KR20080110955A - 간 기능 개선제 - Google Patents

Abstract

본 발명은 오르니플라빈을 유효 성분으로서 포함하는 간 기능 개선제에 관한 것이다.

오르니플라빈, 트리프레닐페놀 화합물, 플라스미노겐 활성화, 간 기능 개선제

Description

간 기능 개선제 {LIVER FUNCTION AMELIORANT}

본 발명은 오르니플라빈을 유효 성분으로서 포함하는 간 기능 개선제에 관한 것이다.

진균 스타키보트리스 마이크로스포라(Stachybotrys microspora)로부터 유래하는 트리프레닐페놀 화합물인 오르니플라빈은, 플라스미노겐 활성화 촉진 작용을 갖는 것으로 알려져 있다(일본 특허 공개 제2004-224737). 보다 구체적으로는, 오르니플라빈은 선용 인자인 플라스미노겐에 결합하여 그 구조를 변화시켜, 플라스미노겐 활성화인자에 의한 플라스미노겐의 플라스민으로의 변환을 촉진한다. 또한, 오르니플라빈은 플라스미노겐의 피브린에의 결합을 촉진한다. 오르니플라빈은 생체 내에서 폐색전 모델 래트의 폐색전 혈전의 용해를 촉진한다.

그러나, 오르니플라빈의 플라스미노겐 활성화 작용 이외의 작용은 알려져 있지 않았다.

<발명의 개시>

<발명이 해결하고자 하는 과제>

본 발명의 목적은 신규한 간 기능 개선제를 제공하는 것이다.

<과제를 해결하기 위한 수단>

본 발명자들은 상기 과제를 해결하기 위해 예의 노력한 결과, 오르니플라빈이 간 기능 장애를 개선할 수 있다는 것을 발견하고, 본 발명을 완성시켰다.

따라서, 본 발명은 오르니플라빈을 유효 성분으로서 포함하는 간 기능 개선제, 간 기능 개선제의 제조를 위한 오르니플라빈의 용도, 및 오르니플라빈을 투여하는 것을 포함하는, 간 기능 개선 방법에 관한 것이다.

오르니플라빈은, 하기의 화학식을 갖는다.

상기 화합물은 염으로 할 수 있는데, 그러한 염으로서는 바람직하게는 나트륨염, 칼륨염, 마그네슘염 또는 칼슘염과 같은 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속의 염; 트리에틸아민염, 트리메틸아민염과 같은 유기 염기의 염을 예시할 수 있으며, 그러한 염도 본 발명에 포함된다. 또한, 수화물이나 용매화물과 같은 염도 본 발명에 포함된다. 또한, 본 발명의 화합물은 에스테르의 형태로도 사용할 수 있다. 예를 들면, 탄소수 1 내지 10의 알코올 또는 카르복실산 등, 바람직하게는 메틸알코올, 에틸알코올, 아세트산 또는 프로피온산 등이, 본 발명의 화합물의 약학적으로 허용되는 에스테르의 형성에 바람직하다.

오르니플라빈은 스타키보트리스 속 등의 사상균의 대사 산물이며, 해당 균주를 배양함으로써 제조할 수 있다.

보다 구체적으로는, 상세하게는 생산균으로서는 스타키보트리스 속 등의 사상균이 선택되고, 바람직하게는 스타키보트리스 속의 사상균이 선택된다. 특히 바람직한 생산균은 스타키보트리스 마이크로스포라 등이고, 보다 바람직하게는 스타키보트리스 마이크로스포라 IFO30018주이지만, 본 발명은 이러한 균으로 한정되는 것은 아니다.

배지는 생산균의 증식에 적합한 것이라면 임의의 배지를 이용할 수 있지만, 바람직하게는 A 배지이다. A 배지는 글루코오스 20 g, 펩톤 5 g, 효모 엑기스 3 g, 인산이칼륨 3 g, 황산마그네슘 7수화물 1 g을 1 리터의 정제수에 용해하고, 염산 또는 수산화나트륨으로 pH를 5.5로 조정하여 제조할 수 있다.

배지 조성에서 가장 중요한 점은 오르니틴을 배지에 첨가하는 것이다. 오르니틴의 첨가 농도는 0.5 내지 2 mg/㎖가 바람직하지만, 이 농도로 한정되는 것은 아니다. 오르니틴의 첨가 시기는 배양 직후에서부터 배양 3일째까지가 바람직하다. 배양 온도는 25 ℃가 최적이지만, 이 온도로 한정되는 것은 아니다. 배양 시간은 오르니틴 첨가 후 1 내지 6일만에 충분한 생산량이 얻어진다. 통기 교반 조건은, 500 ㎖ 용적 삼각 플라스크에 100 ㎖의 A 배지를 넣어 적당한 통기 마개를 한 경우, 180 rpm의 선회 배양으로 얻어지는 조건이 적당하다. 단지 발효기를 이용하는 경우, 이에 상당하는 조건이 바람직하다.

얻어진 화합물은 필요하다면 통상법, 예를 들면 칼럼 크로마토그래피, 실리카 겔 크로마토그래피 등에 의해 정제할 수도 있다.

본 발명의 화합물의 투여 형태로서는, 예를 들면 정제, 캡슐제, 과립제, 산제 또는 시럽제 등에 의한 경구 투여 또는 주사제, 예를 들면 정맥 투여, 피하 투여, 복강내 투여용 주사제 또는 좌제 등에 의한 비경구 투여를 들 수 있다. 이들 제제는 부형제, 결합제, 붕해제, 활택제, 안정제, 교미 교취제 등의 첨가제를 이용하여 공지된 방법으로 제조된다.

그 사용량은 증상, 연령 등에 따라 상이하지만, 1일 0.01 내지 100 mg/kg 체중을, 통상 성인에 대하여 1일 1회 또는 수회로 나누어 투여할 수 있다.

도 1은 혈장 AST의 측정 결과이다. 각 군 사이의 유의차 검정은 튜키(Tukey)의 다중 비교 검정에 의해 행하고, 대조군에 대하여 유의 수준 0.01로 유의차가 확인된 경우에는 **로 나타내었다. 또한, 정상군에 대하여 유의 수준 0.05로 유의차가 확인된 경우에는 #, 0.01로 유의차가 확인된 경우에는 ##로 나타내었다. 에러 바는 표준 오차를 나타낸다.

도 2는 혈장 ALT의 측정 결과이다. 도면 중의 부호는 도 1과 동일하다.

도 3은 혈장 ChE의 측정 결과이다. 도면 중의 부호는 도 1과 동일하다.

본 발명을 실시예에 의해 구체적으로 설명하지만, 본 발명은 이하의 실시예로 한정되는 것은 아니다.

만성 간염 모델 마우스에서의 간 기능 개선 효과

(1) 만성 간염 모델 마우스의 제작

만성 간염 마우스의 제작은 보그텐(Vogten) 등의 방법(문헌 [J. Mathys Vogten et al, Int J Colorectal Dis(2004) 19:387-394])을 개량한 방법에 의해 행하였다.

약 30 g의 ICR 마우스(6주령, 수컷, 산꾜 라보 서비스)를 고형 사료(라보 MR 스톡) 및 증류수를 자유롭게 섭취시켜 5 일간 예비사육한 후 실험에 사용하였다. 동물 사육은 22 ℃±2 ℃, 습도 60±5％, 광 주기 12 시간 사이클의 조건의 동물 사육실에서 행하였다.

예비사육 후, 사염화탄소(10％ 옥수수유 용액(vol/vol))를 주3회 복강내에 투여하였다. 투여량은 첫회는 330 ㎕/kg, 2회째는 400 ㎍/kg, 그 이후에는 500 ㎕/kg이었다. 이 투여를 6 주간에 걸쳐 행함으로써 마우스 만성 간 장애 모델을 제작하였다.

(2) 오르니플라빈 제조

글루코오스 20 g, 펩톤 5 g, 효모 엑기스 3 g, 인산이칼륨 3 g, 황산마그네슘 7수화물 1 g을 1 리터의 정제수에 용해하고, 염산 또는 수산화나트륨으로 pH를 5.5로 조정하여 제조한 A 배지를 500 ㎖ 용적 삼각 플라스크에 넣고, 121 ℃에서 15 분간 오토클레이브 멸균하였다. 여기에 스타키보트리스 마이크로스포라 IFO30018주를 접종하여, 25 ℃에서 4 일간 회전식 진탕기로 180 rpm으로 배양하였다. 이 배양액을 종배양액으로서, 동일하게 제조한 100 ㎖의 A 배지를 포함하는 500 ㎖ 용적 삼각 플라스크에 1 ㎖ 접종하였다. 접종시, L-오르니틴을 1 mg/㎖가 되도록 첨가하였다. 이것을 25 ℃에서 4 일간 회전식 진탕기로 180 rpm으로 배양하였다. 이 배양 여과액 중에는 오르니플라빈(SMTP-7)이 305 ㎍/㎖ 축적되었다. 배양 여과액 3 리터의 pH를 염산을 이용하여 3으로 조정한 후, 메틸에틸케톤 2.7 리터를 첨가하여 오르니플라빈을 추출하였다. 이 용매 추출액을 농축 건고하여 1.9 g의 건고물을 얻었다. 건고물을 메탄올에 용해하고, Li Chrolut RP-18 고상 추출 칼럼에 통과시킨 후, 역상 HPLC 칼럼을 이용한 크로마토그래피에 사용하였다. 50 mM 아세트산암모늄을 포함하는 80％ 수성 메탄올을 사용하여 40 ℃에서 25 ㎖/분의 유속으로 칼럼을 전개하고, 유지 시간 34 내지 39 분만에 용출된 분획으로부터 431 mg의 오르니플라빈을 얻었다.

(3) 오르니플라빈 투여

6주간의 사염화탄소 투여 후, 통계적으로 동질이 되도록 오르니플라빈 투여군 및 대조군의 2군으로 나누었다(오르니플라빈 투여군: 7마리, 대조군: 6마리). 오르니플라빈 10 mg/kg을 복강내에 연일 투여하였다. 대조군에 대해서는 생리 식염수 2 ㎖/kg을 복강내에 연일 투여하였다. 이 조작을 14 일간 행하였다.

투여 종료 후, 항응고제로서 3.8％의 시트르산나트륨 용액(채혈량의 1/10 양)을 함유하는 주사통에 대정맥으로부터 채혈을 행하고, 얻어진 혈액은 바로 3000 rpm으로 20 분간 원심 분리하여 그 상청을 모아 혈장 샘플로 하였다.

(3) 혈장 파라미터의 측정

얻어진 혈장 샘플에 대하여, AST(아스파라긴산 아미노트란스페라제, GOT), ALT(알라닌 아미노트란스페라제, GPT) 및 ChE(콜린에스테라제) 양을 측정하였다(히타치 자동 분석 장치 7180).

AST에 대해서는, 오르니플라빈 투여군에서 대조군에 대한 유의한(P<0.01) 감 소가 확인되었다(도 1). ChE에 대해서는, 오르니플라빈 투여군에서 대조군에 대한 유의한(P<0.01) 증가가 확인되었고, 대조군에서 정상군에 대한 유의한(P<0.01) 감소가 확인되었다(도 3).

ALT에 대해서는, 오르니플라빈군과 대조군 사이에 유의차는 확인되지 않았지만, 오르니플라빈의 투여에 의한 값의 감소가 확인되었다. 또한, 대조군에서 정상군에 대한 유의한(P<0.01) 상승이 확인되었지만, 오르니플라빈군에서는 그 상승이 확인되지 않았다(도 2).

AST나 ALT와 같은 간 세포 장애를 나타내는 중요한 파라미터로 오르니플라빈 투여에 의해 간세포 장애 정도가 정상 수준 근처까지 회복되었다는 것을 나타내고 있으며, 그 밖에도 간장의 단백질 합성능을 나타내는 콜린에스테라제의 값도 정상과 동일한 수준까지 회복되었다는 점으로부터 간 기능이 회복 경향에 있다고 할 수 있다.

Claims (3)

1. 오르니플라빈을 유효 성분으로서 포함하는 간 기능 개선제.
2. 간 기능 개선제의 제조를 위한 오르니플라빈의 용도.
3. 오르니플라빈을 투여하는 것을 포함하는, 간 기능 개선 방법.

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