KR20040088568A - 치료제 또는 세포독성제와 생물학적 활성 펩티드의컨쥬게이트 - Google Patents

Abstract

본 발명은 치료제 또는 세포독성제와 생물학적 활성 펩티드의 컨쥬게이트 및 이들의 사용방법에 관한 것이다.

Description

치료제 또는 세포독성제와 생물학적 활성 펩티드의 컨쥬게이트{CONJUGATES OF THERAPEUTIC OR CYTOTOXIC AGENTS AND BIOLOGICALLY ACTIVE PEPTIDES}

카바메이트(carbamate) 화합물의 전구약물(prodrug)로써의 용도는 잘 알려져 있다. 카바메이트 화합물들은 벡터 분자로의 연결 지점이 히드록시기이건 아민기이건 간에 모(母) 약물(parent drug)을 재생하는데 사용될 수 있기 때문에 전구약물로써 매우 적합하다. 분자간 고리화(cyclization)에 기초한 카바메이트 전구약물들이 1980 년대 후반 이후로 보고되고 있다. 예를 들어, 미국 특허 제 4,812,590 호(유럽 제 0 296 811호에 해당한다)는 흑색종(melanomas) 내의 4-히드록시아니솔(4-hydroxyanisole)의 전달과 농축을 위한 전구약물들로써 4-히드록시아니솔 카바메이트의 유도체들을 개시하고 있다. Vigroux 외.(J. Med. Chem. 38, 3983-3994, 1995)는 N-(치환-2-히드록시페닐)-및 N-(치환 2-히드록시프로필)카바메이트들을 혼입하는(incorporate) 아세트아미노펜(acetaminophen)의 전구약물들을개시하고 있다.

최적의 전구약물 설계 내에서 약물은 생물학적으로 활성인 벡터에 컨쥬게이트되어 순환시 완전히 안정하지만, 표적(target) 세포들 내에 흡수될 때(internalized) 치료적 작용물질을 깨끗하게 방출한다. 다양한 유형들의 링커 기술들은 다른 화학적 수단들에 의해서 이 목적을 달성하고자 한다. 두 가지 유형의 생분해(biodegradation) 현상인 수동적 가수분해(passive hydrolysis) 및 효소에 의한 가수분해(enzymatic hydrolysis)가 일반적으로 고려된다. 수동적 가수분해는 단순한 화학 분해에 의해 분자가 분해할 때 발생하며; 에스테르, 카보네이트, 아미드 및 우레탄은 모두 염기성 pH 하에서 다음의 순서로 가수분해의 변화하는 정도에 민감하다: 우레탄 > 아미드 > 카보네이트 > 에스테르. 효소에 의한 가수분해는 흡수(internalization) 시뿐만 아니라 혈장(plasma) 순환 시에도 발생한다. 원하는 결과가 컨쥬게이트를 표적 세포에 운반하는 것이라면, 도중에 복합체를 분해할 수 있는 혈장 효소들에 매우 내성이 강한 컨쥬게이트가 바람직하다. 일반적으로 사용되는 에스테르 유도체들을 링커(linker)로써 선택하는 것은 특히 잘못된 것인데, 그 이유는 보편적인 에스테라제에 의해 빠르게 공격받는 말초를 순환하는 화합물이기 때문이다.

다른 링커 전략은 세포의 내부와 외부간의 pH 차이를 이용하는 것이다. 세포 내의 분자를 분해하는 리소좀은 4-6의 pH를 갖는 한편, 혈장과 세포 외 유체는 7.4의 pH를 갖는다. pH 5에서 분해하지만, pH 7에서는 안정하도록 고안된 링커는 컨쥬게이트가 혈장 내에서 수동적 또는 효소적으로 가수분해되지 않는다고 간주하면, 컨쥬게이트를 세포들에 전달하는데 유용할 수 있다. 그러나, 이 링커 전략은 펩티드 컨쥬게이트들에 최적은 아닌데, 그 이유는 합성 펩티드들의 대부분의 작업(work-up)과 정제가 산성 매질에서 이루어지기 때문이다.

또 다른 화학적 링커들은 리소좀 내에서 발견되는 특정 효소들을 이용하고자 한다. 예를 들어, 많은 펩티드 서열들은 혈장 내에서 안정하지만, 리소좀성 효소들(lysosomal enzymes)에 의해 특이하게 분해된다(cleaved).

종양 질환(neoplastic disease)의 표준 치료뿐만 아니라 이러한 많은 요법들(therapies)의 독성 부작용은 환자에게 투여될 활성 작용물질의 양을 효과적으로 제한한다. 부가적으로, 많은 활성 작용물질들은 기관-특이 독성(organ-specific toxicities)을 유발하여, 추가로 표적 조직에 전달될 수 있는 투여량(dose)을 제한한다. 예를 들어, 많은 안트라시클린 계열 멤버들(anthracycline family members)의 심장독성(cardiotoxicity)은 화학 요법제들(chemotherapeutic agents)의 그룹에 사용가능한 치료적 투여량의 최대치를 줄인다. 다양한 치료적 작용물질의 목표로 하는 약물 전달은 정상 조직 내의 독성을 낮출 수 있고 특정 조직에 집중된 국부적 효과를 허용함으로써 치료의 효능을 증가시킬 수 있다.

소마토스타틴(Somatostatin), 봄베신(bombesin), 및 다른 생물학적 활성 펩티드 유사체들(analogs)이 이러한 펩티드들에 대해 특이한 수용체들(receptors)을 과도하게 발현하는 종양 세포들을 탐지하는데 사용되어 왔다(예를 들어, Denzler 및 Reubi, Cancer 85(1) : 188-198, 1999 참조). 게다가, 소마토스타틴, 봄베신 및 다른 많은 생물학적 활성 펩티드 작용제(agonist) 유사체들은 그들의 수용체들에 결합된 후에 빠르게 흡수된다(internalized)(예를 들어, Lukinius 외, Acta Onc. 38:383-387,1999 참조). 이 펩티드 유사체들의 흡수(internalization)는 세포 핵으로의 자리 옮김(translocation)을 가져올 수 있다(Chen 외., Am. J. Physiol. Renal Physio, 279: F440-F448,2000).

소마토스타틴 유사체들은 특정 정상 또는 병든 조직들의 표면에 존재하는 특정 소마토스타틴 수용체 서브타입들(subtypes)에 결합한다. 소마토스타틴 수용체들은 염증성 장 질환들(inflammatory bowel diseases), 류마티스관절염(rheumatoid arthritis), 및 다양한 종양 타입들을 포함하는 특정 병든 조직들뿐만 아니라 많은 종양들을 공급하는 혈관들 내에서 상향-조정된다(up-regulated)(Denzler 및 Reubi, Cancer, 85: 4188-198,1999). 유사하게, 다른 생물학적 활성 펩티드에 대해 특이한 수용체들, 물질 P(Substance P)는 다양한 질환들 내에서 상향-조정될 수 있다.

적어도 5종의 소마토스타틴 수용체들이 특징 지워졌으며, 종양들은 다양한 수용체 서브타입들을 발현할 수 있다(Shaer 외., Int. J. Cancer 70: 530-537, 1997). 천연적으로 발생하는 소마토스타틴 및 그 유사체들은 이러한 수용체 서브타입들로의 특이한 결합을 나타내어, 펩티드 유사체가 특정 병든 조직들로 정확한 표적화(targeting)를 하도록 한다.

많은 세포독성제의 물리적 및 화학적 특성들은 약물의 소마토스타틴 및 봄베신 같은 생물학적 활성 펩티드들과의 컨쥬게이션(conjugation)에 문제가 있도록 한다. 예를 들어, 약물은 펩티드 유사체로의 결합 특이성 또는 생물학적 활성도를 감소할 수 있고, 표적화 작용물질로써의 그 효과를 제한한다.

부가적으로, 치료제 및 세포제들은 일정 기관들 내에 약물-펩티드 유사체들의 축적을 촉진하는 화학적 특성들을 가질 수 있어서, 독성을 증가시키고 효능을 감소시킨다. 각각의 성분의 활성을 보유하면서, 세포독성제를 생물학적 활성 펩티드 또는 항체와 같은 표적화제(targeting agent)에 결합하는 효과적 수단이 독성을 최소화하면서 치료적 효과를 극대화하기 위해 필요하다.

발명의 요약

본 발명은 치료제 또는 세포독성제와 표적화 모이어티(moiety)의 컨쥬게이트들을 특징으로 한다. 특히, 본 발명은 순환시 치료제 또는 세포독성제의 방출을 감소시키는 분해가능한(cleavable) 화학적 링커를 가져서, 컨쥬게이트의 활성 작용물질 성분이 세포 내에 더욱 빨리 흡수되고, 세포 내부로의 방출 속도가 더욱 능동적으로 이루어지는 컨쥬게이트들을 특징으로 한다.

따라서, 본 발명의 한 측면은 카바메이트 결합(linkage)을 통해 화학적 화합물들에 컨쥬게이트된 생물학적 활성 펩티드들을 특징으로 한다. 본 발명의 컨쥬게이트들은 펩티드의 생물학적 활성 보유, 컨쥬게이트의 증가된 혈장 내 안정도, 및 부착된 화합물의 세포 내 방출과 같은 많은 이점을 제공한다. 본 발명의 컨쥬게이트와 함께 사용하기 위한 바람직한 펩티드들은 소마토스타틴, 소마토스타틴 유사체들, 봄베신, 봄베신 유사체들, 키스(KiSS) 펩티드들 및 유사체들, 유로텐신 II(urotensin II) 펩티드들 및 유사체들, GnRH I 및 II 펩티드들 및 유사체들, 옥트레오타이드(octreotide), 데프레오타이드(depreotide), 바프레오타이드(vapreotide), 혈관활성 장용(vasoactive intestinal) 펩티드 (VIP), 콜레시스토키닌(cholecystokinin)(CCK), 인슐린-유사 성장인자(insulin-like growth factor)(IGF), RGD-함유 펩티드들, 멜라닌 세포자극 호르몬(melanocyte-stimulating hormone (MSH)) 펩티드, 뉴로텐신(neurotensin), 칼시토닌(calcitonin), 항종양 항체의 상보성(complementarity) 판단 부위들로부터의 펩티드들, 글루타티온(glutathione), YIGSR(백혈구-갈망(eukocyte-avid) 펩티드들, 예를 들어, P483H로 이는 혈소판 인자-4(platelet factor-4 (PF-4))의 헤파린-결합 부위(heparin-binding region)와 리신-풍부 서열을 포함.), 심방 나트륨이뇨펩티드(atrial natriuretic peptide(ANP)), β-아밀로이드(β-amyloid) 펩티드들, 델타-아편유사물질 대항제들(delta-opioid antagonists)(예를 들어, [^l25I]ITIPP(psi)[H-Tyr(3'I)-Ticpsi[CH₂NH]Phe-Phe-OH]; ITIPP(psi)), 아넥신-V(annexin-V), 엔도텔린(endothelin), 인터류킹(interleuking(IL))-1, IL-lra, IL-2, 및 IL-8, 류코트리엔 B4(leukotriene B4 (LTB4)), 화학주성(chemotactic) 펩티드들(예를 들어, N-포르밀-메티오닐-류실-페닐알라닌-라이신(N-formyl-methionyl-leucyl-phenylalanine-lysine(fMLFK)), GP IIb/IIIa 수용체 대항제들(예를 들어, DMP444), 표피성장인자(epidermal growth factor), 인간 호중성 엘라스타제 억제제(human neutrophil elastase inhibitor) (예를 들어, EPI-HNE-2 및 EPI-HNE-4), 플라스민 억제제(plasmin inhibitor), 안티모크로바이얼(antimocrobial) 펩티드들, 앱티사이드(apticide)(예를 들어, P280 및 P274), 트롬보스폰딘 (thrombospondin) 수용체(TP-1300 같은 유사체들 포함함), 비티스타틴(bitistatin), 뇌하수체 아데닐 사이클라제 타입 I 수용체(pituitary adenylyl cyclase type I receptor(PAC1)), 피브린 α-사슬(fibrin α-chain), 및 그것의 유도체들 및 유사체들을 포함한다. 또한, 포유류 체내의 세포 또는 조직을 표적으로 하는(예를 들어, 종양 또는 증식 맥관 유래의 혈관(proliferative angiogenic blood vessel)과 같은 병든 조직; 예를 들어, Aina 외, Biopolymers 66: 184-199, 2002 참조)) 파지 디스플레이 라이브러리(phage display library)에서 유래한 펩티드들, 및 그것의 보존적 치환체들이 포함된다. 그러한 펩티드들은 치료적 작용물질들과 세포독성제들을 특이적으로 암 세포 같은 세포, 또는 포유류의 몸체 내의 조직에 표적화하거나(예를 들어, 안티-아포프타틱(anti-apoptotic) 약물들의 심장 또는 뇌 조직으로의 전달), 또는 결핵에 감염된 백혈구들 또는 결절들(tubercles)을 선택적으로 표적으로 한다. 예를 들어, 소마토스타틴 또는 봄베신 이 본 발명의 컨쥬게이트 내의 생물학적 활성 펩티드로서 사용될 때, 치료제 또는 세포독성제는 소마토스타틴 수용체 또는 봄베신 수용체를 발현하는 암 세포를 표적으로 할 것이다. 본 발명은 또한 본 발명의 컨쥬게이트에 결합될 수 있는 항체들(예를 들어, 단일 클론성 항체) 또는 그것의 단편(fragment)을 특징으로 한다. 펩티드들에 관해 상기에서 논의하였듯이, 항체가 본 발명의 컨쥬게이트에 혼입되면, 치료제 또는 세포독성제는 특정 항체 결합 사이트들(specific antibody binding sites)을 표적으로 할 것이다.

본 발명의 제 1 측면에 따른 컨쥬게이트들은 하기 일반식을 가진다:

상기 식 중,

X는 세포독성제 또는 치료제이며;

n은 0 내지 6의 정수이고, (CH₂)_n은 치환되거나 치환되지 않은, 직쇄 또는 측쇄, 또는 알킬, 알케닐, 알키닐, 고리, 헤테로고리, 방향족, 또는 헤테로방향족기이고;

R은 N(R₁R₂), OR₁, 또는 SR_l이며, 그 중 R₁및 R₂는 독립적으로 수소 또는 저급 알킬기이며;

Y는 친수성 스페이서 서열, 또는 생략되고;

Z는 결합 펩티드 (linking peptide), 또는 생략되며; 및

Q는 존재한다면, 표적화 모이어티이다.

본 발명의 이 측면 및 다른 측면에서, 알킬기는 바람직하게는 1-8의 탄소 원자들을 포함하고; 알케닐기는 바람직하게는 1-X의 탄소 원자들을 포함하며; 알키닐기는 바람직하게는 1-X의 탄소 원자들을 포함하고; 고리기는 1-X의 탄소 원자들을포함한다 등등...

본 발명의 제 2 측면은 하기 식을 갖는 컨쥬게이트를 특징으로 한다:

상기 식 중,

X는 세포독성제 또는 치료제이며;

n은 0 내지 6의 정수이고, (CH₂)_n은 치환되거나 치환되지 않은, 직쇄 또는 측쇄, 또는 알킬, 알케닐, 알키닐, 고리, 헤테로고리, 방향족, 또는 헤테로방향족기이고;

R은 N(R₁R₂), OR₁, 또는 SR_l이며, 그 중 R₁및 R₂는 독립적으로 수소 또는 저급 알킬기이며, 식 중 R₃는 NH(CH₂)mSH 기(여기서 m = 2 내지 6), D 또는 L 시스테인, 벤조페논(예를 들어, p-벤조일-페닐알라닌), 또는 OH 기이다. 이 식을 갖는 컨쥬게이트 화합물은 티올(thiol), 카르복실레이트, 또는 R₃기를 포함하는 광활성 벤조페논을 통해서 펩티드, 단백질, 또는 항체에 결합하기 위해서 사용될 수 있다. 뿐만 아니라, 펩티드 또는 단백질은 펩티드 또는 단백질을 직접적으로 화합물 위에서 합성함으로써 쉽게 제조될 수 있다. 예를 들어, 화합물은 R기가 tBoc 보호된 1차 또는 2차 아미노기가 되도록 제공될 수 있으며, 하기에서 제공되는 실시예들 내에 기재된 바와 같이 펩티드 수지에 첨가될 수 있다.

펩티드들, 단백질들, 및 항체들은 또한 R₃기가 티올기를 포함할 때 알려진 티올-반응성 화학 반응들을 통해 화합물에 결합되거나 또는 R₃기가 벤조페논 모이어티를 포함할 때 광반응성(photoreactive) 반응에 의해 화합물에 부착된다(예를 들어, Greg T. Hermanson,"Bioconjugate Techniques" p. 146-152, 1996 참조).

본 발명의 모든 측면에서의 바람직한 구현예들에서, X는 캄프토테신(camptothecin), 호모캄프토테신(homocamptothecin), 콜히신(colchine), 콤브레타스타틴(combretastatin), 돌리스타틴(dolistatin), 독소루비신(doxorubicin), 메토트렉세이트(methotrexate), 포도필로톡신(podophyllotoxin), 리족신(rhizoxin), 리족신 D(rhizoxin D), 탁솔(taxol), 팩클리탁솔(paclitaxol), CC1065, 또는 마이탄시노이드(maytansinoid) 및 그것의 유도체들과 유사체들로부터 선택된다. 예를 들어, 세포독성제 캄프토테신은 그것의 단일 자유 히드록실기를 통해서 카바메이트 링커에 결합된다. 본 발명의 구현예들에서, n은 바람직하게는 2이고 R은 바람직하게 NH₂이다.

Y는 친수성 스페이서 서열로, 바람직하게는 컨쥬게이트, 또는 친수성 중합체의 생분포(biodistribution)를 증가시키는 펩티드 일 수 있다. 예를 들어, Y는 생물학적 활성 펩티드 컨쥬게이트의 친수성 생분포를 증가시키는 펩티드일 수 있다.바람직한 구현예에서, Y는 식 U(V-V)_n을 가지며, 식 중 U는 D-Pro, L-Pro, D-4-OH-Pro, L-4-OH-Pro, 사코신(Sarcosine), Lys, Orn, Dab, Dap, 4-NH₂-Phe, 또는 (NH₂-(CH₂)_m-COOH)(여기서, m = 2 내지 10임), 또는 결실된다(deleted)); 각각의 V는 독립적으로 D-Ser, L-Ser, D-Thr, L-Thr, D-Gln, L-Gln, D-Asn, L-Asn, D-4-OH-Pro, 또는 L-4 히드록시-Pro로 이루어진 군에서 선택되며; n = 1 내지 50이다. 다른 바람직한 구현예에서, 각각의 V는 독립적으로 D-Ser 또는 L-Ser이다. 다른 바람직한 구현예에서, 하나 이상의 V는 D-아미노산이다.

Y는 친수성 중합체일 수 있다. 예를 들어, Y는 폴리에틸렌 글리콜, 폴리비닐 아세테이트, 폴리비닐 알콜, HPMA(N-(2-히드록시프로필)메타크릴아미드(N-(2-hydroxypropyl)methacrylamide)) 또는 HPMA 공중합체들, α,β-폴리(N-히드록시에틸)-DL-아스파르타미드(α,β-poly(N-hydroxyethyl)-DL-aspartamide(PHEA)), 또는 α,β-폴리(N-히드록시프로필)-DL-아스파르타미드(α,β-poly(N-hydroxypropyl)-DL-aspartamide) 일 수 있다.

Z는 Z가 Q의 말단 또는 측쇄 아미노기를 통해서 Q에 결합될 때, 생물학적 활성도 Q의 50% 이상을 보존하는 결합(linking) 펩티드이다. 일반적으로, Z는 2,3,4 또는 5 잔기들(residues)의 펩티드일 수 있다. Z는 식 A-B-C-E-F를 가지며, 식 중, A는 D-Lys, D-Tyr, D-Ser, 또는 L-Ser, 또는 결실되었고; B는 D-Lys 또는 D-Tyr, 또는 결실되었고; C는 Lys, Ser, hSer, Thr, Nle, Abu, Nva,(2,3, 또는 4)3-피리딜-Ala(Pal), Orn, Dab, Dap, 4-NH₂-Phe, D-4-OH-Pro, 또는 L-4-OH-Pro, 또는 결실되었고; E는 D-Lys, D-Tyr, D-Ser, D-4-OH-Pro, L-4-OH-Pro, 3-아이오도-D-Tyr, 3,5-디아이오도-D-Tyr, 3-아스타틴-D-Tyr, 3,5-아스타틴-D-Tyr, 3-브로모-D-Tyr, 3,5-디브로모-D-Tyr, D-Asn, L-Asn, D-Asp, L-Asp, D-Glu, L-Glu, D-Gln, 또는 L-Gln; 및 F는 D-Lys, D-Tyr, D-Ser, L-Ser, D-4-OH-Pro, L-4-OH-Pro, 3-아이오도-D-Tyr, 3,5-디아이오도-D-Tyr, 3-아스타틴-D-Tyr, 3,5-아스타틴-D-Tyr, 3-브로모-D-Tyr, 3,5-디브로모-D-Tyr, D-Asn, L-Asn, D-Asp, L-Asp, D-Glu, L-Glu, D-Gln, 또는 L-Gln이며; A, B, C 및 E가 각각 Tyr, Tyr, Lys 및 Tyr이면, F는 Lys가 아니고; A, B, C 및 E가 각각 Lys, Tyr, Lys 및 Tyr이면, F는 Tyr 또는 Lys가 아니며; A 및 B는 결실되고, C 및 E는 각각 Lys 및 Tyr이면, F는 Tyr 또는 Lys이 아니다. 몇몇 펩티드들에서, Z가 없는 것이 바람직할 수 있다.

다른 구현예들에서, Z는 식 E-F를 가지며(A, B, 및 C가 결실되는), 식 중 E는 D-Lys, D-Tyr, D-Ser, D-4-OH-Pro, L-4-OH-Pro, 3-아이오도-D-Tyr, 3,5-디아이오도-D-Tyr, 3-아스타틴-D-Tyr, 3,5 아스타틴-D-Tyr, 3-브로모-D-Tyr, 3,5-디브로모-D-Tyr, D-Asn, L-Asn, D-Asp, L-Asp, D-Glu, L-Glu, D-Gln, 또는 L-Gln이고; F는 D-Lys, D-Tyr, D-Ser, L-Ser, D-4-OH-Pro, L-4-OH-Pro, 3-아이오도-D-Tyr, 3,5-디아이오도-D-Tyr, 3-아스타틴-D-Tyr, 3-5 아스타틴-D-Tyr, 3-브로모-D-Tyr, 3,5-디브로모-D-Tyr, D-Asn, L-Asn, D-Asp, L- Asp, D-Glu, L-Glu, D-Gln, 또는 L-Gln이다.

바람직한 구현예들에서, Z는 D-Ser-Nle-D-Ser-D-Ser(SEQ ID NO: 1), D-Ser- Lys-D-Ser-D-Ser(SEQ ID NO: 2), D-Ser-Lys-D-Tyr-D-Tyr(SEQ ID NO: 3), D-Ser-Lys-D-Tyr-D-Ser(SEQ ID NO: 4), D-Ser-Ser-D-Lys-D-Ser(SEQ ID NO: 5), D-Ser- Ser-D-Lys-Ser(SEQ ID NO: 5), D-Ser-Nle-D-Tyr-D-Ser(SEQ ID NO: 6), D-Ser-Pal- D-Tyr-D-Ser(SEQ ID NO: 7),D-Ser-Thr-D-Tyr-D-Ser(SEQ ID NO: 8), Lys-D-Ser-D- Ser(SEQ ID NO: 9), Ser-D-Lys-D-Ser(SEQ ID NO: 10), Ser-D-Lys-Ser(SEQ ID NO: 10), Nle-D-Tyr-D-Ser(SEQ ID NO: 11), Lys-D-Tyr-D-Ser(SEQ ID NO: 12), Pal-D- Lys-D-Ser(SEQ ID NO: 13), Thr-D-Tyr-D-Ser(SEQ ID NO: 14), D-Ser-D-Lys, D- Ser-D-Tyr, D-Lys-D-Lys, D-Lys-D-Tyr, 또는 D-Tyr-D-Lys이다.

Q는 생물학적 활성 펩티드 또는 파지 유래 펩티드들 같은 표적화 모이어티이다. 바람직한 구현예들에서, Q는 소마토스타틴, 소마토스타틴 유사체, 봄베신, 봄베신 유사체와 같은 펩티드, 또는 단일클론성 항체와 같은 항체이다. 바람직한 생물학적 활성 펩티드 또는 표적화 모이어티들은 G-단백질 결합된 수용체 또는 소마토스타틴 타입 2 수용체들(SSTR2)에 결합될 때와 같은 능동 흡수과정을 통하여 세포들을 선택함으로써 흡수된다. .

본 발명의 다른 측면은 질병 또는 생물학적 기능의 변형을 치료하기 위한 방법을 특징으로 한다. 그 방법은 그것을 필요로 하는 온혈 동물, 예를 들어, 인간에게 본 발명의 컨쥬게이트를 치료적으로 효과적이거나 또는 생물학적 기능을 변형시킬 수 있는 양을 투여하는 것을 포함한다. 이 기술분야의 당업자는 사용될 특정 컨쥬게이트가 치료될 병의 상태 또는 변형될 생물학적 시스템에 의존할 것이라는 것을 인식할 것이다. 특히, 이 기술분야의 당업자는 질병의 치료에 특이성을 갖거나 또는 목적하는 생물학적 변형을 유발할 수 있는 본 발명의 컨쥬게이트를 제조하기 위한 특정 표적화 모이어티와 세포독성제 또는 치료제를 선택할 수 있을 것이다. 바람직한 구현예들에서, 질환은 폐, 가슴, 뇌, 눈, 전립샘 또는 결장(colon)의 종량 또는 신경내분비 기원의 종양(tumor of neuroendocrine origin (예를 들어, 카르시노이드 증후군(carcinoid syndrome))이다. 질환은 또한 맥관 유래의 혈관들(angiogenic blood vessels)의 증식을 낳거나 그 원인인 상태(condition)이다.

"투여(administration)" 또는 "투여함(administering)"은 포유류에게 제약학적 조성의 투여량을 주는 방법을 의미하며, 여기서 방법은 예를 들어, 국소, 경구, 정맥내, 복막내 또는 근육내이다. 바람직한 투여의 방법은 다양한 인자들, 예를 들어 제약학적 조성의 성분들, 잠재 또는 실재 질환의 부위 및 질환의 심한 정도에 따라서 다양할 수 있다.

본 발명의 화합물들의 포괄적인 기술들에서, 치환기 내의 특정 타입의 원자들의 수는 일반적으로 범위(range)로써 주어진다. 예를 들어, 1 내지 8의 탄소 원자들을 포함하는 알킬기 또는 C_1-8알킬. 그러한 범위에 대한 언급은 명기된 범위 내의 원자들의 정수 각각을 가진 기들에 대한 특정 기준들을 포함하기 위함이다. 예를 들어, 탄소원자들 1 내지 8의 알킬기는 각각의 C_l, C₂, C₃, C₄, C₅, C₆, C₇, 및 C₈을 포함한다. C_1-8헤테로알킬은 예를 들어 하나 이상의 헤테로 원자들에 추가로 1 내지 8의 탄소원자들을 포함한다. 원자들의 다른 숫자들 및 원자들의 다른 타입들은 유사한 방식으로 나타낼 수 있다.

본원에서 사용된 "알킬"은 측쇄 또는 직쇄 탄화수소기 및 그것의 조합을 포함하기 위한 것이다. 알킬은 선택적으로 하나 이상의 같거나 다른 치환기들에 의해 선택적으로 치환될 수 있다. 알킬기는 1 내지 20의 탄소 원자들, 바람직하게는 1 내지 8의 탄소원자들을 포함한다. 예로는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, 펜틸, 이소아밀, 헥실, 옥틸 등을 포함한다. "저급 알킬"은 탄소수 11 미만, 바람직하게는 C₁-C₈알킬을 가진 측쇄 또는 직쇄를 의미한다. "저급 알킬아미드"는 상술한 바와 같이 하나 이상의 아미드-함유기에 의해 치환된 저급 알킬기를 의미한다. 본원에서 사용된, 용어들 "알킬" 및 접두사 "알크-(alk-)"는 또한 고리기들, 즉, 시클로알킬 및 시클로알케닐기들을 나타낼 수 있다. 고리기들은 전부 포함하여 단일환(環)(monocyclic) 또는 다환(環)(polycyclic)일 수 있고, 바람직하게는 3 내지 8개의 고리(ring) 탄소 원자들을 가질 수 있다.

용어 "알케닐", 단독 또는 조합은, 하나 이상의 이중 결합을 가지며 2 내지 20개의 탄소 원자들, 바람직하게는 2 내기 대략 8개의 탄소원자들을 포함하는 직쇄 또는 측쇄 탄화수소를 의미한다. 용어 "알키닐", 단독 또는 조합은 하나 이상의 삼중 결합을 가지며 2 내지 20개의 탄소 원자들, 바람직하게는 2 내기 대략 8개의 탄소원자들을 포함하는 직쇄 또는 측쇄 탄화수소를 의미한다.

"헤테로알킬"은 그 안에 있는 하나 이상의 메틸렌들(-CH₂-)이 질소, 산소, 황, 카르보닐, 티오카르보닐, 포스포릴, 술포닐, 또는 NR(여기서 알은 알킬이다)에 의해서 치환된 분지(branched) 또는 비분지(unbranched)형 작용기를 의미한다.몇몇 예들은 3급 아민들, 에테르들, 티오에테르들, 아미드들, 티오아미드들, 카바메이트들, 티오카바메이트들, 포스포라미데이트들(phosphoramidates), 술폰아미드들 및 디설파이드들(disulfides)을 포함한다. 헤테로알킬은 선택적으로 단일환(環), 2환(環)(bicyclic) 또는 3환(環)(tricyclic)의 고리들을 포함할 수 있다. 헤텔로알킬기는 치환되거나 치환되지 않을 수 있다.

"유사체(analog)"는 기준 분자와 다르지만, 구조적, 기능적 및/또는 화학적으로 관련된 분자를 의미한다. 유사체는 기준 분자의 필수적인 특성들, 기능들, 또는 구조들을 보유할 수 있다. 가장 바람직하게는, 유사체는 기준 분자의 하나 이상의 생물학적 기능을 보유한다. 일반적으로, 차이들은 제한되어 있어서 기준 분자와 유사체의 구조 또는 서열은 전체적으로 유사하다. 펩티드 유사체와 그것의 기준 펩티드는 하나 이상의 치환, 첨가 및/또는 결실, 그것의 조합에 의해서 아미노산 서열이 다를 수 있다. 치환되거나 또는 삽입된 아미노산 잔기는 펩티드 유사체의 유전성 코드에 의해 코딩되거나 코딩되지 않을 수 있다. 펩티드 또는 폴리펩티드의 유사체는 대립 변형(allelic variant)과 같이 자연적으로 발생할 수 있거나, 또는 자연적으로 발생하는 것으로 알려지지 않은 변형일 수 있다. 펩티드들의 비-자연적 발생 유사체들은 직접 합성, 변형 또는 돌연변이 유발 기술들(mutagenesis techniques)에 의해서 합성될 수 있다.

"생물학적-활성 펩티드"는 생물학적 과정 또는 기능에 관련된 임의의 자연적으로 발생하는, 변형된, 또는 합성 펩티드를 의미한다. 생물학적 활성 펩티드들의 제한되지 않는 예는 다음을 포함한다: 호르몬들, 성장 인자들, 신경 전달 물질들(neurotransmitters), 항원들(antigens), 항체들(antibodies), 또는 그것의 단편들.

용어 "봄베신 펩티드(bombesin peptide)"는 본래 봄베신의 하나 이상의 생물학적 활성를 갖는 봄베신, 또는 그것의 유사체를 의미하며; 바람직하게 이 활성은 봄베신 수용체-포함 세포(bombesin peptide-bearing cell) 상에 알려진 봄베신 수용체 서브타입들의 하나 또는 전부에 특이하게 결합하는 능력이다. 봄베신 유사체들은 제한되지 않는 예로, 옥타펩티드 G-Trp-H-I-His-J-K-NHV(SEQ ID NO:15)를 포함하는 기에서 선택된 펩티드들로 그 중에서 G는 Gln, Ash, Nle, 또는 Nva이고; H는 Ava, Gly, Leu, Val, Ile, Nle, 또는 Nva; I는 β-Ala, 4-아미노부티르산, Gly, Ala, D-Ala, N-Me-Ala, 또는 N-Me-D-Ala이고; J는 Phe, Tyr, 4-클로로-Phe, 4-플루오로-Phe, 4-브로모-Phe, 4-NO₂-Phe, Ala, Gly, Leu, Val, Ile, Nle, 또는 Nva이고; K는 Met, Phe, Tyr, 4-클로로-Phe, 4-플루오로-Phe, 4-브로모-Phe,4-NO₂-Phe, Ala, Gly, Leu, Val, Ile, Nle, 또는 Nva이며; N은 아미드 또는 N-알킬아미드를 나타내고 V는 H 또는 저급 알킬아미드이다.

"고리(cyclic)"는 3 내지 10 및 더욱 바람직하게는 3 내기 6 탄소를 가진 탄화수소기를 의미한다.

"세포독성제(cytotoxic agent)"는 임의의 자연적으로 발생한, 변형된, 또는 합성된 화합물로 종양 세포들에 독성인 것을 의미한다. 그러한 작용물질들은 염증성 질환들, 자가면역 장애들(autoimmune disorders) 뿐만 아니라 종양(neoplasms)의 치료에 유용하며, 세포 증식 또는 과다활동 세포 증식(hyperactive cell population)으로 특징되는 다른 증상들 또는 질환들의 치료에 유용하다. 세포독성제는 제한되지 않는 예로, 알킬화제(alkylating agents), 항생제들(antibiotics), 항대사물질들(antimetabolites), 튜불린 억제제들(tubulin inhibitors), 국소이성화효소 I 및 II 억제제들(topoisomerase I and II inhibitors), 호르몬성 작용제들 또는 대항제들(hormonal agonists or antagonists), 또는 면역성 조절인자(immunomodulators)을 들 수 있다. 세포독성제들은 빛 또는 적외선에 의해 활성될 때 세포독성일 수 있으며(Photofrin, IR dyes; Nat. Biotechnol. 19 (4): 327-331,2001), 다른 역학적 경로들을 통해서 동작할 수 있거나, 또는 보충성 약효 증강 작용물질들(supplementary potentiating agents) 일 수 있다.

"친수성 생분포(hydrophilic biodistribution)"는 본 발명의 펩티드 작용물질들의 펩티드 작용물질들이 투여되는 주체의 신체 유체들(예를 들어, 혈액, 뇌척수액, 소변, 또는 다른 신체 유체들)에 대한 친화력이 펩티드 작용물질들이 주체의 신체를 통해서 분배되지만, 간, 쓸개 담낭(gall bladder), 및 신장 근위 세관들(kidney proximal tubules)과 같은 말초 기관들에 의해 섭취되는 것을 피하면서, 신장을 통하여 소변 내에 분비되는 정도의 친화력을 의미한다.

"친수성 중합체"는 본 발명의 펩티드 작용물질의 생분포를 변경하는 자연적으로-발생하는 또는 합성 수용성 중합체로 선택적으로 변형된 것을 의미한다. 그러한 중합체들의 제한되지 않는 예로는 폴리(에틸렌글리콜)(PEG), 폴리(비닐알콜)(PVA), 폴리비닐 아세테이트, 덱스트란, 히드록시에틸 녹말, 젤라틴, PVP, PHPMA, α,β-폴리[N(2-히드록시에틸)-DL-아스파르타미드(PHEA), 폴리숙신아미드(PSI), α,β-폴리(N-히드록시프로필)-DL-아스파르타미드 등을 들 수 있다. 이러한 중합체들은 예를 들어, 숙시닐화(음전하)(succinylation(negative charge)), PSI의 부분적 가수분해(카르복실기들), 또는 아미노 또는 카르복실-함유기들 등을 부가하기 위한 화합물들과의 반응에 의해서 변형될 수 있다. 그러한 선택적 변형들은 중합체의 친수성도를 증가시키거나 또는 변형할 수 있거나, 또는 본 발명의 펩티드 또는 세포독성 또는 치료적 작용물질들로의 결합을 가능하게 한다. 그러한 중합체들과 변형들은 이 기술분야에 알려져 있고, 예를 들어, Yamoaka 외., J. Pharmacol. Sci. 83: 601-606, 1994; Rypacek 외., Pfluges Arch. 392: 211-217,1982; Yamoaka 외., J. Pharm. Pharmacol. 47: 479-486, 1995; Francesco, Bioconjugate Chemistry 9 (4): 418-450,1998; Duncan 및 Spreafico, Clin. Pharmacokinet. 27 (4): 290-306,1994에 기재되어 있으며, 각각은 그 전체가 본원에 참고문헌으로써 포함된다.

"친수성 스페이서 서열(hydrophilic spacer sequence)"은 말초 축적을 억제하고 및/또는 콩팥에 의한 제거(renal clearance)를 촉진함과 같이 본 발명의 화합물의 생분해를 증가시키는 친수성 펩티드 또는 친수성 중합체를 의미한다. 본 발명에 사용되는 친수성 스페이서 서열들의 예들은 본원 내에 제공된다.

"펩티드"는 임의의 폴리펩티드, 펩티드(고리 또는 가지 펩티드들 포함), 또는 펩티드 결합들 또는 변형된 펩티드 결합들에 의해 서로 결합된 2 이상의 아미노산들을 포함하는 단백질을 의미한다. 본원 내에 사용된, 펩티드는 일반적으로 펩티드들, 올리고펩티드들 또는 올리고머들의 단쇄들(short chains), 길이로 약 100 잔기들 까지의 장쇄들(longer chains)를 나타낸다. 펩티드들은 자연적 공정들 또는 이 기술분야에 잘 알려진 화학적 변형 기술들에 의해서 변형된 아미노산 서열들을 포함한다. 변형들은 펩티드 골격, 아미노산 측쇄들, 및 아미노 또는 카르복실 말단들을 포함하는 폴리펩티드의 어디에서도 발생할 수 있다.

펩티드 아미노산 잔기들에 대해 본 명세서 내에 사용된 표시들(notations)은 이 기술분야에 통상적으로 사용되는 그러한 약자들이다. 보다 덜 일반적인 약자들인 Abu, Ava, β-Ala, hSer, Nle, Nva, Pal, Dab, 및 Dap는 각각 2-아미노-부티르산, 아미노 발레르산, 베타-아미노프로피온산, 호모세린(homoserine), 노르류신(norleucine), 노르발린(norvaline), (2,3 또는 4)3-피리딜-Ala((2,3, or 4)3-pyridyl-Ala), 1,4-디아미노부티르산(1,4-diaminobutyric acid), 및 1,3-디아미노프로피온산(1,3-diaminopropionic acid)을 의미한다. 본 발명의 모든 측면들에서, 아미노산들을 D- 또는 L- 아미노산들로 나타내지 않았으면, 문맥이 특정 이성질체를 필요로 하지 않는다면, 아미노산은 L-아미노산이거나 또는 D- 또는 L-아미노산일 수 있다.

"소마토스타틴 펩티드(somatostatin peptide)"는 소마토스타틴, 또는 본래 소마토스타틴의 생물학적 활성의 하나 이상을 가진 그것의 유사체; 바람직하게는, 이 활성은 소마토스타틴 수용체-함유 세포 상의 소마토스타틴 수용체에 특이적으로 결합하는 능력이다. 생물학적 활성을 갖는 많은 그러한 유사체들이 알려지고 기재되어 있는데, Hornik 외., 미국 특허 제 5,770, 687호; Coy 외., 미국 특허 제 5,708, 135호; Hoeger 외., 미국 특허 제 5,750, 499호; McBride 외., 미국 특허 제 5,620, 675호; Coy 외., 미국 특허 제 5,633, 263호; Coy 외., 미국 특허 제 5,597, 894호; Taylor 외., 미국 특허 제 5,073,541호; Coy 외., 미국 특허 제 4,904,642호; Dean, 미국 특허 제 6,017, 509; Hoffman 외., WO 제 98/47524호; 및 A. E. Bogden, 미국 특허 제 5,411,943호를 예로 들 수 있으며, 각각은 그 전체가 본 명세서에 참고문헌으로써 포함된다.

"표적화 모이어티(targeting moiety)"는 수용체 또는 주어진 표적 세포 집단과 관련된 다른 수용성 모이어티에 특이적으로 결합하거나 또는 반응적으로 결합하거나 또는 복합체를 이루는 것을 의미한다. 컨쥬게이트 내의 링커를 경유하여 약물 시약(drug reagent)이 결합되는 이 세포 반응성 분자는 치료적으로 또는 달리 생물학적으로 변형되는 것을 추구하는 세포 집단에 결합되거나, 복합체를 이루거나 또는 반응하며, 자유 반응성 아민기를 포함하거나 또는 그러한 아민기를 포함하도록 변형될 수 있는 임의의 분자일 수 있다. 세포 반응성 분자는 컨쥬게이트, 및 세포독성 또는 치료적 작용물질을 리간드와 함께 반응하는 특정 표적 세포 집단에 전달하는 역할을 한다. 그러한 분자들은 제한되지 않는 예로, 거대 분자량 단백질들(일반적으로 10,000 달턴 초과), 예를 들어, 항체들 및 폴리펩티드 또는 펩티드 리간드들. 및 비-펩티딜 리간드들과 같은 더 작은 분자량 단백질들(일반적으로, 10,000 달턴 미만)을 들 수 있다.

"치료제(therapeutic agent)"는 인간 질환의 탐지, 진단 또는 치료에 사용되는 임의의 화합물을 의미한다. 그러한 화합물들은 자연적으로 발생되거나, 변형되거나 또는 합성된 것일 수 있다. 치료적 작용물질들은 인간 질환 경로 내에 관련된 임의의 생물학적 과정을 촉진하거나 억제할 수 있다. 바람직한 질환 표적들은 제한되지 않는 예로, 염증성 장 질환(inflammatory bowel disease), 류마티스 관절염(rheumatoid arthritis), 종양 세포들 아포프토시스(neoplastic cells apoptosis), 심장 조직들(cardiac tissues), 또는 이상하게 증식하는 세포들(aberrantly proliferating cells), 카르시노이드 증후군(carcinoid syndrome), 말단비대증(acromegaly), 결핵(tuberculosis), 및 혈관들의 부적절한 증식을 유발하는 혈관생성(angiogenesis)(예를 들어, 눈 안의 지나진 혈관생성(angiogenesis)에서 기인하는 황반 변성(macular degeneration))을 포함한다. 치료제는 예를 들어, 세포독성을 포함하는 항종양제(antineoplastic)일 수 있다. 항종양제들은 알킬화 작용물질들(alkylating agents), 항체들, 항대사물질들(antimetabolites), 호르몬성 작용제 또는 대항제들(hormonal agonists or antagonists), 튜불린 억제제들, 토포이소머라아제 I 및 II 억제제들, 안티- 또는 프로-아폽토시스 작용물질들(anti- or pro- apoptotic agents), 또는 면역 조절인자들(immunomodulators)을 들 수 있다. 항종양제들은 다른 역학적 경로들을 통해서 작동할 수 있거나, 또는 항종양제들은 보충성 약효 증강 작용물질들( supplementary potentiating agents)일 수 있다.

"처치함(treating)"은 예방적 및/또는 치료적 목적을 위해서 제약학적 조성을 투여하는 것을 의미한다. "질환을 예방한다(prevent disease)"는 아직 아프지않지만, 감염되기 쉽거나, 또는 특정 질환에 위험이 있는 환자의 예방적 처리를 의미한다. "질환을 처치하다(treat disease)" 또는 "치료적 처치(therapeutic treatment)"에의 사용은 이미 질환으로 고생하는 환자의 질환을 개선하거나 환자의 상태를 호전되도록 하기 위해 처치함을 의미한다. 또한, 청구항들과 구현예들에서, 처치함은 치료적 또는 예방적 목적으로 포유류를 처치하는 것이다.

본 발명은 치료제 또는 세포독성제와 생물학적 활성 펩티드의 컨쥬게이트 및 그들의 용도에 관한 것이다.

도 1은 소마토스타틴 유사체 함유 BINAR기의 수지-상 합성(on-resin synthesis)과 카바메이트 결합기(linking group)를 통하여 캄프토테신을 부착하고 수지를 제거함으로써 화합물 2를 제공하는 것을 나타내는 도표(diagram)이다. 기본 조건(conditions) 또는 효소적 공격은 자유 캄프토테신의 친핵체-보조 방출을 가져온다.

도 2는 컨쥬게이트들 1-6에 대한 투여량-반응 곡선(dose-response curve)을 나타내고 세포 생활력 MTT 에세이(cell viability MTT assay)를 사용하여 3일 동안의 배양 후 컨쥬게이트들 1-6이 소마토스타틴 수용체 서브타입 2 (SSTR2) 양성 IMR-32 세포들을 죽이는 능력을 보여주는 그래프이다.

본 발명은 세포독성제 또는 치료제들과 생물학적 펩티드들의 컨쥬게이트들을 특징으로 한다. 이러한 컨쥬게이트들은 그러한 세포독성제 또는 치료제들의 투여에 많은 이점을 제공한다. 본 발명의 컨쥬게이트들은 표적 부위들 또는 특정 세포들에 지시되어(directed) 세포독성제 또는 치료제의 효과적 흡수를 가져올 수 있다. 뿐만 아니라, 본 발명의 컨쥬게이트들은 순환시 세포독성 또는 치료적 작용물질의 감소된 방출을 나타낸다. 본 발명의 컨쥬게이트들은 세포독성 또는 치료적 작용물질의 방출을 조절하기 위해서 목적하는 바와 같이 변형될 수 있다.

본 발명의 컨쥬게이트들은 하기 일반식을 가진다:

상기 식 중,

X는 세포독성제 또는 치료제이며;

n은 0 내지 6의 정수이고, (CH₂)_n은 치환되거나 치환되지 않은, 직쇄 또는 측쇄, 또는 알킬, 알케닐, 알키닐, 고리, 헤테로고리, 방향족, 또는 헤테로방향족기이고;

R은 N(R₁R₂), OR₁, 또는 SR_l이며, 그 중 R₁및 R₂는 독립적으로 수소 또는 저급 알킬기이며;

Y는 친수성 스페이서 서열, 또는 생략되고;

Z는 결합 펩티드 (linking peptide), 또는 생략되며; 및

Q는 존재한다면, 표적화 모이어티이다.

본 발명에 의하면, 세포독성제의 방출속도는 컨쥬게이트의 화학적 구조를 변형함으로써 조절될 수 있다. 예를 들어, R이 NH₂이고 n = 2이면, 하기 치환 반응이 일어날 수 있다:

임의의 이론에 구속되지 않는다면, 상기 메카니즘 내에서, 친핵성기는 n에 의존하여 조정 가능한 방식 내에서 세포독성제 또는 치료제("X-OH" 로써)의 세포간 방출을 돕는다. 친핵체(nucleophile)의 반응성은 탄화수소 측쇄의 길이에 따라서 증가되거나 또는 감소될 수 있는데, 즉, n의 값, 또는 R을 NCH₃, OH, 또는 N(CH₃)₂로 바꿈에 따라서 증가되거나 감소될 수 있다. 예를 들어, 세포독성기가 알킬-OH기, 예를 들어, 캄포테신(campothecin), 호모캄프토테신(homocamptothecin), 콜히친(colchicine), 콤브레타스타틴(combretastatin), 돌리스타틴(dolistatin), 독소루비신(doxorubicin), 메토트렉세이트(methotrexate), 포도필로톡신(podophyllotoxin), 리족신(rhizoxin), 리직신 D(rhizixin D), 로카글라미드(rocaglamide), 앙귀딘(anguidine), 탁솔(a taxol), 팍틀리톡솔(pactlitoxol),CC1065, 또는 마이탄시노이드(maytansinoid)를 통해서 카바메이트 결합에 결합될 때 , n = 2가 바람직하다. 그러나, 세포독성기가 아릴-OH기(예를 들어, 콤브레타스타틴 또는 로카글라미드)를 통해 결합될 때, R은 N(CH₃)₂와 n = 3이 바람직하다:

또한, 본 발명의 컨쥬게이트들은 세포독성 또는 치료적 작용물질의 방출을 조절하도록 고안될 수 있다는 것은 본원의 교시로부터 명백하다.

본 발명은 또한 하기 식을 가진 화합물을 특징으로 한다:

상기 식 중,

X는 세포독성제 또는 치료제이며;

n은 0 내지 6의 정수이고, (CH₂)_n은 치환되거나 치환되지 않은, 직쇄 또는 측쇄, 또는 알킬, 알케닐, 알키닐, 고리, 헤테로고리, 방향족, 또는 헤테로방향족기이고;

R은 N(R₁R₂), OR₁, 또는 SR_l이며, 그 중 R₁및 R₂는 독립적으로 수소 또는 저급 알킬기이며, 식 중 R₃는 NH(CH₂)mSH 기(여기서 m = 2 내지 6), D 또는 L 시스테인, 벤조페논(예를 들어, p-벤조일-페닐알라닌), 또는 OH 기이다. 예를 들어, 하기 식을 가진 화합물은:

화합물을 펩티드, 단백질, 또는 항체에 결합하는데 사용될 수 있다. 게다가, 펩티드 또는 단백질은 직접적으로 이 컨쥬게이트 상에서 합성될 수 있고, 그리하여 펩티드 또는 단백질을 포함하는 컨쥬게이트 화합물들을 제조하는 쉬운 수단을 제공한다. 화합물은 R기가 tBoc 보호된 1급 또는 2급 아미노기이도록 제공될 수 있으며, 펩티드 또는 단백질은 하기에서 제공되는 실시예들 내에서 기재된 바와 같이 화합물에 첨가될 수 있다.

펩티드들, 단백질들, 및 항체들은 또한 하기 식을 가진 화합물에 결합될 수있다:

이 보호되지 않은 R 유도체는 R₃위치에서 티올 모이어티에 부착하는 알려진 티올-반응성 화학 반응들을 사용하여 펩티드들, 단백질들 및 항체들을 결합하는데 사용될 수 있다(예를 들어, Greg T. Hermanson, "Bioconjugate Techniques" p. 146-152,1996, 및 하기 실시예 21 참조).

본 발명의 모든 컨쥬게이트들에서, X는 1급, 2급, 3급, 4급, 벤질 또는 페놀 히드록시기에서 선택되는 것이 바람직하다. 이 기술분야의 당업자는 히드록시기가 없는 그러한 세포독성제 또는 치료제들에 대해서 이 기술분야에 알려진 절차들을 사용하여 히드록시기와 같은 것을 포함하는 유도체가 제조될 수 있다는 것을 인식할 것이다.

바람직한 세포독성제들은 암 요법(therapy)에 사용되는 것들로, 일반적으로, 알킬화제(alkylating agents), 항-증식 작용물질들(anti-proliferative agents), 튜불린 결합 작용물질 등이다.

바람직한 세포독성제들의 부류들은, 예를 들어, 안트라시클린 계열의 약물들(anthracycline family of drugs), 빈카 약물들(vinca drugs), 미토마이신들(mitomycins), 블레오마이신들(bleomycins), 세포독성 뉴클레오사이드들(cytotoxic nucleosides), 프테리딘 계열 약물들(pteridine family of drugs), 다이네네스(diynenes), 및 포도필로톡신들을 포함한다. 그러한 부류들의 특별히 유용한 멤버들은, 예를 들어, 아드리아마이신(adriamycin), 카르미노마이신(carminomycin), 다우노루비신(daunorubicin), 아미노프테린(aminopterin), 메토트렉세이트(methotrexate), 메토프테린(methopterin), 디클로로메토트렉세이트(dichloromethotrexate), 미토마이신 C(mitomycin C), 포르피로마이신(porfiromycin), 5-플루오로우라실(5-fluorouracil), 6-메르캅토퓨린(6-mercaptopurine), 시토신 아라미노시드(cytosine arabinoside), 포도필로톡신 (podophyllotoxin), 또는 에토포시드(etoposide) 또는 에토포시드 포스페이트( etoposide phosphate), 멜파란(melphalan), 빈블라스틴(vinblastine), 빈크리스틴(vincristine), 류로시딘(leurosidine), 빈데신(vindesine), 류로신(leurosine) 등과 같은 포도필로톡신 유도체들(podophyllotoxin derivatives)을 포함한다. 이전에 언급하였던 바와 같이, 이 기술분야의 당업자는 본 발명의 컨쥬게이트들을 제조하기 위한 목적들에 더욱 편리한 그 화합물의 반응들을 만들기 위해서 목적하는 화합물들에 대해 화학적 변형을 할 수 있다. 바람직한 구현예들에서, X는 캄프토테신, 호모캄프토테신, 콜치신, 콤브레타스타틴, 돌리스타틴, 독소루비신, 메토트렉세이트, 포도필로틱신, 리족신, 리족신 D, 탁솔, 파클리탁솔, CC1065, 또는 마이탄시노이드 및 그것의 유도체들과 유사체들에서 선택된 세포독성제이다. 예를 들어, 세포독성제 캄프토테신은 그 단일 자유 히드록실기를 통해서 카바메이트 링커에 결합되고 티오콜히친은 기재된 결합기 전략(linking group strategy)에 사용하기에 적당한 히드록시기를 포함하도록 유도화될 수 있다. 본 발명의 이 구현예에서, n은 바람직하게는 2이고 R은 바람직하게 NH₂이다.

본 발명의 컨쥬게이트들 내에서, X는 임의의 세포독성제 또는 치료제 모이어티일 수 있는데, 예를 들어, 아시비신(Acivicin); 아클라루비신(Aclarubicin); 아코다졸 히드로클로라이드(Acodazole Hydrochloride); 아크로닌(Acronine); 아도젤레신(Adozelesin); 아드리아마이신(Adriamycin); 알데스류킨(Aldesleukin); 알트레타민(Altretamine); 암보마이신(Ambomycin); A. 메탄트론 아세테이트(A. metantrone Acetate); 아미노글루테트이미드(Aminoglutethimide); 암사크린(Amsacrine); 아나스트로졸(Anastrozole); 안트라마이신(Anthramycin); 아스파라기나제(Asparaginase); 아스펄린(Asperlin); 아자시티딘(Azacitidine); 아제테파(Azetepa); 아조토마이신(Azotomycin); 바티마스타트(Batimastat); 벤조데파(Benzodepa); 비칼루타미드(Bicalutamide); 비산트렌 히드로클로라이드(Bisantrene Hydrochloride); 비스나피드 디메실레이트(Bisnafide Dimesylate); 비젤레신(Bizelesin); 블레오마이신 설페이트(Bleomycin Sulfate); 브레퀴나르 소듐(Brequinar Sodium); 브로피리민(Bropirimine); 부술판(Busulfan); 카크티노마이신(Cactinomycin); 칼루스테론(Calusterone); 캄프토테신(Camptothecin); 카라세마이드(Caracemide); 카르베티메르(Carbetimer); 카르보플라틴(Carboplatin); 카르무스틴(Carmustine); 카루비신 히드로클로라이드(Carubicin Hydrochloride); 카르젤레신(Carzelesin); 세데핑골(Cedefingol); 클로람부실(Chlorambucil); 시롤레마이신(Cirolemycin); 시스플라틴(Cisplatin); 클라드리빈(Cladribine); 콜히친(Colchicine); 콤브레테스타틴 A-4(Combretestatin A-4); 크리스나톨 메실레이트(Crisnatol Mesylate); 시클로포스파미드(Cyclophosphamide); 사이타라빈(Cytarabine); 다카르바진(Dacarbazine); DACA(N-[2-(디메틸-아미노)에틸]아크리딘-4-카르복스아미드(N-[2-(Dimethyl-amino)ethyl]acridine-4-carboxamide)); 닥티노마이신(Dactinomycin); 다우노루비신 히드로클로라이드(Daunorubicin Hydrochloride); 다우노마이신(Daunomycin); 데시타빈(Decitabine); 덱소르마플라틴(Dexormaplatin); 데자구아닌(Dezaguanine); 데자구아닌 메실레이트(Dezaguanine Mesylate); 디아지퀴논(Diaziquone); 도세탁셀(Docetaxel); 도라사틴스(Dolasatins); 독소루비신(Doxorubicin); 독소루비신 히드로클로라이드(Doxorubicin Hydrochloride); 드로록시펜(Droloxifene); 드로록시펜 시트레이트(Droloxifene Citrate); 드로모스타놀론 프로피오네이트(Dromostanolone Propionate); 두아조마이신(Duazomycin); 에다트렉세이트(Edatrexate); 에플로르니틴 히드로클로라이드(Eflornithine Hydrochloride); 엘립티신(Ellipticine); 엘사미트루신(Elsamitrucin); 엔로플라틴(Enloplatin); 엔프로메이트(Enpromate); 에피프로피딘(Epipropidine); 에피루비신 히드로클로라이드(Epirubicin Hydrochloride); 에르불로졸(Erbulozole); 에소루비신 히드로클로라이드(Esorubicin Hydrochloride); 에스트라무스틴(Estramustine); 에스트라무스틴 포스페이트 소듐(Estramustine Phosphate Sodium); 에타니다졸(Etanidazole); 에티오다이즈드 오일 I 131(Ehiodized Oil I 131); 에토포시드(Etoposide); 에토포시드 포스페이트(Etoposide Phosphate); 에토프린(Etoprine); 파드로졸 히드로클로라이드(Fadrozole Hydrochloride); 파자라빈(Fazarabine); 펜레티니드(Fenretinide); 플록수리딘(Floxuridine); 플루다라빈 포스페이트(Fludarabine Phosphate); 플루오로우라실(Fluorouracil); 5-FdUMP; 플루로시타빈(Flurocitabine); 포스퀴돈(Fosquidone); 포스트리에신 소듐(Fostriecin Sodium); 겜시타빈(Gemcitabine); 겜시타빈 히드로클로라이드(Gemcitabine Hydrochloride); 금 Au 198; 호모캄프로테신(Homocamptothecin); 히드록시우레아(Hydroxyurea); 이다루비신 히드로클로라이드(Idarubicin Hydrochloride); 이포스파미드(Ifosfamide); 일모포신(Ilmofosine); 인터페론 알파-2a(Interferon Alfa-2a); 인터페론 알파-2b(Interferon Alfa-2b); 인터페론 알파-n1(Interferon Alfa-n1); 인터페론 알파-n3(Interferon Alfa-n3); 인터페론 베타-Ia(Interferon Beta-Ia); 인터페론 감마-Ib(Interferon Gamma-Ib); 이프로플라틴(iproplatin); 이리노테칸 히드로클로라이드(Irinotecan Hydrochloride); 란레오타이드 아세테이트(Lanreotide Acetate); 레트로졸(Letrozole); 류프롤리드 아세테이트(Leuprolide Acetate); 리아로졸 히드로클로라이드(Liarozole Hydrochloride); 로메트렉솔 소듐(Lometrexol Sodium); 로무스틴(Lomustine); 로속산트론 히드로클로라이드(Losoxantrone Hydrochloride); 마소프로콜(Masoprocol); 마이탄신(Maytansine); 메클로르에타민 히드로클로라이드(Mechlorethamine Hydrochloride); 메게스트롤 아세테이트(Megestrol Acetate); 메렌게스트롤 아세테이트(Melengestrol Acetate); 멜파란(Melphalan); 메노가릴(Menogaril); 메르캅토푸린(Mercaptopurine); 메토트렉세이트(Methotrexate); 메토트렉세이트 소듐(Methotrexate Sodium); 메토프린(Metoprine); 메투레데파(Meturedepa); 미틴도미드(Mitindomide); 미토카르신(Mitocarcin); 미토크로민(Mitocromin); 미토길린(Mitogillin); 미토말신(Mitomalcin); 미토마이신(Mitomycin); 미토스퍼(Mitosper); 미토탄(Mitotane); 미톡산트론 히드로클로라이드(Mitoxantrone Hydrochloride); 미코페놀산(Mycophenolic Acid); 노코다졸(Nocodazole); 노가라마이신(Nogalamycin); 오르마플라틴(Ormaplatin); 옥시수란(Oxisuran); 파클리탁셀(Paclitaxel); 페가스파르가스(Pegaspargase); 펠리오마이신(Peliomycin); 펜타무스틴(Pentamustine); 페플로이신설페이트(PeploycinSulfate); 페르포스파미드(Perfosfamide); 피포브로만(Pipobroman); 피포술판(Piposulfan); 피록산트론 히드로클로라이드(Piroxantrone Hydrochloride); 플리카마이신(Plicamycin); 플로메스탄(Plomestane); 포르피메르 소듐(Porfimer Sodium); 포르피로마이신(Porfiromycin); 프레드니무스틴(Prednimustine); 프로카르바진 히드로클로라이드(Procarbazine Hydrochloride); 푸로마이신(Puromycin); 푸로마이신 히드로클로라이드(Puromycin Hydrochloride); 피라조푸린(Pyrazofurin) ; 리족신(Rhizoxin); 리족신 D(Rhizoxin D); 리보프린(Riboprine); 로글레티미드(Rogletimide); 사핑콜(Safingol); 사핑골 히드로클로라이드(Safingol Hydrochloride); 세무스틴(Semustine); 심트라젠(Simtrazene); 스파르포세이트 소듐(Sparfosate Sodium); 스파르소마이신(Sparsomycin); 스피로게르마늄 히드로클로라이드(Spirogermanium Hydrochloride); 스피로무스틴(Spiromustine); 스피로플라틴(Spiroplatin); 스트렙토니그린(Streptonigrin); 스트렙토조신(Streptozocin); 스트론듐 클로라이드 Sr 89(Strontium Chloride Sr 89); 술로페누르(Sulofenur); 탈리소마이신(Talisomycin); 탁산(Taxane); 탁소이드(Taxoid); 테코갈란 소듐(Tecogalan Sodium); 테가푸르(Tegafur); 텔옥산트론 히드로클로라이드(Teloxantrone Hydrochloride); 테모포르핀(Temoporfin); 테니포시드(Teniposide); 테록시론(Teroxirone); 테스토락톤(Testolactone); 티오콜치신(Thiocolchicine); 티아미프린(Thiamiprine); 티오구아닌(Thioguanine); 티오테파(Thiotepa); 티미타크(Thymitaq); 티아조푸린(Tiazofurin); 티라파자민(Tirapazamine); 토무덱스(Tomudex); TOP53; 토포테칸 히드로클로라이드(Topotecan Hydrochloride); 토레미펜 시트레이트(Toremifene Citrate); 트레스톨론 아세테이트(Trestolone Acetate); 트리시리빈 포스페이트(Triciribine Phosphate); 트리메트렉세이트(Trimetrexate); 트리메트렉세이트 글루쿠로네이트(Trimetrexate Glucuronate); 트립토렐린(Triptorelin); 투불로졸 히드로클로라이드(Tubulozole Hydrochloride); 우라실 머스타드(Uracil Mustard); 우레데파(Uredepa); 바프레오타이드(Vapreotide); 베르테포르핀(Verteporfin); 빈블라스틴(Vinblastine); 빈블라스틴 설페이트(Vinblastine Sulfate); 빈크리스틴(Vincristine); 빈크리스틴 설페이트(Vincristine Sulfate); 빈데신(Vindesine); 빈데신 설페이트(Vindesine Sulfate); 비네피딘 설페이트(Vinepidine Sulfate); 빙글리시네이트 설페이트(Vinglycinate Sulfate); 빈류로신 설페이트(Vinleurosine Sulfate); 비노렐빈 타르트레이트(Vinorelbine Tartrate); 빈로시딘 설페이트(Vinrosidine Sulfate); 빈졸리딘 설페이트(VinzolidineSulfate); 보로졸(Vorozole); 제니플라틴(Zeniplatin); 지노스타틴(Zinostatin); 조루비신 히드로클로라이드(Zorubicin Hydrochloride); 2-클로로데옥시아데노신(2-Chlorodeoxyadenosine); 2'데옥시포르마이신(2'Deoxyformycin); 9-아미노캄프토테신(9-aminocamptothecin); 랄티트렉세드(raltitrexed); N-프로파르길-5,8-디데아자폴산(N-propargyl-5,8-dideazafolic acid); 2-클로로-2'-아라비노-플루오로-2'-데옥시아데노신(2-chloro-2'-arabino-fluoro-2'-deoxyadenosine); 2-클로로-2'-데옥시아데노신(2-chloro-2'-deoxyadenosine); 아니소마이신(anisomycin); 트리코스타틴 A(trichostatin A); hPRL-G129R; CEP-751; 리노미드(linomide); 술퍼 머스타드(sulfur mustard); 니트로젠 머스타드(메클로르 에타민)(nitrogen mustard(mechlor ethamine)); 시클로포스파미드(cyclophosphamide); 멜파란(melphalan); 클로람부실(chlorambucil); 이포스파미드(ifosfamide); 부술판(busulfan); N-메틸-N-니트로소우레아(N-methyl-N-nitrosourea(MNU)); N,N'-비스(2-클로로에틸)-N-니트로소우레아(N, N'-Bis(2-chloroethyl)-N-nitrosourea (BCNU)); N-(2-클로로에틸)-N'시클로헥실-N-니트로소우레아(N-(2-chloroethyl)-N'cyclohexyl-N-nitrosourea (CCNU)); N-(2-클로로에틸)-N'-(트랜스-4-메틸시클로헥실-N니트로소우레아(N-(2-chloroethyl)-N'-(trans-4-methylcyclohexyl-Nnitrosourea(MeCCNU)); N-N-(2-클로로에틸)-N'-(디에틸)에틸포스포네이트-N-니트로소우레아(포테무스틴)(N-N-(2-chloroethyl)-N'-(diethyl)ethylphosphonate-N-nitrosourea(fotemustine); 스트렙토조토신(streptozotocin); 디아카르바진(diacarbazine)(DTIC); 미토졸로미드(mitozolomide ; 테모졸로미드(temozolomide); 티오테파(thiotepa); 미토마이신 C(mytomycin C);AZQ; 아도젤레신(adozelesin); 시스플라틴(Cisplatin); 카르보플라틴(Carboplatin); 오르마플라틴(Ormaplatin); 옥살리플라틴(Oxaliplatin); C1-973; DWA 2114R; JM216; JM335; 비스(플래티늄)(Bis(platinum)); 토무덱스(tomudex); 아자시티딘(azacitidine); 사이타라빈(cytarabine); 젬시타빈(gemcitabine); 6-메르캅토퓨린(6-Mercaptopurine); 6-티오구아닌(6-Thioguanine); 히포크산틴(Hypoxanthine); 테니포시드 9-아미노 캄프토테신(teniposide 9-amino camptothecin); 토포테칸(Topotecan); CPT-11; 독소루비신(Doxorubicin); 다우노마이신(Daunomycin); 에피루비신(Epirubicin); 다루비신(darubicin); 미톡산트론(mitoxantrone); 로속산트론(losoxantrone); 닥티노마이신(악티노마이신 D)(Dactinomycin(Actinomycin D); 암사크린(amsacrine); 피라졸로아크리딘(pyrazoloacridine); 올-트랜스 아프탈(all-trans apthal); 14-히드록시-레트로-레티놀(14-hydroxy-retro-retinol); 올-트랜스 레틴산(all-trans retinoic acid); N-(4-히드록시페닐)레틴아미드(N-(4-Hydroxyphenyl)retinamide); 13-시스 레틴산(13-cis retinoic acid); 3-메틸 TTNEB(3-Methyl TTNEB); 9-시스 레틴산(9-cis retinoic acid); 플루다라빈(2-F-아라-AMP)(fludarabine(2-F-ara-AMP)); 또는 2-클로로데옥시아데노신(2-chlorodeoxyadenosine(2-Cda))와 같은 항종양성 작용물질들(Antineoplastic agents)을 포함한다.

다른 적당한 항종양제 화합물들은 제한되지 않는 예로, 20-pi-1,25 디히드록시비타빈 D3(20-pi-1,25 dihydroxyvitamin D3); 5-에틸우라실(5-ethynyluracil); 아비라테론(abiraterone); 아클라루비신(aclarubicin); 아실풀벤(acylfulvene); 아데시페놀(adecypenol); 아도젤레신(adozelesin); 알데스류킨(aldesleukin); 올-티로신 키나제 대항제들(all-tyrosine kinase antagonists); 알트레타민(altretamine); 암바무스틴(ambamustine); 아미독스(amidox); 아미포스틴(amifostine); 아미노레불린산(aminolevulinic acid); 암루비신(amrubicin); 암사크린(amsacrine); 아나글렐리드(anagrelide); 아나스트로졸(anastrozole); 안드로그라폴리드(andrographolide); 혈관형성 억제제들(angiogenesis inhibitors); 대항제 D(antagonist D); 대항제 G(antagonist G); 안타렐릭스(antarelix); 안티-도르설라이징 모르포지네틱 프로틴-1(anti-dorsalizing morphogenetic protein-1); 안티안드로겐(antiandrogen), 전립선암(prostatic carcinoma); 항에스트로겐(antiestrogen); 안티네오플라스톤(antineoplaston); 안티센스 올리고뉴클레오타이드들(antisense oligonucleotides); 아피디콜린 글리시네이트(aphidicolin glycinate); 아포프토시스 유전자 조정자들(apoptosis gene modulators); 아포프토시스 조절자들(apoptosis regulators); 아푸린산(apurinic acid); ara-CDP-DL-PTBA; 아르기닌디아미나아제(argininedeaminase); 아술라크린(asulacrine); 아타메스탄(atamestane); 아트리무스틴(atrimustine); 악시나스타틴 1(axinastatin 1); 악시나스타틴 2(axinastatin 2); 악시나스타틴 3(axinastatin 3); 아자세트론(azasetron); 아자톡신(azatoxin); 아자티로신(azatyrosine); 박카틴 III 유도체들(baccatin III derivatives); 바라놀(balanol); 바티마스타트(batimastat); BCR/ABL 대항제들(BCR/ABL antagonists); 벤조클로린스(benzochlorins); 벤조일스타우로스포린(benzoylstaurosporine); 베타 락탐 유도체들(beta lactamderivatives); 베타-알레틴(beta-alethine); 베타클라마이신 B(betaclamycin B); 베툴린산(betulinic acid); 기본 섬유모세포성장인자(basic fibroblast growth factor(bFGF)) 억제제; 비칼루타미드(bicalutamide); 비산트렌(bisantrene); 비사지리디닐스퍼민(bisaziridinylspermine); 비스나피드(bisnafide); 비스트라텐 A(bistratene A); 비젤레신(bizelesin); 브레플레이트(breflate); 블레오마이신 A2(bleomycin A2); 블레오마이신 B2(bleomycin B2); 브로피리민(bropirimine); 부도티탄(budotitane); 부티오닌 술폭시민(buthionine sulfoximine); 칼시포트리올(calcipotriol); 칼포스틴 C(calphostin C); 캄프토테신 유도체들(camptothecin derivatives)(예를 들어, 10-히드록시-캄프토테신); 카나리폭스 IL-2(canarypox IL-2); 카페시타빈(capecitabine); 카르복스아미드-아미노-트리아졸(carboxamide-amino-triazole); 카르복스아미도트리아졸(carboxyamidotriazole); CaRest M3; CARN 700; 연골 유래 억제제(cartilage derived inhibitor); 카르젤레신(carzelesin); 카세인 키나아제 억제제들(casein kinase inhibitors(ICOS)); 카스타노스퍼민(castanospermine); 세크로핀 B(cecropin B); 세트로렐릭스(cetrorelix); 클로린스(chlorins); 클로로퀴녹살린 술폰아미드(chloroquinoxaline sulfonamide); 시카프로스트(cicaprost); 시스-포르피린(cis-porphyrin); 클라드리빈(cladribine); 클로미펜 유사체들(clomifene analogues); 클로트리마졸(clotrimazole); 콜리스마이신 A(collismycin A); 콜리스마이신 B(collismycin B); 콤브레타스타틴 A4(combretastatin A4); 콤브레타스타틴 유사체(combretastatin analogue); 코나게닌(conagenin); 크람베씨딘 816(crambescidin 816); 크리스나톨(crisnatol); 크립토피신 8(cryptophycin 8); 크립토피신 A 유도체들(cryptophycin A derivatives); 쿠라신 A(curacin A); 시클로펜탄쓰라퀴논(cyclopentanthraquinones); 시클로플라탐(cycloplatam); 사이페마이신(cypemycin); 사이타라비네오크포스페이트(cytarabineocfosfate); 세포용해 인자(cytolytic factor); 사이토스타틴(cytostatin); 다크릭시맙(dacliximab); 데시타빈(decitabine); 디하이드로디뎀닌 B(dehydrodidemnin B); 2'데옥시코포르마이신(2'deoxycoformycin(DCF)); 데스로렐린(deslorelin); 덱시포스파미드(dexifosfamide); 덱스라족산(dexrazoxane); 덱스베라파밀(dexverapamil); 디아지퀴논(diaziquone); 디뎀닌 B(didemnin B); 디독스(didox); 디에틸노르스퍼민(diethylnorspermine); 디히드로-5-아자시티딘(dihydro-5-azacytidine); 디히드로탁솔, 9-(dihydrotaxol, 9-); 디옥사마이신(dioxamycin); 디페닐 스피로무스틴(diphenyl spiromustine); 디스코더몰리드(discodermolide); 도코사놀(docosanol); 돌라세트론(dolasetron); 독시플루리딘(doxifluridine); 드롤록시펜(droloxifene); 드로나비놀(dronabinol); 두오카르마이신 SA(duocarmycin SA); 엡셀렌(ebselen); 에코무스틴(ecomustine); 에델포신(edelfosine); 에드레콜로맙(edrecolomab); 에플로르니틴(eflornithine); 엘레멘(elemene); 에미테푸르(emitefur); 에피루비신(epirubicin); 에포틀론들(epothlones((A, R = H; B,R = Me)); 에피틸론들(epithilones); 에프리스테리드(epristeride); 에스트라무스틴 유사체(estramustine analogue); 에스트로겐 작용제들(estrogen agonists); 에스트로겐 대항제들(estrogen antagonists); 에타니다졸(etanidazole); 에토포시드(etoposide); 에토포시드 4'포스페이트(에토포포스)((etoposide 4'-phosphate(etopofos)); 엑세메스탄(exemestane); 파드로졸(fadrozole); 파자라빈(fazarabine); 펜레티니드(fenretinide); 필그라스팀(filgrastim); 피나스테리드(finasteride); 플라보피리돌(flavopiridol); 플레젤라스틴(flezelastine); 플루아스테론(fluasterone); 플루다라빈(fludarabine); 플루오로다우노루니신 히드로클로라이드(fluorodaunorunicin hydrochloride); 포르페니멕스(forfenimex); 프로메스탄(formestane); 포스트리에신(fostriecin); 포테무스틴(fotemustine); 가돌리늄 텍사피린(gadolinium texaphyrin); 갈륨 나이트레이트(gallium nitrate); 갈로시타빈(galocitabine); 가니렐릭스(ganirelix); 겔라티나아제 억제제들(gelatinase inhibitors); 겜시타빈(gemcitabine); 글루타티온 억제제들(glutathione inhibitors); 헵술팜(hepsulfam); 헤레굴린(heregulin); 헥사메틸렌 비스아세트아미드(hexamethylene bisacetamide); 호모하링토닌(homoharringtonine(HHT)); 히페리신(hypericin); 이반드론산(ibandronic acid); 이다루비신(idarubicin); 이독시펜(idoxifene); 이드라만톤(idramantone); 일모포신(ilmofosine); 일로마스타트(ilomastat); 이미다조아크리돈들(imidazoacridones); 이미퀴모드(imiquimod); 면역자극(immunostimulant) 펩티드들; 인슐린-유사 성장 인자-1 수용체 억제제(insulin-like growth factor-1 receptor inhibitor); 인터페론 작용제들(interferon agonists); 인터페론들(interferons); 인터류킨들(interleukins); 이오벤구안(iobenguane); 아이오도 독소루비신(iododoxorubicin); 이포미아놀, 4-(ipomeanol, 4-); 이리노테칸(irinotecan); 이로플락트(iroplact); 이르소글란딘(irsogladine); 이소벤가졸(isobengazole); 이소호모할리콘드린 B(isohomohalicondrin B); 이타세트론(itasetron); 자스플라키놀리드(jasplakinolide); 카할라이드 F(kahalalide F); 라멜라린-N 트리아세테이트(lamellarin-N triacetate); 란레오타이드(lanreotide); 레이나마이신(leinamycin); 레오그라스팀(lenograstim); 렌티난 설페이트(lentinan sulfate); 렙톨스타틴(leptolstatin); 레트로졸(letrozole); 류케미아 억제 인자(leukemia inhibiting factor); 류코사이트 알파 인터페론(leukocyte alpha interferon); 류프로리드 + 에스트로겐 + 프로게스테론(leuprolide + estrogen + progesterone); 류프로렐린(leuprorelin); 레바미솔(levamisole); 리아로졸(liarozole); 선형 폴리아민 유사체(linear polyamine analogue); 친유성 디사카라이드 펩티드(lipophilic disaccharide peptide); 친유성 플래티넘 화합물(lipophilic platinum compounds); 리소클린아미드(lissoclinamide) 7; 로바플라틴(lobaplatin); 롬브리신(lombricine); 로메트렉솔(lometrexol); 로니드아민(lonidamine); 로속산트론(losoxantrone); 로바스타틴(lovastatin); 록소리빈(loxoribine); 러토테칸(lurtotecan); 루테티넘 텍사피린(lutetium texaphyrin); 리소필린(lysofylline); 리틱 펩티드(lytic peptides); 마이타신(maytansine); 마노스타틴(mannostatin) A; 마리마스태트(marimastat); 마소프로콜(masoprocol); 마스핀(maspin); 마트릴신 억제제(matrilysin inhibitors); 매트릭스 메탈로프로티나제 억제제(matrix metalloproteinase inhibitors); 메노가릴(menogaril); 르너바론(rnerbarone); 메터렐린(meterelin); 메티오니나제(methioninase); 메토클로프라미드(metoclopramide); MIF 억제제(MIF inhibitor); 이페프리스톤(ifepristone); 밀테포신(miltefosine); 미리모스팀(mirimostim); 미스매치트 더블 스트랜디드 RNA(mismatched double stranded RNA); 미트라신(mithracin); 미토구아존(mitoguazone); 미토락톨(mitolactol); 미토마이신 유사체(mitomycin analogues); 미토나피드(mitonafide); 미토톡신 섬유아세포 성장인자-사포린(mitotoxin fibroblast growth factor-saporin); 미톡사트론(mitoxantrone); 모파로텐(mofarotene); 몰그라모스팀(molgramostim); 모노클로날 항체(monoclonal antibody), 인간 장막 성선자극 호르몬(human chorionic gonadotrophin); 모노포스포릴 리피드 A + 미오박테리아 세포 월 sk(monophosphoryl lipid A + myobacterium cell wall sk); 모피다몰(mopidamol); 멀티플 약물 저항 유전자 억제제(multiple drug resistance gene inhibitor); 멀티플 종양 억제 1-계 치료(multiple tumor suppressor 1-based therapy); 머스타드 항암제(mustard anticancer agent); 미카퍼옥시드 B(mycaperoxide B); 미코박테리아 세포벽 추출물(mycobacterial cell wall extract); 미리아포론(myriaporone); N-아세틸디날린(N-acetyldinaline); N-치환 벤즈아미드(N-substituted benzamides); 나파렐린(nafarelin); 나그레스팁(nagrestip); 날록손(naloxone) + 펜타조신(pentazocine); 나파빈(napavin); 나프터핀(naphterpin); 나토그라스팀(nartograstim); 네다플라틴(nedaplatin); 네모러비신(nemorubicin); 네리드론산(neridronic acid); 자연 엔도펩티다제(neutral endopeptidase); 닐루타미드(nilutamide); 니사마이신(nisamycin); 나이트릭 옥사이드 조절자(nitric oxide modulators); 니트록사이드 항산화제(nitroxideantioxidant); 니트룰린(nitrullyn); 06-벤질구아닌(06-benzylguanine); 옥트레오티드(octreotide); 옥키세논(okicenone); 올리고뉴클레오티드(oligonucleotides); 오나프리스톤(onapristone); 온단세트론(ondansetron); 온단세트론(ondansetron); 오라신(oracin); 경구 사이토킨 인듀서(oral cytokine inducer); 오마플라틴(ormaplatin); 오사테론(osaterone); 옥사리플라틴(oxaliplatin); 옥사우노마이신(oxaunomycin); 파클리탁셀 유사체(paclitaxel analogues); 파클리탁셀 유도체(paclitaxel derivatives); 팔라우아민(palauamine); 팔미토일리족신(palmitoylrhizoxin); 파미드론산(pamidronic acid); 파낙시트로일(panaxytriol); 파노미페넨(panomifene); 파라박틴(parabactin); 파젤리프틴(pazelliptine); 페가스파가제(pegaspargase); 펠데신(peldesine); 펜토산 폴리설페이트 소듐(pentosan polysulfate sodium); 펜토스타틴(pentostatin); 펜트로졸(pentrozole); 퍼플루브론(perflubron); 퍼포스파미드(perfosfamide); 퍼릴일 알코올(perillyl alcohol); 페나지노마이신(phenazinomycin); 페닐아세테이트(phenylacetate); 포스파타제 억제제(phosphatase inhibitors); 피시반닐(picibanil); 필로카르핀 하이드로클로라이드(pilocarpine hydrochloride); 피라루비신(pirarubicin); 피리트렉심(piritrexim); 플라세틴 A(placetin A); 플라세틴 B(placetin B); 플라스미노젠 활성화제 억제제(plasminogen activator inhibitor); 플래티넘 착체(platinum complex); 플래티넘 화합물(platinum compounds); 플래티넘 트리아민 착제(platinum-triamine complex); 포도필로톡신(podophyllotoxin); 포르피머 소듐(porfimer sodium); 포르피로마이신(porfiromycin); 프로필 비스-아크리돈(propylbis-acridone); 프로스타글라딘 J2(prostaglandin J2); 프로테아좀 억제제(proteasome inhibitors); 단백질 A-계 면역 조절제(protein A-based immune modulator); 단백질 키나제 C 억제제(protein kinase C inhibitor); 단백질 키나제 C 억제제(protein kinase C inhibitors), 마이크로알갈(microalgal); 단백질 티로신 포스파타제 억제제(protein tyrosine phosphatase inhibitors); 퓨린 뉴클레오시드 포스포릴라제 억제제(purine nucleoside phosphorylase inhibitors); 퓨프린( purpurins); 피라졸아크리딘(pyrazoloacridine); 피리독실레이티드 헤모글로빈 폴리옥시에틸렌 컨쥬게이트(pyridoxylated hemoglobin polyoxyethylene conjugate); 라프 안타고니스트(raf antagonists); 랄티트렉시드(raltitrexed);라모세트론(ramosetron); 라스 파르네실 단백질 트랜스퍼라제 억제제(ras farnesyl protein transferase inhibitors); 라스 억제제(ras inhibitors); 라스-GAP 억제제(ras-GAP inhibitor); 레텔리프틴 디메틸레이티드(retelliptine demethylated); 렌니넘 르 186 에티드로네이트(rhenium Re 186 etidronate); 리족신(rhizoxin); 리보자임(ribozymes); RII 레틴아미드(RII retinamide); 로글레트이미드(rogletimide); 로히튜킨(rohitukine); 로머티드(romurtide); 로퀴니멕스(roquinimex); 루비기논 B 1(rubiginone B 1); 루복실(ruboxyl); 사핀골(safingol); 사인토핀(saintopin); SarCNU; 사코피톨 A(sarcophytol A); 사그라모스팀(sargramostim); 스디 1 미메트릭스(Sdi 1 mimetics); 세머스틴(semustine); 세네센스 유도 억제제 1((senescence derived inhibitor 1); 센스 올리고뉴클레오티드(sense oligonucleotides); 시그널 형질도입 억제제(signal transduction inhibitors); 시그널 형질도입 조절제(signal transduction modulators); 단일쇄 항원 결합 단백질(single chain antigen binding protein); 시조피란(sizofiran); 소브족산(sobuzoxane); 소듐 보로캡테이트(sodium borocaptate); 소듐 페닐아세테이트(sodium phenylacetate); 솔베롤(solverol); 소마토메딘 결합 단백질(somatomedin binding protein); 소네르민(sonermin); 스파포신산(sparfosic acid); 스픽카마이신 D(spicamycin D); 스피로뮤스틴(spiromustine); 스플레노펜틴(splenopentin); 스폰기스타틴 1(spongistatin 1); 스쿠알라민(squalamine); 줄기세포 억제제(stem cell inhibitor); 줄기세포 분리 억제제(stem-cell division inhibitors); 스티피아미드(stipiamide); 스트로멜신 억제제(stromelysin inhibitors); 설피노신(sulfinosine); 수퍼활성 혈관확장 작용성 장용 펩티드 안타고니스트(superactive vasoactive intestinal peptide antagonist); 서라디스타(suradista); 서라민(suramin); 스와인소닌(swainsonine); 합성 글리코사미노글리칸(synthetic glycosaminoglycans); 탈리머스틴(tallimustine); 타목시펜 메티오디드(tamoxifen methiodide); 타우로머스틴(tauromustine); 타자로텐(tazarotene); 테코갈란 소듐(tecogalan sodium); 테가퍼(tegafur); 텔루라피릴륨(tellurapyrylium); 텔로머라제 억제제(telomerase inhibitors); 테모포핀(temoporfin); 테모졸로미드(temozolomide); 텐니포시드(teniposide); 테트라클로로데카녹시드(tetrachlorodecaoxide); 테트라조민(tetrazomine); 탈리블라스틴(thaliblastine); 탈리도미드(thalidomide); 티오코랄린(thiocoraline); 트롬보포이에틴(thrombopoietin); 트롬보포이에틴 미메틱(thrombopoietin mimetic); 티말파신(thymalfasin); 티모포리에틴 수용체 아고니스트(thymopoietin receptor agonist); 티모트리난(thymotrinan); 티로이드 자극 호르몬(thyroid stimulating hormone); 틴 에틸 에티오퍼퓨린(tin ethyl etiopurpurin); 티라파자민(tirapazamine); 티타노센 디클로라이드(titanocene dichloride); 토포테칸(topotecan); 토프센틴(topsentin); 토레미펜(toremifene); 토피포텐트 줄기세포 인자(totipotent stem cell factor); 트랜스레이션 억제제(translation inhibitors); 트레티노인(tretinoin); 트리아세틸우리딘(triacetyluridine); 트리시리빈(triciribine); 트리메트렉세이트(trimetrexate); 트립토렐린(triptorelin); 트로피세트론(tropisetron); 튜로스터리드(turosteride); 티로신 키나제 억제제(tyrosine kinase inhibitors); 티로포스틴(tyrphostins); UBC 억제제(UBC inhibitors); 우베니멕스(ubenimex); 우로겐니탈 시너스-유도 성장 억제인자(urogenital sinus-derived growth inhibitory factor); 우로키나제 수용체 안타고니스트(urokinase receptor antagonists); 바프레오티드(vapreotide); 바리올린 B(variolin B); 벡터 시스템, 에리트로사이드 유전자 치료(vector system, erythrocyte gene therapy); 벨라레졸(velaresol); 버아민(veramine); 버딘(verdins); 버테포르핀(verteporfin); 비노렐빈(vinorelbine); 빈살틴(vinxaltine); 비탁신(vitaxin); 보로졸(vorozole); 자노테론(zanoterone); 제니플라틴(zeniplatin); 질라스코브(zilascorb); 및 지노스태틴 스티말라머(zinostatin stimalamer)를 포함한다.

또한, X는 예컨대 피리트렉심 이소티오네이트( piritrexim isothionate)와 같은 항증식제(antiproliferative agent)일 수 있다. 대안으로, X는 예컨대, 스티글루시드(sitogluside)와 같은 안티프로스태틱 하이퍼트로피제(antiprostatic hypertrophy agent) 또는 예컨대, 탐설로신 하이드로클로라이드(tamsulosin hydrochloride)와 같은 양성 프로스태틱 하이퍼플라시아 치료제(benign prostatic hyperplasia therapy agent) 또는 예컨대, 펜토몬(pentomone)와 같은 프로스테이트 성장 억제제(prostate growth inhibitor)일 수 있다.

또한, X는 피브리노겐¹²⁵I(Fibrinogen¹²⁵I); 플루데옥시글루코스¹⁸F(Fludeoxyglucose¹⁸F); 플루오로도파¹⁸F(Fluorodopa¹⁸F); 인슐린¹²⁵I; 인슐린¹³¹I; 로벤구안¹²³I(lobenguane¹²³I); 아이오도디파미드 소듐¹³¹I(Iodipamide Sodium¹³¹I); 아이오도안티피린¹³¹I(Iodoantipyrine¹³¹I); 아이오도콜레스테롤¹³¹I(Iodocholesterol¹³¹I); 아이오도힙퍼레이트 소듐¹²³I(lodohippurate Sodium¹²³I); 아이오도힙퍼레이트 소듐¹²⁵I(Iodohippurate Sodium¹²⁵1); 아이오도힙퍼레이트 소듐¹³¹I(Iodohippurate Sodium¹³¹I); 아이오도피라세트¹²⁵I(Iodopyracet¹²⁵I); 아이오도피라세트¹³¹I(Iodopyracet¹³¹I); 로페타민 하이드로클로라이드¹²³I(lofetamine Hydrochloride¹²³I); 아이오메틴¹²⁵I(Iomethin^l25I); 아이오메틴¹³¹I(Iomethin¹³¹I); 아이오탈라메이트 소듐¹²⁵I(Iothalamate Sodium¹²⁵I) ; 아이도탈라메이트 소듐¹³¹I(Iothalamate Sodium¹³¹I); 티로신¹³¹I(tyrosine^l3lI); 리오티로닌¹²⁵I(Liothyronine¹²⁵I); 리오티로닌¹³¹I(Liothyronine¹³¹I); 메리소프롤 아세테이트¹⁹⁷Hg(Merisoprol Acetate^l97Hg); 메리소프롤 아세테이트²⁰³Hg(Merisoprol Acetate²⁰³Hg); 메리소프롤¹⁹⁷Hg(Merisoprol¹⁹⁷Hg); 셀레노메티오닌⁷⁵Se(Selenomethionine⁷⁵Se); 테크네티넘^99mTc 안티몬 트리설파이드 콜로이드(Technetium^99mTc Antimony Trisulfide Colloid); 테크네티넘^99mTc 비시세이트(Technetium^99mTc Bicisate); 테크네티넘^99mTc 디소페닌(Technetium^99mTc Disofenin); 테크네티넘^99mTc 에티드로네이트(Technetium^99mTc Etidronate); 테크네티넘^99mTc 엑사메타짐(Technetium^99mTc Exametazime); 테크네티넘^99mTc 퓨리포스민(Technetium^99mTc Furifosmin); 테크네티넘^99mTc 글루셉테이트(Technetium^99mTc Gluceptate); 테그네티넘^99mTc 리도페닌(Technetium^99mTc Lidofenin); 테크네티넘^99mTc 메브로페닌(Technetium^99mTc Mebrofenin); 테크네티넘^99mTc 메브로네이트(Technetium^99mTc Medronate); 테크네티넘^99mTc 메드로네이트 디소듐(Technetium^99mTc Medronate Disodium); 테크네티넘^99mTc 멀티아티드(Technetium^99mTc Mertiatide); 테그네티넘^99mTc 옥시드로네이트(Technetium^99mTc Oxidronate); 테크네티넘^99mTc 펜테테이트(Technetium^99mTc Pentetate); 테크네티넘^99mTc 펜테테이트 칼슘 트리소듐(Technetium^99mTc Pentetate Calcium Trisodium); 테그네티넘^99mTc 세스타미비(Technetium^99mTc Sestamibi); 테크네티넘^99mTc 시보록심(Technetium^99mTc Siboroxime); 테크네티넘^99mTc(Technetium^99mTc); 숙시머(Succimer); 테크네티넘^99mTc 설퍼 콜로이드(Technetium^99mTc Sulfur Colloid); 테크네티넘^99mTc 테보록심(Technetium^99mTc Teboroxime); 테크네티넘^99mTc 테트로포스민(Technetium^99mTc Tetrofosmin); 테그네티넘^99mTc 티아티드(Technetium^99mTc Tiatide); 티록신¹²⁵I(Thyroxine¹²⁵I); 티록신¹³¹I(Thyroxine^l3lI); 톨포비돈¹³¹I(Tolpovidone¹³¹I); 트리올렌¹²⁵I(Triolein¹²⁵I); 또는 트리올렌¹³¹I(Triolein¹³¹I)을 포함하는 방사성제(radioactive agent)일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명과 함께 컨쥬게이트 되어 사용되는 다른 적당한 치료제 또는 세포독성제(cytotoxic agent)는 예컨대, 트리사이클릭 항우울제(Tricyclic anti-depressant drugs)[예컨대, 이미프라민(imipramine), 데시프라민(desipramine), 아미트립틸린(amitryptyline), 클로미프라민(clomipramine), 트리미프라민(trimipramine), 독세핀(doxepin), 노르트립틸린(nortriptyline), 프로트립틸린(protriptyline), 아목사핀(amoxapine) 및 마프로틸린(maprotiline)]; 비트리사이클릭 항우울제(non-tricyclic anti-depressant drugs)[예컨대, 서트랄린(sertraline), 트라조돈(trazodone) 및 시탈로프람(citalopram)]; Ca++ 안타고니스트(antagonist)[예컨대, 버라파밀(verapamil), 니페디핀(nifedipine), 니트렌디핀(nitrendipine) 및 카로버린(caroverine)]; 카모듈린 억제제(Calmodulin inhibitors)[예컨대, 프레닐아민(prenylamine), 트리플루오로페라진(trifluoroperazine) 및 클로미프라민(clomipramine)]; 암포테리신 B(Amphotericin B); 트리파라놀 유사체(Triparanol analogues)[예컨대, 타목시펜(tamoxifen)]; 안티아리테믹제(antiarrhythmic drugs)[예컨대, 퀴니딘(quinidine)]; 항고혈압제(antihypertensive drugs)[예컨대, 레저핀(reserpine)]; 트리올 디플리터(Thiol depleters)[예컨대, 부티오닌(buthionine) 및 설폭시민(sulfoximine)] 및 크레마포 EL(Cremaphor EL) 및 크리마포 EL(Cremaphor EL)과 같은 멀티플 약제 저항 감소제(Multiple Drug Resistance reducing agents)를 포함하지만, 이에 한정되지 않는 항암 보충 작용제(anti-cancer Supplementary Potentiating Agents)를 포함한다.

또한, 본 발명의 컨쥬게이트는 그래뉼로사이트 콜로니 자극 인자(granulocyte colony stimulating factor)와 같은 사이토킨(cytokines)과 함께 투여될 수 있다. 항암 칵테일(anti-cancer cocktails)(예컨대, 본 발명의 약제와 함께 사용되는)에 사용되는 바람직한 항암제는 (괄호에 나타난 MTDs와 함께) 하기의 물질을 포함한다: 젬시타빈(gemcitabine)(1000mg/m²); 메토트렉세이트(methotrexate)(15gm/m²i.v. + leuco. < 500mg/m²i.v. w/o leuco); 5-FU(500mg/m²/일 x 5일); FUDR(마우스에서 100 mg/kg x 5, 인간에서 0.6mg/kg/일); FdUMP; 히드록시우레아(Hydroxyurea)(남자에서 35mg/kg/d); 도세탁셀(Docetaxel)(60-100mg/m²); 디스코더모릴드(discodermolide); 에포틸론(epothilones); 빈크리스틴(vincristine)(1.4mg/m²); 빈블라스틴(vinblastine)(단계적으로: 3. 3-11.1mg/m², 또는 드물게 18.5 mg/m²까지); 비노렐빈(vinorelbine)(30 mg/m²/wk); 메타-팩(meta-pac); 이리노테칸(irinotecan)(50-150 mg/m², 환자 반응에 따라 1x/wk); SN-38(-이리노테칸 보다 100배 더 잠재성 있음); 10-OH 캄프토(campto); 토포테칸(topotecan)(인간에서 1.5mg/m²/일, 1 x iv LdlOmice=75mg/m²); 에토포시드(etoposide)(남자에서 100mg/m²); 아드리아마이신(adriamycin); 플라보피리돌(flavopiridol); Cis-Pt(남자에서 100mg/m²); carbo-Pt(남자에서 360mg/m²); 블레오마이신(bleomycin)(20mg/m²); 미토마이신(mitomycin) C(20mg/m²) ; 미트라마이신(mithramycin)(30sug/kg); 카페시타빈(capecitabine)(경구적으로 2.5g/m²); 시타라빈(cytarabine)(100mg/m²/일);2-Cl-2'데옥시아데노신; 플루다라빈(Fludarabine)-P04(25mg/m²/일, x 5일); 미톡산트론(mitoxantrone)(12-14mg/m²); 미토졸로미드(mitozolomide)(>400mg/m²); 펜토스타틴(Pentostatin); 및 토뮤덱스(Tomudex).

X는 바람직하게는 메토트렉세이트(methotrexate)와 같은 항대사제(anantimetabolic)일 수 있다. 항대사제는 하기의 화합물 및 그의 유도체를 포함하지만 이에 한정되는 것은 아니다: 아자티오프린(azathioprine), 클라드리빈(cladribine), 사이타라빈(cytarabine), 다카바진(dacarbazine), 플루다라빈 포스페이트(fludarabine phosphate), 플루오로우라실(fluorouracil), 젠시타빈 클로로하이드레이트(gencitabine chlorhydrate), 머르캅토퓨린(mercaptopurine), 메토트렉세이트(methotrexate), 미토브로니톨(mitobronitol), 미토탄(mitotane), 프로구아닐 클로로하이드레이트(proguanil chlorohydrate), 피리메타민(pyrimethamine), 랄티트렉시드(raltitrexed), 트리메트렉세이트 글루큐로네이트(trimetrexate glucuronate), 우레탄(urethane), 빈블라스틴 설페이트(vinblastine sulfate), 빈크리스틴 설페이트(vincristine sulfate) 등. 더욱 바람직하게는 X는 예컨대, 메토트렉세이트(methotrexate), 프로구아닐 클로로하이드레이트(proguanil chlorhydrate), 피리메타민(pyrimethanime), 트리메토프림(trimethoprime), 또는 트리메트렉세이트 글루큐로네이트(trimetrexate glucuronate) 또는, 이 화합물의 유도체를를 포함하는 엽산(folic acid)형 항대사제일 수 있다.

다른 구현예에서, X는 또한 아클라루비신 클로로하이드레이트(aclarubicine chlorhydrate), 다우노루비신 클로로하이드레이트(daunorubicine chlorhydrate), 독소루비신 클로로하이드레이트(doxorubicine chlorhydrate), 에피루비신 클로로하이드레이트(epirubicine chlorhydrate), 이다루비신 클로로하이드레이트(idarubicine chlorhydrate), 피라루비신(pirarubicine) 또는 조루비신 클로로하이드레이트(zorubicine chlorhydrate)을 포함하지만, 이에 한정되지 않는 신생제(neoplastic agent)의 안트라사이클린(anthracycline)군의 구성원일 수 있다. 또한, X는 캄프토태신(camptothecin), 또는 그의 유도체이거나 또는 10, 11 메틸렌 디옥시 캄프토태신(methylenedioxycamptothecin)과 같은 관련 화합물일 수 있다. 또한, X는 화합물의 메이탄시노이드(maytansinoid) 군에서 선택될 수 있으며, 이는 다양한 구조적으로 관련된 화합물을 포함한다. 예컨대, 안사미토신(ansamitocin) P3, 메이탄신(maytansine), 2'-N-디메틸메이탄부틴(demethylmaytanbutine) 또는 메티탄비사이클리놀(maytanbicyclinol)이 메이탄시노이드(maytansinoids)이다.

Y는 친수성(hydrophilic) 스페이서 시퀀스(spacer sequence)이고, 바람직하게는 컨쥬게이트의 생체내 분포(biodistribution)를 증가시키는 펩티드 또는 친수성 고분자일 수 있다. 예컨대, Y는 생물학적 활성인 펩티드 컨쥬게이트의 친수성 생체분포를 증가시키는 펩티드 서열일 수 있다. 바람직한 구현예에서, Y의 구조식은 U(V-V)_n이고, 여기서 U는 D-Pro, L-Pro, D-4-OH-Pro, L-4-OH-Pro, 사코신(Sarcosine), Lys, Orn, Dab, Dap, 4-NH₂-Phe, 또는 (NH₂-(CH₂)_m-COOH), 여기서 m=2-10이거나 또는 결실되고; 각각의 V는 독립적으로 D-Ser, L-Ser, D-Thr, L-Thr, D-Gln, L-Gln, D-Asn, L-Asn, D-4-OH-Pro 또는 L-4 히드록시-Pro로 이루어진 군에서 선택되며: 및 n=1-50이다. 다른 바람직한 구현예에서, 각각의 V는 독립적으로 D-Ser 또는 L-Ser이다. 다른 바람직한 구현예에서, 적어도 하나의 V는 D-아미노산이다.

본원에서 교시된 바에 따라, Y는 본 발명의 컨쥬게이트의 생체내 분포를 촉진하기 위해 선택될 수 있다. Y는 펩티드 또는 PEG 또는 PVA와 같은 고분자일 수 있다. 만일 Y가 친수성 펩티드이면, Y는 바람직하게는 1 내지 50의 아미노산 길이, 더욱 바람직하게는 3 내지 15의 아미노산 길이일 수 있다. 예컨대, Y는 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20 아미노산 잔기 길이일 수 있다. 펩티드일 때, Y는 자연적으로 발생하는 합성 또는 변형된 대전성(charged) 또는 비극성(non-polar) 아미노산, 그의 유사체 또는 유도체를 함유할 수 있다.

Y는 또한 친수성 고분자일 수 있다. 예컨대, Y는 폴리에틸렌 글리콜(polyethylene glycol)(PEG), 폴리비닐 아세테이트(polyvinyl acetate), 폴리비닐 알코올(polyvinyl alcohol)(PVA), N-(2-히드록시프로필)메타크릴아미드(HPMA) 또는 HPMA 코고분자, α,β-폴리(N-히드록시에틸)-DL-아스파타미드(aspartamide)(PHEA) 또는 α,β-폴리(N-히드록시프로필)-DL-아스파타미드(aspartamide)일 수 있다. 본 발명의 컨쥬게이트에 사용되는 PEG, PHEA 및 PVA군은 또한 일반적으로 낮은 잠재 약물 유독성(toxicities)과 관련된 신속한 신장 분비(renal secretion)의 우수한 프로모터(promoters)인 것으로 알려졌다(참조: Yamoaka 외, J. Pharmacol. Sci., 83: 601-606, 1994; Rypacek 외, Pflugers Arch., 392: 211-217, 1982; Yamoaka 외, J. Pharm. Pharmacol., 47: 479-486, 1995). 이러한 군은 또한, 생체이용성(bioavailable), 비흡수 컨쥬게이트(non-internalized conjugates)에서 나오는 낮은 유독성(toxicity)을 촉진시킬 수 있다.

Z는 Q의 말단 또는 측쇄 아미노기를 통해 Z가 Q에 연결될 때, 적어도 50%의 생물학적 활성을 유지하는 연결 펩티드(linking peptide)이다. 일반적으로, Z는 2, 3, 4 또는 5 잔기의 펩티드일 수 있다. Z의 구조식은 A-B-C-E-F이고, 여기서 A는 D-Lys, D-Tyr, D-Ser 또는 L-Ser이거나 결실될 수 있고; B는 D-Lys 또는 D-Tyr이거나 결실될 수 있으며; C는 Lys, Ser, hSer, Thr, Nle, Abu, Nva,(2, 3 또는 4) 3-피리딜-Ala(Pal), Orn, Dab, Dap, 4-NH₂-Phe, D-4-OH-Pro 또는 L-4-OH-Pro이거나 결실될 수 있고; E는 D-Lys, D-Tyr, D-Ser, D-4-OH-Pro, L-4-OH-Pro, 3-아이오도(iodo)-D-Tyr, 3-5 디이도(diido)-D-Tyr, 3-아스태틴(astatine)-D-Tyr, 3-5 아스태틴-D-Tyr, 3-브로모-D-Tyr, 3-5 디브로모-D-Tyr, D-Asn, L-Asn, D-Asp, L-Asp, D-Glu, L-Glu, D-Gln 또는 L-Gln이며; 및 F는 D-Lys, D-Tyr, D-Ser, L-Ser, D-4-OH-Pro, L-4-OH-Pro, 3-아이오도-D-Tyr, 3-5 디이도-D-Tyr, 3-아스태틴-D-Tyr, 3-5 아스태틴-D-Tyr, 3-브로모-D-Tyr, 3-5 디브로모-D-Tyr, D-Asn, L-Asn, D-Asp, L-Asp, D-Glu, L-Glu, D-Gln 또는 L-Gln이고; 단, A, B, C 및 E가 각각 Tyr, Tyr, Lys 및 Tyr일 때, F는 Lys이 아니고; 및, A, B, C 및 E가 각각 Lys, Tyr, Lys 및 Tyr일 때, F는 Tyr 또는 Lys이 아니며; 및, A 및 B가 결실되고, C 및 E가 각각 Lys 및 Tyr일 때, F는 Tyr 또는 Lys가 아니다.

다른 구현예에서, Z의 구조식은 (A, B 및 C가 결실될 때) E-F이고, 여기서 E는 D-Lys, D-Tyr, D-Ser, D-4-OH-Pro, L-4-OH-Pro, 3-아이오도-D-Tyr, 3-5 디아이오도-D-Tyr, 3-아스태틴-D-Tyr, 3-5 아스태틴-D-Tyr, 3-브로모-D-Tyr, 3-5 디브로모-D-Tyr, D-Asn, L-Asn, D-Asp, L-Asp, D-Glu, L-Glu, D-Gln, 또는 L-Gln이고; 및 F는 D-Lys, D-Tyr, D-Ser, L-Ser, D-4-OH-Pro, L-4-OH-Pro, 3-아이오도-D-Tyr, 3-5 디아이오도-D-Tyr, 3-아스태틴-D-Tyr, 3-5 아스태틴-D-Tyr, 3-브로모-D-Tyr, 3-5 디브로모-D-Tyr, D-Asn, L-Asn, D-Asp, L-Asp, D-Glu, L-Glu, D-Gln 또는 L-Gln이다.

바람직한 구현예에서, Z는 D-Ser-Nle-D-Ser-D-Ser (SEQ ID NO: 1), D-Ser- Lys-D-Ser-D-Ser (SEQ ID NO: 2), D-Ser-Lys-D-Tyr-D-Tyr (SEQ ID NO: 3), D-Ser- Lys-D-Tyr-D-Ser (SEQ ID NO: 4), D-Ser-Ser-D-Lys-D-Ser (SEQ ID NO: 5), D-Ser- Ser-D-Lys-Ser (SEQ ID NO: 5), D-Ser-Nle-D-Tyr-D-Ser (SEQ ID NO: 6), D-Ser-Pal-D-Tyr-D-Ser (SEQ ID NO: 7), D-Ser-Thr-D-Tyr-D-Ser (SEQ ID NO: 8), Lys-D-Ser-D-Ser (SEQ ID NO: 9), Ser-D-Lys-D-Ser (SEQ ID NO: 10),Ser-D-Lys-Ser (SEQ ID NO: 10), Nle-D-Tyr-D-Ser (SEQ ID NO: 11), Lys-D-Tyr-D-Ser (SEQ ID NO: 12), Pal-D-Lys-D-Ser (SEQ ID NO: 13), Thr-D-Tyr-D-Ser (SEQ ID NO: 14), D-Ser-D-Lys, D-Ser-D-Tyr, D-Lys-D-Lys, D-Lys-D-Tyr, 또는 D-Tyr-D-Lys이다.

Q는 생물학적 활성 펩티드와 같은 표적화 모이어티(targeting moiety)이다. 본 발명의 컨쥬게이트를 형성하는데 사용될 수 있는 비면역반응(non-immunoreactive) 단백질, 폴리펩티드, 또는 펩티드 리간드는 트랜스페린(transferrin), 표피 성장인자(epidermal growth factors)("EGF"), 봄베신(bombesin), 가스트린(gastrin), 가스트린-방출 펩티드(gastrin-releasing peptide), 혈소판-유도 성장인자(platelet-derived growth factor), IL-2, IL-6,TGF-α 및 TGF-β와 같은 종양 성장인자(tumor growth factors)("TGF"), 우두 성장인자(vaccinia growth factor)("VGF"), 인슐린 및 인슐린형 성장인자(insulin-like growth factors) I 및 II를 포함하지만, 이에 한정되는 것은 아니다. 비-펩티딜 리간드(non-peptidyl ligands)는 예컨대, 스테로이드, 카보하이드레이트, 비타민 및 렉틴을 포함할 수 있다.

바람직한 구현예에서, Q는 소마토스타틴(somatostatin), 소마토스타틴 유사체(somatostatin analog), 봄베신(bombesin), 봄베신 유사체(bombesin analog), 또는 단일클론 항체(monoclonal antibody)와 같은 항체(antibody)와 같은 펩티드이다. 바람직한 생물학적 활성 펩티드 또는 표적화 모이어티(targeting moieties)는 G-단백질 결합 수용체(G-Protein coupled receptor) 또는 소마스토스타틴 타입 2 수용체(somatostatin type 2 receptors)(SSTR2)에 결합할 때와 같은 활성 내재화 단계(active internalization process)를 통해 선택 세포(select cells)에 의해 내재화된다.

본 발명의 컨쥬게이트는 친수성 잔기(hydrophilic residues)를 함유하는 Z기 (또는 연결 펩티드(linking peptide)의 삽입(즉, 펩티드 말단 연장(peptide terminal extension)) 및 친수성 스페이서 서열(hydrophilic spacer sequence)의 선택적인 삽입(optional inclusion)을 통해 조직 내에 독성 펩티드(toxic peptides)의 축적을 억제한다. 이러한 성분은 신장(kidneys)을 통해 고유의 비제한된(non-bound) 펩티드의 신속한 제거를 촉진한다.

본 발명의 컨쥬게이트는 세포독성제(cytotoxic agent)에 컨쥬게이트 될 때,생물학적으로 활성인 펩티드의 생물학적 잠재성을 전체적으로 유지하도록 고안된다. 본 발명의 펩티드 유사체(peptide analog)는 모체 펩티드의 표적 특이성(parent peptide's target specificity) 보다 크거나, 작거나 또는 동일한 특이성(specificity)을 갖도록 유도된 모체 펩티드 유사체(parent peptide analog) 보다 바람직하게는 크거나 또는 동일한 생물학적 잠재성(biological potency)을 갖는다. 예컨대, 소마토스타틴 유사체(somatostatin analog)는 자연발생(naturally-occurring) 소마토스타틴 보다 더 많은 소마토스타틴 수용체 서브타입(somatostatin receptor subtypes)과 결합하거나, 또는 특정 수용체 서브타입과 결합할 수 있다. 본 발명의 일부 유사체는 펩티드 유사체의 높은 수용체 친화도 및 생물학적 잠재성을 유지하면서 세포독성제의 안정적인 결합을 촉진하는 아미노산의 D-아이소머(D-isomers) 또는 그의 유사체를 함유할 수 있다.

본 발명의 세포독성 또는 치료 컨쥬게이트는 상술한 바와 같은 소마토스타틴 수용체를 인식하는 다수의 공지 소마토스타틴 유사체를 사용할 수 있다. 바람직하게는, 컨쥬게이트의 소마토스타틴 유사체 부분은 10 내지 18의 아미노산을 함유하고, 하기의 핵심 서열(core sequence)을 함유한다: 사이클로[Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys] (SEQ ID NO: 37 및 SEQ ID NO: 38). 바람직하게는, 유사체의 C-말단(C-terminus)은 하기와 같다: Thr-NH₂. 본 명세서에 개시된 봄베신 유사체(bombesin analogs)는 또한, 본 발명의 펩티드제 내의 세포독성제 또는 치료제와 컨쥬게이트될 수 있다.

치료제 또는 세포독성제의 특이적인 표적화(targeting)는 생물학적 활성 펩티드에 대해 수용체 특이성을 발현하는 종양의 선택적인 제거를 허용한다. 예컨대, 소마토스타틴 수용체를 발현하는 종양은 폐(lung), 유방(breast), 전립선(prostate), 결장(colon), 뇌(brain), 위장(gastrointestinal tract), 신경내분비축(neuroendocrine axis), 간(liver), 신장(kidney) 등의 종양(neoplasm)을 포함한다(참조: Schaer 외, Int. J. Cancer, 70: 530-537,1997; Chave 외, Br. J. Cancer 82(1): 124-130, 2000; Evans 외, Br. J. Cancer 75 (6): 798-803, 1997).

본 발명의 컨쥬게이트에 사용되는 펩티드는 KiSS 펩티드 및 유사체, 유로텐신(urotensin) II 펩티드 및 유사체, GnRH I 및 II 펩티드 및 유사체, 옥트레오티드(octreotide), 디프레오티드(depreotide), 바프레오티드(vapreotide), 혈관활성(vasoactive) 장용 펩티드(intestinal peptide)(VIP), 콜레시스토키닌(cholecystokinin)(CCK), 인슐린형 성장인자(insulinlike growth factor)(IGF), RGD-함유 펩티드, 멜라노사이트-자극 호르몬(melanocyte-stimulating hormone)(MSH) 펩티드, 뉴로텐신(neurotensin), 칼시토닌(calcitonin), 항종양 항체(antitumor antibody)의 상보성 결정 영역(complementarity determining regions)으로부터 나온 펩티드, 클루타티온(glutathione), YIGSR[(류코사이트 애비드 펩티드(leukocyte-avid peptides), 예컨대, 혈소판 인자-4(PF-4)의 헤파린 결합 영역 및 리신-풍부 서열(lysine-rich sequence)을 함유하는 P483H], 아트리얼 나트리우레틱 펩티드(atrial natriuretic peptide)(ANP), β-아밀로이드 펩티드(β-amyloid peptides), 델타-오피오이드 안타고니스트(delta-opioid antagonists)(예를 들어 ITIPP(psi)), 아넥신-V(annexin-V), 엔도텔린(endothelin), IL-1, IL-Ira, IL-2, IL-8, 류코트리엔(leukotriene) B4(LTB4), 케모택틱 펩티드(chemotactic peptides)(예컨대, N-포밀-메티오닐-류실-페닐알라닌-리신(fMLFK)), GP Iib/IIIa 수용체 안타고니스트(예컨대, DMP444), 표피 성장인자(epidermal growth factor), 인간 호중구 엘라스타제 억제제(human neutrophil elastase inhibitor)(EPI-HNE-2 및 EPI-HNE-4), 플라즈민 억제제(plasmin inhibitor), 살균 펩티드(antimicrobial peptides), 아프티사이드(apticide)(P280 및 P274), 트롬보스폰딘 수용체(thrombospondin receptor)(TP-1300와 같은 유사체를 포함), 비티스타틴(bitistatin), 뇌하수체 아데닐일 사이클라제 형(pituitary adenylyl cyclase type) I 수용체(PAC1), 피브린 α-쇄, 파지 디스플레이 라이브러리(phage display libraries)에서 유도된 펩티드 및 포유동물의 신체에서 세포 또는 조직에 표적화된 그의 보존 치환체(conservative substitutions)(예컨대, 종양 또는 증식 신생혈관유도 혈관(proliferative angiogenic blood vessel)과 같은 질환조직; 참조: 예컨대, Aina et al., Biopolymers 66: 184-199,2002) 및 그의 유도체 및 유사체(참조: 예컨대, Signore et al., Eur. J. Nucl. Med. 28 (10): 1555-65,2001)을 포함한다.

세포독성 소마토스타틴 펩티드 유사체는 또한, 소마토스타틴 수용체를 과대 발현하는 것과 같은 종양 맥관구조(tumor vasculatures) 또는 신생혈관유도 혈관(angiogenic blood vessels)에 대해 특이적일 수 있다(참조: Denzler 및 Reubi, Cancer 85: 188-198,1999 ; Gulec 외, J. Surg. Res. 97 (2): 131-137,2001; Woltering 외, J. Surg. Res. 50: 245,1991). 부가적으로, 본 발명의 바람직한소마토스타틴 유사체가 다양하게 친수성이기 때문에 그들은 수용성이고, 따라서 이전의 소수성(hydrophobic) 유사체에 비해 향상된 조건으로 사용될 수 있다. 본 명세서에 개시된 친수성 유사체는 혈액(blood), 뇌척수 플루이드(cerebrospinal fluid) 및 다른 신체 플루이드(bodily fluids)에서 가용성일 뿐만 아니라, 신장에 의해 소변의 배설을 촉진한다. 이러한 친수성 특징은 본 발명의 유사체를 신체의 거의 모든 영역으로 전달하는 것을 촉진시킨다. 또한, 본 발명은 펩티드 유사체 내에 삽입하기 위한 특이적인 친수성 요소를 개시함으로써 유사체의 친수성(hydrophilicity)를 조절하여 다양하게 컨쥬게이트된 세폭독성제의 화학적 및 구조적 성질을 조정할 수 있다.

소마토스타틴 아고니스트 유사체(Somatostatin agonist analogs)는 그들의 수용체에 결합한 후에 신속하게 내재화되고(참조: 예컨대, Lukinius et al, Acta Onc., 38: 383-387,1999), 따라서, 전통적인 종양 세포독성제와 같은 다양한 치료제를 표적화하기 위한 벡터로서 사용될 수 있다. 많은 종양 타입이 소마토스타틴 타입 2 수용체(somatostatin type 2 receptors)를 심하게 과대발현하기 때문에 그러한 항종양제의 특이성이 매우 향상될 수 있다. 이러한 방법으로, 우리는 잠재적인 하이브리드 분자가 소마토스타틴 수용체에 대해 매우 높은 친화도를 유지하도록 고안될 수 있는 한, 모든 컨쥬게이트 세포독성제와 관련된 독성 부작용이 유효하게 낮아질 수 있음을 제안한다.

본 발명에서 표적화 모이어티(targeting moiety)로서 사용하기 위한 면역반응성 리간드(immunoreactive ligands)는 항원-인식 면역글로불린 항체(antigen-recognizing immunoglobulin)("항체"라고도 불림), 또는 그의 항원-인식 단편(antigen-recognizing fragment thereof)을 포함한다. 특히 바람직한 면역글로불린은 종양-관련 항원을 인식할 수 있는 것이다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, "면역글로불린"은 IgG, IgA, IgM, IgD 또는 IgE와 같은 면역글로불린의 임의의 인식된 클래스(class) 또는 서브클래스(subclass)를 의미한다. 바람직하게는 면역글로불린의 IgG 클래스 내에 속하는 면역글로불린 항체이다. 면역글로불린은 임의의 종(species)에서 유도될 수 있다. 그러나, 바람직하게는 면역글로불린이 인간, 쥐(murine) 또는 토끼의 기관에서 유도된 것이다. 또한, 면역글로불린은 다클론 또는 단일클론일 수 있지만, 바람직하게는 단일클론이다.

본 발명의 컨쥬게이트는 항원-인식 면역글로불린 단편(antigen-recognizing immunoglobulin fragment)을 포함할 수 있다. 그러한 면역글로불린 단편은 예컨대, Fab', F (ab')₂, Fv 또는 Fab 단편이나 또는 다른 항원-인식 면역글로불린 단편을 포함할 수 있다. 그러한 면역글로불린 단편은 예컨대, 바이프로티오리틱 효소 소화(byproteolytic enzyme digestion), 예컨대, 펩신 또는 파파인(papain) 소화, 환원 알킬화(reductive alkylation), 또는 재조합 기술(recombinant techniques)에 의해 제조될 수 있다. 그러한 면역글로불린 단편을 제조하기 위한 물질 및 방법은 당업자에게 공지되어 있다(참조: Parham, J. Immunology, 131,2895, 1983; Lamoyi 외 , J. Immunological Methods, 56,235, 1983)

본 발명의 컨쥬게이트에 사용된 면역글로불린은 본 발명이 속하는 기술분야에서 잘 알려져 있는 용어인 "키메라(chimeric) 항체"일 수 있다. 또한, 면역글로불린은 "이작용기성(bifunctional)" 또는 "하이브리드(hybrid)" 항체 즉, 하나의 암(arm)이 종양 관련 항원과 같은 하나의 항원부위(antigenic site)에 대해 특이성을 갖고, 다른 암(arm)이 예컨대, 헵텐(hapten) 또는 항원-내포 종양세포(antigen-bearing tumor cell)에 치명적인 약제에 결합하는 다른 표적을 인식하는 항체일 수 있다. 대안으로, 이작용기성 항체(bifunctional antibody)는 각각의 암(arm)이 치료적으로 또는 생물학적으로 변형된 세포의 종양 관련 항원의 다른 에피토프(epitope)에 대해 특이성을 갖는 것일 수 있다. 따라서, 하이브리드 항체는 바람직하게는 헵텐에 대하여 하나 이상의 결합부위(binding sites)를 갖거나 또는 표적항원(target antigen) 예컨대, 종양, 감염 유기체(infectious organism) 또는 기타 질환상태(disease state)와 관련된 항원에 대해 특이적인 하나 이상의 결합부위(binding sites)를 갖는 이중 특이성(dual specificity)을 갖는다.

생물학적 이작용기성 항체는 예컨대, 본 명세서에 전체로서 참고문헌으로 삽입된 유럽 특허 공개 EPA 0 105 360에 개시되어 있다. 그러한 하이브리드 또는 이작용기성 항체는 생물학적으로 세포 융합 기술(cell fusion techniques)에 의해, 또는 화학적으로 교차-결합제(cross-linking agents) 또는 디설파이드 다리-형성제(disulfide bridge-forming reagents)에 의해 유도되거나, 그의 항체 및/또는 단편 모두가 포함될 수 있다. 그러한 하이브리드를 얻기 위한 방법은 예컨대, 본 명세서에 전체로서 참고문헌으로 삽입된 1983년 10월 27일에 공개된 PCT 출원 제W083/03679호, 1987년 4월 8일에 공개된 유럽특허출원 제EPA 0 217 577호에 개시되어 있다. 특히 바람직한 이작용기성 항체는 비스-(말레이미도)-메틸에테르("BMME")와 같은 교차-결합제(cross-linking agents) 또는 당업자에게 잘 알려진 기타 교차-결합체를 이용하여 합성하여 제조된 "폴리도마(polydoma)" 또는 "쿠아드로마(quadroma)"로부터 생물학적으로 제조된 것이다.

또한, 면역글로불린은 단쇄항체(single chain antibody)("SCA")일 수 있다. SCA는 가변성 라이트(variable light)("V_L") 도메인 및 가변성 헤비(variable heavy)("V_H") 도메인들이 펩티드 결합(peptide bridge) 또는 디설파이드 결합(disulfide bonds)에 의해 연결된 단쇄(single chain) Fv 단편 ("scFv")으로 구성될 수 있다. 또한, 면역글로불린은 항원-결합 활성( antigen-binding activity)을 갖는 단일 V_H도메인(dAbs)으로 구성될 수 있다(참조: G. Winter and C. Milstein, Nature 349: 295,1991; R. Glockshuber 외, Biochemistry 29:1362, 1990; 및, E. S. Ward 외, Nature 341: 544, 1989).

본 발명에 사용되는 특히 바람직한 항체는 키메릭 단일클론 항체(chimeric monoclonal antibodies)이고; 바람직하게는 종양 관련 항원에 대하여 특이성을 갖는 키메라 항체(chimeric antibodies)이다. 본 명세서에서 "키메라 항체(chimeric antibody)"라는 용어는 가변영역(variable region) 즉, 하나의 소스(source) 또는 종(species)으로부터의 결합영역(binding region)과 다른 소스 또는 종에서 유도된 적어도 일부의 보존영역(constant region)을 포함하는, 보통 재조합 DNA 기술에 의해 제조되는 단일클론 항체를 의미한다. 쥐 가변영역(murinevariable region) 및 인간 보존영역(human constant region)을 갖는 키메릭 항체(chimeric antibodies)가 신속하게 제조되고, 또한 순수한 쥐 모노클로날 항체 보다 덜 면역원성(immunogenic)이기 때문에 본 발명의 특정 적용, 특히 인간 치료(human therapy)에 바람직하다. 그러한 쥐/인간 키메릭 항체(murine/human chimeric antibodies)는 쥐 면역글로불린 가변영역을 코딩하는 DNA 시그먼트(segments) 및 인간 면역글로불린 보존영역을 코딩하는 DNA 시그먼트(segments)를 포함하는 발현된 면역글로불린 유전자의 생성물이다. 본 발명의 컨쥬게이트에 사용되는 다른 형태의 키메릭 항체는 본래 항체로부터 변형되거나 또는 변경된 클래스 또는 서브클래스이다. 그러한 "키메릭(chimeric)" 항체는 또한 "클래스-스위치 항체(class-switched antibodies)"를 의미한다. 키메릭 항체를 제조하기 위한 방법은 당업계에 잘 알려진 통상적인 재조합 DNA 및 유전자 트랜스펙션 기술을 포함한다(참조: Morrison, S. L, 외, Proc. Nat'1 Acad. Sci. , 81: 6851,1984).

"키메라 항체(chimeric antibody)"는 또한 "인간화된 항체(humanized antibody)" 즉, 프레임워크(framework) 또는 "상보성 결정영역(complementarity determining regions)"("CDR")이 모체 면역글로불린의 CDR과 비교할 때 다른 특이성을 갖는 면역글로불린의 CDR을 포함하도록 변형된 항체를 포함한다. 바람직한 구현예에서, 쥐 CDR은 "인간화된 항체"를 제조하도록 인간항체의 프레임워크 영역으로 융합된다(참조: 예컨대, L. Riechmann 외, Nature 332: 323, 1988; M. S. Neuberger 외, Nature 314: 268, 1985). 특히 바람직한 CDRs은 키메릭 및 이작용기성 항체에 대하여 상기에서 언급한 항원을 인식하는 대표서열(representingsequences)과 일치한다(참조: 예컨대, 본 명세서에 전체로서 참고문헌으로 삽입된 유럽특허출원 제0 239 400호(1987년 9월 30일 공개)).

본 기술 분야의 당업자는 특히 상기 개시한 이작용기성 항체의 치료에 대한 유연성 뿐만 아니라, 낮은 면역원성의 키메라 또는 인간화 항체라는 이점을 갖는 이작용기성-키메라 항체가 제조될 수 있음을 인식할 것이다. 그러한 이작용기성-키메라 항체는 예를 들면, 가교제 및/또는 상기한 형태의 재조합 방법을 이용하여 합성될 수 있다. 본 발명은 이작용기성, 키메라, 이작용기성-키메라, 인간화, 또는 항원-인식 단편 또는 그 유도체 중 어느 한 항체를 생산하기 위한 임의의 특정 방법에 의해 그 범위가 제한되는 것으로 해석되어서는 안된다.

본 발명의 컨쥬게이트는 또한 예를 들면, 본원에 그 전체로서 참조로 포함되는 Neuberger, 외., PCT 출원 W086/01533(1986년 3월 13일 공개)에 개시된 효소와 같은 면역글로불린(상기 개시된 것과 같음) 또는 활성 단백질과 융합될 수 있는 면역글로불린 단편을 포함할 수도 있다.

또한 본원에서 사용된 "이작용기성", "융합된", "키메라"(인간화를 포함.) 및 "이작용기성-키메라"(인간화를 포함.) 항체의 구성(construction)은 그 각각의컨텍스트(context) 내에 항원 인식 단편들을 포함하는 구성을 포함한다. 본 발명의 당업자가 인정할 것과 마찬가지로, 그러한 단편들이 완전한(intact) 이작용기성 항체, 키메라, 인간화 또는 키메라-이작용기성 항체의 전통적인 효소 분해에 의해 제조될 수도 있다. 완전한 항체가 예를 들면, 포함된 구성의 특성으로 인해 분해가 일어나기 쉽지 않은 경우에, 주요(noted) 구성은 출발물질로서 사용된 면역글로불린 단편들을 이용하여 제조될 수 있거나; 또는 만약 재조합 기술이 사용된다면, DNA 서열 그 자체가 원하는 완전한 면역글로불린 "단편"을 제조하도록, 발현되었을 때 생체 내 또는 생체 외에서 화학적 또는 생물학적 수단에 의해 결합될 수 있는 바람직한 "단편"을 코딩하도록 맞추어질 수 있다. 본원에서 사용된 "단편"이라는 용어는 이 컨텍스트 내에 있다.

본 발명의 컨쥬게이트에 사용된 면역글로불린(항체), 또는 이들의 단편은 천연적으로 다클론 또는 단일클론일 수 있다. 단일클론 항체들이 바람직한 면역글로불린들이다. 다클론 또는 단일클론 항체의 제조는 본 기술 분야의 숙련된 기술자에게 잘 알려져 있다. 예를 들면, 「G. Kohler 및 C. Milstein, Nature 256: 495,1975」를 참조할 수 있다. 뿐만 아니라, 하이브리도마 및/또는 그러한 하이브리도마에 의해 생산되고 본 발명의 수행(practice)에 유용한 단일클론 항체가 공개적으로 사용가능하다.

추가적인 구현예에서, 본 발명은 질병의 치료방법 또는 생물학적 기능의 변형을 특징으로 한다. 상기 방법은 치료 유효량 또는 생물학적 기능변형이 가능한 양의 본 발명의 컨쥬게이트를 항온 동물에게 그들의 필요에 따라 투여하는 것을 포함한다. 본 기술 분야의 숙련된 당업자는 사용되는 특정 컨쥬게이트가 치료될 질병 상태 또는 변형될 생물학적 시스템에 의존할 것이라는 점을 인식할 것이다. 구체적으로는, 본 기술 분야의 당업자는 질병의 치료에 특이성을 갖거나 원하는 생물학적 기능을 변형할 수 있는 본 발명의 컨쥬게이트를 제조하기 위해 특이적인 표적화 부위 및 세포독성제 또는 치료제를 선택할 수 있을 것이다. 예를 들면, 폐, 심장, 뇌, 눈, 전립샘, 또는 결장의 종양; 신경내분비 기원의 종양(예를 들면, 카르시노이드 증후군); 및 종양, 망막황반변성, 또는 당뇨망막병증과 같은 증식성 신생형성 혈관을 포함하는 여러 질병이 본 발명의 컨쥬게이트를 사용하여 치료가능하다는 것이 예견된다.

본 발명의 컨쥬게이트는 사람과 같은 포유동물에게 직접적으로 또는 본 기술분야에 알려진 제약학적으로 허용가능한 담체 또는 염과 조합하여 투여될 수도 있다. 제약학적으로 허용가능한 염은 제약 업계에서 흔히 사용되는 비독성의 산 첨가염 또는 금속 착물을 포함할 수도 있다. 산 첨가염의 예로서는 아세트산, 젖산, 파모산(pamoic acid), 말레산, 시트르산, 말산, 아스코르브산, 숙신산, 벤조산, 팔미트산, 수베르산(suberic acid), 살리실산, 타르타르산, 메탄술폰산, 톨루엔술폰산, 또는 트리플루오로아세트산 또는 그 유사체와 같은 유기산; 및 염산, 브롬산, 황산, 인산 또는 그 유사체와 같은 무기산을 포함한다. 금속 착물로는 아연, 철 및 그 유사체를 포함한다. 제약학적으로 허용가능한 담체의 한 예로는 생리 식염수가 있다. 다른 생리학적으로 허용가능한 담체 및 이들의 제형은 본 기술 분야의 당업자에게 알려져 있고, 예를 들면 「Remington's Pharmaceutical Sciences, (18th edition), ed. A.Gennaro, 1990, Mack Publishing Company, Easton, PA」에 개시되어 있다.

본 발명의 컨쥬게이트의 약물 유효량 또는 이들의 제약학적으로 허용가능한 염의 제약학적 제재들은 투여 경로에 따라 적합한 제약학적으로 허용가능한 담체와함께 경구, 비경구(예를 들면, 근육내, 복막내, 정맥내, 피하 또는 접안 주사, 흡입, 경피, 점안액 또는 임플란트), 비강, 질, 직장, 설하 또는 국소 투여될 수 있다.

제재를 제조하는 본 기술 분야에 알려진 방법을 예를 들면, 「Remington's Pharmaceutical Sciences (luth edition), ed. A. Gennaro, 1990, Mack Publishing Company, Easton, PA에서 찾을 수 있다. 경구 사용을 위한 조성물은 제약학적 조성물의 제조를 위한 본 기술 분야에 알려진 임의의 방법에 따라 고체 또는 액체 형태 내에서 제조될 수도 있다. 이 조성물은 보다 맛이 좋은 제재를 제공하기 위해서 선택적으로 감미제, 풍미제, 색소, 향료 및/또는 보존제를 포함한다. 경구 투여를 위한 고체 투약 형태는 캡슐, 정제, 알약, 분말 및 입자를 포함한다. 그러한 고체 형태로서, 활성 화합물은 적어도 하나의 불활성의 제약학적으로 허용가능한 담체 또는 부형제와 혼합된다. 이들은 예를 들면, 탄산칼슘, 탄산나트륨, 락토즈, 슈크로즈, 스타치, 인산칼슘, 인산나트륨, 또는 카올린과 같은 불활성 희석제를 포함할 수도 있다. 바인딩제, 완충제 및/또는 광택제(예를 들면 망간 스테아레이트)가 사용될 수도 있다. 정제 및 알약은 추가적으로 장용(腸用) 코팅제를 사용하여 제조될 수 있다.

경구 투여를 위한 액체 투약 형태는 제약학적으로 허용가능한 에멀젼, 용액, 서스펜젼, 시럽, 및 연화 젤라틴 캡슐을 포함한다. 이러한 형태들은 수성 또는 유성 배지와 같은 본 기술 분야에 통상 알려진 불활성 희석제를 포함한다. 그러한 불활성 희석제 이외에, 조성물은 또한 습윤제, 에멀젼화제, 및 서스펜젼제와 같은 아쥬번트를 포함할 수 있다.

비경구 투여를 위한 제재는 멸균수 또는 비-수용액, 서스펜젼 또는 에멀젼을 포함한다. 적합한 비히클의 예로서는 프로필렌 글라이콜, 폴리에틸렌 글라이콜, 식물성 오일, 젤라틴, 수화 나프탈렌 및 에틸 올레이트와 같은 주사용 유기 에스테르를 포함한다. 그러한 제재는 또한 보존제, 습윤제, 에멀젼화제, 및 분산제와 같은 아쥬번트를 포함할 수도 있다. 생체적합성, 생분해성인 락트산 고분자, 락트산/글라이콜산 공중합체 또는 폴리옥시에틸렌-폴리옥시에틸렌 공중합체가 화합물의 방출을 조절하기 위해 사용될 수도 있다. 본 발명의 폴리펩티드를 위한 다른 비경구 전달 시스템은 에틸렌-비닐 아세테이트 공중합체 입자, 삼투 펌프, 이식가능한 융합 시스템, 및 라이포좀을 포함한다.

액체 제재는 예를 들면, 박테리아-보유 필터를 통한 여과, 조성물 내에 멸균제를 삽입, 또는 조성물을 조사(照射) 또는 가열함으로써 멸균될 수 있다. 대안으로, 제재가 사용 전에 즉시 증류수 또는 다른 멸균 주입가능한 배지 내에 용해시킬 수 있는 멸균된 고체 조성물의 형태로 제조될 수 있다.

직장 또는 질 투여를 위한 조성물은 바람직하게는 활성 물질, 즉 코코아 버터 또는 좌약용 왁스와 같은 부형제를 포함할 수도 있는 좌약이다. 비강 또는 설하 투여를 위한 조성물은 또한 본 기술 분야에 알려진 표준 부형제를 이용하여 제조된다. 흡입을 위한 제재는 예를 들면, 락토오즈와 같은 부형제를 포함할 수도 있고, 예를 들면 폴리옥시에틸렌-9-로릴 에테르, 글라이코콜레이트 및 디옥시콜레이트를 포함하는 수용액이거나, 또는 점비제(nasal drop) 또는 스프레이의 형태,또는 젤 형태로 투여되기 위한 지용성 용액일 수도 있다.

본 발명의 조성물 내의 활성 성분의 양은 다양할 수 있다. 기술 분야의 당업자는 투여될 폴리펩테드, 투여시간, 투여경로, 제재 특성, 분비 속도, 투여대상의 환경 특성, 및 나이, 체중, 건강 및 환자의 성을 포함하는 다양한 인자에 따라 정확한 개인별 투약량을 평가할 것이다. 뿐만 아니라, 소마토스타틴 또는 봄베신과 같은 생물학적 활성 펩티드에 의해 표적화되는 환경의 엄격성은 또한 투약 농도에 영향을 줄 것이다. 일반적으로, 1회 투여 또는 수회 투여 방식으로 0.1μg/kg 내지 100 mg/kg 체중의 투약농도가 매일 투여된다. 바람직하게는, 일반적인 투여 범위는 1일 250μg/kg 내지 5.0mg/kg 체중의 양이다. 다양한 투여 경로에 따른 효과상의 차이로 인해 필요한 투약량의 범위가 다양할 것이 예상된다. 예를 들면, 경구 투여는 일반적으로 정맥주사에 의한 투여보다 높은 투약 농도가 요구될 것이 예상될 수 있다. 이러한 투약 농도의 폭넓은 다양성은 본 기술 분야에 알려진 최적화를 위한 표준화된 경험적 루틴(standard empirical routines)을 이용하여 조성할 수 있다. 일반적으로, 정확한 치료 유효량은 상기에서 밝힌 인자들을 고려하여 주치의에 의해 결정될 것이다.

본 발명의 컨쥬게이트는 예를 들면, 미국특허 5,672,659호 및 5,595, 760호에 개시된 방법과 같은 지효성 조성물로서 투여될 수 있다. 즉효성 또는 지효성 조성물의 사용은 치료될 상태에 따라 달라진다. 만약 상태가 급성 또는 초급성(over-acute)의 질환이라면, 즉효성 형태를 이용한 치료가 지속 방출 조성물보다 바람직할 것이다. 대안으로, 예방 또는 장기 치료를 위해서는 지효성 조성물이일반적으로 바람직할 것이다.

본 발명에 사용되는 폴리펩티드는 임의의 적합한 방법으로 제조될 수 있다. 폴리펩티드는 자연발생 근원으로부터 분리되거나, 재조합하여 생산되거나, 또는 합성하여 생산되거나, 또는 이들 방법을 조합하여 생산될 수도 있다. 짧은 펩티드 합성은 본 기술 분야에 알려져 있다. 예를 들면, 「Stewart 외, Solid Phase Peptide Synthesis (Pierce Chemical Co. , 2d ed. , 1984)」에 개시되어 있다. 본 발명의 펩티드는 본 기술 분야의 알려진 표준 펩티드 합성 방법에 따라 합성될 수 있다.

이하의 실시예는 본 발명을 설명하기 위한 것이다. 임의의 방식으로 본 발명을 제한하고자 하는 것은 아니다.

실시예 1. 캄프토테신(camptothecin)의 클로로포름산염의 제조

캄프토테신(250 mg) 및 4-디메틸아미노피리딘(DMAP; 50 mg)을 3 mL의 무수화 피리딘 및 50 mL의 무수화 메틸렌 클로라이드에 서스펜젼화시켰다. 포스젠(750gL of a 20% solution in toluene)을 슬러리에 첨가하고 실온에서 2시간 혼합하였다. 과량의 포스젠 및 메틸렌 클로라이드를 화학 증기 후드 내에서 증발시키고 캄프토테신의 클로르포름산염을 DCM에 용해시켰다.

실시예 2. 캄프토테신-카르보닐-N-아미노에틸-글리신-D-tert-부틸-Ser-Nle-D-tert-부틸-Tyr-D-tert-부틸-Ser-S-트리틸-Cys-Plze-D-Trp-엡실론-tert-부틸옥시카르보닐-Lys-tert-부틸-Thr-S-트리틸-Cys-tert-부틸-Thr-링크-아마이드-수지(SEQ ID NO: 16)의 제조

링크 아마이드[4- (2', 4'-디메톡시페닐-Fmoc-(아미노메틸)페녹시아세타마이딘-노르류실-메틸벤즈하이드릴아민 수지(0.063 mmole), 100-200 메쉬 (Novabiochem, San Diego, CA)를 CS136 자동 펩티드 합성기(CS Bio, Inc. , San Carlos, CA)의 반응용기에 첨가하고, 약 1시간 동안 디메틸포름아마이드(DMF) 내에서 팽윤시켰다. 수지를 여과하고 과량의 DMF 내에 있는 과량의 20% 피페리딘을 첨가하고 혼합하였다(2분). 수지 Fmoc기의 완전한 제거를 위해 수지는 여과하고 다시 과량의 20% 피페리딘을 첨가하여 혼합하였다(20분). 반응기 노출(deprotection) 후에, 수지는 DMF를 이용하여 4회 세정하고 그 뒤 제 1 보호된 아미노산, Fmoc-Thr(tBut)(0.188 mmol), 디이소프로필카보디이미드(DIC)(0.188 mmol), 및 N-하이드록시벤조트리아졸모노하이드레이트(HOBt)(0.188 mmol)를 DMF안에서 모두 용해시켰고 수지에 첨가한 후 1시간 동안 혼합하고 DMF로 4회 세정하였다.

Fmoc기는 다시 20%의 피페리딘/DMF 용액을 이용하여 제거되고, 동일한 일반적인 커플링 절차가 이어지며, 이하의 아미노산들은 연속적으로 연장된 펩티드 체인과 반응하였다: Fmoc-S-트리틸-L-시스테인, Fmoc-O-t-부틸-L-트레오닌, N^α-Fmoc-N-Boc-L-라이신, N^α-Fmoc-Nⁱⁿ-Boc-D-트립토판, Fmoc-L-페닐알라닌, Fmoc-S-트리틸-L-시스테인, Fmoc-O-t-부틸-D-세린, Fmoc-O-t-부틸-D-타이로신, N^α-Fmoc-노르류신,Fmoc-O-t-부틸-D-세린, 브롬아세트산. 펩티드 수지(3 eq)와의 브롬아세트산의 커플링이 완결된 후에, N-Boc-에틸렌디아민을 N-메틸-α-피롤리돈(NMP) 내에서 첨가하고 혼합한 후(2시간) DMF로 3회, DCM로 3회 세정하였다. 실시예 1에서 얻어진 캄프토테신 클로로포름산은 수지에 첨가되고 밤새 혼합한 후, 충분한 양의 DMF 및 이후의 메탄올로 세정하였다. 최종 여과 후에 유도된 수지는 공기 중에서 밤새 건조하였다.

실시예 3. 캄프토테신-카르보닐-N-(2-아미노에틸)-글리신-D-Ser-Nle-D-Tyr-D-Ser-시클로[Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys]-Thr-아마이드(SEQ ID NO : 17)의 제조

실시예 2에서 제조된 캄프토테신-펩티드 수지(0.063 mmol)를 물(2.5%), 1,2-에탄디티올(2.5%), 및 트리이소프로필실란(1%)가 포함된 15ml의 트리플루오로아세트산(TFA)이 들어있는 둥근바닥 플라스크에 첨가하였다. 서스펜젼을 교반하고(2시간) TFA를 이용하여 수차례 세정하였다. TFA는 진공에서 증발되었고 결과물인 오일에 에테르를 첨가하여 노란색 분말을 얻었으며 이 분말은 그 뒤 60%의 아세트산(250ml) 내에서 용해되었다. 메탄올 내에서 농축된 요오드 용액을 영구적인 갈색 착색이 형성될 때까지 격렬하게 교반하면서 한 방울씩 첨가한 후, 소량의 아스코르브산을 첨가하여 과량의 요오드를 제거하였다.

진공에서 용액을 10mL 정도의 부피로 감소시키고, 조액 캄프토테신 펩티드를 실리카(Dynamax 300,8um) 결합된 C-18 컬럼(21.4×250mm) 상에서의 예비 RP-HPLC(reverse phase high pressure liquid chromatography)를 이용하여 정제하였다. 20mL/min의 속도의 선형 구배 용출 시스템이 채택되었다: 0.1 % TFA 및 완충액 B, 80%의 MeCN 내에 있는 0.1% TFA: 20%B 내지 50%B까지 분당 1% 증가되었다. 분리는 280nm에서 모니터링되었다. 분석용 HPLC로 확인된 순수한 산물을 포함하는 부분은 풀되어(pooled) 진공에서 농축되고 동결건조되었다. 펩티드는 수용성 아세트산으로부터 동결건조함으로써 일정한 무게의 애매한 노란색 분말로써 수득되었다. 산 가수분해물의 아미노산 분석 및 레이져 탈착 질량 분광법이 부가된 매트릭스를 이용하여 정확한 조성을 입증하였다.

실시예 4. 팩클리탁셀의 클로로포름산염의 제조

팩클리탁셀(0.6 mmole)은 100mL의 둥근 바닥 플라스크 내에 있는 30mL의 무수 DCM에 용해되었다. 이 용액에, 20mL의 무수 DCM 내에 용해된 디이소프로필에틸아민(DIEA; 3 mmol)을 건조 질소 기체 하에서 0℃에서 20분간 첨가하였다. 포스젠(3 mmol)은 슬러리에 첨가되었고 30분간 0℃에서 그리고 2시간 동안 실온에서 혼합하였다. 과량의 포스젠 및 메틸렌 클로라이드는 증발되었고 팩클리탁셀의 클로로포름산은 메틸렌 클로라이드에 용해되었다.

실시예 5. 팩클리탁셀-카르보닐-N-(2-레이드록시에틸)-글리신-D-트리틸-Ser-노르류신-D-트리틸-Tyr-D-트리틸-Ser-S-트리틸-Cys-Phe-D-Tip-엡실론-mtt-Lys-트리틸-Thr-S-트리틸-Cys-트리틸-Thr-아미노-크산텐-MBHA-수지(SEQ ID NO : 16)의 제조

FMOC-아미노-크산텐-MBHA(4-메틸벤즈하이드릴아민 하이드로클로라이드)폴리스티렌 수지(0.063 mmol) [Bachem, catalog #D-2040, Lot #0541173]를 CS136 자동 펩티드 합성기(CS Bio, Inc. , San Carlos, CA)의 반응용기에 투입하고 약 1시간 동안 DMF 내에서 팽윤시켰다. 수지 Fmoc기의 완전한 제거를 보장하기 위해 수지를 여과하고 DMF 내에 있는 과량의 20% 피페리딘을 첨가하여 2분 동안 혼합하였다. 반응기 노출 후에, DMF를 이용하여 수지를 4회 세정하고 제 1 보호된 아미노산, Fmoc-Thr(트리틸)(0.188 mmol), 디이소프로필카르보이미드(DIC)(0.188 mmol), 및 N-하이드록시벤조트리아졸 모노하이드레이트(HOBt)(0.188 mmol)를 모두 DMF에 용해하고 1시간 혼합한 후, DMF를 이용하여 4회 세정하였다.

Fmoc기는 20% 피페리딘/DMF 용액 처리로 다시 제거되었고 동일한 일반적 커플링 절차가 이어지는데, 하기 아미노산들이 연속적으로 성장하는 펩티드 체인과 반응하였다: Fmoc-S-트리틸-L-시스테인, Fmoc-0-트리틸-L-트레오닌, N^α-Fmoc-N^εmtt-L-라이신, N-Fmoc-D-킵토판, Fmoc-L-페닐알라닌, Fmoc-S-트리틸-L-시스테인, Fmoc-O-트리틸-D-세린, Fmoc-O-트리틸-D-타이로신, N-Fmoc-노르류신, Fmoc-O-트리틸-D-세린, 브롬아세트산. 펩티드 수지와 브롬아세트산의 커플링이 완결된 이후에, (3 eq)에탄올아민이 NMP에 첨가되었고 2시간 동안 혼합하였고 그 뒤 DMF로 3회, DCM으로 3회 세정하였다. 실시예 4에서 수득한 팩클리탁셀 클로로포름산을 수지에 첨가하여 밤새 혼합하고, 충분한 양의 DMF 및 이후에 메탄올로 세정하였다. 최종 여과 후에, 유도된 수지가 밤새 공기 중에서 건조되었다.

실시예 6. 팩클리탁셀-카르보닐-N-(2-하이드록시에틸)-글리신-D-Ser-Nle-D-Tyr-D-Se-시클로[Cys-Phe-D-Trp-Lys-Tlar-Cys]-Thr-아마이드(SEQ ID NO : 17)

실시예 5에서 제조된 팩클리탁셀-펩티드 수지(0.063mmol)를 메틸렌 클로라이드에 트리플루오로아세트산(2%)이 녹아있는 용액 15ml가 들어있는 RB 플라스크에 넣었다. 서스펜젼을 교반하고(2 h), 여과하여 메틸렌 클로라이드를 이용하여 몇차례 세정하였다. 메틸렌 클로라이드는 진공에서 증발시켰고 60% 아세트산(250mL)에 용해되어 있는 백색 분말을 생성하기 위해 결과물인 오일에 에테르를 첨가하였다. 메탄올에 요오드가 용해된 농축 용액을 영구적인 갈색 착색이 형성될 때까지 격렬한 교반과 함께 한방울씩 첨가하고 과량의 요오드는 소량의 아스코르브산을 첨가함으로써 제거하였다. 용액은 진공에서 약 10mL 부피로 감소시키고 조액 팩클리탁셀 펩티드는 실리카(Dynamax 300,8um) 결합된 C-18 컬럼(21.4×250mm) 상에서의 예비 RP-HPLC(reverse phase high pressure liquid chromatography)를 이용하여 정제하였다. 20mL/min의 속도의 선형 구배 용출 시스템이 채택되었다: 0.1 % TFA 및 완충액 B, 80%의 MeCN 내에 있는 0.1% TFA: 20%B 내지 50%B까지 분당 1% 증가되었다. 분리는 280nm에서 모니터링되었다. 분석용 HPLC로 확인된 순수한 산물을 포함하는 부분은 풀되어(pooled) 진공에서 농축되고 동결건조되었다. 펩티드는 수용성 아세트산으로부터 동결건조함으로써 일정한 무게의 애매한 백색 분말로써 수득되었다. 산 가수분해물의 아미노산 분석 및 레이져 탈착 질량 분광법이 부가된 매트릭스를 이용하여 정확한 조성을 입증하였다.

실시예 7. 캄프토테신-카르보닐-N-아미노에틸-글리신-D-tert-부틸-Ser-D-엡실론-tert-부틸록시카르보닐-Lys-Gln-Trp-Ala-Val-β-Ala-트리틸-His-Phe-Nle-링크-아마이드-수지(NEQ ID NO : 18)

링크 아마이드 MBHA 폴리스티렌 수지(0.063 mmol)[4-(2',4'-디메톡시페닐- Fmoc-(아미노에틸)페녹시아세타미도-노르류실-메틸벤즈하이드릴아민 수지, 100-200 메쉬, Novabiochem, San Diego, CA]를 CS136 자동 펩티드 합성기(CS Bio, Inc. , San Carlos, CA)의 반응용기에 투입하고 약 1시간 동안 DMF 내에서 팽윤시켰다. 수지를 여과하고 과량의 DMF 내에 있는 과량의 20% 피페리딘을 첨가하고 혼합하였다(2분). 수지 Fmoc기의 완전한 제거를 위해 수지는 여과하고 다시 과량의 20% 피페리딘을 첨가하여 혼합하였다(20분). 반응기 노출 후에, DMF를 이용하여 수지를 4회 세정하고 제 1 보호된 아미노산, Fmoc-Thr(트리틸)(0.188 mmol), 디이소프로필카르보이미드(DIC)(0.188 mmol), 및 N-하이드록시벤조트리아졸 모노하이드레이트(HOBt)(0.188 mmol)가 모두 DMF에 용해되고 1시간 혼합한 후, DMF를 이용하여 4회 세정하였다.

Fmoc기는 20% 피페리딘/DMF 용액 처리로 다시 제거되었고 동일한 일반적 커플링 절차가 이어지는데, 하기 아미노산들이 연속적으로 성장하는 펩티드 체인과 반응하였다: Fmoc-L-페닐알라닌, Fmoc-Nⁱⁿ-트리틸-L-히스티딘, Fmoc-βAla, Fmoc-발린, Fmoc-알라닌, Fmoc-Nⁱⁿ-Boc-L-트립토판, Fmoc-글루타민, Fmoc-N^ε-Boc-D-라이신, Fmoc-0-t-부틸-D-세린, 브롬아세트산. 펩티드 수지와 브롬아세트산의 커플링이완결된 이후에, (3 eq)에탄올아민이 NMP에 첨가되었고 2시간 동안 혼합하였고 그 뒤 DMF로 3회, DCM으로 3회 세정하였다. 실시예 1에서 수득한 팩클리탁셀 클로로포름산을 수지에 첨가하고 밤새 혼합하고, 충분한 양의 DMF 및 이후에 메탄올로 세정하였다. 최종 여과 후에, 유도된 수지가 밤새 공기 중에서 건조되었다.

실시예 8. 캄프토테신-카르보닐-N-(2-아미노에틸)-글리신-D-Ser-D-Lys-Gln-Trp-Ala-Val-β-Ala-His-Phe-Nle-아마이드 (SEQ ID NO: 18)의 제조

실시예 7에서 제조된 캄프토테신-펩티드 수지(0.063 mmol)를 물(2.5%), 1,2-에탄디티올(2.5%), 및 트리이소프로필실란(1%)이 포함된 15ml의 트리플루오로아세트산(TFA)이 들어있는 둥근바닥 플라스크에 첨가하였다. 서스펜젼을 교반하고(2시간) TFA를 이용하여 수차례 세정하였다. TFA는 진공에서 증발되었고 결과물인 오일에 에테르를 첨가하여 노란색 분말을 얻었으며 이 분말은 그 뒤 60%의 아세트산(250ml) 내에서 용해되었다.

진공에서 용액을 10mL 정도의 부피로 감소시키고, 조액 캄프토테신 펩티드를 실리카(Dynamax 300,8um) 결합된 C-18 컬럼(21.4×250mm) 상에서의 예비 RP-HPLC(reverse phase high pressure liquid chromatography)를 이용하여 정제하였다. 20mL/min의 속도의 선형 구배 용출 시스템이 채택되었다: 0.1 % TFA 및 완충액 B, 80%의 MeCN 내에 있는 0.1% TFA: 20%B 내지 50%B까지 분당 1% 증가되었다. 분리는 280nm에서 모니터링되었다. 분석용 HPLC로 확인된 순수한 산물을 포함하는 부분은 풀되어(pooled) 진공에서 농축되고 동결건조되었다. 펩티드는 수용성아세트산으로부터 동결건조함으로써 일정한 무게의 애매한 노란색 분말로써 수득되었다. 산 가수분해물의 아미노산 분석 및 레이져 탈착 질량 분광법이 보조된 매트릭스를 이용하여 정확한 조성을 입증하였다.

실시예 9. 캄프토테신-카르보닐-N-아미노에틸-글리신-D-tert-부틸-Ser-D-tert-부틸-Tyr-Glz-Trp-Ala-Val-β-Ala-trityl-His-Phe-Nle-링크-아마이드 수지 (SEQ ID NO : 19)

링크 아마이드 MBHA 폴리스티렌 수지(0.063 mmol)[4-(2',4'-디메톡시페닐- Fmoc-(아미노에틸)페녹시아세타미도-노르류실-메틸벤즈하이드릴아민 수지, 100-200 메쉬, Novabiochem, San Diego, CA]를 CS136 자동 펩티드 합성기(CS Bio, Inc. , San Carlos, CA)의 반응용기에 투입하고 약 1시간 동안 DMF 내에서 팽윤시켰다. 수지를 여과하고 과량의 DMF 내에 있는 과량의 20% 피페리딘을 첨가하고 혼합하였다(2분). 수지 Fmoc기의 완전한 제거를 위해 수지는 여과하고 다시 과량의 20% 피페리딘을 첨가하여 혼합하였다(20분). 반응기 노출 후에, DMF를 이용하여 수지를 4회 세정하고 제 1 보호된 아미노산, Fmoc-Thr(트리틸)(0.188 mmol), 디이소프로필카르보이미드(DIC)(0.188 mmol), 및 N-하이드록시벤조트리아졸 모노하이드레이트(HOBt)(0.188 mmol)가 모두 DMF에 용해되고 1시간 혼합한 후, DMF를 이용하여 4회 세정하였다.

Fmoc기는 20% 피페리딘/DMF 용액 처리로 다시 제거되었고 동일한 일반적 커플링 절차가 이어지는데, 하기 아미노산들이 연속적으로 성장하는 펩티드 체인과반응하였다: Fmoc-L-페닐알라닌, Fmoc-Nⁱⁿ-트리틸-L-히스티딘, Fmoc-βAla, Fmoc-발린, Fmoc-알라닌, Fmoc-Nⁱⁿ-Boc-L-트립토판, Fmoc-글루타민, Fmoc-O-t-부틸-D-Tyr, Fmoc-O-t-부틸-D-세린, 브롬아세트산. 펩티드 수지와 브롬아세트산의 커플링이 완결된 이후에, (3 eq)에탄올아민이 NMP에 첨가되었고 2시간 동안 혼합하였고 그 뒤 DMF로 3회, DCM으로 3회 세정하였다. 실시예 1에서 수득한 캄프토테신 클로로포름산을 수지에 첨가하여 밤새 혼합하고, 충분한 양의 DMF 및 이후에 메탄올로 세정하였다. 최종 여과 후에, 유도된 수지가 밤새 공기 중에서 건조되었다.

실시예 10. 캄프토테신-카르보닐-N-(2-아미노에틸)-글리신-D-Ser-D-Tyr-Gln- Trp-Ala-Val-β-Ala-His-Phe-Nle-아마이드 (SEQ ID NO: 19)의 제조

실시예 9에서 제조된 캄프토테신-펩티드 수지(0.063 mmol)를 물(2.5%), 1,2-에탄디티올(2.5%), 및 트리이소프로필실란(1%)이 포함된 15ml의 트리플루오로아세트산(TFA)이 들어있는 둥근바닥 플라스크에 첨가하였다. 서스펜젼을 교반하고(2시간) TFA를 이용하여 수차례 세정하였다. TFA는 진공에서 증발되었고 결과물인 오일에 에테르를 첨가하여 노란색 분말을 얻었으며 이 분말은 그 뒤 60%의 아세트산(250ml) 내에서 용해되었다.

진공에서 용액을 10mL 정도의 부피로 감소시키고, 조액 캄프토테신 펩티드를 실리카(Dynamax 300,8um) 결합된 C-18 컬럼(21.4×250mm) 상에서의 예비 RP-HPLC(reverse phase high pressure liquid chromatography)를 이용하여 정제하였다. 20mL/min의 속도의 선형 구배 용출 시스템이 채택되었다: 0.1 % TFA 및 완충액 B, 80%의 MeCN 내에 있는 0.1% TFA: 20%B 내지 50%B까지 분당 1% 증가되었다. 분리는 280nm에서 모니터링되었다. 분석용 HPLC로 확인된 순수한 산물을 포함하는 부분은 풀되어(pooled) 진공에서 농축되고 동결건조되었다. 펩티드는 수용성 아세트산으로부터 동결건조함으로써 일정한 무게의 애매한 노란색 분말로써 수득되었다. 산 가수분해물의 아미노산 분석 및 레이져 탈착 질량 분광법이 보조된 매트릭스를 이용하여 정확한 조성을 입증하였다.

실시예 11. 콤브레타스타틴-카르보닐-N-(2-아미노에틸)-글리신-D-tert-부틸-Ser-노르류신-D-tert-부틸-Tyr-D-tert-부틸-Ser-S-트리틸-Cys-Phe-D-Trp-엡실론-tert-부틸록시카르보닐-Lys-tert-부틸-Thr-S-트리틸-Cys-tert-부틸-Thr-링크-아마이드-수지의 SEQ ID NO: 39)의 제조

링크 아마이드 MBHA 폴리스티렌 수지(0.063 mmol)[4-(2',4'-디메톡시페닐- Fmoc-(아미노에틸)페녹시아세타미도-노르류실-메틸벤즈하이드릴아민 수지, 100-200 메쉬, Novabiochem, San Diego, CA]를 CS136 자동 펩티드 합성기(CS Bio, Inc. , San Carlos, CA)의 반응용기에 투입하고 약 1시간 동안 DMF 내에서 팽윤시켰다. 수지를 여과하고 과량의 DMF 내에 있는 과량의 20% 피페리딘을 첨가하고 혼합하였다(2분). 수지 Fmoc기의 완전한 제거를 위해 수지는 여과하고 다시 과량의 20% 피페리딘을 첨가하여 혼합하였다(20분). 반응기 노출 후에, DMF를 이용하여 수지를 4회 세정하고 제 1 보호된 아미노산, Fmoc-Thr(트리틸)(0.188 mmol), 디이소프로필카르보이미드(DIC)(0.188 mmol), 및 N-하이드록시벤조트리아졸 모노하이드레이트(HOBt)(0.188 mmol)가 모두 DMF에 용해되고 1시간 혼합한 후, DMF를 이용하여 4회 세정하였다.

Fmoc기는 20% 피페리딘/DMF 용액 처리로 다시 제거되었고 동일한 일반적 커플링 절차가 이어지는데, 하기 아미노산들이 연속적으로 성장하는 펩티드 체인과 반응하였다: Fmoc-S-트리틸-L-시스테인, Fmoc-O-t-부틸-L-트레오닌, N^α-Fmoc-N^ε-Boc-L-리신, N-Fmoc-Nⁱⁿ-Boc-D-트립토판, Fmoc-L-페닐알라닌, Fmoc-S-트리틸-L-시스테인, Fmoc-O-t-부틸-D-세린, Fmoc-O-t-부틸-D-티로신, N-Fmoc-노르류신, Fmoc-O-t-부틸-D-세린, 브롬아세트산. 펩티드 수지와 브롬아세트산의 커플링이 완결된 이후에, (3 eq)에탄올아민이 NMP에 첨가되었고 2시간 동안 혼합하였고 그 뒤 DMF로 3회, DCM으로 3회 세정하였다. 실시예 7에서 수득한 콤브레타스타틴 클로로포름산을 수지에 첨가하고 밤새 혼합하고, 충분한 양의 DMF 및 이후에 메탄올로 세정하였다. 최종 여과 후에, 유도된 수지가 밤새 공기 중에서 건조되었다.

실시예 12. 콤브레타스타틴-카르보닐-N-(2-아미노에틸)-글리신-D-Ser-Nle-D-Tyr-D-Ser-시클로[Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys]-Thr-아마이드(SEQ ID NO : 40)의 제조

실시예 11에서 제조한 콤브레타스타틴-펩티드 수지(0.063 mmol)를 물(2.5%), 1,2-에탄디티올(2.5%), 및 트리이소프로필실란(1%)이 포함된 15ml의 트리플루오로아세트산(TFA)이 들어있는 둥근바닥 플라스크에 첨가하였다. 서스펜젼을 교반하고(2시간) TFA를 이용하여 수차례 세정하였다. TFA는 진공에서 증발되었고 결과물인 오일에 에테르를 첨가하여 노란색 분말을 얻었으며 이 분말은 그 뒤 60%의 아세트산(250ml) 내에서 용해되었다. 메탄올 내에서 농축된 요오드 용액을 영구적인 갈색 착색이 형성될 때까지 격렬하게 교반하면서 한 방울씩 첨가한 후, 소량의 아스코르브산을 첨가하여 과량의 요오드를 제거하였다.

진공에서 용액을 10mL 정도의 부피로 감소시키고, 조액 캄프토테신 펩티드를 실리카(Dynamax 300,8um) 결합된 C-18 컬럼(21.4×250mm) 상에서의 예비 RP-HPLC(reverse phase high pressure liquid chromatography)를 이용하여 정제하였다. 20mL/min의 속도의 선형 구배 용출 시스템이 채택되었다: 0.1 % TFA 및 완충액 B, 80%의 MeCN 내에 있는 0.1% TFA: 20%B 내지 50%B까지 분당 1% 증가되었다. 분리는 280nm에서 모니터링되었다. 분석용 HPLC로 확인된 순수한 산물을 포함하는 부분은 풀되어(pooled) 진공에서 농축되고 동결건조되었다. 펩티드는 수용성 아세트산으로부터 동결건조함으로써 일정한 무게의 애매한 백색 분말로써 수득되었다. 산 가수분해물의 아미노산 분석 및 레이져 탈착 질량 분광법이 부가된 매트릭스를 이용하여 정확한 조성을 입증하였다.

실시예 13. 캄프토테신-카르보닐-N-(N-메틸-2-아미노에틸)-글리신-D-tert-부틸-Ser-노르류신-D-tert-부틸-Tyr-D-tert-부틸-Ser-S-트리틸-Cys-Phe-D-Trp-엡실론-tert-부틸록시카르보닐-Lys-tert-부틸-Thr-S-트리틸-Cys-tert-부틸-Thr-링크-아마이드-수지(SEQ ID NO: 39)

링크 아마이드 MBHA 폴리스티렌 수지(0.063 mmol)[4-(2',4'-디메톡시페닐- Fmoc-(아미노에틸)페녹시아세타미도-노르류실-메틸벤즈하이드릴아민 수지, 100-200 메쉬, Novabiochem, San Diego, CA]를 CS136 자동 펩티드 합성기(CS Bio, Inc. , San Carlos, CA)의 반응용기에 투입하고 약 1시간 동안 DMF 내에서 팽윤시켰다. 수지를 여과하고 과량의 DMF 내에 있는 과량의 20% 피페리딘을 첨가하고 혼합하였다(2분). 수지 Fmoc기의 완전한 제거를 위해 수지는 여과하고 다시 과량의 20% 피페리딘을 첨가하여 혼합하였다(20분). 반응기 노출 후에, DMF를 이용하여 수지를 4회 세정하고 제 1 보호된 아미노산, Fmoc-Thr(트리틸)(0.188 mmol), 디이소프로필카르보이미드(DIC)(0.188 mmol), 및 N-하이드록시벤조트리아졸 모노하이드레이트(HOBt)(0.188 mmol)가 모두 DMF에 용해되고 1시간 혼합한 후, DMF를 이용하여 4회 세정하였다.

Fmoc기는 20% 피페리딘/DMF 용액 처리로 다시 제거되었고 동일한 일반적 커플링 절차가 이어지는데, 하기 아미노산들이 연속적으로 성장하는 펩티드 체인과 반응하였다: Fmoc-S-트리틸-L-시스테인, Fmoc-O-t-부틸-L-트레오닌, N^α-Fmoc-N^ε-Boc-L-리신, N^α-Fmoc-Nⁱⁿ-Boc-D-트립토판, Fmoc-L-페닐알라닌, Fmoc-S-트리틸-L-시스테인, Fmoc-O-t-부틸-D-세린, Fmoc-O-t-부틸-D-티로신, N^α-Fmoc-노르류신, Fmoc-O-t-부틸-D-세린, 브롬아세트산. 펩티드 수지와 브롬아세트산의 커플링이 완결된 이후에, (3 eq)N-Boc-에탄올아민이 NMP 내에서 첨가되었고 2시간 동안 혼합한 뒤DMF로 3회, DCM으로 3회 세정하였다. 실시예 1에서 수득한 콤브레타스타틴 클로로포름산을 수지에 첨가하고 밤새 혼합하고, 충분한 양의 DMF 및 이후에 메탄올로 세정하였다. 최종 여과 후에, 유도된 수지가 밤새 공기 중에서 건조되었다.

실시예 14. 캄프토테신-카르보닐-N-(N-메틸-2-아미노에틸)-글리신-D-Ser-Nle-D-Tyr-D-Ser-시클로[Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys]-Thr-아마이드(SEQ ID NO : 40)의 제조

실시예 13에서 제조된 캄프토테신-펩티드 수지(0.063 mmol)를 물(2.5%), 1,2-에탄디티올(2.5%), 및 트리이소프로필실란(1%)이 포함된 15ml의 트리플루오로아세트산(TFA)이 들어있는 둥근바닥 플라스크에 첨가하였다. 서스펜젼을 교반하고(2시간) TFA를 이용하여 수차례 세정하였다. TFA는 진공에서 증발되었고 결과물인 오일에 에테르를 첨가하여 노란색 분말을 얻었으며 이 분말은 그 뒤 60%의 아세트산(250ml) 내에서 용해되었다. 메탄올 내에서 농축된 요오드 용액을 영구적인 갈색 착색이 형성될 때까지 격렬하게 교반하면서 한 방울씩 첨가한 후, 소량의 아스코르브산을 첨가하여 과량의 요오드를 제거하였다.

진공에서 용액을 10mL 정도의 부피로 감소시키고, 조액 캄프토테신 펩티드를 실리카(Dynamax 300,8um) 결합된 C-18 컬럼(21.4×250mm) 상에서의 예비 RP-HPLC(reverse phase high pressure liquid chromatography)를 이용하여 정제하였다. 20mL/min의 속도의 선형 구배 용출 시스템이 채택되었다: 0.1 % TFA 및 완충액 B, 80%의 MeCN 내에 있는 0.1% TFA: 20%B 내지 50%B까지 분당 1% 증가되었다.분리는 280nm에서 모니터링되었다. 분석용 HPLC로 확인된 순수한 산물을 포함하는 부분은 풀되어(pooled) 진공에서 농축되고 동결건조되었다. 펩티드는 수용성 아세트산으로부터 동결건조함으로써 일정한 무게의 애매한 노란색 분말로써 수득되었다. 산 가수분해물의 아미노산 분석 및 레이져 탈착 질량 분광법이 부가된 매트릭스를 이용하여 정확한 조성을 입증하였다.

실시예 15. 디-tert-부틸록시카르보닐-His-Leu-Gln-Ile-Gln-Pro-tert-부틸록시카르보닐-Trp-tert-부틸-Tyr-Pro-Gln-Ile-tert-부틸-Ser-N-e-캄프토테신-카르보닐-N-(N-2-아미노에틸)-글리신-Lys-tert-부틸-Ser-링크-아마이드-수지 (SEQ ID NO: 20)

링크 아마이드 MBHA 폴리스티렌 수지(0.063 mmol)[4-(2',4'-디메톡시페닐- Fmoc-(아미노에틸)페녹시아세타미도-노르류실-메틸벤즈하이드릴아민 수지, 100-200 메쉬, Novabiochem, San Diego, CA]를 CS136 자동 펩티드 합성기(CS Bio, Inc. , San Carlos, CA)의 반응용기에 투입하고 약 1시간 동안 DMF 내에서 팽윤시켰다. 수지를 여과하고 과량의 DMF 내에 있는 과량의 20% 피페리딘을 첨가하고 혼합하였다(2분). 수지 Fmoc기의 완전한 제거를 위해 수지는 여과하고 다시 과량의 20% 피페리딘을 첨가하여 혼합하였다(20분). 반응기 노출 후에, DMF를 이용하여 수지를 4회 세정하고, 1차 보호된 아미노산, Fmoc-세린(tBut)(0.188 mmol), 디이소프로필카르보이미드(DIC)(0.188 mmol), 및 N-하이드록시벤조트리아졸 모노하이드레이트(HOBt)(0.188 mmol)가 모두 DMF에 용해되고 1시간 혼합한 후, DMF를 이용하여 4회 세정하였다.

Fmoc기는 다시 20%의 피페리딘/DMF 용액으로 처리하고 이어서 동일한 커플링 절차에 의해 다시 제거되는데, 하기 아미노산들은 연속적으로 성장하는 펩티드 체인과 반응한다: Fmoc-N-e-1(4,4-디메틸-2,6-디옥소시클로헥스-1-일리딘)3-3메틸-부틸-L-라이신, Fmoc-O-t-부틸-L-세린, N^α-Fmoc-L-이소류신, N-Fmoc-L-글루타민, N-Fmoc-L-프롤린, N-Fmoc-O-트리틸-L-티로신, N^α-Fmoc-Nⁱⁿ-Boc-L-트립토판, N-Fmoc-L-프롤린, N-Fmoc-L-글루타민, N^α-Fmoc-L-이소류신, N-Fmoc-L-글루타민, N^α-Fmoc-L-류신, Boc-O-t-부틸-L- 히스티딘.

보호된 펩티드 수지는 라이신 잔기에 있는 N-e-1-(4,4-디메틸-2,6-디옥소시클로헥스-1-일리딘)3-메틸-부틸(ivDde)기를 제거하기 위해, 3회(각 3분) 동안 DMF 내의 히드라진 수화물의 2% 용액으로 처리하였다. 그 뒤 유리 e-아미노기가 브롬아세트산과 커플링하고 이후에 NMP 내에 용해된 N-Boc-N-에틸렌아민(3 eq, 12 h)가 첨가되었다. 실시예 1에서 수득된 캄프토테신 클로로포름산이 수지에 첨가되고 밤새 혼합된 후 충분한 양의 DMF와 이어서 메탄올에 의해 세정되었다. 최종 여과 후에 유도된 수지는 밤새 공기 건조되었다.

실시예 16. 파아지 펩티드 p147의 캄프토테신 유도체의 제조: His-Leu-Gln-Ile-Gln-Pro-Trp-Tyr-Pro-Gln-Ile-Ser-N-e-캄프토테신-카르보닐-N-(N-2-아미노에틸)-글리신-Lys-Ser-NH ₂ (SEQ ID NO : 20)

실시예 15에서 제조된 캄프토테신-펩티드 수지(0.063 mmol)를 물(2.5%), 1,2-에탄디티올(2.5%), 및 트리이소프로필실란(1%)이 포함된 15ml의 트리플루오로아세트산(TFA)이 들어있는 둥근바닥 플라스크에 첨가하였다. 서스펜젼을 교반하고(2시간) TFA를 이용하여 수차례 세정하였다. TFA는 진공에서 증발되었고 결과물인 오일에 에테르를 첨가하여 노란색 분말을 얻었으며, 이 분말은 실리카(Dynamax 300,8um) 결합된 C-18 컬럼(21.4×250mm) 상에서의 예비 RP-HPLC(reverse phase high pressure liquid chromatography)를 이용하여 정제하였다. 20mL/min의 속도의 선형 구배 용출 시스템이 채택되었다: 0.1 % TFA 및 완충액 B, 80%의 MeCN 내에 있는 0.1% TFA: 20%B 내지 50%B까지 분당 1% 증가되었다. 분리는 280nm에서 모니터링되었다. 분석용 HPLC로 확인된 순수한 산물을 포함하는 부분은 풀되어(pooled) 진공에서 농축되고 동결건조되었다. 펩티드는 수용성 아세트산으로부터 동결건조함으로써 일정한 무게의 애매한 노란색 분말로써 수득되었다. 산 가수분해물의 아미노산 분석 및 레이져 탈착 질량 분광법이 보조된 매트릭스를 이용하여 정확한 조성을 입증하였다.

실시예 17. O-t-부틸-D, L-세린의 N-카르복시안하이드라이드의 제조

0-t-부틸-D-세린(0.0062 mol) 및 0-t-부틸-L-세린(0.0062 mol)이 질소 기체 하에서 55 mL의 무수 테트라하이드로퓨란(THF) 내에 서스펜젼되었다. 포스젠(0.025 mol)를 서스펜젼에 첨가하고 서스펜젼을 15분간 환류시켰다. 용매 및 과량의 포스젠을 증발시키고 결과물인 오일은 10ml의 THF에 용해시킨 뒤 600mL의 헥산을 첨가하고 -20℃에서 결정화하였다.

실시예 18. 캄프토테신-카르보닐-N-(2-아미노에틸)-글리신-[D 또는 L O-tert-부틸-Ser] _~15 -D-tert-부틸-Ser-노르류신-D-tert-부틸-Tyr-D-tert-부틸-Ser-S-트리틸-Cys-Phe-D-Trp-엡실론-tert-부틸록시카르보닐-Lys-tert-부틸-Thr-S-트리틸-Cys-tert-부틸-Thr-링크-아마이드-수지(SEQ ID NO: 21, and SEQ ID NO: 23-SEQ ID NO 36)의 제조

링크 아마이드 MBHA 폴리스티렌 수지(0.063 mmol)[4-(2',4'-디메톡시페닐- Fmoc-(아미노에틸)페녹시아세타미도-노르류실-메틸벤즈하이드릴아민 수지, 100-200 메쉬, Novabiochem, San Diego, CA]를 CS136 자동 펩티드 합성기(CS Bio, Inc. , San Carlos, CA)의 반응용기에 투입하고 약 1시간 동안 DMF 내에서 팽윤시켰다. 수지를 여과하고 과량의 DMF 내에 있는 과량의 20% 피페리딘을 첨가하고 혼합하였다(2분). 수지 Fmoc기의 완전한 제거를 위해 수지는 여과하고 다시 과량의 20% 피페리딘을 첨가하여 혼합하였다(20분). 반응기 노출 후에, DMF를 이용하여 수지를 4회 세정하고 1차 보호된 아미노산, Fmoc-Thr(tBut)(0.188 mmol), 디이소프로필카르보이미드(DIC)(0.188 mmol), 및 N-하이드록시벤조트리아졸 모노하이드레이트(HOBt)(0.188 mmol)가 모두 DMF에 용해되고 1시간 혼합한 후, DMF를 이용하여 4회세정하였다.

Fmoc기는 다시 20%의 피페리딘/DMF 용액으로 처리하고 이어서 동일한 커플링 절차에 의해 다시 제거되는데, 하기 아미노산들은 연속적으로 성장하는 펩티드 체인과 반응한다: Fmoc-S-트리틸-L-시스테인, Fmoc-O-t-부틸-L-트레오닌, N^α-Fmoc-N^ε-Boc-L-리신, N^α-Fmoc-Nⁱⁿ-Boc-D-트립토판, Fmoc-L-페닐알라닌, Fmoc-S-트리틸-L-시스테인, Fmoc-O-t-부틸-D-세린, Fmoc-O-t-부틸-D-티로신, N-Fmoc-노르류신, Fmoc-O-t-부틸-D-세린. N-말단 Fmoc기는 제거된 시점에서 수지는 DMF를 이용하여 수차례 세정되었으며, 그 뒤 수지는 100 mL의 RB 플라스크로 옮겨진다. O-tert-부틸-세린 NCA(1. 5g)는 무수 DMF에 용해되었고 펩티드 수지에 첨가되엇으며, 서스펜젼화된 수지는 40℃에서 밤새 진동시켰다. 수지는 여과되고 수차례 DMF를 이용하여 세정되었고 그 뒤 CS Bio 합성기에 다시 넣었다. 브롬아세트산은 그 뒤 DCM/DIC 내에서 세린의 N-말단에 커플링되었다. 브롬아세트산의 펩티드 수지에 대한 커플링이 완결된 후, (3 eq) N-Boc-에틸렌디아민이 NMP에 첨가되고 2시간 동안 혼합된 후, DMF로 3회, DCM으로 3회 세정되었다. 실시예 1의 캄프토테신 클로로포름산이 수지에 첨가되고 밤새 혼합되었으며, 충분한 양의 DMF 및 이어서 메탄올에 의해 세정되었다. 최종 여과 후에 유도된 수지는 밤새 공기 건조되었다.

실시예 19. 캄프토테신-카르보닐-N-(2-아미노에틸)-글리신-[Poly-D,L-Ser]-D-Ser-Nle-D-Tyr-D-Ser-시클로[Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys]-Thr-아마이드 (SEQ IDNO : 22)의 제조

실시예 18에서 제조된 캄프토테신-펩티드 수지(0.063 mmol)를 물(2.5%), 1,2-에탄디티올(2.5%), 및 트리이소프로필실란(1%)이 포함된 15ml의 트리플루오로아세트산(TFA)이 들어있는 둥근바닥 플라스크에 첨가하였다. 서스펜젼을 교반하고(2시간) TFA를 이용하여 수차례 세정하였다. TFA는 진공에서 증발되었고 결과물인 오일에 에테르를 첨가하여 노란색 분말을 얻었으며 이 분말은 그 뒤 60%의 아세트산(250ml) 내에서 용해되었다. 메탄올 내에서 농축된 요오드 용액을 영구적인 갈색 착색이 형성될 때까지 격렬하게 교반하면서 한 방울씩 첨가한 후, 소량의 아스코르브산을 첨가하여 과량의 요오드를 제거하였다.

진공에서 용액을 10mL 정도의 부피로 감소시키고, 조액 캄프토테신 펩티드를 실리카(Dynamax 300,8um) 결합된 C-18 컬럼(21.4×250mm) 상에서의 예비 RP-HPLC(reverse phase high pressure liquid chromatography)를 이용하여 정제하였다. 20mL/min의 속도의 선형 구배 용출 시스템이 채택되었다: 0.1 % TFA 및 완충액 B, 80%의 MeCN 내에 있는 0.1% TFA: 20%B 내지 50%B까지 분당 1% 증가되었다. 분리는 280nm에서 모니터링되었다. 분석용 HPLC로 확인된 순수한 산물을 포함하는 부분은 풀되어(pooled) 진공에서 농축되고 동결건조되었다. 펩티드는 수용성 아세트산으로부터 동결건조함으로써 일정한 무게의 애매한 노란색 분말로써 수득되었다. 산 가수분해물의 아미노산 분석 및 레이져 탈착 질량 분광법이 부가된 매트릭스를 이용하여 정확한 조성을 입증하였다.

실시예 20. 컨쥬게이트 카바메이트 화합물의 생체 내 및 생체 외 용도

카바메이트 링커를 갖는 컨쥬게이트 화합물을 세포독성제의 방출 속도(release rate)에 대하여 테스트하였다. 카바메이트 링커는 그것이 예를 들면, 통상 사용되는 에스테르형 링키지에 비하여 플라즈마 내에서 상당히 안정하기 때문에 선택된 것이다. 본 발명자들은 또한 연결된 알코올 유도체의 방출 및 적합한 세포독성의 방출속도 조절에 유용한 환형 유레아의 형성의 조절을 가능하게 하는 분자내 고리 부분을 포함하는 카바메이트 화합물을 테스트하였다(도 1).

카바메이트의 남겨진 알코올의 pKa값은 전구약물의 안정성에 중요한 것으로 알려져 있고 따라서 본 발명자들은 각각이 매우 다른 pKa 값을 갖는 하나의 하이드록시기를 포함하는 두 개의 다른 화학적으로 적합한 세포 독성제를 선택한다.

하나의 세포 독성제는 토포아이소머레이즈 I 저해제, 캄프토테신으로 약 18의 pKa 값을 갖고 고리 위치 20에 3차 히드록시기를 포함한다(도 1). 다른 세포독성제는 튜불린-결합제, 콤브레타스타틴으로서 이는 방향족 고리에 결합된 하나의 페놀 히드록시기를 갖고 따라서 거의 10.3의 낮은 pKa값을 나타낸다.

표 1에 나타난 모든 펩티드 컨쥬게이트는 단순한 DIC 커플링 및 만약 Kaiser 테스트가 양성인 경우에 한해 제 2 단계로 HBTU 활성화를 채택하는 표준 FMOC(9-fluorenylmethoxycarbonyl) 프로텍션/디프로텍션을 사용하여 링크 아마이드 수지 지지대에서 합성되었다. 일단 컨쥬게이트의 펩티드 부분이 완성되면, 브롬아세트산은 DIC/DCM을 이용하여 N말단에 결합되었다. 수지를 세정한 후에, NMP 내에 용해된 5M의 과량의 N-BOC 에틸렌디아민(또는 적합하게 보호된 디아민)이 첨가되고 1시간 동안 혼합되었다. 이와는 별도로, 무수화 DCM(40mg) 내의 캄프토테신(200mg; Aldrich) 및 DMAP(400mg)을 혼합하고 0℃로 냉각하였다. 이 서스펜젼에 톨루엔(600㎕) 내의 20% 포스젠을 첨가하고 혼합물을 약 45분간 반응하도록 하였다.

용매 증발 후에, 분말은 DCM(40mL) 내에 서스펜젼화되었고, 유리된 제 2아민을 갖는 펩티드 수지에 첨가되어 밤새 반응시킨 후, DMF, DCM, 및 메탄올을 이용하여 몇 차례 세정하였다. 그 후 펩티드는 표준 산 혼합물 TFA: H₂0 : EDT: TIS, 95: 2: 2: 1을 이용하여 2시간 동안 수지로부터 분리되었다. 분리 이후에, 컨쥬게이트는 에틸 에테르 내에서 4회 적정되었고, 60% HOAC 내에 용해되며, 메탄올 내에서 요오드와 함께 고리화되었다. 그 뒤 예비 크로마토그래피가 적용되었고, MS 및 아미노산 분석에 의해 특성이 규정되었다. 모든 펩티드들은 최소한 90+%의 순도를 갖도록 수득되었고 약 35%의 이론상 수율을 가져왔다.

소마토스타틴 자체와 비교한 컨쥬게이트 작용제 효능의 전체 체류시간은 쥐 뇌하수체 세포의 단일층 배양물로부터 생식샘 자극 호르몬 분비 호르몬(GNRH)-자극된 GH 분비를 저해하는 이들의 능력, 인간형 2 소마토스타틴 수용체에 대한 결합 친화력과 밀접하게 관련된 것으로 보여지는 분석 시스템에 의해 확인되었다(예를 들어, Raynor 외. , Mol. Pharmacol. 43: 838,1993를 참조).

표 2에 나타난 컨쥬게이트의 저해성 효능(IC50's)은 소마토스타틴-14 자체가 0.63nM이었던 것에 비하여 0.26 내지 0.49nM의 범주를 나타낸다. 전체 친화력의이러한 체류시간은 큰 작용기가 친화력의 손실이 적거나 거의 없도록 결합가능하게 하는 것으로 발견된 컨쥬게이트의 환형 소마토스타틴 부분의 N-말단 Nle-d-Tyr-d-Ser 트리펩티드 신장(extension)의 채택으로 인한 것이다.

(다양한 BINAR 링킹기를 포함하는 캄프토테신 및 콤브레타스타틴 컨쥬게이트의 구조)

화합물	세포독성 IC30, nMa, IMR-32 세포	반감기 인산 완충액(시간)	반감기 쥐 혈성(시간)	성장 호르몬 저해 IC50, nMa
1	374±18	안정a	106	0.32±0.02
2	54.2±6	123	18	0.27±0.02
3	571±48	안정	59	0.30±0.04
4	>1000	안정	72	0.26±0.03
5	>1000	na	na	0.49±0.1
6	2.79±0.33	31	4	0.31±0.1
캄프토테신	2.21±0.44	na	na	na
콤브레타스타틴	4.36	na	na	na
SRIF(1-14)	nab	na	2-5분	0.63±0.029

(화합물 1 내지 6 및 대조군 화합물의 작용제 활성, 세포독성, 및 완충제 및 혈청 반감기)

^a실험은 50시간 동안 수행됨.

^b소마토스타틴 유사체는 10^-5M 농도에서 IMR32 세포에 대하여 비독성임.

각 펩티드 컨쥬게이트는 인산 완충액이 가해지고 쥐 혈청 안정성 연구가 이루어졌다. 유사체들은 0.1M 인산 완충액 또는 신선한 쥐 혈청내에서 37℃에서 배양되고, 한 방울씩 다른 시점에서 선택되어 HPLC에 의해 분석되었다. 화합물 1, 3 및 4는 실험 길이에 따른 완전한 완충액 안정성을 나타내었다(50시간: 표 2). 화합물 2는 120시간 정도의 반감기를 갖고 있어서 완충액 내에서 보다 덜 안정한 반면, 화합물 6은 완충액 내에서 단지 30시간의 반감기를 가지면서 가장 덜 안정하였다. 쥐 혈청 내에서, 화합물의 안정성에 대한 혈청의 대사 효과가 명백히 있는 경우를 제외하고는 이와 같은 경향은 명백하다. 화합물 2의 반감기가 18시간이고 페놀 하이드록시기를 갖는 화합물 6의 콤브레타스타틴 화합물 6이 최소한 4시간의반감기를 갖으명서 가장 덜 안정한 것에 반하여 화합물 1, 3 및 4는 가장 안정하다.

이들 컨쥬게이트의 세포독성 활성은 표준 MTT 분석 키트(Promega Corporation, Madison, WI)를 사용하여 측정되었다. 각 화합물은 3일동안 사극자플레이트(quadruplate)에서 다른 농도의 인간 신경아세포증 IMR32 세포(소마토스타틴 수용체 과발현)와 함께 배양되었고 IC50's은 도스-반응 곡선으로부터 얻어졌다(도 2). 완충액 내에서의 안정성을 검토한 결과, 콤브레타스타틴-에틸렌디아민 BINAR 화합물 6이 가장 세포독성임에도 불구하고, 이 컨쥬게이트의 50%가 3일 후에 유리된 세포독인데 아마도 세포 배지가 일부 효소를 포함하기 때문일 것이다. N-Me-에틸렌디아민 캄프토테신 컨쥬게이트 2는 두번째로 효능이 크다. 3일 후에, 이 컨쥬게이트의 80% 이상이 완전하게 남아있다. 다음으로 효능이 있는 것은 에틸렌디아민 화합물 1이다. 이 유사체는 인산염 완충액 내에서 완전한 안정성을 나타내지만, 혈청 내에서는 보다 안전함에도 불구하고 화합물 2보다 7배 적은 효능을 갖고 화합물 3보다 약간 활성이 크다. 이 성질은 화합물 3과는 다르게, 환형 유레아를 형성하는 화합물 1의 능력때문일 것이다. 예비 종양을 갖는 동물 연구에서, 화합물 1 및 2는 반복된 복강내 투여 이후에 종양에서의 세포 독성에 대하여 동등하게 효과적인 것으로 나타난다. N, N-디메틸에틸렌디아민, 도아미노프로필, 및 2-하이드록시에틸아민 BINAR기(Fig. 2; Table 2)에 기초한 화합물들은 근본적으로 세포 내외에서 임의의 유기 세포 독성제의 분비가 없기 때문에 불활성이었다. 리드 캄프토테신 컨쥬게이트 2는 누드 마우스에서 캄프토테신 단독의 최대 내성있는 투약량보다 훨씬 낮은 도라에서 이식된 NCI-H69 작은 세포 폐 종양의 성장(SSTR2의 발현)을 현저하게 안정화할 수 있었다. 데이타는 알코올 방출 속도에 대한 화학적 요소뿐만 아니라 일부 효소활성 있는 요소들을 제시한다.

BINAR 링킹 전략의 가치는 다양한 타입의 알코올 포함기의 이상적인 방출 속도를 조정하기 위해서 조절되어야 하는 그 능력 및 단순한 고체-상 화학작용에 의한 펩티드 유리 아미노기에 대한 삽입의 용이성에 있다.

작용기를 도입하는 화학작용은 고체상 합성에 매우 적합하고 많은 다른 펩티드, 치료제 및 세포독성에 용이하게 채택된다. 이 전략은 용이하게 N-말단에 적용됨에도 불구하고, 펩티드 결합 친화력의 보존에 필요할 뿐만 아니라 수직으로 보호된 측쇄에도 적용될 수 있다. 본 발명의 캄프토테신 컨쥬게이트를 이용한다면, 이들이 세포 배지 배양 환경에 대하여 매우 안정했음에도 불구하고 화합물 1 및 2와 함께 높은 세포독성이 달성되었다(도 2; 표 2). 완전한 펩티드 컨쥬게이트의 높은 농도는 현저하게 내부화(internalization)가 일어나자마자 종양 세포에 특이적으로 결합할 것이다. 추가적으로, 컨쥬게이트는 상당히 용해성 있고, 조직 제거율 및 경로가 상기한 펩티드 요소의 친수성을 변화시킴으로써 용이하게 추가적으로 조정될 수 있다. 만약 펩티드 컨쥬게이트가 제거동안 합리적으로 완전하게 남는다면, 독성 부작용은 훨씬 감소될 것이다.

실시예 21. 캄프토테신-카르보닐-N-아미노에틸-글리신-S-트리틸-Cys-링크-아마이드 수지의 제조

링크 아마이드[4-(2',4'-디메톡시페닐-Fmoc-(아미노에틸)페녹시아세타미도-노르류실-메틸벤즈하이드릴아민 수지(0.063 mmole), 100-200 메쉬(Novabiochem, San Diego, CA)를 CS136 자동 펩티드 합성기(CS Bio, Inc. , San Carlos, CA)의 반응용기에 투입하고 약 1시간 동안 DMF 내에서 팽윤시켰다. 수지를 여과하고 과량의 DMF 내에 있는 과량의 20% 피페리딘을 첨가하고 혼합하였다(2분). 수지 Fmoc기의 완전한 제거를 위해 수지는 여과하고 다시 과량의 20% 피페리딘을 첨가하여 혼합하였다(20분). 반응기 노출 후에, DMF를 이용하여 수지를 4회 세정하고 제 1 보호된 아미노산, Fmoc-Thr(트리틸)(0.188 mmol), 디이소프로필카르보이미드(DIC)(0.188 mmol), 및 N-하이드록시벤조트리아졸 모노하이드레이트(HOBt)(0.188 mmol)가 모두 DMF에 용해되고 1시간 혼합한 후, DMF를 이용하여 4회 세정하였다.

Fmoc기는 다시 20%의 피페리딘/DMF 용액 처리에 의해 제거되고, 동일한 일반적인 커플링 절차가 이어지며, Fmoc-N-(2-Boc-아미노에틸)글리신(Neosystem)을 첨가하였다. Fmoc기는 제거되었고 펩티드 수지는 DCM으로 수회 세정되었다. 실시예 1에서 수득한 캄프토테신 클로르포름산을 수지에 첨가하고 밤새 혼합하였고, 충분한 양의 DMF와 메탄올을 이용하여 세정하였다. 최종 여과 후에, 유도된 수지는 밤새 공기 건조되었다.

실시예 22. 캄프토테신-카르보닐-N-(2-아미노에틸)-글리신-Cys-아마이드의 제조

실시예 21에서 제조한 캄프토테신-펩티드 수지(0.063mmol)를 물(2.5%), 1,2-에탄디티올(2.5%), 및 트리이소프로필실란(1%)이 포함된 15ml의 트리플루오로아세트산(TFA)이 들어있는 둥근바닥 플라스크에 첨가하였다. 서스펜젼을 교반하고(2시간) TFA를 이용하여 수차례 세정하였다. TFA는 진공에서 증발되었고 결과물인 오일에 에테르를 첨가하여 노란색 분말을 얻었으며 이 분말은 그 뒤 60%의 아세트산(15ml) 내에서 용해되었다.

조액 캄프토테신 펩티드를 실리카(Dynamax 300,8um) 결합된 C-18 컬럼(21.4×250mm) 상에서의 예비 RP-HPLC(reverse phase high pressure liquid chromatography)를 이용하여 정제하였다. 20mL/min의 속도의 선형 구배 용출 시스템이 채택되었다: 0.1 % TFA 및 완충액 B, 80%의 MeCN 내에 있는 0.1% TFA: 20%B 내지 50%B까지 분당 1% 증가되었다. 분리는 280nm에서 모니터링되었다. 분석용 HPLC로 확인된 순수한 산물을 포함하는 부분은 풀되어(pooled) 진공에서 농축되고 동결건조되었다. 펩티드는 수용성 아세트산으로부터 동결건조함으로써 일정한 무게의 애매한 노란색 분말로써 수득되었다. 레이져 탈착 질량 분광법이 부가된 매트릭스를 이용하여 하기에 나타난 것과 같은 정확한 조성을 입증하였다.

실시예 23. 캄프토테신-카르보닐-N-아미노에틸-글리신-Phe(벤조페논)아마이드-수지

링크 아마이드[4-(2',4'-디메톡시페닐-Fmoc-(아미노메틸)페녹시아세타미도노르류실-메틸벤즈하이드릴아민 수지(0.063 mmole), 100-200 메쉬(Novabiochem, San Diego, CA)CS136 자동 펩티드 합성기(CS Bio, Inc. , San Carlos, CA)의 반응용기에 투입하고 약 1시간 동안 DMF 내에서 팽윤시켰다. 수지를 여과하고 과량의 DMF 내에 있는 과량의 20% 피페리딘을 첨가하고 혼합하였다(2분). 수지 Fmoc기의 완전한 제거를 위해 수지는 여과하고 다시 과량의 20% 피페리딘을 첨가하여 혼합하였다(20분). 반응기 노출 후에, DMF를 이용하여 수지를 4회 세정하고 제 1 보호된 아미노산, Fmoc-Thr(트리틸)(0.188 mmol), 디이소프로필카르보이미드(DIC)(0.188 mmol), 및 N-하이드록시벤조트리아졸 모노하이드레이트(HOBt)(0.188 mmol)가 모두 DMF에 용해되고 1시간 혼합한 후, DMF를 이용하여 4회 세정하였다.

Fmoc기는 다시 20%의 피페리딘/DMF 용액 처리에 의해 제거되고, 동일한 일반적인 커플링 절차가 이어지며, Fmoc-N-(2-Boc-아미노에틸)글리신(Neosystem)을 첨가하였다. Fmoc기는 제거되었고 펩티드 수지는 DCM으로 수회 세정되었다. 실시예 1에서 수득한 캄프토테신 클로르포름산을 수지에 첨가하고 밤새 혼합하였고, 충분한 양의 DMF와 메탄올을 이용하여 세정하였다. 최종 여과 후에, 유도된 수지는 밤새 공기 건조되었다.

실시예 24. 캄프토테신-카르보닐-N-(2-아미노에틸)-글리신-p-벤조일-페닐알라닌-아마이드의 제조

실시예 23에서 제조된 캄프토테신-펩티드 수지(0.063mmol)를 물(2.5%), 1,2-에탄디티올(2.5%), 및 트리이소프로필실란(1%)이 포함된 15ml의 트리플루오로아세트산(TFA)이 들어있는 둥근바닥 플라스크에 첨가하였다. 서스펜젼을 교반하고(2시간) TFA를 이용하여 수차례 세정하였다. TFA는 진공에서 증발되었고 결과물인 오일에 에테르를 첨가하여 노란색 분말을 얻었으며 이 분말은 그 뒤 60%의 아세트산(15ml) 내에서 용해되었다.

조액 캄프토테신 펩티드를 실리카(Dynamax 300,8um) 결합된 C-18 컬럼(21.4×250mm) 상에서의 예비 RP-HPLC(reverse phase high pressure liquid chromatography)를 이용하여 정제하였다. 20mL/min의 속도의 선형 구배 용출 시스템이 채택되었다: 0.1 % TFA 및 완충액 B, 80%의 MeCN 내에 있는 0.1% TFA: 20%B 내지 50%B까지 분당 1% 증가되었다. 분리는 280nm에서 모니터링되었다. 분석용 HPLC로 확인된 순수한 산물을 포함하는 부분은 풀되어(pooled) 진공에서 농축되고 동결건조되었다. 펩티드는 수용성 아세트산으로부터 동결건조함으로써 일정한 무게의 애매한 노란색 분말로써 수득되었다. 레이져 탈착 질량 분광법이 보조된 매트릭스를 이용하여 하기에 나타난 것과 같은 정확한 조성을 입증하였다.

다른 구현예들

본 발명은 바람직한 구현예를 참조로 하여 설명될 뿐, 본 기술 분야의 당업자가 용이하게 그 필연적인 특징을 알 수 있고, 그 정신 및 범위를 벗어나지 않는 범위에서 다양한 용도 및 환경에 적용하기 위해 본 발명을 다양하게 변화 및 변형시킬 수 있다. 본 기술 분야의 당업자는 단지 통상의 실험, 본원에 개시된 구체적인 구현예의 등가물을 이용하는 것을 인식하거나 예측할 수 있다. 그러한 등가물은 본 발명의 범위에 속하는 것이다.

본 명세서에 언급된 모든 공개문헌 및 특허 출원은 각 독립된 공개문헌 또는 특허출원이 구체적으로 별개로 본원에 참조로 포함되는 것처럼 동일한 범위로 참조로 포함된다.

SEQUENCE LISTING <110> The Administrators of the Tulane Educational Fund et al. <120> Conjugates of Therapeutic or Cytotoxic Agents and Biologically Active Peptides <130> 07005/007KR2 <150> PCT/03/06657 <151> 2003-03-03 <150> US 60/360,831 <151> 2002-03-01 <160> 40 <170> FastSEQ for Windows Version 4.0 <210> 1 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> VARIANT <222> 2 <223> Xaa = Nle <223> Synthetic <400> 1 Ser Xaa Ser Ser 1 <210> 2 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 2 Ser Lys Ser Ser 1 <210> 3 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 3 Ser Lys Tyr Tyr 1 <210> 4 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 4 Ser Lys Tyr Ser 1 <210> 5 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 5 Ser Ser Lys Ser 1 <210> 6 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> VARIANT <222> 2 <223> Xaa= Nle <223> Synthetic <400> 6 Ser Xaa Tyr Ser 1 <210> 7 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> VARIANT <222> 2 <223> Xaa= pal <223> Synthetic <400> 7 Ser Xaa Tyr Ser 1 <210> 8 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 8 Ser Thr Tyr Ser 1 <210> 9 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 9 Lys Ser Ser 1 <210> 10 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 10 Ser Lys Ser 1 <210> 11 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> VARIANT <222> 1 <223> Xaa= NLE <223> Synthetic <400> 11 Xaa Tyr Ser 1 <210> 12 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 12 Lys Tyr Ser 1 <210> 13 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> VARIANT <222> 1 <223> Xaa=Pal <223> Synthetic <400> 13 Xaa Lys Ser 1 <210> 14 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 14 Thr Tyr Ser 1 <210> 15 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> VARIANT <222> 1 <223> Xaa= Gln, Asn, Nle, or Nva. <221> VARIANT <222> 3 <223> Xaa= Ava, Gly, Leu, Val, Ile, Nle, or Nva. <221> VARIANT <222> 4 <223> Xaa=BAla, 4Abu, Gly, Ala, D-Ala, N-Me-Ala, or N-Me-D-Ala. <221> VARIANT <222> 6 <223> Xaa= Phe, Tyr, 4-Chloro-Phe, 4-Fluoro-Phe, 4-Bromo-Phe, 4-NO2-Phe, Ala, Gly, Leu, Val, Ile, Nle, or Nva. <221> VARIANT <222> 7 <223> Xaa= Met, Phe, Tyr, 4-Chloro-Phe, 4-Fluoro-Phe, 4-Bromo-Phe, 4-NO2-Phe, Ala, Gly, Leu, Val, Ile, Nle, or Nva. <221> VARIANT <222> 8 <223> Xaa= amide or N-alkylamide. <221> VARIANT <222> (9)...(9) <223> Xaa at position 9 is Ava, Gly, Leu, Val, Ile, Nle, or Nva. <221> VARIANT <222> (10)...(10) <223> Xaa at position 10 is Ava, Gly, Leu, Val, Ile, Nle, Nva, or a lower alkyl amide. <223> Synthetic <400> 15 Xaa Trp Xaa Xaa His Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 <210> 16 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <221> VARIANT <222> 3 <223> Xaa at position 3 is Nle <400> 16 Gly Ser Xaa Tyr Ser Cys Phe Trp Lys Thr Cys Thr 1 5 10 <210> 17 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <221> VARIANT <222> 3 <223> Xaa at positon 3 is Nle <221> MOD_RES <222> 6,11 <223> Cys at positions 6 and 11 are circularized <400> 17 Gly Ser Xaa Tyr Ser Cys Phe Trp Lys Thr Cys Thr 1 5 10 <210> 18 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <221> MOD_RES <222> 8 <223> Ala at position 8 is bAla <221> VARIANT <222> 11 <223> Xaa at position 11 is Nle <400> 18 Gly Ser Lys Gln Trp Ala Val Ala His Phe Xaa 1 5 10 <210> 19 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <221> MOD_RES <222> 8 <223> Ala at position 8 is bAla <221> VARIANT <222> 11 <223> Xaa at position 11 is Nle <400> 19 Gly Ser Tyr Gln Trp Ala Val Ala His Phe Xaa 1 5 10 <210> 20 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 20 His Leu Gln Ile Gln Pro Trp Tyr Pro Gln Ile Ser Gly Lys Ser 1 5 10 15 <210> 21 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <221> VARIANT <222> 4 <223> Xaa at position 4 is Nle <400> 21 Gly Ser Ser Xaa Tyr Ser Cys Phe Trp Lys Thr Cys Thr 1 5 10 <210> 22 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <221> VARIANT <222> 4 <223> Xaa at position 4 is Nle <221> MOD_RES <222> 7, 12 <223> Cys at positions 7 and 12 are circularized <400> 22 Gly Ser Ser Xaa Tyr Ser Cys Phe Trp Lys Thr Cys Thr 1 5 10 <210> 23 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <221> VARIANT <222> 5 <223> Xaa at position 5 is Nle <400> 23 Gly Ser Ser Ser Xaa Tyr Ser Cys Phe Trp Lys Thr Cys Thr 1 5 10 <210> 24 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <221> VARIANT <222> 6 <223> Xaa at position 6 is Nle <400> 24 Gly Ser Ser Ser Ser Xaa Tyr Ser Cys Phe Trp Lys Thr Cys Thr 1 5 10 15 <210> 25 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <221> VARIANT <222> 7 <223> Xaa at position 7 is Nle <400> 25 Gly Ser Ser Ser Ser Ser Xaa Tyr Ser Cys Phe Trp Lys Thr Cys Thr 1 5 10 15 <210> 26 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <221> VARIANT <222> 8 <223> Xaa at position 8 is Nle <400> 26 Gly Ser Ser Ser Ser Ser Ser Xaa Tyr Ser Cys Phe Trp Lys Thr Cys 1 5 10 15 Thr <210> 27 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <221> VARIANT <222> 9 <223> Xaa at position 9 is Nle <400> 27 Gly Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Xaa Tyr Ser Cys Phe Trp Lys Thr 1 5 10 15 Cys Thr <210> 28 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <221> VARIANT <222> 10 <223> Xaa at position 10 is Nle <400> 28 Gly Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Xaa Tyr Ser Cys Phe Trp Lys 1 5 10 15 Thr Cys Thr <210> 29 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <221> VARIANT <222> 11 <223> Xaa at position 11 is Nle <400> 29 Gly Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Xaa Tyr Ser Cys Phe Trp 1 5 10 15 Lys Thr Cys Thr 20 <210> 30 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <221> VARIANT <222> 12 <223> Xaa at position 12 is Nle <400> 30 Gly Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Xaa Tyr Ser Cys Phe 1 5 10 15 Trp Lys Thr Cys Thr 20 <210> 31 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <221> VARIANT <222> 13 <223> Xaa at position 13 is Nle <400> 31 Gly Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Xaa Tyr Ser Cys 1 5 10 15 Phe Trp Lys Thr Cys Thr 20 <210> 32 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <221> VARIANT <222> 14 <223> Xaa at position 14 is Nle <400> 32 Gly Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Xaa Tyr Ser 1 5 10 15 Cys Phe Trp Lys Thr Cys Thr 20 <210> 33 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <221> VARIANT <222> 15 <223> Xaa at position 15 is Nle <400> 33 Gly Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Xaa Tyr 1 5 10 15 Ser Cys Phe Trp Lys Thr Cys Thr 20 <210> 34 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <221> VARIANT <222> 16 <223> Xaa at position 16 is Nle <400> 34 Gly Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Xaa 1 5 10 15 Tyr Ser Cys Phe Trp Lys Thr Cys Thr 20 25 <210> 35 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <221> VARIANT <222> 17 <223> Xaa at position 17 is Nle <400> 35 Gly Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser 1 5 10 15 Xaa Tyr Ser Cys Phe Trp Lys Thr Cys Thr 20 25 <210> 36 <211> 27 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <221> VARIANT <222> 18 <223> Xaa at position 18 is Nle <400> 36 Gly Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser 1 5 10 15 Ser Xaa Tyr Ser Cys Phe Trp Lys Thr Cys Thr 20 25 <210> 37 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 37 Cys Phe Trp Lys Thr Cys 1 5 <210> 38 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <221> MOD_RES <222> 1, 6 <223> Cys at positions 1 and 6 are circularized <400> 38 Cys Phe Trp Lys Thr Cys 1 5 <210> 39 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <221> VARIANT <222> 3 <223> Xaa at position 3 is Nle <400> 39 Gly Ser Xaa Tyr Ser Cys Phe Trp Lys Thr Cys Thr 1 5 10 <210> 40 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <221> VARIANT <222> 3 <223> Xaa at position 3 is Nle <221> MOD_RES <222> 6, 11 <223> Cys at positions 6 and 11 are circularized <400> 40 Gly Ser Xaa Tyr Ser Cys Phe Trp Lys Thr Cys Thr 1 5 10

Claims (114)

1. 하기 식으로 표현되는 컨쥬게이트 화합물:

   상기 식 중,

   X는 세포독성제 또는 치료제이고;

   n은 0 내지 6의 정수이고, (CH₂)_n은 치환되거나 치환되지 않은, 직쇄 또는 측쇄, 또는 알킬, 알케닐, 알키닐, 고리, 헤테로고리, 방향족, 또는 헤테로방향족기이며;

   R은 N(R₁R₂), OR₁, 또는 SR_l이며, 그 중 R₁및 R₂는 독립적으로 수소 또는 저급 알킬기이고;

   Y는 친수성 스페이서 서열, 또는 생략되며;

   Z는 결합 펩티드 (linking peptide), N-말단 또는 Q의 상용성 있는 측쇄 아미노기에서 Q와 결합했을 때 Q의 생물학적 활성의 최소한 50%가 보존되는 것으로, Q는 식 A-B-C-E-F를 갖는데, 여기서:

   A는 D-Lys, D-Tyr, D-Ser, 또는 L-Ser, 또는 결실되었고;

   B는 D-Lys 또는 D-Tyr, 또는 결실되었으며;

   C는 Lys, Ser, hSer, Thr, Nle, Abu, Nva,(2,3, 또는 4)3-피리딜-Ala(Pal), Orn, Dab, Dap, 4-NH₂-Phe, D-4-OH-Pro, 또는 L-4-OH-Pro, 또는 결실되었고;

   E는 D-Lys, D-Tyr, D-Ser, D-4-OH-Pro, L-4-OH-Pro, 3-아이오도-D-Tyr, 3,5-디아이오도-D-Tyr, 3-아스타틴-D-Tyr, 3,5-아스타틴-D-Tyr, 3-브로모-D-Tyr, 3,5-디브로모-D-Tyr, D-Asn, L-Asn, D-Asp, L-Asp, D-Glu, L-Glu, D-Gln, 또는 L-Gln이고; 및

   F는 D-Lys, D-Tyr, D-Ser, L-Ser, D-4-OH-Pro, L-4-OH-Pro, 3-아이오도-D-Tyr, 3,5-디아이오도-D-Tyr, 3-아스타틴-D-Tyr, 3,5-아스타틴-D-Tyr, 3-브로모-D-Tyr, 3,5-디브로모-D-Tyr, D-Asn, L-Asn, D-Asp, L-Asp, D-Glu, L-Glu, D-Gln, 또는 L-Gln이며;

   A, B, C 및 E가 각각 Tyr, Tyr, Lys 및 Tyr이면, F는 Lys가 아니고; A, B, C 및 E가 각각 Lys, Tyr, Lys 및 Tyr이면, F는 Tyr 또는 Lys가 아니며; A 및 B는 결실되고, C 및 E는 각각 Lys 및 Tyr이면, F는 Tyr 또는 Lys이 아니고; 및

   Q는 표적화 모이어티이거나, 생략된다.
2. 제 1항에 있어서, 상기 X는 세포독성제인 컨쥬게이트 화합물.
3. 제 2항에 있어서, 상기 세포독성제는 알킬화제(alkylating agents), 항생제들(antibiotics), 항대사물질들(antimetabolites), 튜불린 억제제들(tubulin inhibitors), 국소이성화효소 I 및 II 억제제들(topoisomerase I and II inhibitors), 호르몬성 작용제들 또는 대항제들(hormonal agonists or antagonists), 또는 면역성 조절인자(immunomodulators)인 컨쥬게이트 화합물.
4. 제 2항에 있어서, 상기 세포독성제는 캄포테신(campothecin), 호모캄프토테신(homocamptothecin), 콜히친(colchicine), 콤브레타스타틴(combretastatin), 돌리스타틴(dolistatin), 독소루비신(doxorubicin), 메토트렉세이트(methotrexate), 포도필로톡신(podophyllotoxin), 리족신(rhizoxin), 리직신 D(rhizixin D), 로카글라미드(rocaglamide), 앙귀딘(anguidine), 탁솔(a taxol), 팍틀리톡솔(pactlitoxol), CC1065, 또는 마이탄시노이드(maytansinoid) 또는 이들의 유도체 또는 유사체인 컨쥬게이트 화합물.
5. 제 1항에 있어서, 상기 친수성 스페이서 서열은 상기 화합물의 친수성 생분포를 증가시키는 펩티드인 컨쥬게이트 화합물.
6. 제 5항에 있어서, 상기 펩티드는 식 U(V-V)_n을 가지며, 식 중에서 U는 D-Pro, L-Pro, D-4-OH-Pro, L-4-OH-Pro, 사코신(Sarcosine), Lys, Orn, Dab, Dap, 4-NH₂-Phe, 또는 (NH₂-(CH₂)_m-COOH)(여기서, m = 2 내지 10임), 또는 결실되고(deleted)); 각각의 V는 독립적으로 D-Ser, L-Ser, D-Thr, L-Thr, D-Gln, L-Gln, D-Asn, L-Asn, D-4-OH-Pro, 또는 L-4 히드록시-Pro로 이루어진 군에서 선택되며; n은 1 내지 50인 컨쥬게이트 화합물.
7. 제 6항에 있어서, 상기 V는 독립적으로 D-Ser 또는 L-Ser인 컨쥬게이트 화합물.
8. 제 6항에 있어서, 적어도 하나의 V가 D-아미노산인 컨쥬게이트 화합물.
9. 제 1항에 있어서, 상기 친수성 스페이서 서열이 친수성 고분자인 컨쥬게이트 화합물,
10. 제 9항에 있어서, 상기 친수성 고분자는 폴리에틸렌 글리콜, 폴리비닐 아세테이트, 폴리비닐 알콜, HPMA(N-(2-히드록시프로필)메타크릴아미드(N-(2-hydroxypropyl)methacrylamide)) 또는 HPMA 공중합체들, α,β-폴리(N-히드록시에틸)-DL-아스파르타미드(α,β-poly(N-hydroxyethyl)-DL-aspartamide(PHEA)), 또는 α,β-폴리(N-히드록시프로필)-DL-아스파르타미드(α,β-poly(N-hydroxypropyl)-DL-aspartamide)인 컨쥬게이트 화합물.
11. 제 1항에 있어서, 상기 표적화 모이어티는 생물학적 활성 펩티드인 컨쥬게이트 화합물.
12. 제 11항에 있어서, 상기 생물학적 활성 펩티드는 소마토스타틴, 봄베신, KiSS 펩티드, 유로텐신(urotensin) II 펩티드, GnRH I 및 II 펩티드, 옥트레오티드(octreotide), 디프레오티드(depreotide), 바프레오티드(vapreotide), 혈관활성(vasoactive) 장용 펩티드(intestinal peptide)(VIP), 콜레시스토키닌(cholecystokinin)(CCK), 인슐린형 성장인자(insulinlike growth factor)(IGF), RGD-함유 펩티드, 멜라노사이트-자극 호르몬(melanocyte-stimulating hormone)(MSH) 펩티드, 뉴로텐신(neurotensin), 칼시토닌(calcitonin), 항종양 항체(antitumor antibody)의 상보성 결정 영역(complementarity determining regions)으로부터 나온 펩티드, 클루타티온(glutathione), YIGSR[(류코사이트 애비드 펩티드(leukocyte-avid peptides), 예컨대, 혈소판 인자-4(PF-4)의 헤파린 결합 영역 및 리신-풍부 서열(lysine-rich sequence)을 함유하는 P483H], 아트리얼 나트리우레틱 펩티드(atrial natriuretic peptide)(ANP), β-아밀로이드 펩티드(β-amyloid peptides), 델타-오피오이드 안타고니스트(delta-opioid antagonists)(예를 들어 ITIPP(psi)), 아넥신-V(annexin-V), 엔도텔린(endothelin), IL-1, IL-Ira, IL-2, IL-8, 류코트리엔(leukotriene) B4(LTB4), 케모택틱 펩티드(chemotactic peptides)(예컨대, N-포밀-메티오닐-류실-페닐알라닌-리신(fMLFK)), GP Iib/IIIa수용체 안타고니스트(예컨대, DMP444), 표피 성장인자(epidermal growth factor), 인간 호중구 엘라스타제 억제제(human neutrophil elastase inhibitor)(EPI-HNE-2 및 EPI-HNE-4), 플라즈민 억제제(plasmin inhibitor), 항균 펩티드(antimicrobial peptides), 아프티사이드(apticide)(P280 및 P274), 트롬보스폰딘 수용체(thrombospondin receptor)(TP-1300와 같은 유사체를 포함), 비티스타틴(bitistatin), 뇌하수체 아데닐일 사이클라제 형(pituitary adenylyl cyclase type) I 수용체(PAC1), 피브린 α-쇄, 또는 이들의 유도체 또는 유사체인 컨쥬게이트 화합물.
13. 제 11항에 있어서, 상기 생물학적 활성 펩티드는 항체 또는 항체 단편인 컨쥬게이트 화합물.
14. 제 12항에 있어서, 상기 류코사이트 애비드 펩티드는 P483H인 컨쥬게이트 화합물.
15. 제 12항에 있어서, 상기 델타-오피오이드 안타고니스트는 ITIPP (psi)인 컨쥬게이트 화합물.
16. 제 12항에 있어서, 상기 케모택틱 펩티드는 N-포밀-메티오닐-류실-페닐알라닌-리신(fMLFK)인 컨쥬게이트 화합물.
17. 제 12항에 있어서, 상기 GP IIb/IIIa 수용체 안타고니스트는 DMP444인 컨쥬게이트 화합물.
18. 제 12항에 있어서, 상기 인간 호중구 엘라스타제 억제제는 EPI-HNE-2 또는 EPI-HNE-4인 컨쥬게이트 화합물.
19. 제 12항에 있어서, 상기 트롬보스폰딘 수용체는 TP- 1300인 컨쥬게이트 화합물.
20. 제 11항에 있어서, 상기 생물학적 활성 펩티드는 상기 생물학적 활성 펩티드는 상기 화합물을 포유동물 체내에서 세포 또는 조직에 표적화하는 컨쥬게이트 화합물.
21. 제 1항에 있어서, 상기 표적화 모이어티는 파지-디스플레이 라이브러리로부터 유도된 펩티드 또는 이들의 보존적 치환체로서, 포유동물 체내에서 상기 화합물을 세포 또는 조직에 표적화하는 컨쥬게이트 화합물.
22. 제 20항 또는 21항에 있어서, 상기 세포 또는 조직은 암 세포, 백혈구 세포, 심장 조직, 뇌 조직 또는 결핵에 감염된 결절을 포함하는 것을 특징으로 하는 컨쥬게이트 화합물.
23. 제 20항 또는 21항에 있어서, 상기 조직은 종양 또는 증식 맥관 유래의 혈관인 것을 특징으로 하는 컨쥬게이트 화합물.
24. 제 23항에 있어서, 상기 혈관은 눈에 존재하는 컨쥬게이트 화합물.
25. 제 1항에 있어서, 상기 Q는 소마토스타틴 펩티드인 컨쥬게이트 화합물.
26. 제 1항에 있어서, 상기 Q는 봄베신 펩티드인 컨쥬게이트 화합물.
27. 제 13항에 있어서, 상기 항체는 단일클론 항체 또는 이들의 단편인 컨쥬게이트 화합물.
28. 제 1항에 있어서, 상기 Z는 D-Ser-Nle-D-Ser-D-Ser인 컨쥬게이트 화합물.
29. 제 1항에 있어서, 상기 Z는 D-Ser-Lys-D-Ser-D-Ser인 컨쥬게이트 화합물.
30. 제 1항에 있어서, 상기 Z는 D-Ser-Lys-D-Tyr-D-Tyr인 컨쥬게이트 화합물.
31. 제 1항에 있어서, 상기 Z는 D-Ser-Lys-D-Tyr-D-Ser인 컨쥬게이트 화합물.
32. 제 1항에 있어서, 상기 Z는 D-Ser-Ser-D-Lys-D-Ser인 컨쥬게이트 화합물.
33. 제 1항에 있어서, 상기 Z는 D-Ser-Ser-D-Lys-Ser인 컨쥬게이트 화합물.
34. 제 1항에 있어서, 상기 Z는 D-Ser-Nle-D-Tyr-D-Ser인 컨쥬게이트 화합물.
35. 제 1항에 있어서, 상기 Z는 D-Ser-Pal-D-Tyr-D-Ser인 컨쥬게이트 화합물.
36. 제 1항에 있어서, 상기 Z는 D-Ser-Thr-D-Tyr-D-Ser인 컨쥬게이트 화합물.
37. 제 1항에 있어서, 상기 Z는 Lys-D-Ser-D-Ser인 컨쥬게이트 화합물.
38. 제 1항에 있어서, 상기 Z는 Ser-D-Lys-D-Ser인 컨쥬게이트 화합물.
39. 제 1항에 있어서, 상기 Z는 Ser-D-Lys-Ser인 컨쥬게이트 화합물.
40. 제 1항에 있어서, 상기 Z는 Nle-D-Tyr-D-Ser인 컨쥬게이트 화합물.
41. 제 1항에 있어서, 상기 Z는 Lys-D-Tyr-D-Ser인 컨쥬게이트 화합물.
42. 제 1항에 있어서, 상기 Z는 Pal-D-Lys-D-Ser인 컨쥬게이트 화합물.
43. 제 1항에 있어서, 상기 Z는 Thr-D-Tyr-D-Ser인 컨쥬게이트 화합물.
44. 제 1항에 있어서, 상기 Z는 D-Ser-D-Lys인 컨쥬게이트 화합물.
45. 제 1항에 있어서, 상기 Z는 D-Ser-D-Tyr인 컨쥬게이트 화합물.
46. 제 1항에 있어서, 상기 Z는 D-Lys-D-Lys인 컨쥬게이트 화합물.
47. 제 1항에 있어서, 상기 Z는 D-Lys-D-Tyr인 컨쥬게이트 화합물.
48. 제 1항에 있어서, 상기 Z는 D-Tyr-D-Lys인 컨쥬게이트 화합물.
49. 제 1항에 있어서, 상기 Z는 식 E-F를 갖는 것으로:

    상기 식에서, E는 D-Lys, D-Tyr, D-Ser, D-4-OH-Pro, L-4-OH-Pro, 3-아이오도-D-Tyr, 3,5-디아이오도-D-Tyr, 3-아스타틴-D-Tyr, 3,5 아스타틴-D-Tyr, 3-브로모-D-Tyr, 3,5-디브로모-D-Tyr, D-Asn, L-Asn, D-Asp, L-Asp, D-Glu, L-Glu, D-Gln, 또는 L-Gln이고;

    F는 D-Lys, D-Tyr, D-Ser, L-Ser, D-4-OH-Pro, L-4-OH-Pro, 3-아이오도-D-Tyr, 3,5-디아이오도-D-Tyr, 3-아스타틴-D-Tyr, 3-5 아스타틴-D-Tyr, 3-브로모-D-Tyr, 3,5-디브로모-D-Tyr, D-Asn, L-Asn, D-Asp, L- Asp, D-Glu, L-Glu, D-Gln, 또는 L-Gln인 컨쥬게이트 화합물.
50. 제 1항에 있어서, 상기 R은 1 내지 20개의 탄소원자를 포함하는 컨쥬게이트 화합물.
51. 제 51항에 있어서, 상기 R은 1 내지 8개의 탄소원자를 포함하는 컨쥬게이트 화합물.
52. 질병으로 고통받는 대상에게 하기 식을 갖는 화합물을 치료유효량으로 투여하는 것을 포함하는 질병의 치료방법:

    상기 식 중,

    X는 세포독성제 또는 치료제이며;

    n은 0 내지 6의 정수이고, (CH₂)_n은 치환되거나 치환되지 않은, 직쇄 또는 측쇄, 또는 알킬, 알케닐, 알키닐, 고리, 헤테로고리, 방향족, 또는 헤테로방향족기고;

    R은 N(R₁R₂), OR₁, 또는 SR_l이며, 그 중 R₁및 R₂는 독립적으로 수소 또는 저급 알킬기이며;

    Y는 친수성 스페이서 서열, 또는 생략되고;

    Z는 결합 펩티드 (linking peptide), N-말단 또는 Q의 상용성 있는 측쇄 아미노기에서 Q와 결합했을 때 Q의 생물학적 활성의 최소한 50%가 보존되는 것으로,

    Q는 식 A-B-C-E-F를 갖는데, 여기서:

    A는 D-Lys, D-Tyr, D-Ser, 또는 L-Ser, 또는 결실되었고;

    B는 D-Lys 또는 D-Tyr, 또는 결실되었으며;

    C는 Lys, Ser, hSer, Thr, Nle, Abu, Nva,(2,3, 또는 4)3-피리딜-Ala(Pal), Orn, Dab, Dap, 4-NH₂-Phe, D-4-OH-Pro, 또는 L-4-OH-Pro, 또는 결실되었고;

    E는 D-Lys, D-Tyr, D-Ser, D-4-OH-Pro, L-4-OH-Pro, 3-아이오도-D-Tyr, 3,5-디아이오도-D-Tyr, 3-아스타틴-D-Tyr, 3,5-아스타틴-D-Tyr, 3-브로모-D-Tyr, 3,5-디브로모-D-Tyr, D-Asn, L-Asn, D-Asp, L-Asp, D-Glu, L-Glu, D-Gln, 또는 L-Gln이며; 및

    F는 D-Lys, D-Tyr, D-Ser, L-Ser, D-4-OH-Pro, L-4-OH-Pro, 3-아이오도-D-Tyr, 3,5-디아이오도-D-Tyr, 3-아스타틴-D-Tyr, 3,5-아스타틴-D-Tyr, 3-브로모-D-Tyr, 3,5-디브로모-D-Tyr, D-Asn, L-Asn, D-Asp, L-Asp, D-Glu, L-Glu, D-Gln, 또는 L-Gln으로서;

    A, B, C 및 E가 각각 Tyr, Tyr, Lys 및 Tyr이면, F는 Lys가 아니고; A, B, C 및 E가 각각 Lys, Tyr, Lys 및 Tyr이면, F는 Tyr 또는 Lys가 아니며; A 및 B는 결실되고, C 및 E는 각각 Lys 및 Tyr이면, F는 Tyr 또는 Lys이 아니고; 및

    Q는 표적화 모이어티이거나, 생략된다.
53. 제 52항에 있어서, 상기 X는 세포독성제인 방법.
54. 제 53항에 있어서, 상기 세포독성제는 캄포테신(campothecin), 호모캄프토테신(homocamptothecin), 콜히친(colchicine), 콤브레타스타틴(combretastatin), 돌리스타틴(dolistatin), 독소루비신(doxorubicin), 메토트렉세이트(methotrexate), 포도필로톡신(podophyllotoxin), 리족신(rhizoxin), 리직신 D(rhizixin D), 로카글라미드(rocaglamide), 앙귀딘(anguidine), 탁솔(a taxol), 팍틀리톡솔(pactlitoxol), CC1065, 또는 마이탄시노이드(maytansinoid) 또는 이들의 유도체 또는 유사체인 방법.
55. 제 52항에 있어서, 상기 친수성 스페이서 서열은 상기 화합물의 친수성 생분포를 증가시키는 펩티드인 방법.
56. 제 55항에 있어서, 상기 펩티드는 식 U(V-V)_n을 가지며, 식 중에서 U는 D-Pro, L-Pro, D-4-OH-Pro, L-4-OH-Pro, 사코신(Sarcosine), Lys, Orn, Dab, Dap, 4-NH₂-Phe, 또는 (NH₂-(CH₂)_m-COOH)(여기서, m = 2 내지 10임), 또는 결실되고(deleted)); 각각의 V는 독립적으로 D-Ser, L-Ser, D-Thr, L-Thr, D-Gln, L-Gln, D-Asn, L-Asn, D-4-OH-Pro, 또는 L-4 히드록시-Pro로 이루어진 군에서 선택되며; n은 1 내지 50인 방법.
57. 제 56항에 있어서, 상기 V는 독립적으로 D-Ser 또는 L-Ser인 방법.
58. 제 56항에 있어서, 적어도 하나의 V가 D-아미노산인 방법.
59. 제 52항에 있어서, 상기 친수성 스페이서 서열이 친수성 고분자인 방법.
60. 제 59항에 있어서, 상기 친수성 고분자가 폴리에틸렌 글리콜, 폴리비닐 아세테이트 또는 폴리비닐 알코올인 방법.
61. 제 52항에 있어서, 상기 표적화 모이어티는 생물학적 활성 펩티드인 방법.
62. 제 61항에 있어서, 상기 생물학적 활성 펩티드는 소마토스타틴, 봄베신, KiSS 펩티드, 유로텐신(urotensin) II 펩티드, GnRH I 및 II 펩티드, 옥트레오티드(octreotide), 디프레오티드(depreotide), 바프레오티드(vapreotide), 혈관활성(vasoactive) 장용 펩티드(intestinal peptide)(VIP), 콜레시스토키닌(cholecystokinin)(CCK), 인슐린형 성장인자(insulinlike growth factor)(IGF), RGD-함유 펩티드, 멜라노사이트-자극 호르몬(melanocyte-stimulating hormone)(MSH) 펩티드, 뉴로텐신(neurotensin), 칼시토닌(calcitonin), 항종양 항체(antitumor antibody)의 상보성 결정 영역(complementarity determining regions)으로부터 나온 펩티드, 클루타티온(glutathione), YIGSR[(류코사이트 애비드 펩티드(leukocyte-avid peptides), 예컨대, 혈소판 인자-4(PF-4)의 헤파린 결합 영역 및 리신-풍부 서열(lysine-rich sequence)을 함유하는 P483H], 아트리얼 나트리우레틱 펩티드(atrial natriuretic peptide)(ANP), β-아밀로이드 펩티드(β-amyloid peptides), 델타-오피오이드 안타고니스트(delta-opioid antagonists)(예를 들어 ITIPP(psi)), 아넥신-V(annexin-V), 엔도텔린(endothelin), IL-1, IL-Ira, IL-2, IL-8, 류코트리엔(leukotriene) B4(LTB4), 케모택틱 펩티드(chemotactic peptides)(예컨대, N-포밀-메티오닐-류실-페닐알라닌-리신(fMLFK)), GP Iib/IIIa 수용체 안타고니스트(예컨대, DMP444), 표피 성장인자(epidermal growth factor), 인간 호중구 엘라스타제 억제제(human neutrophil elastase inhibitor)(EPI-HNE-2 및 EPI-HNE-4), 플라즈민 억제제(plasmin inhibitor), 항균 펩티드(antimicrobial peptides), 아프티사이드(apticide)(P280 및 P274), 트롬보스폰딘 수용체(thrombospondin receptor)(TP-1300와 같은 유사체를 포함), 비티스타틴(bitistatin), 뇌하수체 아데닐일 사이클라제 형(pituitary adenylyl cyclase type) I 수용체(PAC1), 피브린 α-쇄, 또는 이들의 유도체 또는 유사체인 방법.
63. 제 61항에 있어서, 상기 생물학적 활성 펩티드는 항체 또는 항체 단편인 방법.
64. 제 62항에 있어서, 상기 류코사이트 애비드 펩티드는 P483H인 방법.
65. 제 62항에 있어서, 상기 델타-오피오이드 안타고니스트는 ITIPP (psi)인 방법.
66. 제 62항에 있어서, 상기 케모택틱 펩티드는 N-포밀-메티오닐-류실-페닐알라닌-리신(fMLFK)인 방법.
67. 제 62항에 있어서, 상기 GP IIb/IIIa 수용체 안타고니스트는 DMP444인 방법.
68. 제 62항에 있어서, 상기 인간 호중구 엘라스타제 억제제는 EPI-HNE-2 또는 EPI-HNE-4인 방법.
69. 제 62항에 있어서, 상기 트롬보스폰딘 수용체는 TP- 1300인 방법.
70. 제 61항에 있어서, 상기 생물학적 활성 펩티드는 상기 생물학적 활성 펩티드는 상기 화합물을 포유동물 체내에서 세포 또는 조직에 표적화하는 방법.
71. 제 52항에 있어서, 상기 표적화 모이어티는 파지-디스플레이 라이브러리로부터 유도된 펩티드 또는 이들의 보존적 치환체로서, 포유동물 체내에서 상기 화합물을 세포 또는 조직에 표적화하는 것을 특징으로 방법.
72. 제 71항에 있어서, 상기 세포 또는 조직은 암 세포, 백혈구 세포, 심장 조직, 뇌 조직 또는 결핵에 감염된 결절을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
73. 제 70항 또는 71항에 있어서, 상기 조직은 종양 또는 증식 맥관 유래의 혈관인 것을 특징으로 하는 방법.
74. 제 73항에 있어서, 상기 혈관은 눈에 존재하는 것을 특징으로 하는 방법.
75. 제 50항에 있어서, 상기 Q는 소마토스타틴 또는 이들의 유사체, 봄베신 또는 이들의 유사체, 또는 항체인 방법.
76. 제 52항에 있어서, 상기 Q는 소마토스타틴 펩티드인 방법.
77. 제 52항에 있어서, 상기 Q는 봄베신 펩티드인 방법.
78. 제 63항에 있어서, 상기 항체는 단일클론 항체인 방법.
79. 제 52항에 있어서, 상기 Z는 D-Ser-Nle-D-Ser-D-Ser인 방법.
80. 제 52항에 있어서, 상기 Z는 D-Ser-Lys-D-Ser-D-Ser인 방법.
81. 제 52항에 있어서, 상기 Z는 D-Ser-Lys-D-Tyr-D-Tyr인 방법.
82. 제 52항에 있어서, 상기 Z는 D-Ser-Lys-D-Tyr-D-Ser인 방법.
83. 제 52항에 있어서, 상기 Z는 D-Ser-Ser-D-Lys-D-Ser인 방법.
84. 제 52항에 있어서, 상기 Z는 D-Ser-Ser-D-Lys-Ser인 방법.
85. 제 52항에 있어서, 상기 Z는 D-Ser-Nle-D-Tyr-D-Ser인 방법.
86. 제 52항에 있어서, 상기 Z는 D-Ser-Pal-D-Tyr-D-Ser인 방법.
87. 제 52항에 있어서, 상기 Z는 D-Ser-Thr-D-Tyr-D-Ser인 방법.
88. 제 52항에 있어서, 상기 Z는 Lys-D-Ser-D-Ser인 방법.
89. 제 52항에 있어서, 상기 Z는 Ser-D-Lys-D-Ser인 방법.
90. 제 52항에 있어서, 상기 Z는 Ser-D-Lys-Ser인 방법.
91. 제 52항에 있어서, 상기 Z는 Nle-D-Tyr-D-Ser인 방법.
92. 제 52항에 있어서, 상기 Z는 Lys-D-Tyr-D-Ser인 방법.
93. 제 52항에 있어서, 상기 Z는 Pal-D-Lys-D-Ser인 방법.
94. 제 52항에 있어서, 상기 Z는 Thr-D-Tyr-D-Ser인 방법.
95. 제 52항에 있어서, 상기 Z는 D-Ser-D-Lys인 방법.
96. 제 52항에 있어서, 상기 Z는 D-Ser-D-Tyr인 방법.
97. 제 52항에 있어서, 상기 Z는 D-Lys-D-Lys인 방법.
98. 제 52항에 있어서, 상기 Z는 D-Lys-D-Tyr인 방법.
99. 제 52항에 있어서, 상기 Z는 D-Tyr-D-Lys인 방법.
100. 제 52항에 있어서, 상기 Z는 식 E-F를 갖는 것으로:

     상기 식에서, E는 D-Lys, D-Tyr, D-Ser, D-4-OH-Pro, L-4-OH-Pro, 3-아이오도-D-Tyr, 3,5-디아이오도-D-Tyr, 3-아스타틴-D-Tyr, 3,5 아스타틴-D-Tyr, 3-브로모-D-Tyr, 3,5-디브로모-D-Tyr, D-Asn, L-Asn, D-Asp, L-Asp, D-Glu, L-Glu, D-Gln, 또는 L-Gln이고;

     F는 D-Lys, D-Tyr, D-Ser, L-Ser, D-4-OH-Pro, L-4-OH-Pro, 3-아이오도-D-Tyr, 3,5-디아이오도-D-Tyr, 3-아스타틴-D-Tyr, 3-5 아스타틴-D-Tyr, 3-브로모-D-Tyr, 3,5-디브로모-D-Tyr, D-Asn, L-Asn, D-Asp, L- Asp, D-Glu, L-Glu, D-Gln, 또는 L-Gln인 방법.
101. 제 52항에 있어서, 상기 질병은 염증성 장 질환(inflammatory bowel disease), 류머티스 관절염, 말단비대증, 결핵, 폐, 심장, 뇌, 눈, 전립샘 또는 결장의 종양; 신경내분비 기원의 종양; 또는 부적절한 증식성 신생혈관 형성을 유발하는 혈관신생인 것을 특징으로 하는 방법.
102. 제 101항에 있어서, 상기 신경내분비 기원의 종양은 카르시노이드 증후군인 방법.
103. 제 101항에 있어서, 상기 혈관은 눈에 존재하는 것을 특징으로 하는 방법.
104. 제 52항에 있어서, 상기 R은 1 내지 20개의 탄소원자를 포함하는 방법.
105. 제 104항에 있어서, 상기 R은 1 내지 8개의 탄소원자를 포함하는 방법.
106. 하기 식으로 표현되는 화합물:

     상기 식 중,

     X는 세포독성제 또는 치료제이며;

     n은 0 내지 6의 정수이고, (CH₂)_n은 치환되거나 치환되지 않은, 직쇄 또는 측쇄, 또는 알킬, 알케닐, 알키닐, 고리, 헤테로고리, 방향족, 또는 헤테로방향족기이고;

     R은 N(R₁R₂), OR₁, 또는 SR_l이며, 그 중 R₁및 R₂는 독립적으로 수소 또는 저급 알킬기이며, 식 중 R₃는 NH(CH₂)mSH 기(여기서 m = 2 내지 6), D 또는 L 시스테인, 벤조페논(예를 들어, p-벤조일-페닐알라닌), 또는 OH 기이다.
107. 제 106항에 있어서, R₃기는 상기 화합물에 펩티드, 단백질 또는 항체를 결합하기 위해 사용될 수 있는 것을 특징으로 하는 화합물.
108. 제 106항에 있어서, 상기 R₃는 NH(CH₂)mSH 기이고 m은 2 내지 6이며, 상기 펩티드, 단백질 또는 항체는 상기 화합물에 티올 반응에 의해 결합되는 것을 특징으로 하는 화합물.
109. 제 106항에 있어서, 상기 R₃는 벤조페논이고 상기 펩티드, 단백질 또는 항체는 상기 화합물에 광화학 반응에 의해 결합되는 것을 특징으로 하는 화합물.
110. 제 109항에 있어서, 상기 벤조페논은 p-벤조일페닐알라닌인 것을 특징으로하는 화합물.
111. 하기 식을 갖는 질병의 치료를 위한 약물 제조용 콘쥬게이트 화합물의 용도:

     상기 식 중,

     X는 세포독성제 또는 치료제이며;

     n은 0 내지 6의 정수이고, (CH₂)_n은 치환되거나 치환되지 않은, 직쇄 또는 측쇄, 또는 알킬, 알케닐, 알키닐, 고리, 헤테로고리, 방향족, 또는 헤테로방향족기고;

     R은 N(R₁R₂), OR₁, 또는 SR_l이며, 그 중 R₁및 R₂는 독립적으로 수소 또는 저급 알킬기이며;

     Y는 친수성 스페이서 서열, 또는 생략되고;

     Z는 결합 펩티드 (linking peptide), N-말단 또는 Q의 상용성 있는 측쇄 아미노기에서 Q와 결합했을 때 Q의 생물학적 활성의 최소한 50%가 보존되는 것으로, Q는 식 A-B-C-E-F를 갖는데, 여기서:

     A는 D-Lys, D-Tyr, D-Ser, 또는 L-Ser, 또는 결실되었고;

     B는 D-Lys 또는 D-Tyr, 또는 결실되었으며;

     C는 Lys, Ser, hSer, Thr, Nle, Abu, Nva,(2,3, 또는 4)3-피리딜-Ala(Pal), Orn, Dab, Dap, 4-NH₂-Phe, D-4-OH-Pro, 또는 L-4-OH-Pro, 또는 결실되고;

     E는 D-Lys, D-Tyr, D-Ser, D-4-OH-Pro, L-4-OH-Pro, 3-아이오도-D-Tyr, 3,5-디아이오도-D-Tyr, 3-아스타틴-D-Tyr, 3,5-아스타틴-D-Tyr, 3-브로모-D-Tyr, 3,5-디브로모-D-Tyr, D-Asn, L-Asn, D-Asp, L-Asp, D-Glu, L-Glu, D-Gln, 또는 L-Gln이며; 및

     F는 D-Lys, D-Tyr, D-Ser, L-Ser, D-4-OH-Pro, L-4-OH-Pro, 3-아이오도-D-Tyr, 3,5-디아이오도-D-Tyr, 3-아스타틴-D-Tyr, 3,5-아스타틴-D-Tyr, 3-브로모-D-Tyr, 3,5-디브로모-D-Tyr, D-Asn, L-Asn, D-Asp, L-Asp, D-Glu, L-Glu, D-Gln, 또는 L-Gln으로서;

     A, B, C 및 E가 각각 Tyr, Tyr, Lys 및 Tyr이면, F는 Lys가 아니고; A, B, C 및 E가 각각 Lys, Tyr, Lys 및 Tyr이면, F는 Tyr 또는 Lys가 아니며; A 및 B는 결실되고, C 및 E는 각각 Lys 및 Tyr이면, F는 Tyr 또는 Lys이 아니고; 및

     Q는 표적화 모이어티이거나, 생략된다.
112. 제 111항에 있어서, 상기 질병은 염증성 장 질환(inflammatory bowel disease), 류머티스 관절염, 말단비대증, 결핵, 폐, 심장, 뇌, 눈, 전립샘 또는 결장의 종양; 신경내분비 기원의 종양; 또는 부적절한 증식성 신생혈관 형성을 유발하는 혈관신생인 것을 특징으로 하는 용도.
113. 제 111항에 있어서, 상기 신경내분비 기원의 종양은 카르시노이드 증후군인 것을 특징으로 하는 용도.
114. 제 111항에 있어서, 상기 혈관은 눈에 존재하는 것을 특징으로 하는 용도.