EA022839B1

EA022839B1 - Бензимидазол-имидазольные производные

Info

Publication number: EA022839B1
Application number: EA201290260A
Authority: EA
Inventors: Коэн Вандик; Стефан Жюльен Ласт; Иоаннис Николаос Хоупис; Пьер Жан-Мари Бернар Рабуассон
Original assignee: Янссен Сайенсиз Айрлэнд Юси
Priority date: 2009-11-04
Filing date: 2010-11-03
Publication date: 2016-03-31
Also published as: MX2012005178A; CR20120302A; AR078888A1; US20140107172A1; TW201127378A; AU2010317085A1; US20160340344A1; JP2013510119A; CN102741241A; EA201290260A1; CN102741241B; CO6531445A2; KR20120091292A; US9427428B2; BR112012010502A2; IL219087A0; EP2496572A1; CL2012001176A1; JP6005515B2; CA2780034C

Abstract

Предложены ингибиторы репликации HCV формулы (I), включающие его стереохимически изомерные формы, соли и сольваты,где каждый из R и R' независимо представляет собой -CRRR, арил, гетероарил или гетероСциклоалкил, причем арил и гетероарил могут быть необязательно замещены 1 или 2 заместителями, выбранными из галогена и метила. Также настоящее изобретение относится к способу получении указанных соединений, фармацевтическим композициям, содержащим их, и к их применению в терапии HCV.

Description

Данное изобретение относится к бензимидазол-имидазольным производным, которые являются ингибиторами вируса гепатита С (НСУ), их синтезу и их применению для лечения или профилактики НСУ.

Уровень техники

НСУ представляет собой одноцепочечный положительный РНК-вирус, относящийся к семейству вирусов ПауМпйае рода Нерас1У1гиз. Геном вируса транслируется в единую открытую рамку считывания, которая кодирует множество структурных и неструктурных белков.

Белок Νδ5Α НСУ расположен ниже белка Νδ4Β и выше белка Νδ5Β. После посттрансляционного расщепления вирусной сериновой протеазой Νδ3/4Α, Νδ5Α созревает в цинксодержащий фосфопротеин из трех доменов, который существует либо в виде гипофосфорилированной (56-кДа, р56), либо гиперфосфорилированной формах (58-кДа, р58). Νδ5Α НСУ вовлечен во множество аспектов жизненного цикла вируса, включая репликацию вируса и сборку инфекционных частиц, а также модулирование окружающей среды его клетки-хозяина. Хотя этому белку не приписывается ферментативная функция, описано, что он взаимодействует с многочисленными вирусными и клеточными факторами.

В ряде патентов и патентных заявок описаны соединения с ингибирующей активностью в отношении НСУ, в частности, нацеленные на Νδ5Α. В ШО 2006/133326 описаны производные стилбена, а в ШО 2008/021927, ШО 2008/021928, ШО 2009/102325 и ШО 2009/102318 описаны бифенильные производные, обладающие активностью ингибирования Νδ5Α НСУ. В ϋδ 2009/0202483 описаны соединенные мостиковой связью бифенильные производные. В ШО 2008/048589 описаны производные 4-(фенилэтинил)-1Нпиразола и их противовирусное применение. В ШО 2008/070447 описан широкий диапазон ингибирующих НСУ соединений, включающих бензимидазольную часть. В ШО 2010/065668, ШО 2010/065674 и ШО 2010/065681 описаны бензимидазол-имидазольные производные в качестве ингибиторов НСУ Νδ5Α. Например, соединения, имеющие следующую структуру и номер химической реферативной службы, описаны в табл. 1 ШО 2010/065674.

Таблица А

Структура	ИО2010/065674	Номер химической реферативной службы (САЗ), название САЗ и идентификационный номер в 1702010/065674
		САЗ 1242087-93-9 - соединение 174
χΧΧκχ Χ· χ ч <Ао /° '	Метиловый эфир N-[(13)-Ι- Ε [ (23)-2- [5- [6- [2- [ (23)-ΙΕ (23)-2- [(метоксикарбонил)амино]-3метил-1-оксобутил]-2пирролидинил]-1Н-бензимидазолб-ил]-2-нафталенил]-1Нимидазол-2-ил]-1пирролидинил]карбонил]-2метилпропил]карбаминовой кислоты
я ч /°	- ч ч	САЗ 1242087-95-1 - соединение 176 Метиловый эфир Ν-[ (15,2К)-2метокси-1-[[(23)-2- [5- [6- [2[ (23)-1- [ (23,ЗК)-3-метокси-2[(метоксикарбонил)амино]-1оксобутил]-2-пирролидинил]-ΙΗбензимидазол- 6 -ил] -2нафталенил]-1Н-имидазол-2-ил]1-пирролидинил]карбонил] пропил]карбаминовой кислоты
		САЗ 1228552-40-6 - соединение 177
С? н О”Ь	„ч ч	Метилоый эфир Ν-[(13)-Ι- Ε [ (23)-2- [5- [6- [2- [ (23)-ΙΕ (2К)-2-(диметиламино)-2фенилацетил]-2-пирролидинил]1Н-бензимидазол-6-ил]-2нафталенил]-1Н-имидазол-2-ил]1-пирролидинил]карбонил]-2метилпропил]карбаминовой кислоты
Ч у н /°	ίο \	Соединение 179

о...... ч /°	X л/	Соединение 181
ГЛ	/=\	САЗ 1228552-49-5 - соединение 182
Ч ч ч /°	чо	Метиловый эфир N-[(13)-Ι- Ε [ (23)-2-[6-[6- [2- [ (23)-ΙΕ (2Е)-2-(диметиламино)-2фенилацетил]-2-пирролидинил]1Н-имидазол-5-ил]-2нафталенил]-1Н-бензимидазол-2ил]-1-пирролидинил]карбонил]2-метилпропил]карбаминовой кислоты

- 1 022839

После первоначальной острой инфекции у большинства инфицированных индивидов развивается хронический гепатит, поскольку НСУ реплицируется предпочтительно в гепатоцитах, но не является непосредственно цитопатическим. В частности, отсутствие интенсивного Т-лимфоцитарного ответа и высокая способность вируса к мутациям, по-видимому, обеспечивают высокий уровень хронической инфекции. Хронический гепатит может прогрессировать в печеночный фиброз, приводящий к циррозу, заболеванию печени конечной стадии, и в НСС (печеночно-клеточную карциному), что делает его основной причиной трансплантаций печени.

Существует шесть основных генотипов НСУ и более 50 подтипов, которые географически распределены по-разному. НСУ 1 генотипа представляет собой преобладающий генотип в Европе и США. Выраженная генетическая гетерогенность НСУ имеет высокое диагностическое и клиническое значение, являясь возможным объяснением трудностей в разработке вакцины и отсутствия ответа на современную терапию.

НСУ может передаваться через контакт с зараженной кровью или продуктами крови, например, после переливания крови или внутривенного употребления наркотиков. Внедрение диагностических тестов, используемых для скрининга крови, вызвало тенденцию к понижению встречаемости посттрансфузионного заражения НСУ. Однако учитывая медленное прогрессирование в заболевание печени конечной стадии, существующие инфекции будут оставаться серьезной медицинской и экономической проблемой в течение десятилетий.

Современные способы лечения НСУ основаны на (пегилированном) интерфероне-альфа (ΙΕΝ-α) в сочетании с рибавирином. Эта комбинированная терапия приводит к замедленному вирусологическому ответу более чем у 40% пациентов, инфицированных вирусами 1 генотипа НСУ, и приблизительно у 80% пациентов, инфицированных 2 и 3 генотипами. Помимо ограниченной эффективности в отношении НСУ 1 генотипа, эта комбинированная терапия обладает значительными побочными эффектами, включая гриппоподобные симптомы, гематологические нарушения и нейропсихиатрические симптомы. Таким образом, для преодоления недостатков современной терапии НСУ, таких как побочные эффекты, ограниченная эффективность, возникновение устойчивости и несоблюдение пациентом режима лечения, а также для улучшения ответа в виде постоянной вирусной нагрузки, существует необходимость в более эффективных, более удобных и лучше переносимых способах лечения.

Настоящее изобретение относится к группе бензимидазол-имидазольных производных, способных ингибировать цикл репликации НСУ.

Соединения по изобретению также являются привлекательными вследствие того факта, что они демонстрируют более высокую эффективность ингибирования цикла репликации НСУ по сравнению с их способностью ингибировать репликацию ВИЧ. ВИЧ-инфицированные пациенты часто страдают от коинфекций, таких как НСУ. Лечение таких пациентов ингибитором НСУ, который также ингибирует ВИЧ, может привести к нежелательному появлению устойчивых к ВИЧ штаммов.

Описание изобретения

В одном аспекте настоящее изобретение относится к соединениям, которые могут быть представлены формулой I

или их стереоизомерным формам, где

А представляет собой фенилен или нафтилен;

каждый из К и К' независимо представляет собой -СК₁К₂К₃; и где

К₁ представляет собой С_1-4алкил, необязательно замещенный метокси или гидрокси;

фенил;

С_3-6циклоалкил;

тетрагидропиранил;

К₂ представляет собой С_1-4алкилоксикарбониламино;

К₃ представляет собой водород, или

К₁ и К₃ вместе образуют циклопропильную группу;

или их фармацевтически приемлемым солям или гидратам солей.

В другом аспекте настоящее изобретение относится к соединениям, которые могут быть представлены следующими соединениями формулы (Ι-РК):

или их стереоизомерным формам, где

А представляет собой фенилен или нафтилен, каждый из которых может быть необязательно заме- 2 022839 щен 1, 2 или 3 заместителями, выбранными из галогена или С_1-3алкила;

каждый из К и К' независимо представляет собой -СК₁К₂К₃, арил, гетероарил или гетероС₄.₆ циклоалкил, причем арил и гетероарил могут быть необязательно замещены 1 или 2 заместителями, выбранными из галогена и метила; и где

К₁ представляет собой водород;

С_1-4алкил, необязательно замещенный метокси или диметиламино;

фенил, необязательно замещенный 1, 2 или 3 заместителями, независимо выбранными из галогена, С_1-4алкокси и трифторметокси;

1,3-бензодиоксоланил;

бензил, необязательно замещенный 1, 2 или 3 заместителями, независимо выбранными из галогена или метокси;

С3-6циклоалкил;

гетероарил;

гетероС4-6циклоалкил или гетероарилметил;

К₂ представляет собой водород, гидроксил, амино, моно- или ди-С_1-4алкиламино, С_1-4алкилкарбониламино, С_1-4алкилоксикарбониламино, С_1-4алкиламинокарбониламино, пиперидин-1-ил или имидазол1-ил;

К₃ представляет собой водород, или К₁ и К₃ вместе образуют оксогруппу или циклопропильную группу; или их фармацевтически приемлемым солям и/или сольватам.

В другом аспекте настоящее изобретение относится к соединениям, которые могут быть представлены формулой (1-СОК) (1-СОК) или их стереоизомерным формам, где

А представляет собой фенилен или нафтилен, каждый из которых может быть необязательно замещен 1, 2 или 3 заместителями, выбранными из галогена или С_1-3-залкила;

каждый из К и К' независимо представляет собой -СК₁К₂К₃, арил, гетероарил или гетероС_4-6циклоалкил, причем арил и гетероарил могут быть необязательно замещены 1 или 2 заместителями, выбранными из галогена и метила; и где

К1 представляет собой водород;

1,3-бензодиоксоланил;

С3-6циклоалкил;

гетероарил;

гетероС4-6циклоалкил; или гетероарилметил;

К₂ представляет собой водород, гидроксил, амино, моно- или ди-С_1-4алкиламино, С_1-4алкилкарбониламино, С_1-4алкилоксикарбониламино, С_1-4алкиламинокарбониламино, пиперидин-1-ил или имидазол-1-ил;

К3 представляет собой водород, или К₁ и К₃ вместе образуют оксогруппу или циклопропильную группу; или их фармацевтически приемлемым солям и/или сольватам.

В другом аспекте настоящее изобретение относится к соединениям, которые могут быть представлены формулой (1-РК-СОК) (1-РК-СОК) или их стереоизомерным формам, где

А представляет собой фенилен или нафтилен, каждый из которых может быть необязательно замещен 1, 2 или 3 заместителями, выбранными из галогена или С_1-3алкила;

каждый из К и К' независимо представляет собой -СК₁К₂К₃, арил, гетероарил или гетероС_4-6циклоалкил, причем арил и гетероарил могут быть необязательно замещены 1 или 2 заместителями, выбран- 3 022839 ными из галогена и метила; и где

Κι представляет собой водород;

1,3-бензодиоксоланил;

С_3-6циклоалкил;

гетероарил;

гетероС_3-6циклоалкил или гетероарилметил;

К₃ представляет собой водород; или

Κ₁ и К₃ вместе образуют оксогруппу или циклопропильную группу; или их фармацевтически приемлемым солям и/или сольватам.

В другом аспекте настоящее изобретение относится к соединениям, которые могут быть представлены следующими соединениями формулы (Ι-ΡΚ):

или их стереоизомерным формам, где

каждый из Κ и Κ' независимо представляет собой -СК₁К₂К₃, арил, гетероарил или гетероС_4-6циклоалкил, причем арил и гетероарил могут быть необязательно замещены 1 или 2 заместителями, выбранными из галогена и метила; и где

Κ₁ представляет собой водород;

фенил, необязательно замещенный 1, 2 или 3 заместителями, независимо выбранными из галогена, С1-4алкокси и трифторметокси;

1,3-бензодиоксоланил;

С_3-6циклоалкил;

гетероарил;

гетероС4-6циклоалкил или гетероарилметил;

К₃ представляет собой водород, или

Κ₁ и К₃ вместе образуют оксогруппу или циклопропильную группу; или их фармацевтически приемлемым солям и/или сольватам, при условии, что соединение отличается от любого из 6 соединений, приведенных в таблице А.

Когда используется в рамках настоящего изобретения, термин соединения формулы I, настоящие соединения, соединения по настоящему изобретению или подгруппы соединений формулы (I), такие как подгруппы, определенные в настоящем описании с помощью различных вариантов осуществления, а также соединения формулы (Ι-ΡΚ), соединения формулы (Ι-СОК), соединения формулы (I РК-СОК) или сходные термины, включают соединения формулы I или каждую из подгрупп, включая возможные стереоизомерные формы, и их фармацевтически приемлемые соли и сольваты, если нет иных указаний.

В следующем аспекте изобретение относится к применению соединений формулы I или их подгрупп, как указано в настоящем описании, для ингибирования цикла репликации НСУ. Альтернативно предусмотрено применение указанных соединений для изготовления лекарственного средства для ингибирования цикла репликации НСУ.

Варианты осуществления настоящего изобретения относятся к соединениям формулы (I) или любой их подгруппе, как определено в настоящем описании с помощью различных вариантов осуществления, где применимо одно или несколько определений для А, К, К', К₁, К₂ и К₃, как описано в настоящем опи- 4 022839 сании.

Другой вариант осуществления настоящего изобретения относится к соединениям формулы I или любой их подгруппе, где К-(С=О)- и К'-С(=О)- независимо представляют собой -(С=О)-СК1К₂К₃, выбранные из

* обозначает точку присоединения к азоту пирролидина. В частности, К-(С=О)- и К'-С(=О)- независимо представляют собой -(С=О)-СК₁К₂К₃, выбранный из

Другой вариант осуществления настоящего изобретения относится к соединениям формулы I или любой их подгруппе, где А представляет собой фенилен, в частности, где А представляет собой 1,4₄ °· фенилен структуры ' где пунктирная линия указывает на точки присоединения к остальной части молекулы.

Другой вариант осуществления настоящего изобретения относится к соединениям формулы I или любой их подгруппе, где А представляет собой нафтилен, в частности, где А представляет собой 2,6, где пунктирная линия указывает на точки присоединения остальной нафтилен структуры части молекулы.

Другой вариант осуществления относится к соединениям формулы (I) или любой их подгруппе, таким как соединения формулы Д-РК), где А представляет собой 2,6-нафтилен структуры

и где соединения в этом варианте осуществления отличаются от любого из 6 соединений, приведенных в таблице А.

Другой вариант осуществления относится к соединениям формулы (I) или любой их подгруппе, где К и К' отличаются друг от друга.

Другой вариант осуществления относится к соединениям формулы (I), где каждый К₂ независимо представляет собой С_1-4алкилкарбониламино или С_1-4алкилоксикарбониламино.

Другой вариант осуществления относится к соединениям формулы (I) или любой их подгруппе, где каждый К2 независимо представляет собой метоксикарбониламино.

Другой вариант осуществления относится к соединениям формулы (I) или любой их подгруппе, где каждый К₁ независимо выбран из разветвленного С_3-4алкила, метоксиС_2-3алкила, циклопентила или фенила.

Другой вариант осуществления относится к соединениям формулы (I) или любой их подгруппе, где К₁ в К представляет собой 1-метилпропил, 2-метилпропил, 2-метоксиэтил, циклопентил или фенил; К₁ в К' представляет собой 1-метилэтил, 1-метилпропил, 2-метилпропил, 1-метоксиэтил, циклопентил или фенил.

Другой вариант осуществления относится к соединениям формулы (I) или любой их подгруппе, где К и К' независимо представляют собой -СК₁К₂К₃, причем оба атома углерода, несущих заместитель К₁, К₂ и К₃, имеют 8-конфигурацию.

Другой вариант осуществления относится к соединениям формулы (I) или любой их подгрупупе, такой как соединения формулы (^РК), где соединение имеет формулу !а

Другой вариант осуществления относится к соединениям формулы (I) или любой их подгруппе, где соединение представляет собой одно из следующих соединений, представленных в табл. 1а: соединение 9, соединение 11, соединение 13, соединение 14, соединение 16, соединение 17 или соединение 18, или их фармацевтически приемлемую соль.

- 5 022839

В следующем аспекте настоящее изобретение относится к соединениям формулы I и их фармацевтически приемлемым солям и сольватам для применения для лечения или профилактики (или изготовления лекарственного средства для лечения или профилактики) инфекции НСУ. Типичные генотипы НСУ в контексте лечения или профилактики в соответствии с настоящим изобретением включают генотип 1Ь (преобладающий в Европе) или 1а (преобладающий в Северной Америке). Настоящее изобретение также относится к способу лечения или профилактики инфекции НСУ, в частности, инфекции НСУ генотипа 1а или 1Ь.

Чистые стереоизомерные формы соединений и промежуточных соединений, упоминаемых в настоящем описании, определяют как изомеры, по существу, свободные от других энантиомерных или диастереомерных форм той же основной молекулярной структуры указных соединений или промежуточных соединений. В частности, термин стереоизомерно чистый относится к соединениям или промежуточным соединениям, имеющим стереоизомерный избыток по меньшей мере 80% (т.е. минимум 90% одного изомера и максимум 10% других возможных изомеров) вплоть до стереоизомерного избытка 100% (т.е. 100% одного изомера и отсутствие другого изомера), более конкретно, соединения или промежуточные соединения, имеющие стереоизомерный избыток от 90% вплоть до 100%, еще более конкретно имеющие стереоизомерный избыток от 94% вплоть до 100% и наиболее конкретно имеющие стереоизомерный избыток от 97% вплоть до 100%. Термины энантиомерно чистый и диастереомерно чистый следует понимать аналогично, но рассматривая энантиомерный избыток и диастереомерный избыток, соответственно, данной смеси.

Чистые стереоизомерные формы или стереоизомеры соединений и промежуточных соединений настоящего изобретения можно получать путем проведения известных в уровне техники процедур. Например, энантиомеры могут быть выделены из соответствующего соединения путем селективной кристаллизации их стереоизомерных солей с оптически активными кислотами или основаниями. Примерами таковых являются винная кислота, дибензоилвинная кислота, дитолуоилвинная кислота и камфорсульфоновая кислота. Альтернативно, энантиомеры могуть быть выделены путем техник хроматографии с использованием стационарных хиральных фаз. Указанные чистые стереохимические изомерные формы могут также быть получены из соответствующих чистых стереоизомерных форм подходящих исходных материалов, обеспечивающих прохождение стереоспецифической реакции. Предпочтительно, если требуется специфический стереоизомер, указанное соединение синтезируют стереоспецифическим способом получения. Такие способы будут преимущественно использовать чистые энантиомерные исходные материалы.

Диастереомерные рацематы соединений формулы I можно получать по отдельности общепринятыми способами.

Соответствующими способами физического разделения, которые можно преимущественно использовать, являются, например, селективная кристаллизация и хроматография, например, колоночная хроматография или сверхкритическая жидкостная хроматография.

Соединения формулы I имеют несколько центров хиральности. Интерес представляют стереогенные центры пирролидинового кольца на 2 атоме углерода. Конфигурация в этом положении может представлять собой конфигурацию, соответствующую Ь-пролину, т.е.

или конфигурацию, соответствующую Ό-пролину, т.е.

Также интерес представляют стереогенные центры, находящиеся в частях -СК4К2К3 соединений формулы I. Варианты осуществления настоящего изобретения, таким образом, относятся к соединениям формулы I или любой их подгруппе, где атом углерода С в -СК4К2К3 имеет его δ-конфигурацию, в частности, когда Κι представляет собой Сх_-4алкил, необязательно замещенный метокси, гидрокси или диметиламино; бензил, необязательно замещенный 1, 2 или 3 заместителями, независимо выбранными из галогена или метокси; С_3-6циклоалкил; гетероС_4-6циклоалкил; или гетероарилметил. Конкретными примерами частей -(С=О)-СК!К₂К₃ соединений формулы I с указанной стереохимией являются

- 6 022839

где * обозначает точку присоединения к остальной части молекулы.

Фармацевтически приемлемые аддитивные соли включают терапевтически активные нетоксичные формы кислотных и основных аддитивных солей соединений формулы (I) или любой их подгруппы. Интерес представляют свободные, т.е. несолевые формы соединений формулы I или любой их подгруппы.

Фармацевтически приемлемые кислотно-аддитивные соли можно удобным образом получать путем обработки основной формы такой подходящей кислотой. Подходящие кислоты включают, например, неорганические кислоты, такие как галогенводородные кислоты, например хлористо-водородная или бромисто-водородная кислота, серная, азотная, фосфорная кислоты и т.п.; или органические кислоты, например, такие как уксусная, пропионовая, гидроксиуксусная, молочная, пировиноградная, щавелевая (т.е. этандиовая), малоновая, янтарная (т.е. бутандиовая кислота), малеиновая, фумаровая, яблочная (т.е. гидроксилбутандиовая кислота), виннокаменная, лимонная, метансульфоновая, этансульфоновая, бензолсульфоновая, п-толуолсульфоновая, цикламовая, салициловая, п-аминосалициловая, памовая кислоты и т.п. Напротив, указанные солевые формы можно превращать обработкой соответствующим основанием в форму свободного основания.

Соединения формулы (I), содержащие кислотный протон, также можно превращать в их основноаддитивные соли, в частности, аддитивные солевые формы металлов или аминов, путем обработки подходящими органическими и неорганическими основаниями. Подходящие солевые формы включают, например, соли аммония, соли щелочных и щелочно-земельных металлов, например соли лития, натрия, калия, магния, кальция и т.п., соли с органическими основаниями, например бензатин, Ν-метил-Эглюкамин, соли гидрабамина и соли с аминокислотами, например, такими как аргинин, лизин и т.п.

Некоторые из соединений формулы I также могут существовать в таутомерных формах. Например, таутомерными формами амидных (-С(=О)-ЫН-) групп являются иминоспирты (-С(ОН)=Ы-).

Подразумевается, что таутомерные формы, хотя и не указаны явно в структурных формулах, представленных в настоящем описании, включены в объем настоящего изобретения.

Как используют в рамках настоящего изобретения, С_1-4алкил в качестве группы или части группы определяет насыщенные прямые или разветвленные углеводородные группы, имеющие от 1 до 4 атомов углерода, например, такие как метил, этил, 1-пропил, 2-пропил, 1-бутил, 2-бутил, 2-метил-1-пропил, 2метил-2-пропил. Для целей настоящего изобретения среди С_1-4алкилов интерес представляют С_3-4алкилы, т.е. прямые или разветвленные углеводородные группы, имеющие 3 или 4 атома углерода, такие как 1пропил, 2-пропил, 1-бутил, 2-бутил, 2-метил-1-пропил, 2-метил-2-пропил. Особый интерес может представлять разветвленный С_3-4алкил, такой как 2-пропил, 2-бутил, 2-метил-1-пропил, 2-метил-2-пропил.

Термин С_3-6циклоалкил является общим термином для циклопропила, циклобутила, циклопентила и циклогексила. Аналогично, С_4-6циклоалкил является общим названием для циклобутила, циклопентила и циклогексила.

С_1-4алкокси в качестве группы или части группы означает группу формулы -О-С_1-4алкил, где С_1-4алкил является таким, как определено выше. Примерами С_1-4алкокси являются метокси, этокси, нпропокси, изопропокси.

Термин галоген является общим термином для фтора, хлора, брома и йода.

Как используют в рамках настоящего изобретения, термин (=О) или оксо формирует карбонильную часть, когда он присоединен к атому углерода. Следует отметить, что атом может быть замещен только оксогруппой, когда валентность этого атома допускает это.

Как используют в рамках изобретения, арил является общим термином для фенила и нафтила.

Как используют в рамках изобретения, термин гетероарил означает ароматическую кольцевую структуру, имеющую от 5 до 10 атомов кольца, в котором по меньшей мере один атом кольца выбран из Ν, О и 8, в частности, из N и О.

Как используют в рамках изобретения, термин гетероС_4-6циклоалкил означает насыщенную циклическую углеводородную группу, как определено для С_4-6циклоалкила, где по меньшей мере один атом углерода заменен гетероатомом, выбранным из Ν, О и 8, в частности из N и О. Примеры гетероС_4-6циклоалкила включают тетрагидро-2Н-пиранил, пиперидинил, тетрагидрофуранил и пирролидинил.

Где положение группы на молекулярной части не указано (например, заместитель на фениле) или представлено с помощью плавающей связи, такая группа может быть расположена на любом атоме такой части, при условии, что полученная структура является химически стабильной. Когда какая-либо переменная присутствует в молекуле более одного раза, каждое определение является независимым.

Соединения по настоящему изобретению можно синтезировать с использованием следующих методик синтеза. Сокращения, как используют в рамках изобретения, имеют следующее значение:

СЭР' означает Ν,Ν'-карбонилдиимидазол;

брр£ означает 1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен;

- 7 022839

4-ΌΜΑΡ означает 4-диметиламинопиридин;

ΌΜ8Ο означает диметилсульфоксид;

НМРТ означает триамид гексаметилфосфора;

ΌΙΡΕΑ означает Ν,Ν-диизопропилэтиламин;

ΌΜΡ означает диметилформамид;

ТНР означает тетрагидрофуран;

ΤΕΜΡΟ означает 2,2,6,6-тетраметил-1-пиперидинилокси;

ΌΒΌ означает 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ен;

НАТИ означает гексафторфосфат О-(7-азабензотриазол-1-ил)-НН^,^-тетраметилурония; ТВТИ означает тетрафторборат 2-(1Н-бензотриазол-1-ил)-НН^,и-тетраметилурония.

Схема 1

VI

На схеме 1 описан синтез соединений с II по VI. На первой стадии образуется амидная связь с использованием ΡΘ-пролина и 4-галогенбензол-1,2-диамина, где X представляет собой С1, Вг или I, в присутствии пригодного связующего реагента для ацилирования аминогруппы, например, такого как СОТ Как используют в рамках изобретения, ΡΘ представляет собой защитную группу на азоте пирролидина, например, такую как карбаматзащитная группа, такая как бензилоксикарбонил, или трет-бутоксикарбонил, или альтернативно ΡΘ может представлять собой К-С(=О)-, где К имеет значение, как определено для соединений формулы I. Полученное таким образом промежуточное соединение далее подвергают циклизации с получением бензимидазольного производного формулы II. Такую циклизацию можно проводить путем обработки кислотой, например, такой как уксусная кислота, в диапазоне температур от 0 до 150°С, более конкретно от 80 до 120°С. Промежуточное соединение формулы II можно конвертировать в бороновый сложный эфир формулы III в условиях, катализируемых Ρά, например, в присутствии Ρά(άρρί)Ο₂, бис(пинаколато)дибора и основания, например, ацетата калия.

Соединение IV (схема 1В) можно получать после селективного удаления защитной группы ΡΘ из азота пирролидина промежуточного соединения II, в пригодных условиях, например, таких как использование НС1 в изопропаноле, когда ΡΘ представляет собой трет-бутоксикарбонил. Затем полученное промежуточное соединение IV можно конвертировать в промежуточное соединение формулы V путем ацилирования подходящей кислотой формулы К-С(=О)-ОН, где К имеет значение, как определено для соединений формулы I.

Указанное ацилирование можно проводить путем реакции исходных материалов в присутствии связывающего агента или путем конвертирования карбоксильной функциональной группы в активную форму, такую как активный сложный эфир, смешанный ангидрид или хлорид или бромид карбоновой кислоты. Общее описание таких реакций присоединения и реагентов, используемых в них, может быть найдено в обычных справочниках по химии пептидов, например, М. Воскиго/ку, Рерййе Сйеш1§1гу, 2ηά геу. ей., 8рпп§ег^ег1ад, Вег1т, Германия, (1993).

Примеры реакций присоединения для ацилирования аминогруппы или образования амидной связи включают азидный способ, способ смешанного ангидрида угольная-карбоновая кислота (изобутилхлорформиат), способ карбодиимида (дициклогексилкарбодиимид, диизопропилкарбодиимид, или растворимый в воде карбодиимид, такой как ^этил-№-[3-(диметиламино)пропил]карбодиимид), способ активного сложного эфира (например, п-нитрофенил, п-хлорфенил, трихлорфенил, пентахлорфенил, пентафторфенил, имидоэфиры и сходные сложные эфиры Ν-гидроксиянтарной кислоты), способ с реагентом К Вудворда, способ с 1,1-карбонилдиимидазолом, способ с фосфорными реагентами или окислительновосстановительные способы. Некоторые из этих способов могут быть усилены добавлением пригодных катализаторов, например, в способе с карбодиимидом, путем добавления 1-гидроксибензотриазола или 4ΌΜΑΡ. Другими связывающими агентами являются гексафторфосфат (бензотриазол-1-илокси)-трис(диметиламино)фосфония, либо сам по себе, либо в присутствии 1-гидроксибензотриазола или 4-ΌΜΑΡ;

- 8 022839 или тетрафторборат 2-(1Н-бензотриазол-1-ил)-Ы,К,К',Ы'-тетраметилурония (ТВТИ) или гексафторфосфат О-(7-азабензотриазол-1-ил)-Ы,К,К',Ы'-тетраметилурония (НАТИ). Эти реакции присоединения можно проводить либо в растворе (жидкая фаза), либо в твердой фазе. Для целей настоящего изобретения предпочтительным способом для проведения ацилирования является способ с использованием НАТИ.

Реакции присоединения предпочтительно проводят в инертном растворителе, таком как галогенированные углеводороды, например дихлорметан, хлороформ, биполярные апротонные растворители, такие как ацетонитрил, диметилформамид, диметилацетамид, ΏΜ5Ο, НМРТ, простые эфиры, такие как тетрагидрофуран (ТНР).

Во многих случаях реакции присоединения проводят в присутствии пригодного основания, такого как третичный амин, например триэтиламин, диизопропилэтиламин (ΏΙΡΕΑ), Ν-метилморфолин, Νметилпирролидин, 4-ΏΜΑΡ или 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ен (ЭВИ). Температура реакции может находиться в диапазоне от 0 до 50°С и время реакции могут находиться в диапазоне от 15 мин до 24 ч. Затем промежуточное соединение V можно конвертировать в бороновый сложный эфир VI в катализируемых Ρά условиях в присутствии бис(пинаколато)дибора, подобно тому, как при конвертировании из промежуточного соединения II в промежуточное соединение III.

Схема 2

XIII

Другие конструктивные элементы, используемые в синтезе соединений формулы I, описаны на схеме 2. α-Аминокетон VII (схема 2А), где А имеет то же значение, как и для соединений формулы I, и X представляет собой галоген, связывают с пригодным образом защищенным пролином, где ΡΘ представляет собой защитную группу на азоте пирролидина, предпочтительно трет-бутоксикарбонил или бензилоксикарбонил, в присутствии связывающего реагента для ацилирования аминогруппы, как описано выше для конвертирования промежуточного соединения IV в промежуточное соединение V, предпочтительно с НАТИ в присутствии ΙΝΡΡΑ. Полученное таким образом промежуточное соединение подвергают циклизации в имидазольные промежуточные соединения общей формулы VIII путем обработки ацетатом аммония, предпочтительно в диапазоне температур от 0 до 150°С, более конкретно от 80 до 150°С. Альтернативно промежуточное соединение VIII можно получать связыванием α-галогенкетона 'УПа, где каждый X независимо представляет собой атом галогена, с пригодным образом защищенным пролином, где ΡΘ представляет собой защитную группу на азоте пирролидина, предпочтительно третбутоксикарбонил или бензилоксикарбонил, в присутствии пригодного основания, например, ΙΝΡΡΑ, с последующей циклизацией в имидазольное промежуточное соединение VIII, как описано выше, предпочтительно в толуоле или ксилоле. Это соединение можно далее превращать в промежуточное соединение формулы IX, аналогично превращению промежуточного соединения II в промежуточное соединение III. Альтернативно из промежуточного соединения VIII можно удалять защитную группу, например, путем обработки НС1 в изопропаноле в случае, когда ΡΘ представляет собой трет-бутоксикарбонил, с получением промежуточного соединения X (схема 2В) и далее превращать в промежуточное соединение XI, с

- 9 022839 использованием условий, сходных с условиями, использованными для превращения промежуточного соединения IV в промежуточное соединение V. Бороновый сложный эфир XII получают из промежуточного соединения XI с использованием условий, сходных с условиями, используемыми для конвертирования промежуточного соединения II в промежуточное соединение III.

Имидазол XIII можно синтезировать за 4 стадии, начиная с РО-пролина (схема 2С), где РО представляет собой защитную группу на азоте пирролидина, предпочтительно трет-бутоксикарбонил, как описано на схеме 2С. Имидазол XIII' можно синтезировать с использованием

хиг по той же методике за исключением последних стадий, где в имидазол вносят йод вместо брома, что можно обеспечивать путем дийодирования посредством 0/ЫаОН с последующим удалением одного йодида с помощью Иа₂8О₃.

Другие возможные промежуточные соединения описаны на схеме 3. Здесь используют дигалогенид XIV формулы

где А имеет значение, как определено для соединений формулы I, и X и X' представляют собой галогены; независимо выбранные из йода, хлора и брома. Альтернативно X и/или X' могут представлять собой трифлат, используемый в комбинации с галогеном. Промежуточное соединение III связывают с промежуточным соединением XIV, в условиях Сузуки-Майяра с использованием одного или нескольких эквивалентов промежуточного соединения XIV. Полученное промежуточное соединение XV далее превращают в XVI в условиях, сходных с условиями, описанными для конвертирования промежуточного соединения II в промежуточное соединение III. В случае, когда РО представляет собой К-С(=О), где К имеет значение, как определено для соединений формулы I, промежуточное соединение III является таким же, как и промежуточное соединение VI.

Как проиллюстрировано на схеме 4, связывание боронового сложного эфира III и галогенида или трифлата VIII, где X представляет собой галоген или трифлат, в условиях Сузуки-Майяра приводит к образованию промежуточного соединения XVII.

Аналогично связывание соответствующих промежуточных соединений, описанных на схемах 1-3 с использованием условий Сузуки-Майяра может также приводить к образованию промежуточных соединений XVII. Например, бромид II и бороновый сложный эфир IX можно связывать с получением промежуточного соединения XVII, как описано для промежуточных соединений III и VIII.

Альтернативно соединения формулы I можно получать, как проиллюстрировано на схеме 5. Бороновый сложный эфир формулы XVI связывают с бромидом формулы XIII или Йодидом формулы XIII', с получением промежуточного соединения XVII. После удаления защитной группы азота пирролидина в подходящих условиях, например, таких как использование НС1 в изопропаноле, в случае когда РО представляет собой трет-бутоксикарбонила, образуется промежуточное соединение XVIII. Связывание с кислотами общей формулы К-С(=О)-ОН или К'-С(=О)-ОН, где К и К' имеют значения, как определено для соединений формулы I, в условиях, как описано для конвертирования промежуточного соединения IV в промежуточное соединение V, приводит к образованию соединения формулы I, где К-С(=О)- и К'-С(=О)являются идентичными.

- 10 022839

Для способов, проиллюстрированных на схемах 4 и 5, где РО представляет собой К-С(=О)- или К'С(=О)-, промежуточное соединение XVII в действительности представляет собой соединение формулы I. В случае, когда только одна РО в промежуточном соединении XVII представляет собой К-С(=О)- или К'С(=О)-, а другая представляет собой защитную группу, например такую как трет-бутоксикарбонил, возможно селективное удаление защитной группы, подобно тому, как показано для конвертирования промежуточного соединения XIX (схема 6) в промежуточное соединение XX, или промежуточного соединения XXI в промежуточное соединение XXII. Затем промежуточные соединения XX и XXII можно конвертировать в соединение формулы I, как описано для конвертирования промежуточных соединений XVIII в соединения формулы I, как проиллюстрировано на схеме 5.

Способы, проиллюстрированные на схеме 4 и на первой стадии схемы 5, также можно использовать для получения промежуточного соединения XXV (схема 7), где группы пирролидина ортогонально защищены отличающимися защитными группами РО и РО', тем самым обеспечивая селективное удаление защитной группы с получением либо соединения XXVI, либо соединения XXVII, и последующего ацилирования подходящими группами К'-С(=О)- или К-С(=О)-, с получением соединения XXI или XIX', соответственно, (см. схему 7). На следующей стадии вторую защитную группу удаляют селективно и азот пирролидина ацилируют с получением соединения формулы I. Например, для целей настоящего изобретения, такое ортогональное внесение защитных групп можно обеспечивать с использованием группы IВос на одном пирролидине в комбинации с бензилоксикарбонилом (СЬ^) на другом пирролидине.

Методики синтеза, представленные выше в схемах 1-7, можно выполнять с использованием рацемических производных пролина, производных Ь-пролина или производных Ό-пролина. Таким образом, можно получать соединения формулы I с альтернативной стереохимией.

В следующем аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содер- 11 022839 жащей терапевтически или профилактически эффективное количество соединения формулы I, как описано в настоящем описании, и фармацевтически приемлемый носитель. Профилактически эффективное количество в этом контексте представляет собой количество, достаточное для предупреждения инфекции НСУ у индивидуумов, имеющих риск быть инфицированными. Терапевтически эффективное количество в данном случае представляет собой количество, достаточное стабилизации инфекции НСУ, для уменьшения инфекции НСУ или для устранения инфекции НСУ у инфицированных индивидуумов. В следующем аспекте, это изобретение относится к способу получения фармацевтической композиции, как описано в настоящем описании, который включает смешение в однородную смесь фармацевтически приемлемого носителя с терапевтически эффективным количеством соединения формулы I, как описано в настоящем описании.

Таким образом, для введения соединения по настоящему изобретению или любую их подгруппу можно изготавливать в виде различных фармацевтических форм. В качестве пригодных композиций можно назвать все композиции, обычно используемые для системного введения лекарственных средств. Для получения фармацевтических композиций по настоящему изобретению эффективное количество конкретного соединения, необязательно в форме аддитивной соли или комплекса с металлом, в качестве активного ингредиента смешивают в однородную смесь с фармацевтически приемлемым носителем, который может находиться в различных в формах в зависимости от желательной формы препарата для введения. Желательно, чтобы эти фармацевтические композиции были представлены в единичной дозированной форме, в частности, для перорального, ректального, подкожного введения или для парентеральной инъекции. Например, для получения композиций в пероральной дозированной форме, можно использовать любую обычную фармацевтическую среду, например, такую как вода, гликоли, масла, спирты и т.п. в случае пероральных жидких препаратов, таких как суспензии, сиропы, эликсиры, эмульсии и растворы; или твердые носители, такие как крахмалы, сахара, каолин, смазывающие вещества, связующие вещества, дезинтегрирующие вещества и т.п. в случае порошков, пилюль, капсул и таблеток. Вследствие простоты введения, таблетки и капсулы представляют собой наиболее предпочтительные пероральные единичные дозированные формы, в случае которых обычно используют твердые фармацевтические носители. В случае парентеральных композиций, носитель, как правило, содержит, стерильную воду, составляющую по меньшей мере большую его часть, хотя в него могут быть включены другие ингредиенты, например, для обеспечения растворимости. Например, можно получать инъецируемые растворы, в которых носитель содержит солевой раствор, раствор глюкозы или смесь солевого раствора и раствора глюкозы. Также можно получать инъецируемые суспензии, в случае которых можно использовать пригодные жидкие носители, суспендирующие вещества и т.п. Также предусмотрены препараты в твердой форме, которые необходимо превращать, непосредственно перед применением, в препараты в жидкой форме. В композициях, пригодных для чрескожного введения, носитель необязательно содержит усиливающее проницаемость вещество и/или пригодное смачивающее вещество, необязательно в сочетании с пригодными добавками любой структуры в небольших пропорциях, которые не оказывают значительных неблагоприятных эффектов на кожу. Соединения по настоящему изобретению также можно вводить посредством оральной ингаляции или инсуффляции в форме раствора, суспензии или сухого порошка с использованием любой из известных в данной области системы для доставки.

Особенно предпочтительным является составление упомянутых выше фармацевтических композиций в единичную дозированную форму для простоты введения и единообразия дозирования. Как используют в настоящем описании, единичная дозированная форма относится к физически дискретным единицам, пригодным в качестве единичных доз, где каждая единица содержит определенное количество активного ингредиента, вычисленное для обеспечения требуемого терапевтического эффекта, совместно с требуемым фармацевтическим носителем. Примерами таких единичных дозированных форм являются таблетки (включая шероховатые или покрытые таблетки), капсулы, пилюли, суппозитории, пакеты с порошком, вафли, инъецируемые растворы или суспензии и т.п., и отдельные их типы.

Соединения формулы I являются активными в качестве ингибиторов цикла репликации НСУ и их можно использовать для лечения или профилактики инфекции НСУ или заболеваний, обусловленных с НСУ. Заболевания, обусловленные НСУ, включают прогрессирующий фиброз печени, воспаление и некроз, ведущие к циррозу, заболевание печени конечной стадии и печеночно-клеточную карциному. Более того, о некоторых соединений по настоящему изобретению известно, что они являются активными в отношении мутантных штаммов НСУ.

Противовирусную активность соединений формулы I в отношении НСУ ίη νίίτο можно тестировать в клеточной системе с репликоном НСУ на основе ЬоНшапп е1 а1. (1999) §с1епсе 285: 110-113, с дополнительными модификациями, описанными Кпедег е1 а1. (2001) 1оитпа1 οί Упо1оду 75: 4614-4624, которые далее проиллюстрированы в разделе Примеры. Несмотря на то, что эта модель не является полной моделью инфекции НСУ, эта модель широко распространена в качестве наиболее надежной и эффективной модели автономной репликации РНК НСУ, доступной в настоящее время. Будет понятно, что важно отличать соединения, которые специфично препятствуют функционированию НСУ, от соединений, которые оказывают цитотоксические или цитостатические эффекты в модели репликона НСУ, и вследствие этого приводят к снижению РНК НСУ или концентрации связанного с ней репортерного фермента. В

- 12 022839 данной области известны способы анализа для оценки клеточной цитотоксичности на основе, например, активности митохондриальных ферментов с использованием флуорогенных окислительно-восстановительных красителей, таких как резазурин. Более того, существуют способы скрининга с подсчетом клеток, для оценки неселективного ингибирования активности связанного репортерного гена, такого как гена люциферазы светляков. Пригодные типы клеток можно адаптировать посредством стабильной трансфекции репортерным геном люциферазы, экспрессия которого зависит от конститутивно активного промотора гена, и такие клетки можно использовать в качестве способа скрининга с подсчетом для устранения неселективных ингибиторов.

Вследствие свойств, направленных против НСУ, соединения формулы I или их подгруппы, как описано в настоящем описании, являются пригодными для ингибирования цикла репликации НСУ, в частности, для лечения теплокровных животных, в частности людей, инфицированных НСУ, и для профилактики инфекций НСУ. Более того, настоящее изобретение относится к способу лечения теплокровного животного, в частности человека, инфицированного НСУ, или обладающего риском инфицирования НСУ, причем указанный способ включает введение терапевтически или профилактически эффективного количества соединения формулы I.

Таким образом, соединения формулы I, как описано в настоящем описании, можно использовать в качестве лекарственного средства, в частности в качестве лекарственного средства для лечения или профилактики инфекции НСУ. Указанное применение в качестве лекарственного средства или способа лечения включает системное введение инфицированным НСУ индивидуумам или восприимчивым к инфекции НСУ индивидуумов количества, эффективного для борьбы с состояниями, ассоциированными с инфекцией, или количества, эффективного для предупреждения инфекции НСУ.

Настоящее изобретение также относится к применению соединений по настоящему изобретению для изготовления лекарственного средства для лечения или профилактики инфекции НСУ.

Главным образом, предусматривается, что эффективное противовирусное суточное количество может составлять от приблизительно 0,01 до приблизительно 50 мг/кг, или от приблизительно 0,02 до приблизительно 30 мг/кг массы тела. Может быть пригодным введение требуемой дозы в качестве одной, двух, трех, четырех или более субдоз через соответствующие интервалы на протяжении суток. Указанные субдозы можно изготавливать в виде единичных дозированных форм, например, содержащих от приблизительно 1 до приблизительно 500 мг, или от приблизительно 1 до приблизительно 100 мг, или от приблизительно 2 до приблизительно 50 мг активного ингредиента на единичную дозированную форму.

Настоящее изобретение также относится к комбинациям соединений формулы (I) или любой их подгруппы, как указано в настоящем описании, с другими средствами против НСУ. Термин комбинация может относиться к продукту или набору, содержащему (а) соединение формулы I, как указано выше, и (Ь) по меньшей мере одно другое соединение, способное лечить инфекцию НСУ (обозначаемое в настоящем описании как средство против НСУ), в качестве комбинированного препарата для одновременного, отдельного или последовательного применения при лечении инфекций НСУ. В одном варианте осуществления изобретение относится к комбинации соединений формулы (I) или любой их подгруппы по меньшей мере с одним средством против НСУ. В конкретном варианте осуществления изобретение относится к комбинации соединений формулы (I) или любой их подгруппы по меньшей мере с двумя средствами против НСУ. В конкретном варианте осуществления, изобретение относится к комбинации соединений формулы (I) или любой их подгруппы по меньшей мере с тремя средствами против НСУ. В конкретном варианте осуществления, изобретение относится к комбинации соединений формулы (I) или любой их подгруппы по меньшей мере с четырьмя средствами против НСУ.

Комбинацию ранее известных средств против НСУ, таких как интерферон-α (ΓΡΝ-α), пегилированный интерферон-α, рибавирин или их комбинация, и соединений формулы (I) или любой их подгруппы можно использовать в качестве лекарственного средства в комбинированной терапии.

Средства, которые можно комбинировать с соединениями по настоящему изобретению, включают, например, нуклеозидные и ненуклеозидные ингибиторы полимеразы НСУ, ингибиторы протеазы, ингибиторы хеликазы, ингибиторы Ν84Β и средства, которые функционально ингибируют участок внутренней посадки рибосомы (ГКЕ8) и другие средства, которые ингибируют прикрепление НСУ к клетке или проникновение вируса внутрь, трансляцию РНК НСУ, транскрипцию РНК НСУ, репликацию или созревание НСУ, сборку или высвобождение вируса. Конкретные соединения в этих классах включают ингибиторы протеазы НСУ, такие как телапревир (УХ-950), боцепревир (8СН-503034), нарлапревир (8СН900518), 1ΓΜΝ-191 (К-7227), ТМС435350 (ТМС435), МК-7009, ΒΕ201335, ΒΣ-2061 (цилупревир), ΒΜ8650032, АСН-1625, АСН-1095, С8 9256, УХ-985, ГОХ-375 (ингибитор кофактора протеазы Ν34Α НСУ), УХ-500, УХ-813, РНХ-1766, РНХ2054, ГОХ-136, ГОХ-316, ΑΒΤ-450, ЕР-013420 (и родственные соединения) и УЕУ-37 6; нуклеозидные ингибиторы полимеразы НСУ, пригодные для изобретения, включают К7128, Ρ8Σ-7851, Ρ8Σ 7977, ГОХ-189, ГОХ-184, ГОХ-102, К1479, Х-08189, Ρ8Σ-6130, Ρ8Σ-938 и Р8Е879 и различные другие аналоги нуклеозидов и нуклеотидов и ингибиторы НСУ, включая ингибиторы, полученные в качестве 2'-С-метилмодифицированных нуклеозидов, 4'-азамодифицированных нуклеозидов, и 7'-деазамодифицированных нуклеозидов, например 4-амино-1-[5-азидо-4-гидрокси-5-гидроксиметил-3- 13 022839 метилтетрагидрофуран-2-ил]пиримидин-2(1Н)-он (ссылка 1) и его бис-2-метилпропаноатный сложный эфир. Ненуклеозидные ингибиторы полимеразы НСУ, пригодные для изобретения, включают НСУ-796, НСУ-371, УСН-759, УСН-916, УСН-222, ΑΝΑ-598, МК-3281, АВТ-333, АВТ-072, РР-00868554, ΒΙ207127, 08-9190, А-837093, ЖТ-109, ОЬ-59728, ОЬ-60667, АВТ-072, ΑΖΌ-2795 и 13-циклогексил-3метокси-17,23-диметил-7Н-10,6-(метаноиминотиоиминоэтанооксиэтаноиминометано)индоло[2,1-а][2] бензазепин-14,24-диона 16,16-диоксид.

Другие средства против НСУ охватывают средства, выбранные из ингибиторов полимеразы НСУ, К-7128, МК-0608, АВТ-333, УСН759, РР-868554, 089190, ММ283,УСН-222, УСН-916, ΒΙ207217, АВТ072, ГОХ-102, Ρ8Ι-7851, Ρ8Ι-938, валопицитабина, Ρ8Ι-6130, ХТЬ-2125, ΝΜ-107, К7128 (К4048), 08К625433, К803, К-1626, ВГОВ-1941, НСУ-796, ЛК-109 и ЛК-003, ΑΝΑ-598, ΙΌΧ-184, МК-3281, МК1220, производных бензимидазола, производных бензо-1,2,4-тиадиазина, производных фенилаланина, А831 и А-689; ингибиторов протеаз НСУ (Ν82-Ν83 и Ν83-Ν84Α), соединений АО 02/18369 (см., например, стр. 273, строки 9-22, и со стр. 274, строка 4, по стр. 276, строка 11), ΒΙ-1335, ТМС435, МК7009, ΙΤΜΝ-191, МК-7009, ΒΙ-201335, 8СН900518, УХ-813, АВТ-450, УВУ376, РНХ-1766, АСН-1625, ΒΙΡΝ2061, УХ-950, ΒΙΡΝ-2065, ΒΜ8-605339, УХ-500, 8СН 503034; ингибиторы других мишеней в жизненном цикле НСУ, включая ингибиторы хеликазы и металлопротеиназы, Ι8Ι8-14803; иммуномодулирующие средства, такие как α-, β- и γ-интерфероны такие как ΓΙΡΝ-α 2Ь, ΗΡΝ-α2όα. консенсусный ΙΡΝ-α (инферген), ферон, реаферон, интермакс α, τΙΡΝ-β, инферген + актиммун, ΙΡΝ-омега с ΌϋΚΟδ, альбуферон, локтерон, ребиф, пероральный ΙΡΝ-α, ΙΡΝ-α 2Ь ХЬ, ΑΥΙ-005, пегилированный инферген, пегилированные соединения-производные интерферона-α, такие как пегилированный ΓΙΡΝ-α 2Ь, пегилированный ΓΙΡΝ-α 2а, пегилированный ΙΡΝ-β, соединения, которые стимулируют синтез интерферона в клетках, интерлейкины, агонисты То11-подобного рецептора (ТЬК), соединения, которые усиливают развитие ответа хелперных Т-клеток типа 1 и тимозин; другие противовирусные средства, такие как рибавирин, аналоги рибавирина, такие как ребетол, копегус и вирамидин (тарибавирин), амантадин и телбувидин, ингибиторы внутренней посадки рибосомы, ингибиторы альфа-глюкозидазы 1, такие как МХ-3253 (целгосивир) и иТ-23Ш, гепатопротекторы, такие как ΙΌΝ-6556, МЕ-3738, ΡΒ-84451 и МйоЦ, вирусные ингибиторы широкого спектра, такие как ингибиторы кОРЭН (например, соединения И8 5807876, И8 6498178, И8 6344465, И8 6054472, АО 97/40028, АО 98/40381, АО 00/56331, микофеноловая кислота и ее производные и включая, но не ограничиваясь ими, УХ-497, УХ-148, и/или УХ-944); и другие лекарственные средства для лечения НСУ, такие как задаксин, нитазоксанид, ΒΙΥΝ-401 (виростат), РУЯ-17 (алтирекс), КРЕ02003002, актилон (СР0-10101), ΚΚΝ-7000, сивасир, 0Ι-5005, ΑΝΑ-975, ХТЬ-6865, ΑΝΑ-971, ЫОУ205, тарвацин, ЕНС-18, ΝΙΜ811, ^ЕΒIΟ-025, У0Х-410С, ΕΜΖ-702, ΑΫΙ 4 065, бавитуксимаб и оглуфанид; или комбинации любого из указанных выше.

Может быть полезной разработка определенных из упомянутых выше средств против НСУ в их форме пролекарства, в частности, ингибитора полимеразы НСУ с нуклеозидным аналогом. Примерами таких пролекарственных форм могут быть фосфаты, фосфорамидаты или формы сложных эфиров, включающие сложные моноэфиры и сложные диэфиры. Такие пролекарства требуют превращения ίη νίνο в свободный нуклеозид, например, в стенке пищеварительного канала или в печени, перед внутриклеточным фосфорилированием в активные формы.

Таким образом, для борьбы с инфекциями НСУ или их лечения, соединения формулы (Ι) или любые их подгруппы можно вводить совместно в комбинации, например, с интерфероном-α (ΙΡΝ-α), пегилированным интерфероном-α, рибавирином или их комбинацией, а также с терапевтическими средствами на основе антител, направленных против эпитопов НСУ, малыми интерфирирующими РНК (ми РНК), рибозимами, ДНК-зимами, антисмысловой РНК, низкомолекулярными антагонистами, например, протеазы Ν83, хеликазы Ν83 и полимеразы Ν85Β.

Комбинации по настоящему изобретению можно использовать в качестве лекарственных средств. Таким образом, настоящее изобретение относится к применению соединений формулы (Ι) или любой их подгруппы, как определено выше, для изготовления лекарственного средства, пригодного для ингибирования активности НСУ у млекопитающего, инфицированного вирусами НСУ, где указанное лекарственное средство используют в комбинированной терапии, причем комбинированная терапия, в частности, включает соединение формулы (Ι) и по меньшей мере одного другое средство против НСУ, например ΙΡΝ-α, пегилированный ΙΡΝ-α, рибавирин или их комбинацию.

В предпочтительном варианте осуществления комбинация соединений формулы (Ι) или любой их подгруппы с другим средством, которое изменяет репликацию вируса НСУ, может действовать синергично. Взаимодействия соединений можно анализировать различными механистическими и эмпирическими способами.

Одним подходом для анализа таких комбинаций являются трехмерные графики и синергические объемные вычисления, производимые Мас8упегду™ ΙΙ на основе модули Βΐίδδ ШДерепДепсу тойс1 (Όγ. Магк Рг11сНагО, ишуегЩу οί Α1аЬата, Ти8са1оо8а, ΑΌ). По существу, соединения по настоящему изобретению в комбинации с другим средством, которое изменяет репликацию вируса НСУ, называют действующими синергично или имеющими синергический эффект, когда величины, выраженные в нМ²%

- 14 022839 (объем синергии) составляют от 25 до 50 нМ²% (небольшая но значимая величина синергии), от 50 до 100 нМ²% (умеренная синергия) или более 100 нМ²% (сильная синергия).

Следующие примеры предназначены для иллюстрации изобретения и их не следует истолковывать как ограничение его объема.

Примеры иъПример 1. Синтез соединений формулы ХУШа (А= ).

1.1. Получение промежуточного соединения Па (РО=Вос; Х=Вг)

К раствору Вое-Ь-пролина (2669 мг, 12,4 ммоль) в смеси пиридин/ΌΜΡ (30 мл, 1/1) добавляли ди(1Н-имидазол-1-ил)кетон (2205 мг, 13,6 ммоль). Смесь перемешивали при 45°С в течение 2 ч. Добавляли 4-бромбензол-1,2-диамин (2319 мг, 12,4 ммоль) и смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение ночи. Растворитель удаляли и осадок нагревали в уксусной кислоте (15 мл) при 100°С в течение 30 мин. После концентрирования осадка смесь распределяли между этилацетатом и насыщенным раствором бикарбоната натрия. Органическую фазу отделяли и промывали водой, смесь сушили над №₂8О₄ и фильтровали, и фильтрат концентрировали в вакууме. Полученный осадок очищали флэш-хроматографией с использованием СН₂С1₂/ЕЮАс от 90/10 до 50/50, с получением соединения На (3,146 г, 69%).

1.1а. Получение промежуточного соединения ПЪ (РО=СЪ/; Х=Вг)

К перемешиваемому раствору Ν-бензилоксикарбонил-Ь-пролина (39,9 г, 160,4 ммоль) в сухом ТНР (300 мл) добавляли СО! (28,6 г, 176,4 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 45°С в течение 2 ч. Добавляли 4-бром-1,2-диаминобензол (30 г, 160,4 ммоль) и реакционную смесь далее перемешивали в течение 16 ч при комнатной температуре. Растворитель удаляли при пониженном давлении, осадок растворяли в уксусной кислоте (100 мл) и перемешивали в предварительно нагретом колбонагревателе при 100°С в течение 40 мин. Затем растворитель удаляли при пониженном давлении. Полученный осадок растворяли в дихлорметане (500 мл) и воде (300 мл). Органический слой отделяли от водного слоя, промывали 0,5н. НС1 (300 мл), а затем насыщенным раствором №НСО₃ (300 мл). После высушивания с помощью МдЗО₄ и концентрирования в вакууме продукт очищали колоночной хроматографией (градиентное элюирование дихлорметаном до 10% ЕЮАс в дихлорметане) с получением соединения ПЪ (17,1 г, 25%).

1.2. Получение промежуточного соединения Ша (РО=Вос)

К смеси Па (200 г, 546 ммоль), ацетата калия (160,8 г, 1,64 моль) и 4,4,4',4',5,5,5',5'-октаметил-2,2'бис(1,3,2-диоксаборолана) (416 г, 1,64 моль) в ΌΜΡ (3 л) добавляли Рй(йрр£)С1₂ (20 г) в газообразном азоте. Реакционную смесь перемешивали при 85°С в течение 15 ч. Смесь разбавляли этилацетатом, промывали водой и солевым раствором, сушили над сульфатом магния, твердые вещества удаляли фильтрацией и растворители фильтрата удаляли при пониженном давлении. Осадок очищали колоночной хроматографией на кремниземе (петролейный эфир:этилацетат от 10:1 до 2:1) с получением 125 г Ша в виде белого твердого вещества (содержит 15% бороновой кислоты).

иГЛю·

1.3. Получение промежуточного соединения УШа (РО=Вос, Х=Вг; А=)

Стадия 1

К смеси аминометил-(4-бромфенил)кетона (50 г, 0,2 моль), 2-(1Н-7-азабензотриазол-1-ил)-1,1,3,3тетраметилурония гексафторфосфата метанаминия (НАТО; 53 г, 0,21 моль), Ν-Вос-Р-пролина (43,0 г, 0,2 моль) в ΌΜΡ (600 мл) по каплям добавляли Ν,Ν-диизопропилэтиламин (80,0 г, 0,62 моль) в течение 30

- 15 022839 мин. Реакционную смесь перемешивали при 5°С в течение 1 ч. Большинство летучих компонентов удаляли в вакууме и полученный осадок распределяли между этилацетатом (600 мл) и водой (300 мл). Органический слой промывали насыщенным водным ЫаНСО₃ (500 мл) и солевым раствором (500 мл), сушили над ΜβδΟ₄, твердые вещества удаляли фильтрацией и растворители фильтрата удаляли при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией (силикагель, петролейный эфир/этилацетат от 3:1 до 1:1) с получением 60 г (62%) промежуточного соединения XXIII в виде светложелтого твердого вещества.

¹Н-ЯМР (СЭС1₃, 400 МГц): δ 7,85 (д, 1=8,4 Гц, 2Н), 7,66 (д, 1=8,4 Гц, 2Н), 4,67-4,80 (м, 2Н), 4,33-4,41 (м, 1Н), 3,42-3,53 (м, 2Н), 2,19-2,31 (м, 2Н), 1,90-2,00 (м, 2Н), 1,50 (с, 9Н).

Стадия 2

Смесь промежуточного соединения XXIII (60 г, 0,14 моль) и ацетата аммония (89 г, 1,4 моль) в ксилоле (800 мл) нагревали при кипячении с обратным холодильником в течение 16 ч. Реакционную смесь распределяли между этилацетатом (700 мл) и насыщенным раствором ЫаНСО₃ (500 мл). Слои разделяли и водный слой экстрагировали дополнительным этилацетатом (2x300 мл). Органические слои объединяли, промывали солевым раствором (500 мл), сушили над ΜβδΟ₄, твердые вещества удаляли фильтрацией и растворители фильтрата выпаривали при пониженном давлении. Полученный материал перекристаллизовывали из смеси этилацетат/петролейный эфир с получением желтого твердого вещества, УШа, 25 г (43%).

Ή-ЯМР (СП₃ОЭ, 400 МГц): δ 7,62 (д, 1=8,4 Гц, 2Н), 7,51 (д, 1=8,4 Гц, 2Н), 7,31-7,36 (м, 1Н), 4,934,98 (м, 1Н), 3,66-3,70 (м, 1Н), 3,48-3,54 (м, 1Н), 2,29-2,41 (м, 1Н), 1,93-2,17 (м, 3Н), 1,48 (с, 3Н), 1,27 (с, 6Н).

1.4. Получение промежуточного соединения XVIIа (РО=Вос,

К УШа (1138 мг, 2,90 ммоль) и тетракис(трифенилфосфин)палладию (140 мг, 0,121 ммоль) в толуоле в атмосфере азота добавляли 2 Μ Ыа₂СО₃ (2,5 мл, 5,0 ммоль) и соединение Ша (1,0 г, 2,42 ммоль) в метаноле. Энергично перемешиваемую смесь нагревали до 80°С в атмосфере азота и перемешивали при этой температуре в течение ночи. После охлаждения до комнатной температуры добавляли СН₂С1₂ (15 мл), а затем воду (10 мл). Органический слой отделяли и водный слой экстрагировали СН₂С1₂. Объединенные органические слои сушили над Ыа^О₄ и после фильтрации концентрировали до сухого состояния при пониженном давлении с получением коричневого осадка. Этот осадок очищали колоночной хроматографией с от СН2С12 до СН2С12/метанол 90/10 в качестве элюента с получением соединения XУIIа (878 мг, 61%).

1.5. Получение промежуточного соединения XУIIIа (А=-)

К раствору XУIIа (878 мг, 1,47 ммоль) в изопропаноле (5 мл) добавляли НС1 (5-6 Μ в изопропаноле, 15 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Растворитель выпаривали, полученное твердое вещество XУIIIа сушили в вакууме и использовали как есть на следующей стадии.

Пример 2. Синтез соединений формулы XУШЪ (А=2.1 Получение Г-Ьос-пролинола^

Комплекс боранметилсульфид (180 мл, 1,80 моль) по каплям добавляли к раствору Ы-Вос-Г- 16 022839 пролина (300 г, 1,39 моль) в безводном ТНР (3,0 л), который охлаждали до 0°С. Когда выделение газа прекращалось, ледяную баню удаляли и раствор перемешивали при 10°С в течение 18 ч. Тонкослойная хроматография (ТЬС) показала, что исходного материала не осталось и что образовывался желаемый продукт. Раствор охлаждали до 0°С и медленно добавляли метанол (2,4 л). Растворители удаляли при пониженном давлении. Осадок разбавляли в дихлорметане (1 л), промывали ЫаНСО₃ (500 мл, насыщенный, водный) и солевым раствором (500 мл), сушили над Мд8О₄, твердые вещества удаляли фильтрацией и растворители фильтрата удаляли при пониженном давлении с получением белого твердого вещества, 260 г (93%), используемого на следующей стадии без дальнейшей очистки.

2.2. Получение Е-Ьос-пролиналя

К раствору Е-Ьос-пролинола (100 г, 500 ммоль) в СН₂С1₂ (1,5 л) при 0°С последовательно добавляли при энергичном перемешивании 2,2,6,6-тетраметилпиперидин-1-оксил (ТЕМРО; 1,56 г, 10 ммоль) и №Вг (5,14 г, 50 ммоль) . К полученной смеси по каплям добавляли раствор ЫаНСО₃ (6,3 г, 75 ммоль) и 6% ЫаС1О в активном хлоре (750 мл, 750 ммоль) при 0°С в течение 1 ч. ТЕС показала, что исходного материала не осталось и что образовался желаемый продукт. Смесь быстро экстрагировали дихлорметаном (2x1,5 л). Органические слои объединяли, промывали ЫаН8О₄ (10%, 1 л) и ΚΙ (4%, 200 мл), затем Ыа₂8₂О₃ (10%, 1 л) и солевым раствором (1,5 л), сушили над Мд8О₄, твердые вещества удаляли фильтрацией, и растворители упаривали с получением желтого масла, Е-Ьос-пролиналя, (89 г, 92%), используемого на следующей стадии без дальнейшей очистки.

2.3. Получение промежуточного соединения XXIV

К раствору Е-Ьос-пролиналя (89 г, 0,44 моль) и глиоксаля (183 мл, 40% в воде) в метаноле (1 л) по каплям добавляли водный раствор аммиака (25-28%, 200 мл). Реакционную смесь закрывали и подвергали реакции при 10°С. Через 16 ч добавляли дополнительный глиоксаль (20 мл) и водный раствор аммиака (20 мл) и подвергали реакции в течение дополнительных 6 ч. Растворители удаляли при пониженном давлении и неочищенное вещество разбавляли этилацетатом (1,0 л), промывали водой и солевым раствором, сушили над Мд8О₄, твердые вещества удаляли фильтрацией и растворители удаляли при пониженном давлении. Неочищенное вещество очищали колоночной хроматографией (силикагель, от дихлорметана до смеси метанол/дихлорметан 1:70) с получением 73 г (70%) промежуточного соединения XXIV в виде белого твердого вещества.

¹Н-ЯМР (С1).О1). 400 МГц): δ 6,95 (с, 2Н), 4,82-4,94 (м, 1Н), 3,60-3,70 (м, 1Н), 3,41-3,50 (м, 1Н), 2,20-2,39 (м, 1Н), 1,91-2,03 (м, 3Н), 1,47 (с, 3Н), 1,25 (с, 6Н).

2.4. Получение промежуточного соединения XIIIа (РО=Вос)

К охлажденному (баня с ледяным этанолом, -10°С) раствору XXIV (63,0 г, 0,26 моль) в СН₂С1₂ (1,5 л) порционно добавляли Ν-бромсукцинимид (47,2 г, 0,26 моль) в течение 1 ч и перемешивали при сходной температуре в течение 2 ч. Реакционную смесь концентрировали в вакууме и осадок очищали препаративной ВЭЖХ с получением 25,3 г (30%) XIIIа в виде светло-желтого твердого вещества.

¹Н-ЯМР (С1М>1). 400 МГц) δ 6,99-7,03 (с, 1Н), 4,77-4,90 (м, 1Н), 3,61-3,68 (м, 1Н), 3,42-3,50 (м, 1Н), 2,20-2,39 (м, 1Н), 1,89-2,05 (м, 3Н), 1,47 (с, 3Н), 1,27 (с, 6Н).

2.4а. Получение промежуточного соединения XIII'а (РО=Вос)

XXIV хнга

К раствору йода (43,3 г, 170,5 ммоль, 2 экв.) в хлороформе (210 мл) в круглодонной колбе (1 л) добавляли суспензию XXIV (20 г, 84,3 ммоль) в водном растворе №О11 (2 М, 210 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 ч. К полученной реакционной смеси добавляли насыщенный водный раствор №₂8₂О₃ (100 мл) и органический слой отделяли. Водный слой экстрагировали хлороформом (4x150 мл). Органические слои объединяли, промывали водой и сушили над сульфатом магния.

- 17 022839

Твердые вещества отфильтровывали и раствор упаривали до сухого состояния с получением дийодида (38,61 г, 89%). Описанное выше промежуточное соединение дийодид (2,24 г, 4,58 ммоль) и сульфит натрия (4,82 г, 38 ммоль) помещали в круглодонную колбу (100 мл) и суспендировали в смеси 30% ЕЮН/вода (80 мл). Полученную смесь кипятили с обратным холодильником в течение 40 ч. Растворитель удаляли, и после добавления Н₂О (20 мл) смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Твердые вещества отфильтровывали, промывали водой и сушили в вакуумной печи с получением соединения ХШ'а (1,024 г, 61%).

‘Н-ЯМР (400 МГц, ЭМ8О-Об): δ м.д. 1,16 и 1,38 (2х ушир. с, 9Н), 1,68-2,02 (м, 3Н), 2,02-2,27 (м, 1Н), 3,18-3,38 (м, 1Н), 3,38-3,59 (м, 1Н), 4,53-4,88 (м, 1Н), 6,81 (м, приблизительно 0,1Н), 7,05-7,28 (м, приблизительно 0,9Н), 11,90-12,20 (м, приблизительно 0,9Н), 12,22-12,40 (м, приблизительно 0,1Н).

2.5. Получение промежуточного соединения ХУЬ (Х=Вг;

2,6-Дибромнафталин (6,92 г, 24,2 ммоль), бороновый сложный эфир Ша (2 г, 4,84 ммоль), №НСО₃(813 мг, 9,68 ммоль), (НррР)РНС1₂ (710 мг, 0,968 ммоль) растворяли в толуоле (75 мл). Добавляли воду (1 мл) и смесь нагревали в течение 7 ч при кипячении с обратным холодильником. Твердые вещества удаляли фильтрацией над дикалитом и фильтрат выпаривали до сухого состояния на кремниземе. Осадок очищали колоночной хроматографией элюированием градиентом от гептана до этилацетата. Соответствующие фракции объединяли и растворитель удаляли при пониженном давлении. Осадок (1,89 г, 79%) использовали как есть на следующей стадии.

2.6. Получение промежуточного соединения ХУТЬ (А=+ РО=Вос)

Бромид ХУЬ (1890 мг, 3,83 ммоль), 4,4,4',4',5,5,5',5'-октаметил-2,2'-бис(1,3,2-диоксаборолан) (2437 мг, 9,59 ммоль), КБ (390 мг; 6,71 ммоль) и (0ррБ)РНС1₂ (281 мг, 0,384 ммоль) растворяли в толуоле (50 мл) и нагревали в течение 3 суток при кипячении с обратным холодильником. Твердые вещества удаляли фильтрацией через дикалит и фильтрат выпаривали до сухого состояния на диоксиде кремния. Осадок очищали колоночной хроматографией с использованием градиента от гептана до этилацетата. Фракции, содержащие продукт, объединяли и растворитель удаляли при пониженном давлении. Осадок (1,22 г, 59%) использовали как есть в следующей реакции.

2.6а. Альтернативное получение промежуточного соединения ХУ№ (А=

РО=Вос)

В атмосфере азота, Ша (25 г, 60,5 ммоль), 6-бромнафталин-2-ил трифторметансульфонат (20 г, 56,7 ммоль), К₃РО₄ (36,65 г, 173 ммоль) и (РРй₃)₄Рй (717 мг, 0,62 ммоль) перемешивали в ТНБ (60 мл) и воде (15 мл) в колбонагревателе при 85°С (кипячение с обратным холодильником) в течение 2 ч. Добавляли СН₂С1₂ (50 мл) и водный слой отделяли. Органический слой сушили над М§8О₄ и после фильтрации фильтрат концентрировали с получением клейкого твердого вещества. Осадок очищали колоночной хроматографией (петролейный эфир/этилацетат от 15/1 до 1/1) с получением ХУЬ (20 г; 40,6 ммоль). Соединение ХУЬ (1 г, 2,0 ммоль), ацетат калия (0,5 г, 5,0 ммоль), 4,4,4',4',5,5,5',5'-октаметил-2,2'-бис(1,3,2диоксаборолан) (1,29 г, 5,0 ммоль) и Р0(дррБ)С1₂ (0,1 г) перемешивали в ΌΜΡ (15 мл) в атмосфере аргона. Смесь нагревали при 60°С в течение 5 ч. После охлаждения добавляли СН2С12 (50 мл) и смесь промывали насыщенным №НСО₃. Водный слой отделяли и экстрагировали СН₂С1₂. Органические слои объединяли и сушили над М§8О₄. После фильтрации растворитель удаляли и продукт очищали колоночной хроматографией (элюирование градиентом петролейный эфир/этилацетат от 10/1 до 1/1) с получением ХУ№ (0,7 г, 1,3 ммоль, 65%) в виде светло-желтого твердого вещества.

- 18 022839

2.6Ь. Получение промежуточного соединения УШЬ (Х=Вг; А= Стадия 1

РО=Вос)

6-Бром-2-нафтойную кислоту (72,3 г, 282 ммоль, 1,0 экв.) суспендировали в дихлорметане (600 мл) и добавляли ΏΜΓ (каталитический, 5 капель). Порционно добавляли оксалилхлорид (71,6 г, 564 ммоль, 2,0 экв.) в течение 1 ч. Реакционную смесь перемешивали в течение ночи с сушильной трубкой с СаС1₂, помещенной в колбу. Происходило полное растворение. Реакционную смесь концентрировали, добавляли дихлорметан (100 мл) и растворитель вновь выпаривали с получением 6-бром-2-нафтоилхлорида (76,1 г, 100%) в виде масла, которое использовали на следующей стадии.

Стадия 2

Гидрохлорид Ν,Ο-диметилгидроксиламина (41,3 г, 423 ммоль, 1,5 экв.) растворяли в дистиллированной воде (200 мл) и порционно добавляли карбонат калия (117 г, 3,0 экв.) (выделение СО₂). Добавляли воду (300 мл) и дихлорметан (200 мл) и к этой смеси при перемешивании добавляли раствор 6-бром2-нафтоилхлорида (76,1 г, 282 ммоль, 1,00 экв.) в дихлорметане (300 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 1 ч. Органический слой отделяли, сушили над сульфатом натрия, фильтровали, концентрировали и сушили в вакууме в течение ночи с получением 6-бром-^метокси-^метил-2-нафтамида (82,9 г, 100%) в виде коричневого твердого вещества.

Стадия 3

6-Бром-^метокси-^метил-2-нафтамид (82,9 г, 282 ммоль, 1 экв.) растворяли в тетрагидрофуране (600 мл) в 4-горлой колбе в атмосфере азота. Реакционную смесь охлаждали на ледяной бане и по каплям добавляли метилмагнийбромид (3,2 Μ в метилтетрагидрофуране, 197 мл, 2,2 экв.) в течение 1 ч при поддержании температуры реакционной смеси между 10-15°С. Реакционную смесь перемешивали в течение последующих 30 мин на ледяной бане. Затем при охлаждении на ледяной бане осторожно по каплям добавляли водный раствор хлористо-водородной кислоты (2 М, 100 мл). Органический растворитель выпаривали и осажденный продукт экстрагировали дихлорметаном (500 мл). Раствор сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали. Твердый осадок сушили в вакууме при 40°С с получением 1-(6бромнафталин-2-ил)этанона (70,6 г, 99%).

Альтернативная методика получения 1-(6-бромнафталин-2-ил)этанона

Смесь 2-бромнафталина (41,4 г, 200 ммоль), ацетилхлорида (11,3 мл, 160 ммоль), нитробензола (250 мл) и А1С1₃ (28 г, 210 ммоль) перемешивали в течение 4 ч при 100°С (температура масляной бани). Полученную реакционную смесь охлаждали, выливали в лед/воду (100 мл) и фильтровали. Фильтрат промывали водой (100 мл). Растворитель (нитробензол) удаляли дистилляцией. Полученный осадок кристаллизовали из гексана с получением 18 г желаемого продукта (выход 36%).

1-(6-Бромнафталин-2-ил) этанон: ¹Н-ЯМР (400 МГц, ацетонитрил-д₃): δ м.д. 2,66 (с, 3Н) 7,66 (дд, 1=8,8, 2,0 Гц, 1Н) 7,86 (д, 1=8,8 Гц, 1Н) 7,94 (д, 1=8,8 Гц, 1Н) 8,02 (дд, 1=8,8, 1,8 Гц, 1Н) 8,13 (д, 1=2,0 Гц, 1Н) 8,53 (д, 1=1,8 Гц, 1Н).

Стадия 4

1) Вг₂, СН₂С1₂

2) (ЕЮ)₂Р(О)Н, о о

1-(6-Бромнафталин-2-ил)этанон (55,6 г, 223 ммоль, 1,0 экв.) растворяли в дихлорметане (1,3 л). По каплям добавляли дибром (78,3 г, 4 90 ммоль, 2,2 экв.) в течение 30 мин. Реакционную смесь перемешивали в течение 1 ч и концентрировали с получением 2,2-дибром-1-(6-бромнафталин-2-ил)этанона в виде твердого вещества, которое использовали как есть на следующей стадии. 2,2-дибром-1-(6-бромнафталин2-ил)этанон (90,0 г, 221 ммоль, 1,00) растворяли в тетрагидрофуране (800 мл), добавляли триэтиламин (27,67 мл, 199 ммоль, 0,9 экв.), а затем диэтилфосфат (45,8 г, 332 ммоль, 1,50 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение ночи. Реакционную смесь фильтровали и растворитель удаляли в вакууме. По- 19 022839 лученный осадок растворяли в этилацетате (1,2 л) и промывали водой. Органический слой отделяли, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали с получением неочищенного 2-бром-1-(6бромнафталин-2-ил)этанона (70,3 г). Перекристаллизация из ацетонитрила давала 30 г (первая партия) и 6,5 г (вторая партия) 2-бром-1-(6-бромнафталин-2-ил)этанона (50%).

Стадия 5

2-Бром-1-(б-бромнафталин-2-ил)этанон (4,9 г, 14,9 ммоль, 1 экв.) суспендировали в ацетонитриле (150 мл) при 20°С. Добавляли (Ь)-Вос-пролин (3,22 г, 14,9 ммоль, 1 экв.), а затем К-этил-Νизопропилпропан-2-амин (2,83 мл, 16,4 ммоль, 1,10 экв.). Реакционную смесь перемешивали при 20°С в течение 30 мин. Реакционную смесь концентрировали. Осадок растворяли в дихлорметане и промывали последовательно водным раствором хлористоводородной кислоты (1%, 100 мл) и водным раствором ΝαΙ 1СО₃. После высушивания над сульфатом натрия, фильтрации и концентрирования, остаточное масло (6,52 г, 94%) использовали как есть на следующей стадии. К соединению, полученному, как описано выше (6,52 г, 14,1 ммоль, 1,00 экв.), растворенному в толуоле (150 мл), добавляли ацетат аммония (16,3 г, 212 ммоль, 15 экв.) и смесь кипятили с обратным холодильником в течение ночи. Реакционную смесь концентрировали и осадок кристаллизовали из ацетонитрила (100 мл). Кристаллы отфильтровывали и сушили в вакууме при 40°С с получением УШЬ (3,2 г, 51%).

2.6с. Получение промежуточного соединения М (А= '-РО=Бос)

¥ШЬ (3,076 г, 6,95 ммоль), биспинаколатодибор (2,648 г, 10,43 ммоль), ацетат калия (1,365 г, 13,91 ммоль) и РбС1₂ (ύρρί) (254 мг, 0,348 ммоль) растворяли в толуоле (30 мл) и нагревали в течение 17 ч при 85°С в атмосфере аргона. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, добавляли дихлорметан (50 мл) и смесь промывали насыщенным раствором №НСО₃ Органическую фазу сушили над Мд8О₄, фильтровали, концентрировали в вакууме и очищали колоночной хроматографией на силикагеле (градиентное элюирование от 20 до 50% ЕЮАс в гептане) с получением КЬ (2,63 г, 77%). Продукт может быть осажден из смеси гексан/ЕРг₂О (3/2).

2.6ά. Получение промежуточного соединения ΥΠΌ (^=3^ А=2 . РО=СЬ/)

К раствору 2-бром-1-(6-бромнафталин-2-ил)этанона (57,7 г, 175,9 ммоль, чистый на 80%) в ацетонитриле (1 л), добавляли Ь-СЬ/-пролин (43,8 г, 175,9 ммоль), а затем диизопропилэтиламин (33,4 мл, 193,5 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение 40 мин при комнатной температуре. Затем растворитель удаляли при пониженном давлении и полученный осадок перерастворяли в дихлорметане (500 мл), промывали 1% НС1 (500 мл) и насыщенным водным раствором №НСО₃ (500 мл). Органическую фазу сушили посредством М§8О₄, фильтровали и растворитель удаляли при пониженном давлении с получением коричневого маслянистого осадка (80 г), который использовали как есть на следующей стадии. Часть указанного выше осадка (69,8 г, 140,6 ммоль) и ацетата аммония (162,6 г, 2,11 моль) перемешивали в толуоле и кипятили с обратным холодильником в течение ночи. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и растворитель удаляли при пониженном давлении. Полученный осадок перемешивали в смеси дихлорметана и воды (1/1, 1500 мл) для осаждения соединения ΥШс. После фильтрации и промывания водой получали соединение ΥШс (61,3 г, 92%) в виде белого порошка.

^ХН-ЯМР (400 МГц, ОМ8О-0₆): δ м.д. 1,84-2,38 (м, 4Н), 3,42-3,56 (м, 1Н), 3,58-3,73 (м, 1Н), 4,84-5,20 (м, 3Н), 6,97-7,46 (м, 5Н), 7,54-7,60 (м, 1Н), 7,63-7,71 (м, 1Н), 7,83-7,91 (м, 2Н), 7,95-8,05 (м, 1Н), 8,108,16 (м, 1Н), 8,22-8,37 (м, 1Н), 11,92-12,44 (м, 1Н).

2.7. Получение промежуточного соединения XΥIIЬ (А=

РО=Вос)

- 20 022839

К бороновому сложному эфиру XVIЬ (1,22 г, 2,26 ммоль), бромиду КШа (1072 мг, 3,39 ммоль), бикарбонату натрия (380 мг, 4,52 ммоль), Рб(брр1)С1₂ (166 мг, 0,226 ммоль) в толуоле (50 мл), добавляли воду (1 мл). Полученную смесь нагревали при кипячении с обратным холодильником в течение ночи. Реакционную смесь фильтровали, упаривали до сухого состоянии и очищали колоночной хроматографией посредством элюирования градиентом от гептана до этилацетата. Собранные фракции, содержащие продукт, объединяли и летучие вещества удаляли при пониженном давлении. Осадок (960 мг, 65%) использовали как есть в следующей реакции.

2.7а. Альтернативная методика получения промежуточного соединения XVIIЬ (А=

РО=Вос)

XVIЬ (10 г, 18,5 ммоль), ХШ'а (8,76 г, 24 ммоль ), \а11СО₃ (9,32 г, 111 ммоль) и Рб(брр1)С1₂ (1 г) перемешивали в смеси диоксан/вода (140 мл, 6/1) в атмосфере аргона. Смесь нагревали до 85°С в течение 15 ч. Добавляли солевой раствор (100 мл) и смесь экстрагировали СН₂С1₂, после высушивания над М§8О₄, фильтрации и упаривания растворителя, осадок очищали колоночной хроматографией посредством элюирования градиентом от СН₂С1₂ до ЕЮАс с получением XVIIЬ (7 г, 58%).

2.7Ь. Альтернативная методика получения промежуточного соединения РО=Вос)

XVIIЬ (А=

диоксан 'Н₂О 5:1

К перемешиваемому дезоксигенированному раствору VIIIЬ (20,0 г, 45,2 ммоль, 1,00 экв.), Ша (20,6 г, 49,7 ммоль, 1,1 экв.) и бикарбоната натрия (11,4 г, 136 ммоль, 3,0 экв.) в смеси 1, 4-диоксан/вода (500 мл, 5:1) в атмосфере азота добавляли комплекс 1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен-палладий (II) дихлорида с дихлорметаном (2,50 г, 4,52 ммоль, 0,1 экв.). Смесь нагревали при 80°С в атмосфере аргона в течение 15 ч и охлаждали до комнатной температуры. Реакционную смесь разбавляли дихлорметаном (500 мл) и промывали солевым раствором (2x150 мл), сушили над сульфатом магния; фильтровали и упаривали до сухого состояния с получением темно-коричневой пены (43 г). Пену очищали с использованием колоночной хроматографии на силикагеле (элюирование градиентом 0-6% МеОН в СН₂С1₂) с получением XVIIЬ (19,52 г, 65%) в виде не совсем белого порошка.

2.8. Получение промежуточного соединения XVШЬ (А=

К раствору XVIIЬ (960 мг, 1,48 ммоль ) в СН₂С1₂ (25 мл) добавляли НС1 (5-6 М в изопропаноле, 5 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Растворитель выпаривали, полу- 21 022839 ченное твердое вещество сушили в вакууме и использовали как есть на следующей стадии.

2.8а. Альтернативная методика получения промежуточного соединения XVШЬ (А=

XVIIЬ (19,52 г, 30,1 ммоль, 1,00 экв.) растворяли в дихлорметане (200 мл) и добавляли НС1 в изопропаноле (5-6н., 300 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 1 ч при комнатной температуре. К суспензии добавляли ШиОМе (1000 мл) и взвесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Отфильтрованное твердое вещество ополаскивали ©иОМе (2x100 мл) и сушили в вакууме в течение ночи с получением XVШЬ в виде порошка (15,2 г).

¹Н-ЯМР (400 МГц, МеОВ-а₄): δ м.д. 2,15-2,37 (м, 2Н), 2,37-2,52 (м, 2Н), 2,52-2,69 (м, 2Н), 2,69-2,88 (м, 2Н), 3,56-3,71 (м, 4Н), 5,19-5,41 (м, 2Н), 7,90-8,02 (м, 3Н), 8,05 (дд, 1=8,6, 1,6 Гц, 1Н), 8,10-8,25 (м, 4Н), 8,30 (д, 1=1,4 Гц, 1н), 8,47 (д, 1=1,2 Гц, 1Н).

т ΡΟ=^ζ; ΡΘ-Вос)

Пример 2а. Синтез соединений формулы XXVI и XXVII <А=

2а. 1. Получение промежуточного соединения XXVЬ (А=

К КЬ (2,63 г, 5,37 ммоль), ПЬ (2,80 г, 6,99 ммоль), ΡάΟ₂(άρρί) (298 мг, 0,537 ммоль) и бикарбонату натрия (1,354 г, 16,12 ммоль) добавляли смесь диоксан/вода (50 мл, 5/1). Реакционную смесь нагревали в течение 13 ч при 80°С в атмосфере аргона. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, разбавляли дихлорметаном и добавляли солевой раствор, смесь фильтровали через декалит и органическую фазу отделяли. Органическую фазу сушили посредством Μ§δΟ₄, растворитель удаляли при пониженном давлении и очищали колоночной хроматографией (градиент от 0 до 3% метанола в СН₂С1₂) с получением XXVЪ (2,086 г, 57%).

2а.2. Получение промежуточного соединения XXVс (А=

ΡΘ=Βοο; ΡΘ'=^ζ)

Перемешиваемый раствор VШс (36,1 г, 75,8 ммоль), Ша (28,5 г, 68,89 ммоль) и бикарбоната натрия (17,36 г, 206,7 ммоль) в смеси диоксан/вода (500 мл, 5/1) продували азотом в течение 10 мин, а затем добавляли ΡάΟ₂(άρρί) (5,04 г, 6,889 ммоль). Смесь нагревали в течение 15 ч в атмосфере аргона при 80°С. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, разбавляли дихлорметаном (500 мл) и промывали солевым раствором (2x300 мл). Органическую фазу сушили над Μ§δΟ₄, фильтровали и упаривали с получением черной пены. Смесь перемешивали в ЕЮАс (300 мл), черный осадок отфильтровывали и осадок на фильтре промывали дополнительным ЕЮАс (200 мл). К смеси ЕЮАс-фильтрат медленно добавляли гептан (1,5 л) и осадок отфильтровывали. Выход XXVс (28,35 г, 60%).

2а.3. Получение XXVIIЪ (А= , га'=Вос)

- 22 022839

К раствору ХХУЬ (2,086 г, 3,054 ммоль), Ρά/С (10%, 0,5 г) и нескольких капель воды в метаноле (40 мл) добавляли карбонат калия (334 мг, 2,42 ммоль). Реакционную смесь помещали в атмосферу водорода на 2,5 ч. Смесь фильтровали через декалит, растворитель удаляли при пониженном давлении и продукт очищали колоночной хроматографией на силикагеле (градиент метанола в СН₂С1₂ 0-3%, затем СН₂С1₂метанол/ЫН₃ (7н.) от 3-10%) с получением ХХУПЬ (1,018 г, 61%).

2а.4. Получение ХХУ1Ь (Λ=^^ί-2 РО=Вое)

К смеси 10% Ρά/С (2 г), ХХУе (26,35 г, 38,6 ммоль, 1,00 экв.), метанола (800 мл) и воды (5 мл) в круглодонной колбе (2 л) добавляли карбонат калия (4,8 г, 34,7 ммоль, 0,9 экв.).

Реакционную смесь перемешивали в атмосфере водорода в течение ночи. Затем добавляли дополнительный катализатор (10% Ρά/С, 2 г) и реакционную смесь далее перемешивали в атмосфере водорода в течение 2 ч. Затем добавляли дополнительный карбонат калия (4,8 г, 34,7 ммоль, 0,9 экв.) и катализатор (10% Ρά/С, 2 г) и смесь далее перемешивали в атмосфере водорода в течение ночи. Реакционную смесь фильтровали через дикалит δρϋϋά р1и§ (диатомовая фильтрующая присадка) и промывали метанолом (2x50 мл). Растворитель выпаривали с получением коричневатого порошка, который растворяли в дихлорметане (400 мл) и промывали водой (2x200 мл), сушили над сульфатом магния, фильтровали и упаривали до сухого состояния. Полученный неочищенный материал (23 г) подвергали колоночной хроматографии на силикагеле (элюирование градиентом 0-5% метанола в дихлорметане, а затем 5-10% метанолом (7н. ΝΗ₃) в дихлорметане) с получением ХХУ1Ь в виде светло-коричневого порошка (13,85 г, 65%).

Пример 2Ь. Синтез Ν-метоксикарбониламинокислот.

2Ь.1 Синтез (3)-2-(метоксикарбониламино)-3-метилбутановой кислоты

К Б-валину (20 г, 167,3 ммоль) в перемешиваемом водном растворе ΝαΟΗ (1 М, 167 мл) в круглодонной колбе (1 л), добавляли карбонат натрия (8,866 г, 83,6 ммоль). Колбу охлаждали до 0°С на ледяной бане. По каплям добавляли метилхлорформиат (17,4 г, 184 ммоль) и реакционной смеси позволяли перемешиваться в течение 15 ч и достигнуть комнатной температуры. Реакционную смесь разделяли простым эфиром (3x200 мл), и водный слой помещали в круглодонную колбу и охлаждали на бане с ледяной водой. По каплям добавляли концентрированную НС1 (водную) до рН 2. Смесь доводили до комнатной температуры и экстрагировали дихлорметаном (3x200 мл). Органические слои объединяли, сушили (сульфат натрия) и твердые вещества удаляли фильтрацией. Растворители фильтрата удаляли при пониженном давлении с получением белого твердого вещества. Белое твердое вещество далее сушили в вакууме (25,3 г, 86%).

2Ь.2. Синтез ((3)-2-циклопропил-2-(метоксикарбониламино)уксусной кислоты

(3)-2-Циклопропил-2-(метоксикарбониламино)уксусную кислоту синтезировали метоксикарбонил-Б-валину с использованием Б-циклопропилглицина вместо Б-валина.

2Ь.3. Синтез ((23,33)-2-(метоксикарбониламино)-3-метилпентановой кислоты аналогично Ν-

- 23 022839 (28,38)-2-(метоксикарбониламино)-3-метилпентановую кислоту синтезировали аналогично Νметоксикарбонил-Ь-валину с использованием Ь-изолейцина вместо Ь-валина.

2Ь.4. 2-(Метоксикарбониламино)-2-(тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)уксусная кислота

2-(метоксикарбониламино)-2-(тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)уксусную кислоту синтезировали аналогично Ν-метоксикарбонил-Ь-валину с использованием (8)-2-амино-2-(тетрагидро-2Н-пиран-4ил)уксусной кислоты вместо Ь-валина.

2Ь.5. Синтез (28, 3К)-3-метокси-2-(метоксикарбониламино)бутановой кислоты

(28,3К)-3-метокси-2-(метоксикарбониламино)бутановую кислоту синтезировали аналогично Νметоксикарбонил-Ь-валину с использованием О-метил-Ь-треонина вместо Ь-валина. Экстракцию дихлорметаном проводили 10 раз вместо 3 раз.

2Ь.6. Синтез (8)-2-(метоксикарбониламино)-4-метилпентановой кислоты

В круглодонной колбе при перемешивании (250 мл) к Ь-лейцину (4 г, 30,5 ммоль) добавляли водный раствор ЫаОН (1 Μ, 2,6 мл). К этому раствору добавляли карбонат натрия (1,62 г, 15,2 ммоль). Колбу охлаждали до 0°С на бане с ледяной водой. По каплям добавляли метилхлорформиат (2,6 мл, 33,5 ммоль) и реакционной смеси позволяли перемешиваться в течение 15 ч и достигнуть комнатной температуры. Реакционную смесь разделяли простым эфиром (3x50 мл) и водный слой концентрировали в круглодонной колбе и охлаждали на бане с ледяной водой. По каплям добавляли концентрированную НС1 (водную) до рН 2. Реакционную смесь доводили до комнатной температуры и экстрагировали посредством 2^0-1^ (3x50 мл). Органические слои объединяли, сушили ^дЗОД твердые вещества удаляли фильтрацией и растворители фильтрата удаляли при пониженном давлении. Соединение очищали хроматографией на силикагеле с элюированием градиентом от СН₂С1₂ до СН₂С1₂/МеОН/уксусная кислота 17/2/1. Фракции, содержавшие продукт, объединяли и растворитель удаляли в вакууме с получением Ν-метоксикарбонил-Ь-лейцина (1,9 г, 32%).

2Ь.7. Синтез (8)-4-метокси-2-(метоксикарбониламино)бутановой кислоты

К Вос-О-метил-Ь-гомосерин-дициклогексиламиновой соли (5 г, 12,1 ммоль) добавляли НС1 в изопропаноле (5-6 н., 50 мл). Смесь перемешивали в течение ночи. Летучие вещества удаляли и осадок сушили в вакууме. К полученному осадку при перемешивании добавляли воду (10 мл) и ЫаОН (19 Μ, 2 мл). К этому раствору добавляли карбонат натрия (2,89 г, 27,3 ммоль). Колбу охлаждали до 0°С на бане с ледяной водой. По каплям добавляли метилхлорформиат (2,17 мл, 27,3 ммоль) и реакционной смеси позволяли перемешиваться в течение 15 часов и достигнуть комнатной температуры. Растворитель удаляли и осадок очищали посредством ВЭЖХ (КР Уубас БепаИ С18-10 мкм, 250 г, 5 см) с подвижной фазой (0,25% раствор ЫН₄НСО₃ в воде, ΜеΟН+СНзСN), желаемые фракции собирали и растворитель удаляли с получением Ν-метоксикарбонил-О-метил-Ь-гомосерина (1,77 г, 76%).

2Ь.8. Синтез (28,3К)-3-гидрокси-2-(метоксикарбониламино)бутановой кислоты

он о

В круглодонной колбе (1 л) при перемешивании к Ь-треонину (20 г, 30,5 ммоль) добавляют водный раствор №О11 (1 Μ, 167 мл). К этому раствору добавляли карбонат натрия (9,8 г, 92,3 ммоль). Колбу охлаждали до 0°С на бане с ледяной водой. По каплям добавляли метилхлорформиат (14,3 мл, 184,7 ммоль) и реакционной смеси позволяли перемешиваться в течение 15 ч и достигнуть комнатной температуры.

- 24 022839

Реакционную смесь промывали СН₂С1₂ (3x50 мл) и водный слой помещали в круглодонную колбу и охлаждали на бане с ледяной водой. По каплям добавляли концентрированную НС1 (водную) до рН 2. Водный раствор доводили до комнатной температуры и воду удаляли в вакууме. Осадок отбирали в смесь 2:1 МеОН/СН₂С1₂ (150 мл), фильтровали и промывали смесью 2:1 МеОН/СН₂С1₂ (50 мл). Фильтрат концентрировали и сушили в вакууме при 40°С с получением белой пены (29,1 г, 98%).

2Ъ.9. Синтез (8)-2-циклопентил-2-(метоксикарбониламино)уксусной кислоты

(8)-2-Циклопентил-2-(метоксикарбониламино)уксусную кислоту синтезировали аналогично Νметоксикарбонил-Ь-валину с использованием (8)-2-амино-2-циклопентилуксусной кислоты вместо Ьвалина.

2Ъ.10. Синтез (28,3К)-2-(метоксикарбониламино)-3-метилпентановой кислоты

(28,3К)-2-(метоксикарбониламино)-3-метилпентановую кислоту синтезировали аналогично метоксикарбонил-Ь-валину с использованием (28,3К)-2-амино-3-метилпентановлой кислоты вместо валина.

2Ъ.11. Синтез (К)-2-(метоксикарбониламино)-2-фенилуксусной кислоты

ΝЬ-

К раствору (К)-2-амино-2-фенилуксусной кислоты (14 г, 92,6 ммоль) в воде (250 мл) добавляли ЫОН (14,8 г, 618,7 ммоль) при 0°С и смесь перемешивали в течение 15 минут. К этому раствору по каплям добавляли метилхлорформиат (17,9 мл, 231,5 ммоль) и смесь перемешивали в течение 2 часов при 0°С. Затем смесь подкисляли до рН 1 концентрированной НС1. Смесь экстрагировали ЕЮАс и органическую фазу концентрировали в вакууме. Осадок сушили в течение ночи в вакууме с получением (К)-2(метоксикарбониламино)-2-фенилуксусной кислоты (11,8 г; 60,9 ммоль).

Пример 3. Синтез соединений формулы I.

3.1. Получение соединения 1

Сухой пиридин (5 мл) добавляли к соединению ХУШа (267 мг, приблизительно 0,49 ммоль), и растворитель удаляли в вакууме, это повторяли еще два раза. Затем добавляли сухой ΌΜΡ (5 мл), ЭШЕА (0,845 мл, 4,91 ммоль), НАТи (466 мг, 1,23 ммоль) и Ν-метоксикарбонил-Ь-валин (215 мг, 1,23 ммоль). Смесь перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре. Те же эквиваленты реагентов добавляли вновь и смесь далее перемешивали в течение 2 ч. Добавляли СН₂С1₂ (20 мл) и смесь промывали 10% лимонной кислотой (20 мл), а затем насыщенным №НСО₃. Органическую фазу сушили над Μ§8О₄ и твердое вещество удаляли фильтрацией. Растворитель выпаривали и проводили очистку хроматографией на силикагеле (0-10% метанол в СН2С12), с получением соединения 1 в виде твердого вещества (170 мг, 0,226 ммоль).

Способ А: КТ 4,18 мин, т/ζ = 713,4 (М+1)+, точная масса: 712,37; ^!Н-ЯМР (400 МГц, ^Μ8О-ά₆): 12,99-11,63 (2Н, с (ушир.)), 7,88-7,44 (8Н, м), 7,36-7,26 (2Н, м), 5,26-5,16 (1Н, м), 5,06-5,14 (1Н, м), 4,144,04 (2Н, м), 3,90-3,77 (4Н, м), 3,55 (6Н, с), 2,32-1,94 (10Н, м), 1,00-0,79 (12Н, м).

3.2. Получение соединений 2-4.

Соединение 2 синтезировали согласно методике, описанной для соединения 1, с использованием Νметоксикарбонил-О-метил-Ь-треонина вместо Ν-метоксикарбонил-Ь-валина.

Соединение 2. Ή-ЯМР (400 МГц, ^Μ8О-ά₆): δ м.д. 12,12-12,26 (1Н, м), 11,69-11,83 (1Н, с (ушир.)), 7,33-7,86 (8Н, м), 7,18-7,31 (2Н, м), 5,15-5,25 (1Н, м), 5,05-5,13 (1Н, м), 4,25-4,38 (2Н, м), 3,77-3,95 (4Н, м), 3,55 (6Н, с), 3,45-3,52 (2Н, м), 3,20 (6Н, с), 1,79-2,38 (8Н, м), 1,14-1,06 (6Н, м).

Соединение 3 получали согласно методике, описанной для синтеза соединения 1, с использованием промежуточного соединения ХУШЪ вместо промежуточного соединения ХУШа.

- 25 022839

Соединение 3. ¹Н-ЯМР (400 МГц, ΌΜ8Ο-ά₆): δ м.д. 8,34 (2Н, с), 8,21 (1Н, с), 8,19 (1Н, д, >8,69 Гц), 8,06-8,11 (2Н, м), 8,00 (1Н, дд, >8,88, 1,61 Гц), 7,88-7,96 (2Н, м), 7,86 (1Н, д, >8,48 Гц), 7,32 (1Н, д, 1=8,48 Гц), 7,34 (1Н, д, >8,53 Гц), 5,27 (1Н, дд, 1=8,17, 5,33 Гц), 5,17 (1Н, т, >7,00 Гц), 4,15 (2Н, т, >7,95 Гц), 3,84-3,96 (4Н, м), 3,56 (6Н, с), 2,38-2,47 (2Н, м), 1,95-2,30 (8Н, м), 0,86 (ЗН, д, >6,70 Гц), 0,85 (ЗН, д, 1=6,70 Гц), 0,81 (6Н, д, >6,63 Гц).

[α]²%=-148, 98° (с 0,3336 мас./об.%, МеОН).

Альтернативная методика получения соединения 3 и соответствующей соли НС1

Ν-метоксикарбонил-Ь-валин (3,09 г, 17,7 ммоль, 2,1 экв.) растворяли в дихлорметане (300 мл). Добавляли триэтиламин (11,7 мл, 84,1 ммоль, 10 экв.) и гексафторфосфат (1-циано-2-этокси-2оксоэтилиденаминоокси)диметиламиноморфолинокарбения (7,57 г, 17,7 ммоль, 2,1 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 мин, после чего добавляли XVIIIЬ (5 г, 8,41 ммоль в случае, когда х-НС1 равно 4НС1).

Перемешивание продолжали в течение 30 мин. К смеси добавляли НС1 в ^Ρ^ΟН (6н.) (до рН 2), и полученную смесь перемешивали в течение 5 мин. Затем раствор промывали насыщенным водным раствором карбоната натрия (2x200 мл) и один раз солевым раствором (200 мл). Органический слой отделяли, сушили над сульфатом магния и фильтровали. После удаления растворителя в вакууме полученный осадок далее сушили в вакууме с получением оранжевого порошка (6,84 г).

Порошок очищали колоночной хроматографией на силикагеле с использованием элюирования градиентом от 0 до 10% МеОН (7н. ΝΙΡ,) в дихлорметане с получением соединения 3 (2,81 г) в виде пены.

Соединение 3 растворяли в ^Ρ^ΟН (40 мл) и добавляли НС1 (6н. в χΡίΟ^ 10 мл). Летучие вещества удаляли в вакууме. Затем добавляли ^Ρ^ΟН (30 мл) и смесь нагревали при кипячении с обратным холодильником. Раствор охлаждали до комнатной температуры и перемешивали при комнатной температуре в течение 4 суток. К раствору добавляли ΐΒиΟΜе (100 мл) с получением белого осадка, который отфильтровывали, сразу промывали ΐΒиΟΜе (3x10 мл) в атмосфере азота и сушили в вакууме при 40°С. Осадок смешивали с ацетонитрилом и упаривали до сухого состояния (2х). Осадок перемешивали в ацетонитриле (150 мл) и смесь обрабатывали ультразвуком в течение 10 мин. Осадок отфильтровывали в атмосфере азота, промывали два раза ацетонитрилом (50 мл) и сушили в вакууме при 40°С с получением светло-желтого порошка (4 г). Соль соединения 3 с НС1: [α]²%=-110,02° (589 нм, 20°С, с 0,429 мас./об.%, МеОН).

¹Н-ЯМР (600 МГц, диметилформамид-й₇, 280К): δ м.д. 0,86 (д, 1=6,6 Гц, 6Н), 0,95 (д, 1=7,0 Гц, 6Н), 2,03-2,20 (м, 2Н), 2,26-2,37 (м, 3Н), 2,39-2,61 (м, 5Н), 3,61-3,63 (м, 6Н), 3,93-4,01 (м, 2Н), 4,23-4,32 (м, 2Н), 4,32-4,39 (м, 2Н), 5,49 (т, >7,5 Гц, 1Н), 5,52 (дд, 1=8,3, 5,3 Гц, 1Н), 7,22 (д, >8,8 Гц, 1Н), 7,27 (д, 1=8,8 Гц, 1Н), 7,98 (д, 1=8,6 Гц, 1Н), 8,01 (дд, 1=8,6, 1,1 Гц, 1Н), 8,03 (дд, 1=8,8, 1,8 Гц, 1Н), 8,09 (д, 1=8,8 Гц, 1Н), 8,19 (д, 1=8,8 Гц, 1Н), 8,22 (дд, 1=8,4, 1,8 Гц, 1Н), 8,25 (с, 1Н), 8,32 (с, 1Н), 8,41 (с, 1Н), 8,88 (с, 1Н).

Аналитически вычислено для С₄₂Н₅₀^О₆-2НС1-4Н₂О: С 55,56, Н 6,66, N 12,34. Найдено: С 55,00, Н 6,60, N 12,30.

Соединение 4 получали согласно методике, описанной для синтеза соединения 2, с использованием промежуточного соединения XVIIIЬ вместо промежуточного соединения XVIIIа.

¹Н-ЯМР (400 МГц, ^Μ8Ο-ά6): δ м.д. 8,07-8,30 (м, 2Н), 7,88-7,98 (м, 3Н), 7,73-7,87 (м, 2Н), 7,50-7,67 (м, 3Н), 7,21-7,33 (м, 2Н), 5,18-5,24 (м, 1Н), 5,06-5,16 (м, 1Н), 4,31 (м, 2Н), 3,80-3,95 (м, 4Н), 3,56 (с, 6Н), 3,43-3,53 (м, 2Н), 3,20 (с, 6Н), 1,80-2,35 (м, 8Н), 1,05-1,20 (м, 6Н).

3.3. Получение соединений 9, 11, 13, 16, 17, 18.

3.3.1. Получение соединения 9.

3.3.1.1. Получение промежуточного соединения ХШЬ

К ХШ'а (5,3 г, 14,6 ммоль) в СН₂С1₂ (10 мл) при 0°С добавляли ТРА (25 мл). Смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 30 мин. Летучие вещества удаляли и к полученной соли (8)-4-йод-2-(пирролидин-2-ил)-1Н-имидазола с ТРА добавляли СН₂С1₂ (10 мл) и Ό№ΕΑ (15 мл).

- 26 022839

Половину этой смеси использовали далее. В другой колбе к (8)-2-(метоксикарбониламино)-3метилбутановой кислоте (1,77 г, 10,12 ммоль) и НАТИ (3,57 г, 9,4 0 ммоль) добавляли сухой ΌΜΡ (5 мл). Добавляли ЭШЕА (5 мл, 28,7 ммоль), а затем половину указанной выше смеси (8)-4-йод-2-(пирролидин2-ил)-1 Н-имидазола.

Смесь перемешивали в течение ночи. Добавляли СН₂С1₂ и смесь промывали солевым раствором, 10% АсОН и насыщенным ΝαΙ 1СО₃.

После высушивания с помощью Мд8О₄ и фильтрации растворитель удаляли. Смесь очищали колоночной хроматографией с использованием элюирования градиентом от СН₂С1₂ до СН₂С1₂/МеОН 95/5. Фракции, содержащие продукт, объединяли и растворитель удаляли. Полученный осадок растворяли в СН₂С1₂ и промывали 10% лимонной кислотой. Водный слой осторожно нейтрализовывали насыщенным водным раствором ΝαΙ 1СО₃ и вновь экстрагировали СН₂С1₂. Органические слои сушили с помощью №₂8О₄ и после фильтрации растворитель удаляли. Полученное ХШ'Ь (7 90 мг, 26%) использовали как есть в следующей реакции.

3.3.1.2. Получение промежуточного соединения ХХ!Ь

ХУ!Ь (867 мг, 1,61 ммоль), ХШ'Ь (790 мг, 1,88 ммоль), бикарбонат натрия (316 мг, 3,76 ммоль) и Ρά (брр1)С1₂ (138 мг, 0,188 ммоль) растворяли в смеси ТНР/Н₂О (2,5 мл, 4/1) и нагревали при облучении микроволновым излучением в течение 60 мин при 100°С. Реакционную смесь фильтровали через дикалит, летучие вещества удаляли из фильтрата путем выпаривания на ротационном испарителе и осадок очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюирование градиентом от СН₂С1₂ до СН₂С1₂/МеОН 9/1). Фракции, содержащие ХХ!Ь, объединяли и растворитель удаляли при пониженном давлении с получением ХХ!Ь в виде не совсем белого порошка (580 мг, 44%).

Альтернативно соединение ХХ!Ь можно получать, начиная с соединения ХХУ!Ь, аналогично тому, как описано для синтеза соединения ХХ!е из ХХУЕЬ, за исключением того, что для синтеза ХХ!Ь вместо (28,38)-2-(метоксикарбониламино)-3-метилпентановой кислоты, которую используют для синтеза ХХ!е, используют (8)-2-(метоксикарбониламино)-3-метилбутановую кислоту.

3.3.1.3. Получение соединения 9

К ХХ!Ь (580 мг, 0,822 ммоль ) в СН₂С1₂ (10 мл), добавляли НС1 в 1РгОН (5-6 н., 3 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Летучие вещества удаляли и добавляли основание Хунига (0,53 мл, 4 экв.) в ΌΜΡ (5 мл). Эту смесь добавляли к предварительно смешанному (10 мин) раствору НАТИ (469 мг, 1,23 ммоль, 1,5 экв), (28,3К)-3-метокси-2-(метоксикарбониламино)бутановой кислоты (318 мг, 1,64 ммоль, 2 экв.) и основания Хунига (0,15 мл, 1,1 экв.) в ΌΜΡ (5 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин. Добавляли 15 капель концентрированной НС1 и через 15 мин ле- 27 022839 тучие вещества удаляли выпариванием на ротационном испарителе. Осадок очищали колоночной хроматографией на силикагеле элюированием градиентом от СН₂С1₂ до 9/1 СН₂С1₂/МеОН (7н. Ν^). Фракции, содержащие продукт, объединяли и растворитель удаляли при пониженном давлении с получением продукта 9 в виде белого порошка (121 мг, 18%).

[α]²⁰π=-137,04° (с 0,3736 мас./об. %, МеОН).

Ή-ЯМР (600 МГц, СП₃ОП-а₄): δ м.д. 8,04-8,25 (2Н, м) 7,37-7,97 (8Н, м), 5,33 (1Н, дд, 1=4,7; 7,9 Гц), 5,21 (1Н, дд, 1=5,6; 7,9 Гц) 4,48 (1Н, д, 1=4,7; Гц) 4,25 (1Н, д, 1=7,6 Гц), 3,86-4,04 (4Н, м) 3,68-3,73 (1Н, м) 3,63-3,68 (6Н, м) 3,27 (3Н, с) 1,99-2,49 (9Н, м) 1,14-1,19 (3Н, м) 0,95-0,99 (3Н, м) 0,90-0,93 (3Н, м).

3.3.1.4. Получение соединения 13.

Соединение 13 можно синтезировать аналогично тому, как описано для превращения XXIЬ в соединение 9, с использованием (28,38)-2-(метоксикарбониламино)-3-метилпентановой кислоты вместо (28,3К)-3-метокси-2-(метоксикарбониламино)бутановой кислоты.

[α]²⁰π = -147,6° (с 0,3618 мас./об.%, МеОН).

Ή-ЯМР (400 МГц, ЭМ8О-0₆): δ м.д. 11,71-12,51 (2Н, м) 7,51-8,31 (10Н, м) 7,22-7,39 (2Н, м) 5,065,45 (2Н, м) 4,02-4,19 (2Н, м) 3,75-3,95 (4Н, м) 3,52-3,57 (6Н, м) 1,81-2,30 (9Н, м) 1,65-1,79 (1Н, м) 1,391,53 (1Н, м) 1,02-1,14 (1Н, м) 0,74-0,98 (12Н, м).

3.3.2. Получение соединения 11.

3.3.2.1. Получение промежуточного соединения XIXЬ

НАТи (776 мг, 2,04 ммоль), ППФЛ (0,48 мл, 2,78 ммоль) и (8)-2-(метоксикарбониламино)-3метилбутановую кислоту (357 мг, 2,04 ммоль) растворяли в сухом 1)МР (10 мл) и перемешивали в течение 5 мин при комнатной температуре. Добавляли XXVIIЬ (1,018 г, 1,855 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение 1 ч при комнатной температуре. Добавляли дихлорметан (100 мл) и смесь промывали насыщенным раствором №НСО₃ (3x100 мл). Органическую фазу сушили над Мд8О₄, фильтровали и растворитель выпаривали. Осадок использовали как есть в следующей реакции.

3.3.2.2. Получение промежуточного соединения XXЬ

XIXЬ (1,309 г, 1,855 ммоль) растворяли в СН₂С1₂ (10 мл) и добавляли НС1 в 1РгОН (5-6н., 15 мл). Смесь перемешивали в течение 35 мин при комнатной температуре. Добавляли 1ВиОМе (50 мл) и взвесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Отфильтрованное твердое вещество промывали 1ВиОМе (50 мл) и сушили в вакуумной печи при 40°С с получением XXЬ (1,137 г).

3.3.2.3. Получение соединения 11

НАТИ (858 мг, 2,26 ммоль), 1)!РРА (0,808 мл, 4,69 ммоль) и (28,3К)-3-метокси-2-метоксикарбо- 28 022839 ниламино)бутановую кислоту (432 мг, 2,26 ммоль) растворяли в сухом ΌΜΕ (10 мл) и перемешивали в течение 5 мин при комнатной температуре. Добавляли ХХЬ (1,13 7 г, 1,59 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре, после чего добавляли дополнительный ОГРЕЛ (1,5 экв.) и смесь перемешивали в течение еще 1 ч. Добавляли дихлорметан (100 мл) и смесь промывали насыщенным раствором №НСО₃ (3x100 мл), органическую фазу сушили над М§8О₄, фильтровали, растворитель упаривали и очищали на колонке с использованием градиента от 0 до 5% метанола в дихлорметане с получением 11 (585 мг, 47%).

|ыръ=-134,69° (с 0,3638 мас./об. %, МеОН).

‘Н-ЯМР (400 МГц, ΌΜ80-06, N4 заменяли Ό₂0): δ м.д.: 0,78-0,91 (м, 6Н) 1,05-1,19 (м, 3Н), 1,862,30 (м, 9Н), 3,21 (с, 3Н), 3,46-3,62 (м, 7Н), 3,78-3,96 (м, 4Н), 4,02-4,16 (м, 1Н), 4,26-4,40 (м, 1Н) 5,05-5,16 (м, 1Н) 5,18-5,26 (м, 1Н), 7,53-8,33 (м, 10Н).

3.3.3. Получение соединения 16 и 17.

3.3.3.1. Получение промежуточного соединения ХХ!с

К (28,38)-2-(метоксикарбониламино)-3-метилпентановой кислоте (2,39 г, 12,6 ммоль, 1,05 экв.) в 100-мл круглодонной колбе добавляли диметилформамид (60 мл), триэтиламин (3,34 мл, 24,1 ммоль, 2,00 экв.) и НАТИ (4,80 г, 12,6 ммоль, 1,05 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение 5 мин и добавляли ХХУФ (6,60 г, 12,0 ммоль, 1,00 экв.). Смесь обрабатывали ультразвуком в течение одной минуты для растворения всего содержимого. Реакционную смесь перемешивали в течение 20 мин при комнатной температуре. К смеси добавляли насыщенным водный раствор №₂СО₃ (20 мл) (при проверке рН на индикаторной бумаге рН 11). Соединение экстрагировали из водной фазы дихлорметаном (5x150 мл) и объединенные органические слои промывали насыщенным водным раствором №₂СО₃ (150 мл), сушили над сульфатом магния, фильтровали и фильтрат выпаривали до сухого состояния с получением ХХЕ (9,3 г), которое использовали как есть на следующей стадии.

3.3.3.2. Получение промежуточного соединения ХХПс (А=

ХХЕ (8,66 г, 12,0 ммоль, 1,0 экв.) растворяли в дихлорметане (40 мл) и добавляли 5-6н. НС1 в изопропаноле (40 мл, 200 ммоль, 17 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. К раствору добавляли 1ВиОМе (400 мл) и полученную взвесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Отфильтрованное твердое вещество промывали 1ВиОМе (2x100 мл) и дихлорметаном (100 мл) и сушили в вакууме в течение ночи с получением ХХПс (8,35 г). 3.3.3.3 Получение соединения 16

- 29 022839

К (8)-2-(метоксикарбониламино)-3-метилбутановой кислоте (481 мг, 2,74 ммоль) в круглодонной колбе (500 мл) добавляли дихлорметан (300 мл), диизопропилэтиламин (3,7 мл, 21 ммоль) и НАТи (1,04 г, 2,74 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 5 мин и добавляли ХХПс (2,00 г, 2,74 ммоль, если х-НС1 равно 3НС1, 1,0 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение 2,5 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь промывали насыщенным водным раствором №₂СО₃ (2х100 мл), солевым раствором (100 мл), сушили над М§8О₄, фильтровали и фильтрат выпаривали до сухого состояния с получением коричневого осадка. Осадок очищали с использованием колоночной хроматографии на силикагеле посредством элюирования с градиентом 0-5% МеОН (7н. ХН₃) в ЭСМ, с получением белого порошка (1,55 г). Порошок смешивали с водным раствором НС1 (1 М) и метанолом (15 мл) и вновь нейтрализовали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия. Смесь экстрагировали ОСМ (400 мл). Органический слой отделяли и промывали водой (4х150 мл); сушили над сульфатом магния и упаривали до сухого состояния в вакууме. Высушивание в течение выходных дней в вакуумной печи при 40°С давало соединение 16 (1,49 г) в виде белого порошка.

Количество НС1 на соединение ХХПс не определяли. Методику проводили с указанными выше количествами. Если х-НС1 равно 3НС1 в указанной выше методике, использовали 1,0 эквивалента НАТи и (8)-2-(метоксикарбониламино)-3-метилбутановой кислоты и приблизительно 8 эквивалентов диизопропилэтиламина. В теоретическом случае, когда х-НС1 равно 4НС1, использовали 1,05 эквивалента НАТи и (8)-2-(метоксикарбониламино)-3-метилбутановой кислоты и приблизительно 8 эквивалентов диизопропилэтиламина.

‘Н-ЯМР (400 МГц, МеОЭ): δ м.д. 0,79-1,05 (м, 12Н), 1,06-1,26 (м, 1Н), 1,42-1,66 (м, 1Н), 1,69-1,87 (м, 1Н), 1,94-2,51 (м, 9Н), 3,66 (2с, 6Н), 3,82-4,14 (м, 4Н), 4,23-4,31 (м, 2Н), 5,18-5,23 (м, 1Н), 5,27-5,32 (м, 1Н), 7,33-7,53 (м, 1Н), 7,53-7,75 (м, 2Н), 7,75-8,01 (м, 5Н), 8,01-8,33 (м, 2Н).

3.3.3.4. Получение соединения 17

К (28,3К)-3-метокси-2-(метоксикарбониламино)бутановой кислоте (524 мг, 2,74 ммоль) в круглодонной колбе (500 мл), добавляли дихлорметан (300 мл), диизопропилэтиламин (3,7 мл, 21 ммоль) и НАТи (1,04 г, 2,74 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 5 мин и добавляли ХХПс (2,00 г, 2,74 ммоль, если х-НС1 равно 3НС1, 1,0 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение 2,5 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь промывали с насыщенным водным раствором \а₂СО₃ (2х100 мл), солевым раствором (100 мл), сушили над М§8О₄ и фильтровали, и фильтрат выпаривали до сухого состояния с получением коричневого осадка. Осадок очищали с использованием колоночной хроматографии на силикагеле; посредством элюирования в градиенте 0-5% МеОН (7н. ХН₃) в СН₂С1₂ с получе- 30 022839 нием соединения 17 в виде белого порошка (1,24 г).

[а]²° =-158,7° (с 0,3472 масс. /об. %, МеОН)

Количество НС1 на соединение XXIIс не определяли. Методику проводили для указанных выше количеств. Если х-НС1 равно 3НС1 в указанной выше методике, использовали 1,0 эквивалента НАТи и (23,3К)-3-метокси-2-(метоксикарбониламино)бутановой кислоты и приблизительно 8 эквивалентов диизопропилэтиламина. В теоретическом случае, когда х-НС1 равно 4НС1, использовали 1,05 эквивалента НАТИ и (28,3К)-3-метокси-2-(метоксикарбониламино)бутановой кислоты и приблизительно 8 эквивалентов диизопропилэтиламина.

¹Н-ЯМР (400 МГц, МеОВ): δ м.д. 0,83-1,00 (м, 6Н), 1,10-1,22 (м, 4Н), 1,49-1,65 (м, 1Н), 1,72-1,85 (м, 1Н), 1,92-2,52 (м, 8Н), 3,27 (с, 3Н), 3,62-3,77 (м, 7Н), 3,84-4,08 (м, 4Н), 4,28 (д, 1=8,0 Гц, 1Н), 4,48 (д, 1=4,9 Гц, 1Н), 5,16-5,25 (м, 1Н), 5,33 (дд, 1=8,2, 4,9 Гц, 1Н), 7,24-8,35 (м, 10Н).

Получение соли-2НС1-4Н₂О соединения 17

Соединение 17 (315 мг, 0,39 ммоль) растворяли в НСПРгОН (6н. НС1) (10 мл) и летучие вещества удаляли. Соль перемешивали при комнатной температуре в ацетонитриле (6 мл) в течение ночи в открытой колбе. Смесь упаривали до сухого состояния. Остаточную воду удаляли азеотропной перегонкой путем повторяющегося добавления и упаривания, при 30°С при пониженном давлении, ацетонитрила (4x40 мл). Затем порошок перемешивали в ацетонитриле при комнатной температуре в закрытой круглодонной колбе в течение ночи, фильтровали и сразу сушили в вакууме в течение ночи с получением белого порошка (263 мг). Полученное твердое вещество анализировали элементным анализом, анионной ионной хроматографией и титрованием с Н₂О, чтобы оно имело С₄₃Н₅₂Х₈О₇-2НС1-4Н₂О.

Аналитическое вычислено для С₄₃Н₅₂^О₇-2НС1-4Н₂О: С 55,07, Н 6,66, N 11,95. Найдено: С 55,04, Н 6,57, N 12,09, вычислено для 4Н₂О: 7,68, найдено: 7,96; ионная хроматография (анионная), вычислено: 2С1^- 7,56, найдено: 7,75.

¹Н-ЯМР (600 МГц, диметилформамид-άγ, 280К): δ м.д. 0,85 (т, 1=7,3 Гц, 3Н), 0,91 (д, 1=6,7 Гц, 3Н), 1,07-1,13 (м, 1Н), 1,15 (д, 1=6,5 Гц, 3Н), 1,40-1,47 (м, 1Н), 1,98-2,05 (м, 1Н), 2,08 (дт, 1=12,4, 7,6 Гц, 1Н), 2,12-2,19 (м, 1Н), 2,29-2,37 (м, 1Н), 2,40-2,45 (м, 1Н), 2,48 (дд, 1=12,9, 6,2 Гц, 1Н), 2,50-2,55 (м, 2Н), 2,562,62 (м, 1Н), 3,27 (с, 3Н), 3,61 (с, 3Н), 3,62 (с, 3Н), 3,93-4,04 (м, 3Н), 4,29-4,33 (м, 2Н), 4,35 (дд, 1=8,7, 7,5 Гц, 1Н), 4,50 (дд, 1=8,8, 5,0 Гц, 1Н), 5,46 (т, 1=7,6 Гц, 1Н), 5,53 (дд, 1=8,2, 5,9 Гц, 1Н), 7,00 (д, 1=8,8 Гц, 1Н), 7,26 (д, 1=8,8 Гц, 1Н), 8,00 (д, 1=8,5 Гц, 1Н), 8,02-8,06 (м, 2Н), 8,09 (д, 1=8,5 Гц, 1Н), 8,20 (д, 1=8,5 Гц, 1Н), 8,22 (дд, 1=8,8, 1,8 Гц, 1Н), 8,26 (с, 1Н), 8,33 (с, 1Н), 8,42 (с, 1Н), 8,89 (с, 1Н).

[а]²° =-96,7 9° (с 0, 3492 масс./об.%, МеОН)

Получение соли соединения 17 с -Н₂ЗО₄.

Соединение 17 (15,0 г, 0,0189 моль) и этанол (75 мл) помещали в 3-гордую колбу в атмосфере Ν₂. Смесь нагревали до 65-70°С и перемешивали в течение 30 минут. По каплям добавляли раствор серной кислоты (2,0 г, 0,0204 моль) в этаноле (75 мл) в течение 1 ч при 65-70°С. Смесь перемешивали в течение от 2 до 3 часов в атмосфере Ν₂. Затем смесь охлаждали до 25-30°С и перемешивали в течение других 1-2 ч. Полученную суспензию фильтровали и подвергали вакуумной сушке при 50-60°С в течение по меньшей мере 12 ч с получением 16 г (94,8%) белого твердого вещества, которое анализировали на то, чтобы оно представляло собой соль соединения 17 с -Н₂ЗО₄.

Растворимость этой соли -Н₂ЗО₄ в воде при рН 1,2=32,23; при рН 2,2=13,34, при рН 4=0,26; при рН 7,4=0,001; при рН 12=0,02.

3.3.4. Получение соединения 18.

3.3.4.1. Получение промежуточного соединения XXIά

- 31 022839

К раствору ХХУТЬ (3,33 г, 6,07 ммоль) в сухом ΏΜΡ (35 мл), добавляли ΏΖΡΕΑ (1,57 мл, 9,104 ммоль) и Л-(метоксикарбонил)-О-метил-Ь-треонин (1,29 г, 6,68 ммоль). Его перемешивали в течение 5 мин, а затем добавляли НАТи (2,53 г, 6,68 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин при комнатной температуре. Реакционную смесь разбавляли дихлорметаном (100 мл) и промывали насыщенным раствором ЛаНСО₃ (3x100 мл). Органическую фазу сушили над Мд8О₄, фильтровали, упаривали и полученное соединение ХХЫ использовали как есть на следующей стадии.

3.3.4.2. Получение промежуточного соединения ХХПб

К раствору ХХЫ (4,38 г, 6,07 ммоль) в дихлорметане (40 мл) добавляли 5-6н. НС1 в изопропаноле (50 мл) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч. Добавляли ίΒπΟΜο (100 мл) и взвесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Отфильтрованное твердое вещество промывали ίΒπΟΜο (50 мл) и к фильтрату вновь добавляли ίΒπΟΜο (100 мл). Образовывался новый осадок, его фильтровали и промывали ίΒπΟΜο. Все осадки собирали и помещали в вакуумную печь на ночь. Продукт ХХПб получали в виде белого порошка (3,61 г) и использовал и как есть на следующей стадии.

3.3.4.3. Получение соединения 18

НАТИ (1,97 г, 5,189 ммоль), ΏΖΡΕΑ (4,26 мл, 24,71 ммоль) и Ν-метоксикарбонил-Е-изолейцин (981,8 мг, 5,189 ммоль) растворяли в сухом ΏΜΡ (10 мл) и перемешивали в течение 5 мин при комнатной температуре, а затем добавляли ХХПб (3,61 г, 4,94 ммоль, если х-НС1 равно 3НС1). После 1 ч при комнатной температуре добавляли концентрированную НС1 (3 мл) и смесь перемешивали в течение 5 мин. Реакционную смесь нейтрализовывали Ла₂СО₃, разбавляли дихлорметаном (50 мл) и промывали водой (2x100 мл). Органическую фазу сушили над Мд8О₄, концентрировали при пониженном давлении и осадок очищали колоночной хроматографией (метанол в СН2С12) с получением 18 (2,17 г).

- 32 022839

Получение соли соединения 18 с -2НС1₄-Н₂О

Соединение 18 (485 мг; 0,611 ммоль) растворяли в 1РгОН (15 мл, 6н. НС1) и летучие вещества удаляли в вакууме. Добавляли ацетонитрил (10 мл) и смесь нагревали при 40°С в течение 10 мин с получением клейкого осадка. Добавляли воду (0,4 мл) с получением бесцветного раствора. По каплям добавляли ацетонитрил (15 мл) с получением клейкого осадка. Часть раствора (приблизительно 5 мл) упаривали при 40°С с получением однородного раствора. Затем добавляли ацетонитрил (20 мл), и осадок не образовывался. Летучие вещества удаляли в вакууме. Воду удаляли азеотропной перегонкой путем повторяющегося добавления и выпаривания при 30°С при пониженном давлении ацетонитрила (4x40 мл). Полученный порошок перемешивали в ацетонитриле при комнатной температуре в закрытой круглодонной колбе в течение ночи, фильтровали и сразу сушили в вакууме в течение ночи с получением светложелтого порошка (365 мг).

Полученное твердое вещество анализировали элементным анализом, анионной ионной хроматографией и титрованием с Н₂О на то, что оно имеет С₄₃Н₅₂^О₇-2НС1-4Н₂О.

Аналитически вычислено для С₄₃Н₅₂^О₇-2НС1-4Н₂О: С 55,07, Н 6,66, N 11,95. Найдено: С 54,54, Н 6,54, N 12,18. Вычислено для -4Н₂О: 7,68, найдено: 7,55; ионная хроматография (анионная), вычислено: 2С1^- 7,56, найдено: 7,36.

[α]²%=-97,53° (с 0,324 мас./об.%, МеОН).

¹Н-ЯМР (600 МГц, диметилформамид-б₇, 280К): δ м.д. 0,84 (т, Л=7,3 Гц, 3Н), 0,91 (д, 1=6,7 Гц, 3Н), 1,05-1,14 (м, 1Н), 1,15 (д, 1=6,2 Гц, 3Н), 1,39-1,50 (м, 1Н), 1,93-2,02 (м, 1Н), 2,04-2,12 (м, 1Н), 2,12-2,19 (м, 1Н), 2,28-2,37 (м, 1Н), 2,40-2,62 (м, 5Н), 3,27 (с, 3Н), 3,61 (с, 3Н), 3,62 (с, 3Н), 3,93-4,00 (м, 2Н), 4,00-4,05 (м, 1Н), 4,23-4,30 (м, 1Н), 4,36 (м, 2Н), 4,47 (дд, 1=8,8, 4,7 Гц, 1Н), 5,46 (т, 1=7,6 Гц, 1Н), 5,51 (дд, 1=7,9, 5,6 Гц, 1Н), 6,97 (д, 1=8,5 Гц, 1Н), 7,33 (д, 1=8,8 Гц, 1Н), 7,99 (д, 1=8,5 Гц, 1Н), 8,01-8,03 (м, 2Н), 8,09 (д, 1=8,5 Гц, 1Н), 8,19 (д, 1=8,5 Гц, 1Н), 8,22 (дд, 1=8,5, 1,5 Гц, 1Н), 8,26 (с, 1Н), 8,32 (с, 1Н), 8,41 (с, 1Н), 8,90 (с, 1Н).

3.4. Получение соединений 5-8, 10, 12, 14, 15, 19, 20, 21.

3.4.1. Синтез соединения 5

НАТИ (268 мг, 0,71 ммоль), БГРЕА (0,334 мл, 2 ммоль), XΥШЬ (200 мг, 0,34 ммоль, если х-НС1 равно 4НС1) и (8)-2-циклопропил-2-(метоксикарбониламино)уксусную кислоту (145 мг, 0,84 ммоль) смешивали вместе в сухом ΌΜΕ (5 мл). Смесь перемешивали в течение 1 ч при комнатной температуре.

Добавляли СН₂С1₂ и смесь промывали два раза насыщенным №НСО₃. Органическую фазу сушили с помощью Мд8О₄ и после фильтрации растворитель удаляли в вакууме. Смесь очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюирование градиентом 0-5% МеОН в СН₂С1₂) с получением соединения 5 (100 мг, 38%).

3.4.2. Синтез соединений 6-8, 10, 12, 14, 15, 19, 20, 21.

Соединение 6 можно синтезировать согласно методике, описанной для соединения 5, с использованием (28,3К)-3-гидрокси-2-(метоксикарбониламино)бутановой кислоты вместо (8)-2-циклопропил-2(метоксикарбониламино)уксусной кислоты.

Соединение 7 можно синтезировать согласно методике, описанной для соединения 5, с использованием (8)-2-(метоксикарбониламино)-4-метилпентановой кислоты вместо (8)-2-циклопропил-2(метоксикарбониламино)уксусной кислоты.

Соединение 8 можно синтезировать согласно методике, описанной для соединения 5, с использованием (28,3 8)-2-(метоксикарбониламино)-3 -метилпентановой кислоты вместо (8)-2-циклопропил-2(метоксикарбониламино)уксусной кислоты.

- 33 022839 '[ I ЯМР (400 МГц, ΜеΟ^): δ м.д. 0,82-0,94 (м, 12Н), 1,04-1,28 (м, 2Н), 1,41-1,62 (м, 2Н), 1,72-1,86 (м, 2Н), 2,12-2,45 (м, 6Н), 2,53-2,73 (м, 2Н), 3,66 (с, 6Н), 3,82-4,00 (м, 2Н), 4,13-4,23 (м, 2Н), 4,24-4,31 (м, 2Н), 5,25-5,31 (м, 1Н), 5,34-5,41 (м, 1Н), 7,84-7,91 (м, 2Н), 7,94-8,05 (м, 3Н), 8,07-8,17 (м, 3Н), 8,25-8,33 (м, 2Н).

Соединение 10 можно синтезировать согласно методике, описанной для соединения 5, с использованием (8)-4-метокси-2-(метоксикарбониламино)бутановой кислоты вместо (8)-2-циклопропил-2-(метоксикарбониламино)уксусной кислоты.

Соединение 12 можно синтезировать согласно методике, описанной для соединения 5, с использованием 2-(метоксикарбониламино)-2-(тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)уксусной кислоты вместо (8)-2циклопропил-2-(метоксикарбониламино)уксусной кислоты.

Соединение 14 можно синтезировать согласно методике, описанной для соединения 5, с использованием (К)-2-(метоксикарбониламино)-2-фенилуксусной кислоты вместо (8)-2-циклопропил-2-(метоксикарбониламино)уксусной кислоты.

Соединение 15 можно синтезировать согласно методике, описанной для соединения 5, с использованием (8)-2-циклопентил-2-(метоксикарбониламино)уксусной кислоты вместо (8)-2-циклопропил-2(метоксикарбониламино)уксусной кислоты.

Соединение 19 можно синтезировать согласно методике, описанной для соединения 5, с использованием (28,3К)-2-(метоксикарбониламино)-3-метилпентановой кислоты вместо (8)-2-циклопропил-2(метоксикарбониламино)уксусной кислоты.

Соединение 20 и 21 можно синтезировать согласно методикам, сходным с методиками, проиллюстрированными для синтеза соединений 17 и 18 соответственно, за исключением того, что соответствующее промежуточное соединение (8,Κ)-XXVс синтезируют, начиная с соединения (8)-Ша и (Κ)-VIIIс в противоположность синтезу (8,8)-XXVс из (8)-Ша и ^^Шс.

(Κ)-VIIIе можно получать, как проиллюстрировано для (З^Шс, с использованием СΒζ-^-пролина вместо СΒζ-^-пролина.

Все соединения охарактеризовывали с помощью ЖХ/МС.

Способ А. Жидкостная хроматография: Ша1егь АШапсе 2695, УФ-детектор: Ша1егь 996 ГПА, диапазон: 210-400 нм; детектор масс: Ша1егь Ζ^, источник ионов: Е8+, Е8-, используемая колонка: 8ипр1ге С18 3,5 мкм 4,6x100 мм, подвижная фаза А: 10 мМ NН₄ΟΟСН+0,1% НСООН в Н₂О; подвижная фаза В: СН₃ОН; температура колонки: 50°С; поток: 1,5 мл/мин, время градиента (мин) [%А/%В] 0 от [65/35] до 7 [5/95], до 9,6 [5/95], до 9,8 [65/35], до 12 [65/35].

Способ В. Ша1егБ АссщИу иГЬС, оборудованная детектором ГПА (диапазон 210-400 нм) и Ша1егь 8^^ с источником ионов с двойным режимом Е8+/-. Используемая колонка представляла собой На1о С18, 2,7 мкм, 2,1x50 мм, и ее поддерживали при 50°С. Градиент из 95% водного раствора муравьиной кислоты (0,1%)/5% ацетонитрила до 100% ацетонитрила прогоняли на протяжении 1,5 мин, выдерживали в течение 0,6 минуты, а затем возвращали к 100% водной муравьиной кислоте (0,1%) в течение 0,5 мин.

Скорость потока составляла 0,6 мл/мин.

Таблица 1а - соединения формулы I

Стереогенный атом углерода рядом с азотом кольца пирролидина, присоединенного к бензимидазольной группе, имеет для всех соединений в табл. 1а конфигурацию 8. Стереогенный атом углерода рядом с азотом кольца пирролидина, присоединенного к группе имидазола, имеет для всех соединений в табл. 1а конфигурацию 8.

В табл. 1а и 1Ъ - в Ζ и Ζ' обозначает точку присоединения. Например, для соединения 2 в табл.

1а, ζ, представляющий собой

приводит к

- 34 022839

- 35 022839

№ Соединения	Ζ	Ζ'		Точная масса	Наблюдаемая масса (М+Н)	ΚΙ (Мин.)	Способ
11	ΗΝ—ζ Η >°	Η ΗΝ—< /°Ч ' 0 *		778.3	779.3	4.97	А
12	ρ ΗΝ—4	/—0 ΗΝ—< Η >°		846.4	847.4	4.44 4.52	А
13	У⁷ /°Л>°	ΗΝ—ζ Μ >°	,-ΟΈ'	776.4	777.4	5.57	А
14	ΗΝ—< /°Ч >° ^Ζ ο *	ΗΝ—4 /°Ч >°		830.3	831.6	0.9	В
15	Α ΗΝ-< κ>	ΗΝ-< λΟ	' °'	814.4	815.4	6.14	А
16	ΗΝ-ζ /°Λ >^θ	ν ΗΝ—< Η>		776.4	777.3	5.59	А
17	ν°^ζ ΗΝ-—< Η >°	У⁷ ΗΝ—Λ Η>^θ		792.4	793.3	5.31	А
18	У⁷ /°Λ>°	™%^ο//°Ч >°		792.4	793.2	5.37	А

№ Соединения	Ζ	Ζ'		Точная масса	Наблюдаемая масса (М+Н)	К1 (Мин.)	Способ
19	У⁷ ΗΝ—< ,°ч г° / О *'	у⁷ ΗΝ^<		790.4	791.3	5.93	А

- 36 022839

Таблица 1Ь - другие соединения формулы I

Соеди- нения	Ζ(* обозначает точку присоединения)	Ζ' (* обозначает точку присоединения)	Точная масса	Наблюдаемая масса (М+Н)	Р1 (Мин.)	Способ
20	ΗΝ'\ /Ч>°	V ΗΝ-( /°Ч >°	792.4	793.4	5.43	А
21	„У /°Ч / ⁰ ¹ о *	У⁷ ΗΝ—у	792.4	793.4	5.49	А

Пример 4. Активность соединений формулы I против НСУ.

Анализ репликонов.

Соединения формулы (I) исследовали на ингибиторную активность в репликоне НСУ. Этот клеточный анализ основан на бицистронной экспрессирующей конструкции, как описано ЬоЬтапп е! а1. (8с1епсе (1999) 285: 110-113; ,1онта1 о£ \'п'о1оуу (2003) 77: 3007-3019) с модификациями, описанными Кпедег е! а1. (.1онта1 о£ Уио1оду (2001) 75: 4614-4624) и Ьойшапп е! а1. (.1онта1 о£ Уйо1оду (2003) 77: 3007-3019) для генотипа 1Ь и Υΐ е! а1. (.1онта1 о£ Уйо1оду (2004) 78: 7904-7915) для генотипа 1а, в стратегии скрининга с множественными мишенями.

Стабильная трансфекция.

Способ был следующим. В анализе использовали стабильно трансфицированную клеточную линию НиЬ-7 1ис/пео (в дальнейшем в настоящем описании обозначаемую как Ний-Ьис). Эта клеточная линия содержит РНК, кодирующую бицистронную экспрессирующую конструкцию, содержащую участки N83Ν85Β НСУ типа 1Ь дикого типа, транслируемые с внутреннего сайта связывания рибосомы (ΣΗΕ8) вируса энцефаломиокардита (ЕМСУ), с предшествующим репортерным участком (Р£Ь-люцифераза), и участком селективного маркера (пеоК, неомицинфосфотрансфераза). Конструкция фланкировалась 5'- и 3'-ЭТК (нетранслируемые области) из НСУ типа 1Ь. Сохранение культуры клеток с репликоном в присутствии 0418 (пеоК) зависит от репликации РНК НСУ. Для скрининга противовирусных соединений использовали стабильно трансфицированные репликоном клетки, которые экспрессируют РНК НСУ, которая реплицируется автономно и на высоком уровне и которая кодирует, в частности, люциферазу.

Клетки с репликоном помещали в 384-луночные планшеты в присутствии тестируемых и контрольных соединений, которые добавляли в различных концентрациях. После инкубации в течение трех суток определяли репликацию НСУ посредством анализа активности люциферазы (с использованием стандартных субстратов и реагентов для анализа люциферазы и устройства для визуализации микропланшетов Регкт Е1тег У1е^Ьих™ и1!гаНТ8). Клетки с репликоном в контрольных культурах обладали высокой экспрессией люциферазы в отсутствии какого-либо ингибитора. Мониторинг ингибиторной активности соединения в отношении активности люциферазы проводили на клетках Ний-Ьис, получая кривую дозаэффект для каждого тестируемого соединения. Затем вычисляли значения ЕС₅₀, которые соответствуют количеству соединения, необходимому для снижения уровня выявляемой активности люциферазы на 50%, или более конкретно, способности генетически связанного с ней репликона РНК НСУ к репликации. В таблице 2 представлены результаты анализа репликонов, полученные для соединений примеров, приведенных выше, в стабильно трансфицированных клеточных линиях (ЕС₅₀ 1Ь (стабильные)).

Когда в анализе репликонов соединение формулы (I) тестировали более одного раза, в этой таблице 2 приведено среднее значение для всех результатов тестов.

- 37 022839

Таблица 2

- 38 022839

- 39 022839

- 40 022839

Временная трансфекция.

В технологии временной трансфекции клеточную линию гепатомы а НиБ-7 1ипе1 временно трансфицировали автономно реплицирующейся РНК, кодирующей бицистронную экспрессирующую конструкцию. Эта конструкция содержит репортерный ген люциферазы светлячка, предшествующий субгеномной области Ν83-Ν85Β НСУ (генотип 1а Н77 или 1Ь Соп1). Трансляция субгеномной области НСУ опосредуется участком внутренней посадки рибосомы вируса энцефаломиокардита. Более того, конструкция фланкируется 5'- и 3'-нетранслируемыми областями НСУ (генотип 1а Н77 или 1Ь Соп1, соответственно), которые позволяют репликацию РНК.

В дополнение к конструкциям дикого типа сайт-направленные мутации вносили во временный репликон НСУ генотипа 1Ь в гене, кодирующем неструктурный белок 5А (Ν85Α). Точнее, независимо изменяли аминокислота остатки 28, 30, 31 и 93 в Ν85Α.

Клетки высевали в 384-луночные планшеты в присутствии тестируемого и контрольного соединений, которые добавляли в различных концентрациях. После инкубации в течение двух суток репликацию субгеномной репликонной РНК НСУ измеряли путем анализа активности люциферазы (с использованием стандартных субстратов и реагентов для анализа люциферазы и устройства для визуализации микропланшетов Регкш Е1тег У1е^БихТМ иИгаНТЗ). Субгеномный репликон НСУ, содержащий клетки в контрольных культурах, имеет высокую экспрессию люциферазы в отсутствие какого-либо ингибитора. Проводили мониторинг ингибиторной активности соединения, получая кривую доза-эффект для каждого тестируемого соединения. Затем вычисляли величины ЕС₅₀, которые соответствуют количеству соединения, требуемому для снижения уровня выявленной активности люциферазы на 50%, или, более конкретно, для снижения способности генетически связанной субгеномной РНК НСУ реплицироваться.

В табл. 3 представлены результаты анализа репликонов, полученные для соединений примеров, приведенных выше, во временно трансфицированных клеточных линиях для генотипа 1а и 1Ь (ЕС₅₀ 1а. (временная) и ЕС₅₀ 1Ь (временная), соответственно). В табл. 4 представлены результаты репликона для мутантов Ν85Α в 1Ь, полученные для соединений примеров, приведенных выше, во временно трансфицированных клеточных линиях, а также величины ЕС₅₀.

Контрскрининг.

Клеточные линии для контрскрининга включали клеточную линию гепатомы НиБ-7, содержащую

- 41 022839 конструкцию главный предранний промотор цитомегаловируса человека-Ьис (НиН7-СМУ-Ьис), и линию Т-клеток МТ4, содержащую репортер длинный концевой повтор-Ьис (МТ4-ЬТК-Ьис). В табл. 3 представлены результаты контрскрининга, полученные для соединений примеров, приведенных выше.

Когда соединение формулы (I) тестировали более одного раза в анализе временного репликона, в таблице 3 приведено среднее значение для всех результатов тестирования.

Таблица 3

Номер соединения	ЕС₅₀ 1Ъ (временная) (нМ)	ЕС50 1а (временная) (нМ)	СС₅₀ МТ4ЬТЕ-1ис (мкМ)	СС₅₀ НиН7СМУ-1ис (мкМ)
1	0,058		>0,984
2	0,909		>0,984	>0,984
3	0,008	0,051	5,822	7,643
4	0,016	0,033	>0,984	>0,984
5	0, 058		>0,984	>0,984
б	0,142	0,181	>0,984	>0,984
7	0,003	0,989	>0,984	>0,984
8	0,005	0,204	>0,984	>0,984
9	0,007	0,030	>0,984	>0,984
10	0,057		>0,984	>0,984
11	0,012	0,048	>0,984	>0,984
12	0,110	0,268	>0,984	>0,984
13	0,002	0,051	>0,984	>0,984
14	0,004	0,836	>0,984	>0,984
15	0,003	0,277	>0,984	>0,984
16	0,003	0,098	>0,984	>0,984
17	0,005	0,049	9,305	11,10
18	0,004	0,018	9,678	8,684
19	0,002	0,471	>0,984	>0,984
20	4,103	323,504	9,413	8,165
21	2,898	482,403	9,144	8,163

Таблица 4

Пример 5. Фармакокинетический анализ после однократного перорального введения I.

Соединения вводили перорально в качестве раствора в РЕС400 самцам крыс 8ргадие-Эа^1еу на уровне дозы 10 мг/кг. В последовательные моменты времени после дозирования животных умерщвляли и собирали образцы печени. Все образцы анализировали с использованием специализированного исследовательского способа ЖХМС/МС для определения концентрации тестируемых соединений в печени.

- 42 022839

Некомпартментный анализ с использованием правила трапеции 1ш/1од проводили с использованием ^тУопПп™ Рго£е55юпа1 (версии 5.2.1). Результаты обобщенно представлены в табл. 5.

Таблица 5

Пример 6. Исследования комбинаций ингибиторов.

В определенных вариантах осуществления три соединения из табл. 2 комбинируют с соединением, которое ингибирует репликацию вируса гепатита С, например, таким как ТМС435350, МК-7009, ΓΓΜΝ191, или ингибитор полимеразы (ингибитор на основе нуклеозидов: соединение А и Р8Г6130; ненуклеозидный ингибитор: соединение В). Эксперимент было организован в шахматном порядке, когда одно лекарственное средство титровали горизонтально, а другое титровали вертикально, на клетках НиН-Ьис, содержавших стабильно трансфицированный репликон НСУ типа 1Ъ. Каждую двухстороннюю комбинацию осуществляли в четырех экземплярах и анализировали с помощью программного обеспечения ΜасЗупегду™ II для получения объемов процентной синергии/антагонизма (выраженных как нМ²%).

В Μас8уηе^ду™ II теоретические вычисления аддитивных взаимодействий получали из кривых доза-эффект для каждого отдельного соединения. Затем вычисленную аддитивную поверхность вычитают из экспериментальной поверхности с получением поверхности синергии. Только аддитивные взаимодействия могут приводить к горизонтальной плоскости на уровне 0%. Пик выше плоскости 0% указывает на синергию, а снижение ниже плоскости 0% относится к антагонизму. 95% доверительный интервал для экспериментальных поверхностей доза-эффект вычисляли для оценки статистической значимости синергии или антагонизма.

Объемы, полученные с помощью Μас8уηе^ду™ II при комбинировании, описаны в табл. 6. Учитывая, что диапазон объемов синергии, полученный при 95% доверительном интервале для независимости в ВН55 охватывает диапазоны объемов, определенные как синергические и независимые в ВН55, эти тестированные комбинации считали обладающими действием от аддитивного до синергического. Для всех протестированных комбинаций не наблюдали значимого антагонизма (табл. 6).

Соединение А

Таблица 6

Класс ингибитора	Комбинация соединений	Объем синергии (95% доверительный интервал) нМ²%	Объем антагонизма (95% доверительный интервал) нМ²%
	Соединение 3 +
ΡΙ	ТМС435350	20	(34-5)	-4	(0 - -7)
ΡΙ	МК-7009	70	(132-7)	-3	(-1 - -4)
ΡΙ	ΙΤΜΝ-191	58	(112-3)	-4	(-2 - -6)
N1	Ρ3Ι-6130	25	(47-4)	-3	(-1 - -4)
ΝΝΙ	Соединение А Соединение 17 +	57	(108-6)	-3	(-1 - -5)
ΡΙ	ТМС435350	125	(220-29)	-2	(п.5.)

- 43 022839

η.δ. = нет значимых отличий согласно МасЗупегду™ II.

Пример 7. Фармацевтические композиции.

Активный ингредиент, как используют на протяжении этого примера, относится к соединению формулы (I), включая любую его стереохимически изомерную форму, его фармацевтически приемлемой соли или сольвату; в частности, к любому из проиллюстрированных соединений.

Типичные примеры составов соединения по настощему изобретению являются следующими:

1. Покрытые пленкой таблетки.

Получение сердцевины таблетки.

Смесь 100 г активного ингредиента, 570 г лактозы и 200 г крахмала хорошо перемешивают, а затем смачивают раствором 5 г додецилсульфата натрия и 10 г поливинил-пирролидона в приблизительно 200 мл воды. Влажную порошковую смесь просеивают, сушат и вновь просеивают. Затем добавляют 100 г микрокристаллической целлюлозы и 15 г гидрогенизированного растительного масла. Все смесь хорошо перемешивают и прессуют в таблетки с получением 10000 таблеток, каждая из которых содержит 10 мг активного ингредиента.

Нанесение покрытия.

К раствору 10 г метилцеллюлозы в 75 мл денатурированного этанола добавляют раствор 5 г этилцеллюлозы в 150 мл дихлорметана. Затем добавляют 75 мл дихлорметана и 2,5 мл 1,2,3-пропантриола. 10 г полиэтиленгликоль расплавляют и растворяют в 7 5 мл дихлорметана. Последний раствор добавляют к первому, а затем добавляют 2,5 г октадеканоата магния, 5 г поливинилпирролидона и 30 мл концентрированной цветной суспензии, и всю смесь гомогенизируют. Сердцевины таблеток покрывают полученной таким образом смесью в устройстве для нанесения покрытия.

2. Суспензия.

Водную суспензию получают для перорального введения так, чтобы каждый миллилитр содержал от 1 до 5 мг активного ингредиента, 50 мг карбоксиметилцеллюлозы натрия, 1 мг бензоата натрия, 500 мг сорбита и воду до 1 мл.

3. Инъецируемая композиция.

Парентеральную композицию получают перемешиванием 1,5% (мас./об.) активного ингредиента в 0,9% растворе №С1 или в 10% по объему пропиленгликоле в воде.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Соединение формулы I или его стереоизомерная форма, где А представляет собой фенилен или нафтилен; каждый из К и К' независимо представляет собой -СК‘К₂К₃;

где К‘ представляет собой С_1-4алкил, необязательно замещенный метокси или гидрокси; фенил; С_3-6 циклоалкил; тетрагидропиранил;

К₂ представляет собой С_1-4алкилоксикарбониламино;

К₃ представляет собой водород или

К‘ и К₃ вместе образуют циклопропильную группу;

или его фармацевтически приемлемая соль или гидрат соли.
2. Соединение по п.1, где К‘ представляет собой С_1-4алкил, необязательно замещенный метокси; фенил; С3-6циклоалкил или тетрагидропиранил.
3. Соединение по п.1, где А представляет собой нафтилен.
4. Соединение по п.2, где А представляет собой нафтилен.
5. Соединение по п.4, где А представляет собой 2,6-нафтилен.

- 44 022839 представляет собой 1-метоксиэтил, то К¹ в К' отличается от 1-метоксиэтила.
8. Соединение по любому из пп.3-5, где

К₁ отличается от 2-пропила, когда К₂ представляет собой метоксикарбониламино; и

К₁ в К' отличается от 1-метоксиэтила, когда К₂ в К' представляет собой метоксикарбониламино.
9. Соединение по любому из пп.1-8, где К и К' отличаются друг от друга.
10. Соединение по любому из пп.1-8, где К и К' являются одинаковыми.
11. Соединение по любому из пп.1-10, где каждый из К и К' независимо представляет собой СК1К2К3.
12. Соединение по п.11, где каждый К₂ независимо представляет собой С_1- ₄алкилоксикарбониламино.
13. Соединение по любому из пп.11-12, где каждый К₁ независимо выбран из разветвленного С₃₄алкила, метоксиС_2-3алкила, циклопентила или фенила.
14. Соединение по любому из пп.11-12, где К₁ в К представляет собой 1-метилпропил, 2метилпропил, 2-метоксиэтил, циклопентил или фенил; и К₁ в К' представляет собой 1-метилэтил, 1метилпропил, 2-метилпропил, 1-метоксиэтил, циклопентил или фенил.
15. Соединение по любому из пп. 11-14, где оба атома углерода в К и К', несущие заместители К₁, К₂и К₃, имеют 8-конфигурацию.
16. Соединение по любому из пп.1-15, где соединение имеет формулу !а
17. Соединение, имеющее структуру
18. Фармацевтически приемлемая соль или гидрат соли соединения по п.17.
19. Соединение, имеющее структуру

- 45 022839
20. Фармацевтически приемлемая соль или гидрат соли соединения по п.19.
21. Соединение, имеющее структуру
22. Фармацевтически приемлемая соль или гидрат соли соединения по п.21.
23. Соединение, имеющее структуру
24. Фармацевтически приемлемая соль или гидрат соли соединения по п.23.
25. Соединение, имеющее структуру
26. Фармацевтически приемлемая соль или гидрат соли соединения по п.25.
27. Соединение, имеющее структуру
28. Фармацевтически приемлемая соль или гидрат соли соединения по п.27.
29. Соединение по п.27 в его форме -2НС1-4Н₂О.
30. Соединение по п.27 в его форме -Н₂8О₄.
31. Соединение, имеющее структуру
32. Фармацевтически приемлемая соль или гидрат соли соединения по п.31.
33. Соединение по п.31 в его форме -2НС1-4Н₂О.
34. Фармацевтическая композиция, содержащая соединение по любому из пп.1-33 и фармацевтически приемлемый носитель.
35. Применение соединения по любому из пп.1-33 для профилактики или лечения инфекции НСУ у млекопитающего.
36. Применение фармацевтической композиции по п.34 для профилактики или лечения инфекции НСУ у млекопитающего.
37. Фармацевтический комбинированный препарат, содержащий (а) соединение, как определено в любом из пп.1-33, и (Ь) другой ингибитор НСУ, в качестве комбинированного препарата для одновре- 46 022839 менного, отдельного или последовательного применения для лечения инфекций НСУ.
38. Препарат по п.37, где другой ингибитор НСУ представляет собой ингибитор протеазы НСУ.
39. Препарат по п.38, где ингибитор протеазы НСУ выбран из группы, состоящей из телапревира (^-950), боцепревира (8СН-503034), нарлапревира (8СН-900518), ΓΓΜΝ-191 (К-7227), ТМС435350 (ТМС435), МК-7009, ВЕ201335, ВЕ2061 (цилупревира), ΒΜ8-650032, АСН-1625, АСН-1095, 08 9256, УX-985, I^X-375 (ингибитор кофактора протеазы НСУ Ν84Α), УX-500, УX-813, РНХ-1766, РНХ2054, I^X-136, I^X-316, АВТ-450, ЕР-013420 и УВУ-376.
40. Препарат по п.38, где ингибитор протеазы НСУ выбран из группы, состоящей из ТМС435350 (ТМС435), МК-7009 или ΡΙΜΝ-ί^ (К-7227).
41. Препарат по п.37, где другой ингибитор НСУ представляет собой нуклеозидный или ненуклеозидный ингибитор полимеразы НСУ.
42. Препарат по п.41, где ингибитор полимеразы НСУ выбран из группы, состоящей из К7128, Р8Е 7851, Р8I 7977, I^X-189, I^X-184, I^X-102, К1479, ^^-08189, Р8Е6130, Р8Е938, Р8Е879, НСУ-796, НСУ-371, УСН-759, УСН-916, УСН-222, ΑΝΑ-598, МК-3281, АВТ-333, АВТ-072, РЕ-00868554, ВЕ 207127, 08-9190, А-837093, ΙΚΤ-109, ОЕ-59728, 0Е-60667, АВТ-072, ΑΖΌ-2795 и 16,16-диоксида 13циклогексил-3 -метокси-17,23 -диметил-7Н-10,6(метаноиминотиоиминоэтаноксиэтаниминометан)индол[2,1-а] [2]бензазепин-14,24-диона.
43. Препарат по п.41, где ингибитор полимеразы НСУ представляет собой Р8^6130 или его пролекарство.
44. Препарат по п.41, где ингибитор полимеразы НСУ представляет собой или его фармацевтически приемлемую соль или гидрат соли.
45. Фармацевтический комбинированный препарат, содержащий (а) соединение по любому из пп.133 и (Ь) иммуномодулирующее средство, в качестве комбинированного препарата для одновременного, отдельного или последовательного применения при лечении инфекций НСУ.