KR20050111598A - 신경 성장 인자 길항제 및 ｎｓａｉｄ를 투여함으로써통증을 치료하는 방법 및 그것을 함유하는 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 그들이 함께 효과적인 통증 경감을 제공하는 소정량의 신경 성장 인자 길항제(예를 들어, 항-NGF 항체) 및 소정량의 NSAID를 투여하는 것을 포함하는 통증을 치료 또는 예방하기 위한 방법을 특징으로 한다. 또한 본 발명은 신경 성장 인자 길항제 및 NSAID를 포함하는 조성물 및 그것을 함유하는 키트를 특징으로 한다.

Description

신경 성장 인자 길항제 및 ＮＳＡＩＤ를 투여함으로써 통증을 치료하는 방법 및 그것을 함유하는 조성물{METHODS FOR TREATING PAIN BY ADMINISTERING A NERVE GROWTH FACTOR ANTAGONIST AND AN NSAID AND COMPOSITIONS CONTAINING THE SAME}

본 발명은 신경 성장 인자 길항제 및 NSAID의 조합물을 투여함으로써 환자의 통증을 예방 또는 치료하는 방법 및 조성물에 관한 것이다.

비-스테로이드계 항염증성 약물(NSAID)의 투여와 관련한 많은 치료법이 현재 통증 경감을 위해 권고되고 있다. NSAID의 투여는 통증 완화 특성을 보이는 것으로 나타났다. 그러나, NSAID를 이용한 치료법은 예를 들어 위장관의 자극 및 신장과 간 독성과 같은 원치 않는 부작용을 포함하는 알려진 불리점을 가진다. 더욱이, NSAID는 일부 통증 상태에 있어서 그들의 최대 치료적 승인 투여량에서 조차도 적절한 통증 경감을 달성할 수 없다.

신경 성장 인자(NGF)는 동정된 첫번째 뉴로트로핀이며, 말초 및 중추 뉴런 모두의 발달 및 생존에 있어서 그것의 역할이 잘 특성화되어 왔다. NGF는 말초의 교감 및 배아 감각 뉴런 및 기저의 전뇌 콜린성 뉴런의 발달에 있어서 중요한 생존 및 유지 인자인 것으로 나타났다(Smeyne, et al., Nature 368: 246-249 (1994) ; Crowley, et al., Cell 76 : 1001-1011 (1994)). NGF는 감각 뉴런에서 뉴로펩티드의 발현을 억제하고(Lindsay, et al., Nature 337: 362-364 (1989)) 그것의 활성은 두개의 상이한 막-결합 수용체인 TrkA 티로신 키나제 수용체 및 p75 수용체를 통하여 매개되는데, 이것은 종양 괴사 인자 수용체 패밀리의 다른 구성원에 관하여 구조적으로 관련되어 있다(Chao, et al., Science 232:518-521(1986)).

신경계 내 NGF의 효과에 더하여, NGF는 신경계 외부의 과정에 있어서 더욱더 관련되었다. 예를 들어, 외인성으로 투여된 NGF는 혈관 침투성을 증가시키고(Otten, et al., Eur.J.Pharmacol. 106:199-201(1984)), T- 및 B-세포 면역 반응을 증가시키며(Otten, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.86:10059-10063(1989), 림프구 분화 및 비만 세포 증식을 유도하고 비만 세포로부터 가용성 생물학적 신호의 방출을 야기하는 것으로 나타났다(Matsuda, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.85:6508-6512(1998); Pearce, et al., J. Physiol. 372:379-393(1986); Bischoff, et al., Blood 79:2662-2669(1992); Horigome, et al., J. Biol. Chem. 268:14881-14887(1993)).

NGF는 비만 세포(Leon, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 91:3739-3743(1994)), B-림프구(Torcia, et al., Cell 85:345-356(1996), 각질형성세포(Di Marco, et al., J. Biol. Chem. 278:22838-22846)), 평활근 세포(Ueyama, et al., J. Hypertens. 11:1061-1065(193)), 섬유모세포(Lindholm, et al., Eur. J. Neurosci. 2:795-801(1990)), 기관지 상피 세포(Kassel. et al., Clin, Exp. Allergy 31:1432-40(2001)), 신장 혈관 사이세포(Steiner, et al., Am. J. Physiol. 261:F792-798(1991)) 및 골격근 근육대롱(Schwartz, et al., J Photochem. Photobiol. B 66:195-200(2002))을 포함하는 여러 가지 세포 유형에 의해 생성된다. NGF 수용체는 신경계 외부의 각종 세포 유형에서 발견됐다. 예를 들어, TrkA는 인간 단핵구, T- 및 B-림프구 및 비만 세포에서 발견됐다.

증가된 NGF 수준 및 다양한 염증 상태간의 관련성이 몇몇 동물 모델에서 뿐만 아니라 인간 환자에서 관찰됐다. 이들은 전신 홍반 루푸스(Bracci-Laudiero, et al., Neuroreport 4:563-565(1993)), 다발성 경화증(Bracci-Laudiero, et al. Neurosci.Lett.147:9-12(1992)), 건선(Raychaudhuri, et al., Acta Derm. l'enereol. 78:84-86(1998)), 관절염(Falcimi, et al., Ann. Rheum. Dis. 55:745-748(1996)), 사이질 방광염(Okragly, et al., J. Urology 161:438-441(1999)) 및 천식(Braun, et al., Eur. J Immunol. 28:3240-3251(1998))을 포함한다.

일관되게, 말초 조직 내 증가된 수준의 NGF는 통각과민 및 염증과 관련되어 있으며 다수의 관절염 형태에서 관찰됐다. 류마티스 관절염에 걸린 환자의 활액은 고수준의 NGF를 나타내는 반면, 비-염증성 활액에 있어서 NGF는 검출불가한 것으로 보고됐다(Aloe, et al., Arch. Rheum. 35:351-355(1992)). 유사한 결과를 실험적으로 유도된 류마티스 관절염에 걸린 랫트에서 보았다(Aloe, et al., Clin. Exp. Rheumatol. 10:203-204(1992)). 증가된 수준의 NGF는 비만 세포의 수적 증가와 함께 트랜스제닉 관절염 마우스에서 보고되었다. (Aloe, et al., Int. J. Tissue Reactions-Exp. Clin. Aspects 15:139-143(1993)).

각각 상이한 메카니즘을 통하여 작용하고 상이한 효과를 가지며, 두가지 불리점 모두를 갖는 통증의 치료를 위한 약제의 두가지 일반적인 카테고리가 있다. 첫번째 카테고리는 비스테로이드계 항-염증성 약물(NSAID)을 포함하는데, 이것은 경미한 통증을 치료하는데 사용되지만, 이것의 치료적 사용은 지속적 사용으로 인하여 예를 들어, 위 미란, 소화 궤양의 형성 또는 샘창자 및 결장의 염증 및 신장 독성과 같은 바람직하지 않은 위장관 결과에 의해 제한적이다. 두번째 카테고리는 모르핀과 같은 아편유사 진통제를 포함하는데, 이것은 중간정도로부터 심각한 통증까지의 치료에 사용되지만, 이것의 치료적 사용은 예를 들어, 변비, 구역 및 구토, 호흡 저하, 정신적 혼미, 신장 급통증, 지속적 사용에 대한 내성 및 중독의 위험으로 인하여 제한적이다.

개선된 치료적 이익(예를 들어, 통증의 감소된 심각도 및/또는 빈도)을 제공하고 및/또는 많은 현재의 치료법에 의해 생기는 원치 않는 부작용의 발생을 감소시키는 개선된 통증 치료에 대한 필요성이 있음이 명백하다.

특허 출원 및 공보를 포함하여, 본원에서 인용된 모든 참고문헌은 전체적으로 참고로서 인용되어 있다.

도 1은 누적 통증 점수가 NGF 길항제와 함께, 10 또는 30 mg/kg의 S[+] 이부프로펜으로 처리된 동물에서 감소됨을 나타낸다(항-NGF 길항제 Mab 911; 문헌[Hongo et al, Hybridoma 19: 215-227(2000)] 참조). 동물은 두개의 그룹으로 나누었다(대조군 및 항체-처리군). NGF 길항제는 외과적 수술 15 시간 전에, 복막내(시간= -15시간) 1 mg/kg의 투여량으로 제공되었다. 외과 수술은 시간=0 에서 설명되는 바와같이 수행되었다. 잔여 통증은 외과 수술 24 시간 후(그래프에서 "0")에 평가되었다. 그 후 모든 동물은 10 mg/kg 또는 30 mg/kg 체중에서 이부프로펜(45% 베타-시클로덱스트린 액체 중 300 mg/ml)으로 처리하였다. 또한 항체 처리되지 않은 대조군 동물은 10 mg/kg, 30 mg/kg, 100 mg/kg, 및 300 mg/kg에서 이부프로펜으로 처리하였다. 이부프로펜을 목덜미에서 피하로 송달시켰다. 이부프로펜의 투여 1시간 후, 잔여 통증을 테스트하였다. 항-NGF 길항제 항체와 이부프로펜과의 처리는 이부프로펜 단독으로 또는 항-NGF 길항제 항체 단독 처리보다 잔여 통증을 감소시키는데에 더 효과적이다.

도 2는 NGF 길항제와 함께, 5 mg/kg의 디클로페낙으로 처리된 동물의 누적 통 점수를 나타내는 그래프이다(항-NGF 길항제 Mab 911; 문헌[Hongo et al, Hybridoma 19: 215-227(2000)]참조). 동물을 두개의 그룹으로 나누었다(대조군 및 항체-처리군). NGF 길항제는 1 mg/kg의 투여량으로 복막내로(시간= -15 시간), 외과 수술 15 시간 후에 제공되었다. 외과 수술은 시간 0에서 설명되는 바와 같이 수행되었다. 잔여 통증은 외과 수술 24 시간 후에 평가되었다(그래프에서 "0"). 그 후 모든 동물을 5 mg/kg 체중에서 디클로페낙으로 처리하였다. 또한 항체 처리되지 않은 대조군 동물을 5 mg/kg에서 디클로페낙으로 처리하였다. 디클로페낙을 목덜미에서 피하적로 송달시켰다. 디클로페낙의 투여 1 시간 후, 잔여 통증을 테스트하였다.

발명의 상세한 설명

본 발명자들은 통증은 NSAID와 함께 유효량의 NGF 길항제(예를 들어 항-NGF 항체와 같은 것)를 투여함으로써 예방되거나 치료될 수도 있음을 발견했다. 본 발명의 방법 및 조성물은 NSAID의 사용이 통상적으로 처방되는 어떤 통증을 포함하여, 통증의 치료 또는 예방에 대하여 유용하다. 본 발명에 따라서, 신경 성장 인자 길항제 및 NSAID와 결합된 사용에 의해서, NSAID의 낮은 투여량을 이용하여 통증을 치료하는 것이 현재 가능하며, 그로써 NSAID 치료법과 관련한 부작용의 가능성을 줄일 수 있다. 일부 구체예에서, 충분한 NGF 길항제가 필요한 NSAID의 정상 투여량의 감소를 허용하기 위해 투여되어 적어도 약 5%, 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 또는 적어도 약 90%, 또는 그 이상까지 통증 개선의 동일한 정도를 이룰 것이다.

또한 NSAID를 이용한 통증의 치료법은 NGF 길항제와 함께 NSAID를 투여함으로써, 본원에서 설명된 바와 같이 향상될 수 있다.

한 양태에서, 본 발명은 유효량의 NSAID와 함께 유효량의 NGF 길항제를 투여하는 것을 포함하는 개체(예를 들어, 포유동물, 인간 및 비-인간 모두 포함) 내 통증을 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다. 다른 양태에서, 본 발명은 유효량의 NSAID와 함께 유효량의 NGF 길항제(예를 들어 항-NGF 항체와 같은 것)를 투여하는 것을 포함하는 개체 내 통증의 NSAID 치료 또는 예방을 향상시키는 방법을 제공한다. 다른 양태에서, 본 발명은 발달 또는 진행중인 통증을 예방, 개선 및/또는 예방하는 방법을 제공한다.

일부 구체예에서, 항-NGF 항체는 NGF에 결합할 수 있고 생체 내에서 그것의 TrkA 또는 p75 수용체에 대한 NGF의 결합을 효과적으로 억제하거나 NGF가 그것의 TrkA 또는 p75 수용체를 활성화하는 것을 효과적으로 억제할 수 있다. 일부 구체예에서, NGF에 대한 항체의 결합 친화성은 약 0.01 내지 약 1.00 nM, 또는 약 0.05 내지 약 0.25 nM이다. 다른 구체예에서, 결합 친화성은 약 1 pM, 약 2 pM, 약 5 pM, 약 10 pM, 약 15 pM, 약 20 pM, 약 50 pM, 약 100 pM, 또는 그 이상이다. 한 구체예에서, 결합 친화성은 약 2 pM 내지 22 pM이다. 일부 구체예에서, 항체는 다음 중 하나 이상의 어떤 것으로부터 선택되는 항체로서 동일한 NGF 에피토프 6에 본질적으로 결합한다: MAb 911, MAb 912 및 MAb 938. 문헌[Hongo,et al., Hybridoma 19: 215-227 (2000)]을 참조하시오.

또한 항체는 예를 들어 다음 중 하나 이상으로부터 선택되는 항체 단편과 같은 항체 단편일 수도 있다: Fab, Fab', F(ab')2, Fv 단편, 디아바디, 단일 사슬 항체 분자 및 항체 단편으로부터 형성된 복합 특이적 항체, 및 단일 사슬 Fv (scFv) 분자. 또한 항체는 키메라일 수도 있으며, 인간화 또는 인간일 수도 있다. 또한 항체는 이특이적(bispecific)일 수도 있다.

본 발명에 있어서 유용한 전형적인 NSAID는 이에 한정되지는 않지만, (1)예를 들어 이부프로펜, 나프록센, 나프로신, 디클로페낙, 및 케토프로펜과 같은 프로피온산 유도체; (2) 예를 들어, 톨메틴 및 실린닥과 같은 아세트산 유도체; (3) 예를 들어 메페남산 및 메클로페남산과 같은 페남산 유도체; (4) 예를 들어, 디플루니살 및 플루페니살과 같은 비페닐카르복시산 유도체; 및 (5) 예를 들어 피록심, 수독시캄, 및 이속시캄과 같은 옥시캄을 포함한다. NSAID의 다른 분류는 시클로옥시게나제 2를 선택적으로 억제하는 것으로 설명됐다. Cox-2 억제제는 예를 들어 미국 특허 제 5,616,601; 5,604,260; 5,593,994; 5,550,142; 5,536,752; 5,521,213; 5,475, 995; 5,639,780; 5,604,253; 5,552,422; 5,510,368; 5,436,265; 5,409,944; 및 5,130,311호에서 설명됐고, 그들 모두가 본원에서 참고로서 인용되어 있다. 특정한 전형적인 COX-2 억제제는 셀레콕시브(SC-58635), 로페콕시브, DUP-697, 플로술리드(CGP-28238), 멜록시캄, 6-메톡시-2 나프틸아세트산(6-MNA), MK-966, 나부메톤(6-MNA에 대한 프로드러그), 니메술리드, NS-398, SC-5766, SC-58215, T-614; 또는 그들의 조합을 포함한다. 일부 구체예에서, 아스피린 및/또는 아세토미노펜은 NGF 길항제(예를 들어 항-NGF 항체와 같은 것)와 함께 사용된다.

본 발명의 방법 및 조성물은 급성 및 만성 통증, 염증성 구성성분을 갖는 임의의 통증, 및 NSAID가 통상적으로 처방되는 임의의 통증을 포함하는 임의의 병인의 통증의 치료를 위해 유용하다. 통증의 예는 외과적 수술 후 통증, 수술 후 통증(치과 통증 포함), 편두통, 두통 및 삼차 신경통, 화상과 관련한 통증, 상처 또는 신장 결석, 외상과 관련한 통증(두부의 외과적 손상 포함), 신경병증 통증, 예를 들어 류마티스 관절염, 골관절염, 내장 통증, 결장염, 췌장염, 위염, 강직 척추염, 음성혈청(비-류마티스성) 관절병증, 비-관절 류마티스 및 관절주위 질환, 및 암에 관련한 통증("돌발성 통증" 및 말기 암과 관련한 통증을 포함), 말초 신경병증, 대상포진 후 신경통, 및 낫 적혈구 분리와 관련한 통증과 같은 근육-골격계통 질환에 관련한 통증을 포함한다. 염증성 구성성분과 관련한 통증의 예(상기 설명된 것의 일부에 더하여)는 류마티스 통증, 점막염과 관련한 통증, 및 월경통을 포함한다. 일부 구체예에서, 본 발명의 방법 및 조성물은 외과적 수술 후 통증 및/또는 암 통증의 치료 또는 예방을 위해 이용된다. 다른 구체예에서, 통증은 예를 들어 신경병증적 통증과 같이 NSAID가 통상적으로 처방되지 않는 통증 증상이다. 다른 구체예에서, 본원에서 설명되는 방법 및 조성물은 화상과 관련한 통증의 치료 및/또는 예방에 관하여 사용된다. 다른 구체예에서, 본원에서 설명된 방법 및 조성물은 류마티스 관절염과 관련한 통증의 치료 및/또는 예방을 위해 사용된다. 다른 구체예에서, 본원에서 설명되는 방법 및 조성물은 골관절염과 관련한 통증의 치료 및/또는 예방에 관하여 사용된다.

다른 양태에서, 본 발명은 본원에서 설명되는 임의의 방법에 있어서 사용상 적합한 NGF 길항제(예를 들어 항-NGF 항체와 같은 것) 및 NSAID를 포함하는 통증을 치료하기 위한 조성물 및 키트를 제공한다.

일반적 기술

볼 발명의 실행은 달리 나타내지 않는다면, 분자 생물학(재조합 기술 포함), 미생물학, 세포 생물학, 생화학 및 면역학의 전통적인 기술을 사용할 것이며, 이것은 당업계 기술 내에 존재한다. 이러한 기술은 예를 들어 [Molecular Cloning: A Laboratory Manual, second edition (Sambrook etal., 1989) Cold Spring Harbor Press ; Oligonucleotide Synthesis (M. J. Gait, ed., 1984); Methods in Molecular Biology, Humana Press ; Cell Biology : A LaboratoryNotebook (J. E. Cellis, ed., 1998) Academic Press ; Animal Cell Culture %. I. Freshney, ed., 1987); Introduction to Cell and Tissue Culture (J. P. Mather and P. E. Roberts, 1998) Plenum Press; Cell and Tissue Culture: Laboratory Procedures (A. Doyle, J. B. Griffiths, and D. G. Newell, eds., 1993-8) J. Wiley and Sons; Methods in Enzymology (Academic Press, Inc.) ; Handbook of Experimental Immunology (D. M. Weir and C. C. Blackwell, eds.) ; Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (J. M. Miller and M. P. Calos, eds., 1987); Current Protocols in Molecular Biology (F. M. Ausubel et al., eds., 1987); PCR : The Polymerase Chain Reaction, (Mullis et al., eds. , 1994); Current Protocols in Immunology (J. E. Coligan et al., eds. , 1991) ; Short Protocols in Molecular Biology (Wiley and Sons, 1999); Immunobiology(C.A. Janeway and P. Travers, 1997); Antibodies(P. Finch, 1997); Antibodies: a practical approach(D. Catty., ed., IRL Press, 1988-1989); Monoclonal antibodies: a practical approach(P. Shepherd and C.Dean, eds., Oxford University Press, 2000); Using antibodies: a laboratory manual(E. Harlow and D. Lane(Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1999); The Antibodies(M. Zanetti and J.D. Capra, eds., Harwood Academic Publishers, 1995)]와 같은 문헌에 충분히 설명되어 있다.

정의

"항체"(호환적으로 복수 형태로 사용됨)는 예를 들어, 탄수화물, 폴리뉴클레오티드, 지질, 폴리펩티드 등과 같은 표적에, 면역글로불린 분자의 가변 영역에 위치한 적어도 하나의 항원 인식 자리를 통하여 특이적 결합을 할 수 있는 면역글루불린 분자이다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 상기 용어는 손상되지 않은 폴리클론 또는 단일클론 항체뿐만 아니라, 그들의 단편(예를 들어, Fab, Fab', F(ab')2, Fv), 단일 사슬(ScFv), 그들의 돌연변이, 항체 부분을 포함하는 융합 단백질, 인간화 항체, 키메라 항체, 디아바디 선형 항체, 단일 사슬 항체, 복합 특이적 항체(예를 들어, 이특이적 항체) 및 필요한 특이성의 항원 인식 자리를 포함하는 면역글로불린 분자의 어떠한 다른 변형된 배열의 면역글로불린 분자를 포함한다. 항체는 예를 들어 IgG, IgA, 또는 IgM(또는 그들의 하위 클래스)와 같은 임의의 클래스의 항체를 포함하여, 항체는 어떤 특정한 클래스일 필요가 없다. 그것의 중쇄의 불변 도메인의 항체 아미노산 서열에 따라서, 면역글로불린은 다른 클래스로 할당될 수 있다. 면역글로불린의 5가지 주요한 클래스 IgA, IgD, IgE, IgG, 및 IgM가 있으며, 이들 중 몇몇은 예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2와 같은 하위 클래스(이소타입)로 더 나눠질 수도 있다. 면역글로불린의 다른 클래스에 대응하는 중쇄 불변 도메인은 각각 α,δ,ε,γ,μ로 칭하여 진다. 면역글로불린의 다른 클래스의 하위단위 구조 및 3차원적 배열은 주지되어 있다.

"단일클론 항체"는 단일클론 항체가 항원의 선택적 결합에 관련된 아미노산(자연 발생 및 비-자연발생)으로 구성되는 동종 항체 집단을 나타낸다. 단일클론 항체는 고도로 특이적이며, 단일 항원 자리에 표적된다. 용어 "단일클론 항체"는 손상되지 않은 단일클론 항체 및 온-길이 단일클론 항체뿐만 아니라, 그들의 단편(예를 들어, Fab, Fab', F(ab')2, Fv), 단일 사슬(ScFv), 그들의 돌연변이, 항체 부분을 포함하는 융합 단백질, 인간화 된 단일클론 항체, 키메라 단일클론 항체, 및 항원에 대한 필요한 특이성 및 능력의 항원 인식 자리를 포함하는 어떤 다른 변형된 배열의 면역글로불린 분자를 포함한다. 그것은 만들어지는 항체의 공급원이나 방식에 관하여 제한되도록 의도되지 않는다(예를 들어, 하이브리도마, 파지 선택, 재조합 발현, 트랜스제닉 동물 등).

"인간화 된" 항체는 비-인간 종으로부터의 면역글로불린으로부터 실질적으로 유도된 항원 결합 자리를 갖는 분자 및 인간 면역글로불린의 구조 및/또는 서열에 기초한 상기 분자의 잔여 면역글로불린 구조를 나타낸다. 항원 결합 자리는 불변 도메인 상에 융합된 완전 가변 도메인 또는 가변 도메인 내 적당한 외곽구조 영역 상에 이식된 상보성 결정 영역(CDR)을 포함할 수도 있다. 항원 결합 자리는 야생형이거나 하나 이상의 아미노산 치환에 의해 변형, 예를 들어 더 밀접하게 인간 면역글로불린과 유사하게 변형될 수도 있다. 인간화 된 항체의 일부 형태는 모든 CDR 서열을 보존한다(예를 들어, 마우스 항체로부터의 모든 6개의 CDR을 함유하는 인간화 마우스 항체). 다른 형태의 인간화 항체는 하나 이상의 CDR(1, 2, 3, 4, 5, 6)을 가지는데, 이는 본래 항체와 관련하여 변경되어 있다. 일부 예에 있어서, 외곽구조 영역(FR) 잔기 또는 인간 면역글로불린의 다른 잔기가 대응하는 비-인간 잔기에 의해 치환된다. 더욱이, 인간화 항체는 수여자 항체 또는 공여자 항체에서 발견되지 않는 잔기를 포함할 수도 있다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "신경 성장 인자" 및 "NGF"는 신경성장인자 및 그들의 변이체(예를 들어, 스플라이스(splice) 변이체 및 단백질 가공 변이체를 포함)를 나타내는데, 이것은 NGF 활성의 적어도 일부를 보유한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, NGF는 인간, 비-인간 영장류, 개, 고양이, 말, 또는 소를 포함하는 모든 포유동물 종의 고유의 서열 NGF를 포함한다.

"NGF 수용체"는 NGF에 의해 결합되거나 활성화 된 폴리펩티드를 나타낸다. NGF 수용체는 이에 한정되지는 않으나, 인간, 개, 고양이, 말, 영장류, 또는 소를 포함하는 어떤 포유동물 종의 TrkA 수용체 및 p75 수용체를 포함한다.

"NGF 길항제"는 예를 들어 수용체 결합 및/또는 NGF에 대한 세포 반응의 유도와 같은, NGF 신호화에 의해 매개되는 다운스트림 경로를 포함하여, NGF 생물학적 활성을 방해, 억압 또는 감소(현저하게 포함)시키는 어떤 분자를 말한다. 용어 "길항제"는 생물학적 작용 등의 특이적 메카니즘을 포함하지 않으며, 직접 또는 간접인지의 여부, NGF, 그것의 수용체, 또는 다른 메카니즘을 통해서 상호작용 하는지간에 모든 가능한 NGF와의 약리학적, 생리학적, 및 생화학적 상호작용을 명백히 포함하고 아우르는 것으로 여겨지며, 그것의 결과는 각종 상이한, 그리고 화학적으로 다른 조성물에 의해 달성될 수 있다. 전형적인 NGF 길항제는 이에 한정되지는 않지만, 항-NGF 항체, NGF에 대하여 표적된 안티-센스 분자(NGF를 코딩하는 핵산 에 대하여 표적된 안티-센스 분자를 포함), NGF 억제성 화합물, NGF 구조 유사체, NGF에 결합하는 TrkA 수용체의 우성-음성 돌연변이, TrkA 이뮤노아데신, 항-TrkA 항체, 항-p75 항체, TrkA 및/또는 p75 수용체 중 하나 또는 둘 모두에 대하여 표적된 안티-센스 분자(TrkA 또는 p75를 코딩하는 핵산 분자에 대하여 표적된 안티-센스 분자를 포함), 및 키나제 억제제를 포함한다. 본 발명의 목적을 위해, 용어 "길항제"는 모든 앞서 확인된 용어, 제목, 및 기능적 상태 그리고 특징을 포함하며, 이로써 NGF 자체, NGF 생물학적 활성(통증의 어떤 양태를 중재하는 그것의 능력에 제한되지 않는 것을 포함), 또는 생물학적 활성의 결과가 어떤 의미있는 정도로 실질적으로 무효화, 감소, 또는 중화된다. 일부 구체예에서, NGF 길항제는 NGF(예를 들어, 항체)에 (물리적으로 상호작용 하여)결합하고, NGF 수용체(trkA 수용체 또는 p75 수용체와 같은 것)에 결합하며, 다운스트림 NGF 수용체 신호화를 감소시키고(방해 및/또는 차단), 및/또는 NGF 합성, 생성 또는 방출을 억제(감소)시킨다. 일부 구체예에서, NGF 길항제는 NGF(예를 들어, 항체)에 (물리적으로 상호작용하여)결합하고, NGF 수용체(TrkA 수용체 또는 p75 수용체와 같은 것)에 결합하며, 및/또는 다운스트림 NGF 수용체 신호화를 감소(방해 및/또는 차단)시킨다. 다른 구체예에서, NGF 길항제는 NGF에 결합하고 TrkA 수용체 이량체화 및/또는 TrkA 자가인산화를 예방한다. 다른 구체예에서, NGF 길항제는 NGF 합성 및/또는 생성(방출)을 억제 또는 감소시킨다. NGF 길항제의 유형의 예시가 본원에 제공되어 있다.

본원에서 사용되는 바와 같이, "항-NGF 항체"는 NGF에 결합하고 NGF 생물학적 활성 및/또는 NGF 신호화에 의해 매개되는 다운스트림 경로(들)를 억제할 수 있는 항체를 나타낸다.

"TrkA 이뮤노아데신"은 예를 들어, TrkA 수용체 및 면역글로불린 서열의 세포외 도메인으로서, TrkA 수용체의 결합 특이성을 보유하는 TrkA 수용체의 단편을 포함하는 가용성 키메라 분자를 나타낸다.

NGF의 "생물학적 활성"은 일반적으로 NGF 수용체에 결합하고 및/또는 NGF 수용체 신호화 경로를 활성화하는 능력을 나타낸다. 한계를 두지 않고, 생물학적 활성은 다음 중 하나 이상의 어떤 것을 포함한다: NGF 수용체(예를 들어 p75 및/또는 TrkA)에 결합하는 능력; TrkA 수용체 이량체화 및/또는 자가인산화를 촉진하는 능력; NGF 수용체 신호화 경로를 활성화하는 능력; 신경세포 형태학, 시냅스 형성(synaptogenesis), 시냅스 작용, 신경송달물질 및/또는 신경펩티드 방출의 변화 및 재생 후 손상을 포함하여(뉴런의 경우에 있어서, 말초 및 중추 뉴런 포함), 세포 생리학에 있어서 세포 분화, 증식, 생존, 성장 및 기타 변화를 촉진하는 능력; 및 통증을 중재하는 능력.

용어 "에피토프"는 단백질 항원과 같은 항원 상에 (단일클론 또는 폴리클론) 항체에 대한 결합 자리를 나타내는데 사용된다.

본원에서 사용되는 바와 같이, "치료"는 이롭거나 원하는 임상적 결과를 얻기 위한 접근법이다. 본 발명의 목적을 위해, 이롭거나 원하는 임상적 결과는 이에 한정되지는 않으나, 다음 중 하나 이상을 포함한다: 통증의 어떤 양태의 개선 또는 완화로서, 급성, 만성, 염증성, 신경병증성, 또는 외과 수술후 통증을 포함한다. 본 발명의 목적을 위해, 이롭거나 원하는 임상적 결과는 이에 한정되지는 않지만, 다음 중 하나 이상을 포함한다: 심각도의 감소를 포함하여, 통증의 어떤 양태(통증의 지속기간의 단축, 및/또는 통증 민감성 또는 감각의 감소)를 포함하는 통증과 관련된 하나 이상의 증상의 완화.

통증의 "발생률을 감소시키는 것"은 심각도(이러한 상태에 대하여 일반적으로 사용되는 다른 약물 및/또는 치료법에 대한 필요성 및/또는 양(예를 들어, 이에 대한 노출)을 감소시키는 것을 포함할 수 있음), 지속기간, 및/또는 빈도(예를 들어, 개체내 통증에 관한 시간을 지연 또는 증가시키는 것을 포함)를 감소시키는 어떤 것을 의미한다. 당업계 숙련자가 이해하는 바와 같이, 개체는 치료에 대한 그들의 반응에 관하여 다양해질 수 있으며, 이와 같이, 예를 들어, "개체 내 통증의 발생률을 감소시키는 방법"은 특정 개체에 있어서 이러한 투여가 특정 개체에 있어서 발생률의 감소를 야기할 수도 있는 합리적인 예상을 기초로 하여, 본원에서 설명되는 바와 같이 NSAID와 함께 본원에서 설명된 NGF 길항체를 투여하는 것을 나타낸다.

통증 또는 통증의 하나 이상의 증상을 "개선시키는 것"은 NSAID와 함께 NGF 길항제를 투여하지 않는 것에 비하여 통증의 하나 이상의 증상에 대한 감소 또는 향상을 의미한다. "개선시키는 것"은 또한 증상의 지속기간의 감축 또는 감소를 포함한다.

통증 또는 통증의 하나 이상의 증상을 "완화시키는 것"은 본 발명에 따라서 NSAID와 함께 NGF 길항제로 처리된 개체 또는 개체의 집단에 있어서 통증의 하나 이상의 바람직하지 않은 임상 소견의 정도를 감소시키는 것을 의미한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 통증의 발전을 "지연시키는 것"은 통증의 진행을 연기하고, 저지시키고, 속도를 늦추고, 지체시키고, 안정화시키며 및/또는 뒤로 미루는 것을 의미한다. 이러한 지연은 병력 및/또는 치료되는 개체에 따라서, 시간의 길이를 변화시킬 수 있다. 당업계 숙련자에게 명백한 바와 같이, 충분하거나 현저한 지연은 개체가 통증을 발전시키지 않는다는 면에서, 결과적으로 예방을 포함할 수 있다. 증상의 발전을 "지연시키는" 방법은 상기 방법이 사용되지 않는 경우와 비교할 때, 주어진 시간 틀 내에서 증상을 발전시키는 가능성을 감소시키고 및/또는 주어진 시간 틀 내에서 증상의 정도를 감소시키는 방법이다. 이러한 비교는 전형적으로 통계적으로 상당한 수의 피험체를 이용하는 임상적 연구를 기초로 한다.

통증의 "발전" 또는 "진행"은 질병의 초기 징후 및/또는 후속적 진행을 의미한다. 통증의 발전은 당업계 주지된 바와 같이 표준 임상적 기술을 이용하여 검출되고 평가될 수 있다. 그러나, 또한 발전은 검출가능하지 않을 수도 있는 진행을 나타낸다. 본 발명의 목적을 위해, 발전 또는 진행은 증상의 생물학적 경로를 나타낸다. "발전"은 발병, 재발, 및 개시를 포함한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 통증의 "개시" 또는 "발병"은 초기의 개시 및/또는 재발을 의미한다.

"유효량"은 통증 감각의 경감 또는 감소를 포함하는 이롭거나 원하던 임상적 결과를 달성하기에 충분한 양이다. 본 발명의 목적을 위해, 유효량의 NGF 길항제(예를 들어, 항-NGF 항체) 및 NSAID는 급성, 만성, 염증성, 신경병증성, 또는 외과적 수술 후 통증을 포함하는 어떤 종류의 통증(통각 및 통증의 감각을 포함)을 치료, 개선, 강도의 감소 또는 예방하기에 충분한 양을 포함한다. 일부 구체예에서, 유효량의 NSAID 및 NGF 길항제는 건강한 피험체에서 관찰되는 것에 필적하는 수준으로 외부 자극에 대한 민감성 문턱값을 조절할 수 있는 NGF 길항제 및 NSAID의 양이다. 다른 구체예에서, 이 수준은 건강한 피험체에서 관찰되는 것에 필적할 수 없을 수 있으나, 조합 치료를 받지 않는 것에 비교하여 감소된다. 또한 유효량의 NGF 길항제는 본원에서 설명되는 바와 같이, 통증의 NSAID 치료(치료적 결과)를 증가시키거나, 본원에서 설명되는 바와 같이, 통증의 치료 또는 예방에 필수적인 NSAID의 투여량을 감소시키기에 충분한 NGF 길항제의 양을 포함한다. 당업계에서 이해되는 바와 같이, NSAID와 결합된 유효량의 NGF 길항제는 특히, 통증의 유형(상기 유형(및/또는 투여량)과 같은 다른 인자들뿐만 아니라 환자의 병력 또는 사용되는 NGF 길항제 및/또는 NSAID)에 따라서 변화할 수도 있다. 본 발명의 문맥에 있어서, 유효량은 또한 상승작용이 이루어지는 NGF 길항제 및 NSAID 길항제의 양일 수도 있다. 본 발명의 문맥에 있어서 유효량의 길항제는 일반적으로 통증에 대하여 NSAID의 치료적 효과의 향상을 가져오고 (번갈아서, 투요량이 감소되고 및/또는 일부 다른 이로운 결과가 관찰될 수 있음) 및/또는 NSAID만의 단독 치료법에 비교하여 이로운 결과를 가져오기에 충분한 양을 의미한다. "유효량"의 NGF 길항제는 또한 NGF 길항제 또는 NSAID 단독으로 투여하기에 비하여 상승적 결과를 가져올 수 있다.

"개체"는 척추동물, 바람직하게는 포유동물, 더 바람직하게는 인간이다. 포유동물은 이에 한정되지는 않지만, 농장 동물, 스포츠 동물, 애완동물, 영장류, 말, 소, 개, 고양이, 마우스 및 랫트를 포함한다.

용어 "NSAID"는 비-스테로이드계 항-염증성 화합물을 나타낸다. NSAID는 시클로옥시게나제를 억제하는 그들의 능력에 의하여 카테고리화 된다. 시클로옥시게나제 1 및 시클로옥시게나제 2는 두가지의 주요한 이소형태의 시클로옥시게나제이고 대부분의 표준 NSAID는 2개의 이소 형태의 억제제와 혼합된다. 대부분의 표준 NSAID는 다음 5가지의 구조적 카테고리 중 하나에 해당한다:(1) 예를 들어, 이부프로펜, 나프록센, 나프로신, 디클로페낙, 및 케토프로펜과 같은 프로피온산 유도체; (2) 예를 들어, 톨메틴 및 슬린닥과 같은 아세트산 유도체; (3) 예를 들어, 메페남산 및 메클로페남산과 같은 페남산 유도체; (4) 예를 들어, 디플루니살 및 플루페니살과 같은 비페닐카르복시산 유도체; 및 (5) 예를 들어, 피록심, 수독시캄, 및 이소시캄과 같은 옥시캄.

NSAID의 다른 클래스는 시클로옥시게나제 2를 선택적으로 억제하는 것으로 설명됐다. Cox-2 억제제는 예를 들어, 미국 특허 제 5,616,601; 5,604,260; 5,593,994; 5,550,142; 5,536,752; 5,521,213; 5,475,995; 5,639,780; 5,604,253; 5,552,422; 5,510,368; 5,436,265; 5,409,944 ; 및 5,130,311호에서 설명됐으며, 그들 모두가 본원에 참고로서 인용되어 있다. 특정한 전형적인 COX-2 억제제는 셀레콕시브(SC-58635), DUP-697, 플로술리드(CGP-28238), 멜록시캄, 6-메톡시-2 나프틸아세트산(6-MNA), 로페콕시브, MK-966, 나부메톤(6-MNA에 대한 프로드러그), 니메술리드, NS-398, SC-5766, SC-58215, T-614; 또는 그들의 조합을 포함한다.

일부 구체예에서, 아스피린 및/또는 아세토미노펜은 NGF 길항제(예를 들어 항-NGF 항체와 같은 것)와 함께 얻어 진다. 아스피린은 다른 유형의 비-스테로이드계 항-염증성 화합물이다.

본원에서 사용되는 바와 같이, "결합된" 투여는 동시 투여 및/또는 다른 시간에서의 투여를 포함한다. 결합된 투여는 또한 공동-제형으로서 투여(즉, NGF 길항제 및 NSAID가 동일한 조성물 내에 존재함) 또는 분리된 조성물로서 투여를 포함한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 결합된 투여는 NSAID 및 NGF 길항제가 개체에 투여되는 어떤 상황을 포함하는 것을 의미하며, 이것은 동시에 및/또는 따로따로 발생할 수 있다. 본원에서 더 논의되는 바와 같이, NGF 길항제 및 NSAID는 상이한 도싱 빈도 또는 간격으로 투여될 수 있음이 이해된다. 예를 들어, 항-NGF 항체는 주 1회 투여될 수 있는 반면, NSAID는 더 빈번하게 투여될 수 있다. NGF 길항제 및 NSAID는 동일한 루트의 투여 또는 상이한 루트의 투여 이용하여 투여될 수 있다.

"외과적 수술 후 통증"(호환적으로 "절개술 후" 또는 "외상성 통증 후"로 칭함)은 예를 들어, 절단, 구멍 뚫림(puncture), 절개, 째짐, 또는 개체의 조직 내 상처(침투적이거나 또는 비-침투적인, 모든 외과적 과정으로부터 기인한 것을 포함)와 같은 외부적 상처로부터 기인 또는 유발된 통증을 나타낸다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 외과적 수술 후 통증은 외부의 물리적 상처 없이 발생하는(기인 또는 기원하는) 통증을 포함하지 않는다. 일부 구체예에서, 외과적 수술 후 통증은 내부적 또는 외부적(말초적 포함) 통증이며, 상처, 절단, 외상, 째짐 또는 절개는 우연적으로(외과적 상처로서) 또는 고의로(외과수술의 절개로서) 발생할 수도 있다. 본원에서 사용되는 바와 같이, "통증"은 통각 및 통증의 감각을 포함하고, 통증은 통증 점수 및 당업계 주지된 다른 방법을 이용하여, 객관적 및 주관적으로 평가될 수 있다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 외과적 수술 후 통증은 무해자극 통증(즉, 정상적으로 무해한 자극에 대하여 증가된 반응(즉, 유해한 지각)) 및 통각과민(즉, 보통 유해하거나 불쾌한 자극에 대하여 증가된 반응)을 포함하며, 이것은 차례로, 천연에서 열적 또는 기계적(촉각)일 수 있다. 일부 구체예에서, 통증은 열적 민감성, 기계적 민감성 및/또는 잔여 통증에 의해 특성화 된다. 일부 구체예에서, 외과적 수술 후 통증은 기계적으로-유도된 통증 또는 잔여 통증을 포함한다. 다른 구체예에서, 외과적 수술 후 통증은 잔여 통증을 포함한다.

통증의 NSAID 치료법은 NSAID 치료법의 양태가 향상되는 경우(NGF 길항제의 투여 없이 NSAID를 투여하는 것에 비교하여) "증가"된다. 예를 들어, 통증의 NSAID의 효험은 NGF 길항제의 부재하에서 NSAID의 효험에 비하여 NGF 길항제의 존재 하에서 증가될 수도 있다. 다른 실시예로서, NSAID를 이용한 통증의 치료 또는 예방은 더 나은 통증 경감을 허용하는 경우(예를 들어, 통증의 유효한 치료 또는 예방을 허용하지 않는 NSAID의 투여량이 사용되는 경우) NSAID와 결합한 NGF 길항제의 사용에 의해 "증가"될 수도 있다.

발명의 방법

본원에서 사용되는 모든 방법에 관하여, NGF 길항제 및 NSAID에 관한 기준은 또한 하나 이상의 이들 약제를 포함하는 조성물을 포함한다. 본 발명은 모든 포유동물, 인간 및 비-인간을 포함하여 개체 내 통증을 치료하기에 유용하다.

한 양태에서, 본 발명은 유효량의 NSAID와 함께 유효량의 NGF 길항제(예를 들어 항-NGF 항체)를 투여하는 것을 포함하는 개체 내 통증을 치료하는 방법을 제공한다. 일부 구체예에서, 충분한 NGF 길항제가 필요한 NSAID의 정상 투여량의 감소를 허용하기 위해 투여되어 적어도 약 5%, 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 또는 적어도 약 90%, 또는 그 이상까지 동일한 정도의 통증 경감을 가져올 것이다.

다른 양태에서, 본 발명은 유효량의 NSAID와 함께 유효량의 NGF 길항제를 투여하기를 포함하는 개체 내 통증의 NSAID 치료법을 향상시키는 방법을 제공한다.

일부 구체예에서, 통증은 다음 중 하나 이상의 어떤 것을 포함한다: 급성 및/또는 만성 통증, 염증성 구성성분을 갖는 어떤 통증, 수술 후 통증(치과적 통증 포함), 편두통, 두통 및 삼차신경통, 화상과 관련한 통증, 상처 또는 신장 결석, 외상과 관련한 통증(두부의 외과적 상처 포함), 신경병증 통증, 낫적혈구 분리와 관련한 통증, 월경통 또는 장 이상과 관련한 통증, 및 암과 관련한 통증("돌발성 통증" 및 말기 암과 관련한 통증 포함). 다른 구체예에서, 통증은 NSAID(예를 들어, 이부프로펜)를 이용하여 통상 치료되는 어떤 통증이다. 다른 구체예에서, 통증은 화상과 관련한 통증이다. 다른 구체예에서, 통증은 류마티스 관절염과 관련한 통증이다. 다른 구체예에서, 통증은 골관절염과 관련한 통증이다.

다른 양태에서, 본 발명은 통증의 발전 또는 진행을 예방, 완화 및/ 또는 예방하는 방법을 제공한다. 따라서, 일부 구체예에서, 항-NGF 항체와 같은 NGF 길항제, 및/또는 NSAID는 고통스런 사건(예를 들어 외과 수술) 전에 투여된다. 예를 들어, NGF 길항제는 예를 들어 1일, 몇일, 또는 1주, 2주, 3주에 한번이라도, 30분, 1시간, 5시간, 10 시간, 15 시간, 24 시간 또는 그 이상이라도 투여된 후 활성을 결과로 가져오거나, 또는 외부적 상처 또는 수술과 같은 통증을 야기하는 위험이 올 수 있다.

통증의 치료 또는 예방은 당업계 주지되어 있는 방법을 이용하여 평가된다. 평가는 예를 들어, 자극에 대한 반응과 같은 행동의 관찰, 안색 등과 같은 객관적인 측정을 기초로 하여 수행될 수도 있다. 평가는 또한 다양한 통증 규모를 이용하여 통증의 환자 특성과 같은 주관적인 측정치를 기초로 할 수도 있다. 예를 들어, 문헌[Katz et al, Surg Clin North Am. (1999) 79 (2): 231-52; Caraceni et al. J Pain Symptom Manage (2002) 23 (3): 239-55]을 참조하시오.

류마티스 관절염 통증의 진단 또는 평가는 당업계에 상당히 확립되어 있다. 평가는 예를 들어 각종 통증 규모를 이용하여 통증의 환자의 특성과 같은 당업계 공지된 측정치를 기초로 하여 수행될 수도 있다. 예를 들어, 문헌 [Katz et al, Surg Clin North Am. (1999) 79 (2): 231-52; Caraceni et al.JPain Symptom Manage (2002) 23 (3): 239-55]를 참조하시오. 또한 예를 들어 어메리칸 컬리지 류마티즘학(ACR) (Felson, et al.,Arthritis and Rheumatism (1993) 36 (6): 729-740), 건강 평가 질문지(HAQ) (Fries, et al.,(1982) J. Rheumatol. 9: 789-793), 더 파울러스 스케일(Paulus, et al., Arthritis and Rheumatism (1990) 33: 477-484), 및 관절염 영향 평가 스케일(AIMS)(Meenam, et al., Arthritisand Rheumatology (1982) 25:1048-1053)과 같은 질병 상태를 측정하는 통상적으로 사용되는 스케일이 존재한다.

관절염 통증의 진단 또는 평가가 당업계에 잘 확립되어 있다. 평가는 예를 들어 각종 통증 스케일을 이용하여 통증의 환자 특성과 같은 당업계 공지된 측정을 기초로 하여 수행될 수 있다. 예를 들어, 문헌[Katz et al, Surg Clin NorthAm. (1999) 79 (2): 231-52; Caraceni et al. J Pain Symptom Manage (2002) 23 (3): 239-55]을 참조하시오. 예를 들어, WOMAC 보행 통증 스케일(통증, 뻣뻣함, 및 물리적 작용을 포함) 및 100 mm 비쥬얼 아날로그 스케일(VAS)이 통증을 평가하고 치료에 대한 반응을 어림잡는데 이용될 수도 있다.

NGF 길항제(예를 들어 항-NGF 항체) 및 NSAID가 단일 또는 분리 조성물(들)로서 함께 투여되는 경우, 신경 성장 인자 길항제 및 NSAID는 원하는 효과의 징후와 일관된 비율로 나타난다는 것이 이해된다. 일부 구체예에서, NSAID에 대한 신경 성장 인자 길항제의 중량비는 약 1 내지 1일 수도 있다. 일부 구체예에서, 이러한 비율은 약 0.001 내지 약 1 및 약 1000 내지 약 1, 약 0.01 내지 약 1 및 약 100 내지 약 1, 또는 약 0.1 내지 약 1 및 약 10 내지 약 1일 수 있다. 기타 비율이 고려된다.

통증의 치료 또는 예방의 사용에 있어서 필요한 소정량의 신경 성장 인자 길항제 및 NSAID는 선택되는 특정 화합물 또는 조성물과 뿐 아니라 투여의 루트, 치료되는 천연의 상태, 및 환자의 연령 및 상태에 따라 변화할 수 있으며, 궁극적으로 주치의의 자유재량일 것이다.

NGF 길항제

본 발명의 방법은 NGF 길항제를 사용하는데, 이것은 예를 들어 수용체 결합 및/또는 NGF에 대한 세포 반응의 유도와 같은 NGF 신호화에 의해 매개되는 다운스트림 경로를 포함하는 (현저하게 포함)NGF 생물학적 활성을 차단, 억압 또는 감소시키는 어떤 분자를 나타낸다. 용어 "길항제"는 무엇이든지 간에 생물학적 작용의 특이적 메카니즘을 포함하지 않으며, NGF와의 모든 가능한 약리학적, 생리학적, 그리고 생화학적 작용을 명백하게 포함하고 아우르는 것으로 여겨지며, 그것의 결과는 각종 상이한, 그리고 화학적으로 다른, 조성물에 의해 달성될 수 있다. 전형적인 NGF 길항제는 이에 한정되지는 않지만, 항-NGF 항체, 폴리펩티드(예를 들어, NGF에 결합하기에 충분한 CDR 영역을 포함하는 결합 도메인과 같은 항-NGF 항체로부터 유도된 NGF 결합 도메인을 포함하는 폴리펩티드를 포함), NGF에 대하여 표적된 안티-센스 분자(핵산 코팅 NGF에 대하여 표적된 안티-센스 분자를 포함), TrkA 및/또는 p75 수용체 중 하나 또는 둘 모두에 대하여 표적된 안티-센스 분자(핵산 분자 코딩 trkA 또는 p75에 대하여 표적된 안티-센스 분자를 포함), NGF 억제성 화합물, NGF 구조적 유사체, NGF에 결합하는 TrkA 수용체의 우성-음성 돌연변이, TrkA 이뮤노아데신, 항-TrkA 항체, 항-p75 항체, 및 키나제 억제제를 포함한다. 본 발명의 목적을 위해, 용어 "길항제"는 모든 앞서서 확인된 용어, 제목 및 기능적 상태 그리고 NGF 그 자체, NGF 생물학적 활성(이에 한정되지는 않지만 통증의 어떤 양태를 중재하는 그것의 능력을 포함), 또는 생물학적 활성의 결과가 실질적으로 어떤 의미있는 정도로 무효화, 감소, 또는 중화됨에 의한 특징을 포함한다는 것이 명백하게 이해된다. 일부 구체예에서, NGF 항체(예를 들어, 항체)는 (물리적으로 상호작용하여) NGF에 결합하고, NGF 수용체(예를 들어, TrkA 및/또는 p75 수용체와 같은 것)에 결합하며, 및/또는 다운스트림 NGF 수용체 신호화를 감소(방해 및/또는 차단)시킨다. 따라서, 일부 구체예에서, NGF 길항제는 (물리적으로 상호작용하여) NGF에 결합한다. 다른 구체예에서, NGF 길항제는 NGF 수용체(예를 들어 trkA 수용체 또는 p75와 같은 것)에 결합한다. 다른 구체예에서, NGF 길항제는 다운스트림 NGF 수용체 신호화(예를 들어, 키나제 신호화의 억제제)를 감소(방해 및/차단)시킨다. 다른 구체예에서, NGF 길항제는 NGF 합성 및/또는 방출을 억제(감소)시킨다. 다른 구체예에서, NGF 길항제는 TrkA 이뮤노아데신이다. 다른 구체예에서, NGF 길항제는 항-NGF 항체 이외의 것이다. 일부 구체예에서, NGF 길항제는 NGF(예를 들어 hNGF)에 결합하며 NT-3, NT4/5, 및/또는 BDNF와 같은 연관된 뉴로트로핀에 현저하게 결합하지 않는다. 일부 구체예에서, NGF 길항제는 인간 NGF에 결합하고, 다른 척추동물 종(일부 구체예에서, 포유동물)으로부터의 NGF에 현저하게 결합하지 않는다. 일부 구체예에서, NGF 길항제는 다른 척추 동물(일부 구체예에서, 포유동물)로부터의 하나 이상의 NGF 뿐만 아니라 인간 NGF에 결합한다. 일부 구체예에서, NGF 길항제는 적어도 하나의 다른 뉴로트로핀 뿐아니라 NGF에 결합한다. 일부 구체예에서, NGF 길항제는 예를 들어, 말 또는 개와 같은 포유동물 종의 NGF에 결합하지만, 다른 포유동물 종으로부터의 NGF에 현저하게 결합하지 않는다.

항-NGF 항체

본 발명의 일부 구체예에서, NGF 길항제는 항-NGF 항체를 포함한다. 항-NGF 항체는 다음 중 하나 이상의 어떤 특징을 나타내야 한다: (a) NGF에 결합하고 NGF 생물학적 활성 및/또는 NGF 신호화 기능에 의해 매개되는 다운스트림 경로(들)를 억제함; (b) 특히 NSAID와 함께, 어떤 양태의 통증을 치료 또는 예방하는 것; (c) NGF 수용체 활성화(trkA 수용체 이량체화 및/또는 자가인산화를 포함)를 차단 또는 감소시킴; (d) NGF의 제거를 증가시킴; (e) 통증의 NSAID 치료를 향상시킴.

항-NGF 항체는 당업계 공지되어 있으며, 예를 들어 PCT 공개공보 제W002096458; WO01/78698, WO01/64247호, 미국 특허 제 5,844,092, 5,877,016, 및 6,153,189; 문헌[Hongo et al., Hybridoma, 19: 215-227(2000); Cell. Molec. Biol. 13: 559-568 (1993)]; 유전자은행 승인 번호 제 U39608, U39609, L17078, 또는 L17077를 참조하시오.

일부 구체예에서, 항-NGF 항체는 NGF에 특이적으로 결합한다. 여전히 다른 구체예에서, 항-NGF 항체는 인간화 되어 있다(예를 들어, 본원에서 설명되는 항체 E3와 같은 것). 일부 구체예에서, 항-NGF 항체는 항체 E3이다(본원에서 설명되는 바와 같음). 다른 구체예에서, 항-NGF 항체는 항체 E3의 하나 이상의 CDR을 포함한다(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 또는, 일부 구체예에서, E3로부터의 모든 6개의 CDR). 다른 구체예에서, 항체는 인간이다. 여전히 다른 구체예에서, 항-NGF 항체는 표 1에서 나타낸 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열(SEQ ID NO:1) 및 표 2에서 나타낸 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열(SEQ ID NO:2)을 포함한다. 여전히 다른 구체예에서, 항-NGF 항체는 표 1에서 나타낸 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열(SEQ ID NO:1)을 포함한다. 여전히 다른 구체예에서, 항-NGF 항체는 표 2에서 나타낸 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열(SEQ ID NO:2)을 포함한다. 여전히 다른 구체예에서, 항체는 면역학적으로 비활성인 불변 영역와 같은 변형된 불변 영역을 포함하는데, 이는 예를 들어 보체 매개 세포용해를 유발시키지 않거나, 또는 항체-의존성 세포 매개 세포독성(ADCC)을 자극하지 않는다. 다른 구체예에서, 불변 영역은 문헌 [Eur. J. Immunol. (1999) 29:2613-2624]; PCT 출원 제 PCT/GB99/01441호; 및/또는 영국 특허 출원 제 9809951.8호에서 설명되는 바와 같이 변형되어 진다. 다른 구체예에서, 항-NGF 항체는 미국 출원 번호 제 10/745,775호에 설명된 어떤 항체이다.

일부 구체예에서, 항-NGF 항체는 항체 "E3"라 불리는 인간화 된 마우스 항-NGF 단일클론 항체이고, 이것은 다음의 돌연변이를 함유하는 사람 중쇄 IgG2a 불변 영역을 포함한다: A330P331 내지 S330S331(야생형 IgG2a 서열에 관한 아미노산 넘버링; 문헌 [Eur.J.Immumol. (1999)29:2613-2624]참조); 인간 경쇄 10 불변 영역; 및 표 1 및 2에서 나타낸 중쇄 및 경쇄 가변 영역.

다음의 폴리뉴클레오티드 코딩 E3 중쇄 또는 E3 경쇄 가변 영역이 2003년 1월 8일자로 ATCC에 기탁되었다.

물질		ATCC 승인 번호	기탁일
벡터 Eb.911.3E	E3 경쇄 V 영역	PTA-4893	2003년 1월 8일
벡터 Eb.pur.911.3E	E3 경쇄 V 영역	PTA-4894	2003년 1월 8일
벡터 Db.911.3E	E3 중쇄 V 영역	PTA-4895	2003년 1월 8일

벡터 Eb.911.3E는 표 2에서 나타낸 경쇄 가변 영역을 코딩하는 폴리뉴클레오티드이다; 벡터 Eb.pur.911.3E는 표 2에서 나타낸 경쇄 가변 영역을 코딩하는 폴리뉴클레오티드이고 벡터 Db.911.3E는 표 1에서 나타낸 중쇄 가변 영역을 코딩하는 폴리뉴클레오티드이다. 이들 폴리뉴클레오티드는 또한 불변 도메인을 코딩한다.

CDR을 결정하기 위한 적어도 2개의 기술이 있다: (1) 상호-종 서열 변이성에 기초한 접근법(즉, Kabat et al. Sequences ofproteilis of Iyzzmuzrological Interest,(5th ed., 1991, National Institutes of Health, Bethesda MD)); 및 (2) 항원-항체 복합체의 결정학적 연구를 기초로 한 접근법(Chothia et al. (1989) Nature 342: 877 ; Al-lazikani et al (1997) J. Molec. Biol. 273: 927-948)). 본원에서 사용되는 바와 같이, CDR은 접근법 중 하나 또는 두개의 접근법의 조합에 의해 규정된 CDR을 나타낼 수도 있다.

다른 구체예에서, 항-NGF 항체는 항체 E3의 하나 이상의 CDR(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 또는, 일부 구체예에서, E3로부터의 모든 6개의 CDR)을 포함한다. CDR 영역의 결정은 당업계 기술 내에 충분히 존재한다.

본 발명에 있어서 유용한 항체는 단일클론 항체, 폴리클론 항체, 항체 단편 (예를 들어, Fab, Fab', F(ab')2, Fv, Fc 등), 키메라 항체, 이특이적 항체, 이종결합 항체, 단일 사슬(ScFv), 그들의 돌연변이, 항체 부분을 포함하는 융합 단백질, 인간화 된 항체, 및 항체의 글리코실화 변이체, 항체의 아미노산 서열 변이체, 및 공유결합하여 변형된 항체를 포함하는 필요로 하는 특이성의 항원 인식 자리를 포함하는 면역글로불린 분자의 어떤 다른 변형된 배열을 포함할 수 있다. 항체는 뮤린, 랫트, 인간, 또는 다른 기원의 어떤 것(키메라 또는 인간화 된 항체를 포함)일 수도 있다. 본 발명의 목적을 위해, 항체는 NGF 및/또는 NGF 신호화 작용에 의해 매개되는 다운스트림 경로를 억제하는 방식으로 NGF와 작용한다. 한 구체예에서, 항체는 인간 NGF 상의 하나 이상의 에피토프를 인지하는 인간 항체이다. 다른 구체예에서, 항체는 인간 NGF 상에서 하나 이상의 에피토프를 인지하는 마우스 또는 랫트 항체이다. 다른 구체예에서, 항체는 영장류, 설치류, 개, 고양이, 말, 및 소로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는 NGF 상의 하나 이상의 에피토프를 인지한다. 다른 구체예에서, 항체는 면역학적으로 비활성이거나(즉, 보체 매개 세포용해를 유발하지 않음), 또는 항체-의존성 세포 매개 세포독성(ADCC)를 자극하지 않는 불변 영역과 같은 변형된 불변 영역을 포함한다. ADCC 활성은 미국 특허 제 5,500,362호에서 개시된 방법을 이용하여 평가될 수 있다. 다른 구체예에서, 불변 영역은 문헌[Eur. J. Immunol. (1999) 29:2613-2624]; PCT 공개번호 제 PCT/GB99/01441호; 및/또는 미국 특허 출원 제 9809951.8호에서 설명된 바와 같이 변형된다.

항-NGF 항체의 NGF(예를 들어, hNGF)에 대한 결합 친화성은 약 0.01 내지 약 1 nM, 약 0.05 내지 약 0.25 nM, 약 0.10 내지 약 0.80 nM, 약 0.15 내지 약 0.75 nM 및 약 0.18 내지 약 0.72 nM일 수 있다. 일부 구체예에서, 결합 친화성은 약 1pM, 약 2 pM, 약 5 pM, 약 10 pM, 약 15 pM, 약 20 pM, 약 40 pM, 또는 약 40 pM 이상이다. 한 구체예에서, 결합 친화성은 약 2 pM 내지 22 pM이다. 다른 구체예에서, 결합 친화성은 약 100 nM, 약 50 nM, 약 10 nM, 약 1 nM, 약 500 pM, 약 100 pM, 약 50 pM, 약 10 pM 미만이다. 일부 구체예에서, 결합 친화성은 약 10 nM이다. 다른 구체예에서, 결합 친화성은 약 10 nM 미만이다. 다른 구체예에서, 결합 친화성은 약 0.1 nM 또는 약 0.07 nM이다. 다른 구체예에서, 결합 친화성은 약 0.1 nM 미만 또는 약 0.07 nM 미만이다. 다른 구체예에서, 결합 친화성은 약 100 nM, 약 50 nM, 약 10 nM, 약 1 nM, 약 500 pM, 약 100 pM, 또는 약 50 pM 중 어떤 것 내지 약 2 pM, 약 5 pM, 약 10 pM, 약 15 pM, 약 20 pM, 또는 약 40 pM 중 어떤 것이다. 일부 구체예에서, 결합 친화성은 약 100 nM, 약 50 nM, 약 10 nM, 약 1 nM, 약 500 pM, 약 100 pM, 또는 약 50 pM 중 어떤 것, 또는 약 50 pM 미만이다. 여전히 다른 구체예에서, 결합 친화성은 약 2 pM, 약 5 pM, 약 10 pM, 약 15 pM, 약 20 pM, 약 40 pM, 또는 약 40 pM 이상이다.

NGF에 대한 항체의 결합 친화성을 결정하는 한 방법은 항체의 단일 기능적 Fab 단편의 친화성을 측정함에 의한다. 단일 기능적 Fab 단편을 얻기 위해, 항체(예를 들어, IgG)는 파파인을 이용하여 절단되거나 재조합 발현될 수 있다. 항-NGF Fab 단편의 항체에 대한 친화성은 표면 플라즈몬 공명(BIAcore3000^TM surface plasmon resonance(SPR) system, BIAcore, INC, Piscaway NJ)에 의해 결정될 수 있다. CM5 칩은 공급자의 설명에 따라서 N-에틸-N'-(3-디메틸아미노프로필)-카르보디니드 하이드로클로라이드(EDC) 및 N-히드록시숙신이미드(NHS)를 이용하여 활성화 될 수 있다. 인간 NGF를 10 mM 아세트산 나트륨 pH4.0에 희석시키고 0.005 mg/mL의 농도에서 활성화 칩 상으로 주입시킬 수 있다. 각각의 칩 채널을 가로지르는 가변 유동 시간을 이용하여, 2개 범위의 항원 농도가 달성될 수 있다: 상세한 동역학적 연구에 대한 100-200 반응 단위(RU) 및 스크리닝 분석법에 대한 500-600 RU. 상기 칩은 에탄올아민으로 차단될 수 있다. 재생 연구는 Pierce 용리 버퍼(Product No. 21004, Pierce Biotechnology, Rockford IL) 및 4M NaCl(2:1)의 혼합물은 200개의 주입 이상을 위한 칩 상에서 hNGF의 활성을 유지시키는 동안 속박된 Fab를 효과적으로 제거한다. HBS-EP 버퍼(0.O1M HEPES, pH 7.4, 0.15 NaCl, 3mM EDTA, 0.005% Surfactant P20)가 BIAcore 분석법에 대한 작동 버퍼로서 이용된다. 정제된 Fab 샘플의 일련의 희석액(0.1-10x 어림잡은 K_D)이 1분 동안 100 μL/분에서 주입되고 최대 2시간 까지의 해리 시간이 허용된다. Fab 단백질의 농도는 ELISA 및/또는 기준으로서 기지의 농도(아미노산 분석법에 의해 결정된 바와 같음)의 Fab를 이용하는 SDS-PAGE 전기천공법에 의해 결정된다. 동역학적 회합율(k_on) 및 해리율(K_off)은 BIAevaluation 프로그램을 이용하여 1:1 랭뮤어(Langmuir) 결합 모델(Karlsson, R. Roos, H. Fagerstam, L. Petersson, B.(1994). Methods Enzyology 6: 99-110)에 데이타를 맞춤으로써 동시에 얻어진다. 평형상수 해리 불변(K_D) 값은 k_off/k_on으로서 계산될 수 있다. 이 프로토콜은 인간 NGF, 다른 척추동물의 NGF(일구 구체예에서, 포유동물)(예를 들어 마우스 NGF, 랫트 NGF, 영장류 NGF)를 포함하여 임의의 종의 NGF에 대한 항체의 결합 친화성을 결정함에 있어서의 사용, 및 예를 들어 관련된 뉴로트로핀 NT3, NT4/5, 및/또는 BDNF와 같은 다른 뉴로트로핀과의 사용에 관하여 적합하다.

일부 구체예에서, 항체는 인간 NGF에 결합하며, 다른 척추동물 종(일부 구체예에서, 포유동물)으로부터의 NGF에 현저하게 결합하지 않는다. 일부 구체예에서, 항체는 인간 NGF 및 다른 척추동물 종(일부 구체예에서, 포유동물, 예를 들어, 설치류)으로부터의 하나 이상의 NGF에 결합한다. 여전히 다른 구체예에서, 항체는 NGF에 결합하고 다른 뉴로트로핀(예를 들어 관련 뉴로트로핀, NT3, NT4/5, 및/또는 BDNF)과 현저하게 상호-작용하지 않는다. 일부 구체예에서, 항체는 NGF 및 적어도 하나의 다른 뉴로트로핀에 결합한다. 일부 구체예에서, 항체는 예를 들어 말이나 개와 같은 포유동물 종의 NGF에 결합하지만, 다른 포유동물 종으로부터의 NGF에는 현저하게 결합하지 않는다.

에피토프(들)는 연속 또는 불연속일 수 있다. 한 구체예에서, 항체는 문헌[Hongo et al., Hybridoma, 19: 215-227(2000)]에 설명된 바와 같이 MAb 911, MAb912, 및 MAb 938로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는 항체와 같이 동일한 hNGF 에피토프에 본질적으로 결합한다. 다른 구체예에서, 항체는 MAb 911과 같이 동일한 hNGF 에피토프에 본질적으로 결합한다. 여전히 다른 구체예에서, 항체는 MAb 909와 같이 동일한 에피토프에 본질적으로 결합한다. 상기 인용 문헌[Hong et al.,]. 예를 들어, 에피토프는 hNGF의 가변 영역 1(아미노산 23-35) 내 잔기 K32, K34 및 E35; hNGF의 가변 영역 4(아미노산 81-88) 내 잔기 F79 및 T81; 가변 영역 4 내 잔기 H84 및 K88; hNGF의 가변 영역 5(아미노산 94-98) 및 hNGF의 C-말단(아미노산 111-118) 사이의 잔기 R103; hNGF의 사전-가변 영역 1(아미노산 10-23) 내 잔기 E11; hNGF의 가변 영역 2(아미노산 40-49) 및 hNGF의 가변 영역 3(아미노산 59-66) 사이의 Y52; hNGF의 C-말단 내 잔기 L112 및 S113; hNGF의 가변 영역 3 내 잔기 R59 및 R69; 또는 hNGF의 사전-가변 영역 1 내 잔기 V18, V20, 및 G23 중 하나 이상으로 포함할 수도 있다. 또한, 에피토프는 hNGF의 가변 영역 1, 가변 영역 3, 가변 영역 4, 가변 영역 5, N-말단 영역, 및/또는 C-말단 중 하나 이상을 포함할 수 있다. 여전히 다른 구체예에서, 항체는 hNGF의 잔기 R103의 용해 접근성을 현저하게 감소시킨다. 상기 설명된 에피토프가 인간 NGF에 관련한 것이지만, 통상의 기술을 가진자는 다른 종의 NGF와 함께 인간 NGF의 구조를 배열할 수 있고 이들 에피토프에 대한 적당한 대응부를 동정할 수 있다.

한 양태에서, NGF를 억제할 수 있는 항체(예를 들어, 인간, 인간화, 마우스, 키메라)는 온길이 또는 부분 서열의 NGF를 발현시키는 면역원을 이용하여 제작될 수도 있다. 다른 양태에서, NGF를 과잉발현하는 세포를 포함하는 면역원이 사용될 수도 있다. 사용될 수 있는 면역원의 다른 예는 온-길이 NGF 또는 NGF 단백질의 일부를 함유하는 NGF 단백질이다.

항-NGF 항체는 당업계 공지된 임의의 방법에 의해 제조될 수도 있다. 숙주 동물 면역화의 루트 및 스케쥴은 일반적으로 본원에서 더 설명되는 바와 같이, 항체 자극 및 생성을 위한 확립되고 전통적인 기술과 함께 보유되고 있다. 인간 및 마우스 항체의 생성을 위한 일반적인 기술은 당업계에 공지되어 있으며 본원에서 설명되어 있다.

그들로부터의 인간 또는 항체 프로듀싱 셀을 포함하는 임의의 포유동물 피험체는 인간, 하이브리도마 셀라인을 포함하는 포유동물의 생성을 위한 기초로서 작용하도록 조작될 수 있음이 고려된다. 전형적으로, 숙주 동물은 본원에서 설명되는 바를 포함하는, 소정량의 면역원으로 복막내, 근육내, 경구, 피하, 발바닥내, 및/또는 피내로 접종된다.

하이브리도마는 문헌[Kohler, B. and Milstein, C.(1975) Nature 256:495-497 or as modified by Buck, D.W., et al., In Vitro, 18:377-381(1982)]의 일반적인 체세포 하이브리드화 기술을 이용하여 림프구 및 불멸 골수종 세포로부터 제조될 수 있다. 이에 한정되지는 않으나 X63-Ag8.653 및 미국 캘리포니아주 샌디에고 세포 분배 센터의 사크 연구소로부터의 것을 포함하는 이용가능한 골수종 라인이 하이브리드화에 사용될 수도 있다. 일반적으로, 상기 기술은 폴리에틸렌 글리콜과 같은 융합유도제(fusogen)를 이용하거나, 또는 당업계 숙련자에게 주지된 전기적 수단을 이용하여 골수종 세포와 림프계 세포를 융합하는 것을 포함한다. 융합 후, 세포를 융합 배지로부터 분리시키고 히폭산틴-아미노프테린-티민(HAT) 배지와 같은 선택적인 성장 배지에서 성장시켜서 하이브리드화 되지 않은 부모 세포를 제거한다. 혈청으로 보충하거나 보충하지 않은 본원에서 설명되는 임의의 배지는 단일클론 항체를 분비하는 하이브리도마를 배양하는데 사용될 수 있다. 세포 융합 기술에 대한 다른 대안으로서, EBV 불멸 B 세포가 주제 발명의 항-NGF 단일클론 항체를 생성하는데 사용될 수도 있다. 하이브리도마가 확장되고 하위클론화 되고, 원한다면, 상청액을 전통적인 면역분석법 과정(예를 들어, 방사성면역분석법, 효소 면역분석법, 또는 형광성 면역분석법)에 의해 항-면역원 활성에 대하여 분석한다.

항체의 공급원으로서 사용될 수 있는 하이브리도마는 NGF, 또는 그들의 일부에 대하여 특이적인 단일클론 항체를 생성하는 부모 하이브리도마의 모든 유도체, 자손 세포를 포함한다.

이러한 항체를 생성하는 하이브리도마는 공지된 과정을 이용하여 시험관 내 또는 생체 내에서 성장시킬 수도 있다. 단일클론 항체는 원한다면, 황산 암모늄 침전, 겔 전기천공법, 투석, 크로마토그래피, 및 한외여과와 같은 전통적인 면역글로불린 정제 과정에 의해, 배양 배지 또는 체액으로부터 분리시킬 수도 있다. 원하지 않는 활성이 존재한다면, 예를 들어, 고체상에 부착된 면역원으로 만들어진 흡수제 상 제조를 작동시키고 면역원이 없는 원하는 항체를 용리 또는 방출시킴으로써 제거시킬 수 있다. 인간 NGF, 또는 면역화 되는 종에서 면역원인 단백질에 결합된 표적 아미노산 서열을 함유하는 단편, 예를 들어, 말레이미도벤조일 술포숙신이미드 에스테르(시스테인 잔기를 통해 결합), N-히드록시숙신이미드(리신 잔리를 통함), 글루타라데히드, 숙신 알데히드, SOCl2, 또는 R1N=C=NR로서, R 및 R1은 상이한 알킬기인 이중기능성 또는 유도체화 제제를 이용하는 예컨대, 키홀 림펫 헤모시아닌, 혈청 알부민, 소 티로글로불린, 또는 소이빈 트립신 억제제를 이용한 숙주 동물의 면역화는 항체의 집단(예를 들어, 단일클론 항체)을 산출할 수 있다.

원한다면, 관심있는 항-NGF 항체(단일클론 또는 폴리클론)는 서열화될 수 있고 그 후 항-NGF 항체 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열이 발현 또는 증식을 위해 벡터 내로 클로닝될 수도 있다. 관심있는 항체를 코딩하는 서열은 숙주 세포 내 벡터에서 유지될 수 있으며 그 후 숙주 세포는 장래 사용을 위해 팽창되고 냉동될 수 있다. 택일적으로, 폴리뉴클레오티드 서열이 항체를 "인간화"하거나 친화성, 또는 항체의 기타 특성을 향상시키기 위한 유전적 조작에 대하여 사용될 수도 있다. 예를 들어, 불변 영역은 항체가 인간의 임상적 실험 및 치료에서 사용되는 경우 면역 반응을 피하기 위한 인간 불변 영역와 더 유사하도록 조작될 수도 있다. NGF에 대한 더 큰 친화성 및 NGF를 억제하는 더 큰 효능을 얻도록 항체 서열을 유전적으로 조작하도록 하는 것이 바람직할 수도 있다. 하나 이상의 폴리뉴클레오티드 변화는 항-NGF 항체로 만들어 질 수 있고 NGF에 대한 그것의 결합 능력을 여전히 유지할 수 있음이 당업계 숙련자에게 명백하다.

단일클론 항체를 인간화 하기 위한 4가지 일반적인 단계가 존재한다. 이들은 (1) 뉴클레오티드 및 항체 경 및 중 가변 도메인을 개시하는 예상된 아미노산 서열을 결정하는 단계 (2) 인간화 항체를 설계하는 단계, 즉 인간화 과정 동안 사용하기 위한 항체 외곽구조 영역을 결정하는 단계 (3) 실제상의 인간화 방법론/기술 및 (4) 인간화 항체의 형질감염 및 발현. 예를 들어, 미국 특허 제 4,816,567; 5,807,715; 5,866,692; 6,331,415; 5,530,101; 5,693,761; 5,693,762; 5,585,089; 및 6,180,370호를 참조하시오.

비-인간 면역글로불린으로부터 유도된 항원-결합 자리를 포함하는 많은 "인간화" 항체 분자가 설치류 또는 변형된 설치류 V 영역 및 인간 불변 도메인에 융합된 그들의 관련 상보성 결정 영역(CDR)을 갖는 키메라 항체를 포함하여 설명됐다. 예를 들어, 문헌[Winter et al. Nature 349: 293-299 (1991), Lobuglio et al. Proc. Nat. Acad. Sci. USA 86:4220-4224 (1989), Shaw et al.JImnzu7701. 138: 4534-4538 (1987), and Brown et al. Cancer Res. 47: 3577-3583 (1987)]을 참조하시오. 다른 참고문헌은 설치류 CDR을 인간 지지 외곽구조 영역(FR)으로 이식한 후 적절한 인간 항체 불변 도메인을 이용하는 융합을 기술한다. 예를 들어, 문헌[Riechmann et al. Nature 332: 323-327 (1988), Verhoeyen et al. Science 239: 1534-1536 (1988), and Jones et al.Nature 321 : 522-525(1986)]을 참조하시오. 다른 참고문헌은 재조합적으로 덧붙여진 설치류 외곽구조 영역에 의해 지지된 설치류 CDR을 설명한다. 예를 들어, 유럽 특허 공보 제 519,596호를 참조하시오. 이들 "인간화" 분자는 인간 수여자의 그들 부분의 치료적 적용에 있어서 지속기간 및 유효성을 제한하는 설치류 항-인간 항체 분자에 대한 원치 않는 면역학적 반응을 최소화하도록 설계되어 있다. 예를 들어, 항체 불변 영역은 면역학적으로 비활성(예를 들어, 보체 세포용해를 유발하지 않음)이도록 조작될 수 있다. 예를 들어, PCT/GB99/01441; 영국 특허 출원 제 9809951.8호를 참조하시오. 또한 이용될 수 있는 인간화 항체의 다른 방법이 문헌 [Daugherty etal.,Nucl. Acids Res. 19: 2471-2476(1991)] 및 미국 특허 제 6,180,377; 6,054,297; 5,997,867; 5,866,692; 6,210671 ; 6,350,861; 및 PCT 공개번호 제 WO 01/27160호에 의해 개시된다. 다른 방법이 미국 출원 번호 제 10/745,775호에서 설명된다.

또 다른 대안에 있어서, 완전한 인간 항체는 특이적 인간 면역글로불린 단백질을 발현하도록 조작된 상업적으로 이용가능한 마우스를 이용하여 얻을 수도 있다. 보다 바람직하거나(예를 들어, 완전한 인간 항체) 보다 강건한 면역 반응을 생성하도록 설계된 트랜스제닉 동물이 또한 인간화 또는 인간 항체의 발생을 위해 이용될 수도 있다. 이러한 기술의 예는 Abgenix, Inc.(Fremont, CA)로부터의 Xenomouse^TM 및 Medarex, Inc.(Princeton, NJ)로부터의 HuMAb-Mouse® and TC Mouse^TM이다.

상기 논의가 인간화 항체에 관한 것일지라도, 논의되는 일반적인 원리는 예를 들어, 개, 고양이, 영장류, 말 및 소에서의 이용을 위해 항체를 커스터마이징하기 위해 적용가능하다. 본원에서 설명된 항체를 인간화하는 하나 이상의 양태는 예를 들어, CDR 이식, 외곽구조 돌연변이 및 CDR 돌연변이를 조합시킬 수 있음이 더욱 명백하다.

대안적으로, 항체는 당업계 어떤 공지 방법을 이용하여 재조합적으로 만들거나 발현시킬 수 있다. 다른 대안에 있어서, 항체는 파지 디스플레이 기술에 의해 재조합적으로 만들 수도 있다. 예를 들어, 미국 특허 제 5,565,332; 5,580,717; 5,733,743; 6,265,150; 및 문헌[Winteret al., Annu.. Rev. Immunol. 12: 433-455 (1994)]을 참조하시오. 택일적으로, 파지 디스플레이 기술(McCafferty et al., Nature 348: 552-553 (1990))은 비면역화된 공여자로부터의 면역글로불린 가변(V) 유전자 레퍼토리로부터, 시험관 내에서 인간 항체 및 항체 단편을 생성하기 위해 이용될 수 있다. 이 기술에 따르면, 항체 V 도메인 유전자가 M13 또는 fd와 같은 실모양 박테리오파지의 주요한 또는 부수적인 코팅 단백질 유전자로 프레임-내 클로닝되고, 파지 입자의 표면 상에 기능적 항체 단편으로서 디스플레이 된다. 실모양 입자는 파지 게놈의 단일-가닥 DNA 복사본을 함유하기 때문에, 항체의 기능적 특성에 기초한 선택은 또한 그들 특성을 보이는 항체를 코딩하는 유전자의 선택을 야기한다. 따라서, 파지는 B 세포의 특성의 일부를 닮는다. 파지 디스플레이는 다양한 포맷으로 수행될 수 있다; 개관을 위해, 예를 들어 문헌[Johnson, Kevin S. and Chiswell, David J., Current Opinion in Structural Biology 3,564-571(1993)]을 참조. V-유전자 세그먼트의 몇가지 공급원이 파지 디스플레이를 위해 사용될 수 있다. 문헌[Clackson et al., Nature 352: 624-628 (1991)]은 다양한 항-옥사졸론 항체의 배열을 면역화된 마우스의 비장으로부터 유도된 작은 무작위 조합적 라이브러리의 V 유전자로부터 분리시켰다. 비면역화 된 인간 공여자로부터의 V 유전자의 레퍼토리가 구성될 수 있고 항원(자기-항원 포함)의 다양한 배열에 대한 항체는 문헌[Mark et al., J. Mol. Biol. 222:581-597(1991), or Griffith et al., EMBO J. 12:725-734(1993)]에 의해 설명되는 기술 이후에 본질적으로 분리될 수 있다. 천연의 면역 반응에 있어서, 항체 유전자는 고비율로 돌연변이를 축적시킨다(체세포 고도 돌연변이). 도입되는 일부 변화들은 더 높은 친화성을 제공할 것이며, B 세포 디스플레이 고-친화성 표면 면역글로불린이 우세하게 복제되고 후속적 항원 자극 동안에 분화된다. 이러한 천연적 과정은 "사슬 셔플링"으로서 공지된 기술을 이용하여 모방될 수 있다. Marks, et al., Bio/Technol. 10:779-783(1992). 이 방법에 있어서, 파지 디스플레이에 의해 얻은 "초기의" 인간 항체의 친화성은 비면역화 된 공여자로부터 얻은 V 도메인 유전자의 천연 발생 변이체의 레퍼토리(레퍼토리)로 중쇄 및 경쇄 V 영역 유전자를 서열적으로 치환함으로써 향상시킬 수 있다. 이러한 기술은 pM-nM 범위를 갖는 항체 및 항체 단편의 생성을 허용한다. 매우 큰 파지 항체 레퍼토리를 제작하기 위한 전략(또한 모든 라이브러리의 모체("the mother-of-all libraries")로 알려짐)이 문헌[Waterhouse et al., Nucl. Acids Res. 21:2265-2266(1993)]에 의해 설명됐다. 유전자 셔플링은 또한 설치류 항체로부터 인간 항체를 유도하는데 사용될 수도 있으며, 여기서 인간 항체는 설치류 항체를 개시하는데 유사한 친화성 및 특이성을 가진다. 이러한 방법에 따라서, 또한 "에피토프 각인"으로 나타내는데, 파지 디스플레이 기술에 의해 얻은 설치류 항체의 중쇄 또는 경쇄 V 도메인 유전자는 설치류-인간 키메라를 생성하는 인간 V 도메인 유전자의 레퍼토리로 치환된다. 항원 위 선택은 기능적 항원-결합 자리를 저장할 수 있는 인간 가변 영역의 분리를 야기하는데, 즉 에피토프가 파트너의 선택을 지배(각인)한다. 상기 과정이 잔여 설치류 V 도메인을 치환하기 위해 반복되는 경우, 인간 항체가 얻어진다(1993년 4월 1일자로 공개된 PCT 특허 출원 WO 9306213호 참조). CDR 이식에 의한 설치류 항체의 전통적인 인간화와는 달리, 이러한 기술은 완전한 인간 항체를 제공하는데, 이는 설치류 기원의 외곽구조 또는 CDR 잔기를 갖지 않는다. 상기 논의가 인간화 항체에 관한 것일지라도, 논의되는 일반적인 원리는 예를 들어, 개, 고양이, 영장류, 말 및 소에 있어서 사용을 위하여 항체를 커스터마이징 하는 것이 적용가능함이 명백하다.

항체는 우선 항체와 숙주 동물로부터의 항체 프로듀싱 셀을 분리시키고, 유전자 서열을 얻고, 숙주 세포(예를 들어, CHO 세포)에서 재조합적으로 항체를 발현시키기 위한 유전자 서열을 이용함으로써 제조합적으로 제작될 수도 있다. 이용될 수 있는 다른 방법은 식물(예를 들어, 담배) 또는 트랜스제닉 우유에서 항체 서열을 발현시키는 것이다. 식물 또는 우유에서 재조합적으로 항체를 발현시키는 방법이 개시됐다. 예를 들어, 문헌[Peeters, et al. Vaccine 19: 2756 (2001); Lonberg, N. and D. Huszar Int. Rev. Immunol 13: 65 (1995) ; and Pollock, etal., J Immmnol Methods 231:147 (1999)]를 참조하시오. 예를 들어, 인간화, 단일 사슬 등의 항체의 유도체를 만들기 위한 방법은 당업계에 공지되어 있다.

면역분석법 및 예를 들어 형광성 활성화 세포 분류(FACS)와 같은 유동 세포측정 분류 기술이 또한 NGF에 대하여 특이적인 항체를 분리하는데 이용될 수 있다.

항체는 많은 상이한 담체에 속박되어 있을 수 있다. 담체는 활성 및/또는 비활성일 수 있다. 주지의 담체의 예는 폴리프로필렌, 폴리스티렌, 폴리에틸렌, 덱스트란, 나일론, 아밀라제, 유리, 천연 및 변형의 셀룰로스, 폴리아크릴아미드, 아가로스 및 마그네타이트를 포함한다. 천연의 담체는 본 발명의 목적을 위해 가용성 또는 불용성일 수 있다. 당업계 숙련자는 항체를 결합하기 위한 다른 적합한 담체를 알 것이고, 또는 통상의 실험을 이용하여, 이것을 확인할 수 있을 것이다.

단일클론 항체를 코팅하는 DNA는 전통적인 방법(예를 들어, 단일클론 항체의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오티드 프로브를 이용함으로써)을 이용하여 용이하게 분리 및 서열화된다. 하이브리도마 세포는 이러한 DNA의 바람직한 공급원으로서 역할을 한다. 일단 분리되면, DNA는 발현 벡터 내에 위치될 수 있으며, 그 후 예를 들어 E.coli, 원숭이 COS 세포, 중국 햄스터 난소(CHO) 세포, 또는 골수종과 같은 것으로서, 면역글로불린 단백질을 달리 생성하지 않는 숙주 세포로 형질감염 되어, 재조합 숙주 세포 내에서 단일클론 항체의 합성을 얻는다. DNA는 또한 예를 들어, 일치하는 뮤린 서열의 위치에 인간 중쇄 및 경쇄 불변 도메인에 대한 코딩 서열을 치환하고, Morrison etal.,Proc. Nat. Acad. Sci. 81: 6851 (1984), 또는 비-면역글로불린 폴리펩티드에 대한 코딩 서열 모두 또는 일부를 면역글로불린 코딩 서열에 공유결합으로 결합시킴으로써 변형될 수도 있다. 상기 방식에 있어서, "키메라" 또는 "하이브리드" 항체는 제조되어 본원에서 항-NGF 단일클론 항체의 결합 특이성을 갖는다. 길항제 항-NGF 항체를 코딩하는 DNA(예를 들어 인간화 항-NGF 길항제 항체)는 본원에서 설명되는 바와 같이, 원하는 세포에 의해 길항제 항-NGF 항체의 송달 및 발현을 위해 이용될 수 있다. DNA 송달 기술이 본원에서 더 설명된다.

항-NGF 항체는 당업계 주지의 방법을 이용하여 특성화 될 수도 있다. 예를 들어, 한 방법은 상기 항체가 결합하는 에피토프를 동정하는 것이며, "에피토프 맵핑(mapping)"이라고 칭한다. 예를 들어, 문헌[Chapter11 of Harlow and Lane, Using Antibodies, a Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York, 1999]에서 설명된 바와 같이, 항체-항원 복합체의 결정 구조를 용해시키기, 경쟁 분석법, 유전자 단편 발현 분석법, 및 합성적 펩티드-기재 분석법을 포함하여, 단백질 상의 에피토프의 위치를 맵핑하고 특성화하기 위한 당업계 공지된 많은 방법이 있다. 추가적 예에서, 에피토프 맵핑은 항-NGF 항체가 결합하는 서열을 결정하기 위해 사용될 수 있다. 에피토프 맵핑은 다양한 공급원, 예를 들어, Pepscan Systems(Edelhertweg 15, 8219 PH Lelystad, The Netherlands)으로부터 상업적으로 이용가능하다. 에피토프는 선형 에피토프, 즉 아미노산의 단일 신장으로 함유되거나, 또는 반드시 단일 신장으로 함유되지는 않을 수도 있는 아미노산의 3차원적 상호작용에 의해 형성된 배좌적 에피토프일 수 있다. 다양한 길이의 펩티드(예를 들어, 적어도 4-6 아미노산 길이)가 분리되거나 합성될 수 있으며(예를 들어, 재조합적으로) 항-NGF 항체와의 결합 분석법을 위해 이용될 수 있다. 다른 실시예에서, 항-NGF 항체에 결합하는 에피토프는 NGF 서열로부터 유도된 중첩 펩티드를 이용하여 항-NGF 항체에 의한 결합을 결정함에 의해 계통적 스크리닝에 있어서 결정될 수 있다. 유전자 단편 발현 분석법에 따라서, NGF를 코딩하는 열림 판독 프레임은 무작위로 또는 특이적 유전자 구성에 의해 단편화 되고 NGF의 발현된 단편과 테스트되는 항체와의 반응성이 결정된다. 예를 들어, 유전자 단편은 PCR에 의해 생성될 수도 있으며 방사성 아미노산의 존재하에서, 그 후 전사되고 번역되어 시험관 내에서 단백질이 될 수도 있다. 이어서 방사성 표지된 NGF 단편에 대한 항체의 결합은 면역침강법 및 겔 전기영동법에 의해 결정되어 진다. 또한 특정한 에피토프는 파지 입자의 표면 상에 디스플레이 된 무작위 펩티드 서열의 대규모 라이브러리를 이용하여 동정될 수 있다(파지 라이브러리). 택일적으로, 한정된 라이브러리의 중첩 펩티드 단편은 단순한 결합 분석법에 있어서 테스트 항체에 대한 결합에 대하여 테스트될 수 있다. 추가적 실시예에서, 항원 결합 도메인의 돌연변이 유발, 도메인 교환(swapping) 실험 및 알라닌 스캐닝 돌연변이유발이 에피토프 결합을 위해 필요하고, 충분하며, 및/또는 필수적인 잔기를 동정하기위해 수행될 수 있다. 예를 들어, 도메인 교환 실험은 돌연변이 NGF를 이용하여 수행될 수 있는데, NGF 폴리펩티드의 각종 단편은 밀접 관련되지만, 항원상으로 별개인 단백질(예를 들어 뉴로트로핀 단백질 패밀리의 다른 구성원으로서)로부터의 서열로 치환(교환)됐다. 돌연변이 NGF에 대한 항체의 결합을 평가함에 의해, 항체 결합에 대한 특정 NGF 단편의 중요성이 평가될 수 있다.

항-NGF 항체를 특성화하기 위해 사용될 수 있는 또 다른 방법은 동일한 항원에 결합하는 것으로 알려진 다른 항체들, 즉 NGF 상 각종 단편들을 이용한 경쟁 분석법을 이용하여 항-NGF 항체가 다른 항체와 동일한 에피토프에 결합하는지 여부를 결정하는 것이다. 경쟁 분석법은 당업계 숙련자에게 주지되어 있다. 본 발명에 관한 경쟁 분석법에서 이용될 수 있는 항체의 예는 문헌[Hongo, et al., Hybridoma 19:215-227(2000)]에서 설명되는 바와 같이, MAb 911, 912, 938을 포함한다.

다른 NGF 길항제

항-NGF 항체 외에도 NGF 길항제가 사용될 수도 있다. 본 발명의 일부 구체예에서, NGF 길항제는 기능적 NGF, 또는 기능적 trkA 및/또는 p75 수용체의 발현을 차단 또는 감소시킬 수 있는 적어도 하나의 안티센스 분자를 포함한다. NGF, trkA 및 p75의 뉴클레오티드 서열은 공지되어 있고 공개적으로 이용가능한 데이타베이스로부터 용이하게 이용가능하다. 예를 들어, 문헌[Borsani etal.,Nuc. AcidsRes. 1990, 18, 4020]; 승인 번호 NM 002506; Ullrich et al., Nature 303: 821-825 (1983)을 참조하시오. 다른 폴리뉴클레오티드와의 상호-작용없이 NGF, trkA 또는 p75 mRNA에 특이적으로 결합하는 안티센스 올리고뉴클레오티드 분자를 제조하는 것은 통상적이다. 표적의 전형적인 자리는 이에 한정되지는 않으나, 개시 코돈, 5' 조절 부위, 코딩 서열 및 3' 비번역 부위를 포함한다. 일부 구체예에서, 올리고뉴클레오티드는 길이가 약 10 내지 100 뉴클레오티드, 길이가 약 15 내지 50 뉴클레오티드, 길이가 약 18 내지 25 뉴클레오티드, 또는 그 이상이다. 올리고뉴클레오티드는 예를 들어, 포스포티오에이트(phosphorothioate) 연관, 및 당업계 주지된 2'-O 당 변형과 같은 백본 변형을 포함할 수 있다. 예를 들어, 문헌[Agrawal and Zhao(1998),Antisense & Nucleic Acid Drug Development 8,135-139]을 참조하시오. 전형적인 안티센스 분자는 미국 공개번호 제20010046989호에 설명된 NGF 안티센스 분자를 포함하며; 또한 http://www. rna-tec. com/repair. htm를 참조하시오.

택일적으로, NGF 발현 및/또는 방출을 유전자 넉다운, 모르폴리노 올리고뉴클레오티드, RNAi, 또는 리보자임을 이용하여 증가시킬 수 있는데, 방법은 당업계에 주지되어 있다. 예를 들어, [Rossi, J. J. et al., eds.,"Intracellular Ribozyme Applications : Principles and Protocols, "Horizon Scientific Press (Duarte, CA, 1999); US 6,506,559; WO 02/244321; WO 01/192513 ; WO 01/29058]를 참조하시오.

다른 구체예에서, NGF 길항제는 적어도 하나의 NGF 억제제 화합물을 포함한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, "NGF 억제제 화합물"은 NGF 생물학적 활성을 집접 또는 간접적으로 감소, 억제, 중화, 또는 파괴하는 항-NGF 항체 이외의 화합물을 나타낸다. NGF 억제제 화합물은 어떤 하나 이상의 다음 특성을 나타내야 한다: (a) NGF에 결합하고 NGF 생물학적 활성 및/또는 NGF 신호화 기능에 의해 매개되는 다운스트림 경로(들)를 억제하고; (b) 특히 NSAID와 함께 통증의 어떤 양태를 치료 또는 예방하며; (c) NGF 수용체 활성(trkA 수용체 이량체화 및/또는 자가인산화)을 막거나 감소시키고; (d) NGF의 제거를 증가시키며; (e) NGF 합성, 생성 또는 방출을 억제(감소)시키며; (f) 통증의 NSAID 치료를 증가시킨다. 전형적인 NGF 억제제 화합물은 미국 공개번호 제 20010046959호에 설명된 소분자 NGF 억제제를 포함하고; 상기 화합물은 PCT 공개번호 제WO 00/69829호에서 설명된 바와 같이, NGF의 p75에 대한 결합을 억제하며; 상기 화합물은 PCT 공개번호 제 WO 98/17278호에서 설명된 바와 같이 NGF의 TrkA/p75에 대한 결합을 억제한다. NGF 억제제 화합물의 추가적인 예는 PCT 공개번호 제 WO 02/17914, WO 02/20479, 미국 특허 제 5,342, 942, 6,127,401, 및 6,359,130호에서 설명된 화합물을 포함한다. 또한 전형적인 NGF 억제제 화합물은 NGF의 경쟁적 억제제인 화합물이다. 미국 특허 제 6,291,247호를 참조하시오. 또한, 당업계 숙련자는 다른 소분자 NGF 억제제 화합물을 제조할 수 있다.

일부 구체예에서, NGF 억제제 화합물은 NGF에 결합한다. 전형적인 표적(결합) 자리는 이에 한정되지는 않으나, TrkA 수용체 및/또는 p75 수용체에 결합하는 NGF의 일부, 및 수용체-결합 자리에 인접하고 부분적으로 수용체-결합 일부의 정확한 3차원 형상의 원인이 되는 NGF의 그러한 일부를 포함한다. 다른 구체예에서, NGF 억제제 화합물은 NGF 수용체(예를 들어 TrkA 및 p75)에 결합하고 NGF 생물학적 활성을 억제한다. 전형적인 표적 자리는 NGF에 결합하는 TrkA 및/또는 p75의 그 일부를 포함한다.

소분자를 포함하는 구체예에서, 소분자는 약 100 내지 20,000 달톤, 500 내지 15,000 달톤, 또는 1000 내지 10,000 달톤 중 임의의 것의 분자량을 가질 수 있다. 소분자의 라이브러리는 상업적으로 이용가능하다. 소분자는 흡입, 복막내, 정맥내, 근육내, 피하, 경막내, 심실내, 경구, 장관, 비경구, 비강, 또는 피부를 포함하는 당업계 공지된 어떤 수단을 이용하여 투여될 수 있다. 일부 구체예에서, NGF-길항제가 소분자일 경우, 하나에서 셋 또는 그 이상의 투여량으로 나뉘어 지는 환자의 중량에 대하여 0.1 내지 300 mg/kg의 비율로 투여될 것이다.

다른 구체예에서, NGF 길항제는 적어도 하나의 NGF 구조 유사체를 포함한다. 본 발명에서 "NGF 구조 유전자"는 NGF의 일부로서 유사한 3차원적 구조를 가지고 시험관 내 또는 생체 내 생리학적 조건 하에서 NGF 수용체에 결합하는 화합물을 나타낸다. 한 구체예에서, NGF 구조 유사체는 TrkA 및/또는 p75 수용체에 결합한다. 전형적인 NGF 구조 유사체는 이에 한정되지는 않지만, PCT 공개번호 제 WO97/15593호에서 설명된 두고리 펩티드; 미국 특허 제 6,291,247호에 설명된 두고리 펩티드; 미국 특허 제 6,017,878호에서 설명된 두고리 화합물; 및 PCT 공개번호 제 W089/09225호에서 설명된 NGF-유도 펩티드를 포함한다. 적합한 NGF 구조 유사체는 또한 예를 들어, PCT 공개번호 제 WO98/06048호에서 설명된 방법에 의해, NGF-수용체 결합의 분자 모델링을 통해 설계 및 합성될 수 있다. NGF 구조 유사체는 향상된 친화성 및 생물학적 결과를 얻기 위한 동일하거나 상이한 구조의 어떤 원하는 조합의 모노머 또는 다이머/올리고머일 수 있다.

다른 구체예에서, 본 발명은 TrkA 수용체 및/또는 p75 수용체의 적어도 하나의 우성-음성 돌연변이를 포함하는 NGF 길항제를 제공한다. 당업계 숙련자는 예를 들어, TrkA 수용체의 우성-음성 돌연변이를 제조할 수 있는데, 상기 수용체는 NGF에 결합할 것이며, 따라서, NGF를 포획하기 위한 "싱크(sink)"로서 작용할 것이다. 그러나, 우성-음성 돌연변이는 NGF에 결합할 때 수용체(예를 들어 TrkA 수용체)의 정상적 생활성을 갖지 않을 것이다. 전형적인 우성-음성 돌연변이는 이에 한정되지는 않으나, 본원에서 이들 각각이 전체적으로 참고로 인용되는 다음 참고문헌에 설명된 돌연변이를 포함한다: Li et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1998,95, 10884; Eide et al., J.Neurosci. 1996,16, 3123 ; Liu et al., J. Neurosci 1997,17, 8749; Klein et al.,Cell 1990, 61,647 ; Valenzuela et al., Neuron 1993, 10,963 ; Tsoulfas et al., Neuron 1993,10,975 ; 및 Lamballe et al., EMBO J. 1993,12, 3083. 우세한 음성 돌연변이는 단백질 형태 또는 발현 벡터의 형태로 투여될 수 있으며, 이러한 우성-음성 돌연변이(예를 들어, 돌연변이체 TrkA 수용체)는 생체 내에서 발현된다. 단백질 또는 발현 벡터는 예를 들어, 복막내, 정맥내, 근육내, 피하, 경막내, 심실내, 경구, 장관, 비경구, 비강, 피부, 또는 흡입에 의함과 같이, 당업계 공지된 어떤 방법을 이용하여 투여될 수 있다. 예를 들어, 발현 벡터의 투여는 주사, 경구 투여, 입자 총 또는 카테터 투여, 및 국소 투여를 포함하는 국부 또는 전신적 투여를 포함한다. 다른 구체예에서, 단백질 또는 발현 벡터는 교감 신경 또는 감각 줄기 또는 신경절에 직접 투여된다. 당업계 숙련자는 생체 내에서 외인성 단백질의 발현을 얻기 위한 발현 벡터의 투여에 익숙하다. 예를 들어, 미국 특허 제 6,436,908; 6,413,942; 6,376,471호를 참조하시오.

안티센스 폴리뉴클레오티드, 발현 벡터, 또는 하위게놈의 폴리뉴클레오티드를 함유하는 치료적 조성물의 표적된 송달이 또한 이용될 수 있다. 수용체-매개 DNA 송달 기술이 예를 들어, 문헌[Findeis et al.,TrendsBiotechnol.(1993) 11:202 ; Chiou et al., Gene Therapeutics: Methods And Applications Of Direct Gene Transfer (J. A. Wolff, ed.)(1994); Wu et al., J.Biol. Chem.(1988)263: 621; Wu et al., J. Biol. Chem. (1994) 269: 542; Zenke et al., Proc. Natl. Acad. Sci.(USA) (1990) 87: 3655; Wu et al., J. Biol. Chem. (1991) 266:338]에서 설명된다. 폴리뉴클레오티드를 함유하는 치료적 조성물은 유전자 치료 프로토콜에 있어서 국부 투여를 위하여 약 100 ng 내지 약 200 mg(또는 그 이상)의 DNA 범위로 투여된다. 일부 구체예에서, 약 500 ng, 약 500 ng 내지 약 50 mg, 약 1μg 내지 약 2 mg, 약 5 μg 내지 약 500 μg, 및 약 20 μg 내지 약 100 μg 이상의 DNA 미만의 농도 범위가 또한 유전자 치료 프로토콜 중에 이용될 수 있다. 본 발명의 치료적 폴리뉴클레오티드 및 폴리펩티드가 유전자 송달 비히클을 이용하여 송달될 수 있다. 유전자 송달 비히클은 바이러스성 또는 비-바이러스성 기원일 수 있다(예를 들어, 일반적으로, Jolly, Cancer Gene Therapy (1994) 1:51 ; Kimura, Human Gene Therapy (1994) 5: 845; Connelly, Human Gene Therapy (1995) 1: 185; and Kaplitt, Nature Genetics (1994) 6: 148)를 참조). 이러한 코딩 서열의 발현은 내인성 포유동물 또는 이종기원의 프로모터 및/또는 인핸서를 이용하여 유도될 수 있다. 코딩 서열의 발현은 구조적이거나 억제적일 수 있다.

원하는 폴리뉴클레오티드의 송달 및 원하는 세포 내 발현을 위한 바이러스-기재의 벡터는 당업계에 주지되어 있다. 전형적인 바이러스-기재 비히클은 이에 한정되지는 않지만, 재조합 레트로바이러스(예를 들어, PCT 공개번호 제 WO 90/07936; WO 94/03622; WO 93/25698; WO 93/25234; WO 93/11230; WO 93/10218; WO 91/02805; 미국 특허 제 5,219,740; 4,777,127; 영국 특허 제 2,200,651 ; 및 유럽 특허 제 0345242호 참조), 알파바이러스-기재 벡터(예를 들어, 신드비스(Sindbis) 바이러스 벡터, 셈리키(Semliki) 숲 바이러스(ATCC VR-67; ATCCVR-1247), 로스(Ross) 강 바이러스 (ATCC VR-373; ATCCVR-1246) 및 베네수엘라 말 뇌염 바이러스(ATCC VR-923; ATCC VR-1250; ATCC VR 1249; ATCC VR-532)), 및 아데노-관련 바이러스(AAV) 벡터(예를 들어, PCT 공개번호 제 WO 94/12649, WO 93/03769; WO 93/19191; WO 94/28938; WO 95/11984 및 WO 95/00655호)를 포함한다. 문헌[Curiel, Hum. Gene Ther.(1992) 3: 147]에서 설명된 바와 같이 사멸 아데노바이러스에 연결된 DNA의 투여가 또한 이용될 수 있다.

비-바이러스성 송달 비히클 및 방법이 또한 사용될 수 있는데, 이에 한정되지는 않지만, 사멸 아데노바이러스에 단독으로 연결되거나 연결되지 않은 다가양이온 응축 DNA(예를 들어, [Curiel, Hum. Gene Ther. (1992)3: 147] 참조); 리간드-연결된 DNA(예를 들어, [Wu, J. Biol. Chem. (1989)264: 16985] 참조); 진핵 세포 송달 비히클 세포(예를 들어, 미국 특허 제 5,814,482; PCT 공개번호 제WO 95/07994; WO 96/17072; WO 95/30763; 및 WO 97/42338호 참조) 및 세포막과의 핵 전하 중화 또는 융합을 포함한다. 나출 DNA가 또한 사용될 수 있다. 전형적인 나출 DNA 도입법이 PCT 공개번호 제 WO 90/11092호 및 미국 특허 제 5,580,859호에 기재되어 있다. 유전자 송달 비히클로서 작용하는 리포좀이 미국 특허 제 5,422,120; PCT 공개번호 제 WO 95/13796호; WO 94/23697호; WO 91/14445; 및 유럽 특허 제 0 524 968호에 기재되어 있다. 추가적 접근법이 문헌[Philip, Mol. Cell Biol.(1994) 14:2411], 및 [Woffendin, Proc. Natl. Acad. Sci.(1994)91:1581]에 기재되어 있다.

발현 벡터는 본원에서 설명되는 단백질-기재 NGF 길항제의 어떤 직접적 발현을 위해 사용될 수 있음이 또한 명백하다(예를 들어, 항-NGF 항체, TrkA 이뮤노아데신 등). 예를 들어, 길항제 항-NGF 항체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 또한 원하는 세포 내에서 길항제 항-NGF 항체의 송달 및 발현을 위해 이용될 수도 있다. 발현 벡터는 길항제 항-NGF 항체의 직접 발현에 대하여 이용될 수 있음이 명백하다. 상기 발현 벡터는 복막내, 정맥내, 근육내, 피하, 경막내, 심실내, 경구, 장관, 비경구, 비강, 피부, 또는 흡입에 의하여 투여될 수 있다. 예를 들어, 발현 벡터의 투여는 주사, 경구 투여, 입자 총 또는 카테터 투여, 및 국소 투여를 포함하는 국부적 또는 전신적 투여를 포함한다. 본원에서 더 설명되는 바와 같이, 당업계 숙련자는 생체 내 외인성 단백질의 발현을 얻기 위한 발현 벡터의 투여에 익숙하다. 예를 들어, 미국 특허 제 6,436,908; 6,413,942; 및 6,376,471호를 참조하시오. NGF 및/또는 NGF 생물학적 활성을 차단(부분으로부터 전체적인 차단)할 수 있는 다른 TrkA 수용체 단편이 당업계에 공지되어 있다.

다른 구체예에서, NGF 길항제는 적어도 하나의 TrkA 이뮤노아데신을 포함한다. 본원에서 설명된 바와 같인 TrkA 이뮤노아데신은 TrkA 수용체(또는 그것의 일부) 및 면역글로불린 서열의 세포 외 도메인을 포함하는 가용성 키메라 분자를 나타내며, 이는 TrkA 수용체의 결합 특이성(일부 구체예에서, 결합 특이성을 상당히 보유함)을 보유하며 NGF에 결합할 수 있다. TrkA 이뮤노아데신은 본원에서 설명되는 바와 같이, NGF 생물학적 활성을 차단(감소 및/또는 억압)할 수 있다.

TrkA 이뮤노아데신은 당업계에 공지되어 있으며, TrkA 수용체에 대한 NGF의 결합을 차단(감소 또는 억압)하는 것으로 발견되었다. 예를 들어, 미국 특허 제 6,153,189호를 참조하시오. 한 구체예에서, TrkA 이뮤노아데신은 NGF에 결합할 수 있는 TrkA 수용체 아미노산 서열(또는 trkA 수용체의 결합 특이성을 상당히 보유하는 아미노산 서열) 및 면역 글로불린 서열(또는 TrkA 수용체의 결합 특이성을 상당히 보유하는 아미노산)의 융합을 포함한다. 일부 구체예에서, TrkA 수용체는 인간 TrkA 수용체 서열이고, 상기 융합은 면역글로불린 불변 도메인 서열을 갖는다. 다른 구체예에서, 면역글로불린 불변 도메인 서열은 면역글로불린 중쇄 불변 도메인 서열이다. 다른 구체예에서, 두개의 TrkA 수용체-면역글로불린 중쇄 융합과의 연합(예를 들어, 이황화 결합(들)에 의한 공유결합 연결을 통함)은 동종다이머의 면역글로불린-유사 구조를 가져온다. 면역글로불린 경쇄는 동종트리머 또는 동종테트라머 구조를 얻어 내기 위해 이황화-결합 다이머 내 TrkA 수용체-면역글로불린 키메라 중 하나 또는 둘 모두와 더 연합될 수 있다. 적합한 TrkA 이뮤노아데신의 예는 미국 특허 제 6,153,189호에서 설명되는 바를 포함한다.

다른 구체예에서, NGF 길항제는 TrkA 수용체와의 NGF 물리적 상호작용 및/또는 다운스트림 신호화를 차단, 억압, 변경, 및/또는 감소시킬 수 있는 적어도 하나의 항-TrkA 항체를 포함하며, 이로써 NGF 생물학적 활성이 감소 및/또는 차단된다. 항-TrkA 항체는 당업계에 공지되어 있다. 전형적인 항-TrkA 항체는 PCT 공개번호 제 97/21732, WO 00/73344, WO 02/15924, 및 미국 공개번호 제20010046959호에 설명된 바를 포함한다. 다른 구체예에서, NGF 길항제는 p75 수용체와의 NGF 물리적 상호작용 및/또는 다운스트림 신호화를 차단, 억압 및/또는 감소시킬 수 있는 적어도 하나의 항-p75 항체를 포함하는데, 이로써 NGF 생물학적 활성을 감소 및/또는 차단시킨다.

다른 구체예에서, NGF 길항제는 TrkA와의 다운스트림 키나제 신호화 및/또는 p75 수용체 활성을 억제할 수 있는 적어도 하나의 키나제 억제제를 포함한다. 전형적인 키나제 억제제는 K252a 또는 K252b이며, 이는 당업계에 공지되어 있으며 문헌[Kunsel et al., J. Neurochem. 59:715-722(1992); Kunsel et al., J. Neurochemistry 57:955-962(1991); Koizumi et al., J. Neuroscience 8:715-721(1998); Hirata et al., Chemical Abstracts 111: 728, XP00204135, 참조 abstract and 12th Collective Chemical Substance Index, p.34237, c.3(5-7),55-60, 66-69), p.34238, c.1(41-44), c.2(25-27,32-33), p.3423, c.3(48-50,52-53)]; 미국 특허 제 6,306,849호에 설명되어 있다.

임상의가 찾아낸다면 많은 다른 카테고리의 NGF 길항제가 동정될 것이다.

NGF 길항제의 동정

항-NGF 항체 및 다른 NGF 길항제가 당업계 공지된 방법을 이용하여 동정되거나 특성화될 수 있으며, 이로써 NGF 생물학적 활성의 감소, 개량, 또는 중화가 검출 및/또는 측정된다. 예를 들어, 미국 특허 제 5,766,863 및 5,891,650호에 설명된 키나제 수용체 활성(KIRA) 분석법이 항-NGF 약제를 동정하는데 사용될 수 있다. 이러한 ELISA-형 분석법은 예를 들어, TrkA 수용체와 같은 수용체 단백질 티로신 키나제(이후로부터 "rPTK")의 키나제 도메인의 자가인산화를 측정함에 의한 키나제 활성의 질적 또는 양적 측정, 및 예를 들어, TrkA와 같은 선택된 rPTK의 잠재적 길항제의 동정 및 특성화를 위해 적합하다. 분석의 제 1 단계는 예를 들어, TrkA 수용체와 같은 키나제 수용체의 키나제 도메인의 인산화를 포함하고, 여기서 수용체는 진핵세포의 세포막에 존재한다. 상기 수용체는 내인성 수용체 또는 수용체를 코딩하는 핵산일 수도 있으며, 또는 수용체 구조는 세포내로 형질전환될 수도 있다. 전형적으로, 제 1 고체상(예를 들어, 제 1 분석 플레이트의 웰)이 이러한 세포(보통 포유동물 셀라인)에 대하여 실질적으로 동종인 집단으로 코팅되어 이러한 세포가 고체상에 부착된다. 종종, 세포는 부착되어 있고 그로써 제 1 고체상에 자연적으로 부착한다. 만일 "수용체 구조"가 이용된다면, 그것은 일반적으로 키나제 수용체 및 플래그(flag) 폴리펩티드의 융합을 포함한다. 플래그 폴리펩티드는 분석법의 ELISA 부에 있어서, 포획 약제, 종종 포획 항체에 의해 인지된다. 그 후 예를 들어, 후보자 항-NGF 항체 또는 다른 NGF 항체와 같은 분석물질(analyte)이 부착성 세포를 갖는 웰에 NGF와 함께 첨가되고, 이러한 티로신 키나제 수용체(예를 들어, TrkA 수용체)가 NGF 및 분석물질에 노출된다(또는 이들과 접촉함). 이러한 분석법은 그것의 리간드 NGF에 의한 TrkA의 활성을 억제하는 항체(또는 다른 NGF 길항제)에 대한 동정을 가능케 한다. NGF 및 분석물질에 대한 노출 이후에, 흡착성 세포를 용해 버퍼(여기서 가용성 세제를 가짐) 및 부드러운 교반을 이용하여 용해시키고, 그로써, 세포 용해물을 방출하여 농축이나 세포 용해물의 정화에 대한 요구 없이, 분석법의 ELISA부를 겪을 수 있다.

그 후 이렇게 제조한 세포 용해물을 분석법의 ELISA 단계를 겪도록 준비시킨다. ELISA 단계의 제 1 단계로서, 제 2 고체상(통상적으로 ELISA 마이크로타이터 플레이트의 웰)을 포획 약제(종종 포획 항체)로 코팅시키는데, 이것은 티로신 키나제 수용체에, 또는 수용체 구조의 경우에 있어서, 플래그 폴리펩티드에 특이적으로 결합한다. 제 2 고체상의 코팅은 포획 약제를 제 2 고체상에 부착시키기 위해 수행된다. 포획 약제는 일반적으로 단일클론 항체이지만, 본원의 실시예에서 설명되는 바와 같이, 폴리클론 항체가 또한 사용될 수도 있다. 그 후 얻어진 세포 용해물을 수용체 또는 수용체 구조가 제 2 고체상에 부착(또는 여기에 포획됨)되도록 부착 포획 약제에 노출시키거나, 접촉시킨다. 그 후 속박되지 않은 세포 용해물을 제거하기 위해, 세척 단계를 수행하여, 포획된 수용체 또는 수용체 구조를 남긴다. 이어서 부착 또는 포획된 수용체 또는 수용체 구조를 항-포스포티로신 항체에 노출시키거나, 접촉시켜서, 티로신 키나제 수용체 내 인산화 티로신 잔기를 동정한다. 한 구체예에서, 항-포스포티로신 항체가 비-방사성 색체 시약의 색변화를 촉매하는 효소에 (직접 또는 간접적으로) 결합 된다. 따라서, 수용체의 인산화는 시약의 후속적 색변화에 의해 측정될 수 있다. 효소는 항-포스포티로신 항체에 직접 결합될 수 있고, 또는 결합 분자(예를 들어, 비오틴)가 항-포스포티로신 항체에 결합될 수 있으며 후속적으로 효소가 결합 분자를 통해 항-포스포티로신 항체에 결합될 수 있다. 최종적으로, 포획된 수용체 또는 수용체 구조에 대한 항-포스포티로신 항체의 결합이 예를 들어 색체 시약 내 색변화에 의해 측정된다.

또한 NGF 길항제는 NGF와 후보자 약제를 배양시키고 다음 특성 중 어떤 하나 이상을 모니터링함으로써 동정될 수 있다: (a) NGF에 대한 결합 및 NGF 생물학적 활성 및/또는 NGF 신호화 작용에 의해 매개되는 다운스트림 경로(들)를 억제함; (b) NGF 수용체 활성을 차단 또는 감소시킴; (c) NGF의 제거를 증가시킴; (d) NGF 수용체 활성을 억제함(TrkA 이량체화 및/또는 자가인산화를 포함); (e) 특히 NSAID와 결합하여, 통증의 어떤 양태를 치료, 개량 또는 예방함; (f) NGF 합성, 생성 또는 방출을 억제(감소)시킴; (g) 통증의 NSAID 치료를 증가시킴. 일부 구체예에서, NGF 길항제는 후보자 약제를 NGF와 함께 배양시키고 결합 및 NGF의 생물학적 활성의 부수적 감소 또는 중화를 모니터링함으로써 동정된다. 결합 분석법은 정제된 NGF 폴리펩티드(들)를 이용하여 수행되거나, 자연 발현세포를 이용하여, NGF 폴리펩티드(들)를 발현시키도록 형질감염될 수도 있다. 한 구체예에서, 결합 분석법은 경쟁적 결합 분석법이며, 여기서 NGF 결합에 대한 공지의 NGF 길항제와 경쟁하기 위한 후보자 항체의 능력이 평가된다. 상기 분석법은 ELISA 포맷을 포함하는 각종 포맷에서 수행될 수도 있다. 다른 구체예에서, NGF 길항제는 후보자 약제를 NGF와 함께 배양시키고 TrkA 수용체 이량체화 및/또는 자가인산화의 부수적 억제를 모니터링함으로써 동정된다.

초기 동정 이후에, 후보자 항-NGF 길항제의 활성이 표적된 생물학적 활성을 테스트하도록 공지된, 생분석법에 의해 더욱 확증되고 정련될 수 있다. 택일적으로, 생분석법은 후보자를 직접 스크리닝 하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, NGF는 반응 세포 내 다수의 형태학적으로 인지가능한 변화를 촉진한다. 이들은 이에 한정되지는 않지만, PC12 셀의 분화를 촉진시키고 이들 세포로부터의 신경돌기의 성장을 향상시키며(Urfer et al., Biochem. 36: 4775-4781(1997) ;Tsoulfas et al., Neuron 10: 975-990 (1993)), 반응성 감각 및 교감 신경절의 외식편(explant)으로부터의 신경돌기 성장(outgrowth)을 촉진시키며(Levi-Montalcini, R. and Angeletti, P. Nerve growth factor. Physiol. Rev. 48, 534-569, 1968) 예를 들어 배아 후근 신경절, 삼차 신경절, 또는 교감 신경절 뉴런과 같은 NGF 의존성 뉴런의 생존을 촉진시키는 것(예를 들어, Chun & Patterson, Dev. Biol. 75: 705-711,(1977); Buchman & Davies, DezJelopmetzt 118 :989-1001, (1993)을 포함한다. 따라서, NGF 생물학적 활성의 억제에 대한 분석은 예를 들어 후보자 항-NGF 항체 및 후보자 NGF 길항제와 같은 NGF 및 분석물질과의 NGF 반응성 세포를 배양시키는 것을 수반한다. 적절한 시간 후 세포 반응이 분석될 것이다(세포 분화, 신경돌기 생성물 또는 세포 생존).

NGF에 대한 생물학적 활성을 차단 또는 중화시키기 위한 후보자 NGF 길항제의 능력이 또한 문헌[Hongo et al., Hybridoma 19: 215-227 (2000)]에서 설명되는 바와 같이, 배아 랫트 후근 신경절 생존 생분석법에 있어서 NGF 매개 생존을 억제하기 위한 후보자 약제의 능력을 모니터링함으로써 수행될 수 있다. NGF 활성의 조절자를 동정하는 방법이 PCT/US2004/01609호에서 설명된다.

조성물

본 발명의 조성물은 본원의 다양한 구체예에서 설명되는 바와 같이, 유효량의 NGF 길항제(예를 들어, 항-NGF 항체) 및 NSAID를 포함한다. 일부 구체예에서, 조성물은 약학적으로 허용가능한 부형제를 더 포함한다. 일부 구체예에서, 조성물은 본원에서 설명된 임의의 방법의 사용을 위함이다(예를 들어 외과적 수술 후 통증을 치료하기 위한 방법과 같은 것). 제형화하는 방법 뿐만 아니라, 이러한 조성물은 예는 또한 상기 단락 및 하기에서 설명된다. NGF 길항제 및 NSAID는 단일 조성물로 존재하거나 분리 조성물로서 존재할 수도 있다. 따라서, 일부 구체예에서, NGF 길항제 및 NSAID는 동일한 조성물 내에 존재한다. 다른 구체예에서, NGF 길항제 및 NSAID는 분리 조성물 내에 존재한다.

다른 양태에서, 본 발명은 NGF 길항제 및 NSAID의 상승적 조성물을 제공한다.

일부 구체예에서, 본 발명은 통증의 치료에 있어서 사용을 위한 NGF 길항제를 포함하는 약학적 조성물을 제공하는데, 여기서 상기 사용은 NSAID의 동시 및/또는 순차적 투여를 포함한다. 일부 구체예에서, 본 발명은 통증의 치료에 있어서 사용을 위한 NSAID를 포함하는 약학적 조성물을 제공하는데, 상기 사용은 NGF 길항제의 동시 및/또는 순차적 투여를 포함한다. 일부 구체예에서, 본 발명은 통증의 치료를 위한 분리, 동시 및/또는 순차적 사용을 위한 NGF 길항제 및 NSAID를 포함하는 약학적 조성물을 제공한다. 일부 구체예에서, NGF 길항제는 항-NGF 항체이다(예를 들어, 본원에서 설명되는 바와 같이 항체 E3). 다른 구체예에서, NSAID는 이부프로펜이다. 여전히 다른 구체예에서, NGF 길항제는 항-NGF 항체이며 NSAID는 이부프로펜이다.

상기 조성물은 하나 이상의 NGF 길항제를 포함할 수 있음이 이해된다. 예를 들어, 조성물은 NGF 길항제의 클래스의 하나 이상의 구성원(예를 들어, NGF에 대한 다른 에피토프를 인지하는 항-NGF 항체의 혼합물), 및 상이한 클래스의 NGF 길항제의 구성원(예를 들어, 항-NGF 항체 및 NGF 억제 화합물)을 포함할 수 있다. 다른 전형적인 조성물은 동일한 에피토프, NGF의 상이한 에피토프에 결합하는 상이한 종의 항-NGF 항체, 또는 상이한 NGF 억제성 화합물을 인지하는 하나 이상의 항-NGF 항체를 포함한다. 다른 구체예에서, 조성물은 NGF(예를 들어, 항체)에 결합(물리적으로 상호작용)하는 길항제, NGF 수용체(예를 들어, TrkA 수용체 또는 p75 수용체와 같은 것)에 결합하는 길항제, 및 다운스트림 NGF 수용체 신호화를 감소(저지 및/또는 차단)시키는 길항제로 구성되는 그룹으로부터 선택되는 하나 이상의 NGF 길항제를 포함한다.

본 발명에서 사용되는 조성물은 동결건조 제형 또는 수성 용액의 형태로, 약학적으로 허용가능한 담체, 부형제, 또는 안정제(Remington: The Science and Practice of Pharmacy 20th Ed. (2000) Lippincott Williams and Wilkins, Ed. K. E. Hoover)를 더 포함할 수 있다. 허용가능한 담체, 부형제, 또는 안정제는 사용된 투여량 및 농도에서 수여자에게 비독성이며, 예를 들어 인산염, 시트르산염, 및 기타 유기산과 같은 버퍼; 아스코르브산 및 메티오닌을 포함하는 항산화제; 보존제(예를 들어, 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드; 헥사메토니움 클로라이드; 벤즈알코니움 클로라이드, 벤즈에토니움 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질 알콜; 예로써 메틸 또는 프로필 파라벤과 같은 알킬 파라벤; 카테콜; 레소르시놀; 시클로헥사놀; 3-펜타놀; 및 m-크레솔과 같은 것); 저분자량(약 10 잔기 미만) 폴리펩티드; 예를 들어, 혈청 알부민, 젤라틴, 또는 면역글로불린과 같은 단백질; 예를 들어 폴리비닐피롤리돈과 같은 친수성 폴리머; 예를 들어 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌, 또는 리신과 같은 아미노산; 단당류, 이당류, 및 글루코스, 만노스, 또는 덱스트란을 포함하는 기타 탄수화물; 예를 들어 EDTA와 같은 킬레이트 약제; 예를 들어 수크로스, 만니톨, 트레할로스 또는 소르비톨과 같은 당; 예를 들어 나트륨과 같은 자가-형성 반대-이온; 금속 착체(예를 들어, Zn-단백질 착체); 및/또는 예를 들어 TWEEN^TM, PLURONICS^TM 또는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)와 같은 비-이온성 계면활성제를 포함할 수도 있다. 약학적으로 허용가능한 부형제는 본원에서 더 설명된다.

본원에서 설명되는 조성물은 통증의 치료에 유용한 것으로 알려진 추가적 화합물을 함유할 수도 있다. NGF 길항제 및 NSAID, 및 그들의 조성물은 또한 약제의 유효성을 향상 및/또는 보충하기 위해 작용하는 다른 약제와 결합하여 사용될 수 있다.

다른 구체예에서, 의약의 사용 및/또는 의약의 제조용 사용의 문맥이든 간에, 본 발명은 본원에서 설명되는 임의의 방법의 사용을 위한 조성물(본원에서 설명됨)을 제공한다.

키트

본 발명은 또한 본 방법의 사용을 위한 키트를 제공한다. 본 발명의 키트는 NGF 길항제(예를 들어, 항-NGF 항체), NSAID를 포함하는 하나 이상의 용기를 포함하며, 일부 구체예에서, 본원에서 설명되는 임의의 방법에 따라서 사용을 위한 지시를 더 포함한다. 일부 구체예에서, 키트는 항-NGF 항체(예를 들어 본원에서 설명되는 항체 E3)를 포함한다. 다른 구체예에서, 키트는 항체 E3의 하나 이상의 CDR(들)(예를 들어 1, 2, 3, 4, 5, 또는, 일부 구체예에서, E3로부터의 모든 6가지 CDR)을 포함하는 항-NGF 항체를 포함한다. 키트는 개체가 통증이 있는지 또는 상기 개체가 통증의 위험을 갖고 있는지 여부를 동정하는 것을 기초로 하는 치료를 위해 적합한 개체를 선택하는 설명을 더 포함할 수도 있다. 일부 구체예에서, 본 발명은 본원에서 설명되는 어떤 방법의 사용을 위한 키트를 제공하며, 상기 키트는 NGF 길항제를 포함한다. 여전히 다른 구체예에서, 키트는 항-NGF 항체를 포함한다. 여전히 다른 구체예에서, 키트는 인간화 된 항-NGF 항체(예를 들어 본원에서 설명된 항체 E3)를 포함한다. 여전히 다른 구체예에서, 지시는 어떤 통증(예를 들어, 외과적 수술 후 통증, 화상과 관련한 통증, 류마티스 관절염, 또는 골관절염)의 치료, 예방 및/또는 개선을 위해 NSAID와 함께 NGF 길항제를 투여하는 설명을 포함한다.

일부 구체예에서, 키트는 NGF 길항제(예를 들어 항-NGF 항체), NSAID, 및 통증의 효과적인 치료를 위해, 동시에 및/또는 순차적으로 NGF 길항제 및 NSAID를 투여하기 위한 지시를 포함한다. 다른 구체예에서, 키트는 NGF 길항제(예를 들어 항-NGF 항체), 및 통증의 효과적인 치료를 위하여, NGF길항제(예를 들어 항-NGF 항체) 및 NSAID를 서로 결합하여 투여하기 위한 지시를 포함한다. 다른 구체예에서, 키트는 키트는 NGF 길항제(예를 들어 항-NGF 항체), 및 NSAID(예를 들어 이부프로펜), 및 통증의 효과적 치료를 위해, NGF 길항제 및 NSAID를 서로 결합하여 투여하기 위한 지시를 포함한다. 따라서, 본원에서 설명되는 임의의 방법이 상기 지시에 반영될 수도 있다.

일부 구체예에서, 키트는 항-NGF 항체를 포함한다. 다른 구체예에서, 항-NGF 항체는 표 1에서 나타낸 중쇄 가변 영역 및 표 2에서 나타낸 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체이다. 여전히 다른 구체예에서, 항-NGF 항체는 본원에서 설명되는 바와 같이 항체 E3이다.

NGF 길항제(예를 들어 항-NGF 항체) 및 NSAID는 분리 용기 또는 단일 용기 내에 존재할 수 있다. 상기 키트는 하나의 별개의 조성물 또는 2가지 이상의 조성물을 포함하는데, 하나의 조성물은 NGF 길항제를 포함하고 하나의 조성물은 NSAID를 포함하는 것이 이해된다.

이 발명의 키트는 적당한 포장내에 있다. 적당한 포장은 이에 한정되지는 않으나, 바이알, 보틀, 단지, 유연성의 포장(예를 들어, 봉인된 Mylar 또는 플라스틱 백) 등을 포함한다. 키트는 선택적으로 버퍼와 같은 추가적 조성물 및 해석적 정보를 제공할 수도 있다.

NGF 길항제의 사용에 관련된 지시는 일반적으로 의도되는 치료의 투여량, 도싱 스케쥴, 및 투여의 루트에 관한 정보를 포함한다. 상기 용기는 단위 투여량, 대량 포장(예를 들어, 복합-투여 포장) 또는 하위-단위 투여량일 수도 있다. 본 발명의 키트에 있어서 공급되는 지시는 전형적으로 라벨이나 포장 삽입물(예를 들어, 종이 시트가 키트내에 포함됨) 상에 기록된 지시이지만, 기계-판단가능 지시(예를 들어, 마그네틱 또는 광학적 저장 디스크 상에 포함된 지시)가 또한 허용가능하다.

라벨 또는 포장 삽입물은 상기 조성물이 통증(외과수술 후 통증 포함)을 치료, 개선 및/또는 예방하기 위해 이용됨을 나타낸다. 지시는 본원에서 설명되는 임의의 방법을 실행하기 위해 제공될 수도 있다.

본 발명의 키트는 적당한 포장으로 되어 있다. 적당한 포장은 이에 한정되지는 않지만, 바이알, 보틀, 단지, 유연한 포장(예를 들어 봉인된 Mylar 또는 플라스틱 백) 등을 포함한다. 또한 흡입기, 비강 투여 디바이스(예를 들어, 분무기) 또는 미니펌프와 같은 주입 디바이스가 조합되는 사용을 위한 포장이 고려된다. 키트는 살균 접근 포트를 가질 수도 있다(예를 들어 상기 용기는 피하용 주사 바늘에 의해 뚫을 수 있는 마개를 갖는 정맥내 용액 백 또는 바이알일 수 있음). 용기는 또한 살균 접근 포트를 가질 수도 있다(예를 들어 상기 용기는 피하용 주사 바늘에 의해 뚫을 수 있는 마개를 갖는 정맥내 용액 백 또는 바이알일 수도 있음). 조성물 내 적어도 하나의 활성 약제는 항-NGF 항체와 같은 NGF 항체이다. 용기는 제 2의 약학적으로 활성인 약제를 더 포함할 수도 있다.

키트는 선택적으로 버퍼와 같은 추가적 성분 및 해석적 정보를 제공할 수도 있다. 통상적으로, 키트는 용기 및 라벨 또는 용기 상 포장 삽입물이나 용기와 관련된 포장 삽입물을 포함한다.

일부 구체예에서, 본 발명은 상기 설명된 키트의 내용물을 포함하는 제조품을 제공한다. 일부 구체예에서, 상기 키트는 통증을 치료하기 위한 사용을 지시하는 정보와 함께(서로 결합하여) NGF 길항제(예를 들어 항-NGF 항체) 및/또는 NSAID를 포함한다.

NGF 길항제 및 NSAID의 투여, 및 치료의 평가

NGF 길항제 및 NSAID는 어떤 적당한 루트를 통해 개체에 투여될 수 있다. 예를 들어, 그들은 함께 또는 분리하여, 경구, 정맥내, 설하, 피하, 동맥내, 근육내, 척수내, 직장, 흉부내, 복막내, 심실내, 설하, 경피적으로 또는 흡입에 의해 투여될 수 있다. 그들은 예를 들어, 업계 인지된 과정에 의해 제조된 정제, 트로키, 캡슐, 엘릭시르, 현탁액, 시럽, 웨이퍼, 추잉검, 롤리오팝(lolliopops), 좌약 등의 형태로, 경구로 투여될 수 있다. 본원에서 설명된 상기 예시는 이용가능한 기술의 열거를 제한하려 하지 않음이 당업계 숙련자에게 명백할 것이다.

따라서, 일부 구체예에서, 항-NGF 항체와 같은 NGF 길항제는 정맥내 투여와 같이 공지된 방법에 따라서, 예를 들어, 볼러스(bolus)로서 또는 시간의 기간에 걸쳐서 연속 주입으로서, 근육내, 복막내, 뇌척수내, 피하, 관절-내, 활액내, 척추강내, 경구, 흡입 또는 국소 루트에 의해 개체에 투여될 수 있다. 분사 분무기 및 초음파 분무기를 포함하는 액체 제형을 위한 상업적으로 이용가능한 분무기가 투여에 유용하다. 액체 제형은 직접 분무될 수 있고 동결건조된 분말이 재건 이후에 분무될 수 있다. 택일적으로, NGF 길항제(예를 들어 항-NGF 항체)가 탄화플루오르 제형 및 계량된 투여량 흡입기를 이용하여 에어로졸화 되거나, 또는 동결건조 및 분쇄된 분말로서 흡입될 수 있다.

또한 부위-특이적이거나 표적된 국부 송달 기술이 투여에 유용하다. 부위-특이적이거나 표적된 국부 송달 기술의 예는 NGF 길항제 및/또는 NSAID의 각종 이식가능한 저장원, 또는 주입 카테터, 유치 카테터, 또는 바늘 카테터와 같은 국부 송달 카테터, 합성 이식, 외래의 덮개, 문합(shunt) 및 부목(stent) 또는 기타 이식가능한 디바이스, 부위 특이적 담체, 직접 주사, 환자 제어 진통작용(PCA) 기술 또는 디바이스의 사용, 및/또는 직접 적용을 포함한다. 예를 들어, PCT 공개번호 제 WO 00/53211호 및 미국 특허 제 5,981,568호를 참조하시오.

항-NGF 항체와 같은 약제 또는 그들의 단편의 각종 제형이 투여를 위해 사용될 수도 있다. 일부 구체예에서, 항-NGF 항체 또는 그들의 단편과 같은 약제가 순수하게 투여될 수도 있다. 일부 구체예에서, 항-NGF 항체를 포함하는 약제는 약학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 제형을 포함하는, 각종 제형일 수도 있다. 약학적으로 허용가능한 부형제는 당업계에 공지되어 있으며, 약리학적으로 유효한 물질의 투여를 촉진하는 상대적으로 비활성인 물질이다. 예를 들어, 부형제는 형태나 경도(consistency)를 제공할 수 있거나, 희석액으로서 작용할 수 있다. 적합한 부형제는 이에 한정되지는 않지만 안정화제, 습윤 및 에멀젼화제, 다양한 삼투압을 위한 염, 캡슐화제, 버퍼, 및 피부 침투 강화제를 포함한다. 비경구 및 경구적 약물 송달을 위한 제형 뿐 아니라 부형제는 문헌[Remington, et al., The Science and Practice of Pharmacy 20th Ed. Mack Publishing (2000)]에서 상기되어 있다.

일부 구체예에서, 이들 약제(NGF 길항제)는 주사에 의한(예를 들어, 복막내, 정맥내, 피하, 근육내 등) 투여를 위해 제형된다. 따라서, 이들 약제는 식염수, 링거액, 포도당액 등과 같은 약학적으로 허용가능한 비히클과 조합될 수 있다. 특정 투여량 요법, 즉 투여, 시간 및 반복은 특정 개체 및 상기 개체의 의학적 히스토리에 의존적일 것이다. 투여 요법(사용된 NGF 길항제를 포함)은 시간에 걸쳐서 다양할 수 있다.

항-NGF 항체는 주사(예를 들어, 복막내, 정맥내, 피하, 근육내 등)를 포함하여, 어떤 적합한 방법을 이용하여 투여될 수 있다. 항-NGF 항체는 또한 본원에서 설명되는 바와 같이, 흡입을 통해 투여될 수 있다. 일반적으로, 항-NGF 항체의 투여를 위해, 초기 후보 투여량은 약 0.2 mg/kg 또는 약 2 mg/kg일 수 있다. 일부 구체예에서, 전형적인 매일 투여량은 상기 언급된 인자들에 따라서, 약 3 ㎍/kg 내지 30 ㎍/kg 내지 300 ㎍/kg 내지 3 mg/kg 내지 30 mg/kg 내지 100 mg/kg 또는 그 이상 중 임의의 것으로 분포할 수도 있다. 몇일 또는 그 이상에 걸쳐서 반복 투여를 위해, 상태에 따라서, 치료는 원하는 질병 증상이 억제가 발생할 때까지 또는 충분한 치료 수준이 통증을 경감시키도록 달성될 때까지 유지된다. 전형적인 도싱 요법은 약 2 mg/kg의 초기 투여량을 투여한 후, 약 1 mg/kg의 항-NGF 항체의 투여량의 일주일간 유지한 다음, 격주에 한번 약 1 mg/kg의 투요량을 유지하는 것을 포함한다. 그러나, 다른 투여량 요법은 실행자가 달성하기 원하는 약리학적 붕괴의 패턴에 따라서, 유용할 수도 있다. 예를 들어, 일주일에 1 내지 4 시간의 도싱이 고려된다. 다른 도싱 요법은 최대 1일에 1 시간, 일주일에 1 내지 4 시간, 또는 그 미만 빈도의 요법을 포함한다. 일부 구체예에서, 화합물은 일주일에 약 1번, 1달에 약 1 내지 4번 투여된다. 항-NGF 항체의 투여량이 본원에서 기술된다. 이러한 치료법의 진행은 전통적인 기술 및 분석법에 의해 용이하게 모니터링된다.

일부 구체예에서, 그것이 항체가 아닐 경우, 본 발명에 따르는 NGF 길항제는 한가지에서 세가지 투여량으로 나뉘는 환자의 중량에 대하여 0.1 내지 300 mg/kg의 비율로, 또는 본원에서 개시되는 바와 같이 투여될 수도 있다. 정상 체중의 일부 어른 환자에 있어서, 약 0.3 내지 5.00 mg/kg에 이르는 투여량이 투여될 수도 있다. 특정 투여량 요법, 즉 투여, 시간 및 반복은 개별 약제의 특성(예를 들어, 약제의 반감기, 및 당업계 주지된 기타 고려사항들) 뿐만 아니라, 특정 개체 또는 상기 개체의 의학적 히스토리에 의존적일 것이다.

NSAID는 이러한 진통성을 위한 전통적인 투여량 수준까지의 투여량 수준으로 투여될 수도 있다. 일부 구체예에서, NSAID는 감소된 수준으로 투여된다. 적합한 투여량 수준은 선택된 NSAID의 진통 효과에 따르지만, 전형적으로 적합한 수준은 약 0.001 내지 25 mg/kg/1일, 약 0.005 내지 10 mg/kg/1일, 또는 약 0.05 내지 1 mg/kg/1일, 또는 그 미만일 것이다. 상기 화합물은 최대 1일 6번(또는 그 이상), 1일 1 내지 4번의 요법으로 투여될 수도 있으며, 또는 그것은 그보다 덜 자주 투여될 수도 있다. 일부 구체예에서, NSAID는 연속하여, 또는 매우 빈번하게(예를 들어, PCA로서) 투여된다.

조합으로 투여되는 경우, 단일 또는 분리 조성물(들)로서, 신경 성장 인자 길항제 및 NSAID는 원하는 결과의 징후와 일치하는 비율로 표현된다. 일부 구체예에서, NSAID에 대한 신경 성장 인자 길항제의 중량은 약 1 내지 1일 것이다. 일부 구체예에서, 이 비율은 약 0.01 내지 약 1 및 약 1000 내지 약 1, 약 0.01 내지 약 1 및 100 내지 약 1, 또는 약 0.1 내지 약 1 및 약 10 내지 약 1일 수도 있다. 다른 비율들이 고려된다.

통증의 치료 또는 예방의 사용을 위해 필요한 소정량의 신경 성장 인자 길항제 및 NSAID는 선택되는 특정 화합물 또는 조성물 뿐만 아니라 투여의 루트, 치료되는 상태의 성질, 및 환자의 연령 및 상태에 따라서 다양할 것이며, 치료의 경로 및 단계는, 궁극적으로 주치의의 재량일 것이다. 예를 들어, 적절한 투여량의 NGF 길항제(예를 들어 항-NGF 항체)는 사용되는 NGF 길항제(들)(또는 그들의 조성물), 치료되는 통증의 유형 및 심각도, 약제가 예방 또는 치료 목적으로 투여되는지 여부, 사전 치료, 환자의 임상적 히스토리 및 약제에 대한 반응, 및 주치의의 재량에 의존적일 것이다. 전형적으로 임상의는 원하는 결과를 달성하는 투여량에 도달할 때까지, 항-NGF 항체와 같은 NGF 길항제를 투여할 것이다.

반감기와 같은 실험적인 고려사항들은 일반적으로, 투여량의 결정에 기여할 것이다. 예를 들어, 항체는 인간 면역계와 호환가능한데, 인간화 항체 또는 완전 인간 항체와 같이 상기 항체의 반감기를 연장하고 항체가 숙주 면역계에 의해 공격받는 것을 예방하기 위해 사용될 수도 있다. 투여의 빈도는 치료의 경로에 걸쳐서 결정되고 조절될 수 있으며, 일반적으로, 그러나 필수적이지는 않게, 통증의 치료 및/또는 억압 및/또는 완화 및/또는 지연을 기초로 한다. 택일적으로, NGF 길항제 및/또는 NSAID의 지속적 연속 방출 제형이 적합할 수도 있다. 지속적 방출을 달성하기 위한 각종 제형 및 디바이스가 당업계에 공지되어 있다.

한 구체예에서, NGF 길항제에 대한 투여량은 통증을 치료하기 위해 NGF 활성을 억제하는 약제의 하나 이상의 투여가 제공되는 개체내에서 실험적으로 결정될 수도 있다. 개체는 NSAID와 함께, 예를 들어 항-NGF 항체와 같은 NGF를 억제하는 약제의 점증적 투여량이 제공된다. 치료의 효험을 평가하기 위해, 통증 표시기가 뒤따를 수 있다.

본 발명의 방법에 따르는 NGF 길항제 및 NSAID의 투여는 예를 들어, 수여자의 생리학적 상태, 투여의 목적이 치료 또는 예방인지의 여부, 및 숙련된 실행자에게 알려진 기타 인자들에 따라서, 연속적이거나 간헐적일 수 있다. NGF 길항제의 투여는 본질적으로 사전선택된 시간의 기간에 따라서 연속적일 수도 있으며 또는 일련의 간격을 둔 투여량, 예를 들어, 통증 발달의 전, 중, 또는 후; 전 및 후; 중 및 후; 전 및 중; 또는 통증 발달의 전, 중 및 후일 수도 있다. 예를 들어, 투여는 상처, 절개, 외상, 외과수술, 및 통증을 유발할 것 같은 어떤 다른 이벤트의 전, 중 및/또는 후일 수 있다.

일부 구체예에서, 항체와 같은 하나 이상의 NGF 길항제가 존재할 수도 있다. 길항제는 서로 동일하거나 상이할 수 있다. 적어도 하나, 적어도 둘, 적어도 셋, 적어도 넷, 적어도 다섯, 또는 그 이상의 상이한 NGF 길항제가 존재할 수 있다. 일반적으로, 그들 NGF 길항제는 서로 불리하게 영향주지 않는 상보성 활성을 가진다. 또한 NGF 길항제는 약제의 유효성을 향상시키고/향상시키거나 보충시키는 역할을 하는 다른 약제와 결합하여 사용될 수 있다.

일부 구체예에서, 하나 이상의 NSAID가 존재할 수도 있다. NSAID는 서로 동일하거나 상이할 수 있다. 적어도 하나, 적어도 둘, 적어도 셋, 적어도 넷, 적어도 다섯 또는 그 이상의 상이한 NSAID가 존재할 수 있다. 일반적으로 그들 NSAID는 서로 불리하게 영향주지 않는 상보성 활성을 가진다. 또한 NSAID(들)는 약제(들)의 유효성을 향상시키고/향상시키거나 보충시키는 역할을 하는 다른 약제와 결합하여 사용될 수 있다.

본 발명에 따라서 사용된 NGF 길항제(예를 들어 항체) 및 NSAID의 치료적 제형은 동결건조 제형 또는 수성 용액의 형태로, 원하는 순도를 가지는 항체를 임의의 약학적으로 허용가능한 담체, 부형제 또는 안정제와 혼합함으로써(Remington, The Science and Practice of Pharmacy 20th Ed. MAck Publishing(2000)) 저장을 위해 제조된다. 허용가능한 담체, 부형제, 또는 안정제는 사용되는 투여량 및 농도에서 수여자에 대하여 비독성이며, 인산염, 시트르산염, 및 기타 유기산과 같은 버퍼; 염화 나트륨과 같은 염, 아스코르브산 및 메티오닌을 포함하는 항산화제; 보존제(예를 들어, 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드; 헥사메토니움 클로라이드; 벤즈알코니움 클로라이드, 벤즈에토니움 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질 알콜; 메틸 또는 프로필 파라벤과 같은 알킬 파라벤; 카테콜; 레소시놀; 시클로헥사놀; 3-펜타놀; 및 m-크레졸과 같은 것); 저분자량(약 10 잔기 미만) 폴리펩티드; 혈청 부민, 젤라틴, 또는 면역글로불린과 같은 단백질; 폴리비닐피롤리돈과 같은 친수성 폴리머; 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌, 또는 리신과 같은 아미노산; 단당류, 이당류, 및 글루코스, 만노스, 또는 덱스트린을 포함하는 기타 탄수화물; EDTA와 같은 킬레이트제; 수크로스, 만니톨, 트레할로스 또는 소르비톨과 같은 당; 나트륨과 같은 자기-형성 상대-이온; 금속 착체(예를 들어, Zn-단백질 착체); 및/또는 TWEEM^TM, PLURONICS^TM 또는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)와 같은 비-이온성 계면활성제를 포함할 수도 있다.

NGF 길항제(예를 들어 항체)를 함유하는 리포좀은 문헌[Epstein, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. US 82 :3633(1985) ;Hwang, et al., Proc. Natl Acad. Sci. USA 77: 4030(1980)]; 및 미국 특허 제 4,485,045 및 4, 544, 545호에서 설명되는 바와 같이, 당업계 공지된 방법에 의해 제조된다. 향상된 순환 시간을 갖는 리포좀이 미국 특허 제 5,013,556호에 개시되어 있다. 특히 유용한 리포좀은 포스포티딜콜린, 콜레스테롤 및 PEG-유도 포스파티딜에탄올아민(PEG-PE)을 포함하는 지질 조성물을 이용하는 역상 증발법에 의해 생성될 수 있다. 리포좀은 한정된 구멍 크기의 필터를 통해 밀어져 나와서 원하는 직경의 리포좀을 수득한다.

활성 성분은 또한 콜로이드성 약물 송달 시스템(예를 들어, 리포좀, 알부민 마이크로스피어, 마이크로에멀젼, 나노-입자 및 나노캡슐) 내 또는 마크로에멀젼 내에서, 각각 예를 들어, 히드록시메틸셀룰로스 또는 젤라틴-마이크로캡슐 및 폴리-(메틸메타실레이트) 마이크로캡슐과 같이, 예컨대, 코아세르베이션 기술 또는 계면 중합에 의해, 제조된 마이크로캡슐 내에 포획될 수도 있다. 이러한 기술은 문헌[Remington, The Science and Practice of Pharmacy 20th Ed. Mack Publishing(2000)]에 개시된다.

지속적-방출 약제가 조제될 수도 있다. 적합한 예의 지속-방출 약제은 항체를 함유하는 고형 소수성 폴리머의 반투성 매트릭스를 포함하며, 이 매트릭스는 예를 들어 필름, 또는 마이크로캡슐과 같은 모양을 이룬 품목의 형태이다. 지속-방출 매트릭스의 예는 폴리에스테르, 하이드로겔(예를 들어, 폴리(2-히드록시에틸-메타크릴레이트), 또는 '폴리(비닐알콜)), 폴리락티드(미국 특허 제 3,773,919호), L-글루탐산 및 7 에틸-L-굴루타메이트의 공중합체, 비-분해가능성 에틸렌-비닐 아세테이트, LUPRON DEPOT^TM(락트산-클리콜산 공중합체 및 류프로라이드 아세테이트로 구성된 주사가능한 마이크로스피어)과 같은 분해가능한 락트산-글리콜산 공중합체, 수크로스 아세테이트 이소부티레이트, 및 폴리-D-(-)-3히드록시부틸산을 포함한다.

생체 내 투여를 위해 사용되는 제형은 무균이어야 한다. 이것은 예를 들어, 무균 필터막을 통한 필터에 의해 용이하게 완수된다. 치료적 NGF 길항제(예를 들어 항-NGF 항체) 조성물은 일반적으로 예를 들어 피하용 주사 바늘에 의해 뚫릴 수 있는 덮개를 갖는 정맥 용액 백 또는 바이알과 같은, 무균 접근 포트를 갖는 용기 내에 놓여진다.

본 발명에 따르는 조성물은 경구, 비경구 또는 직장 투여, 또는 흡입 또는 취입(insufflation)에 의한 투여를 위하여, 정제, 환약, 캡슐, 분말, 미립, 용액 또는 현택액, 또는 좌약과 같은 단위 투여 형태일 수도 있다.

정제와 같은 고형 조성물을 제조하기 위해, 주요한 활성 성분을 약학적 담체, 예를 들어, 옥수수 녹말, 락토스, 수크로스, 소르비톨, 활석, 스테아르산, 스테아르산염 마그네슘, 인산염 이칼슘 또는 고무질, 및 예로써 물과 같은 다른 약학적 희석제와 혼합시켜서, 본 발명의 화합물, 또는 그것의 비독성인 약학적으로 허용가능한 염의 동종 혼합물을 함유하는 고형 예비제형 조성물을 형성한다. 균질성으로서 이들 예비제형 조성물에 관하여 언급하는 경우, 그것은 활성 성분이 상기 조성물이 정제, 환약 및 캡슐과 같은 동등하게 효과적인 단위 투여량으로 용이하게 하위분류될 수 있도록 상기 조성물을 통해 균등하게 분포되는 것을 의미한다. 이어서 이러한 고형 예비제형 조성물을 본 발명의 활성성분의 약 0.01 mg 내지 약 0.1 mg 내지 약 500 mg을 함유하는 상기 설명된 유형의 단위 투여량 형태로 하위분류된다. 신규한 조성물의 정제 또는 환약이 연장된 활동의 이점을 제공하는 투여량 형태를 제공하기 위해 코팅되거나 그렇지 않으면 조제될 수 있다. 예를 들어, 정제 또는 환제는 내부 투여량 및 외부 투여량 성분을 포함할 수 있으며, 후자는 전자 위에 싸여진 형태로 존재한다. 두개의 성분은 장의 층에 의해 분리될 수 있는데, 이것은 위에서의 분해에 저항하고 내부 성분이 십이지장 내로 접촉하여 통과하거나 방출에 있어서 지연되도록 허용하기 위해 작용한다. 다양한 물질이 이러한 장의 층 또는 코팅을 위해 이용될 수 있으며, 이러한 물질은 많은 중합체산 및 중합체산과 셸락, 세틸 알콜 및 셀룰로스 아세테이트와 같은 이러한 물질과의 혼합물을 포함한다.

액체 형태로서, 본 발명의 조성물은 경구로 또는 주사에 의한 투여를 위해 통합될 수 있는데, 이것은 수성 용액, 적당히 향미된 시럽, 수성 또는 지성 현탁액, 및 면실유, 참기름, 코코넛 오일 또는 땅콩 오일과 같은 식용 오일을 이용하여 향미된 에멀젼, 및 엘릭시르 및 유사한 약학적 비히클을 포함한다. 수성 현탁액을 위한 적당한 분산제 또는 현탁제는 트래거캔스, 아라비아 고무, 아르기네이트, 덱스트란, 나트륨 카르복시메틸셀룰로스, 메틸셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈 또는 젤라틴과 같은 합성 및 천연 고무를 포함한다. 활성 성분은 또한 예를 들어, 수크로스 아세테이트 이소부티레이트와 같은 고도 점성 억제 방출 생성물 또는 기타로 통합될 수도 있다. 이들 제형은 경구 도싱, 또는 주사를 위해 이용될 수도 있다. 주사는 약물의 국소적 저장을 야기할 수 있음, 이는 1일에서 3개월의 경로에 걸쳐서 국부적으로 방출된다.

주사에 의한 투여를 위한 조성물은 활성 성분으로서, 표면-활성제(습윤제 또는 계면활성제)와 결합하여 또는 에멀젼의 형태로(오일 속 물 또는 물 속 오익의 에멀젼과 같음), NGF 길항제 및 NSAID를 포함하는 것을 포함한다.

적합한 표면-활성제는 특히, 예로써, 폴리옥시에틸렌소르비탄트(예를 들어, Tween^TM 20, 40, 60, 80 또는 85) 및 다른 소르비탄트(예를 들어, Span^TM 20, 40, 60, 80 또는 85)와 같은, 비-이온성 약제를 포함한다. 표면-활성제를 갖는 조성물은 0.05 내지 5% 표면-활성제, 또는 0.1 내지 2.5%를 편리하게 포함할 것이다. 필요하다면, 다른 성분이 예를 들어, 만니톨 또는 다른 약학적으로 허용가능한 비히클을 첨가시킬 수도 있음이 이해될 것이다.

적합한 에멀젼은 예를 들어 Intralipid^TM, Liposyn^TM, Infonutol^TM, Lipofundin^TM 및 Lipiphysan^TM과 같은 상업적으로 이용가능한 지방 에멀젼을 이용하여 제조될 수도 있다. 활성 성분은 사전-혼합된 에멀젼 조성물에 용해될 수도 있으며 또는 택일적으로 그것은 오일(예를 들어, 대두유, 홍화유, 면실유, 참기름, 옥수수 오일 또는 아몬드 오일) 및 인지질(예를 들어, 계란 인지질, 대두 인지질 또는 대두 레시틴) 및 물과의 혼합으로 형성된 에멀젼에 용해될 수도 있다. 에멀젼의 삼투성을 조절하기 위해 예를 들어 글리세롤 또는 글루코스와 같은 다른 성분들이 첨가될 수도 있음이 이해될 것이다. 적당한 에멀젼은 전형적으로 최대 20% 오일, 예를 들어, 5 내지 20%를 함유할 것이다. 지방 에멀젼은 지방 비말(droplet) 0.1 내지 1.0 μm, 특히 0.1 내지 0.5 μm를 포함할 수 있으며, 5.5 내지 8.0 범위의 pH를 가진다.

일부 구체예에서, 에멀젼 조성물은 신경 성장 인자 길항제를 Intralipid^TM 또는 그것의 성분들(대두유, 계란 인지질, 글리세롤 및 물)을 혼합함으로써 제조되는 것이다.

흡입 또는 취분을 위한 조성물은 약학적으로 허용가능한, 수성 또는 유기용매의 용액 및 현탁액, 또는 그것의 혼합물, 및 분말을 포함한다. 액체 또는 고체 조성물은 상기한 바와 같이 적당한 약학적으로 허용가능한 부형제를 함유할 수도 있다. 상기 조성물은 국부 또는 전신적 효과를 위해 경구 또는 경비적 호흡의 루트에 의해 투여된다. 바람직하게는 무균인 약학적으로 허용가능한 용매의 조성물은 가스를 이용하여 분무될 수도 있다. 분무된 용액은 분무 디바이스로부터 직접 호흡될 수도 있으며 또는 상기 분무 디바이스가 페이스 마스크, 텐트 또는 간헐적 양압 호흡기에 부착될 수도 있다. 용액, 현탁액 또는 분말 조성물이 디바이스로부터 (경구 또는 경비를 포함) 투여될 수 있는데, 이것은 적절한 방식으로 조성물을 송달시킨다.

치료 효과는 당업계 주지된 방법에 의해 평가될 수 있다.

다음 실시예는 본 발명을 설명하지만 제한하지는 않도록 제공된다.

발명의 간단한 설명

본 발명은 NGF의 길항제가 NSAID와 함께 통증을 치료하는데 효과적이라는 발견에 기초한다. 이러한 치료법은 예상외로 향상된 통증 치료를 결과로 가져온다. 또한, 이러한 치료는 일반적으로 NSAID의 감소된 투여량이 동일한 양의 통증 감소 및/또는 다른 형태의 NSAID 통증 치료의 향상을 달성하도록 허용한다.

첫번째 양태에서, 본 발명은 소정량의 신경 성장 인자 길항제 및 소정량의 NSAID를 투여하여, 이들이 함께 효과적인 통증 경감을 제공하는 것을 포함하는 통증을 치료(또는, 다른 구체예에서, 예방)하는 방법을 특징으로 한다. 상대적 양 및 비율의 NGF 길항제 및 NSAID는 다양할 수 있다. 일부 구체예에서, 충분한 NGF 길항제는 필요한 NSAID의 정상 투여량의 감소를 허용하여 동일한 정도의 통증 개선을 달성하기 위해 투여될 것이다. 일부 구체예에서, 충분한 NGF 길항제는 필요한 NSAID의 정상 투여량의 감소를 허용하여 적어도 약 5%, 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 또는 적어도 약 90% 이상까지 동일한 정도의 통증 개선을 달성하기 위해 투여될 것이다. 이러한 감소는 제공된 투여에 있어서 투여된 양 및/또는 제공된 시간의 기간에 걸쳐서 투여된 양에 관하여 반영할 수도 있다(감소된 빈도).

다른 양태에서, 본 발명은 유효량의 NGF 길항제와 함께 유효량의 NSAID를 투여하는 것을 포함하는 NSAID 통증 치료를 향상시키는 방법을 제공한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 결합된 투여는 동시 투여 및/또는 다른 시간에서의 투여를 포함한다. 결합된 투여는 또한 공동-제형(즉, NGF 길항제 및 NSAID는 동일한 조성물 내에 존재함(조합됨))로서 투여 및/ 또는 분리 조성물로서 투여를 포함한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, "결합된 투여"는 NSAID 및 NGF 길항제가 개체에 유효량으로 투여되는 어떤 상황을 포함하는 것을 의미한다. 본원에서 더 논의되는 바와 같이, NGF 길항제 및 NSAID는 상이한 도싱 빈도 및/또는 간격으로 투여될 수 있음이 이해된다. 예를 들어, 항-NGF 항체는 주 1회 투여될 수 있는 반면, NSAID는 더 자주 투여될 수 있다. NGF 길항제 및 NSAID가 동일한 투여의 루트 또는 상이한 투여의 루트를 이용하여 투여될 수 있고, 그러한 상이한 도싱 요법은 투여(들)의 경로에 걸쳐서 변화할 수도 있음이 이해된다. 투여는 통증의 개시 전일 수도 있다.

다른 양태에서, 본 발명은 통증의 발생을 감소시키고, 통증을 완화하고, 통증을 약화시키고, 및/또는 개체 내 통증의 발달 또는 진행을 지연시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 유효량의 NSAID와 함께 유효량의 NGF 길항제를 투여하는 것을 포함한다.

본 발명의 방법은 통증을 포함하는 어떤 병인의 어떤 통증을 치료 또는 예방하는데 적합하며, NSAID의 사용이 일반적으로 기술된다. 일부 구체예에서, 통증은 외과적 수술 후 통증이다. 일부 구체예에서, 통증은 화상과 관련한 통증이다. 다른 구체예에서, 통증은 류마티스 관절염과 관련한 통증이다. 다른 구체예에서, 통증은 골관절염과 관련한 통증이다.

본 발명의 방법에 있어서 사용상 적합한 NGF 길항제는 감소된 NGF 생물학적 활성을 직접 또는 간접적으로 야기할 수 있는 어떤 약제가다. 일부 구체예에서, NGF 길항제는 (물리적으로 상호작용하여) NGF(예를 들어, 항체)와 결합하고, NGF 수용체(예를 들어 trkA 수용체 및/또는 p75)에 결합하며 및/또는 다운스트림 NGF 수용체 신호화(예를 들어, 키나제 신호화 또는 표적 세포에서 NGF에 의해 감소된 다른 다운스트림 신호화의 억제제)를 감소(방해 및/또는 차단)시킨다. 다른 구체예에서, NGF 길항제는 NGF 합성 및/또는 방출을 억제(감소)시킨다. 다른 구체예에서, NGF 길항제는 NGF 수용체 TrkA 및/또는 p75의 발현 또는 작용을 감소시킨다. 다른 구체예에서, NGF 길항제는 TrkA 이뮤노아데신이 아닌(즉, TrkA 이뮤노아데신 이외임) NGF 길항제이다. 일부 구체예에서, NGF 길항제는 다음 중 하나 이상의 어떤 것으로부터 선택된다: 항-NGF 항체, NGF를 코딩하는 핵산에 대하여 표적된 안티-센스 분자(NGF를 코딩하는 핵산에 대하여 표적된 안티-센스 분자 포함), NGF 수용체에 대하여 표적된 안티-센스 분자(예를 들어 TrkA 및/또는 p75와 같은 것), NGF 억제성 화합물, NGF 구조적 유사체, NGF에 결합하는 TrkA 및/또는 p75 수용체의 우성-음성 돌연변이, 항-TrkA 항체, 항-p75 항체 및 키나제 억제제. 일부 구체예에서, NGF 길항제(예를 들어, 항-NGF 항체와 같은 것)는 NGF(예를 들어 hNGF와 같은 것)에 결합하고 예를 들어 NT-3, NT-4/5, 및/또는 BDNF와 같은 관련 뉴로트로핀에 대하여 현저하게 결합하지 않는다. 다른 구체예에서, NGF 길항제는 항-NGF 항체이다. 여전히 다른 구체예에서, 항-NGF 항체는 NGF에 특이적으로 결합한다. 여전히 다른 구체예에서, 항-NGF 항체는 인간 NGF를 인지한다. 또 다른 구체예에서, 항-NGF 항체는 사람 NGF에 특이적으로 결합한다. 여전히 다른 구체예에서, 항체는 다음 중 하나 이상으로부터 선택된 항체로서 동일한 NGF 에피토프 6에 본질적으로 결합한다: MAb 911, MAb 912 및 MAb 938(Hongo, et al., Hybridoma 19: 215-227 (2000)참조). 여전히 다른 구체예에서, 항-NGF 항체는 인간화 되어 있다(예를 들어 본원에서 설명된 항체 E3와 같은 인간화 된 Mab 911을 포함). 여전히 다른 구체예에서, 항-NGF 항체는 항체 E3(본원에서 설명된 바와 같음)이다. 다른 구체예에서, 항-NGF 항체는 항체 E3의 하나 이상의 CDR(들)을 포함한다(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 또는 다른 구체예에서, E3로부터의 모든 6개의 CDR). 다른 구체예에서, 항-NGF 항체는 인간이다. 여전히 다른 구체예에서, 항-NGF 항체는 표 1에서 나타낸 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열(SEQ ID NO:1) 및 표2에서 나타낸 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열(SEQ ID NO:2)을 포함한다. 여전히 다른 구체예에서, 항-NGF 항체는 표 1(SEQ ID NO:1)에서 나타낸 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열을 포함한다. 여전히 다른 구체예에서, 항-NGF 항체는 표 2(SEQ ID NO:2)에서 나타낸 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열을 포함한다. 여전히 다른 구체예에서, 항체는 예를 들어 면역학적으로 비활성인 불변 영역, 즉, 보체 매개 세포용해를 유발하지 않거나, 항체-의존성 세포 매개 세포독성(ADCC)를 자극하지 않는 변형된 불변 영역을 포함한다. 다른 구체예에서, 불변 영역은 문헌[Eur. J. Immunol. (1999) 29: 2613-2624]; PCT 출원 제 PCT/GB99/01441호; 및/또는 영국 특허 출원 제 9809951. 8호에서 설명된 바와 같이 변형된다.

일부 구체예에서, NGF 길항제는 NGF 분자에 결합한다. 여전히 다른 구체예에서, NGF 길항제는 NGF에 특이적으로 결합하는 항체이다. 그러나, NGF 길항제는 대안적으로 trkA 수용체에 결합할 수도 있다. NGF 길항제는 hNGF에 결합할 수 있고 인간 TrkA(hTrkA)에 대한 hNGF의 결합을 효과적으로 억제할 수 있는 항-인간 NGF(항-hNGF) 단일클론 항체일 수도 있다.

NGF(예를 들어 hNGF와 같은 것)에 대한 항-NGF 항체의 결합 친화성은 약 0.1. nM 내지 약 0.80 nM, 약 0.15 내지 약 0.75 nM 및 약 0.18 내지 약 0.72 nM 일 수 있다. 한 구체예에서, 결합 친화성은 약 2 pM 내지 22 pM이다. 일부 구체예에서, 결합 친화성은 약 10 nM이다. 다른 구체예에서, 결합 친화성은 약 10 nM 미만이다. 다른 구체예에서, 결합 친화성은 약 0.1 nM 또는 약 0.07 nM이다. 다른 구체예에서, 결합 친화성은 약 0.1 nM 미만, 또는 약 0.07 nM 미만이다. 다른 구체예에서, 결합 친화성은 약 100 nM, 약 50 nM, 약 10 nM, 약 1 nM, 약 500 pM, 약 100 pM, 또는 약 50 pM 중 어떤 것 내지 약 2 pM, 약 5 pM, 약 10 pM, 약 15 pM, 약 20 pM, 약 40 pM, 또는 약 50 pM 중 어떤 것이다. 일부 구체예에서, 결합 친화성은 약 100 nM, 약 50 nM, 약 10 nM, 약 1 nM, 약 500 pM, 약 100 pM, 또는 약 50 pM 중 어떤 것, 또는 약 50pM 미만이다. 일부 구체예에서, 결합 친화성은 약 100 nM, 약 50 nM, 약 10 nM, 약 1 nM, 약 500 pM, 약 100 pM, 또는 약 50 pM 중 어떤 것 미만이다. 여전히 다른 구체예에서, 결합 친화성은 약 2 pM, 약 5pM, 약 10 pM, 약 15 pM, 약 20 pM, 약 40 pM, 또는 약 40 pM 이상이다. 당업계에 주지된 바와 같이, 결합 친화성은 K_D, 또는 해리 상수로서 표현될 수 있으며, 증가된 결합 친화성은 감소된 K_D에 대응한다. 항-NGF 마우스 단일클론 항체 911(Hongo et al. , Hybridoma 19: 215-227 (2000))의 인간 NGF에 대한 결합 친화성은 약 10 nM이며, 인간화 된 항-NGF 항체 E3(본원에서 설명됨)의 인간 NGF에 대한 결합 친화성은 약 0.07 nM이다.

예를 들어 NGF 길항제가 항체인 경우, 항체는 Fab, Fab', F(ab')2, Fv 단편, 디아바디(diabodies), 단일 사슬 항체 분자 및 항체 단편으로부터 형성된 복합 특이적 항체로부터 선택되는 항체 단편 및, 단일-사슬 Fv(scFv) 분자를 포함하는 항체 단편일 수도 있다.

NSAID는 임의의 비-스테로이드계 항-염증성 화합물일 수도 있다. NSAID는 시클로옥시게나제를 억제하는 그들의 능력에 의하여 분류되어 진다. 시클로옥시게나제 1 및 시클로옥시게나제 2는 시클로옥시게나제의 두개의 주요한 이소형태이며 대부분의 표준 NSAID는 두개의 이소형태의 억제제와 혼합된다. 대부분의 표준 NSAID는 다음의 5가지의 구조적 카테고리 중 하나에 해당한다: (1) 예를 들어, 이소프로펜, 나프록센, 나프로신, 디클로페낙, 및 케노프로펜과 같은 프로피온산 유도체; (2) 예를 들어, 톨메틴 및 슬린닥과 같은 아세트산 유도체; (3) 예를 들어 메페남산 및 메클로페남산과 같은 페남산 유도체; (3) 예를 들어, 메페남산 및 메클로페남산과 같은 페남산 유도체; (4) 예를 들어 디플루니살 및 플루페니살과 같은 비페닐카르복실산 유도체; 및 (5) 예를 들어, 피록심, 수독시캄, 및 이소시캄과 같은 옥시캄.

NSAID의 다른 분류는 시클로옥시게나제 2를 선택적으로 억제하는 것으로 설명됐다. Cox-2 억제제는 예를 들어, 미국 특허 제 5,616,601; 5,604,260; 5,593,994; 5,550,142; 5,536,752; 5,521,213; 5,475,995; 5,639,780; 5,604,253; 5,552,422; 5,510,368; 5,436,265; 5,409,944 ; 및 5,130,311호에서 설명되었고, 그들 모두는 본원에서 참고로 인용되어 있다. 특정한 전형적인 COX-2 억제제는 셀레콕시브(SC-58635), 로페콕시브, DUP-697, 플로술리드(CGP-28238), 멜록시캄, 6-메톡시-2 나프틸아세트산(6-MNA), MK-966, 나부메톤(6-MNA에 대한 프로드러그), 니메술리드, NS-398, SC-5766, SC-58215, T-614; 또는 그들의 조합을 포함한다.

일부 구체예에서, 본 발명은 아스피린 및/또는 아세토미노펜이 NGF-길항제(예를 들어 항-NGF 항체와 같은 것)와 함께 사용되는 방법을 제공한다.

NGF 길항제 및/또는 NSAID는 임의의 적당한 루트를 통하여 개체에 투여될 수 있다. 예를 들어, 그들은 함께 또는 개별적으로, 및/또는 동시에 및/또는 순차적으로, 경구, 정맥내, 설하, 피하, 동맥내, 근육내, 직장내, 척추강내, 흉부내, 복막내, 심실내, 설하, 경피 또는 흡입에 의해 투여될 수 있다. 투여는 전신적, 예를 들어, 정맥내이거나, 국소적일 수 있다.

제 2의 양태에서, 본 발명은 신경 성장 인자 길항제 및 NSAID를 포함하는 조성물을 특징으로 한다. 신경 성장 인자 길항제 및 NSAID는 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 담체 또는 부형제와 함께 존재할 수도 있으며, 또는 그들은 개별 조성물로 존재할 수도 있다. 다른 양태에서, 본 발명은 NGF 길항제 및 NSAID의 상승적 조성물을 제공한다.

제 3의 양태에서, 본 발명은 본원에서 개시된 방법 중 어떤 것의 사용에 대한 키트를 특징으로 하며, 상기 키트는 NGF 길항제 및 NSAID를 포함한다. 키트는 본원에서 설명되는 임의의 방법에 대한 지시를 더 포함할 수도 있다. 지시는 NSAID와 함께(즉, 동시 투여 및/또는 다른 시간의 투여) NGF 길항제(예를 들어 항-NGF 항체와 같은 것)의 투여를 포함할 수도 있다. 일부 구체예에서, NGF 길항제 및 NSAID는 함께 포장되지만, 그들은 동일한 용기 내에서 존재할 수도 있고 그렇지 않을 수도 있다. 따라서, 일부 구체예에서, 키트는 동일한 용기 내에 존재하는 NGF 길항제 및 NSAID, 그리고 본원에서 설명되는 임의의 방법의 사용에 대한 지시를 포함한다. 다른 구체예에서, 키트는 개별 용기 내에 존재하는 NGF 길항제 및 NSAID를 포함한다.

일부 구체예에서, 발명은 유효량의 항-신경 성장 인자(NGF) 항체 및 NSAID를 개체에 투여하는 것을 포함하는 개체 내 통증을 치료하는 방법을 제공한다. 일부 구체예에서, NSAID는 이부프로펜, 나프록센, 나프로신, 디클로페낙, 케토프로펜, 톨메틴, 슬린닥, 메페남산, 메클로페남산, 디플루니살, 플루페니살, 피록심, 수독시캄, 이속시캄, 셀레콕시브, 로페콕시브, DUP-697, 플로술리드, 멜록시캄, 6-메톡시-2 나프틸아세트산, MK-966, 나부메톤, 니메술리드, NS-398, SC-5766, SC-58215, T-614로 구성되는 그룹으로부터 선택된다. 일부 구체예에서, NSAID는 이부로펜이다. 일부 구체예에서, 항-NGF 항체는 인간 NGF에 결합한다. 일부 구체예에서, 항-NGF 항체는 약 10 nM 또는 약 10 nM 미만의 결합 친화성으로 인간 NGF에 결합한다. 일부 구체예에서, 항-NGF 항체는 인간 항체이다. 일부 구체예에서, 항-NGF 항체는 인간화 항체이다. 일부 구체예에서, 인간화 항체는 SEQ ID NO:1에서 나타낸 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO:2에서 나타낸 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체이다. 일부 구체예에서, 통증은 외과적 수술 후 통증이다.

일부 구체예에서, 본 발명은 유효량의 항-NGF 항체 및 NSAID를 포함하는 통증을 치료하기 위한 약학적 조성물, 및 약학적으로 허용가능한 담체를 제공한다.

일부 구체예에서, 본 발명은 항-NGF 항체, NSAID, 및 통증을 치료하기 위해 NSAID와 함께 항-NGF 항체를 투여하기 위한 지시를 포함하는 통증을 치료하기 위한 키트를 제공한다.

실시예 1

외과적 수술 후 통증을 치료하기 위하여 NSAID와 결합된 항-NGF 단일클론 항체를 이용한 치료법

본 발명자들은 NSAID, 이부프로펜과 결합한 항-NGF 항체의 효험을 평가하기 위해 수술 후 통증을 흉내내는 통증 모델을 사용하였다. 각각의 실험을 위해, 중량이 200 내지 220g(Harlian; Indianapolis, IN)인 16 수컷 성인 스파라거스 다울리 랫트(Sparagus Dawley rat)를 임의로 음식과 물을 사용하기 전에 적어도 1주일 동안 정상 빛 조건하에 두었다. 테스트 챔버 내에서 2시간 기간의 환경순응 후 수술 전날에, 랫트를 2가지 그룹으로 나누었다: 하나는 수술 15시간 전에 수여받은 항체, 나머지는 이 때에 수여받은 비히클(5% 덱스트로스/0.45% 식염수 USP). 항-NGF 길항제 항체 911(문헌[Hongo, et al.,Hybridoma 19:215-227(2000)]참조)이 체중의 1 mg/kg으로 제공되었다. 이부프로펜이 모든 동물에 대하여 외과 수술 24 시간 후에 10, 30, 100 및 300 mg/kg(s.c.)에 이르는 다양한 농도로 제공되었다.

수술은 문헌[Brennan, et al., Pain 64:493-501(1996)]에 의해 설명된 과정을 기초로 하였다. 동물을 2% 이소플루란 및 공기 혼합물로 마취시키고, 이것을 노즈콘(nose cone)을 통해 수술 동안 유지시켰다. 오른쪽 뒷발의 발바닥 표면을 포비돈-요오드 패드와 함께 준비하고, 1-cm 중앙의 세로 절개가 발뒤꿈치의 가장자리로부터 0.5 cm에서 시작하여 발가락으로 확장되어 피부 및 근막을 통해 이루어졌다. 측정은 구부러진 위치에서 발을 잡아서 룰러를 이용해 이루어진다. 장딴지빗근(plantaris muscle)을 곡선형 핀셋을 이용하여 들어올리고 세로로 절개하였다. 상기 근육을 기시점(origin)과 삽입물 사이의 그것의 전체 깊이에 걸쳐서 절개하였다. 출혈은 가제 패트를 이용해 가해진 압력에 의해 수술 내내 억제되었다. 상처는 두개의 매트리스 봉합선(5-0 ethicon 블랙 모노필라멘트)으로 봉하였다. 이들 봉합선을 느슨하게 묶인 첫번째 매듭과 함께, 5-6번 매듭지었다. 상처 부위를 바시트라신 용액을 이용해 면봉을 발랐다. 행동 테스트가 시작되기 전에 22 시간 동안 동물이 청결한 우리에서 회복 및 휴식하도록 허용하였다.

각각의 실험을 위해, 동물을 2가지 그룹(대조군 및 항체-처리군)으로 나누었다. 항-NGF 항체를 외과 수술 15 시간 전에 제공하였다. 잔여 통증을 두개 모두의 그룹에서 수술 22 시간 후에 평가하였다(다음 그래프에서 "베이스라인"). 그 후 수술 후 24 시간에, 모든 동물을 10, 30, 100 또는 300 mg/kg(s.c.) mg/kg의 이부프로펜으로 처리하였다. 잔여 통증은 이부프로펜 처리 1 시간 후를 시작으로 평가하였다.

잔여 통증을 누적 통증 점수를 이용하여 외과수술 후 다양한 시간에 평가하였다. 랫트를 청결한 플라스틱 우리 내 플라스틱 망(격자눈금: 8mm²) 위에 두고 1분-20분 동안 순응하도록 허용하였다. 행동은 0 내지 2의 규모에서 평가되었다. 0의 점수가 주어졌는데, 만일 동물이 절개된 발 위에서 체중을 도려낸다면, 만일 말이 망에 대하여 표백되거나 가압되지 않음에 의해 평가되는 바와 같다. 만일 발이 피부의 표백이나 만입 없이, 단지 망에 접촉하는 피부와 접촉한다면 1의 점수가 주어졌다. 만일 발이 완전히 망과 멀리 있다면 2의 점수가 주어졌다. 각각의 동물을 30분 동안 5분 마다 1분 동안 관찰하였다. 1/2-시간 동안 얻은 6 점수(총 0-12)의 합계를 절개된 발의 통증을 평가하기 위해 사용하였다.

이들 실험의 결과는 표 1 및 도 1에서 나타낸다.

표 1: 수술 후 1일, 1 mg/kg 항-NGF 길항제 항체 및 0, 10 mg/kg, 30 mg/kg, 100 mg/kg 또는 300 g/kg 이부프로펜으로 처리한 후의 동물의 누적 통증 점수. 데이타는 평균(SEM)으로서 나타낸다. 데이타는 가변조건의 한가지 분석법에 의해 분석하였으며 그 후 개별 쌍을 Prizm 소프트웨어를 이용하여 복합적 비교를 위한 Bonferroni 보정을 이용하여 분석하였다.

표 1에 나타내는 바와 같이, 처리된 Mab911(1 mg/kg에서)에 대한 잔여 통증 점수는 이부프로펜이 없는 대조군(p<0.001) 보다 현저히 낮았다. 이와 유사하게, 1 mg/kg Mab911 및 10 mg/kg 이부프로펜 처리에 대한 잔여 통증 점수는 10 mg/kg 이부프로펜 단독 처리(p<0.001) 보다 현저하게 낮았고; 1 mg/kg Mab911 및 30 mg/kg에 대한 잔여 통증 점수가 30 mg/kg 이부프로펜 단독 처리(p<0.05) 보다 현저하게 낮았다. 도 1은 상기 1 mg/kg의 항-NGF 항체로 처리되거나 처리되지 않은, 그리고 다양한 투여량의 이부프로펜으로 처리되거나 처리되지 않은 동물에서 측정된 잔여 통증 점수를 나타낸다. 항-NGF 항체 및 이부프로펜을 이용한 수술전 처리는 이부프로펜 단독 또는 항체 단독 처리보다 잔여 통증을 감소시킴에 있어서 더 효과적이다. 10 mg/kg의 이부프로펜과 함께 Mab911(1 mg/kg) 처리는 적어도 300 mg/kg의 이부프로펜 단독 만큼 효과적이라는 것이 이해된다.

외과 수술 후 통증을 치료하기 위하여 디클로페낙과 함께 항-NGF 단일클론 항체 911을 이용한 처리의 효과를 테스트하기 위해, 동물을 이부프로펜 대신에 비히클 또는 5 mg/kg 디클로페낙으로 투여하는 것을 제외하고 상기 설명되는 바와 같이 실험을 수행하였다. 결과는 도 1에 나타낸다. 통증 점수의 감소는 디클로페낙 5 mg/kg 단독을 갖는 처리와 비교하여 1 mg/kg의 911 및 5 mg/kg의 디클로페낙 모두를 갖는 처리에 대한 평균에 대하여 관찰하였다.

앞의 발명이 분명한 이해를 위하여 설명과 실시예의 방법에 의해 다소 상세하게 설명되었지만, 서술 및 실시예는 본 발명의 카테고리를 제한하는 것으로 이해되어서는 안된다.

관련 출원과의 상호-참조

이 출원은 2003년 2월 19일자로 출원된, 가출원 미국 일련 번호 제 60/448,823호, 및 2003년 2월 19일자로 출원된 제 60/448,853호의 우선권 이익을 주장하며, 그것의 내용이 전체적으로 참고로서 인용되어 있다.

Claims (13)

1. 유효량의 항-신경 성장 인자(NGF) 항체 및 NSAID를 개체에 투여하는 것을 포함하는 개체 내 통증을 치료하는 방법.
2. 제 1 항에 있어서, NSAID는 이부프로펜, 나프록센, 나프로신, 디클로페낙, 케토프로펜, 톨메틴, 슬린닥, 메페남산, 메클로페남산, 디플루니살, 플루페니살, 피록심, 수독시캄, 이속시캄, 셀레콕시브, 로페콕시브, DUP-697, 플로술리드, 멜록시캄, 6-메톡시-2 나프틸아세트산, MK-966, 나부메톤, 니메술리드, NS-398, SC-5766, SC-58215, T-614로 구성되는 그룹으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
3. 제 1 항에 있어서, NSAID는 이부프로펜인 것을 특징으로 하는 방법.
4. 제 1, 2, 또는 3 항에 있어서, 항-NGF 항체는 인간 NGF에 결합하는 것을 특징으로 하는 방법.
5. 제 4 항에 있어서, 항-NGF 항체는 약 10 nM 또는 약 10 nM 미만의 결합 친화성으로 인간 NGF에 결합하는 것을 특징으로 하는 방법.
6. 제 1 항에 있어서, 항-NGF 항체는 인간 항체인 것을 특징으로 하는 방법.
7. 제 1 항에 있어서, 항-NGF 항체는 인간화 항체인 것을 특징으로 하는 방법.
8. 제 7 항에 있어서, 인간화 항체는 SEQ ID NO:1에서 나타난 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO:2에서 나타낸 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체인 것을 특징으로 하는 방법.
9. 제 1 항에 있어서, 통증은 외과 수술 후 통증인 것을 특징으로 하는 방법.
10. 제 4 항에 있어서, 통증은 외과 수술 후 통증인 것을 특징으로 하는 방법.
11. 제 8 항에 있어서, 통증은 외과 수술 후 통증인 것을 특징으로 하는 방법.
12. 유효량의 항-NGF 항체 및 NSAID, 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 통증을 치료하기 위한 약학적 조성물.
13. 항-NGF 항체, NSAID, 및 통증을 치료하기 위해 NSAID와 함께 항-NGF 항체를 투여하기 위한 지시를 포함하는 통증을 치료하기 위한 키트.