KR20010080330A

KR20010080330A - 루티노사이드의 효소적 분할 방법

Info

Publication number: KR20010080330A
Application number: KR1020017005194A
Authority: KR
Inventors: 부흐홀츠헤르비크; 코페토마스; 슐레한미카엘
Original assignee: 플레믹 크리스티안; 메르크 파텐트 게엠베하
Priority date: 1998-10-30
Filing date: 1999-10-13
Publication date: 2001-08-22
Also published as: US6420142B1; WO2000026400A1; BR9914812B1; BR9914812A; AU6338799A; CA2348933A1; EP1124981A1; DE59911291D1; EP1124981B1; ATE284971T1; JP2002528133A; DE19850029A1; CN1325454A

Abstract

본 발명은 루티노사이드를 효소적으로 분할하여 람노스 및/또는 상응하는 글루코피라노사이드를 수득하는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 방법은 물, 및 하나 또는 몇몇 유기 용매로 구성된 용매 혼합물의 존재하에 수행된다.

Description

루티노사이드의 효소적 분할 방법{METHOD FOR ENZYMATIC SPLITTING OF RUTINOSIDES}

본원에서 루티노사이드는 하기 화학식 I의 라디칼이 글리코사이드 결합으로 결합되어 있는 비당질(sugar-free) 구성성분을 포함하는 화합물이다:

예를 들어, 루티노사이드는 화학식 I로 나타낸 비스글리코사이드 단위를 갖는 플라보노이드이다. 이 루티노사이드로부터 본 발명의 방법에 의해 람노스 및/또는 상응하는 글루코피라노사이드가 생성된다. 글루코피라노사이드는 루티노사이드로부터 유래한 화합물로서, 화학식 I의 라디칼 대신 하기 화학식 Ia의 라디칼이 비당질 구성성분에 결합되어 있다:

예를 들어, 루틴으로부터는 본 발명의 방법에 의해 람노스 및 이소쿼세틴이 둘다 수득될 수 있다.

람노스는 자연에서 광범위하게 존재하지만 일반적으로 매우 소량으로 존재하는 단당류이다. 람노스의 중요한 공급원은, 예를 들어 루틴과 같은 천연 플라보노이드의 글리코사이드 라디칼로서 이로부터 글리코사이드 절단에 의해 람노스를 수득할 수 있다. 람노스는, 예를 들어 푸란올과 같은 합성 방향족 물질을 제조하기 위한 출발 물질로서 중요한 역할을 한다.

이소쿼세틴은 하기 화학식 II의 모노글리코사이드화된 플라보노이드이다:

식물에서 폭넓게 존재하는 착색제인 플라보노이드(라틴어 플라부스(flavus)는 황색을 의미한다)는, 예를 들어 플라본(2-페닐-4H-1-벤조피란-4-온) 모 구조를 공통적으로 갖는 플라본의 글리코사이드이다.

플라보노이드의 비당질 구성성분은 소위 아글리콘으로 지칭된다. 이소쿼세틴은, 예를 들어 5개의 하이드록실 기가 존재하는 면에서 플라본과 상이한 아글리콘 쿼세틴(2-(3,4-디하이드록시페닐)-3,5,7-트리하이드록시-4H-1-벤조피란-4-온)의 글리코사이드이다. 이소쿼세틴에는 탄수화물 라디칼인 글루코스가 쿼세틴의 3번 위치의 하이드록실 기에 결합되어 있다. 이소쿼세틴은, 예를 들어 쿼세틴 3-O-β-D-글루코피라노사이드 또는 2-(3,4-디하이드록시페닐)-3-(β-D-글루코피라노실옥시)-5,7-디하이드록시-4H-1-벤조피란-4-온이다. 그러나, 예를 들어 히르수트린(hirsutrin)이란 명칭으로도 공지되어 있다.

플라보노이드 및 플라보노이드 혼합물은, 예를 들어 식품 산업 및 화장품 산업에서 사용되며, 그 중요성이 날로 증가되고 있는 추세이다. 특히, 이소쿼세틴과 같은 모노글리코사이드화된 플라보노이드는 인체내 흡수성이 양호하다는 특징을 갖는다.

비스글리코사이드 단위를 갖는 천연 플라보노이드의 한 예는 하기 화학식 III의 루틴이다:

이소쿼세틴과 마찬가지로 루틴도 탄수화물 라디칼인 루티노스가 쿼세틴의 3번 위치의 하이드록시 기에 결합되어 있는 아글리콘 쿼세틴의 글리코사이드이다. 루틴중의 탄수화물 라디칼은 1번 및 6번 위치에서 결합되어 있는 글루코스 단위, 및 말단에 결합된 람노스 또는 6-데옥시만노스 단위로 구성된다. 즉, 루틴은 쿼세틴 3-O-β-D-루티노사이드 또는 2-(3,4-디하이드록시페닐)-3-{[6-O-(6-데옥시-α-만노피라노실)-β-D-글루코피라노실]옥시}-5,7-디하이드록시-4H-1-벤조피란-4-온이다. 그러나, 예를 들어 소포린(sophorin), 비루탄(birutan), 루타비온(rutabion),타루틴(tarutin), 파이토멜린(phytomelin), 멜린 또는 루토사이드(rutoside)란 명칭으도로 공지되어 있다.

3분자의 결정수를 갖는 루틴은 담황색 내지 녹색을 띠는 니들(needle)을 형성한다. 무수 루틴은 약산성이고, 125℃에서 갈색으로 되며, 214℃ 내지 215℃에서 분해된다. 여러 식물 종, 예를 들어 귤나무 종, 황색 팬지 종, 개나리 종, 아카시아 종, 다양한 가지 종 및 담배 종, 케이퍼(caper), 라임나무의 꽃, 세이트 존의 나무(St. John's wort), 차나무 등에서 종종 비타민 C의 결합체로서 존재하는 루틴은 1842년에 흔히 볼 수 있는 운향풀(루타 그라베올렌스(Ruta graveolens))로부터 단리되었다. 루틴은 또한 13 내지 27%의 루틴을 함유하는, 메밀 및 동아시아 회화나무 웨이-파(Wei-Fa)(콩과에 속하는 소포라 야포니카(Sophora japonica))의 잎으로부터도 수득할 수 있다.

앞에서 살펴본 바와 같은 이유로, 천연 원료물질, 예를 들어 비스글리코사이드 단위를 갖는 플라보노이드로부터 람노스 및 모노글리코사이드화된 플라보노이드를 모두 제조하는 방법이 바람직할 수 있다. 이와 관련하여, 예를 들면, 루티노사이드를 람노스 및 상응하는 글루코피라노사이드로 절단시키는 방법이 주목되어 왔다.

람노스를 효소 촉매적으로 제조하는 방법들이 문헌에 개시되어 있다. 예를 들어, 유럽 특허 제 EP 0 317 033 호에는 말단 위치에 람노스가 결합되어 있는 글리코사이드에서 람노사이드 결합을 효소적으로 가수분해하는, L-람노스의 제조 방법이 개시되어 있다. 그러나, 탄수화물 라디칼의 비스글리코사이드 구조를 갖는글리코사이드를 수성 매질중에서 절단시키는 상기 유형의 제조 방법은 일반적으로 낮은 선택성으로 진행된다. 예를 들어, 루틴에 존재하는 탄수화물 라디칼의 비스글리코사이드 구조로 인해, 상기 방법에서는 2가지 단당류인 글루코스와 람노스의 혼합물이 통상적으로 얻어진다. 더욱이, 아글리콘 쿼세틴 및 다른 바람직하지 않은 부산물이 통상적으로 높은 비율로 생성된다.

또한, 루틴의 효소 촉매적 절단 방법은, 예를 들어 일본 특허 제 JP 01213293 호에 기재되어 있다. 그러나, 이러한 유형의 반응은 수성 매질중에서 수행되기 때문에 마찬가지로 일반적으로 낮은 선택성으로 진행된다.

본 발명은 물 및 하나 이상의 유기 용매로 구성된 용매 혼합물의 존재하에 루티노사이드를 효소적으로 절단시켜 람노스 및/또는 상응하는 글루코피라노사이드를 수득하는 방법에 관한 것이다.

따라서, 본 발명의 목적은, 공지되어 있는 방법들의 단점들이 없거나 또는 적어도 이러한 단점들이 적으며, 특히 가능한 선택적인 방식으로 람노스 및 상응하는 글루코피라노사이드를 제조함으로써 이들 생성물을 고수율로 제조할 수 있는, 루티노사이드를 람노스 및/또는 글루코피라노사이드로 효소적으로 절단시키는 방법을 개발하는 것이다.

놀랍게도, 물과 하나 이상의 유기 용매로 구성된 용매 혼합물의 존재하에서 루티노사이드를 람노스 및/또는 상응하는 글루코피라노사이드로 효소적으로 절단시키는 경우, 상기 목적이 달성됨이 밝혀졌다.

본 발명에 따른 방법은 특히 높은 선택성으로 루티노사이드가 람노스 및 상응하는 글루코피라노사이드로 절단된다는 점을 특징으로 한다. 람노스 및 글루코피라노사이드는 바람직하게는 본 발명에 따른 방법으로 제조된 후에 적절한 후처리에 의해 수득된다. 그러나, 본 발명에 따른 방법으로 제조된 후에 단지 람노스만을 또는 단지 글루코피라노사이드만을 적절한 후처리에 의해 수득할 수도 있다.

본 발명은 루티노사이드를 효소적으로 절단시켜 람노스 및/또는 상응하는 글루코피라노사이드를 수득하는 유리한 방법에 관한 것이다. 본 발명의 방법에 따르면, 루티노사이드는 물 및 하나 이상의 유기 용매로 구성된 용매 혼합물중에서 촉매량의 효소와 접촉된다. 바람직하게는, 교반시키는 것과 같이 격렬하게 혼합시킴으로써 반응시킨다.

상기 반응은 바람직하게는 질소 대기하에 수행된다.

본 발명에 따른 방법에 적절한 루티노사이드는, 예를 들어 비당질 구성성분 또는 아글리콘으로서 2-페닐-4H-1-벤조피란-4-온 모 구조를 포함하고, 그의 3번 위치에 화학식 I의 라디칼을 가지며 3번 위치 이외의 페닐 기에서 또한 -OH 또는 -O-(CH₂)_n-H(이때, n은 1 내지 8이다)로 일치환 내지 다치환될 수 있는 루티노사이드이다.

n은 바람직하게는 1이다.

2-페닐-4H-1-벤조피란-4-온 모 구조에 -OH 및/또는 -O-(CH₂)_n-H가 치환되는 위치는 바람직하게는 5번, 7번, 3'번 및/또는 4'번 위치이다.

특히 바람직한 루티노사이드는 하기 화학식 IV에 상응한다:

상기 식에서,

R은 H(캠페롤(kaempferol) 루티노사이드), OH(루틴) 또는 OCH₃(이소람네틴 (isorhamnetin) 루티노사이드)이다.

본 발명에 따른 방법에 의해 캠페롤 루티노사이드로부터 람노스와 캠페롤 글리코사이드가 수득되고, 루틴으로부터는 람노스와 이소쿼세틴이 수득되며, 이소람네틴 루티노사이드로부터는 람노스와 이소람네틴 글리코사이드가 수득된다. 루티노사이드로서 루틴이 특히 바람직하게 사용된다.

본 발명은 또한 식품 및 화장품 산업에서 캠페롤 글리코사이드, 이소쿼세틴 및/또는 이소람네틴 글리코사이드의 용도에 관한 것이다.

본 발명에 따른 방법에서는 고도로 순수한 출발 물질이 필요하지 않다. 예를 들어, 루티노사이드의 혼합물도 본 발명의 방법에 사용할 수 있다. 예를 들어,다른 플라보노이드로 오염된 출발 물질인 경우에도 상기 반응을 수행할 수 있다. 또한, 루틴의 제조 방법으로부터 수득된 모액 잔류물도 본 발명의 방법에 사용할 수 있다.

본 발명에 따른 방법에 적절한 효소는 하이드롤라제(hydrolase)이다. 페니실륨 데쿰벤스(Penicillium decumbens) 균주로부터 수득되는 하이드롤라제가 바람직하게 사용되며, 특히 나린지나제(naringinase) 및 헤스퍼리디나제 (hesperidinase)가 바람직하다. 나린지나제 효소가 가장 바람직하다.

본 발명에 따른 방법에서 출발 물질 및 효소는 상업적으로 구입가능하거나 또는 당해 분야의 숙련자에게 널리 공지된 방법으로 제조하거나 수득될 수 있다.

본 발명에 따른 방법에 적절한 반응 온도는 15℃ 내지 80℃의 온도이다. 본 발명에 따른 방법은 바람직하게는 30℃ 내지 50℃의 반응 온도, 특히 35℃ 내지 45℃의 반응 온도에서 행해진다.

반응 온도가 너무 낮으면, 반응이 부적절하게 느린 반응 속도로 진행된다. 이와는 반대로, 반응 온도가 너무 높으면, 단백질인 효소가 변성되어 불활성화된다.

본 발명에 따른 방법에 적절한 pH는 pH 3 내지 8이다. 본 발명에 따른 방법은 바람직하게는 4.5 내지 7, 특히 4.8 내지 6.8의 pH에서 수행된다. 그러나, 바람직한 pH는 사용된 효소에 따라 일정한 한도내에서 다양할 수 있다. 예를 들어, 나린지나제 효소를 사용하는 경우, 6.4 내지 6.8의 pH가 매우 바람직하다.

본 발명의 방법에서 pH는 바람직하게는 완충액 시스템의 보조하에 pH를 조정하는 방식으로 조정된다. 대체적으로, 상기 pH로 조정하는데 적합한 모든 통상적인 완충액 시스템을 사용할 수 있다. 그러나, 바람직하게는 수성 시트레이트 완충액이 사용된다.

바람직하게는, 바람직한 온도 및 pH 범위가 함께 사용된다. 즉, 상기 반응은 바람직하게는 15℃ 내지 80℃의 반응 온도 및 3 내지 8의 pH, 더욱 바람직하게는 30℃ 내지 50℃의 반응 온도 및 4.5 내지 7의 pH, 특히 바람직하게는 35℃ 내지 45℃의 반응 온도 및 4.8 내지 6.8의 pH에서 행해진다.

물에 추가하여 존재하는 유기 용매는 물과 혼화될 수 있는 유기 용매 및 물과 혼화될 수 없는 유기 용매 둘다 포함한다.

본 발명의 방법에 적합한 유기 용매는 니트릴(예를 들어, 아세토니트릴), 아미드(예를 들어, 디메틸포름아미드), 에스테르(예를 들어, 아세트산 에스테르, 특히 메틸 아세테이트 또는 에틸 아세테이트), 알콜(예를 들어, 메탄올 또는 에탄올), 에테르(예를 들어, 테트라하이드로푸란 또는 메틸 3급-부틸 에테르) 및 탄화수소(예를 들어, 톨루엔)이다. 바람직하게는, 본 발명에 따른 방법은 하나 이상의 유기 용매, 예를 들어 아세트산 에스테르, 메탄올, 에탄올, 메틸 3급-부틸 에테르 또는 톨루엔의 존재하에 행해진다. 특히 바람직하게는, 본 발명에 따른 방법은 하나 이상의 아세트산 에스테르, 특히 메틸 아세테이트의 존재하에 행해진다.

본 발명에 따른 방법에 적합한 물:유기 용매의 부피비는 1:99 내지 99:1이다. 바람직하게는, 본 발명에 따른 방법은 20:80 내지 80:20, 특히 50:50 내지 70:30의 물:유기 용매의 부피비로 수행된다.

본 발명의 방법에 적합한 루티노사이드:(물+유기 용매)의 중량비는 0.001:99.999 내지 40:60의 비이다. 바람직하게는 본 발명에 따른 방법은 0.005:99.995 내지 20:80, 특히 0.5:99.5 내지 10:90의 루티노사이드:(물+유기 용매)의 중량비로 수행된다.

본 발명의 방법에 적합한 효소:루티노사이드의 중량비는 0.005:99.995 내지 50:50의 비이다. 바람직하게는, 본 발명에 따른 방법은 0.5:99.5 내지 30:70, 특히 2:98 내지 20:80의 효소:루티노사이드의 중량비로 수행된다.

반응의 경과 또는 종료 여부는, 예를 들어 박막 크로마토그래피(TLC)를 사용하여 확인할 수 있다.

반응이 완료된 후, 반응 혼합물은 주로 물, 유기 용매, 완충액(예를 들어, 시트르산나트륨), 효소, 소량의 미반응 루티노사이드, 람노스, 글루코피라노사이드, 소량의 루티노사이드의 아글리콘, 및 적절하게는 소량의 글루코스로 구성된다. 바람직한 반응 생성물인 람노스 및 글루코피라노사이드는 통상적인 방법에 따라 단리된다. 본 발명에서 "통상적인 후처리"란 이하에 개시하는 방법을 의미하는 것으로 이해된다.

바람직하게, 유기 용매가 감압하에 유거된다. 이로써 결정화되는 글루코피라노사이드는, 예를 들어 소량의 루티노사이드 및 그의 아글리콘을 포함할 수 있으며, 예를 들어 흡입 여과하거나 감압하에 여과함으로써 또는 침전된 결정을 원심분리시킴으로써 잔존 반응 혼합물로부터 완전히 분리된다. 이어서 이들 고형물은 바람직하게는 물로 세척된 후, 건조된다. 순수한 루티노사이드를 사용하여 수득된글루코피라노사이드의 순도는 통상적으로 94%보다 크다. 더욱 정제하기 위해서는, 예를 들어 물, 또는 톨루엔 및 메탄올로 구성되거나 물 및 메틸 아세테이트로 구성된 용매 혼합물과 같은 적절한 용매로부터 재결정화시킬 수 있다.

물, 완충액, 효소, 소량의 루티노사이드, 소량의 그의 아글리콘, 및 적절하게는 글루코스, 및 원하는 반응 생성물인 람노스가 여액에 존재한다.

여액중에 남아있는 람노스는 공지된 방법들, 예를 들어 한외여과하거나, 여액을 양이온 및/또는 음이온 교환기를 통과시키거나, 결정화시키거나 또는 여과와 같이 기계적으로 분리시킴으로써 단리시킬 수 있다. 여액에 존재할 수 있는 글루코스는 또한, 예를 들어 효모를 발효시킴으로써 제거할 수 있다.

상기 후처리 단계들에서 수득된 물질들, 예를 들어 유기 용매, 효소 또는 완충액(예를 들어, 시트르산나트륨)은 재순환시켜 이후의 반응에 사용할 수 있다.

반응 생성물의 분석은, 예를 들어 표준 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC) 장비 및 C₁₈알킬로 피복된 역상 물질을 함유하는 칼럼을 사용하여 HPLC에 의해 수행할 수 있다.

하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위함이다. 그러나, 하기 실시예는 어떠한 경우에도 본 발명을 제한하는 것으로 간주되지 않는다.

사용된 물질에 대한 공급처는 다음과 같다:

루틴: 메르크(Merck) KGaA의 물품 번호 500017,

나린지나제: 시그마(Sigma)의 물품 번호 N-1385,

헤스퍼리디나제: 아마노(Amano)의 물품 번호 HPV 12519,

시트르산 일수화물: 메르크 KGaA의 물품 번호 100243,

수산화나트륨 용액: 메르크 KGaA의 물품 번호 105587,

메틸 아세테이트: 메르크 KGaA의 물품 번호 809711.

반응 경과는 박막 크로마토그래피(TLC)를 사용하여 확인하였고, 반응 생성물은 HPLC를 사용하여 분석하였다.

TLC 조건:

예비피복된 TLC 판: 실리카겔 60(메르크 KGaA의 물품 번호 105719),

용리액: 50:30:10:10:5의 부피비의 에틸 아세테이트:에틸 메틸 케톤:포름산:물:1-부탄올의 혼합물,

분무 시약: 요오드/황산,

검출: 자외선(UV)(254nm),

R_f수치: 루틴: 0.38, 이소쿼세틴: 0.61, 쿼세틴: 0.96.

표준 HPLC 장치를 사용한 HPLC 조건

카트리지: 리크로카트(LiChroCart, 등록상표) 2504/4,

칼럼: 리크로소브(LiChroSorb, 등록상표) RP18(C₁₈알킬로 피복되고 5㎛의 입경을 갖는 역상 물질(메르크 KGaA의 물품 번호 151355)),

용리액: 20:80의 부피비의 아세토니트릴 및 물의 혼합물(pH 2; NaH₂PO₄·H₂O/H₃PO₄로 완충됨),

유속: 1㎖/분,

파장: 260nm,

온도: 30℃,

샘플 부피: 10㎕,

샘플 제조: 3㎖의 메탄올에 5mg의 샘플을 용해시키고, 용리액으로 10㎖까지 첨가하여 제조함,

반응 시간: 루틴: 7 내지 7.5분, 이소쿼세틴: 8.5 내지 9분, 쿼세틴: 40 내지 43분.

실시예 1

3.15g의 시트르산 일수화물을 150㎖의 완전 탈이온수에 용해시키고, pH를 32% 수산화나트륨 수용액 10g을 사용하여 6.6으로 조정하였다. 이어서 150㎖의 메틸 아세테이트를 첨가하고, 질소 대기하에 교반하면서(1분당 200회전수) 5.0g의 루틴 및 0.5g의 나린지나제를 도입하였다. 그다음 반응 혼합물을 40℃의 반응 온도에서 24시간 동안 교반하였다. 통상적으로 후처리한 후에, 람노스 및 3.82g의 황색 결정이 수득되었다. 황색 결정을 HPLC로 분석한 결과, 하기 조성임을 알 수 있었다:

루틴: 1.2 면적%, 이소쿼세틴: 94.4 면적%, 쿼세틴: 2.6 면적%.

실시예 2

0.32g의 시트르산 일수화물을 150㎖의 완전 탈이온수에 용해시키고, 150㎖의 메틸 아세테이트를 첨가하였다. 이어서 이 유화액의 pH를 1N 수산화나트륨 수용액 2.5g을 사용하여 5.0으로 조정하고, 5.0g의 루틴 및 0.125g의 헤스퍼리디나제를 질소 대기하에 도입하였다. 그다음 반응 혼합물을 40℃의 반응 온도에서 21시간 동안 교반하였다(1분당 250회전수). 통상적으로 후처리한 후에, 람노스 및 3.41g의 황색 결정이 수득되었다. 황색 결정을 HPLC로 분석한 결과, 하기 조성임을 알 수 있었다:

루틴: 0.1 면적%, 이소쿼세틴: 98.0 면적%, 쿼세틴: 0.2 면적%.

실시예 3

6.37g의 시트르산 일수화물을 300㎖의 완전 탈이온수에 용해시키고, pH를 32% 수산화나트륨 수용액 11.33g을 사용하여 6.6으로 조정하였다. 이어서 300㎖의 메틸 아세테이트를 첨가하고, 53.5 면적%의 루틴, 39.8 면적%의 이소쿼세틴 및 0.4 면적%의 쿼세틴으로 구성된 출발 물질 혼합물(루틴 제조 공정으로부터 수득한 모액 잔류물) 20.11g, 및 1.11g의 나린지나제를 질소 대기하에 도입하였다. 그다음 반응혼합물을 40℃의 반응 온도에서 46시간 동안 교반하였다(1분당 200회전수). 통상적으로 후처리한 후에, 람노스 및 14.18g의 황색 결정이 수득되었다. 황색 결정을 HPLC로 분석한 결과, 하기 조성임을 알 수 있었다:

루틴: 0.5 면적%, 이소쿼세틴: 92.0 면적%, 쿼세틴: 4.7 면적%.

비교 실시예

12.6g의 시트르산 일수화물을 600㎖의 완전 탈이온수에 용해시키고, pH를 32% 수산화나트륨 수용액 40g을 사용하여 6.6으로 조정하였다. 이어서 10.0g의 루틴 및 1.0g의 나린지나제를 질소 대기하에 교반하면서(1분당 200회전수) 도입하였다. 약 24시간 동안 36℃에서 교반한 후에, 이소쿼세틴 및 루틴이 약 2:1의 비로 반응 혼합물에 존재하였다. 이 반응 혼합물을 36℃에서 추가로 7시간 동안 그리고 40℃에서 22시간 동안 더 교반한 후, 15℃로 냉각시켰다. 통상적으로 후처리한 후에, 람노스 및 7.25g의 황색 결정이 수득되었다. 황색 결정을 HPLC로 분석한 결과, 하기 조성임을 알 수 있었다:

루틴: 12.1 면적%, 이소쿼세틴: 76.6 면적%, 쿼세틴: 10.5 면적%.

상기 비교 실시예는, 용매로서 단지 물만을 사용하였을 때, 물 및 유기 용매로 구성된 용매 혼합물을 사용하였을 때보다 더욱 적은 양의 고형물(황색 결정)이 수득될 뿐 아니라 더 많은 출발 물질 및 부산물이 존재함을 나타낸다.

Claims

물 및 하나 이상의 유기 용매로 구성된 용매 혼합물의 존재하에 반응시킴을 특징으로 하는, 루티노사이드를 효소적으로 절단시켜 람노스 및/또는 상응하는 글루코피라노사이드를 제조하는 방법.
제 1 항에 있어서,

15℃ 내지 80℃의 반응 온도에서 수행됨을 특징으로 하는 방법.
제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,

pH 3 내지 8에서 수행됨을 특징으로 하는 방법.
제 1 항 내지 제 3 항중 어느 한 항에 있어서,

완충액 시스템의 보조하에 pH를 조정함을 특징으로 하는 방법.
제 4 항에 있어서,

수성 시트레이트 완충액의 보조하에 pH를 조정함을 특징으로 하는 방법.
제 1 항 내지 제 5 항중 어느 한 항에 있어서,

아세트산 에스테르, 메탄올, 에탄올, 메틸 3급-부틸 에테르 및 톨루엔을 포함하는하나 이상의 유기 용매의 존재하에 수행됨을 특징으로 하는 방법.
제 6 항에 있어서,

하나 이상의 아세트산 에스테르의 존재하에 수행됨을 특징으로 하는 방법.
제 7 항에 있어서,

메틸 아세테이트의 존재하에 수행됨을 특징으로 하는 방법.
식품 및 화장품 산업에서의 캠페롤(kaempferol) 글리코사이드, 이소쿼세틴 및/또는 이소람네틴(isorhamnetin) 글리코사이드의 용도.