MX2012005178A - Derivados bencimidazol-imidazol. - Google Patents

Abstract

Inhibidores de replicación de HCV de fórmula I (ver fórmula (I)) que incluye formas estereoquímicamente isoméricas, y sales, solvatos de los mismos, donde R y R' son, cada uno independientemente, -CR1R2R3, arilo, heteroarilo o heterocicloalquilo C4-6, donde arilo y heteroarilo pueden estar opcionalmente sustituidos con 1 o 2 sustituyentes seleccionados de halo y metilo; la presente invención también se refiere a procedimientos para la preparación de dichos compuestos, composiciones farmacéuticas que los contienen y su uso en terapia de HCV.

Description

DERIVADOS BENCIMIDAZOL-IMIDAZOL CAMPO TÉCNICO Esta invención se refiere a derivados bencimidazol-imidazol, que son inhibidores del virus de hepatitis C (HCV), a su síntesis y a su uso en el tratamiento o profilaxis de HCV.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN HCV es un virus de ARN de sentido positivo, de un solo filamento, que pertenece a la familia de virus Flaviviridae en el género de hepacivirus. El genoma viral se traduce en un marco de lectura abierta único que codifica para proteínas múltiples estructurales y no estructurales.

La proteína NS5A de HCV está situada cadena abajo de la proteína NS4B y cadena arriba de la proteína NS5B. Por disociación post-translacional mediante la serina proteasa viral NS3/4A, la NS5A madura en una fosfoproteína de tri-dominio, que contiene zinc, que o bien existe como especie hipofosforilada (56-kDa, p56) o bien hiperfosforilada (58-kDa, p58). NS5A de HCV está implicada en múltiples aspectos del ciclo de vida viral, incluyendo replicación viral y conjunto de partículas infecciosas, así como también en la modulación del medio ambiente de su célula huésped. Aunque no se ha atribuido ninguna función enzimática a la proteína, se ha informado que interactúa con numerosos factores virales y celulares.

Cierta cantidad de patentes y solicitudes de patente describen compuestos con actividad inhibidora de HCV, apuntando a NS5A. La WO2006/133326 describe derivados estilbeno mientras que las WO 2008/021927, WO 2008/021928, WO2009102325 y WO2009/102318 describen derivados bifenilo que tienen actividad inhibidora de NS5A HCV. La US2009/0202483 describe derivados bifenilo puenteados. La WO 2008/048589 describe derivados 4— (feniletinil)— 1 -— pirazol y su uso antiviral. La WO 2008/070447 describe un amplio rango de compuestos inhibidores de HCV que incluyen una porción bencimidazol. Las WO2010/099527. WO2010/065668, WO2010/065674 y WO2010/065681 describen derivados bencimidazol-imidazol, como inhibidores de HCV NS5A. Por ejemplo, compuestos que tienen la siguiente estructura y Chemical Abstracts Number se describen en el cuadro 1 de WO2010/065674: CUADRO A A continuación de la infección inicial aguda, la mayoría de individuos infectados desarrollan hepatitis crónica debido a replicación de HCV preferiblemente en hepatocitos, pero no es directamente citopática. En particular, la falta de respuesta de T-linfocitos vigorosos y la alta propensión del virus a mutar, parecen promover una alta tasa de infección crónica. La hepatitis crónica puede avanzar a fibrosis del hígado, lo cual conduce a cirrosis que es una enfermedad del hígado de etapa final, y HCC (carcinoma hepatocelular), lo cual lo convierte en la causa principal de los transplantes de hígado.

Existen seis tipos principales de genotipos de HCV y más de 50 subtipos, los cuales están distribuidos geográficamente en forma diferente. El genotipo HCV 1 es el genotipo predominante en Europa y en los Estados Unidos. La extensa heterogeneidad genética de HCV tiene importantes implicaciones clínicas y de diagnóstico; quizás la explicación son las dificultades en el desarrollo de la vacuna y la falta de respuesta a la terapia común.

La transmisión de HCV 1 puede ocurrir a través del contacto con sangre contaminada o productos de sangre, por ejemplo después de una transfusión de sangre o el uso de drogas intravenosas. La introducción de ensayos de diagnóstico que se usan en rastreo de sangre, ha conducido a una tendencia descendente en la incidencia de HCV en post-transfusión. Sin embargo, dada la lentitud con que progresa la enfermedad hepática de etapa final, las infecciones existentes continuarán presentando una seria carga médica y económica durante décadas.

Las terapias corrientes para HCV están basadas en ¡nterferon-alfa (pegilado) (IFN-a) en combinación con ribavirina. Esta terapia de combinación proporciona una respuesta virológica sostenida en 40% de los pacientes infectados con el genotipo de HCV 1 , y aproximadamente 80% de aquellos que están infectados por los genotipos 2 y 3. Además de la eficacia limitada del genotipo de HCV 1 , esta terapia de combinación tiene efectos secundarios, incluyendo síntomas del tipo de gripe, anormalidades hematológicas y síntomas neuropsiquiátricos. Por lo tanto, para superar las desventajas de la terapia de HCV corriente, tales como efectos secundarios, eficacia limitada, emergencia de resistencia y fallas en el cumplimiento, así como también para mejorar la respuesta de la carga viral, existe la necesidad de tratamientos más eficaces, convenientes y mejor tolerados.

La presente invención se refiere a un grupo de derivados bencimidazol-imidazol capaces de inhibir el ciclo de replicación de HCV.

Los compuestos de la presente invención son también atractivos debido al hecho de que muestran mayor selectividad para inhibir el ciclo de replicación de HCV cuando se comparan con su capacidad para inhibir la replicación de HIV. Los pacientes infectados con HIV sufren a menudo coinfecciones, tales como HCV. El tratamiento de dichos pacientes con un inhibidor que inhibe también HIV puede conducir a la emergencia indeseable de cepas HIV resistentes.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN En un aspecto, la presente invención provee compuestos, que pueden estar representados por la fórmula I: o formas estereoisoméricas de los mismos, donde: A es fenileno o naftileno, cada uno de los cuales puede estar opcionalmente sustituido con 1 , 2 o 3 sustituyentes seleccionados de halo o alquilo C1--3; R y R', son cada uno independientemente, -CR1 R2R3, arilo, heteroarilo o heterocicloalquilo C4-6, donde arilo y heteroarilo pueden estar opcionalmente sustituidos con 1 o 2 sustituyentes seleccionados de halo y metilo; y donde Ri es hidrógeno; alquilo Ci_4 opcionalmente sustituido con metoxi, hidroxi o dimetilamino; fenilo opcionalmente sustituido con 1 , 2 o 3 sustituyentes independientemente seleccionados de halo, alcoxi Ci_4 y trifluormetoxi; 1 ,3-benzodioxolanilo; bencilo opcionalmente sustituido con 1 , 2 o 3 sustituyentes independientemente seleccionados de halo o metoxi; cicloalquilo C3-6; heteroarilo; heterocicloalquilo C4_6¡ o heteroarilmetilo; R2 es hidrógeno, hidroxilo, amino, mono- o dialquilamino C-i^, alquilcarbonilamino C-M, alquiloxicarbonilamino Ci_ , alquilaminocarbonilamino Ci_4, piperidin-1-ilo o imidazol-1-ilo; R3 es hidrógeno, o R1 y R3 forman conjuntamente un grupo oxo o ciclopropilo; o sales y/o solvatos farmacéuticamente aceptables de los mismos.

En otro aspecto, la presente invención provee compuestos que pueden estar representados por los siguientes compuestos de fórmula (l-PR): o formas estereoisoméricas de los mismos, donde : A es fenileno o naftileno, cada uno de los cuales puede estar opcionalmente sustituido con , 2 o 3 sustituyentes seleccionados de halo o alquilo C-i_3; R y R' son cada uno independientemente, -CR1 R2R3, arilo, heteroarilo o heterocicloalquilo 04-5, donde arilo y heteroarilo pueden estar opcionalmente sustituidos con 1 o 2 sustituyentes seleccionados de halo y metilo; y donde R- es hidrógeno; alquilo Ci_4 opcionalmente sustituido con metoxi o dimetilamino; fenilo opcionalmente sustituido con 1 , 2 o 3 sustituyentes independientemente seleccionados de halo, alcoxi d-^ y trifluormetoxi; 1 ,3-benzodioxolanilo; bencilo opcionalmente sustituido con 1 , 2 o 3 sustituyentes independientemente seleccionados de halo o metoxi; cicloalquilo C3_6; heteroarilo; heterocicloalquilo C4-6; o heteroarilmetilo; R2 es hidrógeno, hidroxilo, amino, mono- o di-alquilamino Ci_4, alquilcarbonilamino C1- , alquiloxicarbonilamino C^, alquilaminocarbonilamino Ci_4, piperidin-1-ilo o ¡midazol— 1— ilo; R3 es hidrógeno, o R1 y R3 forman conjuntamente un grupo oxo o un grupo ciclopropilo; o sales y/o solvatos farmacéuticamente aceptables de los mismos.

En otro aspecto, la presente invención provee compuestos, que pueden estar representados por la fórmula (l-COR): y las formas estereoisoméricas de los mismos, donde : A es fenileno o naftileno, cada uno de los cuales pueden estar opcionalmente sustituidos con 1 , 2 o 3 sustituyentes seleccionados de halo o alquilo C1-3; R y R' son cada uno independientemente, -CR1 R2R3, arilo, heteroarilo o heterocicloalquilo C4-6, donde arilo y heteroarilo pueden estar opcionalmente sustituidos con 1 o 2 sustituyentes seleccionados de halo y metilo; y donde R1 es hidrógeno; alquilo C1- opcionalmente sustituido con metoxi, hidroxi o dimetilamino; fenilo opcionalmente sustituido con 1 , 2 o 3 sustituyentes independientemente seleccionados de halo, alcoxi Ci_4 y trifluormetoxi; 1 ,3-benzodioxolanilo; bencilo opcionalmente sustituido con 1 , 2 o 3 sustituyentes independientemente seleccionados de halo o metoxi; cicloalquilo C3--5; heteroarilo; heterocicloalquilo C4_6; o heteroarilmetilo; R2 es hidrógeno, hidroxilo, amino, mono- o di-alquilamino Ci_4, alquilcarbonilamino C1-4, alquiloxicarbonilamino Ci_4, alquilaminocarbonilamino Ci_4, piperidin-1-ilo o imidazol-1-ilo¡ R3 es hidrógeno, o R1 y R3 forman conjuntamente un grupo ciclopropilo; o R2 y R3 forman oxo; y las sales y los solvatos farmacéuticamente aceptables de los mismos.

En otro aspecto, la presente invención provee compuestos, que pueden estar representados por la fórmula (l-PR-COR): o formas estereoisoméricas de los mismos, donde : A es fenileno o naftileno, cada uno de los cuales pueden estar opcionalmente sustituidos con 1 , 2 o 3 sustituyentes seleccionados de halo o alquilo C1-3; R y R' son cada uno independientemente, -CR1 R2R3, arilo, heteroarilo o heterocicloalquilo C4-6, donde arilo y heteroarilo pueden estar opcionalmente sustituidos con 1 o 2 sustituyentes seleccionados de halo y metilo; y donde R1 es hidrógeno; alquilo Ci_4 opcionalmente sustituido con metoxi o dimetilamino; fenilo opcionalmente sustituido con 1 , 2 o 3 sustituyentes independientemente seleccionados de halo, alcoxi C1-4 y trifluormetoxi; 1 ,3-benzodioxolanilo; bencilo opcionalmente sustituido con 1 , 2 o 3 sustituyentes independientemente seleccionados de halo o metoxi; cicloalquilo C3-6; heteroarilo; heterocicloalquilo C4-e; o heteroarilmetilo; R2 es hidrógeno, hidroxilo, amino, mono- o di-alquilamino Ci_4, alquilcarbonilamino Ci_4, alquiloxicarbonilamino C1- , alquilaminocarbonilamino C-i-^, piperidin— 1— ¡lo o imidazol-1-ilo; R3 es hidrógeno, o R1 y R3 forman conjuntamente un grupo ciclopropilo; o R2 y R3 forman oxo; y las sales y los solvatos farmacéuticamente aceptables de los mismos.

En otro aspecto, la presente invención provee compuestos que pueden estar representados por los siguientes compuestos de fórmula (l-PR): o formas estereoisoméricas de los mismos, donde : A es fenileno o naftileno, cada uno de los cuales puede estar opcionalmente sustituido con 1 , 2 o 3 sustituyentes seleccionados de halo o alquilo C1-3; R y R' son cada uno independientemente, -CR1 R2R3, arilo, heteroarilo o heterocicloalquilo C -6, donde arilo y heteroarilo pueden estar opcionalmente sustituidos con 1 o 2 sustituyentes seleccionados de halo y metilo; y donde R1 es hidrógeno; alquilo C-i_4 opcionalmente sustituido con metoxi o dimetilamino; fenilo opcionalmente sustituido con 1 , 2 o 3 sustituyentes independientemente seleccionados de halo, alcoxi C1-4 y trifluormetoxi; 1 ,3-benzodioxolanilo; bencilo opcionalmente sustituido con 1 , 2 o 3 sustituyentes independientemente seleccionados de halo o metoxi; cicloalquilo C3_6; heteroarilo; heterocicloalquilo C4-6; o heteroarilmetilo; R2 es hidrógeno, hidroxilo, amino, mono- o di-alquilamino C1-4, alquilcarbonilamino C1-4, alquiloxicarbonilamino C1-4, alquilaminocarbonilamino C1-4, piperidin-1-ilo o imidazol— 1— ilo; R3 es hidrógeno, o Ri y R3 forman conjuntamente un grupo oxo o ciclopropilo; o sales y/o solvatos de los mismos farmacéuticamente aceptables; con la condición de que el compuesto es distinto a cualquiera de los 6 compuestos enumerados en el cuadro A.

Cada vez que se usa aquí, el término "compuestos de fórmula I", "los presentes compuestos", "compuestos de la presente invención" o subgrupos de los compuestos de fórmula (I) tal como los que se definen aquí en las siguientes modalidades como "los compuestos de fórmula (l-PR)", "los compuestos de fórmula (l-COR)", "los compuestos de fórmula (I PR-COR)" o términos similares, se entiende que incluyen los compuestos de fórmula I, o dicho subgrupo de los mismos, incluyendo las formas estereoisoméricas posibles, y las sales y solvatos de los mismos farmacéuticamente aceptables, a menos que se indique lo contrario.

En un aspecto adicional, la invención se refiere al uso de compuestos de fórmula I, o subgrupos de los mismos, tal como se especifica aquí, para inhibir el ciclo de replicación de HCV. Alternativamente, se provee el uso de dichos compuestos para la manufactura de un medicamento para inhibir el ciclo de replicación de HCV.

Las modalidades de la presente invención se refieren a los compuestos de fórmula (I), o cualquier grupo del mismo tal como se definen aquí mediante las diferentes modalidades, donde se aplican una o más de las definiciones para A, R, R', R^ R2 y R3 que se especifican aquí.

Una modalidad de la presente invención se refiere a aquellos compuestos de fórmula I, o cualquier subgrupo del mismo, donde R y R' son independientemente -CR1 R2R3 o un heteroarilo de cinco miembros opcionalmente sustituido; en particular, donde R y R' son independientemente -CR1 R2R3; más en particular, donde R y R' son -CR1 R2R3 y son iguales; alternativamente, R y R' son -CR1 R2R3 y son diferentes.

Otra modalidad de la presente invención se refiere a aquellos compuestos de fórmula I, o cualquier subgrupo del mismo, donde R2 es hidroxilo, amino, mono- o di-alquilamino Ci_4, alquilcarbonilamino C1-4 o alquiloxicarbonilamino C1-4; en particular, R2 es alquilcarbonilamino Ci_4 o alquiloxicarbonilamino Ci-^; o, R2 es alquiloxicarbonilamino Ci_4. Más en particular, R2 es metoxicarbonilamino.

Otra modalidad de la presente invención se refiere a aquellos compuestos de fórmula I, o cualquier subgrupo del mismo, donde R1 está seleccionado de alquilo C1--4; fenilo opcionalmente sustituido con 1 o 2 sustituyentes independientemente seleccionados de halo, metilo, metoxi; 1 ,3-benzodioxolanilo; y heteroarilo. En particular, R1 está seleccionado de alquilo C3- ramificado; fenilo opcionalmente sustituido con halo o metilo; y heteroarilo. Más en particular, R1 está seleccionado de alquilo ramificado C3--4; fenilo opcionalmente sustituido con halo. O, R1 es alquilo ramificado C3_4. Alternativamente, en otra modalidad particular, R1 está seleccionado de alquilo C1--4 opcionalmente sustituido con metoxi.

Otra modalidad de la presente invención se refiere a aquellos compuestos de fórmula I, o cualquier subgrupo de los mismos, donde Ri está seleccionado de alquilo Ci_ ¡ fenilo opcionalmente sustituido con 1 o 2 sustituyentes independientemente seleccionados de halo, metoxi; 1 ,3-benzodioxolanilo; y heteroarilo. En particular, Ri está seleccionado de alquilo ramificado C3^; fenilo opcionalmente sustituido con halo; y heteroarilo.

Otra modalidad de la presente invención se refiere a aquellos compuestos de fórmula I, o cualquier subgrupo de los mismos, donde R-(C=O)- y R'-C(=O)- son independientemente -(C=O)-CRiR2R3 seleccionados de donde * denota el punto de unión al nitrógeno pirrolidina. En particular, R-(C=O)- y R'-C(=O)- son independientemente -(C=O)-CR R2R3 seleccionados de Otra modalidad de la presente invención se refiere a aquellos compuestos de fórmula I, o cualquier subgrupo del mismo, donde A es fenileno, en particular donde A es 1 ,4-fenileno de estructura donde la línea de puntos indica los puntos de unión al resto de la molécula.

Otra modalidad de la presente invención se refiere a aquellos compuestos de fórmula I, o cualquier subgrupo del mismo, donde A es naftileno, en particular donde A es 2,6-naftileno de estructura donde la línea de puntos indica los puntos de unión al resto de la molécula.

Otra modalidad de la presente invención se refiere a los compuestos de fórmula (I), o cualquier subgrupo de los mismos, A es naftileno que puede estar opcionalmente sustituido con 1 , 2 o 3 sustituyentes seleccionados de halo o alquilo C1-3; R1 es tal como se define en los compuestos de fórmula (I) pero diferente de 2-propilo no sustituido, y cuando R1 en R es 1-metoxi-etilo, entonces R1 en R' es diferente de 1-metoxietilo. En particular, la presente invención se refiere a aquellos compuestos de fórmula (l-PR) donde A es naftileno que puede estar opcionalmente sustituido con 1 , 2 o 3 sustituyentes seleccionados de halo o alquilo Ci_3, más particularmente A es naftileno, aún más particularmente A es 2,6-naftileno; R y R' son cada uno independientemente, -CR1 R2R3, arilo, heteroarilo o heterocicloalquilo C4_6, donde arilo y heteroarilo pueden estar opcionalmente sustituidos con 1 o 2 sustituyentes seleccionados de halo y metilo; y donde R1 es hidrógeno; alquilo Ci_4 opcionalmente sustituido con metoxi o dimetilamino, pero diferente de 2-propilo no sustituido; fenilo opcionalmente sustituido con 1 , 2 o 3 sustituyentes independientemente seleccionados de halo, Ci_4alcox¡ y trifluormetoxi; 1 ,3-benzodioxolanilo; bencilo opcionalmente sustituido con 1 , 2 o 3 sustituyentes independientemente seleccionados de halo o metoxi; cicloalquilo C3- ; heteroarilo; heterocicloalquilo C4-6; o heteroarilmetilo; R2 es hidrógeno, hidroxilo, amino, mono- o di-alquilamino Ci_4, alquilcarbonilamino C1-4, alquiloxicarbonilamino C1-4, alquilaminocarbonilamino Ci_4, piperidin-1-ilo o imidazol-1-ilo; R3 es hidrógeno, o R1 y R3 forman conjuntamente un grupo oxo o ciclopropilo; o sales y/o solvatos del mismo farmacéuticamente aceptables, con la condición de que cuando R1 en R es 1-metoxietilo, entonces R en R' es diferente de 1-metoxietilo.

Otra modalidad se refiere a los compuestos de fórmula (I), o cualquier subgrupo del mismo, donde A es naftileno; R y R' son cada uno independientemente, -CR1 R2R3 donde cada R1 es independientemente alquilo C1- opcionalmente sustituido con metoxi o hidroxi; ciclopentilo; o fenilo; cada R2 es independientemente amino, mono- o di-alquilamino Ci_4, alquilcarbonilamino C1-4, alquiloxicarbonilamino Ci_4, alquilaminocarbonilamino C1-4, y cada R3 es hidrógeno, con la condición de que: • R1 es distinto de 2 propilo cuando R2 es metoxicarbonilamino; y • ^ en R' es distinto de 1-metoxietilo cuando R2 en R' es metoxicarbonilamino; y las sales y los solvatos farmacéuticamente aceptables de los mismos.

Otra modalidad se refiere a los compuestos de Fórmula (I) o cualquier subgrupo de los mismos de fórmula (l-PR), donde A es 2,6-naftileno de estructura y donde los compuestos en esta modalidad son diferentes de cualquiera de los 6 compuestos enumerados en el cuadro A.

Otra modalidad se refiere a los compuestos de fórmula (I) o cualquier subgrupo de los mismos donde R y R' son diferentes uno del otro.

Otra modalidad se refiere a los compuestos de fórmula (I) donde cada R2 es independientemente alquilcarbonilamino o alquiloxicarbonilamino Ci_4.

Otra modalidad se refiere a los compuestos de fórmula (I) o cualquier subgrupo de los mismos donde cada R2 es independientemente metoxicarbonilamino.

Otra modalidad se refiere a los compuestos de fórmula (I) o cualquier subgrupo de los mismos donde cada R1 está independientemente seleccionado de alquilo ramificado C3--4, metoxialquilo C2-3, ciclopentilo o fenilo.

Otra modalidad se refiere a los compuestos de fórmula (I) o cualquier subgrupo de los mismos donde R1 en R es 1-metilpropilo, 2-metilpropilo, 2-metoxietilo, ciclopentilo o fenilo; R1 en R' es 1— metiletilo, 1-metilpropilo, 2-metilpropilo, 1-metoxietilo, ciclopentilo o fenilo.

Otra modalidad se refiere a los compuestos de fórmula (I) o cualquier subgrupo de los mismos donde R y R' independientemente son -CR1R2R3, donde ambos átomos de carbono portadores del sustituyente R1 ( R2 y el R3 tienen la configuración S.

Otra modalidad se refiere a los compuestos de fórmula (I), o cualquier subgrupo de los mismos tal como los compuestos de fórmula (l-PR), donde el compuesto es de fórmula la Otra modalidad se refiere a los compuestos de fórmula (I) o cualquier subgrupo de los mismos donde el compuesto es uno de los siguientes compuestos del cuadro 1A: compuesto 9, compuesto 1 1 , compuesto 13, compuesto 14, compuesto 16, compuesto 17 o compuesto 18, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

En un aspecto adicional, la presente invención provee compuestos de fórmula I, y sus sales y solvatos del mismo farmacéuticamente aceptables, para ser usados en el tratamiento o profilaxis (o manufactura de un medicamento para el tratamiento o profilaxis) de infección de HCV. Los genotipos HCV representativos en el contexto del tratamiento o profilaxis de acuerdo con la presente invención incluyen el genotipo 1 b (prevaleciente en Europa) o 1 a (prevaleciente en América del Norte). La presente invención provee también un método para el tratamiento o profilaxis de infección de HCV, en particular infección de HCV del genotipo 1a o 1 b.

Las formas estereoisoméricamente puras de los compuestos e intermediarios tal como se menciona aquí se definen como isómeros sustancialmente libres de otras formas enantioméricas o diaestereoméricas de la misma estructura molecular básica de dichos compuestos o intermediarios. En particular, el término "estereoisoméricamente puro" se refiere a compuestos o intermediarios que tienen un exceso estereoisomérico de por lo menos 80% (es decir, mínimo 90% de un isómero y máximo 10% de otros isómeros posibles) hasta un exceso estereoisomérico de 100% (es decir 100% de un isómero y nada del otro), más en particular los compuestos o intermediarios que tienen un exceso estereoisomérico de 90% hasta 100%, aún más particularmente que tienen un exceso estereoisomérico de 94% hasta 100% y más particularmente que tienen un exceso estereoisomérico de 97% hasta 100%. Los términos "enantioméricamente puro" y "diastereoméricamente puro" deberían entenderse de manera similar, pero teniendo en cuenta el exceso enantiomérico y el exceso diaestereomérico, respectivamente de la mezcla en cuestión.

Pueden obtenerse las formas estereoisoméricas puras o estereoisómeros de los compuestos e intermediarios de esta invención mediante la aplicación de procedimientos conocidos. Por ejemplo, los enantiómeros pueden separarse uno del otro mediante cristalización selectiva de sus sales diaestereoméricas con ácidos o bases ópticamente activos. Ejemplos de los mismos son ácido tartárico, ácido dibenzoiltartárico, ácido ditoluoiltartárico y ácido alcanforsulfónico. Alternativamente, los enantiómeros pueden separarse mediante técnicas cromatográficas usando fases estacionarias quirales. Dichas formas isoméricas estereoquímicamente puras pueden también estar derivadas de las correspondientes formas estereoisoméricamente puras de los materiales de partida apropiados, con la condición de que la reacción ocurra estereoespecíficamente. Preferiblemente, si se desea un estereoisómero específico, dicho compuesto se sintetiza mediante métodos de preparación estereoespecíficos. Estos métodos emplearán ventajosamente materiales de partida enantioméricamente puros.

Los racematos diaestereoméricos de los compuestos de fórmula I pueden obtenerse en forma separada mediante métodos convencionales. Los métodos apropiados de separación física que pueden emplearse ventajosamente son, por ejemplo, cristalización selectiva y cromatografía, por ejemplo, cromatografía en columna o cromatografía de fluido supercrítico.

Los compuestos de fórmula I tienen varios centros de quiralidad. Son de interés los centros estereogénicos del anillo de pirrolidina en el átomo de carbono 2. La configuración en esta posición puede ser la correspondiente a L— prolina, es decir, Son también de interés los centros estereogénicos que ocurren en las porciones-CRiR2R3 de los compuestos de fórmula I. Las modalidades de la presente invención se refieren por lo tanto a aquellos compuestos de fórmula I, o cualquier subgrupo de los mismos, donde el átomo de carbono C en -CR1 R2 3 aparece en su configuración S, en particular cuando R1 es alquilo Ci_4 opcionalmente sustituido con metoxi, hidroxi o dimetilamino; bencilo opcionalmente sustituido con 1 , 2 o 3 sustituyentes independientemente seleccionados de halo o metoxi; cicloalquilo C3.-6; heterocicloalquilo C4_6¡ o heteroarilmetilo. Ejemplos particulares de porciones -(C=0)-CR1 R2R3 de los compuestos de fórmula I con estereoquímica específica denota el punto de unión con el resto de la molécula.

Las sales de adición farmacéuticamente aceptables comprenden las formas de sal de adición de ácido y base no tóxicas terapéuticamente activas de fórmula (I) o cualquier subgrupo de las mismas. Son de interés, las libres, es decir, formas no-sal de los compuestos de fórmula I, o de cualquier subgrupo de los mismos.

Las sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables pueden obtenerse convenientemente tratando la forma base con dicho ácido apropiado. Los ácidos apropiados comprenden, por ejemplo, ácidos inorgánicos tales como ácidos haiohídricos, por ejemplo, ácido clorhídrico o bromhídrico, sulfúrico, nítrico, fosfórico y ácidos similares; o ácidos orgánicos tales como por ejemplo, acético, propiónico, hidroxiacético, láctico, pirúvico, oxálico (es decir, etanodiónico), malónico, succínico (es decir, ácido butanodioico), maleico, fumárico, mélico (es decir, ácido hidroxibutanodioico), tartárico, cítrico, metansulfónico, etansulfónico, bencensulfónico, p-toluensulfónico, ciclámico, salicílico, p-aminosalicílico, pamoico y ácidos similares. Por el contrario, dichas formas de sal pueden convertirse mediante tratamiento con una base apropiada en la forma de base libre.

Los compuestos de fórmula (I) que contienen un protón ácido pueden también convertirse en sus sales de adición de base, en particular formas de sal de adición de metal o amina, mediante tratamiento con bases inorgánicas u orgánicas apropiadas. Las formas de sal de base apropiada comprenden, por ejemplo, sales de amonio, sales de metales alcalinos y alcalino térreos, por ejemplo, sales de litio, sodio, potasio, magnesio, calcio y similares; sales con bases orgánicas, por ejemplo, sales de benzatina, N-metil-D-glucamina, hidrabamina y sales como amino ácidos tales como, por ejemplo, arginina, lisina y similares.

El término "solvatos" abarca cualquier solvato farmacéuticamente aceptable que los compuestos de fórmula I así como cualquier sal del mismo farmacéuticamente aceptable son capaces de formar. Dichos solvatos son por ejemplo, hidratos, alcoholatos, por ejemplo, etanolatos, propanolatos, y similares.

Algunos de los compuestos de fórmula I pueden también existir en formas tautoméricas. Por ejemplo, las formas tautoméricas de grupos amida (-C(=0)-NH-) son iminoalcoholes (-C(OH)=N-). Las formas tautoméricas, aunque no se indican explícitamente en las fórmulas estructurales representadas aquí, se entiende que están incluidas dentro del alcance de la presente invención.

Tal como se usa aquí, "alquilo CWcomo un grupo o parte de un grupo define grupos hidrocarbonados de cadena recta o ramificada, saturados que tienen 1 a 4 átomos de carbono tales como por ejemplo, metilo, etilo, 1-propilo, 2-propilo, 1— butilo, 2-butilo, 2-metil-1-propilo, 2-metil-2-propilo. Para los propósitos de la presente invención, de interés entre alquilo Ci-4 es alquilo C3-4, es decir, grupos hidrocarbonados de cadena recta o ramificada que tienen 3 o 4 átomos de carbono tales como 1— propilo, 2-propilo, 1— butilo, 2-butilo, 2— metil—1— propilo, 2-metil-2-propilo. De particular interés puede ser alquilo C3-4 ramificado, tal como 2-propilo, 2-butilo, 2-metil-1-propilo, 2-metil-2-propilo.

El término "cicloalquilo C3-6" es genérico a ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo y ciclohexilo. De manera similar, "cicloalquilo C4-6" es genérico a ciclobutilo, ciclopentilo y ciclohexilo.

"Alcoxi C1-C4" como grupo o parte de un grupo significa un grupo de fórmula-O-alquilo C1-4 donde alquilo C1-4 es tal como se ha definido anteriormente. Ejemplos de alcoxi C1-4 son metoxi, etoxi, n-propoxi, o isopropoxi.

El término "halo" es genérico a flúor, cloro, bromo e yodo.

Tal como se usa aquí, el término formas "(=0)" u "oxo" forman una porción carbonilo cuando está unida a un átomo de carbono. Debe notarse que un átomo puede solo estar sustituido con un grupo oxo cuando la valencia de este átomo lo permite.

Tal como se usa aquí, "arilo" es genérico a fenilo y naftilo.

Tal como se usa aquí, el término "heteroarilo" significa una estructura de anillo carbohidrato aromático que tiene 5 a 10 átomos en el anillo del cual por lo menos un átomo del anillo es un heteroátomo seleccionado de N, O y S, en particular de N y O.

Tal como se usa aquí, el término "heterocicloalquilo CW significa un grupo hidrocarbonado cíclico saturado tal como se define para "cicloalquilo C4-6" donde por lo menos un átomo de carbono es reemplazado por un heteroátomo seleccionado de N, O y S, en particular de N y O. Ejemplos de heterocicloalquilo C4_6 incluyen tetrahidro-2H-piranilo, piperidinilo, tetrahidrofuranilo y pirrolidinilo.

Cuando la posición de un grupo en una porción molecular no está especificada (por ejemplo un sustituyente en fenilo) o está representada por un enlace flotante, dicho grupo puede estar posicionado sobre cualquier átomo de dicha porción, siempre que la estructura resultante sea químicamente estable. Cuando está presente cualquier variable más de una vez en la molécula, cada definición es independiente.

Los compuestos de la presente invención pueden sintetizarse usando los siguientes procedimientos de síntesis. Los acronismos tal como se usan aquí tienen los siguientes significados: "CDI" significa que es ?/,?/'-carbonil-diimidazol. "dppf" significa que es 1 , 1 '-Bis(difenilfosfino)ferroceno "4-DMAP" significa que es 4-dimetilaminopiridina "DMSO" significa que es sulfóxido de dimetilo ????" significa que es triamida de hexametilfósforo "DIPEA" significa que es N,N— diisopropil etilamina "DMF" significa que es dimetilformamida "THF" significa que es tetrahidrofurano "TEMPO" significa que es 2,2,6,6— tetrametil—1—piperidiniloxi DBU significa que es 1 ,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno HATU significa que es hexafluorfosfato de O-(7 azabenzotriazol-1-il)-/\/,/\/,/V' /V-tetrametiluronio TBTU significa que es tetrafluorborato de 2-(l/-/-benzotriazol-1 \)-N,N,N', ?/'-tetrametiluronio ESQUEMA 1 vi En el esquema 1 , se describe la síntesis del compuesto II a VI. En una primera etapa, se forma un enlace amida usando PG-prolina y una 4-halobenceno-1 ,2-diamina donde X es Cl, Br o I, en presencia de un reactivo de acoplamiento apropiado para la acilación del grupo amino, tal como, por ejemplo, CDI. Tal como se usa aquí, PG es un grupo protector en el nitrógeno de pirrolidina, tal como, por ejemplo, un grupo protector carbamato tal como benciloxicarbonilo, o ter-butoxicarbonilo, o alternativamente, PG puede ser R-C(=0)- donde R tiene el significado definido para los compuestos de fórmula I. El intermediario así obtenido es ciclado adicionalmente, lo cual da como resultado el derivado bencimidazol de fórmula II. Dicha ciclación puede llevarse a cabo mediante tratamiento con un ácido, tal como, por ejemplo, ácido acético en un rango de temperatura de desde 0 a 150°C, más específicamente entre 80°C y 120°C. El intermediario de fórmula II puede convertirse en un éster borónico de fórmula III bajo condiciones catalizadas por Pd, por ejemplo en presencia de Pd(dppf)CI2, í)/'s(pinacolato)diboro y una base, por ejemplo, acetato de potasio.

El compuesto IV (Esquema 1 B) pede obtenerse después de remoción selectiva del grupo protector PG del nitrógeno de pirrolidina del intermediario II, bajo condiciones apropiadas, tales, como por ejemplo, usando HCI en isopropanol cuando PG es ter-butoxicarbonilo. El intermediario IV resultante pude ser luego convertido a un intermediario de fórmula V por acilación con el ácido apropiado de fórmula R-C(=0)-OH donde R tiene el significado definido para los compuestos de fórmula I.

Dicha acilación puede llevarse a cabo por reacción de los materiales de partida en presencia de un agente de acoplamiento o por conversión de la funcionalidad carboxilo en una forma activa tal como un éster activo, anhídrido mixto o un cloruro o bromuro de ácido carboxílico. Las descripciones generales de dichas reacciones de acoplamiento y los reactivos usados allí pueden hallarse en general, en libros de texto sobre química de péptidos, por ejemplo, M. Bodanszky, "Peptide Chemistry", 2nda rev. ed., Springer-Verlag, Berlín, Alemania, (1993).

Ejemplos de reacciones de acoplamiento para reacciones de acilación de grupo amino o formación de enlace amida, incluyen el método de azidas, método de anhídrido de ácido carbónico-carboxílico (cloroformato de isobutilo), el método de carbodiimida (diciclohexilcarbodiimida, diisopropil-carbodiimida, o carbodiimida soluble en agua, tal como método ?— etil— ?/'— [3— (dimetilamino)propil]carbodiimida), el método de éster activo (por ejemplo, p-nitrofenilo p-clorofenilo, triclorofenilo, pentacloro-fenilo, pentafluorfenilo, ácido /V-hidroxisuccínico imido y ésteres similares), el método K de reactivo Woodward, el método 1 ,1-carbonildiimidazol, los reactivos fosforosos o métodos de reducción por oxidación. Algunos de estos métodos pueden mejorarse agregando catalizadores apropiados, por ejemplo en el método de carbodiimida, mediante agregado de 1-hidroxibenzotriazol, o 4-DMAP. Otros agentes de acoplamiento son hexafluorfosfato de (benzotriazol-l-iloxi)-frís-(dimetilamino) fosfonio, ya sea solo o en presencia de 1-hidroxi-benzotriazol o 4-DMAP; o tetrafluorborato de 2-(IH-benzotriazol-1-il)-A/,N,/V',/V-tetrametiluronio (TBTU), o hexafluorfosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il)-?/, /,?/',/V'-tetrametiluronio (HATU). Estas reacciones de acoplamiento pueden llevarse a cabo en cualquier solución de (fase líquida) o de (fase sólida). Para los propósitos de la presente invención, un método preferido para acilación se lleva a cabo empleando HATU.

Las reacciones de acoplamiento se llevan a cabo preferiblemente en un solvente inerte, tal como hidrocarburos halogenados, por ejemplo diclorometano, cloroformo, solventes apróticos dipolares, tales como acetonitrilo, dimetilformamida, dimetilacetamida, DMSO, HMPT y éteres tales como tetrahidrofurano. (THF).

En muchos casos las reacciones de acoplamiento se efectúan en presencia de una base apropiada tal como amina terciaria, por ejemplo, trietilamina, diisopropiletilamina (DIPEA), /V-methyl-morfolina, N- metilpirrolidina, 4-DMAP o 1 ,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno (DBU). La temperatura de reacción puede estar en un rango de entre 0 °C y 50 °C y el tiempo de reacción puede estar en un rango de entre 15 min. y 24 h. El intermediario V puede ser luego convertido a un éster VI, bajo condiciones catalizadas por Pd en presencia de b/s(pinacolato)diboro tal como en la conversión del intermediario II al intermediario III.

ESQUEMA 2 Otros bloques de construcción usados en la síntesis de los compuestos de fórmula I se describen en el Esquema 2. a-Amino cetona VII (Esquema 2A), donde A tiene el mismo significado que para los compuestos de fórmula I y 2, X es un halógeno, está acoplado con una prolina apropiadamente sustituida por lo cual PG es un grupo protector en el nitrógeno de pirrolidina, preferiblemente ter- butoxicarbónico o benciloxicarbonilo, en presencia de un reactivo de acoplamiento para la acilación del grupo amino tal como se describió anteriormente para la conversión del intermediario IV al intermediario V, preferiblemente con HATU en presencia de DIPEA. El intermediario así formado es ciclado a los intermediarios imidazol de la fórmula general VIII por tratamiento con acetato de amonio, preferiblemente en un rango de temperatura de entre 0°C y 150°C, más específicamente de entre 80 °C y 150°C. Alternativamente, el intermediario VIII puede obtenerse por acoplamiento de a-halo cetona VII a con lo cual X independientemente, es un átomo de halógeno, con prolina apropiadamente protegida, con lo cual PG es un grupo de protección en el nitrógeno de pirrolidina, preferiblemente ter-butoxicarbonilo o benciloxicarbonilo, en presencia de una base apropiada, por ejemplo DIPEA, seguido de ciclación a un intermediario imidazol VIII tal como se describió anteriormente, preferiblemente en tolueno o xileno. Este compuesto puede ser luego transformado a un intermediario de fórmula IX, en una manera similar a la transformación del intermediario II al intermediario III. Alternativamente, el intermediario VIII puede desprotegerse, por ejemplo por tratamiento con HCI en ¡sopropanol en caso de que PG ¡guale a ter-butoxicarbonilo, al intermediario X (Esquema 2B) y sea además transformado al intermediario XI, usando condiciones similares a aquellas usadas en la transformación del intermediario IV al intermediario V. El ácido borónico XII es el resultado del intermediario XI mediante el uso de condiciones similares a aquellas que se usan en la conversión del intermediario II al intermediario III.

Imidazol XIII puede ser sintetizado en 4 etapas a partir de PG- Prolina (Esquema 2C) con lo cual PG es un grupo protector en el nitrógeno de pirrolidina, preferiblemente fer-butoxicarbonilo, tal como se describió en el Esquema 2C. El imidazol ??? puede sintetizarse usando el mismo procedimiento, excepto para las últimas etapas donde se introduce yodo en lugar de bromo en el imidazol, lo cual puede lograrse por di-yodación con \2I NaOH seguido de remoción de un yoduro con Na2S03.

ESQUEMA 3 III XV XVI Otros posibles intermediarios se describen en el Esquema 3. Aquí, se usa un dihalogenuro de XIV de la fórmula la cual A tiene el significado definido para los compuestos de fórmula I, y X y X' son halógenos, independientemente seleccionados entre yodo, cloro y bromo.. Alternativamente X y/ o X' pueden ser triflato usado en combinación con un halógeno. El Intermediario III es acoplado con el intermediario XIV, bajo condiciones de Suzuki-Miyaura, usando uno o más equivalentes del intermediario XIV. El intermediario XV resultante es luego transformado a XVI bajo condiciones similares a aquellas descritas para convertir el intermediario II al intermediario III. En caso de que PG iguale R-C(=0) donde R tiene el significado definido para los compuestos de fórmula I, el intermediario III es el mismo que el intermediario VI.

ESQUEMA 4 Tal como se ¡lustra en el Esquema 4, el acoplamiento del éster borónico III y halogenuro o triflato VIII, donde X es un halógeno o un triflato, bajo condiciones de Suzuki-Miyaura, da como resultado la formación del intermediario XVII. Acoplamientos similares de intermediarios apropiados descritos en los Esquemas 1 a 3 usando condiciones de Suzuki-Miyaura, pueden dar como resultado la formación de intermediario XVII. Por ejemplo, bromuro II y éster IX pueden acoplarse obteniendo como resultado el intermediario XVII, descrito para los intermediarios III y VIII.

Alternativamente, los compuestos de fórmula I pueden obtenerse tal como se ilustró en el Esquema 5. Un éster borónico de fórmula XVI es acoplado con la fórmula XIII o yoduro de fórmula XIIP, lo cual da como resultado el intermediario XVII. Después de desprotección del nitrógeno de pirrolidina bajo condiciones apropiadas, tales como por ejemplo el uso de HCI en isopropanol en caso de que PG iguale ter-butoxicarbonilo, se forma el intermediario XVIII. El acoplamiento con ácidos de la fórmula general R-C(=0)-OH o R'-C(=0)-OH donde R y R' tienen los significados definidos para los compuestos de fórmula I, bajo condiciones tales como las descritas para la conversión del intermediario IV al intermediario V, da como resultado la formación de un compuesto de fórmula I, donde R-C(=0)- y R'-C(=0)- son idénticos.

ESQUEMA 5 Para los métodos ¡lustrados en los Esquemas 4 y 5, donde PG es R-C(=0)- o R'-C(=0)-, el intermediario XVII es en realidad, un compuesto de fórmula I. En caso de que solamente un PG en el intermediario XVII iguale a R-C(=0)- o R'-C(=0)-, y el otro sea un grupo protector tal como por ejemplo ter-butoxicarbonilo, es posible una desprotección selectiva tal como se muestra en la conversión del intermediario XIX (Esquema 6) al intermediario XX, o el intermediario XXI al intermediario XXII. Los intermediarios XX y XXII pueden ser entonces convertidos a un compuesto de fórmula I tal como se describió para la conversión del intermediario XVIII a los compuestos de fórmula I que se ilustran en el Esquema 5.

ESQUEMA 6 Los métodos ilustrados en el Esquema 4 y primera etapa del Esquema 5, pueden usarse también para obtener el compuesto intermediario XXV (Esquema 7) donde los grupos pirrolidina están ortogonalmente protegidos mediante grupos protectores diferentes PG y PG' permitiendo de esta manera una desprotección selectiva, que da como resultado cualquiera de los compuestos XXVI o XXVII y la acilación subsiguiente con grupos R'-C(=0)- o R-C(=0)- apropiados, lo cual da como resultado el compuesto XXI o XIX' respectivamente (ver Esquema 7). En una etapa siguiente, el segundo grupo protector es removido selectivamente y el nitrógeno de pirrolidina es adiado para obtener un compuesto de fórmula I. Por ejemplo, para el propósito de la presente invención, dicha protección ortogonal puede lograrse usando el grupo f-Boc en una pirrolidina en combinación con el benciloxi carbonilo (Cbz) en la otra pirrolidina.

ESQUEMA 7 Los procedimientos de síntesis descritos anteriormente en los esquemas 1 a 7 pueden llevarse a cabo usando derivados racémicos de prolina, derivados de L-prolina o derivados de D-prolina. Por lo tanto, pueden obtenerse compuestos de fórmula I con estereoquímica alternativa.

En un aspecto más, la presente invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente o profilácticamente eficaz de un compuesto de fórmula I tal como se especifica aquí, y un portador farmacéuticamente aceptable. Una cantidad profilácticamente eficaz en este contexto es una cantidad suficiente para evitar la infección de HCV en sujetos que corren el riesgo de ser infectados. Una cantidad profilácticamente eficaz en este contexto es una cantidad suficiente para estabilizar la infección de HCV, para reducir la infección de HCV, o para erradicar la infección de HCV, en sujetos infectados. En un aspecto más, esta invención se refiere a un procedimiento para preparar una composición farmacéutica tal como la especificada aquí, que comprende mezclar íntimamente un portador farmacéuticamente aceptable con una cantidad terapéuticamente o profilácticamente eficaz de un compuesto de fórmula I, tal como se ha especificado aquí.

Por lo tanto, los compuestos de la presente invención o cualquier subgrupo de la misma puede formularse en varas formas farmacéuticas para propósitos de administración. Como composiciones apropiadas, pueden citarse todas las composiciones usualmente empleadas para administrar drogas sistémicamente. Para preparar las composiciones farmacéuticas de esta invención, una cantidad eficaz del compuesto particular, opcionalmente en forma de adición de sal, como ingrediente activo se combina en mezcla íntima con un portador farmacéuticamente aceptable, opcionalmente en forma de sal de adición, ya que el ingrediente activo se combina en mezcla íntima con un portador farmacéuticamente aceptable, donde dicho portador puede tener una amplia variedad de formas, dependiendo de la preparación deseada para la administración. Estas composiciones farmacéuticas, son deseables en forma de dosificación unitaria apropiada, particularmente, para administración oral, rectal, percutánea o por inyección parenteral .Por ejemplo, en la preparación de composiciones en forma de dosificación oral, pueden emplearse cualquiera de los medios farmacéuticos usuales tales como por ejemplo, agua, glicoles, aceites alcoholes y similares en el caso de preparaciones líquidas orales, tales como suspensiones, jarabes, elixires, emulsiones y soluciones, o portadores sólidos tales como almidones, azucares, caolín, lubricantes, aglutinantes, agentes desintegrantes y similares en el caso de polvos, pastillas cápsulas y tabletas. Debido a su facilidad de administración, las tabletas y cápsulas representan las formas de dosificación oral más ventajosas, en cuyo caso se emplean portadores farmacéuticos sólidos. Para composiciones parenterales, el portador comprende usualmente agua estéril, por lo menos en gran parte, aunque pueden incluirse otros ingredientes, por ejemplo, para ayudar a la solubilidad.. Por ejemplo, pueden prepararse soluciones inyectables, en las cuales el portador comprende solución salina, solución de glucosa, o una mezcla de solución salina y glucosa. También pueden prepararse suspensiones inyectables, en cuyo caso pueden emplearse portadores líquidos apropiados, agentes suspendedores y similares. También están incluidas las preparaciones de forma sólida destinadas a ser convertidas, porco tiempo antes de su uso, a preparaciones de forma líquida. En las composiciones apropiadas para administración percutánea, el portador comprende opcionalmente un agente realzador de penetración y/ o un agente humectante apropiado, combinado opcionalmente con aditivos apropiados de cualquier naturaleza en proporciones menores, donde dichos aditivos no introducen un efecto perjudicial significativo sobre la piel. Los compuestos de la presente invención pueden administrarse también por inhalación o insuflación oral en forma de una solución, una suspensión o un polvo seco usando cualquier sistema de liberación conocido en la técnica.

Es especialmente ventajoso formular las composiciones farmacéuticas anteriormente mencionadas en forma de dosificación unitaria para facilitar la administración y uniformidad de dosificación. Forma de dosificación unitaria, tal como se usa aquí, se refiere a unidades físicamente discretas apropiadas como dosis unitarias, donde cada unidad contiene una cantidad predeterminada de ingrediente activo, calculada para producir el efecto terapéutico deseado en asociación con el portador farmacéutico apropiado. Ejemplos de dichas formas de dosificación unitaria son tabletas (incluyendo tabletas recubiertas ranuradas o recubiertas), cápsulas, pastillas, supositorios, polvo en paquetes, obleas, soluciones o suspensiones inyectables y similares, y múltiples segregados de las mismas.

Los compuestos de fórmula I son activos como inhibidores del ciclo de replicación de HCV y pueden usarse en el tratamiento y profilaxis de la infección de HCV o enfermedades asociadas con HCV. Esta última incluye fibrosis hepática progresiva, inflamación y necrosis que lleva a cirrosis, enfermedad hepática de etapa final, y carcinoma hepatocelular. Se estima además que una cantidad de compuestos de esta invención son activos contra cepas mutadas de HCV.

La actividad antiviral ¡n vitro contra HCV, de los compuestos de fórmula I pueden ser ensayados en un sistema de replicación de HCV celular, basado en Lohmann et al. (1999) Science 285:110-1 13, con las modificaciones adicionales descritas por Krieger et al. (2001 ) Journal of Virology 75: 4614^624 and Lohmann et al. (2003) Journal of Virology 77: 3007-3019 para el genotipo 1 b'y para Yi et al. (2004) Journal of Virology 78: 7904-7915 para el genotipo 1a (que se incorpora aquí como referencia), el cual es ejemplificado además en la sección de ejemplos. Este modelo, aunque no es un modelo completo de infección para HCV, es ampliamente aceptado como el más sólido y eficiente modelo de replicación de ARN de HCV autónomo corrientemente disponible. Se apreciará que es importante distinguir entre compuestos que interfieren específicamente con las funciones de HCV, de aquellas que ejercen efectos citotóxicos o citostáticos en el modelo replicón HCV, y como causa de consecuencia una disminución en el ARN de HCV o concentración de enzima informante ligada. Se conocen ensayos en el campo de la evaluación de citotoxicidad celular basada por ejemplo en la actividad de enzimas mitocondriales usando tintes redox fluorogénicos, tales como resazurin. Además, existen tamices celulares de recuento para la evaluación de inhibición no seleccionare de actividad génica informante ligadas, tal como luciferasa de luciérnaga. Tipos de células apropiadas pueden equiparse mediante transfección estable con un gen informante de luciferasa cuya expresión depende de un promotor génico constitutivamente activo y dichas células pueden usarse como contra-tamices para eliminar inhibidores no selectivos.

Debido a sus propiedades antivirales particularmente sus propiedades anti-HCV los compuestos de fórmula I o cualquier subgrupo de los mismos, son útiles en la inhibición del ciclo de replicación de HCV, en particular en el tratamiento de animales de sangre caliente, en particular seres humanos, infectados con HCV, y para la profilaxis de infecciones de HCV. La presente invención se refiere además a un método de tratamiento de un animal de sangre caliente, en particular un ser humano, infectado con HCV, o que corre el riesgo de sufrir infección de HCV, donde dicho método comprende la administración de una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula I.

Los compuestos de fórmula I, tal como se han especificado aquí, pueden usarse por lo tanto como medicamento, en particular como medicamento para tratar o prevenir la infección de HCV. Dicho uso como medicamento o método de tratamiento, comprende la administración sistémica a sujetos infectados con HCV o sujetos susceptibles de infección con HCV, de una cantidad eficaz para combatir los trastornos asociados con infección de HCV o una cantidad eficaz para prevenir la infección de HCV.

La presente invención se refiere también al uso de los presentes compuestos en la manufactura de un medicamento para el tratamiento o la prevención de infección con HCV.

En general se ha contemplado que la cantidad antiviral diaria eficaz, sería de desde aproximadamente 0.01 hasta aproximadamente 50 mg/kg, o aproximadamente 0.01 hasta aproximadamente 30 mg/ kg de peso corporal. Puede ser apropiado administrar la dosis requerida como dos, tres, cuatro o más sub-dosis a intervalos apropiados a través del día. Dichas sub-dosis pueden formularse como formas de dosificación unitaria, por ejemplo, que contienen aproximadamente 1 hasta aproximadamente 500 mg, o aproximadamente 1 hasta aproximadamente 300 mg, o aproximadamente 1 hasta aproximadamente 100 mg, o aproximadamente 2 hasta aproximadamente 50 mg de ingrediente activo por dosis unitaria.

La presente invención se refiere también a combinaciones de un compuesto de fórmula (I) o cualquier subgrupo del mismo, tal como se ha especificado aquí con otros agentes anti-HCV. El término "combinación" puede relacionarse con un producto o equipo que contiene (a) un compuesto de fórmula I, tal como se ha especificado anteriormente, y (b) por lo menos otro compuesto capaz de tratar infección de HCV (que se designa aquí como agente anti-HCV), como una preparación combinada para uso simultáneo, separado o consecutivo en el tratamiento de infecciones de HCV. En cualquier modalidad, la invención se refiere a una combinación de un compuesto de fórmula (I) o cualquier subgrupo del mismo con por lo menos un agente anti— HCV . En una modalidad particular, la invención se refiere a una combinación de un compuesto de fórmula (I) o cualquier sub-grupo del mismo con por lo menos dos agentes anti-HCV. En una modalidad particular, la invención se refiere a la combinación de un compuesto de fórmula (I) o cualquier sub-grupo del mismo con por lo menos tres agentes anti-HCV. En una modalidad particular, la invención se refiere a la combinación de un compuesto de fórmula (I) o cualquier sub-grupo del mismo con por lo menos cuatro agentes anti-HCV.

La combinación de agentes anti-HCV, tales como interferon-a (IFN-a), interferon-a pegilado, ribavirina o una combinación de los mismos, y un compuesto de fórmula (I) o cualquier sub-grupo del mismo, pueden usarse como medicamento en una terapia de combinación.

Los agentes que pueden combinarse con los compuestos de la presente invención incluyen, por ejemplo, inhibidores nucleósidos y no-nucleósidos de polimerasa HCV, inhibidores de proteasa, inhibidores de helicasa, inhibidores de NS4B y agentes que inhiben funcionalmente el sitio de entrada ribosomal interno (IRES) y otros agentes que inhiben la adhesión a la célula de HCV o la entrada del virus, la traducción de ARN de HCV, transcripción de ARN de HCV, replicación o maduración de HCV, ensamblado o liberación del virus. Compuestos específicos en estas clases, incluyen inhibidores de proteasas HCV tales como telaprevir (VX-950), boceprevir (SCH-503034), narlaprevir (SCH-900518), ITMN-191 (R-7227), TMC435350 (TMC435), MK- 7009, BI-201335, BI-2061 (ciluprevir), BMS-650032, ACH-1625, ACH-1095, GS 9256, VX-985, IDX-375 (HCV NS4A inhibidor del factor de proteasa), VX-500, VX-813, PHX-1766, PHX2054, IDX-136, IDX-3 6, ABT-450, EP-013420 (y congéneres) y VBY-376;los inhibidores nucleosídicos de polimerasa HCv útiles en la invención incluyen R7128, PSI-7851 , PSI 7977, IDX-189.IDX-184, IDX- 02, R1479, UNX-08189, PSI-6130, PSI-938 y PSI-879 y varios otros nucleótidos e inhibidores de HCV, que incluyen aquellos derivados, como nucleósidos 2'-C-metilo modificados, nucleósidos 4'-aza modificados, y nucleósidos 7'-deaza modificados, por ejemplo 4-am ino-1 -[5-azido-4-h id roxi-5-h id roximetil-3-metiltetrahidrofuran-2-il]pirimidin-2(1 H)-ona y el éster bis-2-metilpropanoato del mismo. Inhibidores no-nucleósidos de polimerasa de HCV útiles en la invención incluyen HCV-796, HCV-371 , VCH-759, VCH-916, VCH-222, ANA-598, MK-3281 , ABT-333, ABT-072, PF-00868554, BI-207127, GS-9190, A-837093, JKT-109, GL-59728, GL-60667, ABT-072, AZD-2795 y 16-16 dióxido de 13-ciclohexil-3-metoxi-17,23-dimetil-7H-10,6-(metanoiminotioiminoetanooxietanoiminometano)indolo[2,1-a][2]benzazepina-14,24-diona.

Otros agentes anti-HCV abarcan agentes de inhibidores de polimerasa de HCV, R-7128, MK-0608, ABT-333, VCH759, PF-868554, GS9190, NM283.VCH-222, VCH-916, BI207217, ABT-072, IDX-102, PSI- 7851 , PSI-938, valopicitabina, PSI-6130, XTL-2125, NM-107, R7128 (R4048), GSK625433, R803, R-1626, BILB-1941 , HCV-796, JTK-109 y JTK-003, ANA-598, IDX-184, MK-3281 , MK-1220, derivados benzimidazol, derivados benzo-1 ,2,4-tiadiazina, derivados fenilalanina, A-831 y A-689; proteasas HCV, inhibidores de (NS2-NS3 y NS3-NS4A), Los compuestos de WO02/18369 (ver, por ejemplo, página 273, líneas 9-22 y página 274, línea 4 hasta página 276, línea 1 1), BI-1335, TMC435, MK7009, ITMN-19 , MK-7009, BI-201335, SCH9005 8, VX-813, ABT- 50, VBY376, PHX-1766, ACH-1625, BILN-2061 , VX-950, BILN-2065, BMS-605339, VX-500, SCH 503034; inhibidores de otros objetivos en el ciclo de vida de HCV, incluyendo helicasa, e inhibidores de metaloproteasa, ISIS— 14803; agentes inmunomoduladores tales como a-, ß-, y ?- interferones tales como rIFN-a 2b, rIFN-a 2ba, IFN-a de consenso (infergen), feron, reaferon, intermax a, rlFN-ß, infergen + actinmune, IFN-omega con DUROS, albuferon, locteron, Rebif, Oral IFN-a, IFN-a 2b XL, AVI-005, infergen-pegilados, compuestos interferon-a derivatizados pegilados tales como rlFN-a 2b pegilado, rIFN-a 2a pegilado, IFN- ß pegilado, compuestos que estimulan la síntesis de interferon en células, interleucinas, agonistas del receptor de tipo Toll (TLR), compuestos que realzan el desarrollo de la respuesta de célula T auxiliar, de tipo 1 , y timosina, otros agentes antivirales tales como ribavirina, análogos de ribavirina, tales como rebetol, copegus y viramidina (taribavirina), amantadina, y telbivudina, inhibidores de entrada interna al ribosoma, inhibidores de alfa-glucosidasa 1 , tales como X-3253 (celgosivir) y UT-231 B, hepatoprotectores tales como IDN-6556, ME-3738, LB-84451 y Mito Q, inhibidores virales de amplio espectro, tales como inhibidores de IMPDH (por ejemplo, compuestos de US5,807,876, US6,498,178, US6,344,465, US6,054,472, WO97/40028, WO98/40381 , WO00/56331 , ácido micofenólico y derivados del mismo, e incluyendo, pero sin limitarlo a VX-497, VX-148, y/o VX-944); y otras drogas para tratar HCV, tales como zadaxina, nitazoxanida, BIVN- 01 (virostat), PYN-17 (altirex), KPE02003002, actilon (CPG-10101 ), KRN-7000, civacir, GI-5005, ANA-975, XTL-6865, ANA-971 , NOV-205, tarvacina, EHC-18, NIM81 1 , DEBIO-025, VGX- 10C, EMZ-702, AVI 4065, Bavituximab, y Oglufanida; o combinaciones de cualquiera de los anteriores.

Puede ser beneficioso desarrollar ciertos de los agentes anti— HCV antes mencionados en su forma de prodroga, en particular el inhibidor nucleósido análogo de polimerasa de HCV. Ejemplos de dichas formas de prodrogas podrían ser fosfatos, fosforam ¡datos, o formas éster incluyendo mono-ésteres y di-ésteres. Dichas prodrogas requieren transformación in vivo al nucleósido libre, por ejemplo én la pared intestinal o hígado, antes de fosforilación intracelular a las especies activas.

Por lo tanto, para combatir o tratar infecciones de HCV, los compuestos de fórmula (I) o cualquier sub-grupos de los mismos, pueden ser co-administrados en combinación con, por ejemplo, interferon-a (IFN-a), ¡nterferon-a pegilado, ribavirina o una combinación de los mismos, así como también terapéutica basada en anticuerpos dirigidos contra epitopos de HCV, ARN de pequeña interferencia (ARN si), ribozimas, ADNzimas, ARN antisentido, antagonistas de moléculas pequeñas de por ejemplo proteasa NS3, helicasa NS3 y polimerasa NS5B.

Las combinaciones de la presente invención pueden usarse como medicamentos. Por consiguiente, la presente invención se refiere al uso de un compuesto de fórmula (I) o cualquier subgrupo del mismo tal como se definió anteriormente para la manufactura de un medicamento útil para inhibir la actividad de CV en un mamífero infectado con virus de HCV, donde dicho medicamento se usa en una terapia de combinación o cualquier subgrupo del mismo tal como se definió anteriormente para la manufactura de un medicamento útil para inhibir la actividad de HCV en un mamífero infectado con virus de HCV, donde dicho medicamento se usa en una terapia de combinación, comprendiendo dicha terapia de combinación en particular, un compuesto de fórmula (I) y por lo menos otro agente anti-HCV, por ejemplo IFN-a, IFN-a pegilado, ribavirina o una combinación de los mismos.

En una modalidad preferida, la combinación de compuestos de fórmula (I), o cualquier subgrupo de los mismos con otro agente que altera la replicación viral de HCV, puede actuar sinérgicamente. Las interacciones de compuestos pueden analizarse mediante una variedad de métodos mecanicísticos y empíricos.

Una modalidad para analizar dichas combinaciones es mediante gráficos tri-dimensionales y cálculos de volumen sinérgico producidos por MacSynergyTM II basados en el modelo de independencia Bliss (Dr. Mark Pritchard, University of Alabama, Tuscaloosa, AL). De este modo, se dice que los compuestos de la presente invención, en combinación con otro agente que altera la replicación de HCV viral actúan sinérgicamente o tiene efecto sinérgico cuando los valores expresados en nM2% (volumen de sinergia) están entre 25 y 50 nM2% (cantidad de sinergia menor, pero significativa), entre 50 y 100 nM2% (sinergia moderada) o por arriba de 100 nM2% (sinergia fuerte).

Los ejemplos siguientes se dan para ilustrar la invención no deberían considerarse como una limitación de su alcance.

EJEMPLOS EJEMPLO 1 Síntesis de los compuestos de fórmula XVIIIa (A= 1.1 preparación del intermediario Ha (PG= Boc; X= Br) Na A una solución de Boc-L-Prolina (2669 mg, 12.4 mmoles) en piridina /DMF (30 mL, 1/1) se agregó di(1 H-imidazol-1-¡l)cetona (2205 mg, 13.6 mmoles). La mezcla se agitó a 45°C durante 2 horas. Se agregó 4-bromobencen-1 ,2-diamina (2319 mg, 12.4 mmoles) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche. El solvente se removió y el residuo se calentó en ácido acético (15 mL) a 100°C durante 30 minutos. Después de la concentración del residuo, la mezcla se dividió entre acetato de etilo y una solución de bicarbonato de sodio saturado. Se separó la fase orgánica y se lavó con agua, después de secar sobre Na2S04, la mezcla se filtró y el filtrado se concentró al vacío. El residuo obtenido se purificó mediante cromatografía evaporativa usando CH2Cl2/EtOAc 90/10 a 50/50, dando como resultado el compuesto lia (3.146 g, 69 %). 1.1 a Preparación del intermediario llb (PG= Cbz; X= Br) llb A una solución agitada de N-benciloxicarbonil-L-Prolina (39.9 g, 160.4 mmoles) en THF seco (300 mL) se agregó CDI (28.6 g, 176.4 mmoles). La mezcla de reacción se agitó a 45°C durante 2 horas. Se agregó 4-bromc—1 ,2-diaminobenceno (30 g, 160.4 mmoles) y la reacción se agitó adicionalmente durante 16 horas a temperatura ambiente. El solvente se removió bajo presión reducida, el residuo se disolvió en ácido acético (100 mL) y se agitó en un manto pre-calentado a 100°C durante 40 minutos. Se removió luego el solvente bajo presión reducida. El residuo obtenido se disolvió en diclorometano (500 mL) y agua (300 mL). Se separó la capa orgánica de la capa acuosa, se lavó con HCI 0.5N (300 mL) seguido de una solución saturada de NaHCÜ3 (300 mL). Después de secar con MgS04 y concentración al vacío, el producto se purificó mediante cromatografía en columna (gradiente de elución con diclorometano a 10 % EtOAc en dicloro-metano) dando como resultado el compuesto llb ( 7.1 g, 25 %). 1.2 Preparación del intermediario Illa (PG= Boc) lia Illa A una mezcla de lia (200 g, 546 mmoles), acetato de potasio (160.8 g, 1.64 moles) y 4,4,4,,4,,5,5,5,,5'-octametil-2,2'-bis(1 ,3,2-dioxaborolano) (416 g, 1.64 moles) en DMF (3L) se agregó Pd(dppf)CI2 (20 g) bajo gas nitrógeno. La mezcla de reacción se agitó a 85°C durante 15 horas. La mezcla se diluyó con acetato de etilo, se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio, se removieron los sólidos por filtración, y los solventes del filtrado se removieron bajo presión reducida. Se purificó el residuo mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (éter de petróleo: acetato de etilo 10:1 a 2:1 ) para proporcionar 125 g de Illa en forma de un sólido blanco (contiene 15% de ácido borónico). 1.3 Preparación del intermediario Villa (PG= Boc, X= Br ; A= Se agregó por goteo ?/,/V-diisopropiletilamina (80.0 g, 0.62 moles), durante 30 minutos, a una mezcla de aminometil-(4-bromo-fenil)-cetona (50 g, 0.2 moles), metanaminio hexafluorfosfato de 2-(1 H-7-azabenzotriazol-1-il)-1 ,1 ,3,3-tetrametil uronio (HATU; 53 g, 0.21 moles), N-Boc-L-Prolina (43.0 g, 0.2 moles ) en DMF (600 ml_). La mezcla de reacción se agitó a 5°C durante 1 hora. Se removieron al vacío la mayor parte de los componentes volátiles, y el residuo resultante se dividió entre acetato de etilo (600 ml_) y agua (300 ml_). La capa orgánica se lavó con NaHC03 acuoso saturado (500 mL) y salmuera (500 mL), se secó sobre MgS04, los sólidos se removieron por filtración y los solventes del filtrado se removieron bajo presión reducida. El producto crudo se purificó mediante cromatografía en columna (gel de sílice, éter de petróleo/acetato de etilo 3:1 a 1 :1 ) para obtener un sólido amarillo pálido, 60 g (62%) del intermediario XXIII. 1H RMN: (CDCI3 400 MHz): d 7.85 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.66 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 4.67-4.80 (m, 2H), 4.33-4.41 (m, 1 H), 3.42-3.53 (m, 2H), 2.19- 2.31 (m, 2H), 1.90- 2.00 (m, 2H), 1.50 (s, 9H) Etapa 2 Una mezcla del intermediario XXIII (60 g, 0.14 moles) y acetato de amonio (89 g, 1.4 moles) en xileno (800 mL) se calentó a reflujo durante 16 horas. La mezcla de reacción se dividió entre acetato de etilo (700 mL) y una solución NaHC03 saturada (500 mL). Se separaron las capas y la capa acuosa se extrajo con acetato de etilo adicional (2 * 300 mL). Se combinaron las capas orgánicas, se lavaron con salmuera (500 mL), se secaron sobre MgS04, los sólidos se removieron por filtración y los solventes del filtrado se evaporaron bajo presión reducida. El material resultante se recristalizó a partir de acetato de etilo /éter de petróleo para proporcionar un sólido amarillo, Villa, 25 g (43%). 1H RMN: (CD3OD 400 MHz): d 7.62 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.51 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.31-7.36 (m, 1 H), 4.93-4.98 (m, 1 H), 3.66-3.70 (m, 1 H), 3.48- 3.54 (m, 1 H), 2.29-2.41 (m, 1 H), 1.93-2.17 (m. 3H), 1.48 (s, 3H), 1.27 (s, 6H). 1.4 Preparación del intermediario XVIIa (PG= Boc . ?=??~^ )) A Villa (1 138 mg, 2.90 mmoles) y tefra/«'s(tr¡fenilfosf¡na )paladio (140 mg, 0.121 mmoles) en tolueno bajo atmósfera de nitrógeno, se agregaron Na2CC>3 2M (2.5 ml_, 5.0 mmoles) y compuesto Illa (1 .0 g, 2.42 mmoles) en metanol. La mezcla agitada vigorosamente se calentó a 80°C bajo atmósfera de nitrógeno y se agitó a esta temperatura durante la noche.

Después de enfriar a temperatura ambiente, se agregó CH2CI2 (15 mL) seguido de agua (10 mL). Se separó la capa orgánica y la capa acuosa se extrajo con CH2CI2. Se secaron las capas orgánicas combinadas sobre Na2S04 y después de filtración, se concentraron hasta sequedad bajo presión reducida para proporcionar un residuo marrón. Este residuo se purificó mediante cromatografía en columna evaporativa con CH2CI2 a CH2Cl2/metanol 90/10 como eluyente, dando como resultado el compuesto XVIIa (878 mg, 61 %). 1.5 Preparación del intermediario XVIIIa (A= \—// V-A ) XVIIa XVIIIa A una solución de XVIIa (878 mg, 1.47 mmoles) en isopropanol (5ml_) se agregó HCI (5-6 M en isopropanol, 15 ml_). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche.EI solvente se evaporó, el sólido obtenido XVIIIa se secó al vacío y se usó así, en la etapa siguiente.

EJEMPLO 2 Síntesis de los compuestos de fórmula XVIIIb (A= V 2.1 preparación de L-boc-prolinol Se agregó por goteo un complejo de sulfato de borano-metilo (180 mL, 1.80 moles) a una solución de A/-Boc- L-Prolina (300 g, 1.39 moles) en THF anhidro (3.0 L) que se enfrió a 0°C. Cuando cesó la emanación de gas, se removió el baño de hielo y la solución se agitó a 10°C durante 18 horas. La cromatografía de capa delgada (TLC) mostró que no quedaban restos del material de partida y que se había formado el producto deseado. La solución se enfrió a 0°C y se agregó lentamente metanol (2.4 L). Los solventes se removieron bajo presión reducida. El residuo se reconstituytó en diclorometano (1 L), se lavó con NaHC03 (500 mL, saturado, acuoso) y salmuera (500 mL), se secó sobre MgS04, los sólidos se removieron por filtración, y los solventes del filtrado se removieron bajo presión reducida para proporcionar un sólido blanco, 260 g (93%), usado en la etapa siguiente sin purificación adicional. 2.2 preparación de L-boc-prolinal A una solución de L-boc-prolinol (100 g, 500 mmoles) en CH2CI2 (1.5 L) a 0°C se agregaron sucesivamente, bajo agitación vigorosa, 2,2,6,6-tetrametilpiperidina -1-oxilo (TEMPO; 1.56 g, 10 mmoles) y NaBr (5.14 g, 50 mmoles). A la mezcla resultante se agregó por goteo una solución de NaHC03 (6.3 g, 75 mmoles) y 6% NaCIO en cloro activo (750 mL, 750 mmoles) a 0°C durante un período de 1 hora. La TLC mostró que no quedaban restos del material de partida y que se había formado el producto deseado. La mezcla se extrajo rápidamente con diclorometano (2 ? 1.5 L). Se combinaron las capas orgánicas, se lavaron con NaHS04 (10%, 1 L) y Kl (4%, 200 mL), luego con Na2S203 (10%, 1 L) y salmuera (1.5 L), se secaron sobre MgS0 , los sólidos se removieron por filtración, y los solventes se evaporaron para proporcionar un aceite amarillo, L-boc-prolinal, (89 g, 92%), usado en la etapa siguiente sin purificación adicional. 2.3 Preparación del intermediario XXIV XXIV Se agregó por goteo amoníaco acuoso (25~28%, 200 mL) a una solución de L-boc-prolinal (89 g, 0.44 moles) y glioxal (183 mL de 40% en agua) en metanol (1 L). La mezcla de reacción se selló y se hizo reaccionar a 10°C. Después de 16 horas, se agregaron glioxal adicional (20 mL) y amoníaco acuoso (20 mL) y se hizo reaccionar durante un adicional de 6 horas. Se removieron los solventes bajo presión reducida, y el crudo se reconstituyó en acetato de etilo (1 .0 L), se lavó con agua y salmuera, se secaron sobre MgS04, los sólidos se removieron por filtración y los solventes se removieron bajo presión reducida. El crudo se purificó por cromatografía en columna (gel de sílice, diclorometano a metanol/diclorometano 1 :70) para obtener 73 g (70%) del intermediario XXIV en forma de un sólido blanco. 1H RMN: (CD3OD 400 MHz) d 6.95 (s, 2H), 4.82-4.94 (m, 1 H), 3.60-3.70 (m, 1 H), 3.41-3.50 (m, 1 H), 2.20-2.39 (m, 1 H), 1.91-2.03 (m, 3H), 1.47 (s, 3H), 1.25 (s, 6H) 2.4 Preparación del intermediario Xllla (PG= Boc) Se agregó en porciones N-bromosuccinimida (47.2 g, 0.26 moles) durante 1 hora a una solución fría (baño de hielo-etanol, -10 °C) de XXIV (63.0 g, 0.26 moles) en CH2CI2 (1.5 L) y se agitó a una temperatura similar durante 2 horas. La mezcla de reacción se concentró al vacío y el residuo se purificó por HPLC preparatoria para proporcionar 25.3 g (30%) de Xllla en forma de un sólido amarillo pálido. 1H RMN: CD3OD 400Mhz d 6.99-7.03 (s,1 H), 4.77^t.90 (m, 1 H), 3.61-3.68 (m, 1 H), 3.42-3.50 (m, 1 H), 2.20-2.39 (m, 1 H), 1.89-2.05 (m, 3H), 1.47 (s, 3H), 1.27 (s, 6H). 2.4a Preparación del intermediario Xlll'a (PG= Boc) A una solución de yodo (43.3 g, 170.5 mmoles, 2 eq) en cloroformo (210 mL) en un frasco de fondo redondo (1 L) se agregó una suspensión de XXIV (20 g, 84.3 mmoles) en una solución de NaOH acuosa (2M, 210 mL). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 15 horas. A la mezcla de reacción resultante se agregó una solución Na2S203 acuosa saturada (100 mL) y la capa orgánica se separó. La capa acuosa se extrajo con cloroformo (4x 150 mL). Se combinaron las capas orgánicas, se lavaron con agua y se secaron sobre sulfato de magnesio. Se filtraron los sólidos y la solución se evaporó hasta sequedad para proporcionar diyoduro (38.61 g, 89 %).

Se colocaron el intermediario de diyoduro obtenido (2.24 g, 4.58 mmoles) y sulfito de sodio (4.82 g, 38 mmoles) en un frasco de fondo redondo (100 mL) y se suspendieron en 30% de EtOH/agua (80 mL). La mezcla resultante se reflujo durante 40 horas. El solvente se removió y después de la adición de H20 (20 mL), la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Los sólidos se filtraron, se lavaron con agua y se secaron en un horno al vacío para proporcionar el compuesto Xlll'a (1.024 g, 61 %). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 1.16 y 1.38 (2x br. s., 9 H), 1 .68 - 2.02 (m, 3 H), 2.02 - 2.27 (m, 1 H), 3.18 - 3.38 (m, 1 H), 3.38 -3.59 (m, 1 H), 4.53 - 4.88 (m, 1 H), 6.81 (m, -0.1 H), 7.05 - 7.28 (m, -0.9 H), 1 1.90 - 12.20 (m, -0.9 H), 12.22 - 12.40 (m, -0.1 H) 2.5 Preparación del intermediario XVb (X= Br; A= V PG= Boc) Se disolvieron 2,6-dibromonaftaleno (6.92 g, 24.2 mmoles), éster borónico Illa (2 g, 4.84 mmoles), NaHC03 (813 mg, 9.68 mmoles), (dppf)PdCI2 (710 mg, 0.968 mmoles) en tolueno (75 mL). Se agregó agua (1 mL) y la mezcla se calentó durante 7 horas a reflujo. Los sólidos se removieron por filtración sobre dicalite y el filtrado se evaporó hasta sequedad sobre sílice. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna por gradiente de elución con heptano a acetato de etilo. Las fracciones se reunieron y el solvente se removió bajo presión reducida. El residuo (1.89 g, 79 %) se usó así en la etapa siguiente. 2.6 Preparación del intermediario XVIb (A= . PG= Se disolvieron bromo XVb (1890 mg, 3.83 mmoles), 4,4,4,,4,,5,5,5,,5,-octametil-2,2'-bis(1 ,3,2-dioxaborolano) (2437 mg, 9.59 mmoles), KF (390 mg; 6.71 mmoles) y (dppf)PdCI2 (281 mg, 0.384 mmoles) en tolueno (50 mL) y se calentaron 3 días a reflujo.

Los sólidos se removieron por filtración sobre dicalite y el filtrado se evaporó hasta sequedad sobre sílice. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna usando gradiente de heptano a acetato de etilo. Las fracciones que contenían el producto se reunió y el solvente se removió bajo presión reducida. El residuo (1.22 g, 59 %) se usó así en la reacción siguiente. 2.6a Preparación alternativa del intermediario XVIb (A=V PG= Boc) Se agitaron bajo nitrógeno, Illa (25 g, 60.5 mmoles), trifluormetansulfonato de 6-bromonaftalen-2-ilo (20 g, 56.7 mmoles), K3P04 (36.65 g, 173 mmoles) y (PPh3)4Pd (717 mg, 0.62 mmoles) en THF (60 mL) y agua (15 mL) con el manto de calentamiento a 85 °C (reflujo) durante 2 horas. Se agregó CH2CI2 (50 mL) y se separó la capa acuosa. Se secó la capa orgánica sobre MgS04 y después de filtración, el filtrado se concentró dando como resultado un sólido pegajoso. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (éter de petróleo/acetato de etilo 15/1 a 1/1 ) para proporcionar XVb (20 g; 40.6 mmoles). Se agitaron el compuesto XVb (1 g, 2.0 mmoles), acetato de potasio (0.5 g, 5.0 mmoles), 4,4>4',4,,5,515',5'-octametil-2,2'-bis(1 ,3,2-dioxaborolano) (1.29 g, 5.0 mmoles), y Pd(dppf)CI2 (0.1g) en DMF (15 ml_) bajo argón. La mezcla se calentó a 60°C durante 5 horas. Después de enfriamiento, se agregó CH2CI2 (50 ml_) y la mezcla se lavó con NaHC03 saturado. La capa acuosa se separó y se extrajo con CH2CI2. Se combinaron las capas orgánicas y se secaron sobre gS04. El solvente se removió después de filtración y el producto se purificó por cromatografía en columna (gradiente de elución con éter de petróleo/acetato de etilo 10/1 a 1/1) para proporcionar XVIb (0.7 g, 1.3 mmoles, 65 %) en forma de un sólido amarillo claro. 2.6b Preparación del intermediario Vlllb(X PG= Boc) Etapa 1 Se suspendió ácido 6-bromo-2-naftoico (72.3 g, 282 mmoles, 1.0 equiv.) en diclorometano (600 mL) y se agregó DMF (catalítico, 5 gotas).

Se agregó en porciones cloruro de oxalilo (71.6 g, 564 mmoles, 2.0 equiv.) durante 1 hora. La mezcla de reacción se agitó durante la noche con un tubo de secado CaC^ con abertura en el frasco. Ocurrió la completa disolución. La mezcla de reacción se concentró, se agregó diclorometano (100 mL) y el solvente se evaporó nuevamente, proporcionando cloruro de 6-bromo-2-naftoilo (76.1 g, 100 %) en forma de un aceite que se usó así en la etapa siguiente.

Etapa 2 Se disolvió clorhidrato de N,O-dimetilhidroxilamina (41.3 g, 423 mmoles, 1.5 equiv.) en agua destilada (200 mL) y se agregó en porciones carbonato de potasio (1 17 g, 3.0 equiv.) (emanación de CO2). Se agregaron agua (300 mL) y diclorometano (200 mL) y se agregó en porciones una solución de cloruro de 6-bromo-2-naftoilo (76.1 g, 282 mmoles, 1.00-equiv.) en diclorometano (300 mL) a esta mezcla mientras se agitaba. La mezcla de reacción se agitó durante 1 hora. La capa orgánica se separó, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró, se concentró y se secó al vacío durante la noche, proporcionando 6-bromo-N-metoxí-N-metil-2-naftamida (82.9 g, 100 %) en forma de un sólido marrón.

Etapa 3 6-bromo-N-metoxi-N-metil-2-naftamida (82.9 g, 282 mmoles, 1 equiv.) se disolvió en tetra h id rotura no (600 mL) en un frasco de 4 cuellos bajo nitrógeno. La mezcla de reacción se enfrió en un baño de hielo y se agregó por goteo bromuro de metil magnesio (3.2 M in metil-tetrahidrofurano, 197 mL, 2.2 equiv.) durante 1 hora, mientras se mantenía la temperatura de la reacción entre 10-15°C. La mezcla de reacción se agitó 30 minutos adicionales en un baño de hielo. Se agregó luego cuidadosamente por goteo ácido clorhídrico acuoso (2 M, 100 mL) mientras se enfriaba en un baño de hielo. Se evaporó el solvente orgánico y el producto precipitado se extrajo con diclorometano (500 mL). La solución se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró. El residuo sólido se secó al vacío a 40°C proporcionando 1-(6-bromonaftalen-2-il)etanona (70.6 g, 99 %).

Alternativa para la preparación de 1-(6-bromonaftalen-2-iD- Una mezcla de 2-bromonaftaleno (41 .4 g, 200 mmoles), cloruro de acetilo (1 1.3 mL, 160 mmoles), nitrobenceno (250 mL) y AICI3 (28g, 210 mmoles) se agitó durante 4 horas a 100°C (temperatura de baño de aceite). La mezcla de reacción resultante se enfrió, se vertió en hielo/agua (100 mL) y se filtró. El filtrado se lavó con agua (100 mL). El solvente (nitrobenceno) se removió por destilación. El residuo resultante se cristalizó a partir de hexano para proporcionar 18 g del producto deseado (36% de rendimiento). 1-(6-bromonaftalen-2-il)etanona: 1H RMN (400 MHz, AC ETO N ITR I LO-d3) d ppm 2.66 (s, 3 H) 7.66 (dd, J=8.8, 2.0 Hz, 1 H) 7.86 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 7.94 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 8.02 (dd, J=8.8, 1.8 Hz, 1 H) 8.13 (d, J=2.0 Hz, 1 H) 8.53 (d, J=1.8 Hz, 1 H).

Etapa 4 Se disolvió 1-(6-bromonaftalen-2-il)etanona (55.6 g, 223 mmoles, 1.0 equiv.) en diclorometano (1.3 L). Se agregó por goteo dibromo (78.3 g, 490 mmoles, 2.2 equiv.) durante 30 minutos. La mezcla de reacción se agitó durante 1 hora y se concentró para proporcionar 2,2-dibromo-1-(6-bromonaftalen-2-il)etanona en forma de un sólido que se usó en la etapa siguiente.

Se disolvió 2,2-dibromo-1-(6-bromonaftalen-2-il)etanona (90.0 g, 221 mmoles, 1.00) en tetrahidrofurano (800 mL), se agregó trietilamina (27.67 mL, 199 mmoles, 0.9 equiv.) seguido de fosfito de dietilo (45.8 g, 332 mmoles, 1.50 equiv.). La mezcla de reacción se agitó durante la noche. La mezcla de reacción se filtró y el solvente se removió al vacío. El residuo obtenido se disolvió en acetato de etilo (1.2 L) y se lavó con agua. Se separó la capa orgánica, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró para proporcionar 2-bromo-1-(6-bromonaftalen-2-il)etanona crudo (70.3 g). La recristalización a partir de acetonitrilo proporcionó 30 g (primer baño) y 6.5 g (segundo baño) de 2-bromo-1-(6-bromonaftalen-2-il)etanona (50 %) Etapa 5 Se suspendió 2-bromo-1-(6-bromonaftalen-2-il)etanona (4.9 g, 14.9 mmoles, 1 equiv.) en acetonitrilo (150 mL) a 20°. Se agregó (L)-Boc-Prolina (3.22g, 14.9 mmoles, 1 equiv.) seguido de N-etil-N-isopropilpropan- 2-amina (2.83 mL, 16.4 mmoles, 1.10 equiv.) La mezcla de reacción se agitó a 20°C durante 30 minutos. La mezcla de reacción se concentró. El residuo se disolvió en diclorometano y se lavó sucesivamente con ácido clorhídrico acuoso (1 %, 100 mL) y una solución acuosa de NaHCC>3. Después de secado sobre sulfato de sodio, filtración y concentración, el aceite residual (6.52 g, 94%) se usó así en la etapa siguiente.

Se agregó acetato de amonio (16.3 g, 212 mmoles, 15 equiv.) al compuesto obtenido anteriormente (6.52 g, 14.1 mmoles, 1 .00 equiv.) se disolvió en tolueno (150 mL) y la mezcla se reflujo durante la noche. La mezcla de reacción se concentró y el residuo se cristalizó a partir de acetonitrilo (100 mL). Los cristales se filtraron y secaron al vacío a 40°C para proporcionar Vlllb (3.2 g, 51 %).

Boc) Vlllb (3.076 g, 6.95 mmoles), bispinacolatodiborónico (2.648 g, 10.43 mmoles), acetato de potasio (1.365 g, 13.91 mmoles) y PdCI2(dppf) (254 mg, 0.348 mmoles) se disolvieron en tolueno (30 mL) y calentaron durante 17 horas a 85°C bajo argón. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, se agregó diclorometano (50 mL) y la mezcla se lavó con una solución NaHC03 saturada. La fase orgánica se secó sobre MgS04, se filtró, se concentró al vacío y purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (gradiente de elución a partir de 20 a 50% de EtOAc en heptano) para proporcionar IXb (2.63 g, 77 %). El producto puede precipitarse a partir de hexano/ i-Pr20 (3/2) 2.6d Preparación del intermediario Vlllc (X= Br, A= \- PG= Cbz) A una solución de 2-bromo-1-(6-bromonaftalen-2-il)etanona (57.7 g, 175.9 mmoles, 80% puro) en acetonitrilo (1 L), se agregó L-Cbz-Prolina (43.8 g, 175.9 mmoles), seguido de diisopropiletilamina (33.4 mL, 193.5 mmoles) y la reacción se agitó 40 minutos a temperatura ambiente. El solvente se removió bajo presión reducida y el residuo obtenido se redisolvió en diclorometano (500 mL), se lavó con 1 % de HCI (500 mL) y NaHC03 acuoso saturado (500 mi). La fase orgánica se secó con MgS04, se filtró y el solvente se removió bajo presión reducida dando como resultado un residuo aceitoso marrón (80 g) que se usó así en la etapa siguiente.

Parte del residuo anterior (69.8 g, 140.6 mmoles) y acetato de amonio (162.6 g, 2.11 moles) se agitaron en tolueno y reflujaron durante la noche. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y el solvente se removió bajo presión reducida. El residuo obtenido se agitó en una mezcla de diclorometano y agua (1/1 , 1500 mL) hasta precipitar el compuesto Vlllc. Después de filtrar y enjuagar con agua, se obtuvo el compuesto Vlllc (61.3 g, 92 %) en forma de un polvo blanco. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 1.84 - 2.38 (m, 4 H), 3.42 - 3.56 (m, 1 H), 3.58 - 3.73 (m, 1 H), 4.84 - 5.20 (m, 3 H), 6.97 - 7.46 (m, 5 H), 7.54-7.60(m, 1 H), 7.63-7.71 (m, 1 H), 7.83 - 7.91 (m, 2 H), 7.95-8.05 (m, 1 H), 8.10-8.16 (m, 1 H), 8.22-8.37 (m, 1 H), 1 1.92 - 12.44 (m, 1 H) 2.7 Preparación del intermediario XVllb (A= \- , PG= Boc) Al éster borónico XVIb (1.22 g, 2.26 mmoles), bromuro Xllla (1072 mg, 3.39 mmoles), bicarbonato de sodio (380 mg, 4.52 mmoles), Pd(dppf)CI2 (166 mg, 0.226 mmoles) en tolueno (50 mL), se agregó agua (1 mL). La mezcla resultante se calentó a reflujo durante la noche. La mezcla de reacción se filtró, se evaporó hasta sequedad y se purificó por cromatografía en columna por gradiente de elución con heptano a acetato de etilo. Las fracciones recogidas que contenían el producto se reunió y los volátiles se removieron bajo presión reducida. El residuo (960 mg, 65 %) se usó así en la siguiente reacción. 2.7a Preparación Alternativa del intermediario XVHb (A= \- PG= Boc) Se agitaron XVlb (10 g, 18.5 mmoles), Xlll'a (8.76 g, 24 mmoles), NaHC03 (9.32 g, 1 1 1 mmoles) y Pd(dppf)CI2 (1g) en dioxano/agua (140 mL, 6/1 ) bajo argón. La mezcla se calentó a 85 °C durante 15 horas. Se agregó salmuera (100 mL ) y la mezcla se extrajo con CH2CI2, después de secar sobre MgS04, filtración y evaporación del solvente, el residuo se purificó por cromatografía en columna mediante gradiente de elución con CH2CI2 a EtOAc para proporcionar XVHb (7 g, 58 %). 2.7b Preparación Alternativa del intermediario XVIIb (A PG= Boc) A una solución agitada, desoxigenada de Vlllb (20.0 g, 45.2 mmoles, 1 .00 equiv.), Illa (20.6 g, 49.7 mmoles, 1.1 equiv.) y bicarbonato de sodio (1 1.4 g, 136 mmoles, 3.0 equiv.) en 1 ,4-dioxano/agua (500 ml_, 5: 1 ) bajo nitrógeno, se agregó complejo dicloruro de diclorometano de 1 ,1 '-Bis(d¡fenilfosfino)ferroceno-paladiom(ll) (2.50 g, 4.52 mmoles, 0.1 equiv.). La mezcla se calentó a 80°C bajo argón durante 15 horas y se enfrió a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se diluyó con diclorometano (500 mL) y se lavó con salmuera (2 x 150 mL) se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y evaporó hasta sequedad para proporcionar una espuma marrón oscura (43 g). La espuma se purificó usando cromatografía en columna de gel de sílice (gradiente de elución con 0-6% MeOH en CH2CI2) para proporcionar XVIIb (19.52 g, 65%) en forma de un polvo blancuzco. 2.8 Preparación del intermediario XVIIlb (A= V A una solución de XVIIb (960 mg, 1.48 mmoles) en CH2CI2 (25mL) se agregó HCI (5-6 M en isopropanol, 5 mL). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche. El solvente se evaporó, el sólido obtenido se secó al vacío y se usó así en la etapa siguiente. 2.8a Preparación Alternativa del intermediario XVIIlb Se disolvió XVIIb (19.52 g, 30.1 mmoles, 1.00 equiv.) en diclorometano (200 mL) y se agregó HCI en isopropanol (5-6 N, 300 mL). La mezcla de reacción se agitó durante 1 h a temperatura ambiente. Se agregó tBuOMe (1000 mL) a la suspensión y la suspensión se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. Se enjuagó el sólido filtrado con tBuOMe (2x 100 mL) y se secó bajo vacío durante la noche para proporcionar XVIIlb en forma de un polvo (15.2 g). 1H RMN (400 MHz, MeOD-d4) d ppm 2.15 - 2.37 (m, 2 H), 2.37 - 2.52 (m, 2 H), 2.52 - 2.69 (m, 2 H), 2.69 - 2.88 (m, 2 H), 3.56 - 3.71 (m, 4 H), 5.19 - 5.41 (m, 2 H), 7.90 - 8.02 (m, 3 H), 8.05 (dd, J = 8.6, 1.6 Hz, 1 H), 8.10 - 8.25 (m, 4 H), 8.30 (d, J=1.4 Hz, 1 H), 8.47 (d, J=1.2 Hz, 1 H) EJEMPLO 2a Síntesis de los compuestos de fórmula XXVI y XXVII .¡ - ^ ) 2a.1 Preparación del intermediario XXVb (A= y ^ ' ; PG= Cbz; PG'= Boc) A IXb (2.63 g, 5.37 mmoles), llb (2.80 g, 6.99 mmoles), PdCI2(dppf) (298 mg, 0.537 mmoles) y bicarbonato de sodio (1.354 g, 16.12 mmoles), se agregó dioxano/agua (50 ml_, 5/1 ). La reacción se calentó durante 13 horas a 80°C bajo atmósfera de argón. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, se diluyó con diclorometano y se agregó salmuera, la mezcla se filtró sobre dicalite y se separó la fase orgánica. La fase orgánica se secó con MgS04l el solvente se removió bajo presión reducida y se purificó por cromatografía en columna (gradiente desde 0 a 3% de metanol en CH2CI2) para proporcionar XXVb (2.086 g, 57%) Bo Una solución agitada de Vlllc (36.1g, 75.8 mmoles), Illa (28.5g, 68.89 mmoles) y bicarbonato de sodio (17.36g, 206.7 mmoles) en dioxano/agua (500 ml_, 5/1 ) se niveló con nitrógeno durante 10 minutos antes de la adición de PdC ídppf) (5.04g, 6.889 mmoles). La mezcla se calentó durante 15 horas bajo argón a 80°C. La reacción se enfrió a temperatura ambiente, se diluyó con diclorometano (500 mL) y se lavó con salmuera (2x300 mL). La fase orgánica se secó sobre MgS04, se filtró y evaporó para proporcionar una espuma negra. La mezcla se agitó en EtOAc (300 mL), se filtraron los precipitados negros y la torta se lavó con más EtOAc (200 mL). Se agregó lentamente heptano (1.5 L) al EtOAc-filtrado y el precipitado se filtró para proporcionar XXVc (28.35 g, 60%) 2a.3 preparación de XXVIlb (A= V PG'= Boc) Se agregó carbonato de potasio (334 mg, 2.42 mmoles) a una solución de XXVb (2.086 g, 3.054 mmoles), Pd/C (10%, 0.5 g) y algunas gotas de agua en metanol (40 mL). La reacción se colocó bajo una atmósfera de hidrógeno durante 2.5 horas. La mezcla se filtró sobre dicalita, el solvente se removió bajo presión reducida y el producto se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (gradiente de metanol en CH2CI2 desde 0-3%, luego CH2CI2 metanol/NH3(7N) desde 3-10%) para proporcionar XXVIlb (1 .018 g, 61 %).

Se agregó carbonato de potasio (4.8 g, 34.7 mmoles, 0.9 equiv.) a la mezcla de 10 % de Pd/C (2 g), XXVc (26.35g, 38.6 mmoles, 1.00 equiv.), metanol (800 mL) y agua (5 mL) en un frasco de fondo redondo (2 L). La mezcla de reacción se agitó bajo atmósfera de hidrógeno durante la noche. Luego se agregó catalizador adicional (10% Pd/C, 2 g) y la mezcla de reacción se agitó adicionalmente bajo atmósfera de hidrógeno durante 2 horas. Luego, se agregaron carbonato de potasio adicional (4.8 g, 34.7 mmoles, 0.9 equiv.) y catalizador (10% Pd/C)(2 g) y la mezcla se agitó adicionalmente bajo hidrógeno durante la noche. La mezcla de reacción se filtró sobre dicalite speed plus (auxiliar de filtro de diatomeas) y se lavó con metanol (2 x 50 mL). El solvente se evaporó para proporcionar un polvo amarronado que se disolvió en diclorometano (400 mL) y lavó con agua (2 x 200 mL) se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y evaporó hasta sequedad. El material crudo resultante (23 g) se sometió a cromatografía en columna de gel de sílice (gradiente de elución con 0-5% de metanol en diclorometano seguido de 5-10% de metanol (7N NH3) en diclorometano) para proporcionar XXVIb en forma de un polvo marrón claro (13.85 g, 65%).

EJEMPLO 2b Síntesis de amino ácidos N-metoxicarbonilo 2b.1 Síntesis de ácido (S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilbutanoico A L-Valina (20 g, 167.3 mmoles) en una solución acuosa agitada de NaOH (1 M, 167 mL) en un frasco de fondo redondo (1 L), se agregó carbonato de sodio (8.866 g, 83.6 mmoles). El frasco se enfrió a 0°C en un baño de hielo-agua. Se agregó por goteo cloroformiato de metilo (17.4 g, 184 mmoles) y la mezcla de reacción se dejó agitar durante 15 horas y alcanzar la temperatura ambiente. La mezcla de reacción se separó con éter (3 x 200 mL), y la capa acuosa se contuvo en un frasco de fondo redondo y se enfrió en un baño de hielo-agua. Se agregó por goteo HCI concentrado (ac) hasta pH 2. La mezcla se llevó a temperatura ambiente y se extrajo con diclorometano (3 x 200 mL). Las capas orgánicas se reunieron, se secaron (sulfato de sodio), y los sólidos se removieron por filtración. Los solventes del filtrado se removieron bajo presión reducida para proporcionar un sólido blanco. El sólido blanco se secó adicionalmente al vacío (25.3 g, 86 %). 2b.2 Síntesis de ácido ((S)-2-ciclopropil-2-(metoxicarbonilamino)acético Se sintetizó ácido (S)-2-c¡clopropil-2- (metoxicarbonilamino)acético similar a N-metoxicarbonil-L-Valina , usando L-ciclopropilglicina en lugar de L-Valina . 2b.3 Síntesis de ácido ((2S.3S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilpentanoico Se sintetizó ácido (2S,3S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilpentanoico similar a N-metoxicarbonil-L-Valina , usando L-isoleucina en lugar de L-Valina . 2b.4 Acido 2-(metoxicarbonilamino)-2-(tetrahidro-2H-piran-4- ¡Qacético Se sintetizó 2-(metoxicarbonilamino)-2-(tetrahidro-2H-piran-4-il)acético similar a N-metoxicarbonil-L-Valina, usando ácido (S)-2-amino-2-(tetrahidro-2H-piran^-il)acético en lugar de L-Valina . 2b.5 Síntesis de ácido (2S,3R)-3-metoxi-2-(metoxicarbonilamino)butanoico Se sintetizó ácido (2S,3R)-3-metoxi-2- (metoxicarbonilamino)butanoico similar a N-metoxicarbonil-L-Valina, usando O-Metil-L-Treonina en lugar de L-Valina . La extracción de diclorometano se llevó a cabo 10 veces en lugar de 3 veces. 2b.6 Síntesis de ácido (S)-2-(metoxicarbonilamino)-4-metilpentanoico En un frasco de fondo redondo (250 ml_) se agregó, mientras se agitaba, una solución acuosa NaOH (1 M, 2.6 mL), a L-Leucina (4 g, 30.5 mmoles). A esta solución se agregó carbonato de sodio (1.62 g, 15.2 mmoles). El frasco se enfrió a 0°C en un baño de hielo-agua. Se agregó por goteo cloroformiato de metilo (2.6 mL, 33.5 mmoles) y la mezcla de reacción se dejó agitar durante 15 horas y alcanzó la temperatura ambiente. La mezcla de reacción se separó con éter (3 x 50 mL), y la capa acuosa se contuvo en un frasco de fondo redondo y se enfrió sobre un baño de hielo-agua. Se agregó por goteo HCI concentrado (ac) hasta pH 2. La mezcla de reacción se llevó a temperatura ambiente y se extrajo con 2-Me-THF (3 x 50 mL). Las capas orgánicas se reunieron, se secaron (MgS04), los sólidos se removieron por filtración, y los solventes del filtrado se removieron bajo presión reducida. El compuesto se purificó mediante cromatografía sobre gel de sílice con un gradiente de elución desde CH2CI2 a CH2Cl2/MeOH/ácido acético 17/2/1. Las fracciones que contenían el producto se combinaron y el solvente se removió al vacío, dando como resultado N-metoxicarbonil-L-leucina (1.9 g, 32 %). 2b.7 Síntesis de ácido (S -metoxi-2- (metoxicarbonilamino)butanoico A sal de eoc-O-metil-L-homoserina -diciclohexilamina (5 g, 12.1 mmoles), se agregó HCI en isopropanol (5-6 N, 50 ml_). La mezcla se agitó durante la noche. Se removieron los volátiles y el residuo se secó al vacío. Al residuo obtenido, se agregaron agua (10 ml_) y NaOH (19 M, 2 ml_), mientras se agitaban. A esta solución se agregó carbonato de sodio (2.89 g, 27.3 mmoles). El frasco se enfrió a 0°C en un baño de hielo-agua. Se agregó por goteo cloroformiato de metilo (2.17 mL, 27.3 mmoles) y la mezcla de reacción se dejó agitar durante 15 horas y alcanzar la temperatura ambiente. El solvente se removió y el residuo se purificó mediante HPLC (RP Vydac Denali C18 - 10µ??, 250g, 5cm). Fase móvil (0.25% de una solución NH HC03 en agua, MeOH + CH3CN), se recogieron las fracciones deseadas, y el solvente se removió, proporcionando N-metoxicarbonil-O-metil-L-homoserina (1.77 g, 76%) 2b.8 Síntesis de (2S.3R)-3-hidroxi-2- (metoxicarbonilamino)butanoico Se agregó una solución acuosa de NaOH (1 M, 167 mL), mientras se agitaba, a L-Treonina (20 g, 30.5 mmoles) en un frasco de fondo redondo (1 L). A esta solución se agregó carbonato de sodio (9.8 g, 92.3 mmoles). El frasco se enfrió a 0°C en un baño de hielo-agua. Se agregó por goteo cloroformiato de metilo (14.3 mL, 184.7 mmoles) y la mezcla de reacción se dejó agitar durante 15 horas y alcanzar la temperatura ambiente. La mezcla de reacción se lavó con CH2CI2 (3 x 50 mL), y la capa acuosa se contuvo en un frasco de fondo redondo y se enfrió sobre un baño de hielo-agua. Se agregó por goteo HCI concentrado (ac) hasta pH 2. La solución acuosa se llevó a temperatura ambiente y el agua se removió al vacío. El residuo se extrajo en una mezcla de 2:1 de MeOH/CH2CI2 (150 mL, se filtró y lavó con una mezcla de 2:1 de MeOH/CH2Cl2 (50 mL). El filtrado se concentró y secó al vacío a 40°C, dando como resultado una espuma blanca (29.1 g, 98 %). 2b.9 Síntesis de ácido (S)-2-ciclopentil-2-(metoxicarbonilamino)acético Se sintetizó ácido (S)— 2— ciclopentil— 2— (metoxicarbonilamino)acético similar a N-metoxicarbonil-L-Valina, usando ácido (S)-2-amino-2-ciclopentilacético en lugar de L-Valina . 2b.10 Síntesis de ácido (2S,3f?)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilpentanoico Se sintetizó ácido (2S,3R)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilpentanoico similar a N-metoxicarbonil-L-Valina, usando ácido (2S.3R)-2-amino-3-metilpentanoico en lugar de L-Valina . 2b.1 1 Síntesis de ácido (R)-2-(metoxicarbonilamino)-2-fenilacético A una solución de ácido (R)-2-amino-2-fenilacético (14 g, 92.6 mmoles) en agua (250 mL) se agregó LiOH (14.8 g, 618.7 mmoles) a 0°C y la mezcla se agitó durante 15 minutos. A esta solución, se agregó por goteo cloroformiato de metilo (17.9 mL, 231.5 mmoles) y la mezcla se agitó durante 2 horas a 0°C. La mezcla se acidificó luego hasta pH 1 con HCI concentrado. La mezcla se extrajo con EtOAc y la fase orgánica se concentró al vacío. El residuo se secó durante la noche al vacío, dando como resultado ácido (R)-2-(metoxicarbonilamino)-2-fenilacético (1 1.8 g; 60.9 mmoles).

EJEMPLO 3 Síntesis de compuestos de fórmula I 3.1. Preparación del compuesto nr. 1 Se agregó piridina seca (5 ml_) al compuesto XVIIIa (267 mg, ~0.49 mmoles), y el solvente se removió al vacío, esto se repitió dos veces más. Luego, se agregaron DMF seco (5 mL) DIPEA (0.845 mL, 4.91 mmoles), HATU (466 mg, 1.23 mmoles) y /v-metoxicarbonil-L-Valina (215 mg, 1.23 mmoles). La mezcla se agitó durante 2 horas a temperatura ambiente. Se agregaron nuevamente los mismos equivalentes de reactivos y la mezcla se agitó adicionalmente durante 2 horas. Se agregó CH2CI2 (20 mL) y la mezcla se lavó con ácido cítrico al 10 % (20 mi) seguido de NaHC03 saturado. La fase orgánica se secó sobre MgS04 y el sólido se removió por filtración. El solvente se evaporó y la purificación se llevó a cabo mediante cromatografía sobre gel de sílice (0-10% metanol en CH2CI2), dando como resultado el compuesto 1 en forma de un sólido (170 mg, 0.226 mmoles). Método A: Rt: 4.18 min. m/z=: 713.4 (M+1 )+ Masa Exacta: 712.37; 1H RMN (400 MHz, DMSO-de): 12.99-1 1.63 (2H,s ?), 7.88-7.44 (8H, m), 7.36-7.26 (2H, m), 5.26-5.16 (1 H, m), 5.06-5.14 (1 H, m), 4.14-4.04 (2H, m), 3.90-3.77 (4H, m), 3.55 (6H, s), 2.32-1 .94 (10H, m), 1.00-0.79 (12H, m). 3.2 preparación de los compuestos 2 a 4 Se sintetizó el Compuesto 2 siguiendo el procedimiento descrito para el compuesto 1 usando -/V-Metoxicarbonil- O-Metil-L-Treonina en lugar de /V-Metoxicarbonil-L-Valina.

Compuesto 2. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 12.12 - 12.26 (1 H, m), 1 1.69 - 1 1.83 (1 H, s (br)), 7.33-7.86 (8H, m), 7.18-7.31 (2H, m), 5.15-5.25 (1 H, m), 5.05-5.13 (1 H, m), 4.25-4.38 (2H, m), 3.77-3.95 (4H, m), 3.55 (6H, s), 3.45-3.52 (2H, m), 3.20 (6H, s), 1.79-2.38 (8H, m), 1.14-1.06 (6H, m).

Se preparó el Compuesto 3 siguiendo el procedimiento descrito para la síntesis del compuesto 1 usando el intermediario XVIIIb en lugar del intermediario XVIIIa.

Compuesto 3. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 8.34 (2 H, s), 8.21 (1 H, s), 8.19 (1 H, d, J=8.69 Hz), 8.06 - 8.1 1 (2 H, m), 8.00 (1 H, dd, =8.88, 1 .61 Hz), 7.88 - 7.96 (2 H, m), 7.86 (1 H, d, J=8.48 Hz), 7.32 (1 H, d, J=8.48 Hz), 7.34 (1 H, d, J=8.53 Hz), 5.27 (1 H, dd, J=8.17, 5.33 Hz), 5.17 (1 H, t, J=7.00 Hz), 4.15 (2 H, t, J=7.95 Hz), 3.84 - 3.96 (4 H, m), 3.56 (6 H, s), 2.38 - 2.47 (2 H, m), 1.95 - 2.30 (8 H, m), 0.86 (3 H, d, J=6.70 Hz), 0.85 (3 H, d, J=6.70 Hz), 0.81 (6 H, d, J=6.63 Hz). [a]2D°= -148.98 0 (c 0.3336 p/v %, MeOH) Preparación alternativa del compuesto 3 y la correspondiente sal Se disolvió N-metoxicarbonil-L-Valina (3.09 g, 17.7 mmoles, 2.1 equiv) en diclorometano (300 mL). Se agregaron trietilamina (1 1 .7 mL, 84.1 mmoles, 10 equiv) y hexafluorfosfato de (1-ciano-2-etox¡-2-oxoet¡lidenaminooxi)dimetilamino-morfolino-carbenio (7.57 g, 17.7 mmoles, 2.1 eq). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 5 minutos, después de agregar XVIIIb (5 g, 8.41 mmoles en caso x.HCI equiv. 4 HCI). La agitación se continuó durante 30 minutos. Se agregó HCI en ¡PrOH (6N) a la mezcla (hasta pH = 2), y la mezcla resultante se agitó durante 5 minutos. La solución se lavó luego con carbonato de sodio acuoso saturado (2 x 200 mL) y una vez con salmuera (200 mL). Se separó la capa orgánica, se secó sobre sulfato de magnesio y se filtró. Después de remover el solvente al vacío, el residuo obtenido se secó adicionalmente al vacío para proporcionar un polvo naranja (6.84 g) El polvo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice usando gradiente de elución con 0 a 10 % de MeOH (7N NH3) en diclorometano, dando como resultado el compuesto 3 (2.81 g) en forma de una espuma.

Se disolvió el compuesto 3 en iPrOH (40 mL) y se agregó HCI (6N en iPrOH, 10 mL). Se removieron al vacío los volátiles. Luego se agregó iPrOH (30 mL) y la mezcla se calentó a reflujo. La solución se enfrió a temperatura ambiente y se agitó a temperatura ambiente durante 4 días. Se agregó tBuOMe (100 mL) a la solución, dando como resultado una precipitación blanca, que se filtró, se lavó inmediatamente con tBuOMe (3 x 10 mL) bajo atmósfera de nitrógeno y se secó bajo vacío a 40°C. El residuo se mezcló con acetonitrilo y se evaporó hasta sequedad (2x). El residuo se agitó en acetonitrilo (150 mL) y la mezcla se sónico durante 10 minutos. El precipitado se filtró bajo atmósfera de nitrógeno, se lavó dos veces con acetonitrilo (50 mL) y se secó al vacío a 40°C, dando como resultado un polvo ligeramente amarillo (4 g).

Sal HCI del compuesto 3: [a]2D°= -1 10.02 0 (589 nm, 20 °C, c 0.429 p/v%, MeOH) 1H RMN (600 MHz, DIMETILFORMAMIDA-d7, 280K) d ppm 0.86 (d, J=6.6 Hz, 6 H), 0.95 (d, J=7.0 Hz, 6 H), 2.03 - 2.20 (m, 2 H), 2.26 - 2.37 (m, 3 H), 2.39 - 2.61 (m, 5 H), 3.61 - 3.63 (m, 6 H), 3.93 - 4.01 (m, 2 H), 4.23 - 4.32 (m, 2 H), 4.32 - 4.39 (m, 2 H), 5.49 (t, J=7.5 Hz, 1 H), 5.52 (dd, J=8.3, 5.3 Hz, 1 H), 7.22 (d, J=8.8 Hz, 1 H), 7.27 (d, J=8.8 Hz, 1 H), 7.98 (d, J=8.6 Hz, 1 H), 8.01 (dd, J=8.6, 1.1 Hz, 1 H), 8.03 (dd, J=8.8, 1.8 Hz, 1 H), 8.09 (d, J=8.8 Hz, 1 H), 8.19 (d, J=8.8 Hz, 1 H), 8.22 (dd, J=8.4, 1.8 Hz, 1 H), 8.25 (s, 1 H), 8.32 (s, 1 H), 8.41 (s, 1 H), 8.88 (s, 1 H).

Anal. Caled para C42H50N8O6 . 2 HCI . 4 H20: C 55.56, H 6.66 , N 12.34. Hallado: C 55.00, H 6.60, N 12.30 Se preparó el compuesto 4 siguiendo el procedimiento descrito para la síntesis del compuesto 2 usando el intermediario XVIMb en lugar del intermediario XVIIIa. 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) d ppm 8.07-8.30 (m, 2 H), 7.88 - 7.98 (m, 3 H), 7.73 - 7.87 (m, 2 H), 7.50 - 7.67 (m, 3 H), 7.21-7.33 (m, 2 H), 5.18-5.24 (m, 1 H), 5.06-5.16 (m, 1 H), 4.31 (m, 2 H), 3.80 - 3.95 (m, 4 H), 3.56 (s, 6 H), 3.43 - 3.53 (m, 2 H), 3.20 (s, 6 H), 1.80 - 2.35 (m, 8 H), 1.05-1.20 (m, 6 H), 3.3 preparación de los compuestos 9, 11 , 13, 16, 17, 18 3.3.1 preparación del compuesto 9 3.3.1.1 Preparación del intermediario Xlll'b A Xlll'a (5.3 g, 14.6 mmoles) en CH2CI2 (10 mL) a 0°C se agregó TFA (25 mL). La mezcla se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante 30 minutos. Se removieron los volátiles y se agregaron CH2CI2 (10 mL) y DIPEA (15 ml_) para obtener la sal TFA de (SM-yodo-2-(p¡rrolidin-2-il)-1 H-imidazol. La mitad de esta mezcla se usó a continuación.

En otro frasco, a ácido (S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilbutanoico (1.77 g, 10.12 mmoles) y HATU (3.57 g, 9.40 mmoles) se agregó DMF seco (5 mL). Se agregó DIPEA (5 mL, 28.7 mmoles) seguido de la mitad de la mezcla preparada anteriormente de (S)-4-yodo-2-(pirrolidin- 2-il)-1 H-imidazol.

La mezcla se agitó durante la noche. Se agregó CH2CI2 y la mezcla se lavó con salmuera, 10 % de AcOH y NaHC03 sat. Después de secar con MgS04 y filtración, se removió el solvente. La mezcla se purificó a través de cromatografía en columna usando gradiente de elución a partir de CH2CI2 a Ch^C /MeOH 95/5. Las fracciones que contenían el producto se combinaron y se removió el solvente. El residuo obtenido se disolvió en CH2CI2 y se lavó con 10 % de ácido cítrico. La capa acuosa se neutralizó cuidadosamente con NaHCC saturado y se extrajo nuevamente con CH2CI2.

Las capas orgánicas se secaron con Na2S04 y después de filtración, se removió el solvente. El Xlll'b obtenido (790 mg, 26 %) se usó así en la siguiente reacción.

Se disolvieron XVIb (867 mg, 1.61 mmoles), Xlll'b (790 mg, 1.88 mmoles), bicarbonato de sodio (316 mg, 3.76 mmoles) y Pd(dppf)CI2 (138 mg, 0.188 mmoles) en THF/H20 (2.5 mL, 4/1 ) y calentaron en un horno microondas durante 60 minutos a 100°C. La mezcla de reacción se filtró sobre dicalite, los volátiles se removieron del filtrado por evaporación giratoria y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (gradiente de elución a partir de CH2CI2 a CH2Cl2/MeOH 9/1 ) Las fracciones que contenían XXIb se reunieron y el solvente se removió bajo presión reducida, proporcionando XXIb en forma de un polvo blancuzco (580 mg, 44 %).

Alternativamente, el compuesto XXIb, puede obtenerse a partir del compuesto XXVIb de manera similar a la descrita para la síntesis del compuesto XXIc a partir de XXVIb, con la excepción de que para la síntesis de XXIb es usado ácido (S)-2-(metoxicarbon¡lamino)-3-metilbutanoico en lugar de ácido (2S,3S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilpentanoico, que se usó en la síntesis de XXIc. 3.3.1.3 preparación del compuesto 9 A XXIb (580 mg, 0.822 mmoles) en CH2CI2 (10 mL), se agregó HCI en ¡PrOH (5-6 N, 3 mL). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Se removieron los volátiles y se agregó base de Hunigs (0.53 mL, 4 eq) en DMF (5 mL). La mezcla se agregó a una solución premezclada (10 minutos) de HATU (469 mg, 1.23 mmoles, 1.5 eq), ácido (2S,3R)-3- metoxi-2-(metoxicarbonilamino)butanoico (318 mg, 1.64 mmoles, 2 eq) y base de Hunigs (0.15 mL, 1.1 eq) en DMF (5 mL). La mezcla de reacción se agitó durante 30 minutos. Se agregaron 15 gotas de HCI concentrado y después de 15 minutos se removieron los volátiles mediante evaporación giratoria. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice mediante un gradiente de elución a partir de CH2CI2 a 9/1 Ch C /MeOH (7 N NH3). Las fracciones que contenían el producto se reunió y el solvente se removió bajo presión reducida proporcionando el producto 9 en forma de un polvo blanco (121 mg, 18 %). [a]2D° = -137.04° (c 0.3736 p/v %, MeOH). 1H RMN (600 MHz, CD3OD-d4) d ppm 8.04 - 8.25 (2 H, m) 7.37 - 7.97 (8 H, m), 5.33 (1 H, dd, J= 4.7; 7.9 Hz), 5.21 (1 H, dd, J= 5.6; 7.9 Hz) 4.48 (1 H, d, J= 4.7; Hz) 4.25 (1 H, d, J= 7.6 Hz), 3.86 - 4.04 (4 H, m) 3.68 -3.73 (1 H, m) 3.63 - 3.68 (6 H, m) 3.27 (3 H, s) 1.99 - 2.49 (9 H, m) 1.14 -1.19 (3 H, m) 0.95 - 0.99 (3 H, m) 0.90 - 0.93 (3 H, m) 3.3.1.4 preparación del compuesto 13 Puede sintetizarse el compuesto 13 de manera similar a la descrita en la conversión de XXIb al compuesto 9, usando ácido (2S,3S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilpentanoico en lugar de ácido (2S,3R)-3-metoxi-2-(metoxicarbonilamino)butanoico. [a] 20= -147.6 0 (c 0.3618 p/v %, MeOH). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 11.71 - 12.51 (2 H, m) 7.51 - 8.31 (10 H, m) 7.22 - 7.39 (2 H, m) 5.06 - 5.45 (2 H, m) 4.02 - 4.19 (2 H, m) 3.75 - 3.95 (4 H, m) 3.52 - 3.57 (6 H, m) 1.81 - 2.30 (9 H, m) 1.65 - I .79 (1 H, m) 1.39 - 1.53 (1 H, m) 1.02 - 1 .14 (1 H, m) 0.74 - 0.98 (12 H, m) 3.3.2 preparación del compuesto 11 3.3.2.1 Preparación del intermediario XlXb {f - ^ 'W ; PG= Se disolvieron HATU (776 mg, 2.04 mmoles), DIPEA (0.48 mL, 2.78 mmoles) y ácido (S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilbutanoico (357 mg, 2.04 mmoles) en DMF seco (10 mL) y se agitaron durante 5 minutos a temperatura ambiente. Se agregó XXVllb (1.018 g, 1.855 mmoles) y la reacción se agitó 1 h a temperatura ambiente. Se agregó diclorometano (100 mL) y la mezcla se lavó con una solución NaHC03 saturada (3 x 100 mL). La fase orgánica se secó sobre MgS04, se filtró y el solvente se evaporó. El residuo se usó así en la siguiente reacción.

Se disolvió XlXb (1 .309 g, 1.855 mmoles) en CH2CI2 (10 mL) y se agregó HCI en iPrOH (5-6 N, 15 mL). La mezcla se agitó durante 35 minutos a temperatura ambiente. Se agregó tBuOMe (50 mL) y la suspensión se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. El sólido filtrado se enjuagó con tBuOMe (50 mL) y se secó en un horno al vacío a 40°C para proporcionar XXb (1.137 g).

Se disolvieron HATU (858 mg, 2.26 mmoles), DIPEA (0.808 mL, 4.69 mmoles) y ácido (2S, 3R)-3-metoxi-2-metoxicarbonilamino)butanoico (432 mg, 2.26 mmoles) en DMF seco (10 mL) y agitaron 5 minutos a temperatura ambiente. Se agregó XXb (1.137 g, 1 .59 mmoles) y la reacción se agitó 2 horas a temperatura ambiente, después de lo cual se agregó más DIPEA (1.5 eq) y la mezcla se agitó durante 1 hora más. Se agregó diclorometano (100 mL) y la mezcla se lavó con una solución NaHC03 saturada (3 x 100 mL), la fase orgánica se secó sobre MgS04, se filtró, el solvente se evaporó y se purificó sobre una columna usando un gradiente desde 0 a 5% de metanol en diclorometano para proporcionar 11 (585 mg, 20 47%). [<X]D = -134.69 0 (c 0.3638 p/v %, MeOH) 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6, NH intercambiado con D20) d ppm: 0.78-0.91 (m, 6 H) 1 .05-1 .19 (m, 3 H), 1.86 - 2.30 (m, 9 H), 3.21 (s, 3 H), 3.46 - 3.62 (m, 7 H), 3.78-3.96 (m, 4 H), 4.02-4.16 (m, 1 H), 4.26-4.40 (m, 1 H) 5.05 - 5.16 (m, 1 H) 5.18 - 5.26 (m, 1 H), 7.53-8.33 (m., 10 H) 3.3.3 preparación de los compuestos 16 v 17 XXIc A ácido (2S,3S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilpentanoico (2.39 g, 12.6 mmoles, 1.05 equiv.) en un frasco de fondo redondo de 100 mL, se agregaron dimetilformamida (60 mL), trietilamina (3.34 mL, 24.1 mmoles, 2.00 equiv.) y HATU (4.80 g, 12.6 mmoles, 1 .05 equiv.). La mezcla de reacción se agitó durante 5 minutos y se agregó XXVIb (6.60 g, 12.0 mmoles, 1.00 equiv.). La mezcla se sónico durante un minuto hasta disolver todo. La mezcla de reacción se agitó durante 20 minutos a temperatura ambiente. Se agregó una solución Na2CÜ3 acuosa saturada (20 mL) a la mezcla (pH de control del pH del papel = 1 1 ). El compuesto se extrajo de la fase acuosa con diclorometano (5 x 150 mL) y las capas orgánicas combinadas se lavaron con una solución Na2C03 acuosa saturada (150 mL), se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y el filtrado se evaporó hasta sequedad para proporcionar XXIc (9.3 g) que se usó así en la etapa siguiente. xxilc Se disolvió XXIc (8.66 g, 12.0 mmoles, 1 .0 equiv.) en diclorometano (40 mL) y se agregó HCI 5-6 N en isopropanol (40 mL, 200 mmoles, 17 equiv.). La mezcla de reacción se agitó durante la noche a temperatura ambiente. Se agregó tBuOMe (400 mL) a la solución y la suspensión resultante se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. El sólido filtrado se enjuagó con tBuOMe (2x 100 mL) y diclorometano (100 mL) y se secó bajo vacío durante la noche para proporcionar XXIIc (8.35 g) 3.3.3.3 preparación del compuesto 16 6 A ácido (S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilbutanoico (481 mg, 2.74 mmoles) en un frasco de fondo redondo (500 mL), se agregaron diclorometano (300 mL), diisopropiletilamina (3.7 mL, 21 mmoles) y HATU (1 .04 g, 2.74 mmoles). La mezcla de reacción se agitó durante 5 minutos y se agregó XXIIc (2.00 g, 2.74 mmoles, si x HCI equiv. 3 HCI, LO equiv.). La mezla de reacción se agitó durante 2.5 horas a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se lavó con una solución Na2C03 acuosa saturada (2 x 100 mL), salmuera (100 mL), se secó sobre MgS04, se filtró y el filtrado se evaporó hasta sequedad para proporcionar un residuo marrón. El residuo se purificó usando cromatografía en columna sobre gel de sílice mediante gradiente de elución con 0- 5% de MeOH (NH3 7N) en DCM, para proporcionar un polvo blanco (1.55 g). El polvo se mezcló con HCI acuoso (1 M) y metanol (15 mL) y se neutralizó nuevamente con bicarbonato de sodio acuoso saturado. La mezcla se extrajo con DCM (400 ml_). La capa orgánica se separó y se lavó con agua (4 x 150 mL); se secó sobre sulfato de magnesio y se evaporó hasta sequedad al vacío. El secado durante el fin de semana en un horno al vacío a 40°C proporcionó el compuesto 16 (1.49 g) en forma de un polvo blanco.

No fue determinado el valor de HCI en el compuesto XXIIc. El procedimiento se llevó a cabo con los valores establecidos anteriormente. Si x HCI igual 3 HCI en el procedimiento anterior, se usarán 1.0 equivalentes de HATU y ácido (S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilbutanoico y ~8 equivalentes de diisopropiletilamina. En el hipotético caso de que x HCI igual 4 HCI, se usarán 1.05 equivalentes de HATU y ácido (S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilbutanoico y ~8 equivalentes de diisopropiletilamina. 1H RMN (400 MHz, MeOD) d ppm 0.79 - 1.05 (m, 12 H), 1.06 -1.26 (m, 1 H), 1.42 - 1.66 (m, 1 H), 1.69 - 1.87 (m, 1 H), 1.94 - 2.51 (m, 9 H), 3.66 (2 s, 6 H), 3.82 - 4.14 (m, 4 H), 4.23 - 4.31 (m, 2 H), 5.18-5.23 (m, 1 H), 5.27- 5.32 (m, 1 H), 7.33 - 7.53 (m, 1 H), 7.53 - 7.75 (m, 2 H), 7.75 - 8.01 (m, 5 H), 8.01 - 8.33 (m, 2 H) 3.3.3.4 preparación de compuesto 17 A ácido (2S,3R)-3-metoxi-2-(metoxicarbonilamino)butanoico (524 mg, 2.74 mmoles) en un frasco de fondo redondo (500 ml_), se agregaron diclorometano (300 ml_), diisopropiletilamina (3.7 ml_, 21 mmoles) y HATU (1 .04 g, 2.74 mmoles). La mezcla de reacción se agitó durante 5 minutos y se agregó XXIIc (2.00 g, 2.74 mmoles, si x HCI igual 3 HCI, 1.0 equiv.). La mezcla de reacción se agitó durante 2.5 horas a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se lavó con una solución de Na2C03 acuoso saturado (2 x 100 mL), salmuera (100 mL), se secó sobre MgSO4 y se filtró y el filtrado se evaporó hasta sequedad para proporcionar el residuo marrón. El residuo se purificó usando cromatografía en columna sobre gel de sílice; mediante gradiente de elución con 0- 5% MeOH (7N NH3) en CH2CI2 para proporcionar el compuesto 17 en forma de un polvo blanco (1 .24 g). [af°= -158.7 0 (c 0.3472 p/v %, MeOH).

No se determinó el valor de HCI en el compuesto XXIIc. El procedimiento se llevó a cabo con los valores establecidos anteriormente. Si x HCI igual 3 HCI en el procedimiento anterior, se usarán 1.0 equivalentes de HATU y (2S,3R)-3-metoxi-2-(metoxicarbonilamino)butanoico y ~8 equivalentes de diisopropiletilamina. En el hipotético caso de que x HCI igual 4 HCI, se usarán 1.05 equivalentes de HATU y ácido (2S,3R)-3-metoxi-2-(metoxicarbonilamino)butanoico y ~8 equivalentes de diisopropiletilamina. 1H RMN (400 MHz, MeOD) d ppm 0.83 - 1.00 (m, 6 H), 1 .10 -1.22 (m, 4 H), 1 .49 - 1.65 (m, 1 H), 1 .72 - 1.85 (m, 1 H), 1 .92 - 2.52 (m, 8 H), 3.27 (s, 3 H), 3.62 - 3.77 (m, 7 H), 3.84 - 4.08 (m, 4 H), 4.28 (d, J = 8.0 Hz, 1 H), 4.48 (d, J = 4.9 Hz, 1 H), 5.16 - 5.25 (m, 1 H), 5.33 (dd, J=8.2, 4.9 Hz, 1 H), 7.24 - 8.35 (m, 10 H) Preparación de la sal de 2HCI.4H?Q del compuesto 17 Se disolvió el compuesto 17 (315 mg, 0.39 mmoles) en HCI/iPrOH (6N HCI) (10 mL) y se removieron los volátiles. La sal se agitó a temperatura ambiente en acetonitrilo (6 mL) durante la noche en un frasco abierto. La mezcla se evaporó hasta sequedad. Se removió azeotrópicamente el agua residual mediante adición repetida y evaporación, a 30°C bajo presión reducida, de acetonitrilo (4 x 40 mL). El polvo se agitó luego en acetonitrilo a temperatura ambiente en un frasco de fondo redondo cerrado, durante la noche, se filtró e inmediatamente se secó bajo vacío durante la noche, para proporcionar un polvo blanco (263 mg). El sólido obtenido se analizó para tener C43H52N807.2 HCI.4H20 por análisis elementales, cromatografía iónica (anión) y tritación H20.

Anal. Cale, para C43H52N807.2 HCI.4 H20: C 55.07, H 6.66 , N 11.95. Hallado: C 55.04, H 6.57, N 12.09 Cale. .4 H20: 7.68, Hallado: 7.96; Cromatografía iónica (anión) Cale: 2 CI" 7.56 Hallado: 7.75 H RMN (600 MHz, DIMETILFORMAMIDA-d7, 280K) d ppm 0.85 (t, J=7.3 Hz, 3 H), 0.91 (d, J=6.7 Hz, 3 H), 1.07 - 1.13 (m, 1 H), 1.15 (d, J=6.5 Hz, 3 H), 1.40 - 1.47 (m, 1 H), 1.98 - 2.05 (m, 1 H), 2.08 (dt, J=12.4, 7.6 Hz, 1 H), 2.12 - 2.19 (m, 1 H), 2.29 - 2.37 (m, 1 H), 2.40 - 2.45 (m, 1 H), 2.48 (dd, J=12.9, 6.2 Hz, 1 H), 2.50 - 2.55 (m, 2 H), 2.56 - 2.62 (m, 1 H), 3.27 (s, 3 H), 3.61 (s, 3 H), 3.62 (s, 3 H), 3.93 - 4.04 (m, 3 H), 4.29 - 4.33 (m, 2 H), 4.35 (dd, J=8.7, 7.5 Hz, 1 H), 4.50 (dd, J=8.8, 5.0 Hz, 1 H), 5.46 (t, J=7.6 Hz, 1 H), 5.53 (dd, J=8.2, 5.9 Hz, 1 H), 7.00 (d, J=8.8 Hz, 1 H), 7.26 (d, J=8.8 Hz, 1 H), 8.00 (d, J=8.5 Hz, 1 H), 8.02 - 8.06 (m, 2 H), 8.09 (d, J=8.5 Hz, 1 H), 8.20 (d, J=8.5 Hz, 1 H), 8.22 (dd, J=8.8, 1.8 Hz, 1 H), 8.26 (s, 1 H), 8.33 (s, 1 H), 8.42 (s, 1 H), 8.89 (s, 1 H) [a] = -96.79 ° (c 0.3492 ?/? %, MeOH) 20 D Preparación de sal de H?SO del compuesto 17 Se cargaron el Compuesto 17 (15.0 g, 0.0189 moles) y etanol (750 mL) en un frasco de tres cuellos bajo N2. La mezcla se calentó a 65-70°C y se agitó durante 30 minutos. Se agregó por goteo una solución de ácido sulfúrico (2.0 g, 0.0204 moles) en etanol (750 mL) durante 1 hora a 65-70°C. La mezcla se agitó durante 2 a 3 horas bajo N2. La mezcla se enfrió luego a 25 - 30°C y se agitó durante otras 1 a 2 horas. Se filtró la suspensión resultante y se secó al vacío a 50-60°C durante por lo menos 12 horas dando como resultado 16 g (94.8%) de un sólido blanco que se analizó para ser la sal.H2S04 del compuesto 17.

Solubilidad acuosa en mg/mL de esta sal de H2S04 a pH 1.2 = 32.23; a pH 2.2 = 13.34, a pH 4 = 0.26; a pH 7.4 = 0.001 ; a pH 12 = 0.02. 3.3.4 preparación de compuesto 18 3.3.4.1 Preparación del intermediario XXId(A= V" A una solución de XXVIb (3.33 g, 6.07 mmoles) en DMF seco (35 mL), se agregó DIPEA (1.57 mL, 9.104 mmoles) y N-(metoxicarbonil)-0-metil-L-treonina (1.29 g, 6.68 mmoles). Esto se agitó 5 minutos antes de agregar HATU (2.53 g, 6.68 mmoles) y la reacción se agitó 30 minutos a temperatura ambiente. La reacción se diluyó con diclorometano (100 mL) y se lavó con una solución NaHC03 saturada (3 x 100 mL). La fase orgánica se secó sobre MgS04, se filtró, se evaporó, y el compuesto obtenido XXId se usó así en la etapa siguiente.

A una solución de XXId (4.38 g, 6.07 mmoles) en diclorometano (40 mL) se agregó 5-6N HCI en isopropanol (50 mL) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas. Se agregó tBuOMe (100 mL) y la suspensión se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. El sólido filtrado se enjuagó con tBuOMe (50 mL) y al filtrado se agregó nuevamente tBuOMe (100 mL). Se formaron nuevos precipitados, se filtraron y lavaron con tBuOMe. Se recogieron todos los precipitados y se colocaron en un horno al vacío durante la noche. Se obtuvo el producto XXIId en forma de un polvo blanco (3.61 g) y se usó así en la siguiente etapa. 3.3.4.3 Preparación del compuesto 18 Se disolvieron HATU (1.97 g, 5.189 mmoles), DIPEA (4.26 mL, 24.71 mmoles) y N-metoxicarbonil-L-isoleucina (981.8 mg, 5.189 mmoles) en DMF seco (10 mL) y agitaron durante 5 minutos a temperatura ambiente antes de agregar XXIId (3.61 g, 4.94 mmoles si x HCI igual 3 HCI). Después de 1 h a temperatura ambiente, se agregó HCI (3 mL) concentrado y esto se agitó durante 5 minutos. La reacción se neutralizó con Na2C03, se diluyó con diclorometano (50 mL) y se lavó con agua (2 x 100 mL). La fase orgánica se secó sobre MgS04, se concentró bajo presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna (metanol en CH2CI2) para proporcionar 18 (2.17 g). [a]2D°= -139.97 0 (c 0.3558 p/v %, MeOH) Preparación de la sal de .2HCI.4H?0 del compuesto 18 Se disolvió el compuesto 18 (485 mg; 0.61 1 mmoles) en iPrOH (15 mL, 6N HCI) y se removieron los volátiles al vacío. Se agregó acetonitrilo (10 mL) y la mezcla se calentó a 40°C durante 10 minutos para proporcionar un precipitado pegajoso. Se agregó agua (0.4 mL) para proporcionar una solución incolora. Se agregó por goteo acetonitrilo (15 mL) para proporcionar un precipitado pegajoso. Se evaporó parte de la solución (~5 mL) a 40°C para proporcionar una solución homogénea. Se agregó nuevamente acetonitrilo (20 mL) y no se formó un precipitado. Se removieron los volátiles al vacío. Se removió azeotrópicamente el agua residual mediante adición repetida y evaporación, a 30°C bajo presión reducida, de acetonitrilo (4 x 40 mL). Se agitó el polvo obtenido en acetonitrilo a temperatura ambiente en un frasco cerrado de fondo redondo durante la noche, se filtró e inmediatamente se filtró al vacío durante la noche para proporcionar un polvo ligeramente amarillo (365 mg).

Se analizó el sólido obtenido para tener C43H52N8O7.2 HCI.4H20 mediante análisis elementales, cromatografía iónica (anión) y tritación de H20.

Anal. Cale, para C43H52 807.2 HCI.4 H20: C 55.07, H 6.66, N 11.95. Hallado: C 54.54, H 6.54, N 12.18 Calc.4 H20: 7.68, Hallado: 7.55; Cromatografía iónica (anión) Cale: 2 CI" 7.56 Hallado: 7.36 [a]2D° = -97.53 ° (c 0.324 p/v %, MeOH) 1H RMN (600 MHz, DIMETILFORMAMIDA-d7, 280K) d ppm 0.84 (t, J=7.3 Hz, 3 H), 0.91 (d, J=6.7 Hz, 3 H), 1.05 - 1.14 (m, 1 H), 1.15 (d, J=6.2 Hz, 3 H), 1.39 - 1.50 (m, 1 H), 1.93 - 2.02 (m, 1 H), 2.04 - 2.12 (m, 1 H), 2.12 - 2.19 (m, 1 H), 2.28 - 2.37 (m, 1 H), 2.40 - 2.62 (m, 5 H), 3.27 (s, 3 H), 3.61 (s, 3 H), 3.62 (s, 3 H), 3.93 - 4.00 (m, 2 H), 4.00 - 4.05 (m, 1 H), 4.23 - 4.30 (m, 1 H), 4.36 (m, 2 H), 4.47 (dd, J=8.8, 4.7 Hz, 1 H), 5.46 (t, J=7.6 Hz, 1 H), 5.51 (dd, J=7.9, 5.6 Hz, 1 H), 6.97 (d, J=8.5 Hz, 1 H), 7.33 (d, J=8.8 Hz, 1 H), 7.99 (d, J=8.5 Hz, 1 H), 8.01 - 8.03 (m, 2 H), 8.09 (d, J=8.5 Hz, 1 H), 8.19 (d, J=8.5 Hz, 1 H), 8.22 (dd, J=8.5, 1.5 Hz, 1 H), 8.26 (s, 1 H), 8.32 (s, 1 H), 8.41 (s, 1 H), 8.90 (s, 1 H). 3.4 preparación de los compuestos 5 a 8, 10, 12, 14, 15, 19, 20. 3.4.1 Síntesis del compuesto 5 HATU (268 mg, 0.71 mmoles), DIPEA (0.334 mL, 2 mmoles), XVIIIb (200 mg, 0.34 mmoles si x HCI igual 4 HCI) y ácido (S)-2-cíclopropil-2-(metoxicarbonilamino)acético (145 mg, 0.84 mmoles) se mezclaron conjuntamente en DMF seco (5 mL). La mezcla se agitó durante 1 h a temperatura ambiente. Se agregó CH2CI2 y la mezcla se lavó dos veces con NaHCC>3 saturado. La fase orgánica se secó con MgS0 y después de filtración, el solvente se removió al vacío. La mezcla se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (gradiente de elución con 0-5% MeOH en CH2CI2) para proporcionar el compuesto 5 (100 mg, 38%). 3.4.2 Síntesis de los compuestos 6 a 8. 10, 12. 14. 15. 19. 20, 21 El Compuesto 6 puede sintetizarse siguiendo el procedimiento descrito para el compuesto 5 usando ácido (2S,3R)-3-hidroxi-2-(metoxicarbonilamino)butanoico en lugar de ácido (S)-2-ciclopropil-2-(metoxicarbonilamino)acético.

El Compuesto 7 puede sintetizarse siguiendo el procedimiento descrito para el compuesto 5 usando ácido (S)-2-(metoxicarbonilamino)-4-metilpentanoico en lugar de ácido (S)-2-ciclopropil-2-(metoxicarbonilamino)acético.

El Compuesto 8 puede sintetizarse siguiendo el procedimiento descrito para el compuesto 5 usando ácido (2S,3S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilpentanoico en lugar de ácido (S)-2-ciclopropil-2-(metoxicarbonilamino)acético. 1H RMN (400 MHz, MeOD) d ppm 0.82 - 0.94 (m, 12 H), 1.04 -1.28 (m, 2 H), 1.41 - 1.62 (m, 2 H), 1.72 - 1.86 (m, 2 H), 2.12 - 2.45 (m, 6 H), 2.53 - 2.73 (m, 2 H), 3.66 (s, 6 H), 3.82 - 4.00 (m, 2 H), 4.13 - 4.23 (m, 2 H), 4.24^.31 (m, 2 H), 5.25-5.31 (m, 1 H), 5.34-5.41 (m, 1 H), 7.84 - 7.91 (m, 2 H), 7.94 - 8.05 (m, 3 H), 8.07 - 8.17 (m, 3 H), 8.25-8.33 (m, 2 H) El Compuesto 10 puede sintetizarse siguiendo el procedimiento descrito para el compuesto 5 usando ácido (S)-4-metox¡-2-(metoxicarbonilamino)butanoico en lugar de ácido (S)— 2— ciclopropil— 2— (metoxicarbonilamino)acético.

El Compuesto 12 puede sintetizarse siguiendo el procedimiento descrito para el compuesto 5 usando ácido 2-(metoxicarbonilamino)-2-(tetrahidro-2H-piran-4-il)acético en lugar de ácido (S)-2-ciclopropil-2-(metoxicarbonilamino)acético.

El Compuesto 14 puede sintetizarse siguiendo el procedimiento descrito para el compuesto 5 usando ácido ( ?)-2-(metoxicarbonilamino)-2-fenilacético en lugar de ácido ( S)— 2— ci el op rop i I— 2— (metoxicarbonilamino)acético.

El Compuesto 15 puede sintetizarse siguiendo el procedimiento descrito para el compuesto 5 usando ácido (S)-2-ciclopentil-2-(metoxicarbonilamino)acético en lugar de ácido (S)— 2— ciclopropil— 2— (metoxicarbonilamino)acético.

El Compuesto 19 puede sintetizarse siguiendo el procedimiento descrito para el compuesto 5 usando ácido (2S,3f?)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilpentanoico en lugar de ácido (S)-2-ciclopropil-2-(metoxicarbonilamino)acético.

Los Compuestos 20 y 21 pueden sintetizarse de acuerdo con procedimientos similares a aquellos ejemplificados en la síntesis de los compuestos 17 y 18 respectivamente, con la excepción de que el correspondiente intermediario (S,f?)-XXVc es sintetizado a partir del compuesto (S)— Illa y (R)-Vlllc en contraste con la síntesis de (S,S)-XXVc de (S)— Illa y (S)-Vlllc. (R)-VHIc que pueden ser preparados como se ejemplifica para (S)-Vlllc usando CBz-D-Prolina en lugar de CBz-L-Prolina .

Todos los compuestos se caracterizaron por LC/MS.

Método A: Cromatografía Líquida: Waters Alliance 2695, detector UV: Waters 996 PDA, rango: 210^400 nm; Detector de masa: Waters ZQ, fuente iónica: ES+, ES- Columna usada: SunFire C 8 3.5µ 4.6x100 mm fase móvil A: 10mM NH4OOCH+ 0.1 % HCOOH in H20; fase móvil B: CH3OH; temp. de columna: 50°C; fluidez: 1.5mL/min Gradiente tiempo (min) [%A/%B] 0 [65/35] a 7[5/95] a 9.6[5/95] a 9.8[65/35] a 12 [65/35] Método B: Waters Acquity UPLC equipado con un detector PDA (rango 210-400 nm) y un SQD Waters con una fuente iónica de modo dual ES+/-. La columna usada fue una Halo C18, 2.7µ, 2.1 x 50 mm, y se mantuvo a 50°C. Un gradiente de 95% de ácido fórmico acuoso (0.1 %)/ 5% de acetonitrilo a 100% de acetonitrilo fue en rampa durante 1.5 minutos, se mantuvo durante 0.6 minutos, luego volvió a 100% de ácido fórmico acuoso (0.1 %) durante 0.5 minutos. El régimen de fluidez fue de 0.6 mL/min.

El átomo de carbono adyacente al nitrógeno del anillo pirrolidina unido al grupo bencimidazol tiene para todos los compuestos en este cuadro 1A, una configuración en "S". El átomo de carbono estereogénico adyacente al nitrógeno del anillo pirrolidina unido al grupo imidazol tiene para todos los compuestos en este cuadro 1A, una configuración "S".

En los cuadros 1A y 1 B, "*" en Z y Z' denota el punto de unión. Por ejemplo para el compuesto 2 en este cuadro 1A, cuando Z es CUADRO 1B Más compuestos de fórmula I EJEMPLO 4 Actividad anti-HCV de compuestos de fórmula I Ensayo de Replicón Los compuestos de fórmula (I) fueron examinados para la actividad inhibitoria en el replicón de HCV. Este ensayo celular se basa en una construcción de expresión bicistrónica, descrita por Lohmann et al. (Science (1999) 285: 1 10-1 13; Journal of Virology (2003) 77: 3007-3019) con modificaciones descritas por Krieger et al. (Journal of Virology (2001 ) 75: 4614-4624), y Lohmann et al. (Journal of Virology (2003) 77: 3007-3019 para el genotipo 1 b y para Yi et al. (Journal of Virology (2004) 78: 7904-7915) para el genotipo 1a, en una estrategia de cribado de multi-objetivo.

Transfección estable El método fue el siguiente. El ensayo utilizó la línea celular transfectada establemente Huh-7 luc/neo (denominada a continuación Huh- Luc). Esta línea celular aloja un ARN que codifica una construcción de expresión bicistrónica que comprende las regiones de tipo salvaje NS3-NS5B, de tipo HCV, de tipo 1 b traducidas desde un Sitio de Entrada de Ribosoma Interno (IRES) de virus de encefalomiocarditis (EMCV), precedido por una porción informante (FfL-luciferasa), y una porción de marcador seleccionare (neoR, neomicina fosfotransferasa). La construcción está flanqueada por NTRs 5' y 3' (regiones no-traducidas) del tipo de HCV 1 b. El cultivo continuado de las células replicón en presencia de G418 (neoR) depende de la replicación del ARN de HCV. Las células replicón establemente transfectadas que replican autonómicamente ARN de HCV y a niveles elevados codifican inter alia, luciferasa, fueron usadas para el cribado de los compuestos antivirales.

Las células replicón fueron depositadas en placas de 384 receptáculos en presencia de los compuestos de ensayo y de control, que fueron agregados en varias concentraciones. A continuación de una incubación de tres días, se midió la replicación de HCV mediante ensayo de la actividad de luciferasa (usando sustratos de ensayo de luciferasa y reactivos y un formador de imágenes de microplaca de Perkin Elmer ViewLuxTM ultraHTS). Las células replicón en los cultivos de control, tienen una alta expresión de luciferasa en ausencia de cualquier inhibidor. La actividad inhibitoria del compuesto, fue monitoreada en las células Huh-Luc, lo cual permitió una curva de respuesta a la dosis para cada compuesto de ensayo. Luego se calcularon los valores de CE50, los cuales representan la cantidad de compuesto requerido para disminuir el nivel de actividad de luciferasa detectada, en un 50%, o más específicamente para reducir la capacidad de replicación del ARN replicón de HCV genéticamente ligado. El cuadro 2 muestra los resultados del replicón obtenidos para los compuestos de los ejemplos que se dan anteriormente en las líneas de células establemente transfectadas (CE50 1 b (estable)).

Cuando un compuesto de fórmula (I) es ensayado más de una vez en el ensayo de replicón, el promedio de todos los resultados de ensayos, se da en este cuadro 2.

CUADRO 2 Transfección transitoria En un montaje transitorio, una línea de célula de hepatoma Huh-7 lunet fue transfectada transitoriamente con un ARN autonómicamente replicante que codifica una construcción de expresión bi-cistrónica. Esta construcción comprende un gen informante de luciferasa de luciérnaga que precede la región subgenómica NS3-NS5B de HCV (genotipo 1a H77 o 1 b Con1 ). La traducción de la región subgenómica HCV es intermediada por un sitio de entrada de ribosoma interno del virus de encefalomiocarditis. La construcción está además flanqueada por regiones no traducidas 5' y 3' de HCV (genotipo 1a H77 o 1 b Con 1 , respectivamente), que permiten la replicación del ARN.

Adicionalmente con las construcciones de tipo salvaje, se introdujeron mutaciones dirigidas al sitio en el replicón 1b del genotipo HCV en el gen que codifica para la proteína 5A no estructural (NS5A). Más precisamente, los residuos amino ácidos 28, 30, 31 y 93 en NS5A fueron alterados independientemente.

Se depositaron células en placas de 384 receptáculos, en presencia de compuestos de ensayo y de control, los cuales fueron agregados en varias concentraciones. A continuación de una incubación de dos días, la replicación del ARN replicón subgenómico de HCV se midió mediante ensayo de la actividad de luciferasa (usando sustratos convencionales de ensayo de luciferasa, y reactivos y un formador de imagen de microplaca Perkin Elmer ViewLuxTM ultraHTS). Las células que contenían el replicón sub-genómico HCV en los cultivos de control, tienen elevada expresión de luciferasa en ausencia de cualquier inhibidor. La actividad inhibidora del compuesto fue monitoreada, permitiendo una curva de respuesta a la dosis para cada compuesto de ensayo. Luego se calcularon los valores de CE5o, los cuales representan la cantidad de compuesto requerido para disminuir el nivel de actividad de luciferasa detectado en un 50%, o más específicamente, para reducir la capacidad del ARN sub-genómico de HCV genéticamente ligado para duplicarse.

El cuadro 3 muestra los resultados del replicón obtenidos para compuestos de los ejemplos que se dieron anteriormente en las líneas de células transfectadas transitoriamente para el genotipo 1 a y 1 b (CE50 1 a (transitorio), y, CE50 1 b (transitorio) respectivamente). El cuadro 4 muestra los resultados del replicón en los mutantes NS5A en 1 b obtenidos para los compuestos de los ejemplos que se dan anteriormente en las líneas de células transfectadas transitoriamente también como valores de CE50.

Sistemas celulares de cribado (Counterscreens) Las líneas celulares de cribado incluyen una línea celular de hepatoma Huh-7 que contiene una construcción significativa inmediata de -promotor precoz- Luc de citomegalovirus humano (Huh7-CMV-Luc) y una línea de célula T T4 que contiene un informante Luc de repetición terminal larga (MT4-LTR-Luc). El cuadro 3 muestra los resultados del sistema de cribado para los compuestos de los ejemplos que se dan anteriormente.

Cuando un compuesto de fórmula (I) se ensaya más de una vez en el ensayo de replicón transitorio, el promedio de todos los resultados del ensayo se proveen en el cuadro 3.

CUADRO 3 CUADRO 4 EJEMPLO 5 Análisis farmacocinético después de una sola administración oral I Las dosis de compuestos se administraron oralmente en forma de una solución en PEG400, para ratas macho Sprague-Dawley a un nivel de dosis de 10 mg/kg. En puntos de tiempo seriados, después de la dosificación, los animales fueron sacrificados y se recogieron muestras del hígado. Todas las muestras fueron analizadas usando un método de investigación LC-MS/MS cualificado para determinar la concentración de los compuestos de ensayo en el hígado. Se efectuó un análisis no compartimental usando la regla trapezoidal lin/ log empleando WinNonlin™ Professional (Versión 5.2.1). Los resultados se resumen en el cuadro 5.

CUADRO 5 EJEMPLO 6 Estudios de Combinación de Inhibidor En ciertas modalidades, tres compuestos de el cuadro 2 fueron combinados con un compuesto que inhibe la replicación del virus de hepatitis C, tal como por ejemplo, TMC435350, MK-7009, ITMN-191 , o un inhibidor de polimerasa (inhibidor a base de nucleósidos: compuesto A y PSI-6130; inhibidor no a base de nucleósidos: compuesto B). El experimento se efectuó en un motivo de "tablero de ajedrez" con un ajuste de la droga horizontal, y el otro vertical sobre células Huh7-Luc que contienen el replicón 1 b de HCV establemente transfectado. Cada combinación de dos se llevó a cabo por lo menos tres veces y se analizó con el software MacSynergy™ II para obtener los volúmenes porcentuales de sinergia/ antagonismo (expresados como nM2%).

Los cálculos teóricos de interacciones de aditivo en MacSynergy™ II fueron derivados de curvas de respuesta a la dosis de cada compuesto individual. La superficie de aditivo calculada fue luego restada de la superficie experimental para obtener una superficie de sinergia. Las interacciones de aditivo dieron como resultado un plano horizontal de 0%. Un pico por arriba del plano de 0% indicó sinergia, una depresión por debajo de un plano de 0% se refirió a antagonismo. El 95% de intervalo de confianza para la superficie experimental de respuesta a la dosis, se calculó para evaluar la significancia estadística de la sinergia o antagonismo.

Los volúmenes obtenidos por MacSynergyTM II con la combinación, se mencionan en el cuadro 6. Dado que los rangos de volumen de sinergia para las combinaciones ensayadas, tal como las derivadas del sobre de confianza del 95% para independencia Bliss, extienden los rangos de volumen determinados como sinérgicos e independientes de Bliss, las combinaciones ensayadas fueron consideradas que actuaban como aditivas a sinérgicas. No se observó ningún antagonismo signficativo en ninguna de las combinaciones ensayadas (cuadro 6).

Compuesto A CUADRO 6 n.s. = 'No Significativo' como referencia de MacSynergy II EJEMPLO 7 Composiciones farmacéuticas "Ingrediente activo" tal como se usa a través de este ejemplo se refiere a un compuesto de fórmula (I), incluyendo cualquier forma estereoquímicamente isomérica del mismo, o un solvato del mismo, en cualquiera de los compuestos ejemplificados.

Ejemplos típicos de formulaciones de un compuesto de esta invención son los siguientes: 1 . Tabletas recubiertas con película Preparación del núcleo de tabletas Una mezcla de 100 g de ingrediente activo, 570 g de lactosa y 200 g de almidón se mezclaron bien y a continuación se humidificaron con una solución de 5 g de dodecil sulfato de sodio y 10 g polivinil-pirrolidona en aproximadamente 200 mi de agua. La mezcla de polvo húmedo, es secada y tamizada nuevamente. Luego se agregaron 100 g de celulosa microcristalina y 15 g de aceite vegetal hidrogenado. La totalidad se mezcla bien y se comprime en tabletas, lo cual proporciona 10 mg de ingrediente activo.

Recubrimiento A una solución de 10 g de metil celulosa en 75 mi de etanol desnaturalizado, se agregó una solución de 5 g de etil celulosa en 150 mi de diclorometano. Luego se agregaron 75 mi de diclorometano y 2.5 mi de 1 ,2,3-propanotriol, 10 g de polietilen glicol se muelen y se disuelven en 75 mi de diclorometano. Esta última solución se agrega a la primera y luego se agregan 2.5 g de octadecanoato de magnesio, 5 g de polivinil-pirrolidona y 30 mi de suspensión coloreada concentrada y se homogeniza la totalidad. Los núcleos de tableta son recubiertos con la mezcla así obtenida en un aparato para recubrimiento. 2. Suspensión Se prepara una suspensión acuosa para administración oral de manera que cada mililitro contenga 1 a 5 mg de ingrediente activo, 50 mg de carboximetil celulosa de sodio, 1 mg de benzoato de sodio, 500 mg de sorbitol y agua 1 mi. 3. Inyectable Se prepara una composición parenteral mediante agitación de 1.5 % (peso/ volumen) de ingrediente activo en 0.9 % de solución de NaCI o en 10 % en volumen de propilen glicol en agua.

Claims (56)

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES

1 .- Un compuesto de fórmula o una forma estereoisoméhca del mismo, donde : A es fenileno o naftileno, cada uno de los cuales puede estar opcionalmente sustituido con 1 , 2 o 3 sustituyentes seleccionados de halo o alquilo Ci_3; R y R', son cada uno independientemente, -CR1R2R3, arilo, heteroarilo o heterocicloalquilo C4-6, donde arilo y heteroarilo pueden estar opcionalmente sustituidos con 1 o 2 sustituyentes seleccionados de halo y metilo; y donde R1 es hidrógeno; alquilo Ci_4 opcionalmente sustituido con metoxi, hidroxi o dimetilamino; fenilo opcionalmente sustituido con 1 , 2 o 3 sustituyentes independientemente seleccionados de halo, alcoxi C1- y trifluormetoxi; 1 ,3-benzodioxolanilo; bencilo opcionalmente sustituido con 1 , 2 o 3 sustituyentes independientemente seleccionados de halo o metoxi; cicloalquilo C3-S; heteroarilo; heterocicloalquilo C4_6; o heteroarilmetilo; R2 es hidrógeno, hidroxilo, amino, mono- o dialquilamino C-i_4, alquilcarbonilamino Ci_4, alquiloxicarbonilamino C1-4, alquilaminocarbonilamino C-i_4, piperidin-1-ilo o ¡midazol-1-ilo; R3 es hidrógeno, o R1 y R3 forman conjuntamente un grupo ciclopropilo; o R2 y R3 forman oxo; o una sal farmacéuticamente aceptable o un solvato del mismo.

2. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R1 es hidrógeno; alquilo Ci_4 opcionalmente sustituido con metoxi o dimetilamino; fenilo opcionalmente sustituido con 1 , 2 o 3 sustituyentes independientemente seleccionados de halo, alcoxi y trifluormetoxi; 1 ,3-benzodioxolanilo; bencilo opcionalmente sustituido con 1 , 2 o 3 sustituyentes independientemente seleccionados de halo o metoxi; cicloalquilo C3_e; heteroarilo; heterocicloalquilo C4_6¡ o heteroarilmetilo.

3. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado además porque A es naftileno opcionalmente sustituido con 1 , 2 o 3 sustituyentes seleccionados de halo o alquilo Ci_3.

4. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado además porque A es 2,6-naftileno opcionalmente sustituido con 1 , 2 o 3 sustituyentes seleccionados de halo o alquilo C^.

5. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado además porque A es naftileno.

6. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado además porque A es 2,6-naftileno.

7. - El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 3 a 6, caracterizado además porque el compuesto distinto de

8. - El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 3 a 6, caracterizado además porque Ri es diferente de 2-propilo no sustituido y cuando R en R es 1-metoxietilo, entonces R1 en R' es diferente de 1-metoxietilo.

9. - El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 3 a 6, caracterizado además porque - Ri es distinto de 2 propilo cuando R2 es metoxicarbonilamino; y - Ri en R' es distinto de 1-metoxietilo cuando R2 en R' es metoxicarbonilamino.

10. - El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, caracterizado además porque R y R' son diferentes uno del otro.

1 1. - El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, caracterizado además porque R y R' son iguales.

12. - El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 1 1 , caracterizado además porque R y R' son cada uno independientemente -CR1 R2R3.

13. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado además porque cada R2 es independientemente alquilcarbonilamino C1-4 o alquiloxicarbonilamino Ci_4.

14. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado además porque cada R2 es independientemente metoxicarbonilamino.

15.- El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 12 a 14, caracterizado además porque cada R1 está independientemente seleccionado de alquilo C3_4 ramificado, metoxialquilo C2_ 3, ciclopentilo o fenilo.

16 - El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 12 a 14, caracterizado además porque R1 en R es 1-metilpropilo, 2-metilpropilo, 2-metoxietilo, ciclopentilo o fenilo; y R1 y R' es 1-metiletilo, 1-metilpropilo, 2-metilpropilo, 1-metoxietilo, ciclopentilo o fenilo.

17.- El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 12 a 16, caracterizado además porque ambos átomos de carbono en R y R' portadores del sustituyente R-i , R2 y el R3 tienen la configuración S.

18.- El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17, caracterizado además porque el compuesto es de fórmula la

19.- Un compuesto que tiene la estructura

20. - Una sal farmacéuticamente aceptable o un solvato de compuesto de la reivindicación 19.

21. - Un compuesto que tiene la estructura

22. - Una sal farmacéuticamente aceptable o un solvato de un compuesto de la reivindicación 21.

23. - Un compuesto que tiene la estructura

24. - Una sal farmacéuticamente aceptable o un solvato de un compuesto de la reivindicación 23.

25. - Un compuesto que tiene la estructura

26.- Una sal farmacéuticamente aceptable o un solvato de un compuesto de la reivindicación 25.

27.- Un compuesto que tiene la estructura

28. - Una sal farmacéuticamente aceptable o un solvato de compuesto de la reivindicación 27.

29. - Un compuesto que tiene la estructura

30. - Una sal farmacéuticamente aceptable o un solvato de un compuesto de la reivindicación 29.

31. - Un compuesto de la reivindicación 29 en su forma ,2HCI.4H20.

32. - Un compuesto de la reivindicación 29 en su forma .H2S04.

Un compuesto que tiene la estructura

34. - Una sal farmacéuticamente aceptable o un solvato de un compuesto de la reivindicación 33.

35. - Un compuesto de la reivindicación 33 en su forma .2HCI.4H20.

36. - Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 35, y un portador farmacéuticamente aceptable.

37. - Un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 35 o una composición farmacéutica de la reivindicación 36, para usarse en la prevención o tratamiento de una infección de HCV en un mamífero.

38. - Un producto que comprende (a) un compuesto tal como se ha definido en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 35, y (b) otro inhibidor de HCV, como una preparación combinada para uso simultáneo, separado o consecutivo en el tratamiento de infecciones de HCV.

39. - Un producto de la reivindicación 38 donde el otro inhibidor de HCV es un inhibidor de proteasa HCV.

40. - El producto de conformidad con la reivindicación 39, caracterizado además porque el inhibidor de proteasa HCV está seleccionado del grupo que consiste en: telaprevir (VX-950), boceprevir (SCH-503034), narlaprevir (SCH-900518), ITMN-191 (R-7227), TMC435350 (TMC435), MK-7009, BI-201335, BI-2061 (ciluprevir), BMS-650032, ACH-1625, ACH-1095, GS 9256, VX-985, IDX-375 (HCV NS4A inhibidor de co-factor de proteasa), VX-500, VX-8 3, PHX- 766, PHX2054, IDX-136, IDX-3 6, ABT-450, EP-013420 (y congéneres) y VBY-376.

41. - El producto de conformidad con la reivindicación 39, caracterizado además porque el inhibidor de proteasa HCV está seleccionado del grupo que consiste en TMC435350 (TMC435), MK- 7009 o ITMN-191 (R-7227).

42. - El producto de conformidad con la reivindicación 38, caracterizado además porque el otro inhibidor de HCV es un nucleósido HCV o un inhibidor de polimerasa no-nucleósido.

43.- El producto de conformidad con la reivindicación 42, caracterizado además porque el inhibidor de polimerasa de HCV está seleccionado del grupo que consiste en R7128, PSI-7851 , PSI 7977, IDX-189, IDX-184, IDX-102, R1479, UNX-08189, PSI-6130, PSI-938, PSI-879, HCV-796, HCV-371 , VCH-759, VCH-916, VCH-222, ANA-598, MK-3281 , ABT-333, ABT-072, PF-00868554, BI-207127, GS-9190, A- 837093, JKT-109, GL-59728, GL-60667, ABT-072, AZD-2795 y 16,16-dióxido de 13-ciclohexil-3-metoxi-17,23-dimetil-7H-10,6-(metanoiminotioiminoetano oxietanoiminometano)indol[2,1-a][2]benzazepina- 4,24-diona.

44. - El producto de conformidad con la reivindicación 42, caracterizado además porque el inhibidor de polimerasa de HCV es PSI-6130 o un profármaco del mismo.

45. - El producto de conformidad con la reivindicación 42, caracterizado además porque el inhibidor de polimerasa de HCV es o una sal farmacéuticamente aceptable o un solvato del mismo.

46. - Un producto que comprende (a) un compuesto tal como se ha definido en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 35, y (b) un agente ¡nmunomodulador, como una preparación combinada para uso simultáneo, separado o consecutivo en el tratamiento de infecciones de HCV.

47. - El uso de un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 35 o una composición farmacéutica de la reivindicación 36, en la preparación de un medicamento para la prevención o tratamiento de una infección de HCV en un mamífero.

48. - El uso de (a) un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 35, y (b) otro inhibidor de HCV, en la preparación de un medicamento para el tratamiento de las infecciones de HCV, en donde el compuesto y el otro inhibidor de HCV se adaptan para ser administrables simultáneamente, por separado o secuencialmente.

49.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 48, en donde el otro inhibidor de HCV es un inhibidor de proteasa de HCV.

50.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 49, en donde el inhibidor de proteasa de HCV se selecciona del grupo que consiste en telaprevir (VX-950), boceprevir (SCH-503034), narlaprevir (SCH-9005 8), ITMN-191 (R-7227), TMC435350 (TMC435), MK- 7009, BI-20 335, BI-2061 (ciluprevir), BMS-650032, ACH-1625, ACH- 095, GS 9256, VX-985, IDX-375 (HCV NS4A inhibidor del co-factor de proteasa), VX-500, VX-8 3, PHX-1766, PHX2054, IDX-136, IDX-316, ABT- 50, EP-013420 (y congéneres) y VBY-376.

51. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 49, en donde el inhibidor de proteasa de HCV se selecciona del grupo que consiste en TMC435350 (T C435), MK- 7009 o ITMN-191 (R-7227).

52. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 48, en donde el otro inhibidor de HCV es un inhibidor de nucleósidos y no-nucleósidos de polimerasa HCV.

53. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 52, en donde el inhibidor de polimerasa de HCV se selecciona del grupo que consiste en R7128, PSI-7851 , PSI 7977, IDX-189, IDX-184, IDX-102, R1479, UNX-08189, PSI-6130, PSI-938, PSI-879, HCV-796, HCV-371 , VCH-759, VCH-916, VCH-222, ANA-598, MK-3281 , ABT-333, ABT-072, PF-00868554, BI-207 27, GS-9190, A- 837093, JKT-109, GL-59728, GL-60667, ABT-072, AZD-2795 y 6, 6-dióxido de 13-ciclohexil-3-metoxi-17,23-dimetil-7H-10,6-(metanoiminotioiminoetano oxietanoiminometano)indol-[2,1-a][2]benzazepina-14,24-diona.

54.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 52, en donde el inhibidor de polimerasa de HCV es PSI-6130 o un profármaco del mismo.

55.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 52, en donde el inhibidor de polimerasa de HCV es o una sal o solvato farmacéuticamente del mismo.

56.- El uso de (a) un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 35, y (b) un agente inmunomodulador, en la preparación de un medicamento para el tratamiento de infecciones de HCV, en donde el compuesto y el agente inmunomodulador se adaptan para ser administrables simultáneamente, por separado o secuencialmente.