KR100727743B1

KR100727743B1 - 캄페롤을 유효성분으로 함유하는 피부 보습용, 피부 장벽기능 강화용, 및 피부 각질형성세포 분화 유도용 피부 외용 화장료 조성물

Info

Publication number: KR100727743B1
Application number: KR1020050076551A
Authority: KR
Inventors: 박준성; 노호식; 김덕희; 장이섭
Original assignee: (주)아모레퍼시픽
Priority date: 2005-08-20
Filing date: 2005-08-20
Publication date: 2007-06-13
Also published as: KR20070021853A

Abstract

본 발명은 캄페롤을 유효성분으로 함유하는 피부 보습용, 피부 장벽 기능 강화용 및 피부 각질형성세포 분화 유도용 피부 외용제 조성물에 관한 것으로, 상기 캄페롤은 캄페롤 배당체로부터 산, 염기, 효소, 또는 상기 효소를 생산하는 미생물을 이용한 분해반응을 통해 캄페롤을 분리시켜 얻어진 것으로, 상기 캄페롤 배당체는 식물, 특히 녹차 유래인 것으로, 캄페롤 함량이 90%이상인 것을 특징으로 한다.

본 발명에 의한 상기 캄페롤은 피부 각질형성세포의 분화 촉진, 손상된 피부 장벽기능의 회복 및 피부 보습력을 증가시키는 효과를 나타낸다. 따라서, 상기 캄페롤을 함유하는 피부 외용제 조성물은 피부 보습용, 피부 장벽기능 강화용 및 피부 각질형성세포 분화 유도용으로, 표피 분화가 불완전함으로서 생기는 피부건조증, 아토피 피부염, 접촉성 피부염 또는 건선 등을 예방 또는 개선하며, 피부 보습용, 피부 장벽기능 강화용 및 피부 각질형성세포 분화 유도용 화장료 조성물 또는 약학 조성물로 유용하게 사용할 수 있다.

캄페롤, 피부, 보습, 외용제, 배당체, 산, 염기, 효소, 미생물, 식물, 녹차, 장벽기능, 각질형성세포, 아토피, 화장료, 약학, 조성물.

Description

캄페롤을 유효성분으로 함유하는 피부 보습용, 피부 장벽기능 강화용, 및 피부 각질형성세포 분화 유도용 피부 외용 화장료 조성물{Cosmetic omposition for skin external application for skin moisturing effect, for reinforcement of skin barrier function, or for induction of skin keratinocytes differentiation comprising kaempferol}

도 1은 본 발명에 의한 캄페롤이 손상된 피부 장벽의 회복에 미치는 효과를 나타내는 그래프이다.

도 2는 본 발명에 의한 캄페롤이 피부 수분량에 미치는 효과를 나타내는 그래프이다.

본 발명은 캄페롤을 유효성분으로 함유하는 피부 보습용, 피부 장벽기능 강화용, 및 피부 각질형성세포 분화 유도용 피부 외용제 조성물에 관한 것으로, 상기 캄페롤은 각질형성세포의 분화 촉진, 손상된 피부 장벽의 회복 및 피부 보습력을 증가시키는 효과를 나타내므로, 상기 캄페롤을 함유하여 표피 분화가 불완전함으로서 발생하는 피부 건조증상, 아토피 증상, 및 접촉성 피부염 등을 예방 또는 개선하는 효과가 있는 피부 보습용 , 피부 장벽기능 강화용, 및 피부 각질형성세포 분화 유도용 피부 외용제 조성물에 관한 것이다.

피부는 외부로부터 개체를 보호하는 장벽기능이라는 매우 중요한 역할을 수행한다. 장벽기능은 외부로부터의 다양한 자극(화학물질, 대기오염물질, 건조한 환경, 자외선 등)에 대한 방어와 피부를 통한 체내 수분의 과도한 발산을 막는 보호 기능이며, 이러한 보호기능은 각질형성세포로 구성된 각질층이 정상적으로 형성되어 있을 경우에만 그 기능을 유지할 수 있다.

표피 중에서도 가장 바깥쪽에 존재하는 각질층(Stratum corneum, horney layer)은 각질형성세포로부터 형성되며, 분화가 완결된 각질세포와 그를 둘러싼 지질층으로 구성되어 있다.(Marcelo C. L. et al, J. Invest. Dermatol., 80, pp37-44, 1983)

각질세포는 표피 최하층에서 지속적으로 증식(proliferation)하는 기저세포(basal cell)가 단계적으로 형태 및 기능상의 변화를 거치며, 피부 표면까지 상승한 특징적인 세포이며, 일정 기간이 경과하면 오래된 각질세포는 피부에서 탈락되고 새로운 각질세포가 그 기능을 대신하게 되는데, 이러한 반복적인 일련의 변화 과정을 "표피 세포의 분화" 또는 "각화(keratinization)"라고 부른다.

또한, 각화과정 중에 각질형성세포는 천연보습인자(Natural moisturizing factor; NMF) 와 세포간 지방질(세라마이드, 콜레스테롤, 지방산)을 생성하면서 각 질층을 형성하여 각질층이 견고함과 유연성을 가지게 하여 피부 장벽(skin barrier)으로서의 기능을 보유하게 한다.

이러한 각질층은 과도한 세안이나, 목욕 등의 생활 습관적 요소나, 건조한 대기 오염 물질 등의 환경적인 요인, 그리고 아토피성 피부나 노인성 피부 같은 내인성 질환 등으로 인해 쉽게 그 기능이 손실될 수 있으며, 실제로 현대에 들어서 더욱 늘어난 다양한 요인들로 인해 최근에는 건조피부증상 및 이로 인한 제반 장해를 호소하는 부분들이 점점 증가하고 있는 추세이다.

따라서, 적절한 피부 수분을 유지하기 위하여 외부로부터 수분을 공급하거나, 체내로부터의 수분 손실을 방지하기 위한 연구가 다양하게 진행되어 왔으며, 실제로 수분 보유 능력이 있는 다양한 보습제(moisturizer) 가 개발되어 있다. 피부 보습제로는 세라마이드 등의 지질성분과 필수지방산 및 지질복합체 등 각질층에서의 수분보유를 증가시킬 수 있는 물질을 사용하는 것이 일반적이다(Rawlings A. V. et al, J. Invest. Dermatol., 5, pp731-741, 1994)

그러나, 최근 피부에 대한 위해 요인이 점점 증가되고 있고, 식생활 양상의 변화로 각질층의 생성, 탈락 속도가 늦어지며, 각질형성세포의 기능 저하로 각질층의 보습인자와 지질의 양이 감소되어 각질층이 정상적인 피부 장벽 기능을 발휘하지 못하는 피부를 가진 사람들이 증가하고 있는 추세이다. 이런 피부 장벽 기능의 와해는 피부건조증, 아토피 피부염, 접촉성 피부염, 건선 등의 다양한 피부 질환을 유발하게 된다. 이와 같은 질환들은 기존의 통상적인 수분보유기능을 갖는 보습제만으로도 증상 완화는 기대할 수 있지만 근본적인 치유는 어려운 실정이다.

이에, 본 발명자들은 상기의 문제점을 해결하기 위하여 천연유래의 유효물질 중 우수한 피부 보습 효과 등을 나타내는 물질을 찾고자 연구하던 중 캄페롤, 그 중에서도 식물, 특히 녹차로부터 분리한 캄페롤 배당체로부터 산, 염기, 효소 또는 상기 효소를 생산하는 미생물을 이용한 분해반응을 통해 얻어진 캄페롤이 상기 효과가 있음을 확인하여 본 발명을 완성하게 되었다.

따라서, 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 캄페롤, 그 중에서도 특히 녹차 유래의 캄페롤 배당체로부터 산, 염기, 효소 또는 상기 효소를 생산하는 미생물을 이용한 분해 반응을 통하여 얻어진 캄페롤의 각질형성세포의 분화 촉진 효과, 손상된 피부 장벽기능의 회복 및 피부 보습량 증가 효과를 조사하고, 이를 바탕으로 피부 보습용, 피부 장벽기능 강화용, 및 피부 각질형성세포 분화 유도용 피부 외용제 조성물을 제공하는 것을 그 목적으로 한다.

상기와 같은 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 캄페롤을 유효성분으로 함유하는 피부 보습용 피부 외용제 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 캄페롤을 유효성분으로 함유하는 피부 장벽기능 강화용 피부 외용제 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 캄페롤을 유효성분으로 함유하는 피부 각질형성세포 분화 유도용 피부 외용제 조성물을 제공한다.

상기 피부 외용제 조성물에 있어서, 상기 캄페롤은 캄페롤 함량이 90%이상인 것을 특징으로 한다.

상기 피부 외용제 조성물에 있어서, 상기 캄페롤은 캄페롤 배당체로부터 산, 염기, 효소, 또는 상기 효소를 생산하는 미생물을 이용한 분해반응을 통해 캄페롤을 분리시켜 얻어진 것임을 특징으로 한다.

상기 캄페롤 배당체는 식물 유래인 것, 바람직하게는 녹차 유래인 것을 특징으로 한다.

상기 분해방법에 있어서, 상기 산은 염산, 황산 및 질산으로 구성되는 군으로부터 선택된 하나 이상의 산, 또는 이들 산과 에탄올, 메탄올 및 부탄올로 구성되는 군으로부터 선택된 하나 이상의 알코올과의 혼합용매인 것을 특징으로 한다.

상기 분해방법에 있어서, 상기 염기는 수산화나트륨 및 수산화칼륨으로 구성되는 군으로부터 선택된 하나 이상의 염기 또는 이들 염기와 에탄올, 메탄올 및 부탄올로 구성되는 군으로부터 선택된 하나 이상의 알코올과의 혼합용매인 것을 특징으로 한다.

상기 분해방법에 있어서, 상기 효소는 캄페롤 배당체에서 당 부분을 제거하여 캄페롤을 분리하는 엑소(exo) 당결합 분해 효소인 것을 특징으로 한다.

상기 분해방법에 있어서, 상기 엑소 당결합 분해 효소는 글루코시다제(glucosidase), 아라비노시다제(arabinosidase), 람노시다제(rhamnosidase), 자일로시다제(Xylosidase), 셀룰라제(cellulase), 헤스페리디나제(hesperidinase), 나 린지나제(naringinase), 글루쿠로니다제(glucuronidase), 펙티나제(pectinase), 갈락토시다제(galactosidase) 및 아밀로글루코시다제(amyloglucosidase)로 구성되는 군 중에서 선택된 하나 이상인 것을 특징으로 한다.

상기 분해방법에 있어서, 상기 효소를 생산하는 미생물은 아스퍼질러스(aspergillus)속, 바실러스(bacillus)속, 페니실리움(penicillium)속, 리조푸스(rhizopus)속, 리조무코르(rhizomucor)속, 탈라로마이세스(talaromyces)속, 비피도박테리움(bifidobacterium)속, 모르티에렐라(mortierella)속, 크립토코커스(cryptococcus)속 및 마이크로박테리움(microbacterium)속으로 구성되는 군으로부터 선택된 하나 이상인 것을 특징으로 한다.

상기 피부 외용제 조성물은 표피 분화가 불완전함으로서 생기는 피부건조증, 아토피 피부염, 접촉성 피부염 또는 건선 등을 예방 또는 개선하는 것을 특징으로 한다.

상기 피부 외용제 조성물은 화장료 조성물임을 특징으로 한다.

상기 피부 외용제 조성물은 약학 조성물임을 특징으로 한다.

상기 피부 외용제 조성물은 캄페롤을 조성물 총중량에 대해 0.0001∼10중량％의 양으로 함유함을 특징으로 한다.

이하, 본 발명을 상세히 설명하면 하기와 같다.

본 발명의 캄페롤은 식물류 특히, 녹차로부터 수득한 캄페롤 배당체를 함유하는 녹차 추출물을 산, 염기, 효소, 또는 상기 효소를 생산하는 미생물을 이용한 분해 반응을 통해 얻어진 것이 바람직하다.

먼저, 식물, 특히 녹차로부터 물 또는 유기용매를 이용하여 캄페롤 배당체를 함유하는 식물 추출물인 녹차 추출물을 제조하기 위하여 녹차잎 또는 녹차씨에 약 1 내지 6 배, 바람직하게는 약 3배의 물 또는 에탄올, 메탄올, 부탄올, 에테르, 에틸아세테이트 및 클로로포름을 포함하는 군으로부터 선택된 하나 이상의 유기용매 또는 이들 유기용매와 물과의 혼합용매를 넣고, 상온에서 1 내지 5회 교반하면서 추출하여 탈지시킨 다음, 탈지된 식물에 약 1 내지 8 배, 바람직하게는 약 4 배의 물 또는 상기 유기용매를 넣고, 1 내지 5회 환류 추출한 후, 10 내지 20 ℃에서 1 내지 3일간 침적시킨 후, 여과와 원심분리를 통하여 잔사와 여액을 분리하고, 분리된 여액을 감압농축하여 얻은 엑기스를 물에 현탁한 후, 에테르 등을 이용하여 색소를 제거한 다음, 수층을 상기 유기용매를 사용하여 1 내지 5회 추출한 후, 수득한 유기용매층을 감압농축하여 상기 유기용매 엑기스를 얻은 다음, 이를 소량의 메탄올 등에 녹인 후, 대량의 에틸아세테이트 등을 추가하여 생성된 침전물을 건조시켜, 본 발명의 상기 캄페롤 배당체를 함유하는 녹차 추출물을 수득할 수 있다.

그 다음 상기 캄페롤 배당체를 함유하는 녹차 추출물을 산, 염기, 효소 또는 상기 효소를 생산하는 미생물을 이용하여 가수분해하여 녹차 유래의 캄페롤을 제조한다.

이 때 산을 이용 시, 상기 녹차 추출물에 0.1N ∼2N 농도, 바람직하게는 1N 농도의 산 또는 산 및 알코올의 혼합용매(바람직하게는 50% 에탄올 혼합용매)를 가한 후, 50 내지 100 ℃, 바람직하게는 80 ℃ 수욕조에서 0.5 내지 2시간 동안 가열 환류시켜 가수분해하여 반응액을 수득할 수 있다.

상기 산은 염산, 황산 및 질산으로 구성되는 군으로부터 선택된 하나 이상의 산, 또는 이들 산과 에탄올, 메탄올 및 부탄올로 구성되는 군으로부터 선택된 하나 이상의 알코올과의 혼합용매를 사용할 수 있다.

이 때 염기를 이용 시, 상기 녹차 추출물을 녹인 후, 0.1N ∼ 2N 농도, 바람직하게는 1N 농도의 염기 또는 염기 및 알코올의 혼합용매(바람직하게는 50% 부탄올 혼합용매)를 가해 50 내지 100 ℃, 바람직하게는 100 ℃ 수욕조에서 1 내지 12 시간 동안 가열 환류시켜 가수분해하여 반응액을 수득할 수 있다.

상기 염기는 수산화나트륨 및 수산화칼륨으로 구성되는 군으로부터 선택된 하나 이상의 염기, 또는 이들 염기와 에탄올, 메탄올, 부탄올로 구성되는 군으로부터 선택된 하나 이상의 알코올과의 혼합용매를 사용할 수 있다.

이 때 효소를 이용시, 상기 녹차 추출물을 5 내지 20 배, 바람직하게는 약 10 배의 산성완충용액에 용해시킨 다음, 효소를 첨가하여 약 37 ℃ 수욕상에서 약 1 내지 60시간 동안 교반하면서, 박층크로마토그래피로 기질의 소거율을 확인하여 기질이 완전히 소실되면 열수(80∼100 ℃)중에서 5 내지 15 분 동안 가열하여 가수분해 반응을 종료시키고 반응액을 수득할 수 있다.

상기 효소를 생산하는 미생물을 활용 시, 상기 녹차 추출물을 5 내지 10배, 바람직하게는 약 10배의 이온수에 용해시킨 후 121℃에서 30분간 멸균하여 30 ℃로 냉각한 후 미리 배양된 미생물을 액체량 대비 5∼10% 로 접종하여 30 ℃에서 2 내지 5일 배양 시킨 후 5,000 내지 10,000 rpm 으로 원심분리하여 회수한 침전물을 증류수로 3회 세척 후 원심분리하여 침전물로써 반응액을 수득할 수 있다.

상기 효소 또는 상기 효소를 생산하는 미생물은 엑소(exo) 당결합 분해 효소 또는 상기 엑소 당결합 분해 효소를 생산하는 미생물을 사용하며, 상기 효소는 캄페롤 배당체에서 당 부분을 제거하여 캄페롤을 분리할 수 있다.

상기와 같이 산, 염기, 효소 또는 상기 효소를 생산하는 미생물을 이용하여 가수분해 한 후, 반응액을 감압농축하여 용매를 제거하고, 잔사에 알코올을 가하여 1 내지 5회 교반시킨 후, 침전된 염들을 여과를 통하여 제거하고, 여과된 여액을 감압농축하여 조 생성물을 수득하고, 상기 수득한 조 생성물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(클로로포름: 메탄올= 8:1 내지 4:1)로 분리하여 일정량의 캄페롤(캄페롤 함량 90% 이상인 고순도 캄페롤) 을 수득할 수 있다.

상기 방법으로 수득된 캄페롤의 보습 효과 등을 알아보기 위하여, 상기 산 및 염기 가수분해, 효소분해, 및 미생물을 이용한 분해방법을 통하여 수득한 캄페롤의 각질형성세포의 분화 촉진 효과, 손상된 피부 장벽기능의 회복 및 피부 보습량 증가 효과를 측정한 결과, 그 효과를 확인하였다.

본 발명에 따른 상기 캄페롤은 피부 외용제 조성물에 사용될 수 있는데, 그 제형에 있어서 특별히 한정되는 바가 없다. 예를 들면, 유연화장수, 수렴화장수, 영양화장수, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 아이크림, 아이에센스, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징워터, 팩, 파우더, 바디로션, 바디크림, 바디오일, 바디에센스, 메이컵 베이스, 파운데이션, 염모제, 샴푸, 린스 또는 바디 세정제 등의 화장료 조성물 또는 연고, 겔, 크림, 패취 또는 분무제 등의 약학 조성물로 제형화될 수 있다.

이들 각 제형은 그 제형의 제제화에 필요하고 적절한 각종의 기제와 첨가물을 함유할 수 있으며, 이들 성분의 종류와 양은 발명자에 의해 용이하게 선정될 수 있다.

본 발명의 피부 외용제 조성물은 상기 캄페롤을 조성물 총 중량에 대하여 각각 0.0001 ∼ 10중량％의 양으로 함유함을 특징으로 한다. 그 함량이 0.0001 중량％ 미만일 경우, 상기 성분에 의한 피부 보습 효과, 피부 장벽기능 강화 효과, 및 피부 각질형성세포 분화 유도 효과 등을 얻을 수 없고, 함량이 10중량％ 이상이 될 경우, 함량 증가에 비해 효과의 증가가 크지 않기 때문이다.

본 발명의 피부 외용제 조성물의 제형을 좀 더 설명하면 하기와 같다.

본 발명의 피부 외용제 조성물은 화장료 조성물로써, 상기 캄페롤의 양이 전체 화장료 조성물 총중량에 대하여 0.0001∼10중량％의 양으로 함유됨을 특징으로 한다.

또한, 본 발명에 따른 상기 화장료 조성물은, 상기한 캄페롤 외에 본 발명이 목적으로 하는 주 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 바람직하게는 주 효과에 상승 효과를 줄 수 있는 다른 성분 등을 함유하는 것도 무방하다.

본 발명에 따른 캄페롤은, 각 화장료 제형으로 제조하여 그대로 도포하는 것이 적합하나, 통상의 외용의 제제로도 할 수 있다.

본 발명의 상기 화장료 조성물은 피부 보습 효과, 피부 장벽기능 강화 효과, 및 피부 각질형성세포 분화 유도 효과를 위한 화장품 등에 다양하게 이용될 수 있다. 본 조성물을 첨가할 수 있는 제품으로는, 예를 들어, 각종 크림, 로션, 스킨 등과 같은 화장품 류와 클렌징, 세안제, 비누, 미용액 등이 있다.

본 발명의 상기 캄페롤을 함유하는 조성물이 첨가된 화장료는 용액, 유화물, 점성형 혼합물 등의 형상을 취할 수 있다.

즉, 본 발명의 화장료는 그 제형에 있어서 특별히 한정되지 않으며, 예를 들어 유액, 크림, 화장수, 에센스, 팩, 젤, 파우더, 메이크업 베이스, 파운데이션, 로션, 연고, 패취, 미용액, 클렌징폼, 클렌징크림, 클렌징워터, 바디로션, 바디크림, 바디오일, 바디에센스, 샴푸, 린스, 바디세정제, 비누, 염모제, 분무제 등과 같은 제형을 들 수 있다.

각 제형의 화장료 조성물에 있어서, 상기의 캄페롤 이외에 다른 성분들은 기타 화장료의 제형 또는 사용 목적에 따라 당업자가 어려움 없이 적의선정하여 배합할 수 있다.

상기한 제제는 피부 보습 효과, 피부 장벽기능 강화 효과, 및 피부 각질형성세포 분화 유도 효과를 증가시키기 위하여 피부 흡수 촉진 물질을 함유할 수 있다.

또한, 본 발명의 화장료는 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 스핑고 지질 및 해초 엑기스로 이루어진 군에서 선택된 조성물을 포함할 수 있다.

본 발명의 화장료에는 상기 필수 성분과 더불어 필요에 따라 통상 화장료에 배합되는 다른 성분을 배합해도 된다.

이외에 첨가해도 되는 배합 성분으로서는 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기 및 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산 화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한(制汗)제, 정제수 등을 들 수 있다.

또한, 이외에 첨가해도 되는 배합 성분은 이에 한정되는 것은 아니며, 또, 상기 어느 성분도 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 배합 가능하다.

본 발명의 피부 외용제 조성물은 약학 조성물로써, 상기 캄페롤의 양이 전체 약학 조성물의 0.0001 내지 10 중량 %를 갖는 피부 보습용, 피부 장벽기능 강화용, 및 피부 각질형성세포 분화 유도용 약학 조성물을 제공한다.

본 발명의 상기 캄페롤을 포함하는 약학 조성물은 약학조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.

그 제형으로는 본 발명에 따른 캄페롤을 포함하는 약학조성물은 각각 통상의 방법에 따라 연고, 겔, 크림, 패취 또는 분무제 등의 외용제 등을 비롯하여 약제학적 제제에 적합한 어떠한 형태로든 제형화하여 사용할 수 있다.

상기 제제의 투여량은 대상자의 연령, 성별, 체중, 증상, 투여 방법에 의해 상이하나, 1일당 1.0 내지 3.0 ㎖로 이를 1일 1 내지 5회 도포하여 1개월 이상 계속하는 것이 좋다.

한편, 본 발명의 상기 캄페롤은 독성 및 부작용은 거의 없으므로 예방 목적으로 장기간 사용 시에도 안심하고 사용할 수 있다.

이하, 실시예 및 실험예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하지만, 본 발명이 이들 예로만 한정되는 것은 아니다.

[실시예 1] 녹차 씨 추출물의 제조

녹차 씨 2 ㎏에 각각 헥산 6L를 넣고, 상온에서 3회 교반 추출하여 탈지시킨 다음, 탈지된 녹차 씨 1 kg에 80 % 메탄올 4L를 넣고, 3회 환류 추출한 후, 15℃에서 1일간 침적시켰다. 그 후, 여과포 여과와 원심분리를 통해 잔사와 여액을 분리하고, 분리된 여액을 감압농축하여 얻은 엑기스를 물에 현탁한 후, 에테르 1L로 5회 추출하여 색소를 제거하고, 수층을 1-부탄올 500 ㎖로 3회 추출하였다. 이로부터 얻은 총 1-부탄올층을 감압농축하여 1-부탄올 엑기스를 얻고, 이를 소량의 메탄올에 녹인 다음, 대량의 에틸아세테이트에 추가하여, 생성된 침전물을 건조함으로써, 녹차 씨 추출물 250 g을 수득하였다.

[실시예 2] 녹차 잎 추출물의 제조

녹차 잎 2 ㎏에 헥산 6L를 넣고, 상온에서 3회 교반 추출하여 탈지시킨 다음, 탈지된 녹차 잎 1 kg 에 80 % 메탄올 4L를 넣고, 3회 환류 추출한 후, 15℃에서 1일간 침적시켰다. 그 후, 여과포 여과와 원심분리를 통해 잔사와 여액을 분리하고, 분리된 여액을 감압농축하여 얻은 엑기스를 물에 현탁한 후, 에테르 1L로 5회 추출하여 색소를 제거하고, 수층을 1-부탄올 500 ㎖로 3회 추출하였다. 이로부터 얻은 총 1-부탄올층을 감압농축하여 1-부탄올 엑기스를 얻고, 이를 소량의 메탄올에 녹인 다음, 대량의 에틸아세테이트에 추가하여, 생성된 침전물을 건조함으로써, 녹차 잎 추출물 150 g을 수득하였다.

[실시예 3] 산 가수분해 방법에 의한 캄페롤의 제조

상기 실시예 1에서 수득한 녹차 씨 추출물 10 g에 20배(v/w)의 1 N HCl-50 % 메탄올 용액(v/v)을 가하여, 80℃ 수욕조에서 8시간 동안 가열 환류시켜, 카멜리아시드 A와 카멜리아시드 B에 결합된 당들을 가수분해시킨 후, 반응액을 감압농축하여 용매를 제거하고, 잔사에 에탄올(200 ㎖)을 가해 교반시킨 후(3회), 침전된 염들을 여과를 통해 제거한 다음, 여과된 여액을 감압농축하여 조 생성물을 수득하였다. 이후 상기 수득된 조 생성물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(클로로포름:메탄올 = 8:1 ~ 4:1)로 분리하여 캄페롤 0.95 g을 수득하였다.

[실시예 4] 염기 가수분해 방법에 의한 캄페롤의 제조

상기 실시예 1에서 수득한 녹차 씨 추출물 10 g을 건조피리딘(500 ㎖)에 녹이고, 여기에 소디움 메톡사이드(sodium methoxide)(powder, 10 g)를 가해 수욕조에서 8시간동안 가열 환류시켜, 카멜리아시드 A와 카멜리아시드 B에 결합된 당들을 가수분해시킨 후, 반응액을 감압농축하여 용매를 제거하고, 잔사에 에탄올(200 ㎖)을 가해 교반시킨 후(3회), 침전된 염들을 여과를 통해 제거하였다. 여과된 여액을 감압농축하여 조 생성물을 수득하였다. 이후 상기 수득된 조 생성물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(클로로포름:메탄올 = 8:1 ~ 4:1)로 분리하여 캄페롤 0.25 g을 수득하였다.

[실시예 5] 효소분해 방법에 의한 캄페롤의 제조

상기 실시예 1에서 수득한 녹차 씨 추출물 10 g을 100 ㎖의 0.1 M 초산완충용액(pH 4.5)에 용해시키고, 여기에 효소 2.5 g(헤스페리디나제 0.5 g, 나린지나제 0.5 g, 셀룰라제 0.5 g, β-글루쿠로니다제 0.2 g, β-갈락토시다제 0.5 g, 아밀로글루코시다제 0.3 g ; Sigma사 제조)을 첨가하여 37℃ 수욕상에서 48 시간동안 교반시키면서, 박층크로마토그래피에 의해 주기적으로 확인하여, 기질(camelliaside A와 camelliaside B)이 완전히 소실되면 열수(80 ∼ 100℃) 중에서 10분간 가열하여 반응을 종료시킨 후, 반응액을 감압농축하여 용매를 제거하고, 잔사에 에탄올(200㎖)을 가해 교반시킨 다음(3회), 침전물을 여과를 통해 제거한 다음, 여과된 여액을 감압농축하여 조 생성물을 수득하였다. 이후 상기 수득한 조 생성물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(클로로포름:메탄올= 8:1∼4:1)로 분리하여 캄페롤 1.02 g을 얻었다.

[실시예 6] 미생물을 이용한 캄페롤의 제조

상기 실시예 2에서 수득한 녹차 잎 추출물 10 g을 100 ㎖의 이온수에 용해시키고, 121℃에서 30분간 멸균하여 30℃로 냉각한 후 미리 배양된 아스퍼질러스 니거(Aspergillus niger) KCCM 11885를 액체량 대비 5~10 %로 접종하여 30℃에서 5일 동안 배양시킨 후, 박층 크로마토그래피로 기질의 소거율을 확인하여 기질이 완전히 소실되면 반응을 종료시키고, 배양액을 5,000 내지 10,000 rpm으로 원심분리하여 회수한 침전물을 증류수로 3회 세척 후 원심분리하여 침전물로써 반응액을 얻은 다음, 상기 침전물에 에탄올(200㎖)을 가해 교반시킨 후(3회), 침전된 염들을 여과를 통해 제거한 다음, 여과된 여액을 감압농축하여 조 생성물을 수득하였다. 이후 상기 수득된 조 생성물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(클로로포름:메탄올 = 8:1 ~ 4:1)로 분리하여 캄페롤 0.62 g을 수득하였다.

[실험예 1] 각질형성세포 분화 촉진 효과

상기 실시예 3 내지 6으로 부터 수득한 캄페롤의 각질형성세포의 분화 촉진 효과를 알아보기 위해, 하기와 같이 각질형성세포의 분화시 생성되는 CE(Cornified Envelop)양을 흡광도를 이용하여 측정하였다.

먼저, 신생아의 표피로부터 분리해 일차 배양한 사람의 각질형성세포를 배양용 플라스크에 넣어 바닥에 부착시킨 뒤 하기 표 1의 시험물질을 배양액에 1ppm 농도로 처리한 후 세포가 바닥 면적의 70~80 % 정도 자랄 때까지 5일간 배양하였다. 이때, 저칼슘(0.03mM) 처리군과 고칼슘(1.2mM) 처리군을 각각 음성 대조군, 양성 대조군으로 하였다. 그 다음 상기 배양한 세포를 수확하여 PBS(Phophate buffered saline)로 세척한 뒤 2% SDS(sodium dodecyl sulfate)와 20mM 농도의 DTT(Dithiothreitol)를 함유한 10mM 농도의 트리스-염산 완충액(Tris-HCl, pH 7.4) 1ml를 가하여 소니케이션(sonication), 보일링(boiling), 원심분리한 후 침전물을 다시 PBS 1ml에 현탁시켜 340 nm 에서의 흡광도를 측정하였다. 이와 별도로 상기 소니케이션 후의 용액을 일부 취하여 단백질 함량을 측정하고, 세포 분화정도 평가시 기준으로 삼았다. 그 결과를 하기 표 1에 나타내었다.

시험물질	각질형성세포에서의 분화능(%)
저칼슘(0.03mM) 용액 (음성 대조군)	100
고칼슘(1.2mM) 용액 (양성 대조군)	210
실시예 3의 캄페롤	142
실시예 4의 캄페롤	137
실시예 5의 캄페롤	140
실시예 6의 캄페롤	143

그 결과, 상기 표 1에 나타낸 바와 같이, 상기 실시예 3 내지 6으로부터 수득한 캄페롤은 각질형성세포의 분화를 촉진하는 것을 알 수 있었다.

[실험예 2] 무모생쥐 피부에서의 피부 장벽기능 회복 및 피부 보습력 증가 효과 측정

상기 실시예 3 내지 6으로부터 수득한 캄페롤이 피부 손상으로 인해 손상된 피부 장벽기능의 회복에 미치는 효과 및 피부 보습력 증가에 미치는 효과를 측정하기 위하여, 하기와 같은 실험을 수행하였다.

먼저, 출생 후 8 내지 10 주 경과한 무모생쥐(Charles River, Japan)의 등에 아세톤을 1일 2회씩 5일 동안 주기적으로 도포하여 실험동물 등 피부의 장벽 기능 손실을 유도한 다음 증발계(Evaporimeter)로 TEWL(Transepidermal water loss, 경피수분손실)을 측정하여 40g/m²/hr 이상의 경피 수분 손실을 나타내는 피부를 가진 실험동물만을 대상으로 시험물질로 프로필렌 글리콜과 에탄올을 7: 3의 비율로 혼합한 비히클(Vehicle)(비히클 처리군)과 실시예 3 내지 6으로부터 수득한 각 캄페롤(캄페롤 처리군)을 각각 1% 함유한 샘플을 피부면적 5cm² 당 200μl의 용량으로 1일 2회씩 3일 동안 연속 도포하면서 일정 시간마다 TEWL을 측정하여 그 결과를 도 1에 나타내었다. 또한, 코니오미터(Corneometer, 독일 Courage Khazaka 사)를 사용하여 피부 수분량을 동시에 측정하여 그 결과를 도 2에 나타내었다. 이때 무처리군의 피부 수분량도 함께 측정하였다.

그 결과, 도 1에서 나타낸 바와 같이, 상기 실시예 3 내지 6으로부터 수득한 캄페롤 처리군이 비히클 처리군 보다 더 빠르게 장벽 손상이 회복되었다. 또한, 도 2에 나타낸 바와 같이, 피부 수분량에 있어서도 실시예 3 내지 6으로부터 수득한 캄페롤 처리군이 비히클 처리군 및 무처리군 보다 높았으며, 장벽 손상 회복과 더불어 피부 수분량도 증가함을 알 수 있었다.

이상의 결과로부터, 녹차 유래의 캄페롤 배당체로부터 산, 염기 또는 효소나 이 효소를 생산하는 미생물을 이용하여 얻어진 캄페롤은 피부 세포의 분화 촉진과 증식 억제 및 각질형성세포의 분화 촉진, 손상된 피부 장벽 회복 및 피부 보습력 증가에 있어서 그 효과가 매우 우수한 것을 확인할 수 있었다.

하기에 상기 조성물의 제제예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.

제제예 1. 비누 제조

실시예 3의 캄페롤.........................1.00 (%)

유지........................................적당량

수산화나트륨................................적당량

염화나트륨..................................적당량

향료........................................소 량

정제수로 전량을 100으로 하였으며, 상기의 배합비에 의해 비누를 제조하였다.

제제예 2. 로션 제조

실시예 4의 캄페롤.........................3.00 (%)

L-아스코르빈산-2-인산마그네슘염.............1.00

수용성 콜라겐 (1 % 수용액)..................1.00

시트르산나트륨..............................0.10

시트르산....................................0.05

감초 엑기스.................................0.20

1,3-부틸렌글리콜............................3.00

정제수로 전량을 100으로 하였으며, 상기의 배합비(%)에 의해 로션을 제조하였다.

제제예 3. 크림 제조

실시예 5의 캄페롤..........................1.00(%)

폴리에틸렌글리콜모노스테알레이트............2.00

자기유화형모노스테아르산글리세린............5.00

세틸알코올..................................4.00

스쿠알렌....................................6.00

트리2-에틸헥산산글리세릴....................6.00

스핑고당지질................................1.00

1.3-부틸렌글리콜............................7.00

정제수로 전량을 100으로 하였으며, 상기의 배합비(%)로 크림을 제조하였다.

제제예 4. 팩 제조

실시예 6의 캄페롤..........................5.00(%)

폴리비닐알코올..............................13.00

L-아스코르빈산-2-인산마그네슘염..............1.00

라우로일히드록시프롤린.......................1.00

수용성 콜라겐 (1 % 수용액)...................2.00

1,3-부틸렌글리콜.............................3.00

에탄올.......................................5.00

정제수로 전량을 100으로 하였으며, 상기의 배합비(%)로 팩을 제조하였다.

제제예 5. 미용액 제조

실시예 3의 캄페롤...........................2.00(%)

히드록시에틸렌셀룰로오스(2 % 수용액).........12.00

크산탄검(2 % 수용액)...........................2.00

1,3-부틸렌글리콜...............................6.00

진한 글리세린..................................4.00

히알루론산나트륨 (1 % 수용액)..................5.00

정제수로 전량을 100으로 하였으며, 상기의 배합비(%)로 미용액을 제조하였다.

이상에서 설명한 바와 같이, 본 발명에 의한 상기 캄페롤은 각질형성세포의 분화 촉진, 손상된 피부 장벽기능의 회복 및 피부 보습력을 증가시키는 효과를 나타낸다. 따라서, 상기 캄페롤을 함유하는 피부 외용제 조성물은 피부 보습용으로, 표피 분화가 불완전함으로서 생기는 피부건조증, 아토피 피부염, 접촉성 피부염 또는 건선 등을 예방 또는 개선하며, 피부 보습용, 피부 장벽기능 강화용, 및 피부 각질형성세포 분화 유도용 화장료 조성물 또는 약학 조성물로 유용하게 사용할 수 있다.

Claims

캄페롤을 유효성분으로 함유하는 피부 보습용 피부 외용 화장료 조성물.
캄페롤을 유효성분으로 함유하는 피부 장벽기능 강화용 피부 외용 화장료 조성물.
캄페롤을 유효성분으로 함유하는 피부 각질형성세포 분화 유도용 피부 외용 화장료 조성물.
제 1항 내지 제 3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 캄페롤은 캄페롤 함량이 90%이상인 것을 특징으로 하는 피부 외용 화장료 조성물.
제 1항 내지 제 3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 캄페롤은 캄페롤 배당체로부터 산, 염기, 효소, 또는 상기 효소를 생산하는 미생물을 이용한 분해반응을 통해 캄페롤을 분리시켜 얻어진 것임을 특징으로 하는 피부 외용 화장료 조성물.
제 5항에 있어서, 캄페롤 배당체는 식물 유래인 것을 특징으로 하는 피부 외용 화장료 조성물.
제 6항에 있어서, 상기 캄페롤 배당체는 녹차 유래인 것을 특징으로 하는 피부 외용 화장료 조성물.
제 5항에 있어서, 상기 산은 염산, 황산 및 질산으로 구성되는 군으로부터 선택된 하나 이상의 산, 또는 이들 산과 에탄올, 메탄올 및 부탄올로 구성되는 군으로부터 선택된 하나 이상의 알코올과의 혼합용매인 것을 특징으로 하는 피부 외용 화장료 조성물.
제 5항에 있어서, 상기 염기는 수산화나트륨 및 수산화칼륨으로 구성되는 군으로부터 선택된 하나 이상의 염기 또는 이들 염기와 에탄올, 메탄올 및 부탄올로 구성되는 군으로부터 선택된 하나 이상의 알코올과의 혼합용매인 것을 특징으로 하는 피부 외용 화장료 조성물.
제 5항에 있어서, 상기 효소는 캄페롤 배당체에서 당 부분을 제거하여 캄페롤을 분리하는 엑소(exo) 당결합 분해 효소인 것을 특징으로 하는 피부 외용 화장료 조성물.
제 10항에 있어서, 상기 엑소 당결합 분해 효소는 글루코시다제(glucosidase), 아라비노시다제(arabinosidase), 람노시다제(rhamnosidase), 자일로시다제(Xylosidase), 셀룰라제(cellulase), 헤스페리디나제(hesperidinase), 나린지나제(naringinase), 글루쿠로니다제(glucuronidase), 펙티나제(pectinase), 갈락토시다제(galactosidase) 및 아밀로글루코시다제(amyloglucosidase)로 구성되는 군 중에서 선택된 하나 이상인 것을 특징으로 하는 피부 외용 화장료 조성물.
제 5항에 있어서, 상기 효소를 생산하는 미생물은 아스퍼질러스(aspergillus)속, 바실러스(bacillus)속, 페니실리움(penicillium)속, 리조푸스(rhizopus)속, 리조무코르(rhizomucor)속, 탈라로마이세스(talaromyces)속, 비피도박테리움(bifidobacterium)속, 모르티에렐라(mortierella)속, 크립토코커스(cryptococcus)속 및 마이크로박테리움(microbacterium)속으로 구성되는 군으로부터 선택된 하나 이상인 것을 특징으로 하는 피부 외용 화장료 조성물.
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제 1항 내지 제 3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 피부 외용 화장료 조성물은 캄페롤을 조성물 총중량에 대해 0.0001∼10중량％의 양으로 함유함을 특징으로 하는 피부 외용 화장료 조성물.