KR20020087394A - 5알파 리덕타아제 활성을 억제하도록 디자인된 조성물을제조하기 위한 약리학, 특히 피부 의학, 화장품에있어서의 하나 이상의 지방 에스테르의 용도 및 식품첨가제로서의 이의 용도 - Google Patents

5알파 리덕타아제 활성을 억제하도록 디자인된 조성물을제조하기 위한 약리학, 특히 피부 의학, 화장품에있어서의 하나 이상의 지방 에스테르의 용도 및 식품첨가제로서의 이의 용도 Download PDF

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Abstract

본 발명은 5알파 리덕타아제 활성을 억제하도록 디자인된 조성물을 제조하기 위한 하나 이상의 지방 에스테르의 용도에 관한 것이다. 상기 용도는 5알파 리덕타아제의 현저한 억제 효과를 산출하여, 5알파 리덕타아제 활성의 선천적이거나 후천적인 강조 인자와 관련된 피부 병변 및/또는 질환, 특히 전립선 비대, 전립선 선종, 좌창, 과다 지루, 탈모증 및 다모증을 치료하기 위한 신규 반응을 제공한다. 본 발명은 또한 특히 지성 피부의 미용 치료 방법, 및 사람 및/또는 동물 섭취용 식품의 첨가제로서의 상술한 지방 에스테르의 용도에 관한 것이다.

Description

5알파 리덕타아제 활성을 억제하도록 디자인된 조성물을 제조하기 위한 약리학, 특히 피부 의학, 화장품에 있어서의 하나 이상의 지방 에스테르의 용도 및 식품 첨가제로서의 이의 용도{Use of at least a fatty ester for preparing a composition designed to inhibit 5- α-reductase activity, in pharmacology, in particular dermatology, in cosmetics and food additive}
5알파 리덕타아제는 2개의 상이한 유전자로부터 합성된 2개의 아이소자임 형태로 존재하는 NADPH 의존성 소체증 효소이다. 5알파 리덕타이제 타입 1 아이소자임은 또한 실제로 간 및 피부, 특히 비생식기 피부 및 두피의 피지선에 발견되고, 사춘기에 나타난다. 타입 2는 전립선 및 분화된 성기 부위, 즉 생식기 부위, 수염의 피부에 현저하고, 자웅 분화 역할을 한다. 사람의 피부 및 피부 부가물에 있어서의 5알파 리덕타아제 타입 1 및 2 아이소자임의 분포는 하기 표에 의해 예시될수 있다.
본 발명은 5알파 리덕타아제 활성을 억제하도록 디자인된 조성물을 제조하기 위한, 특히 전립선 비대, 전립선 선종, 좌창, 과다 지루, 탈모증 및 다모증을 치료하기 위한 하나 이상의 지방 에스테르의 용도에 관한 것이다. 본 발명은 또한 특히 지성 피부의 미용 치료 방법, 및 사람 및/또는 동물 섭취용 식품의 첨가제로서 상술한 지방 에스테르의 용도에 관한 것이다.
(표 1)
5알파 리덕타아제 활성의 선천적이거나 후천적인 강조 인자가 완전히 또는 현저하게 관찰된 질환의 원인이 되는 다수의 병리가 존재한다.
예를 들면, 사람에게 있어서, 주로 생식기 조직 및 피부에 위치하는 이러한 5알파 리덕타아제는 테스토스테론의 5알파 리덕타아제 디히드로테스토스테론(DHT)으로의 히드록시화 반응을 촉진시킨다. 그러나, DHT가 테스토스테론보다 훨씬 더 활성을 나타내는(약 2배) 안드로겐이므로, 테스토스테론의 효능은 DHT가 생성되는 조직에서 확대된다. 그리하여, 과다하게 높은 5알파 리덕타아제의 활성으로 인해,전립선에 있어서의 DHT 형태로 과다하게 높은 레벨의 안드로겐을 가져오므로, 전립선을 과잉 자극함으로써, 대부분 종종 외과술을 요하는 전립선 비대나 심지어는 전립선 선종의 병리 상태를 가져올 수 있는 바람직하지 않은 성장을 유발할 수 있다.
피부 의학 타입의 기타 병리는 특히 좌창, 다모증 또는 탈모증에 있어서의 5알파 리덕타아제의 과다 활성으로 인한 것으로서 남성 또는 여성에게서 관찰될 수 있다.
피부에 있어서는, 5알파 리덕타아제 활성은 다른 조직에서보다 피지선에서 높다. 또한, 지루선은 다른 피부 부위보다 높은 5알파 리덕타아제 활성을 나타낸다. 따라서, 생리적인 피지 분비의 레벨은 이 효소의 활성에 밀접하게 관련되는 것으로 나타난다.
좌창 환자에 있어서는 5알파 리덕타아제의 과활성이 존재한다. 혈청 안드로겐 레벨의 증가 이상으로, DHT, 주요 피지 기능 인자의 전구물질에 있어서의 증가가 있는데, 이는 좌창에 관여한다. 눈에 거슬리는 외관은 별문제로 하고, 지성 또는 지루성 피부는 합병증이 일어날 수 있는 원인을 구성한다. 피지선이 다수인 부위에 영향을 미치며, 주로 이들 특정한 선에 의해 피지 생성의 안드로겐 과잉 자극으로 인한 것이다. 과다 지루는 심상성 좌창으로 인한 병변의 개시에 관여한다.
두피에 있어서는, 5알파 리덕타아제 타입 1 아이소자임은 모낭 뿐만 아니라, 피지선에서도 발견된다. 5알파 리덕타아제 타입 2 아이소자임은 내상피초 및 모발의 피부 유두에 현저하게 위치한다. 그러나, 상기 모발의 피부 유두는 구체적으로 지정되어 있다.
이의 생리 병인인 좌창의 생리 병인과 매우 유사한 안드로겐 탈모증은 탈모증의 가장 빈번한 증상으로, 확실히 치료법 수요가 가장 크다는 것이다. 5알파 리덕타아제는 이 병리에 중요한 역할을 하는 것으로 나타나다. 실로, 5알파 리덕타아제 타입 2 아이소자임의 유전적 결핍에 걸린 남자는 안드로겐 탈모증을 나타내지 않는다.
상기 사정을 감안하여, 5알파 리덕타아제의 개발에 대하여 연구조사를 행하였다. 프로게스테론 등의 몇몇 스테로이드는 이에 관련해서 테스트되었으나, 이의 신속한 물질대사로 생체 내에서는 효과가 없다. 활성을 나타내기 위해서는, 5알파 리덕타아제 억제제는 시험관 내에서의 효소 활성을 블록하도록 충분히 안정해야 한다. 피나스테라이드(finasteride), 스테로이드 억제제는 이 조건을 충족시키지만, 타입 1 아이소자임에 대한 것보다 타입 2 아이소자임에 대하여 훨씬 더 활성을 나타내며, 이들 2개의 아이소자임은 이들의 아미노산 서열에 대하여 다만 50%의 상동을 나타낸다. 따라서, 특히 피나스테라이드가 이미 테스트된 전립선의 양성 이상 증식에 있어서이다.
또한, 세레노아 레펜스(Serenoa Repens) 추출물은 또한 5알파 리덕타아제로서의 기준으로서 공지되어 있고, 피나스테라이드와 비교하여, 세레노아 레펜스 추출물은 식물 추출물로서 천연원인 장점을 갖고 있으며, 또한 천연원인 테스트된 생성물과 비교하여 우수하다는 것이다, 또한 사발 세룰락텀(Sabal serrulatum)으로도 명명되는 세레노아 레펜스는 미국(플로리다), 북아프리카 및 스페인에서 발견되는 야자수이다.상당히 놀랍게도 의외로, 특정 화합물, 지방 에스테르의 사용으로 현저한 5알파 리덕타아제 활성 억제 효과를 얻을 수 있어서, 특히 피부 의학 병리 및/또는 상술한 질환의 치료에 신규 반응을 제공할 수 있다.
따라서, 본 발명은 5알파 리덕타아제 활성을 억제하도록 디자인된 조성물을 제조하기 위한 하나 이상의 지방 에스테르의 용도에 관한 것이다.
특히, 본 발명의 용도는 조성물이 5알파 리덕타아제 타입 1 아이소자임 및/또는 타입 2 아이소자임을 억제하도록 디자인되는 것을 특징으로 한다.
용어 "지방 에스테르"는 본 발명에 의하면, 당해 기술분야의 숙련가의 통상적인 지식에 따라, 하나 이상의 에스테르 작용기 및 하나 이상의 "지방" 탄화수소 쇄를 갖는 분자, 즉 탄소 원자수가 7 이상인 선형 탄화수소쇄를 의미하는 것으로 고려된다.
본 발명에 따라 사용될 수 있는 지방 에스테르는 하나 이상의 에스테르 작용기 및 하나 이상의 지방 쇄를 갖는데, 상기 에스테르 작용기는 탄화수소 쇄가 임의로 1∼3개의 히드록시기로 치환된 선형 또는 분기형인 C1∼C30알콕시기를 포함하고, 상기 지방 쇄는 임의로 1∼3개의 히드록시기 및/또는 1∼3개의 에스테르 작용기(물론, 주 에스테르 작용기 이외에도)로 치환된 0∼2개의 에틸렌성 불포화 결합을 포함하는 선형 C7∼C30탄화수소 쇄이다.
특히, 에스테르 작용기는 모노글리세리드(글리세롤 모노에스테르)의 경우에서와 같이, C1∼C22, 특히 C1∼C18알콕시기를 포함할 수 있고, 예를 들면 이소프로필 또는 이소부틸 등의 분기형 쇄일 수 있다.
지방 쇄는 바람직하게는 예를 들면 메틸리놀레이트의 경우에서와 같이, 1 또는 2개의 컨쥬게이트되거나 컨쥬게이트되지 않은 에틸렌성 불포화 결합을 포함하는 에틸렌성 불포화 결합된 C7∼C30탄화수소 쇄이다.
지방 쇄는 유리하게는 탄소 원자수가 1∼22, 특히 1∼18이다.
본 발명에 사용될 수 있는 지방 에스테르의 제법은 당해 기술분야의 숙련가에게 공지된 방법에 해당한다. 따라서, 본 명세서에는 인용되어 있지 않지만, 당해 기술분야의 숙련가에게 공지된 통상적인 지식의 일부를 이루는 에스테르의 제조방법이 또한 사용될 수 있다.
물론, 첫째로 지방 쇄가 원하는 지방 에스테르의 지방 쇄에 대응하는 지방산과, 탄화수소 부분이 원하는 지방 쇄의 알콕시기의 그 부분에 대응하는 알콜의 에스테르화 반응을 들 수 있다.
카복실산과 알콜의 에스테르 생성은 직접적으로, 또는 산을 훨씬 더 반응성을 지닌 유도체로 전환하거나, 카복실레이트와의 축합반응을 위해 알콜을 활성화함으로써 행해질 수 있다.
카복실산과 알콜의 직접 에스테르화 반응은 강한 프로톤산에 의해 촉진되는 균형 반응이다. 이 반응은 증류에 의해 제거되는 공비 혼합물을 생성하는 용매 중에서 과잉량의 알콜과 함께 행해진다. 메틸에스테르는 5% 염산 메탄올이나 1∼3% 황산 메탄올 용액으로부터 얻어질 수 있다. 촉매로서의 루이스 산을 사용할 수 있다. 균질 산 또는 불균질 산 촉매의 존재하에 지방산과 글리세롤의 직접 에스테르화 반응을 또한 들 수 있다.
카보닐의 활성화는 히드록시기의 양호한 이탈기로의 전환에 있다. 산 클로라리드는 가장 흔히 사용되는 유도체이다. 산 무수물의 사용도 들 수 있다.
알콜의 활성화는 카복실레이트 이온에 의한 친핵성 공격에 대하여 훨씬 더 반응성을 나타내게 하는데 있다. 디아조메탄은 산의 탈양성자 반응후의 메틸의 우수한 반응원이다.
최종적으로, 카복실산의 에스테르화 반응은 효소 경로에 의해 행해질 수도 있다. 리파아제는 에스테르화 반응을 촉진시킨다. 이들 리파아제는 아스퍼길루스속(Aspergillus), 칸디다속(Candida), 지오트리쿰속(Geotrichum), 무코속(Mucor), 페니실륨속(Penicilium)의 미생물로부터 얻어진다.
또한, 본 발명에 사용될 수 있는 지방 에스테르는 에스테르와 상이한 에스테르를 유도하는 알콜의 반응인 에스테르 교환반응에 의해 제조될 수 있다. 세 타입의 반응은 에스테르 교환 반응으로 분류된다:
- 에스테르와 알콜의 반응인 가알콜 분해;
- 에스테르와 카복실산(또는 산 부수물)의 반응인 가산분해;
- 2개의 에스테르간, 비알콕시기의 교환반응인 분자간 에스테르화 반응.
에스테르 교환 반응은 유리하게는 균질 또는 불균질 촉매반응에 의해 촉진된다.
다수의 균질(산 또는 염기) 촉매는 문헌에 기재되어 있다. 산성 촉매는 황산, 인산 또는 하이포아염소산 등의 강 무기산은 물론, 파라톨루엔술폰산 또는 메탄술폰산 등의 유기산일 수 있다. 에스테르 교환반응에 통상 사용되는 염기성 촉매로는 수산화물(수산화나트륨 또는 수산화칼륨), 탄산염(K2CO3, Na2CO3) 및 알콜레이트(NaOCH3, NaOEt) 등의 통상적인 염기이다.
에스테르 교환반응의 불균질 촉매반응에 있어서, 루이스 산을 사용할 수 있으나, 일반적으로 그다지 활성을 나타내지 않는다. 또한 트리부틸주석알콜레이트(Bu3SnOR)가 10의 알콜/에스테르 몰비로 120℃에서 알콜과 에스테르의 에스테르 교환반응을 촉진시키는 것을 보여준다. 티타늄알콜레이트(Ti(OR)4)는 활발한 에스테르 교환반응 촉매로서 산업 분야에서 장기간 동안 사용되어 왔다. 그러나, 반응매질에서 이들을 제거하기 위해 이들을 가수분해하여, 반응종료시에 이들을 여과시키는 것이 필요하다. 특히, 담지형 티타네이트는 대두유의 가메탄올 분해시에 활성을 나타내는 것으로 입증되었다.
에스테르 교환반응의 불균질 촉매반응에 사용될 수 있는 기타 촉매 중에서, 구아니딘, 란탄족, 리파아제(예: Pseudomanos sp 또는 Mercor Miehei) 등의 효소, 알칼리 토금속 산화물(산화마그네슘) 및 최종적으로 각종 산화물(산화마그네슘, 알루미나, 실리카 등) 등의 담지형 촉매를 들 수 있다.
불균질 촉매는 빈응매질로부터 훨씬 더 용이하게 분리될 수 있는 촉매를 사용하고, 부식 및 부반응의 문제를 보다 적게 일으키는 균질 촉매반응과 비교하여, 이점을 갖고 있다.
상술한 에스테르 교환반응의 출발물질로는 합성 또는 천연원, 특히 동물원또는 식물원일 수 있다.
식물원 또는 동물원의 지방 물질은 본 발명에 따라 사용된 지방 에스테르의 지방 쇄를 제공하는 출발물질로서 바람직하다.
따라서, 상술한 바와 같이 지방산, 특히 식물원과 알콜의 에스테르 교환반응을 행할 수 있다.
이들 에스테르화 반응에 사용될 수 있는 지방산 중에서, 특히 식물유의 비누화의 부산물인 지방산 비누로부터 얻어진 지방산을 들 수 있다. 이는 사실상 식물유의 불비누화성 성분의 제조시의 부산물의 값이 매우 유리하게 향상할 수 있다는 것이다.
사용될 수 있는 식물유 중에서, 특히 해바라기, 야자, 야자 핵(palm kernel), 코코넛, 포도씨, 블랙 머스터드, 양귀비씨, 콩, 아보카도, 루핀, 땅콩, 목화씨, 스위트 아몬드, 참께, 올리브, 옥수수, 코코아, 피마자, 고추냉이, 아마인, 평지, 아나토(annatto), 맥아, 잇꽃, 견과, 개암 및 평지 씨를 들 수 있다. 아보카도유 및 대두유가 특히 바람직하다.
오일, 특히 아보카도유(또는 대두유)의 비누화는 불비누화성 성분의 제조방법의 기본 단계이다. 수성 수산화칼륨 및 에탄올의 존재하에 수행되는 이 단계는 칼륨 비누 및 글레세롤의 생성을 유도하는 오일(트리글리세리드)의 염기성 가수분해이다:
(RCO2)CH2CH(O2CR)CH2(O2CR) + 3KOH →3RCOO-K++ HOCH2CH(OH)CH2OH
트리글리세리드 수산화칼륨 비누 글리세롤
그 다음에, 수성 알콜상("비누질" 상)의 에멀젼에 있어서의 불비누화성 성분은 액체-액체 추출법에 따라 디클로로메탄(DCE)으로 추출된다. 추출후에, 불비우화성 부분이 없는 수성 알콜상은 실질적으로 비누, 에탄올, 물, 글리세롤, DCE 및 분획 Ⅰ로 이루어지는 혼합물이다. 분획 Ⅰ은 아보카도의 불비누화성 성분 중의 하나이다. 지방 알킬쇄(라디칼 R) 및 히드록시 작용기를 갖는 기질로 구성된다:
RCH2-CH(OH)CH2CH(OH)CH2OH
이러한 히드록시화 성분은 수성 알콜상에 부분적으로 용해한다.
액체-액체 추출단계후에, "비누질" 상은 황산으로 산성화된다. 비누는 그 다음에 지방산으로 전환된다(하기 반응 1). 얻어진 혼합물은 그 다음에 에탄올 및 DCE 트레이스를 제거하도록 증류된다. 최종적으로, 지방산 및 물은 디캔테이션에 의해 분리된다.
2RCOO_K++ H2SO4→2RCOOH + K2SO4(1)
최종적으로, 이러한 조질의 아보카도 지방산은 예를 들면 실리카겔 컬럼(헥산, 이어서 헥산-디에틸에테르 95: 9로 용리) 상이나 분자 증류에 의해 정제되고, 그리하여 아보카도 지방 에스테르, 특히 아보카도 메틸에스테르의 합성시에 사용되는 원료를 구성할 수 있다. 대두유 또는 상술한 다른 식물유의 지방산은 동리한 합성 경로에 따라 얻어질 수 있다.
따라서, 특정 실시형태에 의하면, 본 발명에 따라 사용되는 지방 에스테르는하나 이상의 식물유의 하나 이상의 지방산의 에스테르화 반응에 의해 얻어지며, "식물유 지방산"이란 상술한 바와 같이, 본 발명에 따라 식물유에 원래 존재하는 지방산과, 상기 식물유의 비누화후의 비누질 상을 처리함으로써 얻어지는 지방산을 포함하는 것으로 고려된다.
식물원(특히 식물유) 또는 동물원(특히 어유)의 지방 물질에 존재하는 트리글리세리드는 또한 상술한 바와 같이 당해 기술분야의 숙련가에게 공지된 수단을 사용하는 에스테르 교환반응을 통해, 본 발명에 따라 사용될 수 있는 무시할 수 없는 지방 에스테르 원을 나타낼 수 있다.
따라서, 또 하나의 특정 실시형태에 의하면, 본 발명에 따라 사용되는 지방 에스테르는 상술한 바와 같이 하나 이상의 식물유의 트리글리세리드의 에스테르 교환반응에 의해 얻어진다.
선택된 합성 경로에 관계없이, 지방 에스테르는 유리하게도 본 발명에 따라 사용되는데, 아보카도 및 대두유의 지방 에스테르 및 이들의 혼합물로 구성되는 그룹 중에서 선택된다.
특히, 지방 에스테르는 아보카도유의 알킬에스테르, 대두유의 알킬에스테르 및 이들의 혼합물로 이루어진다. "아보카도유의 알킬에스테르(각각 "대두유의 알킬에스테르")"는 본 발명에 따라 아보카도유(각각 대두유)의 지방산, 아보카도유(각각 대두유)의 비누화후의 비누질 상을 처리함으로써 얻어진 지방산의 에스테르화 반응에 이어서, 하나 이상의 알콜 또는 알콜 혼합물과의 에스테르화 반응에 의해 얻어진 지방 에스테르의 혼합물을 나타내는 것으로, 알킬기는 알킬에스테르의 "알킬" 부분을 결정한다. 따라서, 예를 들면 부탄올을 사용하면, "부틸"에스테르를 얻을 수 있다. 바람직하게는, 탄소 원자수가 1∼6인 알콜이 사용되는데, 알킬기는 예를 들면 이소프로판올 등의 선형 또는 분기형이다. 물론, 이 정의는 상술한 바와 같이, 이러한 에스테르화 반응에 있어서 알콜 혼합물, 예를 들면 부탄올과 메탄올의 혼합물의 사용을 포함한다는 것을 알 수 있다. 바람직하게는, 이러한 에스테르화 반응은 촉매 혼합물, 특히 BF3/에틸에테르 혼합물로 행해진다.
특히, 지방 에스테르는 아보카도유의 메틸에스테르, 대두유의 메틸에스테르 또는 이들의 혼합물로 이루어진다. "아보카도유의 메틸에스테르(각각 "대두유의 메틸에스테르")"는 본 발명에 따라 아보카도유(각각 대두유)의 지방산, 아보카도유(각각 대두유)의 비누화후의 비누질 상을 처리함으로써 얻어진 지방산의 에스테르화 반응에 이어서, 메탄올, 바람직하게는 촉매 혼합물, 특히 BF3/에틸에테르와의 에스테르화 반응에 의해 얻어진 지방 에스테르의 혼합물을 나타낸다.
특히, 지방 에스테르는 아보카도유의 부틸에스테르, 대두유의 부틸에스테르 또는 이들의 혼합물로 이루어진다. 따라서, "아보카도유의 부틸에스테르(각각 "대두유의 부틸에스테르")"는 본 발명에 따라 아보카도유(각각 대두유)의 지방산, 아보카도유(각각 대두유)의 비누화후의 비누질 상을 처리함으로써 얻어진 지방산의 에스테르화 반응에 이어서, 부탄올, 바람직하게는 촉매 혼합물, 특히 BF3/에틸에테르와의 에스테르화 반응에 의해 얻어진 지방 에스테르의 혼합물을 나타낸다. 아보카도유 및 대두유의 부틸에스테르는 하기와 같은 특징을 나타낸다:
(아보카도유의 부틸에스테르)
부틸에스테르의 함량 95% min.
산가 < 5
잔류 불비누화성 성분 < 0.5wt%
지방산의 분포:
팔미트산 C16 12∼25%
팔미톨레산 C16' 3∼10%
스테아르산 C18 미량
올레산 C18' 45∼75%
리놀레산 6∼18%
리놀렌산 C18' < 5%
(대두유의 부틸에스테르)
부틸에스테르의 함량 95% min.
산가 < 5
잔류 불비누화성 성분 < 0.5wt%
지방산의 분포:
미리스트산 C14 < 0.2%
팔미트산 C16 9∼13%
팔미톨레산 C16' < 0.3%
스테아르산 C18 3∼5%
올레산 C18' 17∼30%
리놀레산 C18" 48∼58%
리놀렌산 C18'" 5∼11%
아라키드산 C20 < 1%
에이코세노산 C20' < 1%
베헨산 C22 < 1%
본 발명의 또 하나의 바람직한 실시형태에 의하면, 메틸올레이트, 메틸리놀레이트, 메틸스테아레이트, 메틸라우레이트, 메틸운데실레네이트, 부틸올레이트, 올레일올레이트, 메틸리시놀레이트, 메틸팔미테이트, 메틸팔미톨레이트, 및 이들의 혼합물로 구성되는 그룹 중에서 선택되는 하나 이상의 지방 에스테르가 사용된다.
본 발명에 따라, 상술한 바와 같은 지방 에스테르는 조성물의 전체 중량에 대하여, 약 0.001 내지 약 100중량%(순수 제형, 예를 들면 연화제로서의 사용), 바람직하게는 약 0.01 내지 약 70중량%, 더욱 바람직하게는 약 0.1 내지 10중량%의 비율로 사용된다. 또한, 본 발명의 사용에 의해 제조된 조성물은 약제, 피부 의학 또는 미용상 허용가능한 부형제를 포함할 수 있다. 국소용, 경구용, 장용 또는 비경구용, 특히 직장용 경로에 의한 투여를 위해 당해 기술분야의 숙련가에게 공지된 갈레누스 제제에 적합한 부형제를 사용할 수 있다.
특히, 이러한 부형제는 유성 용액, 유중수(water-in-oil) 에멀젼, 수중유(oil-in-water) 에멀젼, 마이크로에멀젼, 유성 겔, 무수 겔, , 크림, 소포 분산제, 마이크로캡슐 분산제 또는 미이크로파티클 분산제, 또는 경질 젤라틴 캡슐분산제 또는 식물 분산제 또는 연질 젤라틴 캡슐 분산제 형태의 조성물의 제조에 적합하다.
바람직하게는, 외부 국소 경로 또는 직장 경로에 의한 투여에 적합한 부형제가 사용된다.
본 발명의 용도에 의해 제공된 5알파 리덕타아제의 억제에 대한 유리한 효과에 의해, 치료상, 특히 피부 의학 및 미용상 치료용으로 제조된 조성물을 디자인 할 수 있다.
따라서, 본 발명의 용도는 조성물이 5알파 리덕타아제 활성의 선천적이거나 후천적인 강조 인자와 관련된 피부 병변 및/또는 질환을 치료하기 위해 디자인되는 것을 특징으로 한다.
특히, 본 발명의 용도는 조성물이 전립선 비대를 치료하기 위해 디자인되는 것을 특징으로 한다.
또한, 본 발명의 용도는 조성물이 전립선 선종을 치료하기 위해 디자인되는 것을 특징으로 한다.
상술한 바와 같은 직장 경로에 의한 투여에 적합한 부형제의 사용은 특히 전립선 비대 및/또는 선종의 치료에 구상된다.
본 발명의 용도는 조성물이 좌창을 치료하기 위해 디자인되는 것을 특징으로 한다.
본 발명의 용도는 조성물이 과다 지루를 치료하기 위해 디자인되는 것을 특징으로 한다.
최종적으로, 본 발명의 용도는 또한 탈모증을 치료하기 위해 디자인되는 것을 특징으로 한다.
본 발명의 용도는 또한 조성물이 다모증을 치료하기 위해 디자인되는 것을 특징으로 한다.
본 발명의 목적은 또한 상술한 하나 이상의 지방 에스테르를 함유하는 미용 조성물을 피부에 도포하는 것을 특징으로 하는 지성 피부의 미용 치료 방법이다.
최종적으로, 본 발명의 목적은 상술한 하나 이상의 지방 에스테르를 함유하는 미용 조성물이 과다 다모성을 나타내는 피부 부위에 도포되는 것을 특징으로 하는 과다 다모성의 미용 치료방법이다.
실제로, 호르몬 의학 치료와는 달리, 상기 두가지의 미용 치료 방법에 의해, 탈모증에 관련된 모발 손실의 추한 현상 및 다모증에 관련된 과다 다모성 현상을 눈에 띄게 줄임으로써 외관을 향상킬 수 있다.
본 발명의 미용 치료 방법에 대한 바람직한 실시형태에 따르면, 지방 에스테르는 조성물의 전체 중량에 대하여, 약 0.001 내지 약 100중량%(부형제를 포함하지 않는 순수 제형, 예를 들면 연화제로서의 사용), 바람직하게는 약 0.01 내지 약 70중량%, 특히 바람직하게는 약 0.1 내지 10중량%의 비율로 조성물 중에 존재한다.
유리하게는, 본 발명의 미용 방법에 따라 사용된 미용 조성물은 또한 상술한 하나 이상의 미용상 허용가능한 부형제를 함유한다.
최종적으로, 본 발명의 목적은 사람 및/또는 동물 섭취용 식품 중의 첨가제로서의 상술한 하나 이상의 지방 에스테르의 용도에 있다. 이 식품 용도는 바람직하게는 식품의 전체 중량에 대하여, 약 0.001 내지 약 100중량%, 바람직하게는 약 0.01 내지 약 70중량%, 특히 바람직하게는 약 0.1 내지 10중량%의 비율로 식품 중에 존재한다.
하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위를 한정하는 것으로 해석되어서는 안된다.
달리 지적하지 않으면, 하기 실시예에 사용된 비율은 중량%를 나타낸다.
실시예 1 : 아보카도유 및 대두유의 메틸에스테르의 제조
아보카도유 및 대두유의 메틸에스테르는 하기 방법에 따라 제조하였다.
1. 정제된 아보카도 및 대두 지방산의 제조
아보카도(또는 대두) 유의 비누화는 불비누화성 성분의 제조방법의 필수단계이다. 수성 수산화칼륨 및 에탄올 존재하에 수행되는 상기 단계는 칼륨 비누 및 글리세롤을 생성하는 오일(트리글리세리드)의 염기성 가수분해이다.
(RCO2)CH2CH(O2CR)CH2(O2CR) + 3KOH →3RCOO-K++ HOCH2CH(OH)CH2OH
(트리글리세리드 + 수산화칼륨 → 비누 + 글리세롤)
수성 알콜 상에서 에멀젼 상태("비누질" 상)의 불비누화성 성분을 액체-액체 추출법에 따라 디클로로에탄(DCE)으로 추출하였다. 추출후, 불비누화성 성분이 없는 물-알콜상은 비누, 에탄올, 물, 글리세롤, DCE 및 부분Ⅰ으로 필수적으로 구성되는 혼합물이다. 부분Ⅰ은 아보카도의 불비누화성 성분중의 한 구성성분이다. 이는 지방알킬사슬(라디칼 R) 및 히드록시 작용기를 가지는 기질로 구성되어 있다.
RCH2-CH(OH)CH2CH(OH)CH2OH
상기 수산화 성분은 물-알콜상에서 부분적으로 가용성이다.
액체-액체 추출단계후에, 비누질 상은 황산으로 산성화하였다. 비누는 지방산으로 전환되었다(반응 1). 얻어진 혼합물을 에탄올 및 미량의 DCE를 제거하기 위해서 증류하였다. 지방산 및 물을 디캔테이션에 의해 마지막으로 분리하였다.
2RCOO-K++ H2SO4→ 2RCOOH + K2SO4(1)
상기 정제하지 않은 아보카도 지방산은 최종적으로 규소 컬럼(용리제 헥산 및 헥산-디에틸에테르 95:5)에서 정제하였고, 아보카도 메틸에스테르의 합성동안에 사용된 원재료가 되었다.
대두 지방산도 상기 합성법과 동일한 루트에 의해서 얻었다.
2. 아보카도유 및 대두유의 메틸에스테르의 제조
아보카도의 메틸에스테르는 하기 방법에 따라서 얻었다.
250ml의 메탄올, 500g의 아보카도 지방산 및 12.5ml의 BF3/에틸에테르 혼합물을 콘덴서 및 마그네틱 스터링(magnetic stirring)이 구비된 삼구 둥근 바닥 플라스크안에서 혼합하였다. 반응 혼합물은 환류하에서 1시간 동안 열을 가하였다.
상기와 같이 제조한 메틸에스테르는 진공하의 회전 증발기에서 건조한 후, 120℃ 및 4㎛ 수은의 진공하에서 90％의 증류율로 분자증류에 의해 최종 정제하였다.
대두 지방 에스테르도 상기 합성법과 동일한 경로에 의해서 얻었다.
예를 들어, 아보카도유 및 대두유 각각의 부틸에스테르를 메탄올 대신 부탄올을 사용하여 상기 합성법과 동일한 경로에 따라 제조하는 것도 가능하다 (하기 조성물의 실시예 6 참조).
3.제조한 생성물의 분석
(표 2)
3.1 정제한 아보카도 지방산 조성
지방산 함유량잔류 불비누화성 성분지방산의 분포:미리스트산 C14:0팔미트산 C16:0팔미톨레산 C16:1스테아르산 C18:0올레인산 C18:1리놀레산 C18:2리놀렌산 C18:3 96.2％3.8％0.08％22.7％9.9％0.6％50.3％11.8％0.9％
(표 3)
3.2 아보카도 메틸에스테르의 조성
지방산의 메틸에스테르잔류 불비누화성 성분미확인 성분지방산의 분포:팔미트산 C16:0팔미톨레산 C16:1스테아르산 C18:0올레인산 C18:1리놀레산 C18:2리놀렌산 C18:3 86.02.111.925.1％8.4％0.6％55.8％9.1％0.4％
(표 4)
3.3 대두 메틸에스테르의 조성
지방산의 메틸에스테르잔류 불비누화성 성분미확인 성분지방산의 분포:팔미트산 C16:0팔미톨레산 C16:1스테아르산 C18:0올레인산 C18:1리놀레산 C18:2리놀렌산 C18:3 97.8-2.220.4％0.2％2.9％20.9％49.8％2.8％
실시예 2 : DU145 세포에 의해 테스토스테론으로부터 생성된 5-디히드로테스토스테론의 양의 측정에 의한 5알파 리덕타아제 활성에 대한 억제활성의 평가
1. 재료 및 방법
1.1 재료
전립선세포 DU145는 전립선 암으로부터 얻어진 암세포주로부터 유래하였다(ATCC No. HTB 81). MEM 배지(ref. 0410265), 글루타민 및 젠타마이신(gentamycin)은 Gibco로부터 구입하였다. 페탈 카프 시럼(fetal calf serum. FCS)은 DAP로부터 구입하였고 보충없이 사용하였다 (56℃에서 45mm). 배양에 사용되는 플라스틱(디쉬 및 플레이트)는 Costar로부터 구입하였다. 테스토스테론은 Sigma것을 사용하였다.
1.2 방법
1.2.1 생산물 범위의 제조
에탄올에서 10 mg/ml의 원액은 테스트된 생성물의 각각으로부터 제조되었다.
실험에 사용된 농도 범위는 다음과 같다 : 0, 5, 10, 50, 100 및 500 ㎍/ml (배양 배지에서 수행한 희석).
웰(well)당 첨가되는 추출액의 부피는 20㎕/well이기 때문에, 제조되어야 할 용액은 50X로 농축하여야 한다.
테스토스테론의 제조
10mM의 테스토스테론의 원액을 에탄올 용매로 제조하였다. 사용시에는 상기 용액을 배양액에 1:1000으로 희석하였고 웰당 10㎕를 가하였다.
1.2.2 DU145세포의 5알파 리덕타아제의 억제 실험
전립선 세포 DU145는 37℃, 5％ CO2에서 글루타민(2mM), 젠타마이신 (50㎍/ml) 및 10％ FCS를 함유한 MEM 배지에서 배양하였다. 이들의 계대배양율(subculture rate)은 1:10 이었다.
실험시작전에, 세포들을 웰당 2×105DU145세포 / 1％ FCS만을 함유한 배지1ml의 비율로 배양하였다. 세포들은 5％ CO2, 37℃에서 3일간 유지시켰다. 실험날, 웰의 배양액을 제거하고 1％의 FCS를 함유한 새 배양액으로 교체하였다. 테스토스테론(최종 0.1μM) 및 상이한 농도의 추출액을 각각 10~20㎕/웰의 비율로 배지에 첨가하였다. (대조군 웰은 테스토스테론 및 이와 동등한 에탄올의 존재하에 배양되는 세포에 대응된다. 상기 대조군에 의해 배양액에 대한 용매의 영향을 제거하고 억제제가 존재하지 않는 경우에 생성되는 DHT의 퍼센트를 결정하는 것이 가능하다.) 세포들을 37℃, 5％ CO2에서 배양하였다. 3시간 후, 배양 상등액을 채취하고 분석시까지 -80℃에서 동결시켰다.
생성된 DHT양의 측정
원리 : 에테르로 친유성 생성물의 추출, 친화 크로마토그래피(affinity chromatography) 및 방사성면역학적 분석법(radioimmunological assay)에 의해 DHT에 대해 샘플의 농축
샘플의 제조
- 샘플을 볼텍스(vortex)한 후 "SEPEX" 플라스크에 넣었다.
- 방사성 용액 "3H-Rdt" 0.1ml을 각각의 튜브에 첨가하였다(추출 수득율을 평가하기 위함). 플라스크를 닫고, 하나씩 볼텍스하였다.
- 상온에서 30분간 정치한 후 다시 각각의 플라스크를 볼텍스하였다.
- 각 플라스크에 5ml의 디에틸에테르를 가하였다.
- 플라스크를 닫고 손으로 힘차게 흔들었다. 몇분간 두었다.
- 적어도 1시간 동안 -30℃에서 수성 상을 동결하였다.
- 대응되는 5ml 보로실리케이트 테스트 튜브에서 에테르상을 채취하였다.
- 37℃ 물중탕계 및 증발기를 사용하여 에테르상을 완전히 증발시켰다.
DHT의 분리
ㆍ컬럼의 제조 : 10 cm의 크로마토리트A (chromatolithe A)로 5ml 유리 배양 피펫에 컬럼을 제조하였다.
ㆍ컬럼의 린싱(rinsing) : 3ml의 콤비팁 순수 이소옥탄(combitips pure isooctane)으로 중력에 의해 흐르도록 하여 린싱하였다.(3번)
ㆍ건조 에테르 추출물의 용출
- 각 건조 추출물을 1ml의 순수 이소옥탄에 넣은 후 힘차게 볼텍스하였다. 상온에서 15분간 두고 난후 다시 볼텍스하였다.
- 3ml의 이소옥탄(컬럼을 세척한 것)을 용출하고, 이소옥탄에 녹인 건조 에테르 추출물을 컬럼위로 부은 후 용출시켰다.
- 각각의 건조 추출물을 콤비팁 순수 이소옥탄 1ml로 린스하고 힘차게 볼텍스하였다. 15분간 상온에 두었다. 다시 볼텍스하고 상기와 같이 컬럼에 부었다.
- 순수 이소옥탄 4ml로 세척하였다.
ㆍDHT의 채취
- 용출 용매를 제조하였다. (6％의 이소옥탄/에틸아세테이트: 94/6 (v-v)를 함유하는 혼합액)
- 상기 혼합액 6ml(피펫)로 용출하였다.
- DHT용출액을 5ml의 확인된 보로실리케이트 테스트 튜브에 채취하였다.
ㆍDHT 용출액의 처리 : 37℃ 물중탕계 및 증발기를 사용하여 용출용매를 완전히 증발시켰다.
RIA 분석
ㆍ분배 프로토콜 : 0.5ml의 RC 버퍼로 샘플를, 1ml의 Rcet버퍼로 블랭크(Blank)를, 0.5ml의 RC버퍼로 대조군을 각각 채취한다. 37℃오븐에 15분간 두고 오븐에서 꺼내자 마자 튜브를 흔든다 (1분).
5ml의 유리 용혈 튜브안에 다음의 순서로 둔다:
*버퍼 : 총 활성(Total Activity, TA) : 0.7ml의 RC 버퍼, 비특이활성 (Nonspecific Activity(N)) : 0.2ml의 RC 버퍼, 범위: 범위의 0점(B0로 표기) 만이 0.1ml의 RC버퍼를 함유한다.
*표준 용액 (1000 내지 7.8pg/튜브 까지): 0.1ml의 각 표준용액
*버퍼에 채취된 0.1ml의 건조 추출물
- 항 혈청의 분배 : TA와 N을 제외한 모든 튜브에 0.1ml
- 분석 용액 "3HD"의 분배 : 모든 튜브에 0.1ml
- 볼텍스하고 파라필름으로 덮었다.
- 4℃에서 최소 1시간 30분간 (최대 24시간) 인큐베이션 하였다.
ㆍ목탄-덱스트란(charcoal-dextran)의 제조 : 비이커에 목탄-덱스트란 서스펜션을 두고, 4℃ 빙수욕에 최소한 1시간 30분간 두었다.
ㆍDHT 정제 수득율
- 6개의 작은 신틸레이션 플라스크(시리즈당 3개)에 침전 : 0.4ml의 RC 버퍼 + 0.1ml의 "3H-Rdt"용액 (냉장고에 두고 최초날로부터의 플라스크). 블랭크 : 블랭크로 0.5ml의 재구성된 건조 추출물을 사용하였다. 샘플 및 대조군 : 0.25ml의 RC 버퍼 + 0.25ml의 추출물을 사용하였다.
- 모든 플라스크에 5ml의 신틸레이션 용액을 첨가하였다.
항체에 결합된 것으로부터 자유 DHT의 분리
- 목탄-덱스트란 서스펜션을 얼음물 용기에서 자석 교반하였다.
- 0.5ml의 목탄-덱스트란을 TA를 제외한 모든 튜브에 최대 2분이상 첨가하였다.
- 볼텍스하고 튜브를 얼음물에 다시 두었다. 정확히 10분간 두고, 4℃, 3400rpm에서 11분간 원심분리 하였다.
- 0.5ml의 각 상등액을(TA를 포함) 작은 카운팅 플라스크에 피펫하였다.
- 5ml의 신틸레이션 액체를 첨가하고, 교반하고, 평형이 되도록 상온에서 30분간 두었다.
- β카운터로 2분간 카운트 한다(Beckman, LS 6000 SE).
2. 결과
2.1 DU145 세포에 의한 테스토스테론의 5-디히드로테스토스테론으로의 변환의 평가 - IC50 값의 결정
(표 5)
테스트한 생성물 IC 50 (㎍/㎖)
아보카도유의 지방산 (1) 510
아보카도유의 메틸에스테르 (1) 13
대두유의 메틸에스테르 (1) 304
메틸올레이트 (2) 386
세레노아 레펜스 60
(1) 실시예 1에서 기술된 바에 따라 얻음
(2) 시판품 (Sigma, 99％순도)
3. 결론
일반적으로, 지방산의 메틸에스테르는 5알파 리덕타아제 억제활성을 보인다.
그 중, 아보카도유의 메틸에스테르는 억제활성이 가장 큰 산물을 구성한다. 이는 5알파 리덕타아제 억제제로 알려진 세레노아 레펜스 추출물보다 5 내지 6배 더 활성이 강하다.
아보카도유의 메틸에스테르는 그들의 대두유의 상응체보다 더 활성이 크다.
아보카도의 메틸에스테르는 5알파 리덕타아제에 대해 낮은 활성을 보이는 그들의 전구체인 아보카도의 지방산과는 다르게 상기 효소에 대한 억제 활성을 나타낸다.
마지막으로, 아보카도의 메틸에스테르 주요 구성성분(50％)인 메틸올레이트는 단독으로 테스트되면 아보카도의 메틸에스테르보다 매우 낮은 활성을 가짐이 증명되었다.
실시예 3: 정상인 피부 피브로블라스트의 배양에서 테스토스테론의 5α- 디히드로테스토스테론으로의 변환에 대한 5알파 리덕타아제의 시험관에서의 평가
하기의 실시예에서 사용되는 약어:
3H: 삼중수소
TLC: 얇은 층 크로마토그래피
Ci: 큐리 (Curie)
DMSO: 디메틸술폭시드
M199: 표준 배양액
FCM: 피브로블라스트 배양액 (fibroblast culture medium)
MEM: 최소 필수 배양액 (Minimum Essential Medium)
FIM: 피브로블라스트 인큐베이션 배지 (fibroblast incubation medium)
Rf: 상대 지연 인자
FCS: 페탈 카프 시럼(fetal calf serum)
5α-DHT: 5α-디히드로테스토스테론
5알파 리덕타아제 활성에 대한 참고로서 선택된 세레노아 레펜스 및 아보카도의 메틸에스테르 및 메틸올레이트(Sigma 제품, 99％순도)와 같은 생산물의 영향을 평가하는 것이 제안되었다. 정상인 피부 피브로블라스트 배양의 시험관 모델을 선택하였다.
1.재료 및 방법
1.1 테스트 제품, 기준 제품 및 시약
테스트 제품은 EXPANSCIENCE에서 구입하였고, 사용시까지 +4℃에서 저장하였다. 방사성 테스토스테론(1, 2, 6 및 7 위치에 삼중수소로 표지함, 비활성도 79Ci/mmol)은 AMERSHAM으로부터 구입하였고, 방사성으로 표지되지 않은 테스토스테론은 SIGMA로 부터 구입하였다.
분석용 시약은 달리 언급이 없다면, SIGMA, MERCK, BDH, ALDRICH 또는 CARLO ERBA로부터 구입하였다.
1.2 분석 시스템
피브로블라스트 배양액(FCM)은 페니실린(50 IU/ml), 스트렙토마이신(50㎍/㎖), 중탄산나트륨(0.2％, w/v) 및 FCS(10％, v/v)로 보충된 MEM/M199 (3:1, v/v)으로 구성하였다.
분석 시스템은 단층으로 배양한 정상인 피부 피브로블라스트으로 구성하였다. 피브로블라스트는 51세 여성의 복부 성형 수술 잔류물로부터 분리하였다 (subject BIOPREDIC No.I0013). 세포는 15회의 계대(passage)에서 사용하였다; 세포들을 단층이 5％ CO2를 함유하는 37℃ 습한 공기중의 FCM 배지에서 유착(confluent)할 때까지 배양하였다.
1.3 생산물의 제조 및 분석 시스템의 인큐베이션
피브로블라스트 인큐베이션 배양액(FIM)은 삼중수소화된 테스토스테론(1.6 ×10-7M, 즉 6.32 μCi/ml) 및 방사성으로 표지되지 않은 테스토스테론 (3.84 ×10-6M)으로 보충된 FCM으로 구성하였다.
테스트 제품 및 피나스테라이드(finasteride)를 인큐베이션 배양액에 희석하기 전에 DMSO에 녹였다. DMSO의 최종농도는 일정하게 유지하였고, 테스트 제품 및 기준 제품의 각 희석에 일정 및 1％(v/v)와 동일하게 유지시켰다.
시간 눈금:
T-2T0T22
ㆍㆍㆍ시간
▽△ ▼▲ ※
▽: FCM 배양액의 제거
△: FCM 배양액에서 제조된 테스트 제품 및 기준 제품의 전인큐베이션 (preincubation)
▼: 테스트 제품 또는 참고 생산물을 함유한 FCM 배양액의 제거
▲: FIM 배양액에서 제조된 테스트 제품 및 참고 생산물의 인큐베이션
※ : 5알파 리덕타아제 활성의 결정
피브로블라스트 배양은 기질인 테스토스테론을 첨가하기 전에 테스트 제품 또는 기준 제품의 존재하에서 2시간 동안 전인큐베이션하였다. 상기 단계를 위해, 테스트 제품 및 기준 제품을 FCM 배양액에서 제조하였다.
전인큐베이션후에, 피브로블라스트 배양을 5％ CO2를 함유하는 37℃ 습한 공기에서 22시간 동안 FIM 배양액에서 제조한 테스트 제품 또는 기준 제품의 존재하에 인큐베이션하였다. 대조군 배양은 테스트 제품 및 기준 제품의 부존재하에 FIM 배지에서 인큐베이션하였다. "DMSO 대조군" 배양은 1％ (v/v)의 DMSO를 함유한 FIM배양액에서 인큐베이션하였다. 각 실험 조건은 세번 테스트 하였다.
1.4 영향에 대한 평가
인큐베이션 기간후에, 세포들을 FIM 배양액에서 초음파 분쇄 작업을 행하였다. 상기 작업으로 얻어진 세포 분쇄물(cellular lysate)을 디클로로메탄으로 추출하였다. 증발시킨 후, 건조 잔류물을 메탄올에 녹이고, 60F254실리카 플레이트(MERCK, 참조 5554)에 두었다.
방사성으로 표지하지 않은 표준, 테스토스테론, 5α-디히드로-테스토스테론 및 안드로스테네디온(androstenedione)을 플레이트 각각에 가하였다.
이동용매는 디클로로메탄 및 에테르(7:3, v/v) 혼합물이었다. 이동을 마친후 실리카 플레이트를 BERTHOLD 방사성 스캐너를 사용하여 읽었다.
방사성으로 표지하지 않은 표준은 크로마토그래피 플레이트상에 5％ 황산(v/v)을 분사하고, 100℃ 에서 10분간 열을 가함으로서 볼 수 있다.
표준에 대한 Rf값 (비교 지연 인자)과 다양한 방사성 대사물질에 대한 Rf값을 비교함으로써 후자를 확인할 수 있다.
다양한 실험조건하에서 테스토스테론의 5α-디히드로-테스토스테론으로의 대사가 계산되었다: 결과(BERTHOLD 스캐너에 의해 카운트된 5α-디히드로-테스토스테론 피크의 영역)는 배양 웰당 생성된 5α-디히드로-테스토스테론의 pmol로 표현하였다. 이는 또한 "DMSO 대조군" 그룹에 존재하는 5알파 리덕타아제 활성의 퍼센트로도 또한 표현할 수 있다.
1.5 - 자료의 처리
자료 그룹(대조군 및 처리군)은 단일 변수 분석법(one-way analysis of variance) (ANOVA 1, p < 0.05)에 의해 처리하고, DUNNETT's 테스트(p < 0.05)에 의해 처리하였다. 테스트 제품 및 참고 생산물의 영향을 "DMSO 대조군"의 것과 비교하였다. 테스트 제품의 영향은 이 변수 분석법(two-way analysis of variance) (ANOVA 2, p < 0.05, 펙터 1 = 농도 및 펙터 2 = 처리)
2. 결과 및 토의
대조군 배양에서, 테스토스테론 대사율은 배양 웰당 22시간안에 형성된 5α-DHT의 9.71 +/- 0.77 pmol 이었다. 상기 대사율은 실험실에서 이미 얻어진 결과와 일치하였다.
10 및 100 ㎍/㎖에서 테스트한 아보카도의 메틸에스테르는 각각 29％ 및 55％로 5알파 리덕타아제 활성을 억제하였다(표 6).
1, 10 및 100 ㎍/㎖에서 테스트한 정제한 메틸올레이트는 각각 24％, 38％ 및 41％로 5알파 리덕타아제 활성을 억제하였다(표 7).
10 및 100 ㎍/㎖에서 테스트한, 기준 제품, 세레노아 레펜스 추출물은 각각 15％, 35％로 5알파 리덕타아제 활성을 억제하였다. 1㎍/㎖에서는 아무런 효과가 나타나지 않았다(표 7).
결론적으로, 테스트한 생산물은 5알파 리덕타아제 활성을 억제하였다.
테스트 제품 활성에 따라, 10 및 100 ㎍/㎖에서 테스트한 아보카도의 메틸에스테르 및 정제한 메틸올레이트의 5알파 리덕타아제 억제활성은 기준으로 선택한세레노아 레펜스 추출물의 것보다 현저히 높다는 것을 나타내었다.
따라서, 상기 테스트로 지방산의 메틸에스테르 특히 아보카도유의 메틸에스테르의 억제 활성을 확인하였다.
3. 표
3.1 22시간 인큐베이션 후 정상인 피부 피브로블라스트 배양에서의 5알파 리덕타아제 활성에 대한 아보카도의 메틸에스테르의 영향
(표 6)
제품 DMSO1％ (v/v) 농도 (㎍/㎖)
10 100
아보카도메틸에스테르 8.008.928.688.53 +/- 0.48 100 5.806.366.086.08* +/- 0.28 71 4.282.724.483.83＊ +/- 0.96 45
결과는 생성된 5α-DHT pmol/배양웰로 표현하였다.
볼드(bold)체 : 평균 및 표준편차
이탤릭체 : DMSO 그룹의 퍼센트
* : DMSO 그룹과 현저히 차이가 나는 평균 (p < 0.05)
3.2 22시간 인큐베이션 후 정상인 피부 피브로블라스트 배양에서의 5알파 리덕타아제 활성에 대한 세레노아 레펜스 및 메틸올레이트의 영향
(표 7)
제품 DMSO1％ (v/v) 농도(㎍/㎖)
1 10 100
메틸올레이트 8.008.928.688.53 +/- 0.48 100 7.126.246.086.48* +/- 0.56 76 3.007.045.925.32* +/- 2.09 62 5.445.124.605.05* +/- 0.42 59
세레노아레펜스추출물 8.008.928.688.53 +/- 0.48 100 7.729.208.088.33 +/- 0.77 98 6.847.487.527.28* +/- 0.38 85 5.485.685.445.53* +/- 0.13 65
결과는 생성된 5α-DHT pmol/배양웰 로 표현하였다.
볼드(bold)체: 평균 및 표준편차
* : DMSO 그룹과 현저히 차이가 나는 평균 (p < 0.05)
실시예 4: 정상인 피부 피브로블라스트 배양에서 테스토스테론의 5α-디히드로테스토스테론으로의 변환의 5알파 리덕타아제 활성에 대한 지방산 에스테르의 시험관 평가
1. 재료 및 방법
상기 실시예 3에 사용된 것과 동일한 재료 및 방법.
2. 결과 및 토의
5알파 리덕타아제 활성에 대한 지방산 에스테르의 영향을 평가하는 것이 제안되었다. 정상인 피부 피브로블라스트의 시험관 모델이 선택되었다. 테스트된 생산물은 알콕시기의 성질 및 지방 쇄의 길이 및 기능이 다양한 지방산 에스테르 그룹으로부터 선택되었다. 상기 에스테르는 하기와 같다: 메틸올레이트, 메틸리놀레이트, 메틸스테아레이트, 메틸라우레이트, 메틸운데실레네이트, 부틸올레이트, 올레일올레이트 및 메틸리시놀레이트.
1, 10 및 100㎍/㎖ 에서 테스트된 메틸올레이트는 각각 29％, 42％ 및 26％로 5알파 리덕타아제 활성을 현저히 억제하였다(p < 0.05).
1, 10 및 100㎍/㎖ 에서 테스트된 올레일올레이트는 각각 28％, 45％ 및 35％로 5알파 리덕타아제 활성을 현저히 억제하였다(p < 0.05). 10 및 100㎍/㎖ 에서 피브로블라스트는 세포의 형태학적 검사에 의해 관찰되는 세포 손상을 나타내었다.
1, 10 및 100㎍/㎖ 에서 테스트된 부틸 올레이트는 각각 21％, 45％ 및 49％로 5알파 리덕타아제 활성을 현저히 억제하였다(p < 0.05).
1, 10 및 100㎍/㎖ 에서 테스트된 메틸운데실레네이트는 각각 40％, 32％ 및 26％로 5알파 리덕타아제 활성을 현저히 억제하였다(p < 0.05).
1, 10 및 100㎍/㎖ 에서 테스트된 메틸스테아레이트는 각각 41％, 35％ 및 43％로 5알파 리덕타아제 활성을 현저히 억제하였다(p < 0.05).
1, 10 및 100㎍/㎖ 에서 테스트된 메틸리놀레이트는 각각 42％, 40％ 및 29％로 5알파 리덕타아제 활성을 현저히 억제하였다(p < 0.05).
1, 10 및 100㎍/㎖ 에서 테스트된 메틸리시놀레이트는 각각 37％, 38％ 및 62％로 5알파 리덕타아제 활성을 현저히 억제하였다(p < 0.05).
결론적으로, 선택된 실험 조건하에서, 테스트 제품의 활성에 따라, 1, 10 및 100 ㎍/㎖ 에서 테스트하였는데, 다음의 세가지 그룹으로 분류할 수 있다: 메틸올레이트, 부틸올레이트, 올레일올레이트 및 메틸리시놀레이트 = 그룹A 가장 높은 억제 활성. 메틸리놀레이트, 스테아레이트, 라우레이트 및 운데실레네이트 = 그룹B 중간 억제 활성.
그룹A에 속하는 생산물은 그룹B에 속하는 생산물의 것보다 현저히 높은 5알파 리덕타아제 억제활성을 나타내었다(p < 0.05).
그룹내에서는 각 생산물들은 비교할 만한 억제 활성을 가졌다.
3. 결과의 상세한 표 : 24시간 인큐베이션 시킨후의 정상인 피부 피브로블라스트 배양에서 5알파 리덕타아제 활성에 대한 지방산 에스테르의 영향
(표 8)
제품 DMSO0.1％ (v/v) 농도(㎍/㎖)
1 10 100
메틸올레이트 10.5612.0011.6411.40 +/- 0.75100 8.248.287.848.12*+/-0.2471 6.286.447.126.61*+/-0.4558 7.527.007.207.24*+/-0.2664
올레일올레이트 10.5612.0011.6411.40 +/- 0.75100 9.007.328.208.17*+/-0.8472 6.126.446.206.25*+/-0.1755 6.288.607.487.45*+/-1.1665
부틸올레이트 10.5612.0011.6411.40 +/- 0.75100 10.648.288.089.00*+/-1.4279 6.245.047.366.21*+/-1.1655 5.206.725.405.77*+/-0.8351
메틸운데실레네이트 10.5612.0011.6411.40 +/- 0.75100 6.567.446.686.89*+/-0.4860 7.687.847.607.71*+/-0.1268 8.687.769.008.48*+/-0.6474
메틸스테아레이트 10.5612.0011.6411.40 +/- 0.75100 6.926.087.086.69*+/-0.5459 8.806.726.767.43*+/-1.1965 6.885.926.766.52*+/-0.5257
메틸리놀레이트 10.5612.0011.6411.40 +/- 0.75100 7.046.406.366.60*+/-0.3858 6.006.608.006.87*+/-1.0360 8.568.047.568.05*+/-0.5064
메틸리시놀레이트 10.5612.0011.6411.40 +/- 0.75100 6.528.366.687.19*+/-1.0263 7.847.405.887.04*+/-1.0362 3.684.524.804.33*+/-0.5838
메틸라우레이트 10.5612.0011.6411.40 +/- 0.75100 5.766.886.846.49*+/-0.6457 6.849.889.528.75+/-1.6677 8.4811.968.969.80*+/-1.8986
결과는 생성된 5α-DHT pmol/배양웰 로 표현하였다.
볼드(bold)체: 평균 및 표준편차
이탤릭체: "DMSO 0.1％(v/v)" 그룹의 퍼센트
* : "DMSO 0.1％(v/v)" 그룹과 현저히 차이가 나는 평균 (p < 0.05)
실시예 6 : 과다 지루 크림의 조성
아보카도유의 부틸에스테르15.0
스타릴알콜(Staryl alcohol)3.0
스테아레스-21(Steareth-21)3.0
스테아레스-2 2.0
물충분량 100
카르보폴(Carbopol)0.4
수산화나트륨 0.3
부틸화 히드록시톨루엔 0.4
향수 0.1
------
100

Claims (32)

  1. 지방 쇄가 0∼2개의 에틸렌성 불포화 결합을 포함하고, 주 에스테르 작용기 이외에도 1∼3개의 히드록시기 및/또는 1∼3개의 에스테르 작용기로 치환될 수 있는 선형 C7∼C30탄화수소 쇄인 것을 특징으로 하는 5알파 리덕타아제 활성을 억제하도록 디자인된 조성물의 제조용으로서의 하나 이상의 지방 에스테르의 용도.
  2. 제 1 항에 있어서, 조성물은 5알파 리덕타아제 타입 1 아이소자임 및/또는 타입 2 아이소자임을 억제하도록 디자인되는 것을 특징으로 하는 용도.
  3. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 에스테르 작용기는 탄화수소 쇄가 임의로 1∼3개의 히드록시기로 치환된 선형 또는 분기형인 C1∼C30알콕시기를 포함하는 것을 특징으로 하는 용도.
  4. 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, 지방 쇄는 1 또는 2개의 에틸렌성 불포화 결합을 포함하는 에틸렌성 불포화 선형 C7∼C30탄화수소 쇄인 것을 특징으로 하는 용도.
  5. 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서, 지방 에스테르는 하나 이상의 식물유의 하나 이상의 지방산의 에스테르화 반응에 의해 얻어지는 것을 특징으로 하는 용도.
  6. 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서, 지방 에스테르는 하나 이상의 식물유의 트리글리세리드의 에스테르 교환반응에 의해 얻어지는 것을 특징으로 하는 용도.
  7. 제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서, 지방 에스테르는 아보카도유 또는 대두유의 지방 에스테르 및 이들의 혼합물로 구성되는 그룹 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는 용도.
  8. 제 7 항에 있어서, 지방 에스테르는 아보카도유의 알킬에스테르, 대두유의 알킬에스테르 및 이들의 혼합물로 이루어지는 것을 특징으로 하는 용도.
  9. 제 7 항 또는 제 8 항에 있어서, 지방 에스테르는 아보카도유의 메틸에스테르, 대두유의 메틸에스테르 또는 이들의 혼합물로 이루어지는 것을 특징으로 하는 용도.
  10. 제 7 항 또는 제 8 항에 있어서, 지방 에스테르는 아보카도유의 부틸에스테르, 대두유의 부틸에스테르 또는 이들의 혼합물로 이루어지는 것을 특징으로 하는용도.
  11. 제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서, 지방 에스테르는 메틸올레이트, 메틸리놀레이트, 메틸스테아레이트, 메틸라우레이트, 메틸운데실레네이트, 부틸올레이트, 올레일올레이트, 메틸리시놀레이트, 메틸팔미테이트, 메틸팔미톨레이트, 및 이들의 혼합물로 구성되는 그룹 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는 용도.
  12. 제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서, 지방 에스테르는 부틸올레이트인 것을 특징으로 하는 용도.
  13. 제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서, 지방 에스테르는 메틸리시놀레이트인 것을 특징으로 하는 용도.
  14. 제 1 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 있어서, 지방 에스테르는 조성물의 전체 중량에 대하여, 약 0.001 내지 약 100중량%의 비율로 사용되는 것을 특징으로 하는 용도.
  15. 제 1 항 내지 제 14 항 중 어느 한 항에 있어서, 제조된 조성물은 약제, 피부 의학 또는 미용상 허용가능한 부형제를 포함하는 것을 특징으로 하는 용도.
  16. 제 15 항에 있어서, 부형제는 외부 국소 경로 또는 직장 경로에 의한 투여에 적합한 것을 특징으로 하는 용도.
  17. 제 1 항 내지 제 16 항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물은 5알파 리덕타아제 활성의 선천적이거나 후천적인 강조 인자와 관련된 피부 병변 및/또는 질환을 치료하기 위해 디자인되는 것을 특징으로 하는 용도.
  18. 제 1 항 내지 제 16 항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물은 전립선 비대를 치료하기 위해 디자인되는 것을 특징으로 하는 용도.
  19. 제 1 항 내지 제 16 항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물은 전립선 선종을 치료하기 위해 디자인되는 것을 특징으로 하는 용도.
  20. 제 1 항 내지 제 16 항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물은 좌창을 치료하기 위해 디자인되는 것을 특징으로 하는 용도.
  21. 제 1 항 내지 제 16 항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물은 과다 지루를 치료하기 위해 디자인되는 것을 특징으로 하는 용도.
  22. 제 1 항 내지 제 16 항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물은 탈모증을 치료하기 위해 디자인되는 것을 특징으로 하는 용도.
  23. 제 1 항 내지 제 16 항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물은 다모증을 치료하기 위해 디자인되는 것을 특징으로 하는 용도.
  24. 제 1 항에 기재된 하나 이상의 지방 에스테르를 함유하는 미용 조성물을 피부에 도포하는 것을 특징으로 하는 지성 피부의 미용 치료 방법.
  25. 제 1 항에 기재된 하나 이상의 지방 에스테르를 함유하는 미용 조성물이 두피에 도포되는 것을 특징으로 하는 모발 손실의 미용 치료 방법.
  26. 제 1 항에 기재된 하나 이상의 지방 에스테르를 함유하는 미용 조성물이 과다 다모성을 나타내는 피부 부위에 도포되는 것을 특징으로 하는 과다 다모성의 미용 치료 방법.
  27. 제 24 항 내지 제 26 항 중 어느 한 항에 있어서, 지방 에스테르는 제 3 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 기재되어 있는 것을 특징으로 하는 미용 치료 방법.
  28. 제 24 항 내지 제 26 항 중 어느 한 항에 있어서, 지방 에스테르는 조성물의전체 중량에 대하여, 약 0.001 내지 약 100중량%의 비율로 조성물 중에 존재하는 것을 특징으로 하는 미용 치료 방법.
  29. 제 24 항 내지 제 26 항 중 어느 한 항에 있어서, 미용 조성물은 또한 하나 이상의 미용상 허용가능한 부형제를 함유하는 것을 특징으로 하는 미용 치료 방법.
  30. 사람 및/또는 동물 섭취용 식품 중의 첨가제로서의 제 1 항의 하나 이상의 지방 에스테르의 용도.
  31. 제 30 항에 있어서, 지방 에스테르는 제 3 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 기재되어 있는 것을 특징으로 하는 용도.
  32. 제 30 항 또는 제 31 항에 있어서, 지방 에스테르는 식품의 전체 중량에 대하여, 약 0.001 내지 약 100중량%의 비율로 식품 중에 존재하는 것을 특징으로 하는 용도.
KR1020027009245A 2000-01-18 2001-01-18 5알파 리덕타아제 활성을 억제하도록 디자인된 조성물을제조하기 위한 약리학, 특히 피부 의학, 화장품에있어서의 하나 이상의 지방 에스테르의 용도 및 식품첨가제로서의 이의 용도 KR100763728B1 (ko)

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