CN109477075B - 新型支气管败血鲍特菌噬菌体Bor-BRP-1及其抑制支气管败血鲍特菌增殖的用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种以具备特异性杀灭支气管败血鲍特菌的能力并具有用序列号1标示的基因组为特征的从自然界分离的短尾噬菌体科噬菌体Bor‑BRP‑1(保藏号KCTC 12705BP)及利用以其为有效成分包含的组合物防止支气管败血鲍特菌感染及治疗支气管败血鲍特菌感染的方法。

Description

新型支气管败血鲍特菌噬菌体Bor-BRP-1及其抑制支气管败 血鲍特菌增殖的用途

技术领域

本发明涉及一种防止及处置支气管败血鲍特菌感染的方法，该方法利用感染支气管败血鲍特菌后能够将支气管败血鲍特菌杀灭的从自然界分离的噬菌体及以其为有效成分包含在内的组合物。更具体地，涉及一种以具备特异性杀灭支气管败血鲍特菌的能力并具有用序列号1标示的基因组为特征的从自然界分离的短尾噬菌体科噬菌体Bor-BRP-1(保藏号KCTC 12705BP)，及利用以所述噬菌体为有效成分包含的组合物防止支气管败血鲍特菌感染及感染后处置的方法。

背景技术

鲍特菌是属于变形菌(Proteobacteria)门的革兰氏阴性菌。鲍特菌是一种在猪的鼻腔内形成菌落，感染鼻甲骨而引发萎缩性鼻炎(atrophic rhinitis)的病原菌。猪的萎缩性鼻炎是一种带有鼻甲萎缩、歪鼻、面部异常及鼻出血等症状的慢性呼吸道疾病，其致病菌是支气管败血鲍特菌(Bordetella bronchis eptica)。除了猪之外，在狗、猫、兔子等也检测出了支气管败血鲍特菌。另外，也会在人体诱发感染性疾病。

通常情况下，为了预防及治疗支气管败血鲍特菌感染疾病而采取的方法是使用疫苗及抗生素，利用抗生素的治疗因耐性菌的增加，其效果在持续下降。由于加强了对抗生素用于动物的规制，就需要研发除了抗生素之外的其它有效方法。

最近，作为应对细菌性疾病的方案，噬菌体(Bacteriophage)的利用受到了极大的关注。特别是，由于人们提倡亲近自然的方式，使得大家对噬菌体的关注比以往任何时候都要高。噬菌体作为一种感染至细菌的非常小的微生物，一般也被简称为噬体(Phage)。当噬菌体感染(Infection)细菌之后，就在细菌细胞内部增殖。增殖后，通过子孙噬菌体来到细菌外时破坏宿主即细菌的细胞壁的方式将细菌杀灭。噬菌体的细菌感染方式具有非常高的特异性，能够感染特定细菌的噬菌体的种类限定在一部分。即，特定噬菌体只能够感染特定范畴的细菌。因此，特定噬菌体只杀灭特定细菌，而不会对其它的细菌产生影响。这种噬菌体的细菌特异性仅对目标细菌提供抗菌效果，不会对环境或者动物体内的常居菌产生影响。通常情况下，广泛用于细菌处置的现有的抗生素会同时对多种类型的细菌产生影响。因此，导致了环境污染或者动物体内的正常细菌丛搅乱等问题。与此不同，噬菌体只针对特定细菌发挥作用，因此，利用噬菌体不会发生体内正常菌丛的搅乱等。所以，与使用抗生素相比，利用噬菌体是非常安全的，而且相对地，使用噬菌体产生副作用的可能性非常低。

噬菌体是1915年英国的细菌学家Twort在对葡萄球菌(Micrococcus)菌落被某种物质透明溶化的现象进行研究的过程中发现的。另外，1917年，法国的细菌学家d'Herelle在痢疾患者粪便的过滤液中发现了具有使痢疾杆菌(Shigella dysenteriae)溶解作用的物质，通过对此进行研究，独立发现了噬菌体。当时，从猎食细菌的意义出发将其命名为噬菌体。此后，相继发现了针对痢疾菌、伤寒杆菌、霍乱弧菌等多种致病性细菌的噬菌体。

由于具有能够杀灭细菌的特殊能力，因此噬菌体被发现之后，以应对细菌感染的有效方案受到了期待，并开展了相关大量的研究。但是，当Fleming发现青霉素之后，抗生素得到了广泛普及，对噬菌体的研究仅限于在一部分东欧国家及原苏联维持命脉。但是，由于2000年以后抗生素耐药菌的增加，导致现有抗生素表现出了一定的局限性。随着作为现有抗生素替代物质的开发可能性的凸显，噬菌体再次作为抗菌剂得到关注。特别是，随着最近在全世界范围内政府层次对抗生素的使用加强了规制，对噬菌体的关注度进一步提高，将其用于产业方面的事例也在逐渐增加。

如上所述，噬菌体对细菌具有非常高的特异性。正是由于存在这种特异性，即使是属于同一种类(Species)的细菌，噬菌体往往也只对其中一部分株(strain)发挥抗菌效果。另外，针对不同的对象菌株，噬菌体的抗菌力的强度本身也会不一样。正是由于这种原因，如果想要确保针对特定种类的细菌的有效控制方法，就需要确保多种种类的有用噬菌体。为了开发能够应对支气管败血鲍特菌的噬菌体的有效的噬菌体利用方法，当然也需要确保能够针对支气管败血鲍特菌提供抗菌效果的多种多样的噬菌体，还需要进一步在所确保的多样的有用噬菌体中筛选抗菌力强度或者抗菌范围层面具有相对优势的噬菌体并加以利用。

发明内容

所要解决的技术问题

因此，本发明人努力尝试着开发出一种利用从自然界分离并能够选择性地杀灭支气管败血鲍特菌的噬菌体而可以用于防止或处置支气管败血鲍特菌感染的组合物，以及一种利用该组合物防止或处置支气管败血鲍特菌感染的方法。其结果是，从自然界分离出了合适的噬菌体，为了能够将所述分离的噬菌体与其它噬菌体进行特定区分而确保了基因组(Genome)的基因序列，之后开发出了以所述噬菌体为有效成分的组合物，然后确认该组合物能够有效用于支气管败血鲍特菌的感染防止及处置，由此完成了本发明。

因此，本发明的一个目的在于，提供一种以具备特异性杀灭支气管败血鲍特菌的能力并具有以序列号1标示的基因组为特征的从自然界分离的短尾噬菌体科(Podoviridae)噬菌体Bor-BRP-1(保藏号KCTC 12705BP)。

本发明的另一个目的在于，提供一种可用于防止支气管败血鲍特菌感染的组合物及利用该组合物防止支气管败血鲍特菌感染的方法，该组合物以感染支气管败血鲍特菌后能够杀灭支气管败血鲍特菌的噬菌体Bor-BRP-1为有效成分包含。

本发明的又一个目的在于，提供一种可用于处置支气管败血鲍特菌感染的组合物及利用该组合物处置支气管败血鲍特菌感染的方法，该组合物以感染支气管败血鲍特菌后能够杀灭支气管败血鲍特菌的噬菌体Bor-BRP-1为有效成分包含。

本发明的又一个目的在于，提供一种利用所述组合物的、以支气管败血鲍特菌的感染防止及处置为目的的消毒剂。

本发明的又一个目的在于，提供一种利用所述组合物的、以通过防止及处置支气管败血鲍特菌感染的饲养效果提供为目的的饲料添加剂。

解决技术问题的方法

本发明提供了一种以具备特异性杀灭支气管败血鲍特菌的能力并具有以序列号1标示的基因组为特征的从自然界分离的短尾噬菌体科噬菌体Bor-BRP-1(保藏号KCTC12705BP)及利用以其为有效成分包含的组合物的防止及处置支气管败血鲍特菌感染的方法。

噬菌体Bor-BRP-1由本发明人分离后，于2014年11月7日寄托在韩国生命工学研究院生物资源中心(受托编号KCTC 12705BP)。

另外，本发明提供了一种以可用于防止或处置支气管败血鲍特菌感染的噬菌体Bor-BRP-1为有效成分包含的消毒剂及饲料添加剂。

本发明的组合物中包含的噬菌体Bor-BRP-1能够有效杀灭支气管败血鲍特菌，因此对由支气管败血鲍特菌引发疾病的预防(防止感染)或者治疗(感染处置)显示出效果。因此，本发明的组合物可以以预防及治疗由支气管败血鲍特菌引发疾病的目的而使用。

本说明书中使用的“防止”或“预防”等术语意味着：(i)防止支气管败血鲍特菌感染；以及(ii)抑制因感染支气管败血鲍特菌而引起的向疾病的发展。

另外，本说明书中使用的“处置”或“治疗”等术语意味着：(i)抑制由支气管败血鲍特菌引发的疾病；以及(ii)减轻由支气管败血鲍特菌引发疾病的病态的所有行为。

本说明书中提到的“分离”、“分离的”或“被分离的”，是指在自然状态下利用多种实验技法对噬菌体进行分离和确保能够区分于其它噬菌体而特定对象噬菌体的特征的作业。除此之外，还包含通过生物工学技术为了工业利用而增殖对象噬菌体的作业。

本发明的组合物中包含的药剂学上允许使用的载体是生产制剂时通常利用的物质，包括：乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露醇、淀粉、刺槐胶、磷酸钙、藻酸盐、明胶、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、水、糖浆、甲基纤维素、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸镁、及矿物油等，但并非仅限定于此。本发明的组合物中除了上述成分之外，还可进一步包括：润滑剂、润湿剂、甜味剂、增香剂、乳化剂、悬浮剂、保存剂等。

本发明的组合物将噬菌体Bor-BRP-1作为有效成分包含在内。其中所含的噬菌体Bor-BRP-1以1×10¹pfu/ml至1×10³⁰pfu/ml或1×10¹pfu/g至1×10³⁰pfu/g包含，优选地，以1×10⁴pfu/ml至1×10¹⁵pfu/ml或1×10⁴pfu/g至1×10¹⁵pfu/g包含。

本发明的组合物可以按照具有本发明所属技术领域普通知识的技术人员能够容易实施的方法利用药学上允许使用的载体及/或赋形剂实现制剂化，从而既可以按照单位容量形态制造，也可以装入大容量容器内制造。在这种情况下，所述剂型既可以是油或水性介质中的溶液、悬浮液或乳化液形态，也可以是萃取剂、粉末剂、颗粒剂、片剂或胶囊形态。除此之外，还可进一步包括：分散剂或稳定剂。

本发明的组合物根据利用方式，可以实现为消毒剂及饲料添加剂，但不局限于此。

为了提高上述利用目的方面的效率，能够对其它菌种提供抗菌活性的噬菌体可以用于本发明的组合物中。另外，本发明的组合物中还可追加对于支气管败血鲍特菌具有抗菌活性的其它种类的噬菌体。即使是对于支气管败血鲍特菌具有抗菌活性的噬菌体，其在抗菌力的强度或者抗菌范围方面相互存在一定的差异，因此将它们适当组合可以最大化其效果。

发明效果

本发明中利用以噬菌体Bor-BRP-1为有效成分包含在内的组合物对支气管败血鲍特菌的感染进行防止及处置的方法，与现有基于抗生素等化学物质的方式相比，其优点在于对支气管败血鲍特菌的特异性非常高。这意味着，在不会对其它有用的常居菌产生影响的同时，还能够以防止或处置支气管败血鲍特菌的感染的目的使用，而且使用其而产生的副作用非常小。通常情况下，如果使用抗生素等化学物质，同时也会对普通常居菌造成损害，其结果是会导致动物的免疫力下降等，随着使用会显示出多种副作用。此外，本发明是将自然界已经存在的噬菌体分离后用作组合物的有效成分，因此还具有非常亲近自然的优点。另外，即使噬菌体能够发挥抗菌活性的细菌种相同，但就其发挥的抗菌效果而言，在抗菌力的强度或者抗菌范围([即，从属于支气管败血鲍特菌的多种菌株(Strain)的层面来看，噬菌体对个别细菌株发挥抗菌活性的范围。通常情况下，噬菌体可以对属于相同细菌种(Species]的一部分细菌株(Strain)发挥抗菌活性。即，即使属于相同菌种，噬菌体对个细别菌株的敏感性也会存在差异]方面也存在一定的差异。因此，本发明与对支气管败血鲍特菌具有抗菌力的其它噬菌体相比，可提供差异化的抗菌效果。这一点在用于产业现场时，其效果会有很大的差异。

附图说明

图1是噬菌体Bor-BRP-1的电子显微镜照片。

图2是显示噬菌体Bor-BRP-1对支气管败血鲍特菌杀灭能力的实验结果，透明部分是试验对象细菌经过溶菌后最终形成的溶菌斑。

具体实施方式

下面，将依据实施例对本发明进行更加具体的说明。但是，这些实施例只是本发明的示例，本发明的范围并非限定于这些实施例。

实施例1：能够杀灭支气管败血鲍特菌的噬菌体的分离

在对能够杀灭支气管败血鲍特菌的噬菌体进行分离时，利用了从自然环境中获取的样品。另外，用于噬菌体分离的支气管败血鲍特菌株是由本发明人事先分离并被鉴定(identification)为支气管败血鲍特菌的。

下面，将对噬菌体分离过程进行详细说明。将收集的样品一并添加到按照1/1000比例接种有支气管败血鲍特菌的TSB(胰蛋白酶大豆肉汤；Tryptic Soy Broth)培养基(酪蛋白消化物，17g/L；大豆消化物，3g/L；葡萄糖，2.5g/L；NaCl，5g/L；磷酸氢二钾，2.5g/L)中，然后在37℃下振荡培养3-4小时。培养之后，在8,000rpm的条件下离心分离20分钟，回收上清液。在回收的上清液中按照1/1000比例接种支气管败血鲍特菌，然后在37℃下再次振荡培养3-4小时。在样品中包含噬菌体的情况下，为了使噬菌体的数量(滴度；Titer)能够充分增加，总共重复执行了5次上述过程。经过5次重复执行后，将培养液在8,000rpm的条件下离心分离20分钟。经过离心分离后，将回收的上清液利用0.45μm的过滤器进行过滤。通过利用如上获得的滤液的普通的斑点实验(Spot assay)调查是否存在能够杀灭支气管败血鲍特菌的噬菌体。

所述斑点实验是按如下方法实施的。将支气管败血鲍特菌以1/1000比例接种到TSB培养基中，然后在37℃下振荡培养一夜。将通过上述过程准备好的支气管败血鲍特菌的培养液3ml(OD₆₀₀为1.5)涂抹(Spreading)到TSA(胰蛋白酶大豆肉汤；Tryptic Soy Agar)平板培养基(酪蛋白消化物，15g/L；大豆消化物，5g/L；NaCl，5g/L；琼脂，15g/L)上。将涂抹后的平板培养基在净化工作台(Clean bench)上放置约30分钟左右，使涂抹液干燥。干燥后，将前面准备的滤液10μl滴定到涂抹有支气管败血鲍特菌的平板培养基上，将其放置30分钟左右进行干燥。干燥后，将经过所述滴定处理的平板培养基在37℃下静置培养一天后，调查在滴有滤液的位置是否生成有透明环(Clear zone)。如果生成有透明环，就可以判断滤液中包含能够杀灭支气管败血鲍特菌的噬菌体。通过上述调查，可以确保包含了对支气管败血鲍特菌具有杀灭能力的噬菌体的滤液。

利用确认了存在对支气管败血鲍特菌具有杀灭能力的噬菌体的滤液实施了纯粹噬菌体的分离。纯粹噬菌体的分离采用了常用的溶菌斑分析(Plaque assay)。下面将对此进行详细说明，将在溶菌斑分析过程中形成的一个溶菌斑利用灭菌的吸头(Tip)回收之后，将其添加到支气管败血鲍特菌培养液中在37℃下一起培养4-5小时。培养之后，在8,000rpm的条件下离心分离20分钟，获取上清液。向获取的上清液中以1/50的体积添加支气管败血鲍特菌培养液，然后再次在37℃下培养4-5小时。为了使噬菌体的数量增加，至少实施5次以上这一过程，最后在8,000rpm的条件下离心分离20分钟，获取上清液。使用获取的上清液再次进行溶菌斑分析。通常情况下，纯粹噬菌体的分离不能仅通过1次的上述过程完成。因此，利用此时形成的溶菌斑再次重复前面的整个步骤，至少重复实施5次以上上述过程，以确保获得包含纯粹噬菌体的溶液。通常情况下，纯粹噬菌体的分离需要一直重复执行，直到形成的溶菌斑大小及形状全都相似时为止。另外，最后通过电子显微镜分析确认是否有噬菌体的纯粹分离。重复执行前面叙述的过程，直至在电子显微镜分析中确认到纯粹分离。电子显微镜分析是按照常用的方法实施的，下面将对此进行简单说明。将包含纯粹噬菌体的溶液涂到铜载网(Copper grid)上，利用2％乙酸铀酰(Uranyl acetate)进行负染法(Negativestaining)和干燥后，通过透射电子显微镜对其形态进行观察。纯粹分离的噬菌体的电子显微镜照片如图1所示，从其形态特征判断，可以确认新获得的噬菌体属于短尾噬菌体科(Podoviridae)噬菌体。

包含通过这种方式确认的纯粹噬菌体的溶液经过了以下提纯过程。按照包含纯粹噬菌体溶液的溶液整体体积1/50的体积标准添加支气管败血鲍特菌培养液后，再次培养4-5小时。培养之后，在8,000rpm的条件下离心分离20分钟，获取上清液。为了获取包含充足数量噬菌体的溶液，将这一过程总共重复执行了5次。将最终通过离心分离获得的上清液利用0.45μm的过滤器进行过滤，然后实施了普通的聚乙二醇(Polyethylene Glycol；PEG)沉淀过程。具体地，向滤液100ml中添加PEG和NaCl，使其达到10％PEG 8000/0.5M NaCl。然后在4℃下静置2-3小时，接着在8,000rpm的条件下离心分离30分钟，获得噬菌体沉淀物。利用缓冲液(Buffer；10mM Tris-HCl、10mM MgSO4、0.1％明胶[Gelatin]、pH 8.0)5ml使通过上述过程获得的噬菌体沉淀物悬浮，将其称为噬菌体悬浮液或噬菌体溶液。

通过上述过程，可以确保获得经过提纯的纯粹噬菌体，将所述噬菌体命名为噬菌体Bor-BRP-1后，于2014年11月7日托管于韩国生命工学研究院生物资源中心(保藏号KCTC12705BP)。

实施例2：噬菌体Bor-BRP-1的基因组分离及序列分析

将噬菌体Bor-BRP-1的基因组按下述方法实施了分离。基因组的分离利用了按照实施例1所述的方法获得的噬菌体悬浮液。首先，为了将悬浮液中可能包含的支气管败血鲍特菌的DNA和RNA除去，向噬菌体悬浮液10ml中分别添加200U的DNase I和RNase A，然后在37℃下放置30分钟。放置30分钟之后，为了除去DNase I与RNase A的活性，添加0.5M乙二胺四乙酸(Ethylenediaminetetraacetic acid；EDTA)500μl，然后再次静置10分钟。接着，将其在65℃下再进一步静置10分钟。然后，为了使噬菌体外壁瓦解，添加蛋白酶(proteinase)K(20mg/ml)100μl，然后在37℃下反应20分钟。接着，添加10％十二烷基硫酸钠(Sodiumdodecyl sulfate；SDS)500μl，然后再次在65℃下反应1小时。反应1小时之后，向该反应液中添加具有25：24：1的构成比的苯酚(Phenol)：三氯甲烷(Chloroform)：异戊醇(Isoamylalcohol)的混合液10ml，并混合均匀。接着，将其在13,000rpm条件下离心分离15分钟，从而实现分层后从分离的层中取上层，向其中添加1.5体积比的异丙醇(Isopropylalcohol)后，在13,000rpm的条件下离心分离10分钟，使基因组沉淀。将沉淀物回收后，向沉淀物中添加70％乙醇(Ethan ol)，然后再次在13,000rpm的条件下离心分离10分钟，从而对沉淀物进行清洗。将经过清洗的沉淀物回收，并实施真空干燥后，使用100μl的水将沉淀物溶解。重复执行上述过程，确保了大量的噬菌体Bor-BRP-1的基因组。

利用由此获得的基因组在首尔大学农业生命科学联合仪器院(NationalInstrumentation Center for Environmental Management)使用illumina Mi-Se q仪器执行下一代碱基序列分析(Next generation sequencing analysis)，获得了噬菌体Bor-BRP-1的基因组序列信息。最终分析的噬菌体Bor-BRP-1基因组的大小为49,601bp，整体基因组序列被标记为序列号1。

以获得的噬菌体Bor-BRP-1的基因组序列为基础，利用Web上的BLAS T(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/)对其与当前已知的噬菌体基因组序列的同源性(Similarity)进行了调查。BLAST调查的结果是，没有确认到具有50％以上的同源性的噬菌体序列。

根据这一事实，可以判断噬菌体Bor-BRP-1是目前尚未报告过的新颖的噬菌体。与这一事实一同地，还依据通常情况下，如果噬菌体的种类不同，则可以提供的抗菌力的强度及抗菌范围不相同的事实，可以判断噬菌体Bor-BRP-1能够提供与目前已报告过的其它噬菌体不同的抗菌效果。

实施例3：噬菌体Bor-BRP-1对支气管败血鲍特菌的杀灭能力调查

对分离的噬菌体Bor-BRP-1对支气管败血鲍特菌的杀灭能力进行了调查。杀灭能力调查采用通过实施例1中所述的斑点实验，以调查是否生成透明环的方式执行。用于进行杀灭能力调查的支气管败血鲍特菌是由本发明人分离并鉴定为支气管败血鲍特菌的，总共为10株。噬菌体Bor-BRP-1对成为实验对象的10株支气管败血鲍特菌中的9株具有杀灭能力。具有代表性的实验结果如图2所示。另外，还通过另行实验对噬菌体Bor-BRP-1杀灭金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、粪肠球菌(Enterococcus faecalis)、屎肠球菌(Enterococcus faecium)、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、乳房链球菌(Streptococcus uberis)及绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa)的能力也进行了调查，结果表明，噬菌体Bor-BRP-1对这些菌种不具有杀灭能力。

通过以上结果可以确认，噬菌体Bor-BRP-1对支气管败血鲍特菌具有特定杀灭能力，可以对多数支气管败血鲍特菌发挥抗菌效果。这意味着，噬菌体Bor-BRP-1可用作支气管败血鲍特菌感染防止及处置用途的组合物的有效成分。

实施例4：噬菌体Bor-BRP-1预防支气管败血鲍特菌感染的实验例

向装有9mlTSB培养基的一个试管内放入1×10⁸pfu/ml标准的噬菌体Bor-BRP-1溶液100μl，向另一个装有9ml的TSB培养基的试管内仅进一步添加等量的TSB培养基。然后，分别向每个试管内放入支气管败血鲍特菌的培养液，确保600nm的吸光度达到约0.5左右。添加支气管败血鲍特菌后，将试管转移到37℃的培养器中进行振荡培养，并对支气管败血鲍特菌的生长状态进行了观察。如表1所示，在添加了噬菌体Bor-BRP-1溶液的试管中，观察到了支气管败血鲍特菌的生长得到了抑制；相反，在未添加噬菌体溶液的试管中，未观察到支气管败血鲍特菌的生长被抑制。

【表1】

支气管败血鲍特菌的生长抑制

从以上结果可以看出，本发明的噬菌体Bor-BRP-1不仅阻碍了支气管败血鲍特菌的生长，而且还具有将其杀灭的能力。由此可以得出结论，噬菌体Bor-BRP-1可用作防止支气管败血鲍特菌感染用途的组合物的有效成分。

实施例5：利用噬菌体Bor-BRP-1预防支气管败血鲍特菌感染的动物实验

利用断奶仔猪对噬菌体Bor-BRP-1预防支气管败血鲍特菌感染的效果进行了调查。将出生后25天的断奶仔猪4头作为一组，总共分为两组。然后，将其分开饲养在实验饲养猪舍(1.1m×1.0m)内进行实验。在保温设施下对周围的环境进行了控制，将猪舍的温度与湿度保持恒定，并每天对猪舍的地面进行清扫。从试验开始日起到试验结束日止，采用普通的投喂饲料的方式给实验组(投喂噬菌体组)的猪投喂包含1×10⁸pfu/g的噬菌体Bor-BRP-1的饲料。相反，按照相同的方式给对照组(未投喂噬菌体组)的猪投喂不含噬菌体Bor-BRP-1的相同组成的饲料。从试验开始日起的第7天开始，在投喂的饲料中包含了1×10⁸cfu/g标准的支气管败血鲍特菌，一天投喂2次饲料并持续投喂2天，从而诱导支气管败血鲍特菌感染。从试验开始日起的第9天开始，每天以所有的试验动物为对象，对鼻分泌物中支气管败血鲍特菌检出程度进行了调查。这一操作按照以下方式实施，将鼻分泌物(鼻腔内部棉签采集物：nasal swab)样品涂抹在血琼脂平板(Blood agar plate)上，然后在37℃下培养18-24小时。接着，在形成的菌落(Colony)中筛选被推断为支气管败血鲍特菌的菌落。将所述筛选的菌落分别作为样品执行支气管败血鲍特菌特异聚合酶链反应(polymerase chainreaction：PCR)，最终确认了支气管败血鲍特菌。菌检测结果如表2所示。

【表2】

支气管败血鲍特菌检出结果(平均值)

从以上结果可以确认，本发明的噬菌体Bor-BRP-1对于抑制支气管败血鲍特菌感染非常有效。

实施例6：利用噬菌体Bor-BRP-1治疗支气管败血鲍特菌感染疾病的例子

调查了噬菌体Bor-BRP-1对由支气管败血鲍特菌引发疾病的动物的治疗效果。将出生后25天的断奶仔猪4头作为一组，总共分为两组。然后，将断奶仔猪分开饲养在实验饲养猪舍(1.1m×1.0m)内进行实验。在保温设施下对周围的环境进行了控制，使猪舍的温度与湿度保持恒定，每天对猪舍的地面进行清扫。在实验开始日起的第4天，对所有猪的鼻腔喷雾给予支气管败血鲍特菌溶液(10⁹CFU/ml)5ml。用于鼻腔给予的支气管败血鲍特菌溶液按照以下方式准备。利用TSB培养基将支气管败血鲍特菌在37℃下培养18小时后，只将菌体进行回收，接着使其悬浮在生理盐水(pH 7.2)中，将菌体的浓度调整到10⁹CFU/ml。从强制感染支气管败血鲍特菌的第二天开始，按照与给予支气管败血鲍特菌溶液相同的方式给实验组(给予噬菌体溶液组)的猪鼻腔给予10⁹PFU的噬菌体Bor-BRP-1，每天给予2次。对照组(未给予噬菌体溶液组)的猪不做任何处置。饲料和饮水，对照组与实验组全都按照相同的方式投喂。从强制感染支气管败血鲍特菌后的第3天(实验开始的第7天)开始，每天以所有试验动物为对象，对由支气管败血鲍特菌引发的萎缩性鼻炎的发生状态进行了调查。对由支气管败血鲍特菌引发萎缩性鼻炎的调查是按照调查鼻腔分泌物量的方式实施的。鼻腔分泌物量根据试验员的观察，将正常标准指标化为“0”，将稍微多一点的情况指标化为“1”，将严重的情况指标化为“2”，其结果如表3所示。

【表3】

鼻腔分泌物调查结果(平均值)

从以上结果可以确认，本发明的噬菌体Bor-BRP-1对于由支气管败血鲍特菌导致的感染疾病的治疗也非常有效。

实施例7：饲料添加剂及饲料的制造

利用噬菌体Bor-BRP-1溶液，以每1g饲料添加剂中包含1×10⁸pfu的噬菌体Bor-BRP-1的标准制造饲料添加剂。饲料添加剂的制造方法是向噬菌体溶液中添加麦芽糊精(50％，w/v)后，冷冻干燥从而制造。最后粉碎成细粉形态。所述制造过程中的干燥过程也可以采用减压干燥、加温干燥、常温干燥的方式代替。为了进行对照实验，制造不含噬菌体的饲料添加剂采用以下方式，即代替噬菌体溶液使用制作噬菌体溶液时所用的缓冲液(Buffer；10mM Tris-HCl，10mM MgSO4，0.1％Gelatin，pH8.0)。

将通过上述方法制造的2种饲料添加剂分别按重量比与1,000倍的养猪用饲料混合，最终制造出2种饲料。

实施例8：消毒剂的制造

消毒剂按照以下方法制造。利用噬菌体Bor-BRP-1溶液，以每1ml消毒剂中包含1×10⁸pfu的噬菌体Bor-BRP-1的方式制造消毒剂。消毒剂的制造方法是：以制造噬菌体溶液时使用的每1ml缓冲液中包含1×10⁸pfu噬菌体Bor-BRP-1的标准添加所述噬菌体Bor-BRP-1溶液并进行充分混合的方式制造。为了进行对照实验，不含噬菌体的消毒剂直接采用了制造噬菌体溶液时使用的缓冲液本身。

将通过上述方法制造的2种消毒剂按体积比用1,000倍的水进行稀释，作为最终的消毒剂使用。

实施例9：猪饲养过程中的饲养效果确认

对利用实施例7及实施例8中制造的饲料和消毒剂饲养猪的饲养效果是否获得了改善进行了调查。特别是，本调查是通过调查体重增加程度的方式实施的。将总共40头仔猪的每20头为一组，总共分为2组(用饲料喂养的组-A；经过消毒处理的组-B)，实施了2周的试验。将每一组又重新分为由10头组成的小组，各小组分为适用噬菌体Bor-BRP-1的小组(小组-①)及未适用噬菌体的小组(小组-②)。成为本试验对象的仔猪为出生后20天的断奶仔猪，各试验小组的仔猪各自饲养在以一定间隔隔离的不同猪舍内。各小组按照表4的方式进行区分并命名。

【表4】

仔猪饲养试验中的小组区分及标记

用饲料喂养的情况下，就采用通常的饲料投喂方式按照表4的区分投喂实施例7中制造的饲料。进行消毒处理的情况下，就与现有消毒方式轮番实施，一周实施3次。在喷雾本发明消毒剂的日子就不实施利用普通消毒剂的消毒。试验结果表明，与未使用噬菌体Bor-BRP-1的组相比，使用噬菌体Bor-BRP-1的组体重增加程度非常优秀(参照表5)。作为参考，如实施例5所述，对鼻分泌物中支气管败血鲍特菌的分离率也进行了调查，在未使用噬菌体Bor-BRP-1的组的部分动物的鼻腔分泌物中检出了支气管败血鲍特菌。相反，使用噬菌体Bor-BRP-1的组的所有动物在试验期间未检出支气管败血鲍特菌。

【表5】

猪饲养试验结果

从以上结果可以确认，投喂依据本发明制造的饲料和利用依据本发明的消毒剂进行处理，对饲养动物的饲养结果改善方面具有效果。由此可以得出以下结论，使用本发明的组合物，对动物的饲养结果改善方面是有效的。

通过以上说明，对本发明的特定部分进行了详细介绍，对于具有本行业普通技术知识的技术人员来说，应当明白，这种具体的技术仅仅是优选的实现例，本发明的范围并非限制于此。因此，本发明的实质性范围应当依据后附权利要求书及其等价物定义。

托管机构名称：KCTC

保藏号：KCTC 12705BP

接管日期：20141107

<110> 尹特荣生物科技株式会社

<120> 新型支气管败血鲍特菌噬菌体Ｂｏｒ-ＢＲＰ-1及其抑制支气管败血鲍特菌增殖的用途

<130> DFP18KR3505

<160> 1

<170> KopatentIn 2.0

<210> 1

<211> 49601

<212> DNA

<213> 噬菌体 Bor-BRP-1(bacteriophage Bor-BRP-1)

<400> 1

cagattttcc ccccaccccc gcctacctgc ctgcccatcc gacgacctgc aacgttataa 60

cattccatct cacagaggaa aagcatacct taccccctgt gtcccccata tctttatatg 120

gtgtttctac ccccaagccg gtgggcttct atggtgttag ggaaggggtg ccaagaaccc 180

cactgacata tcaagcactt acctaccccc atccccccat aatcccccat ctcattacag 240

cctctctaag cctctcttta caccatcaag ctacctaccc attaccccat tcccgttcgt 300

tcgttgtagg ccgttctgac gcgttctagg cctattccta caccccaagt acacccccat 360

tcccatcccg ttacacattt ttaccatttc cgtaccttaa ggaactgatt tcgtgctatc 420

gtagaggtgt tgtcttaacc cttatgtccc cttttattgg agtctttcat gccttcctct 480

cccattcaaa tgacacgtga cgagttacag gtcgcattgt tatccctggc tatggacatg 540

tgcattgatt atccccagcc cattctccgc gcctgggcga cttcttttgc tgaaagtgct 600

taccatcgtt tcgacctgga tctccacgaa atgacggcct tgattgagga catcgttaac 660

aacgtggatt aatattgtga agccaaccat gtctaaactc gacctgaccc cagccaaccc 720

cgatgtggtc tttttgaaaa acgaccccac caacgaagct attcccgcag acaccctctt 780

ccgcattatc gctaacagca acctgtccaa ctcggcgcgg aacgccgcca agctgtacct 840

ggaagcacgt gacctaacat ggatggcgct gtacaaggca gctaaaggta agtagttctg 900

ttacaatctt ttacatcttt tactggcacg ttacatttat ttgtgttgta atagccctgt 960

atcccgctct ttaaaactag tgacgtatcg ccctggtagc gcccctttca tgggtgcgtt 1020

cccctatgtc tataggtacg tcgcttgtta caacttccca atgtgaggaa ccaaccatgc 1080

aaaccgctac gctccgctgg tacgaaaagg gcagtactca aggaaagtca cagacattca 1140

accaaatgca actgtcggct ggcttcctgg acgctgctgt cgataacctg ctgtttgaca 1200

acatcgcgtt ttcggtaacg tatcaaccca ccaacccgca gaccagcctg cctcttgctg 1260

actgcgagtg ctaactcagg tacaaccgat agggtattcc ccgagtatcc tatctggtgc 1320

tacttggcac taacttcgcc taacttcggg caaaatctgt taactcttag gagaatatca 1380

tggcccgcaa ctctaacgcc gccattgctg tcaacccgct ggctaacctg gaagcccgcg 1440

ccaccaccga atcggctacc gccccggtcg aaaaggccct gaaagtaggt aagccgatca 1500

cgggtcagta cctgtacgag caatttgttc tgcctaacaa gcaagaactg acgaagatgc 1560

aaatgatccg tcagtgggcc gatccgaaga ctggtctggc cgtgtctgtc ctggacaccg 1620

cgctgaaaga catggtggaa ctggcttccc agcagggtga cgcccccaag aaaaccgcgc 1680

aaaaccatgc ttccaccctg cgtagtgtgt acggtgcctt gaagttcgcc aacgatgcgt 1740

tcactgccgc tggctatgtg gatggcgaga ctggttacca gtccgcccgt gtcctggcca 1800

agaaagccct ggccgatgct ggcatgcact ggaccggtgc acgggtcaag tccacggaag 1860

agaagcaacg cgaggccgac aacaaagccc acgcgaaggc catcgagaaa gcgaaggaag 1920

agaacccgca ggcgcacgac gagtcctacg gcgattggat gcagcgcgtc ctgatcgagg 1980

ccgaccggat caaggatcag gtgaccctcg aacaacacgt tgagaatgtc aaggcgcttg 2040

ccaaacgggt ccgcgacctg tgcggggaaa gcctgacaga cgtgttggcg tacatcacca 2100

cggaacaatt ccccacgtcc ccgacggatg atgggggttc ttccgaataa aagactatca 2160

acttctttta acccgcccca aaaggcgggt tttttattgt ctcatcaatt ctattgtcat 2220

gtttaggatt gtgactatga gtaagaacga tatttatccg gagtcccaca ctgacgcatg 2280

ccgtgctcaa tatcgcttga acatgttgcg tcgttacagc tcacaccgca ccaaagtatt 2340

tattaaacga cgtatgagtc ggatgaccgc aagggaattg cttgtagctt tagaagaagt 2400

acgacgcgcg cgttacttgt ccgccgtggt ggagaatgtg aaatgaaaca aagtaaagaa 2460

aatagcacgt ctatgtcggt tatagtcatt ttgaaagagg ctcgtaacat tttgaagtct 2520

cctgataatt ggacacaagg gacgtttgcc cgcgatcatg agggccaact gtctgatccc 2580

catgatccag ccgcaactaa attttgcata ttgggtgccg tagaaaaggc aggtgctgac 2640

ttgggggttc gagacagttt gacagaacta gcgctcgaat atgttgattg ggcagcgccg 2700

gggtgggaag tcgttaagta caatgaccat cccgctacta cccacccgga cattttgtgt 2760

gtcctggatg aagctattga aatggccgcc gacgagaaaa actggtttta ttaaactaat 2820

aggagtctaa cgaatgcccc atccaccaca cattcagaca ttcttgttgt tttggatcag 2880

gcgatcgagc tagcaaagac tcgttgtacg aactaaagtt tcttcttgtt acaacttcct 2940

aacgtaagga atttaaatca tggatcttga cctgaacaaa ccgcttcgtt ttaaattcaa 3000

caaaaaaccg tgcactcttt tgcatgtgtt gacgcacccc tggaatcctc tgcgtgcaca 3060

tgtggtgcta cataaaataa ccggcccaaa cttccgggat gtagtcgaaa ttgtttccga 3120

aaaggttctt gaaaatattc ctgaaagcct gtggatgaat atttataagg atcatgggtc 3180

aatttggcat tccactaaag aaattgccga gaaggcacgc ggtactgatt ctacttggct 3240

gggggtacta gaataccccc aagacggatc tccggctatc tttcacccaa aaaaataaac 3300

taggtctatc gactttttaa aagggcttcc aatgaaacgc cgcgcgaccg acaaaatcaa 3360

aagtaattcc ccattttctt acgtagtggt atttgttttt acgattgggt tggtcgtgtt 3420

ggctggtcat attgctcttt ggttggtctc ttttaattaa cacacggaga aactactatg 3480

aagttttctc atattaaaat gatgttggca agttttgtat tgctagcatc gatgataagg 3540

cccgctgatt ctggagaatt ggacaccttt tctcgtgaaa aggtacagct atgcggggaa 3600

ctgttggaag atttcgagac cttgtacacg ttttatcata tgggtcttga agaagttctt 3660

gctgacgaga ttgtggcaaa gaacccggag tacactcctc atgcacagtt tgtattgggg 3720

gtagctgtca aggtgatata ccattccccg gaaatcgatt atcccacctg gattttgggt 3780

actcaggccg catgtttcag aatcgccggg ccggctgctg atcctcgcat ggattttcgc 3840

ccttattaca atcatcaaag gaagcatatc taatgacggc cgaaacactt acctggagtg 3900

tccgaaataa tgagaggcct gtggtcgggg aaagggatct gagtattaga tacgttcatc 3960

cagaaaaacc gaatacttcc atgcccgttt tgaacatgac gtgtaaactt tcctttcagt 4020

gttgtgctat gagggagatt gccgggttta atttgatgct accaaaaaca gcagacagga 4080

aacgatttct gctaccgccc cctgaaattg tacaggaata cgtggccctt tttaacccac 4140

cttatcaagc ccttggtatt attgccgata atcaaaacgt tggaaaatat aacactctag 4200

cggttgagca gttttggaaa ctgttgtttt gctatgaaaa tatcaaacaa acctataaca 4260

aagtacattc aggaaatgtt ctgaatgtga ttttagcgga tttcgcagcg atgcaggaag 4320

cctggaaacc ccaaggtgtg tctttcttaa aatatacgga gatttataat gaatccatgg 4380

acggtaaccg ttgaaaaatc tgagcaggat ttgcaagggt ttatggtagt aaaactcttc 4440

catcgtaggg gggttgttct taacatgcac ataactccgt ggactttcca ctgttgtgcg 4500

tgttcaagta tcgctggttt tgatgtctgg tttcctgcgg aatacgactc ggacacaaaa 4560

aaacgccggt ctattattcc tcctccggaa atcatggcac atttttgccg agccctggcg 4620

cgggttttgg aaccccaatc tgcattgggt attatctctt cccaccaaaa aaacaagttg 4680

gttttgtccc acggtaaaac caaagacgct aacgaggaag ttaagaacga cgttttcgca 4740

aaagattttt gggatttgat tctttcccca acttatctaa gggacactat cccatcccgg 4800

gcagacggaa ccccgttgtc gttcgttctt atcaacggtc ctgacctagt ggcatcgtgg 4860

tcaagaaaag gtcgtggaaa atacagggct tatcaggagt tttataatgc ttaccaagaa 4920

aattaagtct cggcaaattc agcaagctga cggcagcgtg gtgtatccta ttttcgataa 4980

ctattttgac tatttcactg gtccgggttg ggaaaattgg tcccgttatc gaatcgtccg 5040

taagaatgtg attcacgtgg cgggtgttaa acatccagtg gcgcgtatcc ttgccctaac 5100

acgctaagga aggtgcatga aaaaatcaaa caaacctgaa tctcgttttt atttcccgga 5160

gcctatcgta aaagaaatct ctcctcctaa catggatccc gtgtatcctg aaatgaatta 5220

cgcggaagtt gctgcaatca ttaaagatgc agaaaaagcg gggtatggta agggggcgct 5280

cattgttaaa tatgctcctt cgtacattag tggtaatgta ttcggctggg gtatggtcgt 5340

gcggttgaac catacggtcc ctcataaagg gatgccatat cgaggacccc ttattgccgt 5400

gttccccatg tcggccagcg tcgcaactgg tccgcgtgag gaatatttgt ggccagatga 5460

agtgtacttg attgacactg ccccgacgga agaggaacaa aaggaagtaa cctctgatat 5520

gaaattgctt caggaggaaa aagagaacgc gaagaaagct cgtcttacaa aattcccaat 5580

cctaggaaac tgtaacagtt aaggatatat catgcgttat actgttatta aatgtccccc 5640

cggttatttg caaaatcaac cgaacgctca agaacaagca attgatgcac aactaaatcg 5700

gacccggcga aaccccgtac ctgccgctca ggttgtacta gatgactggg ccagggcggt 5760

tggtagtcgg gaagttggcg ggaccccttc tcctccagtt gtgagacaga tgtttaacac 5820

gttggaagaa gctgtcgtat atgctcagat gcaggcgcaa cagttgcgag aagcccatat 5880

ggttctcgta gcccatacgg taatcgaacc attagtaacg gaaactgttc tcgtgacgaa 5940

acggtttacg gaaactggtg aacttcttat cacaggataa tttatatggc acgtaattct 6000

aaatttgtta tgggttaccc gaaaaatacc attggtactg gtaaccagcg tagcgccccg 6060

tttgacgatt tgtttgatac gattgcggca acacccgaaa atattcggca acgtgccgtg 6120

gatgtattgg tggtgtgggg tggtgctgac atttcgccga tcatttatca agcacagccc 6180

agtcgtatgg cgggaacttc tagccttact gaactgagtt atcgggaccg agaagagatc 6240

gctgttgtcg aagcagctat cgagatgggg atacctattc tcggtatttg tcgcggggcg 6300

caactggcat gcgcaatgtc tgggggtctt ttggtccagc acgttgatgg acatgggggt 6360

gatcacctta tcaccactga cgacggacgg caactggtca gcagttctgt gcaccatcaa 6420

atgatgtggc ctttcttgct tgacaacaag gtctatcgac ttcttgcttg gtcgtctgag 6480

cctcagtcca gtatctatgt ttttgacgac gtgcacgtgc gcaagacggt tgacatagag 6540

ccggaaatta tctggttccc taagaccaaa gccctggcta ttcagggaca ccccgaattt 6600

atgtcacgag attctgaatt tgtggtatat tgtaaagaac tgatccagaa atacatcttt 6660

ccttgtgtgt ggagtgatca tgaatttgaa tgaaatccag gcgaaagcaa atgaattttt 6720

gactgatgaa cttaaagtaa aatttttaaa tgtatattat gagaagtggc atcgggtgtt 6780

tcgtgatact actgctgact tttctccagc actgttgact gtgaggatcc ggaacacgac 6840

ttacacaggt ttagaacaat atagtgtgga acttcgttat ggagaagacc tttttcgtga 6900

cctgcttcgg tttcgactac agggatatcc gtcctgctgt ggtttaacca tgtttcacac 6960

atttttttgt gagaccattg tacttccgaa atgtcctgaa ttttttaaag ctcttatgaa 7020

cttgtgcttt acccttgatc gtaaaaacga cacaggtttc gcaaatcgac gtattgagct 7080

agtcatggta actgaccaca acaccgcgac cctcaaactt ggggaagatg tctttgagaa 7140

cgattccaaa tacgaacatt ttcgtttcaa ggtcccagct cagtgggaag attctgtagc 7200

gaaaaaagaa cttaaattta tattcgatcc ctttttccgg tacttcacag acgtagccga 7260

ggaggtccac acatccctct ttttcaacta caactccggt cgtattctgg caaagattgt 7320

cgcctctgta gactcatact tttttaaaat ggactgagaa tagctatgaa tatcaccaca 7380

ttgggttgcg accctgaagt tttcctggcc gacgaagccg gctacatggt gtcgagtatc 7440

ggcctgattg gaggatcgaa agatcatccc cgccccatcg atgaggaagg taacgcggta 7500

caagaggaca atgtagcggt ggaatttaat accccgcctt gtcaaacggt tgaggatttc 7560

cgtaaacaca tcaaaaagaa cttgacttac ttggaaagtc tttgtaacac tatgggcttg 7620

aaacttgcta ttcaagcaag cgctgttttt gatgatgttg aattgcaaac tccgggtgcc 7680

cagacgtttg ggtgcgaacc ggatttcaat gcatacactg ggaaagaaaa cccacgtccc 7740

acggccaaca atccgaatct gcgctcggca gggggccaca tccacgttgg tacggacgag 7800

tccattgaca agaatctttt gattcaatgg atggatgtgt atgtcggagc acagttgttg 7860

cgttttgata cagattccga acgtcgggaa ctttatggta aggcaggtgc gtgtcgttat 7920

aagtcttatg gcgttgagta ccgcactcct tccaatgtct ggatcaaatc cgatgacctg 7980

attcaatttg tgtgggatca aactgacaaa gcgcttggcc gcgccaaagc aggggatcgt 8040

atcccggaag atttgcaagt agtggtacaa caatgtatca acacgagcga tctttctttg 8100

ctggaagtga ttgaaaagga acttggcaaa tgagtatgac atcggctcaa atcatccaag 8160

aattgtctcg gaaatacacg ggaacatacg tattcacgga tgttaacaac acggaaatgc 8220

tggcgtacat cgacagtatt aaggtagttg gtagcgaaaa caaagcagcc ggagagtgta 8280

ttcttcaaac acaagctcac ggtaaacttc gctatatcct gccgtcgtcg cagcgtttga 8340

agattcgtat cccgaaagcc ggtgtgttcc aacacgagac caacgccgtg ttgtgtgccc 8400

gttttccggc ccgacaatgg cggcggggca tctctgaagg aaacacatct ttcctggatt 8460

tggcattgct ggttgctaac ggaggtattt ccaacggccc agcacctaat cttcccctaa 8520

cgtttgaccg tatcctcgca tcttttgaac gaaaaacttt ttcagttcaa gatgctttgt 8580

ctatgttgtt gagtaatagg tatactagcg ttgcccttcc aggagattgg gcgctagttc 8640

aaagtcccgt tgctggggga cttccttctt ttatcttgat gtatcgtctc cttatggtgg 8700

gtattgtttc ggctaaaaaa caattgctgc acacgtatct gcctacgtac caacaagctg 8760

ctacggagct tttgaatgac tactaaaaaa cccacatcaa tagaacggac attggatcta 8820

gatccaatgc ctgttgtgga aactgtatcg gacattcccg caccccttat ccttatcgac 8880

agcgatgatt tggttggact ggaaatcgaa gttgagagtg caacgaccac ccggtgtcca 8940

aaaccctggt ttgcaaagga agatggttcc ctacggaatg gaggtatgga atatattacc 9000

gcccccatcc aagcacgaga taccccgaaa gcactggcat ggttgtacac taaagtgatc 9060

ggaccggaat gttctttcag catgcgtaca tcggtacacg tacacctaaa cgtccgagat 9120

ttcacccacg aacaagtgcg taacttggtc gctttgtaca tggtttttga acctgccttt 9180

tttaattttg ttggtcgcgg ccgctggaag aatatttttt gtgttccgtt gaatgagtgt 9240

aatgatcctg ttatgcacct gacgcgggcg cgttattgga cagcttggaa taagtatact 9300

gcgttgaatc tccgtcgttt ggcagacttg ggcacagtag aattccgcca catgcccgga 9360

acacgggacg ttgagaaact agttcagtgg gtgggtatta tcacgaagct gaagcactat 9420

gttcgtgaaa ctcctaccag tgttttgcgg aaagccatta acaccatgtc cggttatttc 9480

gattacaatc ggtactctca tgaagtgttt ggggaatttg cagagtgttt gcaaatctct 9540

gacccgggtg tgcattaccc atgctcgctg aatgctcgtg ctgtattttt ggggacgaca 9600

ccttctggta atttgatgga aaacggaagt cctctccatc tcttcctaaa acaacgtcgc 9660

gtttaactta aaggattaaa attatgtgtg gtatcgttgg tatgatcacc aagcgtcagt 9720

acggatttac ttctgctgat caagatttgt ttcgtcgact gttggttctt gatggagaat 9780

atcgaggcct tgatgcaact ggtgtgtatc aagtccaaaa gaatcgacaa gtgttccttg 9840

ctaaaagtgc tactcaacca caggtgtttt tccattcgtc ggcttggacg gatttcaatc 9900

gacgcatgct ttcctcttct cggattgtag tggggcataa ccggaaagct actgttggtg 9960

caaagaccag tgaaaatgca cacccgtttc acgaggacaa catcatcctc gttcataacg 10020

ggacgttgca tggtcacaaa gaactagcag aaaccgatgt agacagtcac gcagtttgtc 10080

aagcatttgc aaagggtgaa gcagaaaaga ttcttccgac cattaatggt gcctttgctt 10140

tcgtttggta tgacatcaac aaggagcgtt tgtttgctgt ccgtaatgac gagcgccccc 10200

ttaccattac tgaaactccg gacaacattg tcattgcttc tgaagcgtgg atggctgtgg 10260

caatgttgcg gcgcgcggaa gtcaagcaag aaaatattaa ggtaactctc cttcagccgg 10320

gggaaatcta tgaattcaat ccggacgatg gtacgtacac cactaagaaa attgatcttc 10380

ccaaacatgt accgaacacg acggcttttg cccggggttt cctaggccaa gaggtgtcaa 10440

cgtacacccc gcctcgtgtg aacacccagt cggtaaaacg tcctcctcat ataactacgg 10500

ggaatgttct taaaattcat ccggacttga aaaagaaatt tccggagaaa agaaccatct 10560

tggtcaagat ttcttccatg cgtaaggtag gtcctgcaac tactccagcg tggcaagtaa 10620

cgggtaaatg tattgagccg ggaatgcctg atgtggatat taccggatca atctacggac 10680

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tgactacttt tggtggagat attggatatt cagaatggga ttacgtatcg tcgaattgta 10860

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gacttgagat cggggttaat acccgttatc atgttgagtg cacggcgtgc ttggaaaaac 10980

aaactactaa cgaacaaacg gagaatacta atgagaaacg tggtcatctt gccctacaaa 11040

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attattaact ggggtgcatc gcgcaacaat cttcccttgt ttaataacta ccgggtgttg 11220

aatcagtttg ataacgtgcg ggcagcaggt aacaaacttg ctacttttaa catcttgtca 11280

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acttcgtaca gagatgcatt tgaagtattt tttcggacgt agataccatg actaaacgtt 11820

atagcgaaag cggagaagtg tggctagaag aagttacttc ggaagatggg atcaccacga 11880

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gatctagctt ttgggacagg cggagtcgaa ggacttaccg ctgaggatgt gaagacatac 26640

attcgctata tttgcgatcg ccgtcttatt tcgatgggat tgaaagggat gtacaagatt 26700

aaaaagaacc cgcttccgtg ggtagatgaa atgattaatg caccaattca aggcaacttc 26760

tttgagacac gtgttactga ttatggtaag ggtgccttga gtggtacgtg ggccgacgta 26820

tgggcataaa ggacataaaa atgaaagcac gccagtttag ttttgacttc aacgccatct 26880

ttggcggcat ggttggattt gagtttctcc ctggggaata ttttgagcag gaaggctggg 26940

gttttgtggt ggatctgctt ttcttccgct tctccgtaat ctgtgagcac gtggagattt 27000

aagtatgtac aacacggtgg atgtaacggt agcttttgat gtgcatcctg agcaagtctt 27060

tgctttggat atggctcttg atgctcttgt aaaggctttt gaaggtcgtg ttactcttcg 27120

agagtctttc cgttattaca atccgacggc aaaagaaaag ccccccgagg atatccccga 27180

ggagcttatg tcgagttaac cgtcccgcat catgtcagat aaacgggtgg cccgggattt 27240

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ttgcatcatt gccaaggtgt tcttaaacga cagaagacct tgcagtccaa gattaaacct 27360

catattgacc aagacccgtt gacgggcatc agtcatctct ctccaccacg gtaacgcttt 27420

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tcgtaatctt cccccttttc gtttgtcaat aaggcgaccc acaccaatcg tccagtagcc 27540

taggctatcc tggtacgcat tcggtattac tccctcatcc ctccgtagtt cttgaattaa 27600

tttattcttg tccacgcatt tcccttattc gttcatactt ccttgcacta ccaatgttat 27660

tgatggtgtc tggcatttgg cgacggaata catcctgctc acgttgtgtc agagaacgct 27720

tcaacccttg ctgaagataa ttagctacct cttccggacc catccaacga cttaaggttt 27780

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cgcctaattg accttgagac agagagccgt gcatgttagc acctaccaat ttagagaaca 28260

ggccgtagtt agcccaatca ctaaagttgt ttaacatctt gccctttaga tcggtgtctg 28320

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ccccatacat acccaggttg cctcctaaga agtactgcac tcccagcatc atagctagtg 28440

gtgcaacctt actaggacgg ccttctttga taccttcctt ggcagtcttg gcgtagttga 28500

taacttggtg gtactggttg ttcaagaacg tctttagagt acctgctgca cgtcctgtta 28560

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tcaccatagc ctctgctgtt cggtagagag tttcccccct caacccagac tcatacaaat 28680

ggttaattgc cccaatgtat gaaaaggttc gaccaaattc ctcagccttg acctggttaa 28740

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ccagaacgtt gatcgacaga ataccatttt ccttagcata atccaaagcc tctttcatct 28860

ccggacgttg ctttttacca gaccacaggt taaacgcatc caacacggtg tttgcatatg 28920

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agagcggttg tactaactgc acaaacatag ccttggggtt tagcaaacct agattcttgg 29040

tgtaaaaata tccacgagct aagtttaacc ctgccatagc ttgttcacga tctattccaa 29100

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cattcttaga atattcccga gcgtagttca cgttgttagg ttgagtttgc tgtaattctg 29220

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tgttcttcat gtactgaatc tgactgttca acaactcgat agcgttttgt ttgtcagagc 29340

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ggtttttttg taacgcttgt tgagcagatt ttaatgcccg ttgactcggc tcacgcaaat 29640

accacaccaa gtttccttca gcgtcgcgca cttccatttt gtaattacca cgccaccgag 29700

atgccatgta gtaatcatgc atagaaatag gctctaatcc agctgcttca cgacctttgt 29760

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ccggagtcat acgagaaact tcacccgggg ttaattcccg gttaaacatc tcattcttta 29880

gtacgttggc taagttttcc cggtcactcc gagacaattt agctagagac ttctccacag 29940

gaattacctg ggtattccag gctttacggg cggtattctc cgctgcattc caataggtgt 30000

ataccccctt gaccaatgaa gaacggcgcg tctgagaggc tagattcgcg ccagaagacc 30060

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attccggagg ttggtcctca aagatgcgca tttgcatctc tttgtttaac ccaggaatat 30180

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gttcggctac agcagctgtt tcaatattct ctaaccccgg aacatccttt atagcttccc 30300

gtaatggttg aggaaattcc atttgaggtt gtggtgccca atccgaagtt tggactagtt 30360

ccccgatggg attaccatat tgatcatagc cagtaggttg ttggctatat cgaccatagg 30420

gatcaccggg ggcctctaag cggggttgag acacgtctag gggctgttct gcagtgaaca 30480

tatccccctg tgctaacgga tcaataaccc gctcacggcc ttgtagagcg tctgtaacac 30540

ccccacctac atcgtaagga ttgacggttt caaacatatc caactgcgta cccggaggtg 30600

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cacccaacag agtgccacca acgttcttcc cgaaatcagc agcatagtca agtaaaccgg 31140

gactttcttc ggctagttca aagccttccg gaatttcctc aaacccttcc ggaagggaat 31200

tatctacaag ctcgaaccca tccgggacga gttcaaaacc ttcaggaagt ttagttgcca 31260

ttatttttta gctctcacag ttcgcccgtc aggaagcctg tacatgccat cacccaatgc 31320

ttgtgtgcct tggggtaatt tggacaggtt cggatcttga cgagattggg gttgttgtcc 31380

agtggaggga agtccttgaa gtcctgcagg tcccgctcca tatacatctt gttgtacaat 31440

attaccacta ggatcaagag tcattccagg cttcgccccg gcaatacgag actcaatatt 31500

gagccgtcgc atcagttccg aggattctcg gtactcttcc ttcagaacag gatcttgagt 31560

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ggtagcggga tcattttgag cacgagtacg atcgtatttg cctgcttcaa ttcgacgctc 31680

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tgtacccact tgcttcaaag cgttgggtaa catctctgga gtctcctgca tcaattgttg 31920

gaacagggga tgagctgcta attccggaga ttgcgacgcc agtttctgca tcacaggtaa 31980

tcgttgatcc acacgaactc gacctaaaac atctccgagc tgttgtgcat attgtccaat 32040

ttggttgtaa tcttttaatt cattatcttt aatctgagat cctaacttcg atttctcagc 32100

tgccatacga tgcggggaca gttcttgagc ctcttgaagt tcaagcatcc ccttttgttg 32160

agctaatcta ttagcttgtt gttgttgctg ttgattaaag agattagcaa gactggtttc 32220

atgggccatg tctgcagcac gttgggtgtt gtacccctgc atcatttgcc ctaaaccgcc 32280

ctgcatcccg aacaattcaa aaggattagc cattagaaaa gccccgctaa accacgaata 32340

cctttagaca atgcccccac cgaaccgagt ccttggccga tcatgccggc atagttagga 32400

cgatacgttt gaggacgtaa ccgtgcattc gcagcaccta attgttgaat atacgacgga 32460

ctggacatga cattagcttg gttctgtgtg agcagagcag ctaattcagt ttcacgacca 32520

ccatagttag aacgccgtcc acgcgccgca tctcgacgga ccatgttttg cattgcttgt 32580

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ccacgctgca tagcttgctg gttacggtag tcagcttgaa tcatatcttg catatcacgc 32700

atttgctgat aattctgata tgcctgaaca cccccaagaa tacctttact taagttattg 32760

aatgtgtcaa atttatccga attcaggaaa tcactgacac ctccgaataa acttccgaga 32820

ttcattttat ttgctcctgt tgaggattta ggcatgatac cggtgccttg aagagtactg 32880

ggagattgtt cccctagaaa atctcctaga gcatcatcag tgtcagaaag tacaggggag 32940

tatccaggag atacaccacc catttctaag ttctgtgtga tgttaccagt agggacagag 33000

ttcagaccgg tgatctgatt aatatcagta ccaccttggg ataaggcaga catatctcct 33060

aggaaatctc cgccaggggt aaacgaatcc gagaccccca taagatcgct aagaccgcca 33120

ccttctaagc cagacatgtc cccaagggca gaaccaccct gtacaaagtc cggagaaact 33180

ccaataccac ccacagagct taaaccaccg gtggcatcac caacgccttg gaacacagat 33240

ccccaatctc ctgtcatgcc cccgacatca ccaagagcag caccagatag agccccagaa 33300

ccacctaaag ccgatgaggt atccgctgct cccgaaagca tactcccgaa gtcaccaaac 33360

ttacctgctg ccccaagaga agataaacca gctccaagcc agtcaccctc tgcgacgttc 33420

tgtacagcat ttgcagctaa ggcgggtaac tgccacgggc caggaactac agaagcaaca 33480

ctcagaatag agcctaaatc accgtgggct actccggtag ctacatcacc aagagtgtca 33540

ccaacaaaat taacaccctc ttctaaccaa ccaccaacgt ctccaagagc gtctccgaca 33600

ctttcaaagg cacttgagac cccctttacg acgcttttaa caactttaga aacgccaccc 33660

atatttaaag ttccttatta aagactgtac ccacagtttt gtaaccagag cgttctagaa 33720

aggtaataat tgttccagct ttaataccgc tgttatgatt aaattcaatg ctatgtgccc 33780

cctgttcttg tgcccactgt tcaaattctc gaacagcgcg ggcgaaccaa gaacctccac 33840

gatgttctgg taaaatataa taaattaacg catctgcttt aagggtgtat gagaatatta 33900

aagagtccac atacccaatg aagataccca caatctttcc ttcgtcgtcg aatttaaacc 33960

ggaagaaaaa tccaggagag ccataggctt tcatgagacg tttggctacc attgtgctat 34020

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ggactaattc ttcaaaagtg atttcagtag atatcatatg tagtatagtc ctgtaatata 34140

gattgttgat gtgtctgctg tccatgaagg aagataaatt cttccaggac taaccgacat 34200

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agctccaaaa ggtatgggga agtacgtagt acctcttaca ctcgtagtat ctgttgcgga 34320

tgtaagtaca atggttgccg aatacgtcac cacatcattg attcgagcat atgttcctga 34380

ggctgtaata gaaccaccgt taacagtcaa tcctgtaaac acaggagtga acacgctaga 34440

attataaaag aacgaggcaa tagagttata ctgagcttgg gttagatgat atcgctcact 34500

agtagtacca ccctgcatat tttgtaaatc gttatgctgc cgtgtttgga tatctgttaa 34560

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gtgtagtcat tatctgacca cgatactttt atagtacttg atgtactggg tgtgtcccca 34920

accattacta accggtttaa aaactttcgg ttcatggtgt caaaatcgat aggtagtgta 34980

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tacaaggctg tttctgtgac aatgtacgaa taaccttggt tgttgtccag agctaacttc 35100

ccaggccaat taccaccatt ccatgtccat tgatgccata atttttcccg ggtatcatat 35160

aaccaagtac tattagaaag acacaataca taaaactggt gacccatcgt tcgtaggctg 35220

tatgctttgg cattacctag ttgagagcct tcaaaattaa tttgctgttt gacgaaagga 35280

gtggcaatct cttctggttt aaaatccacc atcatccaaa cagaacgttc tccctcacta 35340

gtttgcccca cccagaaaaa cttctggtcg gtttgtaaag cagtttcagg agccgcgcaa 35400

ccaatcgtga ttacagcaga ttcgttacgt aagaaaggag acccgctctc tagggcagcg 35460

tcataaaaca tttcaatgga tgtctgacct agtgctaata aatagttatt ataccgtgca 35520

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tcaatggtgc tggaatggcc acagaaccgc cgataccgaa agagactttc ccattgacaa 36660

aatcggtaca aggtatagta gattcaataa tagcccacag aggcatcccg tccgcctggg 36720

cttccttgat tactgtatcc agtacaaaag ctccgttggt aatctggtag gccgacggag 36780

tttcatcctc cgcgattgct gcgagtttcc ggagggcaga cgtaatgatc tgatcccgag 36840

tcgcatcaaa gaccgacaca ccgctcgttg tcatttatct ccccttattt gatctaatag 36900

taatcgttca accctgtcga atcgttgtcc catttcctgt ttcaactcac gtatatcatc 36960

tttgtgaacg tacttctccc gtgtgtcttg caaatccgct cgaagttcct ccaaacgact 37020

ataaaaggtt ttgagaatcc atcccatggt agccaccaca atgttagaaa ggatcgtaaa 37080

gattgtcatt aaatccatta cgaagcccct ttcacaacgc ccttaacttt ctcatacgta 37140

tgcatcccac cgatacccaa cataccccct aacatcgtca tgatcatttc aaaaggaagt 37200

gtgggcatta caatggcgat actgaacatt tgacctagcc aaaatactag ggggaagaga 37260

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acaagaatac tcgcgtgggc agcttcctgt ttattaatgt ccgcttgcat ttgttgagat 37380

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ccagcaagga tctcaagtaa tgaccccata cccttctcct aaataagttt caccgagtta 37560

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tcagggattc tacccacgac ttccgatgtt ctttgcccgg gggaagtaac caatacgtgt 37680

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gatttccggg gactgagtca attttatctc ccatcgccaa aggcatttga gtgacgttta 37860

gatcccagtc gggtacgtta gcaacgaaat cacgaagaga gaggttctcc tcagcacagt 37920

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caggttctgt catatcatac gaaacgtcgt gaatgatata cttaccgggg gcgaggatgg 38340

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actggtcagt agtgtggatg tggcgttgtt agtaaattgt tgttgttcaa gagccgacgt 39480

aggcatatta agctcccgtg aaagaaatgg tccacacgat atttagagtg tcaccagcat 39540

ttttaattac actaatacta ttgctgcggg agaacatcgt gcctccgaca ctggcattaa 39600

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acctgtccac tcttttcgaa tttcagtggc cttgaacttc tctccacatc gatcacaaat 40500

aacgttccac gacccttgta gaagataagt tctcgacata aattatccgt aataaatgta 40560

aacagtaccg cctgtcggag acacaaacat accttctttc gattgtacca tatggctaaa 40620

atcgaaaaat aacggttctg ttccagcatt ctcagcctga aagattactg gtgccgtagc 40680

atcaatacca ttatagacaa ttacactggc tcctttttct aacaacaccg atttaagata 40740

ggttgtccca ttaaataaaa gggtgtctgc tgtcaaaggt ccactagaaa ccgaggagtt 40800

cattgacatg ataccccctt attactggat gaattcgagc gaaacaatcc acggaccacc 40860

tgtagtagag gccgtgcctg tttcagcata cgacatttgc acagtgtaat cggtagtgta 40920

agaattgctg tcaattagcg gaaggcccgc catttgtaca atagttgtcg atgcgccatc 40980

agcaacaaga tccacgacac ccaccgaaat aacagtgttg ttattcatga tttcaatagt 41040

tgcttgtgcc gttgtacccg catccgatga agcagctccc gacaggtata ctcgatacgg 41100

agtagaacct ttcggaaaca ttgctttcac agtatccgta gtatcattac gagtcagttc 41160

tgcaacttta ataagatgct ctttgcccgg aggggtgatc ggggaaatac gtgtcgggta 41220

aagatcagtg gtattaaaac ccattttatt ctcctataaa tgaaaaagaa aggggcacta 41280

aggccccttg ggtttaagcg ccctgagacc cgaacagacc gcgaggatcc gaccagccaa 41340

acgaataacg gctatcggcc ttgaacttcg cgttcgacgt gtcgaaatcg ttatcctgtt 41400

ggaaacgatc cggacgacgt tcaaagtact tcataccatc cttgacgtta gtacggataa 41460

accaggcatc cggatccgtg aggtagtggt taacatgaac accacccggg aaaatacctt 41520

ctgccttaat agcgttcaga tcgttcaggt ccgtacccac acggccttgc gacttcagga 41580

tacggtcagc ttcccacttg agttgcggag ggataatcag cttatccggc atcgccgcga 41640

tcagcagacc acgatcatct cggaacaggg agatatcaat ccaagcctgt tcaagagccg 41700

cttccgacaa gtcagccggg gtcgccagcg tgttcgacca tgtaccacca gcatagttcg 41760

ggtgagctgc attaagcagc gaagcaccgt caccaccaac gtaagcaccg ttaaaggcac 41820

ggttatacac gtttgcaccg atgatttcct tcgtttgacg aatcgaacga gcgagacctt 41880

gagcacgacg ctggcccacg acatcataca gatcgtcttc catgatttct tcagtgatga 41940

tgaaacccag ggcatagacg atgtgctgat agcgagaagt ccaggtttgg ttctccgaat 42000

cgtaagaaat accagcacct tcaggcttga cttgcgccag accgaacgaa gtgatgccga 42060

catcttcttc aaacgcttta cgagaagtat tcttatcgaa aagtttgtcg aactctacgg 42120

gataatcgtt gtattcctta ccataccaag catttacacc aggccagagg gcctttgcaa 42180

aactggcgga agtgataatg ttagccattc tctagcctcc ttaattaaac accaagcgtg 42240

cccgtaccgg acgccagttg gtggttattg attttaacgc gaacctttgc gttcgccgaa 42300

acttcgttct ccggagattg gacaaaatcc agaatcttca gagtcagcgt agcagtggtt 42360

gcagcagtag agaggtctac agtttcaccc gattgacccg tcgaggtcga accaccagca 42420

tcagcatggt tagcgttttg accgacaaca gtcgccgtaa ccgtacccga cacttgagct 42480

tcatacaccg tcgcgggatc atccgccaca tacacataca ttgccaccga ggcaggacga 42540

tactgaggag tattcaggtt ggtcatgatg tattcaacgt tgaccaccga acccacagcc 42600

gccgcaccga cagcagtttt agtaacagcg cggacgccat tcacatccgc attaccatcc 42660

aacgacacca aatcgccgac gaagatcgcc gtcgcattcg acgccgccac aaaatacttg 42720

gtaagttgac cattccaagc agcaccaagt cccgttttag cgggacggaa accattgaca 42780

cgagatacgt ttgccattag ttttctccaa ttataaattt aaaacaatgg caagtatcca 42840

gtgtattaac ctgttcgttt tgcagattgt ttaatatcac catacttccc atcagagcga 42900

tcttgtaaga ttgcattttc tttttcagac aagagagttt gcttcgctcg ttgatcttct 42960

tcataccaat cctttcggat ccgcatcaag atacctttat caccattacc cacctggaca 43020

gttttagctg taccttcagc agaggcaaca tttaaacgag aaactcccac atcttcattt 43080

ccggtcgcaa tttcccaacc atattcttgg agttgttcta cccgaccgtc cttatcagtc 43140

acaaagcgat attcaaaatt atcatctttg ttttttacag acatgcggtt acgcacacct 43200

accggggtac gtgtcgttcg gcctcttggc gcgcgtgcaa cggtttcttt ttcgttagcc 43260

atgttacttt ccttactgta gatcagtata ttgtttcaaa tattcttctt tcgtcataac 43320

accggtacga ataatcgttt ccatgatgcg acgctcttca gaagacatat tagtttccac 43380

tgccttcgca gcggtgggct tagagccacg tcccgcaacc gccgaggggc gttcacgatt 43440

cgtgtttaca aatttttcag ggaacttctt ctttacttca cgctctagca tttgaagtac 43500

ctcaccagga tcttcaccgc tttgggcgag agtgacacca cgagaatctg cccaatcccg 43560

aagcccctca tcacgctcat accaagtatt ccgacctaac cattcttgaa attcttgacg 43620

gcggtcttgt tgaggtatag cttgttgagt ctgtgcttcg tacaaccgat gttgttcatg 43680

aatgttgtca atttgatcgt taatagtttc agcccgatca aaatcaccgt cctcatgtgc 43740

gcgtctgcgc tcggctttaa gttcattaac agcccgttca tatgcttgtt tacggacttg 43800

ttgcatgtcc ttggcaatca tttgaaattg cttttggttc tgtttaattt gtttactctg 43860

ccgctcaatc ttttcataga acggttgcag agtcataaac agttcagcat ttcggaattt 43920

agccggatca ccttcatatt gatcctgggg cttccacccc aattccatcg ctgctaattc 43980

aacttcagta aacgaaggct cattcgtgga agtatcaatg tccacatttg tgtcttcttg 44040

attctcttgt ttaatttgtt cactcataat tagttccctt tcttaaggat acacacaata 44100

tcttcgtcgt ttagtacttg gtacttttga ccgtcatcta aatccgtgac atattttcca 44160

gcgtattttg caaaagcaac tcggtctcct acggcgcacc acggctctcc accgaagtcc 44220

ttaaatgctg tagggccaat ggccatgact tcacctacgt ctaccgcttc ttttcgacgt 44280

tcgatgtcct gacctgcaat ttcaaaaccc ggaatattta cgttgtatgc cttgtcaacc 44340

tcagtaagat caacaactcg gactacaata cgatgaccac aaggaattac tcccattagt 44400

tttctccttc cactcgaaag tttaagatat cacggagggc cgcgatagcc ccccgcagat 44460

agttatcgtt aacaggatca atacctgctg aatacgacaa agattccata caattttcta 44520

aacgttcaga aagttctcga aacaactctt gagttagttc ttgccctttc cactcgtcga 44580

tttctgtctt ggttgcgatg attgtgtctc cttagactgt gctaattttt gccgatgtga 44640

ttcgtcattc tgtcgttgac gttgttggtg cttcacttca gcaatagcaa tatttgctcg 44700

atctttacga ttttggattt cagcttgatt acgtgctttc aatcgatcta attgaatctg 44760

atttgctgtc ttgtaggttt ccatctgctg tttgaattct tgatcacgat tagcaagagc 44820

agacttcatg gacaattcag cttgttttaa ttccgacttc tgttgttcag cttgagcctt 44880

tagttggaat tccatcataa caggatcaac ttcgtcttgc ccttgttggg cagcatcagg 44940

agccaccaaa tcttcccagt tcggaatttc tagagcttcc atcagacgta caatcacctt 45000

cataggatca attaatccgg tcgggaggag ttccatgagg gcttgtgcct tgacgagctt 45060

ttccgtttgc gaaatagctg cgggatcagc gccaggacaa acatcgtaac cagaagaatc 45120

aaaatcagtc ggatcaacag tcgcgtcaat aacaccaaca taggtatcgt actctaagaa 45180

aacctcgttc aaccggaaga gtttcttaaa ctcactttcc aacgaacgat aaatacgctt 45240

gtacacggct gtaaagactt tcataccctg ttcaatagtg gccatcgtgg tagttgccgg 45300

ggtgttttgc ccaggcatct ttcctacgaa gatttccgcc acagaagcga gttcctttcc 45360

agattgaatc aaagcaccca tcaactgaaa gagaacgtta gaaggttctt tactcggaat 45420

aggtacgatc tgtttcttca ggtcatctcc ggtgctattt acagcacgcc attcaccagg 45480

ttgaagacgg gtttccccca tccgtaaccg aagtcccttt ccaataaaac ctgtctgaag 45540

gttatttaaa gtaccagcgt cgatgagctg gttgattaaa gtattaacag attcgttcaa 45600

aggaccgagt aggtggccaa acccaatatc ataaaaacca ccatccggat taggaataaa 45660

gccgtatttg gtgtaatact ggattggatt gatttgaata atctcccctt catcgttagt 45720

aatgatggat tgatcatcaa atcgcgcaga gattcgtaaa actttttggc ttcccaggtc 45780

caccgtaaca atgtacggtt ccggataacc atcgtcattt aagtctaaga acgtatgttg 45840

ttctagaatt aaatacgggg tggtctcatc cgccgaagga ggttcttgat tacgtaaaac 45900

ttccttatga gggggcaata aacccacttg aggagcatga agatcgatgt ctaagtatag 45960

tccggctagt tgtttttcac gaactttccg gggagacatc tcaatctgct cagtaatacg 46020

ttcagcatct tccaaacaag atgcccaata attaattaca aggtttttcg gtagaacaag 46080

ggtagaacag ttctttttag tgattggatc aaaataagtc ttcttgaaaa gtgttcccac 46140

aatgggcagc attaacagaa gtttgtccat ctcttcttcc caaccataca tttcgtacat 46200

caactggtac gacatgtagt cagaaatacg ttcagccttg tcctttttag ctccagtggg 46260

gtctttacca ataaccttag ttttaacaat cttcccgtca gaaggaatta gacttggata 46320

tgcacgggca ttgaattgca tcgcagctgt ggaaataagg ggatacttta cgttcgaggc 46380

tttgggccac gggtacacct tttcttccac tacctgagat gctagtttag tccaatcttc 46440

aatctgacgt tcccaaagtt cgcgagagct taaatcatcg ttgtaccctt ggataacatc 46500

ctgggcgatt ttgaccagtt cttgatcatc caaatcttca gcaatattca ctgtttcgat 46560

gaatgcacga agttccgggg gttgttgggg ggcttgttgg tcctcaagag caggagcaaa 46620

tccagccggt acttgaggaa tattccggaa accagctggg tccattgccc ctaactgggt 46680

cggatcaagt ccagcagcca tttgtccgtt agaaagaccg actccttgat tatctcctaa 46740

tgccattctt tagtatcccg ttgttaggga gcgaccatcc gccccttcgt ttgattcgtt 46800

ataatcttcc caaaattcag cctcttcttc ctcagccggg gtaggagcct caatcagaac 46860

atccaacatc atgccaagat acgcaaatgc gtctacttgg tcatcatgct tatcccgagg 46920

aaaccgcata cactcatctt caaaggtttg ataccattcg ccgtctttgt caaatttgac 46980

accattagct ctcatccttg cctggataga gcgagcacgg gcgattttat ccttgttcat 47040

gtgcttcatt gggtgaagat taatataatt attttgcttg atcatctctt cccgcaggaa 47100

ggggcctata gccttactga tctgcatttc ttcaatacca atagcaaccg gattgtatag 47160

tctttgaatt gtaaggagtg tatcgacaat atcacgacca tccaagcggt cccgaataac 47220

gttcttgacg tggattcgtt tgttgtcgtc caccccggca atcacgaata cactgtagtc 47280

agcacgttct ttttcagaaa tagctaagtc agctgtaacg taatagttga gggttttgga 47340

actgtcttct tttgtgatag gcaaaaagtc ttgccgtttg aaataagtat tggcttcatc 47400

aagaggccgg ttaaggtatt cttgggagta gaggtcagtt atcccctgat cggcgaacat 47460

agtgtaaaga tcgtcaaacg tctctttaga catacgctct ggccacagaa tagctgagaa 47520

atcggggttg tgtgcacggt aacgcacaga cttccacgga gttctataat ccgtccaaac 47580

ctttaattcg tcttctttga tgtacttaat ttttttgtta gcacggagtc gttgggtttg 47640

actttccggc ataaaggatt ctaacagaga gtccatatgc aagatcgttc cgaccacccg 47700

gatgatacca tgttgagcaa gcattggaag aagagccgca gagaaccagt tacggaactt 47760

ctcacgacga tccttgttca tgactagttc gtcgttctcc atgtcgtcac agatgacgat 47820

atctggacgt gctccgttcc agttcatccc acgtagcttt tgttctgccc cttttgccat 47880

aatccggaac atatgtccgt cgttacacgc cacgatgatg tccgtttggg aatctttgat 47940

aaaatcaaca tccccccttt cattcaatcg tagatcgaag agcttggcga tatcgggatt 48000

atctgcgatt tcagtacgca tgttacccaa gaacatggca gcctgtcctt ccgtgtccga 48060

tacaataacc atataacgtc gttgtcgaaa caaaagggtg gctaagccat agcccacagt 48120

aacagcagta gtcttggcgt gtccccgggg ggcggcaata gctacaaatt tattctctga 48180

gcaacatagt tcccaccact catagtgaca ttgaggggaa gctgtagccc cgtcaaatcg 48240

gggagcgaaa caagaaccga ccaaccccgc tacgacagag gctgttagtt tcatcgtcct 48300

ttcttactcc gttgggattt catactgcca tccgaattac gggaaaaact gcgattagct 48360

gttttagagg taactcgcgt atttgattta gaattggaac cacccttgct tagggggcgg 48420

atatgatcca gatcctttcc gtcaccctta gaggttcgac cgtcttcatt ggccttccgg 48480

cgtgccatcg tccgaaggga acgattcttc cgttgttccg gtttcgagtt gtaaagctcg 48540

ttctcccgtt tgtaatcccg tttcccgttc ttcatgtaag gcattgtctg gcgtctccgt 48600

gatataaata acatctgtaa cttcgacaga tggtttttca ttcgttaccc gttcagctaa 48660

ggaagcaaac cgttctgcta gttcagcaaa cttggcggta gtgctttgct ctaattcggg 48720

agcctcgact tgtttgttat cgaggacttg tgtcttgtcc accatatcca tggcgacttt 48780

gtgagcatct ttcatactca ccgggactcg aagcatctga cccgatcgag agtcgtactt 48840

ccaatcccca tgttccattc gatcattgat aaccgttaaa gatttctcaa cgattcgctt 48900

taggttcgag gacagcttca tgtcctcttg aactcggagt tccttttcaa gttgtttaaa 48960

ccactctttg gatttccaaa cacgagcagt cacttcagga atttttaacg tagcagcact 49020

aagagctaag tttcctgtga gcaggtacat ctgaacaagt tcaattttct gttcatccga 49080

atagtgatgt tttccttgac ccggtttttt acgggtggta cgaacagcac gacgatgaac 49140

atcagaatct gacagcgcca taatttcctc cttttccact gatggaatta attctaaaat 49200

ttacaccata tactaatatt ataccatata ttatttaaaa agtcaaggaa tatttaattt 49260

taccaccaat tatttataaa tataccaccg agtattaaat acttgacttt tgttttcttt 49320

tatgttataa tatattattt atatattaat atatatatat tatataatat atattattta 49380

tattatatat tattatttat ttatatataa tatatttatt aaaagaagaa agaaagaaag 49440

tatcgtacac ccattaaggg tgtcctcgcg agcctcagcg agcgatgcat gaaagtcaag 49500

aacaatatgc aaaataggca gcaatacact ttatagggta cctaggattc ctaaaactat 49560

acgcagaatg ttaaggtggt tccccccaca atccagccac c 49601

Claims (3)

1. 一种从自然界分离的短尾噬菌体科噬菌体Bor-BRP-1，该噬菌体Bor-BRP-1 的保藏号为 KCTC 12705BP，其特征在于，

其具备特异性杀灭支气管败血鲍特菌的能力并具有用序列号1标示的基因组。

2.一种用于防止支气管败血鲍特菌感染及治疗支气管败血鲍特菌感染的组合物，其特征在于，

以权利要求1所述的噬菌体为有效成分，所述噬菌体Bor-BRP-1的保藏号为 KCTC12705BP。

3.根据权利要求2所述的用于防止支气管败血鲍特菌感染及治疗支气管败血鲍特菌感染的组合物，其特征在于，

所述组合物以制造消毒剂或饲料添加剂的用途使用。

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