KR100773856B1 - 나한과 추출물 또는 이로부터 분리된 트라이터펜계화합물을 함유하는 주름개선용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 나한과(Siraitia grosvenori) 조추출물, 극성용매 가용추출물, 비극성용매 가용추출물 및 이로부터 분리된 트라이터펜계 화합물을 함유하는 조성물에 관한 것으로서, 상세하게는 본 발명의 나한과 조추출물, 극성용매 가용추출물, 비극성용매 가용추출물 및 이로부터 분리된 트라이터펜계 화합물들은 엘라스타제 저해효과, MMP-1 저해효과, 콜라겐합성증진, 피부주름개선 및 피부탄력증진 효과를 나타내는바, 주름개선용 피부외용 약학 조성물 및 화장료 조성물로 이용될 수 있다.

나한과, 트라이터펜계 화합물, 주름개선

Description

나한과 추출물 또는 이로부터 분리된 트라이터펜계 화합물을 함유하는 주름개선용 조성물{Composition comprising an extract of Siraitia grosvenori or triterpene compound isolated therefrom showing anti-wrinkle activity}

도 1은 화합물 2(Mogroside V)의 수소핵자기공명 스펙트럼을 나타낸 도이다.

본 발명은 나한과(Siraitia grosvenori) 조추출물, 극성용매 가용추출물, 비극성용매 가용추출물 및 이로부터 분리된 트라이터펜계 화합물을 함유하는 주름개선 효과를 나타내는 조성물에 관한 것이다.

피부의 노화는 주름 증가와 탄력감소, 색소 침착 등의 여러 형태로 나타난다. 그 중 가장 대표적인 노화의 현상은 바로 주름이다. 이러한 주름을 생성하게 하는 피부의 노화원인은 크게 두 가지로 나누어 볼 수 있다. 나이가 들어감에 따른 자연적인 노화인 내적 요인과 외적 요인으로 인한 노화이다. 외적 요인으로는 자외선, 공해, 병, 음주, 흡연 등이 있고, 내적 요인으로는 프리라디칼과 염증의 발생, 스트레스, 세포 활성의 저하 및 돌연변이화, 세포대사 불균형 등이다(Peter T, et al., Physiology of The Skin, Allured Publishing Corporation, pp61-72, 2001). 피부의 구조에 따라 주름 발생 원인을 좀 더 자세히 설명하면, 피부는 크게 표피와 진피로 나뉜다. 표피에서의 주름 생성 원인으로는 각질 형성 세포의 턴-오버(turn-over)의 감소로 각질층의 누적과 이로 인해 각질층이 두꺼워지고, 각질층의 수분 함유 능력이 감소되며, 각질이 경화되어 주름이 발생하게 된다. 표피와 진피의 경계부위는 표피세포 지지, 부착, 영양물질의 이동, 표피 분화의 조절 등에 관여하는데, 각종 노화 요인으로 특히, UV 에 인하여 콜라겐 IV, VII이 감소되어 표피, 진피 지지기능이 감소되고, 선별 투과 기능이 약화되어 해로운 성분이 쉽게 진피에 영향을 미치게 되어 주름이 생성된다(Keene, J., Cell Biol ., 104, pp.611-621, 1987). 진피는 표피의 아래에 있는 결합조직으로 이루어지는 조직으로 표피 세포인 케라티노사이트처럼 치밀하게 채워져 있지 않고 세포외 공간이 많으며 세포외 간질(extracellular matrix)이라 불리는 거대 분자의 망상 구조에 의해 채워져 있다. 이 세포외 간질은 진피내의 섬유아세포에서 만들어지며, 콜라겐, 엘라스틴 등의 섬유상 단백질과 히알루론산 등의 산성 뮤코다당체라 불리는 다당류로 이루어져 있다. 세포외 간질은 피부의 탄력성, 신진대사, 생기 등에 직접적으로 관여하고 있다. 좀 더 자세히 설명하면, 섬유성 단백질은 조직의 형태를 유지하거나, 피부에 탄성을 부여하는 등의 기능을 담당하고 있다. 따라서 세포외 간질에 있어서의 섬유성 단백질의 생산이 촉진되면, 피부에 탄력을 주게 되어 주름 또는 잔주름이 억제된다. 이러한 세포외 간질을 생산하는 섬유아세포의 활성이 내적, 외적인 노화 요인, 특히, UV에 의해 저하되게 되면 콜라겐 생합성이 감소하고 변성된 엘라스틴이 증가하게 된다. 또한 매트릭스 메탈로프로테아제(Matrix Metalloproteinases. MMPs)의 증가로 콜라겐 등의 세포외 간질의 분해가 증가되고 진피 내에 태양열상이 발생하게 되며, 표피-진피 경계부가 파괴되어 유해 성분이 유입되고 진피 분해가 가속화된다. 특히, 콜라겐 I은 피부 진피의 주성분으로 MMP-1 에 의해 분해된다. 따라서 결국에는 피부의 탄력성이나 싱싱함, 생기를 잃게 되고, 주름, 잔주름, 피부의 거칠어짐이 발생하게 되어 피부 노화를 초래하는 하나의 원인이 된다(Herrmann G. et al., Journal of Investigative Dermatology , 107(3), pp92, 1996; Brenneisen P. et.al., Photochemistry & Photobiology, 64(5), pp649, 1996). 위와 같이 주름 생성 요인 중 가장 큰 부분을 차지하고 있는 콜라겐 등의 세포외 간질의 합성량을 증가시키고 매트릭스 메탈로프로테아제(Matrix Metalloproteinases. MMPs)를 저해함으로서 생기가 있는 젊은 피부를 유지하기 위한 방법을 모색하기 위한 시도가 이루어지고 있다.

본 발명은 박과(Cucurbitaceous)에 속하는 식물인 나한과로부터 추출된 트라이터펜계 물질을 유효 성분으로 하여 주름의 생성을 억제 및 개선시키기 위한 조성물을 제조하기 위한 것이다.

나한과(Siraitia grosvenori)는 중국 광동, 광서성의 고랭지에서 재배되는 박과의 다년생 초본으로 과실은 직경 4~5 cm의 달갈형 또는 구형이며 원래 중국계림지방에서는 청량음료의 원료나 조미료로 사용되어져 왔으며, 목이 아프거나 기침, 위나 장에 문제가 있을 경우 민간에서 사용되었다.

나한과 추출물에 관한 선행발명의 예를 보면, 피부상에서의 항산화물발생을 억제하는 화장료 조성물(일본특허공개번호 10-130137), 외용제 조성물(일본특허공개번호 10-306030), 항산화작용이 있는 나한과 배당체를 함유하는 항산화 조성물(일본특허등록번호 2001-322934), 화장료조성물 또는 식품(일본특허등록번호 2003-95913), 스트레스에 의한 피부거침 개선제(일본특허등록번호 2001-322939), 항암활성(Cancer Lett. 198(1), pp.37-42, 2003; Zhonghua Kou Qiang Yi Xue Za Zhi., 33(3), pp.183-185, 1998), 염증 유발 후 히스타민 방출량 저해(Hossen M.A. et al, Biol , Pharm . Bull., 28(2), pp.238-241, 2005) 등이 있으나 본 발명에서 달성하고자 하는 주름 생성 억제제 및 개선제로서 이를 함유한 화장료 조성물 및 피부 외용제와는 무관하다. 이에 본 발명자들은, 피부 주름 억제 및 개선에 효능이 있는 근본적 물질을 찾고자 하여 자연의 여러 가지 천연물질들 중에서 주름 예방에 유효한 물질을 스크리닝한 결과, 나한과 조추출물, 극성용매 가용추출물, 비극성용매 가용추출물 및 이로부터 분리된 트라이터펜계 화합물들이 매우 우수한 주름 생성 억제 효과를 나타냄을 확인하였다.

또한 일정농도 이상 배합하여 사람 피부에 직접 도포한 실험 결과에서도 뚜렷한 주름 감소 및 노화로 기인한 피부상태 개선효과를 나타냄을 확인하여 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 목적은, 나한과 조추출물, 극성용매 가용추출물, 비극성용매 가용 추출물 또는 이로부터 분리된 트라이터펜계 화합물들을 함유하는 피부 주름 생성 억제 및 개선 효과를 나타내는 피부외용 약학 조성물 및 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 주름 생성 억제 및 개선 효과를 갖는 나한과(Siraitia grosvenori) 조추출물, 극성용매 가용추출물, 비극성용매 가용추출물 또는 이로부터 분리된 트라이터펜계 화합물을 함유하는 주름 생성 억제 및 개선용 피부외용 약학 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 주름 생성 억제 및 개선 효과를 갖는 나한과(Siraitia grosvenori) 조추출물, 극성용매 가용추출물, 비극성용매 가용추출물 또는 이로부터 분리된 트라이터펜계 화합물을 함유하는 주름 생성 억제 및 개선용 화장료 조성물을 제공한다.

본원에서 정의되는 조추출물은 정제수를 포함한 물, 탄소수 1 내지 4의 저급알코올 또는 프로필렌글리콜, 초산에칠, 부틸렌글리콜, 에테르, 클로로포름으로 구성된 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 용매에 가용한 추출물을 포함한다.

또한 본원에서 정의되는 극성용매 가용 추출물은 물, 메탄올, 부탄올 또는 이들의 혼합용매로부터 선택되어진 용매, 바람직하게는 부탄올에 가용된 추출물이고, 비극성용매 가용추출물은 헥산, 클로로포름, 메틸렌클로라이드 및 에틸아세테이트와 같은 비극성 용매에 가용한 추출물을 의미한다.

상기 트라이터펜계 화합물은 모그로시드 Ⅳ(mogroside Ⅳ), 모그로시드 Ⅴ(mogroside Ⅴ), 시아메노시드 Ⅰ(siamenoside Ⅰ)및 11-옥소-모그로시드 Ⅴ(11-oxo-mogroside Ⅴ)로부터 선택된 화합물임을 특징으로 한다.

이하, 본 발명의 조추출물, 극성용매 가용 추출물 및 비극성 용매 가용 추출물을 수득하는 방법을 상세히 설명한다.

본 발명의 조추출물은 나한과를 건조하여 그 중량의 약 1 내지 10배, 바람직하게는 약 2 내지 5배 부피의 정제수를 포함한 물, 탄소수 1 내지 4의 저급알코올 또는 프로필렌글리콜, 초산에칠, 부틸렌글리콜, 에테르, 글리세린, 클로로포름으로 구성된 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 용매, 바람직하게는 물, 메탄올, 에탄올, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 및 글리세린으로부터 선택된 용매로 20 내지 100℃, 바람직하게는 20 내지 50℃의 추출 온도에서 약 1시간 내지 5일, 바람직하게는 1일 내지 5일 동안 열수 추출, 환류냉각 추출, 초음파 추출 등의 추출방법, 바람직하게는 환류냉각 추출의 추출방법으로 1회 내지 5회, 바람직하게는 2회 내지 3회 반복하여 추출물을 수득한 후, 감압여과하고 여과한 추출물을 혼합하여 회전진공농축기로 20 내지 100℃, 바람직하게는 50 내지 70℃에서 감압 농축하여 용매를 제거하여 본 발명의 나한과 조추출물을 수득할 수 있다.

또한, 본 발명의 극성용매 및 비극성용매 가용 추출물은 상기에서 얻은 나한과 조추출물, 바람직하게는 나한과의 에탄올 가용 조추출물 중량의 2 내지 7배, 바람직하게는 4 내지 6배 부피의 물을 분산시킨 후, 헥산, 클로로포름, 메틸렌클로라이드, 에틸아세테이트 및 부탄올을 순차적으로 물과 동량 부피를 가하여 1 내지 5 회, 바람직하게는 2 내지 4회 분획하여 본 발명의 나한과 극성용매 및 비극성용매 가용 추출물을 수득할 수 있다.

또한, 본 발명의 나한과로부터 트라이터펜계 화합물들을 분리하는 방법을 상세히 설명하면, 상기에서 얻은 극성용매 가용추출물에 클로로포름: 메탄올: 물의 혼합용매, 바람직하게는 클로로포름: 메탄올: 물 (6: 4: 1)의 혼합비를 갖는 혼합용매를 사용하여 실리카겔 컬럼 크로마토그래피법을 수행하여 수득되는 10개의 분획 중 7번째 분획으로부터 모그로시드Ⅳ(Mogroside Ⅳ, 화합물 1이라 명명함) 및 시아메노시드 Ⅰ(Siamenoside Ⅰ, 화합물 3이라 명명함)를 수득할 수 있으며, 7번째 분획으로부터 11-옥소-모그로시드 Ⅴ(11-Oxo-mogroside Ⅴ, 화합물 4라 명명함)를, 9번째 분획으로부터 모그로시드 Ⅴ(Mogroside Ⅴ, 화합물 2이라 명명함)를 각각 수득할 수 있다.

상기 조추출물, 극성용매 가용추출물, 비극성용매 가용추출물 또는 이로부터 분리된 트라이터펜계 화합물들은 조성물 총 중량에 대하여 0.0001 내지 20중량%, 바람직하게는 0.01 내지 10 중량%로 함유하는 것을 특징으로 한다.

상기 조추출물, 극성용매 가용추출물, 비극성용매 가용추출물 또는 이로부터 분리된 트라이터펜계 화합물들은 엘라스타제 저해효과, MMP-1 유전자 발현 억제효과, 콜라겐합성, 피부주름개선 및 피부탄력증진 효과를 확인한 결과 뛰어난 효과를 나타내었으며, 또한 피부에 적용시 안전성에도 문제가 없음을 확인할 수 있었다.

본 발명은 상기의 제조방법으로 얻어진 나한과 조추출물, 극성용매 가용추출 물, 비극성용매 가용추출물 또는 이로부터 분리된 트라이터펜계 화합물들을 유효성분으로 함유하는 주름 개선용 피부외용 약학조성물을 제공한다.

본 발명의 주름 개선용 피부외용 약학조성물은, 조성물 총 중량에 대하여 상기 조추출물, 극성용매 가용추출물, 비극성용매 가용추출물 또는 이로부터 분리된 트라이터펜계 화합물들을 0.1 내지 50 중량%로 포함한다.

본 발명의 조추출물, 극성용매 가용추출물, 비극성용매 가용추출물 또는 이로부터 분리된 트라이터펜계 화합물들을 포함하는 피부외용 약학조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 조추출물, 극성용매 가용추출물, 비극성용매 가용추출물 또는 이로부터 분리된 트라이터펜계 화합물들을 포함하는 약학조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 외용제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있으며, 바람직하게는 크림, 젤, 패취, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 또는 카타플라스마제의 피부 외용 약학 조성물을 제공한다. 조추출물, 극성용매 가용추출물, 비극성용매 가용추출물 또는 이로부터 분리된 트라이터펜계 화합물들을 포함하는 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 올리고당, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필 히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜 (propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈 (tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 나한과 조추출물, 극성용매 가용추출물, 비극성용매 가용추출물 또는 이로부터 분리된 트라이터펜계 화합물들을 함유하는 피부노화 방지 및 주름 개선용 조성물은 피부에 적용할 수 있는 피부 외용제 제형으로서 크림, 젤, 패취, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 또는 카타플라스마제의 피부 외용제 형태의 약학조성물로 제조하여 사용할 수 있으나, 이에 한정하는 것은 아니다.

본 발명의 조추출물, 극성용매 가용추출물, 비극성용매 가용추출물 또는 이로부터 분리된 트라이터펜계 화합물들의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 추출물은 1일 0.0001 내지 100㎎/㎏으로, 바람직하게는 0.001 내지 10㎎/㎏으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

본 발명의 나한과 조추출물, 극성용매 가용추출물, 비극성용매 가용추출물 또는 이로부터 분리된 트라이터펜계 화합물들을 포함하는 조성물은 피부의 주름개선 효과를 위한 화장품 및 세안제 등에 다양하게 이용될 수 있다. 본 조성물을 첨가할 수 있는 제품으로는, 예를 들어, 각종 크림, 로션, 스킨 등과 같은 화장품류와 클렌징, 세안제, 비누, 트리트먼트, 미용액 등이 있다.

본 발명의 화장료는 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 스핑고 지질 및 해초 엑기스로 이루어진 군에서 선택된 조성물을 포함한다.

수용성 비타민으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 비타민 B1, 비타민 B2, 비타민 B6, 피리독신, 염산피리독신, 비타민 B12, 판토텐산, 니코틴산, 니코틴산아미드, 엽산, 비타민 C, 비타민 H 등을 들 수 있으며, 그들의 염 (티아민염산염, 아스코르빈산나트륨염 등)이나 유도체 (아스코르빈산-2-인산나트륨염, 아스코르빈산-2-인산마그네슘염 등)도 본 발명에서 사용할 수 있는 수용성 비타민에 포함된다. 수용성 비타민은 미생물 변환법, 미생물의 배양물로부터의 정제법, 효소법 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 수득할 수 있다.

유용성 비타민으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 비타민 A, 카로틴, 비타민 D2, 비타민 D3, 비타민 E (d1-알파 토코페롤, d-알파 토코페롤, d-알파 토코페롤) 등을 들 수 있으며, 그들의 유도체 (팔미틴산아스코르빈, 스테아르산아스코르빈, 디팔미틴산아스코르빈, 아세트산dl-알파 토코페롤, 니코틴산dl-알파 토코페롤비타민 E, DL-판토테닐알코올, D-판토테닐알코올, 판토테닐에틸에테르 등) 등도 본 발명에서 사용되는 유용성 비타민에 포함된다. 유용성 비타민은 미생물 변환법, 미생물의 배양물로부터의 정제법, 효소 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 취득할 수 있다.

고분자 펩티드로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 콜라겐, 가수 분해 콜라겐, 젤라틴, 엘라스틴, 가수 분해 엘라스틴, 케라틴 등을 들 수 있다. 고분자 펩티드는 미생물의 배양액으로부터의 정제법, 효소법 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 정제 취득할 수 있으며, 또는 통상 돼지나 소 등의 진피, 누에의 견섬유 등의 천연물로부터 정제하여 사용할 수 있다.

고분자 다당으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 히드록시에틸셀룰로오스, 크산탄검, 히알루론산나트륨, 콘드로이 틴 황산 또는 그 염 (나트륨염 등) 등을 들 수 있다. 예를 들어, 콘드로이틴 황산 또는 그 염 등은 통상 포유 동물이나 어류로부터 정제하여 사용할 수 있다.

스핑고 지질로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 세라미드, 피토스핑고신, 스핑고당지질 등을 들 수 있다. 스핑고 지질은 통상 포유류, 어류, 패류, 효모 또는 식물 등으로부터 통상의 방법에 의해 정제하거나 화학 합성법에 의해 취득할 수 있다.

해초 엑기스로는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 갈조 엑기스, 홍조 엑기스, 녹조 엑기스 등을 들 수 있으며, 또, 이들의 해초 엑기스로부터 정제된 칼라기난, 아르긴산, 아르긴산나트륨, 아르긴산칼륨 등도 본 발명에서 사용되는 해초 엑기스에 포함된다. 해초 엑기스는 해초로부터 통상의 방법에 의해 정제하여 취득할 수 있다.

본 발명의 화장료에는 상기 필수 성분과 더불어 필요에 따라 통상 화장료에 배합되는 다른 성분을 배합해도 된다.

이외에 첨가해도 되는 배합 성분으로서는 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기 및 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한(制汗)제, 정제수 등을 들 수 있다.

유지 성분으로서는 에스테르계 유지, 탄화수소계 유지, 실리콘계 유지, 불소계 유지, 동물 유지, 식물 유지 등을 들 수 있다.

에스테르계 유지로서는 트리2-에틸헥산산글리세릴, 2-에틸헥산산세틸, 미리 스틴산이소프로필, 미리스틴산부틸, 팔미틴산이소프로필, 스테아르산에틸, 팔미틴산옥틸, 이소스테아르산이소세틸, 스테아르산부틸, 리놀레산에틸, 리놀레산이소프로필, 올레인산에틸, 미리스틴산이소세틸, 미리스틴산이소스테아릴, 팔미틴산이소스테아릴, 미리스틴산옥틸도데실, 이소스테아르산이소세틸, 세바신산디에틸, 아디핀산디이소프로필, 네오펜탄산이소알킬, 트리(카프릴, 카프린산)글리세릴, 트리2-에틸헥산산트리메틸롤프로판, 트리이소스테아르산트리메틸롤프로판, 테트라2-에틸헥산산펜타엘리슬리톨, 카프릴산세틸, 라우린산데실, 라우린산헥실, 미리스틴산데실, 미리스틴산미리스틸, 미리스틴산세틸, 스테아르산스테아릴, 올레인산데실, 리시노올레인산세틸, 라우린산이소스테아릴, 미리스틴산이소트리데실, 팔미틴산이소세틸, 스테아르산옥틸, 스테아르산이소세틸, 올레인산이소데실, 올레인산옥틸도데실, 리놀레산옥틸도데실, 이소스테아르산이소프로필, 2-에틸헥산산세토스테아릴, 2-에틸헥산산스테아릴, 이소스테아르산헥실, 디옥탄산에틸렌글리콜, 디올레인산에틸렌글리콜, 디카프린산프로필렌글리콜, 디(카프릴,카프린산)프로필렌글리콜, 디카프릴산프로필렌글리콜, 디카프린산네오펜틸글리콜, 디옥탄산네오펜틸글리콜, 트리카프릴산글리세릴, 트리운데실산글리세릴, 트리이소팔미틴산글리세릴, 트리이소스테아르산글리세릴, 네오펜탄산옥틸도데실, 옥탄산이소스테아릴, 이소노난산옥틸, 네오데칸산헥실데실, 네오데칸산옥틸도데실, 이소스테아르산이소세틸, 이소스테아르산이소스테아릴, 이소스테아르산옥틸데실, 폴리글리세린올레인산에스테르, 폴리글리세린이소스테아르산에스테르, 시트르산트리이소세틸, 시트르산트리이소알킬, 시트르산트리이소옥틸, 락트산라우릴, 락트산미리스틸, 락트산세틸, 락트산옥틸데 실, 시트르산트리에틸, 시트르산아세틸트리에틸, 시트르산아세틸트리부틸, 시트르산트리옥틸, 말산디이소스테아릴, 히드록시스테아르산 2-에틸헥실, 숙신산디2-에틸헥실, 아디핀산디이소부틸, 세바신산디이소프로필, 세바신산디옥틸, 스테아르산콜레스테릴, 이소스테아르산콜레스테릴, 히드록시스테아르산콜레스테릴, 올레인산콜레스테릴, 올레인산디히드로콜레스테릴, 이소스테아르산피트스테릴, 올레인산피트스테릴, 12-스테알로일히드록시스테아르산이소세틸, 12-스테알로일히드록시스테아르산스테아릴, 12-스테알로일히드록시스테아르산이소스테아릴 등의 에스테르계 등을 들 수 있다.

탄화 수소계 유지로서는 스쿠알렌, 유동 파라핀, 알파-올레핀올리고머, 이소파라핀, 세레신, 파라핀, 유동 이소파라핀, 폴리부덴, 마이크로크리스탈린왁스, 와셀린 등의 탄화 수소계 유지 등을 들 수 있다.

실리콘계 유지로서는 폴리메틸실리콘, 메틸페닐실리콘, 메틸시클로폴리실록산, 옥타메틸폴리실록산, 데카메틸폴리실록산, 도데카메틸시클로실록산, 디메틸실록산ㆍ메틸세틸옥시실록산 공중합체, 디메틸실록산ㆍ메틸스테알록시실록산 공중합체, 알킬 변성 실리콘유, 아미노 변성 실리콘유 등을 들 수 있다.

불소계 유지로서는 퍼플루오로폴리에테르 등을 들 수 있다.

동물 또는 식물 유지로서는 아보카도유, 아르몬드유, 올리브유, 참깨유, 쌀겨유, 새플라워유, 대두유, 옥수수유, 유채유, 행인(杏仁)유, 팜핵유, 팜유, 피마자유, 해바라기유, 포도종자유, 면실유, 야자유, 쿠쿠이너트유, 소맥배아유, 쌀 배아유, 시아버터, 월견초유, 마커데이미아너트유, 메도홈유, 난황유, 우지(牛脂), 마유, 밍크유, 오렌지라피유, 호호바유, 캔데리러왁스, 카르나바왁스, 액상 라놀린, 경화피마자유 등의 동물 또는 식물 유지를 들 수 있다.

보습제로서는 수용성 저분자 보습제, 지용성 분자 보습제, 수용성 고분자, 지용성 고분자 등을 들 수 있다.

수용성 저분자 보습제로서는 세린, 글루타민, 솔비톨, 만니톨, 피롤리돈-카르복실산나트륨, 글리세린, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 에틸렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜B(중합도 n = 2 이상), 폴리프로필렌글리콜(중합도 n = 2 이상), 폴리글리세린B(중합도 n = 2 이상), 락트산, 락트산염 등을 들 수 있다.

지용성 저분자 보습제로서는 콜레스테롤, 콜레스테롤에스테르 등을 들 수 있다.

수용성 고분자로서는 카르복시비닐폴리머, 폴리아스파라긴산염, 트라가칸트, 크산탄검, 메틸셀룰로오스, 히드록시메틸셀룰로오스, 히드록시에틸셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스, 수용성 키틴, 키토산, 덱스트린 등을 들 수 있다.

지용성 고분자로서는 폴리비닐피롤리돈ㆍ에이코센 공중합체, 폴리비닐피롤리돈ㆍ헥사데센 공중합체, 니트로셀룰로오스, 덱스트린지방산에스테르, 고분자 실리콘 등을 들 수 있다.

에몰리엔트제로서는 장쇄아실글루타민산콜레스테릴에스테르, 히드록시스테아르산콜레스테릴, 12-히드록시스테아르산, 스테아르산, 로진산, 라놀린지방산콜레스테릴에스테르 등을 들 수 있다.

계면 활성제로서는 비이온성 계면 활성제, 음이온성 계면 활성제, 양이온성 계면 활성제, 양성 계면 활성제 등을 들 수 있다.

비이온성 계면 활성제로서는 자기 유화형 모노스테아르산글리세린, 프로필렌글리콜지방산에스테르, 글리세린지방산에스테르, 폴리글리세린지방산에스테르, 솔비탄지방산에스테르, POE (폴리옥시에틸렌)솔비탄지방산에스테르, POE 솔비트지방산에스테르, POE 글리세린지방산에스테르, POE 알킬에테르, POE 지방산에스테르, POE 경화피마자유, POE 피마자유, POEㆍPOP (폴리옥시에틸렌ㆍ폴리옥시프로필렌) 공중합체, POEㆍPOP 알킬에테르, 폴리에테르변성실리콘, 라우린산알카놀아미드, 알킬아민옥시드, 수소첨가대두인지질 등을 들 수 있다.

음이온성 계면 활성제로서는 지방산비누, 알파-아실술폰산염, 알킬술폰산염, 알킬알릴술폰산염, 알킬나프탈렌술폰산염, 알킬황산염, POE 알킬에테르황산염, 알킬아미드황산염, 알킬인산염, POE 알킬인산염, 알킬아미드인산염, 알킬로일알킬타우린염, N-아실아미노산염, POE 알킬에테르카르복실산염, 알킬술포숙신산염, 알킬술포아세트산나트륨, 아실화 가수분해 콜라겐펩티드염, 퍼플루오로알킬인산에스테르 등을 들 수 있다.

양이온성 계면 활성제로서는 염화알킬트리메틸암모늄, 염화스테아릴트리메틸암모늄, 브롬화스테아릴트리메틸암모늄, 염화세토스테아릴트리메틸암모늄, 염화디스테아릴디메틸암모늄, 염화스테아릴디메틸벤질암모늄, 브롬화베헤닐트리메틸암모늄, 염화벤잘코늄, 스테아르산디에틸아미노에틸아미드, 스테아르산디메틸아미노프로필아미드, 라놀린 유도체 제 4급 암모늄염 등을 들 수 있다.

양성 계면 활성제로서는 카르복시베타인형, 아미드베타인형, 술포베타인형, 히드록시술포베타인형, 아미드술포베타인형, 포스포베타인형, 아미노카르복실산염형, 이미다졸린 유도체형, 아미드아민형 등의 양성 계면 활성제 등을 들 수 있다.

유기 및 무기 안료로서는 규산, 무수규산, 규산마그네슘, 탤크, 세리사이트, 마이카, 카올린, 벵갈라, 클레이, 벤토나이트, 티탄피막운모, 옥시염화비스무트, 산화지르코늄, 산화마그네슘, 산화아연, 산화티탄, 산화알루미늄, 황산칼슘, 황산바륨, 황산마그네슘, 탄산칼슘, 탄산마그네슘, 산화철, 군청, 산화크롬, 수산화크롬, 칼라민 및 이들의 복합체등의 무기 안료 ; 폴리아미드, 폴리에스테르, 폴리프로필렌, 폴리스티렌, 폴리우레탄, 비닐수지, 요소수지, 페놀수지, 불소수지, 규소수지, 아크릴수지, 멜라민수지, 에폭시수지, 폴리카보네이트수지, 디비닐벤젠ㆍ스티렌 공중합체, 실크파우더, 셀룰로오스, CI 피그먼트옐로우, CI 피그먼트오렌지 등의 유기 안료 및 이들의 무기 안료와 유기 안료의 복합 안료 등을 들 수 있다.

유기 분체로서는 스테아르산칼슘 등의 금속비누 ; 세틸린산아연나트륨, 라우릴린산아연, 라우릴린산칼슘 등의 알킬인산금속염 ; N-라우로일-베타-알라닌칼슘, N-라우로일-베타-알라닌아연, N-라우로일글리신칼슘 등의 아실아미노산 다가금속염 ; N-라우로일-타우린칼슘, N-팔미토일-타우린칼슘 등의 아미드술폰산 다가금속염 ; N-엡실론-라우로일-L-리진, N-엡실론-팔미토일리진, N-알파-파리토일올니틴, N-알파-라우로일아르기닌, N-알파-경화우지지방산아실아르기닌 등의 N-아실염기성아미노산 ; N-라우로일글리실글리신 등의 N-아실폴리펩티드 ; 알파-아미노카프릴산, 알파-아미노라우린산 등의 알파-아미노지방산 ; 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 나일 론, 폴리메틸메타크릴레이트, 폴리스티렌, 디비닐벤젠ㆍ스티렌 공중합체, 사불화에틸렌 등을 들 수 있다.

자외선 흡수제로서는 파라아미노벤조산, 파라아미노벤조산에틸, 파라아미노벤조산아밀, 파라아미노벤조산옥틸, 살리실산에틸렌글리콜, 살리신산페닐, 살리신산옥틸, 살리신산벤질, 살리신산부틸페닐, 살리신산호모멘틸, 계피산벤질, 파라메톡시계피산-2-에톡시에틸, 파라메톡시계피산옥틸, 디파라메톡시계피산모노-2-에틸헥산글리세릴, 파라메톡시계피산이소프로필, 디이소프로필ㆍ디이소프로필계피산에스테르 혼합물, 우로카닌산, 우로카닌산에틸, 히드록시메톡시벤조페논, 히드록시메톡시벤조페논술폰산 및 그 염, 디히드록시메톡시벤조페논, 디히드록시메톡시벤조페논디술폰산나트륨, 디히드록시벤조페논, 테트라히드록시벤조페논, 4-tert-부틸-4'-메톡시디벤조일메탄, 2,4,6-트리아닐리노-p-(카르보-2'-에틸헥실-1'-옥시)-1,3,5-트리아진, 2-(2-히드록시-5-메틸페닐)벤조트리아졸 등을 들 수 있다.

살균제로서는 히노키티올, 트리클로산, 트리클로로히드록시디페닐에테르, 크로르헥시딘글루콘산염, 페녹시에탄올, 레조르신, 이소프로필메틸페놀, 아줄렌, 살리칠산, 진크필리티온, 염화벤잘코늄, 감광소 301 호, 모노니트로과이어콜나트륨, 운데시렌산 등을 들 수 있다.

산화 방지제로서는 부틸히드록시아니솔, 갈릭산프로필, 엘리소르빈산 등을 들 수 있다.

pH 조정제로서는 시트르산, 시트르산나트륨, 말산, 말산나트륨, 프말산, 프말산나트륨, 숙신산, 숙신산나트륨, 수산화나트륨, 인산일수소나트륨 등을 들 수 있다.

알코올로서는 세틸알코올 등의 고급 알코올을 들 수 있다.

또한, 이외에 첨가해도 되는 배합 성분은 이에 한정되는 것은 아니며, 또, 상기 어느 성분도 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 배합 가능하지만, 총중량에 대하여 바람직하게는 0.01 - 5 % 중량 백분율, 보다 바람직하게는 0.01 - 3 % 중량 백분율로 배합된다.

본 발명의 화장료는 용액, 유화물, 점성형 혼합물 등의 형상을 취할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효성분으로서 상기 조추출물, 극성용매 가용추출물, 비극성용매 가용추출물 또는 이로부터 분리된 트라이터펜계 화합물들 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예를 들면, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제 및 담체를 포함한다.

본 발명의 주름개선용 기능성 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어 유액, 크림, 화장수, 팩, 파운데이션, 로션, 미용액, 모발화장료 등을 들 수 있다.

구체적으로, 본 발명의 화장료 조성물은 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 및 바디클린저의 제형을 포함한다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액의 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

이하, 본 발명을 하기 실시예 및 실험예에 의해 상세히 설명한다.

단, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예 및 실험예에 의해 한정되는 것은 아니다.

참고예 . 사용기기 및 용매

본 발명에서 ¹H-NMR 및 ¹³C-NMR 분석에 사용된 핵자기공명분석기는 부루커사 Avance 500(BRUKER, 500MHz)를 사용하여 구조를 분석하였으며, 사용된 용매는 피리딘(pyridine)-d₅로써 시그마-알드리치(sigma-Aldrich)사에서 구입하여 사용하였다.

실시예 1. 나한과 조추출물의 제조

1-1. 에탄올 조추출물의 제조

나한과를 건조하여 1 kg을 에탄올 3000 ㎖ 로 3회 반복하여 환류냉각추출 후 여과하여 얻은 여과액을 감압농축기로 농축하여 건조된 추출물 140 g을 수득하였다. 수득된 나한과 추출물을 고성능액체크로마토그래피(HPLC, Shimadzu LC-10Avp system, Japan)로 분석한 결과 나한과 추출물 중의 모그로시드 V의 함량은 2.98% 이었다.

1-2. 물 조추출물의 제조

나한과를 건조하여 1kg에 물을 1-20배 부피량을 가하여, 추출 방법으로는 냉각 콘덴서가 장치되어 용매가 증발되는 것을 방지한 상태에서 40~95℃, 4~20시간 가열하여 추출하거나 5~40℃에서 1~15일간 침적시켜 유효성분을 추출하고, 냉각 콘덴서가 달린 증류장치를 이용하여 증발되어 나오는 용매를 회수하면서 완전히 감압 농축하였다. 얻어진 수득량과 모그로시드 V의 함유량을 표 1에 기재하였다.

1-3. 메탄올 조추출물의 제조

실시예 1-2와 동일한 방법으로 용매로 메탄올을 사용하여 조추출물을 수득하여 수득량과 모그로시드 Ⅴ의 함유량을 표 1에 기재하였다.

1-4. 부틸렌글리콜 조추출물의 제조

실시예 1-2와 동일한 방법으로 용매로 부틸렌글리콜을 사용하여 조추출물을 수득하여 수득량과 모그로시드 Ⅴ의 함유량을 표 1에 기재하였다.

1-5. 프로필렌글리콜 조추출물의 제조

실시예 1-2와 동일한 방법으로 용매로 프로필렌글리콜을 사용하여 조추출물을 수득하여 수득량과 모그로시드 Ⅴ의 함유량을 표 1에 기재하였다.

1-6. 글리세린 조추출물의 제조

실시예 1-2와 동일한 방법으로 용매로 글리세린을 사용하여 조추출물을 수득하여 수득량과 모그로시드 Ⅴ의 함유량을 표 1에 기재하였다.

1-7. 함수 부틸렌글리콜 (30 w/w %) 조추출물의 제조

실시예 1-2와 동일한 방법으로 용매로 함수 부틸렌글리콜(30 w/w %)을 사용하여 조추출물을 수득하여 수득량과 모그로시드 Ⅴ의 함유량을 표 1에 기재하였다.

1-8. 함수 프로필렌글리콜 (30 w/w %) 조추출물의 제조

실시예 1-2와 동일한 방법으로 용매로 함수 프로필렌글리콜(30 w/w %)을 사용하여 조추출물을 수득하여 수득량과 모그로시드 Ⅴ의 함유량을 표 1에 기재하였다.

1-9. 함수 에탄올(30 w/w %) 조추출물의 제조

실시예 1-2와 동일한 방법으로 용매로 함수 에탄올(30 w/w %)을 사용하여 조추출물을 수득하여 수득량과 모그로시드 Ⅴ의 함유량을 표 1에 기재하였다.

1-10. 함수 에탄올(70 w/w %) 조추출물의 제조

실시예 1-2와 동일한 방법으로 용매로 함수 에탄올(70 w/w %)을 사용하여 조추출물을 수득하여 수득량과 모그로시드 Ⅴ의 함유량을 표 1에 기재하였다.

	용매	수득량 (g)	모그로시드 V 함량 (%)
실시예 1-2	물	145	1.97
실시예 1-3	메탄올	135	2.41
실시예 1-4	부틸렌글리콜	109	1.05
실시예 1-5	프로필렌글리콜	104	0.98
실시예 1-6	글리세린	103	1.21
실시예 1-7	함수 부틸렌글리콜 (30 w/w%)	132	2.07
실시예 1-8	함수 프로필렌글리콜 (30 w/w%)	128	1.75
실시예 1-9	함수 에탄올 (30 w/w%)	130	2.54
실시예 1-10	함수 에탄올 (70 w/w%)	132	2.65

실시예 2. 나한과 극성용매 및 비극성용매 가용추출물의 제조

실시예 1-1에서 수득한 나한과 에탄올 추출물 130 g를 물 700 ㎖에 분산시킨 후 헥산, 메틸렌클로라이드, 에틸아세테이트 및 n-부탄올을 순차적으로 700 ㎖씩 3회 가하여 추출 및 분획하여 나한과의 극성용매 및 비극성용매 가용추출물을 수득하였다. 얻은 수율과 모그로시드 V 함량을 표 2에 나타내었다.

용매	수득량 (g)	모그로시드 V 함량 (%)
헥산	11.7	검출되지 않음
메틸렌클로라이드	14.4	0.06
에틸아세테이트	16.8	0.64
n-부탄올	28.4	1.48
물	58.3	4.08

실시예 3. 나한과 조추출물로부터 트라이터펜계 화합물의 분리

실시예 1-1에서 수득한 나한과 조추출물 건조분말 5g를 헥산으로 세척한 후 실리카겔(Merck silica gel60, 0.063~0.20mm)로 충진된 컬럼에서 클로로포름: 메탄올: 물(6:4:1)의 혼합용매를 전개용매로 분획하여 10개의 분획을 각각 300㎖씩 수득하였으며, 이 중, 7번째 분획으로부터 모그로시드 Ⅳ(화합물 1)와 시아메노시드 Ⅰ(화합물 3), 8번째 분획으로부터 11-옥소-모그로시드 Ⅴ(화합물 4), 9번째 분획으로부터 모그로시드 Ⅴ(화합물 2)를 각각 수득하였으며 개개의 화합물들을 핵자기공명분석기를 이용하여 분석한 결과를 표 3 및 표 4에 나타내었으며, 화합물 2의 수소핵자기공명 스펙트럼을 도 1에 나타내었다.

수소핵자기공명 분석 결과

	화합물명	Chemical Shift (δ)
화합물 1	Mogroside IV	anomeric H 5.34(1H, d, J=7.7Hz), 5.17(1H, d, J=7.9Hz), 5.09(1H, d, J=7.7Hz), 4.82(1H, d, J=7.9Hz)
화합물 2	Mogroside V	anomeric H 5.41(1H, d, J=7.7Hz), 4.88(1H, d, J=8.6Hz), 4.86(1H, d, J=6.1Hz), 4.84(1H, d, J=7.4Hz), 4.864(1H, d, J=6.1Hz)
화합물 3	Siamenoside I	anomeric H 5.38(1H, d, J=7.7Hz), 4.99(1H, d, J=7.7Hz), 4.86(1H, d, J=7.7Hz), 4.84(1H, d, J=7.5Hz),
화합물 4	11-Oxo-mogroside V	anomeric H 5.46(1H, d, J=7.7Hz), 5.12(1H, d, J=7.7Hz), 4.88(1H, d, J=7.9Hz), 4.84(1H, d, J=7.7Hz), 4.77(1H, d, J=7.5Hz)

탄소핵자기공명 분석 결과

	화합물명	Chemical Shift (δ)
화합물 1	Mogroside IV	anomeric C 107.0, 106.4, 105.5, 101.8.
화합물 2	Mogroside V	anomeric C 106.8, 105.5, 105.2, 104.7, 103.5.
화합물 3	Siamenoside I	anomeric C 107.3, 105.7, 104.9, 103.6.
화합물 4	11-Oxo-mogroside V	anomeric C 106.9, 105.6, 105.5, 104.9, 103.6.

실험예 1. 단층 세포배양에서의 세포 생존률 측정

상기 실시예1 내지 3에서 수득된 나한과 조추출물, 극성용매 가용추출물, 비극성용매 가용추출물 또는 이로부터 분리된 트라이터펜계 화합물들 중 모그로시드 V에 대하여 단층 세포 배양에서의 세포증식 효과를 MTT 법을 이용하여 측정 하였다. 인간 섬유아 세포(human fibroblasts cell line)(ATCC, CRL-2076)를 5 × 10⁴ 세포/㎖의 농도로 하여 24 웰 배양접시에 분주하였다. 배지는 소혈청 10%를 함유한 DMEM (Dubelcco'S Modified Eagle Medium, BRL, USA)을 사용하였다. 분주 24시간 후 소혈청 2%를 함유한 DMEM 배지로 교체하고, 시험 시료를 농도별로 10㎕ 첨가한 후 24시간 동안 37℃, 5% CO₂ 배양기에서 배양하였다. 배양이 끝난 후 상등액을 제거 하고 다시 5% PBS(phosphate buffered saline) 200㎕씩을 가하여 세척한 후 0.25 mg/㎖ MTT(3-[4,5-dimethylthiazole-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide) 용액을 웰 당 1.0 ㎖씩 가한 후 4시간 후에 MTT를 제거하고 DMSO(dimethylsulfoxide)를 웰당 1.0㎖씩 가하여 용해시킨 후 570nm에서 흡광도를 측정 하여, 그 결과를 표 5에 나타내었다.

시 료	세포 생존률 (%)
	250 ㎍/㎖	500 ㎍/㎖
실시예 1-1	118.43	118.90
실시예 1-2	115.12	115.30
실시예 1-3	117.83	118.21
실시예 1-4	113.53	111.25
실시예 1-5	109.54	110.42
실시예 1-6	111.63	112.84
실시예 1-7	108.84	109.55
실시예 1-8	109.95	112.24
실시예 1-9	115.52	110.75
실시예 1-10	112.84	111.53
실시예 2(물 가용 추출물)	110.85	108.35
실시예 2(메틸렌클로라이드 가용 추출물)	105.35	101.68
모그로시드 V (34.4 ㎍/㎖)	103.23
모그로시드 V (68.7 ㎍/㎖)	101.49

실험예 2. 제 1형 콜라겐 생합성량 측정

상기 실시예로부터 얻어진 나한과 조추출물, 극성용매 가용추출물, 비극성용매 가용추출물 또는 이로부터 분리된 트라이터펜계 화합물들에 대하여 콜라겐 합성량을 측정 하였다(Taubman, M.B. et al., Science, 186, p1115, 1974).

PIP(Procollagen Type I C-peptide) EIA 어세이로 콜라겐 합성량을 측정하였으며, 가장 많이 합성이 이루어지는 제I형 전구 콜라겐 C 말단 펩타이드(PICP)를 정량적으로 측정하였다.

24 웰 플레이트에 1× 10⁵의 세포를 분주하여 24시간 배양하였다. 배양 후 혈청을 포함하지 않은 배지로 교체해주고 각각의 시료를 500 /㎖의 농도로 첨가하여, 37℃, 5% CO₂ 인큐베이터에서 24시간 배양하였다. 대조군으로는 콜라겐 합성을 촉진하는 것으로 알려진 비타민 C를 대조군으로 하였다. 배양 상층액인 배지를 원심 분리하여 PIP (Procollagen Type I C-peptide) EIA KIT 에 사용하였으며, PIP에 대한 마우스 단클론 항체가 코팅되어있는 96 웰 플레이트에 퍼록시다제(peroxidase)로 표지한 항체-POD 컨쥬게이트(MK1O1, TAKARA BIO INC.)를 넣어 반응시키고, 여기에 배양액을 20 ㎕/웰을 첨가하였다.

37℃, 5% CO₂ 인큐베이터에서 3시간 반응시킨 후 기질용액인 ρ-페닐렌디아민(phenylenediamine)을 100 ㎕/웰 넣어 발색시켰다. 실내온도에서 15분 방치 후 반응중지용액을 100 ㎕/웰 넣어 반응을 중지시켰다. 5분 이내에 450 nm에서 흡광도를 측정하였고, PICP 표준농도로 그래프를 작성하여 콜라겐 양을 측정하여 그 결과를 표 6에 나타내었다.

시 료	제 1형 콜라겐 생합성량(%)
	500 /㎖
대조군	100
실시예 1-1	130.45
실시예 1-2	119.87
실시예 1-3	111.72
실시예 1-4	99.10
실시예 1-5	98.71
실시예 1-6	99.14
실시예 1-7	102.21
실시예 1-8	100.01
실시예 1-9	107.54
실시예 1-10	107.98
실시예 2(물 가용 추출물)	120.58
실시예 2(메틸렌클로라이드 가용 추출물)	98.95
모그로시드 V	111.24

실험예 3. MMP -1 저해 효과 측정

상기 실시예로부터 얻어진 나한과 조추출물, 극성용매 가용추출물, 비극성용매 가용추출물 또는 이로부터 분리된 트라이터펜계 화합물들에 대하여 MMP-1 유전자의 발현 정도를 측정하기 위하여 RT-PCR(Reverse Transcription -Polymerase Chain Reaction)을 실시하였다. 인간 정상 섬유아세포(ATCC -2706)를 60mm 배양접시에 1 × 10⁶의 밀도로 10% 소혈청(Gibco/BRL)을 포함하는 DMEM 배지(Gibco/BRL)로 37℃, 5% CO₂ 배양기에서 하루 동안 배양하였다. 그 후 혈청이 2% 첨가된 배지로 교환해 주고 소디움 니트로프루사이드 (Sodium Nitroprusside, 시그마사) 50 을 산화질소의 공급원으로 사용하여 배지에 첨가하고 시료를 농도별로 첨가하여 24시간 37℃에서 배양한다. 그 후, 세포로부터 트라이졸 시약(Trizole reagent) (Gibco/BRL)을 이용한 구아니디움 티오시아네이트-페놀-클로로포름 추출 방법 (Guanidium thiocyanate-phenol- chloroform extraction)으로 토탈 RNA를 분리하였다. RT-PCR을 하기 위해 위의 방법으로 얻어진 RNA에 RNA 분해 효소가 없는 DNA 분해 효소 (RNase-free DNase, Promega)를 37℃에서 30분간 처리하여 DNA의 오염을 제거하였으며 페놀/클로로포름 추출법과 에탄올 침전으로 순수 RNA를 얻었다. 1 ㎍의 RNA를 올 인 원 RT/PCR 키트 (All in one RT/PCR kit, Superbio)를 사용하여 RT-PCR를 실시하였다. 대조군으로 베타-엑틴을 사용하였으며 RT-PCR에 사용된 MMP-1의 프라이머(primer)는 서열번호 1 및 서열번호 2(표 7 참조)로 구성되어있고, 베타-엑틴의 프라이머는 서열번호 3 및 서열번호 4(표 7 참조)로 구성되어있다. 반응 조건은 MMP-1은 95℃ 1분, 48℃ 1분, 72℃ 1분, 29사이클이며, 베타-엑틴은 95℃ 1분, 62℃ 1분, 72℃ 1분, 22사이클이며, PCR 생산물은 1.5%(w/v) 아가로즈(agarose, Sigma사)젤에 전기영동하여 젤 이미지 분석기(Biorad)로 정량하였다. 그 결과를 표 8에 나타내었다.

서열번호 1	5'-TGGGAGCAAACACATCTGA-3'
서열번호 2	5'-ATCACTTCTCCCCGAATCGT-3'
서열번호 3	5'-GAGACCTTCAACACCCCAGCC-3'
서열번호 4	5'-GGCCATCTCTTGCTCGAAGTC-3'

시 료	MMP-1 발현량 (%)
	250 ㎍/㎖	500 ㎍/㎖
대조군	100	100
소디움 니트로프루사이드	110.66	110.66
소디움 니트로프루사이드 + 실시예 1-1	70.28	29.45
소디움 니트로프루사이드 + 실시예 1-2	75.23	30.24
소디움 니트로프루사이드 + 실시예 1-3	74.25	32.58
소디움 니트로프루사이드 + 실시예 1-4	98.44	95.42
소디움 니트로프루사이드 + 실시예 1-5	95.43	95.23
소디움 니트로프루사이드 + 실시예 1-6	96.27	94.37
소디움 니트로프루사이드 + 실시예 1-7	89.87	85.41
소디움 니트로프루사이드 + 실시예 1-8	92.21	86.38
소디움 니트로프루사이드 + 실시예 1-9	79.85	41.25
소디움 니트로프루사이드 + 실시예 1-10	75.88	40.58
소디움 니트로프루사이드 + 실시예 2(물 가용 추출물)	74.35	32.54
소디움 니트로프루사이드 + 실시예 11.(메틸렌클로라이드 가용 추출물)	99.65	95.35
소디움 니트로프루사이드 + 모그로시드 V	73.22	33.47
소디움 니트로프루사이드 + EGCG (11.46 ㎍/㎖)	76.44

실험예 4. 제 1형 콜라겐 유전자 발현량 조사

상기 실시예로부터 얻어진 나한과 나한과 조추출물, 극성용매 가용추출물, 비극성용매 가용추출물 또는 이로부터 분리된 트라이터펜계 화합물들에 대하여 제 1형 콜라겐 유전자의 발현 정도를 측정하기 위하여 RT-PCR(Reverse Transcription -Polymerase Chain Reaction)을 실시하였다. 인간 정상 섬유아세포(ATCC -2706)를 60mm 배양접시에 1 × 10⁶의 밀도로 10% 소혈청(Gibco/BRL)을 포함하는 DMEM 배지(Gibco/BRL)로 37℃, 5% CO₂ 배양기에서 하루 동안 키웠다. 그 후 혈청이 2% 첨가된 배지로 교환해 주고 시료를 농도별로 첨가하여 24시간 37℃에서 배양한다. 그 후, 세포로부터 트라이졸 시약(Trizole reagent) (Gibco/BRL)을 이용한 구아니디움 티오시아네이트-페놀-클로로포름 추출 방법 (Guanidium thiocyanate-phenol- chloroform extraction)으로 토탈 RNA를 분리하였다. RT-PCR을 하기 위해 위의 방법으로 얻어진 RNA에 RNA 분해 효소가 없는 DNA 분해 효소 (RNase-free DNase, Promega)를 37℃에서 30분 동안 처리하여 DNA의 오염을 제거하였으며 페놀/클로로포름 추출법과 에탄올 침전으로 순수 RNA를 얻었다. 1 ㎍의 RNA를 올 인 원 RT/PCR 키트 (All in one RT/PCR kit, Superbio)를 사용하여 RT-PCR를 실시하였다. 대조군으로 베타-엑틴을 사용하였으며 RT-PCR에 사용된 제 1형 콜라겐의 프라이머(primer)는 서열번호 5 및 서열번호 6(표 9 참조)으로 구성되어있고, 베타-엑틴의 프라이머는 상기 실험예 3에서 사용된 서열번호 3 및 서열번호 4와 동일한 것을 사용하였다. 반응 조건은 제 1형 콜라겐은 94℃ 1분, 62℃ 1분, 72℃ 1분, 30사이클이며, 베타-엑틴은 95℃ 1분, 62℃ 1분, 72℃ 1분, 22사이클이며, PCR 생산물은 1.5%(w/v) 아가로즈(agarose, Sigma사) 겔에 전기영동하여 겔 이미지 분석기(Biorad)로 정량하였다. 그 결과를 표 10에 나타내었다.

서열번호 5	5'-CTGGCAAAGAAGGCGGCAAA-3'
서열번호 6	5'-CTCACCACGATCACCACTCT-3'

시 료	Type I 콜라겐 발현량 (%)
	500 ㎍/㎖	1000 ㎍/㎖
대조군	100.00	100.00
실시예 1-1	112.92	131.62
실시예 1-2	110.21	129.54
실시예 1-3	109.28	126.87
실시예 1-4	100.75	105.47
실시예 1-5	99.78	100.54
실시예 1-6	101.56	103.96
실시예 1-7	103.55	104.84
실시예 1-8	102.45	102.98
실시예 1-9	108.59	127.59
실시예 1-10	109.54	127.88
실시예 2(물 가용추출물)	110.52	128.54
실시예 2(메틸렌클로라이드 가용추출물)	99.85	102.35
모그로시드 V (70 ㎍/㎖)	107.41
모그로시드 V (140 ㎍/㎖)	116.24
EGCG (11.46 ㎍/㎖)	100.41

실험예 5. 제 1형 콜라겐 단백질 발현 조사

상기 실시예로부터 얻어진 나한과 조추출물, 극성용매 가용추출물, 비극성용매 가용추출물 또는 이로부터 분리된 트라이터펜계 화합물들에 대하여 제 1형 콜라겐 유전자의 발현 정도를 측정하기 위하여 웨스턴 블럿(western blot)을 실시하였다. 인간 정상 섬유아세포(ATCC -2076)를 60mm 배양접시에 1 × 10⁶의 밀도로 10% 소혈청(Gibco/BRL)을 포함하는 DMEM 배지(Gibco/BRL)로 37℃, 5% CO₂ 배양기에서 하루 동안 키웠다. 그 후 혈청이 2% 첨가된 배지로 교환해 주고 시료를 농도별로 첨가하여 24시간 동안 37℃에서 배양한다. 그 후, 세포 배양액을 농축필터 (Millipore)를 사용하여 단백질을 농축 후 BCA 방법(Sigma)에 따라 단백질 정량하여 웨스턴 블럿에 사용하였다. 7% 분리 겔(separating gel)과 5% 스타킹 겔(staking gel)로 구성된 SDS-PAGE 겔에 같은 양의 단백질을 전기영동하고 반-건조 전이(semi-dry transfer) 장치(Biorad사)를 사용하여 전기영동한 단백질을 PVDF 막(membrane)으로 옮긴 후 항-제 1형 콜라겐(Anti-Collagen Type I) 항체(Oncogene)와 항-토끼(Anti-Rabbit) 항체(SantaCruz)를 처리하고 ECL (enhanced chemiluminescence, Intron) 반응 후 X-ray 필름에 감광시켜 확인하였다. 제 1형 콜라겐의 발현량은 필름에 감광된 밴드를 이미지 분석기(Biorad)로 정량하여 그 결과를 표 11에 나타내었다.

시 료	Type I 콜라겐 발현량 (%)
	500 ㎍/㎖	1000 ㎍/㎖
대조군	100.00	100.00
실시예 1-1	119.58	128.68
실시예 1-2	115.98	127.56
실시예 1-3	116.87	125.45
실시예 1-4	101.45	101.85
실시예 1-5	99.45	100.87
실시예 1-6	101.55	101.58
실시예 1-7	101.97	102.01
실시예 1-8	100.48	100.98
실시예 1-9	105.87	114.05
실시예 1-10	106.98	116.58
실시예 2(물 가용추출물)	114.52	125.55
실시예 11 (메틸렌클로라이드 가용추출물)	99.44	100.84
모그로시드 V (70 ㎍/㎖)	115.24
모그로시드 V (140 ㎍/㎖)	114.85
EGCG (11.46 ㎍/㎖)	101.28

실험예 4. 히알루로니다제 활성의 저해 효과 실험

상기 실시예로부터 얻어진 나한과 조추출물, 극성용매 가용추출물, 비극성용매 가용추출물 또는 이로부터 분리된 트라이터펜계 화합물에 대하여 문헌에 알려진 방법에 따라 히알루로니다제 활성 저해 효과를 측정하였다(Reissig, GL and Leloir, LF, J. Biol . Chem ., 217, pp..959-963, 1955).

히알루로니다제(sigma H3506, Type I-S, 999units/mg)는 0.1M 아세테이트 완충액(acetate buffer, pH3.5)로 7900 유닛/㎖이 되게 제조하고 소디움 히알루로네이트는 0.1M 아세테이트 완충액(pH3.5)으로 2.4 mg/㎖이 되게 제조하였다. DMAB 용액은 4g의 p-디메틸아미노벤즈알데히드(p-dimethylaminobenzaldehyde, sigma, D2004)를 350 ㎖ 아세트산과 50 ㎖ 10N HCl로 녹여서 제조한다.

히알루로니다제 활성을 측정하기 위하여, 50 ㎕ 히알루로니다제 용액과 100 ㎕ 시료를 넣어 섞어 37℃에서 20 분간 수조에서 반응을 시키고, 그 후, 100 ㎕의 12.5 mM CaCl₂를 첨가하여 37℃에서 20 분간 수조에서 반응을 시켰다. 기질로 250 ㎕ 소디움 히랄루로네이트를 첨가하여 37℃에서 40 분간 수조에서 반응을 시킨 후 100 ㎕ 0.4N 수산화나트륨과 100 ㎕ 0.4 M 포타슘 보레이트를 첨가하여 잘 섞어 끓는 물에 3분간 반응을 시켰다. 상온에서 20분간 식힌 후, 3 ㎕ DMAB 용액을 첨가하여 잘 섞어 37℃에서 20 분간 수조에서 반응을 시켰다. 585 nm에서 흡광도를 측정하였으며, 시료 대신 시료를 녹인 용매를 검액과 같은 방법으로 조작하여 얻은 액을 공시험액으로 하여 그 흡광도(A)를 측정하고, 효소액 및 검액 대신 정제수를 넣어 검액과 같은 방법으로 조작하여 얻은 액을 색보정액으로 하여 그 흡광도(D)를 측정하고, 또한, 효소 대신 0.1M 아세테이트 완충액(pH3.5)을 넣어 위와 같은 방법으로 조작하여 얻은 용액을 대조액으로 하여 흡광도(C)를 측정하였다. 하기 수학식 1에 따라 히알루로니다제 저해율(%)을 구하고, 그 결과를 표 12에 나타내었다.

시 료	농도 (㎍/㎖)	히알루로니다제 저해율(%)
대조군	1000	4.91
실시예 1-1	1000	4.51
실시예 1-2	1000	4.65
실시예 1-3	1000	4.58
실시예 1-4	1000	4.48
실시예 1-5	1000	4.88
실시예 1-6	1000	4.75
실시예 1-7	1000	4.65
실시예 1-8	1000	4.35
실시예 1-9	1000	4.46
실시예 1-10	1000	4.58
실시예 2(물 가용추출물)	1000	4.61
실시예 2(메틸렌클로라이드 가용추출물)	1000	1.50
모그로시드 V	1.37	22.22
	27.5	21.62

본 발명의 나한과 조추출물, 극성용매 가용추출물, 비극성용매 가용추출물 또는 이로부터 분리된 트라이터펜계 화합물을 포함하는 화장료 조성물의 제제의 예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.

제조예 1. 유연 화장수( 스킨 )의 제조

나한과 조추출물을 함유한 화장료 중 유연 화장수(스킨)의 제조예를 표 13에 나타내었다.

번호	원료	단위 : 중량 %
		제형예 1	비교제형예 1
1	실시예 1-1의 나한과 조추출물	2.0	-
2	글리세린	3.0	3.0
3	부틸렌 글리콜	2.0	2.0
4	프로필렌 글리콜	2.0	2.0
5	폴리옥시에칠렌(60)경화 피마자유	1.00	1.0
6	에탄올	10.0	10.0
7	트라이에탄올아민	0.1	0.1
8	방부제	미량	미량
9	색소	미량	미량
10	향료	미량	미량
11	정제수	잔량	잔량
합 계		100	100

〈제조방법〉

제형예 1

11에 2, 3, 4 및 8을 순서대로 투입하여 교반하여 용해시킨 후 5를 60℃정도 가열하여 용해시킨 후 10을 투입 교반하여 11에 투입한다. 마지막으로 1, 6, 7 및 9를 투입하여 충분히 교반한 뒤 마이크로플루다이져를 통과시킨 후 숙성시켰다.

비교제형예 1

원료물질 1을 제외하고 상기 제형예 1과 동일한 방법으로 제조하였다.

제조예 2. 영양화장수(로션)의 제조

나한과 조추출물을 함유한 화장료 중 영양화장수(로션)의 제조예를 표 14에 나타내었다.

번호	원료(중량 %)	단위 : 중량 %
		제형예 2	비교제형예 2
1	실시예 1-1의 나한과 조추출물	2.0	-
2	시토 스테롤	1.70	1.70
3	폴리글리세릴 2-올레이트	1.50	1.50
4	세라마이드	0.7	0.7
5	세테아레스-4	1.2	1.2
6	콜레스테롤	1.5	1.5
7	디세틸포스페이트	0.4	0.4
8	농글리세린	5.0	5.0
9	선플라우어오일	10.0	10.0
10	카르복시비닐폴리머	0.2	0.2
11	산탄검	0.3	0.3
12	방부제	미량	미량
13	향료	미량	미량
14	정제수	잔량	잔량
합 계		100	100

〈제조방법〉

제형예 2

원료물질 2, 3, 4 및 6을 일정한 온도에서 균질화하여 비이온계 양친매성 지질이라 칭하였다. 상기 비이온계 양친매성 지질과 원료물질 1, 7, 8 및 14를 혼합하고 일정한 온도에서 균질화하여 마이크로플루다이져를 통과하고 이어 원료물질 9를 일정한 온도에서 서서히 첨가하여 균질화한 후 다시 마이크로플루다이져에 재차 통과시켰다. 그리고 10, 11, 12 및 13을 투입하여 분산시켜 안정화하고 숙성시켰다.

비교제형예 2

원료물질 1을 제외하고 상기 제형예 2와 동일한 방법으로 제조하였다.

제조예 3. 영양크림의 제조

나한과 조추출물을 함유한 화장료 중 영양크림의 제조예를 표 15에 나타내었다.

번호	원료(중량 %)	단위 : 중량 %
		제형예 3	비교제형예 3
1	실시예 1-1의 나한과 조추출물	3.0	-
2	시토 스테롤	4.0	4.0
3	폴리글리세릴 2-올레이트	3.0	3.0
4	세라마이드	0.7	0.7
5	세테아레스-4	2.0	2.0
6	콜레스테롤	3.0	3.0
7	디세틸포스페이트	0.4	0.4
8	농글리세린	5.0	5.0
9	선플라우어오일	22.0	22.0
10	카르복시비닐폴리머	0.5	0.5
11	트라이에탄올아민	0.5	0.5
12	방부제	미량	미량
13	향료	미량	미량
14	정제수	잔량	잔량
합 계		100	100

〈제조방법〉

제형예 3

원료물질 2, 3, 4, 5 및 6을 일정한 온도에서 균질화하여 비이온계 양친매성 지질이라 칭하였다. 상기 비이온계 양친매성 지질과 원료물질 1, 7, 8 및 14를 혼합하고 일정한 온도에서 균질화하여 마이크로플루다이져를 통과하고 이어 원료물질 9를 일정한 온도에서 서서히 첨가하여 균질화한 후 다시 마이크로플루다이져에 재차 통과시켰다. 그리고 10, 11, 12 및 13을 투입하여 분산시켜 안정화하고 숙성시켰다.

비교제형예 3

원료물질 1을 제외하고 상기 제형예 3과 동일한 방법으로 제조하였다.

제조예 4. 에센스의 제조

모그로시드 V를 함유한 화장료 중 에센스의 제조 예를 표 16에 나타내었다.

번호	원료(중량 %)	단위 : 중량 %
		제형예 4	비교제형예 4
1	모그로시드 V	0.05	-
2	시토스테롤	1.70	1.70
3	폴리글리세릴 2-올레이트	1.50	1.50
4	세라마이드	0.7	0.7
5	세테아레스-4	1.2	1.2
6	콜레스테롤	1.5	1.5
7	디세틸포스페이트	0.4	0.4
8	농글리세린	5.0	5.0
9	선플라우어오일	15.0	15.0
10	카르복시비닐폴리머	0.2	0.2
11	산탄검	0.2	0.2
12	방부제	미량	미량
13	향료	미량	미량
14	정제수	잔량	잔량
합 계		100	100

〈제조방법〉

제형예 4

원료물질 2, 3, 4, 5 및 6을 일정한 온도에서 균질화하여 비이온계 양친매성 지질이라 칭하였다. 상기 비이온계 양친매성 지질과 원료물질 1, 7, 8 및 14를 혼합하고 일정한 온도에서 균질화하여 마이크로플루다이져를 통과하고 이어 원료물질 9를 일정한 온도에서 서서히 첨가하여 균질화한 후 다시 마이크로플루다이져에 재차 통과시켰다. 그리고 10, 11, 12 및 13를 투입하여 분산시켜 안정화하고 숙성시켰다.

비교제형예 4

원료물질 1을 제외하고 상기 제형예 4과 동일한 방법으로 제조하였다.

제조예 5. 유화형 파운데이션의 제조

n-부탄올 분획물을 함유한 화장료중 유화형 파운데이션의 제조예를 표 17에 나타내었다.

번호	원료(중량 %)	단위 : 중량 %
		제형예 5	비교제형예 5
1	나한과 물 가용추출물	2.0	-
2	밀납	2.0	2.0
3	사이크로메치콘	2.0	2.0
4	유동파라핀	5.0	5.0
5	스쿠알란	5.0	5.0
6	스테아린산	2.0	2.0
7	친유성 모노스테아린산 글리세린	3.0	3.0
8	카프릴릭/카프릭트라이글리세라이드	4.0	4.0
9	글리세린	4.0	4.0
10	프로필렌글리콜	3.0	3.0
11	부틸렌글리콜	3.0	3.0
12	트라이에탄올아민	1.0	1.0
13	알루미늄마그네슘실리케이트	0.5	0.5
14	안료	12	12
15	방부제	미량	미량
16	향료	미량	미량
17	정제수	잔량	잔량
합 계		100	100

〈제조방법〉

제형예 5

9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 및 17을 혼합교반하면서 80~85℃ 사이로 가열하여 제조부에 투입한 후 유화기를 작용시키고 2, 3, 4, 5, 6, 7 및 8을 80~85℃ 사이로 가열하여 투입한 뒤 유화시킨다. 유화가 끝나면 교반기를 이용하여 교반하면서 45℃까지 냉각한 뒤 16을 투입하고 35℃까지 냉각한 뒤 1을 투입하였고, 25℃까지 냉각한 뒤 숙성시켰다.

비교제형예 5

원료물질 1을 제외하고 상기 제형예 4과 동일한 방법으로 제조하였다.

제조예 6. 친수성 연고제의 제조

번호	원 료	함량(중량%)	함량(중량%)
1	실시예 1-1의 나한과 조추출물	0.5	-
2	실시예 1-2의 나한과 조추출물	-	0.5
3	백색 바세린	250	250
4	스테아릴 알콜	220	220
5	에칠(또는 메칠)p-옥시벤조에이트	0.25	0.25
6	프로필렌 글리콜	120	120
7	라우릴 황산 나트륨	15	15
8	프로필 p-옥시벤조에이트	0.15	0.15

임상 시험예 1. 주름 깊이 감소에 의한 피부 탄력도 개선 효과 측정

피부주름에 대한 나한과 추출물의 영향을 실험하기 위해 제조예 3의 제형예 3을 여성 20명에게 왼쪽 눈 가장자리에 하루에 세안 후 아침, 저녁 두 번 적용하였다. 비교제형예 3의 영양크림은 오른쪽 눈 가장자리에 처리하여 대조군으로 사용하였다. 적용 15일, 30일 후 피부 표면의 피부 주름 깊이를 피부탄력도측정기(Cutometer SEM 474)에 의해 측정하였다. 피부탄력도측정기에 의한 피부 탄력도 측정은 주름의 깊이를 측정하는 것으로서, 값이 적을수록 탄력성이 좋은 것이다. 탄력도 값은 대조군에 비해 감소한 값을 %로 나타내었으며, 피검자 20명의 평균값을 표 18에 나타내었다.

시 료	피부 탄력도(주름깊이 감소) 효과(%)
	0일	15일	30일
제형예 3	0.48	0.43	0.39
비교제형예 3	0.50	0.48	0.49

임상시험예 2. 피부 상태 개선효과 확인 실험

제조예 4의 제형예 4와 비교제형예 4의 에센스에 대한 피부 도포 시 피부상태 개선효과를 확인하기 위하여 다음과 같은 임상 확인 실험을 하였다. 36~69세의 건강한 여성층으로서 30명에게 안면 왼쪽 부분에는 제형예 4의 에센스를, 안면 오른쪽 부분에는 비교제형예 4의 에센스를 매일 아침, 저녁 세안 후 피부에 1일 2회 4주간 도포한 후 피부상태 개선을 확인하기 위하여 피부상태 개선 정도를 측정하였다. 피부의 탄력 및 늘어짐에 대한 개선 효과와 주름 및 잔주름에 대한 개선 효과에 관해서 표 17의 평점으로 판정하여, 30명의 평균점으로 평가한 결과를 표 19에 나타내었다. 제형예 4를 사용한 군에서는 피부의 탄력 및 늘어짐에 대한 개선 효과와 주름 및 잔주름에 대한 개선 효과 모두에서 비교제형예 4를 사용한 군에 비교하여 훨씬 뛰어난 피부 개선 효과가 확인되었다(표 20 참조).

	피부의 탄력 및 늘어짐에 대한 개선 효과의 평점	주름 및 잔주름에 대한 개선 효과의 평점
대단히 개선되었다	3점	3점
개선되었다	2점	2점
약간 개선되었다	1점	1점
개선효과가 없다	0점	0점
악화되었다	-1점	-1점

시료	피부의 탄력 및 늘어짐	주름 및 잔주름
제형예 4	65	61
비교제형예 4	35	40

상술한 바와 같이, 본 발명의 나한과 조추출물, 극성용매 가용추출물, 비극성용매 가용추출물 및 이로부터 분리된 트라이터펜계 화합물을 함유하는 화장료 조성물은 피부의 주름, 잔주름 및 거칠어짐 등으로 나타나는 피부 노화를 근본적으로 예방 및 개선하여, 주름 생성 억제 및 개선용 피부외용 약학 조성물 및 화장료 조성물로 사용할 수 있다.

서열목록 전자파일 첨부

Claims (14)

1. 나한과의 물, 메탄올, 에탄올, 프로필렌글리콜, 글리세린 또는 부틸렌글리콜로 부터 선택된 용매에 가용한 조추출물을 유효성분으로 함유하는 주름개선용 피부외용 약학조성물.
2. 삭제
3. 나한과의 물 또는 n-부탄올 가용추출물을 유효성분으로 함유하는 주름개선용 피부외용 약학조성물.
4. 삭제
5. 나한과의 메틸렌클로라이드 가용추출물을 유효성분으로 함유하는 주름개선용 피부외용 약학조성물.
6. 삭제
7. 나한과로부터 분리된 트라이터펜계 화합물인 모그로시드 Ⅳ, 모그로시드 Ⅴ, 시아메노시드 Ⅰ및 11-옥소-모그로시드 Ⅴ로부터 선택된 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 주름개선용 피부 외용 약학조성물.
8. 삭제
9. 나한과의 물, 메탄올, 에탄올, n-부탄올, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜 또는 메틸렌클로라이드로부터 선택된 용매에 가용한 추출물을 유효성분으로 함유하는 주름 개선용 화장료 조성물.
10. 삭제
11. 삭제
12. 삭제
13. 나한과로부터 분리된 트라이터펜계 화합물인 모그로시드 IV, 모그로시드 V, 시아메노시드 I 및 11-옥소-모그로시드 V로부터 선택된 화합물을 유효성분으로 함유하는 주름 개선용 화장료 조성물.
14. 삭제

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