KR20070008589A

KR20070008589A - 아밀린 족 펩티드 및 이의 제조 및 사용 방법

Info

Publication number: KR20070008589A
Application number: KR1020067018379A
Authority: KR
Inventors: 크리스토퍼 제이. 소어스; 마이클 알. 핸리; 다이아나 이본느 루이스; 데이비드 제프리 파크스; 캐롤라인 마리 조드카; 캐트린 에스. 프리케트; 수미트라 고쉬; 크리스틴 마리 매크; 큉 린
Original assignee: 아밀린 파마슈티칼스, 인크.
Priority date: 2004-02-11
Filing date: 2005-02-11
Publication date: 2007-01-17
Also published as: DE602005021858D1; US8114958B2; NZ549332A; RU2006132293A; IL177230A0; ES2345113T3; JP2008500281A; BRPI0507623A; ATE471340T1; WO2006083254A1; KR101196122B1; AU2005320351A1; EP2233497A3; US20080274952A1; EP1716172A1; NZ571824A; EP2233497A2; CA2556226A1; EP1716172B1; AU2010212468A1

Abstract

본 발명은 아밀린 족 펩티드의 기능을 갖는 신규 화합물, 관련된 핵산, 발현 구축물, 숙주 세포, 및 화합물의 제조 방법에 관한 것이다. 본 발명의 화합물은 1 개 이상의 아미노산 서열 변형을 포함한다. 또한, 비만, 당뇨병 및 증가된 심혈관 위험도와 같은 대사 장애의 치료 및 예방을 위한 방법 및 조성물이 개시된다.

아밀린 족 펩티드, 식이 장애, 비만, 당뇨병, 심혈관 질환, 대사 장애

Description

아밀린 족 펩티드 및 이의 제조 및 사용 방법{AMYLIN FAMILY PEPTIDES AND METHODS FOR MAKING AND USING THEM}

관련 출원

본 출원은 미국 특허 가출원 번호 제60/543,275호 (2004년 2월 11일 출원) 및 미국 특허 가출원 번호 제60/550,447호 (2004년 3월 3일 출원)를 우선권으로 청구하고, 상기 특허 모두는 전체적으로 이러한 거명에 의해 본원에 참고로 포함된다.

본 발명은 신규 화합물 및 이의 제조 및 사용 방법에 관한 것이다. 이 화합물은 대사 장애, 혈관 장애, 신장 장애 및/또는 위장관 장애와 같은 상태의 치료 또는 예방에 유용할 수 있다. 예시적인 상태는 식품 섭취 또는 칼로리 섭취의 저하가 가치있는 것, 예를 들어, 비만, 제II형 당뇨병, 식이 장애, 대사 증후군 및 인슐린-저항성 증후군일 수 있다.

아밀린, 칼시토닌 및 칼시토닌 유전자 관련 펩티드 (CGRP: calcitonin gene related peptide)에 대해 이들의 구조 및 기능을 이해하기 위해 많은 연구가 현재까지 이루어졌다. 표 1은 [Wimalawansa, S. J. (1997) Critical Reviews in Neurobiology, 11;167-239]에 발표된 바와 같은 CGRP, 칼시토닌 및 아밀린의 일부 생물학적 효과의 개요를 제공한다.

생물학적 효과	CGRP	칼시토닌	아밀린
혈관확장	++++	+/-	++
심박수변동	++	-	++
수축력변동	++	-	++
골흡수 저해	+	++++	++
골형성 자극	-	-	+
칼슘 저하 효과	-	+++	++
성장인자형 효과	+	-	+
신경 재생	++	+/-	-
체온조절	+	-	+
염증	++	+/-	-
위점막 보호	++	-	-
β 세포에 대한 효과	+	+/-	++
골격근	+	-	+
포도당 대사	+	-	+
식욕억제 효과	+	++	++
진통 효과	-	++	+

아밀린은 위 배출을 조절하고 글루카곤 분비 및 식품 섭취를 억제하고, 따라서 혈액순환에서의 포도당 출현 속도를 조절하는 것으로 보고되었다. 아밀린은 혈액순환으로부터의 포도당 소실 속도 및 말초 조직에 의한 이의 섭취를 조절하는 인슐린의 작용을 보완하는 것으로 여겨진다. 이러한 작용은 아밀린이 3개 이상의 독립적인 메카니즘에 의해 식후 포도당 제어에서의 인슐린의 효과를 보완한다는 것을 나타내는 설치류 및 인간에서의 실험적인 발견에 의해 지지되고, 이러한 메카니즘 모두는 포도당 출현 속도에 영향을 미친다. 첫번째로, 아밀린은 식후 글루카곤 분비를 억제한다. 건강한 성인과 비교하여, 제1형 당뇨병 환자는 혈액순환 아밀린이 없고, 제2형 당뇨병 환자는 식후 아밀린 농도가 감소되어 있다. 또한, 아밀린 특이적 모노클로날 항체를 주입하면, 혈액순환 아밀린에 결합하여, 그 결과 다시 대조군과 비교하여 글루카곤 농도가 매우 상승되었다. 이러한 결과 모두는 식후 글루카곤 분비에서의 내인성 아밀린의 생리학적인 역할을 가리킨다. 두번째로, 아밀린은 위장관 운동성 및 위 배출을 느리게 한다. 마지막으로, 래트 아밀린의 시상하부내 주사는 래트에서의 음식섭취를 저하시키고 시상하부에서의 신경전달물질 대사를 변경시키는 것으로 나타났다. 어떤 연구에서는, 래트 아밀린 및 래트 CGRP의 시상하부내 주사 후 8시간까지 식품 섭취가 현저하게 저하되었다. 인간 시험에서는, 아밀린 유사체인 프람린타이드가 체중 또는 체중 증가를 저하시키는 것으로 나타났다. 아밀린은 당뇨병 및 비만과 같은 대사 상태의 치료에 이로울 수 있다. 또한 아밀린은 통증, 골 장애, 위염의 치료, 지질, 특히 트리글리세라이드의 조정, 또는 신체 조성에의 작용 예컨대 지방의 선택적인 손실 및 제지방 조직의 보존에 사용될 수 있다.

호르몬 칼시토닌 (CT)은 유도된 고칼슘혈증에 응답한 이의 분비 및 이의 급속한 저칼슘혈증 효과에 대해 명명되었다. 칼시토닌은 C 세포로 칭해지는 갑상선 내의 신경내분비 세포에서 생산되어 이로부터 분비된다. CT (1-32)의 가장 잘 연구된 작용은 파골세포에 대한 이의 효과이다. CT의 시험관내 효과에는 라이소좀 효소의 감소된 방출 및 주름진(ruffled) 경계의 급속한 상실이 포함된다. 궁극적으로, CT에 의해 파골세포 기능이 저해된 결과로 골 흡수가 감소된다. 그러나, 갑상선절제술의 경우에서의 혈청 CT의 만성 저하 또는 수질 갑상선 암에서 발견되는 증가된 혈청 CT 중 어떤 것도 혈청 칼슘 또는 골 질량에서의 변화에 관련되지 않는 것으로 나타난다. 따라서, CT (1-32)의 주요 기능은 긴급 상황에서 급성 고칼슘혈증에 대항하고/하거나 성장, 임신 및 수유와 같은 "칼슘 스트레스" 기간 동안 골격을 보호하는 것일 것이다. ([Becker, JCEM, 89(4): 1512-1525 (2004)] 및 [Sexton, Current Medicinal Chemistry 6:1067-1093 (1999)]에서 검토됨). 칼시토닌 및 CGRP-I 펩티드 모두가 제거된 칼시토닌 유전자 녹아웃(knockout) 마우스로부터의 최근 데이타는 마우스가 기저 칼슘-관련 값은 정상 수준이지만 칼슘혈증 응답은 증가되었음을 나타냈고, 상기의 연구에 일관적이었다 (Kurihara H, et al., Hypertens Res. 2003 Feb; 26 Suppl:S105-8).

CT는 혈장 칼슘 수준에 대한 효과를 갖고, 파골세포 기능을 저해하며, 골다공증의 치료에 널리 사용된다. 치료적으로, 연어 CT는 골 밀도를 증가시키고, 최소한도의 역효과와 함께 골절 비율을 감소시키는 것으로 여겨진다. 또한 CT는 골격의 하나 이상의 영역에서의 골 비대 또는 변형으로 귀착될 수 있는 만성 골격 장애인 뼈의 파제트 병에 대한 치료법으로서 지난 25 년 동안 성공적으로 사용되어 왔다. CT는 골다공증 동안 겪게 되는 골 통증에 대한 이의 진통 효과에 대해서도 또한 널리 사용되지만, 이러한 효과에 대한 메카니즘은 명확하게 이해되지 않고 있다.

칼시토닌 유전자 관련 펩티드 (CGRP)는 신경계 및 심혈관계를 포함하여 신체 내에 이의 수용체가 널리 분포되어 있는 신경펩티드이다. 이러한 펩티드는 감각 신경전달을 조정하는 것으로 보이고, 현재까지 발견된 가장 강력한 내인성 혈관확장 펩티드 중 하나이다. CGRP에 대해 보고된 생물학적 효과에는 염증에서 물질 P의 조정, 신경근 접합부에서의 니코틴성 수용체 활성, 췌장 효소 분비의 자극, 위산 분비의 저하, 말초혈관확장, 심장 가속화, 신경조정, 칼슘 대사의 조절, 골원성(骨原性) 자극, 인슐린 분비, 체온 증가 및 식품 섭취 감소가 포함된다. (Wimalawansa, Amylin, calcitonin gene-related peptide, calcitonin and ADM: a peptide superfamily. Crit Rev Neurobiol. 1997; 11(2-3):167-239). CGRP의 주요 역할은, CGRP의 정맥내 투여 후의 평균 동맥압의 감소에 의해 증명되는 바와 같이, 이의 강력한 혈관확장 작용에 의해 다양한 기관으로의 혈류를 제어하는 것이다. 혈관확장 작용은 동형접합 녹아웃 CGRP 마우스의 최근의 분석에 의해 또한 지지되는데, 이는 증가된 말초 교감신경 활성에 의해 야기된 상승된 말초 혈관 저항 및 높은 혈압을 설명한다 (Kurihara H, et al., Targeted disruption of ADM and alphaCGRP genes reveals their distinct biological roles. Hypertens Res. 2003 Feb; 26 Suppl:S105-8). 따라서, CGRP는 그중에서도 특히 혈관확장 효과, 혈압강하 효과, 및 심장 속도에서의 증가를 이끌어 내는 것으로 여겨진다.

CGRP을 울혈성 심부전 환자에게 장기간 주입하면 역효과 없이 혈역학적 기능에 대한 지속적인 이로운 효과가 나타났고, 이는 심부전에서의 용도를 제안한다. CGRP 용도의 다른 적응증에는 신부전, 급성 및 만성 관상 동맥 허혈, 심장 부정맥의 치료, 기타 말초 혈관 질환 예컨대 레이노병, 거미막하출혈, 고혈압, 및 폐동맥 고혈압이 포함된다. 임신 및 조기분만의 자간전중독증 또한 잠재적으로 치료가능하다. (Wimalawansa, 1997). 최근의 치료적 용도에는 편두통의 치료를 위한 CGRP 길항제의 용도가 포함된다.

다양한 상태를 치료 또는 예방하기 위해 단독으로 또는 조합되어 사용될 수 있는 각각의 펩티드의 많은 이로운 성질이 있다. 기존의 펩티드가 지니고 있지 않은 개선된 특징을 부여하는 다중 작용을 갖는 유용한 신규 펩티드를 생성시키는 것이 유리할 것이다. 예를 들어, 식품 섭취 분석법에서, 아밀린은 30 분 이내에 신속하게 개시되는 것으로 나타나지만, 이의 효과는 60 분 후에 점점 감소한다. 반면에, 연어 칼시토닌은 지연된 효과를 갖는 것으로 나타나고, 최고 수준이 240분에서도 여전히 유지되었다. 아밀린 및/또는 칼시토닌의 효과를 의태(擬態)할 수 있고 칼시토닌의 지속적인 활성과 함께 아밀린과 같이 활성이 신속하게 개시되는 신규 화합물은 어느 한쪽 화합물 단독의 효력 및 효능을 증가시킬 수 있다. 또한, 아밀린, 칼시토닌 및/또는 CGRP의 특정 물리화학적 특징을 단일 양식으로 조합하는 것은 기능장애 대사 회로 내의 상이한 지점에서의 개입을 용이하게 할 수 있다. 이러한 신규 화합물은 우수한 치료를 위한 바람직한 활성 또는 성질을 조합할 수 있고, 그 결과 하나 이상의 바람직한 특징 예컨대 더 높은 효능, 더 큰 효력, 더 큰 생체이용율, 더 적은 부작용, 제조 용이성, 안정성 및/또는 용해성을 갖는 화합물이 생성될 수 있다.

본원에서 언급된 모든 문헌은 이러한 거명에 의해 본원에 완전하게 기재된 것처럼 본 출원 내에 포함된다.

발명의 개요

본 발명은, 적어도 부분적으로, 신규 아밀린 족 펩티드 또는 화합물에 관한 것이다. 일반적인 양상에서, 이러한 신규 화합물 (본 발명의 화합물로도 칭해짐)은 아밀린 또는 칼시토닌 및 이의 유사체의 루프(loop) 영역; 칼시토닌 또는 이의 유사체의 α 나선 영역의 적어도 일부의 α 나선 영역, 또는 아밀린 α 나선 영역 및 칼시토닌 α 나선 영역 또는 이들 각각의 유사체의 일부를 갖는 α 나선 영역; 및 아밀린 또는 칼시토닌 또는 이의 유사체의 C-말단 꼬리를 적어도 갖고, 단 칼시토닌 또는 칼시토닌 유사체의 C-말단 꼬리는 프롤린 (Pro), 히드록시프롤린 (Hyp), 호모세린 (Hse) 또는 Hse의 유도체가 아니다.

본원에서 사용된 "유사체"는 기초 참조 펩티드, 예를 들어 아밀린 및 칼시토닌의 서열로부터 서열이 유도된 펩티드를 지칭하고, 참조 아미노산 서열의 삽입, 치환, 확장 및/또는 결실을 포함하고, 바람직하게는 기초 펩티드와의 아미노산 서열 동일성이 적어도 50 또는 55 ％이고, 더욱 바람직하게는 기초 펩티드와의 아미노산 서열 동일성이 적어도 70 ％, 80 ％, 90 ％ 또는 95 ％이다. 한 실시양태에서, 이같은 유사체는 보존성 또는 비보존성 아미노산 치환 (비천연 아미노산 및 L 및 D 형태 포함)을 포함할 수 있다. 유사체에는 아고니스트 활성을 갖는 화합물 및 길항제활성을 갖는 화합물이 포함된다. 본원에서 정의된 유사체에는 유도체가 또한 포함된다.

"유도체"는 1 개 이상의 이의 아미노산 측기(side group), α-탄소 원자, 말단 아미노기, 또는 말단 카르복실산 기가 화학적으로 변형된 참조 펩티드 또는 상기 기술된 유사체로서 정의된다. 화학적 변형에는 화학적 부분의 부가, 신규 결합의 생성, 및 화학적 부분의 제거가 포함되지만, 이에 한정되지는 않는다. 아미노산 측기에서의 변형에는 라이신 ε-아미노 기의 아실화, 아르기닌, 히스티딘 또는 라이신의 N-알킬화, 글루탐산 또는 아스파르트산 카르복실산 기의 알킬화, 및 글루타민 또는 아스파라긴의 탈아미드화가 비제한적으로 포함된다. 말단 아미노의 변형에는 데스아미노(desamino), N-저급 알킬, N-디-저급 알킬, 및 N-아실 변형이 비제한적으로 포함된다. 말단 아미노의 변형에는 알킬 아실, 분지형 알킬아실, 알킬아릴-아실과 같은, 데스아미노, N-저급 알킬, N-디-저급 알킬, 및 N-아실 변형이 비제한적으로 포함된다. 말단 카르복시 기의 변형에는 아미드, 저급 알킬 아미드, 디알킬 아미드, 아릴아미드, 알킬아릴아미드 및 저급 알킬 에스테르 변형이 비제한적으로 포함된다. 저급 알킬은 C1-C4 알킬이다. 또한, 1 개 이상의 측기, 또는 말단 기가 합성 화학 분야의 당업자에게 공지된 보호기에 의해 보호될 수 있다. 아미노산의 α-탄소는 모노- 또는 디메틸화될 수 있다.

특정 실시양태에서, 신규 화합물은 아밀린 또는 아밀린 유사체 루프 영역, 칼시토닌 또는 칼시토닌 유사체 α 나선 영역의 적어도 일부, 및 아밀린 또는 아밀린 유사체 C-말단 꼬리를 갖는다. 또다른 실시양태에서, 신규 화합물은 칼시토닌 또는 칼시토닌 유사체 루프 영역, 칼시토닌 또는 칼시토닌 유사체 α 나선 영역의 적어도 일부, 및 아밀린 또는 아밀린 유사체 C-말단 꼬리를 갖는다. 또다른 실시양태에서, 신규 화합물은 아밀린 또는 아밀린 유사체 루프 영역, 아밀린 또는 아밀린 유사체 α 나선 영역의 적어도 일부 및 칼시토닌 또는 칼시토닌 유사체 α 나선 영역의 적어도 일부, 및 아밀린 또는 아밀린 유사체 C-말단 꼬리를 갖는다. 또다른 실시양태에서, 신규 화합물은 칼시토닌 또는 칼시토닌 유사체 루프 영역, 아밀린 또는 아밀린 유사체 α 나선 영역의 적어도 일부 및 칼시토닌 또는 칼시토닌 유사체 α 나선 영역의 적어도 일부, 및 아밀린 또는 아밀린 유사체 C-말단 꼬리를 갖는다. 또다른 실시양태에서, 신규 화합물은 아밀린 또는 아밀린 유사체 루프 영역, 칼시토닌 또는 칼시토닌 유사체 α 나선 영역의 일부 또는 아밀린 또는 아밀린 유사체 α 나선 영역의 적어도 일부 및 칼시토닌 또는 칼시토닌 유사체 α 나선 영역의 적어도 일부, 및 칼시토닌 또는 칼시토닌 유사체 C-말단 꼬리를 갖는다.

특정 실시양태에서, 신규 화합물의 루프 영역은 아밀린 또는 칼시토닌 루프및 이의 유사체로부터의 치환, 삽입 또는 결실을 포함하는 변형을 1 개, 2 개, 3 개, 또는 4 개 이하로 추가로 포함할 수 있다. 신규 화합물이 N-캡(cap) 영역을 포함하는 루프의 N-말단 부분에서 소수성 또는 친수성 특징을 가질 수 있는 추가적인 변형 예컨대 아세틸, 이소카프로일, 3,6-디옥시옥탄산, 또는 1-아미노-4,7.10-트리옥사-13-트리데칸아민 숙시님산을 가질 수 있는 것으도 또한 구현된다. 변형에는 1개, 2개, 3개 또는 그 이상의 부가적인 아미노산이 추가로 포함될 수 있다. 이는 많은 변형이 언급되기에는 너무 많도록 하는 분야이지만, 본 출원에서 추가로 예시되는 것을 기초로 당업자에게 이해될 것이다.

일반적으로, 아미노산 서열과 관련하여, 용어 "변형"에는 단독적인 또는 조합된 치환, 삽입, 신장, 결실, 및 유도체화가 포함된다. 본 발명의 신규 화합물은 "비필수" 아미노산 잔기의 1개 이상의 변형을 포함할 수 있다. 본 발명의 문맥에서, "비필수" 아미노산 잔기는 유사체 폴리펩티드의 아고니스트 활성을 폐지하거나 실질적으로 저하시키지 않으면서 신규 아미노산 서열에서 변경될 수 있는, 즉 결실 또는 치환될 수 있는 잔기이다.

치환에는 보존성 아미노산 치환이 포함된다. "보존성 아미노산 치환"은 아미노산 잔기가 유사한 측쇄 또는 물리화학적 특징 (예를 들어, 정전기학적, 수소 결합, 등입체성, 소수성 특색)를 갖는 아미노산 잔기로 대체된 것이다. 아미노산은 천연 발생되는 것이거나 비천연성일 수 있다. 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기의 족은 당업계에 공지되어 있다. 이러한 족에는 염기성 측쇄를 갖는 아미노산 (예를 들어, 라이신, 아르기닌, 히스티딘), 산성 측쇄를 갖는 아미노산 (예를 들어, 아스파르트산, 글루탐산), 전하를 띠지 않는 극성 측쇄를 갖는 아미노산 (예를 들어, 글리신, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 타이로신, 메티오닌, 시스테인), 비극성 측쇄를 갖는 아미노산 (예를 들어, 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 트립토판), β-분지형 측쇄를 갖는 아미노산 (예를 들어, 트레오닌, 발린, 이소류신) 및 방향족 측쇄를 갖는 아미노산 (예를 들어, 타이로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘)이 포함된다. 치환은 비보존성 변화를 또한 포함할 수 있다.

본 발명의 화합물은 화학적 변경 예컨대 아미드화, 글리코실화, 아실화, 황산화, 인산화, 아세틸화 및 고리화에 의해 추가로 유도체화될 수 있다. 이같은 화학적 변경은 화학적 또는 생화학적 방법론을 통해, 뿐만 아니라 생체내 프로세스를 통해, 또는 이들의 임의의 조합에 의해 수득될 수 있다. 본 발명의 화합물의 유도체는 1 개 이상의 중합체에의 접합 또는 소형 분자 치환체를 또한 포함할 수 있다. 중합체 접합의 한 유형은 폴리에틸렌 글리콜 ("PEG") 중합체, 폴리아미노산 (예를 들어, 폴리-히스티딘, 폴리-아르기닌, 폴리-라이신 등) 및/또는 다양한 길이의 지방산 사슬이 AFP-6 유사체의 N- 또는 C-말단 또는 아미노산 잔기 측쇄에 결합 또는 부착되는 것이다. 소형 분자 치환체에는 짧은 알킬 및 구속 알킬 (예를 들어, 분지형, 고리형, 융합 아다만틸), 및 방향족 기가 포함된다. 또한, 펩티드의 대사 안정성을 개선시키기 위해 염기성 잔기 예컨대 R 및 K가 호모R 및 호모K, 시트룰린 또는 오르니틴으로 대체될 수 있다. 본 발명의 화합물에는 펩티드의 산 뿐만 아니라 아미드 형태가 또한 포함된다.

특성 실시양태에서, 신규 화합물의 α 나선 영역은 칼시토닌 또는 칼시토닌 유사체 α 나선 영역의 4개 이상의 연속적인 아미노산을 포함한다. 또다른 실시양태에서, α 나선 영역은 칼시토닌 또는 칼시토닌 유사체 α 나선 영역의 적어도 5개, 6개, 7개, 또는 8개의 연속적인 아미노산을 포함한다. 또다른 실시양태에서, α 나선 영역은 칼시토닌 또는 칼시토닌 유사체 α 나선 영역의 적어도 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개, 20개, 21개 또는 그 이상의 연속적인 아미노산을 포함한다. 특정 실시양태에서, 연속적인 아미노산의 수가 8개 미만이면, α 나선 영역이 아밀린 또는 아밀린 유사체 α 나선 영역의 적어도 4개, 5개, 6개, 7개, 9개, 10개, 11개 또는 그 이상의 연속적인 아미노산을 추가로 포함하는 것으로 구현된다. 특정 실시양태에서, 칼시토닌 또는 칼시토닌 유사체의 아미노산이 적을수록, 아밀린 또는 아밀린 유사체의 더 많은 아미노산이 신규 화합물의 α 나선 영역에서 발견될 수 있는 것으로 구현된다. α 나선 영역을 포함하는 아미노산의 수는 약 10개 내지 23개의 아미노산일 수 있다. 따라서, α 나선 영역은 길이가 아미노산 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개, 20개, 21개, 22개, 또는 23개일 수 있다. 또한, 아미노산은 약 3개 내지 약 6개의 α 나선형 회전을 제공하여야 한다. 신규 화합물의 α 나선 영역이 칼시토닌 및/또는 아밀린 α 나선 영역 및 이의 유사체의 것으로부터 치환, 삽입 또는 결실이 포함되는 변형을 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개 또는 10개 이하로 추가로 포함할 수 있는 것으로 또한 구현된다.

특정 실시양태에서, 신규 화합물의 C-말단 꼬리는 아밀린 또는 칼시토닌 또는 이의 유사체의 마지막 6개, 5개 또는 4개의 아미노산을 적어도 포함한다. 특정 실시양태에서, 신규 화합물의 C-말단 꼬리는 β 회전을 갖는 C-말단 종지부의 적어도 일부를 포함한다. 특정 실시양태에서, β 회전은 Gly-Ser의 아미노산 조합에 의해 도입된다. 따라서, 신규 화합물은 Gly-Ser을 갖거나 Gly-Ser에서 개시되는 아밀린 또는 칼시토닌 C-말단 꼬리 (및 이의 유사체)의 일부를 포함하는 C-말단 종지부를 가질 수 있다.

특정 실시양태에서, 신규 화합물의 C-말단 꼬리는 아밀린 또는 칼시토닌 루프 또는 이의 유사체로부터 치환, 삽입 또는 결실이 포함되는 변형을 1개, 2개 또는 3개 이하로 추가로 포함할 수 있다. 신규 화합물이 C-말단 꼬리의 C-말단 부분에서 L-옥틸글리신, 4ABU (4-아미노부티르산), 9Anc (9 아미노난산), 3,6-디옥시옥탄산 또는 1-아미노-4,7,10-트리옥사-13-트리데칸아민 숙시님산을 포함할 수 있는 추가적인 변형을 가질 수 있는 것으로 또한 구현된다. 변형에는 1개, 2개, 3개 또는 그 이상의 부가적인 아미노산이 포함될 수 있다. 이러한 분야에서 구현되는 변형의 유형은 본 출원에서 추가로 예시되는 것을 기초로 당업자에게 이해될 것이다.

한 양상에서, 루프 영역은 첫번째 및 마지막 아미노산이 결합을 생성시킬 수 있는, 적어도 5개 내지 8개의 아미노산을 포함하는 N-말단 종지부에서 발견되는 영역, 예를 들어, 아밀린의 위치 2-7에서의 잔기 또는 칼시토닌의 위치 1-7에서의 잔기 및 이들 각각의 유사체 내의 상응하는 영역으로 정의된다. 또다른 양상에서, α 나선 영역은 α 나선을 구조적으로 형성하는, 루프 영역 및 C-말단 꼬리가 측면에 있는 아밀린 또는 칼시토닌의 내부 부분, 예를 들어, 아밀린의 위치 8-23에서의 잔기 또는 칼시토닌의 위치 8-27에서의 잔기 및 이들 각각의 유사체 내의 상응하는 영역으로 정의된다. 또다른 양상에서, C-말단 꼬리는 α 나선 다음의 영역, 예를 들어 아밀린의 위치 33-37에서의 잔기 또는 더 긴 것 예컨대 위치 27-37에서의 잔기 또는 칼시토닌의 위치 27 또는 28 내지 32에서의 잔기로 정의된다. 본 발명의 화합물에는 개시된 화합물의 아미드 및 산 형태 모두가 포함된다.

본원에서 개시된 아밀린 및 칼시토닌에는 모든 천연 및 종 변이가 포함된다. 아밀린 및 칼시토닌의 예로는 인간 아밀린 (h아밀린) KCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGAILSSTNVGSNTY (SEQ ID NO: 1) 및 래트 아밀린 (r아밀린) KCNTATCATQRLANFLVRSSNNLGPVLPPTNVGSNTY (SEQ ID NO: 2), 연어 칼시토닌 (sCT) CSNLSTCVLGKLSQELHKLQTYPRTNTGSGTP (SEQ ID NO: 3), 인간 칼시토닌 (hCT) CGNLSTCMLGTYTQDFNKFHTFPQTAIGVGAP (SEQ ID NO: 4)가 포함되지만, 이에 한정되지는 않는다.

"아미노산" 및 "아미노산 잔기"는 천연 아미노산, 비천연 아미노산, 및 변형된 아미노산을 의미한다. 달리 지정되지 않는 한, 아미노산에 대한 모든 언급은, 일반적으로 또는 명칭에 따라 특이적으로, D 및 L 입체이성질체 (구조가 이같은 입체이성질체 형태를 허용하는 경우) 양쪽에 대한 언급을 포함한다. 천연 아미노산에는 알라닌 (Ala), 아르기닌 (Arg), 아스파라긴 (Asp), 아스파르트산 (Asp), 시스테인 (Cys), 글루타민 (Gln), 글루탐산 (Glu), 글리신 (Gly), 히스티딘 (His), 이소류신 (Ile), 류신 (Leu), 라이신 (Lys), 메티오닌 (Met), 페닐알라닌 (Phe), 프롤린 (Pro), 세린 (Ser), 트레오닌 (Thr), 트립토판 (Trp), 타이로신(Tyr) 및 발린 (Val)이 포함된다. 비천연 아미노산에는 호모라이신, 호모아르기닌, 호모세린, 아제티딘카르복실산, 2-아미노아디프산, 3-아미노아디프산, 베타-알라닌, 아미노프로피온산, 2-아미노부티르산, 4-아미노부티르산, 6-아미노카프로산, 2-아미노헵탄산, 2아미노이소부티르산, 3-아미노이소부티르산, 2-아미노피멜산, 3차-부틸글리신, 2,4-디아미노이소부티르산, 데스모신, 2,2'-디아미노피멜산, 2,3-다아미노프로피온산, N-에틸글리신, N-에틸아스파라긴, 호모프롤린, 히드록시라이신, 알로-히드록시라이신, 3-히드록시프롤린, 4-히드록시프롤린, 이소데스모신, 알로-이소류신, N-메틸알라닌, N-메틸글리신, N-메틸이소류신, N-메틸펜틸글리신, N-메틸발린, 나프탈라닌, 노르발린, 노르류신, 오르니틴, 펜틸글리신, 피페콜산 및 티오프롤린이 포함되지만, 이에 한정되지는 않는다. 부가적인 비천연 아미노산에는 가역적 또는 비가역적으로 화학적으로 블로킹된(blocked), 또는 N-말단 아미노기 또는 측쇄 기 상에서 화학적으로 변형된 변형 아미노산 잔기, 예를 들어, N-메틸화 D 및 L 아미노산 또는 측쇄 관능기가 또다른 관능기로 화학적으로 변형된 잔기가 포함된다. 예를 들어, 변형 아미노산에는 메티오닌 술폭시드; 메티오닌 술폰; 아스파르트산의 변형 아미노산인 아스파르트산-(베타-메틸 에스테르); 글리신의 변형 아미노산인 N-에틸글리신; 또는 알라닌의 변형 아미노산이 알라닌 카르복사미드가 포함된다. 포함될 수 있는 부가적인 잔기는 [Sandberg et al., J. Med. Chem. 41:2481-91, 1998]에 기술되어 있다.

일반적인 양상에서, 본 발명의 화합물은 루프 영역, α 나선 영역 및 C-말단 꼬리를 적어도 포함한다. 루프 영역은 화학식 X-Xaa1서열-Y를 포함하는 아미노 서열을 포함하고, 식중 X 및 Y는 결합을 생성시킬 수 있고, 디술피드 결합; 아미드 결합; 고리형 락탐을 형성할 수 있는 알킬 산 및 알킬 아민; 축합 및 환원되어 알킬 아민 또는 이민 가교를 형성할 수 있는 알킬 알데히드 또는 알킬 할라이드 및 알킬아민; 또는 연결되어 알킬, 알케닐, 알키닐, 에테르 또는 티오에테르 결합을 형성할 수 있는 측쇄와 같은 서로 화학적으로 결합되어 분자내 결합을 형성하는 측쇄를 갖는 독립적으로 선택되는 잔기이다. 알킬 사슬에는 탄소수가 약 1 내지 약 6인 저급 알킬 기가 포함될 수 있다. 특정 실시양태에서, 분자내 결합은 디술피드, 아미드, 이민, 아민, 알킬 및 알켄 결합일 수 있다. 특정 실시양태에서, X 및 Y는 Ser, Asp, Glu, Lys, Orn, 또는 Cys로부터 독립적으로 선택된다. 특정 실시양태에서, X 및 Y는 Cys 및 Cys이다. 또다른 실시양태에서, X 및 Y는 Ser 및 Ser이다. 또다른 실시양태에서, X 및 Y는 Asp 및 Lys 또는 Lys 및 Asp이다.

Xaa1 서열은 X와 Y 사이의 아미노산 3개, 4개, 5개 또는 6개의 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, Xaa1 서열은 Y 옆에 1 개 이상의 치환된 또는 비치환된 히드록실-함유 잔기가 있는 영역을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 예를 들어, 히드록실 함유 잔기 영역은 Y에 인접한 3개의 아미노산 중 2 개 이상이 Ser 또는 Thr일 수 있다. Xaa1 서열 내의 다른 아미노산은 임의의 아미노산일 수 있다. 특정 실시양태에서, Xaa1 서열은 3개의 아미노산이다. 또다른 실시양태에서, Xaa1은 4개의 아미노산이다. 또다른 실시양태에서 Xaa1은 5개의 아미노산이다. 또다른 실시양태에서, Xaa1은 6개의 아미노산이다. 따라서, Xaa1은 Xaa2-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Xaa7 (SEQ ID NO: 5)로 표시될 수 있다. 특정 실시양태에서, Xaa2, Xaa3 및/또는 Xaa4는 존재하지 않을 수 있다. 특정 실시양태에서, Xaa5, Xaa6 및 Xaa7은 히드록시-함유 잔기 영역을 포함한다. 따라서, 3개의 아미노산 중 2개 이상은 Ser, hSer, Thr, 알로Thr, d-Thr, 또는 이의 기타 비천연 유사체일 수 있다. Xaa2는 임의의 아미노산이거나 존재하지 않을 수 있고, Xaa3은 임의의 아미노산이거나 존재하지 않을 수 있고, Xaa4는 임의의 아미노산이거나 존재하지 않을 수 있고, Xaa5는 Xaa6이 Ser 또는 Thr이고 Xaa7이 Ser 또는 Thr이면 임의의 아미노산일 수 있고, Xaa6은 Xaa5가 Ser 또는 Thr이고 Xaa7이 Ser 또는 Thr이면 임의의 아미노산일 수 있고, Xaa7은 Xaa5가 Ser 또는 Thr이고 Xaa6이 Ser 또는 Thr이면 임의의 아미노산일 수 있다. 따라서, 특정 실시양태에서, Xaa1은 Xaa2는 존재하지 않고, Xaa3은 Ala, Gly, Ser, Asp이거나 존재하지 않고, Xaa4는 Asn, Ala, Asp, Gly이거나 존재하지 않고; Xaa5는 Ala, Leu, Thr 또는 Ser이고; Xaa6은 Ala, Ser 또는 Thr이고; Xaa7은 Ala, Ser, Val, Hse, (S)-2-아미노-3-히드록시-메틸부탄산 (Ahb), (2S,3R)-2-아미노-3히드록시-메틸펜탄산 (Ahp), D-Thr, Thr, 또는 이의 유도체인 것으로 표시될 수 있다. 또다른 실시양태에서, Xaa1은 Xaa2는 존재하지 않고, Xaa3은 Ser, Gly이거나 존재하지 않고, Xaa4는 Asn 또는 Asp이고, Xaa5는 Ala, Ser, Thr 또는 Leu이고, Xaa6은 Ala, Thr 또는 Ser이고, Xaa7은 Ser, D-Thr, 알로Thr 또는 Thr인 것으로 표시될 수 있다. 특정 실시양태에서, 루프 영역은 Xaa3이 Ala이거나, Xaa3이 Ser이거나 또는 Xaa3이 Gly인 Xaa1의 상기 기술된 표현물을 포함할 수 있다. 별법으로 또는 추가적으로, 루프 영역은 Xaa4가 Ala이거나, Xaa4가 Asn이거나, Xaa4가 Asp이거나 또는 Xaa4가 Gly인 Xaa1의 상기 기술된 표현물을 포함할 수 있다. 별법으로 또는 추가적으로, 루프 영역은 Xaa5가 Ala이거나, Xaa5가 Thr이거나 또는 Xaa5가 Leu인 Xaa1의 상기 기술된 표현물을 포함할 수 있다. 별법으로 또는 추가적으로, 루프 영역은 Xaa6이 Ser이거나 또는 Xaa6이 Ala인 Xaa1의 상기 기술된 표현물을 포함할 수 있다. 별법으로 또는 추가적으로, 루프 영역은 Xaa7이 Thr이거나 또는 Xaa7이 D-Thr인 Xaa1의 상기 기술된 표현물을 포함할 수 있다. 1개, 2개 또는 3개 이하의 변형 예컨대 치환, 삽입, 결실 및/또는 유도체화가 루프 영역에 이루어질 수 있는 것으로 또한 구현된다.

본 출원 전반에 걸쳐 마쿠쉬(Markush) 군으로 대안이 기술되고, 예를 들어, 각각의 아미노산 위치가 1개 초과의 가능한 아미노산을 함유한다는 것이 주지되어야 한다. 마쿠쉬 군의 각각의 구성원이 별도로 간주됨으로써 본 발명의 또다른 실시양태를 이루어야 하고, 마쿠쉬 군이 단일 단위로 이해되지 않는 것으로 명확하게 구현된다.

본 발명의 루프 영역의 예로는 하기 서열이 포함되지만, 이에 한정되지는 않는다:

앞서 언급된 바와 같이, 1개, 2개 또는 3개 이하의 변형 예컨대 치환, 삽입, 결실 및/또는 유도체화가 루프 영역에 이루어질 수 있는 것으로 또한 구현된다.

신규 화합물의 루프 영역은 N-말단 종지부에서 변형 또는 부가적인 아미노산을 또한 포함할 수 있다. 이같은 변형에는 화합물 예컨대 Lys, Ala, Phe, Ile, Ser, 옥틸글리신, 이소캡(Isocap), Fmoc-3,6-디옥시옥탄산, Fmoc-1-아미노-4,7,10-트리옥사-13-트리데칸아민 숙시님산, 아세틸, 및/또는 용해도, 전달, 신호전달을 위한 기의 부가가 포함된다. 예시적인 변형된 루프는 Xaa1의 서열에의 Lys의 부가 또는 Xaa1 서열에의 Ile의 부가를 포함한다. 예를 들어, 변형된 루프 영역은 K-C-N-T-A-T-C (SEQ ID NO: 27)일 수 있다. 특정 실시양태에서, 루프 영역의 N-말단 종지부에서의 부가 및/또는 변형은 루프 영역을 변화시킬 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 루프 영역은 하기와 같이 변형될 수 있다: 시클로(2,7) 1-7 h아밀린, 시클로(2Asp 7Lys) 1-7 h아밀린, N-이소카프로일 1-7 h아밀린, N-3,6 디옥사옥타노일 1-7 h아밀린, L-옥틸글리신 1-7 h아밀린, 아세틸 (2Agy, 7Agy) 1-7 h아밀린 [식중 Agy는 알릴글리신이다], 아세틸 (1Ala) 1-7 h아밀린, (1Thr 3Asp) 1-7 h아밀린, 이소캡 (7Ala) 5-7 sCT, 아세틸 (2Agy, 7Agy) 1-7 sCT, 및 시클로 (1,7) (1Asp 7Lys) 1-7 sCT. 따라서, 이소캡(7Ala) 5-7 sCT를 예로 들면, 본 발명의 특정 실시양태는 본 발명의 루프 영역의 N-말단 영역에서 아미노산 Xaa2 내지 Xaa5가 존재하지 않도록 하는 변형을 포함한다.

본 출원 전반에 걸쳐, 아미노산 서열은 참조 펩티드에 인접한 위치 a에서 위치 b까지의 아미노산으로 칭해질 수 있다. 본 출원에서, 참조 펩티드는 아밀린 및 칼시토닌이고, 이들의 서열은 SEQ ID NO: 1-4에 제공된다. 예를 들어, 이전 단락에서, 1-7 h아밀린은 인간 아밀린 (SEQ ID NO: 1)의 위치 1에서 위치 7 (경계 포함)까지의 아미노산 서열을 가리킨다. 참조 펩티드에 대한 변형은 변형에 인접한 변형의 위치로 제시될 수 있다. 예를 들어, (2Asp 7Lys) 1-7 h아밀린은 위치 2에서 Cys가 Asp로 변형되고 위치 7에서 Cys가 Lys으로 변형된 인간 아밀린의 위치 1 내지 7의 아미노산 서열을 나타낸다.

신규 화합물의 α 나선 영역은 길이가 약 8 내지 약 23개의 아미노산일 수 있다. 특정 실시양태에서, α 나선 영역은 양쪽성이다. 특정 실시양태에서, α 나선 영역은 약 3 내지 6개의 나선형 회전을 포함한다. 특정 실시양태에서, α 나선 영역은 3개, 4개, 5개, 또는 6개의 나선형 회전을 포함한다. 또다른 실시양태에서, α 나선 영역은 약 3개, 4개, 5개, 또는 6개의 나선형 회전과 등가인 경직 구조이다. 이상적인 나선의 예는 LLQQLQKLLQKLKQY (SEQ ID NO: 28)이다. 특정 실시양태에서, α 나선은 양쪽성 구조이다. 따라서, 이러한 유형의 구조를 제공하는 바람직한 아미노산의 특징이 선택될 수 있다.

칼시토닌 α 나선 영역, 아밀린 및 칼시토닌 α 나선 영역 또는 이의 일부의 조합, 및/또는 일부 CGRP 요소가 신규 화합물의 α 나선 영역 내에서 바람직하다는 것이 발견되었다. 루프 영역과 같이, α 나선 영역은 임의의 아밀린 또는 칼시토닌 및 이의 유사체로부터 유래될 수 있다. 따라서, 특정 실시양태에서, α 나선 영역은 칼시토닌 또는 칼시토닌 유사체의 α 나선 영역의 적어도 일부이다. 또다른 실시양태에서, α 나선 영역은 칼시토닌 또는 칼시토닌 유사체의 α 나선 영역의 적어도 일부 및 아밀린 또는 아밀린 유사체의 α 나선의 적어도 일부이다. 또다른 실시양태에서, 신규 화합물의 α 나선 영역은 CGRP의 요소를 함유한다. 신규 화합물은 치환, 삽입, 결실 및/또는 유도체화와 같은 추가적인 변형을 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 이하로 가질 수 있다는 것이 또한 구현된다.

특정 실시양태에서, 본 발명의 α 나선 영역은 sCT의 위치 8에서 sCT의 위치 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26 또는 27까지의 아미노산을 포함할 수 있다. 또한, α 나선 영역은 동일 또는 상이한 종의 칼시토닌 또는 칼시토닌 유사체 α 나선 영역의 부분을 1개 초과로 포함할 수 있고, 예를 들어 8-21 sCT 19-27 sCT; 8-21 sCT 18-27 sCT; 또는 8-16 hCT 17-27 sCT; 또는 (11Arg) 8-16 hCT (18Arg) 17-27 sCT이다. 별법으로 또는 추가적으로, 8-18 sCT 내지 8-27 sCT의 상기 기술된 α 나선은 1 개 이상의 (10Aib), (11Arg), (11Orn), (11hArg), (11Cit), (11hLys), (11Lys(for)), (17Aib), (18Arg), (18Orn), (18hArg), (18Cit), (18Lys(for)), (18Lys(PEG5000)), (22Leu), (24Pro) 또는 이들의 임의의 조합인 치환을 추가로 포함할 수 있다.

한 실시양태에서, 본 발명의 α 나선 영역은 (α 나선 영역 유형 I) R1-VL Xaa10 Xaa11 LSQ Xaa15 L Xaa17 Xaa18 LQT Xaa22 P Xaa24 TNT-R1 (SEQ ID NO: 29)로 표시될 수 있고, 식중

Xaa10은 Gly 또는 Aib이고;

Xaa11은 Lys, Arg, Orn, hArg, Cit, hLys 또는 Lys(for)이고;

Xaa15는 Glu 또는 Phe이고;

Xaa17은 His 또는 Aib이고;

Xaa18은 Lys, Arg, Orn, hArg, Cit, hLys, Lys(for), Lys(PEG 5000)이고;

Xaa22는 Tyr 또는 Leu이고;

Xaa24는 Arg 또는 Pro이고;

R1은 존재하지 않거나 1-4개의 부가적인 아미노산을 포함한다.

다시, 마쿠쉬 군의 각각의 구성원 또는 이의 조합이 본 발명의 또다른 실시양태이고 단일 단위로 이해되지 않는다는 것이 기억되어야 한다. 이것은 간단한 언급 방법이고, 예를 들어, 본 발명의 실시양태에는 Xaa18이 Lys, Arg, Orn, hArg, Cit, hLys 또는 Lys(for)일 수 있는 α 나선 영역 유형 I 화학식이 포함되고, 각각의 변종은 본 발명의 개별적인 실시양태이다. 따라서, α 나선 영역 유형 I 화학식은 Xaa18이 Lys인 한 실시양태를 갖는다. α 나선 영역 유형 I 화학식은 Xaa18이 Arg인 또다른 실시양태 등을 갖는다. α 나선 영역이 치환, 삽입, 결실 및/또는 유도체화와 같은 변형을 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 이하로 함유할 수 있다는 것이 또한 구현된다. 따라서, α 나선 영역 유형 I의 화합물은 C-말단 종지부에서 추가적인 결실을 가질 수 있다. 특정 실시양태에서, R1의 아미노산은 α 나선 회전을 형성할 수 있다.

본 발명의 α 나선 유형 I의 예로는 하기의 것들이 포함되지만 이에 한정되지는 않는다:

특정 실시양태에서, 본 발명의 α 나선 영역은 아밀린 또는 아밀린 유사체의 α 나선의 일부분 및 칼시토닌 또는 칼시토닌 유사체의 α 나선 영역의 일부분을 포함할 수 있다. 본 발명의 α 나선 영역은 h아밀린의 위치 8부터 h아밀린의 위치 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18 또는 19까지의 아미노산 및 sCT의 위치 13, 14, 15, 16, 17, 18 및 19부터 sCT의 위치 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26 또는 27까지의 아미노산을 포함할 수 있다. 별법으로 또는 추가적으로, 아밀린 및 칼시토닌의 상기 기술된 α 나선 영역은 하나 이상의 (8Val), (9Leu), (9Met), (10Gly), (10His), (12Thr), (13Thr), (13Asn), (13Phe), (13Tyr), (14Arg), (14Ala), (14Asp), (14Glu), (14Gln), (14Thr), (14Gly), (15Leu), (15Ser), (15Glu), (15Ala), (15Tyr), (16Asp), (17Ser), (17Phe), (18Arg), (17Aib), (18Arg), (18Orn), (18hArg), 18(Cit), (18hLys), (18Lys(for)), (18Lys(PEG 5000)), (19Phe), (20His)), (21Asn), (22Met), (22Val), (22Phe), (22Leu), (24Pro), 또는 이의 임의의 조합의 치환을 추가로 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 본 발명의 α 나선 영역 내의 아미노산의 수는 적어도 아미노산 10개이다. 또다른 실시양태에서, 본 발명의 α 나선 영역 내의 아미노산의 수는 아미노산 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개, 20개, 21개, 22개 또는 23개이다. 또다른 실시양태에서, 본 발명의 α 나선 영역 내의 아미노산의 수는 24개 이상이다.

한 실시양태에서, 본 발명의 α 나선 영역은 (α 나선 영역 유형 II) R1 - Xaa8 Xaa9 Xaa10 R Xaa12 Xaa13 Xaa14 Xaa15 Xaa16 Xaa17 Xaa18 Xaa19 Xaa20 Xaa21 Xaa22 P Xaa24 TNT-R1 (SEQ ID NO: 30)로 표시될 수 있고, 식중

Xaa8은 Ala 또는 Val이고;

Xaa9는 Thr, Met 또는 Leu이고;

Xaa10은 Gln, Gly 또는 His이고;

Xaa12는 Leu 또는 Thr이고;

Xaa13은 Ala, Thr, Asn, Phe, Tyr, Ser 또는 Thr이고;

Xaa14는 Asn, Arg, Ala, Asp, Glu, Gln, Thr 또는 Gly이고;

Xaa15는 Phe, Leu, Ser, Glu, Ala, Asp 또는 Tyr이고;

Xaa16은 Leu 또는 Asp이고;

Xaa17은 Val, His, Ser, Phe 또는 Aib이고;

Xaa18은 His, Arg, Lys, Orn, hArg, Cit, hLys, Lys(for) 또는 Lys(PEG 5000)이고;

Xaa19는 Leu, Ser 또는 Phe이고;

Xaa20은 Gln 또는 His이고;

Xaa21은 Thr 또는 Asn이고;

Xaa22는 Tyr, Val, Phe, Leu 또는 Met이고;

Xaa24는 Arg 또는 Pro이고;

다시, 마쿠쉬 군의 각각의 구성원 또는 이의 조합이 본 발명의 또다른 실시양태이고 단일 단위로 이해되지 않는다는 것이 기억되어야 한다. α 나선 영역이 본원에 기술된 화합물의 치환, 삽입, 결실 및/또는 유도체화와 같은 변형을 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 이하로 함유할 수 있다는 것이 또한 구현된다. 예를 들어, 특정 실시양태에서, α 나선 영역 유형 II는 결과적으로 위치 27, 26, 25, 24 또는 22가 결실되는 C-말단 종지부에서의 결실을 가질 수 있다. 그러나, 또다른 실시양태에서, 결실은 위치 19, 20, 21 또는 22의 아미노산을 제거하지 않는다.

유형 II의 α 나선 영역의 예는 하기의 것들이 포함되지만 이에 한정되지는 않는다:

또다른 실시양태에서, 신규 화합물에는 α 나선이 sCT의 22, 23, 24, 25, 26 또는 27에 상응하는 곳에서 종결되는 상기 예시 화합물들의 변종이 포함된다. 바꿔 말하면, 화합물 8-18 h아밀린 19-24 sCT은 이러한 화합물은 단지 위치 24에 절단된 상기 기술된 8-18 h아밀린 19-27 sCT이기 때문에 또한 명확하게 기술된다. 또다른 예로서, 화합물 (13Ala 14Asp 15Ala) 8-18 h아밀린 19-23은 (13Ala 14Asp 15Ala) 8-18 h아밀린 19-22에 적용된 상기 언어로 인해 명확하게 기술된다.

특정 실시양태에서, 본 발명의 C-말단 꼬리는 h아밀린의 위치 27, 28, 29, 30, 31, 32 또는 33부터 위치 36 또는 37까지의 아미노산을 포함한다. 또다른 실시양태에서, C-말단 꼬리는 sCT의 위치 27 또는 28부터 위치 32까지의 아미노산을 포함한다; 그러나, 루프 영역이 칼시토닌 또는 칼시토닌 유사체로부터 유래되고 α 나선 영역이 칼시토닌 또는 칼시토닌 유사체로부터 유래되는 경우, C-말단 꼬리의 마지막 위치는 Pro, Hyp, 호모세린 (Hse) 또는 Hse의 유도체가 아니다. 별법으로 또는 추가적으로, 아밀린 및 칼시토닌의 상기 기술된 α 나선은 하나 이상의 (27Tyr) h아밀린, (29Arg) h아밀린, (32Val) h아밀린, (32Thr) h아밀린, (34Glu) h아밀린, (35Lys) h아밀린, (36Phe) h아밀린, (36Ala) h아밀린, (37Phe) h아밀린, (30Asn) sCT, (32Tyr) sCT 또는 이의 임의의 조합의 치환을 추가로 포함할 수 있다.

한 실시양태에서, 본 발명의 C-말단 꼬리는 Xaa28 Xaa29 Xaa30 Xaa31 Xaa32 Xaa33 G Xaa35 Xaa36 Xaa37 Xaa38 (SEQ ID NO: 31)로 표시될 수 있고, 식중

Xaa28은 Lys 또는 Tyr이거나 존재하지 않고;

Xaa29는 Ser 또는 Pro이거나 존재하지 않고;

Xaa30은 Ser, Pro 또는 Arg이거나 존재하지 않고;

Xaa31은 Thr이거나 존재하지 않고;

Xaa32는 Asn이거나 존재하지 않고;

Xaa33은 Val 또는 Thr이거나 존재하지 않고;

Xaa35는 Ser 또는 Glu이고;

Xaa36은 Asn, Lys 또는 Gly이고;

Xaa37은 Thr, Phe 또는 Ala이고;

Xaa38은 Tyr, Phe 또는 Pro이거나 존재하지 않고,

단, 루프 영역이 칼시토닌 또는 칼시토닌 유사체로부터 유래되고 α 나선 영역이 칼시토닌 또는 칼시토닌 유사체로부터 유래되는 경우, C-말단 꼬리의 마지막 위치는 Pro, Hyp, 호모세린 (Hse) 또는 Hse의 유도체가 아니다.

다시, 마쿠쉬 군의 각각의 구성원 또는 이의 조합이 본 발명의 또다른 실시양태이고 단일 단위로 이해되지 않는다는 것이 기억되어야 한다. C-말단 꼬리가 이전의 단락들에서 기술된 화합물의 치환, 삽입, 결실 및/또는 유도체화와 같은 변형을 1개, 2개 또는 3개 이하로 함유할 수 있다는 것이 또한 구현된다.

본 발명의 C-말단 꼬리의 예로는 27-37 r아밀린, (27Tyr 29Arg 32Thr) 27-37 r아밀린, (29Arg 32Thr) 28-37 r아밀린, 30-37 h아밀린, (32Thr) 30-37 h아밀린, (35Lys 36Ala 37Phe) 30-37 h아밀린, 30-36 h아밀린, (32Val) 30-36 h아밀린, (34Glu 36Phe) 30-36 h아밀린, 31-37 h아밀린, 31-36 h아밀린, 33-36 h아밀린, 33-7 h아밀린, 28-32 sCT, (30Asn 32Tyr) 28-32 sCT, 및 27-32 sCT가 포함되지만, 이에 한정되지는 않는다. 또다른 실시양태에서, C-말단 꼬리는 아미노산 서열 KSNFVPTN (SEQ ID NO: 32) 또는 SNFVPTNV (SEQ ID NO: 33)를 포함한다.

1개, 2개 또는 3개 이하의 변형 예컨대 치환, 삽입, 결실 및/또는 유도체화가 이전의 단락들에서 기술된 바와 같이 본 발명의 C-말단 꼬리에 이루어질 수 있다는 것이 구현된다. 신규 화합물의 C-말단 꼬리는 C-말단 종지부에서 변형 또는 부가적인 아미노산을 또한 포함할 수 있다. 이같은 변형에는 화합물 예컨대 Lys, 4개 이하의 Lys, L-옥틸글리신, 4ABU (4-아미노부티르산), 9Anc (9-아미노난산) 및/또는 용해도, 안정성 또는 전달을 위한 기의 부가가 포함된다. 예로는 33-37 h아밀린 L-옥틸글리신, 33-37 h아밀린 4ABU, 및 33-37 h아밀린 9Anc가 포함된다.

일반적인 양상에서, 본 발명의 화합물은

(a) 임의의 본 발명의 루프 영역;

(b) 임의의 본 발명의 α 나선 영역; 및

(c) 임의의 본 발명의 C-말단 꼬리를 포함하고,

또다른 일반적인 양상에서, 본 발명의 화합물은

(a) Xaa1 또는 N-말단 종지부에서의 변형이 있는 Xaa1을 포함하는 루프 영역;

(b) α 나선 영역 유형 I 또는 유형 II를 포함하는 α 나선 영역; 및

(c) SEQ ID NO: 31로 표시되는 C-말단 꼬리를 포함하고,

단, 루프 영역이 칼시토닌 또는 칼시토닌 유사체로부터 유래되고 α 나선 영역이 칼시토닌 또는 칼시토닌 유사체로부터 유래되는 경우, C-말단 꼬리의 마지막 위치는 Pro, Hyp, 호모세린 (Hse) 또는 Hse의 유도체가 아니다. C-말단 꼬리는 추가적인 변형을 포함할 수 있다.

또다른 양상에서, 본 발명의 화합물은 화학식 I Xaa1 X Xaa3 Xaa4 Xaa5 Xaa6 Y Xaa8 Xaa9 Xaa10 Xaa11 Xaa12 Xaa13 Xaa14 Xaa15 Xaa16 Xaa17 Xaa18 Xaa19 Xaa20 Xaa21 Xaa22 Xaa23 Xaa24 Xaa25 Xaa26 Xaa27 Xaa28 Xaa29 Xaa30 Xaa31 Xaa32 (SEQ ID NO: 34)의 아미노산 서열을 포함하고, 식중

Xaa1은 A, C, hC, D, E, F, I, L, K, hK, R, hR, S, Hse(호모SER), T, G, Q, N, M, Y, W, P, Hyp(히드록시프롤린), H 또는 V이거나 존재하지 않고;

Xaa3은 A, D, E, N, Q, G, V, R, K, hK, hR, H, I, L 또는 M이거나 존재하지 않고;

Xaa4는 A, I, L, S, Hse, T, V 또는 M이거나 존재하지 않고;

Xaa5는 A, S, T, Hse, Y, V, I, L 또는 M이고;

Xaa6은 T, A, S, Hse, Y, V, I, L 또는 M이고;

Xaa8은 A, V, I, L, F 또는 M이고;

Xaa9는 L, T, S, Hse, V, I 또는 M이고;

Xaa10은 G, H, Q, K, R, N, hK 또는 hR이고;

Xaa11은 K, R, Q, N, hK, hR 또는 H이고;

Xaa12는 L, I, V, F, M, W 또는 Y이고;

Xaa13은 A, F, Y, N, Q, S, Hse 또는 T이고;

Xaa14는 A, D, E, G, N, K, Q, R, H, hR 또는 hK이고;

Xaa15는 A, D, E, F, L, S, Y, I, V 또는 M이고;

Xaa16은 L, F, M, V, Y 또는 I이고;

Xaa17은 H, Q, N, S, Hse, T 또는 V이고;

Xaa18은 K, hK, R, hR, H, u (Cit) 또는 n (Orn)이고;

Xaa19는 F, L, S, Hse, V, I 또는 T이거나 존재하지 않고;

Xaa20은 H, R, K, hR, hK, N 또는 Q이거나 존재하지 않고;

Xaa21은 T, S, Hse, V, I, L, Q 또는 N이거나 존재하지 않고;

Xaa22는 F, L, M, V, Y 또는 I이고;

Xaa23은 P 또는 Hyp이고;

Xaa24는 P, Hyp, R, K, hR, hK 또는 H이고;

Xaa25는 T, S, Hse, V, I, L, F 또는 Y이고;

Xaa26은 N, Q, D 또는 E이고;

Xaa27은 T, V, S, F, I 또는 L이고;

Xaa28은 G 또는 A이고;

Xaa29는 S, Hse, T, V, I, L 또는 Y이고;

Xaa30은 E, G, K, N, D, R, hR, hK, H 또는 Q이고;

Xaa31은 A, T, S, Hse, V, I, L, F 또는 Y이고;

Xaa32는 F, P, Y, Hse, S, T 또는 Hyp이고;

X 및 Y는 결합을 생성시킬 수 있고, 디술피드 결합; 아미드 결합; 고리형 락탐을 형성할 수 있는 알킬 산 및 알킬 아민; 축합 및 환원되어 알킬 아민 또는 이민 가교를 형성할 수 있는 알킬 알데히드 또는 알킬 할라이드 및 알킬아민; 또는 연결되어 알킬, 알케닐, 알키닐, 에테르 또는 티오에테르 결합을 형성할 수 있는 측쇄와 같은 서로 화학적으로 결합되어 분자내 결합을 형성하는 측쇄를 갖는 독립적으로 선택되는 잔기이다. 알킬 사슬에는 탄소수가 약 1 내지 약 6인 저급 알킬 기가 포함될 수 있다. 특정 실시양태에서, 분자내 결합은 디술피드, 아미드, 이민, 아민, 알킬 및 알켄 결합일 수 있다. 특정 실시양태에서, X 및 Y는 Ser, Asp, Glu, Lys, Orn, 또는 Cys로부터 독립적으로 선택된다. 특정 실시양태에서, X 및 Y는 Cys 및 Cys이다. 또다른 실시양태에서, X 및 Y는 Ser 및 Ser이다. 또다른 실시양태에서, X 및 Y는 Asp 및 Lys 또는 Lys 및 Asp이다.

또다른 양상에서, 본 발명의 화합물은 화학식 II Xaa1 Xaa2 Xaa3 Xaa4 Xaa5 Xaa6 Xaa7 Xaa8 Xaa9 Xaa10 Xaa11 Xaa12 Xaa13 Xaa14 Xaa15 Xaa16 Xaa17 Xaa18 Xaa19 Xaa20 Xaa21 Xaa22 Xaa23 Xaa24 Xaa25 Xaa26 Xaa27 Xaa28 Xaa29 Xaa30 Xaa31 Xaa32 (SEQ ID NO: 35)의 아미노산 서열을 포함하고, 식중

Xaa1은 A, C, D, F, I, K, S 또는 T이거나 존재하지 않고;

Xaa2는 C, D 또는 S이거나 존재하지 않고;

Xaa3은 A, D 또는 N이거나 존재하지 않고;

Xaa4는 A, L 또는 T이거나 존재하지 않고;

Xaa5는 A 또는 S이고;

Xaa6은 T, A, S 또는 V이고;

Xaa7은 C, K 또는 A이고;

Xaa8은 A, V, L 또는 M이고;

Xaa9는 L 또는 T이고;

Xaa10은 G, H 또는 Q이고;

Xaa11은 K, R, Q 또는 hArg이고;

Xaa12는 L, W 또는 Y이고;

Xaa13은 A, F, N, Q, S 또는 T이고;

Xaa14는 A, D, E, G, N, K, Q 또는 R이고;

Xaa15는 A, D, E, F, L, S 또는 Y이고;

Xaa16은 L 또는 F이고;

Xaa17은 H, Q, S 또는 V이고;

Xaa18은 K, R, hArg, u (Cit) 또는 n (Orn)이고;

Xaa19는 F, L 또는 S이거나 존재하지 않고;

Xaa20은 H 또는 Q이거나 존재하지 않고;

Xaa21은 T 또는 N이거나 존재하지 않고;

Xaa22는 F, L, M, V 또는 Y이고;

Xaa23은 P이고;

Xaa24는 P 또는 R이고;

Xaa25는 T이고;

Xaa26은 N이고;

Xaa27은 T 또는 V이고;

Xaa28은 G이고;

Xaa29는 S이고;

Xaa30은 E, G, K 또는 N이고;

Xaa31은 A 또는 T이고;

Xaa32는 F, P 또는 Y이다.

또다른 양상에서, 본 발명의 화합물은 화학식 III Xaa1 Xaa2 Xaa3 Xaa4 Xaa5 Xaa6 Xaa7 Xaa8 Xaa9 Xaa10 Xaa11 Xaa12 Xaa13 Xaa14 Xaa15 Xaa16 Xaa17 Xaa18 Xaa19 Xaa20 Xaa21 Xaa22 Xaa23 Xaa24 Xaa25 Xaa26 Xaa27 Xaa28 Xaa29 Xaa30 Xaa31 Xaa32 (SEQ ID NO: 36)의 아미노산 서열을 포함하고, 식중

Xaa1은 A, C, F, I, K 또는 S이거나 존재하지 않고;

Xaa2는 C, D 또는 S이고;

Xaa3은 A, D 또는 N이고;

Xaa4는 A, L 또는 T이고;

Xaa5는 A 또는 S이고;

Xaa6은 T이고;

Xaa7은 C 또는 K이고;

Xaa8은 A 또는 V이고;

Xaa9는 L 또는 T이고;

Xaa10은 G, H 또는 Q이고;

Xaa11은 K, R 또는 hArg이고;

Xaa12는 L이고;

Xaa13은 A, F, N, S 또는 T이고;

Xaa14는 A, D, E, G, N, Q 또는 R이고;

Xaa15는 A, E, F, L, S 또는 Y이고;

Xaa16은 L이고;

Xaa17은 H, S 또는 V이고;

Xaa18은 K, R, hArg, u (Cit) 또는 n (Orn)이고;

Xaa19는 F, L 또는 S이고;

Xaa20은 H 또는 Q이고;

Xaa21은 T 또는 N이고;

Xaa22는 F, L, M, V 또는 Y이고;

Xaa23은 P이고;

Xaa24는 P 또는 R이고;

Xaa25는 T이고;

Xaa26은 N이고;

Xaa27은 T 또는 V이고;

Xaa28은 G이고;

Xaa29는 S이고;

Xaa30은 E, G, K 또는 N이고;

Xaa31은 A 또는 T이고;

Xaa32는 F, P 또는 Y이다.

일반적인 양상에서, 화학식 I, II 또는 III의 서열은 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개 또는 그 이상의 치환, 삽입, 결실, 신장 및/또는 유도체화의 변형을 추가로 포함한다. 특정 실시양태에서, 화학식 I, II 또는 III의 서열은 위치 22와 23의 아미노산 사이에 삽입된 Val을 포함한다. 또다른 실시양태에서, 화학식 I, II 또는 III의 서열은 위치 22와 23 사이에 삽입된 Gln을 포함한다. 또다른 실시양태에서, 화학식 I, II 또는 III의 서열은 위치 22와 23 사이에 Gln-Thr-Tyr의 서열 (SEQ ID NO: 37)을 포함한다. 또다른 실시양태에서, 화학식 I, II 또는 III의 서열은 위치 22와 23 사이에 Leu-Gln-Thr-Tyr의 서열 (SEQ ID NO: 38)을 포함한다. 또다른 양상에서, 화학식 I, II 또는 III이 N-말단 종지부에서 변형될 수 있다. 특정 실시양태에서, 화학식 I, II 또는 III의 N-말단 부분에 옥틸글리신이 부가된다. 또다른 실시양태에서, 화학식 I, II 또는 III의 N-말단 부분에 이소캡이 부가된다.

또다른 양상에서, 본 발명의 화합물은 화학식 IV Xaa1 Xaa2 Xaa3 Xaa4 Xaa5 Xaa6 Xaa7 Xaa8 Xaa9 Xaa10 Xaa11 Xaa12 Xaa13 Xaa14 Xaa15 Xaa16 Xaa17 Xaa18 Xaa19 Xaa20 Xaa21 Xaa22 Xaa23 Xaa24 Xaa25 Xaa26 Xaa27 Xaa28 Xaa29 Xaa30 Xaa31 Xaa32 (SEQ ID NO: 39)의 아미노산 서열을 포함하고, 식중

Xaa1은 A, C, D, F, K 또는 T이거나 존재하지 않고;

Xaa2는 A, C, D 또는 S이거나 존재하지 않고;

Xaa3은 A, D 또는 N이거나 존재하지 않고;

Xaa4는 A, L 또는 T이거나 존재하지 않고;

Xaa5는 A 또는 S이고;

Xaa6은 A, S, T 또는 V이고;

Xaa7은 A, C 또는 K이고;

Xaa8은 A, L, M 또는 V이고;

Xaa9는 L 또는 T이고;

Xaa10은 G, H 또는 Q이고;

Xaa11은 K, Q 또는 R이고;

Xaa12는 L, W 또는 Y이고;

Xaa13은 A, N, Q, S 또는 T이고;

Xaa14는 A, D, E, G, K, N, Q 또는 R이고;

Xaa15는 A, D, E, F, L, S 또는 Y이고;

Xaa16은 F 또는 L이고;

Xaa17은 H, Q, S 또는 V이고;

Xaa18은 K 또는 R이고;

Xaa19는 F, L 또는 S이거나 존재하지 않고;

Xaa20은 H, K 또는 Q이거나 존재하지 않고;

Xaa21은 Q 또는 T이거나 존재하지 않고;

Xaa22는 F, L 또는 Y이고;

Xaa23은 P이고;

Xaa24는 P 또는 R이고;

Xaa25는 T이고;

Xaa26은 N이고;

Xaa27은 T 또는 V이고;

Xaa28은 G이고;

Xaa29는 S이고;

Xaa30은 E, K 또는 N이고;

Xaa31은 A 또는 T이고;

Xaa32는 F 또는 Y이거나 존재하지 않는다.

일반적인 양상에서, 화학식 IV의 서열은 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개 또는 그 이상의 치환, 삽입, 결실, 신장 및/또는 유도체화의 변형을 추가로 포함한다. 특정 실시양태에서, 화학식 I, II, III 또는 IV의 서열은 위치 24에서의 결실을 포함한다.

또다른 실시양태에서, 본 발명의 화합물은

(a) Xaa1을 포함하는 루프 영역;

(b) α 나선 루프 유형 I; 및

(c) C-말단 말단 꼬리를 포함하는 아미노산 서열을 포함하고;

식중, X1은 X Xaa2 Xaa3 Xaa4 Xaa5 Xaa6 Xaa7 Y (SEQ ID NO: 5)의 아미노 서열을 포함하고,

식중 Xaa2는 임의의 아미노산이거나 존재하지 않고;

Xaa3은 Ala, Gly, Ser 또는 Asp이거나 존재하지 않고;

Xaa4는 Asn, Ala, Asp 또는 Gly이거나 존재하지 않고;

Xaa5는 Ala, Leu, Thr 또는 Ser이고;

Xaa6은 Ala, Ser 또는 Thr이고;

Xaa7은 Ala, Ser, Val, Hse, (S)-2-아미노-3-히드록시-메틸부탄산 (Ahb), (2S,3R)-2-아미노-3히드록시-메틸펜탄산 (Ahp), D-Thr, Thr, 또는 이의 유도체이고;

X 및 Y는 결합을 생성시킬 수 있는 아미노산이고, 디술피드 결합; 아미드 결합; 고리형 락탐을 형성할 수 있는 알킬 산 및 알킬 아민; 축합 및 환원되어 알킬 아민 또는 이민 가교를 형성할 수 있는 알킬 알데히드 또는 알킬 할라이드 및 알킬아민; 또는 연결되어 알킬, 알케닐, 알키닐, 에테르 또는 티오에테르 결합을 형성할 수 있는 측쇄와 같은 서로 화학적으로 결합되어 분자내 결합을 형성하는 측쇄를 갖는 독립적으로 선택되는 잔기이고;

α 나선형 영역 유형 I은 서열 R1-V L Xaa10 Xaa11 L S Q Xaa15 L Xaa17 Xaa18 L Q T Xaa22 P Xaa24 T N T-R1 (SEQ ID NO: 29)을 포함하고, 식중

Xaa10은 Gly 또는 Aib이고;

Xaa11은 Lys, Arg, Orn, hArg, Cit, hLys 또는 Lys(for)이고;

Xaa15는 Glu 또는 Phe이고;

Xaa17은 His 또는 Aib이고;

Xaa18은 Lys, Arg, Orn, hArg, Cit, hLys, Lys(for), Lys(PEG 5000)이고;

Xaa22는 Tyr 또는 Leu이고;

Xaa24는 Arg 또는 Pro이고;

R1은 존재하지 않거나 1-4개의 부가적인 아미노산을 포함하며;

C-말단 꼬리는 서열 Xaa28 Xaa29 Xaa30 Xaa31 Xaa32 Xaa33 G Xaa35 Xaa36 Xaa37 Xaa38 (SEQ ID NO: 31)을 포함하고, 식중

Xaa28은 Lys 또는 Tyr이거나 존재하지 않고;

Xaa29는 Ser 또는 Pro이거나 존재하지 않고;

Xaa30은 Ser, Pro 또는 Arg이거나 존재하지 않고;

Xaa31은 Thr이거나 존재하지 않고;

Xaa32는 Asn이거나 존재하지 않고;

Xaa33은 Val 또는 Thr이거나 존재하지 않고;

Xaa35는 Ser 또는 Glu이고;

Xaa36은 Asn, Lys 또는 Gly이고;

Xaa37은 Thr, Phe 또는 Ala이고;

Xaa38은 Tyr, Phe 또는 Pro이거나 존재하지 않고,

또다른 양상에서, 본 발명의 화합물은

a) Xaa1을 포함하는 루프 영역;

b) α 나선 루프 유형 II; 및

(c) C-말단 말단 꼬리를 포함하는 아미노산 서열을 포함하고;

식중, 루프 영역 Xaa1은 X Xaa2 Xaa3 Xaa4 Xaa5 Xaa6 Xaa7 Y의 아미노 서열을 포함하고,

식중 Xaa2는 임의의 아미노산이거나 존재하지 않고;

Xaa3은 Ala, Gly, Ser 또는 Asp이거나 존재하지 않고;

Xaa4는 Asn, Ala, Asp 또는 Gly이거나 존재하지 않고;

Xaa5는 Ala, Leu, Thr 또는 Ser이고;

Xaa6은 Ala, Ser 또는 Thr이고;

α 나선형 영역 유형 II는 서열 R1 - Xaa8 Xaa9 Xaa10 R Xaa12 Xaa13 Xaa14 Xaa15 Xaa16 Xaa17 Xaa18 Xaa19 Xaa20 Xaa21 Xaa22 P Xaa24 TNT-R1 (SEQ ID NO: 30)을 포함하고, 식중

Xaa8은 Ala 또는 Val이고;

Xaa9는 Thr, Met 또는 Leu이고;

Xaa10은 Gln, Gly 또는 His이고;

Xaa12는 Leu 또는 Thr이고;

Xaa13은 Ala, Thr, Asn, Phe, Tyr, Ser 또는 Thr이고;

Xaa14는 Asn, Arg, Ala, Asp, Glu, Gln, Thr 또는 Gly이고;

Xaa15는 Phe, Leu, Ser, Glu, Ala, Asp 또는 Tyr이고;

Xaa16은 Leu 또는 Asp이고;

Xaa17은 Val, His, Ser, Phe 또는 Aib이고;

Xaa19는 Leu, Ser 또는 Phe이고;

Xaa20은 Gln 또는 His이고;

Xaa21은 Thr 또는 Asn이고;

Xaa22는 Tyr, Val, Phe, Leu 또는 Met이고;

Xaa24는 Arg 또는 Pro이고;

R1은 존재하지 않거나 1-4개의 부가적인 아미노산을 포함하고;

Xaa28은 Lys 또는 Tyr이거나 존재하지 않고;

Xaa29는 Ser 또는 Pro이거나 존재하지 않고;

Xaa30은 Ser, Pro 또는 Arg이거나 존재하지 않고;

Xaa31은 Thr이거나 존재하지 않고;

Xaa32는 Asn이거나 존재하지 않고;

Xaa33은 Val 또는 Thr이거나 존재하지 않고;

Xaa35는 Ser 또는 Glu이고;

Xaa36은 Asn, Lys 또는 Gly이고;

Xaa37은 Thr, Phe 또는 Ala이고;

Xaa38은 Tyr, Phe 또는 Pro이거나 존재하지 않는다.

또다른 양상에서, 본 발명의 화합물에는 하기의 것들이 포함된다:

또다른 양상에서, 본 발명의 화합물에는 서열 40 내지 137의 생물학적으로 활성인 단편이 포함된다. 생물학적으로 활성인 단편은 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 15개 또는 그 이상의 아미노산의 결실을 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 서열 40 내지 137의 아미노산 서열은 적어도 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개 또는 그 이상의 변형 예컨대 치환, 삽입, 결실 및/또는 유도체화를 포함한다. 또다른 실시양태에서, SEQ ID NO: 40 내지 137의 아미노산 서열은 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 이하의 변형 예컨대 치환, 삽입, 결실 및/또는 유도체화를 갖는다. 본 발명의 또다른 양상에서, 본 발명의 화합물에는 SEQ ID NO: 40 내지 137 중 임의의 것과 적어도 75, 80, 85, 90, 95 또는 97 ％의 아미노산 서열 동일성을 갖는 것들이 포함된다. 백분율 동일성은 Vector NTI (Invitrogen; Carlsbad CA) 내의 AlignX 모듈로의 분석법에 의해 결정된다. 기술된 각각의 백분율 동일성, 또는 생물학적으로 활성인 단편 또는 변형에 대한 참조는 각각의 서열번호에 대해 개별적으로 적용되는 것으로 의도된다. 예를 들어, 각각의 기술된 실시양태, 단편, 변형 또는 ％ 동일성은 서열 40, 41, 42, 43, 44 등, 또는 서열번호들 중의 임의의 군에 적용가능하다. 또한, 본 발명의 화합물에는 실시예 3에 기술된 화합물 1-127이 포함된다.

또다른 일반적인 양상에서, 본 발명의 화합물은 본원에 개시된 칼시토닌, 아밀린 및/또는 CGRP의 1개 이상의 생물학적 효과에 대한 아고니스트로서 작용할 수 있거나, 또는 아밀린, 칼시토닌 또는 CGRP의 수용체 중 1개 이상에 결합할 수 있다.

또다른 일반적인 양상에서, 본 발명의 화합물은 식품 섭취의 저하, 식욕 저하, 포만감 유도, 영양소 가용성의 저하, 체중 감소의 야기, 신체 조성에의 작용, 신체 에너지 함량 또는 에너지 소비의 변경, 지질 프로파일의 개선 (LDL 콜레스테롤 및 트리글리세리드 수준의 저하 및/또는 HDL 콜레스테롤 수준의 변화 포함), 위장관운동의 감속, 위 배출의 지연, 식후 혈당 운동(excursion)의 완화, 글루카곤 분비 방지 또는 저해, 및 혈압 감소에 유용할 수 있다.

따라서, 특정 실시양태에서, 치료적 또는 예방적 유효량의 본 발명의 화합물을 상기 대상에게 투여하는 것을 포함하는 본 발명의 방법은 영양소 가용성을 저하시킴으로써 경감될 수 있는 상태 또는 장애의 치료 또는 예방에 유용하다. 이같은 상태 또는 장애로는 식이 장애, 인슐린-저항성, 비만, 이상 식후 고혈당, 제I형, 제II형 및 임신성 당뇨병이 포함되는 임의 종류의 당뇨병, 대사 증후군, 덤핑 증후군, 고혈압, 이상지질혈증, 심혈관질환, 고지질혈증, 수면 무호흡, 암, 폐동맥 고혈압, 쓸개염, 및 골관절염이 포함되지만, 이에 한정되지는 않는다.

심혈관 상태 또는 질환의 비제한적인 예는 고혈압, 심근허혈, 및 심근 재관류이다. 본 발명의 화합물은 뇌졸중, 암 (예를 들어, 자궁내막암, 유방암, 전립선암 및 결장암), 쓸개 질환, 수면무호흡, 생식능력 저하, 및 골관절염이 포함되는 비만과 관련된 기타 상태의 치료 또는 예방에 또한 유용할 수 있다 ([Lyznicki et al., Am. Fam. Phys. 63:2185, 2001] 참조). 또다른 실시양태에서, 본 발명의 화합물은 미적인 이유로 신체 조성을 변경시키거나, 개인의 신체 능력을 증강시키거나, 또는 보다 기름기가 없는 정육 공급원을 제조하는데 사용될 수 있다.

또다른 일반적인 양상에서, 본 발명의 화합물은 그렐린(ghrelin)의 분비를 저해하는데 사용될 수 있다. 따라서, 본 발명의 화합물은 그렐린 관련 장애 예컨대 프라더-윌리(Prader-Willi) 증후군, 모든 유형의 당뇨병 및 이의 합병증, 비만, 과식증, 고지질혈증, 또는 영양과다와 관련된 기타 장애를 치료 또는 예방하는데 이러한 메카니즘을 활용할 수 있다.

또다른 일반적인 양상에서, 아밀린 및 본 발명의 화합물이 포함되는 아밀린 아고니스트가 바레트 식도, 위식도 역류 질환 (GERD) 및 이와 관련된 상태의 치료 또는 예방에 유용할 수 있다는 것으로 현재 인정되고 있다. 이같은 상태에는 가슴쓰림, 입 또는 폐 내로 위/장 내용물이 역류되는 것이 동반되는 가슴쓰림, 삼키기 어려움, 기침, 간헐적인 쌕쌕거림 및 성대 염증 (GERD와 관련된 상태), 식도 미란, 식도 궤양, 식도 협착, 바레트 화생 (정상 식도 상피가 비정상 상피로 대체됨), 바레트 선암종, 및 폐 흡인이 포함될 수 있지만, 이에 한정되지는 않는다. 아밀린 및 본 발명의 화합물이 포함되는 아밀린 아고니스트는 항분비성 성질, 예컨대 위산의 저해, 담즙산의 저해, 및 췌장효소의 저해 성질을 갖는다. 또한, 아밀린은 위장보호 효과를 갖는 것으로 발견되었다. 따라서, 아밀린, 아밀린 아고니스트 및 본 발명의 화합물의 이러한 성질은 바레트 식도, 및/또는 GERD 및 본원에 기술된 관련 상태의 치료 또는 예방에 이들이 특히 유용하게 할 수 있다.

또다른 일반적인 양상에서, 본 발명의 화합물은 췌장염, 췌장암종, 및 위염의 치료 또는 예방에 또한 유용할 수 있다. 또한, 본 발명의 화합물은 내시경 역행 쓸개이자조영술 (ERCP)을 받은 환자에서의 췌장염의 치료 및 예방에 유용할 수 있다. 아밀린 및 본 발명의 화합물이 포함되는 아밀린 아고니스트가 소마토스타틴과 조합되는 경우 놀랍게도 우수한 치료 효과를 가질 수 있다는 것이 추가로 발견되었다. 따라서, 특정 실시양태에서, 췌장염의 치료 또는 예방 방법은 대상에게 아밀린, 및 본 발명의 화합물이 포함되는 아밀린 아고니스트를 투여하는 것 및 소마토스타틴 및 소마토스타틴 아고니스트를 투여하는 것을 포함한다. 또다른 실시양태에서, 췌장염의 치료 또는 예방 방법은 본 발명의 화합물을 투여하는 것 및 소마토스타틴 및 소마토스타틴 아고니스트를 투여하는 것을 포함한다.

또다른 일반적인 양상에서, 본 발명의 화합물은 골 흡수의 감소, 혈장 칼슘의 감소 및 진통 효과의 유도에 또한 유용할 수 있다. 따라서, 본 발명의 화합물은 골 장애 예컨대 골감소증 및 골다공증의 치료에 유용할 수 있다. 또다른 실시양태에서, 본 발명의 화합물은 통증 및 통증성 신경병증의 치료에 유용할 수 있다.

또다른 일반적인 양상에서, 본 발명의 화합물은 병용 치료법의 일부로서 사용될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본 발명의 화합물은 다른 시판되는 식이 보조물 또는 기타 항비만제, 예컨대 PYY 및 PYY 아고니스트, GLP-1 및 GLP-1 아고니스트, DPPIV 저해제, CCK 및 CCK 아고니스트, 엑센딘(exendin) 및 엑센딘 아고니스트, 및 렙틴 및 렙틴 아고니스트와 함께 사용될 수 있다. 또다른 실시양태에서, 본 발명의 화합물은 기타 진통제, 면역 억제제, 또는 기타 소염제와 함께 사용될 수 있다.

또다른 일반적인 양상에서, 본 발명의 화합물을 포함하는 신규 제약 조성물, 뿐만 아니라 이들의 사용 방법이 기술된다. 특정 실시양태에서, 제약 조성물은 적어도 0.01 ％ 내지 5 ％ w/v를 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 조성물의 pH는 약 3.0 내지 약 6.0일 수 있다. 특정 실시양태에서, 완충제는 아세테이트, 포스페이트, 시트레이트, 또는 글루타메이트일 수 있다. 특정 실시양태에서, 조성물은 탄수화물 또는 다가 알콜 강장제를 추가로 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 조성물은 m-크레졸, 벤질 알콜, 파라벤 및 페놀로 구성되는 군으로부터 선택된 방부제를 추가로 포함할 수 있다. 또다른 실시양태에서, 화합물은 약 0.05 ㎎/㎏ 내지 약 2 ㎎/㎏ 범위의 용량으로 투여된다. 예를 들어, 1일 용량은 1 ㎍ 내지 약 5 ㎎/1일일 수 있다. 특정 실시양태에서, 예시적인 전달 방식은 주사, 주입, 흡수 (점막), 및 흡입일 수 있다. 투여 경로는 근육내, 정맥내, 피하, 경피, 경점막, 경구, 코일 수 있거나, 또는 폐 흡입에 의한 것일 수 있다.

본원에 개시된 아미노산 서열을 코딩하는 뉴클레오티드, 뉴클레오티드를 함유하는 벡터, 뉴클레오티드의 증식 및 뉴클레오티드에 의해 코딩되는 폴리펩티드의 발현을 위한 숙주 세포, 신규 화합물에 대한 항체, 및 대상(對象)에서 본원에 기술된 것들과 같은 상태를 스크리닝 또는 검출/진단하는 것에서의 이들의 용도가 또한 본 발명의 일부로 구현된다.

본 발명의 이러한 및 기타 양상은 하기의 바람직한 실시양태 및 상세한 설명을 참조로 더욱 명확하게 이해될 것이다.

도 1은 본 발명의 예시적인 화합물의 용량에 대한 야간 금식시킨 마우스에서의 식품 소비에서의 용량-의존적 저하를 설명한다 (식품 섭취 분석).

도 2A는 2주의 기간에 걸쳐 비히클 또는 본 발명의 예시적인 화합물을 연속적으로 말초 주입한 비대해진 (식이-유도에 의해 살찐, 또는 DIO) 래트에서의 감소된 칼로리 섭취를 도해한다.

도 2B는 상응하는 시간 구간에 걸친 체중 저하를 도해한다.

도 3은 본 발명의 예시적인 화합물에 의한 신체 조성에 대한 효과를 묘사한다.

도 4A는 본 발명의 예시적인 화합물에 의한 위 배출에 대한 효과를 묘사한 다.

도 4B는 본 발명의 예시적인 화합물에 의한 저칼슘혈증의 효과를 묘사한다.

도 5는 본 발명의 예시적인 화합물에 의한 트리글리세리드에 대한 효과를 묘사한다.

도 6A-6B는 본 발명의 예시적인 화합물에 의한 경시적인 트리글리세리드에 대한 효과를 묘사한다.

도 7A-7E는 본 발명의 예시적인 화합물에 의한 경시적인 트리글리세리드에 대한 용량 효과를 묘사한다.

도 8A는 아밀린에 의한 그렐린에 대한 효과를 묘사한다.

도 8B-8C는 아밀린에 의한 그렐린에 대한 효과를 묘사한다.

도 9A는 본 발명의 예시적인 화합물에 의한 췌장 기능의 마커에 대한 효과를 묘사한다.

도 9B는 본 발명의 예시적인 화합물에 의한 췌장 기능의 마커에 대한 효과를 묘사한다.

도 10A는 아밀린에 의한 위산 분비에 대한 효과를 묘사한다.

도 10B는 아밀린에 의한 위산 분비에 대한 용량 응답 효과를 묘사한다.

도 11A는 아밀린에 의한 위장보호 효과를 묘사한다.

도 11B는 아밀린에 의한 위장보호 효과를 묘사한다.

도 11C는 아밀린의 용량 응답 곡선을 묘사한다.

본 발명은 신규 아밀린 족 화합물 또는 아고니스트 (신규 화합물 및 본 발명의 화합물로도 칭해짐)에 관한 것이다. 이러한 신규 화합물은 대사 장애, 혈관 장애, 신장 장애 및/또는 위장관 장애와 같은 상태의 치료 또는 예방에 유용할 수 있다. 이전의 섹션에서는 화합물의 구조가 제공되었다. 신규 화합물은, 아밀린, 칼시토닌 및/또는 CGRP와 비교하여, 대사 상태 및 장애 및 상기 언급된 것들의 치료 및/또는 예방에서 동등한 또는 더 높은 활성과 같은 바람직한 특징을 갖는 것으로 추가로 기술될 수 있다. 또다른 실시양태에서, 본 발명의 화합물은 동등한 또는 더 높은 활성을 갖지 않을 수 있지만, 아밀린, 칼시토닌 또는 CGRP보다 증가된 안정성 또는 용해도, 더 적은 부작용, 생물학적 활성의 조합, 활성의 더 빠른 개시, 더 긴 활성 기간 및/또는 제조, 제형 또는 사용 시의 용이함을 가질 수 있다.

아밀린 활성은 화합물이 아밀린과 유사한 생리학적 특징, 예컨대 본 명세서에 기술된 것들, 예를 들어, 식품 섭취의 저하를 나타내는 것을 의미한다. 본 발명의 화합물은 아밀린 수용체 또는 아밀린 자체가 상호작용하여 생물학적 응답, 예를 들어 식품 섭취의 저하를 유발시킬 수 있는 기타 수용체(들)에 결합하거나 다르게는 수용체와 직접적으로 또는 간접적으로 상호작용할 수 있다.

칼시토닌 활성은 화합물이 칼시토닌과 유사한 생리학적 특징, 예컨대 본 명세서에 기술된 것들, 예를 들어 파골세포 기능의 저해를 나타내는 것을 의미한다. 본 발명의 화합물은 CT 수용체 또는 칼시토닌 자체가 상호작용하여 생물학적 응답, 예를 들어 파골세포 기능의 저해를 유발시킬 낼 수 있는 기타 수용체(들)에 결합하거나 다르게는 수용체와 직접적으로 또는 간접적으로 상호작용할 수 있다.

CGRP 활성은 화합물이 CGRP와 유사한 생리학적 특징, 예컨대 본 명세서에 기술된 것들, 예를 들어 혈관확장 효과의 유발을 나타내는 것을 의미한다. 본 발명의 화합물은 CGRP 수용체 또는 CGRP 자체가 상호작용하여 생물학적 응답, 예를 들어 혈관확장 효과의 유발을 유발시킬 수 있는 기타 수용체(들)에 결합하거나 다르게는 수용체와 직접적으로 또는 간접적으로 상호작용할 수 있다.

본 발명의 화합물에는 활성이 유지된, 본원에 기술된 더 큰 펩티드의 생물학적으로 활성인 단편들이 또한 포함된다. 따라서, 본 발명의 화합물이 갖는 바람직한 활성의 예로는 (1) 아밀린, 칼시토닌 또는 CGRP와 유사한, 식품 섭취, 위 배출, 췌장 분비, 혈압, 심장 속도 또는 체중 손실 분석에서의 활성을 갖는 것, 및/또는 (2) 아밀린, 칼시토닌 또는 CGRP에 대한 수용체 결합 분석에서 결합하는 것이 포함된다. 일부 예시적인 분석이 실시예 1에서 제공된다.

본 발명의 화합물은 특별한 결합 프로파일을 또한 가질 수 있다. 예를 들어, 아밀린, 칼시토닌 및 CGRP의 생물학적 작용이 2개의 밀접하게 관련된 유형 II G 단백질-커플링 수용체 (GPCR)인 칼시토닌 수용체 (CTR)와 칼시토닌 수용체 유사 수용체 (CRLR)에 결합하는 것에 의해 매개된다는 것이 보고되었다. 클로닝 및 기능 연구는 CGRP 및 아밀린이 CTR 또는 CRLR 및 수용체 활성 변형 단백질 (RAMP)의 상이한 조합과 상호작용한다는 것을 나타냈다. 많은 세포들은 다중 RAMP를 발현한다. RAMP와 CTR 또는 CRLR의 공발현(co-expression)이 칼시토닌, CGRP 및 아밀린에 대한 기능성 수용체의 생성에 필요한 것으로 여겨진다. RAMP 족에는 3종의 구성원 (RAMP1, -2 및 -3)이 있고, 이들은 서열 동일성이 30 ％ 미만이지만, 공통적인 위상 조직을 갖는다. CRLR 및 RAMP1의 공발현으로 CGRP에 대한 수용체가 형성되고, CRLR 및 RAMP3의 공발현도 마찬가지이다. hCTR2와 RAMP1의 공발현으로는 아밀린 및 CGRP에 대한 수용체가 형성된다. hCTR2와 RAMP3의 공발현으로는 아밀린에 대한 수용체가 형성된다.

따라서, 본 발명의 방법에서 사용하기 위한 본 발명의 화합물은 아밀린 족에 속하는 아밀린, CGRP 및 칼시토닌의 수용체에 대한 친화력을 나타낼 수 있다. 본 발명의 화합물은 아밀린 수용체에의 결합에 대한 상당한 친화력, 뿐만 아니라 칼시토닌 및 CGRP 수용체와 같은 기타 수용체에 결합하는 능력을 나타낼 수 있다. 본 발명의 화합물은 아밀린 수용체에 20 nM, 10 nM, 5 nM, 1 nM을 초과하는 친화력으로, 더욱 바람직하게는 0.10 nM을 초과하는 친화력으로 결합할 수 있다 또한, 본 발명의 화합물은 칼시토닌 및 CGRP 수용체에 유사한 친화력으로 또한 결합할 수 있지만, CGRP 수용체에서는 친화력이 더 낮다. 또다른 실시양태에서, 본 발명의 화합물은 칼시토닌 수용체에 20 nM, 10 nM 또는 1 nM을 초과하는 친화력으로 결합할 수 있다. 또다른 실시양태에서, 본 발명의 화합물은 CGRP 수용체에 약 1 μM, 700 nM 또는 500 nM을 초과하는 친화력으로 결합할 수 있다. 본 발명의 화합물은 모든 3종의 수용체에 다양한 정도로 또한 결합할 수 있다. 따라서, 본 발명의 화합물이 본원에 기술된 것들로부터의 각각의 수용체에 대해 특별한 결합 친화력으로 결합 프로파일을 가질 수 있는 것으로 생각된다.

화학식 I, II, III, IV의 것들, SEQ ID NO: 40 내지 137의 생물학적으로 활성인 단편, SEQ ID NO: 40-237 중 임의의 것에 대해 아미노산 동일성이 적어도 75, 80, 82, 85, 87, 90, 92, 95 또는 97 ％인 것들, 및 이들의 생물학적으로 활성인 단편들이 포함되는 본 발명의 화합물은, 식품 섭취의 저하 또는 본원, 예를 들어 표 1에 기술된 기타 활성들 중 하나와 관련하여, 아밀린, 칼시토닌, CGRP 또는 SEQ ID NO: 40-137의 서열을 갖는 화합물, 또는 실시예 3의 화합물 1-137의 생물학적 활성의 적어도 약 25 ％, 바람직하게는 약 30 ％, 40 ％, 50 ％, 60 ％, 70 ％, 80 ％, 90 ％, 95 ％, 98 ％ 또는 99 ％를 유지할 수 있다. 또다른 실시양태에서, 본 발명의 화합물은 개선된 생물학적 활성을 나타낸다. 바람직하게는, 신규 화합물은, 식품 섭취의 저하 또는 본원, 예를 들어 표 1에 기술된 기타 활성들 중 하나와 관련하여, 아밀린, 칼시토닌, CGRP 또는 SEQ ID NO: 40-137의 서열을 갖는 화합물, 또는 실시예 3의 화합물 1-137의 생물학적 활성의 적어도 약 110 ％, 125 ％, 130 ％, 140 ％, 150 ％, 200 ％ 또는 그 이상을 나타낸다. 예를 들어, 본 발명의 바람직한 화합물은 본원에 기술된 분석 중 하나에서 아밀린, 칼시토닌 또는 CGRP의 동일한 분석 (식품 섭취, 체중 저하 분석, 위 배출, 트리글리세리드, 췌장염, 그렐린 또는 칼슘)에서의 활성보다 활성이 큰 것이다.

예증으로서만, 본 발명의 화합물은 누적 식품 섭취를 비히클의 투여에 비해 5 ％ 초과, 바람직하게는 15 ％ 초과, 더욱 바람직하게는 25 ％ 초과, 더욱더 바람직하게는 35 ％ 또는 40 ％ 초과, 가장 바람직하게는 비히클에 비해 50 ％ 초과만큼 저하시키는 능력을 나타낼 수 있다.

또다른 일반적인 양상에서, 본 발명의 화합물은 식품 섭취의 저하, 식욕 저하, 포만감 유도, 영양소 가용성의 저하, 체중 감소의 야기, 신체 조성에의 작용, 신체 에너지 함량 또는 에너지 소비의 변경, 지질 프로파일의 개선 (LDL 콜레스테롤 및 트리글리세리드 수준의 저하 및/또는 HDL 콜레스테롤 수준의 변화 포함), 위장관운동의 감속, 위 배출의 지연, 식후 혈당 운동의 완화, 글루카곤 분비 방지 또는 저해, 및 혈압 감소에 유용할 수 있다. 식품 섭취, 체중 저하, 위 배출, 트리글리세리드, 및 신체 조성에 대한 효과의 예시적인 분석은 적어도 실시예 3, 4, 5, 6 및 7에서 기술된다.

또다른 일반적인 양상에서, 본 발명의 화합물은 그렐린의 분비를 저해하는데 사용될 수 있다. 따라서, 본 발명의 화합물은 그렐린 관련 장애 예컨대 프라더-윌리 증후군, 모든 유형의 당뇨병 및 이의 합병증, 비만, 과식증, 고지질혈증, 또는 영양과다와 관련된 기타 장애를 치료 또는 예방하는데 이러한 메카니즘을 활용할 수 있다. 그렐린에 대한 효과의 예시적인 분석은 실시예 8에서 기술된다.

또다른 일반적인 양상에서, 아밀린 및 본 발명의 화합물이 포함되는 아밀린 아고니스트가 바레트 식도, 위식도 역류 질환 (GERD) 및 이와 관련된 상태의 치료 또는 예방에 유용할 수 있다는 것으로 현재 인정되고 있다. 이같은 상태에는 가슴쓰림, 입 또는 폐 내로 위/장 내용물이 역류되는 것이 동반되는 가슴쓰림, 삼키기 어려움, 기침, 간헐적인 쌕쌕거림 및 성대 염증 (GERD와 관련된 상태), 식도 미란, 식도 궤양, 식도 협착, 바레트 화생 (정상 식도 상피가 비정상 상피로 대체됨), 바레트 선암종, 및 폐 흡인이 포함될 수 있지만, 이에 한정되지는 않는다. 아밀린 및 본 발명의 화합물이 포함되는 아밀린 아고니스트는 항분비성 성질, 예컨대 위산의 저해, 담즙산의 저해, 및 췌장효소의 저해 성질을 갖는다. 따라서, 아밀린, 아밀린 아고니스트 및 본 발명의 화합물의 이러한 성질은 바레트 식도, 및/또는 GERD 및 본원에 기술된 관련 상태의 치료 또는 예방에 이들이 특히 유용하게 할 수 있다. 위산 분비에 대한 효과 및 위장보호 효과를 나타내는 예시적인 분석은 실시예 10 및 11에서 기술된다.

또다른 일반적인 양상에서, 본 발명의 화합물은 췌장염, 췌장암종, 및 위염의 치료 또는 예방에 또한 유용할 수 있다. 또한, 본 발명의 화합물은 내시경 역행 쓸개이자조영술 (ERCP)을 받은 환자에서의 췌장염의 치료 및 예방에 유용할 수 있다. 아밀린 및 본 발명의 화합물이 포함되는 아밀린 아고니스트가 소마토스타틴과 조합되는 경우 놀랍게도 우수한 치료 효과를 가질 수 있다는 것이 추가로 발견되었다. 따라서, 특정 실시양태에서, 췌장염의 치료 또는 예방 방법은 대상에게 아밀린, 및 본 발명의 화합물이 포함되는 아밀린 아고니스트를 투여하는 것 및 소마토스타틴 및 소마토스타틴 아고니스트를 투여하는 것을 포함한다. 또다른 실시양태에서, 췌장염의 치료 또는 예방 방법은 본 발명의 화합물을 투여하는 것 및 소마토스타틴 및 소마토스타틴 아고니스트를 투여하는 것을 포함한다. 췌장 기능에 대한 효과를 나타내는 예시적인 분석은 실시예 9에서 기술된다.

또다른 일반적인 양상에서, 본 발명의 화합물은 골 흡수의 감소, 혈장 칼슘의 감소 및 진통 효과의 유도에 또한 유용할 수 있다. 따라서, 본 발명의 화합물은 골 장애 예컨대 골감소증 및 골다공증의 치료에 유용할 수 있다. 또다른 실시양태에서, 본 발명의 화합물은 통증 및 통증성 신경병증의 치료에 유용할 수 있다. 칼슘 수준에 대한 효과를 나타내는 예시적인 분석은 실시예 6에서 제공된다.

본 발명의 방법에서, 폴리펩티드는 단독으로, 또는 아밀린 또는 아밀린 유사체 작용체, 연어 칼시토닌, 콜레사이스토키닌 (CCK) 또는 CCK 아고니스트, 렙틴 (OB 단백질) 또는 렙틴 아고니스트, 엑센딘 또는 엑센딘 유사체 아고니스트, GLP-1 또는 GLP-1 유사체 아고니스트, DPPIV 저해제, PYY 또는 PYY 유사체, AFP-6 (인터메딘) 또는 AFP-6 아고니스트, 유로코르틴(Urocortin) 또는 유로코르틴 아고니스트, 또는 아드레노메둘린(Adrenomedullin) 또는 아드레노메둘린 아고니스트를 포함하는 기타 화합물 및 조성물이 포함되지만 이에 한정되지 않는, 영양소 가용성을 저하시키는 작용을 장기적으로 또는 단기적으로 나타내는 1종 이상의 기타 화합물 및 조성물과 함께 투여될 수 있다. 적절한 아밀린 아고니스트로는, 예를 들어, [25,28,29 프로-]-인간 아밀린 ("프람린타이드(pramlintide)"로도 공지되어 있고, 미국 특허 제5,686,511호 및 제5,998,367호에 기술되어 있음)이 포함된다. 사용된 CCK는 바람직하게는 CCK 옥토펩티드 (CCK-8)이다. 렙틴은, 예를 들어, [Pelleymounter, Cullen et al., Science 269:540-543 (1995)]; [Halaas, Gajiwala et al., Science 269:543-6 (1995)]; [Campfield, Smith et al., Science 269:546-549 (1995)]에 논의되어 있다. 적절한 엑센딘에는 엑센딘-3 및 엑센딘-4가 포함되고, 엑센딘 아고니스트 화합물에는, 예를 들어, PCT 공보 제WO99/07404호, 제WO99/25727호 및 제WO99/25728호에 기술된 것들이 포함된다. 적절한 PYY 폴리펩티드 및 유사체에는 미국 특허 출원 [대리인의 도켓 번호 제18528.662호 및 제18528.663호]에 기술된 것들이 포함된다.

"비만"은 일반적으로 신체 질량 지수가 30을 초과하는 것으로 정의되지만, 본 명세서에서는 신체 질량 지수가 30 미만인 대상들을 포함하여 체중 감소가 필요하거나 체중 감소를 원하는 모든 대상이 "살찐"의 범주에 포함된다.

본 발명의 화합물의 제조

당업계에 공지된 표준 재조합 기술 또는 화학적 펩티드 합성 기술을 사용하여, 예를 들어, 자동화 또는 반자동화 펩티드 합성기 또는 양자를 모두 사용하여, 본원에 기술된 본 발명의 화합물을 제조할 수 있다. 마찬가지로, 본 발명의 폴리펩티드의 유도체를 표준 화학, 생화학 또는 생체내 방법론을 사용하여 제조할 수 있다.

본 발명의 화합물을 용액 내에서 또는 고체 지지체 상에서 통상적인 기술에 따라 합성할 수 있다. 다양한 자동 합성기가 시판되고, 공지된 프로토콜에 따라 이를 사용할 수 있다. 예를 들어, [Stewart and Young, Solid Phase Peptide Synthesis, 2nd ed., Pierce Chemical Company, (1984)]; [Tam et al., J. Am. Chem. Soc., 105:6442 (1983)]; [Merrifield, Science 232:341-7 (1986)]; 및 [Barany and Merrifield, The Peptides, Gross and Meienhofer, eds., Academic Press, New York 1-284 (1979)] 참조. 고체 상 펩티드 합성은 자동 펩티드 합성기 (예를 들어, Model 430A, Applied Biosystems Inc., Foster City, California)로 캡핑(capping)과 함께 NMP/HOBt (옵션 I) 시스템 및 tBoc 또는 Fmoc 화학 ([Applied Biosystems User's Manual for the ABI 430A Peptide Synthesizer, Version 1.3B July 1, 1988, section 6, pp.49-70, Applied Biosystems, Inc., Foster City, California] 참조)을 사용하여 수행할 수 있다. Advanced ChemTech Synthesizer (Model MPS 350, Louisville, Kentucky)를 사용하여 펩티드를 또한 어셈블링(assembling)할 수 있다. 펩티드를, 예를 들어, Waters Delta Prep 3000 시스템 및 C4, C8 또는 C18 정제용 컬럼 (10 μ, 2.2 × 25 ㎝; Vydac, Hesperia, California)을 사용하여, RP-HPLC (정제용 및 분석용)에 의해 정제할 수 있다. 활성 단백질은 용이하게 합성된 후, 반응성 펩티드를 동정하기 위해 고안된 스크리닝 분석에서 스크리닝될 수 있다.

전통적인 단계적인 합성 이외에, 수렴성 고체 상 펩티드 합성 (하이브리드 접근법 또는 단편 축합 방법으로 또한 공지됨)이 복합적이고 어려운 펩티드 및 소형 단백질의 제조를 위해 개발되어 왔다. 이러한 방법에 따라, 전체 펩티드 서열에 스패닝되고(spanning) 고체 상 위에서 제조된 적절하게 보호된 펩티드 단편이, 고체 지지체 위에서 또는 용액 내에서, 표적 펩티드에 축합된다. 새로운 수지 및 수지 핸들의 가용성으로 완전하게 보호된 펩티드 절편을 고체-상 기술에 의해 신속하게 합성하는 가능성이 열려졌다. 이러한 접근법은 고체-상 방법과 용액-상 방법 양쪽의 장점을 조합하기 때문에 대형 분자의 제조에 특히 매력적이다. 제조 사이클 시간이 용액-상 방법론과 비교하여 짧고, 수율 및 순도는 종종 더 높다. 추가적으로, 규모 증진이 더욱 용이하고, 긴 펩티드의 고체-상 합성에서 종종 마주치게 되는 많은 응집 문제가 방지된다.

또다른 실시양태에서, 합성 전략은 수렴성 단편 축합을 이용한다. 수렴성 단편 축합은 표준 고체 또는 표준 액체 상 합성에 비해 대형 고품질 펩티드의 우수한 제조 방법이다. 이같은 방법으로, 합성 시간을 줄이면서 뿐만 아니라 품질을 보장하면서 단편을 병렬식으로 합성할 수 있다. 펩티드가 더 길게 성장하면, 부반응 및 불완전한 합성의 위험이 커진다. 본 발명의 펩티드 서열이 단편 접근법을 촉진시키는 이상적으로 위치하는 글리신 및 프롤린을 가질 수 있는 것으로 인지되었는데, 이는 이러한 2종의 아미노산이 단편 커플링 동안 라세미화할 수 없고 매우 효율적인 축합 속도를 나타내기 때문이다. 직선 방향의 고체 상 합성은 주요 규모 증진 문제를 나타내고 따라서 대규모 합성에 적절하지 않을 수 있다는 사실 이외에도, 단편 접근법은 훨씬 더 제어가능하고 중간체를 정제할 수 있는 기회를 제공한다. 디술피드 가교는 제1단편 내에만 존재하고, 따라서 전적으로 보호된 전구체와 함께 단편 단계에서 형성될 수 있다. 이러한 접근법은 전략 및 규모 면에서 다수의 장점을 나타내기 때문에, 모든 단편이 동시에 합성될 수 있으므로 합성 시간을 단축시킬 것이다. 이는 위험을 최소화시키고 비용을 저하시키는 훌륭한 도구이다. 이러한 전략이 실행되도록 하는 바람직한 단편의 골격 구조를 나타내기 위해 하기의 단편들이 묘사된다:

단편 1: Boc-X (Boc)-X-X (Trt)-X (tBu)-X-X(tBu)-X-X-X-Gly-OH

고리형 (고리화는 단편 커플링 전에 일어날 것이다)

단편 2: Fmoc-K(Pbf)-X-X(tBu)-X(Trt)-X(OtBu)-X-X(Trt)-X(Pbf)-X-X(Trt)-X(tBu)-X(tBu)-Pro-OH

단편 3: Fmoc-X(Pbf)-X(tBu)-X(Trt)-X(tBu)-X-X(tBu)-X(Trt)-X(tBu)-OH

단편 4: H-Tyr(tBu)-NH₂

이러한 교시를 기초로, 본 발명의 어떤 화합물이 이같은 합성에 이상적인가는 당업자가 이해할 수 있을 것이다. 기술 발달은 3개의 단편만을 갖도록, 즉 4번째 단편이 3번째 단편으로부터 별도로 생성될 필요가 없도록 하는 것을 가능하게 할 수 있다.

별법으로, 본 발명의 화합물을 당업계에 주지된 재조합 기술에 의해 제조할 수 있다. 예를 들어, [Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd ed., Cold Spring Harbor (1989)] 참조. 재조합 기술에 의해 제조된 이러한 폴리펩티드는 폴리뉴클레오티드로부터 발현될 수 있다. 이러한 폴리뉴클레오티드 서열에는 미생물 숙주 내에서의 mRNA의 전사 및 번역을 용이하게 하는 코돈이 혼입될 수 있다. 이같은 제작 서열은 당업계에 주지된 방법에 따라 쉽게 구축될 수 있다. 예를 들어, WO83/04053 참조. 상기 폴리뉴클레오티드는 또한 N-말단 메티오닐 잔기를 임의로 코딩할 수 있다. 본 발명에서 유용한 비-펩티드 화합물은 당업계에 공지된 방법에 의해 제조할 수 있다. 예를 들어, 포스페이트-함유 아미노산 및 이같은 아미노산을 함유하는 펩티드는 당업계에 공지된 방법을 이용하여 제조할 수 있다. 예를 들어, [Bartlett and Landen, Bioorg. Chem. 14:356-77 (1986)] 참조.

다양한 발현 벡터/숙주 시스템이 신규 화합물의 코딩 서열을 함유 및 발현하는데 사용될 수 있다. 여기에는 재조합 박테리오파지, 플라스미드 또는 코스미드 DNA 발현 벡터로 형질전환된 박테리아; 효모 발현 벡터로 형질전환된 효모 세포; 바이러스 발현 벡터 (예를 들어, 배큘로바이러스)로 감염된 곤충 세포 시스템; 바이러스 발현 벡터 (예를 들어, 꽃양배추 모자이크 바이러스, CaMV; 담배 모자이크 바이러스, TMV)로 형질감염된 또는 박테리아 발현 벡터 (예를 들어, Ti 또는 pBR322 플라스미드)로 형질전환된 식물 세포 시스템; 또는 동물 세포 시스템이 포함되지만, 이에 한정되지는 않는다. 재조합 단백질 생산에 유용한 포유류 세포에는 VERO 세포, HeLa 세포, 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포주, COS 세포 (예컨대 COS-7), WI 38, BHK, HepG2, 3T3, RIN, MDCK, A549, PC12, K562 및 293 세포가 포함되지만, 이에 한정되지는 않는다. 단백질의 재조합 발현을 위한 예시적인 프로토콜이 하기에 기술된다.

그 자체로서, 본 발명에 의해 제공되는 폴리뉴클레오티드 서열은 새롭고 유용한 바이러스 및 플라스미드 DNA 벡터, 새롭고 유용한 형질전환 및 형질감염된 원핵 및 진핵 숙주 세포 (배양물 내에서 성장된 박테리아, 효모 및 포유류 세포가 포함됨), 및 본 발명의 폴리펩티드를 발현할 수 있는 이같은 숙주 세포의 새롭고 유용한 배양 성장 방법에 유용하다. 본원의 신규 화합물을 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 유전자 요법에 또한 유용할 수 있다.

본 발명은 신규 화합물의 재조합 DNA 제조 방법을 또한 제공한다. 신규 화합물을 코딩하는 핵산을 함유하는 숙주 세포로부터 폴리펩티드를 생산하는 방법으로, (a) 이같은 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 함유하는 상기 숙주 세포를 이같은 DNA 분자의 발현을 용이하게 하는 조건 하에 배양하고, (b) 신규 화합물을 수득하는 것을 포함하는 방법이 제공된다.

숙주 세포는 원핵 생물성 또는 진핵 생물성일 수 있고, 박테리아, 포유류 세포 (예컨대 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포, 원숭이 세포, 베이비 햄스터 신장 세포, 암 세포 또는 기타 세포), 효모 세포, 및 곤충 세포가 포함된다.

재조합 단백질의 발현을 위한 포유류 숙주 시스템 또한 당업자에게 주지되어 있다. 숙주 세포 균주는 발현된 단백질을 프로세싱하거나 단백질 활성을 제공하는데 유용할 특정한 번역후 변형을 생산하는 특별한 능력에 대해 선택될 수 있다. 폴리펩티드의 이같은 변형에는 아세틸화, 카르복실화, 글리코실화, 인산화, 지질화 및 아실화가 포함되지만, 이에 한정되지는 않는다. 단백질의 "프리프로(prepro)" 형태를 절단하는 번역후 프로세싱이 정확한 삽입, 폴딩(folding) 및/또는 기능에 또한 중요할 수 있다. 상이한 숙주 세포들, 예컨대 CHO, HeLa, MDCK, 293, WI38 등은 이같은 번역후 활성에 대해 특이적인 세포 장치 및 특징적인 메카니즘을 갖고, 도입된 외래 단백질의 정확한 변형 및 프로세싱을 확실히 하도록 선택될 수 있다.

별법으로, 효모 시스템을 사용하여 본 발명의 신규 화합물을 생성시킬 수 있다. 신규 화합물을 코딩하는 DNA의 코딩 영역을 PCR에 의해 증폭시킨다. 효모 프리-프로-알파 리더(leader) 서열을 코딩하는 DNA를 알파 짝짓기 인자 유전자의 뉴클레오티드 1-20을 함유하는 한 프라이머 및 이러한 유전자의 뉴클레오티드 255-235에 상보적인 또다른 프라이머를 사용하여 PCR 반응에서 효모 게놈 DNA로부터 증폭시킨다 (Kurjan and Herskowitz, Cell, 30:933-43 (1982)). 프리-프로-알파 리더 코딩 서열 및 신규 화합물의 코딩 서열 단편을, 프로모터가 성숙한 신규 화합물에 융합된 프리-프로-알파 인자로 구성된 융합 단백질의 발현을 지시하도록, 효모 알콜 탈수소효소 (ADH2) 프로모터를 함유하는 플라스미드 내로 결찰시킨다. [Rose and Broach, Meth. Enz. 185:234-79, Goeddel ed., Academic Press, Inc., San Diego, California (1990)]에 교시된 바와 같이, 벡터는 클로닝 부위 하류의 ADH2 전사 종결인자, 효모 "2-마이크론" 복제 기원, 효모 leu-2d 유전자, 효모 REP1 및 REP2 유전자, 대장균 β-락타마제 유전자, 및 대장균 복제 기원을 추가로 포함한다. β-락타마제 및 leu-2d 유전자는 각각 박테리아 및 효모에서 선택을 제공한다. 또한 leu-2d 유전자는 효모 내에서의 플라스미드의 증가된 카피수를 촉진하여 더 높은 수준의 발현을 유도한다. REP1 및 REP2 유전자는 플라스미드 카피수의 조절에 수반되는 단백질을 코딩한다.

이전의 단락에 기술된 DNA 구축물을 공지된 방법, 예를 들어, 리튬 아세테이트 처리를 사용하여 효모 세포 내로 형질전환시킨다 (Steams et al., Meth. Enz. 185:280-97 (1990)). 성장 배지 내의 포도당이 고갈되면 ADH2 프로모터가 유도된다 (Price et al., Gene 55:287 (1987)). 프리-프로-알파 서열은 세포로부터의 융합 단백질의 분비를 초래한다. 부수적으로, 효모 KEX2 단백질은 본 발명의 성숙한 화합물로부터 프리-프로 서열을 절단한다 (Bitter et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:5330-4 (1984)).

또한 본 발명의 화합물을 시판되는 발현 시스템, 예를 들어, Pichia Expression System (Invitrogen, San Diego, California)을 사용하여, 제조업자의 사용설명서에 따라, 효모에서 재조합적으로 발현시킬 수 있다. 이러한 시스템 또한 분비를 지시하기 위해 프리-프로-알파 서열에 의존하지만, 삽입물의 전사는 메탄올에 의한 유도 시 알콜 산화효소 (AOX1) 프로모터에 의해 구동된다. 분비된 신규 화합물은, 예를 들어, 박테리아 및 포유류 세포 상층액으로부터 신규 화합물을 정제하기 위해 사용된 방법에 의해, 효모 성장 배지로부터 정제된다.

별법으로, 신규 화합물을 코딩하는 DNA를 배큘로바이러스 발현 벡터 pVL1393 (PharMingen, San Diego, California) 내로 클로닝할 수 있다. 이어서 이러한 신규 화합물-함유 벡터를 제조업자의 지시 (PharMingen)에 따라 사용하여 sF9 단백질이 없는 배지 내의 스포돕테라 프루기페르다(Spodoptera frugiperda) 세포를 감염시켜 재조합 단백질을 생산한다. 헤파린-세파로스 컬럼 (Pharmacia, Piscataway, New Jersy) 및 순차적 분자 사이징(sizing) 컬럼 (Amicon, Beverly, Massachusetts)을 사용하여 배지로부터 단백질을 정제 및 농축하고, PBS 내에 재현탁시킨다. SDS-PAGE 분석은 단일 밴드를 나타내고, 이러한 분석으로 단백질의 크기가 확인되며, Proton 2090 Peptide Sequencer 상에서의 에드만(Edman) 서열분석으로 이의 N-말단 서열이 확인된다.

예를 들어, 원하는 신규 화합물을 코딩하는 DNA 서열을 원하는 프로모터 및 임의로 리더 서열을 함유하는 플라스미드 내로 클로닝할 수 있다 (예를 들어, [Better et al., Science 240:1041-3 (1988) 참조). 이러한 구축물의 서열은 자동화 서열분석에 의해 확인할 수 있다. 이어서, 박테리아의 CaCl₂ 인큐베이션 및 열 충격 처리를 사용하는 표준 절차를 사용하여, 플라스미드를 대장균 균주 MC1061 내로 형질전환시킨다 (Sambrook 등의 상기 문헌). 형질전환된 박테리아를 카르베니실린이 보충된 LB 배지 내에서 성장시키고, 발현된 단백질의 생산을 적절한 배지 내에서의 성장에 의해 유도한다. 존재하는 경우, 리더 서열은 성숙한 신규 화합물의 분비에 영향을 미치고, 분비되는 동안 절단될 것이다. 분비된 재조합 단백질을 박테리아 배양 배지로부터 하기에 기술되는 방법에 의해 정제한다.

별법으로, 본 발명의 폴리펩티드는 곤충 시스템 내에서 발현될 수 있다. 단백질 발현을 위한 곤충 시스템은 당업자에게 주지되어 있다. 한 이같은 시스템에서, 오토그래파(Autographa) 캘리포니아 핵 다면체 바이러스 (AcNPV)를 벡터로 사용하여 스포롭테라 프루기페르다 세포 내에서 또는 트리코플루시아 라르바에(Trichoplusia larvae) 내에서 외래 유전자를 발현시킨다. 신규 화합물의 코딩 서열은 바이러스의 비필수 영역, 예컨대 폴리헤드린 유전자 내로 클로닝되고, 폴리헤드린 프로모터의 제어 하에 놓인다. 신규 화합물의 성공적인 삽입은 폴리헤드린 유전자가 비활성이게 할 것이고, 코트 단백질 코트가 결여된 재조합 바이러스가 생산될 것이다. 이이서 재조합 바이러스를 사용하여 스포롭테라 프루기페르다 세포 또는 트리코플루시아 라르바에를 감염시키고, 이러한 세포 내에서 폴리펩티드가 발현된다 ([Smith et al., J. Virol. 46:584 (1983); [Engelhard et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:3324-7 (1994)]).

또다른 예에서, 신규 화합물을 코딩하는 DNA 서열을 PCR에 의해 증폭시키고 적절한 벡터, 예를 들어, pGEX-3X (Pharmacia, Piscataway, New Jersy) 내로 클로닝시킬 수 있다. pGEX 벡터는 벡터에 의해 코딩되는, 글루타티온-S-트랜스페라제 (GST)를 포함하는 융합 단백질, 및 벡터의 클로닝 부위 내로 삽입된 DNA 단편에 의해 코딩되는 단백질을 생산하도록 고안된다. PCR용 프라이머는, 예를 들어, 적절한 절단 부위를 포함하도록 생성될 수 있다. 이어서 재조합 융합 단백질을 융합 단백질의 GST 부분으로부터 절단할 수 있다. pGEX-3X/PYY 유사체 폴리펩티드 구축물을 대장균 XL-1 Blue 세포 (Stratagene, La Jolla, California) 내로 형질전환시키고, 개별적인 형질전환체들을 단리하고, 37 ℃에서 LB 배지 (카르베니실린이 보충됨) 내에서 600 nm에서의 광학 밀도가 0.4가 될 때까지 배양한 후, 4 시간 동안 0.5 mM 이소프로필 β-D-티오갈락토피라노시드 (Sigma Chemical Co., St. Louis, Missouri)의 존재 하에 추가로 인큐베이션한다. 개별적인 형질전환체로부터의 플라스미드 DNA를 정제하고, 자동화 서열분석기를 사용하여 부분적으로 서열분석하여, 적절한 방향으로의 원하는 유전자 삽입물의 존재를 확인한다.

박테리아에서 불용성 봉입체로서 생산될 것으로 예상되는 융합 단백질은 하기와 같이 정제할 수 있다. 세포를 원심분리에 의해 수확하고; 0.15 M NaCl, 10 mM 트리스 (pH 8), 1 mM EDTA 내에서 세정하고; 0.1 ㎎/㎖ 라이소자임 (Sigma Chemical Co.)으로 15 분 동안 실온에서 처리한다. 용해질을 초음파처리에 의해 청정시키고, 세포 잔해물을 10 분 동안 12,000×g에서의 원심분리에 의해 펠렛화시킨다. 융합 단백질을 함유하는 펠렛을 50 mM 트리스 (pH 8) 및 10 mM EDTA에 재현탁시키고, 50 ％ 글리세롤 상에 층을 이루게 하고, 30 분 동안 6000×g에서 원심분리한다. 펠렛을 Mg⁺⁺ 및 Ca⁺⁺가 없는 표준 포스페이트 완충 염수 용액 (PBS) 내에 재현탁시킨다. 재현탁된 펠렛을 변성 SDS 폴리아크릴아미드 겔 내에서 분획화시킴으로써 융합 단백질을 추가로 정제한다 (Sambrook 등의 상기 문헌). 겔을 0.4 M KCl에 침지시켜 단백질을 가시화시키고, 이를 절제하여 SDS가 없는 겔-러닝(running) 완충액 내에서 전기용출시킨다. GST/신규 화합물 융합 단백질이 박테리아에서 가용성 단백질로 생산되는 경우, GST Purification Module (Pharmacia Biotech)을 사용하여 이를 정제할 수 있다.

융합 단백질을 소화시켜 성숙한 신규 단백질로부터 GST를 절단할 수 있다. 소화 반응물 (20-40 ㎍ 융합 단백질, 20-30 유닛 인간 트롬빈 (0.5 ㎖ PBS 내의 4000 U/㎎ (Sigma))을 16-48 시간 동안 실온에서 인큐베이션하고, 변성 SDS-PAGE 겔 상에 로딩하여(loaded), 반응 생성물을 분획화시킨다. 겔을 0.4M KCl에 침지시켜 단백질 밴드를 가시화시킨다. 신규 화합물의 예상 분자량에 상응하는 단백질 밴드의 정체는 자동화 서열분석기 (Applied Biosystems Model 473A, Foster City, California)를 사용하여 부분적인 아미노산 서열 분석에 의해 확인할 수 있다.

신규 화합물의 특히 바람직한 재조합 발현 방법에서, pCMV 벡터 (5' CMV 프로모터, 3' HGH 폴리A 서열) 내의 신규 화합물의 DNA를 함유하는 플라스미드와 pSV2neo (neo 저항성 유전자 함유)로 인산칼슘 방법에 의해 293 세포를 공-감염시킬 수 있다. 바람직하게는, 형질감염 전에 벡터를 ScaI으로 선형화시켜야 한다. 유사하게, neo 유전자가 혼입된 유사한 pCMV 벡터를 사용하는 대안적인 구축물을 사용할 수 있다. 10-14일 동안 0.5 ㎎/㎖ G418 (네오마이신형 항생제)을 함유하는 성장 배지에서의 제한 희석에 의해 단일 세포 클론으로부터 안정한 세포주를 선택한다. 세포주를 신규 화합물의 발현에 대해 ELISA 또는 웨스턴 블롯에 의해 스크리닝하고, 고발현 세포주를 대규모 성장을 위해 확장시킨다.

형질전환된 세포를 장기간의 고수율 단백질 생산에 사용하는 것이 바람직하고, 이같은 안정한 발현이 바람직하다. 일단 이같은 세포가 원하는 발현 카세트와 함께 선택가능한 마커를 함유하는 벡터로 형질전환되면, 세포를 1-2일 동안 강화 배지에서 성장시킨 후, 선택성 배지로 교체할 수 있다. 선택가능한 마커는 선택에 대한 저항성을 부여하도록 고안되고, 마커의 존재는 도입된 서열을 성공적으로 발현하는 세포가 성장 및 회수되도록 한다. 안정하게 형질전환된 세포의 저항성 클럼프(clump)를 세포에 적절한 조직 배양 기술을 사용하여 증식시킬 수 있다.

다수의 선택 시스템을 사용하여 재조합 단백질 생산을 위해 형질전환된 세포를 회수할 수 있다. 이같은 선택 시스템에는 각각 tk-, hgprt- 또는 aprt-세포 내의 HSV 티미딘 키나제, 하이포잔틴-구아닌 포스포리보실트랜스페라제 및 아데닌 포스포리보실트랜스페라제 유전자가 포함되지만, 이에 한정되지는 않는다. 또한, 항-대사산물 저항성은 메토트렉세이트에 대한 저항성을 부여하는 dhfr; 마이코페놀산에 대한 저항성을 부여하는 gpt; 아미노글리코시드, G418에 대한 저항성을 부여하고, 또한 클로르술푸론에 대한 저항성을 부여하는 neo; 및 히그로마이신에 대한 저항성을 부여하는 hygro의 선택의 기초로 사용될 수 있다. 유용할 수 있는 추가적인 선택가능한 유전자로는 세포가 트립토판 대신 인돌을 사용하도록 하는 trpB; 또는 세포가 히스티딘 대신에 히스티놀을 사용하도록 하는 hisD가 포함된다. 형절전환체의 동정을 위한 가시적인 표시를 제공하는 마커에는 안트로시아닌, β-글루쿠로니다제 및 이의 기질, GUS, 및 루시퍼라제 및 이의 기질, 루시페린이 포함된다.

자동화 펩티드 합성과 재조합 기술 모두를 조합하여 사용하여 본 발명의 많은 신규 화합물을 생산할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 화합물은 PEG화에 의한 삽입, 결실 및 치환이 포함되는 변형의 조합을 함유할 수 있다. 이같은 화합물은 단계적으로 생산될 수 있다. 첫번째 단계에서, 결실, 치환, 삽입 및 이의 임의의 조합을 함유하는 신규 화합물의 중간체 형태를 기술된 바와 같은 재조합 기술에 의해 생산할 수 있다. 이어서, 하기 기술되는 임의의 정제 단계 후에, 중간체 폴리펩티드를 적절한 PEG화 시약 (예를 들어, Nectar Transforming Therapeutics (San Carlos, California)로부터 입수)으로의 화학 변형을 통해 PEG화시켜, 원하는 화합물을 수득한다. 당업자는 상기 기술된 절차가 결실, 치환, 삽입, 유도체화 및 당업계에 주지되고 본 발명에 의해 구현되는 기타 변형 수단으로부터 선택된 변형의 조합을 함유하는 신규 화합물에 적용되도록 일반화될 수 있음을 인지할 것이다.

본 발명에 의해 생성된 신규 화합물을 정제하는 것이 바람직할 수 있다. 펩티드 정제 기술은 당업자에게 주지되어 있다. 이러한 기술에는, 한 수준으로, 세포 환경물을 폴리펩티드 및 비-폴리펩티드 분획으로 조(粗) 분획화하는 것이 수반된다. 다른 단백질로부터 폴리펩티드를 분리한 후, 크로마토그래피 및 전기영동 기술을 사용하여 당해 폴리펩티드를 추가로 정제하여, 부분적인 또는 완전한 정제 (또는 균질할 때까지의 정제)를 달성할 수 있다. 순수한 펩티드의 제조에 특히 적합한 분석 방법은 이온 교환 크로마토그래피, 배제 크로마토그래피, 폴리아크릴아미드 겔 전기영동, 및 등전 포커싱(focusing)이다. 특히 효율적인 펩티드 정제 방법은 역상 HPLC이고, 이어서 정제 산물을 액체 크로마토그래피/질량 분광법 (LC/MS) 및 매트릭스-보조 레이저 탈착 이온화 (MALDI: Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization) 질량분석법에 의해 특징화시킨다. 추가적인 순도 확인은 아미노산 분석을 측정함으로써 수득된다.

본 발명의 특정 양상은 코딩된 단백질 또는 펩티드의 정제에 관한 것이고, 특정 실시양태에서는 코딩된 단백질 또는 펩티드의 실질적인 정제에 관한 것이다. 펩티드 정제에서 사용하기에 적절한 다양한 기술은 당업자에게 주지되어 있다. 예를 들어, 황산암모늄, PEG, 항체 등으로의 침전; 열 변성에 이은 원심분리; 크로마토그래피 단계 예컨대 이온 교환, 겔 여과, 역상, 히드록시아파타이트 및 친화 크로마토그래피; 등전 포커싱; 겔 전기영동; 및 이같은 및 기타 기술의 조합이 포함된다. 당업계에 일반적으로 공지된 바와 같이, 다양한 정제 단계를 수행하는 순서는 변화될 수 있거나, 또는 특정 단계가 생략될 수 있고, 여전히 실질적으로 정제된 단백질 또는 펩티드의 적절한 제조 방법인 것으로 여겨진다. 폴리펩티드의 정제 방법은 미국 특허 제5,849,883호에서 확인할 수 있다. 이러한 특허에는 본 발명의 신규 화합물의 단리 및 정제에 유용할 수 있는, G-CSF 조성물의 단리 및 정제를 위한 특이적인 예시 방법이 기술되어 있다. 이러한 특허의 명세서에서, 당업자가 소정의 공급원으로부터 폴리펩티드를 정제하는데 사용할 수 있는 수많은 정제 기술을 잘 인식할 것임이 명백하다. 음이온 교환 및 면역친화 크로마토그래피를 조합하여 사용하여 본 발명의 정제된 화합물을 생산할 수 있다는 것이 또한 구현된다.

따라서, 용어 "단리된 폴리펩티드 또는 펩티드"는 단백질이 유래되는 세포 또는 조직 공급원으로부터의 세포성 물질 또는 다른 오염 단백질이 실질적으로 없는, 또는 화학적으로 합성되는 경우 화학 전구체 또는 기타 화학물질이 실질적으로 없는 폴리펩티드 또는 펩티드를 칭한다. 용어 "세포성 물질이 실질적으로 없는"에는 단백질이 단리되거나 재조합적으로 생산되는 세포의 세포성 성분으로부터 단백질이 분리된 단백질의 제제가 포함된다. 따라서, 세포성 물질이 실질적으로 없는 단백질에는 이종 단백질 (본원에서 "오염 단백질"로도 칭해짐)을 약 30 ％, 20 ％, 10 ％ 또는 5 ％ 미만 (건조 중량 기준)으로 갖는 단백질의 제제가 포함된다. 단백질, 펩티드 또는 이의 단편이 재조합적으로 생산되는 경우, 바람직하게는 배양 배지가 실질적으로 없고, 즉 배양 배지는 단백질 제제의 부피의 약 20 ％, 10 ％ 또는 5 ％ 미만을 나타낸다. 단백질이 화학 합성에 의해 생산되는 경우, 바람직하게는 화학 전구체 또는 기타 화학물질이 실질적으로 없고, 즉, 단백질이 단백질의 합성에서 수반되는 화학 전구체 또는 기타 화학물질로부터 분리된다. 따라서, 이같은 단백질 제제는 당해 폴리펩티드 이외의 화학 전구체 또는 화합물을 약 30 ％, 20 ％, 10 ％, 5 ％ 미만 (건조 중량 기준)으로 갖는다. 바람직한 실시양태에서, 예를 들어 인간이 아닌 세포에서의 인간 단백질의 재조합 발현에 의해 성취될 수 있는 바와 같이, 정제된 또는 단리된 제제에는 단백질이 정상적으로 생산되는 동일한 동물로부터의 어떠한 오염 단백질도 없을 것이다.

특정한 바람직한 합성 방법은 통상적으로 할당된 특허 출원 일련번호 제454,533호 (1999년 12월 6일 출원)에 기술되어 있고, 이의 전체적인 내용은 이러한 거명에 의해 본원에 포함된다.

모든 적응증에 대해, 신규 화합물은 약 1 ㎍ 내지 약 5 ㎎/1일의 용량으로 단일 용량 또는 분할 용량으로 또는 제어 지속 방출로, 또는 용량 당 약 0.01 ㎍/㎏ 내지 약 500 ㎍/㎏, 더욱 바람직하게는 약 0.05 ㎍/㎏ 내지 약 250 ㎍/㎏, 가장 바람직하게는 약 50 ㎍/㎏ 미만으로 말초적으로 투여될 수 있다. 용량은 하루에 1회, 2회, 3회 또는 4회 투여될 수 있다. 이러한 범위 내의 투여량은 물론 각각의 유사체 또는 유도체의 효능에 따라 변할 것이고, 당업자에 의해 결정될 수 있다.

본 발명의 방법에서, 폴리펩티드는 단독으로, 또는 아밀린 또는 아밀린 유사체 아고니스트, 연어 칼시토닌 또는 연어 칼시토닌 아고니스트, 콜레사이스토키닌 (CCK) 또는 CCK 아고니스트, 렙틴 (OB 단백질) 또는 렙틴 아고니스트, 엑센딘 또는 엑센딘 유사체 아고니스트, 또는 GLP-1 또는 GLP-1 유사체 아고니스트 또는 PYY 또는 PYY 유사체, 또는 PYY 관련 폴리펩티드를 포함하는 기타 화합물 및 조성물이 포함되지만 이에 한정되지 않는, 영양소 가용성을 저하시키는 작용을 장기적으로 또는 단기적으로 나타내는 1종 이상의 기타 화합물 및 조성물과 함께 투여될 수 있다. 적절한 아밀린 아고니스트로는, 예를 들어, [25,28,29 프로-]-인간 아밀린 ("프람린타이드"로도 공지되어 있고, 미국 특허 제5,686,511호 및 제5,998,367호에 기술되어 있음)이 포함된다. 사용된 CCK는 바람직하게는 CCK 옥토펩티드 (CCK-8)이다. 렙틴은, 예를 들어, [Pelleymounter, Cullen et al., Science 269:540-543 (1995)]; [Halaas, Gajiwala et al., Science 269:543-6 (1995)]; [Campfield, Smith et al., Science 269:546-549 (1995)]에 논의되어 있다. 적절한 엑센딘에는 엑센딘-3 및 엑센딘-4가 포함되고, 엑센딘 아고니스트 화합물에는, 예를 들어, PCT 공보 제WO99/07404호, 제WO99/25727호 및 제WO99/25728호에 기술된 것들이 포함된다. 적절한 PYY 폴리펩티드 및 유사체에는 미국 특허 출원 [대리인의 도켓 번호 제18528.740호 및 제18528.723호]에 기술된 것들이 포함된다.

제약 조성물

본 발명은 치료적 또는 예방적 유효량의 1종 이상의 본 발명의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 신규 화합물의 전달에 유용한 제약상 허용가능한 희석제, 방부제, 가용화제, 유화제, 보조제 및/또는 캐리어와 함께 포함하는 제약 조성물에 또한 관한 것이다. 이같은 조성물은 다양한 완충액 함량 (예를 들어, 아세테이트, 시트레이트, 타르트레이트, 포스페이트, TRIS), pH 및 이온 강도의 희석제; 첨가제 예컨대 계면활성제 및 가용화제 (예를 들어 소르비탄 모노올레에이트, 레시틴, 플루로닉스(Pluronics), 트윈(Tween) 20 & 80, 폴리소르베이트(Polysorbate) 20 & 80, 프로필렌 글리콜, 에탄올, PEG-40, 소듐 도데실 술페이트), 항산화제 (예를 들어, 모노티오글리세롤, 아스코르브산, 아세틸시스테인, 아황산 염 (비술파이트 및 메타비술파이트), 방부제 (예를 들어, 페놀, 메타-크레졸, 벤질 알콜, 파라벤 (메틸, 프로필, 부틸), 벤즈알코늄 클로라이드, 클로로부탄올, 티메졸, 페닐수은산 염, (아세테이트, 보레이트, 니트레이트), 및 강장/벌크화제 (글리세린, 염화나트륨, 만니톨, 수크로스, 트레할로스, 덱스트로스)를 포함할 수 있고, 물질은 중합체성 화합물, 예컨대 폴리락트산, 폴리글리콜산 등의 입상 제제 내로 또는 리포좀과 관련하여 혼입될 수 있다. 이같은 조성물은 본 발명의 화합물의 물리적 상태, 안정성, 생체내 방출 속도 및 생체내 제거 속도에 영향을 미칠 것이다. 예를 들어, [Remington's Pharmaceutical Sciences 1435-1712, 18th Ed., Mack Publishing Co., Easton, Pennsylvania (1990)] 참조.

일반적으로, 본 발명의 화합물은 약리학적 성질의 관점에서 아밀린이 유용한 것과 동일한 방식으로 유용할 것이다. 한 바람직한 용도는 대사 상태 및 장애의 치료 또는 예방을 위해 이같은 신규 화합물을 말초 투여하는 것이다. 특히, 본 발명의 화합물은 영양소 가용성을 저하시키고, 식품 섭취를 저하시키고, 체중 손실을 초래하는 작용제로서의 활성을 갖는다.

신규 화합물은, 주사, 경구 투여, 코 투여, 폐 투여, 국소 투여, 또는 당업자에게 인지될 기타 유형의 투여를 위한 제형을 포함하여, 말초 투여용으로 제형될 수 있다. 제형의 예는 미국 특허 6,410,511호, 및 특허 출원 제10/159,779호에서 확인할 수 있고, 이들은 이러한 거명에 의해 본원에 전체적으로 포함된다. 더욱 특히, 본 발명에 따른 제약 조성물은 표적 조직이 이러한 경로를 통해 이용가능하다면 임의의 통상적인 경로를 통해 투여될 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 제약 조성물은 임의의 통상적인 말초 방법에 의해, 예를 들어 정맥내, 피내, 근육내, 유방내, 복강내, 경막내, 눈뒤, 폐내 (예를 들어, 만기(term) 방출)에 의해; 경구, 설하, 코, 항문, 질, 또는 경피 전달에 의해, 또는 특정 부위에서의 외과적 이식에 의해 대상에게 도입될 수 있다. 치료는 단일 용량 또는 일정 기간에 걸친 다수의 용량으로 구성될 수 있다. 본 발명의 조성물의 제어 연속 방출이 또한 구현된다. 미세구 기술의 예는 미국 특허 제6,458,387호 및 미국 특허 제5,578,708호에서 확인할 수 있고, 이들은 이러한 거명에 의해 전체적으로 본원에 포함된다.

제형은 액체일 수 있거나, 또는 재구성을 위한 고체, 예컨대 동결건조물일 수 있다. 본 발명의 수성 조성물은 제약상 허용가능한 캐리어 또는 수성 매질 내에 용해 또는 분산된 유효량의 신규 화합물을 포함한다. 용어 "제약상 또는 약리학적으로 허용가능한"은 동물 또는 인간에게 투여되었을 때 부작용, 알러지 반응 또는 기타 부적절한 반응을 일으키지 않는 분자성 실체 및 조성물을 칭한다. 본원에서 사용되는 "제약상 허용가능한 캐리어"에는 임의의 모든 용매, 분산 매질, 코팅물, 항균 및 항진균제, 등장성 및 흡수 지연제 등이 포함된다. 제약상 활성인 물질에 대한 이같은 매질 및 작용제의 사용은 당업계에 주지되어 있다. 임의의 통상적인 매질 또는 작용제가 활성 성분과 비혼화성인 것을 제외하고, 치료 조성물에서의 이의 사용이 구현된다. 보충적인 활성 성분이 또한 조성물 내에 혼입될 수 있다. 일부 경우에, 본 발명의 화합물과 또다른 식품 섭취 저하제, 혈장 포도당 감소제 또는 혈장 지질 변경제, 예컨대 아밀린, 아밀린 아고니스트 유사체, CCK 또는 CCK 아고니스트, 또는 렙틴 또는 렙틴 아고니스트, 또는 엑센딘 또는 엑센딘 아고니스트 유사체, 또는 PYY 또는 PYY 유사체를 함께 투여하기 위한 단일 조성물 또는 용액으로 제공하는 것이 편리할 것이다. 또다른 경우에, 추가적인 작용제를 신규 화합물과 별도로 투여하는 것이 더욱 유리할 수 있다.

본 발명의 화합물은 계면활성제, 예컨대 히드록시프로필셀룰로스와 적절하게 혼합된 유리 염기 또는 약리학적으로 허용가능한 염의 수용액으로서 투여를 위해 제조될 수 있다. 본원에서 사용된 용어 "제약상 허용가능한 염"은 제약상 허용가능한, 바람직하게는 독성이 없는, 무기 및 유기 산 및 염기가 포함되는 산 및 염기로부터 제조된 염을 칭하고, 황산, 시트르산, 말레산, 아세트산, 옥살산, 히드로클로라이드, 히드로브로마이드, 히드로요오다이드, 니트레이트, 술페이트, 비술파이트, 포스페이트, 산 포스페이트, 이소니코티네이트, 아세테이트, 락테이트, 살리실레이트, 시트레이트, 산 시트레이트, 타르트레이트, 올레에이트, 탄네이트, 판토테네이트, 비타르트레이트, 아스코르베이트, 숙시네이트, 말레에이트, 겐티시네이트, 푸마레이트, 글루코네이트, 글루카로네이트, 사카레이트, 포르메이트, 벤조에이트, 글루타메이트, 메탄술포네이트, 에탄술포네이트, 벤젠술포네이트, p-톨루엔술포네이트 및 파모에이트 (즉, 1,1'-메틸렌-비스-(2-히드록시-3-나프토에이트)) 염이 포함되지만, 이에 한정되지는 않는다. 제약상 허용가능한 염에는 유리 아미노기로 형성된 것들, 예컨대 염산, 인산, 아세트산, 옥살산 및 타르타르산으로부터 유도된 것들이 포함되지만, 이에 한정되지는 않는다. 제약상 허용가능한 염에는 유리 카르복실기로 형성된 것들, 예컨대 나트륨, 칼륨, 암모늄, 나트륨 리튬, 칼슘, 수산화철, 이소프로필아민, 트리에틸아민, 2-에틸아미노 에탄올, 히스티딘, 및 프로카인으로부터 유도된 것들이 포함되지만, 이에 한정되지는 않는다. 일반적인 보관 및 사용 조건 하에, 이러한 제제들은 미생물의 성장을 방지하는 방부제를 함유한다.

한 실시양태에서, 본 발명의 제약 조성물은 비경구적 투여, 예를 들어 주사 또는 주입에 의한 투여에 적절하도록 제형된다. 바람직하게는, 신규 화합물은 수성 캐리어, 예를 들어 pH가 약 3.0 내지 약 8.0, 바람직하게는 pH가 약 3.0 내지 약 7.4, 3.5 내지 6.0, 또는 3.5 내지 약 5.0인 등장 완충제 용액 내에 현탁된다. 유용한 완충제로는 아세트산나트륨/아세트산, 락트산나트륨/락트산, 아스코르브산, 시트르산나트륨-시트르산, 중탄산나트륨/탄산, 숙신산나트륨/숙신산, 히스티딘, 벤조산나트륨/벤조산, 및 인산나트륨, 및 트리스(히드록시메틸)아미노메탄이 포함된다. 경피 주사 또는 전달 후 수시간 내지 수일에 걸쳐 치료적 유효량의 제제가 혈류 내로 전달되도록 저장형 또는 "데포(depot)" 저속 방출 제제의 형태를 사용할 수 있다.

주사 용도에 적절한 제약 조성물에는 멸균 수용액 또는 분산액, 및 멸균 주사 용액 또는 분산액의 임시 제제용 멸균 분말이 포함된다. 모든 경우에, 형태는 멸균성이어야 하고, 용이하게 주사가능한 유체이어야 한다. 본 발명의 PPF 폴리펩티드가 제조 및 보관 조건 하에 안정적인 것이 바람직하고, 미생물, 예컨대 박테리아 및 진균의 오염 작용에 대항하여 보존되어야 한다. 캐리어는 물, 에탄올, 폴리올 (예를 들어, 소르비톨, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 및 액체 폴리에틸렌 글리콜 등), 디메틸아세트아미드, 크레모르포르 EL, 이들의 적절한 혼합물, 및 오일 (예를 들어, 대두유, 참기름, 피마자유, 면실유, 에틸 올레에이트, 이소프로필 미리스테이트, 글리코푸롤, 옥수수유)를 예를 들어 함유하는 용매 또는 분산 매질일 수 있다. 적절한 유동성은, 예를 들어, 레시틴과 같은 코팅물의 사용, 분산액의 경우 필요한 입자 크기의 유지, 및 계면활성제의 사용에 의해 유지될 수 있다. 미생물 작용의 예방은 다양한 항균 및 항진균제, 예를 들어, 메타-크레졸, 벤질 알콜, 파라벤 (메타, 프로필, 부틸), 클로로부탄올, 페놀, 페닐수은산 염 (아세테이트, 보레이트, 니트레이트), 소르브산, 티메로살 등에 의해 이루어질 수 있다. 많은 경우에, 강장제 (예를 들어, 당, 염화나트륨)를 포함하는 것이 바람직할 것이다. 주사가능한 조성물의 장기간 흡수는 흡수를 지연시키는 작용제 (예를 들어, 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴)를 조성물 내에 사용함으로써 이루어질 수 있다. 예시적인 제약 조성물에는 본 발명의 화합물 0.1 내지 5 ％가 최종 조성물의 pH가 약 3.0 내지 약 6.0이 되도록 하는 아세테이트, 포스페이트, 시트레이트 또는 글루타메이트 완충제 약 0.02 내지 약 0.5 ％ (w/v), 뿐만 아니라 탄수화물 또는 다가 알콜 강장제 약 1.0 내지 10 ％ (w/v); 및 선택적으로, m-크레졸, 벤질 알콜, 파라벤 및 페놀로 구성되는 군으로부터 선택된 방부제 약 0.005 내지 1.0 ％ (w/v)와 함께 수성 시스템 내에 존재할 수 있다.

주사가능한 멸균 용액은 필요한 양의 활성 화합물을 적절한 용매 내에 필요한 만큼의 상기 열거된 다양한 기타 성분과 함께 혼입시킨 후, 멸균 여과함으로써 제조할 수 있다. 일반적으로, 분산액은 다양한 멸균된 활성 성분들을 기본 분산 매질 및 상기 열거된 것들로부터의 필요한 다른 성분을 함유하는 멸균 비히클 내로 혼입시킴으로써 제조된다. 주사가능한 멸균 용액의 제조를 위한 멸균 분말의 경우, 바람직한 제조 방법은 진공-건조 및 동결-건조 기술이고, 활성 성분 + 임의의 부가적인 원하는 성분의 미리 멸균 여과된 용액으로부터 활성 성분 + 임의의 부가적인 원하는 성분의 분말이 산출된다.

일반적으로, 본 발명의 신규 화합물의 치료적 또는 예방적 유효량은 수용자의 연령, 체중, 및 질환 또는 대사 상태 또는 장애의 상태 또는 중증도에 의해 결정될 것이다. 예를 들어, [Remington's Pharmaceutical Sciences 697-773] 참조. 또한 [Wang and Hanson, Parenteral Formulations of Proteins and Peptides: Stability and Stabilizers, Journal of Parenteral Science and Technology, Technical Report No. 10, Supp. 42:2S (1988)] 참조. 전형적으로, 약 0.001 ㎍/체중 ㎏/일 내지 약 1000 ㎍/체중 ㎏/일의 투여량이 사용될 수 있지만, 당업자가 인지하는 바와 같이 더 많거나 더 적게 사용될 수 있다. 투여는 하루에 한번 또는 여러번, 또는 덜 자주일 수 있거나, 본원에 기술되는 다른 조성물과 관련되어 이루어질 수 있다. 본 발명이 본원에 언급된 투여량에 한정되지 않음을 주지하여야 한다.

적절한 투여량은 관련된 용량-응답 데이타와 함께 대사 상태 또는 장애의 수준을 결정하기 위한 확립된 분석법의 사용을 통해 확인될 수 있다. 최종 투여 요법은 약물의 작용을 변형시키는 인자, 예를 들어, 약물의 특이적 활성, 손상의 중증도 및 환자의 응답성, 환자의 연령, 상태, 체중, 성별 및 식이, 임의 감염의 중증도, 투여 시간 및 기타 임상 인자를 고려하여 주치의에 의해 결정될 것이다. 연구가 수행됨에 따라, 특정 질환 및 상태에 대한 적절한 투여량 수준 및 치료 기간에 관해 추가적인 정보가 드러날 것이다.

전형적으로 유효 용량은 단일 또는 분할 용량으로 투여되는 약 1 내지 30 ㎍ 내지 약 5 ㎎/일, 바람직하게는 약 10 내지 30 ㎍ 내지 약 2 ㎎/일, 더욱 바람직하게는 약 5 내지 100 ㎍ 내지 약 1 ㎎/일, 가장 바람직하게는 약 5 ㎍ 내지 약 500 ㎍/일의 범위일 것이다. 투여량은 약 0.01 내지 약 500 ㎍/용량일 수 있다. 본 발명의 화합물이 하루에 1회, 2회, 3회, 4회 또는 그 이상으로 투여될 수 있는 것으로 구현된다. 따라서, 예시적인 용량은 하루에 제공되는 약물의 총량 및 하루에 투여되는 용량의 횟수로부터 유도될 수 있다. 예를 들어, 예시적인 용량은 약 0.125 ㎍/용량 (하루에 4회로 제공되는 0.5 ㎍) 내지 약 5 ㎎/용량 (하루에 1회로 제공되는 5 ㎎) 범위일 수 있다. 또다른 투여량은 약 0.01 내지 약 100 ㎍/㎏/용량일 수 있다. 또다른 예시적인 용량은 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190 또는 200 ㎍/용량일 수 있다. 투여될 정확한 용량은 당업자에 의해 결정될 수 있고, 특정 화합물의 효능, 뿐만 아니라 개인의 연령, 체중 및 상태에 의존적이다. 영양소 가용성의 억제, 식품 섭취, 체중, 혈액 포도당 또는 혈장 지질 저하가 필요할 때마다, 예를 들어, 증상의 징후가 최초로 나타났을 때 또는 비만, 진성 당뇨병, 또는 인슐린 저항성 증후군의 진단 직후에, 투여가 개시되어야 한다. 투여는 임의의 경로, 예를 들어 주사, 바람직하게는 피하 또는 근육내 주사, 경구, 코, 경피 등에 의해 이루어질 수 있다. 특정 경로, 예를 들어 경구 투여에 대한 투여량은 감소된 생체이용률을 설명하기 위해, 예를 들어, 약 5-100배 증가될 수 있다.

한 실시양태에서, 제약 제형물이 비경구적으로 투여되는 경우, 조성물은 0.1 ㎍/㎏ 내지 100 ㎎/체중 ㎏/일 범위의 용량, 바람직하게는 10 ㎍/㎏ 내지 약 50 ㎎/체중 ㎏/일 범위의 용량의 신규 화합물을 전달하도록 제형된다. 비경구 투여는 초기 볼루스(bolus)에 이은 연속적인 주입으로 수행되어, 약물 제품의 치료적 순환 수준을 유지할 수 있다. 당업자는 양질의 의학 진료 및 개별 환자의 임상 상태에 의해 결정되는 효과적인 투여량 및 투여 요법을 쉽게 최적화할 것이다.

투여 빈도는 작용제의 약동학적 파라메터 및 투여 경로에 의존할 것이다. 최적의 제약 제형은 투여 경로 및 원하는 투여량에 따라 당업자에 의해 결정될 것이다. 예를 들어, [Remington's Pharmaceutical Sciences (상기 문헌), pp 1435-1712] 참조. 이같은 제형은 투여된 작용제의 물리적 상태, 안정성, 생체내 방출 속도 및 생체내 제거 속도에 영향을 미칠 것이다. 투여 경로에 따라, 적절한 용량을 체중, 신체 표면적 및 장기 크기에 따라 계산할 수 있다. 적절한 치료 용량을 결정하는데 필요한 계산의 추가적인 개선은, 특히 본원에 개시된 투여량 정보 및 분석법, 뿐만 아니라 동물 및 인간 임상 실험에서 관찰되는 약동학적 데이타에 비추어, 당업자에 의해 과도한 실험 없이 일상적으로 이루어진다.

본 발명의 제약 조성물 및 치료 방법이 인간 의약 및 수의학 의약 분야에 유용할 수 있다는 것이 인정될 것이다. 따라서, 치료될 대상은 포유동물, 바람직하게는 인간 또는 기타 동물일 수 있다. 수의학적인 목적을 위해, 대상에는, 예를 들어, 소, 양, 돼지, 말 및 염소가 포함되는 농장 동물, 개 및 고양이와 같은 애완 동물, 외래 및/또는 동물원의 동물, 마우스, 래트, 토끼, 기니 피그 및 햄스터가 포함되는 실험용 동물; 및 닭, 칠면조, 오리 및 거위와 같은 가금류가 포함된다.

본 발명의 이해를 돕기 위해, 하기의 실시예가 포함된다. 물론 본 발명과 관련된 실험은 본 발명을 명확하게 제한하는 것으로 구축되지 않아야 하고, 당업자의 시계(視界) 내인, 현재 알려진 또는 추후에 나타날 본 발명의 이같은 변형은 본 명세서에서 기술되고 하기에 청구되는 본 발명의 범주 내에 속하는 것으로 간주된다.

실시예 1: 칼로리 섭취 저하 폴리펩티드의 합성

표준 폴리펩티드 합성 방법을 사용하여 하기의 폴리펩티드를 합성할 수 있다. 이같은 방법은 하기 및 미국 특허 제6,610,824호 및 미국 특허 제5,686,411호 및 특허 출원 일련 번호 제454,533호 (1999년 12월 6일 출원)에 기술되어 있고, 이들은 전체적으로 이러한 거명에 의해 본원에 포함된다.

폴리펩티드를 4-(2'-4'-디메톡시페닐)-Fmoc 아미노메틸 페녹시 아세트아미드 노르류신 MBHA 수지 (Novabiochem, 0.55 mmole/g) 상에서 Fmoc-보호 아미노산 (Applied Biosystems, Inc.)을 사용하여 어셈블링하였다. 일반적으로, 단일-커플링 사이클을 합성 전반에 걸쳐 사용하고, Fast Moc (HBTU 활성화) 화학을 사용하였다. 그러나, 일부 지점에서 커플링이 예상보다 덜 효율적일 수 있고, 이중 커플링이 필요할 수 있었다. 마찬가지로 피페리딘을 사용한 성장 펩티드 사슬의 탈보호 (Fmoc 기 제거)는 항상 효율적이지 않을 수 있고, 이중 탈보호가 필요할 수 있었다. 완결된 펩티드 수지의 최종 탈보호는 트리에틸실란 (0.2 ㎖), 에탄디티올 (0.2 ㎖), 아니솔 (0.2 ㎖), 물 (0.2 ㎖) 및 트리플루오로아세트산 (15 ㎖)의 혼합물을 사용하여 표준 방법에 따라 달성하였다 (Introduction to Cleavage Techniques, Applied Biosystems, Inc.). 펩티드를 에테르/물 (50 ㎖)에 침전시키고, 원심분리하였다. 침전물을 빙초산 내에 재구성시키고, 동결건조시켰다. 동결건조된 펩티드를 물에 용해시켰다. 이어서 조(粗) 순도를 결정하였다.

용매 A (수중 0.1 ％ TFA) 및 용매 B (ACN 중 0.1 ％ TFA)를 정제 및 분석 단계에서 사용하였다.

다양한 폴리펩티드를 함유하는 용액을 정제용 C-18 컬럼에 가하여 정제하였 다 (40 분에 걸쳐 용매 A 내의 10 ％ 내지 40 ％ 용매 B). 분획의 순도를 동용매적으로(isocratically) C-18 분석용 컬럼을 사용하여 결정하였다. 상기 동정된 펩티드를 제공하면서 순수한 분획을 풀링하였다(pooling). 동결건조된 펩티드의 분석용 RP-HPLC (30 분에 걸쳐 용매 A 내의 구배 30 ％ 내지 60 ％ 용매 B)로 체류시간을 결정하였다.

실시예 2: 수용체 결합 분석

먼저, 폴리펩티드를 아밀린, 칼시토닌 및 CGRP 수용체에 대한 결합 능력을 결정하는 분석에서 사용할 수 있다. 아밀린-수용체, 칼시토닌-수용체 및 CGRP 수용체와의 상호작용을 결정하는 결합 분석은 예를 들어 미국 특허 제5,264,372호에 기술되어 있고, 이는 전체적으로 이러한 거명에 의해 본원에 포함된다.

더욱 구체적으로, 본 발명의 화합물이 아밀린 수용체에 결합하는 것의 평가는 하기와 같이 수행할 수 있다. ¹²⁵I-래트 아밀린 (N-말단 라이신에서 볼튼-헌터(Bolton-Hunter) 표지됨)을 Amersham Corporation (Arlington Heights, Ill.)에서 구입하였다. 표지되지 않은 펩티드는 BACHEM Inc. (Torrance, Calif.) 및 Peninsula Laboratories (Belmont, Calif.)로부터 수득하였다.

수컷 Sprague-Dawley

래트 (200-250 그램)를 단두에 의해 희생시켰다. 뇌를 저온 포스페이트-완충 염수 (PBS) 내로 제거하였다. 앞면으로부터, 후삭에 의해 측면이 경계지워지고 이러한 후삭으로부터 중앙으로 45도로 연장된 시상하부쪽으로 입쪽에서 절단하였다. 측중격핵 및 주변의 영역을 함유하는 이러한 기저 전뇌 조직을 칭량하고, 빙냉 20 mM HEPES 완충액 (20 mM HEPES 산, 23 ℃에서 NaOH로 pH가 7.4로 조정됨) 내에서 균질화시켰다. 15 분 동안의 48,000×g에서의 원심분리에 의해 신선한 완충액에서 막을 3회 세정하였다. 최종 막 펠렛을 0.2 mM 페닐메틸술포닐 플루오라이드 (PMSF)를 함유하는 20 mM HEPES 완충액에 재현탁시켰다.

¹²⁵I-아밀린 결합을 측정하기 위해, 4 ㎎의 최초 습윤 중량의 조직으로부터의 막을 0.5 ㎎/㎖ 바시트라신, 0.5 ㎎/㎖ 소 혈청 알부민 및 0.2 mM PMSF를 함유하는 20 mM HEPES 완충액 내에서 12-16 pM의 ¹²⁵I-아밀린과 함께 인큐베이션하였다. 용액을 60 분 동안 2 ℃에서 인큐베이션하였다. 방사성표지된 펩티드의 비특이적 결합을 저하시키기 위해 4 시간 동안 0.3 ％ 폴리에틸렌이민 내에 예비침지시킨 GF/B 유리 섬유 필터 (Whatman Inc., Clifton, N.J.)에 여과시켜 인큐베이션을 종결시켰다. 필터를 여과 직전에 5 ㎖ 저온 PBS로 세정하고, 여과 직후에 15 ㎖ 저온 PBS로 세정하였다. 필터를 제거하고, 계측 효율 77 ％의 감마-계측기에서 방사성을 평가하였다. 10^-12 내지 10^-6 M의 비표지된 테스트 화합물의 존재 하에서의 결합을 측정함으로써 경쟁 곡선을 생성시키고, 4-파라메터 로지스틱 방정식을 사용하여 비선형 회귀에 의해 분석하였다 (Inplot 프로그램: GraphPAD Software, San Diego).

이러한 분석에서, 정제된 인간 아밀린은 이의 수용체에 약 50 pM의 측정된 IC₅₀으로 결합하였다. 본 발명의 테스트 화합물에 대한 결과는 각각의 화합물이 상당한 수용체 결합 활성을 갖고 있음을 나타내는 하기의 표에 제시된다.

본 발명의 화합물이 CGRP에 결합하는 것의 평가는 ¹²⁵I hCGRP 및 CGRP 수용체를 발현하는 것으로 공지된 SK-N-MC 세포로부터 제조된 막을 사용한 것을 제외하고는 본질적으로 아밀린에 대해 기술된 대로였다 (Muff, R. et al., Ann NY Acad. Sci. 1992:657, 106-16). 13,500 cpm ¹²⁵I-hCGRP/웰 또는 21.7 pM/웰 (Amersham)을 사용한 것을 제외하고는 아밀린에 대해 기술된 대로 결합 분석을 수행하였다.

칼시토닌 수용체에 대한 결합은, 당업계에 공지된 바와 같이, 칼시토닌 수용체를 또한 발현하는 CHO 세포 또는 T47D 세포를 사용하여 연구할 수 있었다 ([Muff R et al., Ann NY Acad. Sci. 1992, 657:106-16] 및 [Kuestner R.E. et al., Mol. Pharmacol. 1994, 46:246-55]).

실시예 3: 식품 섭취에 대한 폴리펩티드의 활성

암컷 NIH/Swiss 마우스 (8-14주령)을 12:12 시간의 밝음:어두움 사이클로 집단 사육시켰다. 달리 명시되지 않는 한, 물 및 펠렛화된 표준 마우스 음식 사료는 무제한으로 이용가능하였다. 동물들을 실험 1일 전에 약 1500 시간에서 시작하여 금식시켰다.

시간 = 0분에서, 모든 동물에게 200 ㎕/마우스의 부피로 비히클 또는 폴리펩티드를 복강내에 주사하고, 즉시 미리 칭량된 양 (10-15 g)의 표준 음식을 제공하였다. 식품을 제거하고, 30분, 60분, 120분 및 180분에 칭량하여 소비된 식품의 양을 결정하였다. 식품 섭취에 대한 처리 효과는 대조군에 대한 ％ 변화로 표현된다.

도 1에서 볼 수 있는 바와 같이, 25-300 nmol/㎏ 용량의 화합물 2는 주사 30 분 후에 식품 섭취를 용량-의존적으로 저하시켰다. 하기의 표는 25 nmol/㎏의 용량으로 말초 투여 (복강내 주사)된 폴리펩티드로 저하된 식품 섭취를 묘사한다. 30분, 60분, 120분 및 180분 시점에서의 데이타는 비히클과 비교하여 누적 식품 섭취에서의 ％ 감소를 나타낸다.

실시예 4: 체중 저하 및 칼로리 섭취에 대한 본 발명의 화합물의 활성

개별적으로 사육된 수컷 Sprague-Dawley

래트 (350 g; 12시간 밝음/어두움 사이클)을 고지방 식이요법 (지방으로부터 58 ％ kcal)에서 4 주간 유지시켰다. 살이 찌게 한 기간 말기에, 마취 하에 14-일 삼투압 펌프 (Durect Corp.)를 견갑골 사이에 이식하였다. 래트는 비히클 (50 ％ DMSO) 또는 폴리펩티드를 2.9 nmol/㎏/일의 용량으로 연속적으로 전달하는 펌프작용을 받았다. 식품 섭취 및 체중 측정값을 매주 수득하였다. 도 2A 및 2B는 폴리펩티드 화합물 3, 화합물 4 및 화합물 5가 14일의 테스트 기간에 걸쳐 칼로리 섭취 및 체중 증가에서 감소가 일어나도록 했음을 나타낸다.

하기의 표는 여러 화합물에 대한 1주 및 2주에서의 백분율 체중 손실을 나타낸다.

<표 X>

실시예 5: 신체 조성

개별적으로 사육된 수컷 Sprague-Dawley

래트 (420 g; 12시간 밝음/어두움 사이클)를 고지방 식이요법 (지방으로부터 58 ％ kcal)에서 4 주간 유지시켰다. 살이 찌게 한 기간 말기에, 마취 하에 14-일 삼투압 펌프 (Durect Corp.)를 견갑골 사이에 이식하였다. 래트는 비히클 (50 ％ DMSO) 또는 화합물 1을 70 nmol/㎏/일의 용량으로 연속적으로 전달하는 펌프작용을 받았다. 동물을 12일에 희생시켰다. 시체를 즉시 동결시키고, 신체 조성 (지방 및 단백질)을 화학적 분석 (Covance Laboratories, Madison, WI)에 의해 측정하였다. 도 3은 대조군과 비교하여 화합물 1로 처리된 래트에서 전체 신체 질량의 백분율로서의 지방 함량이 저하되었음을 나타낸다. 또한, 화합물 1은 제지방 질량 함량의 백분율을 증가시켰다.

실시예 6: 위 배출 및 이온 칼슘

강제공급된(gavaged) 삼중수소화 포도당의 혈장 내 출현을 측정함으로써 위 배출을 모니터링하였다. 대상은 의식이 있는 수컷 Sprague-Dawley

래트 (7-9주령, 12시간 밝음/어두움 사이클)였고, 실험을 시작할 때까지 식품 및 물에 무제한으로 접근시켰다. 투여 전에, 식품 및 물을 제거하였다. t = -5분에, 펩티드 또는 비히클 (200 ㎕ 염수)을 피하 투여하였다. t = 0분에, 5 μCi D-[3-3H] 포도당 (Dupont, Wilmington, DE, USA)을 함유하는 1 ㎖ 멸균수 용액을 입인두 관에 의해 제공하였다. t = 20분에, 국소적인 마취제 (Hurricaine

, 20 ％ 벤조카인 액체)를 꼬리끝에 가하였다. t = 40분에, 꼬리끝을 외과용 매스로 결찰시키고, ∼250 ㎕의 혈액을 헤파린첨가 튜브 내로 수집하였다. 이어서 Ciba/Corning 634 Ca/pH 분석기 (Ciba/Corning, Inc., Medfield, MA)를 사용하여 이온화된 칼슘에 대해 혈장을 즉시 분석하였다. 10 ㎕ 혈장 샘플을 준비된 섬광 바이알 (0.5 ㎖ 물 + 2 ㎖ 섬광 칵테일 (Ecolite 섬광 칵테일, ICN, Costa Mesa, CA)) 내로 피펫팅하고, 와류시키고, β-계측기 (1209 Rack-beta; LKB-Wallac, Gaithersburg, MD)에서 1분/바이알 동안 계측하였다.

도 4A에서, 점들은 6마리의 SD 래트 (비육(肥肉)됨, 의식 있음)의 평균 ± 표준편차를 나타낸다. 표시된 용량의 펩티드를 t = 0에 피하 주사하였다. 35분 후에 cpm 분석을 위해 혈액을 수집하였다. * 모든 지점에서 염수 대조군에 대해 p<0.001; ANOVA, 던넷 테스트(Dunnett's test). 비선형 회귀로부터: ED50 = 2.3 ㎍/㎏. 기저부 = 25 cpm/10 ㎕; 최상부 = 328 cpm/10 ㎕. 혈장 cpm에서의 최대 감소: -92 ％. 적합도: r2 = 0.9992.

도 4B에서, 점들은 6마리의 SD 래트 (비육(肥肉)됨, 의식 있음)의 평균 ± 표준편차를 나타낸다. 표시된 용량의 펩티드를 t = 0에 피하 주사하였다. 35분 후에 cpm 분석을 위해 혈액을 수집하였다. * 염수 대조군에 대해 p<0.001; ANOVA, 던넷 테스트. 비선형 회귀로부터: ED50 = 1.1 ㎍/㎏. 기저부 = 1.2 mmol/ℓ; 최상부 = 1.3 mmol/ℓ. 혈장 iCa에서의 최대 감소: -14 ％. 적합도: r2 = 0.9936.

실시예 7: 트리글리세리드

연구 1에서, 더 이상 번식할 수 없는 암컷 Harlan Sprague-Dawley

래트 (HSD; Harlan Teklad, Indianapolis, IN)에 9주 동안 고지방 식이요법 (지방으로부터 40 ％ 칼로리; Diet #TD95217, Harlan Teklad)의 먹이를 공급한 후, 연구를 개시하였고, 이러한 식이요법을 실험 기간 전반에 걸쳐 지속시켰다. 본 발명의 대표적인 화합물인 화합물 1의 대사 효과를 시험하기 위한 연구 전반에 걸쳐 일군의 래트에게 먹이를 무제한으로 공급하였다; 비처리된 대조군 래트 (n = 10)에 대해 처리 (n = 10). 식품 제한의 설정 ("식이조절(dieting)")에서 화합물의 1의 대사 효과를 결정하기 위해, 제2군의 래트에게는 화합물 1 (n = 10) 또는 비히클 (n = 10) 처리의 개시 전에 10일 동안 각각의 날에 연구전(pre-study) 기준선 식품 섭취의 75％를 제공하였다 (제한전(pre-restriction) 체중에 대해 ∼5％ 체중 손실). 이때, 모든 래트에게 이소플루란 마취 하에 Alzet

삼투압 펌프 (Durect, Cupertino, CA)를 견갑골사이의 부위 내에 외과적으로 피하 이식하였다. 펌프는 화합물 1 (101 ㎍/㎏/일) 또는 비히클 (수중 50 ％ 디메톡시술폭시드 [DMSO])를 21일 동안 연속적으로 전달하도록 제조되었다. 식품-제한된 래트에게는 이들의 기준선 식품 섭취의 75％를 계속 매일 제공하였다. 처리 21일 후, 혈액 샘플을 이소플루란-마취된 흡수후 래트 (오전에 ∼2-4 시간 금식)로부터 심장 천자에 의해 헤파린첨가 주사기 내로 수득하고, 분석물 분석을 위해 혈장을 수득하였다. 혈장 트리글리세리드를 임상 화학을 위한 표준 자동화 분석을 사용하여 결정하였다 (LabCorp, Inc., San Diego, CA).

연구 2에서, 비만의 경향이 있는 Levin 계통의 HSD 래트로부터의 수컷 래트 (Charles River, Wilmington, MA)에게 고지방 식이요법 (지방으로부터 32 ％ 칼로리; Diet #12266B, Research Diets, Inc., New Brunswick, NJ)의 먹이를 6 주 동안 공급한 후 연구를 개시하고, 이러한 식이요법을 실험 전반에 걸쳐 지속시켰다. 처리의 시작은 연구 1에서와 같이 화합물 1 또는 DMSO 비히클을 함유하는 피하 삼투압 펌프를 놓는 것으로 개시되었고, 3주 (21일) 동안 계속되었다. 화합물 1로 처리된 래트 (303 ㎍/㎏/일; n = 10) 및 비히클로 처리된 대조군 (n = 10)과 화합물 1로 처리된 래트가 먹는 식품의 양을 매일 받은 페어-공급(pair-fed) 군 (n = 10) 간에 대사 파라메터를 비교하였다. 혈액 수집 및 혈장 트리글리세리드 농도의 분석은 연구 1에서와 같이 수행하였지만, 1주 및 2주 시점에 꼬리 동맥 수집을 사용하였다.

연구 3은 동물들을 8주 (56일) 동안 상이한 용량의 화합물 1로 처리한 것을 제외하고는 연구 2와 같이 수행하였다. 처리 28일째에, 사용된 펌프를 신선한 삼투압 펌프로 교체하였다. 펌프는 1, 3, 10 또는 100 ㎍/㎏/일 (n = 10/군) 용량의 화합물 1 또는 DMSO 비히클 (대조군, n = 10)을 전달하도록 제조되었다. 추가적인 페어-공급 군 (n = 10)은 비히클을 받았고, 100 ㎍/㎏/일 화합물 1 군이 먹은 식품의 양을 매일 공급받았다. 표준 트리글리세리드 분석 (Cobas Mira Plus, Roche Diagnostics)을 사용하여, 기준선, 2주, 4주 및 6주 시점에 대한 혈액 수집 및 혈장 트리글리세리드 농도의 분석은 의식이 있는 비육된 래트로부터 꼬리 동맥 수집을 통해 헤파린처리 튜브 내로 수득하였고; 8주 시점에 대한 혈액 수집 및 혈장 트리글리세리드 농도의 분석은 이소플루란으로 마취된 비육된 래트로부터 헤파린처리된 주사기 내로 심장 천자에 의해 수득하였다.

소정의 연구 시점에 대한 처리 전반에 걸친 평균 혈장 트리글리세리드 수준에서의 차이를 일원 변량 분석 (ANOVA)에 이어 던넷 다중 비교 테스트 (Prism v. 4.01, GraphPad Software, San Diego, CA)에 의해 평가하였다. 차이는 p<0.05로 통계적으로 유의한 것으로 간주되었다.

도 5 내지 7E에 나타난 바와 같이, 연구 1, 2 및 3 각각에서, 1-8주에 걸쳐 화합물 1로 처리한 결과 트리글리세리드 농도가 현저하게 저하되었다. 도 5는 연속적인 피하 주입에 의해 화합물 1로 21일 동안 처리한 후의 더 이상 번식할 수 없는 암컷 래트에서의 혈장 트리글리세리드 농도를 나타낸다. 화합물 1이 투여된 래트는 무제한으로 비육된 대조군과 비교하여 현저하게 더 낮은 트리글리세리드 수준을 나타냈다; 이러한 효과는 화합물 1이 무제한적인 비육 조건 또는 식품-제한 조건 하에 제공되는지 여부와 상관없이 관찰되었다. 무제한적인, 비히클-처리된 대조군과 비교하여 * p<0.05, ** p<0.01.

도 6A-6C는 연속적인 피하 주입에 의한 화합물 1로의 3주 처리 동안의 식이요법으로 유도된 살찐 (DIO: Diet-induced Obese) 수컷 Levin 래트에서의 혈장 트리글리세리드 농도를 묘사한다. 그래프는 처리 후 (A) 1주, (B) 2주, 및 (C) 3주에 수집된 혈액 샘플로부터의 값을 나타낸다. 비히클-처리된 대조군과 비교하여 * p<0.05, ** p<0.01.

도 7A-7E는 화합물 1의 용량 응답 연구를 나타내고, 1 ㎍/㎏/일 정도로 낮은 용량의 결과로 2주, 4주, 6주 및 8주 시점 (각각 도 7B, C, D 및 E)에서 비히클 대조군과 비교했을 때 혈장 트리클리세리드 농도가 저하되었다. 비히클-처리된 대조군과 비교하여 * p<0.05, ** p<0.01. 처리 군은 범례에 표시된다.

실시예 8: 그렐린 분석

이 실시예는 그렐린에 대한 본 발명의 화합물의 효과를 검출하기 위한 예시적인 분석을 제공한다.

수컷 Harlan Sprague-Dawley

(HSD) 래트를 22.8 ± 0.8 ℃에서 12:12 시간 밝음:어두움 사이클로 사육하였다. 모든 실험은 밝음 사이클에서 수행하였다. 동물들을 실험 전에 약 20 시간 동안 금식시켰다. 실험을 시작하기 전까지 모든 동물들을 물에 자유롭게 접근시켰다. 동물의 꼬리를 20 ％ 벤조카인 (Hurricaine, Beutlich Pharmaceutical, Waukegan, IL)으로 마취시키고, 혈액 샘플을 꼬리 정맥으로부터 수집하였다. 전체 및 활성 그렐린 농도를 Linco RIA 키트 GHRA-89HK 및 GHRA-88HK를 사용하여 측정하였다.

연구 1에서, HSD 래트에서 국소적으로 마취된 꼬리로부터 주기적으로 혈액을 샘플링하고, 그렐린 수준을 분석하였다. t = 0에서, 래트 (n = 6)에게 125 ㎍/㎏ 펜타가스트린 (Sigma)을 피하 주사하여 위산 분비를 자극하고 (도 1에서 PG = 0 분), 20 분 후에 10 ㎍ 래트 아밀린을 피하 주사하였다. 혈액 샘플을 전체 및 활성 (아실화) 그렐린에 대해 분석하였다 (Linco). 도 8A에 나타난 바와 같이, 아밀린은 1시간 이내에 활성 그렐린을 ∼50 ％ 저하시켰다.

연구 2는 펜타가스트린 자극과 상관없이 외인성 아밀린이 그렐린 분비를 저해하는지 여부를 시험하기 위해 수행하였다. t = 0분에, 금식된 래트에게 염수 또는 30 ㎍/㎏ 래트 아밀린을 피하 주사하거나, 염수 또는 125 ㎍/㎏ 펜타가스트린 (Sigma, Lot#050K1525)을 피하 주사하였다. 염수 100 ㎕ 내의 30 ㎍/㎏ 용량의 래트 아밀린 (AC0128, lot#AR2081-42A, Amylin Pharmaceuticals), 또는 염수 비히클 단독 (각각 n = 5, 5)을 20분의 시점에 피하 주사하였다. 혈액 혈장 샘플을 적어도 0분, 10분, 20분, 30분, 60분 및 90분의 시점에 수집하였다. 도 8B 및 8C 모두 염수 대조군과 비교하여 아밀린 투여로 전체 혈장 그렐린이 저하되었음을 나타내고, 도 8B에서는 아밀린 단독의 존재 하에, 즉 펜타가스트린 없이, 대조군과 비교하여 혈장 그렐린이 저하되었음이 확인된다. 펜타가스트린은 아밀린의 그렐린 저하 효과를 증강시키는 것으로 나타난다.

실시예 9: 췌장 기능

대퇴 동맥 및 정맥 관삽입술을 금식 및 마취시킨 HSD 래트 (체중 320-350 g)에게 수행하고, 래트를 90 분 동안 안정화시켰다. t = -30에, 염수 (1 ㎖/시) 또는 화합물 1 (1 ㎖/시)의 주입을 시작하였다. t = 0에서, 래트에게 캐룰레인(caerulein) 10 ㎍/㎏을 imp 주사하였다. 혈장 아밀라제, 리파제에 대한 샘플을 t = -30 내지 t = 240의 다양한 시점에서 수집하였다.

도 9A 및 9B에 나타난 바와 같이, 화합물 1로의 처리는 급성 췌장염의 래트 모델에서 혈액내 췌장 효소 활성에서의 증가를 약화시켰고, 이는 아밀린의 아고니스트가 췌장염의 예방 및 치료를 위한 전망적인 약물 후보물질일 수 있음을 제안한다.

실시예 10: 아밀린의 위산 분비

수컷 Harlan Sprague-Dawley

래트를 22.8 ± 0.8 ℃에서 12:12 시간 밝음:어두움 사이클로 사육하였다. 실험은 밝음 사이클에서 수행하였다. 래트용 음식 (Teklad LM 485, Madison, WI)을 먹인 래트를 실험 전에 약 20 시간 동안 금식시켰다. 실험을 시작하기 전까지 래트에 물을 무제한으로 제공하였다.

래트 (9-14주령, 체중 264-395 g)에 제조업자에 의해 이중 위루 (胃瘻)를 외과적으로 달았다 (Zivic Miller, 카탈로그# SCAO3.00). 할로탄 마취 하의 개복술 동안, 그로멧(grommet)-형상의 이중 루멘(lumen) 플러그를 위벽 내에 봉합하였다. 플러그에 연결되고 위강(胃腔)과 이어진 2.3 ㎜ 내부 직경의 2개의 실라스틱 (입구 및 출구) 삽관을, 삽관들이 개별적으로 외향화되는 견갑골사이의 부위에 피하로, 배벽에 트랙킹하였다(tracked). 개복술을 클립으로 닫고, 래트를 물에 자유롭게 접근시키면서 가열된 회복 우리 내에 1일 동안 놓았다. 그 후, 수술 약 10-15일 후에 의식이 있는 래트에 대해 수행되는 실험을 위해 야간 금식시킬 때까지 래트를 물 및 래트용 음식에 자유롭게 접근시키면서 단독으로 사육하였다.

위 도관의 뚜껑을 벗기고, 주사 및 샘플링을 위해 연성 PE240 배관에 부착시켰다. 도관의 개방성을 확실히 하기 위해, 실온의 염수 용액 2-3 ㎖를 주사하고, 위로부터 즉시 배출시켰다. 흐름이 용이하고 유출물이 깨끗할 때까지 이를 반복하였다. 5 ㎖ 염수 및 2 ㎖ 공기를 한 도관을 통해 주사한 직후에 이를 다른 도관을 통해 배출시킴으로써 위산 분비를 10분 간격으로 측정하였다. 이러한 방식으로, 작은 분비된 부피의 불완전한 흡인으로 인한 오차가 최소화될 수 있다. 각각의 위 흡인물 3 ㎖를 pH 측정기 (Beckman 모델# PHI34, Fullerton, CA)를 사용하여 0.01 N 수산화나트륨으로 pH 7.0으로 적정하였다. 흡인된 전체 부피에 대해 보정된, 각각의 적정에 필요한 염기의 양을 사용하여 각 샘플 내의 산의 몰을 계산하였다.

기준선 샘플을 수집하고 회수된 부피를 기록한 후, 동물에게 125 ㎍/㎏ 펜타가스트린 (Peninsula Laboratories 로트# 019945 및 034686)을 피하 주사하고, 10분 위 샘플링을 또다른 2 시간 동안 계속하였다. 위산 분비의 안정한 평탄역이 관찰된 펜타가스트린 주사 40분 후에, 래트에게 염수 (n = 6) 또는 0.01, 0.1, 1.0, 10.0 또는 100 ㎍ 용량 (각각 n = 3, 3, 4, 5, 5)의 래트 아밀린 (배치# AR905-80, Amylin Pharmaceuticals Inc., San Diego, CA)을 피하 주사하였다.

도 10A에 나타난 바와 같이, 펜타가스트린 주사 40 분 후에, 펜타가스트린은 약 13.8 ± 2.2 μmol/10분의 기준 속도에서 약 63.4 ± 3.3 μmol/10분으로 위산 분비를 4.6배 자극하였다 (총평균; P < 0.0001). 펜타가스트린보다 40분 후에 주사된 아밀린은 각각 0.1, 1, 10 및 100 ㎍의 용량에 대해 8.6분, 10.4분, 5.8분 및 6.3분의 작용 시작에 대한 반감기로 용량 의존적으로 위산 생산을 저해하였다. 최고 (100 ㎍) 용량의 아밀린으로, 펜타가스트린에 의해 자극된 위산 분비가 아밀린 주사 1시간 후에 93.4 ± 2.6 ％ 저하되었다 (용량 0.1-100 ㎍에 대해 P < 0.001). 이러한 분비 속도는 펜타가스트린 주사 이전의 기초 속도의 오직 32 ％였다 (P < 0.01, t-테스트, 웰치(Welch) 보정). 펜타가스트린에 의해 자극된 위산 분비의 아밀린 저해에 대한 용량 응답이 도 10B에 나타난다. 아밀린의 산-억제 효과에 대한 ED₅₀은 0.05 ㎍/래트 ± 0.15 log 유닛 (41 pmol/㎏)이었다.

실시예 11: 아밀린의 위장보호 효과

체중 163-196 g의 금식시킨 수컷 래트에게 1 ㎖ 무수 에탄올 (에틸 알콜-200 프루프(proof) 탈수 알콜, USP, Spectrum Quality Products, Inc., Cardena, CA)을 강제공급하기 20분 전에 0.1 ㎖ 염수 (n = 12) 또는 0.001, 0.01, 0.1, 0.3, 1, 3 또는 10 ㎍ 용량 (각각 n = 5, 5, 5, 9, 9, 5, 6)의 래트 아밀린을 함유하는 동일한 부피를 피하 주사하였다. 강제공급 30분 후에, 각각의 래트를 5 ％ 할로탄으로 마취시키고, 위를 절제하고, 덜 뒤틀린 곳을 따라 열고, 뒤집어서, 점막을 노출시켰다. 뒤집어진 위를 염수로 부드럽게 헹구고, 즉시 실험 처리에 대해 모르는 각각 10명의 관찰자에 의해 점막 손상에 대해 등급을 매겼다. 등급화 단계는, 다른 사람들, 예를 들어 [Guidobono F. et al., Br J Pharmacol 120:581-586 (1997)]이 사용한 0-5 점수매김 시스템에 필적하도록, 0 (관찰가능한 손상이 없음)과 5 (100 ％의 점막 표면이 충혈, 궤양 또는 딱지로 덮여있음) 사이로 구애(拘碍)시켰다. 도 11A는 에탄올에 의해 유도된 손상의 백분율로서 손상 점수의 결과를 나타낸다.

아밀린의 위장보호 효과가 아밀린-특이적 메카니즘에 기인하는지를 결정하기 위해, 4마리의 래트에게 선택적 아밀린 길항물질인 AC187 (Amylin Pharmaceuticals, Inc., San Diego, CA) 3.0 ㎎을 에탄올 강제공급 25 분 전에 정맥내 주사한 후, 5 분 후에 (강제공급으로부터 t = -20) 래트 아밀린 0.3 ㎍을 피하 주사하였다. 상기 기술된 바와 같이, 에탄올 강제공급 30분 후에 위를 절제하고 손상에 대해 등급을 매겼다. 결과가 도 11A의 마지막 막대기 옆에 제공된다. 마지막 막대기는 래트 아밀린이 주사되지 않은 AC187 3.0 ㎎ 주사의 결과를 나타낸다. 결과의 더욱 선택적인 모양이 도 11B에서 제시된다.

도 11C는 에탄올 강제공급 5분 전에 피하 주사된 아밀린이 용량 의존적으로 점막 손상으로부터 위를 보호하였음을 나타낸다 (0.1 ㎍ 이상의 용량으로 P < 0.05). 아밀린은 0.3 ㎍ 이상의 용량으로 손상 점수를 67 ％ 저하시켰다. 이러한 실험 시스템에서 아밀린의 위장보호 효과에 대한 ED₅₀은 0.036 ㎍ (31 pmol/㎏) ± 0.40 log 유닛이었다.

아밀린의 위장보호 효과가 포도당에 의해 자극된 내인성 아밀린의 분비에 응답하여 일어날 수 있는지를 추가로 조사하기 위해, 선행 복강내 포도당 투여 (250 ㎎/0.5 ㎖ D-포도당; 강제공급으로부터 t = -30분; n= 9)의 에탄올에 의해 유도된 위염에 대한 효과를 비히클로 처리된 래트 (n = 23)에서 관찰된 손상과 비교하였다. 상기 기술된 바와 같이, 에탄올 강제공급 30분 후에 위를 절제하고 손상에 대해 등급을 매기고, 혈장 포도당 측정을 위해 혈액을 취하였다. AC187의 3 ㎎ 정맥내 볼루스가 공투여된, 포도당으로 처리된 래트에서 손상 응답을 또한 측정하였다 (n = 9).

t = +30 분 후에 혈장 포도당을 (대조군에서의 76 ㎎/㎗에 비해) 123 ㎎/㎗로 증가시키고 금식시킨 Sprague Dawley 래트에서 내인성 혈장 아밀린 농도를 4.8 ± 0.6 pM으로 증가시키는 것으로 나타난 D-포도당의 선행 투여는 위 손상 점수를 18.5 ± 4.6 ％만큼 상당히 감소시켰다 (P < 0.0005). 그러나, AC187의 선행 주사는 포도당으로 처리된 래트에서 손상 점수에 대한 효과가 없었다.

본 명세서에서 언급된 모든 출판물 및 특허 출원은 본 발명이 속하는 분야의 당업자의 수준을 나타낸다. 모든 출판물 및 특허 출원은 각각의 개별적인 출판물 또는 특허 출원이 거명에 의해 포함되는 것으로 명확하게 및 개별적으로 지시되는 것과 동일한 정도로 거명에 의해 본원에 포함된다.

상기의 발명이 명쾌한 이해를 위해 설명 및 예로서 다소 상세하게 기술되었지만, 특정 변화 및 변형이 첨부된 청구항의 범주 내에서 실행될 수 있다는 것이 명백할 것이다.

SEQUENCE LISTING <110> AMYLIN PHARMACEUTICALS, INC. <120> AMYLIN FAMILY PEPTIDES AND METHODS FOR MAKING AND USING THEM <130> 18528.835 <140> PCT/US05/004631 <141> 2005-02-11 <150> 60/550,447 <151> 2004-03-03 <150> 60/543,275 <151> 2004-02-11 <160> 138 <170> Patentln Ver. 3.3 <210> 1 <211> 37 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu 1 5 10 15 Val His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Ala Ile Leu Ser Ser Thr Asn Val 20 25 30 Gly Ser Asn Thr Tyr 35 <210> 2 <211> 37 <212> PRT <213> Rattus sp. <400> 2 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu 1 5 10 15 Val Arg Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Val Leu Pro Pro Thr Asn Val 20 25 30 Gly Ser Asn Thr Tyr 35 <210> 3 <211> 32 <212> PRT <213> Oncorhynchus sp. <400> 3 Cys Ser Asn Leu Ser Thr Cys Val Leu Gly Lys Leu Ser Gln Glu Leu 1 5 10 15 His Lys Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Gly Thr Pro 20 25 30 <210> 4 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4 Cys Gly Asn Leu Ser 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substitutions and preferred embodiments <220> <221> MOD_RES <222> (6) <223> Any amino acid, see specification as filed for detailed description of substitutions and preferred embodiments <400> 5 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 <210> 6 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 6 Cys Asn Thr Ala Thr Cys 1 5 <210> 7 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 7 Cys Ala Thr Ala Thr Cys 1 5 <210> 8 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 8 Cys Asp Thr Ala Thr Cys 1 5 <210> 9 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 9 Cys Gly Thr Ala Thr Cys 1 5 <210> 10 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 10 Cys Asn Ala Ala Thr Cys 1 5 <210> 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Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 22 Cys Ala Asn Leu Ser Thr Cys 1 5 <210> 23 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 23 Cys Ser Ala Leu Ser Thr Cys 1 5 <210> 24 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 24 Cys Ser Asn Ala Ser Thr Cys 1 5 <210> 25 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 25 Cys Ser Asn Leu Ala Thr Cys 1 5 <210> 26 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 26 Cys Ser Asn Leu Ser Ala Cys 1 5 <210> 27 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 27 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys 1 5 <210> 28 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 28 Leu Leu Gln Gln Leu Gln Lys Leu Leu Gln Lys Leu Lys Gln Tyr 1 5 10 15 <210> 29 <211> 28 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic amino acid sequence <220> <221> M0D_RES <222> (1)..(4) <223> This region may encompass 1-4 variable amino acids <220> <221> MOD_RES <222> (7) <223> Gly or Aib <220> <221> MOD_RES <222> (8) <223> Lys, Arg, Orn, hArg, Cit, hLys, or Lys(for) <220> <221> MOD_RES <222> (12) <223> Glu or Phe <220> <221> MOD_RES <222> (14) <223> His or Aib <220> <221> MOD_RES <222> (15) <223> Lys, Arg, Orn, hArg, Cit, hLys, Lys(for), or Lys(PEG5000) <220> <221> MOD_RES <222> (19) <223> Tyr or Leu <220> <221> MOD_RES <222> (21) <223> Arg or Pro <220> <221> MOD_RES <222> (25) . . (28) <223> This region may encompass 1-4 variable amino acids <400> 29 Xaa Xaa Xaa Xaa Val Leu Xaa Xaa Leu Ser Gln Xaa Leu Xaa Xaa Leu 1 5 10 15 Gln Thr Xaa Pro Xaa Thr Asn Thr Xaa Xaa Xaa Xaa 20 25 <210> 30 <211> 28 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic amino acid sequence <220> <221> MOD_RES <222> (1).. (4) <223> This region may encompass 1-4 variable amino acid residues <220> <221> MOD_RES <222> (5) <223> Ala or Val <220> <221> MOD_RES <222> (6) <223> Thr, Met, or Leu <220> <221> MOD_RES <222> (7) <223> Gln, Gly, or His <220> <221> MOD_RES <222> (9) <223> Leu or Thr <220> <221> MOD_RES <222> (10) <223> Ala, Thr, Asn, Phe, Tyr, Ser, or Thr <220> <221> MOD_RES <222> (11) <223> Asn, Arg, Ala, Asp, Glu, Gln, Thr, or Gly <220> <221> MOD_RES <222> (12) <223> Phe, Leu, Ser, Glu, Ala, Asp, or Tyr <220> <221> MOD_RES <222> (13) <223> Leu or Asp <220> <221> MOD_RES <222> (14) <223> Val, His, Ser, Phe, or Aib <220> <221> MOD_RES <222> (15) <223> His, Arg, Lys, Orn, hArg, Cit, hLys, Lys(for), or Lys(PEG500 0) <220> <221> MOD_RES <222> (16) <223> Leu, Ser, or Phe <220> <221> MOD_RES <222> (17) <223> Gln or His <220> <221> MOD_RES <222> (18) <223> Thr or Asn <220> <221> MOD_RES <222> (19) <223> Tyr, Val, Phe, Leu, or Met <220> <221> MOD_RES <222> (21) <223> Arg or Pro <220> <221> MOD_RES <222> (25)..(28) <223> This region may encompass 1-4 variable amino acid residues <400> 30 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Arg Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 15 Xaa Xaa Xaa Pro Xaa Thr Asn Thr Xaa Xaa Xaa Xaa 20 25 <210> 31 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic C-terminal amino acid sequence <220> <221> MOD_RES <222> (1) <223> Lys, Tyr, or not present <220> <221> MOD_RES <222> (2) <223> Ser, Pro, or not present <220> <221> MOD_RES <222> (3) <223> Ser, Pro, Arg, or not present <220> <221> MOD_RES <222> (4) <223> Thr or not present <220> <221> MOD_RES <222> (5) <223> Asn or not present <220> <221> MOD_RES <222> (6) <223> Val, Thr, or not present <220> <221> MOD_RES <222> (8) <223> Ser or Glu <220> <221> MOD_RES <222> (9) <223> Asn, Lys, or Gly <220> <221> MOD_RES <222> (10) <223> Thr, Phe, or Ala <220> <221> MOD_RES <222> (11) <223> Tyr, Phe, Pro, or not present <400> 31 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Gly Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 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<221> MOD_RES <222> (5) <223> Ala, Ser, Thr, Hse, Tyr, Val, Ile, Leu, or Met <220> <221> MOD_RES <222> (6) <223> Thr, Ala, Ser, Hse, Tyr, Val, Ile, Leu, or Met <220> <221> MOD_RES <222> (7) <223> Variable amino acid or not present; see specification as filed for detailed description of substitutions and preferred embodiments <220> <221> MOD_RES <222> (8) <223> Ala, Val, He, Leu, Phe, or Met <220> <221> MOD_RES <222> (9) <223> Leu, Thr, Ser, Hse, Val, Ile, or Met <220> <221> MOD_RES <222> (10) <223> Gly, His, Gln, Lys, Arg, Asn, hLys, or hArg <220> <221> MOD_RES <222> (11) <223> Lys, Arg, Gln, Asn, hLys, hArg, or His <220> <221> MOD_RES <222> (12) <223> Leu, Ile, Val, Phe, Met, Trp, or Tyr <220> <221> MOD_RES <222> (13) <223> Ala, Phe, Tyr, Asn, Gln, Ser, Hse, or Thr <220> <221> MOD_RES <222> (14) <223> Ala, Asp, Glu, Gly, Asn, Lys, Gln, Arg, His, hArg, or hLys <220> <221> MOD_RES <222> (15) <223> Ala, Asp, Glu, Phe, Leu, Ser, Tyr, Ile, Val, or Met <220> <221> MOD_RES <222> (16) <223> Leu, Phe, Met, Val, Tyr, or Ile <220> <221> MOD_RES <222> (17) <223> His, Gln, Asn, Ser, Hse, Thr, or Val <220> <221> MOD_RES <222> (18) <223> Lys, hLys, Arg, hArg, His, Cit, or Orn <220> <221> MOD_RES <222> (19) <223> Phe, Leu, Ser, Hse, Val, Ile, Thr, or not present <220> <221> MOD_RES <222> (20) <223> His, Arg, Lys, hArg, hLys, Asn, Gln, or not present <220> <221> MOD_RES <222> (21) <223> Thr, Ser, Hse, Val, Ile, Leu, Gln, Asn, or not present <220> <221> MOD_RES <222> (22) <223> Phe, Leu, Met, Val, Tyr, or Ile <220> <221> MOD_RES <222> (23) <223> Pro or Hyp <220> <221> MOD_RES <222> (24) <223> Pro, Hyp, Arg, Lys, hArg, hLys, or His <220> <221> MOD_RES <222> (25) <223> Thr, Ser, Hse, Val, Ile, Leu, Phe, or Tyr <220> <221> MOD_RES <222> (26) <223> Asn, Gln, Asp, or Glu <220> <221> MOD_RES <222> (27) <223> Thr, Val, Ser, Phe, He, or Leu <220> <221> MOD_RES <222> (28) <223> Gly or Ala <220> <221> MOD_RES <222> (29) <223> Ser, Hse, Thr, Val, Ile, Leu, or Tyr <220> <221> MOD_RES <222> (30) <223> Glu, Gly, Lys, Asn, Asp, Arg, hArg, hLys, His, or Gln <220> <221> MOD_RES <222> (31) <223> Ala, Thr, Ser, Hse, Val, lie Leu, Phe, or Tyr <220> <221> MOD_RES <222> (32) <223> Phe, Pro, Tyr, Hse, Ser, Thr, or Hyp <400> 34 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 15 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 20 25 30 <210> 35 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic amino acid sequence <220> <221> MOD_RES <222> (1) <223> Ala, Cys, Asp, Phe, Ile, Lys, Ser, Thr, or not present <220> <221> MOD_RES <222> (2) <223> Cys, Asp, Ser, or not present <220> <221> MOD_RES <222> (3) <223> Ala, Asp, Asn, or not present <220> <221> MOD_RES <222> (4) <223> Ala, Leu Thr, or not present <220> <221> MOD_RES <222> (5) <223> Ala or Ser <220> <221> MOD_RES <222> (6) <223> Thr, Ala, Ser, or Val <220> <221> MOD_RES <222> (7) <223> Cys, Lys, or Ala <220> <221> MOD_RES <222> (8) <223> Ala, Val, Leu, or Met <220> <221> MOD_RES <222> (9) <223> Leu or Thr <220> <221> MOD_RES <222> (10) <223> Gly, His, or Gln <220> <221> MOD_RES <222> (11) <223> Lys, Arg, Gln, or hArg <220> <221> MOD_RES <222> (12) <223> Leu, Trp, or Tyr <220> <221> MOD_RES <222> (13) <223> Ala, Phe, Asn, Gln, Ser, or Thr <220> <221> MOD_RES <222> (14) <223> Ala, Asp, Glu, Gly, Asn, Lys, Gln, or Arg <220> <221> MOD_RES <222> (15) <223> Ala, Asp, Glu, Phe, Leu, Ser, or Tyr <220> <221> MOD_RES <222> (16) <223> Leu or Phe <220> <221> MOD_RES <222> (17) <223> His, Gln, Ser, or Val <220> <221> MOD_RES <222> (18) <223> Lys, Arg, hArg, Cit, or Orn <220> <221> MOD_RES <222> (19) <223> Phe, Leu, Ser, or not present <220> <221> MOB_RES <222> (20) <223> His, Gln, or not present <220> <221> MOD_RES <222> (21) <223> Thr, Asn, or not present <220> <221> MOD_RES <222> (22) <223> Phe, Leu, Met, Val, or Tyr <220> <221> MOD_RES <222> (24) <223> Pro or Arg <220> <221> MOD_RES <222> (27) <223> Thr or Val <220> <221> MOD_RES <222> (30) <223> Glu, Gly, Lys, or Asn <220> <221> MOD_RES <222> (31) <223> Ala or Thr <220> <221> MOD_RES <222> (32) <223> Phe, Pro, or Tyr <400> 35 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 15 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Pro Xaa Thr Asn Xaa Gly Ser Xaa Xaa Xaa 20 25 30 <210> 36 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic amino acid sequence <220> <221> MOD_RES <222> (1) <223> Ala, Cys, Phe, Ile, Lys, Ser, or not present <220> <221> MOD_RES <222> (2) <223> Cys, Asp, or Ser <220> <221> MOD_RES <222> (3) <223> Ala, Asp, or Asn <220> <221> MOD_RES <222> (4) <223> Ala, Leu, or Thr <220> <221> MOD_RES <222> (5) <223> Ala or Ser <220> <221> MOD_RES <222> (7) <223> Cys or Lys <220> <221> MOD_RES <222> (8) <223> Ala or Val <220> <221> MOD_RES <222> (9) <223> Leu or Thr <220> <221> MOD_RES <222> (10) <223> Gly, His, or Gln <220> <221> MOD_RES <222> (11) <223> Lys, Arg, or hArg <220> <221> MOD_RES <222> (13) <223> Ala, Phe, Asn, Ser, or Thr <220> <221> MOD_RES <222> (14) <223> Ala, Asp, Glu, Gly, Asn, Gln, or Arg <220> <221> MOD_RES <222> (15) <223> Ala, Glu, Phe, Leu, Ser, or Tyr <220> <221> MOD_RES <222> (17) <223> His, Ser, or Val <220> <221> MOD_RES <222> (18) <223> Lys, Arg, hArg, Cit, or Orn <220> <221> MOD_RES <222> (19) <223> Phe, Leu, or Ser <220> <221> MOD_RES <222> (20) <223> His or Gln <220> <221> MOD_RES <222> (21) <223> Thr or Asn <220> <221> MOD_RES <222> (22) <223> Phe, Leu, Met, Val, or Tyr <220> <221> MOD_RES <222> (24) <223> Pro or Arg <220> <221> MOD_RES <222> (27) <223> Thr or Val <220> <221> MOD_RES <222> (30) <223> Glu, Gly, Lys, or Asn <220> <221> MOD_RES <222> (31) <223> Ala or Thr <220> <221> MOD_RES <222> (32) <223> Phe, Pro, or Tyr <400> 36 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Thr Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Leu Xaa Xaa Xaa Leu 1 5 10 15 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Pro Xaa Thr Asn Xaa Gly Ser Xaa Xaa Xaa 20 25 30 <210> 37 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 37 Gln Thr Tyr 1 <210> 38 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 38 Leu Gln Thr Tyr 1 <210> 39 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic amino acid sequence <220> <221> MOD_RES <222> (1) <223> Ala, Cys, Asp, Phe, Lys, Thr, or not present <220> <221> MOD_RES <222> (2) <223> Ala, Cys, Asp, Ser, or not present <220> <221> MOD_RES <222> (3) <223> Ala, Asp, Asn, or not present <220> <221> MOD_RES <222> (4) <223> Ala, Leu, Thr, or not present <220> <221> MOD_RES <222> (5) <223> Ala or Ser <220> <221> MOD_RES <222> (6) <223> Ala, Ser, Thr, or Val <220> <221> MOD_RES <222> (7) <223> Ala, Cys, or Lys <220> <221> MOD_RES <222> (8) <223> Ala, Leu, Met, or Val <220> <221> MOD_RES <222> (9) <223> Leu or Thr <220> <221> MOD_RES <222> (10) <223> Gly, His, or Gln <220> <221> MOD_RES <222> (11) <223> Lys, Gln, or Arg <220> <221> MOD_RES <222> (12) <223> Leu, Trp, or Tyr <220> <221> MOD_RES <222> (13) <223> Ala, Asn, Gln, Ser, or Thr <220> <221> MOD_RES <222> (14) <223> Ala, Asp, Glu, Gly, Lys, Asn, Gln, or Arg <220> <221> MOD_RES <222> (15) <223> Ala, Asp, Glu, Phe, Leu, Ser, or Tyr <220> <221> MOD_RES <222> (16) <223> Phe or Leu <220> <221> MOD_RES <222> (17) <223> His, Gln, Ser, or Val <220> <221> MOD_RES <222> (18) <223> Lys or Arg <220> <221> MOD_RES <222> (19) <223> Phe, Leu, Ser, or not present <220> <221> MOD_RES <222> (20) <223> His, Lys, Gln, or not present <220> <221> MOD_RES <222> (21) <223> Gln, Thr, or not present <220> <221> MOD_RES <222> (22) <223> Phe, Leu, or Tyr <220> <221> MOD_RES <222> (24) <223> Pro or Arg <220> <221> MOD_RES <222> (27) <223> Thr or Val <220> <221> MOD_RES <222> (30) <223> Glu, Lys, or Asn <220> <221> MOD_RES <222> (31) <223> Ala or Thr <220> <221> MOD_RES <222> (32) <223> Phe, Tyr, or not present <400> 39 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 15 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Pro Xaa Thr Asn Xaa Gly Ser Xaa Xaa Xaa 20 25 30 <210> 40 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic amino acid sequence <400> 40 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Val Leu Gly Lys Leu Ser Gln Glu Leu 1 5 10 15 His Arg Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 20 25 30 <210> 41 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic amino acid sequence <400> 41 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ser Gln Glu Leu 1 5 10 15 His Arg Leu Gln Thr Leu Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 20 25 30 <210> 42 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic amino acid sequence <400> 42 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ser Gln Glu Leu 1 5 10 15 His Arg Leu Gln Thr Tyr Pro Pro Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 20 25 30 <210> 43 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic amino acid sequence <400> 43 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ser Gln Glu Leu 1 5 10 15 His Arg Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Val Gly Ser Asn Thr Tyr 20 25 30 <210> 44 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic amino acid sequence <400> 44 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ser Gln Glu Leu 1 5 10 15 His Arg Leu Gln Thr Leu Pro Pro Thr Asn Val Gly Ser Asn Thr Tyr 20 25 30 <210> 45 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic amino acid sequence <400> 45 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ala Asn Phe Leu 1 5 10 15 His Arg Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 20 25 30 <210> 46 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic amino acid sequence <400> 46 Ala Cys Asn Thr Ala Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ser Gln Glu Leu 1 5 10 15 His Arg Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 20 25 30 <210> 47 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic amino acid sequence <400> 47 Lys Cys Asn Ala Ala Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ser Gln Glu Leu 1 5 10 15 His Arg Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 20 25 30 <210> 48 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic amino acid sequence <400> 48 Lys Cys Asn Thr Ala Ala Cys Val Leu Gly Arg Leu Ser Gln Glu Leu 1 5 10 15 His Arg Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 20 25 30 <210> 49 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic amino acid sequence <400> 49 Cys Ala Asn Leu Ser Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ser Gln Glu Leu 1 5 10 15 His Arg Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 20 25 30 <210> 50 <211> 28 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic amino acid sequence <220> <221> MOD_RES <222> (1). . (1) <223> Isocaproyl-Ser <400> 50 Ser Thr Ala Val Leu Gly Arg Leu Ser Gln Glu Leu His Arg Leu Gln 1 5 10 15 Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 20 25 <210> 51 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic amino acid sequence <400> 51 Cys Ser Asn Ala Ser Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ser Gln Glu Leu 1 5 10 15 His Arg Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 20 25 30 <210> 52 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic amino acid sequence <400> 52 Cys Ser Asn Leu Ala Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ser Gln Glu Leu 1 5 10 15 His Arg Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 20 25 30 <210> 53 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic amino acid sequence <400> 53 Cys Ser Asn Leu Ser Ala Cys Val Leu Gly Arg Leu Ser Gln Glu Leu 1 5 10 15 His Arg Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 20 25 30 <210> 54 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic amino acid sequence <400> 54 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ser Gln Glu Leu 1 5 10 15 His Lys Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 20 25 30 <210> 55 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic amino acid sequence <400> 55 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ser Gln Glu Leu 1 5 10 15 His Arg Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Gly Thr Pro 20 25 30 <210> 56 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic amino acid sequence <400> 56 Cys Ser Ala Leu Ser Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ser Gln Glu Leu 1 5 10 15 His Arg Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 20 25 30 <210> 57 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic amino acid sequence <220> <221> MOD_RES <222> (1) <223> Ac-Agy <220> <221> MOD_RES <222> (7) <223> Agy <400> 57 Xaa Ser Asn Leu Ser Thr Xaa Val Leu Gly Arg Leu Ser Gln Glu Leu 1 5 10 15 His Arg Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 20 25 30 <210> 58 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic amino acid sequence <220> <221> MOD_RES <222> (1) <223> Ac-Lys <220> <221> MOD_RES <222> (2) <223> Agy <220> <221> MOD_RES <222> (7) <223> Agy <400> 58 Lys Xaa Asn Thr Ala Thr Xaa Val Leu Gly Arg Leu Ser Gln Glu Leu 1 5 10 15 His Arg Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 20 25 30 <210> 59 <211> 27 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic amino acid sequence <220> <221> MOD_RES <222> (1) <223> Isocaproyl-Ser <220> <221> MOD_RES <222> (6) <223> Aib <400> 59 Ser Thr Ala Val Leu Xaa Arg Leu Ser Gln Glu Leu Arg Leu Gln Thr 1 5 10 15 Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Gly Thr Pro 20 25 <210> 60 <211> 28 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic amino acid sequence <220> <221> MOD_RES <222> (1) <223> Isocaproyl-Ser <220> <221> MOD_RES <222> (7) <223> Lys(For) <220> <221> MOD_RES <222> (14) <223> Lys(For) <400> 60 Ser Thr Ala Val Leu Gly Lys Leu Ser Gln Glu Leu His Lys Leu Gln 1 5 10 15 Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Gly Thr Pro 20 25 <210> 61 <211> 28 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic amino acid sequence <220> <221> MOD_RES <222> (1) <223> Isocaproyl-Ser <220> <221> MOD_RES <222> (6) <223> Aib <220> <221> MOD_RES <222> (7) <223> Lys(For) <220> <221> MOD_RES <222> (13) <223> Aib <220> <221> MOD_RES <222> (14) <223> Lys(For) <400> 61 Ser Thr Ala Val Leu Xaa Lys Leu Ser Gln Glu Leu Xaa Lys Leu Gln 1 5 10 15 Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 20 25 <210> 62 <211> 28 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic amino acid sequence <220> <221> MOD_RES <222> (1) <223> Isocaproyl-Ser <220> <221> MOD_RES <222> (6) <223> Aib <220> <221> MOD_RES <222> (7) <223> Lys(For) <220> <221> MOD_RES <222> (13) <223> Aib <220> <221> MOD_RES <222> (14) <223> Lys(For) <400> 62 Ser Thr Ala Val Leu Xaa Lys Leu Ser Gln Glu Leu Xaa Lys Leu Gln 1 5 10 15 Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Val Gly Ser Asn Thr Tyr 20 25 <210> 63 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic amino acid sequence <400> 63 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Leu Leu Gln Gln Leu Gln Lys Leu Leu 1 5 10 15 Gln Lys Leu Lys Gln Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 20 25 30 <210> 64 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic amino acid sequence <400> 64 Lys Cys Asn Thr Ala Ser Cys Val Leu Gly Arg Leu Ser Gln Glu Leu 1 5 10 15 His Arg Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 20 25 30 <210> 65 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic amino acid sequence <400> 65 Lys Cys Asn Thr Ala Val Cys Val Leu Gly Arg Leu Ser Gln Glu Leu 1 5 10 15 His Arg Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 20 25 30 <210> 66 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic amino acid sequence <400> 66 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ser Gln Glu Leu 1 5 10 15 His Arg Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 20 25 <210> 67 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic amino acid sequence <220> <221> MOD_RES <222> (11) <223> Lys(For) <220> <221> MOD_RES <222> (18) <223> Lys(For) <400> 67 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Val Leu Gly Lys Leu Ser Gln Glu Leu 1 5 10 15 His Lys Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 20 25 30 <210> 68 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic amino acid sequence <220> <221> MOD_RES <222> (6) <223> D-Thr <400> 68 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ser Gln Glu Leu 1 5 10 15 His Arg Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 20 25 30 <210> 69 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic amino acid sequence <220> <221> MOD_RES <222> (6) <223> dAh <400> 69 Lys Cys Asn Thr Ala Xaa Cys Val Leu Gly Arg Leu Ser Gln Glu Leu 1 5 10 15 His Arg Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 20 25 30 <210> 70 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic amino acid sequence <220> <221> M0D_RES <222> (1) <223> Ac-Ala <220> <221> MOD_RES <222> (18) <223> Lys(PEG5000) <400> 70 Ala Cys Asn Thr Ala Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ser Gln Glu Leu 1 5 10 15 His Lys Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 20 25 30 <210> 71 <211> 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N-3,6-dioxaoctanoyl-Cys <400> 86 Cys Asn Thr Ala Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ser Gln Glu Leu His 1 5 10 15 Arg Leu Gln Thr Val Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 20 25 30 <210> 87 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic amino acid sequence <400> 87 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Met Leu Gly Arg Tyr Thr Gln Asp Phe 1 5 10 15 His Arg Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 20 25 30 <210> 88 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic amino acid sequence <400> 88 Asp Ser Asn Leu Ser Thr Lys Val Leu Gly Arg Leu Ser Gln Glu Leu 1 5 10 15 His Arg Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 20 25 30 <210> 89 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic amino acid sequence <400> 89 Lys Asp Asn Thr Ala Thr Lys Val Leu Gly Arg Leu Ser Gln Glu Leu 1 5 10 15 His Arg Leu Gln Thr Tyr Pro Arg 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Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic amino acid sequence <220> <221> MOD_RES <222> (1) <223> 1-Octylglycine <400> 99 Xaa Cys Asn Thr Ala Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ser Gln Glu Leu 1 5 10 15 His Arg Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 20 25 30 <210> 100 <211> 31 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic amino acid sequence <220> <221> MOD_RES <222> (1) <223> Isocaproyl-Cys <400> 100 Cys Asn Thr Ala Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ser Gln Glu Leu His 1 5 10 15 Arg Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 20 25 30 <210> 101 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic amino acid sequence <220> <221> MOD_RES <222> (11) <223> Cit <400> 101 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Val Leu Gly Xaa Leu Ser Gln Glu Leu 1 5 10 15 His Arg Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 20 25 30 <210> 102 <211> 33 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic amino acid sequence <220> <221> MOD_RES <222> (33) <223> 4ABU <400> 102 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ser Gln Glu Leu 1 5 10 15 His Arg Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 20 25 30 Xaa <210> 103 <211> 33 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic amino acid sequence <220> <221> MOD_RES <222> (1) <223> Isocaproyl-Lys <220> <221> MOD_RES <222> (33) <223> 4ABU <400> 103 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ser Gln Glu Leu 1 5 10 15 His Arg Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 20 25 30 Xaa <210> 104 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic amino acid sequence <400> 104 Lys Cys Asn Thr Ser Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Glu Leu 1 5 10 15 Val Arg Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Val Gly Ser Glu Ala Phe 20 25 30 <210> 105 <211> 31 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sequence <400> 115 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ala Asp Ala Leu 1 5 10 15 His Arg Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 20 25 30 <210> 116 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic amino acid sequence <400> 116 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ala Ala Phe Leu 1 5 10 15 His Arg Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 20 25 30 <210> 117 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic amino acid sequence <400> 117 Ser Cys Asn Thr Ala Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ala Asp Phe Leu 1 5 10 15 His Arg Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 20 25 30 <210> 118 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic amino acid sequence <400> 118 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ser Gln Glu Leu 1 5 10 15 His Arg Leu Gln Thr Met Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 20 25 30 <210> 119 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic amino acid sequence <400> 119 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ser Gln Glu Leu 1 5 10 15 His Arg Leu Gln Thr Val Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 20 25 30 <210> 120 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic amino acid sequence <400> 120 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Asn Glu Tyr Leu 1 5 10 15 His Arg Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 20 25 30 <210> 121 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic amino acid sequence <400> 121 Ser Cys Asn Thr Ala Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ser Gln Glu Leu 1 5 10 15 His Arg Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 20 25 30 <210> 122 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic amino acid sequence <400> 122 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Thr Glu Phe Leu 1 5 10 15 His Arg Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 20 25 30 <210> 123 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic amino acid sequence <400> 123 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ala Glu Phe Leu 1 5 10 15 His Arg Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 20 25 30 <210> 124 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic amino acid sequence <400> 124 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Thr Asp Tyr Leu 1 5 10 15 His Arg Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 20 25 30 <210> 125 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic amino acid sequence <400> 125 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ala Gln Phe Leu 1 5 10 15 His Arg Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 20 25 30 <210> 126 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic amino acid sequence <400> 126 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ala Asp Phe Leu 1 5 10 15 His Arg Phe Gln Thr Phe Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 20 25 30 <210> 127 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic amino acid sequence <400> 127 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ala Asp Phe Leu 1 5 10 15 His Arg Phe His Thr Phe Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 20 25 30 <210> 128 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic amino acid sequence <400> 128 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ala Asp Phe Leu 1 5 10 15 His Arg Phe Gln Thr Phe Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Gly Thr Pro 20 25 30 <210> 129 <211> 31 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic amino acid sequence <400> 129 Cys Asn Thr Ala Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ala Asp Phe Leu His 1 5 10 15 Arg Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 20 25 30 <210> 130 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic amino acid sequence <400> 130 Lys Cys Asp Thr Ala Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ser Gln Glu Leu 1 5 10 15 His Arg Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 20 25 30 <210> 131 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic amino acid sequence <400> 131 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Phe Asp Phe Leu 1 5 10 15 His Arg Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 20 25 30 <210> 132 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic amino acid sequence <400> 132 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ala Ala Ala Leu 1 5 10 15 His Arg Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 20 25 30 <210> 133 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic amino acid sequence <400> 133 Thr Cys Asp Thr Ala Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ser Gln Glu Leu 1 5 10 15 His Arg Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 20 25 30 <210> 134 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic amino acid sequence <400> 134 Cys Ser Asn Leu Ser Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Glu Leu 1 5 10 15 Val Arg Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Val Gly Ser Asn Thr Tyr 20 25 30 <210> 135 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic amino acid sequence <400> 135 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Glu Leu 1 5 10 15 Val Arg Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Val Gly Ser Asn Thr Tyr 20 25 30 <210> 136 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic amino acid sequence <400> 136 Cys Ser Asn Leu Ser Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ser Gln Glu Leu 1 5 10 15 His Arg Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 20 25 30 <210> 137 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic amino acid sequence <400> 137 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ser Gln Glu Leu 1 5 10 15 His Arg Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 20 25 30 <210> 138 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (1) <223> Variable amino acid; see specification as filed for detailed description of substitutions and preferred embodiments <220> <221> MOD_RES <222> (2) <223> Variable amino acid or not present <220> <221> MOD_RES <222> (3) <223> Ala, Gly, Ser, Asp, or not present <220> <221> MOD_RES <222> (4) <223> Asn, Ala, Asp, Gly, or not present <220> <221> MOD_RES <222> (5) <223> Ala, Leu, Thr, or Ser <220> <221> MOD_RES <222> (6) <223> Ala, Ser, or Thr <220> <221> MOD_RES <222> (7) <223> Ala, Ser, Val, Hse, Ahb, Ahp, D-thr, Thr, or a derivative thereof <220> <221> MOD_RES <222> (8) <223> Variable amino acid; see specification as filed for detailed description of substitutions and preferred embodiments <400> 138 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5

Claims

아밀린 및 이의 유사체의 루프 영역; 칼시토닌 또는 이의 유사체의 α 나선 영역의 적어도 일부의 α 나선 영역 및 칼시토닌 또는 이의 유사체의 α 나선 영역을 포함하는 아밀린 족 펩티드.
제1항에 있어서, 아밀린이 인간 아밀린 및 이의 유사체인 펩티드.
제1항에 있어서, 칼시토닌이 연어 칼시토닌인 펩티드.
제2항에 있어서, 칼시토닌이 연어 칼시토닌인 펩티드.
제1항에 있어서, 화학식 I: Xaa1 X Xaa3 Xaa4 Xaa5 Xaa6 Y Xaa8 Xaa9 Xaa10 Xaa11 Xaa12 Xaa13 Xaa14 Xaa15 Xaa16 Xaa17 Xaa18 Xaa19 Xaa20 Xaa21 Xaa22 Xaa23 Xaa24 Xaa25 Xaa26 Xaa27 Xaa28 Xaa29 Xaa30 Xaa31 Xaa32 (SEQ ID NO: 34)의 아미노산 서열을 포함하고, 식중

Xaa1은 A, C, hC, D, E, F, I, L, K, hK, R, hR, S, Hse(호모SER), T, G, Q, N, M, Y, W, P, Hyp(히드록시프롤린), H 또는 V이거나 존재하지 않고;

Xaa3은 A, D, E, N, Q, G, V, R, K, hK, hR, H, I, L 또는 M이거나 존재하지 않고;

Xaa4는 A, I, L, S, Hse, T, V 또는 M이거나 존재하지 않고;

Xaa5는 A, S, T, Hse, Y, V, I, L 또는 M이고;

Xaa6은 T, A, S, Hse, Y, V, I, L 또는 M이고;

Xaa8은 A, V, I, L, F 또는 M이고;

Xaa9는 L, T, S, Hse, V, I 또는 M이고;

Xaa10은 G, H, Q, K, R, N, hK 또는 hR이고;

Xaa11은 K, R, Q, N, hK, hR 또는 H이고;

Xaa12는 L, I, V, F, M, W 또는 Y이고;

Xaa13은 A, F, Y, N, Q, S, Hse 또는 T이고;

Xaa14는 A, D, E, G, N, K, Q, R, H, hR 또는 hK이고;

Xaa15는 A, D, E, F, L, S, Y, I, V 또는 M이고;

Xaa16은 L, F, M, V, Y 또는 I이고;

Xaa17은 H, Q, N, S, Hse, T 또는 V이고;

Xaa18은 K, hK, R, hR, H, u (Cit) 또는 n (Orn)이고;

Xaa19는 F, L, S, Hse, V, I 또는 T이거나 존재하지 않고;

Xaa20은 H, R, K, hR, hK, N 또는 Q이거나 존재하지 않고;

Xaa21은 T, S, Hse, V, I, L, Q 또는 N이거나 존재하지 않고;

Xaa22는 F, L, M, V, Y 또는 I이고;

Xaa23은 P 또는 Hyp이고;

Xaa24는 P, Hyp, R, K, hR, hK 또는 H이고;

Xaa25는 T, S, Hse, V, I, L, F 또는 Y이고;

Xaa26은 N, Q, D 또는 E이고;

Xaa27은 T, V, S, F, I 또는 L이고;

Xaa28은 G 또는 A이고;

Xaa29는 S, Hse, T, V, I, L 또는 Y이고;

Xaa30은 E, G, K, N, D, R, hR, hK, H 또는 Q이고;

Xaa31은 A, T, S, Hse, V, I, L, F 또는 Y이고;

Xaa32는 F, P, Y, Hse, S, T 또는 Hyp이고;

X 및 Y는 결합을 생성시킬 수 있고, 디술피드 결합; 아미드 결합; 고리형 락탐을 형성할 수 있는 알킬 산 및 알킬 아민; 축합 및 환원되어 알킬 아민 또는 이민 가교를 형성할 수 있는 알킬 알데히드 또는 알킬 할라이드 및 알킬아민; 또는 연결되어 알킬, 알케닐, 알키닐, 에테르 또는 티오에테르 결합을 형성할 수 있는 측쇄와 같은 서로 화학적으로 결합되어 분자내 결합을 형성하는 측쇄를 갖는 독립적으로 선택되는 잔기인 펩티드.
제5항에 있어서, X 및 Y가 디술피드, 아미드, 이민, 아민, 알킬 및 알켄 결합의 분자내 결합을 형성하는 펩티드.
제5항에 있어서, 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개 또는 12개의 치환, 삽입, 결실, 신장 및/또는 유도체화의 변형을 추가로 포함하는 펩티드.
제1항에 있어서, 화학식 II: Xaa1 Xaa2 Xaa3 Xaa4 Xaa5 Xaa6 Xaa7 Xaa8 Xaa9 Xaa10 Xaa11 Xaa12 Xaa13 Xaa14 Xaa15 Xaa16 Xaa17 Xaa18 Xaa19 Xaa20 Xaa21 Xaa22 Xaa23 Xaa24 Xaa25 Xaa26 Xaa27 Xaa28 Xaa29 Xaa30 Xaa31 Xaa32 (SEQ ID NO: 35)의 아미노산 서열을 포함하고, 식중

Xaa1은 A, C, D, F, I, K, S 또는 T이거나 존재하지 않고;

Xaa2는 C, D 또는 S이거나 존재하지 않고;

Xaa3은 A, D 또는 N이거나 존재하지 않고;

Xaa4는 A, L 또는 T이거나 존재하지 않고;

Xaa5는 A 또는 S이고;

Xaa6은 T, A, S 또는 V이고;

Xaa7은 C, K 또는 A이고;

Xaa8은 A, V, L 또는 M이고;

Xaa9는 L 또는 T이고;

Xaa10은 G, H 또는 Q이고;

Xaa11은 K, R, Q 또는 hArg이고;

Xaa12는 L, W 또는 Y이고;

Xaa13은 A, F, N, Q, S 또는 T이고;

Xaa14는 A, D, E, G, N, K, Q 또는 R이고;

Xaa15는 A, D, E, F, L, S 또는 Y이고;

Xaa16은 L 또는 F이고;

Xaa17은 H, Q, S 또는 V이고;

Xaa18은 K, R, hArg, u (Cit) 또는 n (Orn)이고;

Xaa19는 F, L 또는 S이거나 존재하지 않고;

Xaa20은 H 또는 Q이거나 존재하지 않고;

Xaa21은 T 또는 N이거나 존재하지 않고;

Xaa22는 F, L, M, V 또는 Y이고;

Xaa23은 P이고;

Xaa24는 P 또는 R이고;

Xaa25는 T이고;

Xaa26은 N이고;

Xaa27은 T 또는 V이고;

Xaa28은 G이고;

Xaa29는 S이고;

Xaa30은 E, G, K 또는 N이고;

Xaa31은 A 또는 T이고;

Xaa32는 F, P 또는 Y인 펩티드.
제8항에 있어서, 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개 또는 12개의 치환, 삽입, 결실, 신장 및/또는 유도체화의 변형을 추가로 포함하는 펩티드.
제1항에 있어서, 화학식 III: Xaa1 Xaa2 Xaa3 Xaa4 Xaa5 Xaa6 Xaa7 Xaa8 Xaa9 Xaa10 Xaa11 Xaa12 Xaa13 Xaa14 Xaa15 Xaa16 Xaa17 Xaa18 Xaa19 Xaa20 Xaa21 Xaa22 Xaa23 Xaa24 Xaa25 Xaa26 Xaa27 Xaa28 Xaa29 Xaa30 Xaa31 Xaa32 (SEQ ID NO: 36)의 아미노산 서열을 포함하고, 식중

Xaa1은 A, C, F, I, K 또는 S이거나 존재하지 않고;

Xaa2는 C, D 또는 S이고;

Xaa3은 A, D 또는 N이고;

Xaa4는 A, L 또는 T이고;

Xaa5는 A 또는 S이고;

Xaa6은 T이고;

Xaa7은 C 또는 K이고;

Xaa8은 A 또는 V이고;

Xaa9는 L 또는 T이고;

Xaa10은 G, H 또는 Q이고;

Xaa11은 K, R 또는 hArg이고;

Xaa12는 L이고;

Xaa13은 A, F, N, S 또는 T이고;

Xaa14는 A, D, E, G, N, Q 또는 R이고;

Xaa15는 A, E, F, L, S 또는 Y이고;

Xaa16은 L이고;

Xaa17은 H, S 또는 V이고;

Xaa18은 K, R, hArg, u (Cit) 또는 n (Orn)이고;

Xaa19는 F, L 또는 S이고;

Xaa20은 H 또는 Q이고;

Xaa21은 T 또는 N이고;

Xaa22는 F, L, M, V 또는 Y이고;

Xaa23은 P이고;

Xaa24는 P 또는 R이고;

Xaa25는 T이고;

Xaa26은 N이고;

Xaa27은 T 또는 V이고;

Xaa28은 G이고;

Xaa29는 S이고;

Xaa30은 E, G, K 또는 N이고;

Xaa31은 A 또는 T이고;

Xaa32는 F, P 또는 Y인 펩티드.
제11항에 있어서, 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11 개 또는 12개의 치환, 삽입, 결실, 신장 및/또는 유도체화의 변형을 추가로 포함하는 펩티드.
SEQ ID NO: 40 내지 137의 서열을 포함하는 아밀린 족 펩티드.
제12항에 있어서, 펩티드가 SEQ ID NO: 40 내지 137에 대해 95 ％ 이상의 서열 동일성을 갖는 펩티드.
제1항의 펩티드를 포함하는 식이 장애, 인슐린-저항성, 비만, 이상 식후 고혈당, 제I형, 제II형 및 임신성 당뇨병이 포함되는 임의 종류의 당뇨병, 대사 증후군, 덤핑 증후군, 고혈압, 이상지질혈증, 심혈관질환, 고지질혈증, 수면 무호흡, 암, 폐동맥 고혈압, 쓸개염, 및 골관절염의 치료 방법.
제5항의 펩티드를 포함하는 식이 장애, 인슐린-저항성, 비만, 이상 식후 고혈당, 제I형, 제II형 및 임신성 당뇨병이 포함되는 임의 종류의 당뇨병, 대사 증후군, 덤핑 증후군, 고혈압, 이상지질혈증, 심혈관질환, 고지질혈증, 수면 무호흡, 암, 폐동맥 고혈압, 쓸개염, 및 골관절염의 치료 방법.
제8항의 펩티드를 포함하는 식이 장애, 인슐린-저항성, 비만, 이상 식후 고혈당, 제I형, 제II형 및 임신성 당뇨병이 포함되는 임의 종류의 당뇨병, 대사 증후 군, 덤핑 증후군, 고혈압, 이상지질혈증, 심혈관질환, 고지질혈증, 수면 무호흡, 암, 폐동맥 고혈압, 쓸개염, 및 골관절염의 치료 방법.
제12항의 펩티드를 포함하는 식이 장애, 인슐린-저항성, 비만, 이상 식후 고혈당, 제I형, 제II형 및 임신성 당뇨병이 포함되는 임의 종류의 당뇨병, 대사 증후군, 덤핑 증후군, 고혈압, 이상지질혈증, 심혈관질환, 고지질혈증, 수면 무호흡, 암, 폐동맥 고혈압, 쓸개염, 및 골관절염의 치료 방법.