KR20110014565A

KR20110014565A - 봄베신 유사체 펩티드 길항제 접합체

Info

Publication number: KR20110014565A
Application number: KR1020107022308A
Authority: KR
Inventors: 헬무트 맥케; 쟝 클라우드 로이비; 로살바 만시
Original assignee: 우니베르지테츠스피탈 바젤; 우니베르지테트 베른
Priority date: 2008-03-07
Filing date: 2009-02-27
Publication date: 2011-02-11
Also published as: NZ587795A; PE20091753A1; UA103314C2; CY1118687T1; SV2010003660A; CA2717427A1; CR11671A; KR101734553B1; ES2615805T3; WO2009109332A1; US20150265733A1; US9035023B2; TW200944239A; MX2010009843A; US20110097266A1; KR20160128425A; HUE032980T2; EP2100900A1; AU2009221204C1; EP2252628A1

Abstract

진단 및 치료 의약을 제공하기 위해, 다음 화학식 I로 표시되는 봄베신 유사체 펩티드 길항제 접합체를 제공한다: [A-(B)_n]_x-C (식에서, A는 적어도 하나의 방사성 핵종 금속을 포함하는 금속 킬레이터이고, B는 C의 N-말단에 연결되는 스페이서, 또는 공유결합이고, C는 청구된 바와 같은 서열을 갖는 봄베신 유사체 펩티드 길항제이고, 여기서 추가로 x는 1 내지 3의 정수이고, n은 1 내지 6의 정수이다).

Description

봄베신 유사체 펩티드 길항제 접합체{BOMBESIN ANALOG PEPTIDE ANTAGONIST CONJUGATES}

본 발명은 치료 또는 진단/조영 (imaging) 방사성 약품, 그의 제조 및 용도에 관한 것이고, 여기서 치료 또는 진단 방사성 약품은 봄베신 수용체, 보다 특히 가스트린 방출 펩티드 (GRP) 수용체에 대한 친화도를 갖고 그에 결합할 수 있는 결합 모이어티 (moiety)로서 규정된다. 결합 모이어티는 알파-, 베타-, 감마- 및 양전자 방출 동위원소에 대한 금속 착화기에 표지된다. 용도는 대상에게 종양 세포 상에 과다발현된 봄베신 수용체, 보다 특히 가스트린 방출 펩티드 (GRP) 수용체에 결합할 수 있는 모이어티에 부착된 킬레이팅기로 킬레이팅된 금속을 갖는 치료적 방사성 약품의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는, 신생물성 질병이 있는 대상을 치료하는 것을 포함한다. 용도는 종양 세포 상에서 과다발현된 봄베신 수용체, 및 보다 특히 가스트린 방출 펩티드 (GRP) 수용체에 결합할 수 있는 모이어티에 부착된 킬레이팅기로 킬레이팅된 금속을 갖는 진단/조영 방사성 약품을 사용하여 신생물성 질병이 있는 대상을 진단 또는 조영하는 것을 포함한다. 방법은 봄베신 수용체, 보다 특히 가스트린 방출 펩티드 (GRP) 수용체에 결합할 수 있는 모이어티와 공유 연결된 금속 킬레이팅기로 이루어지는 전구체 화합물로부터 치료 또는 진단 화합물을 형성하는 것으로 이루어진다.

진단제로서 사용하기 위해 효과적인 방사성 약품 추적자 (tracer)를 설계하는데 있어서, 약물이 적절한 생체내 표적화 및 약동학적 특성을 갖는 것이 필수적이다. 문헌 [Fritzberg et al. (1992, J. Nucl. Med., 33:394)]에서는 방사성 핵종 화학물질 및 연관된 연결이 생체분자 담체의 부착 및 표지의 화학적 변형의 최적화가 필요함을 분명히 나타낸다고 설명하고 있다. 따라서, 방사성 핵종의 종류, 생체분자의 종류, 및 이들을 서로 연결하기 위해 사용되는 방법이 방사성 추적자 특성에 대해 중대한 효과를 가질 수 있다.

펩티드는 신경전달물질, 호르몬 및 항생제로서의 작용을 포함한 많은 생리학적 과정에서 중대한 역할을 하는 생체분자이다. 연구에서는 신경과학, 면역학, 약물학 및 세포 생물학과 같은 분야에서 그들의 중요성을 보여주었다. 일부 펩티드는 화학 메신저 (messenger)로서 작용할 수 있다. 이들은 표적 세포 표면 상의 수용체에 결합하고, 리간드의 생물학적 효과는 표적 조직에 전달된다. 따라서, 리간드를 방사성 핵종으로 표지함으로써 리간드의 특이적 수용체 결합 특성을 이용할 수 있다. 이론적으로, 수용체에 대한 리간드의 높은 친화도는 수용체 발현 조직 내에 방사성 표지된 리간드의 체류를 용이하게 한다. 그러나, 어떠한 펩티드가 효율적으로 표지될 수 있는지, 및 표지가 일어날 조건은 여전히 조사중이다. 리간드 펩티드의 수용체 특이성은 화학 반응 동안 변경될 수 있음이 잘 알려져 있다. 따라서, 최적 펩티드 구성체가 결정되어야 한다.

종양은 펩티드가 특이적으로 결합하는 다양한 수용체 종류를 과다발현한다. 다음 공개문 [Boerman et al., Seminar in Nuclear Medicine, 2000, 30(3), 195)]; [Reubi et al. J. Nucl. Med., 2005, 46, (supp1) 67S]; [Reubi, J.C., Endocrine Reviews, 2003, 24(4), 389]에서는 신생물 내의 세포 표면 수용체에 특이적으로 결합하는 펩티드의 비-배제적인 (exhaustive) 목록을 제공한다: 즉, 소마토스타틴, 혈관작용성 장 펩티드 (VIP), 가스트린 방출 펩티드 (GRP) 수용체에 대한 봄베신 결합, 가스트린, 콜레시스토키닌 (CCK), 및 칼시토닌.

섬광조영 (scintigraphic imaging) 및 방사선 요법을 위한 금속 표지된 수용체 특이적 펩티드의 잠재적인 효용성은 소마토스타틴 유사체, 예를 들어, ¹¹¹In-DTPA 접합된 옥트레오타이드 (Octreotide) (FDA 승인된 진단 조영제, Octreoscan® (미국에서 코비디엔 (Covidien)에 의해 시판됨))에 의해 예시된다 (각각 [Lowbertz et al., Seminars in Oncology, 1994, 1] 및 [Reubi et al., J. Nucl. Med., 2005, 46, 67S-75S] 및 그의 참조문헌). 옥트레오타이드 및 그의 유사체는 몇몇 조영 금속 동위원소 (⁹⁹ ^mTc, ¹¹¹In, ⁶⁸Ga), 및 치료 금속 동위원소 (¹⁰⁵Rh, ^186/188Re, ¹⁵³Sm, ⁹⁰Y, ¹⁶⁶Ho, ¹⁷⁷Lu)에 공유 연결되었다. 금속 표지된 접합체는 수용체에 특이적으로 결합하고, 수용체에 결합 시에 구성체가 수용체에 의해 내재화되고, 금속 표지된 수용체 특이적 펩티드 또는 그들의 대사물질은 표적화된 세포 내에 포획된다.

상기한 원리는 GRP 수용체 고결합 (avid) 펩티드 (펩티드는 수용체에 대해 높은 친화도를 갖는다)로 더욱 확장되고, 여기서 금속 접합된 봄베신 작용제가 섬광조영 및 방사선 요법을 위해 사용된다:

문헌 ([Chen et al. (Appl. Radiat. Isot, 2007 (In Press))], [Waser et al. (Eur. J. Nucl. Med. Mol. Imaging. 2007 34, 95-100)] 및 [Lantry et al. (J. Nucl. Med., 2006, 47, 1144-52)])에서, -NH-CH₂-CO-[4-아미노벤조일]-QWAVGHLM-NH₂))에 커플링된 봄베신 작용제 ¹⁷⁷Lu-DOTA (¹⁷⁷Lu-AMBA)의 조영 및 방사선 요법이 설명되었다.

몇몇 특허 및 특허 출원에서는 금속 표지된 봄베신 작용제를 언급한다. US 2007/0065362 A (Volkert et al.)에서는 일반적인 구조가 금속 표지 모이어티-스페이서 (spacer) 기-봄베신 작용제인, 조영 및 치료 용도를 위한 금속 표지된 봄베신 작용제를 특허 청구하고 있다. 동일한 발명자의 다른 특허 및 특허 출원은 US 6,921,526 B (2005), US 7,060,247 B, US 7,147,838 B (2006) 및 WO 2002/087631 A1을 포함한다.

<기술의 설명>

모든 상기 공개문에서 방사성 약품으로서 작용제의 선택에 대한 근원적인 원리는 이들이 상호작용 시에 GRP 수용체에 의한 반응을 생성하거나 유도하는 것이고, 여기서 방사성 약품은 후속적으로 세포내이입 (endocytosis)에 의해 세포 내부로 내재화된다. GRP 길항제는 작용제의 효과에 반대작용하고, 세포 내로 내재화되지 않고, 따라서 길항제는 방사성 섬광조영 및 방사선 치료 목적을 위해 아주 적합하지 않을 수 있는 것으로 가정된다. 지금까지, 생체 내에서 최적 가시화 및 방사성 핵종 요법을 위해 요구되는 것으로 보이는, 종양에서 방사성 리간드의 높은 생체내 축적을 일으키는 우수한 방사성 리간드 내재화 특성을 갖는 화합물을 개발하기 위한 합의가 있었다. 분자-약물학 조사로부터, 효율적인 내재화는 대체로 작용제에 의해 대부분 제공되는 것이 잘 알려져 있고 ([Bodei et al., J. Nucl. Med., 2006;47, 375-377]; [Koenig et al., Trends Pharmacol. Sci., 1997;18, 276-287], [Cescato et al., J. Nucl. Med., 2006;47, 502-511], [Ginj et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2006; 103, 16436-16441]), 최근에, 소마토스타틴 수용체의 경우, 고-친화도 금속 표지된 소마토스타틴 수용체 길항제는 종양 세포 내로 거의 내재화하지 않고, 동물 종양 모델에서 종양 내로 생체내 흡수의 측면에서, 대량으로 내재화하는 상응하는 작용제보다 동등하게 또는 훨씬 더 우수하게 기능함이 입증되었다. GRP 수용체는 전립선암 및 전이암, 유방암 및 전이암, 위장관 간질성 종양, 소세포 폐 암종, 신세포 암종, 위장관췌장 신경내분비 종양, 두경부 편평세포암, 신경모세포종 및 식도 편평세포 암종과 같은 몇몇 신생물에서 과다발현된다 ([Cornelio et al., Ann. Onco., 2007, 18, 1457-1466] 및 그의 참조문헌). GRP 수용체는 또한 인간 난소암, 자궁내막암 및 췌장암의 종양-연관 혈관에서 발현된다 (Fleischmann et al., Cell Onc., 2007, 29, 421-33). 따라서, 조영 및 방사선 요법을 위해 길항제 특성을 갖는 강력한 방사성 약품을 설계하는 것이 매우 바람직하다.

최근에 문헌 [Jensen et al., Pharma. Reviews, 2008 (in Press)]에서는 그의 GRP 수용체가 서브타입 2에 속하는 3가지의 상이한 봄베신 수용체 서브타입의 수용체 약물을 검토하였다.

최근의 공개문 [Cescato et al., J. Nucl. Med., 2008, 49, 318-26]에서는 ^99mTc-N₄-표지된 봄베신 길항제가 종양 표적화를 위해 작용제에 비해 바람직할 수 있음을 입증하였다.

GRP-수용체 표적화된 화합물 분야에서 초기의 발명은 WO 2007/109475 A2, WO 2007/095443 A2, US 2008/0008649 A1 및 US 7,226,577 B2에 설명되어 있고, 여기서 금속 킬레이팅된-링커 (linker)-봄베신은 아래 제시된 일반식으로 표시된다.

금속-킬레이터-링커-봄베신 유사체

WO 2007/095443 A2에 따르면, 특정 서열 ¹⁷⁷Lu-DOTA-Gly-4-아미노벤조일-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH₂를 갖는 L70 샘플은 작용제로서 거동하였고, 여기서 1 및 24시간에서 흡수를 측정하였다. 흡수는 치료 목적을 위해 최적이 아니고, 개선될 필요가 있다.

이들 특허 및 출원 이외에, 전-임상 및 임상 연구가 공개문 ([Waser et al., Eur. J. Nucl. Medicine, 2007, 34, 95-100]; [J. Nucl. Med., 2006, 47, 1144-52])에 포함된다.

높은 친화도로 상이한 부위에서 GPR 수용체를 표적화하는 길항제를 선택함으로써, 본 발명에서, 스페이서 전략의 조합이 비-표적 장기에서 낮은 흡수 및 신속한 청소와 함께 예상외로 높고 지속적인 종양 흡수를 일으키는 것으로 나타났다. 비교 연구에서, 유사한 링커를 사용할 때 종양에서 현저하게 더 높은 흡수 (>2X)가 관찰되었다. 봄베신 유사체의 길항 특성을 확인하는 시험관내 분석으로부터 출발하여, N-말단에 스페이서, 킬레이터 및 금속을 첨가한 후에도, 이들 길항 효과는 보유되고, 종양-대-배경 비에 관하여 뛰어난 생체내 거동으로 해석된 것으로 밝혀졌다.

따라서, 본 발명의 목적은 높은 흡수 및 높은 생체내 안정성 (인간 혈청 및 조직)을 보이는 새로운 봄베신 펩티드 길항제 접합체를 제공하는 것이다.

요약

본 발명의 설명

제1 측면에서, 본 발명은 다음 2가지 시스템에서 작용제-유도된 효과를 길항하면서 세포 내로의 내재화를 촉발시키지 않고 칼슘 이동을 통한 신호전달을 수행하지 않으면서 봄베신 수용체 및 보다 특히 GRP 수용체에 선택적으로 결합하는 봄베신 유사체 펩티드 길항제 접합체에 관한 것이고, 여기서 봄베신 유사체 펩티드 길항제 접합체는 하기 화학식 I로 표시된다:

<화학식 I>

식에서, x는 1 내지 3의 정수이고,

n은 1 내지 6의 정수이고,

A는 바람직하게는 진단 또는 치료 용도를 위해, 보다 바람직하게는 조영 또는 방사선 요법을 위해 적합한 적어도 하나의 방사성 핵종 금속을 포함하는 금속 킬레이터이고,

B는 C의 N-말단에 연결되는 스페이서, 또는 공유결합이고,

C는 하기 서열 C-1 내지 C-4를 갖는 봄베신 유사체 펩티드 길항제이고, 여기서

식에서, X_aa1은 D-Phe, D-Cpa, D-Tyr, D-Trp, 또는 아래 기재된 임의의 하나의 화학식으로 표시되는 잔기이고,

K는 F, Cl, I, 또는 NO₂이고,

X_aa2는 Gly 또는 β-Ala이고,

X_aa3은 스타틴 (Statine), 스타틴 유사체 및 이성질체, 4-Am,5-MeHpA, 4-Am,5-MeHxA 또는 α-치환된 아미노산이고,

X_aa4는 Leu, Cpa, Cba, CpnA, Cha, t-buGly, tBuAla, Met, Nle, 또는 이소-Bu-Gly이고,

Z는 NH 또는 O이고;

식에서, Leuψ(CHOH-CH₂)-(CH₂)₂-CH₃은

이고,

X_aa1은 D-Phe, D-Cpa, D-Tyr, D-Trp, 또는 아래 기재된 임의의 하나의 화학식으로 표시되는 잔기이고,

K는 F, Cl, I, 또는 NO₂이고,

X_aa2는 Gly 또는 β-Ala이고;

K는 F, Cl, I, 또는 NO₂이고,

X_aa2는 Gly 또는 β-Ala이고,

X_aa5는 Leuψ-CH₂NH-이고,

X_aa6은 Cys, Phe, Trp, Tpi 또는 Tac이고,

여기서, Tpi 및 Tac는 다음 구조를 갖고,

Z는 NH 또는 O이고;

K는 F, Cl, I, 또는 NO₂이고,

X_aa2는 Gly 또는 β-Ala이고,

X_aa7은 Leu-O-알킬, 또는 Leu-NH-알킬이다.

본 발명은 추가로 상기 봄베신 유사체 펩티드 길항제 접합체의 무기산 또는 유기산의 제약상 허용되는 염, 및 추가로 화학식 I로 표시되는 이들 화합물의 수화물, 착물, 에스테르, 아미드, 용매화물 및 전구약물에 관한 것이다.

설명 A (금속 킬레이터):

본 발명의 바람직한 실시태양에서, 금속 킬레이터 (A)는 3가 금속 또는 5가 금속에 대한 금속 킬레이터 및 그들의 근접 유사체이다.

바람직하게는, 3가 금속에 대한 금속 킬레이터 (A)는 DOTA-, NODASA-, NODAGA-, NOTA-, DTPA-, EDTA-, TETA- 및 TRITA-계 킬레이터 및 그들의 근접 유사체를 포함하는 군 중에서 선택되고, 여기서

DOTA는 1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-N,N',N",N'" 테트라아세트산이고,

DTPA는 디에틸렌트리아민펜타아세트산이고,

EDTA는 에틸렌디아민-N,N'-테트라아세트산이고,

TETA는 1,4,8,11-테트라아자시클로도데칸-1,4,8,11-테트라아세트산이고,

NOTA는 1,4,7-트리아자시클로노난트리아세트산이다.

보다 바람직하게는, 3가 금속에 대한 금속 킬레이터 (A)는 DOTA-, NOTA-, DTPA- 및 TETA-계 킬레이터 및 그들의 근접 유사체를 포함하는 군 중에서 선택된다.

이들 킬레이팅 리간드의 구조를 그들의 완전 탈양성자화된 형태로 아래에 제시한다.

훨씬 더 바람직하게는, 3가 금속에 대한 금속 킬레이터 (A)는 DTPA (디에틸렌트리아민펜타아세트산) 및 폴리아자-폴리카르복실레이트 마크로사이클, 예를 들어 DOTA (1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-N,N',N",N'" 테트라아세트산) 및 그의 근접 유사체를 포함하는 군 중에서 선택된다.

바람직하게는, 5가 금속에 대한 금속 킬레이터 (A)는 2-히드라지노 니코틴아미드 (HYNIC), N₄-킬레이터, N₄-X (N₄는 선형 또는 마크로시클릭일 수 있고, X는 아지드 아민, OH, 할로겐, o-, m-, p-아미노 벤질 메타파라카르복시벤질, 및 카르복시일 수 있다 (Nock, B. et al. (2003 [⁹⁹ ^mTc]Demobesin 1, a novel bombesin analogue for GRP receptor-targeted tumour imaging. Eur. I. Nucl. Mol. Imaging, 30, 247-258)), 데스페리옥사민 (DFO), 및 N_rS_(4-r) 킬레이터, 및 다음 화합물을 포함하는 군 중에서 선택되고,

식에서, R₁-R₁₅는 서로 독립적으로 수소 원자 또는 (C₁-C₄) 알킬기이고,

여기서, 상기 화학식의

모이어티에서, t는 1 또는 2 또는 3이고, 상기

모이어티 내의 탄소 원자 중 적어도 하나는 Y로 치환되거나 Y로 치환되지 않고,

R₁₆은 수소 원자 또는 CO₂ (C₁-C₄)알킬기이고;

R₁₇ 및 R₁₈은 서로 독립적으로 (C₁-C₄) 알킬기 또는 페닐기이고;

R₁₉는 CH₂-COOH 또는 그의 기능적 유도체이고;

E는 (C₁-C₄)알킬렌, 또는 페닐렌이고;

임의로 (C₁-C₄)알킬렌은 CO₂-알킬, CH₂-CO알킬, CONH₂, 또는 CONHCH₂-CO₂-알킬로 치환되고;

임의로 페닐렌은 CO₂-알킬로 치환되고,

여기서 알킬기는 1 내지 4개의 탄소 원자를 갖고;

G는 NH 또는 S이고;

Y는 펩티드 (N-말단)의 유리 아미노기와 또는 스페이서와 결합할 수 있는 관능기이고;

Z'는 S 또는 O이다.

N₄-킬레이터는 바람직하게는 다음 화학식을 갖는다:

식에서, m은 1 내지 4의 정수를 의미한다.

r이 1 내지 4의 정수인 N_rS_(4-r) 킬레이터가 규정된다.

상기 관능기 Y는 바람직하게는 이소시아나토, 이소티오시아나토, 포르밀, 할로니트로페닐, 디아조늄, 에폭시, 트리클로로-s-트리아지닐, 에틸렌이미노, 클로로술포닐, 알콕시카르브-이미도일, (치환된 또는 비치환된) 알킬카르보닐옥시카르보닐, 알킬카르보닐이미다졸릴, 숙신이미도-옥시카르보닐을 포함하고; 상기 기는 (C₁-C₁₀) 탄화수소 이가라디칼 (biradical)에 부착된다. 탄화수소 이가라디칼의 적합한 예는 벤젠, (C₁-C₆) 알칸, (C₂-C₆) 알켄 및 (C₁-C₄)-알킬벤젠으로부터 유도된 이가라디칼, 및 그의 근접 유사체이다.

바람직하게는, N_tS_(4-t) 킬레이터는 테크네튬 방사성 핵종 금속에 대해 비스아미노 비스티올 (BAT)계 킬레이터, 테크네튬 방사성 핵종 금속에 대해 머캅토-아세틸-글라이실-글라이실-글라이신 (MAG3) 및 그의 근접 유사체를 포함하는 군 중에서 선택된다.

보다 바람직하게는, 5가 금속에 대한 금속 킬레이터 (A)는 다음의 화학식 및 그의 근접 유사체를 포함하는 군 중에서 선택된다:

식에서, R₁-R₁₉, Z', Y, G 및 t는 상기 규정된 바와 같다.

바람직하게는 r은 2 내지 4의 정수이고, 보다 바람직하게는 r은 2 또는 3이다.

바람직하게는 m은 1 내지 2의 정수를 의미하고, 보다 바람직하게는 m은 1이다.

잘 알려진 금속 킬레이터, 예를 들어 선형, 마크로시클릭, 테트라피리딘 및 N₃S, N₂S₂ 또는 N₄ 킬레이터는 그 개시내용 전부가 본원에 참고로 포함된 US 5,367,080 A, US 5,364,613 A, US 5,021,556 A, US 5,075,099 A, US 5,886,142 A에 개시되어 있다.

잘 알려진 금속 킬레이터, 예를 들어 HYNIC, DTPA, EDTA, DOTA, TETA, 비스아미노 비스티올 (BAT)계 킬레이터는 그 개시내용 전부가 본원에 참고로 포함된 US 5,720,934 A에 개시되어 있다.

잘 알려진 금속 킬레이터, 예를 들어 데스페리옥사민 (DFO)은 문헌 [Doulias et al. (2003) Endosomal and lysosomal effects of desferrioxamine: protection of HeLa cells from hydrogen peroxide-induced DNA damage and induction of cell-cycle arrest. Free Radic. Biol. Med., Vol. 35, Issue 7:719-28]에 개시되어 있다.

매우 다양한 킬레이팅제가 이용가능하고, 본원에 참고로 포함된 문헌 [Banerjee et al., Nucl. Med. and Biology, 2005, 32, 1-20] 및 그의 참조문헌에서 검토되었다.

2-히드라지노 니코틴아미드 (HYNIC)는 ⁹⁹ ^mTc 및 ^186,188Re의 통합을 위해 널리 사용된 보조리간드의 존재 하의 다른 클래스의 킬레이팅기 (A)이다 ([Schwartz et al. Bioconj. Chem., 1991, 2, 333-6]; [Babich et al., J. Nucl. Med., 1993, 34, 1964-70]; [Nucl. Med. Biol, 1995, 22, 25-30]; [Nucl. Med. Biol., 1995, 22, pp. 32, pp. 1-10]).

DTPA는 ¹¹¹In을 착화시키기 위해 Octreoscan® (코비디엔에 의해 시판됨)에서 사용되고, 몇몇 변형은 문헌 ([Brechbiel et al., Biocon. Chem., 1991, 2, 187-194]; [Li et al., Nucl. Med. Biol., 2001, 28, 145-154])에 기재되어 있다.

방사선 요법 적용을 위한 DOTA형 킬레이트는 미국 특허 48885363 (Tweedle 등)에 기재되어 있다. 3가 동위원소 금속을 킬레이팅하기 위한 다른 폴리아자 마크로사이클은 문헌 [Maecke et al in Bioconj. Chem., 2002, 13, 530]에 기재되어 있고, 본원에 참고로 포함된다.

N₄-킬레이터, ⁹⁹ ^mTc-N₄-킬레이터는 미니가스트린의 경우에 CCK-2 수용체를 표적화하기 위해 펩티드 표지를 위해 사용되었다 (Nock et al., J. Nucl. Med., 2005, 46, 1727-36).

본 발명의 바람직한 실시태양에서, 방사성 핵종 금속은 조영을 위해 금속 킬레이터를 사용하여 착화시키고 방사성 금속 킬레이터를 생성시키기 위해 적합하다. 바람직하게는, 방사성 핵종 금속은 ¹³³ ^mIn, ⁹⁹ ^mTc, ⁶⁷Ga, ⁵²Fe, ⁶⁸Ga, ⁷²As, ¹¹¹In, ⁹⁷Ru, ²⁰³Pb, ⁶²Cu, ⁶⁴Cu, ⁵¹Cr, ⁵² ^mMn, ¹⁵⁷Gd, ¹²³I, ¹²⁴I, ¹³¹I, ⁷⁵Br, ⁷⁶Br, ⁷⁷Br, ⁶⁴Cu 및 ⁸²Br을 포함하는 군 중에서 선택된다. 보다 바람직하게는, 방사성 핵종 금속은 ⁹⁹ ^mTc, ⁶⁷Ga, ⁶⁸Ga, ¹¹¹In, 및 ¹²³I를 포함하는 군 중에서 선택된다. 훨씬 더 바람직하게는, 방사성 핵종 금속은 ⁶⁸Ga이다. 훨씬 더 바람직하게는, 방사성 핵종 금속은 ⁹⁹ ^mTc이다.

본 발명의 바람직한 실시태양에서, 방사성 핵종 금속은 방사선 요법을 위해 금속 킬레이터를 사용하여 착화시키고 방사성 금속 킬레이터를 생성시키기 위해 적합하다. 바람직하게는, 방사성 핵종 금속은 ¹⁸⁶Re, ⁹⁰Y, ⁶⁷Cu, ⁶⁸Ga, ⁶⁹Er, ¹²¹Sn, ¹²⁷Te, ¹⁴²Pr, ¹⁴³Pr, ¹⁹⁸Au, ¹⁹⁹Au, ¹⁶¹Tb, ¹⁰⁹Pd, ¹⁸⁸Rd, ¹⁸⁶Re, ¹⁸⁸Re, ⁷⁷As, ¹⁶⁶Dy, ¹⁶⁶Ho, ¹⁴⁹Pm, ¹⁵¹Pm, ¹⁵³Sm, ¹⁵⁹Gd, ¹⁷²Tm, ⁹⁰Y, ¹¹¹In, ¹⁶⁹Yb, ¹⁷⁵Yb, ¹⁷⁷Lu, ¹⁰⁵Rh, ¹¹¹Ag, ¹²⁵I, ¹²³I, ²¹³Bi, ²²⁵Ac, ¹²⁹I, ⁶⁴Cu 및 ¹⁷⁷ ^mSn을 포함하는 군 중에서 선택된다. 보다 바람직하게는, 방사성 핵종 금속은 ¹⁸⁶Re, ¹⁸⁸Re, ⁹⁰Y, ¹⁵³Sm, ⁶⁸Ga 및 ¹⁷⁷Lu를 포함하는 군 중에서 선택된다.

제1 측면의 추가의 별법에서, 적합한 방사성 핵종 금속은 방사성 할로겐 (요오드 및 브롬 동위원소)이고, 방사성 할로겐은 예를 들어, 펩티드 내의 Tyr 또는 Trp 모이어티에 대한 화학 반응에 의해 펩티드에 직접 결합되거나, 임의로 A는 Tyr 또는 Trp일 수 있다.

바람직한 방사성 진단제 (⁶⁷Ga, ¹¹¹In) 및 방사선 치료제 (⁹⁰Y, ¹⁵³Sm, ¹⁷⁷Lu)는 임의로 란탄 계열로서 공지된 원소의 클래스로부터의 킬레이팅된 +3 금속 이온을 함유한다. 상기 클래스의 대표적인 방사성 금속은 동위원소 ⁹⁰이트륨, ¹¹¹인듐, ¹⁴⁹프로메튬, ¹⁵³사마륨, ¹⁶⁶디스프로슘, ¹⁶⁶홀뮴, ¹⁷⁵이터븀, 및 ¹⁷⁷루테튬을 포함한다. 모든 이들 금속 (및 란탄 계열 내의 다른 것)은 +3 산화 상태로 유지되고 단단한 (산소/질소) 공여 원자를 보유하는 리간드에 킬레이팅하는 것을 선호한다는 점에서 매우 유사한 화학적 특성을 갖는다.

설명 B (스페이서):

B는 C의 N-말단에 연결되는 스페이서, 또는 공유결합이다.

본 발명의 바람직한 실시태양에서, B는 하기 화학식 II의 화합물이다:

<화학식 II>

식에서, B₁은 공유결합, 천연 아미노산, 비천연 아미노산, 선형 디아민 또는 시클릭 디아민이고,

B₂는 공유결합, 천연 아미노산, 비천연 아미노산, 선형 카르복실산 또는 시클릭 카르복실산이고,

단 B₁ 및 B₂ 둘 모두가 동시에 공유결합일 수는 없고, B₁이 디아민일 때, B₂는 카르복실산이다 (즉, B₂는 상기 경우에 결합 또는 천연 또는 비천연 아미노산일 수 없다).

바람직하게는, 비천연 아미노산은 하기 화학식 III, IV, V 및 VI 중 임의의 하나로 표시되는 화합물이다:

<화학식 III>

식에서, a는 0 내지 3의 정수이고,

b는 0 내지 3의 정수이고,

상대적인 치환 패턴은 임의로 1,2-, 1,3- 또는 1,4-이다.

바람직하게는, a는 0 또는 1이고,

b는 0 또는 1이다.

<화학식 IV>

식에서, c는 1 내지 24의 정수이고,

d는 1 내지 6의 정수이다.

바람직하게는 c는 1 내지 15의 정수이고, 보다 바람직하게는 c는 1 내지 8이고,

d는 1 내지 3의 정수이고, 보다 바람직하게는 d는 1이다.

<화학식 V>

식에서, E'는 NH, 또는 CH₂이고,

f는 0 내지 6의 정수이고,

g는 0 내지 6의 정수이고;

E'가 CH₂일 때, 6원 고리는 고리의 동일한 탄소 상의 또는 상이한 탄소 상의 6원 고리의 임의의 탄소 위치에서 임의로 치환되고,

E'가 NH일 때, 6원 고리는 고리의 동일한 탄소 원자 상의 또는 상이한 탄소 원자 상의 6원 고리의 임의의 탄소 위치에서 및/또는 질소 원자 상에서 임의로 치환되고, 단 f 또는 g는 1 또는 그보다 큰 정수이다.

바람직하게는, E'는 NH이고,

f는 0 내지 3의 정수이고,

g는 0 내지 3의 정수이다.

<화학식 VI>

식에서, i는 1 내지 6의 정수이고,

j는 1 내지 6의 정수이고,

P는 O 또는 H₂이다.

바람직하게는, i는 1 내지 3의 정수이고,

j는 1 내지 3의 정수이고,

P는 O이다.

보다 바람직하게는, 스페이서는 4-아미노-1-카르복시메틸피페리딘, (R,S)-디아미노아세트산, PEG₁ _-24, Sar₅ _-10, 8-아미노옥탄산, 6-아미노카프로산, 4-(2-아미노에틸)-1-카르복시메틸 피페라진, 디아미노부티르산, 히푸르산, 4-아미노-1-Boc-피페리딘-4-카르복실산, Gly-아미노벤조산, 5-아미노-3-옥사-펜틸-숙시남산, Peg_1-24-4-아미노-1-카르복시메틸 피페리딘, Dab(쉬킴산), (D-Gln)x, (D-Asn)x를 포함하는 군 중에서 선택된다.

설명 C (서열의 봄베신 유사체 펩티드 길항제)

본 발명의 바람직한 실시태양에서, 봄베신 유사체 펩티드 길항제 서열은 C-1 내지 C-3, 바람직하게는 C-1 내지 C-2를 포함하는 군 중에서 선택된다.

바람직하게는, 봄베신 유사체 펩티드 길항제 서열은 다음을 포함하는 군 중에서 선택된다:

바람직하게는, 적어도 하나의 방사성 핵종 금속을 포함하는 화학식 I로 표시되는 봄베신 유사체 펩티드 길항제 접합체는 다음을 포함하는 군 중에서 선택된다:

화합물 1: DOTA-Gly-아미노벤조일-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Sta-Leu-NH₂;

화합물 2: DOTA-4-아미노-1-카르복시메틸-피페리딘-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Sta-Leu-NH₂;

화합물 3: DOTA-4-아미노-1-피페리딘-4-카르복실산-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Sta-Leu-NH₂;

화합물 4: DOTA-15-아미노-4,7,10,13-테트라옥사펜타데칸산-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Sta-Leu-NH₂;

화합물 5: DOTA-(15-아미노-4,7,10,13-테트라옥사펜타데칸산)-(4-아미노-1-카르복시메틸-피페리딘)-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Sta-Leu-NH₂;

화합물 6: DOTA-디아미노부티르산-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Sta-Leu-NH₂;

화합물 7: DOTA-4-(2-아미노에틸)-1-카르복시메틸-피페라진-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Sta-Leu-NH₂;

화합물 8: DOTA-(5-아미노-3-옥사-펜틸)-숙시남산-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Sta-Leu-NH₂;

화합물 9: DOTA-4-아미노-1-카르복시메틸-피페리딘-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leuψ(CHOH-CH₂)-(CH₂)₂-CH₃;

화합물 10: DOTA-(15-아미노-4,7,10,13-테트라옥사펜타데칸산-4-아미노-1-카르복시메틸-피페리딘-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leuψ(CHOH-CH₂)-(CH₂)₂-CH₃;

화합물 11: DOTA-15-아미노-4,7,10,13-테트라옥사펜타데칸산-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leuψ(CHOH-CH₂)-(CH₂)₂-CH₃;

화합물 12: DOTA-4-아미노-1-카르복시메틸-피페리딘-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leuψ(CH₂NH)-Phe-NH₂;

화합물 13: DOTA-4-아미노-1-카르복시메틸-피페리딘-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leuψ(CH₂NH)-Cys-NH₂;

화합물 14: N₄-트리아졸-dPEG₁-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Sta-Leu-NH₂.

다른 바람직한 실시태양:

본 발명의 바람직한 실시태양에서, 화학식 I로 표시되는 화합물에 대해, x는 1 내지 2의 정수이고, 바람직하게는 x는 1이다.

x가 2 이상일 때, (B)_n은 봄베신 유사체 펩티드 길항제 (C)의 N-말단에 연결된 선형 스페이서 또는 분지형 스페이서이다.

본 발명의 바람직한 실시태양에서, 화학식 I로 표시되는 화합물에 대해, n은 1 내지 4의 정수이고, 바람직하게는 n은 1 또는 3, 보다 바람직하게는 1이다.

본 발명의 바람직한 실시태양에서, 화학식 I로 표시되는 화합물에 대해, A는 추가로 상기 나열된 방사성 핵종 금속에 상응하거나 동등한 적어도 하나의 금속 원자를 포함하는 금속 킬레이터이다. 그러한 화합물은 시험관내 생체내 결합 분석을 위해 및 참조 화합물로서 유용하다. 상기 나열된 바람직한 실시태양이 여기에 적용된다.

본 발명의 바람직한 실시태양에서, 화학식 I로 표시되는 화합물에 대해, K는 추가로 H이거나, 바람직하게는 H이다.

제2 측면에서, 본 발명은 다음 2가지 시스템에서 작용제-유도된 효과를 길항하면서 세포 내로의 내재화를 촉발시키지 않고 칼슘 이동을 통한 신호전달을 수행하지 않으면서 봄베신 수용체에 선택적으로 결합하고, 보다 특히 GRP 수용체에 결합하는 봄베신 유사체 펩티드 길항제 접합체 전구체에 관한 것이고, 여기서 봄베신 유사체 펩티드 길항제 접합체는 하기 화학식 I'로 표시된다:

<화학식 I'>

식에서, x는 1 내지 3의 정수이고,

n은 1 내지 6의 정수이고,

A'는 금속 킬레이터이고,

B는 C의 N-말단에 연결된 스페이서 또는 공유결합이고,

C는 서열 C-1 내지 C-4의 봄베신 유사체 펩티드 길항제이다.

금속 킬레이터 A'는 A에 대한 제1 측면에서 규정된 것과 같은 방사성 핵종 금속이 없는 금속 킬레이터이다.

스페이서 B 및 봄베신 유사체 펩티드 길항제 C는 상기 제1 측면에서와 같이 규정된다.

본 발명은 추가로 상기 봄베신 유사체 펩티드 길항제 접합체의 무기산 또는 유기산의 제약상 허용되는 염, 및 화학식 I'로 표시되는 이들 화합물의 수화물, 착물, 에스테르, 아미드, 용매화물 및 전구약물에 관한 것이다.

본 발명의 바람직한 실시태양에서, x는 1 내지 2의 정수이고, 바람직하게는 x는 1이다. x가 2 이상일 때, (B)_n은 봄베신 유사체 펩티드 길항제 (C)의 N-말단에 연결된 선형 스페이서 또는 분지형 스페이서이다.

본 발명의 바람직한 실시태양에서, 화학식 I'에서, n은 1 내지 4의 정수이고, 바람직하게는 n은 1 또는 3이고, 보다 바람직하게는 1이다.

제3 측면에서, 본 발명은 화학식 I 또는 I'로 표시되는 봄베신 유사체 펩티드 길항제 접합체 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물에 관한 것이다.

제4 측면에서, 본 발명은 봄베신 수용체 및 보다 특히 가스트린 방출 펩티드 수용체 (GRP)에 결합하기 위한 및/또는 봄베신 수용체 및 보다 특히 가스트린 방출 펩티드 수용체 (GRP)를 억제하기 위한 화학식 I 또는 I'로 표시되는 봄베신 유사체 펩티드 길항제 접합체의 용도에 관한 것이다.

제5 측면에서, 본 발명은 위에서와 같이 규정된 화학식 I'로 표시되는 봄베신 유사체 펩티드 길항제 접합체를 상기 나열된 방사성 핵종 금속에 상응하는 적합한 방사성 핵종 금속 또는 금속 원자로 방사성 킬레이팅하는 단계를 포함하는, 하기 화학식 I로 표시되는 봄베신 유사체 펩티드 길항제 접합체의 제조 방법에 관한 것이다:

<화학식 I>

식에서, n, x, A, B 및 C는 위에서와 같이 규정된다.

바람직하게는, 화학식 I로 표시되는 봄베신 유사체 펩티드 길항제 접합체의 제조 방법은 적합한 방사성 핵종 금속으로 방사성 킬레이팅하는 단계를 포함한다.

추가의 실시태양에서, 하기 화학식 I로 표시되는 봄베신 유사체 펩티드 길항제 접합체의 제조 방법은

a) 스페이서 B를 봄베신 유사체 펩티드 길항제 C에 커플링시켜, 스페이서-서열 C-1 내지 C-4의 봄베신 유사체 펩티드 길항제를 얻고, 임의로 단계 a)를 반복하고;

b) 스페이서-봄베신 유사체 펩티드 길항제를 금속 킬레이터 A'와 커플링시켜, 화학식 I'로 표시되는 봄베신 유사체 펩티드 길항제 접합체를 얻고, 임의로 단계 b)를 반복하는 단계를 추가로 포함하고,

상기 단계는 화학식 I'로 표시되는 봄베신 유사체 펩티드 길항제 접합체를 적합한 방사성 핵종 금속, 또는 상기 나열된 방사성 핵종 금속에 상응하거나 동등한 금속 원자로 방사성 킬레이팅하기 전에 일어난다:

<화학식 I>

식에서, n, x, A, A', B 및 C는 위에서와 같이 규정된다

본 발명의 바람직한 실시태양에서, n, x, 금속 킬레이터 A, 금속 킬레이터 A' 스페이서 B 및 봄베신 유사체 펩티드 길항제 C는 위에서와 같이 규정된다.

제6 측면에서, 본 발명은

- 환자에게 방사성 약품상 유효량의 화학식 I로 표시되는 봄베신 유사체 펩티드 길항제 접합체를 투여하고;

- 환자에서 방사성 핵종 금속을 조영하는 단계

를 포함하는, 환자에서 봄베신 수용체 및 보다 특히 GRP 수용체 발현 종양 세포 및/또는 종양성 및 종양 주위성 혈관의 조영 방법에 관한 것이다.

제6 측면의 바람직한 실시태양은 봄베신 수용체 및 보다 특히 GRP 수용체 발현 종양 세포 및/또는 종양성 및 종양 주위성 혈관을 조영하기 위한 조영제의 제조를 위한, 방사성 약품상 유효량의 화학식 I로 표시되는 봄베신 유사체 펩티드 길항제 접합체의 용도에 관한 것이다.

바람직한 실시태양에서, 종양 세포는 다음을 포함하는 군 중에서 선택되는 암을 나타낸다:

- 전이를 포함한 전립선암,

- 전이를 포함한 유방암,

- 위장관 간질성 종양,

- 소세포 폐 암종,

- 신세포 암종,

- 위장관췌장 신경내분비 종양,

- 두경부 편평세포암,

- 신경모세포종, 및

- 식도 편평세포 암종.

훨씬 더 바람직하게는, 종양 세포는 다음 중에서 선택되는 암을 나타낸다:

- 전이를 포함한 전립선암, 및

- 전이를 포함한 유방암.

추가의 바람직한 실시태양에서, 종양성 및 종양 주위성 혈관은 다음 중에서 선택되는 암을 나타낸다:

- 난소암,

- 자궁내막암, 및

- 췌장암.

바람직하게는, 종양성 및 종양 주위성 혈관은 난소암을 나타낸다.

제7 측면에서, 본 발명은 치료상 유효량의 화학식 I로 표시되는 봄베신 유사체 펩티드 길항제 접합체를 투여하는 단계를 포함하는, 종양 세포 및/또는 종양성 및 종양 주위성 혈관 관련 질병을 치료 또는 예방하는 방법에 관한 것이다.

제7 측면의 바람직한 실시태양은 종양 세포 및/또는 종양성 및 종양 주위성 혈관 관련 질병의 치료 또는 예방용 의약의 제조를 위한, 치료상 유효량의 화학식 I로 표시되는 봄베신 유사체 펩티드 길항제 접합체의 용도에 관한 것이다.

바람직한 실시태양에서, 종양 세포 관련 질병은 다음을 포함하는 군 중에서 선택되는 암을 나타낸다:

- 전이를 포함한 전립선암,

- 전이를 포함한 유방암,

- 위장관 간질성 종양,

- 소세포 폐 암종,

- 신세포 암종,

- 위장관췌장 신경내분비 종양,

- 두경부 편평세포암,

- 신경모세포종, 및

- 식도 편평세포 암종.

훨씬 더 바람직하게는, 종양 세포 관련 질병은 다음을 포함하는 군 중에서 선택되는 암을 나타낸다:

- 전이를 포함한 전립선암, 및

- 전이를 포함한 유방암.

추가의 바람직한 실시태양에서, 종양성 및 종양 주위성 혈관 관련 질병은 다음을 포함하는 군 중에서 선택되는 암을 나타낸다:

- 난소암,

- 자궁내막암, 및

- 췌장암.

바람직하게는, 종양성 및 종양 주위성 혈관 관련 질병은 난소암을 나타낸다.

제8 측면에서, 본 발명은 화학식 I로 표시되는 방사선 치료제 또는 방사성 약품 조영제의 제조를 위한 키트에 관한 것이고, 상기 키트는 소정량의 화학식 I'의 봄베신 유사체 펩티드 길항제 접합체 및 금속 킬레이터를 방사성 표지하기 위한 허용되는 담체, 희석제, 부형제 또는 보조제를 함유하는 바이알을 포함한다.

제9 측면에서, 본 발명은 하기 서열 C-1 내지 C-4의 봄베신 유사체 펩티드 길항제에 관한 것이다:

K는 F, Cl, I, 또는 NO₂이고,

X_aa2는 Gly 또는 β-Ala이고,

X_aa3은 스타틴, 스타틴 유사체 및 이성질체, 4-Am,5-MeHpA, 4-Am,5-MeHxA 또는 α-치환된 아미노산이고,

Z는 NH 또는 O이고;

식에서, Leuψ(CHOH-CH₂)-(CH₂)₂-CH₃은

이고,

K는 F, Cl, I, 또는 NO₂이고,

X_aa2는 Gly 또는 β-Ala이고;

K는 F, Cl, I, 또는 NO₂이고,

X_aa2는 Gly 또는 β-Ala이고,

X_aa5는 Leuψ-CH₂NH-이고,

X_aa6은 Cys, Phe, Trp, Tpi 또는 Tac이고,

여기서, Tpi 및 Tac는 다음 구조를 갖고,

Z는 NH 또는 O이고;

K는 F, Cl, I, 또는 NO₂이고,

X_aa2는 Gly 또는 β-Ala이고,

X_aa7은 Leu-O-알킬, 또는 Leu-NH-알킬이다.

<정의>

이하에서 본 발명의 설명 및 특허청구범위에서 사용될 때, 용어 "알킬"은 단독으로 또는 다른 기의 일부로서 1 내지 20개의 탄소 원자를 갖는 직쇄 또는 분지쇄 알킬기, 예를 들어, 메틸, 에틸, 프로필, 이소-프로필, 부틸, 이소-부틸, t-부틸, 펜틸, 이소-펜틸, n-펜틸, 헵틸, 헥실, 데실을 나타낸다. 알킬기는 또한 예를 들어 할로겐 원자, 히드록실기, C₁-C₄-알콕시기 또는 C₆-C₁₂-아릴기에 의해 치환될 수 있다. 보다 바람직하게는, 알킬은 C₁-C₁₀-알킬, C₁-C₆-알킬 또는 C₁-C₄-알킬이다.

이하에서 본 발명의 설명 및 특허청구범위에서 사용될 때, 용어 "저급 비-분지형 또는 분지형 알킬(렌)"은 다음 의미를 가질 것이다: 불포화를 함유하지 않고 1 내지 8개의 탄소 원자를 갖는, 탄소 및 수소로 이루어지는 치환된 또는 비치환된 직쇄 또는 분지쇄 1가, 2가 또는 3가 라디칼, 예를 들어 비제한적으로 메틸, 에틸, n-프로필, n-펜틸, 1,1-디메틸에틸 (t-부틸), n-헵틸 등. 상기 모이어티는 비치환되거나, 예를 들어 할로겐 원자, 히드록실 원자, C₁-C₄-알콕시기 또는 C₆-C₁₂-아릴기에 의해 치환될 수 있다.

이하에서 본 발명의 설명 및 특허청구범위에서 사용될 때, 용어 "페닐렌"기는 이치환된, 또는 임의로 삼치환된 벤젠 고리에 기반한다. 예를 들어, 폴리(p-페닐렌)은 파라-페닐렌 반복 단위로부터 생성된 중합체이다. 페닐렌은 치환되거나 비치환될 수 있다. 페닐렌은 할로겐, OH, 알콕시, 바람직하게는 C₁-C₄-알콕시, 카르복시, 에스테르, 바람직하게는 C₁-C₄-에스테르, 아미드, 니트로로 치환될 수 있다.

이하에서 본 발명의 설명 및 특허청구범위에서 사용될 때, 용어 "알켄"은 다음 의미를 가질 것이다: 적어도 하나의 탄소-대-탄소 이중결합을 함유하는 불포화 지방족 또는 지환족 화학적 화합물. 단지 하나의 이중결합을 갖고 다른 관능기가 없는 가장 간단한 비시클릭 알켄은 상동성 시리즈의 일반식 C_nH_2n을 갖는 탄화수소, 예를 들어, 에틸렌 (C₂H₄), 프로필렌 (C₃H₆)을 형성한다. 알켄은 치환되거나 비치환될 수 있다. 알켄은 치환되면 할로겐 원자, 히드록실기, C₁-C₄-알콕시, C₆-C₁₂-아릴기 등에 의해 치환될 수 있다.

이하에서 본 발명의 설명 및 특허청구범위에서 사용될 때, 용어 "아릴"은 불포화 고리 시스템, 바람직하게는 방향족 고리 시스템, 보다 바람직하게는 고리 골격 내에 6 내지 12개의 탄소 원자를 갖는 것을 의미할 것이다. 그의 예는 페닐 및 나프탈레닐이다. 아릴 모이어티는 비치환되거나, 예를 들어 할로겐 원자, 히드록실기, C₁-C₄-알콕시, C₆-C₁₂-아릴기에 의해 치환될 수 있다.

이하에서 본 발명의 설명 및 특허청구범위에서 사용될 때, 용어 "벤젠"은 다음 의미를 가질 것이다: 화학식 C₆H₆을 갖는 유기 화학 화합물. 벤젠은 방향족 탄화수소이고, 제2 [n]-아눌렌 ([6]-아눌렌) (연속적인 파이 결합을 갖는 시클릭 탄화수소)이다. 벤젠은 비치환되거나, 예를 들어 할로겐 원자, 히드록실기, C₁-C₄-알콕시기 또는 C₆-C₁₂-아릴기에 의해 치환될 수 있다.

이하에서 본 발명의 설명 및 특허청구범위에서 사용될 때, 용어 "알케닐" 및 "알키닐"은 알킬에 대해서와 유사하게 규정되지만, 각각 적어도 하나의 탄소-탄소 이중 또는 삼중 결합을 함유한다. 알케닐은 보다 바람직하게는 C₂-C₆-알케닐일 수 있고, 알키닐은 보다 바람직하게는 C₂-C₆-알키닐일 수 있다.

이하에서 본 발명의 설명 및 특허청구범위에서 사용될 때, 용어 "할로겐"은 F, Cl, Br 또는 I를 의미할 것이다.

이하에서 본 발명의 설명 및 특허청구범위에서 사용될 때, 용어 "무기산 또는 유기산의 염", "무기산" 및 "유기산"은 광물산, 예를 들어 비제한적으로 탄산, 질산, 인산, 염산, 과염소산 또는 황산과 같은 산 또는 그의 산염, 예를 들어 칼륨, 나트륨, 칼슘, 마그네슘염, 예를 들어 황산수소칼륨, 또는 적절한 유기산, 예를 들어 비제한적으로 지방족산, 지환족산, 방향족산, 방향지방족산, 헤테로시클릭산, 카르복실산 및 술폰산과 같은 산, 예를 들어 각각 포름산, 아세트산, 트리플루오르아세트산, 프로피온산, 숙신산, 글리콜산, 글루콘산, 락트산, 말산, 푸마르산, 피루브산, 벤조산, 안트라닐산, 메실산, 푸마르산, 살리실산, 페닐아세트산, 만델산, 엠본산, 메탄술폰산, 에탄술폰산, 벤젠술폰산, 판토텐산, 톨루엔술폰산, 트리플루오르메탄술폰산 및 술파닐산을 나타낸다. 마찬가지로, 유기산은 또한 그의 염, 예를 들어 칼륨, 나트륨, 칼슘, 마그네슘염으로서 존재할 수 있다.

이하에서 본 발명의 설명 및 특허청구범위에서 사용될 때, 용어 "제약상 허용되는 염"은 무기산 및 유기산, 예를 들어 광물산, 예를 들어 비제한적으로 탄산, 질산 또는 황산과 같은 산, 또는 유기산, 예를 들어 비제한적으로 지방족산, 지환족산, 방향족산, 방향지방족산, 헤테로시클릭산, 카르복실산 및 술폰산과 같은 산, 예를 들어 포름산, 아세트산, 트리플루오르아세트산, 프로피온산, 숙신산, 글리콜산, 글루콘산, 락트산, 말산, 푸마르산, 피루브산, 벤조산, 안트라닐산, 메실산, 살리실산, 페닐아세트산, 만델산, 엠본산, 메탄술폰산, 에탄술폰산, 벤젠술폰산, 판토텐산, 톨루엔술폰산 및 술파닐산의 염을 나타낸다.

이하에서 본 발명의 설명 및 특허청구범위에서 사용될 때, 용어 "전구약물"은 화학식 I에 따른 활성 모 약품을 방출하는 임의의 공유 결합된 화합물을 의미한다.

용어 "전구약물"은 본원 전체에서 사용될 때 또한 유도체의 생성되는 생체내 변환 생성물이 화학식 I로 규정된 활성 약물이 되도록 하는 약물학상 허용되는 유도체, 예를 들어 에스테르, 아미드 및 포스페이트를 포함한다. 그 개시내용을 본원에 참고로 포함시킨 문헌 [Goodman and Gilman (The Pharmacological Basis of Therapeutics, 8ed, McGraw-Hill, Int. Ed. 1992," Biotransformation of Drugs", 13-15)에서는 전구약물을 설명하고 있다. 본 발명의 화합물의 전구약물은 변형이 일상적인 조작으로 또는 생체 내에서 절단되어 모 화합물이 되는 방식으로 화합물 내에 존재하는 관능기를 변형시킴으로써 제조된다. 본 발명의 화합물의 전구약물은 예를 들어 히드록시기, 예를 들어 비대칭 탄소 원자 상의 히드록시기, 또는 아미노기가 전구약물이 환자에게 투여될 때 절단되어 각각 유리 히드록실 또는 유리 아미노를 형성하는 임의의 기에 결합된 화합물을 포함한다.

전구약물의 대표적인 예는 예를 들어, 그 개시내용 전부가 본원에 참고로 포함된 WO 99/33795 A, WO 99/33815 A, WO 99/33793 A 및 WO 99/33792 A에 기재되어 있다.

전구약물은 뛰어난 수용해도, 증가된 생체이용률을 특징으로 하고, 생체 내에서 활성 억제제로 쉽게 대사된다.

이하에서 본 발명의 설명 및 특허청구범위에서 사용될 때, 용어 "아미노산 서열" 및 "펩티드"는 본원에서 적어도 2개의 아미노산의 (중)축합에 의해 수득가능한 폴리아미드로서 규정된다.

이하에서 본 발명의 설명 및 특허청구범위에서 사용될 때, 용어 "아미노산"은 적어도 하나의 아미노기 및 적어도 하나의 카르복실기를 포함하지만, 분자 내에 펩티드 결합을 갖지 않는 임의의 분자를 의미한다. 즉, 아미노산은 카르복실산 관능기 및 바람직하게는 그에 대해 알파 위치에 적어도 하나의 유리 수소를 갖는 아민 질소를 갖지만, 분자 구조 내에 아미드 결합을 갖지 않는 분자이다. 따라서, N-말단에서 유리 아미노기 및 C-말단에서 유리 카르복실기를 갖는 디펩티드는 상기 정의 내에서 단일 "아미노산"으로 간주되지 않아야 한다. 그러한 축합으로부터 얻어지는 2개의 인접한 아미노산 잔기 사이의 아미드 결합은 "펩티드 결합"으로서 규정된다.

본원에서 사용될 때 아미드 결합은 다음 구조를 갖는 임의의 공유결합을 의미한다:

여기서, 카르보닐기는 하나의 분자에 의해 제공되고, NH- 기는 연결되는 다른 분자에 의해 제공된다. 그러한 중축합으로부터 얻어지는 2개의 인접한 아미노산 잔기 사이의 아미드 결합은 "펩티드 결합"으로서 규정된다. 임의로, 폴리아미드 백본의 질소 원자 (상기 NH로서 지시된)는 독립적으로, 예를 들어 -C₁-C₆-알킬, 바람직하게는 -CH₃으로 알킬화될 수 있다.

이하에서 본 발명의 설명 및 특허청구범위에서 사용될 때, 아미노산 잔기는 다른 아미노산과의 펩티드 결합을 형성함으로써 상응하는 아미노산으로부터 유도된다.

이하에서 본 발명의 설명 및 특허청구범위에서 사용될 때, 아미노산은 자연 발생의 또는 비천연 아미노산이고, 여기서 비천연 아미노산은 합성/인공 아미노산 잔기, 단백질 구성 (proteinogenic) 및/또는 비-단백질 구성 아미노산 잔기이다. 비-단백질 구성 아미노산 잔기는 (a) 단백질 구성 아미노산의 호모 (homo) 유사체, (b) 단백질 구성 아미노산 잔기의 β-호모 유사체, 및 (c) 추가로 비-단백질 구성 아미노산 잔기로서 추가로 분류될 수 있다.

따라서, 아미노산 잔기는 상응하는 아미노산, 예를 들어, 다음으로부터 유도된다:

단백질 구성 아미노산, 즉 Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr 및 Val; 또는

비-단백질 구성 아미노산, 예를 들어 단백질 구성 아미노산의 호모 유사체 (여기서, 측쇄는 메틸렌기에 의해 연장되었다), 예를 들어, 호모알라닌 (Hal), 호모아르기닌 (Har), 호모시스테인 (Hcy), 호모글루타민 (Hgl), 호모히스티딘 (Hhi), 호모이소류신 (Hil), 호모류신 (Hle), 호모라이신 (Hly), 호모메티오닌 (Hme), 호모페닐알라닌 (Hph), 호모프롤린 (Hpr), 호모세린 (Hse), 호모트레오닌 (Hth), 호모트립토판 (Htr), 호모타이로신 (Hty) 및 호모발린 (Hva);

단백질 구성 아미노산의 β-호모유사체 (여기서, 메틸렌기가 α-탄소 및 카르복실기 사이에 삽입되어 β-아미노산을 생성시켰다), 예를 들어, β-호모알라닌 (βHal), β-호모아르기닌 (βHar), β-호모아스파라긴 (βHas), β-호모시스테인 (βHcy), β-호모글루타민 (βHgl), β-호모히스티딘 (βHhi), β-호모이소류신 (βHil), β-호모류신 (βHle), β-호모라이신 (βHly), β-호모메티오닌 (βHme), β-호모페닐알라닌 (βHph), β-호모프롤린 (βHpr), β-호모세린 (βHse), β-호모트레오닌 (βHth), β-호모트립토판 (βHtr), β-호모타이로신 (βHty) 및 β-호모발린 (βHva);

추가의 비-단백질 구성 아미노산, 예를 들어, α-아미노아디프산 (Aad), β-아미노아디프산 (βAad), α-아미노부티르산 (Abu), α-아미노이소부티르산 (Aib), β 알라닌 (βAla), 4-아미노부티르산 (4-Abu), 5-아미노발레르산 (5-Ava), 6-아미노헥산산 (6-Ahx), 8-아미노옥탄산 (8-Aoc), 9-아미노노난산 (9-Anc), 10-아미노데칸산 (10-Adc), 12-아미노도데칸산 (12-Ado), α-아미노수베르산 (Asu), 아제티딘-2-카르복실산 (Aze), β-시클로헥실알라닌 (Cha), 시트룰린 (Cit), 데히드로알라닌 (Dha), γ-카르복시글루탐산 (Gla), α-시클로헥실글라이신 (Chg), 프로파르길글라이신 (Pra), 파이로글루탐산 (Glp), α-t-부틸글라이신 (Tle), 4-벤조일페닐알라닌 (Bpa), δ-히드록시라이신 (Hyl), 4-히드록시프롤린 (Hyp), 알로-이소류신 (aIle), 란티오닌 (Lan), (1-나프틸)알라닌 (1-Nal), (2-나프틸)알라닌 (2-Nal), 노르류신 (Nle), 노르발린 (Nva), 오르니틴 (Orn), 페닐글라이신 (Phg), 피페콜산 (Pip), 사르코신 (Sar), 셀레노시스테인 (Sec), 스타틴 (Sta), β-티에닐알라닌 (Thi), 1,2,3,4-테트라히드로이소키놀린-3-카르복실산 (Tic), 알로-트레오닌 (aThr), 티아졸리딘-4-카르복실산 (Thz), γ-아미노부티르산 (GABA), 이소-시스테인 (이소-Cys), 디아미노프로피온산 (Dpr), 2,4-디아미노부티르산 (Dab), 3,4-디아미노부티르산 (γβDab), 비페닐알라닌 (Bip), 파라-위치에서 -C₁-C₆-알킬, -할라이드, -NH₂, -CO₂H 또는 Phe(4-R) (여기서, R = -C₁-C₆-알킬, -할라이드, -NH₂, 또는 -CO₂H)로 치환된 페닐알라닌; 펩티드 핵산 (PNA, [P.E. Nielsen, Acc. Chem. Res., 32, 624-30] 참조); 또는 그들의 N-알킬화 유사체, 예를 들어 그들의 N-메틸화 유사체.

시클릭 아미노산은 단백질 구성 또는 비-단백질 구성, 예를 들어 Pro, Aze, Glp, Hyp, Pip, Tic 및 Thz일 수 있다.

추가의 예 및 상세한 내용에 대해서는 예를 들어, 그 개시내용 전부가 본원에 참고로 포함된 문헌 [J.H. Jones, J. Peptide Sci., 2003, 9, 1-8]을 참조할 수 있다.

이하에서 본 발명의 설명 및 특허청구범위에서 사용될 때, 용어 "비-단백질 구성 아미노산" 및 "비-단백질 구성 아미노산 잔기"는 또한 단백질 구성 아미노산의 유도체를 포함한다. 예를 들어, 단백질 구성 아미노산 잔기의 측쇄는 유도체화되어, 단백질 구성 아미노산 잔기를 "비-단백질 구성"으로 만들 수 있다. 동일한 내용이 아미노산 서열로 끝나는 단백질 구성 아미노산 잔기의 C-말단 및/또는 N-말단의 유도체에 적용된다.

이하에서 본 발명의 설명 및 특허청구범위에서 사용될 때, 단백질 구성 아미노산 잔기는 L- 또는 D-입체형상의 Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr 및 Val으로 이루어지는 군 중에서 선택되는 단백질 구성 아미노산으로부터 유도되고; Thr 및 Ile 내의 제2 키랄 (chiral) 중심은 R- 또는 S-입체형상을 가질 수 있다. 따라서, 예를 들어, 아미노산 서열의 임의의 번역후 변형, 예를 들어 N-알킬화 (이는 자연적으로 발생할 수도 있다)는 상응하는 변형된 아미노산 잔기를 "비-단백질 구성"으로 만들지만, 자연에서는 상기 아미노산 잔기는 단백질 내에 포함된다. 바람직하게는, 변형된 아미노산은 N-알킬화 아미노산, β-아미노산, γ-아미노산, 란티오닌, 데히드로 아미노산, 및 알킬화 구아니딘 모이어티를 갖는 아미노산 중에서 선택된다.

이하에서 본 발명의 설명 및 특허청구범위에서 사용될 때, 용어 "카르복실산" 또는 "디카르복실산"은 각각 하나의 COOH 모이어티 또는 2개의 COOH 모이어티를 갖는 유기 화합물, 예를 들어 각각 포름산, 아세트산, 프로피온산, 부티르산, 시클로헥산 카르복실산, 벤조산, 살리실산, 락트산 (카르복실산), 또는 옥살산, 말론산, 숙신산, 아디프산, 푸마르산, 말레산, 말산, 프탈산 (디카르복실산)을 의미한다.

이하에서 본 발명의 설명 및 특허청구범위에서 사용될 때, 용어 "디아민"은 2개의 NR'R" 모이어티 (여기서, R' 및 R"는 서로 독립적으로 알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴일 수 있다)를 갖는 유기 화합물을 의미한다. 디아민은 예를 들어 에틸렌디아민, 1,4-시클로헥산 디아민, 피페라진일 수 있다.

위에서 아미노산, 카르복실산, 디카르복실산 또는 디아민이 언급되지만, 이는 또한 구체적으로 각각 그러한 아미노산, 카르복실산, 디카르복실산 또는 디아민이 본 발명의 화합물 내에 포함될 때 얻어진 각각의 라디칼, 즉, 예를 들어 -HN-...-CO- (아미노산), -OC-... (카르복실산), -OC-...-CO- (디카르복실산), -HN-...-NH- (디아민)을 포함한다.

이하에서 본 발명의 설명 및 특허청구범위에서 사용될 때, 용어 "금속 킬레이터"는 방사성 핵종 금속을 착화시켜, 생리학적 조건 하에 안정하고 또한 스페이서를 통해 표적화기와 접합될 수 있는 금속 착물을 형성하는 분자로서 규정된다. 금속 킬레이터는 금속 방사성 핵종과 착화되거나 착화되지 않는다.

이하에서 본 발명의 설명 및 특허청구범위에서 사용될 때; 단어 "방사성 핵종 금속"은 불안정한 핵 (여기서, 핵은 이용가능한 과잉의 에너지가 핵 내의 새로 형성된 방사선 입자에, 또는 달리 원자의 전자 (내부 전환 참조)에 부여되는 것을 특징으로 한다)을 갖는 원자인 방사성 핵종으로서 규정된다. 본원에서 사용되는 방사성 핵종 금속은 진단 또는 치료 용도, 보다 바람직하게는 조영 또는 방사선 요법을 위해 특히 적합하다. 상기 과정에서 방사성 핵종은 방사성 붕괴를 겪고, (a) 감마선(들) 및/또는 아원자 (subatomic) 입자를 방출한다. 이들 입자는 이온화 방사선을 구성한다. 방사성 핵종은 자연적으로 발생할 수 있지만, 또한 인공으로 생산될 수 있다.

이들 방사성 핵종 금속은 갈륨 (예를 들어, ⁶⁷Ga, ⁶⁸Ga), 구리 (예를 들어, ⁶⁷Cu 및 ⁶⁴Cu); 테크네튬 (예를 들어, ⁹⁹ ^mTc 및 ⁹⁴ ^mTc); 레늄 (예를 들어, ¹⁸⁶Re 및 ¹⁸⁸Re); 납 (예를 들어, ²¹²Pb); 비스무쓰 (예를 들어, ²¹²Bi); 및 팔라듐 (예를 들어, ¹⁰⁹Pd)을 포함하고 이로 제한되지 않는다. 이들 동위원소의 제조 방법은 공지되어 있다. ⁹⁹ ^mTc를 생산하기 위한 몰리브덴/테크네튬 발생기는 상업적으로 이용가능하다. ¹⁸⁶Re을 생산하기 위한 절차는 문헌 ([Deutsch et al., Nucl. Med. Biol, Vol. 13:4:465-477, 1986] 및 [Vanderheyden et al. Inorganic Chemistry, Vol. 24:1666-1673, 1985])에 기재된 절차를 포함하고, ¹⁸⁸Re의 생산 방법은 문헌 ([Blachot et al., Intl. J. of Applied Radiation and Isotopes, Vol. 20:467-470, 1969)] 및 [Klofutar et al., J. of Radioanalytical Chem, Vol. 5:3-10, 1970])에 기재되어 있다. ²¹²Pd의 생산은 문헌 [Fawwaz et al., J. Nucl. Med, (1984), 25:796]에 기재되어 있다. ²¹²Pb 및 ²¹Bi의 생산은 문헌 ([Gansow et al., Amer. Chem. Soc. Symp, Ser. (1984), 241:215-217], 및 [Kozah et al., Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA, (January 1986), 83:474-478]에 기재되어 있다. ⁹⁹ ^mTc이 진단 용도를 위해 바람직하고, 상기 나열된 다른 방사성 핵종은 치료 용도를 갖는다.

이하에서 본 발명의 설명 및 특허청구범위에서 사용될 때, 용어 "스페이서"는 금속 킬레이터와 봄베신 펩티드 길항제 사이의 연결기로서 규정된다.

이하에서 본 발명의 설명 및 특허청구범위에서 사용될 때; 단어 "작용제"는 세포의 수용체 분자에서 특이적 부위에 결합하여, 세포 내의 신호 전달을 활성화시키는 물질 (리간드)을 의미한다. 이는 측정가능한 효과를 생성시킨다.

이하에서 본 발명의 설명 및 특허청구범위에서 사용될 때; 단어 "길항제"는 작용제 물질에 특이적인 수용체 세포의 부위에 결합하여, 효과를 발휘하지 않으면서 작용제에 대해 상기 부위를 차단시키는 물질 (리간드)을 의미한다. 따라서, 길항제는 작용제의 효과를 억제한다.

이하에서 본 발명의 설명 및 특허청구범위에서 사용될 때, 용어 "스타틴 유사체"는 다음의 일반 구조를 갖는 디-펩티드 모방체 (mimetic)로서 규정된다:

스타틴 R2 = OH, R1은 유의하게 변할 수 있지만 일반적으로 아미노산 측쇄와 동일하다.

스타틴 유사체 R2 = H, R1은 유의하게 변할 수 있지만 일반적으로 아미노산 측쇄와 동일하다.

약어:

NODASA = 1,4,7-트리아자시클로노난-1-숙신산-4,7-디아세트산

NODAGA = 1,4,7-트리아자시클로노난-N-글루타르산-N',N"-디아세트산

TRITA = 1,4,7,10 테트라아자시클로트리데칸-1,4,7,10 N,N',N",N'"-테트라아세트산

Cpa = (S)-4-카르복스아미도페닐알라닌

4-Am-5-MeHpA = 4-아미노-5-메틸헵탄산

4-Am-5-MeHxA = 4-아미노-5-메틸헥산산

DFO = N'-[5-(아세틸-히드록시-아미노)펜틸]-N-[5-[3-(5-아미노펜틸-히드록시-카르바모일)프로파노일아미노]펜틸]-N-히드록시-부탄디아미드

추가로 부연 설명하지 않으면서, 당업자는 상기한 설명을 이용하여 본 발명을 가장 충분한 정도로 활용할 수 있음이 이해된다. 따라서, 다음의 바람직한 특정 실시태양은 단지 예시적이고, 어떠한 방식으로도 본 개시문의 나머지를 제한하지 않는 것으로 해석되어야 한다.

도 1: 칼슘 방출 분석에 의해 결정된 봄베신 유사체의 용량-반응 곡선.
칼슘 방출 분석은 물질 및 방법에 기재된 바와 같이 수행하였다. PC3 세포를 봄베신으로 0.01 nmol/L 내지 10 μmol/L의 농도에서 (●) 단독으로, 또는 10 μmol/L의 봄베신 유사체 화합물 1 (▲), 또는 In-화합물 1 (◆)의 존재 하에, 또는 봄베신 유사체 화합물 1a (■)로 처리하였다. 화합물 1, 1 μmol/L 및 10 μmol/L에서 단독으로 처리된 화합물 1 (△), In-화합물 1 (×) 및 화합물 1a (□)는 PC3 세포에서 칼슘 방출에 대해 효과가 없다. 화합물 1a는 링커 및 킬레이트

가 없는 화합물 1의 결합 서열을 나타낸다. 화합물 1은 킬레이트

를 나타낸다. In-화합물 1은 In-킬레이팅된 킬레이트

를 나타낸다.
도 2: HEK-GRPR 세포 면역형광 현미경
마우스 모노클로날 HA-에피토프 항체 및 HEK-GRPR 세포를 사용하는 화합물 1, In-화합물 1, 화합물 1b 및 GRPR-ANTAG의 면역형광 현미경, (a) 펩티드 없음, (b) 10 nmol/L 봄베신, (c) 화합물 1b, (d) 화합물 1b + 10 nmol/L 봄베신, (d, f, h, j) 세포를 1 μmol/L의 유사체 화합물 1b, GRPR-ANTAG, 화합물 1, 및 In-화합물 1의 존재 하에 10 nmol/L 봄베신으로 처리함, (c, e, g, i) 세포를 화합물 1b, GRPR-ANTAG, 및 화합물 1로 처리함.
도 3a, 3b, 4a, 4b: Ga-68-DOTA 화합물 2의 PC-3 (3) 및 LNCaP (4)-종양 보유 마우스에서의 PET-조영. a) 10 MBq 방사성 추적자의 주사 1h 후, b) 100 ㎍ 봄베신으로 차단시킴.
도 6: PC-3-종양 보유 마우스에서 ⁹⁹ ^mTc-ARN4-06 (15 MBq/200 pmol)의 SPECT/CT 영상.
도 8: PC-3-종양 보유 마우스에서 ⁹⁹ ^mTc-ARN4-05 (15 MBq/200 pmol)의 SPECT/CT 영상.
도 9: 역상 컬럼 상에서 Ga-68-DOTA 화합물 2의 HPLC 분석.
도 10a, b, c, d, e: HPLC에 의해 분석한 마우스 혈장 및 소변 내에서 Ga-68-DOTA 화합물 2의 안정성 분석.
도 11: Lu-177-DOTA 화합물 2의 인간 혈청 안정성.
도 12: 종양/조직 Ga-68 RM2와 F18 FDG 및 F18 콜린의 비교.

본원에 인용되는 모든 특허 출원, 특허 및 공개의 전체 공개문(들)은 그 전부가 본원에 참고로 포함된다.

다음 실시예는 일반적으로 또는 구체적으로 설명된 본 발명의 반응물 및/또는 작업 조건을 선행 실시예에서 사용된 것 대신에 사용하여 유사하게 성공적으로 반복될 수 있다.

상기한 설명으로부터, 당업자는 본 발명의 필수 특징을 쉽게 확인할 수 있고, 그의 취지와 범위를 벗어나지 않으면서, 다양한 용도 및 조건에 맞도록 본 발명을 다양하게 변화 및 변형시킬 수 있다.

실시예

여기서, A는 A의 의미를 갖지만, 또한 아래 개시된 모든 예에 대해 적절한 경우에 A'의 의미를 갖는다.

실시예 1 (A-B-C)

a) 일반적 서열을 사용한 봄베신 펩티드 길항제 접합체의 합성.

(A = DOTA, B = 스페이서 B₁ - B₂, C = N-말단 아미드 Z를 갖는 펩티드 [Z = NH])

DOTA-스페이서-X_aa1 ⁶-Gln⁷-Trp⁸-Ala⁹-Val¹⁰-X_aa2 ¹¹-His¹²-Sta¹³-Leu¹⁴-NH₂

펩티드는 고체상 상에서 Fmoc-전략을 이용하여 수동으로 합성하였다. N-말단 아미드를 얻기 위해, Rink 아미드 MBHA 수지 LL (100-200 메시) (4-(2',4'-디메톡시페닐-Fmoc-아미노메틸)-페녹시아세트아미도-노르류실-4-메틸벤즈히드릴아민 수지)를 사용하였다. 일반적으로, 이론적인 로딩이 0.34 mmole/g 수지인 Rink 아미드 MBHA 수지를 반응기에 제공하였다. N,N-디메틸포름아미드 (DMF)를 반응기에 첨가하고, 30분 동안 진탕하여 수지를 팽윤시켰다. 용매를 제거한 후에, DMF 중 20％ 피페리딘의 용액을 첨가하고, 수지를 15분 동안 진탕시켜 9-플루오레닐메톡시카르보닐 (Fmoc) 보호기를 제거하였다. 상기 단계를 2회 반복하였다. 상기 절차 후에, 수지를 5 min 동안 DMF로 3회 세척하였다. 피페리딘 용액 및 마지막 세번째 세척의 DMF 용액을 모으고, 에탄올로 100 mL까지 채웠다. 상기 용액으로부터, 제거된 Fmoc-보호기의 양을 분광광도법에 의해 결정하기 위해 분취액을 취하였다.

Fmoc-아미노산 유도체를 커플링시키기 전에, 수지를 2 min 동안 DMF로 2회 세척하였다. 2 당량의 N,N-디이소프로필카르보디이미드 (DIC)/N-히드록시벤조트리아졸 (HOBt)로 예비활성화시킨 2 당량의 Fmoc-아미노산을 수지에 첨가하고, 약 4 당량의 N-에틸디이소프로필아민 (DIPEA)을 첨가함으로써 pH를 8-9의 값으로 조정하였다. 반응물을 부드럽게 진탕하면서 2h 동안 인큐베이팅하였다. 반응 후에, 용액을 제거하고, 고체상을 5 min 동안 DMF로 2회 세척하였다. 반응을 카이저-테스트 (Kaiser-test)에 의해 모니터링하였다. 특정량의 수지 비드를 에탄올로 3회 세척하고, 50 ㎕의 용액 1 (10 mL 에탄올 중 20 g 페놀을 49 mL 피리딘 중 0.01 M KCN의 용액 1 mL과 혼합하였다) 및 50 ㎕의 용액 2 (10 mL 에탄올 중 500 g 닌히드린)를 첨가하고, 비드를 10 min 동안 95℃에서 가열하였다. 청색 비드는 커플링되지 않은 유리 아미노 기능을 나타냈다.

모든 아미노산을 N-말단 Fmoc-보호된 유도체로서 사용하였고, 이들을 유사한 방식으로 커플링시켰다. 트립토판은 측쇄 상의 t-부틸옥시카르보닐 (Boc) 보호기와 함께 사용한 반면, 히스티딘 및 글루타민은 Trt 보호시켰다. 각각의 아미노산의 커플링 후에 수행된 카이저-테스트가 아미노 기능의 불완전한 커플링을 나타내면, 커플링을 반복하였다.

전체 목적하는 펩티드 서열의 제작 후에, 수지를 각각 2분 동안 DCM으로 5회 세척한 후, 디에틸 에테르로 5회 세척하였고, 진공 하에 건조시켰다.

b) 스페이서 및 프로킬레이터 (prochelator) DOTA(^tBu)₃을 사용한 커플링

프로킬레이터 DOTA(^tBu)₃은 마크로시클릭스 인크. (Macrocyclics Inc., 미국 달라스)로부터 구입하였다. 스페이서를 커플링하기 전에, 수지 결합된 펩티드로부터 N-말단 Fmoc-보호기를 제거하였다. 수지를 15 min 동안 DMF 내에서 팽윤시키고, DMF 중 20％ 피페리딘의 용액으로 2회 처리하고 (15 min), DMF로 3회 세척하였다. 절단된 Fmoc기의 양을 결정하기 위해, 피페리딘 처리 및 다음 DMF 세척으로부터의 용액을 모았다.

2-(1H-9-아자벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸-아미늄 헥사플루오로포스페이트 (HATU)로 20 min 동안 DMF 내에서 예비활성화시킨 2 당량의 스페이서를 수지에 첨가하였다. DIPEA를 첨가하여 pH를 8-9로 조정하였다. 반응 혼합물을 2 h 동안 진탕하고, 커플링을 카이저 테스트에 의해 모니터링하였다. 프로킬레이터 DOTA(^tBu)₃을 앞서 설명된 바와 같이 Fmoc의 제거 후에 동일한 방식으로 커플링시켰다. DOTA(^tBu)₃ 커플링 반응액을 밤새 진탕하였다. 용액을 제거한 후, 수지를 각각 2분 동안 DMF로 3회 세척하고, DCM으로 5회 세척한 후, 디에틸 에테르로 5회 세척하고, 진공 하에 건조시켰다.

c) 탈보호, 절단 및 정제

펩티드-수지를 프릿 (frit)이 장치된 주사기 내에 취하였다. 트리플루오로아세트산 (TFA)/티오아니솔 (TA)/트리이소프로필실란 (TIS)/H₂O (94/2/2/1)의 용액을 첨가하고, 주사기를 2h 동안 교반하였다. 용액을 얼음 상에서 50％ 디이소프로필에테르 및 50％ 디에틸 에테르의 혼합물에 첨가하여 펩티드를 침전시켰다. 펩티드를 3000 rpm에서 5 min 동안 원심분리에 의해 수집하고, 상등액을 따라냈다. 침전물을 디에틸 에테르로 수회 세척하고, 진공 하에 건조시켰다. 조질 생성물을 물에 용해시키고, Macherey-Nagel VP 250/21 Nucleosil 100-5 C₁₈ 컬럼 (용출액: 용출액 1 = 물 중 0.1％ TFA, 및 용출액 2 = 아세토니트릴; 구배: 0-20 min, 90％-50％ 용출액 1; 유속: 15 mL/min)을 갖는 Metrohm HPLC 시스템 LC-CaDI 22-14 (헤리사우 (Herisau), 스위스) 상에서 반-제조용 RP-HPLC에 의해 정제하였다.

접합체는 분석용 RP-HPLC에 의해 분석하고, 질량 분광법 (ESI-MS)에 의해 특성결정하였다.

A-B-C-1

DOTA-스페이서-X_aa1 ⁶-Gln⁷-Trp⁸-Ala⁹-Val¹⁰-X_aa2 ¹¹-His¹²-X_aa3 ¹³-X_aa4 ¹⁴-ZH (Z = NH)

화합물 1: A = DOTA, B₁ = Gly, B₂ = 4-아미노벤조일; X_aa1 = DPhe; X_aa2 = Gly; X_aa3 = Sta; X_aa4 = Leu,

DOTA-Gly-아미노벤조일-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Sta-Leu-NH₂; C₈₀H₁₁₄N₂₀O₂₀, 계산치 (m/z): 1675.8, 측정치 [M+K]⁺: 1715.1.

화합물 2: A = DOTA, B₁ = 4-아미노-1-카르복시메틸-피페리디닐; B₂ = 없음, X_aa1 = DPhe; X_aa2 = Gly; X_aa3 = Sta; X_aa4 = Leu,

DOTA-4-아미노-1-카르복시메틸-피페리딘-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Sta-Leu-NH₂; C₇₉H₁₁₈N₂₀O₁₉; 계산치 (m/z): 1639.9, 측정치 [M+K]⁺: 1678.1.

화합물 3: A = DOTA, B₁ = 4-아미노-1-피페리딘-4-카르복시; B₂ = 없음, X_aa1 = DPhe; X_aa2 = Gly; X_aa3 = Sta; X_aa4 = Leu,

DOTA-4-아미노-1-피페리딘-4-카르복실산-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Sta-Leu-NH₂; C₇₇H₁₁₆N₂₀O₁₉, 계산치 (m/z): 1624.9, 측정치 [M+K]⁺: 1663.7.

화합물 4: A = DOTA, B₁ = 15-아미노-4,7,10,13-테트라옥사펜타데카노일; B₂ = 없음, X_aa1 = DPhe; X_aa2 = Gly; X_aa3 = Sta; X_aa4 = Leu,

DOTA-15-아미노-4,7,10,13-테트라옥사펜타데칸산-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Sta-Leu-NH₂; C₈₂H₁₂₇N₁₉O₂₃, 계산치 (m/z): 1747.8, 측정치 [M+K]⁺: 1785.1.

화합물 5: A = DOTA, B₁ = 15-아미노-4,7,10,13-테트라옥사펜타데카노일; B₂ = 4-아미노-1-피페리딘-4-카르복시, X_aa1 = DPhe; X_aa2 = Gly; X_aa3= Sta; X_aa4 = Leu,

DOTA-(15-아미노-4,7,10,13-테트라옥사펜타데칸산)-(4-아미노-1-카르복시메틸-피페리딘)-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Sta-Leu-NH₂; C₈₉H₁₃₉N₂₁O₂₄, 계산치 (m/z): 1886.0, 측정치 [M+K]⁺: 1924.9.

화합물 6: A = DOTA, B₁ = 디아미노부티르산; B₂ = 없음, X_aa1 = DPhe; X_aa2 = Gly; X_aa3 = Sta; X_aa4 = Leu,

DOTA-디아미노부티르산-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Sta-Leu-NH₂; C₇₅H₁₁₄N₂₀O₁₉, 계산치 (m/z): 1598.9, 측정치 [M+K]⁺: 1638.4.

화합물 7: A = DOTA, B₁ = 4-(2-아미노에틸)-1-카르복시메틸-피페라지닐; B₂ = 없음, X_aa1 = DPhe; X_aa2 = Gly; X_aa3 = Sta; X_aa4= Leu,

DOTA-4-(2-아미노에틸)-1-카르복시메틸-피페라진-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Sta-Leu-NH₂; C₇₉H₁₂₁N₂₁O₁₉, 계산치 (m/z): 1667.9, 측정치 [M+Na]⁺: 1691.2.

화합물 8: A = DOTA, B₁ = (5-아미노-3-옥사-펜틸)-숙시남산; B₂ = 없음, X_aa1 = DPhe; X_aa2 = Gly; X_aa3 = Sta; X_aa4 = Leu,

DOTA-(5-아미노-3-옥사-펜틸)-숙시남산-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Sta-Leu-NH₂; C₇₉H₁₂₀N₂₀O₂₁, 계산치 (m/z): 1685.9, 측정치 [M+K]⁺: 1723.7.

실시예 2 (A-B-C)

(A = N₄-아지도, B = 스페이서 B₁ - B₂, C = N-말단 아미드 Z를 갖는 펩티드 [Z = NH₂])

N₄-트리아졸-dPEG₁-X_aa1 ⁶-Gln⁷-Trp⁸-Ala⁹-Val¹⁰-X_aa2 ¹¹-His¹²-Sta¹³-Leu¹⁴-NH₂

a) 펩티드: Fmoc-X_aa1 ⁶-Gln⁷-Trp⁸-Ala⁹-Val¹⁰-X_aa2 ¹¹-His¹²-Sta¹³-Leu¹⁴-NH₂의 합성

펩티드는 고체상 상에서 Fmoc-전략을 이용하여 수동으로 합성하였다. N-말단 아미드를 얻기 위해, Rink 아미드 MBHA 수지 LL (100-200 메시)을 사용하였다. 합성은 실시예 1에 설명된 바와 같이 수행하였다.

b) 알킬기 프로파르길-dPEG₁-NHS-에스테르를 사용한 커플링

알킬기로 커플링하기 전에, 수지 결합된 펩티드로부터 N-말단 Fmoc-보호기를 제거하였다. 수지를 15 min 동안 DMF 내에서 팽윤시키고, DMF 중 20％ 피페리딘의 용액 (15 min)으로 2회 처리하고, DMF로 3회 세척하였다. 피페리딘 처리 및 다음 DMF 세척으로부터의 용액을 Fmoc 결정을 위해 수집하였다.

2 당량의 프로파르길-dPEG₁-NHS-에스테르를 수지에 첨가하였다. DIPEA를 첨가하여 pH를 8-9로 조정하였다. 반응 혼합물을 24 h 동안 진탕하고, 커플링을 카이저-테스트에 의해 모니터링하였다.

c) 탈보호, 절단 및 정제

펩티드-수지를 프릿이 장치된 주사기 내에 취하였다. TFA/TIS/H₂O (94/2.5/2.5)의 용액을 첨가하고, 주사기를 2h 동안 교반하였다. 용액을 얼음 상에서 50％ 디이소프로필에테르 및 50％ 디에틸 에테르의 혼합물에 첨가하여 펩티드를 침전시켰다. 펩티드를 3000 rpm에서 5 min 동안 원심분리에 의해 수집하고, 상등액을 따라냈다. 침전물을 디에틸 에테르로 수회 세척하고, 진공 하에 건조시켰다. 조질 생성물을 물에 용해시키고, 앞서 설명된 바와 같이 반-제조용 RP-HPLC에 의해 정제하였다.

d) N₄-아지도 킬레이터의 합성. 합성은 3개의 단계를 포함한다.

i) N,N',N",N'"-테트라키스(t-부틸옥시카보닐)-6-(아지도)-1,4,8,11-테트라아자운데칸 (N₄(Boc)₄-N₃) [3]의 합성:

a) N,N',N",N'"-테트라키스(t-부틸옥시카보닐)-6-(히드록시)-1,4,8,11-테트라아자운데칸 (N₄(Bob)₄-OH) [1]: DMF (10 mL) 중 6-(히드록시)-1,4,8,11-테트라아자운데칸 (1 g, 3.1 mmol)의 용액을 0℃로 냉각시켰다. 여기에 DMF (5 mL) 중 디-t-부틸디카르보네이트 (3.32 mL, 15.5 mmol)의 용액, 이어서 DIPEA (2.7 mL, 15.5 mmol)을 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 실온에서 18h 동안 교반하였다. 상기 반응 시간 후에, 반응 혼합물을 물 및 에틸 아세테이트 사이에 분배하였다. 수층을 에틸 아세테이트로 3회 추출하고, 합한 에틸 아세테이트상을 염화나트륨 용액으로 세척하고 무수 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 여과하고 감압 하에 용매를 증발시켜 표제 화합물을 86％ 수율로 수득하였다.

ii) N,N',N",N'"-테트라키스(t-부틸옥시카보닐)-6-(O-메틸 술포닐))-1,4,8,11-테트라아자운데칸 (N₄(Bob)₄-O-SO₂CH₃) [2]:

피리딘 (3 mL) 중 1 (300 mg, 0.54 mmol)의 용액에 메틸술포닐 클로라이드 (84 ㎕, 1.08 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 TLC에 의해 모니터링할 때 완료될 때까지 실온에서 교반하였다. 용매를 감압 하에 증발시키고, 잔류물을 에틸 아세테이트에 용해시켰다. 에틸 아세테이트를 10％ NaHCO₃ 및 물로 3회 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 여과하고 감압 하에 용매를 증발시켜 조질 생성물을 얻고, 이를 실리카겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 더욱 정제하여 표제 화합물을 84％ 수율로 수득하였다.

iii) N,N',N",N'"-테트라키스(t-부틸옥시카보닐)-6-(아지도)-1,4,8,11-테트라아자운데칸 (N₄(Boc)₄-N₃) [3]:

DMF (3 mL) 중 2 (250 mg, 0.38 mmol) 및 나트륨 아지드 (100 mg, 1.52 mmol)의 현탁액을 75℃에서 5h 동안 교반하였다. 나중에, 반응 혼합물을 실온에서 18h 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 물 및 에틸 아세테이트 사이에 분배하였다. 수층을 에틸 아세테이트로 3회 추출하고, 합한 에틸 아세테이트를 염화나트륨 용액으로 세척하고 무수 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 여과하고 감압 하에 용매를 증발시켜 조질 생성물을 얻고, 이어서 이를 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다 (수율 88％).

d) 용액 중에서의 커플링

말단 알킬기를 갖는 펩티드 (6.2 mg, 5 ㎛) 및 3 (3 mg, 5 ㎛)을 물 및 t-부틸 알콜의 1:1 혼합물 (1 mL)에 용해시켰다. 구리 분말 (10 mg)을 첨가한 후, 0.1 M 수성 황산구리(II) 5수화물 (60 ㎕, 6 ㎛, 1.2 당량)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 24 h 동안 교반하였다. 구리 분말을 여과 제거하고, 용매를 감압 하에 제거하였다. 조질 펩티드는 반-제조용 RP-HPLC에 의해 정제하였다.

킬레이터-펩티드 접합체를 TFA:TIS:H₂O (95:2:3)으로 2h 동안 처리하였다. 용매를 감압 하에 제거하였다. 조질 생성물을 디에틸 에테르와 함께 연마하고, 앞서 설명된 바와 같이 반-제조용 RP-HPLC에 의해 정제하였다.

화합물 14: A = N₄-아지도, B₁ = 프로파르길-dPEG₁-NHS-에스테르; B₂ = 없음, X_aa1 = DPhe; X_aa2 = Gly; X_aa3 = Sta; X_aa4 = Leu,

N₄-트리아졸-dPEG₁-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Sta-Leu-NH₂; C₆₈H₁₀₅N₂₁O₁₃, 계산치 (m/z): 1424.7, 측정치 [M+H]⁺: 1425.5.

실시예 3 (A-B- C2 )

DOTA-스페이서-X_aa1 ⁶-Gln⁷-Trp⁸-Ala⁹-Val¹⁰-X_aa2 ¹¹-His¹²-Leuψ(CHOH)-(CH₂)₂-CH₃

모든 슈도펩티드는 헵타펩티드 Fmoc-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-X_aa2-His-OH를 변형된 아미노산 H-Leuψ(CHOH)-(CH₂)₃-CH₃과 축합시켜 용액상에서 합성하였다.

a) 헵타펩티드 Fmoc-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-X_aa2-His-OH의 합성

펩티드는 2-클로로트리틸 클로라이드 수지 상에서 Fmoc 전략을 이용하여 수동으로 합성하였다. 일반적으로, 이론적인 로딩이 1.4 mmole/g 수지인 2-클로로트리틸 클로라이드 수지를 반응기에 제공하였다. 수지를 DCM 내에서 30 min 동안 팽윤시키고, 1 당량의 아미노산을 첨가하여 제1 아미노산을 커플링시키고, DCM 중 4배 몰 과량의 DIPEA와 혼합하였다. 커플링 반응 혼합물을 실온에서 2 h 동안 교반한 후, 수지를 DCM/MeOH/DIPEA (17/2/1) 혼합물로 2회 세척하고, DCM으로 2회 세척하고, 마지막으로 DMF 내에서 팽윤시켰다. Fmoc는 DMF 중 20％의 피페리딘을 사용하여 탈보호시키고, 제거된 Fmoc-보호기의 양을 300 nm에서 분광광도법에 의해 결정하였다. 다음 아미노산은 2배 몰 과량의 아미노산을 첨가함으로써 커플링시키고, 등몰량의 DIC/HOBt, DMF 중 4배 몰 과량의 DIPEA와 혼합하였다. 수지를 실온에서 2h 동안 교반하고, 커플링을 카이저 닌히드린 테스트에 의해 모니터링하였다. 각각의 아미노산을 동일한 전략을 이용하여 커플링시켰다.

b) 스페이서 및 프로킬레이터 DOTA(^tBu)₃을 사용한 커플링

커플링은 상기 기재된 바와 같이 수행하였다.

c) 절단 및 정제

수지를 TFA/TIS/DCM (1/5/94)의 혼합물에 현탁함으로써 완전히 보호된 펩티드를 고체 지지체로부터 절단하였다. 주사기로 5 mL 부피의 절단 용액을 수회 뽑아내고, 10 min 동안 인큐베이팅하고, 절단된 분획을 50 mL 플라스크 내에 수집하였다. 모든 분획을 수집한 후, 3X10 mL의 톨루엔을 플라스크에 첨가하고, 용매를 증발시키고, 생성물을 그 후 1 h 동안 오일 펌프 진공에서 건조시켰다.

d) Boc-Leuψ(CHOH)-(CH₂)₃-CH₃의 합성. 합성은 3개의 단계를 포함한다.

i) Boc-Leu-N(OCH₃)CH₃의 합성

Boc-Leu-OH (1 g, 4.3 mmol)를 DCM (30 mL)에 용해시키고, 2-(1H-벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸우로늄 테트라플루오로보레이트 (TBTU) (1.380 g, 4.3 mmol), HOBt (0.581 g, 4.3 mmol) 및 DIPEA (743 ㎕, 4.3 mmol)을 0℃에서 첨가하였다. 5 min 동안 교반한 후, O,N-디메틸히드록실아민 염산염 (0.461 g, 4.73 mmol) 및 DIPEA (817 ㎕, 4.73 mmol)을 첨가하였다. 모든 고체 물질이 10 min 내에 용해되었고, 혼합물을 RT에서 밤새 교반하였다. 용매를 증발시키고, 반응 혼합물을 AcOEt 내에 재용해시키고, H₂O, 5％ 시트르산, H₂O, 5％ 수성 NaHCO₃ 용액, 포화 NaCl 용액으로 수회 세척하였다. 용액을 MgSO₄ 상에서 건조시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 목적하는 화합물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다. ESI-MS: 계산치. 269; 측정치 292 [M+Na]⁺.

ii) Boc-Leu-(CH₂)₃-CH₃의 합성

마그네슘 (0.330 g, 13.6 mmol)을 N₂ 하에서 30 min 동안 톨루엔 내에 현탁함으로써 활성화시켰다. 톨루엔을 제거하고, Mg를 N₂ 하에 건조시켰다. THF (20 mL) 중 Mg의 현탁액에 브로모부탄 (1.46 mL, 13.6 mmol)을 적가하고, 혼합물을 환류에서 가열하였다. 모든 마그네슘이 용해되었을 때, THF 중 Boc-Leu-N(OCH₃)CH₃을 적가하고, 반응물을 2h 동안 0℃에서 교반하였다. 1 M HCl (150 mL)을 첨가한 후, 에틸 아세테이트 (100 mL)를 첨가하였다. 유기층을 1 M 황산수소칼륨, 물로 세척하고, 건조시키고 (Na₂SO₄), 진공에서 농축시켰다. 예상된 생성물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 생성물을 ¹H-NMR 및 ¹³C-NMR에 의해 특성결정하였다. ESI-MS: 계산치. 271; 측정치 293.3 [M+Na]⁺.

iii) Boc-Leuψ(CHOH)-(CH₂)₃-CH₃의 합성

메탄올 (5 mL) 중 Boc-Leu-(CH₂)₃-CH₃ (0.190 g, 0.7 mmol)의 용액에, NaBH₄ (0.104 g, 2.8 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 1h 동안 더욱 교반한 후, 아세트산으로 중화시키고, 용매를 감압 하에 제거하였다. 예상된 생성물을 포화 중탄산염 용액으로 침전시켰다. 펩티드를 여과에 의해 수집하고, 물, 헥산으로 세척하고, 건조시켰다. 생성물을 ¹H-NMR 및 ¹³C-NMR에 의해 특성결정하였다. ESI-MS: 계산치. 272; 측정치 273 [M+H]⁺; 547.7 [2M+H]⁺.

iv) 용액 중에서 커플링

Boc-Leuψ(CHOH)-(CH₂)₃-CH₃을 DCM 중 80％ TFA의 용액을 사용하여 탈보호시켰다. 1h 후에, 용액을 농축시키고, DCM으로 수회 세척하고 건조시켰다. 킬레이터-스페이서-펩티드를 DMF 내에 용해시키고, HATU (1.2 당량)을 첨가하고, 혼합물을 1h 동안 교반하였다. H-Leuψ(CHOH)-(CH₂)₃-CH₃을 DMF 내에 용해시키고, 펩티드에 첨가하였다. DIPEA를 사용하여 pH를 8로 조정하고, 반응물을 4h 동안 RT에서 교반하였다.

용매를 농축시키고, 완전히 보호된 펩티드를 얼음 상에서 H₂O를 사용한 침전에 의해 수득하였다. 조질 펩티드를 침전시키고, 냉각시키고, 원심분리하고, 따라내어 용매으로부터 분리하였다. 완전히 탈보호된 펩티드를 얻기 위해, 이를 DCM/TFA/TIS/H₂O 10/85/2.5/2.5의 혼합물 내에 가용화시켰다. 4h 후에, 용액을 농축시키고, 펩티드를 얼음 상에서 50％ 디에틸 에테르 및 50％ 디이소프로필에테르의 혼합물을 사용하여 침전시켰다. 이어서, 펩티드를 3000 rpm에서 5 min 동안 원심분리에 의해 수집하고, 상등액을 따라냈다. 침전물을 디에틸 에테르로 수회 세척한 후, 조질 생성물을 진공에서 밤새 유지하여 남아있는 용매를 제거하였다. 조질 생성물을 물에 용해시키고, 앞서 설명된 바와 같이 제조용으로 정제하였다.

화합물 9: A = DOTA, B₁ = 4-아미노-1-카르복시메틸-피페리딘; B₂ = 없음, X_aa1 = DPhe; X_aa2 = Gly;

DOTA-4-아미노-1-카르복시메틸-피페리딘-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leuψ(CHOH-CH₂)-(CH₂)₂-CH₃, C₇₄H₁₁₂N₁₈O₁₇, 계산치 (m/z): 1524.8, 측정치 [M+K]⁺: 1564.3.

화합물 10: A = DOTA, B₁ = 15-아미노-4,7,10,13-테트라옥사펜타데카노일; B₂ = 4-아미노-1-카르복시메틸-피페리딘, X_aa1 = DPhe; X_aa2 = Gly;

DOTA-PEG₄-4-아미노-1-카르복시메틸-피페리딘-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leuψ(CHOH-CH₂)-(CH₂)₂-CH₃; C₈₆H₁₃₅N₁₉O₂₂, 계산치 (m/z): 1786.9, 측정치 [M+K]⁺: 1811.1.

화합물 11: A = DOTA, B₁ = 15-아미노-4,7,10,13-테트라옥사펜타데카노일; B₂ = 없음, X_aa1 = DPhe; X_aa2 = Gly;

DOTA-PEG₄-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leuψ(CHOH-CH₂)-(CH₂)₂-CH₃; C₇₈H₁₂₁N₁₇O₂₁, 계산치 (m/z): 1632.8, 측정치 [M+K]⁺: 1672.2.

실시예 4 (A-B-C-3)

DOTA-스페이서-X_aa1 ⁶-Gln⁷-Trp⁸-Ala⁹-Val¹⁰-X_aa2 ¹¹-His¹²-X_aa3 ¹³-X_aa4 ¹⁴-NH₂

일반적 서열을 사용한 봄베신 접합체의 합성: DOTA-스페이서-X_aa1 ⁶-Gln⁷-Trp⁸-Ala⁹-Val¹⁰-X_aa2 ¹¹-His¹²-Leuψ(CH₂NH)-Phe-NH₂

a) 펩티드: Fmoc-X_aa1 ⁶-Gln⁷-Trp⁸-Ala⁹-Val¹⁰-X_aa2 ¹¹-His¹²-Leuψ(CH₂NH)-Phe-NH₂의 합성

펩티드는 MBHA 수지 LL (100-200 메시) HCl 상에서 Boc 전략을 이용하여 수동으로 합성하였다. 일반적으로, 이론적인 로딩이 0.59 mmol/g인 MBHA 수지를 반응기에 제공하고, DCM 내에서 30 min 동안 팽윤시켰다. 수지를 DCM 중의 10％ DIPEA의 용액으로 3회 (10 min) 처리하였다. Boc-Leuψ(CH₂NH)-Phe-OH의 제1 커플링은 2 당량의 HOBt 및 2 당량의 DIC를 사용하여 활성화시킨 2 당량의 Boc-아미노산을 사용하여 달성하였다. 커플링 반응 혼합물을 실온에서 2h 동안 교반하고, 반응을 카이저 닌히드린 테스트로 모니터링하였다. Boc는 DCM 중 30％의 TFA를 사용하여 탈보호하고, 상기 단계를 2회 반복하였다. 이어서, 수지를 DCM 중 10％ DIPEA의 용액으로 처리하고, 커플링을 상기 기재된 바와 같이 수행하였다.

H-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leuψ(CH₂NH)-Phe-NH₂: C₅₆H₇₆N₁₄O₉, 계산치 (m/z): 1089.3, 측정치 [M+H]⁺: 1089.8.

b) 스페이서 및 프로킬레이터 DOTA (^tBu)₃을 사용한 커플링

커플링은 상기 기재된 바와 같이 수행하였다.

c) 탈보호, 절단 및 정제

펩티드를 TFA (1 mL) 및 TIS (30 ㎕)로 처리하고, 혼합물을 실온에서 5 min 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 얼음조에서 냉각시키고, 트리플루오로메탄술폰산 (TFMSA) (100 ㎕)을 교반하면서 적가하였다. 플라스크를 스토퍼로 밀봉하고, 혼합물을 실온에서 2 h 동안 교반하였다. 진공 하에 부피를 감소시키고, 펩티드를 냉 디에틸 에테르를 첨가하여 침전시켰다. 침전물을 디에틸 에테르로 수회 세척하고, 조질 생성물을 진공 하에 건조시켰다. 조질 생성물을 물에 용해시키고, 상기 설명된 바와 같이 제조용 HPLC에 의해 정제하였다.

화합물 12: A = DOTA, B₁ = 4-아미노-1-카르복시메틸-피페리딘; B₂ = 없음, X_aa1 = DPhe; X_aa2 = Gly; X_aa3 = Leuψ(CH₂NH); X_aa4 = Phe

DOTA-4-아미노-1-카르복시메틸-피페리딘-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leuψ(CH₂NH)-Phe-NH₂; C₇₉H₁₁₄N₂₀O₁₇, 계산치 (m/z): 1615.9, 측정치 [M+K]⁺: 1654.9.

일반적 서열을 사용한 봄베신 접합체의 합성: DOTA-스페이서-X_aa1 ⁶-Gln⁷-Trp⁸-Ala⁹-Val¹⁰-X_aa2 ¹¹-His¹²-Leuψ(CH₂NH)-Cys-NH₂

a) 펩티드: Fmoc-X_aa1 ⁶-Gln⁷-Trp⁸-Ala⁹-Val¹⁰-X_aa2 ¹¹-His¹²-Leuψ(CH₂NH)-Cys-NH₂의 합성

펩티드는 고체상에 의해 MBHA 수지 (0.59 mmol/g) 상에서 Boc-전략을 이용하여 수동으로 합성하였다. Boc-Cys(4-MeOBzl)-OH (2.5 eq.)을 활성화 시약으로서 DIC (2.5 eq.) 및 HOBt (2.5 eq.)를 사용하여 수지에 커플링시켰다. DIPEA (5 eq.)를 사용하여 pH를 8로 조정하였다. 환원된 결합 ¹³ψ¹⁴(CH₂-NH)의 도입은 산성화 디메틸포름아미드에 용해시킨 Boc-Leu-알데히드 (2.5 eq.)를 사용하여 수행하였다. DMF 중의 NaBH₃CN (2.5 eq.)을 20 min 내에 서서히 첨가하고, 반응물을 1h 동안 RT에서 교반하였다. 환원된 펩티드 결합의 형성 후에, 모든 커플링 반응을 N-Boc-보호된 아미노산을 사용하여 수행하였다.

b) 스페이서 및 프로킬레이터 DOTA (^tBu)₃을 사용한 커플링

커플링은 상기 기재된 바와 같이 수행하였다.

c) 탈보호, 절단 및 정제

탈보호, 절단 및 정제는 앞서 설명된 바와 같이 수행하였다. 접합체는 분석용 RP-HPLC에 의해 분석하고, 질량 분광법 (ESI-MS)에 의해 특성결정하였다.

화합물 13: A = DOTA, B₁ = 4-아미노-1-카르복시메틸-피페리딘; B₂ = 없음, X_aa1 = DPhe; X_aa2 = Gly; X_aa3 = Leuψ(CH₂NH)-; X_aa4 = Cys

DOTA-4-아미노-1-카르복시메틸-피페리딘-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His- Leuψ(CH₂NH)-Cys-NH₂; C₇₃H₁₁₀N₂₀O₁₇S, 계산치 (m/z): 1571.8, 측정치 [M+Na]⁺: 1593.6.

실시예 4

합성된 접합체 (화합물 1-13)의 방사성 표지

일반적인 절차

물 중 킬레이터-봄베신 펩티드 길항제 접합체의 10 ㎍의 분취액에 (¹¹¹InCl₃, ¹⁷⁷LuCl₃ 또는 ^67/68GaCl₃)의 1 - 2 mCi 수용액 및 250-500 ㎕의 0.4M 아세트산나트륨 버퍼 (pH=5)를 첨가하였다. 상기 용액을 30 min 동안 95℃에서 가열하고, 실온으로 10 min 동안 냉각시켰다. 반응 혼합물의 5 ㎕ 분취액을 25 ㎕의 Ca-DTPA 용액 (0.1 M, pH 5.2)에 첨가하고, 비표지된 방사성 핵종의 양을 결정하기 위해 HPLC에 의해 분석하였다.

실시예 5

합성된 접합체를 ¹¹⁵In로 표지함.

^natIn을 사용한 봄베신 유사체의 착화 반응은 동일한 프로토콜에 따라 수행하였다. ^natIn은 ^natInCl₃ 용액의 형태로 1:1의 몰비로 사용하였다.

실시예 6 (시험관내 분석)

GRP 수용체 길항제의 시험관내 특성결정을 위한 물질 및 방법

시약 및 펩티드

모든 시약은 이용가능한 최상급의 것이고, 일반적인 공급회사로부터 구입하였다. 마우스 모노클로날 헤마글루티닌 (HA) 에피토프 항체는 코반스 (Covance, 미국 캘리포니아주 버컬리)로부터 구입하였다. 2차 항체 Alexa Fluor 488 염소 항-마우스 IgG (H+L)은 몰레큘라 프로브스, 인크. (Molecular Probes, Inc., 미국 오레곤주 유진)로부터 구입하였다. 봄베신 및 길항제 [D-Phe⁶, Leu-NHEt¹³, des-Met¹⁴]-봄베신(6-14) (GRPR-ANTAG)은 바켐 (Bachem, 스위스 부덴도르프)로부터 구입하였다. RM26, RM1b, In-RM1b, 및 ¹⁷⁵Lu-AMBA는 에이치.알. 마케 (H.R. Macke (스위스 바젤)에 의해 제공받았다. Fluo-4NW 칼슘 분석 키트는 몰레큘라 프로브스, 인크.로부터 구입하였다.

세포주

HA-에피토프 태깅된 인간 GRP 수용체 (HEK-GRPR)를 안정하게 발현하는 인간 배아 신장 293 (HEK293) 세포는 이전에 설명된 바와 같이 (Cescato at al., 2008) 생성하고, 37℃ 및 5％ CO₂에서 10％ (v/v) 태소 혈청 (FBS), 100 U/ml 페니실린, 100 ㎍/ml 스트렙토마이신 및 750 ㎍/ml G418을 함유하는 GlutaMAX™-I을 갖는 둘베코 (Dulbecco) 변형 이글 (Eagle) 배지 (DMEM) 내에서 배양하였다. 인간 전립선암 세포 (PC3 세포)는 DSMZ (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH; DSMZ No: ACC465)로부터 입수하고, 37℃ 및 5％ CO₂에서 2 mM L-글루타민을 함유하고 10％ (v/v) FBS, 100 U/ml 페니실린 및 100 ㎍/ml 스트렙토마이신을 보충한 햄 (Ham) F12K 내에서 배양하였다. 모든 배양 시약은 깁코 비알엘 (Gibco BRL, 미국 뉴욕주 그랜드 아일랜드)로부터 구입하였다.

결합-친화도 측정

다양한 화합물의 GRP 수용체 결합 친화도는 특성이 잘 결정된 전립선 암종의 냉동 (cryostat) 절편, 또는 앞서 설명된 바와 같이 HEK-GRPR 또는 PC3 세포로부터의 절편에 대한 시험관내 수용체 자가방사선촬영에 의해 결정하였다 ([Markwalder et al., Can. Res., 1999; 59, 1152-1159]; [Reubi et al., Eur. J. Nucl. Med., 2000;27: 273-282]; [Reubi et al., Clin. Cancer Res. 2002;8 1139-1146]). 사용된 방사성 리간드는 GRP 수용체를 우선적으로 표지하는 것으로 알려진 ¹²⁵I-[Tyr⁴]-봄베신 (Vigna et al., Gastroenterology. 1987;93: 1287-1295), 및 범용 봄베신 수용체 리간드로서의 ¹²⁵I-[D-Tyr⁶,β-Ala¹¹, Phe¹³, Nle¹⁴]-봄베신(6-14)이다 (Gastroenterology. 1987;93: 1287-1295).

표 1의 결과를 참조한다.

면역형광 현미경

HEK-GRPR 세포를 사용하는 면역형광 현미경 기반 내재화 분석을 이전에 설명된 바와 같이 수행하였다 ([Cescato et al., 2006]; [Cescato et al., 2008]). 간단히 설명하면, HEK-GRPR 세포를 폴리-D-라이신 (20 ㎍/ml) (시그마-알드리치 (Sigma-Aldrich, 미국 미주리주 세인트루이스) 코팅된 35 mm 4-웰 플레이트 (셀스타 (Cellstar), 그라이너 비오-원 게엠베하 (Greiner Bio-One GmbH, 독일 프리켄하우젠)) 상에서 성장시켰다. 실험을 위해, 세포를 10 nM 봄베신, 또는 1 μM의 다양한 봄베신 유사체로 처리하거나, 잠재적인 길항작용을 평가하기 위해 100배 과량의 이들 다양한 유사체의 존재 하에 30 min 동안 37℃ 및 5％ CO₂에서 성장 배지 내에서 10 nM 봄베신으로 처리한 후, 제1 항체로서 마우스 모노클로날 HA-에피토프 항체를 1:1,000의 희석액으로 및 2차 항체로서 Alexa Fluor 488 염소 항-마우스 IgG (H+L)을 1:600의 희석액으로 사용하는 면역형광 현미경을 위해 처리하였다. 세포를 Leica DM RB 면역형광 현미경 및 Olympus DP10 카메라를 사용하여 조영하였다.

봄베신에 의해 유도된 GRP 수용체 내재화는 봄베신 유사체 화합물 1, In-화합물 1, 화합물 1b 및 GRPR-ANTAG에 의해 효율적으로 길항된다. HEK-GRPR 세포를 30 min 동안 비히클 (펩티드 없음, a), 또는 10 nmol/L의 봄베신 (b) (최대치 미만의 내재화 효과를 유도하는 농도)으로 처리하였다. 패널 (d, f, h, j)은 1 μmol/L의 유사체 화합물 1b, GRPR-ANTAG, 화합물 1, 및 In-화합물 1의 존재 하에 10 nmol/L 봄베신으로 처리한 세포를 보여준다. 화합물 1b, GRPR-ANTAG, 화합물 1, 및 In-화합물 1의 1 μmol/L의 농도에서 단독 사용시의 효과를 패널 (c, e, g, i, k)에 제시한다. 펩티드와 함께 인큐베이션한 후, 세포를 상기 설명한 바와 같이 면역세포화학을 위해 가공하였다. 명백한 점상 (punctate) 핵주위 염색이 봄베신 처리된 세포에 대해 검출가능하다. 상기 점상 염색은 과잉의 유사체 화합물 1, In-화합물 1, 화합물 1b 및 GRPR-ANTAG에 의해 효율적으로 제거된다. 단독으로 주어진 화합물-1, In-화합물 1, 화합물 1b 및 GRPR-ANTAG은 GRP 수용체 내재화에 대한 효과가 없다.

표 1 및 도 2의 결과를 참조한다.

칼슘 방출 분석.

세포내 칼슘 방출을 앞서 설명된 바와 같이 Fluo-4NW 칼슘 분석 키트를 사용하여 PC3 세포에서 측정하였다 ([Magrys et al., J. Clin. Immunol. 2007, 27, 181-192]; [Michel et al.,]; [Cescato et al., J. Nucl. Med. 2008; 49: 318-326]). 간단히 설명하면, PC3 세포를 96 웰 플레이트 내에 접종하고 (10,000개 세포/웰), 2일 동안 37℃ 및 5％ CO₂에서 배양 배지 내에서 배양하였다. 실험일에, 세포를 2.5 mM 프로베네시드를 함유하는 분석 버퍼 (1 x HBSS, 20 mM HEPES)로 세척한 후, 30 min 동안 37℃ 및 5％ CO₂에서, 이어서 추가로 30 min 동안 실온에서 2.5 mM 프로베네시드를 함유하는 분석 버퍼 내에서 100 ㎕/웰 Fluo-4NW 염료를 로딩하였다. 시험할 봄베신 유사체로 자극한 후 세포내 칼슘 이동을 측정하기 위해, 염료를 로딩한 세포를 SpectraMax M2^e (몰레큘라 디바이시즈 (Molecular Devices, 미국 캘리포니아주 서니베일))에 옮겼다. 세포내 칼슘 이동을 키네틱 (kinetic)에서 60 sec 동안 실온에서 기록하고, 지시된 농도에서 유사체의 존재 하에 520 nm에서 형광 방출 (λ_ex = 485 nm)을 모니터링하였다. 최대 형광 (F-max)는 25 μM 이오노마이신의 첨가 후에 측정하였다. 기준선 (F-기준선) 측정은 염료-로딩된, 비처리된 세포에 대해 실시하였다. 데이타는 이전에 보고된 바와 같이 최대 칼슘 반응의 백분율로서 제시한다 (F-max - F-기준선 = 최대 칼슘 반응의 100％) ([Magrys et al., J. Clin. Immunol. 2007, 27, 181-192]; [Michel et al., Cescato et al., J. Nucl. Med. 2008; 49: 318-326]). 모든 실험을 삼중으로 적어도 3회 반복하였다.

도 1은 In-화합물 1 및 화합물 1a가 봄베신의 용량-반응 곡선을 봄베신 (BB)의 존재 하에 우측으로 이동시키는, 길항제처럼 거동하는 것을 보여준다.

표 1 및 도 1의 결과를 참조한다.

화합물 1, 2 및 9의 결합 친화도는 ¹¹⁵In 비방사성 동위원소와의 착화 후에 측정하였다. 데이타는 동위원소와의 착화반응이 수용체에 대한 결합 친화도뿐만 아니라 길항제 특성에도 영향을 미치지 않음을 보여주었다.

Claims

하기 화학식 I로 표시되는 봄베신 유사체 펩티드 길항제 접합체 및 그의 무기산 또는 유기산의 제약상 허용되는 염, 그의 수화물, 착물, 에스테르, 아미드, 용매화물 및 전구약물.
<화학식 I>

식에서, x는 1 내지 3의 정수이고,
n은 1 내지 6의 정수이고,
A는 적어도 하나의 방사성 핵종 금속을 포함하는 금속 킬레이터이고,
B는 C의 N-말단에 연결되는 스페이서, 또는 공유결합이고,
C는 하기 서열 C-1 내지 C-4의 봄베신 유사체 펩티드 길항제이고, 여기서

식에서, X_aa1은 D-Phe, D-Cpa, D-Tyr, D-Trp, 또는 아래 기재된 임의의 하나의 화학식으로 표시되는 잔기이고,

K는 F, Cl, I, 또는 NO₂이고,
X_aa2는 Gly 또는 β-Ala이고,
X_aa3은 스타틴 (Statine), 스타틴 유사체 및 이성질체, 4-Am,5-MeHpA, 4-Am,5-MeHxA 또는 α-치환된 아미노산이고,
X_aa4는 Leu, Cpa, Cba, CpnA, Cha, t-buGly, tBuAla, Met, Nle, 또는 이소-Bu-Gly이고,
Z는 NH 또는 O이고;

식에서, Leuψ(CHOH-CH₂)-(CH₂)₂-CH₃은

이고,
X_aa1은 D-Phe, D-Cpa, D-Tyr, D-Trp, 또는 아래 기재된 임의의 하나의 화학식으로 표시되는 잔기이고,

K는 F, Cl, I, 또는 NO₂이고,
X_aa2는 Gly 또는 β-Ala이고;

식에서, X_aa1은 D-Phe, D-Cpa, D-Tyr, D-Trp, 또는 아래 기재된 임의의 하나의 화학식으로 표시되는 잔기이고,

K는 F, Cl, I, 또는 NO₂이고,
X_aa2는 Gly 또는 β-Ala이고,
X_aa5는 Leuψ-CH₂NH-이고,
X_aa6은 Cys, Phe, Trp, Tpi 또는 Tac이고,
여기서, Tpi 및 Tac는 다음 구조를 갖고,

Z는 NH 또는 O이고;

식에서, X_aa1은 D-Phe, D-Cpa, D-Tyr, D-Trp, 또는 아래 기재된 임의의 하나의 화학식으로 표시되는 잔기이고,

K는 F, Cl, I, 또는 NO₂이고,
X_aa2는 Gly 또는 β-Ala이고,
X_aa7은 Leu-O-알킬, 또는 Leu-NH-알킬이다.
제1항에 있어서, 금속 킬레이터 (A)가 3가 금속 또는 5가 금속에 대한 금속 킬레이터 및 그의 근접 유사체인 봄베신 유사체 펩티드 길항제 접합체.
제2항에 있어서, 3가 금속에 대한 금속 킬레이터가 DOTA-, NODASA-, NODAGA-, NOTA-, DTPA-, EDTA-, TETA- 및 TRITA-계 킬레이터 및 그들의 근접 유사체를 포함하는 군 중에서 선택되는 것인 봄베신 유사체 펩티드 길항제 접합체.
제2항에 있어서, 5가 금속에 대한 금속 킬레이터가 다음 화합물을 포함하는 군 중에서 선택되는 것인 봄베신 유사체 펩티드 길항제 접합체.

식에서, R₁-R₁₅는 서로 독립적으로 수소 원자 또는 (C₁-C₄) 알킬기이고,
여기서, 상기 화학식의
모이어티에서, t는 1 또는 2 또는 3이고, 상기
모이어티 내의 탄소 원자 중 적어도 하나는 Y로 치환되거나 Y로 치환되지 않고,
R₁₆은 수소 원자 또는 CO₂ (C₁-C₄)알킬기이고;
R₁₇ 및 R₁₈은 서로 독립적으로 (C₁-C₄) 알킬기 또는 페닐기이고;
R₁₉는 CH₂-COOH 또는 그의 기능적 유도체이고;
E는 (C₁-C₄)알킬렌, 또는 페닐렌이고;
임의로 (C₁-C₄)알킬렌은 CO₂-알킬, CH₂-CO-알킬, CONH₂, 또는 CONHCH₂-CO₂-알킬로 치환되고;
임의로 페닐렌은 CO₂-알킬로 치환되고,
여기서 알킬기는 1 내지 4개의 탄소 원자를 갖고;
G는 NH 또는 S이고;
Y는 펩티드 (N-말단)의 유리 아미노기와 또는 스페이서와 결합할 수 있는 관능기이고;
Z'는 S 또는 O이다.
제1항에 있어서, 조영을 위한 방사성 핵종 금속이
¹³³ ^mIn, ⁹⁹ ^mTc, ⁶⁷Ga, ⁵²Fe, ⁶⁸Ga, ⁷²As, ¹¹¹In, ⁹⁷Ru, ²⁰³Pb, ⁶²Cu, ⁶⁴Cu, ⁵¹Cr, ^52mMn, ¹⁵⁷Gd, ¹²³I, ¹²⁴I, ¹³¹I, ⁷⁵Br, ⁷⁶Br, ⁷⁷Br 및 ⁸²Br을 포함하는 군 중에서 선택되는 것인 봄베신 유사체 펩티드 길항제 접합체.
제1항에 있어서, 방사선 요법을 위한 방사성 핵종 금속이 ¹⁸⁶Re, ⁹⁰Y, ⁶⁷Cu, ⁶⁹Er, ¹²¹Sn, ¹²⁷Te, ¹⁴²Pr, ¹⁴³Pr, ¹⁹⁸Au, ¹⁹⁹Au, ¹⁶¹Tb, ¹⁰⁹Pd, ¹⁸⁸Rd, ¹⁸⁶Re, ¹⁸⁸Re, ⁷⁷As, ¹⁶⁶Dy, ¹⁶⁶Ho, ¹⁴⁹Pm, ¹⁵¹Pm, ¹⁵³Sm, ¹⁵⁹Gd, ¹⁷²Tm, ⁹⁰Y, ¹¹¹In, ¹⁶⁹Yb, ¹⁷⁵Yb, ¹⁷⁷Lu, ¹⁰⁵Rh, ¹¹¹Ag, ¹²⁵I, ¹²³I, ²¹³Bi, ²²⁵Ac, ¹²⁹I 및 ¹⁷⁷ ^mSn을 포함하는 군 중에서 선택되는 것인 봄베신 유사체 펩티드 길항제 접합체.
제1항에 있어서, C의 N-말단에 연결되는 스페이서 B가 하기 화학식 II의 화합물인 봄베신 유사체 펩티드 길항제 접합체.
<화학식 II>

식에서, B₁은 공유결합, 천연 아미노산, 비천연 아미노산, 선형 디아민 또는 시클릭 디아민이고,
B₂는 공유결합, 천연 아미노산, 비천연 아미노산, 선형 카르복실산 또는 시클릭 카르복실산이고,
단 B₁ 및 B₂ 둘 모두가 동시에 공유결합일 수는 없고, B₁이 디아민일 때, B₂는 카르복실산이다.
제7항에 있어서, 비천연 아미노산이 하기 화학식 III, IV, V 및 VI 중의 임의의 하나로 표시되는 화합물 및 그의 근접 유사체인 봄베신 유사체 펩티드 길항제 접합체.
<화학식 III>

(식에서, a는 0 내지 3의 정수이고,
b는 0 내지 3의 정수이고,
상대적인 치환 패턴은 임의로 1,2-, 1,3- 또는 1,4-이다)
<화학식 IV>

(식에서, c는 1 내지 24의 정수이고,
d는 1 내지 6의 정수이다)
<화학식 V>

식에서, E'는 NH, 또는 CH₂이고,
f는 0 내지 6의 정수이고,
g는 0 내지 6의 정수이고;
E'가 CH₂일 때, 6원 고리는 고리의 동일한 탄소 상의 또는 상이한 탄소 상의 6원 고리의 임의의 탄소 위치에서 임의로 치환되고,
E'가 NH일 때, 6원 고리는 고리의 동일한 탄소 원자 상의 또는 상이한 탄소 원자 상의 6원 고리의 임의의 탄소 위치에서 및/또는 질소 원자 상에서 임의로 치환되고, 단 f 또는 g는 1 또는 그보다 큰 정수이다)
<화학식 VI>

(식에서, i는 1 내지 6의 정수이고,
j는 1 내지 6의 정수이고,
P는 O 또는 H₂이고,
바람직하게는, i는 1 내지 3의 정수이고,
j는 1 내지 3의 정수이고,
P는 O이다).
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 봄베신 유사체 펩티드 길항제 접합체가 하기 화학식 I'로 표시되는 것인 봄베신 유사체 펩티드 길항제 접합체.
<화학식 I'>

식에서, A'는 A 대신에 포함되고, 방사성 핵종 금속이 없는 금속 킬레이터인 것을 제외하고는 A와 동일한 의미를 갖는다.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 임의의 하나의 봄베신 유사체 펩티드 길항제 접합체를 포함하는 제약 조성물.
봄베신 수용체, 바람직하게는 가스트린 방출 펩티드 수용체 (GRP)에 결합하기 위한 및/또는 봄베신 수용체, 바람직하게는 가스트린 방출 펩티드 수용체 (GRP)를 억제하기 위한, 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 임의의 하나의 봄베신 유사체 펩티드 길항제 접합체의 용도.
제9항에 규정된 화학식 I'로 표시되는 봄베신 유사체 펩티드 길항제 접합체를 적합한 방사성 핵종 금속 또는 금속 원자로 방사성 킬레이팅하는 단계를 포함하는, 제1항에 따른 임의의 하나의 봄베신 유사체 펩티드 길항제 접합체의 제조 방법.
- 환자에게 방사성 약품상 유효량의 제1항 내지 8항 중 어느 한 항에 따른 봄베신 유사체 펩티드 길항제 접합체를 투여하는 단계;
- 환자에서 방사성 핵종 금속을 조영하는 단계
를 포함하는, 환자에서 봄베신 수용체, 바람직하게는 GRP 수용체 발현 종양 세포 및/또는 종양성 및 종양 주위성 혈관의 조영 방법.
봄베신 수용체, 바람직하게는 GRP 수용체 발현 종양 세포 및/또는 종양성 및 종양 주위성 혈관을 조영하기 위한 조영제의 제조를 위한, 방사성 약품상 유효량의 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 따른 봄베신 유사체 펩티드 길항제 접합체의 용도.
제14항에 있어서, 상기 종양 세포가
- 전이를 포함한 전립선암,
- 전이를 포함한 유방암,
- 위장관 간질성 종양,
- 소세포 폐 암종
- 신세포 암종,
- 위장관췌장 신경내분비 종양,
- 두경부 편평세포암,
- 신경모세포종, 및
- 식도 편평세포 암종을 포함하는 군 중에서 선택되는 암을 나타내고,
상기 종양성 및 종양 주위성 혈관은
- 난소암,
- 자궁내막암, 및
- 췌장암을 포함하는 군 중에서 선택되는 암을 나타내는 것인 용도.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 따른 치료상 유효량의 봄베신 유사체 펩티드 길항제 접합체를 투여하는 단계를 포함하는, 종양 세포 및/또는 종양성 및 종양 주위성 혈관 관련 질병을 치료 또는 예방하는 방법.
종양 세포 및/또는 종양성 및 종양 주위성 혈관 관련 질병의 치료 또는 예방용 의약의 제조를 위한, 치료상 유효량의 제1항 내지 8항 중 어느 한 항에 따른 봄베신 유사체 펩티드 길항제 접합체의 용도.
제17항에 있어서, 상기 종양 세포 관련 질병이
- 전이를 포함한 전립선암,
- 전이를 포함한 유방암,
- 위장관 간질성 종양,
- 소세포 폐 암종
- 신세포 암종,
- 위장관췌장 신경내분비 종양,
- 두경부 편평세포암,
- 신경모세포종, 및
- 식도 편평세포 암종을 포함하는 군 중에서 선택되고,
상기 종양성 및 종양 주위성 혈관 관련 질병이
- 전이를 포함한 전립선암, 및
- 전이를 포함한 유방암을 포함하는 군 중에서 선택되는 것인 용도.
제9항에 따른 소정량의 봄베신 유사체 펩티드 길항제 접합체 및 금속 킬레이터를 방사성 표지하기 위한 허용되는 담체, 희석제, 부형제 또는 보조제를 함유하는 바이알을 포함하는, 방사선 치료제 또는 방사성 약품 조영제의 제조를 위한 키트.