KR20110039351A - 이산화 규소 나노입자 및 예방접종을 위한 그의 용도 - Google Patents

이산화 규소 나노입자 및 예방접종을 위한 그의 용도 Download PDF

Info

Publication number
KR20110039351A
KR20110039351A KR1020117003524A KR20117003524A KR20110039351A KR 20110039351 A KR20110039351 A KR 20110039351A KR 1020117003524 A KR1020117003524 A KR 1020117003524A KR 20117003524 A KR20117003524 A KR 20117003524A KR 20110039351 A KR20110039351 A KR 20110039351A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
nanoparticles
antigen
cells
targeting
nanoparticle
Prior art date
Application number
KR1020117003524A
Other languages
English (en)
Other versions
KR101694130B1 (ko
Inventor
마르쿠스 바이간트
안드레아 하네펠트
아르민 퀴벨벡
그레고어 라르비히
Original Assignee
메르크 파텐트 게엠베하
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 메르크 파텐트 게엠베하 filed Critical 메르크 파텐트 게엠베하
Publication of KR20110039351A publication Critical patent/KR20110039351A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR101694130B1 publication Critical patent/KR101694130B1/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/16—Agglomerates; Granulates; Microbeadlets ; Microspheres; Pellets; Solid products obtained by spray drying, spray freeze drying, spray congealing,(multiple) emulsion solvent evaporation or extraction
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/52—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an inorganic compound, e.g. an inorganic ion that is complexed with the active ingredient
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/643—Albumins, e.g. HSA, BSA, ovalbumin or a Keyhole Limpet Hemocyanin [KHL]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6921—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere
    • A61K47/6923—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being an inorganic particle, e.g. ceramic particles, silica particles, ferrite or synsorb
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/141—Intimate drug-carrier mixtures characterised by the carrier, e.g. ordered mixtures, adsorbates, solid solutions, eutectica, co-dried, co-solubilised, co-kneaded, co-milled, co-ground products, co-precipitates, co-evaporates, co-extrudates, co-melts; Drug nanoparticles with adsorbed surface modifiers
    • A61K9/143—Intimate drug-carrier mixtures characterised by the carrier, e.g. ordered mixtures, adsorbates, solid solutions, eutectica, co-dried, co-solubilised, co-kneaded, co-milled, co-ground products, co-precipitates, co-evaporates, co-extrudates, co-melts; Drug nanoparticles with adsorbed surface modifiers with inorganic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
    • A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/5115—Inorganic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B82—NANOTECHNOLOGY
    • B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
    • B82Y5/00—Nanobiotechnology or nanomedicine, e.g. protein engineering or drug delivery
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55505—Inorganic adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/62—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the link between antigen and carrier
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
    • Y10T428/00—Stock material or miscellaneous articles
    • Y10T428/29—Coated or structually defined flake, particle, cell, strand, strand portion, rod, filament, macroscopic fiber or mass thereof
    • Y10T428/2982—Particulate matter [e.g., sphere, flake, etc.]

Abstract

본 발명은 표면에 하나 이상의 항원이 부착된 이산화 규소의 초소형, 단순분산 나노입자에 관한 것이다. 상기 나노입자는 암의 면역예방 또는 면역요법을 위해 사용될 수 있다. 또한 본 발명은 표적화 및/또는 면역 활성화의 효율이 입자 특성을 통해 조정되는, 항원 제시 세포로 항원을 표적화하는 방법 및 면역계의 활성화 방법을 제공한다. 또한 본 발명은 포유류의 능동 및 수동 면역화 방법에 관한 것이다.

Description

이산화 규소 나노입자 및 예방접종을 위한 그의 용도{SILICON DIOXIDE NANOPARTICLES AND THEIR USE FOR VACCINATION}
본 발명은 하나 이상의 항원이 표면에 부착된 이산화 규소를 포함하는 초소형, 단순분산 나노입자에 관한 것이다. 상기 나노입자는 암의 면역예방 또는 면역요법을 위해 사용될 수 있다. 또한 본 발명은 표적화 및/또는 면역 활성화의 효율이 입자 특성을 통해 조정되는, 항원 제시 세포로 항원을 표적화하는 방법 및 면역계의 활성화 방법을 제공한다. 또한 본 발명은 포유류의 능동 및 수동 면역화 방법에 관한 것이다.
동물 또는 인간 유기체의 건강은 그 중에서도 유기체가 그의 환경으로부터의 병원성 물질에 대항하여 자신을 보호할 수 있는 정도 또는 유기체가 변형된 내인성 물질을 인지하고 제거할 수 있는 정도에 의존한다. 상기 기능을 수행하는 인간 또는 동물 신체의 면역계는 선천 면역계 및 후천 면역계의 2 개의 기능적 영역으로 분류될 수 있다. 선천 면역은 감염에 대항하는 1 차 방어이고, 대부분의 잠재적 병원체는 예를 들어 탐지가능한 감염을 야기할 수 있기 전에 무해하게 된다. 후천성 면역계는 항원으로서 알려진 진입하는 유기체 또는 변형된 내인성 물질의 표면 구조에 반응한다.
체액성 면역 반응 및 세포 매개 면역 반응의 2 가지 유형의 후천성 면역 반응이 존재한다. 체액성 면역 반응에서, 체액 내에 존재하는 항체는 항원에 결합하여 그의 불활성화를 개시한다. 세포 매개 면역 반응에서, 다른 세포를 파괴할 수 있는 T-세포가 활성화된다. 예를 들어, 질환과 연관된 단백질이 세포 내에 존재하는 경우, 그들은 세포 내에서 단백질분해적으로 조각나서 펩티드가 된다. 그후 특이적 세포 단백질이 결과로서 생긴 단백질 또는 항원의 조각에 결합하여 이를 세포의 표면으로 수송하고, 거기서 그들은 분자 방어 메카니즘, 특히 신체의 T-세포에 제시된다.
펩티드를 세포 표면으로 수송하고 제시하는 분자는 주조직적합 복합체 (MHC) 의 단백질로서 알려져 있다. MHC 단백질의 중요성은 또한 그것이 T-세포가 자기 항원을 비자기 항원과 구별할 수 있게 한다는 데 있다. 이러한 유형의 비자기 펩티드의 서열의 지식은 예를 들어 펩티드 백신을 사용하여 면역계가 질병에 걸린 세포에 대항하여 조종할 수 있게 한다.
백신 분야에서 단백질성 또는 펩티드성 항원의 제시를 위한 기술은 하기 2 가지 기초적 작업을 해야 한다: 후천 면역 반응을 야기하기 위한 수지상 세포로의 항원의 효율적 수송 및 그 후 그의 활성화. 현재의 백신 개발은 표적으로서 예컨대, 예를 들어 피부 또는 근육 내의 말초 수지상 세포를 어드레싱하는 분자적 전략에 초첨을 두고 있다. 항원은 특히 수지상 세포의 세포 표면 수용체에 대해 특이적이고 항원에 융합되거나 입자 표면에 부착된 항체에 의해 그의 수지상 도착지로 인도된다. 그러나, 그 중에서도, 은 접합된 폴리스티렌 비드의 수지상 세포로의 수송에 의해 면역 반응을 야기시킨 Fifis et al. (2004) J Immunol. 173(5), 3148 에 의해 밝혀진 바와 같이, 세포-특이적 표적화의 상기 어려운 디자인은 필연적이지 않다.
또한 비특이적으로 주어진 물질에 대한 면역 반응을 증가시키기 위해 아주반트를 이용하는 것이 면역학에서 알려져 있다. 즉, 항원이 특이적 면역 반응을 야기하는 한편, 아주반트는 이 반응의 강도를 본질적으로 책임진다. 후천성 면역 반응을 야기하기 위해, 아주반트의 사용은 수지상 세포 성숙의 유도에 필수적이다. 수지상 세포는 예를 들어 톨 라이크 수용체 (TLR) 또는 염증성 사이토카인 수용체와 같이 선천성 면역의 신호전달 경로를 통해 작용하는 분자 위험 신호의 결과로서 성장한다. 예를 들어 WO 2004/108072 A2 는 접합체로서 그안에서 예를 들어 TLR 작용제와 같이 면역 반응을 조절하는 화합물이 금속 입자 지지체에 결합되어 있고, 하나 이상의 활성 화합물을 추가로 포함하는 접합체를 기술한다. 면역 반응을 조절하는 화합물은 백신에 대한 아주반트로서 여겨져야 하는데, 이는 세포독성 림프구의 강한 활성화를 야기하긴 하지만, 입자의 제조 및 그의 경제적 생산을 복잡하게 만들고, 증가된 독성 위험 및 생리적 수송 제한과 연관된다.
WO 2001/12221 A1 은 이산화 규소에 대해 거친 모서리 및 불규칙적 형상에 기초하는, 단백질성 항원, 세포 또는 세포 분획과 조합된 고유의 아주반트 효과를 기술하며, 그 결과로 세포 막의 관통 및 표면 단백질의 수정이 촉진된다. 대조적으로, WO 2007/030901 A1 및 Vallhov et al. (2007), Nano Lett. 7(12), 3576 은 아주반트 효과를 실리카 입자의 메소다공성과 연관시킨다. 근본적 원인에 상관없이, EP 0 465 081 B1 은 금속, 도자기 (예를 들어 이산화 규소) 또는 중합체의 코어 입자, 코어 입자의 표면을 적어도 부분적으로 덮고 있는 코팅 (기본 당, 변성 당 또는 올리고뉴클레오티를 포함함), 및 코팅된 코어 입자와 접촉하고 있는 하나 이상의 바이러스성 단백질 또는 펩티드를 포함하는 제제를 이미 교시했다. 상기 코어 입자는 직경이 10 내지 200 ㎚ 이지만 데포 효과가 확립되므로 훨씬 바람직한 더 큰 입자를 형성하기 위해 응집된다. 이러한 유형의 응집체는 약학적으로 안정한 현탁액을 생산하거나 살균 여과성을 달성할 수 없음을 의미하므로 불리하다.
본 발명은 선행 기술에서 나타난 단점을 극복하고, 치료적 효능을 개선시키는 동시에 부작용을 감소시키는 특히 백신으로서, 면역예방 또는 면역요법에서의 효과적인 응용을 가능케 하는, 단순분산 입자 크기를 갖는 나노입자를 개발하려는 목적에 기초한다.
본 발명의 목적은 독립 청구항에 따라 달성된다. 종속 청구항은 바람직한 구현예를 포함한다. 본 발명에 따라, 하나 이상의 항원이 부착된 하나 이상의 표면 기능기를 갖는 이산화 규소를 50 % 를 초과하여 포함하는 매트릭스를 포함하는, 크기가 5 내지 50 ㎚ 인 나노입자가 제공된다. 여기서 입자 크기는 5 내지 50 ㎚ 의 전체 범위에 걸쳐 무작위 분포가 존재하지 않는 대신, 상기 범위 내에서 한정된 입자 크기가 선택되는 것으로 해석되어야 하며, 그의 표준 편차는 최대 15 %, 바람직하게는 최대 10 % 이다. 본 발명의 하나의 구현예에서, 입자 크기는 10 내지 30 ㎚, 바람직하게는 20 내지 30 ㎚, 특히 바람직하게는 13 내지 29 ㎚, 매우 특히 바람직하게는 25 ㎚ ± 10 % 이다.
놀랍게도, 이산화 규소 나노입자를 5 내지 50 ㎚ 의 좁은 크기 범위에서 제공하는 것은 항원 제시 세포로의 항원 표적화의 효율을 유의하게 증가시킬 수 있는 것으로 밝혀졌다. 특히, 주로 표적화되는 것은 더이상 말초 수지상 세포가 아닌 대신 림프절의 수지상 세포이다. 본 발명에 따른 나노입자는 수지상 세포 성숙의 효과적인 유도가 일어나도록 크기 및 재료의 선택을 통해 디지인된다. 이 유도는 특히 보체계의 활성화를 통해 일어난다. 따라서 본 발명에 따른 이산화 규소 나노입자는 수지상 세포 밀도가 높은 림프절의 표적화에 대해, 그리고 T-세포 증식 및 면역화의 전제조건으로서의 수지상 세포 성숙의 경로에 대해 완전히 새로운 기회를 연다. 상기 나노입자에 기초한 백신이 예방접종에서 다른 경우에는 불가피한 아주반트를 필요로 하지 않는다는 점이 주목할 만하다.
지금까지는 단지 US 6,086,881 로부터 백신 물질은 항원 결정기의 가능성을 증가시키는 높은 분자량을 가져야 한다고 알려졌다. 마찬가지로 백신 물질이 백반 또는 다른 겔 위에 응집하거나 흡착하는 것이 바람직한데, 이는 그것이 보통 세포 결합 및 세포 표면 분자의 자극에 대해 더욱 효과적으로 되고, 항원이 느린 탈착 속도 때문에 더 긴 기간에 걸쳐 조직 내에 잔류하기 때문이다. 또한 Vallhov et al. (2007), Nano Lett. 7(12), 3576 에 의해, 메소다공성 이산화 규소를 포함하는 더 큰 입자가 단핵구에서 유래된 인간 수지상 세포에 대해 더 큰 영향을 미친다는 것이 확인되었다. 또한, 항원 제시 세포로 표적화하기 위한 항원-실리카 접합체 (0.3 내지 20 ㎛ 의 입자 크기가 식세포작용에 대한 필요조건으로 여겨짐) 가 WO 2008/019366 A2 에 따라 선행기술에서 기술되어 있다. 그와 대조적으로, 본 발명은 구체적으로 이산화 규소 나노입자가 5 내지 50 ㎚ 의 한정된 좁은 크기 범위에서 항원 제시 세포로의 수동 표적화 및 보체 활성화 능력이 있다고 밝힌다.
"항원 제시 세포" 는 본 발명에서 항원을 T-세포에 제시하도록 유도될 수 있는 임의의 세포를 의미하는 것으로 여겨지며, 항원 제시 세포로 분화되고 활성화될 수 있는 전구 세포를 또한 포함한다. 항원 제시 세포는 수지상 세포, 랑게르한스 세포, PBMC, 대식세포, B 림프구 또는, 예를 들어 그의 세포 표면 위에 MHC 분자를 발현하는 상피 세포, 섬유모세포 및 내피 세포와 같은 다른 활성화되거나 변형된 세포 유형을 포함하며, 바람직하게는 수지상 세포, 특히 바람직하게는 림프절의 수지상 세포이다. 항원 제시 세포의 전구체는 CD34+ 세포, 단핵구, 섬유모세포 및 내피 세포를 포함한다.
본 발명에 따라, 미립자성 결합 매트릭스는 이산화 규소를 50 % 를 초과하여 포함한다. 따라서 결합 매트릭스는 또한 추가의 성분과 혼합될 수 있고, 이 경우 이산화 규소는 다성분 시스템 내에서 가장 높은 비율을 나타낸다. 다른 성분의 예는 금속, 금속 유도체, 금속 산화물, 중합체, 유기실란, 다른 도자기 또는 유리이다. 그러나, 본 발명의 하나의 구현예에서, 추가의 성분으로서 중합체가 배제된다. 매트릭스는 바람직하게는 80 % 이상의, 특히 바람직하게는 90 % 이상의 이산화 규소를 포함한다. 본 발명에 따른 나노입자의 매우 특히 바람직한 구현예에서, 매트릭스는 본질적으로 순수한, 즉 제조 공정 중에 예상되는 불순물만을 포함한는 이산화 규소를 포함한다. 본 발명의 매우 바람직한 구현예에서, 미립자성 결합 매트릭스는 이산화 규소로 이루어진다.
입자는 그 중에서도 고전적 Stober 합성법을 사용하여 제조될 수 있고, 이 경우 한정된 크기의 단순분산 나노규모 이산화 규소가 수성-알코올성-암모니아성 매질 내에서 테트라에톡시실란 (TEOS) 의 가수분해에 의해 제조될 수 있다 (J. Colloid Interface Sci. 1968, 26, 62). 놀랍게도, 본 발명자는 표면 기능화에도 불구하고 나노입자의 안정성이 유지되고, 그 결과 응집하는 경향이 없는 단순분산 입자가 수득됨을 밝힐 수 있었다. 따라서 본 발명에 따라 하기 단계를 포함하는 방법에 의해 제조된 나노입자가 바람직하다:
(a) 물, 하나 이상의 용해화제 및 하나 이상의 아민 또는 암모니아를 포함하는 매질 내에서 테트라알콕시실란 및/또는 오르가노트리알콕시실란을 가수분해성 중축합하는 단계로서, 여기서 첫째로 제 1 입자의 졸이 생성되고, 수득된 나노입자가 그 후, 반응의 정도에 따라 제어되는 식의 해당 실란의 연속적 미터링-인 (metering-in) 에 의해 추가의 핵형성이 방지되는 방식으로 5 내지 50 ㎚ 범위의 바람직한 입자 크기로 되는 단계, 및
(b) 나노입자의 표면 기능기에 항원을 부착하는 단계.
암모니아가 매질의 구성요소인 경우, 사용되는 용해화제는 특히 알콜이며, 이 경우 반응이 수성-알코올성-암모니아성 매질 내에서 진행되어, 평균 입자 직경으로부터의 표준 편차가 10 % 이하인 고도의 단순분산 입자가 수득된다. 놀랍게도, 본 발명자는 상기 방법이 바람직한 단순분산 특성과 함께 50 ㎚ 미만의 입자 직경을 가능케 함을 발견했다. 상기 방법의 단계 (a) 는 EP 0 216 278 B1 및 WO 2005/085135 A1 에 상세히 기술되어 있고, 따라서 이들 문헌은 그 전체가 참조에 의해 본 발명의 공개 내용에 포함된다. 바람직하게는 하나 이상의 아민이 매질 내에 사용된다.
본 발명에 따른 나노입자의 이산화 규소 매트릭스는 다공성 또는 비다공성일 수 있다. 다공도는 본질적으로 생산 방법에 의존한다. EP 0 216 278 B1 에 따른 합성에서, 특히 비다공성 입자가 수득된다. 5 내지 50 ㎚ 의 입자 범위 내에서, 비다공성 나노입자에 대한 바람직한 입자 크기는 10 내지 30 ㎚ 인 한편, 다공성 입자에 대한 바람직한 입자 크기는 10 내지 40 ㎚ 이다. 본 발명의 바람직한 입자는 고체이다.
본 발명과 관련하여, "나노입자" 는 궁극적으로 결합되거나 흡착된 항원에 대한 인지 지점으로서 기능하는 기능기를 표면에 갖는 미립자성 결합 매트릭스를 의미한다. 여기서 표면은 모든 영역, 즉 외부 표면 뿐만 아니라 입자 내 공동 (구멍) 의 내부 표면도 포함한다. 본 발명에 따른 구현예에서, 항원은 따라서 입자 내로 들어갈 수 있고, 이는 이산화 규소 매트릭스의 다공성을 요구한다.
표면 기능기는 동일 또는 상이할 수 있는 하나 이상의 화학적 기로 이루어질 수 있고, 이 경우 기는 링커로서의 그의 특성으로 나노 입자 및 항원의 특이적 부착을 가능케 하거나 부착을 위한 비특이적 제타전위를 형성한다.
용어 "부착" 은 본원에서 표면 기능기 및 항원 사이의 임의의 유형의 상호작용, 특히 공유 또는 비공유 결합, 예컨대, 예를 들어, 공유 결합, 소수성/친수성 상호작용, 반 데르 발스 힘, 이온 결합, 수소 결합, 리간드-수용체 상호작용, 뉴클레오티드의 염기 쌍형성 또는 에피토프 및 항원 결합 부위 사이의 상호작용에 관한 것이다.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 항원은 나노입자에 공유적으로 결합된다. 공유 결합은 직접적으로 또는 간접적으로 일어날 수 있다. 직접적 변이에서, 항원은 입자 위의 화학적 기로 직접적으로 접합되며, 이는 보통 비-위치 특이적으로 일어나고, 이후 식포 내에서의 항원 제시 세포의 유리를 더욱 어렵게 한다. 본 발명의 하나의 구현예에서, 표면 기능기로서 티오에테르, 탄수화물 및/또는 올리고뉴클레오티드가 배제되는 것이 바람직하다. 공유적 연결의 간접적 방법은 링커 또는 태그를 사용하며, 이를 통해 항원은 입자에 위치 특이적으로 결합되고 제어된 방식으로 다시 유리된다. 위치 특이적 접합을 위한 태그는 예를 들어, SNAP 태그, 할로 (halo) 태그, C-말단 LPXTG 태그, 비오틴 수용체 펩티드, PCP 또는 ybbR 태그와 같이 선행기술에서 알려졌고, 그 중에서도 WO 2008/019366 A2 에 기술되어 있고, 따라서 이 문헌은 그 전체가 참조에 의해 본 발명의 공개 내용에 포함된다. 상기 참조는 또한 본 명세서에서 상기 문헌의 모든 추가의 언급에 대해 적용된다.
표면 기능기의 바람직한 구현예에서, 그것은 불안정 링커로, 특히 바람직하게는, 효소적으로 쉽게 접근가능한 펩티드 서열, 디설피드 링커 또는 히드라존 링커로 나타난다. 첫번째 임상 후보에서, 독소루비신이 명목 파단점으로서 산-반응성 히드라존 결합을 통해 중합체에 결합된다 (Angew. Chem. 2006, 118, 1218). 상기 거대분자는 엔도사이토시스에 의해 세포 내로 섭취되는 한편, 세포외 공간 내의 생리적 값 (pH 7.2 - 7.4) 으로부터 엔도솜 내의 pH 6.5 - 6 및 1 차 및 2 차 리소좀 내의 pH 4 로 유의한 pH 의 하락이 발생한다. 세포성 섭취의 결과로서 pH 가 6 미만으로 하락하는 경우, 히드라존 링크가 파괴되고 중합체성 지지체에 의해 활성 화합물이 해리된다. 추가의 본 발명의 목적에 적합하고 본 명세서에서 하기 기술된 절단가능 링커는 당업자에게 알려져 있다.
표면 기능기의 추가의 바람직한 구현예에서, 그것은 알콕시실란으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 여기서 그것은 말단, 반응성 티올기인 것이 특히 바람직하다. 알콕시실란은 항원의 및 또한 다른 기능의 추가의 리간드의 부착 모두를 위해 이용될 수 있고, 이 경우 이 안정적 링커에 의한 후자의 부착이 바람직하다. 본 발명에 따른 나노입자를 위한 적합한 알콕시실란은 당업자에 의해 일상적으로 선택될 수 있다.
본 발명의 또다른 구현예에서, 항원은 나노입자 위에 흡착된다. 상기 흡착은 예를 들어, 한정된 시간 내에 항원을 입자와 혼합함으로써 수행될 수 있고, 그 후 예를 들어 원심분리 또는 여과에 의해 나노입자가 혼합물로부터 분리된다. 상기 충전은 심지어 입자 합성 동안 발생할 수 있다. 물론 본 발명의 목적을 위해 흡착은 적합한 표면 기능기 (제타 전위) 를 또한 요구하며, 이는 매트릭스의 본래적 구성요소일 수 있고, 또는 또다른 방식으로 도입되어야 한다.
선택된 합성 경로에 따라, 표면이 기능화를 수반하지 않는 경우, 이는 항원의 부착 전에 도입된다. 상기 방법 단계 (a) 에 따라 가수분해성 중축합에 의해 나노입자가 생성되는 경우, 표면의 기능화는 단계 (a) 이후 및 단계 (b) 이전에 수행된다. 입자 껍질 위의 많은 실리콘 원자는, 복수의 시판되는 트리알콕시실란 또는 트리클로로실란과 표준 방법에 의해 반응할 수 있는 히드록실 기능기를 수반하고, 이는 입자가 단순한 방식으로 다양한 방법에 의해 기능화될 수 있음을 의미한다 (J. Liq. Chrom. & rel. Technol. 1996, 19, 2723). 나노규모 이산화 규소 입자의 표적 적용 또는 바람직한 특성이 더 큰 화학적 복잡성을 요구하는 경우, 면밀한 다단계 합성이 사용된다.
마지막으로, 항원은 표면 기능기와의 상호작용에 의해 나노입자에 부착된다.
"항원" 은 본원에서 세포성 또는 동물 면역 반응을 야기할 수 있는 구조를 의미한다. 물론 동물 내의 면역 반응은 포유류, 특히 인간을 포함한다. 항원은 바람직하게는 단백질성, 즉 단백질, 폴리펩티드, 펩티드 또는 그의 조각이며, 임의의 바람직한 크기, 기원 및 분자량을 가질 수 있고 글리코실화될 수 있으나, 하나 이상의 항원 결정기 또는 항원 에피토프를 함유한다. 면역계에 의한 인지는 특히 3 개 아미노산의 최소 길이로부터 일어날 수 있다. 단백질 또는 펩티드는 바람직하게는 사이토카인, 수용체, 렉틴, 아비딘, 지질단백질, 당단백질, 올리고펩티드, 펩티드 리간드 및 펩티드 호르몬의 군으로부터 선택된다. 항원은 또한 핵산 자체이거나 핵산에 의해 인코딩될 수 있고, 이는 항원 제시 세포의 코어 내로 수송된 후 단백질성 항원으로 번역되어 MHC 분자에 제시된다. 핵산은 단일 및 이중 가닥 DNA 또는 RNA 및 올리고뉴클레오티드이다. 또한 핵산은 지질, 탄수화물, 단백질 또는 펩티드로 이루어진 제형물 또는 복합체의 구성요소일 수 있다. 또한 항원은 다당류, 중합체, 분자량이 50 내지 1000 Da 인 저분자량 물질, 바이러스, 완전한 원핵 또는 진핵 세포 또는 세포 조각이다.
본 발명의 하나의 구현예에서, 항원은 500 kDa 미만의 분자량을 갖는다. 항원은 바람직하게는 암 항원이다. 이 유형의 암 항원은 예를 들어, WO 2008/019366 A2 에서 개시되어 있다. 특히 바람직한 구현예에서, 암 항원은 뉴욕 식도 1 항원 (NY-ESO-I), MAGE-A1, MAGE-A2, MAGE-A3, MAGE-A4, MAGE-A6, MAGE-A8, MAGE-A10, MAGE-B, MAGE-C1, MAGE-C2, L 항원 (LAGE), SSX2, SSX4, SSX5, PRAME, 멜란-A, 캐스페이즈-8, 타이로시네이즈, MAGF, PSA, CEA, HER2/neu, MUC-1, MART1, BCR-abl, p53, ras, myc, RB-1 및 서바이빈 또는 그의 에피토프를 포함하는 군으로부터 선택된다. 본 발명의 매우 특히 바람직한 구현예에서, 암 항원은 서바이빈 또는 그의 에피토프이다. 상기 암 항원은 WO 2007/039192 A2 에 기술되어 있고, 따라서 이 문헌은 그 전체가 참조에 의해 본 발명의 공개 내용에 포함된다.
본 발명의 또다른 구현예에서, 표면 기능기 및 항원 모두로서 수용체 및/또는 MHC 분자가 배제된다.
나노입자는 다기능화될 수 있고, 이는 본 발명에서 상이한 화학적 기 (표면 기능기) 및/또는 상이한 결합된 분자 (기능기) 를 의미한다. 표면 기능기 및 결합된 기능기 모두가 상이하여, 기능성 분자의 특이적, 독립적 결합이 발생시키는 것이 바람직하다. 기능기는 바람직하게는 항원, 폴리에틸렌 글리콜 (PEG), 표지 및 아주반트의 군으로부터 선택되고, 이 경우 물론 항원은 항상 선택된다. 특히 바람직하게는 항원 및 PEG 및/또는 아주반트, 매우 특히 바람직하게는 항원, PEG 및 아주반트가 존재하고, 이 경우 이들 기능기는 흡착적으로 및/또는 공유적으로 결합될 수 있다.
본 발명에 따른 입자의 구현예에서, 표지는 발광, UV/VIS 색소에 의해, 효소적으로, 전기화학적으로 또는 방사선적으로 탐지된다. 바람직하게는 형광 염료 또는 방사성 표지가 사용된다. 광발광 도는 형광의 경우, 여기는 광자의 흡수에 의해 수행된다. 바람직한 형광단은 비스벤즈이미다졸, 형광물질, 아크리딘 오렌지, Cy5, Cy3 또는 프로피디움 아이오다이드이다. 평가는 시각적으로 또는 적당한 측정 기구를 사용하여, 예를 들어 형광 현미경으로, 또는 유동 세포분석법에 의해, 예를 들어 세포형광측정기 내에서 수행된다. 본 발명의 특히 바람직한 구현예에서, 형광 염료는 3-아미노프로필트리에톡시실란에 결합되고, 이 경우 형광물질 이소티오시아네이트가 매우 특히 바람직한 형광 염료이다.
대안적으로, 탐지는 방사성 동위원소를 사용하여, 바람직하게는 3H, 14C, 32P, 33P, 35S, 99mTc, 111In 또는 125I 를 사용하여, 특히 바람직하게는 99mTc 또는 111In 을 사용하여 수행될 수 있다. 특히, 클릭 화학을 통해 나노입자에 결합되는 1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-N,N',N'',N'''-테트라아세트산 (DOTA) 또는 디에틸렌트리아민펜타아세트산 (DTPA) 의 유도체에게 주사 직전에 특히 바람직한 방사성동위원소가 제공된다. 섬광 계수의 경우, 분자 칵테일은 예를 들어 방사성 γ 방사선에 의해 여기된다. 바닥 상태로 전이하면서 빛으로서 방출된 에너지는 광전자 증폭기에 의해 증폭되고 계수된다.
따라서 본 발명에 따른 나노입자는 또한 진단 도구 (예를 들어 영상화 방법에서) 및/또는 연구 도구로서 중요하고, 이는 표적화 및 활성 화합물 섭취의 가시화를 가능케 한다.
본 발명의 추가의 구현예에서, 항원은 표지와 조합되어 항원으로의 할당이 표지를 통해 입자 단편 내에서 수행될 수 있다. 이는 첫번째 입자 또는 그의 복수에게 첫번째 항원 및 첫번째 표지가 제공되는 한편, 두번째 입자 또는 그의 복수에게 두번째 항원 및 두번째 표지가 제공되는 등을 의미한다 (각각의 경우에 항원 및 표지 모두가 서로 상이함). 따라서 항원 및 표지의 특이적 조합은 독특하고 본원에서 바람직하며, 입자의 상이한 항원과의 혼합 및 표적화 효율 및/또는 면역/보체 활성화의 평행 모니터링을 가능케 한다. 이는 순차적 투여에 비해 진단 시간의 절약을 초래한다. 물론 마찬가지로 입자가 강도가 다른 복수의 항원 및 복수의 표지를 수반하는 것이 가능한데, 이는 특정 항원이 혼합물로부터 선택될 수 있음을 의미한다. 표지는 바람직하게는 형광 염료이며, 이는 특히 실란에 결합된다.
더욱이 본 발명의 나노입자는 예를 들어 TLR 또는 사이토카인과 같은 위험 신호와 항원의 조합으로서 디자인될 수 있다.
본 발명의 추가의 구현예에서, 표면은 다기능기의 교차결합이 배제되는 방식으로 다기능화된다.
항원을 나노입자에 부착하기 위한 표면 기능기와 관련된 본 발명의 상기 교시 및 그의 구현예는, 그것이 적절해 보이는 한, 추가의 기능기의 나노입자에의 부착 및/또는 다기능기에 유효하고 제한없이 적용가능하다.
고도의 복합체 시스템의 구성을 위한 범용 전략은 K. B. Sharpless (Angew. Chem. Int. Ed. 2001, 40, 2004) 에 의해 제시된 클릭 화학의 개념이다. 이는 과학 원리라기보다는 오히려 합성 철학에 속하고, 특히 자연적으로 발생하는 반응의 단순성 및 효율성에 의해 고무된다. 클릭 화학의 주요 예는 Huisgen 방법에 의한 아지드 및 말단 알킨의 1,3-이극성 시클로-첨가임이 밝혀졌다. 일가 구리의 존재 하에, 이들 반응은 급격한 가속도로 일어나고, 또한 부위선택적으로, 매우 높은 수율로 그리고 광범위한 기능기의 허용으로 진행한다. 추가의 장점은 수성 매질 내에서 및 실온에서 합성을 수행하는 가능성에 있고, 이는 관심의 생물분자가 건축 세트 원칙의 유형의 다른 구성 블록에 모듈식으로 및 넓게 적용가능한 방식으로 연결되는 것을 가능케 한다. 그러므로 본 발명의 목적을 위해 상응하게 기능화된 이산화 규소 입자를 클릭 화학을 사용하여, 상기 기능기, 특히 항원에 연결하는 것이 바람직하다.
본 발명은 또한 본 발명에 따른 나노입자를 포함하는 분산물에 관한 것이다. 수득된 나노분산물이 안정하고, 특히 약학적으로 및 물리적으로 안정하도록, 용매에 의해 화학적으로 공격받거나 물리적으로 변형되지 않는 한, 및 반대의 경우도 마찬가지로, 나노입자는 임의의 바람직한 용매 내에 분산된 형태일 수 있다. 분산물은 특히 나노입자가 단순분산 및 비응집된 형태이고 침강하는 경향이 없다는 것이 특성이며, 이는 살균 여과성을 초래한다. 나노입자와 관련된 본 발명의 상기 교시 및 그의 구현예는, 그것이 적절해 보이는 한, 분산물에 유효하고 제한없이 적용가능하다.
또한 본 발명은 본 발명에 따른 나노입자 및 그의 분산물을 포함하는 키트로서 실시될 수 있다. 본 발명의 키트는 본 발명의 나노입자의 취급을 설명하는 서면 지시를 사용자에게 지적하거나 서면 지시를 포함하는 물품을 또한 포함할 수 있다. 나노입자 및/또는 그의 분산물과 관련된 본 발명의 상기 교시 및 구현예는, 그것이 적절해 보이는 한, 키트에 유효하고 제한없이 적용가능하다.
또한 본 발명은 본 발명에 따른 나노입자 또는 그의 분산물을 포함하는 약학적 조성물에 관한 것이다. "약학적 조성물" 은 본원에서 특히 전염성 질환, 패혈 쇼크, 종양, 암, 자가면역 질환, 알레르기 및 만성 또는 급성 염증 반응의 결과로서, 환자 유기체의 전반적 상태 또는 개별적 부분의 상태의 변적 변화를 적어도 일시적으로 보이는 환자의 예방, 치료, 제어 또는 치료후에 이용될 수 있는 임의의 조성물이다. 따라서, 특히, 본 발명에서 약학적 조성물은 백신 및/또는 면역치료제일 수 있다. 약학적 조성물은 예를 들어 약학적으로 허용가능한 염으로서, 예를 들어 펩티드 또는 핵산과 같은 항원을 포함할 수 있다. 이는, 그 중에서도, 예를 들어 인산과 같은 무기산의 염, 또는 유기산의 염일 수 있다.
의학적 효과, 즉, 특히 면역 반응을 보조하기 위해, 약학적 조성물은 본 발명의 하나의 구현예에서 동시 또는 연속적 투여가 고려할 수 있는 추가의 활성 화합물을 또한 포함할 수 있다. 본 발명에 따른 약학적 조성물의 치료적 효과는 예를 들어, 더 양호하게 작용하는 특정 항종양 약제를 통해 바람직한 부작용으로서 보체계의 활성화를 통해 또는 투여량 감소에 의한 이들 약물의 부작용의 수의 감소를 통해 발생한다.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 본 발명에 따른 약학적 조성물은 사이토카인, 케모카인, 세포자멸촉진제, 인터페론, 방사성 화합물 또는 그의 조합을 포함하는 군으로부터 선택된 화학요법제와 조합된다. 화학요법제가 핵산 및/또는 단백질 물질대사, 세포 분열, DNA 복제, 퓨린, 피리미딘 및/또는 아미노산 생합성, 유전자 발현, mRNA 가공, 단백질 합성, 세포자멸 또는 그의 조합을 변형, 특히 감소시키는 것이 바람직하다.
내인성 방어를 자극하거나 면역계를 강화하기 위해, 본 발명의 추가의 구현예에서 본 약학적 조성물과 함께 면역자극제 예를 들어, IFN-α, IFN-β 또는 IFN-γ 와 같은 인터페론, 예를 들어, IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10 또는 IL-12 와 같은 인터루킨, 예를 들어, TNF-α 또는 TNF-β 와 같은 종양 괴사 인자, 에리트로포이에틴, M-CSF, G-CSF, GM-CSF, CD2 또는 ICAM 을 투여하는 것이 또한 가능하다. 상기 방식으로, 예를 들어, T 림프구, B 림프구, 단핵구, 대식세포, 호중성 세포, 호산성 세포, 거대핵세포 및/또는 과립백혈구의 증식, 발달, 분화 또는 활성화가 자극될 수 있다.
본 발명에 따른 면역성 나노입자의 보호적 또는 치료적 활동을 증가시키기 위해, 입자 또는 그로부터 제조된 모든 약학적 조성물에 약학적으로 허용되는 아주반트가 첨가될 수 있다. 본 발명의 목적을 위해, 본 발명에 따른 항원에 의한 효과를 촉진, 향상 또는 변경하는 임의의 물질은 "아주반트" 이다. 알려진 아주반트는 예를 들어, 알루미늄 히드록시드 또는 알루미늄 포스페이트와 같은 알루미늄 화합물, 예를 들어 QS 21, 무라밀 디펩티드 또는 무라밀 트리펩티드와 같은 사포닌, 예를 들어 감마-인터페론 또는 TNF 와 같은 단백질, MF 59, 포스파티딜콜린, 스쿠알렌 또는 폴리올이다. 완전 프로인트 아주반트 내에 달걀 알부민의 동시적용은 마찬가지로 증가된 세포 매개 면역을 야기하고 따라서 형성된 중화 항체의 작용을 보조할 수 있다. 게다가, 면역자극 특성을 갖거나, 예를 들어 사이토카인과 같이 아주반트 효과를 갖는 단백질을 인코딩하는 DNA 가 동시에 또는 구조물 내에 적용될 수 있다. 그러나, 본 발명에 따른 이산화 규소-기재 나노입자의 고유의 아주반트 효과 때문에, 본 경우에는 추가의 아주반트를 사용하지 않는 것이 바람직하다. 특정 적용에서 고유의 아주반트 효과가 부적당한 것으로 밝혀진 경우에는 물론, 나노입자에 하나 이상의 아주반트, 바람직하게는 오직 하나의 아주반트를 추가로 부착하는 것이 가능하다. 부착의 유형은 흡착적이거나 공유 결합으로 이루어질 수 있다. 흡착적으로 결합되는 본 발명의 바람직한 아주반트는 폴록사머 및 TLR 을 포함한다. 본 발명의 바람직한 공유 결합된 아주반트는 단쇄 펩티드, 특히 바람직하게는 터프트신 또는 난알부민을 포함한다.
세포 또는 유기체 내로 약학적 조성물의 도입은, 본 발명에 따라 항원 제시 세포가 조성물 내에 존재하는 나노입자 또는 항원과 접촉되고 식세포작용에 의해 세포 내로 섭취된 결과 면역 반응이 유도될 수 있게 하는 임의의 방식으로 수행될 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물은 경구적으로, 경피적으로, 경점막적으로, 경요도적으로, 질로, 직장으로, 폐로, 장관으로 및/또는 비경구적으로 투여될 수 있다. 약학적 조성물의 비경구적 투여가 바람직하다. 중합체성 아주반트에 대해 관찰된 바와 같이, 본 경우에 이산화 규소는 아주반트로서의 그의 특성으로 지질 균형에 대해 유해 효과를 갖지 않음이 밝혀졌고, 이는 이 유형의 적용에 대해 결과적으로 입증되지 않았다. 신체 내로의 직접적 주사가 특히 바람직하다. 선택되는 투여의 유형은 지시, 투여될 투여량, 개체 특이적 파라미터 등에 따라 다르다. 특히, 다양한 유형의 투여는 부작용을 최소화하고 활성 화합물 투여량을 감소시키는 위치 특이적 요법을 용이하게 한다. 매우 특히 바람직한 주사는 진피내, 피하, 근육내 또는 정맥내 주사이다. 투여는 예를 들어 소위 예방접종 총의 도움에 의해 또는 주사기에 의해 수행될 수 있다. 또한 물질을 에어로졸로서 제조하는 것이 가능하며, 이는 유기체, 바람직하게는 인간 환자에 의해 흡입된다.
약학적 조성물의 투여 형태는, 통상적으로 이용되는 종래의 고체 또는 액체 운반체 및/또는 희석제 및 보조제를 사용하여 그 자체로 알려진 방식으로 그리고 접합한 투여량으로 바람직한 유형의 투여에 따라 제조된다. 따라서, 당업자에게 알려진 약학적으로 허용가능한 부형제는 기본적으로 본 발명에 따른 약학적 조성물의 일부를 형성할 수 있고, 이 경우 단일 투여물을 제조하기 위해 활성 화합물과 조합되는 부형제 물질의 양은 치료될 개인 및 투여의 유형에 따라 다르다. 이들 약학적으로 허용되는 첨가제는 염, 완충제, 충전제, 안정화제, 착화제, 항산화제, 용매, 결합제, 윤활제, 정제 코팅, 향미제, 염료, 보존제, 조절제 등을 포함한다. 이 유형의 부형제의 예는 물, 식물성 기름, 벤질 알콜, 알킬렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 글리세롤 트리아세테이트, 젤라틴, 예를 들어 락토스 또는 전분과 같은 탄수화물, 마그네슘 스테아레이트, 탈크 및 바셀린이다.
약학적 제형물은 정제, 필름 정제, 당제, 함당정제, 캡슐, 알약, 분말, 과립, 시럽, 쥬스, 점적약제, 용액, 분산물, 현탁액, 좌약, 에멀전, 임플란트, 크림, 겔, 연고, 페이스트, 로션, 세럼, 오일, 분무, 에어로졸, 접착제, 고약 또는 붕대의 형태일 수 있고, 이 경우 분산물이 바람직하다.
제조되는 경구 투여 형태는 바람직하게는 데포 형태로서를 포함하는 정제, 필름 정제, 당제, 함당정제, 캡슐, 알약, 분말, 과립, 시럽, 쥬스, 점적약제, 용액, 분산물 또는 현탁액이다. 정제로서의 약제 형태는 예를 들어 활성 물질을 알려진 덱스트로스, 당, 소르비톨, 만니톨, 폴리비닐피롤리돈과 같은 보조제, 옥수수 전분 또는 알긴산과 같은 붕괴제, 전분 또는 젤라틴과 같은 결합제, 마그네슘 스테아레이트 또는 탈크과 같은 윤활제, 및/또는 카르복시폴리메틸렌, 카르복시메틸셀룰로스, 셀룰로스 아세테이트 프탈레이트 또는 폴리비닐 아세테이트와 같은 데포 효과를 달성할 수 있는 물질과 혼합함으로써 수득될 수 있다. 또한 정제는 복수의 층으로 이루어질 수 있다. 마찬가지로 당제는 정제와 유사하게 제조된 코어를 당제 코팅에서 보통 사용되는 물질, 예를 들어 폴리비닐피롤리돈 또는 셸락, 아라비아 검, 탈크, 티타늄 디옥시드 또는 당으로 코팅함으로써 제조될 수 있다. 이 경우 당제 껍질은 또한 복수의 층으로 이루어질 수 있고, 이 경우 예를 들어 상기 보조제가 사용될 수 있다. 캡슐은 활성 화합물을 락토스 또는 소르비톨과 같은 운반체와 혼합한 후, 이를 캡슐 내로 도입함으로써 제조될 수 있다. 약학적 조성물의 용액 또는 분산물은 맛을 개선하기 위해, 예를 들어 사카린, 시클라메이트 또는 당 유형과 같은 물질, 및/또는 예를 들어 바닐린 또는 오렌지 추출물과 같은 향과 혼합될 수 있다. 게다가, 그들은 예를 들어, 나트륨 카르복시메틸셀룰로스와 같은 현탁 보조제, 또는 예를 들어, p-히드록시벤조산, 페놀, 벤질 알콜, m-크레솔, 메틸파라벤, 프로필파라벤, 벤잘코늄 클로리드 또는 벤제토늄 클로리드와 같은 보존제와 혼합될 수 있다.
게다가, 예를 들어, 좌약, 현탁액, 에멀전, 임플란트 또는 용액과 같은 비경구적 약제 형태, 바람직하게는 유성 또는 수성 용액이 고려되어야 한다. 비경구적 투여를 위해, 본 발명의 면역성 구성물은 예를 들어 중성 지방 또는 폴리에틸렌 글리콜 또는 그의 유도체와 같이 생리적으로 허용되는 희석제 내에 용해되거나 현탁될 수 있다. 사용되는 바람직한 용매는 종종 용해화제, 표면 활성제, 현탁제 또는 유화제를 첨가하거나 첨가하지 않은 기름이다. 사용되는 기름의 예는 올리브 기름, 땅콩 기름, 면실유, 피마자유 및 참기름이다.
약학적 조성물의 국소적 적용을 위해, 후자는 예를 들어 미세결정 셀룰로스와 같은 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 운반제, 및 임의로, 예를 들어 보습제와 같은 추가의 보조제와 함께 종래의 방식으로 제형화되어, 예를 들어 크림, 겔, 연고, 페이스트, 분말 또는 에멀전과 같이 피부에 적용될 수 있는 고체 제형물을 제공하거나, 예를 들어 용액, 현탁액, 로션, 세럼, 오일, 분무 또는 에어로졸과 같이 피부에 적용될 수 있는 액체 제형물을 제공한다. 예를 들어, 에탄올 또는 이소프로판올, 아세톤, DMF, 디메틸아세타미드, 1,2-프로판디올 또는 그들 상호간 및/또는 물과의 혼합물과 같은 알콜 내의 용액이 예이다. 또한, 피부 내로의 최적의 수송을 보장하는 리포솜이 약학적 조성물을 위한 담체 시스템으로서 기능할 할 수 있다. 적합한 국소적 제제는 또한, 운반체와 함께 나노입자를 포함하는, 예를 들어 용액, 현탁액, 크림, 연고, 분말, 겔, 에멀전, 접착제, 고약 또는 붕대와 같은 경피 시스템이다. 피부를 통한 나노입자의 통과를 보조하기 위해, 유용한 운반체는 흡수성의, 약리적으로 적합한 용매를 포함할 수 있다. 피부 내로의 양호한 투과를 보장하는 용매는 예를 들어 알콜 페닐-1-에탄올, 글리세롤, 에탄올 또는 그의 혼합물이다.
약학적 조성물은 바람직하게는 주사 용액의 형태이다. 주사 용액의 제조를 위해, 예를 들어 증류수 또는 생리 식염수와 같은 수성 매질이 사용될 수 있고, 이 경우 후자는 산성 및 염기성 부가 염을 포함한다. 또한 약학적 조성물은 예를 들어 동결건조된 상태의 고체 조성물의 형태일 수 있고, 그 후 사용 전에 예를 들어 증류수와 같은 용해화제의 첨가에 의해 제조될 수 있다. 당업자는 동결건조물의 제조의 기본 원리를 잘 안다.
제형물 내의 활성 나노입자의 농도는 0.1 내지 100 중량 백분율 사이에서 다양할 수 있다. 약학적 조성물이 약학적으로 허용되는 보조제와 함께 활성 화합물로서 유효량의 나노입자 및/또는 그의 분산물을 포함하는 것이 중요하다. 용어 "유효량" 또는 "유효 투여량" 은 본원에서 호환적으로 사용되며, 질환 또는 병적 변화에 대해 예방적으로 또는 치료적으로 적절한 작용을 하는 약학적 활성 화합물의 양을 의미한다. "예방적 작용" 은 개체 대표의 진입 후 그의 확산이 크게 감소되거나 심지어 그들이 완전히 비활성화되는 방식으로 병원체에 의한 감염 또는 질환의 발생을 방지한다. "치료적으로 적절한 작용" 은 하나 이상의 질환 증상으로부터 벗어나게 하거나, 질환 또는 병적 변화와 연관되거나 우연히 수반되는 하나 이상의 생리적 또는 생화학적 파라미터의 정상적 상태로의 부분적 또는 완전한 반전을 초래한다. 본 발명에 따른 나노입자의 투여를 위한 각각의 투여량 또는 투여 범위는 면역 반응의 유도의 바람직한 예방적 또는 치료적 효과를 달성할 정도로 충분히 크다. 일반적으로, 투여량은 환자의 연령, 체질 및 성별에 따라 다를 것이며, 질환의 중증도가 고려될 것이다. 물론 투여의 특정 투여량, 빈도 및 지속시간은 또한 예를 들어 나노입자의 표적화 및 결합 능력, 치료되는 개체의 영양 습관, 투여의 유형, 배출 속도 및 다른 약제와의 조합과 같은 다수의 인자에 따라 다르다. 개체의 투여량은 주요 질환에 대해 및 또한 임의의 합병증의 발생에 대해 조정될 수 있다. 정확한 투여량은 알려진 수단 및 방법을 사용하여 당업자에 의해 확립될 수 있다. 본 발명의 이 교시는, 그것이 적절해 보이는 한, 나노 입자 및/또는 그의 분산물을 포함하는 약학적 조성물에 유효하고 제한없이 적용가능하다.
본 발명의 하나의 구현예에서, 나노입자는 1 일 당 및 체중 1 킬로그램 당 0.01 ㎎ 내지 1 g 의 용량으로 투여된다. 그러나, 바람직하게는 1 일 당 및 체중 1 킬로그램 당 20 내지 60 ㎎ 의 용량이 투여된다. 1 일 투여량은 바람직하게는 0.02 내지 10 ㎎/체중㎏ 이다.
본 발명에 따라, 본 발명의 나노입자 및/또는 나노입자 분산물은 전염성 질환, 패혈 쇼크, 종양, 암, 자가면역 질환, 알레르기 및 만성 또는 급성 염증 반응의 군으로부터 선택된 질환의 예방적 또는 치료적 처치에 적합하다. 물론 약학적 조성물의 호스트는 본 발명의 범주 내에 또한 포함된다.
바람직한 구현예에서, 치료되거나, 예방적으로 방지되거나 그의 재발이 방지되는 암 또는 종양 질환은 귀-코-목구멍 부위, 종격 강, 위장관 (결장 암종, 위 암종, 결장 암, 소장의 암, 췌장 암종, 간 암종을 포함함), 비뇨생식기계 (신장 세포 암종을 포함함), 여성생식계 (난소 암종을 포함함) 및 내분기계의 및 폐 (폐암을 포함함), 유방 (유방 암종을 포함함) 및 피부의 암 또는 종양 질환, 및 골 및 연부 육종, 중피종, 흑색종, 중추신경계의 종양, 소아 암 질환 또는 종양 질환, 림프종, 백혈병, 종양부수 증후군, 알려진 주요 종양 없는 전이 (CUP 증후군), 복막 암종증, 면역억제 관련 악성종양, 다발성 골수종 및 종양 전이의 군으로부터 선택된다.
본 발명과 관련된 자가면역 질환은 바람직하게는 관절염, 자가면역 감염, 만성 위염, 신경피부염, 건선, 관절증, 류마티스 질환, 류마티스 관절염, 소아 특발성 관절염, 크론병, 결장의 화농성 염증, 당뇨병, 염증성 장질환, 다발성 경화증 및/또는 알레르기성 염증을 포함하는 군으로부터 선택된다.
본 발명에 따라, 상기 나노입자는 또한 포유류에게 병원성일 수 있는 미생물에 의해 야기되는 질환의 예방 또는 요법에 이용된다. 이는 본 발명에 따른 작용이, 약화된 면역계를 갖는 숙주의 경우 및/또는 숙주 유기체에서 콜로니를 형성하고 있는 미생물 균주의 자연적 평형의 교란을 통해 그 자신의 유익을 위해 건강을 손상하는 과정을 수행할 수 있는 미생물에 대항하여, 또는 본질적으로 병원성인 것에 대항하여 지시된다는 것을 의미한다. 본 발명에 바람직한 미생물은 바이러스, 박테리아, 곰팡이 및/또는 단세포 동물이다. 박테리아가 특히 바람직하며, 그람 양성 및 그람 음성 박테리아가 성장에 영향을 받는다. 상기 나노입자에 의해 치료될 수 있는 질환의 예는 상기 미생물에 의해 야기된 간염 B, 간염 C, HIV, 포진, 결핵, 나병 또는 말라리아이다.
항체 중화 및/또는 T-세포 증식의 유도는 사실상 언제라도 유리할 수 있음이 당업자에게 알려져 있다. 본 발명의 경우에, 나노입자 및 그의 분산물은 주로 면역요법에 이용되며, 이는 본 발명에서 예방접종이 바람직하게는 면역요법에 반응하는 질환의 진단 및/또는 발생 이후 본 발명에 따른 약학적 조성물의 투여임을 의미한다. 예방접종은 바람직하게는 질환의 진단 또는 발생 후 단시간에 수행되어야 하며, 또한 다수의 주사에 의해 유기체의 초기 증식성 면역 반응을 향상시키기 위해 요법으로서 여러번 투여될 수 있다. 따라서, 모니터링은 또한 예를 들어 질환을 완전히 제거하기 위해, 나노입자가 특정 간격으로 투여되는 경우 치료적 처치의 유형을 의미한다. 본 발명의 바람직한 구현예에서, 나노입자 및/또는 그의 분산물은 암 및/또는 종양의 요법을 위해, 특히 바람직하게는 암 요법을 위해 사용된다.
물론 마찬가지로 유리하게는 유기체 내의 예방적 투여 후 활성 예방접종 보호가 발달하는 것이 가능하다. 예방적 면역요법은 예를 들어 가족력, 유전자 결함 또는 최근 겪은 질환과 같은 상기 질환의 발생에 개인이 취약한 경우에 특히 권할만하다.
따라서 본 발명은 또한 면역예방 또는 면역요법을 위한 본 발명에 따른 나노입자 및/또는 본 발명에 따른 분산물의 용도에 관한 것이다. 또한 본 발명은 면역예방 또는 면역요법용 백신의 제조를 위한 유효량의 본 발명에 따른 나노입자 및/또는 본 발명에 따른 분산물의 용도에 관한 것이다. 상기 주제 모두에 있어서, 치료되는 질환은 전염성 질환, 패혈 쇼크, 종양, 암, 자가면역 질환, 알레르기 및 만성 또는 급성 염증 반응을 포함하는 군으로부터 선택된다. 특히 백신은 하나 이상의 추가의 활성 화합물과 임의로 조합된, 하나 이상의 고체, 액체 및/또는 반액체 운반체 또는 보조제와 함께 적합한 투여 형태로 활성 화합물을 전환함으로써 비화학적 방법에 의해 제조된다. 본 발명의 상기 교시 및 그의 구현예는, 그것이 적절해 보이는 한, 나노입자, 분산물 및 그의 의료적 용도에 유효하고 제한없이 적용가능하다.
본 발명의 추가의 구현예는 항원을 항원 제시 세포로 표적화하기 위한 및 임의로 면역계의 활성화를 위한, 바람직하게는 보체계의 활성화를 위한 본 발명에 따른 나노입자 및/또는 그의 분산물의 용도에 관한 것이다. 표적화는 바람직하게는 항원 제시 세포를 포함하는 세포, 세포 배양물, 조직 또는 기관에 항원을 수반하는 나노입자를 투여함으로써 생체 외에서 또는 시험관 내에서 수행된다. 생체 외에서의 사용은 특히 전염성 질환, 패혈 쇼크, 종양, 암, 자가면역 질환, 알레르기 및 만성 또는 급성 염증 반응의 군으로부터 선택된 질환에 의해 영향받은 동물 유기체로부터 유래된 동물 세포의 경우에 사용된다. 생체 외에서 치료된 세포는 차후의 조사를 위해 배양액 내에 계속 보관되거나 숙주 동물 또는 또다른 동물일 수 있는 동물 내로 전달될 수 있다. 본 발명에 따른 생체 외 표적화는 입자 크기, 항원, 부착 및 다기능화에 대한 나노입자의 특이적 구조를 시험하여, 이들 생체 외 데이타의 평가에 따라 미리 생체내 투여량을 조정할 수 있도록 하기 위해 특히 유리하다. 결과적으로, 후천 면역 반응 형태의 치료적 효과가 유의하게 증가된다. 나노입자에 노출되었던 항원 제시 세포에 의해 직접적으로 신체 밖에서 환자의 T-세포를 자극한 후 T-세포를 이식하거나 연구 목적으로 T-세포를 이용하는 것이 가능하다.
본 발명에 따른 용도의 바람직한 구현예에서, 항원은 수지상 세포로 인도된다. 이 용도의 특히 바람직한 구현예에서, 수지상 세포는 림프절 내에 위치한다. 물론 마지막으로 언급한 구현예는 하나 이상의 조직 또는 기관, 그러나 최상의 경우에는 완전한 동물 유기체를 요구한다. 마찬가지로 이 전제조건은 면역 또는 특히 보체 활성화를 위해 충족되어야 한다.
따라서 나노입자는 알려진 경로를 통해, 동물, 특히 포유류, 특히 바람직하게는 인간에게 직접 투여함으로써 생체 내에서 사용될 수 있다. 게다가 나노입자는 생체 외에서 이용될 수 있고, 이 경우 먼저 항원 제시 세포가 동물로부터 분리된 후, 세포에 의해 나노입자가 섭취되는 방식으로 본 발명에 따른 나노입자에 의해 생체 외에서 치료된다. 이 방식으로 치료된 항원 제시 세포는 신체로 복귀되고, 그 결과 유기체의 T-세포가 자극된다.
따라서, 본 발명은 또한 하기 단계를 포함하는, 항원 제시 세포로 항원을 표적화하는 방법에 관한 것이다:
(a) 하나 이상의 항원이 부착된 표면 기능기를 갖는 순수한 이산화 규소를 본질적으로 포함하는 나노입자를 제공하는 단계,
(b) 세포 배양물, 조직, 기관 또는 동물 내에 존재하는 항원 제시 세포에 나노입자를 투여하는 단계,
(c) 나노입자의 크기를 통해 표적화 효율을 조정함으로써 (이들은 적어도 부분적으로 반비례함) 사이질 유체를 통해 항원 제시 세포로 항원을 표적화하는 단계.
본 발명에 따른 방법의 단계 (a) 에서, 나노입자는 바람직하게는 하기 단계에 의해 제공된다:
(a') 물, 하나 이상의 용해화제 및 하나 이상의 아민 또는 암모니아를 포함하는 매질 내에서 테트라알콕시실란 및/또는 오르가노트리알콕시실란을 가수분해성 중축합하는 단계로서, 여기서 첫째로 제 1 입자의 졸이 생성되고, 수득된 나노입자가 그 후, 반응의 정도에 따라 제어되는 식의 해당 실란의 연속적 미터링-인에 의해 추가의 핵형성이 방지되는 방식으로 바람직한 입자 크기로 되는 단계, 및
(a'') 나노입자의 표면 기능기에 하나 이상의 항원을 부착하는 단계, 및 임의로
(a''') 나노입자를 분산시키는 단계.
본 발명에 따른 방법의 단계 (b) 에서, 나노입자는 바람직하게는 동물, 특히 바람직하게는 포유류, 매우 특히 바람직하게는 인간에게 투여된다. 투여는 특히 비경구, 특히 바람직하게는 진피내 또는 피하 수행된다.
단계 (c) 에서, 예상외로 이산화 규소 입자의 표적화가 나노입자의 크기에 의해 영향을 받을 수 있음이 밝혀졌다. 약 150 ㎚ 의 입자 크기가 표적화가 여전히 관찰되는 상한을 나타내지만, 표적화의 효율은 입자 크기가 작을수록 증가된다. 입자의 크기 범위는 바람직하게는 0 ㎚ 초과 및 150 ㎚ 미만, 특히 바람직하게는 5 내지 50 ㎚, 매우 특히 바람직하게는 10 내지 30 ㎚, 가장 바람직하게는 13 내지 29 ㎚ 이다.
본 발명의 하나의 구현예에서, 나노입자의 표적화 효율 및 크기는 범위 전체에서 반비례한다. 효율은 선형 방식으로 또는 비선형 방식으로, 바람직하게는 비선형 방식으로 증가될 수 있다.
본 발명의 또다른 구현예에서, 크기 범위 전체에서 표적화 효율 및 입자 크기 사이의 반비례가 존재하지 않는 대신, 본 발명에 따른 상관관계가 최소 입자 크기 및 따라서 크기 범위의 종점에서 관찰되지 않는 표적화 효율에 대한 최대 값에 접근할 수 있다. 본 발명에 따른 방법의 상기 구현예에서, 입자 크기 (가로 좌표) 에 대한 표적화 효율 (세로 좌표) 의 의존성은 바람직하게는 2 이상의 자연, 짝수 지수의 지수 함수에 의해 기술된다 (이의 포물선은 바닥에서 열려 있어서, 꼭지점이 최대 효율을 나타냄). 이차 함수가 특히 바람직하다. 즉, 이는 반비례가 상기 0 내지 150 ㎚ 의 입자 크기 범위에서 꼭지점 (변곡점) 으로 관찰됨을 의미한다.
상기 방법에 의해, 부분적 표적화가 특이적으로 조정되거나 표적화의 최대화가 달성될 수 있다. 본 발명의 하나의 구현예에서, 림프절 내의 항원 제시 세포의 50 % 초과, 바람직하게는 70 % 초과, 특히 바람직하게는 85 % 초과, 매우 특히 바람직하게는 95 % 초과가 표적화된다. 이 목적을 위해, 크기가 5 내지 50 ㎚ 인 나노입자를 이용하는 것이 바람직하다. 입자 크기는 적어도 이산화 규소 매트릭스, 바람직하게는 전체 나노입자를 포함한다.
본 발명에 따른 방법의 추가의 구현예에서, 단계 (c) 이후 하기 추가의 단계가 수행된다:
(d) 항원 제시 세포 내로 나노입자가 섭취되는 단계, 및 임의로
(e) 엔도솜 내에서 항원이 유리되는 단계.
단계 (c) 이후 단계 (d) 및 (e) 모두가 수행되는 것이 바람직하다. 엔도사이토시스 후 미립자성 결합 매트릭스에 의한 항원 유리의 동태는 단계 (e) 에서 항원이 소위 절단가능 링커를 통해 운반체에 공유결합됨으로써 제어될 수 있다. 예를 들어, pH-감수성 결합, 효소 경계면 (예를 들어 프로테아제-감수성 링커) 및/또는 환원적으로 또는 산화적으로 절단가능한 링커가 표면 기능기로서 혼입될 수 있다. 본 발명의 바람직한 pH-감수성 결합은 특정 에스테르, 디설피드 가교, 히드라존 링커, 무수물 결합, 자가-절단성 인테인 서열, pH-감수성 착화제 또는, 예를 들어 폴리에틸렌 옥시드-변형된 폴리-β-아미노 에스테르와 같은 중합체에 의해 달성된다. 표면 기능기로서 불안정 링커를 통한 항원의 공유 결합은 단계 (e) 에 본질적이며, 이 경우 효소적으로 쉽게 접근가능한 펩티드 서열, 디설피드 링커 또는 히드라존 링커가 바람직하다. 게다가 항원이 초기 엔도솜 내에서 유리되는 것이 바람직하다.
나노입자, 그의 분산물, 약학적 조성물 및 용도에 관한 상기 본 발명의 교시 및 그의 구현예는, 그것이 적절해 보이는 한, 항원을 항원 제시 세포로 표적화하는 방법에 유효하고 제한없이 적용가능하다.
또한 본 발명은 첫번째 단계 (a) 에서 상기 본 발명에 따른 방법에 따라 나노입자가 항원 제시 세포로 인도되고, 두번째 단계 (b) 에서 면역계가 활성화되는, 포유류의 면역계의 활성화 방법에 관한 것이다. 바람직하게는 보체계가 활성화된다. 단계 (b) 에서, 활성화 효율은 특히, 입자 크기, 표면 기능기, 표면 충전 및 리간드 (예를 들어 항원, PEG, 아주반트) 의 유형, 비, 양 및 밀도를 포함하는 입자 특성을 통해 조정될 수 있다. 단계 (b) 에서, 입자 크기를 통해 활성화 효율을 조정하는 것이 바람직하다 (이들은 적어도 부분적으로 반례함). 활성화 효율은 특히 입자 크기가 작을수록 증가한다. 항원을 항원 제시 세포로 표적화하는 방법과 관련된 상기 본 발명의 교시 및 그의 구현예는, 그것이 적절해 보이는 한, 포유류의 면역 또는 보체계의 활성화를 위한 방법에 유효하고 제한없이 적용가능하다.
본 발명은 또한 유효량의 본 발명에 따른 나노입자 및/또는 이들 나노입자를 포함하는 분산물이 그러한 치료를 필료로 하는 포유류에게 투여되는 예방접종 방법을 교시한다. 치료되는 포유류는 바람직하게는 인간이다. 상기 본 발명의 교시 및 그의 구현예는, 그것이 적절해 보이는 한, 상기 치료 방법에 유효하고 제한없이 적용가능하다.
본 발명은 또한 분산물 및/또는 약학적 조성물의 형태일 수 있는 본 발명에 따른 나노입자가 포유류에게 투여되고, T-세포 및/또는 수지상 세포의 증식 및/또는 중화 항체의 형성이 유도되는 것을 특징으로 하는, T-세포 반응, 항원 반응 및/또는 수지상 세포 성숙의 유도 방법을 교시한다. 본 발명에서 바람직한 유기체는 인간 또는 동물이다. 본 발명에 따른 나노입자의 개시는 당업자가 이를 T-세포 및/또는 중화 항체의 유도를 위해 사용할 수 있게 한다.
본 발명에 따른 약학적 조성물로서도 물론 사용될 수 있는 본 발명에 따른 나노입자를 다양한 투여량으로 유기체, 특히 인간 환자에게 투여할 수 있음이 본원에서 당업자에게 알려진다. 본원에서 투여는 가능한 가장 많은 양의 T-세포 및/또는 중화 항체가 생성되도록 실시되어야 한다. 투여의 농도 및 유형은 당업자에 의해 일상적 실험에 의해 결정될 수 있다.
나노입자 또는 약학적 조성물에 접촉시키는 것은 예방적으로 또는 치료적으로 수행될 수 있다. 예를 들어 바이러스성 전염성 질환에 대항하는 활성 예방접종 보호의 발달을 위한 예방적 예방접종의 경우에, 예를 들어 상처 내로, 개별 바이러스의 진입 후 그의 추가의 증식이 크게 감소되거나, 진입한 바이러스가 사실상 완전히 사멸되는 방식으로, 바이러스에 의한 감염은 적어도 방지되어야 한다. 면역 반응의 치료적 유도의 경우에, 환자의 감염은 이미 존재하며, 신체 내에 이미 존재하는 바이러스를 사멸하거나 그의 증식을 억제하기 위해 T-세포 및/또는 중화 항체의 유도가 수행된다.
본 발명은 또한 포유류에게 본 발명에 따른 나노입자를 투여함으로써 유도된 T-세포 및/또는 항체가 분리되고 추가의 포유류에게 투여되는 것을 특징으로 하는, 유기체의 수동 면역화 방법에 관한 것이다. 본 발명에서 "추가의 포유류" 는 동일한 종 또는 상이한 종의 유기체 모두를 의미하지만, 상기 T-세포 및/또는 항체를 유도한 유기체와는 동일하지 않다. 그 중에서도 해당하는 인간화 이후 이용되는 모노클론 항체를 분리하는 것이 또한 가능하다. 마찬가지로 항원-생산 세포는 본 발명에 따른 나노입자로 인도되는 중화 항체를 생산하는 예방접종되거나 감염된 개체로부터 분리될 수 있고, 수동 면역화의 경우 모노클론 항체의 형태로 투여된다.
수동 면역화에서, 환자의 신체 내에서 예를 들어 특정 바이러스에 대한 선천성 면역 반응이 본질적으로 일어나지 않는 대신, T-세포 및/또는 항체가 예를 들어 치유 세럼의 형태로 환자 내로 도입된다. 능동 면역화와 대조적으로, 수동 면역화는 이미 발생한 감염을 가능한 빨리 치유하거나, 대안적으로는 바이러스에 의한 감염에 대한 보호를 즉시 제공하는 일을 한다. 수동 면역화를 위한 다양한 예방접종 방법이 예를 들어 간염 A, 간염 B 또는 FSME 에 대한 수동 면역화로부터 당업자에게 알려져 있다. 상기 유형의 예방접종 방법은 일상적 실험에 의해 예를 들어, HIV, 고양이 백혈병 바이러스 등과 같은 특이적 레트로바이러스에 적응될 수 있다. 수동 면역화에 사용되는 항체는 바람직하게는 모노클론 항체이다. 이는 특히 병합 요법의 구성요소로서 사용된다.
모든 알려진 및 추가의 구성요소 또는 성분은 당업자에게 잘 알려져 있고, 일상적 실험에서 본 발명에 따른 교시에 대해 구체적 개량을 수행할 수 있다.
본 발명의 테두리 안에서, 따라서 예방접종 후 효과적인 세포성 면역 반응을 촉진하는 초소형 이산화 규소 항원 접합체가 최초로 제공된다. 상기 접합체는 항원 제시 세포로의 특이적 표적화 및 또한 동시적 보체 활성화가 모두 가능한 이중 작용 메카니즘을 어드레싱한다. 50 ㎚ 미만의 나노입자의 표적화 효율은 선행 기술의 대형 나노입자에 비해 몇 배 더 높다. 림프관 내로의 효율적 전달의 결과, 사이질 흐름의 생물리적 메카니즘이 림프절의 수지상 세포의 표적화를 위해 유리하게 이용될 수 있다. 상기 새로운 수송 경로에서 나노입자의 전도는 수동 표적화를 가능케 하고, 그 결과 복잡한 세포-특이적 표적화가 불필요하지만, 그럼에도 불구하고 림프절 내에 수지상 세포가 다수 존재하기 때문에 특히 다수의 세포가 도달된다. 상기 특성은 림프절의 수지상 세포의 신뢰할 만한 인지 (말초 수지상 세포의 표적화를 포함하는, 교차 반응성의 부재를 포함함) 및 상기 항원 제시 세포 내로의 재현가능하고 신뢰할 만하고 완전한 식세포작용에 대한 기초를 형성한다. 그의 고유 아주반트 효과가 면역계 및 특히 보체계를 활성화시키는, 이산화 규소에 기초한 나노입자의 두번째 유리한 특성이 표적에서 효과를 발휘한다. 활성화의 강도는 선택된 항원과 독립적인 한편, 입자 크기를 통해 변경될 수 있다. 면역 또는 보체계의 활성화를 위한 나노입자 표면의 변형(예를 들어 폴리히드록실화) 및/또는 부가적 보조제의 부재는 의미있는 단순화 및 비용 절감을 나타낸다.
본 발명에 따른 나노입자는 특히 예방적 또는 치료적 예방접종을 위해 사용될 수 있는 무기, 비활성 및 생체적합성 매트릭스 물질인 것을 특징으로 한다. 본원에서 제시된 이산화 규소/항원 접합체를 포함하는 나노입자의 개발은 마찬가지로 세포독성 활성 화합물의 치료 지수를 개선하기 위한 매우 유망한 전략이다. 특히, 구성요소의 불안정한 연결은 신체의 특정 구획 내에서의 항원성 치료제의 유리를 보장하며, 이는 가능한 부작용의 감소가 기대될 수 있음을 의미한다. 나노입자는 또한 특히 그의 작은 크기 때문에 다루기 쉽고 높은 약학적 안정성에 의해 구별된다. 단순 분산 크기의 입자를 포함하는 초미세 나노분산물은 유리하게는 살균 여과성에 적합하다.
물론 본 발명은 본원에서 기술된 구체적 방법, 입자 및 조건에 제한되지 않는데, 이는 그러한 것들이 다를 수 있기 때문이다. 또한 물론 본원에서 사용된 용어는 오로지 특정 구현예를 기술하기 위한 것이며, 본 발명의 보호 범위를 제한하려는 것이 아니다. 첨부된 청구항을 포함하는 본 명세서에서 사용된 단수형은 문맥이 특별히 다르게 지시하지 않는 한 복수형을 포함한다. 예를 들어, "항원" 이라는 언급은 동일 또는 상이할 수 있는 하나의 항원 또는 복수의 항원들을 포함하며, 또는 "방법" 이라는 언급은 당업자에게 알려져 있는 동등한 단계들 및 방법들을 포함한다.
본 발명은 구체적 구현예의 비제한적 실시예를 참조하여 이하에서 더욱 자세히 설명된다. 특히 실시예는 구체적으로 설명된 특징 조합에 제한되지 않는 것으로 해석되어야 하는 대신, 본 발명의 목적이 달성되는 한 설명적 특징은 자유롭게 조합될 수 있다.
실시예 1: 단순분산 이산화 규소 입자의 제조
단순분산 이산화 규소 입자의 제조를 EP 0 216 278 B1 에서 기술된 바와 같이 수성-알코올성-암모니아성 매질 내에서 테트라알콕시실란의 가수분해에 의해 수행했고, 여기서 첫째로 제 1 입자의 졸이 제조되고, 수득된 SiO2 입자가 그 후 반응의 정도에 따라 제어되는 식의 해당 테트라알콕시실란의 연속적 미터링-인에 의해 바람직한 입자 크기로 된다. 예를 들어, 크기가 25 ㎚ 인 SiO2 입자 50 g 의 제조는 용해화제로서 1.2 ℓ 의 EtOH , 860 ㎖ 의 탈이온수, 167 ㎖ 의 테트라에틸 오르토실리케이트 (TEOS) 및 28.5 ㎖ 의 25 % 암모니아 수용액을 요구한다.
구형 이산화 규소 입자를 Zetasizer Nano ZS (Malvern Instruments, 헤렌베르크, 독일) 를 사용하여 동적 광 산란 측정에 의해 확인했다. 값이 0.1 미만인 Malvern-PDI (다분산 지수) 는 단순분산 분포를 나타냈다. 도 1 은 SEM 현미경사진에 의한 형태 및 입자 크기를 나타낸다.
실시예 2: N-말단 알킨기를 갖는 OVA 펩티드 조각 SIINFEKL 의 제조
Fmoc 화학에 의해 링크(rink) 아미드 수지 위에 펩티드를 조립했다. 적합한 측쇄 보호기를 갖는 N-알파-Fmoc-보호된 아미노산을 이용했다. 사용한 용매는 N-메틸피롤리돈이었다. 먼저, 펩티드 사슬을 자동 합성기 (Applied Biosystems Model ABI 433　A) 내에서 제조했다. 서열의 완성 후, 말단 Fmoc 보호기를 절단해냈다. 중합체를 주사기 내의 알킨카르복실산에 수동으로 커플링했다. 그것을 DMF, 그 후 디클로로메탄 및 메탄올로 조심스럽게 세척하고, 수지를 밤새 진공 하에 건조시켰다. 절단 및 탈보호를 위해, 5 ㎖ 의 TFA/H2O/페놀/트리이소프로필실란 (37:1:1:1) 의 혼합물을 수지에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 2 시간 동안 흔들었다. 상기 TFA 용액을 원심분리 튜브 내로 전달하고, 4 ℃ 에서 디에틸 에테르의 느린 첨가에 의해 침전시키고, 원심분리해내고, 디에틸 에테르의 부가에 의해 2 회 세척하고, 건조시키고, 2 ㎖ 의 H2O/아세토니트릴 (1:1 v/v) 내에 흡수시켰다. 흐름 속도 = 10 ㎖/분 , 7.5 분 내에 0 % 의 B - 100 % 의 B (A = H2O 및 B = 아세토니트릴, 모두 0.1 % 의 TFA 를 포함함) 의 기울기를 갖는, RP-선택 B 칼럼 (150 × 10 ㎜) 을 사용하여 RP-HPLC 에 의해 정제를 수행했다. 정제한 생성물의 균질성 및 정체를 분석적 HPLC 및 질량 분석법에 의해 확인했다. RP-HPLC 정제 후, 펩티드를 동결건조시켰다.
실시예 3: 3-브로모프로필트리메톡시실란을 갖는 이산화 규소 입자의 기능화
실시예 1 에서 제조된 1 g 의 SiO2 입자 (25 ㎚) 를 에탄올/물 혼합물 (100 ㎖; 4:1) 내에 현탁시키고, 0.3 ㎖ 의 25 % 암모니아 수용액을 첨가했다. 그 후 10 ㎖ 의 에탄올 내에 용해된 0.25 ㎖ 의 3-브로모프로필트리메톡시실란 (ABCR, 카를스루에, 독일) 을 적하 깔대기를 통해 한방울씩 천천히 첨가하고, 혼합물을 환류 하에 약 20 시간 동안 가열했다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, SiO2 입자를 에탄올/물 혼합물 (4:1) 로 5 회 세척했다. 50 ㎖ 반응 용기 내 온도-제어된 원심분리기 내에서 9000 ×g 및 20 ℃ 에서 10 분 동안 원심분리에 의해 모든 세척 단계를 수행했다.
실시예 4: 기능화된 이산화 규소 입자와 나트륨 아지드의 반응
실시예 3 에서 3-브로모프로필트리메톡시실란으로 기능화된 SiO2 입자를 80 ㎖ 의 디메틸 술폭시드 (DMSO) 내에 재현탁시키고, 1 g 의 나트륨 아지드 및 100 ㎎ 의 테트라부틸암모늄 브로미드를 첨가하고, 혼합물을 80 ℃ 에서 40 분 동안 교반했다. 그 후 200 ㎖ 의 탈이온수를 첨가하고, 보유 용량이 10 kDa 인 막 (Millipore, 베드포드, 미국) 을 사용하여 초미세여과 방법에 의해 입자를 분리하고, 600 ㎖ 의 탈이온수로 세척했다.
실시예 5: OVA 펩티드 조각 SIINFEKL 의 기능화된 SiO 2 입자로의 연결
실시예 4 에서 제조한 아지드-SiO2 입자를 40 ㎖ 의 아세토니트릴, 실시예 1 로부터의 OVA 펩티드 조각 (SIINFEKL-알킨), 디이소프로필에틸아민 (DIPEA) 및 구리(I) 요오드화물을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 약 20 시간 동안 교반했다. 100 ㎖ 의 탈이온수를 현탁액에 첨가하고, 10 kDa 막 (Millipore, 베드포드, 미국) 을 통해 초미세여과에 의해 생성물을 분리하고, 200 ㎖ 의 탈이온수 및 50 ㎖ 의 EDTA 수용액으로 세척했다.
실시예 6: 판독으로서 PBL 표현형 (말초 혈액 림프구) 을 사용하는 생체내 아주반트 활성에 대한 실리카 나노입자의 시험
C57B1/6 마우스에 대해 조사를 수행했다. 동물을 PBS (인산염 완충 식염수), LPS (지질다당류) 또는 실리카 나노입자 (25 ㎚) 가 투여되는 3 개의 군 (1 군 당 마우스 2 마리) 으로 분할했다. 아주반트 활성에 관하여 실리카 나노입자에 대한 기준이 되는 참조 (TLR4 작용제) 로서 LPS 를 그리고 대조군으로서 PBS 를 사용했다.
실험에서, 실시예 1 에서 기술한 방법에 의해 제조하고, 투석한 후 살균 여과한, 크기가 25 ㎚ 인 미변형 실리카 나노입자를 조사했다. 그 후 나노입자의 엔토톡신 오염에 의해 동물 실험의 판독이 왜곡되지 않았음을 보장하기 위해 실리카 분산물을 엔토톡신에 대해 조사했다. 조사한 나노입자 분산물 내의 엔토톡신 농도는 0.5　IU/㎖ 의 액체, 비경구적 제형물에 대해 Ph.Eur. 에 의해 권장되는 최대 수준 미만이었다. 100 ㎕ 의 각각의 시험 용액 또는 분산물을 동물의 옆구리에 피하 투여했다. 상기 나노입자 분산물은 100 ㎕ 의 PBS 내에 450 ㎍ 의 실리카 나노입자를 포함했다. 참조로서, 10 ㎍ 의 LPS/마우스 를 투여했다.
헤파린첨가 모세관에 의한 눈 뒤 블리딩에 의해 마우스 1 마리 당 75-100 ㎕ 의 말초 혈액을 취하고, 헤파린첨가 에펜도르프 컵 내에 수집했다. 상기 혈액 샘플을 다양한 탐지 칵테일로 표지했다. 그 후 면역적으로 관련된 PBL 표현형의 백분율 분포를 FACS (형광 표지 세포 분류) 에 의해 확인했다. 도 2a-c 에서, 총 PBL 집단에 대해 4 개의 PBL 아집단 CD4 (도 2a), CD8 이펙터 (도 2b), CD11b+ 및 CD11c+(DC) (도 2c) 의 백분율 비율을 도시했다. 상기 데이타는 실리카 나노입자의 투여 후, 면역적으로 중요한 T-세포 및 수지상 세포의 수가 운반체 대조군 PBS 에 비해 증가되었음을 확인하며, 이는 실리카 나노입자의 아주반트 효과를 시사한다.
실시예 7: 물 내 실리카 나노입자의 99m Tc 표지
나노입자 용액 (25 ㎚, 고체 함량 9.0 ㎎/㎖) 을 사용 전에 MILEX-GV 0.22 ㎛ 필터 유닛을 통해 여과했다. 50 ㎕ 의 실리카 나노입자를 99mTc (132 MBq, 40 ㎕) 에 첨가하고, 용액을 혼합했다. 그 후 2 ㎕ 의 SnCl2 용액 (10 mM HCl 내의 0.1 % 의 SnCl2 이수화물) 을 첨가하고, 용액을 다시 혼합했다. 약 2 분 후, 150 ㎕ 의 0.5 M 인산염 완충액 pH 8 을 첨가하고, 용액을 Millipore Microcon Ultracel YM-100 원심분리 필터 장치 내로 옮기고 3 분 동안 13,000 rpm 에서 원심분리했다. 필터를 매번 200 ㎕ 의 0.5 M 인산염 완충액 pH 8 로 2 회 세척했다. 총 여과물은 46.84 MBq 의 99mTc 를 포함하고, 69.8 BMq 의 99mTc 가 필터 내에 잔류했다. 필터 내의 입자를 매번 200 ㎕ 의 0.5 M 인산염 완충액 pH 8 내에 2 회 현탁시키고, 필터의 회전 및 간단한 원심분리에 의해 회수했다. 28 MBq 의 99mTc 로 표지한 입자 현탁액을 수득했다. 수득한 입자 현탁액을 그 후 동물 실험에 사용했다.
실시예 8: 99m Tc-표지된 실리카 나노입자의 생체내 영상화
실시예 7 에서 기술한 바와 같이 입자를 표지했다. 그 후 전초 림프절 내 이동의 비침습적 영상화를 수행했다. 이 목적을 위해, 체중 약 400-500 g 의 암컷 위스타 래트를 이소플루란을 사용하여 흡입마취에 의해 마취시켰다. 동물에게 10-20 MBq 의 99mTc 를 포함하는 방사선표지된 입자의 맑은 현탁액을 2 개의 뒷발 중 하나에 피하주사했다. 그 후 여전히 마취 상태에 있는 동물을 섬광조영술에 의해 조사했다. 이 목적을 위해, 다양한 시점에서 동물의 하체 내의 축적을 감마 카메라를 사용하여 표시했다. 이들 사진의 동태는 뒷발에서 이어지는 림프절 내에서의 입자의 상당한 축적을 나타낸다 (도 3 참조). 이들은 전초 림프절이다. 또한, 신장 및 방광 내의 일시적 축적이 명백하다. 그와 대조적으로, 림프절 내의 축적은 24 시간 동안 지속된다. 투여된 용량의 약 1 % 의 이동 비율을 관찰했다. 대조군 실험으로서, 전초 림프절의 영상화를 위해 시판되는 콜로이드 제제인 99mTc-표지된 나노-알부몬의 이동 분석을 수행했다. 이 물질의 축적은 실리카 입자의 축적과 비슷했다. 암컷 위스타 래트의 2 개의 뒷발 중 하나 내로 피하 주사에 의해 자유 99mTc 가 투여되는 추가의 대조군 실험에 의해, 자유 99mTc 가 림프절 내에 축적되지 않음을 증명했다.
따라서 실리카 나노입자가 림프절을 표적화할 수 있고, 이를 통해 면역계의 활성화가 일어날 수 있음이 밝혀졌다.
하기 실시예는 약학적 제제에 관한 것이다.
실시예 A: 주사 바이알
3　ℓ 의 2 차 증류수 내의 100 g 의 나노입자 및 5 g 의 수소인산 이나트륨의 용액을 2 N 염산을 사용하여 pH　6.8 로 조정하고, 살균 여과하고, 주사 바이알 내로 옮기고, 살균 조건 하에 동결건조시키고, 살균 조건 하에 밀봉한다. 각각의 주사 바이알은 5 ㎎ 의 나노입자를 함유한다.
실시예 B: 좌약
20 g 의 나노입자와 100 g 의 콩 레시틴 및 1400 g 의 코코아 버터의 혼합물을 녹이고, 몰드에 붓고 냉각되도록 놔둔다. 각각의 좌약은 20 ㎎ 의 나노입자를 함유한다.
실시예 C: 용액
940　㎖ 의 2 차 증류수 내의 1 g 의 나노입자, 9.38 g 의 NaH2PO4 *2 H2O, 28.48 g 의 Na2HPO4 *12 H2O 및 0.1 g 의 벤잘코늄 클로리드로부터 용액을 제조한다. pH 를 6.8 로 조정하고, 용액을 1　ℓ 로 만들고, 방사선조사에 의해 살균한다. 이 용액은 점안액의 형태로 사용될 수 있다.
실시예 D: 연고
무균 상태 하에 500 ㎎ 의 나노입자를 99.5 g 의 바셀린과 혼합한다.
실시예 E: 정제
통상적 방식으로 1 ㎏ 의 나노입자, 4 ㎏ 의 락토스, 1.2 ㎏ 의 감자 전분, 0.2 ㎏ 의 탈크 및 0.1 ㎏ 의 마그네슘 스테아레이트의 혼합물을 압착하여 정제를 제조하여, 각각의 정제가 10 ㎎ 의 나노입자를 함유하도록 한다.
실시예 F: 당제
실시예 E 와 유사하게 정제를 압착한 후, 통상적 방식으로 수크로스, 감자 전분, 탈크, 트라가칸트 및 염료의 코팅에 의해 코팅한다.
실시예 G: 캡슐
통상적 방식으로 2 ㎏ 의 나노입자를 경질 젤라틴 캡슐 내로 도입하여 각각의 캡슐이 20 ㎎ 의 나노입자를 함유하도록 한다.
실시예 H: 앰플
60　ℓ 의 2 차 증류수 내의 1 ㎏ 의 나노입자의 용액을 살균 여과하고, 앰플 내로 옮기고, 살균 조건 하에 동결건조시키고, 살균 조건 하에 밀봉한다. 각각의 앰플은 10 ㎎ 의 나노입자를 함유한다.
실시예 I: 흡입 분무
14 g 의 나노입자를 10 ℓ 의 등장성 NaCl 용액 내에 용해시키고, 용액을 펌프 메카니즘에 의해 시판되는 분무 용기 내로 도입한다. 상기 용액은 입 또는 코 안으로 분무될 수 있다. 하나의 분무 샷 (약 0.1 ㎖) 은 약 0.14 ㎎ 의 투여량에 해당한다.

Claims (35)

  1. 입자 크기가 5 내지 50 ㎚ 인 것을 특징으로 하는, 하나 이상의 항원이 부착된 하나 이상의 표면 기능기를 갖는 이산화 규소를 50 % 를 초과하여 포함하는 매트릭스를 포함하는 나노입자.
  2. 하기 단계를 포함하는 방법에 의해 제조된 나노입자:
    (a) 물, 하나 이상의 용해화제 및 하나 이상의 아민 또는 암모니아를 포함하는 매질 내에서 테트라알콕시실란 및/또는 오르가노트리알콕시실란을 가수분해성 중축합하는 단계로서, 여기서 첫째로 제 1 입자의 졸이 생성되고, 수득된 나노입자가 그 후, 반응의 정도에 따라 제어되는 식의 해당 실란의 연속적 미터링-인에 의해 추가의 핵형성이 방지되는 방식으로 5 내지 50 ㎚ 범위의 바람직한 입자 크기로 되는 단계, 및
    (b) 나노입자의 표면 기능기에 항원을 부착하는 단계.
  3. 제 2 항에 있어서, 단계 (a) 이후 및 단계 (b) 이전에 표면이 기능화되는 것을 특징으로 하는 나노입자.
  4. 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, 표면 기능기가 불안정 링커 또는 알콕시실란, 바람직하게는 디설피드 링커, 효소적으로 접근가능한 펩티드 서열, 히드라존 링커 또는 말단, 반응성 티올기인 것을 특징으로하는 나노입자.
  5. 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서, 표면이 다기능화되고(이 경우 다기능기의 교차결합은 배제됨), 바람직하게는 표면이 항원 및 PEG 및/또는 아주반트에 의해 흡착적으로 또는 공유적으로 다기능화되는 것을 특징으로 하는 나노입자.
  6. 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서, 입자 크기가 10 내지 30 ㎚, 바람직하게는 25 ㎚ ± 10 % 인 것을 특징으로 하는 나노입자.
  7. 제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서, 다공성 또는 비다공성인 것을 특징으로 하는 나노입자.
  8. 제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 있어서, 단순분산인 것을 특징으로 하는 나노입자.
  9. 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 있어서, 항원이 암 항원, 바람직하게는 서바이빈 또는 그의 에피토프인 것을 특징으로 하는 나노입자.
  10. 제 1 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항에 따른 나노입자를 포함하는 분산물.
  11. 제 10 항에 있어서, 나노입자가 단순분산이고 비응집된 것을 특징으로 하는 분산물.
  12. 제 1 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항에 따른 나노입자 및/또는 제 10 항 또는 제 11 항에 따른 분산물을 포함하는 키트.
  13. 제 1 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항에 따른 나노입자 및/또는 제 10 항 또는 제 11 항에 따른 분산물을 포함하는 약학적 조성물.
  14. 제 13 항에 있어서, 비경구적 투여를 위한 약학적 조성물.
  15. 약학적으로 허용되는 보조제와 함께 활성 화합물로서, 유효량의 제 1 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항에 따른 나노입자 및/또는 제 10 항 또는 제 11 항에 따른 분산물을 포함하는 약학적 조성물.
  16. 전염성 질환, 패혈 쇼크, 종양, 암, 자가면역 질환, 알레르기 및 만성 또는 급성 염증 반응의 군으로부터 선택된 질환의 예방 또는 치료를 위한, 제 1 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항에 따른 나노입자 및/또는 제 10 항 또는 제 11 항에 따른 분산물.
  17. 제 16 항에 있어서, 종양 및/또는 암의 예방 또는 치료, 바람직하게는 암의 치료를 위한 나노입자 및/또는 분산물.
  18. 면역예방 또는 면역요법을 위한 백신의 제조를 위한, 제 1 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항에 따른 나노입자 및/또는 제 10 항 또는 제 11 항에 따른 분산물의 용도.
  19. 항원 제시 세포로 항원을 표적화하기 위한 및 임의로 면역계의 활성화를 위한, 제 1 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항에 따른 나노입자 및/또는 제 10 항 또는 제 11 항에 따른 분산물의 용도.
  20. 제 19 항에 있어서, 항원이 림프절 내의 수지상 세포로 표적화되는 것을 특징으로하는 용도.
  21. 제 19 항 또는 제 20 항에 있어서, 생체 외에서의 용도.
  22. 하기 단계를 포함하는, 항원 제시 세포로 항원을 표적화하는 방법:
    (a) 하나 이상의 항원이 부착된 표면 기능기를 갖는 순수한 이산화 규소를 본질적으로 포함하는 나노입자를 제공하는 단계,
    (b) 세포 배양물, 조직, 기관 또는 포유류 내에 존재하는 항원 제시 세포에 상기 나노입자를 투여하는 단계,
    (c) 나노입자의 크기를 통해 표적화 효율을 조정함으로써 (이들은 적어도 부분적으로 반비례함) 사이질 유체를 통해 항원 제시 세포로 항원을 표적화하는 단계.
  23. 제 22 항에 있어서, 단계 (a) 에서 나노입자가 하기 단계에 의해 제공되는 것을 특징으로 하는 방법:
    (a') 물, 하나 이상의 용해화제 및 하나 이상의 아민 또는 암모니아를 포함하는 매질 내에서 테트라알콕시실란 및/또는 오르가노트리알콕시실란을 가수분해성 중축합하는 단계로서, 여기서 첫째로 제 1 입자의 졸이 생성되고, 수득된 나노입자가 그 후, 반응의 정도에 따라 제어되는 식의 해당 실란의 연속적 미터링-인에 의해 추가의 핵형성이 방지되는 방식으로 바람직한 입자 크기로 되는 단계, 및
    (a'') 나노입자의 표면 기능기에 하나 이상의 항원을 부착하는 단계, 및 임의로
    (a''') 나노입자를 분산시키는 단계.
  24. 제 23 항에 있어서, 단계 (a'') 에서 표면이 다기능화되고(이 경우 다기능기의 교차결합은 배제됨), 바람직하게는 표면이 항원 및 PEG 및/또는 아주반트로 흡착적으로 또는 공유적으로 다기능화되는 것을 특징으로 하는 방법.
  25. 제 22 항 내지 제 24 항 중 어느 한 항에 있어서, 단계 (a) 에서 크기가 5 내지 50 ㎚ 인 다공성 또는 비다공성 나노입자가 제공되는 것을 특징으로 하는 방법.
  26. 제 22 항 내지 제 25 항 중 어느 한 항에 있어서, 단계 (a) 에서 표면 기능기가 불안정 링커 또는 알콕시실란, 바람직하게는 디설피드 링커, 효소적으로 접근가능한 펩티드 서열, 히드라존 링커 또는 말단, 반응성 티올기인 것을 특징으로 하는 방법.
  27. 제 22 항 내지 제 26 항 중 어느 한 항에 있어서, 단계 (b) 에서 나노입자가 바람직하게는 비경구적으로 포유류에게 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
  28. 제 22 항 내지 제 27 항 중 어느 한 항에 있어서, 단계 (c) 에서 림프절 내의 50 % 초과의 항원 제시 세포가 표적화되는 것을 특징으로 하는 방법.
  29. 제 22 항 내지 제 28 항 중 어느 한 항에 있어서, 단계 (c) 이후 하기 추가의 단계가 수행되는 방법:
    (d) 항원 제시 세포 내로 나노입자가 섭취되는 단계, 및 임의로
    (e) 엔도솜 내에서 항원이 유리되는 단계.
  30. 제 29 항에 있어서, 단계 (e) 에서 항원이 초기 엔도솜 내에서 유리되는 것을 특징으로 하는 방법.
  31. 하기 단계를 포함하는 포유류의 면역계의 활성화 방법:
    (a) 제 22 항 내지 제 30 항 중 어느 한 항에 따른 방법에 의해 항원 제시 세포로 나노입자를 표적화하는 단계, 및
    (b) 면역계를 활성화시키는 단계.
  32. 제 31 항에 있어서, 단계 (b) 에서 활성화 효율이 입자 크기를 통해 조정되는 (이들은 적어도 부분적으로 반비례함) 것을 특징으로 하는 방법.
  33. 제 1 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항에 따른 나노입자 및/또는 제 10 항 또는 제 11 항에 따른 분산물이 그러한 치료를 필요로 하는 포유류에게 투여되는 것을 특징으로 하는 예방접종 방법.
  34. 제 1 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항에 따른 나노입자 및/또는 제 10 항 또는 제 11 항에 따른 분산물이 포유류에게 투여되고, T-세포 및/또는 수지상 세포의 증식 및/또는 중화 항체의 형성이 유도되는 것을 특징으로 하는, T-세포 반응, 항원 반응 및/또는 수지상 세포 성숙의 유도 방법.
  35. 제 30 항에 따른 방법에 의해 증식된 형성된 T-세포 및/또는 항체가 분리되고 포유류에게 투여되는 것을 특징으로 하는, 포유류의 수동 면역화 방법.
KR1020117003524A 2008-07-15 2009-07-13 이산화 규소 나노입자 및 예방접종을 위한 그의 용도 KR101694130B1 (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE102008033175.9 2008-07-15
DE102008033175A DE102008033175A1 (de) 2008-07-15 2008-07-15 Siliciumdioxid-Nanopartikel und deren Verwendung zur Vakzinierung
PCT/EP2009/005078 WO2010006753A2 (de) 2008-07-15 2009-07-13 Siliciumdioxid-nanopartikel und deren verwendung zur vakzinierung

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020167037081A Division KR101973841B1 (ko) 2008-07-15 2009-07-13 이산화 규소 나노입자 및 예방접종을 위한 그의 용도

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20110039351A true KR20110039351A (ko) 2011-04-15
KR101694130B1 KR101694130B1 (ko) 2017-01-09

Family

ID=41165124

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020117003524A KR101694130B1 (ko) 2008-07-15 2009-07-13 이산화 규소 나노입자 및 예방접종을 위한 그의 용도
KR1020167037081A KR101973841B1 (ko) 2008-07-15 2009-07-13 이산화 규소 나노입자 및 예방접종을 위한 그의 용도

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020167037081A KR101973841B1 (ko) 2008-07-15 2009-07-13 이산화 규소 나노입자 및 예방접종을 위한 그의 용도

Country Status (17)

Country Link
US (4) US8980324B2 (ko)
EP (2) EP2299980B1 (ko)
JP (3) JP5726075B2 (ko)
KR (2) KR101694130B1 (ko)
CN (2) CN102099014B (ko)
AU (1) AU2009270468B2 (ko)
BR (2) BRPI0915788B8 (ko)
CA (1) CA2730694C (ko)
DE (1) DE102008033175A1 (ko)
DK (2) DK2299980T3 (ko)
EA (1) EA023047B1 (ko)
ES (2) ES2640012T3 (ko)
HU (2) HUE036309T2 (ko)
MX (1) MX341881B (ko)
PT (2) PT2299980T (ko)
WO (1) WO2010006753A2 (ko)
ZA (1) ZA201101171B (ko)

Families Citing this family (32)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102791827B (zh) 2009-11-09 2016-11-16 华盛顿大学商业化中心 官能化发色聚合物点及其生物共轭体
AU2011317142B2 (en) 2010-10-18 2015-04-23 University of Washington Center for Commercialization Chromophoric polymer dots
US9028880B2 (en) * 2010-11-30 2015-05-12 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Silica nanoparticle agent conjugates
DE102011018499A1 (de) 2011-04-23 2012-10-25 Emc Microcollections Gmbh Topische Nanopartikel-Vakzine zur Immunstimulation der dendritischen Zellen in der Haut
KR20120132183A (ko) * 2011-05-27 2012-12-05 포항공과대학교 산학협력단 종양 조직에서 유래한 나노소포체 및 이를 이용한 암 백신
CN103012594B (zh) * 2011-09-22 2015-09-02 中国农业科学院兰州兽医研究所 一种运载猪圆环病毒抗原表位蛋白的纳米载体及应用
US9797840B2 (en) 2011-11-28 2017-10-24 University Of Washington Through Its Center For Commercialization Highly fluorescent polymer nanoparticle
EP2797635B1 (en) 2011-12-30 2020-05-20 University of Washington Through Its Center for Commercialization Chromophoric polymer dots with narrow-band emission
WO2013116614A1 (en) 2012-02-03 2013-08-08 University Of Washington Through Its Center For Commercialization Polyelectrolyte-coated polymer dots and related methods
EP2644703A1 (en) * 2012-03-26 2013-10-02 ETH Zurich Molecular code system
GB201205237D0 (en) * 2012-03-26 2012-05-09 Univ Edinburgh Adjuvant
BR112015017966A2 (pt) * 2013-01-31 2017-07-11 Univ Portland State composições imunogênicas compreendendo vírus silificado e métodos de uso
CN103175661B (zh) * 2013-03-01 2015-06-24 南京理工大学 一种微纳米生产粉尘泄露源的同位素法定位检测方法
JP6587605B2 (ja) 2013-03-14 2019-10-09 ユニバーシティ オブ ワシントン スルー イッツ センター フォー コマーシャリゼーション ポリマードット組成物および関連方法
EP3220913B1 (en) * 2014-11-19 2021-09-08 Kiromic BioPharma, Inc. Nanoparticle-based vaccine targeting cancer/testis antigens (cta) and its use in solid and hematological malignancies
JP6868862B2 (ja) * 2015-08-31 2021-05-12 国立研究開発法人産業技術総合研究所 メソポーラスシリカ粒子
CN105597094A (zh) * 2015-12-31 2016-05-25 河南农业大学 猪传染性胃肠炎病毒纳米硅佐剂灭活疫苗及其制备方法
EP3405432A1 (en) * 2016-01-25 2018-11-28 King Abdullah University Of Science And Technology Methods of making silica nanoparticles, propellants, and safety devices
ES2879881T3 (es) 2016-08-10 2021-11-23 Res & Innovation Uk Composiciones que comprenden partículas de nanosílice y su uso en métodos de activación de linfocitos T para terapia
US20200246441A1 (en) * 2016-08-19 2020-08-06 Amrita Vishwa Vidyapeetham Compositions and methods for autoimmune disease treatment
DE102017116370A1 (de) * 2017-07-20 2019-01-24 Leibniz-Institut Für Neue Materialien Gemeinnützige Gmbh Siliziumdioxidnanopartikel zur therapeutischen Anwendung
US10952904B2 (en) * 2017-11-28 2021-03-23 International Business Machines Corporation Antimicrobial bandage with nanostructures
WO2019152672A1 (en) * 2018-01-31 2019-08-08 Prolynx Llc Aseptic method and apparatus to prepare sterile formulations of drug-linked hydrogel microspheres
KR102166606B1 (ko) * 2018-10-12 2020-10-16 한국교통대학교산학협력단 대식세포 표적형 나노어셈블리 및 이를 포함하는 항염증 조성물
AU2020377966A1 (en) * 2019-11-04 2022-05-19 Cornell University Ultrasmall nanoparticles and methods of making, using and analyzing same
EP3909612A1 (en) 2020-05-12 2021-11-17 Life Science Inkubator Betriebs GmbH & Co. KG Composition of nanoparticles
CN111973741B (zh) * 2020-08-23 2023-01-10 中国医学科学院生物医学工程研究所 pH响应型基于共包载抗原和光敏剂的介孔硅纳米粒的治疗性疫苗的制备方法
CN112641935B (zh) * 2020-10-15 2023-05-23 百葵锐(深圳)生物科技有限公司 一种含颗粒载体的亚单位疫苗及其应用
WO2022103639A1 (en) * 2020-11-16 2022-05-19 Orcosa Inc. Methods of treating autoimmune or inflammatory conditions with cannabidiol or its derivatives/analogs
US11672761B2 (en) 2020-11-16 2023-06-13 Orcosa Inc. Rapidly infusing platform and compositions for therapeutic treatment in humans
CN114081961B (zh) * 2021-11-10 2024-02-23 中国科学技术大学 复合纳米颗粒、制备方法、应用
CN114377120B (zh) * 2022-01-10 2023-09-22 大连理工大学 一种以病毒样颗粒为模板的二氧化硅疫苗递送系统的构建及其应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2006335722A (ja) * 2005-06-03 2006-12-14 National Institute Of Advanced Industrial & Technology 抗体産生キャリア

Family Cites Families (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3616133A1 (de) * 1985-09-25 1987-11-19 Merck Patent Gmbh Kugelfoermige sio(pfeil abwaerts)2(pfeil abwaerts)-partikel
US5178882A (en) 1990-06-22 1993-01-12 The Regents Of The University Of California Viral decoy vaccine
IL109519A (en) * 1994-05-03 1999-03-12 Yeda Res & Dev Vaccines for oral immunization against infecting agents
US6086881A (en) 1998-05-15 2000-07-11 Children's Medical Center Corp. Spatially aligned conjugated composition having a thioether bond linkage
EP1202745A4 (en) 1999-08-16 2004-09-22 Henceforth Hibernia Inc THERAPEUTIC AND PROPHYLACTIC COMPOSITIONS CONTAINING CATALYTIC BIOMIMETIC SOLIDS AND METHODS OF PREPARING AND USING SAME
ATE320267T1 (de) * 2000-08-11 2006-04-15 Lohmann Animal Health Gmbh W/o emulsion adjuvanszuzammensetzungen für impstoffen
ES2304467T3 (es) * 2001-07-10 2008-10-16 North Carolina State University Vehiculo de liberacion de nanoparticulas.
JP2004138522A (ja) * 2002-10-18 2004-05-13 Meneki Seibutsu Kenkyusho:Kk 腫瘍診断剤およびその用途
US20040202720A1 (en) 2003-04-10 2004-10-14 3M Innovative Properties Company Delivery of immune response modifier compounds using metal-containing particulate support materials
DE102004011110A1 (de) 2004-03-08 2005-09-22 Merck Patent Gmbh Verfahren zur Herstellung monodisperser SiO2-Partikel
US7342093B2 (en) * 2004-07-23 2008-03-11 University Of Massachusetts Compounds that inhibit Hsp90 protein-protein interactions with IAP proteins
JP2009501237A (ja) 2005-03-14 2009-01-15 ボード オブ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティー オブ テキサス システム 生物活性ｆｕｓ１ペプチドおよびナノ粒子−ポリペプチド複合体
DE102005033954A1 (de) * 2005-07-20 2007-01-25 Switzerland c/o Laris Fiduciara Sca, Ethios Zusammensetzung, die eine liposomale Dispersion von SiO2-Nanopartikeln und ein ß-1,3-verknüpftes Glucanetherderivat umfasst
CA2621352A1 (en) * 2005-09-08 2007-03-15 Biterials Co., Ltd. Magnetic nanoparticle having fluorescent and preparation method thereof and use thereof
BRPI0503817A (pt) 2005-09-12 2007-05-15 Cristalia Prod Quimicos Farm complexo imunogênico formado por antìgenos vacinais encapsulados por sìlica mesoporosa nanoestruturada
US20070104689A1 (en) 2005-09-27 2007-05-10 Merck Patent Gmbh Compositions and methods for treating tumors presenting survivin antigens
US8603530B2 (en) * 2006-06-14 2013-12-10 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Nanoshell therapy
US20080171059A1 (en) 2006-08-07 2008-07-17 Shanshan Wu Howland Methods and compositions for increased priming of t-cells through cross-presentation of exogenous antigens
WO2008109366A2 (en) 2007-03-02 2008-09-12 Mdrna, Inc. Nucleic acid compounds for inhibiting ccnd1 gene expression and uses thereof
WO2008109852A2 (en) * 2007-03-07 2008-09-12 Uti Limited Partnership Compositions and methods for the prevention and treatment of autoimmune conditions
CN100567145C (zh) * 2007-07-19 2009-12-09 东华大学 单分散磁性二氧化硅纳米颗粒的制备方法
CA2746124A1 (en) * 2008-12-11 2010-06-17 The Governors Of The University Of Alberta Methods and systems for inducing immunologic tolerance to non-self antigens

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2006335722A (ja) * 2005-06-03 2006-12-14 National Institute Of Advanced Industrial & Technology 抗体産生キャリア

Also Published As

Publication number Publication date
JP2015042694A (ja) 2015-03-05
US20110123620A1 (en) 2011-05-26
EP3241545B1 (de) 2021-04-28
EP3241545A2 (de) 2017-11-08
EA023047B1 (ru) 2016-04-29
MX2011000401A (es) 2011-03-15
DK3241545T3 (da) 2021-07-12
KR101694130B1 (ko) 2017-01-09
DE102008033175A1 (de) 2010-01-21
AU2009270468B2 (en) 2014-08-21
BRPI0915788B1 (pt) 2020-10-20
EP2299980B1 (de) 2017-06-14
AU2009270468A1 (en) 2010-01-21
ES2885055T3 (es) 2021-12-13
ES2640012T3 (es) 2017-10-31
US8980324B2 (en) 2015-03-17
CN102099014B (zh) 2015-08-26
BR122019011790B8 (pt) 2021-07-27
JP2011527996A (ja) 2011-11-10
KR20170005169A (ko) 2017-01-11
CA2730694A1 (en) 2010-01-21
US9808521B2 (en) 2017-11-07
JP6109805B2 (ja) 2017-04-05
DK2299980T3 (en) 2017-09-11
JP2017031222A (ja) 2017-02-09
ZA201101171B (en) 2011-10-26
JP6479744B2 (ja) 2019-03-06
EP2299980A2 (de) 2011-03-30
CN105126115A (zh) 2015-12-09
US9433673B2 (en) 2016-09-06
BRPI0915788B8 (pt) 2021-05-25
WO2010006753A2 (de) 2010-01-21
EP3241545A3 (de) 2017-12-13
US10111952B2 (en) 2018-10-30
MX341881B (es) 2016-09-07
PT3241545T (pt) 2021-07-30
CN105126115B (zh) 2020-11-27
WO2010006753A3 (de) 2010-04-29
PT2299980T (pt) 2017-09-19
BRPI0915788A2 (pt) 2015-11-10
US20150224189A1 (en) 2015-08-13
JP5726075B2 (ja) 2015-05-27
CN102099014A (zh) 2011-06-15
CA2730694C (en) 2017-10-10
US20180071386A1 (en) 2018-03-15
US20160303228A1 (en) 2016-10-20
KR101973841B1 (ko) 2019-04-29
HUE054973T2 (hu) 2021-10-28
EA201100190A1 (ru) 2011-08-30
BR122019011790B1 (pt) 2020-12-15
HUE036309T2 (hu) 2018-06-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US10111952B2 (en) Silicon dioxide nanoparticles and the use thereof for vaccination
US9079765B2 (en) Nanoparticles comprising antigens and adjuvants, and immunogenic structures
ES2730273T3 (es) Métodos y composiciones para inmunoterapia sostenida
CA2545276A1 (en) Carbohydrate antigen-nanoparticle conjugates and uses thereof as antimetastatic agents in treating cancer
Bai et al. Chitosan-functionalized graphene oxide as adjuvant in HEV P239 vaccine
CN105492022B (zh) 用于接种疫苗的免疫原性络合物及其获得方法
Rosales-Mendoza et al. Liposome-Based Nanovaccines
JP2023529066A (ja) アジュバント／抗原の担体系としてのナノ粒子
Traini Nanoparticle-filled micelles as versatile delivery vehicles for TLR4 mediated immunotherapy

Legal Events

Date Code Title Description
A302 Request for accelerated examination
E902 Notification of reason for refusal
E601 Decision to refuse application
E902 Notification of reason for refusal
E902 Notification of reason for refusal
GRNT Written decision to grant
FPAY Annual fee payment

Payment date: 20191217

Year of fee payment: 4