KR100671793B1 - 참소리쟁이 추출물, 소리쟁이 추출물을 유효성분으로 함유하는 약학적 조성물 및 건강기능식품 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 참소리쟁이 추출물, 소리쟁이 추출물 및 그 제조방법에 관한 것으로서, 본 발명에 따른 참소리쟁이 추출물은 참소리쟁이 뿌리를 건조하고 세절한 다음, 알콜 또는 알콜 수용액으로 추출한 후, 추출된 추출액을 여과하고 감압 농축하여 얻어지는 것을 특징으로 하고, 그 제조방법은 참소리쟁이 뿌리를 건조하고, 세절하는 약재준비단계와; 세절된 참소리쟁이 뿌리를 30 ~ 100%의 메틸알콜, 에틸알콜 또는 알콜 수용액 중 어느 하나로 추출하는 추출단계와; 추출된 추출액을 여과한 후 감압 농축하는 농축단계로 이루어지는 것을 특징으로 한다.
또한, 본 발명에 따른 소리쟁이 추출물은 소리쟁이 뿌리를 건조하고 세절한 다음, 알콜 또는 알콜 수용액으로 추출한 후, 추출된 추출액을 여과하고 감압 농축하여 얻어지는 것을 특징으로 하고, 그 제조방법은 소리쟁이 뿌리를 건조하고, 세절하는 약재준비단계와; 세절된 소리쟁이 뿌리를 30 ~ 100%의 메틸알콜, 에틸알콜 또는 알콜 수용액 중 어느 하나로 추출하는 추출단계와; 추출된 추출액을 여과한 후 감압 농축하는 농축단계로 이루어지는 것을 특징으로 한다.
또한, 본 발명에 따른 당뇨합병증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 기능성 식품은 상기 참소리쟁이 또는 소리쟁이 추출물을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 한다.
또한, 본 발명에 따른 노화방지 또는 지연용 약학적 조성물 및 기능성 식품은 상기 참소리쟁이 또는 소리쟁이 추출물을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 한다.
본 발명의 혼합 생약추출물은 당뇨합병증 유발 원인 인자 중의 하나인 최종당화산물의 생성을 효과적으로 억제하므로, 당뇨합병증의 예방 및 치료와 노화방지를 위한 약학적 조성물 및 기능성 식품 등으로 응용될 수 있다.
참소리쟁이, 소리쟁이, 최종당화산물, 당뇨합병증

Description

참소리쟁이 추출물, 소리쟁이 추출물을 유효성분으로 함유하는 약학적 조성물 및 건강기능식품{Pharmaceutical compositions and functional food comprising Extract of Rumex japonicus, Extract of Rumex Crispus}
도 1은 본 발명에 따른 참소리쟁이 추출물의 최종당화산물 생성억제 효과를 나타내는 그래프이고,
도 2는 본 발명에 따른 소리쟁이 추출물의 최종당화산물 생성억제 효과를 나타내는 그래프이며,
도 3은 대조군인 아미노구아니딘의 최종당화산물 생성억제 효과를 나타내는 그래프이다.
본 발명은 참소리쟁이 추출물, 소리쟁이 추출물 및 그 제조방법에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 참소리쟁이 또는 소리쟁이 뿌리를 추출하여 얻어지는 추출물을 이용하여 당뇨합병을 유발하는 인자 중의 하나인 최종당화산물의 생성을 억제하여 당뇨합병증의 예방 또는 치료 및 노화방지 또는 지연에 효과적인 참소리쟁이 추출물, 소리쟁이 추출물 및 그 제조방법에 관한 것이다.
당뇨병은 전 세계적으로 중요한 성인병 중의 하나로서, 최근 우리나라에서도 급속한 경제 성장과 더불어 당뇨병 유병율이 7-8％에 달하며, 60-70대의 경우 중요한 사망원인이 되고 있다. 당뇨병에 의한 사망원인 중 하나인 당뇨합병증은, 당뇨병에 걸린 후 10-20년이 지나면 체내 거의 모든 기관이 손상을 받아 당뇨성 망막병증(retinopathy), 당뇨성 백내장(cataract), 당뇨성 신증(nephropathy), 당뇨성 신경병증(Neuropathy) 등으로 나타난다.
특히, 만성 당뇨성 신증은 혈액 투석 치료 및 말기 신부전의 가장 중요한 원인으로, 혈액 투석 치료 및 장기이식 이외에는 다른 치료방법이 없는 실정이다. 이러한 당뇨합병증은 당뇨병을 치료하여 정상적인 혈당 농도를 회복한 경우에도 진행되는 것을 볼 수 있는데, 이는 고혈당 상태의 지속으로 인한 단백질의 비효소적 당화반응의 결과에 의하여 비가역적으로 생성된 최종당화산물(advanced glycat ion endproducts, AGEs)이 그 주원인 중의 하나로 알려져 있다.
이러한 당뇨합병증을 유발하는 기전으로는 크게 단백질의 비효소적 당화반응(nonenzymatic glycation of proein), 폴리올 경로(polyol pathway) 및 산화적 스트레스(oxidative stress) 등으로 설명되고 있다.
단백질의 비효소적 당화반응(nonenzymatic glycation of protein)이란, 단백질의 리신 잔기 등의 아미노산 그룹과 환원당이 효소 작용 없이 축합반응 즉 밀리아드 반응에 의한 것으로, 이 반응의 결과로 최종당화산물(advanced glycation endproducts, AGEs)이 생성된다. 단백질의 비효소적 당화반응은 (1)단백질의 리신 잔기 등의 아미노산 그룹과 환원당의 알데히드 또는 케톤이 효소 작용 없이 친핵성 첨가 반응을 하여 초기 단계 산물인 쉬프염기(schiff base)를 형성하고, 상기 쉬프염기와 인접한 케토아민 어닥트(ketoamine adduct)가 서로 축합하여 가역적인 아마도리형의 조기당화산물이 생성되는 단계와 (2) 고혈당 상태가 지속되어 가역적인 아마도리형의 조기당화산물이 분해되지 않고 재배열(rearrangement)되고 단백질과 교차결합(cross-linking)하여 비가역적인 최종당화산물이 생성되는 단계로 나눌 수 있다.
가역적인 아마도리형의 조기당화산물과 달리 최종당화산물은 비가역적인 반응 산물이므로, 일단 생성되면 혈당이 정상으로 회복되어도 분해되지 않고 단백질 생존기간동안 조직에 축적되어 조직의 구조와 기능을 비정상적으로 변화시킨다(Vinson, J. A. et al., 1996, J. Nutritinal Biochemistry 7: 559-663; Smith, P. R. et al., 1992, Eur. J. Biochem., 210: 729-739).
예를 들면, 포도당과 여러 종류의 단백질과 반응하여 생성된 최종당화산물 중 하나인 당화 알부민은 만성 당뇨성 신증을 일으키는 중요한 요인으로 작용한다. 당화 알부민은 당화가 진행되지 않은 정상 알부민에 비해 더 용이하게 신사구체 세포 내로 유입되고, 고농도의 포도당은 메산지움 세포를 자극하여 세포외 기질(extracellular matrix)합성을 증가시킨다. 과도하게 유입된 당화 알부민과 증가된 세포외 기질로 인하여 신사구체의 섬유화가 야기된다. 이와 같은 기전으로 신사구체가 계속 손상 받게 되어 혈액투석 또는 장기이식 등의 극단적인 치료방법을 쓸 수밖에 없는 단계에 이르게 되는 것이다. 또한, 만성 당뇨로 인하여 동맥벽에 서는 콜라겐이, 신사구체에서는 기저막성 단백질이 최종당화산물과 결합되어 조직에 축적됨이 보고된 바 있다(Brownlee, M., et al., 1986, Sciences, 232, 1629-1632).
이처럼 비효소적 단백질 당화반응에 의하여 기저막, 혈장 알부민, 수정체 단백질, 피브린, 콜라겐 등의 단백질에서 당화가 일어나며, 생성된 최종당화산물이 조직의 구조와 기능을 비정상적으로 변화시켜 당뇨성 망막병증(retinopathy), 당뇨성 백내장(cataract), 당뇨성 신증(nephropathy), 당뇨성 신경병증(Neuropathy) 등의 만성 당뇨합병증을 유발시킨다.
또한, 비효소적 단백질 당화반응에서 생성된 최종당화산물은 노화에도 중요한 역할을 한다고 알려져 있다(Monnier et all., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81: 583, 1984; Lee et a1., Biochem. Biophys. Res. Comm., 123: 888, l984; Diabetologia, 38: 357-394).
전술한 바와 같이 비효소적 단백질 당화반응에서 생성된 최종당화산물은 당뇨합병증 및 노화의 진행에 주원인이 되고 있어, 당뇨합병증 및 노화의 진행을 막기 위해서는 최종당화산물의 생성을 억제할 필요가 있다.
현재, 단백질 당화억제제로 유일한 합성제제인 아미노구아니딘·HCl (aminoguanidine·HCl)은 친핵성 히드라진(hydrazine)으로 아마도리 산물과 결합하여 단백질과의 교차결합을 방지함으로써 최종당화산물의 생성을 억제하여 합병증으로 진전되는 것을 지연 또는 방지한다(Brownlee, M., et al., 1986, Sciences, 232, 1629-1632; Edelstein, D. et al., l992, Diabetes, 4l, 26-29). 아미노구아 니딘·HCl은 당뇨합병 중의 예방 및 치료에 가장 유망한 합성 의약품으로 제 3상 임상실험까지 진행되었으나, 장기간 투여시 독성이 유발되는 문제점이 있어 보다 안전한 약제의 개발이 요망되고 있다.
따라서, 최근에는 기존의 합성 화합물들에 의한 질환 치료제 개발의 한계와 치료시의 부작용 및 독성에 관한 문제점들로 인해 생약제제를 중심으로 한 질환 치료제의 개발이 활발히 진행되고 있다.
이에 본 발명자들은 참소리쟁이와 소리쟁이 뿌리를 알콜에 추출한 추출물이 최종당화산물의 생성을 억제하여 당뇨합병증의 치료 및 예방에 사용될 수 있음을 발견하여 본 발명을 완성하였다.
이에 본 출원인은 상기와 같은 문제점을 해결하기 위하여 당뇨합병증의 원인, 처방 및 치료법 등에 대한 계속적인 연구를 하였으며, 본 발명은 당뇨합병증 유발 원인 중의 하나인 최종당화산물의 생성을 억제하는 효과를 가는 참소리쟁이 또는 소리쟁이의 뿌리 추출물을 제공하는데 그 목적이 있다.
본 발명의 다른 목적은 상기 참소리쟁이 또는 소리쟁이 추출물을 유효성분으로 함유하는 당뇨합병증의 예방 및 치료용 또는 노화방지 및 지연용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 참소리쟁이 또는 소리쟁이 추출물을 유효성분으로 함유하는 당뇨합병증의 예방 및 치료용 또는 노화방지 미치 지연용 기능성 식품을 제공하는 것이다.
상기 본 발명의 목적을 달성하기 위한 본 발명에 따른 참소리쟁이 추출물은 참소리쟁이 뿌리를 건조하고 세절한 다음, 알콜 또는 알콜 수용액으로 추출한 후, 추출된 추출액을 여과하고 감압 농축하여 얻어지는 것을 특징으로 한다.
또한 본 발명에 따른 소리쟁이 추출물은 소리쟁이 뿌리를 건조하고 세절한 다음, 알콜 또는 알콜 수용액으로 추출한 후, 추출된 추출액을 여과하고 감압 농축하여 얻어지는 것을 특징으로 한다.
또한, 본 발명에 따른 당뇨합병증이 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 기능성 식품은 상기 참소리쟁이 추출물 또는 소리쟁이 추출물을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 한다.
또한, 본 발명에 따른 노화방지 또는 지연용 약학적 조성물 및 기능성 식품은 상기 참소리쟁이 추출물 또는 소리쟁이 추출물을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 한다.
본 발명에 사용되는 참소리쟁이(Rumex japonicus Houtt.)와 소리쟁이(Rumex Crispus L.)는 마디풀과(Polygonaceae)에 속하는 여러해살이풀로서 전국의 들 습지에서 흔히 자라며, 일본, 중국, 아시아, 유럽, 아프리카에 분포한다(배기환, 한국의 약용식물, p 52, 교학사, 2000).
한방에서는 뿌리를 양제근(羊蹄根) 또는 우이대황(牛耳大黃)이라하여 대황( 大黃) 대용으로 청혈, 양혈, 화담, 지해, 통변의 효능이 있고, 급성간염, 토혈, 기관지염, 변비, 개선 창독을 치료한다. 잎을 우이대황엽(牛耳大黃葉)이라 하며, 청열, 해독의 효능이 있다(이창복, 대한식물도감, p 297, 향문사, 서울, 1989; 배기환, 한국의 약용식물, p 52, 교학사, 서울, 2000).
이들의 뿌리에는 에모딘(emodin)을 비롯한 안트라퀴노이드(anthraquinoid) 그리고 무시진(musizin)을 비롯한 나프탈렌(naphthalene) 유도체들을 함유하고 있다(생약학연구회, 현대생약학, p 320, 학창사, 서울, 1995).
참소리쟁이의 생리활성물질에 대한 연구로는 김 등이 몇 종의 인체암 세포주에 대한 세포독성물질로서 안트라퀴논화합물과 나프탈렌화합물 각각 1종을 보고였다(김대근 외, 약학회지, 42, pp 233-237, 1998).
소리쟁이의 잎과 씨의 에테르, 에탄올, 뜨거운 물 추출물이 DPPH(2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl) 소거작용과 항미생물작용(antimicrobial activity)가 있음을 보고하였다(Yildirim, A et al, J. Agric Food Chem., 2001, Aug;49(8): 4083-9). 그러나 지금까지 참소리쟁이와 소리쟁이의 당뇨병합병증 예방 및 억제활성이나 그 활성성분에 대한 연구는 보고 된 바 없다.
이하, 본 발명을 상세히 설명하면 다음과 같다.
I. 참소리쟁이 추출물
본 발명에 따른 참소리쟁이 추출물은 참소리쟁이 뿌리를 건조하고 세절한 다음, 알콜 또는 알콜 수용액으로 추출한 후, 추출된 추출액을 여과하고 감압 농축하 여 얻어진다.
상기 추출물의 제조방법은 참소리쟁이 뿌리를 건조하고, 세절하는 약재준비단계와; 세절된 참소리쟁이 뿌리를 30 ~ 100%의 메틸알콜, 에틸알콜 또는 알콜 수용액 중 어느 하나로 추출하는 추출단계와; 추출된 추출액을 여과한 후 감압 농축하는 농축단계로 이루어진다.
참소리쟁이 추출물의 제조방법을 보다 상세히 설명하면 다음과 같다.
1. 약재준비단계
먼저, 참소리쟁이 뿌리를 건조하고, 세절한다.
2. 추출단계
상기 세절된 참소리쟁이 뿌리의 5 ~ 10배(w/v)량의 30 ~ 100%읠 메틸알콜, 에틸알콜 또는 그 알콜 수용액 중 어느 하나를 가하여 상온에서 2 ~ 5회 연속 추출한다.
3. 농축단계
상기 추출액을 여과한 후 감압 상태에서 농축한다. 이때, 구성성분의 분해 및 가수분해를 방지할 수 있도록 농축 시 온도를 45℃ 이하로 유지한다.
II. 소리쟁이 추출물
본 발명에 따른 소리쟁이 추출물은 소리쟁이 뿌리를 건조하고 세절한 다음, 알콜 또는 알콜 수용액으로 추출한 후, 추출된 추출액을 여과하고 감압 농축하여 얻어진다.
상기 추출물의 제조방법은 소리쟁이 뿌리를 건조하고, 세절하는 약재준비단계와; 세절된 소리쟁이 뿌리를 30 ~ 100%의 메틸알콜, 에틸알콜 또는 알콜 수용액 중 어느 하나로 추출하는 추출단계와; 추출된 추출액을 여과한 후 감압 농축하는 농축단계로 이루어진다.
소리쟁이 추출물의 상세한 제조방법은 상기 참소리쟁이 추출물의 제조방법에서 참소리쟁이 대신 소리쟁이를 사용하는 것을 제외하고는 동일하다.
본 발명의 참소리쟁이 또는 소리쟁이 추출물은 시험관내 실험에서, 소혈청알부민(bovine serum albumin;BSA)의 당화를 억제하는 것을 확인하였고, 최종당화산물의 생성 50％ 억제 농도 즉 IC50 값이 18.9 μg/ml, 21.74 μg/ml로 우수한 생성 억제 효과를 나타내었다.
III. 참소리쟁이 또는 소리쟁이 추출물을 유효성분으로 함유하는 약학적 조성물
본 발명은 참소리쟁이 또는 소리쟁이의 추출물을 유효성분으로 함유하는 당뇨합병증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 노화방지 또는 지연용 약학적 조성물에 관한 것으로서, 상기 참소리쟁이 또는 소리쟁이 추출물은 당뇨합병증 또는 노화를 일으키는 주 원인인 최종당화산물의 생성을 억제하는 등의 당뇨합병증 또는 노화의 치료활성을 나타내고, 임상 투여 시에 경구 또는 비경구로 투여가 가능하여 일반적인 의약품 제제의 형태로 사용될 수 있다.
즉, 본 발명의 약학적 조성물은 실제 임상투여 시 여러 가지 제형으로 투여될 수 있는데, 제제화 할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 하나 이상의 화학식 1의 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘 카보네이트(Calcium carbonate), 수크로스 (Sucrose) 또는 락토오스(Lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다.
또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.
비경구투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜(Propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
IV. 참소리쟁이 또는 소리쟁이 추출물을 유효성분으로 함유하는 기능성 식품
본 발명은 참소리쟁이 또는 소리쟁이의 뿌리를 추출하여 얻어지는 참소리쟁이 또는 소리쟁이 추출물을 유효성분으로 함유하는 당뇨합병증의 예방 또는 치료용 기능성 식품 및 노화방지 또는 지연용 기능성 식품에 관한 것으로서, 상기 기능성 식품은 최종 제품의 상품성과 소비자 기호도에 따라 다른 식품소재를 첨가할 수 있다.
이러한 참소리쟁이 또는 소리쟁이 추출물을 식품 첨가물로 사용할 경우, 상기 참소리쟁이 또는 소리쟁이 추출물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다.
유효 성분의 혼합양은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시에 본 발명의 참소리쟁이 또는 소리쟁이 추출물은 원료에 대하여 15 중량% 이하, 바람직하게는 1O 중량% 이하의 양으로 첨가된다. 그러나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는, 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.
상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 기능성 식품을 모두 포함한다.
본 발명의 기능성 식품은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드, 및 데스트린, 사이클로덱스트린과 간은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 추출물 100㎖당 일반적으로 약 0.01 ~ 0.04g, 바람직하게는 약 0.02 ~ 0.03g 이다.
상기 외에 본 발명의 추출물은 여러가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제,펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 조성물은 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100중량부 당 0.Ol ~ 0.l 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
최종당화산물이 생성되는 과정에서 지질대사에 이상이 일어나고, 동시에 생성되는 유해 산소 자유라디칼에 대한 방어시스템 기능이 저하되어 산화적 스트레스가 유발된다고 보고한 바 있고, 한편, 산화적 스트레스는 안정한 상태로 체내에 존재하던 산소가 효소계, 환원대사, 화학약품, 공해물질, 광화학 반응과 같은 환경적 및 생화학적 요인 등에 의해 반응성이 큰 활성산소로 전환되어 인체의 세포구성 성 분인 단백질, 지질 및 DNA 등을 비가역적으로 파괴되는 것으로서, 최종당화산물의 생성을 억제하는 경우 산화적 스트레스의 유발 비율이 줄어들 것으로 판단된다.
이하, 본 발명을 다음의 실시예 및 실험예에 의해 보다 상세히 설명한다. 다만, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명의 내용을 예시하는 것일 뿐 발명의 범위가 실시예 및 실험예에 의해 한정되는 것은 아니다.
[실시예 1]
대전광역시의 전민동 지역에서 참소리쟁이(Rumex japonicus Houtt.)와 소리쟁이(Rumex Crispus L.)를 채집하여 건조시킨 다음, 뿌리를 세절하였다. 각각의 시료에 80% 에탄올에 넣고, 추출용기에서 상온에서 7일씩 3회 추출하였다. 이 추출물들을 감압농축하여 참소리쟁이와 소리쟁이의 뿌리 추출물을 수득하였다. 이때 구성성분의 분해 및 가수분해를 방지하기 위하여 워터베이스(water bath)를 40 ~ 45℃로 유지하였다. 감압농축으로 에틸알콜을 완전히 제거한 후 동결건조기에서 수분을 완전히 건조하였다. 건조 결과 0.85g의 추출물을 획득하였다(수득율: 10.6%).
[실험예 1] 참소리쟁이 또는 소리쟁이 추출물의 시험관내에서 최종당화산물 생성억제 효능분석
단백질원(原)으로 소혈청알부민(bovine serum albumin, 이하 BSA라고 한다: 미국 시그마 제품)을 택하였다. BSA을 10㎎/㎖의 농도가 되도록 50mM 인산 완충 용액(phosphate buffer; pH 7.4)에 가하여 제조하였다. 당원(原)으로는 0.1 M 과 당과 0.1 M글루코스가 혼합된 액을 사용하였다. 제조된 BSA 용액에 과당과 글루코스 혼합액을 가하였다. 참소리쟁이와 소리쟁이의 뿌리 추출물을 시료군으로 하여 증류수에 용해한 후, 이를 상기 BSA 와 당의 혼합액에 첨가하고 37℃에서 15일간 배양하였다. 이때 0.02% 소디움아자이드(sodium azide)를 항박테리아제로서 첨가하였다.
대조군은 BSA와 당 혼합액을 배양한 것이며, 시험군과 대조군의 공시험군(blank)은 각각 조제한 후 배양하지 않은 것이다. 한편 효능의 우수함을 비교할 수 있는 지표인 양성 대조군으로서 아미노구아니딘을 사용하였다. 모든 배양액은 4 개씩 준비하여 최대한 오차를 피하였으며, 배양 직전에 질소가스(순도: 99.999%)를 충진하여 오염을 방지하였다. 15일 후 배양액에서 생성된 최종당화산물의 함량을 분석하여 그 결과를 나타내었다. 최종당화산물은 형광, 갈색을 띠고 있으며 교차결합을 할 수 있는 물리화학적인 특성을 지니고 있을 뿐 아니라 세포막 수용체가 인지할 수 있는 배위자를 지니고 있다. 이러한 특성을 지닌 최종당화산물의 양을 spectrofluorometer(Excitation: 350nm, Emission: 450nm)로 측정하여 그 생성 억제 정도를 분석하였다.
[실험예 2] 참소리쟁이 또는 소리쟁이 추출물의 최종당화산물 생성억제 효능
실시예 1에서 제조된 참소리쟁이 추출물은 2.5 ㎍/㎖, 5.0 ㎍/㎖,25 ㎍/㎖의 농도로 조제하였고, 실시예 1에서 제조된 소리쟁이 추출물은 10 ㎍/㎖, 20 ㎍/㎖, 25 ㎍/㎖의 농도로 조제한 후, 상기 실험예 1에 기재한 방법으로 37℃에서 15 일 동안 배양하였다. 15일 후 배양액에서 생성된 최종당화산물의 양을 spectrofluorometer (Excitation: 350nm, Emission: 450nm)로 측정하고 그 결과를 표 1과 도 1 및 도 2에 나타내었다.
생성억제율은 하기의 식으로 계산된다.
생성억제율(%)= 100 -(시료군의 형광강도-시료 공시험군의 형광강도)/(대조군의 형광강도-대조군 공시험군의 형광강도)×100
[비교예 1] 아미노구아니딘의 최종당화산물 생성억제 효능
아미노구아니딘을 증류수에 용해하여 27.5 ㎍/㎖, 55 ㎍/㎖, 110 ㎍/㎖, 550㎍/㎖의 농도로 조제한 후 상기 실험예 1에 기재한 방법으로 37℃에서 15일 동안 배양하였다. 15일 후 배양액에서 생성된 최종당화산물의 양을 spectrofluorometer (Excitation: 350nm, Emission: 450nm)로 측정하고 그 결과를 표 1과 도 2에 나타내었다.
Figure 112004062880529-pat00001
표 1에서 보인대로 참소리쟁이 추출물은 2.5 ㎍/㎖, 5 ㎍/㎖, 25 ㎍/㎖에서 각각 최종당화산물 생성억제 효과가 7.92 ％, 11.67 ％, 66.39 ％ 이였으며 IC50은 18.88 ㎍/㎖로 나타났다. 소리쟁이 추출물은 10 ㎍/㎖, 20 ㎍/㎖, 25 ㎍/㎖에서 각각 최종당화산물 생성억제 효과가 13.34 ％, 48.43 ％, 57.39 ％ 이였으며 IC50은 21.74 ㎍/㎖로 나타났다 이는 양성대조군인 아미노구아니딘(86.91 ㎍/㎖)보다 우수한 효능임을 알 수 있다.
상기에서 살펴본 바와같이, 본 발명에 따른 참소리쟁이 또는 소리쟁이 추출물은 양성대조군인 아미노구아니딘에 비하여 월등히 낮은 저농도에서 당뇨합병증 유발 원인 중의 하나인 최종당화산물의 생성을 억제함으로서, 최종당화산물의 생성에서 기인되는 당뇨합병증 즉, 당뇨성 망막병증(retinopathy), 당뇨성 백내장 (cataract), 당뇨성 신증(nephropathy), 당뇨성 신경병증(Neuropathy) 등의 예방 및 치료를 위한 약학적 조성물 및 기능성 식품으로 응용될 수 있다. 또한, 최종당화산물의 생성을 억제하는 경우 산화적 스트레스의 유발 비율이 줄어들어, 산화적 스트레스에 의한 노화의 방지 및 지연용 약학적 조성물 및 기능성 식품으로 응용될 수 있다.

Claims (10)

  1. 참소리쟁이 뿌리를 건조하고 세절한 다음, 알콜 또는 알콜 수용액으로 추출한 후, 추출된 추출액을 여과하고 감압 농축하여 얻어지는 참소리쟁이 추출물을 유효성분으로 함유하는 당뇨합병증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  2. 제 1항에 있어서,
    상기 알콜 또는 알콜 수용액은 30 ~ 100%의 메틸알콜, 에틸알콜 또는 그 알콜 수용액 중 어느 하나인 것을 특징으로 참소리쟁이 추출물을 유효성분으로 함유하는 당뇨합병증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  3. 삭제
  4. 소리쟁이 뿌리를 건조하고 세절한 다음, 알콜 또는 알콜 수용액으로 추출한 후, 추출된 추출액을 여과하고 감압 농축하여 얻어지는 소리쟁이 추출물을 유효성분으로 함유하는 당뇨합병증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  5. 제 4항에 있어서,
    상기 알콜 또는 알콜 수용액은 30 ~ 100%의 메틸알콜, 에틸알콜 또는 그 알콜 수용액 중 어느 하나인 것을 특징으로 참소리쟁이 추출물을 유효성분으로 함유하는 당뇨합병증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  6. 삭제
  7. 삭제
  8. 삭제
  9. 참소리쟁이 뿌리를 건조하고 세절한 다음, 알콜 또는 알콜 수용액으로 추출한 후, 추출된 추출액을 여과하고 감압 농축하여 얻어지는 참소리쟁이 추출물 또는 소리쟁이 뿌리를 건조하고 세절한 다음, 알콜 또는 알콜 수용액으로 추출한 후, 추출된 추출액을 여과하고 감압 농축하여 얻어지는 소리쟁이 추출물을 유효성분으로 함유하는 당뇨합병증 예방 또는 개선용 건강기능식품.
  10. 삭제
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