KR20110029148A - 항감염성 화합물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 소분자 화합물 및 박테리아 감염, 특히 결핵의 치료에 있어서의 이들의 용도에 관한 것이다.

Description

항감염성 화합물 {Anti-infective compounds}
본 발명은 소분자 화합물 및 박테리아 감염, 특히 결핵의 치료에 있어서의 이들의 용도에 관한 것이다.
결핵(Tuberculosis; TB)은 여전히 질환으로서 매년 수백만명의 사망을 초래하고 있다. 화학요법의 부적절한 사용이 약물 내성 케이스의 수를 증가시키고 있다. 이러한 상황은 최근 공지된 모든 약물에 대해 매우 내성인 균주의 출현으로 악화될 듯하다(문헌 참조; Van Rie and Enarson, 2006). DOTS(directly observed short-course chemotherapy)라고도 하는 국제적으로 권장되는 TB 조절 방안은 5가지 항균제의 배합물을 6개월 이상의 연장된 기간 동안 복용하는 것에 의존한다(http://www.who.int/tb/dots/en/). 수학적 모델을 사용하여, 치료 지속기간 및 TB 동력학을 고려하면, 감소된 치료 기간의 이익이 상당한 것으로 예측되며 광범위한 TB 부담을 감소시키는데 크게 기여할 듯하다(문헌 참조; Salomon et al., 2006).
최근 화학요법은 일반적인 정보 경로 및 중요한 공정, 예를 들면, RNA 중합 및 단백질 합성 억제를 중화시키거나 마이코박테리아 특이 세포 외피(envelope) 합성을 방해함으로써 마이코박테리움 투베르쿨로시스 바실러스(Mycobacterium tuberculosis bacillus)를 직접적으로 표적으로 하는 화합물로 이루어진다. 가장 널리 사용되는 전용 항-결핵 약물 이소니아지드, 에티온아미드 및 피라진아미드는 먼저 활성화를 필요로 하는 전구-약물이다. 활성 형태로서, 이들은 광범위한 마이코박테리아 표적에 대해 억제 활성을 입증하며, 이것은 아직 충분히 특징지워지지는 않았다. 사람 면역결핍 바이러스와 같은 기타의 만성 전염성 질환에 대해, 마이코박테리움 투베르쿨로시스의 광범위한 중요 특징을 표적으로 하는 약물을 포함하는 다중요법(multi-therapy) 접근법이 지금까지 가장 성공적인 전략인 것으로 판명되었다. 따라서, 마이코박테리움 투베르쿨로시스에 대해 상이한 작용 메카니즘을 갖는 최근 약물 억제제의 배합물이 질환의 조절을 위한 해결책일 듯하다.
신규한 항-TB 약물을 발견하기 위한 가장 도전적인 방법은 바실러스의 생존에 필수적인 중요한 특징을 표적으로 하는 활성 화합물을 스크리닝하는데 있다. 사람에서 결핵균 지속(tubercle bacillus persistence)을 뒷받침하는 생물학적 메카니즘, 즉, 잠복 박테리아(latent bacteria)의 위치 및 상태에 대한 이해가 여전히 부족하지만, 마이코박테리움 투베르쿨로시스는 저산소 상태하에서 원발성 육아종에 존재(문헌 참조; Lenaerts et al., 2007)할 뿐만 아니라 다양한 유형의 세포내에 숨겨져 있는 것으로 생각된다(문헌 참조; Houben et al., 2006; Neyrolles et al., 2006). 바실러스는 주로 포식 세포, 예를 들면, 대식세포 및 수지상 세포 내에 위치하며, 결핵균은 세포외 조건에서의 성장과 비교하여 숙주 대식세포의 식포(phagosome)에서 상이한 표현형을 채택하는 것으로 명백히 확립되어 있다(문헌 참조; Rohde et al., 2007; Schnappinger et al., 2003). 감염시, 염증 반응이 유도되며, 이로서 인터루킨 및 사이토킨을 방출하는 T 림프구의 보충을 개시하고, 인터루킨 및 사이토킨은 감염된 대식세포를 활성화시켜 병원균의 파괴를 가능케 한다. 따라서, 적절한 개시시, 숙주 대식세포는 침입하는 바실러스를 제거할 수 있다. 이것은 마이코박테리움 투베르쿨로시스를 흡입한 사람 중의 95% 이상에서 질환이 발병하지 않았다는 사실에 의해 더욱 지지되며, 이는 사람 숙주 반응이, 대부분의 경우에, 마이코박테리움 투베르쿨로시스 유도된 병인을 방해하는데 충분하다는 것을 시사한다. 이것은 소분자 화합물이 면역 세포 반응 신호를 흉내내어 마이코박테리아를 제거하도록 숙주 세포를 유도할 수 있다는 가설을 야기한다.
따라서, 본 발명의 목적은 숙주 대식세포 내에서 마이코박테리움 투베르쿨로시스 증식을 방지하는 화합물을 찾을 수 있도록 하는 고속 스크리닝에 적합한 표현형 세포계 검정법(phenotypic cell-based assay)을 개발하는 것이다.
지금까지, 숙주 세포내에서의 결핵균 성장에 대한 이러한 유형의 조사는 숙주 세포 용해에 이은 연속 희석 및 한천 플레이트 상에서의 박테리아 성장에 필요한 3주간의 배양 기간 후의 콜로니 형성 단위(colony forming unit; CFU)에 의존한다. 루시퍼라제-발현 마이코박테리아가 실험 지속시간을 감소시키는데 효율적인 것으로 나타났지만, 세포 용해 및 루시페린 기질 첨가 단계가 여전히 요구된다(문헌 참조; Arain et al., 1996). 또한, 이러한 유형의 실험은 대규모 스크리닝에 용이하게 적용 가능하지 않다.
본 발명의 또 다른 목적은 박테리아 감염에 대해 효과적인 화합물, 특히 숙주 대식세포 내에서 마이코박테리움 투베르쿨로시스 증식을 방지하는 화합물을 확인하는 것이다.
하나의 양태에서, 본 발명은 화학식 VIII의 화합물에 관한 것이다:
[화학식 VIII]
Figure pct00001
위의 화학식 VIII에서,
m은 0, 1, 2 또는 3이고;
X3은 CH2, O, S 및 NH를 포함하는 그룹으로부터 선택되고;
X4는 할라이드, 알킬, OR23, SR24 및 NR25R26을 포함하는 그룹으로부터 선택되고;
R20은 아실, 알콕시, 알킬, 알킬아미노, 알킬카복실산, 아릴카복실산, 알킬카복실산 알킬에스테르, 알킬렌, 알킬에테르, 알킬하이드록시, 알킬티오, 알키닐, 아미도, 아미노, 아릴, 아릴알콕시, 아릴아미노, 아릴티오, 카복실산, 시아노, 사이클로알킬, 카복실산, 에스테르, 할로, 할로알콕시, 할로알킬, 할로알킬에테르, 헤테로아릴, 헤테로아릴아미노, 헤테로사이클로알킬 및 수소를 포함하는 그룹으로부터 선택되고, 이들은 임의로 치환되며;
R21 및 R22는 각각 독립적으로 알콕시, 알킬, 알킬아미노, 알킬렌, 알킬에테르, 알킬티오, 알키닐, 아미도, 아미노, 아릴, 아릴에테르, 아릴알콕시, 아릴아미노, 아릴티오, 카복시, 시아노, 사이클로알킬, 에스테르, 할로, 할로알콕시, 할로알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴아미노, 헤테로사이클로알킬, 하이드록실, 수소, 니트로, 티오, 설포네이트, 설포닐 및 설포닐아미노를 포함하는 그룹으로부터 선택되고, 이들은 임의로 치환되며;
R23은 아실, 알킬, 알킬아미노, 알킬렌, 알키닐, 아릴, 아릴알콕시, 아릴아미노, 아릴티오, 카복시, 사이클로알킬, 에스테르, 에테르, 할로알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴아미노, 헤테로사이클로알킬, 수소, 티오, 설포네이트 및 설포닐아미노를 포함하는 그룹으로부터 선택되고, 이들은 임의로 치환되며;
R24는 알킬, 알킬아릴, 알킬렌, 알키닐, 아릴, 사이클로알킬, 에스테르, 할로, 할로알킬, 헤테로아릴, 헤테로사이클로알킬 및 수소를 포함하는 그룹으로부터 선택되고, 이들은 임의로 치환되며;
R25 및 R26은 각각 독립적으로 아실, 알킬, 아미노알킬, 알킬렌, 알킬티오, 알키닐, 아릴, 아릴알콕시, 아릴아미노, 아릴티오, 카복시, 사이클로알킬, 에스테르, 에테르, 할로, 할로알콕시, 할로알킬, 할로알킬에테르, 헤테로아릴, 헤테로아릴아미노, 헤테로사이클로알킬 및 수소를 포함하는 그룹으로부터 선택되고, 이들은 임의로 치환된다.
일반적으로, 본원에서 사용되는 바와 같은 용어 "임의로 치환된"은 알킬, 알킬렌, 알키닐, 아릴, 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬 또는 헤테로아릴과 같은 그룹이 치환되지 않거나 하나 이상의 치환체로 치환될 수 있음을 나타내는 것으로 한다. 그룹과 관련하여 "치환된"은 그룹내의 구성원 원자에 부착된 수소원자가 대체됨을 나타낸다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 화학식 VIIIa의 화합물에 관한 것이다:
[화학식 VIIIa]
Figure pct00002
위의 화학식 VIIIa에서,
X5는 CH2, C=O 및 C=S를 포함하는 그룹으로부터 선택되고;
Z1 및 Z2는 각각 독립적으로 알콕시, 알킬, 알킬아미노, 알킬렌, 알킬에테르, 알킬티오, 알키닐, 아미도, 아미노, 아릴, 아릴에테르, 아릴알콕시, 아릴아미노, 아릴티오, 카복시, 시아노, 사이클로알킬, 에스테르, 할로, 할로알콕시, 할로알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴아미노, 헤테로사이클로알킬, 하이드록실 및 수소를 포함하는 그룹으로부터 선택되거나, 두 개의 그룹은 서로 결합하여 5원 또는 6원 사이클릭, 헤테로사이클릭 및 헤테로아릴 환을 생성하고, 이들은 임의로 치환되며;
R27 및 R28은 각각 독립적으로 알콕시, 알킬, 알킬아미노, 알킬렌, 알킬에테르, 알킬티오, 알키닐, 아미도, 아미노, 아릴, 아릴에테르, 아릴알콕시, 아릴아미노, 아릴티오, 카복시, 시아노, 사이클로알킬, 에스테르, 할로, 할로알콕시, 할로알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴아미노, 헤테로사이클로알킬, 하이드록실, 수소, 니트로, 티오, 설포네이트, 설포닐 및 설포닐아미노를 포함하는 그룹으로부터 선택되고, 이들은 임의로 치환되며;
R29 및 R30은 각각 독립적으로 알콕시, 알킬, 알킬아미노, 알킬렌, 알킬에테르, 알킬티오, 알키닐, 아미도, 아미노, 아릴, 아릴에테르, 아릴알콕시, 아릴아미노, 아릴티오, 카복시, 시아노, 사이클로알킬, 에스테르, 할로, 할로알콕시, 할로알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴아미노, 헤테로사이클로알킬, 하이드록실, 수소, 니트로, 티오, 설포네이트, 설포닐 및 설포닐아미노를 포함하는 그룹으로부터 선택되거나, 두 개의 그룹은 서로 결합하여 5원 또는 6원 사이클릭, 헤테로사이클릭, 아릴 및 헤테로아릴 환을 형성하고, 이들은 임의로 치환된다.
본원에서 사용되는 바와 같은 용어 "알킬"은 직쇄 또는 측쇄를 갖는 치환되거나 치환되지 않은 C1-C10 알킬 그룹과 같은 그룹을 나타낸다.
본원에서 사용되는 바와 같은 용어 "사이클로알킬"은 C3-C8 환 구조의 치환되거나 치환되지 않은 사이클릭 화합물과 같은 그룹을 나타낸다.
본원에서 사용되는 바와 같은 용어 "헤테로아릴"은 환 구조 자체에 N, O 및 S의 하나 이상의 헤테로원자를 갖는 치환되거나 치환되지 않은 5원 내지 9원 방향족 화합물과 같은 그룹을 나타낸다.
본원에서 사용되는 바와 같은 용어 "임의로 치환된"은 그룹내의 구성원 원자에 부착된 수소원자가 가능하게는 C1-C10 알킬, 불소를 포함한 할로겐, OH, NO2, OR31, CN, NR31R32, COR31, SOR32, SO2R31, SO2NR31 , CR31=CR31R32, CR31=NR32, 아릴, 아릴옥시, C4-C10 헤테로아릴 그룹 또는 -NR31-COR32, -O-COR31과 같은 그룹으로 대체됨을 나타낸다.
R31 및 R32는 각각 독립적으로 수소, 알킬, 알킬옥시, 알킬아미노, 알킬카보닐, 알킬카보닐아미노, 알킬카보닐옥시, 알킬아미노카보닐, 알킬옥시카보닐, 사이클로알킬, 사이클로알킬옥시, 사이클로알킬아미노, 사이클로알킬카보닐, 사이클로알킬카보닐아미노, 사이클로알킬카보닐옥시, 사이클로알킬아미노카보닐, 사이클로알킬옥시카보닐, 헤테로아릴, 헤테로아릴옥시, 헤테로아릴 아미노, 헤테로아릴 카보닐, 헤테로아릴 카보닐아미노, 헤테로아릴 카보닐옥시, 헤테로아릴 아미노카보닐, 헤테로아릴 옥시카보닐, 헤테로아릴 알킬, 헤테로아릴 알킬옥시, 헤테로아릴 알킬아미노, 헤테로아릴 알킬카보닐, 헤테로아릴 알킬카보닐아미노, 헤테로아릴 알킬카보닐옥시, 헤테로아릴 알킬아미노카보닐, 헤테로아릴 알킬옥시카보닐, 페닐, 페닐옥시, 페닐아미노, 페닐카보닐, 페닐카보닐아미노, 페닐카보닐옥시, 페닐아미노카보닐 및 페닐옥시카보닐을 포함하는 그룹으로부터 선택되고, 이들은 임의로 치환된다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 실시예 7에 나타낸 바와 같은 화학식 125 내지 301 중의 하나를 갖는 화합물, 바람직하게는 표 4에 나타낸 바와 같은 화학식 132-135, 137, 139-140, 147, 151-152, 160, 163, 173, 180, 184-185, 193, 195, 199-201, 204, 206-222, 224, 226, 229, 231-243, 245-278, 280-286 및 290-301 중의 하나를 갖는 화합물에 관한 것이다. 특히 바람직한 화합물은 표 4에 나타낸 바와 같은 화학식 133, 232 및 264 중의 하나를 갖는 화합물이다.
하나의 양태에서, 본 발명은 화학식 II의 화합물에 관한 것이다:
[화학식 II]
Figure pct00003
위의 화학식 II에서,
R5 및 R6은 각각 독립적으로 아실, 알킬, 알킬아미노, 알킬렌, 알킬티오, 알키닐, 아릴, 아릴알콕시, 아릴아미노, 아릴티오, 카복시, 사이클로알킬, 에스테르, 할로알콕시, 할로알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴아미노, 헤테로사이클로알킬, 하이드록실, 수소, 설포네이트 및 설포닐을 포함하는 그룹으로부터 선택되고, 이들은 임의로 치환되며,
R7, R8 및 R9는 각각 독립적으로 알콕시, 알킬, 알킬아미노, 알킬렌, 알킬티오, 알키닐, 아미도, 아미노, 아릴, 아릴알콕시, 아릴아미노, 아릴티오, 카복시, 시아노, 사이클로알킬, 에스테르, 할로, 할로알콕시, 할로알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴아미노, 헤테로사이클로알킬, 하이드록실, 수소, 니트로, 티오, 설포네이트, 설포닐 및 설포닐아미노를 포함하는 그룹으로부터 선택되고, 이들은 임의로 치환된다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 화학식 IIa를 갖는 R5 및 R6가 결합되어 있는 화학식 II의 화합물에 관한 것이다:
[화학식 IIa]
Figure pct00004
위의 화학식 IIa에서,
n은 0, 1, 2 또는 3이고;
Y 및 Z는 각각 독립적으로 CH2, CHOR10, CHNR10R11 , CR10R11 및 NR10을 포함하는 그룹으로부터 선택되고;
R10 및 R11은 각각 독립적으로 아실, 알킬, 알킬아미노, 알킬렌, 알킬티오, 알키닐, 아릴, 아릴알콕시, 아릴아미노, 아릴티오, 카복시, 사이클로알킬, 에스테르, 할로알콕시, 할로알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴아미노, 헤테로사이클로알킬, 수소, 설포네이트 및 설포닐을 포함하는 그룹으로부터 선택되고, 이들은 임의로 치환된다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 표 2에 나타낸 바와 같은 화학식/스캐폴드 II를 갖는 화학식 중의 하나를 갖는 화합물 뿐만 아니라 실시예 6에 나타낸 바와 같은 화학식 1-123 중의 하나를 갖는 화합물, 바람직하게는 표 4에 나타낸 바와 같은 화학식 1-24, 26-34, 54, 56, 58-61, 63-64, 67, 90-101, 103-105, 107-109, 112, 114-116 및 118-121 중의 하나를 갖는 화합물에 관한 것이다. 특히 바람직한 화합물은 표 4에 나타낸 바와 같은 화학식 4 및 24 중의 하나를 갖는 화합물이다.
바람직하게는, 위에 정의된 화합물은 숙주 세포, 바람직하게는 대식세포 내에서 5 내지 20μM, 바람직하게는 5μM 미만의 농도에서 박테리아 성장, 바람직하게는 마이코박테리움 투베르쿨로시스의 성장에 대해 억제 활성, 바람직하게는 65% 초과의 억제 활성을 갖는다.
하나의 양태에서, 본 발명은 박테리아 감염의 치료에 사용하기 위한 앞서 정의한 화합물에 관한 것이다.
하나의 양태에서, 본 발명은 결핵의 치료에 사용하기 위한 앞서 정의한 화합물에 관한 것이다.
하나의 양태에서, 본 발명은 앞서 정의한 화합물을 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다.
하나의 양태에서, 본 발명은 적당량의 앞서 정의한 화합물을 결핵의 치료를 필요로 하는 사람에게 적용함을 포함하는 결핵의 치료방법에 관한 것이다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 표 3에 나타낸 바와 같은 화학식/스캐폴드 I, III-VII 및 IX-XX 중의 하나를 갖는 화합물에 관한 것이다.
하나의 양태에서, 본 발명은 화학식 I의 화합물에 관한 것이다:
[화학식 I]
Figure pct00005
위의 화학식 I에서,
X1 및 X2는 각각 독립적으로 CH 및 NH를 포함하는 그룹으로부터 선택되고;
R1 및 R2는 각각 독립적으로 알콕시, 알킬, 알킬아미노, 알킬렌, 알킬티오, 알키닐, 아미도, 아미노, 아릴, 아릴알콕시, 아릴아미노, 아릴티오, 카복시, 시아노, 사이클로알킬, 에스테르, 할로, 할로알콕시, 할로알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴아미노, 헤테로사이클로알킬, 하이드록실, 수소, 니트로, 티오, 설포네이트, 설포닐 및 설포닐아미노를 포함하는 그룹으로부터 선택되고, 이들은 임의로 치환되며;
R3 및 R4는 각각 독립적으로 알콕시, 알킬, 알킬아미노, 알킬렌, 알킬티오, 알키닐, 아릴, 아릴알콕시, 아릴아미노, 아릴티오, 시아노, 사이클로알킬, 할로알콕시, 할로알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴아미노, 헤테로사이클로알킬 및 수소를 포함하는 그룹으로부터 선택되고, 이들은 임의로 치환된다.
하나의 양태에서, 본 발명은 화학식 III의 화합물에 관한 것이다:
[화학식 III]
Figure pct00006
위의 화학식 III에서,
R10 및 R11은 각각 독립적으로 알콕시, 알킬, 알킬아미노, 알킬렌, 알킬티오, 알키닐, 아미도, 아미노, 아릴, 아릴알콕시, 아릴아미노, 아릴티오, 카복시, 시아노, 사이클로알킬, 에스테르, 할로, 할로알콕시, 할로알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴아미노, 헤테로사이클로알킬, 하이드록실, 수소, 니트로, 티오, 설포네이트, 설포닐 및 설포닐아미노를 포함하는 그룹으로부터 선택되고, 이들은 임의로 치환된다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 화학식 IV의 화합물에 관한 것이다:
[화학식 IV]
Figure pct00007
위의 화학식 IV에서,
A는 임의로 치환된 헤테로아릴, 나프틸 및 페닐이고,
R12는 알콕시, 알킬, 알킬아미노, 알킬렌, 알킬티오, 알키닐, 아미도, 아미노, 아릴, 아릴알콕시, 아릴아미노, 아릴티오, 카복시, 시아노, 사이클로알킬, 에스테르, 할로, 할로알콕시, 할로알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴아미노, 헤테로사이클로알킬, 하이드록실, 수소, 니트로, 티오, 설포네이트, 설포닐 및 설포닐아미노를 포함하는 그룹으로부터 선택되고, 이들은 임의로 치환된다.
하나의 양태에서, 본 발명은 화학식 V의 화합물에 관하 것이다:
[화학식 V]
Figure pct00008
위의 화학식 V에서,
R13, R14 및 R15는 각각 독립적으로 알콕시, 알킬, 알킬아미노, 알킬렌, 알킬티오, 알키닐, 아미도, 아미노, 아릴, 아릴알콕시, 아릴아미노, 아릴티오, 카복시, 시아노, 사이클로알킬, 에스테르, 할로, 할로알콕시, 할로알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴아미노, 헤테로사이클로알킬, 하이드록실, 수소, 니트로, 티오, 설포네이트, 설포닐 및 설포닐아미노를 포함하는 그룹으로부터 선택되고, 이들은 임의로 치환된다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 화학식 VI의 화합물에 관한 것이다:
[화학식 VI]
Figure pct00009
위의 화학식 VI에서,
R16은 알콕시, 알킬, 알킬아미노, 알킬렌, 알키닐, 아미노, 아릴, 아릴알콕시, 아릴아미노, 아릴티오, 사이클로알킬, 할로알콕시, 할로알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴아미노, 헤테로사이클로알킬, 하이드록실 및 수소를 포함하는 그룹으로부터 선택되고, 이들은 임의로 치환되며,
R17은 알콕시, 알킬, 알킬아미노, 알킬렌, 알킬티오, 알키닐, 아미도, 아미노, 아릴, 아릴알콕시, 아릴아미노, 아릴티오, 카복시, 시아노, 사이클로알킬, 에스테르, 할로, 할로알콕시, 할로알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴아미노, 헤테로사이클로알킬, 하이드록실, 수소, 니트로, 티오, 설포네이트, 설포닐 및 설포닐아미노를 포함하는 그룹으로부터 선택되고, 이들은 임의로 치환된다.
하나의 양태에서, 본 발명은 화학식 VII의 화합물에 관한 것이다:
[화학식 VII]
Figure pct00010
위의 화학식 VII에서,
R18 및 R19는 각각 독립적으로 알콕시, 알킬, 알킬아미노, 알킬렌, 알킬티오, 알키닐, 아미도, 아미노, 아릴, 아릴알콕시, 아릴아미노, 아릴티오, 카복시, 시아노, 사이클로알킬, 에스테르, 할로, 할로알콕시, 할로알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴아미노, 헤테로사이클로알킬 및 수소를 포함하는 그룹으로부터 선택되고, 이들은 임의로 치환된다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 표 2에 나타낸 바와 같은 화학식 I, III-VII 및 IX-XX 중의 하나를 갖는 화합물에 관한 것이다.
하나의 양태에서, 본 발명은 표 1에 열거된 화합물에 관한 것이다.
하나의 양태에서, 본 발명은 박테리아 감염의 치료에 사용하기 위한 앞서 정의한 화합물에 관한 것이다.
하나의 양태에서, 본 발명은 결핵의 치료에 사용하기 위한 앞서 정의한 화합물에 관한 것이다.
하나의 양태에서, 본 발명은 앞서 정의한 화합물을 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다.
하나의 양태에서, 본 발명은 적당량의 앞서 정의한 화합물을 결핵의 치료를 필요로 하는 사람에게 적용함을 포함하는 결핵의 치료방법에 관한 것이다.
또 다른 양태에서, 본 발명은
(a) 숙주 세포를 형광 표지된 마이코박테리움 투베르쿨로시스 마이코박테리아로 배치 감염(batch infection)시키는 단계;
(b) 결합되지 않은 유리 마이코박테리아를 제거하는 단계;
(c) 시험하고자 하는 화합물을 다중-웰 플레이트에 가하는 단계;
(d) 형광 표지된 마이코박테리움 투베르쿨로시스 마이코박테리아로 감염된 숙주 세포를 상기 화합물을 함유하는 다중-웰 플레이트에 접종하는 단계;
(e) 형광 표지된 마이코박테리움 투베르쿨로시스 마이코박테리아로 감염된 숙주 세포 및 상기 화합물을 함유하는 다중-웰 플레이트를 배양하는 단계;
(f) 상기 숙주 세포를 형광 표지하는 단계;
(g) 자동 공초점 현미경(automated confocal microscopy)을 사용하여 상기 다중-웰을 분석하는 단계를 포함하는 스크리닝 방법에 관한 것이다.
본 발명에 따르는 스크리닝 방법은 숙주 대식세포 내에서 마이코박테리움 투베르쿨로시스의 증식을 방해하는 약물을 찾을 수 있는 표현형 세포계 검정을 나타낸다. 당해 검정은 형광 표지된 마이코박테리아로 감염된 형광 표지된 살아있는 대식세포를 사용하며, 세포내 마이코박테리아 성장을 측정하기 위해 자동 공초점 형광 현미경을 사용한다. 검정은 대규모 화학적 라이브러리의 고속 스크리닝(high throughput screening; HTS)을 위해 설정된다.
이하에서는 도면 및 표를 참고한다.
도 1은 자동 공초점 현미경에 의한 대식세포 내에서의 결핵균 세포내 성장의 모니터링을 보여준다: (a) 감염후 상이한 시점에서의 마이코박테리움 투베르쿨로시스 H37Rv-GFP로 감염된 Raw264.7 세포의 대표적인 사진. (b) 이미지 분석: 1: 전형적인 2-색 이미지; 2: 원형 물체(Circled object)는 검출된 세포에 상응한다; 3: 원형 물체는 박테리아 응집물에 상응한다; 4: 메워진 자주색 세포는 감염된 세포에 상응한다. (c,d,e) 0.5(회색 정사각형), 1(검정색 원) 및 2(짙은 회색 삼각형)의 감염 다중도(multiplicity of infection)로 H37Rv-GFP로 감염시킨지 2시간 내지 7일 후의 감염된 세포의 비율(%) 및 세포의 평균 수의 이미지-기반 정량. 비-감염된 세포(검정색 다이아몬드)를 음성 대조군으로서 사용하였다;
도 2는 시험관내 성장 형광 검정 및 표현형 세포계 검정에서 참조 약물의 약리학적 검증 및 MIC(최소 억제 농도) 비교를 보여준다: (a) 1㎍/mL의 INH 또는 DMSO 대조군의 존재하에서의 감염된 세포의 대표적인 사진. (b,c,d) INH, 리팜핀 및 에티온아미드의 용량-반응; 검정색 정사각형 및 선은 세포계 검정에서의 성장 억제에 상응한다; 회색 원 및 선은 시험관내 성장 억제에 상응한다; 대표적인 데이타 세트가 나타나 있다;
도 3은 표현형 세포계 검정의 분석 자동화 검증(assay automation validation)을 보여준다: (a) 384-플레이트 웰-지수를 기준으로 한 마이코박테리움 투베르쿨로시스 감염된 세포의 %. 검정색 정사각형, 짙은 회색 정사각형, 회색 정사각형 및 열린 정사각형은 각각 INH 1㎍/mL, 리팜핀 5㎍/mL, PBS 및 DMSO 대조군에 상응한다. (b,c) INH 및 리팜핀 농도를 기준으로 한 마이코박테리움 투베르쿨로시스 감염된 세포의 %. 실험은 두 개의 독립적인 날짜에 4개의 상이한 플레이트에서 수행하였다;
도 4는 26500개 화합물에 대한 표현형 세포계 검정 및 시험관내 성장 검정에 대한 1차 스크리닝 결과를 보여준다: (a) 각각의 화합물에 대한 감염 비를 기준으로 한 억제율(%) 및 분포. (b) 각각의 화합물에 대한 RFU를 기준으로 한 억제율(%) 및 분포. (c) 각각의 화합물에 대한 표현형 세포계 검정 및 시험관내 성장 검정에 대한 억제율(%)의 비교;
도 5는 시험관내 성장 형광 검정 및 표현형 세포계 검정으로부터의 연속 희석 결과를 보여준다: (a,b,c) 시험관내 박테리아 성장 (d,e,f) 시험관내 성장과 세포내 성장 둘 다 및 (g,h,i) 세포내 성장만을 억제하는 화합물에 대한 전형적인 곡선. (a,d,g) 화합물 농도를 기준으로 한 감염 비. (b,e,h) 화합물 농도를 기준으로 한 세포 수. (c,f,i) 화합물 농도를 기준으로 한 상대적 형광 강도. 화합물 농도는 M로 제공된다;
도 6은 (a) 분석 자동화의 개략도; (b) 384-플레이트 포멧 기술; (c) 384-플레이트 용량-반응 곡선 기술을 보여주며, A 내지 P 및 a 내지 b는 웰 A 또는 a에서 출발 농도를 20mg/mL로 하여 각각 INH 및 리팜핀의 2배 연속 희석에 상응하며; RIF: 리팜핀 5㎍/mL, Cpd: 화합물, INH100 1㎍/mL, INH50 0.05㎍/mL;
도 7은 MOI 2.5:1(대조군 INH 5μM)로 감염시킨지 7일 후의 50ng/mL rhM-CSF(1.5*104)로 변이시킨 (a) Raw267.4(104 세포), (b) 마우스 골수-유도된 대식세포 및 (c) 사람 1차 대식세포에서의 마이코박테리움 투베르쿨로시스 H37Rv-GFP에 대한 화합물 4 및 24(5μM)의 항-결핵 효과를 보여준다.
도 8은 마이코박테리움 투베르쿨로시스 H37Rv로 감염시킨 후 상이한 시점에서 대식세포로부터 회수된 콜로니 형성 단위(CFU)를 예시한다. Raw264.7 세포(a) 또는 뮤린 BMDM(b)를 1:1의 MOI로 감염시키고 DMSO, INH(10μM) 및 RIF(10μM)를 대조군으로 하여 지정된 양의 피리도피리미디논 화합물 232(20μM)로 처리하였다.
표 1은 세포내(QIM) 검정 또는 시험관내(QUM) 검정에서 억제 활성이 확인된 340개 히트를 열거하며, 여기서, 약어 "QIM"은 세포내 마이코박테리아의 정량(Quantification of Intracellular Mycobacteria)을 나타내고, 약어 "QUM"은 시험관내에서 성장한 마이코박테리아의 정량(Quantification of in vitro grown Mycobacteria)을 나타내며, 약어 "CellNb"은 세포 수를 나타낸다;
표 2는 20μM에서 명백한 세포 독성 없이 2μM에서 65% 이상의 억제 활성을 입증하는 121개의 화합물을 열거하며, 따라서, 이것은 10회의 3배 연속 희석에 의한 추가의 확인을 위해 선택되었다;
표 3은 표 2에 열거된 121개의 히트의 독립적인/일반적인 분자 스캐폴드/화학식을 요약한다;
표 4는 각각의 억제 활성을 갖는 디니트로벤즈아미드 및 피리도피리미디논 유도체(각각 화학식 II 및 VIII, 표 3 참조)를 열거하며, 여기서, 굵게 인쇄된 숫자는 실시예 6 및 7에 열거된 화합물을 나타낸다;
표 5는 디니트로벤즈아미드 화합물 4 및 24의 세포독성 및 항균 스펙트럼을 보여준다(표 4 참조);
표 6은 피리도피리미디논 화합물 133의 세포독성 및 항균 스펙트럼을 보여준다(표 4 참조);
표 7은 대표적인 디니트로벤즈아미드 및 피리도피리미디논 화합물에 대한 자발적 내성(spontaneous resistance)의 빈도를 보여준다.
이하에서는 다음의 실시예를 참고로 하여 본 발명을 더욱 상세하게 기재하며, 이러한 실시예는 본 발명의 범위를 제한하는 것이 아니라 예시하기 위해 의도된다.
재료 및 방법
유전자 작제물 및 마이코박테리아 균주
녹색 형광 단백질을 발현하는 마이코박테리움 투베르쿨로시스 H37Rv의 재조합 균주(H37Rv-GFP)는 통합성 플라스미드(integrative plasmid)의 형질전환에 의해 수득하였다(문헌 참조; Abadie et al., 2005; Cremer et al., 2002). Ms6 마이코박테리오파지로부터 유도되는 이러한 플라스미드 내에서, gfp 유전자를 클로닝하고 강한 마이코박테리아 프로모터 pBlaF 하에서 구조적으로 발현시킨다. 마이코박테리움 투베르쿨로시스 H37Rv-GFP에 대한 전기충격용 세포(electrocompetent cell)를 알부민-덱스트로즈-카탈라제(ADC, 제조원; Difco, Sparks MD, USA), 글리세롤 및 0.05% 트윈 80으로 보충된 15일된 Middlebrook 7H9 배양액(제조원; Difco, Sparks MD, USA) 400mL로부터 제조하였다. 3000g에서 20분 동안 원심분리하여 바실러스를 수거하고, 실온에서 H2O로 2회 세척하며, 실온에서 재원심분리한 후 10% 글리세롤 1-2mL에 재현탁시켰다. 바실러스 250㎕를 플라스미드를 암호화하는 녹색 형광 단백질과 혼합하고, 바이오라드 유전자 펄서(제조원; Biorad)를 사용하여 전기천공시켰다. 전기천공 후, 바실러스를 배지에 재현탁시키고, 37℃에서 1일간 방치하였다. 형질전환체를 올레산-알부민-덱스트로즈-카탈라제(OADC, 제조원; Difco, Sparks MD, USA) 및 50㎍/mL 하이그로마이신(제조원; Invitrogen, Carlsbad, CA USA)으로 보충된 Middlebrook 7H11 배지(제조원; Difco, Sparks MD, USA)에서 선택하였다. 선택된 하이그로마이신-내성 및 녹색 형광 콜로니가 3주후에 출현하였다. H37Rv-GFP 균주의 배양액 100mL를 0.05% 트윈 80 및 50㎍/mL 하이그로마이신으로 보충된 Middlebrook 7H9-ADC 배지에서 성장시켰다. 박테리아를 수거하고, 2회 세척하고, 50mM 인산나트륨 완충액(pH 7.5)에 현탁시켰다. 이어서, 박테리아를 초음파 처리하고, 1시간 동안 정치시켜 잔류 응집물이 침강되도록 하였다. 이어서, 박테리아 현탁액을 분취화하고 -80℃에서 동결시켰다. 단독 해동된 분취액을 사용하여 접종 전 CFU(콜로니 형성 단위)를 정량하였으며, 전형적인 스톡 농도는 약 2 내지 5 x 108 CFU/mL이었다.
숙주 세포
50ng/mL PMA(제조원; Sigma)로 변이시킨 마우스 대식세포 세포주 Raw 264.7(ATCC # TIB-71), J774A.1(ATCC # TIB-67) 또는 사람 단핵구(ATCC # TIB-202)를 10% 열-불활성화된 태아 송아지 혈청(제조원; Gibco)을 갖는 RPMI 1640(제조원; Gibco)에서 성장시켰다.
화학적 화합물
스크리닝 라이브러리로부터의 합성 소분자를 Corning 96 웰 투명 V-바닥 폴리프로필렌 플레이트(제조원; Corning, #3956)에서 10mM(마스터 플레이트)의 농도로 순수 DMSO(제조원; Sigma, D5879-500mL)에 현탁시켰다. 이어서, 화합물을 Greiner 384 웰 V형 폴리프로필렌 플레이트(제조원; Greiner, #781280)에서 재포맷하고, 순수 DMSO 속에서 2mM의 최종 농도로 되도록 희석시켰다. 화합물을 사용할 때까지 동결시켜 두었다. 스크리닝을 위해, 화합물 플레이트를 해동될 때까지 실온에서 항온처리하였다. 화합물을 EVObird 액체 핸들러(제조원; Evotec Technologies)를 사용하여 DMSO 스톡으로부터 분석 플레이트에 직접 가하며, 상기 핸들러는 화합물 250nl를 2회 전달하여 1:100의 최종 희석도에 도달한다. 이러한 1단계 희석은 중간 플레이트에서의 화합물 침전 위험을 감소시키고, 낮은 최종 DMSO 농도(1%)를 가능케 한다.
양성 대조군 항생제(이소니아지드(제조원; Sigma, I3377-50G) 및 리팜핀(제조원; Euromedex, 1059-8, 5g)) 뿐만 아니라 음성 대조군(DMSO)을 각각의 플레이트에서 컬럼 1-2 및 23-24에 수동으로 가하였다(플레이트 설명에 대해서는 도 6b 참조).
총 26500개의 화합물을 시험하였다. 이들 화합물은 Timtec으로부터의 시판 라이브러리로부터 수득되었다(25000개는 ActiProbe 다양한 라이브러리로부터 수득되고, 1000개는 키나제 억제제 ActiTargK 라이브러리로부터 수득되고, 500개는 프로테아제 억제제 ActitargP 라이브러리로부터 수득됨). 스크리닝된 화합물을 높은 다양성(diversity) 및 약물-유사 특성을 기준으로 하여 (리핀스키 룰-오브-파이브(Lipinski rule-of-five)를 사용하여) 선택하였다(문헌 참조; Lipinski et al., 2001)). 이들을 먼저 하나의 농도(1차 스크린, 농도 = 20μM)에서 스크리닝하였다. 이어서, 1차 스크린으로부터 선택된 "양성" 화합물을 가장 활성인 것을 동정하기 위해 3개의 농도(20μM, 2μM 및 0.2μM)에서 시험함으로써 및/또는 10회의 3배 희석에 의해(20μM 내지 0.5nM) 확인하였다.
대식세포 진입 검정 설정
세포를 먼저 384-웰 플레이트(제조원; Evotec technologies #781058)의 웰 당 20,000개 세포의 밀도로 16시간 동안 50㎕를 접종한 다음 10:1 내지 1:1(박테리아:숙주 세포)로 다양한 감염 다중도(MOI)에서 박테리아 현탁액으로 감염시켰다. 2시간 후, 세포를 인산염 완충 염수(PBS)로 3회 세척하고, 신선한 배양 배지에서 희석시킨 화합물을 가하였다. 세포를 37℃, 5% CO2에서 7일 이하 동안 항온처리하였다.
대식세포 배치 감염 검정 스케일-업
세포(1.5 x 108개 세포)를 진탕시키면서(100rpm) 37℃에서 2시간 동안 300mL에서 1:1의 MOI로 H37Rv-GFP 현탁액으로 감염시켰다. 1100rpm에서 5분 동안 원심분리(Beckman SX4250, 165g)에 의해 2회 세척한 후, 감염된 세포 현탁액으로부터의 남은 세포외 바실러스를 1시간의 아미카신(amykacin)(20μM, 제조원; Sigma, A2324-5G) 처리에 의해 사멸시켰다. 최종 원심분리 단계 후, 세포를 웰메이트(Wellmate)(제조원; Matrix)와 함께 세포 배지에서 희석시킨 각각의 화합물 10㎕로 예비플레이팅된 384-웰 Evotec 플레이트(#781058)에 분배하였다. 이어서, 감염된 세포를 화합물의 존재하에서 37℃, 5% CO2에서 5일 동안 항온처리하였다. 5일 후, 대식세포를 SYTO 60(제조원; Invitrogen, S11342)으로 염색한 다음 플레이트를 밀봉하고 이미지를 획득하였다. 스크리닝 동안, 세포 화학 염료와의 연장된 항온처리로 인한 세포사를 제한하기 위해 2시간마다 3개의 플레이트 세트에서 살아있는 세포를 염색하였다.
이미지 획득 및 데이타 분석
20X-워터 대물렌즈(NA 0.70), 488-nm 및 635-nm 레이저 및 488/635 1차 이색 미러(primary dichroic mirror)를 사용하여 자동 형광 공초점 현미경 OperaTM(제조원; Evotec Technologies)에서 공초점 이미지를 기록하였다. 이어서, 각각의 이미지를 전용 인-하우스 이미지 분석 소프트웨어(IM)를 사용하여 프로세싱하였다. 결정된 파라미터는 총 세포 수 및 감염된 세포의 수이었다. 간략하게, 알고리즘은 먼저 달리 기재된 바와 같은(문헌 참조; Fenistein et al., manuscript in press) 프로세싱 단계의 순서를 사용하여 적색 채널에서 세포를 분절한다. 이것은 일반적으로 1) 본래 이미지의 히스토그램의 역치를 선정하고(thresholding)(3종류의 K-평균), 2) 세포의 평균 반경과 동일하게 설정된 표준 편차로 본래 이미지를 가우스 필터링하며(gaussian filtering), 3) 각각의 세포 자체의 표면을 한정하는 성장하는 영역 4)에 대한 시드(seed)로서 세포 중심을 제공하는 필터링된 이미지의 로컬 맥시마(local maxima)를 찾고, 최종적으로 5) 잠재적인 인공산물 또는 노이즈로서 극히 작은 세포를 제거하는 것을 계속함을 기초로 한다. 이러한 단계를 적색 채널에서의 세포의 총 수를 제공한다. 이어서, 감염된 세포를, 녹색 채널에서의 강도가 소정의 강도 역치 이상인 적어도 소정 갯수의 픽셀(통상적으로 3개)을 갖는 것으로서 정의한다. 세포의 총 수에 대한 감염된 세포의 비가 중요한 척도(명명된 감염비)이다. 각각의 웰에 대해, 4개의 사진을 기록하였으며, 각각의 파라미터에 대해 4개의 이미지의 평균을 사용하였다.
이어서, 세포내 검정 이미지 분석 또는 통상적인 항균 검정(아래 참조)으로부터 수득된 데이타를 ActivityBase(제조원; IDBS)를 사용하여 프로세싱하여 통계학적 데이타(억제율 %, 각각의 화합물에 대해 Z 스코어, Z', 대조군 플레이트에 대해 CV 등)를 계산하고 Oracle 데이타베이스에 데이타를 저장하였다. 스크린의 품질 관리 및 히트 확인 둘 다에 관한 추가의 분석을 Spotfire(제조원; Tibco) 및 Pipelinepilot(제조원; Accelrys)를 포함한 다양한 소프트웨어 패키지를 사용하여 수행하였다.
시험관내 호기성 박테리아 성장 검정
동결된 분취량의 마이코박테리움 투베르쿨로시스 H37Rv-GFP를 0.05% 트윈 80으로 보충된 Middlebrook 7H9-ADC 배지에서 1.5 x 106 CFU/mL로 희석시켰다. Greiner μclear-black 384-웰 플레이트(제조원; Greiner, #781091)에 먼저 0.05% 트윈 80으로 보충된 Middlebrook 7H9-ADC 배지 10㎕ 중에 EVOBird(제조원; Evotec)에 의해 분배된 화합물 0.5㎕를 예비플레이팅하였다. 이어서, 희석된 H37Rv-GFP 박테리아 현탁액 40㎕를 희석된 화합물의 상부에 가하여, 1% DMSO를 함유하는 50㎕의 최종 용적을 생성하였다. 플레이트를 37℃, 5% CO2에서 10일간 항온처리하고, 그후 GFP-형광을 Victor 3 판독기(제조원; Perkin-Elmer Life Sciences)를 사용하여 기록하였다.
대식세포 감염 검정 및 이미지 분석
Raw 264.7(ATCC # TIB-71)(1.5*108 세포)를 진탕시키면서 37℃에서 2시간 동안 1:1의 MOI로 현탁액 상태로 H37Rv-GFP(문헌 참조; Abadie et al ., 2005, Cremer et al ., 2002)로 감염시켰다. 원심분리에 의해 2회 세척한 후, 감염된 세포 현탁액으로부터의 남은 세포외 바실러스를 1시간의 아미카신(20μM, 제조원; Sigma, A2324) 처리에 의해 사멸시켰다. 최종 원심분리 단계 후, 세포를 화합물 및 대조군으로 예비플레이팅된 384-웰 Evotec 플레이트(#781058)에 분배하였다. 이어서, 감염된 세포를 37℃, 5% CO2에서 5일 동안 항온처리하였다. 뮤린 골수-유도된 대식세포(Bone Marrow-Derived Macrophage; BMDM)를 이전에 기재된 바와 같이 제조하였다(문헌 참조; Brodin et al ., 2006). 간략하게, 세포를 6주령 암컷 마우스(C57BL/6, Orientbio)의 대퇴골 및 경골로부터 추출하고, 10% 열-불활성화된 태아 송아지 혈청(FCS)을 함유하는 RPMI 1640 배지(둘 다 Gibco®로부터, 제조원; Invitrogen, Carlsbad, CA) 및 10% L-929 세포 컨디셔닝된 배지에서 배양하였다. 말초 혈액 단핵 세포(Peripheral Blood Mononuclear Cell; PBMC)를 건강한 지원자로부터의 백혈구 연층(Buffy coat)으로부터 분리하였다. 1% FCS로 보충된 PBS에 희석된 백혈구 연층을 Ficoll-Paque Plus(제조원; Amersham Biosciences, Sweden) 15ml로 처리하고 2500xg에서 20분 동안 원심분리하였다. CD14+ 비드 분리(제조원; Miltenyi Biotec, Germany)에 의해 PBMC를 수득하고, PBS(1% FCS)로 3회 세척하고, RPMI 1640 배지, 10% FCS 및 50ng/ml의 재조합-사람 대식세포 콜로니 자극 인자(제조원; R & D systems, Minneapolis)를 함유하는 75cm2 배양 플라스크로 옮겼다. 6주된 부착성 뮤린 BMDM 및 PBMC 유도된 사람 대식세포를 37℃에서 2시간 동안 1:1의 MOI로 현탁액 상태로 H37Rv-GFP(문헌 참조; Abadie et al ., 2005)로 감염시킨 다음 광범위하게 세척하고, 마지막으로 화합물 또는 대조군과 함께 항온처리하였다. 며칠 후, 대식세포를 SYTO 60(제조원; Invitrogen, S11342)으로 염색하고, OperaTM(20X-워터 대물렌즈, NA 0.70)과 일체화되고 BSL-3 안전 실험실에 위치하는 EVOscreen-MarkIII 완전 자동 플랫폼(제조원; PerkinElmer)에서 이미지를 획득하였다. 마이코박테리아-GFP는 535/50nm 검출 필터와 커플링된 488-nm 레이저를 사용하여 검출하고, 세포를 690/40nm 검출 필터와 커플링된 635-nm 레이저로 표지하였다. 각각의 플레이트 웰에 대해 4개의 필드를 기록한 다음 각각의 이미지를 달리 기재된 바와 같은(문헌 참조; Fenistein et al., in press) 전용 인-하우스 이미지 분석 소프트웨어(IM)를 사용하여 프로세싱하였다.
마이코박테리아 염색 및 시험관내 박테리아 성장 검정
마이코박테리움 투베르쿨로시스 H37Rv, H37Ra 및 BCG 파스퇴르를 기준 염료(reference strain)로서 사용하였다. 모든 염료를 0.05% 트윈 80으로 보충된 Middlebrook 7H9-ADC 배지 속에서 1.5 x 106 CFU/mL로 희석시켰다. 384-웰 플레이트(제조원; Greiner, #781091)에 먼저 0.05% 트윈 80으로 보충된 Middlebrook 7H9-ADC 배지 10ml 중에 EVOBird(제조원; Evotec)에 의해 분배된 화합물 0.5㎕를 예비플레이팅하였다. 이어서, 희석된 H37Rv-GFP 박테리아 현탁액 40㎕를 희석된 화합물에 가하여, 1% DMSO를 함유하는 50㎕의 최종 용적을 생성하였다. 플레이트를 37℃, 5% CO2에서 10일간 항온처리하였다. H37Rv-GFP에 대해 Victor 3 판독기(제조원; Perkin-Elmer Life Sciences)를 사용한 GFP-형광을 측정함으로써 또는 레사주린 방법(resazurin method)으로 마이코박테리아 성장을 결정하였다. 0.05㎍/mL 및 1㎍/mL의 이소니아지드(제조원; Sigma, I3377), 1㎍/mL의 리팜핀(제조원; Euromedex) 및 DMSO를 대조군으로서 사용하였다.
세포독성 검정
화합물 독성을 해결하기 위해, 상이한 체조직으로부터 기원한 7개의 세포주를 100μM로부터 출발하여 화합물의 3배 희석물의 존재하에 배양하였다. 배양한지 5일 후, 레사주린 시험에 의해 세포 생존률(cell viability)을 평가하였다. 간략하게, 세포를 5% CO2하에 37℃에서 4시간 동안 10㎍/mL의 레사주린(제조원; Sigma-Aldrich St. Louis, MO)과 함께 항온처리하였다. 레조푸린 형광(Resofurin fluorescence; RFU)을 위에 제시된 바와 같이 측정하였다. 세포의 독성률(%)을 다음과 같이 계산하였다: 세포독성(%) = (RFUDMSO-RFU블랭크) - (RFU화합물-RFU블랭크) / (RFUDMSO-RFU블랭크)×100. 세포독성률(%)을 화합물 농도에 대해 플롯팅하고, 최소 독성 농도(minimal toxic concentration; MTC50)를 50% 독성이 상응하는 세포주에서 관찰되는 최저 화합물 농도로서 비회귀 분석에 의해 결정하였다.
자발적 내성의 빈도
자발적 돌연변이의 빈도를, 증가하는 농도의 디니트로벤즈아미드(0.2, 0.8, 1.6 및 3.2㎍/mL) 또는 피리도피리미디논(0.4, 0.8, 1.6 및 3.2㎍/mL) 화합물을 함유하는 7H10 플레이트에서 측정하였다. 106, 107 및 108 CFU 함유 박테리아 현탁액을 화합물 함유 한천 플레이트 상에 분산시켰다. 37℃에서 5-6주 후, 콜로니를 계수하고, 돌연변이의 빈도를 원래의 접종원(original inoculum)에 대한 콜로니의 비로서 평가하였다. DMSO 및 INH를 각각 음성 및 양성 대조군으로서 사용하였다.
실시예 1: 표현형 대식세포계 검정 설정 및 자동 이미지 정량
마이코박테리움 투베르쿨로시스 감염의 최적 조건을 설정하기 위해, Raw264.7 대식세포를 먼저 상이한 감염 다중도(MOI)로 녹색 형광 단백질(GFP)을 구조적으로 발현하는 마이코박테리아로 감염시킨 다음 동력학적으로 분석하였다. 바실러스로 감염시킨지 7일째까지, 살아있는 숙주 세포를 적색 화학적 형광 염료 Syto60로 매일 표지하고, 자동 공초점 현미경을 사용하여 살아있는 샘플의 공초점 이미지를 획득하였다. 전형적인 이미지가 도 1a에 도시되어 있다. 처음 24시간 동안, 몇몇 이산적인 약한 형광성 박테리아가 세포내에 편재되었다. 2일째까지, 세포의 평균 수는 증가하며, 마이코박테리아는 주변 세포로 퍼지기 시작하여, 강한 형광성 박테리아 영역을 야기한다. 녹색 신호의 부위(localization)는 항상 적색 세포 신호의 5㎛ 거리내이며, 대부분의 경우 실제로 세포 신호와 중첩된다. 이것은 마이코박테리아 성장의 세포내 본질을 확인시켜 준다. 4일째까지, 세포 수는 상당히 감소하며, 박테리아는 매우 형광성인 큰 응집물을 형성하며, 이것은 5일째 이후 전체 이미지를 거의 커버한다. 대조군으로서, 비-감염된 세포를 2일째 합류점(confluence)까지 성장시키며, 7일째까지 생존한 채로 있었다.
세포내 박테리아 부하를 자동으로 정량하기 위해, 인-하우스 이미지 분석 스트립트를 개발하였다. 이러한 스크립트는 세포의 수 및 감염된 세포의 비율(%)의 자동 정량을 가능케 하며, 여기서, 감염된 세포는 정의된 역치 이상의 강도를 갖는 적어도 3개의 녹색 픽셀을 함유하는 세포이다(도 1b). 감염시킨지 2시간 후, Raw264.7 세포의 2 내지 10%에 적은 수의 바실러스가 번식하는 것으로 밝혀졌다(도 1c). 감염된 세포의 비율(%)(이하, 감염 비라고 함)은 감염시킨지 72시간부터 계속 증가하여 감염시킨지 7일째에는 70%에 이르렀다. 감염 비에 있어서의 이러한 증가는 세포 사망률의 증가와 상관성이 있었다(도 1d/e).
실시예 2: 공지된 항-결핵 약물의 비교 최소 억제 농도
검정 설정을 확인하기 위해, 마이코박테리움 투베르쿨로시스 세포내 성장에 대한 최신 항-결핵 약물의 효과를 조사하였다. 이소니아지드(INH), 리팜핀 및 에티온아미드의 2배 연속 희석을 수행한 다음 마이코박테리움 투베르쿨로시스 H37Rv-GFP로 이전에 감염시킨 대식세포에서 시험하였다. 5일간 배양한 후, 대식세포를 염색하고, 상기한 바와 같이 자동 공초점 현미경에서 이미지를 획득하였다. DMSO 음성 대조군과 비교하여 INH와 함께 배양한 샘플에 상응하는 사진에서, 보다 많은 수의 세포와 보다 적은 수의 박테리아가 명확히 보인다. 이것은 INH가 세포내 마이코박테리움 투베르쿨로시스 성장 및 바실러스 매개된 세포독성 둘 다를 방지함을 보여준다(도 2a). 분명한 억제 용량-반응 곡선이 이미지-추출 분석(image-extracted analysis)에 의해 수득되었다(도 2b). 병행하여, INH에 의한 마이코박테리움 투베르쿨로시스 H37Rv-GFP 시험관내 성장의 억제를 동일한 조건하에서 녹색 형광 강도를 기록함으로써 모니터링하였다. 두 가지 실험 모두에서, INH에 대한 최소 억제 농도(minimal inhibitory concentration; MIC)는 0.1㎍/mL이었으며, 이것은 세포외 마이코박테리움 투베르쿨로시스 성장에 대해 문헌에 보고된 MIC와 일치한다(문헌 참조; Andries et al ., 2005). 유사한 결과가 표준 항-결핵 약물 에티온아미드(도 2c) 및 에탐부톨(데이타는 나타나 있지 않음)에 의해 수득되었으며, 반면 리팜핀에 대해서는, 시험관내 검정에 비해 세포계 검정에서 MIC가 log-배수로 증가하였다(도 2d). 세포계 검정에서의 리팜핀의 감소된 효능은 손상된 세포 침투로 인한 것으로 보이며, 이것은 당해 검정에서 모니터링되는 세포내 항균 활성임을 추가로 입증한다. 따라서, 고속 스크리닝(HTS)을 위해 세포내 및 시험관내 마이코박테리움 투베르쿨로시스 성장 검정 둘 다가 적응되었다.
실시예 3: 검정 스케일-업 및 검증
HTS 목적으로 프로토콜을 간소화시키기 위해, 대식세포를 화합물에 분배하기 전에 마이코박테리움 투베르쿨로시스로 배치에서 감염시켰다. 배치 감염(batch infection)은 가볍게 진탕시키면서 37℃에서 현탁액 상태로 대식세포를 사용하여 수행하였다. 결합되지 않은 유리 마이코박테리아를, PBS를 사용한 3회 세척 및 차동 원심분리에 의해서 뿐만 아니라 세포외 미생물을 선택적으로 사멸시키는 것으로 공지된 항생제인 아미카신을 사용한 추가의 1시간 배양 단계에 의해 제거하였다(도 6a). 이어서, 마이코박테리움 투베르쿨로시스 감염된 대식세포를 이전에 화합물, DMSO 또는 항생제 대조군으로 분배된 플레이트에 접종하였다. 매일 매일의 재현성(day-to-day) 뿐만 아니라 플레이트간(plate-to plate) 재현성을 먼저 시험하였다. 이를 위해, INH 또는 리팜핀의 연속 희석물을 정규 DMSO 및 양성 대조군(1㎍/mL(MIC100) 및 0.05㎍/mL(MIC90)의 INH 및 1㎍/mL의 리팜핀) 웰과 함께 8개 플레이트에 분배한 다음 감염된 세포에 접종하였다. 동일한 실험을 연속 2일에 걸쳐 반복하였다. 5일간 배양 및 대식세포 염색 후, 각각의 플레이트로부터의 사진을 획득하였다. 2일간의 실험 동안의 각각의 플레이트에서의 DMSO 음성 대조군에 대해 결정된 평균 감염 비는 50% 내지 70%인 반면, INH 및 리팜핀 샘플에 대해서는 평균 감염 비가 20% 아래로 떨어졌다(도 3a). 두 개의 실험 사이의 평균 감염 비에 있어서의 약간의 변동에도 불구하고, INH-양성 및 DMSO-음성 대조군 간의 차이는 양일에 대해 5배 이상이었다. 페어드 t-스튜던트 테스트(paired t-student test)를 사용하여 각각의 플레이트에 대해 계산된 P 값은 또한 양성 및 음성 대조군 간의 상당한 차이를 확인시켜 준다(p < 0.000001, 데이타는 나타나 있지 않음). 또한, 본 발명자들은 플레이트 상의 웰에 분배된 마이코박테리움 투베르쿨로시스 세포내 성장 감염의 억제제가 이중-맹검 대조를 수행함으로써 검출될 수 있는지를 결정하기 위한 실험을 수행하였다(3개의 상이한 농도에서의 INH 및 리팜핀의 스파이크). 실제로, 100%의 스파이크가 확인되었다(데이타는 나타나 있지 않음). 함께 고려해 볼 때, 이러한 결과는 검정이 HTS 조건하에서 억제제를 확인하기에 충분할 정도로 민감하다는 것을 입증한다. 마지막으로, 기준 화합물의 용량-반응을 모니터링함으로써 검정의 강건성(robustness)을 확인하였다. 플레이트 또는 실험 일자에 무관하게 항생제 양성 대조군에 대해 거의 동일한 MIC가 측정되었다(도 3b/c). 감염 비의 이미지 기반 정량으로부터 계산된 MIC는 INH 및 리팜핀에 대해 각각 0.16 +/- 0.05㎍/mL 및 2.4 +/- 1.3㎍/mL이었으며, CFU 플레이팅에 의해 확인되었다(데이타는 나타나 있지 않음). 병행하여, 세포외 성장 검정을 유사한 접근법으로 검증하였다(데이타는 나타나 있지 않음).
실시예 4: 표현형 세포계 검정을 사용한 소 합성 화합물의 대형 라이브러리의 1차 스크리닝
리핀스키 법칙(문헌 참조; Lipinski et al., 2001)에 따라 이의 높은 화학적 다양성 및 약물-유사 특성에 대해 선택된 26500개 소분자 화합물 라이브러리를 검증된 표현형 세포계 검정을 사용하여 스크리닝하고자 하는 1차 라이브러리로서 선택하였다. 1차 스크린을 싱글톤(singleton)으로 20μM의 화합물을 사용하여 수행하였다. 처리량을, 25개 플레이트를 포함하여 작업일 당 약 6000개 화합물로 설정하였다. 마이코박테리움 투베르쿨로시스 H37Rv-GFP로 감염시키기 전 10일 동안 동결된 스톡으로부터 팽창된 Raw264.7 세포를 사용하여 스크리닝을 수행하였다. 스크리닝 결과를 수용하기 위해서는, 스크리닝 일자의 초기 및 말기에 프로세싱된 INH 및 리팜핀의 2개의 연속 희석으로부터 수득된 MIC가 검증 동안 수득된 값과 비교하여 유사한 결과를 보여주어야 한다(상기 참조). 이어서, DMSO 및 INH 사이의 윈도우(1㎍/ml)가 3보다 높고 각각의 플레이트에 존재하는 320개 화합물에 대해 계산된 CV가 25보다 낮다면 각각의 스크리닝된 플레이트는 품질 관리 과정에 의해 허용된다. 이러한 품질 관리 기준은 75% 이상의 활성을 갖는 히트를 확인할 수 있다. 이어서, 각각의 화합물에 대한 억제율(%)을 동일한 384-웰 플레이트에서 1㎍/mL INH(100%) 및 DMSO(0%) 사이의 상응하는 평균 감염 비를 기준으로 하여 결정하였다. 억제율 분포는 -20% 억제율 주위에 집중되었다(도 4a). 거의 전체 화합물의 1.5% 미만에 상응하는 65% 이상의 억제 효과를 갖는 화합물을 선택하기로 결정하였다.
병행하여, 동일한 화합물을 마이코박테리움 투베르쿨로시스 H37Rv-GFP 박테리아 성장에 대한 억제 활성에 대해서만 시험하였다. 종래의 형광 강도를 기초로 하는 이러한 검정으로부터의 결과는 고도의 재현성을 나타내었으며, 플레이트 검증을 위한 기준을 0.35 이상의 Z' 값(DMSO/INH)으로 설정하였다. 이러한 형광을 기초로 하는 검정에 대한 처리량은 1일당 대략 20,000개 화합물이었다. 그후, 65% 이상의 억제 효과로 마이코박테리움 투베르쿨로시스 시험관내 성장을 방지하는 화합물은 0%에 집중된 불활성 개체군과 비교하여 명확한 독립적인 개체군에 속하기 때문에 히트(1.4%)로서 선택하였다(도 4b).
이어서, 두 가지 상이한 스크리닝으로부터 모은 결과를 편집하고 비교하였다(도 4c). 4개의 상이한 개체군을 확인할 수 있었다: i) 세포외 박테리아에 대해서만 활성인 화합물, ii) 세포내 박테리아에 대해서만 활성인 화합물, iii) 두 가지 세팅 모두에 대해 활성인 화합물 또는 iv) 두 가지 세팅 모두에 대해 활성이 아닌 화합물. 657개 화합물(2.5%)이 처음 3개의 카테고리 중의 하나에 속하였으며, 이에 따라, 이를 추가의 조사를 위해 선택하였다.
이미지 분석 동안 측정할 수 있는 중요한 파라미터는 총 세포 수이며, 이것은 또한 세포독성이라고도 한다. 낮은 세포 수는 두 가지 독립적인 현상, 화합물 독성 및 마이코박테리움 투베르쿨로시스 성장 매개된 세포 독성의 결과일 수 있다. 사실상, 마이코박테리움 투베르쿨로시스로 감염시킨지 5일째에, 세포 수는 비감염된 세포에 대한 이미지당 500개 이상의 세포에 비해 이미지당 100개 미만의 세포로 감소하였다(도 1e). 이와 달리, 높은 세포 수는, 화합물이 독성이 아니고 마이코박테리아 성장을 방지하는 경우에만 수득된다. 이것은 화합물의 항-마이코박테리아 활성의 제2 관련 측정치인 것으로 드러났다. 그러나, 이러한 기준은, 낮은 세포 수는 단지 몇 개의 화합물에서만 나타나고 발명자들은 20μM에서의 세포 독성에도 불구하고 훨씬 더 낮은 농도에서 활성인 것으로 나중에 판명되는 고도로 활성인 화합물의 선택 실패를 피하고 싶어하기 때문에, 1차 스크린으로부터 히트를 선택하는데 적용되지 않는다. 0.2 이상의 총 세포 수의 Z'(DMSO/INH) 값의 추가의 검증 기준을 다음의 스크리닝 단계를 위해 덧붙였다.
실시예 5: 스크리닝 결과의 확인, 용량-반응 분석 및 히트 분류
657개의 선택된 히트를 먼저 3개의 상이한 농도, 20μM, 2μM 및 0.2μM에서 확인하였다. 340개의 히트에 대해, 세포내 또는 시험관내 검정에서 20μM 또는 2μM에서 활성이 확인되었다(표 1 참조). 이러한 후자의 목록으로부터, 121개 화합물이 20μM에서 어떠한 명백한 세포 독성 없이 2μM에서 65% 이상의 억제 활성을 입증하였으며, 따라서, 10회 3배 연속 희석에 의한 추가의 확인을 위해 선택되었다(표 2 참조). 121개 화합물 모두는 250nM 내지 20μM에 이르는 MIC를 갖는 것으로 연속 희석에 의해 확인되었다. 도 5에 도시된 결과는 관찰된 세 가지 유형의 거동을 대표한다: 대부분의 화합물은 활성을 감염 비로서 측정하는 경우 분명한 용량 반응 곡선을 나타내었다(도 5b/e/h). 바실러스 수준에 대해 활성인 화합물은, MIC가 검정 마다 상이하더라도, 세포외 검정(도 5c/f)에서 유사한 활성을 나타낸다. 몇몇 화합물은 시험관내 바실러스에 대해 명확한 활성을 나타내지 않으며(도 5i), 감염 프로세스 동안에만 관여하는 바실러스 표적에 대해 또는 세포 표적을 통해 작용하는 약물을 나타낼 수 있다. 추가로, 독성 화합물은 화합물 농도가 증가하는 경우 세포 수의 극적인 감소 덕분에 확인할 수 있으며(도 5d), 비독성 화합물의 활성은 세포 수에 대한 용량 반응 보호 효과에 의해 검증된다(도 5a). 따라서, 세포 수 검출은 1차 검정과 동일한 웰에서 독립적인 2차 검정을 나타낸다. 121개 화합물 모두로부터의 연속 희석 결과가 표 2에 나타나 있다.
121개의 확인된 히트는 20개의 독립적인/일반적인 스캐폴드로서 군집화될 수 있다(표 3). 각각의 골격에 대한 화합물의 수는 다양하며, 1개 내지 69개 분자에 이른다. 69-화합물 골격으로부터의 분자는 INH와 유사한 공통의 구조를 공유하며, 이에 의해 스크리닝 결과를 검증한다. 하나의 스캐폴드는 단지 세포내 검정에서 활성인 분자를 함유하며, 이의 작용 메카니즘은 추가의 조사를 위한 초점이 될 것이다.
실시예 6: 벤즈아미드 화합물의 유도체화
벤즈아미드 화합물(스캐폴드 II; 표 3 참조)을 아래에 요약된 방법(반응식 1-7)에 따라 유도체화시켰다. 아미드의 형성은 아실 클로라이드 대신에 산을 갖는 EDC 또는 DCC 커플링 시약을 사용하여 일반적인 조건하에서 수행할 수 있다. 생성된 유도체를 상기한 검정을 사용하여 억제 활성에 대해 실험하였으며, 결과가 표 4에 요약되어 있다.
[반응식 1]
Figure pct00011
[반응식 2]
Figure pct00012
2-페녹시에틸 이소인돌린-1,3-디온(A1)의 합성을 위한 일반적인 과정
메틸렌 클로라이드(10mL) 중의 2-(2-하이드록시에틸)이소인돌린-1,3-디온(1.68mmol)의 용액에 ADDP(1.68mmol), 트리페닐포스핀(1.68mmol) 및 페놀(3.18mmol)을 가하고, 실온에서 교반하였다. 밤새 교반한 후, 반응 혼합물을 메틸렌 클로라이드(30mL)로 희석시키고, 1M NaOH 수용액(50mL) 및 염수(50mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 MgSO4로 건조시키고, 진공에서 농축시켰다. 조 생성물을 실리카겔 섬광 컬럼 크로마토그래피(4:1 헥산/에틸 아세테이트)로 정제하고 헥산과 에틸 아세테이트의 혼합물로부터 재결정화하여 A1을 수득하였다.
N-(2-페녹시에틸)-벤즈아미드(A2)의 합성을 위한 일반적인 과정
메탄올(10mL) 중의 A1(1.14mmol)의 용액에 하이드라진 모노하이드레이트(1.42mmol)를 가하고, 생성된 혼합물을 질소 대기하에 환류시켰다. 3시간 후, 반응 혼합물을 실온으로 냉각되도록 하고 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 메틸렌 클로라이드(10mL)로 침전시켰다. 생성된 침전물을 셀라이트를 통해 여과하고, 여액을 진공에서 농축시켜 아민 중간체를 수득하였다. 메틸렌 클로라이드(10mL) 중의 아민의 용액에 0℃에서 트리에틸아민(0.45mmol) 및 벤조일클로라이드(0.45mmol)를 가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 교반하였다. 3시간 후, 반응 혼합물을 메틸렌 클로라이드(10mL)로 희석시키고, 1M HCl 수용액(30mL), 포화 Na2CO3 수용액(30mL) 및 염수(30mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 MgSO4로 건조시키고, 진공에서 농축시켰다. 조 생성물을 실리카겔 섬광 컬럼 크로마토그래피(3:1 헥산/에틸 아세테이트)로 정제하고, 헥산과 에틸 아세테이트의 혼합물로부터 재결정화하여 A2를 수득하였다.
3,5-디니트로-N-(2-페녹시에틸)벤즈아미드(1)
Figure pct00013
1H NMR (400 MHz, 아세톤-d 6 ) δ 3.88 (t, J = 4.4 Hz, 2H), 4.21 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 6.89 (d, J = 8.4 Hz, 3H), 7.24 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 8.78 (brs, 1H), 9.02 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 9.07 (d, J = 2.0 Hz, 2H); 13C NMR (100 MHz, 아세톤-d 6 ) δ 40.1, 66.0, 114.5, 120.8, 127.6, 129.6, 137.8, 148.8, 158.9, 163.0.
N-(2-(2-메톡시페녹시)에틸)-3,5-디니트로벤즈아미드(2)
Figure pct00014
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.89 (s, 3H), 3.92 (dd, J = 5.2, 10.4 Hz, 2H), 4.23 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 6.91-7.02 (m, 4H), 7.63 (brs, 1H), 9.02 (d, J = 1.6 Hz, 2H), 9.14 (t, J = 2.0 Hz, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 40.0, 56.1, 68.8, 112.2, 115.8, 121.0, 121.5, 122.9, 127.3, 137.8, 147.5, 148.6, 149.8, 162.6.
N-(2-(3-메톡시페녹시)에틸)-3,5-디니트로벤즈아미드(3)
Figure pct00015
1H NMR (400 MHz, 아세톤-d 6 ) δ 3.74 (s, 3H), 3.85 (dd, J = 5.6 Hz, 4.8 Hz, 2H), 4.21 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 6.50 (m, 3H), 7.14 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 8.75 (brs, 1H), 9.04 (s, 1H), 9.08 (s, 2H); 13C NMR (100 MHz, 아세톤-d 6 ) δ 40.1, 54.8, 66.1, 100.9, 106.5, 106.8, 120.9, 127.5, 130.0, 137.9, 148.8, 160.2, 161.2, 163.0.
N-(2-(4-메톡시페녹시)에틸)-3,5-디니트로벤즈아미드(4)
Figure pct00016
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.72 (s, 3H), 3.91 (dd, J = 5.2, 10.8 Hz, 2H), 4.12 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 6.74-6.80 (m, 4H), 7.21 (brs, 1H), 8.95 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 9.07 (t, J = 2.0 Hz, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 40.4, 55.6, 66.8, 114.7, 115.4, 121.0, 127.2, 137.6, 148.5, 152.2, 154.3, 163.1; LC-MS (ESI, m/z): 361 [M+H]+.
N-(2-(2-클로로페녹시)에틸)-3,5-디니트로벤즈아미드(5)
Figure pct00017
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.97 (dd, J = 5.2, 10.4 Hz, 2H), 4.25 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 6.93-6.95 (m, 2H), 7.19-7.24 (m, 2H), 7.35 (dd, J = 1.2, 8.0 Hz, 1H), 8.98 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 9.12 (t, J = 2.0 Hz, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 34.9, 63.0, 109.7, 116.2, 117.7, 118.2, 122.3, 123.1, 125.5, 132.6, 143.7, 148.7, 157.9.
N-(2-(3-클로로페녹시)에틸)-3,5-디니트로벤즈아미드(6)
Figure pct00018
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.97 (dd, J = 5.6, 10.8 Hz, 2H), 4.19 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 6.80-6.98 (m, 4H), 7.24 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 8.96 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 9.17 (t, J = 2.0 Hz, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 40.1, 66.4, 110.7, 115.0, 121.2, 121.7, 127.2, 130.4, 135.1, 137.6, 148.7, 158.8, 163.0.
N-(2-(4-클로로페녹시)에틸)-3,5-디니트로벤즈아미드(7)
Figure pct00019
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.96 (dd, J = 5.6, 10.4 Hz, 2H), 4.17 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 6.78 (brs, 1H), 6.86 (dd, J = 2.4, 6.8 Hz, 2H), 7.23 (dd, J = 2.0, 6.8 Hz, 2H), 8.96 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 9.17 (t, J = 2.0 Hz, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 40.1, 66.5, 115.7, 121.2, 126.5, 127.2, 129.6, 137.6, 148.9, 156.8, 163.0.
N-(2-(2-플루오로페녹시)에틸)-3,5-디니트로벤즈아미드(8)
Figure pct00020
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.97 (dd, J = 5.2, 10.8 Hz, 2H), 4.25 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 6.91-7.06 (m, 4H), 7.39 (brs, 1H), 8.97 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 9.15 (t, J = 2.0 Hz, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 40.1, 68.3, 115.7, 116.3 (d, J = 20 Hz, F로 인해), 121.1, 122.3 (d, J = 7 Hz, F로 인해), 124.6 (d, J = 5 Hz, F로 인해), 127.3, 137.6, 146.2, 148.6, 152.8 (d, J = 250 Hz, F로 인해), 163.1; LC-MS (ESI, m/z): 350 [M+H]+.
N-(2-(4-플루오로페녹시)에틸)-3,5-디니트로벤즈아미드(9)
Figure pct00021
1H NMR (400 MHz, 아세톤-d 6 ) δ 3.88 (dd, J = 5.2, 10.8 Hz, 2H), 4.23 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 6.95-7.07 (m, 4H), 8.79 (brs, 1H), 9.07 (t, J = 2.4 Hz, 1H), 9.11 (d, J = 2.0 Hz, 2H).
N-(2-(4-하이드록시페녹시)에틸)-3,5-디니트로벤즈아미드(10)
Figure pct00022
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 3.66 (dd, J = 5.6, 11.2 Hz, 2H), 4.06 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 6.65-6.68 (m, 2H), 6.76-6.80 (m, 2H), 8.91 (brs, 1H), 8.98 (t, J = 2.0 Hz, 1H), 9.08 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 9.42 (brs, 1H); 13C NMR (100 MHz DMSO-d 6 ) δ 40.1, 66.9, 116.2, 116.4, 121.5, 128.2, 137.4, 148.8, 151.8, 152.0, 163.1.
N-(2-(3-(트리플루오로메톡시)페녹시)에틸)-3,5-디니트로벤즈아미드(11)
Figure pct00023
1H NMR (400 MHz, 아세톤-d 6 ) δ 3.89 (dd, J = 5.6, 11.2 Hz, 2H), 4.29 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 6.88 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 6.99 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.38 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 8.79 (brs, 1H), 9.05 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 9.08 (d, J = 1.2 Hz, 2H) ; 13C NMR (100 MHz, 아세톤-d 6 ) δ 39.9, 66.7, 107.8, 113.1, 113.6, 120.9, 127.6, 130.9, 137.8, 148.9, 150.1, 160.2, 163.0.
N-(2-(4-(트리플루오로메톡시)페녹시)에틸)-3,5-디니트로벤즈아미드(12)
Figure pct00024
1H NMR (400 MHz, 아세톤-d 6 ) δ 3.88 (dd, J = 10.8 Hz, 5.2 Hz, 2H), 4.27 ( t, J = 5.6 Hz, 2H), 7.03 (dd, J = 7.2, 2.0 Hz, 2H), 7.23 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 8.78 (brs, 1H), 9.04 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 9.08 (d, J = 2.0 Hz, 2H) ; 13C NMR (100 MHz, 아세톤-d 6 ) δ 40.0, 66.8, 115.7, 120.9, 122.7, 127.6, 137.8, 142.7, 142.8, 148.9, 157.9, 163.1.
메틸 4-(2-(3,5-디니트로벤즈아미도)에톡시)벤조에이트(13)
Figure pct00025
1H NMR (400 MHz, 아세톤-d 6 ) δ 3.81 (s, 3H), 3.91 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 4.33 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 7.00 (t, J = 2.8 Hz, 1H), 7.03 (t, J = 2.8 Hz, 1H), 7.90 (t, J = 2.8 Hz, 1H), 7.92 (t, J = 2.8 Hz, 1H), 8.78 (brs, 1H), 9.03 (t, J = 2.4 Hz, 1H), 9.07 (d, J = 2.4 Hz, 2H) ; 13C NMR (100 MHz, 아세톤-d 6 ) δ 39.9, 51.3, 66.5, 114.4, 120.9, 123.0, 127.6, 131.5, 137.8, 148.9, 162.8, 163.0, 166.1.
N-(2-(4-아미노페녹시)에틸)-3,5-디니트로벤즈아미드하이드로클로라이드(14)
Figure pct00026
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 3.67 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 4.15 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 7.03 (d, J = 1.6 Hz, 2H), 7.29 (d, J = 1.6 Hz, 2H), 8.91 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 9.04 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 9.52 (brs, 1H), 10.28 (brs, 3H) ; 13C NMR (100 MHz, DMSO-d 6 ) δ 40.1, 66.1, 115.4, 120.8, 124.3, 124.5, 127.5, 136.7, 148.1, 157.8, 162.4.
N-(2-(4-(t-부톡시카보닐아미노)페녹시)에틸)-3,5-디니트로벤즈아미드(15)
Figure pct00027
1H NMR (400 MHz, 아세톤-d 6 ) δ 1.44 (s, 9H), 3.83 (m, 2H), 4.18 (m, 2H), 6.84 (dd, J = 3.2, 9.2 Hz, 2H), 7.40 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 8.15 (brs, 1H), 8.73 (brs, 1H), 9.03 (t, J = 2.0 Hz, 1H), 9.08 (d, J = 2.0 Hz, 2H) ; 13C NMR (100 MHz, 아세톤-d 6 ) δ 27.8, 40.1, 66.4, 78.9, 114.8, 119.9, 120.9, 127.6, 133.3, 137.9, 148.8, 153.2, 154.4, 163.0; LC-MS (ESI, m/z): 469 [M+Na]+.
N-(2-(4-메톡시페녹시)에틸)-3-니트로벤즈아미드(16)
Figure pct00028
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.69 (s, 3H), 3.81 (dd, J = 5.2, 10.4 Hz, 2H), 4.06 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 6.73-6.78 (m, 4H), 7.48 (brs, 1H), 7.53 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 8.13 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 8.24 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 8.56 (t, J = 2.0 Hz, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 39.8, 55.4, 66.7, 114.4, 115.2, 121.9, 125.8, 129.5, 133.1, 135.7, 147.8, 152.3, 153.9, 165.2.
N-(2-(2-플루오로페녹시)에틸)-3-니트로벤즈아미드(17)
Figure pct00029
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.92 (dd, J = 5.6, 10.8 Hz, 2H), 4.23 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 6.90-7.09 (m, 4H 및 brs, 1H), 7.62 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 8.14 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.33 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.63 (t, J = 2.0 Hz, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 39.8, 68.3, 115.6, 116.6 (d, J = 18.6 Hz, F로 인해), 122.3 (d, J = 5.3 Hz, F로 인해), 124.7 (d, J = 4.5 Hz, F로 인해), 126.0, 129.7, 133.0, 135.8, 146.3 (d, J = 10.4 Hz, F로 인해), 148.1, 152.6 (d, J = 245 Hz, F로 인해), 165.2.
N-(2-(4-메톡시페녹시)에틸)벤즈아미드(18)
Figure pct00030
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.72 (s, 3H), 3.80 (dd, J = 5.2, 10.8 Hz, 2H), 4.05 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 6.78-6.83 (m, 4H), 7.03 (brs, 1H), 7.35-7.45 (m, 4H), 7.74 (d, J = 11.2 Hz, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 39.4, 55.4, 67.1, 114.5, 115.2, 126.8, 128.3, 131.3, 134.1, 152.4, 153.9, 167.6.
N-(2-(4-메톡시페녹시)에틸)-N-메틸-3,5-디니트로벤즈아미드(19)
Figure pct00031
(두 개의 회전이성체, 1:1) 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.18 (brs, 3H), 3.65 (brs, 1H), 3.75 (s, 3H), 3.94 (brs, 1H), 4.03 (brs, 1H),4.27 (brs, 1H), 6.79-6.84 (brd, 4H), 8.55 (brs, 1H), 8.72 (brs, 1H), 9.04 (br s, 1H).
N-에틸-N-(2-(4-메톡시페녹시)에틸)-3,5-디니트로벤즈아미드(20)
Figure pct00032
(두 개의 회전이성체, 1:1) 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.22-1.30 (m, 3H), 3.42 (brs, 1H), 3.63 (brs, 2H), 3.75 (s, 3H), 3.89 (brs, 1H), 4.01 (brs, 1H), 4.26 (brs, 1H), 6.80 (br, 4H), 8.53 (brs, 1H), 8.72 (brs, 1H), 9.04 (brs, 1H).
N-(3-(4-메톡시페녹시)프로필)-3,5-디니트로벤즈아미드(21)
Figure pct00033
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.04-2.20 (m, 2H), 3.76 (t, J = 6.0 Hz, 2H ), 3.77 (s, 3H), 4.17 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 6.85-6.91 (m, 4H), 7.24 (brs, 1H), 8.96 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 9.16 (t, J = 2.0 Hz, 1H).
메틸 4-(3-(3,5-디니트로벤즈아미도)프로폭시)벤조에이트(22)
Figure pct00034
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.21-2.24 (m, 2H), 3.77 (dd, J = 6.0, 12.0 Hz, 2H ), 3.89 (s, 3H), 4.24 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 6.95 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.04 (brs, 1H), 8.00 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 8.96 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 9.16 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 28.4, 39.3, 52.0, 67.2, 113.9, 121.1, 123.3, 127.0, 131.8, 137.8, 148.6, 161.9, 162.5, 166.6.
N-(3-(2-플루오로페녹시)프로필)-3,5-디니트로벤즈아미드(23)
Figure pct00035
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.19-2.25 (m, 2H), 3.83 (dd, J = 5.2, 11.2 Hz, 2H), 4.27 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 6.90-7.11 (m, 4H), 7.50 (brs, 1H), 8.99 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 9.16 (t, J = 2.0 Hz, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 28.2, 40.0, 69.5, 114.0, 116.3 (d, J = 18 Hz, F로 인해), 120.9, 121.8 (d, J = 7.4 Hz, F로 인해), 124.7 (d, J = 3.7 Hz, F로 인해), 127.2, 127.3, 138.1, 147.3 (d, J = 245 Hz, F로 인해), 153.5, 162.7.
[반응식 3]
Figure pct00036

N-(2-(벤질옥시)에틸)-디니트로벤즈아미드(B2)의 합성을 위한 일반적인 과정
디메틸 포름아미드(10mL) 중의 2-(2-하이드록시에틸)이소인돌린-1,3-디온(1.17mmol)의 용액에 0℃에서 수소화나트륨(2.34mmol) 및 벤질 브로마이드(1.40mmol)를 가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 교반하였다. 밤새 교반한 후, 증류수(50mL)를 가하고, 생성된 침전물을 여과에 의해 수집하여 B1을 수득하였다.
메탄올(10mL) 중의 B1(0.85mmol)의 용액에 하이드라진 모노하이드레이트(0.85mmol)를 가하고, 생성된 혼합물을 질소 대기하에 환류시켰다. 3시간 후, 반응 혼합물을 실온으로 냉각되도록 하고 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 메틸렌 클로라이드(10mL)로 침전시켰다. 생성된 침전물을 셀라이트를 통해 여과하고, 여액을 진공에서 농축시켜 아민을 수득하였다.
메틸렌 클로라이드(10mL) 중의 아민의 용액에 0℃에서 트리에틸아민(113㎕, 0.81mmol) 및 벤조일클로라이드(0.81mmol)를 가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 교반하였다. 3시간 후, 반응 혼합물을 메틸렌 클로라이드(30mL)로 희석시키고, 1M HCl 수용액(50mL), 포화 Na2CO3 수용액(50mL) 및 염수(50mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 MgSO4로 건조시키고, 진공에서 농축시켰다. 조 생성물을 실리카겔 섬광 컬럼 크로마토그래피(3:1 헥산/에틸 아세테이트)로 정제하고 헥산과 에틸 아세테이트의 혼합물로부터 재결정화하여 B2를 수득하였다.
N-(2-(벤질옥시)에틸)-3,5-디니트로벤즈아미드(24)
Figure pct00037
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.68-3.72 (m, 4H), 4.55 (s, 2H), 6.75 (brs, 1H), 7.24-7.33 (m, 5H), 8.91 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 9.13 (t, J = 2.0 Hz, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 40.4, 68.1, 73.4, 121.0, 127.2, 128.0, 128.2, 128.7, 137.5, 138.0, 148.6, 162.7; LC-MS (ESI, m/z): 346 [M+H]+.`
N-(2-(3-메톡시벤질옥시)에틸)-3,5-디니트로벤즈아미드(25)
Figure pct00038
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.71-3.74 (m, 4H), 3.76 (s, 3H), 4.52 (s, 2H), 6.77-6.90 (m, 3H), 6.97 (brs, 1H), 7.23 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 8.91 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 9.12 (t, J = 2.0 Hz, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 40.5, 55.2, 68.2, 73.1, 113.1, 113.6, 120.0, 120.9, 127.2, 129.6, 137.8, 139.1, 148.5, 159.7, 162.8.
N-(2-(4-메톡시벤질옥시)에틸)-3,5-디니트로벤즈아미드(26)
Figure pct00039
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.65-3.71 (m, 4H), 3.75 (s, 3H), 4.47 (s, 2H), 6.71 (brs, 1H), 6.84 (dd, J = 6.8, 2.0 Hz, 2H), 7.23 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 8.87 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 9.13 (t, J = 2.0 Hz, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 40.5, 55.3, 67.8, 73.1, 114.0, 121.0, 127.1, 129.6, 130.0, 137.9, 148.6, 159.5, 162.7.
N-(2-(4-클로로벤질옥시)에틸)-3,5-디니트로벤즈아미드(27)
Figure pct00040
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.68-3.76 (m, 4H), 4.53 (s, 2H), 6.77 (brs, 1H), 7.25-7.32 (m, 4H), 8.91 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 9.15 (t, J = 2.0 Hz, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 40.4, 68.3, 72.6, 121.1, 127.2, 128.8, 129.2, 134.0, 136.0, 137.8, 148.6, 162.7.
N-(2-(3-클로로벤질옥시)에틸)-3,5-디니트로벤즈아미드(28)
Figure pct00041
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.68-3.76 (m, 4H), 4.52 (s, 2H), 6.79 (brs, 1H), 7.17-7.29 (m, 4H), 8.91 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 9.13 (t, J = 2.0 Hz, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 40.4, 68.4, 72.5, 121.1, 125.8, 127.2, 127.8, 128.1, 129,2, 134.5, 137.8, 139.6, 148.6, 162.8.
N-(2-(4-플루오로벤질옥시)에틸)-3,5-디니트로벤즈아미드(29)
Figure pct00042
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.68-3.76 (m, 4H), 4.53 (s, 2H), 6.74 (brs, 1H),7.02-7.06 (m, 2H), 7.30-7.33 (m, 2H), 8.92 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 9.16 (t, J = 2.0 Hz, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 40.4, 68.1, 72.6, 115.5 (d, J = 22 Hz, F로 인해), 121.1, 127.1, 130.0 (d, J = 8.2 Hz, F로 인해), 133.5 (d, J = 3.0 Hz, F로 인해), 137.8, 148.6, 162.5 (d, J = 245 Hz, F로 인해), 162.7.
N-(2-(2-플루오로벤질옥시)에틸)-3,5-디니트로벤즈아미드(30)
Figure pct00043
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.75 (s, 4H), 4.64 (s, 2H), 7.07-7.17 (m, 3H), 7.29-7.39 (m, 1H 및 brs. 1H), 8.94 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 9.17 (t, J = 2.0 Hz, 1H).
3,5-디니트로-N-(2-(4-(트리플루오로메톡시)벤질옥시)에틸)벤즈아미드(31)
Figure pct00044
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.72-3.76 (m, 4H), 4.54 (s, 2H), 7.13 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.31-7.35 (m, 2H 및 brs, 1H), 8.94 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 9.08 (t, J = 2.0 Hz, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 40.4, 68.4, 72.2, 120.9, 121.0, 127.2, 129.1, 136.3, 137.7, 148.4, 148.7, 148.9, 162.9.
3,5-디니트로-N-(2-(3-(트리플루오로메틸)벤질옥시)에틸)벤즈아미드(32)
Figure pct00045
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.72-3.79 (m, 4H), 4.61 (s, 2H), 7.06 (brs, 1H), 7.45-7.55 (m, 4H), 8.93 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 9.10 (t, J = 2.0 Hz, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 40.4, 68.7, 72.4, 121.0, 124.1, 124.6, 124.7, 127.2, 129.0, 130.6 (q, J = 32 Hz, F로 인해), 130.8, 137.7, 138.6, 148.6, 162.9.
메틸 4-((2-(3,5-디니트로벤즈아미도)에톡시)메틸)벤조에이트(33)
Figure pct00046
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.71-3.74 (m, 4H), 3.84 (s, 3H), 4.55 (s, 2H), 7.29 (d, J = 8.0 Hz, 2H 및 brs, 1H), 7.85 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 8.90 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 9.01 (t, J = 2.0 Hz, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 40.6, 52.2, 68.8, 72.6, 120.9, 127.3, 129.5, 129.7, 137.8, 142.9, 148.5, 163.0, 166.8.
4-((2-(3,5-디니트로벤즈아미도)에톡시)메틸)벤조산(34)
Figure pct00047
1H NMR (400 MHz, 아세톤-d 6 ) δ 3.74 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.81 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 4.72 (s, 2H), 7.56 (d, J = 8.4 Hz, 2H) 7.72 (brs, 1H), 8.03 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 9.02 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 9.13 (t, J = 2.0 Hz, 1H).
N-(2-(벤질옥시)에틸)벤즈아미드(35)
Figure pct00048
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.62-3.68 (m, 4H), 4.52 (s, 2H), 6.71 (brs, 1H), 7.24-7.49 (m, 8H), 7.73-7.76 (m, 2H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 39.7, 68.8, 73.1, 126.9, 127.8, 128.4, 131.3, 134.5, 137.8, 167.5.
N-(2-(3-(트리플루오로메틸)벤질옥시)에틸)벤즈아미드(36)
Figure pct00049
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.63-3.70 (m, 4H), 4.56 (s, 2H), 6.72 (brs, 1H), 7.37-7.53 (m, 6H), 7.58 (s, 1H), 7.74-7.76 (m, 2H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 39.7, 69.3, 72.3, 124.2, 124.3, 124.6, 126.9, 128.5, 128.9, 130.8, 131.5, 134.4, 139.0, 148.6, 167.6.
N-(2-(3-클로로벤질옥시)에틸)벤즈아미드(37)
Figure pct00050
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.62-3.69 (m, 4H), 4.49 (s, 2H), 6.71 (brs, 1H), 7.17-7.50 (m, 7H), 7.75-7.77 (m, 2H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 39.7, 69.0, 72.2, 125.6, 126.8, 127.6, 127.8, 128.4, 129,7, 131.3, 134.3, 139.9, 167.4.
N-(2-(3-클로로벤질옥시)에틸)-3,5-디플루오로벤즈아미드(38)
Figure pct00051
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.64-3.69 (m, 4H), 4.52 (s, 2H), 6.54 (brs, 1H), 6.95 (tt, J = 2.4, 11.2 Hz, 1H), 7.19-7.33 (m, 6H).
N-(2-(3-클로로벤질옥시)에틸)-3,5-디클로로벤즈아미드(39)
Figure pct00052
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 3.13 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.67 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 4.55 (s, 2H), 7.27 - 7.29 (m, 3H), 7.42 (s, 1H), 7.46, (s, 1H), 7.81 (s, 2H) ; 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 40.6, 67.2, 73.2, 127.0, 128.7, 128.8, 128.9, 130.7, 131.0, 135.4, 135.5, 141.4, 142.7, 171.5.
N-(2-(3-클로로벤질옥시)에틸)-3,5-비스(트리플루오로메틸)벤즈아미드(40)
Figure pct00053
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.64 - 3.68 (m, 4H), 4.49 (s, 2H), 6.89 (brs, 1H), 7.15 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.21 - 7.24 (m, 2H), 7.27 (s, 1H), 7.95 (s, 1H), 8.18 (s, 2H) ; 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 40.3, 68.37, 72.5, 121.6, 125.0, 125.1, 125.7, 127.8, 128.1, 129.9, 132.0, 134.5, 136.6, 139.8, 164.8.
N-(2-(3-클로로벤질옥시)에틸)-3-메톡시벤즈아미드(41)
Figure pct00054
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.63 (d, J = 3.6 Hz, 2H), 3.65 (d, J = 3.6 Hz, 2H), 3.81 (s, 3H), 4.49 (s, 2H), 6.51 (brs, 1H), 7.01 (dd, J = 8.0 Hz, 2.4 Hz, 1H), 7.16 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 7.28 (m, 3H), 7.25 - 7.34 (m, 3H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 39.9, 55.5, 69.2, 72.5, 112.4, 117.8, 118.7, 125.8, 127.8, 128.0, 129.6, 129.9, 134.5, 136.0, 140.0, 159.9, 167.5.
N-(2-(3-클로로벤질옥시)에틸)-4-메톡시벤즈아미드(42)
Figure pct00055
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.62 - 3.66 (m, 4H), 3.82 (s, 3H), 4.49 (S, 2H), 6.48 (brs, 1H), 6.89 (d, J = 8.8 hz, 2H), 7.17 (t, J = 4.4 Hz, 2H), 7.24 (m, 1H), 7.32 (s, 1H), 7.71 (d, J = 8.8 Hz, 2H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 39.8, 55.5, 69.4, 72.4, 113.8, 125.7, 126.8, 127.8, 128.0, 128.8, 129.8, 134.5, 140.1, 162.2, 167.1.
N-(2-(3-클로로벤질옥시)에틸)-3-(트리플루오로메톡시)벤즈아미드(43)
Figure pct00056
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.62 - 3.68 (m, 4H), 4.49 (s, 2H), 6.62 (brs, 1H), 7.15 (dd, J = 1.2, 8.8 Hz, 1H), 7.22 - 7.23 (m, 2H), 7.36 (t, J = 1.2 Hz, 2H), 7.43 ( t, J = 8.4 Hz, 1H), 7.63 (dd, J = 1.2, 4.4 Hz, 2H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 40.0, 69.0, 72.4, 119.3, 120.1, 123.8, 125.1, 125.7, 127.8, 128.0, 129.9, 130.1, 134.5, 136.6, 140.0, 149.4, 166.1.
N-(2-(3-클로로벤질옥시)에틸)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드(44)
Figure pct00057
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.62 - 3.68 (m, 4H), 4.49 (s, 2H), 6.71 (brs, 1H), 7.14 - 7.17 (m, 1H), 7.23 - 7.24 (m, 2H), 7.3 (s, 1H), 7.64 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.83 (d, J = 8.0 Hz, 2H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 40.0, 68.9, 72.4, 125.6 (q, J = 3.7 Hz), 125.8, 127.5, 127.8, 128.1, 129.9, 138.1, 133.4, 134.5, 137.7, 140.0, 166.4.
N-(2-(3-클로로벤질옥시)에틸)-3-(트리플루오로메틸)벤즈아미드(45)
Figure pct00058
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.62 (m, 4H), 4.46 (s, 2H), 6.96 (brs, 1H), 7.14 - 7.27 (m, 4H), 7.47 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.68 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 7.89 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 8.01 (s, 1H) ; 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 40.0, 68.9, 72.3, 122.4, 124.1, 125.7, 127.7, 127.9, 128.0, 129.1, 129.8, 130.3, 130.8, 134.4, 135.2, 140.0, 166.3.
메틸 3-(2-(3-클로로벤질옥시)에틸카바모일)벤조에이트(46)
Figure pct00059
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.62 - 3.69 (m, 4H), 3.89 (s, 3H), 4.48 (s, 2H), 6.71 (brs, 1H), 7.15 - 7.16 (m, 1H), 7.21 - 7.24 (m, 2H), 7.28 (s, 1H), 7.47 (t, J = 4.0 Hz, 1H), 7.97 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 8.11 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 8.35 (t, J = 1.6 Hz, 1H) ; 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 40.0, 52.4, 69.0, 72.4, 125.7, 127.7, 127.8, 128.0, 128.9, 129.8, 130.5, 131.8, 132.4, 134.4, 134.8, 140.0, 166.3, 166.6.
메틸 4-(2-(3-클로로벤질옥시)에틸카바모일)벤조에이트(47)
Figure pct00060
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.62 - 3.66 (m, 4H), 3.90 (s, 3H), 4.48 (s, 2H), 6.65 (brs, 1H), 7.14 - 7.17 (m, 1H), 7.22 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 7.30 (s, 1H), 7.78 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 8.04 (d, J = 8.0 Hz, 2H) ; 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 40.0, 52.4, 69.0, 72.4, 125.7, 127.1, 127.8, 128.1, 129.9, 132.7, 134.5, 138.4, 140.0, 160.3, 166.7.
N-(2-(3-클로로벤질옥시)에틸)-3-니트로벤즈아미드(48)
Figure pct00061
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.64 (m, 4H), 4.45 (s, 2H), 7.13 - 7.23 (m, 5H), 7.53 (m, 1H), 8.08 (d, J = 6.8 Hz, 1H) 8.22 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.54 (s, 1H) ; 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 40.1, 68.7, 72.2, 122.0, 125.6, 125.9, 127.5, 127.8, 129.7, 129.8, 133.1, 134.2, 136.0, 139.9, 148.0, 165.3.
N-(2-(3-클로로벤질옥시)에틸)-4-니트로벤즈아미드(49)
Figure pct00062
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.63 (m, 4H), 4.45 (s, 2H), 6.97 (brs, 1H), 7.12 - 7.25 (m, 4H), 7.87 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 8.15 (d, J = 6.4 Hz, 2H) ; 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 40.1, 68.7, 72.2, 123.6, 125.6, 127.5, 127.9, 128.2, 129.7, 134.3, 139.9, 140.0, 149.4, 165.6.
N-(2-(3-클로로벤질옥시)에틸)-3-플루오로벤즈아미드(50)
Figure pct00063
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.56 - 3.61 (m, 4H), 4.43 (s, 2H), 6.66 (brs, 1H), 7.10 - 7.12 (m, 2H), 7.18 - 7.19 (m, 2H), 7.25 (s, 1H), 7.30 - 7.31 (m, 1H), 7.41 - 7.45 (m, 2H) ; 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 39.9, 69.0, 72.4, 114.3 (d, J = 23.0 Hz, F로 인해), 118.4 (d, J = 20.8 Hz, F로 인해), 122.4 (d, J = 3.0 Hz, F로 인해), 125.7, 127.7, 128.0, 129.8, 130.2 (d, J = 8.2 Hz, F로 인해), 134.5, 136.7 (d, J = 6.7 Hz, F로 인해), 140.0, 163.0 (d, J = 245 Hz, F로 인해), 166.3 (d, J = 3.0 Hz, F로 인해).
N-(2-(3-클로로벤질옥시)에틸)-3-클로로벤즈아미드(51)
Figure pct00064
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.64 (m, 4H), 4.49 (s, 2H), 6.52 (brs, 1H), 7.17 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 7.24 (s, 2H), 7.31 - 7.36 (m, 2H), 7.44 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.59 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.73 (s, 1H) ; 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 40.0, 69.1, 72.5, 125.1, 125.8, 127.5, 127.8, 128.1, 129.9, 130.0, 131.6, 134.6, 134.9, 136.3, 140.0, 166.3.
N-(2-(3-클로로벤질옥시)에틸)-4-하이드록시벤즈아미드(52)
Figure pct00065
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.64 (s, 4H), 4.48 (s, 2H), 6.57 (brs, 1H), 6.84 (dd, J = 2.0, 8.8 Hz, 2H), 7.17 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 7.23 (d, J = 3.2 Hz, 2H), 7.31 (s,1H), 7.60 (dd, J = 2.0, 8.8 Hz, 2H), 8.22 (brs, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 40.0, 69.1, 72.5, 115.7, 125.4, 125.8, 127.8, 128.1, 129.0, 129.9, 134.5, 140.0, 160.2, 168.2.
N-(2-(3-클로로벤질옥시)에틸)-3-하이드록시벤즈아미드(53)
Figure pct00066
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.65 (m, 4H), 4.49 (s, 2H), 6.64 (brs, 1H), 6.98 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.13 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.17 - 7.26 (m, 5H), 7.30 (s, 1H), 7.50 (s, 1H) ; 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 40.0, 69.1, 72.5, 115.1, 117.8, 119.3, 125.9, 127.3, 128.1, 129.9, 130.0, 134.6, 135.4, 139.9, 157.2, 168.0.
[반응식 4]
Figure pct00067

페녹시-피롤리딘-1-일-메타논(C2)의 합성을 위한 일반적인 과정
메틸렌 클로라이드(50mL) 중의 (S)-3-피롤리디놀(10mmol) 및 트리에틸아민(11mmol)의 용액에 0℃에서 벤조일 클로라이드(8.67mmol)를 가하였다. 반응 온도를 실온으로 되게 하였다. 2시간 후, 반응 혼합물을 메틸렌 클로라이드(50mL)로 희석시킨 다음 0.5M HCl 수용액(100mL) 및 염수(100mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 MgSO4로 건조시키고, 진공에서 농축시켰다. 조 생성물을 실리카겔 섬광 컬럼 크로마토그래피(2:1 헥산/에틸 아세테이트)로 정제하여 C1을 수득하였다.
메틸렌 클로라이드(10mL) 중의 C1(1.07mmol)의 용액에 실온에서 ADDP(1.28mmol), 트리페닐포스핀(1.28mmol) 및 페놀(1.28mmol)을 가하였다. 밤새 교반한 후, 반응 혼합물을 메틸렌 클로라이드(30mL)로 희석시키고, 1M HCl 수용액(50mL), 포화 Na2CO3 수용액(50mL) 및 염수(50mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 MgSO4로 건조시키고, 진공에서 농축시켰다. 조 물질을 실리카겔 섬광 컬럼 크로마토그래피(2:1 헥산/에틸 아세테이트)로 정제하고 헥산과 에틸 아세테이트의 혼합물로부터 재결정화하여 C2를 수득하였다.
(R)-(3,5-디니트로페닐)(3-(4-메톡시페녹시)피롤리딘-1-일)메타논(54)
Figure pct00068
(두 개의 회전이성체, 1:1 비), m.p. 124 - 125℃; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.11-2.19 (m, 1H), 2.30-2.34 (m, 1H), 3.54-3.64 (m, 1H), 3.72 & 3.76 (s, 3H), 3.81-3.99 (m, 3H), 4.86-4.94 (m, 1H), 6.74-6.84 (m, 4H), 8.68 & 8.75 (d, J = 1.6 Hz, 2H), 9.05 & 9.08 (brs, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 30.6, 32.4, 45.2, 47.7, 52.8, 54.8, 55.8, 55.9, 75.7, 115.0, 117.1, 117.3, 120.1, 120.2, 127.7, 127.9, 139.9, 140.0, 148.6, 150.4, 150.8, 154.8, 154.8, 164.7, 165.1; LC-MS (ESI, m/z): 388 [M+H]+.
(R)-(3,5-디니트로페닐)(3-(4-플루오로페녹시)피롤리딘-1-일)메타논(55)
Figure pct00069
(두 개의 회전이성체, 1:1 비, 75%), 담황색 고체; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.15-2.37 (m, 2H), 3.56-3.63 (m, 1H), 3.79-3.97 (m, 3H), 4.91-4.99 (m, 1H), 6.76-7.03 (m, 4H), 8.71 & 8.76 (d, J = 1.6 Hz, 2H), 9.08 & 9.10 (brs, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 29.9, 32.3, 45.1, 47.7, 52.7, 54.8, 75.5, 77.0, 116.2, 116.5, 116.9, 117.0, 117.1, 120.1, 120.2, 127.7, 127.8, 139.8, 139.9, 148.6, 152.6, 152.9, 157.9 (d, J = 245 Hz, F로 인해), 164.7, 165.0.
(R)-N-(4-(1-(3,5-디니트로벤조일)피롤리딘-3-일옥시)페닐)아세트아미드(56)
Figure pct00070
(두 개의 회전이성체, 1:1 비, 63%), 황색 고체; 1H NMR (400 MHz, CDCl3 + CD3OD) δ 1.96 & 1.99 (s, 3H), 2.03-2.27 (m, 2H), 3.45-3.50 (m, 1H), 3.69-3.83 (m, 3H), 4.83-4.91 (m, 1H), 6.64 & 6.74 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.26 & 7.33 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 8.58 & 8.65 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 8.95-8.99 (m, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3 + CD3OD) δ 23.3, 23.4, 29.7, 32.0, 45.0, 47.6, 52.6, 54.6, 75.0, 76.4, 115.8, 115.9, 120.0, 121.9, 127.4, 127.5, 127.6, 127.7, 132.4, 132.5, 139.4, 148.4, 152.8, 153.1, 165.0, 165.3, 169.7.
(R)-(3,5-디니트로페닐)(3-(4-(트리플루오로메톡시)페녹시)피롤리딘-1-일)메타논(57)
(두 개의 회전이성체, 6:4 비, 67%), 백색 고체; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.20-2.40 (m, 2H), 3.59-3.66 (m, 1H), 3.84-4.00 (m, 3H), 4.97-5.05 (m, 1H), 6.83 & 6.92 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.12 & 7.18 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 8.73 & 8.77 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 9.09 & 9.11 (d, J = 2.0 Hz, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 29.8, 32.2, 45.1, 47.6, 52.6, 54.7, 75.2, 76.7, 116.4, 120.1, 122.8, 127.7, 127.8, 139.6, 139.7, 143.4, 148.5, 155.0, 155.2, 164.7, 164.9.
(R)-메틸 4-(1-(3,5-디니트로벤조일)피롤리딘-3-일옥시)벤조에이트(58)
Figure pct00072
(두 개의 회전이성체 1:1 비), 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.21-2.37 (m, 2H), 3.57-3.65 (m, 1H), 3.85 & 3.87 (s, 3H), 3.89-3.99 (m, 3H), 5.03-5.11 (m, 1H), 6.82 & 6.91 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 7.93 & 7.99 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 8.70 & 8.75 (s, 2H), 9.07 & 9.09 (s, 1H) ; 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 22.1, 30.0, 32.4, 45.2, 47.7, 52.2, 52.8, 54.8, 74.9, 76.3, 115.0, 120.36, 123.7, 123.8, 127.8, 127.9, 132.0, 139.7, 148.6, 160.2, 160.5, 164.7, 166.7.
(R)-(3,5-디니트로페닐)(3-(2-플루오로페녹시)피롤리딘-1-일)메타논(59)
Figure pct00073
(두 개의 회전이성체 1:1 비), 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 2.26-2.33 (m, 2H), 3.62-3.97 (m, 3H), 4.00 & 4.36 (s, 1H), 5.06 & 5.21 (s, 1H), 7.11 & 7.27 (m, 4H), 8.78 & 8.83 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 9.01 & 9.04 (d, J = 2.0 Hz, 1H) ; 13C NMR (100 MHz, CD3OD) δ 29.9, 31.9, 44.9, 52.3, 54.4, 77.2, 78.7, 116.62, 116.67, 116.80, 116.85, 117.8 (d, J = 20 Hz, F로 인해), 120.04 (d, J = 3.7 Hz, F로 인해), 122.5, 122.6, 122.70, 122.77, 125.1, 125.15 (d, J = 3.7 Hz, F로 인해), 127.80 (d, J = 7.4 Hz F로 인해), 127.9, 139.8, 153.6 (d, J = 244 Hz, F로 인해), 165.4, 165.5.
(S)-메틸-4-(1-(3,5-디니트로벤조일)피롤리딘-3-일옥시)벤조에이트(60)
Figure pct00074
(두 개의 회전이성체 1:1 비), 1H NMR (400 MHz, 아세톤-d 6 ) δ 2.21-2.29 (m, 2H), 3.58 & 3.61 (s, 1H), 3.69 & 3.71 (s, 3H), 3.73-4.02 (m, 3H), 4.99 & 5.06 (s, 1H), 6.77-6.94 (m, 4H), 8.73 & 8.77 (s, 2H), 8.96 & 8.99 (s, 1H) ; 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 29.9, 31.9, 44.1, 44.7, 52.2, 54.2, 55.1, 55.2, 76.0, 77.5, 114.82, 114.88, 117.2, 119.6, 127.7, 127.8, 140.5, 148.7, 151.1, 151.3, 154.7, 164.6, 164.7.
(S)-(3,5-디니트로페닐)(3-(4-메톡시페녹시)피롤리딘-1-일)메타논(61)
Figure pct00075
(두 개의 회전이성체 1:1 비), 1H NMR (400 MHz, 아세톤-d 6 ) δ 2.19-2.28 (m, 2H) 3.60-4.01 (m, 4H), 4.98 & 5.06 (s, 1H), 6.76-6.94 (m, 4H), 8.73 & 8.76 (s, 2H), 8.95 & 8.99 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, 아세톤-d 6 ) δ 31.9, 44.7, 52.2, 54.2, 55.0, 55.1, 65.8, 75.9, 77.5, 114.81, 114.87, 117.2, 119.6, 127.7, 127.8, 128.6, 129.8, 140.4, 148.7, 151.3, 154.7, 164.6, 164.7.
(S)-N-(4-(1-(3,5-디니트로벤조일)피롤리딘-3-일옥시)페닐)아세트아미드(62)
Figure pct00076
(두 개의 회전이성체 1:1 비), 1H NMR (400 MHz, 아세톤-d 6 ) δ 1.99 (s, 3H), 2.22-2.28 (m, 2H), 3.54-4.06 (m, 3H), 5.04 & 5.11 (s, 1H), 6.80 & 6.90 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.46-7.70 (m, 4H, brs, 1H), 8.73 & 8.76 (s, 2H), 8.95 & 8.99 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, 아세톤-d 6 ) δ 24.1, 24.2, 30.0, 32.2, 45.2, 47.7, 52.7, 54.7, 75.1, 76.6, 115.9, 120.0, 120.1, 127.7, 127.8, 128.7, 128.8, 131.6, 132.0, 132.4, 132.6, 132.7, 132.8, 139.7, 148.4, 153.1, 165.0, 169.1.
(S)-4-(1-(3,5-디니트로벤조일)피롤리딘-3-일옥시)벤조산(63)
Figure pct00077
(두 개의 회전이성체 1:1 비), 1H NMR (400 MHz, 아세톤-d 6 ) δ 2.31-2.42 (m, 2H), 3.61-3.65 (m, 1H), 3.75-4.06 (m, 3H), 5.19 & 5.28 (s, 1H), 7.02 & 7.13 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.98 & 8.06 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 8.72 & 8.78 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 9.02 & 9.05 (s, 1H).
(S)-(3,5-디니트로페닐)(3-(2-플루오로페녹시)피롤리딘-1-일)메타논(64)
Figure pct00078
(두 개의 회전이성체, 1:1 비), 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 2.14-2.24 (m, 2H), 3.50-3.88 (m, 4H), 4.98 & 5.08 (s, 1H), 6.86-7.15 (m, 4H), 8.65 & 8.69 (s, 2H), 8.88 & 8.92 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d 6 ) δ 29.1, 31.1, 44.1, 51.5, 53.6, 76.4, 77.9, 115.7, 115.8, 115.9, 116.0, 117.1 (d, J = 22.3 Hz, F로 인해), 119.2 (d, J = 3.7 Hz, F로 인해), 121.7, 121.83, 121.88, 121.9, 124.2 (d, J = 3.7 Hz, F로 인해), 127.0, 139.0, 144.1, 144.4, 148.0, 152.8 (d, J = 242.6 Hz, F로 인해), 164.6, 164.7.
(R)-(3-(2-플루오로페녹시)피롤리딘-1-일)(페닐)메타논(65)
Figure pct00079
(두 개의 회전이성체 1:1 비), 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.02-2.24 (m, 2H), 3.51-3.91 (m, 4H), 4.85 & 4.98 (s, 1H), 6.86-7.09 (m, 4H), 7.36-7.48 (m, 3H), 7.52 (d, J = 5.2, 1H), 7.53 (d, J = 5.2 Hz, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 30.3, 32.4, 44.3, 47.5, 52.1, 54.8, 78.0, 79.0, 116.8, 117.0, 117.9, 118.6, 122.6, 122.7, 122.9, 123.0, 124.6 (d, J = 3.7 Hz F로 인해), 127.2, 127.4, 128.5, (d, J = 3.7 Hz, F로 인해), 130.1, 130.3, 136.7, 136.9, 144.7 (d, J = 20.1 Hz F로 인해), 153.8 (d, J = 245.6 Hz, F로 인해), 155.2, 170.0, 170.2.
(R)-(3-(4-메톡시페녹시)피롤리딘-1-일)(페닐)메타논(66)
Figure pct00080
(두 개의 회전이성체, 1:1 비), 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.99-2.21 (m, 2H), 3.48-3.66 (m, 2H), 3.68 & 3.73 (s, 3H), 3.79-3.89 (m, 2H), 4.74 & 4.96 (s, 1H), 6.71 (s, 2H), 6.76 (s, 2H), 7.34 & 7.36 (d, J = 5.6 Hz, 3H), 7.46 & 7.52 (d, J = 5.2 Hz, 2H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 30.2, 32.3, 44.4, 47.6, 52.1, 54.8, 55.8, 55.9, 76.0, 114.9, 115.0, 117.1, 117.3, 127.3, 127.4, 128.50, 128.54, 130.1, 130.2, 136.8, 137.0, 150.9, 151.1, 154.5, 154.6, 169.9, 170.2; LC-MS (ESI, m/z): 298.1 [M+H]+.
(R)-(3,5-디니트로페닐)(3-하이드록시피롤리딘-1-일)메타논(67)
Figure pct00081
(두 개의 회전이성체, 1:1 비), 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.98-2.11 (m, 2H), 3.23 (brs, 1H), 3.37-3.48 (m, 1H), 3.61-3.79 (m, 3H), 4.47 & 4.56 (s, 1H), 8.62 & 8.67 (s, 2H), 8.99 - 9.00 (m, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 33.0, 34.9, 45.1, 47.6, 55.5, 57.5, 69.4, 70.9, 120.1, 120.2, 127.8, 139.8, 139.9, 148.5, 165.1, 165.3.
(R)-(3-(3-메톡시페녹시)피롤리딘-1-일)(3-메톡시페닐)메타논(68)
Figure pct00082
(두 개의 회전이성체, 1:1 비, 85%), 담황색 액체; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.97 - 2.22 (m, 2H), 3.48 - 3.65 (m, 2H), 3.68 & 3.71 (s, 3H), 3.73 & 3.76 (s, 3H), 3.79 - 3.89 (m, 2H), 4.74 - 4.84 (m, 1H), 6.70 - 6.80 (m, 4H), 6.86 - 6.92 (m, 1H), 6.99 & 7.01 (s, 1H), 7.04 & 7.08 (s, 1H), 7.21 - 7.28 (m, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 30.2, 32.3, 44.5, 47.7, 52.2, 54.8, 55.6, 55.8, 76.0, 112.6, 112.8, 114.9, 115.0, 116.1, 116.6, 117.1, 117.2, 119.4, 119.6, 129.27, 129.32, 138.1, 150.9, 151.1, 154.5, 159.7, 169.8.
(R)-(3-(4-메톡시페녹시)피롤리딘-1-일)(3-메톡시페닐)메타논(69)
Figure pct00083
(두 개의 회전이성체, 1:1 비, 83%), 담황색 액체; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.97 - 2.22 (m, 2H), 3.48 - 3.65 (m, 2H), 3.68 & 3.71 (s, 3H), 3.73 & 3.76 (s, 3H), 3.79 - 3.89 (m, 2H), 4.72 - 4.84 (m, 1H), 6.70 - 6.80 (m, 4H), 6.86 - 6.92 (m, 1H), 6.99 - 7.08 (m, 2H), 7.21 - 7.28 (m, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 29.2, 32.1, 44.4, 47.6, 52.1, 54.4, 55.33, 55.62, 75.8, 113.4, 114.7, 116.9, 128.63, 128.75, 129.16, 129.32, 131.9, 150.9, 154.3, 160.9, 169.48, 169.79.
(R)-메틸 3-(3-(4-메톡시페녹시)피롤리딘-1-카보닐)벤조에이트(70)
Figure pct00084
(두 개의 회전이성체, 1:1 비, 87%), 담황색 액체; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.99 - 2.24 (m, 2H), 3.45 - 3.65 (m, 2H), 3.67 & 3.71 (s, 3H), 3.75 - 3.82 (m, 2H), 3.86 & 3.87 (s, 3H), 4.74 - 4.86 (m, 1H), 6.72 & 6.80 (m, 4H), 7.40 - 7.67 (m, 1H), 7.66 & 7.71 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 8.04 (t, J = 9.0 Hz, 1H), 8.13 & 8.19 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 29.9, 32.0, 44.3, 47.3, 52.2, 54.5, 55.5, 55.6, 75.7, 114.7, 114.8, 116.9, 117.0, 128.1, 128.2, 128.5, 128.6, 130.9, 134.0, 131.5, 131.6, 136.8, 136.9, 150.5, 150.7, 154.33, 154.38, 166.6, 168.6, 168.9.
(R)-메틸 4-(3-(4-메톡시페녹시)피롤리딘-1-카보닐)벤조에이트(71)
Figure pct00085
(두 개의 회전이성체, 1:1 비, 85%), 담황색 액체; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.98 - 2.11 (m, 1H), 2.15 - 2.25 (m, 1H), 3.42 - 3.67 (m, 2H), 3.68 & 3.71 (s, 3H), 3.77 - 3.81 (m, 1H), 3.83 - 3.88 (m, 1H), 3.86 & 3.88 (s, 3H), 4.73 - 4.86 (m, 1H), 6.69 - 6.75 (m, 2H), 6.80 (s, 2H), 7.51 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.57 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.00 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.03 (d, J = 8.4 Hz, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 29.9, 32.0, 44.2, 47.2, 51.9, 52.2, 54.3, 55.5, 55.6, 75.6, 114.7, 114.8, 116.8, 117.0, 127.0, 127.1, 129.5, 129.6, 131.2, 131.3, 140.7, 140.8, 150.5, 150.7, 154.3, 154.4, 168.7, 168.9.
(R)-(3-(4-메톡시페녹시)피롤리딘-1-일)(3-(트리플루오로메틸)페닐)메타논(72)
Figure pct00086
(두 개의 회전이성체, 1:1 비, 82%), 담황색 액체; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.04 - 2.15 (m, 1H), 2.21 - 2.30 (m, 1H), 3.48 - 3.67 (m, 2H), 3.72 & 3.75 (s, 3H), 3.78 - 3.90 (m, 2H), 4.79 - 4.90 (m, 1H), 6.74 - 6.83 (m, 4H), 7.48 - 7.55 (m, 1H), 7.64 - 7.82 (m, 3H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 30.0, 32.1, 44.5, 47.5, 52.2, 54.6, 55.7, 55.8, 75.8, 114.8, 114.9, 117.0, 117.2, 124.2, 124.3, 129.0, 129.1, 130.4, 130.6, 137.3, 137.4. 150.6, 150.8, 154.5, 154.6, 168.3, 168.6.
(R)-(3-(4-메톡시페녹시)피롤리딘-1-일)(4-(트리플루오로메틸)페닐)메타논(73)
Figure pct00087
(두 개의 회전이성체, 1:1 비, 55%), 담황색 고체; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.03 - 2.06 (m, 1H), 2.20 - 2.25 (m, 1H), 3.49 - 3.70 (m, 2H), 3.72 & 3.75 (s, 3H), 3.81-3.88 (m, 2H), 4.72 & 8.89 (m, 1H), 6.74-6.83 (m, 4H), 7.23-7.50 (m, 4H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 30.0, 32.2, 44.5, 47.5, 52.2, 54.6, 55.7, 55.8, 75.8, 76.8, 114.9, 117.0, 117.2, 119.8, 120.1, 122.5, 122.6, 125.6, 125.8, 130.0, 130.1, 138.5, 149.1, 150.6, 150.9, 154.5, 168.2.
(R)-(3-(4-메톡시페녹시)피롤리딘-1-일)(3-(트리플루오로메톡시)페닐)메타논(74)
Figure pct00088
(두 개의 회전이성체, 1:1 비, 67%), 황색 액체; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.01 - 2.23 (m, 2H), 3.43 - 3.68 (m, 2H), 3.69 & 3.72 (s, 3H), 3.72 - 3.83 (m, 2H), 4.75 - 4.88 (m, 1H), 6.72 - 6.82 (m, 4H), 7.58 - 7.66 (m, 4H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 29.1, 30.1, 32.2, 38.9, 44.6, 47.6, 52.2, 54.7, 55.8, 75.9, 114.9, 115.0, 117.1, 117.3, 125.5, 125.6, 127.7, 128.8, 150.8, 151.0, 154.6, 154.7, 168.5, 168.6.
(R)-(3-(4-메톡시페녹시)피롤리딘-1-일)(3-니트로페닐)메타논(75)
Figure pct00089
(두 개의 회전이성체, 1:1 비, 84%), 황색 액체; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.00 - 2.24 (m, 2H), 3.48 - 3.56 (m, 1H), 3.68 & 3.72 (s, 3H), 3.73 - 3.88 (m, 3H), 4.79 - 4.89 (m, 1H), 6.71 - 6.83 (m, 4H), 7.52 - 7.59 (m, 1H), 7.81 & 7.87 (d, J = 7.6 H, 1H), 8.22 (t, J = 9.8 Hz, 1H), 8.32 & 8.38 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 29.8, 32.0, 44.5, 47.4, 52.2, 54.5, 55.5, 55.6, 75.6, 77.0, 114.7, 114.8, 116.9, 117.0, 122.2, 122.3, 124.6, 124.7, 129.6, 133.1, 133.2, 138.0, 138.1, 147.8, 150.4, 150.6, 154.3, 154.4, 166.9, 167.2.
(R)-(3-(4-메톡시페녹시)피롤리딘-1-일)(4-니트로페닐)메타논(76)
Figure pct00090
(두 개의 회전이성체, 1:1 비, 73%), 황색 고체; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.01 - 2.31 (m, 2H), 3.44 - 3.69 (m, 2H), 3.72 & 3.75 (s, 3H), 3.80 - 3.90 (m, 2H), 4.79 - 4.90 (m, 1H), 6.72 - 6.82 (m, 4H), 7.63 & 7.70 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 8.22 & 8.24 (d, J = 8.2 Hz, 2H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 30.2, 31.9, 44.3, 47.2, 52.0, 55.5, 75.5, 76.7, 114.7, 114.8, 116.8, 116.9, 123.5, 128.0, 128.2, 128.6, 142.4, 142.5, 148.4, 150.3, 150.6, 154.3, 154.4, 167.3, 167.6.
(R)-(3-플루오로페닐)(3-(4-메톡시페녹시)피롤리딘-1-일)메타논(77)
Figure pct00091
(두 개의 회전이성체, 1:1 비, 78%), 담황색 액체; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.01 - 2.11 (m, 1H), 2.12 - 2.42 (m, 1H), 3.48 - 3.69 (m, 2H), 3.71 & 3.74 (s, 3H), 3.78 - 3.87 (m, 2H), 4.76 - 4.88 (m, 1H), 6.72 - 6.82 (m, 4H), 7.05 - 7.36 (m, 4H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 29.9, 32.0, 44.3, 47.4, 52.0, 54.5, 55.6, 75.7, 114.4, 114.8, 116.9, 117.1, 122.8, 122.9, 130.1, 130.2, 138.6, 138.7, 150.6, 150.8, 154.4, 154.5, 162.4 (d, J = 245 Hz, F로 인해), 168.3, 168.5.
(R)-(3-클로로페닐)(3-(4-메톡시페녹시)피롤리딘-1-일)메타논(78)
Figure pct00092
(두 개의 회전이성체, 1:1 비, 87%), 담황색 액체; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.01 - 2.24 (m, 2H), 3.47 - 3.69 (m, 2H), 3.71 & 3.74 (s, 3H), 3.78 - 3.86 (m, 2H), 4.75 - 4.88 (m, 1H), 6.73 - 6.82 (m, 4H), 7.26 - 7.42 (m, 3H), 7.46 & 7.52 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 29.9, 32.0, 44.3, 47.4, 52.0, 54.5, 55.6, 55.7, 75.7, 76.7, 114.7, 114.8, 116.6, 117.1, 125.1, 125.3, 127.3, 127.4, 129.7, 129.8, 130.0, 130.1, 134.3, 138.2, 138.3, 150.5, 150.7, 154.4, 168.1, 168.4
(R)-(3-하이드록시페닐)(3-(4-메톡시페녹시)피롤리딘-1-일)메타논(79)
Figure pct00093
(두 개의 회전이성체, 1:1 비, 53%), 백색 액체; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.96 - 2.25 (m, 2H), 3.53 - 3.74 (m, 2H), 3.77 & 3.81 (s, 3H), 3.83 - 3.94 (m, 2H), 4.73 & 4.87 (m, 1H), 6.72 - 6.82 (m, 4H), 6.85 - 6.98 (m, 2H), 7.08 - 7.20 (m, 2H), 8.21 (brs, 1H);
(R)-(4-하이드록시페닐)(3-(4-메톡시페녹시)피롤리딘-1-일)메타논(80)
Figure pct00094
(두 개의 회전이성체, 1:1 비, 37%), 백색 고체; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.03 - 2.32 (m, 2H), 3.59 - 3.71 (m, 2H), 3.74 & 3.76 (s, 3H), 3.79 - 3.93 (m, 2H), 4.80 - 4.91 (m, 1H), 6.75 - 6.84 (m, 4H), 7.21 - 7.24 (m, 2H), 7.56 & 7.62 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 8.01 & 8.03 (brs, 1H).
(R)-(4-하이드록시-3-니트로페닐)(3-(4-메톡시페녹시)피롤리딘-1-일)메타논(81)
Figure pct00095
(두 개의 회전이성체, 1:1 비, 63%), 황색 액체; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.01 - 2.14 (m, 1H), 2.25 - 2.27 (m, 1H), 3.56 - 3.65 (m, 2H), 3.72 &3.74 (s, 3H), 3.81 - 3.91 (m, 2H), 4.81 - 4.89 (m, 1H), 6.76 (m, 4H), 7.16 (t, J = 9.4 Hz, 1H), 7.78 & 7.84 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.29 & 8.37 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 29.9, 31.8, 45.0, 47.6, 52.6, 54.9, 55.9, 115.1, 117.2, 117.3, 120.4, 124,7, 125.0, 128.8, 133.1, 136.9, 137.0, 151.0, 154.7, 156.4, 166.9, 167.3.
(R)-(3,5-디클로로페닐)(3-(4-메톡시페녹시)피롤리딘-1-일)메타논(82)
Figure pct00096
(두 개의 회전이성체, 1:1 비, 85%), 담황색 액체; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.02 - 2.10 (m, 1H), 2.20 - 2.25 (m, 1H), 3.47 - 3.70 (m, 2H), 3.72 & 3.74 (s, 3H), 3.75 - 3.85 (m, 2H), 4.78 - 4.87 (m, 1H), 6.74 - 6.82 (m, 4H), 7.34 -7.41 (m, 3H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 29.9, 32.0, 44.4, 47.4, 52.1, 54.4, 55.6, 55.7, 75.5, 114.8, 116.9, 125.6, 125.7, 130.0, 135.1, 139.2, 139.3, 150.4, 150.7, 154.4, 154.5, 166.7, 167.0.
(R)-(3,5-디플루오로페닐)(3-(4-메톡시페녹시)피롤리딘-1-일)메타논(83)
Figure pct00097
(두 개의 회전이성체, 1:1 비, 75%), 황색 액체; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.01 - 2.27 (m, 2H), 3.48 - 3.67 (m, 2H), 3.71 & 3.74 (s, 3H), 3.77 - 3.85 (m, 2H), 4.78 - 4.88 (m, 1H), 6.73 - 6.87 (m, 5H), 6.99 & 7.06 (d, J = 5.6 Hz, 2H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 29.8, 32.0, 44.4, 47.3, 52.1, 54.9, 55.6, 75.6, 105.3, 105.4, 110.3, 110.4, 110.5, 110.7, 114.8, 116.9, 117.1, 150.2, 154.9, 162.4 (d, J = 250 Hz, F로 인해), 162.5 (d, J = 250 Hz, F로 인해), 167.0, 167.3.
(R)-(3,5-비스(트리플루오로메틸)페닐)(3-(4-메톡시페녹시)피롤리딘-1-일)메타논(84)
Figure pct00098
(두 개의 회전이성체, 1:1 비, 65%), 황색 액체; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.08 - 2.14 (m, 1H), 2.24 - 2.29 (m, 1H), 3.47 - 3.67 (m, 2H), 3.71 & 3.74 (s, 3H), 3.76 - 3.91 (m, 2H), 4.81 - 4.91 (m, 1H), 6.74 - 6.83 (m, 4H), 7.90 - 8.12 (m, 3H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 29.8, 32.1, 44.6, 47.4, 52.3, 54.5, 55.6, 75.6, 114.8, 114.9, 116, 9, 117.2, 123.7, 124.3, 127.5, 127.7, 131.1, 132.1, 138.5, 138.6, 150.4, 150.7, 154.5, 154.7, 166.5, 166.8.
(R)-(3-(4-메톡시페녹시)피롤리딘-1-일)(피리딘-3-일)메타논(85)
Figure pct00099
(두 개의 회전이성체, 1:1 비, 82%), 황색 고체; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.00 - 2.10 (m, 1H), 2.16 - 2.24 (m, 1H), 3.48 - 3.58 (m, 1H), 3.64 - 3.73 (m, 1H), 3.67 & 3.69 (s, 3H), 3.73 - 3.85 (m, 2H), 4.75 - 4.85 (m, 1H), 6.69 - 6.78 (m, 4H), 7.25 - 7.31 (m, 1H), 7.78 &7.83 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 8.57 - 8.61 (m, 1H), 8.71 & 8.77 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 29.7, 31.9, 44.3, 47.2, 51.9, 54.4, 55.49, 55.53, 75.5, 114.66, 114.69, 116.8, 116.9, 123.1, 123.2, 132.3, 134.8, 134.9, 147.9, 148.1, 150.39, 150.63, 150.83, 150.89, 154.2, 154.3, 167.0, 167.3.
(R)-(3-(4-메톡시페녹시)피롤리딘-1-일)(피리딘-4-일)메타논(86)
Figure pct00100
(두 개의 회전이성체, 1:1 비, 79%), 황색 고체; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.04 - 2.23 (m, 2H), 3.46 - 3.67 (m, 2H), 3.70 & 3.72 (s, 3H), 3.73 - 3.90 (m, 2H), 4.78 - 4.88 (m, 1H), 6.76 - 6.82 (m, 4H), 7.34 (s, 1H), 7.40 (s, 1H), 8.66 (d, J = 13.2 Hz, 2H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 29.6, 31.7, 44.0, 46.8, 51.7, 53.9, 55.3, 55.4, 75.3, 114.5, 114.6, 116.7, 116.8, 120.9, 121.0, 143.6, 143.7, 149.7, 150.2, 154.1, 154.2, 166.9, 167.1.
(R)-4-(3-(4-메톡시페녹시)피롤리딘-1-카보닐)피리딘 1-옥사이드(87)
Figure pct00101
(두 개의 회전이성체, 1:1 비, 97%), 황색 고체; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.03 - 2.11 (m, 1H), 2.21 - 2.26 (m, 1H), 3.50 - 3.68 (m, 2H), 3.70 & 3.72 (s, 3H), 3.74 - 3.88 (m, 2H), 4.79 - 4.87 (m, 1H), 6.70 - 6.81 (m, 4H), 7.25 - 7.41 (m, 2H), 8.17 - 8.20 (m, 1H), 8.29 & 8.35 (brs, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 29.8, 32.0, 44, 7, 47.3, 52.3, 54.4, 55.7, 75.4, 114.8, 116.9, 117.0, 124.5, 126.0, 126.1, 135.7, 135.8, 137.9, 138.1, 140.1, 150.3, 154.5, 154.5, 164.1, 164.3.
(R)-4-(3-(4-메톡시페녹시)피롤리딘-1-카보닐)피리딘-1-옥사이드(88)
Figure pct00102
(두 개의 회전이성체, 1:1 비, 95%), 황색 고체; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.03 - 2.10 (m, 1H), 2.22 - 2.27 (m, 1H), 3.52 - 3.68 (m, 2H), 3.70 & 3.72 (s, 3H), 3.76 - 3.83 (m, 2H), 4.80 - 4.87 (m, 1H), 6.70 - 6.79 (m, 4H), 7.40 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 7.47 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.13 - 8.18 (m, 2H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 29.7, 32.1, 44.7, 47.3, 52.4, 54.4, 55.6, 75.4, 114.8, 116.9, 125.0, 125.1, 132.9, 133.0, 139.1, 150.3, 150.6, 154.4, 154.6, 165.3.
(R)-(3-(4-메톡시페녹시)피롤리딘-1-일)(피리미딘-5-일)메타논(89)
Figure pct00103
(두 개의 회전이성체, 1:1 비, 84%), 담황색 고체; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.03 - 2.13 (m, 1H), 2.23 - 2.28 (m, 1H), 3.52 - 3.67 (m, 2H), 3.69 & 3.72 (s, 3H), 3.78 - 3.88 (m, 2H), 4.79 - 4.89 (m, 1H), 6.70 - 6.80 (m, 4H), 8.56 & 8.91 (s, 2H), 9.20 & 9.22 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 29.8, 32.1, 44.7, 52.3, 54.4, 55.6, 55.7, 75.5, 114.8, 116.9, 117.0 130.2, 130.3, 150.3, 150.6, 154.5, 154.6, 155.5, 155.6, 159.4, 159.5, 164.5.
(3,5-디니트로페닐)(4-하이드록시피페리딘-1-일)메타논(90)
Figure pct00104
1H NMR (400 MHz, 아세톤-d 6 ) δ 1.50-1.56 (m, 2H), 1.80-1.90 (m, 2H), 3.30-3.42 (m, 2H), 3.63 (brs, 1H), 3.94-4.05 (m, 3H), 8.61 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 8.95 (d, J = 2.0 Hz, 1H); 13C NMR (100 MHz, 아세톤-d 6 ) δ 33.7, 34.5, 39.5, 44.9, 66.0, 119.1, 127.4, 140.2, 148.8, 165.1.
메틸 4-(1-(3,5-디니트로벤조일)피페리딘-4-일옥시)벤조에이트(91)
Figure pct00105
1H NMR (400 MHz, 아세톤-d 6 ) δ 1.84 (brs, 2H), 1.96 (brs, 2H), 3.31 (brs, 1H), 3.59-3.74 (m, 2H), 3.77 (s, 3H), 3.84-3.96 (m, 1H), 4.63-4.66 (m, 1H), 6.81-6.85 (m, 2H), 7.87-7.90 (m, 2H), 8.50 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 8.97 (d, J = 2.0 Hz, 1H).
(3,5-디니트로페닐)(4-(4-메톡시페녹시)피페리딘-1-일)메타논(92)
Figure pct00106
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.85-1.98 (m, 4H), 3.35 (brs, 1H), 3.68-3.80 (m, 2H), 3.73 (s, 3H), 3.93 (brs, 1H), 4.49 (brs, 1H), 6.79 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.84 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 8.57 (s, 2H), 9.03 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 30.0, 31.2, 39.3, 44.6, 55.8, 71.9, 115.0, 117.9, 119.8, 127.5, 139.6, 148.7, 150.8, 154.6, 165.4.
N-(4-(1-(3,5-디니트로벤조일)피페리딘-4-일옥시)페닐)아세트아미드(93)
Figure pct00107
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 1.62-1.96 (m, 4H), 1.97 (s, 3H), 3.48 (m, 3H), 3.93 (brs, 1H), 4.56 (s, 1H), 6.89 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.44 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 8.64 (s, 2H), 8.33 (s, 1H), 9.74 (s, 1H);
(3,5-디니트로페닐)(4-(2-플루오로페녹시)피페리딘-1-일)메타논(94)
Figure pct00108
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 1.70-2.10 (m, 4H), 3.39-4.11 (m, 4H), 4.59 (m, 1H), 6.86-6.92 (m, 1H), 7.01-7.15 (m, 3H), 8.60 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 8.89 (d, J = 2.0 Hz, 1H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d 6 ) δ 31.1, 31.9, 45.5, 49.6, 75.0, 117.6 (d, J = 18.6 Hz, F로 인해), 119.5, 120.5, 123.3 (d, J = 6.7 Hz, F로 인해), 126.0 (d, J = 3.7 Hz, F로 인해), 128.6, 140.6, 146.1, 149.8, 154.8 (d, J = 242.6 Hz, F로 인해), 166.9.
(3,5-디니트로페닐)(4-(2-메톡시페닐)피페라진-1-일)메타논(95)
Figure pct00109
1H NMR (400 MHz, 아세톤-d 6 ) δ 3.02-3.12 (m, 4H), 3.62 (brs, 2H), 3.82 (s, 3H), 3.87 (brs, 2H), 6.85-6.95 (m, 4H), 8.68 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 8.96 (d, J = 2.4 Hz, 1H); LC-MS (ESI, m/z): 387 [M+H]+.
(3,5-디니트로페닐)(4-(4-메톡시페닐)피페라진-1-일)메타논(96)
Figure pct00110
1H NMR (400 MHz, 아세톤-d 6 ) δ 3.08-3.17 (m, 4H), 3.68 (brs, 2H), 3.71 (s, 3H), 3.88 (brs, 2H), 6.82 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.93, (d, J = 8.8 Hz, 2H), 8.69 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 8.98 (d, J = 2.0 Hz, 1H); 13C NMR (100 MHz, 아세톤-d 6 ) δ 42.4, 47.7, 50.5, 50.9, 54.9, 114.4, 118.8, 119.3, 127.7, 139.9, 145.6, 148.8, 154.5, 165.2; LC-MS (ESI, m/z): 387 [M+H]+.
(4-(2-클로로페닐)피페라진-1-일)(3,5-디니트로페닐)메타논(97)
Figure pct00111
1H NMR (400 MHz, 아세톤-d 6 ) δ 3.09-3.17 (m, 4H), 3.70 (brs, 2H), 3.94 (brs, 2H), 7.07 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.18 (d, J = 8 Hz, 1H), 7.30 (t, J = 8 Hz, 1H), 7.41 (d, J = 8 Hz, 1H), 8.72 (s, 1H), 9.00 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, 아세톤-d 6 ) δ 43.3, 48.7, 51.6, 52.1, 120.0, 122.0, 125.3, 128.5, 128.9, 129.4, 131.4, 140.6, 149.6, 149.8, 166.1; LC-MS (ESI, m/z): 391 [M+H]+.
[반응식 5]
Figure pct00112

t-부틸-벤질옥시피롤리딘-1-카복실레이트(D1)의 합성을 위한 일반적인 과정
디메틸 포름아미드(10mL) 중의 (R)-3급-부틸 3-하이드록시피롤리딘-1-카복실레이트(3.2mmol)의 용액에 0℃에서 수소화나트륨(3.2mmol) 및 벤질 브로마이드(3.2mmol) 를 가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 교반하였다. 밤새 교반한 후, 증류수(50mL)를 가하고, 생성된 침전물을 여과에 의해 수집하여 D1을 수득하였다.
벤질옥시-피롤리디닐-페닐메타논(D2)의 합성을 위한 일반적인 과정
D1(0.43mmol)을 트리플루오로 아세트산(5mL)에 용해시키고 실온에서 교반하였다. 1시간 후, 반응 혼합물을 진공에서 농축시켜 아민을 수득하였다. 메틸렌 클로라이드(5mL) 중의 아민의 용액에 0℃에서 트리에틸아민(0.51mmol) 및 벤조일클로라이드(0.51mmol)를 가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 교반하였다. 3시간 후, 반응 혼합물을 메틸렌 클로라이드(30mL)로 희석시키고, 1M HCl 수용액(30mL), 포화 Na2CO3 수용액(30mL) 및 염수(30mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 MgSO4로 건조시키고, 진공에서 농축시켰다. 조 생성물을 실리카겔 섬광 컬럼 크로마토그래피(3:1 헥산/에틸 아세테이트)로 정제하고, 헥산과 에틸 아세테이트의 혼합물로부터 재결정화하여 D2를 생성하였다.
(R)-(3-(벤질옥시)피롤리딘-1-일)(3,5-디니트로페닐)메타논(98)
Figure pct00113
(두 개의 회전이성체, 1:1 비, 23%), 백색 고체; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.18 - 2.29 (m, 2H), 3.53 - 3.58 (m, 1H), 3.76 - 3.93 (m, 3H), 5.12 -5.37 (m, 3H), 7.34 - 7.44 (m, 5H), 8.67 & 8.73 (d, J = 1.6 Hz, 2H), 9.08 & 9.09 (d, J = 1.6 Hz, 1H).
((R)-3-(3-클로로벤질옥시)피롤리딘-1-일)(3,5-디니트로페닐)메타논(99)
Figure pct00114
(두 개의 회전이성체 3:1 비, 75%); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.93 - 2.21 (m, 2H), 3.38 - 3.83 (m, 4H), 4.13 - 4.47 (m, 1H), 4.99 & 5.07 (s, 1H), 5.17 & 5.29 (s, 1H), 7.07 - 7,29 (m, 4H), 8.64 & 8.69 (s, 2H), 8.98 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 29.8, 32.2, 45.1, 47.6, 52.3, 54.8, 70.3, 70.4, 76.4, 78.0, 120.0, 120.1, 125.5, 125.6, 127.5, 127.7, 127.8, 127.9, 128.1, 129.9, 134.5, 134.6, 139.7, 139.8, 139.9, 148.5, 164.7, 164.8.
((R)-3-(2-플루오로벤질옥시)피롤리딘-1-일)(3,5-디니트로페닐)메타논(100)
Figure pct00115
(두 개의 회전이성체 1:1 비), 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.02 - 2.30 (m, 2H), 3.50 & 3.52 (s, 1H), 3.63 - 3.94 (m, 3H), 4.24 & 4.33 (s, 1H), 4.48 & 4.56 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 4.65 (s, 1H), 6.99 - 7.44 (m, 4H), 8.69 & 8.75 (s, 2H), 9.10 (s, 1H).
((R)-3-(3-(트리플루오로메틸)벤질옥시)피롤리딘-1-일)(3,5-디니트로페닐)메타논(101)
Figure pct00116
(두 개의 회전이성체 2:1 비), 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.06 - 2.29 (m, 2H), 3.53 & 3,55 (s, 1H), 3.78 - 3.96 (m, 3H), 4.27 & 4.35 (s, 1H), 4.51 & 4.62 (d, J = 12.4 Hz, 1H), 4.65 (s, 1H), 7.47 - 7.62 (m, 4H), 8.69 & 8.74 (s, 2H), 9.07 (s, 1H) ; 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 29.7, 32.1, 45.1, 47.7, 52.4, 54.9, 70.4, 70.5, 76.7, 78.2, 120.1, 124.1, 124.3, 124.83, 124.87, 127.7, 127.8, 129.2, 130.8, 130.9, 138.7, 138.8, 139.7, 139.8, 148.5, 165.0.
(R)-(3,5-디니트로페닐)(3-(피리딘-4-일메톡시)피롤리딘-1-일)메타논(102)
Figure pct00117
(두 개의 회전이성체, 1:1 비, 75%), 갈색 오일; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.99 - 2.24 (m, 2H), 3.49 - 3.92 (m, 4H), 4.20 - 4.28 (m, 1H), 4.41 - 4.61 (m, 2H), 7.14 - 7.24 (m, 2H), 8.49 - 8.56 (m, 2H), 8.67 & 8.70 (d, J = 1.6 Hz, 2H), 9.04 (d, J = 1.6 Hz, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 29.7, 32.3, 45.1, 47.6, 52.3, 54.8, 69.4, 69.5, 76.9, 78.5, 120.1, 121.6, 121.7, 121.8, 127.7, 127.8, 139.8, 139.9, 146.6, 146.8, 148.5, 150.1, 150.2, 164.7.
[반응식 6]
Figure pct00118

아미노피롤리디닐-페닐-메타논(E3)의 합성을 위한 일반적인 과정
메틸렌 클로라이드(50mL) 중의 (S)-(+)-N-Boc-3-피롤리디놀(2.67mmol) 및 트리에틸아민(4.01mmol)의 용액에 빙욕하에 메탄설포닐 클로라이드(4.01mmol)를 가하고, 생성된 혼합물을 4℃에서 추가로 교반하였다. 2시간 후, 잔류물을 메틸렌 클로라이드(50mL)로 희석시키고, 물(100mL) 및 염수(100mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 MgSO4로 건조시키고, 진공에서 농축시켰다. 조 생성물을 실리카겔 섬광 컬럼 크로마토그래피(2:1 헥산/에틸 아세테이트)로 정제하여 E1을 수득하였다.
E1(0.75mmol) 및 아민(3.75mmol)의 용액을 100℃에서 교반하였다. 밤새 교반한 후, 잔류물을 메틸렌 클로라이드(30mL)에 용해시키고, 물(30mL) 및 염수(30mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 MgSO4로 건조시키고, 진공에서 농축시켰다. 조 생성물을 실리카겔 섬광 컬럼 크로마토그래피(1:1 헥산/에틸 아세테이트)로 정제하여 E2를 수득하였다.
메틸렌 클로라이드(20mL) 중의 E2(0.96mmol)의 용액에 트리플루오로아세트산(0.5mL)을 가하였다. 3시간 후, 용매를 진공에서 제거하였다. 반응 혼합물을 메틸렌 클로라이드(20mL)에 용해시키고, 0℃로 냉각시켰다. 트리에틸아민(4.83mmol) 및 벤조일 클로라이드(1.05mmol)를 가하였다. 2시간 후, 잔류물을 메틸렌 클로라이드(20mL)로 희석시키고, 물(40mL) 및 염수(40mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 MgSO4로 건조시키고, 진공에서 농축시켰다. 조 물질을 실리카겔 섬광 컬럼 크로마토그래피(1:1 헥산/에틸 아세테이트)로 정제하여 E3을 수득하였다.
(R)-(3,5-디니트로페닐)(3-(4-메톡시페닐아미노)피롤리딘-1-일)메타논(103)
Figure pct00119
(두 개의 회전이성체, 1:1 비, 63%), 갈색 고체; 1H NMR (400 MHz, CDCl3 + CD3OD) δ 1.93 - 2.01 (m, 1H), 2.14 - 2.30 (m, 1H), 3.26 - 3.30 & 3.44 - 3.50 (m, 1H), 3.54 - 3.72 (m, 2H), 3.61 & 3.68 (s, 3H), 3.80 - 3.91 (m, 1H), 3.95 - 4.05 (m, 1H), 6.43 & 6.55 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.62 & 6.70 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 8.58 & 8.67 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 8.95 - 8.99 (m, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3 + CD3OD) δ 30.4, 32.4, 45.2, 47.9, 52.6, 53.0, 54.4, 55.0, 55.8, 55.9, 115.0, 115.1, 115.2, 115.3, 120.1, 127.6, 127.7, 139.6, 140.5, 140.7, 148.5, 148.6, 152.8, 152.9, 165.2, 165.4.
(R)-(3-(4-부톡시페닐아미노)피롤리딘-1-일)(3,5-디니트로페닐)메타논(104)
Figure pct00120
(두 개의 회전이성체, 1:1 비, 54%), 갈색 고체; m.p. 118 - 120℃; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 0.83 - 0.98 (m, 3H), 1.39 - 1.52 (m, 2H), 1.61 - 1.76 (m, 2H), 2.02 - 2.05 (m, 1H), 2.24 - 2.41 (m, 1H), 3.33 - 3.37 & 3.50 - 3.63 (m, 2H), 3.66 - 4.13 (m, 6H), 6.47 & 6.60 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.70 & 6.78 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 8.66 & 8.74 (s, 2H), 9.05 & 9.08 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3 ) δ 14.0, 14.1, 19.4, 19.5, 30.9, 31.6, 31.7, 32.9, 45.3, 47.9, 52.8, 53.4, 54.6, 55.2, 68.5, 68.6, 115.0, 115.2, 116.0, 116.2, 120.2, 127.8, 127.9, 139.9, 140.1, 140.4, 148.6, 152.7, 164.9, 165.1.
(R)-(3,5-디니트로페닐)(3-(4-페녹시페닐아미노)피롤리딘-1-일)메타논(105)
Figure pct00121
(두 개의 회전이성체, 1:1 비, 60%), 갈색 고체; 1H NMR (400 MHz, CDCl3 + CD3OD) δ 2.00 - 2.06 (m, 1H), 2.18 - 2.35 (m, 1H), 3.32 - 3.35 & 3.48 - 3.54 (m, 1H), 3.61 - 3.78 (m, 2H), 3.82 - 4.12 (m, 2H), 6.47 & 6.60 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.77 - 6.97 (m, 5H), 7.17, 7.24 (m, 2H), 8.63 & 8.69 (d, J = 1.6 Hz, 2H), 9.01 & 9.04 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3 + CD3OD) δ 30.6, 32.5, 45.3, 47.9, 52.3, 53.0, 54.0, 55.1, 114.5, 114.8, 117.4, 117.5, 120.2, 121.3, 121.4, 122.4, 122.5, 127.7, 127.8, 129.7, 139.6, 142.8, 143.0, 148.6, 148.8, 165.2, 165.3.
(R)-(3,5-디니트로페닐)(3-(4-하이드록시페닐아미노)피롤리딘-1-일)메타논(106)
Figure pct00122
(두 개의 회전이성체, 1:1 비, 83%), 황색 고체; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 1.78 - 1.89 (m, 1H), 2.03 - 2.15 (m, 1H), 3.12 - 3.17 (m, 1H), 3.37 - 3.45 (m, 1H), 3.52 - 3.95 (m, 3H), 5.15 - 5.23 (m, 1H), 6.36 - 6.56 (m, 4H), 8.38 & 8.44 (brs, 1H), 8.64 & 8.67 (s, 2H), 8.81 & 8.84 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d 6 ) δ 29.6, 31.3, 44.6, 46.9, 51.6, 51.9, 53.3, 54.1, 113.8, 114.2, 115.6, 115.7, 119.4, 127.4, 127.5, 139.6, 139.7, 140.3, 140.4, 148.0, 148.1, 148.5, 148.7, 164.2.
(R)-(3,5-디니트로페닐)(3-(페닐아미노)피롤리딘-1-일)메타논(107)
Figure pct00123
(두 개의 회전이성체, 1:1 비, 80%), 적색 고체; 1H NMR (400 MHz, CDCl3 + CD3OD) δ 1.99 - 2.04 (m, 1H), 2.17 - 2.33 (m, 1H), 3.28 - 3.31 & 3.57 -3.95(m, 4H), 4.04 - 4.11 (m, 1H), 6.46 - 6.48 (m, 1H), 6.59 - 6.70 (m, 2H), 7.02 - 7.14 (m, 2H), 8.60 & 8.67 (s, 2H), 8.98 & 9.01 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3 + CD3OD) δ 30.3, 32.2, 45.1, 47.8, 51.7, 52.8, 53.3, 54.9, 113.2, 113.5, 118.3, 118.4, 120.0, 127.6, 127.7, 129.4, 139.5, 146.3, 146.4, 148.4, 148.5, 165.1, 165.3.
(R)-(3,5-디니트로페닐)(3-(피리딘-2-일아미노)피롤리딘-1-일)메타논(108)
Figure pct00124
(두 개의 회전이성체, 1:1 비, 70%), 황색 고체; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.00 - 2.44 (m, 2H), 3.38 - 4.11 (m, 4H), 4.38 & 4.50 (m, 1H), 6.36 & 6.44 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.57 & 6.64 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 7.37 & 7.44 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.98 & 8.11 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 8.67 & 8.73 (s, 2H), 9.05 & 9.09 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 30.4, 32.6, 45.1, 47.7, 51.7, 52.9, 55.3, 76.7, 101.8, 108.3, 113.7, 119.9, 127.7, 137.5, 137.7, 147.8, 147.9, 148.3, 148.4, 157.2, 157.4, 164.8, 164.9.
(R)-(3-(사이클로헥실아미노)피롤리딘-1-일)(3,5-디니트로페닐)메타논(109)
Figure pct00125
(두 개의 회전이성체, 1:1 비, 69%), 담황색 고체; 1H NMR (400 MHz, CDCl3 + CD3OD) δ 0.99 - 1.35 (m, 6H), 1.60 - 1.98 (m, 5H), 2.15 - 2.32 (m, 1H), 2.39 - 2.57 (m, 1H), 3.24 - 3.60 (m, 2H), 3.63 - 3.73 (m, 2H), 3.81 - 3.91 (m, 1H), 8.73 & 8.78 (s, 2H), 9.10 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3 + CD3OD) δ 24.7, 24.8, 24.9, 25.6, 25.7, 30.6, 32.4, 33.3, 33.4, 45.2, 47.7, 52.6, 54.5, 54.8, 54.9, 55.1, 119.7, 127.4, 127.5, 139.5, 148.3, 164.9, 165.0.
(R)-N-사이클로헥실-N-(1-(3,5-디니트로벤조일)피롤리딘-3-일)-3,5-디니트로벤즈아미드(110)
Figure pct00126
(두 개의 회전이성체, 1:1 비, 15%), 백색 고체; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.01 - 1.22 (m, 3H), 1.62 - 1.86 (m, 6H), 2.18 - 2.26 (m, 1H), 2.74 - 2.89 (m, 1H), 3.30 - 3.35 (m, 1H), 3.50 - 3.78 (m, 2H), 3.97 - 4.19 (m, 4H), 8.51 & 8.56 (s, 2H), 8.74 (s, 2H), 9.09 - 9.10 (m, 2H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 24.8, 24.9, 25.3, 25.5, 27.3, 30.0, 31.8, 45.6, 48.7, 48.9, 50.0, 53.6, 54.8, 60.5, 119.8, 120.0, 126.7, 127.8, 139.8, 140.1, 140.2, 140.4, 148.6, 148.2, 164.4, 164.7, 166.6, 166.7.
(R)-(3-(4-메톡시페닐아미노)피롤리딘-1-일)(페닐)메타논(111)
Figure pct00127
(두 개의 회전이성체, 1:1 비, 75%), 담황색 고체; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.84 - 1.88 (m, 1H), 2.08 - 2.32 (m, 1H), 3.26 - 3.34 & 3.49 - 4.03 (m, 5H), 3.69 & 3.72 (s, 3H), 6.48 & 6.50 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 6.71 & 6.76 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 7.36 - 7.51 (m, 5H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 30.7, 32.5, 44.5, 47.7, 52.6, 52.7, 54.2, 55.2, 55.8, 55.9, 114.7, 114.9, 115.0, 127.2, 128.3, 130.1, 136.7, 140.8, 141.0, 152.6, 170.0.
(R)-(3-(3-클로로벤질아미노)피롤리딘-1-일)(3,5-디니트로페닐)메타논(112)
Figure pct00128
(두 개의 회전이성체, 1:1 비, 32%), 담황색 고체; 1H NMR (400 MHz, CDCl3 + CD3OD) δ 1.83 - 1.89 (m, 1H), 2.01 - 2.08 & 2.14 - 2.19 (m, 1H), 2.75 (brs, 1H), 3.15 - 3.19 & 3.35 - 3.83 (m, 7H), 7.05 - 7.23 (m, 4H), 8.58 & 8.67 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 8.97 - 8.99 (m, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3 + CD3OD) δ 30.4, 32.1, 45.2, 47.7, 51.2, 51.4, 52.4, 54.9, 55.2, 57.5, 119.8, 126.0, 126.2, 127.2, 127.3, 127.5, 127.6, 127.8, 128.0, 129.7, 129.8, 134.1, 134.2, 139.5, 139.6, 141.3, 141.7, 148.2, 148.3, 164.7, 164.8.
(R)-N-(3-클로로벤질)-N-(1-(3,5-디니트로벤조일)피롤리딘-3-일)-3,5-디니트로벤즈아미드(113)
Figure pct00129
(두 개의 회전이성체, 1:1 비, 44%), 백색 고체; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.26 - 2.35 (m, 2H), 3.56 - 4.05 (m, 4H), 4.57 - 4.65 (m, 3H), 7.06 - 7.15 (m, 2H), 7.24 - 7.35 (m, 2H), 8.50 - 8.62 (m, 4H), 8.97 - 9.02 (m, 2H); LC-MS (ESI, m/z): 599 [M+H]+.
(R)-(3-(벤질아미노)피롤리딘-1-일)(3,5-디니트로페닐)메타논(114)
Figure pct00130
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.59 (brs, 1H), 1.87-1.94 (m, 1H), 2.06-2.24 (m, 1H), 3.20 (dd, J = 4.8, 10.4 Hz, 0.5H ), 3.46-3.89 (m, 6.5H), 7.15-7.36 (m, 5H), 8.63 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.71 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 9.03 (t, J = 2.0 Hz, 0.5H), 9.06 (t, J = 2.0 Hz, 0.5H).
(R)-(3,5-디니트로페닐)(3-(3-(트리플루오로메틸)벤질아미노)피롤리딘-1-일)메타논(115)
Figure pct00131
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.51 (brs, 1H), 1.89-1.94 (m, 1H), 2.10-2.28 (m, 1H), 3.24 (dd, J = 5.2, 10.0 Hz, 0.5H ), 3.45-3.92 (m, 6.5H), 7.40-7.61 (m, 4H), 8.65 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.72 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 9.06 (t, J = 2.0 Hz, 0.5H), 9.08 (t, J = 2.0 Hz, 0.5H).
(R)-(3,5-디니트로페닐)(3-(2-플루오로벤질아미노)피롤리딘-1-일)메타논(116)
Figure pct00132
(두 개의 회전이성체, 1:1 비, 75%), 황색 고체; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.89 - 1.94 (m, 1H), 2.11 - 2.25 (m, 1H), 3.22 - 3.89 (m, 7H), 6.93 & 7.02 (t, J = 8.6 Hz, 2H), 7.20 & 7.33 (m, 2H), 8.66 & 8.72 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 9.06 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 30.7, 32.5, 45.3, 47.8, 51.3, 51.5, 52.7, 55.1, 55.4, 57.7, 115.1, 115.3, 119.8, 119.9, 127.6, 127.7, 129.4, 129.6, 135.4, 135.5, 139.8, 148.3, 148.4, 162.0 (d, J = 245 Hz, F로 인해), 162.1 (d, J = 245 Hz, F로 인해), 164.5, 164.6.
(R)-(3,5-디니트로페닐)(3-(2-플루오로벤질아미노)피롤리딘-1-일)메타논 하이드로클로라이드(117)
Figure pct00133
(두 개의 회전이성체, 1:1 비, 92%), 백색 고체; 1H NMR (400 MHz, CD3OD + D2O) δ 2.24 - 2.35 (m, 1H), 2.48 - 2.63 (m, 1H), 3.48 - 4.34 (m, 7H), 7.13 & 7.24 (t, J = 8.6 Hz, 2H), 7.47 & 7.58 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 8.73 & 8.8 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 9.16 (brs, 1H); 13C NMR (100 MHz, CD3OD + D2O) δ 28.1, 29.7, 45.5, 50.6, 50.7, 51.9, 56.6, 57.7, 81.1, 117.0, 117.1, 127.7, 128.6, 128.7, 133.2, 133.3, 139.0, 147.1, 149.7, 167.5, 167.6.
(R)-(3,5-디니트로페닐)(3-(피리딘-4-일메틸아미노)피롤리딘-1-일)메타논(118)
Figure pct00134
(두 개의 회전이성체, 1:1 비, 69%), 황색 고체; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.80 (br, 1H), 1.88 - 2.23 (m, 2H), 3.23 - 3.89 (m, 7H), 7.17 & 7.26 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 8.45 & 8.52 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 8.65 & 8.69 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 9.04 (t, J = 2.0 Hz, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 30.2, 32.4, 44.7, 47.7, 52.4, 54.8, 55.9, 76.0, 115.0, 115.1, 117.2, 117.4, 124.4, 124.5, 127.0, 129.1, 130.6, 130.8, 137.5, 137.7, 150.8, 151.0, 154.7, 154.8, 168.5, 168.8.
[반응식 7]
Figure pct00135

(R)-N-벤조일피롤리디닐-벤즈아미드(F5)의 합성을 위한 일반적인 과정
DMF(15mL) 중의 F1(3.77mmol)의 용액에 나트륨 아지드(11.00mmol)를 가하고, 생성된 혼합물을 70℃로 가온시켰다. 3시간 후, 용매를 진공에서 제거하고, 에틸아세테이트(50mL)에 용해시키고, 물(50mL) 및 염수(50mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 MgSO4로 건조시키고, 진공에서 농축시켰다. 조 생성물을 실리카겔 섬광 컬럼 크로마토그래피(1:1 헥산/에틸 아세테이트)로 정제하여 F2를 수득하였다.
F2(2.68mmol)의 용액에 활성탄 상의 10% 팔라듐을 가하고, 수소 대기하에 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트 545를 사용하여 여과하고, 생성된 여액을 진공에서 농축시켜 F3을 수득하였다.
메틸렌 클로라이드(10mL) 중의 F3(0.77mmol) 및 트리에틸아민(1.16mmol)의 용액에 빙욕하에 벤조일 클로라이드(1.00mmol)를 가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 되게 하였다. 2시간 후, 반응 혼합물을 메틸렌 클로라이드(20mL)로 희석시키고, 물(30mL) 및 염수(30mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 MgSO4로 건조시키고, 진공에서 농축시켰다. 조 생성물을 실리카겔 섬광 컬럼 크로마토그래피(2:1 헥산/에틸 아세테이트)로 정제하여 F4를 수득하였다.
메틸렌 클로라이드(10mL) 중의 F4(0.59mmol)의 용액에 트리플루오로아세트산(0.5mL)을 가하고, 실온에서 교반하였다. 3시간 후, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 메틸렌 클로라이드(10mL)에 용해시키고, 트리에틸아민(0.41mL, 2.96mmol)을 가하였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시킨 다음 3,5-디클로로벤조일 클로라이드(0.65mmol)를 가하였다. 생성된 혼합물을 실온으로 되게 하였다. 2시간 후, 용매를 진공에서 제거하고, 조 잔류물을 실리카겔 섬광 컬럼 크로마토그래피(1:1 헥산/에틸 아세테이트)로 정제하여 F5를 수득하였다.
(R)-N-(1-(3,5-디니트로벤조일)피롤리딘-3-일)-3-(트리플루오로메톡시)벤즈아미드(119)
Figure pct00136

(두 개의 회전이성체, 1:1 비, 67%), 담황색 고체; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.07 - 2.18 (m, 1H), 2.29 - 2.40 (m, 1H), 3.49 - 3.60 (m, 1H), 3.68 - 3.76 (m, 1H), 3.87 - 3.98 (m, 2H), 4.60 - 4.74 (m, 1H), 7.19 - 7.60 (m, 5H), 8.51 & 8.59 (s, 2H), 8.91 & 8.96 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 29.9, 32.5, 45.3, 48.0, 49.2, 50.8, 51.9, 54.8, 119.9, 120.0, 120.2, 124.3, 125.7, 127.6, 130.2, 135.7, 136.0, 139.4, 148.4, 148.5, 149.2, 164.9, 165.0, 166.5, 166.6.
(R)-N-(1-(3,5-디니트로벤조일)피롤리딘-3-일)-4-메톡시벤즈아미드(120)
Figure pct00137
(두 개의 회전이성체, 1:1 비, 0.19g, 76%), 백색 고체; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.08 - 2.15 (m, 1H), 2.35 - 2.47 (m, 1H), 3.47 - 4.08 (m, 4H), 3.81 & 3.84 (s, 3H), 4.62 - 4.64 & 4.77 - 4.78 (m, 1H), 6.45 & 6.50 (brs, 1H), 6.82 & 6.88 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.62 & 7.72 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 8.62 & 8.71 (s, 2H), 9.04 & 9.08 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 30.0, 32.8, 45.2, 48.0, 48.9, 50.5, 52.2, 55.2, 55.6, 60.6, 113.9, 120.2, 125.6, 126.1, 127.7, 127.8, 129.0, 139.5, 148.5, 162.7, 164.9, 165.0, 167.4.
(R)-3-클로로-N-(1-(3,5-디니트로벤조일)피롤리딘-3-일)벤즈아미드(121)
Figure pct00138
(두 개의 회전이성체, 1:1 비, 66%), 담황색 고체; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 1.94 - 2.20 (m, 2H), 3.33 - 3.83 (m, 4H), 4.42 - 4.55 (m, 1H), 7.43 - 7.60 (m, 2H), 7.71 - 7.90 (m, 2H), 8.66 & 8.69 (d, J = 2.0 Hz, 2H, brs, 1H), 8.83 - 8.86 (m, 1H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d 6 ) δ 29.3, 31.5, 44.6, 47.0, 48.4, 49.9, 51.1, 53.3, 119.4, 119.5, 126.2, 126.3, 127.0, 127.1, 127.5, 130.2, 130.3, 131.1, 133.0, 133.1, 136.1, 136.3, 139.5, 139.6, 148.0, 164.0, 164.1, 165.0, 165.1.
(S)-1-(3,5-디니트로벤조일)피롤리딘-3-일 메탄설포네이트(122)
Figure pct00139
(두 개의 회전이성체, 1:1 비, 92%), 백색 고체; m.p. 138 - 140℃; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.25 - 2.46 (m, 2H), 3.03 & 3.10 (s, 3H), 3.59 - 3.67 & 3.75 - 4.03 (m, 4H), 5.28 - 5.40 (m, 1H), 8.68 & 8.73 (s, 2H), 9.08 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 31.1, 33.6, 38.9, 39.0, 44.7, 47.2, 53.3, 55.3, 78.2, 78.6, 120.5, 127.8, 127.9, 139.3, 148.7, 164.8, 165.0; LC-MS (ESI, m/z): 360 [M+H]+.
(R)-1-(3,5-디니트로벤조일)피롤리딘-3-일 메탄설포네이트(123)
Figure pct00140
(두 개의 회전이성체, 1:1 비, 89%), 백색 고체; 1H NMR (400 MHz, CDCl3 + CD3OD) δ 2.16 - 2.32 (m, 2H), 2.94 & 3.02 (s, 3H), 3.50 - 3.91 (m, 4H), 5.19 - 5.30 (m, 1H), 8.58 & 8.63 (s, 2H), 8.97 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3 + CD3OD) δ 30.7, 33.1, 38.3, 38.4, 44.5, 46.9, 53.0, 55.0, 78.5, 79.0, 120.1, 127.6, 139.0, 148.4, 164.9, 165.0.
실시예 7: 피리도피리미디논 화합물의 유도체화
피리도피리미디논 화합물(스캐폴드 VIII; 표 3 참조)을 아래에 요약된 방법(반응식 8-10)에 따라 유도체화시켰다. 생성된 유도체를 상기한 검정을 사용하여 억제 활성에 대해 실험하였으며, 결과가 표 4에 요약되어 있다.
[반응식 8]
Figure pct00141

G1의 합성을 위한 일반적인 과정
2-아미노-3-피콜린(1.0mmol)을 디에틸 말로네이트(1.0mmol)에 용해시켰다. 용액을 12시간 동안 170℃로 가열하였다. 냉각시킨 후, 짙은색 잔류물을 CH2Cl2(10mL)로 연마하였다. 잔류성 담색 고체를 여과에 의해 수집하고, CH2Cl2로 세척하여 G1을 수득하였다.
G2의 합성을 위한 일반적인 과정
DMF(2.0mL)에 0℃에서 POCl3(3.0mmol)을 가하였다. 혼합물을 0℃에서 40분 동안 교반한 후, DMF(2.0mL) 중의 G1(1.0mmol)의 용액을 가하고, 80℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 냉각시키고, 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 물로 희석시키고, CH2Cl2(10mLⅹ3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 섬광 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 G2를 수득하였다.
G3의 합성을 위한 일반적인 과정
THF(2.0mL) 중의 G2(1.0mmol)의 교반 용액에 Et3N(2.0mmol)을 가하였다. 혼합물을 0℃로 냉각시켰다. 5분 후, 아민(1.0mmol)을 적가하고, 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 CH2Cl2(10mL)로 희석시키고, 염수(10mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 MgSO4로 건조시키고, 진공에서 농축시켰다. 조 생성물을 섬광 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 G3을 수득하였다.
G4의 합성을 위한 일반적인 과정
G2(0.5mmol)를 3급-부틸 알콜 10.4mL 및 2-메틸-2-부텐 2.5mL에 용해시켰다. 물 4.2mL 중의 차아염소산나트륨(4.59mmol) 및 인산이수소나트륨(3.46mmol)의 용액을 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 이어서, 휘발 성분을 진공하에 제거하고, 잔류물을 물 10ml에 용해시키고, 헥산 2회 10ml 분획으로 추출하였다. 수성 층을 HCl(aq)을 사용하여 pH=3으로 되도록 산성화시키고, 메틸렌 클로라이드 10mL 분획으로 추출하였다. 합한 유기 층을 냉수 20mL로 세척하고, 건조시키고, 농축시켜 G4를 수득하였다.
G3으로부터 G5의 합성을 위한 일반적인 과정
G3(36.6μmol)을 3급-부틸 알콜 760㎕ 및 2-메틸-2-부텐 180㎕에 용해시켰다. 물 300㎕ 중의 차아염소산나트륨(335μmol) 및 인산이수소나트륨(253μmol)의 용액을 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 이어서, 휘발 성분을 진공하에 제거하고, 잔류물을 물 10ml에 용해시키고, 헥산 2회 10ml 분획으로 추출하였다. 수성 층을 HCl(aq)을 사용하여 pH=3으로 되도록 산성화시키고 메틸렌 클로라이드 10ml 분획으로 추출하였다. 합한 유기 층을 냉수 20ml로 세척하고, 건조시키고, 농축시켜 G5를 수득하였다.
G4로부터 G5의 합성을 위한 일반적인 과정
DMF(2.0mL) 중의 G4(1.0mmol)의 교반 용액에 Et3N(2.0mmol) 및 아민(1.5mmol)을 가하고, 혼합물을 60℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 CH2Cl2(10mL)로 희석시키고, 염수(10mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 MgSO4로 건조시키고, 진공에서 농축시켰다. 조 생성물을 헥산과 메틸렌 클로라이드의 혼합물로부터 재결정화에 의해 정제하여 G5를 수득하였다.
G6의 합성을 위한 일반적인 과정
CH2Cl2(3mL) 및 건조된 피리딘(1mL)의 용액 중의 2-아미노-3-피콜린(4.0mmol)의 용액을 실온에서 CH2Cl2(3mL) 중의 에틸 3-클로로-3-옥소-프로피오네이트(5.3mmol)의 교반 용액에 적가하였다(첨가 동안 백색 연기가 방출하면서 발열 반응이 일어남). 생성된 가온 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반한 다음 냉수 30mL에 부었다; 과량의 탄산나트륨을 교반하면서 주의해서 가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 추가로 교반하였다. 이어서, 유기 층을 수집하고, 수성 상을 CH2Cl2로 수회 추출하였다. 합한 유기 층을 물로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 진공에서 농축시켰다. 조 생성물을 섬광 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 G6을 수득하였다.
G7의 합성을 위한 일반적인 과정
G6(1.83mmol), POCl3(0.5mL) 및 다가인산(137mg)의 혼합물을 130℃에서 3시간 동안 교반하면서 가열하였다. 냉각시킨 후, 무수 에탄올을 가하고, 혼합물을 30분 동안 환류시킨 다음 냉각되도록 하였다. 혼합물을 수성 탄산나트륨으로 처리하고, CH2Cl2(10mLⅹ3)로 철저하게 추출하였다. 합한 층을 물(10mL), 염수(10mL)로 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 조 생성물을 섬광 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 G7을 수득하였다.
G8의 합성을 위한 일반적인 과정
DMF(0.96mL) 중의 G6(1mmol)의 용액에 탄산칼륨(5.0mmol)에 이어 페놀(1.94mmol)을 가하였다. 100℃에서 12시간 후, 용액을 23℃로 냉각되도록 하였다. 반응 혼합물을 H2O(50mL)로 세척하고, 수성 층을 CH2Cl2(20mLⅹ3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 1N HCl(20mLⅹ2)로 세척하고, 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 조 생성물을 섬광 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 G8을 수득하였다.
G9의 합성을 위한 일반적인 과정
DMF(2.0mL)에 0℃에서 POCl3(3.0mmol)을 가하였다. 혼합물을 0℃에서 40분 동안 교반한 후, DMF(2.0mL) 중의 G8(1.0mmol)의 용액을 가하고, 80℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 냉각시키고, 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 물로 희석시키고, CH2Cl2(10mLⅹ3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 섬광 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 G9를 수득하였다.
에틸 3-(3-메틸피리딘-2-일아미노)-3-옥소프로파노에이트(124)
Figure pct00142
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.25 (t, J = 7.0 Hz, 3H), 2.25 (s, 3H), 3.45 (s, 2H), 4.20 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 7.47 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.03 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.07 (s, 1H), 9.67 (brs, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 13.9, 17.7, 42.6, 61.7, 113.8, 129.3, 138.8, 147.6, 148.8, 163.5, 168.4.
2-하이드록시-9-메틸-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(125)
Figure pct00143
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 2.48 (s, 3H), 5.44 (s, 1H), 7.20 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 7.87 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.84 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 11.52 (brs, 1H).
2-하이드록시-8-메틸-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(126)
Figure pct00144
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 2.50 (s, 3H), 4.88 (s, 1H), 7.20 - 7.24 (m, 2H), 8.85 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 11.98 (br s, 1H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d 6 ) δ 20.6, 80.3, 114.4, 117.1, 127.7, 146.7, 153.5, 155.3, 162.3.
2-클로로-9-메틸-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(127)
Figure pct00145
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.57 (s, 3H), 6.45 (s, 1H), 7.12 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 7.68 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.93 (d, J = 6.8 Hz, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 18.0, 102.3, 115.8, 125.7, 134.7, 136.9, 150.0, 157.6, 157.9.
2-클로로-9-메틸-4-옥소-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-카브알데히드(128)
Figure pct00146
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.64 (s, 3H), 7.30 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 7.92 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 9.10 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 10.42 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 17.7, 107.3, 117.7, 127.0, 135.6, 140.6, 150.0, 156.4, 160.2, 187.1.
2-클로로-8-메틸-4-옥소-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-카브알데히드(129)
Figure pct00147
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.59 (s, 3H), 7.24 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.52 (s, 1H), 9.09 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 10.40 (s, 1H).
2-클로로-7-메틸-4-옥소-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-카브알데히드(130)
Figure pct00148
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 2.32 (s, 3H), 7.49 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.78 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 8.79 (s, 1H), 10.16 (s, 1H).
2-클로로-6-메틸-4-옥소-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-카브알데히드(131)
Figure pct00149
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.11 (s, 3H), 6.98 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.51 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.79 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 10.29 (s, 1H).
9-메틸-4-옥소-2-(페닐아미노)-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-카브알데히드(132)
Figure pct00150
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.44 (s, 3H), 6.89 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 7.11 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.34 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 7.62 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 7.76 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 8.80 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 10.27 (s, 1H), 11.67 (brs, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 18.1, 94.6, 113.6, 121.8, 124.2, 125.9, 128.7, 133.6, 138.1, 138.9, 152.5, 153.8, 160.2, 190.2.
2-(3-클로로페닐아미노)-9-메틸-4-옥소-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-카브알데히드(133)
Figure pct00151
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.50 (s, 3H), 6.97 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 7.08 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.25 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.42 (d, J = 8.0 H, 1H), 7.69 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.18 (s, 1H), 8.84 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 10.27 (s, 1H), 11.72 (brs, 1H).
9-메틸-4-옥소-2-(3-(트리플루오로메톡시)페닐아미노)-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-카브알데히드(134)
Figure pct00152
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.50 (s, 3H), 6.99 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 7.36 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.42 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.70 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.16 (s, 1H), 8.88 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 10.32 (s, 1H), 11.86 (brs, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 18.0, 94.7, 114.2, 114.7, 116.5, 119.7, 126.1, 129.7, 133.8, 139.4, 139.7, 149.4, 152.6, 157.0, 160.1, 190.4.
9-메틸-4-옥소-2-(3-(트리플루오로메틸)페닐아미노)-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-카브알데히드(135)
Figure pct00153
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.49 (s, 1H), 6.98 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 7.37 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.45 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.61 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.70 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 8.61 (s, 1H), 8.87 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 10.30 (s, 1H), 11.85 (brs, 1H).
2-(4-3급-부틸페닐아미노)-9-메틸-4-옥소-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-카브알데히드(136)
Figure pct00154
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.32 (s, 9H), 2.48 (s, 3H), 6.89 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 7.37 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.62 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.73 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 8.81 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 10.30 (s, 1H), 11.68 (br s, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 18.2, 31.3, 34.3, 94.6, 113.5, 121.4, 125.6, 125.9, 133.6, 135.6, 138.8, 147.2, 152.6, 156.7, 160.4, 190.2.
2-(3-클로로벤질아미노)-9-메틸-4-옥소-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-카브알데히드(137)
Figure pct00155
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.40 (s, 3H), 4.80 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 6.87 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 7.24-7.26 (m, 3H), 7.37 (s, 1H), 7.59 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.79 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 10.34 (brs, 1H), 10.30 (s, 1H).
9-메틸-2-모르폴리노-4-옥소-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-카브알데히드(138)
Figure pct00156
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.30 (s, 3H), 3.65 (d, J = 2.4 Hz, 4H), 3.72 (d, J = 3.2 Hz, 4H), 6.74 - 6.77 (m, 1H), 7.49 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.62 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 10.01 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 17.6, 49.5, 67.0, 95.9, 112.9, 125.7, 133.0, 138.1, 150.5, 158.4, 162.3, 186.2
2-(4-(2-클로로페닐)피페라진-1-일)-9-메틸-4-옥소-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-카브알데히드(139)
Figure pct00157
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.41 (s, 3H), 3.19 (t, J = 4.8 Hz, 4H), 3.92 (t, J = 4.6 Hz, 4H), 6.82 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 6.98 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.04 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.21 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.36 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.55 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 8.73 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 10.15 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 17.6, 49.3, 51.4, 96.1, 112.7, 120.5, 124.0, 125.8, 127.6, 128.8, 130.6, 133.0, 137.8, 148.7, 150.5, 158.6, 162.5, 186.4.
2-(3,4-디하이드로이소퀴놀린-2(1H)-일)-9-메틸-4-옥소-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-카브알데히드(140)
Figure pct00158
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.43 (s, 3H), 3.05 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 4.03 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 4.73 (s, 2H), 6.78 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 7.06 - 7.17 (m, 4H), 7.52 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.70 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 10.21 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 17.6, 28.7, 46.3, 52.0, 96.1, 112.5, 125.8, 126.2, 126.6, 128.4, 133.0, 133.9, 134.6, 137.5, 150.3, 158.6, 162.3, 186.7.
2-(이소부틸아미노)-9-메틸-4-옥소-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-카브알데히드(141)
Figure pct00159
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 0.95 (d, J = 4Hz, 6H), 1.90 (m, 1H), 2.37 (s, 3H), 3.41 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 6.76 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 7.24 - 7.52 (m, 1H), 8.69 (dd, J = 0.8, 7.2 Hz, 1H), 9.67 (brs, 1H), 10.22 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 17.9, 20.4, 28.7, 48.1, 94.4, 112.5, 125.9, 133.2, 138.1, 152.8, 159.5, 160.7, 190.2.
2-(디에틸아미노)-9-메틸-4-옥소-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-카브알데히드(142)
Figure pct00160
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.25 (t, J = 6.8 Hz, 6H), 2.36 (s, 3H), 3.65 (q, J = 6.8 Hz, 4H), 6.72 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 7.47 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.65 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 10.12 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 13.2, 17.7, 45.3, 96.2, 112.2, 125.8, 133.0, 137.3, 150.2, 158.5, 162.6, 186.9.
2-(사이클로헥실메틸아미노)-9-메틸-4-옥소-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-카브알데히드(143)
Figure pct00161
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 0.93 - 1.02 (m, 2H), 1.11 - 1.25 (m, 3H), 1.57 - 1.77 (m, 6H), 2.36 (s, 3H), 3.43 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 6.75 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.50 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 8.67 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 9.65 (brs, 1H), 10.21 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 17.9, 26.0, 26.5, 31.1, 38.2, 47.0, 94.4, 112.5, 125.8, 133.2, 138.0, 152.8, 159.4, 160.6, 190.2
2-클로로-9-메틸-4-옥소-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-카복실산(144)
Figure pct00162
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 2.58 (s, 3H), 7.53 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 8.14 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 8.97 (d. J = 6.8 Hz, 1H), 13.53 (brs, 1H); 13C NMR (100 MHz, DMSO- d 6 ) δ 16.7, 108.1, 117.1, 125.6, 133.3, 138.7, 148.2, 152.0, 154.6, 163.9.
2-클로로-7-메틸-4-옥소-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-카복실산(145)
Figure pct00163
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 2.49 (s, 3H), 7.76 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 8.11 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 8.89 (s, 1H), 13.46 (br s, 1H).
2-클로로-6-메틸-4-옥소-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-카복실산(146)
Figure pct00164
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 3.00 (s, 3H), 7.19 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.52 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.92 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 13.35 (br s, 1H).
9-메틸-4-옥소-2-(페닐아미노)-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-카복실산(147)
Figure pct00165
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.50 (s, 3H), 6.70 (dd, J = 6.8, 7.2 Hz, 1H), 7.15 (dd, J = 7.2, 7.2 Hz, 1H), 7.37 (dd, J = 7.2, 7.6 Hz, 2H), 7.65 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.76 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 8.76 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 11.70 (brs, 1H), 14.31 (s, 1H).
2-(3-클로로페닐아미노)-9-메틸-4-옥소-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-카복실산(148)
Figure pct00166
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 2.55 (s, 3H), 7.04 (t, J= 7.0 Hz, 1H), 7.12 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.28 (J= 8.0 Hz, 1H), 7.71 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 8.17 (s, 1H), 8.79 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 11.78 (brs, 1H).
2-(3-클로로페닐아미노)-8-메틸-4-옥소-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-카복실산(149)
Figure pct00167
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.49 (s, 3H), 6.93 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.12 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.25 - 7.29 (m, 2H), 7.46 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.96 (s, 1H), 8.76 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 11.72 (br s, 1H), 14.19 (s, 1H).
2-(3-클로로페닐아미노)-7-메틸-4-옥소-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-카복실산(150)
Figure pct00168
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.41 (s, 3H), 7.12 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.27 (t, J = 8.6 Hz, 1H), 7.41 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.47 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.96 (s, 1H), 8.68 (s, 1H), 11.70 (br s, 1H), 14.28 (s, 1H).
2-(3-클로로페닐아미노)-6-메틸-4-옥소-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-카복실산(151)
Figure pct00169
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.03 (s, 3H), 6.70 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.10 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.23 - 7.27 (m, 2H), 7.44 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.56 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.91 (s, 1H), 11.76 (br s, 1H), 14.37 (s, 1H).
2-(3-플루오로페닐아미노)-9-메틸-4-옥소-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-카복실산(152)
Figure pct00170
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.54 (s, 3H), 6.81 - 6.87 (m, 1H), 7.03 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.28 - 7.31 (m, 2H), 7.71 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.89 (d, J = 10.4Hz, 1H), 8.79 (d, J = 7.2 Hz 1H), 11.83 (b s, 1H), 14.26 (br s, 1H).
9-메틸-4-옥소-2-(3-(트리플루오로메틸)페닐아미노)-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-카복실산(153)
Figure pct00171
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.54 (s, 3H), 7.05 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 7.40 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.47 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.61 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.73 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.58 (s 1H), 8.81 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 11.91 (br s, 1H).
9-메틸-4-옥소-2-(3-(트리플루오로메톡시)페닐아미노)-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-카복실산(154)
Figure pct00172
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.58 (s, 3H), 7.00 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.05 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 7.36 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.42 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.72 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.09 (s, 1H), 8.81 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 11.89 (br s, 1H), 14.26 (br s, 1H).
9-메틸-2-(3-니트로페닐아미노)-4-옥소-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-카복실산(155)
Figure pct00173
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 2.60 (s, 3H), 7.40 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 7.73 (t, J = 8.2 Hz, 1H), 7.96 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 8.02 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 8.13 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.90 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 9.33 (s, 1H), 11.84 (br s, 1H), 14.43 (br s, 1H).
2-(3-(메톡시카보닐)페닐아미노)-9-메틸-4-옥소-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-카복실산(156)
Figure pct00174
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.57 (s, 3H), 3.92 (s, 3H), 7.052 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 7.43 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.71 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 7.82 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.79 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.83 (s, 1H), 11.83 (br s, 1H), 14.28 (br s, 1H).
2-(3-하이드록시페닐아미노)-9-메틸-4-옥소-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-카복실산(157)
Figure pct00175
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 2.55 (s, 3H), 6.61 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.15 - 7.24 (m, 3H), 7.34 (s, 1H), 7.88 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.82 (d, J = 7.2 Hz, 1H).
2-(4-하이드록시페닐아미노)-9-메틸-4-옥소-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-카복실산(158)
Figure pct00176
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 2.45 (s, 3H), 6.81 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.10 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 7.57 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.81 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.78 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 11.26 (br s, 1H).
2-(4-3급-부틸페닐아미노)-9-메틸-4-옥소-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-카복실산(159)
Figure pct00177
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.33 (s, 9H), 2.49 (s, 3H), 6.95 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 7.37 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 7.63 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 7.69 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 8.71 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 11.64 (br s, 1H) 14.31 (br s, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 18.2, 31.3, 34.4, 85.3, 114.1, 121.3, 125.5, 125.7, 133.6, 135.4, 138.2, 147.4, 150.2, 157.0, 161.8, 169.7.
2-(3-클로로벤질아미노)-9-메틸-4-옥소-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-카복실산(160)
Figure pct00178
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.38 (s, 3H), 4.83 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 7.17 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 7.32 - 7.40 (m, 3H), 7.50 (s, 1H), 7.89 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.68 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 9.82 (d, J = 6.2 Hz, 1H), 14.25 (br s, 1H).
2-(디에틸아미노)-9-메틸-4-옥소-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-카복실산(161)
Figure pct00179
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.32 (t, J = 6.8 Hz, 6H), 2.41 (s, 3H), 3.68 (q, J = 6.8 Hz, 4H), 6.67 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.38 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.71 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 14.08 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 13.8, 17.8, 45.4, 96.2, 112.2, 125.8, 133.0, 137.3, 150.2, 158.5, 162.6, 171.6.
2-(이소부틸아미노)-9-메틸-4-옥소-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-카복실산(162)
Figure pct00180
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 0.97 (d, J = 6.8 Hz, 6H), 1.93 - 1.99 (m, 1H), 2.40 (s, 3H), 3.43 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 6.84 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.53 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 8.62 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 9.52 (brs, 1H), 14.12 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 17.9, 20.4, 28.7, 48.6, 84.8, 113.2, 125.7, 133.2, 137.5, 150.5, 159.7, 162.0, 169.9.
2-(사이클로헥실메틸아미노)-9-메틸-4-옥소-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-카복실산(163)
Figure pct00181
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 0.98 - 1.05 (m, 2H), 1.13 - 1.24 (m, 3H), 1.60 - 1.79 (m, 6H), 2.42 (s, 3H), 3.45 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 6.83 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.54 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.62 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 9.57 (brs, 1H), 14.13 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 18.0, 26.0, 26.2, 31.2, 38.2, 47.4, 84.8, 113.2, 125.7, 133.2, 137.5, 150.5, 159.6, 162.0, 170.0.
2-(사이클로헥실아미노)-9-메틸-4-옥소-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-카복실산(164)
Figure pct00182
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.19 - 1.42 (m, 5H), 1.56 - 1.60 (m, 2H), 1.70 - 1.76 (m, 2H), 1.94 - 1.98 (m, 2H), 2.38 (s, 3H), 6.79 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 7.51 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.56 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 9.42 (d, J= 6.8 Hz, 1H), 14.14 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 17.8, 24.7, 25.7, 32.6, 50.0, 84.7, 113.1, 125.6, 133.1, 137.4, 150.5, 158.5, 162.0, 169.9.
2-(사이클로펜틸아미노)-9-메틸-4-옥소-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-카복실산(165)
Figure pct00183
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.54 - 1.67 (m, 4H), 1.73 - 1.78 (m, 2H), 2.04 - 2.10 (m, 2H), 2.42 (s, 3H), 4.51 (q, J = 6.8 Hz, 1H), 6.83 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 7.53 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.59 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 9.47 (d, J= 6.8 Hz, 1H), 14.15 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 18.0, 24.1, 33.3, 53.0, 84.8, 113.3, 125.7, 133.3, 137.5, 150.5, 158.9, 162.0, 169.9.
2-(사이클로헵틸아미노)-9-메틸-4-옥소-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-카복실산(166)
Figure pct00184
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.23 - 1.57 (m, 4H), 1.59 - 1.68 (m, 4H), 1.69 - 1.74 (m, 2H), 1.98 - 2.04 (m, 2H), 2.43 (s, 3H), 4.30 - 4.36 (m, 1H), 6.83 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 7.53 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.64 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 9.53 (d, J= 6.8 Hz, 1H), 14.19 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 18.0, 24.6, 28.1, 34.7, 52.3, 84.8, 113.1, 125.8, 133.2, 137.4, 150.4, 158.3, 162.1, 170.0.
2-(1-(3급-부톡시카보닐)피페리딘-4-일아미노)-9-메틸-4-옥소-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-카복실산(167)
Figure pct00185
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.51 (s, 9H), 1.61 - 1.65 (m, 2H), 2.01 - 2.03 (m, 2H), 2.42 (s, 3H), 2.99 - 3.05 (m, 2H), 3.98 - 4.00 (m, 2H), 4.26 - 4.33 (m, 1H), 6.88 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.58 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.67 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 9.56 (d, J = 6.8 Hz), 14.12 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 17.9, 28.6, 31.6, 48.5, 66.4, 79.9, 85.0, 113.5, 125.9, 133.2, 137.8, 150.6, 154.9, 158.9, 162.0, 169.9.
2-(2-(4-플루오로페녹시)에틸아미노)-9-메틸-4-옥소-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-카복실산(168)
Figure pct00186
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.44 (s, 3H), 4.01 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 4.15 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 6.83 - 6.96 (m, 5H), 7.59 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.68 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 9.81 (brs, 1H), 14.01 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 18.0, 40.5, 67.1, 85.3, 113.6, 115.8, 115.9, 116.0, 116.1, 125.9, 133.2, 137.9, 150.6, 154.8, 159.8, 161.9, 169.7.
9-메틸-4-옥소-2-(2-(4-(트리플루오로메톡시)페녹시)에틸아미노)-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-카복실산(169)
Figure pct00187
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.44 (s, 3H), 4.03 (t, J = 5.6 Hz, 2H),4.18 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 6.90 (d, J = 9.2 Hz, 2H), 6.91 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 7.11 (d, J = 9.2 Hz, 2H), 7.60 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 9.70 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 9.82 (brs, 1H), 14.08 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 18.0, 40.5, 66.9, 77.4, 85.4, 113.7, 115.7, 122.6, 126.0, 133.2, 138.0, 155.8, 157.6, 159.9, 162.0, 169.0, 170.4 .
9-메틸-2-모르폴리노-4-옥소-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-카복실산(170)
Figure pct00188
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.42 (s, 3H), 3.65 (t, J = 4.8 Hz, 4H), 3.74 (t, J = 4.8 Hz, 4H), 6.86 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 7.51 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.67 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 13.98 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 18.1, 58.4, 64.8, 97.5, 113.6, 124.6, 132.6, 136.0, 148.1, 160.5, 161.7, 171.3.
2-(3,4-디하이드로이소퀴놀린-2(1H)-일)-9-메틸-4-옥소-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-카복실산(171)
Figure pct00189
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.45 (s, 3H), 3.03 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 4.08 (m, 2H), 4.73 (m, 2H), 6.83 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 7.06 - 7.18 (m, 4H), 7.52 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.60 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 13.73 (br s, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 17.6, 28.5, 46.1, 52.4, 86.4, 113.0, 125.5, 126.1, 126.2, 126.6, 128.4, 132.9, 133.7, 134.4, 136.8, 148.1, 159.9, 163.2, 165.3.
2-(4-(2-클로로페닐)피페라진-1-일)-9-메틸-4-옥소-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-카복실산(172)
Figure pct00190
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.44 (s, 3H), 3.19 (t, J = 4.8 Hz, 4H), 3.96 (m, 4H), 6.87 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 6.98 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.02 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.20 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.36 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.55 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.66 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 13.74 (br s, 1H).
2-(3-클로로페닐아미노)-8-(4-메틸피페라진-1-일)-4-옥소-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-카복실산(173)
Figure pct00191
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.34 (s, 3H), 2.53 (t, J = 4.8 Hz, 4H), 3.54 (t, J = 4.8 Hz, 4H), 6.34 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 6.55 (dd, J = 2.8, 8.4 Hz, 1H), 7.04 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.22 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.49 (dd, J = 1.6, 8.0 Hz, 1H), 7.86 (t, J = 2.0 Hz, 1H), 8.53 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 11.5 (s, 1H), 14.18 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 46.1, 46.4, 54.4, 83.6, 98.8, 105.1, 120.0, 121.9, 124.0, 128.8, 129.9, 134.4, 139.9, 151.4, 155.6, 158.2, 161.8, 170.2.
[반응식 9]
Figure pct00192

H1의 합성을 위한 일반적인 과정
2-아미노-3-피콜린(1.0mmol)을 디에틸 에톡시메틸렌말로네이트(1.0mmol)에 용해시켰다. 용액을 12시간 동안 170℃로 가열하였다. 냉각시킨 후, 짙은색 잔류물을 EtOAc(10mL)로 연마하였다. 잔류성 담색 고체를 여과에 의해 수집하고 EtOAc로 세척하여 H1을 수득하였다.
H2의 합성을 위한 일반적인 과정
H2O(3.0mL) 및 EtOH(1.0mL) 중의 H1(0.43mmol)의 교반 용액에 LiOH(0.86mmol)를 가하였다. 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 CH2Cl2(10mL)로 희석시키고, 1N HCl(10mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 MgSO4로 건조시키고, 진공에서 농축시켰다. 조 생성물을 섬광 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 H2를 수득하였다.
H3의 합성을 위한 일반적인 과정
THF(2.0mL) 중의 H1(0.38mmol)의 교반 용액에 0℃에서 LiAlH4(0.57mmol)를 가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응을 완료한 후, 1N NaOH(2mL)를 적가하였다. 혼합물을 CH2Cl2(10mL)로 희석시키고, H2O(10mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 MgSO4로 건조시키고, 진공에서 농축시켰다. 조 생성물을 섬광 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 H3을 수득하였다.
H4의 합성을 위한 일반적인 과정
CH2Cl2(1.0mL) 중의 H3(95μmol)의 교반 용액에 0℃에서 NaHCO3(285μmol) 및 데스-마틴 페리오디난(114μmol)을 가하였다. 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과 제거하고, 진공에서 농축시켰다. 조 생성물을 섬광 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 H4를 수득하였다.
H5의 합성을 위한 일반적인 과정
크실렌(10.0mL) 중의 2-아미노-피리딘(10.6mmol)의 교반 용액에 디에틸 에톡시메틸렌말로네이트(21.2mmol)를 가하였다. 혼합물을 140℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응을 완료한 후, 잔류성 담색 고체를 여과에 의해 수집하고 디에틸 에테르로 세척하여 H5를 수득하였다.
H6의 합성을 위한 일반적인 과정
THF(5.0mL) 중의 H5(0.42mmol)의 교반 용액에 0℃에서 트리에틸아민(0.63mmol) 및 p-톨루엔설포닐클로라이드(0.46mmol)를 가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응을 완료한 후, 혼합물을 CH2Cl2(40mL)로 희석시키고, 1N HCl(50mL), 포화 NaHCO3(50mL) 및 염수(50mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 MgSO4로 건조시키고 진공에서 농축시켰다. 조 생성물을 섬광 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 H6을 수득하였다.
H7의 합성을 위한 일반적인 과정
THF(1.2mL) 중의 H6(0.25mmol)의 교반 용액에 0℃에서 트리에틸아민(0.5mmol) 및 아민(0.26mmol)을 가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응을 완료한 후, 혼합물을 CH2Cl2(10mL)로 희석시키고, 1N HCl(10mL), 포화 NaHCO3(10mL) 및 염수(10mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 MgSO4로 건조시키고, 진공에서 농축시켰다. 조 생성물을 섬광 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 H7을 수득하였다.
H8의 합성을 위한 일반적인 과정
에틸렌 글리콜(3.0mL) 중의 H7(0.27mmol)의 교반 용액에 메틸아민(THF 1.3mL 중의 2N 용액)을 가하였다. 혼합물을 150℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸아세테이트(10mL)와 함께 가하고, 잔류성 담색 고체를 여과에 의해 수집하고 EtOAc로 세척하였다. 조 생성물을 섬광 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 H8을 수득하였다.
H9의 합성을 위한 일반적인 과정
MeOH(8.0mL) 중의 H5(2.13mmol)의 교반 용액에 Pd/C(113mg)를 가하였다. 혼합물을 H2 하에 3시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응을 완료한 후, 반응 혼합물을 여과 제거하고, 진공에서 농축시켰다. 조 생성물을 EtOAc 및 헥산(1:4)으로 재결정화하여 H9를 수득하였다.
H10의 합성을 위한 일반적인 과정
CH2Cl2(5.0mL) 중의 H9(0.42mmol)의 교반 용액에 0℃에서 트리에틸아민(0.63mmol) 및 p-톨루엔설포닐클로라이드(0.46mmol)를 가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응을 완료한 후, 혼합물을 CH2Cl2(40mL)로 희석시키고, 1N HCl(50mL), 포화 NaHCO3(50mL) 및 염수(50mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 MgSO4로 건조시키고, 진공에서 농축시켰다. 조 생성물을 섬광 컬럼 크로마토그래피(헥산 : EtOAc = 1:2)로 정제하여 H10을 수득하였다.
H11의 합성을 위한 일반적인 과정
THF(2.0mL) 중의 H10(0.25mmol)의 교반 용액에 0℃에서 트리에틸아민(0.5mmol) 및 아민(0.37mmol)을 가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응을 완료한 후, 혼합물을 CH2Cl2(10mL)로 희석시키고, 1N HCl(10mL), 포화 NaHCO3(10mL) 및 염수(10mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 MgSO4로 건조시키고, 진공에서 농축시켰다. 조 생성물을 섬광 컬럼 크로마토그래피(헥산 : EtOAc = 1:1)로 정제하여 H11을 수득하였다.
H12의 합성을 위한 일반적인 과정
THF(2mL) 중의 G3(1.0mmol), 아민(1.1mmol) 및 트리에틸아민(2.0mmol)의 용액을 1시간 동안 환류시키고 실온으로 냉각시켰다. 용매를 건조될 때까지 증발시키고, 이를 CH2Cl2(20mLⅹ3)로 추출하였다.
반응 혼합물을 5% 중탄산나트륨으로 세척하였다. 유기 층을 건조(MgSO4)시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 조 생성물을 섬광 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 H12를 수득하였다.
H13의 합성을 위한 일반적인 과정
CH2Cl2(5mL) 중의 G3(1.1mmol), 아민(1.0mmol)의 용액에 수소화트리아세톡시붕소나트륨(2.0mmol) 및 빙초산(2.0mmol)을 실온에서 20시간 동안 가하였다. 반응 혼합물에 포화 염화암모늄 용액을 가하고, 10분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 CH2Cl2(20mL)로 추출하였다. 유기 층을 건조(MgSO4)시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 조 생성물을 섬광 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 H13을 수득하였다.
에틸 9-메틸-4-옥소-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-카복실레이트(174)
Figure pct00193
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.39 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 2.62 (s, 3H), 4.39 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 7.20 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.77 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 9.05 (s, 1H), 9.16 (d, J = 7.2 Hz, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) 14.6, 18.2, 61.2, 105.3, 116.8, 127.0, 135.9, 138.2, 155.3, 158.4, 165.0, 189.1.
9-메틸-4-옥소-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-카복실산(175)
Figure pct00194
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.56 (s, 3H), 7.12 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 7.79 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.87 (s, 1H), 9.21 (d, J = 7.2 Hz), 14.13 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 18.3, 110.9, 117.1, 128.1, 137.6, 141.1, 155.0, 157.1, 158.3, 171.3.
3-(하이드록시메틸)-9-메틸-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(176)
Figure pct00195
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.51 (s, 3H), 3.27 (brs, 1H), 4.66 (s, 2H), 7.01 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 7.51 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.32 (s, 1H), 8.87 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) 18.2, 44.1, 111.2, 117.9, 127.1, 135.7, 139.8, 153.9, 155.6, 158.2.
9-메틸-4-옥소-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-카브알데히드(177)
Figure pct00196
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.63 (s, 3H), 7.29 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.86 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 8.85 (s, 1H), 9.14 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 10.33 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 18.2, 110.9, 117.5, 126.7, 136.5, 139.5, 153.1, 155.6, 158.1, 188.5.
에틸 2-하이드록시-4-옥소-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-카복실레이트(178)
Figure pct00197
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.42 (t, J = 7.2 Hz 3H), 4.45 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 7.13 (ddd, J = 1.2, 6.8, 7.2 Hz, 1H), 7.49 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.82 - 7.86 (m, 1H), 9.00 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 13.64 (brs, 1H, NH); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 14.2, 62.3, 87.1, 115.3, 125.1, 128.7, 140.3, 148.4, 152.6, 155.5, 171.7.
2-하이드록시-4-옥소-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-카복실산(179)
Figure pct00198
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.50 (s, 3H), 6.70 (dd, J = 6.8, 7.2 Hz, 1H), 7.15 (dd, J = 7.2, 7.2 Hz, 1H), 7.37, (dd, J = 7.2, 7.6 Hz, 1H), 7.65 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.76 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.76 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 11.70 (brs, 1H), 14.31 (s, 1H).
에틸 4-옥소-2-(페닐아미노)-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-카복실레이트(180)
Figure pct00199
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.45 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 4.44 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 6.93 (dd, J = 6.8, 6.8 Hz, 1H), 7.29 - 7.36 (m, 3H), 7.65 - 7.68 (m, 3H), 8.97 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 11.39 (brs, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 14.4, 61.0, 85.5, 113.6, 122.5, 124.2, 124.5, 128.4, 128.6, 138.4, 139.0, 151.6, 155.9, 159.5, 169.6.
에틸 2-(3-하이드록시페닐아미노)-4-옥소-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-카복실레이트(181)
Figure pct00200
1H NMR (400 MHz, CDCl3 + CD3OD) δ 1.38 (t, J = 7.0 Hz, 3H), 4.37 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 6.56 - 6.58 (m, 1H), 6.92 (dd, J = 6.8, 7.2 Hz, 1H0, 7.05 (d, J = 8.4 Hz, 1h0, 7.12 (dd, J = 8.0, 8.0 Hz, 1H), 7.26 (m, 1H), 7.31 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.66 (dd, J = 7.2, 7.6 Hz, 1H), 8.90 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 11.22 (brs, 1H).
에틸 2-(2-하이드록시페닐아미노)-4-옥소-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-카복실레이트(182)
Figure pct00201
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.45 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 4.45 (q, J = 6.8 Hz, 2H), 6.90 (dd, J = 7.2, 8.0 Hz, 1H), 7.05 - 7.08 (m, 2H), 7.13 (dd, J = 7.6, 8.4 Hz, 2H), 7.37 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.81 (dd, J = 7.6, 8.0 Hz, 1H), 9.03 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 11.52 (brs, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) 14.4, 61.3, 114.7, 120.1, 120.5, 122.9, 124.4, 127.0, 127.1, 129.0, 140.8, 149.3, 151.1, 158.6, 169.5.
에틸 2-(3-니트로페닐아미노)-4-옥소-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-카복실레이트(183)
Figure pct00202
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.46 (t, J = 6.4 Hz, 3H), 4.45 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 7.05 (ddd, J = 1.2, 6.8, 6.8 Hz, 1H), 7.43 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.47 (dd, J = 8.0, 8.4 Hz, 2H), 7.77 - 7.82 (m, 2H), 7.93 - 7.96 (m, 1H), 8.97 - 8.98 (m, 1H), 9.04 (dd, J = 0.8, 7.2 Hz, 1H), 11.74 (brs, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) 14.4, 61.3, 86.1, 114.5, 116.9, 118.4, 124.7, 127.4, 128.6, 129.2, 139.8, 148.5, 151.5, 155.7, 159.5, 169.6.
에틸 4-옥소-2-페녹시-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-카복실레이트(184)
Figure pct00203
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.38 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 4.42 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 7.15 - 7.17 (m, 3H), 7.24 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 7.36 - 7.41 (m, 3H), 7.77 (ddd, J = 1.6, 6.8, 6.8 Hz, 1H), 9.10 (dd, J = 0.8, 6.8 Hz, 1H); ); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 14.2, 61.3, 115.7, 121.8, 125.3, 128.5, 129.2, 128.7, 150.3, 152.5, 156.7, 164.1, 165.0.
에틸 2-(3-플루오로페녹시)-4-옥소-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-카복실레이트(185)
Figure pct00204
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.37 (t, J = 7.0 Hz, 3H), 4.40 (q, J = 6.8 Hz, 2H), 6.91 - 6.98 m, 3H), 7.19 (ddd, J = 1.2, 7.2, 7.2 Hz, 1H), 7.32 - 7.36 (m, 1H), 7.39 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.78 - 7.82 (m, 1H), 9.10 (d, J = 6.8 Hz, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 14.2, 61.4, 94.6, 109.8, 110.0, 112.2, 112.4, 115.9, 117.5, 117.6, 125.3, 128.5, 129.8, 129.9, 139.9, 150.3, 153.3, 156.6, 161.6, 163.8, 164.0, 164.5.
에틸 4-옥소-2-(3-(트리플루오로메틸)페녹시)-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-카복실레이트(186)
Figure pct00205
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.39 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 4.43 (q, J = 7.0 Hz 2H), 7.21 (dd, J = 6.8, 6.8 Hz, 1H), 7.38 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.47 - 7.52 (m, 2H), 7.81 (dd, J = 7.2, 8.4 Hz, 1H), 9.12 (d, J = 6.8 Hz, 1H).
메틸 2-클로로-9-메틸-4-옥소-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-카복실레이트(187)
Figure pct00206
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.56 (s, 3H), 3.93 (s, 3H), 7.19 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.75 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.91 (d, J = 7.2 Hz, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 17.1, 52.8, 108.0, 116.7, 126.1, 134.9, 138.3, 149.1, 155.1, 155.2, 164.2.
메틸 2-(3-클로로페닐아미노)-9-메틸-4-옥소-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-카복실레이트(188)
Figure pct00207
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.51 (s, 3H), 3.99 (s, 3H), 6.94 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 7.09 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.27 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.41 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.64 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.18 (s, 1H), 8.91 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 11.52 (br s, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 18.0, 52.1, 85.3, 113.7, 119.6, 121.9, 123.5, 126.4, 129.4, 133.2, 134.1, 138.4, 139.9, 151.0, 156.2, 158.6, 170.1.
메틸 2-(3-클로로벤질아미노)-9-메틸-4-옥소-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-카복실레이트(189)
Figure pct00208
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.35 (s, 3H), 3.92 (s, 3H), 4.77 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 6.80 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 7.20-7.24 (m, 3H), 7.34 (s, 3H), 7.50 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.82 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 9.69 (br s, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 17.8, 44.4, 51.8, 84.6, 112.6, 125.5, 126.4, 127.2, 127.7, 129.7, 132.7, 134.3, 137.6, 141.1, 151.3, 156.4, 160.8, 170.1.
에틸 2-하이드록시-4-옥소-6,7,8,9-테트라하이드로-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-카복실레이트(190)
Figure pct00209
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.36 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.82 - 1.93 (m, 4H), 2.86 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.84 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 4.39 (q, J = 7.2 Hz, 2H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 14.4, 18.9, 21.9, 32.2, 43.0, 62.4, 90.9, 159.8, 165.1, 171.7, 173.5.
에틸 4-옥소-2-(토실옥시)-6,7,8,9-테트라하이드로-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-카복실레이트(191)
Figure pct00210
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.25 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.79 - 1.91 (m, 4H), 2.41 (s, 3H), 2.79 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.84 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 4.25 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 7.31 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.89 (d, J = 8.0 Hz, 2H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 14.2, 18.8, 21.6, 21.9, 31.8, 43.6, 61.9, 104.2, 129.1, 129.7, 134.2, 145.8, 159.4, 160.8, 162.0, 162.2.
에틸 4-옥소-2-(페닐아미노)-6,7,8,9-테트라하이드로-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-카복실레이트(192)
Figure pct00211
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.40 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.80 - 1.92 (m, 4H), 2.80 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.87 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 4.36 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 7.08 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.29 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 7.53 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 11.2 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 14.6, 19.2, 22.2, 32.2, 42.4, 61.0, 88.4, 122.9, 124.4, 128.8, 138.4, 160.5, 160.8, 162.2, 169.8 .
에틸 2-(3-클로로페닐아미노)-4-옥소-6,7,8,9-테트라하이드로-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-카복실레이트(193)
Figure pct00212
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.32 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.76 - 1.88 (m, 4H), 2.76 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.78 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 4.29 (q, J 7.06 (dd, J = 7.2 Hz, 2H), J = 1.2, 8.0 Hz, 1H), 7.27 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.51 (dd, J = 1.2, 8.0 Hz, 1H), 7.58 (d, J = 2.0 Hz, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 14.3, 18.6, 22.1, 32.1, 42.6, 61.1, 81.4, 111.2, 111.7, 113.0, 128.4, 140.4, 149.6, 158.7, 161.12, 163.2, 170.4
에틸 4-옥소-2-(3-(트리플루오로메틸)페닐아미노)-6,7,8,9-테트라하이드로-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-카복실레이트(194)
Figure pct00213
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.45 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.88 - 1.97 (m, 4H), 2.87 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.93 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 4.41 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 7.35 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.35 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.67 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 8.05 (s, 1H), 11.2 (s, 1H);
에틸 2-(2-하이드록시페닐아미노)-4-옥소-6,7,8,9-테트라하이드로-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-카복실레이트(195)
Figure pct00214
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.40 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.81 - 1.94 (m, 4H), 2.65 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.65 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 4.18 (q, J = 6.8 Hz, 2H), 6.85 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.00 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.06 - 7.12 (m, 2H), 9.98 (s, 1H), 11.3 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 14.6, 18.8, 21.9, 31.6, 42.6, 61.3, 88.4, 120.2, 120.7, 124.5, 127.1, 127.2, 149.1, 159.4, 159.5, 163.0, 169.6 .
에틸 2-(3-하이드록시페닐아미노)-4-옥소-6,7,8,9-테트라하이드로-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-카복실레이트(196)
Figure pct00215
1H NMR (400 MHz, CDCl3+MeOD-d 4 ) δ 1.26 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.71 - 1.81 (m, 4H), 2.72 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.74 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 4.23 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 6.47 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.88 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.99 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.02 (t, J = 2.0 Hz, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3 + MeOD-d 4 ) δ 14.2, 18.8, 21.9, 31.8, 42.4, 60.9, 79.8, 109.8, 111.6, 114.0, 129.4, 139.4, 149.7, 159.3, 160.2, 163.1, 169.6
에틸 2-(4-하이드록시페닐아미노)-4-옥소-6,7,8,9-테트라하이드로-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-카복실레이트(197)
Figure pct00216
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 1.21 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.67 - 1.80 (m, 4H), 2.65 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.65 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 4.18 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 6.68 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.25 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 9.29 (s, 1H), 10.7 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 14.9, 18.9, 21.9, 32.1, 42.3, 60.4, 87.2, 115.7, 125.0, 130.1, 154.9, 159.4, 160.6, 163.3, 169.6 .
2-(3-클로로-4-플루오로페닐아미노)-9-메톡시-N-메틸-4-옥소-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-카복스아미드(198)
Figure pct00217
mp = 218℃ (분해); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.97 (d, J = 4.8 Hz, 3H), 4.41 (s, 3H), 6.89 (dd, J = 7.2 Hz, 7.2 Hz, 1H), 6.97 (dd, J = 1.2 Hz, 8.0 Hz, 1H), 7.05 (dd, J = 8.8 Hz, 8.8 Hz, 1H), 7.40 - 7.44 (m, 1H), 8.46 - 8.51 (m, 2H), 8.82 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 12.98 (s, 1H);
(E)-2-(3-클로로페닐아미노)-3-((사이클로헥실이미노)메틸)-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(199)
Figure pct00218
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.23 - 1.37 (m, 3H), 1.41 - 1.50 (m, 2H), 1.56 - 1.59 (m, 1H), 1.73 - 1.76 (m, 4H), 3.16 - 3.22 (m, 1H), 6.85 (ddd, J = 1.2, 6.8, 6.8 Hz, 1H), 6.94 (ddd, J = 0.8, 1.2, 8.0 Hz, 1H), 7.14 (dd, J = 8.0, 8.0 Hz, 1H), 7.38 (ddd, J = 0.8, 1.2, 8.0 Hz, 1H), 7.54 - 7.58 (m, 1H), 7.90 - 7.91 (m, 1H), 8.83 (s, 1H), 8.85 (dd, J = 0.8, 1.2 Hz, 1H), 13.40 (brs, 1H);13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 24.4, 25.6, 34.9, 68.4, 91.6, 113.4, 119.2, 121.2, 123.0, 124.7, 127.6, 129.5, 134.2, 137.6, 140.8, 150.6, 156.3, 157.0, 158.3.
(E)-2-(3-클로로페닐아미노)-3-((3-클로로페닐이미노)메틸)-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(200)
Figure pct00219
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.01 (dd, J = 0.8, 1.2, 8.0 Hz, 1H), 7.28 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.29 (dd, J = 2.0, 4.0 Hz, 1H), 7.33 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.44 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.52 (ddd, J = 0.8, 1.2, 8.0 Hz, 1H), 7.17 - 7.76 (m, 1H), 8.02 - 8.04 (m, 1H), 8.98 (dd, J = 0.8, 6.8 Hz, 1H), 9.17 (s, 1H), 12.94 (brs, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 92.6, 114.0, 119.5, 119.8, 121.8, 123.9, 125.0, 125.7, 128.0, 129.7, 130.2, 134.4, 134.8, 138.7, 140.1, 151.3, 151.8, 157.0, 158.0, 158.9.
2-(3-클로로페닐아미노)-3-((사이클로펜틸아미노)메틸)-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(201)
Figure pct00220
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.54 - 1.57 (m, 2H), 1.74 - 1.83 (m, 4H), 2.05 - 2.08 (m, 2H), 3.23 - 3.24 (m, 1H), 4.19 (s, 2H), 6.93 - 6.98 (m, 2H), 7.11 - 7.15 (m, 1H), 7.32 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.51 (dd, J = 2.0, 8.4 Hz, 1H), 7.61 - 7.65 (m, 1H), 7.74 - 7.75 (m, 1H), 8.73 (d, J = 7.2 Hz, 1H).
2-(3-클로로페닐아미노)-3-((사이클로헥실아미노)메틸)-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(202)
Figure pct00221
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.20 - 1.35 (m, 4H), 1.66 - 1.72 (m, 2H), 1.86 - 1.89 (m, 2H), 2.23 - 2.39 (m, 2H), 3.12 - 3.18 (m, 1H), 6.93 (ddd, J = 1.2, 6.8, 7.2 Hz, 1H), 6.99 (ddd, J = 0.8, 1.2, 7.6 Hz, 1H), 7.20 (dd, J = 8.0, 8.0 Hz, 1H), 7.25 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.52 - 7.57 (m, 1H), 7.61 (dd, J = 1.2, 8.0 Hz, 1H), 7.84 - 7.85 (m, 1H), 8.76 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 9.77 (brs, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 24.6, 25.0, 41.2, 57.9, 88.9, 114.6, 119.2, 121.1, 122.8, 124.6, 127.3, 129.4, 133.7, 137.3, 140.8, 149.6, 157.2, 158.8.
2-(3-클로로페닐아미노)-3-((사이클로헵틸아미노)메틸)-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(203)
Figure pct00222
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.40 - 1.59 (m, 6H), 1.72 - 1.81 (m, 4H), 2.18 - 2.23 (m, 2H), 3.07 - 3.12 (m, 1H), 4.05 (m, 2H), 6.82 (ddd, J = 1.2, 6.8, 6.8 Hz, 1H), 6.91 (dd, J = 1.2, 8.0 Hz, 1H), 7.14 (dd, J = 8.0, 8.0 Hz, 1H), 7.44 - 7.49 (m, 2H), 7.78 - 7.80 (m, 1H), 8.70 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 10.00 (brs, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 23.8, 32.3, 41.5, 59.7, 89.7, 114.2, 118.7, 120.6, 122.4, 124.4, 127.2, 129.3, 133.7, 136.8, 140.9, 149.4, 157.2, 158.2.
2-(3-클로로페닐아미노)-3-((이소프로필아미노)메틸)-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(204)
Figure pct00223
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.25 (s, 3H), 1.26 (s, 3H), 2.30 - 3.06 (m, 1H), 4.05 (s, 2H), 6.87 (dd, J = 6.4, 7.2 Hz, 1H), 6.95 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.17 (dd, J = 8.0, 8.0 Hz, 1H), 7.32 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.41 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.54 (dd, J = 7.2, 7.2 Hz, 1H), 7.81 (s, 1H), 8.83 (d, J = 6.8 Hz, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 22.1, 41.7, 48.9, 91.5, 113.7, 118.2, 120.1, 122.2, 124.6, 127.5, 129.5, 134.1, 136.2, 141.2, 149.5, 157.4, 157.8.
2-(3-클로로페닐아미노)-3-((사이클로헥실아미노)메틸)-8-(4-메틸피페라진-1-일)-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(205)
Figure pct00224
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.20 - 1.34 (m, 3H), 1.71 - 1.91 (m, 3H), 1.92 - 2.04 (m, 2H), 2.20 (s, 3H), 2.23 - 2.36 (m, 6H), 3.04 - 3.10 (m, 5H), 4.01 (s, 2H), 5.87 (s, 1H), 6.55 (s, J = 8.0 hz, 1H), 6.90 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.14 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.62 (d, J = 7.6 Hz,1H), 7.84 (s, 1H), 8.46 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 9.59 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 24.9, 25.3, 30.2, 41.2, 46.1, 46.3, 54.2, 58.4, 86.2, 98.9, 106.5, 119.3, 121.0, 122.3, 128.3, 129.5, 133.9, 141.9, 150.8, 154.8, 157.7, 158.9.
[반응식 10]
Figure pct00225

J1의 합성을 위한 일반적인 과정
메탄올(0.5mL) 중의 알데히드(0.9mmol)의 용액에 실온에서 NaBH4(1.35mmol)를 가하였다. 1시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 메틸렌 클로라이드(10mL)로 희석시키고, 염수(10mL)로 세척하였다. 유기 층을 MgSO4로 건조시키고, 진공에서 농축시켰다. 조 생성물을 헥산과 에틸 아세테이트의 혼합물로부터 재결정화에 의해 정제하여 J1을 수득하였다.
J2의 합성을 위한 일반적인 과정
THF(1.0mL) 중의 에스테르(0.06mmol)의 교반 용액에 LiAlH4(0.09mmol)를 가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응을 완료한 후, H2O(0.1mL)를 적가하였다. 반응 혼합물을 여과 제거하고, 진공에서 농축시켰다. 조 생성물을 섬광 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 J2를 수득하였다.
J3의 합성을 위한 일반적인 과정
CH2Cl2(0.6mL) 중의 J1 또는 J2(0.19mmol)의 교반 용액에 0℃에서 트리에틸아민(0.38mmol) 및 벤조일 클로라이드(0.28mmol)를 가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응을 완료한 후, 혼합물을 CH2Cl2(10mL)로 희석시키고, 염수(10mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 MgSO4로 건조시키고, 진공에서 농축시켰다. 조 생성물을 섬광 컬럼 크로마토그래피(헥산 : EtOAc = 2:1)로 정제하여 J3을 수득하였다.
3-(하이드록시메틸)-2-(페닐아미노)-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(206)
Figure pct00226
1H NMR (400 MHz, CDCl3 + CD3OD) δ 4.80 (s, 2H), 6.87 - 6.90 (m, 1H), 8.03 (dd, J = 7.2, 7.6 Hz, 1H), 7.27 (dd, J = 7.6, 8.0 Hz, 2H), 7.53 - 7.58 (m, 3H), 8.36 (brs, 1H), 8.82 (d, J = 6.8 Hz, 1H);13C NMR (100 MHz, CDCl3 + CD3OD) δ 56.0, 94.80, 94.85, 113.8, 121.1, 121.2, 123.2, 123.3, 124.5, 127.5, 128.6, 136.4, 138.9, 139.0, 149.7, 157.1, 158.0, 158.1.
2-(3-클로로페닐아미노)-3-(하이드록시 메틸)-4H-피리도-[1,2-a]피리미딘-4-온(207)
Figure pct00227
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.95 (d, J =6.4 Hz, 2H), 6.93 (t, J =6.8 Hz, 1H), 7.05 (d, J =8.0 Hz, 1H), 7.38 (t, J =4.4 Hz, 2H), 7.42 (s, 1H), 7.63 (t, J =6.8 Hz, 1H), 7.81 (t, J =1.6 Hz, 1H), 8.20 (s, 1H), 8.92 (d, J =7.2 Hz, 1H),
2-(3-플루오로페닐아미노)-3-(하이드록시메틸)-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-카브알데히드(208)
Figure pct00228
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.94 (s, 2H), 6.94 (t, J =6.0 Hz, 2H), 7.17 (d, J =8.0 Hz, 1H), 7.43 (d, J =8.8 Hz, 2H), 7.63 (t, J =7.2 Hz, 2H), 7.70 (d, J =9.2 Hz, 1H), 8.26 (s, 1H), 8.93 (d, J =7.2 Hz, 1H).
3-(하이드록시메틸)-2-(3-(트리플루오로메틸)페닐아미노)-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(209)
Figure pct00229
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.99 (s, 2H), 6.99 (d, J =6.0 Hz, 2H), 7.32 (d, J =8.0 Hz, 1H), 7.43 (d, J =7.6 Hz, 2H), 7.69 (brs, 2H), 8.06 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 8.96 (d, J =7.6 Hz, 1H).
3-(하이드록시메틸)-2-(3-(트리플루오로메톡시)페닐아미노)-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(210)
Figure pct00230
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.95 (d, J =6.4 Hz, 2H), 6.84 (t, J =6.8 Hz, 1H), 6.92 (d, J =6.8 Hz, 1H), 7.30-7.34 (m, 3H), 7.59 (t, J =7.2 Hz, 1H), 7.86 (s, 1H), 8.36 (s, 1H), 8.87 (d, J =6.4 Hz, 1H),
메틸 3-(3-(하이드록시메틸)-4-옥소-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-2-일아미노)벤조에이트(211)
Figure pct00231
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.92 (s, 3H), 4.99 (d, J =6.4 Hz, 2H), 6.96 (t, J =7.2Hz, 1H), 7.38-7.42 (m, 2H), 7.63 (t, J =7.8 Hz, 1H), 7.75 (d, J =7.6 Hz, 1H), 7.88 (d, J =8.0 Hz, 1H), 8.21(s, 1H), 8.25 (brs, 1H), 8.96 (d, J =7.6 Hz, 1H).
3-(3-(하이드록시메틸)-4-옥소-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-2-일아미노)벤조산(212)
Figure pct00232
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.73 (s, 1H), 5.74 (s, 2H), 7.19 (t, J =7.2Hz, 1H), 7.38-7.42 (m, 2H), 7.45 (d, J =7.6 Hz, 1H), 7.86 (t, J =8.4 Hz, 1H), 8.00 (d, J =8.0 Hz, 1H), 8.19 (s, 1H), 8.82 (s, 1H), 8.89 (d, J =6.8 Hz, 1H).
2-(4-클로로페닐아미노)-3-(하이드록시메틸)-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(213)
Figure pct00233
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 4.05 (d, J =7.2 Hz, 2H), 7.37 (d, J =8.8Hz, 2H), 7.44 (d, J =8.8 Hz, 1H), 7.75 (d, J =6.8 Hz, 2H), 7.88 (t, J =8.8 Hz, 1H), 8.81 (s, 1H), 8.88 (d, J =6.4 Hz, 1H).
2-(2-클로로페닐아미노)-3-(하이드록시메틸)-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(214)
Figure pct00234
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 5.01 (d, J =5.6 Hz, 2H), 6.97-7.01 (m, 3H), 7.26-7.29 (m, 1H), 7.42 (t, J =8.8 Hz, 2H), 7.66 (t, J =7.2 Hz, 1H), 8.41 (t, J =5.2 Hz, 1H), 8.53(s, 1H), 8.99 (d, J =6.8 Hz, 1H).
3-(하이드록시메틸)-2-(3-하이드록시페닐아미노)-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(215)
Figure pct00235
1H NMR (400 MHz, CDCl3 + CD3OD) δ 4.81 (s, 2H), 6.53 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.99 (dd, J = 6.8, 6.8 Hz, 1H), 7.04 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.12 (dd, J = 6.8, 6.8 Hz, 1H), 7.18 (s, 1H), 7.42 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 7.64 (dd, J = 6.8, 8.8 Hz, 1H), 8.88 (d, J = 7.2 Hz, 1H).
3-(하이드록시메틸)-2-(4-하이드록시페닐아미노)-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(216)
Figure pct00236
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 4.83 (s, 2H), 6.77 (dd, J = 2.0, 8.8 Hz, 2H), 7.04 (dd, J = 6.8, 6.8 Hz, 1H), 7.32 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.34 - 7.67 (m, 2H), 7.67 - 7.73 (m, 1H), 8.84 (d, J = 6.8 Hz, 1H).
3-(하이드록시메틸)-2-(2-하이드록시페닐아미노)-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(217)
Figure pct00237
1H NMR (400 MHz, CDCl3 + CD3OD) δ 3.71 (s, 1H), 4.86 (s, 2H), 6.88 (ddd, J = 1.6, 7.6, 8.0 Hz, 1H), 6.93 (dd, J = 1.6, 8.0 Hz, 1H), 6.98 (ddd, J = 1.6, 7.2, 8.0 Hz, 1H), 7.05 (ddd, J = 1.2, 6.8, 6.8 Hz,. 1H), 7.43 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.69 - 7.73 (m, 2H), 8.91 (dd, J = 0.8, 6.8 Hz, 1H).
2-(2,6-디클로로페닐아미노)-3-(하이드록시메틸)-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(218)
Figure pct00238
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 5.03 (d, J =6.0 Hz, 2H), 6.96 (t, J =7.2 Hz, 1H), 7.16 (t, J =7.6 Hz, 2H), 7.2 (s, 1H), 7.39 (d, J =8.0 Hz, 2H), 7.56 (t, J =7.6 Hz, 1H), 7.77 (s, 1H), 8.96 (d, J =7.2 Hz, 1H).
2-(3,5-디클로로페닐아미노)-3-(하이드록시메틸)-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(219)
Figure pct00239
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.97 (d, J =6.0 Hz, 2H), 7.01-7.04 (m, 2H), 7.50 (t, J =6.8 Hz, 1H), 7.60 (s, 2H), 7.71 (t, J =8.4 Hz, 2H), 8.24 (s, 1H), 8.98 (d, J =7.2 Hz, 1H).
2-(3,5-디플루오로페닐아미노)-3-(하이드록시메틸)-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(220)
Figure pct00240
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.99 (d, J =6.0 Hz, 2H), 6.52 (t, J =8.8 Hz, 1H), 7.05 (t, J =5.6 Hz, 2H), 7.29 (d, J =2.0 Hz, 2H), 7.51 (s, 1H), 7.72 (t, J =7.6 Hz, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.99 (d, J =6.4 Hz, 1H).
2-(2,6-디메틸페닐아미노)-3-(하이드록시메틸)-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(221)
Figure pct00241
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.23 (s, 6H), 5.02 (d, J =6.4 Hz, 2H), 6.92 (t, J =6.8 Hz 1H), 7.12 (s, 3H), 7.20 (d, J =8.8 Hz, 1H), 7.33 (s, 1H), 7.53 (t, J =6.8 Hz, 1H), 8.94 (d, J =6.4 Hz, 1H).
3-(하이드록시메틸)-2-페녹시-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(222)
Figure pct00242
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.31 (brs, 1H), 4.86 (s, 2H), 7.03 - 7.09 (m, 3H), 7.13 - 7.18 (m, 1H), 7.28 - 7.34 (m, 3H), 7.58 - 7.62 (m, 1H), 8.94 - 8.96 (m, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 56.0, 99.7, 115.2, 121.7, 125.1, 125.3, 127.4, 129.3, 136.8, 149.2, 152.8, 159.6, 164.0.
2-(3-플루오로페녹시)-3-(하이드록시메틸)-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(223)
Figure pct00243
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.62 (brs, 1H), 4.78 (s, 2H), 6.78 - 6.85 (m, 3H), 7.02 (ddd, J = 1.2, 6.8, 7.2 Hz, 1H), 7.18 - 7.23 (m, 1H), 7.25 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.57 -7.62 (m, 1H), 8.89 (d, J = 6.8 Hz, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 55.3, 99.7, 109.4, 109.6, 111.7, 111.9, 115.2, 117.2, 117.3, 125.0, 127.3, 129.7, 129.8, 137.0, 149.0, 153.5, 153.6, 159.4, 161.4, 163.6, 163.8.
2-(3-클로로페녹시)-3-(하이드록시메틸)-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(224)
Figure pct00244
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.51 (t, J = 6.4 Hz, 1H), 4.79 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 6.95 - 6.98 (m, 1H), 7.04 (dd, J = 6.8, 7.2 Hz, 1H), 7.08 - 7.10 (m, 1H), 7.20 (dd, J = 8.4, 8.8 Hz, 1H), 7.27 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.59 - 7.63 (m, 1H), 8.91 9dd, J = 0.4, 7.2 Hz, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 53.3, 55.4, 99.7, 115.3, 120.1, 122.2, 125.1, 127.4, 129.8, 134.3, 137.0, 153.2, 159.2, 163.6.
3-(하이드록시메틸)-2-(페닐아미노)-6,7,8,9-테트라하이드로-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(225)
Figure pct00245
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.85 - 1.93 (m, 4H), 2.15 (s, 2H), 2.84 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.87 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 7.06 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 7.26 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 7.51 (d, J = 7.4 Hz, 2H), 11.2 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 14.6, 19.2, 22.2, 32.2, 42.4, 88.4, 122.9, 124.4, 128.8, 138.4, 160.5, 160.8, 162.2.
2-(3-클로로페닐아미노)-3-(하이드록시메틸)-6,7,8,9-테트라하이드로-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(226)
Figure pct00246
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 1.23 - 1.34 (m, 2H), 1.38 - 1.51 (m, 4H), 2.35 - 2.41 (m, 2H), 3.98 - 4.05 (m, 2H), 4.12 (s, 2H), 7.17 - 7.22 (m, 2H), 7.31 (t, J = 2.0 Hz, 1H), 7.36 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.77 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d 6 ) δ 15.1, 23.1, 31.4, 42.4, 59.2, 61.4, 65.7, 122.8, 123.9, 125.6, 131.6, 134.3, 139.4, 157.9, 164.3
3-(하이드록시메틸)-2-(3-(트리플루오로메틸)페닐아미노)-6,7,8,9-테트라하이드로-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(227)
Figure pct00247
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 1.19 - 1.38 (m, 2H), 1.48 - 1.54 (m, 2H), 1.70 - 1.73 (m, 2H), 2.38 (t, J = 12.8 Hz, 1H), 3.98 - 4.06 (m, 2H), 4.13 (s, 2H), 7.47 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.52 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.55 - 7.59 (m, 2H), 7.83 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d 6 ) d14.3, 22.2, 30.5, 41.5, 58.4, 77.9, 119.8, 121.2, 127.0, 129.8, 130.1, (d, J = 26.8 CF3로 인해), 138.2, 146.1, 157.1, 163.6, 169.1.
3-(하이드록시메틸)-2-(2-하이드록시페닐아미노)-6,7,8,9-테트라하이드로-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(228)
Figure pct00248
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.78 - 1.94 (m, 4H), 2.13 - 2.23 (m,, 2H), 2.61 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 3.98 - 4.05 (m, 2H), 4.12 (s, 2H), 6.81 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 6.89 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.98 - 7.12 (m, 2H), 10.11(s, 1H), 11.3 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 14.3, 21.4, 31.3, 42.1, 61.1, 87.7, 121.2, 126.4, 128.3, 128.6, 151.1, 161.3, 162.5, 163.7, 169.4 .
3-(하이드록시메틸)-2-(3-하이드록시페닐아미노)-6,7,8,9-테트라하이드로-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(229)
Figure pct00249
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.41 - 1.61 (m, 4H), 1.62 - 1.77 (m, 2H), 2.72 (t, J = 10.0 Hz, 1H), 3.78 - 3.95 (m, 2H), 4.17 (s,2H), 6.43 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.81 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.87 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.98 (t, J = 2.0 Hz, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 14.2, 21.8, 31.9, 42.4, 60.1, 79.8, 109.8, 111.6, 114.0, 129.4, 139.4,149.7, 159.3, 160.2, 163.1.
3-(하이드록시메틸)-2-(4-하이드록시페닐아미노)-6,7,8,9-테트라하이드로-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(230)
Figure pct00250
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 1.21 - 1.45 (m, 4H), 1.63 - 1.71 (m, 2H), 2.34 (t, J = 12.8 Hz, 1H), 3.98 - 4.05 (m, 2H), 4.19 (s, 2H), 6.75 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.00 (d, J = 8.8 Hz, 2H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d 6 ) δ 14.9, 21.9, 32.1, 42.3, 60.4, 87.2, 115.7, 125.0, 130.1, 154.9, 159.4, 160.6, 163.3.
3-(하이드록시메틸)-9-메틸-2-(페닐아미노)-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(231)
Figure pct00251
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.40 (s, 3H), 2.97 (brs, 1H), 4.93 (s, 2H), 6.89 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 7.11 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.34 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 7.62 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 8.02 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 8.73 (d, J = 6.8 Hz, 1H).
2-(3-클로로페닐아미노)-3-(하이드록시메틸)-9-메틸-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(232)
Figure pct00252
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.43 (s, 3H), 3.06 (t, J= 6.4 Hz, 1H), 4.92 (d, J= 6.4 Hz, 2H), 6.69 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 7.03 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.23 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.29 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.44 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.03 (s, 1H), 8.38 (s, 1H), 8.71 (d, J = 7.2 Hz, 1H).
2-((3-클로로페닐)(메틸)아미노)-3-(하이드록시메틸)-9-메틸-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(233)
Figure pct00253
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.51 (s, 3H), 4.09 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 4.12 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 6.95 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 7.04 - 7.06 (m, 2H), 7.20 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 7.54 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.84 (d, J = 7.2 Hz, 1H).
2-((3-클로로페닐)(메틸)아미노)-3-(메톡시메틸)-9-메틸-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(234)
Figure pct00254
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.49 (s, 3H), 3.01 (s, 3H), 4.04 (s, 3H), 6.91 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 7.08 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.12 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.20 (s, 1H), 7.26 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.52 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.86 (d, J = 7.2 Hz, 1H).
3-(하이드록시메틸)-9-메틸-2-(3-(트리플루오로메톡시)페닐아미노)-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(235)
Figure pct00255
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.40 (s, 3H), 3.15 (t, J = 6.2 Hz, 1H), 4.93 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 6.67 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 6.91 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.25-7.27 (m, 1H), 7.32 (t, J = 8.2 Hz, 1H), 7.43 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.98 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 8.72 (d, J = 6.8 Hz, 1H).
3-(하이드록시메틸)-2-(3-하이드록시페닐아미노)-9-메틸-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(236)
Figure pct00256
1H NMR (400 MHz, CDCl3 + CD3OD) δ 2.44 (s, 3H), 4.75 (s, 2H), 6.45 (dd, J = 2.4, 8.0 Hz, 1h), 6.84 (dd, J = 6.8, 6.8 Hz, 1H), 7.06 (dd, J = 8.0, 8.4 Hz, 1H), 7.11 (dd, J = 2.0, 2.4 Hz, 1H), 7.17 (dd, H = 2.0, 8.0 Hz, 1H), 7.45 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.72 (d, J = 7.2 Hz, 1H).
3-(하이드록시메틸)-2-(4-하이드록시페닐아미노)-9-메틸-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(237)
Figure pct00257
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.40 (s, 3H), 4.94 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 6.81 -6.84 (m, 3H), 7.46 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.50 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.84 (s, 1H), 8.82 (d, J = 7.2 Hz, 1H).
2-(4-3급-부틸페닐아미노)-3-(하이드록시메틸)-9-메틸-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(238)
Figure pct00258
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.34 (s, 9H), 2.40 (s, 3H), 3.07 (t, J = 6.2 Hz, 1H), 4.91 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 6.61 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 7.34 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 7.38 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.21 (br s, 1H), 8.69 (d, J = 7.2 Hz, H).
2-(3-클로로벤질아미노)-3-(하이드록시메틸)-9-메틸-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(239)
Figure pct00259
1H NMR (400 MHz, CDCl3 + CD3OD) δ 2.31 (s, 3H), 3.02 (s, 1H), 4.68 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 4.70 (s, 2H), 6.70 (dd, J = 5.6, 6.0 Hz, 1H), 6.74 (dd, J = 6.8, 7.2 Hz, 1H), 7.11 - 7.20 (m, 3H), 7.31 (s, 1H), 7.38 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.66 (d, J = 6.8 Hz, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3 + CD3OD) δ 17.7, 44.2, 44.3, 55.8, 93.1, 93.2, 112.6, 125.4, 125.5, 126.9, 127.5, 129.5, 132.6, 134.0, 134.9, 141.7, 149.45, 149.47, 157.4, 159.10, 159.16.
3-(하이드록시메틸)-2-(이소부틸아미노)-9-메틸-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(240)
Figure pct00260
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 0.96 (d, J = 6.8 Hz, 6H), 1.88 - 1.95 (m, 1H), 2.34 (s, 3H), 3.13 (brs, 1H), 3.32 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 4.78 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 6.08 (brs, 1H), 6.72 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 7.37 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.66 (d, J = 6.8 Hz, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 17.9, 20.5, 28.9, 48.6, 57.1, 92.5, 112.1, 126.0, 132.5, 134.6, 149.6, 157.1, 159.5.
2-(디에틸아미노)-3-(하이드록시메틸)-9-메틸-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(241)
Figure pct00261
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.22 (t, J = 6.8 Hz, 6H), 2.35 (s, 3H), 3.41 (s, 1H), 3.63 (q, J = 6.8 Hz, 4H), 4.44 (s, 2H), 6.65 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.31 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.68 (d, J = 7.2 Hz, 1H) 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 13.9, 17.7, 44.0, 67.0, 92.2, 111.7, 125.8, 132.5, 134.4, 148.1, 160.7, 160.8.
2-(사이클로헥실메틸아미노)-3-(하이드록시메틸)-9-메틸-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(242)
Figure pct00262
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 0.95 - 0.98 (m, 2H), 1.18 - 1.23 (m, 3H), 1.58 - 1.79 (m, 6H), 2.42 (s, 3H), 3.27 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.85 (brs, 1H), 4.74 (m, 2H), 6.21 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 6.68 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.33 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 8.57 (d, J = 7.2 Hz, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 17.9, 26.2, 26.7, 31.3, 38.4, 47.5, 56.9, 92.8, 112.0, 126.0, 132.3, 134.5, 149.4, 156.9, 159.5.
3-(하이드록시메틸)-9-메틸-2-모르폴리노-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(243)
Figure pct00263
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.01 (brs, 1H), 2.43 (s, 3H), 3.62 (t, J = 4.8 Hz, 4H), 3.78 (t, J = 4.8 Hz, 4H), 4.62 (s, 2H), 6.85 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 7.46 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.76 (d, J = 6.8 Hz, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 17.9, 49.7, 58.9, 67.1, 95.5, 113.3, 125.2, 133.4, 135.0, 148.2, 160.6, 161.7.
3-(하이드록시메틸)-9-메틸-2-모르폴리노-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온 하이드로클로라이드 (244)
Figure pct00264
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.43 (s, 3H), 3.42 (s, 1H), 3.62 (t, J = 4.8 Hz, 4H), 3.78 (t, J = 4.8 Hz, 4H), 4.62 (s, 2H), 6.85 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 7.46 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.76 (d, J = 6.8 Hz, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 17.9, 49.7, 58.9, 67.1, 98.5, 113.3, 125.2, 133.4, 135.0, 148.2, 160.6, 161.7.
7-브로모-2-(3-클로로페닐아미노)-3-(하이드록시메틸)-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(245)
Figure pct00265
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 4.78 (s, 2H), 5.37 (s, 1H), 7.12 (dd, J = 1.6 Hz, 8.4 Hz, 1H), 7.32 (d, J = 8.0 Hz 1H), 7.42 (dd, J = 1.6 Hz, 8.4 Hz, 1H), 7.54 (dd, J = 0.8 Hz, 8.0 Hz, 1H), 7.64 (d, J = 8.0 Hz 1H), 7.91 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.47(s, 1H), 8.71 (s, 1H);
2-(3-클로로페닐아미노)-3-(하이드록시메틸)-7-메톡시-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(246)
Figure pct00266
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 3.86 (s, 3H), 4.70 (s, 2H), 5.22 (s, 1H), 7.02 (dd, J = 0.8 Hz, 8.0 Hz, 1H), 7.28 - 7.32 (m, 1H), 7.41 (dd, J = 1.2 Hz, 9.6 Hz, 1H), 7.58 (dd, J = 0.8 Hz, 8.0 Hz, 1H), 7.64 - 7.68 (m, 1H), 7.87 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.36 (s, 1H), 8.69 (s, 1H)
2-(3-클로로페닐아미노)-3-(하이드록시메틸)-8-메톡시-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(247)
Figure pct00267
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 3.92 (s, 3H), 4.62 (s, 2H), 5.07 (s, 1H), 6.71 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 6.83 (dd, J = 2.8 Hz, 8.0 Hz, 1H), 7.01 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.28 (dd, J = 8.0 Hz, J = 8.0 Hz, 1H), 7.62 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.76 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.62 (s, 1H), 8.71 (d, J = 8.0 Hz, 1H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d 6 ) 54.8, 57.3, 93.8, 101.5, 109.3, 120.0, 120.9, 122.5, 129.5, 130.7, 133.4, 142.2, 151.9, 156.9, 157.8, 166.2.
8-클로로-2-(3-클로로페닐아미노)-3-(하이드록시메틸)-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(248)
Figure pct00268
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.68 (s, 2H), 5.14 (brs, 1H), 7.03 (dd, J = 1.2, 8.0 Hz, 1H), 7.19 (dd, J = 2.4, 7.6 Hz, 1H), 7.28 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.54, (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.58 (dd, J = 1.2, 8.4 Hz, 1H), 7.57 (t, J = 2.0 Hz, 1H), 8.78 (d, J = 8.0 Hz, 1H).
2-(3-클로로페닐아미노)-3-(하이드록시메틸)-8-(메틸아미노)-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(249)
Figure pct00269
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.81 (s, 3H), 3.85 (s, 2H), 6.02 (s, 1H), 6.32 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.93 (d, J = 2 Hz, 1H), 7.12 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.38 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.81 (s, 1H), 8.42 (s, 1H), 9.93 (s, 1H).
2-(3-클로로페닐아미노)-8-(디에틸아미노)-3-(하이드록시메틸)-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(250)
Figure pct00270
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.23 (t, J = 6.8 Hz, 6H), 3.44 (q, J = 6.8 Hz, 4H), 3.99 (s, 2H), 4.82 (t, J = 2.1 Hz, 1H), 6.29 (d, J = 2.1Hz, 1H), 6.54 (dd, J = 2.4, 8.4 Hz, 1H), 6.92 (d, J = 2 Hz, 1H), 7.21 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.81 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.06 (t, J = 2.0 Hz, 1H), 8.85 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 9.71 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 12.7, 20.0, 44.7, 92.8, 97.1, 104.0, 118.9, 120.7, 121.9, 128.5, 129.5, 134.1, 142.8, 150.6, 151.9, 158.3, 159.2.
3-(하이드록시메틸)-8-모르폴리노-2-(페닐아미노)-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(251)
Figure pct00271
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 3.43 (s, 4H), 3.67 (s, 4H), 4.59 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 5.05, (t, J = 4.8 Hz, 1H), 6.41 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.95 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.00 (dd, J = 2.8, 8.4 Hz, 1H), 7.25 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 7.64 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 8.38 (s, 1H), 8.69 (d, J = 8.0 Hz, 1H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d 6 ) δ 46.5, 55.1, 66.3, 91.5, 99.1, 105.4, 121.3, 122.6, 128.5, 129.1, 140.9, 151.4, 155.0, 156.7, 158.5.
2-(3-플루오로페닐아미노)-3-(하이드록시메틸)-8-모르폴리노-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(252)
Figure pct00272
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 3.46 (s, 4H), 3.68 (s, 4H), 4.59 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 5.06, (t, J = 5.2 Hz, 1H), 6.47 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.74 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.03 (dd, J = 2.8, 8.0 Hz, 1H), 7.26 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.64 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.79 (d, J = 12.4 Hz, 1H), 8.52(s, 1H), 8.60 (d, J = 8.0 Hz, 1H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d 6 ) δ 45.8, 54.2, 65.6, 91.3, 98.4, 105.0, 108.0 (d, J = 20 Hz, F로 인해), 116.0, 128.0, 129.8 (d, J = 10 Hz, F로 인해), 142.1 (d, J = 11 Hz, F로 인해), 150.6, 154.4, 156.1, 157.4, 161.0, 163.3.
2-(3-클로로페닐아미노)-3-(하이드록시메틸)-8-모르폴리노-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(253)
Figure pct00273
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 3.45 (t, J = 5.6 Hz, 4H), 3.69 (t, J = 5.6 Hz, 4H), 4.58 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 5.01 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 6.42 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 6.98 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.05 (dd, J = 2.8, 8.0 Hz, 1H), 7.26 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.64 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.80 (t, J = 2.0 Hz, 1H), 8.48(s, 1H), 8.60 (d, J = 8.0 Hz, 1H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d 6 ) δ 45.4, 53.6, 65.7, 84.7, 98.6, 105.3, 117.8, 118.7, 119.8, 127.1, 130.2, 129.2, 141.8, 149.7, 153.0, 155.3, 157.4; LC-MS (ESI, m/z): 386 [M+H]+.
3-(하이드록시메틸)-8-(4-메틸피페라진-1-일)-2-(페닐아미노)-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(254)
Figure pct00274
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.34 (s, 3H), 2.52 (t, J =5.2 Hz, 4H), 3.43 (t, J =5.2 Hz, 4H), 4.88 (s, 2H), 5.28 (s, 1H), 6.37 (s, 1H), 6.55 (d, J =8.0Hz, 1H), 7.05 (t, J =7.2Hz, 1H), 7.33 (t, J =7.6 Hz, 2H), 7.60 (d, J =7.6 Hz, 2H), 7.91 (s, 1H), 8.64 (d, J =8.0Hz, 1H).
2-(3-클로로페닐아미노)-3-(하이드록시메틸)-8-(4-메틸피페라진-1-일)-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(255)
Figure pct00275
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.14 (s, 3H), 2.38 (t, J = 4.4 Hz, 4H), 3.45 (t, J = 4.4 Hz, 4H), 3.56 (s, 2H), 6.41 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.95 (dd, J = 1.6, 8.0 Hz, 1H), 7.01 (dd, J = 2.4, 8.0 Hz, 1H), 7.27 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.50 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 8.0 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 10.4 (s, 1H), 14.18 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 45.6, 51.6, 54.0, 55.0, 85.3, 98.3, 105.1, 117.7, 118.5, 121.0, 127.9, 130.3, 133.0, 142.1, 150.8, 154.1, 156.4, 157.8; LC-MS (ESI, m/z): 400 [M+H]+.
2-(3-플루오로페닐아미노)-3-(하이드록시메틸)-8-(4-메틸피페라진-1-일)-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(256)
Figure pct00276
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.35 (s, 3H), 2.54 (t, J =4.4 Hz, 4H), 3.48 (t, J =4.8 Hz, 4H), 4.87 (s, 2H), 5.23 (s, 1H), 6.42 (s, 1H), 6.60 (d, J =8.4Hz, 1H), 6.73 (t, J =8.4Hz, 1H), 7.12 (d, J =8.4 Hz, 1H), 7.19 (d, J =8.4 Hz, 1H), 7.71-7.75 (m, 1H), 8.04 (s, 1H), 8.71 (d, J =8.0 Hz, 1H).
2-(3-클로로페닐아미노)-3-(하이드록시메틸)-8-메틸-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(257)
Figure pct00277
무색 고체, mp 235℃ (분해); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.42 (s, 3H), 4.07 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 7.03 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.26 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 7.46 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.84 (t, J = 2.0 Hz, 1H), 8.79 (d, J = 7.2 Hz, 2H).
2-(4-클로로페닐아미노)-3-(하이드록시메틸)-8-메틸-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(258)
Figure pct00278
무색 고체, mp 227℃ (분해); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.42 (s, 3H), 4.10 (s, 2H), 6.85 (d, J = 7.2Hz, 1H), 7.23-7.28 (m, 4H), 7.87 (d, J = 6.8Hz, 2H), 8.94 (d, J = 7.6 Hz, 1H).
2-(4-플루오로페닐아미노)-3-(하이드록시메틸)-8-메틸-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(259)
Figure pct00279
무색 고체, mp 232℃ (분해); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.42(s, 3H), 4.12 (s, 2H), 6.85 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.05 (t, J = 8.4 Hz, 2H), 7.21 (s, 1H), 7.31-7.38 (m, 2H), 7.85 (q, J = 4.8 Hz, 2H), 8.94 (d, J = 7.2 Hz, 1H).
2-(3,4-디클로로페닐아미노)-3-(하이드록시메틸)-8-메틸-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(260)
Figure pct00280
무색 고체, mp 230℃ (분해); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.44 (s, 3H), 4.09 (s, 2H), 6.89 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.26 (s, 1H), 7.36 (d, J =8.8 Hz, 1H), 7.76 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.24 (d, J =2.4 Hz, 1H), 8.95 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 9.71(s, 1H).
2-(3-클로로-4-플루오로페닐아미노)-3-(하이드록시메틸)-8-메틸-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(261)
Figure pct00281
무색 고체, mp 225℃ (분해); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.43 (s, 3H), 4.09 (s, 2H), 6.88 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.11 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 7.27 (s, 1H), 7.69-7.73 (m, 1H), 8.12 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.95 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 9.71 (s, 1H).
9-클로로-2-(3-클로로페닐아미노)-3-(하이드록시메틸)-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(262)
Figure pct00282
무색 고체, mp 230℃ (분해); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.95 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 6.80 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.06 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.27 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.46 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.78 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 8.18 (t, J = 2.4 Hz, 1H), 8.43 (s, 1H), 8.81 (d, J = 7.2 Hz, 1H).
2-(3-클로로페닐아미노)-3-(하이드록시메틸)-9-(트리플루오로메틸)-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(263)
Figure pct00283
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 4.77 (s, 2H), 7.11 - 7.13 (m, 1H), 7.32 (dd, J = 7.2, 7.2 Hz, 1H), 7.35 (dd, J = 8.0, 8.0 Hz, 1H), 7.48 - 7.50 (m, 1H), 8.13 - 8.14 (m, 1H), 8.41 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 9.12 (dd, J = 1.2, 7.2 Hz, 1H).
2-(3-클로로페닐아미노)-9-플루오로-3-(하이드록시메틸)-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(264)
Figure pct00284
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 4.76 (s, 1H), 5.31 (brs, 1H), 7.11 - 7.13 (m, 1H), 7.18 -7.23 (m, 1H), 7.38 (dd, J = 8.0, 8.0 Hz, 1H), 7.63 - 7.65 (m, 1H), 7.86 (dd, J = 8.4, 8.8 Hz, 1H), 8.12 - 8.13 (m, 1H), 8.73 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 8.96 (brs, 1H).
2-(4-클로로페닐아미노)-9-플루오로-3-(하이드록시메틸)-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(265)
Figure pct00285
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 4.72 (s, 2H), 5.30 (brs, 1H), 7.15 - 7.20 (m, 1H), 7.41 - 7.44 (m, 2H), 7.79 - 7.82 (m, 2H), 7.84 - 7.86 (m, 1H), 8.72 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 8.92 (brs, 1H).
9-플루오로-2-(4-플루오로페닐아미노)-3-(하이드록시메틸)-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(266)
Figure pct00286
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 4.75 (s, 2H), 5.25 (brs, 1H), 7.13 - 7.25 (m, 3H), 7.73 - 7.77 (m, 2H), 7.80 - 7.85 (m, 1H), 8.72 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 8.84 (brs, 1H).
2-(3-클로로-4-플루오로페닐아미노)-9-플루오로-3-(하이드록시메틸)-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(267)
Figure pct00287
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 4.74 (s, 2H), 5.24 (brs, 1H), 7.18 - 7.22 (m, 1H), 7.39 - 7.44 (m, 1H), 7.65 - 7.69 (m, 1H), 7.83 - 7.87 (m, 1H), 8.20 - 8.22 (m, 1H), 8.72 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 8.91 (brs, 1H).
2-(3,4-디플루오로페닐아미노)-9-플루오로-3-(하이드록시메틸)-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(268)
Figure pct00288
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 4.75 (s, 2H), 5.26 (brs, 1H), 7.17 - 7.22 (m, 1H), 7.39 - 7.49 (m, 1H), 7.84 - 7.88 (m, 1H), 8.08 - 8.14 (m, 1H), 8.73 (m, J = 7.2 Hz, 1H), 8.93 (brs, 1H).
2-(3,4-디클로로페닐아미노)-9-플루오로-3-(하이드록시메틸)-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(269)
Figure pct00289
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 4.75 (s, 2H), 5.27 (brs, 1H), 7.19- 7.23 (m, 1H), 7.60 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.7 (dd, J = 2.8, 8.8 Hz, 1H), 7.85 - 7.89 (m, 1H), 8.83 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 8.73 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 9.00 (brs, 1H).
2-(1H-인돌-5-일아미노)-9-플루오로-3-(하이드록시메틸)-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(270)
Figure pct00290
m.p=184 - 185℃; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 4.70 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 5.18 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 6.35 (s, 1H), 7.00 - 7.04 (m, 1H), 7.23 (dd, J = 2 Hz, 8.8 Hz, 1H), 7.28 - 7.32 (m, 2H), 7.68 (dd, J = 8 Hz, J = 8 Hz, 1H), 7.82 (s, 1H), 8.61 (s, 1H), 8.64 (d, J = 6 Hz, 1H), 10.98 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d 6 ) 55.2, 94.6, 101.7 (d, J = 5.2 Hz, F로 인해), 111.6, 112.1 (d, J = 7.4 Hz, F로 인해), 113.7, 118.0, 119.8 (d, J = 17.1 Hz, F로 인해), 124.2 (d, J = 4.4 Hz, F로 인해), 126.5, 128.2, 131.9, 133.5, 151.6, 154.1, 156.3, 157.6.
3-(하이드록시메틸)-9-메톡시-2-(페닐아미노)-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(271)
Figure pct00291
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 3.93 (s, 3H), 4.71 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 5.29 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 6.97 - 7.01 (m, 1H), 7.06 - 7.10 (m, 1H), 7.27 - 7.32 (m, 3H), 7.83 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 8.47 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 8.68 (s, 1H).
3-(하이드록시메틸)-9-메톡시-2-(페닐아미노)-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-티온(272)
Figure pct00292
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.98 (s, 3H), 4.11 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 6.88 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 7.04 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.31 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 7.82 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.98 (s, 1H), 8.59 (d, J = 5.6 Hz, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) 26.9, 57.1, 94.2, 111.8, 112.7, 119.9, 121.1, 123.3, 128.9, 139.8, 143.7, 151.3, 155.6, 158.6.
2-(3-클로로페닐아미노)-3-(하이드록시메틸)-9-메톡시-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(273)
Figure pct00293
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 3.94 (s, 3H), 4.68 (s, 2H), 6.99 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.09 (dd, J = 7.2 Hz, J = 7.2 Hz, 1H), 7.25 - 7.29 (m, 2H), 7.56 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.42 (s, 1H), 8.45 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.77 (s, 1H).
2-(4-클로로페닐아미노)-3-(하이드록시메틸)-9-메톡시-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(274)
Figure pct00294
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 3.90 (s, 3H), 4.65 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 5.19 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 7.03 (dd, J = 7.2 Hz, 7.6 Hz, 1H), 7.23 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.29 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.85 (d, J = 9.2 Hz, 2H), 8.42 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 8.72 (s, 1H).
2-(4-플루오로페닐아미노)-3-(하이드록시메틸)-9-메톡시-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(275)
Figure pct00295
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 3.91 (s, 3H), 4.69 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 5.19 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 7.06 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 7.13 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 7.25 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.83 - 7.86 (m, 1H), 8.45 (dd, J = 1.2 Hz, 7.2 Hz, 1H), 8.66 (s, 1H).
3-(하이드록시메틸)-9-메톡시-2-(4-(트리플루오로메톡시)페닐아미노)-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(276)
Figure pct00296
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 3.96 (s, 3H), 4.67 (d, J = 4.0 Hz, 2H), 5.20 (s, 1H), 7.07 (dd, J = 7.2 Hz, J = 7.2 Hz, 1H), 7.23 (s, 1H), 7.27 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.95 (dd, J = 8.8 Hz, J = 8.8 Hz, 2H), 8.45 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 8.78 (s, 1H).
3-(하이드록시메틸)-9-메톡시-2-(4-(트리플루오로메틸)페닐아미노)-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(277)
Figure pct00297
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 3.97 (s, 3H), 4.72 (s, 2H), 5.32 (s, 1H), 7.14, (dd, J = 7.2 Hz, 7.2 Hz, 1H), 7.33 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.64 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 8.11 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 8.49 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 9.09 (s, 1H).
2-(3-클로로-4-플루오로페닐아미노)-3-(하이드록시메틸)-9-메톡시-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(278)
Figure pct00298
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 3.95 (s, 3H), 4.69 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 5.16 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 7.10 (dd, J = 7.2 Hz, 7.2 Hz, 1H), 7.30 (dd, J = 0.8 Hz, 8.0 Hz, 1H), 7.32 (dd, J = 9.2 Hz, 9.2 Hz, 1H), 7.61 - 7.65 (m, 1H), 8.46 (dd, J = 0.8 Hz, 7.2 Hz, 1H), 8.59 (dd, J = 2.8 Hz, 7.2 Hz, 1H), 8.76 (s, 1H).
2-(3,4-디플루오로페닐아미노)-3-(하이드록시메틸)-9-메톡시-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(279)
Figure pct00299
m.p=231℃ (분해); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.92 (s, 3H), 4.66 (s, 2H), 5.17 (brs, 1H), 7.07 (dd, J = 7.2 Hz, 7.2 Hz, 1H), 7.26 - 7.33 (m, 2H), 7.39 - 7.41 (m, 1H), 8.34 - 8.40 (m, 1H), 8.44 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 8.74 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, DMSO) δ 54.1, 56.8, 95.2, 109.1, 113.4, 116.0 (d, J = 3.8 Hz, F로 인해), 116.8, 118.7, 137.5 (d, J = 9.7 Hz, F로 인해), 143.2 (d, J = 11.9 Hz, F로 인해), 145.6, 147.5 (d, J = 13.4 Hz, F로 인해), 149.9 (d, J = 13.4 Hz, F로 인해), 150.6, 155.5.
2-(3-클로로-4-하이드록시페닐아미노)-3-(하이드록시메틸)-9-메톡시-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(280)
Figure pct00300
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 3.93 (s, 3H), 4.68 (s, 2H), 5.14 (s, 1H), 6.99 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.06 (dd, J = 7.2 Hz, 7.2 Hz, 1H), 7.26 (dd, J = 1.2 Hz, 8.0 Hz, 1H), 7.38 (dd, J = 1.2 Hz, 8.0 Hz, 1H), 8.25 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 8.45 (dd, J = 1.2 Hz, 7.2 Hz, 1H), 8.52 (s, 1H), 9.79 (s, 1H).
2-(3,4-디클로로페닐아미노)-3-(하이드록시메틸)-9-메톡시-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(281)
Figure pct00301
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 3.93 (s, 3H), 4.66 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 5.16 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.09 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.29 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.48 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.64 (dd, J = 2.8 Hz, 8.8 Hz, 1H), 8.44 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 8.67 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 8.82 (s, 1H).
3-(하이드록시메틸)-9-메톡시-2-(4-메틸-3-(트리플루오로메틸)페닐아미노)-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(282)
Figure pct00302
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 2.49 (t, J = 2.0 Hz, 3H due to CF3 ), 3.93 (s, 3H), 4.70 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 5.19 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 7.10 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.29 (dd, J = 1.2 Hz, 8.0 Hz, 1H), 7.32 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.74 (dd, J = 1.6 Hz, 8.0 Hz, 1H), 8.46 (dd, J = 1.2 Hz, 6.8 Hz, 1H), 8.81 (s, 1H), 8.85 (d, J = 2.0 Hz, 1H).
2-(4-플루오로-3-(트리플루오로메틸)페닐아미노)-3-(하이드록시메틸)-9-메톡시-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(283)
Figure pct00303
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 3.92 (s, 3H), 4.68 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 5.12 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 7.07 (dd, J = 7.2 Hz, 7.2 Hz, 1H), 7.27 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.37 - 7.42 (m, 1H), 7.86 - 7.88 (m, 1H), 8.43 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 8.87 (s, 1H), 8.99 - 9.00 (m, 1H).
2-(2,3-디하이드로-1H-인덴-5-일아미노)-3-(하이드록시메틸)-9-메톡시-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(284)
Figure pct00304
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 1.97 - 2.05 (m, 2H), 2.79 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 2.85 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 3.92 (s, 3H), 4.69 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 5.26 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 7.04 (dd, J = 7.2 Hz, 1H), 7.12 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.24 (dd, J = 0.8 Hz, 7.6 Hz, 1H), 7.46 (dd, J = 2.0 Hz, 8.0 Hz, 1H), 7.82 (s, 1H), 8.45 (dd, J = 1.2 Hz, 7.2 Hz, 1H), 8.59 (s, 1H).
2-(벤조[d][1,3]디옥솔-5-일아미노)-3-(하이드록시메틸)-9-메톡시-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(285)
Figure pct00305
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 3.91 (s, 3H), 4.68 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 5.21 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 5.98 (s, 2H), 6.84 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.05 - 7.07 (m, 1H), 7.26 (dd, J = 1.2 Hz, 8.0 Hz, 1H), 7.82 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.46 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.45 (dd, J = 1.2 Hz, 7.2 Hz, 1H), 8.56 (s, 1H).
2-(2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-6-일아미노)-3-(하이드록시메틸)-9-메톡시-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(286)
Figure pct00306
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 3.92 (s, 3H), 4.19 - 4.24 (m, 4H), 4.67 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 5.19 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 6.77 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.05 (dd, J = 7.2 Hz, 7.2 Hz, 1H), 7.12 (dd, J = 2.4 Hz, 8.4 Hz, 1H), 7.26 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.64 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.46 (dd, J = 2.0 Hz, 7.2 Hz, 1H), 8.47 (s, 1H).
3-(하이드록시메틸)-9-메톡시-2-(1-메틸-1H-인돌-5-일아미노)-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(287)
m.p=195-197℃; 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 3.82 (s, 3H), 3.97 (s, 3H), 4.77 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 5.28 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 6.42 (d, J = 3.0 Hz, 1H), 7.09 (dd, J = 7.2, 7.6 Hz, 1H), 7.28 - 7.30 (m, 1H), 7.33 (d, J = 3.0 Hz, 1H), 7.41 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.46 (dd, J = 2.0, 8.8 Hz, 1H), 8.18 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.52 (dd, J = 1.2, 6.8 Hz, 1H), 8.62 (br s, 1H).
3-(하이드록시메틸)-9-메톡시-2-(1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-5-일아미노)-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(288)
Figure pct00308
m.p=186℃ (분해); 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 3.87 (s, 3H), 3.98 (s, 3H), 4.79 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 5.31 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 7.08 (dd, J = 7.2, 7.2 Hz, 1H), 7.28 (dd, J = 0.8, 7.6 Hz, 1H), 7.50 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.56 (dd, J = 2.0, 8.8 Hz, 1H), 8.13(s, 1H), 8.34 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 8.53 (dd, J = 0.8, 7.2 Hz, 1H), 8.73 (br s, 1H).
3-(하이드록시메틸)-9-메톡시-2-(1-메틸-1H-인다졸-5-일아미노)-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(289)
Figure pct00309

m.p=205℃ (분해); 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 3.40 (s, 3H), 4.08 (s, 3H), 4.78 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 5.28 (t, J = 5.0 Hz, 1H), 7.12 (dd, J = 7.2, 7.6 Hz, 1H), 7.32 (1H, J = 1.2, 7.6 Hz, 1H), 7.62 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.68 (dd, J = 2.0, 9.0 Hz, 1H), 8.04 (m, 1H), 8.07(d, J = 1.2 Hz, 1H), 8.53 (dd, J = 1.2, 6.8 Hz, 1H), 8.75 (br s, 1H).
9-(디플루오로메톡시)-2-(4-플루오로페닐아미노)-3-(하이드록시메틸)-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(290)
Figure pct00310
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 4.67 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 5.14 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 7.07 - 7.11 (m, 3H), 7.17 (t, J = 74 Hz F2로 인해, 1H), 7.63 - 7.69 (m, 3H), 8.71 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 8.75 (s, 1H).
2-(4-클로로페닐아미노)-9-(디플루오로메톡시)-3-(하이드록시메틸)-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(291)
Figure pct00311
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 4.69 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 5.23 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 7.13 (dd, J = 7.2 Hz, 7.2 Hz, 1H), 7.23 (t, J = 74 Hz, 1H, F2로 인해), 7.30 - 7.33 (m, 2H), 7.72 - 7.75 (m, 3H), 8.75 (dd, J = 1.2 Hz, 7.2 Hz, 1H), 8.86 (s, 1H);
9-(디플루오로메톡시)-2-(3,4-디플루오로페닐아미노)-3-(하이드록시메틸)-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(292)
Figure pct00312
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 4.70 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 5.22 (s, 1H), 7.16 (dd, J = 7.2 Hz, J = 7.2 Hz, 1H), 7.26 (t, J = 74 Hz, F2로 인해, 1H), 7.33 - 7.38 (m, 2H), 7.75 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 8.12 (dd, J = 7.6 Hz, 12.8 Hz, 1H), 8.76 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.90 (s, 1H); LC-MS (ESI, m/z): 370[M+H]+.
2-(3,4-디클로로페닐아미노)-9-(디플루오로메톡시)-3-(하이드록시메틸)-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(293)
Figure pct00313
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 4.68 (s, 2H), 5.19 (s, 1H), 7.15 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.24 (t, J = 74 Hz, F2로 인해, 1H), 7.47 - 7.57 (m, 2H), 7.72 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 8.32 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.73 (dd, J = 1.6 Hz, 7.2 Hz, 1H), 8.92 (s, 1H).
2-(3-클로로-4-플루오로페닐아미노)-9-(디플루오로메톡시)-3-(하이드록시메틸)-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(294)
Figure pct00314
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 4.68 (d, J = 4.0 Hz, 2H), 5.18 (s, 1H), 7.15 (dd, J = 7.2 Hz, 7.2 Hz, 1H), 7.24 (t, J = 74 Hz, 1H, F2로 인해), 7.32 (dd, J = 9.2 Hz, 9.2 Hz, 1H), 7.50 - 7.54 (m, 1H), 7.73 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 8.22 (dd, J = 2.8 Hz, 6.8 Hz, 1H), 8.74 (dd, J = 1.2 Hz, 7.2 Hz, 1H), 8.86 (s, 1H).
2-(1H-인돌-5-일아미노)-9-(디플루오로메톡시)-3-(하이드록시메틸)-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(295)
Figure pct00315
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 4.72 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 5.23 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 6.34 (s, 1H), 7.05 - 7.09 (m, 1H), 7.23 (dd, J = 8.8 Hz, 8.8 Hz, 1H), 7.25 (t, J = 74.4 Hz, 1H F2로 인해), 7.31 - 7.33 (m, 2H), 7.68 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.93 (s, 1H), 8.70 (s, 1H), 8.73 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 10.99 (s, 1H).
2-(3-클로로페닐아미노)-3-(하이드록시메틸)-6,8-디메틸-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(296)
Figure pct00316
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.32 (s, 3H), 2.40 (s, 3H), 3.55 (s, 2H), 6.78 (s, 1H), 7.06 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.21 (dd, J = 8.0 Hz, J = 8.0 Hz, 1H), 7.39 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.69 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.71 (s, 1H), 9.60 (s, 1H); LC-MS (ESI, m/z): 330 [M+H]+.
7,9-디클로로-2-(3-클로로페닐아미노)-3-(하이드록시메틸)-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(297)
Figure pct00317
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 4.65 (s, 2H), 5.70 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.29 (dd, J = 8.0 Hz, J = 8.0 Hz, 1H), 7.57 (dd, J = 8.0 Hz, J = 8.0 Hz, 1H), 8.25 (s, 1H), 8.32 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.76 (d, J = 2.0 Hz, 1H).
2-(3-클로로페닐아미노)-7,9-디플루오로-3-(하이드록시메틸)-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(298)
Figure pct00318
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.69 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 5.31 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 7.06 (dd, J = 1.2 Hz, 8.0 Hz, 1H), 7.32 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.56 (dd, J = 1.2 Hz, 8.0 Hz, 1H), 8.02 (s, 1H), 8.18 - 8.23 (m, 1H), 8.68 (t, J = 2.0 Hz, 1H), 8.90 (s, 1H).
(4-옥소-2-(페닐아미노)-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-일)메틸 벤조에이트(299)
Figure pct00319
m.p=178 - 179℃; 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 5.66 (s, 2H), 6.96 (ddd, J = 1.2, 1.2, 6.8 Hz, 1H), 7.06 - 7.10 (m, 1H), 7.33 - 7.44 (m, 5H), 7.53 - 7.56 (m, 1H), 7.61 - 7.65 (m, 1H), 7.72 (m, 2H), 8.12 (dd, J = 1.2, 8.4 Hz, 1H), 9.14 (brs, 1H).
(4-옥소-2-(페닐아미노)-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-일)메틸 아세테이트 (300)
Figure pct00320
m.p=160 - 161℃; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.13 (s, 3H), 6.92 (dd, J = 6.8, 7.2 Hz, 1H), 7.04 - 7.08 (m, 1H), 7.30 - 7.37 (m, 3H), 7.59 - 7.66 (m, 3H), 8.91 (brs, 1H), 8.94 (d, J = 7.2 Hz, 1H).
(4-옥소-2-(페닐아미노)-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-3-일)메틸 이소부티레이트(301)
Figure pct00321
m.p=161 - 163℃; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.17 (d, J = 7.2 Hz, 6H), 2.62 - 2.65 (m, 1H), 6.94 (dd, J = 6.8, 7.2 Hz, 1H), 7.04 - 7.08 (m, 1H), 7.31 - 7.38 (m, 3H), 7.60 - 7.67 (m, 3H), 8.95 (brs, 1H), 8.95 (d, J = 6.8 Hz, 1H).
실시예 8: 디니트로벤즈아미드 화합물에 대한 추가의 연구
두 개의 대표적인 분자, 화합물 4 및 24를 실내에서 재합성하고, 1차 대식세포에서 통상의 CFU-기본 활성을 시험하였다(도 7). INH에서 볼 수 있는 바와 유사하게, 세 개의 상이한 세포주에서 감염시킨지 5일 후 두 가지 화합물 모두에 대해 CFU의 수에 있어서의 10배 감소가 관찰되었다. 이것은 이러한 일련의 화합물의 효능을 확인시켜 준다.
독성 문제를 해결하기 위해, 화합물 4 및 24를 상이한 체조직으로부터 유도된 5개의 세포주 패널에서 시험하였다. 세포를 증가량의 화합물과 함께 항온처리하고, 5일간의 동시-항온처리 후 레사주린을 사용하여 세포 생존률을 평가하였다. 세포독성률(%)은 DMSO 함유 웰에 의해 측정된 레소푸린 형광도를 기준으로 하여 결정하였다. 세포의 50%가 사멸하는 농도를 최소 독성 농도(Minimal Toxic Concentration; MTC50)로서 정의하였다. 화합물 4 및 24 둘 다는 세포주 패널에 대해 세포독성을 나타내지 않았으며, 이것은 이러한 일련의 화합물이 유망한 신규 항-결핵 약물임을 시사한다(표 5).
화합물 4 및 24의 활성의 가능한 특이성을 통찰하기 위해, 광범위한 항미생물 스펙트럼의 분석을 실시하였으며, 이러한 디니트로벤즈아미드 유도체의 효과가 주로 악티노마이세테스(actinomycetes)에 제한되며, 마이코박테리움에 대해 가장 강력한 활성이 관찰되는 것으로 나타났다(표 5). 특히 중요하게도, 시험된 DNB는 또한 다중약물-내성(multidrug-resistant; MDR) 및 광범위한 약물-내성(extensively drug-resistant; XDR) 임상 단리물에 대해 매우 활성이었으며, 이것은 이들이 최신 항결핵 화합물과는 상이한 표적에서 작용할 수 있음을 시사한다.
마이코박테리움 투베르쿨로시스 H37Rv의 돌연변이 빈도를 화합물 4 및 24에 대해 측정하였다. 증가하는 수의 박테리아를 상이한 농도의 화합물로 보충된 7H10 한천 배지에서 성장시켰다. 6주간 성장시킨 후, 자발적 돌연변이 빈도의 비율을 구하기 위해 콜로니를 계수하였다(표 7). 화합물 4의 경우, 0.2㎍/mL 및 3.2㎍/mL에서 각각 1×10-6 및 1×10-8의 내성 빈도가 나타났다. 이에 따라, 자발적 돌연변이율은 1×10-7인 것으로 계산되었다. 화합물 24의 경우, 0.2㎍/mL 및 3.2㎍/mL에서, 돌연변이 빈도는 각각 7×10-7 및 1×10-8이며, 이는 3.5×10-7의 평균 빈도에 상응한다. 전체적으로, 이러한 값은 INH-내성 돌연변이체에 대해 관찰된 돌연변이 빈도(3×10-6)보다 우수하였다. 따라서, 이러한 결과는 이러한 종류의 화합물이 낮은 돌연변이 빈도를 야기함을 입증한다.
실시예 9: 피리도피리미디논 화합물에 대한 추가의 연구
표 6은 상이한 마이코박테리아 균주에 대한 하나의 대표적인 화합물 133의 최소 억제 농도(MIC)를 보여준다. 빠르게 성장하는 마이코박테리움 스메그마티스(Mycobacterium smegmatis mc2)에 대한 효과는 갖지 않지만, 2μM의 MIC로 H37Rv, H37Ra 및 BCG 파스퇴르와 같은 전형적인 실험실 균주를 억제할 수 있었다. 매우 중요하게도, 화합물 133의 항미생물 활성을 또한 마이코박테리아의 임상 단리물 균주에 대해 시험하였다. 다중-약물 내성(MDR-TB) 및 광범위한-약물-내성(XDR-TB) 단리물 균주에 대한 MIC 값은 마이크로몰 범위 이내였다.
독성 문제를 해결하기 위해, 화합물 133을 상이한 체조직으로부터 유도된 7개의 세포주 패널에서 시험하였다. 세포를 증가량의 화합물과 함께 항온처리하고, 5일간의 동시-항온처리 후 레사주린을 사용하여 세포 생존률을 평가하였다. 세포독성률(%)은 DMSO 함유 웰에 의해 측정된 레소푸린 형광도를 기준으로 하여 결정하였다. 세포의 50%가 사멸하는 농도를 최소 독성 농도(MTC50)로서 정의하였다. 화합물 133은 100μM까지 시험된 모든 세포주에 대해 세포독성을 나타내지 않았다(표 6). 이에 따라, 항결핵 활성 및 세포독성 사이의 비율로 이루어진 선택도 지수(selectivity index)는 세포외 및 세포내 마이코박테리아 둘 다에 대해 50 초과이었으며, 이것은 이러한 일련의 화합물이 유망한 신규 항-결핵 약물임을 시사한다.
1차 대식세포에 대한 이러한 일련의 화합물의 효과를 추가로 측정하였다. 화합물 232와 함께 배양된 숙주 세포에는 DMSO 대조군에 비해 보다 적은 박테리아가 번식하며, 도 8에 도시된 바와 같이 감염시킨지 5일 후에 보다 풍부하였다. 유사한 데이타가 화합물 133에 대해 수득되었다(데이타는 나타나 있지 않음). 이어서, 감염시킨지 7일 후에 통상의 CFU 측정을 수행하여 남아있는 박테리아 부하를 정량하였다. INH에서 볼 수 있는 바와 유사하게, 사람 및 마우스 세포 둘 다에서 화합물 둘 다에 대해 CFU의 수에 있어서의 10배 감소가 관찰되었다. 이것은 이러한 일련의 화합물의 효능을 확인시켜 준다.
마이코박테리움 투베르쿨로시스 H37Rv의 돌연변이 빈도를 화합물 264에 대해 측정하였다. 증가하는 수의 박테리아를 상이한 농도의 화합물로 보충된 7H10 한천 배지에서 성장시켰다. 6주간 성장시킨 후, 자발적 돌연변이 빈도의 비율을 구하기 위해 콜로니를 계수하였다(표 7). 화합물 264는 0.4 및 0.8㎍/mL에서 각각 3.4×10-6 및 8×10-6, 1.6㎍/mL 및 3.2㎍/mL 둘 다에서 2×10-8의 내성 빈도를 제공하였다. 이에 따라, 자발적 돌연변이율은 7×10-7인 것으로 계산되었다. 전체적으로, 이러한 값은 INH에 대해 관찰된 돌연변이 빈도(2.9×10-6)보다 우수하다. 따라서, 이러한 결과는 이러한 종류의 화합물이 낮은 돌연변이 빈도를 야기함을 입증한다.
TB 약물 발견을 위한 최근의 도전중의 하나는 지속성 박테리아에 대해 활성인 화합물을 확인하는 것이다. 잠복성 박테리아의 위치 및 상태는 여전히 논의할 여지가 있지만, 마이코박테리아 지속에 대해 일반적으로 공용되는 가설 중의 하나는 마이코박테리움 투베르쿨로시스 바실러스가 연장된 시간 동안 대식세포에서 생존할 수 있으며, 다른 박테리아와는 달리 활발히 복제될 수 있다는 것이다. 마이코박테리움 투베르쿨로시스의 포식소체내 프로필(intraphagosomal profile)은 복잡하며; 매우 다양한 유전자가 과발현되고 적시에 조절되며 또한 환경적 요인에 따라 좌우된다. 전체적으로 보아, 이것은 이상적인 표적으로서 선택될 수 있는 하나의 특정 결핵의 확인을 어렵게 만든다. 따라서, 비-표적 세포계 검정은 세포내 마이코박테리움 투베르쿨로시스 억제제를 찾아내는데 중요한 도구이다.
대식세포 내에서의 바실러스 성장 억제제의 연구는 성가신 CFU 플레이팅, 느린 바실러스 성장, 안전성 요건 및 적절한 감염 조건 설정에 있어서의 어려움으로 인해 오랫동안 제한되어 왔다. 그 결과, 이러한 방법은 항상 시험관내 세포외 성장에 대해 활성인 화합물의 초기 선택 후의 부가적인 검정으로서 사용되었다. 자동 공초점 현미경의 출현으로, 상기한 제한에 다시 착수할 수 있게 되었으며, 본 발명자들은 대규모 화합물 스크리닝의 실행 가능성을 보여주었다. 단계들을 최소화하고 안전성 요건을 충족시키기 위해 부유 대식세포 배치 감염을 수행하기로 하였다. 이를 위해, 세포외 비-포식된(non-phagocytosed) 마이코박테리아를 제거하는데 세심한 주의를 기울여야 한다. 세척 단계 동안 사용되는 원심분리 조건을, 감염된 세포만을 회수하고 세포외 박테리아의 대부분은 버리기 위해 설정하였다. 현미경법에 의해, 본 발명자들은 비결합 마이코박테리아가 전체 박테리아 부하의 10% 미만을 나타냄을 확인하였다(데이타는 나타나 있지 않음). 마이코박테리아는 숙주 세포와 무관하게 성장할 수 있으며, 이에 따라, 남아있는 세포외 바실러스는 발명자의 모델의 타당성을 매우 손상시킬 것이다. 이를 위해, 추가의 아미카신 처리 단계를 프로토콜에 부가하여 남아있는 마이코박테리아를 추가로 제거하였다. 따라서, 최적화된 프로토콜에 의해, 화합물이 첨가되는 시간까지 남아있는 비-포식된 마이코박테리아는 거의 없다. 수득된 결과는 또한 이것이 특히 화합물 처리로 측정되는 세포내 마이코박테리아에 대한 효과임을 입증한다. 사실상, 본 발명자들은 세포에 불충분하게 침투하는 것으로 공지된 항생제인 리팜핀에 의한 약한 억제를 관찰하였다. 시험관내 성장 검정에 비해 세포내 검정에서의 리팜핀에 대한 MIC에 있어서의 재현성있는 50배 감소가 입증되었다. 달리, 두 가지 검정 사이에는 MIC에 있어서 차이를 보이지 않았다. 유사하게, 표현형 세포계 검정에서는 마이코박테리아 성장을 억제할 수 있지만 시험관내 성장 검정에서는 그러하지 않은 화합물이 또한 확인되었다. 또한, 화합물을 이미 감염된 세포와 혼합한다는 사실은 1차 감염 억제제의 확인을 위한 기회를 감소시킬 것이다. 그러나, 이러한 화합물은 여전히 이웃 세포 감염의 차단제로서 확인될 수 있다.
통상의 CFU-플레이팅 방법에 비해, 형광성 박테리아의 현미경 기반 검출은, GFP 신호가 몇 일 동안 안정하기 때문에, 죽은 바실러스와 살아있는 바실러스를 구분하기에 충분히 민감하지 않다. 사실상, 높은 농도의 INH, 리팜핀 또는 활성 화합물에서, 항상 세포의 10%는 감염된 것으로 보이며, 이것은 초기 감염 비와 유사하다. 놀랍게도, 이러한 샘플을 플레이팅한 후에는 CFU를 회복할 수 없었다. 잠복성 바실러스는 성장을 회복할 수 있다는 사실(문헌 참조; Cho et al., 2007)로 인해, 현미경-검출된 바실러스는 잠복성 바실러스라기 보다는 죽은 바실러스임에 틀림없다. 따라서, 본 발명자의 검정은 대식세포 내에서 바실러스 성장을 방해하는 화합물을 검출한다.
널리 확립되고 확인된 바와 같이(도 1a), 대식세포는 세포 세포질의 대부분을 둘러싸고 있으며 마침내 대식세포 세포사를 야기하는 높은 박테리아 부하를 지지할 수 있다. 이것은 마이코박테리움 투베르쿨로시스가 BCG(Bacille Calmette-Guerin)와 비교하여 감염원(infectious agent)인 경우에 명백하며, 이는 심지어 높은 MOI에서도 심한 세포독성을 유도하지 않는다(데이타는 나타나 있지 않음). 이것을 고려하여, DMSO 샘플에서의 세포 수가 항생제 보호된 대조군에 비해 상당히 감소하는 때인 감염후 5일째에 데이타를 획득하기로 하였다. 따라서, 세포 수를 모니터링하는 것은 본 발명자가 화합물의 항균 활성을 확인할 수 있도록 하는 추가의 파라미터이었다.
직접 형광 기본 검정과는 달리, 이미지-기반 검정에 대한 분석이 훨씬 더 가변적인 것으로 판명되었다. 검정의 생물학에 내재되어 있는 몇 가지 파라미터는 HTS 검증을 위해 통상적으로 허용되는 보다 낮은 Z'-값을 부분적으로 설명한다. 남아있는 죽은 형광성 바실러스는 Z'-값에 그다지 큰 영향을 미치지 않으며, 오히려 DMSO 대조군에 대한 감염 비에 있어서의 변화성이 차이(discrepancy)를 설명하는 것으로 보인다. 감염시, 대식세포가 이동하는 경향이 있어 이것이 불균일한 이미지 세트를 야기한다는 사실이 또한 중요하다(도 2a). 그러나, 1차 스크린의 목적은 20μM의 농도에서 충분히 활성인 화합물을 확인하는 것이다. 따라서, 이러한 목적을 위해, 감염 비(INH/DMSO)에 대한 양의(positive) Z'는 허용 가능한 값으로 간주된다. 본 발명에 따르는 히트 선택의 타당성의 최선의 증거는 이후의 연속 희석 분석으로부터 나오며, 이에 의해 히트의 거의 100%가 확인되었다. 각각의 히트에 대해, 감염 비에 대한 제대로 피팅된 용량-반응 곡선 뿐만 아니라 세포 수 측면에서 비-독성 화합물에 대한 용량-반응 곡선이 수득되었다. 다시, 세포 수는 전적으로 녹색 형광 방출 및 GFP 발현과는 무관한 결과를 추가로 확인시켜 주었다.
분명히, 세포내 및 시험관내 마이코박테리움 투베르쿨로시스 성장 둘 다에 대해 활성인 것으로 밝혀진 화합물이 가장 유망하다. 이러한 라이브러리로부터 단리된 최선의 억제제는 INH와 동일한 범위내의 억제 활성을 갖는다. 추가의 구조 활성 관계 연구가 이들의 활성을 개선시킬 수 있을지를 결정하는데 기여할 것이다. 이러한 표현형 세포계 모델을 사용한 또 다른 연구 과정에서, 공지된 시험관내 항균 효능을 갖는 화합물에 대해 ng/mL 규모에 이르는 MIC가 수득되었으며, 이는 INH보다 낮은 MIC를 갖는 화합물이 본 발명에 따르는 검정에 의해 확인될 수 있음을 보여준다(데이타는 나타나 있지 않음). 감염 균주와는 무관한 신규한 작용 메카니즘을 가질 것으로 보이기 때문에 세포내 박테리아 검정에서만 활성인 화합물이 가장 중요하며, 이것은 이들이 또한 치료할 수 없는 다중-약물-내성(MDR)-균주에 대해 활성일 수 있음을 시시한다.
이러한 것들로 미루어 볼 때, 상기 결과는 자동 형광 현미경으로 마이코박테리움 투베르쿨로시스 성장을 모니터링하는 것이 매우 확고하고 신뢰성이 높으며 이러한 방법이 강력한 항-TB 화합물의 신속한 선택을 가능케 한다는 것을 보여준다.
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[표 1]
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[표 2]
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INH: 이소니아지드, RIF: 리팜핀, Strep: 스트렙토마이신, R: 내성. 1임상 단리물은 2003년 10월에서 2007년 3월 동안 국립 마산 결핵 병원(National Masan Tuberculosis Hospital)으로부터의 활성 결핵 환자로부터 수집한, 잘라낸 폐 조직 또는 가래 표본으로부터 분리하였다.
NE: 320에 등가인 100mg/mL까지는 효과가 없음. 항미생물 스펙트럼은 프랑스 CHU d'Angers로부터의 임상 단리물에서 수행하였다.
[표 7]
Figure pct00497

Claims (15)

  1. 화학식 VIII의 화합물.
    화학식 VIII
    Figure pct00498

    위의 화학식 VIII에서,
    m은 0, 1, 2 또는 3이고;
    X3은 CH2, O, S 및 NH를 포함하는 그룹으로부터 선택되고;
    X4는 할라이드, 알킬, OR23, SR24 및 NR25R26을 포함하는 그룹으로부터 선택되고;
    R20은 아실, 알콕시, 알킬, 알킬아미노, 알킬카복실산, 아릴카복실산, 알킬카복실산 알킬에스테르, 알킬렌, 알킬에테르, 알킬하이드록시, 알킬티오, 알키닐, 아미도, 아미노, 아릴, 아릴알콕시, 아릴아미노, 아릴티오, 카복실산, 시아노, 사이클로알킬, 카복실산, 에스테르, 할로, 할로알콕시, 할로알킬, 할로알킬에테르, 헤테로아릴, 헤테로아릴아미노, 헤테로사이클로알킬 및 수소를 포함하는 그룹으로부터 선택되고, 이들은 임의로 치환되며;
    R21 및 R22는 각각 독립적으로 알콕시, 알킬, 알킬아미노, 알킬렌, 알킬에테르, 알킬티오, 알키닐, 아미도, 아미노, 아릴, 아릴에테르, 아릴알콕시, 아릴아미노, 아릴티오, 카복시, 시아노, 사이클로알킬, 에스테르, 할로, 할로알콕시, 할로알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴아미노, 헤테로사이클로알킬, 하이드록실, 수소, 니트로, 티오, 설포네이트, 설포닐 및 설포닐아미노를 포함하는 그룹으로부터 선택되고, 이들은 임의로 치환되며;
    R23은 아실, 알킬, 알킬아미노, 알킬렌, 알키닐, 아릴, 아릴알콕시, 아릴아미노, 아릴티오, 카복시, 사이클로알킬, 에스테르, 에테르, 할로알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴아미노, 헤테로사이클로알킬, 수소, 티오, 설포네이트 및 설포닐아미노를 포함하는 그룹으로부터 선택되고, 이들은 임의로 치환되며;
    R24는 알킬, 알킬아릴, 알킬렌, 알키닐, 아릴, 사이클로알킬, 에스테르, 할로, 할로알킬, 헤테로아릴, 헤테로사이클로알킬 및 수소를 포함하는 그룹으로부터 선택되고, 이들은 임의로 치환되며;
    R25 및 R26은 각각 독립적으로 아실, 알킬, 아미노알킬, 알킬렌, 알킬티오, 알키닐, 아릴, 아릴알콕시, 아릴아미노, 아릴티오, 카복시, 사이클로알킬, 에스테르, 에테르, 할로, 할로알콕시, 할로알킬, 할로알킬에테르, 헤테로아릴, 헤테로아릴아미노, 헤테로사이클로알킬 및 수소를 포함하는 그룹으로부터 선택되고, 이들은 임의로 치환된다.
  2. 제1항에 있어서, 화학식 VIIIa의 화합물.
    화학식 VIIIa
    Figure pct00499

    위의 화학식 VIIIa에서,
    X5는 CH2, C=O 및 C=S를 포함하는 그룹으로부터 선택되고;
    Z1 및 Z2는 각각 독립적으로 알콕시, 알킬, 알킬아미노, 알킬렌, 알킬에테르, 알킬티오, 알키닐, 아미도, 아미노, 아릴, 아릴에테르, 아릴알콕시, 아릴아미노, 아릴티오, 카복시, 시아노, 사이클로알킬, 에스테르, 할로, 할로알콕시, 할로알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴아미노, 헤테로사이클로알킬, 하이드록실 및 수소를 포함하는 그룹으로부터 선택되거나, 두 개의 그룹은 서로 결합하여 5원 또는 6원 사이클릭, 헤테로사이클릭 및 헤테로아릴 환을 생성하고, 이들은 임의로 치환되며;
    R27 및 R28은 각각 독립적으로 알콕시, 알킬, 알킬아미노, 알킬렌, 알킬에테르, 알킬티오, 알키닐, 아미도, 아미노, 아릴, 아릴에테르, 아릴알콕시, 아릴아미노, 아릴티오, 카복시, 시아노, 사이클로알킬, 에스테르, 할로, 할로알콕시, 할로알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴아미노, 헤테로사이클로알킬, 하이드록실, 수소, 니트로, 티오, 설포네이트, 설포닐 및 설포닐아미노를 포함하는 그룹으로부터 선택되고, 이들은 임의로 치환되며;
    R29 및 R30은 각각 독립적으로 알콕시, 알킬, 알킬아미노, 알킬렌, 알킬에테르, 알킬티오, 알키닐, 아미도, 아미노, 아릴, 아릴에테르, 아릴알콕시, 아릴아미노, 아릴티오, 카복시, 시아노, 사이클로알킬, 에스테르, 할로, 할로알콕시, 할로알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴아미노, 헤테로사이클로알킬, 하이드록실, 수소, 니트로, 티오, 설포네이트, 설포닐 및 설포닐아미노를 포함하는 그룹으로부터 선택되거나, 두 개의 그룹은 서로 결합하여 5원 또는 6원 사이클릭, 헤테로사이클릭, 아릴 및 헤테로아릴 환을 형성하고, 이들은 임의로 치환된다.
  3. 제1항에 있어서, 실시예 7에 나타낸 바와 같은 화학식 125-301 중의 하나, 바람직하게는 표 4에 나타낸 바와 같은 화학식 132-135, 137, 139-140, 147, 151-152, 160, 163, 173, 180, 184-185, 193, 195, 199-201, 204, 206-222, 224, 226, 229, 231-243, 245-278, 280-286 및 290-301 중의 하나를 갖는 화합물.
  4. 화학식 II의 화합물.
    화학식 II
    Figure pct00500

    위의 화학식 II에서,
    R5 및 R6은 각각 독립적으로 아실, 알킬, 알킬아미노, 알킬렌, 알킬티오, 알키닐, 아릴, 아릴알콕시, 아릴아미노, 아릴티오, 카복시, 사이클로알킬, 에스테르, 할로알콕시, 할로알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴아미노, 헤테로사이클로알킬, 하이드록실, 수소, 설포네이트 및 설포닐을 포함하는 그룹으로부터 선택되고, 이들은 임의로 치환되며,
    R7, R8 및 R9는 각각 독립적으로 알콕시, 알킬, 알킬아미노, 알킬렌, 알킬티오, 알키닐, 아미도, 아미노, 아릴, 아릴알콕시, 아릴아미노, 아릴티오, 카복시, 시아노, 사이클로알킬, 에스테르, 할로, 할로알콕시, 할로알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴아미노, 헤테로사이클로알킬, 하이드록실, 수소, 니트로, 티오, 설포네이트, 설포닐 및 설포닐아미노를 포함하는 그룹으로부터 선택되고, 이들은 임의로 치환된다.
  5. 제4항에 있어서, R5와 R6이 결합되어 있는 화학식 IIa의 화합물.
    화학식 IIa
    Figure pct00501

    위의 화학식 IIa에서,
    n은 0, 1, 2 또는 3이고;
    Y 및 Z는 각각 독립적으로 CH2, CHOR10, CHNR10R11 , CR10R11 및 NR10을 포함하는 그룹으로부터 선택되고;
    R10 및 R11은 각각 독립적으로 아실, 알킬, 알킬아미노, 알킬렌, 알킬티오, 알키닐, 아릴, 아릴알콕시, 아릴아미노, 아릴티오, 카복시, 사이클로알킬, 에스테르, 할로알콕시, 할로알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴아미노, 헤테로사이클로알킬, 수소, 설포네이트 및 설포닐을 포함하는 그룹으로부터 선택되고, 이들은 임의로 치환된다.
  6. 제4항에 있어서, 표 2에 나타낸 바와 같은 화학식 II를 갖는 화학식 중의 하나 뿐만 아니라 실시예 6에 나타낸 바와 같은 화학식 1-123 중의 하나, 바람직하게는 표 4에 나타낸 바와 같은 화학식 1-24, 26-34, 54, 56, 58-61, 63-64, 67, 90-101, 103-105, 107-109, 112, 114-116 및 118-121 중의 하나를 갖는 화합물.
  7. 표 3에 나타낸 바와 같은 화학식 I, III 내지 VII 및 IX 내지 XX 중의 하나를 갖는 화합물.
  8. 제1항 내지 제7항 중의 어느 한 항에 있어서, 박테리아 감염의 치료에 사용하기 위한 화합물.
  9. 제1항 내지 제6항 중의 어느 한 항에 있어서, 박테리아 감염의 치료에 사용하기 위한 화합물.
  10. 제1항 내지 제7항 중의 어느 한 항에 있어서, 결핵의 치료에 사용하기 위한 화합물.
  11. 제1항 내지 제6항 중의 어느 한 항에 있어서, 결핵의 치료에 사용하기 위한 화합물.
  12. 제1항 내지 제7항 중의 어느 한 항에 따르는 화합물을 포함하는 약제학적 조성물.
  13. 제1항 내지 제6항 중의 어느 한 항에 따르는 화합물을 포함하는 약제학적 조성물.
  14. 적당량의 제1항 내지 제7항 중의 어느 한 항에 따르는 화합물을 결핵의 치료를 필요로 하는 사람에게 적용함을 포함하는, 결핵의 치료방법.
  15. 적당량의 제1항 내지 제6항 중의 어느 한 항에 따르는 화합물을 결핵의 치료를 필요로 하는 사람에게 적용함을 포함하는, 결핵의 치료방법.
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