KR20120091292A

KR20120091292A - 벤즈이미다졸-이미다졸 유도체

Info

Publication number: KR20120091292A
Application number: KR1020127014503A
Authority: KR
Inventors: 코엔 반다이크; 스테판 줄리엔 라스트; 이오아니스 니콜라오스 후피스; 피에르 쟝-마리 버나드 라보이송
Original assignee: 얀센 알 앤드 디 아일랜드
Priority date: 2009-11-04
Filing date: 2010-11-03
Publication date: 2012-08-17
Also published as: US9433609B2; JP6005515B2; US20160340344A1; CR20120302A; US20120219594A1; EP2496572A1; WO2011054834A1; TW201127378A; CO6531445A2; AP2012006216A0; JP2013510119A; AU2010317085A1; ECSP12011867A; EA022839B1; CN102741241A; CL2012001176A1; ZA201203205B; AR078888A1; CA2780034A1; CN102741241B

Abstract

본 발명은 다음 화학식 (I)의 HCV 복제 억제제, 그의 입체화학적 이성체, 및 이들의 염, 용매화물에 관한 것으로, R과 R'이 각각 독립적으로 -CR₁R₂R₃인, 아릴, 헤테로아릴 또는 헤테로C₄ _- ₆사이클로알킬이고, 아릴 및 헤테로아릴은 할로 및 메틸에서 선택된 1 또는 2개 치환체로 임의로 치환될 수 있다. 본 발명은 또한, 상기 화합물의 제조방법, 이들을 함유하는 약학 조성물 및 HCV 요법에서 그의 용도에 관한 것이다.

Description

벤즈이미다졸-이미다졸 유도체{BENZIMIDAZOLE-IMIDAZOLE DERIVATIVES}

본 발명은 C형 간염 바이러스(HCV)의 저해제인 벤즈이미다졸-이미다졸 유도체, 그의 합성 및 HCV의 치료 또는 예방에 있어서 그의 용도에 관한 것이다.

HCV는 헤파시바이러스(hepacivirus)속 바이러스의 플라비바이러스 (Flaviviridae)과에 속하는 단일가닥의 양성 센스 RNA 바이러스이다. 이 바이러스의 게놈은 다중 구조 및 비구조 단백질을 코딩하는 단일 오픈리딩프레임으로 번역된다.

HCV의 NS5A 단백질은 NS4B 단백질의 하부와 NS5B 단백질의 상부에 위치한다. 바이러스 세린 프로테아제 NS3/4A에 의한 번역후 분해 시에, NS5A는 저인산화된 종(56-kDa, p56) 또는 과인산화된 종(58-kDa, p58)으로 존재하는 아연을 함유하는 3개 도메인 인단백질로 자란다. HCV의 NS5A는 그의 숙주세포의 환경 조절뿐만 아니라 바이러스 복제 및 감염 입자 어셈블리를 포함한 다양한 측면의 바이러스 생존주기에 연관되어 있다. 효소작용이 이 단백질 때문은 아니지만 수많은 바이러스 및 세포 인자와 상호작용하는 것으로 보고되었다.

많은 특허와 특허출원들이, 특히 NS5A를 표적으로 하는, HCV 저해 활성을 가지는 화합물을 기술하고 있다. WO2006/133326은 스틸벤 유도체를 기술하고 있고, WO 2008/021927, WO 2008/021928, WO2009102325 및 WO2009/102318은 NS5A HCV 저해 활성을 가지는 비페닐 유도체를 기술하고 있다. US2009/0202483은 가교결합된 비페닐 유도체를 기술하고 있다. WO 2008/048589는 4-(페닐에티닐)-1H-피라졸 유도체와 그의 항바이러스 용도를 기술하였다. WO 2008/070447은 벤즈이미다졸 잔기를 포함하는 다양한 HCV 저해 화합물을 기술하고 있다. WO2010/099527, WO2010/065668, WO2010/065674 및 WO2010/065681은 벤즈이미다졸-이미다졸 유도체를 HCV NS5A 저해제로 기술하였다. 예를 들면, 다음 화학식과 Chemical Abstracts Number를 가지는 화합물들이 WO2010/065674의 표 1에 기술되어 있다.

표 A

HCV는 직접적으로 세포병변하는 것이 아니라 우선적으로 간세포에서 복제되기 때문에 초기 급성 감염 이후에, 감염된 개체 중 대부분이 만성 간염으로 진행한다. 특히, 활발한 T-림프구 반응의 결핍과 바이러스의 높은 돌연변이 성향이 만성 감염율을 높이는 것으로 보인다. 만성 간염은 말기 간질환인 간경변을 유도하는 간 섬유화 및, 간 이식의 주요 원인이 되는 HCC(간세포 암종)로 진행할 수 있다.

HCV에는 6개의 주요 유전자형과 50개 이상의 서브타입이 있으며 지리적으로 다르게 분포한다. HCV 유전자형 1은 유럽과 미국에 많은 유전자형이다. HCV의 다양한 유전적 이질성은 중요한 진단적 및 임상적 의미를 가지므로, 아마도 백신 개발의 어려움과 현재 치료요법에 대한 반응 부재를 설명할 수 있을 것이다.

HCV 전파는 오염된 혈액 또는 혈액 제품과의 접촉을 통해, 예를 들면 수혈 또는 정맥 약물 사용 후 발생할 수 있다. 혈액 스크리닝에서 사용되는 진단 검사 도입은 수혈 후 HCV 발생의 하향 추세를 이끌었다. 그러나, 말기 간 질환으로의 완만한 진행을 고려하면, 기존 감염은 여전히 심각한 의료적 및 경제적 부담을 수십 년간 제공할 것이다.

현재의 HCV 치료요법은 (페길화된)(pegylated) 인터페론-알파(IFN-α)와 리바비린의 병용을 기초로 한다. 이러한 병용 요법은 HCV 유전자형 1로 감염된 환자의 40%와, 유전자형 2 및 3으로 감염된 환자의 약 80%에서 지속적인 바이러스 반응을 야기한다. HCV 유전자형 1에 대한 제한된 효능 이외에, 상기 병용 요법은, 예를 들면 인플루엔자 유사 증상, 혈액학적 이상 및 신경정신계 증상 같은 상당한 부작용을 가진다. 따라서, 지속적인 바이러스 로드 반응을 개선하고 부작용, 제한된 효능, 저항성 발생 및 이행 실패 같은 현재의 HCV 치료요법의 단점을 극복하기 위해 보다 효과적이고, 편리하며 내성(tolerance)이 양호한 치료가 필요하다.

본 발명은 HCV 복제주기를 저해할 수 있는 일 군의 벤즈이미다졸-이미다졸 유도체에 관한 것이다.

본 발명의 화합물은 또한 HIV 복제를 저해하는 능력과 비교하여 HCV 복제 주기를 저해하는데 보다 더 선택성을 나타낸다는 점에서 주목된다. HIV 감염된 환자들은 대개 HCV 등으로 동시감염된다. HIV 또한 저해하는 HCV 저해제로 이러한 환자를 치료하는 것은 바람직하지 않은 저항성 HIV 균주의 발생을 유발할 수 있다.

일 측면에서, 본 발명은 다음 화학식 (I)로 표시할 수 있는 화합물 또는 그의 입체이성체, 또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염 및/또는 용매화물을 제공한다:

상기 식에서,

A는 페닐렌 또는 나프틸렌이고, 각각은 할로 또는 C₁ _- ₃알킬에서 선택된 1, 2 또는 3개의 치환체로 임의로 치환될 수 있고;

R 및 R'은, 각각 독립적으로, -CR₁R₂R₃, 아릴, 헤테로아릴 또는 헤테로C₄ _- ₆사이클로알킬이다[여기에서 아릴과 헤테로아릴은 임의로 할로 및 메틸에서 선택된 1 또는 2개 치환체로 치환될 수 있고,

R₁은 수소; 메톡시, 하이드록시 또는 디메틸아미노로 임의로 치환된 C₁ _- ₄알킬; 할로, C₁ _- ₄알콕시 및 트리플루오로메톡시에서 독립적으로 선택된 1, 2 또는 3개의 치환체로 임의로 치환된 페닐; 1,3-벤조디옥솔라닐; 할로 또는 메톡시에서 독립적으로 선택된 1, 2 또는 3개의 치환체로 임의로 치환된 벤질; C₃ _- ₆사이클로알킬; 헤테로아릴; 헤테로C₄ _- ₆사이클로알킬; 또는 헤테로아릴메틸이고;

R₂는 수소, 하이드록실, 아미노, 모노- 또는 디-C₁ _- ₄알킬아미노, C₁ _- ₄알킬카보닐아미노, C₁ _- ₄알킬옥시카보닐아미노, C₁ _- ₄알킬아미노카보닐아미노, 피페리딘-1-일 또는 이미다졸-1-일이고;

R₃는 수소이거나,

R₁ 및 R₃는 함께 옥소 또는 사이클로프로필 그룹을 형성함].

다른 측면에서, 본 발명은 다음 화학식 (I-PR)로 표시할 수 있는 화합물 또는 그의 입체이성체, 또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염 및/또는 용매화물을 제공한다:

상기 식에서,

R 및 R'은, 각각 독립적으로, -CR₁R₂R₃, 아릴, 헤테로아릴 또는 헤테로C₄ _-6사이클로알킬이다[여기에서 아릴과 헤테로아릴은 임의로 할로 및 메틸에서 선택된 1 또는 2개 치환체로 치환될 수 있고,

R₁은 수소; 메톡시 또는 디메틸아미노로 임의로 치환된 C₁ _- ₄알킬; 할로, C₁ _- ₄알콕시 및 트리플루오로메톡시에서 독립적으로 선택된 1, 2 또는 3개의 치환체로 임의로 치환된 페닐; 1,3-벤조디옥솔라닐; 할로 또는 메톡시에서 독립적으로 선택된 1, 2 또는 3개의 치환체로 임의로 치환된 벤질; C₃ _- ₆사이클로알킬; 헤테로아릴; 헤테로C₄ _- ₆사이클로알킬; 또는 헤테로아릴메틸이고;

R₃는 수소이거나,

또다른 측면에서, 본 발명은 다음 화학식 (I-COR)로 표시할 수 있는 화합물 또는 그의 입체이성체, 또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염 및/또는 용매화물을 제공한다:

상기 식에서,

R₃는 수소이거나,

R₁ 및 R₃는 함께 사이클로프로필 그룹을 형성하거나

R₂ 및 R₃는 옥소를 형성함].

또다른 측면에서, 본 발명은 다음 화학식 (I-PR-COR)로 표시할 수 있는 화합물 또는 그의 입체이성체, 또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염 및/또는 용매화물을 제공한다:

상기 식에서,

R₁은 수소; 메톡시, 또는 디메틸아미노로 임의로 치환된 C₁ _- ₄알킬; 할로, C₁ _- ₄알콕시 및 트리플루오로메톡시에서 독립적으로 선택된 1, 2 또는 3개의 치환체로 임의로 치환된 페닐; 1,3-벤조디옥솔라닐; 할로 또는 메톡시에서 독립적으로 선택된 1, 2 또는 3개의 치환체로 임의로 치환된 벤질; C₃ _- ₆사이클로알킬; 헤테로아릴; 헤테로C₄ _- ₆사이클로알킬; 또는 헤테로아릴메틸이고;

R₃는 수소이거나,

R₁ 및 R₃는 함께 사이클로프로필 그룹을 형성하거나

R₂ 및 R₃는 옥소를 형성함].

또다른 측면에서, 본 발명은 표 A에 열거된 6개 화합물 중 어느 하나를 제외한, 다음 화학식 (I-PR)로 표시할 수 있는 화합물 또는 그의 입체이성체, 또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염 및/또는 용매화물을 제공한다:

상기 식에서,

R₁은 수소; 메톡시 또는 디메틸아미노로 임의로 치환된 C₁ _- ₄알킬; 할로, C₁ _- ₄알콕시 및 트리플루오로메톡시에서 독립적으로 선택된 1, 2 또는 3개의 치환체로 임의로 치환된 페닐; 1,3-벤조디옥솔라닐; 할로 또는 메톡시에서 독립적으로 선택된 1, 2 또는 3개의 치환체로 임의로 치환된 벤질; C₃ _- ₆사이클로알킬; 헤테로아릴; 헤테로C_4- ₆사이클로알킬; 또는 헤테로아릴메틸이고;

R₃는 수소이거나,

"화학식 I의 화합물", "본 화합물", "본 발명의 화합물" 또는 "화학식 (I-PR)의 화합물", "화학식 (I-COR)의 화합물", "화학식 (I PR-COR)의 화합물" 또는 비슷한 용어들뿐만 아니라 상이한 구체예에 의해 여기에서 정의된 것과 같은 화학식 (I)의 화합물의 서브그룹은 여기에서 사용될 때, 별도로 구체화되지 않는 한 화학식 I의 화합물 또는, 가능한 입체이성체를 포함하는 그의 서브그룹, 및 이들의 약학적으로 허용가능한 염 및 용매화물을 포함하는 것을 의미한다.

다른 측면에서, 본 발명은 HCV의 복제 주기를 저해하는 화학식 I의 화합물, 또는 여기에서 특정된 그의 서브그룹의 용도에 관한 것이다. 선택적으로, HCV의 복제 주기를 저해하는 의약의 제조를 위한 화합물의 용도를 제공한다.

본 발명의 구체예는, 여기에서 구체화된 A, R, R', R₁, R₂ 및 R₃에 대한 하나 이상의 정의가 적용되는, 화학식 (I)의 화합물 또는 상이한 구체예에 의해 여기에서 정의된 그의 서브그룹에 관한 것이다.

본 발명의 구체예는 화학식 (I)의 화합물, 또는 그의 서브그룹에 관한 것으로, 여기에서 R 및 R'은 독립적으로 -CR₁R₂R₃ 또는 임의로 치환된 5원 헤테로아릴이고; 특히 R 및 R'은 독립적으로 -CR₁R₂R₃이고; 더욱 특히 R 및 R'은 -CR₁R₂R₃이고 같으며; 선택적으로 R 및 R'은 -CR₁R₂R₃이고 상이하다.

본 발명의 다른 구체예는 화학식 (I)의 화합물, 또는 그의 서브그룹에 관한 것으로, 여기에서 R₂는 하이드록실, 아미노, 모노- 또는 디-C₁ _- ₄알킬아미노, C₁ _- ₄알킬카보닐아미노 또는 C₁ _- ₄알킬옥시카보닐아미노이고; 특히 R₂는 C₁ _- ₄알킬카보닐아미노 또는 C₁ _- ₄알킬옥시카보닐아미노이고; 또는 R₂는 C₁ _- ₄알킬옥시카보닐아미노이다. 보다 특히, R₂는 메톡시카보닐아미노이다.

본 발명의 다른 구체예는 화학식 (I)의 화합물, 또는 그의 서브그룹에 관한 것으로, 여기에서 R₁은 C₁ _- ₄알킬; 할로, 메틸, 메톡시에서 독립적으로 선택된 1 또는 2개 치환체로 임의로 치환된 페닐; 1,3-벤조디옥솔라닐; 및 헤테로아릴에서 선택된다. 특히, R₁은 분지된 C₃ _- ₄알킬; 할로 또는 메틸로 임의로 치환된 페닐; 및 헤테로아릴에서 선택된다. 보다 특히, R₁은 분지된 C₃ _- ₄알킬; 할로로 임의로 치환된 페닐에서 선택된다. 또는, R₁은 분지된 C₃ _- ₄알킬이다. 선택적으로, 다른 특정 구체예에서, R₁은 메톡시로 임의로 치환된 C₁ _- ₄알킬에서 선택된다.

본 발명의 다른 구체예는 화학식 (I)의 화합물, 또는 그의 서브그룹에 관한 것으로, 여기에서 R₁은 C₁ _- ₄알킬; 할로, 메톡시에서 독립적으로 선택된 1 또는 2개 치환체로 임의로 치환된 페닐; 1,3-벤조디옥솔라닐; 및 헤테로아릴에서 선택된다. 특히, R₁은 분지된 C₃ _- ₄알킬; 할로로 임의로 치환된 페닐; 및 헤테로아릴에서 선택된다.

본 발명의 다른 구체예는 화학식 (I)의 화합물, 또는 그의 서브그룹에 관한 것으로, 여기에서 R-(C=0)- 및 R'-C(=0)-는 독립적으로

에서 선택된 -(C=0)-CR₁R₂R₃이고, 여기에서 *는 피롤리딘 질소와의 결합위치를 나타낸다. 특히, R-(C=0)- 및 R'-C(=0)-는 독립적으로

에서 선택된 -(C=0)-CR₁R₂R₃이다.

본 발명의 다른 구체예는 화학식 (I)의 화합물, 또는 그의 서브그룹에 관한 것으로, 여기에서 A는 페닐렌이고, 특히 A가 화학식

의 1,4-페닐렌이다(여기에서 점선은 분자의 남은 부분에 대한 결합위치를 나타낸다).

본 발명의 다른 구체예는 화학식 (I)의 화합물, 또는 그의 서브그룹에 관한 것으로, 여기에서 A는 나프틸렌이고, 특히 A가 화학식

의 2,6-나프틸렌이다(여기에서 점선은 분자의 남은 부분에 대한 결합위치를 나타낸다).

본 발명의 다른 구체예는 화학식 (I)의 화합물, 또는 그의 서브그룹에 관한 것으로, 여기에서 A는 할로 또는 C₁ _- ₃알킬에서 선택된 1, 2 또는 3개의 치환체로 임의로 치환될 수 있는 나프틸렌이고; R¹은 화학식 (I)의 화합물에서 정의된 바와 같으나 치환되지 않은 2-프로필이 다르고, R에서 R¹이 1-메톡시-에틸이면, R'에서 R¹은 1-메톡시에틸과 다르다. 특히, 본 발명은 화학식 (I-PR)의 화합물 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염 및/또는 용매화물에 관한 것으로, 여기에서 A는 할로 또는 C₁ _-3알킬에서 선택된 1, 2 또는 3개의 치환체로 임의로 치환될 수 있는 나프틸렌이고, 보다 특히 A는 나프틸렌이고, 보다 더 특히 A는 2,6-나프틸렌이며;

R과 R'은 각각 독립적으로, -CR₁R₂R₃, 아릴, 헤테로아릴 또는 헤테로C₄ _- ₆사이클로알킬이며, 여기에서 아릴과 헤테로아릴은 임의로 할로 및 메틸에서 선택된 1 또는 2개 치환체로 임의로 치환될 수 있고, R₁은 수소; 메톡시 또는 디메틸아미노로 임의로 치환되나 불포화된 2-프로필과는 상이한 C₁ _- ₄알킬; 할로, C₁ _- ₄알콕시 및 트리플루오로메톡시에서 독립적으로 선택된 1, 2 또는 3개의 치환체로 임의로 치환된 페닐; 1,3-벤조디옥솔라닐; 할로 또는 메톡시에서 독립적으로 선택된 1, 2 또는 3개의 치환체로 임의로 치환된 벤질; C₃ _- ₆사이클로알킬; 헤테로아릴; 헤테로C₄ _- ₆사이클로알킬; 또는 헤테로아릴메틸이고; R₂는 수소, 하이드록실, 아미노, 모노- 또는 디-C_1-4알킬아미노, C₁ _- ₄알킬카보닐아미노, C₁ _- ₄알킬옥시카보닐아미노, C₁ _- ₄알킬아미노카보닐아미노, 피페리딘-1-일 또는 이미다졸-1-일이고; R₃는 수소이거나, R₁ 및 R₃는 함께 옥소 또는 사이클로프로필 그룹을 형성하나; 단 R에서 R¹이 1-메톡시에틸이년 R'에서 R¹은 1-메톡시에틸과는 다르다.

다른 구체예는 화학식 (I)의 화합물, 또는 그의 서브그룹 및 약학적으로 허용가능한 이들의 염 및/또는 용매화물에 관한 것으로, 여기에서 A는 나프틸렌이고; R과 R'은 각각 독립적으로 -CR₁R₂R₃이다(여기에서 각각의 R₁은 독립적으로 메톡시 또는 하이드록시로 임의로 치환된 C₁ _- ₄알킬, 사이클로펜틸, 또는 페닐이고; 각각의 R₂는 독립적으로 아미노, 모노- 또는 디-C₁ _- ₄알킬아미노, C₁ _- ₄알킬카보닐아미노, C₁ _- ₄알킬옥시카보닐아미노 또는 C₁ _- ₄알킬아미노카보닐아미노이고; R₃는 수소이나,

단 R₂가 메톡시카보닐아미노면 R₁은 2 프로필 이외의 것이고; R'에서 R₂가 메톡시카보닐아미노이면 R'에서 R₁은 1-메톡시에틸 이외의 것임).

다른 구체예는 화학식 (I)의 화합물 또는 화학식 (I-PR)의 화합물 같은 서브그룹에 관한 것으로, 여기에서 A는 화학식

의 2,6-나프틸렌이고, 이 구체예의 화합물은 표 A에 나열된 6개 화합물과는 다른 것이다.

다른 구체예는 R과 R'이 서로 상이한 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 서브그룹에 관한 것이다.

다른 구체예는 각각의 R₂가 독립적으로 C₁ _- ₄알킬카보닐아미노 또는 C₁ _- ₄알킬옥시카보닐아미노인 화학식 (I)의 화합물에 관한 것이다.

다른 구체예는 각각의 R₂가 독립적으로 메톡시카보닐아미노인 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 서브그룹에 관한 것이다.

다른 구체예는 각각의 R₁이 독립적으로 분지된 C₃ _- ₄알킬, 메톡시C₂ _- ₃알킬, 사이클로펜틸 또는 페닐에서 선택된, 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 서브그룹에 관한 것이다.

다른 구체예는 R에서 R₁이 1-메틸프로필, 2-메틸프로필, 2-메톡시에틸, 사이클로펜틸 또는 페닐이고; R'에서 R₁이 1-메틸에틸, 1-메틸프로필, 2-메틸프로필, 1-메톡시에틸, 사이클로펜틸 또는 페닐인 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 서브그룹에 관한 것이다.

다른 구체예는 R과 R'이 독립적으로 -CR₁R₂R₃이고 R₁, R₂, 및 R₃ 치환체를 가지는 탄소 원자 2개는 모두 S-구조(configuration)를 가지는, 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 서브그룹에 관한 것이다.

다른 구체예는 다음 화학식 (Ia)의 화합물인, 화학식 (I)의 화합물, 또는 화학식 (I-PR) 같은 그의 서브그룹에 관한 것이다:

다른 구체예는 화합물이 다음 표 1a의 화합물 중 하나인, 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 서브그룹에 관한 것이다: 화합물 9, 화합물 11, 화합물 13, 화합물 14, 화합물 16, 화합물 17 또는 화합물 18, 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염.

다른 측면에서, 본 발명은 HCV 감염의 치료 또는 예방(또는 치료 또는 예방을 위한 의약의 제조)에서 사용하기 위한, 화학식 (I)의 화합물, 약학적으로 허용가능한 그의 염 및 용매화물을 제공한다. 본 발명에 따른 치료 또는 예방에 있어서 대표적인 HCV 유전자형은 (유럽에서 일반적인)유전자형 1b 또는 (북미에서 일반적인)유전자형 1a를 포함한다. 본 발명은 또한 HCV 감염, 특히 유전자형 1a 또는 1b의 HCV 감염을 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다.

여기에서 언급된 화합물과 중간체의 순수한 입체이성체는 이 화합물 또는 중간체의 동일한 기본 분자구조의 다른 에난티오머 또는 부분입체이성체가 실질적으로 없는 이성체로 정의된다. 특히, "입체이성체적으로 순수한"이란 용어는 적어도 80%(즉, 최소 90%의 일 이성체와 최대 10%의 다른 가능한 이성체)의 입체이성체 과량 내지 100% 이하(즉, 다른 이성체가 없는 100%의 일 이성체)의 입체이성체 과량을 가지는 화합물 또는 중간체, 보다 특히 90% 내지 100% 이하의 입체이성체 과량, 보다 더 특히 94% 내지 100% 이하의 입체이성체 과량, 가장 특히 97% 내지 100% 이하의 입체이성체 과량을 가지는 화합물 또는 중간체에 관한 것이다. "에난티오머적으로 순수한"과 "부분입체이성체적으로 순수한"이란 용어는 비슷한 방법으로 이해되어야 하지만, 관심 혼합물에서 에난티오머 과량 및 부분입체이성체 과량, 각각과 관련한 것이다.

본 발명의 화합물과 중간체의 순수한 입체이성체 또는 입체이성체는 공지된 방법을 사용하여 얻을 수 있다. 예를 들면, 에난티오머는 그의 부분입체이성체 염을 임의로 활성적인 산 또는 염기로 선택적 결정화하여 서로에서 분리할 수 있다. 그 예로는 타르타르산, 디벤조일타르타르산, 디톨루오일타르타르산 및 캄포설폰산이 있다. 선택적으로, 에난티오머는 크로마토그래피 방법으로 키랄 정지상을 사용하여 분리할 수 있다. 순수한 입체화학적 이성체는 또한 적절한 출발물질의 상응하는 순수한 입체이성체로부터 유도될 수 있으나, 단 반응은 입체특이적으로 일어난다. 바람직하게, 특이적 입체이성체를 필요로 하는 경우, 화합물은 입체특이적 제조방법에 의해 합성된다. 이러한 방법은 유리하게 에난티오머적으로 순수한 출발물질을 사용한다.

화학식 (I) 화합물의 부분입체이성체 라세미체는 일반적인 방법으로 별도로 얻을 수 있다. 유리하게 사용가능한 적절한 물리적 분리방법은, 예를 들면 선택적 결정화 및, 크로마토그래피, 예를 들면 컬럼 크로마토그래피 또는 초임계 유체 크로마토그래피이다.

화학식 (I)의 화합물은 다양한 키랄 중심을 가진다. 주목되는 것은 피롤리딘 고리의 2-탄소원자의 입체중심이다. 이 위치에서의 구조는 L-프롤린, 즉

및/또는

에 상응하거나, D-프롤린, 즉

및/또는

에 상응할 수 있다.

또한, 화학식 (I) 화합물의 -CR₁R₂R₃ 잔기에서 발생하는 입체중심이 주목된다. 따라서, 본 발명의 구체예는, 특히 R₁이 메톡시, 하이드록시 또는 디메틸아미노로 임의로 치환된 C₁ _- ₄알킬; 할로 또는 메톡시에서 독립적으로 선택된 1, 2 또는 3개의 치환체로 임의로 치환된 벤질; C₃ _- ₆사이클로알킬; 헤테로C₄ _- ₆사이클로알킬 또는 헤테로아릴메틸일 때 -CR₁R₂R₃에서 탄소 원자 C가 그의 S-구조를 나타내는 화학식 (I)의 화합물, 또는 그의 서브그룹에 관한 것이다. 특정한 입체화학을 가지는 화학식 (I)의 화합물의 -(C=0)-CR₁R₂R₃ 잔기의 구체적인 예는

및

이며, 여기에서 *는 나머지 분자에 대한 결합위치를 나타낸다.

약학적으로 허용가능한 부가염은 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 서브그룹의 치료적으로 활성인 비독성 산 및 염기 부가염을 포함한다. 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 서브그룹의 자유, 즉 비염 형태가 주목된다.

약학적으로 허용가능한 산 부가염은 염기 형태를 적절한 산으로 처리하여 간편하게 얻어질 수 있다. 적절한 산은, 예를 들면 할로겐화수소산, 예를 들면 염산 또는 브롬산, 황산, 질산, 인산 등 같은 무기산; 또는 유기산, 예를 들면 아세트산, 프로피온산, 수산화초산, 락트산, 피루브산, 옥살산(즉, 에탄디산), 말론산, 숙신산(즉, 부탄디산), 말레산, 푸마르산, 말산(즉, 하이드록실-부탄디산), 타르타르산, 시트르산, 메탄설폰산, 에탄설폰산, 벤젠설폰산, p-톨루엔설폰산, 시클람산, 살리실산, p-아미노살리실산, 파모산 등을 포함한다. 역으로, 이 염들은 적절한 염기로 처리되어 자유 염기 형태로 전환될 수 있다.

산성 프로톤을 포함하는 화학식 (I)의 화합물은 또한 적절한 유기염기 및 무기염기로 처리하여 그의 염기 부가염, 특히 금속 또는 아민 부가염 형태로 전환할 수 있다. 적절한 염기염 형태는, 예를 들면 암모늄염, 알칼리 및 알칼리토금속염, 예를 들면 리튬, 나트륨, 칼륨, 마그네슘, 칼슘염 등, 유기염기와의 염, 예를 들면 벤자틴, N-메틸-D-글루카민, 하이드라바민염, 및 아르기닌, 라이신 등과 같은 아미노산과의 염을 포함한다.

"용매화물"이란 용어는 화학식 (I)의 화합물뿐만 아니라 약학적으로 허용가능한 그의 염이 형성할 수 있는 약학적으로 허용가능한 용매화물을 포함한다. 이러한 용매화물은, 예를 들면 수화물, 알코올화물, 예를 들면 에탄올화물, 프로판올화물 등이다.

화학식 (I)의 화합물 중 일부는 또한 토토머 형태로 존재할 수 있다. 예를 들면, 아미드(-C(=0)-NH-) 그룹의 토토머 형태는 이미노알코올(-C(OH)=N-)이다. 토토머 형태는, 여기에 나타난 화학식에서 분명하게 표시되지 않았지만, 본 발명의 범위 내에 포함된다.

여기서 사용된, 그룹 또는 그룹의 일부로서 "C₁ _- ₄알킬"은 1 내지 4개의 탄소 원자를 가지는 포화된 직쇄 또는 분지쇄 탄화수소 그룹으로 정의되며, 예를 들면 메틸, 에틸, 1-프로필, 2-프로필, 1-부틸, 2-부틸, 2-메틸-1-프로필, 2-메틸-2-프로필이다. 본 발명의 목적에 있어서는 C₁ _- ₄알킬 중에서 C₃ _- ₄알킬, 즉 3 또는 4개의 탄소 원자를 가지는 직쇄 또는 분지쇄 탄화수소 그룹이 주목되며, 예를 들면 1-프로필, 2-프로필, 1-부틸, 2-부틸, 2-메틸-1-프로필, 2-메틸-2-프로필이다. 특히 주목되는 것은 분지된 C₃ _- ₄알킬이며, 예를 들면 2-프로필, 2-부틸, 2-메틸-1-프로필, 2-메틸-2-프로필일 수 있다.

"C₃ _- ₆사이클로알킬"이란 용어는 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸 및 사이클로헥실의 총칭이다. 마찬가지로, "C₄ _- ₆사이클로알킬"은 사이클로부틸, 사이클로펜틸 및 사이클로헥실의 총칭이다.

그룹 또는 그룹의 일부로서 "C₁ _- ₄알콕시"는 화학식 -0-C₁ _- ₄알킬의 그룹을 의미하며, 여기에서 C₁ _- ₄알킬은 위에서 정의된 바와 같다. C₁ _- ₄알콕시의 예로는 메톡시, 에톡시, n-프로폭시 또는 이소프로폭시가 있다.

"할로"란 용어는 플루오로, 클로로, 브로모 및 요오도의 총칭이다.

여기서 사용된, "(=0)" 또는 "옥소"란 용어는 탄소 원자에 결합될 때 카보닐 잔기를 형성한다. 원자는 그 원자가가 허용될 때 옥소 그룹으로 치환될 수 있을 뿐임을 주지하여야 한다.

여기에서 사용된, "아릴"이란 페닐 및 나프틸에 대한 총칭이다.

여기에서 사용된, "헤테로아릴"이란 용어는 적어도 하나의 고리 원자가 N, O 및 S, 특히 N 및 O에서 선택된 헤테로원자인, 5 내지 10개 고리 원자를 가지는 방향족 탄화수소 고리 구조를 의미한다.

여기에서 사용된, "헤테로C₄ _- ₆사이클로알킬"이란 용어는 적어도 하나의 탄소 원자가 N, O 및 S, 특히 N 및 O에서 선택된 헤테로원자로 대체된, "C₄ _- ₆사이클로알킬"에 대해 정의된 바와 같은 포화 사이클릭 탄화수소 그룹을 의미한다. 헤테로C₄ _- ₆사이클로알킬의 예로는 테트라하이드로-2H-피라닐, 피페리디닐, 테트라하이드로퓨라닐 및 피롤리디닐이 있다.

분자 잔기상에서 그룹의 위치가 특정화되지 않았거나(예를 들면 페닐 상의 치환체) 부동(floating) 결합으로 표시된 경우, 생성된 구조가 화학적으로 안정한 한, 이러한 그룹은 잔기의 원자 상에 위치할 수 있다. 변수가 분자 내에서 1회 이상 존재하면 각각의 정의는 독립적이다.

본 발명의 화합물은 다음과 같은 합성방법을 사용하여 합성할 수 있다. 여기에서 사용된 약어는 다음 의미를 가진다:

"CDI"는 N,N'-카보닐-디이미다졸을 의미한다.

"dppf"는 1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센을 의미한다.

"4-DMAP"는 4-디메틸아미노피리딘을 의미한다.

"DMSO"는 디메틸 설폭사이드를 의미한다.

"HMPT"는 헥사메틸포스포러스 트리아미드를 의미한다.

"DIPEA"는 N,N-디이소프로필 에틸아민을 의미한다.

"DMF"는 디메틸포름아미드를 의미한다.

"THF"는 테트라하이드로퓨란을 의미한다.

"TEMPO"는 2,2,6,6-테트라메틸-1-피페리디닐옥시를 의미한다.

DBU는 1,8-디아자비사이클로[5.4.0]운데크-7-엔을 의미한다.

HATU는 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸유로늄 헥사플루오로포스페이트를 의미한다.

TBTU는 2-(1H-벤조트리아졸-1-일)-N,N, N',N'-테트라메틸유로늄 테트라플루오로보레이트를 의미한다.

반응식 1

반응식 1에 화합물 II 내지 VI의 합성을 기술하였다. 제1 단계에서, 아미드 결합을 PG-프롤린과 X가 Cl, Br 또는 I인 4-할로벤젠-1,2-디아민을 사용하여, 예를 들면 CDI 같은 아미노 그룹 아실화를 위한 적합한 커플링제의 존재 하에서 형성한다. 여기에서 사용된 PG는 피롤리딘 질소 상의 보호그룹이며, 예를 들면 벤질옥시카보닐 또는 tert-부톡시카보닐 같은 카바메이트 보호그룹이거나, 선택적으로 PG는 R-C(=0)-일 수 있다(여기에서, R은 화학식 (I)의 화합물에서 정의된 바와 같은 의미를 가진다). 이렇게 얻어진 중간체를 다시 고리화하여 화학식 (II)의 벤즈이미다졸 유도체를 얻는다. 이러한 고리화반응은 아세트산 같은 산으로 0 내지 150 ℃, 보다 구체적으로 80 ℃ 내지 120 ℃의 온도 범위에서 처리하여 수행할 수 있다. 화학식 (II)의 중간체는 Pd 촉매 조건, 예를 들면 Pd(dppf)Cl₂, bis(피나콜레이토)디보론 및 염기, 예를 들면 아세트산칼륨 존재 하에서 화학식 (III)의 보론산 에스테르로 전환될 수 있다.

화합물 IV (반응식 1B)는 중간체 II의 피롤리딘 질소의 보호그룹 PG를 적합한 조건, 예를 들면 PG가 tert-부톡시카보닐일 경우 HCl의 이소프로판올 용액을 사용하여 선택적으로 제거한 후 얻어질 수 있다. 얻어진 중간체 IV를 화학식 R-C(=0)-OH(여기에서, R은 화학식 (I)의 화합물에 대하여 정의된 바와 같은 의미를 가진다)의 적절한 산으로 아실화하여 화학식 (V)의 중간체로 전환할 수 있다. 아실화반응은 출발물질을 커플링제의 존재 하에서 반응시키거나 카복실 작용기를 활성 에스테르, 혼합 무수물 또는 카복실산 클로라이드 또는 브로마이드 같은 활성형태로 전환하여 수행할 수 있다. 커플링 반응과 그에 사용되는 시약의 일반적인 설명은 펩티드 화학의 일반서적, 예를 들면 M. Bodanszky, "Peptide Chemistry", 2nd rev. ed., Springer-Verlag, Berlin, Germany, (1993)에서 확인할 수 있다.

아미노 그룹 아실화 또는 아미드 결합 형성을 위한 커플링 반응의 예로는 아자이드 방법, 혼합 카보닉-카복실산 무수물(이소부틸 클로로포르메이트) 방법, 카보디이미드(디사이클로헥실카보디이미드, 디이소프로필-카보디이미드, 또는 수용성 카보디이미드, 예를 들면 N-에틸-N'-[3-(디메틸아미노)-프로필]카보디이미드) 방법, 활성 에스테르 방법(예; p-니트로페닐, p-클로로페닐, 트리클로로페닐, 펜타클로로페닐, 펜타플루오로페닐, N-하이드록시숙신산 이미도 등의 에스테르), Woodward 시약 K-방법, 1,1-카보닐-디이미다졸 방법, 인 시약 또는 산화-환원 방법이 있다. 이러한 방법 중 일부는 적합한 촉매를 첨가하여, 예를 들면 카보디이미드 방법에서 1-하이드록시벤조트리아졸, 또는 4-DMAP를 첨가하여 강화시킬 수 있다. 또한, 커플링제는 1-하이드록시-벤조트리아졸 또는 4-DMAP 존재 하의 (벤조트리아졸-1-일옥시)-tris-(디메틸아미노) 포스포늄 헥사플루오로포스페이트 또는 그 자체; 또는 2-(1H-벤조트리아졸-1-일)-N,N, N' , N'-테트라메틸유로늄 테트라플루오로보레이트 (TBTU), 또는 0-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N, N' , N'-테트라메틸유로늄 헥사플루오로포스페이트 (HATU)이다. 이러한 커플링 반응은 용액(액체상) 또는 고체상으로 수행할 수 있다. 본 발명의 목적을 위하여 아실화에 바람직한 방법은 HATU를 사용하여 수행한다.

커플링 반응은 바람직하게 불활성 용매, 예를 들면 디클로로메탄, 클로로포름 같은 할로겐화된 탄화수소, 아세토니트릴, 디메틸포름아미드, 디메틸아세트아미드, DMSO, HMPT 같은 쌍극성 비양성자성 용매, 테트라하이드로퓨란(THF) 같은 에테르 중에서 실시된다.

수많은 예에서 커플링 반응은 3차 아민, 예를 들면 트리에틸아민, 디이소프로필에틸아민(DIPEA), N-메틸-모폴린, N-메틸피롤리딘, 4-DMAP 또는 1,8-디아자비사이클로[5.4.0]운데크-7-엔 (DBU) 같은 적합한 염기 존재 하에서 실시된다. 반응 온도는 0 ℃ 내지 50 ℃의 범위이고, 반응 시간은 15분 내지 24시간의 범위일 수 있다. 이후에 중간체 V는 중간체 II에서 중간체 III으로의 전환에서와 같이 bis(피나콜레이토)디보론의 존재 하에 Pd 촉매화된 조건에서 보론산 에스테르 VI로 전환될 수 있다.

반응식 2

화학식 (I)의 화합물의 합성에서 사용된 추가의 구성 블럭을 반응식 2에 기술하였다. α-아미노 케톤 VII (반응식 2A)(여기에서 A는 화학식 (I)의 화합물과 같은 의미를 가지며, X는 할로겐이다)은 적합하게 보호된 프롤린과 결합되며, 여기에서 PG는 피롤리딘 질소의 보호그룹이고, 중간체 IV를 중간체 V로 전환하기 위해 상기한 바와 같은 아미노 그룹의 아실화를 위한 커플링제의 존재 하에서는 바람직하게 tert-부톡시카보닐 또는 벤질옥시카보닐이고, 바람직하게 DIPEA 존재 하에서는 HATU이다. 이렇게 얻어진 중간체를 암모늄아세테이트로, 바람직하게 0 ℃ 내지 150 ℃, 보다 구체적으로 80 ℃ 내지 150 ℃의 온도 범위에서 처리하여 화학식 (VIII)의 이미다졸 중간체로 고리화한다. 선택적으로, 중간체 (VIII)은 α-할로 케톤 VIIa(여기에서 각각의 X는 독립적으로 할로 원자이다)를 적합하게 보호된 프롤린(여기에서 PG는 피롤리딘 질소 상의 보호그룹이고, 바람직하게 적합한 염기, 예를 들면 DIPEA의 존재 하에서 tert-부톡시카보닐 또는 벤질옥시카보닐이다)과 커플링한 다음, 바람직하게 톨루엔 또는 자일렌 중에서 상기한 이미다졸 중간체 (VIII)로 고리화하여 얻어질 수 있다. 이 화합물을 다시 중간체 (II)의 중간체 (III)로의 변형과 유사한 방법으로 화학식 (IX)의 중간체로 변형할 수 있다. 선택적으로 중간체 (VIII)은, 예를 들면 PG가 tert-부톡시카보닐인 경우 이소프로판올 중의 HCl로 처리하여 중간체 (X)(반응식 2B)로 탈보호하고, 중간체 (IV)를 중간체 (V)로 변형하는데 사용된 것과 유사한 조건을 사용하여 중간체 (XI)로 추가 변형시킬 수 있다. 중간체 (II)를 중간체 (III)로 전환하는데 사용된 것과 유사한 조건을 사용하여 중간체 (XI)에서 보론산 에스테르(XII)를 얻는다.

이미다졸 (XIII)을 PG-프롤린 (반응식 2C)(여기에서 PG는 피롤리딘 질소의 보호그룹이고, 바람직하게 tert-부톡시카보닐이다)에서 출발하여 반응식 2C에 기술된 바와 같이 4 단계로 합성할 수 있다. 이미다졸 (XIII')은 브롬 대신에 요오드를 이미다졸에 도입하여 I₂/NaOH로 이요오드화한 후, 하나의 요오드를 Na₂SO₃로 제거하는 마지막 단계를 제외하고 동일한 방법을 사용하여 합성할 수 있다:

반응식 3

다른 가능한 중간체를 반응식 3에 기술하였다. 이 반응에서 화학식

의 디할로게나이드 (XIV)가 사용된다(여기에서, A는 화학식 (I)의 화합물에서 정의된 바와 같은 의미를 가지며, X 및 X'은 할로겐이고; 요오도, 클로로 및 브로모에서 독립적으로 선택된다). 선택적으로 X 및/또는 X'은 할로겐과 함께 사용된 트리플레이트(triflate)일 수 있다. 중간체 (III)는 스즈키-미야우라 (Suzuki-Miyaura) 조건 하에서, 중간체 (XIV)의 하나 이상의 등가물을 사용하여 중간체 (XIV)와 결합된다. 얻어진 중간체 (XV)는 중간체 (II)를 중간체 (III)로 전환하기 위해 기술된 것과 유사한 조건 하에서 XVI로 변환된다. PG가 R-C(=0)일 경우(여기에서 R은 화학식 (I)의 화합물에 대하여 정의된 의미를 가진다), 중간체 (III)는 중간체 (VI)와 동일하다.

반응식 4

반응식 4에서 보이는 바와 같이, 보론산 에스테르 (III)와 할로겐화물 또는 트리플레이트 (VIII)(여기에서, X는 할로겐 또는 트리플레이트이다)의 스즈키-미야우라 조건 하의 커플링으로 중간체 (XVII)을 형성한다. 스즈키-미야우라 조건을 사용하는 반응식 1 내지 3에 기술된 적절한 중간체의 유사한 커플링 또한 중간체 (XVII)를 생성할 수 있다. 예를 들면, 브롬화물 (II)와 보론산 에스테르 (IX)를 결합하여 중간체 (III) 및 (VIII)에 대해 기술된 바와 같이 중간체 (XVII)를 얻을 수 있다.

선택적으로, 화학식 (I)의 화합물을 반응식 5에 나타낸 바와 같이 얻을 수 있다. 화학식 (XVI)의 보론산 에스테르를 화학식 (XIII)의 브롬화물 또는 화학식 (XIII')의 요오드화물과 결합하여 중간체 (XVII)를 생성한다. 피롤리딘 질소를, 예를 들면 PG가 tert-부톡시카보닐일 경우에 이소프로판올 중의 HCl을 사용하는 것과 같이 적합한 조건 하에서 탈보호한 후, 중간체 (XVIII)을 형성한다. 화학식 R-C(=0)-OH 또는 R'-C(=0)-OH의 산(여기에서, R과 R'은 화학식 (I)의 화합물에 대해 정의된 바와 같은 의미를 가진다)으로 중간체 (IV)를 중간체 (V)로 전환하기 위해 기술된 조건 하에서 커플링하여 화학식 (I)의 화합물을 형성하며, 여기에서 R-C(=0)-와 R'-C(=0)-는 동일하다.

반응식 5

PG가 R-C(=0)- 또는 R'-C(=0)-인 반응식 4와 5에 예시된 방법에 있어서, 중간체 (XVII)는 실질적으로 화학식 (I)의 화합물이다. 중간체 (XVII)에서 하나의 PG만이 R-C(=0)- 또는 R'-C(=0)-이고, 다른 것이 예를 들어 tert-부톡시카보닐 같은 보호그룹인 경우에, 중간체 (XIX) (반응식 6)를 중간체 (XX)로, 또는 중간체 (XXI)를 중간체 (XXII)로 전환하는데서 보이는 바와 같이 선택적 탈보호하는 것이 가능하다. 이후, 중간체 (XX)과 (XXII)를 반응식 5에 나타낸 중간체 (XVIII)을 화학식 (I)의 화합물로 전환하기 위해 기술된 바와 같이 화학식 (I)의 화합물로 전환시킬 수 있다.

반응식 6

또한, 반응식 4와 반응식 5의 제1 단계에 나타낸 방법을 사용하여 중간체 화합물 (XXV)(반응식 7)를 얻을 수 있으며, 여기에서 피롤리딘 그룹은 상이한 보호그룹 PG와 PG'에 의해 수직으로 보호되어 선택적 탈보호가 가능하여 화합물 (XXVI) 또는 (XXVII)를 생성하고, 적절한 R'-C(=0)- 또는 R-C(=0)- 그룹으로 후속 아실화되어 화합물 (XXI) 또는 (XIX') 각각을 얻는다(반응식 7 참조). 다음 단계에서, 제2 보호그룹을 선택적으로 제거하고 피롤리딘 질소가 아실화하여 화학식 (I)의 화합물을 얻는다. 예를 들면, 본 발명의 목적을 위하여 이러한 수직적 보호는 다른 피롤리딘상의 벤질옥시카보닐(Cbz)과 조합하여 하나의 피롤리딘상의 t-Boc 그룹을 사용하여 얻어질 수 있다.

반응식 7

상기한 바와 같이 반응식 1 내지 7의 합성방법은 라세믹 프롤린 유도체, L-프롤린 유도체 또는 D-프롤린 유도체를 사용하여 수행할 수 있다. 따라서, 선택적 입체화학을 가지는 화학식 (I)의 화합물을 얻을 수 있다.

다른 측면에서, 본 발명은 여기에 특정된 화학식 (I)의 화합물의 치료적 또는 예방적으로 유효한 양과 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다. 본 내용 중에서 예방적으로 유효한 양이란 감염될 위험이 있는 대상에서 HCV 감염을 방지하는데 충분한 양을 의미한다. 본 내용 중에서 치료적으로 유효한 양이란 감염된 대상에서 HCV 감염을 안정화하거나, HCV 감염을 감소시키거나, HCV 감염을 근치(eradicate)하는데 충분한 양이다. 또다른 측면에서, 본 발명은 약학적으로 허용가능한 담체와 여기에 기술된 화학식 (I)의 화합물의 치료적 또는 예방적으로 유효량을 밀접하게 혼합하는 것을 포함하는, 약학 조성물의 제조방법에 관한 것이다.

그러므로, 본 발명의 화합물 또는 그의 서브그룹은 투약 목적을 위한 다양한 약학적 형태로 제제화될 수 있다. 적절한 조성물로서는 전신성 투약 약물에 일반적으로 적용된 모든 조성물이 인용될 수 있다. 본 발명의 약학 조성물을 제조하기 위하여 활성성분으로서 특정 화합물의 유효량을, 임의로 부가염 형태로 약학적으로 허용가능한 담체와 밀접한 혼합물로 조합하며, 여기에서 담체는 투약에 바람직한 제조물 형태에 따라 다양한 형태를 가질 수 있다. 이러한 약학 조성물은, 특히 경구, 직장, 경피 투여 또는 비경구 주사에 적합한 단위투약형태가 바람직하다. 예를 들면, 경구투여형태의 조성물을 제조하는데 있어서, 일반적 약학 매질로는, 예를 들면 현탁액, 시럽, 엘릭시르(elixir), 에멀젼 및 용액 같은 경구용 액체 제제의 경우 물, 글리콜, 오일, 알코올 등; 또는 분말, 알약, 캡슐 및 정제의 경우에는 전분, 당, 카올린, 윤활제, 결합제, 붕해제 등의 고체 담체를 사용할 수 있다. 투여의 용이성으로 인하여 정제와 캡슐이 가장 유리한 경구투여 단위형태이며, 이 경우 고체 약학적 담체가 사용된다. 비경구적 조성물에 있어서, 다른 성분들, 예를 들면 용해도를 보조하는 다른 성분들이 포함될 수 있으나 담체는 일반적으로 적어도 대부분이 멸균수를 포함한다. 주사 용액은, 예를 들면 담체가 생리식염수(saline) 용액, 글루코스 용액 또는 생리식염수와 글루코스 용액의 혼합물을 포함하여 제조할 수 있다. 주사가능한 현탁액은 또한 적절한 액체 담체, 현탁화제 등을 사용하여 제조할 수 있다. 또한 사용 직전에 액체 형태 조제물로 전환되도록 하는 고체 형태 조제물도 포함된다. 경피 투여에 적합한 조성물에 있어서, 담체는 임의로 침투 촉진제(penetration enhancing agent) 및/또는 적합한 습윤제를 포함하며, 이들은 임의로 미량의 적합한 다른 성질의 첨가제와 조합될 수 있으며, 여기에서 첨가제는 피부에 심각한 유해 효과를 주지 않는다. 본 발명의 화합물은 또한 용액, 현탁액 또는 건조 분말의 형태로 당업계에 공지된 전달 시스템을 사용하여 경구 흡입 또는 살포(insufflation)에 의해 투여될 수 있다.

투여의 용이성과 투약의 단일성을 위하여 상기한 약학 조성물을 단위투약형태로 제형화하는 것이 특히 유리하다. 여기에서 사용된 단위투약형태란 단일 용량으로서 적합한 물리적으로 개별적인 단위를 지칭하며, 각각의 단위는 필요한 약학적 담체와 결합하여 바람직한 치료 효과를 얻기 위해 계산된 활성성분의 미리 결정된 양을 포함한다. 이러한 단위투약형태의 예는, 정제(할선 또는 코팅 정제 포함), 캡슐, 알약, 좌약, 분말 패킷, 웨이퍼, 주사 용액 또는 현탁액 등, 및 이들의 별개 멀티플이다.

화학식 (I)의 화합물은 HCV 복제주기의 저해제로서 활성이 있으며, HCV 감염 또는 HCV와 연관된 질환의 치료 및 예방에 사용될 수 있다. HCV와 연관된 질환은 진행성 간 섬유화, 간경변을 유발하는 염증 및 괴사, 말기 간질환 및 간암을 포함한다. 본 발명의 수많은 화합물들은 또한 HCV의 돌연변이 균주에 대해서도 활성이 있을 것으로 판단된다.

화학식 (I)의 화합물의 HCV에 대한 시험관내 항바이러스 활성은 Lohmann et al. (1999) Science 285: 110-113에 기초한 세포 HCV 리플리콘(replicon) 시스템에서 시험할 수 있으며, 추가적인 변경은 유전자형 1b에 대하여는 Krieger et al. (2001) Journal of Virology 75: 4614-4624 및 Lohmann et al. (2003) Journal of Virology 77: 3007-3019에 그리고 유전자형 1a에 대하여는 실시예 부분에서 예시된 Yi et al. (2004) Journal of Virology 78: 7904-7915(참조를 위해 여기에 통합)에 기술되어 있다. 이 모델이 HCV에 대한 완전한 감염 모델은 아니지만, 현재 입수가능한 자율 HCV RNA 복제에 대한 가장 강력하고 효과적인 모델로서 널리 받아들여지고 있다. HCV 작용을 특정하게 방해하는 화합물들 사이에서 HCV 리플리콘 모델에서 세포독성 또는 세포증식억제 효과를 나타내어 결과적으로 HCV RNA 또는 결합된 리포터 효소 농도의 감소를 유발하는 것들을 구별하는 것이 중요하다는 것을 알 수 있다. 이 분야에서는 레자주린(resazurin) 같은 플루오로제닉(fluorogenic) 산화환원 염료를 사용하는, 예를 들면 미토콘드리아 효소의 활성에 기초한 세포의 세포독성 평가를 위한 에세이들이 알려져 있다. 또한, 세포 계수 스크린이 반딧불이 루시퍼라제 같은 결합 리포터 유전자 활성의 비선택적 저해의 평가를 위해 존재한다. 적절한 세포 종류들은 발현이 본질적으로 활성인 유전자 프로모터에 따르는 루시퍼라제 리포터 유전자로의 안정한 형질감염이 구비될 수 있으며, 이러한 세포들은 비선택적 저해제를 제거하기 위한 계수-스크린으로서 사용될 수 있다.

이들의 항바이러스 특성, 특히 이들의 항HCV 특성으로 인하여 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 서브그룹은 HCV 복제 주기의 저해, 특히 온혈동물, 특히 HCV 감염된 인간의 치료 및 HCV 감염의 예방에 유용하다. 본 발명은 또한 온혈동물, 특히 HCV에 감염된, 또는 HCV 감염의 위험이 있는 인간의 치료방법에 관한 것으로, 이 방법은 치료학적 유효량의 화학식 (I) 화합물의 투여를 포함한다.

따라서, 여기에 구체화된 화학식 (I)의 화합물은 의약, 특히 HCV 감염을 치료 또는 예방하기 위한 의약으로서 사용될 수 있다. 의약 또는 치료방법 같은 용도는 HCV에 감염된 대상 또는 HCV에 감염되기 쉬운 대상에게 HCV 감염과 연관된 상태와 싸우기 위해 유효한 양 또는 HCV 감염을 방지하기 위해 유효한 양의 전신성 투여를 포함한다.

본 발명은 또한 HCV 감염의 치료 또는 예방을 위한 의약의 제조에서 본 화합물의 용도에 관한 것이다.

일반적으로, 1일 항바이러스 유효량은 약 0.01 내지 약 50 mg/kg, 또는 약 0.01 내지 약 30 mg/kg 체중일 수 있다. 필요량을 하루 동안 적절한 간격으로 2, 3, 4 이상의 하부 용량으로 투여하는 것이 적절할 수 있다. 하부 용량은 단위투약형태로 제제화될 수 있으며, 예를 들면 단위투약형태 당 약 1 내지 약 500 mg, 또는 약 1 내지 약 300 mg, 또는 약 1 내지 약 100 mg, 또는 약 2 내지 약 50 mg의 활성성분을 함유한다.

본 발명은 또한 여기에 기술된 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 서브그룹과 다른 항HCV제와의 조합물에 관한 것이다. "조합물"이란 용어는 (a) 위에서 기술된 화학식 (I)의 화합물, 및 (b) HCV 감염을 치료할 수 있는 적어도 하나의 다른 화합물(여기에서는 항HCV제로 표시)을 HCV 감염의 치료에서 동시, 개별 또는 순차적 사용을 위해 조합된 조제물로서 포함하는 생성물 또는 키트에 관한 것일 수 있다. 일 구체예에서, 본 발명은 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 서브그룹과 적어도 하나의 항HCV제의 조합물에 관한 것이다. 특정 구체예에서, 본 발명은 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 서브그룹과 적어도 2개의 항HCV제의 조합물에 관한 것이다. 특정 구체예에서, 본 발명은 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 서브그룹과 적어도 3개의 항HCV제의 조합물에 관한 것이다. 특정 구체예에서, 본 발명은 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 서브그룹과 적어도 4개의 항HCV제의 조합물에 관한 것이다.

이전에 알려진 항HCV제, 예를 들면 인터페론-α(IFN-α), 페길화된 인터페론-α, 리바비린 또는 이들의 조합물 및 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 서브그룹의 조합물은 병용요법의 의약으로 사용될 수 있다.

본 발명의 화합물과 조합할 수 있는 제제는, 예를 들면 HCV 폴리머라제의 뉴클레오시드 및 비뉴클레오시드 저해제, 프로테아제 저해제, 헬리카제 저해제, NS4B 저해제와 내부 리보솜 진입부위(IRES)를 기능적으로 저해하는 제제 및 HCV 세포 부착 또는 바이러스 침입, HCV RNA 번역, HCV RNA 전사, 복제 또는 HCV 성숙, 어셈블리 또는 바이러스 방출을 저해하는 기타 제제이다. 이러한 종류의 특이적 화합물은 HCV 프로테아제 억제제, 예를 들면 텔라프레비어(telaprevir)(VX-950), 보세프레비어(boceprevir)(SCH-503034), 날라프레비어(narlaprevir)(SCH-900518), ITMN-191 (R-7227), TMC435350 (TMC435), MK-7009, BI-201335, BI-2061 (ciluprevir), BMS-650032, ACH-1625, ACH-1095, GS 9256, VX-985, IDX-375 (HCV NS4A 프로테아제 보조인자 저해제), VX-500, VX-813, PHX-1766, PHX2054, IDX-136, IDX-316, ABT-450, EP-013420 (및 콘제너(congener)) 및 VBY-376이고; 본 발명에 유용한 뉴클레오시드 HCV 폴리머라제 저해제는 R7128, PSI-7851, PSI 7977, IDX-189, IDX-184, IDX-102, R1479, UNX-08189, PSI-6130, PSI-938 및 PSI-879 및 다양한 다른 뉴클레오시드와 뉴클레오티드 유사체 및 HCV 저해제, 예를 들면 2'-C-메틸 변성 뉴클레오시드, 4'-아자 변성 뉴클레오시드, 및 7'-데아자 변성 뉴클레오시드로서 유도된 것들, 예를 들면 4-아미노-1-[5-아지도-4-하이드록시-5-하이드록시메틸-3-메틸테트라하이드로퓨란-2-일]피리미딘-2(1H)-온 및 그의 비스-2-메틸프로파노에이트 에스테르이다. 본 발명에 유용한 비뉴클레오시드 HCV 폴리머라제 저해제는 HCV-796, HCV-371, VCH-759, VCH-916, VCH-222, ANA-598, MK-3281, ABT-333, ABT-072, PF-00868554, BI-207127, GS-9190, A-837093, JKT-109, GL-59728, GL-60667, ABT-072, AZD-2795 및 13-사이클로헥실-3-메톡시-17,23-디메틸-7H-10,6-(메타노이미노티오이미노에타노옥시에타노이미노메타노)인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-14,24-디온 16,16-디옥사이드이다.

기타 항HCV제는 HCV 폴리머라제 저해제, R-7128, MK-0608, ABT-333, VCH759, PF-868554, GS9190, NM283, VCH-222, VCH-916, BI207217, ABT-072, IDX-102, PSI-7851, PSI-938, 발로피시타빈(valopicitabine), PSI-6130, XTL-2125, NM-107, R7128 (R4048), GSK625433, R803, R-1626, BILB-1941, HCV-796, JTK-109 및 JTK-003, ANA-598, IDX-184, MK-3281, MK-1220, 벤즈이미다졸 유도체, 벤조-1,2,4-티아디아진 유도체, 페닐알라닌 유도체, A-831 및 A-689; HCV 프로테아제 (NS2-NS3 및 NS3-NS4A) 저해제, WO02/18369 (예를 들면, 273 페이지, 9-22째줄 및 274 페이지, 4째줄 내지 276 페이지, 11째줄 참조)의 화합물, BI-1335, TMC435, MK7009, ITMN-191, MK-7009, BI-201335, SCH900518, VX-813, ABT-450, VBY376, PHX-1766, ACH-1625, BILN-2061, VX-950, BILN-2065, BMS-605339, VX-500, SCH 503034; HCV 수명주기의 다른 타겟에 대한 저해제, 예를 들면 헬리카제, 및 메탈로프로테아제 저해제, ISIS-14803; 면역조절제, 예를 들면 α-, β-, 및 γ-인터페론, 예를 들면 rIFN-α 2b, rIFN-α 2ba, 컨센서스 IFN-α(infergen), 페론, 레아페론(reaferon), 인터맥스 α, rIFN-β, 인퍼겐 + 악티뮨(actimmune), IFN-오메가+DUROS, 알부페론(albuferon), 록테론(locteron), Rebif, Oral IFN-α, IFN-α 2b XL, AVI-005, 페길화 인퍼겐, 페길화 유도된 인터페론-α 화합물, 예를 들면 페길화 rIFN-α 2b, 페길화 rIFN-α 2a, 페길화 IFN-β, 세포에서 인터페론 합성을 자극하는 화합물, 인터루킨, Toll 유사 리셉터(TLR) 작용제, 타입 1 헬퍼 T 세포 반응의 진행을 강화하는 화합물, 및 티모신(thymosin); 리바비린 및, 레베톨(rebetol), 코페구스(copegus) 및 비라미딘(taribavirin) 같은 리바비린 유사체, 아만타딘 및 텔비부딘(telbivudine) 같은 항바이러스제, 내부 리보솜 진입의 저해제, 알파-글루코시다제 I 저해제, 예를 들면 MX-3253 (celgosivir)과 UT-231B, 헤파토프로텍턴트(hepatoprotectant), 예를 들면 IDN-6556, ME-3738, LB-84451 및 MitoQ, 광범위 바이러스 저해제, 예를 들면 IMPDH 저해제(예; US5,807,876, US6,498,178, US6,344,465, US6,054,472, WO97/40028, WO98/40381, WO00/56331의 화합물, 마이코페놀산 및 그의 유도체, 및 제한적인 것은 아니나 VX-497, VX-148, 및/또는 VX-944); 및 기타 HCV 치료 약물, 예를 들면 자닥신(zadaxin), 니타족사나이드(nitazoxanide), BIVN-401 (virostat), PYN-17 (altirex), KPE02003002, 악틸론 (CPG-10101), KRN-7000, 시바시르(civacir), GI-5005, ANA-975, XTL-6865, ANA-971, NOV-205, 타바신(tarvacin), EHC-18, NIM811, DEBIO-025, VGX-410C, EMZ-702, AVI 4065, 바비툭시맵(Bavituximab), 및 오글루파니드(Oglufanide); 또는 이들의 조합물에서 선택된 약제를 포함한다.

임의의 상기한 항HCV제를 이들의 프로드럭 형태, 특히 뉴클레오시드 유사체 HCV 폴리머라제 저해제를 개발하는 것이 유리할 수 있다. 이러한 프로드럭 형태의 예는 포스페이트, 포스포아미데이트 또는 모노에스테르와 디에스테르를 포함하는 에스테르 형태일 수 있다. 이러한 프로드럭은, 예를 들면 활성종으로의 세포내 인산화하기 전에 소화관 벽 또는 간에서 자유 뉴클레오시드로 생체내 전환되어야 한다.

따라서, HCV 감염을 방지하거나 치료하기 위해 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 서브그룹은, 예를 들면 인터페론-α (IFN-α), 페길화 인터페론-α, 리바비린 또는 그의 조합물뿐만 아니라 HCV 에피토프에 대해 표적화된 항체, 짧은간섭 RNA (si RNA), 리보자임, DNAzymes, 안티센스 RNA, 예를 들어 NS3 프로테아제, NS3 헬리카제 및 NS5B 폴리머라제의 소분자 길항제를 포함하는 치료제와 조합하여 동시 투여될 수 있다.

본 발명의 조합물은 의약으로서 사용할 수 있다. 따라서, 본 발명은 HCV 바이러스로 감염된 포유동물에서 HCV 활성을 저해하는데 유용한 의약의 제조에서 위에서 정의된 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 서브그룹의 용도에 관한 것으로, 여기에서 의약은 병용요법(combination therapy)에 사용되며, 병용요법은 특히 화학식 (I)의 화합물과, 적어도 하나의 다른 항HCV제, 예를 들면 IFN-α, 페길화 IFN-α, 리바비린 또는 그의 조합물을 포함한다.

바람직한 구체예에서, 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 서브그룹과 HCV 바이러스 복제를 변경하는 또다른 약제의 조합물은 상승적으로 작용할 수 있다. 화합물들의 상호작용은 다양한 기계적 및 실험적 방법으로 분석할 수 있다.

조합물을 분석하는 방법 중 하나는 Bliss 독립 모델(Dr. Mark Pritchard, University of Alabama, Tuscaloosa, AL)을 기초로 MacSynergyTM II에 의해 제조된 3차원 그래프 및 시너지 용적 계산에 의한 것이다. 이와 같이, HCV 바이러스 복제를 변성하는 다른 제제와의 조합에서 본 발명의 화합물은 nM²% (시너지 용적)로 표시되는 값이 25 내지 50 nM²% (작지만 유의량의 시너지), 50 내지 100 M²% (중등도의 시너지) 또는 100 M²% 초과(강력한 시너지)일 때 상승적으로 작용하거나 상승효과를 가지는 것으로 일컬어진다.

이하의 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것으로, 본 발명의 범위를 한정하는 것으로 이해되지 않아야 한다.

실시예

실시예 1 - 화학식 ( XVIIIa ) 화합물(A =

)의 합성

1.1 중간체 IIa (PG= Boc; X= Br)의 제조

Boc-L-프롤린 (2669 mg, 12.4 mmol)의 피리딘/DMF (30 mL, 1/l) 용액에 디(1H-이미다졸-1-일)케톤(2205 mg, 13.6 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 45 ℃에서 2시간 동안 교반하였다. 4-브로모벤젠-1,2-디아민 (2319 mg, 12.4 mmol)을 첨가하고 혼합물을 주위 온도에서 밤새 교반하였다. 용매를 제거하고 잔류물을 아세트산(15 mL) 중에서 100 ℃로 30분 동안 가열하였다. 잔류물을 농축한 후, 혼합물을 에틸 아세테이트와 포화 중탄산나트륨 용액에 분배하였다. 유기층을 분리하고 물로 세척하여 Na₂SO₄로 건조한 후, 혼합물을 여과하고 여액을 진공에서 농축하였다. 얻어진 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피에 의해 CH₂Cl₂/EtOAc 90/10 내지 50/50를 사용하여 정제하여 화합물 IIa를 얻었다(3.146 g, 69 %).

1.1a 중간체 IIb (PG= Cbz; X= Br)의 제조

교반된 N-벤질옥시카보닐-L-프롤린(39.9 g, 160.4 mmol)의 건조 THF(300 mL) 용액에 CDI (28.6 g, 176.4 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 45 ℃에서 2시간 동안 교반하였다. 4-브로모-1,2-디아미노벤젠(30 g, 160.4 mmol)을 첨가하고 반응물을 실온에서 16시간 동안 추가로 교반하였다. 감압 하에서 용매를 제거하고, 잔류물을 아세트산(100 mL)에 용해하여 예열된 맨틀에서 100 ℃로 40분 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에서 제거하였다. 얻어진 잔류물을 디클로로메탄(500 mL)과 물(300 mL)에 용해하였다. 유기층을 물층과 분리하고, 0.5 N HCl (300 mL)로 세척한 후, 포화 NaHC0₃ 용액(300 mL)으로 세척하였다. MgSO₄로 건조하고 진공에서 농축한 후, 생성물을 컬럼 크로마토그래피(디클로로메탄 내지 10 % EtOAc의 디클로로메탄으로 그래디언트 용출)로 정제하여 화합물 IIb를 얻었다(17.1g, 25 %).

1.2 중간체 IIIa (PG= Boc)의 제조

DMF(3L) 중의 IIa (200 g, 546 mmol), 아세트산칼륨(160.8 g, 1.64 mol) 및 4,4,4',4',5,5,5',5'-옥타메틸-2,2'-비스(1,3,2-디옥사보롤란)(416g, 1.64 mol)의 혼합물에 Pd(dppf)Cl₂ (20 g)를 질소 가스 하에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 85 ℃에서 15시간 동안 교반하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고 물과 브라인으로 세척한 다음, 황산마그네슘으로 건조하여 고체를 여과하여 제거하고 여액의 용매를 감압 하에서 제거하였다. 잔류물을 실리카 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르 : 에틸 아세테이트 10:1 내지 2:1)로 정제하여 125 g의 IIIa를 흰색 고체로 얻었다(15%의 보론산 포함).

1.3 중간체 VIIIa (PG= Boc, X= Br ; A=

)의 제조

단계 1

N,N-디이소프로필에틸아민 (80.0 g, 0.62 mol)을 30분에 걸쳐서 DMF(600 mL) 중의 아미노메틸-(4-브로모-페닐)-케톤 (50 g, 0.2 mol), 2-(1H-7-아자벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸 유로늄 헥사플루오로포스페이트 메탄아미니움(HATU; 53 g, 0.21 mol), N-Boc-L-프롤린 (43.0 g, 0.2 mol)의 혼합물에 적가하였다. 반응 혼합물을 5 ℃에서 1시간 동안 교반하였다. 대부분의 휘발성 성분을 진공에서 제거하고, 얻어진 잔류물을 에틸 아세테이트(600 mL)와 물(300 mL) 사이에 분배하였다. 유기층을 포화 수성 NaHC0₃(500 mL)와 브라인(500 mL)으로 세척하고, MgS0₄ 상에서 건조하여, 여과에 의해 고체를 제거하고, 여액의 용매를 감압 하에서 제거하였다. 조생성물을 컬럼 크로마토그래피(실리카겔, 석유 에테르/에틸 아세테이트 3:1 내지 1:1)로 정제하여 60 g (62%)의 중간체 XXIII를 엷은 황색 고체로 얻었다.

단계 2

자일렌(800 mL) 중의 중간체 XXIII(60 g, 0.14 mol)와 암모늄 아세테이트(89 g, 1.4 mol)의 혼합물을 16시간 동안 가열환류하였다. 반응 혼합물을 에틸아세테이트(700 mL)와 포화 NaHC0₃ 용액(500 mL)에 분배하였다. 층을 분리하고 수층을 추가의 에틸아세테이트(2 x 300 mL)로 추출하였다. 유기층을 모아서 브라인(500 mL)으로 세척하고 MgS0₄ 상에서 건조한 후, 고체를 여과에 의해 제거하고 여액의 용매를 감압 하에 증발시켰다. 얻어진 물질을 에틸아세테이트/석유 에테르에서 재결정하여 황색 고체의 VIIIa, 25 g (43%)을 얻었다.

1.4 중간체 XVIIa (PG= Boc, A=

)의 제조

톨루엔 중의 VIIIa (1138 mg, 2.90 mmol)와 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(140 mg, 0.121 mmol)에 질소 분위기 하에서, 메탄올 중의 2 M Na₂C0₃ (2.5 mL, 5.0 mmol)와 화합물 IIIa(1.0 g, 2.42 mmol)를 첨가하였다. 격렬하게 교반된 혼합물을 질소 분위기 하에서 80 ℃로 가온하고 이 온도에서 밤새 교반하였다.

실온으로 냉각한 후, CH₂C1₂ (15 mL) 및 물(10 mL)을 차례로 첨가하였다. 유기층을 분리하고 물층을 CH₂C1₂로 추출하였다. 모아진 유기층을 Na₂S0₄ 상에서 건조하여 여과한 후, 감압 하에서 건조될 때까지 농축하여 갈색 잔류물을 얻었다. 이 잔류물을 CH₂C1₂ 대 CH₂C1₂/메탄올 90/10을 용리액으로 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 XVIIa (878 mg, 61 %)를 얻었다.

1.5 중간체 XVIIIa (A=

)의 제조

XVIIa (878 mg, 1.47 mmol)의 이소프로판올(5mL) 용액에 HCl(5-6 M의 이소프로판올 용액, 15 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 용매를 증발시키고, 얻어진 고체 XVIIIa를 진공에서 건조하여 다음 단계에서 그 자체로 사용하였다.

실시예 2 - 화학식 XVIIIb 화합물(A =

)의 합성

2.1 L-boc-프롤리놀의 제조

보레인-메틸 설파이드 복합체(180 mL, 1.80 mol)를 N-Boc-L-프롤린 (300 g, 1.39 mol)의 무수 THF (3.0 L) 용액에 적가하여 0 ℃로 냉각하였다. 가스 방출이 중단되면, 빙냉조를 분리하고 용액을 10 ℃에서 18시간 동안 교반하였다. 박층 크로마토그래피(TLC)로 출발물질이 남아있지 않고 목적물이 형성된 것을 확인하였다. 용액을 0 ℃로 냉각하고 메탄올(2.4 L)을 서서히 첨가하였다. 용매를 감압 하에서 제거하였다. 잔류물을 디클로로메탄(1 L)에서 재구성하여 NaHC0₃(500 mL, 포화, 수성) 및 브라인(500 mL)으로 세척하고, MgS0₄ 상에서 건조하여 고체를 여과에 의해 제거하고, 여액의 용매를 감압 하에서 제거하여 흰색 고체, 260 g (93%)을 얻어서 추가의 정제 없이 다음 단계에 사용하였다.

2.2 L-boc-프롤리날의 제조

L-boc-프롤리놀(100 g, 500 mmol)의 CH₂Cl₂(1.5 L) 용액에 0 ℃에서 격렬하게 교반하면서 2,2,6,6-테트라메틸피페리딘-1-옥실 (TEMPO; 1.56 g, 10 mmol)과 NaBr (5.14 g, 50 mmol)를 연속적으로 첨가하였다. 얻어진 혼합물에 NaHC0₃(6.3 g, 75 mmol)와 6% NaClO의 활성 염소(750 mL, 750 mmol) 용액을 0 ℃에서 1시간 정도 적가하였다. TLC로 남아있는 출발물질이 없고 목적 생성물이 형성된 것을 확인하였다. 혼합물을 신속하게 디클로로메탄(2 x 1.5 L)으로 추출하였다. 유기층을 모아서 NaHS0₄(10%, 1 L)와 KI(4%, 200 mL)로 세척한 다음, Na₂S₂0₃ (10%, 1 L)와 브라인 (1.5 L)으로 세척하고 MgS0₄로 건조하여 고체를 여과에 의해 제거하고 용매를 증발시켜서 황색 오일의 L-boc-프롤리날(89 g, 92%)을 얻어서 추가의 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.

2.3 중간체 XXIV의 제조

수성 암모니아(25~28%, 200 mL)를 메탄올(1 L) 중의 L-boc-프롤리날 (89 g, 0.44 mol)과 글라이옥살(glyoxal) (183 mL의 40% 수용액) 용액에 적가하였다. 반응 혼합물을 밀봉하여 10 ℃에서 반응시켰다. 16시간 후에, 추가 글라이옥살(20 mL) 과 수성 암모니아(20 mL)를 첨가하고 다시 6시간 동안 반응시켰다. 용매를 감압 하에서 제거하고, 조생성물을 에틸 아세테이트(1.0 L)에 재용해하여, 물과 브라인으로 세척하고 MgS0₄로 건조한 다음, 고체를 여과에 의해 제거하고 용매를 감압 하에서 제거하였다. 조생성물을 컬럼 크로마토그래피(실시카겔, 디클로로메탄 대 메탄올/디클로로메탄 1:70)로 정제하여 73 g (70%)의 중간체 XXIV를 흰색 고체로 얻었다.

2.4 중간체 XIIIa (PG= Boc)의 제조

N-브로모숙신이미드(47.2 g, 0.26 mol)를 일정량씩 1시간 동안 냉각된 (에탄올 얼음조, -10 ℃) XXIV (63.0 g, 0.26 mol)의 CH₂Cl₂ (1.5 L) 용액에 첨가하고 비슷한 온도에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축하고, 잔류물을 제조용 HPLC로 정제하여 25.3 g (30%)의 XIIIa를 엷은 황색 고체로 얻었다.

2.4a 중간체 XIII'a (PG= Boc)의 제조

둥근바닥 플라스크(1L) 중의 요오드(43.3 g, 170.5 mmol, 2 eq)의 클로로포름 (210 mL) 용액에 NaOH 수용액(2M, 210 mL) 중의 XXIV (20 g, 84.3 mmol) 현탁액을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 15시간 동안 교반하였다. 얻어진 반응 혼합물에 포화 Na₂S₂O₃ 수용액(100 mL)을 첨가하고 유기층을 분리하였다. 수층을 클로로포름(4x150 mL)으로 추출하였다. 유기층을 모아서 물로 세척하고 황산마그네슘으로 건조하였다. 고체를 여과하고 용액을 증발시켜서 건조하여 이요오드화염(38.61 g, 89 %)을 얻었다.

얻어진 중간체 이요오드화염(2.24 g, 4.58 mmol)과 아황산나트륨 (4.82 g, 38 mmol)을 둥근바닥 플라스크(100 mL)에 첨가하여 30% EtOH/물(80 mL)로 현탁하였다. 얻어진 혼합물을 40시간 동안 환류하였다. 용매를 제거하고 H₂0 (20 mL)를 첨가한 후, 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 고체를 여과하여 물로 세척하고, 진공 오븐에서 건조하여 화합물 XIII'a (1.024 g, 61 %)를 얻었다.

2.5 중간체 XVb(X= Br; A=

, PG= Boc)의 제조

2,6-디브로모나프탈렌(6.92 g, 24.2 mmol), 보론산에스테르 IIIa (2 g, 4.84 mmol), NaHC0₃ (813 mg, 9.68 mmol), (dppf)PdCl₂(710 mg, 0.968 mmol)를 톨루엔(75 mL)에 용해하였다. 물(1 mL)을 첨가하고 혼합물을 7시간 동안 가열 환류하였다. 고체를 디칼라이트(dicalite)로 여과하여 제거하고 여액을 증발시켜서 실리카 상에 건조하였다. 잔류물을 헵탄 대 에틸아세테이트로 그래디언트 용출하여 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 적절한 분획을 모으고 용매를 감압 하에서 제거하였다. 잔류물(1.89 g, 79 %)을 그 자체로 다음 단계에 사용하였다.

2.6 중간체 XVIb(A=

, PG= Boc)의 제조

브롬화물 XVb(1890 mg, 3.83 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-옥타메틸-2,2'-bis(1,3,2-디옥사보롤란)(2437 mg, 9.59 mmol), KF (390 mg; 6.71 mmol) 및 (dppf)PdCl₂ (281 mg, 0.384 mmol)를 톨루엔(50 mL)에 용해하여 3일 동안 환류가열하였다.

고체를 디칼라이트로 여과하여 제거하고 여액을 증발시켜서 실리카 상에 건조하였다. 잔류물을 헵탄 대 에틸아세테이트 그래디언트를 사용하여 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획을 모으고 용매를 감압 하에서 제거하였다. 잔류물(1.22 g, 59 %)을 그 자체로 다음 반응에 사용하였다.

2.6a 중간체 XVIb(A=

, PG= Boc)의 대체 제조

질소 하에서, IIIa (25 g, 60.5 mmol), 6-브로모나프탈렌-2-일 트리플루오로메탄-설포네이트(20 g, 56.7 mmol), K₃P0₄(36.65 g, 173 mmol) 및 (PPh₃)₄Pd (717 mg, 0.62 mmol)를 THF(60 mL)와 물(15 mL) 중에서 가열 맨틀로 85 ℃ (환류)에서 2 시간 동안 교반하였다. CH₂Cl₂ (50 mL)를 첨가하고 물층을 분리하였다. 유기층을 MgS0₄에서 건조하고 여과 후에 여액을 농축하여 단단한 고체를 얻었다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸아세테이트 15/1 내지 1/1)로 정제하여 XVb (20 g; 40.6 mmol)를 얻었다. 화합물 XVb (1 g, 2.0 mmol), 아세트산칼륨 (0.5 g, 5.0 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-옥타메틸-2,2'-bis(1,3,2-디옥사보롤란) (1.29 g, 5.0 mmol), 및 Pd(dppf)Cl₂(0.1 g)를 아르곤 하에 DMF (15 mL) 중에서 교반하였다. 혼합물을 60 ℃에서 5 시간 동안 가열하였다. 냉각 후, CH₂Cl₂ (50 mL)를 첨가하고 혼합물을 포화 NaHC0₃로 세척하였다. 물층을 분리하여 CH₂Cl₂로 추출하였다. 유기층을 모아서 MgSO₄로 건조하였다. 여과 후, 용매를 제거하고 생성물을 컬럼 크로마토그래피(그래디언트 용리액:석유 에테르/에틸아세테이트 10/1 내지 1/1)로 정제하여 XVIb (0.7 g, 1.3 mmol, 65 %)를 밝은 황색 고체로 얻었다.

2.6b 중간체 VIIIb(X= Br; A=

, PG= Boc)의 제조

단계 1

6-브로모-2-나프토산(72.3g, 282mmol, 1.0 equiv.)을 디클로로메탄(600 mL)에 현탁하여 DMF(촉매성, 5 방울)를 첨가하였다. 염화옥살릴(71.6 g, 564 mmol, 2.0 equiv.)을 일정량씩 1시간 동안 첨가하였다. 반응 혼합물을 플라스크 상에 개구된 CaCl₂ 건조 튜브로 밤새 교반하였다. 완전히 용해시켰다. 반응 혼합물을 농축하여 디클로로메탄(100 mL)을 첨가하고, 용매를 다시 증발시켜서 6-브로모-2-나프토일 클로라이드(76.1 g, 100 %)를 오일로서 얻어, 다음 단계에서 그대로 사용하였다.

단계 2

N,O-디메틸하이드록실아민 염산염(41.3 g, 423 mmol, 1.5 equiv.)을 증류수(200 mL)에 용해하여 탄산칼륨(117 g, 3.0 equiv.)을 일정량씩 첨가하였다(CO₂ 발생). 물(300 mL)과 디클로로메탄(200 mL)을 첨가하고 6-브로모-2-나프토일 클로라이드(76.1 g, 282 mmol, 1.00-equiv.)의 디클로로메탄(300 mL) 용액을 교반하면서 이 혼합물에 일정량씩 첨가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. 유기층을 분리하여, 황산나트륨에서 건조하고, 여과 및 농축하여 진공에서 밤새 건조하여, 갈색 고체의 6-브로모-N-메톡시-N-메틸-2-나프타미드(82.9 g, 100 %)를 얻었다.

단계 3

6-브로모-N-메톡시-N-메틸-2-나프타미드(82.9 g, 282 mmol, 1 equiv.)를 4구 플라스크 중에서 질소 하에 테트라하이드로퓨란(600 mL)에 용해하였다. 반응 혼합물을 얼음조에서 냉각하고 메틸 마그네슘 브로마이드(메틸-테트라하이드로퓨란 중의 3.2 M 용액, 197 mL, 2.2 equiv.)를 1시간 동안 적가하고, 이때 반응 혼합물의 온도를 10-15 ℃로 유지하였다. 반응 혼합물을 얼음조에서 30분 동안 추가로 교반하였다. 빙냉조에서 냉각하면서 염산 수용액(2 M, 100 mL)을 주의깊게 적가하였다. 유기용매를 증발시키고 침전된 생성물을 디클로로메탄 (500 mL)으로 추출하였다. 용액을 황산나트륨으로 건조하고, 여과하여 농축하였다. 고체 잔류물을 40 ℃에서 진공으로 건조하여 1-(6-브로모나프탈렌-2-일)-에타논(70.6 g, 99 %)을 얻었다.

1-(6- 브로모나프탈렌 -2-일)- 에타논의 대체 제조

2-브로모나프탈렌(41.4 g, 200 mmol), 염화아세틸 (11.3 mL, 160 mmol), 니트로벤젠(250 mL) 및 AlCl₃(28g, 210 mmol)의 혼합물을 4시간 동안 100 ℃(유탕조 온도)에서 교반하였다. 얻어진 반응 혼합물을 냉각하고, 얼음/물(100 mL)에 따라서 여과하였다. 여액을 물(100 mL)로 세척하였다. 용매(니트로벤젠)을 증류하여 제거하였다. 얻어진 잔류물을 헥산에서 결정화하여 18 g의 목적 생성물(36% 수율)을 얻었다.

1-(6-브로모나프탈렌-2-일)에타논: ¹H NMR (400 MHz, ACETONITRILE-d ₃) δ ppm 2.66 (s, 3 H) 7.66 (dd, J=8.8, 2.0 Hz, 1 H) 7.86 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 7.94 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 8.02 (dd, J=8.8, 1.8 Hz, 1 H) 8.13 (d, J=2.0 Hz, 1 H) 8.53 (d, J=1.8 Hz, 1 H).

단계 4

1-(6-브로모나프탈렌-2-일)에타논(55.6 g, 223 mmol, 1.0 equiv.)을 디클로로메탄 (1.3 L)에 용해하였다. 디브로민(78.3 g, 490 mmol, 2.2 equiv.)을 30분 동안 적가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 교반하고 농축하여 2,2-디브로모-1-(6-브로모나프탈렌-2-일)에타논을 고체로 얻어 그대로 다음 단계에 사용하였다.

2,2-디브로모-1-(6-브로모나프탈렌-2-일)에타논(90.0 g, 221 mmol, 1.00)을 테트라하이드로퓨란(800 mL)에 용해하여, 트리에틸아민(27.67 mL, 199 mmol, 0.9 equiv.)과 이어서 디에틸 포스파이트(45.8 g, 332 mmol, 1.50 equiv.)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고 용매를 진공에서 제거하였다. 얻어진 잔류물을 에틸아세테이트(1.2 L)에 용해하여 물로 세척하였다. 유기층을 분리하고, 황산나트륨에서 건조하여, 여과하고 농축하여 정제되지 않은 2-브로모-l-(6-브로모나프탈렌-2-일)에타논 (70.3 g)을 얻었다. 아세토니트릴에서 재결정하여 30 g (1차분)과 6.5 g (2차분)의 2-브로모-1-(6-브로모나프탈렌-2-일)에타논을(50 %) 얻었다.

단계 5

2-브로모-l-(6-브로모나프탈렌-2-일)에타논(4.9 g, 14.9 mmol, 1 equiv.)을 아세토니트릴(150 mL)에 20°에서 현탁하였다. (L)-boc-프롤린(3.22g, 14.9 mmol, 1 equiv.)을 첨가한 다음, N-에틸-N-이소프로필프로판-2-아민(2.83 mL, 16.4 mmol, 1.10 equiv.)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 20 ℃에서 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축하였다. 잔류물을 디클로로메탄에 용해하고 연속하여 염산 수용액(1 %, 100 mL)과 NaHC0₃ 수용액으로 세척하였다. 황산나트륨에서 건조하고, 여과 및 농축한 후, 얻어진 오일(6.52 g, 94%)을 그대로 다음 단계에 사용하였다.

암모늄 아세테이트(16.3 g, 212 mmol, 15 equiv.)를 톨루엔(150 mL)에 용해된, 위에서 얻어진 화합물(6.52 g, 14.1 mmol, 1.00 equiv.)에 첨가하고, 이 혼합물을 밤새 환류하였다. 반응 혼합물을 농축하고 잔류물을 아세토니트릴(100 mL)에서 재결정하였다. 결정을 여과하고 진공에서 40 ℃에서 건조하여 VIIIb(3.2 g, 51 %)를 얻었다.

2.6c 중간체 IXb(A=

, PG= Boc)의 제조

VIIIb (3.076 g, 6.95 mmol), 비스피나콜라토디보론(2.648 g, 10.43 mmol), 아세트산칼륨(1.365 g, 13.91 mmol) 및 PdCl₂(dppf) (254 mg, 0.348 mmol) 를 톨루엔(30 mL)에 용해하여 아르곤 하에서 17시간 동안 85 ℃에서 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각하여 디클로로메탄(50 mL)을 첨가하고, 혼합물을 NaHC0₃ 포화용액으로 세척하였다. 유기층을 MgS0₄에서 건조하고, 여과한 다음, 진공에서 농축하여 실리카겔 컬럼 크로마토그래피 (그래디언트 용리액: 20 내지 50% EtOAc/헵탄)로 정제하여 IXb (2.63 g, 77 %)를 얻었다. 생성물은 헥산/i-Pr₂0 (3/2)에서 침전될 수 있다.

2.6d 중간체 VIIIc(X= Br, A=

, PG= Cbz)의 제조

2-브로모-1-(6-브로모나프탈렌-2-일)에타논(57.7 g, 175.9 mmol, 80% 순도)의 아세토니트릴(1 L) 용액에, L-Cbz-프롤린 (43.8 g, 175.9 mmol)과 이어서 디이소프로필에틸아민(33.4 mL, 193.5 mmol)을 첨가하고 반응물을 40분 동안 실온에서 교반하였다. 용매를 감압 하에 제거하고, 얻어진 잔류물을 디클로로메탄 (500 mL)에 다시 용해한 다음, 1% HCl (500 mL)과 NaHC0₃ 포화 수용액(500 ml)으로 세척하였다. 유기층을 MgS0₄로 건조하고, 여과한 다음, 용매를 감압 하에서 제거하여 갈색의 오일성 잔류물(80 g)을 얻어서 다음 단계에 사용하였다.

잔류물 일부(69.8 g, 140.6 mmol)와 암모늄 아세테이트 (162.6 g, 2.11 mol)를 톨루엔 중에서 교반하여 밤새 환류하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각하고 용매를 감압 하에서 제거하였다. 얻어진 잔류물을 디클로로메탄과 물의 혼합물(1/1, 1500 mL) 중에서 교반하여 화합물 VIIIc를 침전시켰다. 여과하고 물로 세정하여 화합물 VIIIc (61.3 g, 92 %)를 흰색 분말로 얻었다.

2.7 중간체 XVIIb(A=

, PG= Boc)의 제조

보론산 에스테르 XVIb(1.22 g, 2.26 mmol), 브롬화물 XIIIa (1072 mg, 3.39 mmol), 중탄산나트륨(380 mg, 4.52 mmol), Pd(dppf)Cl₂(166 mg, 0.226 mmol)의 톨루엔 (50 mL) 용액에 물(1 mL)을 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 가열하여 밤새 환류하였다. 반응 혼합물을 여과 및 증발시켜서 건조하고 컬럼 크로마토그래피(그래디언트 용출: 헵탄 대 에틸아세테이트)하여 정제하였다. 생성물을 함유하는 수집된 분획을 모으고 휘발물질을 감압 하에서 제거하였다. 잔류물(960 mg, 65 %)을 그대로 다음 단계에 사용하였다.

2.7a 중간체 XVIIb(A=

, PG= Boc)의 대체 제조

XVIb (10 g, 18.5 mmol), XIII'a (8.76 g, 24 mmol), NaHC0₃ (9.32 g, 111 mmol) 및 Pd(dppf)Cl₂ (1 g)를 아르곤 하에 디옥산/물(140 mL, 6/1) 중에서 교반하였다. 혼합물을 85 ℃로 15시간 동안 가열하였다. 브라인(100 mL)을 첨가하고 혼합물을 CH₂Cl₂로 추출하여 MgS0₄로 건조한 후, 용매를 여과 및 증발시키고, 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(그래디언트 용출: CH₂Cl₂ 대 EtOAc)로 정제하여 XVIIb (7 g, 58 %)를 얻었다.

2.7b 중간체 XVIIb(A=

, PG= Boc)의 대체 제조

VIIIb (20.0 g, 45.2 mmol, 1.00 equiv.), IIIa (20.6 g, 49.7 mmol, 1.1 equiv.) 및 중탄산나트륨(11.4 g, 136 mmol, 3.0 equiv.)의 1,4-디옥산/물(500 mL, 5:1) 용액을 교반하여 탈산소화하고, 여기에 질소 하에서 1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센-팔라듐(II)디클로라이드 디클로로메탄 복합체(2.50 g, 4.52 mmol, 0.1 equiv.)를 첨가하였다. 혼합물을 아르곤 하에 80 ℃에서 15시간 동안 가열하고 실온으로 냉각하였다. 반응 혼합물을 디클로로메탄(500 mL)으로 희석하고 브라인(2 x 150 mL)으로 세척하여 황산마그네슘에서 건조하고; 여과 및 건조상태까지 증발시켜 진한 갈색 기포(43 g)를 얻었다. 기포를 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(0-6% MeOH/CH₂Cl₂로 그래디언트 용출)로 정제하여 회백색 분말의 XVIIb (19.52 g, 65%)를 얻었다.

2.8 중간체 XVIIIb (A=

)의 제조

XVIIb (960 mg, 1.48 mmol)의 CH₂Cl₂(25mL) 용액에 HCl(5-6 M 이소프로판올 용액, 5 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 용매를 증발시켜서, 얻어진 고체를 진공에서 건조하여 다음 단계에 그대로 사용하였다.

2.8a 중간체 XVIIIb (A=

)의 대체 제조

XVIIb (19.52 g, 30.1 mmol, 1.00 equiv.)를 디클로로메탄 (200 mL)에 용해하여 HCl의 이소프로판올(5-6 N, 300 mL) 용액을 첨가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하였다. tBuOMe (1000 mL)를 이 현탁액에 첨가하고 슬러리를 30분 동안 실온에서 교반하였다. 여과된 고체를 tBuOMe (2x 100 mL)로 세정하고 진공 하에서 밤새 건조하여 XVIIIb 분말(15.2 g)을 얻었다.

실시예 2a - 화학식 ( XXVI ) 및 ( XXVII )의 화합물(A=

)의 합성

2a.1 중간체 XXVb (A=

; PG= Cbz; PG'= Boc)의 제조

IXb (2.63 g, 5.37 mmol), IIb (2.80 g, 6.99 mmol), PdCl₂(dppf) (298 mg, 0.537 mmol) 및 중탄산나트륨(1.354 g, 16.12 mmol)에, 디옥산/물(50 mL, 5/1)을 첨가하였다. 반응물을 13시간 동안 80 ℃, 아르곤 분위기 하에서 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각하고, 디클로로메탄으로 희석한 후, 브라인을 첨가하고 혼합물을 데칼라이트에서 여과하여 유기층을 분리하였다. 유기층을 MgS0₄로 건조하여, 용매를 감압 하에서 제거하고 컬럼 크로마토그래피(0 내지 3% 메탄올/CH₂Cl₂ 그래디언트)로 정제하여 XXVb (2.086 g, 57%)를 얻었다.

2a.2 중간체 XXVc (A=

; PG= Cbz; PG'= Boc)의 제조

디옥산/물 (500 mL, 5/1) 중의 VIIIc (36.1 g, 75.8 mmol), IIIa (28.5g, 68.89 mmol) 및 중탄산나트륨(17.36g, 206.7 mmol)의 교반된 용액을 질소로 10 분 동안 플러쉬(flush)한 후, PdCl₂(dppf) (5.04g, 6.889 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 15시간 동안 아르곤 하에서 80 ℃로 가열하였다. 반응물을 실온으로 냉각하고, 디클로로메탄(500 mL)으로 희석하여 브라인(2x300 mL)으로 세척하였다. 유기층을 MgS0₄로 건조하고, 여과 및 증발시켜서 검은색 기포를 얻었다. 혼합물을 EtOAc(300 mL) 중에서 교반하여, 검정색 침전을 여과한 후, 케이크를 다량의 EtOAc (200 mL)로 세척하였다. 헵탄(1.5 L)을 서서히 EtOAc-여액에 첨가하고 침전을 여과하여 XXVc(28.35 g, 60%)를 얻었다.

2a.3 중간체 XXVIIb (A=

; PG'= Boc)의 제조

탄산칼륨(334 mg, 2.42 mmol)을 XXVb (2.086 g, 3.054 mmol), Pd/C(10%, 0.5 g) 및 소량의 물을 함유하는 메탄올(40 mL) 용액에 첨가하였다. 반응물을 수소 분위기 하에 2.5시간 동안 정치하였다. 혼합물을 데칼라이트에서 여과하고 용매를 감압 하에서 제거한 후, 생성물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피 (그래디언트: 0-3%의 메탄올/CH₂Cl₂ 다음, 3-10%의 CH₂Cl₂ 메탄올/NH₃(7N))로 정제하여 XXVIIb (1.018 g, 61%)를 얻었다.

2a.4 중간체 XXVIb (A=

; PG= Boc)의 제조

탄산칼륨(4.8 g, 34.7 mmol, 0.9 equiv.)을 둥근바닥 플라스크(2 L) 중의 10% Pd/C (2 g), XXVc (26.35g, 38.6 mmol, 1.00 equiv.), 메탄올(800 mL) 및 물(5 mL)의 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 수소 분위기 하에서 밤새 교반하였다. 이후, 추가의 촉매(10% Pd/C, 2 g)를 첨가하고 반응 혼합물을 다시 수소 분위기 하에서 2시간 동안 교반하였다. 다음으로, 추가의 탄산칼륨(4.8 g, 34.7 mmol, 0.9 equiv.)과 촉매(10% Pd/C)(2 g)를 첨가하고 혼합물을 다시 수소 분위기 하에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 디칼라이트 스피드 플러스(dicalite speed plus)(규조토 여과 조제)로 여과하여 메탄올(2 x 50 mL)로 세척하였다. 용매를 증발시켜서 갈색 분말을 얻고, 디클로로메탄(400 mL)에 용해하여 물(2 x 200 mL)로 세척한 다음, 황산마그네슘으로 건조하고, 여과하여 증발시켜 건조하였다. 얻어진 정제되지 않은 물질(23 g)을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(그래디언트 용리액: 0-5% 메탄올의 디클로로메탄 용액 다음, 5-10% 메탄올(7N NH₃)의 디클로로메탄 용액)하여 밝은 갈색 분말의 XXVIb(13.85 g, 65%)를 얻었다.

실시예 2b - N- 메톡시카보닐 아미노산의 합성

2b.1 (S)-2-(메톡시카보닐아미노)-3-메틸부탄산의 합성

둥근바닥 플라스크(1 L)에 있는 L-발린 (20 g, 167.3 mmol)의 교반된 NaOH (1M, 167 mL) 수용액에 탄산나트륨(8.866 g, 83.6 mmol)을 첨가하였다. 플라스크를 얼음수조에서 0 ℃로 냉각하였다. 메틸 클로로포르메이트(17.4 g, 184 mmol)를 적가하고 반응 혼합물을 15시간 동안 교반하여 실온이 되게 하였다. 반응 혼합물을 에테르(3 x 200 mL)로 분리하였고, 수층을 둥근바닥 플라스크에 투입하여 얼음 수조에서 냉각하였다. 진한 HCl (aq)을 pH 2까지 적가하였다. 혼합물을 실온이 되게 하여 디클로로메탄 (3 x 200 mL)으로 추출하였다. 유기층을 모아서 건조(황산나트륨)하고, 고체를 여과에 의해 제거하였다. 여액의 용매를 감압 하에서 제거하여 희색 고체를 얻었다. 흰색 고체를 다시 진공에서 건조하였다(25.3 g, 86 %).

2b.2 ((S)-2-사이클로프로필-2-(메톡시카보닐아미노)아세트산의 합성

(S)-2-사이클로프로필-2-(메톡시카보닐아미노)아세트산을 L-발린 대신에 L-사이클로프로필글리신을 사용하여 N-메톡시카보닐-L-발린과 유사하게 합성하였다.

2b.3 ((2S,3S)-2-(메톡시카보닐아미노)-3-메틸펜탄산의 합성

(2S,3S)-2-(메톡시카보닐아미노)-3-메틸펜탄산을 L-발린 대신에 L-이소루이신을 사용하여 N-메톡시카보닐-L-발린과 유사하게 합성하였다.

2b.4 2-(메톡시카보닐아미노)-2-(테트라하이드로-2H-피란-4-일)아세트산

2-(메톡시카보닐아미노)-2-(테트라하이드로-2H-피란-4-일)아세트산을 L-발린 대신에 (S)-2-아미노-2-(테트라하이드로-2H-피란-4-일)아세트산을 사용하여 N-메톡시카보닐-L-발린과 유사하게 합성하였다.

2b.5 (2S,3R)-3-메톡시-2-(메톡시카보닐아미노)부탄산의 합성

(2S,3R)-3-메톡시-2-(메톡시카보닐아미노)부탄산을 L-발린 대신에 O-메틸-L-트레오닌을 사용하여 N-메톡시카보닐-L-발린과 유사하게 합성하였다. 디클로로메탄 추출을 3배 대신 10배로 수행하였다.

2b.6 (S)-2-(메톡시카보닐아미노)-4-메틸펜탄산의 합성

NaOH (1M, 2.6 mL) 수용액을 교반하면서 둥근바닥 플라스크(250 mL) 중의 L-루이신(4 g, 30.5 mmol)에 첨가하였다. 이 용액에 탄산나트륨 (1.62 g, 15.2 mmol)을 첨가하였다. 플라스크를 얼음 수조 내에서 0 ℃로 냉각하였다. 메틸클로로포르메이트(2.6 mL, 33.5 mmol)를 적가하고 반응 혼합물을 15시간 동안 교반하여 실온이 되게 하였다. 반응 혼합물을 에테르(3 x 50 mL)로 분리하고, 수층을 둥근바닥 플라스크에 투입하여 얼음 수조에서 냉각하였다. 진한 HCl (aq)을 pH 2까지 적가하였다. 반응 혼합물이 실온이 되게 하고, 2-Me-THF (3 x 50 mL)로 추출하였다. 유기층을 모아서, 건조하고(MgSO₄), 여과에 의해 고체를 제거한 다음, 여액의 용매를 감압 하에서 제거하였다. 화합물을 CH₂Cl₂에서 CH₂Cl₂/MeOH/아세트산 17/2/1의 그래디언트 용리액으로 실리카겔 크로마토그래피하여 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획을 모아서 용매를 진공으로 제거하여 N-메톡시카보닐-L-루이신(1.9 g, 32 %)을 얻었다.

2b.7 (S)-4-메톡시-2-(메톡시카보닐아미노)부탄산의 합성

Boc-0-메틸-L-호모세린-디사이클로헥실아민염(5 g, 12.1 mmol)에 HCl의 이소프로판올(5-6 N, 50 mL) 용액을 첨가하였다. 혼합물을 밤새 교반하였다. 휘발물질을 제거하고 잔류물을 진공에서 건조하였다. 얻어진 잔류물에 교반하면서 물(10 mL)과 NaOH (19 M, 2 mL)를 첨가하였다. 이 용액에 탄산나트륨 (2.89 g, 27.3 mmol)을 첨가하였다. 플라스크를 얼음 수조에서 0 ℃로 냉각하였다. 메틸 클로로포르메이트(2.17 mL, 27.3 mmol)를 적가하고, 반응 혼합물을 15시간 동안 교반하여 실온이 되게 하였다. 용매를 제거하고 잔류물을 HPLC (RP Vydac Denali C18 - 10 μm, 250g, 5cm; 이동상: 0.25% NH₄HC0₃ 수용액, MeOH + CH₃CN)로 정제하여, 목적하는 분획을 수집하고 용매를 제거하여, N-메톡시카보닐-O-메틸-L-호모세린(1.77 g, 76%)을 얻었다.

2b.8 (2S,3R)-3-하이드록시-2-(메톡시카보닐아미노)부탄산의 합성

NaOH(1 M, 167 mL) 수용액을 교반하면서 둥근바닥 플라스크(1 L) 중의 L-트레오닌(20 g, 30.5 mmol)에 첨가하였다. 이 용액에 탄산나트륨(9.8 g, 92.3 mmol)을 첨가하였다. 플라스크를 얼음 수조 내에서 0 ℃로 냉각하였다. 메틸클로로포르메이트(14.3 mL, 184.7 mmol)를 적가하고 반응 혼합물을 15시간 동안 교반하여 실온이 되게 하였다. 반응 혼합물을 CH₂Cl₂ (3 x 50 mL)로 세척하고, 수층을 둥근바닥 플라스크에 투입하여 얼음 수조에서 냉각하였다. 진한 HCl (aq)을 pH 2까지 적가하였다. 수용액을 실온이 되게 하고, 진공으로 물을 제거하였다. 잔류물을 MeOH/ CH₂Cl₂의 2:1 혼합물(150 mL)에 용해하여 여과하고 MeOH/CH₂Cl₂의 2:1 혼합물(50 mL)로 세척하였다. 여액을 농축하여 진공으로 40 ℃에서 건조하여 흰색 기포(29.1 g, 98 %)를 얻었다.

2b.9 (S)-2-사이클로펜틸-2-(메톡시카보닐아미노)아세트산의 합성

(S)-2-사이클로펜틸-2-(메톡시카보닐아미노)아세트산을 L-발린 대신에 (S)-2-아미노-2-사이클로펜틸아세트산을 사용하여 N-메톡시카보닐-L-발린과 유사하게 합성하였다.

2b.10 (2S,3R)-2-(메톡시카보닐아미노)-3-메틸펜탄산의 합성

(2S,3R)-2-(메톡시카보닐아미노)-3-메틸펜탄산을 L-발린 대신에 (2S,3R)-2-아미노-3-메틸펜탄산을 사용하여 N-메톡시카보닐-L-발린과 유사하게 합성하였다.

2b.11 (R)-2-(메톡시카보닐아미노)-2-페닐아세트산의 합성

(R)-2-아미노-2-페닐아세트산 (14 g, 92.6 mmol)의 수용액(250 mL)에 LiOH (14.8 g, 618.7 mmol)를 0 ℃에서 첨가하여 혼합물을 15분 동안 교반하였다. 이 용액에 메틸 클로로포르메이트(17.9 mL, 231.5 mmol)를 적가하고 혼합물을 2시간 동안 0 ℃에서 교반하였다. 혼합물을 진한 HCl로 pH 1로 산성화하였다. 혼합물을 EtOAc로 추출하고 유기층을 진공에서 농축하였다. 잔류물을 진공에서 밤새 건조하여 (R)-2-(메톡시카보닐아미노)-2-페닐아세트산 (11.8 g; 60.9 mmol)을 얻었다.

실시예 3 - 화학식 (I)의 화합물의 합성

3.1. 화합물 nr . 1의 제조

건조 피리딘(5 mL)을 화합물 XVIIIa (267 mg, ~0.49 mmol)에 첨가하고, 진공에서 용매를 제거한 후, 이것을 2회 이상 반복하였다. 이후, 건조 DMF(5 mL), DIPEA(0.845 mL, 4.91 mmol), HATU (466 mg, 1.23 mmol) 및 N-메톡시카보닐-L-발린 (215 mg, 1.23 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 2 시간 동안 실온에서 교반하였다. 같은 당량의 시료를 다시 첨가하고 혼합물을 추가로 2시간 동안 교반하였다. CH₂Cl₂(20 mL)를 첨가하고, 혼합물을 10 % 시트르산(20 ml)에 이어서 포화 NaHC0₃로 세척하였다. 유기층을 MgS0₄로 건조하고, 여과에 의해 고체를 제거하였다. 용매를 증발시키고 실리카겔 크로마토그래피(0-10% 메탄올/CH₂Cl₂)로 정제하여, 고체의 화합물 1(170 mg, 0.226 mmol)을 얻었다. 방법 A: Rt: 4.18 min. m/z=: 713.4 (M+1)+ Exact mass: 712.37; ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆): 12.99-11.63 (2H,s (br)), 7.88-7.44 (8H, m), 7.36-7.26 (2H, m), 5.26-5.16 (1H, m), 5.06-5.14 (1H, m), 4.14-4.04 (2H, m), 3.90-3.77 (4H, m), 3.55 (6H, s), 2.32-1.94 (10H, m), 1.00-0.79 (12H, m).

3.2 화합물 2 내지 4의 제조

화합물 2를 화합물 1에 대하여 보고된 방법에 따라 N-메톡시카보닐-L-발린 대신에 N-메톡시카보닐-O-메틸-L-트레오닌을 사용하여 합성하였다.

화합물 2. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆): 12.12 - 12.26 (1H, m), 11.69 - 11.83 (1H, s (br)), 7.33-7.86 (8H, m), 7.18-7.31 (2H, m), 5.15-5.25 (1H, m), 5.05-5.13 (1H, m), 4.25-4.38 (2H, m), 3.77-3.95 (4H, m), 3.55 (6H, s), 3.45-3.52 (2H, m), 3.20 (6H, s), 1.79-2.38 (8H, m), 1.14-1.06 (6H, m).

화합물 3을 화합물 1에 대하여 보고된 방법에 따라 중간체 XVIIIa 대신에 중간체 XVIIIb를 사용하여 제조하였다.

화합물 3. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆)δ ppm 8.34 (2 H, s), 8.21 (1 H, s), 8.19 (1 H, d, J=8.69 Hz), 8.06 - 8.11 (2 H, m), 8.00 (1 H, dd, J=8.88, 1.61 Hz), 7.88 - 7.96 (2 H, m), 7.86 (1 H, d, J=8.48 Hz), 7.32 (1 H, d, J=8.48 Hz), 7.34 (1 H, d, J=8.53 Hz), 5.27 (1 H, dd, J=8.17, 5.33 Hz), 5.17 (1 H, t, J=7.00 Hz), 4.15 (2 H, t, J=7.95 Hz), 3.84-3.96 (4 H, m), 3.56 (6 H, s), 2.38 - 2.47 (2 H, m), 1.95 - 2.30 (8 H, m), 0.86 (3 H, d, J=6.70 Hz), 0.85 (3 H, d, J=6.70 Hz), 0.81 (6 H, d, J=6.63 Hz).

화합물 3과 상응하는 HCl 염의 대체 제조

N-메톡시카보닐-L-발린 (3.09 g, 17.7 mmol, 2.1 equiv)을 디클로로메탄(300 mL)에 용해하였다. 트리에틸아민(11.7 mL, 84.1 mmol, 10 equiv)과 (1-시아노-2-에톡시-2-옥소에틸리덴아미노옥시)디메틸아미노-모폴리노-카베늄 헥사플루오로포스페이트(7.57 g, 17.7 mmol, 2.1 eq)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 5분 동안 교반한 후, XVIIIb를 첨가하였다(5 g, x.HCl이 4 HCl인 경우에 8.41 mmol). 30분 동안 교반을 계속하였다. HCl의 iPrOH (6N) 용액을 혼합물에 (pH = 2까지)첨가하고, 얻어진 혼합물을 5분 동안 교반하였다. 용액을 포화 탄산나트륨 수용액(2 x 200 mL)으로 세척하고 브라인(200 mL)으로 1회 세척하였다. 유기층을 분리하여 황산마그네슘에서 건조하고 여과하였다. 진공에서 용매를 제거한 후, 얻어진 잔류물을 다시 진공에서 건조하여, 오렌지색 분말(6.84 g)을 얻었다.

분말을 0 내지 10 % MeOH (7N NH₃)의 디클로로메탄 용액을 그래디언트 용리액으로 하여 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 기포 형태의 화합물 3 (2.81 g)을 얻었다.

화합물 3을 iPrOH (40 mL)에 용해하여 HCl(6N/iPrOH, 10 mL)을 첨가하였다. 휘발물질을 진공에서 제거하였다. 이후, iPrOH (30 mL)를 첨가하고, 혼합물을 가열환류하였다. 용액을 실온으로 냉각하여 실욘에서 4일 동안 교반하였다. tBuOMe (100 mL)를 이 용액에 첨가하여 흰색 침전을 얻은 다음, 여과하여 즉시 tBuOMe (3 x 10 mL)로 질소 분위기 하에서 세척하고 진공으로 40 ℃에서 건조하였다. 잔류물을 아세토니트릴과 혼합하고 증발시켜서 건조하였다(2x). 잔류물을 아세토니트릴(150 mL) 중에서 교반하고 혼합물을 10분 동안 초음파처리하였다. 침전물을 질소 분위기 하에서 여과하고 아세토니트릴(50 mL)로 2회 세척한 다음, 진공에서 40 ℃로 건조하여, 엷은 황색 분말(4 g)을 얻었다.

화합물 3의 HCl염:

C₄₂H₅₀N₈O₆.2 HCl.4H₂0에 대해 계산된 분석치: C 55.56, H 6.66, N 12.34. 실험치: C 55.00, H 6.60, N 12.30

화합물 4를 화합물 2의 합성에 대하여 보고된 방법에 따라 중간체 XVIIIa 대신에 중간체 XVIIIb를 사용하여 제조하였다.

3.3 화합물 9, 11, 13, 16, 17, 18의 제조

3.3.1 화합물 9의 제조

3.3.1.1 중간체 XIII'b 의 제조

XIII'a (5.3 g, 14.6 mmol)의 CH₂Cl₂(10 mL) 용액에 0 ℃에서 TFA (25 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 실온으로 가온하여 30분 동안 교반하였다. 휘발물질을 제거하고, CH₂Cl₂(10 mL)와 DIPEA (15 mL)를 얻어진 (S)-4-요오도-2-(피롤리딘-2-일)-1H-이미다졸의 TFA염에 첨가하였다. 이 혼합물의 절반을 하기에서 사용하였다. 다른 플라스크에서, (S)-2-(메톡시카보닐아미노)-3-메틸부탄산(1.77 g, 10.12 mmol)과 HATU (3.57 g, 9.40 mmol)에 건조 DMF (5 mL)를 첨가하였다. DIPEA (5 mL, 28.7 mmol)를 첨가한 다음, 위에서 제조한 (S)-4-요오도-2-(피롤리딘-2-일)-1H-이미다졸의 혼합물 절반을 첨가하였다.

혼합물을 밤새 교반하였다. CH₂Cl₂를 첨가하고 혼합물을 브라인, 10 % AcOH 및 포화 NaHC0₃로 세척하였다. MgS0₄로 건조하고 여과한 후, 용매를 제거하였다. 혼합물을 CH₂Cl₂ 내지 CH₂Cl₂/MeOH 95/5를 그래디언트 용리액으로 하여 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획을 모아서 용매를 제거하였다. 얻어진 잔류물을 CH₂Cl₂에 용해하고 10 % 시트르산으로 세척하였다. 물층을 포화 NaHC0₃로 주의깊게 중화하고, 다시 CH₂Cl₂로 추출하였다. 유기층을 Na₂S0₄로 건조하고, 여과한 후, 용매를 제거하였다. 얻어진 XIII'b(790 mg, 26 %)를 다음 반응에 그대로 사용하였다.

3.3.1.2 중간체 XXIb (A=

; PG = Boc ; R' =

)의 제조

XVIb(867 mg, 1.61 mmol), XIII'b (790 mg, 1.88 mmol), 중탄산나트륨(316 mg, 3.76 mmol) 및 Pd(dppf)Cl₂ (138 mg, 0.188 mmol)를 THF/H₂0 (2.5 mL, 4/l)에 용해하여 마이크로웨이브로 60분 동안 100 ℃에서 가열하였다. 반응 혼합물을 디칼라이트로 여과하고, 휘발물질을 회전식 증발에 의해 여액에서 제거한 다음, 잔류물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피 (그래디언트 용리액: CH₂Cl₂ 내지 CH₂Cl₂/MeOH 9/1)로 정제하였다. XXIb를 함유하는 분획을 모아서 감압 하에 용매를 제거하여, 회백색 분말의 XXIb(580 mg, 44 %)를 얻었다.

선택적으로, XXIb의 합성에서 (S)-2-(메톡시카보닐아미노)-3-메틸-부탄산이 XXIc의 합성에서 사용된 (2S,3S)-2-(메톡시카보닐아미노)-3-메틸펜탄산 대신에 사용된 것을 제외하고, 화합물 XXVIb로부터 화합물 XXIc의 합성에서 기술된 것과 유사하게 화합물 XXIb를 화합물 XXVIb에서 출발하여 얻을 수 있다.

3.3.1.3 화합물 9의 제조

XXIb (580 mg, 0.822 mmol)의 CH₂Cl₂ (10 mL) 용액에, HCl의 iPrOH 용액을 첨가하였다(5-6 N, 3 mL). 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 휘발물질을 제거하고 Hunigs 염기 (0.53 mL, 4 eq)의 DMF (5 mL) 용액을 첨가하였다. 이 혼합물을 미리 혼합된(10 분) HATU(469 mg, 1.23 mmol, 1.5 eq), (2S,3R)-3-메톡시-2-(메톡시카보닐아미노)부탄산 (318 mg, 1.64 mmol, 2 eq) 및 Hunigs 염기 (0.15 mL, 1.1 eq)의 DMF (5 mL) 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 30분 동안 교반하였다. 15방울의 conc. HCl을 첨가하고, 15분 후에 휘발물질을 회전식 증발에 의해 제거하였다. 잔류물을 CH₂Cl₂ 내지 9/1 CH₂Cl₂/MeOH (7 N NH3)를 그래디언트 용리액으로 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획을 모아서 용매를 감압 하에 제거하여 흰색 분말의 생성물 9(121 mg, 18 %)를 얻었다.

3.3.1.4 화합물 13의 제조

화합물 13은 (2S,3R)-3-메톡시-2-(메톡시카보닐아미노)부탄산 대신에 (2S, 3S)-2-(메톡시카보닐아미노)-3-메틸펜탄산을 사용하여 XXIb의 화합물 9로의 전환에서와 유사하게 합성할 수 있다.

3.3.2 화합물 11의 제조

3.3.2.1 중간체 XIXb (A=

; PG = Boc ; R=

)의 제조

HATU (776 mg, 2.04 mmol), DIPEA (0.48 mL, 2.78 mmol) 및 (S)-2-(메톡시- 카보닐아미노)-3-메틸부탄산 (357 mg, 2.04 mmol)을 건조 DMF (10 mL)에 용해하여 실온에서 5분 동안 교반하였다. XXVIIb (1.018 g, 1.855 mmol)를 첨가하고 반응물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 디클로로메탄 (100 mL)을 첨가하고 혼합물을 NaHC0₃ 포화용액 (3 x 100 mL)으로 세척하였다. 유기층을 MgSO₄에서 건조하고 여과한 다음, 용매를 증발시켰다. 잔류물을 다음 반응에서 그대로 사용하였다.

3.3.2.2 중간체 XXb (A=

; R=

)의 제조

XIXb(1.309 g, 1.855 mmol)를 CH₂Cl₂(10 mL)에 용해하고 HC1의 iPrOH (5-6 N, 15 mL)용액을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 35분 동안 교반하였다. tBuOMe (50 mL)를 첨가하고 슬러리를 실온에서 30분 동안 교반하였다. 여과된 고체를 tBuOMe (50 mL)로 세정하고 진공 오븐에서 40 ℃로 건조하여 XXb (1.137 g)를 얻었다.

3.3.2.3 화합물 11의 제조

HATU (858 mg, 2.26 mmol), DIPEA (0.808 mL, 4.69 mmol) 및 (2S,3R)-3-메톡시-2-메톡시카보닐아미노)부탄산 (432 mg, 2.26 mmol)을 건조 DMF (10 mL)에 용해하여 실온에서 5분 동안 교반하였다. XXb (1.137 g, 1.59 mmol)를 첨가하고 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반한 후, 더 많은 DIPEA (1.5 eq)를 첨가하여 혼합물을 1시간 이상 교반하였다. 디클로로메탄(100 mL)을 첨가하고, 혼합물을 NaHC0₃ 포화용액 (3 x 100 mL)으로 세척하여, 유기층을 MgS0₄로 건조하고 여과한 다음, 용매를 증발시키고 0 내지 5% 메탄올의 디클로로메탄 용액으로 그래디언트하여 컬럼에서 정제하여 화합물 11 (585 mg, 47%)을 얻었다.

3.3.3 화합물 16과 17의 제조

3.3.3.1 중간체 XXIc (A=

; PG = Boc ; R' =

)의 제조

100 mL 둥근바닥 플라스크 중의 (2S,3S)-2-(메톡시카보닐아미노)-3-메틸펜탄산(2.39 g, 12.6 mmol, 1.05 equiv.)에 디메틸포름아미드(60 mL), 트리에틸아민 (3.34 mL, 24.1 mmol, 2.00 equiv.) 및 HATU (4.80 g, 12.6 mmol, 1.05 equiv.)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 5분 동안 교반하고, XXVIb (6.60 g, 12.0 mmol, 1.00 equiv.)를 첨가하였다. 혼합물을 1분 동안 초음파처리하여 모두 용해시켰다. 반응 혼합물을 실온에서 20분 동안 교반하였다. 포화 Na₂C0₃ 수용액(20 mL)을 혼합물에 첨가하였다(pH 페이퍼로 pH=11 확인). 화합물을 수층으로부터 디클로로메탄 (5 x 150 mL)으로 추출하고 모아진 유기층을 포화 Na₂C0₃ 수용액(150 mL)으로 세척하여, 황산마그네슘으로 건조하고 여과하여 여액을 증발시켜서 건조하여 XXIc (9.3 g)를 수득하여 다음 단계에 그대로 사용하였다.

3.3.3.2 중간체 XXIIc (A=

; R' =

)의 제조

XXIc (8.66 g, 12.0 mmol, 1.0 equiv.)를 디클로로메탄(40 mL)에 용해하고 5-6 N HCl의 이소프로판올(40 mL, 200 mmol, 17 equiv.) 용액을 첨가하였다. 반응 혼합물을 밤새 실온에서 교반하였다. tBuOMe (400 mL)를 이 용액에 첨가하고 얻어진 슬러리를 실온에서 30분 동안 교반하였다. 여과된 고체를 tBuOMe (2x 100 mL) 및 디클로로메탄(100 mL)으로 세정하고 진공 하에 밤새 건조하여 XXIIc (8.35 g)를 얻었다.

3.3.3.3 화합물 16의 제조

둥근바닥 플라스크(500 mL) 내의 (S)-2-(메톡시카보닐아미노)-3-메틸부탄산 (481 mg, 2.74 mmol)에, 디클로로메탄(300 mL), 디이소프로필에틸아민 (3.7 mL, 21 mmol) 및 HATU (1.04 g, 2.74 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 5분 동안 교반하여 XXIIc (2.00 g, 2.74 mmol, x HCl이 3 HCl이면, 1.0 equiv.)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 2.5시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 Na₂CO₃ 수용액 (2 x 100 mL), 브라인(100 mL)으로 세척하고, MgS0₄에서 건조하고 여과하여, 여액을 건조할 때까지 증발시켜서 갈색 잔류물을 얻었다. 잔류물을 0-5% MeOH (7 N NH₃)의 DCM을 그래디언트 용리액으로 실리카겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 흰색 분말(1.55 g)을 얻었다. 분말을 수성 HCl (1 M) 및 메탄올(15 mL)과 혼합하고 다시 포화 중탄산나트륨 수용액으로 중화하였다. 혼합물을 DCM (400 mL)으로 추출하였다. 유기층을 분리하고 물(4 x 150 mL)로 세척하여; 황산마그네슘으로 건조하고 진공에서 건조 시까지 증발시켰다. 40 ℃의 진공 오븐에서 주간 동안 건조하여 화합물 16(1.49 g)을 흰색 분말로 얻었다.

화합물 XXIIc에서 HCl 카운트는 측정되지 않았다. 이 방법은 위에 기재한 양으로 수행되었다. x HCl이 상기 방법에서 3 HCl과 같을 때, 1.0 당량의 HATU와 (S)-2-(메톡시카보닐아미노)-3-메틸부탄산 및 ~8 당량 디이소프로필에틸아민이 사용되었다. x HCl이 4 HCl인 이론적 경우에서는, 1.05 당량의 HATU와 S)-2-(메톡시카보닐아미노)-3-메틸부탄산 및 ~8당량 디이소프로필에틸아민이 사용되었다.

3.3.3.4 화합물 17의 제조

둥근바닥 플라스크 (500 mL) 내의 (2S,3R)-3-메톡시-2-(메톡시카보닐아미노)부탄산 (524 mg, 2.74 mmol)에, 디클로로메탄(300 mL), 디이소프로필에틸아민 (3.7 mL, 21 mmol) 및 HATU (1.04 g, 2.74 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 5분 동안 교반하고 XXIIc (2.00 g, 2.74 mmol, x HCl이 3 HCl이면, 1.0 equiv.)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 2.5시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 Na₂CO₃ 수용액 (2 x 100 mL), 브라인(100 mL)으로 세척하고, MgS0₄에서 건조하고 여과하여, 여액을 건조할 때까지 증발시켜서 갈색 잔류물을 얻었다. 잔류물을 0-5% MeOH (7 N NH₃)의 CH₂Cl₂를 그래디언트 용리액으로 실리카겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 흰색 분말의 화합물 17(1.24 g)을 얻었다.

화합물 XXIIc에서 HCl 카운트는 측정되지 않았다. 이 방법은 위에 기재한 양으로 수행되었다. x HCl이 상기 방법에서 3 HCl과 같을 때, 1.0 당량의 HATU와 (2S,3R)-3-메톡시-2-(메톡시카보닐아미노)부탄산 및 ~8 당량 디이소프로필에틸아민이 사용되었다. x HCl이 4 HCl인 이론적 경우에서는, 1.05 당량의 HATU와 (2S,3R)-3-메톡시-2-(메톡시카보닐아미노)부탄산 및 ~8당량 디이소프로필에틸아민이 사용되었다.

화합물 17의 .2 HCl .4 H ₂ O 염의 제조

화합물 17 (315 mg, 0.39 mmol)을 HCl/iPrOH (6N HC1) (10 mL)에 용해하여 휘발물질을 제거하였다. 염을 실온에서 아세토니트릴(6 mL) 중에서 밤새 개방 플라스크 내에서 교반하였다. 혼합물을 건조 시까지 증발시켰다. 남아있는 물을 30 ℃, 감압 하에 아세토니트릴(4 x 40 mL)의 첨가와 증발을 반복하여 공비적으로 제거하였다. 이후, 분말을 폐쇄된 둥근바닥 플라스크 내의 아세토니트릴 중에서 밤새 실온으로 교반하여 여과하고, 즉시 진공 하에 밤새 건조하여 흰색 분말(263 mg)을 얻었다. 얻어진 고체는 원소분석, Anion Ion 크로마토그래피 및 H₂0 적정에 의해 C₄₃H₅₂N₈O₇.2 HCl.4H₂0를 가지는 것으로 분석되었다.

C₄₃H₅₂N₈O₇.2HCl.4H₂0에 대하여 계산된 분석치: C 55.07, H 6.66 , N 11.95. 실험치: C 55.04, H 6.57, N 12.09 Calc.4 H₂0: 7.68, 실험치: 7.96; 이온 크로마토그래피(anion) Calc: 2 CI^- 7.56 실험치: 7.75

화합물 17의 . H ₂ SO ₄ 염의 제조

화합물 17 (15.0 g, 0.0189 mol)과 에탄올(75 mL)을 N₂ 하의 3구 플라스크에 충전하였다. 혼합물을 65-70 ℃로 가열하고 30분 동안 교반하였다. 황산(2.0 g, 0.0204 mol)의 에탄올(75 mL) 용액을 1시간 동안 65-70 ℃에서 적가하였다. 혼합물을 2 내지 3 시간 동안 N₂ 하에서 교반하였다. 이후, 혼합물을 25 - 30 ℃로 냉각하고 다시 1 내지 2시간 동안 교반하였다. 얻어진 현탁액을 여과하고 50-60 ℃에서 적어도 12시간 동안 진공건조하여 16 g (94.8%)의 흰색 고체를 얻었으며, 화합물 17의 .H₂SO₄염인 것으로 분석되었다.

이 .H₂SO₄염의 수용해도(Aqueous solubility), mg/mL는 pH 1.2에서 32.23; pH 2.2에서 13.34, pH 4에서 0.26; pH 7.4에서 0.001; pH 12에서 0.02였다.

3.3.4 화합물 18의 제조

3.3.4.1 중간체 XXId (A=

; PG = Boc ; R' =

)의 제조

XXVIb (3.33 g, 6.07 mmol)의 건조 DMF (35 mL) 용액에, DIPEA (1.57 mL, 9.104 mmol) 및 N-(메톡시카보닐)-0-메틸-L-트레오닌 (1.29 g, 6.68 mmol)을 첨가하였다. 이것을 5분 동안 교반하고, HATU (2.53 g, 6.68 mmol)를 첨가한 다음, 반응물을 30분 동안 실온에서 교반하였다. 반응물을 디클로로메탄(100 mL)으로 희석하고 NaHC0₃ 포화용액(3 x 100 mL)으로 세척하였다. 유기층을 MgSO₄로 건조하고 여과하여 증발시켜서, 얻어진 화합물 XXId를 그대로 다음 단계에 사용하였다.

3.3.4.2 중간체 XXIId (A=

; R' =

)의 제조

XXId (4.38 g, 6.07 mmol)의 디클로로메탄(40 mL) 용액에 5-6N HCl의 이소프로판올(50 mL) 용액을 첨가하여 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. tBuOMe (100 mL)를 첨가하고 슬러리를 실온에서 30분 동안 교반하였다. 여과된 고체를tBuOMe(50 mL)로 세정하고 여액에 다시 tBuOMe(100 mL)를 첨가하였다. 새로운 침전이 형성되면, 여과하여 tBuOMe로 세척하였다. 모든 침전물을 모아서 밤새 진공 하에 두었다. 생성물 XXIId를 흰색 분말(3.61 g)로 얻어서 다음 단계에 그대로 사용하였다.

3.3.4.3 화합물 18의 제조

HATU (1.97 g, 5.189 mmol), DIPEA (4.26 mL, 24.71 mmol) 및 N-메톡시카보닐-L-이소루이신(981.8 mg, 5.189 mmol)을 건조 DMF(10 mL)에 용해하고 5분 동안 실온에서 교반한 후, XXIId (3.61 g, x HCl이 3 HCl이면 4.94 mmol)를 첨가하였다. 실온에서 1시간 후에, 진한 HCl(3 mL)을 첨가하고 이것을 5분 동안 교반하였다. 반응물을 Na₂C0₃로 중화하고, 디클로로메탄(50 mL)으로 희석하여 물(2 x 100 mL)로 세척하였다. 유기층을 MgS0₄에서 건조하고, 감압 하에 농축한 다음, 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(메탄올의 CH₂Cl₂ 용액)로 정제하여 화합물 18 (2.17 g)을 얻었다.

화합물 18의 .2 HCl .4 H ₂ O 염의 제조

화합물 18(485 mg; 0.611 mmol)을 iPrOH (15 mL, 6N HCl)에 용해하고 휘발물질을 진공에서 제거하였다. 아세토니트릴(10 mL)을 첨가하고 혼합물을 40 ℃에서 10분 동안 가열하여 점액성 침전물을 얻었다. 물(0.4 mL)을 첨가하여 무색의 용액을 얻었다. 아세토니트릴(15 mL)을 적가하여 점액성 침전물을 얻었다. 용액의 일부(~5 mL)를 40 ℃에서 증발시켜서 균질 용액을 얻었다. 다시, 아세토니트릴(20 mL)을 첨가하였고 침전물은 형성되지 않았다. 휘발물질을 진공에서 제거하였다. 남아있는 물을 30 ℃, 감압 하에 아세토니트릴(4 x 40 mL)의 첨가와 증발을 반복하여 공비적으로 제거하였다. 얻어진 분말을 폐쇄된 둥근바닥 플라스크 내의 아세토니트릴 중에서 밤새 실온으로 교반하여 여과하고, 즉시 진공 하에 밤새 건조하여 약간 황색의 분말(365 mg)을 얻었다.

얻어진 고체는 원소분석, Anion Ion 크로마토그래피 및 H₂0 적정에 의해 C₄₃H₅₂N₈O₇.2 HCl.4H₂0를 가지는 것으로 분석되었다.

C₄₃H₅₂N₈O₇.2 HCl.4H₂0에 대하여 계산된 분석치: C 55.07, H 6.66 , N 11.95. 실험치: C 54.54, H 6.54, N 12.18 Calc.4 H₂0: 7.68, 실험치: 7.55; 이온 크로마토그래피(anion) Calc: 2 CI^- 7.56 실험치: 7.36

3.4 화합물 5 내지 8, 10, 12, 14, 15, 19, 20, 21의 제조

3.4.1 화합물 5의 합성

HATU (268 mg, 0.71 mmol), DIPEA (0.334 mL, 2 mmol), XVIIIb (200 mg, x HCl이 4 HCl이면 0.34 mmol) 및 (S)-2-사이클로프로필-2-(메톡시카보닐아미노)아세트산(145 mg, 0.84 mmol)을 건조 DMF (5 mL)에 혼합하였다. 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하였다. CH₂Cl₂를 첨가하고 혼합물을 포화 NaHC0₃로 2회 세척하였다. 유기층을 MgS0₄로 건조하고 여과한 후, 용매를 진공에서 제거하였다. 혼합물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(그래디언트 용리액: 0-5% MeOH의 CH₂Cl₂ 용액)로 정제하여 화합물 5(100 mg, 38%)를 얻었다.

3.4.2 화합물 6 내지 8, 10, 12, 14, 15, 19, 20, 21의 합성

화합물 6은 (S)-2-사이클로프로필-2-(메톡시카보닐아미노)아세트산 대신에 (2S,3R)-3-하이드록시-2-(메톡시카보닐아미노)부탄산을 사용하여 화합물 5에 대하여 보고된 방법에 따라 합성할 수 있다.

화합물 7은 (S)-2-사이클로프로필-2-(메톡시카보닐아미노)아세트산 대신에 (S)-2-(메톡시카보닐아미노)-4-메틸펜탄산을 사용하여 화합물 5에 대하여 보고된 방법에 따라 합성할 수 있다.

화합물 8은 (S)-2-사이클로프로필-2-(메톡시카보닐아미노)아세트산 대신에 (2S,3S)-2-(메톡시카보닐아미노)-3-메틸펜탄산을 사용하여 화합물 5에 대하여 보고된 방법에 따라 합성할 수 있다.

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ ppm 0.82 - 0.94 (m, 12 H), 1.04 - 1.28 (m, 2 H), 1.41 -1.62 (m, 2 H), 1.72 - 1.86 (m, 2 H), 2.12 - 2.45 (m, 6 H), 2.53 - 2.73 (m, 2 H), 3.66 (s, 6 H), 3.82 - 4.00 (m, 2 H), 4.13 - 4.23 (m, 2 H), 4.24-4.31 (m, 2 H), 5.25-5.31 (m, 1 H), 5.34-5.41 (m, 1 H), 7.84 - 7.91 (m, 2 H), 7.94 - 8.05 (m, 3 H), 8.07 - 8.17 (m, 3 H), 8.25-8.33 (m, 2 H)

화합물 10은 (S)-2-사이클로프로필-2-(메톡시카보닐아미노)아세트산 대신에 (S)-4-메톡시-2-(메톡시카보닐아미노)부탄산을 사용하여 화합물 5에 대하여 보고된 방법에 따라 합성할 수 있다.

화합물 12는 (S)-2-사이클로프로필-2-(메톡시카보닐아미노)아세트산 대신에 2-(메톡시카보닐아미노)-2-(테트라하이드로-2H-피란-4-일)아세트산을 사용하여 화합물 5에 대하여 보고된 방법에 따라 합성할 수 있다.

화합물 14는 (S)-2-사이클로프로필-2-(메톡시카보닐아미노)아세트산 대신에 (R)-2-(메톡시카보닐아미노)-2-페닐아세트산을 사용하여 화합물 5에 대하여 보고된 방법에 따라 합성할 수 있다.

화합물 15는 (S)-2-사이클로프로필-2-(메톡시카보닐아미노)아세트산 대신에 (S)-2-사이클로펜틸-2-(메톡시카보닐아미노)아세트산을 사용하여 화합물 5에 대하여 보고된 방법에 따라 합성할 수 있다.

화합물 19는 (S)-2-사이클로프로필-2-(메톡시카보닐아미노)아세트산 대신에 (2S,3R)-2-(메톡시카보닐아미노)-3-메틸펜탄산을 사용하여 화합물 5에 대하여 보고된 방법에 따라 합성할 수 있다.

화합물 20과 21은 상응하는 중간체 (S,R)-XXVc는 (S,S)-XXVc가 (S)-IIIa와 (S)-VIIIc로부터 합성되는 것과 대조적으로 화합물 (S)-IIIa와 (R)-VIIIc에서 출발하여 합성되는 것을 제외하고, 화합물 17 및 18 각각의 합성에서 예시된 것과 유사한 방법에 따라 합성할 수 있다.

모든 화합물들은 LC/MS에 의해 특성화되었다.

방법 A: 액체 크로마토그래피: Waters Alliance 2695, UV 검출기: Waters 996 PDA, 범위:210-400 nm; 중량 검출기: Waters ZQ, 이온원(ion source): ES+, ES- 사용 컬럼: SunFire C18 3.5μ 4.6x100 mm 이동상 A: lOmM NH₄OOCH+ 0.1% HCOOH /H₂0; 이동상 B: CH₃OH; 컬럼 온도: 50 ℃; 유속: 1.5 mL/분 그래디언트 시간(분) [%A/%B]0 [65/35] 내지 7[5/95] 내지 9.6[5/95] 내지 9.8[65/35] 내지 12[65/35]

방법 B: PDA 검출기가 구비된 Waters Acquity UPLC (범위 210-400 nm) 및 Waters SQD, 듀얼 모드 이온원 ES+/-. 사용된 컬럼: Halo C18, 2.7μ, 2.1 x 50 mm, 50 ℃로 유지. 95% 수성 포름산(0.1%)/5% 아세토니트릴 내지 100% 아세토니트릴의 그래디언트를 1.5분 동안 램프하고, 0.6분 동안 유지한 다음, 100% 수성 포름산(0.1%)으로 0.5분 동안 리턴하였다. 유속은 0.6 mL/분이었다.

표 1a - 화학식 (I)의 화합물

벤즈이미다졸 그룹에 결합된 피롤리딘 고리의 질소에 이웃한 입체 탄소 원자는 표 1a의 모든 화합물에 대하여 "S" 구조를 가진다. 이미다졸 그룹에 결합된 피롤리딘 고리의 질소에 이웃한 입체 탄소 원자는 표 1a의 모든 화합물에 대하여 "S" 구조를 가진다.

표 1a와 1b에서, Z 및 Z'의 "*"는 결합위치를 나타낸다. 예를 들면, 표 1a의 화합물 2에서 Z가

인 경우

가 생성된다.

표 1b - 화학식 (I)의 다른 화합물

실시예 4 - 화학식 (I) 화합물의 항 HCV 활성

리플리콘 에세이

화학식 (I)의 화합물을 HCV 리플리콘에서 저해 활성을 실험하였다. 세포 에세이는 복수 타겟 스크리닝 전략에서 Lohmann et al. (Science (1999) 285: 110-113; Journal of Virology (2003) 77: 3007-3019)이 기술하고, Krieger et al. (Journal of Virology (2001) 75: 4614-4624), 및 유전자형 1b에 대한 Lohmann et al. (Journal of Virology (2003) 77: 3007-3019)과 유전자형 1a에 대한 Yi et al. (Journal of Virology (2004) 78: 7904-7915)에 의해 변성이 기술된 비시스트론(bicistronic) 발현 구조물을 기초로 한다.

안정한 형질감염

방법은 다음과 같다. 에세이에서는 안정하게 형질감염된 세포주 Huh-7 luc/neo(이후 Huh-Luc로 칭해짐)를 이용하였다. 이 세포주는 리포터 부분(FfL-루시퍼라제)가 선행하는, 뇌심근염 바이러스(EMCV)의 내부 리보솜 진입 부위(IRES)로부터 번역된 HCV 1b형의 야생형 NS3-NS5B 영역과, 선택성 마커 부분(neoR, 네오마이신 포스포트랜스퍼라제)을 포함하는 비시스트론 발현 구조물을 코딩하는 RNA를 보유한다. 구조물은 HCV 1b형으로부터의 5' 및 3' NTR(비번역 영역)이 측면에 있다. G418(neoR)의 존재 하에 리플리콘 세포의 연속 배양은 HCV RNA 복제에 좌우된다. 자율적으로 및 고 수준으로, 특히 루시퍼라제를 코딩하는, HCV RNA를 복제하는 안정하게 형질감염된 리플리콘 세포를 항바이러스 화합물을 스크리닝하는데 사용하였다.

리플리콘 세포를 다양한 농도로 첨가된 시험 및 대조 화합물 존재 하의 384 웰 플레이트에 플레이팅하였다. 3일간 배양한 후, 루시퍼라제 활성을 분석하여(표준 루시퍼라제 분석 기질 및 시약과 Perkin Elmer ViewLuxTM ultraHTS 마이크로플레이트 이미저를 사용함) HCV 복제를 측정하였다. 대조 배양물에서 리플리콘 세포는 저해제의 부재하에 루시퍼라제를 고 발현하였다. 화합물의 저해 활성을 Huh-Luc 세포 상에서 모니터하여, 각 시험 화합물에 대한 용량-반응 곡선을 작성하였다. 그 후, EC₅₀ 값을 계산하였는데, 이 값은 검출된 루시퍼라제 활성 수준, 또는 더욱 구체적으로는, 유전적으로 연결된 HCV 리플리콘 RNA의 복제능을 50%까지 감소시키는데 필요한 화합물의 양을 나타낸다. 표 2는 안정하게 형질감염된 세포주에서 위에서 제공된 실시예의 화합물들에 대하여 얻어진 리플리콘 결과를 나타낸다(EC₅₀ 1b (안정)).

화학식 (I)의 화합물이 리플리콘 에세이에서 1회 이상 시험되는 경우, 모든 시험 결과의 평균을 표 2에 기재하였다.

일시적 형질감염

일시적 셋업에서, Huh-7 루네트(lunet) 간암 세포주를 비시스트론 발현 구조물을 코딩하는 자율 복제 RNA로 일시적 형질감염하였다. 이 구조물은 HCV (유전자형 1a H77 또는 1b Con1)의 NS3-NS5B 서브게놈 영역 앞에 반딧불이 루시퍼라제 리포터 유전자를 포함한다. HCV 서브게놈 영역의 번역은 뇌심근염 바이러스의 내부 리보솜 진입 부위에 의해 매개된다. 구조물은 또한 HCV (유전자형 1a H77 또는 1b Con1, 각각)의 5'과 3' 비번역 영역이 측면에 있어서 RNA의 복제가 가능하다.

야생형 구조물 이외에, 부위 특이적 돌연변이가 비구조 단백질 5A (NS5A)를 코딩하는 유전자에서 일시적 HCV 유전자형 1b 리플리콘에 도입되었다. 보다 구체적으로, NS5A의 아미노산 잔기 28, 30, 31 및 93이 각각 변성되었다.

세포를 다양한 농도로 첨가된 시험 및 대조 화합물 존재 하의 384 웰 플레이트에 플레이팅하였다. 2일간 배양한 후, 루시퍼라제 활성을 분석하여(표준 루시퍼라제 분석 기질 및 시약과 Perkin Elmer ViewLuxTM ultraHTS 마이크로플레이트 이미저를 사용함) HCV 서브게놈 리플리콘 RNA의 복제를 측정하였다. 대조 배양물 중의 HCV 서브게놈 리플리콘을 포함하는 세포는 저해제의 부재 하에서 루시퍼라제의 높은 발현을 나타내었다. 화합물의 저해 활성을 모니터하여, 각 시험 화합물에 대한 용량-반응 곡선을 작성하였다. 이 후, EC₅₀ 값을 계산하였으며, 이 값은 검출된 루시퍼라제 활성 수준, 또는 더욱 구체적으로는, 유전적으로 연결된 HCV 서브게놈 RNA의 복제능을 50%까지 감소시키는데 필요한 화합물의 양을 나타낸다.

표 3은 유전자형 1a 및 1b의 일시적 형질감염 세포주에서 위에서 제공된 실시예의 화합물들에 대하여 얻어진 리플리콘 결과를 나타낸다(EC₅₀ 1a (트랜지언트) 및 EC₅₀ 1b (트랜지언트), 각각). 표 4는 일시적으로 형질감염된 세포주에서 위에서 제공된 실시예의 화합물들에 대하여 얻어진 1b 내의 NS5A 돌연변이에 대한 EC₅₀ 값로서의 리플리콘 결과를 나타낸다.

카운터스크린( Counterscreen )

카운터스크린 세포주는 인간 거대세포 바이러스 주요 급속초기(immediate-early) 프로모터-Luc 구조물을 함유하는 Huh-7 간암 세포주(Huh7-CMV-Luc)와 긴 터미널 리피트-Luc 리포터를 함유하는 MT4 T-세포주(MT4-LTR-Luc)를 포함한다. 표 3은 위에 제공된 실시예의 화합물들에 대하여 얻어진 카운터스크린 결과를 나타낸다.

화학식 (I)의 화합물이 일시적 리플리콘 에세이에서 1회 이상 시험되는 경우, 모든 시험 결과의 평균을 표 3에 기재하였다.

실시예 5 - 단일 경구투여 I 후 약동학 분석

화합물을 PEG400의 용액으로 수컷 Sprague-Dawley 래트에게 10 mg/kg의 용량으로 경구투여하였다. 투여 후, 일련의 시점에서 동물들을 치사하여 간 샘플을 수집하였다. 모든 샘플들은 정격화된 연구용 LC-MS/MS 방법으로 분석하여 시험 화합물들의 간내 농도를 측정하였다. lin/log 사다리꼴 공식을 사용하는 비구분(non-compartmental) 분석을 WinNonlin™ Professional (버젼 5.2.1)을 사용하여 수행하였다. 결과를 표 5에 요약하였다.

실시예 6 : 저해제 조합물 시험

특정 구체예에서, 표 2의 3개 화합물을, 예를 들면 TMC435350, MK-7009, ITMN-191, 또는 폴리머라제 저해제 (뉴클레오시드계 저해제: 화합물 A 및 PSI-6130; 비뉴클레오시드계 저해제: 화합물 B) 같은 C형 간염 바이러스의 복제를 억제하는 화합물과 조합하였다. 이 실험은 하나의 약물은 수평으로, 다른 하나는 수직으로 안정하게 형질감염된 HCV 1b 리플리콘을 함유하는 Huh7-Luc 세포에서 적정하는 "체커보드(checkerboard)" 모티브에서 셋업되었다. 각각 2가지 방법의 조합을 적어도 3회 수행하고 MacSynergy™ II 소프트웨어로 분석하여 시너지/길항작용 부피 백분율(nM²%로 표시)을 얻었다.

MacSynergy™ II에서 첨가물 상호작용의 이론적 계산은 각각의 개별 화합물의 용량-반응 곡선에서 유도되었다. 계산된 첨가제 표면을 실험적 표면에서 감산하여 시너지 표면을 얻었다. 첨가제 상호작용은 0%의 수평면을 나타내었다. 0% 평면 이상의 피크는 시너지를 나타내며, 0% 평면 이하의 강하는 길항작용으로 지칭되었다. 실험적 용량-반응 표면에 대한 95% 컨피던스 간격을 계산하여 시너지 또는 길항작용의 통계적 유의성을 평가하였다.

조합 시 MacSynergyTM II로 얻어진 부피를 표 6에 기재하였다. Bliss 인디펜던스에 대한 95% 컨피던스 인벨로프에서 유도된, 시험된 조합물에 대한 시너지 부피 범위, 상승적이고 Bliss 독립적으로 측정된 스팬 부피 범위를 고려하면, 시험된 조합물은 첨가물이 상승작용하도록 작용하는 것으로 간주되었다. 시험된 어떠한 조합물에서도 유의한 길항작용은 관찰되지 않았다 (표 6).

화합물 A

n.s. = '유의성 없음' - MacSynergy^TM II에 의해 지칭된 바와 같음.

실시예 7 : 약학 조성물

실시예 전체에서 사용된 "활성성분"은 화학식 (I)의 화합물에 관한 것으로, 그의 입체화학적 이성체, 이들의 약학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물을 포함하며; 특히 예시된 화합물 중 어느 하나에 관한 것이다.

본 발명에 따른 화합물의 전형적인 제형 예는 다음과 같다:

1. 필름 코팅정

정제 코어의 제조

100 g의 활성성분, 570 g 락토스 및 200 g 전분의 혼합물을 잘 혼합한 후, 약 200 ml의 물에 용해된 5 g의 소듐도데실설페이트와 10 g의 폴리비닐-피롤리돈 용액으로 습윤하였다. 습윤된 분말 혼합물을 체에 내리고 건조한 다음, 다시 체에 내렸다. 여기에 100 g의 미세결정질 셀룰로스와 15 g의 수소첨가된 식물성 오일을 첨가하였다. 전체를 잘 혼합하고 정제로 압착하여 10,000개의 정제를 제조하였으며, 각각은 10 mg의 활성성분을 포함하였다.

코팅

75 ml의 변성(denaturated) 에탄올에 용해된 10 g의 메틸 셀룰로스 용액에 5 g 에틸 셀룰로스의 디클로로메탄(150 ml) 용액을 첨가하였다. 75 ml의 디클로로메탄과 2.5 ml의 1,2,3-프로판트리올을 첨가하였다. 10 g의 폴리에틸렌 글리콜을 용융하여 75 ml의 디클로로메탄에 용해하였다. 후자의 용액을 전자에 첨가한 다음, 2.5 g의 마그네슘 옥타데카노에이트, 5 g의 폴리비닐-피롤리돈 및 30 ml의 진한 컬러 현탁액을 첨가하고 전체를 균질화하였다. 정제 코어를 이렇게 얻어진 혼합물로 코팅 장치에서 코팅하였다.

2. 현탁액

각 밀리리터 당 1 내지 5 mg의 활성성분, 50 mg의 소듐 카복시메틸 셀룰로스, 1 mg의 소듐 벤조에이트, 500 mg의 소르비톨 및 물 약 1 ml를 포함하도록 경구 투여용 수성 현탁액을 제조하였다.

3. 주사제

1.5 % (중량/부피)의 활성성분을 0.9 % NaCl 용액 또는 10 부피% 프로필렌 글리콜 수용액에 교반하여 비경구용 조성물을 제조하였다.

Claims

화학식 (I)의 화합물, 그의 입체이성체, 또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물:

상기 식에서,
A는 페닐렌 또는 나프틸렌이고, 각각은 할로 또는 C₁ _- ₃알킬에서 선택된 1, 2 또는 3개의 치환체로 임의로 치환될 수 있고;
R 및 R'은, 각각 독립적으로, -CR₁R₂R₃, 아릴, 헤테로아릴 또는 헤테로C₄ _-6사이클로알킬이다[여기에서 아릴과 헤테로아릴은 임의로 할로 및 메틸에서 선택된 1 또는 2개 치환체로 치환될 수 있고,
R₁은 수소; 메톡시, 하이드록시 또는 디메틸아미노로 임의로 치환된 C₁ _- ₄알킬; 할로, C₁ _- ₄알콕시 및 트리플루오로메톡시에서 독립적으로 선택된 1, 2 또는 3개의 치환체로 임의로 치환된 페닐; 1,3-벤조디옥솔라닐; 할로 또는 메톡시에서 독립적으로 선택된 1, 2 또는 3개의 치환체로 임의로 치환된 벤질; C₃ _- ₆사이클로알킬; 헤테로아릴; 헤테로C₄ _- ₆사이클로알킬; 또는 헤테로아릴메틸이고;
R₂는 수소, 하이드록실, 아미노, 모노- 또는 디-C₁ _- ₄알킬아미노, C₁ _- ₄알킬카보닐아미노, C₁ _- ₄알킬옥시카보닐아미노, C₁ _- ₄알킬아미노카보닐아미노, 피페리딘-1-일 또는 이미다졸-1-일이고;
R₃는 수소이거나,
R₁ 및 R₃는 함께 사이클로프로필 그룹을 형성하거나;
R₂ 및 R₃는 옥소를 형성함].
제1항에 있어서, R₁이 수소; 메톡시 또는 디메틸아미노로 임의로 치환된 C₁ _- ₄알킬; 할로, C₁ _- ₄알콕시 및 트리플루오로메톡시에서 독립적으로 선택된 1, 2 또는 3개의 치환체로 임의로 치환된 페닐; 1,3-벤조디옥솔라닐; 할로 또는 메톡시에서 독립적으로 선택된 1, 2 또는 3개의 치환체로 임의로 치환된 벤질; C₃ _- ₆사이클로알킬; 헤테로아릴; 헤테로C₄ _- ₆사이클로알킬; 또는 헤테로아릴메틸인 화합물.
제2항에 있어서, A가 할로 또는 C₁ _- ₃알킬에서 선택된 1, 2 또는 3개의 치환체로 임의로 치환된 나프틸렌인 화합물.
제3항에 있어서, A가 할로 또는 C₁ _- ₃알킬에서 선택된 1, 2 또는 3개의 치환체로 임의로 치환된 2,6-나프틸렌인 화합물.
제2항에 있어서, A가 나프틸렌인 화합물.
제5항에 있어서, A가 2,6-나프틸렌인 화합물.
제3항 내지 제6항 중 어느 하나의 항에 있어서, 다음을 제외한 화합물:
제3항 내지 제6항 중 어느 하나의 항에 있어서, R₁이 치환되지 않은 2-프로필과 다르고, R에서 R¹이 1-메톡시에틸이면 R'에서 R¹은 1-메톡시에틸과 다른 화합물.
제3항 내지 제6항 중 어느 하나의 항에 있어서,
- R₂가 메톡시카보닐아미노이면 R₁은 2 프로필 이외의 것이고,
- R'에서 R₂가 메톡시카보닐아미노이면 R'에서 R¹은 1-메톡시에틸 이외의 것인 화합물.
제1항 내지 제9항 중 어느 하나의 항에 있어서, R과 R'이 서로 상이한 화합물.
제1항 내지 제9항 중 어느 하나의 항에 있어서, R과 R'이 동일한 화합물.
제1항 내지 제11항 중 어느 하나의 항에 있어서, R과 R'이 각각 독립적으로 -CR₁R₂R₃인 화합물.
제12항에 있어서, 각각의 R₂가 독립적으로 C₁ _- ₄알킬카보닐아미노 또는 C₁ _- ₄알킬옥시카보닐아미노인 화합물.
제12항에 있어서, 각각의 R₂가 독립적으로 메톡시카보닐아미노인 화합물.
제12항 내지 제14항 중 어느 하나의 항에 있어서, 각각의 R₁이 독립적으로 분지된 C₃ _- ₄알킬, 메톡시C₂ _- ₃알킬, 사이클로펜틸 또는 페닐에서 선택된 화합물.
제12항 내지 제14항 중 어느 하나의 항에 있어서, R에서 R₁이 1-메틸프로필, 2-메틸프로필, 2-메톡시에틸, 사이클로펜틸 또는 페닐이고; R'에서 R₁이 1-메틸에틸, 1-메틸프로필, 2-메틸프로필, 1-메톡시에틸, 사이클로펜틸 또는 페닐인 화합물.
제12항 내지 제16항 중 어느 하나의 항에 있어서, R₁, R₂ 및 R₃ 치환체를 가지는 R과 R'의 탄소 원자가 둘 다 S-구조를 가지는 화합물.
제1항 내지 제17항 중 어느 하나의 항에 있어서, 다음 화학식 (Ia)의 화합물인 화합물:
다음 구조를 가지는 화합물:
제19항에 따른 화합물의 약학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물.
다음 구조를 가지는 화합물:
제21항에 따른 화합물의 약학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물.
다음 구조를 가지는 화합물:
제23항에 따른 화합물의 약학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물.
다음 구조를 가지는 화합물:
제25항에 따른 화합물의 약학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물.
다음 구조를 가지는 화합물:
제27항에 따른 화합물의 약학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물.
다음 구조를 가지는 화합물:
제29항에 따른 화합물의 약학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물.
제29항에 있어서, .2HCl.4H₂O 형태인 화합물.
제29항에 있어서, .H₂SO₄ 형태인 화합물.
다음 구조를 가지는 화합물:
제33항에 따른 화합물의 약학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물.
제33항에 있어서, .2HCl.4H₂O 형태인 화합물.
제1항 내지 제35항 중 어느 하나의 항에 따른 화합물과 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약학 조성물.
포유동물의 HCV 감염을 예방 또는 치료에 사용하기 위한, 제1항 내지 제35항 중 어느 하나의 항에 따른 화합물 또는 제36항에 따른 약학 조성물.
HCV 감염의 치료에서 동시, 개별 또는 순차적 사용을 위해 조합된 조제물로서 (a) 제1항 내지 제35항 중 어느 하나의 항에 의해 정의된 화합물, 및 (b) 다른 HCV 저해제를 포함하는 생성물.
제38항에 있어서, 다른 HCV 저해제가 HCV 프로테아제 저해제인 생성물.
제39항에 있어서, HCV 프로테아제 저해제가 텔라프레비어(telaprevir)(VX-950), 보세프레비어(boceprevir)(SCH-503034), 날라프레비어(narlaprevir)(SCH-900518), ITMN-191(R-7227), TMC435350(TMC435), MK-7009, BI-201335, BI-2061 (ciluprevir), BMS-650032, ACH-1625, ACH-1095, GS 9256, VX-985, IDX-375 (HCV NS4A 프로테아제 보조인자 저해제), VX-500, VX-813, PHX-1766, PHX2054, IDX-136, IDX-316, ABT-450, EP-013420 (및 congener) 및 VBY-376으로 구성되는 군에서 선택된 생성물.
제39항에 있어서, HCV 프로테아제 저해제가 TMC435350(TMC435), MK-7009 또는 ITMN-191(R-7227)로 구성되는 군에서 선택된 생성물.
제38항에 있어서, 다른 HCV 저해제가 HCV 뉴클레오시드 또는 비뉴클레오시드 폴리머라제 저해제인 생성물.
제42항에 있어서, HCV 폴리머라제 저해제가 R7128, PSI-7851, PSI 7977, IDX-189, IDX-184, IDX-102, R1479, UNX-08189, PSI-6130, PSI-938, PSI-879, HCV-796, HCV-371, VCH-759, VCH-916, VCH-222, ANA-598, MK-3281, ABT-333, ABT-072, PF-00868554, BI-207127, GS-9190, A-837093, JKT-109, GL-59728, GL-60667, ABT-072, AZD-2795 및 13-사이클로헥실-3-메톡시-17,23-디메틸-7H-10,6-(메타노이미노티오이미노에타노옥시에타노이미노메타노)인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-14,24-디온 16,16-디옥사이드로 구성되는 군에서 선택된 생성물.
제42항에 있어서, HCV 폴리머라제 저해제가 PSI-6130 또는 그의 프로드럭인 생성물.
제42항에 있어서, HCV 폴리머라제 저해제가

또는 약학적으로 허용가능한 그의 염 또는 용매화물인 생성물.
HCV 감염의 치료에서 동시, 개별 또는 순차적 사용을 위해 조합된 조제물로서 (a) 제1항 내지 제35항 중 어느 하나의 항에 의해 정의된 화합물, 및 (b) 면역조절제를 포함하는 생성물.