KR20200143407A

KR20200143407A - Cgrp를 억제하는데 사용하기 위한 신경독소

Info

Publication number: KR20200143407A
Application number: KR1020207031275A
Authority: KR
Inventors: 마이클 자르페; 파우아드 하산
Original assignee: 본티, 인크.
Priority date: 2018-04-03
Filing date: 2019-04-03
Publication date: 2020-12-23
Also published as: BR112020020346A2; IL277772A; CA3096032A1; AU2019247751A1; MX2020010439A; US20190300583A1; CN112533676A; EP3773906A1; US20220306704A1; RU2020132826A; JP2021520373A; WO2019195454A1

Abstract

CGRP 생산 및 방출을 억제하는데 사용하기 위한 조성물 및 방법이 본원에 개시된다.

Description

CGRP를 억제하는데 사용하기 위한 신경독소

관련 출원에 대한 상호 참조

본 출원은 2018년 4월 3일에 출원된 미국 특허 가출원 번호 62/651,839에 대한 우선권의 이익을 주장하며, 이는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.

기술 분야

본 개시내용은 장애를 치료하기 위한 신경독소의 용도에 관한 것이다.

칼시토닌 유전자-관련 펩티드 (CGRP)는 인간에서 2종의 형태, α-CGRP 및 β-CGRP로 존재하는 펩티드의 칼시토닌 패밀리의 구성원이다. α-CGRP는 37-아미노산 펩티드이고, 염색체 11 상에 위치하는 칼시토닌/CGRP 유전자의 대안적 스플라이싱으로부터 형성된다. 덜 연구된 β-CGRP는 3개의 아미노산에서 상이하고, 개별 유전자의 동일한 부근에서 코딩된다. CGRP는 말초 및 중심 뉴런 둘 다에서 생산된다. 이는 강력한 펩티드 혈관확장제이다. 척수에서, CGRP의 기능 및 발현은 합성 위치에 따라 상이할 수 있다. CGRP는 주로 척수의 복측각에서 합성될 때 운동 뉴런의 세포체로부터 유래되고, 손상 후 신경 조직의 재생에 기여할 수 있다. CGRP는 또한 척수의 후각에서 합성될 때 후근 신경절로부터 유래된다. 삼차신경 혈관계에서, 삼차신경 신경절 상의 세포체는 CGRP의 주요 공급원이다. CGRP는 심혈관 항상성 및 침해수용에서 소정의 역할을 하는 것으로 생각된다.

CGRP는 칼시토닌 수용체-유사 수용체 (CALCRL)로 불리는 G 단백질-커플링된 수용체 및 수용체 활성-변형 단백질 (RAMP1)로 구성된 이형체 수용체를 통해 그의 효과를 매개한다. CGRP 수용체는 신체 전반에 걸쳐 발견되며, 이는 단백질이 모든 주요 계 (예를 들어, 호흡기계, 내분비계, 위장계, 면역계 및 심혈관계)에서 다양한 생리학적 기능을 조정할 수 있다는 것을 시사한다. 세포외 루프 번호 2는 R274/Y278/D280/W283의 주요 상호작용에 의한 리간드 유도된 활성화의 기본이다. 감각계 및 면역계 사이의 상호작용의 한 측면은 CGRP의 방출이다.

전임상 증거는, 편두통 동안, 삼차신경 신경절에서의 활성화된 1차 감각 뉴런 (수막 침해수용체)이 수막 내에 위치한 그의 말초 돌출된 신경 말단으로부터 CGRP를 방출한다는 것을 시사한다. 이어서, 이러한 CGRP는 수막 혈관 주위에 위치한 CGRP 수용체에 결합하고 이를 활성화시켜, 혈관확장, 비만 세포 탈과립화, 및 혈장 혈관외유출을 유발한다. 인간 관찰은 편두통의 병리생리상태에서 CGRP의 역할을 추가로 연루시켰다. 인간에서 삼차신경 혈관계에서의 1차 감각 뉴런의 활성화는 CGRP의 방출을 유발할 수 있다. 일부 편두통 발작 동안, 증가된 농도의 CGRP가 타액 및 외부 경정맥으로부터 채취된 혈장 둘 다에서 발견될 수 있다. 또한, 알파-CGRP의 정맥내 투여는 편두통에 감수성인 개체에서 두통을 유발할 수 있다.

감염은 질환-유발제에 의한 유기체의 신체 조직의 침습, 그의 증식, 및 그것이 생산하는 작용제 및 독소에 대한 숙주 조직의 반응이다. 감염은 바이러스, 바이로이드, 프리온, 박테리아, 선충류, 예컨대 기생 회충 및 요충, 절지동물, 예컨대 진드기, 응애, 벼룩 및 이, 진균, 예컨대 백선, 및 다른 거대-기생충, 예컨대 촌충 및 다른 연충에 의해 유발될 수 있다. 증후성 감염은 분명하고 임상적인 반면에, 활성이지만 분별가능한 증상을 발생시키지 않는 감염은 비-명백, 침묵, 준임상적, 또는 숨은 감염으로 불릴 수 있다. 불활성 또는 휴지상태인 감염은 잠복 감염으로 불리고; 잠복 박테리아 감염의 예는 잠재성 결핵이다. 일부 바이러스 감염이 또한 잠복성일 수 있고; 잠복 바이러스 감염의 예는 헤르페스비리다에(Herpesviridae) 패밀리로부터의 것 중 임의의 것이다. 단기 감염은 급성 감염이다. 장기 감염은 만성 감염이다. 감염은 추가로 병원체 (박테리아, 바이러스, 진균, 기생충)에 의해, 및 전신 증상 (패혈증)의 존재 또는 부재에 의해 분류될 수 있다.

포유동물 숙주는 종종 염증을 수반하는 선천성 반응에 의해 감염에 반응한 후, 적응 반응에 의해 감염에 반응한다. 감염을 치료하는데 사용되는 특정 의약은 항생제, 항바이러스제, 항진균제, 항원충제, 및 항연충제를 포함한다. 감염성 질환은 2013년에 9.2백만명의 사망을 유발하였다 (모든 사망의 약 17%).

통증은 종종 강렬한 자극 또는 손상 자극에 의해 유발되는 고통스러운 느낌이다. 국제 통증 연구 협회에서 널리 사용되는 정의는 통증을 "실제 또는 잠재적 조직 손상과 연관되거나, 또는 이러한 손상의 관점에서 설명되는 불쾌한 감각 및 정서적 경험"으로 정의하지만, 이는 복잡한 주관적 현상이기 때문에 통증을 정의하는 것은 도전과제이다. 의학적 진단에서, 통증은 기저 상태의 증상으로 간주된다. 통증은 개체가 손상 상황으로부터 빠져나와, 치유 동안 손상된 신체 부분을 보호하고, 미래에 유사한 경험을 피하도록 동기를 부여한다. 대부분의 통증은 유해 자극이 제거되고 신체가 치유되면 해결되지만, 자극의 제거 및 신체의 명백한 치유에도 불구하고 지속될 수 있다. 때때로 통증은 임의의 검출가능한 자극, 손상 또는 질환의 부재 하에 발생한다.

통증 및 염증 둘 다는 보호 반응이다. 그러나, 이들 자기-제한 상태가 (잘 확립된 음성 피드백 루프에 의해) 제어되지 않고 방치되면 병리상태가 된다. 통증 및 염증 둘 다는, 예를 들어 말초, 감각 및 중추 신경계 수준을 통해, 다차원 방식으로 서로 상호작용할 수 있다. 선천성 면역은 중추 감작 및 급성 통증의 만성 상태로서의 확립에서 중요한 역할을 한다. 또한, 염증 매개체는 또한 심리적 영향을 나타내며, 따라서 통증과 연관된 정서적 요소의 원인이 된다. 그러나, 면역계의 상당한 항염증 및 진통 역할이 또한 존재한다.

침해수용체는 "가능한 위협" 신호를 척수 및 뇌로 보냄으로써 손상 또는 잠재적 손상 자극에 반응하는 감각 뉴런의 축삭 말단의 수용체 유형이다. 침해수용체 뉴런은 병원체에 노출된 말초 장벽 조직을 조밀하게 신경지배한다: 뇌가 위협이 신뢰가능한 것이라고 생각하면, 이는 신체 부분에게 주의를 지시하는 통증의 감각을 생성하고, 따라서 위협이 성공적으로 매개될 수 있다. 이러한 과정이 침해수용이라 불린다. 포유동물에서, 침해수용체는 유해 자극을 감지할 수 있는 신체의 임의의 구역에서 발견된다. 외부 침해수용체는 피부 (피부 침해수용체), 각막, 및 점막과 같은 조직에서 발견된다. 내부 침해수용체는 근육, 관절, 방광, 장, 및 소화관과 같은 다양한 기관에서 발견된다. 이들 뉴런의 세포체는 후근 신경절 또는 삼차신경 신경절에 위치한다. 삼차신경 신경절은 얼굴에 대해 특화된 신경인 반면, 후근 신경절은 신체의 나머지와 연관된다. 축삭은 말초 신경계로 연장되고, 분지에서 종결되어 수용 영역을 형성한다.

반흔형성을 최소화하는데 사용하기 위한 조성물 및 방법이 본원에 개시된다. 예를 들어, 개시된 실시양태는 상처 부근의 근육 긴장을 감소시킴으로써 반흔형성을 예방하거나 감소시키기 위한 "빠른 작용" 보툴리눔 독소의 사용을 포함한다.

보툴리눔 신경독소는 예를 들어 감염 동안 CGRP의 뉴런 방출을 효과적으로 감소시키거나 차단할 수 있고, 따라서 다수의 상태의 치료에 유용할 수 있다. 예를 들어, 개시된 실시양태는 박테리아 감염, 예를 들어 괴사성 병변, 예를 들어 에스. 피오게네스(S. Pyogenes)에 의해 유발되는 것을 제한하거나 예방할 수 있다. 개시된 실시양태는 통증을 감소시키거나 예방할 수 있다.

제1 측면에서, 감염을 치료하는 방법이 제공된다. 한 실시양태에서, 방법은 박테리아 감염에 의해 유발된 괴사성 병변을 치료하는 것을 포함한다. 한 실시양태에서, 방법은 치료 유효량의 빠른 작용 신경독소를 환자에게 감염에 의해 유발된 병변의 부근에 투여하는 것을 포함한다.

또 다른 측면에서, cGRP 생산 또는 방출을 억제함으로써 통증의 치료를 필요로 하는 환자에서 통증을 치료하는 방법. 방법은 치료 유효량의 빠른 작용 신경독소를 환자가 통증을 겪고 있는 구역에 투여하는 것을 포함한다.

또 다른 측면에서, cGRP 생산 또는 방출을 억제함으로써 통증의 발생의 감소를 필요로 하는 환자에서 통증의 발생을 감소시키는 방법. 방법은 치료 유효량의 빠른 작용 및/또는 짧은 지속기간 신경독소를 환자가 통증을 겪은 구역 및/또는 통증을 겪을 가능성이 있는 구역에 투여하는 것을 포함한다.

한 실시양태에서, 치료 유효량의 빠른 작용 및/또는 짧은 지속기간 신경독소를 외과적 절개 구역 부근에 국부로 투여하는 것을 포함하는, 수술후 통증의 감소를 필요로 하는 환자에서 수술후 통증을 감소시키는 방법이 제공된다.

또 다른 실시양태에서, 치료 유효량의 빠른 작용 및/또는 짧은 지속기간 신경독소를 외과적 절개 구역 부근에 투여하는 것을 포함하는, 수술후 통증의 발생을 감소시키는 방법이 제공된다.

한 실시양태에서, 빠른 작용 신경독소는 보툴리눔 신경독소 혈청형 E를 포함한다.

일부 실시양태에서, 투여는 외과적 절차 전에 수행된다. 다른 실시양태에서, 투여는 외과적 절차 동안 수행된다. 또 다른 실시양태에서, 투여는 외과적 절차 후에 수행된다.

한 실시양태에서, 치료 유효량은 약 10^-3 U/kg 내지 약 35 U/kg의 양을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 치료 유효량은 약 1 U/kg 내지 약 25 U/kg의 양을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 치료 유효량은 약 5 U/kg 내지 약 15 U/kg의 양을 포함한다.

또 다른 실시양태에서, 치료 유효량은 약 0.2 나노그램 내지 약 2 나노그램의 양을 포함한다.

또 다른 실시양태에서, 피부 절개 또는 열상 부근의 근육 활동이 감소됨으로써, 반흔 형성이 감소되거나 예방된다.

또 다른 실시양태에서, 보툴리눔 독소는 빠른 회복 독소이다.

또 다른 실시양태에서, "빠른 작용" 보툴리눔 독소는 또한 빠른 회복 독소이다.

또 다른 실시양태에서, 방법은 빠른 작용 보툴리눔 신경독소를, 예를 들어, 보다 느린 작용 신경독소와 조합하여 투여하는 것을 추가로 포함한다. 한 실시양태에서, 보다 느린 작용 신경독소는 보툴리눔 독소 하위유형 A (BoNT/A)이다.

다른 실시양태에서, 방법은 빠른 회복 보툴리눔 신경독소를, 예를 들어, 보다 느린 회복 신경독소와 조합하여 투여하는 것을 추가로 포함한다.

또 다른 실시양태에서, 신경독소는 근육 마비를 유발할 용량 미만의 용량으로 투여된다.

BoNT/E에 의한 근육 이완 효과의 빠른 개시는 대상체에서 개선된 치유, 감소된 수술후 통증 및 감소된 부작용, 예컨대 근육 강직, 안검 하수증 또는 경부 약화를 부여한다. BoNT/E는 수술후 보다 빠른 회복 및 재활을 가능하게 할 수 있기 때문에, BoNT/E에 의해 제공되는 보다 짧은 근육 이완 지속기간 (2-4주)은 또한 BoNT/A 생성물에 의할 경우의 3-4개월과 비교하여 바람직하다.

다른 실시양태에서, BoNT/E를 포함하는 제제 또는 조성물은 근육내로 투여된다.

도 1은 보툴리눔 신경독소 (BoNT)의 1차 구조를 도시한 것을 보여준다.
도 2a-2d는 BoNT/E (도 2a, 2c) 및 BoNT/B (도 2b, 2d)의 개략도 및 리본 표현이다. 촉매, 전위, 및 결합 도메인은 각각 CD, TD 및 BD로 라벨링된다.
도 3a-3b는 근육을 확인시켜주는, 인체의 정면도 (도 3a) 및 후면도 (도 3b)의 예시이다.
도 4는 신경이 확인된 인간 신체의 예시이다.
도 5는 실시예 1에 기재된 연구를 위한 이마 주사 부위를 보여준다.
도 6은 실시예 1에 기재된 연구에서 대상체의 % IR-2 반응자 (1차 효능 결과)를 보여주는 막대 그래프이다.
도 7은 최대로 찌푸렸을 때 부재하거나 또는 경도의 GL의 조사자-평가 FWS 등급을 갖는 실시예 1의 대상체의 비율을 보여주는 막대 그래프이다.
도 8은 수술후 통증의 래트 모델에서 대표적인 빠른 작용 독소인 BoNT/E의 단일 국부 투여의 효과를 보여주는 막대 그래프이다.

본원에 개시된 실시양태는, 예를 들어 감염, 통증, 염증 동안 CGRP의 뉴런 방출을 효과적으로 차단할 수 있고, 따라서 다수의 상태의 치료에 유용할 수 있다. 예를 들어, 개시된 실시양태는 통증을 감소시키거나 예방할 수 있다. 개시된 실시양태는 염증을 감소시킬 수 있다. 개시된 실시양태는 박테리아 괴사성 병변, 예를 들어 에스. 피오게네스에 의해 유발되는 것을 제한하거나 예방할 수 있다.

통증을 카테고리화하는 여러 방법이 존재한다. 하나는 이를 급성 통증 및 만성 통증으로 분리하는 것이다. 급성 통증은 전형적으로 갑자기 발생하고, 제한된 지속기간을 갖는다. 이는 골, 근육, 또는 기관과 같은 조직에 대한 손상에 의해 빈번하게 유발되고, 그의 개시는 종종 불안 또는 정서적 곤란을 동반한다. 만성 통증은 급성 통증보다 더 오래 지속되고, 일반적으로 의학적 치료에 대해 다소 저항성이다. 이는 통상적으로 장기 질병, 예컨대 골관절염과 연관된다. 일부 경우에, 예컨대 섬유근육통을 갖는 것은, 질환의 한정된 특징 중 하나이다. 만성 통증은 손상된 조직의 결과일 수 있지만, 매우 종종 신경 손상에 기인한다.

개시된 조성물 및 방법을 사용한 치료에 적합한 통증의 예시적인 유형은 침해수용성, 신경병증성, 및 염증성 통증을 포함한다.

침해수용성은 피부, 근육, 내장 기관, 관절, 건, 또는 뼈와 같은 조직의 유해 상해 또는 손상에 대해 정상적인 반응을 나타낸다. 예는 (a) 체세포-근골격 (관절 통증, 근막 통증), 피부; 종종 잘 국재화된 것; 및 (b) 내장-중공 기관 및 평활근을 포함한다.

본원에 개시된 실시양태는 침해수용성 통증을 치료하기 위한 조성물 및 방법을 포함한다.

신경병증성 통증은 원발성 병변 또는 체성감각 신경계에서의 질환에 의해 개시되거나 유발된다. 감각 이상은 무감각으로 인식되는 결핍으로부터 과민증 (통각과민 또는 이질통)까지, 그리고 자통과 같은 감각이상까지 다양하다. 예는 당뇨병성 신경병증, 포진후 신경통, 척수 손상 통증, 환상지 (절단후) 통증, 및 졸중후 중추성 통증을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.

본원에 개시된 실시양태는 신경병증성 통증을 치료하기 위한 조성물 및 방법을 포함한다.

염증성 통증은 조직 염증 부위에서 방출되는 다양한 매개체에 의한 침해수용성 통증 경로의 활성화 및 감작의 결과이다. 주요 역할자로서 연루되는 매개체는 염증유발 시토카인 예컨대 IL-1-알파, IL-1-베타, IL-6 및 TNF-알파, 케모카인, 반응성 산소 종, 혈관활성 아민, 지질, ATP, 산, 및 침윤 백혈구, 혈관 내피 세포, 또는 조직 상주 비만 세포에 의해 방출된 다른 인자이다. 예는 충수염, 류마티스 관절염, 염증성 장 질환 및 대상 포진을 포함한다.

본원에 개시된 실시양태는 염증성 통증을 치료하기 위한 조성물 및 방법을 포함한다.

분류의 임상 관련성: 병리학적 과정은 별개로 발생하지 않고, 결과적으로 1종 초과의 메카니즘이 존재할 수 있으며, 1종 초과의 유형의 통증이 단일 환자에서 검출될 수 있고; 예를 들어, 염증성 메카니즘은 신경병증성 통증에 수반되는 것으로 공지되어 있다. 용이하게 분류될 수 없는 널리 인식되는 통증 장애가 존재한다. 그러한 장애에 대한 특정 요법이 널리 공지되어 있지만, 본 발명자들이 그의 기저 메카니즘을 이해하는 것은 여전히 미숙하고; 여기에는 암 통증, 편두통 및 다른 원발성 두통 및 섬유근육통 유형의 광범위한 통증이 포함된다.

통증 강도: 경도, 중등도 및 중증으로 광범위하게 카테고리화될 수 있다. 수치 단위를 사용하여 통증 강도를 등급화하는 것이 통상적이며, 여기서 0 = 통증 없음이고, 10은 상상가능한 최악의 통증이다:

a. 중등도: 5/10 내지 6/10

b. 중등도: 5/10 내지 6/10

c. 중증: ≥7/10

본원에 개시된 실시양태는 경도, 중등도 또는 중증 통증을 치료하기 위한 조성물 및 방법을 포함한다.

시간 경과: 통증 지속기간

a. 급성 통증: 3개월 미만 내지 6개월 기간의 통증

b. 만성 통증: 3-6개월 초과 동안 지속되는 통증, 또는 급성 질환의 과정을 넘어 지속되는 통증, 또는 조직 치유가 완료된 후의 통증.

c. 만성-중-급성 통증: 기저 만성 통증에 중첩된 급성 통증 악화.

본원에 개시된 실시양태는 경도, 중등도 또는 중증 급성, 만성, 또는 만성-중-급성 통증을 치료하기 위한 조성물 및 방법을 포함한다.

개시된 실시양태는, 전형적으로 신체 표면 또는 근골격 조직에서의 통증 수용체의 활성화에 의해 유발되는 통증인 체성 통증의 치료를 포함할 수 있다.

개시된 실시양태는 내부 기관이 손상되거나 다칠 경우 발생하는 내장통의 치료를 포함할 수 있다. 내장통은 흉부, 복부 또는 골반 영역에서의 통증 수용체의 활성화에 의해 유발된다. 내장통은 종종 모호하고 잘 국재화되지 않으며, 통상적으로 누름-유사, 심부 압박, 둔통 또는 확산성으로 기재된다. 내장통은 내부 기관, 예컨대 위, 신장, 담낭, 방광 및 장의 문제로 인해 유발될 수 있다. 내장통은 또한 복근 및 복벽의 문제, 예컨대 연축에 의해 유발될 수 있다.

개시된 실시양태는 척수 및/또는 말초 신경에 대한 손상 또는 기능부전에 의해 유발된 신경병증성 통증의 치료를 포함할 수 있다. 신경병증성 통증은 전형적으로 작열감, 자통, 전격통, 찌름, 또는 "따끔거림" 감각이다. 이러한 유형의 통증은 통상적으로 손상의 수일, 수주, 또는 수개월 내에 발생하고, 파상적 빈도 및 강도로 발생하는 경향이 있다. 신경병증성 통증은 확산성이고, 손상의 수준 또는 그러한 수준의 미만으로, 가장 종종 하지, 등, 발, 넓적다리, 및 발가락에서 발생하지만, 이는 또한 엉덩이, 둔부, 상배부, 팔, 손가락, 복부 및 목에서 발생할 수 있다.

실시양태는 예를 들어 두통, 치통 등을 치료하는데 사용될 수 있다.

개시된 실시양태는 면역계 경로, 예를 들어 염증 경로를 방해할 수 있다.

개시된 실시양태는 감염, 예를 들어 박테리아 또는 진균 감염의 치료를 포함할 수 있다.

괴사성 연부 조직 감염은 광범위한 카테고리의 박테리아 및 진균 피부 감염이다. 서술적 용어는 감염의 위치, 깊이 및 정도에 기초하여 달라진다 (예를 들어, 푸니어 괴저 [괴사성 회음 감염], 괴사성 근막염 [심부 피하 감염]). 침습의 깊이에 따라, 괴사성 연부 조직 감염은 광범위한 국부 조직 파괴, 조직 괴사, 전신 독성, 및 심지어 사망을 유발할 수 있다. 외과적 진보 및 항생제의 도입에도 불구하고, 괴사성 연부 조직 감염에 대해 보고된 사망률은 6 퍼센트 내지 높게는 76 퍼센트의 범위이다.

괴사성 연부 조직 감염을 치료하기 위한 방법 및 조성물이 본원에 개시된다. 본원에 개시된 실시양태는 감염 동안 CGRP의 뉴런 방출을 효과적으로 제한 또는 차단할 수 있고, 박테리아 괴사성 병변을 제한 또는 방지할 수 있다. 예를 들어, 개시된 실시양태는 박테리아 괴사성 병변, 예를 들어 에스. 피오게네스에 의해 유발된 것 부근에 개시된 조성물을 투여하는 것을 포함할 수 있다.

개시된 실시양태는 근육 수축을 억제 또는 예방하는데 요구되는 용량보다 낮은 용량의 투여를 포함할 수 있다.

일부 실시양태에서, 본원에 개시된 조성물은 빠른 작용 보툴리눔 독소, 예를 들어 보툴리눔 유형 E를 포함할 수 있다.

일부 실시양태에서, 본원에 개시된 조성물은 빠른 회복 보툴리눔 독소, 예를 들어 보툴리눔 유형 E를 포함할 수 있다.

일부 실시양태에서, 본원에 개시된 조성물은 빠른 작용, 빠른 회복 보툴리눔 독소, 예를 들어 보툴리눔 유형 E를 포함할 수 있다.

정의

"투여" 또는 "투여하다"는 제약 조성물 또는 활성 성분을 대상체에게 제공하는 (즉, 투여하는) 단계를 의미한다. 본원에 개시된 제약 조성물은 다수의 적절한 경로를 통해 투여될 수 있다. 예를 들어, 근육내, 피내, 피하 투여, 척수강내 투여, 복강내 투여, 국소 (경피), 점적주입, 및 (예를 들어, 저속-방출 장치, 예컨대 중합체 이식물 또는 미니삼투 펌프의) 이식은 모두 적절한 투여 경로일 수 있다.

"완화"는 통증, 두통, 또는 상태 또는 장애의 임의의 증상 또는 원인의 발생의 감소를 의미한다. 따라서, 완화는 일부 감소, 유의한 감소, 거의 전부의 감소, 및 전부 감소를 포함한다.

용어 "아미노산"은 자연 발생 또는 합성 아미노산, 뿐만 아니라 자연 발생 아미노산과 유사하게 기능하는 아미노산 유사체, 입체이성질체, 및 아미노산 모방체를 의미한다. 이러한 정의에는 천연 아미노산 예컨대: (1) 히스티딘 (His; H) (2) 이소류신 (Ile; I) (3) 류신 (Leu; L) (4) 리신 (Lys; K) (5) 메티오닌 (Met; M) (6) 페닐알라닌 (Phe; F) (7) 트레오닌 (Thr; T) (8) 트립토판 (Trp; W) (9) 발린 (Val; V) (10) 아르기닌 (Arg; R) (11) 시스테인 (Cys; C) (12) 글루타민 (Gln; Q) (13) 글리신 (Gly; G) (14) 프롤린 (Pro; P) (15) 세린 (Ser; S) (16) 티로신 (Tyr; Y) (17) 알라닌 (Ala; A) (18) 아스파라긴 (Asn; N) (19) 아스파르트산 (Asp; D) (20) 글루탐산 (Glu; E) (21) 비천연 아미노산: (a) 시트룰린 (Cit); (b) 시스틴; (c) 감마-아미노 부티르산 (GABA); (d) 오르니틴 (Orn); (f) 테아닌; (g) 호모시스테인 (Hey); (h) 티록신 (Thx)을 포함한 셀레노시스테인 (Sec; U); 및 아미노산 유도체 예컨대 베타인; 카르니틴; 카르노신 크레아틴; 히드록시트립토판; 히드록시프롤린 (Hyp); N-아세틸 시스테인; S-아데노실 메티오닌 (SAM-e); 타우린; 티라민이 포함된다.

"동물 단백질 무함유"는 혈액 유래되고, 혈액 풀링되고, 다른 동물 유래된 생성물 또는 화합물의 부재를 의미한다. "동물"은 포유동물 (예컨대, 인간), 조류, 파충류, 어류, 곤충, 거미 또는 다른 동물 종을 의미한다. "동물"은 미생물, 예컨대, 박테리아를 제외한 것이다. 따라서, 동물 단백질 무함유 제약 조성물은 보툴리눔 신경독소를 포함할 수 있다. 예를 들어, "동물 단백질 무함유" 제약 조성물은 혈청 유래 알부민, 젤라틴 및 다른 동물 유래 단백질, 예컨대 이뮤노글로불린을 실질적으로 무함유하거나, 본질적으로 무함유하거나, 또는 완전히 무함유하는 제약 조성물을 의미한다. 동물 단백질 무함유 제약 조성물의 예는 (활성 성분으로서) 보툴리눔 독소 및 안정화제 또는 부형제로서 적합한 폴리사카라이드를 포함하거나 이로 이루어진 제약 조성물이다.

"보툴리눔 독소" 또는 "보툴리눔 신경독소"는 클로스트리디움 보툴리눔(Clostridium botulinum)에 의해 생산된 신경독소, 뿐만 아니라 비-클로스트리디움 종에 의해 재조합적으로 제조된 보툴리눔 독소 (또는 그의 경쇄 또는 중쇄)를 의미한다. 본원에 사용된 어구 "보툴리눔 독소"는 보툴리눔 독소 혈청형 A, B, C, D, E, F, G, H 및 X, 및 그의 하위유형, 모자이크 독소, 예컨대 BoNT/DC 및 BoNT/CD, 및 그의 하위유형의 임의의 다른 유형, 또는 각각의 경우에 상기 중 임의의 것의 임의의 재조작된 단백질, 유사체, 유도체, 상동체, 부분, 하위부분, 변이체 또는 버전을 포괄한다. 본원에 사용된 "보툴리눔 독소"는 "변형된 보툴리눔 독소"를 또한 포괄한다. 추가로, 본원에 사용된 "보툴리눔 독소"는 보툴리눔 독소 복합체 (예를 들어, 300, 600 및 900kDa 복합체), 뿐만 아니라 복합체 단백질과 비회합된 보툴리눔 독소의 신경독성 성분 (150kDa)을 또한 포괄한다. "정제된 보툴리눔 독소"는 배양 또는 발효 공정으로부터 수득될 때 보툴리눔 독소에 동반될 수 있는 다른 단백질 및 불순물로부터 단리되거나 또는 실질적으로 단리된 순수 보툴리눔 독소 또는 보툴리눔 독소 복합체를 의미한다. 이에 따라, 정제된 보툴리눔 독소에서 적어도 95%, 보다 바람직하게는 적어도 99%의 비-보툴리눔 독소 단백질 및 불순물이 제거될 수 있다.

"클로스트리디움 독소"는 낮은 또는 높은 친화도 클로스트리디움 독소 수용체에의 클로스트리디움 독소 결합, 독소/수용체 복합체의 내재화, 클로스트리디움 독소 경쇄의 세포질 내로의 전위 및 클로스트리디움 독소 기질의 효소적 변형을 포괄하는, 클로스트리디움 독소가 세포를 중독시키는 전체 세포 메카니즘을 실행할 수 있는 클로스트리디움 독소 균주에 의해 생산되는 임의의 독소를 지칭한다. 클로스트리디움 독소의 비제한적 예는 보툴리눔 독소, 예컨대 BoNT/A, BoNT/B, BoNT/C₁, BoNT/D, BoNT/CD, BoNT/DC, BoNT/E, BoNT/F, BoNT/G, BoNT/H (또한 유형 FA 또는 HA로서 공지됨), BoNT/X, 테타누스(Tetanus) 독소 (TeNT), 바라티이(Baratii) 독소 (BaNT), 및 부티리쿰(Butyricum) 독소 (BuNT)를 포함한다. 신경독소가 아닌, BoNT/C₂ 세포독소 및 BoNT/C₃ 세포독소는 용어 "클로스트리디움 독소"로부터 제외된다. 용어 클로스트리디움 독소는 또한 대략 150-kDa 클로스트리디움 독소 단독 (즉, NAP 부재)을 포함한다. 클로스트리디움 독소는 자연 발생 클로스트리디움 독소 변이체, 예컨대, 예를 들어, 클로스트리디움 독소 이소형 및 클로스트리디움 독소 하위유형; 비-자연 발생 클로스트리디움 독소 변이체, 예컨대, 예를 들어, 보존적 클로스트리디움 독소 변이체, 비-보존적 클로스트리디움 독소 변이체, 클로스트리디움 독소 키메라 변이체 및 그의 활성 클로스트리디움 독소 단편, 또는 그의 임의의 조합을 포함한다. 클로스트리디움 독소는 또한 클로스트리디움 독소 및 비-독소 연관 단백질 (NAP)을 포함하는 복합체를 지칭하는 클로스트리디움 독소 복합체, 예컨대, 예를 들어, 보툴리눔 독소 복합체, 테타누스 독소 복합체, 바라티이 독소 복합체, 및 부티리쿰 독소 복합체를 포함한다. 클로스트리디움 독소 복합체의 비제한적 예는 클로스트리디움 보툴리눔에 의해 생산된 것, 예컨대, 예를 들어, 900-kDa BoNT/A 복합체, 500-kDa BoNT/A 복합체, 300-kDa BoNT/A 복합체, 500-kDa BoNT/B 복합체, 500-kDa BoNT/C₁ 복합체, 500-kDa BoNT/D 복합체, 300-kDa BoNT/D 복합체, 300-kDa BoNT/E 복합체, 및 300-kDa BoNT/F 복합체를 포함한다.

생물학적 활성 성분에 적용되는 "유효량"은 일반적으로 대상체에서 목적하는 변화를 일으키는데 충분한 성분의 양을 의미한다. 예를 들어, 목적하는 효과가 반흔 형성의 감소인 경우, 성분의 유효량은 유의한 독성을 초래하지 않으면서 반흔 형성의 적어도 실질적인 감소를 유발하는 양이다. 이러한 실시양태의 다른 측면에서, 치료 유효 농도의 클로스트리디움 독소 활성 성분은 치료될 질병과 연관된 증상을, 예를 들어 최대 10%, 최대 20%, 최대 30%, 최대 40%, 최대 50%, 최대 60%, 최대 70%, 최대 80%, 최대 90% 또는 최대 100%만큼 감소시킨다.

본원에 사용된 "빠른 작용"은 예를 들어 보툴리눔 신경독소 유형 A, 예컨대 오나보툴리눔톡신A에 의해 생성되는 것보다 더 빠르게 환자에서 효과를 생성하는 보툴리눔 독소를 지칭한다. 예를 들어, 빠른 작용 보툴리눔 독소의 효과는 12시간, 24시간 또는 36시간 내에 생성될 수 있다. 이에 따라, 빠른 작용 독소 예컨대 유형 E 대비, 보툴리눔 독소 유형 A는 "보다 느린 작용" 보툴리눔 독소로서 분류될 수 있다. 일부 경우에, 보다 느린 작용 보툴리눔 독소는 "중간 작용" 독소로서 지칭된다. 일부 실시양태에서, 빠른 작용 보툴리눔 독소는 그의 투여 후 6시간, 12시간, 24시간 또는 36시간 내에 측정가능한 치료 효과를 생성하고/거나, 그의 효과는 오나보툴리눔톡신A에 의해 생성된 치료 효과보다 적어도 약 50% 더 빨리 관찰된다.

본원에 사용된 "빠른 회복"은 예를 들어 보툴리눔 신경독소 유형 A, 예컨대 오나보툴리눔톡신A에 의해 생성되는 것보다 더 빠르게 환자에서 그의 효과가 저하되는 보툴리눔 독소를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 빠른 회복 보툴리눔 독소의 치료 효과는 그의 투여 후 약 3개월, 2개월 또는 6주 내에 저하되고, 그의 효과는 오나보툴리눔톡신A에 의해 생성된 효과보다 약 50% 더 빨리 저하된다. 예를 들어, 빠른 회복 보툴리눔 독소의 효과는 예를 들어 120시간, 150시간, 300시간, 350시간, 400시간, 500시간, 600시간, 700시간, 800시간 등 내에 저하될 수 있다. 보툴리눔 독소 유형 A는, 예컨대 다한증의 치료에서 샘을 치료하는데 사용될 때, 최대 12개월 동안 (European J. Neurology 6 (Supp 4): S111-S1150:1999), 및 일부 상황에서는 27개월만큼 길게 효능을 가질 수 있는 것으로 공지되어 있다. 예를 들어, 문헌 [Bushara K., Botulinum toxin and rhinorrhea, Otolaryngol Head Neck Surg 1996; 114(3):507, 및 The Laryngoscope 109:1344-1346:1999]을 참조한다. 그러나, 보툴리눔 신경독소 유형 A의 근육내 주사의 통상의 지속기간은 전형적으로 약 3 내지 4개월이다. 따라서, 빠른 회복 독소 예컨대 유형 E 대비, 보툴리눔 독소 유형 A, 예컨대 오나보툴리눔톡신A는 "보다 느린 회복" 또는 "보다 긴 작용" 보툴리눔 독소로서 분류될 수 있다.

본원에 사용된 "중간 작용"은 빠른 작용 독소보다 더 느리게 효과를 생성하는 보툴리눔 독소를 지칭한다.

"국부 투여"는 예컨대, 예를 들어, 근육내 또는 피내 또는 피하 주사 또는 국소 투여를 통해 제약의 생물학적 효과가 요구되는 부위인, 동물의 신체 상의 또는 그 내부의 부위에 또는 그 주변부에 제약을 직접 투여하는 것을 의미한다. 국부 투여는 정맥내 또는 경구 투여와 같은 전신 경로의 투여는 제외한다. 국소 투여는 제약 작용제가 환자에게 적용되는 국부 투여의 한 유형이다.

"신경독소"는 뉴런 세포 표면 수용체에 대하여 특이적 친화도를 갖는 생물학적 활성 분자를 의미한다. 신경독소는 순수 독소로서, 및 1종 이상의 비-독소와 복합체화된, 독소 회합된 단백질로서 둘 다의 클로스트리디움 독소를 포함한다.

"환자"는 의학적 또는 수의학적 관리를 받는 인간 또는 비-인간 대상체를 의미한다.

"제약 조성물"은 활성 제약 성분, 예컨대, 예를 들어, 클로스트리디움 독소 활성 성분, 예컨대, 보툴리눔 독소, 및 적어도 1종의 추가의 성분, 예컨대, 예를 들어, 안정화제 또는 부형제 등을 포함하는 조성물을 의미한다. 따라서, 제약 조성물은 대상체, 예컨대, 인간 환자에의 진단적 또는 치료적 투여에 적합한 제제이다. 제약 조성물은, 예를 들어, 동결건조 또는 진공 건조된 상태, 동결건조 또는 진공 건조된 제약 조성물의 재구성 후에 형성된 용액, 또는 재구성이 필요없는 용액 또는 고체일 수 있다. 언급된 바와 같이, 제약 조성물은 액체 또는 고체일 수 있다. 제약 조성물은 동물 단백질 무함유일 수 있다.

수술 부위를 "준비"하는 것은 본원에 개시된 조성물을 투여하여 절개 구역에서 근육 긴장을 감소시키는 것을 지칭한다.

본원에 사용된 "보충 투여"는 최초 신경독소 투여에 후속하는 보툴리눔 투여를 지칭한다.

"치료 제제"는 말초 근육의 활성을 특징으로 하는 장애 또는 질환과 같은 장애 또는 질환 및/또는 그와 연관된 증상을 치료함으로써 그것을 완화시키는데 사용될 수 있는 제제를 의미한다.

"치료 유효 농도", "치료 유효량", "유효량", "유효 용량", 및 "치료 유효 용량"은 목적하는 치료 효과를 달성하는데 필요한 작용제 (예를 들어, 예컨대 보툴리눔 독소 또는 보툴리눔 독소를 포함하는 제약 조성물)의 최소 용량을 지칭하고, 유의한 음성 또는 유해 부작용을 유발하지 않으면서 치료될 질환, 장애 또는 상태와 연관된 증상을 감소시키기에 충분한 용량을 포함한다.

"치료하다", "치료하는" 또는 "치료"는 예컨대 다치거나 손상된 조직의 치유에 의해, 또는 기존의 것이거나 인지된 질환, 장애 또는 상태를 변경시키고/거나, 변화시키고/거나, 증진시키고/거나, 개선시키고/거나, 호전시키고/거나 미화하는 것에 의해 목적하는 치료상 또는 미용상의 결과를 달성하도록 하는, 질환, 장애 또는 상태의 완화 또는 감소 (일부 감소, 유의한 감소, 거의 완전한 감소, 및 완전한 감소 포함), 해결 또는 예방 (일시적 또는 영구적)을 의미한다.

"유닛" 또는 "U"는 상업적으로 입수가능한 보툴리눔 신경독소 유형 A의 유닛과 등가의 신경근육 차단 효과를 갖도록 표준화된 활성 보툴리눔 신경독소의 양을 의미한다.

본원에 사용된 "상처"는, 예를 들어 손상에 의해 또는 의도적으로 유발된 피부의 파괴를 지칭한다.

본 개시내용의 대안적 실시양태, 요소, 또는 단계의 그룹화는 제한으로 해석되어서는 안 된다. 각각의 그룹 구성원은 개별적으로 또는 본원에 개시된 다른 그룹 구성원과 임의로 조합되어 언급되고 청구될 수 있다. 그룹의 하나 이상의 구성원은 편의성 및/또는 특허가능성의 이유로 그룹에 포함될 수 있거나 또는 그로부터 결실될 수 있는 것으로 예상된다. 임의의 이러한 포함 또는 결실이 발생할 경우, 명세서는 변형된 그룹을 함유하여, 첨부된 청구항에 사용된 모든 마쿠쉬 그룹의 서면상 기재를 충족시키는 것으로 간주된다.

달리 나타내지 않는 한, 본 명세서 및 청구범위에 사용된 특징, 항목, 양, 파라미터, 특성, 용어 등을 표현하는 모든 숫자는 모든 경우에 용어 "약"에 의해 수식되는 것으로 이해되어야 한다. 본원에 사용된 용어 "약"은 이렇게 수식된 특징, 항목, 양, 파라미터, 특성 또는 용어가 언급된 특징, 항목, 양, 파라미터, 특성 또는 용어의 값의 위 및 아래 플러스 또는 마이너스 10 퍼센트의 범위를 포괄한다는 것을 의미한다. 따라서, 달리 나타내지 않는 한, 명세서 및 첨부된 청구범위에 제시된 수치 파라미터는 변할 수 있는 근사값이다. 적어도, 청구범위의 범주에 대한 균등론의 적용을 제한하고자 하는 것은 아니나, 각각의 숫자 표시는 적어도 보고된 유효 숫자의 수에 비추어, 통상의 반올림 기술을 적용하여 해석되어야 한다. 개시내용의 넓은 범주를 기재하는 수치 범위 및 값이 근사값이라 할지라도, 구체적 예에 제시된 수치 범위 및 값은 가능한 한 정확하게 보고된다. 그러나, 임의의 수치 범위 또는 값은 그의 각각의 시험 측정에서 발견되는 표준 편차로부터 필연적으로 초래되는 특정 오차를 본질적으로 함유한다. 본원에서의 값의 수치 범위의 열거는 단지 이러한 범위 내에 속하는 각각의 별개의 수치를 개별적으로 지칭하는 것의 약칭 방법으로서의 역할을 하는 것으로 의도된다. 본원에 달리 나타내지 않는 한, 수치 범위의 각각의 개별 값은 그것이 본원에서 개별적으로 언급된 바와 같이 본 명세서에 포함된다.

본원에 달리 나타내지 않거나 문맥에 의해 명백하게 모순되지 않는 한, 개시내용을 기재하는 문맥 (특히 하기 청구범위의 문맥)에 사용된 단수 용어 및 유사한 지시물은 단수 및 복수 둘 다를 포괄하는 것으로 해석되어야 한다. 본원에 기재된 모든 방법은, 본원에 달리 나타내지 않거나 문맥에 의해 명백하게 모순되지 않는 한, 임의의 적합한 순서로 수행될 수 있다. 본원에 제공된 임의의 및 모든 예, 또는 예시적인 어휘 (예를 들어 "예컨대")의 사용은 단순히 개시내용을 더 잘 예시하기 위해 의도되고, 달리 청구하는 범주에 제한을 두는 것이 아니다. 본 명세서의 언어가 본원에 개시된 실시양태의 실시에 필수적인 임의의 비-청구 요소를 표시하는 것으로 해석되어서는 안 된다.

신경독소 조성물

본원에 개시된 실시양태는 신경독소 조성물, 예를 들어 빠른 회복 신경독소를 포함한다. 이러한 신경독소는 임의의 제약상 허용되는 형태의 임의의 제약상 허용되는 제제로 제제화될 수 있다. 신경독소는 또한 임의의 제조자에 의해 공급되는 임의의 제약상 허용되는 형태로 사용될 수 있다.

신경독소는 클로스트리디움 박테리아에 의해, 예컨대 클로스트리디움 보툴리눔, 클로스트리디움 부티리쿰, 또는 클로스트리디움 베라티 박테리아에 의해 제조될 수 있다. 추가적으로, 신경독소는 변형된 신경독소; 즉, 천연 또는 야생형 신경독소와 비교하여 그의 아미노산 중 적어도 1개가 결실, 변형 또는 교체된 신경독소일 수 있다. 또한, 신경독소는 재조합으로 생성된 신경독소 또는 그의 유도체 또는 단편일 수 있다.

도 1은 보툴리눔 신경독소 (BoNT)의 1차 구조를 도시한다. 도 2a-2d는 BoNT/E (도 2a, 2c) 및 BoNT/B (도 2b, 2d)의 개략도 및 리본 표현이다. 촉매, 전위, 및 결합 도메인은 각각 CD, TD 및 BD로 라벨링된다.

일부 실시양태에서, 개시된 보툴리눔 신경독소 유형 E (BoNT/E) 조성물은 유형 A와 비교하여 40% 아미노산 상동성을 가지며, 이들은 디술피드 결합에 의해 연결된, 2개의 쇄, 100 kDa 중쇄 (HC) 및 50 kDa 경쇄 (LC)로 이루어진 동일한 기본 도메인 구조를 공유하며, 예를 들어 문헌 [Whelan et al., The complete amino acid sequence of the Clostridium botulinum type-E neurotoxin, derived by nucleotide-sequence analysis of the encoding gene, Eur. J. Biochem. 204(2): 657-667 (1992)]을 참조한다. HC는 수용체 결합 도메인 및 전위 도메인을 함유하는 한편, LC는 시냅토솜-연관 단백질 (SNAP) 효소 활성을 함유한다. 도메인 구조는 모든 보툴리눔 신경독소 혈청형에 의해 공유되는 동일한 구조이다.

개시된 실시양태에서, 신경독소는 단위 투여 형태로 제제화되며; 예를 들어 바이알 중 멸균 용액으로서, 또는 주사용 염수와 같은 적합한 비히클에 의한 재구성을 위한 동결건조 분말이 담긴 바이알 또는 사쉐로서 제공될 수 있다.

일부 실시양태에서, 보툴리눔 독소는 염수, 및 독소를 안정화하고 비-특이적 흡착을 통한 손실을 최소화하는 저온살균된 인간 혈청 알부민을 함유하는 용액 중에 제제화된다. 용액은 멸균 여과되고 (0.2 μm 필터), 개별 바이알에 충전된 다음, 진공-건조되어, 멸균 동결건조 분말을 제공할 수 있다. 사용시, 분말은 멸균 비보존 생리 염수 (주사용 염화나트륨 0.9%)의 첨가에 의해 재구성될 수 있다.

한 실시양태에서, 보툴리눔 유형 E는 0.03 M 인산나트륨, 0.12 M 염화나트륨, 및 1 mg/mL 인간 혈청 알부민 (HSA), pH 6.0 중 20 ng/mL의 5-mL 바이알 공칭 농도로 주사용 멸균 용액 중에 공급된다. 또 다른 실시양태에서, 보툴리눔 유형 E는 인산나트륨, 염화나트륨, 및 HSA로 구성된 액체 제제로서 제공된다. 또 다른 실시양태에서, 보툴리눔 유형 E는 계면활성제 및 디사카라이드를 포함하는 동결건조 또는 액체 제제로서 공급된다.

조성물이 오직 단일 유형의 신경독소, 예를 들어 보툴리눔 유형 E만을 함유할 수 있지만, 개시된 조성물은 장애의 증진된 치료 효과를 제공할 수 있는 2종 이상의 유형의 신경독소를 포함할 수 있다. 예를 들어, 환자에게 투여되는 조성물은 보툴리눔 유형 A 및 E를 포함할 수 있다. 2종의 상이한 신경독소를 함유하는 단일 조성물을 투여하는 것은, 목적하는 치료 효과를 여전히 달성하면서, 단일 신경독소가 환자에게 투여되는 경우보다 각각의 신경독소의 유효 농도를 더 낮출 수 있다. 환자에게 투여되는 조성물은 또한 신경독소 또는 신경독소들과 조합된 다른 제약 활성 성분, 예컨대 단백질 수용체 또는 이온 채널 조정제를 함유할 수 있다. 이들 조정제는 다양한 뉴런들 사이의 신경전달의 감소에 기여할 수 있다. 예를 들어, 조성물은 GABA_A 수용체에 의해 매개되는 억제 효과를 증진시키는 감마 아미노부티르산 (GABA) 유형 A 수용체 조정제를 함유할 수 있다. GABA_A 수용체는 세포막을 가로지르는 전류 흐름을 효과적으로 단락시킴으로써 뉴런 활성을 억제한다. GABA_A 수용체 조정제는 GABA_A 수용체의 억제 효과를 증진시킬 수 있고, 뉴런으로부터의 전기적 또는 화학적 신호 전달을 감소시킬 수 있다. GABA_A 수용체 조정제의 예는 벤조디아제핀, 예컨대 디아제팜, 옥사제팜, 로라제팜, 프라제팜, 알프라졸람, 할라제팜, 클로르디아제폭시드, 및 클로라제페이트를 포함한다. 조성물은 또한 글루타메이트 수용체에 의해 매개되는 흥분성 효과를 감소시키는 글루타메이트 수용체 조정제를 함유할 수 있다. 글루타메이트 수용체 조정제의 예는 AMPA, NMDA, 및/또는 글루타메이트 수용체의 카이네이트 유형을 통해 전류 흐름을 억제하는 작용제를 포함한다.

치료 방법

본원에 개시된 방법은 환자에의 빠른 작용 신경독소의 투여를 포함할 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 신경독소는 보툴리눔 유형 E이다.

본원에 개시된 방법은 환자에의 빠른 작용 신경독소의 보충 투여를 포함할 수 있다. 보충 투여를 포함하는 실시양태는 추가로 선행 신경독소 투여의 결과에 대한 의사 또는 환자 평가를 포함할 수 있다.

일부 실시양태에서, 빠른 작용 신경독소의 투여는 외과적 절차 전에 수행된다. 일부 실시양태에서, 투여는, 예를 들어 절차 전 6시간 내, 절차 전 5시간 내, 절차 전 4시간 내, 절차 전 3시간 내, 절차 전 2시간 내, 절차 전 60분 내, 절차 전 50분 내, 절차 전 40분 내, 절차 전 30분 내, 절차 전 20분 내, 절차 전 10분 내, 절차 전 5분 내, 절차 전 2분 내 등에 수행된다.

대안적 실시양태에서, 빠른 작용 신경독소의 투여는 외과적 절차와 공동으로 수행된다.

다른 실시양태에서, 빠른 작용 신경독소의 투여는 외과적 절차 후에 수행된다. 예를 들어, 투여는 절차 후 1분 내, 절차 후 2분 내, 절차 후 3분 내, 절차 후 4분 내, 절차 후 5분 내, 절차 후 6분 내, 절차 후 7분 내, 절차 후 8분 내, 절차 후 9분 내, 절차 후 10분 내, 절차 후 20분 내, 절차 후 30분 내, 절차 후 40분 내, 절차 후 50분 내, 절차 후 60분 내, 절차 후 90분 내, 절차 후 120분 내, 절차 후 180분 내, 절차 후 240분 내, 절차 후 300분 내 등에 수행될 수 있다. 일부 다른 실시양태에서, 투여는 절차 후 1 내지 3일 내에 수행될 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 투여는 절차 후 3개월 내에 수행될 수 있다.

보충 투여를 포함하는 실시양태에서, 초기 신경독소 투여의 결과의 평가는 예를 들어 초기 투여의 6시간, 초기 투여의 8시간, 초기 투여의 10시간, 초기 투여의 12시간, 초기 투여의 14시간, 초기 투여의 16시간, 초기 투여의 18시간, 초기 투여의 24시간, 초기 투여의 30시간, 초기 투여의 36시간, 초기 투여의 42시간, 초기 투여의 48시간, 초기 투여의 54시간, 초기 투여의 60시간, 초기 투여의 66시간, 초기 투여의 72시간, 초기 투여의 78시간, 초기 투여의 84시간, 초기 투여의 90시간, 초기 투여의 96시간, 초기 투여의 102시간, 초기 투여의 108시간, 초기 투여의 114시간, 초기 투여의 120시간, 초기 투여의 1주, 초기 투여의 2주, 초기 투여의 3주, 초기 투여의 4주, 초기 투여의 5주, 초기 투여의 6주, 초기 투여의 7주, 초기 투여의 8주, 초기 투여의 9주, 초기 투여의 10주, 초기 투여의 11주, 초기 투여의 12주 등 내에 수행될 수 있다.

보충 투여를 포함하는 실시양태에서, 보충 용량의 투여는 예를 들어 평가의 6시간, 평가의 8시간, 평가의 10시간, 평가의 12시간, 평가의 14시간, 평가의 16시간, 평가의 18시간, 평가의 24시간, 평가의 30시간, 평가의 36시간, 평가의 42시간, 평가의 48시간, 평가의 54시간, 평가의 60시간, 평가의 66시간, 평가의 72시간, 평가의 78시간, 평가의 84시간, 평가의 90시간, 평가의 96시간, 평가의 102시간, 평가의 108시간, 평가의 114시간, 평가의 120시간, 평가의 1주, 평가의 2주, 평가의 3주, 평가의 4주, 평가의 5주, 평가의 6주, 평가의 7주, 평가의 8주, 평가의 9주, 평가의 10주, 평가의 11주, 평가의 12주 등 내에 수행될 수 있다.

일부 실시양태에서, 보충 투여 그 자체는, 예를 들어, 빠른 작용 신경독소의 초기 투여의 6시간, 초기 투여의 8시간, 초기 투여의 10시간, 초기 투여의 12시간, 초기 투여의 14시간, 초기 투여의 16시간, 초기 투여의 18시간, 초기 투여의 24시간, 초기 투여의 30시간, 초기 투여의 36시간, 초기 투여의 42시간, 초기 투여의 48시간, 초기 투여의 54시간, 초기 투여의 60시간, 초기 투여의 66시간, 초기 투여의 72시간, 초기 투여의 78시간, 초기 투여의 84시간, 초기 투여의 90시간, 초기 투여의 96시간, 초기 투여의 102시간, 초기 투여의 108시간, 초기 투여의 114시간, 초기 투여의 120시간, 초기 투여의 1주, 초기 투여의 2주, 초기 투여의 3주, 초기 투여의 4주, 초기 투여의 5주, 초기 투여의 6주, 초기 투여의 7주, 초기 투여의 8주, 초기 투여의 9주, 초기 투여의 10주, 초기 투여의 11주, 초기 투여의 12주 등 내에 수행될 수 있다. 일부 실시양태에서, 보충 투여는 예를 들어 초기 투여의 3 내지 6개월 내에 수행될 수 있다. 일부 실시양태에서, 보충 투여는 초기 투여와 공동으로 수행될 수 있다.

본원에 개시된 방법은 (예를 들어, 빠른 작용 신경독소를 사용하여) 신속 개시 효과를 제공할 수 있다. 예를 들어, 개시된 실시양태는, 예를 들어, 투여 후 30분, 투여 후 45분, 투여 후 60분, 투여 후 75분, 투여 후 90분, 투여 후 2시간, 투여 후 3시간, 투여 후 4시간, 투여 후 5시간, 투여 후 6시간, 투여 후 7시간, 투여 후 8시간, 투여 후 9시간, 투여 후 10시간, 투여 후 11시간, 투여 후 12시간, 투여 후 13시간, 투여 후 14시간, 투여 후 15시간, 투여 후 16시간, 투여 후 17시간, 투여 후 18시간, 투여 후 19시간, 투여 후 20시간, 투여 후 21시간, 투여 후 22시간, 투여 후 23시간, 투여 후 24시간, 투여 후 30시간, 투여 후 36시간, 투여 후 42시간, 투여 후 48시간, 투여 후 3일, 투여 후 4일, 투여 후 5일, 투여 후 6일, 투여 후 7일 등 내에 외과적 절개 부근의 근육 활동을 감소시킬 수 있다.

본원에 개시된 방법은 (예를 들어, 빠른 회복 신경독소를 사용하여) 보다 짧은 기간 동안 근육 활동의 감소를 제공할 수 있다. 예를 들어, 개시된 실시양태는, 예를 들어, 투여 후 3일, 투여 후 4일, 투여 후 5일, 투여 후 6일, 투여 후 7일, 투여 후 8일, 투여 후 9일, 투여 후 10일, 투여 후 11일, 투여 후 12일, 투여 후 13일, 투여 후 14일, 투여 후 15일, 투여 후 16일, 투여 후 17일, 투여 후 18일, 투여 후 19일, 투여 후 20일, 투여 후 21일, 투여 후 22일, 투여 후 23일, 투여 후 24일, 투여 후 25일, 투여 후 26일, 투여 후 27일, 투여 후 28일, 투여 후 29일, 투여 후 30일, 투여 후 45일, 투여 후 60일, 투여 후 75일, 투여 후 90일, 투여 후 105일 등 내에 진정되는 근육 활동의 감소를 제공할 수 있다.

부작용이 보툴리눔 주사와 연관될 수 있다. 개시된 실시양태는 통상적인 신경독소 치료, 예를 들어 유형 A와 같은 보다 긴 작용 신경독소를 사용한 치료보다 더 적은 부작용 또는 단축된 기간의 부작용을 발생시키는 신경독소 치료를 제공할 수 있다.

예를 들어, 개시된 실시양태는 더 적은 (또는 더 짧은 기간의) 복시 또는 흐린 시각, 안검 마비 (대상체가 눈꺼풀을 완전히 들어올려 개방할 수 없음), 안면 근육 움직임의 상실, 애성, 방광 제어 상실, 숨가쁨, 연하 곤란, 말하기 곤란, 사망 등의 예를 발생시킬 수 있다.

개시된 방법은 반흔형성하기 쉬운 구역, 예를 들어 외과적 절개 부근의 구역, 또는 피부에 대한 임의의 손상, 예를 들어 외상성 손상 부근의 구역에 투여하는 것을 포함한다. 개시된 실시양태는 반흔형성하기 쉬운 구역에 근접한 근육, 예를 들어 골격근 조직 또는 평활근 조직에 투여하는 것을 포함한다.

추가로, 개시된 실시양태는 보다 특정 기간의 감소된 근육 활동을 제공할 수 있다. 예를 들어, 보다 긴 작용 신경독소에 의하면, 효과 기간에서의 20% 가변성은 유효 기간에서의 1개월의 차이로 이어질 수 있다. 개시된 빠른 회복 신경독소에 의하면, 이러한 20% 가변성은 유효 기간에서 훨씬 덜 현저한 차이를 발생시킨다.

개시된 빠른 작용 신경독소 조성물은 바늘 또는 무바늘 장치를 사용하여 개체에게 주사될 수 있다. 특정 실시양태에서, 방법은 조성물을 개체에게 피하로 주사하는 것을 포함한다. 예를 들어, 투여는 약 30 게이지 이하의 바늘을 통해 조성물을 주사하는 것을 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 방법은 보툴리눔 독소 유형 E를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함한다.

조성물의 주사는 시린지, 카테터, 바늘 및 다른 주사 수단에 의해 수행될 수 있다. 주사는 안면, 목, 몸통, 팔, 손, 하지 및 발을 포함하여, 치료를 필요로 하는 포유동물 신체의 임의의 구역에서 수행될 수 있다. 주사는 표피, 진피, 지방, 근육 또는 피하 층과 같은 특정 구역의 임의의 위치에서 이루어질 수 있다.

예를 들어, 개시된 조성물의 투여에 적합한 골격근은 도 3a-3b에 제시된 예시의 근육 중 임의의 것 또는 근육의 조합을 포함할 수 있다.

투여는 도 4의 개략도에 제시된 신경 중 1종 이상 내로 또는 그 부근에 주사하는 것을 포함할 수 있다.

개시된 조성물의 투여에 적합한 평활근은 혈관 벽, 위 벽, 요관, 장, 대동맥 (중막 층), 안구의 홍채, 전립선, 위장관, 기도, 소동맥, 세동맥, 생식관 (둘 다의 성별), 정맥, 신장의 사구체 (혈관간 세포로 불림), 방광, 자궁, 피부의 입모근, 섬모체근, 괄약근, 기관, 담관 등 중 임의의 것을 포함할 수 있다.

개시된 방법 하에서의 주사의 빈도 및 양은 치료될 특정한 구역의 속성 및 위치에 기초하여 결정될 수 있다. 그러나, 특정 경우에, 최적의 결과를 달성하기 위해 반복 주사가 바람직할 수 있다. 각각의 특정한 경우에 대한 주사의 빈도 및 양은 관련 기술분야 통상의 기술자에 의해 결정될 수 있다.

투여 경로 및 투여량의 예가 제공되기는 하지만, 적절한 투여 경로 및 투여량은 일반적으로 담당 의사에 의해 사례별로 결정된다. 이러한 결정은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 상용적이다 (예를 들어, 문헌 [Harrison's Principles of Internal Medicine (1998), edited by Anthony Fauci et al., 14th edition, published by McGraw Hill] 참조). 예를 들어, 개시된 본 발명에 따른 클로스트리디움 신경독소의 투여 경로 및 투여량은 선택된 신경독소의 용해도 특징 뿐만 아니라 치료될 상태의 정도 및 범주와 같은 기준에 기초하여 선택될 수 있다.

빠른 작용 신경독소는 약 10^-3 U/kg 내지 약 35 U/kg의 양으로 투여될 수 있다. 한 실시양태에서, 신경독소는 약 10^-2 U/kg 및 약 25 U/kg의 양으로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 신경독소는 약 10^-1 U/kg 내지 약 15 U/kg의 양으로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 신경독소는 약 1 U/kg 내지 약 10 U/kg의 양으로 투여된다. 많은 경우에, 약 1 유닛 내지 약 500 유닛의 신경독소, 예컨대 보툴리눔 유형 E의 투여가 효과적인 치료상 경감을 제공한다. 한 실시양태에서, 약 5 유닛 내지 약 200 유닛의 신경독소, 예컨대 보툴리눔 유형 E가 사용될 수 있고, 또 다른 실시양태에서 약 10 유닛 내지 약 100 유닛의 신경독소, 예컨대 보툴리눔 유형 E가 근육과 같은 표적 조직에 국부로 투여될 수 있다.

일부 실시양태에서, 투여는 약 10 유닛의 신경독소, 또는 약 20 유닛의 신경독소, 또는 약 30 유닛의 신경독소, 또는 약 40 유닛의 신경독소, 또는 약 50 유닛의 신경독소, 또는 약 60 유닛의 신경독소, 또는 약 70 유닛의 신경독소, 또는 약 80 유닛의 신경독소, 또는 약 90 유닛의 신경독소, 또는 약 100 유닛의 신경독소, 또는 약 110 유닛의 신경독소, 또는 약 120 유닛의 신경독소, 또는 약 130 유닛의 신경독소, 또는 약 140 유닛의 신경독소, 또는 약 150 유닛의 신경독소, 또는 약 160 유닛의 신경독소, 또는 약 170 유닛의 신경독소, 또는 약 180 유닛의 신경독소, 또는 약 190 유닛의 신경독소, 또는 약 200 유닛의 신경독소, 또는 약 210 유닛의 신경독소, 또는 약 220 유닛의 신경독소, 또는 약 230 유닛의 신경독소, 또는 약 240 유닛의 신경독소, 또는 약 250 유닛의 신경독소, 또는 약 260 유닛의 신경독소, 또는 약 270 유닛의 신경독소, 또는 약 280 유닛의 신경독소, 또는 약 290 유닛의 신경독소, 또는 약 290 유닛의 신경독소, 또는 약 300 유닛의 신경독소, 또는 약 310 유닛의 신경독소, 또는 약 320 유닛의 신경독소, 또는 약 330 유닛의 신경독소, 또는 약 340 유닛의 신경독소, 또는 약 350 유닛의 신경독소, 또는 약 360 유닛의 신경독소, 또는 약 370 유닛의 신경독소, 또는 약 380 유닛의 신경독소, 또는 약 390 유닛의 신경독소, 또는 약 400 유닛의 신경독소, 또는 약 410 유닛의 신경독소, 또는 약 420 유닛의 신경독소, 또는 약 430 유닛의 신경독소, 또는 약 440 유닛의 신경독소, 또는 약 450 유닛의 신경독소, 또는 약 460 유닛의 신경독소, 또는 약 470 유닛의 신경독소, 또는 약 480 유닛의 신경독소, 또는 약 490 유닛의 신경독소, 또는 약 500 유닛의 신경독소 등의 용량을 포함할 수 있다.

일부 실시양태에서, 투여는 약 0.1 나노그램 (ng)의 신경독소, 0.2 ng의 신경독소, 0.3 ng의 신경독소, 0.4 n의 신경독소, 0.5 ng의 신경독소, 0.6 ng의 신경독소, 0.7 ng의 신경독소, 0.8 ng의 신경독소, 0.9 ng의 신경독소, 1.0 ng의 신경독소, 1.1 ng의 신경독소, 1.2 ng의 신경독소, 1.3 ng의 신경독소, 1.4 ng의 신경독소, 1.5 ng의 신경독소, 1.6 ng의 신경독소, 1.7 ng의 신경독소, 1.8 ng의 신경독소, 1.9 ng의 신경독소, 2.0 ng의 신경독소, 2.1 ng의 신경독소, 2.2 ng의 신경독소, 2.3 ng의 신경독소, 2.4 ng의 신경독소, 2.5 ng의 신경독소, 2.6 ng의 신경독소, 2.7 ng의 신경독소, 2.8 ng의 신경독소, 2.9 ng의 신경독소, 3.0 ng의 신경독소, 3.1 ng의 신경독소, 3.2 ng의 신경독소, 3.3 ng의 신경독소, 3.4 ng의 신경독소, 3.5 ng의 신경독소, 3.6 ng의 신경독소, 3.7 ng의 신경독소, 3.8 ng의 신경독소, 3.9 ng의 신경독소, 4.0 ng의 신경독소, 4.1 ng의 신경독소, 4.2 ng의 신경독소, 4.3 ng의 신경독소, 4.4 ng의 신경독소, 4.5 ng의 신경독소, 5 ng의 신경독소, 6 ng의 신경독소, 7 ng의 신경독소, 8 ng의 신경독소, 9 ng의 신경독소, 10 ng의 신경독소 등의 용량을 포함할 수 있다.

일부 실시양태에서, 투여는 약 0.1 나노그램 (ng)의 신경독소 내지 20 ng의 신경독소, 약 1 ng의 신경독소 내지 19 ng의 신경독소, 약 2 ng의 신경독소 내지 18 ng의 신경독소, 약 3 ng의 신경독소 내지 17 ng의 신경독소, 약 4 ng의 신경독소 내지 16 ng의 신경독소, 약 5 ng의 신경독소 내지 15 ng의 신경독소, 약 6 ng의 신경독소 내지 14 ng의 신경독소, 약 7 ng의 신경독소 내지 13 ng의 신경독소, 약 8 ng의 신경독소 내지 12 ng의 신경독소, 약 9 ng의 신경독소 내지 11 ng의 신경독소 등의 용량을 포함할 수 있다. 실시양태에서, 투여는 약 0.1 나노그램 (ng)의 신경독소, 0.2 ng의 신경독소, 0.3 ng의 신경독소, 0.4 ng의 신경독소, 0.5 ng의 신경독소, 0.6 ng의 신경독소, 0.7 ng의 신경독소, 0.8 ng의 신경독소, 0.9 ng의 신경독소, 1.0 ng의 신경독소, 1.1 ng의 신경독소, 1.2 ng의 신경독소, 1.3 ng의 신경독소, 1.4 ng의 신경독소, 1.5 ng의 신경독소, 1.6 ng의 신경독소, 1.7 ng의 신경독소, 1.8 ng의 신경독소, 1.9 ng의 신경독소, 2.0 ng의 신경독소, 2.1 ng의 신경독소, 2.2 ng의 신경독소, 2.3 ng의 신경독소, 2.4 ng의 신경독소, 2.5 ng의 신경독소, 2.6 ng의 신경독소, 2.7 ng의 신경독소, 2.8 ng의 신경독소, 2.9 ng의 신경독소, 3.0 ng의 신경독소, 3.1 ng의 신경독소, 3.2 ng의 신경독소, 3.3 ng의 신경독소, 3.4 ng의 신경독소, 3.5 ng의 신경독소, 3.6 ng의 신경독소, 3.7 ng의 신경독소, 3.8 ng의 신경독소, 3.9 ng의 신경독소, 4.0 ng의 신경독소, 4.1 ng의 신경독소, 4.2 ng의 신경독소, 4.3 ng의 신경독소, 4.4 ng의 신경독소, 4.5 ng의 신경독소, 5 ng의 신경독소, 6 ng의 신경독소, 7 ng의 신경독소, 8 ng의 신경독소, 9 ng의 신경독소, 10 ng의 신경독소 등의 1회 이상의 주사를 포함할 수 있다.

일부 실시양태에서, 투여는 약 0.1 나노그램 (ng)의 신경독소 내지 20 ng의 신경독소, 약 1 ng의 신경독소 내지 19 ng의 신경독소, 약 2 ng의 신경독소 내지 18 ng의 신경독소, 약 3 ng의 신경독소 내지 17 ng의 신경독소, 약 4 ng의 신경독소 내지 16 ng의 신경독소, 약 5 ng의 신경독소 내지 15 ng의 신경독소, 약 6 ng의 신경독소 내지 14 ng의 신경독소, 약 7 ng의 신경독소 내지 13 ng의 신경독소, 약 8 ng의 신경독소 내지 12 ng의 신경독소, 약 9 ng의 신경독소 내지 11 ng의 신경독소 등의 1회 이상의 주사를 포함할 수 있다.

그러나 궁극적으로, 투여되는 독소의 양 및 그의 투여 빈도 둘 다는 치료를 담당하는 의사의 판단 하에 있을 것이고, 독소에 의해 야기되는 안전성 문제 및 효과에 부합하게 될 것이다.

일부 실시양태에서, 투여는 1회 이상의 주사, 예를 들어 실질적으로 절개 부위 또는 절개 선 또는 선들을 따른 주사를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 투여는 특정 패턴, 예를 들어 W 패턴, 및 X 패턴, Z 패턴, 별 패턴, 원 패턴, 반원 패턴, 정사각형 패턴, 직사각형 패턴, 초승달 패턴, 또는 그의 조합의 주사를 포함할 수 있다.

인간에서의 BoNT/E의 작용 개시, 안전성 및 내약성을 평가하기 위해, 미간 주름의 치료를 받고 있는 인간 환자에게 BoNT/E를 투여하는 연구를 수행하였다. 연구는 실시예 1에 기재되어 있다. 도 5에 예시된 바와 같이, BoNT/E를 눈살근 및 추미근 내의 5개의 주사 지점에 투여하였다. BoNT/E는 신속한 작용 개시, 및 유리한 안전성 및 내약성 프로파일로 미간 주름의 중증도의 개선을 제공하였다.

수술후 통증의 감소에서 BoNT/E의 작용 개시 및 효능을 평가하기 위해, 수술후 통증의 동물 모델에서 BoNT/E를 래트에게 투여하는 또 다른 연구를 수행하였다. 실시예 9에 기재된 바와 같이, 마취된 래트에서, 뒷발의 족저측 피부, 근막 및 근육을 통해 1cm 종방향 절개를 만들었다. 비손상 발을 대조군 발로서 사용하였다. 수술 24시간 후에, 절개는 기계적 이질통을 발생시켰고, 이를 전자 폰 프라이 시험을 사용하여 정량화하였다. 3회의 용량의 BoNT/E를 수술 24시간 전에 손상된 발 및 대조군 발 둘 다의 뒷발 내로 투여하였다. 통증 역치를 수술 24시간 후에 전자 폰 프라이 시험으로 평가하였다. 하나의 군에서는, 모르핀을 사용하여 달성가능한 최대 통증 감소를 평가하였다. 결과를 도 8에 제시하며, 비히클-처리군과 비교하여 증가 (+) 또는 감소 (-)로서 표현한다. BoNT/E는 도 8에 제시된 바와 같이 BoNT/E의 통증 감소 능력을 입증하는 통증 역치의 유의한 증가를 제공하였다.

신경독소를 특정 시간 기간에 걸쳐 미리 결정된 속도로 생체내 전달하기 위해 제어 방출 시스템이 본원에 기재된 실시양태에서 사용될 수 있다. 일반적으로, 방출 속도는 시스템의 설계에 의해 결정되며, pH와 같은 환경 조건에 대체로 독립적일 수 있다. 수년의 기간에 걸쳐 약물을 전달할 수 있는 제어 방출 시스템이 공지되어 있다. 반대로, 지속 방출 시스템은 전형적으로 24시간 이하 이내에 약물을 전달하며, 환경 요인이 방출 속도에 영향을 미칠 수 있다. 따라서, 이식된 제어 방출 시스템 ("이식물")으로부터의 신경독소의 방출 속도는 캐리어 이식물 물질 및 약물 자체의 물리화학적 특성의 함수이다. 전형적으로, 이식물은 숙주 반응을 적게 도출하거나 도출하지 않는 불활성 물질로 제조된다.

제어 방출 시스템은 캐리어에 혼입된 신경독소로 구성될 수 있다. 캐리어는 중합체 또는 바이오-세라믹 물질일 수 있다. 제어 방출 시스템은 환자의 신체의 선택된 위치에 주사, 삽입 또는 이식되어 그곳에서 장기간 체류할 수 있고, 그러한 동안 신경독소는 목적하는 치료 효능을 제공하는 방식 및 농도로 이식물에 의해 방출된다.

중합체 물질은 확산, 화학 반응 또는 용매 활성화로 인해, 뿐만 아니라 자기, 초음파 또는 온도 변화 인자에 의해 영향을 받을 때 신경독소를 방출할 수 있다. 확산은 저장소 또는 매트릭스로부터 이루어질 수 있다. 화학적 조절은 중합체 분해 또는 중합체로부터의 약물의 절단으로 인한 것일 수 있다. 용매 활성화는 중합체의 팽윤 또는 삼투 효과를 수반할 수 있다.

이식물은 메틸렌 클로라이드에 용해된 적합한 중합체의 용액에 목적하는 양의 안정화된 신경독소를 혼합하는 것에 의해 제조될 수 있다. 용액은 실온에서 제조될 수 있다. 이어서, 용액을 페트리 접시로 옮기고, 진공 데시케이터에서 메틸렌 클로라이드를 증발시킬 수 있다. 목적하는 이식물 크기 및 그에 따른 혼입된 신경독소의 양에 따라, 적합한 양의 건조된 신경독소 혼입 이식물을 몰드에서 약 8000 p.s.i.로 5초 동안 또는 3000 p.s.i.로 17초 동안 압축하여 신경독소를 캡슐화한 이식물 디스크를 형성한다.

바람직하게는, 사용되는 이식물 물질은 실질적으로 비-독성, 비-발암성, 및 비-면역원성이다. 적합한 이식물 물질은 중합체, 예컨대 폴리(2-히드록시 에틸 메타크릴레이트) (p-HEMA), 폴리(N-비닐 피롤리돈) (p-NVP)+, 폴리(비닐 알콜) (PVA), 폴리(아크릴산) (PM), 폴리디메틸 실록산 (PDMS), 에틸렌-비닐 아세테이트 (EVAc) 공중합체, 폴리비닐피롤리돈/메틸아크릴레이트 공중합체, 폴리메틸메타크릴레이트 (PMMA), 폴리(락트산) (PLA), 폴리(글리콜산) (PGA), 폴리무수물, 폴리(오르토 에스테르), 콜라겐 및 셀룰로스 유도체 및 바이오세라믹, 예컨대 히드록시아파타이트 (HPA), 인산삼칼슘 (TCP), 및 알루미늄칼슘 포스페이트 (ALCAP)를 포함한다. 락트산, 글리콜산 및 콜라겐은 생분해성 이식물을 제조하는데 사용될 수 있다.

이식물 물질은 생분해성 또는 생침식성일 수 있다. 생침식성 이식물의 장점은 그것이 환자로부터 제거될 필요가 없다는 것이다. 생침식성 이식물은 생물활성 물질의 막 또는 매트릭스 방출에 기초할 수 있다. PLA-PGA로 제조된 생분해성 마이크로구체는 피하 또는 근육내 투여용으로 공지되어 있다.

개시된 실시양태를 실시하기 위한 키트가 또한 본 개시내용에 의해 포괄된다. 키트는 30 게이지 이하의 바늘 및 상응하는 시린지를 포함할 수 있다. 키트는 또한 클로스트리디움 신경독소 조성물, 예컨대 보툴리눔 유형 E 독소 조성물을 포함한다. 신경독소 조성물은 시린지 내에 제공될 수 있다. 조성물은 바늘을 통해 주사가능하다. 키트는 시린지 및 바늘의 크기, 및 그에 담긴 주사가능한 조성물의 부피에 기초하여, 이어서 키트가 치료하도록 설계된 구체적 결핍에 기초하여 다양한 형태로 설계된다.

실시예

하기 비제한적 실시예는 단지 예시 목적으로, 대표적인 실시양태의 보다 완전한 이해를 용이하게 하기 위해 제공된다. 이러한 실시예는 본 명세서에 기재된 실시양태 중 임의의 것을 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다.

실시예 1

미간 주름을 치료하기 위한 보툴리눔 독소 유형 E의 사용

미간의 찌푸린 주름을 갖는 대상체에서 개시된 빠른 작용 유형 E 조성물의 단일 치료 사이클의 안전성 및 효능을 평가하기 위해, 인간에서 무작위, 이중-맹검, 위약-대조, 상승 용량 코호트, 2a상 연구를 수행하였다. 본 연구는 이러한 프로토콜 및 모든 적용가능한 연방 및 주의 규정을 준수하여 수행하였다. 보툴리눔 신경독소 하위유형 E (BoNT/E, "EB-001")로 구성된 조성물을 대상체에게 투여하였다. 이러한 최초 인간 무작위화, 이중-맹검, 위약-대조, 상승 용량 코호트 연구에 EB-001 (본원에 개시된 보툴리눔 유형 E 조성물) (N = 35) 또는 위약 (N = 7)을 제공받은 42명의 대상체가 등록되었다. 효능 1차 결과는 최대로 찌푸렸을 때 GL 중증도에 있어서 2-등급의 조사자-평가 (IR-2) 개선을 갖는 대상체의 비율이었다. 안전성 평가는 유해 사건 (AE), 실험실 시험, 및 신체 검사를 포함하였다. IR-2 반응은 제3 코호트 (EB-001)에서 시작되어 관찰되었고, 보다 높은 용량에서 증가된 비율이 관찰되었다. 임상 효과의 개시는 24시간 이내였고, 가장 높은 용량의 경우 지속기간은 14 내지 30일 범위였다. AE 발생률은 낮았고, 가장 흔한 것은 경도 내지 중등도의 두통이었다. 심각한 AE 또는 안검하수증은 없었고, 다른 안전성 평가에 있어서 임상적으로 유의한 변화도 없었다.

GL에서의 이러한 임상 연구에서, EB-001은 바람직한 안전성 및 내약성, 및 가장 높은 용량에서 80% 반응률을 갖는 용량 의존성 효능을 나타내었다. EB-001 최대 임상 효과는 24시간 내에 관찰되어, 14일 내지 30일간 지속되었다. 이러한 구별되는 EB-001 프로파일은 효과의 빠른 개시 및 짧은 지속기간이 바람직한 미적 및 치료 용도를 위한 그의 개발을 뒷받침한다.

아세틸콜린의 시냅스-전 방출을 억제하는 보툴리눔 신경독소는 자연에서 가장 강력한 분자에 속한다. 근육에 주사될 경우, 보툴리눔 신경독소는 신경근육 전송을 억제하여 용량-의존성 국부 근육 이완을 야기한다. 혈청형 A 및 B를 포함한 정제된 보툴리눔 신경독소는 주사가능한 약물로서 개발되었고, 다양한 신경근육 상태를 치료하기 위해 광범위하게 사용된다. 보툴리눔 신경독소 혈청형 E는 지금까지 임상 용도로 개발되지 않은 신규 혈청형이다. 보툴리눔 독소 유형 E는 모든 보툴리눔 신경독소 중 가장 빠른 개시 및 가장 짧은 작용 지속기간을 갖는다. 유형 E는 도 1에 제시된 바와 같이 디술피드 결합에 의해 연결된 100 kDa 중쇄 및 50kDa 경쇄의 2개의 단백질 쇄로 이루어진, 유형 A와 유사한 도메인 구조를 갖는다. 유형 E는 유형 A와 동일한 시냅스전 소포 단백질 (시냅토솜 연관 단백질 25)을 절단하지만 상이한 절단 부위에서 절단함으로써 신경근육 전송을 억제한다. 운동 축삭 상의 2개의 결합 부위가 보툴리눔 신경독소에 의한 신경 세포의 높은 친화도 인식을 매개한다. 결합은 먼저 세포 표면 강글리오시드에 의해 매개되고, 이어서 특이적 단백질 수용체에 의해 매개된다. 이들 수용체는 운동 축삭 말단의 신경근육 접합부에서 발견된다. 보툴리눔 독소 유형 A 및 E는 둘 다 특이적 수용체 시냅스 소포 단백질 2에 결합하는 것으로 제시되었고, 오직 이들 2종의 혈청형만이 이러한 수용체를 공유한다. 이는 GL을 갖는 대상체에서 보툴리눔 독소 유형 E의 상승 용량의 안전성 및 효능을 평가하는 최초 임상 연구였다.

본 연구는 EB-001의 안전성 및 효능의 최초 인간 평가이며, 중등도 내지 중증 GL의 치료에 초점이 맞추어져 있다. EB-001은 주사용 액체로 제제화된 보툴리눔 독소 유형 E의 사유 정제된 형태이다 (본티, 인크.(Bonti, Inc.), 미국 캘리포니아주 뉴포트 비치). 이는 2개의 전문 임상 센터 (스티브 요엘린(Steve Yoelin), MD 의학 협회, 미국 캘리포니아주 뉴포트 비치; 피부학 임상 연구 센터, 미국 캘리포니아주 프리몬트)에서 수행된 무작위화, 이중-맹검, 위약-대조, 상승-용량 코호트 연구였다. 본 연구는 임상시험 심사 위원회 (아스파이어 임상시험 심사 위원회, 미국 캘리포니아주 샌티)에 의해 승인되었고, 헬싱키 선언에 의해 정립된 가이드라인에 따라 수행되었다. 모든 대상체로부터 그의 참여 전에 서면 사전 동의를 제출받았다.

18 내지 60세 연령의 총 42명의 건강한 독소-나이브 남성 및 여성 대상체가 연구에 등록되었다. 각 대상체의 참여는 대략 6주 동안 지속되었다. 주요 포함 기준은 하기와 같다: 최대로 찌푸렸을 때 중등도 내지 중증 등급의 양측 대칭 GL의 존재, 안경의 사용 없이 (콘택트 렌즈 사용은 허용됨) 안면 주름을 정확하게 평가하기에 충분한 시력, 및 연구 요건을 따르는 능력. 주요 배제 기준은 하기와 같다: 임의의 비제어 전신 질환 또는 다른 의학적 상태, 보툴리눔 신경독소에의 노출에 의해 대상체를 증가된 위험에 빠뜨릴 수 있는 임의의 의학적 상태 (진단된 중증 근무력증, 이튼-램버트 증후군, 근육위축 측삭 경화증, 또는 신경근육 기능을 방해하는 임의의 다른 상태 포함), 현재 또는 이전의 보툴리눔 신경독소 치료, 보툴리눔 신경독소에 대한 공지된 면역화 또는 과민성, 연구의 3 내지 12개월 내의 사전-명시된 피부과적 시술 (비-절제 박피, 안면 미용 시술, 국소/경구 레티노이드 요법 등), 및 이전의 안와주위 수술 또는 치료. 여성은 임신하였거나, 수유중이거나, 임신 계획이 있는 경우 등록되지 못한다. 가임 여성 파트너(들)가 있는 남성은 그들이 투여 후 3개월 동안 이중 피임법을 사용하는 것에 동의한 경우에만 등록되었다.

스크리닝 시, 대상체 인구통계, 의료 병력, 및 선행 및 병용 의약을 기록하고, 알콜/약물 스크리닝을 수행하였다. 치료 전 기준선에서, 그리고 연구 종료시까지 매 추적 방문 시에 표준화된 안면 사진촬영을 수행하였으나, 효능 평가에 사진을 사용하지는 않았다.

7개의 코호트 (코호트당 6명의 대상체)를 등록하고, 상승 용량의 EB-001 또는 위약을 5:1 비로 제공하였다. 전임상 안전성 및 독성 연구 (미공개 데이터)로부터의 무관찰 부작용 수준에 기초하여 이러한 최초 인간 연구에서의 최대 권장 개시 용량 (10-배의 안전 계수를 가짐)을 개발하였다. 이로부터, 기본 용량 (코호트 1)을 계산하고, 이를 효과적인 용량 미만인 것으로 결정하고, 코호트 2 내지 7에게 각각 기본 용량의 3, 9, 12, 16, 21, 및 28배를 제공하였다. 이는 EB-001의 효과적인 용량 미만 내지 최대-효과적인 용량을 나타내었다. 총 용량을 표준화된 방식으로 5개의 주사 부위에 동일한 부피로 전달하였다 (눈살근, 좌측 및 우측 내측 추미근, 및 좌측 및 우측 외측 추미근 내로 부위당 0.1 mL) (도 5 참조). 외측 추미근에의 주사 간격은 안와상 능선 위 대략 1 cm였다. EB-001을 5-mL 바이알 내의 주사용 멸균 용액으로 공급하였다. 위약은 EB-001이 없는 동일한 바이알로 공급하였다.

각 대상체는 스크리닝 (제-30일 내지 제-1일), 기준선/주사 (제0일), 제1일, 제2일, 제7일, 제14일, 및 제30일 (연구 종료), 및 제42일 (최종 안전성 추적)의 방문을 완료하였다.

안전성은 유해 사건 (AE), 실험실 시험, 심전도 (ECG), 신체 검사, 활력 징후 (맥박수, 호흡률, 및 혈압), 소변 임신 검사 (가임 여성의 경우), 및 보툴리눔 신경독소의 잠재적 확산에 대해 평가하기 위한 집중 신경학 검사에 의해 평가하였다. 치료-발현성 AE (TEAE)는 연구 치료에의 노출 후 중증도가 시작되거나 악화된 임의의 AE로 정의하였다. AE 및 TEAE를 문헌 [Medical Dictionary for Regulatory Activities (MedDRA, version 19.0)]을 사용하여 기관계 분류 및 선호 용어에 의해 요약하였다. 심각한 AE (SAE, 또는 의학적 심각성에 대한 규제 기준을 충족시키는 AE) 및 AE로 인한 중단을 또한 평가하였다. AE의 중증도는 경도, 중등도, 중증, 또는 생명 위협으로 기록하였다. 각 투여 코호트의 등록 전에, 안전성 데이터 검토 위원회를 소집하여 이전 코호트(들)로부터의 모든 안전성 데이터를 분석하였다.

스크리닝, 기준선, 및 제1일, 제2일, 제7일, 제14일, 및 제30일에, 안면 주름 단위 (FWS)를 사용하여 최대로 찌푸렸을 때 및 휴식 시의 대상체의 GL을 평가하였다. 조사자 및 대상체에 의해 평가를 완료하였다. FWS는 안면 주름 중증도의 평가에 사용되는 광범위하게 승인된 척도이다. 본 연구에서, GL의 중증도를 표시하는 4-점 단위는 하기와 같았다: 0 = 없음, 1 = 경도, 2 = 중등도, 3 = 중증. 대상체는 조사자의 FWS 평가 (IR-2)에 기초하여 적어도 2-등급 개선 (감소)을 달성한 경우에 치료 응답자로 간주되었다. 1차 효능 변수는 제30일까지 임의의 기준선후 방문 시 최대로 찌푸렸을 때의 IR-2 반응자의 비율이었다. 추가의 관심 효능 종점은 제1일, 제2일, 제7일, 제14일, 또는 제30일에 부재하거나 또는 경도의 조사자-평가 FWS 등급을 달성한 반응자의 비율이었다 (방문별로 분석됨).

안전성 집단 및 효능 집단의 2개 분석 집단을 사전-명시하였다. 모든 분석에 대해 위약을 제공받은 대상체를 풀링하였다. 안전성 집단은 연구 치료를 받고 이후 적어도 1회의 안전성 평가를 받은 모든 대상체를 포함하였다. 모든 TEAE 및 SAE를 치료군별로 요약하였다. 조사자는 실험실 시험, ECG, 신체 검사, 활력 징후, 소변 임신 검사, 및 집중 신경학 검사를 포함한 모든 안전성 파라미터를 검토하고, 임상 유의성을 평가하였다. 효능 집단은 적어도 1회 용량의 연구 치료를 받고 적어도 1회의 기준선후 효능 평가를 받은 모든 무작위화된 대상체로서 정의되는, 변형된 치료 의도 (mITT) 집단이다. mITT 집단에 대해 인구통계 및 기준선 특징의 분석을 수행하였다. 의료 병력은 안전성 집단에 기초하였고, MedDRA를 사용하여 코드화하고, 기관계 분류 및 선호 용어에 의해 요약하였다. 선행 및 병용 의약은 안전성 집단에 기초하였고, 세계 보건 기구 해부학적 및　치료학적 의약품 분류 지표를 사용하여 코드화하고, 약물 부류 및 치료군에 의해 요약하였다. mITT 집단을 사용하여 효능 분석을 수행하였다. FWS 등급을 빈도 계수 및 반응률 (%)을 사용하여 치료 및 연구일별로 요약하였다. 피셔 정확 검정을 사용하여 0.05의 유의성 수준으로 각 EB-001 코호트 대 위약 (풀링됨)에서의 IR-2 반응자의 비율을 비교하는 분석을 수행하였다.

연구를 위해 스크리닝된 59명의 대상체 중에서, 43명이 7개의 코호트 중 1개에 등록되었다. 1명의 대상체는 치료를 받지 않았고, 결과적으로 42명의 대상체가 mITT 및 안전성 집단에 포함되었다 (EB-001 치료 35명 및 위약 치료 7명). 41명의 대상체가 연구를 완료하였고, 1명의 대상체는 추적 소실되었다. EB-001 (풀링됨) 대 위약 (풀링됨) 군의 대상체의 평균 (범위) 연령은 각각 47.9세 (22세 내지 60세) 및 50.4세 (32세 내지 57세)였다. 대상체 대부분은 여성이었고 (EB-001 = 91.4%; 위약 = 85.7%) 백인이었다 (둘 다의 군에 대해 71.4%). 최대로 찌푸렸을 때의 기준선 평균 (표준 편차 [SD]) 조사자-평가 GL은 EB-001 및 위약 군에서 각각 2.6 (0.50) 및 2.9 (0.38)였다. EB-001 및 위약군은 실질적인 군-사이의 차이 없이 잘 균형잡혔다.

제30일까지의 임의의 기준선후 방문에서 최대로 찌푸렸을 때의 GL 중증도에 대해 IR-2 반응을 달성한 mITT 집단 내 대상체의 비율을 도 6에 용량 코호트별로 제시한다. 코호트 3에서, 대상체의 40%가 IR-2 반응자였다. 이러한 반응자율은 모든 보다 높은 용량 코호트에서와 동일하거나 더 컸고, 코호트 6 및 7은 80%의 IR-2 반응자를 가졌다. 코호트 6 및 7은 위약 대비 유의하게 더 큰 IR-2 반응자 백분율을 입증하였다 (P = 0.046). 도 7은 제30일까지 임의의 기준선후 방문 시 최대로 찌푸렸을 때 부재하거나 또는 경도의 GL의 조사자-평가 FWS 등급을 갖는, 각각의 코호트에서의 대상체의 비율을 요약한다. 코호트 2 내지 7 (포함)은 위약 대비 더 큰 반응자 백분율을 가졌고, 코호트 3 이상에서 60% 내지 100%의 비율이 달성되었다. 코호트 3 내지 7에서, 제1일, 제2일 및/또는 제7일에 거의 부재하거나 또는 경도의 반응이 관찰되었다. 코호트 3, 5, 6 및 7에서 제14일에, 및 코호트 3 및 5에서 제30일에 1명의 반응자 (20%)가 관찰되었다. 안전성 결과는 이러한 집단에서 IM 주사로서 투여된 EB-001의 모든 평가된 용량의 안전성을 뒷받침한다. 어떠한 대상체에 대해서도 신경학 검사, ECG, 신체 검사, 또는 실험실 시험에서 기준선으로부터의 임상적으로 유의한 변화가 관찰되지 않았다.

EB-001로 치료된 5명의 대상체는 TEAE를 보고하였고, 위약군에서는 없었다. SAE는 보고되지 않았고, 어떠한 TEAE도 연구의 중단으로 이어지지 않았다. 모든 TEAE는 중증도에 있어서 경도 또는 중등도였다. 인두통 및 플루 유사 증상 사례는 치료와 관련이 없는 것으로 생각되었다. 3명의 대상체가 두통 TEAE를 보고하였고, 그 중 1명은 치료와 관련된 것으로 생각되었다. 두통 발생률에 있어서 용량-관련 증가는 없었다. 독소의 확산과 관련이 있을 수 있는 안검하수증 또는 다른 TEAE 사례는 존재하지 않았다.

본 발명자들의 지식으로는, 이것이 임의의 미적 또는 치료 용도에서의 보툴리눔 독소 유형 E 생성물의 제1 대조 임상 시험이다. IM 투여된 보툴리눔 독소 유형 E의 신규 정제된 형태인 EB-001의 이러한 최초 인간 연구는 EB-001의 안전성, 내약성, 및 효과적인 용량-범위를 평가하는 그의 목적을 충족시켰다. EB-001의 보다 높은 투여 코호트에서 보다 큰 비율의 치료 반응자가 존재하는 용량 반응이 관찰되었다. IR-2 반응은 코호트 3에서 시작되어 관찰되었고, 보다 높은 용량 코호트에서 증가되었으며, 이는 EB-001의 효과적인 용량 범위가 코호트 4 내지 7에서 사용된 용량일 수 있음을 시사한다. 코호트 6 및 7은 승인된 보툴리눔 독소 유형 A 생성물과 유사한 반응률인 80% IR-2 반응자를 가졌다. 부재하거나 또는 경도의 FWS 등급을 달성한 대상체는 코호트 2에서 시작되어 관찰되었다. 효과의 개시 측면에서, 치료 반응은 투여 후 24시간만큼 조기에 관찰되었고, 이는 보툴리눔 독소 유형 E가 유형 A보다 더 빨리 개시된다는 것을 시사한 선행 보고서를 뒷받침한다.

부재하거나 또는 경도의 등급을 갖는 반응자의 비율로서 정의되는 효과의 지속기간과 관련하여, 5개의 보다 높은 용량 코호트의 대부분에서 1명의 대상체에서 제14일까지, 그리고 5개의 보다 높은 용량 코호트 중 2개에서 1명의 대상체에서 제30일까지 효과가 관찰되었다. EB-001의 모든 용량은 국부 주사 부위 반응없이 우수한 내약성을 나타내었다. 어떠한 SAE 또는 중증 TEAE도 보고되지 않았고, TEAE로 인한 중단도 존재하지 않았다. 가장 흔한 TEAE인 두통은 중증도에 있어서 경도 또는 중등도였고, 다른 치료 관련 AE는 존재하지 않았다. 어떠한 용량 수준에서도 안검하수증 사례는 존재하지 않았고, 잠재적으로 독소의 확산과 관련된 사례도 존재하지 않았다. 따라서, 본 연구에서, 임상 안전성 및 내약성 프로파일은 바람직한 것으로 보인다. EB-001의 효능 및 안전성 프로파일은 유망하고, GL의 치료 및 다른 안면 미적 용도에 있어서 특별한 치료 옵션으로서의 EB-001의 잠재성을 뒷받침한다. 빠른 개시는 예상외의 사회적 또는 직업적 행사 전에 신속한 안면 주름 치료를 추구하는 개체의 미충족 필요를 충족시킬 수 있다. 제한된 효과의 지속기간은 보툴리눔 신경독소 치료의 사용을 처음으로 고려하고 있을 수 있는, 더 긴 기간의 참여는 원치않는 개체에게 유익할 수 있다. EB-001 치료는 12-주의 보툴리눔 독소 유형 A 생성물의 효과 지속기간과 비교하여 보다 짧은 효과 지속기간에 걸쳐 미적 효과를 평가하는 것을 가능하게 할 것이다. GL을 갖는 대상체에서의 이러한 최초 임상 연구에서, EB-001은 모든 코호트에서 바람직한 안전성 및 내약성을 나타내었다. 7개의 코호트 중 5개가 위약과 비교하여 수치상 더 높은 반응률을 나타내어, GL 중증도 감소에 있어서의 EB-001의 효능을 뒷받침한다. 2개의 가장 높은 용량은 승인된 보툴리눔 독소 유형 A 생성물과 유사한 80% 반응률을 제공하였다. 유형 A 생성물의 공지된 시간 경과와 대조적으로, EB-001의 임상 효과는 24시간 내에 관찰되었고 (개시), 14-30일 동안 지속되었다 (지속기간). 이러한 구별되는 임상 프로파일은 효과의 빠른 개시 및 짧은 지속기간이 바람직한 안면 미적 및 주요 치료 용도를 위한 EB-001의 추가의 개발을 뒷받침한다.

총 용량을 하기와 같이 배분하였다:

실시예 2

박테리아 괴사성 병변을 치료하기 위한 보툴리눔 독소 유형 E의 사용

60세 여성은 그의 다리에 박테리아 괴사성 병변을 나타내었다. 변연절제 시술 12시간 전에, 보툴리눔 유형 E를 병변의 경계 주위에 주사하였다 (6개의 동등하게 이격된 주사 부위; 각 부위에 5U가 주사됨). 보툴리눔 유형 E는 병변 주위의 근육 활동을 감소시킬 뿐만 아니라 CGRP의 뉴런 방출을 차단한다. 1주 내에 병변은 치유되고 있다.

실시예 3

30세 여성은 그의 팔에 박테리아 괴사성 병변을 나타내었다. 진단 직후에, 보툴리눔 유형 E를 병변의 경계 주위에 주사하였다 (15개의 동등하게 이격된 주사 부위; 각 부위에 3U가 주사됨). 보툴리눔 유형 E는 병변 주위의 근육 활동을 감소시키고, CGRP의 뉴런 방출을 차단한다. 1주 내에 병변은 치유되고 있다.

실시예 4

14세 소년은 그의 팔에 박테리아 괴사성 병변을 나타내었다. 진단 직후에, 보툴리눔 유형 E를 병변의 경계 주위에 주사하였다 (15개의 동등하게 이격된 주사 부위; 각 부위에 3U가 주사됨). 보툴리눔 유형 E는 병변 주위의 근육 활동을 감소시키고, CGRP의 뉴런 방출을 차단한다. 1주 내에 병변은 치유되고 있다.

실시예 5

박테리아 괴사성 병변을 치료하기 위한 보툴리눔 독소 유형 E 및 유형 A의 사용

24세 여성은 그의 복부에 박테리아 괴사성 병변을 나타내었다. 진단 직후에, 보툴리눔 유형 E 및 A의 조합물을 병변의 경계 주위에 주사하였다 (12개의 동등하게 이격된 주사 부위; 각 부위에 4U가 주사됨). 보툴리눔은 병변 주위의 근육 활동을 감소시키고, CGRP의 뉴런 방출을 차단한다. 1주 내에 병변은 치유되고 있다.

실시예 5

실시예 6

편두통을 치료하기 위한 보툴리눔 독소 유형 E A의 사용

만성 편두통을 앓고 있는 40세 남성에게 두개골 주위에 보툴리눔 유형 E를 주사하였다 (20개의 동등하게 이격된 주사 부위; 각 부위에 2U가 주사됨). 환자는 다음 달 동안 편두통이 부재하였다.

실시예 7

화상 통증을 치료하기 위한 보툴리눔 독소 유형 E의 사용

14세 여아가 그의 팔에 2"x2" 3도 화상을 나타내었다. 보툴리눔 유형 E를 화상의 경계 주위에 각각 1 유닛의 총 10회 주사로 투여하였다. 통증 완화를 48시간 내에 느꼈고, 이는 4주 동안 지속되었다.

실시예 8

염증을 치료하기 위한 보툴리눔 독소 유형 E의 사용

55세 남성은 그의 하퇴에서 국재화된 종창을 동반한 감염을 나타내었다. 주사당 0.5 ng의 20회 주사를 환자의 하퇴에 투여하였다. 36시간 내에 염증이 감소하였다.

마지막으로, 본 명세서의 측면이 구체적 실시양태를 언급하는 것에 의해 강조되었지만, 관련 기술분야의 통상의 기술자는 이들 개시된 실시양태가 단지 본원에 개시된 대상의 원리를 예시하는 것임을 쉽게 인식할 것으로 이해된다. 따라서, 개시된 대상은 어떠한 방식으로도 본원에 기재된 특정한 방법론, 프로토콜, 및/또는 시약 등으로 제한되지 않는다는 것을 이해해야 한다. 이와 같이, 본 명세서의 취지를 벗어나지 않으면서 본원의 교시에 따라 개시된 대상에 대한 다양한 변형 또는 변경 또는 대안적 구성이 이루어질 수 있다. 마지막으로, 본원에 사용된 용어는 오직 특정한 실시양태를 기재하기 위한 목적이며, 청구범위에 의해서만 규정되는 본 개시내용의 범주를 제한하는 것으로 의도되지 않는다. 따라서, 본 개시내용의 실시양태는 정확하게 제시되고 기재된 것으로 제한되지 않는다.

실시예 9

수술후 통증을 치료하기 위한 보툴리눔 독소 유형 E의 사용

수술후 통증을 치료하기 위한 BoNT/E의 단일 국부 투여의 효과를 브렌난 모델로 공지되어 있는 수술후 통증의 래트 모델에서 평가하였다. 간략하게, 모델은 외과적 절개 후 증가된 기계적 감수성의 평가를 가능하게 한다. 마취된 래트에서, 뒷발의 족저측 피부, 근막 및 근육을 통해 1-cm 종방향 절개를 만들었다. 대조군 발은 외과적 손상이 없는 발을 지칭한다. 수술 24시간 후에, 절개는 기계적 이질통을 발생시켰고, 이를 전자 폰 프라이 시험을 사용하여 정량화하였다. 3회의 용량의 BoNT/E를 수술 24시간 전에 손상된 발 및 대조군 발 둘 다의 뒷발 내로 투여하였다. 통증 역치를 수술 24시간 후에 전자 폰 프라이 시험으로 평가하였다. 하나의 군에서는, 모르핀을 사용하여 달성가능한 최대 통증 감소를 평가하였다. 결과를 도 8에 제시하며, 비히클-처리군과 비교하여 증가 (+) 또는 감소 (-)로서 표현한다. 도 8을 참조하면, 대조군 발 및 손상된 발 둘 다에 대해: (1) 제1 칼럼은 비히클-처리군에 대해 수득된 데이터를 보여주고, (2) 제2, 제3 및 제4 칼럼은 BoNT/E 처리군에 대해 각각 0.75ng/kg, 1ng/kg 및 2ng/kg의 증가하는 농도에서 수득된 데이터를 보여주고; (3) 마지막 칼럼은 모르핀-처리군에서 수득된 데이터를 보여준다. 수술후 통증에 대한 이러한 브렌난 래트 모델에서, 치료가 효과적일 경우, 통증 역치는 대조군 비손상 발의 값에 더 근접하게 되돌아간다. 도 8에 제시된 바와 같이, 모르핀은 통증 역치를 대조군 비손상 발의 통증 역치까지 완전히 감소시킬 수 있었다. BoNT/E 치료된 발은 용량 의존성 통증 감소를 나타내었다.

근육 이완에 대한 BONT/E의 효과를 또한 근육 이완의 DAS 모델에서 평가하였다. 간략하게, DAS 검정은 뒷다리 상승 (꼬리-올리기)에 반응한 마우스 뒷다리 발가락 외전 ("놀람", "발가락 펴기") 행동 반사에 대한 BoNT 제제의 효과를 조사한다. 마비의 정도는 뒷다리 발의 발가락을 외전시키는 마우스의 능력을 점수화함으로써 측정된다. 외전의 상실은 0에서 4로 점수화되며, 여기서 4는 외전 능력의 총 상실을 나타내고, 0은 발가락을 외전시키는 완전한 능력을 나타낸다. 상기 기재된 바와 같이 BoNT/E로 처리된 손상된 발 및 비손상된 발에 대해 DAS 검정을 수행하였다. BoNT/E 처리된 군에서 용량 반응 프로파일이 관찰되었으며, 이는 DAS 반응에 의해 측정된 바와 같은 근육 이완 활성을 입증하는 것으로 밝혀졌고 (데이터는 제시되지 않음), 여기서: (1) BoNT/E는 0.75 ng/kg 내지 2 ng/kg의 용량을 사용한 DAS 검정에서 용량-의존성 효과를 나타내었고; (2) 임상 효과의 개시는 용량에 상관없이 ~12시간이었고; (3) 최대 임상 효과의 개시는 용량에 상관없이 ~24시간이었고; (4) 효과의 지속기간은 가장 높은 용량에서는 ~72시간이었고, 2개의 보다 낮은 용량에서는 48시간이었다. BoNT/E에 의해 수득되는 근육 약화의 보다 짧은 지속기간은 수술후에 보다 빠른 회복 및 재활을 가능하게 할 수 있다.

본원에 기재된 방법 및 장치를 수행하는데 있어서 본 발명자들에게 공지된 최적 방식을 포함하여, 특정 실시양태가 본원에 기재되어 있다. 물론, 이들 기재된 실시양태에 대한 변형은, 상기의 설명을 읽은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 명백할 것이다. 따라서, 본 개시내용은 적용되는 법에 의해 허용되는 바와 같은 본원에 첨부된 청구범위에 열거된 대상의 모든 변형 및 등가물을 포함한다. 또한, 본원에 달리 나타내지 않거나 문맥에 의해 명백하게 모순되지 않는 한, 상기 기재된 실시양태의 임의의 조합은 모든 가능한 그의 변경으로 개시내용에 포괄된다. 본원에 개시된 구체적 실시양태는 이루어진 또는 본질적으로 이루어진과 같은 언어를 사용하여 청구범위에서 추가로 제한될 수 있다. 청구범위에 사용된 경우, 출원서에서 또는 보정서에 부가되어 사용되었는지에 관계 없이, 연결 용어 "이루어진"은 청구범위에 명시되지 않은 임의의 요소, 단계, 또는 성분은 배제한다. 연결 용어 "본질적으로 이루어진"은 청구범위의 범주를 명시된 물질 또는 단계, 및 기본 및 신규 특징(들)에 실질적으로 영향을 미치지 않는 것으로 제한한다. 이와 같이 청구된 본 개시내용의 실시양태는 본원에 본질적으로 또는 명시적으로 기재되고 구현된다.

Claims

치료 유효량의 빠른 작용 신경독소를 환자에게 감염 부근에 투여하는 것을 포함하는, 감염을 치료하는 방법.
제1항에 있어서, 상기 빠른 작용 신경독소가 보툴리눔 신경독소 혈청형 E를 포함하는 것인 방법.
제2항에 있어서, 상기 치료 유효량이 약 10^-3 U/kg 내지 약 35 U/kg의 양을 포함하는 것인 방법.
제4항에 있어서, 상기 치료 유효량이 약 1 U/kg 내지 약 25 U/kg의 양을 포함하는 것인 방법.
제4항에 있어서, 상기 치료 유효량이 약 5 U/kg 내지 약 15 U/kg의 양을 포함하는 것인 방법.
제2항에 있어서, 상기 치료 유효량이 약 0.2 나노그램 내지 약 2 나노그램의 양을 포함하는 것인 방법.
제6항에 있어서, 상기 치료 유효량이 약 0.5 나노그램 내지 약 1 나노그램의 양을 포함하는 것인 방법.
제2항에 있어서, 상기 투여하는 것이 주사에 의해 투여하는 것을 포함하는 것인 방법.
제8항에 있어서, 상기 주사에 의해 투여하는 것이 근육내 주사인 방법.
제2항에 있어서, 보툴리눔 독소 하위유형 A를 환자에게 투여하는 것을 추가로 포함하는 방법.
제2항에 있어서, 오나보툴리눔톡신A를 환자에게 투여하는 것을 추가로 포함하는 방법.
제2항에 있어서, 보다 느린 회복 독소를 투여하는 것을 추가로 포함하는 방법.
제2항에 있어서, 외과적 변연절제를 추가로 포함하는 방법.
치료 유효량의 빠른 작용 신경독소를 cGRP 방출의 억제 또는 감소를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, cGRP 방출의 억제 또는 감소를 필요로 하는 환자에서 cGRP 방출을 억제 또는 감소시키는 방법.
제14항에 있어서, 상기 빠른 작용 신경독소가 보툴리눔 신경독소 혈청형 E (BoNT/E)를 포함하는 것인 방법.
제15항에 있어서, 상기 치료 유효량이 약 10^-4 U/kg 내지 약 35 U/kg의 양을 포함하는 것인 방법.
제15항에 있어서, 상기 치료 유효량이 약 0.2 나노그램 내지 약 2 나노그램의 양을 포함하는 것인 방법.
제15항에 있어서, 환자에게 장기-작용 신경독소를 투여하는 것을 추가로 포함하는 방법.
제15항에 있어서, 환자에게 보툴리눔 독소 하위유형 A를 투여하는 것을 추가로 포함하는 방법.
제14항에 있어서, 상기 치료 유효량이 근육 마비를 유발할 용량 미만인 양을 포함하는 것인 방법.