CN101965358B

CN101965358B - 铃蟾肽类似肽拮抗物缀合物

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Publication number: CN101965358B
Application number: CN200980107992.5A
Authority: CN
Inventors: H·梅克; J·C·鲁比; R·曼西
Original assignee: Universitaet Bern; Universitaetsspital Basel USB
Current assignee: Universitaet Bern; Universitaetsspital Basel USB
Priority date: 2008-03-07
Filing date: 2009-02-27
Publication date: 2019-09-03
Anticipated expiration: 2029-02-27
Also published as: EP2252628A1; CO6290707A2; CY1118687T1; AR070809A1; CL2009000537A1; EP2100900A1; ZA201006385B; SV2010003660A; PT2252628T; ECSP10010467A; CN101965358A; PE20091753A1; SI2252628T1; AU2009221204B2; KR20160128425A; AU2009221204C1; JP5784911B2; DOP2010000269A; PA8818501A1; US9035023B2

Abstract

为了提供诊断和治疗性药物，本发明提供了铃蟾肽类似肽拮抗物缀合物，其具有如下通式(I)，其中A是金属螯合剂，包含至少一种放射性核素金属，B是连接C的N‑末端的间隔区或者共价键，以及C是具有如权利要求的序列的铃蟾肽类似肽拮抗物，另外其中x是从1至3的整数，并且n是从1至6的整数。(I)[A‑(B)_n]_x‑C。

Description

铃蟾肽类似肽拮抗物缀合物

导言

本发明涉及治疗性或诊断性/成像性的放射药物，其制备或者应用，其中所述治疗性或者诊断性的放射药物被定义为与铃蟾肽(bombesin)受体及更特别是与胃泌素释放肽(GRP)受体具有亲和性且能与其结合的结合部分。该结合部分标记到金属络合基团用于发射α-、β-、γ-和正电子的同位素。所述应用包括治疗患有瘤性疾病的对象，包含对该对象施用有效量治疗性放射药物的步骤，所述治疗性放射药物具有与螯合基团螯合的金属，该螯合基团附着于能结合铃蟾肽受体以及更特别是在肿瘤细胞上过表达的胃泌素释放肽(GRP)受体的部分。所述应用包括使用诊断性/成像性的放射药物来诊断患有瘤性疾病的对象或者对其成像，所述诊断性/成像性的放射药物具有与螯合基团螯合的金属，该螯合基团附着于能结合铃蟾肽受体以及更特别是在肿瘤细胞上过表达的胃泌素释放肽(GRP)受体的部分。所述方法由从前体化合物形成治疗性或者诊断性的化合物所做成，所述前体化合物由与能结合铃蟾肽受体及更特别是胃泌素释放肽(GRP)受体的部分共价连接的金属螯合基团所组成。

背景

在用作诊断剂的有效放射药物的设计中，必要的是该药物具有适当的体内靶向和药代动力学性质。Fritzberg et al.(1992，J.Nucl.Med.，33：394)进一步指出放射性核素化学和相关的连接强调了对生物分子载体的附着及标记化学修饰进行优化的需要。因此，放射性核素的类型、生物分子的类型以及用于使其彼此连接的方法对于放射示踪剂的性质可具有关键影响。

肽是在许多生理学过程中起关键作用的生物分子，包括作为神经递质、激素和抗生素的作用。研究已经表明了其在诸如神经科学、免疫学、药物学和细胞生物学等领域中的重要性。一些肽可作为化学信使起作用。它们结合靶细胞表面上的受体并将配体的生物作用传递至靶组织。因此，配体的特异性受体结合性质可通过用放射性核素标记该配体而进行开发。理论上，配体对受体的高度亲和性有助于放射标记的配体在受体表达组织中的保持。然而，仍在研究的是哪些肽可以有效地被标记以及在哪些条件下标记会发生。众所周知的是配体肽的受体特异性可在化学反应期间被改变。因此，必须确定最佳的肽构建体。

肿瘤过表达由肽特异性结合的各种受体类型。如下出版物Boerman et al.，Seminar in Nuclear Medicine，2000，30(3)，195)、Reubi et al.J.Nucl.Med.， 2005，46，(suppl)67S、Reubi，J.C.，Endocrine Reviews，2003，24(4)，389提供了特异性结合瘤中细胞表面受体的肽的非详尽的列表，即促生长素抑制素、血管活性肠肽(VIP)、结合胃泌素释放肽(GRP)受体的铃蟾肽、胃泌素、缩胆囊素(CCK)以及降钙素。

金属标记的受体特异性肽在闪烁扫描成像和放射治疗中的潜在用途由促生长素抑制素类似物来进行例证，例如¹¹¹In-DTPA缀合的Octreotide，是 FDA许可的诊断性成像剂，在美国由Covidien公司上市 (Lowbertz et al.，Seminars inOncology，1994，1)，以及分别见Reubi et al..J. Nucl.Med.，2005，46，67S-75S及其中的参考文献所述。Octreotide及其类似物已被共价连接到一些成像金属同位素(^99mTc、¹¹¹In、⁶⁸Ga)以及治疗性金属同位素(¹⁰⁵Rh、^186/188Re、¹⁵³Sm、⁹⁰Y、¹⁶⁶Ho、¹⁷⁷Lu)。经金属标记的缀合物特异性地结合受体，并且在与受体结合后，该构建体被受体内在化，而所述经金属标记的受体特异性肽或者其代谢物在靶细胞中被捕获。

前述原理被进一步扩展至GRP受体亲合(avid)肽(与受体具有高度亲和性的肽)，其中金属缀合的铃蟾肽激动剂被用于闪烁扫描成像和放射治疗 (Smith et al.，Anticancer Res，，23(2003)，63-70；Baidoo et al.，Bioconjug. Chem.，9(1998)，218-225；Gali et al.，Bioconjug.Chem.，12(2001)，354-363； Smith et al.，Bioconjug.Chem.，14(2003)，93-102，Cancer Res.，63(2003)， 4082-4088；Rogers etal.，In，M.Nicolini and U.Mazzi，Editors，Technetium， rhenium and other metals inchemistry and nuclear medicine，SGE Editoriali， Italy(1999)，519-525；Zhang etal.，Cancer Res.，64(2004)，6707-6715；Lantry et al.，EANM，Helsinki(Finland)(2004)；Linder et al.，J.Nucl.Med.， 45，(2004)(5)，169P[abstract 482].Chen etal.，J.Nucl.Med.，45(2004)， 1390-1397；Johnson et al.，Cancer BiotherRadiopharm.2006，21(2)，155-66， Smith et al.，Nucl.Med.Biol.，2005，32733-40)。

在Chen et al.(Appl.Radiat.Isot.，2007，(In Press))、Waser et al.(Eur.J.Nucl.Med.Mol.Imaging.200734，95-100)和Lantry et al.(J.Nucl.Med.，2006， 47，1144-52)中描述了铃蟾肽激动剂，即与-NH-CH₂-CO-[4-氨基苯甲酰基]-QWAVGHLM-NH₂)偶联的¹⁷⁷Lu-DOTA(¹⁷⁷Lu-AMBA)，的成像与放射治疗。

一些专利和专利申请提及了金属标记的铃蟾肽激动剂。Volkert et al.(US2007/0065362A)要求保护通用结构(金属标记部分-间隔区团-铃蟾肽激动剂，用于成像和治疗用途)的金属标记的铃蟾肽激动剂。相同发明人的其它专利和专利申请包括US 6,921,526B(2005)、US 7,060,247B、US 7,147,838B(2006)和WO 2002/087631A1。

现有技术

在所有上述出版物中选择激动剂作为放射药物的潜在原理是其通过相互作用产生或者诱发GRP受体的应答，其中所述放射药物随后通过胞吞作用而被内在化。GRP拮抗物抵消激动剂的作用且不被内在化到细胞内，因此据推测拮抗物可能不太适用于放射性闪烁扫描成像和放射治疗目的。迄今为止，一致认为应开发具有良好放射配体内在化性质的化合物，其导致放射配体在肿瘤内高度的体内积聚，这看来是最佳的体内可视化和放射性核素治疗所需要的。从分子-药理学研究可知有效内在化通常主要由激动剂提供(Bodeiet al.，J.Nucl.Med.，2006；47，375-377；Koenig et al.，Trends Pharmacol.Sci.，1997；18，276-287，Cescato et al.，J.Nucl.Med.，2006；47， 502-511.Ginj et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA.2006；103，16436-16441)；近来已证明，在促生长素抑制素受体的情况中，与大量进行内在化的相应激动剂相比，高亲和性金属标记的促生长素抑制素受体拮抗物在肿瘤细胞中内在化很差，而在动物肿瘤模型中体内吸收进肿瘤中的方面其表现相同或者甚至更好。GRP受体在一些瘤中过表达(Cornelio et al，Ann.Onco.，2007，18，1457-1466及其参考文献)，如前列腺癌及癌转移、乳腺癌及癌转移、胃肠道基质肿瘤、小细胞肺癌、肾细胞癌、胃肠胰腺神经内分泌肿瘤、头颈部鳞状细胞癌、成神经细胞瘤以及食管鳞状细胞癌。GRP受体也在人卵巢、子宫内膜和胰腺癌的肿瘤相关血管中表达(Fleischmann et al.，Cell Onc.， 2007，29，421-33)。因此，特别希望设计具有拮抗物性质的有效的放射药物以用于成像和放射治疗。

Jensen et al.(Pharma.Reviews，2008(in Press))近来综述了三种不同的铃蟾肽受体亚型的受体药理学，GRP受体属于其亚型2。

在最近的出版物中，Cescato et al.(J.Nucl.Med.，2008，49，318-26)证明了^99mTc-N₄-标记的铃蟾肽拮抗物可在肿瘤靶向中比激动剂优选。

GRP受体靶向化合物领域中的较早的发明在WO 2007/109475A2、WO 2007/095443A2、US 2008/0008649A1和US 7,226,577B2中描述，具有金属螯合的-连接体-铃蟾肽，其具有如下的通式：

金属-螯合剂-连接体-铃蟾肽类似物

根据WO 2007/095443A2所述，具有特定序列¹⁷⁷Lu-DOTA-Gly-4-氨基苯甲酰基-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH₂的L70样品起激动剂作用，其中测量了在1和24小时的吸收。所述吸收对于治疗目的不是最佳的，需要改良。

除了这些专利和专利申请之外，出版物中也包括临床前和临床的研究 (Waser etal.，Eur.J.Nucl.Medicine，2007，34，95-100；J.Nucl.Med.，2006，47， 1144-52)。

通过对在不同位点以高亲和性靶向GRP受体的拮抗物进行筛选的优点，本发明显示出间隔区策略的组合导致出乎预料地高且持久的肿瘤吸收并且在非靶器官中具有低吸收和快速清除。在对比研究中，当使用相似的连接体时观测到肿瘤中显著较高的吸收(＞2×)。从确认铃蟾肽类似物的拮抗性质的体外测定开始，发现即使在N末端加入间隔区、螯合剂和金属之后，这些拮抗作用仍被保留并且转化为关于体内肿瘤-背景比率的极佳行为。

因此，本发明的一个目的是提供示出高吸收率和高体内稳定性(人血清和组织)的新的铃蟾肽肽拮抗物缀合物。

概述

发明描述

在第一方面，本发明涉及铃蟾肽类似肽拮抗物缀合物，其选择性结合铃蟾肽受体及更特别地选择性结合GRP受体，而在拮抗这两个系统中激动剂诱导的作用时并不触发进入细胞的内在化以及不通过钙转移而传导信号，其中所述铃蟾肽类似肽拮抗物缀合物具有通式(I)：

(I)[A-(B)_n]_x-C

其中

x是从1至3的整数，

n是从1至6的整数，

A是包含至少一种放射性核素金属的金属螯合剂，优选适用于诊断或者治疗性用途，更优选适用于成像或者放射治疗，

B是与C的N末端连接的间隔区或者是共价键，

C是序列C-1至C-4的铃蟾肽类似肽拮抗物，其中：

C-1：Xaa₁ ⁶-Gln⁷-Trp⁸-Ala⁹-Val¹⁰-Xaa₂ ¹¹-His¹²-Xaa₃ ¹³-Xaa₄ ¹⁴-ZH，

其中

Xaa₁是D-Phe，D-Cpa，D-Tyr，D-Trp或者具有下述任一结构式的残基：

K是F、Cl、I或者NO₂，

Xaa₂是Gly或者β-Ala，

Xaa₃是抑胃酶氨酸、抑胃酶氨酸类似物和异构体、4-Am，5-MeHpA、 4-Am，5-MeHxA或者α-取代的氨基酸，

Xaa₄是Leu、Cpa、Cba、CpnA、Cha、t-buGly、tBuAla、Met、Nle或者iso-Bu-Gly，以及

Z是NH或者O；

C-2：

Xaa₁ ⁶-Gln⁷-Trp⁸-Ala⁹-Val¹⁰-Xaa₂ ¹¹-His¹²-Leuψ(CHOH-CH₂)-(CH₂)₂-CH₃，

其中

Leuψ(CHOH-CH₂)-(CH₂)₂-CH₃是

Xaa₁是D-Phe，D-Cpa，D-Tyr，D-Trp或者具有如下任一结构式的残基：

以及

K是F、Cl、I或者NO₂，

Xaa₂是Gly或者β-Ala；

C-3：Xaa₁ ⁶-Gln⁷-Trp⁸-Ala⁹-Val¹⁰-Xaa₂ ⁿ-His¹²-Xaa₅ ¹³-Xaa₆ ¹⁴-ZH，

其中

Xaa₁是D-Phe、D-Cpa、D-Tyr、D-Trp或者具有如下任一结构式的残基：

K是F、Cl、I或者NO₂，

Xaa₂是Gly或者β-Ala，

Xaa₅是Leuψ-CH₂NH-，

Xaa₆是Cys、Phe、Trp、Tpi或者Tac，

其中Tpi和Tac具有如下含义：

以及

Z是NH或者O；

C-4：Xaa₁ ⁶-Gln⁷-Trp⁸-Ala⁹-Val¹⁰-Xaa₂ ¹¹-His¹²-Xaa₇，

其中

K是F、Cl、I或者NO₂，

Xaa₂是Gly或者β-Ala，

Xaa₇是Leu-O-烷基，或者Leu-NH-烷基。

本发明进一步提及药物可接受的这些铃蟾肽类似肽拮抗物缀合物的无机酸的或者有机酸的盐，以及进一步提及具有通用化学式(I)的这些化合物的水合物、络合物、酯、酰胺、溶剂化物和前体药物。

描述A(金属螯合剂)：

在本发明的优选实施方案中，金属螯合剂(A)是用于三价金属或者五价金属及其密切相关的类似物的金属螯合剂。

优选地，用于三价金属的金属螯合剂(A)选自包含如下的组：

基于DOTA、NODASA、NODAGA、NOTA、DTPA、EDTA、TETA 以及TRITA的螯合剂及其密切相关的类似物，

其中

DOTA代表1，4，7，10-四氮杂环十二烷-N，N′，N″，N″′四乙酸，

DTPA代表二乙烯三胺五乙酸，

EDTA代表乙二胺-N，N’-四乙酸，

TETA代表1，4，8，11-四氮杂环十二烷-1，4，8，11-四乙酸，以及

NOTA代表1，4，7-三氮杂环壬烷三乙酸。

更优选地，用于三价金属的金属螯合剂(A)选自包含如下的组：

基于DOTA、NOTA、DTPA和TETA的螯合剂及其密切相关的类似物。

这些螯合配体的完全质子化形式的结构如下所示：

更优选地，三价金属的金属螯合剂(A)选自包含如下的组：DTPA(二乙烯三胺五乙酸)和多氮多羧基大环(polyaza-polycarboxylate macrocycles)如 DOTA(1，4，7，10-四氮杂环十二烷-N，N′，N″，N″′四乙酸)及其密切相关的类似物。

优选地，用于五价金属的金属螯合剂(A)选自包含如下的组：2-肼基烟酰胺(HYNIC)、N₄-螯合剂、N₄-X(N₄可以是线型或者大环，X可以是叠氮胺、OH、卤素、o-、m-、p-氨基苄间位对位羧基苄，和羧基(Nock，B.et al.(2003 [^99mTc]Demobesin 1，a novelbombesin analogue for GRP receptor-targeted tumourimaging.Eur.I.Nucl.Mol.Imaging，30，247-258))、去铁胺(DFO)以及 N_rS_(4-r)螯合剂。

以及

其中

R₁-R₁₅各不相关地是氢原子或者(C₁-C₄)烷基，

其中，在上述化学式的部分中，t是1或者2或者3，

且所述部分中至少一个碳原子由Y取代或者不由Y取代，

R₁₆是氢原子或者CO₂(C₁-C₄)烷基；

R₁₇和R₁₈各不相关地是(C₁-C₄)烷基或者苯基；

R₁₉是CH₂-COOH或者其功能性衍生物；

E是(C₁-C₄)亚烷基或者亚苯基；

任选地，(C₁-C₄)亚烷基由CO₂-烷基、CH₂-CO烷基、CONH₂或者 CONHCH₂-CO₂-烷基取代；

任选地，亚苯基由CO₂-烷基取代，

其中所述烷基具有1-4个碳原子；

G是NH或者S；

Y是能结合所述肽的游离氨基(N末端)或者结合间隔区的官能团；

Z’是S或者O。

N₄-螯合剂优选是：

其中

M是指从1至4的整数。

N_rS_(4-r)螯合剂被定义为其中r是从1至4的整数。

所述官能团Y优选包含异氰酸基、异硫氰酸基、甲酰基、卤代硝基苯基、重氮基、环氧基、三氯-s-三嗪基、亚乙基氨基、氯磺酰基、烷氧羰-亚氨基、(取代或者未取代的)烷基羰基氧羰基、烷基羰基咪唑基、琥珀酰亚胺基-氧羰基；所述基团附着于(C₁-C₁₀)烃双游离基。合适的烃双游离基的实例是衍生自苯、(C₁-C₆)烷、(C₂-C₆)烯和(C₁-C₄)-烷基苯的双游离基，及其密切相关类似物。

优选地，N_tS_(4-t)螯合剂选自包含如下的组：

用于锝放射性核素金属的基于双氨基双硫醇(BAT)的螯合剂，

用于锝放射性核素金属及其密切相关类似物的巯基-乙酰基-甘氨酰-甘氨酰-甘氨酸(MAG3)。

更优选地，用于五价金属的金属螯合剂(A)选自包含如下的组：

及其密切相关类似物，

其中R₁-R₁₉、Z’、Y、G和t如上文定义。

优选地，r是从2至4的整数，且更优选r是2或者3。

优选地，m是指从1至2的整数，更优选m是1。

熟知的金属螯合剂如线型、大环、四嘧啶及N₃S、N₂S₂或者N₄螯合剂在US 5,367,080A、US 5,364,613A、US 5,021,556A、US 5,075,099A、US 5,886,142A中公开，所述专利在此以其全部内容并入本文作参考。

熟知的金属螯合剂如基于HYNIC、DTPA、EDTA、DOTA、TETA、双氨基双硫醇(BAT)的螯合剂在US 5,720,934A中公开，所述专利以其全部内容并入本文作参考。

熟知的金属螯合剂如去铁胺(DFO)在Doulias et al.(2003)Endosomal andlysosomal effects of desferrioxamine：protection of HeLa cells from hydrogenperoxide-induced DNA damage and induction of cell-cycle arrest. FreeRadic.Biol.Med.，Vol.35，Issue 7：719-28中公开。

各种螯合剂是可以使用的，并且在包括入本文作参考的Banerjee et al.，(Nucl.Med.and Biology，2005，32，1-20及其的参考文献)中进行了综述。

2-肼基烟酰胺(HYNIC)在存在共配体时是另一类螯合基团(A)，所述共配体广泛用于^99mTc和^186，188Re的掺入(Schwartz et al.Bioconj.Chem.，1991，2， 333-6；Babich etal.，J.Nucl.Med.，1993，34，1964-70；Nucl.Med.Biol.，1995，22，25-30；Nucl.Med.Biol.，1995，22，pp.32，pp.1-10)。

DTPA被用来在 (由Covidian公司销售)中络合¹¹¹In，文献中描述了一些修饰(Brechbiel et al.，Biocon.Chem.，1991，2，187-194；Li et al.，Nucl.Med.Biol.，2001，28，145-154)。

用于放射治疗应用的DOTA类的螯合物由Tweedle et al.，US Pat 48885363进行了描述。用于螯合三价同位素金属的其它多氮大环在Maecke et al in Bioconj.Chem.，2002，13，530中有描述，所述文献在此并入本文作参考。

N₄-螯合剂、^99mTc-N₄-螯合剂已在小胃泌素(minigastrin)靶向CCK-2受体的情况中被用于肽标记(Nock et al.，J.Nucl.Med.，2005，46，1727-36)。

在本发明的优选实施方案中，所述放射性核素适于与金属螯合剂络合，并导致放射性金属螯合剂以用于成像。优选地，所述放射性核素金属选自包含如下的组：^133mIn、^99mTc、⁶⁷Ga、⁵²Fe、⁶⁸Ga、⁷²As、¹¹¹In、⁹⁷Ru、²⁰³Pb、 ⁶²Cu、⁶⁴Cu、⁵¹Cr、^52m Mn、¹⁵⁷Gd、¹²³I、¹²⁴I、¹³¹I、⁷⁵Br、⁷⁶Br、⁷⁷Br、⁶⁴Cu 和⁸²Br。更优选地，所述放射性核素金属选自包含如下的组：^99mTc、⁶⁷Ga、⁶⁸Ga、¹¹¹In和¹²³I。再优选地，所述放射性核素金属是⁶⁸Ga。尤为优选的放射性核素金属是^99mTc。

在本发明的优选实施方案中，所述放射性核素金属适于与金属螯合剂络合，并导致放射性金属螯合剂以用于放射治疗。优选地，所述放射性核素金属选自包含如下的组：¹⁸⁶Re、⁹⁰Y、⁶⁷Cu、⁶⁸Ga、⁶⁹Er、¹²¹Sn、¹²⁷Te、 ¹⁴²Pr、¹⁴³Pr、¹⁹⁸Au、¹⁹⁹Au、¹⁶¹Tb、¹⁰⁹pd、¹⁸⁸Rd、¹⁸⁶Re、¹⁸⁸Re、⁷⁷As、¹⁶⁶Dy、 ¹⁶⁶Ho、¹⁴⁹Pm、¹⁵¹pm、¹⁵³Sm、¹⁵⁹Gd、¹⁷²Tm、⁹⁰Y、¹¹¹In、¹⁶⁹Yb、¹⁷⁵Yb、¹⁷⁷Lu、 ¹⁰⁵Rh、¹¹¹Ag、、¹²⁵I、¹²³I、²¹³Bi、²²⁵Ac、¹²⁹I、⁶⁴Cu和¹⁷⁷mSn。更优选地，所述放射性核素金属选自包含如下的组：¹⁸⁶Re、¹⁸⁸Re、⁹⁰Y、¹⁵³Sm、⁶⁸Ga 和¹⁷⁷Lu。

在第一方面进一步的选择中，所述适宜的放射性核素金属是放射性卤素(碘和溴同位素)，所述放射性卤素与肽直接键合，如通过与所述肽内的 Tyr或者Trp部分的化学反应，或者任选A可以是Tyr或者Trp。

优选的放射诊断剂(⁶⁷Ga、¹¹¹In)和放射治疗剂(⁹⁰Y、¹⁵³Sm、¹⁷⁷Lu)任选含有螯合的来自已知为镧系元素类的+3金属离子。这个类别中典型的放射性金属包括同位素⁹⁰钇、¹¹¹铟、¹⁴⁹钷、¹⁵³钐、¹⁶⁶镝、¹⁶⁶钬、¹⁷⁵镱和¹⁷⁷镥。所有这些金属(以及镧系元素中的其它元素)具有非常相似的化学性质，其保持+3氧化状态，且优选与携带硬(hard)(氧/氮)供体原子的配体螯合。

描述B(间隔区)：

B是与C的N末端连接的间隔区或者是共价键。

在本发明的优选实施方案中，B是具有结构式(II)的化合物。

II B₁-B₂

其中

B₁是共价键、天然氨基酸、非天然氨基酸、线型二胺或者环状二胺，

B₂是共价键、天然氨基酸、非天然氨基酸、线型羧酸或者环状羧酸，

附带条件是B₁和B₂不可以同时是共价键，以及当B₁是二胺时，则B₂是羧酸(即在这种情况中B₂不可以是键或者天然或非天然氨基酸)。

优选地，所述非天然氨基酸是具有(III)、(IV)、(V)或者(VI)任一结构式的化合物，

其中

(III)

其中

a是从0至3的整数，

b是从0至3的整数，

以及相关的取代模式或者任选是1，2-、1，3-或者1，4-。

优选地，

a是0或者1，

b是0或者1，

(IV)

其中

C是从1至24的整数，

d是从1至6的整数。

优选地，

c是从1至15的整数，更优选c是从1至8，

d是从1至3的整数，更优选d是1。

(V)

其中

E’是NH或者CH₂，

f是从0至6的整数，

g是从0至6的整数；

当E’是CH₂时，则该六元环任选在该环任意碳原子位置于该六元环的相同或不同的碳原子上被取代，

当E’是NH时，则该六元环任选在该环任意碳原子位置于该六元环相同或不同的碳原子上被取代，和/或在氮原子上被取代其条件是f或者g是等于或者大于1的整数。

优选地，

E’是NH，

f是从0至3的整数，

g是从0至3的整数；

其中

i是从1至6的整数，

j是从1至6的整数，

P是O或者H₂。

优选地，

i是从1至3的整数，

j是从1至3的整数，

P是O。

更优选地，所述间隔区选自包含如下的组：4-氨基-1-羧甲基哌啶、(R，S)- 二氨基乙酸、PEG_1-24、Sar_5-10、8-氨基辛酸、6-氨基己酸、4-(2氨基乙基)-1- 羧甲基哌嗪、二氨基丁酸、马尿酸、4-氨基-1-Boc-哌啶-4-羧酸、Gly-氨基苯甲酸、5-氨基-3-氧杂-戊基-琥珀酰胺酸、Peg_1-24-4-氨基-1-羧甲基哌啶、 Dab(莽草酸)、(D-Gln)x、(D-Asn)x。

描述C(序列的铃蟾肽类似肽拮抗物)

在本发明的优选实施方案中，所述铃蟾肽类似肽拮抗物序列选自包含如下的组：C-1至C-3，优选C-1至C-2。

优选地，所述铃蟾肽类似肽拮抗物序列选自包含如下的组：

化合物1Seq：D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Sta-Leu-NH₂；

化合物9Seq：D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leuψ(CHOH-CH₂)-(CH₂)₂- CH₃；

化合物12Seq：D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leuψ(CH₂NH)-Phe-NH₂；

化合物13Seq：Dphe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leuψ(CH₂NH)-Cys-NH₂。

优选地，包含至少一种放射性核素金属的具有结构式(I)的铃蟾肽类似肽拮抗物缀合物选自包含如下的组：

化合物1：DOTA-Gly-氨基苯甲酰基-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Sta -Leu-NH2；

化合物2：DOTA-4-氨基-1-羧甲基-哌啶-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His- Sta-Leu-NH₂；

化合物3：DOTA-4-氨基-1-哌啶-4-羧酸-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His- Sta-Leu-NH₂；

化合物4：DOTA-15-氨基-4，7，10，13-四氧杂十五烷酸-D-Phe-Gln-Trp-Ala -Val-Gly-His-Sta-Leu-NH₂；

化合物5：DOTA-(15-氨基-4，7，10，13-四氧杂十五烷酸)-(4-氨基-1-羧甲基 -哌啶)-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Sta-Leu-NH₂；

化合物6：DOTA-二氨基丁酸-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Sta-Leu-N H₂；

化合物7：DOTA-4-(2-氨基乙基)-1-羧甲基-哌嗪-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val- Gly-His-Sta-Leu-NH₂；

化合物8：DOTA-(5-氨基-3-氧杂-戊基)-琥珀酰胺酸-D-Phe-Gln-Trp-Ala- Val-Gly-His-Sta-Leu-NH₂；

化合物9：DOTA-4-氨基-1-羧甲基-哌啶-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His- Leuψ(CHOH-CH₂)-(CH₂)₂-CH₃；

化合物10：DOTA-(15-氨基-4，7，10，13-四氧杂十五烷酸-4-氨基-1-羧甲基- 哌啶-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leuψ(CHOH-CH₂)-(CH₂)₂-CH₃；

化合物11：DOTA-15-氨基-4，7，10，13-四氧杂十五烷酸-D-Phe-Gln-Trp-A la-Val-Gly-His-Leuψ(CHOH-CH₂)-(CH₂)₂-CH₃；

化合物12：DOTA-4-氨基-1-羧甲基-哌啶-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His -Leuψ(CH₂NH)-Phe-NH₂；

化合物13：DOTA-4-氨基-1-羧甲基-哌啶-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His -Leuψ(CH₂NH)-Cys-NH₂；

化合物14：N₄-三唑-dPEG₁-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Sta-Leu-NH₂。

其它优选的实施方案

在本发明的优选实施方案中，对于具有结构式(I)的化合物，x是从1 至2的整数，优选x是1。

当x等于或者大于2时，则(B)_n是与铃蟾肽类似肽拮抗物(C)的N末端连接的线型间隔区或者分支的间隔区。

在本发明的优选实施方案中，对于具有结构式(I)的化合物，n是从1 至4的整数，优选n是1或者3，更优选是1。

在本发明的优选实施方案中，对于具有结构式(I)的化合物，A另外是包含相应于或者等价于上述放射性核素金属的至少一个冷(cold)金属原子的金属螯合剂。这种化合物可用于体外体内结合测定以及作为参考化合物。上述优选的实施方案适用于此处。

在本发明的优选实施方案中，对于具有结构式(I)的化合物，K另外是 H或者优选是H。

在第二方面，本发明涉及铃蟾肽类似肽拮抗物缀合物前体，其选择性结合铃蟾肽受体，以及其更特别地结合GRP受体，而在拮抗这两个系统中激动剂诱导的作用时并不触发进入细胞的内在化及不通过钙转移传导信号，其中所述铃蟾肽类似肽拮抗物缀合物具有通式(I’)：

(I’)[A’-(B)_n]_x-C

其中

x是从1至3的整数，

n是从1至6的整数

A’是金属螯合剂，

B是与C的N-末端连接的间隔区或者是共价键，

C是序列C-1至C-4的铃蟾肽类似肽拮抗物。

金属螯合剂A’是没有如在第一方面中针对A定义的放射性核素金属的金属螯合剂。

间隔区B和铃蟾肽类似肽拮抗物C如上述第一方面那样进行定义。

本发明进一步提及所述铃蟾肽类似肽拮抗物缀合物的药物可接受的有机酸盐或者无机酸盐，以及提及具有通用化学式(I’)的这些化合物的水合物、络合物、酯、酰胺、溶剂化物以及前体药物。

在本发明的优选实施方案中，x是从1至2的整数，优选x是1。当x 等于或者大于2时，则(B)_n是与铃蟾肽类似肽拮抗物(C)的N-末端连接的线型间隔区或者分支的间隔区。

在本发明的优选实施方案中，在结构式(I’)中，n是从1至4的整数，优选n是1或者3，更优选n是1。

在第三方面，本发明涉及药物组合物，其包含具有结构式(I)或者(I’)的铃蟾肽类似肽拮抗物缀合物以及药物可接受的载体。

在第四方面，本发明涉及具有结构式(I)或者(I’)的铃蟾肽类似肽拮抗物缀合物在用于结合铃蟾肽受体及更特别是结合胃泌素释放肽(GRP)受体和/ 或在抑制铃蟾肽受体及更特别是抑制胃泌素释放肽(GRP)受体时的用途。

在第五方面，本发明涉及制备具有通式(I)的铃蟾肽类似肽拮抗物缀合物的方法：

(I)[A-(B)_n]_x-C

其中n、x、A、B和C如上述定义，

包含步骤：

-将具有上述通式(I’)的铃蟾肽类似肽拮抗物缀合物与合适的放射性核素金属或者相应于上述放射性核素金属的金属原子放射性螯合。

优选地，制备具有通式(I)的铃蟾肽类似肽拮抗物缀合物的方法包含与合适的放射性核素金属放射性螯合的步骤。

在进一步的实施方案中，制备具有通式(II)的铃蟾肽类似肽拮抗物缀合物的方法

(II)[A-(B)_n]_x-C

其中n、x、A、A’、B和C如上述定义，

另外包括如下步骤：

a)将间隔区B与铃蟾肽类似肽拮抗物C偶联以获得序列C-1至C-4 的间隔区-铃蟾肽类似肽拮抗物，任选重复步骤a)；以及

b)将间隔区-铃蟾肽类似肽拮抗物与金属螯合剂A’偶联以获得具有通式(I’)的铃蟾肽类似肽拮抗物缀合物，任选重复步骤b)，

上述步骤在将具有通式(I’)的铃蟾肽类似肽拮抗物缀合物与合适的放射性核素金属或者与相应于或者等价于上述放射性核素金属的金属原子放射性螯合之前进行。

在本发明的优选实施方案中，n、x、金属螯合剂A、金属螯合剂A’、间隔区B以及铃蟾肽类似肽拮抗物C如上述定义。

在第六方面，本发明涉及对患者中的表达铃蟾肽受体及更特别GRP受体的肿瘤细胞和/或肿瘤和肿瘤周围血管进行成像的方法，包括如下步骤：

-对患者施用放射药物有效量的具有结构式(I)的铃蟾肽类似肽拮抗物缀合物；以及

-对患者体内的放射性核素金属进行成像。

所述第六方面的优选实施方案涉及使用放射药物有效量的具有结构式 (I)的铃蟾肽类似肽拮抗物缀合物生产成像剂，用以对表达铃蟾肽受体及更特别GRP受体的肿瘤细胞和/或肿瘤和肿瘤周围血管进行成像。

在优选的实施方案中，所述肿瘤细胞是指选自包含如下的组的癌症：

-前列腺癌，包括癌转移，

-乳腺癌，包括癌转移，

-胃肠道基质肿瘤，

-小细胞肺癌，

-肾细胞癌，

-胃肠胰腺神经内分泌肿瘤，

-头颈部鳞状细胞癌，

-成神经细胞瘤，以及

-食管鳞状细胞癌。

更优选地，肿瘤细胞是指选自如下的癌症：

-前列腺癌，包括癌转移，以及

-乳腺癌，包括癌转移。

在进一步优选的实施方案中，肿瘤和肿瘤周围血管是指选自如下的癌症：

-卵巢癌，

-子宫内膜癌，以及

-胰腺癌。

优选地，所述肿瘤和肿瘤周围血管是指卵巢癌。

在第七方面，本发明涉及治疗或者预防肿瘤细胞和/或肿瘤和肿瘤周围血管相关疾病的方法，包括如下步骤：

-施用治疗有效量的具有通式(I)的铃蟾肽类似肽拮抗物。

所述第七方面的优选的实施方案涉及使用治疗有效量的具有通式(I)的铃蟾肽类似肽拮抗物来生产药物，所述药物用于治疗或者预防肿瘤细胞和/ 或肿瘤和肿瘤周围血管相关疾病。

在优选的实施方案中，所述肿瘤细胞相关疾病是指选自包含如下的组的癌症：

-前列腺癌，包括癌转移，

-乳腺癌，包括癌转移，

-胃肠道基质肿瘤，

-小细胞肺癌，

-肾细胞癌，

-胃肠胰腺神经内分泌肿瘤，

-头颈部鳞状细胞癌，

-成神经细胞瘤，以及

-食管鳞状细胞癌。

更优选地，所述肿瘤细胞相关疾病是指选自包含如下的组的癌症：

-前列腺癌，包括癌转移，以及

-乳腺癌，包括癌转移。

在进一步优选的实施方案中，肿瘤和肿瘤周围血管相关疾病是指选自包含如下的组的癌症：

-卵巢癌，

-子宫内膜癌，以及

-胰腺癌。

优选地，所述肿瘤和肿瘤周围血管相关疾病是指卵巢癌。

在第八方面，本发明涉及用于制备具有通式(I)的放射治疗剂或者放射药物成像剂的试剂盒，所述试剂盒包含一小瓶，该小瓶中含有预定量的通式(I’)的铃蟾肽类似肽拮抗物缀合物以及可接受的载体、稀释剂、赋形剂或者佐剂，用以对金属螯合剂进行放射性标记。

在第九方面，本发明涉及序列C-1至C-4的铃蟾肽类似肽拮抗物，其中

其中

Xaa₁是D-Phe、D-Cpa、D-Tyr、D-Trp或者具有下述任一结构式的残基：

K是F、Cl、I或者NO₂，

Xaa₂是Gly或者β-Ala，

Xaa₄是Leu、Cpa、Cba、CpnA、Cha、t-buGly、tBuAla、Met、Nle、或iso-Bu-Gly，以及

Z是NH或者O；

C-2：Xaa₁ ⁶-Gln⁷-Trp⁸-Ala⁹-Val¹⁰-Xaa₂ ¹¹-His¹²-Leuψ(CHOH-CH₂)-(CH₂)₂- CH₃，

其中

Leuψ(CHOH-CH₂)-(CH₂)₂-CH₃是

K是F、Cl、I或者NO₂，

Xaa₂是Gly或者β-Ala；

C-3：Xaa₁ ⁶-Gln⁷-Trp⁸-Ala⁹-Val¹⁰-Xaa₂ ¹¹-His¹²-Xaa₅ ¹³-Xaa₆ ¹⁴-ZH，

其中

K是F、Cl、I或者NO₂，

Xaa₂是Gly或者β-Ala，

Xaa₅是Leuψ-CH₂NH-，

Xaa₆是Cys、Phe、Trp、Tpi或者Tac，

其中Tpi和Tac具有如下含义：

以及

Z是NH或者O；

C-4：Xaa₁ ⁶-Gln⁷-Trp⁸-Ala⁹-Val¹⁰-Xaa₂ ¹¹-His¹²-Xaa₇，

其中

K是F、Cl、I或者NO₂，

Xaa₂是Gly或者β-Ala，

Xaa₇是Leu-O-烷基或者Leu-NH-烷基。

定义

如本发明下文中的描述及权利要求书中所用，术语“烷基”其本身或者作为另一基团的一部分，是指具有1-20个碳原子的直链或者支链烷基，如例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基、异戊基、新戊基、庚基、己基、癸基。烷基也可以被取代，如由卤素原子、羟基、C₁-C₄-烷氧基或者C₆-C₁₂-芳基取代。更优选地，烷基是C₁-C₁₀-烷基、C₁-C₆-烷基或者C₁-C₄-烷基。

如本发明下文中的描述及权利要求书中所用，术语“较低非分支或者分支的烷基(亚烷基)”应具有如下含义：取代或者非取代的、直链或者支链的由碳和氢组成的一价、二价或者三价的根，不含不饱和度以及具有1-8 个碳原子，例如但不限于甲基、乙基、n-丙基、n-戊基、1，1-二甲基乙基(t- 丁基)、n-庚基，及类似等。这个部分可以未取代或者经取代的，例如由卤素原子、羟基原子、C₁-C₄-烷氧基或者C₆-C₁₂-芳基所取代。

如本发明下文中的描述及权利要求书中所用，术语“亚苯基”是基于双-或者任选三-取代的苯环的基团。例如，聚(p-亚苯基)是由对位-亚苯基重复单位构建成的聚合物。亚苯基可以被取代或者未被取代的。其可以由卤素、OH、烷氧基取代，优选由C₁-C₄-烷氧基、羧基、酯、优选C₁-C₄-酯、酰胺、硝基所取代。

如本发明下文中的描述及权利要求书中所用，术语“烯”应具有如下含义：不饱和的脂肪族或者脂环族化合物，含有至少一个碳-碳双键。仅具有一个双键而无其它官能团的最简单的无环烯形成具有通式C_nH_2n的烃的同源系列，例如乙烯(C₂H₄)、丙烯(C₃H₆)。所述烯可以被取代或者未被取代。如果所述链烯被取代，其可以由卤素原子、羟基、C₁-C₄-烷氧基、C₆-C₁₂- 芳基或类似等所取代。

如本发明下文中的描述及权利要求书中所用，术语“芳基”应具有不饱和的环状体系的含义，优选芳香族环状体系，更优选在环骨架中具有6-12 个碳原子。其实例是苯基和萘基(naphthalenyl)。所述芳基部分可以未取代或者被取代的，如由卤素原子、羟基、C₁-C₄-烷氧基或者C₆-C₁₂-芳基所取代。

如本发明下文中的描述及权利要求书中所用，术语“苯”应具有如下含义：具有化学式C₆H₆的有机化合物。苯是芳香族烃以及第二个[n]-轮烯 ([6]-轮烯)，具有连续π键的环烃。苯可以是未被取代或者被取代的，例如由卤素原子、羟基、C₁-C₄-烷氧基或者C₆-C₁₂-芳基所取代。

如本发明下文中的描述及权利要求书中所用，术语“烯基”和“炔基” 的定义与烷基相似，但是分别含有至少一个碳-碳双键或三键。烯基可以更优选C₂-C₆-烯基，而炔基可以更优选是C₂-C₆-炔基。

如本发明下文中的描述及权利要求书中所用，术语“卤素”应具有F、 Cl、Br或者I的含义。

如本发明下文中的描述及权利要求书中所用，术语“无机酸或者有机酸的盐”、“无机酸”和“有机酸”是指无机酸(mineral acid)，包括但不限于诸如碳酸、硝酸、磷酸、盐酸、高氯酸或者硫酸，或者其酸盐如钾盐、钠盐、钙盐、镁盐，例如硫酸氢钾；或者是指有机酸包括但不限于如脂肪酸、脂环酸、芳香酸、芳代脂肪酸、杂环酸、羧酸和磺酸，其实例分别是甲酸、乙酸、三氟乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、葡萄糖酸、乳酸、苹果酸、反丁烯二酸、丙酮酸、苯甲酸、邻氨基苯甲酸、甲磺酸(mesylic)、反丁烯二酸、水杨酸、苯乙酸、扁桃酸、扑酸、甲磺酸(methansulfonic)、乙磺酸、苯磺酸、泛酸、甲苯磺酸、三氟甲磺酸和对氨基苯磺酸。同样，有机酸也可以其盐形式出现，如钾盐、钠盐、钙盐、镁盐。

如本发明下文中的描述及权利要求书中所用，术语“药物可接受的盐” 是指无机酸或者有机酸的盐，如无机酸，包括但不限于如碳酸、硝酸或者硫酸，或者有机酸，包括但不限于如脂肪酸、脂环酸、芳香酸、芳代脂肪酸、杂环酸、羧酸和磺酸，其实例分别是甲酸、乙酸、三氟乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、葡萄糖酸、乳酸、苹果酸、反丁烯二酸、丙酮酸、苯甲酸、邻氨基苯甲酸、甲磺酸(mesylic)、水杨酸、苯乙酸、扁桃酸、扑酸、甲磺酸(methansulfonic)、乙磺酸、苯磺酸、泛酸、甲基苯磺酸和对氨基苯磺酸。

如本发明下文中的描述及权利要求书中所用，术语“前体药物”是指任何共价键合的化合物，其释放如结构式(I)所示的活性亲代药物。

贯穿本申请所用术语“前体药物”还包含药物可接受的衍生物如酯、酰胺和磷酸盐，由此该衍生物所得的体内生物转化产物是结构式(I)所定义的活性药物。Goodman和Gilman的参考文献(The Pharmacological Basis of Therapeutics，8ed，McGraw-HiM，Int.Ed.1992，″Biotransformation of Drugs″， 13-15)描述了前体药物，该文献的揭示并入本文作参考。本发明化合物的前体药物通过修饰该化合物中存在的官能团而制备，由此方式将所述修饰物以常规方式或者在体内裂解为亲代化合物。本发明化合物的前体药物包括这样的化合物，其中例如羟基如在不对称碳原子上的羟基或者氨基与任何基团键合，该任意基团在将所述前体药物对患者施用时，分别裂解形成游离羟基或者游离氨基。

前体药物的典型实例在例如WO 99/33795A、WO 99/33815A、WO 99/33793A和WO99/33792A中描述，所述文献在此以其全部内容并入本文作参考。

前体药物特征在于极佳的水溶性、增加的生物有效度以及在体内易于代谢为活性抑制剂。

如本发明下文中的描述及权利要求书中所用，术语“氨基酸序列”和 “肽”在本文被定义为可通过至少两个氨基酸的缩合(缩聚)而获得的聚酰胺。

如本发明下文中的描述及权利要求书中所用，术语“氨基酸”是指包含至少一个氨基和至少一个羧基的任何分子，但是在分子内无肽键。换句话说，氨基酸是具有羧酸功能性以及优选在α位置具有至少一个游离氢的胺氮的分子，但是在分子结构中没有酰胺键。因此，在N末端具有游离氨基基团和在C末端具有游离羧基基团的二肽在上述定义范畴内不被认为是单一“氨基酸”。得自这种缩合的两个相邻氨基酸残基之间的酰胺键被定义为 “肽键”。

如本文所用，酰胺键是指具有如下结构的任何共价键：

-C(＝O)-NH-CH-或者-HC-HN-(O＝)C-

其中羰基由一个分子提供，NH-基由将要连接的另一个分子提供。得自这种缩聚的两个相邻氨基酸残基之间的酰胺键被定义为“肽键”。任选地，聚酰胺主链的氮原子(在上文以NH表示)可以独立地被烷化，例如用-C₁-C₆- 烷基、优选-CH₃烷化。

如本发明下文中的描述及权利要求书中所用，氨基酸残基通过与另一氨基酸形成肽键而衍生自相应的氨基酸。

如本发明下文中的描述及权利要求书中所用，氨基酸是天然发生的或者非天然发生的氨基酸，其中非天然的氨基酸是合成/人工制成的氨基酸残基、蛋白原和/或非蛋白原氨基酸残基。非蛋白原氨基酸残基可以进一步分为(a)蛋白质氨基酸的高(homo)类似物，(b)蛋白质氨基酸残基的β-高类似物，以及(c)另外的非蛋白原氨基酸残基。

因此，所述氨基酸残基衍生自相应的氨基酸，例如衍生自：

蛋白原氨基酸，即Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、 Ile、Leu、Iys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr和Val；或者

非蛋白原氨基酸，如其中侧链已经由亚甲基基团扩展的蛋白原氨基酸的高类似物，例如高丙氨酸(Hal)、高精氨酸(Har)、高半胱氨酸(Hcy)、高谷氨酰胺(Hgl)、高组氨酸(Hhi)、高异亮氨酸(Hil)、高亮氨酸(Hle)、高赖氨酸 (Hly)、高甲硫氨酸(Hme)、高苯丙氨酸(Hph)、高脯氨酸(Hpr)、高丝氨酸(Hse)、高苏氨酸(Hth)、高色氨酸(Htr)、高酪氨酸(Hty)以及高缬氨酸(Hva)；

蛋白原氨基酸的β-高类似物，其中将亚甲基基团插入到α-碳与羧基基团之间，产生β-氨基酸，例如β-高丙氨酸(βHal)、β-高精氨酸(βHar)、β-高天冬酰胺(βHas)、β-高半胱氨酸(βHcy)、β-高谷氨酰胺(βHgl)、β-高组氨酸 (βHhi)、β-高异亮氨酸(βHil)、β-高亮氨酸(βHle)、β-高赖氨酸(βHly)、β-高甲硫氨酸(βHme)、β-高苯丙氨酸(βHph)、β-高脯氨酸(βHpr)、β-高丝氨酸 (βHse)、β-高苏氨酸(βHth)、β-高色氨酸(βHtr)、β-高酪氨酸(βHty)以及β-高缬氨酸(βHva)；

另外的非蛋白原氨基酸，例如α-氨基己二酸(Aad)、β-氨基己二酸(β Aad)、α-氨基丁酸(Abu)、α-氨基异丁酸(Aib)、β-丙氨酸(βAla)、4-氨基丁酸 (4-Abu)、5-氨基戊酸(5-Ava)、6-氨基己酸(6-Ahx)、8-氨基辛酸(8-Aoc)、9- 氨基壬酸(9-Anc)、10-氨基癸酸(10-Adc)、12-氨基十二酸(12-Ado)、α-氨基辛二酸(Asu)、氮杂环丁烷-2-羧酸(Aze)、β-环己基丙氨酸(Cha)、瓜氨酸(Cit)、脱氢丙氨酸(Dha)、γ-羧基谷氨酸(Gla)、α-环己基甘氨酸(Chg)、炔丙基甘氨酸(Pra)、焦谷氨酸(Glp)、α-叔丁基甘氨酸(Tle)、4-苯甲酰苯丙氨酸(Bpa)、δ- 羟赖氨酸(Hyl)、4-羟脯氨酸(Hyp)、别-异亮氨酸(aIle)、羊毛硫氨酸(Lan)、 (1-萘基)丙氨酸(1-Nal)、(2-萘基)丙氨酸(2-Nal)、正亮氨酸(Nle)、正缬氨酸 (Nva)、鸟氨酸(Orn)、苯基甘氨酸(Phg)、哌啶酸(Pip)、肌氨酸(Sar)、硒代半胱氨酸(Sec)、抑胃酶氨酸(Sta)、β-噻吩基丙氨酸(Thi)，1，2，3，4-四氢喹啉-3- 羧酸(Tic)、别-苏氨酸(aThr)、噻唑烷-4-羧酸(Thz)、γ-氨基丁酸(GABA)、异半胱氨酸(iso-Cys)、二氨基丙酸(Dpr)、2，4-二氨基丁酸(Dab)、3，4-二氨基丁酸(γβDab)、二苯基丙氨酸(Bip)，在对位由-C₁-C₆-烷基、-卤化物、-NH₂、-CO₂H 或者Phe(4-R)(其中R＝-C₁-C₆-烷基、-卤化物、-NH₂或者-CO₂H)取代的苯丙氨酸；肽核酸(PNA，cf.，P.E.Nielsen，Acc.Chem.Res.，32，624-30)；或者它们的N-烷化的类似物，如其N-甲基化类似物。

环状氨基酸可以是蛋白原或者非蛋白原氨基酸，如Pro、Aze、Glp、 Hyp、Pip、Tic和Thz。

进一步的实例和详细描述参见例如J.H.Jones，J.Peptide Sci.，2003，9， 1-8所述，所述文献在此以其全部内容并入本文作参考。

如本发明下文中的描述及权利要求书中所用，术语“非蛋白原氨基酸” 和“非蛋白原氨基酸残基”也涵盖蛋白原氨基酸的衍生物。例如，蛋白原氨基酸残基的侧链可以被衍生化，从而使得所述蛋白原氨基酸残基变为“非蛋白原的”。这同样适用于在氨基酸序列末端的蛋白原氨基酸残基的C末端和/或N末端的衍生物。

如本发明下文中的描述及权利要求书中所用，蛋白原氨基酸残基衍生自选自由如下所组成的组的蛋白原氨基酸：Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、 Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Iys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr 和Val，L-或者D-构型；Thr和Ile中的第二个手性中心可具有R-或者S- 构型。因此，例如氨基酸序列的任何翻译后修饰如N-烷化，其可天然发生而使得相应经修饰的氨基酸残基成为“非蛋白原的”，尽管事实上所述氨基酸残基被掺入蛋白质中。优选修饰的氨基酸选自N-烷化氨基酸、β-氨基酸、 γ-氨基酸、羊毛硫氨酸、脱氢氨基酸以及具有烷化胍部分的氨基酸。

如本发明下文中的描述及权利要求书中所用，术语“羧酸”或者“二羧酸”分别是指具有一个COOH部分或者两个COOH部分的有机化合物，如分别例如甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、环己烷羧酸、苯甲酸、水杨酸、乳酸(羧酸)，或者草酸、丙二酸、琥珀酸、己二酸、反丁烯二酸、顺丁烯二酸、苹果酸、邻苯二甲酸(二羧酸)。

如本发明下文中的描述及权利要求书中所用，术语“二胺”是指具有两个NR’R”部分的有机化合物，其中R’和R”可彼此独立地是烷基、烯基、炔基、芳基。二胺可例如是乙二胺、1，4-环己烷二胺、哌嗪。

只要上文提及氨基酸、羧酸、二羧酸或者二胺，这也特别包括当这种氨基酸、羧酸、二羧酸或者二胺分别包含于本发明化合物中时所获得的各自的根，即例如-HN-...-CO-(氨基酸)、-OC-...(羧酸)、-OC-...-CO-(二羧酸)、 -HN-...-NH--(二胺)。

如本发明下文中的描述及权利要求书中所用，术语“金属螯合剂”被定义为络合放射性核素金属以形成金属络合物的分子，其在生理条件下稳定并且也可以通过间隔区与靶向基团缀合。所述金属螯合剂与金属放射性核素络合或者未络合。

如本发明下文中的描述及权利要求书中所用，措词“放射性核素金属” 被定义为是具有不稳定核的原子的放射性核素，所述核特征在于过量的能量，其可用于被赋予给核内新生成的放射粒子或者原子电子(见内转化)。本发明所用放射性核素金属特别适用于诊断或者治疗性用途，更优选用于成像或者放射治疗。在此过程中，该放射性核素经历放射性衰变以及发射γ射线和/或亚原子粒子。这些粒子组成电离辐射。放射性核素可以天然发生，但是也可以人工产生。

这些放射性核素金属包括但不限于镓(如⁶⁷Ga、⁶⁸Ga)、铜(如⁶⁷Cu和 ⁶⁴Cu)、锝(如^99mTc和^94mTc)、铼(如¹⁸⁶Re和¹⁸⁸Re)、铅(如²¹²Pb)；铋(如²¹²Bi) 以及钯(如¹⁰⁹Pd)。用于制备这些同位素的方法是已知的。用于产生^99mTc的钼/锝发生器可商购。产生¹⁸⁶Re的过程包括Deutsch et al.，(Nucl.Med.Biol.，Vol.13：4：465-477，1986)和Vanderheyden et al.(Inorganic Chemistry，Vol. 24：1666-1673，1985)所述过程；以及产生¹⁸⁸Re的方法已由Blachot et al.(Intl. J.of Applied Radiation and Isotopes，Vol.20：467-470，1969)和Klofutar et al.(J. of Radioanalytical Chem，Vol.5：3-10，1970)进行了描述。²¹²Pd的产生在 Fawwaz et al，J.Nucl.Med，(1984)，25：796中描述。²¹²Pb和²¹Bi的产生在 Gansowet al.，Amer.Chem.Soc.Symp，Ser.(1984)，241：215-217和Kozah et al.， Proc.Nat′l.Acad.Sci.USA，(January 1986)，83：474-478中有描述。^99mTc优选用于诊断用途，上述其它放射性核素具有治疗用途。

如本发明下文中的描述及权利要求书中所用，术语“间隔区”被定义为在金属螯合剂与铃蟾肽肽拮抗物之间的连接基团。

如本发明下文中的描述及权利要求书中所用，措词“激动剂”是指这样的物质(配体)，其结合细胞的受体分子的特定位点并因此激活细胞中信号转导。这导致可测量的作用。

如本发明下文中的描述及权利要求书中所用，措词“拮抗物”是指这样的物质(配体)，其结合特异于激动剂物质的受体细胞的位点，因此针对激动剂而阻断这个位点，而不启动作用。因此所述拮抗物抑制激动剂的作用。

如本发明描述及权利要求书中所用，术语“抑胃酶氨酸(Statine)类似物” 被定义为具有如下一般结构的二肽模拟物

抑胃酶氨酸R2＝OH，R1可显著变化但典型地是与氨基

酸侧链相同

抑胃酶氨酸R2＝H，R1可显著变化但典型地是与氨基

酸侧链相同

缩写：

NODASA＝1，4，7-三氮杂环壬烷-1-琥珀酸-4，7-二乙酸

NODAGA＝1，4，7-三氮杂环壬烷-N-戊二酸-N’，N”-二乙酸

TRITA＝1，4，7，10四氮杂环十四烷-1，4，7，10N，N′，N″，N′″-四乙酸

Cpa＝(S)-4-甲酰胺基苯丙氨酸

4-Am-5-MeHpA＝4-氨基-5-甲基庚酸

4-Am-5-MeHxA＝4-氨基-5-甲基己酸

DFO＝N′-[5-(乙酰-羟基-氨基)戊基]-N-[5-[3-(5-氨基戊基-羟基-氨甲酰) 丙酰氨基]戊基]-N-羟基-丁二酰胺

三酰胺一硫醇(MAG3) 二胺二硫醇(BAT)

不用进一步详细阐述，据信本领域技术人员凭借前文描述可在最完全的范围内利用本发明。因此，对如下优选的特定实施方案的解析仅仅是用来说明本发明，而并无以任何形式限制本发明之意。

附图简述

图1：通过钙释放测定法来确定的铃蟾肽类似物的剂量-反应曲线。

所述钙释放测定按照材料和方法章节的描述而进行。将PC3细胞用浓度在0.01nmol/L-10μmol/L之间的铃蟾肽(●)单独处理，或者在存在10 μmol/L的铃蟾肽类似物化合物1(▲)或In-化合物1(◆)或铃蟾肽类似物化合物1a(■)的条件下进行处理。化合物1，在1μmol/L化合物1以及10μmol/L 单独进行测试化合物1(△)、In-化合物1(×)和化合物1a(口)对于PC3细胞中钙释放无影响。化合物1a是指1的结合序列，无连接体和螯合物 (D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Sta-Leu-NH₂)。化合物1是指螯合物 (D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Sta-Leu-NH₂)。In-化合物1是指In-螯合的 (D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Sta-Leu-NH₂)。

图2：HEK-GRPR细胞免疫荧光显微镜检测

使用小鼠单克隆HA-表位抗体和HEK-GRPR细胞对化合物1、In-化合物1、化合物1b和GRPR-ANTAG进行的免疫荧光显微镜检测。(a)，没有肽；(b)10nmol/L铃蟾肽；(c)化合物1b；(d)化合物1b+10nmol/L铃蟾肽； (d，f，h，j)细胞用10nmol/L铃蟾肽在存在1μmol/L的类似物化合物1b、 GRPR-ANTAG、化合物1以及In-化合物1的条件下进行处理；(c，e，g，i) 细胞用化合物1b、GRPR-ANTAG和化合物1进行处理。

图3a，3b，4a，4b：Ga-68-DOTA化合物2在携带PC-3(3)和LNCaP(4)肿瘤的小鼠中的PET成像。a)注射10MBq放射示踪剂一小时后；b)用100 μg铃蟾肽阻断。

图6：^99mTc-ARN4-06(15MBq/200pmol)在携带PC-3肿瘤的小鼠中的 SPECT/CT图像。

图8：^99mTc-ARN4-05(15MBq/200pmol)在携带PC-3肿瘤的小鼠中的SPECT/CT图像。

图9：在反相柱上对Ga-68-DOTA化合物2进行的HPLC分析。

图10a，b，c，d，e：通过HPLC分析的小鼠血浆和尿液中Ga-68-DOTA化合物2的稳定性测定。

图11：Lu-177-DOTA化合物2的人血清稳定性。

图12：肿瘤/组织Ga-68RM2与F18FDG和F18胆碱的对比。

本文引用的所有申请、专利和出版物的全部内容均以其整体并入本文作参考。

可以通过用在前述实施例中使用的那些来替代本发明中一般性或者特殊描述的反应物和/或运行条件，来重复如下实施例并取得相似结果。

通过前文描述，本领域技术人员可轻易确定本发明的基本特性，以及在不偏离本发明精神和范围的条件下，可以对本发明进行各种改变和修改，以使其适于各种用途和情况。

实施例

其中A具有A的含义，但是对于下述所有实施例合适时其也具有A′ 含义。

实施例1(A-B-C)

a)具有一般序列

DOTA-间隔区-Xaa₁ ⁶-Gln⁷-Trp⁸-Ala⁹-Val¹⁰-Xaa₂ ¹¹-His¹²-Sta¹³-Leu¹⁴-NH₂的铃蟾肽肽拮抗物缀合物的合成(A＝DOTA，B＝间隔区B₁-B₂，C＝具有N末端酰胺Z的肽[Z＝NH])

在固相上使用Fmoc-策略人工合成肽。为了获得N末端酰胺，使用Rink 酰胺MBHA树脂LL(100-200孔)(4-(2’，4’-二甲氧基苯基-Fmoc-氨基甲基)- 苯氧乙酰氨基-正亮氨酰-4-甲苯氢胺树脂)。通常将具有理论加样0.34 mmole/g树脂的Rink酰胺MBHA树脂提供给置于反应器。向该反应器中加入N，N-二甲基甲酰胺(DMF)并摇动30分钟，以使得该树脂溶胀。在除去溶剂之后，加入在DMF中的20％哌啶溶液，并将该树脂摇动15分钟以除去 9-芴甲氧羰基(Fmoc)保护基团。重复两次这个步骤。在这个程序之后，所述树脂用DMF洗涤3次5分钟。收集最后三次洗涤的哌啶溶液和DMF溶液并用乙醇填至100mL。从这个溶液取等分试样以通过分光光度法确定除去的保护基团的量。

在偶联Fmoc-氨基酸衍生物之前，将该树脂用DMF洗涤两次2分钟。向该树脂中加入用2当量的N，N-二异丙基碳二亚胺(DIC)N-羟基苯并三唑 (HOBt)预先活化的2当量的Fmoc-氨基酸，并通过加入大约4当量的N-乙基二异丙胺(DIPEA)将pH调节为8-9。在轻轻摇动下将反应温育2小时。在反应之后，除去溶液，并将固相用DMF洗涤两次5分钟。通过Kaiser- 测试来监测该反应。将一定量的树脂珠用乙醇洗涤3次，加入50μL溶液 1(将10mL乙醇中的20g苯酚与1mL的0.01M KCN在49mL嘧啶中的溶液混合)和50μL溶液2(500g茚三酮在10mL乙醇中)，并将该珠在95℃ 加热10分钟。蓝色珠表明了未偶联的游离氨基官能团。

所有氨基酸均以N-末端Fmoc-保护的衍生物来使用，且其以相似方式偶联。色氨酸以其侧链上具有叔丁基氧羰基(Boc)保护基团而进行使用，而组氨酸和谷氨酰胺是Trt保护的。如果在每个氨基酸偶联之后进行的Kaiser 测试表明氨基官能团的不完全偶联，则重复进行偶联。

在构建完整的所希望的肽序列之后，将所述树脂用DCM洗涤5次，随后用二乙醚洗涤5次，每次2分钟并在真空下干燥。

b)与SPACER和前螯合剂(prochelator)DOTA(^tBu)₃偶联

前螯合剂DOTA(^tBu)₃购自美国达拉斯Macrocyclics公司。在与SPACER 偶联之前，从树脂结合的肽中除去N-末端Fmoc-保护。使该树脂在DMF 中溶胀15分钟，用在DMF中的20％哌啶溶液处理两次(15分钟)，以及用 DMF洗涤3次。收集哌啶处理及随后DMF洗涤的溶液，以确定裂解的Fmoc 基团的量。

在所述树脂中加入在DMF中用2-(1H-9-氮杂苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基-六氟磷酸铵(HATU)预活化20分钟的2当量的SPACER。加入DIPEA 将pH调节为8-9。将反应混合物摇动2小时，并通过Kaiser测试监测偶联情况。在如先前所述，在除去Fmoc之后以相同方式偶联前螯合剂DOTA(^tBu)₃。将DOTA(^tBu)₃偶联摇动过夜。在除去溶液之后，将树脂用DMF洗涤3次，用DCM洗涤5次，随后用二乙醚洗涤5次，每次2分钟并在真空下干燥。

c)去保护、裂解和纯化

在配备玻璃料(frit)的注射器中取得所述肽-树脂。加入三氟乙酸(TFA)/ 苯甲硫醚(Thioanisol，TA)/三异丙基硅烷(TIS)/H₂O(94/2/2/1)的溶液，并搅动该注射器2小时。将该溶液加入到在冰上的50％二异丙醚和50％二乙醚的混合物中，以使得肽沉淀。通过在3000rpm离心5分钟收集所述肽并轻轻倒出上清。将所述沉淀物用二乙醚洗涤几次，并在真空下干燥。将粗产物溶解于水中并纯化，所述纯化是通过在具有Macherey-Nagel VP 250/21 Nucleosil 100-5C ₁₈柱的Metrohm HPLC系统LC-CaDI 22-14(Herisau， Switzerland)上进行的半制备性RP-HPLC来实现的(洗脱液：洗脱液1＝在水中的0.1％TFA，洗脱液2＝乙腈；梯度：0-20分钟，90％-50％洗脱液1；流速：15mL/分钟)。

所述缀合物通过分析性RP-HPLC进行分析，并且通过质谱(ESI-MS) 进行鉴定。

A-B-C-1

DOTA-间隔区-Xaa₁ ⁶-Gln⁷-Trp⁸-Ala⁹-Val¹⁰-Xaa₂ ¹¹-His¹²-Xaa₃ ¹³-Xaa₄ ¹⁴-ZH (Z＝NH)

化合物1：A＝DOTA，B₁＝Gly，B₂＝4-氨基苯甲酰基；Xaa₁＝DPhe；Xaa₂＝Gly；Xaa₃＝Sta；Xaa₄＝Leu，

DOTA-Gly-氨基苯甲酰基-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Sta-Leu-NH₂；C₈₀H₁₁₄N₂₀O₂₀，所计算的(m/z)：1675.8，所发现的[M+K]⁺：1715.1.

化合物2：A＝DOTA，B₁＝4-氨基-1-羧甲基-哌啶基；B₂＝无，Xaa₁＝ DPhe；Xaa₂＝Gly；Xaa₃＝Sta；Xaa₄＝Leu

DOTA-4-氨基-1-羧甲基-哌啶-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Sta-Leu- NH₂；C₇₉H₁₁₈N₂₀O₁₉；所计算的(m/z)：1639.9，所发现的[M+K]⁺：1678.1

化合物3：A＝DOTA，B₁＝4-氨基-1-哌啶-4-羧基；B₂＝无，Xaa₁＝ DPhe；Xaa₂＝Gly；Xaa₃＝Sta；Xaa₄＝Leu

DOTA-4-氨基-1-哌啶-4-羧酸-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Sta-Leu-N H₂

C₇₇H₁₁₆N₂₀O₁₉，所计算的(m/z)：1624.9，所发现的[M+K]⁺：1663.7

化合物4：A＝DOTA，B₁＝15-氨基-4，7，10，13-四氧杂十五酰基；B₂＝无， Xaa₁＝DPhe；Xaa₂＝Gly；Xaa₃＝Sta；Xaa₄＝Leu

DOTA-15-氨基-4，7，10，13-四氧杂十五烷酸-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly- His-Sta-Leu-NH₂；C₈₂H₁₂₇N₁₉O₂₃，所计算的(m/z)：1747.8，所发现的[M+K]⁺： 1785.1

化合物5：A＝DOTA，B₁＝15-氨基-4，7，10，13-四氧杂十五酰基；B₂＝4- 氨基-1-哌啶-4-羧基，Xaa₁＝DPhe；Xaa₂＝Gly；Xaa₃＝Sta；Xaa₄＝Leu

DOTA-(15-氨基-4，7，10，13-四氧杂十五烷酸)-(4-氨基-1-羧甲基-哌啶)-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Sta-Leu-NH₂；C₈₉H₁₃₉N₂₁O₂₄，所计算的(m/z)： 1886.0，所发现的[M+K]⁺：1924.9

化合物6：A＝DOTA，B₁＝二氨基丁酸；B₂＝无，Xaa₁＝DPhe；Xaa₂＝ Gly；Xaa₃＝Sta；Xaa₄＝Leu

DOTA-二氨基丁酸-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Sta-Leu-NH₂；C₇₅H₁₁₄N₂₀O₁₉，所计算的(m/z)：1598.9，所发现的[M+K]⁺：1638.4

化合物7：A＝DOTA，B₁＝4-(2-氨基乙基)-1-羧甲基-哌嗪基；B₂＝无， Xaa₁＝DPhe；Xaa₂＝Gly；Xaa₃＝Sta；Xaa₄＝Leu

DOTA-4-(2-氨基乙基)-1-羧甲基-哌嗪-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His- Sta-Leu-NH₂；C₇₉H₁₂₁N₂₁O₁₉，所计算的(m/z)：1667.9，所发现的[M+Na]⁺： 1691.2

化合物8：A＝DOTA，B₁＝(5-氨基-3-氧杂-戊基)-琥珀酰胺酸；B₂＝无， Xaa₁＝DPhe；Xaa₂＝Gly；Xaa₃＝Sta；Xaa₄＝Leu

DOTA-(5-氨基-3-氧杂-戊基)-琥珀酰胺酸-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-Hi s-Sta-Leu-NH₂

C₇₉H₁₂₀N₂₀O₂₁，所计算的(m/z)：1685.9，所发现的[M+K]⁺：1723.7

实施例2(A-B-C)

a)具有一般序列

N₄-三唑-dPEG₁-Xaa₁ ⁶-Gln⁷-Trp⁸-Ala⁹-Val¹⁰-Xaa₂ ¹¹-His¹²Sta¹³-Leu¹⁴-NH₂的铃蟾肽肽拮抗物缀合物的合成(A＝N₄-叠氮基，B＝间隔区B₁-B₂，C＝具有N末端酰胺Z的肽[Z＝NH₂])

a)肽Fmoc-Xaa₁ ⁶-Gln⁷-Trp⁸-Ala⁹-Val¹⁰-Xaa₂ ¹¹-His¹²-Sta¹³-Leu¹⁴-NH₂的合成

在固相上使用Fmoc-策略人工合成肽。为了获得N-末端酰胺，使用 Rink酰胺MBHA树脂LL(100-200孔)。如实施例1所述进行合成。

b)与烷基炔丙基-dPEG₁-NHS-酯的偶联

在与烷基偶联之前，从树脂结合的肽中除去N-末端Fmoc保护。使该树脂在DMF中溶胀15分钟，用在DMF中的20％哌啶溶液处理两次(15分钟)，以及用DMF洗涤3次。收集哌啶处理及随后DMF洗涤的溶液用于 Fmoc的确定。

将2当量的炔丙基-dPEG₁-NHS-酯加入树脂中。通过加入DIPEA将pH 调节至8-9。将反应混合物摇动24小时，并通过Kaiser测试监测偶联。

c)去保护、裂解和纯化

在配备玻璃料的注射器中取得所述肽-树脂。加入TFA/TIS/ H₂O(94/2.5/2.5)的溶液，并搅动该注射器2小时。将该溶液加入到在冰上的 50％二异丙醚和50％二乙醚的混合物中，以使得肽沉淀。通过在3000rpm 离心5分钟收集所述肽并轻轻倒出上清。将所述沉淀物用二乙醚洗涤几次，并在真空下干燥。将粗产物溶解于水中并通过如前述的半制备性RP-HPLC 进行纯化。

通过分析性RP-HPLC分析所述缀合物，并通过质谱(ESI-MS)进行鉴定。

d)N₄-叠氮基螯合剂的合成。这个合成包括三个步骤。

i)N，N‘，N”，N”’-四(叔-丁基氧羰基)-6-(叠氮基)-1，4，8，11-四氮杂十一烷 (N₄(Boc)₄-N₃)[3]的合成：

a)N，N’，N”，N”’-四(叔-丁基氧羰基)-6-(羟基)-1，4，8，11-四氮杂十一烷(N₄(Bob)₄-OH)[1]：将在DMF(10mL)中的6-(羟基)-1，4，8，11-四氮杂十一烷(1 g，3.1mmol)溶液冷却至0℃。向其中加入在DMF(5mL)中二-叔-丁基碳酸氢盐(3.32mL，15.5mmol)及随后加入DIPEA(2.7mL，15.5mmol)。然后将此反应混合物在室温搅拌18小时。在此反应时间之后，该反应混合物分开为水与乙酸乙酯。水层用乙酸乙酯萃取三次，而将组合的乙酸乙酯相用氯化钠溶液洗涤，并通过无水硫酸钠干燥。在减压条件下对所述溶剂进行的过滤和蒸发产生了产量为86％的所述化合物。

ii)N，N’，N”，N”’-四(叔-丁基氧羰基)-6-(O-甲基磺酰基))-1，4，8，11-四氮杂十一烷(N₄(Bob)₄-O-SO₂CH₃)[2]：

向在嘧啶(3mL)中的1(300mg，0.54mmol)的溶液中加入甲基磺酰氯 (84μL，1.08mmol)。将此反应混合物在室温搅拌直至通过TLC监测其完全混合。将溶剂在减压下蒸发，取残余物于乙酸乙酯中。将该乙酸乙酯用 10％NaHCO₃和水洗涤三次，并经无水硫酸钠干燥。在减压下对溶剂进行的过滤和蒸发产生粗产物，将其通过硅胶柱层析进一步纯化产生84％的所述化合物。

iii)N，N’，N”，N”’-四(叔-丁基氧羰基)-6-(叠氮基)-1，4，8，11-四氮杂十一烷(N₄(B oc)₄-N₃)[3]：

将2(250mg，0.38mmol)与叠氮化钠(100mg，1.52mmol)在DMF(3mL) 中的悬浮液在75℃搅拌5小时。之后将反应混合物在室温下搅拌18小时。然后该反应混合物在被分成水和乙酸乙酯。将水层用乙酸乙酯萃取三次，以及将组合的乙酸乙酯用氯化钠溶液洗涤并经无水硫酸钠干燥。在减压下对溶剂进行的过滤和蒸发产生粗产物，然后将其通过柱层析纯化(产量 88％)。

d)在溶液中的偶联

将具有末端烷基的肽(6.2mg，5μm)与3(3mg，5μm)溶解于水与叔-丁醇的1∶1混合物(1mL)中。加入铜粉(10mg)及随后加入0.1M水成的硫酸铜五水合物(60μL，6μm，1.2当量)，并将此反应混合物在室温搅拌24小时。过滤出铜粉，在减压下除去溶剂。粗制的肽通过半制备性RP-HPLC进行纯化。

将螯合剂-肽缀合物用TFA∶TIS∶H₂O(95∶2∶3)处理2小时。在减压下除去溶剂。将粗产物如前所述那样用二乙醚提出(titurate)以及通过半制备性RP-HPLC纯化。

通过分析性RP-HPLC分析所述缀合物并通过质谱(ESI-MS)进行鉴定。

化合物14：A＝N₄-叠氮基，B₁＝炔丙基-dPEG₁-NHS-酯；B₂＝无，Xaa₁＝ DPhe；Xaa₂＝Gly；Xaa₃＝Sta；Xaa₄＝Leu

N₄-三唑-dPEG₁-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Sta-Leu-NH₂； C₆₈H₁₀₅N₂₁O₁₃，所计算的(m/z)：1424.7，所发现的[M+H]⁺：1425.5

实施例3(A-B-C2)

DOTA-间隔区-Xaa₁ ⁶-Gln⁷-Trp⁸-Ala⁹-Val¹⁰-Xaa₂ ¹¹-His¹²-Leuψ(CHOH)-(C H₂)₂-CH₃

在溶液相中通过将七肽Fmoc-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Xaa₂-His-OH与修饰的氨基酸H-Leuψ(CHOH)-(CH₂)₃-CH₃进行缩合来合成所有假肽。

a)七肽Fmoc-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Xaa₂-His-OH的合成

使用Fmoc策略在2-氯三苯甲基氯树脂上人工合成肽。通常将理论加样1.4mmole/g树脂的2-氯三苯甲基氯树脂提供给反应器。使该树脂在DCM 中溶胀30分钟并通过加入1当量的氨基酸而对第一个氨基酸进行偶联，所述加入的氨基酸是与DCM中4倍摩尔体积的过量DIPEA混合的。将偶联反应混合物在室温搅拌2小时，然后将该树脂用DCM/MeOH/DIPEA(17/2/1) 的混合物洗涤两次，用DCM洗涤两次，最后在DMF中溶胀。使用在DMF 中的20％哌啶对Fmoc进行去保护，并通过分光光度测定法在300nm确定除去的Fmoc-保护基团的量。通过加入2倍摩尔体积过量氨基酸而对下一个氨基酸进行偶联，所加入的氨基酸是与在DMF中的等摩尔量DIC/HOBt 以及4倍摩尔体积过量的DIPEA混合的偶联下一个氨基酸。在室温搅动该树脂2小时，并通过Kaiser茚三酮测试监测偶联情况。使用相同策略偶联每个氨基酸。

b)与SPACER和前螯合剂DOTA(^tBu)₃的偶联

如上述进行所述偶联。

c)裂解和纯化

通过将所述树脂悬浮于TFA/TIS/DCM(1/5/94)混合物中而从固体支持物中裂解完全保护的肽。用注射器抽取几次5mL体积的裂解溶液，温育 10分钟，并将裂解部分收集在50mL烧瓶中。在收集所有部分之后，在烧瓶中加入3×10mL甲苯，蒸发溶剂并在之后将产物在油泵真空中干燥1 小时。

d)Boc-Leuψ(CHOH)-(CH₂)₃-CH₃的合成。所述合成包括三个步骤。

i)Boc-Leu-N(OCH₃)CH₃的合成。

将Boc-Leu-OH(1g，4.3mmol)溶解于DCM(30mL)中，并在0℃加入 2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲四氟硼酸盐(TBTU)(1.380g，4.3 mmol)、HOBt(0.581g，4.3mmol)和DIPEA(743μL，4.3mmol)。在搅拌5 分钟之后，加入O，N-二甲基羟胺盐酸盐(0.461g，4.73mmol)和DIPEA(817 μL，4.73mmol)。所有固体材料在10分钟内溶解，并将混合物在室温搅拌过夜。蒸发溶剂，将反应混合物重溶解于AcOEt中，用H₂O、5％柠檬酸、 H₂O、5％水成NaHCO₃溶液、饱和的NaCl溶液洗涤几次。将该溶液经过 MgSO₄干燥，真空除去溶剂。通过硅胶柱层析纯化所希望的化合物。ESI-MS： calcd.269；发现292[M+Na]⁺。

ii)Boc-Leu-(CH₂)₃-CH₃的合成

通过将镁(0.330g，13.6mmol)在N₂下悬浮于甲苯中30分钟而使其活化。除去甲苯并将Mg在N₂下干燥。向在THF(20mL)中的Mg悬浮液中滴加溴丁烷(1.46mL，13.6mmol)，并将该混合物回流加热。当所有镁均溶解时，将滴加在THF中的Boc-Leu-N(OCH₃)CH₃进行滴加，并将该反应物在 0℃搅拌2小时。加入1M HCl(150mL)，随后加入乙酸乙酯(100mL)。有机层用1M硫酸氢钾、水洗涤，干燥(Na₂SO₄)以及在真空下浓缩。通过硅胶柱层析纯化预期产物。该产物通过¹H-NMR和¹³C-NMR进行鉴定。 ESI-MS：calcd.271；发现293.3[M+Na]⁺。

iii)Boc-Leuψ(CHOH)-(CH₂)₃-CH₃的合成

向在甲醇(5mL)中的Boc-Leu-(CH₂)₃-CH₃(0.190g，0.7mmol)溶液中加入NaBH₄(0.104g，2.8mmol)。进一步搅拌该反应混合物1小时，然后用乙酸中和，并在减压下除去溶剂。用饱和的碳酸氢盐溶液沉淀预期产物。通过过滤收集肽，用水、己烷洗涤并干燥。所述产物通过¹H-NMR和¹³C-NMR 进行鉴定。ESI-MS：calcd.272；发现273[M+H]⁺；547.7[2M+H]⁺.

iv)在溶液中偶联

使用在DCM中的80％TFA溶液对Boc-Leuψ(CHOH)-(CH₂)₃-CH₃进行去保护。在1小时后，浓缩该溶液，用DCM洗涤几次并干燥。

将螯合剂-间隔区-肽溶解于DMF中，加入HATU(1.2当量)，并将该混合物搅拌1小时。将H-Leuψ(CHOH)-(CH₂)₃-CH₃溶解于DMF中，病加入所述肽中。使用DIPEA将pH调节为8，并在室温搅拌该反应物4小时。

浓缩该溶液，并通过用H₂O在冰上进行沉淀来获得完全保护的肽。将粗制的肽沉淀、冷却、离心以及通过倾析而从溶剂中分离。为了使所述肽完全去保护，将其溶解于DCM/TFA/TIS/H₂O 10/85/2.5/2.5混合物中。4小时后，浓缩该溶液，并使用50％二乙醚和50％二异丙醚的混合物在冰上沉淀所述肽。然后通过在3000rpm离心5分钟收集所述肽，并慢慢倒出上清。将沉淀物用二乙醚洗涤几次，然后将粗产物在真空下保持过夜以除去剩余的溶剂。将所述粗产物溶解于水中，通过如前述制备方法纯化。

化合物9：A＝DOTA，B₁＝4-氨基-1-羧甲基-哌啶；B₂＝无，Xaa₁＝ DPhe；Xaa₂＝Gly；

DOTA-4-氨基-1-羧甲基-哌啶-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leuψ(CH OH-CH₂)-(CH₂)₂-CH₃，C₇₄H ₁₁₂N₁₈O₁₇，所计算的(m/z)：1524.8，所发现的 [M+K]⁺：1564.3

化合物10：A＝DOTA，B₁＝15-氨基-4，7，10，13-四氧杂十五酰基；B₂＝4- 氨基-1-羧甲基-哌啶，Xaa₁＝DPhe；Xaa₂＝Gly；

DOTA-PEG₄-4-氨基-1-羧甲基-哌啶-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Le uψ(CHOH-CH₂)-(CH₂)₂-CH₃；C₈₆H₁₃₅N₁₉O₂₂，所计算的(m/z)：1786.9，所发现的[M+K]⁺：1811.1

化合物11：A＝DOTA，B₁＝15-氨基-4，7，10，13-四氧杂十五酰基；B₂＝无， Xaa₁＝DPhe；Xaa₂＝Gly；

DOTA-PEG₄-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leuψ(CHOH-CH₂)-(CH₂)₂- CH₃

C₇₈H₁₂₁N₁₇O₂₁，所计算的(m/z)：1632.8，所发现的[M+K]⁺：1672.2

实施例4(A-B-C-3)

DOTA-间隔区-Xaa₁ ⁶-Gln⁷-Trp⁸-Ala⁹-Val¹⁰-Xaa₂ ¹¹-His¹²X_aa3 ¹³X_aa4 ¹⁴NH₂具有如下一般序列的铃蟾肽缀合物的合成：

DOTA-间隔区-Xaa₁ ⁶-Gln⁷-Trp⁸-Ala⁹-Val¹⁰-Xaa₂ ¹¹-His¹²-Leuψ(CH₂NH)- Phe-NH₂

a)合成肽Fmoc-Xaa₁ ⁶-Gln⁷-Trp⁸-Ala⁹-Val¹⁰-Xaa₂ ¹¹-His¹²-Leuψ(CH₂NH)- Phe-NH₂

使用Boc策略在MBHA树脂LL(100-200孔)上人工合成肽。通常地将理论加样0.59mmol/g的MBHA树脂提供给反应器，并使其在DCM中溶胀30分钟。将该树脂用在DCM中的10％DIPEA溶液处理3次(10分钟)。使用经2当量的HOBt和2当量的DIC活化的2当量的Boc-氨基酸实现 Boc-Leuψ(CH₂NH)-Phe-OH的第一次偶联。将此偶联反应混合物在室温搅拌2小时，通过Kaiser茚三酮测试监测该反应。使用在DCM中的30％TFA 对Boc进行去保护，并将这个步骤重复两次。然后用在DCM中的10％ DIPEA溶液来处理树脂，并如上所述来进行偶联。

(H-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leuψ(CH₂NH)-Phe-NH₂：C₅₆H₇₆N ₁₄O₉，所计算的(m/z)：1089.3，所发现的[M+H]⁺：1089.8

b)与SPACER和前螯合剂DOTA(^tBu)₃偶联

如上述进行偶联。

c)去保护、裂解和纯化

将所述肽用TFA(1mL)和TIS(30μL)进行处理，并将此混合物在室温搅拌5分钟。然后将此混合物在冰浴中冷却，并伴随搅拌而滴加三氟甲磺酸 (TFMSA)(100μL)。将烧瓶用瓶塞密封，并将该混合物在室温搅拌2小时。在真空下减少体积，加入冷却的二乙醚而沉淀所述肽。将沉淀物用二乙醚洗涤几次，并将粗产物在真空下干燥。将该粗产物在水中溶解，并如上述通过HPLC制备法而进行纯化。

通过分析性RP-HPLC分析所述缀合物，并通过质谱(ESI-MS)来进行鉴定。

化合物12：A＝DOTA，B₁＝4-氨基-1-羧甲基-哌啶；B₂＝无，Xaa₁＝ DPhe；Xaa₂＝Gly；Xaa₃＝Leuψ(CH₂NH)；Xaa₄＝Phe

DOTA-4-氨基-1-羧甲基-哌啶-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leuψ(CH₂ NH)-Phe-NH₂

C₇₉H₁₁₄N₂₀O₁₇，所计算的(m/z)：1615.9，所发现的[M+K]⁺：1654.9

合成具有如下一般序列的铃蟾肽缀合物：

DOTA-间隔区-Xaa₁ ⁶-Gln⁷-Trp⁸-Ala⁹-Val¹⁰-Xaa₂ ¹¹-His¹²-Leuψ(CH₂NH)- Cys-NH₂

a)合成肽：Fmoc-Xaa₁ ⁶-Gln⁷-Trp⁸-Ala⁹-Val¹⁰-Xaa₂ ¹¹-His¹²-Leuψ(CH₂NH) -Cys-NH₂

使用Boc-策略在MBHA树脂(0.59mmol/g)上通过固相来人工合成肽。使用DIC(2.5eq.)和HOBt(2.5eq.)作为活化剂使Boc-Cys(4-MeOBzl)-OH(2.5 eq.)与树脂偶联。用DIPEA(5eq.)将pH调节为8。使用溶解于酸化二甲基甲酰胺中的Boc-Leu-醛(2.5eq.)来实现经还原的键¹³ψ¹⁴(CH₂-NH)的导入。在20分钟内缓慢加入在DMF中的NaBH₃CN(2.5eq.)，并在室温搅拌该反应1小时。在还原的肽键形成之后，使用N-Boc-保护的氨基酸进行所有偶联反应。

b)与SPACER和前螯合剂DOTA(^tBu)₃偶联

如上述进行偶联。

c)去保护、裂解和纯化

如前所述那样进行去保护、裂解和纯化。通过分析性RP-HPLC分析所述缀合物并通过质谱(ESI-MS)来进行鉴定。

化合物13：A＝DOTA，B₁＝4-氨基-1-羧甲基-哌啶；B₂＝无，Xaa₁＝ DPhe；Xaa₂＝Gly；Xaa₃＝Leuψ(CH₂NH)-；Xaa₄＝Cys

DOTA-4-氨基-1-羧甲基-哌啶-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leuψ(CH ₂NH)-Cys-NH₂；C₇₃H₁₁₀N₂₀O₁₇S，所计算的(m/z)：1571.8，所发现的[M+Na] ⁺；1593.6

实施例4：合成的缀合物(化合物1-13)的放射性标记

一般程序

向在水中的螯合剂-铃蟾肽肽拮抗物缀合物的10μg等分试样加入1-2 mCi(¹¹¹InCl₃、¹⁷⁷LuCl₃或者^67/68GaCl₃)的水溶液和250-500μL的0.4M乙酸钠缓冲液(pH＝5)。将这个溶液在95℃加热30分钟，及冷却至室温10分钟。将该反应混合物5μl的等分试样加入到25μl的Ca-DTPA溶液(0.1M， pH 5.2)中，并通过HPLC分析以确定未标记的放射性核素的量。

实施例5：用¹¹⁵In标记合成的缀合物

根据相同方案进行铃蟾肽类似物与^natIn的络合。^natIn以^natInCl₃溶液形式应用，并且摩尔比率为1∶1。

实施例6(体外测定)

用于GRP受体拮抗物体外鉴定的材料和方法

试剂和肽

所有试剂均是可利用的最佳级别，并购自普通供应商。小鼠单克隆血凝素(HA)表位抗体购自Covance(Berkeley，CA)。二抗Alexa Fluor 488山羊抗小鼠IgG(H+L)来自Molecular Probes，Inc.(Eugene，OR)。铃蟾肽和拮抗物 [D-Phe⁶，Leu-NHEt¹³，des-Met¹⁴]-铃蟾肽(6-14)(GRPR-ANTAG)购自Bachem(Bubendorf，Switzerland)。RM26、RM1b、In-RM1b以及¹⁷⁵Lu-AMBA 由H.R. (Basel，Switzerland)提供。Fluo-4NW钙测定试剂盒来自Molecular Probes，Inc.(Eugene，OR)。

细胞系

如先前所述(Cescato at al.，2008)来产生稳定表达HA-部位标记的人 GRP受体(HEK-GRPR)的人胚胎肾293(HEK293)细胞，并将其在37℃及5％ CO₂于具有GlutaMAX^TM-I(DMEM)的Dulbecco’s Modified Eagle Medium中培养，所述培养基含有10％(v/v)胎牛血清(FBS)、100U/ml青霉素、100μg/ml 链霉素和750μg/ml G418。人前列腺癌细胞(PC3细胞)得自DSMZ(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH；DSMZ No：ACC465)，冰将其在37℃及5％CO₂于含有2mM L-谷氨酰胺的Ham’s F12K 中培养，所述培养基中补加10％(v/v)FBS、100U/ml青霉素和100μg/ml 链霉素。所有培养试剂均来自GibcoBRL(Grand Island，NY)。

结合亲和性的测量

如先前所述，通过在充分鉴定的前列腺癌的冷冻切片上或者在来自 HEK-GRPR或PC3细胞团块的切片上，所进行的体外受体放射自显影技术来确定各个化合物的GRP受体结合亲和性(Markwalder et al.，Can.Res.， 1999；59，1152-1159；Reubi et al.，Eur.J.Nucl.Med.，2000；27：273-282；Reubi et al.，Clin.Cancer Res.2002；81139-1146)。所使用的放射配体是¹²⁵I-[Tyr⁴]- 铃蟾肽，已知其优选标记GRP受体(Vigna etal.，Gastroenterology.1987；93： 1287-1295)，以及¹²⁵I-[D-Tyr⁶，β-Ala¹¹，Phe¹³，Nle¹⁴]-铃蟾肽(6-14)作为通用的铃蟾肽受体配体(Gastroenterology.1987；93：1287-1295)。

见表1中的结果。

免疫荧光显微镜检测

如先前所述使用HEK-GRPR细胞进行基于免疫荧光显微镜检测的内在化测定(Cescato et al.，2006；Cescato et al.，2008)。简而言之，使HEK-GRPR 细胞在聚-D-赖氨酸(20μg/ml)(Sigma-Aldrich，St.Louis，MO)包被的35mm 的4孔平板(Cellstar，GreinerBio-One GmbH，Frickenhausen，Germany)上生长。为了进行实验，将细胞在生长培养基中在37℃和5％CO₂条件下用10 nM铃蟾肽处理30分钟，或者用1μM的各种铃蟾肽类似物处理30分钟，或者为了评估潜在拮抗性而用10nM铃蟾肽在存在100倍过量体积的这些各种类似物的条件下处理30分钟，并继而进行免疫荧光显微镜检测，使用 1∶1,000稀释的小鼠单克隆HA-表位抗体作为一抗，以及1∶600稀释的Alexa Fluor 488山羊抗小鼠IgG(H+L)作为二抗。使用Leica DM RB免疫荧光显微镜和Olympus DP10相机对细胞进行成像。

由铃蟾肽诱导的GRP受体内在化被铃蟾肽类似物化合物1、In-化合物 1、化合物1b和GRPR-ANTAG有效地拮抗。将HEK-GRPR细胞用载体液 (没有肽，a)或者用10nmol/L铃蟾肽(b)处理，这是诱导次最大内在化作用的浓度。实验组(d，f，h，j)示出用10nmol/L铃蟾肽在存在1μmol/L的类似化合物1b、GRPR-ANTAG、化合物1和In-化合物1条件下所处理的细胞。1μmol/L浓度的化合物1b、GRPR-ANTAG、化合物1和In-化合物1单独的作用在实验组(c，e，g，i，k)中示出。在与所述肽温育后，如上所述来对细胞进行免疫细胞化学处理。对于铃蟾肽处理的细胞可检测到清晰的点状核周染色。这个点状染色由过量的类似的化合物1、In-化合物1、化合物1b和 GRPR-ANTAG有效消除。单独提供的化合物-1、In-化合物1、化合物1b 和GRPR-ANTAG对于GRP受体内在化无作用。

见表1和图2所示结果。

钙释放测定

在PC3细胞中使用Fluo-4NW钙测定试剂盒如先前所述那样来测量细胞钙释放情况(Magrys et al.，J.Clin.Immunol.2007，27，181-192；Michel et al.，；Cescato etal.，J.Nucl.Med.2008；49：318-326)。简而言之，将PC3细胞播种于96孔平板中(10,000个细胞/孔)，并于培养基中在37℃和5％CO₂条件下培养2天。在实验当天，将细胞用含有2.5mM丙磺舒(probenecid) 的测定缓冲液(1×HBSS，20mM HEPES)洗涤，然后在37℃和5％CO₂条件下用100μL/孔的在测定缓冲液中含有2.5mM丙磺舒的Fluo-4NW染料来进行30分钟的载入(load)，然后在室温进一步载入30分钟。为了测量在用待检测铃蟾肽类似物刺激之后细胞内钙转移情况，将载入染料的细胞移至 SpectraMax M2^e(Molecular Devices，Sunnyvale，CA)。在室温动态记录60秒细胞内钙转移情况，在存在指定浓度类似物条件下于520nm监测荧光发射情况(λ_ex＝485nm)。在加入25μM离子霉素之后测量最大荧光值(F-max)。针对载入染料的未处理的细胞测量基线(F-基线)。如先前报道的那样，数据以最大钙应答百分比表示(F-max-F-基线＝最大钙应答的100％)(Magrys et al.，J.Clin.Immunol.2007，27，181-192；Michel et al.，Cescato et al.，J.Nucl. Med.2008；49：318-326))。所有试验均一式三份的重复至少三次。

图1示出In-化合物1和化合物1a表现类似拮抗物，在存在铃蟾肽(BB) 的条件下使铃蟾肽剂量-反应曲线向右侧偏移。

见表1和图1中所示结果。

化合物1：DOTA-Gly-氨基苯甲酰基-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Sta- Leu-NH₂

化合物2：DOTA-4-氨基-1-羧甲基-哌啶-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His -Sta-Leu-NH₂

化合物3：DOTA-4-氨基-1-哌啶-4-羧酸-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His -Sta-Leu-NH₂

化合物4：DOTA-15-氨基-4，7，10，13-四氧杂十五烷酸-D-Phe-Gln-Trp-Ala -Val-Gly-His-Sta-Leu-NH₂

化合物5：DOTA-(15-氨基-4，7，10，13-四氧杂十五烷酸)-(4-氨基-1-羧甲基-哌啶)-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Sta-Leu-NH₂

化合物6：DOTA-二氨基丁酸-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Sta-Leu- NH₂

化合物7：DOTA-4-(2-氨基乙基)-1-羧甲基-哌嗪-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val -Gly-His-Sta-Leu-NH₂

化合物8：DOTA-(5-氨基-3-氧杂-戊基)-琥珀酰胺酸-D-Phe-Gln-Trp-Ala -Val-Gly-His-Sta-Leu-NH₂

化合物9：DOTA-4-氨基-1-羧甲基-哌啶-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His -Leuψ(CHOH-CH₂)-(CH₂)₂-CH₃

化合物10：DOTA-(15-氨基-4，7，10，13-四氧杂十五烷酸-4-氨基-1-羧甲基-哌啶-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leuψ(CHOH-CH₂)-(CH₂)₂-CH₃

化合物11：DOTA-15-氨基-4，7，10，13-四氧杂十五烷酸-D-Phe-Gln-Trp- Ala-Val-Gly-His-Leuψ(CHOH-CH₂)-(CH₂)₂-CH₃

化合物12：DOTA-4-氨基-1-羧甲基-哌啶-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His -Leuψ(CH₂NH)-Phe-NH₂

化合物13：DOTA-4-氨基-1-羧甲基-哌啶-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His -Leuψ(CH₂NH)-Cys-NH₂

化合物14：N₄-三唑-dPEG₁-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Sta-Leu-NH₂

表1：BN类似物的体外GRP受体结合、信号传导和内在化性质

在与¹¹⁵In非放射性同位素络合之后测量化合物1、2和9的结合亲和性。数据表明与同位素的络合不影响对受体的结合亲和性以及拮抗物性质。

Claims

1.具有如下式(I)的铃蟾肽类似肽拮抗物缀合物：

(I)[A-(B)_n]_x-C

其中

X＝1,

n是从1至3的整数，

A是包含至少一种放射性核素金属的金属螯合剂，

B是连接至C的N末端的间隔区或者是共价键，

C是序列如下的铃蟾肽类似肽拮抗物，D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Sta-Leu-NH₂；

以及其药物可接受的无机酸盐或者有机酸盐、水合物、络合物、酯、酰胺和溶剂化物。

2.权利要求1的铃蟾肽类似肽拮抗物缀合物，其中所述金属螯合剂(A)是用于三价金属的金属螯合剂。

3.权利要求2的铃蟾肽类似肽拮抗物缀合物，其中所述用于三价金属的金属螯合剂选自1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸、1,4,7-三氮杂环壬烷-1-琥珀酸-4,7-三乙酸、1,4,7-三氮杂环壬烷-1-戊二酸-4,7-二乙酸、1,4,7-三氮杂环壬烷-1,4,7-三乙酸。

4.权利要求3的铃蟾肽类似肽拮抗物缀合物，其中所述金属螯合剂是1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸。

5.权利要求1的铃蟾肽类似肽拮抗物缀合物，其中所述放射性核素金属选自^133mIn、⁶⁸Ga、和¹¹¹In，并且其中所述放射性核素金属用于成像。

6.权利要求5的铃蟾肽类似肽拮抗物缀合物，其中所述放射性核素金属是⁶⁸Ga。

7.权利要求1的铃蟾肽类似肽拮抗物缀合物，其中所述放射性核素金属选自⁹⁰Y和¹⁷⁷Lu，并且其中所述放射性核素金属用于放射治疗。

8.权利要求1的铃蟾肽类似肽拮抗物缀合物，其中与C的N-末端连接的间隔区B具有通式II：

II B₁-B₂

其中

B₁是共价键或者天然氨基酸或者非天然氨基酸或者线型二胺或者环状二胺，

B₂是共价键或者天然氨基酸或者非天然氨基酸或者线型羧酸或者环状羧酸，

附带条件是B₁和B₂不能同时均是共价键，以及当B₁是二胺时，B₂是羧酸。

9.权利要求8的铃蟾肽类似肽拮抗物缀合物，其中所述间隔区B选自：

a)-Gly-氨基苯甲酰基-，

b)-4-氨基-1-羧甲基-哌啶-，

c)-4-氨基-1-哌啶-4-羧酸-，

d)15-氨基-4,7,10,13-四氧杂十五烷酸-，

e)-(15-氨基-4,7,10,13-四氧杂十五烷酸)-(4-氨基-1-羧甲基-哌啶)-，

f)-二氨基丁酸-。

10.权利要求1-9中任一项的铃蟾肽类似肽拮抗物缀合物，附带条件是所述铃蟾肽类似肽拮抗物缀合物具有式(I’)，

(I’)[A’-(B)_n]_x-C

其中

包括了A’来代替A，且除了其是没有放射性核素金属的金属螯合剂之外，其具有与A相同含义。

11.包含权利要求1-10任一项的任一铃蟾肽类似肽拮抗物缀合物的药物组合物。

12.权利要求1-10任一项的任一铃蟾肽类似肽拮抗物缀合物在制备用于结合铃蟾肽受体和/或用于抑制铃蟾肽受体的药物中的用途。

13.权利要求12的用途，其中所述药物用于结合胃泌素释放肽受体(GRP)和/或抑制胃泌素释放肽受体。

14.制备权利要求1的任一铃蟾肽类似肽拮抗物缀合物的方法，包括：

-用合适的放射性核素金属或者金属原子对具有式(I’)的铃蟾肽类似肽拮抗物缀合物进行放射性螯合，

(I’)[A’-(B)_n]_x-C

其中

15.放射药物有效量的权利要求1-10中任一项的铃蟾肽类似肽拮抗物缀合物在生产成像剂中的用途，所述成像剂用于对表达铃蟾肽受体的肿瘤细胞和/或肿瘤及肿瘤周围血管进行成像。

16.权利要求15的用途，其中所述铃蟾肽受体为GRP受体。

17.权利要求15或16的用途，其中所述肿瘤细胞是指选自如下的癌的肿瘤细胞：

-前列腺癌，

-乳腺癌，

-胃肠道基质肿瘤，

-小细胞肺癌，

-肾细胞癌，

-胃肠胰腺神经内分泌肿瘤，

-头颈部鳞状细胞癌，

-成神经细胞瘤，以及

-食管鳞状细胞癌，

并且其中

所述肿瘤及肿瘤周围血管是指选自如下的癌的肿瘤及肿瘤周围血管：

-卵巢癌，

-子宫内膜癌，及

-胰腺癌。

18.权利要求15或16的用途，其中所述肿瘤细胞是前列腺癌癌转移的肿瘤细胞。

19.权利要求15或16的用途，其中所述肿瘤细胞是乳腺癌癌转移的肿瘤细胞。

20.治疗有效量的权利要求1-10任一项的任一铃蟾肽类似肽拮抗物缀合物在生产用于治疗或者预防肿瘤细胞和/或肿瘤及肿瘤周围血管相关疾病的药物中的用途，其中所述肿瘤细胞相关疾病选自：

-前列腺癌，

-乳腺癌，

-胃肠道基质肿瘤，

-小细胞肺癌，

-肾细胞癌，

-胃肠胰腺神经内分泌肿瘤，

-头颈部鳞状细胞癌，

-成神经细胞瘤，以及

-食管鳞状细胞癌

并且其中

所述肿瘤及肿瘤周围血管相关疾病选自：

-前列腺癌，及

-乳腺癌。

21.权利要求20的用途，其中所述肿瘤细胞相关疾病是前列腺癌癌转移。

22.权利要求20的用途，其中所述肿瘤细胞相关疾病是乳腺癌癌转移。

23.权利要求20的用途，其中所述肿瘤及肿瘤周围血管相关疾病是前列腺癌癌转移。

24.权利要求20的用途，其中所述肿瘤及肿瘤周围血管相关疾病是乳腺癌癌转移。

25.用于制备放射治疗剂或者放射性药物成像剂的试剂盒，其包含含有预定量的权利要求10的铃蟾肽类似肽拮抗物缀合物的小瓶，以及用于对具有金属螯合剂的制剂进行放射标记的可接受的载体、稀释剂、赋形剂或者佐剂。