RU2662985C1 - Новый бактериофаг шига-токсин продуцирующей e. coli типа f18 esc-cop-1 и его применение для ингибирования пролиферации шига-токсин продуцирующей e. coli типа f18 - Google Patents

Новый бактериофаг шига-токсин продуцирующей e. coli типа f18 esc-cop-1 и его применение для ингибирования пролиферации шига-токсин продуцирующей e. coli типа f18 Download PDF

Info

Publication number
RU2662985C1
RU2662985C1 RU2017121454A RU2017121454A RU2662985C1 RU 2662985 C1 RU2662985 C1 RU 2662985C1 RU 2017121454 A RU2017121454 A RU 2017121454A RU 2017121454 A RU2017121454 A RU 2017121454A RU 2662985 C1 RU2662985 C1 RU 2662985C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
bacteriophage
toxin producing
cop
shiga
coli
Prior art date
Application number
RU2017121454A
Other languages
English (en)
Inventor
Сон Джун ЁОН
Сан Хеон КАН
Соо Ёун ДЖУН
Хёун Рок ПАИК
Джее Соо СОН
Сук Хван ПАРК
Бюн Кук КИМ
Original Assignee
Интрон Байотекнолоджи, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Интрон Байотекнолоджи, Инк. filed Critical Интрон Байотекнолоджи, Инк.
Application granted granted Critical
Publication of RU2662985C1 publication Critical patent/RU2662985C1/ru

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K10/00—Animal feeding-stuffs
    • A23K10/10—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
    • A23K10/16—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K10/00—Animal feeding-stuffs
    • A23K10/10—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
    • A23K10/16—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions
    • A23K10/18—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions of live microorganisms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K50/00—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals
    • A23K50/30—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for swines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L2/00—Non-alcoholic beverages; Dry compositions or concentrates therefor; Their preparation
    • A23L2/38—Other non-alcoholic beverages
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L2/00—Non-alcoholic beverages; Dry compositions or concentrates therefor; Their preparation
    • A23L2/52—Adding ingredients
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/76—Viruses; Subviral particles; Bacteriophages
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2/00—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor
    • A61L2/0005—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor for pharmaceuticals, biologicals or living parts
    • A61L2/0082—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor for pharmaceuticals, biologicals or living parts using chemical substances
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C02—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F3/00—Biological treatment of water, waste water, or sewage
    • C02F3/34—Biological treatment of water, waste water, or sewage characterised by the microorganisms used
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C02—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F2103/00—Nature of the water, waste water, sewage or sludge to be treated
    • C02F2103/02—Non-contaminated water, e.g. for industrial water supply
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C02—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F2303/00—Specific treatment goals
    • C02F2303/04—Disinfection
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C02—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F2305/00—Use of specific compounds during water treatment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2795/00—Bacteriophages
    • C12N2795/00011—Details
    • C12N2795/10011—Details dsDNA Bacteriophages
    • C12N2795/10111—Myoviridae
    • C12N2795/10121—Viruses as such, e.g. new isolates, mutants or their genomic sequences
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2795/00—Bacteriophages
    • C12N2795/00011—Details
    • C12N2795/10011—Details dsDNA Bacteriophages
    • C12N2795/10111—Myoviridae
    • C12N2795/10132—Use of virus as therapeutic agent, other than vaccine, e.g. as cytolytic agent

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Animal Husbandry (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Physiology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Water Supply & Treatment (AREA)
  • Hydrology & Water Resources (AREA)
  • Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
  • Environmental & Geological Engineering (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)

Abstract

Представленные изобретения относятся, в частности, к миовирусному бактериофагу Esc-СОР-1, выделенному из природы и имеющему геном, представленный нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 1 (регистрационный №: КСТС 12662 ВР). Изобретения также относятся к способу предупреждения или лечения инфекций, вызываемых Шига-токсин продуцирующей Е. coli типа F18, с использованием композиции, содержащей указанный бактериофаг в качестве активного ингредиента. Изобретения позволяют использовать заявленный бактериофаг, который способен специфически уничтожать штаммы Шига-токсин продуцирующей E. соli типа F18, и могут быть использованы в медицинской промышленности. 3 н. и 2 з.п. ф-лы, 2 ил.,4 табл., 8 пр.

Description

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Область изобретения
Настоящее изобретение относится к бактериофагу, выделенному из природы, инфицирующему и уничтожающему Шига-токсин продуцирующую Е. coli типа F18, и способу предупреждения и лечения инфекций, вызываемых Шига-токсин продуцирующей Е. coli типа F18, с использованием композиции, содержащей бактериофаг в качестве активного ингредиента. В частности, настоящее изобретение относится к миовирусному бактериофагу Esc-COP-1, выделенному из природы и способному специфически уничтожать штаммы Шига-токсин продуцирующей E. coli типа F18, имеющему геном, представленный нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 1 (регистрационный №: КСТС 12662 ВР), и способу предупреждения инфекций, вызываемых Шига-токсин продуцирующей Е. coli типа F18, и их последующего лечения с использованием композиции, содержащей указанный бактериофаг в качестве активного ингредиента.
2. Описание уровня техники
Существует два вида Escherichia coli (Е. coli): непатогенная Е. coli и патогенная Е. coli. Непатогенная Е. coli является представителем нормальной флоры кишечника и полезна для достижения баланса с другими энтеробактериями, помощи пищеварению и так далее. Патогенная Е. coli прикрепляется к стенке кишечника с помощью фимбрий для пролиферации и продуцирует энтеротоксины, вызывающие диарею.
Патогенная Е. coli поражает различные виды сельскохозяйственных животных, вне зависимости от возраста, и вызывает диарею - существенный симптом, способный повлечь высокую смертность вследствие обезвоживания. В Корее сообщалось о возникновении этой диареи практически на всех животноводческих фермах. Более того, в случае смешанных инфекций, вызываемых ротавирусом, коронавирусом, простейшими кокцидиями и тому подобными, эта вспышка усиливается в связи с повреждением слизистой кишечника и симптомы значительно усугубляются по сравнению со случаями единичных инфекций. Существует несколько патогенных штаммов Е. coli, вызывающих диарею. Прежде всего, часто сообщается, что Шига-токсин продуцирующая Escherichia coli типа F18 вызывает тяжелую диарею и отеки у свиней. Шига-токсин продуцирующая Е. coli типа F18 прикрепляется к эпителиальным клеткам кишечника с помощью фимбрий (F18) для выделения Шига-токсина. Выделяемый токсин абсорбируется кровеносными сосудами, что приводит к повышению кровяного давления и повреждению артериол, что вызывает опухоли во всех частях тела, сопровождаемые судорогами, параличом и тому подобным. Учитывая существенный вред, который Шига-токсин продуцирующая Е. coli типа F18 наносит животноводческой отрасли, возникла острая потребность в разработке эффективного способа предупреждения и лечения таких инфекций. Для предупреждения или лечения таких инфекций, вызываемых Шига-токсин продуцирующей Е. coli типа F18, использовали различные антибиотики. Тем не менее, в связи с возрастающим в последнее время числом бактерий, устойчивых к антибиотикам, возникла острая потребность в эффективной альтернативе.
В последнее время внимание авторов привлекло применение бактериофагов в качестве нового способа лечения бактериальных инфекций. В частности, причиной повышенного интереса авторов к бактериофагам является то, что лечение, основанное на применении бактериофагов, является способом, дружественным к окружающей среде. Бактериофаги представляют собой чрезвычайно маленькие инфицирующие бактерии микроорганизмы, сокращенно называемые фагами. Как только бактериофаг инфицирует бактерию, бактериофаг пролиферирует внутри бактериальной клетки. После полной пролиферации потомки разрушают бактериальную клеточную стенку, чтобы выйти из хозяина, что указывает на то, что бактериофаги обладают способностью уничтожать бактерии. Инфицирование бактериофагами характеризуется высокой специфичностью, так что конкретный бактериофаг инфицирует только определенную бактерию. То есть, число бактерий, которые могут быть инфицированы конкретным бактериофагом, ограничено, что указывает на то, что бактериофаг способен уничтожать только определенную бактерию, и не может нанести вред другим бактериям.
Бактериофаг был впервые обнаружен английским бактериологом Туортом в 1915 г., когда он заметил, что колонии Micrococcus под воздействием чего-то неизвестного стали плавиться и становиться прозрачными. В 1917 г. французский бактериолог Д'Эрелль обнаружил, что Shigella disentriae в фильтрате кала больного дизентерией расплавилась под воздействием чего-то, и впоследствии исследовал этот феномен. В результате он независимо обнаружил бактериофаг, и назвал его «бактериофагом», что означает «пожиратель бактерий». После этого были обнаружены бактериофаги, обладающие специфическим антибактериальным действием против таких патогенных бактерий, как Shigella, Salmonella Typhi и Vibrio cholerae.
По причине их уникальной способности уничтожать бактерии, бактериофаги исследовали и прогнозировали как более совершенный способ для лечения бактериальных инфекций. Однако после открытия пенициллина Флемингом исследования бактериофагов продолжились только в ряде западноевропейских стран и бывшем Советском Союзе по причине универсализации антибиотиков. После 2000 года достоинства общепринятых антибиотиков померкли по причине увеличения числа бактерий, устойчивых к антибиотикам. Таким образом, бактериофаги вновь оказались в центре внимания как новый антибактериальный агент, способный заменить общепринятые антибиотики.
Более того, недавнее регулирование использования антибиотиков поддерживается правительствами по всему миру. Интерес к бактериофагам все больше повышается, а также постоянно открываются их промышленные применения.
Таким образом, в настоящем изобретении реализована попытка разработать композицию, подходящую для предупреждения или лечения инфекций, вызываемых Шига-токсин продуцирующей E. coli типа F18, с помощью бактериофага, выделенного из природы и способного селективно уничтожать Шига-токсин продуцирующую Е. coli типа F18, и дополнительно обеспечить способ предупреждения или лечения инфекций, вызываемых Шига-токсин продуцирующей Е. coli типа F18, с использованием композиции. В результате, авторы выделили бактериофаги, подходящие для этой цели, и установили нуклеотидную последовательность генома, позволяющую отличить бактериофаг по настоящему изобретению от других бактериофагов. Затем авторы разработали композицию, содержащую выделенный бактериофаг в качестве активного ингредиента, и подтвердили, что эта композиция может эффективно применяться для предупреждения и лечения инфекций, вызываемых Шига-токсин продуцирующей Е. coli типа F18, что привело к созданию настоящего изобретения.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Целью настоящего изобретения является обеспечение миовирусного бактериофага Esc-COP-1, выделенного из природы и способного специфически уничтожать Шига-токсин продуцирующую Е. coli типа F18, имеющего геном, представленный нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 1 (регистрационный №: КСТС 12662 ВР).
Еще одной целью настоящего изобретения является обеспечение композиции, подходящей для предупреждения инфекций, вызываемых Шига-токсин продуцирующей Е. coli типа F18, содержащей бактериофаг Esc-COP-1, способный инфицировать и уничтожать Шига-токсин продуцирующую Е. coli типа F18, в качестве активного ингредиента, и способа предупреждения инфекций, вызываемых Шига-токсин продуцирующей Е. coli типа F18, с использованием указанной композиции.
Еще одной целью настоящего изобретения является обеспечение композиции, подходящей для лечения инфекций, вызываемых Шига-токсин продуцирующей Е. coli типа F18, содержащей бактериофаг Esc-COP-1, способный инфицировать и уничтожать Шига-токсин продуцирующую Е. coli типа F18, в качестве активного ингредиента, и способа лечения инфекций, вызываемых Шига-токсин продуцирующей Е. coli типа F18, с использованием указанной композиции.
Еще одной целью настоящего изобретения является обеспечение дезинфицирующего средства для предупреждения и лечения инфекций, вызываемых Шига-токсин продуцирующей Е. coli типа F18, с использованием указанной композиции.
Еще одной целью настоящего изобретения является обеспечение добавки для питьевой воды для предупреждения и лечения инфекций, вызываемых Шига-токсин Продуцирующей Е. coli типа F18, с использованием указанной композиции.
Еще одной целью настоящего изобретения является обеспечение пищевой добавки, эффективной в сельском хозяйстве, для предупреждения и лечения инфекций, вызываемых Шига-токсин продуцирующей Е. coli типа F18, с использованием указанной композиции.
Для достижения вышеуказанных целей в настоящем изобретении обеспечен миовирусный бактериофаг ESC-COP-1, выделенный из природы и способный специфически уничтожать Шига-токсин продуцирующую Е. coli типа F18, имеющий геном, представленный нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 1 (регистрационный №: КСТС 12662 ВР), и способ предупреждения и лечения инфекций, вызываемых Шига-токсин продуцирующей Е. coli типа F18, с использованием композиции, содержащей бактериофаг в качестве активного ингредиента. Бактериофаг Esc-COP-1 был выделен авторами настоящего изобретения и затем депонирован в Корейской коллекции типовых культур Корейского научно-исследовательского института биологических наук и биотехнологии 21 августа 2014 г. (регистрационный №: КСТС 12662 ВР). В настоящем изобретении также предложены дезинфицирующее средство, добавка для питьевой воды и пищевая добавка, подходящие для предупреждения или лечения инфекций, вызываемых Шига-токсин продуцирующей Е. coli типа F18, содержащие бактериофаг Esc-COP-1 в качестве активного ингредиента.
Поскольку бактериофаг Esc-COP-1, входящий в состав композиции по настоящему изобретению, эффективно уничтожает Шига-токсин продуцирующую Е. coli типа F18, его следует считать эффективным для предупреждения или лечения диареи (инфекций), вызываемой Шига-токсин продуцирующей Е. coli типа F18. Следовательно, композиция по настоящему изобретению может применяться для предупреждения и лечения диареи Е. coli, вызываемой Шига-токсин продуцирующей Е. coli типа F18. В настоящем описании диарея Е. coli включает симптомы, вызываемые инфекциями Е. coli, сопровождающиеся лихорадкой, диареей и тому подобными.
В настоящем описании термин «лечение» или «лечить» обозначает (i) подавление диареи, вызываемой Шига-токсин продуцирующей Е. coli типа F18; и (ii) облегчение диареи, вызываемой Шига-токсин продуцирующей Е. coli типа F18.
В настоящем описании термин «выделение» или «выделенный» обозначает все действия, необходимые для отделения бактериофага с помощью различных экспериментальных техник, и для определения характеристик, позволяющих отличить данный бактериофаг от других бактериофагов, и дополнительно включает действие пролиферации бактериофага посредством биоинженерных технологий с тем, чтобы сделать его полезным.
Фармацевтически приемлемый носитель, входящий в состав композиции по настоящему изобретению, представляет собой носитель, обычно используемый для получения фармацевтического состава, примерами которого являются лактоза, декстроза, сахароза, сорбит, маннит, крахмал, гуммиарабик, фосфат кальция, альгинат, желатин, силикат кальция, микрокристаллическая целлюлоза, поливинилпирролидон, целлюлоза, вода, сироп, метилцеллюлоза, метилгидроксибензоат, пропилгидроксибензоат, тальк, стеарат магния и минеральное масло, но не всегда ограничиваясь перечисленным. Композиция по настоящему изобретению помимо вышеуказанных ингредиентов может дополнительно включать смазывающие вещества, смачивающие агенты, подсластители, вкусовые добавки, эмульгаторы, суспендирующие агенты и консерванты.
Бактериофаг Esc-COP-1 включен в состав композиции согласно настоящему изобретению в качестве активного ингредиента. При этом бактериофаг Esc-COP-1 включен в концентрации от 1×101 БОЕ/мл до 1×1030 БОЕ/мл, или от 1×101 БОЕ/г до 1×1030 БОЕ/г, и предпочтительно в концентрации от 1×104 БОЕ/мл до 1×1015 БОЕ/мл, или от 1×104 БОЕ/г до 1×1015 БОЕ/г.
Композиция по настоящему изобретению может быть получена способом, осуществляемым специалистами в данной области, с использованием фармацевтически приемлемого носителя и/или эксципиента, в форме контейнера для однократной дозы или многократных доз. Состав может быть представлен в форме раствора, суспензии или эмульсии в масле или водорастворимой среде, экстракта, порошка, гранулы, таблетки или капсулы. При этом может быть дополнительно включен диспергирующий агент или стабилизатор.
Композиция по настоящему изобретению может быть изготовлена в виде дезинфицирующего средства, добавки для питьевой воды или пищевой добавки, в зависимости от цели использования, но не всегда ограничиваясь перечисленным.
ПОЛОЖИТЕЛЬНЫЙ ЭФФЕКТ
Способ предупреждения и лечения инфекций, вызываемых Шига-токсин продуцирующей Е. coli типа F18, с использованием данной композиции, содержащей бактериофаг Esc-COP-1 в качестве активного ингредиента, обладает преимуществом высокой специфичности к Шига-токсин продуцирующей Е. coli типа F18 по сравнению с общепринятыми способами, основанными на химических веществах, включая общепринятые антибиотики. Это означает, что композиция по настоящему изобретению может специфически применяться для предупреждения или лечения инфекций, вызываемых Шига-токсин продуцирующей Е. coli типа F18, не оказывая воздействия на другие имеющиеся полезные бактерии, и, соответственно, имеет меньше побочных эффектов. В общем, при использовании химических веществ, таких как антибиотики, основные имеющиеся бактерии также уничтожаются, что приводит к ослаблению иммунитета у животных с различными сопутствующими побочными эффектами. В то же время, в композиции по настоящему изобретению в качестве активного ингредиента используется бактериофаг, выделенный из природы, что является очень дружественным к окружающей среде.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ
Применение предпочтительных вариантов осуществления настоящего изобретения более понятно со ссылкой на прилагаемые фигуры, где:
Фиг. 1 представляет собой снимок, полученный при помощи электронного микроскопа, демонстрирующий морфологию бактериофага Esc-COP-1.
Фиг. 2 представляет собой фотографию, иллюстрирующую способность бактериофага Esc-COP-1 уничтожать Шига-токсин продуцирующую Е. coli типа F18. Прозрачный участок на чашке представляет собой бляшки, образованные в результате лизиса бактериальных клеток.
ОПИСАНИЕ ПРЕДПОЧТИТЕЛЬНЫХ ВАРИАНТОВ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ
Практические и предпочтительные в настоящий момент варианты осуществления настоящего изобретения являются иллюстративными, как показано в следующих Примерах.
Тем не менее, следует понимать, что специалисты в данной области с учетом настоящего описания могут создавать модификации и улучшения, оставаясь в рамках сущности и объема настоящего изобретения.
Пример 1: Выделение бактериофага, способного уничтожать Шига-токсин продуцирующую Е. coli типа F18
Образцы отбирали из природы для отбора бактериофага, способного уничтожать Шига-токсин продуцирующую Е. coli типа F18. Шига-токсин продуцирующая Е. coli типа F18, использованная здесь для выделения бактериофага, представляла собой выделенную авторами настоящего изобретения и ранее идентифицированную как Шига-токсин продуцирующая Е. coli типа F18.
Процедура выделения бактериофага подробно описана далее. Собранный образец добавляли к TSB (триптиказо-соевый бульон) среде (панкреатический гидролизат казеина, 17 г/л; папаиновый гидролизат соевых бобов, 3 г/л; декстроза, 2,5 г/л; хлорид натрия, 5 г/л; дикалийфосфат, 2,5 г/л), инокулированной Шига-токсин продуцирующей Е. coli типа F18 в соотношении 1/1000, с последующим встряхиванием культуры при 37°С в течение от 3 до 4 часов. После завершения культивирования осуществляли центрифугирование при 8000 об/мин в течение 20 минут, и собирали супернатант. Собранный супернатант инокулировали Шига-токсин продуцирующей Е. coli типа F18 в соотношении 1/1000 с последующим встряхиванием культуры при 37°С в течение от 3 до 4 часов. Когда образец содержал бактериофаг, для увеличения титра бактериофага вышеуказанную процедуру повторяли в общей сложности 5 раз. После повторения процедуры 5 раз культуральный раствор подвергали центрифугированию при 8000 об/мин в течение 20 минут и собирали полученный супернатант. Собранный супернатант фильтровали с использованием 0,45 мкм фильтра. Полученный фильтрат использовали в капельном анализе для исследования способности бактериофага уничтожать Шига-токсин продуцирующую Е. coli типа F18.
Капельный анализ проводили следующим образом; среду TSB инокулировали Шига-токсин продуцирующей E. coli типа F18 в соотношении 1/1000 с последующим встряхиванием культуры при 37°С в течение ночи. 3 мл (с OD600, равной 1,5) культурального бульона Шига-токсин продуцирующей E.coli типа F18, полученного как описано выше, распределяли по пластинке с TSA (триптиказо-соевый агар; панкреатический гидролизат казеина, 17 г/л; папаиновый гидролизат соевых бобов, 3 г/л; хлорид натрия, 5 г/л; агар, 15 г/л). Пластинка находилась в камере в течение приблизительно 30 минут для высыхания. После высыхания 10 мкл полученного фильтрата точечно наносили непосредственно на поверхность газонов Шига-токсин продуцирующей E. coli типа F18 и сушили в течение приблизительно 30 минут. После сушки планшет инкубировали при 37°С в течение суток, и затем исследовали образование прозрачных участков на поверхности газонов бактерий. Если прозрачный участок был образован в том месте, куда капали фильтрат, можно было сделать вывод, что в фильтрате содержался бактериофаг, способный уничтожать Шига-токсин продуцирующую E. coli типа F18. Фильтрат, содержащий бактериофаг, способный уничтожать Шига-токсин продуцирующую E. coli типа F18, можно получать посредством вышеуказанного способа.
После чего бактериофаг выделяли из фильтрата, для которого ранее было подтверждено, что он содержит бактериофаг, способный уничтожать Шига-токсин продуцирующую E.coli типа F18. Для выделения чистых бактериофагов использовали общепринятый анализ бляшкообразования. А именно, бляшки, образованные в ходе анализа бляшкообразования, собирали с использованием стерилизованного наконечника, и затем добавляли в культуральный раствор Шига-токсин продуцирующей E. coli типа F18, с последующим культивированием в течение от 4 до 5 часов. После завершения культивирования проводили центрифугирование при 8000 об/мин в течение 20 минут с получением супернатанта. Собранный супернатант инокулировали культурой Шига-токсин продуцирующей Е. coli типа F18 в соотношении 1/50, с последующим культивированием вновь в течение от 4 до 5 часов. Для увеличения титра бактериофага вышеуказанную процедуру повторяли по меньшей мере 5 раз. Затем проводили центрифугирование при 8000 об/мин в течение 20 минут с получением супернатанта. С полученным супернатантом проводили анализ бляшкообразования. В общем, выделение чистого бактериофага не завершается однократной процедурой, поэтому вышеуказанную процедуру повторяли с использованием бляшек, образованных ранее. После повторения процедуры по меньшей мере 5 раз получали раствор, содержащий чистый бактериофаг. Процедуру выделения чистого бактериофага обычно повторяли до тех пор, пока образуемые бляшки не обладали схожими размерами и морфологиями. И последнее выделение чистого бактериофага подтверждали путем наблюдения с помощью электронного микроскопа. Вышеуказанную процедуру выполняли до тех пор, пока выделение чистого бактериофага не подтверждалось при помощи электронного микроскопа. Наблюдение при помощи электронного микроскопа проводили общепринятым способом. Вкратце, раствор, содержащий чистый бактериофаг, наносили на медную сетку с последующим негативным окрашиванием 2% уранилацетатом. После его сушки исследовали морфологию с помощью электронного микроскопа. Полученный при помощи электронного микроскопа снимок бактериофага, выделенного в настоящем изобретении, представлен на Фиг. 1. В результате морфологического исследования выделенный выше бактериофаг идентифицировали как принадлежащий к семейству миовирусов.
Раствор, содержащий чистый бактериофаг, подтвержденный как описано выше, подвергали очистке. Культуральный бульон Шига-токсин продуцирующей Е. coli типа F18 добавляли к раствору, содержащему чистый бактериофаг, в объемном соотношении 1/50 от общего объема раствора бактериофага, затем вновь культивировали в течение от 4 до 5 часов. После завершения культивирования проводили центрифугирование при 8000 об/мин в течение 20 минут с получением супернатанта. Эту процедуру повторяли 5 раз до получения раствора, содержащего достаточное количество бактериофага. Супернатант, полученный после последнего центрифугирования, фильтровали через 0,45 мкм фильтр, с последующим общепринятым осаждением полиэтиленгликолем (ПЭГ). В частности, ПЭГ и NaCl добавляли к 100 мл фильтрата до достижения 10% ПЭГ 8000/0,5 М NaCl, который выдерживали при 4°С в течение от 2 до 3 часов. Затем проводили центрифугирование при 8000 об/мин в течение 30 минут с получением преципитата бактериофага. Полученный преципитат бактериофага ресуспендировали в 5 мл буфера (10 мМ Трис-HCl, 10 мМ MgSO4, 0,1% желатина, рН 8,0). Этот раствор называли суспензией бактериофага или раствором бактериофага.
В результате чистый бактериофаг, очищенный как описано выше, собирали, называли бактериофагом Esc-COP-1 и затем депонировали в Корейской коллекции типовых культур Корейского научно-исследовательского института биологических наук и биотехнологии 21 августа 2014 г. (регистрационный №: КСТС 12662 ВР).
Пример 2: Выделение и секвенирование генома бактериофага Esc-COP-1
Геном бактериофага Esc-COP-1 выделяли следующим образом. Геном выделяли из суспензии бактериофага, полученной в Примере 1. Сначала для того, чтобы устранить ДНК и РНК Шига-токсин продуцирующей Е. coli типа F18, содержащихся в суспензии, добавляли ДНКазу I и РНКазу А по 200 Е каждая к 10 мл суспензии бактериофага, которую инкубировали при 37°С в течение 30 минут. 30 минут спустя для удаления активности ДНКазы I и РНКазы А к ней добавляли 500 мкл 0,5 М этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА), и затем ее инкубировали в течение 10 минут. Суспензию дополнительно инкубировали при 65°С в течение 10 минут, и затем к ней добавляли 100 мкл протеиназы К (20 мг/мл) для разрыва внешней стенки бактериофага, с последующим инкубированием при 37°С в течение 20 минут. Затем к ней добавляли 500 мкл 10% раствора додецилсульфата натрия (SDS) с последующим инкубированием при 65°С в течение 1 часа. К ней добавляли 10 мл смеси фенол:хлороформ:изоамиловый спирт в соотношении 25:24:1, затем хорошо перемешивали. Смесь центрифугировали при 13000 об/мин в течение 15 минут для разделения всех слоев. Получали верхний слой, к которому добавляли изопропиловый спирт в 1,5-кратном объеме по отношению к объему верхнего слоя с последующим центрифугированием при 13000 об/мин в течение 10 минут для осаждения генома бактериофага. После сбора преципитата к нему добавляли 70% этанол с последующим центрифугированием при 13000 об/мин в течение 10 минут для промывки преципитата. Промытый преципитат собирали, сушили в вакууме и затем растворяли в 100 мкл воды. Эту процедуру повторяли с получением достаточного количества генома бактериофага Esc-COP-1.
Нуклеотидную последовательность генома бактериофага Esc-COP-1, полученного выше, анализировали по технологии Секвенирования нового поколения (NGS) с помощью устройства Mi-Seq от illumina в Национальном инструментальном центре Экологического управления Национального университета Сеула. В результате было предположено, что конечный геном бактериофага Esc-COP-1 имеет размер 169727 п. н., и нуклеотидная последовательность полного генома имеет SEQ ID NO: 1.
Схожесть геномной последовательности бактериофага Esc-COP-1, полученной выше, с ранее описанными геномными последовательностями бактериофагов была исследована с помощью BLAST, доступного из Интернет (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/). Результатами BLAST было подтверждено, что геномная последовательность бактериофага Esc-COP-1 имеет высокую гомологичность с последовательностями бактериофага Е. coli vB_EcoM_ACG-С40 (регистрационный № в Genbank: JN986846.1), бактериофага Е. coli RB14 (регистрационный № в Genbank: FH839692.1), бактериофага Е coli HY01 (регистрационный № в Genbank: KF925357.1), бактериофага Е. coli RB51 (регистрационный № в Genbank: FJ839693.1) и бактериофага Е. coli RB68 (регистрационный № в Genbank: КМ607004.1) (96%, 96%, 97%, 95% и 95%). Тем не менее, размеры их геномов отличались друг от друга. А именно, было определено, что полный геном бактериофага Esc-COP-1 имел размер 169727 п. н., тогда как, в отличие от него, размер полного генома бактериофага Е. coli vB_EcoM_ACG-C40 составлял 167396 п. н., для бактериофага Е. coli RB14 он составлял 165429 п. н., для бактериофага Е. coli HY01 - 166977 п. н., для бактериофага Е. coli RB51 - 168394 п. н. и для бактериофага Е. coli RB68 - 168401 п. н. Более того, установленное количество ORF (открытых рамок считывания) в геноме бактериофага Esc-COP-1 составило 275 ORF, тогда как, в отличие от него, число ORF в бактериофаге Е. coli vB_EcoM_ACG-C40 составило 273 ORF, для бактериофага Е. coli RB14 оно составило 274 ORF, для бактериофага Е. coli HY01 - 257 ORF и для бактериофага Е. coli RB68 - 276 ORF. Но число ORF в геноме бактериофага Е. coli RB51 составило 275 ORF, что совпало с бактериофагом Esc-COP-1. Тем не менее, расположение ORF в геноме бактериофага Е. coli RB51 очень отличалось от Esc-COP-1.
На основании этого результата заключили, что бактериофаг Esc-COP-1 должен быть новым бактериофагом, не описанным ранее.
Пример 3: Исследование способности бактериофага Esc-COP-1 уничтожать Шига-токсин продуцирующую Е. coli типа F18
Исследовали способность выделенного бактериофага Esc-COP-1 уничтожать Шига-токсин продуцирующую Е. coli типа F18. Для этого наблюдали за образованием прозрачного участка посредством капельного анализа, таким же образом, как описано в Примере 1. Шига-токсин продуцирующая Е. coli типа F18, использованная для этого исследования, составляла 10 штаммов, ранее выделенных и идентифицированных авторами настоящего изобретения как Шига-токсин продуцирующая Е. coli типа F18. Бактериофаг Esc-COP-1 демонстрировал способность уничтожать 9 штаммов Шига-токсин продуцирующей Е. coli типа F18, использованных в данном эксперименте. Показательный результат исследования способности к уничтожению представлен на Фиг. 2. В то же время, также исследовали активность бактериофага Esc-COP-1 в отношении уничтожения Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis, Enterococcus faecium, Lactobacillus plantarum, Streptococcus uberis и Pseudomonas aeruginosa. В результате было решено, что бактериофаг Esc-COP-1 не обладал активностью в отношении уничтожения этих микроорганизмов.
Следовательно, было подтверждено, что бактериофаг Esc-COP-1 обладает специфической способностью уничтожать Шига-токсин продуцирующую Е. coli типа F18 и широким антибактериальным спектром против Шига-токсин продуцирующей Е. coli типа F18, указывая на то, что бактериофаг Esc-COP-1 по настоящему изобретению мог бы применяться в качестве активного ингредиента композиции для предупреждения и лечения инфекций, вызываемых Шига-токсин продуцирующей Е. coli типа F18.
Пример 4: Эффект бактериофага Esc-COP-1 в отношении предупреждения инфекций, вызываемых Шига-токсин продуцирующей Е. coli типа F18
100 мкл раствора бактериофага Esc-COP-1 в концентрации 1×108 БОЕ/мл добавляли в пробирку, содержащую 9 мл TSB. В другую пробирку, содержащую 9 мл TSB, добавляли такой же объем только TSB. Затем в каждую пробирку добавляли культуру Шига-токсин продуцирующей Е. coli типа F18 с получением бактериальной суспензии с OD600, равной 0,5. После чего пробирки переносили в инкубатор при 37°С с последующим встряхиванием культуры, во время которого наблюдали рост Шига-токсин продуцирующей Е. coli типа F18. Как представлено в Таблице 1, рост Шига-токсин продуцирующей Е. coli типа F18 ингибировался в пробирке, в которую был добавлен раствор бактериофага Esc-COP-1, тогда как в пробирке, не содержащей раствор бактериофага Esc-COP-1, рост Шига-токсин продуцирующей Е. coli типа F18 не ингибировался.
Figure 00000001
Вышеприведенные результаты указывают на то, что бактериофаг Esc-COP-1 не только ингибировал рост Шига-токсин продуцирующей Е. coli типа F18, но также мог ее уничтожать. Следовательно, бактериофаг Esc-COP-1 может применяться в качестве активного ингредиента в композиции для предупреждения инфекций, вызываемых Шига-токсин продуцирующей Е. coli типа F18.
Пример 5: Терапевтический эффект бактериофага Esc-COP-1 в отношении инфекций, вызываемых Шига-токсин продуцирующей Е. coli типа F18
Исследовали терапевтический эффект бактериофага Esc-COP-1 на животных, пораженных Шига-токсин продуцирующей Е. coli типа F18. 4 поросенка-отъемыша в возрасте 25 дней группировали; всего 2 группы поросят выращивали в свинарнике (1,1 м × 1,0 м) в течение 14 дней. Была оборудована нагревательная система и проводился контроль за окружающей средой. Контролировали температуру и влажность в свинарнике и ежедневно производили уборку пола. На 7-й день эксперимента всем животным пероральнр вводили 1 мл суспензии Шига-токсин продуцирующей Е. coli типа F18 с помощью питательного зонда. Суспензию Шига-токсин продуцирующей Е. coli типа F18, вводимую как описано выше, получали следующим образом: Шига-токсин продуцирующую Е. coli типа F18 культивировали в среде TSB (триптиказо-соевый бульон) при 37°С в течение 18 часов и собирали бактериальные клетки центрифугированием. К бактериальной клеточной массе добавляли физиологический раствор (рН 7,2) с получением суспензии клеток с концентрацией 109 КОЕ/мл. Начиная со следующего дня после введения Шига-токсин продуцирующей Е. coli типа F18, экспериментальной группе (свиньи, подвергавшиеся обработке раствором бактериофага) перорально вводили бактериофаг Esc-COP-1 (109 БОЕ/особь) тем же способом введения, как описано выше, дважды в сутки. Контрольную группу (свиньи, не подвергавшиеся обработке раствором бактериофага) не подвергали какой-либо обработке. Корма и питьевую воду одинаково предоставляли обеим группам. После введения Шига-токсин продуцирующей Е. coli типа F18 за всеми животными наблюдали ежесуточно, вне зависимости от того, наблюдалась ли у них диарея. Наблюдение производили путем измерения показателя диареи. Были установлены следующие показатели диареи в соответствии со шкалой консистенции кала (FC) (нормальный: 0, жидкий стул: 1, умеренная диарея: 2, и тяжелая диарея: 3). Результаты представлены в Таблице 2.
Figure 00000002
Исходя из вышеприведенных результатов было подтверждено, что бактериофаг Esc-COP-1 по настоящему изобретению мог бы быть очень эффективным в лечении инфекционных заболеваний, вызываемых Шига-токсин продуцирующей Е. coli типа F18.
Пример 6: Получение кормовых добавок и кормов
Кормовую добавку, содержащую бактериофаг Esc-COP-1 в концентрации 1×108 БОЕ/г, получали, используя раствор бактериофага Esc-COP-1. Способ ее получения представлял собой следующий: мальтодекстрин (40%, w/v) добавляли к раствору бактериофага, и затем добавляли трегалозу до достижения конечной концентрации 10%. После хорошего перемешивания смесь лиофилизировали. Наконец, лиофилизированную смесь размалывали в мелкие порошки. Вышеуказанный процесс лиофилизации может быть заменен сушкой в вакууме, сушкой при повышенной температуре или сушкой при комнатной температуре. Для получения контрольной кормовой добавки для сравнения получали кормовую добавку, не содержавшую бактериофаг, а содержавшую только буфер (10 мМ Трис-HCl, 10 мМ MgSO4, 0,1% желатина, рН 8,0).
Два вышеуказанных типа кормовых добавок смешивали с 1000-кратным объемом корма для свиноводства, соответственно, с получением двух типов конечных кормов.
Пример 7: Получение добавок для питьевой воды и дезинфицирующих средств
Добавка для питьевой воды и дезинфицирующее средство различаются по своему назначению, однако имеют аналогичный состав, поэтому их получали аналогичным образом. Добавку для питьевой воды (или дезинфицирующее средство), содержащую бактериофаг Esc-COP-1 в концентрации 1×108 БОЕ/мл, получали, используя раствор бактериофага Esc-COP-1. В частности, для получения добавки для питьевой воды (или дезинфицирующего средства), раствор бактериофага Esc-COP-1 добавляли к буферному раствору до достижения концентрации 1×108 БОЕ/мл, который хорошо перемешивали. Для сравнения, вышеуказанный буферный раствор сам по себе использовали в качестве добавки для питьевой воды (или дезинфицирующего средства), не содержащей бактериофаг.
Полученные два типа добавок для питьевой воды (или дезинфицирующих средств) разбавляли водой в соотношении 1:1000, и затем использовали как питьевую воду или дезинфицирующее средство.
Пример 8: Эффект в свиноводстве
Исследовали эффект кормов, питьевой воды и дезинфицирующего средства, полученных в Примере 6 и Примере 7, в свиноводстве. В частности, исследование фокусировалось на состоянии диареи, оцененном с помощью шкалы консистенции кала, использованной в Примере 5. Всего 30 поросят делили на три группы, и в каждой группе было по 10 поросят (группа А: группа исследования корма, группа В: группа исследования питьевой воды; и группа С: группа исследование дезинфицирующего средства). Исследование проводили в течение 2 недель. Каждую группу делили на две подгруппы по 5 поросят в каждой. Подгруппы делили в соответствии с тем, проводили ли лечение бактериофагом Esc-COP-1, или нет (подгруппа-
Figure 00000003
: подвергалась лечению бактериофагом Esc-COP-1; и подгруппа-
Figure 00000004
: не подвергалась лечению бактериофагом Esc-COP-1). Поросята, использованные в данном эксперимента, представляли собой поросят-отъемышей в возрасте 20 дней, и их выращивали в отдельных комнатах, расположенных на достаточном расстоянии друг от друга. Каждую подгруппу делили и называли, как показано в Таблице 3.
Figure 00000005
Корма предоставляли в соответствии с общепринятым способом кормления, как представлено в Таблице 3, с кормами, полученными в Примере 6. Питьевую воду предоставляли в соответствии с традиционным способом снабжения водой, как представлено в Таблице 3, с питьевой водой, полученной в Примере 7. Обработку дезинфицирующим средством проводили трижды в неделю, по очереди с общепринятым дезинфицирующим средством. То есть, в день, когда распыляли дезинфицирующее средство по настоящему изобретению, не производили обработку общепринятым дезинфицирующим средством. Результаты представлены в Таблице 4.
Figure 00000006
Вышеприведенные результаты подтвердили, что корма, питьевая вода и дезинфицирующее средство, полученные согласно настоящему изобретению, были эффективны в снижении диареи у животных. Следовательно, можно сделать вывод, что композиция по настоящему изобретению может эффективно применяться для улучшения продуктивности животноводства.
Специалистам в данной области понятно, что концепции и конкретные варианты осуществления, раскрытые в вышеизложенном описании, могут быть без труда использованы в качестве основы для модификации или разработки других вариантов осуществления для достижения тех же целей, которые достигаются в настоящем изобретении. Специалистам в данной области также понятно, что такие эквивалентные варианты осуществления не отступают от сущности и объема настоящего изобретения, как представлено в прилагаемой формуле изобретения.

Claims (5)

1. Миовирусный бактериофаг Esc-COP-1 (регистрационный №: KCTC 12662 ВР), выделенный из природы и способный специфически уничтожать Шига-токсин продуцирующую Е. coli типа F18, имеющий геном, представленный нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 1.
2. Композиция для предупреждения или лечения инфекций, вызываемых Шига-токсин продуцирующей Е. coli типа F18, содержащая от 1×101 БОЕ/мл до 1×1030 БОЕ/мл или от 1×101 БОЕ/г до 1×1030 БОЕ/г бактериофага Esc-COP-1 по п. 1 в качестве активного ингредиента.
3. Композиция для предупреждения или лечения инфекций, вызываемых Шига-токсин продуцирующей Е. coli типа F18, по п. 2, где указанную композицию используют для получения кормовой добавки, добавки для питьевой воды или дезинфицирующего средства.
4. Способ предупреждения или лечения инфекций, вызываемых Шига-токсин продуцирующей Е. coli типа F18, включающий стадию введения субъекту композиции по п. 2 или 3, содержащей бактериофаг Esc-COP-1 в качестве активного ингредиента.
5. Способ предупреждения или лечения инфекций, вызываемых Шига-токсин продуцирующей Е. coli типа F18, по п. 4, где указанную композицию вводят субъекту в форме кормовой добавки, добавки для питьевой воды или дезинфицирующего средства.
RU2017121454A 2014-12-30 2015-12-28 Новый бактериофаг шига-токсин продуцирующей e. coli типа f18 esc-cop-1 и его применение для ингибирования пролиферации шига-токсин продуцирующей e. coli типа f18 RU2662985C1 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020140192983A KR101649851B1 (ko) 2014-12-30 2014-12-30 신규한 시가독소생산 F18형 대장균 박테리오파지 Ｅｓｃ-ＣＯＰ-1 및 이의 시가독소생산 F18형 대장균 증식 억제 용도
KR10-2014-0192983 2014-12-30
PCT/KR2015/014331 WO2016108541A1 (ko) 2014-12-30 2015-12-28 신규한 시가독소생산 F18형 대장균 박테리오파지 Ｅｓｃ-ＣＯＰ-1 및 이의 시가독소생산 F18형 대장균 증식 억제 용도

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2662985C1 true RU2662985C1 (ru) 2018-07-31

Family

ID=56284613

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2017121454A RU2662985C1 (ru) 2014-12-30 2015-12-28 Новый бактериофаг шига-токсин продуцирующей e. coli типа f18 esc-cop-1 и его применение для ингибирования пролиферации шига-токсин продуцирующей e. coli типа f18

Country Status (8)

Country Link
US (1) US10265355B2 (ru)
KR (1) KR101649851B1 (ru)
CN (1) CN107208068B (ru)
BR (1) BR112017013238A2 (ru)
CO (1) CO2017006495A2 (ru)
MX (1) MX2017008563A (ru)
RU (1) RU2662985C1 (ru)
WO (1) WO2016108541A1 (ru)

Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101761573B1 (ko) * 2014-12-29 2017-07-26 주식회사 인트론바이오테크놀로지 신규한 장출혈성 대장균 박테리오파지 Ｅｓｃ-ＣＨＰ-1 및 이의 장출혈성 대장균 증식 억제 용도
KR101649851B1 (ko) * 2014-12-30 2016-08-30 주식회사 인트론바이오테크놀로지 신규한 시가독소생산 F18형 대장균 박테리오파지 Ｅｓｃ-ＣＯＰ-1 및 이의 시가독소생산 F18형 대장균 증식 억제 용도
KR101761581B1 (ko) * 2014-12-30 2017-07-26 주식회사 인트론바이오테크놀로지 신규한 장침입성 대장균 박테리오파지 Ｅｓｃ-ＣＯＰ-4 및 이의 장침입성 대장균 증식 억제 용도
KR101761578B1 (ko) * 2014-12-30 2017-07-26 주식회사 인트론바이오테크놀로지 신규한 장병원성 대장균 박테리오파지 Ｅｓｃ-ＣＨＰ-2 및 이의 장병원성 대장균 증식 억제 용도
US11058131B2 (en) 2015-04-16 2021-07-13 Kennesaw State University Research And Service Foundation, Inc. Escherichia coli O157:H7 bacteriophage Φ241
KR101796642B1 (ko) * 2016-11-30 2017-11-10 주식회사 인트론바이오테크놀로지 대장균 박테리오파지 Ｅｓｃ-ＣＯＰ-9 및 이의 병원성 대장균 증식 억제 용도
KR20180061774A (ko) * 2016-11-30 2018-06-08 주식회사 인트론바이오테크놀로지 대장균 박테리오파지 Ｅｓｃ-ＣＯＰ-7 및 이의 병원성 대장균 증식 억제 용도
CN108906654B (zh) * 2018-05-15 2019-12-20 天津英创汇智汽车技术有限公司 Esc产品检测装置及方法
KR102073095B1 (ko) * 2018-07-11 2020-02-04 주식회사 인트론바이오테크놀로지 대장균 박테리오파지 Esc-COP-14 및 이의 병원성 대장균 증식 억제 용도
CN110129279B (zh) * 2019-04-24 2022-02-18 昆明理工大学 一种粪肠球菌噬菌体及其分离、纯化、富集和应用
CN111481574B (zh) * 2020-04-17 2023-03-14 吉林省农业科学院 一种用于治疗仔猪腹泻的组合型噬菌体制剂

Family Cites Families (31)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MXPA04005395A (es) 2001-12-13 2005-03-23 Nestle Sa Fagos aislados y su uso en alimento o productos de alimento para mascotas.
KR100781669B1 (ko) * 2006-06-20 2007-12-03 주식회사 인트론바이오테크놀로지 황색포도상구균 특이적 사멸능을 갖는 박테리오파지
BRPI0808704B1 (pt) * 2007-03-02 2022-01-18 Dupont Nutrition Biosciences Aps Método para gerar uma cultura inicial compreendendo pelo menos duas cepas variantes resistentes a bacteriófagos, cultura iniciadora e método de fermentação
KR101016918B1 (ko) * 2009-01-08 2011-02-25 주식회사 인트론바이오테크놀로지 박테리아 특이적 넓은 항균 활성을 갖는 신규한 리신 단백질
US8846368B2 (en) 2009-09-03 2014-09-30 Cj Cheiljedang Corporation Bacteriophage and antibacterial composition comprising the same
KR101101376B1 (ko) 2009-10-16 2012-01-02 경희대학교 산학협력단 대장균 또는 시겔라속 균에 특이적 사멸능을 갖는 박테리오파지
CN101724607B (zh) * 2009-12-18 2012-05-09 江苏省农业科学院 一种产肠毒素性大肠杆菌的噬菌体ek99-c及其应用
EP2539467B1 (en) * 2010-02-24 2016-06-08 The Broad Institute, Inc. Methods of diagnosing infectious disease pathogens and their drug sensitivity
KR101275263B1 (ko) 2011-04-01 2013-06-14 서울대학교산학협력단 조류 병원성 대장균 특이 박테리오파지 및 이를 포함하는 항균 조성물
US20130011369A1 (en) * 2011-07-05 2013-01-10 Intron Biotechnology, Inc. Method for Prevention and Treatment of Salmonella Infection
US9402873B2 (en) * 2011-09-09 2016-08-02 Intron Biotechnology, Inc. Method for preventing and treating Salmonella Typhimurium infection
WO2013049489A1 (en) * 2011-09-28 2013-04-04 E.I. Dupont De Nemours And Company Sequences and their use for detection and characterization of stec bacteria
KR101260645B1 (ko) 2011-11-14 2013-05-03 씨제이제일제당 (주) 대장균 특이적 사멸능을 나타내는 신규 분리된 박테리오파지 및 이를 포함하는 항균 조성물
US9504721B2 (en) * 2012-06-04 2016-11-29 Ctc Bio, Inc. Bacteriophage and its use for preventing proliferation of pathogenic bacteria
KR20140140698A (ko) * 2013-05-30 2014-12-10 한국외국어대학교 연구산학협력단 에세리키아 콜라이의 박테리오파아지 및 그 용도
KR101581654B1 (ko) * 2013-06-27 2015-12-31 주식회사 인트론바이오테크놀로지 K99형 대장균 감염을 방지 및 처치하는 방법
KR101590108B1 (ko) 2014-04-10 2016-01-29 씨제이제일제당(주) 신규 박테리오파지 및 이를 포함하는 조성물
KR101591795B1 (ko) 2014-04-15 2016-02-04 씨제이제일제당(주) 신규 박테리오파지 및 이를 포함하는 조성물
KR101591793B1 (ko) 2014-04-15 2016-02-04 씨제이제일제당(주) 신규 박테리오파지 및 이를 포함하는 조성물
KR101592177B1 (ko) * 2014-05-07 2016-02-05 주식회사 인트론바이오테크놀로지 대장균에 대한 광범위 항균 활성을 갖는 박테리오파지를 활용한 대장균 감염을 방지 및 처치하는 방법
KR101761573B1 (ko) * 2014-12-29 2017-07-26 주식회사 인트론바이오테크놀로지 신규한 장출혈성 대장균 박테리오파지 Ｅｓｃ-ＣＨＰ-1 및 이의 장출혈성 대장균 증식 억제 용도
KR101649849B1 (ko) * 2014-12-29 2016-08-22 주식회사 인트론바이오테크놀로지 신규한 클로스트리디움 퍼프린젠스 박테리오파지 Ｃｌｏ-ＰＥＰ-1 및 이의 클로스트리디움 퍼프린젠스 증식 억제 용도
KR101649851B1 (ko) * 2014-12-30 2016-08-30 주식회사 인트론바이오테크놀로지 신규한 시가독소생산 F18형 대장균 박테리오파지 Ｅｓｃ-ＣＯＰ-1 및 이의 시가독소생산 F18형 대장균 증식 억제 용도
KR101761578B1 (ko) * 2014-12-30 2017-07-26 주식회사 인트론바이오테크놀로지 신규한 장병원성 대장균 박테리오파지 Ｅｓｃ-ＣＨＰ-2 및 이의 장병원성 대장균 증식 억제 용도
KR101761581B1 (ko) * 2014-12-30 2017-07-26 주식회사 인트론바이오테크놀로지 신규한 장침입성 대장균 박테리오파지 Ｅｓｃ-ＣＯＰ-4 및 이의 장침입성 대장균 증식 억제 용도
KR101676621B1 (ko) 2015-01-16 2016-11-16 주식회사 인트론바이오테크놀로지 신규한 락토코커스 가르비에 박테리오파지 Ｌａｃ-ＧＡＰ-1 및 이의 락토코커스 가르비에 균 증식 억제 용도
KR101679548B1 (ko) * 2015-01-28 2016-12-06 주식회사 인트론바이오테크놀로지 신규한 락토바실러스 브레비스 박테리오파지 Ｌａｃ-ＢＲＰ-1 및 이의 락토바실러스 브레비스 균 증식 억제 용도
KR101679549B1 (ko) * 2015-01-29 2016-12-06 주식회사 인트론바이오테크놀로지 신규한 락토바실러스 플랜타룸 박테리오파지 Ｌａｃ-ＰＬＰ-1 및 이의 락토바실러스 플랜타룸 균 증식 억제 용도
KR101699245B1 (ko) 2015-12-21 2017-02-13 주식회사 인트론바이오테크놀로지 신규한 파스튜렐라 멀토시다 박테리오파지 Ｐａｓ-ＭＵＰ-1 및 이의 파스튜렐라 멀토시다 균 증식 억제 용도
WO2017223101A1 (en) 2016-06-22 2017-12-28 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy Bacteriophage compositions and methods of selection of components against specific bacteria
KR20180061774A (ko) * 2016-11-30 2018-06-08 주식회사 인트론바이오테크놀로지 대장균 박테리오파지 Ｅｓｃ-ＣＯＰ-7 및 이의 병원성 대장균 증식 억제 용도

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
OLIVIRA A. et. al. Isolation and characterization of bacteriophages for avian pathogenic E. coli strains, Journal of Applied Microbiology, 2009, vol. 106(6), p. 1919-27. *
OLIVIRA A. et. al. Isolation and characterization of bacteriophages for avian pathogenic E. coli strains, Journal of Applied Microbiology, 2009, vol. 106(6), p. 1919-27. ИВАНОВА И.К. и др. Выявление генов патогенности, кодирующих способность к токсинообразованию, у штаммов escherichia coli, выделенных из кишечного биотопа детей, Журнал Acta Biomedica Scientifica, 2013(2), стр.111-114. *
ИВАНОВА И.К. и др. Выявление генов патогенности, кодирующих способность к токсинообразованию, у штаммов escherichia coli, выделенных из кишечного биотопа детей, Журнал Acta Biomedica Scientifica, 2013(2), стр.111-114. *

Also Published As

Publication number Publication date
WO2016108541A1 (ko) 2016-07-07
CO2017006495A2 (es) 2017-09-20
US10265355B2 (en) 2019-04-23
KR101649851B1 (ko) 2016-08-30
MX2017008563A (es) 2017-10-26
US20170340686A1 (en) 2017-11-30
CN107208068A (zh) 2017-09-26
KR20160080576A (ko) 2016-07-08
CN107208068B (zh) 2021-04-20
BR112017013238A2 (pt) 2018-08-07

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2662986C1 (ru) Новый бактериофаг clostridium perfringens clo-pep-1 и его применение для ингибирования пролиферации clostridium perfringens
RU2662985C1 (ru) Новый бактериофаг шига-токсин продуцирующей e. coli типа f18 esc-cop-1 и его применение для ингибирования пролиферации шига-токсин продуцирующей e. coli типа f18
RU2662984C1 (ru) Новый бактериофаг энтероинвазивной e. coli esc-cop-4 и его применение для ингибирования пролиферации энтероинвазивной e. coli
US10265354B2 (en) Enteropathogenic E. coli bacteriophage Esc-CHP-2 and use thereof for inhibiting proliferation of enteropathogenic E. coli
RU2704864C1 (ru) Новый бактериофаг pas-mup-1 pasteurella multocida и его применение для ингибирования размножения pasteurella multocida
US9433653B2 (en) Method for prevention and treatment of Escherichia coli infections using a bacteriophage with broad antibacterial spectrum against Escherichia coli
US10265353B2 (en) Enterohemorrhagic E. coli bacteriophage Esc-CHP-1 and use thereof for inhibiting proliferation of enterohemorrhagic E. coli
US10226060B2 (en) Lactococcus garvieae bacteriophage Lac-GAP-1 and use thereof in suppressing proliferation of lactococcus garvieae bacteria
US11412760B2 (en) Escherichia coli bacteriophage Esc-COP-7, and use thereof for suppressing proliferation of pathogenic Escherichia coli
US11458177B2 (en) Enterococcus faecium bacteriophage Ent-FAP-4 and use for inhibiting Enterococcus faecium proliferation of same
US11529406B2 (en) Clostridium perfringens bacteriophage Clo-PEP-2 and use for inhibiting Clostridium perfringens proliferation of same
US10898531B2 (en) Vibrio parahaemolyticus bacteriophage Vib-PAP-5 and use thereof for suppressing proliferation of Vibrio parahaemolyticus bacteria
US11497216B2 (en) Pseudomonas aeruginosa bacteriophage pse-AEP-4 and use thereof for inhibiting proliferation of Pseudomonas aeruginosa
US11457635B2 (en) Pseudomonas aeruginosa bacteriophage Pse-AEP-3 and use thereof for inhibiting proliferation of Pseudomonas aeruginosa
CN108179136B (zh) 大肠杆菌噬菌体Esc-COP-9及其致病性大肠杆菌增殖抑制用途
CN108179135B (zh) 大肠杆菌噬菌体Esc-COP-7及其致病性大肠杆菌增殖抑制用途
KR101291052B1 (ko) 살모넬라 티피무륨 감염을 방지 및 처치하는 방법
US9539294B2 (en) Method for prevention and treatment of Streptococcus parauberis infections
US11844818B2 (en) Aeromonas hydrophila bacteriophage Aer-HYP-3 and use thereof for inhibiting growth of Aeromonas hydrophila bacteria
US11213050B2 (en) Escherichia coli bacteriophage Esc-COP-9 and use for inhibiting proliferation of pathogenic Escherichia coli thereof
CN109477075B (zh) 新型支气管败血鲍特菌噬菌体Bor-BRP-1及其抑制支气管败血鲍特菌增殖的用途
US11439677B2 (en) Vibrio anguillarum bacteriophage VIB-ANP-1 and use thereof for inhibiting proliferation of Vibrio anguillarum bacteria
US20210054345A1 (en) Novel salmonella typhimurium bacteriophage stp-2 and use thereof for inhibiting proliferation of salmonella typhimurium