KR20100115425A

KR20100115425A - 기능성 음료

Info

Publication number: KR20100115425A
Application number: KR1020090033976A
Authority: KR
Inventors: 이이한
Original assignee: 이이한
Priority date: 2009-04-20
Filing date: 2009-04-20
Publication date: 2010-10-28

Abstract

본 발명은 송이버섯 유래의 신규한 기능성 음료에 관한 것으로, 특히 송이버섯 알코올 추출물을 이용하여 버섯 균주를 발효시킴으로써 버섯의 효능을 추가하고 동시에 기존 송이버섯 성분의 개량을 통해 기능성을 더욱 향상시킬 수 있는 송이버섯 유래의 신규한 기능성 음료에 관한 것이다.

기능성 음료, 송이버섯 알코올 추출물, 버섯 발효

Description

기능성 음료 {Functional drinks}

본 발명은 송이버섯 유래의 신규한 기능성 음료에 관한 것으로, 보다 상세하게는 송이버섯 알코올 추출물을 이용하여 버섯 균주를 발효시키는 것을 특징으로 하는 송이버섯 유래의 신규한 기능성 음료에 관한 것이다.

전세계적으로 고령화 사회가 빠르게 진전되고, 또 고지혈증, 당뇨병, 고혈압 등 생활습관 병이 크게 증가에 따라 건강에의 관심이 매우 높아지게 됨으로써 각종 식품소재를 대상으로 한 기능성이 현저히 주목받게 되었다.

이 중에서도 대부분이 담자균류(Basidiomycetes)인 버섯은 전 세계 각지에서 지역의 식문화에 깊게 침투한 대표적인 식품소재로서 향이나 식감이 좋을 뿐 아니라 예로부터 건강유지나 자양강장에 효과적인 것으로 인식되어 식용, 약용 등으로 가장 널리 유통되고 있는 기능성 소재의 하나로 널리 알려져 있다. 또, 최근에 와서는 이들 버섯의 각종 약효성분이 규명되고, 그 효과도 보고되어 이제 버섯 유래 생리활성 물질의 개발과 이용은 산업적인 중요과제로 등장하기에까지 이르렀다.

특히, 주류에서도 이러한 건강, 웰빙 트렌드는 기능성 주류시대로 전환되어 버섯이 저도수의 기능성 주류 제조의 제조원이나 제조수단으로도 이용되게 되었으 며, 점차 그 산업적 생산체제가 확대되고 있는 실정이다.

그동안 송이버섯 등의 침출주를 비롯하여 과일이나 곡류 대신 버섯의 자실체나 균사체를 당화한 후 효모로 발효시킨 발효주가 일부 제조, 판매되었는데, 최근에는 버섯에서 알코올 탈수소 효소를 지니는 것이 발견되어 효모 대신 신령버섯, 표고, 느타리, 상황 등 버섯의 알코올 생성능을 이용한 곡주(청주) 등의 발효주도 시판되게 되었고, 와인이나 맥주의 제조도 보고되었다.

와인, 맥주, 청주 등의 효모에서 양조되는 알코올 음료에 대해서 버섯을 이용해도 생산하는 것이 가능하며, 이와 같이 버섯으로 발효한 알코올 음료에는 선용활성이나 항트롬빈(thrombin) 등의 각종 기능성이 인정되고, 면역력의 향상이나 심근경색, 뇌혈전 등 혈전증의 예방 가능성이 시준되었으므로 일상의 생활로부터 이들의 질병을 예방하는 차원에서 금후 버섯을 활용한 건강기능성 주류의 개발에 대한 연구 필요성은 매우 높다고 볼 수 있다.

송이버섯(Tricholoma matsutake Sing.: pine-mushroom)은 담자균아문, 자실층균강, 주름버섯목, 송이과, 송이속에 속하는 활물 기생균으로, 주로 소나무 뿌리에 기생하고 균근을 형성하여 영양을 취하는 생활을 하고 있다. 송이버섯은 인공재배되지 않고 특정환경의 자연상태에서만 자실체를 형성하므로 대단히 귀하고, 값이 매우 비싸다. 또, 철분과 칼슘 등 무기질 성분을 함유하며, 비타민 B군이 풍부하고, 맛, 향 및 식감 등이 다른 버섯보다 뛰어나므로 전세계적으로 가장 값진 버섯종의 하나로 인식되고 있다. 이 버섯은 혈액순환과 콜레스테롤 저하작용을 가지므로 심장병, 당뇨병 및 고지혈병 등의 성인병 예방효과를 가지며, 위와 장의 기능을 도와주고 항산화, 면역조절 및 항암효과를 갖는 것으로 알려졌다.

그동안의 보고에 의하면, 송이는 β-glucan, α-glucan(MPG-1) 등의 항암 및 면역조절 다당류를 함유하며 1-oten-3-ol, methylcinnamate, 2-otenol, octyl alcohol 3-methyl-butanol 등 향기성분, ergosterol 등 steroid 성분 등을 함유하고 있다.

한편, 기능성 주류 시대를 맞이하여 송이버섯을 이용한 주류의 제조도 이루어 졌는데, 예로서 솔래원은 2002년 송이주 생산시설을 완료하고 송이버섯 장기보존법의 원료확보 기술을 바탕으로 독특한 침출, 여과, 숙성 및 blending 기술을 적용하여 침출주로서의 송이주(알코올 함량; 20%, v/v)를 생산, 판매, 수출하고 있다. 반면, 양양 송이발효주(13%)는 효모를 사용한 버섯발효주로 원료에 버섯을 배합기질로 하여 누룩(효모)으로 발효시킨 전통적인 방법의 발효주로 생산되었으며, 중국에서도 이와 유사하게 버섯 균사체 발효액을 당화하고 효모를 접종하여 버섯 술을 제조하고 있다.

하지만 버섯을 이용한 효모 발효주나 효모대신 버섯 균사체를 이용한 발효주 등의 등장으로 이들과 차별화되는 송이주의 개발이 절실하게 되었다.

이러한 측면에서 만약 송이 등 버섯 알코올 추출물을 이용하여 버섯으로 다시 배양하여 발효산물을 얻게 된다면 버섯 발효에 의한 각종 생리활성의 상승 또는 수식(modification) 작용으로 원래의 송이 침출주와는 달리 새로운 형태의 기능성 제품화를 기대할 수 있다. 하지만 이러한 버섯 에탄올 추출물을 이용한 버섯발효와 같은 액체배양은 전혀 보고된 바 없다.

상기와 같은 종래기술의 문제점을 해결하고자, 본 발명은 버섯의 효능을 추가하고 동시에 기존 송이버섯 성분의 개량을 통해 항산화 및 항암 성분의 함량이 크게 증가된 송이버섯 유래의 신규한 기능성 음료를 제공하는 것을 목적으로 한다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 송이버섯 알코올 추출물을 이용하여 버섯 균주를 발효시켜 제조된 버섯 균주체 및 상등액을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 송이버섯 유래의 신규한 기능성 음료를 제공한다.

특히, 상기 버섯 균주는 가노데르마 아플라나툼(Ganoderma applanatum, 잔나비불로초)인 것이 바람직하다.

또한, 상기의 버섯 균주체 및 상등액은 기능성 음료 조성물에 0.1~99 중량%로 포함되는 것이 바람직하다.

본 발명의 송이버섯 유래의 신규한 기능성 음료는 버섯의 효능을 추가하고 동시에 기존 송이버섯 성분의 개량을 통해 항산화 및 항암 성분의 함량을 크게 증가시킬 수 있는 효과가 있다.

이하 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명자는 새로운 기능성 송이주를 개발하고자, 버섯 발효를 이용한 알코올 발효능을 조사였고, 이에 의한 알코올 음료의 가능성을 탐색하였다. 또한, 침출주로 이용되는 송이버섯 알코올 원액을 이용하여 버섯 균주를 발효시킴으로써 버섯의 효능을 추가하고 동시에 기존 송이성분의 개량할 수 있는 송이버섯 유래의 신규한 기능성 음료를 개발하였다.

본 발명의 송이버섯 유래의 신규한 기능성 음료는 송이버섯 알코올 추출물을 이용하여 버섯 균주를 발효시켜 제조된 버섯 균주체 및 상등액을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 한다.

본 발명에서 사용되는 상기 송이버섯 알코올 추출물은 (a) 아가 플레이트 상의 송이버섯 균사체를 맥아추출물 15~25g/L와 펩톤 2.0~7.0g/L로 구성된 멸균배지에 접종하여 30℃에서 24시간 배양하여 액체종균을 제조하는 단계; (b) 0.0001~10% 곡물 분말이 첨가된 멸균수에 상기 (a)단계의 액체종균을 접종하여 15~45℃에서 1~10일간 교반하면서 액체배양하거나 또는 증자한 곡물에 액체종균을 접종하여 고체배양하는 단계; (c) 상기 (b)단계의 액체배양한 송이버섯 균사체를 원심분리하여 균사체와 상등액을 분리하는 단계; (d) 상기 (b)단계의 고체배양한 송이버섯 균사체, (c)단계의 원심분리하여 분리한 송이버섯 균사체와 상등액을 소주 또는 청주 또는 희석한 주정에 첨가하는 단계; (e) 상기 (d) 단계에서 송이버섯 균사체와 상등액을 첨가한 후 하고 5일 이상 숙성시켜 제조할 수 있다.

상기 송이버섯 균사체(Tricholoma matsutake KCTC 6488)는 생명공학연구소내 미생물기탁센터로부터 분양받아 사용하였다.

또한, 상기 송이버섯 균사체의 액체배양과 고체배양은 0.0001~10% 곡물 분말이 첨가된 멸균된 액체배지 또는 증자한 곡물에 접종하여 15~45℃에서 1~10일간 배양하였으며, 바람직하게는 20~35℃에서 2~6일간 배양하였다.

상기 배지에 첨가한 곡물은 쌀, 찹쌀, 보리, 콩, 조, 수수를 각각 단독으로 사용하거나 또는 2종 이상 혼합하여 사용하였다.

또한, 상기 혼합·침출주 제조는 소주, 청주 또는 희석한 주정에 고체배양 또는 액체배양한 송이버섯 균사체를 0.0001%(w/v)이상 첨가하였으며, 바람직하게는 0.001 %(w/v)이상 첨가하였다.

또한 본 발명에서는 송이버섯 알코올 추출물을 이용하여 버섯 균주를 발효시키기 위해, 10종의 버섯 균주를 선별하여 액체배양에 의한 ADH 활성을 측정하고, 이를 통하여 ADH 활성이 우수한 균주를 선정하고, 이를 본 발명에 사용하였다.

상기 10종의 버섯 균주는 Phelinus linteus, Hericium erinacium, Lentinus edodes, Cordiceps Militaris, Inontus obiliquus, Flammulina velutipes, Grifola frondosa, Ganoderma applanatum, Agaricus blazei, Tricholoma matsutake를 사용하였으며, 최종 가노데르마 아플라나툼(Ganoderma applanatum, 잔나비불로초)을 선정하여 본 발명에 사용하였다.

상기 가노데르마 아플라나툼(G. applanatum)은 한국생물자원센터(균주번호: KCTC 6281)에서 분양받아 사용하였다.

상기 가노데르마 아플라나툼(G. applanatum)은 호기적 또는 혐기적 조건에서 모두 알코올 발효능을 가지며, 특히 정치 또는 진탕 배양에 비해 진탕배양 후 정치배양하는 방법으로 배양 시 알코올의 수율을 향상시킬 수 있다.

또한, 상기 가노데르마 아플라나툼(G. applanatum)은 송이버섯 알코올 추출물을 이용하여 발효시킬 경우, 고체배양과 액체배양이 모두 가능하나 가노데르마 아플라나툼(G. applanatum)의 액체배양 중 송이버섯 알코올 추출물의 첨가시기를 늦출수록 균사생육이 잘 이루어지는 특징이 있다. 이때, 송이버섯 알코올 추출물의 첨가시기는 가노데르마 아플라나툼(G. applanatum)의 액체배양 1일 이후부터 가능하며, 첨가시기나 늦어질수록 균사생육이 더욱 우수하게 된다.

상기와 같이 송이버섯 알코올 추출물을 이용하여 가노데르마 아플라나툼(G. applanatum)을 발효시켜 제조된 버섯 균주체 및 상등액은 본 발명의 기능성 음료에 유효성분으로 포함되는데, 이때 상기 가노데르마 아플라나툼(G. applanatum) 버섯 균주체 및 상등액은 기능성 음료에 0.1 내지 99 중량%로 포함되는 것이 바람직하다. 그 함량이 상기 범위내일 경우에는 가노데르마 아플라나툼(G. applanatum) 버섯의 효능과 송이버섯 성분의 개량을 통한 항산화 및 항암 성분 함량의 증가에 있어 더욱 좋다.

이하에서는 실시예를 들어 본 발명에 관하여 더욱 상세하게 설명할 것이나. 이들 실시예는 단지 설명의 목적을 위한 것으로 본 발명의 보호 범위를 제한하고자 하는 것은 아니다.

[실시예]

실시예 1. 버섯 균주 선별

본 실시예에서는 액체배양에 의한 ADH 활성이 우수한 버섯 균주를 선별하기 위하여, 강원대학교 공과대학 생물공학과 생물신소재연구실에 보관 중인 총 10종의 버섯(Phelinus linteus, Hericium erinacium, Lentinus edodes, Cordiceps Militaris, Inontus obiliquus, Flammulina velutipes, Grifola frondosa, Ganoderma applanatum, Agaricus blazei, Tricholoma matsutake)을 P.D.A.(Potato Dextrose Agar) 평판배지에서 28℃로 6일간 배양한 후 4℃에서 보존하였고, 3개월마다 계대배양하면서 실험에 사용하였다.

각 버섯 균주는 하기 표 1 및 표 2와 같이 최적 배지로 알려진 배지를 이용하여, 표 1 및 표 2의 최적의 조건을 사용하여 다음과 같이 배양하였다.

즉, P.D.A. 평판배지에서 생육한 균사체를 직경 5㎜의 stanless steel pipe로 mycelium disk를 만든 다음, 이 disk 5~7개를 배지 50mL을 넣은 250mL 삼각 플라스크에 접종하였다. 각 버섯의 최적 온도에서 7일간 배양한 다음, 다시 종균용 배지 50mL을 함유한 250mL의 삼각플라스크에 5%(v/v)의 전 배양액을 접종하였고, 각 최적온도에서 7일간 진탕 배양하였다. 이 때, 전 배양액은 균질기(Heidolph Co., DIAX 600)로 1분 동안 균질화시켜 본 배양의 접종용으로 사용하였고, 매 실험마다 새로이 배양하여 사용하였다.

Mushroom	Ingredient Concentration(g/L)		Temperature(℃)	pH	r.p.m (flask)
Phelinus linteus	Glucose Peptone Yeast extract	20 2 6	30	6.0	100~150
Hericium erinacium	Glucose Yeast extract Malt extract Polypeptone KH2PO₄ MgSO₄·7H₂O	30 2 10 2 2 1	30	5.5	100
Lentinus edodes	Glucose Yeast extract KNO₃ KH2PO₄ MgSO₄·7H₂O	40 4 1 0.5 0.5	25	6.3	100~150
Cordiceps militaris	Glucose Y.E. KNO₃ KH2PO₄ MgSO₄·7H₂O	30 5 1 0.5 0.5	25	7.0	100
Inonotus obiliquus	Glucose Yeast extract MgSO₄·7H₂O	20 5 1	25	7.0	120

Mushroom	Ingredient Concentration(g/L)		Temperature(℃)	pH	r.p.m (flask)
Flammulina velutipes	Sucrose Y.E. KH₂PO₄ MgSO₄·7H₂O	30 3 1 1	20	6.0 ~7.5	125
Grifola frondosa	Dextrose M.E. Y.E.	4 10 4	25	5.0	120
Ganoderma aplanatum	Y.E. Dextrose KH2PO₄ K2HPO₄ MgSO₄·7H₂O Peptone Sucrose Csamino acid	10.0 30.0 0.46 1.0 0.5 4.0 20.0 5.0	30	5.4	100
Agaricus blazei	Glucose Y.E. MgSO₄·7H₂O KH₂PO₄	20 5 1 2	25	5.5	150
Tricholoma matsutake	Glucose Y.E. Soytone	20 1.5 1.5	25	5.2	150

상기와 같이 배양한 각각의 버섯 균주로부터 생성된 NADH양을 측정하였다. 효소 활성 단위(Unit)는 반응 1분당 1μmol의 NADH 형성을 촉매하는 양으로 정의하였으며, 하기 수학식 1에 의해 산출하였다.

한편, 비활성(Specific activity)은 단백질 1mg당 효소활성 단위(Unit/mg protein)로 산출하였고, 이때, 단백질의 량은 표준물질로서 Bovine serum albumin을 사용하여 Lowry 등의 방법으로 측정하였다. 이 값을 이용해 비활성은 하기 수학식 2에 의해 산출하였다.

실험결과, 조효소 1mL 당 ADH 활성은 가노데르마 아플라나툼(G. applanatum; 잔나비 불로초)이 127.6Unit으로 가장 높았고, P. linteus(상황) 역시 117,10Unit으로 매우 높은 활성을 보였다. 그러나 비활성은 상황(100.09U)>표고(75.56U)>신령버섯(67.52U)>동충하초??잔나비 불로초(48.64-48.34U)>차가버섯(30.29U)>잎새버섯(26.27U)의 순이었고, 팽이, 송이 및 노루궁뎅이는 10U 이하의 매우 낮은 활성을 나타내었다.

따라서, 본 발명에서는 가노데르마 아플라나툼(G. applanatum; 잔나비 불로초)을 선별하여 이하의 실험에 사용하였다.

실시예 2. 가노데르마 아플라나툼( G. applanatum )의 액체배양시 경시 변화 측정

30℃에서 3~9%(v/v)로 접종비를 달리하여 가노데르마 아플라나툼(G. applanatum)을 정치 또는 진탕하면서 액체배양 중의 pH 및 균사생육의 경시변화를 살펴보았다.

진탕배양(100rpm)의 경우 접종비에 상관없이 배양 경과에 따라 pH는 아마도 유기산 생성 등에 의해 서서히 감소하여 초기 pH 5.7로부터 배양 5~7일 후 pH 3.5 내외까지 감소하였다가 이후 다시 증가하는 경향을 보였으며, 대체로 접종비가 클수록 그 경향은 더욱 커짐을 보였다. 또, 균사체 생육의 경우도 접종비에 상관없이 배양 3일 이후부터 서서히 증가하였으며, 접종비가 증가할수록 더 큰 균사체 생육을 나타내었다.

반면, 정치배양의 경우는 배양시간 경과에 따라 미미하게 pH가 감소하였고, 균사생육이 거의 없었으며, 접종비 5%에서 최대 균사생육을 보였다. 하지만 진탕배양에 비하면 거의 1/3 수준에 불과하여 호기적 조건하에서 균사생육이 양호함을 확인할 수 있었다.

그러나 ADH의 경시변화를 살펴보면, 정치 및 진탕배양 시 모두 배양 3일 이후부터 ADH 활성이 크게 증가하기 시작하여 배양 7일까지 계속 증가하였으며, 배양 7일 후 비활성은 정치 및 진탕 배양 시에 각각 약 70 및 50unit에 달하여 정치배양시에 진탕 시보다 더 높은 활성을 나타내었다. 따라서 가노데르마 아플라나툼(G. applanatum)은 호기적 조건에서 잘 생육하나 ADH 생성은 혐기적 조건에서 더 잘 생성되었으며, 호기적 조건에서도 생성됨으로써 혐기적은 물론 호기적 조건하에서도 에탄올 발효가 가능함을 보였다.

실시예 3. 송이버섯 에탄올 추출물을 이용한 가노데르마 아플라나툼( G. applanatum )의 고체배양

송이버섯 에탄올 추출물을 이용하여 가노데르마 아플라나툼(G. applanatum)을 다음과 같은 방법으로 고체배양하였다.

본 실험에 사용한 송이버섯 에탄올 추출물(45%, v/v)은 (주)솔래원의 침출주 원액을 사용하였다. 또한, 가노데르마 아플라나툼(G. applanatum)은 한국생물자원센터(균주번호: KCTC 6281)로부터 분양받아 사용하였으며, P.D.A.(Potato Dextrose Agar) 평판배지에서 28℃로 6일간 배양한 후 4℃에서 보존하였고, 3개월마다 계대배양하면서 실험에 사용하였다.

본 실험에 사용한 기본배지는 상기 표 2과 같으며, 배양 방법은 상기 실시예 1에서 언급한 대로 250mL 플라스크를 사용하여 working volume 50mL, 접종비 5%, 온도 30℃, pH 5.4, 진탕속도 100rpm의 조건하에서 실시하였다. 다만, 고체배양의 영향을 검토하기 위하여 대조구로 P.D.A. 또는 한천과 여러 농도(%, v/v)의 송이버섯 에탄올 추출물을 넣은 평판배지에서 30℃로 7일간 평판배양하였다.

실험결과, 가노데르마 아플라나툼(G. applanatum)은 대조구인 P.D.A. 배지에서는 균사가 직경 9 cm의 평판 전체 부위에 고르게 활착되었으나 한천배지의 송이버섯 에탄올 추출물을 1~9%(v/v) 첨가한 처리구에서는 전혀 생육되지 않았다. PDA 배지에 송이 에탄을 추출물을 첨가한 경우는 가노데르마 아플라나툼(G. applanatum)은 1~3% 에탄올 추출물에서 생육을 보였다. 특히, 가노데르마 아플라나툼(G. applanatum)은 3% 에탄올 농도에서도 대조구와 거의 비슷한 생육환을 나타내어 잘 생육하며, 거의 저해를 보이지 않았다.

실시예 4. 송이버섯 에탄올 추출물을 이용한 가노데르마 아플라나툼( G. applanatum )의 액체배양

상기 실시예 3에서 송이버섯 에탄올 추출물의 영향을 검토하기 위하여 기본배지에 송이버섯 에탄올 추출물의 농도를 각각 0, 1, 3, 5, 7, 9%(v/v)로 달리하여 첨가하였으며, 또한 액체배양 중 송이버섯 에탄올 추출물의 첨가시기를 배양 0, 1, 3, 5, 7일 후로 달리 첨가하여 실험하였다.

먼저, 송이버섯 에탄올 추출물의 농도를 달리 첨가하여 액체배양한 경우, 기본 배지하에서는 배양 2일 후 hairy pellet의 형태로 자라기 시작하여 배양 6일 이후 최대 크기의 rough pellet 형태를 유지하였다. 배양 초기(0일)에 송이버섯 에탄올 추출물을 기질로 첨가한 경우는 1% 에탄올 농도인 경우는 배양 5일 후부터 pellet이 성장하여 7~9일에 대조구와 비슷한 형태를 나타내었으나, 이상의 에탄올 농도에서는 균사생육이 거의 이루어지지 않았음을 볼 수 있다. 특히, 3% 이상의 고농도 알코올에서 저해가 심하였다.

이는 고체배양에서와 마찬가지로 송이버섯 에탄올 추출물을 기질로 한 가노데르마 아플라나툼(G. applanatum)의 액체배양은 에탄올 자체 또는 항균성 물질과 같은 송이 추출물 성분에 의한 생육의 저해 현상이 일어나는 것으로 생각되며 따라서 송이버섯 에탄올 추출물을 초기 기질로 사용하는 액체배양의 수행은 이루어지지 않는 것으로 판단되었다.

한편, 액체배양 중 송이버섯 에탄올 추출물의 첨가시기를 달리하여 액체배양한 경우에는, 배양 초기(0일)에 송이버섯 에탄올 추출물을 첨가한 경우는 다당의 생성이 없었다. 그러나 1일 및 3일 때 첨가한 경우는 미미하게 생성되었고, 배양 5일 및 7일째 첨가한 경우는 대조구보다도 더 많은 량의 다당을 생성하였다. 따라서 균사 생육의 경향과 마찬가지로 첨가시기를 늦출수록 다당 함량도 증가하여 primary 삼물로서의 특징을 나타내었으며, 최대값은 배양 5일 또는 7일째 첨가한 경우로 배양 종료일인 15일에 약 6 g/L로 2배 이상이나 향상되었다. 아마도 이는 송이버섯 에탄올 추출물에 의한 세포막 구조의 변형과 이에 따른 세포막 투과성의 변화에 기인하는 것으로 생각된다.

따라서, 송이버섯 에탄올 추출물을 이용하여 가노데르마 아플라나툼(G. applanatum) 버섯 균주를 배양하게 되면 다당 함량이 증가됨으로써 송이의 다당류와 함께 생리활성 물질로서의 항암 다당류를 다량 포함하여 이에 의한 생리활성을 기대할 수 있을 것임을 예측할 수 있었다.

실시예 5. 송이버섯 에탄올 추출물을 이용한 가노데르마 아플라나툼( G. applanatum )의 배양 생성물의 생리활성 측정

상기 실시예 4에서 수득한 가노데르마 아플라나툼(G. applanatum) 의 액체배양 생성물을 원심분리(8,000ㅧg, 15분)하여 얻은 배양여액을 시료로 사용하여 항산화 활성과 혈전용해 활성을 측정하였다.

먼저, 항산화 활성은 DPPH free radical의 소거활성(전자공여능)에 대한 chelating 효과로서 검정하였다.

전자공여능(electron donationg ability, EDA)은 Blois의 방법을 일부 변형 하여 측정하였다.

즉, 시료 0.2mL에 4ㅧ10^-4M DPPH(1,1-diphenyl-2-picryl hydrazyl, Sigma Co., USA) 용액 0.8mL를 가하여 10초 동안 진탕하고 상온에서 10분간 방치 후 517nm에서 흡광도를 측정하였다. 이때, 전자공여능은 시료 첨가구와 무첨가구의 흡광도 차이를 구하여 하기 수학식 3에서와 같이 DPPH 유리 라디칼 소거능을 계산하고 백분율로 표시하였다.

DPPH radical scavenging activity(%) =

(여기서, A: 대조군의 흡광도, B: 시료 첨가군의 흡광도임)

실험결과, 송이버섯 에탄올 추출액(에탄올 함량; 1~9%, v/v)의 총 페놀성 화합물(GAE)은 1%의 경우 125mg/L이었고 에탄올 농도에 따라 비례적으로 증가하여 241mg/L이었다.

반면, 송이버섯 에탄올 추출물을 이용한 가노데르마 아플라나툼(G. applanatum)의 배양 생성물은 460~554mg/L로 약 2~4배의 증가를 보여 버섯발효에 의한 수식효과를 나타내었다.

또한, DPPH 라디칼 소거능을 조사한 경우에도 송이버섯 에탄올 추출물은 에탄올 함량에 따라 약 27~57%의 소거능을 나타내었으나, 송이버섯 에탄올 추출물을 이용한 가노데르마 아플라나툼(G. applanatum)의 배양 생성물은 약 68~81%로 역시 발효수식의 효과를 나타내었다.

실시예 6. 송이버섯 유래 기능성 음료 제조

상기 실시예 3에서 송이버섯 에탄올 추출물을 이용하여 가노데르마 아플라나툼(G. applanatum)을 액체배양하여 생성된 생성물 50 중량% 및 정제수 50 중량%를 혼합하여 음료를 제조하였다. 이때, 비교구로는 송이버섯 에탄올 추출물 50 중량% 및 정제수 50 중량%를 혼합하여 제조한 음료를 사용하였다.

상기 제조한 건강음료를 연령과 성별을 달리한 20명의 관능검사원을 대상으로 각각 동일한 조건으로 마시게 한 다음, 맛, 향 및 전체적인 선호도에 대해 5점척도법(아주나쁘다(1점), 나쁘다(2점), 보통이다(3점), 좋다(4점), 아주좋다(5점))으로 평가하고, 그 평균값을 하기 표 3에 나타내었다.

구분	송이버섯 에탄올 추출물을 이용하여 발효시킨 G. applanatum 생성물 함유 음료	비교구
맛	5	3
향	4.5	4
전체적인 선호도	4.75	3.5

상기 표 3에 나타낸 바와 같이, 본 발명에 따라 송이버섯 에탄올 추출물을 이용하여 가노데르마 아플라나툼(G. applanatum)을 발효시켜 생성된 생성물을 함유하는 음료의 경우 송이버섯 에탄올 추출물을 함유하는 음료와 비교하여 맛, 향 및 전체적인 선호도에 있어서 우수함을 확인할 수 있었다.

비록 본 발명이 상기에 언급된 바람직한 실시예로서 설명되었으나, 발명의 요지와 범위로부터 벗어남이 없이 다양한 수정이나 변형을 하는 것이 가능하다. 또한 첨부된 청구 범위는 본 발명의 요지에 속하는 이러한 수정이나 변형을 포함한다.

Claims

송이버섯 알코올 추출물을 이용하여 버섯 균주를 발효시켜 제조된 버섯 균주체 및 상등액을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 송이버섯 유래의 신규한 기능성 음료.
제 1 항에 있어서,

상기 버섯 균주는 가노데르마 아플라나툼(Ganoderma applanatum, 잔나비불로초)인 것을 특징으로 하는 송이버섯 유래의 신규한 기능성 음료.
제 1 항에 있어서,

상기 버섯 균주체 및 상등액은 기능성 음료에 0.1~99 중량%로 포함되는 것을 특징으로 하는 송이버섯 유래의 신규한 기능성 음료.
제1항에 있어서, 상기 송이버섯 알코올 추출물은,

(a) 아가 플레이트 상의 송이버섯 균사체를 맥아추출물 15~25g/L와 펩톤 2.0~7.0g/L로 구성된 멸균배지에 접종하여 30℃에서 24시간 배양하여 액체종균을 제조하는 단계;

(b) 0.0001~10% 곡물 분말이 첨가된 멸균수에 상기 (a)단계의 액체종균을 접종하여 15~45℃에서 1~10일간 교반하면서 액체배양하거나 또는 증자한 곡물에 액체 종균을 접종하여 고체배양하는 단계;

(c) 상기 (b)단계의 액체배양한 송이버섯 균사체를 원심분리하여 균사체와 상등액을 분리하는 단계;

(d) 상기 (b)단계의 고체배양한 송이버섯 균사체, (c)단계의 원심분리하여 분리한 송이버섯 균사체와 상등액을 소주 또는 청주 또는 희석한 주정에 첨가하는 단계;

(e) 상기 (d) 단계에서 송이버섯 균사체와 상등액을 첨가한 후 하고 5일 이상 숙성시켜 제조되는 것을 특징으로 송이버섯 유래의 신규한 기능성 음료.