KR102038948B1 - 알파 코넥신 c-말단 (act) 펩타이드를 포함하는 국소 겔 - Google Patents

알파 코넥신 c-말단 (act) 펩타이드를 포함하는 국소 겔 Download PDF

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Abstract

본 발명은 알파 코넥신의 카복시-말단 아미노산 서열(ACT 펩타이드), 펩타이드 안정화제, 부형제, 완충제 등을 가진 분리된 폴리펩타이드를 포함하는 조성물을 포함하는 국소 겔 약품에 관한 것이다. 제제 및 제조 단계는 안정하고, 세련되고 부을 수 있는 국소 겔을 제조하기 위해 개시된다. 최종 제제는 흉터 예방 및 상처의 빠른 치료를 포함하는 심미적뿐만 아니라 치료적 용도에 적합한 장기간 안정성을 가진다.

Description

알파 코넥신 C-말단 (ACT) 펩타이드를 포함하는 국소 겔{Topical Gels Containing Alpha Connexin C-Terminal (ACT) Peptides}
본 발명은 알파 코넥신 폴리펩타이드 및 안정제를 포함하는 상처 치료용 조성물에 관한 것이다. 알파 코넥신 폴리펩타이드 및 하이드록시에틸셀룰로오스를 포함하는 국소 제제가 특히 안정하다. 이런 조성물은 급성 외과 수술 및 만성 궤양을 포함하는 다양한 상처를 치료하는데 사용될 수 있다.
기계적 부상, 질병 프로세스 및 다른 원인에 의해 손상된 인간 조직들은 치료될 수 있으나, 복합 조직 구조 및 기능은 가능한 경우라도 좀처럼 완전히 회복되지 않는다. 대신에, 인간 및 다른 고등 척추동물의 손상에 의한 거의 모든 조직들의 회복은 상처 조직의 형성에 의해 지배된다. 이것의 가장 흔히 있는 예는 피부 베인 상처 또는 찰과상의 치료 이후 잔존하는 변색되고 섬유성 상처이다. 뇌 또는 척수에 대한 손상 이후 신경교 상처 조직의 형성은 중추신경계에 대한 손상 이후 신경 기능의 회복에 대한 주요 장애들 중 하나라는 것이 덜 알려져 있다(Silver and Miller JH, 2004). 손상 이후 흉터 발생을 치료 또는 예방하고 복합 조직 구조 및 기능의 재생을 촉진하는 수단이 현재 존재하지 않는다.
이런 치료가 발견되면, 포함하는 활성 약학적 성분(API)을 안정화하는 제제를 제공할 필요 또한 존재한다. 무수한 잠재적 안정제들이 존재하나, 이들 모두가 특정 API를 안정화하는데 매우 동일하게 작동하지 않는다.
본 발명은 분리된 알파 코넥신 폴리펩타이드를 포함하는 조성물을 함유하는 국소 겔 약품 제제에 관한 것이다. 국소 제제는 저장 동안 알파 코넥신 폴리펩타이드를 안정화하는 하이드록시에틸셀룰로오스 겔을 추가로 포함할 수 있다. 특정 실시태양에서, 알파 코넥신 폴리펩타이드는 알파 코넥신의 카복시 말단 아미노산 서열(이하 "ACT")을 포함한다. 본 발명의 알파 코넥신 폴리펩타이드는 알파 코넥신 단백질 또는 이의 보존성 변형체의 카복실-말단 대부분 4 내지 30개 연속 아미노산을 포함하거나 이루어질 수 있으며, 상기 적어도 하나의 알파 코넥신 폴리펩타이드는 이의 아미노 말단에서 세포 내재화 수송체에 연결된다.
본 발명의 목적은 대상의 흉터 발생의 예방 및 상처의 가속화된 치료를 포함하는 심미적 용도뿐만 아니라 치료적 용도를 위한 ACT를 포함하는 안정하고, 세련되고 부을 수 있는 국소 겔 담체의 제제를 제조하는 것이다. 약품은 흉터 발생을 감소시키기 위해 급성 외과 상처에 투여될 수 있거나 정맥성 다리 궤양, 당뇨성 발 궤양, 욕창 등을 포함하나 이에 제한되지 않는 치료가 어려운 상처에 장기간 도포될 수 있다. 약품은 모든 형태의 상처에 도포될 때 치료적 유효량의 ACT 펩타이드를 제공하는 이의 능력을 가능하게 하는 물리화학적, 생화학적 및 유동학적 특성을 소유한다.
본 발명의 한 양태에서, 하나 이상의 안정제는 여러 개 중에서 선택되며, 분리된 폴리펩타이드를 안정화하도록 ACT 펩타이드로 제조된다. 바람직하게는 안정제는 비-자극성이고, 비-착색성이고 비-면역원성이다. 안정제는 다양한 온도 조건(즉, 약 5℃, 약 10℃, 약 15℃, 약 20℃, 약 25℃, 약 30℃, 약 35℃ 또는 약 40℃) 및 상대 습도의 범위(즉, 0% 상대 습도, 10% 상대 습도, 20% 상대 습도, 30% 상대 습도, 40% 상대 습도, 50% 상대 습도, 60% 상대 습도, 70% 상대 습도, 80% 상대 습도, 90% 상대 습도, 또는 100% 상대 습도)하에서 약품의 장기간(즉, 3개월, 6개월, 9개월, 12개월, 18개월 또는 24개월 동안) 저장을 가능하게 한다.
본 발명의 다른 양태에서, 하나 이상의 부형제는 수용성 기공유도물질(porogen), 폴리머, 이온 화합물, 비-이온 화합물 및 용매로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 추가 실시태양에서, 부형제는 담체, 안정제 및 겔화제의 하나 이상으로 작용한다. 한 실시태양에서, 적어도 하나의 부형제는 ACT로 제조된다. 바람직하게는 부형제는 비-자극성이고, 비-착색성이고 비-면역원성이다. 한 실시태양에서 제제는 적어도 하나의 폴리머를 포함한다. 추가 실시태양에서, 제제는 셀룰로오스의 한 유도체를 포함한다. 또 다른 실시태양에서, 셀룰로오스의 유도체는 하이드록시에틸셀룰로오스이다.
본 발명의 또 다른 양태에서, 국소 겔에 대한 최적 pH 범위는 약 pH 5 내지 약 pH 7이며, 하나 이상의 완충제의 첨가에 의해 유지된다. 바람직하게는 완충제는 비-자극성이고, 비-착색성이고 비-면역원성이다.
본 발명의 또 다른 양태에서, 적어도 하나의 부형제는 겔화제이다. 한 실시태양에서, 겔화제는 ACT의 담체이다. 일부 실시태양에서, 겔화제는 또한 안정제로서 작용한다. 일부 실시태양에서, 겔화제는 다음 중 적어도 하나와 혼합될 수 있다: 하나 이상의 완충제 및 하나 이상의 부가 부형제. 한 실시태양에서, 겔화제는 하이드록시에틸셀룰로오스이다.
일부 실시태양에서, 본 발명은 적어도 하나의 알파 코넥신 폴리펩타이드 및 하이드록시에틸셀룰로오스 겔을 포함하는 국소 제제를 필요한 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 상처 치료 방법을 포함한다.
한 예시적 실시태양에서, 단계들은 약품의 제조를 위해 개시된다.
본 발명의 내용 중에 포함되어 있다.
본 발명의 특성 및 장점을 완전히 이해하기 위해서, 첨부된 도면과 관련하여 다음 상세한 설명을 참조해야 한다.
도 1은 제조 방법 흐름도를 도시한다.
본 발명의 조성물 및 방법을 기술하기 전에, 본 발명은 기술된 특정한 방법, 조성물 또는 방법에 제한되지 않는다는 것을 이해해야 하는데, 이는 변할 수 있기 때문이다. 상세한 설명에서 사용된 용어는 특정 버전 또는 단지 실시태양을 기술하기 위한 것이며, 첨부된 청구항에 의해서만 제한될 것인 본 발명의 범위를 제한하려는 것은 아니다. 달리 정의하지 않는 한, 본 발명에서 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어는 당업자 중 하나에 의해 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 가진다. 본 발명에서 언급한 모든 공개공보는 전문이 참조로 포함된다. 본 발명에서 어떤 것도 본 발명이 종래 발명 때문에 이 공개공보에 선행하는 자격을 얻지 않는다는 것을 인정하는 것으로 해석되지 않는다.
상세한 설명 및 첨부된 청구항에서 사용된 대로, 단수 형태("a", "an" 및 "the")는 내용이 분명하게 달리 나타내지 않는 한 복수의 참조를 포함한다. 따라서, 한 "요소"에 대한 참조는 당업자에게 공지된 하나 이상의 요소 및 이의 등가물에 대한 참조이다.
용어 "국소"는 도포 지점 또는 바로 아래에 본 발명의 약품의 투여를 의미한다. 본 발명에 사용된 "국소 도포"는 케라틴 조직을 포함하는 하나 이상의 표면(들)에 대한 도포, 즉 "국소적으로 도포하는 것"을 의미한다. 국소 도포 또는 "국소적으로 도포하는 것"은 원하는 기질의 면적에 대한 직접 도포를 필요로 할 수 있다. 국소 제제 및/또는 조성물은 액체인 경우 붓기, 적하 또는 분사에 의해 도포될 수 있고; 연고, 로션, 크림 겔 등인 경우 문지르기에 의해 도포될 수 있고; 분말인 경우 뿌리기에 의해 도포될 수 있고; 액체 또는 에어로졸 조성물인 경우 분사에 의해 도포될 수 있고; 또는 다른 적절한 수단에 의해 도포될 수 있다.
본 발명에서 사용된 문장 "겔화제"는 국소 제제를 점도에서 더 짙거나 끈적끈적하게 만드는 물질을 의미한다. 겔화제는 물-기반 또는 오일-기반일 수 있다. 겔화제는 또한 "점증제"로 부를 수 있다. 본 발명에서 사용된 "부형제"는 활성 약학적 성분(API)의 담체로서 작용하는 불활성 성분이다. 부형제는 또한 겔화제 또는 점증제 또는 안정제로서 역할을 할 수 있다.
"대상" 또는 "포유류"는 인간 또는 비-인간 포유류를 포함한다. 비-인간 포유류는 양, 소, 돼지, 개, 고양이 및 설치 포유류와 같은 가축 및 애완동물을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 한 실시태양에서, 대상 또는 포유류는 인간이다.
치료제와 함께 사용될 때 "투여"는 표적 조직 속에 또는 위에 직접 치료제를 투여하거나 환자에게 치료제를 투여하는 것을 의미하며 이에 의해 치료제는 표적으로 하는 조직에 긍정적으로 영향을 미친다. 따라서, 치료제와 함께 사용될 때, 본 발명에 사용된 용어 "투여"는 약품 및 ACT 펩타이드를 표적 조직 속에 또는 위에 제공하는 것을 포함할 수 있으나 이에 제한되지 않는다. 조성물을 "투여하는 것"은 주사, 국소 투여 또는 다른 공지된 기술들과 조합한 임의의 방법에 의해 성취될 수 있다.
달리 나타내지 않는 한, 용어 "피부"는 진피 및 상피로 이루어지고 피하 조직 위에 놓인 신체의 외피 또는 덮개를 의미한다.
본 발명에서 사용된 용어 "치료제"는 환자의 원치않는 질환 또는 질병을 치료하고, 싸우고, 완화하고, 예방하거나 개선하도록 사용된 물질을 의미한다. 부분적으로, 본 발명의 실시태양은 흉터 발생 및 지연된 상처 회복의 치료에 관한 것이다.
본 발명에서 사용된 문구 "유효량" 또는 "치료 유효량"은 원하는 효과를 얻는데, 즉 급성 및 만성 상처를 치료하는데 효과적인 본 발명의 실시에 사용된 비독성이나 충분한 양의 ACT 폴리펩타이드를 의미한다. 본 방법에 의해 고려된 활성은, 예를 들어, 질병 또는 이상의 신호, 증상 또는 원인의 감소 및/또는 완화 또는 생물학적 시스템의 임의의 다른 원하는 변형을 포함하는 의학 치료적 및/또는 예방적 치료 모두를 포함한다. 치료 및/또는 예방 효과를 얻기 위해 본 발명에 따라 투여된 화합물의 구체적인 양은, 물론, 예를 들어, 투여된 구체적인 폴리펩타이드 및 치료될 질환을 포함하는 케이스에 관한 특정한 상황에 의해 측정될 것이다. 본 발명의 화합물의 치료적 유효량은 통상적으로 생리학적으로 견딜 수 있는 부형제 조성물에 투여될 때, 효과적인 세포내 농도 및 조직에서 국소 농도를 얻는데 충분한 양이다.
일반적으로 말해서, 용어 "조직"은 특정 기능의 성능에서 협력하는 유사하게 특수화된 세포들의 임의의 집합체를 의미한다. 본 발명에 사용된 "조직"은, 달리 나타내지 않는 한, 필수적인 구조 및/또는 기능의 일부로서 엘라스틴을 포함하는 조직을 의미한다.
본 발명에 사용된 대로 용어 "치료하다", "치료된" 또는 "치료하는"은 치료법 및 예방 또는 방지 수단을 의미하며, 목적은 바람직하지 않은 생리적 질환, 이상 또는 질병의 작용을 예방, 완화하는 것이며 또는 바람직하지 않은 생리적 질환, 이상 또는 질병을 늦추는(줄이는) 것이며 또는 유익한 또는 바람직한 임상적 결과를 얻는 것이다. 본 발명을 위해서, 유익한 또는 바람직한 임상적 결과는 증상의 완화; 질환, 이상 또는 질병의 정도의 감소; 질환, 질병 또는 이상의 증상의 심각성 감소; 질환, 이상 또는 질병의 상태의 안정화(즉, 악화되지 않음); 질환, 이상 또는 질병의 진행의 개시 지연 또는 진행의 늦춤; 질환, 이상 또는 질병 상태의 완화; 및 질환, 이상 또는 질병의 탐지가능하거나 탐지가능하지 않은 (부분 또는 전체인) 회복, 또는 향상 또는 개선을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 치료는 과도한 수준의 부작용없이 임상적으로 현저한 반응을 유도하는 것을 포함한다. 일부 실시태양에서, 치료는 손상 이후 흉터 발생의 예방 또는 감소 및/또는 복합 조직 구조 및 기능의 재생의 촉진을 포함할 수 있다.
본 발명에 사용된 용어 "펩타이드", "폴리펩타이드" 또는 "단백질"은 서로 교환가능하게 사용되며 펩타이드 결합에 의해 공유결합된 아미노산 잔기로 이루어진 화합물을 의미한다. 단백질 또는 펩타이드는 적어도 2개의 아미노산을 포함해야 하며, 단백질 또는 펩타이드의 서열을 포함할 수 있는 아미노산의 최대 숫자에 대한 제한은 없다. 폴리펩타이드는 펩타이드 결합에 의해 서로 연결된 둘 이상의 아미노산을 포함하는 임의의 펩타이드 또는 단백질을 포함한다. 본 발명에 사용된 용어는, 예를 들어, 펩타이드, 올리고펩타이드 및 올리고머로 당업계에서 일반적으로 불리는 짧은 사슬 및 여러 형태가 존재하는 단백질로 당업계에서 일반적으로 불리는 더 긴 사슬 모두를 의미한다. "폴리펩타이드"는, 다른 것들 중에서, 예를 들어, 생물학적으로 활성인 단편, 실질적으로 상동 폴리펩타이드, 올리고펩타이드, 호모다이머, 헤테로다이머, 폴리펩타이드의 변형체, 변형 폴리펩타이드, 유도체, 유사체 및 융합 단백질을 포함한다. 폴리펩타이드는 천연 펩타이드, 재조합 펩타이드, 합성 펩타이드 또는 이의 조합을 포함한다. 고리가 아닌 펩타이드는 N-말단 및 C-말단을 가질 것이다. N-말단은 유리될 수 있는(즉, NH2 그룹) 또는 (예를 들어, BOC 또는 Fmoc 그룹에 의해) 적절하게 보호될 수 있는 아미노 그룹을 가질 것이다. C-말단은 유리될 수 있는(즉, COOH 그룹) 또는 적절하게 보호될 수 있는(예를 들어, 벤질 또는 메틸 에스터) 아미노 그룹을 가질 것이다. 고리형 펩타이드는 유리 N- 또는 C-말단을 갖지 않는데, 이는 말단이 아마이드 결합을 통해 공유결합되어 고리 구조를 형성하기 때문이다. 아미노산은 이들의 전체 이름(예를 들어, 루신), 3자 약어(예를 들어, Leu) 및 1자 약어(예를 들어, L)로 나타낼 수 있다. 아미노산의 구조 및 이들의 약어는 Stryer, "Biochemistry", 3rd Ed., W. H. Freeman and Co., New York, 1988과 같은 화학 문헌에서 발견될 수 있다.
국소 겔에 사용하기 위한 부형제는 당업계에 주지되어 있고 실시예들은 약학적 부형제의 안내서에서 발견될 수 있다(Rowe, R.C. et al, APhA Publications; 5th ed., 2005). 예시적 부형제는 왁스, 다양한 당 및 전분 형태, 폴리머, 겔, 피부 연화제, 점증제, 유동 변형제, 습윤제, 글리세롤, 유기 염기 화합물, 셀룰로오스 유도체, 젤라틴, 식물유, 폴리에틸렌 글리콜 및 용매를 포함할 수 있다. 유동 변형제의 예들은 카보폴, 하이드록시프로필 셀룰로오스, C26 -28 알킬 다이메티콘, C26 -28 알킬 메티콘, 폴리페닐시스퀴옥세인, 트라이메틸실록시실리케이트, 사이클로펜타실록세인 및 다이메티콘/바이닐트라이메틸실록시실리케이트의 가교폴리머, 흄드 실리카(fumed silica)(예를 들어, Cab-O-Sil M5P) 및 이의 혼합물을 포함한다. 피부 연화제의 예들은 글리세린, 펜틸렌 글리콜, 소듐 피롤리돈 카복실산, 라놀린, 사카라이드 아이소머레이트, 스테아록시 다이메티콘, 스테아릴 다이메티콘 및 이의 혼합물을 포함한다. 피부 연화제는 제제에서 무수 용매의 사용 때문에 발생하는 각질층 탈수를 예방하는 유용할 수 있다. 유기 염기의 예는 2-아미노-2-메틸 프로판올, 니아신아마이드, 메탄올아민, 트라이에탄올아민, 트리스아미노, AMP-95, AmP-Ultra PC 2000, 트라이아이소프로파놀아민, 다이아이소프로판올아민, 뉴트롤 TE, 에토민 및 이의 혼합물을 포함한다. 유기 염기는 의약의 pH를 염기성으로 또는 중성으로 만들 수 있다.
다른 예시적 부형제는 수용성 포로젠을 포함한다. 수용성 포로젠은 물 흡수 및 겔 속으로 확산을 촉진할 수 있는 첨가제이다. 임의의 적절한 포로젠이 사용될 수 있으나, 일부 실시태양에서, 포로젠은 염화나트륨, 염화칼륨, 수크로오스, 글루코오스, 락토오스, 소르비톨, 자일리톨, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리바이닐피롤리돈, 폴리바이닐 알코올 또는 이의 혼합물을 포함할 수 있다.
폴리머는 또한 국소 겔에서 부형제로서 작용할 수 있다. 예시적 폴리머는 친수성 폴리우레탄, 친수성 폴리아크릴레이트, 카복시메틸셀룰로오스 및 아크릴산의 코폴리머, N-바이닐피롤리돈, 폴리(하이드록시산), 폴리안하이드라이드, 폴리오르쏘에스터, 폴리아마이드, 폴리카보네이트, 폴리알킬렌(예를 들어, 폴리에틸렌 및 폴리프로필렌), 폴리알킬렌 글리콜(예를 들어, 폴리(에틸렌 글리콜)), 폴리알킬렌 옥사이드(예를 들어, 폴리에틸렌 옥사이드), 폴리알킬렌 테레프탈레이트(예를 들어, 폴리에틸렌 테레프탈레이트), 폴리바이닐 알코올, 폴리바이닐 에터, 폴리바이닐 에스터, 폴리바이닐 할라이드(예를 들어, 폴리(바이닐 클로라이드)), 폴리바이닐피롤리돈, 폴리실록세인, 폴리(바이닐 아세테이트), 폴리스티렌, 폴리우레탄 코폴리머, 셀룰로오스, 유도 셀룰로오스(예를 들어, 하이드록시에틸 셀룰로오스, 하이드록시프로필 셀룰로오스, 하이드록시프로필 메틸 셀룰로오스, 메틸셀룰로오스, 에틸셀룰로오스, 카복시메틸 셀룰로오스 또는 셀룰로오스 아세테이트), 알지네이트, 폴리(아크릴산), 폴리(아크릴산) 유도체, 아크릴산 코폴리머, 메타크릴산, 메타크릴산 유도체, 메타크릴산 코폴리머, 폴리(부티르산), 폴리(발레르산), 폴리(락티드-코-카프로락톤), 이의 코폴리머 및 이의 혼합물을 포함한다.
본 발명의 일부 실시태양에서, 폴리머는 초흡수 폴리머(SAPs)일 수 있다. 폴리머는 IUPAC에 따라 정의된 대로, 자체 질량에 비해 매우 다량의 물을 흡수하고 보유할 수 있는 폴리머로서 초흡수성으로 여겨진다. SAP는 자체 중량의 500배까지 물을 흡수할 수 있고 원래 부피의 1000배까지 팽창할 수 있다. 특정한 관심 SAP는 소듐 폴리아크릴레이트, 폴리우레탄 테코필릭 TG-2000 및 폴리아크릴아마이드 코폴리머, 에틸렌 말레 무수물 코폴리머, 가교 카복시-메틸-셀룰로오스, 폴리바이닐 알코올 코폴리머, 폴리바이닐피롤리돈 및 가교 폴리에틸렌 산화물의 사용에 의해 제조된 폴리머를 포함한다.
본 발명의 일부 실시태양에서, 비교적 소수성인 폴리머가 사용될 수 있다. 임의의 적절한 소수성 폴리머가 사용될 수 있다. 그러나, 비교적 소수성인 예시적 폴리머는 방향족 폴리우레탄, 실리콘 고무, 폴리실록세인, 폴리카프로락톤, 폴리카보네이트, 폴리바이닐클로라이드, 폴리에틸렌, 폴리-L-락티드, 폴리-DL-글리콜리드, 폴리에터에터케톤(PEEK), 폴리아마이드, 폴리이미드 및 폴리바이닐 아세테이트를 포함한다. 또한, 소수성 겔-염기 및/또는 유동 변형제가 사용될 수 있다.
본 발명의 일부 실시태양에서, 폴리머는 의약에서 점증제로서 작용할 수 있다. 구체적으로, 겔의 폴리머 부분은 점성-탄성 물질로서 작용할 수 있고 안에 분산된 알파 코넥신 폴리펩타이드와 함께 도포 위치에서 겔을 보유할 수 있다.
일부 다른 실시태양에서, 폴리머를 포함하는 겔은 분산성을 가질 수 있어서 피부 표면에 도포될 때 박막을 형성한다. 이 막은 넓은 영역에 걸쳐 알파 코넥신 폴리펩타이드의 도포를 가능하게 할 수 있고, 피부의 영향받은 면적 위에 알파 코넥신 폴리펩타이드를 유지하는 역할을 할 수 있다.
다른 부형제는 제제의 안정성을 유지하는 다양한 이온성 또는 비-이온성 화합물을 포함할 수 있어서, 이의 치료적 또는 심미적 가치를 줄일 수 있는 제제 성분의 탈-에멀젼화, 응고, 덩어리화 또는 분해로부터 보호할 수 있다.
이온 화합물의 예는 염화나트륨, 염화칼륨과 같은 염; 소듐 도데실 설페이트(SDS), 퍼플루오로옥타노에이트(PFOA), 퍼플루오로옥테인설포네이트(PFOS), 암모늄 라우릴 설페이트(ALS), 소듐 라우릴 에터 설페이트(SLES), 알킬 벤젠 설포네이트, 세틸 트라이메틸암모늄 브로마이드(CTAB), 세틸피리디늄 클로라이드(CPC), 폴리에톡실화 탈로우 아민(POEA), 벤즈알코늄 클로라이드(BAC), 벤즈에토늄 클로라이드, 도데실 베타인, 코카미도프로필 베타인 및 코코암포 글리시네이트와 같은 양이온성, 음이온성 또는 양쪽성 계면활성제를 포함할 수 있다.
부형제로서 작용할 수 있는 비-이온성 화합물의 예들은 플루로닉, 티윈, AMP 및 Brij 집단의 계면활성제와 같은 비-이온성 계면활성제; 및 생물학적 원료, 예를 들어, 올레산, 소르비탄 트라이올레이트, 소르비탄 모노올레이트, 레시틴, 코카미드 MEA, 코카미드 DEA 및 코카미도프로필 베타인과 같은 천연 또는 반-합성 계면활성제로부터 유도된 계면활성제를 포함한다. (이온성 및 비-이온성인) 계면활성제들은 계면 표면 에너지를 감소시킬 수 있고 넓은 영역 위에서 국소 제제의 확산을 촉진할 수 있다.
본 발명의 일부 실시태양에서, 용매 부형제는 알파 코넥신 폴리펩타이드 및 다른 부형제를 위한 담체 운반체로서 사용될 수 있다. 폴리머 사슬은 용매와 상호작용할 수 있고 증대되어 국소 제제에 점성-탄성을 제공할 수 있는 네트워크를 형성할 수 있다. 국소 제제의 일부 실시태양에서, 용매는 도포하자마자 증발되어, 갇힌 알파 코넥신 폴리펩타이드와 함께 폴리머의 잔여 막을 남길 수 있다.
친수성 제제에서 유용할 수 있는 예시적 용매 부형제는 다이메틸 아이소소르비드, 프로필렌 글리콜, 글리세롤, 아이소프로판올, 에탄올, 벤질 알코올, 에틸렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 에톡시다이글리콜 또는 이의 혼합물을 포함할 수 있다. 소수성 제제에서 유용할 수 있는 예시적 용매 부형제는 카프리/카프릴 트라이글리세라이드, 아이소프로필 미리스테이트, 미네랄 오일, 아이소도데케인, 아이소데실 네오펜타노에이트, 부틸렌 글리콜, 펜틸렌 글리콜, 헥실렌 글리콜, 메톡시폴리에틸렌글리콜, 사이클로펜타실록세인, 사이클로테트라실록세인, 다이메티콘, 카프릴일 메티콘 또는 이의 혼합물을 포함할 수 있다.
알파 코넥신 폴리펩타이드 및 부형제에 이외에, 국소 제제는 또한 항균제, 항여드름제, 항염증제, 진통제, 마취제, 항히스타민제, 살균제, 면역억제제, 지혈제, 혈관확장제, 상처 치료제, 항바이오필름제 및 이의 혼합물과 같은 적어도 하나의 추가 치료제를 포함할 수 있다.
항균제의 예들은 페니실린 및 관련 약물, 카바페넴, 세팔로스포린 및 관련 약물, 에리쓰로마이신, 아미노글리코시드, 바시트라신, 그라미시딘, 무피로신, 클로람페니콜, 티암페니콜, 푸시데이트 소듐, 린코마이신, 클린다마이신, 매크로리드, 노보바이오신, 폴리믹신, 리파마이신, 스펙티노마이신, 테트라사이클린, 바노마이신, 테이코플라닌, 스트렙토그라민, 설폰아마이드, 트라이메토프림 및 이의 조합 및 피리메타민을 포함하는 항-엽산제, 나이트로푸란, 메텐아민 만델레이트 및 메텐아민 힙푸레이트를 포함하는 합성 항박테리아제, 나이트로이미다졸, 퀴놀론, 플루오로퀴놀론, 이소니아지드, 에탐부톨, 피라진아마이드, 파라-아미노살리실산(PAS), 사이클로세린, 카프레오마이신, 에티온아마이드, 프로티온아마이드, 티아세타존, 바이오마이신, 에베미노마이신, 글리코펩타이드, 글리실사이클린, 케톨리드, 옥사졸리디논, 이미페넨, 아미카신, 네틸미신, 포스포마이신, 젠타마이신, 세프트라아존, 지라신, 리네졸리드, 시네르시드, 아즈트레오남 및 메트로니다졸, 에피로프림, 산페트리넴 소듐, 바이아페넴, 다이네마이신, 세플루프레남, 세포세리스, 산페트리넴 셀렉세틸, 세피피롬, 메르사시딘, 리팔라질, 코산, 레나페넴, 베네프림, 설로페넴, 리티페넴 아콕실, 사이클로티아리딘, 마이카코시딘 A, 카루모남, 세포조프란 및 세페트메트 피복실을 포함한다.
국소 항여드름제의 예들은 아다팔렌, 아젤라산, 벤조일 퍼록사이드, 클린다마이신 및 클린다마이신 포스페이트, 독시사이클린, 에리쓰로마이신, 살리실산 및 레티노산(레틴-A")과 같은 각막용해제, 노르게스티메이트, 유기 과산화물, 아이소트레티노인 및 트레티노인과 같은 레티노이드, 설파세타미드 소듐 및 타자로텐을 포함한다. 특정 항여드름제는 아다팔렌, 아젤라산, 벤조일 퍼록사이드, 클린다마이신(예를 들어, 클린다마이신 포스페이트), 독시사이클린(예를 들어, 독시사이클린 모노하이드레이트), 에리쓰로마이신, 아이소트레티노인, 노르게스티메이트, 설파세타미드 소듐, 타자로텐, 에트레티네이트 및 아세트레틴을 포함한다.
항히스타민제의 예들은 다이펜하이드라민 하이드로클로라이드, 다이펜하이드라민 살리실레이트, 다이펜하이드라민, 클로로페니르아민 하이드로클로라이드, 클로로페니르아민 말레이트 아이소티펜딜 하이드로클로라이드, 트라이펠렌아민 하이드로클로라이드, 프로메타진 하이드로클로라이드, 메티디라진 하이드로클로라이드 등을 포함한다. 국소 마취제의 예들은 다이부케인 하이드로클로라이드, 다이부케인, 리도케인 하이드로클로라이드, 리도케인, 벤조케인, p-부틸아미노벤조산 2-(다이-에틸아미노)에틸 에스터 하이드로클로라이드, 프로케인 하이드로클로라이드, 테트라케인, 테트라케인 하이드로클로라이드, 클로로프로케인 하이드로클로라이드, 옥시프로케인 하이드로클로라이드, 메피바케인, 코케인 하이드로클로라이드, 피페로케인 하이드로클로라이드, 다이클로닌 및 다이클로닌 하이드로클로라이드를 포함한다.
살균제의 예들은 알코올, 4차 암모늄 화합물 화합물, 붕산, 클로로헥시딘 및 클로로헥시딘 유도체, 아이오딘, 페놀, 터펜, 살균제, 티메로살, 페놀, 티몰, 벤즈알코늄 클로라이드, 벤즈에토늄 클로라이드, 클로로헥시딘, 포비돈 아이오드, 세틸피리디늄 클로라이드, 에우게놀 및 트라이메틸암모늄 브로마이드를 포함하는 소독제를 포함한다.
항염증제의 예들은 비스테로이드성 항염증제(NSAIDs); 이부프로펜 및 나프록센과 같은 프로피온산 유도체; 인도메타신과 같은 아세트산 유도체; 멜옥시캄, 아세트아미노펜과 같은 에놀산 유도체; 메틸 살리실레이트; 모노글리콜 살리실레이트; 아스피린; 메페남산; 플루페남산; 인도메타신; 다이클로로페낙; 알클로페낙; 다이클로페낙 소듐; 이부프로펜; 케토프로펜; 나프록센; 프라노프로펜; 페노프로펜; 술린닥; 펜클로페낙; 클리다낙; 플루르바이프로펜; 펜티아작; 부펙사맥; 피록시캄; 페닐부타존; 옥시펜부타존; 클로페존; 펜타조신; 메피리졸; 티아라미드 하이드로클로라이드; 클로베타솔 프로피오네이트, 베타메타손 다이프로피오네이트, 할베타솔 프로피오네이트, 다이플로라손 다이아세테이트, 플루오시노나이드, 할시노나이드, 암시노나이드, 데속시메타손, 트라이암시놀론 아세토나이드, 모메타손 푸로에이트, 플루티카손 프로피리오네이트, 베타메토손 다이프로프리오네이트, 트라이암시놀론 아세토나이드, 플루티카손 프로피오네이트, 데소나이드, 플루오시놀론 아세토나이드, 하이드로코르티손 발레르에이트, 프레드니카르베이트, 트라이암시놀론 아세토나이드, 플루오시놀론 아세토나이드, 하이드로코르티손 및 당업계에 공지된 다른 것과 같은 스테로이드, 프레도니솔론, 덱사메타손, 플루오시놀론 아세토나이드, 하이드로코르티손 아세테이트, 프레도니솔론 아세테이트, 메틸프로도니솔론, 덱사메타손 아세테이트, 베타메타손, 베타메타손 발레르에이트, 플루메타손, 플루오로메톨론, 베클로메타손 다이프로피리오네이트, 플루오시노나이드, 국소 코르티코스테로이드를 포함하며, 하이드로코르티손, 하이드로코르티손-21-모노에스터(예를 들어, 하이드로코르티손-21-아세테이트, 하이드로코르티손-21-부티레이트, 하이드로코르티손-21-프로피오네이트, 하이드로코르티손-21-발레르에이트 등), 하이드로코르티손-17,21-다이에스터(예를 들어, 하이드로코르티손-17,21-다이아세테이트, 하이드로코르티손-17-아세테이트-21-부티레이트, 하이드로코르티손-17,21-다이부티레이트 등), 알클로메타손, 덱사메타손, 플루메타손, 프레드니솔론, 또는 메틸프로드니솔론과 같은 저 효력 코르티코스테로이드 중 하나일 수 있으며 또는 클로베타솔 프로피오네이트, 베타메타손 벤조에이트, 베타메타손 다이프로피오네이트, 다이플로라손 다이아세테이트, 플루오시노나이트, 모메타손 푸로에이트, 트라이암시놀론 아세토나이드와 같은 고 효력 코르티코스테로이드일 수 있다.
진통제의 예들은 알펜타닐, 벤조케인, 부프레노르핀, 부토르파놀, 부탐벤, 캡사이신, 클로니딘, 코데인, 다이부케인, 엔케팔린, 펜탄일, 하이드로코돈, 하이드로모르폰, 인도메타신, 리도케인, 레보르파놀, 메피리딘, 메타돈, 모르핀, 니코모르핀, 아편, 옥시부프로케인, 옥시코돈, 옥시모르폰, 펜타조신, 프라목신, 프로파라케인, 프로폭시펜, 프록시메타케인, 설펜타닐, 테트라케인 및 트라마돌을 포함한다.
마취제의 예들은 페놀과 같은 알코올; 벤질 벤조에이트; 칼아민; 클로로옥시레놀; 다이클로닌; 케타민; 멘톨; 프라목신; 레소르시놀; 트로클로산; 벤조케인, 부피바케인, 클로로프로케인과 같은 프로케인 약물; 신코케인; 코케인; 덱시바케인; 다이아모케인; 다이부케인; 에티도케인; 헥실케인; 레보부피바케인; 리도케인; 메피바케인; 옥세타제인; 프릴로케인; 프로케인; 프로파라케인; 프로폭시케인; 필로케인; 리소케인; 로도케인; 로피바케인; 테트라케인; 및 부피바케인 HCl, 크로로프로케인 HCl, 다이아모케인 사이클라메이트, 다이부케인 HCl, 프라목신 HCl, 프릴로케인 HCl, 프로케인 HCl, 프로파라케인 HCl, 프로폭시케인 HCl, 로피바케인 HCl 및 테트라케인 HCl을 포함하는 약학적으로 허용가능한 염 및 에스터와 같은 유도체를 포함한다.
지혈제의 예들은 트로빈, 피토나다이온, 프로타민 설페이트, 아미노카프로산, 트라넥삼산, 카바조크롬, 카박소크롬 소듐 설파네이트, 루틴 및 헤스페리딘을 포함한다.
생체활성 폴리펩타이드 구성요소 이외에, 본 발명은 또한 니아신아마이드, 피탄트라이올, 파르네솔, 바이사볼올 및 살리실산과 같은 다른 활성제를 포함할 수 있다. 특정 추가 활성제는 생체활성 펩타이드 구성요소와 상승작용을 내게 작동하거나 제제의 저장수명을 증가시킬 것이라고 예상된다.
본 발명의 약품과 함께 사용될 수 있는 상처 치료제의 예들은 피브리놀리신과 같은 피브리놀성 효소, 데옥시리보뉴클레아제, 스트렙토키나아제 및 스트렙토도르나아제, 리소자임 클로라이드를 포함하는 시체해부 조직 물질, 젠타마이신 설페이트, 설파다이아진 실버, 바시트라신 및 프라다이오마이신 설페이트를 포함하는 항균제, 트라페르민, 부클라데신 소듐, 트레티노인 토코페릴(토코레티네이트), 알프로스타딜 알파덱스, 솔코세릴(어린 소의 용혈 혈액으로부터의 추출물) 및 알클록사를 포함하는 새살촉진제, 백색 연당, 포비돈 아이오딘 및 아이오딘을 포함하는 아이오딘 제제 및 벤다작, 다이메틸 아이소프로필아줄렌(구아이아줄란) 및 활성 성분으로서 에피네피린을 포함하는 제제를 포함한다.
알파 코넥신 폴리펩타이드, 부형제 및 다른 치료제 이외에, 겔은 또한 국소 제제의 감각기 특성을 개선하는 다른 화합물을 포함할 수 있다.
이런 화합물의 예들은 향수, 염료 및 착색제; 에디테이트 다이소듐(EDTA), EGTA, CP94, 시트르산을 포함하나 이에 제한되지 않는 킬레이트화제; 벤즈알코늄 클로라이드, 벤즈에토늄 클로라이드, 세트리미드, 디쿠알리늄 클로라이드 및 세틸피리디늄 클로라이드와 같은 4차 암모늄 화합물을 포함하나 이에 제한되지 않는 방부제; 페닐머큐릭 나이트레이트, 페닐머큐릭 아세테이트 및 티머로살과 같은 수은제; 알코올제, 예를 들어, 클로로부탄올, 페닐에틸 알코올 및 벤질 알코올; 항박테리아성 에스터, 예를 들어, 파라하이드록시벤조산의 에스터; 클로로헥시딘, 클로로크레솔, 벤조산 및 폴리마이신과 같은 다른 항균제를 포함한다.
본 발명의 제제에 사용될 수 있는 알파 코넥신 폴리펩타이드는 참조로 본 발명에 포함된 미국특허 No. 7,786,074에 기술된다. 일부 실시태양에서, 알파 코넥신 폴리펩타이드는 코넥신 37, 코넥신 40, 코넥신 43 또는 코넥신 45와 같은 전장 알파 코넥신 단백질이다. 일부 실시태양에서, 폴리펩타이드는 전장 코넥신 단백질을 포함하지 않는다.
본 발명의 제제에서 유용한 펩타이드는 알파 코넥신 폴리펩타이드를 포함한다. 본 발명의 제제에서 유용한 알파 코넥신 펩타이드는 알파 코넥신 단백질 또는 이의 보존성 변형체의 카복시 말단 대부분 4 내지 30 연속 아미노산을 포함하거나 이루어질 수 있다. 따라서, 제제에서 유용한 펩타이드는 알파 코넥신의 c-말단 대부분 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 25 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 아미노산을 포함하는, 알파 코넥신의 c-말단 대부분 4 내지 30 아미노산을 포함할 수 있다. 일부 양태에서, 제공된 폴리펩타이드는 알파 코넥신의 c-말단 대부분 4 내지 30 아미노산의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10 아미노산의 결실을 포함하는, 알파 코넥신의 c-말단 대부분 4 내지 30 아미노산의 하나 이상의 아미노산의 결실을 더 포함한다. 예를 들어, 일부 양태에서, 본 발명의 제제에서 유용한 폴리펩타이드는 알파 코넥신의 c-말단 대부분 1, 2 또는 3 아미노산을 포함하지 않는다. 예를 들어, 폴리펩타이드는 아미노산 서열 SEQ ID NO:92 또는 적어도 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 아미노산의 이의 카복시 말단 단편으로 필수적으로 이루어질 수 있다.
특정 실시태양에서, 본 발명의 알파 코넥신 폴리펩타이드는 이의 아미노 또는 카복시 말단에서 세포 내재화 수송체에 연결된다. 개별 실시태양은 부착된 임의의 세포 내재화 수송체가 없는 알파 코넥신 폴리펩타이드를 포함한다. 알파 코넥신 폴리펩타이드에 연결된 세포 내재화 수송체는 당업계에 공지된 또는 새롭게 발견된 임의의 내재화 서열 또는 이의 보존성 변형체일 수 있다. 세포 내재화 수송체 및 사열의 비 제한적인 예들은 안테나페디아(Antennapedia) 서열, TAT, HIV-Tat, 페네트라틴, Antp-3A (Antp 돌연변이), Buforin II, 트랜스포르탄(Transportan), MAP(model amphipathic peptide), K-FGF, Ku70, 프리온, pVEC, Pep-1, SynB1, Pep-7, HN-1, BGSC(Bis-Guanidinium-Spermidine-Cholesterol) 및 BGTC(BisGuanidinium-Tren-Cholesterol)을 포함한다.
본 발명의 한 실시태양에서, 알파 코넥신 폴리펩타이드의 아미노산 서열은 SEQ ID NOs: 1, 2, 3, 4 및 5 또는 이의 보존성 변형체로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 본 발명의 추가 실시태양에서, 알파 코넥신 폴리펩타이드는 SEQ ID NO: 2의 아미노산 서열을 포함한다. 본 발명의 다른 실시태양에서, 폴리펩타이드는 알파 코넥신 폴리펩타이드 및 세포 내재화 수송체를 포함한다. 추가 실시태양에서, 알파 코넥신 폴리펩타이드는 이의 아미노 말단에서 세포 내재화 수송체에 연결된다. 또 다른 추가 실시태양에서, 세포 내재화 수송체에 연결된 알파 코넥신 폴리펩타이드의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 8, 9, 10, 11 및 12 또는 이의 보존성 변형체로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 한 실시태양에서, 폴리펩타이드는 SEQ ID NO: 9의 아미노산 서열, 즉, RQPKIWFPNRRKPWKKRPRPDDLEI로 이루어지거나 포함한다.
구체적인 단백질이 본 발명에서 언급될 때, 변형체, 유도체 및 단편이 고려된다. 단백질 변형체 및 유도체는 당업자에 잘 이해되어 있고 아미노산 서열 변형을 포함할 수 있다. 예를 들어, 아미노산 서열 변형은 통상적으로 3종류 중 하나 이상에 해당한다: 치환, 삽입 또는 결실 변형체. 삽입은 아미노산 및/또는 카복실 말단 융합뿐만 아니라 단일 또는 여러 아미노산 잔기의 내부서열 삽입을 포함한다. 삽입은 통상적으로 아미노 또는 카복시 말단 융합의 삽입보다, 예를 들어, 약 1 내지 4개 잔기, 더 작은 삽입일 것이다. 결실은 단백질 서열로부터 하나 이상의 아미노산 잔기의 제거를 특징으로 한다. 이런 변형체는 통상적으로 단백질을 암호화하는 DNA에서 뉴클레오티드의 위치 특이적 돌연변이에 의해 제조되어, 변형체를 암호화하는 DNA를 생산하며, 이후 재조합 세포 배양에서 DNA를 발현한다.공지된 서열을 가진 DNA에서 소정의 위치에 치환 돌연변이를 만들기 위한 기술은 주지되어 있고, 예를 들어, M13 프라이머 돌연변이 및 PCR 돌연변이를 포함한다. 아미노산 치환은 통상적으로 단일 잔기이나, 한 번에 여러 다른 위치에서 일어날 수 있고; 삽입은 주로 약 1 내지 10개 아미노산 잔기일 것이다.결실 또는 삽입은 인접한 쌍, 즉, 2개 잔기의 결실 또는 2개 잔기의 삽입으로 만들어질 수 있다. 치환, 결실, 삽입 또는 이의 임의의 조합은 최종 구조물에 이루도록 조합될 수 있다. 돌연변이는 서열을 리딩 프레임 외부에 놓지 않아야 하며 mRNA의 2차 구조에서 이런 변화가 바람직하지 않는 한 바람직하게는 2차 mRNA 구조를 생산할 수 있는 상보적 영역을 생성하지 않을 것이다. 치환 변형체는 적어도 하나의 잔기가 제거되고 다른 잔기가 그 위치에 삽입되는 것이다. 이런 치환은 일반적으로 보존성 치환으로 불린다. 예를 들어, 한 아미노산 잔기와 생물학적으로 및/또는 화학적으로 유사한 다른 것의 치환은 보존성 치환으로 당업자에게 공지되어 있다. 예를 들어, 보존성 치환은 하나의 소수성 잔기를 다른 것으로 대체하거나 한 극성 잔기를 다른 것으로 대체하게 될 것이다. 각각의 명백하게 나타낸 서열의 치환인 보존성 치환 변형은 그 안에 제공된 폴리펩타이드 내에 포함된다. 통상적으로, 보존성 치환은 얻은 폴리펩타이드의 생물학적 활성에 대해 적은 영향을 주거나 영향을 미치지 않는다. 특정 실시예에서, 보존성 치환은 펩타이드의 생물학적 기능에 실질적으로 영향을 미치지 않는 펩타이드에서 아미노산 치환이다. 펩타이드는 2, 5 또는 10 보존성 치환과 같은 하나 이상의 아미노산 잔기 치환, 예를 들어, 2-10 보존성 치환, 2-5 보존성 치환, 4-9 보존성 치환을 포함할 수 있다. 폴리펩타이드는 위치지정 돌연변이유발 또는 PCR과 가은 표준 절차를 사용하여 폴리펩타이드를 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 조작함으로써 하나 이상의 보존성 치환을 포함하도록 만들어질 수 있다. 선택적으로, 폴리펩타이드는 표준 펩타이드 합성 방법을 사용함으로써 하나 이상의 보존성 치환을 포함하도록 만들어질 수 있다. 알라닌 스캔은 단백질에서 어느 아미노산 잔기가 아미노산 잔기 치환을 견딜 수 있는 확인하기 위해 사용될 수 있다. 한 실시예에서, 단백질의 생물학적 활성은 (아래 나열된 것과 같은) 알라닌 또는 다른 보존성 아미노산이 하나 이상의 고유 아미노산을 대체할 때, 25% 이상, 예를 들어, 20% 이하, 예를 들어, 10% 이하 감소하지 않는다. 보존성 치환에 대한 추가 정보는 다른 장소 중에서, Ben-Bassat et al ., (J. Bacterial . 169:751-7, 1987), O'Regan et al ., ( Gene 77:237-51, 1989), Sahin- Toth et al ., (Protein Sci. 3:240-7, 1994), Hochuli et al ., ( Bio / Technology 6:1321-5, 1988) 및 유전학 및 분자생물학의 표준 교과서에서 발견될 수 있다.
본 발명에서 사용된 대로, "분석 방법"은 특정 제제에서 ACT 펩타이드의 정체 및 양을 측정하는데 유용한 다음 기술을 포함한다: NMR, HPLC, 아미노산 조성물 및 분자량 측정, 및 특이적 광학 회전.
본 발명은 적어도 하나의 알파 코넥신 폴리펩타이드 및 하이드록시에틸셀룰로오스 겔을 포함하는 국소 제제를 포함하며, 하이드록시에틸셀룰로오스 겔은 알파 코넥신 폴리펩타이드를 안정화한다. 특정 실시태양에서, 하이드록시에틸셀룰로오스 겔 안정제는 알파 코넥신 폴리펩타이드를 안정화하여 5℃에서 3개월 저장 후 알파 코넥신 폴리펩타이드의 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%이 분석 방법에 의해 탐지가능하다. 일부 실시태양에서, 알파 코넥신 폴리펩타이드는 약 0.0025%(w/w), 약 0.005%(w/w), 약 0.0075%(w/w), 약 0.010%(w/w), 약 0.015%(w/w), 약 0.020%(w/w), 약 0.025%(w/w), 약 0.030%(w/w), 약 0.035%(w/w), 약 0.040%(w/w), 약 0.045%(w/w), 약 0.050%(w/w), 약 0.055%(w/w), 약 0.060%(w/w), 약 0.065%(w/w), 약 0.070%(w/w), 약 0.075%(w/w), 약 0.080%(w/w), 약 0.085%(w/w), 약 0.090%(w/w), 약 0.095%(w/w), 약 0.100%(w/w), 약 0.150%(w/w), 약 0.200%(w/w), 약 0.250%(w/w), 약 0.500%(w/w), 약 0.750%(w/w), 약 1.00%(w/w), 약 1.50%(w/w), 약 2.00%(w/w), 약 2.50%(w/w), 또는 약 5.00(w/w)의 농도로 제제에 존재한다. 한 실시태양에서, 알파 코넥신 폴리펩타이드는 약 0.005%(w/w) 내지 약 1.00%(w/w)의 농도로 제제에 존재한다.
다른 실시태양에서, 본 발명의 약품은 0.0072%(w/w)(20μM)의 ACT 펩타이드, 0.018%(w/w)(50μM)의 ACT 펩타이드, 0.036%(w/w)(100μM)의 ACT 펩타이드 또는 0.0072%(w/w)(20μM)의 ACT 펩타이드를 포함하는 투명한 무색 겔이다. ACT 펩타이드는 >0% 물, >10% 물, >20% 물, >30% 물, >40% 물, >50% 물, >60% 물, >70% 물, >80% 물, 또는 > 90% 물 및 0.25% 겔화제(폴리머), 0.55% 겔화제(폴리머), 0.75% 겔화제(폴리머), 1.00% 겔화제(폴리머), 1.25% 겔화제(폴리머), 1.50% 겔화제(폴리머), 1.75% 겔화제(폴리머), 2.00% 겔화제(폴리머), 2.25% 겔화제(폴리머), 또는 2.50% 겔화제(폴리머)를 포함하는 반고체 제형에 용해될 수 있다. ACT 펩타이드는 잘 보존되고 pH 6으로 적절하게 완충될 수 있다. 국소 제제의 한 실시태양에서, 정성적 및 정량적 조성물은 표 1에 나열된다.
약품 겔 정성적 & 정량적 조성물
성분 등급 기능 농도(% w/w)

펩타이드 328967 (ACT 펩타이드)
--
활성제		 0.0072; 0.018
0.036; 0.072
메틸파라벤 NF 방부제 0.17
프로필파라벤 NF 방부제 0.02
글리세린 USP 용매 5.0
일염기 인산나트륨 USP 완충제 0.263
이염기 인산나트륨 USP 완충제 0.044
프로필렌 글리콜 USP 용매 3.0
에디테이트 다이소듐(EDTA) USP 킬레이트화제 0.05
D-만니톨 USP 안정제 0.05
하이드록시에틸셀룰로오스, 250HHX NF 겔화제 1.25%
정제수, qsad USP 용매 100%
ACT1 펩타이드 서열은 아래 표 2에 나열되며 Ahx는 L-2-아미노헥사노산으로 불리며, 또한 6-아미노헥사노산으로 알려져 있다.
펩타이드 328967(Antp/ACT1) 서열
Biotin-Ahx-Arg-Gln-Pro-Lys-lle-Trp-Phe-Pro-Asn-Arg-Arg-Lys-Pro-Trp-Lys-Lys-Arg-Pro-Arg-Pro-Asp-Asp-Leu-Glu-lle-OH
펩타이드 328967의 일반적인 특성은 표 3에 나열된다.
펩타이드 328967의 일반적인 물리적 특성
물리적 형태 백색 내지 회색 분말
분자량 3597.33 ±2.0 amu
반대이온 AcOH
용해도 실온에서 물에 가용
본 발명의 한 양태에서, 약품 국소 제제에 사용된 부형제는 다음으로 이루어진 그룹으로부터 선택되거나 다음의 하나 이상이다:
메틸파라벤
프로필파라벤
글리세린
일염기 인산나트륨
이염기 인산나트륨
프로필렌 글리콜
에디테이트 다이소듐(EDTA)
D-만니톨
하이드록시에틸셀룰로오스, 250HHX
정제수
한 실시태양에서, 약품 국소 제제는 펩타이드, D-만니톨, 하이드록시에틸셀룰로오스 및 정제수를 포함한다. 상기 제제는 메틸파라벤, 프로필파라벤, 글리세린, 일염기 인산나트륨, 이염기 인산나트륨, 프로필렌 글리콜 및 에디테이트 다이소듐(EDTA)의 하나 이상을 추가로 포함할 수 있다. 다른 실시태양에서, 하이드록시셀룰로오스는 250HHX이다. 다른 실시태양에서, 펩타이드는 알파 코넥신 폴리펩타이드이다.
이런 실시태양에서, 약품 국소 제제는 약 0.001%(w/w) 내지 약 0.5%(w/w) 농도(예를 들어, 약 0.0072%, 0.018%, 0.036%, 또는 0.072%(w/w))로 펩타이드; 약 0.10%(w/w) 내지 약 0.25%(w/w) 농도(예를 들어, 약 0.17%(w/w))로 메틸파라벤; 약 0.01%(w/w) 내지 약 0.03%(w/w) 농도(예를 들어, 약 0.02%(w/w))로 프로필파라벤; 약 1%(w/w) 내지 약 10%(w/w) 농도(예를 들어, 약 5%(w/w))로 글리세린; 약 0.1%(w/w) 내지 약 0.5%(w/w) 농도(예를 들어, 약 0.263%(w/w))로 일염기 인산 나트륨; 약 0.02% 내지 약 0.06% 농도(예를 들어, 약 0.044%(w/w))로 이염기 인산 나트륨; 약 1%(w/w) 내지 약 5%(w/w) 농도(예를 들어, 약 3% (w/w))로 프로필렌 글리콜; 약 0.01% 내지 약 0.1% 농도(예를 들어, 약 0.05%(w/w))로 EDTA; 약 0.01%(w/w) 내지 약 0.1%(w/w) 농도(예를 들어, 약 0.05%(w/w))로 D-만니톨; 약 0.5% 내지 약 2.5% 농도(예를 들어, 약 1.25%(w/w))로 하이드록시에틸셀룰로오스 및 약 0.1% 내지 약 10% 농도(예를 들어, 약 1%)로 정제수를 포함한다. 추가 실시태양에서, 펩타이드는 알파 코넥신 폴리펩타이드이다. 추가 실시태양에서, 펩타이드는 SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 8, 9, 10, 11 및 12로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 한 실시태양에서, 펩타이드는 SEQ ID NO: 9에 따른 아미노산 서열을 포함한다.
인비트로 및 인비보 연구를 통해 유도된 이런 안정제 및 부형제는 약품 속에 포함되는데 이는 이들이 비-자극성, 비-염색성 및 비-면역원성이기 때문이다. 안정성 연구는 ACT1 펩타이드는 플루로닉(Pluronic) 겔과 비교하여 겔화제 하이드록시에틸셀룰로오스, 250 HHX(1.25%)에서 더욱 안정하다는 것을 입증하였다. 1.25% 하이드록시에틸셀룰로오스를 포함하는 약품 내의 ACT 펩타이드는 5℃에서 3개월 동안 저장할 때 레이블 표시(즉, 최초 농도)의 단지 98%로 떨어졌고 25℃에서 동일한 기간 동안 저장할 때 레이블 표시의 84%로 떨어졌다. 본 발명의 한 양태에서, 에디테이트 다이소듐(EDTA) 및 만니톨은 약품 내에 포함되어 ACT1 펩타이드에 안정성을 제공한다. 본 발명의 일부 실시태양에서, 만니톨은 0.01%(w/w) 내지 1.6%(w/w), 0.01%(w/w) 내지 1.5%(w/w), 0.01%(w/w) 내지 1.4%(w/w), 0.01%(w/w) 내지 1.3%(w/w), 0.01%(w/w) 내지 1.2%(w/w), 0.01%(w/w) 내지 1.1%(w/w), 0.01%(w/w) 내지 1.0%(w/w), 0.01%(w/w) 내지 0.9%(w/w), 0.01%(w/w) 내지 0.8(w/w), 0.01%(w/w) 내지 0.7%(w/w), 0.01%(w/w) 내지 0.6%(w/w), 0.01%(w/w) 내지 0.5%(w/w), 0.01%(w/w) 내지 0.4%(w/w), 0.01%(w/w) 내지 0.3%(w/w), 0.01%(w/w) 내지 0.2%(w/w), 0.01%(w/w) 내지 0.1%(w/w), 또는 0.01%(w/w) 내지 0.0.05%(w/w)로 제제에 존재한다. 한 실시태양에서, 만니톨은 약 0.05%(w/w)로 제제에 존재한다.
본 발명의 다른 양태에서, 완충제는 국소 제제에 포함되어 pH를 특정 범위로 유지시킨다. 적절한 완충제는 아세트산염 완충제, 시트르산염 완충제, 인산염 완충제, 락트산 완충제, 말산 완충제, 숙신산 완충제, 붕산 완충제, 수산화나트륨, 수산환칼륨 및 수산화암모늄을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 인산일나트륨(NaH2PO4; 또한 일염기 인산나트륨로도 알려짐), 인산수소이나트륨(Na2HPO4; 이염기 인산나트륨으로도 알려짐), 인산알칼륨(KH2PO4), 인산이칼륨(K2HPO4) 및 이의 혼합물과 같은 인산염이 또한 사용될 수 있다. 한 실시태양에서, 인산염 버퍼는 시트르산염 완충제와 비교하여 뛰어난 안정성을 제공한다. 25mM의 완충제 용량이 약품에 적절한 것으로 발견되었다. 완충제는 겔 시스템의 pH를 조절하고 펩타이드 약물의 안정성을 유지하는데 필요하다. 국소 제제의 pH 범위는 pH 2 내지 pH 12, pH 4 내지 pH 10 또는 pH 6 내지 pH 8일 수 있다. 한 실시태양에서, 적절한 pH 범위는 5 내지 7 범위이다. 일부 실시태양에서, 본 발명의 국소 제제의 pH는 4.0, 4.5, 5.0, 5.5, 6.0, 6.5, 7.0, 7.5 또는 8.0이다. 또 다른 양태에서, 3% 양의 프로필렌 글리콜은 수성 시스템에서 파라벤의 더 좋은 가용화를 제공한다.
한 실시태양에서, 하이드록시에틸셀룰로오스 속에 포함된 ACT 펩타이드를 가진 제제는 임상 치료에 실용적으로 만들 뿐만 아니라 원하는 저장 및 안정성 요구조건을 충족하는 특성을 가진 제품의 대용량 제조를 가능하게 한다. 플루로닉 겔을 사용하는 ACT1을 위한 제제가 대략 2.5 시간의 상대적으로 긴 혼합 시간을 필요하며 단지 50그램 배치를 생산할 수 있는 반면, 하이드록시에틸셀룰로오스를 가진 제제는 겔 속에 ACT 펩타이드의 현저하게 빠른 혼합을 가능하게 하며 훨씬 더 큰 배치를 생산한다. 예를 들어, 국소 제제에 플루로닉 F 127 겔을 사용할 때, 폴리머를 포함하는데 1시간 이상 소요되고 제제는 혼합을 돕도록 수조에 놓일 필요가 있다. 반대로, 하이드록시에틸셀룰로오스(예를 들어, HEC 250 HHX)는 실온에서 쉽게 혼합되어 30분 내에 수화된다. 따라서, 하이드록시에틸셀룰로오스의 사용은 대용량 제조를 용이하게 할 수 있다. 플루로닉 겔에 의한 제조 과정은 점도를 원하는 범위로 가져오도록 차가운 수조를 필요로 할 수 있고 하이드록시에틸셀룰로오스에 의한 제조 공정보다 더 많은 에너지를 필요로 할 수 있다. 또한, 플루로닉 겔 속 최종 제제는 5℃의 저장 조건에서 매우 얇을 수 있다.
하이드록시에틸셀룰로오스(HEC)가 본 발명의 약품의 적절한 겔화제이며 허용가능한 담체인 것이 발견되었다. 한 실시태양에서, 겔화제는 하이드록시에틸셀룰로오스(HEC), 250 HHX이다. 한 실시태양에서, HEC의 백분율(w/w)은 1-5% 범위이다. 다른 실시태양에서, HEC의 백분율(w/w)은 1.25%이다. HEC의 제조시, 정제된 셀룰로오스가 수산화나트륨과 반응하여 팽창된 알칼리 셀룰로오스를 만든다. 알칼리-처리 셀룰로오스는 셀룰로오스보다 더욱 화학적으로 반응성이 있다. 알칼리 셀룰로오스와 에틸렌 옥사이드를 반응시킴으로써, 일련의 하이드록시셀룰로오스 에터가 만들어진다. 이 반응에서, 셀룰로오스의 수산기에 있는 수소 원자들이 하이드록시에틸기로 대체되어, 겔에 수용성을 제공한다. 단일 HEC 에터가 사용될 수 있거나 다른 분자량과 구조의 HEC 에터의 혼합물이 사용될 수 있다는 것이 본 발명에서 고려된다. 약학적 목적을 위한 HEC의 적절한 등급은 주지되어 있고 약학 문헌에 상세히 기술되어 있다. HEC의 적절한 구입가능한 브랜드는 Fuji HEC-HP; Fuji HEC-AG 15; NATRO-SOL 250HR; NATROSOL 250MH; NATROSOL 250G; CELLOSIZE QP 30000; TYLOSE H SERIES; NATROSOL 180L; NATROSOL 300H; TYLOSE P-X; NATROSOL 250M; CELLOSIZE WP 4400; CELLOSIZE UT 40; NATROSOL 250H4R; Tylose H20P; NATROSOL LR; TYLOSE MHB;NATROSOL 250HHP; HERCULES N100; CELLOSIZE WP 300; TYLOSE P-Z SERIES; NATROSOL 250H; TYLOSE PS-X; Cellobond HEC 400; CELLOSIZE QP; CELLOSIZE QP 1500; NATRO-SOL 250; HYDROXYETHYL CELLULOSE ETHER; HESPAN; TYLOSE MHB-Y; NATROSOL 240JR; HYDROXYETHYL STARCH; CELLOSIZE WP; CELLOSIZE WP 300H; 2-HYDROXYETHYL CELLULOSE ETHER; BL 15; CELLOSIZE QP 4400; CELLOSIZE QP3; TYLOSE MB; CELLULOSE HYDROXY-ETHYLATE; CELLOSIZE WPO 9H17; CELLOSIZE 4400H16; CELLULOSE HYDROXYETHYL ETHER; Hydroxyethyl Cellulose; Hydroxyl Ethyl Cellulose(HEC); Hydroxyethyl Cellulose 100H(celocell 100h); TYLOSE MH-XP; NATROSOL 250HX; Natrosol; Daicel EP 500; HEC-Unicel; HEC(Hydroxyethyl cellulose); Cellosize; HEC-Al 5000; Fuji HEC-AL 15; HEC-Unicel QP 09L; Cellulose, ethers, 2-hydroxyethyl ether; Unicel QP 52000H; HEC-QP 4400; SP 250(cellulose); Hetastarch; Cellulose, ethers, 2-hydroxyethyl ether; Glutofix 600; FL52; Fuji HEC-AX 15F; Tylose H 300P;HEC-Unicel QP 300H; Tylose H 300; Daicel SP 550; Daicel SE 600; Unicel QP 15000; HEC-QP 100MH; HEC-QP 9H; OETs; Daicel EP 850; H. E. Cellulose; Cellobond 25T; Unicel QP 100MH; Tylose H 4000; SE850K; Tylomer H 20; Daicel SE 850K; Tylose H 30000YP; Unicel QP 4400; SP 407; Tylose H 100000; Daicel SP 200; Culminal HEC 5000PR; Tylopur H 300; Daicel SP 750; Sanhec; BL 15(cellulose derivative); Unicel QP 300H; Tylomer H 200; J 164; Tylose H 10; Tylose H 20; AH 15; Daicel SP 600; Daicel SE 900; HEC-Unicel QP 4400H; AX 15; Daicel SP 800; Fuji HEC-AW 15F; HEC-SE 850;HEC-A 5-25CF; Metolose 90SEW; AW 15(polysaccharide); Cellobond HEC 5000; HEC-QP 100M; Cellobond HEC 15A; Tylose H 15000YP2; Walocel HT 6.000PFV; 2- Hydroxyethyl cellulose (Natrosol Type 250HRCS); Fuji HEC-BL 20; Fuji HEC-SY 25F; Telhec; HEC-SP 200; HEC-AH 15; HEC-Unicel QP 30000H; see; HEC 10A; Daicel SP 400; Admiral 3089FS; Fuji HEC-A 5000F; HEC-SP 400; Hydroxyethyl Methyl Cellulose(HEMC); HYDROXYETHYL CELLULOSE(HEC); Hydroxyethyl Starch(CAS No:9004-62-0); Hydroxy Ethyl Cellulose; "natrosol"[Aqualon]; HEC; 2- HYDROXYETHYL CELLULOSE;NATROSOL 150L; TYLOSE MHB-YP; HYDROXYETHYL ETHER CELLULOSE; NATROSOL 250L; CELLOSIZE WP 400H; TYLOSE P; CELLULOSE, 2-HYDROXYETHYL ETHER; TYLOSE MH-K; NATROSOL 250HHR을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
다른 실시태양에서, 본 발명의 약품은 20mL 바이알에 포장된다(USP 타입 I, 폴리-실 콘 우레아 나사 마개를 가진 보로실리케이트 투명 신틸레이션 유리). 0.17%(w/w)의 메틸파라벤 및 0.02%(w/w) 프로필파라벤의 혼합물이 방부제로서 사용된다.
일부 실시태양에서, 본 발명은 적어도 하나의 알파 코넥신 폴리펩타이드 미처 하이드록시에틸셀룰로오스 겔을 포함하는 국소 제제를 치료가 필요한 대상에게 투여하는 단계를 포함하는 상처 치료 방법을 포함하며, 하이드록시에틸셀룰로오스 겔은 알파 코넥신 폴리펩타이드를 안정화한다. 치료된 상처는 급성 수술 상처 또는 만성적, 비-감염성, 전층 하지 궤양일 수 있다.
특정 실시태양에서, 본 발명의 약품은 급성 수술 상처와 관련된 과도한 흉터 형성을 완화하는데 사용될 수 있다. 이 실시태양에서, 본 발명의 약품은 수술 절개 마감시, 수술 절개 마감 1시간 후, 수술 절개 마감 2시간 후, 수술 절개 마감 3시간 후, 수술 절개 마감 4시간 후, 수술 절개 마감 5시간 후, 수술 절개 마감 6시간 후, 수술 절개 마감 7시간 후, 수술 절개 마감 8시간 후, 수술 절개 마감 9시간 후, 수술 절개 마감 10시간 후, 수술 절개 마감 11시간 후, 수술 절개 마감 12시간 후, 수술 절개 마감 13시간 후, 수술 절개 마감 14시간 후, 수술 절개 마감 15시간 후, 수술 절개 마감 16시간 후, 수술 절개 마감 17시간 후, 수술 절개 마감 18시간 후, 수술 절개 마감 19시간 후, 수술 절개 마감 20시간 후, 수술 절개 마감 21시간 후, 수술 절개 마감 22시간 후, 수술 절개 마감 23시간 후, 수술 절개 마감 24시간 후, 수술 절개 마감 48시간 후, 수술 절개 마감 72시간 후 또는 그 후에 도포될 수 있다.
다른 실시태양에서, 본 발명의 약품은 만성 궤양을 치료하는데 사용될 수 있다. 예를 들어, 궤양은 당뇨성 발 궤양, 정맥성 다리 궤양 및 욕창을 포함할 수 있다. 이런 궤양은 만성적, 비-감염성, 전층 하지 궤양일 수 있다. 한 실시태양에서, 본 발명의 약품은 매일 요법, 격일 요법, 주1회 요법 또는 만성 궤양의 치료가 명백해질 때까지 다양한 다른 요법으로 만성 궤양에 도포될 수 있다. 다른 실시태양에서, 본 발명의 약품은 0, 3, 7, 14, 21 및 28일 요법으로 만성 궤양에 도포될 수 있다. 다른 실시태양에서, 본 발명의 약품은 0일, 3일, 1주, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 7주, 8주, 9주, 10주, 11주 및 12주 요법으로 만성 궤양에 도포될 수 있다. 본 발명의 다른 양태에서, 약품은 다음 단계로 제조된다:
단계 1: 적절한 크기의 비이커에, 프로필렌 글리콜, 글리세린, 메틸파라벤 및 프로필렌파라벤을 첨가한다. 파라벤이 완전히 용해될 때까지 프로펠러로 혼합한다.
단계 2: 제조 용기에, 정제수(파트 I), EDTA, 일염기 인산나트륨, 이염기 인산나트륨 및 D-만니톨을 첨가한다. 투명 용액이 얻어질 때까지 프로펠러로 혼합한다.
단계 3: 단계 1의 용액을 제조 용기에 첨가한다. 비이커를 정제수(파트 II, 적절하게 3개의 동일 부분으로 나눔)로 세척하고 세척수를 다시 용기에 첨가한다. 용액이 시각적으로 균일해질 때까지 프로펠러로 혼합을 지속한다.
단계 4: 균일하게 혼합하면서, 하이드록시에틸 셀룰로오스를 단계 3의 제조 용기 속에 첨가한다. 폴리머가 완전히 분산할 때까지 혼합한다.
단계 5: 개별 비이커에, 정제수(파트 III) 및 알파 코넥신 폴리펩타이드(예를 들어, 펩타이드 328967 ACT1 펩타이드)를 첨가한다. 펩타이드가 완전히 용해되어 겔이 형성될 때까지 교반 막대 또는 프로펠러 혼합기로 혼합한다.
단계 6: 프로펠러로 연속적으로 혼합하면서, 단계 5의 약품 용액을 제조 용기에 첨가한다. 비이커를 정제수(파트 IV, 적절하게 3개의 동일 부분으로 나눔)로 세척하고 세척수를 다시 용기에 첨가한다. 겔이 균일해질 때까지 혼합한다.
제조 공정 흐름도는 도 1 제조 공정 흐름도에 제공된다.
서열
Figure 112014092658919-pct00001
Figure 112014092658919-pct00002
Figure 112014092658919-pct00003
Figure 112014092658919-pct00004
Figure 112014092658919-pct00005
Figure 112014092658919-pct00006
Figure 112014092658919-pct00007
실시예
실시예 1
목적은 상처 치료용 활성 약학적 성분(API)가 용액 상태인 안정하고, 세련되고 부을 수 있는 국소 겔을 개발하는 것이었다.
제제 개발 동안 만난 큰 도전은 API(ACT1)를 위한 적절한 안정제 및 상처 치료 용도로 비-자극적인 다른 부형제의 선택이었다. 연구를 실행하여 표본 제제를 평가하였다.
프로토콜 #1062에 따른 R&D 연구
첫 번째 연구를 프로토콜 #1062에 따라 실행하였다. 이 연구 동안, 6개 표본 제제를 표 4에 약술한 대로 평가하였다. 연구의 목적은 제품을 위한 적절한 pH 범위를 선택하고 또한 적절한 겔화제를 선택하는 것이었다. 이 연구에 사용된 API 농도는 최초 목표 제품 농도인 0.072%이었다. pH 5, 6 및 7의 인산염 완충제 및 2개의 겔화제, 플루로닉 및 하이드록시에틸셀룰로오스(HEC)를 평가하였다. 제제에 필요한 API의 양은 다음과 같이 계산하였다:
각 제제를 위한 배치 크기 = 12 x 5g = 60g 또는 70g
6개 제제를 위한 API 양 = 6 x 70 x 0.072% / 82.4% = 0.37g
API 순도 값 = 82.4%
5개 제제, 포뮬라 2414-10 내지 -14를 바람직한 겔화제로 생각된 플루로닉 127로 겔화하였다. 단지 하나의 제제, 2414-15를 대체품으로 HEC로 겔화하였다. 이용가능한 안전성 데이터는 다음 결과를 나타내었다.
완충제는 겔 시스템의 pH를 조절하고 펩타이드 약품의 안정성을 유지하는데 필요하였다. 적절한 pH 범위는 5 내지 7인 것으로 보였다. 인산염 완충제가 적절하였다.
놀랍게도, API, ACT1이 플루로닉 겔보다 HEC 겔에서 더욱 안정하였다. 플루로닉 겔에 의해, API는 겔을 5℃에서 1달 동안 저장할 때 최초로부터 레이블 표시(LC)의 평균 85%로 떨어졌고; 25℃에서 1달 동안 저장할 때 79%로 떨어졌다. HEC 겔에 의해, API는 5℃에서 3달 동안 저장할 때 최초로부터 레이블 표시의 98%로 떨어졌고 25℃에서 3달 동안 저장할 때 84%로 떨어졌다.
HEC는 포뮬라 2414-14 내지 2414-15를 포함할 때 플루로닉보다 더 좋은 선택의 겔화제인 것으로 보였다. 두 제제는 포뮬라 2414-14가 플루로닉으로 겔화되고 포뮬라 2414-15가 HEC로 겔화된 것을 제외하고 정확하게 동일하였다. 포뮬라 2414-14에서 API는 5℃에서 1달 동안 저장할 때 최초 농도로부터 레이블 표시의 68%로 떨어진반면 포뮬라 2414-15에서 API는 5℃에서 3달 동안 저장할 때 최초 농도로부터 레이블 표시의 단지 98%로 떨어졌다.
EDTA 및 만니톨은 펩타이드 약물에 일정한 안정성을 제공하는 것으로 보인다.
제제는 25℃에서 안정한 것으로 보이지 않았다. 최종 제품은 냉장을 필요로 할 수 있는데, 이는 펩타이드와 단백질을 포함하는 제품에 일반적이다.
겔화제로서 HEC를 가진 포뮬라 2414-15는 테스트한 제제들의 나머지와 비교하여 가장 안정한 제제이다. 이것을 추가 개발을 위해 선택하였다. 제제 2414-14 및 2414-15의 안정성 데이터는 각각 표 5와 6에 요약된다.
연구 #1062에 따른 안정성 테스트를 위한 상처 치료 겔 제제 조성물
구성요소
(% W/W) 		포뮬라
#: 2414-
10 		포뮬라
#: 2414-
11 		포뮬라
#: 2414-
12 		포뮬라
#: 2414-
13 		포뮬라
#: 2414-
14 		포뮬라
#: 2414-
15
API 0.072 0.072 0.072 0.072 0.072 0.072
프로필렌 글리콜 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
글리세린 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0
일염기 인산나트륨
-
0.300
0.263
0.120
0.263
0.263
이염기 인산나트륨
-
0.0036
0.044
0.217
0.044
0.044
메틸파라벤 0.17 0.17 0.17 0.17 0.17 0.17
프로필파라벤 0.02 0.02 0.02 0.02 0.02 0.02
플루로닉 127(폴록사머 407)
20.0
20.0
20.0
20.0
20.0
-
EDTA 이나트륨 - - - - 0.05 0.05
만니톨 - - - - 0.05 0.05
하이드록시에틸셀룰로오스 250HHX
-
-
-
-
-
1.25
정제수 q.s. 100 q.s. 100 q.s. 100 q.s. 100 q.s. 100 q.s. 100
완충제 없음 완충제 pH 5 완충제 pH 6 완충제 pH 7 완충제 pH 6 완충제 pH 6
연구 #1062에 따른 플루로닉 127을 포함하는 포뮬라 2414-14의 안정성 결과

저장
조건 		시점 (월) 물리적 특성
및
외관 		화학적 분석(%, LC )
API 메틸파라벤 프로필파라벤

최초		 투명하고 무색인 겔
98.8
92.0
96.6
동결/해동 동일하다 89.8 88.6 94.0
5℃
1
동일하다
84.6
93.0
97.9


25℃		 1/2 동일하다 90.6 93.6 98.6

1
동일하다
82.8
88.8
94.0
연구 #1062에 따른 HEC를 포함하는 포뮬라 2414-15의 안정성 결과

저장
조건 		시점 (월) 물리적 특성
및
외관 		화학적 분석(%, LC )
API 메틸파라벤 프로필파라벤

최초		 투명하고 무색인 겔
101.9
97
103.1
동결/해동 동일하다 89.8 88.6 94.0
5℃
 1 동일하다 96 98.1 104.6
3 동일하다 99.7 98.3 101.8

25℃
 1/2 동일하다 91.6 99.7 106.7
1 동일하다 93.4 96.8 103
3 동일하다 85.7 92.8 96.5
실시예 2
프로토콜 #1074에 따른 R&D 연구
연구 #1062로부터의 결과를 기초로, 포뮬라 2414-15를 기초로 한 추가 표본 제제를 설계하고 프로토콜 #1074에 따라 평가하였다. 이 연구 동안, 7개 표본 제제를 제조하였다. 연구 목적은 제제를 위한 적절한 완충 시스템과 항산화제를 선택하는 것이었다. 다섯 개(5) 항산화제를 평가하였다: 만니톨, 메티오닌, 아세틸시스테인, 리신 및 히스티딘. 2개의 완충 시스템을 사용하였다: pH 6의 인산염 완충제 및 pH 5의 시트르산염 완충제. 글리세린(5%)을 새로운 표본 제제 속에 주입하여 상처 치료 국소 겔에 약간의 습윤성을 제공하였다. PEG 200을 잠재적 안정화제 효과에 대해 평가하였다. 연구 #1074에 따라 평가한 표본의 조성물을 표 7에 나열한다.
연구 #1074에 따른 표본 제제의 조성물
구성요소(%w/w) 포뮬라 # 2414-
18 19 20 21 22 23 26
펩타이드 328967 (ACT1) 0.036 0.036 0.036 0.036 0.036 0.036 0.036
프로필렌 글리콜 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 - -
PEG 200 - - - - - 5.0 5.0
글리세린 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0
일염기 인산나트륨 0.263 0.263 0.263 0.263 0.526 - -
이염기 인산나트륨 0.044 0.044 0.044 0.044 0.088 - -
시트르산, 무수 - - - - - 0.60 0.60
시트르산 나트륨, 무수 - - - - - 1.73 1.73
메틸파라벤 0.17 0.17 0.17 0.17 0.17 0.17 0.17
프로필파라벤 0.02 0.02 0.02 0.02 0.02 0.02 0.02
EDTA 이나트륨 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05
만니톨 0.05 - - - - 0.05 -
메티오닌 - 0.5 0.5 0.5 0.5 - -
아세틸시스테인 - - - - 0.2 - -
리신 - - 0.1 - - - 0.1
히스티딘 - - - 0.1 - - -
하이드록시에틸셀룰로오스
250 HHX		 1.25 1.25 1.25 1.25 1.25 1.25 1.25
정제수, qsad 100 100 100 100 100 100 100
25 mM
완충제 pH 6		 25 mM
완충제
pH 6		 25 mM
완충제
pH 6		 25 mM
완충제
pH 6		 50 mM
완충제
pH 6		 100 mM
완충제
pH 5		 100 mM
완충제
pH 5
API 이용가능성 제한 때문에, 0.036%의 API 농도를 이 연구에 사용하였다. 포뮬라 2414-18은 API 농도가 0.072%로부터 0.036%로 감소하였다는 것을 제외하고 2414-15와 동일하다. 표 8에서 발견된 연구 #1074로부터의 이용가능한 안정성 데이터는 다음 결론을 나타내었다.
인산염 완충제는 시트르산염 완충제와 비교할 때 펩타이드에 더 나은 안정성을 제공하는 것으로 보였다. 25mM에서 완충제 용량은 시스템에 적합하다.
만니톨은 펩타이드에 적절한 안정성을 제공하는 것으로 보였다.
다른 항산화제의 효과는 화학적 데이터의 변화가능성 때문에 분명하지 않았다.
주로 연구 #1062 및 부분적으로 #1074로부터의 연구 결과를 기초로, 최종 제제를 추가 개발을 위해 선택하였다. 최종 제제는 제제의 pH를 유지하기 위한 25mM 인산염 완충제, API를 위한 안정제로서 만니톨 및 겔화제로서 HEC를 포함하였다. 프로필렌 글리콜의 양은 표본 제제에서 1%로부터 3%로 증가하여 수성 시스템에서 파라벤의 더 낮은 가용화를 허용한다. 4개의 효과적인 API 농도를 선택하였다: 0.0072%, 0.018%, 0.036% 및 0.072%. 최종 포뮬라는 표 9에 요약된다. 다른 수준의 API를 포함하는 최종 선택된 포뮬라의 안정성을 또한 분석 방법으로 평가하였다. 또한, 전체 안정성을 백색 분말 또는 침전물에 대한 시각적 검사 및 수분 함량의 측정에 의해 평가하였다.
연구 #1074로부터의 포뮬라 2414-18, 2414-19, 2414-20, 2414-21, 2414-22, 2414-23 및 2414-26의 안정성 결과
샘플
저장
조건 		시점 (월) 물리적 특성 화학적 분석(%, LC )
외관 API 메틸파라벤 프로필파라벤
포뮬라
2414-18
최초		 투명하고 무색인 겔 106.4 94.6 102.2

5℃		 1 동일하다 90.1 83.4 88.2
2 동일하다 NA NA NA
3 동일하다1 NA NA NA

25℃
 1 동일하다 94.3 90.4 95.5
2 동일하다 NA NA NA
3 동일하다1 NA NA NA
포뮬라
2414-19
최초		 투명하고 무색인 겔 109.3 94.2 119.7

5℃		 1 동일하다 101.1 90.4 112.6
2 동일하다 NA NA NA
3 동일하다1 NA NA NA

25℃
 1 동일하다 103.3 94.6 117.4
2 동일하다 NA NA NA
3 동일하다1 NA NA NA
포뮬라
2414-20






최초		 투명하고 무색인 겔 107.0 96.9 99.9

5℃
 1 동일하다 106.8 96.7 98.4
2 동일하다 NA NA NA
3 동일하다1 NA NA NA

25℃

 1 동일하다 97.9 94.2 95.6
2 동일하다 NA NA NA
3 동일하다1 NA NA NA
포뮬라
2414-21





최초 투명하고 무색인 겔 104.3 95.1 110.4

5℃
 1 동일하다 96.7 91.5 104.2
2 동일하다 NA NA NA
3 동일하다1 NA NA NA

25℃
 1 동일하다 96.4 95.0 108.4
2 동일하다 NA NA NA
3 동일하다1 NA NA NA
포뮬라
2014-22




최초 투명하고 무색인 겔 112.2 96.1 109.4

5℃
 1 동일하다 111.4 94.9 106.1
2 동일하다 NA NA NA
3 동일하다1 NA NA NA

25℃
 1 동일하다 96.5 89.5 100.0
2 동일하다 NA NA NA
3 동일하다1 NA NA NA
포뮬라
2014-23





최초 투명하고 무색인 겔 87.8 94.7 101.6

5℃
 1 동일하다 88.3 92.9 97.0
2 동일하다 NA NA NA
3 동일하다1 NA NA NA

25℃
 1 동일하다 74.4 84.4 88.4
2 동일하다 NA NA NA
3 동일하다1 NA NA NA
포뮬라
2014-26





최초 투명하고 무색인 겔 83.0 95.5 105.9

5℃
 1 동일하다 78.5 91.0 98.5
2 동일하다 NA NA NA
3 동일하다1 NA NA NA

25℃
 1 동일하다 77.4 93.3 100.7
2 동일하다 NA NA NA
3 동일하다1 NA NA NA
1 바이알 바닥에 있는 입자; NA = 이용할 수 없는 데이터
한 실시태양에서, 한 배치의 약품을 제조 공정 흐름도의 단계를 따라서 표 9의 조성물을 사용하여 제조하였다.
달리 정의하지 않는 한, 본 발명의 모든 기술적 및 과학적 용어는 본 발명이 속하는 기술분야의 당업자가 일반적으로 이해할 수 있는 것과 동일한 의미를 가진다. 비록 본 발명에 기술된 것과 유사하거나 동일한 임의의 방법 및 재료가 본 발명의 실시 또는 테스트에 사용될 수 있으나, 바람직한 방법 및 재료는 본 발명에 기술된다. 본 발명에서 인용한 모든 공개공보는 공개공보가 인용되는 본 발명의 구체적인 양태를 개시하고 기술하는 목적을 위해 참조로 본 발명에 포함된다.
본 발명에서 논의한 공개공보는 본 출원의 출원일 이전에 이들의 공개를 위해서만 제공된다. 본 발명에서 어떤 것도 본 발명이 종래 발명 때문에 이 공개공보에 선행하는 자격을 얻지 않는다는 것을 인정하는 것으로 해석되지 않는다.
본 발명은 이의 구체적인 실시태양과 관련하여 기술되었지만, 추가 변형이 가능하며 본 출원은 본 발명이 속하는 기술 분야 내의 공지되거나 통상적인 실시 내에 해당하며 이하에서 기술되고 첨부된 청구항의 범위 내의 다음과 같은 필수 특징들에 적용될 수 있기 때문에 일반적으로 본 발명의 원리를 따르며 본 발명으로부터의 이런 변경을 포함하는 본 발명의 임의의 변형, 용도 또는 적응을 포함하는 것이 이해될 것이다.
상처 치료 겔 정량적 및 정성적 조성물

성분
등급
기능 		농도
(% w/w) 		Grams / kg 배치

펩타이드 328967 (ACT1)


--
활성제
0.0072; 0.018

0.036; 0.072
0.072; 0.18

0.36; 0.72
메틸파라벤
NF
방부제
0.17
1.7
프로필파라벤 NF 방부제 0.02 0.2
글리세린 USP 용매 5 50

일염기 인산나트륨
USP
완충제
0.263
2.63

이염기 인산나트륨
USP
완충제
0.044
0.44
프로필렌 글리콜 USP 용매 3 30
에디테이트 다이소듐(EDTA) USP 킬레이트화제 0.05 0.5
D-만니톨 USP 안정화제 0.05 0.5
하이드록시셀룰로오스, 250HHX
NF		 겔화제
1.25
12.5
정제수, qsad
USP		 용매
1
1 kg
SEQUENCE LISTING <110> FirstString Research Inc. Ghatnekar, Gautam <120> TOPICAL GELS CONTAINING ALPHA CONNEXIN C-TERMINAL (ACT) PEPTIDES <130> FIRS-006/01WO <150> US 61/605,528 <151> 2012-03-01 <160> 92 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Pro Ser Ser Arg Ala Ser Ser Arg Ala Ser Ser Arg Pro Arg Pro Asp 1 5 10 15 Asp Leu Glu Ile 20 <210> 2 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Arg Pro Arg Pro Asp Asp Leu Glu Ile 1 5 <210> 3 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> mutated ACT 3 peptide sequence <400> 3 Arg Pro Arg Pro Asp Asp Leu Glu Val 1 5 <210> 4 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> mutated ACT 4 peptide sequence <400> 4 Arg Pro Arg Pro Asp Asp Val Pro Val 1 5 <210> 5 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> mutated ACT 5 peptide sequence <400> 5 Lys Ala Arg Ser Asp Asp Leu Ser Val 1 5 <210> 6 <211> 27 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 6 agacctcggc ctgatgacct ggagatt 27 <210> 7 <211> 16 <212> PRT <213> Drosophila melanogaster <400> 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Prion peptide sequence <400> 23 Met Ala Asn Leu Gly Tyr Trp Leu Leu Ala Leu Phe Val Thr Met Trp 1 5 10 15 Thr Asp Val Gly Leu Cys Lys Lys Arg Pro Lys Pro 20 25 <210> 24 <211> 18 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 24 Leu Leu Ile Ile Leu Arg Arg Arg Ile Arg Lys Gln Ala His Ala His 1 5 10 15 Ser Lys <210> 25 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> mutated Pep-1 peptide sequence <400> 25 Lys Glu Thr Trp Trp Glu Thr Trp Trp Thr Glu Trp Ser Gln Pro Lys 1 5 10 15 Lys Lys Arg Lys Val 20 <210> 26 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> mutated SynB1 peptide sequence <400> 26 Arg Gly Gly Arg Leu Ser Tyr Ser Arg Arg Arg Phe Ser Thr Ser Thr 1 5 10 15 Gly Arg <210> 27 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> mutated Pep-7 peptide sequence <400> 27 Ser Asp Leu Trp Glu Met Met Met Val Ser Leu Ala Cys Gln Tyr 1 5 10 15 <210> 28 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> mutated HN-1 peptide sequence <400> 28 Thr Ser Pro Leu Asn Ile His Asn Gly Gln Lys Leu 1 5 10 <210> 29 <211> 19 <212> PRT <213> Gallus gallus <400> 29 Pro Ser Arg Ala Ser Ser Arg Ala Ser Ser Arg Pro Arg Pro Asp Asp 1 5 10 15 Leu Glu Ile <210> 30 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 30 Gly Ser Asn Lys Ser Thr Ala Ser Ser Lys Ser Pro Asp Pro Lys Asn 1 5 10 15 Ser Val Trp Ile 20 <210> 31 <211> 20 <212> PRT <213> Gallus gallus <400> 31 Gly Ser Asn Lys Ser Ser Ala Ser Ser Lys Ser Gly Asp Gly Lys Asn 1 5 10 15 Ser Val Trp Ile 20 <210> 32 <211> 21 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 32 Gly Arg Ala Ser Lys Ala Ser Arg Ala Ser Ser Gly Arg Ala Arg Pro 1 5 10 15 Glu Asp Leu Ala Ile 20 <210> 33 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 33 Gly Ser Ala Ser Ser Arg Asp Gly Lys Thr Val Trp Ile 1 5 10 <210> 34 <211> 19 <212> PRT <213> Pan troglodytes <400> 34 Pro Arg Val Ser Val Pro Asn Phe Gly Arg Thr Gln Ser Ser Asp Ser 1 5 10 15 Ala Tyr Val <210> 35 <211> 19 <212> PRT <213> Gallus gallus <400> 35 Pro Arg Met Ser Met Pro Asn Phe Gly Arg Thr Gln Ser Ser Asp 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Sequence <220> <223> conservative Cx37 variant <400> 54 Gly Gln Lys Pro Pro Ser Arg Pro Ser Ser Ser Ala Ser Lys Lys Leu 1 5 10 15 Tyr Val <210> 55 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> non-active control peptide <400> 55 Arg Gln Pro Lys Ile Trp Phe Pro Asn Arg Arg Lys Pro Trp Lys Ile 1 5 10 15 Glu Leu Asp Asp Pro Arg Pro Arg 20 <210> 56 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HIV-Tat/ACT 1 fusion peptide sequence <400> 56 Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Pro Pro Gln Arg Pro Arg Pro Asp 1 5 10 15 Asp Leu Glu Ile 20 <210> 57 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Penetratin/ACT 1 fusion peptide sequence <400> 57 Arg Gln Ile Lys Ile Trp Phe Gln Asn Arg Arg Met Lys Trp Lys Lys 1 5 10 15 Arg Pro Arg Pro Asp Asp Leu Glu Ile 20 25 <210> 58 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Antp-3A/ACT 1 fusion peptide sequence <400> 58 Arg Gln Ile Ala Ile Trp Phe Gln Asn Arg Arg Met Lys Trp Ala Ala 1 5 10 15 Arg Pro Arg Pro Asp Asp 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peptide sequence <400> 67 Lys Glu Thr Trp Trp Glu Thr Trp Trp Thr Glu Trp Ser Gln Pro Lys 1 5 10 15 Lys Lys Arg Lys Val Arg Pro Arg Pro Asp Asp Leu Glu Ile 20 25 30 <210> 68 <211> 27 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SynB1/ACT 1 fusion peptide sequence <400> 68 Arg Gly Gly Arg Leu Ser Tyr Ser Arg Arg Arg Phe Ser Thr Ser Thr 1 5 10 15 Gly Arg Arg Pro Arg Pro Asp Asp Leu Glu Ile 20 25 <210> 69 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Pep-7/ACT 1 fusion peptide sequence <400> 69 Ser Asp Leu Trp Glu Met Met Met Val Ser Leu Ala Cys Gln Tyr Arg 1 5 10 15 Pro Arg Pro Asp Asp Leu Glu Ile 20 <210> 70 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HN-1/ACT 1 fusion peptide sequence <400> 70 Thr Ser Pro Leu Asn Ile His Asn Gly Gln Lys Leu Arg Pro Arg Pro 1 5 10 15 Asp Asp Leu Glu Ile 20 <210> 71 <211> 122 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 71 Lys Gly Lys Ser Asp Pro Tyr His Ala Thr Ser Gly Ala Leu Ser Pro 1 5 10 15 Ala Lys Asp Cys Gly Ser Gln Lys Tyr Ala 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Glu Leu Gln Pro 100 105 110 Leu Thr Ile Val Asp Gln Arg Pro 115 120 <210> 73 <211> 120 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 73 Leu Gly Phe Gly Thr Ile Arg Asp Ser Leu Asn Ser Lys Arg Arg Glu 1 5 10 15 Leu Glu Asp Pro Gly Ala Tyr Asn Tyr Pro Phe Thr Trp Asn Thr Pro 20 25 30 Ser Ala Pro Pro Gly Tyr Asn Ile Ala Val Lys Pro Asp Gln Ile Gln 35 40 45 Tyr Thr Glu Leu Ser Asn Ala Lys Ile Ala Tyr Lys Gln Asn Lys Ala 50 55 60 Asn Thr Ala Gln Glu Gln Gln Tyr Gly Ser His Glu Glu Asn Leu Pro 65 70 75 80 Ala Asp Leu Glu Ala Leu Gln Arg Glu Ile Arg Met Ala Gln Glu Arg 85 90 95 Leu Asp Leu Ala Val Gln Ala Tyr Ser His Gln Asn Asn Pro His Gly 100 105 110 Pro Arg Glu Lys Lys Ala Lys Val 115 120 <210> 74 <211> 120 <212> PRT <213> Gallus gallus <400> 74 Gly Phe Gly Thr Ile Arg Asp Thr Leu Asn Asn Lys Arg Lys Glu Leu 1 5 10 15 Glu Asp Ser Gly Thr Tyr Asn Tyr Pro Phe Thr Trp Asn Thr Pro Ser 20 25 30 Ala Pro Pro Gly Tyr Asn Ile Ala Val Lys Pro Asp Gln Met Gln Tyr 35 40 45 Thr Glu Leu Ser Asn Ala Lys Met Ala Tyr Lys Gln Asn Lys Ala Asn 50 55 60 Ile Ala Gln Glu Gln Gln Tyr Gly Ser Asn Glu Glu Asn Ile Pro Ala 65 70 75 80 Asp Leu Glu Asn Leu Gln Arg Glu Ile Lys Val Ala Gln Glu Arg Leu 85 90 95 Asp Met Ala Ile Gln Ala Tyr Asn Asn Gln Asn Asn Pro Gly Ser Ser 100 105 110 Ser Arg Glu Lys Lys Ser Lys Ala 115 120 <210> 75 <211> 120 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 75 Pro Tyr Leu Val Asp Cys Phe Val Ser Arg Pro Thr Glu Lys Thr Ile 1 5 10 15 Phe Ile Ile Phe Met Leu Val Val Gly Leu Ile Ser Leu Val Leu Asn 20 25 30 Leu Leu Glu Leu Val His Leu Leu Cys Arg Cys Leu Ser Arg Gly Met 35 40 45 Arg Ala Arg Gln Gly Gln Asp Ala Pro Pro Thr Gln Gly Thr Ser Ser 50 55 60 Asp Pro Tyr Thr Asp Gln Val Phe Phe Tyr Leu Pro Val Gly Gln Gly 65 70 75 80 Pro Ser Ser Pro Pro Cys Pro Thr Tyr Asn Gly Leu Ser Ser Ser Glu 85 90 95 Gln Asn Trp Ala Asn Leu Thr Thr Glu Glu Arg Leu Ala Ser Ser Arg 100 105 110 Pro Pro Leu Phe Leu Asp Pro Pro 115 120 <210> 76 <211> 120 <212> PRT <213> Rattus norvegicus <400> 76 Cys Gly Ser Lys Glu His Gly Asn Arg Lys Met Arg Gly Arg Leu Leu 1 5 10 15 Leu Thr Tyr Met Ala Ser Ile Phe Phe Lys Ser Val Phe Glu Val Ala 20 25 30 Phe Leu Leu Ile Gln Trp Tyr Leu Tyr Gly Phe Thr Leu Ser Ala Val 35 40 45 Tyr Ile Cys Glu Gln Ser Pro Cys Pro His Arg Val Asp Cys Phe Leu 50 55 60 Ser Arg Pro Thr Glu Lys Thr Ile Phe Ile Leu Phe Met Leu Val Val 65 70 75 80 Ser Met Val Ser Phe Val Leu Asn Val Ile Glu Leu Phe Tyr Val Leu 85 90 95 Phe Lys Ala Ile Lys Asn His Leu Gly Asn Glu Lys Glu Glu Val Tyr 100 105 110 Cys Asn Pro Val Glu Leu Gln Lys 115 120 <210> 77 <211> 239 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> enhanced green fluorescent protein <400> 77 Met Val Ser Lys Gly Glu Glu Leu Phe Thr Gly Val Val Pro Ile Leu 1 5 10 15 Val Glu Leu Asp Gly Asp Val Asn Gly His Lys Phe Ser Val Ser Gly 20 25 30 Glu Gly Glu Gly Asp Ala Thr Tyr Gly Lys Leu Thr Leu Lys Phe Ile 35 40 45 Cys Thr Thr Gly Lys Leu Pro Val Pro Trp Pro Thr Leu Val Thr Thr 50 55 60 Leu Thr Tyr Gly Val Gln Cys Phe Ser Arg Tyr Pro Asp His Met Lys 65 70 75 80 Gln His Asp Phe Phe Lys Ser Ala Met Pro Glu Gly Tyr Val Gln Glu 85 90 95 Arg Thr Ile Phe Phe Lys Asp Asp Gly Asn Tyr Lys Thr Arg Ala Glu 100 105 110 Val Lys Phe Glu Gly Asp Thr Leu Val Asn Arg Ile Glu Leu Lys Gly 115 120 125 Ile Asp Phe Lys Glu Asp Gly Asn Ile Leu Gly His Lys Leu Glu Tyr 130 135 140 Asn Tyr Asn Ser His Asn Val Tyr Ile Met Ala Asp Lys Gln Lys Asn 145 150 155 160 Gly Ile Lys Val Asn Phe Lys Ile Arg His Asn Ile Glu Asp Gly Ser 165 170 175 Val Gln Leu Ala Asp His Tyr Gln Gln Asn Thr Pro Ile Gly Asp Gly 180 185 190 Pro Val Leu Leu Pro Asp Asn His Tyr Leu Ser Thr Gln Ser Ala Leu 195 200 205 Ser Lys Asp Pro Asn Glu Lys Arg Asp His Met Val Leu Leu Glu Phe 210 215 220 Val Thr Ala Ala Gly Ile Thr Leu Gly Met Asp Glu Leu Tyr Lys 225 230 235 <210> 78 <211> 60 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 78 ccctcctccc gggcctcctc ccgggcctcc tcccggcccc ggcccgacga cctggagatc 60 <210> 79 <211> 27 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 79 cggccccggc ccgacgacct ggagatc 27 <210> 80 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> mutated ACT 3 nucleotide sequence <400> 80 cggccccggc ccgacgacct ggaggtg 27 <210> 81 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> mutated ACT 4 nucleotide sequence <400> 81 cggccccggc ccgacgacgt gcccgtg 27 <210> 82 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> mutated ACT 5 nucleotide sequence <400> 82 aaggcccggt ccgacgacct gtccgtg 27 <210> 83 <211> 48 <212> DNA <213> Drosophila melanogaster <400> 83 cggcagccca agatctggtt ccccaaccgg cggaagccct ggaagaag 48 <210> 84 <211> 108 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Antp/ACT 2 fusion nucleotide sequence <400> 84 cggcagccca agatctggtt ccccaaccgg cggaagccct ggaagaagcc ctcctcccgg 60 gcctcctccc gggcctcctc ccggccccgg cccgacgacc tggagatc 108 <210> 85 <211> 75 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Antp/ACT 1 fusion nucleotide sequence <400> 85 cggcagccca agatctggtt ccccaaccgg cggaagccct ggaagaagcg gccccggccc 60 gacgacctgg agatc 75 <210> 86 <211> 75 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Antp/ACT 3 fusion nucleotide sequence <400> 86 cggcagccca agatctggtt ccccaaccgg cggaagccct ggaagaagcg gccccggccc 60 gacgacctgg aggtg 75 <210> 87 <211> 75 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Antp/ACT 4 fusion nucleotide sequence <400> 87 cggcagccca agatctggtt ccccaaccgg cggaagccct ggaagaagcg gccccggccc 60 gacgacgtgc ccgtg 75 <210> 88 <211> 75 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Antp/ACT 5 fusion nucleotide sequence <400> 88 cggcagccca agatctggtt ccccaaccgg cggaagccct ggaagaagaa ggcccggtcc 60 gacgacctgt ccgtg 75 <210> 89 <211> 20 <212> PRT <213> Danio rerio <400> 89 Pro Cys Ser Arg Ala Ser Ser Arg Met Ser Ser Arg Ala Arg Pro Asp 1 5 10 15 Asp Leu Asp Val 20 <210> 90 <211> 19 <212> PRT <213> Gallus gallus <400> 90 Pro Arg Val Ser Val Pro Asn Phe Gly Arg Thr Gln Ser Ser Asp Ser 1 5 10 15 Ala Tyr Val <210> 91 <211> 19 <212> PRT <213> Danio rerio <400> 91 Pro Arg Met Ser Met Pro Asn Phe Gly Arg Thr Gln Ser Ser Asp Ser 1 5 10 15 Ala Tyr Val <210> 92 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Cx43 isoleucine deletion <400> 92 Arg Gln Pro Lys Ile Trp Phe Pro Asn Arg Arg Lys Pro Trp Lys Lys 1 5 10 15 Arg Ala Ser Ser Arg Ala Ser Ser Arg Pro Arg Pro Asp Asp Leu Glu 20 25 30

Claims (20)

  1. 알파 코넥신 폴리펩타이드 및 하이드록시에틸셀룰로오스 겔을 포함하는 상처 치료용 국소 제제로서, 여기서 하이드록시에틸셀룰로오스 겔은 알파 코넥신 폴리펩타이드를 안정화하고, 알파 코넥신 폴리펩타이드는 SEQ ID NO: 2에 따르는 아미노산 서열로 이루어지고, 국소 제제는 선택적으로 부형제, 완충제 또는 둘 다를 포함하는 것인 국소 제제.
  2. 제 1 항에 있어서,
    하이드록시에틸셀룰로오스 겔은 알파 코넥신 폴리펩타이드를 안정화하여 5℃에서 3개월 저장 후 알파 코넥신 폴리펩타이드의 적어도 98%가 분석 방법에 의해 탐지되는 것인 국소 제제.
  3. 제 1 항에 있어서,
    하이드록시에틸셀룰로오스 겔은 알파 코넥신 폴리펩타이드를 안정화하여 5℃에서 3개월 저장 후 알파 코넥신 폴리펩타이드의 적어도 95%가 분석 방법에 의해 탐지되는 것인 국소 제제.
  4. 제 1 항에 있어서,
    하이드록시에틸셀룰로오스는 1.25%(w/w)의 농도로 존재하는 것인 국소 제제.
  5. 제 1 항에 있어서,
    알파 코넥신 폴리펩타이드는 0.005%(w/w) 내지 1.00%(w/w)의 농도로 존재하는 것인 국소 제제.
  6. 제 1 항에 있어서,
    국소 제제의 pH를 5 내지 7로 유지하는 완충제를 더 포함하는 것인 국소 제제.
  7. 제 6 항에 있어서,
    완충제는 인산염 완충제인 국소 제제.
  8. 제 1 항에 있어서,
    상기 알파 코넥신 폴리펩타이드는 이의 아미노 말단에서 세포 내재화 수송체에 연결되는 것인 국소 제제.
  9. 제 8 항에 있어서,
    세포 내재화 수송체는 안테나페디아 서열인 국소 제제.
  10. 제 1 항에 있어서,
    알파 코넥신 폴리펩타이드는 아미노 말단에서 세포 내재화 수송체에 연결되고, 알파 코넥신 폴리펩타이드의 서열이 SEQ ID NO: 9의 아미노산 서열로 이루어진 세포 내재화 수송체에 연결되는 것인 국소 제제.
  11. 제 1 항에 있어서,
    알파 코넥신 폴리펩타이드는 코넥신 37, 코넥신 40, 코넥신 43 또는 코넥신 45인 국소 제제.
  12. 제 1 항에 있어서,
    상처는 급성 수술 상처인 국소 제제.
  13. 제 1 항에 있어서,
    상처는 만성, 비-감염성, 전층 하지 궤양인 국소 제제.
  14. 제 1 항에 있어서,
    하이드록시에틸셀룰로오스 겔은 0.5% 내지 2.5%(w/w)의 농도로 존재하는 것인 국소 제제.
  15. 제 1 항에 있어서,
    상처는 정맥성 다리 궤양인 국소 제제.
  16. 제 1 항에 있어서,
    상처는 당뇨성 발 궤양인 국소 제제.
  17. 제 1 항에 있어서,
    상처는 욕창인 국소 제제.
  18. 제 1 항에 있어서,
    제제는 0일, 3일, 7일, 14일, 21일, 및 28일 투여 요법으로 상처에 투여되는 국소 제제.
  19. 제 1 항에 있어서,
    제제는 0일, 3일, 1주, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 7주, 8주, 9주, 10주, 11주 및 12주 투여 요법으로 상처에 투여되는 국소 제제.
  20. a) 파라벤이 완전히 용해될 때까지 프로필렌 글리콜, 글리세린, 메틸파라벤 및 프로필렌파라벤을 혼합하는 단계;
    b) 투명한 용액이 얻어질 때까지 정제수, EDTA, 일염기 인산나트륨, 이염기 인산나트륨 및 D-만니톨을 개별적으로 혼합하는 단계;
    c) a)로부터의 용액을 b)로부터의 용액에 첨가하고, a)로부터의 용액의 용기를 정제수로 세척하고, 세척수를 혼합 용액에 첨가하고, 혼합 용액이 시각적으로 균일해질 때까지 혼합하는 단계;
    d) 균일하게 혼합하면서, 하이드록시에틸셀룰로오스를 c)의 혼합 용액에 첨가하고 폴리머가 완전히 분산될 때까지 혼합하는 단계;
    e) 펩타이드가 완전히 용해될 때까지 알파 코넥신 폴리펩타이드를 정제수와 개별적으로 혼합하는 단계; 및
    f) e)로부터의 용액을 d)의 용액에 첨가하고, e)로부터의 용액의 용기를 정제수로 세척하고, 세척수를 혼합 용액에 첨가하고, 혼합 용액이 시각적으로 균일해질 때까지 혼합하는 단계를 포함하는 국소 제제의 제조 방법.
KR1020147027397A 2012-03-01 2013-03-01 알파 코넥신 c-말단 (act) 펩타이드를 포함하는 국소 겔 KR102038948B1 (ko)

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