JP2001322934A - 抗酸化作用を有する羅漢果配糖体を含有する抗酸化組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 甘味および抗酸化作用を有し、その結果、ア
テローム性動脈硬化症の抑制および予防に寄与し得る、
抗酸化組成物を提供すること。 【解決手段】 以下の一般式を有する羅漢果配糖体を含
有する抗酸化組成物であって、ここで、該羅漢果配糖体
は、甘味および抗酸化作用を有する、組成物： 【化１】 ここで、Ｒ₁およびＲ₂は、独立して、所定の基から選択
される；ただし、該羅漢果配糖体が１１−オキソ−モグ
ロサイドＶである場合は、該組成物中のモグロサイドＩ
Ｖ、モグロサイドＶ、シアメノサイドＩ、および１１−
オキソ−モグロサイドＶの合計に対する１１−オキソ−
モグロサイドＶの割合が、天然物中の該割合よりも高
い。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、甘味および抗酸化
作用を有する羅漢果配糖体を含有する抗酸化組成物に関
する。

【０００２】

【従来の技術】糖尿病は、アテローム性動脈硬化症のよ
うなアテローム性心臓血管病の危険性の著しい増加と関
連する（文献１および２；文献リストは本書末尾に記載
する）。糖尿病によるアテローム性動脈硬化症の促進
は、おそらく、酸化、グリコシル化、またはその両方に
よる低密度リポタンパク質（本明細書中で「ＬＤＬ」と
いう。）の修飾・変性に基づいている。例えば、変性Ｌ
ＤＬは、内皮損傷を誘導し得、そして単球マクロファー
ジのコレステロール蓄積を増加させて、動脈内膜におけ
る泡沫細胞の形成をもたらし得る（文献２および３）。
このような、酸化的に修飾されたＬＤＬが、アテローム
性動脈硬化症の開始および進展において重要な役割を果
たすという仮説を支持するかなりの証拠が蓄積されてい
る（文献４〜７）。

【０００３】いくつかの報告により、天然に存在するポ
リフェノール（例えば、フラボノイド）が冠状動脈心疾
患による死亡率を低減することが実証されている。この
ことは、ＬＤＬ酸化の阻害および血小板凝集能の減少に
ついての多数のデータによって支持されている（文献８
〜１１）。実際、茶およびワインのＬＤＬ抗酸化作用に
ついての報告は多数ある（文献１１〜１３）。それゆ
え、アテローム性動脈硬化症の予防および治療のため
に、食物成分の生物学的効果について調査が行われ、そ
して議論されている。

【０００４】以前の報告では、真性糖尿病（糖尿病）患
者のＬＤＬが酸化修飾されやすく、糖尿病患者における
ＬＤＬの被酸化性が健常人よりも増加していること、お
よび糖尿病患者では血清中の抗酸化ＬＤＬ抗体が増加し
ていることが示されている（文献１５〜１７）。さら
に、高濃度のグルコースは、おそらく酸素ラジカル経路
を介してＬＤＬ酸化を促進し、そして食後の高血糖は、
糖尿病患者における酸化的ストレスに寄与する。

【０００５】食餌療法および運動は、糖尿病患者の健康
管理のために基本的に推奨される。しかし、いくつかの
報告によれば、酸素ラジカルの生成および脂質の過酸化
が、急激な中等度の有酸素運動の間に増加して、酸化的
ストレスを生じ得ることが示された。そのため、糖尿病
の一般療法においては、運動よりも食餌療法の方が好ま
しいと考えられる。食餌療法は、糖尿病および耐糖能低
下症の治療の基本である。グルコースまたはサッカロー
スの代替品として、低カロリー甘味成分は、糖尿病患者
の食餌療法に臨床的に利用可能であり、かつ有効である
と考えられる。

【０００６】これらの事実をまとめると、ＬＤＬ酸化を
阻害し得る低カロリー甘味成分を用いることができれ
ば、糖尿病の合併症として通常見出される心臓血管病
（例えば、アテローム性動脈硬化症）を予防する上で、
糖尿病患者にとって臨床的に有益であると考えられる。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、上記問題の
解決を課題とするものであり、特に、甘味および抗酸化
作用を同時に有し、その結果、アテローム性動脈硬化症
の抑制および予防に寄与し得る、抗酸化組成物を提供す
ることを目的とする。

【０００８】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、羅漢果
（Ｍｏｍｏｒｄｉｃａｅ ｇｒｏｓｖｅｎｏｒｉ；Ｓｉ
ｒａｉｔｉａ ｇｒｏｓｖｅｎｏｎｉともいう）の甘味
成分が、ＬＤＬ酸化を阻害すること、従って糖尿病およ
びその合併症であるアテローム性動脈硬化症の食餌療法
に有用であることを見出した。

【０００９】本発明の抗酸化組成物は、以下の一般式を
有する羅漢果配糖体を含有する組成物であって、ここ
で、該羅漢果配糖体は、甘味および抗酸化作用を有す
る、組成物：

【００１０】

【化３】

【００１１】ここで、Ｒ₁およびＲ₂は、独立して、直鎖
状もしくは分枝状に連結された糖残基およびその修飾
物、シクロアルキル、ハロゲン化されていてもよいアル
キル、ハロゲン化されていてもよいアルケニル、ハロゲ
ン化されていてもよいアルキニル、ハロゲン化およびア
ルキル化されていてもよいアリールアルキル、ハロゲン
化されていてもよいアリールアルケニル、ハロゲン化さ
れていてもよいアリールアルキニル、ハロゲン、アミ
ノ、ホルミル、およびＨからなる群から選択される；た
だし、Ｒ₁およびＲ₂のうちの少なくとも一方は糖残基ま
たはその修飾物である； ただし、該羅漢果配糖体が１
１−オキソ−モグロサイドＶである場合は、該組成物中
のモグロサイドＩＶ、モグロサイドＶ、シアメノサイド
Ｉ、および１１−オキソ−モグロサイドＶの合計に対す
る１１−オキソ−モグロサイドＶの割合が、天然物中の
該割合よりも高い。

【００１２】好ましい実施態様では、上記糖残基および
その修飾物は、α−Ｄ−グルコピラノシル（α−Ｄ−Ｇ
ｌｃ）、β−Ｄ−グルコピラノシル（β−Ｄ−Ｇｌ
ｃ）、β−Ｄ−ガラクトピラノシル（α−Ｄ−Ｇａ
ｌ）、α−Ｄ−ガラクトピラノシル（β−Ｄ−Ｇａ
ｌ）、α−Ｄ−フルクトピラノシル（α−Ｄ−Ｆｒ
ｕ）、およびβ−Ｄ−フルクトピラノシル（β−Ｄ−Ｆ
ｒｕ）、ならびにそれらの組み合わせ、ならびにそれら
の修飾物からなる群より選択され得る。

【００１３】より好ましい実施態様では、Ｒ₁は、直鎖
状または分枝状に連結された−（β−Ｄ−Ｇｌｃ）_mま
たはその修飾物であり、ｍは０〜５の任意の整数であ
り、Ｒ₂が、直鎖状または分枝状に連結された−（β−
Ｄ−Ｇｌｃ）_nまたはその修飾物であり、ｎは０〜５の
任意の整数である。ｍとｎとは同時に０であってもよい
が、好ましくはｍ＋ｎは１以上であり得る。

【００１４】さらに好ましい実施態様では、Ｒ₁は−β
−Ｄ−Ｇｌｃまたは−β−Ｄ−Ｇｌｃ−β−Ｄ−Ｇｌｃ
であり、Ｒ₂は−β−Ｄ−Ｇｌｃ−β−Ｄ−Ｇｌｃまた
は

【００１５】

【化４】

【００１６】であり得る。

【００１７】さらにより好ましい実施態様では、上記羅
漢果配糖体は１１−オキソ−モグロサイドＶであり得
る。

【００１８】１つの実施態様では、本発明の組成物は、
医薬品、食品、または飼料のいずれかであり得る。好ま
しい実施態様では、本発明の組成物は医薬品であって、
さらに、担体を含有し得る。

【００１９】本発明の方法は、医薬品、食品、または飼
料を製造する方法であって、上記の組成物を添加する工
程を包含する。本発明の医薬品、食品、または飼料は、
上記の方法により得られる。

【００２０】

【発明の実施の形態】以下、本発明を詳細に説明する。

【００２１】（１．定義）羅漢果（学名：Ｍｏｍｏｒｄ
ｉｃａｅ Ｇｒｏｓｖｅｎｏｒｉ）は、ウリ科の多年生
草本の薬用植物であり、古代より中国の民間薬として広
く利用されており、現在でも中国広西省チアン族自治区
の桂林周辺の高冷地で栽培される特産品の一つである。
羅漢果の果実の有する薬効は、のどの荒れおよび痛みの
緩和、咳止め、去痰、気管支炎の緩和、扁桃腺炎の緩
和、解熱、胃腸の機能促進、ストレス解消、利尿、便秘
解消など多数にのぼる。近年ではさらに、羅漢果の果実
には、高血圧症、糖尿病などを防止する作用、老化防止
作用、フリーラジカル消去作用および抗過酸化効果など
を有する成分が含まれていることが明らかになっている
（文献１８）。しかし、本発明がなされるまでは、羅漢
果の果実に含まれるどの成分がフリーラジカル消去作
用、抗過酸化効果などを有するかは明らかでなかった。

【００２２】本明細書においては、「羅漢果配糖体」と
は、以下の一般式に示される骨格（以下、モグロサイド
骨格という）を有する配糖体をいう：

【００２３】

【化５】

【００２４】。上記の一般式において、Ｒ₁およびＲ
₂は、独立して、直鎖状もしくは分枝状に連結された糖
残基およびその修飾物、シクロアルキル、ハロゲン化さ
れていてもよいアルキル、ハロゲン化されていてもよい
アルケニル、ハロゲン化されていてもよいアルキニル、
ハロゲン化もしくはアルキル化されていてもよいアリー
ルアルキル、ハロゲン化されていてもよいアリールアル
ケニル、ハロゲン化されていてもよいアリールアルキニ
ル、ハロゲン、アミノ、ホルミル、およびＨからなる群
から選択される；ただし、Ｒ₁およびＲ₂のうちの少なく
とも一方は糖残基またはその修飾物であり、そしてＲ₃
およびＲ₄は−Ｈおよび−ＯＨであるか、またはＲ₃とＲ
₄と１１位の炭素とでカルボニル基を形成する。上記の
一般式において−ＣＨ₃で示される位置の基は−Ｈであ
ってもよい。羅漢果配糖体は、羅漢果の甘味成分の代表
的な物質である。

【００２５】図１は、代表的な羅漢果配糖体の構造を示
す。代表的な羅漢果配糖体であるモグロサイドＩＶ、モ
グロサイドＶ、１１−オキソ−モグロサイドＶ、および
シアメノサイドＩの分子量は、それぞれ、１１２４、１
２８６、１２８４、および１１２４である。これらの羅
漢果配糖体の１００グラムあたりの甘味強度は、それぞ
れ、ショ糖の約２５０倍、約３３０倍、約７０倍、およ
び約５００倍である。

【００２６】羅漢果配糖体は、一般には黄色〜黄褐色粉
末の形状である。羅漢果配糖体は、例えば、羅漢果の果
実を洗浄し、粉砕した後、水で抽出して得られた抽出液
について濾過、カラム吸収、カラム分離、回収、濃縮、
乾燥などの工程を行なうことにより製造される。

【００２７】羅漢果配糖体のうち、モグロサイド骨格の
１１位がオキソであるもの、すなわち、上記一般式のＲ
₃とＲ₄と１１位の炭素とでカルボニル基を形成するもの
は、抗酸化作用を有する。

【００２８】本発明の抗酸化組成物に含まれる羅漢果配
糖体は、以下の一般式において、Ｒ ₁およびＲ₂は、独立
して、直鎖状もしくは分枝状に連結された糖残基および
その修飾物、シクロアルキル、ハロゲン化されていても
よいアルキル、ハロゲン化されていてもよいアルケニ
ル、ハロゲン化されていてもよいアルキニル、ハロゲン
化もしくはアルキル化されていてもよいアリールアルキ
ル、ハロゲン化されていてもよいアリールアルケニル、
ハロゲン化されていてもよいアリールアルキニル、ハロ
ゲン、アミノ、ホルミル、およびＨからなる群から選択
される。ただし、Ｒ₁およびＲ₂のうちの少なくとも一方
は糖残基またはその修飾物である：

【００２９】

【化６】

【００３０】。

【００３１】本明細書中で使用する用語「ヘテロ原子」
は、酸素原子、窒素原子、イオウ原子、またはリン原子
などの、炭素原子および水素原子以外の原子を意味す
る。

【００３２】本明細書中で使用する用語「ヘテロ基」
は、例えば、イミノ（−ＮＨ−）、−ＳＯ−、−ＳＯ₂
−、アミド、

【００３３】

【化７】 などの、任意のヘテロ原子を含み、さらに水素および／
または炭素原子を含み得る、複数の原子からなる基を意
味する。

【００３４】本明細書中で用いられる「ハロゲン」は、
フルオロ、クロロ、ブロモ、またはヨードを意味する。

【００３５】本明細書中で用いられる「シクロアルキ
ル」は、少なくとも１つの環状アルキルを含む炭化水素
基を意味し、特に指定がない場合、任意の炭素数を有す
る。シクロアルキルは、アルキル鎖部分をさらに含んで
いてもよい。シクロアルキルの例としては、シクロペン
チル、シクロヘキシル、シクロへプチルなどが挙げられ
る。シクロアルキルにおいて、環中の炭素−炭素一重結
合は、任意のヘテロ原子またはヘテロ基で中断されてい
てもよい。例えば、酸素原子で中断されたシクロアルキ
ルは、代表的にはグルコースおよびその異性体、および
その誘導体ならびにそれらのポリマーを含む。

【００３６】本明細書中で用いられる「アルキル」は、
直鎖または分岐鎖の炭化水素基を表し、特に指定がない
場合、任意の鎖長を有する。アルキルの例として、不飽
和結合を有さないメチル、エチル、プロピル、ブチル、
ペンチル、ヘキシル、へプチル、オクチル、ノニル、デ
セニル、ウンデシル、ドデシル、トリデシル、テトラデ
シル、ペンタデシル、イコサニル、ヘニコサニル、ドコ
サニル、トリアコンチルなどが挙げられる。例えば、ア
ルキルが「Ｃ１〜Ｃ５アルキル」として記載されている
場合、この基は例えばメチル、エチル、ｎ−プロピル、
イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブ
チル、ｎ−ペンチル、イソペンチル、ｔｅｒｔ−ペンチ
ル、またはネオペンチルを意味し得る。

【００３７】本明細書中で用いられる「アルケニル」
は、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を有する、直
鎖または分岐鎖の炭化水素基を意味し、特に指定がない
場合、任意の鎖長を有する。アルケニルの例として、ビ
ニレン、プロペニレン、ブタジエニレン、などが挙げら
れる。

【００３８】本明細書中で用いられる「アルキニル」
は、少なくとも１つの炭素−炭素三重結合を有する、直
鎖または分岐鎖の炭化水素基を意味し、特に指定がない
場合、任意の鎖長を有する。アルキニルの例として、エ
チニレン、プロピニレンなどが挙げられる。

【００３９】上記で定義したアルキル、アルケニル、お
よびアルキニルにおいて、存在する炭素−炭素一重結合
（アルキルなどの末端の炭素と、アリールなどの他の基
の炭素との間で形成される一重結合を含む）は、任意の
ヘテロ原子またはヘテロ基で中断されていてもよい。

【００４０】本明細書中で用いられる「アリール」は、
少なくとも１つの芳香族環を有する炭素環式基を表し、
例えば、フェニル、ビフェニル、テルフェニル、ナフチ
ル、アントラニル、フェナントリルなどが挙げられる。
アリールの炭素環式構造中には、ヘテロ原子またはヘテ
ロ基が介在していてもよい。このようなアリールの例に
は、インドール、キノリル、イミダゾリル、オキサゾリ
ル、ピペリジノ、オキサジノなどが挙げられる。例え
ば、アリールが「Ｃ６〜Ｃ１８アリール」として記載さ
れている場合、この基は例えばフェニル、ビフェニル、
ナフチル、インドールなどを意味し得る。

【００４１】本明細書中で用いられる「アリールアルキ
ル」「アリールアルケニル」および「アリールアルキニ
ル」は、上記で定義したアリールに、上記で定義したア
ルキル、アルケニル、およびアルキニルがそれぞれ付加
した基を表す。これらの基は、必要に応じて任意の置換
基を有していてもよい。

【００４２】Ｒ₁およびＲ₂は、好ましくは直鎖状もしく
は分枝状に連結された糖残基およびその修飾物から選択
される。

【００４３】Ｒ₁およびＲ₂のいずれかまたはその両方が
糖残基もしくはその修飾物である場合、任意の糖残基も
しくはその修飾物であるが、好ましくは、α−Ｄ−グル
コピラノシル（α−Ｄ−Ｇｌｃ）、β−Ｄ−グルコピラ
ノシル（β−Ｄ−Ｇｌｃ）、β−Ｄ−ガラクトピラノシ
ル（α−Ｄ−Ｇａｌ）、α−Ｄ−ガラクトピラノシル
（β−Ｄ−Ｇａｌ）、α−Ｄ−フルクトピラノシル（α
−Ｄ−Ｆｒｕ）、およびβ−Ｄ−フルクトピラノシル
（β−Ｄ−Ｆｒｕ）、ならびにそれらの組み合わせ、な
らびにそれらの修飾物からなる群より選択される単位糖
を含み、より好ましくはβ−Ｄ−Ｇｌｃ、β−Ｄ−Ｇａ
ｌ、およびβ−Ｄ−Ｆｒｕ、ならびにそれらの組み合わ
せ、ならびにそれらの修飾物からなる群より選択される
単位糖を含み、最も好ましくは単位糖としてβ−Ｄ−Ｇ
ｌｃを含む。

【００４４】Ｒ₁とＲ₂とは同種の糖残基もしくはその修
飾物であってもよいし異種の糖残基もしくはその修飾物
であってもよい。好ましくは、Ｒ₁とＲ₂とは異種の糖残
基もしくはその修飾物であり、より好ましくはＲ₁は−
β−Ｄ−Ｇｌｃまたは−β−Ｄ−Ｇｌｃ−β−Ｄ−Ｇｌ
ｃであり、Ｒ₂は−β−Ｄ−Ｇｌｃ−β−Ｄ−Ｇｌｃま
たは

【００４５】

【化８】

【００４６】であり、最も好ましくはＲ₁は−β−Ｄ−
Ｇｌｃ−β−Ｄ−Ｇｌｃであり、Ｒ₂は

【００４７】

【化９】

【００４８】（すなわち、１１−オキソ−モグロサイド
Ｖ）である。

【００４９】本明細書中で「直鎖状に連結される」と
は、糖残基もしくはその修飾物がα１−６結合またはβ
１−６結合によってのみ連結されていることをいう。
「分枝状に連結される」とは、糖残基もしくはその修飾
物がα１−６結合またはβ１−６結合に加えて、α２−
４結合またはβ２−４結合によって連結されていること
をいう。

【００５０】本明細書中で糖残基の「修飾物」とは、糖
残基が化学的置換基により修飾された残基をいい、その
例としては、グルコサミニル、Ｎ−アセチルグルコサミ
ニル、ガラクトサミニル、Ｎ−アセチルガラクトサミニ
ル、などが挙げられる。

【００５１】羅漢果配糖体が抗酸化作用を有するか否か
は、当業者に公知の方法によって試験することができ
る。抗酸化作用についての試験としては、例えば、Ｅｓ
ｔｅｒｂａｕｅｒら（文献１０、１３、１９）に記載さ
れるＬＤＬの被酸化性測定法、１，１−ジフェニル−２
−ピクリル−ヒドラジル（ＤＰＰＨ）アッセイ、脂質過
酸化物（ＬＰＯ）アッセイ、チオバルビツール酸反応物
質測定法（ＴＢＡＲＳ法）、化学蛍光発色系ＨＰＬＣ法
などが挙げられる。

【００５２】本発明においては、例えば、下記の実施例
３と実質的に同一の条件（羅漢果配糖体の添加濃度は１
０μＭとする）で測定したとき、共役ジエン形成のラグ
タイムが実施例３のコントロールに示された値の約１１
０％以上であるとき、好ましくは約１２０％以上である
とき、より好ましくは約１３０％以上であるとき、「抗
酸化作用を有する」という。「ラグタイム」とはここ
で、酸化によるジエン形成が始まるまでの時間をいう。
ラグタイムは、時間軸に対する吸光度の増加の直線部分
（増殖時間）の外挿により決定される。

【００５３】抗酸化作用を有する羅漢果配糖体は、羅漢
果のような天然の羅漢果配糖体含有植物から抽出および
単離してもよいし、合成してもよい。羅漢果配糖体は、
当業者に公知の抽出および分離方法を用いて製造され得
る。具体的には、例えば、羅漢果配糖体は、以下の方法
により得られ得る。羅漢果の果実をメタノール抽出して
メタノールエキスを得る。メタノールエキスを水と混合
し、Ｎ−ヘキサンで脱脂する。脱脂後のメタノールエキ
スをカラムクロマトグラフィーにかけて８０％メタノー
ル、１００％メタノール、およびアセトンで順次溶出
し、粗配糖体画分である８０％メタノール画分を得る。
得られた粗配糖体画分をメタノールに溶解した後、シリ
カゲルと混合し、乾燥し、次いでこのシリカゲルをクロ
ロホルム−メタノールの混合溶媒で溶出することによ
り、配糖体画分を得る。得られた配糖体画分を液体クロ
マトグラフィーにかけることにより、さらに高純度の配
糖体画分を入手し得る。

【００５４】抗酸化作用を有する羅漢果配糖体を合成す
る場合、当業者に公知の化学合成理論を用いてモグロサ
イド骨格を一から合成してもよいし、比較的入手が容易
な羅漢果配糖体を修飾することによって目的の羅漢果配
糖体を得てもよい。合成工程が複雑になるのを避けるた
めに、羅漢果配糖体の修飾によって目的の羅漢果配糖体
を得ることが好ましい。

【００５５】羅漢果配糖体が甘味を有するか否かは、当
業者に公知の官能試験によって試験することができる。
羅漢果配糖体は、１００グラムあたりで、代表的にはシ
ョ糖と同等以上の甘味強度、好ましくはショ糖の約５倍
〜約５００倍、より好ましくはショ糖の約１０倍〜約２
００倍、さらにより好ましくはショ糖の約５０倍〜約１
００倍の甘味強度を有する。あるいは、約１〜１０倍、
約１０〜５０倍、またはショ糖の約１倍未満、例えば、
約０．１〜１倍の甘味強度を有してもよいし、羅漢果配
糖体は甘味を有さなくともよい。

【００５６】（２．抗酸化組成物）本発明の抗酸化組成
物は、抗酸化作用を有する羅漢果配糖体を含有する。羅
漢果配糖体としては、単独種または複数種のものが含有
され得る。本発明の抗酸化組成物は、医薬品、食品、ま
たは飼料のいずれかであり得る。

【００５７】（２．１ 医薬品）本発明の抗酸化組成物
が医薬品である場合（このような組成物を医薬抗酸化組
成物という）、当該組成物の乾燥重量のうち、抗酸化作
用を有する羅漢果配糖体の乾燥重量は、代表的には約１
重量％〜約９９重量％、好ましくは約５重量％〜約９０
重量％、より好ましくは約１０重量％〜約８０重量％で
ある。

【００５８】ただし、該羅漢果配糖体が１１−オキソ−
モグロサイドＶである場合は、該組成物中のモグロサイ
ドＩＶ、モグロサイドＶ、シアメノサイドＩ、および１
１−オキソ−モグロサイドＶの合計に対する１１−オキ
ソ−モグロサイドＶの割合が、天然物中の該割合よりも
高い。

【００５９】天然物（例えば、従来の羅漢果抽出物およ
び羅漢果）中のモグロサイドＩＶ、モグロサイドＶ、シ
アメノサイドＩ、および１１−オキソ−モグロサイドＶ
の合計に対する１１−オキソ−モグロサイドＶの割合
は、通常、約０〜約０．１９である。例示的な羅漢果抽
出物中のモグロサイドＩＶ、モグロサイドＶ、シアメノ
サイドＩ、および１１−オキソ−モグロサイドＶの割
合、それらの割合の合計、およびそれらの合計に対する
１１−オキソ−モグロサイドＶの割合を以下の表１に示
す。

【００６０】

【表１】

【００６１】従って、本発明の抗酸化組成物中でのこの
割合は、代表的には約０．２以上、好ましくは約０．３
以上、より好ましくは約０．４以上、最も好ましくは約
０．５以上１以下である。

【００６２】本発明の医薬抗酸化組成物は、薬学的に許
容される担体をさらに含み得る。担体の例としては、ラ
クトース、デキストロース、スクロース、ソルビトー
ル、マンニトール、デンプン、アカシアゴム、リン酸カ
ルシウム、アルギン酸塩、珪酸カルシウム、微結晶性セ
ルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース誘導体、
トラガカント、ゼラチン、シロップ、ヒドロキシ安息香
酸メチル、タルク、ステアリン酸マグネシウム、水、鉱
油などが挙げられる。本発明の医薬抗酸化組成物は、こ
れらの担体を単独種または複数種含み得る。

【００６３】本発明の医薬抗酸化組成物は、潤沢剤、乳
化剤、懸濁化剤、酸化防止剤、防腐剤、甘味剤および香
味剤など、ならびに水溶性ビタミン類および油溶性ビタ
ミン類などを含む他の有効成分の１種以上を含み得る。

【００６４】本発明の医薬抗酸化組成物は、当該分野で
周知の方法によって製造される。例えば、抗酸化作用を
有する純粋な羅漢果配糖体を添加する工程を包含する方
法によって製造してもよいし、抗酸化作用を有する羅漢
果配糖体を含有する抗酸化組成物を添加する工程を包含
する方法によって製造してもよい。

【００６５】本発明の医薬抗酸化組成物の形態は、特に
限定されない。本発明の医薬抗酸化組成物の形態の例と
しては、外用剤として、軟膏、貼付剤などの形態；内用
剤として、錠剤、丸剤、粉剤、シロップ剤、乳濁剤、液
剤、懸濁剤、ゼラチンカプセル剤などの形態；および注
射剤、スプレー剤などの形態を挙げることができる。注
射剤、スプレー剤などの形態の医薬抗酸化組成物は、経
皮、注射、鼻内などの経路によって投与し得る。

【００６６】本発明の医薬抗酸化組成物に用いられる羅
漢果配糖体は、広い用量範囲にわたって有効である。従
って、羅漢果配糖体の一日あたりの用量は、体重１ｋｇ
に対して、代表的には約1ｍｇ〜約５００ｍｇ、好まし
くは約１０ｍｇ〜約２００ｍｇ、さらに好ましくは約２
０ｍｇ〜約１００ｍｇの範囲である。あるいは、一日あ
たりの用量は１ｍｇ未満であってもよい。この用量を、
１回または数回に分けて投与する。実際の用量は、処置
を受ける対象の年齢、体重および症状の重篤度、ならび
に選択した投与経路などを配慮した上で決定される。

【００６７】（２．２ 食品）本発明の抗酸化組成物
は、甘味および抗酸化作用を有する食品そのもの、また
は調味料のような添加物として利用され得る（このよう
な組成物を食品抗酸化組成物という）。本発明の抗酸化
組成物は、健康食品、栄養補助食品、および特別用途食
品（特定保健用食品）として利用され得る。

【００６８】本発明の抗酸化組成物が食品である場合、
当該組成物の乾燥重量のうち、抗酸化作用を有する羅漢
果配糖体の乾燥重量は、代表的には約１重量％〜約９９
重量％、好ましくは約５重量％〜約９０重量％、より好
ましくは約１０重量％〜約８０重量％である。

【００６９】ただし、該羅漢果配糖体が１１−オキソ−
モグロサイドＶである場合は、上記の医薬抗酸化組成物
の場合と同様に、該組成物中のモグロサイドＩＶ、モグ
ロサイドＶ、シアメノサイドＩ、および１１−オキソ−
モグロサイドＶの合計に対する１１−オキソ−モグロサ
イドＶの割合が、天然物中の該割合よりも高い。天然物
（例えば、従来の羅漢果抽出物および羅漢果）中のモグ
ロサイドＩＶ、モグロサイドＶ、シアメノサイドＩ、お
よび１１−オキソ−モグロサイドＶの合計に対する１１
−オキソ−モグロサイドＶの割合は、表１に示すよう
に、通常、約０〜約０．１９である。従って、本発明の
抗酸化組成物中でのこの割合は、代表的には約０．２以
上、好ましくは約０．３以上、より好ましくは約０．４
以上、最も好ましくは約０．５以上１以下である。

【００７０】本発明の食品抗酸化組成物は、当該分野で
通常使用される食品原料をさらに含み得る。食品原料の
例としては、ラクトース、デキストロース、スクロー
ス、ソルビトール、マンニトール、リンゴファイバー、
大豆ファイバー、肉エキス、黒酢エキス、ゼラチン、コ
ーンスターチ、蜂蜜、動植物油脂、多糖類、穀物、野
菜、果菜、果物、肉、卵、乳製品、海藻などおよびそれ
らの加工品が挙げられる。本発明の抗酸化組成物は、こ
れらの食品原料を単独種または複数種含み得る。

【００７１】本発明の食品抗酸化組成物は、上記の医薬
品の場合と同様に、上記の食品原料に加えて、潤沢剤、
乳化剤、懸濁化剤、酸化防止剤、防腐剤、甘味剤および
香味剤などの成分の１種以上をさらに含み得る。また、
水溶性ビタミン類および油溶性ビタミン類などを含む他
の有効成分をさらに含んでいてもよい。当業者は、羅漢
果配糖体の抗酸化作用を妨げることのない適切な成分を
容易に選択し得る。

【００７２】本発明の食品抗酸化組成物は、当該分野で
周知の方法によって製造される。例えば、抗酸化作用を
有する純粋な羅漢果配糖体を添加する工程を包含する方
法によって製造してもよいし、抗酸化作用を有する羅漢
果配糖体を含有する抗酸化組成物を添加する工程を包含
する方法によって製造してもよい。

【００７３】本発明の食品抗酸化組成物の形態は特に限
定されない。本発明の食品抗酸化組成物の形態の例とし
ては、顆粒、錠菓、ゼリー、飴、飲料などが挙げられ
る。

【００７４】本発明の食品抗酸化組成物は、必要に応じ
て摂取され、薬膳などのように毎日毎食摂取してもよい
し、１日１回、１週間に１回、１ヶ月に１回のようなさ
らに長期の間隔をおいて摂取してもよい。好ましくは、
１日３食摂取される。

【００７５】本発明の食品抗酸化組成物に用いられる羅
漢果配糖体は、広い用量範囲にわたって有効である。従
って、羅漢果配糖体の一日あたりの用量は、体重１ｋｇ
に対して、代表的には約１ｍｇ〜約５００ｍｇ、好まし
くは約１０ｍｇ〜約２００ｍｇ、さらに好ましくは約２
０ｍｇ〜約１００ｍｇの範囲である。あるいは、一日あ
たりの用量は１ｍｇ未満であってもよい。この用量を、
１回または数回に分けて投与する。実際の用量は、食品
を摂取する対象の年齢、体重および症状の重篤度などを
配慮した上で決定される。

【００７６】（２．３ 飼料）本発明の抗酸化組成物
は、人間の食べる食品としてだけでなく、ペット、家
畜、競技用動物などの人間以外の動物の飼料として利用
され得る（このような組成物を飼料抗酸化組成物とい
う）。

【００７７】本発明の抗酸化組成物が飼料である場合、
当該組成物の乾燥重量のうち、抗酸化作用を有する羅漢
果配糖体の乾燥重量は、代表的には代表的には約０．０
０１重量％〜約９９重量％、好ましくは約０．０１重量
％〜約５０重量％、より好ましくは約０．０５重量％〜
約２０重量％である。

【００７８】本発明の飼料抗酸化組成物は、当該分野で
通常使用される飼料原料をさらに含み得る。飼料原料の
例としては、動植物繊維、動植物タンパク質、動植物油
脂、動植物炭水化物などおよびそれらの加工品が挙げら
れる。本発明の飼料抗酸化組成物は、これらの飼料原料
を単独種または複数種含み得る。

【００７９】本発明の飼料抗酸化組成物は、上記の医薬
品の場合と同様に、上記の飼料原料に加えて、潤沢剤、
乳化剤、懸濁化剤、酸化防止剤、防腐剤、甘味剤および
香味剤などの成分の１種以上をさらに含み得る。また、
水溶性ビタミン類および油溶性ビタミン類などを含む他
の有効成分をさらに含んでいてもよい。当業者は、羅漢
果配糖体の抗酸化作用を妨げることのない適切な成分を
容易に選択し得る。

【００８０】本発明の飼料抗酸化組成物は、当該分野で
周知の方法によって製造される。例えば、抗酸化作用を
有する純粋な羅漢果配糖体を添加する工程を包含する方
法によって製造してもよいし、抗酸化作用を有する羅漢
果配糖体を含有する抗酸化組成物を添加する工程を包含
する方法によって製造してもよい。

【００８１】本発明の飼料抗酸化組成物の形態は特に限
定されない。本発明の飼料抗酸化組成物の形態の例とし
ては、顆粒、錠剤、ペレット、ゼリー、飲料などが挙げ
られる。

【００８２】本発明の飼料抗酸化組成物は、必要に応じ
て動物に与えられ、１日３回与えてもよいし、１日１
回、１週間に１回、１ヶ月に１回のようなさらに長期の
間隔をおいて与えてもよい。好ましくは、１日３回与え
られる。

【００８３】本発明の飼料抗酸化組成物に用いられる羅
漢果配糖体は、広い用量範囲にわたって有効である。従
って、羅漢果配糖体の一日あたりの用量は、体重１ｋｇ
に対して、代表的には約1ｍｇ〜約５００ｍｇ、好まし
くは約１０ｍｇ〜約２００ｍｇ、さらに好ましくは約２
０ｍｇ〜約１００ｍｇの範囲である。一日あたりの用量
は１ｍｇ未満であってもよい。この用量を、１回または
数回に分けて投与する。実際の用量は、飼料を摂取する
動物の年齢、体重および症状の重篤度などを配慮した上
で決定される。

【００８４】

【実施例】以下、実施例により本発明を更に詳細に説明
するが、本発明は以下の実施例のみに限定されるもので
はない。

【００８５】＜製造例１：羅漢果配糖体の単離＞羅漢果
配糖体であるモグロサイドＩＶ、モグロサイドＶ、１１
−オキソ−モグロサイドＶおよびシアメノサイドＩは市
販されていないために、本発明者らによって下記のよう
な分画・分取方法で各標準品を入手した。

【００８６】すなわち、羅漢果の未乾燥果実をメタノー
ルで抽出し、メタノールエキスを得た。メタノールエキ
スを水と混合し、Ｎ−ヘキサンで脱脂した。脱脂された
メタノールエキスを、多孔性樹脂（ＤＩＡＩＯＮ ＨＰ
−２０カラムクロマト、三菱化学製）にかけ、８０％メ
タノール、１００％メタノール、およびアセトンの順に
溶出させ、粗配糖体画分である８０％メタノール画分を
得た。

【００８７】得られた粗配糖体画分のうちの１０ｇを１
０〜５０ｍＬのメタノールに十分に溶解させ、乳棒を用
いて乳鉢中のシリカゲル（Ｓｉｌｉｃａｇｅｌ６０、７
０〜２３０ｍｅｓｈ、ＭＥＲＣＫ製）５０ｇと混ぜ合わ
せた。適量のメタノールを加えてよく混合した後、８０
〜９０℃の条件下で撹拌しながら十分に乾燥させた。シ
リカゲル粒子が均一になるまで乳棒ですりつぶした後、
３００ｇのシリカゲルを充填したガラスカラム(Ф４０
×７５０ｍｍ、桐山化学)の上部開口部に、上記の乾燥
させたシリカゲル粒子を追充填した。

【００８８】次に、クロロホルム(片山化学、試薬特級)
−メタノール−水を１５：６：１の容積比で混合した分
画溶媒を上記カラムに３Ｌ流して溶出させた後、クロロ
ホルム−メタノール−水を１５：９：２の容積比で混合
した分画溶媒を５Ｌ流して溶出させた。

【００８９】溶出液は、フラクションコレクターを用い
て約１３ｍＬ／８分の流速で、計約５００本の試験管に
回収した。約１０本おきに溶出液の一部を順相系の薄層
クロマトグラフィー（以下、ＴＬＣと称する）（Ｓｉｌ
ｉｃａｇｅｌ ６０Ｆ₂₅₄、ＭＥＲＣＫ製）にかけて分
析することにより、羅漢果配糖体のスポットを確認し
た。この結果に基づいて、得られた約５００本の試験管
に含まれる溶出液を次に示したＡ〜Ｅの５フラクション
にまとめ、分取した。

【００９０】ＡフラクションはＮｏ．００１〜２４２、
ＢフラクションはＮｏ．２４３〜３０５、Ｃフラクショ
ンはＮｏ．３０６〜３４８、ＤフラクションはＮｏ．３
４９〜４７０、そしてＥフラクションはＮｏ．４７１〜
ＬＡＳＴとした。

【００９１】「シアメノサイドＩ」および「モグロサイ
ドＩＶ」を単離するためには、Ｂフラクションを、オク
タデシルシリル（以下、ＯＤＳと称する）カラム（Ｌｉ
Ｃｈｒｏｐｒｅｐ ＲＰ−１８、４０〜６３μｍ、ＭＥ
ＲＣＫ）を用いる逆相カラムクロマトグラフィーにより
分取した。すなわち、ＢフラクションをＯＤＳカラムに
かけ、メタノール−水を５６：４４の容積比で混合した
分画溶媒を１．５Ｌ、およびメタノールを０．５Ｌ順次
用いて溶出させ、溶出液を約１３ｍＬずつ約１００本の
試験管に回収した。約５本おきに溶出液の一部を順相系
ＴＬＣにかけることにより羅漢果配糖体のスポットを確
認し、さらに溶出液の一部について液体クロマトグラフ
ィー（ＬＣ）分析を行うことにより、「シアメノサイド
Ｉ」または「モグロサイドＩＶ」が完全に単離されてい
ることを確認し、その結果、上記の約１００本の試験管
に含まれる溶出液を次のＢ−１からＢ−９に示す９個の
フラクションにまとめ、分取した。

【００９２】９つのフラクションは、Ｎｏ．０１〜２１
をフラクションＢ−１、Ｎｏ．２２〜２６をフラクショ
ンＢ−２、Ｎｏ．２７〜３０をフラクションＢ−３、Ｎ
ｏ．３１〜３２をフラクションＢ−４、Ｎｏ．３３〜３
９をフラクションＢ−５、Ｎｏ．４０〜４３をフラクシ
ョンＢ−６、Ｎｏ．４４〜４５をフラクションＢ−７、
Ｎｏ．４６〜６３をフラクションＢ−８、そしてＮｏ．
６４〜ＬａｓｔをフラクションＢ−９とした。

【００９３】「シアメノサイドＩ」はフラクションＢ−
３に含まれているので、このフラクションを再度カラム
クロマトグラフィーにかけ、メタノール−水＝５４：４
６（１．５Ｌ）の溶媒で溶出させ、溶出液を約１００本
の試験管に回収し、上記と同様にＴＬＣにかけてシアメ
ノサイドＩのスポットを確認し、そしてＬＣにかけてシ
アメノサイドＩが単離されていることを確認した。この
結果に基づいて約１００本の試験管に含まれる溶出液を
４つのフラクションに分けた。Ｎｏ．４２〜５３のフラ
クションにシアメノサイドＩが含まれており、このフラ
クションを乾燥することにより、高純度(純度９７．４
％)の「シアメノサイドＩ」を単離した。

【００９４】「モグロサイドＩＶ」はフラクションＢ−
８に含まれているので、このフラクションを再度カラム
クロマトグラフィーにかけ、メタノール−水＝５４：４
６（１．５Ｌ）の溶媒で溶出させ、溶出液を約１００本
の試験管に回収し、上記と同様にＴＬＣにかけてモグロ
サイドＩＶのスポットを確認し、そしてＬＣにかけてモ
グロサイドＩＶが単離されていることを確認した。この
結果に基づいて約１００本の試験管に含まれる溶出液を
４つのフラクションに分けた。Ｎｏ．５７〜６８のフラ
クションにモグロサイドＩＶが含まれており、このフラ
クションを乾燥することにより、高純度(純度９５．５
％)の「モグロサイドＩＶ」を単離した。

【００９５】「１１−オキソ−モグロサイドＶ」を単離
するためには、ＣフラクションをＯＤＳカラムを用いる
逆相カラムクロマトグラフィーにより分取した。すなわ
ち、ＣフラクションをＯＤＳカラムにかけ、メタノール
−水を５２：４８の容積比で混合した分画溶媒を１．５
Ｌ、およびメタノールを０．５Ｌ順次用いて溶出させ、
溶出液を約１３ｍＬずつ約１００本の試験管に回収し
た。約５本おきに溶出液の一部を順相系ＴＬＣにかける
ことにより「１１−オキソ−モグロサイドＶ」のスポッ
トを確認し、さらに溶出液の一部についてＬＣ分析を行
うことにより１１−オキソ−モグロサイドＶが完全に単
離されていることを確認し、その結果、上記の約１００
本の試験管に含まれる溶出液を次のＣ−１からＣ−４に
示す４個のフラクションにまとめ、分取した。

【００９６】４つのフラクションは、Ｎｏ．０１〜３７
をフラクションＣ−１、Ｎｏ．３８〜５０をフラクショ
ンＣ−２、Ｎｏ．５１〜５９をフラクションＣ−３、そ
してＮｏ．６０〜ＬａｓｔをフラクションＣ−４とし
た。

【００９７】「１１−オキソ−モグロサイドＶ」はフラ
クションＣ−２に含まれているので、このフラクション
を再度逆相カラムクロマトグラフィーにかけ、メタノー
ル−水＝５２：４８（１．５Ｌ）の溶媒で溶出させ、溶
出液を約１００本の試験管に回収し、上記と同様に順相
系ＴＬＣにかけて１１−オキソ−モグロサイドＶのスポ
ットを確認し、そしてＬＣにかけて１１−オキソ−モグ
ロサイドＶが単離されていることを確認した。この結果
に基づいて約１００本の試験管に含まれる溶出液を４つ
のフラクションに分けた。Ｎｏ．３８〜５３のフラクシ
ョンに１１−オキソ−モグロサイドＶが含まれており、
このフラクションを乾燥することにより、高純度(純度
９９．３％)の「１１−オキソ−モグロサイドＶ」を単
離した。

【００９８】「モグロサイドＶ」を単離するためには、
ＤフラクションをＯＤＳカラムを用いる逆相カラムクロ
マトグラフィーにより分取した。すなわち、Ｄフラクシ
ョンをＯＤＳカラムにかけ、メタノール−水を５４：４
６の容積比で混合した分画溶媒を１．５Ｌ、およびメタ
ノールを０．５Ｌ順次用いて溶出させ、溶出液を約１３
ｍＬずつ約１００本の試験管に回収した。約５本おきに
溶出液の一部を順相系ＴＬＣにかけることにより「モグ
ロサイドＶ」のスポットを確認し、さらに溶出液の一部
についてＬＣ分析を行うことによりモグロサイドＶが単
離されていることを確認し、その結果、上記の約１００
本の試験管に含まれる溶出液を次のＤ−１からＤ−６に
示す６個のフラクションにまとめ、分取した。

【００９９】６つのフラクションは、Ｎｏ．０１〜１６
をフラクションＤ−１、Ｎｏ．１７〜２２をフラクショ
ンＤ−２、Ｎｏ．２３〜２６をフラクションＤ−３、Ｎ
ｏ．２７〜３２をフラクションＤ−４、Ｎｏ．３３〜４
５をフラクションＤ−５、そしてＮｏ．４６〜Ｌａｓｔ
をフラクションＤ−６とした。

【０１００】「モグロサイドＶ」はフラクションＤ−５
に含まれているので、このフラクションを再度逆相カラ
ムクロマトグラフィーにかけ、メタノール−水＝５４：
４６（１．５Ｌ）の溶媒で溶出させ、溶出液を約１００
本の試験管に回収し、上記と同様に順相系ＴＬＣにかけ
てモグロサイドＶのスポットを確認し、そしてＬＣにか
けてモグロサイドＶが単離されていることを確認した。
この結果に基づいて約１００本の試験管に含まれる溶出
液を５つのフラクションに分けた。Ｎｏ．３５〜４５の
フラクションにモグロサイドＶが含まれており、このフ
ラクションを乾燥することにより、高純度(純度９７．
３％)の「モグロサイドＶ」を単離した。

【０１０１】モグロサイドＶ、モグロサイドＩＶ、１１
−オキソ−モグロサイドＶおよびシアメノサイドＩの構
造解析は、赤外線吸収スペクトル（ＩＲ）および核磁気
共鳴分光装置（ＮＭＲ）を用いて行なった。上記で得た
モグロサイドＶ、モグロサイドＩＶ、１１−オキソ−モ
グロサイドＶおよびシアメノサイドＩの純度測定は、高
速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を使用して行な
った。

【０１０２】＜製造例２：ＬＤＬの調製＞ＥＤＴＡ（１
ｍｇ／ｍｌ）を含有する採血管を用いて、１２時間絶食
後の健常人から採血し、続いてこの血液からヒト血漿を
回収した。得られたヒト血漿を密度勾配単スピン超遠心
分離（文献１０および１７）にかけ、密度１．０１９〜
１．０６３ｇ／ｍｌの画分を得ることにより、ＥＤＴＡ
を含有する低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）を単離し
た。酸化実験のために、得られたＥＤＴＡ含有ＬＤＬ
を、４℃にて２４時間、リン酸緩衝液（ＰＢＳ、ｐＨ
７．４）に対して透析し、ＥＤＴＡを除去し、ＬＤＬを
得た。ＬＤＬのタンパク質濃度を、ウシ血清アルブミン
（ＢＳＡ）を標準として用いて、Ｌｏｗｒｙら（文献２
１）の手順に従って測定した。

【０１０３】＜実施例１：羅漢果抽出物のＬＤＬ抗酸化
作用＞羅漢果抽出物がＬＤＬ抗酸化作用を有するか否か
を、Ｅｓｔｅｒｂａｕｅｒら（１０、１３、１９）の方
法に従ってＬＤＬの被酸化性を実験することにより調べ
た。まず、５μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌ、１５μｇ／
ｍｌ、または２０μｇ／ｍｌの羅漢果抽出物（中国広西
桂林師範大学より入手）、上記製造例２で得たＬＤＬ
（５０μｇ／ｍｌ）、および２μＭ ＣｕＳＯ₄を含有
するリン酸緩衝液（ＰＢＳ）を調製した。ＰＢＳの組成
は、ＮａＣｌ ０．１３７Ｍ、ＫＣｌ ２．７ｍＭ、Ｎ
ａ₂ＨＰＯ₄ ７．７ｍＭ、ＫＨ₂ＰＯ₄ ７．４ｍＭ水溶
液である。コントロールとして、羅漢果抽出物を含有し
ない、ＬＤＬ（５０μｇ／ｍｌ）および２μＭ ＣｕＳ
Ｏ₄を含有するＰＢＳを調製した。得られたＰＢＳを３
７℃でインキュベートして銅媒介ＬＤＬ酸化を行った。
この酸化反応の間に形成された共役ジエンの量を、２３
４ｎｍのＵＶ吸光度で４時間、１０分間隔でモニタリン
グした。実験を、３連で３回行った。ＬＤＬ酸化は、ほ
ぼ３つの連続した相、すなわち、酸化抵抗時間（ｌａｇ
ｐｈａｓｅ）、酸化進行時間（ｐｒｏｐａｇａｔｉｏ
ｎ ｐｈａｓｅ）、および分解時間（ｄｅｃｏｍｐｏｓ
ｉｔｉｏｎ ｐｈａｓｅ）に分けられ得る。酸化拡張時
間は、脂質過酸化水素への連鎖反応が増殖する前の、酸
化の生じない時間と定義される。

【０１０４】結果を図２に示す。図２からわかるよう
に、羅漢果抽出物は、銅媒介ＬＤＬ酸化を用量依存的に
抑制した。このことは、酸化拡張時間が羅漢果抽出物の
濃度の漸増とともに長期化することを示す。

【０１０５】＜実施例２：ＬＤＬ過酸化物生成に対する
羅漢果抽出物の影響＞細胞媒介ＬＤＬ酸化に対する甘味
成分の効果を、ヒト臍静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）を用
いて試験した。

【０１０６】手短に述べると、まず、ＨＵＶＥＣを、Ｅ
ＢＭ−２培地（Ｃｌｏｎｅｔｉｃｓ，ＵＳＡ）を用い
て、９０％コンフルエントになるまで培養した。９０％
コンフルエントになった時点で、７．５μｇ／ｍｌ、１
５μｇ／ｍｌ、または３０μｇ／ｍｌの羅漢果抽出物
（中国広西桂林師範大学より入手：）、上記製造例２で
得たＬＤＬ（１００μｇ／ｍｌ）を含有するＨａｍのＦ
−１０培地（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｇ
ＩＢＣＯ−ＢＲＬ）に培地を交換した。コントロールと
して、羅漢果抽出物を含有せず、上記製造例２で得たＬ
ＤＬ（１００μｇ／ｍｌ）を含有するＨａｍのＦ−１０
培地を用いた。次いで、３７℃で２４時間インキュベー
トし、酸化させた。インキュベーションの終了後、それ
ぞれの培地上清を回収した。

【０１０７】培地上清についてアガロースゲル電気泳動
および市販のキット（Ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｒ ＬＰＯ，
協和発酵工業株式会社）を用いる脂質過酸化物（ＬＰ
Ｏ）アッセイ（文献１０、１１、および１３）を行っ
て、ＬＤＬ酸化の程度を測定した。ＬＰＯアッセイは、
ロイコメチレンブルー誘導体と、ヘム化合物中の脂質過
酸化水素との反応についての比色系アッセイに基づく。
実験を、３連で３回行った。

【０１０８】結果を図３に示す。図３では、ＬＰＯアッ
セイの結果を、平均±ＳＤで表す。３より多くの群の平
均間の差を、フィッシャー法による分散分析により検定
し、そして２群の平均間の差を、独立スチューデントｔ
検定により分析した。ｐ＜０．０５の値を、統計的に有
意であるとした。

【０１０９】図３から、ＨＵＶＥＣ媒介ＬＤＬ酸化に対
する羅漢果抽出物の効果は、羅漢果抽出物がＨＵＶＥＣ
媒介ＬＤＬ酸化を用量依存性様式で阻害することがわか
る。このことは、アガロース電気泳動で認められるＬＤ
Ｌの陰性荷電の程度のパターンと一致した結果であった
（データは示さず）。

【０１１０】＜実施例３：羅漢果抽出物および各種甘味
成分のＬＤＬ抗酸化作用＞羅漢果抽出物および各種甘味
成分が、ＬＤＬ酸化を抑制するか否かを、上記実施例１
と同様にＥｓｔｅｒｂａｕｅｒらの方法に従ってＬＤＬ
の被酸化性を実験することにより調べた。１０μｇ／ｍ
ｌの羅漢果抽出物は、１０μＭ 羅漢果配糖体とほぼ等
価である。従って、本発明者らは、１０μＭを各種甘味
成分の実験濃度として用いた。

【０１１１】まず、１０μｇ／ｍｌの羅漢果抽出物（中
国広西桂林師範大学より入手）、１０μＭ グルコー
ス、または１０μＭエリスリトール、上記製造例１で得
たＬＤＬ（５０μｇ／ｍｌ）、および２μＭ ＣｕＳＯ
₄を含有するＰＢＳを調製した。コントロールとして、
羅漢果抽出物を含有しない、ＬＤＬ（５０μｇ／ｍｌ）
および２μＭ ＣｕＳＯ₄を含有するＰＢＳを調製し
た。得られたＰＢＳを３７℃でインキュベートして銅媒
介ＬＤＬ酸化を行った。この酸化反応の間に形成された
共役ジエンの量を、２３４ｎｍのＵＶ吸光度で４時間、
１０分間隔でモニタリングした。実験を、３連で３回行
った。

【０１１２】結果を図４に示す。図４から、銅媒介ＬＤ
Ｌ酸化は、１０μｇ／ｍｌの羅漢果抽出物により阻害さ
れるが、１０μＭ グルコースおよび１０μＭ エリス
リトールにより阻害されないことがわかる。また、銅媒
介ＬＤＬ酸化は、１０μＭグルコースおよび１０μＭ
エリスリトールにより促進されなかった。

【０１１３】同様にして、１０ｍＭ グルコースまたは
１０ｍＭ エリスリトールの存在下での銅媒介ＬＤＬ酸
化を測定した。この結果、１０ｍＭ グルコースも１０
ｍＭエリスリトールも銅媒介ＬＤＬ酸化を阻害も促進も
しないことがわかった。

【０１１４】これらのことから、グルコースおよびエリ
スリトールは１０ｍＭまでの濃度では銅媒介性ＬＤＬ酸
化を促進も阻害もし得なかった。いずれにしても、ＬＤ
Ｌ酸化に関して、グルコースおよびエリスリトールは、
阻害効果を有さないようである。それゆえ、本実施例に
より示されるように、羅漢果抽出物は、酸化的ストレス
が増加した糖尿病患者に対して有利な効果を与えると考
えられる。

【０１１５】＜実施例４：各種羅漢果配糖体の抗ＬＤＬ
酸化作用についての検討＞銅媒介ＬＤＬ酸化に対する各
種羅漢果配糖体の効果を試験して、羅漢果抽出物うちの
どの甘味成分が主にＬＤＬ酸化を阻害するかを調べた。
まず、５０μＭおよび２００μＭの上記製造例１で製造
したモグロサイドＶ、モグロサイドＩＶ、シアメノサイ
ドＩＶ、または１１−オキソ−モグロサイドＶ、上記製
造例１で得たＬＤＬ（５０μｇ／ｍｌ）、および２μＭ
ＣｕＳＯ₄を含有するＰＢＳを調製した。コントロー
ルとして、羅漢果配糖体を含有しない、ＬＤＬ（５０μ
ｇ／ｍｌ）および２μＭ ＣｕＳＯ₄を含有するＰＢＳ
を調製した。得られたＰＢＳを３７℃でインキュベート
して銅媒介ＬＤＬ酸化を行った。この酸化反応の間に形
成された共役ジエンの量を、２３４ｎｍのＵＶ吸光度で
４時間、１０分間隔でモニタリングした。実験を、３連
で３回行った。

【０１１６】羅漢果配糖体は、５０μＭの濃度ではＬＤ
Ｌ酸化に対して主な効果はなかった（データは示さ
ず）。

【０１１７】２００μＭの濃度で各種羅漢果配糖体を用
いた場合の結果を図５に示す。図５は、１１−オキソ−
モグロサイドＶのみがＬＤＬ酸化を抑制するが、他の羅
漢果配糖体は２００μＭではＬＤＬ酸化を抑制しないこ
とを示す。

【０１１８】＜実施例５：１１−オキソ−モグロサイド
Ｖの用量依存性抗ＬＤＬ酸化作用＞１１−オキソ−モグ
ロサイドＶによるＬＤＬ酸化抑制の用量依存性につい
て、上記実施例１と同様にＥｓｔｅｒｂａｕｅｒらの方
法に従ってＬＤＬの被酸化性を実験することにより調べ
た。

【０１１９】まず、１００μＭ、２００μＭ、または３
００μＭの１１−オキソ−モグロサイドＶ、上記製造例
１で得たＬＤＬ（５０μｇ／ｍｌ）、および２μＭ Ｃ
ｕＳＯ₄を含有するＰＢＳを調製した。コントロールと
して、１１−オキソ−モグロサイドＶを含有しない、Ｌ
ＤＬ（５０μｇ／ｍｌ）および２μＭ ＣｕＳＯ₄を含
有するＰＢＳを調製した。得られたＰＢＳを３７℃でイ
ンキュベートして銅媒介ＬＤＬ酸化を行った。この酸化
反応の間に形成された共役ジエンの量を、２３４ｎｍの
ＵＶ吸光度で４時間、１０分間隔でモニタリングした。
実験を、３連で３回行った。

【０１２０】結果を図６に示す。図６から、１１−オキ
ソ−モグロサイドＶは、用量依存性様式で、ＬＤＬの銅
媒介酸化を阻害することがわかる。ＬＤＬのラグタイム
を、独立スチューデントｔ検定により評価すると、１１
−オキソ−モグロサイドＶは、７６．８±５．５分（平
均±ＳＤ、ｎ＝３、添加なしのコントロール）から１１
９．７±８．９分（ｎ＝３、１１−オキソ−モグロサイ
ドＶ）へと有意に増加させた（ｐ＜０．０１）。

【０１２１】＜実施例６：酸素ラジカル捕獲能に対する
各種甘味成分の影響の検討＞ＬＤＬ酸化に対する羅漢果
抽出物および羅漢果配糖体の阻害効果が、その酸素ラジ
カル捕獲能と関連し得るか否かを調べるためにＤＰＰＨ
アッセイを行った。甘味成分の酸素ラジカル捕獲能を、
１，１−ジフェニル−２−ピクリル−ヒドラジル（ＤＰ
ＰＨ）アッセイ（文献２２および２３）により分析し
た。

【０１２２】まず、各種甘味成分をそれぞれ、２０μｇ
／ｍｌ羅漢果抽出物、２００μＭモグロサイドＩＶ、２
００μＭモグロサイドＶ、２００μＭ １１−オキソ−
モグロサイドＶ、または２００μＭシアメノサイドＩに
なるようにエタノール中に希釈し、そして最終的に１ｍ
ｌのエタノール中の０．２ｍＭ ＤＰＰＨと混合した。
甘味成分を添加せずにＤＰＰＨと混合したものを陰性コ
ントロールとし、甘味成分の代わりに２０μＭビタミン
Ｅを添加したものを陽性コントロールとした。５１７ｎ
ｍでの光学密度の変化の時間経過を、反応速度によりモ
ニタリングした。

【０１２３】各実験を、それぞれ３連で３回行った。

【０１２４】結果を図７に示す。ＤＰＰＨアッセイを用
いて、５１７ｎｍの吸光度における時間依存的減少が、
羅漢果抽出物および２００μＭ １１−オキソ−モグロ
サイドＶにより観察されたが、他の羅漢果配糖体では観
察されなかった。４分間のインキュベーション後、羅漢
果抽出物および１１−オキソ−モグロサイドＶは、５１
７ｎｍでの吸光度をそれぞれ、３５％および２３％減少
させた。比較として、吸光度の８５％減少が、２０μＭ
ビタミンＥ（酸素ラジカル捕獲抗酸化剤としての陽性コ
ントロール）により得られた。これらの結果は、羅漢果
抽出物および１１−オキソ−モグロサイドＶが実質的に
酸素ラジカルを捕獲し得るが、それらの捕獲能はビタミ
ンＥよりも低いことを示唆する。

【０１２５】この結果、羅漢果抽出物および１１−オキ
ソ−モグロサイドＶのＬＤＬ酸化阻害効果は、酸素ラジ
カル捕獲能に関連することがわかった。

【０１２６】以前の報告により、有効な基捕獲の基準が
示されている。分子構造に関して、ヒドロキシ基の数だ
けでなく、フェノール環または芳香族環上でのそれらの
配置およびアレンジメントが、フラボノイドの抗酸化活
性に影響を与えることが示されている（文献２４および
２５）。フラボノイドの場合、Ｃ環における４−オキソ
の機能は、抗酸化活性の増強を与える。なぜなら、４−
オキソ機能は、電子の脱局在化を提供し、芳香族核の共
鳴効果により酸素ラジカルとの反応後に生じた基の安定
化を生じるからである。図１に示したように、１１−オ
キソ−モグロサイドＶの構造における１１位でのオキソ
機能は、その抗酸化活性に関連すると考えられる。

【０１２７】

【発明の効果】本発明によれば、抗酸化作用を有する羅
漢果配糖体を有効成分として含有する、アテローム性動
脈硬化症を抑制または予防し得る抗酸化組成物が提供さ
れる。本発明の抗酸化組成物は、抗酸化作用とともに甘
味を有する羅漢果配糖体を含有するので、甘味料の代替
物として糖尿病の食餌療法にも利用することができる。
本発明の抗酸化組成物は、従来の抗酸化剤に加えて、Ｌ
ＤＬの動脈硬化惹起性を低減させるために用いられ得
る。

【０１２８】本発明の抗酸化組成物は、抗酸化作用を有
する羅漢果配糖体を、従来の羅漢果抽出物と比較して多
量に含むので、従来の羅漢果抽出物と同じ甘味強度にな
るように調整して用いた場合、従来の羅漢果抽出物より
も強力な抗酸化作用を示す。従って、従来の羅漢果抽出
物と同じ抗酸化作用を得るために、従来の羅漢果抽出物
よりも少量で用いることができる。それゆえ、ほどよい
甘味強度で抗酸化作用を得ることができる。

【０１２９】

【表２】

【図面の簡単な説明】

【図１】羅漢果配糖体の構造を示す化学式である。Ｇｌ
ｃは、β−Ｄ−グルコピラノシルを示す。

【図２】銅媒介性ＬＤＬ酸化に対する羅漢果抽出物の効
果を示すグラフである。白丸は、添加なしのコントロー
ルを示す。白四角、白菱形、白三角、および黒丸は、そ
れぞれ、５μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌ、１５μｇ／ｍ
ｌ、および２０μｇ／ｍｌでの羅漢果抽出物添加を示
す。

【図３】ＨＵＶＥＣ媒介ＬＤＬ酸化に対する羅漢果抽出
物の効果を示すグラフである。全ての値は平均±ＳＤ
（ｎ＝３）である。^*、^**、および^#は、コントロールと
有意に異なる。^*は、ｐ＜０．０５、^**はｐ＜０．０
１、＃はｐ＜０．００１である。¶は、１５μｇ／ｍｌ
羅漢果抽出物添加と比較して有意に異なる（¶はｐ＜
０．００１である）。

【図４】銅媒介ＬＤＬ酸化に対する甘味成分の効果を示
すグラフである。白丸、白四角、白菱形、および白三角
は、それぞれ、添加なしのコントロール、１０μｇ／ｍ
ｌ 羅漢果抽出物、１０μＭグルコース、および１０μ
Ｍエリスリトールの添加を示す。

【図５】銅媒介ＬＤＬ酸化に対する羅漢果配糖体の効果
を示すグラフである。白丸、白四角、白菱形、白三角、
および黒丸は、それぞれ、添加なしのコントロール、１
００μＭ モグロサイドＶ、１００μＭ モグロサイド
ＩＶ、１００μＭ シアメノサイドＩ、および１００μ
Ｍ １１−オキソ−モグロサイドＶの添加を示す。

【図６】銅媒介ＬＤＬ酸化に対する１１−オキソ−モグ
ロサイドＶの用量依存効果を示すグラフである。白丸
は、添加なしのコントロールを示す。白四角、白菱形、
および白三角は、それぞれ、１００μＭ、２００μＭ、
および３００μＭの１１−オキソ−モグロサイドＶの添
加を示す。

【図７】羅漢果抽出物および羅漢果配糖体の酸素ラジカ
ル獲得能を示すグラフである。類似のパターンを有する
３つの異なる研究のうちの代表的な実験を示す。ビタミ
ンＥ（２０μＭ）は、酸素ラジカル捕獲剤の陽性コント
ロールである。白丸は、添加なしのコントロールを示
す。黒丸、黒四角、白菱形、白三角、黒三角、および白
四角は、それぞれ、２０μＭのビタミンＥ、２０μｇ／
ｍｌの羅漢果抽出物、２００μＭのモグロサイドＩＶ、
２００μＭのモグロサイドＶ、２００μＭの１１−オキ
ソ−モグロサイドＶ、および２００μＭのシアメノサイ
ドＩの添加を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） // Ｃ０７Ｊ 9/00 Ｃ０７Ｊ 9/00 (71)出願人 500215090 武生 英一郎 広島県広島市南区翠２丁目１−10−101 (71)出願人 500215104 神田 博史 広島県広島市東区牛田早稲田３丁目３−３ −102 (72)発明者 吉田 博 広島県安芸郡海田町寿町５−３−305 (72)発明者 神田 博史 広島県広島市東区牛田早稲田３丁目３−３ −102 (72)発明者 新宮 哲司 広島県広島市安佐南区長束１−６−５ (72)発明者 武生 英一郎 広島県広島市南区翠２丁目１−10−101 (72)発明者 村田 雄司 大阪府堺市山田３丁1007番地−２ (72)発明者 吉川 慎一 大阪府南河内郡美原町阿弥474−２ Ｆターム(参考） 4B018 MD42 ME06 4C086 AA01 AA02 DA11 MA01 MA03 MA04 MA05 MA52 NA09 NA14 ZA45 ZC35 ZC37 4C091 AA01 BB06 CC01 DD01 EE06 FF02 GG01 HH04 KK01 LL03 LL06 MM03 NN01 PA02 PA05 PB04 QQ01 RR13

Claims (9)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 以下の一般式を有する羅漢果配糖体を含
   有する抗酸化組成物であって、ここで、該羅漢果配糖体
   は、甘味および抗酸化作用を有する、組成物： 【化１】 ここで、 Ｒ₁およびＲ₂は、独立して、直鎖状もしくは分枝状に連
   結された糖残基およびその修飾物、シクロアルキル、ハ
   ロゲン化されていてもよいアルキル、ハロゲン化されて
   いてもよいアルケニル、ハロゲン化されていてもよいア
   ルキニル、ハロゲン化もしくはアルキル化されていても
   よいアリールアルキル、ハロゲン化されていてもよいア
   リールアルケニル、ハロゲン化されていてもよいアリー
   ルアルキニル、ハロゲン、アミノ、ホルミル、およびＨ
   からなる群から選択される；ただし、Ｒ₁およびＲ₂のう
   ちの少なくとも一方は糖残基またはその修飾物である；
   ただし、該羅漢果配糖体が１１−オキソ−モグロサイド
   Ｖである場合は、該組成物中のモグロサイドＩＶ、モグ
   ロサイドＶ、シアメノサイドＩ、および１１−オキソ−
   モグロサイドＶの合計に対する１１−オキソ−モグロサ
   イドＶの割合が、天然物中の該割合よりも高い。
2. 【請求項２】 前記糖残基およびその修飾物が、α−Ｄ
   −グルコピラノシル（α−Ｄ−Ｇｌｃ）、β−Ｄ−グル
   コピラノシル（β−Ｄ−Ｇｌｃ）、β−Ｄ−ガラクトピ
   ラノシル（α−Ｄ−Ｇａｌ）、α−Ｄ−ガラクトピラノ
   シル（β−Ｄ−Ｇａｌ）、α−Ｄ−フルクトピラノシル
   （α−Ｄ−Ｆｒｕ）、およびβ−Ｄ−フルクトピラノシ
   ル（β−Ｄ−Ｆｒｕ）、ならびにそれらの組み合わせ、
   ならびにそれらの修飾物からなる群より選択される単位
   糖を含む、請求項１に記載の組成物。
3. 【請求項３】 Ｒ₁が、直鎖状または分枝状に連結され
   た−（β−Ｄ−Ｇｌｃ）_mまたはその修飾物であり、ｍ
   は０〜５の任意の整数であり、Ｒ₂が、直鎖状または分
   枝状に連結された−（β−Ｄ−Ｇｌｃ）_nまたはその修
   飾物であり、ｎは０〜５の任意の整数であるが、ただし
   ｍ＋ｎは１以上である、請求項２に記載の組成物。
4. 【請求項４】 Ｒ₁が−β−Ｄ−Ｇｌｃまたは−β−Ｄ
   −Ｇｌｃ−β−Ｄ−Ｇｌｃであり、Ｒ₂が−β−Ｄ−Ｇ
   ｌｃ−β−Ｄ−Ｇｌｃまたは 【化２】 である、請求項３に記載の組成物。
5. 【請求項５】 前記羅漢果配糖体が１１−オキソ−モグ
   ロサイドＶである、請求項４に記載の組成物。
6. 【請求項６】 医薬品、食品、または飼料のいずれかで
   ある、請求項１に記載の組成物。
7. 【請求項７】 医薬品であって、さらに、担体を含有す
   る、請求項６に記載の組成物。
8. 【請求項８】 医薬品、食品、または飼料を製造する方
   法であって、請求項１に記載の組成物を添加する工程を
   包含する、方法。
9. 【請求項９】 請求項８に記載の方法により得られる、
   医薬品、食品、または飼料。