량을 갖는 출발 폴리글루탐산을 얻는 단계; 185 kDa 미만인 폴리글루탐산의 목표 제2 중량평균 분자량을 선택하는 단계; 상기 제1 중량평균 분자량의 상기 출발 폴리글루탐산을 상기 선택된 목표 제2 중량평균 분자량의 폴리글루탐산으로 바꾸는데 효과적인 가수분해 조건을 선택하는 단계; 및 상기 출발 폴리글루탐산을 상기 가수분해 조건 하에서 가수분해하여 그로부터 상기 선택된 목표 제2 중량평균 분자량의 약 +-10 kDa 이내의 중량평균 분자량을 갖는 폴리글루탐산 산물을 얻는 단계를 포함할 수 있다.
이러한 구현예 및 다른 구현예들은 이하 보다 자세히 설명된다.
도 1은 191 kDa의 출발 중량평균 분자량을 갖는 폴리글루타믹 벤질 에스테르를 HBr-AcOH를 포함하는 가수분해 조건 하에서 30℃에서 수 시간 동안 가수분해하여 얻은 폴리글루탐산의 평균 중량평균 분자량을 나타낸 도면을 보여준다.
도 2는 130 kDa의 출발 중량평균 분자량을 갖는 2개의 폴리글루타믹 벤질 에스테르 샘플을 HBr-AcOH를 포함하는 가수분해 조건 하에서 30℃에서 수 시간 동안 가수분해하여 얻은 폴리글루탐산의 평균 중량평균 분자량을 나타낸 도면을 보여준다.
I. 정의
달리 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 모든 기술 용어 및 과학 용어는 당업자에게 통용되어 이해되는 바와 동일한 의미를 가진다. 본 명세서에서 인용된 모든 특허, 명세서, 공개된 명세서 및 기타 공개 자료는 달리 기재되지 않는 한 그 전문으로서 인용에 의하여 통합된다. 본 명세서의 용어에 대하여 복수 개로 정의 내려진 경우, 달리 기재되지 않는 한, 이 분야에서의 정의들이 우선한다.
"폴리글루탐산" 또는 "PGA"라는 용어는 당업자에게 이해되는 통상적인 의미에 따라서 본 명세서에서 사용된다. 당업자라면 특정 pH 수준 (예를 들어, pH > 7)에서 폴리글루탐산의 펜던트 카르복실산기에 결합된 수소는 나트륨과 같은 적절한 양이온으로 치환될 수 있다. 따라서, 폴리글루탐산은 상기 펜던트 카르복실산이 양성자화(protonated)되거나 탈양성자화된(deprotonated) 글루탐산 모노머 단위로 구성된다. 폴리글루탐산의 탈양성자화된 글루탐산 모노머 단위는 글루탐산염(glutamate salt), 예를 들어, 나트륨염, 칼륨염, 리튬염, 칼슘염, 마그네슘염, 및 암모늄염 (예를 들어, 테트라부틸암모늄 (TBA), 테트라프로필암모늄 (TPA), 헥사데실트리메틸암모늄, 도데실트리에틸암모늄, 테트라메틸암모늄, 테트라에틸암모늄, 및 트리스(히드록시메틸)아미노메탄 염), 및 그 조합을 포함한다.
일부 구현예에서, 카르복실산기의 말단 수소는 적절한 보호기(protecting group)로 치환될 수 있다. 따라서 폴리글루탐산은 비보호된 폴리글루탐산 및 보호된 폴리글루탐산을 포함한다. 적절한 보호기는 당업자에게 공지되어 있다. 에스테르 보호기는 C1-C14 알킬 에스테르, C6-C10 아릴 에스테르, 및 C7-C14 아르알킬 에스테르를 포함하고, 이에 한정되지는 않는다. 폴리글루탐산에 대한 예시적인 에스테르 보호기는 페닐 에스테르, 벤질 에스테르, 알킬 에스테르 (예를 들어, 메틸 에스테르, 에틸 에스테르, 프로필 에스테르, 이소프로필 에스테르, 부틸 에스테르, t-부틸 에스테르, 및 헵틸 에스테르), 및 당업계에 공지된 임의의 다른 에스테르를 포함하고, 이에 한정되지는 않는다. 예를 들어, Wuts 및 Greene의 ' Greene's Protective Groups in Organic Synthesis' (John Wiley and Sons, 2007)를 참조한다. 일부 구현예에서, 상기 보호기는 벤질기 함유 에스테르(benzylic ester)와 같은 벤질 에스테르(benzyl ester)일 수 있다.
따라서, 상기 용어, "폴리글루탐산" 또는 "PGA"는 폴리글루타메이트(polyglutamate) 및 카르복실산기의 수소가 짝이온 및/또는 적절한 보호기로 치환된 폴리글루탐산(polyglutamic acid)과 같은 변형물을 포함하는 일반적인 용어이다. 폴리글루탐산은 폴리-알파-글루탐산 및 폴리-감마-글루탐산을 모두 포함한다. 예를 들어, 상기 용어, "폴리글루탐산"은 폴리-알파-글루탐산-감마-(벤질)에스테르 및 폴리-알파-글루탐산-감마-(t-부틸)에스테르를 포함한다. 폴리글루탐산은 75% 이상의 모노머 단위가 글루탐산 모노머 단위인 중합체를 포함한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 상기 용어 "가수분해" 및 "가수분해하다"는 상기 폴리글루탐산으로부터 보호기를 분리하는 것, 및/또는, 상기 폴리글루탐산 내의 아미드 백본 결합을 분할하는 것을 지칭한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 상기 용어 "가수분해 조건"은 가수분해를 일으키는 화학 반응 파라미터를 지칭한다. 예시적인 가수분해 조건 파라미터는 시간, 온도, 용매, 및 가수분해 시약을 포함하고, 이에 한정되지는 않는다. 예시적인 가수분해 시약은 산 시약, 염기 시약, 및/또는 효소 시약을 포함하고, 이에 한정되지는 않는다. 가수분해 조건은 당업계에서 일반적으로 공지되어 있다. 예를 들어, Smith 및 March, March의 Advanced Organic Chemistry, John Wiley & Sons, 2007, 페이지 1400-1411을 참고한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 상기 용어 "중량평균 분자량" 또는 "
Figure pct00001
"는 중합체의 분자량을 설명하기 위하여 사용될 수 있다. 상기 중량평균 분자량은 각 부의 몰 질량(molar mass)을 그 중량 분율로 곱한 결과의 합이다. 예를 들어, Introduction to Polymers, Chapman and Hall, 1981, 페이지 8; 및 Stevens의 Polymer Chemistry : An Introduction, Oxford University Press, 페이지 35-37을 참조한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 상기 용어 "수평균 분자량" 또는 "
Figure pct00002
"는 중합체의 분자량을 설명하기 위하여 사용될 수 있다. 상기 수평균 분자량은 각 부의 몰 질량을 그 몰 분율로 곱한 결과의 합이다. 예를 들어, Introduction to Polymers, Chapman and Hall, 1981, 페이지 5; 및 Stevens의 Polymer Chemistry : An Introduction, Oxford University Press, 페이지 35-37을 참고한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 상기 용어, "다분산지수"는 중량평균 분자량 대 수평균 분자량의 비를 지칭한다. 상기 다분산지수는 수학적으로
Figure pct00003
로 표시될 수 있다.
본 명세서에서 제공되는 수치 범위의 경우, 상기 수치 범위는 수치 범위 내의 각 정수를 포함하도록 의도된 것으로 이해되어야 한다. 예를 들어, 20-25 kDa 범위의 분자량을 갖는 중합체의 언급은 20 kDa, 21 kDa, 22 kDa, 23 kDa, 24 kDa, 및 25 kDa의 분자량을 갖는 다양한 중합체에 대한 기재임이 이해되어야 한다. 마찬가지로, 20-40℃ 범위의 온도에 대한 언급은 20℃, 21℃, 22℃, 23℃, 24℃, 25℃, 26℃, 27℃, 28℃, 29℃, 30℃, 31℃, 32℃, 33℃, 34℃, 35℃, 36℃, 37℃, 38℃, 39℃, 및 40℃의 다양한 온도의 기재임이 이해되어야 한다.
본 명세서에 기재된 하나 이상의 키랄 중심(chiral center)을 갖는 임의의 화합물에서, 만약 절대적 입체화학이 명백히 달리 나타내지 않는 한, 각 센터는 독립적으로 R-폼(R-configuration) 또는 S-폼(S-configuration) 또는 그 혼합물일 수 있다. 따라서, 본 명세서에서 제공된 화합물은 이성질체적으로(enatiomerically) 순수하거나, 입체 이성질체 혼합물일 수 있다. 또한, E 또는 Z로 정의될 수 있는 기하학적 이성질체를 발생시키는 이중 결합을 하나 이상 갖는 본 명세서에서 기재된 임의의 화합물에서, 각 이중 결합은 독립적으로 E 또는 Z이거나, 그 혼합물일 수 있다. 마찬가지로, 모든 토토머(tautomeric) 형태가 또한 포함되는 것으로 의도된다.
II . 폴리글루탐산
폴리글루탐산을 제조하는 방법이 개시된다. 본 명세서에 개시된 일부 구현예는 185 kDa 이상의 제1 중량평균 분자량을 갖는 출발 폴리글루탐산을 얻는 단계; 185 kDa 미만인 폴리글루탐산의 목표 제2 중량평균 분자량을 선택하는 단계; 상기 제1 중량평균 분자량의 상기 출발 폴리글루탐산을 상기 선택된 목표 제2 중량평균 분자량의 폴리글루탐산으로 바꾸는데 효과적인 가수분해 조건을 선택하는 단계; 및 상기 출발 폴리글루탐산을 상기 선택된 가수분해 조건 하에서 가수분해하여 그로부터 상기 선택된 목표 제2 중량평균 분자량의 약 +-10 kDa 이내의 중량평균 분자량을 갖는 폴리글루탐산 산물을 얻는 단계를 포함하는 폴리글루탐산을 제조하는 방법에 관한 것이다.
일부 구현예에서, 상기 폴리글루탐산을 제조하는 방법은 50 kDa 내지 500 kDa의 제1 중량평균 분자량을 갖는 출발 폴리글루탐산을 선택하는 단계를 포함할 수 있다. 폴리글루탐산을 준비하는 단계는 100,000 kDa 까지의 제1 중량평균 분자량을 갖는 출발 폴리글루탐산을 선택하는 단계를 포함할 수 있다.
상기 폴리글루탐산을 제조하는 방법은 상기 출발 폴리글루탐산의 분자량 보다 작은 분자량을 갖는 목표 제2 분자량 폴리글루탐산을 선택하는 단계를 포함할 수 있다.
상기 폴리글루탐산을 제조하는 방법은 상기 중량평균 분자량의 상기 출발 폴리글루탐산을 상기 목표 제2 중량평균 분자량으로 바꾸는데 효과적인 산성, 염기성, 또는 효소적 가수분해 조건을 선택하는 단계를 포함할 수 있다.
상기 폴리글루탐산을 제조하는 방법은 상기 선택된 목표 제2 중량평균 분자량의 약 +-5 내지 +-50 kDa 이내로 보다 낮은 중량평균 분자량을 갖는 폴리글루탐산 산물을 제조할 수 있다. 상기 폴리글루탐산을 제조하는 방법은 상기 선택된 제2 중량평균 분자량의 약 +- 1 % 내지 +- 10 % 이내로 보다 낮은 중량평균 분자량을 갖는 폴리글루탐산 산물을 제조할 수 있다.
A. 출발 폴리글루탐산
폴리글루탐산은 다양한 공급원으로부터 얻을 수 있다. 예를 들면, 상기 출발 폴리글루탐산은 Sigma-Aldrich Chemical Co.와 같은 상업적 공급원으로부터 얻을 수 있다. 선택적으로, 상기 출발 폴리글루탐산은 합성될 수 있다. 출발 폴리글루탐산을 합성하는 적당한 방법은 당업계에 공지되어 있다. 상기 출발 폴리글루탐산을 합성하는 하나의 방법은 글루타믹 에스테르 모노머를 적절한 개시제와 반응시키는 것에 의할 수 있다. 글루타믹 에스테르 모노머와 개시제 간의 적절한 반응의 예는 하기 반응식 1A에 예시된다.
[반응식 1A]
Figure pct00004
상기 식에서, R은 에스테르 보호기이다. 당업계에 공지되거나, 또는 본 명세서에서 앞서 언급된 임의의 에스테르 보호기가 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, R은 C1-C14 알킬, C6-C10 아릴, 또는 C7-C14 아르알킬이다. 일부 구현예에서, R은 벤질, 페닐, t-부틸, 이소프로필, 에틸, 또는 메틸이다.
예를 들어, 반응식 1B에 예시된 바와 같이, 벤질 에스테르 글루탐산 N-카르복시안하이드라이드는 아민 개시제와 반응하여 폴리글루탐산 벤질 에스테르 중합체를 제조할 수 있다. 상기 아민 개시제는 트리에틸 아민 (TEA)일 수 있다. 상기 반응은 실온에서 디옥산 내에서 수행될 수 있다.
[반응식 1B]
Figure pct00005
i. 출발 폴리글루탐산 분자량
상기 출발 폴리글루탐산은 가수분해 결과인 폴리글루탐산 산물에 비하여 높은 중량평균 분자량을 가진다. 일부 구현예에서, 상기 출발 폴리글루탐산은 80 kDa 이상의 제1 중량평균 분자량을 가진다. 일부 구현예에서, 상기 출발 폴리글루탐산은 100 kDa 이상의 제1 중량평균 분자량을 가진다. 일부 구현예에서, 상기 출발 폴리글루탐산은 130 kDa 이상의 제1 중량평균 분자량을 가진다. 일부 구현예에서, 상기 출발 폴리글루탐산은 150 kDa 이상의 제1 중량평균 분자량을 가진다. 일부 구현예에서, 상기 출발 폴리글루탐산은 170 kDa 이상의 제1 중량평균 분자량을 가진다. 일부 구현예에서, 상기 출발 폴리글루탐산은 185 kDa 이상의 제1 중량평균 분자량을 가진다. 상기 출발 폴리글루탐산의 중량평균 분자량을 측정하는 방법은 당업자에게 공지되어 있다. 다양한 방법들은 적절한 분자량 감지 기술 (예를 들어, 광 산란)을 사용하는 크기 배제 크로마토그래피-고압 액체 크로마토 그래피 (size exclusion chromatography-high pressure liquid chromatography: SEC-HPLC), 중성자 작은 각 산란 (small angle neutron scattering: SANS), X선 산란 (X-ray scattering), 및 침강 속도(sedimentation velocity)를 포함하고, 이에 한정되지는 않는다. SEC-HPLC는 또한 겔침투 크로마토그래피 (GPC)로 지칭될 수 있다. 상기 폴리글루탐산 중합체의 중량평균 분자량을 결정하는 2개 이상의 방법이 상이한 분자량 값을 제조한다면, SEC-HPLC에 의해 얻어진 중량평균 분자량 값이 바람직하다. 일부 구현예에서, 상기 출발 폴리글루탐산은 190 kDa 이상의 제1 중량평균 분자량을 가질 수 있다. 다른 구현예에서, 상기 출발 폴리글루탐산은 200 kDa 이상의 제1 중량평균 분자량을 가질 수 있다. 또 다른 구현예에서, 상기 출발 폴리글루탐산은 220 kDa 이상의 제1 중량평균 분자량을 가질 수 있다. 또 다른 구현예에서, 상기 출발 폴리글루탐산은 230 kDa 이상의 제1 중량평균 분자량을 가질 수 있다. 또 다른 구현예에서, 상기 출발 폴리글루탐산은 240 kDa 이상의 제1 중량평균 분자량을 가질 수 있다.
일부 구현예에서, 상기 출발 폴리글루탐산은 약 50 kDa 내지 약 500 kDa 범위의 제1 중량평균 분자량을 가질 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 출발 폴리글루탐산은 약 80 kDa 내지 약 300 kDa 범위의 제1 중량평균 분자량을 가질 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 출발 폴리글루탐산은 약 80 kDa 내지 약 130 kDa 범위의 제1 중량평균 분자량을 가질 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 출발 폴리글루탐산은약 130 kDa 내지 약 270 kDa 범위의 제1 중량평균 분자량을 가질 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 출발 폴리글루탐산은 80 kDa 이상의 제1 중량평균 분자량을 가질 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 출발 폴리글루탐산은 40 kDa 이상의 제1 중량평균 분자량을 가질 수 있다.
ii . 중합 개시제
일반적으로, 반응식 1A에서 중합 개시제는 친핵체(nucleophile)이다. 또한, 중합개시제는, 바람직하게는 개시제가 중합체 산물로부터 분리되거나, 그렇지 않으면 중합 반응 완료시 반응 혼합물로부터 제거될 수 있는 물리적 성질을 가진다. 개시제의 예는 벤질아민, n-헥실아민, 디에틸아민, 트리에틸아민, 소듐 메톡사이드, 소듐 N-벤질카바메이트, 소듐 하이드록사이드, 소듐 보로하이드라이드, 소듐 에톡사이드, 소듐 프로폭사이드, 포타슘 메톡사이드, 포타슘 에톡사이드, 포타슘 프로폭사이드, 포타슘 터트-부톡사이드, 디이소프로필에틸아민, l,8-디아자바이시클로[5,4,0]운데크-7-엔 (DBU), 4- 디메틸아미노피리딘 (DMAP), 글루탐산 디메틸 에스테르, 및 글루탐산-감마-터트-부틸 데스테르, 또는 공지된 임의의 음이온성 개환 개시제를 포함한다.
B. 목표 분자량
일부 구현예에서, 상기 선택된 목표 제2 중량평균 분자량은 40 kDa 이하이다. 일부 구현예에서, 상기 선택된 목표 제2 중량평균 분자량은 약 40 kDa 내지 약 12 kDa의 범위 내일 수 있다. 다른 구현예에서, 상기 선택된 목표 제2 중량평균 분자량은 약 30 kDa 내지 약 15 kDa의 범위 내일 수 있다. 또 다른 구현예에서, 상기 선택된 목표 제2 중량평균 분자량은 약 25 kDa 내지 약 20 kDa의 범위 내일 수 있다. 특정의 선택된 목표 제2 중량평균 분자량을 선택하는 이유는 다양하다. 이유를 열거하면, 상기 선택된 목표 중량평균 분자량을 갖는 상기 폴리글루탐산의 증가된 용해도, 신체 (예를 들어, 신장)로부터 폴리글루탐산 분비의 저감 및/또는 감소 및 상기 폴리글루탐산에 대한 신체의 면역반응의 감소를 포함하고, 이에 제한되지 않는다.
또한, 생체내 (in vivo) 열화 시간, 혈액 순환 시간, 생체 적합성, 독성, 항원 잠재성(antigenic potential), 면역원성 자극, 생물학적 안정성, 가수분해 안정성, 효소 안정성, 용해도, 투과성(permeability), 팽창, 유리 전이 온도, 융점, 분해 온도, 모듈러스, 인장 강도, 탄성, 및 확산 수송(diffusivity transport)과 같은 특성이 상기 선택된 목표 폴리글루탐산 중합체의 분자량에 의존할 수 있다.
일부 구현예에서, 상기 선택된 목표 제2 중량평균 분자량은 약 100 kDa 내지 약 1 kDa의 범위 내일 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 선택된 목표 제2 중량평균 분자량은 약 100-80 kDa, 90-70 kDa, 80-60 kDa, 70-50 kDa, 60-40 kDa, 50-30 kDa, 40-20 kDa, 30-10 kDa, 또는 20-1 kDa의 범위 내일 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 선택된 목표 제2 중량평균 분자량은 약 45-35 kDa, 40-35 kDa, 35-30 kDa, 30-25 kDa, 25-20 kDa, 22-17 kDa, 20-15 kDa, 15-10 kDa, 10-5 kDa, 또는 5-2 kDa의 범위 내일 수 있다.
일부 구현예에서, 상기 선택된 목표 제2 중량평균 분자량은 30 kDa ± 10 %, 29 kDa ± 10 %, 28 kDa ± 10 %, 27 kDa ± 10 %, 26 kDa ± 10 %, 25 kDa ± 10 %, 24 kDa ± 10 %, 23 kDa ± 10 %, 22 kDa ± 10 %, 21 kDa ± 10 %, 20 kDa ± 10 %, 19 kDa ± 10 %, 18 kDa ± 10 %, 17 kDa ± 10 %, 16 kDa ± 10 %, 15 kDa ± 10 %, 14 kDa ± 10 %, 13 kDa ± 10 %, 12 kDa ± 10 %, 11 kDa ± 10 %, 또는 10 kDa ± 10 %이다.
일부 구현예에서, 상기 선택된 목표 제2 중량평균 분자량은 30 kDa ± 5 %, 29 kDa ± 5 %, 28 kDa ± 5 %, 27 kDa ± 5 %, 26 kDa ± 5 %, 25 kDa ± 5 %, 24 kDa ± 5 %, 23 kDa ± 5 %, 22 kDa ± 5 %, 21 kDa ± 5 %, 20 kDa ± 5 %, 19 kDa ± 5 %, 18 kDa ± 5 %, 17 kDa ± 5 %, 16 kDa ± 5 %, 15 kDa ± 5 %, 14 kDa ± 5 %, 13 kDa ± 5 %, 12 kDa ± 5 %, 11 kDa ± 5 %, 또는 10 kDa ± 5 %이다.
일부 구현예에서, 상기 선택된 목표 제2 중량평균 분자량은 약 30 kDa, 29 kDa, 28 kDa, 27 kDa, 26 kDa, 25 kDa, 24 kDa, 23 kDa, 22 kDa, 21 kDa, 20 kDa, 19 kDa, 18 kDa, 17 kDa, 16 kDa, 15 kDa, 14 kDa, 13 kDa, 12 kDa, 11 kDa, 또는 10 kDa이다.
일부 구현예에서, 상기 선택된 목표 제2 중량평균 분자량은 40 kDa 미만이다. 일부 구현예에서, 상기 선택된 목표 제2 중량평균 분자량은 30 kDa 미만이다. 일부 구현예에서, 상기 선택된 목표 제2 중량평균 분자량은 20 kDa 미만이다.
C. 가수분해 조건
상기 출발 폴리글루탐산은 가수분해되어 폴리글루탐산 산물을 얻을 수 있다. 상기 폴리글루탐산 산물의 중량평균 분자량은 상기 출발 폴리글루탐산의 중량평균 분자량보다 작을 수 있다. 상기 출발 폴리글루탐산을 가수분해하는 하나의 방법은 상기 출발 폴리글루탐산을 반응식 2에서 예시된 바와 같은 가수분해 조건 하에 두는 것이다.
[반응식 2]
Figure pct00006
상기 식에서, R은 에스테르 보호기이고; x 및 y는 정수를 나타내고; 그리고, x는 y 보다 크다(즉, x > y).
일부 구현예에서, 상기 폴리글루탐산 산물은 양이온화되거나, 탈양이온화될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 폴리글루탐산 산물은 나트륨염, 칼륨염, 리튬염, 칼슘염, 마그네슘염, 및 암모늄염 (예를 들어, 테트라부틸암모늄 (TBA), 테트라프로필암모늄 (TPA), 헥사데실트리메틸암모늄, 도데실트리에틸암모늄, 테트라메틸암모늄, 테트라에틸암모늄, 및 트리스(히드록시메틸)아미노메탄염)과 같은 글루타메이트 염 잔기를 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 상기 가수분해 조건은 상기 출발 폴리글루탐산으로부터 상기 보호기를 절단한다(cleave). 일부 구현예에서, 상기 가수분해 조건은 상기 출발 폴리글루탐산 내의 백본 아미드 결합을 절단한다(cleave). 일부 구현예에서, 상기 가수분해 조건은 상기 출발 폴리글루탐산 내의 보호기 및 백본 아미드 결합 모두를 절단한다.
다양한 조건이 사용되어 상기 출발 폴리글루탐산을 가수분해할 수 있다. 적절한 가수분해 조건을 선택하는 적당한 방법이 당업자에게 공지되어 있다. 일부 구현예에서, 상기 가수분해 조건은 산의 사용을 포함한다. 적당한 산은 당업자에게 공지되어 있다. 일부 구현예에서, 상기 산은 양성자성 산(protic acid)일 수 있다. 예를 들어, 상기 산은 브롬화수소산, 염화수소산 및 황산일 수 있다. 필요하거나, 및/또는 원하는 경우, 상기 산은 양성자성 용매, 예를 들어, 물, 아세트산 및/또는 디클로로아세트산 내에서 희석될 수 있다. 일 구현예에서, 상기 산은 HBr-아세트산 (HBr-AcOH)일 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 산은 약 20 질량% 내지 약 60 질량% 범위 내의 퍼센트 조성을 가질 수 있다. 다른 구현예에서, 상기 산은 약 30 질량% 내지 약 40 질량% 범위 내의 퍼센트 조성을 가질 수 있다. 또 다른 구현예에서, 상기 산은 대략 33 질량%의 퍼센트 조성을 가질 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 가수분해 조건은 상기 선택된 목표 제2 중량평균 분자량 보다 큰 중량평균 분자량을 갖는 폴리글루탐산에 대하여 다양한 가수분해 조건을 적용하는 실험으로부터 생성된 그래프에 근거하여 선택될 수 있다. 그러한 그래프의 예는 도 1에서 보여진다. 일부 구현예에서, 상기 그래프를 생성하기 위해 사용된 폴리글루탐산은 상업적으로 입수될 수 있다. 다른 구현예에서, 상기 그래프를 얻기 위해 사용된 폴리글루탐산은, 예를 들어 본 명세서에서 설명된 바와 같은 절차를 사용하여 합성될 수 있다.
i. 가수분해 조건 선택
가수분해 조건은 폴리글루탐산 중합체 내의 보호기의 절단 및/또는 아미드 백본 결합의 절단을 초래하는 반응 파라미터를 포함한다. 가수분해 조건 파라미터의 예는 가수분해 시약, 온도, 시간, 용매, 및 농도를 포함하고, 이에 한정되지는 않는다. 다양한 가수분해 조건 파라미터는 목표 중량평균 분자량을 갖는 폴리글루탐산 산물을 제조하도록 조절될 수 있다. 따라서, 적절한 가수분해 조건을 선택하는 것은 목표 중량평균 분자량을 갖는 폴리글루탐산 산물을 제조할 것이다.
예를 들어, 보다 높은 가수분해 온도는 일반적으로 상기 폴리글루탐산의 가수분해 속도 및/또는 양을 증가시킨다. 따라서, 보다 높은 가수분해 온도를 선택하는 것은 보다 낮은 온도가 선택된 경우 대비하여 낮은 중량평균 분자량을 갖는 폴리글루탐산 산물을 제조하려는 경향이 있을 것이다.
또한, 폴리글루탐산 중합체를 가수분해 조건 하에 두는 시간의 정도를 증가시키는 것은 일반적으로 폴리글루탐산의 가수분해 양을 증가시킨다. 따라서, 보다 긴 가수분해 시간을 선택하는 것은 보다 짧은 시간이 선택된 경우 대비하여 낮은 중량평균 분자량을 갖는 폴리글루탐산 산물을 제조하려는 경향이 있을 것이다.
마찬가지로, 보다 강한 가수분해 시약을 사용하는 것은 일반적으로 폴리글루탐산의 가수분해 속도 및/또는 양을 증가시킨다. 따라서, 보다 강한 가수분해 시약을 선택하는 것은 보다 약한 가수분해 시약이 선택된 경우 대비하여 낮은 중량평균 분자량을 갖는 폴리글루탐산 산물을 제조하려는 경향이 있을 것이다. 예를 들어, 보다 강한 산성 시약은 보다 약한 산성 시약 보다 낮은 중량평균 분자량을 갖는 폴리글루탐산 중합체를 제조하려는 경향이 있을 것이다. 마찬가지로, 보다 강한 염기성 시약은 보다 약한 염기성 시약 보다 낮은 중량평균 분자량을 갖는 폴리글루탐산 산물을 제조하려는 경향이 있을 것이다.
ii . 가수분해 시약
반응식 2에서 예시된 가수분해 조건은 산성, 염기성, 및 효소 조건을 포함한다. 상기 출발 폴리글루탐산으로부터 목표 중량평균 분자량을 갖는 원하는 폴리글루탐산 산물을 제조하기 위한 상기 선택된 가수분해 조건을 구현하기 위하여 다양한 시약이 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 산성 가수분해 조건이 사용된다. 산성 조건은 6 내지 1의 pH를 갖는 용액 내에서 제조될 수 있다. 산성 가수분해 조건을 제조할 수 있는 시약은 HCl, HBr, HF, HC104, HC103, HC1O2, HC1O, H2S04, HN03, H3P04, 아세트산, HC02H, C12CHC02H, 양이온 교환 수지, 또는 이들의 조합을 포함하고, 이에 한정되지는 않는다.
예를 들어, 반응식 2에서 예시된 상기 가수분해 조건은 C12CHC02H 내의 HBr 및 아세트산의 혼합물을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 가수분해 조건은 C12CHC02H 내의 HC1 및 아세트산의 혼합물을 포함한다.
일부 구현예에서, 염기성 가수분해 조건이 사용된다. 염기성 조건은 8 내지 14의 pH를 갖는 용액 내에서 제조될 수 있다. 염기성 가수분해 조건을 제조하는 시약은 알칼리 금속 수산화물 (예를 들어, NaOH, KOH, LiOH, Ba(OH)2, Cu(OH)2), t-BuOK, NaH, 음이온 교환 수지, 또는 이들의 조합)을 포함하고, 이에 한정되지는 않는다.
일부 구현예에서, 효소 촉매 반응시키는 가수분해 조건이 사용된다. 사용될 수 있는 효소는 에스테라아제 (예를 들어, 돼지 간 에스테라아제, 바실러스 섭틸러스(Bacillus subtilis)로부터의 에스테라아제), 탈수 효소 (예를 들어, 탄산무수화 효소), 리파아제 (예를 들어, 돼지 췌장 리파아제, 테르미타아제(thermitase), 및 리조퍼스 니베우스(Rhizopus niveus), 아스퍼질러스 나이거(Aspergillus niger), 칸디다 안타르시티카(Candida antarcitica), 및 무코르 쟈바니카스(Mucor javanicus)), 및 가수분해 화학 결합에 알려진 임의의 다른 효소를 포함하고, 이에 한정되지는 않는다.
iii . 온도
하나 이상의 가수분해 시약의 사용에 더하여, 상기 가수분해 조건은 상기 출발 폴리글루타믹 폴리머를 고온 상태에 두는 것을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 출발 폴리글루탐산 중합체를 약 60℃ 이상의 온도에 둘 수 있다. 다른 구현예에서, 상기 출발 폴리글루탐산 중합체를 약 50℃ 이상의 온도에 둘 수 있다. 또 다른 구현예에서, 상기 출발 폴리글루탐산 중합체를 약 40℃ 이상의 온도에 둘 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 출발 폴리글루탐산 중합체를 약 40℃ 내지 약 60℃ 범위의 온도에 둘 수 있다. 선택적으로, 상기 출발 폴리글루탐산 중합체를 실온, 약 25℃ 가수분해 조건에 둘 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 가수분해 조건은 -40℃ 내지 300℃ 범위의 온도를 포함할 수 있다.
iv . 시간
상기 출발 폴리글루탐산을 다양한 시간 동안 가수분해 조건에 둘 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 폴리글루탐산 중합체를 1 내지 120분의 범위 내의 시간 동안 가수분해 조건에 둘 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 폴리글루탐산을 1 내지 24 시간의 범위 내의 시간 동안 가수분해 조건에 둘 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 폴리글루탐산을 1일 내지 3일의 범위 내의 기간 동안 가수분해 조건에 둘 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 폴리글루탐산을 3일 이상 기간 동안 가수분해 조건에 둘 수 있다. 시간의 범위가 본 명세서에 기재될 때, 상기 범위는 그 제공된 시간 범위 내에 정수 및 포함된 된 십진 분수(decimal fraction)를 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 예를 들어, 1-2 시간의 시간 범위는 1.0, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 및 2.0 시간의 시간을 기재한 것이다.
일부 구현예에서, 상기 가수분해 조건은 상기 출발 폴리글루탐산 중합체를 제1 온도에서 제1 시간 동안 및 제2 온도에서 제2 시간 동안 두는 것을 포함할 수 있다. 예를 들어, 상기 폴리글루탐산을 전술한 바와 같은 제1 온도에서 제1 시간 동안 및 전술한 바와 같은 제2 온도에서 제2 시간 동안 두고, 이때, 상기 제1 온도 및 상기 제2 온도는 상이하다. 일부 구현예에서, 상기 제2 온도는 상기 제1 온도보다 낮을 수 있다. 다른 구현예에서, 상기 제2 온도는 상기 제1 온도보다 높을 수 있다. 또 다른 구현예에서, 상기 제1 및 제2 온도는 대략 같을 수 있다. 예를 들어, 상기 출발 폴리글루탐산 중합체는 약 40℃ 내지 약 60℃ 범위의 제1 온도에서 제1 시간 동안 및 실온에서 제2 시간 동안 둘 수 있다.
상기 출발 폴리글루탐산을 상기 제1 온도 및 상기 제2 온도에 두는 시간은 다양할 수 있다. 예를 들어, 상기 제1 온도에 두는 시간은 상기 제2 온도에 두는 시간과 상이할 수 있다. 예를 들어, 상기 출발 폴리글루탐산 중합체는 제1 온도에서 제1 시간 동안 둘 수 있고, 상기 제1 시간은 제2 온도과 연계된 제2 시간 보다 길거나 짧을 수 있다. 선택적으로, 제1 및 제2 온도의 시간 기간이 대략 같을 수 있다. 일부 구현예에서, 시간의 제1 기간은 3 시간 이하일 수 있다. 다른 구현예에서, 제1 시간은 2 시간 이하일 수 있다. 또 다른 구현예에서, 제1 시간은 1 시간 이하일 수 있다. 일부 구현예에서, 제2 시간은 1 시간 이상일 수 있다. 다른 구현예에서, 제2 시간은 2 시간 이상일 수 있다. 또 다른 구현예에서, 제2 시간은 3 시간 이상일 수 있다. 또 다른 구현예에서, 상기 제2 시간은 4 시간 이상일 수 있다.
일부 구현예에서, 제1 시간은 1분 내지 120분의 범위 내이다. 일부 구현예에서, 제1 시간은 1 시간 내지 24 시간의 범위 내이다. 일부 구현예에서, 제1 시간은 1일 내지 3일의 범위 내이다. 일부 구현예에서, 제1 시간은 3일 초과이다.
일부 구현예에서, 제2 시간은 1분 내지 120분의 범위 내이다. 일부 구현예에서, 제2 시간은 1 시간 내지 24 시간의 범위 내이다. 일부 구현예에서, 제2 시간은 1일 내지 3일의 범위 내이다. 일부 구현예에서, 제2 시간은 3일 초과이다.
상기 출발 폴리글루탐산을 선택된 가수분해 조건에 두는 전체 시간은 다양할 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 출발 폴리글루탐산은 상기 선택된 가수분해 조건에서 적어도 총 2 시간 동안 가수분해될 수 있다. 다른 구현예에서, 상기 출발 폴리글루탐산은 상기 선택된 가수분해 조건에서 적어도 총 2.5 시간 동안 가수분해될 수 있다. 또 다른 구현예에서, 상기 출발 폴리글루탐산은 상기 선택된 가수분해 조건에서 적어도 총 3 시간 동안 가수분해될 수 있다. 또 다른 구현예에서, 상기 출발 폴리글루탐산은 상기 선택된 가수분해 조건에서 적어도 총 4 시간 동안 가수분해될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 출발 폴리글루탐산은 상기 선택된 가수분해 조건에서 적어도 총 5 시간, 적어도 총 6 시간 또는 적어도 총 7 시간 동안 가수분해될 수 있다. 다른 구현예에서, 상기 출발 폴리글루탐산은 상기 선택된 가수분해 조건에서 적어도 총 8 시간 미만 동안 가수분해될 수 있다.
v. 규모( scale )
상기 출발 폴리글루탐산 중합체의 다양한 양을 본 명세서에서 기재된 상기 가수분해 조건에 둘 수 있다. 본 명세서에서 기재된 상기 방법은 특히 대량 생산 규모에 유용하다. 일부 구현예에서, 임의의 특정 배치(batch) 내에서 가수분해 조건에 두는 출발 폴리글루탐산 중합체의 양은 10 그램 내지 100 그램의 범위 내이다. 일부 구현예에서, 임의의 특정 배치(batch) 내에서 가수분해 조건에 두는 출발 폴리글루탐산 중합체의 양은 100 그램 내지 1,000 그램의 범위 내이다. 일부 구현예에서, 임의의 특정 배치(batch) 내에서 가수분해 조건에 두는 출발 폴리글루탐산 중합체의 양은 1 킬로그램 내지 10 킬로그램의 범위 내이다.
vi . 용매
폴리글루탐산의 가수분해에 적당한 임의의 용매가 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 가수분해 용매는 디옥산, 아니솔, 벤젠, 클로로폼, 클로로벤젠, 에틸아세테이트, 니트로벤젠, 아세토니트릴, 디메틸포름아미드, 니트로메탄, 메탄올, 아세트산, 아세톤, n-부탄올, 부틸아세테이트, 카본 테트라클로라이드, 시클로헥산, 1,2-디클로로에탄, 디클로로메탄, 디메틸설폭사이드, 에탄올, 디에틸에테르, 헵탄, 헥산, 메탄올, 메틸-t-부틸 에테르, 메틸에틸케톤, 펜탄, n-프로판올, 이소프로판올, 디이소프로필 에테르, 테트라하이드로퓨란, 톨루엔, 트리클로로에틸렌, 물, 자일렌, 및 임의의 그 혼합물에서 선택된다.
바람직한 용매는 극성 용매, 예를 들어, 극성 양성자성 또는 극성 비양성자성 용매를 포함한다. 상기 가수분해 조건은 수성 용매, 알콜성 용매, 또는 그 임의의 혼합물에서 선택된 용매 내에서 수행될 수 있다. 용매의 예는 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올, 물, 또는 임의의 그 혼합물을 포함하고, 이에 한정되지는 않는다. 바람직한 용매는 아세트산, 디클로로아세트산, 및 아세트산과 디클로로아세트산의 혼합물을 포함한다.
vii . 가수분해의 정도 측정
일부 구현예에서, 상기 폴리글루탐산의 가수분해는 측정된다. 예를 들어, 상기 출발 폴리글루탐산 중합체의 가수분해의 정도를 측정하기 위해 측정이 적용될 수 있다. 측정은 상기 폴리글루탐산의 목표 중량평균 분자량이 제조되었는지 측정하기 위해 사용될 수 있다. 상기 측정은 또한 상기 공정의 임의의 선택된 단계에서 상기 가수분해 용액 내에 포함된 상기 폴리글루탐산의 중량평균 분자량을 측정하기 위해 사용될 수 있다.
상기 폴리글루탐산의 가수분해를 측정하기 위한 다양한 기술이 사용될 수 있다. 예를 들어, 상기 폴리글루탐산의 가수분해는 적절한 분자량 검출 기술 (예를 들어, 광 산란(light scattering))을 사용하는 크기배제 크로마토그래피-고압 액체 크로마토그래피 (size exclusion chromatography-high pressure liquid chromatography: SEC-HPLC), 소각 중성자 산란 (small angle neutron scattering: SANS), X-레이 산란 (X-ray scattering), 침강 속도법 (sedimentation velocity), 크기배제 크로마토그래피, 고성능 액체 크로마토그래피 (high performance liquid chromatography), 기체 크로마토그래피-질량분석법 (gas chromatography-mass spectrometry: GC/MS), 액체 크로마토그래피-질량분석법 (liquid chromatography-mass spectrometry: LC/MS), 매트릭스 보조 레이져 탈착/이온화 질량 분석법 (matrix-assisted laser desorption/ionization mass spectrometry: MALDI-MS), 전기분무 이온화 질량 분석법 (electrospray ionization mass spectrometry: ESI/MS), 고속 원자 충돌 질량 분석법 (fast atom bombardment mass spectrometry: FAB-MS), 유도결합 플라즈마-질량 분석법 (inductively coupled plasma-mass spectrometry: ICP-MS), 가속기 질량 분석법 (accelerator mass spectrometry: AMS), 열 이온화- 질량 분석법 (thermal ionization-mass spectrometry: TIMS), 스파크 광원 질량 분석법 (spark source mass spectrometry: SSMS), 삼투압 측정법 (osmometry), 광 산란 (light scattering), 초원심분리 (ultracentrifugation), 빙점법 (cryoscopy), 비점 상승 측정법 (ebulliometry), 말단기 정량 (end-group analysis), 적정 (titration), 어는점 내림 (freezing-pint depression), 끓는점 오름 (boiling-point elevation), 삼투압 (osmotic pressure), 또는 당업계에 공지된 중합체의 분자량을 측정하는 임의의 다른 방법을 포함하는, 그러나 이에 한정되지는 않는 기술에 의해 측정될 수 있다. 만약 상기 폴리글루탐산 중합체의 분자량을 측정하는 둘 이상의 방법에 의해 상이한 분자량 값이 나온 경우, SEC- HPLC에 의해 얻은 분자량 값이 선호된다.
일부 구현예에서, 전체 가수분해 용액이 측정될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 가수분해 용액의 샘플 또는 표본이 측정된다. 일부 구현예에서, 상기 가수분해 용액 전체 및 상기 가수분해 용액의 샘플이 측정되어 상기 출발 폴리글루탐산의 가수분해의 정도를 측정한다.
viii . 다중 측정
일부 구현예에서, 다중 측정되어 상기 출발 폴리글루탐산 중합체의 가수분해의 정도를 측정한다. 일부 구현예에서, 다중 측정되어 상기 폴리글루탐산의 목표 중량평균 분자량이 제조되었는지 여부를 측정한다. 이러한 측정의 갯수는 2 내지 40, 또는 40 이상일 수 있다. 다중 측정은 다양한 시간 지점에서 수행될 수 있다. 예를 들어, 측정은 약 1분 내지 약 120분의 범위 내의 시간 지점 사이의 간격으로 수행될 수 있다.
ix . 가수분해 시간 및 폴리글루탐산 분자량의 상관 관계
상기 폴리글루탐산을 가수분해 조건에 두는 시간의 정도 및 상기 폴리글루탐산의 중량평균 분자량의 상관 관계를 알아보기 위하여 전술한 다중 측정을 사용될 수 있다. 예를 들어, 폴리글루탐산의 중량평균 분자량 대 시간의 그래프가 도 1 및 도 2에서 보여진다. 이들 그래프는 폴리글루탐산 및 가수분해 시약을 포함하는 용액으로부터 폴리글루탐산의 분자량을 다양한 시간 간격으로 측정하여 작성되었다. 이러한 그래프는 선택된 목표 중량평균 분자량을 갖는 소정의 폴리글루탐산 산물을 제조하기 위해 출발 폴리글루탐산 중합체를 가수분해 조건에 두어야 하는 시간의 정도를 결정하기 위해 사용될 수 있다.
x. 가수분해 조건의 선택
가수분해 조건 및 폴리글루탐산 중량평균 분자량의 상관 관계에 기초하여, 목표 중량평균 분자량을 갖는 폴리글루탐산 중합체 산물을 제조하기에 효과적인 가수분해 조건을 선택할 수 있다.
일부 구현예에서, 가수분해 시간 및 폴리글루탐산 중량평균 분자량의 관계는 목표 중량평균 분자량을 갖는 폴리글루탐산 중합체 산물을 제조하기에 효과적인 시간의 정도를 선택하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, 도 1을 작성하기 위해 이용되는 가수분해 조건에 따르면, 대략 75 kDa의 중량평균 분자량을 갖는 폴리글루탐산 산물을 제조하기 위해 약 1 시간의 가수분해 시간을 선택할 수 있다. 또한, 도 1에 따르면, 대략 50 kDa의 중량평균 분자량을 갖는 폴리글루탐산 산물을 제조하기 위해 약 2 시간의 가수분해 시간을 선택할 수 있다. 도 1에 따르면, 대략 40 kDa의 중량평균 분자량을 갖는 폴리글루탐산 산물을 제조하기 위해 약 3 시간의 가수분해 시간을 선택할 수 있다. 도 1에 따르면, 대략 34 kDa의 중량평균 분자량을 갖는 폴리글루탐산 산물을 제조하기 위해 약 4-5 시간의 가수분해 시간을 선택할 수 있다. 도 1에 따르면, 대략 26 kDa의 중량평균 분자량을 갖는 폴리글루탐산 산물을 제조하기 위해 약 6 시간의 가수분해 시간을 선택할 수 있다. 도 1에 따르면, 대략 20 kDa의 중량평균 분자량을 갖는 폴리글루탐산 산물을 제조하기 위해 약 7 시간의 가수분해 시간을 선택할 수 있다.
도 2에 따르면, 대략 72 kDa의 중량평균 분자량을 갖는 폴리글루탐산 산물을 제조하기 위해 약 1 시간의 가수분해 시간을 선택할 수 있다. 또한, 도 2에 따르면, 대략 50 kDa의 중량평균 분자량을 갖는 폴리글루탐산 산물을 제조하기 위해 약 2 시간의 가수분해 시간을 선택할 수 있다. 도 2에 따르면, 대략 36 kDa의 중량평균 분자량을 갖는 폴리글루탐산 산물을 제조하기 위해 약 3 시간의 가수분해 시간을 선택할 수 있다. 도 2에 따르면, 대략 28 kDa의 중량평균 분자량을 갖는 폴리글루탐산 산물을 제조하기 위해 약 4 시간의 가수분해 시간을 선택할 수 있다. 도 2에 따르면, 대략 23 kDa의 중량평균 분자량을 갖는 폴리글루탐산 산물을 제조하기 위해 약 5 시간의 가수분해 시간을 선택할 수 있다. 도 2에 따르면, 대략 20 kDa의 중량평균 분자량을 갖는 폴리글루탐산 산물을 제조하기 위해 약 6-8 시간의 가수분해 시간을 선택할 수 있다. 도 2에 따르면, 대략 16 kDa의 중량평균 분자량을 갖는 폴리글루탐산 산물을 제조하기 위해 약 9-10 시간의 가수분해 시간을 선택할 수 있다. 도 2에 따르면, 대략 13 kDa의 중량평균 분자량을 갖는 폴리글루탐산 산물을 제조하기 위해 약 11-12 시간의 가수분해 시간을 선택할 수 있다. 도 2에 따르면, 대략 12 kDa의 중량평균 분자량을 갖는 폴리글루탐산 산물을 제조하기 위해 약 13-15 시간의 가수분해 시간을 선택할 수 있다.
본 명세서에 기재된 가수분해 조건 및 폴리글루탐산 중량평균 분자량 간의 다양한 상관 관계는 선택된 목표 중량평균 분자량을 갖는 폴리글루탐산 중합체를 제조하기 위하여 사용될 수 있다.
xi . 정제
선택적으로, 상기 폴리글루탐산 산물은, 이어서, 분리 및/또는 정제될 수 있다. 당업자에게 공지된 적당한 방법이 상기 폴리글루탐산 산물을 분리 및/또는 정제하기 위해 사용될 수 있다. 필요하거나 및/또는 원하는 경우, 상기 폴리글루탐산 산물은 당업자에게 공지된 적당한 방법에 의해 건조될 수 있다. 예를 들어, 폴리글루탐산은 시약을 첨가하여 용액에서 침전될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 시약은 아세톤일 수 있다. 형성된 임의의 폴리글루탐산 산물의 침전물은 이어서 여과되고, 예를 들어 아세톤으로 세척될 수 있다. 선택적으로, 상기 폴리글루탐산 산물은 임의의 적당한 방법에 의해 정제될 수 있다. 예를 들어, 상기 폴리글루탐산 산물은 소듐 바이카보네이트 용액 내로 용해되고, 셀루로오스 멤브레인을 사용하여 물에 투석될 수 있고, 상기 폴리글루탐산 산물은 감압하에 동결 건조되고(lyophilized) 분리될 수 있다.
전술한 바와 같이, 상기 선택된 가수분해 조건에서 얻은 상기 폴리글루탐산 산물은 상기 출발 폴리글루탐산 보다 낮은 중량평균 분자량을 가진다. 상기 폴리글루탐산 산물의 중량평균 분자량을 측정하는 방법이 본 명세서에 기재되어 있다. 일부 구현예에서, 상기 폴리글루탐산 산물의 중량평균 분자량이 약 35 kDa 내지 약 12 kDa의 범위 내일 수 있다.
전술한 바와 같이, 일부 구현예에서, 본 명세서에 기재된 방법의 하나의 잇점은 킬로달톤 (kDa)의 상대적으로 좁은 범위 이내의 원하는 중량평균 분자량을 갖는 폴리글루탐산 산물을 얻을 수 있다는 점이다. 일부 구현예에서, 상기 폴리글루탐산 산물은 선택된 목표 제2 중량평균 분자량의 약 ±5 kDa 이내의 중량평균 분자량을 가질 수 있다. 다른 구현예에서, 상기 폴리글루탐산 산물은 선택된 목표 제2 중량평균 분자량의 약 ±3 kDa, ±1.0 kDa, ±0.5 kDa, ±0.2 kDa, ±0.1 kDa 또는 ±0.05 kDa 이내의 중량평균 분자량을 가질 수 있다.
xii . 다분산성( polydispersity )
본 명세서에 기재된 가수분해 조건은 낮은 다분산성 인덱스(polydispersity index)를 갖는 폴리글루탐산 중합체 산물을 제조하는데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 폴리글루탐산 중합체 산물은 1.5 미만, 1.25 미만, 또는 1.1 미만의 다분산성을 가질 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 폴리글루탐산 중합체 산물은 약 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 또는 2.0의 다분산성을 가진다. 일부 구현예에서, 상기 폴리글루탐산 중합체 산물은 1.01 내지 1.09의 다분산성을 가진다. 일부 구현예에서, 상기 폴리글루탐산 산물은 약 1.01, 1.02, 1.03, 1.04, 1.05, 1.06, 1.07, 1.08, 또는 1.09의 다분산성을 가진다.
실시예
하기 실시예들은 본 명세서에서 기재된 구현예들을 보다 더 상세하게 설명하기 위한 목적으로 제공되고, 청구범위의 범위를 제한하여서는 안 된다.
실시예 1
상업적으로 입수한 PGA 의 가수분해
17 kDa의 분자량을 갖는 폴리글루탐산 (PGA)을 Sigma Aldrich Chemical Co.로부터 얻었다. 상기 상업적인 PGA를 표 1에 나타난 가수분해 조건을 사용하여 처리하였다. 결과적인 PGA 산물의 중량평균 분자량을 또한 표 1에 나타낸다.
샘플 출발 물질 가수분해 조건 GPC-MALS에 의해 측정된 MW (kDa)
Cl2CHCO2H 33% HBr-AcOH 50℃에서 가열 및 (실온에서 방치) 시간
1 Sigma PGA, 17kDa, - - 0 h + (0 h) 17.00
2 Sigma PGA, 17kDa, 40 ml/g 3.75 ml/g 0 h + (3 h) 15.33
3 Sigma PGA, 17kDa, 40 ml/g 3.75 ml/g 1 h + (1 h) 12.85
4 Sigma PGA, 17kDa, 40 ml/g 3.75 ml/g 2 h + (2 h) 8.25
5 Sigma PGA, 17kDa, 37 ml/g 6.6 ml/g 2 h + (4 h) 6.38
실시예 2
PGA -벤질기 함유 에스테르의 합성
Figure pct00007
테프론(teflon) 코팅된 혼합 막대를 구비한, 오븐에서 건조된 500 mL 둥근바닥 플라스크에 5-벤질 에스테르 글루탐산-N-카르복시안하이드라이드 (NCA) 10 그램 (38 mmol, 1 당량) 및 190 mL의 디옥산을 넣었다. 결과적인 용액을 아르곤으로 5분 동안 퍼지(purge)하였다. 이어서, 막 증류된 트리에틸아민 (0.02 당량) 약 0.106 mL (0.76 mmol, 0.02 당량)을 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 추가적으로 5분 동안 아르곤으로 퍼지하고, 10분 동안 교반하였다. 이어서, 교반을 중지하고, 상기 반응 혼합물을 72 시간 동안 방치하였다. 이어서, 빠르게 교반되는 무수 에탄올 1000 mL에 천천히 상기 반응 혼합물을 부었다. 길쭉한 백색의, 섬유상 필라멘트로서 산물이 침전되었다. 상기 혼합물을 여과하였고, 상기 산물을 분리하여 250 mL 에탄올로 세척하였다. 임의의 잔여 용매를 진공 (in vacuo)에서 제거하였다. 상기 결과적인 PGA 샘플 (실시예 3에서 출발 PGA로 사용됨)의 중량평균 분자량을 광 산란 분자량 측정기를 구비한 GPC를 사용하여 측정하였다. 2 개의 추가적인 PGA 샘플을 동일한 과정에 의해 제조하였다. 조건 및 결과적인 PGA 샘플의 중량평균 분자량의 보다 상세한 사항을 표 2에 설명된다.
샘플 중합용 출발 물질 및 용매 PGA 벤질 에스테르 분자량 (GPC-광 산란 측정기) 다분산성 (polydispersity)
1 상업적으로 입수한 NCA 및 디옥산 191 kDa 1.162
2 상업적으로 입수한 NCA 및 디옥산 221 kDa 1.032
3 상업적으로 입수한 NCA 및 Na 함유 증류된 디옥산 240 kDa 1.123
실시예 3
PGA 의 가수분해
테프론(teflon) 코팅된 혼합 막대 및 가스 어댑터(gas adaptor)를 구비한, 오븐에서 건조된 100 mL 둥근바닥 플라스크에 실시예 2에서 얻은 PGA-감마 벤질 에스테르 (191 kDa 중량평균 분자량을 가짐) 1.0 g (4.57 mmol, 1 당량) 및 40 mL의 디클로로아세트산을 넣었다. 반응 혼합물을 아르곤 분위기 하에 놓고, 15분 동안 교반하여 상기 에스테르가 부분적으로 용해되게 하였다. 33% HBr-AcOH 용액 3.5 mL (28.5 mmol, 6.24 당량)을 주사기를 통해 첨가하였다. 이어서, 상기 반응 혼합물을 6 시간 동안 교반하였다. 아세톤 (50 mL)를 첨가하였고, 백색 침전물이 형성되었다. 결과적인 슬러리를 여과하고, 아세톤 (50 mL)으로 세척하여 고체를 얻었다. 상기 고체를 pH ~8에 도달할 때까지 1 N 수성 소듐 바이카보네이트에 녹였다 (대략 20 mL). 상기 용액을 투석 튜브 (dialysis tubing)에 놓고 4 L 탈이온수로 약 1 시간 동안 투석하였다. 1 시간 후, 100%의 물을 교환하였고, 추가적인 1 시간 동안 투석을 계속하였다. 이러한 과정을 2회 이상 반복하였고, 이어서, 상기 용액을 밤새 투석하였다. 상기 투석된 용액을 0.45 ㎛ 셀룰로오스 아세테이트 멤브레인에 의해 여과하였고, 감압하에 동결건조하여 물을 제거하였다. 얻어진 PGA 산물은 백색 고체이었다 (0.18 g, 31 % 수율, 16.80 kDa 중량평균 분자량).
33% HBr-AcOH 첨가 후 1, 2, 3, 4, 5, 6 및 7 시간에서 반응 혼합물로부터 표본을 채취하는 실시예 3의 절차를 수행하였다. 상기 표본으로부터의 PGA 산물을 정제하고 실시예 3에서 설명된 절차를 수행하여 분리하였다. 상기 표본으로부터의 PGA 산물의 중량평균 분자량이 측정되었고, 표 3에 기재된다.
Figure pct00008
* MW = GPC-광 산란 감지(GPC-light scattering detection)에 의해 측정된 중량평균 분자량
도 1에 도시된 그래프는 표 3의 데이터를 사용하여 작성되었다. 당업자라면, 목표 중량평균 분자량을 선택하고 이러한 그래프를 사용하여 출발 폴리글루탐산을 가수분해하는 데 필요한 시간을 결정하여 폴리글루탐산 산물을 얻을 수 있을 것이고, 상기 폴리글루탐산 산물은 선택된 목표 제2 중량평균 분자량의 약 ±10 kDa 이내의 중량평균 분자량을 가진다.
실시예 4
PGA 의 가수분해
130 kDa의 출발 중량평균 분자량을 갖는 PGA 벤질기 함유 에스테르 (5.0 g, 22.85 mmol, 1 당량) 및 디클로로아세트산 (200 mL)의 제1 샘플을 테프론(teflon) 자기(magnetic) 혼합 막대를 구비한, 오븐에서 건조된 500 mL 둥근바닥 플라스크에 아르곤 분위기 하에서 첨가하였다. 상기 플라스크를 예열된 30℃ 오일 바쓰 내로 넣었다. 결과적인 현탁액을 15분 동안 교반하여, 상기 에스테르가 부분적으로 용해되게 하였다. HBr-AcOH (17.5 mL, 100.1 mmol, 4.37 당량) 용액을 주사기를 통해 첨가하였다. 상기 HBr-AcOH 용액을 한 시간 동안 첨가한 후, 용액의 2.0 mL 표본이 주사기를 통해 제거되었다 (그 당시 모든 PGA-에스테르는 용액으로 첨가된 상태이다). 상기 표본을를 원심분리 튜브에 놓고, 33 mL 아세톤으로 희석한 후 소용돌이로 저어서 상기 용매 혼합물 내에 상기 중합체를 고르게 분산하였다. 이어서, 상기 튜브를 20℃, 3000 rpm에서 5분 동안 원심분리하였다. 중합체가 상기 튜브의 바닥을 단단히 폐쇄하도록 형성되었다. 상층액을 가만히 따르고, 추가적인 33 mL의 아세톤을 상기 튜브에 첨가하였다. 이어서, 상기 튜브를 소용돌이치게 하고, 앞에서와 같이 원심분리하였다. 상기 결과적인 상층액을 가만히 따른 후, 상기 메워진 중합체(polymer plug)를 10 mL의 1 N 수성 소듐 바이카보네이트에 용해시켰다. 추가적인 14 시간에서의 각 이어진 시간에, 상기 반응 혼합물의 표본 2.0 mL를 제거하고, 전술한 바와 같이 진행하였다. 상기 중합체는 광 산란 감지기를 구비한 겔투과 크로마토그래피에 의해 특성을 파악하였다. 상기 PGA 산물의 중량평균 분자량을 측정하였다.
130 kDa의 출발 중량평균 분자량을 갖는 PGA 벤질기 함유 에스테르의 제2 샘플을 전술한 절차에 따라 가수분해하였다. 제1 및 제2 샘플에서 상기 PGA 산물의 중량평균 분자량은 표 4에서 나타난다.
Figure pct00009
* W = GPC-광 산란 감지에 의해 측정된 중량평균 분자량
도 2에 도시된 그래프는 표 4의 데이터를 사용하여 작성되었고, 수 시간 동안 가수분해 조건 하에서 상기 2개 샘플의 폴리글루탐산의 중량평균 분자량을 나타낸다. 당업자라면, 목표 중량평균 분자량을 선택하고, 출발 폴리글루탐산을 가수분해하는 데에 필요한 시간을 결정하여 폴리글루탐산 산물을 얻을 수 있고, 상기 폴리글루탐산 산물은 선택된 목표 제2 중량평균 분자량의 약 ±10 kDa 이내인 중량평균 분자량을 갖는다.
실시예 5
PGA 의 가수분해
가수분해 조건의 재현 가능성은 130 kDa의 출발 중량평균 분자량을 갖는 PGA의 8개 샘플에 의해 보여졌다. 간단히, PGA 벤질기 함유 에스테르 (5.0 g, 22.85 mmol, 1 당량) 및 디클로로아세트산 (200 mL)의 샘플을 테프론(teflon) 자기 혼합 막대를 구비한, 오븐에서 건조된 500 mL 둥근바닥 플라스크에 아르곤 분위기 하에서 첨가하였다. 상기 플라스크를 예열된 30℃ 오일 바쓰 내로 넣었다. 결과적인 현탁액을 15분 동안 교반하여, 상기 에스테르가 부분적으로 용해되게 하였다. HBr-AcOH (17.5 mL, 100.1 mmol, 4.37 당량) 용액을 첨가하였다. 상기 반응을 6 시간 동안 교반되었다. 상기 반응은 신속히 교반된 에틸 아세테이트 내의 10% 헥산 혼합물 1500 mL로 부었다. 산물이 15분의 시간에 걸쳐 선명한 젤라틴 상의 고체로 침전되었다. 결과적인 혼합물을 그레이드 54 페이퍼 필터를 통해 여과하였다. 상기 결과적인 고체를 모아서 2 x 250 mL 에틸 아세테이트로 세척하였다. 상기 물질을 혼합 막대를 구비한 삼각 플라스크 (Erlenmeyer flask)로 이동하였다. 이어서, 250 mL 1 N 소듐 바이카보네이트 용액을 상기 플라스크에 첨가하였고, 상기 물질을 용해하였다. 상기 용액을 분액 깔대기(separation funnel)에 놓고, 상기 수성 상 (aqueous phase, 하부 층)을 상부 유기 층 (벤질 브로마이드 부산물 및 일부 잔여 에틸 아세테이트)로부터 분리하였다. 상기 수성 층을 투석 멤브레인에 놓고, 4L 탈이온수로 1 시간 동안 투석하였다. 100% 물 교환을 수행한 뒤, 이어서, 추가적인 한 시간 동안 투석하였다. 이러한 절차가 2회 이상 반복되었고, 이어서 밤새 투석하였다. 상기 용액을 그레이드 No. 50 필터 페이퍼를 통해 여과하였고, 감압하에 동결건조하여 물을 제거하였다. 상기 결과적인 중합체는 1H-NMR 스펙트로스코피에 의해 조성을 분석하였고, 광 산란 감지기를 구비한 겔투과 크로마토그래피에 의해 중량평균 분자량을 분석하였다. 상기 각 8개의 샘플의 PGA 산물의 중량평균 분자량을 측정하여, 표 5에 제공하였다.
Figure pct00010
실시예 6
PGA 의 가수분해
130 kDa 또는 270 kDa의 출발 중량평균 분자량을 갖는 PGA 중합체의 6개의 샘플을 가수분해하여 본 명세서에서 설명한 상기 가수분해 조건의 다용성(versatility)을 증명하였고, 상기 샘플은 5 내지 50 그램의 규모이다. 간단히, 샘플_PGA 벤질기 함유 에스테르 및 디클로로아세트산을 테프론(teflon) 자기 혼합 막대를 구비한, 오븐에서 건조된 500 mL 둥근바닥 플라스크에 아르곤 분위기 하에서 첨가하였다. 상기 플라스크를 예열된 30℃ 오일 바쓰 내로 넣었다. 결과적인 현탁액을 15분 동안 교반하여, 상기 에스테르가 부분적으로 용해되게 하였다. HBr-AcOH (4.37 당량) 용액을 첨가하였다. 상기 반응을 6 시간 동안 교반되었다. 상기 반응을 신속히 교반된 에틸 아세테이트 내의 10% 헥산 혼합물로 부었다. 산물이 15분의 시간에 걸쳐 선명한 젤라틴 상의 고체로 침전되었다. 결과적인 혼합물을 그레이드 54 페이퍼 필터를 통해 여과하였다. 상기 결과적인 고체를 모아서 에틸 아세테이트로 세척하였다. 상기 물질을 혼합 막대를 구비한 삼각 플라스크 (Erlenmeyer flask)로 이동하였다. 이어서, 1 N 소듐 바이카보네이트 용액을 상기 플라스크에 첨가하였고, 상기 물질이 용해하였다. 상기 용액을 분액 깔대기에 놓고, 상기 수성 상 (aqueous phase, 하부 층)을 상부 유기 층 (벤질 브로마이드 부산물 및 일부 잔여 에틸 아세테이트)로부터 분리하였다. 상기 수성 층을 투석 멤브레인에 놓고, 탈이온수로 1 시간 동안 투석하였다. 100% 물 교환을 수행한 뒤, 이어서, 추가적인 한 시간 동안 투석하였다. 이러한 절차가 2회 이상 반복되었고, 이어서 밤새 투석하였다. 상기 용액을 그레이드 No. 50 필터 페이퍼를 통해 여과하였고, 감압하에 동결건조하여 물을 제거하였다. 상기 결과적인 중합체는 1H-NMR 스펙트로스코피에 의해 조성을 분석하였고, 광 산란 감지기를 구비한 겔투과 크로마토그래피에 의해 중량평균 분자량을 분석하였다. 상기 각 6개의 샘플의 PGA 산물의 중량평균 분자량을 측정하여, 표 6에 제공하였다.
Figure pct00011
당업자라면, 수많은 및 다양한 변형이 본 출원의 범위를 벗어나지 않고 이루어짐을 이해할 것이다. 따라서, 본 출원에서 개시된 형태는 단지 예시적인 것으로 청구범위의 범위를 제한하고자 의도되지 않는다.

Claims (20)

  1. 80 kDa 이상의 제1 중량평균 분자량을 갖는 출발 폴리글루탐산을 얻는 단계;
    80 kDa 미만인 폴리글루탐산의 목표 제2 중량평균 분자량을 선택하는 단계;
    상기 제1 중량평균 분자량의 상기 출발 폴리글루탐산을 상기 선택된 목표 제2 중량평균 분자량의 폴리글루탐산으로 바꾸는데 효과적인 가수분해 조건을 선택하는 단계; 및
    상기 출발 폴리글루탐산을 상기 선택된 가수분해 조건 하에서 가수분해하여 그로부터 상기 선택된 목표 제2 중량평균 분자량의 약 ±10 kDa 이내의 중량평균 분자량을 갖는 폴리글루탐산 산물을 얻는 단계
    를 포함하는 폴리글루탐산을 제조하는 방법.
  2. 185 kDa 이상의 제1 중량평균 분자량을 갖는 출발 폴리글루탐산을 얻는 단계;
    185 kDa 미만인 폴리글루탐산의 목표 제2 중량평균 분자량을 선택하는 단계;
    상기 제1 중량평균 분자량의 상기 출발 폴리글루탐산을 상기 선택된 목표 제2 중량평균 분자량의 폴리글루탐산으로 바꾸는데 효과적인 가수분해 조건을 선택하는 단계; 및
    상기 출발 폴리글루탐산을 상기 선택된 가수분해 조건 하에서 가수분해하여 그로부터 상기 선택된 목표 제2 중량평균 분자량의 약 ±10 kDa 이내의 중량평균 분자량을 갖는 폴리글루탐산 산물을 얻는 단계
    를 포함하는 폴리글루탐산을 제조하는 방법.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 폴리글루탐산은 상기 선택된 목표 제2 중량평균 분자량의 약 ±5 kDa 이내의 중량평균 분자량을 갖는
    방법.
  4. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 폴리글루탐산은 상기 선택된 목표 제2 중량평균 분자량의 약 ±3 kDa 이내의 중량평균 분자량을 갖는
    방법.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 출발 폴리글루탐산은 190 kDa 이상의 제1 중량평균 분자량을 갖는
    방법.
  6. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 출발 폴리글루탐산은 220 kDa 이상의 제1 중량평균 분자량을 갖는
    방법.
  7. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 출발 폴리글루탐산은 240 kDa 이상의 제1 중량평균 분자량을 갖는
    방법.
  8. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 출발 폴리글루탐산은 80 kDa 내지 약 300 kDa 범위 내의 제1 중량평균 분자량을 갖는
    방법.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 출발 폴리글루탐산은 글루탐산 에스테르(glutamic acid ester) 및 아민의 반응 산물인
    방법.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 선택된 목표 제2 중량평균 분자량이 40 kDa 이하인
    방법.
  11. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 선택된 목표 제2 중량평균 분자량이 약 35 kDa 내지 약 15 kDa 범위 내인
    방법.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 출발 폴리글루탐산이 적어도 총 2 시간 동안 상기 선택된 가수분해 조건 하에서 가수분해되는
    방법.
  13. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 출발 폴리글루탐산이 적어도 총 3 시간 동안 상기 선택된 가수분해 조건 하에서 가수분해되는
    방법.
  14. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 출발 폴리글루탐산이 적어도 총 5 시간 동안 상기 선택된 가수분해 조건 하에서 가수분해되는
    방법.
  15. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 출발 폴리글루탐산이 총 8 시간 미만 동안 상기 선택된 가수분해 조건 하에서 가수분해되는
    방법.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 선택된 가수분해 조건은 상기 출발 폴리글루탐산과 산을 반응시키는 단계를 포함하는
    방법.
  17. 제16항에 있어서,
    상기 산은 HBr-아세트산인
    방법.
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 선택된 가수분해 조건이 상기 출발 폴리글루탐산을 25℃ 초과의 제1 온도에 두는 단계를 포함하는
    방법.
  19. 제18항에 있어서,
    상기 선택된 가수분해 조건이 상기 출발 폴리글루탐산을 상기 제1 온도와 같지 않은 제2 온도에 두는 단계를 더 포함하는
    방법.
  20. 제19항에 있어서,
    상기 출발 폴리글루탐산 중합체가 상기 제1 온도에서 제1 시간 동안 및 상기 제2 온도에서 제2 시간 동안 가수분해되는
    방법.
KR1020127016061A 2009-12-16 2010-12-14 폴리글루탐산의 제어된 합성법 KR20120094061A (ko)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US28712909P 2009-12-16 2009-12-16
US61/287,129 2009-12-16

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20120094061A true KR20120094061A (ko) 2012-08-23

Family

ID=44143670

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020127016061A KR20120094061A (ko) 2009-12-16 2010-12-14 폴리글루탐산의 제어된 합성법

Country Status (11)

Country Link
US (1) US20110144315A1 (ko)
EP (1) EP2513133A4 (ko)
JP (1) JP2013514443A (ko)
KR (1) KR20120094061A (ko)
CN (1) CN102666566A (ko)
AU (1) AU2010331986A1 (ko)
BR (1) BR112012013305A2 (ko)
CA (1) CA2782410A1 (ko)
MX (1) MX2012006834A (ko)
TW (1) TW201124447A (ko)
WO (1) WO2011075483A1 (ko)

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP5237821B2 (ja) 2005-12-05 2013-07-17 日東電工株式会社 ポリグルタミン酸−アミノ酸結合体および方法
EP2155255B1 (en) 2007-05-09 2013-08-14 Nitto Denko Corporation Compositions that include a hydrophobic compound and a polyamino acid conjugate
EP2358396A2 (en) * 2008-10-15 2011-08-24 Nitto Denko Corporation Method of preparing polyglutamate conjugates
EP2836238B1 (en) 2012-04-12 2018-05-02 Nitto Denko Corporation Co-polymer conjugates
EP2846838B1 (en) 2012-05-07 2017-05-03 Nitto Denko Corporation Polymer conjugates with a linker
CN105296558B (zh) * 2015-11-18 2018-11-20 广东迪美生物技术有限公司 一种基于分段发酵生产低分子量γ-聚谷氨酸的方法

Family Cites Families (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE1253863B (de) * 1962-03-27 1967-11-09 Ajinomoto Kk Verfahren zum Herstellen von Fasern, bestehend aus einem Gemisch von Regeneratcellulose und einer polymeren Aminosaeure
SE8304361D0 (sv) * 1983-08-10 1983-08-10 Ferrosan Ab Novel 1-acylpiperazine derivatives novel 1-acylpiperazine derivatives
DE3575130D1 (de) * 1984-05-12 1990-02-08 Fisons Plc Antiinflammatorische 1,n-diarylpyrazol-3-amine, deren zusammensetzungen und verfahren zu deren herstellung.
JP2759716B2 (ja) * 1991-03-28 1998-05-28 明治製菓株式会社 ポリ−γ−グルタミン酸の分子量制御法
US5981507A (en) * 1995-12-14 1999-11-09 Advanced Magnetics, Inc. Polymeric carriers linked to nucleotide analogues via a phosphoramide bond
SE9703379D0 (sv) * 1997-09-18 1997-09-18 Astra Ab New compounds
US7090845B2 (en) * 1998-05-13 2006-08-15 Genentech, Inc. Diagnosis and treatment of hepatic disorders
CZ20023330A3 (cs) * 2000-03-17 2003-02-12 Cell Therapeutics, Inc. Konjugáty kamptotecinu a polyglutamové kyseliny a způsoby přípravy
AU2003272719A1 (en) * 2002-09-26 2004-04-19 Carbomer, Inc. Inhibitors of the nitrix oxide synthase iii (nos iii) as neuroprotective agents
US20050276783A1 (en) * 2004-06-10 2005-12-15 Ernest Giralt Lledo Polypeptides with the capacity to entrap drugs and release them in a controlled way
TWI317291B (en) * 2005-01-12 2009-11-21 Tung Hai Biotechnology Corp Polyglutamic acid (gamma;-pga, h form), y-polyglutamates and gamma-polyglutamate hydrogels for use as super moisturizers in cosmetic and personal care products
EP1867657A1 (en) * 2006-06-15 2007-12-19 Cell Therapeutics Europe S.R.L. Process for the preparation of poly-a-glutamic acid and derivatives thereof
CA2656077C (en) * 2006-06-15 2014-12-09 Marc Mckennon A process for the preparation of poly-alpha-glutamic acid and derivatives thereof
US20080051603A1 (en) * 2006-06-15 2008-02-28 Cell Therapeutics, Inc. Process for the preparation of poly-alpha-glutamic acid and derivatives thereof
US20080181852A1 (en) * 2007-01-29 2008-07-31 Nitto Denko Corporation Multi-functional Drug Carriers
CN104800856A (zh) * 2007-04-10 2015-07-29 日东电工株式会社 多功能聚谷氨酸盐药物载体
EP2155255B1 (en) * 2007-05-09 2013-08-14 Nitto Denko Corporation Compositions that include a hydrophobic compound and a polyamino acid conjugate
WO2008141111A2 (en) * 2007-05-09 2008-11-20 Nitto Denko Corporation Polymers conjugated with platinum drugs
JP2010526917A (ja) * 2007-05-09 2010-08-05 日東電工株式会社 複数種の薬物を有するポリグルタミン酸塩複合体及びポリグルタミン酸塩−アミノ酸複合体
WO2009111271A1 (en) * 2008-03-06 2009-09-11 Nitto Denko Corporation Polymer paclitaxel conjugates and methods for treating cancer
EP2358396A2 (en) * 2008-10-15 2011-08-24 Nitto Denko Corporation Method of preparing polyglutamate conjugates

Also Published As

Publication number Publication date
EP2513133A1 (en) 2012-10-24
TW201124447A (en) 2011-07-16
AU2010331986A1 (en) 2012-05-31
US20110144315A1 (en) 2011-06-16
CA2782410A1 (en) 2011-06-23
EP2513133A4 (en) 2014-07-02
JP2013514443A (ja) 2013-04-25
BR112012013305A2 (pt) 2016-03-01
CN102666566A (zh) 2012-09-12
MX2012006834A (es) 2012-07-10
WO2011075483A1 (en) 2011-06-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR20120094061A (ko) 폴리글루탐산의 제어된 합성법
US9688631B2 (en) Thermosetting ring-opening metathesis polymerization materials with thermally degradable linkages
US10577456B2 (en) Halogenated cyclic diesters, related polymers, and methods for their preparation and use
KR20170066606A (ko) 실란 올리고머 조성물의 제조 방법 및 이의 적용
US9738832B2 (en) Flame retardant block copolymers from renewable feeds
KR101411041B1 (ko) 폴리아스파라긴산 전구체 폴리머 및 폴리아스파라긴산염의 제조방법
US6962963B2 (en) Enzymatic synthesis of polymers
JP6912060B2 (ja) 含リンチオフェン化合物およびその含リンポリチオフェン化合物、並びにそれらの製造方法。
Pană et al. Novel D-glucose and D-mannose based oligomers: Synthesis and characterization
US10087265B2 (en) Method for producing dimethyl polyvinylphosphonate and polyvinylphosphonic acid
US20200377655A1 (en) Polyamide composition and method for producing polyamide composition
CN113929897A (zh) 一种硅烷改性的酯化聚醚及其制备方法和应用
CN105152903B (zh) 一种脂肪族二元羧酸的制备方法
KR20170089419A (ko) 2-에틸헥실 실리케이트를 함유하는 조성물의 제조 방법
CN113956485A (zh) 一种改性聚磷酸酯阻燃剂的制备方法
TW201302863A (zh) 籠型倍半矽氧烷樹脂及籠型倍半矽氧烷共聚物，及其製造方法
US11254790B2 (en) Silicone rubber and phenolic modified silicone rubber and methods for preparing the same
WO2017135184A1 (ja) ２－シアノアクリレートの製造方法
Seo et al. Enzyme-catalyzed quantitative chain-end functionalization of poly (ethylene glycol) s under solventless conditions
US9273179B2 (en) Decomposable polymer
Lamparth et al. Monomers for Adhesive Polymers, 14 Synthesis and Radical Polymerization of 4‐[11‐(Acryloyl‐methyl‐amino)‐undecyloxy]‐phthalic Acid and {10‐[1, 3‐Bis (methacrylamido)‐propoxy]‐decyloxy}‐phthalic Acid
CN105254684A (zh) 一种蔗糖-6-乙酸酯的制备方法
JP2003146981A (ja) ６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−カルボン酸エステルの製造方法
SU883076A1 (ru) Способ получени поли-W-додеканамида
CN114057788A (zh) 一种高纯度4,4’-联苯二酚双（二(2,6-二甲基苯基)磷酸酯）的制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
WITN Application deemed withdrawn, e.g. because no request for examination was filed or no examination fee was paid