DE60111489T2

DE60111489T2 - Verwendung mindestens eines fettsäureesters zur zubereitung einer pharmazeutischen oder kosmetischen zusammensetzung zur behandlung von prostatahypertrophie, prostata-adenom, akne, seborrhoe, haarausfall und hirsutismus

Info

Publication number: DE60111489T2
Application number: DE60111489T
Authority: DE
Inventors: Philippe Msika; Antoine Piccirilli; Jacques Legrand
Original assignee: Laboratoires Expanscience SA
Current assignee: Laboratoires Expanscience SA
Priority date: 2000-01-18
Filing date: 2001-01-18
Publication date: 2006-05-11
Anticipated expiration: 2021-01-19
Also published as: AU3554901A; US20030129268A1; DE60111489D1; MXPA02006986A; US8318186B2; CA2397987A1; FR2803749A1; ATE297725T1; AU782758B2; WO2001052837A3; ES2240414T3; KR100763728B1; FR2803749B1; JP2003520229A; KR20020087394A; CA2397987C; JP4948732B2; EP1248610A2; EP1248610B1; WO2001052837A2

Description

Die Erfindung betrifft die Verwendung von wenigstens einem Fettester für die Herstellung einer Zusammensetzung, die dazu bestimmt ist, die Aktivität der 5α-Reduktase zu hemmen, insbesondere für die Behandlung von Prostatavergrößerung, Prostataadenom, Akne, Hyperseborrhoe, Alopezie, Hirsutismus. Die Erfindung betrifft gleichfalls Verfahren zur kosmetischen Behandlung, insbesondere von fettiger Haut.
Die 5α-Reduktase ist ein mikrosomales, NADPH-abhängiges Enzym, das in Form von zwei Isoenzymen, die ausgehend von zwei unterschiedlichen Genen synthetisiert werden, vorkommt. Das Isoenzym der 5α-Reduktase vom Typ 1 findet sich im Wesentlichen in der Leber und der Haut, insbesondere in den Talgdrüsen der nicht-genitalen Haut und der behaarten Haut und tritt in der Pubertät auf. Das Isoenzym vom Typ 2 ist in der Prostata und im Bereich der Haut der differenzierten Geschlechtsbereiche: Genitalregion, Bart, vorherrschend und spielt eine Rolle bei der Geschlechtsdifferenzierung. Die Verteilung der Isoenzyme der 5α-Reduktase vom Typ 1 und 2 im Bereich der Haut und der Hautanhänge beim Menschen kann durch die folgende Tabelle veranschaulicht werden.
Tabelle 1: Verteilung der Isoenzyme der 5α-Reduktase vom Typ 1 und 2 im Bereich der Haut und der Hautanhänge beim Menschen
Es gibt eine bestimmte Anzahl von Pathologien, bei denen eine vererbte oder erworbene starke Übersteigerung der Aktivität der 5α-Reduktase in der Gesamtheit oder in der Hauptsache für die beobachteten Störungen verantwortlich ist.
Beim Menschen katalysiert dieses Enzym 5α-Reduktase, welches hauptsächlich in den Genitalgeweben und in der Haut lokalisiert ist, beispielsweise die Hydroxylierung von Testosteron zu 5α-Reduktasedihydrotestosteron (5α-Dihydrotestosteron) (DHT). Da DHT ein deutlich aktiveres Androgen als Testosteron ist (ungefähr zweifach stärker), werden indessen die Wirkungen von diesem Letzteren in den Geweben, wo DHT produziert wird, verstärkt. Eine zu hohe Aktivität der 5α-Reduktase bewirkt so zu hohe Androgengehalte in Form von DHT in der Prostata, wo eine übermäßige Stimulation von dieser Letzteren in einem unerwünschten Wachstum zum Ausdruck kommt, welches zu der Pathologie der Prostatavergrößerung, ja sogar des Prostataadenoms, welches zumeist einen chirugischen Eingriff erforderlich macht, führen kann.
Beim Mann oder bei der Frau können als Ergebnis einer übermäßigen Aktivität der 5α-Reduktase andere Pathologien vom dermatologischen Typ beobachtet werden, nämlich insbesondere Akne, Hirsutismus oder ferner Alopezie.
In der Haut ist die Aktivität der 5α-Reduktase in der Talgdrüse bedeutender als in den anderen Strukturen. Außerdem zeigen die Drüsen mit gesteigerter Talgproduktion eine bedeutendere 5α-Reduktase-Aktivität als jene der anderen Hautbereiche. Folglich scheint das Niveau der physiologischen Talgsekretion eng mit der Aktivität dieses Enzyms verbunden zu sein.
Bei der Akne liegt eine Hyperaktivität der 5α-Reduktase vor. Mehr als eine Erhöhung der Serumspiegel der Androgene ist es eine Erhöhung der Vorstufen von DHT, dem Hauptfaktor der Talgdrüsenfunktion, die an der Akne beteiligt ist. Die fettige Haut oder (Seborrhoe) bildet außer ihrem unansehnlichen Aspekt ein Gebiet, auf welchem Komplikationen auftreten können. Sie befällt die Zonen, wo die Talgdrüsen zahlreich sind, und resultiert hauptsächlich aus einer Androgen-bedingten übermäßigen Stimulation der Talgproduktion durch diese speziellen Drüsen. Die Hyperseborrhoe ist an dem Auftreten der Läsionen von Akne vulgaris beteiligt.
Bei der behaarten Haut findet man das Isoenzym der 5α-Reduktase vom Typ 1 im Bereich der Talgdrüsen wie auch im Bereich der Haarfollikel. Das Isoenzym der 5α-Reduktase vom Typ 2 ist hauptsächlich im Bereich der inneren epithelialen Scheide wie auch im Bereich der Hautpapille des Haars lokalisiert. Diese letztere Lokalisierung bleibt indessen noch zu präzisieren.
Die Androgen-bedingte Alopezie, deren Pathophysiologie jener der Akne sehr nahe kommt, ist die häufigste der Alopezien und ohne Zweifel jene, wo der Therapiebedarf am höchsten ist. Die 5α-Reduktase scheint eine wesentliche Rolle bei dieser Pathologie zu spielen. Tatsächlich entwickeln die Männer, die unter einem genetisch bedingten Mangel an Isoenzym der 5α-Reduktase vom Typ 2 leiden, keine Androgen-bedingte Alopezie.
Unter Berücksichtigung des Vorangegangenen, richtet sich die Forschung auf die Entwicklung von Inhibitoren der 5α-Reduktase. Bestimmte Steroide, wie Progesteron, sind in diesem Sinne getestet worden, aber dessen schnelle Metabolisierung macht dieses in vivo unwirksam. Um aktiv zu sein, muss der Inhibitor der 5α-Reduktase ausreichend stabil sein, um die Aktivität des Enzyms in vivo zu blockieren. Finasterid, ein kompetitiver steroidartiger Inhibitor, erfüllt diese Bedingung, ist aber gegenüber dem Isoenzym vom Typ 2 aktiver als gegenüber dem Isoenzym vom Typ 1, und diese beiden Isoen zyme haben lediglich 50% Homologie hinsichtlich ihrer Aminosäuresequenz. Es ist dementsprechend vor allem die gutartige Prostatavergrößerung gewesen, bei welcher Finasterid bereits getestet worden ist.
Man kennt überdies gleichfalls den Extrakt von Serenoa repens als Referenz als Inhibitor der 5α-Reduktase, wobei der Extrakt von Serenoa repens bezogen auf Finasterid den Vorteil einer natürlichen Herkunft als pflanzlicher Extrakt aufweist, was einen besseren Vergleich für getestete Produkte, die gleichfalls natürlicher Herkunft sind, ermöglicht. Serenoa repens, welche gleichfalls unter der Bezeichnung Sabal serrulatum bekannt ist, ist eine kleine Palme, die man in den Vereinigten Staaten (Florida), in Nordafrika und in Spanien finden kann.
Aufgrund ihrer die Aktivität der 5α-Reduktase regulierenden Eigenschaften wurden gleichfalls Fettsäuren eingesetzt. So beschreibt die Patentanmeldung DE 41 34137 eine Lotion, um den Ausfall der Haare zu verhindern, welche Isopropylpalmitat umfasst. Es wurden andere Fettsäureester mit 10 Kohlenstoffatomen eingesetzt, um die Akne zu bekämpfen (EP-0 039 857). Linolensäure, Linolsäure und Ölsäure sind ebenfalls hinsichtlich ihrer die 5α-Reduktase hemmenden Eigenschaften untersucht worden (WO-99/22728).
Man hat jetzt ganz und gar überraschend und unerwartet festgestellt, dass die Verwendung von bestimmten Fettestern es erlaubt, eine bemerkenswerte Wirkung einer Hemmung der Aktivität der 5α-Reduktase zu erhalten, wodurch insbesondere eine neue Antwort für die Behandlung der oben aufgeführten dermatologischen Pathologien und/oder Störungen gegeben wird.
Die Erfindung bezieht sich so auf die Verwendung von wenigstens einem Fettester, ausgewählt aus den Alkylestern von Avocadoöl, Methyloleat, Methyllinoleat, Methylstearat, Butyloleat, Oleyloleat, Methylricinoleat und den Mischungen von diesen Letzteren, für die Herstellung einer Zusammensetzung, die dazu bestimmt ist, die Aktivität der 5α-Reduktase zu hemmen.
So ist die erfindungsgemäße Verwendung dadurch gekennzeichnet, dass die Zusammensetzung für die Behandlung von Prostatavergrößerung, Prostataadenom, Akne, Hyperseborrhoe, Alopezie, Hirsutismus bestimmt ist.
Die Herstellung der Fettester, die gemäß der Erfindung einsetzbar sind, beruht auf Verfahren, die den Fachleuten auf diesem Gebiet bekannt sind. Die Verfahren zur Herstellung der Ester, die im Folgenden nicht aufgeführt werden, die aber einen Teil der allgemeinen Kenntnisse des Fachmanns auf diesem Gebiet bilden, können folglich gleichfalls eingesetzt werden.
Man kann selbstverständlich an erster Stelle die Veresterung einer Fettsäure, deren Fettkette jener des gewünschten Fettesters entspricht, mit dem Alkohol, dessen kohlenwasserstoffhaltiger Teil jenem der Alkoxygruppe des gewünschten Fettesters entspricht, aufgeführt werden.
Die Bildung der Ester ausgehend von Carbonsäuren und Alkoholen kann entweder direkt oder unter Umwandlung der Säure in reaktivere Derivate oder unter Aktivierung des Alkohols für eine Kondensation mit dem Carboxylat erfolgen.
Die direkte Veresterung einer Carbonsäure durch einen Alkohol ist eine Gleichgewichtsreaktion, welche durch starke Brönsted-Säuren katalysiert wird. Die Reaktion erfolgt mit einem großen Überschuss von Alkohol in einem Lösemittel, welches ein Azeotrop bildet, welches durch Destillation entfernt wird. Die Methylester können ausgehend von Salzsäure in einer Konzentration von 5% oder Schwefelsäure in einer Konzentration von 1-3% enthaltenden methanolischen Lösungen erhalten werden. Man kann Lewis-Säuren als Katalysatoren einsetzen. Man kann gleichfalls den besonderen Fall der direkten Veresterung zwischen einer Fettsäure und Glycerol in Gegenwart von homogenen oder heterogenen sauren Katalysatoren aufführen.
Die Aktivierung des Carbonyls besteht darin, das Hydroxyl in eine bessere austretende Gruppe umzuwandeln. Die Säurechloride sind die am häufigsten verwendeten Derivate. Man kann gleichfalls die Verwendung von Säureanhydriden aufführen.
Die Aktivierung des Alkohols besteht darin, jenen gegenüber einem nukleophilen Angriff des Carboxylations reaktiver zu machen. Diazomethan ist nach Deprotonierung der Säure eine sehr reaktive Methylquelle.
Schließlich kann die Veresterung der Carbonsäuren gleichfalls auf enzymatischem Wege erfolgen. Die Lipasen katalysieren die Veresterung. Diese Lipasen stammen von Mikroorganismen der Gattungen Aspergillus, Candida, Geotrichum, Mucor, Penicillium.
Überdies können die gemäß der Erfindung einsetzbaren Fettester hergestellt werden durch Umesterung, welche eine Reaktion zwischen einem Ester und einem Alkohol, welche zu einem unterschiedlichen Ester führt, ist. Unter dem Begriff der Umesterung werden drei Arten von Reaktionen eingestuft:

– die Alkoholyse, die eine Reaktion zwischen einem Ester und einem Alkohol ist;
– die Acidolyse, die eine Reaktion zwischen einem Ester und einer Carbonsäure (oder einem Säureanhydrid) ist
– die Veresterung zwischen gleichartigen Molekülen („Interesterification"), die eine Austauschreaktion zwischen zwei Estern, der Nicht-Alkoxy-Gruppen, ist.

Die Umesterung wird vorteilhafterweise durch eine homogene oder heterogene Katalyse katalysiert.
In der Literatur werden zahlreiche homogene (saure oder basische) Katalysatoren beschrieben. Die sauren Katalysatoren können starke Mineralsäuren, wie Schwefelsäure, Sulfonsäure, Phosphorsäure oder Hypochlorsäure, aber gleichfalls organische Säuren, wie p-Toluolsulfonsäure oder Methansulfonsäure, sein. Die basischen Katalysatoren, die bei der Umesterung üblicherweise eingesetzt werden, sind klassische Basen, wie Hydroxide (Natriumhydroxide oder Kaliumhydroxide), Carbonate (K₂CO₃, Na₂CO₃), wie auch Alkoholate (NaOCH₃, NaOEt).
Bei einer heterogenen Katalyse für die Umesterung kann man die Lewis-Säuren einsetzen, aber sie sind im allgemeinen wenig aktiv. Es ist gleichfalls gezeigt worden, dass Tributylzinnalkoholat (Bu₃SnOR) die Umesterungsreaktion zwischen einem Alkohol und einem Ester bei 120°C bei einem Molverhältnis Alkohol/Ester von 10 katalysieren kann. Die Titanalkoholate (Ti(OR)₄) werden in der Industrie seit langem als aktive Umesterungskatalysatoren eingesetzt. Es ist indessen notwendig, diese am Ende der Reaktion zu hydrolysieren und diese abzufiltrieren, um sie aus dem Reaktionsmedium zu entfernen. Insbesondere erweisen sich die trägergestützten Titanate während der Methanolyse von Sojaöl als aktiv.
Unter den anderen Katalysatoren, die für eine heterogene Katalyse der Umesterung eingesetzt werden können, kann man ferner die Guanidine, die Lanthanide, die Enzyme, wie die Lipasen, wie von Pseudomonas-Sp. oder Mercor Miehei, die Erdalkalimetalloxide, Magnesiumoxid und schließlich die trägergestützten Katalysatoren, wie die gebrannten Kalke („centres basiques") (Calciumoxid), die auf verschiedene Oxide (Oxide von Magnesium, Aluminiumoxid, Siliciumdioxid u.s.w.) als Träger aufgebracht sind, aufführen.
Die heterogene Katalyse weist bezogen auf die homogene Katalyse die Vorteile auf, dass Katalysatoren eingesetzt werden, die von dem Reaktionsmedium leichter abtrennbar sind und weniger Probleme von Korrosion und von Nebenreaktionen aufwerfen.
Die Ausgangsprodukte für die oben beschriebenen Umesterungsreaktionen können von synthetischer oder natürlicher Herkunft, insbesondere tierischer oder pflanzlicher Herkunft sein.
Es werden die Fette pflanzlicher oder tierischer Herkunft als Ausgangsprodukte, welche die Fettkette der erfindungsgemäß eingesetzten Fettester liefern, bevorzugt.
Man kann so eine Veresterung, wie oben beschrieben, einer Fettsäure insbesondere pflanzlicher Herkunft mit einem Alkohol vornehmen.
Unter den Fettsäuren, die für diese Veresterungsreaktionen einsetzbar sind, kann man insbesondere die Fettsäuren aufführen, die ausgehend von Fettsäureseifen, die Nebenprodukte aus der Verseifung eines pflanzlichen Avocadoöls sind, erhalten werden. Es handelt sich tatsächlich um eine sehr interessante Verwertung dieser Nebenprodukte aus der Herstellung der unverseifbaren Anteile von pflanzlichen Ölen.
Die Verseifung von Avocadoöl ist ein essentieller Schritt des Verfahrens zur Herstellung der unverseifbaren Anteile. Dieser Schritt, der in Gegenwart von wässrigem Kaliumhydroxid und von Ethanol ausgeführt wird, ist eine basische Hydrolyse des Öls (Triglyceride), welche zu der Bildung von Kaliumseifen und von Glycerol führt.
Der in Emulsion in der wässrig-alkoholischen Phase („Seifen"-Phase; phase „savonneuse") befindliche unverseifbare Anteil wird dann durch Dichlorethan (DCE) gemäß einem Flüssig-Flüssig-Extraktionsverfahren extrahiert. Nach der Extraktion ist die wässrig-alkoholische Phase, die von der unverseifbaren Fraktion befreit ist, eine Mischung, die im Wesentlichen aus Seifen, Ethanol, Wasser, Glycerol, DCE und der Fraktion I besteht. Die Fraktion I ist einer der Bestandteile des unverseifbaren Anteils von Avocado. Sie besteht aus Substraten, die eine Fettalkylkette (Rest R) und Hydroxylfunktionen aufweisen: RCH₂-CH(OH)CH₂CH(OH)CH₂OH
Diese hydroxylierten Verbindungen sind in der wässrig-alkoholischen Phase teilweise löslich.
Nach dem Flüssig-Flüssig-Extraktionsschritt wird die „Seifen"-Phase durch Schwefelsäure angesäuert. Die Seifen werden dann in Fettsäuren umgewandelt (nachfolgende Reaktion 1). Die erhaltene Mischung wird dann destilliert, um das Ethanol und die Spuren von DCE zu entfernen. Die Fettsäuren und das Wasser werden schließlich durch Dekantation abgetrennt. 2 RCOO^-K⁺ + H₂SO₄ → 2 RCOOH + K₂SO₄ (1)
Diese rohen Fettsäuren von Avocado werden schließlich gereinigt, beispielsweise an einer Siliciumdioxid-Säule (Elutionsmittel Hexan, dann Hexan-Diethylether, 95:5) oder durch Molekulardestillation, und können so das Ausgangsmaterial, welches während der Synthese der Fettester von Avocado, insbesondere der Methylester von Avocado, eingesetzt wird, bilden.
So wird gemäß einer besonderen Ausführungsweise der Ausführung der gemäß der Erfindung eingesetzte Fettester durch Veresterung von wenigstens einer Fettsäure eines pflanzlichen Öls von Avocado erhalten, wobei sich versteht, dass der Ausdruck „Fettsäure eines pflanzlichen Öls" gemäß der Erfindung die Fettsäuren umfasst, die in dem pflanzlichen Öl von Anfang an vorhanden sind, und wobei die Fettsäuren durch Behandlung der „Seifen"-Phase nach Verseifung des pflanzlichen Öls, wie oben beschrieben, erhalten werden können.
Die in dem Fett pflanzlicher Herkunft (insbesondere den pflanzlichen Ölen) vorhandenen Triglyceride können über den Umweg einer Umesterung unter Verwendung von Mitteln, die dem Fachmann auf diesem Gebiet bekannt sind, wie oben beschrieben, gleichfalls eine nicht zu vernachlässigende Quelle von gemäß der Erfindung verwendbaren Fettestern darstellen.
So wird der erfindungsgemäß verwendete Fettester gemäß einer anderen besonderen Ausführungsweise durch Umesterung der Triglyceride von wenigstens einem pflanzlichen Öl von Avocado erhalten.
Unter „Alkylester von Avocadoöl" versteht man gemäß der Erfindung eine Mischung von Fettestern, die durch Veresterung von Fettsäuren von Avocadoöl erhalten worden sind, wobei die Fettsäuren durch Behandlung der Seifen-Phase nach Verseifung des Avocadoöls erhalten und dann einer Veresterung mit wenigstens einem Alkohol oder einer Mischung von Alkoholen, deren Alkylgruppe den „Alkyl"-Abschnitt dieser Alkylester bestimmt, unterworfen worden sind. Beispielsweise erlaubt die Verwendung von Butanol so, „Butyl"ester zu erhalten. Man setzt vorzugsweise einen Alkohol mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen, dessen Alkylgruppe linear oder verzweigt ist, wie beispielsweise Isopropanol, ein. Es versteht sich selbstverständlich, dass diese Definition die Verwendung einer Mischung von Alkoholen, wie oben bereits erwähnt, beispielsweise einer Mischung von Butanol und von Methanol, für eine solche Veresterung mit umfasst. Noch weiter bevorzugt führt man eine solche Veresterung mit einer katalytischen Mischung, insbesondere einer Mischung von BF₃ und Ethylether aus.
Insbesondere wird der Fettester aus Methylestern von Avocadoöl gebildet. Unter „Methylester von Avocadoöl" versteht man gemäß der Erfindung eine Mischung von Fettestern, die durch Veresterung von Fettsäuren von Avocadoöl erhalten worden sind, wobei die Fettsäuren durch Behandlung der Seifen-Phase nach Verseifung des Avocadoöls erhalten und dann einer Veresterung mit Methanol, vorzugsweise mit einer katalytischen Mischung, insbesondere einer Mischung von BF₃/Ethylether, unterworfen worden sind.

Noch spezieller wird der Fettester aus Butylestern von Avocadoöl gebildet. Unter „Butylester von Avocadoöl" versteht man folglich gemäß der Erfindung eine Mischung von Fettestern, die durch Veresterung von Fettsäuren von Avocadoöl erhalten worden sind, wobei die Fettsäuren durch Behandlung der Seifen-Phase nach Verseifung des Avocadoöls erhalten und dann einer Veresterung mit Butanol, vorzugsweise mit einer katalytischen Mischung, insbesondere einer Mischung von BF₃/Ethylether, unterworfen worden sind. Die Butylester von Avocadoöl sind gekennzeichnet, wie folgt: Butylester von Avocadoöl:

Gehalte an Butylestern	min. 95%
Säurezahl	< 5
Restlicher unverseifbarer Anteil	< 0,5 Gew.-%
Verteilung der Fettsäuren:
C16-Palmitinsäure	12 bis 25%
C16'-Palmitoleinsäure	3 bis 10%
C18-Stearinsäure	Spuren
C18'-Ölsäure	45 bis 75%

Linolsäure	6 bis 18%
C18'-Linolensäure	> 5%

Gemäß der Erfindung wird der Fettester, wie oben beschrieben, gemäß einem Anteil zwischen 0,001 und 100 Gew.-% eingeschlossen (Verwendung in reiner Form, beispielsweise als Weichmacher), vorzugsweise zwischen 0,01 und 70 Gew.-% und noch spezieller zwischen 0,1 und 10 Gew.-% bezogen auf das Gesamtgewicht der Zusammensetzung eingesetzt.
Die durch die erfindungsgemäße Verwendung hergestellte Zusammensetzung kann außerdem einen pharmazeutisch, dermatologisch oder kosmetisch annehmbaren Träger umfassen. Man kann einen jeglichen Träger einsetzen, der für die dem Fachmann auf diesem Gebiet in Hinblick auf eine Verabreichung auf topischem, oralem, enteralem oder parenteralem, insbesondere rektalem Wege bekannten galenischen Formen angepasst ist.
Insbesondere kann dieser Träger für die Herstellung einer Zusammensetzung in Form einer ölartigen Lösung, einer Wasser-in-Öl-Emulsion, einer Öl-in-Wasser-Emulsion, einer Mikroemulsion, eines ölartigen Gels, eines wasserfreien Gels, einer Creme, einer Dispersion von Vesikeln, von Mikrokapseln oder von Mikropartikeln oder ferner von hart- oder weichschaligen Kapseln aus Gelatine oder pflanzlichen Substanzen angepasst sein.
Man setzt vorzugsweise einen Träger ein, der für eine Verabreichung auf topischem äußerlichem Wege oder auf rektalem Wege angepasst ist.
Die vorteilhafte Wirkung einer Hemmung der Aktivität der 5α-Reduktase, die durch die erfindungsgemäße Verwendung bereitgestellt wird, erlaubt es, die so hergestellte Zusammensetzung für therapeutische, insbesondere dermatologische, und kosmetische Behandlungen vorzusehen.
Die Verwendung eines für eine Verabreichung auf rektalem Wege angepassten Trägers, wie oben beschrieben, kann insbesondere für diese Behandlungen von Prostatavergrößerung und/oder von Prostataadenomen ins Auge gefasst werden.
Die Erfindung hat ferner ein Verfahren zur kosmetischen Behandlung von fettiger Haut zum Gegenstand, welches dadurch gekennzeichnet ist, dass man auf die Haut eine kosmetische Zusammensetzung aufträgt, welche wenigstens einen Fettester, wie oben beschrieben, enthält.
Die Erfindung hat außerdem ein Verfahren zur kosmetischen Behandlung von Haarausfall zum Gegenstand, welches dadurch gekennzeichnet ist, dass man auf die behaarte Haut eine kosmetische Zusammensetzung aufträgt, welche wenigstens einen Fettester, wie oben beschrieben, enthält.
Schließlich hat die Erfindung gleichfalls ein Verfahren zur kosmetischen Behandlung von übermäßiger Behaarung zum Gegenstand, welches dadurch gekennzeichnet ist, dass man auf die Zonen der Haut, die übermäßige Behaarung aufweisen, eine kosmetische Zusammensetzung aufträgt, welche wenigstens einen Fettester, wie oben beschrieben, enthält.
Tatsächlich erlauben diese beiden letzteren Behandlungsverfahren im Gegensatz zu den medizinischen Hormonbehandlungen, das Aussehen zu verbessern, indem die unangenehmen Phänomene des Haarausfalls, die mit der Alopezie verbunden sind, und die Phänomene von übermäßiger Behaarung, die mit dem Hirsutismus verbunden sind, auf sichtbare Weise verringert werden.
Gemäß einer bevorzugten Ausführungsweise dieser kosmetischen Behandlungsverfahren ist der Fettester in der Zusammensetzung entsprechend einem Anteil zwischen 0,001 und 100 Gew.-% eingeschlossen (Verwendung in reiner Form, ohne Träger, beispielsweise als Weichmacher), vorzugsweise zwischen 0,01 und 70 Gew.-% und noch spezieller zwischen ungefähr 0,1 und 10 Gew.-% bezogen auf das Gesamtgewicht der Zusammensetzung vorhanden.
Die kosmetische Zusammensetzung, die gemäß dem kosmetischen Verfahren der Erfindung angewendet wird, enthält vorteilhafterweise außer dem wenigstens einen kosmetisch annehmbaren Träger, wie oben beschrieben.
Die folgenden Beispiele sind dazu bestimmt, die Erfindung zu veranschaulichen.
Zumindest wo nicht anders angegeben, sind die in den folgenden Beispielen angegebenen Prozentsätze Gewichtsprozentsätze.
Beispiel 1: Herstellung von Methylestern von Avocadoöl
Man stellt Methylester von Avocadoöl gemäß der folgenden Vorgehensweise her.
1. Gewinnung der gereinigten Fettsäuren von Avocado
Die Verseifung von Avocadoöl ist ein essentieller Schritt des Verfahrens zur Herstellung der unverseifbaren Anteile. Dieser Schritt, der in Gegenwart von wässrigem Kaliumhydroxid und von Ethanol ausgeführt wird, ist eine basische Hydrolyse des Öls (Triglyceride), welche zu der Bildung von Kaliumseifen und von Glycerol führt:
Der in Emulsion in der wässrig-alkoholischen Phase („Seifen"-Phase) befindliche unverseifbare Anteil wird dann durch Dichlorethan (DCE) gemäß einem Flüssig-Flüssig-Extraktionsverfahren extrahiert. Nach der Extraktion ist die wässrig-alkoholische Phase, die von der unverseifbaren Fraktion befreit ist, eine Mischung, die im Wesentlichen aus Seifen, Ethanol, Wasser, Glycerol, DCE und der Fraktion I besteht. Die Fraktion I ist einer der Bestandteile des unverseifbaren Anteils von Avocado. Sie besteht aus Substraten, die eine Fettalkylkette (Rest R) und Hydroxylfunktionen aufweisen: RCH₂-CH(OH)CH₂CH(OH)CH₂OH
Diese hydroxylierten Verbindungen sind in der wässrig-alkoholischen Phase teilweise löslich.
Nach dem Flüssig-Flüssig-Extraktionsschritt wird die „Seifen"-Phase durch Schwefelsäure angesäuert. Die Seifen werden dann in Fettsäuren umgewandelt (Reaktion 1). Die erhaltene Mischung wird dann destilliert, um das Ethanol und die Spuren von DCE zu entfernen. Die Fettsäuren und das Wasser werden schließlich durch Dekantation abgetrennt. 2 RCOO^-K⁺ + H₂SO₄ → 2 RCOOH + K₂SO₄ (1)
Diese rohen Fettsäuren von Avocado werden schließlich an einer Siliciumdioxid-Säule (Elutionsmittel Hexan, dann Hexan-Diethylether, 95:5) gereinigt und bilden derart das Ausgangsmaterial, welches während der Synthese der Methylester von Avocado eingesetzt wird.
2. Herstellung der Methylester von Avocadoöl
Die Methylester von Avocado werden gemäß der folgenden Vorgehensweise erhalten:
In einem Dreihalskolben, der mit einem Kühler und einem mechanischen Rührer ausgestattet ist, mischt man 250 ml Methanol, 500 g Fettsäuren von Avocado und 12,5 ml einer Mischung von BF₃ und Ethylether. Die Reaktionsmischung wird dann 1 h bis zum Rückfluss erwärmt.
Die so erhaltenen Methylester werden unter Vakuum im Rotationsverdampfer getrocknet, dann schließlich durch Molekulardestillation bei 120°C unter einem Vakuum von 4 μm Quecksilber und mit einer Destillationsausbeute von 90% gereinigt.
Man kann gemäß dem gleichen Syntheseweg mit der Ausnahme, dass man das Methanol durch Butanol ersetzt, beispielsweise gleichfalls jeweilige Butylester von Avocadoöl erhalten (siehe Beispiel 6 mit der nachfolgend angegebenen Zusammensetzung).
3. Analyse der erhaltenen Produkte
3.1 Zusammensetzung der gereinigten Fettsäuren von Avocado
Tabelle 2
3.2 Zusammensetzung der Methylester von Avocado
Tabelle 3
Beispiel 2: Auswertung der inhibitorischen Aktivität auf die Aktivität der 5α-Reduktase durch Messung des Gehalts von ausgehend von Testosteron durch DU145-Zellen gebildetem 5-Dihydrotestosteron
1. Material und Methoden
1.1 Material
Die DU145-Prostatazellen stammen von einer Tumorlinie, die ausgehend von einem Prostatakarzinom erhalten worden ist (ATCC-Nr. HTB 81). Das MEM-Medium (Ref. 0410265), das Glutamin und das Gentamycin stammen von Gibco. Das fötale Kälberserum (FKS oder FCS) stammt von DAP und wird de komplementiert (45 min bei 56°C) eingesetzt. Die für die Kultur dienenden Plastikwaren (Schalen und Platten) stammen von Costar. Das Testosteron stammt von Sigma.
1.2 Methode
1.2.1 Herstellung der Produktreihen
Ausgehend von jedem der getesteten Produkte wird eine Stammlösung in Ethanol mit einer Konzentration von 10 mg/ml hergestellt.
Die für die Experimente eingesetzte Konzentrationsreihe ist die Folgende: 0, 5, 10, 50, 100 und 500 Mikrogramm/ml (Verdünnung ausgeführt in dem Kulturmedium).
Da das pro Vertiefung zugesetzte Volumen von Extrakt 20 Mikroliter/Vertiefung beträgt, sind die herzustellenden Lösungen 50-fach konzentriert.
Herstellung des Testosteron-Präparats
Eine Stammlösung von Testosteron mit einer Konzentration von 10 mM wird in Ethanol hergestellt. Zum Zeitpunkt von deren Verwendung wird diese Lösung in Kulturmedium 1:1000 verdünnt und es werden 10 Mikroliter pro Vertiefung zugesetzt.
1.2.2 Experiment der Inhibition der 5α-Reduktase der DU145
Die DU145-Prostatazellen werden bei 37°C, 5% CO₂ in einem Glutamin (2 mM), Gentamycin (50 Mikrogramm/ml) und 10% FKS enthaltenden MEM-Medium kultiviert. Ihr Subkulturverhältnis beträgt 1:10.
Vor dem Beginn des Experiments werden die Zellen in Platten mit 6 Vertiefungen in einer Menge von 2·10⁵ DU145 pro Vertiefung/1 ml Medium, welches lediglich 1% FKS enthält, in Kultur genommen. Die Zellen werden 3 Tage bei 37°C, 5% CO₂ gehalten. Am Tag des Experiments wird das in den Vertiefungen enthaltene Kulturmedium entfernt und durch neues Medium, welches 1% FKS enthält, ersetzt. Das Testosteron (0,1 mikromolar Endkonzentration) sowie die Extrakte mit den unterschiedlichen Konzentrationen werden zu dem Medium in einer Menge von 10 bzw. 20 Mikrolitern/Vertiefung zugesetzt. (Die „Kontroll"-Vertiefungen entsprechen Zellen, die in Gegenwart von Testosteron und eines Äquivalentes Ethanol inkubiert werden. Dies erlaubt, die Wirkung des Lösemittels auf die Kulturen abzuziehen und den Prozentsatz von in Abwesenheit von Inhibitor gebildetem DHT zu bestimmen). Die Zellen werden dann bei 37°C, 5% CO₂, inkubiert. Nach 3 h werden die Kulturüberstände gesammelt und bis zur quantitativen Bestimmung bei –80°C eingefroren.
Messung des Gehalts von gebildetem DHT
Prinzip: Extraktion der lipophilen Produkte durch Ether, Aufkonzentrierung der Proben hinsichtlich DHT durch Affinitätschromatographie und radio-immunologische quantitative Bestimmung
Vorbereitung der Proben

– Nachdem die Proben gevortext worden sind, die Proben in „SEPEX"-Fläschchen einfüllen
– Zu jedem Röhrchen 0,1 ml der radioaktiven „3H-Rdt"-Lösung (für die Auswertung der Extraktionsausbeute) zugeben. Die Fläschchen mit einem Stopfen verschließen, diese nacheinander vortexen.
– 30 min bei Umgebungstemperatur ruhen lassen. Dann jedes Fläschchen erneut vortexen.
– Zu jedem Fläschchen hinzusetzen: 5 ml Ethylether.
– Die Fläschchen mit einem Stopfen verschließen und manuell kräftig schütteln. Einige Minuten absitzen lassen.
– Die wässrigen Phasen bei –30°C während mindestens 1 h einfrieren.
– Die etherische Phase in einem entsprechenden 5 ml-Borsilikat-Versuchsröhrchen sammeln.
– Die etherische Phase mit Hilfe des Verdampfer + Wasserbad-Systems bei 37°C vollständig eindampfen.

Abtrennung des DHT

• Vorbereitung der Säulen: Vorbereitung der Säulen in 5 ml-Kulturpipetten aus Glas mit 10 cm Chromatolith A.
• Spülen der Säulen: 3 ml reines Isooctan combitips (dreimal), wobei man durch einfache Schwerkraft fließen lässt.
• Elution der trockenen etherischen Extrakte
– Jeder Trockenextrakt wird mit 1 ml reinem Isooctan aufgenommen, kräftig vortexen. Bei Umgebungstemperatur 15 min warten. Erneut vortexen.
– Wenn die 3 ml Isooctan (Spülen der Säulen) eluiert sind, die in Isooctan wieder aufgenommenen etherischen Trockenextrakte auf die Säule auftragen. Eluierenlassen.
– Jedes „Trockenextrakt"-Röhrchen mit 1 ml reinem Isooctan combitips spülen, kräftig vortexen. Bei Umgebungstemperatur 15 min warten. Erneut vortexen und auf die Säule, wie zuvor, auftragen.
– Mit 4 ml reinem Isooctan spülen.
• Gewinnung des DHT
– Vorbereitung des Elutionslösemittels (Mischung mit 6% Isooctan/Ethylacetat: 94/6 (Vol./Vol.)).
– Eluieren durch 6 ml (Pipette) dieser Mischung.
– Sammlung des DHT-Eluats in gekennzeichneten 5 ml-Borsilikat-Versuchsröhrchen.
• Behandlung des DHT-Eluats: Verdampfen des Lösemittels des Eluats mit Hilfe des Verdampfer-Wasserbad (37°C)-Systems

Quantitative RIA-Bestimmung

• Verteilungsprotokoll: Die Proben in 0,5 ml RC-Puffer, den Leerwert in 1 ml Rcet-Puffer, die Kontrollen in 0,5 ml RC-Puffer wieder aufnehmen. 15 min in den Trockenschrank bei 37°C stellen. Beim Herausnehmen aus dem Ofen die Röhrchen erneut bewegen (1 min). In gekennzeichnete 5 ml-Hämolyseröhrchen aus Glas in der folgenden Reihenfolge hineingeben:
– Puffer: Gesamtaktivität (AT): 0,7 ml RC-Puffer, nicht-spezifische Aktivität (N): 0,2 ml RC-Puffer, Reihe: nur der Punkt 0 der Reihe (bezeichnet als B0) umfasst 0,1 ml RC-Puffer,
– Eichlösung (1000 bis 7,8 pg/Röhrchen): 0,1 ml der jeweiligen Eichlösung.
– 0,1 ml in dem Puffer wieder aufgenommener Trockenextrakt
– Dann das Antiserum verteilen: 0,1 ml in alle Röhrchen außer AT und N.
– Dann die „3HD"-Lösung für die quantitative Bestimmung verteilen: 0,1 ml in alle Röhrchen.
– Vortexen und mit einem Parafilm bedecken.
– Inkubation bei 4°C während mindestens 1 h 30 (höchstens 24 h).
• Vorbereitung des (Aktiv)Kohle-Dextrans: Die Suspension von (Aktiv)Kohle-Dextran in ein Becherglas, dann in ein Eiswasserbad von 4°C während wenigstens 1 h 30 geben.
• Reinigungsausbeute an DHT
– In 6 kleine Szintillationsfläschchen (3 pro Reihe) hineingeben: 0,4 ml RC-Puffer + 0,1 ml der „3H-Rdt"-Lösung (Flasche des ersten Tags im Kühlschrank). Leerwerte: 0,5 ml rekonstituierter Trockenextrakt für den Leerwert nehmen. Proben und Kontrollen: 0,25 ml RC-Puffer + 0,25 ml Extrakt nehmen.
– 5 ml Szintillationsflüssigkeit zu allen Fläschchen zusetzen.

Abtrennung des freien DHT von jenem, das an den Antikörper gebunden ist

– Die Suspension von (Aktiv)Kohle-Dextran unter magnetischem Rühren in ein Gefäß mit Eiswasser setzen.
– In maximal 2 min 0,5 ml (Aktiv)Kohle-Dextran zu allen Röhrchen bis auf AT hinzusetzen.
– Vortexen, die Röhrchen erneut in das Eiswasser setzen. Genau 10 min warten. Bei 4°C, 3400 Upm 11 min zentrifugieren.
– 0,5 ml von jedem Überstand (einschließlich AT) in ein kleines Zählfläschchen pipettieren.
– 5 ml Szintillationsflüssigkeit zusetzen. Bewegen, 30 min bei Umgebungstemperatur äquilibrieren lassen.
– 2 min mit dem β-Zähler (Beckman, LS 6000 SE) zählen lassen.

2. Ergebnisse
2.1 Auswertung der Umwandlung des Testosterons in 5-Dihydrotestosteron durch die DU145-Zellen – Bestimmung der IC 50
Tabelle 5

(1) Erhalten, wie in Beispiel 1 beschrieben
(2) Kommerzielles Produkt (Sigma, Reinheit 99%)

3. Schlussfolgerungen
Allgemein weisen die Methylester von Fettsäuren eine inhibitorische Aktivität auf die 5α-Reduktase auf.
Unter diesen bilden die Methylester von Avocadoöl das aktivste Produkt. Sie sind 5- bis 6-mal aktiver als der Extrakt von Serenoa repens, ein bekannter Inhibitor der 5α-Reduktase.
Die Methylester von Avocado weisen eine inhibitorische Aktivität auf die 5α-Reduktase auf im Gegensatz zu deren Vorstufen, den Fettsäuren von Avocado, die eine deutlich geringere Aktivität gegenüber diesem Enzym zeigen.
Schließlich erweist sich Methyloleat, der Hauptbestandteil der Methylester von Avocado (50%), allein getestet, als deutlich weniger aktiv als die Methylester von Avocado.
Beispiel 3: In vitro-Auswertung der Aktivität der 5α-Reduktase auf die Umwandlung von Testosteron in 5α-Dihydrotestosteron in Kulturen von normalen humanen Dermis-Fibroblasten.
In den folgenden Beispielen verwendete Abkürzungen:

³H:: Tritium
DSC:: Dünnschichtchromatographie
Ci:: Curie
DMSO:: Dimethylsulfoxid
M199:: einem Standard-Kulturmedium verliehene Bezeichnung
MCF:: Kulturmedium der Fibroblasten
MEM:: dem Kulturmedium „Minimum Essential Medium" verliehene Bezeichnung
MIF:: Inkubationsmedium der Fibroblasten
Rf:: Relativer Rückhaltewert (Retentionsfaktor)
FKS:: Fötales Kälberserum
5α-DHT:: 5α-Dihydrotestosteron

Es ist beabsichtigt, die Wirkung der Produkte, wie Methyloleast (kommerzielles Produkt von Sigma, Reinheit 99%), der Methylester von Avocado und eines Extrakts von Serenoa repens, der als Referenz ausgewählt wird, auf die Aktivität der 5α-Reduktase auszuwerten. Es wurde ein in vitro-Modell von Kulturen von normalen humanen Dermis-Fibroblasten herangezogen.
1. Materialien und Methoden
1.1 Produkte für den Assay, Referenzprodukte und Reagenzien
Die Produkte für den Assay wurden von EXPANSCIENCE geliefert und wurden bei +4°C bis zum Zeitpunkt von deren Verwendung aufbewahrt.
Das radioaktive Testosteron (mit Tritium an Position 1, 2, 6 und 7 markiert, spezifische Aktivität 79 Ci/mmol) wurde von AMERSHAM geliefert_, das nicht radioaktiv markierte Testosteron wurde von SIGMA geliefert.
Die Reagenzien von Analysenqualität stammten von SIGMA, MERCK, BDH, ALDRICH oder CARLO ERBA, sofern nicht anders angegeben.
1.2 Assaysystem
Das Kulturmedium der Fibroblasten (MCF) wurde aus MEM/M199 (3:1, Vol./Vol.), zu welchem Penicillin (50 IE/ml), Streptomycin (50 μg/ml), Natriumbicarbonat (0,2%, Gew./Vol.) und FKS (10%, Vol./Vol.) hinzugesetzt worden waren, gebildet.
Das Assaysystem wurde aus normalen humanen Dermis-Fibroblasten, die in einer Monolayer kultiviert wurden, gebildet. Die Fibroblasten wurden ausgehend von einem Rückstand aus einer Abdominalplastik, die bei einer Frau von 51 Jahren vorgenommen worden war (Patientin BIOPREDIC Nr. I0013), isoliert. Die Zellen wurden in der fünften Passage verwendet, sie wurden bis zur Konfluenz der Monolayer in MCF-Medium bei 37°C in einer feuchten Atmosphäre, die 5% CO₂ enthielt, kultiviert.
1.3 Herstellung/Vorbereitung der Produkte und Inkubation mit dem Assaysystem
Das Inkubationsmedium der Fibroblasten (MIF) wurde aus MCF, zu welchem tritiummarkiertes Testosteron (1,6 × 10^-7 M, entsprechend 6,32 μCi/ml) und nicht radioaktiv markiertes Testosteron (3,84 × 10^-6 M) hinzugesetzt worden waren, gebildet.
Die Produkte für den Assay und Finasterid wurden in DMSO aufgenommen, bevor sie in dem Inkubationsmedium verdünnt wurden. Die Endkonzentration an DMSO wurde konstant gehalten und betrug 1% (Vol./Vol.) in jeder Verdünnung von Produkten für den Assay und von Referenzprodukt. Zeitskala:

⇩: Entfernung des MCF-Mediums
⇧: Vorinkubation der Produkte für den Assay und des Referenzprodukts, die in MCF-Medium hergestellt worden sind
↓: Entfernung der MCF-Medien, die die Produkte für den Assay oder das Referenzprodukt enthalten
↑: Inkubation der Produkte für den Assay und des Referenzprodukts, die in MIF-Medium hergestellt worden sind
Bestimmung der Aktivität der 5α-Reduktase

Die Fibroblasten-Kulturen wurden in Gegenwart der Produkte für den Assay oder des Referenzprodukts 2 h vor der Zugabe des Substrats, des Testosterons, vorinkubiert. Für diesen Schritt wurden die Produkte für den Assay und das Referenzprodukt in MCF-Medium hergestellt.
Nach der Vorinkubation wurden die Fibroblasten-Kulturen in Gegenwart der Produkte für den Assay oder des Referenzprodukts, die in MIF-Medium hergestellt worden sind, 22 h bei 37°C in einer feuchten Atmosphäre, die 5% CO₂ enthielt, inkubiert. Vergleichskulturen wurden in MIF-Medium in Abwesenheit von Produkten für den Assay und von Re ferenzprodukt inkubiert. „DMSO-Vergleichs"-Kulturen wurden in MIF-Medium, welches 1% (Vol./Vol.) DMSO enthielt, inkubiert.
Jede Versuchsbedingung wurde dreifach getestet.
1.4 Auswertung der Wirkungen
Nach der Inkubationsperiode wurden die Zellen in dem MIF-Medium der Wirkung von Ultraschallwellen unterworfen. Die so erhaltenen Zelllysate wurden mit Dichlormethan extrahiert. Nach dem Eindampfen wurden die trockenen Rückstände in Methanol wieder aufgenommen und auf 60F₂₅₄-Siliciumdioxidplatten (MERCK, Referenz 5554) aufgetragen.
Auf jede der Platten wurden nicht radioaktiv markierte Standardverbindungen, Testosteron, 5α-Dihydrotestosteron und Androstendion, aufgetragen.
Das Wanderungslaufmittel war eine Mischung von Dichlormethan und Ether (7:3, Vol./Vol.). Am Ende der Wanderung wurden die Siliciumdioxidplatten mit Hilfe eines Radioaktivitätsscanners der Firma BERTHOLD abgelesen.
Die nicht radioaktiv markierten Standardverbindungen wurden durch Zerstäubung von 5%-iger Schwefelsäure (Vol./Vol.) auf die Chromatographieplatten, die dann 10 min auf 100°C erwärmt wurden, nachgewiesen.
Der Vergleich der Rf (relativer Rückhaltewert oder Retentionsfaktor), die für die Standardverbindungen bestimmt wurden, mit jenen, die für die verschiedenen radioaktiven Metabolite erhalten wurden, erlaubte die Identifizierung von diesen Letzteren.
Es wurde die Metabolisierung des Testosteros zu 5α-Dihydrotestosteron unter den verschiedenen Versuchsbedingungen berechnet: die Ergebnisse (Flächeninhalte der Peaks von 5α-Dihydrotestosteron, gezählt durch den BERTHOLD-Scanner) wurden in pmol 5α-Dihydrotestosteron, gebildet pro Kulturvertiefung, ausgedrückt. Sie wurden auch als Prozentsatz der 5α-Reduktaseaktivität, die in der „DMSO-Vergleichs"-Gruppe vorhanden war, ausgedrückt.
1.5 Datenverarbeitung
Die Datengruppen (Vergleichsgruppe und behandelte Gruppen) wurden durch eine Varianzanalyse mit einem Faktor (ANOVA 1, p<0,05), gefolgt von einem DUNNETT-Test (p<0,05), verarbeitet. Die Wirkung der Produkte für den Assay und des Referenzprodukts wurden mit der „DMSO-Vergleichs"-Gruppe verglichen. Die Wirkungen der Produkte für den Assay wurden untereinander durch eine Varianzanalyse mit zwei Faktoren (ANOVA 2, p<0,05, Faktor 1 = Konzentration und Faktor 2 = Behandlung) verglichen.
2. Ergebnisse und Diskussion
In den Vergleichskulturen betrug die Metabolisierungsgeschwindigkeit des Testosterons 9,71 +/- 0,77 pmol 5α-DHT, gebildet in 22 h pro Kulturvertiefung. Diese Geschwindigkeit stimmte überein mit den bereits im Labor erhaltenen Ergebnissen.
Die Methylester von Avocado, getestet in einer Konzentration von 10 und 100 μg/ml, hemmten die Aktivität der 5α-Reduktase um 29 bzw. 55% (Tabelle 6).
Gereinigtes Methyloleat, getestet in einer Konzentration von 1, 10 und 100 μg/ml, inhibierte die Aktivität der 5α-Reduktase um 24, 38 bzw. 41% (Tabelle 7).
Der Extrakt von Serenoa repens, das Referenzprodukt, getestet in einer Konzentration von 10 und 100 μg/ml, inhibierte die Aktivität der 5α-Reduktase um 15 bzw. 35%. In einer Konzentration von 1 μg/ml hatte er keine Wirkung (Tabelle 7).
Als Schlussfolgerung inhibierten die getesteten Produkte die Aktivität der 5α-Reduktase.
Abhängig von der Aktivität der Produkte für den Assay, die in einer Konzentration von 10 und 100 μg/ml getestet wurden, wiesen die Methylester von Avocado und das gereinigte Methyloleat eine Inhibitionsaktivität der 5α-Reduktase auf, die signifikant höher war als je ne des Extrakts von Serenoa repens, der als Referenz ausgewählt worden war.
Dieser Test bestätigt folglich die inhibitorische Aktivität der Methylester von Fettsäuren und insbesondere von jenen von Avocadoöl.
3. Tabellen
3.1 – Wirkung der Methylester von Avocado auf die Aktivität der 5α-Reduktase in Kulturen von normalen humanen Dermis-Fibroblasten nach 22 h Inkubation
Tabelle 6
Die Ergebnisse sind ausgedrückt als gebildete pmol 5α-DHT/Kulturvertiefung.
Fettgedruckt: Mittelwert und Standardabweichung
Kursiv: Prozentsatz der DMSO-Gruppe
*: Mittelwert signifikant unterschiedlich von der DMSO-Gruppe (p<0,05)
3.2 – Wirkung von Methyloleat und des Extrakts von Serenoa repens auf die Aktivität der 5α-Reduktase in Kulturen von normalen humanen Dermis-Fibroblasten nach 22 h Inkubation
Tabelle 7
Die Ergebnisse sind ausgedrückt als gebildete pmol 5α-DHT/Kulturvertiefung.
Fettgedruckt: Mittelwert und Standardabweichung
*: Mittelwert signifikant unterschiedlich von der DMSO-Gruppe (p<0,05)
Beispiel 4: In vitro-Auswertung der Ester von Fettsäuren hinsichtlich der Aktivität der 5α-Reduktase betreffend die Umwandlung von Testosteron in 5α-Dihydrotestosteron in Kulturen von normalen humanen Dermis-Fibroblasten
1. Materialien und Methoden
Man setzt die gleichen Materialien und Methoden wie in dem vorangegangenen Beispiel 3 ein.
2 – Ergebnisse und Diskussion
Es wird beabsichtigt, die Wirkung der Ester von Fettsäuren auf die Aktivität der 5α-Reduktase auszuwerten. Es wurde ein in vitro-Modell von Kulturen von normalen humanen Dermis-Fibroblasten beibehalten. Die getesteten Produkte wurden in der Gruppe der Ester von Fettsäuren, die in der Länge und der Funktionalität der Fettkette und in der Natur der Alkoxygruppe variierten, ausgewählt. Diese Ester sind die folgenden: Methyloleat, Butyloleat, Oleyloleat und Methylricinoleat.
Methyloleat, das in einer Konzentration von 1, 10 und 100 μg/ml getestet wurde, inhibierte die Aktivität der 5α-Reduktase signifikant (p<0,05) um 29%, 42% bzw. 26%.
Oleyloleat, das in einer Konzentration von 1, 10 und 100 μg/ml getestet wurde, inhibierte die Aktivität der 5α-Reduktase signifikant (p<0,05) um 28%, 45% bzw. 35%. Bei einer Konzentration von 10 und 100 μg litten die Fibroblasten-Zellen, was durch die morphologische Untersuchung der Zellen festgestellt wurde.
Butyloleat, das in einer Konzentration von 1, 10 und 100 μg/ml getestet wurde, inhibierte die Aktivität der 5α-Reduktase signifikant (p<0,05) um 21%, 45% bzw. 49%.
Als Schlussfolgerung war es unter den beibehaltenen Versuchsbedingungen abhängig von der Aktivität der Produkte für den Assay, die in einer Konzentration von 1, 10 und 100 μg/ml getestet wurden, möglich, für die Methyl-, Butyl-, Oleyloleate und das Methylricinoleat eine signifikante Aktivität einer Inhibition der 5α-Reduktase nachzuweisen.
3 – Tabelle von detaillierten Ergebnissen: Wirkung der Fettsäureester auf die Aktivität der 5α-Reduktase in Kulturen von normalen humanen Dermis-Fibroblasten nach 29 h Inkubation
Tabelle 8

Die Ergebnisse sind ausgedrückt als gebildete pmol 5α-DHT/Kulturvertiefung.
Fettgedruckt: Mittelwert und Standardabweichung
Kursiv: Prozentsatz der „DMSO 0,1% (Vol./Vol.)"-Gruppe
* Mittelwert signifikant unterschiedlich von der „DMSO 0,1% (Vol./Vol.)"-Gruppe Beispiel 6: Zusammensetzung einer Creme für Hyperseborrhoe

	Gew.-%
Butylester von Avocadoöl	15,0
Stearylalkohol	3,0
Steareth-21	3,0
Steareth-2	2,0
Wasser	ausreichende Menge auf 100
Carbopol	0,4
Natriumhydroxid	0,3
Butyliertes Hydroxytoluol (BHT)	0,4
Parfum	0,1
	100%

Claims

Verwendung von wenigstens einem Fettester, ausgewählt aus den Methyl-, Butyl-, Oleyloleaten; Methylricinoleat; den Alkylestern von Avocadoöl oder den Mischungen von diesen Letzteren, für die Herstellung einer Zusammensetzung, die für die Behandlung von Prostatavergrößerung, Prostataadenom, Akne, Hyperseborrhoe, Alopezie, Hirsutismus bestimmt ist.
Verwendung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass der Fettester durch Umesterung von Triglyceriden von Avocadoöl erhalten wird.
Verwendung nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, dass der Fettester aus Methylestern von Avocadoöl besteht.
Verwendung nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, dass der Fettester aus Butylestern von Avocadoöl besteht.
Verwendung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass der Fettester Butyloleat ist.
Verwendung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass der Fettester Methylricinoleat ist.
Verwendung nach einem der vorangegangenen Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass der Fettester entsprechend einem Anteil zwischen 0,001 und 100 Gew.-% bezogen auf das Gesamtgewicht der Zusammensetzung eingesetzt wird.
Verwendung nach einem der vorangegangenen Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass die hergestellte Zusammensetzung einen aus pharmazeutischer, dermatologischer oder kosmetischer Sicht annehmbaren Träger umfasst.
Verwendung nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, dass der Träger für eine Verabreichung auf topischem äußerlichem Wege oder auf rektalem Wege angepasst ist.
Verfahren zur kosmetischen Behandlung von fettiger Haut, dadurch gekennzeichnet, dass man auf die Haut eine kosmetische Zusammensetzung, die wenigstens einen Fettester, wie in einem der Ansprüche 1 bis 6 definiert, enthält, aufträgt.
Verfahren zur kosmetischen Behandlung von Haarausfall, dadurch gekennzeichnet, dass man auf die behaarte Haut eine kosmetische Zusammensetzung, die wenigstens einen Fettester, wie in einem der Ansprüche 1 bis 6 definiert, enthält, aufträgt.
Verfahren zur kosmetischen Behandlung von übermäßiger Behaarung, dadurch gekennzeichnet, dass man auf die Zonen der Haut, die übermäßige Behaarung aufweisen, eine kosmetische Zusammensetzung, die wenigstens einen Fettester, wie in einem der Ansprüche 1 bis 6 definiert, enthält, aufträgt.
Verfahren zur kosmetischen Behandlung nach einem der Ansprüche 10 bis 12, dadurch gekennzeichnet, dass der Fettester in der Zusammensetzung entsprechend einem Anteil zwischen 0,001 und 100 Gew.-% bezogen auf das Gesamtgewicht der Zusammensetzung vorhanden ist.
Verfahren nach einem der Ansprüche 10 bis 13, dadurch gekennzeichnet, dass die kosmetische Zusammensetzung außerdem wenigstens einen aus kosmetischer Sicht annehmbaren Träger enthält.