KR20110009075A - 단백질 및 펩티드의 전달을 위한 국소 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명의 양상은 생물학적 활성제, 특히 펩티드 및 핵산의 안정화, 저장, 및 전달 조성물 및 방법에 관한 것이다. 특히 바람직한 실시양태는 재조합 천연 발생 인간 간세포 성장 인자 (HGF), 예를 들어 dHGF, 다섯 아미노산 말단절단형 HGF 변이체, 및 신체 온도에서 결정질 형태로 유지되는 하나 이상의 모노글리세라이드를 포함하는 조성물을 포함한다. 경우에 따라, 겔화제, 예를 들어 히드록시에틸셀룰로스, 및/또는 항병원성 화합물 (예를 들어, 부피바카인)이 조성물에 포함될 수 있다. 피부 상태의 개선, 호전, 또는 치료를 위한 이러한 조성물의 사용 방법 또한 실시양태이다.

Description

단백질 및 펩티드의 전달을 위한 국소 조성물{TOPICAL COMPOSITIONS FOR DELIVERY OF PROTEINS AND PEPTIDES}

본 발명의 양상은 단백질 및 펩티드, 특히 간세포 성장 인자 (HGF) 및 이들의 변이체의 안정화, 저장, 및 전달 조성물 및 방법, 및 이러한 안정화된 조성물을 사용하여 인간의 병, 예를 들어 피부 궤양 및 피부 암 또는 전암 상태를 억제, 호전, 또는 치료하는 방법에 관한 것이다.

단백질/펩티드-기재 약물은 약물 전달에서 독특한 난점을 제시한다. 위장관에서 변성에 대한 단백질/펩티드의 감수성은 경구 투여를 불리하게 만든다. 그 결과, 단백질/펩티드-기재 약물은 일반적으로 멸균 주사가능한 용액의 형태로 전신적으로 투여된다. 단백질/펩티드는 혈류에서 매우 짧은 약동학적 반감기를 가져 빠르게 물질대사되고 없어지기(clear) 때문에, 비경구 투여 역시 비효율적이다. 그런 이유로, 많은 조사관들이 단백질/펩티드-기재 치료제를 안정화하고, 저장하고, 전달하기 위한 대안 접근법을 개발하고자 한다.

예를 들어 수술 후 또는 피부 궤양을 치료하기 위한 종래 창상 치료에서, 멸균 단백질/펩티드 함유 용액이 창상 부위로 주입된다. 이러한 적용에서 용액의 낮은 점도는 투여를 어렵게 하고, 용해된 단백질/펩티드는 특히 저장 동안 쉽게 분해된다. 유효 성분이 고체 분말의 형태로 존재하고 액체에 노출시 반고체 제제를 형성할, 단백질/펩티드-기재 치료제의 제조가 기술되었다 (예를 들어, 본 명세서에 그 전체가 참고문헌으로 명확히 도입된, 미국 특허 제5,192,743호 참조). 그러나, 민감한 단백질/펩티드를 함유하는 재구성가능한 형태의 현재 제품들은 특히 제품이 실온에서 저장되는 경우, 일반적으로 좋지못한 안정성을 가진다.

본 분야의 조사관들이 직면하는 다른 어려움은 임상 세팅에서 개방창에의 이러한 제품의 적용에 관한 것이다. 즉, 피부 궤양, 찰과상, 미용상 흠, 또는 열상을 비롯한 많은 개방창은, 일부는 종래 치료 접근법 (예를 들어, 항생 요법)에 내성인 다양한 병원체 (예를 들어, 박테리아, 진균, 또는 다른 균 또는 미생물)를 함유한다. 병원체의 종은 흔히 "환자 기원"의 것이고 전신 감염을 일으키진 않을 것이지만, 병원체의 존재는 창상의 치유를 막기에 충분하다. 예를 들어 이러한 병원체의 일부는 치료제에 존재하는 단백질/펩티드를 분해하는 프로테아제를 생성한다.

단백질/펩티드-기재 제품의 좋지않은 안정성은 단백질 또는 펩티드와 상호작용하여 분자의 구조를 변경시키고 이의 기능을 감소 또는 억제시키는, 제제내 지질 및 계면활성제의 존재와 관련이 있을 수 있다. 소량의 지질 및 계면활성제는 단백질 또는 펩티드의 삼차원 구조를 변화시켜 제품의 효능을 감소시킬 수 있다. 예를 들어 유아용 조제유 에멀젼내의 모노글리세라이드의 존재는 제품의 열 안정성을 감소시키는 것으로 밝혀졌다 (예를 들어, 문헌 [McSweeney et al., Food Hydrocolloids, Volume 22, Issue 5, July 2008, Pages 888-898] 참조).

단백질/펩티드-기재 제품의 좋지않은 안정성은 또한 제품의 치료 투여량을 정확히 제공하는 것을 매우 어렵게 만든다. 즉, 단백질 또는 펩티드 (유효 성분)의 분해 또는 불안정화의 속도가 환자마다 다를 수 있기 때문에, 안전하고 효과적인 단백질/펩티드-기재 제품을 제제화하는 것은 어렵다. 종종, 이러한 문제는 유효 성분을 더 제공함으로써 감안되나, 이러한 접근법은 특히나 유효 성분의 증가된 농도에서의 제품의 약리학적 활성이 낮은 농도에서 나타나는 것과 다른 제제에서 유해할 수 있다.

이러한 것이 현재 간세포 성장 인자 (HGF)-함유 제품의 경우이다. HGF는 정상 상피세포(epitheliocyte)의 성장을 촉진시키고 세포 운동성을 개선시키는 것으로 공지되어 있다 (예를 들어, 1994년 8월 30일자로 공고된, 미국 특허 제5,342,831호 참조). HGF-함유 창상 치유 제품이 거의 20년 동안 고려되어 왔으나, 이러한 제품의 개발은 분자의 좋지않은 안정성 및 이의 독특한 생물학적 특성에 의해 방해되었다. HGF는 혈액에서 오직 약 10분의 반감기를 가지는 상대적으로 불안정한 분자이다 (예를 들어, 2007년 7월 24일자로 공고된, 미국 특허 제7,247,620호 참조). HGF의 자극 활성은 농도 의존적으로 여겨지고, 최대 세포 증식이 2.5 및 5 ng/ml에서 나타났으며 보다 높은 농도는 비효과적인 것으로 보고되었다 (예를 들어, 문헌 [Bussolino et al., J. of Cell Biol. Vol. 119, No. 3, 629-641 (1992)] 참조). 이러한 요인들은 본 분야의 일부사람들이 HGF 단백질의 투여를 위한 구체적이고 효과적인 방법, 효과적인 투여 등이 아직 밝혀지지 않은 것으로 결론짓도록 하였다 (예를 들어, 2007년 7월 24일자로 공고된, 미국 특허 제7, 247,620호 참조). 그런 이유로, 안정화된 단백질/펩티드-기재 치료제의 새로운 제제, 특히 HGF를 함유하는 안정화된 제제의 개발이 나타난다.

단백질/펩티드-기재 치료제, 특히 HGF-함유 제제의 단백질/펩티드 ("유효 성분")가 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 또는 18개 탄소의 탄소 사슬 길이, 바람직하게 10 내지 16개 탄소 (예를 들어, 12, 13, 14, 15, 또는 16개 탄소)의 탄소 사슬 길이, 바람직하게 12, 13, 또는 14개 탄소, 및 가장 바람직하게 12 또는 14개 탄소인 탄소 사슬 길이를 가질 수 있는, 유효량의 결정질 모노글리세라이드 (예를 들어, α 또는 β-결정질 모노글리세라이드)를 포함함으로써 안정화될 수 있다는 것이 발견되었다. 따라서, 본 명세서에 기술된 본 발명의 양상은 단백질 또는 펩티드 (예를 들어, 전장 HGF 또는 dHGF (HGF의 천연 발생 다섯 아미노산 말단절단 형태)와 같은 HGF 분자, 또는 다른 천연 발생 HGF 분자 또는 이들의 변이체 (예를 들어, NK1, dNK1, NK2, dNK2, NK3, dNK3, NK4 또는 dNK4)) 및 15 ℃ 이상, 바람직하게 20 ℃ 이상, 및 바람직하게 23 ℃ 이상의 온도에서 결정질 형태로 유지되는 모노글리세라이드 (예를 들어, α 및/또는 β-결정질 모노글리세라이드) 하나 또는 복수의 혼합물 (예를 들어, 15 ℃, 16 ℃, 17 ℃, 18 ℃, 19 ℃, 20 ℃, 21 ℃, 22 ℃, 23 ℃, 24 ℃, 25 ℃, 26 ℃, 27 ℃, 28 ℃, 29 ℃, 30 ℃, 31 ℃, 32 ℃, 33 ℃, 34 ℃, 35 ℃, 36 ℃, 37 ℃, 38 ℃, 39 ℃, 40 ℃, 41 ℃, 또는 42 ℃ 이상의 온도에서, 실질적으로 결정질 형태, 예를 들어 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 또는 95 % 이상의 결정질 형태로 유지되는 α 및/또는 β-결정질 모노글리세라이드)을 포함하는 조성물에 관한 것이다. 달리 말하자면, 본 명세서에서 개시되는 조성물 및 방법은 단백질/펩티드-기재 제제 (예를 들어, HGF 단백질, 예를 들어 재조합, 천연 발생 전장 HGF 또는 dHGF 또는 이들의 재조합 천연 발생 변이체, 예를 들어, NK1, dNK1, NK2, dNK2, NK3, dNK3, NK4 또는 dNK4를 함유하는 제제) 및 42 ℃, 41 ℃, 40 ℃, 39 ℃, 38 ℃, 37 ℃, 36 ℃, 35 ℃, 34 ℃, 33 ℃, 32 ℃, 31 ℃, 30 ℃, 29 ℃, 28 ℃, 27 ℃, 26 ℃, 25 ℃, 24 ℃, 23 ℃, 22 ℃, 21 ℃, 20 ℃, 19 ℃, 18 ℃, 17 ℃, 16 ℃, 또는 15 ℃ 이하의 온도, 바람직하게 피부 온도에서 결정질 형태로 유지되는, 모노글리세라이드 (예를 들어, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 또는 18개 탄소, 바람직하게, 12 또는 14개 탄소의 탄소 사슬 길이를 가지는 α 및/또는 β-결정질 모노글리세라이드) 하나 또는 복수의 혼합물을 이용한다. 전술한 조성물의 제조 및 사용 방법 (예를 들어, 창상 또는 피부 암 또는 전암 상태의 치유의 개선, 호전, 또는 촉진 방법에서)이 또한 고려된다.

일부 실시양태는 결정질 모노글리세라이드와 함께 항균 효과를 향상시키기 위하여 추가적으로 국소 마취 약물 (예를 들어, 부피바카인)을 포함한다. 즉, 일부 제제에서, 결정질 모노글리세라이드 (예를 들어, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 또는 18개 탄소의 탄소 사슬 길이, 바람직하게 10 내지 16개 탄소 (예를 들어, 12, 13, 14, 15, 또는 16개 탄소)의 탄소 사슬 길이, 바람직하게 12, 13, 또는 14개 탄소, 및 가장 바람직하게 12 또는 14개 탄소인 탄소 사슬 길이를 가질 수 있는, α 또는 β-결정질 모노글리세라이드)를 포함하는 단백질/펩티드-함유 제품으로 국소 마취 약물 (예를 들어, 부피바카인)의 첨가는 향상된 또는 상승작용적 항균 효과, 및 보다 잘 안정화된 단백질/펩티드를 제공한다고 생각된다. 바람직하게, 국소 마취제는 국소 마취에 필요한 양 미만의 양으로 포함된다. 달리 말하자면, 일부 실시양태에서, 본 명세서에서 개시되는 조성물 및 방법은 단백질/펩티드-기재 제제 (예를 들어, HGF 단백질, 예를 들어 재조합, 천연 발생 전장 HGF 또는 dHGF 또는 이들의 재조합 천연 발생 변이체, 예를 들어, NK1, dNK1, NK2, dNK2, NK3, dNK3, NK4 또는 dNK4를 함유하는 제제) 및 42 ℃, 41 ℃, 40 ℃, 39 ℃, 38 ℃, 37 ℃, 36 ℃, 35 ℃, 34 ℃, 33 ℃, 32 ℃, 31 ℃, 30 ℃, 29 ℃, 28 ℃, 27 ℃, 26 ℃, 25 ℃, 24 ℃, 23 ℃, 22 ℃, 21 ℃, 20 ℃, 19 ℃, 18 ℃, 17 ℃, 16 ℃, 또는 15 ℃ 이하의 온도, 바람직하게 피부 온도에서 결정질 형태로 유지되는, 모노글리세라이드 (예를 들어, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 또는 18개 탄소, 바람직하게, 12 또는 14개 탄소의 탄소 사슬 길이를 가지는 α 및/또는 β-결정질 모노글리세라이드) 하나 또는 복수의 혼합물을 이용하고, 치료양의 국소 마취 약물 (예를 들어, 부피바카인)을 추가적으로 포함하며 이는 국소 마취에 필요한 양 이하의 농도로 존재할 수 있다.

다른 실시양태는 하나 이상의 결정질 모노글리세라이드 및 국소 마취 약물 (예를 들어, 부피바카인)에 추가적으로 또는 이 대신에, 하나 이상의 항병원성 화합물을 추가적으로 포함한다. 본 발명의 일부 양상에서, 부피바카인은 그 자체가 항병원성 화합물이고 다른 항균제는 제공되지 않으며, 다른 제제에서는 부피바카인 외의 다른 항병원성 화합물이 제공된다. 일부 실시양태에서, 전술한 조성물은 부피바카인에 추가적으로 또는 대신에 항생제, 항진균 조성물, 3 내지 6개 탄소 원자를 가지는 디올, 니트로이미다졸 유도체, 이미다졸 유도체, 카르바미드, 및 아미드 유형의 국소 마취제로 구성된 군으로부터 선택되는 항병원성 화합물을 포함한다. 즉, 본 발명의 양상은 결정질 모노글리세라이드 (예를 들어, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 또는 18개 탄소의 탄소 사슬 길이, 바람직하게 10 내지 16개 탄소 (예를 들어, 12, 13, 14, 15, 또는 16개 탄소)의 탄소 사슬 길이, 바람직하게 12, 13, 또는 14개 탄소, 및 가장 바람직하게 12 또는 14개 탄소인 탄소 사슬 길이를 가질 수 있는, α 또는 β-결정질 모노글리세라이드)를 포함하는 단백질/펩티드-함유 제품에 추가적으로 항생제, 항진균 조성물, 3 내지 6개 탄소 원자를 가지는 디올, 니트로이미다졸 유도체, 이미다졸 유도체, 카르바미드, 및 아미드 유형의 국소 마취제로 구성된 군으로부터 선택되는 항병원성 화합물을 포함하고, 경우에 따라 부피바카인과 같은 국소 마취 약물을 포함할 수 있다. 달리 말하자면, 일부 실시양태에서, 본 명세서에서 개시되는 조성물 및 방법은 단백질/펩티드-기재 제제 (예를 들어, HGF 단백질, 예를 들어 재조합, 천연 발생 전장 HGF 또는 dHGF 또는 이들의 재조합 천연 발생 변이체, 예를 들어, NK1, dNK1, NK2, dNK2, NK3, dNK3, NK4 또는 dNK4를 함유하는 제제) 및 42 ℃, 41 ℃, 40 ℃, 39 ℃, 38 ℃, 37 ℃, 36 ℃, 35 ℃, 34 ℃, 33 ℃, 32 ℃, 31 ℃, 30 ℃, 29 ℃, 28 ℃, 27 ℃, 26 ℃, 25 ℃, 24 ℃, 23 ℃, 22 ℃, 21 ℃, 20 ℃, 19 ℃, 18 ℃, 17 ℃, 16 ℃, 또는 15 ℃ 이하의 온도, 바람직하게 피부 온도에서 결정질 형태로 유지되는, 모노글리세라이드 (예를 들어, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 또는 18개 탄소의 탄소 사슬 길이를 가지는 α 및/또는 β-결정질 모노글리세라이드) 하나 또는 복수의 혼합물을 이용하고, 부피바카인과 같은 국소 마취 약물에 추가적으로 또는 대신에 항생제, 항진균 조성물, 3 내지 6개 탄소 원자를 가지는 디올, 니트로이미다졸 유도체, 이미다졸 유도체, 카르바미드, 및 아미드 유형의 국소 마취제로 구성된 군으로부터 선택되는 항병원성 화합물을 추가적으로 포함한다.

일부 실시양태는 하나 이상의 점도증가제를 추가적으로 포함한다. 바람직한 점도증가제는 히드록시에틸셀룰로스, 메틸셀룰로스, 히드록시프로필 셀룰로스, 카르복시메틸 셀룰로스, 히드록시프로필 메틸 셀룰로스 (E464), 및 히드록시에틸 메틸 셀룰로스로 구성된 군으로부터 선택되는 셀룰로스 유도체를 포함하나 이로 제한되지는 않는다. 즉, 일부 실시양태는 결정질 모노글리세라이드 (예를 들어, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 또는 18개 탄소의 탄소 사슬 길이, 바람직하게 10 내지 16개 탄소 (예를 들어, 12, 13, 14, 15, 또는 16개 탄소)의 탄소 사슬 길이, 바람직하게 12, 13, 또는 14개 탄소, 및 가장 바람직하게 12 또는 14개 탄소인 탄소 사슬 길이를 가질 수 있는, α 또는 β-결정질 모노글리세라이드)를 포함하는 단백질/펩티드-함유 제품에 추가적으로 히드록시에틸셀룰로스, 메틸셀룰로스, 히드록시프로필 셀룰로스, 카르복시메틸 셀룰로스, 히드록시프로필 메틸 셀룰로스 (E464), 및 히드록시에틸 메틸 셀룰로스로 구성된 군으로부터 선택되는 셀룰로스 유도체와 같은 점도증가제를 포함하고, 경우에 따라 부피바카인과 같은 국소 마취 약물 및/또는 항생제, 항진균 조성물, 3 내지 6개 탄소 원자를 가지는 디올, 니트로이미다졸 유도체, 이미다졸 유도체, 카르바미드, 및 아미드 유형의 국소 마취제로 구성된 군으로부터 선택되는 항병원성 화합물을 포함할 수 있다. 달리 말하자면, 일부 실시양태에서, 본 명세서에서 개시되는 조성물 및 방법은 단백질/펩티드-기재 제제 (예를 들어, HGF 단백질, 예를 들어 재조합, 천연 발생 전장 HGF 또는 dHGF 또는 이들의 재조합 천연 발생 변이체, 예를 들어, NK1, dNK1, NK2, dNK2, NK3, dNK3, NK4 또는 dNK4를 함유하는 제제) 및 42 ℃, 41 ℃, 40 ℃, 39 ℃, 38 ℃, 37 ℃, 36 ℃, 35 ℃, 34 ℃, 33 ℃, 32 ℃, 31 ℃, 30 ℃, 29 ℃, 28 ℃, 27 ℃, 26 ℃, 25 ℃, 24 ℃, 23 ℃, 22 ℃, 21 ℃, 20 ℃, 19 ℃, 18 ℃, 17 ℃, 16 ℃, 또는 15 ℃ 이하의 온도, 바람직하게 피부 온도에서 결정질 형태로 유지되는, 모노글리세라이드 (예를 들어, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 또는 18개 탄소, 바람직하게, 12 또는 14개 탄소의 탄소 사슬 길이를 가지는 α 및/또는 β-결정질 모노글리세라이드) 하나 또는 복수의 혼합물을 이용하고, 경우에 따라 히드록시에틸셀룰로스, 메틸셀룰로스, 히드록시프로필 셀룰로스, 카르복시메틸 셀룰로스, 히드록시프로필 메틸 셀룰로스 (E464), 및 히드록시에틸 메틸 셀룰로스로 구성된 군으로부터 선택되는 셀룰로스 유도체와 같은 점도증가제, 및 경우에 따라 항생제, 항진균 조성물, 3 내지 6개 탄소 원자를 가지는 디올, 니트로이미다졸 유도체, 이미다졸 유도체, 카르바미드, 및 아미드 유형의 국소 마취제로 구성된 군으로부터 선택되는 항병원성 화합물, 및/또는 경우에 따라 부피바카인과 같은 국소 마취 약물을 추가적으로 포함한다.

많은 실시양태에서, 조성물은 건조 분말이고, 다른 실시양태에서, 조성물은 재구성된 겔 또는 크림이다. 일부 실시양태에서, 재구성된 겔 또는 크림은 하나 이상의 결정질 모노글리세라이드 (예를 들어, 42 ℃, 41 ℃, 40 ℃, 39 ℃, 38 ℃, 37 ℃, 36 ℃, 35 ℃, 34 ℃, 33 ℃, 32 ℃, 31 ℃, 30 ℃, 29 ℃, 28 ℃, 27 ℃, 26 ℃, 25 ℃, 24 ℃, 23 ℃, 22 ℃, 21 ℃, 20 ℃, 19 ℃, 18 ℃, 17 ℃, 16 ℃, 또는 15 ℃ 이하의 온도, 바람직하게 피부 온도에서 결정질 형태로 유지되는, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 또는 18개 탄소의 탄소 사슬 길이, 바람직하게 10 내지 16개 탄소 (예를 들어, 12, 13, 14, 15, 또는 16개 탄소)의 탄소 사슬 길이, 바람직하게 12, 13, 또는 14개 탄소, 및 가장 바람직하게 12 또는 14개 탄소인 탄소 사슬 길이를 가지는 α 및/또는 β-결정질 모노글리세라이드) 및 점도증가제를 포함하는 건조 분말을 단백질/펩티드, 바람직하게 HGF 단백질, 예를 들어 재조합, 천연 발생 전장 HGF 또는 dHGF (HGF의 다섯 아미노산 말단절단 형태) 또는 이들의 재조합 천연 발생 변이체 (예를 들어, NK1, dNK1, NK2, dNK2, NK3, dNK3, NK4 또는 dNK4)를 포함하는 액체와 혼합함으로써 얻어진다.

다른 실시양태에서, 재구성은 다구획 장치 내부에서 수행되고, 여기서 주변과의 접촉을 억제하면서 (예를 들어, 폐쇄/멸균 시스템을 유지하면서) 요망시 다른 구획의 내용물간의 접촉을 허용하도록 구성된 (예를 들어, 압착시 밀봉의 파손, 또는 반전) 패키징 장치를 통하여 조성물의 건조 부분이 조성물의 유체 부분과 접촉하게 된다. 고려되는 하나의 장치는 압력에 의해 파손가능하여 구획의 성분들이 혼합되게 하여 재구성 반응을 개시할 수 있는, 이중 내부 구획을 갖는 사셰(sachet)이다.

본 발명의 양상은 또한 전술한 조성물의 제조 및 사용 방법을 포함한다. 하나의 접근법으로, 본 명세서에 기술된 조성물은 42 ℃, 41 ℃, 40 ℃, 39 ℃, 38 ℃, 37 ℃, 36 ℃, 35 ℃, 34 ℃, 33 ℃, 32 ℃, 31 ℃, 30 ℃, 29 ℃, 28 ℃, 27 ℃, 26 ℃, 25 ℃, 24 ℃, 23 ℃, 22 ℃, 21 ℃, 20 ℃, 19 ℃, 18 ℃, 17 ℃, 16 ℃, 또는 15 ℃ 이하의 온도, 바람직하게 피부 온도에서 결정질 형태로 유지되는, 체온에서 및/또는 그 미만에서 결정질 형태로 유지되는 하나 이상의 모노글리세라이드 (예를 들어, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 또는 18개 탄소, 바람직하게 12 또는 14개 탄소의 탄소 사슬 길이를 가지는 α 및/또는 β-결정질 모노글리세라이드) 및 단백질 또는 펩티드 (예를 들어, HGF 단백질, 예를 들어 전장 HGF 또는 dHGF (HGF의 다섯 아미노산 말단절단 형태) 또는 이들의 변이체 (예를 들어, NK1, dNK1, NK2, dNK2, NK3, dNK3, NK4 또는 dNK4))를 포함하는 용액을 제공하고, 상기 용액을 건조시켜 건조 과립을 형성 (여기서, 건조 공정은 모노글리세라이드의 결정질 구조를 보존함)함으로써 제조된다. 이용가능한 많은 건조 방법이 본 명세서에 기술된 하나 이상의 제제를 제조하기 위해 사용될 수 있다. 바람직하게, 건조 동안의 온도는 모노글리세라이드 결정의 융점을 초과하지 않는다. 일부 접근법에서, 이 방법에서 사용되는 용액은 히드록시에틸셀룰로스, 메틸셀룰로스, 히드록시프로필 셀룰로스, 카르복시메틸 셀룰로스, 히드록시프로필 메틸 셀룰로스 (E464), 및 히드록시에틸 메틸 셀룰로스로 구성된 군으로부터 선택되는 셀룰로스 유도체와 같은 점도증가제를 추가적으로 포함한다. 구체화된 방법 일부는 또한 단독으로 또는 상기 하나 이상의 결정질 모노글리세라이드와 함께, 하나 이상의 항병원성 화합물을 포함하는 용액을 이용한다. 바람직한 방법에서, 항병원성 화합물은 부피바카인이나, 항병원성 화합물은 3 내지 6개 탄소 원자를 가지는 디올, 니트로이미다졸 유도체, 이미다졸 유도체, 카르바미드, 및 아미드 유형의 국소 마취제로 구성된 군으로부터 선택될 수 있다.

다른 합성 접근법으로, 체온에서 및/또는 그 미만에서 결정질 형태로 유지되는 하나 이상의 모노글리세라이드 (예를 들어, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 또는 18개 탄소의 탄소 사슬 길이, 바람직하게 10 내지 16개 탄소 (예를 들어, 12, 13, 14, 15, 또는 16개 탄소)의 탄소 사슬 길이, 바람직하게 12, 13, 또는 14개 탄소, 및 가장 바람직하게 12 또는 14개 탄소인 탄소 사슬 길이를 가지는 α 또는 β-결정질 모노글리세라이드)를 포함하는 용액이 점도증가제 (예를 들어, 히드록시에틸셀룰로스, 메틸셀룰로스, 히드록시프로필 셀룰로스, 카르복시메틸 셀룰로스, 히드록시프로필 메틸 셀룰로스 (E464), 또는 히드록시에틸 메틸 셀룰로스)와 합쳐지고, 이 혼합물은 모노글리세라이드의 β-결정질 구조를 보존하는 방식으로 건조되어 건조 과립을 형성한다. 그다음, 단백질 또는 펩티드 (예를 들어, HGF 단백질, 예를 들어 전장 HGF 또는 dHGF (HGF의 다섯 아미노산 말단절단 형태) 또는 이들의 변이체 (예를 들어, NK1, dNK1, NK2, dNK2, NK3, dNK3, NK4 또는 dNK4))를 포함하는 액체가 제공되고, 하나 이상의 모노글리세라이드의 결정질 구조를 보유하는 조건하에서 단백질 또는 펩티드를 포함하는 상기 액체가 하나 이상의 모노글리세라이드 및 점도증가제를 포함하는 상기 건조 과립과 합쳐진다. 일부 접근법으로, 이 방법은 히드록시에틸셀룰로스, 메틸셀룰로스, 히드록시프로필 셀룰로스, 카르복시메틸 셀룰로스, 히드록시프로필 메틸 셀룰로스 (E464), 및 히드록시에틸 메틸 셀룰로스로 구성된 군으로부터 선택되는 셀룰로스 유도체인 점도증가제를 사용한다. 경우에 따라, 이러한 방법에서 사용되는 용액은 단독으로 또는 상기 하나 이상의 모노글리세라이드와 함께, 하나 이상의 항병원성 화합물을 추가적으로 포함한다. 바람직하게, 항병원성 화합물은 부피바카인이나, 항병원성 화합물은 3 내지 6개 탄소 원자를 가지는 디올, 니트로이미다졸 유도체, 이미다졸 유도체, 카르바미드, 및 아미드 유형의 국소 마취제로 구성된 군으로부터 선택될 수 있다.

본 명세서에서 기술된 조성물은 대상체의 피부 상태를 개선 또는 호전시키거나 또는 이의 젊은 모습을 회복시키기 위한 방법에서 사용될 수 있다. 하나의 접근법으로, 대상체의 피부 상태를 개선 또는 호전시키거나 또는 이의 젊은 모습을 회복시키는 약제를 필요로 하는 대상체를 확인하고, 임의의 하나 이상의 전술한 조성물을 확인된 대상체에게 제공한다. 대상체의 피부 상태를 개선 또는 호전시키거나 또는 이의 젊은 모습을 회복시키는 약제를 필요로 하는 대상체는 당업자들에 의해 통상적으로 수행되는 것과 같이, 임상 평가 또는 진단 시험 또는 관찰에 의해 확인될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 명세서에 기술된 조성물은 만성 당뇨병성 피부 궤양, 열상, 창상, 욕창, 욕창궤양(decubitus ulcer), 압력 괴저 또는 미용상 흠과 같은 피부 상태를 치료, 예방, 개선 또는 호전시키기 위해 사용된다. 더많은 실시양태에서, 본 명세서에 기술된 조성물은 대상체의 젊은 모습을 개선하거나 또는 대상체의 주름을 호전시키기 위해 사용된다. 경우에 따라, 피부 상태의 개선 또는 호전 또는 젊은 모습의 회복은 하나 이상의 구체화된 조성물의 적용 후, 피부 상태 또는 젊은 모습의 개선 또는 호전의 관찰, 또는 종래 진단 또는 임상 평가를 사용하여 측정될 수 있다.

따라서, 본 발명의 일부 양상에서, 피부 상태의 개선, 호전, 또는 치료를 위하거나 또는 젊은 모습의 회복 (예를 들어, 궤양, 당뇨병성 궤양, 열상, 천자, 찰과상, 미용상 찰과상, 욕창, 욕창궤양, 압력 괴저, 화상, 수술후 외상, 미용상 재건, 건선, 모발 성장, 주름 감소, 피부의 팽팽함, 피부 신생물, 바닥 세포 암종, 편평 세포 암종, 흑색종 또는 전암 피부 상태, 예를 들어 광선 각화증)을 위한 의약을 제조하기 위한, 단백질 또는 펩티드 (예를 들어, HGF 단백질, 예를 들어 전장 HGF 또는 dHGF (HGF의 다섯 아미노산 말단절단 형태) 또는 이들의 변이체 (예를 들어, NK1, dNK1, NK2, dNK2, NK3, dNK3, NK4 또는 dNK4) 및 결정질 모노글리세라이드 (예를 들어, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 또는 18개 탄소의 탄소 사슬 길이, 바람직하게 10 내지 16개 탄소 (예를 들어, 12, 13, 14, 15, 또는 16개 탄소)의 탄소 사슬 길이, 바람직하게 12, 13, 또는 14개 탄소, 및 가장 바람직하게 12 또는 14개 탄소인 탄소 사슬 길이를 가질 수 있는 α 또는 β-결정질 모노글리세라이드); 및, 경우에 따라 점도증가제 (예를 들어, 히드록시에틸셀룰로스, 메틸셀룰로스, 히드록시프로필 셀룰로스, 카르복시메틸 셀룰로스, 히드록시프로필 메틸 셀룰로스 (E464), 및 히드록시에틸 메틸 셀룰로스), 및, 경우에 따라 부피바카인과 같은, 3 내지 6개 탄소 원자를 가지는 디올, 니트로이미다졸 유도체, 이미다졸 유도체, 카르바미드, 또는 아미드 유형의 국소 마취제를 포함하는 혼합물의 사용이 고려된다.

따라서, 본 명세서에 기술된 일부 실시양태는 생물학적 활성을 가지는 단백질 또는 펩티드를 포함하는 안정화된 단백질 조성물; 및 20 ℃ 이상의 용융 온도를 가지는 하나 이상의 모노글리세라이드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 단백질은 천연 발생 간세포 성장 인자 (HGF)의 재조합 형태이고, 일부 실시양태에서는, 천연 발생 HGF의 재조합 형태는 HGF의 다섯 아미노산 말단절단 형태 (dHGF) 또는 NK1, dNK1, NK2, dNK2, NK3, dNK3, NK4 또는 dNK4로 구성된 군으로부터 선택되는 천연 발생 HGF이다. 상기 조성물의 일부에서, 모노글리세라이드는 25 ℃ 이상, 30 ℃ 이상, 또는 35 ℃ 이상의 용융 온도를 가진다. 상기 실시양태의 일부에서, 조성물은 상기 하나 이상의 모노글리세라이드에 추가적으로 항병원성 약제를 추가적으로 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 항병원성 약제는 3 내지 6개 탄소 원자를 가지는 디올, 니트로이미다졸 유도체, 이미다졸 유도체, 카르바미드, 및 아미드 유형의 국소 마취제로 구성된 군으로부터 선택되고, 일부 실시양태에서는, 항병원성 약제는 부피바카인이다. 상기 기술한 조성물은 히드록시에틸셀룰로스, 메틸셀룰로스, 히드록시프로필 셀룰로스, 카르복시메틸 셀룰로스, 히드록시프로필 메틸 셀룰로스 (E464), 및 히드록시에틸 메틸 셀룰로스로 구성된 군으로부터 선택되는, 셀룰로스 유도체와 같은 점도증가제를 추가적으로 포함할 수 있고, 상기 실시양태의 일부에서, 하나 이상의 모노글리세라이드는 10, 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16개 탄소, 바람직하게 12 또는 14개 탄소의 탄소 사슬 길이를 가진다.

본 명세서에 기술된 더많은 실시양태는 10, 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16개 탄소, 바람직하게 12 또는 14개 탄소의 탄소 길이를 가지는 β-결정질 모노글리세라이드와 제제화된 dHGF 단백질을 포함하는 안정화된 단백질 조성물에 관한 것이고, 여기서 안정화된 단백질 조성물의 상기 dHGF의 농도는 50 ng/ml 이하이다. 이러한 실시양태의 일부에서, 제제는 1-글리세롤 모노라우레이트 또는 1-글리세롤 모노미리스테이트 또는 모두를 포함하고, 제제는 또한 점도증가제 및/또는 항균제를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 점도증가제는 히드록시에틸셀룰로스이고 항균제는 부피바카인이다. 본 명세서에 기술된 실시양태의 일부에서, 안정화된 단백질 조성물의 dHGF의 농도는 10 ng/ml 이하이다.

본 발명의 더많은 실시양태는 1-글리세롤 모노라우레이트 및 1-글리세롤 모노미리스테이트와 제제화된 HGF 또는 HGF 변이체 단백질을 포함하는 안정화된 단백질 조성물에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 조성물은 점도증가제 (예를 들어, 히드록시에틸셀룰로스)를 추가적으로 포함하고, 전술한 조성물의 일부는 또한 항병원성 약제 (예를 들어, 부피바카인)를 포함한다. 이러한 조성물의 일부에서, HGF 또는 HGF 변이체 단백질은 NK1, dNK1, NK2, dNK2, NK3, dNK3, NK4 또는 dNK4 또는 상기 HGF 또는 HGF 변이체 단백질에 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 이상 (또는 85 % 내지 99 %내에서 임의의 %)의 서열 동일성 또는 상동성을 포함하는 단백질 (단, 이 동일 또는 상동성인 단백질은 예를 들어 cMet 수용체로의 결합, 상피세포 촉진, 세포 산란, 세포 성장의 유도, 상피세포 촉진의 억제, 세포 산란의 억제, 또는 세포 성장의 억제와 같은 HGF 또는 HGF 변이체 단백질의 속성인 기능을 보유함)로 구성된 군으로부터 선택된다.

본 발명의 추가로 더많은 양상은 1-글리세롤 모노라우레이트 및 1-글리세롤 모노미리스테이트와 제제화된 dHGF 단백질을 포함하는 안정화된 단백질 조성물에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 이러한 조성물은 점도증가제 (예를 들어, 히드록시에틸셀룰로스)를 추가적으로 포함하고, 전술한 조성물의 일부는 또한 항병원성 약제 (예를 들어, 부피바카인)를 포함한다. 추가적인 실시양태는 1-글리세롤 모노라우레이트 및 1-글리세롤 모노미리스테이트와 제제화된 HGF, NK1, dNK1, NK2, dNK2, NK3, dNK3, NK4 또는 dNK4를 포함하는 안정화된 단백질 조성물을 포함하고, 이러한 조성물은 경우에 따라 점도증가제 (예를 들어, 히드록시에틸셀룰로스)를 포함할 수 있고, 전술한 조성물의 일부는 또한 항병원성 약제 (예를 들어, 부피바카인)를 포함한다.

본 발명의 양상은 또한 상기 기술된 조성물의 제조 방법을 포함하고, 여기서 이 방법은 dHGF 단백질 및 30 ℃ 초과의 용융 온도를 가지는 하나 이상의 모노글리세라이드를 포함하는 용액을 제공하고, 이 용액을 건조시켜 건조 과립을 형성 (여기서, 건조 공정은 모노글리세라이드의 β-결정질 구조를 보존함)시킴으로써 실시된다. 이러한 방법의 일부에서, 용액은 점도증가제를 추가적으로 포함한다. 이러한 방법의 일부에서, 점도증가제는 히드록시에틸셀룰로스, 메틸셀룰로스, 히드록시프로필 셀룰로스, 카르복시메틸 셀룰로스, 히드록시프로필 메틸 셀룰로스 (E464), 및 히드록시에틸 메틸 셀룰로스로 구성된 군으로부터 선택되는, 셀룰로스 유도체이고, 이러한 방법의 일부에서, 하나 이상의 모노글리세라이드는 10, 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16개 탄소, 바람직하게 12 또는 14개 탄소의 탄소 사슬 길이를 가진다. 이러한 방법의 일부에서, 용액은 단독으로 또는 상기 하나 이상의 모노글리세라이드와 함께, 하나 이상의 항병원성 화합물을 추가적으로 포함하고, 이러한 방법의 일부에서, 항병원성 화합물은 부피바카인이다. 이러한 방법의 일부에서, 항병원성 화합물은 3 내지 6개 탄소 원자를 가지는 디올, 니트로이미다졸 유도체, 이미다졸 유도체, 카르바미드, 및 아미드 유형의 국소 마취제로 구성된 군으로부터 선택된다.

본 발명의 양상은 또한 30 ℃ 초과의 용융 온도를 가지는 하나 이상의 결정질 모노글리세라이드 및 점도증가제를 포함하는 용액을 제공하는 단계; 이 용액을 동결 분무-건조시켜 건조 과립을 형성 (여기서, 동결 건조 공정은 모노글리세라이드의 β-결정질 구조를 보존함)하는 단계; 천연 발생 HGF 단백질의 재조합 형태를 포함하는 액체를 제공하는 단계; 및 하나 이상의 모노글리세라이드의 결정질 구조를 유지하는 조건하에서 상기 HGF 단백질을 포함하는 상기 액체와 상기 하나 이상의 모노글리세라이드 및 점도증가제를 포함하는 상기 건조 과립을 합치는 단계를 포함하는 전술한 조성물의 제조 방법을 포함한다. 이러한 방법의 일부에서, 천연 발생 HGF 단백질의 재조합 형태는 dHGF이고, 이러한 방법의 일부에서, 점도증가제는 히드록시에틸셀룰로스, 메틸셀룰로스, 히드록시프로필 셀룰로스, 카르복시메틸 셀룰로스, 히드록시프로필 메틸 셀룰로스 (E464), 및 히드록시에틸 메틸 셀룰로스로 구성된 군으로부터 선택되는, 셀룰로스 유도체이다. 이러한 방법의 일부에서, 하나 이상의 모노글리세라이드는 10, 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16개 탄소, 바람직하게 12 또는 14개 탄소의 탄소 사슬 길이를 가지고, 이러한 방법의 일부에서, 용액은 단독으로 또는 상기 하나 이상의 모노글리세라이드와 함께, 하나 이상의 항병원성 화합물을 추가적으로 포함한다. 이러한 방법의 일부에서, 항병원성 화합물은 부피바카인이고, 이러한 방법의 일부에서, 항병원성 화합물은 3 내지 6개 탄소 원자를 가지는 디올, 니트로이미다졸 유도체, 이미다졸 유도체, 카르바미드, 및 아미드 유형의 국소 마취제로 구성된 군으로부터 선택된다.

본 발명의 양상은 또한 피부 상태를 개선 또는 호전시키는 약제를 필요로 하는 대상체를 확인하는 단계; 및 본 명세서에 기술된 조성물을 상기 대상체에게 제공하는 단계를 포함하는, 대상체의 피부 상태를 개선 또는 호전시키기 위한 전술한 조성물의 사용 방법을 포함한다. 이러한 방법의 일부에서, 피부 상태는 만성 당뇨병성 피부 궤양, 열상, 창상, 미용상 흠, 피부 신생물, 또는 바닥 세포 암종이다. 경우에 따라, 상기 방법은 피부 상태의 개선 또는 호전을 측정하는 단계를 추가적으로 포함할 수 있다.

도 1은 전형적인 곡선의 하나의 건조 분말 (ÅLL07005C) 및 둘의 재구성된 분말 (ÅLL07005A 및 ÅLL07005F) 및 크림 ÅLL07001의 용융 곡선을 나타냈다.

본 명세서에 기술된 많은 실시양태는 안정화된 전달된 약제 (예를 들어, 단백질 또는 이들의 단편 및/또는 핵산, 예를 들어, DNA 또는 RNA)를 함유하는 국소 조성물에 관한 것이다. 바람직한 실시양태에서, 조성물은 하나 이상의 결정질 모노글리세라이드, 예를 들어 42 ℃, 41 ℃, 40 ℃, 39 ℃, 38 ℃, 37 ℃, 36 ℃, 35 ℃, 34 ℃, 33 ℃, 32 ℃, 31 ℃, 30 ℃, 29 ℃, 28 ℃, 27 ℃, 26 ℃, 25 ℃, 24 ℃, 23 ℃, 22 ℃, 21 ℃, 20 ℃, 19 ℃, 18 ℃, 17 ℃, 16 ℃, 또는 15 ℃ 이하, 바람직하게 피부 온도 이하에서 결정질 구조를 유지하는 모노글리세라이드를 포함한다. 보다 바람직한 실시양태에서, 모노글리세라이드는 β-결정질 상태이다. "결정질 상태"는 세 치수 모두가 반복되는 구조이나, 반복되는 함수가 세 방향 모두에서 동일할 필요는 없다. β-결정질 모노글리세라이드는 고체 모노글리세라이드의 고체 층판상 구조를 함유하고, 탄소 사슬은 용융되지 않았고 고체이다.

다른 바람직한 실시양태에서, 조성물은 단독으로 또는 결정질 모노글리세라이드와 함께, 하나 이상의 항병원성 화합물 (예를 들어, 항균 화합물, 항진균제, 살균제 또는 정균제, 또는 항생제), 및 경우에 따라 부형제를 추가적으로 포함한다. 특히 바람직한 실시양태에서, 조성물은 현탁 또는 점도증가제 (예를 들어, 셀룰로스 유도체, 예를 들어 히드록시 프로필 셀룰로스, 히드록시 메틸 셀룰로스, 히드록시에틸셀룰로스 (예를 들어, 나트로솔(Natrosol)®), 메틸 셀룰로스, 카르복시메틸 셀룰로스, 또는 히드록시프로필 메틸 셀룰로스)를 추가적으로 포함한다.

일부 실시양태에서, 국소 조성물은 액체 (예를 들어, 물, 오일, 또는 에멀젼)에 노출시 반고체 제제를 생성할, 액체-흡수 능력을 가지는 건조 분말로 제조된다. 이 재생성된 반고체 제품은 전달된 약제 (예를 들어, 단백질 또는 이들의 단편, 핵산 (예를 들어, DNA 또는 RNA) 또는 이들의 조합물)의 표피, 진피, 경피 또는 피내 전달을 유도하기 위하여 국소적으로 적용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 유효 성분은 액체 형태 (예를 들어, 적합한 완충액)로 존재하고, 안정화된 제품의 최종 제제를 제조하기 위하여 유효 성분을 함유하는 수용액이 겔화제 또는 점도증가제를 포함하는 건조 분말로 첨가된다. 유효 성분을 포함하는 수용액 및 겔화제를 포함하는 건조 분말의 혼합은 유효 성분을 필요로 하는 자로 확인된 대상체에게 안정화된 조성물을 제공하기에 약간 앞서 수행될 수 있다.

이러한 안정화된 전달된 약제의 제제는 대상체 (예를 들어, 동물, 가축, 파충류, 새, 또는 포유동물, 예를 들어, 개, 고양이, 말, 돼지, 또는 인간)의 건강 및 보건에 이득을 제공하기 위해 사용될 수 있다. 일부 제제는 대상체의 피부 상태를 치료, 호전, 또는 개선시키기에 유용하다 (예를 들어, 궤양, 창상 또는 피부 신생물의 치유 촉진 또는 가속). 예를 들어 일부 실시양태는 미용 상태를 치료, 개선, 또는 호전시키기 위해서나 또는 동물의 건강 및 보건을 더 좋게 하기 위해 제제화된다. 일부 실시양태는 동물, 바람직하게 포유동물, 예를 들어 인간에서 궤양, 당뇨병성 궤양, 욕창, 욕창궤양, 압력 괴저, 열상, 천자, 찰과상, 미용상 찰과상, 화상, 수술후 외상, 피부 신생물, 바닥 세포 암종, 편평 세포 암종, 흑색종, 광선 각화증, 미용상 재건, 건선, 모발 성장, 주름 감소, 피부의 팽팽함, 및/또는 젊은 모습을 치료, 개선, 호전시키기 위해 사용될 수 있다.

몇몇의 실시양태는 단백질, 단백질을 코딩하는 핵산 또는 단백질의 단편 또는 상기 단백질 단편을 코딩하는 핵산인, 전달된 약제 또는 유효 성분을 포함하거나, 이로 구성되거나, 또는 이로 본질적으로 구성된 국소 조성물에 관한 것이다. 본 명세서에 기술된 제제 또는 제품에서 전달된 약제로 사용될 수 있는 예시적인 단백질은 인간 성장 호르몬 (hGH), 간세포 성장 인자 또는 산란 인자 (HGF), 및 데스-N-메티오닐 인간 성장 호르몬을 비롯한 성장 호르몬; 부갑상샘 호르몬; 갑상샘 자극 호르몬; 티록신; 지질단백질, α1-항트립신; 인슐린 α-사슬; 인슐린 β-사슬; 전구인슐린; 응고 인자, 예를 들어 인자 VIIIC, 인자 IX, 조직 인자, 및 폰빌레브란트 인자; 항응고 인자, 예를 들어 단백질 C; 심방 나트륨이뇨 펩티드, 폐 계면활성제, 플라스미노겐 활성제, 예를 들어 우로키나아제 또는 인간 뇨 또는 조직-유형 플라스미노겐 활성제 (t-PA); 봄베신; 트롬빈; 조혈 성장 인자; 종양 괴사 인자 (TNF) α 및 β; 엔케팔리나제; 혈청 알부민, 예를 들어 인간 혈청 알부민; 뮬러리안-억제 물질; 리랙신(relaxin) A-사슬; 리랙신 B-사슬; 전구리랙신; DNase; 인히빈; 액티빈; 혈관 내피세포 성장 인자; 호르몬 또는 성장 인자를 위한 수용체; 인테그린; 트롬보포이에틴; 단백질 A 또는 D; 류마티스 인자; 신경성 인자, 예를 들어 골-유래 신경성 인자 (BDNF), 뉴로트로핀-3, -4, -5, 또는 -6 (NT-3, NT-4, NT-5, 또는 NT-6), 또는 신경 성장 인자, 예를 들어 NGF-β; 혈소판-유래 성장 인자 (PDGF); 섬유모세포 성장 인자, 예를 들어 aFGF 및 bFGF; 표피 성장 인자 (EGF); 전환 성장 인자 (TGF), 예를 들어 TGF-α 및 TGF-β (TGF-βl, TGF-β2, TGF-β3, TGF-β4, 또는 TGF-γ 포함); 인슐린-유사 성장 인자-I 및 -II (IGF-I 및 IGF-II); 인슐린-유사 성장 인자 결합 단백질; CD 단백질, 예를 들어 CD-3, CD-4, CD-8, 및 CD-19; 에리트로포이에틴; 골유도 인자; 골 형태형성(morphogenetic) 단백질 (BMP); 소마토트로핀; 인터페론 (IFN), 예를 들어 IFN-α, IFN-β, 및 IFN-γ; 집락 자극 인자 (CSF), 예를 들어, M-CSF, GM-CSF, 및 G-CSF; 인터루킨 (IL), 예를 들어, IL-1 내지 IL-1O; 수퍼옥사이드 디스뮤타제; T-세포 수용체; 표면 막 단백질; 붕괴 촉진 인자; 귀소 수용체; 어드래신(addressin); 조절 단백질; 또는 항체를 포함하나 이로 제한되지는 않는다.

본 명세서에 기술된 하나 이상의 조성물로의 도입을 위해 특히 바람직한 유효 성분은 재조합적으로 생성 또는 단리된 천연 발생 HGF 단백질, 예를 들어 전장 HGF 또는 dHGF (HGF의 천연 발생 다섯 아미노산 말단절단 형태) 또는 이들의 천연 발생 변이체 (예를 들어, NK1, dNK1, NK2, dNK2, NK3, dNK3, NK4 또는 dNK4) 및 결정질 모노글리세라이드 (예를 들어, 42 ℃, 41 ℃, 40 ℃, 39 ℃, 38 ℃, 37 ℃, 36 ℃, 35 ℃, 34 ℃, 33 ℃, 32 ℃, 31 ℃, 30 ℃, 29 ℃, 28 ℃, 27 ℃, 26 ℃, 25 ℃, 24 ℃, 23 ℃, 22 ℃, 21 ℃, 20 ℃, 19 ℃, 18 ℃, 17 ℃, 16 ℃, 또는 15 ℃ 이하의 온도, 바람직하게 피부 온도에서 결정질 형태로 유지되는, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 또는 18개 탄소, 바람직하게 12 또는 14개 탄소의 탄소 사슬 길이를 가지는 α 및/또는 β-결정질 모노글리세라이드)를 포함한다. 본 발명의 양상은 또한 상기 나열된 폴리펩티드 또는 이들의 돌연변이체 중 임의의 것을 코딩하고/하거나 이와 간섭하는 핵산 (예를 들어, DNA, RNAi와 같은 억제 RNA를 포함하는 RNA)을 포함하거나, 이로 본질적으로 구성되거나, 또는 이로 구성된 전달된 약제를 포함하는 제제를 포함한다. 더많은 실시양태는 상기 나열된 폴리펩티드의 단편 및 상기 단편을 코딩하고/하거나 이와 간섭하는 핵산 (예를 들어, DNA, RNAi와 같은 억제 RNA를 포함하는 RNA)을 포함한다.

예를 들어, 일부 실시양태에서 사용되는 전달된 약제 또는 유효 성분은 예를 들어 HGF (간세포 성장 인자 또는 산란 인자), hGH, TGF-α, TGF-β, 혈소판-유래 성장 인자 (PDGF), 표피 성장 인자 (EGF), 섬유모세포 성장 인자 (FGF), 인슐린-유사 성장 인자-1 및 2 (IGF-I 및/또는 IGF-2), t-PA, 인자 VIII, 리랙신, 인슐린, IFN-γ 및/또는 TGF-γ와 같은, 조직, 예를 들어 피부에 국소적으로 적용시 치료적, 호전적, 또는 개선 효과를 가지는 단백질 또는 단백질을 코딩하는 핵산을 포함한다. 일부 실시양태는 전술한 단백질의 단편 또는 돌연변이체 또는 상기 단편 또는 돌연변이체를 코딩하는 핵산을 포함할 수 있다.

일부 실시양태에서, 하나 이상의 단백질 또는 이들의 단편을 코딩하는 핵산이 제제에 포함된다 (예를 들어, 단백질 또는 단백질 단편에 추가적으로 또는 상기 단백질 또는 단백질 단편 대신에). 예를 들어, 일부 실시양태에서, HGF, HGF의 단편, HGF의 돌연변이체 형태 또는 HGF 단편의 돌연변이체 형태 (예를 들어, 전장 HGF 또는 dHGF (HGF의 다섯 아미노산 말단절단 형태) 또는 이들의 변이체 (NK1, dNK1, NK2, dNK2, NK3, dNK3, NK4 또는 dNK4))를 코딩하는 핵산 및 β 결정질 모노글리세라이드 (예를 들어, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 또는 18개 탄소의 탄소 사슬 길이, 바람직하게 10 내지 16개 탄소 (예를 들어, 12, 13, 14, 15, 또는 16개 탄소)의 탄소 사슬 길이, 바람직하게 12, 13, 또는 14개 탄소, 및 가장 바람직하게 12 또는 14개 탄소인 탄소 사슬 길이를 가질 수 있는 α 또는 β-결정질 모노글리세라이드)가 본 명세서에 기술된 설명에 따라 국소 제품으로 제제화되고, 상기 제제는 또한 HGF 단백질, HGF 단백질의 단편, 또는 돌연변이체 HGF 단백질 또는 이들의 단편 (예를 들어, 전장 HGF 또는 dHGF (HGF의 다섯 아미노산 말단절단 형태) 또는 이들의 변이체 (예를 들어, NK1, dNK1, NK2, dNK2, NK3, dNK3, NK4 또는 dNK4))를 함유할 수 있다. 즉, 일부 실시양태에서, 단백질, 예를 들어, HGF 단백질 또는 돌연변이체 HGF 단백질 또는 이들의 단편을 코딩하는 DNA는 HGF 단백질 또는 돌연변이체 HGF 단백질 또는 이들의 단편과 함께 또는 이들 없이, 본 명세서에 기술된 조성물로 제제화될 수 있다. 이러한 핵산은 특정 대상체에 적합한 발현 플라스미드 (예를 들어, 인간, 고양이, 개, 말, 돼지, 또는 닭에서 발현을 지시하는데 특히 적합한 플라스미드)로 도입될 수 있다. 또한, DNA 전달된 약제는 대상체에서 펩티드의 개선된 생성을 제공하기 위하여, 특정 대상체 (예를 들어, 인간, 고양이, 개, 말, 돼지, 또는 닭)를 위해 코돈-최적화될 수 있다. 예를 들어, 코돈-최적화된 HGF 또는 돌연변이체 HGF DNA (예를 들어, 전장 HGF 또는 dHGF (HGF의 다섯 아미노산 말단절단 형태) 또는 이들의 변이체 (예를 들어, NK1, dNK1, NK2, dNK2, NK3, dNK3, NK4 또는 dNK4))가 본 명세서의 설명을 고려하여 국소 겔로 제제화될 수 있고, 상기 코돈-최적화된 HGF 또는 돌연변이체 HGF DNA (예를 들어, 전장 HGF 또는 dHGF (HGF의 다섯 아미노산 말단절단 형태) 또는 이들의 변이체 (예를 들어, NK1, dNK1, NK2, dNK2, NK3, dNK3, NK4 또는 dNK4))는 개, 고양이, 말, 돼지, 또는 인간에서의 발현을 위해 최적화될 수 있다.

본 명세서에 기술된 제제에서 사용될 수 있는 단백질/펩티드는 천연 공급원으로부터 얻어졌든지, 화학적으로 합성되었든지, 또는 재조합 기술의 방법에 의해 생성되었든지, 천연 및 합성 단백질/펩티드 모두를 포함한다. 일부 실시양태에서, 단백질/펩티드는 당단백질, 인단백질, 요오도단백질, 황단백질(sulphoprotein), 메틸화 단백질, 비개질 단백질/펩티드 또는 다른 개질을 함유하는 단백질/펩티드일 수 있다. 본 명세서에 기술된 조성물은 치료 효능에 적합한 특정 단백질/펩티드의 양에 따라, 넓은 범위의 단백질 농도를 함유하도록 제제화될 수 있거나, 또는 넓은 범위의 단백질 농도를 전달하도록 제제화될 수 있으나, 제품에 함유된 또는 제품에 의해 전달되는 단백질/펩티드의 농도가 10 mg/ml, 5 mg/ml, 2 mg/ml, 1 mg/ml, 0.5 mg/ml, 0.2 mg/ml, 0.1 mg/ml, 50 μg/ml, 25 μg/ml, 10 μg/ml, 5 μg/ml, 2 μg/ml, 1 μg/ml, 0.5 μg/ml, 0.2 μg/ml, 0.1 μg/ml, 50 ng/ml, 25 ng/ml, 10 ng/ml, 5 ng/ml, 2 ng/ml, 또는 1 ng/ml 이하이도록 조성물이 제제화되는 것이 바람직하다. 달리 말하자면, 본 명세서에 기술된 조성물 또는 방법은 단백질/펩티드 또는 의도된 요법에 따라, 9 내지 10 mg/ml, 8 내지 9 mg/ml, 7 내지 8 mg/ml, 6 내지 7 mg/ml, 5 내지 6 mg/ml, 4 내지 5 mg/ml, 3 내지 4 mg/ml, 2 내지 3 mg/ml, 1 내지 2 mg/ml, 0.5 내지 1 mg/ml, 0.25 내지 0.5 mg/ml, 0.1 내지 0.25 mg/ml, 0.05 내지 0.1 mg/ml, 0.02 내지 0.05 mg/ml, 10 내지 20 μg/ml, 9 내지 10 μg/ml, 8 내지 9 μg/ml, 7 내지 8 μg/ml, 6 내지 7 μg/ml, 5 내지 6 μg/ml, 4 내지 5 μg/ml, 3 내지 4 μg/ml, 2 내지 3 μg/ml, 1 내지 2 μg/ml, 0.5 내지 1 μg/ml, 0.3 내지 0.5 μg/ml, 0.1 내지 0.3 μg/ml, 0.05 내지 0.1 μg/ml, 0.02 내지 0.05 μg/ml, 10 내지 20 ng/ml, 9 내지 10 ng/ml, 8 내지 9 ng/ml, 7 내지 8 ng/ml, 6 내지 7 ng/ml, 5 내지 6 ng/ml, 4 내지 5 ng/ml, 3 내지 4 ng/ml, 2 내지 3 ng/ml, 또는 1 내지 2 ng/ml의 범위내의 임의의 수 미만, 그 사이, 또는 그와 동일할 수 있는, 치료 목적을 달성하기에 충분한 단백질 또는 펩티드 농도를 포함 또는 이용하거나, 또는 단백질 또는 펩티드 농도를 전달할 수 있다.

창상, 궤양, 및 피부 신생물과 같은 피부 상태를 개선, 호전, 또는 치료하기 위한 많은 국소 조성물과 관련하여, 제제의 유효 성분의 양 (예를 들어, 전장 HGF 또는 dHGF (HGF의 다섯 아미노산 말단절단 형태) 또는 이들의 변이체 (예를 들어, NK1, dNK1, NK2, dNK2, NK3, dNK3, NK4 또는 dNK4))이 5 μg/ml, 4 μg/ml, 3 μg/ml, 2 μg/ml, 1 μg/ml, 0.5 μg/ml, 0.2 μg/ml, 100 ng/ml, 95 ng/ml, 90 ng/ml, 85 ng/ml, 80 ng/ml, 75 ng/ml, 70 ng/ml, 65 ng/ml, 60 ng/ml, 55 ng/ml, 50 ng/ml, 45 ng/ml, 40 ng/ml, 35 ng/ml, 30 ng/ml, 25 ng/ml, 20 ng/ml, 20 ng/ml, 19 ng/ml, 18 ng/ml, 17 ng/ml, 16 ng/ml, 15 ng/ml, 14 ng/ml, 13 ng/ml, 12 ng/ml, 11 ng/ml, 10 ng/ml, 9 ng/ml, 8 ng/ml, 7 ng/ml, 6 ng/ml, 5 ng/ml, 4 ng/ml, 3 ng/ml, 2 ng/ml, 또는 1 ng/ml 이하의 임의의 수인, 제품에 함유된 또는 제품에 의해 전달되는 농도로 존재하는 것이 바람직하다.

바람직한 실시양태에서, 단백질/펩티드는 겔 형성 화합물을 함유하는 제제의 일부로서 국소 전달을 위해 제제화된다. 임의의 현탁 또는 점도증가제가 제제에 사용될 수 있고, 아카시아, 아가, 알긴산, 알루미늄 모노스테아레이트, 벤토나이트, 정제 벤토나이트, 마그마 벤토나이트, 카르보머 934p, 카르복시메틸 셀룰로스 칼슘, 카르복시메틸 셀룰로스 소듐, 카르복시메틸셀룰로스 소듐 12, 카라게난, 미세결정질 및 카르복시메틸 셀룰로스 소듐 셀룰로스, 덱스트린, 젤라틴, 구아 검, 히드록시에틸셀룰로스 (예를 들어, 나트로솔®), 히드록시프로필 셀룰로스, 히드록시프로필 메틸셀룰로스, 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 메틸셀룰로스, 펙틴, 폴리에틸렌 옥사이드, 폴리비닐 알콜, 포비돈, 프로필렌 글리콜 알기네이트, 실리콘 디옥사이드, 콜로이드 실리콘 디옥사이드, 소듐 알기네이트, 트라가칸트, 및 크산탄 검을 포함하나 이로 제한되지는 않는다. 바람직한 실시양태에서, 히드록시에틸셀룰로스 (예를 들어, 나트로솔®), 히드록시프로필 셀룰로스, 카르복시메틸 셀룰로스, 히드록시프로필 메틸 셀룰로스 (E464), 및 히드록시에틸 메틸 셀룰로스를 포함하나 이로 제한되지는 않는, 셀룰로스 유도체가 겔 형성 화합물로 사용된다. 겔 형성 화합물은 바람직하게 반고체 제품을 제공하는 양으로 있다. 겔 형성 화합물의 예는 상술된 것과 같은 셀룰로스 유도체를 포함한다.

바람직한 실시양태에서, 본 명세서에서 계획되는 제제는 피부 온도 미만의 온도에서 고체 결정질 상태인 지질을 함유한다. 바람직한 실시양태에서 사용되는 지질은 42 ℃ 미만의 저장 온도에서 고체 상태로 유지되는 지질에 공헌하는 지질 사슬 용융 온도를 가진다. 즉, 본 명세서에 기술된 조성물 또는 방법에서 사용될 수 있는 결정질 모노글리세라이드는 42 ℃, 41 ℃, 40 ℃, 39 ℃, 38 ℃, 37 ℃, 36 ℃, 35 ℃, 34 ℃, 33 ℃, 32 ℃, 31 ℃, 30 ℃, 29 ℃, 28 ℃, 27 ℃, 26 ℃, 25 ℃, 24 ℃, 23 ℃, 22 ℃, 21 ℃, 20 ℃, 19 ℃, 18 ℃, 17 ℃, 16 ℃, 또는 15 ℃ 이하인 용융 온도를 가진다. 지질 화합물은 약 90 % 내지 약 1 %, 바람직하게 약 85 % 내지 약 5 %, 보다 바람직하게 약 80 % 내지 약 10 %, 훨씬 더 바람직하게 약 75 % 내지 약 15 %, 더욱 더 바람직하게 약 70 % 내지 약 20 %, 훨씬 더 바람직하게 약 65 % 내지 약 25 % 및 가장 바람직하게 약 60 내지 약 40 %의 양으로 건조 제품의 일부로서 존재할 것이다. 본 명세서에 사용되는 바람직한 지질의 예는 지방산의 결정질 모노글리세라이드를 포함한다. 지방산은 12 또는 14개 탄소, 바람직하게 10 내지 16개 탄소 원자 및 바람직하게 10 내지 18개 탄소 원자 (즉, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 또는 18개 탄소 원자 이상 또는 이에 동일 또는 이들 사이의 임의의 수)를 가지는 포화 지방산을 포함하나 이로 제한되지는 않는다. 바람직한 조성물은 1-글리세롤 모노라우레이트, 1-글리세롤 모노미리스테이트, 1-글리세롤 모노팔미테이트, 및 1-글리세롤 모노스테아레이트를 비롯한, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16개 탄소의 탄소 사슬 길이를 가지는 결정질 모노글리세라이드를 포함한다. 가장 바람직하게, 조성물은 12 또는 14개 탄소를 가지는 β-결정질 모노글리세라이드를 포함한다. 결정질 모노글리세라이드는 시판되는 것과 같이, 균일 또는 불균일 상태로 존재할 수 있다. 본 명세서에 기술된 조성물 및 방법에서 사용되는 바람직한 모노글리세라이드는 글리세롤 모노라우레이트 및/또는 1-글리세롤 모노미리스테이트를 포함한다.

결정질 모노글리세라이드의 혼합물이 일부 제제에서 또한 사용될 수 있다. 그런 이유로, 일부 실시양태는 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 또는 18개 탄소의 탄소 사슬 길이, 바람직하게 10 내지 16개 탄소 (예를 들어, 12, 13, 14, 15, 또는 16개 탄소)의 탄소 사슬 길이, 바람직하게 12, 13, 또는 14개 탄소, 및 가장 바람직하게 12 또는 14개 탄소의 탄소 사슬 길이를 가질 수 있는, 하나 이상의 결정질 모노글리세라이드 (예를 들어, α 또는 β-결정질 모노글리세라이드)의 혼합물을 포함한다. 예시적 비율은 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7, 1:8, 1:9, 1:10, 1:11, 1:12, 1:13, 1:14, 1:15, 1:16, 1:17, 1:18, 1:19, 또는 1:20 또는 초과를 포함한다. 더 바람직한 조성물은 1:9 또는 9:1 비율의 1-글리세롤 모노라우레이트 및 1-글리세롤 모노미리스테이트의 혼합물을 포함한다.

제품이 반고체이기 때문에, 단백질/펩티드의 전달 속도가 조정될 수 있다. 이는 겔 형성 화합물의 양 및 지질의 양의 변경에 의해 수행될 수 있다. 요망되는 전달 속도는 사용되는 단백질/펩티드에 의존할 수 있고 조성물은 각 단백질/펩티드에 대해 맞추어질 수 있다. α 또는 β-결정질 모노글리세라이드의 결정화의 백분율은 또한 특정 제제에 있어 중요할 수 있고, 상업적 공급원, 순도, 불균일성에 따라 다를 수 있다. 그런 이유로, 일부 실시양태는 α 또는 β-결정질 모노글리세라이드가 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 또는 95 % 이상 또는 이러한 백분율 사이의 임의의 수의 결정질 모노글리세라이드 분자를 가지는, α 또는 β-결정질 모노글리세라이드의 양을 포함한다. 본 명세서에서 사용되는 일부 양상에서, 용어 결정질 모노글리세라이드는 모노글리세라이드의 보다 많은 백분율이 특정 온도에서 비결정질 상태보다 결정질 상태로 존재하는 모노글리세라이드를 지칭한다. 예를 들어, 결정질 모노글리세라이드는 42 ℃, 41 ℃, 40 ℃, 39 ℃, 38 ℃, 37 ℃, 36 ℃, 35 ℃, 34 ℃, 33 ℃, 32 ℃, 31 ℃, 30 ℃, 29 ℃, 28 ℃, 27 ℃, 26 ℃, 25 ℃, 24 ℃, 23 ℃, 22 ℃, 21 ℃, 20 ℃, 19 ℃, 18 ℃, 17 ℃, 16 ℃, 또는 15 ℃ 이하에서 비결정질 상태보다 결정질 상태에 있는 보다 많은 백분율의 분자를 가지는 α 또는 β-결정질 모노글리세라이드일 수 있다. 임의의 특정 α 또는 β-결정질 모노글리세라이드에서 결정화된 형태의 이러한 백분율은 시차 주사 열량측정 (DSC) 분석에 의해 구해질 수 있다.

추가적인 실시양태는 궤양, 당뇨병성 궤양, 욕창, 욕창궤양, 압력 괴저, 열상, 천자, 찰과상, 미용상 찰과상, 화상, 수술후 외상, 피부 신생물, 바닥 세포 암종, 편평 세포 암종, 흑색종, 미용상 재건, 건선, 모발 성장, 주름 감소, 피부의 팽팽함, 및/또는 젊은 모습의 상태를 치료, 호전, 또는 다르게 개선시키기 위하여, 본 명세서에 기술된 하나 이상의 재구성된 겔 또는 크림 제제가 이를 필요로 하는 대상체 (예를 들어, 개, 고양이, 말, 돼지, 또는 인간과 같은 대상체)에게 제공되는 방법에 관한 것이다. 이러한 접근법에서, 상기 대상체는 바람직하게 궤양, 당뇨병성 궤양, 욕창, 욕창궤양, 압력 괴저, 열상, 천자, 찰과상, 미용상 찰과상, 화상, 수술후 외상, 피부 신생물, 바닥 세포 암종, 편평 세포 암종, 흑색종, 광선 각화증, 미용상 재건, 건선, 모발 성장, 주름 감소, 피부의 팽팽함, 및/또는 젊은 모습 중 하나 이상의 상태를 치료, 호전, 또는 다르게 개선시키는 조성물을 필요로 하는 대상체로 확인된다. 확인은 당분야에 공지된 바와 같이, 임상 또는 진단적 평가에 의해 달성될 수 있고, 이는 내과의사, 외과의사, 또는 다른 건강 관리 제공자와의 상담 또는 진단 검사 또는 생검의 실시를 포함할 수 있다. 이러한 대상체는 경우에 따라 또는 대안으로 창상 부위에서 상피세포의 증식 및/또는 새살형성을 유도하는 약제 또는 암 세포의 증식 또는 산란을 억제하는 약제를 필요로 하는 대상체로 확인될 수 있다. 다시, 이러한 확인은 당분야에 공지된 바와 같이, 임상 또는 진단적 평가에 의해 달성될 수 있고, 이는 내과의사, 외과의사, 또는 다른 건강 관리 제공자와의 상담, 진단적 평가 및/또는 생검을 포함할 수 있다.

대상체가 확인되면, 이들에게 본 명세서에 기술된 하나 이상의 조성물이 제공 또는 투여된다. 바람직하게, 방법은 제품에 함유된 또는 제품에 의해 전달되는 단백질/펩티드의 농도가 10 mg/ml, 5 mg/ml, 2 mg/ml, 1 mg/ml, 0.5 mg/ml, 0.2 mg/ml, 0.1 mg/ml, 50 μg/ml, 25 μg/ml, 10 μg/ml, 5 μg/ml, 2 μg/ml, 1 μg/ml, 0.5 μg/ml, 0.2 μg/ml, 0.1 μg/ml, 50 ng/ml, 25 ng/ml, 10 ng/ml, 5 ng/ml, 2 ng/ml, 또는 1 ng/ml 이하이도록 제제화된 조성물을 제공함으로써 실시된다. 달리 말하자면, 대상체가 특정 치료제를 필요로 하는 환자로 확인되면, 단백질/펩티드 또는 의도된 요법에 따라, 9 내지 10 mg/ml, 8 내지 9 mg/ml, 7 내지 8 mg/ml, 6 내지 7 mg/ml, 5 내지 6 mg/ml, 4 내지 5 mg/ml, 3 내지 4 mg/ml, 2 내지 3 mg/ml, 1 내지 2 mg/ml, 0.5 내지 1 mg/ml, 0.25 내지 0.5 mg/ml, 0.1 내지 0.25 mg/ml, 0.05 내지 0.1 mg/ml, 0.02 내지 0.05 mg/ml, 10 내지 20 μg/ml, 9 내지 10 μg/ml, 8 내지 9 μg/ml, 7 내지 8 μg/ml, 6 내지 7 μg/ml, 5 내지 6 μg/ml, 4 내지 5 μg/ml, 3 내지 4 μg/ml, 2 내지 3 μg/ml, 1 내지 2 μg/ml, 0.5 내지 1 μg/ml, 0.3 내지 0.5 μg/ml, 0.1 내지 0.3 μg/ml, 0.05 내지 0.1 μg/ml, 0.02 내지 0.05 μg/ml, 10 내지 20 ng/ml, 9 내지 10 ng/ml, 8 내지 9 ng/ml, 7 내지 8 ng/ml, 6 내지 7 ng/ml, 5 내지 6 ng/ml, 4 내지 5 ng/ml, 3 내지 4 ng/ml, 2 내지 3 ng/ml, 또는 1 내지 2 ng/ml의 범위내의 임의의 수 미만, 그 사이, 또는 그와 동일한 것과 같이, 단백질/펩티드 및 치료 목적에 따라 치료 목적을 달성하기에 충분한 단백질 또는 펩티드 농도를 포함 또는 이용하거나, 또는 단백질 또는 펩티드 농도를 전달할 수 있는, 본 명세서에 기술된 하나 이상의 조성물이 이들에게 제공 또는 투여된다.

HGF-기재 제제, 예를 들어, 전장 HGF 또는 dHGF (HGF의 다섯 아미노산 말단절단 형태) 또는 이들의 변이체 (예를 들어, NK1, dNK1, NK2, dNK2, NK3, dNK3, NK4 또는 dNK4)를 함유하는 조성물이 제공되는 일부 바람직한 실시양태에서 제공되는 조성물은 상기 유효 성분이 5 μg/ml, 4 μg/ml, 3 μg/ml, 2 μg/ml, 1 μg/ml, 0.5 μg/ml, 0.2 μg/ml, 100 ng/ml, 95 ng/ml, 90 ng/ml, 85 ng/ml, 80 ng/ml, 75 ng/ml, 70 ng/ml, 65 ng/ml, 60 ng/ml, 55 ng/ml, 50 ng/ml, 45 ng/ml, 40 ng/ml, 35 ng/ml, 30 ng/ml, 25 ng/ml, 20 ng/ml, 20 ng/ml, 19 ng/ml, 18 ng/ml, 17 ng/ml, 16 ng/ml, 15 ng/ml, 14 ng/ml, 13 ng/ml, 12 ng/ml, 11 ng/ml, 10 ng/ml, 9 ng/ml, 8 ng/ml, 7 ng/ml, 6 ng/ml, 5 ng/ml, 4 ng/ml, 3 ng/ml, 2 ng/ml, 또는 1 ng/ml 이하의 임의의 수인, 제품에 함유된 또는 제품에 의해 전달되는 농도로 존재하도록 제제화된다.

투여 양생법, 투여 빈도, 및 전달 시간은 요망되는 용도 및 환자 또는 대상체 상태의 세부사항을 참작하여 내과의사 또는 다른 건강 관리 제공자에 의해 결정될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 명세서에 기술된 하나 이상의 조성물을 격일로 제공하고 그에 따른 환자의 개선을 모니터링 및/또는 측정한다. 즉, 경우에 따라 혈관형성, 새살형성, 치료된 조직의 외관, 창상의 삼출, 건강한 조직의 복원, 각화증 또는 신생물성 병소의 소멸과 같은, 대상체의 회복 또는 이들의 마커가 당분야에 공지된 바와 같이 임상 및 진단적 평가에 의해 측정 또는 모니터링될 수 있다.

많은 창상 또는 미용성 피부 상태는 병원체에 의해 감염되거나 또는 이에 의해 감염될 위험에 있다. 창상에 존재하는 병원체 종은 흔히 "환자 기원"의 것인만큼, 이러한 유기체의 존재는 언제나 전신 감염을 유발하지는 않는다. 그러나, 많은 병원체는 일부 단백질의 구조 및 기능을 파괴할 수 있는 프로테아제를 생성할 수 있다. 어떠한 실시양태에서, 항병원성 화합물 (예를 들어, 항균 화합물, 항진균제, 살균제 또는 정균제, 또는 항생제)은 단독으로 또는 결정질 모노글리세라이드 및 단백질/펩티드 유효 성분 (예를 들어, 전장 HGF 또는 dHGF (HGF의 다섯 아미노산 말단절단 형태) 또는 이들의 변이체 (예를 들어, NK1, dNK1, NK2, dNK2, NK3, dNK3, NK4 또는 dNK4))와 함께 제제에 첨가되어 대상체에 존재하는 병원체를 억제, 감소 또는 치료한다.

결정질 모노글리세라이드 (바람직하게, β-결정질 모노글리세라이드)를 함유하는 제제에서 항병원체 화합물의 포함은 상승작용적으로 병원체를 억제, 감소 또는 치료할 수 있다. 즉, 일부 실시양태에서, 화합물이 결정질 모노글리세라이드 (바람직하게, β-결정질 모노글리세라이드)와 함께 적용될 때, 항병원성 화합물이 병원체 (예를 들어, 박테리아 또는 진균)의 증식을 상승작용적으로 억제하는 것으로 생각된다. 일부 실시양태에서, 항병원성 약제, 결정질 모노글리세라이드 (바람직하게, β-결정질 모노글리세라이드), 및 단백질 (예를 들어, 전장 HGF 또는 dHGF (HGF의 다섯 아미노산 말단절단 형태) 또는 이들의 변이체 (예를 들어, NK1, dNK1, NK2, dNK2, NK3, dNK3, NK4 또는 dNK4))을 함유하는 제제가 단백질/펩티드를 단독으로, 또는 결정질 모노글리세라이드 (바람직하게, β-결정질 모노글리세라이드)와 함께 또는 항균 화합물과 함께 함유하는 제제보다 더 상태 (예를 들어, 피부 궤양과 같은 피부 상태)를 호전, 개선, 또는 치료할 것이라고 또한 생각된다. 본 명세서에서 논의된 바와 같이, 특정 결정질 모노글리세라이드 (바람직하게, β-결정질 모노글리세라이드)와 일정한 특이적 군의 화학 물질의 조합이 항균 특성과 관련하여 상승작용적 효과를 제공한다 (또한, 그 전체가 본 명세서에 참고문헌으로 명확히 도입된, 미국 특허 제5,550,145호 참조). 라우르산, 미리스트산 또는 이러한 모노글리세라이드의 블렌드를 포함하나 이로 제한되지는 않는 결정질 모노글리세라이드 (바람직하게, β-결정질 모노글리세라이드) 및 i) 아미드 유형의 국소 마취제, ii) 카르바미드, iii) 항균, 항박테리아, 또는 항진균 물질, 이미다졸 유도체 또는 니트로이미다졸 유도체, 및 iv) 3 내지 6개 탄소 원자를 가지는 디올의 군으로부터 선택되는 하나 이상의 화학 물질의 조합의 항균 유효량은 항균 특성을 부여하기에 효과적이다.

본 명세서에 기술된 제제 또는 방법에서 사용될 수 있는 특히 바람직한 아미드 유형의 국소 마취제는 리도카인, 프릴로카인, 메피바카인, 신초카인, 부피바카인, 프로카인, 디부카인, 테트라카인, 옥시부프로카인, 옥세타제인(oxethazeine) 및 에티도카인을 포함하나 이로 제한되지는 않는다. 부피바카인은 본 명세서에 기술된 제제 및 방법에서의 사용을 위한 상기 국소 마취제 중에서 특히 바람직한 물질이다.

국소 마취제에 추가적으로 또는 이 대신에, 카르바미드 화합물, 술파구아니딘, 술파닐일루어(sulfanilylure), 우레아 유도체, 푸시드산, 세팔로스포린 P가 본 명세서에 기술된 하나 이상의 제제 또는 방법에서 또한 사용될 수 있다. 에코나졸 니트레이트, 미코나졸 니트레이트, 바이포나졸 및 클로트리마졸을 비롯한 이미다졸 유도체가 본 명세서에 기술된 하나 이상의 제제 또는 방법에서 또한 사용될 수 있다. 티니다졸 및 메트로니다졸을 비롯한 니트로이미다졸 화합물과 같은 항병원성 물질이 본 명세서에 기술된 하나 이상의 제제 또는 방법에서 또한 사용될 수 있다. 3 내지 6개 탄소 원자를 가지는 디올 화합물은 프로판디올 (예를 들어, 1,2-프로판디올(프로필렌 글리콜), 1,3-프로판디올, 2,2-디메틸-l,3 프로판디올), 부탄디올 (예를 들어, 1,2-부탄디올, l,3-부탄디올(부틸렌 글리콜) 1,4-부탄디올, 2,3-부탄디올), 펜탄디올 (예를 들어, 1,2-펜탄디올(펜틸렌 글리콜), 1,3-펜탄디올, 1,4-펜탄디올, 1,5-펜탄디올, 2,3-펜탄디올, 2,4-펜탄디올) 및 헥산디올 (예를 들어, 1,2-헥산디올, 1,3-헥산디올, 1,4-헥산디올, 1,5-헥산디올, 1,6-헥산디올, 2,3-헥산디올, 2,4-헥산디올, 및 2,5-헥산디올, 헥사메틸렌 디올, 1,2-시클로헥산 디올, 1,4-시클로헥산 디올)을 포함하나 이로 제한되지는 않고, 본 명세서에 기술된 하나 이상의 제제 또는 방법에서 또한 사용될 수 있다.

일부 실시양태에서, 제조 방법은 액체-흡수 능력을 가지는, 유효 성분 또는 전달된 약제 (예를 들어, 전장 HGF 또는 dHGF (HGF의 다섯 아미노산 말단절단 형태) 또는 이들의 변이체 (예를 들어, NK1, dNK1, NK2, dNK2, NK3, dNK3, NK4 또는 dNK4))를 함유하는 건조 분말을 생성하도록 설계된다. 이 건조 분말은 물 또는 적합한 완충액에 노출시 반고체를 생성하는 능력을 가진다. 제조 방법은 성분들의 용해 또는 분산의 초기 단계 및 그 후, 건조, 액체의 제거 및 재구성에 적합한 입자의 형성 단계를 수반한다. 제조 방법에서, 지질의 결정 구조가 변화하지 않는 온도에서 지질을 유지하는 것이 중요할 수 있다. 예를 들어, 제조 동안의 온도는 지질의 용융 온도 미만일 수 있고 예를 들어 42 ℃를 초과하지 않는다.

다른 실시양태에서, 제조 방법은 겔화제 (예를 들어, 나트로솔®) 및 모노글리세라이드만을 함유하는 건조 분말을 생성하도록 수행되고, 이 건조 분말은 유효 성분 또는 전달된 약제 (예를 들어, 전장 HGF 또는 dHGF (HGF의 다섯 아미노산 말단절단 형태) 또는 이들의 변이체 (예를 들어, NK1, dNK1, NK2, dNK2, NK3, dNK3, NK4 또는 dNK4))를 함유하는 수용액 (예를 들어, 적합한 완충액)과 재구성된다. 상기와 같이, 제조 방법은 결정질 모노글리세라이드 (바람직하게, β-결정질 모노글리세라이드) 및 겔화제의 용해 또는 분산의 초기 단계 및 그 후, 건조, 액체의 제거 및 재구성에 적합한 입자의 형성 단계를 수반한다. 바람직하게, 지질의 결정 구조가 변화하지 않고 남도록 35 ℃ 미만의 온도가 유지된다. 겔화제 및 결정질 모노글리세라이드 (바람직하게, β-결정질 모노글리세라이드)를 함유하는 분말의 재구성은 그다음 제품을 이를 필요로 하는 대상체에게 제공하기에 앞서 수행될 수 있거나, 또는 재구성된 재료는 바람직하게 실온 미만의 온도에서 사용시까지 저장될 수 있다. 본 발명의 비제한적인 예가 하기에 제공된다.

<실시예 1>

본 명세서에 기술된 일부 실시양태는 다음의 서열을 가지는 재조합 인간 간세포 성장 인자 (rhHGF)를 포함한다:

본 명세서에 기술된 더많은 실시양태는 다음의 서열을 가지는 dHGF를 포함한다:

<실시예 2>

물-흡수 능력을 가지는 dHGF 함유 건조 분말을 제조하였다. 제조된 조성물은 건조 전, 대략 dHGF 2.5 μg, β-결정질 모노글리세라이드 1-글리세롤 모노라우레이트 37.8 g, β-결정질 모노글리세라이드 1-글리세롤 모노미리스테이트 12.6 g, 히드록시에틸셀룰로스 48 g (예를 들어, 나트로솔®), 및 물 (조성물이 1200 mL이 되게 함)을 함유하였다.

물에서 지질의 혼합물을 만들었고, 여기서 모노글리세라이드, 1-글리세롤 모노라우레이트 및 1-글리세롤 모노미리스테이트를 물 200 g과 혼합하였고 70 내지 75 ℃로 가열하였다. 70 내지 75 ℃에서 15 분 혼합 후, 지질 용액을 천천히 20 ℃ 내지 30 ℃로 냉각시켜 β-결정질 모노글리세라이드를 제공하였다. 물의 남은 부분을 겔 형성 화합물, 히드록시에틸셀룰로스 (예를 들어, 나트로솔®)를 용해시키고 dHGF를 분산시키기 위해 사용하였다. 세 혼합물 또는 용액을 혼합하였고 5 % 미만의 최종 물 함량으로 분무-건조하였다 (예를 들어, 액체 질소의 하단층을 가지는 용기에서 냉동). 제품의 냉동 입자를 수집하였고 5 % 미만의 물로 냉동 건조하였다.

<실시예 3>

다른 실시양태에서, 겔화제 및 모노글리세라이드만을 가지는 건조 분말을 제조하였고 이 건조 분말을 dHGF를 함유하는 용액 (예를 들어, 적합한 완충액)에서 재구성하였다. 제조된 조성물은 건조 전, 대략 1-글리세롤 모노라우레이트 37.8 g, 1-글리세롤 모노미리스테이트 12.6 g, 히드록시에틸셀룰로스 48 g (예를 들어, 나트로솔®), 및 물 (조성물이 1200 mL이 되게 함)을 함유할 것이다.

지질 혼합물을 만들었고, 여기서 모노글리세라이드, 1-글리세롤 모노라우레이트 및 1-글리세롤 모노미리스테이트를 물 200 g과 혼합하였고 70 내지 75 ℃로 가열하였다. 70 내지 75 ℃에서 15 분 혼합 후, 지질 용액을 천천히 20 ℃ 내지 30 ℃로 냉각시켜 β-결정질 모노글리세라이드를 제공하였다. 물의 남은 부분을 히드록시에틸셀룰로스 (예를 들어, 나트로솔®)를 용해시키 위해 사용하였다. 두 혼합물 또는 용액 (즉, 모노글리세라이드 혼합물 및 히드록시에틸셀룰로스 혼합물)을 그다음 혼합하였고 5 % 미만의 최종 물 함량으로 분무-건조하였다 (예를 들어, 액체 질소의 하단층을 가지는 용기에서 냉동). 제품의 냉동 입자를 수집하였고 5 % 미만의 물로 냉동 건조하였다. 냉동-건조된 분말은 그다음 dHGF를 함유하는 용액 (예를 들어, dHGF 약 2.5 μg을 함유하는 적합한 완충액)에서 재구성될 수 있다. 재구성된 제품은 창상으로의 국소 적용에 바로 사용할 수 있는 겔을 형성한다.

<실시예 4>

이 실험에서, 다양한 모노글리세라이드 제제의 결정화도(crystallinity)를 시차 주사 열량측정 (DSC)을 사용하여 가열시 제제의 에너지 요구량을 분석함으로써 구하였다. β-결정질 모노글리세라이드 및 물을 함유하는 크림, ÅLL07001의 결정화도 ( 표 1 참조)를 실시예 2에 기재된 바와 같이 제조되고 DSC 분석에 앞서 재구성된 분말, ÅLL07005A 및 ÅLL07005F ( 표 2 참조)와 비교하였다. ÅLL07005C 분말은 재구성하지 않았고 대조물로서 포함하였다.

ÅLL07001 크림을 완충액과 함께 제조하였다. 물을 제조 용기로 첨가하였고 부피바카인 HCl 및 NaCl을 첨가하였고, pH를 제어하였다 (약 5). 물 상을 기계적 교반과 함께 75 ℃로 가열하였고, 그다음 지질을 첨가하였다. 혼합물을 15분 동안 75 ℃에서 보관하였고, 그다음 교반하면서 온도를 35 ℃로 비교적 빨리 감소시켰다. 그다음, 결정화가 일어나는 동안 (크림이 빛나고 고점성이 될 때까지) 제제를 약 15분 동안 이 온도에서 보관하였다. 그다음 온도를 천천히 교반하는 동안 실온으로 감소시켰다.

크림 형태의 결정질 모노글리세라이드를 교반으로 건조 알기네이트 입자와 혼합하였다. 냉동 건조될 덩어리가 유동적이어야 하기 때문에 추가적인 물을 첨가하였다. 혼합물을 그다음 분무 가스로 CO₂ (g)를 사용하여, 액체 질소로 분무 냉동시켰다. 질소를 3시간 동안 -34 ℃에서 증발시켰다. 혼합물을 총 21시간 동안 냉동 건조하였다.

그다음, 제품 및 원료의 용융 거동을 다음의 프로그램을 사용하여 DSC (퍼킨 엘머(Perkin Elmer) DSC 7)로 분석하였다:

5분 동안 -35 ℃로 냉각

10 ℃/분에서 -35 ℃에서 80 ℃으로 가열

재구성된 분말 (ÅLL07005A 및 ÅLL07005F) 및 크림 (ÅLL07001)의 융점은 약 35 ℃에서 에너지 요구량 최고조에 달하고, 이는 물에서의 β-결정질 모노글리세라이드의 공지된 용융 온도와 잘 일치한다 ( 도 1 참조). 50 ℃ 초과에서 재구성되지 않은 분말의 융점은 건조 모노글리세라이드의 용융 온도와 부합된다. 이러한 데이터는 크림의 제조 동안 형성된 β-결정질 결정이 건조 공정을 견뎌내었고 물에 노출시 재변형되었음을 보여준다.

<실시예 5>

실시예 2에 기술된 방법에 따라 제조된 분말 dHGF 제제를 희석제 완충액으로 5회 희석시켰고 dHGF의 존재 및/또는 회복을 시판되고 있는 키트를 사용하여 엘리사(ELISA) 분석으로 구하였다. 결과는 준비 방법이 넣은 dHGF의 90 % 초과의 회복을 내었다는 것을 보여준다.

<실시예 6>

dHGF 제제의 안정성에 대한 각종 모노글리세라이드의 효과를 그다음 분석하였다. 이 실험에서, dHGF 및 β-결정질 모노글리세라이드를 포함하는 조성물의 안정성을 dHGF 및 α-결정성 모노글리세라이드를 포함하는 조성물 및 dHGF 및 비결정성 재료를 포함하는 조성물의 안정성과 비교하였다.

다음의 조성물을 제조하였다:

제제 6A*

1-글리세롤 모노라우레이트 12.6 g

1-글리세롤 모노미리스테이트 38.4

물 149 g

* 이 조성물은 DSC 분석에 따르면 약 80 % β-결정을 함유한다.

제제 6B**

1-글리세롤 모노스테아레이트 40 g

폴리에틸렌 스테아레이드 (Myrj 62) 4 g

물 156 g

** 이 조성물은 약 70 % α 결정을 포함한다.

제제 6C***

1-글리세롤 모노올레에이트 40 g

물 160 g

*** 이 조성물은 비결정질이다.

이 제제를 모노글리세라이드 결정을 형성시키기 위하여 75 ℃로 가열, 15분 동안 교반하고 천천히 20분 동안 실온, 20 ℃로 냉각시켰다. 제제 6A 및 6B는 회백색의 크림이었던 반면 제제 6C는 반투명했고 상등액 물을 함유했다. 결정질 구조를 현미경 평가로 확인하였다

약 10.0 g의 제제 6A, 6B, 및 6C를 그다음 dHGF 함유 완충액으로 1:3 희석하였고, 2 내지 8 ℃ 및 실온, 약 20 ℃에서 10 ml 시험관에서 저장하였다. 제조 후 및 저장 7일 후 샘플을 취출하고 냉동시켰다. dHGF의 안정성을 엘리사 (B-브릿지)에 의해 평가하였고 그 결과가 표 3에 나타난다.

이 결과들은 결정질 모노글리세라이드, 특히 β-결정질 모노글리세라이드가 단백질 및 펩티드-함유 제제, 특히 dHGF-함유 제제의 안정성 및 저장을 크게 개선하고, 이것은 다시 국소 적용의 면에서 특정양의 단백질을 표적화된 부위로 선택적으로 투여 및/또는 전달하는 능력을 개선한다는 것의 강력한 증거를 제공한다. 상피세포 증식 및 산란을 비롯한 단백질에 대한 많은 신체의 반응이 국소화된 양의 단백질에 의해 치밀하게 조절되므로, 이러한 발견은 HGF 및 이의 변이체, 예를 들어 dHGF와 같은 분자에 특히 중요하다.

<실시예 7>

두개의 상이한 국소 HGF 제제를 실험적으로 유도된 창상이 제공된 괴팅겐(Goettingen) SPF 미니피그에 수행된 임상전 시험에서 평가하였다. 따라서, 각 제제를 인공 창상을 받은 4마리의 암컷 괴팅겐 SPF 미니피그에 적용하였고 각 창상의 치유를 시간에 걸쳐 모니터링/측정 및 평가하였다.

순응 기간 후, 동물들의 체중은 약 31.1 내지 37.7 kg이었다. 도착시에 모든 동물들을 엔터리솔® 일레이티스 벳(Enterisol® Ileitis vet) (보어링거 잉겔하임(Boehringer Ingelheim)의 경구 투여로 (2.0 ml/동물) 로소니아 인트라셀룰라리스(Lawsonia intracellularis)에 대해 백신접종시켰다. 좋지않은 상태의 동물들을 거부하기 위하여 동물들을 매일 관찰한 3주의 치료전 기간 (순응 기간 5일 포함)을 두었다.

첫 dHGF 제제 ("표준 조성물")를 나예리(Nayeri)의 미국 특허출원 제10/398,304호에 기술된 바와 같이 제조하였고 20.9 ng/ml dHGF, 알부민, 헤파린, 및 희석된 완충액을 함유하였다 (하기 참조).

표준 dHGF 조성물:

치료 1: dHGF 20.9 ng/ml

치료 2: dHGF 위약 (대조물)

본 발명의 안정화된 제제를 실시예 2에 기술된 바와 같이 제조하였고 10 ng/ml dHGF를 함유하였다 (하기 참조).

안정화된 dHGF 조성물

치료 3: dHGF 10 ng/ml

치료 4: dHGF 위약 (대조믈)

dHGF 제품의 적용에 앞서, 주변 피부를 멸균수로 세정하였고 필요한 경우 면도하였다. 추가로, 전날의 투약으로부터 남아있을 수 있는 시험 제품을 멸균 거즈 및 멸균 수를 사용하여 조심히 제거하였다 (필요한 경우).

표준 dHGF 조성물의 시험과 관련하여, 20.9 ng/ml 표준 조성물을 미니피그의 원형 전체-두께 창상 (20 mm 직경)에 창상제공 후 즉시 및 그 후 14일 동안 매일 국소적으로 적용하였다. 이러한 치료 후, 대조물 치료된 창상 (위약)과 비교한 창상 치유 과정에서의 유해 효과는 관찰되지 않았다. 창상 치유에서 약간의 개선이 관찰되었다 ( 표 4 참조).

안정화된 dHGF 제제와 관련하여, 결과는 극적이였다 ( 표 4 참조). dHGF 10 ng/ml 제제로 치료된 모든 창상에서 치유 과정이 진전되었다 (모든 창상에서 잘 체계화된 새살형성 조직의 존재로 특징됨 (모든 창상에서 양으로 등급매김)). 재상피화는 저투여량, 10 ng/m 군에서 14/24 창상으로 등급매겨졌고, 이는 위약 군에서 관찰된 것보다 약간 높았다 (대조군에서 3/24).

따라서, 이 실험은 안정화된 dHGF 제제가 위약보다 재상피화에서 약간 더 효율적인 반면, 표준 HGF 제제는 아니었다는 것을 증명했다. 추가적으로, 결과는 안정화된 dHGF 제제가 위약 및 표준 제제에 비해 창상 봉합에 개선된 효과를 가진다는 것을 보여준다.

SEQUENCE LISTING <110> Kringle Pharma Inc., Kringle Pharma Europe AB Lindahl, Ake <120> TOPICAL COMPOSITIONS FOR THE CONTROLLED DELIVERY OF PROTEINS AND PEPTIDES <130> TRIPEP.105VPC <150> 60/018640 <151> 2008-01-02 <160> 2 <170> FastSEQ for Windows Version 4.0 <210> 1 <211> 728 <212> PRT <213> Human <400> 1 Met Trp Val Thr Lys Leu Leu Pro Ala Leu Leu Leu Gln His Val Leu 1 5 10 15 Leu His Leu Leu Leu Leu Pro Ile Ala Ile Pro Tyr Ala Glu Gly Gln 20 25 30 Arg Lys Arg Arg Asn Thr Ile His Glu Phe Lys Lys Ser Ala Lys Thr 35 40 45 Thr Leu Ile Lys Ile Asp Pro Ala Leu Lys Ile Lys Thr Lys Lys Val 50 55 60 Asn Thr Ala Asp Gln Cys Ala Asn Arg Cys Thr Arg Asn Lys Gly Leu 65 70 75 80 Pro Phe Thr Cys Lys Ala Phe Val Phe Asp Lys Ala Arg Lys Gln Cys 85 90 95 Leu Trp Phe Pro Phe Asn Ser Met Ser Ser Gly Val Lys Lys Glu Phe 100 105 110 Gly His Glu Phe Asp Leu Tyr Glu Asn Lys Asp Tyr Ile Arg Asn Cys 115 120 125 Ile Ile Gly Lys Gly Arg Ser Tyr Lys Gly Thr Val Ser Ile Thr Lys 130 135 140 Ser Gly Ile Lys Cys Gln Pro Trp Ser Ser Met Ile Pro His Glu His 145 150 155 160 Ser Phe Leu Pro Ser Ser Tyr Arg Gly Lys Asp Leu Gln Glu Asn Tyr 165 170 175 Cys Arg Asn Pro Arg Gly Glu Glu Gly Gly Pro Trp Cys Phe Thr Ser 180 185 190 Asn Pro Glu Val Arg Tyr Glu Val Cys Asp Ile Pro Gln Cys Ser Glu 195 200 205 Val Glu Cys Met Thr Cys Asn Gly Glu Ser Tyr Arg Gly Leu Met Asp 210 215 220 His Thr Glu Ser Gly Lys Ile Cys Gln Arg Trp Asp His Gln Thr Pro 225 230 235 240 His Arg His Lys Phe Leu Pro Glu Arg Tyr Pro Asp Lys Gly Phe Asp 245 250 255 Asp Asn Tyr Cys Arg Asn Pro Asp Gly Gln Pro Arg Pro Trp Cys Tyr 260 265 270 Thr Leu Asp Pro His Thr Arg Trp Glu Tyr Cys Ala Ile Lys Thr Cys 275 280 285 Ala Asp Asn Thr Met Asn Asp Thr Asp Val Pro Leu Glu Thr Thr Glu 290 295 300 Cys Ile Gln Gly Gln Gly Glu Gly Tyr Arg Gly Thr Val Asn Thr Ile 305 310 315 320 Trp Asn Gly Ile Pro Cys Gln Arg Trp Asp Ser Gln Tyr Pro His Glu 325 330 335 His Asp Met Thr Pro Glu Asn Phe Lys Cys Lys Asp Leu Arg Glu Asn 340 345 350 Tyr Cys Arg Asn Pro Asp Gly Ser Glu Ser Pro Trp Cys Phe Thr Thr 355 360 365 Asp Pro Asn Ile Arg Val Gly Tyr Cys Ser Gln Ile Pro Asn Cys Asp 370 375 380 Met Ser His Gly Gln Asp Cys Tyr Arg Gly Asn Gly Lys Asn Tyr Met 385 390 395 400 Gly Asn Leu Ser Gln Thr Arg Ser Gly Leu Thr Cys Ser Met Trp Asp 405 410 415 Lys Asn Met Glu Asp Leu His Arg His Ile Phe Trp Glu Pro Asp Ala 420 425 430 Ser Lys Leu Asn Glu Asn Tyr Cys Arg Asn Pro Asp Asp Asp Ala His 435 440 445 Gly Pro Trp Cys Tyr Thr Gly Asn Pro Leu Ile Pro Trp Asp Tyr Cys 450 455 460 Pro Ile Ser Arg Cys Glu Gly Asp Thr Thr Pro Thr Ile Val Asn Leu 465 470 475 480 Asp His Pro Val Ile Ser Cys Ala Lys Thr Lys Gln Leu Arg Val Val 485 490 495 Asn Gly Ile Pro Thr Arg Thr Asn Ile Gly Trp Met Val Ser Leu Arg 500 505 510 Tyr Arg Asn Lys His Ile Cys Gly Gly Ser Leu Ile Lys Glu Ser Trp 515 520 525 Val Leu Thr Ala Arg Gln Cys Phe Pro Ser Arg Asp Leu Lys Asp Tyr 530 535 540 Glu Ala Trp Leu Gly Ile His Asp Val His Gly Arg Gly Asp Glu Lys 545 550 555 560 Cys Lys Gln Val Leu Asn Val Ser Gln Leu Val Tyr Gly Pro Glu Gly 565 570 575 Ser Asp Leu Val Leu Met Lys Leu Ala Arg Pro Ala Val Leu Asp Asp 580 585 590 Phe Val Ser Thr Ile Asp Leu Pro Asn Tyr Gly Cys Thr Ile Pro Glu 595 600 605 Lys Thr Ser Cys Ser Val Tyr Gly Trp Gly Tyr Thr Gly Leu Ile Asn 610 615 620 Tyr Asp Gly Leu Leu Arg Val Ala His Leu Tyr Ile Met Gly Asn Glu 625 630 635 640 Lys Cys Ser Gln His His Arg Gly Lys Val Thr Leu Asn Glu Ser Glu 645 650 655 Ile Cys Ala Gly Ala Glu Lys Ile Gly Ser Gly Pro Cys Glu Gly Asp 660 665 670 Tyr Gly Gly Pro Leu Val Cys Glu Gln His Lys Met Arg Met Val Leu 675 680 685 Gly Val Ile Val Pro Gly Arg Gly Cys Ala Ile Pro Asn Arg Pro Gly 690 695 700 Ile Phe Val Arg Val Ala Tyr Tyr Ala Lys Trp Ile His Lys Ile Ile 705 710 715 720 Leu Thr Tyr Lys Val Pro Gln Ser 725 <210> 2 <211> 720 <212> PRT <213> Human <400> 2 Met Trp Val Thr Lys Leu Leu Pro Ala Leu Leu Leu Gln His Val Leu 1 5 10 15 Leu His Leu Leu Leu Leu Pro Ile Ala Ile Pro Tyr Ala Glu Gly Gln 20 25 30 Arg Lys Arg Arg Asn Thr Ile His Glu Phe Lys Lys Ser Ala Lys Thr 35 40 45 Thr Leu Ile Lys Ile Asp Pro Ala Leu Lys Ile Lys Thr Lys Lys Val 50 55 60 Asn Thr Ala Asp Gln Cys Ala Asn Arg Cys Thr Arg Asn Lys Gly Leu 65 70 75 80 Pro Phe Thr Cys Lys Ala Phe Val Phe Asp Lys Ala Arg Lys Gln Cys 85 90 95 Leu Trp Phe Pro Phe Asn Ser Met Ser Ser Gly Val Lys Lys Glu Phe 100 105 110 Gly His Glu Phe Asp Leu Tyr Glu Asn Lys Asp Tyr Ile Arg Asn Cys 115 120 125 Ile Ile Gly Lys Gly Arg Ser Tyr Lys Gly Thr Val Ser Ile Thr Lys 130 135 140 Ser Gly Ile Lys Cys Gln Pro Trp Ser Ser Met Ile Pro His Glu His 145 150 155 160 Ser Tyr Arg Gly Lys Asp Leu Gln Glu Asn Tyr Cys Arg Asn Pro Arg 165 170 175 Gly Glu Glu Gly Gly Pro Trp Cys Phe Thr Ser Asn Pro Glu Val Arg 180 185 190 Tyr Glu Val Cys Asp Ile Pro Gln Cys Ser Glu Val Glu Cys Met Thr 195 200 205 Cys Asn Gly Glu Ser Tyr Arg Gly Leu Met Asp His Thr Glu Ser Gly 210 215 220 Lys Ile Cys Gln Arg Trp Asp His Gln Thr Pro His Arg His Lys Phe 225 230 235 240 Leu Pro Glu Arg Tyr Pro Asp Lys Gly Phe Asp Asp Asn Tyr Cys Arg 245 250 255 Asn Pro Asp Gly Gln Pro Arg Pro Trp Cys Tyr Thr Leu Asp Pro His 260 265 270 Thr Arg Trp Glu Tyr Cys Ala Ile Lys Thr Cys Ala Asp Asn Thr Met 275 280 285 Asn Asp Thr Asp Val Pro Leu Glu Thr Thr Glu Cys Ile Gln Gly Gln 290 295 300 Gly Glu Gly Tyr Arg Gly Thr Val Asn Thr Ile Trp Asn Gly Ile Pro 305 310 315 320 Cys Gln Arg Trp Asp Ser Gln Tyr Pro His Glu His Asp Met Thr Pro 325 330 335 Glu Asn Phe Lys Cys Lys Asp Leu Arg Glu Asn Tyr Cys Arg Asn Pro 340 345 350 Asp Gly Ser Glu Ser Pro Trp Cys Phe Thr Thr Asp Pro Asn Ile Arg 355 360 365 Val Gly Tyr Cys Ser Gln Ile Pro Asn Cys Asp Met Ser His Gly Gln 370 375 380 Asp Cys Tyr Arg Gly Asn Gly Lys Asn Tyr Met Gly Asn Leu Ser Gln 385 390 395 400 Thr Arg Ser Gly Leu Thr Cys Ser Met Trp Asp Lys Asn Met Glu Asp 405 410 415 Leu His Arg His Ile Phe Trp Glu Pro Asp Ala Ser Lys Leu Asn Glu 420 425 430 Asn Tyr Cys Arg Asn Pro Asp Asp Asp Ala His Gly Pro Trp Cys Tyr 435 440 445 Thr Gly Asn Pro Leu Ile Pro Trp Asp Tyr Cys Pro Ile Ser Arg Cys 450 455 460 Glu Gly Asp Thr Thr Pro Thr Ile Val Asn Leu Asp His Pro Val Ile 465 470 475 480 Ser Cys Ala Lys Thr Lys Gln Leu Arg Val Val Asn Gly Ile Pro Thr 485 490 495 Arg Thr Asn Ile Gly Trp Met Val Ser Leu Arg Tyr Arg Asn Lys His 500 505 510 Ile Cys Gly Gly Ser Leu Ile Lys Glu Ser Trp Val Leu Thr Ala Arg 515 520 525 Gln Cys Phe Pro Ser Arg Asp Leu Lys Asp Tyr Glu Ala Trp Leu Gly 530 535 540 Ile His Asp Val His Gly Arg Gly Asp Glu Lys Cys Lys Gln Val Leu 545 550 555 560 Asn Val Ser Gln Leu Val Tyr Gly Pro Glu Gly Ser Asp Leu Val Leu 565 570 575 Met Lys Leu Ala Arg Pro Ala Val Leu Asp Asp Phe Val Ser Thr Ile 580 585 590 Asp Leu Pro Asn Tyr Gly Cys Thr Ile Pro Glu Lys Thr Ser Cys Ser 595 600 605 Val Tyr Gly Trp Gly Tyr Thr Gly Leu Ile Asn Tyr Asp Gly Leu Leu 610 615 620 Arg Val Ala His Leu Tyr Ile Met Gly Asn Glu Lys Cys Ser Gln His 625 630 635 640 His Arg Gly Lys Val Thr Leu Asn Glu Ser Glu Ile Cys Ala Gly Ala 645 650 655 Glu Lys Ile Gly Ser Gly Pro Cys Glu Gly Asp Tyr Gly Gly Pro Leu 660 665 670 Val Cys Glu Gln His Lys Met Arg Met Val Leu Gly Val Ile Val Pro 675 680 685 Gly Arg Gly Cys Ala Ile Pro Asn Arg Pro Gly Ile Phe Val Arg Val 690 695 700 Ala Tyr Tyr Ala Lys Trp Ile His Lys Ile Ile Leu Thr Tyr Lys Val 705 710 715 720

Claims (57)

1. 생물학적 활성을 가지는 단백질 또는 펩티드; 및
   20 ℃ 이상의 용융 온도를 가지는 하나 이상의 모노글리세라이드
   를 포함하는 안정화된 단백질 조성물.
2. 제1항에 있어서, 상기 단백질이 천연 발생 간세포 성장 인자 (HGF)의 재조합 형태인 조성물.
3. 제2항에 있어서, 상기 천연 발생 HGF의 재조합 형태가 HGF의 다섯 아미노산 말단절단 형태 (dHGF)인 조성물.
4. 제2항에 있어서, 상기 천연 발생 HGF의 재조합 형태가 NK1, dNK1, NK2, dNK2, NK3, dNK3, NK4 또는 dNK4를 구성하는 군으로부터 선택되는 조성물.
5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 모노글리세라이드가 25 ℃ 이상의 용융 온도를 가지는 조성물.
6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 모노글리세라이드가 30 ℃ 이상의 용융 온도를 가지는 조성물.
7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 모노글리세라이드가 35 ℃ 이상의 용융 온도를 가지는 조성물.
8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물이 상기 하나 이상의 모노글리세라이드에 추가적으로 항병원성 약제를 추가로 포함하는 조성물.
9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항병원성 화합물이 3 내지 6개 탄소 원자를 가지는 디올, 니트로이미다졸 유도체, 이미다졸 유도체, 카르바미드, 및 아미드 유형의 국소 마취제로 구성된 군으로부터 선택되는 조성물.
10. 제9항에 있어서, 상기 항병원성 약제가 부피바카인인 조성물.
11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 점도증가제를 추가로 포함하는 조성물.
12. 제11항에 있어서, 상기 점도증가제가 히드록시에틸셀룰로스, 메틸셀룰로스, 히드록시프로필 셀룰로스, 카르복시메틸 셀룰로스, 히드록시프로필 메틸 셀룰로스 (E464), 및 히드록시에틸 메틸 셀룰로스로 구성된 군으로부터 선택되는 셀룰로스 유도체인 조성물.
13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 하나 이상의 모노글리세라이드가 10, 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16개 탄소의 탄소 사슬 길이를 가지는 조성물.
14. 10, 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16개 탄소의 탄소 길이를 가지는 β-결정질 모노글리세라이드와 함께 제제화된 dHGF 단백질을 포함하고, 여기서 안정화된 단백질 조성물내 상기 dHGF의 농도가 50 ng/ml 이하인 안정화된 단백질 조성물.
15. 제14항에 있어서, 상기 제제가 1-글리세롤 모노라우레이트 또는 1-글리세롤 모노미리스테이트 또는 모두를 포함하는 조성물.
16. 제14항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 점도증가제를 추가로 포함하는 조성물.
17. 제14항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 항균제를 추가로 포함하는 조성물.
18. 제17항에 있어서, 상기 점도증가제가 히드록시에틸셀룰로스이고 상기 항균제가 부피바카인인 조성물.
19. 제14항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 안정화된 단백질 조성물에서 dHGF의 농도가 10 ng/ml 이하인 조성물.
20. dHGF 단백질 및 30 ℃ 이상의 용융 온도를 가지는 하나 이상의 모노글리세라이드를 포함하는 용액을 제공하는 단계; 및
    상기 용액을 건조시켜 건조 과립을 형성하고 여기서 건조 공정이 모노글리세라이드의 β-결정질 구조를 보존하는 단계
    를 포함하는, 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항의 조성물의 제조 방법.
21. 제20항에 있어서, 상기 용액이 점도증가제를 추가로 포함하는 제조 방법.
22. 제21항에 있어서, 상기 점도증가제가 히드록시에틸셀룰로스, 메틸셀룰로스, 히드록시프로필 셀룰로스, 카르복시메틸 셀룰로스, 히드록시프로필 메틸 셀룰로스 (E464), 및 히드록시에틸 메틸 셀룰로스로 구성된 군으로부터 선택되는 셀룰로스 유도체인 제조 방법.
23. 제20항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 하나 이상의 모노글리세라이드가 10, 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16개 탄소의 탄소 사슬 길이를 가지는 제조 방법.
24. 제20항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 용액이 단독으로 또는 상기 하나 이상의 모노글리세라이드와 함께, 하나 이상의 항병원성 화합물을 추가로 포함하는 제조 방법.
25. 제24항에 있어서, 상기 항병원성 화합물이 부피바카인인 제조 방법.
26. 제24항에 있어서, 상기 항병원성 화합물이 3 내지 6개 탄소 원자를 가지는 디올, 니트로이미다졸 유도체, 이미다졸 유도체, 카르바미드, 및 아미드 유형의 국소 마취제로 구성된 군으로부터 선택되는 제조 방법.
27. 30 ℃ 이상의 용융 온도를 가지는 하나 이상의 결정질 모노글리세라이드 및 점도증가제를 포함하는 용액을 제공하는 단계;
    상기 용액을 냉동 분무-건조시켜 건조 과립을 형성하고 여기서 냉동 건조 공정이 모노글리세라이드의 β-결정질 구조를 보존하는 단계;
    천연 발생 HGF 단백질의 재조합 형태를 포함하는 액체를 제공하는 단계; 및
    상기 HGF 단백질을 포함하는 상기 액체와 상기 하나 이상의 모노글리세라이드 및 점도증가제를 포함하는 상기 건조 과립을 하나 이상의 모노글리세라이드의 결정질 구조를 유지하는 조건하에서 합치는 단계
    를 포함하는 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항의 조성물의 제조 방법.
28. 제27항에 있어서, 상기 천연 발생 HGF 단백질의 재조합 형태가 dHGF인 제조 방법.
29. 제27항 또는 제28항에 있어서, 상기 점도증가제가 히드록시에틸셀룰로스, 메틸셀룰로스, 히드록시프로필 셀룰로스, 카르복시메틸 셀룰로스, 히드록시프로필 메틸 셀룰로스 (E464), 및 히드록시에틸 메틸 셀룰로스로 구성된 군으로부터 선택되는 셀룰로스 유도체인 제조 방법.
30. 제27항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 하나 이상의 모노글리세라이드가 10, 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16개 탄소의 탄소 사슬 길이를 가지는 제조 방법.
31. 제27항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 용액이 단독으로 또는 상기 하나 이상의 모노글리세라이드와 함께, 하나 이상의 항병원성 화합물을 추가로 포함하는 제조 방법.
32. 제31항에 있어서, 상기 항병원성 화합물이 부피바카인인 제조 방법.
33. 제31항에 있어서, 상기 항병원성 화합물이 3 내지 6개 탄소 원자를 가지는 디올, 니트로이미다졸 유도체, 이미다졸 유도체, 카르바미드, 및 아미드 유형의 국소 마취제로 구성된 군으로부터 선택되는 제조 방법.
34. 피부 상태를 개선 또는 호전시키는 약제를 필요로 하는 대상체를 확인하는 단계;
    제1항 내지 제19항 중 어느 한 항의 조성물을 상기 대상체에게 제공하는 단계
    를 포함하는, 대상체의 피부 상태를 개선 또는 호전시키기 위한 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항의 조성물의 사용 방법.
35. 제34항에 있어서, 상기 피부 상태가 만성 당뇨병성 피부 궤양인 사용 방법.
36. 제34항에 있어서, 상기 피부 상태가 열상인 사용 방법.
37. 제34항에 있어서, 상기 피부 상태가 창상인 사용 방법.
38. 제34항에 있어서, 상기 피부 상태가 미용상 흠인 사용 방법.
39. 제34항에 있어서, 상기 피부 상태가 피부 신생물인 사용 방법.
40. 제34항에 있어서, 상기 피부 상태가 바닥 세포 암종인 사용 방법.
41. 제34항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 피부 상태의 개선 또는 호전을 측정하는 단계를 추가로 포함하는 사용 방법.
42. 1-글리세롤 모노라우레이트 및 1-글리세롤 모노미리스테이트와 함께 제제화된 HGF 또는 HGF 변이체 단백질
    을 포함하는 안정화된 단백질 조성물.
43. 제42항에 있어서, 점도증가제를 추가로 포함하는 조성물.
44. 제43항에 있어서, 항병원성 약제를 추가로 포함하는 조성물.
45. 제43항에 있어서, 상기 점도증가제가 히드록시에틸셀룰로스인 조성물.
46. 제44항에 있어서, 상기 항병원성 약제가 부피바카인인 조성물.
47. 제42항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 HGF 또는 HGF 변이체 단백질이 NK1, dNK1, NK2, dNK2, NK3, dNK3, NK4 또는 dNK4 또는 상기 HGF 또는 HGF 변이체 단백질에 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 이상의 서열 동일성 또는 상동성을 포함하는 단백질로 구성된 군으로부터 선택되고, 단, 이 동일 또는 상동성인 단백질은 예를 들어 cMet 수용체로의 결합, 상피세포 촉진, 세포 산란, 세포 성장의 유도, 상피세포 촉진의 억제, 세포 산란의 억제, 또는 세포 성장의 억제와 같은 HGF 또는 HGF 변이체 단백질의 속성인 기능을 보유하는 조성물.
48. 1-글리세롤 모노라우레이트 및 1-글리세롤 모노미리스테이트와 함께 제제화된 dHGF 단백질
    을 포함하는 안정화된 단백질 조성물.
49. 제48항에 있어서, 점도증가제를 추가로 포함하는 조성물.
50. 제48항에 있어서, 상기 점도증가제가 히드록시에틸셀룰로스인 조성물.
51. 제48항에 있어서, 항병원성 약제를 추가로 포함하는 조성물.
52. 제48항에 있어서, 상기 항병원성 약제가 부피바카인인 조성물.
53. 1-글리세롤 모노라우레이트 및 1-글리세롤 모노미리스테이트와 함께 제제화된 HGF, NK1, dNK1, NK2, dNK2, NK3, dNK3, NK4 또는 dNK4
    을 포함하는 안정화된 단백질 조성물.
54. 제51항에 있어서, 점도증가제를 추가로 포함하는 조성물.
55. 제53항에 있어서, 상기 점도증가제가 히드록시에틸셀룰로스인 조성물.
56. 제53항에 있어서, 항병원성 약제를 추가로 포함하는 조성물.
57. 제48항에 있어서, 상기 항병원성 약제가 부피바카인인 조성물.

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