KR20080076885A

KR20080076885A - 티로시나제 발현을 억제하는 이중 가닥 ｒｎａ올리고뉴클레오티드

Info

Publication number: KR20080076885A
Application number: KR1020080073913A
Authority: KR
Inventors: 크리스틴 꼴랭-쟝곤; 쟝-띠에리 시모네
Original assignee: 로레알
Priority date: 2005-09-21
Filing date: 2008-07-29
Publication date: 2008-08-20
Also published as: CN105854028A; JP2007084544A; JP5390065B2; CN1966084A; EP1774959B1; FR2890859A1; KR20090118889A; US8410260B2; US20090081263A1; CN102579274A; EP1774959A1; KR101307734B1; CN102579274B; KR101215340B1; US8822428B2; FR2890859B1; KR100865061B1; KR20070033284A; US20070134188A1; JP2013255511A

Abstract

본 발명은 티로시나제 발현을 감소시키는 신규한 이중 가닥 RNA 올리고뉴클레오티드, 미용 및/또는 약학적 목적을 위한 이의 용도 및 제타 전위가 10 내지 80 mV 이고 크기가 1 ㎛ 이하인 양이온성 입자와 이의 결합에 관한 것이다.

티로시나제, RNA 올리고뉴클레오티드, 제타 전위, 양이온성 입자

Description

티로시나제 발현을 억제하는 이중 가닥 ＲＮＡ 올리고뉴클레오티드 {DOUBLE-STRANDED RNA OLIGONUCLEOTIDE WHICH INHIBITS TYROSINASE EXPRESSION}

티로시나제 (모노페놀 디히드록실 페닐알라닌: 산소 산화환원효소 EC 1.14.18.1) 는 피부의 색소 침착 기작과 관련된 주요 효소이다. 이는 특히, 이의 히드록실라제 활성에 의한 티로신의 도파 (Dopa: 디히드록시페닐알라닌) 로의 전환 반응 및 이의 옥시다제 활성에 의한 도파의 도파퀴논으로의 전환 반응을 촉매한다. 티로시나제는 특정 생물학적 인자의 작용 하에 성숙 상태에 있을 때만 작용한다.

상기 효소는 또한, 흑색종 (Riley 등, J. Immunother. 2001, 21, 212-220) 또는 Vogt-Koyanagi-Harada 병 (Read 등, Curr. Opin. Ophthalmol., 2000, 11, 437-442) 과 같은 병상의 치료에 유리할 수 있다.

피부 색소 침착의 형성, 즉 멜라닌 형성의 기작은 특히 복잡하며, 도식적으 로 하기와 같은 주요 단계를 수반한다:

티로신 → 도파 → 도파퀴논 → 도파크롬 → 멜라닌

따라서, 인간 피부의 색소 침착은 수지상 세포인 멜라닌세포에 의한 멜라닌 합성 결과이다. 후자는 멜라닌 생합성 장소인 멜라노좀이라는 소기관을 함유한다. 수상돌기를 따라 이동한 후 멜라닌세포로부터 각질형성세포로 운반되는 것이 멜라노좀이다. 그 후 각질형성세포는 상피세포 분화 과정 동안 피부의 표면으로 이동된다 (Gilchrest BA, Park HY, Eller MS, Yaar M, Mechanisms of ultraviolet light-induced pigmentation. Photochem Photobiol 1996; 63: 1-10; Hearing VJ, Tsukamodo K, Enzymatic control of pigmentation in mammals. FASEB J 1991; 5: 2902-2909).

멜라닌형성 효소 중에서, 티로시나제는 멜라닌 합성의 처음 두 단계를 촉매하는 중요 효소이다. 티로시나제의 동종접합 변이는 멜라닌 합성이 전혀 일어나지 않는 것을 특징으로 하는 눈 피부 백색증 타입 I 을 유발한다 (Toyofuku K, Wada　I, Spritz RA, Hearing VJ, The molecular basis of oculocutaneous albinism type 1 (OCA1): sorting failure and degradation of mutant tyrosinases results in a lack of pigmentation. Biochem J. 2001; 355: 259-269).

과색소침착 질환은 멜라닌 생성의 증가가 원인이므로, 티로시나제 활성의 억제를 그 기본 원리로 하는 새로운 치료적 접근법의 개발이 중요한 것으로 나타나고 있다.

이미 공지된 피부-미백 화합물 대부분은 페놀/카테콜이다. 이들 화합물 은 티로시나제를 억제하지만 이들 화합물 대부분은 멜라닌세포에 대하여 세포독성을 가지는데, 이는 피부의 영구적 탈색을 유발할 수 있다.

따라서, 인간에 적용함에 있어서, 매우 효과적이면서도 양호한 용인성을 나타내는 신규한 티로시나제-억제 화합물을 수득하는 것이 유리할 것으로 여겨진다.

*최근, 이중 가닥 RNA (dsRNA) 올리고뉴클레오티드, 특히 siRNA 올리고뉴클레오티드 (12 내지 40 개 뉴클레오티드) 를 사용함으로써, 피부 관리 또는 모발 관리 등의 미용 분야 뿐만 아니라 피부학 및 약학 분야에서도 특정한 활성을 얻을 수 있다.

그러나, siRNA 의 생체내 사용은 여러모로 어려운 것으로 알려져 있다.

이들 siRNA 를 국소적으로 적용할 경우 표적 세포에 도달하기 위한 siRNA 의 침투 문제, 특히 각질층 (stratum corneum) 을 가로지르는데 있어서의 어려움으로 인한 문제 외에도, 경험적으로 siRNA 투여가 다수의 공개 문헌에서 보고된 인터페론 반응의 촉발 (Sledz CA 등, Activation of the interferon system by short-interfering RNAs. Nat Cell Biol. 2003; 9:834-9. Katalin Kariko 등, Small Interfering RNAs Mediate Sequence-Independent Gene Suppression and Induce Immune Activation by Signaling through Toll-Like Receptor 31. J.　Immunol. 2004; 172: 6545-6549. Judge AD 등 Sequence-dependent stimulation of the mammalian innate immune response by synthetic siRNA. Nat Biotechnol. 2005; 23:457-62) 및 siRNA 의 표적이 아닌 유전자의 발현의 유발 또는 억제 (Jackson 등 Expression profiling reveals off-target gene regulation by RNAi. Nat Biotechnol. 2003; 21:635-7) 를 일으킬 수 있는 것으로 나타났는 바, 이 두 가지 현상은 극히 바람직하지 않다.

특허 출원 US 2004/0215006 에는 티로시나제에 대하여 활성인 이중 가닥 및 안티센스 단일 가닥 RNA 올리고뉴클레오티드가 기재되어 있는데; 이용된 예는 오로지 안티센스 단일 가닥 RNA 올리고뉴클레오티드에 관한 것이다. 특히, 이들 안티센스 RNA 와 유사한 siRNA 가 효과적인 여부에 관하여는 증명되어 있지 않다.

일부 저자는 siRNA 와 같은 이중 가닥 RNA 올리고뉴클레오티드, 및 안티센스 단일 가닥 RNA 올리고뉴클레오티드가 서로 상이한 표적을 가지며, 안티센스 RNA 의 활성을 동일 서열의 siRNA 에 외삽할 수 없음을 강조하였다 (Xu 등, Effective small interfering RNAs and phosphorothioate antisense DNAs have different preferences for target sites in the luciferase mRNAs. BBRC 2003; 306:712-717).

또한, 상기 US 2004/0215006 문헌에서, 제시된 siRNA 농도는 50 내지 200　nM 이다. 상술한 바와 같이, Jackson 등은 100　nM 농도로 사용된 siRNA 의 표적이 아닌 유전자의 강한 양성 및 음성 조절에 관해 기재하고 있다.

유사하게, 티로시나제를 특이적으로 억제하는 siRNA 에 관해 기재한 WO 2005/060536 에서는 제시된 농도 범위가 매우 광범위하고, siRNA 의 표적이 아닌 유전자의 양성 및 음성 조절이 관찰될 수 있는 매우 다량의 siRNA 를 포함하는 조성물을 초래할 수 있다.

미용 또는 치료적 용도 면에서, 이러한 비-표적 유전자의 조절은, 특히 그 예측불가능한 성질상 허용될 수 없다.

본 출원인은 티로시나제 발현을 특이적으로 억제하는 신규한 siRNA 를 개발하였는 바, siRNA 가 1 nM 이하의 용량으로 사용될 수 있도록 하는 활성을 나타내는 siRNA 를 그로부터 선별하였다.

비특이적 유전자의 유도에 관계된 문제의 해결에 더하여, 본 출원인은 이들 siRNA 의 서열이 인터페론 반응을 유발하지 않음을 확인하였다.

이를 위하여, 인터페론에 의해 유도되는 것으로 알려진 OAS-1 및 IFIT-1 (인터페론-유도성 테트라트리코펩티드 반복 도메인, interferon-inducible tetratricopeptide repeat domain) 유전자 (Stefan F. Wieland 등, Searching for Interferon-Induced Genes that inhibit Hepatitis B Virus Replication in Transgenic Mouse Hepatocytes, J. of Virology 2003, 77:1227-1236) 의 발현을, Invitrogen 이 판매하는 "인간 세포에 있어서 이중 가닥 RNA 에 대한 인터페론-매개 스트레스 반응을 모니터링하기 위한 BLOCK-iT^TM RNAi 스트레스 반응 컨트롤 키트 (인간)" 의 매뉴얼에 기재된 프로토콜에 따라 측정하였다.

나아가, 이들 티로시나제-특이적 siRNA 와, 제타 전위가 10 내지 80 mV 이고 크기가 1 ㎛ 이하인 양이온성 입자의 결합으로, 피부와 같은 3차원적 모델의 표적 세포내로의 이들의 침투를 매우 현저히 향상시킬 수 있다. 일단 침투되면, 티로시나제-특이적 siRNA 는 활성화된다.

상기 침투는 siRNA 에 부착된 형광 표지로 측정가능하고, 그 활성은 정량적 PCR 로 표적 메신저를 정량하거나 또는 표적 메신저에 대응하는 단백질을 검정 (assay) 함으로써 측정할 수 있다.

본 발명의 양이온성 입자는 계면활성제 미셀, 블록 또는 비(非)블록 중합체의 미셀, 양이온 리포좀 및 니오좀, 양이온 올레오좀, 양이온 나노에멀젼, 및 양이온 유기 또는 무기 입자 및 나노캡슐일 수 있다.

따라서, 본 발명의 제 1 주제는, 임의로 변형된 서열 번호: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47 및 48 의 서열의 올리고뉴클레오티드 중에서 선택되는 이중 가닥 RNA 올리고뉴클레오티드 (dsRNA 또는 siRNA 라고도 함) 에 관한 것이다.

dsRNA, 특히 siRNA (short interfering RNA) 를 사용함으로써, 표적 단백질을 인코딩하는 mRNA 의 분해에 의해 표적 단백질의 합성을 특이적으로 억제하는 활성을 얻을 수 있다. 표적 mRNA 의 분해는, dsRNA 의 안티센스 가닥이 mRNA 에 결합함으로써 그 효과를 발휘하는 RISC 복합체 (RNA-유도 침묵 복합체, RNA Induced Silencing Complex) 의 활성화에 의해 수득된다 (Tuschl T. Chem. Biochem. 2001; 2:239-245; Nykanen A & al, Cell 2001; 107:309-321; Dorsett Y. and Tuschl T. Nat Rev Drug Discov. 2004; 3:318-329; Downward J. BMJ. 2004; 328:1245-1248; Shanker P. 등, JAMA 2005; 293:1367-1373 참조).

실행되는 분자적 기작에는 12 내지 40 개 뉴클레오티드, 바람직하게는 23 내지 27 개 뉴클레오티드로 이루어진 이중 가닥 RNA 절편이 포함된다.

이들 이중 가닥 RNA 올리고뉴클레오티드는 바람직하게는 인간 티로시나제의 mRNA 서열 (GenBank 등록 번호: NM_000372) 에 대하여 상동인 센스 가닥 및 상보적인 안티센스 가닥으로 이루어질 수 있다. 이중 가닥 RNA 올리고뉴클레오티드는 평활 말단 (blunt end) 또는 2 내지 6 개 뉴클레오티드의 단일 가닥 말단 (unpaired end) 을 가진다.

이중 가닥 RNA 올리고뉴클레오티드는 여러 수동 또는 자동의 생체내 또는 시험관내 합성 방법에 따라 합성가능하다.

시험관내 합성 방법은 선택된 DNA (또는 cDNA) 서열 모델의 전사를 수행하는 RNA 중합효소 (예컨대, T3, T7 또는 SP6) 를 사용하는 효소적인 것 또는 화학적인 것일 수 있다.

이중 가닥 RNA 의 생체내 합성의 여러 방법들이 문헌에 기재되어 있으며; 이를 다양한 세균 세포 유형 또는 더 고등한 유기체의 세포 유형 내에서 수행할 수 있다 (Sambrook 등 Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 제2판 (1989), DNA cloning, volume I and II, D.N.　Glover (ed. 1985), oligonucleotide Synthesis, M.J. Gaits (ed. 1984), Nucleic Acid Hybridation, B.D. Hames and S.J.　Higgins (ed. 1984), Transcription and Translation B.D. Hames and S.J. Higgins (ed. 1984), Animal Cell Culture, R.I.　Freshney (ed. 1986), Immobilized Cells and Enzymes, IRL Press (1986), B. Pertal, A Practical Guide to Molecular Cloning (1984), Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells, J.H.　Miller 및 M.P.　Calos, Cold Spring Harbor Laboratory (ed. 1987), Methods in Enzymology, vol.　154, Wu and Grossman, and 155, Wu, Mayer and Walker (1987), Immunochemical Methods in Cell and Molecular Biology, Academic Press, London, Scopes (1987), Protein Purification: Principle and Practice, 2nd ed., Springer-Verlag, N.-Y. and Handbook of Experimental Immunology, vol. I-IV, C.D. Weir 및 C.C.　Blackwell (1986)). 또한, 특허 출원 WO 01/36646, WO 01/75164 및 US 2003/0088087 에 개시된 합성법을 참조할 수도 있다.

바람직하게는, 본 발명에 따른 이중 가닥 RNA 올리고뉴클레오티드는 2'-위치에 -O-메틸기를 첨가함으로써 변형된다.

상기 이중 가닥 RNA 올리고뉴클레오티드를 다양하게 변형시킬 수 있는데, 특히 문헌 US　2004/014956 에 기재된 바와 같이 변형시킬 수 있다.

유리하게는, 상기 변형에 의해 더욱 안정한 이중 가닥 RNA 올리고뉴클레오티드, 더욱 바람직하게는, 인터페론 반응에 관하여 은밀해진 이중 가닥 RNA 올리고뉴클레오티드가 생성되는 바, 이러한 특성은 생체내 사용에 있어 필수적이다. 또한, 이중 가닥 RNA 올리고뉴클레오티드는 RISC 에 혼입될 수 없도록 변형된 센스 서열을 가질 수 있으므로 부작용을 유발할 수 없다.

바람직하게는, 하기 실시예 2 의 프로토콜에 따라 측정된, 0.016　nM 에서 50% 초과의 티로시나제 mRNA 분해 효율을 갖는 서열 번호: 1, 2, 4, 13, 16, 35, 37, 40 및 42 의 이중 가닥 RNA 올리고뉴클레오티드를 사용할 수 있다.

본 발명의 주제는 또한, 서열 번호: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47 및 48 의 올리고뉴클레오티드에서 선택되는 하나 이상의 이중 가닥 RNA 올리고뉴클레오티드를 함유하는 조성물에 관한 것이다.

*상기 조성물에서, 이중 가닥 RNA 올리고뉴클레오티드는 100　μM 이하, 바람직하게는 10 μM 이하, 더욱 바람직하게는 1 μM 이하의 농도로 존재한다.

본 발명에 따른 조성물은 바람직하게는 인체 표면, 즉 피부, 외피, 점막 및 안구에 국소 적용하기에 적합하다.

본 발명의 바람직한 구현예에서, 이중 가닥 RNA 올리고뉴클레오티드는 제타 전위가 10 내지 80 mV 이고 크기가 1 ㎛ 이하인 양이온성 입자와 결합된다. 이 구현예에서, 이중 가닥 RNA 올리고뉴클레오티드는 입자 표면에 부착되는데, 후자는 이를 미용적, 피부학적 및/또는 안과적 적용을 위하여 피부의 구조물 및 피부, 안구의 점막 등의 표적 세포에 침투시키기 위한 운반체 역할을 한다.

본 발명에 따른 양이온성 입자는, 크기가 1 ㎛ 이하, 바람직하게는 500 nm 이하, 더욱 바람직하게는 300 nm 이하이고 (상기 크기는, 예컨대 Brookhaven 사의 레이저 입도 분석기 타입 BI90 plus 로 측정가능함), 제타 전위가 10 내지 80 mV (이는 Coultronics 사의 제타측정기(zetameter) 타입 DELSA 440 으로 측정가능함) 인 입자이다.

양이온성 입자는, 계면활성제 미셀, 특히 비이온 양친매성 계면활성제 및 양이온 계면활성제의 미셀, 블록 중합체 미셀, 특히 양이온 양친매성 블록 중합체의 미셀, 비이온 양친매성 블록 중합체 및 양이온 양친매성 블록 중합체의 미셀 및 비이온 양친매성 블록 중합체 및 양이온 계면활성제의 미셀, 비이온 및 양이온 계면활성제의 리포좀, 니오좀, 올레오좀, 나노에멀젼 입자, 나노캡슐, 유기 입자 또는 무기 입자 중에서 선택가능하다.

하기에 비제한적 방식으로, 본 발명에 따라 사용가능한 양이온성 입자를 나열한다.

계면활성제 미셀

되돌아보면, 미셀은, 임계값으로 명명되는 특정 농도인 CMC 를 초과하여 물 또는 오일 중에서 가용화되는 경우 양친매성 분자들에 의해 자발적으로 형성되는 응집물이다. 본 발명의 문맥상 사용될 수 있는 미셀은 하나 이상의 양이온성 계면활성제로 이루어진다. 상기 양이온성 계면활성제는 하나 이상의 비이온성 양친매성 계면활성제와 결합될 수 있다.

당업계의 숙련된 자는 McCutcheons 1998 "emulsifiers and detergents" 및 후속 판으로부터 비이온성 및 양이온성 계면활성제를 유리하게 선별할 것이다. 비제한적 예시로서, 본 발명의 맥락상 사용될 수 있는 양이온성 계면활성제가 이후 제시된다.

이에 제한됨없이, 사용될 수 있는 비이온성 계면활성제는 하기와 같다: PEO, 글리세롤 및 폴리글리세롤, 옥시에틸렌화되거나 그렇지 않을 수 있는 소르비탄, 수크로오스, 옥시에틸렌화되거나 또는 그렇지 않을 수 있는 글루코오스, 말토오스, PPO-PEO 의 알킬 및 폴리알킬 (C6 내지 C30, 포화 또는 불포화, 분지 또는 비분지) 에스테르 또는 에테르. 비이온성 계면활성제 및 양이온성 계면활성제의 혼합물의 경우, 각각의 비율은 중량비로서 99/1 내지 1/99 이다.

미셀을 형성하는 계면활성제의 양은 미셀의 CMC 에 좌우될 것이다. 그러나, 본 발명의 맥락에서, 미셀 계면활성제의 농도는 조성물의 총 중량에 대해 0.1 내지 10%, 바람직하게는 0.2 내지 5% 가 될 것이다.

블록 중합체 미셀

양친매성 블록 중합체의 미셀은 문헌 WO　04/035013 에 기재된 방법에 따라 제조될 수 있다.

본 발명에 따라 dsRNA 와 결합되는 미셀의 제조에 사용되는 블록 공중합체는, 특히, 바람직하게는 비이온성, 디블록 또는 트리블록이며, 물과 접촉시 미셀을 형성할 수 있는 양친매성 블록 중합체이다. 이들은 특히 디블록 (A-B) 또는 트리블록 (A-B-A) 유형이며, 여기서 A 는 비이온성 친수성 중합체 블록에 해당하고, B 는 소수성 중합체 블록에 해당한다. 중합체의 분자량은 1,000 내지 100,000 이고, A/B 비율은 1/100 내지 50/1 일 수 있다.

본 발명의 맥락에서, 3 가지 유형의 미셀이 사용될 수 있다:

- 양이온성 양친매성 블록 중합체의 미셀;

- 양이온성 양친매성 블록 중합체와 결합된 비이온성 양친매성 블록 중합체의 혼합 미셀; 및

- 양이온성 계면활성제와 결합된 비이온성 양친매성 블록 중합체의 혼합 미셀.

비이온성 친수성 중합체 블록은 폴리에틸렌 옥시드 (PEO) 및 폴리비닐피롤리돈 (PVP) 으로부터 선택될 수 있다.

소수성 중합체 블록은 폴리스티렌, 폴리(tert-부틸스티렌), 폴리(메틸 메타크릴레이트), 폴리(에틸 아크릴레이트), 폴리(부틸 아크릴레이트), 폴리(부틸 메타크릴레이트), 폴리(비닐 아세테이트), 폴리카프로락톤, 폴리카프로락탐, 폴리디메틸실록산, 폴리(C₃-C₆ 알킬렌 옥시드), 폴리(아스파르트산), 폴리(락트산), 폴리(글리콜산), 폴리류신, 폴리부타디엔, 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 폴리부틸렌으로부터 선택될 수 있다.

블록 공중합체는 바람직하게는 하기의 블록 공중합체로부터 선택된다:

-　폴리프로필렌 옥시드/폴리에틸렌 옥시드

-　폴리스티렌/폴리옥시에틸렌

-　폴리(메틸 메타크릴레이트)/폴리옥시에틸렌

-　폴리(부틸 메타크릴레이트)/폴리옥시에틸렌

-　폴리옥시부틸렌/폴리옥시에틸렌

-　폴리카프로락톤/폴리옥시에틸렌

-　폴리에틸렌/폴리옥시에틸렌

-　폴리옥시에틸렌/폴리옥시부틸렌/폴리옥시에틸렌.

본 발명의 맥락에서, 미셀형 조성물에는 하기를 첨가할 필요가 있다:

-　블록 중 하나가 양이온성이고, 예시로서 하기로부터 선택될 수 있는, 양이온성 양친매성 블록 중합체:

- 폴리(트리메틸에틸암모늄 메타크릴레이트);

- 4 차화 폴리(디메틸아미노에틸 메타크릴레이트);

- 폴리메틸비닐이미다졸륨;

- 폴리(비닐벤질트리메틸암모늄 클로라이드).

(이 때, 비이온성 양친매성 블록 중합체와 양이온성 양친매성 블록 중합체의 결합은 그 둘의 비율이 99/1 내지 1/99 가 되도록 함);

및/또는

-　이후 제시되는 바와 같은 하나 이상의 양이온성 계면활성제.

상기의 경우, 비이온성 양친매성 블록 중합체 대 양이온성 계면활성제의 각각의 비율은 50/50 내지 99/1 이다.

본 발명의 맥락에서, 양이온성 계면활성제와 결합되거나 또는 그렇지 않을 수 있는 미셀 블록 중합체의 농도는 조성물의 총 중량에 대하여 0.1 내지 10 중량% 이며, 바람직하게는 0.2 내지 5 중량% 이다.

본 발명의 변형에서, 상기 기재된 바와 같은 양이온성 양친매성 블록 중합체로 이루어진 미셀을 형성하는 것이 가능하다.

리포좀 및 니오좀

비이온성 리포좀을 형성할 수 있는 비이온성 양친매성 지질은 특히 특허 출원 EP　0　582　503 에 기재되어 있는 것이다.

특히, 비이온성 양친매성 지질은 1 내지 60 개의 에틸렌 옥시드 단위를 포함하는 폴리에틸렌 글리콜, 소르비탄, 2 내지 60 개의 에틸렌 옥시드 단위를 포함하는 소르비탄, 2 내지 30 개의 에틸렌 옥시드 단위를 포함하는 글리세롤, 2 내지 15 개의 글리세롤 단위를 포함하는 폴리글리세롤, 수크로오스, 2 내지 30 개의 에틸렌 옥시드 단위를 포함하는 글루코오스로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 폴리올의 에스테르의 혼합물, 및 폴리올기 당 알킬 사슬의 갯수가 1 내지 10 인, 선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화 C₅-C₁₇ 알킬 사슬을 포함하는 하나 이상의 지방산으로 이루어질 수 있다. "에스테르의 혼합물"이라는 표현은 상이한 화학적 패밀리들의 순수한 에스테르들의 혼합물 뿐만 아니라 동일한 패밀리의 폴리올의 다양한 비율의 화학적으로 순수한 각종 에스테르를 포함하는 임의의 생성물까지도 포괄한다. 이는 특히, 그의 친수성 부분에 통계적 화학식을 갖는 생성물의 경우, 예를 들어 화학식 CO-(OCH₂-CHOH-CH₂)_n-OH (식 중, n 은 통계적인 값이며, n　=　1, n　=　2, n　=　3, n　=　4, 등인 다양한 비율의 에스테르를 포함할 수 있다) 의 폴리글리세릴 에스테르인 경우이며; 이는 또한, 그의 친유성 부분에 여러 개의 알킬 사슬을 포함하는 에스테르, 예컨대 C₅ 내지 C₁₇ 알킬 사슬을 포함하는 코코에이트 (cocoate), 또는 C₁₇ 알킬 사슬이 이성질체 형태의 복합 혼합물인 이소스테아레 이트의 경우이며; 이는 또한, 동일한 폴리올의 모노-, 디-, 트리- 또는 폴리에스테르의 혼합물로 이루어진 생성물의 경우이다. 또다른 유형의 소낭 (vesicle) 및 불순물을 형성할 수 있는 단일 에스테르만을 포함하는 생성물은 본 발명에 따라 사용될 수 없다는 점에 유의해야 한다.

에스테르의 실제적인 혼합물이기 때문에 본 발명에 따라 단독으로 사용될 수 있는 시판 에스테르는 예를 들어 하기와 같다:

- "ICI" 사에 의해 "SPAN 20, 40, 60 및 80"이라는 상품명으로 시판중인, 소르비탄 (또는 소르비톨 무수물) 및 지방산의 부분 에스테르;

-　"NIKKO" 사에 의해 "SI 10 R NIKKOL"이라는 상품명으로 시판중인, 소르비탄 이소스테아레이트;

-　"ICI" 사에 의해 "TWEEN 61"이라는 제품명으로 시판중인, 4 개의 에틸렌 옥시드 단위를 포함하는 소르비탄 스테아레이트;

-　"ICI" 사에 의해 "MYR J 45"라는 제품명으로 시판중인, 8 개의 에틸렌 옥시드 단위를 포함하는 폴리에틸렌 글리콜 스테아레이트;

-　"NIKKO" 사에 의해 "MYS 4"라는 제품명으로 시판중인, 폴리에틸렌 글리콜 모노스테아레이트;

-　"UNICHEMA" 사에 의해 시판중인, 화학적 품질 또는 생명공학에 의해 제시되는 품질의, 분자량 400 의 폴리에틸렌 글리콜 스테아레이트;

-　"HOECHST" 사에 의해 "HOSTACERINE DGS"라는 제품명으로 시판중인, 4 개의 에틸렌 옥시드 단위를 포함하는 디글리세릴 스테아레이트;

-　"NIKKO" 사에 의해 "TETRAGLYN 1S"라는 제품명으로 시판중인, 테트라글리세릴 스테아레이트;

-　"SOLVAY" 사에 의해 시판중인, 디글리세릴 이소스테아레이트;

-　"NIHON" 사에 의해 "EMALEX DSG 2"라는 제품명으로 시판중인, 디글리세릴 디스테아레이트;

-　"CRODA" 사에 의해 "F50, F70, F110 및 F160 CRODESTA"라는 제품명으로 시판중인, 수크로오스 모노-, 디- 및 트리팔미토스테아레이트;

-　"GRILLO" 사에 의해 "GRILLOTEN PSE 141 G"라는 제품명으로 시판중인, 수크로오스 모노팔미토스테아레이트 및 수크로오스 디팔미토스테아레이트의 혼합물;

-　"ICI" 사에 의해 "ARLATONE 2121"이라는 제품명으로 시판중인, 수크로오스 스테아레이트 및 수크로오스 코코에이트의 혼합물;

-　"AMERCHOL" 사에 의해 "GLUCAM E 20 DISTEARATE"라는 제품명으로 시판중인, 20 개의 에틸렌 옥시드 단위를 포함하는 메틸글루코오스 디스테아레이트.

이미 혼합물인 상기 제품들 상호간의 혼합물 또는 상기 제품들과 순수한 생성물과의 혼합물도 물론 사용될 수 있다.

양이온성 계면활성제는 이후 목록으로부터, 분산물에 5 내지 8 의 pH 를 부여하도록 선택되며; 지질상 중의 비이온성 양친매성 지질의 양 대 양이온성 계면활성제의 양의 중량비는 50/1 내지 50/25 이며, 분산물의 지질상 대 수성상의 중량비는 1/1000 내지 300/1000 이다.

올레오좀

본 발명에 관련된 올레오좀은 특허 출원 EP 0 705 593 에 기재되어 있다. 이들은, 단위로서의 각각의 오일성 소구체 (globule) 가 에멀젼에 5 내지 8 의 pH 를 부여하는 하나 이상의 친유성 계면활성제, 하나 이상의 친수성 계면활성제 및 하나 이상의 양이온성 계면활성제로부터 수득되는 단일층성 또는 복층성 층 (급냉 파쇄 후 투과 전자 현미경으로 관찰가능한 1 내지 10 개의 시트) 으로 코팅된 것을 특징으로 하는, 적층성 액정 코팅이 제공된 오일성 소구체로 이루어진, 수성상에 분산된 수중유 유형의 에멀젼을 수반하는데, 상기 코팅된 오일성 소구체의 평균 직경은 500 나노미터 미만이다.

친유성 계면활성제 및 친수성 계면활성제는 각각, 탄소수가 약 12 를 초과하는 하나 이상의 포화 지방 사슬을 포함한다. 더욱더 바람직하게는, 이 지방 사슬은 탄소수가 16 내지 22 이다.

본 발명의 또다른 바람직한 구현예에 따르면, 친유성 계면활성제의 HLB 는 약 2 내지 약 5 이다. 널리 공지된 바와 같이, HLB (친수성-친유성 균형) 라는 용어는 계면활성제의 친수성기의 크기 및 강도와 친유성기의 크기 및 강도 사이의 균형을 의미하도록 의도한 것이다.

상기 친유성 계면활성제의 예시는 수크로오스 디스테아레이트, 디글리세릴 디스테아레이트, 테트라글리세릴 트리스테아레이트, 데카글리세릴 데카스테아레이트, 디글리세릴 모노스테아레이트, 헥사글리세릴 트리스테아레이트, 데카글리세릴 펜타스테아레이트, 소르비탄 모노스테아레이트, 소르비탄 트리스테아레이트, 디에틸렌 글리콜 모노스테아레이트, 팔미트산 및 스테아르산의 글리세릴 에스테르, 폴 리옥시에틸렌화 모노스테아레이트 2 OE (2 개의 옥시에틸렌 단위를 포함함), 글리세릴 모노베헤네이트 및 디베헤네이트, 및 펜타에리트리톨 테트라스테아레이트이다.

친수성 계면활성제의 HLB 는 바람직하게는 약 8 내지 약 12 이다.

상기 친수성 계면활성제의 예시로서, 하기의 화합물들을 언급할 수 있다: 폴리옥시에틸렌화 소르비탄 모노스테아레이트 4 OE, 폴리옥시에틸렌화 소르비탄 트리스테아레이트 20 OE, 폴리옥시에틸렌화 모노스테아레이트 8 OE, 헥사글리세릴 모노스테아레이트, 폴리옥시에틸렌화 모노스테아레이트 10 OE, 폴리옥시에틸렌화 디스테아레이트 12 OE 및 폴리옥시에틸렌화 메틸글루코오스 디스테아레이트 20 OE.

양이온성 계면활성제는 이후 언급되는 화합물들로부터 선택될 수 있다.

나노에멀젼

양이온성 입자들은 또한, 양이온성 양친매성 지질 및 하나 이상의 비이온성 양친매성 지질을 포함하는 하나 이상의 양친매성 지질을 포함하고, 오일상 및 양친매성 지질이 오일상/양친매성 지질 중량비가 3 내지 10 인 함유량으로 존재하는 것을 특징으로 하는, 오일 소구체의 수평균 크기가 100 nm 미만인, 수성상에 분산된 오일상을 포함하는 수중유 나노에멀젼으로부터 선택될 수 있다.

나노에멀젼은 일반적으로 투명 내지 푸르스름한 외양을 갖는다. 상기 나노에멀젼의 투명도는 탁도 또는 600 nm 에서의 10 내지 90% 의 범위의 투과 계수로 측정한다. 본 발명의 조성물의 탁도는 60 내지 400　NTU, 바람직하게는 70 내 지 300 NTU 이며, 상기 탁도는 약 25℃ 에서 HACH 이동성 탁도 측정기 - 모델 2100 P 를 이용하여 측정한다.

본 발명의 나노에멀젼의 오일 소구체는 수평균 크기가 100 nm 미만, 바람직하게는 20 내지 80 nm, 더욱 바람직하게는 40 내지 60 nm 이다. 소구체 크기를 감소시킴으로써, 피부의 표층에 대한 활성제의 침투를 촉진할 수 있다 (담체 효과).

본 발명에 따른 나노에멀젼은 바람직하게는 4 내지 45℃ 의 온도에서 제조되며, 이에 따라 열감수성 반응제와 함께 상용가능하다.

상기 분산물은 특히 하기 출원에 기재되어 있다: EP　0728　460, EP　0　879　589, EP　1　010　413, EP　1　010　414, EP　1　010　416, EP　1　013　338, EP　1　016　453, EP　1　018　363, EP　1　025　898 및 EP　1　120　102. 모든 상기 출원에서는, 입자 안정성을 개선하기 위해서, 이온성 계면활성제를 비이온성 계면활성제 (또는 혼합물) 에 첨가하는 것이 명시되어 있다.

본 출원의 경우, 하나 이상의 양이온성 계면활성제가 독점적으로 이온성 계면활성제로서 사용된다.

상기 참고문헌에서 지시된 비율은 유지될 것이며, 양이온성 계면활성제의 예시로서는, 모든 입자들에 대해 일반적인 목록이 선택될 것이다.

바람직하게는 수용성 또는 수분산성인, 비이온성 계면활성제는 하나 이상의 소수성 블록 및 하나 이상의 친수성 블록을 함유한다. 본 발명의 비이온성 양친매성 지질은 바람직하게는 하기의 것들 및 이러한 계면활성제의 혼합물로부터 선 택된다:

1/ 실리콘 계면활성제,

2/ 하나 이상의 폴리올, 또는 하나 이상의 선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화, 및 특히 불포화 또는 분지형 C₈-C₂₂ 알킬 사슬을 함유하는 하나 이상의 지방산의 에스테르로부터 선택된, 45℃ 이하의 온도에서 액체인 양친매성 지질 (여기서, 상기 폴리올은 1 내지 60 개의 에틸렌 옥시드 단위를 함유하는 폴리에틸렌 글리콜, 소르비탄, 2 내지 30 개의 에틸렌 옥시드 단위를 함유할 수 있는 글리세롤, 및 2 내지 15 개의 글리세롤 단위를 함유하는 폴리글리세롤로 이루어진 군으로부터 선택됨),

3/ 지방산 및 당 (sugar) 의 에스테르, 및 지방 알콜 및 당의 에테르,

4/ 글리세롤 지방 에스테르, 소르비탄 지방 에스테르 및 옥시에틸렌화 소르비탄 지방 에스테르, 에톡시화 지방 에테르 및 에톡시화 지방 에스테르로부터 선택된, 45℃ 의 온도에서 고체인 계면활성제,

*5/ 에틸렌 옥시드 (A) 및 프로필렌 옥시드 (B) 의 블록 공중합체.

1/ 본 발명에 따라 사용될 수 있는 실리콘 계면활성제는 하나 이상의 옥시에틸렌화 사슬 -OCH₂CH₂- 및/또는 옥시프로필렌화 사슬 -OCH₂CH₂CH₂- 를 함유하는 실리콘 화합물이며; 문헌 US-A-5,364,633 및 US-A-5,411,744 에 기재된 것들을 언급할 수 있다.

바람직하게는, 본 발명에 따라 사용되는 실리콘 계면활성제는 하기 화학식 (II) 의 화합물이다:

[화학식 (II)]

{식 중:

R₁, R₂ 및 R₃ 은 서로 독립적으로, C₁-C₆ 알킬 라디칼 또는 -(CH₂)_x-(OCH₂CH₂)_y-(OCH₂CH₂CH₂)_z-OR₄ 라디칼을 나타내고, 하나 이상의 라디칼 R₁, R₂ 또는 R₃ 은 알킬 라디칼이 아니고; R₄ 는 수소, 알킬 라디칼 또는 아실 라디칼이고;

A 는 0 내지 200 의 범위의 정수이고;

B 는 0 내지 50 의 범위의 정수이고; 단, A 및 B 는 동시에 0 이 아니며;

x 는 1 내지 6 의 범위의 정수이고;

y 는 1 내지 30 의 범위의 정수이고;

z 는 0 내지 5 의 범위의 정수이다}.

본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 화학식 (X) 의 화합물에서, 알킬 라디칼은 메틸 라디칼이고, x 는 2 내지 6 의 범위의 정수이고, y 는 4 내지 30 의 범위의 정수이다.

화학식 (II) 의 실리콘 계면활성제의 예로서는, 하기 화학식 (III) 의 화합 물을 언급할 수 있다:

[화학식 (III)]

{식 중, A 는 20 내지 105 의 범위의 정수이고, B 는 2 내지 10 의 범위의 정수이고, y 는 10 내지 20 의 범위의 정수이다}.

화학식 (II) 의 실리콘 계면활성제의 예로서는, 하기 화학식 (IV) 의 화합물을 언급할 수 있다:

[화학식 (IV)]

{식 중, A' 및 y 는 10 내지 20 의 범위의 정수이다}.

실리콘 계면활성제로서, 특히 Dow Corning 사에 의해 제품명 DC　5329, DC　7439-146, DC 2-5695 및 Q4-3667 으로 시판중인 것들이 사용될 수 있다. 상기 화합물 DC　5329, DC　7439-146 및 DC 2-5695 는 각각, A 가 22 이고, B 가 2 이고, y 가 12 인 화학식 (XI) 의 화합물; A 가 103 이고, B 가 10 이고, y 가 12 인 화학식 (XI) 의 화합물; A 가 27 이고, B 가 3 이고, y 가 12 인 화학식 (XI) 의 화합물이다.

화합물 Q4-3667 은, A 가 15 이고 y 가 13 인 화학식 (IV) 의 화합물이다.

2/ 45℃ 이하의 온도에서 액체인 양친매성 지질은 특히 하기로부터 선택될 수 있다:

- UNICHEMA 사에 의해 제품명 Prisorine 3644 로 시판중인, 몰 중량이 400 인 폴리에틸렌 글리콜 이소스테아레이트 (CTFA 명: PEG-8 이소스테아레이트);

-　SOLVAY 사에 의해 시판중인 디글리세릴 이소스테아레이트;

-　SOLVAY 사에 의해 제품명 Diglycerin-monolaurate 로 시판중인, 2 개의 글리세롤 단위를 함유하는 폴리글리세릴 라우레이트 (폴리글리세릴-2 라우레이트);

- ICI 사에 의해 제품명 SPAN 80 으로 시판중인　소르비탄 올레에이트;

- NIKKO 사에 의해 제품명 NIKKOL SI 10R 로 시판중인 소르비탄 이소스테아레이트;

-　ULICE 사에 의해 시판중인 α-부틸글루코시드 코코에이트 또는 α-부틸글루코시드 카프레이트.

3/ 본 발명에 따른 나노에멀젼 (nanoemulsion) 내에서 비이온성 양친매성 지질로서 사용될 수 있는 지방산 및 당의 에스테르는 바람직하게는 45℃ 이하의 온도에서 고체이고, 특히 C₈-C₂₂ 지방산 및 수크로오스의 에스테르, C₈-C₂₂ 지방산 및 말토오스의 에스테르, C₈-C₂₂ 지방산 및 글루코오스의 에스테르 또는 C₈-C₂₂ 지방산 및 프룩토오스의 에스테르, 또는 이들 에스테르의 혼합물, 및 C₁₄-C₂₂ 지방산 및 메틸글루코오스의 에스테르 또는 이들 에스테르의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.

본 발명의 나노에멀젼에 사용될 수 있는 에스테르의 지방 단위를 형성하는 C₈-C₂₂ 또는 C₁₄-C₂₂ 지방산은 각각, 탄소수 8 내지 22 또는 탄소수 14 내지 22 인 포화 또는 불포화 선형 알킬 사슬을 함유한다. 상기 에스테르의 지방 단위는 특히 스테아레이트, 베헤네이트, 아라키도네이트, 팔미테이트, 미리스테이트, 라우레이트, 카프레이트 및 이들의 혼합물로부터 선택될 수 있다. 바람직하게는 스테아레이트가 사용된다.

지방산 및 수크로오스의 에스테르, 지방산 및 말토오스의 에스테르, 지방산 및 글루코오스의 에스테르 또는 지방산 및 프룩토오스의 에스테르, 또는 이들 에스테르의 혼합물의 예로서는, 수크로오스 모노스테아레이트, 수크로오스 디스테아레이트, 수크로오스 트리스테아레이트 및 이들의 혼합물, 예컨대 HLB (친수성-친지질성 균형; Hydrophilic-Lipophilic Balance) 이 각각 5, 7, 11 및 16 인, Croda 사에 의해 Crodesta F50, F70, F110 및 F160 이라는 제품명으로 시판중인 제품들을 언급할 수 있고; 지방산 및 메틸글루코오스의 에스테르 또는 이들 에스테르의 혼합물의 예로서는, Goldschmidt 사에 의해 제품명 Tego-care 450 으로 시판중인 폴리글리세릴-3 메틸글루코오스 디스테아레이트를 언급할 수 있다. 또한, 글루코오스 또는 말토오스의 모노에스테르, 예컨대 메틸 o-헥사데카노일-6-D-글루코시드 및 o-헥사데카노일-6-D-말토시드도 언급할 수 있다.

본 발명에 따른 나노에멀젼 내에서 비이온성 양친매성 지질로서 사용될 수 있는, 지방 알콜 및 당의 에테르는 45℃ 이하의 온도에서 고체이며, 특히 C₈-C₂₂지방 알콜 및 글루코오스의 에테르, C₈-C₂₂지방 알콜 및 말토오스의 에테르, C₈-C₂₂지 방 알콜 및 수크로오스의 에테르 또는 C₈-C₂₂지방 알콜 및 프룩토오스의 에테르 또는 이들 에테르의 혼합물, 및 C₁₄-C₂₂지방 알콜 및 메틸글루코오스의 에테르 또는 이들 에테르의 혼합물을 포함하는 군으로부터 선택될 수 있다. 이는 특히 알킬폴리글루코시드이다.

본 발명의 나노에멀젼에 사용될 수 있는 에테르의 지방 단위를 형성하는 C₈-C₂₂ 또는 C₁₄-C₂₂지방 알콜은 각각 탄소수 8 내지 22 또는 탄소수 14 내지 22 인 포화 또는 불포화 선형 알킬 사슬을 함유한다. 에테르의 지방 단위는 특히 데실, 세틸, 베헤닐, 아라키딜, 스테아릴, 팔미틸, 미리스틸, 라우릴, 카프릴 및 헥사데카노일 단위, 및 이들의 혼합물, 예컨대 세테아릴로부터 선택될 수 있다.

지방 알콜 및 당의 에테르의 예로서는, 예를 들어 Henkel 사에 의해 각각 제품명 Plantaren 2000 및 Plantaren 1200 으로 시판중인 데실글루코시드 및 라우릴글루코시드, 예를 들어 Seppic 사에 의해 제품명 Montanov 68 로 시판중이고, Goldschmidt 사에 의해 제품명 Tego-care CG90 으로 시판중이며, Henkel 사에 의해 제품명 Emulgade KE3302 으로 시판중인, 임의로는 세토스테아릴 알콜과의 혼합물로서의 세토스테아릴글루코시드, 및 예를 들어 Seppic 사에 의해 제품명 Montanov 202 로 시판중인 아라키딜 및 베헤닐 알콜과 아라키딜글루코시드와의 혼합물 형태인 아라키딜글루코시드 등의 알킬폴리글루코시드를 언급할 수 있다.

이러한 유형의 비이온성 양친매성 지질로서, 더욱 특별하게는 수크로오스 모노스테아레이트, 수크로오스 디스테아레이트, 수크로오스 트리스테아레이트 및 이 들의 혼합물, 폴리글리세릴-3 메틸글루코오스 디스테아레이트 및 알킬폴리글루코시드가 사용된다.

4/ 본 발명에 따른 나노에멀젼 내에서 비이온성 양친매성 지질로서 사용될 수 있는 글리세롤 지방 에스테르는 45℃ 이하의 온도에서 고체로서, 특히, 탄소수 16 내지 22 의 포화 선형 알킬 사슬을 함유하는 하나 이상의 산 및 1 내지 10 개의 글리세롤 단위로부터 형성된 에스테르를 포함하는 군으로부터 선택될 수 있다. 이들 글리세롤 지방 에스테르 중 하나 이상이 본 발명의 나노에멀젼에 사용될 수 있다.

이러한 에스테르는 특히 스테아레이트, 베헤네이트, 아라키데이트, 팔미테이트 및 이들의 혼합물로부터 선택될 수 있다. 바람직하게는 스테아레이트 및 팔미테이트가 사용된다.

본 발명의 나노에멀젼에 사용될 수 있는 계면활성제의 예로서는, 데카글리세릴 (10 개의 글리세롤 단위) 모노스테아레이트, 디스테아레이트, 트리스테아레이트 및 펜타스테아레이트 (CTFA 명: 폴리글리세릴-10 스테아레이트, 폴리글리세릴-10 디스테아레이트, 폴리글리세릴-10 트리스테아레이트, 폴리글리세릴-10 펜타스테아레이트), 예컨대 Nikko 사에 의해 각각 Nikkol Decaglyn 1-S, 2-S, 3-S 및 5-S 라는 제품명으로 시판중인 제품들, 및 디글리세릴 모노스테아레이트 (CTFA 명: 폴리글리세릴-2 스테아레이트), 예컨대 Nikko 사에 의해 제품명 Nikkol DGMS 로 시판중인 제품을 언급할 수 있다.

본 발명에 따른 나노에멀젼 내에서 비이온성 양친매성 지질로서 사용될 수 있는 소르비탄 지방 에스테르는 45℃ 이하의 온도에서 고체로서, 특히, C₁₆-C₂₂ 지방산 및 소르비탄의 에스테르 및 C₁₆-C₂₂ 지방산 및 소르비탄의 옥시에틸렌화 에스테르를 포함하는 군으로부터 선택된다. 이들은 각각 하나 이상의 탄소수 16 내지 22 의 포화 선형 알킬 사슬을 함유하는 하나 이상의 지방산, 및 소르비톨 또는 에톡시화 소르비톨로부터 형성된다. 옥시에틸렌화 에스테르는 일반적으로 1 내지 100 개의 에틸렌 옥시드 단위, 바람직하게는 2 내지 40 개의 에틸렌 옥시드 (EO) 단위를 함유한다.

이러한 에스테르는 특히 스테아레이트, 베헤네이트, 아라키데이트, 팔미테이트, 및 이들의 혼합물로부터 선택될 수 있다. 바람직하게는 스테아레이트 및 팔미테이트가 사용된다.

본 발명의 나노에멀젼에 사용될 수 있는 소르비탄 지방 에스테르 및 옥시에틸렌화 소르비탄 지방 에스테르의 예로서는, ICI 사에 의해 제품명 Span　60 으로 시판중인 소르비탄 모노스테아레이트 (CTFA 명: 소르비탄 스테아레이트), ICI 사에 의해 제품명 Span 40 으로 시판중인 소르비탄 모노팔미테이트 (CTFA 명: 소르비탄 팔미테이트), 및 ICI 사에 의해 제품명 Tween 65 로 시판중인 소르비탄 트리스테아레이트 20 EO (CTFA 명: 폴리소르베이트 65) 를 언급할 수 있다.

본 발명에 따른 나노에멀젼 내에서 비이온성 양친매성 지질로서 사용될 수 있는, 45℃ 이하의 온도에서 고체인 에톡시화 지방 에테르는 바람직하게는 1 내지 100 개의 에틸렌 옥시드 단위 및 하나 이상의 탄소수 16 내지 22 의 지방 알콜 사 슬로부터 형성된 에테르이다. 상기 에테르의 지방 사슬은 특히 베헤닐, 아라키딜, 스테아릴 및 세틸 단위, 및 이들의 혼합물, 예컨대 세테아릴로부터 선택될 수 있다. 에톡시화 지방 에테르의 예로서는, 5, 10, 20 및 30 개의 에틸렌 옥시드 단위를 포함하는 베헤닐 알콜의 에테르 (CTFA 명: 베헤네쓰-5 (Beheneth-5), 베헤네쓰-10, 베헤네쓰-20, 베헤네쓰-30), 예컨대 Nikko 사에 의해 제품명 Nikkol BB5, BB10, BB20 및 BB30 으로 시판중인 제품들, 및 2 개의 에틸렌 옥시드 단위를 포함하는 스테아릴 알콜의 에테르 (CTFA 명: 스테아레쓰-2 (Steareth-2)), 예컨대 ICI 사로부터 제품명 Brij 72 로 시판중인 제품을 언급할 수 있다.

본 발명에 따른 나노에멀젼 내에서 비이온성 양친매성 지질로서 사용될 수 있는, 45℃ 이하의 온도에서 고체인 에톡시화 지방 에스테르는 1 내지 100 개의 에틸렌 옥시드 단위 및 하나 이상의 탄소수 16 내지 22 의 지방산 사슬로부터 형성된 에스테르이다. 상기 에스테르의 지방 사슬은 특히 스테아레이트, 베헤네이트, 아라키데이트 및 팔미테이트 단위, 및 이들의 혼합물로부터 선택될 수 있다. 에톡시화 지방 에스테르의 예로서는, 40 개의 에틸렌 옥시드 단위를 포함하는 스테아르산의 에스테르, 예컨대 ICI 사에 의해 제품명 Myrj 52 로 시판중인 제품 (CTFA 명: PEG-40 스테아레이트), 및 또한 8 개의 에틸렌 옥시드 단위를 포함하는 베헨산의 에스테르 (CTFA 명: PEG-8 베헤네이트), 예컨대 Gattefosse 사에 의해 제품명 Compritol HD5 ATO 로 시판중인 제품을 언급할 수 있다.

5/ 본 발명에 따른 나노에멀젼 내에서 비이온성 양친매성 지질로서 사용될 수 있는, 에틸렌 옥시드 및 프로필렌 옥시드의 블록 공중합체는 특히 하기 화학식 (V) 의 블록 공중합체 및 이들의 혼합물, 더욱 구체적으로는 HLB 가 2 내지 16 의 범위인 화학식 (V) 의 블록 공중합체로부터 선택될 수 있다:

[화학식 (V)]

{식 중, x, y 및 z 는, x+z 가 2 내지 100 의 범위이고 y 가 14 내지 60 의 범위가 되도록 하는 정수이다}.

이러한 블록 공중합체는 특히 폴록사머 (poloxamer), 및 특히 ICI 사에 의해 제품명 Pluronic L81 으로 시판중인 제품과 같은, x=z=6, y=39 (HLB 2) 인 화학식 (V) 의 Poloxamer 231; ICI 사에 의해 제품명 Pluronic L92 로 시판중인 제품과 같은, x=z=10, y=47 (HLB 6) 인 화학식 (V) 의 Poloxamer 282; 및 ICI 사에 의해 제품명 Pluronic L44 로 시판중인 제품과 같은, x=z=11, y=21 (HLB 16) 인 화학식 (V) 의 Poloxamer 124 로부터 선택될 수 있다.

비이온성 양친매성 지질로서, 문서 EP-A-705593 에 기술된 비이온성 계면활성제의 혼합물이 또한 언급될 수 있으며, 이는 참조로서 본원에 포함된다.

비이온성 양친매성 지질 중, 특히 하기를 사용할 수 있다:

- PEG 400 이소스테아레이트 또는 PEG-8 이소스테아레이트 (8 몰의 에틸렌 옥시드 함유),

- 디글리세릴 이소스테아레이트,

- 2 개의 글리세롤 단위를 함유하는 폴리글리세릴 모노라우레이트 및 10 개 의 글리세롤 단위를 함유하는 폴리글리세릴 스테아레이트,

- 소르비탄 올레에이트,

- 소르비탄 이소스테아레이트, 및 이들의 혼합물.

비이온성 양친매성 지질은 본 발명에 따른 나노에멀젼 중에, 조성물의 총 중량에 대하여, 0.2 중량% 내지 12 중량%의 범위, 바람직하게는 0.2 중량% 내지 8 중량%의 범위, 선호하게는 0.2 중량% 내지 6 중량%의 범위의 함량으로 존재할 수 있다.

양이온성 양친매성 지질은 이하 주어지는 목록에서 선택된다.

이들은 본 발명의 나노에멀젼 중에, 나노에멀젼의 총 중량에 대하여, 바람직하게는 0.01 내지 6 중량%, 더욱 특히는 0.2 내지 4 중량% 범위의 농도로 존재한다.

오일:

본 발명에 따른 나노에멀젼의 오일상은 하나 이상의 오일을 함유한다. 본 발명의 나노에멀젼에 사용될 수 있는 오일은 바람직하게는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:

- 폴리올 및 지방산의 에스테르, 특히 액체 트리글리세리드로 이루어진 식물 또는 동물 유래의 오일, 예를 들어, 해바라기유, 옥수수유, 대두유, 아보카도유, 호호바유, 매로우유 (marrow oil), 포도씨유, 참기름, 헤이즐넛유, 어유 및 글리세릴 트리카프로카프릴레이트 또는 식 R₉COOR₁₀ 의 식물성 또는 동물성 오일 (식 중, R₉ 는 탄소수 7 내지 29 의 고급 지방산 잔기를 나타내고, R₁₀ 은 탄소수 3 내지 20 의 선형 또는 분지형 탄화수소-기재 사슬, 특히 알킬 또는 알케닐을 나타냄), 예를 들어, 푸르셀린 오일 또는 액체 호호바 왁스;

- 천연 또는 합성 정유 (essential oil), 예를 들어, 유칼리유, 라반딘유, 라벤더유, 베티버유 (vetiver oil), 리째아큐베바유 (litsea cubeba oil), 레몬유, 샌들우드유 (sandlewood oil), 로즈마리유, 카모마일유, 세이버리유 (savoury oil), 너트메그유 (nutmeg oil), 시나몬유, 히솝유 (hyssop oil), 캐러웨이유 (caraway oil), 오렌지유, 게라니올유 (geraniol oil), 케이드유 (cade oil) 및 베르가모트유;

- 합성 오일, 예컨대, 팔레암유 (parleam oil), 폴리올레핀 및 액체 카르복실산 에스테르;

- 광유, 예컨대, 헥사데칸, 이소헥사데칸 및 파라핀유;

- 할로겐화 오일, 특히 플루오로카본, 예컨대 플루오로아민, 예를 들어, 퍼플루오로트리부틸아민, 플루오로히드로카본, 예를 들어, 퍼플루오로데카히드로나프탈렌, 플루오로 에스테르 및 플루오로 에테르;

- 휘발성 또는 비-휘발성 실리콘 오일.

합성 오일로서 사용될 수 있는 폴리올레핀은 특히 폴리-α-올레핀, 더욱 특히는 수소화 또는 비(非)수소화 폴리부텐형, 및 바람직하게는 수소화 또는 비(非)수소화 폴리이소부텐형의 것들이다.

합성 오일로서 사용될 수 있는 액체 카르복실산 에스테르는 모노카르복실산, 디카르복실산, 트리카르복실산 또는 테트라카르복실산 에스테르일 수 있다. 에스테르 내 탄소의 총 수는 일반적으로 10 이상, 바람직하게는 100 미만, 더욱 특히는 80 미만이다. 이들은 특히 포화 또는 불포화, 선형 또는 분지형 C₁-C₂₆ 지방족산 및 포화 또는 불포화, 선형 또는 분지형 C₁-C₂₆ 지방족 알콜의 모노에스테르이고, 상기 에스테르 내 탄소의 총 수는 일반적으로 10 이상이다. C₄-C₂₂ 디카르복실산 또는 트리카르복실산과 C₁-C₂₂ 알콜과의 에스테르, 및 C₂-C₂₆ 디히드록시, 트리히드록시, 테트라히드록시 또는 펜타히드록시 알콜과 모노카르복실산, 디카르복실산 또는 트리카르복실산과의 에스테르가 또한 사용될 수 있다.

상기 언급한 에스테르 중, 바람직하게는 알킬 팔미테이트, 예컨대 에틸 팔미테이트, 이소프로필 팔미테이트, 2-에틸헥실 팔미테이트, 2-옥틸데실 팔미테이트; 알킬 미리스테이트, 예컨대 이소프로필 미리스테이트, 부틸 미리스테이트, 세틸 미리스테이트, 2-옥틸도데실 미리스테이트; 알킬 스테아레이트, 예컨대 헥실 스테아레이트, 부틸 스테아레이트, 이소부틸 스테아레이트; 알킬 말레이트, 예컨대 디옥틸 말레이트; 알킬 라우레이트, 예컨대 헥실 라우레이트 및 2-헥실데실 라우레이트; 이소노닐 이소노나노에이트; 세틸 옥타노에이트가 사용될 수 있다.

유리하게는, 본 발명에 따른 나노에멀젼은, 분자량이 400 이상, 특히 400 내지 10,000 의 범위, 보다 낫게는 400 내지 5,000 의 범위, 또는 더욱이 400 내지 2,500 의 범위의 하나 이상의 오일을 함유한다. 분자량이 400 이상인 오일은 동물 또는 식물 유래의 오일, 광유, 합성 오일 및 실리콘 오일, 및 이들의 혼합물로부터 선택될 수 있다. 상기 유형의 오일로서, 예를 들어, 이소세틸 팔미테이트, 이소세틸 스테아레이트, 아보카도유 및 호호바유를 언급할 수 있다.

본 발명에 따른 나노에멀젼은, 나노에멀젼의 총 중량에 대하여, 바람직하게는 2 내지 40 중량%, 더욱 특히는 4 내지 30 중량% 및 바람직하게는 4 내지 20 중량%의 범위의 양의 오일상 (양친매성 지질 이외의 오일 및 기타 지방 물질) 을 함유한다.

오일상 및 양친매성 지질 (비이온성 및 이온성 양친매성 지질) 은 바람직하게는, 본 발명에 따른 나노에멀젼 내에서, 양친매성 지질의 양에 대한 오일상의 양의 중량비가 3 내지 10 의 범위, 바람직하게는 3 내지 6 의 범위가 되도록 존재한다. 용어 "오일상의 양" 이란 여기서 양친매성 지질의 양을 포함시키지 않은 상기 오일상의 구성성분의 총 양을 의미하는 것이다. 본 발명에 따른 나노에멀젼은 상기 기술한 화학식 (I) 의 우레아 유도체 외에, 특히, 필요한 경우, 조성물의 투명도를 향상시키기 위해, 용매를 함유할 수 있다.

이러한 용매는 바람직하게는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:

- C₁-C₈ 저급 알콜, 예컨대 에탄올;

- 글리콜, 예컨대, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸렌 글리콜, 디프로필렌 글리콜, 또는 4 내지 16, 바람직하게는 8 내지 12 개의 에틸렌 옥시드 단위를 함유하는 폴리에틸렌 글리콜;

- 당, 예컨대, 글루코오스, 프룩토오스, 말토오스, 락토오스 또는 수크로오스.

이러한 용매는 혼합물로서 사용될 수 있다. 이들이 본 발명의 나노에멀젼에 존재하는 경우, 이들은 나노에멀젼의 총 중량에 대하여 바람직하게는 0.01 내지 30 중량%의 농도로, 보다 낫게는 나노에멀젼의 총 중량에 대하여 5 내지 20 중량%의 농도로 사용될 수 있다. 알콜(들) 및/또는 당(들)의 양은 나노에멀젼의 총 중량에 대하여 바람직하게는 5 내지 20 중량%의 범위이고, 글리콜(들)의 양은 바람직하게는 나노에멀젼의 총 중량에 대하여 5 내지 15 중량%의 범위이다.

제조 방법:

상기 정의된 나노에멀젼의 제조 방법은, 10 ℃ 내지 80 ℃ 범위의 온도에서 격렬하게 교반하면서 오일상 및 우레아 유도체를 함유하는 수성상을 혼합하고, 5 × 10⁷ Pa 을 초과하는 압력에서 고압 균질화 단계를 수행하고, 임의로는 사용되는 중합체를 첨가하는 것으로 이루어진다. 본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 이어서, 5 × 10⁷ Pa 을 초과하는 압력에서 또다른 고압 균질화 단계를 수행한다. 고압 균질화는 바람직하게는 6 × 10⁷ Pa 내지 18 × 10⁷ Pa 범위의 압력에서 수행된다. 전단은 바람직하게는 2 × 10⁶ s^-1 내지 5 × 10⁸ s^-1, 보다 낫게는 1 × 10⁸ s^-1 내지 3 × 10⁸ s^-1 의 범위이다 (s^-1 는 초^-1를 나타냄). 그러한 방법은 감열 (thermosensitive) 활성 화합물과 혼화가능한 나노에멀젼을 생성하는 것을 가 능하게 하는데, 이는 지방 물질들을 변성없이 함유하는 오일 및 특히 향수를 함유할 수 있다.

나노캡슐

본 발명과 관련된 나노캡슐은 특허 출원 EP 0 447 318, EP 0 557 489, EP 0 780 115, EP 1 025 901, EP 1 029 587, EP 1 034 839, EP 1 414 390, FR 2 830 776, EP 1 342 471, FR 2 848 879 및 FR 04/50057 에 기술된 것들이다.

나노캡슐은, 오일성 코어 (core) 및 중합체계 쉘 (shell) 을 갖는 코어-쉘 (Core-Shell) 입자이다. 상기 언급한 다양한 출원은 다양한 부류의 중합체 및 이를 수득하기 위한 다양한 방법에 관한 것이다. 캡슐의 크기는 항상 1 ㎛ 미만이고, 80 nm 미만의 크기를 갖는 것이 가능하다. 이러한 입자는, 가장 통상적으로는 레시틴 또는 디메티콘 코폴리올로 이루어지는 라멜라 액정으로 코팅될 수 있다. 코팅은, 물에 접촉될 때 라멜라 액정상을 자발적으로 형성할 수 있는 양친매성 지질로 이루어져야 한다. 상기 라멜라상을 형성할 수 있는 양친매성 지질에, 입자 (나노캡슐) 에 포지티브 제타 전위를 부여하는 양이온성 계면활성제가 첨가될 것이다. 양이온성 계면활성제에 대한, 라멜라상을 형성하는 양친매성 지질의 중량비는 99/1 내지 75/25 일 것이다.

사용될 수 있는 양이온성 계면활성제는 이하 열거되는 것들이다.

유기 입자

본 발명의 유기 입자는 고체 나노스피어 (nanosphere) 로서, 이는 내부 공동이 없고, 다양한 방법 (수중 분산, 나노침전, 마이크로에멀젼 등) 에 의해 형성되 고, 하나 이상의 중합체 또는 하나 이상의 공중합체, 또는 이들의 혼합물로 이루어진다. 입자는 상기 정의된 제타 전위를 가지며 양이온성인데, 이는 중합체(들) 또는 공중합체(들)이 양이온성이거나, 또는 중합체(들) 또는 공중합체(들)이 비이온성이고, 이하 기술되는 바와 같은 양이온성 계면활성제가 사용되기 때문이다. 중합체와 관련하여, 양이온성 계면활성제의 양은 0 내지 25 % 일 것이다.

무기 입자

본 발명의 양이온성 무기입자는, 예를 들어, 실리카, TiO₂, ZnO, 알루미나 등을 기재로 할 수 있다. 예를 들어, 수중 콜로이달 분산액 중의 알루미나 입자, 예컨대, Nanomer 2 입자 (Nalco 사제) 를 언급할 수 있다. Clariant 사 및 Grace 사 또한 상기 유형의 입자를 제공한다.

*본 발명의 양이온성 입자의 제조에 사용될 수 있는 양이온성 계면활성제

본 발명에 따라 사용될 수 있는 양이온성 계면활성제가 이하 열거되는데, 이 리스트는 비제한적인 것이다.

양이온성 양친매성 지질은 바람직하게는 4 차 암모늄염 및 지방 아민 및 이들의 염으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

4 차 암모늄염은, 예를 들어, 하기이다:

- 하기 일반식 (IV) 을 갖는 화합물:

[일반식 (IV)]

{식 중, 라디칼 R₁ 내지 R₄ 는 동일하거나 상이할 수 있고, 탄소수 1 내지 30 의 선형 또는 분지형 지방족 라디칼, 또는 아릴 또는 알킬아릴과 같은 방향족 라디칼을 나타낸다. 지방족 라디칼은, 특히 산소, 질소, 황 또는 할로겐과 같은 헤테로 원자를 함유할 수 있다. 지방족 라디칼은, 예를 들어, 하기의 라디칼로부터 선택된다: 알킬, 알콕시, 폴리옥시(C₂-C₆)알킬렌, 알킬아미드, (C₁₂-C₂₂)알킬아미도(C₂-C₆)알킬, (C₁₂-C₂₂)알킬 아세테이트, 히드록시알킬 (대략 탄소수 1 내지 30); X 는 할라이드, 포스페이트, 아세테이트, 락테이트, (C₂-C₆)알킬 술페이트 및 알킬- 또는 알킬아릴술포네이트로 이루어진 군으로부터 선택되는 음이온이다},

- 예를 들어, 하기 화학식 (V) 을 갖는 것 등의 이미다졸리늄의 4 차 암모늄염:

[화학식 (V)]

{식 중, R₅ 는, 예를 들어, 탈로우 지방산 유래의 탄소수 8 내지 30 의 알케 닐 또는 알킬 라디칼을 나타내고, R₆ 은 수소 원자, C₁-C₄ 알킬 라디칼 또는 탄소수 8 내지 30 의 알케닐 또는 알킬 라디칼을 나타내고, R₇ 은 C₁-C₄ 알킬 라디칼을 나타내고, R₈ 은 수소 원자 또는 C₁-C₄ 알킬 라디칼을 나타내고, X 는 할라이드, 포스페이트, 아세테이트, 락테이트, 알킬 술페이트 및 알킬- 또는 알킬아릴술포네이트로 이루어진 군으로부터 선택되는 음이온이다. 바람직하게는, R₅ 및 R₆ 은, 예를 들어, 탈로우 지방산 유래의 탄소수 12 내지 21 의 알케닐 또는 알킬 라디칼의 혼합물을 나타내고, R₇ 은 메틸을 나타내고, R₈ 은 수소를 나타낸다. 그러한 제품은, 예를 들어, REWO 사에 의해 제품명 "REWOQUAT W 75" 로 시판된다},

- 하기 화학식 (VI) 의 4 차 디암모늄염:

[화학식 (VI)]

{식 중, R₉ 는 대략 탄소수 16 내지 30 의 지방족 라디칼을 나타내고, R₁₀, R₁₁, R₁₂, R₁₃및 R₁₄ 는 동일하거나 상이할 수 있고, 탄소수 1 내지 4 의 알킬 라디칼 또는 수소로부터 선택되고, X 는 할라이드, 아세테이트, 포스페이트, 니트레이트 및 메틸 술페이트로 이루어진 군으로부터 선택되는 음이온이다. 그러한 4 차 디암모늄 염은 특히 프로판탈로우디암모늄 디클로라이드를 함유한다},

- 하나 이상의 에스테르 관능기를 함유하는 4 차 암모늄 염.

본 발명에 따라 사용될 수 있는 하나 이상의 에스테르 관능기를 포함하는 4 차 암모늄염은 예를 들면 하기 화학식 (VII) 의 것이다:

[화학식 (VII)]

{식 중,

-　R₁₅ 는 C₁-C₆ 알킬 라디칼 및 C₁-C₆ 히드록시알킬 또는 디히드록시알킬 라디칼로부터 선택되고;

-　R₁₆ 은 하기로부터 선택되고:

-　라디칼

-　선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화 C₁-C₂₂ 탄화수소 기재 라디칼 R₂₀,

-　수소 원자,

-　R₁₈ 은 하기로부터 선택되고:

-　라디칼

-　선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화 C₁-C₆ 탄화수소 기재 라디칼 R₂₂,

-　수소 원자,

-　동일하거나 상이할 수 있는 R₁₇, R₁₉ 및 R₂₁ 은 선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화 C₇-C₂₁ 탄화수소 기재 라디칼로부터 선택되고;

-　n, p 및 r 은 동일하거나 상이할 수 있고, 2 내지 6 의 정수이고;

- y 는 1 내지 10 의 정수이고;

- x 및 z 는 동일하거나 상이할 수 있고, 0 내지 10 의 정수이고;

- X^- 은 단순 또는 복합 유기 또는 무기 음이온이고;

단, x + y + z 합계가 1 내지 15 이고, x 가 0 인 경우, R₁₆ 은 R₂₀ 을 나타내고, z 가 0 인 경우, R₁₈ 는 R₂₂ 를 나타낸다}.

알킬 라디칼 R₁₅ 는 선형 또는 분지형일 수 있고, 더욱 특히는 선형이다.

바람직하게는, R₁₅ 는 메틸, 에틸, 히드록시에틸 또는 디히드록시프로필 라 디칼을 나타내고, 더욱 특히는 메틸 또는 에틸 라디칼이다. 유리하게는, x + y + z 합계는 1 내지 10 이다.

R₁₆ 이 탄화수소 기재 라디칼 R₂₀ 인 경우, 이는 길고 탄소수가 12 내지 22 일 수 있고, 또는 짧고 탄소수가 1 내지 3 일 수 있다.

R₁₈ 이 탄화수소 기재 라디칼 R₂₂ 인 경우, 이의 탄소수는 바람직하게는 1 내지 3 이다.

유리하게는, R₁₇, R₁₉ 및 R₂₁ 는 동일하거나 상이할 수 있고, 선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화 C₁₁-C₂₁ 탄화수소 기재 라디칼로부터 선택되고, 더욱 특히는 선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화 C₁₁-C₂₁ 알킬 또는 알케닐 라디칼로부터 선택된다.

바람직하게는, x 및 z 는 동일하거나 상이할 수 있고, 0 또는 1 이다.

유리하게는, y 는 1 이다.

바람직하게는, n, p 및 r 은 동일하거나 상이할 수 있ㄱ, 2 또는 3 이고, 보다 더욱 특히는 2 이다.

음이온은 바람직하게는 할라이드(클로라이드, 브로마이드 또는 요오다이드) 또는 알킬 술페이트, 더욱 특히는 메틸 술페이트이다. 그러나, 아세테이트 또는 락테이트와 같은 유기산에서 유래한 음이온, 메탄술포네이트, 포스페이트, 니트레이트, 토실레이트, 또는 에스테르 관능기를 포함하는 암모늄과 혼화가능한 임의 의 기타 음이온이 사용될 수 있다.

음이온 X^- 는 보다 더욱 특히는 클로라이드 또는 메틸 술페이트이다.

하기 화학식 (VII) 의 암모늄 염이 보다 특히 사용된다:

식 중,

-　R₁₅ 는 메틸 또는 에틸 라디칼이고;

-　x 및 y 는 1 이고;

-　z 는 0 또는 1 이고;

n, p 및 r 은 2 이고;

-　R₁₆ 은 하기로부터 선택되고:

- 라디칼

- 메틸, 에틸 또는 C₁₄-C₂₂ 탄화수소 기재 라디칼;

- 수소 원자;

- R₁₈ 은 하기로부터 선택되고:

-　라디칼

-　수소 원자:

R₁₇, R₁₉ 및 R₂₁ 은 동일하거나 상이할 수 있고, 선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화 C₁₃-C₁₇ 탄화수소 기재 라디칼, 바람직하게는 선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화 C₁₃-C₁₇ 알킬 또는 알케닐 라디칼로부터 선택된다.

유리하게는, 탄화수소 기재 라디칼은 선형이다.

예를 들면, 화학식 (VII) 의 화합물, 예컨대, 디아실옥시에틸-디메틸암모늄, 디아실옥시에틸히드록시에틸메틸-암모늄, 모노아실옥시에틸디히드록시에틸메틸암모늄, 트리아실옥시에틸메틸암모늄 및 모노아실옥시에틸-히드록시에틸디메틸암모늄 염 (특히, 클로라이드 또는 메틸 술페이트) 및 이들의 혼합물을 언급할 수 있다. 바람직하게는 아실 라디칼은 탄소수가 14 내지 18 이고, 이는 더욱 특히는 야자유 또는 해바라기유 등의 식물성 오일로부터 유래한다.

화합물이 여러 개의 아실 라디칼을 포함하는 경우, 후자는 동일하거나 상이할 수 있다.

상기 생성물은 예를 들면, 식물 또는 동물성 기원의 지방산, 또는 지방산 혼합물 상에, 임의로 옥시알킬렌화된, 트리에탄올아민, 트리이소프로판올아민, 알킬디에탄올아민 또는 알킬디이소프로판올아민의 직접적 에스테르화에 의해 수득되거나, 또는 이들의 메틸 에스테르의 에스테르교환에 의해 수득된다. 상기 에스테르화 후에는, 알킬화제, 예컨대 알킬 할라이드 (바람직하게는, 메틸 또는 에틸 할라이드), 디알킬 술페이트 (바람직하게는, 메틸 또는 에틸 술페이트), 메틸 메탄 술포네이트, 메틸 파라-톨루엔술포네이트, 글리콜 클로로히드린 또는 글리세롤 클로로히드린을 이용하여 사차화가 수행된다.

상기 화합물은 예를 들면 HENKEL 사에 의해 제품명 DEHYQUART 로, STEPAN 사에 의해 제품명 STEPANQUAT 로, CECA 사에 의해 제품명 NOXAMIUM 로, 및 REWOWITCO 사에 의해 제품명 REWOQUAT WE 18 로 시판중이다.

본 발명에 따른 조성물에는 바람직하게는 4차 암모늄 모노에스테르, 디에스테르 및 트리에스테르 염의 혼합물이 함유되며, 중량 기준으로 대다수는 디에스테르 염이다.

암모늄 염의 혼합물로서는, 예를 들면 15 내지 30 중량%의 아실옥시에틸디히드록시에틸메틸암모늄 메틸 술페이트, 45 내지 60 중량%의 디아실옥시에틸히드록시에틸-메틸암모늄 메틸 술페이트 및 15 내지 30 중량%의 트리아실옥시에틸메틸암모늄 메틸 술페이트를 함유하는 혼합물이 사용될 수 있으며, 상기 아실 라디칼은 탄소수가 14 내지 18 이고, 이는 임의적으로는 부분적으로 수소화된 야자유로부터 비롯한다. 또한 특허 US-A-4　874　554 및 US-A-4　137　180 에 기재된 하나 이상의 에스테르 관능기를 함유하는 암모늄염이 사용될 수 있다.

화학식 (IV) 를 가진 4차 암모늄염 중에서, 우선 테트라알킬암모늄 클로라이드, 예를 들면 디알킬디메틸암모늄 또는 알킬트리메틸암모늄 클로라이드(여기서, 알킬 라디칼은 탄소수가 약 12 내지 22 임), 특히 베헤닐트리메틸암모늄, 디스테아릴디메틸암모늄, 세틸트리메틸암모늄 또는 벤질디메틸스테아릴암모늄 클로라이드가 바람직하며, 그렇지 않으면 두번째로, VAN DYK 사에 의해 제품명 "CERAPHYL 70" 으 로 시판중인 스테아라미도프로필디메틸 (미리스틸 아세테이트) 암모늄 클로라이드가 바람직하다.

본 발명에 의하면, 베헤닐트리메틸암모늄 클로라이드 또는 베헤닐트리메틸암모늄 브로마이드 및 CTAB (세틸트리메틸암모늄 브롬) 가 가장 특히 바람직한 4차 암모늄 염이다.

본 발명의 지방 아민은 하기 일반식에 해당한다:

{식 중,

- R₁ 은 탄소수 8 내지 30, 바람직하게는 탄소수 10 내지 24 의 분지형 또는 비분지형, 포화 또는 불포화 탄화수소 기재 사슬이고,

- R₂ 및 R₃ 은 탄소수 1 내지 10, 바람직하게는 탄소수 1 내지 4 의 분지형, 비분지형, 포화 또는 불포화 탄화수소로부터 독립적으로 선택되고,

- R₂ 및 R₃ 은 또한 서로 독립적으로, 수소 원자 H 에 해당할 수 있고,

- M 은 1 내지 10, 바람직하게는 1 내지 5 이다}.

비제한적인 예로, 하기를 언급할 수 있다: 스테아릴아민, 스테아레이트 아미노에틸에탄올아미드, 스테아릴 디에탄올아미드, 스테아레이트 디에틸렌트리아민, 스테아라미도프로필디메틸아민, 스테아라미도프로필디에틸아민, 스테아라미도에틸디에틸아민, 스테아라미도에틸디메틸아민, 팔미토아미도프로필디메틸아민, 팔미토 아미도프로필디에틸아민, 팔미토아미도에틸디에틸아민, 팔미토아미도에틸디메틸아민, 베헨아미도프로필디메틸아민, 베헨아미도프로필디에틸아민, 베헨아미도에틸디에틸아민, 베헨아미도에틸디메틸아민, 아라키다미도프로필디메틸아민, 아라키다미도프로필디에틸아민, 아라키다미도에틸디에틸아민 및 아라키다미도에틸디메틸아민.

시판되고 있는 지방 아민으로서, 하기를 언급할 수 있다: Croda 사의 Incromine BB, Nikkol 사의 Amidoamine MSP 및 Inolex 사의 Lexamine.

다른 지방 아민으로서, 예로서 하기를 언급할 수 있다: 스테아릴아민, 스테아레이트 아미노에틸에탄올아미드, 스테아릴 디에탄올아미드 및, 그 중에서도 Sabo 사가 Sabomina 계열로 판매하는 스테아레이트 디에틸렌트리아민.

또한, 지방 아민 아세테이트, 예컨대 Kao 사의 Acetamine 계열을 언급할 수 있다.

상기 지방 아민은 또한 에톡시화될 수 있고, 그 예에는 Akzo Nobel 사의 Berol 380, 390, 453 및 455, Ethomeens, 또는 Condea Chemie 사의 Marlazin L10, OL2, OL20, T15/2, T50 이 있다.

본 발명의 입자는 화장용, 피부학용 또는 안과용 목적을 위하여 임의의 약제학적 담체에 도입될 수 있다. 예로, 모든 유형의 로션, 세럼(serum), 젤 및 에멀젼을 언급할 수 있다.

본 발명에 따른 조성물은 국소 적용에 일반적으로 사용되는 임의의 약제학적 형태, 예컨대 용액, 젤, 로션 또는 세럼 유형의 분산물, 수성상 중 지방상의 분산 (O/W) 또는 그 반대 (W/O) 에 의해 수득된, 밀크 타입의 액체 또는 반액체 밀도를 가진 에멀젼, 크림 또는 젤 타입의 부드러운 반고체 또는 고체 밀도를 가진 현탁물 또는 에멀젼의 분산물, 또는 그 밖에 이온 및/또는 비이온 유형의 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 마이로입자 또는 소낭 분산물의 형태일 수 있다. 상기 조성물은 통상적인 방법에 따라 제조된다.

본 발명에 따른 조성물에는 또한 화장품 또는 약제학적 분야에서 일반적으로 사용되는 임의의 첨가제가 포함될 수 있다.

물론, 당업계의 숙련된 자는 상기의 임의의 추가 화합물(들) 및/또는 그의 양을, 본 발명에 따른 조성물의 유익한 특성이 손상되지 않거나 또는 실질적으로 손상되지 않도록 선택에 주의할 것이다.

특히, 상기 도입에 의해, siRNA 와 결합된 양이온성 입자의 안정성이 손상되지 않도록 주의될 것이다.

본 발명의 조성물은 특히 미용 또는 약제학적 활성제를 함유할 수 있다. 이는 바람직하게는 탈색소제, 선스크린(sunscreen)을 포함할 것이다.

조성물에 혼입될 수 있는 탈색소제에는 예를 들면, 하기의 화합물이 포함될 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다: 코직산; 엘라직산; 아르부틴 및 이의 유도체, 예컨대 출원 EP-895　779 및 EP-524　109 에 기재된 것; 히드로퀴논; 아미노페놀 유도체, 예컨대 출원 WO　99/10318 및 WO　99/32077 에 기재된 것, 특히 N-콜레스테릴옥시카르보닐-파라-아미노페놀 및 N-에틸옥시카르보닐-파라-아미노페놀; 이미노페놀 유도체, 특히 출원 WO　99/22707 에 기재된 것; L-2-옥소티아졸리딘-4-카르 복실산 또는 프로시스테인, 및 이의 염 및 에스테르; 아스코르브산 및 이의 유도체, 특히 아스코르빌 글루코시드; 및 식물 추출물, 특히 감초, 뽕나무 및 골무꽃의 추출물.

자외 복사 스크리닝제(ultraviolet-radiation-screening agent)는 유기 UV-스크리닝제 또는 무기 UV-복사-스크리닝제로부터 선택될 수 있다.

본 발명에 따른 유기 UV 스크리닝제는 일반 미용 용매에서 불용성, 수용성,또는 지용성일 수 있다. 이는 특히 하기로부터 선택된다: 안트라닐레이트; 신남산 유도체; 디벤조일메탄 유도체; 살리실산 유도체, 캄포르 유도체; 트리아진 유도체, 예컨대 특허 출원 US　4,367,390, EP　863　145, EP　517　104, EP　570　838, EP　796　851, EP　775　698, EP　878　469 및 EP　933　376 에 기재된 것; 벤조페논 유도체, 특히 출원 EP　1　046　391 및 DE 10012408 에 기재된 것; β,　β'-디페닐 아크릴레이트 유도체, 벤조트리아졸 유도체, 벤즈이미다졸 유도체; 이마다졸린; 비스벤조아졸릴 유도체, 예컨대 특허 EP　669　323 및 US　2,463,264 에 기재된 것; p-아미노벤조산 (PABA) 유도체; 출원 US　5,237,071, US　5,166,355, GB　2303549, DE　19726184 및 EP　893　119 에 기재된 바와 같은 메틸렌비스(히드록시페닐-벤조트리아졸) 유도체; 스크리닝 중합체 및 스크리닝 실리콘, 예컨대 출원 WO　93/04665 에 기재된 것; α-알킬스티렌-유래 이량체, 예컨대 특허 출원 DE　19855649 에 기재된 것; 및 4,4-디아릴부타디엔 유도체, 예컨대 특허 출원 EP　0　967　200 및 DE　19755649 에 기재된 것.

무기 스크리닝제는 일반적으로, 코팅될 수도 또는 코팅되지 않을 수도 있는 금속 산화물의 색소 또는 다른 나노색소 (1차 입자의 평균 크기: 일반적으로 5 nm 내지 100 nm, 바람직하게는 10 nm 내지 50 nm), 예를 들어, 티타늄 산화물 (금홍석 (rutile) 및/또는 예추광 (anatase) 형태인 무정형 또는 결정질), 철 산화물, 아연 산화물, 지르코늄 산화물 또는 세륨 산화물의 나노색소이고, 이들은 모두 그 자체로 공지된 UV 광보호제이다. 게다가 통상적인 코팅제는 알루미나 및/또는 알루미늄 스테아레이트이다. 이러한 코팅 또는 비코팅 금속 산화물 나노색소는 특허 출원 EP　0　518　772 및 EP　0　518　773 에 자세히 기재되어 있다.

본 발명에 따른 복사-스크리닝제는 본 발명에 따른 조성물 중에 일반적으로, 조성물의 총 중량에 대해 0.1 내지 20 중량%, 바람직하게는 0.2 내지 15 중량% 범위의 비율로 존재한다.

이의 다른 목적에 따르면, 본 발명은 또한, 서열번호: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47 및 48 에서 선택되는 서열 중 하나 이상의 이중 가닥 RNA 올리고뉴클레오티드의, 티로시나제 발현 저해를 위한 용도에 관한 것이다.

특히, 본 발명에 따른 올리고뉴클레오티드는 피부용의 미백제 및/또는 항-갈변제 (anti-browning agent) 로 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 이중 가닥 RNA 올리고뉴클레오티드는 또한 멜라닌 합성을 감소시키기 위한, 특히 과색소침착 및 색소침착 흔적, 피부 이상 변색 치료를 위한, 또는 모낭 표백, 멜라닌세포 과다활성에 의한 국부적 과색소침착, 예컨대 임신 중 또는 에스트로겐-프로게스틴 피임 중에 나타나는 특발성 기미("임신 흔적" 또는 갈색반), 양성 멜라노사이트 과다활성 및 증식에 의한 국지적 과색소침착, 예컨대 광선 흑색점 (actinic lentigo) 이라 불리는 노인성 색소침착 흔적, 상해 후 상처 치유 또는 광민감성에 의하여 일어날 수 있는 우발적 과색소침착 및 또한 특정 형태의 백피증, 예컨대 백반증의 치료를 위한 국소적, 미용 또는 피부학적 조성물의 제조에 사용될 수 있다. 후자 (피부가 하얗게 보이는 흉터를 야기할 수 있는 상처 치유) 에 있어서, 상해를 입은 피부를 재색소화 하는 것이 불가능하므로, 나머지 부분의 정상 피부 영역을 탈색소화하여 전체적으로 균질하게 하얀 색조를 가지는 피부를 제공하는 것으로 과정이 마무리된다.

본 발명의 또 다른 목적은 서열번호: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47 및 48 에서 선택되는 서열 중 하나 이상의 이중 가닥 RNA 올리고뉴클레오티드를 국소 적용하는 것을 포함하는, 피부색을 희게 및/또는 밝게 하고/하거나, 갈색화된 피부의 색을 고르게 하는 미용 방법에 관한 것이다.

바람직하게는, 올리고뉴클레오티드는 국소 조성물 중에 1 nM 이하의 농도로 제형화된다.

더 바람직하게는, 올리고뉴클레오티드는 제타 전위가 10 내지 80 mV 이고 크기가 1 ㎛ 이하인 양이온성 입자와 결합되는데, 상기 양이온성 입자는 상기한 계면활성제 미셀, 블록 중합체 미셀, 비이온성 및 양이온성 계면활성제의 리포좀, 니오 좀, 올레오좀, 나노에멀젼의 입자, 나노캡슐, 유기 입자 또는 무기 입자 중에서 선택된다.

미용, 피부학적, 안과적 또는 약학적 케어 목적에 있어서, 침해성 방법, 예컨대 피하 또는 안구 주사와 같은 방법을 피하고자 하였다. 본 발명에 따른 siRNA 와 결합된 양이온성 입자는, 현탁액 중 또는 허용되는 미용용 담체, 예컨대 로션, 세럼, 유화된 또는 유화되지 않은 젤, 오일/수, 수/오일 또는 다중 에멀젼, 마이크로에멀젼 등 내로 혼입되어, 피부 또는 점막에 국소적으로, 또는 눈 속에 적용할 수 있다.

siRNA 와 결합된 입자의 침투를 촉진하기 위해, 수분 침투성을 개질시킬 수 있고; 따라서, Tewameter TM210 또는 Dermalab (Cortex technology) 로 IWL (불감성 수분 손실) 를 측정하여 수분 침투성을 제어할 수 있다.

예로서, 하기의 방법을 사용할 수 있다:

- 본 발명에 따른 조성물의 적용 전, 스트리핑 (stripping) (코르네오디스크(corneodisc) "바니시")), 화학 박피 또는 기계적 박피술;

- 탈지 효과를 가지는 하나 이상의 용매의 혼합물로 전처리;

- 세정제 거품 제품을 이용한 피부 클렌징;

- 예를 들어, 처리할 피부의 표면을 방수성 합성 막 (예, Blenderm) 으로 덮거나, 또는 바셀린 층 적용을 통한 폐색적 전- 및/또는 후-처리. 이는 피부의 자연적인 IWL 을 막아 상피 지방질의 과도한 수화 (overhydration) 를 야기하여 침투성을 더욱 높이는 효과가 있다.

본 발명의 조성물 적용 후, 당업계의 숙련된 자에게 공지된, 피부로의 분자 침투를 촉진하는 방법, 예를 들어, 이온 영동법 또는 전기 천공법을 사용할 수 있다.

시험관내 피부 모델의 경우, 하기 처리가 적용될 수 있다:

- 본 발명에 따른 조성물의 적용 전, 매질을 변화 (1.5 mM 대신 0.10 - 0.75 mM) 시키거나 또는 킬레이트제를 첨가함으로써, Ca²⁺ 함량을 감소시킬 수 있음. 이는 막간 부착을 감소시켜, 피부의 침투성을 증가시키는 효과가 있음 (Effects of extra- and intracellular calcium concentration on DNA replication, lateral growth, and differentiation of human epidermal cells in culture. Virchows Arch B Cell Pathol Incl Mol Pathol. 1990; 59(1): 17-25);

- 이온 영동법, 전기 천공법 및 모델의 침투성 개질을 위한 임의의 공지된 방법을 사용.

본 발명에 따르면, 티로시나제 발현을 감소시키는 신규한 이중 가닥 RNA 올리고뉴클레오티드가 제공된다.

실시예 1 - 제형

양이온성 미셀

- 실시예 1: 몰 비 5/1 의 옥틸-β-글루코시드/세틸트리암모늄 브로마이드의

E1: 증류수 중 100　mM

E2: 증류수 중 50　mM

E3: 증류수 중 25　mM

E4: 증류수 중 12.5　mM.

2 가지 계면활성제 (비이온성 + 양이온성) 를 증류수 중에 가용화하였다. 서열번호: 1 (20　μM) 의 siRNA 의 현탁액을 1:1 내지 1:9 부피 (siRNA:미셀) 로 첨가하여, 미셀의 농도 비율을 감소시켰다.

- 실시예 2: 증류수 중 몰 비 5/1 의 데실-β-글루코시드/베헤닐트리암모늄 클로라이드의 미셀. 이전 실시예에서와 동일한 농도로 제조하였다.

이러한 2 개의 현탁액을 색소침착 흔적 및 피부 이상 변색의 치료 또는 모낭의 표백을 위해 피부에 적용할 수 있다.

양이온성 리포좀

- 실시예 1: "유동성" 소낭

PEG 400 이소스테아레이트 5.5%

베헤닐트리암모늄 클로라이드 0.5%

증류수 100 까지의 충분량

- 실시예 2: "비유동성" 소낭

소르비탄 팔미테이트 2.75%

콜레스테롤 2.75%

베헤닐트리암모늄 클로라이드 0.5%

증류수 100 까지의 충분량

이러한 리포좀 현탁액의 예는 투석을 통해 실현되었다. 소낭을 이루는 지질을 옥틸-β-글루코시드의 수용액에 가용화하였다. 이후 이 용액을 72 시간 동안 물에 대해 투석시켰다. 이후 siRNA 서열번호:　4 의 현탁액을 첨가하고, 소낭에 대해 지질의 농도를 약 3% 로 만들었다. 이 비이온성 리포좀의 현탁액을 색소침착 흔적 및 피부 이상 변색의 치료 또는 모낭의 표백을 위해 피부에 적용할 수 있다.

양이온성 올레오좀

- 오일상

수크로오스 모노-디스테아레이트

(Stearaineries Dubois 에서 판매) 0.45%

소르비탄 스테아레이트 4EO (Tween 61 Uniquema) 0.30%

베헤닐트리암모늄 클로라이드 0.21%

비타민 E 아세테이트 0.5%

호호바유 0.5%

스테아릴 헵타노에이트 1%

휘발성 실리콘 오일 1%

비타민 F 글리세리드 0.5%

보존제 0.02%

BHT 0.01%

- 수성상

증류수 100 까지의 충분량

보존제 0.1%

고압 균질화를 통해 이 분산액이 약 170 nm 의 입자 크기를 가지도록 하였다. 이후 1:1 내지 1:20 (siRNA/올레오좀) 범위의 비율의 siRNA 서열번호:　16 (20 μM) 의 현탁액을 첨가하였다. 이후 siRNA 는 상기 입자의 표면과 복합체를 형성할 것이다.

양이온성 나노캡슐

- 유기상

폴리카프로락톤 (MW: 50,000) 1%

비타민 E 1%

디메티콘 코폴리올 DC2 5695 (Dow Corning) 0.5%

베헤닐트리암모늄 클로라이드 0.21%

아세톤 200 ㎖

- 수성상

플루로닉 F68 0.5%

증류수 200 ㎖

교반하면서 유기상을 수성상에 도입하였다. 이후 아세톤 및 100 ㎖ 의 수성상을 증발 제거하여 크기가 220 nm 인 나노캡슐의 현탁액을 수득하였다. 이후 1:1 내지 1:20 (siRNA/나노캡슐) 범위의 비율의 siRNA 서열번호:　37 (20 μ M) 의 현탁액을 첨가하였다. 이후 siRNA 는 상기 입자의 표면과 복합체를 형성할 것이다.

유기 나노입자

- 유기상

폴리에틸렌 아디페이트

(Scientific Polymer 제품) 2%

디메티콘 코폴리올 DC2 5695 (Dow Corning) 0.5%

베헤닐트리암모늄 클로라이드 0.21%

아세톤 200 ㎖

- 수성상

플루로닉 F68 0.5%

증류수 200 ㎖

교반하면서 유기상을 수성상에 도입하였다. 이후, 아세톤 및 100 ㎖ 의 수성상을 증발 제거하여 크기가 180 nm 인 나노입자의 현탁액을 수득하였다. 이후 1:1 내지 1:20 (siRNA/나노입자) 범위의 비율의 siRNA 서열번호:　40 (20 μM) 의 현탁액을 첨가하였다. 이후 siRNA 는 상기 입자의 표면과 복합체를 형성할 것이다.

양이온성 나노에멀젼

- 오일상

PEG 400 이소스테아레이트 (Uniqema 에서 판매) 1%

베헤닐트리암모늄 클로라이드 1%

아보카도유 1%

호호바유 3%

시클로펜타메틸실록산 2%

- 수성상

증류수 30%

*디프로필렌 글리콜 10%

- 희석상

증류수 100% 까지의 충분량

보존제 0.1%

매우 강하게 교반하면서 수성상에 오일상을 분산시켜 에멀젼을 제조하였다. 이후, 수득한 현탁액을, 약 1200 b 의 압력에서 초고압 균질화기를 사용하여 수차례 균질화시켰다. 입자 크기는 50 nm 정도이고, 현탁액은 투명하였다. 이후 희석상을 첨가하였다.

이전 경우들과 같이, 이후 1:1 내지 1:20 (siRNA/나노에멀젼) 범위의 비율의 siRNA 서열번호:　42 (20 μM) 의 현탁액을 첨가하였다. 이후 siRNA 는 상기 입자의 표면과 복합체를 형성할 것이다.

실시예 2 - 본 발명에 따른 siRNA 의 활성 측정

Invitrogen 에 의해 개발된 "pSCREEN-iT™ 시스템" 테스트를 티로시나제 억 제에 대한 유효성을 평가하도록 설정하여, 본 발명에 따른 서열번호: 1 내지 47 의 47 개의 siRNA 의 유효성을 평가하였다.

테스트를 위한 실험 프로토콜:

- 2×10⁴ A549 세포/웰을 48-웰 플레이트에 접종하고, 밤새 배양한다.

- 하기와 복합시킨 Lipofectamine 2000 (Invitrogen) 2 μg/㎖ 을 사용하여 5 시간 동안 3 중으로 동시-트랜스펙션 (cotransfection) 을 수행한다:

* LacZ 유전자에 결합시킨 티로시나제 pSCREEN-iT™ 벡터 - 10 ng/웰

* 루시퍼라제 리포터 플라스미드 - 20 ng/웰

* 1 nM Stealth™ RNA (하기 서열목록 (표 Ⅰ) 에 주어진 서열)

- 트랜스펙션 24 시간 후, 세포를 용해시키고, β-갈락토시다제 (β-Gal) 및루시퍼라제 (Luc) 활성을 측정한다. β-Gal/Luc 비율은 티로시나제의 억제 백분율을 결정한다.

수득된 결과는 표 II 에 나타내었다.

[표 II]

다음으로, 가장 효과적이었던, 즉 1 nM 에서 91 % 초과의 유효성을 가진 20 개 서열들에 대하여 용량-효과를 측정하였다. 결과는 표 III 에 제공되어 있 다.

[표 III]

본 발명에 따른 siRNA 는 가장 효과적인 20 개 서열들에 대하여 1 nM 에서 94 % 초과의 유효성을 나타낸다. 테스트된 가장 낮은 용량은, 티로시나제를 인코딩하는 mRNA 의 분해에 대해 72 % 의 유효성을 나타낸 0.016 nM 이다.

실시예 3 - 본 발명에 따른 siRNA 에 의해 유발되는 가능한 인터페론형 반응 의 평가

본 발명의 대상인 siRNA 는 인터페론형 반응을 유도하지 않았음이 입증되었다. 이를 위하여, Invitrogen 에 의해 시판중인 "인간 세포에서의 이중 가닥 RNA 에 대한 인터페론-매개 스트레스 반응을 모니터링하기 위한 BLOCK-iT^TM RNAi 스트레스 반응 컨트롤 키트 (인간)"에 기재된 프로토콜에 따라, 정량적 PCR (qPCR) 에 의해, 인터페론에 의해 유도되는 것으로 알려진 OAS-1 및 IFIT-1 (인터페론-유도성 테트라트리코펩티드 반복 도메인) 유전자들 [Wieland SF 등, Searching for Interferon-Induced Genes That Inhibit Hepatitis B Virus Replication in Transgenic Mouse Hepatocytes, J. of Virology 2003; 77: 1227-1236. Persengiev SP 등, Nonspecific, concentration-dependent stimulation and repression of mammalian gene expression by small interfering RNAs (siRNAs). RNA 2004; 10: 12-18. Bridge AJ 등, Induction of an interferon response by RNAi vectors in mammalian cells. Nature Genet. 2003; 34: 263-264. Scacheri PC 등, Short interfering RNAs can induce unexpected and divergent changes in the levels of untargeted proteins in mammalian cells. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2004, 101: 1892-1897. Sledz CA 등, Activation of the interferon system by short-interfering RNAs. Nat Cell Biol. 2003; 9: 834-9. Patzwahl R 등, Enhanced expression of interferon-regulated genes in the liver of patients with chronic hepatitis C virus infection: detection by suppression-subtractive hybridization. J. Virol. 2001; 75: 1332-1338.] 의 발현을 측정하였다.

hOAS-1 유전자의 발현 수준 측정:

hOAS-1 유전자의 발현 수준은 GAPDH 기준 유전자의 발현 수준과 관련되어 있었다.

결과: 오직 양성 대조군 (1 kb 의 긴 dsRNA) 만이 hOAS-1 유전자 발현의 유의미한 증가를 유도한다. 테스트된 서열들 (서열번호: 1, 2, 4, 13 및 46) 은 hOAS-1 유전자 발현을 유의미하게 증가시키지 않는다.

hIFIT-1 의 발현 수준의 측정

결과: 오직 양성 대조군 (1 kb 의 긴 dsRNA) 만이 대략 25 의 역치 사이클 값에서 검출된 hIFIT-1 유전자의 유의미한 발현을 유도한다. 테스트된 서열 (서열번호: 1, 2, 4, 13 및 46) 은 오직 대략 32 ~ 36 의 역치 사이클 값에 대하여만 hIFIT-1 유전자 발현을 유도하는데, 즉, 10² ~ 10³ 배 더 낮은 양의 전달자에 해당하는 7 ~ 11 사이클의 차이가 난다.

이들 검정에 의하여, 본 발명에 따른 dsRNA 가 인터페론형 반응을 유도하지 않는다고 결론지을 수 있다.

<110> L'OREAL <120> Double-stranded RNA oligonucleotide which inhibits tyrosinase expression <130> OA05362/CB <160> 48 <170> PatentIn version 3.3 <210> 1 <211> 25 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1 gcguaauccu ggaaaccaug acaaa 25 <210> 2 <211> 25 <212> RNA <213> homo sapiens <400> 2 gccuaccuca cuuuagcaaa gcaua 25 <210> 3 <211> 25 <212> RNA <213> homo sapiens <400> 3 ccugugucuc cucuaagaac cugau 25 <210> 4 <211> 25 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 4 ccauagggac cuauggccaa augaa 25 <210> 5 <211> 25 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 5 ccgauuggag gaguacaaca gccau 25 <210> 6 <211> 25 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 6 ggaccuuuac ggcguaaucc uggaa 25 <210> 7 <211> 25 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 7 ggcguaaucc uggaaaccau gacaa 25 <210> 8 <211> 25 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 8 ccugucagaa uauccuucug uccaa 25 <210> 9 <211> 25 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 9 ccuggaaacc augacaaauc cagaa 25 <210> 10 <211> 25 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 10 ccaauaugaa ucugguucca uggau 25 <210> 11 <211> 25 <212> RNA <213> homo sapiens <400> 11 gguuccaugg auaaagcugc caauu 25 <210> 12 <211> 25 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 12 gcaaagcaua ccaucagcuc agacu 25 <210> 13 <211> 25 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 13 ggaguacaac agccaucagu cuuua 25 <210> 14 <211> 25 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 14 gcagagguuc cugucagaau auccu 25 <210> 15 <211> 25 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 15 gcagauuguc uguagccgau uggag 25 <210> 16 <211> 25 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 16 gaucaacacc cauguuuaac gacau 25 <210> 17 <211> 25 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 17 gaguacaaca gccaucaguc uuuau 25 <210> 18 <211> 25 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 18 gcauuauuau gugucaaugg augca 25 <210> 19 <211> 25 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 19 gaccuuuacg gcguaauccu ggaaa 25 <210> 20 <211> 25 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 20 gccuuggcau agacucuucu uguug 25 <210> 21 <211> 25 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 21 gcacagauga guacauggga gguca 25 <210> 22 <211> 25 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 22 gagagacgac ucuuggugag aagaa 25 <210> 23 <211> 25 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 23 gaggaguaca acagccauca gucuu 25 <210> 24 <211> 25 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 24 ucuguagccg auuggaggag uacaa 25 <210> 25 <211> 25 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 25 ucccuagagc cugugucucc ucuaa 25 <210> 26 <211> 25 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 26 ucuuggcaga uugucuguag ccgau 25 <210> 27 <211> 25 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 27 ucuuguugcg gugggaacaa gaaau 25 <210> 28 <211> 25 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 28 gccaucaguc uuuaugcaau ggaac 25 <210> 29 <211> 25 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 29 ccaaacugca cagagagacg acucu 25 <210> 30 <211> 25 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 30 ccugaguuug acccaauaug aaucu 25 <210> 31 <211> 25 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 31 ccaauuagcc aguuccugca gaccu 25 <210> 32 <211> 25 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 32 ggaggaguac aacagccauc agucu 25 <210> 33 <211> 25 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 33 ccauggauaa agcugccaau uucag 25 <210> 34 <211> 25 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 34 acucuucuug uugcgguggg aacaa 25 <210> 35 <211> 25 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 35 acaacagcca ucagucuuua ugcaa 25 <210> 36 <211> 25 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 36 accucacuuu agcaaagcau accau 25 <210> 37 <211> 25 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 37 gucuggaugc auuauuaugu gucaa 25 <210> 38 <211> 25 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 38 accuugugag gacuagagga agaau 25 <210> 39 <211> 25 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 39 guuccaugga uaaagcugcc aauuu 25 <210> 40 <211> 25 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 40 acagagagac gacucuuggu gagaa 25 <210> 41 <211> 25 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 41 gccugugucu ccucuaagaa ccuga 25 <210> 42 <211> 25 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 42 ucaggcagag guuccuguca gaaua 25 <210> 43 <211> 25 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 43 caacagccau cagucuuuau gcaau 25 <210> 44 <211> 25 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 44 gcauaccauc agcucagacu auguc 25 <210> 45 <211> 25 <212> RNA <213> homo sapiens <400> 45 ccaucagucu uuaugcaaug gaacg 25 <210> 46 <211> 25 <212> RNA <213> homo sapiens <400> 46 ggaucaacac ccauguuuaa cgaca 25 <210> 47 <211> 25 <212> RNA <213> homo sapiens <400> 47 cagagguucc ugucagaaua uccuu 25 <210> 48 <211> 19 <212> RNA <213> homo sapiens <400> 48 ugcaccacuu gggccucaa 19

Claims

티로시나제 (tyrosinase) 발현을 억제하기 위하여, 서열번호: 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46 또는 47 에서 선택되는 서열 중 하나 이상의 이중 가닥 RNA 올리고뉴클레오티드를 사용하는 미용 (cosmetic) 방법.
티로시나제 발현을 억제하기 위하여, 서열번호: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46 또는 47 에서 선택되는 서열 중 하나 이상의 이중 가닥 RNA 올리고뉴클레오티드를 사용하는 방법으로서, 상기 올리고뉴클레오티드는, 제타 전위가 10 내지 80 mV 이고 크기가 1 ㎛ 이하인 양이온성 입자에 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 미용 방법.
제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 상기 하나 이상의 이중 가닥 RNA 올리고뉴클레오티드를 피부용 미백제 또는 항-갈변제 (anti-browning agent) 로서 사용하는 미용 방법.
제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 색소침착 흔적 또는 노화 흔적의 형성을 예 방하거나 이를 제거하기 위한, 또는 갈색화된 피부를 밝게 또는 희게하거나, 또는 갈색화된 피부의 색을 고르게 하기 위한 미용 방법.
서열번호: 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46 또는 47 에서 선택되는 서열 중 하나 이상의 이중 가닥 RNA 올리고뉴클레오티드의 국소 적용을 포함하는, 피부색을 희게 또는 밝게 하거나, 갈색화된 피부의 색을 고르게 하는 미용 방법.
서열번호: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46 또는 47 에서 선택되는 서열 중 하나 이상의 이중 가닥 RNA 올리고뉴클레오티드의 국소 적용을 포함하는, 피부색을 희게 또는 밝게하거나, 갈색화된 피부의 색을 고르게 하는 미용 방법으로서, 상기 올리고뉴클레오티드가, 제타 전위가 10 내지 80 mV 이고 크기가 1 ㎛ 이하인 양이온성 입자에 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 미용 방법.
제 5 항 또는 제 6 항에 있어서, 상기 올리고뉴클레오티드가 국소용 조성물 중에 1nM 내지 100 μM 의 농도 범위로 제형화되는 것을 특징으로 하는 미용 방법.
제 5 항 또는 제 6 항에 있어서, 상기 국소 적용이, 스트리핑 (stripping), 화학 박피, 기계적 박피술, 탈지 (defatting) 효과를 가진 하나 이상의 용매의 적용, 및 세정제 거품 제품을 이용한 피부 클렌징에서 선택되는 피부에 대한 전처리 후에 실시되는 것을 특징으로 하는 미용 방법.
제 5 항 또는 제 6 항에 있어서, 상기 국소 적용이 폐색적 (occlusive) 후처리 전에 실시되는 것을 특징으로 하는 미용 방법.