KR101906940B1

KR101906940B1 - 보툴리눔 독소, 4-헥실레조르시놀 및 실크 피브로인을 포함하는 조성물

Info

Publication number: KR101906940B1
Application number: KR1020170024866A
Authority: KR
Inventors: 김성곤; 김민근
Original assignee: 강릉원주대학교산학협력단
Priority date: 2017-02-24
Filing date: 2017-02-24
Publication date: 2018-10-11
Also published as: KR20180097985A

Abstract

본 발명에 따른 주사용 조성물은 보툴리눔 독소, 4-헥실레조르시놀 및 실크 피브로인을 조합하여 사용함으로써, 보툴리눔 독소를 구조적으로 안정화하여 적은 양의 보툴리눔 독소로부터 유의한 효과를 얻을 수 있다. 따라서, 본 발명의 조성물은 보툴리눔 독소의 안정성 증가와 함께 경제적 비용 감축 효과를 동시에 제공할 수 있다.

Description

보툴리눔 독소, 4-헥실레조르시놀 및 실크 피브로인을 포함하는 조성물 {Composition containing botulinium toxin, 4-hexylresorsinol and silk fibroin}

본 발명은 보툴리눔 독소, 4-헥실레조르시놀 및 실크 피브로인을 포함하는 조성물에 관한 것이다.

보툴리눔 독소(botulinum toxin)는 1970년대 치료목적으로 처음 사용되었으며, 그 이후 주름 등의 미용 목적으로도 사용되어 왔다 (비특허문헌 1). 또한, 미용적인 목적 외에도 안과 질환, 편두통 등의 신경 질환, 비뇨기과 질환 등 다양한 영역에서 사용되고 있다. 우리나라에서는 1999년부터 피부과 영역에서 사용이 보편화되었고, 주름, 다한증, 사각 턱 등의 치료에 주로 이용되고 있다. 다만, 보툴리눔 독소에 의한 효과는 영구적으로 지속되지 않으며, 비교적 약값이 고가인 단점이 있다 (비특허문헌 2).

한편, 실크 피브로인(silk fibroin)은 생체 친화적인 재료로 알려져 있으며, 생체 조직에의 이물반응이 적은 장점이 있어 최근까지도 임상 활용을 위한 다양한 시도들이 이루어지고 있다. 특히 실크 피브로인은 약물 전달체로 그 유용성을 평가 받고 있다 (비특허문헌 3).

4-헥실레조르시놀(4-hexylresorsinol)과 같은 치환된 레조르시놀은 국소적으로 적용되는 경우, 피부에 노화 방지 및 라이트닝 이익을 제공하는 것으로 공지되어 있다 (특허문헌 1). 러시아 과학자들에 의하면 4-헥실레조르시놀은 라이소자임 (lysozyme) 단백질과 친수성 결합 및 소수성 결합으로 해당 단백질의 구조적 안정화 및 기능에 영향을 미칠 수 있음을 보고하였다 (비특허문헌 4).

상기 보툴리눔 독소는 4-6개월 정도의 작용기간을 가지므로, 반복적인 주사가 필요하나 반복적인 주사로 인해 부작용을 초래할 수 있는 문제점이 있다. 이에, 기능의 보완을 통해 효과를 증가시킬 수 있고 경제적으로 비용을 감축시킬 수 있는 제품의 개발이 필요한 실정이다.

대한민국 공개특허 제2015-0112846호

Park YW, Kim SG, Jo YY. S100 and p65 expression are increased in the masseter muscle after botulinum toxin-A injection. Maxillofac Plast Reconstr Surg. 2016;38(1):33. Liu A, Crruthers A, Cohen JL, et al. Recommendation and current practices for the reconstitution and storage of botulinum toxin type A. J Am Acad Dermatol 2012;67:373-8. Mottaghitalab F, Farokhi M, Shokrgozar MA, Atyabi F, Hosseinkhani H. Silk fibroin nanoparticle as a novel drug delivery system. J Control Release. 2015;206:161-76. Krupyanskii, Y.F. et al. Possible mechanisms of the influence of hexylresorcinol on the structure-dynamic and functional properties of lysozyme protein. Russ. J. Phys. Chem. B. 6, 301-314 (2012).

본 발명의 목적은 4-헥실레조르시놀과 실크 피브로인을 이용하여 보툴리눔 독소의 효능을 개선한 제조방법을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여,

본 발명은 보툴리눔 독소; 4-헥실레조르시놀 및 실크 피브로인을 포함하는 주사용 조성물을 제공한다.

본 발명은 또한, 상기 주사용 조성물을 포함하는 화장료 조성물 및 약학 조성물을 제공한다.

본 발명은 또한, 보툴리눔 독소; 4-헥실레조르시놀 및 실크 피브로인을 혼합하는 단계를 포함하는 보툴리눔 독소에 의한 효과를 증진시키는 방법을 제공한다.

본 발명은 또한, 보툴리눔 독소; 4-헥실레조르시놀 및 실크 피브로인을 포함하는 보툴리눔 독소의 안정화용 조성물을 제공한다.

도 1은 4-헥실레조르시놀과 실크 피브로인의 조합이 보툴리눔 독소의 구조적 안정화에 영향을 미치는 과정을 도식화하여 나타낸 것이다.
도 2는 본 발명의 조성물을 처리함에 따른 처리 전 후의 rat의 음식물 섭취량을 상대적으로 나타낸 그래프이다.
도 3은 본 발명의 조성물을 처리함에 따른 처리 전 후의 저작근의 상대적 두께를 나타낸 그래프이다.
도 4는 본 발명의 조성물을 처리한 rat로부터 저작근(씹기 근육)을 채취하여 면역화학염색을 시행한 결과이다.
도 5는 본 발명의 조성물을 처리한 rat의 저작근을 면역화학염색하여 bcl2의 발현 정도를 정량화한 결과이다.
도 6는 본 발명의 조성물을 처리한 rat의 저작근을 면역화학염색하여 Myo2의 발현 정도를 정량화한 결과이다.
도 7은 본 발명의 조성물을 처리한 rat의 bcl2와 Myo2의 발현 정도를 정량적으로 분석한 결과를 나타낸 그래프이다.

본 발명은 다양한 변경을 가할 수 있고 여러 가지 실시 예를 가질 수 있는 바, 특정 실시 예들을 도면에 예시하고 상세한 설명에 상세하게 설명하고자 한다.

그러나, 이는 본 발명을 특정한 실시 형태에 대해 한정하려는 것이 아니며, 본 발명의 사상 및 기술 범위에 포함되는 모든 변경, 균등물 내지 대체물을 포함하는 것으로 이해되어야 한다.

이하, 본 발명에 의한 주사용 조성물을 상세히 설명한다.

본 발명은 보툴리눔 독소; 4-헥실레조르시놀; 및 실크 피브로인을 포함하는 주사용 조성물을 제공한다.

보툴리눔 독소(botulinum toxin)는 혐기성 박테리아인 클로스트리디움 보툴리눔(Clostridium botulinum)에 의해 생성되는 신경독소로 모두 7가지 종류가 있으며, 이중 보툴리눔 독소 A형과 보툴리눔 독소 B형이 정제되어 의학적으로 사용된다. 이 독소는 운동 신경 말단 부위에서 아세틸콜린의 분비를 억제하게 되고, 이를 통해 해당되는 근육을 마비시킨다. 이러한 특징으로 인해 효과를 볼 수 있는 다양한 질환이 본 발명의 치료에 사용될 수 있다. 예를 들면, 다양한 근육 관련 질환, 예컨대 눈꺼풀 경련, 사경(목의 근육들이 수축하여 목이 한쪽으로 기운 듯 부자연스러운 상태), 경부 근긴장 이상, 강직성 안검연축, 겨드랑이 다한증, 항문열창, 질경련, 이완불능증, 편두통 등 두통 질환, 특발성 및 신경성 배뇨근 과다증, 국소이긴장증(사지, 턱관절, 성대 등), 측두하악관절 통증 장애, 당뇨병성 신경증, 성대(vocal cord) 기능 장애, 사시, 만성신경병증, 안면근육비대증(저작근 등), 배뇨근 조임근 장애 및 양성 전립선 비대증과 같은 질환은 물론, 주름 치료, 사각턱 교정술, 피부 노화 개선 등의 미용적 목적으로도 사용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

한 구체예에서, 본 발명에서 사용된 보툴리눔 독소는 시판되는 다양한 보툴리눔 독소제가 사용될 수 있으며, 당업자가 적의적절하게 선택할 수 있다.

다른 구체예에서, 보툴리눔 독소는 세균에 의해 생산되거나 또는 재조합 방식으로 생산되는 임의의 공지된 보툴리눔 독소 및 변이체(engineered variant) 또는 융합 단백질을 포함한다. 현재, 보툴리눔 독소는 면역학적으로 구분되는 세로타입(serotype) A형, B형, C형, D형, E형, F형 및 G형의 보툴리눔 독소가 있으며, 모든 세로타입의 보툴리눔 독소는 신경근 접합부에서 신호전달물질인 아세틸콜린의 분비를 저해함으로써 신경마비효과를 발생하며, 각각의 세로타입에 따라 작용하는 동물 종 및 마비의 정도, 지속시간 등이 달라질 수 있는 것으로 알려져 있다. 예컨대 보툴리눔 독소 중 특히 A형 및 B형이 치료 및/또는 미용제제로서 사용될 수 있다. 예컨대, A형은 Botox®(Onabotulinumtoxin A, Allergan Inc., USA), 메디톡신(태평양제약, 대한민국), 보툴렉스(휴젤파마, 대한민국), Xeomin®(Merz Pharmaceuticals, USA), Dysport®(Ipsen, UK) 등이 있고, B형은 MYOBLOC®(Elan, USA) 등을 들 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.

상기 보툴리눔 독소는 대안적으로 보툴리눔 독소 유도체, 즉, 보툴리눔 독소 활성을 가지나 변형되기 전의 보툴리눔 독소와 비교하여 하나 이상의 아미노산 결실, 변경 또는 치환을 가질 수 있다. 예컨대, 상기 변형은 보툴리눔 독소의 특징을 개선 또는 강화하거나 또는 부작용을 감소시키는 방식으로 변형된 보툴리눔 독소일 수 있다. 대안적으로 보툴리눔 독소는 활성을 갖는 전체 또는 그 일부일 수 있으며, 그 자체로 또는 융합 단백질의 일부로서 이용될 수 있다. 또한, 보툴리눔 독소는 그 자체로 무독성일 수 있는 보툴리눔 독소의 전구체, 예컨대 단백질 가수분해에 의한 분해시 독성을 나타내는 무독성 징크 프로테아제(zink protease)의 형태일 수 있다.

4-헥실레조르시놀(4-hexylresorsinol)의 IUPAC 명은 4-헥실벤젠-1,3-디올(4-hexylbenzene-1,3-diol)이고, 하기 화학식 1과 같은 화학 구조를 갖는 화합물이다.

[화학식 1]

4-헥실레조르시놀은 이소프레노이드 리피드(isoprenoid lipid)의 일종으로서, 종래 장염의 치료 목적으로 올리브유에 타서 복용하거나 최근에는 바다새우의 탈색을 막을 목적으로 첨가하거나 식품과 방부제의 소재로 흔히 사용되어 왔으나, 본 발명에서는 보툴리눔 독소의 효과 증진을 위해 사용되었다.

누에고치의 내피 성분인 실크 피브로인은 전형적인 자연 고분자 물질로서, 생체에 적용할 때 염증 반응을 거의 일으키지 않으면서, 세포 부착능력과 증식효과가 뛰어난 특성이 있다. 따라서, 실크 피브로인은 생체 적합성이 우수하여 특별한 정제 과정을 거치지 않아도 인체에 대한 거부 반응이 거의 일어나지 않고 분말, 막, 다공질체 및 겔 등 다양한 형태로 성형할 수 있는 특징이 있다. 본 발명에서, 상기 실크 피브로인은 생리식염수에 용해된 분말의 형태로서 개체에 투여될 수 있다.

본 발명에 따른 조성물은 상기 보툴리눔 독소를 전체 조성물 1ml 당 0.1unit 내지 200unit의 함량으로, 4-헥실레조르시놀을 1㎍ 내지 100㎍ 함량으로, 실크 피브로인을 0.1mg 내지 10mg 함량으로 포함할 수 있다. 예컨대 4-헥실레조르시놀은 전체 조성물 1ml 당 5㎍ 내지 50㎍, 10㎍ 내지 40㎍, 15㎍ 내지 30㎍ 함량으로 포함될 수 있으며, 실크 피브로인은 0.5mg 내지 7mg, 1mg 내지 5mg, 1.5mg 내지 4mg 함량으로 포함될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니며, 당업자가 개선 또는 치료가 요구되는 증상의 정도, 환자의 상태, 치료기간 등을 고려하여 적절한 양 및 비율을 선택할 수 있다.

한 구체예에서, 보툴리눔 독소는 전체 조성물 1ml 당 1unit 내지 10unit으로 포함될 수 있다.

본 발명에 따른 조성물은 주름 개선용 화장료 조성물 또는, 다한증 또는 과도한 수축에 의한 근육 관련 질환의 예방 및 치료용 약학 조성물로 제공될 수 있다.

본 발명에 있어서, 주름은 신체의 모든 주름, 특히 안면 주름을 일컫는 것으로, 안면 주름은 정적인 주름(static rhytides)과 동적인 주름(dynamic rhytides)을 포함하는 것이다. 정적인 주름은 주로 얕으며, 그 원인이 피부의 노화 및 부피의 결손이다. 동적인 주름은 주로 깊으며, 그 원인이 안면 근육의 수축 때문인데, 이의 치료를 위해 안면 근육에 보툴리눔 독소를 주사하여 근육을 마비시킴으로써 치료할 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 과도한 수축에 의한 근육 관련 질환은 안검 경련, 안면 경련, 근육 경직, 두통, 소아뇌성마비, 사시, 요실금 및 턱관절 질환으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 질환일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니며 보툴리눔 독소로부터 치료 효과를 얻을 수 있는 질환이라면 모두 적용가능하다. 상기 턱관절 질환은 악관절 탈구,　골절, 악관절부　염좌,　화농성 악관절염, 류머티스성　관절염, 외상성 악관절염, 악관절증, 퇴행성　관절질환 또는 변형성 관절증, 악관절 강직증, 종양, 종양과 유사한 질환 등을 모두 포함할 수 있다. 또한, 상기 질환 외에도 외상 후 부정교합, 성장 이상, 타액선이나 눈물샘의 분비 이상과 같은 증상의 개선 및 치료를 위해 사용될 수 있다.

상기 화장료 조성물 및 약학 조성물의 제조방법은 공지된 것으로, 당업자가 제조, 제형 및 첨가물과 관련된 적절한 기술을 적의선택할 수 있다.

본 발명에 따른 조성물은 상기 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다. 예를 들면 완충된 염수와 같은, 약학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제는 물론 피부학적으로 또는 약학적으로 허용가능한 담체, 매체(vehicle) 또는 매질(medium)을 포함하는, 국소 약학적 도는 미용 약학적 조성물에서 전형적으로 사용되는 기타 성분들을 포함할 수 있다. 본 발명에서, 용어 “피부학적으로 또는 약학적으로 허용가능한”은 상술한 조성물 또는 성분이 피부에 주입시 과다한 독성, 부적합성, 알레르기 반응 등을 유발하지 않는 것을 의미한다.

본 발명의 조성물은 액상 제제 또는 동결건조 제제로 제형화될 수 있다.

본 발명에 따른 조성물은 본 발명이 목적으로 하는 주 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 주 효과에 상승 효과를 줄 수 있는 다른 성분 등을 함유할 수 있다. 예를 들면, 물성 개선을 위하여 향료, 색소, 살균제, 산화 방지제, 방부제, 보습제, 점증제, 무기염류, 유화제 및 합성 고분자 물질 등의 첨가제를 더 포함할 수 있다. 그 외에도, 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드 및 고분자 다당 등의 보조 성분을 더 포함할 수도 있다. 상기 성분들은 제형 또는 사용 목적에 따라서 당업자가 어려움 없이 적의 선정하여 배합할 수 있으며, 그 첨가량은 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 선택될 수 있다. 예를 들면, 상기 성분들의 첨가량은, 전체 조성물 총 중량을 기준으로, 0.01 내지 5 중량%, 보다 구체적으로는 0.01 내지 3 중량%의 범위일 수 있다.

본 발명의 조성물의 바람직한 투여량은 개체의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 조성물은 1회 주입시 보툴리눔 독소 A형 기준으로 0.1unit 내지 200unit의 양으로 투여할 수 있으며, 예컨대 1unit 내지 10unit의 양을 투여할 수 있다. 상기 조성물의 투여는 하루에 한 번 투여할 수도 있고 수 회 나누어 투여할 수도 있다.

본 발명의 조성물은 피부 주름 개선, 다한증 또는 과도한 수축에 의한 근육 관련 질환의 치료를 위하여 단독으로, 또는 수술, 방사선 치료, 호르몬 치료, 화학 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.

본 발명은 또한 피부에 보툴리눔 독소를 주입하기 위한 장치 및 담체를 포함하고 대상자의 피부 또는 상피에 적용하기에 적합한 액체, 겔, 크림 등을 모두 포함하는 키트를 포함한다. 의료 전문가의 지시 하에 또는 환자 또는 대상자에 의해 본 발명의 조성물을 투여하기 위한 키트는 그 목적에 적합한 맞춤형 애플리케이터(custom applicator)를 포함할 수 있다.

하기 실시예에서는, 보툴리눔 독소를 4-헥실레조르시놀과 실크 피브로인을 조합하여 사용함으로써, 적은 양의 보툴리눔 독소로도 유의한 근육 마비 효과를 얻을 수 있음을 확인하였다. 실크 피브로인은 물에 용해가 잘 되지 않는 소수성 아미노산으로 주로 구성되어있고, 분자량이 다른 단백질에 비하여 비교적 높은 단백질이다. 실크 단백질의 소수성 아미노산 영역은 4-헥실레조르시놀의 알킬 그룹과 소수성 상호작용에 의하여 결합할 수 있고, 이는 이온결합에 비하여 비교적 안정적인 결합이다. 4-헥실레조르시놀에는 벤젠링에 부착되어 있는 두 개의 수산화기가 있으며 이는 물에 잘 용해되는 보툴리눔 독소와 상호 작용하여 보툴리눔 독소의 구조적 안정성에 기여하게 된다. 이는 도 1에서 보는 것과 같이, 4-헥실레조르시놀(4HR)과 실크 피브로인(SF)이 결합하여 보툴리눔 독소가 구조적으로 안정하게 존재하게 되어 보툴리눔 독소의 활성이 증가하는 것임을 본 발명을 통해 확인하였다.

따라서, 본 발명은 보툴리눔 독소; 4-헥실레조르시놀; 및 실크 피브로인을 조합하여 사용함으로써, 보툴리눔 독소로부터 얻을 수 있는 효과에 있어서 상승 효과(시너지 효과)를 얻을 수 있다.

또한, 본 발명은 보툴리눔 독소; 4-헥실레조르시놀; 및 실크 피브로인을 포함하는 보툴리눔 독소의 안정화용 조성물을 제공한다.

상기 방법에 있어서, 보툴리눔 독소, 4-헥실레조르시놀 및 실크 피브로인은 위에서 기술한 모든 내용을 그대로 적용 또는 준용할 수 있다.

이하에서, 본 발명을 실시예를 통해 상세히 설명한다. 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 범위가 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.

[ 실시예 ]

실시예 1: 보툴리눔 독소, 4- 헥실레조르시놀 및 실크 피브로인의 조합에 따른 효과 확인

보툴리눔 독소(BTX), 4-헥실레조르시놀(4HR) 및 실크 피브로인(SF)의 조합에 따른 효과를 확인하기 위해 30마리의 rat를 사용하여 본 실험을 수행하였다.

먼저, rat는 각각 개별 케이지에 사육하였으며, 총 6개의 그룹으로 나누었다.

음성 대조군(negative control)은 생리 식염수를 양측 저작근(masseter muscle)에 0.1cc 주입하였고(SA, n=5), 양성 대조군(positive control)은 보툴리눔 독소를 양측 저작근에 rat 5마리씩 각각 2unit(B2), 5unit(B5) 주입하였다. 또한, 대조군으로 생리식염수에 용해된 형태의 실크 피브로인(SF) 또는 4-헥실레조르시놀(4HR)만을 rat 5마리씩 처리하였다. 실크 피브로인(SF) 처리군은 2.5mg을 양측 저작근에 주입하였고, 4-헥실레조르시놀(4HR) 처리군은 25μg을 양측 저작근에 주입하였다. 실험군으로는 2unit의 보툴리눔 독소, 4-헥실레조르시놀 및 실크 피브로인을 혼합하여 rat의 양측 저작근에 주입하였다.

1) 상대적인 음식 섭취량 측정

조성물의 주입에 따른 식사량을 비교하기 위해, 주입 전 식사량과 주입 후 10일간의 식사량(음식물 섭취량)을 비교하였다.

그 결과, 도 2에서 보는 것과 같이 보툴리눔 독소를 5unit 주입한 대조군(B5)에서 주입 3일째에 주입 전과 비교하여 44.76%의 음식물 섭취를 보였으며 4일째부터는 회복세를 보이는 것을 확인할 수 있었다. 모든 그룹에서 주입 10일째에는 유사한 수준의 음식물 섭취를 보이는 것을 알 수 있었다. 이를 통해 본 실험에 사용된 용량에서는 모든 실험군에서 저작 기능의 비가역적인 손상이나 전신적인 부작용이 초래되지 않는 것을 확인할 수 있었다.

2) 저작근(씹기 근육)의 두께 측정

조성물의 처리에 따른 저작근(씹기 근육)의 상대적인 두께는 조성물 주입 전과 후 14일째에 초음파 영상을 통해 확인하여 도 3에 그래프로 나타내었다.

도 3에서 보는 것과 같이, 음성 대조군(SA), 실크 피브로인 처리군(SF), 4-헥실레조르시놀 처리군(4HR)의 주입 전 후 상대적인 근육의 두께가 100% 정도로 주입 전 후에 큰 차이가 없었으나, 보툴리눔 독소 2unit(B2)을 처리한 실험군에서는 다소 유의한 차이가 나타났다. B2 처리군에서는 주입 전과 비교하여 66.14±4.55% 정도를 나타냈으나, 보툴리눔 독소 2unit, 4-헥실레조르시놀 및 실크 피브로인을 조합하여 처리한 군(B2+SF+4HR)에서는 54.59±4.83%를, 보툴리눔 독소 5unit을 처리한 군(B5)에서는 56.19±8.28%로 나타나는 것을 확인함으로써, 보툴리눔 독소를 2unit 조합하여 사용한 경우에 5unit의 보툴리눔 독소를 사용한 것과 다소 유사한 수준의 근육 두께가 측정되는 것을 알 수 있었다(p>0.05). 이를 통해 적은 양의 보툴리눔 독소에 4-헥실레조르시놀과 실크 피브로인을 조합하여 사용하면 더 많은 양의 보툴리눔 독소를 사용한 경우와 유사한 수준의 효과를 얻을 수 있음을 확인하였다.

3) Myo2 및 bcl2 발현 수준 확인

1)에서 식사량을 회복한 rat는 희생시켜 조직학적 분석을 시행하였다. 상기 쥐로부터 저작근(씹기 근육)을 채취하고 Myo2와 bcl2의 발현 정도를 확인하기 위해 헤마톡실린-에오신(hematoxylin-eosin) 면역화학염색을 시행한 후(도 4) 정량화하였다. 이때, ROI(관심영역)는 100배 배율에서 10군데를 임의로 선택하여 평가하였으며, Sigma scan pro(SPSS, Chicago, IL, USA)를 이용하여 발현 강도를 평가하였다.

그 결과, 도 5에서 보는 것과 같이 bcl2의 발현 정도는 각 처리군 간에 유사한 결과를 나타나는 것을 확인할 수 있었다. 4-헥실레조르시놀만 처리한 군(4HR)에서 약간 강한 염색이 관찰되었으나, 두드러지게 나타나지는 않았다. 반면, Myo2 면역염색결과는 조금 다르게 나타나는 것을 확인할 수 있다(도 6).

또한, 도 7에서 보는 것과 같이 bcl2와 Myo2는 정량적 분석 결과가 유사하게 나타나는 것을 확인할 수 있었다. 특히, 각 처리군 간의 Myo2 면역염색결과의 차이는 통계적으로 유의한 차이를 보였으며(p<0.001), 구체적으로 B5, B2, B2+SF+4HR 처리군에서 Myo2 면역염색 강도는 각각 94.14±14.48, 91.07±5.66, 97.12±6.12를 나타내는 것을 확인할 수 있었다. 또한, Myo2 면역염색결과 SA, SF, 4HR 처리군은 각각 70.99±5.68, 78.39±4.83, 69.77±2.24로, 다른 처리군과 비교하여 통계학적으로 유의할 만한 차이가 나타나는 것을 확인하였다.

Claims

보툴리눔 독소; 4-헥실레조르시놀; 및 실크 피브로인을 포함하는 보툴리눔 독소의 안정화용 조성물.
제1항에 있어서,
상기 조성물은 주사용인 보툴리눔 독소의 안정화용 조성물.
제1항에 있어서,
보툴리눔 독소는 보툴리눔 독소 A형, B형, C형, D형, E형, F형 또는 G형인 보툴리눔 독소의 안정화용 조성물.
제1항에 있어서,
보툴리눔 독소는 보툴리눔 독소 A형 또는 B형인 보툴리눔 독소의 안정화용 조성물.
제1항에 있어서,
보툴리눔 독소는 전체 조성물 1ml 당 0.1 unit 내지 200 unit으로 포함되는 보툴리눔 독소의 안정화용 조성물.
제1항에 있어서,
4-헥실레조르시놀은 전체 조성물 1ml 당 1㎍ 내지 100㎍으로 포함되는 보툴리눔 독소의 안정화용 조성물.
제1항에 있어서,
실크 피브로인은 전체 조성물 1ml 당 0.1mg 내지 10mg으로 포함되는 보툴리눔 독소의 안정화용 조성물.
제1항에 있어서,
조성물은 액상 제제 또는 동결건조 제제인 보툴리눔 독소의 안정화용 조성물.
보툴리눔 독소; 4-헥실레조르시놀; 및 실크 피브로인을 포함하는 피부 주름 개선용 화장료 조성물.
보툴리눔 독소; 4-헥실레조르시놀; 및 실크 피브로인을 포함하는 다한증 또는 과도한 수축에 의한 근육 관련 질환의 예방 및 치료용 약학 조성물.
제10항에 있어서,
과도한 수축에 의한 근육 관련 질환은 안검 경련, 안면 경련, 근육 경직, 두통, 소아뇌성마비, 사시, 요실금 및 턱관절 질환으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 질환인 약학 조성물.