KR20100116289A

KR20100116289A - 병원성 장내세균을 사멸시키는 박테리오파지

Info

Publication number: KR20100116289A
Application number: KR1020090034922A
Authority: KR
Inventors: 김석호; 김성훈; 권혁준; 이복권; 김정민
Original assignee: 경북대학교 산학협력단
Priority date: 2009-04-22
Filing date: 2009-04-22
Publication date: 2010-11-01
Also published as: KR101101604B1; WO2010123200A2; WO2010123200A3

Abstract

본 발명은 신규한 박테리오파지에 관한 것으로, 구체적으로 병원성 장내세균에 대한 사멸능을 갖고, 서열번호 1로 구성된 아미노산 서열을 코딩하는 추정상 헬리케이즈(Putative helicase) 유전자 서열을 갖는 박테리오파지(Bacteriophage) SS3e에 관한 것이다.

본 발명에 따르면, 상기 박테리오파지를 이용하여 대표적인 식품매개질환을 일으키는 원인균으로서 병원성 장내세균을 효과적으로 사멸시키거나 감소시킬 수 있다. 특히 박테리오파지는 세균을 숙주로 하는 바이러스로 사람과 동물 등에는 전혀 작용하지 않는 것으로 알려져 있기 때문에 의약산업, 식품산업, 생명공학 등에 응용이 가능할 뿐 아니라, 항생제 내성에 대한 문제점 없이 유해 장내세균을 목표장소 또는 목표물질에서 효과적으로 사멸시킬 수 있다.

박테리오파지, 장내세균, 살모넬라, 병원성 대장균, 이질균, 엔테로박터

Description

병원성 장내세균을 사멸시키는 박테리오파지 {A bacteriophage killing pathogenic enteric bacteria}

본 발명은 병원성 장내세균을 사멸시키는 박테리오파지에 관한 것으로, 더욱 구체적으로 병원성 장내세균에 대한 사멸능을 갖고, 서열번호 1로 구성된 아미노산 서열을 코딩하는 추정상 헬리케이즈(Putative helicase) 유전자 서열을 갖는 것을 특징으로 하는 시포비리대 과(Siphoviridae)의 박테리오파지(Bacteriophage) SS3e에 관한 것이다.

박테리오파지는 세균을 감염시키는 바이러스의 일종으로 보통 파지라고 줄여서 부르기도 한다. 박테리오파지는 핵산으로 이루어진 유전물질 중심부를 단백질 외피가 싸고 있는 단순한 구조의 유기체이며 핵산은 단일 사슬이거나 이중 사슬인 DNA 또는 RNA로 되어있다. 박테리오파지는 생존에 숙주가 반드시 필요하며 모든 세균에는 특정 파지가 존재한다고 알려져 있다. 박테리오파지는 숙주에 침투하여 복제 과정을 끝낸 다음, 숙주인 세균의 세포벽을 분해하기 위해 필요한 일군의 효소 를 발현시킨다. 이들 효소는 세포벽의 경직성(rigidity) 및 기계적 강도(mechanical strength)를 담당하는 세포벽의 뮤레인(murein) 또는 펩티도글리칸(peptidoglycan) 층을 공격하여 세포벽을 파괴한다.

박테리오파지는 1915년 영국의 세균학자 Twort가 포도상구균(Micrococcus) 집락이 어떤 것에 의해 투명하게 녹는 현상에 대한 연구에서 발견되었다. 또한, 1917년에는 프랑스의 세균학자 d'Herelle이 이질환자 변의 여과액 중에 적리균(Shigella disentriae)을 녹이는 작용을 가진 것이 있다는 것을 발견하고 이에 대한 연구를 통해 독립적으로 박테리오파지를 발견하였으며, 세균을 잡아먹는다는 뜻에서 박테리오파지라고 명명하였다. 이후 이질균, 장티푸스균, 콜레라균 등 여러 병원균에 대한 박테리오파지가 계속적으로 발견되었고 캘리포니아 공과대학의 Delbruck와 제2차 세계대전 중에 미국으로 건너간 유럽의 과학자들에 의해 대장균의 박테리오파지에 대한 연구가 집중되었다. 그러나 1950년 Flemming에 의해 페니실린이 발견된 이후, 항생제 사용의 보급화로 인해 일부 동유럽 국가에 한정되어서만 박테리오파지에 대한 연구가 계속되었다. 그러나 2000년 이후에는 지속적인 항생제 오남용으로 인해 다제 내성(multi-drug resistant)을 지닌 병원성 세균의 출현빈도가 높아져 항생제 대체 물질로의 개발의 가능성 때문에 다시 박테리오파지에 대한 연구가 선진국들을 중심으로 진행되고 있다.

한편, 장티푸스, 살모넬라증, 세균성 이질, 대장균 등은 대표적인 식품매개질환(식중독)을 일으키는 원인세균병원체이다. 식품매개질환 원인세균 병원체를 효과적으로 사멸시키거나 저감화하는 것은 질환예방 차원에서 매우 중요하다. 이러한 감염질환을 치료하거나 원인세균을 사멸시키기 위하여 인체 또는 가축 등에 항균제를 투여하고, 식자재나 환경에는 물리화학적 요법으로 원인세균을 저감하기도 한다. 그러나 현재 항균제 남용으로 인한 다제내성 세균의 유행이 국민보건에 크게 위해요소가 되고 있으며 물리화학적 요법은 환경오염과 경제적 비용이 많이 든다는 단점이 있다.

이에, 본 발명자들은 상기 종래기술들의 문제점들을 극복하기 위하여 예의 연구노력한 결과, 하천으로부터 분리된 박테리오파지 SS3e가 다양한 장내세균에 대하여 특이적 사멸능을 나타냄을 확인하고, 본 발명을 완성하게 되었다.

따라서, 본 발명의 주된 목적은 다종의 병원성 장내세균에 대한 사멸능을 갖는 박테리오파지(Bacteriophage) SS3e를 제공하는 데 있다.

본 발명의 다른 목적은 상기 박테리오파지 SS3e를 유효성분으로 함유하는 병원성 장내세균 유발성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는데 있다.

또한 본 발명의 다른 목적은 상기 박테리오파지 SS3e를 포함하는 항생제 및 소독제를 제공하는데 있다.

본 발명의 한 양태에 따르면, 본 발명은 병원성 장내세균에 대한 사멸능을 갖고, 서열번호 1로 구성된 아미노산 서열을 코딩하는 추정상 헬리케이즈(Putative helicase) 유전자 서열을 갖는 것을 특징으로 하는 시포비리대 과(Siphoviridae)의 박테리오파지(Bacteriophage) SS3e를 제공한다.

본 발명에 있어서, 상기 박테리오파지 SS3e는 본 발명에서 처음으로 분리 동정된 것으로서, 그 유전체의 서열 또한 본 발명자에 의해 처음으로 시퀀싱되었다. 이중에서 다른 종과 상동성이 높아 그 기능이 추정될 수 있는 유전자로서 서열번호 1로 구성된 아미노산 서열을 코딩하는 추정상 헬리케이즈(Putative helicase) 유전자를 찾아내었다. 바람직하게는 추정상 헬리케이즈(Putative helicase) 유전자는 서열번호 2의 염기 서열을 갖는 것을 특징으로 한다.

본 발명에 있어서, 상기 박테리오파지 SS3e의 유전체는 실시예 3에 따라 제한효소 맵핑하였는 바, 그 결과를 도 3b에 개시하였다. 바람직하게는, 상기 박테리오파지의 유전체는 도 3b에 개시된 제한효소 지도(map)를 갖는 것을 특징으로 한다.

본 발명에 있어서, 상기 박테리오파지는 기탁번호 KCTC11492BP인 것을 특징으로 한다. 본 발명자들은 수도권 지역의 하천수로부터 다양한 병원성 장내세균에 대하여 사멸능을 가지고 있는 신규한 박테리오파지를 선별하였고, 분리된 박테리오파지를 한국 생명공학연구원의 유전자은행에 2009년 3월 27일자로 기탁하였다.

본 명세서에서 사용된 “핵산 분자”라는 용어는 DNA (gDNA 및 cDNA) 그리고 RNA 분자를 포괄적으로 포함하는 의미를 가지며, 핵산 분자에서 기본 구성 단위인 뉴클레오타이드는 자연의 뉴클레오타이드 뿐만 아니라, 당 또는 염기 부위가 변형된 유사체(analogue)도 포함한다(Scheit, Nucleotide Analogs, John Wiley, New York(1980); Uhlman 및 Peyman, Chemical Reviews, 90:543-584(1990)).

본 발명에 있어서, 상기 병원성 장내세균은 살모넬라균, 병원성 대장균, 이질균 및 엔테로박터로 구성된 군에서 선택된 장내세균인 것을 특징으로 한다.

본 명세서에 사용된 용어 ‘장내세균’은 장 속에 존재하는 세균을 말하며, 이러한 장내세균에는 대장균·장구균(腸球菌)·젖산균·포도상구균·진균(眞菌) 등이 있고, 그 밖에 살모넬라균·적리균·변형균 등이 있다.

상기 장내세균 중 살모넬라균·적리균 및 일부의 대장균(병원대장균)은 병원 성을 나타내는데, 이들 ‘병원성 장내세균’은 소장의 상부에는 장구균만 있고, 아래쪽으로 내려감에 따라 균의 수와 종류가 많아지며, 회맹부(回盲部) 이하 대장에 가장 많이 존재한다. 병원성 장내세균은 대개 음용수 및 식품매개성이며 입을 통하여 전염되어 장에서 질병을 일으키고 때로는 전신감염으로 번지기도 한다. 대표적으로 Salmonella Typhi에 의한 장티푸스, Salmonella Paratyphi A, B, C에 의한 파라티푸스, Nontyphoidal Salmonella에 의한 살모넬라증, Shigella에 의한 세균성이질, Escherichia coli에 의한 장출혈성 대장증상이 있다. 장내세균은 그람음성의 간균(桿菌)으로서 아포(芽胞)를 형성하지 않는다. 또, 포도당을 분해하는 능력과 질산염을 아질산염으로 환원하는 능력이 있다.

상기 병원성 장내세균의 균 중 살모넬라균, 병원성 대장균, 이질균 및 엔테로박터는 식품매개질환을 일으키는 가장 대표적인 원인균으로서 본 발명의 박테이오파지는 이들 다종의 병원성 장내세균을 효과적으로 사멸 또는 감소시킬 수 있다.

이제까지 알려진 박테리오파지는 특정 세균만을 사멸하는 것으로 알려져 있지만 본 발명의 박테이오파지 SS3e는 다양한 식품매개질환 원인세균들을 사멸하여 보건산업 뿐 아니라 식품, 친환경 대체항균제로 이용될 가치가 높다. 본 발명자들의 박테리오파지 SS3e를 이용한 세균사멸 기법을 통하여 식품매개질환 및 감염치료 또는 보건위생 향상에 많은 도움을 줄 것이다.

본 발명의 다른 양태에 따르면, 본 발명은 상기 박테리오파지를 유효성분으 로 포함하는 병원성 장내세균 유발성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

본 명세서에서 사용된 ‘치료’라는 용어는 병원성 장내세균에 의해 유발된 질환의 예방; 병원성 장내세균에 의해 유발된 질환의 억제; 및 병원성 장내세균에 의해 유발된 질환의 경감을 의미한다.

상기 병원성 장내세균에 의해 유발될 수 있는 질환은, 살모넬라 속의 균들에 의한 장티푸스, 파라티푸스와 같은 티푸스; 병원성 대장균, 이질균, 엔테로박터 등에 의한 식중독; 및 시트로박터, 세라티아 등에 의한 감염증을 포함하며, 본 발명의 약학적 조성물은 이러한 질환의 치료에 효과적으로 사용될 수 있다.

본 발명의 조성물에 포함되는 약학적으로 허용되는 담체는 제제시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 약학적 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 질환 부위에의 도포 또는 분무하는 방법으로 이용할 수 있으며, 그 밖에 경구 투여 또는 비경구 투여를 통해 투여할 수도 있으며, 비경구 투여의 경우 정맥내 투여, 복강내 투여, 근육내 투여, 피하 투여 또는 국부 투여를 이용하여 투여할 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물의 적합한 도포, 분무 및 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 질병 증상의 정도, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하며, 보통으로 숙련된 의사는 소망하는 치료에 효과적인 투여량을 용이하게 결정 및 처방할 수 있다. 일반적으로, 본 발명의 약학적 조성물은 1 × 10³ 내지 1 × 10¹⁰ pfu/㎖의 박테리오파지를 포함한다.

본 발명의 약학적 조성물은 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 약학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 이용하여 제제화 됨으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기내에 내입시켜 제조될 수 있다. 이때 제형은 오일 또는 수성 매질중의 용액, 현탁액 또는 유화액 형태이거나 엑스제, 분말제, 과립제, 정제 또는 캅셀제 형태일 수도 있으며, 분산제 또는 안정화제를 추가적으로 포함할 수 있다.

본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 본 발명은 상기 박테리오파지를 유효성분으로 포함하는 화장품용 항균제 및 의약용 항생제를 제공한다.

화장품은 기름이나 물을 주성분으로 하며, 미생물의 탄소원이 되는 글리세린이나 솔비톨 등과 질소원이 되는 아미노산 유도체, 단백질 등이 배합된 것이 많으므로 세균 등의 미생물 침투가 용이하다. 또, 식품에 비하여 사용기간이 매우 길기 때문에 미생물에 의한 오염 위험이 훨씬 크다고 할 수 있다. 사용함에 따른 미생물 오염으로 나타나는 변색이나 변취 등으로부터 화장품을 장기간 보호하기 위하여 항균제의 첨가가 필수적이다.

본 발명의 박테리오파지는 기존 항생제에 비하여 다종의 병원성 장내세균을 사멸시킬 수 있는 장점을 갖고 있다. 이는 각각의 병원성 장내세균별로 서로다른 복수의 항생제를 사용하는 것 보다 단일 처방으로 다종의 병원성 장내세균을 한꺼번에 사멸시킬 수 있으므로 매우 가치가 있다고 할 수 있다. 또한, 본 발명의 박테리오파지를 항생제로 이용하게 되면 기존의 항생제를 이용하는 것과는 달리 병원균의 내성 내지 저항성(resistance)을 유도하지 않는다는 중요한 장점을 갖기 때문에 기존의 항생물질에 비하여 제품수명(life cycling)이 긴 신규 항생제로서 제공될 수 있다. 대부분의 항생 물질들은 내성 증가에 직면함에 따라 갈수록 사용범위가 줄어들 수밖에 없는데 반해, 본 발명의 박테리오파지를 유효성분으로 포함하는 항생제는 항생제 내성 문제를 근본적으로 해결할 수 있기에 그 만큼 항생제로서의 제품수명이 길어질 것으로 기대된다.

따라서, 병원성 장내세균을 특이적으로 사멸시키는 본 발명의 박테리오파지를 유효성분으로 포함하는 항생제는 항균 효과, 살균 효과 및 방부 효과가 뛰어난 항생제로서 유용하게 사용될 수 있다. 본 명세서에서 사용된 ‘항생제’라는 용어는 방부제, 살균제 및 항균제를 총칭한다.

또한, 본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 본 발명은 상기 박테리오파지를 유효성분으로 포함하는 소독제를 제공한다.

상기 병원성 장내세균에 대해 효과적인 사멸능을 갖는 본 발명의 박테리오파지를 유효성분으로 포함하는 소독제는 병원감염을 막기 위한 병원 및 보건용의 소독제로 유용하게 사용될 수 있고 또한, 일반 생활 소독제, 식품 및 조리 장소 및 설비의 소독제, 축산산업의 축사 소독제로서 유용하게 사용될 수 있다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하기로 한다. 이들 실시예는 단지 본 발명을 예시하기 위한 것이므로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는다.

실시예 1. 박테리오파지의 분리

서울 및 경기지역의 생활하천으로부터 시료를 수집하여 분리하였다. 우선 시료를 0.45 μm 필터를 이용하여 여과한 후 대수기로 증식한 살모넬라 엔테리티디스(Salmonella Enteritidis) 배양액과 혼합하고 0.5% agar를 함유하는 top LB agar 10 ml과 혼합한 후 LB agar plate에 부어 잘 굳게 하였다. 37℃ 인큐베이터에서 배양한 후 플라크(plaque) 형성 유무를 관찰하였다. 형성된 플라크에서 파지(phage)들을 분리한 다음, 다시 같은 균을 이용하여 파지들을 증폭하는 과정을 반복하여 10종의 파지(phage)들을 순수분리 및 정제하였다 (도 1 참조). 스톡 파지(stock phage)는 LB 액체 배지로 용해하여 4℃에 보관하였다.

실시예 2. 파지들의 용균가능한 숙주범위

실시예 1에서 얻은 10종의 파지들을, 영양배지에서 배양한 살모넬라 등 여러 가지 세균들(표 1에 기재된 균주)을 영양배지(Nutrient broth)에서 1시간 교반배양 후 평판 영양배지(nutrient agar plate)에 도말하고 각각의 파지 용액을 떨어뜨린 후 37℃ 인큐베이터에서 18시간 동안 배양하여 용균(lysis) 정도를 확인하였다.

10종의 파지들을 이용하여 다종의 장내세균에 대한 용균 효과를 시험한 결과, 9종의 파지들은 살모넬라 엔테리티디스 이외의 다른 세균들에서는 용균 효과를 나타내지 않은 반면, 1종의 파지는 하기 표 1과 같이, 다양한 숙주범위에서 용균효과를 나타냄을 확인하고 이를 다종의 장내세균에 대하여 사멸효과를 갖는 박테리오파지로서 선정하였다 (도 2 및 표 1 참조). 본 발명자들은 이렇게 선정된 파지를 한국 생명공학연구원의 유전자은행(KCTC)에 기탁하고 (기탁번호: KCTC11492BP) ‘SS3e’ 파지라고 명명하였다.

[표 1-1]

[표 1-2]

파지의 숙주범위를 테스트한 결과 상기 표 1에서와 같이, 대부분의 살모넬라속의 균, 다수의 병원성 대장균, 다수의 이질균뿐만 아니라, Enterobacter cloacae, Citrobacter freundii, Seratia marcescenes도 파지의 숙주범위에 포함됨을 알 수 있었다. 따라서 본 발명의 파지는 특이적으로 다종의 병원성 세균에 대하여 사멸능을 가짐을 확인하였다.

실시예 3. 파지 염색체의 분리 및 제한효소를 이용한 맵핑

실시예 1에서 제조된 파지 용액에 proteinase K와 SDS(Sodium Dodecyl Sulphate)를 각각 50 μg/ml, 0.5%가 되도록 넣고 1시간 동안 56℃에서 배양하고 페놀(phenol)을 이용하여 단백질을 제거하였다. 13,000 rpm에서 10분 동안 원심분리하고 상층액을 조심스럽게 새로운 튜브로 옮겼다. 100% 에탄올을 2배 넣고 -20℃에 15분간 정치 후 1,300 rpm으로 15분간 원심분리하고 상층액을 버리고 70% 에탄올 100 μl 넣고 1,300 rpm 10분간 원심분리하였다. 상층액을 버리고 건조 후 증류수를 적당량 넣어서 보관하였다. 준비한 파지 DNA에 SmaI, PstI, SacI, NotI, XhoI, EcoRI, BamHI, XbaI, HindIII, SalI 제한효소를 처리하여 제한효소 맵(map)과 게놈 크기(genome size)를 확인하였다 (도 3a 참조).

제한효소 맵핑 결과, SS3e 파지의 게놈은 이중나선구조의 DNA이며 도 3b의 제한효소 지도를 가지며, 전체 게놈이 약 41K bp되는 크기임을 확인하였다.

실시예 4. 파지의 전자현미경 관찰

증균한 파지 용액을 초원심분리(ultra centrifuge)를 이용하여 RCF 110,000 g에서 2시간 원심분리하였다. 조심스럽게 상층액을 버리고 파지 저장에 사용하는 SM buffer 1 ml을 넣고 하룻밤 배양하여 침전물을 녹여내었다. 정제된 파지를 5% 포르말린(formalin)으로 고정한 후 2% 우라닐 아세테이트(uranyl acetate, pH 4.0)로 음성 염색하여 투사전자현미경(Transmission Electron Microscope; TEM, 75 Kv) 을 사용하여 파지의 모양을 관찰하였다 (도 4).

관찰결과, 코도비랄레스(Caudovirales)의 시포비리대(Siphoviridae)에 속하는 파지로 밝혀졌다. 처음에는 살모넬라 엔테리티디스를 용혈하는 파지로 분리되었지만, 실험결과 대부분의 살모넬라 혈청형과 병원성 대장균, 이질균, 엔테로박터를 사멸시키는 것으로 나타났다.

이상 설명한 바와 같이, 본 발명에 따르면 살모넬라균, 이질균, 대장균군 등은 식품매개질환을 일으키고 이러한 원인세균병원체를 효과적으로 사멸시키거나 저감화하는 것은 질환예방차원에서 매우 중요하다. 이러한 감염질환을 치료하거나 원인세균을 사멸시키기 위하여 인체 또는 가축 등에 항균제를 투여하고 식자재나 환경에는 물리화학적 요법으로 원인세균을 저감하기도 한다. 그러나 현재 항균제 남용으로 인한 다제내성 세균의 유행이 국민보건에 크게 위해요소가 되고 있으며 물리화학적 요법은 환경오염과 경제적 비용이 많이 든다는 단점이 있다. SS3e는 장티푸스 균과 파라티푸스 균을 포함하는 대부분의 살모넬라 세균과 이질균, 병원성 대장균 등을 사멸하는 장내세균속 숙주범위를 갖는 특이한 박테리오파지이다. 이제까지 알려진 박테리오파지는 특정 세균만을 사멸하는 것으로 알려져 있지만 SS3e는 다양한 식품매개질환 원인세균들을 사멸하여 보건산업 뿐 아니라 식품, 친환경 대체항균제로 이용될 가치가 높다. 본 발명의 박테리오파지 SS3e를 이용한 세균사멸기법을 통하여 식품매개질환 및 감염치료 또는 보건위생 향상에 많은 도움을 줄 것 이다.

도 1은 살모넬라 엔테리티디스에서 생산된 박테리오파지 SS3e의 플라크 사진이다.

도 2는 다양한 장내세균에 대한 박테리오파지 SS3e의 용균 결과를 나타낸다. 1: E. coli DH5α, 2: S. Paratyphi A, 3: S. Typhimurium, 4: S. Typhi, 5: S. Enteritidis, 6: Shigella sonnei.

도 3a는 SS3e 게놈 DNA의 제한효소 맵핑 결과이다. 레인 1: 완전한 파지 게놈, 레인 2: 1 kb DNA 사이즈 마커 (Invitrogen 1kb plus ladder), 레인 3: SmaI, 레인 4: PstI, 레인 5: SacI, 레인 6: NotI, 레인 7: XhoI, 레인 8: EcoRI, 레인 9: BamHI, 레인 10: XbaI, 레인 11: HindIII, 레인 12: SalI

도 3b는 SS3e 게놈 DNA의 제한효소 지도를 나타낸다.

도 4는 SS3e 파지의 전자현미경(TEM) 사진이다. 정제된 파지 입자는 2% 우라닐 아세테이트로 염색하였다. 크기 바(bar)는 100 nm이다.

<110> Kyungpook National University Industry-Academic Cooperation Foundation <120> A bacteriophage killing pathogenic enteric bacteria <160> 2 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 474 <212> PRT <213> Bacteriophage SS3e <400> 1 Met Ser Lys Phe Arg Arg Arg Glu Tyr Gln Lys Ile Met Thr Ser Phe 1 5 10 15 Met Leu Gln His Pro Arg Cys Asn Ile Trp Cys Gly Met Gly Gly Gly 20 25 30 Lys Thr Ser Ser Thr Met Trp Val Leu Ser Arg Leu Phe Arg Asn Gly 35 40 45 Gln Leu Asn Asp Asp Asp Arg Val Leu Ile Leu Ala Pro Leu Arg Val 50 55 60 Ala Ser Gly Thr Trp Pro Ala Glu Gln Glu Lys Trp Asn Phe Pro Cys 65 70 75 80 Leu Ser Val Val Asp Ala Thr Gly Ser Glu Lys Arg Arg Ile Ala Ala 85 90 95 Leu Glu Ser Asp Ala Asn Val Val Cys Thr Asn Tyr Glu Val Ile Glu 100 105 110 Trp Leu Ile Asp Tyr Tyr Gly Lys Asp Asp Trp Pro Phe Thr Val Ile 115 120 125 Val Ala Asp Glu Ser Thr Lys Leu Lys Ser Phe Arg Ser Arg Ser Gly 130 135 140 Gly Ser Lys Arg Ala Lys Ala Leu Ser Lys Val Ala Phe Gly Lys Val 145 150 155 160 Lys Arg Phe Ile Asn Leu Thr Gly Thr Pro Ser Pro Asn Gly Leu Lys 165 170 175 Asp Leu Trp Gly Gln Asn Trp Phe Ile Asp Ala Gly Glu Arg Leu Gly 180 185 190 Ser Ser Tyr Thr Ala Phe Thr Asp Arg Trp Phe Asn Ser Val Gln Lys 195 200 205 Gly Lys Ser Ala Met Ala Arg Glu Tyr His Ser Arg Pro Gly Ala Asp 210 215 220 Asn Glu Ile His Gln Lys Met Lys Asp Ile Ser Leu Thr Ile Asp Ala 225 230 235 240 Ala Glu Trp Phe Gly Cys Glu Ala Pro Val Ile Val Pro Val Glu Ile 245 250 255 Asp Leu Pro Lys Lys Ala Arg Gln Ala Tyr Ile Asp Met Glu Glu Lys 260 265 270 Leu Phe Ala Glu Leu Glu Ser Gly Glu Val Glu Ala Ala Asn Ala Ala 275 280 285 Ala Lys Thr Ser Lys Cys Leu Gln Ile Ala Ser Gly Ala Val Tyr Val 290 295 300 Ser Gly Pro Asp Gly Glu Ala Thr Lys Glu Trp Glu Lys Val His Asp 305 310 315 320 Thr Lys Leu Asp Ala Leu Glu Ser Ile Val Glu Glu Leu Gln Gly Ala 325 330 335 Pro Leu Leu Val Ala Tyr Gln Phe Lys His Glu Leu Glu Arg Ile Leu 340 345 350 Lys Arg Phe Pro Gln Ala Gln Ala Phe Ser Lys Gly Ala Lys Gly Asn 355 360 365 Lys Gln Met Glu Ser Trp Asn Arg Gly Glu Ile Glu Ile Leu Cys Val 370 375 380 His Pro Ala Ser Ala Gly His Gly Leu Asn Leu Gln Asp Gly Gly His 385 390 395 400 His Leu Ala Phe Ile Ser Gln Gly Trp Asn Leu Glu His Tyr Leu Gln 405 410 415 Val Val Glu Arg Ile Gly Pro Val Arg Gln Lys Gln Ala Gly His Glu 420 425 430 Arg Pro Val Phe Leu Tyr His Ile Val Ala Lys Asp Thr Leu Asp Glu 435 440 445 Val Val Ala Ala Arg Thr Asp Glu Lys Lys Ser Val Gln Glu Glu Leu 450 455 460 Leu Asn Tyr Met Lys Arg Arg Gly Lys Arg 465 470 <210> 2 <211> 1425 <212> DNA <213> Bacteriophage SS3e <400> 2 atgagtaagt ttaggcgcag ggaataccag aaaataatga cgtcgtttat gctacagcac 60 ccacgttgca atatatggtg cggtatgggt ggcggcaaga cctcgtcgac aatgtgggtg 120 cttagccgcc tgttccgtaa tgggcaactt aatgacgacg accgagtgtt aattctggcc 180 cctttacgtg ttgcgtcagg tacgtggcca gcagaacaag agaaatggaa cttcccgtgt 240 ctgagtgtag tagatgcaac tggttctgag aagcgacgca tcgcggcgct ggagtcagac 300 gctaacgtgg tttgcacaaa ttacgaagtt atagaatggc ttattgacta ctacggcaaa 360 gacgactggc cttttaccgt tatcgttgcc gatgagagca cgaagctgaa atcgttccgt 420 agccgttctg gcgggagcaa gagggcaaag gcgcttagta aggtggcgtt cggtaaagtt 480 aagcgtttca ttaacctgac cggtacacca tcaccaaacg gcctcaaaga cttgtggggt 540 cagaactggt tcatcgacgc cggcgagcgc ctcgggtctt cgtacacagc attcacagac 600 cgatggttta actcggtaca gaaagggaag tcagctatgg cacgggaata ccactctcgc 660 cctggcgccg ataacgagat tcaccagaaa atgaaggata ttagcctgac cattgatgct 720 gccgagtggt tcggttgtga agcgcccgtt attgtgccgg ttgaaattga cctgccgaag 780 aaagcacgtc aggcgtacat cgatatggag gagaagttat tcgcagaact ggagagtggg 840 gaagttgaag cggctaacgc cgcggcgaag acgtcgaagt gtttgcagat tgcatcaggc 900 gccgtgtatg tatcggggcc agacggagaa gctaccaaag aatgggagaa agtgcacgat 960 acgaaactgg atgcgctcga gtccattgta gaggagttac agggtgcgcc gttgttggtg 1020 gcctatcagt tcaaacacga actggagcgc atccttaagc gattcccgca ggctcaggcc 1080 ttttccaaag gtgctaaagg taataagcag atggaatctt ggaaccgcgg ggaaatcgag 1140 attttgtgcg tgcaccctgc atcggcgggc catggtttga atttacagga cggcgggcat 1200 catctggcgt ttatttcgca aggctggaac ctggagcact atttgcaggt tgtcgagcgt 1260 ataggtcctg tacgccagaa acaggctggc cacgagcgtc cagtgttcct gtatcacata 1320 gtcgctaaag acacgctgga tgaggtcgtt gccgcgcgta cggacgagaa aaaatctgtc 1380 caggaagagt tgcttaatta tatgaagaga cgaggtaaga gatga 1425

Claims

병원성 장내세균에 대한 사멸능을 갖고, 서열번호 1로 구성된 아미노산 서열을 코딩하는 추정상 헬리케이즈(Putative helicase) 유전자 서열을 갖는 것을 특징으로 하는 시포비리대 과(Siphoviridae)의 박테리오파지(Bacteriophage) SS3e.
제 1항에 있어서, 상기 추정상 헬리케이즈(Putative helicase) 유전자는 서열번호 2의 염기 서열을 갖는 것을 특징으로 하는 박테리오파지(Bacteriophage) SS3e.
제 1항에 있어서, 상기 박테리오파지의 유전체는 도 3b에 개시된 제한효소 지도(map)를 갖는 것을 특징으로 하는 박테리오파지(Bacteriophage) SS3e.
제 1항에 있어서, 상기 박테리오파지는 기탁번호 KCTC11492BP인 것을 특징으로 하는 박테리오파지 SS3e.
제 1항에 있어서, 상기 병원성 장내세균은 살모넬라, 병원성 대장균, 이질균 및 엔테로박터로 구성된 군에서 선택된 것을 특징으로 하는 박테리오파지 SS3e.
제 1항 내지 제 5항 중 어느 한 항의 박테리오파지 SS3e를 유효성분으로 포함하는 병원성 장내세균 유발성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
제 1항 내지 제 5항 중 어느 한 항의 박테리오파지 SS3e를 포함하는 항생제.
제 1항 내지 제 5항 중 어느 한 항의 박테리오파지 SS3e를 포함하는 소독제.