CN112533676A - 用于抑制cgrp的神经毒素 - Google Patents

Abstract

本文公开了用于抑制CGRP产生和释放的组合物和方法。

Description

用于抑制CGRP的神经毒素

相关申请的交叉引用

本申请要求2018年4月3日提交的62/651,839号美国临时专利申请的优先权的权益，其全部内容通过引用的方式并入本文。

技术领域

本公开内容涉及神经毒素用于治疗疾病的用途。

背景技术

降钙素基因相关肽(CGRP)为降钙素肽家族的成员，其在人类中以两种形式存在，即α-CGRP和β-CGRP。α-CGRP为37个氨基酸的肽且由对位于11号染色体上的降钙素/CGRP基因的选择性剪接(alternative splicing)形成。研究较少的β-CGRP有三个氨基酸不同且在同一区域的不同基因中编码。它是一种有效的血管舒张肽。在脊髓中，CGRP的功能和表达可能根据合成的位置而不同。当CGRP在脊髓的腹侧角中合成时，其主要衍生自运动神经元的细胞体且可在损伤后促进神经组织的再生。当CGRP在脊髓的背角中合成时，其还衍生自背根神经节。在三叉神经血管系统中，三叉神经节上的细胞体是CGRP的主要来源。CGRP被认为在心血管体内平衡和伤害感受中起作用。

CGRP通过包括称为降钙素受体样受体(CALCRL)的G蛋白偶联受体和受体活性修饰蛋白(RAMP1)的异聚受体介导其效果。CGRP受体遍布全身，这表明该蛋白可调节所有主要系统(例如呼吸、内分泌、胃肠、免疫和心血管)的各种生理功能。第二细胞外环是配体诱导活化的基础，具有R274/Y278/D280/W283的关键相互作用。感觉和免疫系统之间相互作用的一个方面是CGRP的释放。

临床前证据表明，在偏头痛过程中，三叉神经节中活化的初级感觉神经元(脑膜伤害感受器)从其位于脑膜内的外周投射神经末梢释放CGRP。然后，该CGRP结合并激活位于脑膜血管周围的CGRP受体，导致血管舒张、肥大细胞脱粒和血浆外渗。人类的观察结果进一步暗示了CGRP在偏头痛的病理生理学中的作用。人类中三叉神经血管系统中的初级感觉神经元的活化可导致CGRP的释放。在一些偏头痛发作期间，在唾液和从颈外静脉抽取的血浆中均可发现CGRP的浓度增加。此外，α-CGRP的静脉给药可在偏头痛易感的个体中诱发头痛。

感染是致病原(disease-causing agents)对有机体组织的入侵、致病原的增殖以及宿主组织对病原体及其产生的毒素的反应。感染可由病毒、类病毒、朊病毒、细菌、线虫(例如寄生蛔虫和蛲虫)、节肢动物(例如壁虱、螨虫、跳蚤和虱子)、真菌(例如癣)以及其他大的寄生虫(例如绦虫和其他蠕虫)导致。有症状的感染是明显的且临床的，而活动性的但不产生明显症状的感染可称为隐性、无症状、亚临床或隐秘的。非活动性或休眠性感染称为潜伏感染；潜伏性细菌感染的一个实例是潜伏性肺结核。一些病毒感染也可能是潜伏的；潜伏性病毒感染的实例为来自疱疹病毒科(Herpesviridae)家族的那些中的任一种。短期感染是急性感染。长期感染是慢性感染。感染可通过病原体(细菌、病毒、真菌、寄生虫)以及存在或不存在全身症状(败血症)进一步分类。

哺乳动物宿主对感染的反应是先天性应答，通常涉及炎症，然后是适应性应答。用于治疗感染的具体药物包括抗生素、抗病毒、抗真菌、抗原生动物和抗蠕虫药。2013年，传染病导致920万人死亡(所有死亡人数的约17％)。

疼痛是通常由强烈或破坏性的刺激导致的令人痛苦的感觉。国际疼痛研究协会(International Association for the Study of Pain)广泛使用的定义将疼痛定义为“与实际或潜在的组织损伤相关的或以这种损伤的形式描述的不愉快的感觉和情感体验”，但是由于疼痛是一种复杂的主观的现象，定义痛苦一直是一个挑战。在医学诊断中，疼痛被认为潜在病症的症状。疼痛促使个体离开损伤性情形，在愈合过程中保护受损伤的身体部位以及避免将来遭受类似的体验。一旦去除有害刺激并治愈身体后，大多数疼痛都会消退，但尽管移除了刺激并明显治愈了身体，疼痛仍可能持续。有时，在没有任何可检测的刺激、损伤或疾病的情况下也会出现疼痛。

疼痛和炎症都是保护性应答。然而，如果不加以控制，这些自限性病症(具有公认的负反馈环)将变成病理性的。疼痛和炎症都可以以多维方式相互作用，例如通过周围、感觉和中枢神经系统水平。先天性免疫在中枢敏化和确认急性疼痛为慢性病症中起关键作用。而且，炎性介质也表现出心理作用，从而促进了与疼痛相关的情感因素。然而，免疫系统也有相当大的抗炎和镇痛作用。

伤害感受器是感觉神经元轴突末端的一种受体类型，其通过将“可能的威胁”信号发送至脊髓和大脑来对破坏性或潜在破坏性刺激做出应答。伤害感受器神经元密集地支配着暴露于病原体的周围屏障组织：如果大脑认为该威胁是可信的，它会产生疼痛感觉以将注意力引导至该身体部位，因此希望可以调节这种威胁。这个过程称为伤害感受。在哺乳动物中，伤害感受器存在于可以感觉到有害刺激的任何身体区域。外部伤害感受器存在于组织例如皮肤(皮肤伤害感受器)、角膜和粘膜中。内部伤害感受器存在于各种器官中，例如肌肉、关节、膀胱、肠道和消化道。这些神经元的细胞体位于背根神经节或三叉神经节中。三叉神经节是面部的专门神经，而背根神经节则与身体的其余部分相关。轴突延伸到周围神经系统且终止于分支以形成接受区。

发明内容

本文公开了用于最小化瘢痕形成的组合物和方法。例如，所公开的实施方案包括使用“速效”肉毒杆菌毒素来减少伤口附近的肌肉张力，从而预防或减少瘢痕形成。

肉毒杆菌神经毒素可有效地减少或阻断CGRP的神经元释放，例如在感染过程中，因此可以用于治疗多种病症。例如，所公开的实施方案可限制或预防细菌感染，例如坏死性病变，例如由化脓性链球菌(S.Pyogenes)导致的那些感染。所公开的实施方案可减少或预防疼痛。

在第一方面，提供了用于治疗感染的方法。在一个实施方案中，该方法包括治疗由细菌感染导致的坏死性病变。在一个实施方案中，该方法包括将治疗有效量的速效神经毒素给药至患者的由所述感染导致的病变附近。

在另一方面，用于通过抑制cGRP产生或释放来在有需要的患者中治疗疼痛的方法。该方法包括将治疗有效量的速效神经毒素给药至患者正经历疼痛的区域。

在另一方面，用于通过抑制cGRP产生或释放来在有需要的患者中减少疼痛发生的方法。该方法包括将治疗有效量的速效和/或短效神经毒素给药至患者已经历疼痛和/或可能经历疼痛的区域。

在一个实施方案中，提供了一种用于在有需要的患者中减少术后疼痛的方法，该方法包括将治疗有效量的速效和/或短效神经毒素局部给药至手术切口的区域附近。

在另一个实施方案中，提供了用于减少术后疼痛发生的方法，该方法包括将治疗有效量的速效和/或短效神经毒素给药至手术切口的区域附近。

在一个实施方案中，速效神经毒素包含血清型E型肉毒杆菌神经毒素。

在一些实施方案中，所述给药是在外科手术操作之前进行。在其他实施方案中，所述给药是在外科手术操作过程中进行。在另一个实施方案中，所述给药是在外科手术操作之后进行。

在一个实施方案中，治疗有效量包括约10^-3U/kg至约35U/kg的量。在另一个实施方案中，治疗有效量包括约1U/kg至约25U/kg的量。在另一个实施方案中，治疗有效量包括约5U/kg至约15U/kg的量。

在另一个实施方案中，治疗有效量包括约0.2纳克至约2纳克的量。

在另一个实施方案中，减少了皮肤切口或撕裂伤附近的肌肉活动，从而减少或预防瘢痕形成。

在另一个实施方案中，所述肉毒杆菌毒素是快速恢复的毒素。

在另一个实施方案中，所述“速效”肉毒杆菌毒素也是快速恢复的毒素。

在另一个实施方案中，该方法还包括给予速效肉毒杆菌神经毒素与例如慢效神经毒素的组合。在一个实施方案中，所述慢效神经毒素为A亚型肉毒杆菌毒素(BoNT/A)。

在其他实施方案中，该方法还包括给予快速恢复的肉毒杆菌神经毒素与例如慢恢复的神经毒素的组合。

在另一个实施方案中，所述神经毒素是以低于会导致肌肉麻痹的剂量的剂量给药。

使用BoNT/E的肌肉松弛效果的快速起效提供了在受试者中改善的愈合、降低的术后疼痛和减少的副作用，例如肌肉僵硬、眼睑下垂或颈部无力。与使用BoNT/A产品的3-4个月相比，由BoNT/E提供的肌肉松弛的较短持续时间(2-4周)也是合乎需要的，因为在手术后BoNT/E可能允许更快的恢复和康复。

在其他实施方案中，包含BoNT/E的制剂或组合物为肌内给药。

附图说明

图1示出了对肉毒杆菌神经毒素(BoNT)的一级结构的描述。

图2A-2D是BoNT/E(图2A，2C)和BoNT/B(图2B，2D)的示意图和带状图示。催化、易位和结合结构域分别标记为CD、TD和BD。

图3A-3B是人体的示意图，前视图(图3A)和后视图(图3B)，标识了肌肉。

图4是标识了神经的人体的示意图。

图5示出了用于实施例1中所述的研究的前额注射位点。

图6是示出了实施例1中所述的研究中受试者的％IR-2应答者(主要功效结果)的柱状图。

图7是示出了最大皱眉时，研究者评估的FWS等级为无或轻度GL的实施例1中受试者的比例的柱状图。

图8是示出了在术后疼痛的大鼠模型中，代表性速效毒素BoNT/E的单次局部给药的效果的柱状图。

具体实施方式

本文所公开的实施方案可有效地阻断CGRP的神经元释放，例如在感染、疼痛、炎症过程中，因此可用于治疗多种病症。例如，所公开的实施方案可减少或预防疼痛。所公开的实施方案可减少炎症。所公开的实施方案可限制或预防细菌坏死性病变，例如由化脓性链球菌导致的那些病变。

有几种分类疼痛的方法。一种是将其分为急性疼痛和慢性疼痛。急性疼痛通常突然发作且具有有限的持续时间。它往往是由于组织(例如骨骼、肌肉或器官)的损伤而导致的，且发作通常伴随着焦虑或情绪困扰。慢性疼痛比急性疼痛持续得更长，且通常对药物治疗具有一些抗性。它通常与长期疾病(例如骨关节炎)相关。在一些情况下，例如纤维肌痛，这是该疾病的明确特征之一。慢性疼痛可以是由损伤的组织导致的，但通常被归因于神经损伤。

适用于使用所公开的组合物和方法治疗的疼痛的示例性类型包括伤害性、神经性和炎性疼痛。

伤害性疼痛代表对组织(例如皮肤、肌肉、内脏器官、关节、腱或骨骼)的有害创伤(noxious insult)或损伤的正常应答。实例包括：(a)躯体-肌肉骨骼(关节痛，肌筋膜痛)，皮肤的；通常是明确定位的；以及(b)内脏-中空器官和平滑肌。

本文所公开的实施方案包括用于治疗伤害性疼痛的组合物和方法。

神经性疼痛是由躯体感觉神经系统中的原发性病变或疾病引发或导致的。感觉异常的范围从被视为麻木的缺陷到超敏反应(痛觉过敏或异常性疼痛)以及感觉异常例如麻刺痛。实例包括但不限于糖尿病神经病变、疱疹后神经痛、脊髓损伤疼痛、幻肢(截肢术后)疼痛和中风后中枢性痛。

本文所公开的实施方案包括用于治疗神经性疼痛的组合物和方法。

炎性疼痛是由组织炎症的位点处释放的多种介质对伤害性疼痛通路的活化和敏化作用导致。被认为是关键角色的介质是促炎性细胞因子，例如IL-1-α、IL-1-β、IL-6和TNF-α，趋化因子，活性氧簇，血管活性胺，脂质，ATP，酸，以及其他由浸润性白细胞、血管内皮细胞或组织驻留肥大细胞释放的因子。实例包括阑尾炎、类风湿关节炎、炎性肠病和带状疱疹。

本文所公开的实施方案包括用于治疗炎性疼痛的组合物和方法。

分类的临床意义：病理过程永远不会孤立发生，因此可能存在不止一种机制，并且在单个患者中可能检测到不止一种类型的疼痛；例如，已知炎性机制与神经性疼痛有关。存在公认的不容易分类的疼痛障碍。尽管对用于那些障碍的具体疗法是公知的(其包括癌症疼痛、偏头痛和其他原发性头痛以及纤维肌痛类型的广泛性疼痛)，但人们对它们潜在机制的理解仍然是初步的。

疼痛强度：可以大致分类为：轻度、中度和重度。通常使用数字量表来评定疼痛强度，其中0＝无疼痛，而10是可想象的最严重的疼痛：

a.中度：5/10至6/10

b.中度：5/10至6/10

c.重度：>7/10

本文所公开的实施方案包括用于治疗轻度、中度或重度疼痛的组合物和方法。

时程：疼痛持续时间

a.急性疼痛：持续时间少于3至6个月的疼痛

b.慢性疼痛：持续3至6个月以上的，或持续超过急性疾病过程的，或组织愈合后完成的疼痛。

c.急-加-慢性疼痛：急性疼痛发作叠加在潜在的慢性疼痛上。

本文所公开的实施方案包括用于治疗轻度、中度或重度急性、慢性或急-加-慢性疼痛的组合物和方法。

所公开的实施方案可包括躯体疼痛的治疗，躯体疼痛通常是由在体表或肌肉骨骼组织中的疼痛受体的活化而导致的疼痛。

所公开的实施方案可包括内脏疼痛的治疗，所述内脏疼痛是在内脏器官受到损害或损伤时导致的。内脏疼痛是由胸部、腹部或骨盆区域中的疼痛受体活化而导致的。内脏疼痛通常是模糊不清的且不能明确定位，且常常被描述为压力样、深挤压(deep squeezing)、钝感或弥漫性。内脏疼痛可以是由内脏器官(例如胃、肾脏、胆囊、膀胱和肠道)的问题导致。内脏疼痛还可以是由腹肌和腹壁的问题(例如痉挛)导致。

所公开的实施方案可包括治疗由脊髓和/或周围神经的损伤或机能障碍导致的神经性疼痛。神经性疼痛通常是灼痛、麻刺痛、闪痛、刺痛或“发麻”感觉。这种类型的疼痛通常发生在受伤的几天、几周或几个月内，并倾向于波动的频率和强度发生。神经性疼痛是弥漫性的且以损伤水平或低于损伤水平的水平发生，最常见发生在腿、背部、脚、大腿和脚趾，尽管其也可以发生在臀部(buttocks)、髋部(hips)、上背部、手臂、手指、腹部和颈部。

实施方案可用于治疗例如头痛、牙痛等。

所公开的实施方案可中断免疫系统通路，例如炎症通路。

所公开的实施方案可包括治疗感染，例如细菌或真菌感染。

坏死性软组织感染是细菌和真菌皮肤感染的一个大类。描述性术语基于感染的位置、深度和程度而变化(例如，富尼埃坏疽(Fournier's gangrene)[坏死性会阴感染]，坏死性筋膜炎[深皮下感染])。根据浸润深度，坏死性软组织感染可导致广泛的局部组织破坏、组织坏死、全身毒性甚至死亡。尽管存在外科手术的进步和抗生素的引入，但报道的坏死性软组织感染的死亡率范围为从6％到高达76％。

本文公开了用于治疗坏死性软组织感染的方法和组合物。本文所公开的实施方案可在感染期间有效地限制或阻断CGRP的神经元释放，并且限制或预防细菌坏死性病变。例如，所公开的实施方案可包括将所公开的组合物给药至细菌坏死性病变附近，例如由化脓性链球菌引起的那些病变。

所公开的实施方案可包括低于抑制或预防肌肉收缩所需剂量的剂量的给药。

在一些实施方案中，本文所公开的组合物可包含速效的肉毒杆菌毒素，例如E型肉毒杆菌。

在一些实施方案中，本文所公开的组合物可包含快速恢复的肉毒杆菌毒素，例如E型肉毒杆菌。

在一些实施方案中，本文所公开的组合物可包含速效的、快速恢复的肉毒杆菌毒素，例如E型肉毒杆菌。

定义

“给药(Administration)”或“给予(to administer)”意指将药物组合物或活性成分供给(即给予)受试者的步骤。本文所公开的药物组合物可通过许多合适的途径给予。例如，肌内、皮内、皮下给药、鞘内给药、腹膜内给药、局部(透皮)、滴注和植入(例如，缓释设备，如聚合物植入物或微渗透泵)都可是适当的给药途径。

“缓解”意指疼痛、头痛或病症或障碍的任何症状或病因的发生减少。因此，缓解包括一定的减少、显著减少、接近全部减少和全部减少。

术语“氨基酸”意指天然存在的或合成的氨基酸以及功能类似于天然存在的氨基酸的氨基酸类似物、立体异构体和氨基酸模拟物。该定义包括天然氨基酸、非天然氨基酸和氨基酸衍生物，天然氨基酸例如：(1)组氨酸(His；H)(2)异亮氨酸(Ile；I)(3)亮氨酸(Leu；L)(4)赖氨酸(Lys；K)(5)蛋氨酸(Met；M)(6)苯丙氨酸(Phe；F)(7)苏氨酸(Thr；T)(8)色氨酸(Trp；W)(9)缬氨酸(Val；V)(10)精氨酸(Arg；R)(11)半胱氨酸(Cys；C)(12)谷氨酰胺(Gln；Q)(13)甘氨酸(Gly；G)(14)脯氨酸(Pro；P)(15)丝氨酸(Ser；S)(16)酪氨酸(Tyr；Y)(17)丙氨酸(Ala；A)(18)天冬酰胺(Asn；N)(19)天冬氨酸(Asp；D)(20)谷氨酸(Glu；E)(21)硒代半胱氨酸(Sec；U)；非天然氨基酸：(a)瓜氨酸(Cit)；(b)胱氨酸；(c)γ-氨基丁酸(GABA)；(d)鸟氨酸(Orn)；(f)茶氨酸；(g)同型半胱氨酸(Hey)；(h)甲状腺素(Thx)；氨基酸衍生物例如甜菜碱；肉毒碱；肌肽肌酸；羟色氨酸；羟脯氨酸(Hyp)；N-乙酰半胱氨酸；S-腺苷甲硫氨酸(SAM-e)；牛磺酸；酪胺。

“无动物蛋白质”意指不存在血液来源的、血液汇集的和其它动物来源的产物或化合物。“动物”意指哺乳动物(例如人类)、鸟、爬行动物、鱼、昆虫、蜘蛛或其它动物物种。“动物”排除微生物，例如细菌。因此，无动物蛋白的药物组合物可包括肉毒杆菌神经毒素。例如，“无动物蛋白质”的药物组合物意指实质上不含或基本上不含或完全不含血清来源的白蛋白、明胶和其它动物来源的蛋白质(诸如免疫球蛋白)的药物组合物。无动物蛋白质的药物组合物的实例是包含以下或由其组成的药物组合物：肉毒杆菌毒素(作为活性成分)和合适的多糖作为稳定剂或赋形剂。

“肉毒杆菌毒素”或“肉毒杆菌神经毒素”意指由肉毒梭菌(Clostridiumbotulinum)产生的神经毒素，以及由非梭菌属种重组制备的肉毒杆菌毒素(或其轻链或重链)。如本文中所用，短语“肉毒杆菌毒素”包括血清型A、B、C、D、E、F、G、H和X型肉毒杆菌毒素以及它们的亚型，嵌合毒素(例如BoNT/DC和BoNT/CD)，以及其亚型的任何其它类型，或在每种情况下任何前述类型的任何再工程化的蛋白质、类似物、衍生物、同源物、部分、亚部分、变体或形式。如本文中所用，“肉毒杆菌毒素”还包括“经修饰的肉毒杆菌毒素”。如本文中所用，其他“肉毒杆菌毒素”还包括肉毒杆菌毒素复合物(例如300kDa、600kDa和900kDa复合物)，以及未与所述复合蛋白缔合(unassociated)的肉毒杆菌毒素的神经毒性组分(150kDa)。“经纯化的肉毒杆菌毒素”意指与其他蛋白质和杂质分离或基本上分离的纯的肉毒杆菌毒素或肉毒杆菌毒素复合物，所述其他蛋白质和杂质可能在从培养或发酵方法中获得的肉毒杆菌毒素时与肉毒杆菌毒素同时存在。因此，经纯化的肉毒杆菌毒素可移除至少95％，更优选至少99％的非-肉毒杆菌毒素蛋白质和杂质。

“梭菌毒素”是指由梭菌毒素菌株产生的任何毒素，其可执行整个细胞机制，其中梭菌毒素毒化细胞并且包括梭菌毒素与低或高亲和力梭菌毒素受体的结合、毒素/受体复合物的内化、梭菌毒素轻链至细胞质中的易位和梭菌毒素底物的酶促修饰。梭菌毒素的非限制性实例包括肉毒杆菌毒素，例如BoNT/A、BoNT/B、BoNT/C₁、BoNT/D、BoNT/CD、BoNT/DC、BoNT/E、BoNT/F、BoNT/G、BoNT/H(又名FA或HA型)、BoNT/X、eBoNT/J、破伤风毒素(TeNT)、巴氏毒素(BaNT)和丁酸毒素(BuNT)。术语“梭菌毒素”不包括不是神经毒素的BoNT/C₂细胞毒素和BoNT/C₃细胞毒素。术语梭菌毒素还包括单独的约150kDa的梭菌毒素(即不含NAP)。梭菌毒素包括天然存在的梭菌毒素变体，例如梭菌毒素同种型和梭菌毒素亚型；非天然存在的梭菌毒素变体，例如保守性梭菌毒素变体、非保守性梭菌毒素变体、梭菌毒素嵌合变体及其活性梭菌毒素片段或其任意组合。梭菌毒素还包括梭菌毒素复合物，其是指包含梭菌毒素和非毒素相关蛋白(NAP)的复合物，例如肉毒杆菌毒素复合物、破伤风毒素复合物、巴氏毒素复合物和丁酸毒素复合物(Butyricum toxin complex)。梭菌毒素复合物的非限制性实例包括由肉毒梭菌产生的那些复合物，例如900-kDa BoNT/A复合物、500-kDa BoNT/A复合物、300-kDa BoNT/A复合物、500-kDa BoNT/B复合物、500-kDa BoNT/C₁复合物、500-kDaBoNT/D复合物、300-kDa BoNT/D复合物、300-kDa BoNT/E复合物和300-kDa BoNT/F复合物。

当应用于生物活性成分时，“有效量”意指通常足以在受试者中实现所需变化的成分的量。例如，当所需效果是瘢痕形成的减少时，所述成分的有效量是至少引起瘢痕形成的实质性减少并且不会导致显著毒性的量。在该实施方案的其它方面，梭菌毒素活性成分的治疗有效浓度使与所治疗的区域(aliment)相关的症状减少例如至多10％、至多20％、至多30％、至多40％、至多50％、至多60％、至多70％、至多80％、至多90％或至多100％。

如本文中所用，“速效”是指与由例如A型肉毒杆菌神经毒素(例如onabotulinumtoxinA)产生的效果相比，在患者中更快地产生效果的肉毒杆菌毒素。例如，速效肉毒杆菌毒素的效果可在12小时、24小时或36小时内产生。因此，相对于速效毒素例如E型，A型肉毒杆菌毒素可被分类为“慢效”肉毒杆菌毒素。在一些情况下，慢效肉毒杆菌毒素被称为“中效”毒素。在一些实施方案中，速效肉毒杆菌毒素在其给药后6小时、12小时、24小时或36小时内产生可测量的治疗效果，和/或观察到其效果比由onabotulinumtoxinA产生的治疗效果快至少约50％。

如本文中所用，“快速恢复”是指与由例如A型肉毒杆菌神经毒素(例如onabotulinumtoxinA)产生的效果相比，其效果在患者中降低得更快的肉毒杆菌毒素。在一些实施方案中，快速恢复的肉毒杆菌毒素的治疗效果在其给药后约3个月、2个月或6周内降低，并且其效果的降低比由onabotulinumtoxinA产生的效果减小快约50％。例如，快速恢复的肉毒杆菌毒素的效果可以在例如120小时、150小时、300小时、350小时、400小时、500小时、600小时、700小时、800小时等内降低。已知A型肉毒杆菌毒素可具有最长达12个月的功效(European J.Neurology 6(Supp 4):S111-S1150:1999)，且在一些情况下长达27个月，当用于治疗腺体，例如在多汗症(hyperhydrosis)的治疗中。参见例如Bushara K.，Botulinum toxin and rhinorrhea,Otolaryngol Head Neck Surg 1996；114(3):507和The Laryngoscope 109:1344-1346:1999。然而，肌内注射A型肉毒杆菌神经毒素的通常持续时间通常为约3至4个月。因此，相对于快速恢复的毒素(例如E型)，A型肉毒杆菌毒素(例如onabotulinumtoxinA)可被分类为“慢恢复”或“长效”肉毒杆菌毒素。

如本文中所用，“中效”是指与速效毒素相比产生效果更慢的肉毒杆菌毒素。

“局部给药”意指在动物身体上或动物身体内的位点处或在其附近直接给予药物，所述位点处需要所述药物的生物学效果，例如经由肌内或皮内或皮下注射或局部给药。局部给药排除全身的给药途径，例如静脉内或口服给药。局部给药是一种将药物制剂施用于患者的局部给药类型。

“神经毒素”意指对神经细胞表面受体具有特异性亲和力的生物活性分子。神经毒素包括梭菌毒素，所述梭菌毒素为纯毒素以及与一种或多种非毒素的毒素相关蛋白复合的毒素。

“患者”意指接受医疗或兽医护理的人类或非人类受试者。

“药物组合物”意指包含活性药物成分(例如，梭菌毒素活性成分如肉毒杆菌毒素)和至少一种额外成分(例如，稳定剂或赋形剂等)的组合物。因此，药物组合物是适于对受试者(例如人类患者)进行诊断或治疗性给药的制剂。药物组合物可以为例如冻干或真空干燥状态、冻干或真空干燥药物组合物复原之后形成的溶液，或者为不需要复原的溶液或固体。如上所述，药物组合物可为液体或固体。药物组合物可为无动物蛋白质的。

“准备”手术位点是指给予本文所公开的组合物以减少切口区域中的肌肉张力。

如本文中所用，“补充给药”是指在初次神经毒素给药之后进行的肉毒杆菌给药。

“治疗制剂”意指可用于治疗并由此减轻障碍或疾病和/或其相关症状(例如特征为周围肌肉活动的障碍或疾病)的制剂。

“治疗有效浓度”、“治疗有效量”、“有效量”、“有效剂量”和“治疗有效剂量”是指达到所需治疗效果需要的试剂(例如肉毒杆菌毒素或包含肉毒杆菌毒素的药物组合物)的最小剂量，以及包括足以减少与所治疗的疾病、障碍或病症相关的症状而不导致明显的消极或不良副作用的剂量。

“治疗(treat)、治疗(treating)”或“治疗(treatment)”意指疾病、障碍或病症的缓解或减少(其包括一定的减少、显著减少、接近全部减少和全部减少)，消除或预防(暂时或永久)，从而达到所需的治疗或美容结果，例如通过治愈受伤或受损的组织，或通过改变、变化、增强、改善、改进和/或美化已存在的或觉察到的疾病、障碍或病症。

“单位”或“U”意指标准化为具有与市售A型肉毒杆菌神经毒素的单位等同的神经肌肉阻断效果的活性肉毒杆菌神经毒素的量。

如本文中所用，“伤口”是指皮肤的破坏，例如由损伤或故意造成的皮肤破坏。

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除非本文另有说明或与上下文明显矛盾，否则在描述本公开内容的上下文中使用的术语“一(a)”、“一个(an)”、“所述(the)”和类似指代物(特别是在以下权利要求的上下文中)应解释为涵盖单数和复数。除非本文另有说明或与上下文明显矛盾，否则本文描述的所有方法可以以任何合适的顺序执行。本文提供的任何和所有实例或示例性语言(例如“如”)的使用仅旨在更好地阐明本公开内容，并不对原本要求保护的范围构成限制。本说明书中的任何语言都不应被解释为表示，本文所公开的实施方案的实践所必需的任何不要求保护的元素。

神经毒素组合物

本文所公开的实施方案包含神经毒素组合物，例如快速恢复的神经毒素。这样的神经毒素可以任何药学上可接受的形式配制成任何药学上可接受的制剂。神经毒素也可以任何制造商提供的任何药学上可接受的形式使用。

神经毒素可由梭菌细菌制备，例如肉毒梭菌(Clostridium botulinum)，丁酸梭菌(Clostridium butyricum)或巴氏梭菌(Clostridium beratti)细菌。另外，神经毒素可以是经修饰的神经毒素；即与天然或野生型神经毒素相比，至少一个氨基酸被缺失、修饰或替代的神经毒素。此外，神经毒素可以是重组产生的神经毒素或其衍生物或片段。

图1描绘了肉毒杆菌神经毒素(BoNT)的一级结构。图2A-2D是BoNT/E(图2A，2C)和BoNT/B(图2B，2D)的示意图和带状图示。催化、易位结构域和结合结构域分别标记为CD、TD和BD。

在一些实施方案中，所公开的E型肉毒杆菌神经毒素(BoNT/E)组合物与A型相比具有40％的氨基酸同源性，并且它们共有相同的由以下2条链组成的基本结构域结构：通过二硫键连接的100kDa的重链(HC)和50kDa轻链(LC)，参见例如Whelan et al.,The completeamino acid sequence of the Clostridium botulinum type-E neurotoxin,derived bynucleotide-sequence analysis of the encoding gene,Eur.J.Biochem.204(2):657-667(1992)。HC含有受体结合结构域和易位结构域，而LC含有突触小体相关蛋白(SNAP)的酶促活性。结构域结构是所有肉毒杆菌神经毒素血清型共有的相同结构。

在所公开的实施方案中，神经毒素被配制成单位剂型；例如，它可以在小瓶中以无菌溶液的形式提供，或者以含有用于以合适的载物(例如注射用的盐水)复原的冻干粉末的小瓶或囊剂形式提供。

在一些实施方案中，肉毒杆菌毒素被配制在含有盐水和巴氏灭菌的人血清白蛋白的溶液中，其使毒素稳定并通过非特异性吸附使损失最小化。可将溶液无菌过滤(0.2μm过滤器)，装入单个小瓶中，然后真空干燥得到无菌冻干粉末。在使用中，可通过添加无菌的无防腐剂的生理盐水(注射用0.9％氯化钠)来复原粉末。

在一个实施方案中，E型肉毒杆菌以5mL小瓶中的注射用无菌溶液提供，其在pH6.0下，标称浓度(nominal concentration)为20ng/mL溶于0.03M磷酸钠、0.12M氯化钠和1mg/mL人血清白蛋白(HSA)中。在另一个实施方案中，E型肉毒杆菌以包含磷酸钠、氯化钠和HAS的液体制剂形式提供。在另一个实施方案中，E型肉毒杆菌以包含表面活性剂和二糖的冻干或液体制剂形式提供。

尽管所述组合物可仅包含单独一种类型的神经毒素，例如E型肉毒杆菌，但是所公开的组合物可包含两种或更多种类型的神经毒素，其可提供对障碍的增强的治疗效果。例如，给予患者的组合物可包含A型和E型肉毒杆菌。给予含有两种不同神经毒素的单独一种组合物可以使每种神经毒素的有效浓度低于将单独一种神经毒素给予所述患者时的有效浓度，同时仍实现所需治疗效果。给予患者的组合物还可含有与一种神经毒素或多种神经毒素组合的其他药物活性成分，例如蛋白受体或离子通道调节剂。这些调节剂可有助于减少多种神经元之间的神经传递。例如，组合物可含有增强由GABA_A受体介导的抑制效果的γ氨基丁酸(GABA)A型受体调节剂。GABA_A受体通过有效地分流流过细胞膜的电流来抑制神经元活性。GABA_A受体调节剂可增强GABA_A受体的抑制效果，并减少来自神经元的电信号传递或化学信号传递。GABA_A受体调节剂的实例包括苯二氮卓类，例如地西泮(diazepam)、奥沙西泮(oxaxepam)、劳拉西泮(lorazepam)、普拉西泮(prazepam)、阿普唑仑(alprazolam)、哈拉西泮(halazeapam)、氯氮平(chordiazepoxide)和二甲氯氮卓(chlorazepate)。组合物还可包含降低由谷氨酸受体介导的兴奋效果的谷氨酸受体调节剂。谷氨酸受体调节剂的实例包括抑制通过AMPA、NMDA和/或红藻氨酸类型的谷氨酸受体的电流的试剂。

治疗的方法

本文所公开的方法可包括将速效神经毒素给予患者。在一个优选的实施方案中，所述神经毒素为E型肉毒杆菌。

本文所公开的方法可包括将速效神经毒素补充给予患者。包括补充给药的实施方案还可包括医生或患者对在先的神经毒素给药的结果的评估。

在一些实施方案中，速效神经毒素的给药是在外科手术操作前进行。在一些实施方案中，给药在以下时间进行：例如手术前6小时内、手术前5小时内、手术前4小时内、手术前3小时内、手术前2小时内、手术前60分钟内、手术前50分钟内、手术前40分钟内、手术前30分钟内、手术前20分钟内、手术前10分钟内、手术前5分钟内、手术前2分钟内等。

在替代的实施方案中，速效神经毒素的给药是与外科手术操作同时进行。

在其他实施方案中，速效神经毒素的给药是在外科手术操作后进行。例如，给药是在以下时间进行：手术后1分钟内、手术后2分钟内、手术后3分钟内、手术后4分钟内、手术后5分钟内、手术后6分钟内、手术后7分钟内、手术后8分钟内、手术后9分钟内、手术后10分钟内、手术后20分钟内、手术后30分钟内、手术后40分钟内、手术后50分钟内、手术后60分钟内、手术后90分钟内、手术后120分钟内、手术后180分钟内、手术后240分钟内、手术后300分钟内等。在一些其他实施方案中，给药可在手术后1至3天内进行。在另一个实施方案中，给药可在手术后3个月内进行。

在包括补充给药的实施方案中，初次神经毒素给药的结果的评估可在以下时间进行：例如，初次给药的6个小时内、初次给药的8个小时内、初次给药的10个小时内、初次给药的12个小时内、初次给药的14个小时内、初次给药的16个小时内、初次给药的18个小时内、初次给药的24个小时内、初次给药的30个小时内、初次给药的36个小时内、初次给药的42个小时内、初次给药的48个小时内、初次给药的54个小时内、初次给药的60个小时内、初次给药的66个小时内、初次给药的72个小时内、初次给药的78个小时内、初次给药的84个小时内、初次给药的90个小时内、初次给药的96个小时内、初次给药的102个小时内、初次给药的108个小时内、初次给药的114个小时内、初次给药的120个小时内、初次给药的1周内、初次给药的2周内、初次给药的3周内、初次给药的4周内、初次给药的5周内、初次给药的6周内、初次给药的7周内、初次给药的8周内、初次给药的9周内、初次给药的10周内、初次给药的11周内、初次给药的12周内等。

在包括补充给药的实施方案中，补充剂量的给药可在以下时间进行：例如评估的6小时内、评估的8小时内、评估的10小时内、评估的12小时内、评估的14小时内、评估的16小时内、评估的18小时内、评估的24小时内、评估的30小时内、评估的36小时内、评估的42小时内、评估的48小时内、评估的54小时内、评估的60小时内、评估的66小时内、评估的72小时内、评估的78小时内、评估的84小时内、评估的90小时内、评估的96小时内、评估的102小时内、评估的108小时内、评估的114小时内、评估的120小时内、评估的1周内、评估的2周内、评估的3周内、评估的4周内、评估的5周内、评估的6周内、评估的7周内、评估的8周内、评估的9周内、评估的10周内、评估的11周内、评估的12周内等。

在一些实施方案中，补充给药自身可在以下时间进行：例如，在速效神经毒素的初次给药的6小时内、初次给药的8个小时内、初次给药的10个小时内、初次给药的12个小时内、初次给药的14个小时内、初次给药的16个小时内、初次给药的18个小时内、初次给药的24个小时内、初次给药的30个小时内、初次给药的36个小时内、初次给药的42个小时内、初次给药的48个小时内、初次给药的54个小时内、初次给药的60个小时内、初次给药的66个小时内、初次给药的72个小时内、初次给药的78个小时内、初次给药的84个小时内、初次给药的90个小时内、初次给药的96个小时内、初次给药的102个小时内、初次给药的108个小时内、初次给药的114个小时内、初次给药的120个小时内、初次给药的1周内、初次给药的2周内、初次给药的3周内、初次给药的4周内、初次给药的5周内、初次给药的6周内、初次给药的7周内、初次给药的8周内、初次给药的9周内、初次给药的10周内、初次给药的11周内、初次给药的12周内等。在一些实施方案中，补充给药可在例如初次给药的3至6个月内进行。在一些实施方案中，补充给药可与初次给药同时进行。

本文所公开的方法可提供快速起效的效果(例如，使用速效神经毒素)。例如，所公开的实施方案可在以下时间减少在手术切口附近的肌肉活动：例如，给药后30分钟内、给药后45分钟内、给药后60分钟内、给药后75分钟内、给药后90分钟内、给药后2小时内、给药后3小时内、给药后4小时内、给药后5小时内、给药后6小时内、给药后7小时内、给药后8小时内、给药后9小时内、给药后10小时内、给药后11小时内、给药后12小时内、给药后13小时内、给药后14小时内、给药后15小时内、给药后16小时内、给药后17小时内、给药后18小时内、给药后19小时内、给药后20小时内、给药后21小时内、给药后22小时内、给药后23小时内、给药后24小时内、给药后30小时内、给药后36小时内、给药后42小时内、给药后48小时内、给药后3天内、给药后4天内、给药后5天内、给药后6天内、给药后7天内等。

本文所公开的方法可提供在较短的持续时间内的肌肉活动减少(例如，使用快速恢复的神经毒素)。例如，所公开的实施方案可提供在以下时间内消退的肌肉活动减少：例如，给药后3天内、给药后4天内、给药后5天内、给药后6天内、给药后7天内、给药后8天内、给药后9天内、给药后10天内、给药后11天内、给药后12天内、给药后13天内、给药后14天内、给药后15天内、给药后16天内、给药后17天内、给药后18天内、给药后19天内、给药后20天内、给药后21天内、给药后22天内、给药后23天内、给药后24天内、给药后25天内、给药后26天内、给药后27天内、给药后28天内、给药后29天内、给药后30天内、给药后45天内、给药后60天内、给药后75天内、给药后90天内、给药后105天内等。

副作用可与肉毒杆菌注射相关。与常规神经毒素治疗相比(例如使用更长效的神经毒素(例如A型)的治疗)，所公开的实施方案可提供产生更少的副作用或持续时间缩短的副作用的神经毒素治疗。

例如，所公开的实施方案可使以下情况更少(或持续时间更短)：复视或视力模糊、眼睑麻痹(受试者不能完全睁开眼睑)、面部肌肉运动丧失、声嘶、排尿控制丧失、呼吸急促、吞咽困难、说话困难、死亡等。

所公开的方法包括向易于形成瘢痕的区域给药，例如手术切口附近的区域，或皮肤的任何损伤(例如创伤性损伤)附近的区域。所公开的实施方案包括向易于形成瘢痕的区域附近的肌肉(例如骨骼肌组织或平滑肌组织)给药。

此外，所公开的实施方案可提供具有更确定的持续时间的减少的肌肉活动。例如，使用更长效的神经毒素，效果持续时间的20％差异会导致有效持续时间的一个月差异。使用所公开的快速恢复的神经毒素，这种20％的差异在有效持续时间方面产生的差异较不明显。

所公开的速效神经毒素组合物可使用针或无针装置注射到个体中。在某些实施方案中，该方法包括将组合物皮下注射到个体中。例如，给药可包括通过不大于约30号的针注射组合物。在某些实施方案中，该方法包括给予包含E型肉毒杆菌毒素的组合物。

组合物的注射可通过注射器、导管、针和其他注射手段进行。注射可在需要治疗的哺乳动物身体的任何区域上进行，包括但不限于面部、颈部、躯干、手臂、手、腿和足。注射可在特定区域的任何位置中，例如表皮、真皮、脂肪、肌肉或皮下层。

例如，适合于给予所公开的组合物的骨骼肌可包括图3A-3B所示的示意图的任何肌肉或肌肉的组合。

给药可包括注射到图4的示意图所示的一条或多条神经中或附近。

适合于给药所公开的组合物的平滑肌可包括以下中的任一个：血管壁、胃壁、输尿管、肠、主动脉中(血管中膜层)、眼虹膜、前列腺、胃肠道、呼吸道、小动脉、细动脉、生殖道(两性)、静脉、肾脏的肾小球(称为肾小球系膜细胞)、膀胱、子宫、皮肤的竖毛肌、睫状肌、括约肌、气管、胆管等。

根据所公开的方法的注射频率和注射量可以基于所治疗的具体区域的性质和位置来确定。然而，在某些情况下，可能需要重复注射以实现最佳结果。每种具体情况下的注射频率和注射量可由本领域普通技术人员确定。

尽管提供了给药途径和剂量的实例，但是合适的给药途径和剂量通常由主治医师根据具体病例确定。对于本领域普通技术人员而言，这种确定是常规的(例如，参见Harrison's Principles of Internal Medicine(1998),edited by Anthony Fauci etal.,14th edition,published by McGraw Hill)。例如，根据本公开的发明的梭菌神经毒素的给药途径和剂量可基于标准(例如所选择的神经毒素的溶解度特性以及所治疗的病症的强度和范围)来选择。

速效神经毒素的给药量可以为约10^-3U/kg至约35U/kg。在一个实施方案中，神经毒素的给药量为约10^-2U/kg至约25U/kg。在另一个实施方案中，神经毒素的给药量为约10^-1U/kg至约15U/kg。在另一个实施方案中，神经毒素的给药量为约1U/kg至约10U/kg。在许多情况下，约1单位至约500单位的神经毒素(例如E型肉毒杆菌)的给药提供有效的治疗缓解。在一个实施方案中，可使用约5单位至约200单位的神经毒素(例如E型肉毒杆菌)；并且在另一个实施方案中，可将约10单位至约100单位的神经毒素(例如E型肉毒杆菌)局部给药到靶组织例如肌肉中。

在一些实施方案中，给药可包括以下剂量的神经毒素：约10单位的神经毒素、或约20单位的神经毒素、或约30单位的神经毒素、或约40单位的神经毒素、或约50单位的神经毒素、或约60单位的神经毒素、或约70单位的神经毒素、或约80单位的神经毒素、或约90单位的神经毒素、或约100单位的神经毒素、或约110单位的神经毒素、或约120单位的神经毒素、或约130单位的神经毒素、或约140单位的神经毒素、或约150单位的神经毒素、或约160单位的神经毒素、或约170单位的神经毒素、或约180单位的神经毒素、或约190单位的神经毒素、或约200单位的神经毒素、或约210单位的神经毒素、或约220单位的神经毒素、或约230单位的神经毒素、或约240单位的神经毒素、或约250单位的神经毒素、或约260单位的神经毒素、或约270单位的神经毒素、或约280单位的神经毒素、或约290单位的神经毒素、或约290单位的神经毒素、或约300单位的神经毒素、或约310单位的神经毒素、或约320单位的神经毒素、或约330单位的神经毒素、或约340单位的神经毒素、或约350单位的神经毒素、或约360单位的神经毒素、或约370单位的神经毒素、或约380单位的神经毒素、或约390单位的神经毒素、或约400单位的神经毒素、或约410单位的神经毒素、或约420单位的神经毒素、或约430单位的神经毒素、或约440单位的神经毒素、或约450单位的神经毒素、或约460单位的神经毒素、或约470单位的神经毒素、或约480单位的神经毒素、或约490单位的神经毒素、或约500单位的神经毒素等。

在一些实施方案中，给药可包括以下剂量的神经毒素：约0.1纳克(ng)的神经毒素、0.2ng的神经毒素、0.3ng的神经毒素、0.4ng的神经毒素、0.5ng的神经毒素、0.6ng的神经毒素、0.7ng的神经毒素、0.8ng的神经毒素、0.9ng的神经毒素、1.0ng的神经毒素、1.1ng的神经毒素、1.2ng的神经毒素、1.3ng的神经毒素、1.4ng的神经毒素、1.5ng的神经毒素、1.6ng的神经毒素、1.7ng的神经毒素、1.8ng的神经毒素、1.9ng的神经毒素、2.0ng的神经毒素、2.1ng的神经毒素、2.2ng的神经毒素、2.3ng的神经毒素、2.4ng的神经毒素、2.5ng的神经毒素、2.6ng的神经毒素、2.7ng的神经毒素、2.8ng的神经毒素、2.9ng的神经毒素、3.0ng的神经毒素、3.1ng的神经毒素、3.2ng的神经毒素、3.3ng的神经毒素、3.4ng的神经毒素、3.5ng的神经毒素、3.6ng的神经毒素、3.7ng的神经毒素、3.8ng的神经毒素、3.9ng的神经毒素、4.0ng的神经毒素、4.1ng的神经毒素、4.2ng的神经毒素、4.3ng的神经毒素、4.4ng的神经毒素、4.5ng的神经毒素、5ng的神经毒素、6ng的神经毒素、7ng的神经毒素、8ng的神经毒素、9ng的神经毒素、10ng的神经毒素等。

在一些实施方案中，给药可包括以下剂量的神经毒素：约0.1纳克(ng)的神经毒素至20ng的神经毒素、约1ng的神经毒素至19ng的神经毒素、约2ng的神经毒素至18ng的神经毒素、约3ng的神经毒素至17ng的神经毒素、约4ng的神经毒素至16ng的神经毒素、约5ng的神经毒素至15ng的神经毒素、约6ng的神经毒素至14ng的神经毒素、约7ng的神经毒素至13ng的神经毒素、约8ng的神经毒素至12ng的神经毒素、约9ng的神经毒素至11ng的神经毒素等。在实施方案中，给药可包括以下剂量的神经毒素的一次或多次注射：约0.1纳克(ng)的神经毒素、0.2ng的神经毒素、0.3ng的神经毒素、0.4ng的神经毒素、0.5ng的神经毒素、0.6ng的神经毒素、0.7ng的神经毒素、0.8ng的神经毒素、0.9ng的神经毒素、1.0ng的神经毒素、1.1ng的神经毒素、1.2ng的神经毒素、1.3ng的神经毒素、1.4ng的神经毒素、1.5ng的神经毒素、1.6ng的神经毒素、1.7ng的神经毒素、1.8ng的神经毒素、1.9ng的神经毒素、2.0ng的神经毒素、2.1ng的神经毒素、2.2ng的神经毒素、2.3ng的神经毒素、2.4ng的神经毒素、2.5ng的神经毒素、2.6ng的神经毒素、2.7ng的神经毒素、2.8ng的神经毒素、2.9ng的神经毒素、3.0ng的神经毒素、3.1ng的神经毒素、3.2ng的神经毒素、3.3ng的神经毒素、3.4ng的神经毒素、3.5ng的神经毒素、3.6ng的神经毒素、3.7ng的神经毒素、3.8ng的神经毒素、3.9ng的神经毒素、4.0ng的神经毒素、4.1ng的神经毒素、4.2ng的神经毒素、4.3ng的神经毒素、4.4ng的神经毒素、4.5ng的神经毒素、5ng的神经毒素、6ng的神经毒素、7ng的神经毒素、8ng的神经毒素、9ng的神经毒素、10ng的神经毒素等。

在一些实施方案中，给药可包括以下剂量的神经毒素的一次或多次注射：约0.1纳克(ng)的神经毒素至20ng的神经毒素、约1ng的神经毒素至19ng的神经毒素、约2ng的神经毒素至18ng的神经毒素、约3ng的神经毒素至17ng的神经毒素、约4ng的神经毒素至16ng的神经毒素、约5ng的神经毒素至15ng的神经毒素、约6ng的神经毒素至14ng的神经毒素、约7ng的神经毒素至13ng的神经毒素、约8ng的神经毒素至12ng的神经毒素、约9ng的神经毒素至11ng的神经毒素等。

然而，最终，毒素的给药量及其给药频率将由负责治疗的医师酌情决定，并且与安全性问题和毒素产生的效果相称。

在一些实施方案中，给药可包括一次或多次注射，例如基本上沿着切口位点或线进行注射。在一些实施方案中，给药可包括以具体模式进行的注射，例如W模式和X模式、Z模式、星形模式、圆形模式、半圆形模式、正方形模式、长方形模式、新月形模式或其组合。

进行了一项研究，其中将BoNT/E给予接受眉间纹(glabellar lines)治疗的人类患者，以评估BoNT/E在人类中的起效、安全性和耐受性。该研究记载于实施例1中。如图5所示出，将BoNT/E在五个注射点给药到降眉间肌和皱眉肌。BoNT/E提供了对眉间纹的严重程度的改善，具有快速的起效并具有良好的安全性和耐受性特性。

进行了另一项研究，其中将BoNT/E给予术后疼痛的动物模型中的大鼠，以评估BoNT/E在减少术后疼痛方面的起效和功效。如实施例9中所述，在麻醉的大鼠中，制作穿过后足的足底面的皮肤、筋膜和肌肉的1cm的纵向切口。未受伤的足用作对照足。手术后二十四小时，切口产生机械性痛觉超敏(mechanical allodynia)，其是使用电子Von Fret测试定量的。手术前24小时，将三个剂量的BoNT/E给药到受伤的足和对照足的后足。手术后24小时用电子Von Frey测试评估疼痛阈值。在一个组中，吗啡用于评估可达到的最大疼痛降低。结果示于图8且与载体治疗组相比，其表示为增加(+)或减少(-)。BoNT/E提供了疼痛阈值的显著增加，这证明了BoNT/E的疼痛降低能力，如图8所示。

在本文所述的实施方案中可使用控释系统，以在特定时间段内以预定速率在体内递送神经毒素。通常，释放速率是由系统的设计确定并且在很大程度上独立于环境条件(例如pH)。可以在数年的时间段内递送药物的控释系统是已知的。相反地，持续释放系统通常在24小时或更短的时间内递送药物，且环境因素可影响释放速率。因此，神经毒素从植入的控释系统(“植入物”)的释放速率是载体植入物材料和药物本身的理化特性的函数。通常，植入物是由惰性材料制成的，该惰性材料几乎不会或不会引起宿主应答。

控释系统可包括掺入载体中的神经毒素。载体可为聚合物或生物-陶瓷材料。控释系统可被注射、插入或植入到患者身体的选定位置，并在其中存在较长的时间，在此期间，神经毒素由植入物以提供所需治疗功效的方式和浓度释放。

聚合材料可由于扩散、化学反应或溶剂活化以及当受到磁、超声或温度变化因素影响时释放神经毒素。扩散可以来自贮库(reservoir)或基质。化学控制可以是由于聚合物降解或从聚合物中切割药物。溶剂活化可涉及聚合物的溶胀或渗透效果。

植入物可通过将所需量的稳定化的神经毒素混合到溶于二氯甲烷中的合适聚合物的溶液中来制备。该溶液可在室温下制备。然后可将溶液转移到陪替(Petri)培养皿中，并在真空干燥器中蒸发二氯甲烷。根据所需的植入物大小以及因此所掺入的神经毒素的量，将合适量的经干燥的掺入神经毒素的植入物在模具中在约8000p.s.i下压缩5秒或在3000p.s.i.下压缩17秒，以形成包封神经毒素的植入盘。

优选地，所使用的植入物材料是基本上无毒的、非致癌的和非免疫原性的。合适的植入物材料包括聚合物，例如聚(甲基丙烯酸-2-羟乙酯)(p-HEMA)、聚(N-乙烯基吡咯烷酮)(p-NVP)+、聚(乙烯醇)(PVA)、聚(丙烯酸)(PM)、聚二甲基硅氧烷(PDMS)、乙烯-乙酸乙烯酯(EVAc)共聚物、聚乙烯吡咯烷酮/丙烯酸甲酯共聚物、聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)、聚乳酸(PLA)、聚乙醇酸(PGA)、聚酸酐、聚(原酸酯)、胶原蛋白和纤维素衍生物以及生物陶瓷、例如羟基磷灰石(HPA)、磷酸三钙(TCP)和磷酸铝钙(ALCAP)。乳酸、乙醇酸和胶原蛋白可用于制造可生物降解的植入物。

植入物材料可以是可生物降解的或可生物蚀解的。可生物蚀解的植入物的优点是不需要将从患者中去除的植入物。可生物蚀解的植入物可以基于生物活性物质的膜或基质释放。已知由PLA-PGA制备的可生物降解的微球是用于皮下或肌内给药。

本公开内容还包括用于实施所公开的实施方案的试剂盒。该试剂盒可包括30号或更小的针和相应的注射器。该试剂盒还包含梭菌神经毒素组合物，例如E型肉毒杆菌毒素组合物。神经毒素组合物可在注射器中提供。该组合物可通过针注射。根据注射器和针的大小以及其中含有的可注射组合物的体积(这又基于试剂盒被设计用于治疗的具体缺陷)，将试剂盒设计成各种形式。

实施例

提供以下非限制性实施例仅出于举例说明目的，以便于更完整地理解代表性实施方案。该实施例不应被解释为限制本说明书中描述的任何实施方案。

实施例1

E型肉毒杆菌毒素用于治疗眉间纹的用途

在人类中进行了一项随机、双盲、安慰剂对照、递增剂量群组(cohort)、2a期研究，以评估所公开的速效E型组合物的单次治疗周期在眉间皱纹的受试者中的安全性和功效。这项研究是按照本方案以及所有适用的联邦和州法规(Federal and State regulations)进行的。向受试者给予包含E亚型肉毒杆菌神经毒素(BoNT/E，“EB-001”)的组合物。这项首次人体、随机、双盲、安慰剂对照、递增剂量群组研究招募了42名受试者，使这些受试者接受EB-001(本文所公开的E型肉毒杆菌组合物)(N＝35)或安慰剂(N＝7)。功效的主要结果是最大皱眉时，GL严重程度得到研究者评定的2级(IR-2)改善的受试者的比例。安全性评估包括不良事件(AE)、实验室测试和身体检查。在第三个群组(EB-001)中开始观察到IR-2应答，并在较高剂量下观察到比例增加。在最高剂量下，临床效果在24小时内起效，持续时间为14到30天。AE发生率低，最常见的是轻度至中度头痛。没有严重的AE或上睑下垂，在其他安全性评估中没有临床上显著的改变。

在这项GL的临床研究中，EB-001显示出良好的安全性和耐受性，以及在最高剂量下应答率为80％的剂量依赖性功效。EB-001最大临床效果在24小时内即可见，并持续14至30天。这种可区分的EB-001特性(profile)支持其用于美学和治疗应用的开发，其中快速起效和短的效果持续时间是合乎需要的。

肉毒杆菌神经毒素(其抑制乙酰胆碱的突触前释放)是自然界中最具潜力的分子。当将肉毒杆菌神经毒素注射到肌肉中时，它会抑制神经肌肉传递并产生剂量依赖性局部肌肉松弛。纯化的肉毒杆菌神经毒素(包括血清型A型和血清型B型)已开发为可注射药物，且已广泛用于治疗多种神经肌肉病症。血清型E型肉毒杆菌神经毒素是迄今为止尚未被开发用于临床用途的新的血清型。E型肉毒杆菌毒素在所有肉毒杆菌神经毒素中具有最快的起效且最短的作用持续时间。E型具有与A型相似的结构域结构，由2条蛋白质链(通过二硫键连接的100kDa重链和50kDa轻链)组成，如图1所示。E型通过与A型一样(但在不同的切割位点)切割相同的突触前囊泡蛋白(突触小体相关蛋白25)而抑制神经肌肉传递。运动轴突上的两个结合位点介导肉毒杆菌神经毒素对神经细胞的高亲和力识别。结合首先是由细胞表面神经节苷脂介导，然后由特定的蛋白质受体介导。这些受体存在于神经肌肉接头处的运动轴突末端上。已经证明，A型和E型肉毒杆菌毒素均结合特异性受体突触囊泡蛋白2，且仅这两种血清型共有该受体。这是评估递增剂量的E型肉毒杆菌毒素在GL受试者中的安全性和功效的首次临床研究。

这项研究是对EB-001的安全性和功效进行的首次人体评估，其关注的是中度至重度GL的治疗。EB-001是E型肉毒杆菌毒素的专有纯化形式，被配制为注射液(Bonti，Inc.，Newport Beach,California,USA)。这是在两个专业临床中心(Steve Yoelin,MD MedicalAssociates,Newport Beach,California,USA；Center for Dermatology ClinicalResearch,Fremont,California,USA)进行的随机、双盲、安慰剂对照、剂量递增的群组研究。这项研究已由机构审查委员会(Institutional Review Board)(AspireInstitutional Review Board,Santee,California,USA)批准，并根据赫尔辛基宣言(Declaration of Helsinki)确定的指南进行。在所有受试者参与之前从其收到书面知情同意书。

这项研究共招募42名健康的首次接受毒素

的男性和女性受试者，年龄为18至60岁。每名受试者的参与持续约6周。主要纳入标准为：在最大皱眉时存在中度至重度评分的双侧对称GL，在不使用眼镜(可接受使用隐形眼镜)的情况下具有足够的视敏度以准确评估其面部皱纹，以及符合研究要求的能力。主要排除标准为：任何不受控制的全身性疾病或其他医学病症，任何可能在暴露于肉毒杆菌神经毒素时使受试者处于增加的风险下的医学病症(包括确诊的重症肌无力、爱-朗综合征(Eaton-Lambert syndrome)、肌萎缩侧索硬化或任何干扰神经肌肉功能的其他病症)，当前或先前的肉毒杆菌神经毒素治疗，已知的针对肉毒杆菌神经毒素的免疫接种或超敏反应，研究的3至12个月内的预先指定的皮肤病学操作(非烧蚀性表面修复、面部美容操作、局部/口服类维生素A疗法等)，以及先前的眶周手术或治疗。女性如果已怀孕、正在哺乳或计划怀孕，则不会招募。对于具有生育能力的女性伴侣的男性，只有他们同意在服药后三个月内使用双重避孕方法，才会被招募。

在筛查时，记录受试者的人口统计资料、医疗史以及先前和同时的药物疗法，并进行酒精/药物筛查。在治疗前的基线和直至研究结束的每次随访中，均进行标准化的面部摄影，但并未将这些照片用于功效评估。

招募了七个群组(每个群组6个受试者)，并以5：1的比例接受了递增剂量的EB-001或安慰剂。在这项首次人体研究中的最大推荐起始剂量(具有10倍安全系数)是基于来自临床前安全性和毒性研究(未公开的数据)中的未观察到不良反应的水平而制定的。据此，计算出基础剂量(群组1)并将其确定为亚有效(sub-efficacious)，以及群组2至7分别接受了基础剂量的3、9、12、16、21和28倍。这代表EB-001亚有效剂量至最大有效剂量。全部的剂量以标准化方式以相等体积在5个注射位点(以每个位点0.1mL注射到降眉间肌、左内侧皱眉肌、右内侧皱眉肌、左外侧皱眉肌和右外侧皱眉肌)递送(参见图5)。外侧皱眉肌中的注射间隔在眉弓(supraorbital ridge)上方约1cm处。EB-001是以5mL小瓶中的无菌注射溶液的形式提供。安慰剂是以在不含EB-001的相同小瓶中的形式提供。

每个受试者在筛选(第-30天至-1天)，基线/注射(第0天)，第1、2、7、14和30天(研究结束)时和第42天(最后的安全性随访)时完成访视。

通过不良事件(AE)、实验室测试、心电图(ECG)、身体检查，生命体征(脉搏率、呼吸率和血压)、尿液妊娠测试(针对有生育能力的妇女)和聚焦神经学检查(focusedneurological examination)评估安全性，以评估肉毒杆菌神经毒素的潜在蔓延性。将治疗中出现的不良事件(TEAE)定义为在暴露于研究治疗之后，开始的或严重程度恶化的任何不良事件。使用《监管活动医学词典》(Medical Dictionary for Regulatory Activities)(MedDRA，版本19.0)按系统器官类别和首选术语汇总AE和TEAE。还评估了严重的AE(SAE或满足医学严重性监管标准的AE)以及由于AE而导致的停药。AE的严重程度记录为轻度、中度、重度或威胁生命。在每个剂量群组加入之前，安全性数据审查委员会开会分析先前群组的所有安全性数据。

在筛选、基线以及第1、2、7、14和30天时，使用面部皱纹量表(FWS)评估受试者在最大皱眉和休息时的GL。由研究者和受试者完成评估。FWS是一种被广泛认可的用于评估面部皱纹严重程度的量度。在本研究中，表明GL严重程度的4分制量表如下：0＝无，1＝轻度，2＝中度，3＝重度。如果根据研究者的FWS评估，受试者获得了至少2级改善(降低)(IR-2)，则被视为治疗应答者(treatment responders)。主要功效变量是直至第30天的任何基线后访视时在最大皱眉时的IR-2应答者的比例。另一个感兴趣的功效终点是在第1、2、7、14或30天达到研究者评估的FWS等级为零或轻度的应答者比例(通过访视分析)。

预先指定了两个分析人群，即安全性人群和功效人群。合并接受安慰剂的受试者用于所有分析。安全性人群包括接受研究治疗并在其后进行了至少一次安全性评估的所有受试者。按照治疗组汇总所有的TEAE和SAE。研究者审查所有安全性参数(包括实验室测试、ECG、身体检查、生命体征、尿液妊娠测试和聚焦神经学检查)，并就其临床显著性进行了评估。功效人群是修正的意向治疗(mITT)人群，被定义为接受至少1个剂量的研究治疗并且进行至少1次基线后功效评估的所有随机受试者。对mITT人群进行人口统计学和基线特征的分析。医疗史是基于安全性人群并使用MedDRA进行编码，并按系统器官类别和首选术语进行汇总。先前和同时的药物疗法均是基于安全性人群，并使用世界卫生组织解剖学治疗化学(World Health Organization Anatomical Therapeutic Chemical)分类索引进行编码，并按药物类别和治疗组进行汇总。使用mITT人群进行功效分析。通过使用频率计数和应答率(％)的治疗和研究日总结FWS等级。使用具有0.05的显著性水平的费舍尔精确检验进行比较每个EB-001群组与安慰剂(合并)中IR-2应答者比例的分析。

在就研究进行筛选的59名受试者中，43名被招募到7个群组的1组中。一名受试者未接受治疗，随后42名受试者被纳入mITT和安全性人群中(35名接受EB-001治疗，7名接受安慰剂治疗)。41名受试者完成了研究，1名受试者未接受随访。EB-001(合并)组与安慰剂(合并)组的受试者的平均年龄(年龄范围)分别为47.9岁(22至60)和50.4岁(32至57)。大多数受试者为女性(EB-001＝91.4％；安慰剂＝85.7％)和白人(两组均为71.4％)。研究者评估的最大皱眉时的GL基线平均值(标准差[SD])，对于EB-001组和安慰剂组分别为2.6(0.50)和2.9(0.38)。EB-001组和安慰剂组平衡良好，无明显的组间差异。

在图6中，通过剂量群组代表在直至第30天的任何基线后访视时，mITT人群中实现对最大皱眉时GL严重程度的IR-2应答的受试者比例。在群组3中，40％的受试者为IR-2应答者。在所有较高剂量的群组中，该应答率相同或更高，群组6和7具有的IR-2应答者。群组6和7表明IR-2应答者的百分比明显高于安慰剂(P＝0.046)。图7汇总了在直至第30天的任何基线后访视时，研究者评估的最大皱眉时FWS等级为无或轻度GL的受试者在每组群组中的比例。与安慰剂组相比，群组2至7(包含)的应答者的百分比更高，群组3及更高剂量的群组达到60％至100％的比率。在群组3至7中，在第1、2和/或7天，观察到大多数为无应答或轻度应答。在群组3、5、6和7中，在第14天观察到一名应答者(20％)；以及在群组3和5中，在第30天观察到一名应答者(20％)。安全性结果支持了该人群中以IM注射形式给药的EB-001的所有评估剂量的安全性。在任何受试者的神经学检查、ECG、身体检查或实验室测试中均未观察到与基线相比的临床上显著性变化。

用EB-001治疗的5名受试者报告了TEAE，而安慰剂组中没有受试者报告TEAE。没有报告SAE，也没有TEAE导致研究中断。所有TEAE的严重程度均为轻度或中度。喉咙痛和流感样症状的事件被认为与治疗无关。3名受试者报告了为头痛的TEAE，其中1名被认为与治疗有关。没有剂量相关的头痛发生率的增加。没有可能与毒素蔓延有关的上睑下垂或其他TEAE事件。

据本发明人所知，这是将E型肉毒杆菌毒素产品用于任何美学或治疗用途的首次对照临床试验。这项EB-001(以IM形式给药的E型肉毒杆菌毒素的一种新的纯化形式)的首次人体研究实现了其评估EB-001的安全性、耐受性和有效剂量范围的目标。观察到剂量应答，在EB-001的较高剂量的群组中治疗应答者的比例更高。从群组3开始观察到IR-2应答，并且在更高剂量的群组中有所增加，这表明EB-001的有效剂量范围可能是在群组4至7中使用的剂量。群组6和7具有80％的IR-2应答者，其应答率与经批准的A型肉毒杆菌毒素产品相似。从群组2开始，观察到实现FWS等级为零或轻度的受试者。就起效而言，最早在服药后24小时就观察到治疗应答，这支持了先前的报道，表明E型肉毒杆菌毒素比A型起效更快。

关于被定义为具有无或轻度评分的应答者比例的效果持续时间，在5个较高剂量的群组的大多数中，在14天中在1名受试者中观察到该效果，在5个较高剂量的群组的2组中，在30天中在1名受试者中观察到效果。所有剂量的EB-001均显示出良好的耐受性，没有局部注射位点反应。没有报道SAE或严重TEAE，也没有因为TEAE而停药。最常见的头痛TEAE的严重程度是轻度或中度的，并且没有其他与治疗相关的AE。在任何剂量水平都没有上睑下垂的事件，也没有可能与毒素蔓延有关的事件。因此，该研究的临床安全性和耐受性特性似乎是有利的。EB-001的功效和安全性特性是有前景的，并支持了EB-001在GL治疗和其他面部美容用途中作为一种独特的治疗选择的潜力。快速起效可以满足那些在不可预料的社交或专业事件之前寻求快速治疗面部皱纹的个体的尚未满足需求。效果的有限持续时间对于可能正在考虑首次使用肉毒杆菌神经毒素治疗并且不愿长期承诺的个体可以是有益的。与A型肉毒杆菌毒素产品的12周的效果持续时间相比，EB-001治疗会允许他们在较短的效果持续时间内评估美容效果。在这项针对GL受试者的首次临床研究中，EB-001在所有群组中均显示出良好的安全性和耐受性。与安慰剂相比，这7个群组中的5个显示出数值更高的应答率，从而支持EB-001在降低GL严重程度方面的功效。与经批准的A型肉毒杆菌毒素产品相似，这2种最高剂量提供了80％的应答率。与已知的A型产品的时程相比，EB-001的临床效果在24小时内即可见(起效)，并持续14-30天(持续时间)。这种不同的临床特性支持了未来EB-001用于面部美容和关键治疗用途的开发，其中需要快速起效和短的持续时间。

总剂量分布如下：

实施例2

E型肉毒杆菌毒素治疗细菌坏死性病变的用途

一名60岁的妇女在其腿上出现细菌坏死性病变。清创术操作前12小时，沿病变周围注射E型肉毒杆菌(6个等间距的注射位点；每个位点注射5U)。E型肉毒杆菌减少了病变周围的肌肉活动，并阻断了CGRP的神经元释放。一周内，病变正在愈合。

实施例3

E型肉毒杆菌毒素治疗细菌坏死性病变的用途

一名30岁的妇女在其手臂上出现细菌坏死性病变。诊断后立即，沿病变周围注射E型肉毒杆菌(15个等间距的注射位点；每个位点注射3U)。E型肉毒杆菌减少了病变周围的肌肉活动，并阻断了CGRP的神经元释放。一周内，病变正在愈合。

实施例4

E型肉毒杆菌毒素治疗细菌坏死性病变的用途

一名14岁的男孩在其手臂上出现细菌坏死性病变。诊断后立即，沿病变周围注射E型肉毒杆菌(15个等间距的注射位点；每个位点注射3U)。E型肉毒杆菌减少了病变周围的肌肉活动，并阻断了CGRP的神经元释放。一周内，病变正在愈合。

实施例5

E型和A型肉毒杆菌毒素治疗细菌坏死性病变的用途

一名24岁的妇女在其腹部上出现细菌坏死性病变。诊断后立即，沿病变周围注射E型和A型肉毒杆菌的组合(12个等间距的注射位点；每个位点注射4U)。肉毒杆菌减少了病变周围的肌肉活动，并阻断了CGRP的神经元释放。一周内，病变正在愈合。

实施例5

E型和A型肉毒杆菌毒素治疗细菌坏死性病变的用途

一名24岁的妇女在其腹部上出现细菌坏死性病变。诊断后立即，沿病变周围注射E型和A型肉毒杆菌的组合(12个等间距的注射位点；每个位点注射4U)。肉毒杆菌减少了病变周围的肌肉活动，并阻断了CGRP的神经元释放。一周内，病变正在愈合。

实施例6

E型肉毒杆菌毒素治疗偏头痛的用途

一名患有慢性偏头痛的40岁男性在头骨周围注射E型肉毒杆菌(20个等间距的注射位点；每个位点注射2U)。该患者在下个月无偏头痛。

实施例7

E型肉毒杆菌毒素治疗烧伤疼痛的用途

一名14岁的女孩在其手臂上出现2英寸乘2英寸的三度烧伤。沿烧伤周围给予E型肉毒杆菌，共注射10次，每次1个单位。48小时内可感觉到疼痛缓解，持续4周。

实施例8

E型肉毒杆菌毒素治疗炎症的用途

一名55岁的男性在其小腿上出现感染，并伴有局部肿胀。向患者的小腿给予20次注射，每次注射0.5ng。36小时内，炎症减少。

最后，应当理解，尽管本说明书的各方面是通过参照特定实施方案来强调的，但是本领域技术人员将容易领会，这些公开的实施方案仅是对本文公开主题的原理的举例说明。因此，应当理解，所公开的主题绝不限于本文所述的具体方法、方案和/或试剂等。因此，在不脱离本说明书的主旨的前提下，可以根据本文的教导对所公开的主题进行各种修改或改变或替代的配置。最后，本文中使用的术语仅出于描述具体的实施方案的目的，并且无意于限制本公开内容的范围，本公开内容的范围仅由权利要求书限定。因此，本公开内容的实施方案不限于精确地示出和记载的那些。

实施例9

E型肉毒杆菌毒素治疗术后疼痛的用途

在术后疼痛的大鼠模型(称为Brennan模型)中评估BoNT/E的单次局部给药治疗术后疼痛的效果。简而言之，该模型可以评估手术切口后提高的机械灵敏度。在麻醉的大鼠中，穿过后足的足底面的皮肤、筋膜和肌肉制成1cm的纵向切口。对照足是指没有手术损伤的足。手术后二十四小时，切口产生机械性痛觉超敏，其是使用电子Von Fret测试定量的。手术前24小时，将三个剂量的BoNT/E给药到受伤的足和对照足的后足。手术后24小时用电子Von Frey测试评估疼痛阈值。在一个组中，吗啡用于评估可达到的最大疼痛减少。结果示于图8且与载体治疗组相比，其表示为增加(+)或减少(-)。参考图8，对于对照足和受伤足，(1)第一列示出了载体治疗组获得的数据，(2)第二列、第三列和第四列示出了分别具有增加的浓度0.75ng/kg、1ng/kg和2ng/kg的BoNT/E治疗组获得的数据；以及(3)最后一栏示出了在吗啡治疗组中获得的数据。在该术后疼痛的Brennan大鼠模型中，当治疗有效时，疼痛阈值会回升至更接近对照未受伤足的数值。如图8所示，吗啡能够将疼痛阈值完全降低至对照未受伤足的疼痛阈值。BoNT/E治疗的足显示出剂量依赖性疼痛减少。

还在肌肉松弛的DAS模型中评估了BONT/E对肌肉松弛的效果。简而言之，DAS测定研究了BoNT制剂对响应于后肢抬高(尾巴抬起)的小鼠后肢足趾外展(“惊吓”，“脚趾展开”)行为反射的影响。麻痹的程度是通过对小鼠外展后肢足足趾的能力进行评分来测量。外展损失的得分从0至4，其中4代表外展能力的全部丧失，0代表完全的外展足趾的能力。如上所述，对用BoNT/E治疗的受伤和未受伤足进行DAS测定。发现(数据未示出)，在用BoNT/E治疗的组中观察到剂量反应曲线，这证明了通过DAS反应测量的肌肉松弛活动，其中：(1)BoNT/E在剂量为0.75ng/kg至2ng/kg的DAS测定中显示出剂量依赖性效果；(2)不论剂量如何，临床起效均为～12小时；(3)不论剂量如何，最大的临床起效为～24小时；以及(4)在最高剂量下效果持续时间更长，为～72小时时，而在两个较低剂量下为48小时。用BoNT/E获得的较短的肌肉无力持续时间可使术后恢复和康复更快。

本文所记载的某些实施方案，包括发明人已知的用于进行本文所述的方法和设备的最佳模式。当然，在阅读了上述说明之后，这些所记载的实施方案的变型对于本领域普通技术人员而言将变得显而易见的。因此，本公开内容包括如适用法律所允许的，在所附的权利要求书中记载的主题的全部修改方案和等同方案。而且，除非本文另外指出或与上下文明显矛盾，否则本公开内容所包括在其所有可能的变型中，上述实施方案的任何组合。可使用表述“由……组成”或“基本上由……组成”在权利要求中进一步限制本文所公开的特定实施方案。当在权利要求书中使用时，无论是原始提交的或是通过修改而添加的，过渡术语“由……组成”将排除权利要求中未明确记载的任何元素、步骤或成分。过渡术语“基本上由……组成”将权利要求的范围限制为明确记载的材料或步骤和不实质性影响基本特征和新颖特征的材料或步骤。本文中固有地或清楚地描述并且能够实施如此要求保护的本公开内容的实施方案。

Claims (20)

1.一种用于治疗感染的方法，其包括：

将治疗有效量的速效神经毒素给药至患者的感染处附近。

2.权利要求1的方法，其中所述速效神经毒素包含血清型E型肉毒杆菌神经毒素。

3.权利要求2的方法，其中所述治疗有效量包括约10^-3U/kg至约35U/kg的量。

4.权利要求4的方法，其中所述治疗有效量包括约1U/kg至约25U/kg的量。

5.权利要求4的方法，其中所述治疗有效量包括约5U/kg至约15U/kg的量。

6.权利要求2的方法，其中所述治疗有效量包括约0.2纳克至约2纳克的量。

7.权利要求6的方法，其中所述治疗有效量包括约0.5纳克至约1纳克的量。

8.权利要求2的方法，其中所述给药包括通过注射进行的给药。

9.权利要求8的方法，其中所述通过注射进行的给药为肌内注射。

10.权利要求2的方法，其中所述方法还包括将A亚型肉毒杆菌毒素给予所述患者。

11.权利要求2的方法，其中所述方法还包括将onabotulinumtoxinA给予所述患者。

12.权利要求2的方法，其中所述方法还包括给予慢恢复的毒素。

13.权利要求2的方法，其中所述方法还包括外科清创术。

14.一种用于抑制或减少向有需要的患者的cGRP释放的方法，所述方法包括：

将有效量的速效神经毒素给予所述患者。

15.权利要求14的方法，其中所述速效神经毒素包含血清型E型肉毒杆菌神经毒素(BoNT/E)。

16.权利要求15的方法，其中所述治疗有效量包括约10^-4U/kg至约35U/kg的量。

17.权利要求15的方法，其中所述治疗有效量包括约0.2纳克至约2纳克的量。

18.权利要求15的方法，其中所述方法还包括将长效神经毒素给予所述患者。

19.权利要求15的方法，还包括将A亚型肉毒杆菌毒素给予所述患者。

20.权利要求14的方法，其中所述治疗有效量包括低于会导致肌肉麻痹的剂量的量。

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