KR19990045312A

KR19990045312A - 탄수화물 유도체

Info

Publication number: KR19990045312A
Application number: KR1019980049021A
Authority: KR
Inventors: 콘스탄트 아드리안 안톤 반 뵈켈; 모리스 쁘띠도; 필립 뒤쇼소위; 요하네스 에그버투스 마리아 바스텐; 트롬프 코넬리아 마리아 드레프
Original assignee: 사노피; 이.에이치. 리링크; 악조 노벨 엔.브이.
Priority date: 1997-11-19
Filing date: 1998-11-16
Publication date: 1999-06-25
Also published as: NO310723B1; NO985365D0; ES2198081T3; SK7362000A3; NO985365L; KR100518497B1; BR9804699A; AU9324298A; SK284134B6; CZ293639B6; ATE239030T1; ID21287A; BRPI9804699B1; EE04348B1; EP1032579B1; EE200000301A; HUP9802663A2; RU2210573C2; IL126893A0; ZA9810559B

Abstract

본 발명은 하기 화학식 1의 탄수화물 유도체 또는 이것의 약학적으로 허용 가능한 염에 관한 것이다:

상기 식 중,

R¹은 C₁∼C₄의 알콕시이고,

R², R³및 R⁴는 각각 C₁∼C₄의 알콕시 또는 OSO₃ ^-이고,

황산염 기의 총 개수는 4 내지 6이며,

꺾인 선은 6원 고리면의 위 또는 아래로 결합된 결합을 나타낸다.

본 발명의 화합물은 항혈전 활성을 가지며, 혈전증의 치료 또는 예방용 및 연근육 세포의 증식 억제용으로 사용할 수 있다.

Description

탄수화물 유도체

본 발명은 탄수화물 유도체, 이것을 함유한 약학 조성물, 및 상기 탄수화물 유도체를 의약의 제조에 사용하는 방법에 관한 것이다.

헤파린은 장 점막 등의 생물체로부터 분리된 통상 사용되는 항응고제이다. 헤파린의 존재하에서는, 항트롬빈 III(AT-III)에 의한 트롬빈의 불활성화가 상당히 촉진된다. 트롬빈은 혈액 응고단계의 최종 단계를 제어한다. 트롬빈의 주요 기능은 피브리노겐을 분해시켜 피브린 단량체를 형성시키는 것으로서, 이 피브린 단량체는 가교 결합에 의해 불용성 겔 형태의 피브린 응고물(clot)을 형성한다.

AT-III과의 반응에 필요한 헤파린의 구조적 특징에 대해 다각적인 연구가 이루어져 왔다. 헤파린 중합체의 일부는 AT-III에 약간의 친화성만을 보이는 한편, 다른 부분은 AT-III과의 결합에 보다 중요한 작용을 하는 것으로 밝혀졌다. 헤파린 단편에 대한 연구 결과, 오당(五糖) 단편이 AT-III에 결합하는 최소의 친화성 구조라는 것이 확인되었다{예, 문헌 [Physiological Reviews, 71(2), 488/9,1991] 참조}. 이러한 고친화성 단편에는 8개의 황산염 기가 존재한다. 이들 황산염 기 중 4개는 AT-III에 대한 결합에 필수적인 한편{ 알.에스. 팁슨, 디.호튼의 문헌 [Advances in Carbohydrate Chemistry and Biochemistry, 43권, Harcourt Brace Jovanovich, B. Casu, p.51-127, 6] 참조}, 나머지 기는 보다 높은 친화성에 더 기여하는 것으로 밝혀졌다. 이러한 사실은 오당 단편의 합성 유사체에서 확인되었다 {문헌 [Angew. Chem. 32(12), 1671-1818,1993] 참조}.

고친화성 오당 단편의 확인은 이것의 합성 유사체의 제조를 고무시켰다. 글리코스아미노글리칸 타입의 소형 합성 탄수화물 분자는 효과적이면서 선택적인 항 Xa 억제제인 것으로 밝혀졌다. 예를 들어, 유럽 특허 제84,999호를 참고한다. 이후의 특허 출원에서는, 이들 분자의 각종 변형체, 예를 들어 EP 529, 715호 및 EP 454,220호에 개시된 글리코스아미노글리칸 관련 탄수화물이 상기 분자와 유사하거나 심지어 보다 높은 활성과 더욱 개질된 약리학적 특성을 갖는다는 점을 밝혀냈다. 이들 탄수화물 유도체는 글리코스아미노글리칸의 특징적인 작용기, 즉 자유 히드록실기, N-황산염기 및 N-아세틸기를 갖지 않는다. 또한, 상기 EP 529,715호 및 EP 454,220호에 개시된 모든 오당류는 7개 이상의 황산염기를 갖는다. 따라서, 항혈전성 올리고당 유도체 분야에서는, 임상적으로 허용되는 항혈전 활성을 얻기 위해서는 오당 화합물에 7개 이상의 황산염기가 필요한 것으로 통상 추정하고 있다.

그러나, 최근에는 글리코스아미노글리칸 관련 탄수화물 유도체류가 단지 4개 내지 6개의 황산염기만을 가졌음에도 불구하고 임상적으로 유효한 항혈전 활성을 갖는다는 의외적인 사실이 밝혀졌다. 또한, 본 발명의 화합물은 부작용을 거의 나타내 보이지 않는다. 예를 들어, 출혈 위험성이 감소하며, 화합물 중의 황산염 함량이 낮아서 헤파린에 의한 혈소판 감소증(HIT) [HIT는 환자의 사인이 될 수도 있는 심각한 부작용임]을 유발시키지 않는다. 또한, 본 발명의 화합물은 생물학적 반감기를 가지므로 1일 1회 치료가 가능하다. 1일 1회 치료법은, 약물 치료가 필요한 환자가 이러한 약물 치료에 빨리 적응할 수 있으므로, 예를 들어 1주 1회 치료법보다 더욱 바람직한 것으로 볼 수 있다. 환자의 치료 시에는 복잡한 투여 방식이 필요치 않기 때문에, 1일 1회 치료법은 병원 처방 면에서도 용이하다.

따라서, 본 발명의 화합물은 특이적이며 정교하게 균형을 이룬 약리학적 특성을 나타내 보인다.

본 발명은 하기 화학식 1의 탄수화물 유도체 또는 이것의 약학적으로 허용 가능한 염에 관한 것이다.

화학식 1

상기 식 중, R¹은 C₁∼C₄의 알콕시이고, R², R³및 R⁴는 각각 C₁∼C₄의 알콕시 또는 OSO₃ ^-이고, 황산염기의 총 개수는 4 내지 6이며, 꺾인 선은 6원 고리면의 위 또는 아래로 결합된 결합을 나타낸다.

본 발명의 화합물은 트롬빈 매개 질환 및 트롬빈 관련 질환의 치료 또는 예방에 유용하다. 이러한 질환에는 응고 단계가 활성화된 각종 혈전증 상태 및 혈전증 이전 상태가 포함되며, 그 예로는 심정맥 혈전증, 폐 색전증, 혈전 정맥염, 혈전증 또는 색전증으로 인한 동맥 폐색증, 혈관 성형술 또는 혈전 용해술 도중 또는 이후의 동맥 재폐색증, 혈관 손상 또는 침해적 심장 수술 이후의 재협착증, 수술후 정맥 혈전증 또는 색전증, 급성 또는 만성 동맥경화증, 발작, 심근 경색, 암, 전이 및 신경 퇴행성 질환이 있으나, 이들에 국한되는 것은 아니다. 본 발명의 탄수화물 유도체는 또한 연근육 세포 증식의 억제제로서, 그리고 혈관 형성, 암 및 레트로바이러스 감염(예, HIV)의 치료에도 사용할 수 있다.

또한, 본 발명의 화합물은 투석 및 수술 시 필요에 따라 외삽성 혈류관의 항응고제 코팅 및 항응고제로도 사용할 수 있다.

본 발명의 화합물은 시험관 내 또는 시험관 외의 항응고제로도 사용될 수 있다.

본 발명의 바람직한 탄수화물 유도체는 D 단위가 하기 화학식 2를 갖는 화학식 1의 화합물이다.

상기 식 중, R¹은 메톡시이고, R², R³및 R⁴는 각각 메톡시 또는 OSO₃ ^-이다.

보다 바람직한 탄수화물 유도체는 R²가 메톡시인 화합물이다. 특히 바람직한 탄수화물 유도체는 R³이 메톡시인 화합물이며, 가장 바람직한 탄수화물 유도체는 R⁴가 메톡시인 화합물이다.

용어 C₁∼C₄의 알콕시 중 C₁∼C₄의 알킬기는 C₁∼C₄의 분지형 또는 비분지형 알킬기로서, 예를 들면 메틸, 에틸, 이소프로필, t-부틸 등이 있다. 가장 바람직한 알킬기는 메틸이다.

하전된 부에 대응하는 반대 이온은 약학적으로 허용 가능한 반대 이온으로서, 그 예는 수소, 보다 바람직하게는 알칼리 또는 알칼리토 금속 이온(예, 나트륨, 칼슘 또는 마그네슘)이다.

본 발명의 탄수화물 유도체는 올리고당의 합성에 대해 기재되어 사용되는 공지된 방법에 따라 제조할 수 있다. 이와 관련해서는 전술한 EP 529,715호를 참고할 수 있다. 화학식 1의 탄수화물 유도체의 제조에 적합한 방법은, 다른 구조를 가진 보호된 단당류를 결합시켜 보호된 이당류를 형성시킨 후,

(a) 한 종류의 보호된 이당류를 또다른 종류의 보호된 이당류에 결합시켜 보호된 사당류를 형성하고, 이 사당류를 보호된 단당류에 결합시켜 보호된 오당류를 형성하거나, 또는

(b) 보호된 단당류를 보호된 이당류에 결합시켜 보호된 삼당류를 형성하고, 이 삼당류를 보호된 이당류에 결합시켜 보호된 오당류를 형성하고,

이어서 보호된 기들을 분해하고, 자유 히드록시기를 황산염화하여 얻은 화합물을 약학적으로 허용 가능한 염으로 임의 전환시키는 것을 특징으로 하는 방법이다.

단당류는, 필요한 알킬기 또는 임시 보호기에 의해 적당히 작용화된 D-글루코즈, D-만노즈, L-이도즈, D-글루쿠론산 또는 L-이두론산이다. 적당한 보호기는 당해 기술 분야에 공지되어 있다. 바람직한 보호기는, 히드록시기의 경우에는 벤질 및 아세틸이고, 우론산의 카르복실레이트기의 경우에는 벤질이다. 다른 보호기, 예를 들어 벤조일, 레불리닐, 알콕시페닐, 클로로아세틸, 트리틸 등을 사용하여도 마찬가지로 우수한 효과를 거둘 수 있다. 당류의 결합은 당해 기술 분야에 공지된 방식, 예를 들면 글리코실 공여체 1 위치의 탈보호법, 및/또는 이 1 위치의 활성화법(예, 브롬화물, 펜테닐, 플루오르화물, 티오글리코시드, 또는 트리클로로아세트이미드 유도체를 형성시킴으로써), 및 임의 보호된 글리코실 수용체와 활성화된 글리코실 공여체와의 결합법으로 수행한다.

정맥 혈전증의 치료 또는 연근육 세포 증식의 억제 시에는, 본 발명의 화합물을 장내 또는 비경구적으로 투여할 수도 있으며, 사람의 경우 일일 투여량은 체중 1 kg 당 0.001∼10 mg이 바람직하다. 본 발명의 화합물은, 예를 들어 표준 참고 문헌인 게나로 외 다수의 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, 18판, Mack Publishing Company, 1990] 중 Part 8의 "Pharmaceutical Preparations and Their Manufacture"에 기재된 바와 같이 약학적으로 적당한 보조제와 혼합하여 고형 투여 단위(예, 환약, 정제)로 압착시키거나, 또는 캡슐 또는 좌약으로 가공할 수도 있다. 또한 본 발명의 화합물은 약학적으로 적당한 액체를 사용하여 용액, 현탁액, 에멀젼 형태의 주사 제제 또는 스프레이(예, 비강 스프레이) 제제로 사용할 수도 있다.

투여 단위(예, 정제)의 제조 시에는, 충전제, 색소, 중합체 결합제 등의 통상의 첨가제를 사용할 수 있다. 통상적으로 활성 화합물의 작용을 방해하지 않는 임의의 약학적으로 허용 가능한 첨가제를 사용할 수 있다. 본 발명의 조성물과 함께 투여하기에 적합한 담체로는 젖당, 전분, 셀룰로즈 유도체 등, 또는 이들의 혼합물을 적당량 사용할 수 있다.

본 발명은 하기 실시예를 통해 더욱 구체적으로 설명할 것이다.

실시예

실시예 1의 제제(화합물 32)

GH 이당 16의 합성(도식 1+2)

화합물 2

화합물 1(60 g, 시판물)을 벤질 브로마이드(50.5 ml)와 함께 N,N-디메틸포름아미드(858 ml)에 용해시켰다. +10℃로 냉각시킨 후, 20% 수산화나트륨 수용액을 적가하였다. 1 시간 동안 교반한 후, 온도를 20℃로 상승시키고 20 시간 동안 더 교반하였다. 이어서, 용액을 빙수와 톨루엔의 혼합물에 붓고 추출하였다. 유기 층을 농축시키고, 결정화를 통해 미정제 생성물을 정제하여 30.3 g의 화합물 2를 얻었다.

TLC: Rf = 0.60, 톨루엔/에틸 아세테이트: 7/3, v/v

화합물 3

화합물 2(26.4 g)를 N,N-디메틸포름아미드(211 ml)에 용해시킨 후 얼음으로 냉각시켰다. 질소 대기 하에 수화나트륨(2.5 g)을 첨가하고, 4-메톡시 벤질 클로라이드(13.3 g)를 적가한 후 실온에서 1 시간 동안 교반하였다. 이어서, 이 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석시키고, 물로 2회 세척한 후 농축시켜 40.7 g의 미정제 화합물 3을 얻었다.

TLC: Rf = 0.80, 톨루엔/에틸 아세테이트: 7/3, v/v

화합물 4

화합물 3(34.9 g)을 60% 아세트산 수용액에 용해시키고 60℃에서 4 시간 동안 교반하였다. 이 혼합물을 톨루엔으로 희석시키고 농축시켰다. 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 26.4 g의 화합물 4를 얻었다.

TLC: Rf = 0.07, 톨루엔/에틸 아세테이트: 7/3, v/v

화합물 5

화합물 4(26.4 g)를 질소 대기 하에 디클로로메탄(263 ml)에 용해시켰다. 트리메톡시옥소늄 테트라플루오로보레이트(11.6 g) 및 2,6-디-t-부틸-4-메틸피리딘(17.4 g)을 실온에서 첨가하였다. 4 시간 후, 이 혼합물을 빙수에 붓고 디클로로메탄으로 추출하였다. 유기 층은 탄산수소나트륨으로 세척하여 증발시켰다. 미정제 생성물을 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 18.5 g의 화합물 5를 얻었다.

TLC: Rf = 0.25, 톨루엔/에틸 아세테이트: 7/3, v/v

화합물 7

화합물 6(3-메틸-1,2,4,6-테트라아세틸-이도즈)(48.4 g)을 톨루엔(175 ml)에 용해시켰다. 질소 대기 하에서 에탄티올(20 ml) 및 붕소 트리플루오리드 디에틸 에테레이트(톨루엔 중의 1 M; 134 ml)를 첨가하였다. 1 시간 동안 교반한 후, 탄산수소나트륨 수용액(400 ml)을 첨가하고, 이 혼합물을 다시 1 시간 동안 교반하였다. 이 혼합물을 에틸 아세테이트에 붓고, 유기 층을 물로 2회 세척한 후 농축시켰다. 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 29.6 g의 화합물 7을 얻었다.

TLC: Rf = 0.45, 톨루엔/에틸 아세테이트: 6/4, v/v

화합물 8

화합물 5(17.5 g) 및 화합물 7(28.2 g)을 질소 대기 하에서 톨루엔(525 ml)에 용해시켰다. 분말형 분자체(4 Å)를 첨가한 후, 반응물을 -20℃로 냉각시켰다. N-요오도숙신이미드(17.4 g) 및 트리플루오로메탄설폰산(1.38 ml)을 디옥산/디클로로메탄(1/1, v/v)에 용해시켜 새로 제조한 0.1 M 용액을 연속 질소 흐름 하에 적가하였다. 10 분 후 적색 반응 혼합물을 여과하여 티오황산 나트륨 수용액 및 탄산수소나트륨 수용액으로 연속 세척하였다. 유기 층은 진공 하에서 농축시켜 30.0 g의 화합물 8을 분리하였다.

TLC: Rf = 0.45, 디클로로메탄/에틸 아세테이트: 8/3, v/v

화합물 9

화합물 8(30.0 g)을 460 ml의 메탄올/디옥산(1/1, v/v)에 용해시키고, 칼륨 부타놀레이트를 첨가하여 비누화시켰다. 15 분 후, 이 혼합물을 Dowex 50WX8H⁺형태로 중화시켜 진공하에 농축시켰다. 실리카겔 크로마토그래피를 통해 정제시켜 17.4 g의 화합물 9를 얻었다.

TLC: Rf = 0.25, 디클로로메탄/메탄올: 95/5, v/v

화합물 10

질소 대기 하에서 화합물 9(17.4 g)를 N,N-디메틸-포름아미드(77 ml)에 용해시키고, 1,2-디메톡시프로판(26 ml) 및 p-톨루엔설폰산을 첨가한 후 30 분동안 교반하였다. 이 혼합물을 탄산수소나트륨 수용액으로 희석시킨 후 에틸 아세테이트로 추출하여 용매를 증발시키므로써 19.7 g의 화합물 10을 얻었다.

TLC: Rf = 0.45, 디클로로메탄/메탄올: 95/5, v/v

화합물 11

화합물 10(18.5 g)을 N,N-디메틸포름아미드(24.4 ml)에 용해시키고 0℃로 냉각시켰다. 질소 대기 하에서 수화나트륨(1.47 g; 60%의 오일 분산액) 및 요오도메탄(2.36 ml)을 첨가하였다. 1 시간 이상 동안 과량의 수화나트륨을 중화시키고후, 디클로로메탄으로 추출한 후 농축시켜 20.0 g의 화합물 11을 얻었다.

TLC: Rf = 0.85, 디클로로메탄/메탄올: 95/5, v/v

화합물 12

화합물 11(18.4 g)을 디클로로메탄(838 ml) 및 물(168 ml)에 용해시켰다. 이어서, 2,3-디클로로-5,6-디시아노-1,4-벤조퀴논(7.1 g)을 첨가한 후, 이 혼합물을 4℃에서 18 시간 동안 교반하였다. 이 혼합물을 탄산수소나트륨 수용액에 붓고 디클로로메탄으로 추출하였다. 유기 층을 농축시켜 12.7 g의 화합물 12를 얻었다.

TLC: Rf = 0.40, 디클로로메탄/메탄올: 95/5, v/v

화합물 13

화합물 11의 제조 방법과 동일한 방법에 따라 화합물 12를 표제 화합물로 전환시켰다.

TLC: Rf = 0.48, 톨루엔/에틸 아세테이트: 1/1, v/v

화합물 14

화합물 13(2.5 g)을 아세트산(14.6 ml) 및 물(6.1 ml)에 용해시킨 후, 실온에서 밤새 교반하였다. 톨루엔과 함께 증발시킨 후 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 1.9 g의 화합물 14를 얻었다.

TLC: Rf = 0.31, 에틸 아세테이트, v/v

화합물 15

디클로로메탄(9 ml) 중의 화합물 14(1.7 g) 용액에 2,2,6,6-테트라메틸-1-피페리디닐옥시(5 mg), 탄산수소나트륨 포화 용액(5.8 ml), 브롬화칼륨(32 mg) 및 테트라부틸염화암모늄(42 mg)을 첨가하였다. 이 혼합물을 0℃로 냉각시킨 후, 염화나트륨 포화 용액(6.5 ml), 탄산수소나트륨 포화 용액(3.2 ml)과 차아염소산나트륨(1.3 M; 7.3 ml)의 혼합물을 15 분 동안 첨가하였다. 1 시간 동안 교반한 후, 이 혼합물을 물로 희석하고 디클로로메탄으로 3회 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, 황산마그네슘으로 건조시키고 여과한 후 건조 상태로 증발시켜 1.74 g의 미정제 화합물 15를 얻었다.

TLC: Rf = 0.14, 디클로로메탄/메탄올: 9/1, v/v

메틸 O -(벤질 2,3-디- O -메틸-α-L-이도피라노실우로네이트)-(1→4)-2- O -벤질-3,6-디- O -메틸-α-D-글루코피라노시드 16

N,N-디메틸포름아미드 중의 1.74 g의 화합물 15 용액에 질소 대기 하에서 벤질브로마이드 1.68 ml 및 탄산수소칼륨 1.1 g을 첨가하였다. 이 용액을 90 분 동안 교반한 후, 물을 첨가하고 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 층을 증발시키고 실리카겔 크로마토그래피로 정제한 후 1.64 g의 화합물 16을 분리하였다.

TLC: Rf = 0.50, 톨루엔/에틸 아세테이트: 1/1, v/v

EF-이당 25의 합성(도식 2+3)

화합물 17

화합물 12(10.5 g)를 무수 N,N-디메틸포름아미드(178 ml)에 용해시키고 질소 대기 하에서 0℃로 냉각시켰다. 벤질브로마이드(3.3 ml)를 적가한 후 수화나트륨(1.91 g, 60% 오일 분산액)을 첨가하였다. 30 분 후 반응을 완료하고, 과량의 수화나트륨을 중화시켰다. 물을 첨가한 후 에틸 아세테이트로 2회 추출하였다. 용매를 증발시켜 13.6 g의 화합물 17을 얻었다.

TLC: Rf = 0.50, 톨루엔/에틸 아세테이트: 1/1, v/v

화합물 18

화합물 14의 제조 방법과 동일한 방법에 따라 화합물 17을 표제 화합물로 전환시켰다.

TLC: Rf = 0.68, 디클로로메탄/메탄올: 9/1, v/v

화합물 19

화합물 15의 제조 방법과 동일한 방법에 따라 화합물 18을 표제 화합물로 전환시켰다.

TLC: Rf = 0.14, 디클로로메탄/메탄올: 9/1, v/v

화합물 20

화합물 16의 제조 방법과 동일한 방법에 따라 화합물 19를 표제 화합물로 전환시켰다.

TLC: Rf = 0.38, 디클로로메탄/메탄올: 85/15, v/v

화합물 21

화합물 20(9.9 g)을 300 ml의 메탄올(무수)에 용해시키고 질소 대기 하에서 환류시켰다. 1 M의 메톡시화나트륨(65.2 ml) 용액을 적가하여 3 시간 동안 교반하였다. 이어서, 온도를 실온으로 냉각시키고 1 N 수산화나트륨(22.2 ml)을 첨가한 후 90 분 동안 교반하였다. Dowex50WX8H⁺형태로 중화시키고 용매를 증발시켜 미정제 잔류물을 얻었다.

질소 대기 하에서 N,N-디메틸포름아미드(192 ml) 및 분말형 분자체(4Å)를 첨가하였다. 탄산수소칼륨(3.2 g) 및 벤질브로마이드(4.8 ml)를 첨가하고 5 시간 동안 교반한 후, 에틸 아세테이트를 첨가하고 물로 세척하였다. 용매를 증발시키고, 미정제 생성물을 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 6.19 g의 화합물 21 및 1.88 g의 화합물 20을 얻었다.

TLC: Rf = 0.74, 디클로로메탄/메탄올: 9/1, v/v

화합물 22

화합물 21(6.2 g)을 디옥산 40 ml에 용해시켰다. 레불린산(2.1 g), 디시클로헥실 카르보디이미드(3.75 g) 및 4-디메틸아미노피리딘(0.2 g)을 첨가하고, 이 혼합물을 질소 대기 하에서 2 시간 동안 교반하였다. 에테르(95 ml)를 첨가하고, 침전물을 여과 분리하였다. 유기 층은 황산수소칼륨 수용액으로 세척하고 농축시켰다. 디에틸 에테르/헵탄으로 결정화하여 6.2 g의 화합물 22를 얻었다.

TLC: Rf = 0.26, 디클로로메탄/아세톤: 95/5, v/v

화합물 23

질소 대기 하에서 화합물 22(6.1 g)를 아세트산 무수물(256 ml)에 용해시키고 -20℃로 냉각시켰다. 아세트산 무수물(49 ml) 중의 황산(4.9 ml) 혼합물을 30 분 동안 적가하였다. 60 분 후, 혼합물의 pH가 중성이 될 때까지 아세트산 나트륨을 첨가하였다. 에틸 아세테이트 및 물을 첨가하고, 유기 층은 농축시켰다. 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 4.2 g의 화합물 23을 얻었다.

TLC: Rf = 0.63, 디클로로메탄/아세톤: 9/1, v/v

화합물 24

화합물 23(4.2 g)을 테트라히드로푸란(42 ml)에 용해시키고, 피페리딘(4.1 ml)을 첨가하였다. 이 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고, 에틸 아세테이트를 첨가한 후, 0.5 N 염산으로 세척하였다. 유기 층을 농축시키고, 잔류물은 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 3.2 g의 화합물 24를 얻었다.

TLC: Rf = 0.33, 디클로로메탄/에틸 아세테이트: 1/1, v/v

O -(벤질 2,3-디- O -메틸-4- O -레불리노일-β-D-글루코피라노실우로네이트)-(1→4)-3- O -아세틸-2- O -벤질-6- O -메틸-D-글루코피라노실 트리클로로아세트이미데이트 25

질소 대기 하에서 화합물 24(1.59 g)를 디클로로메탄에 용해시켰다. 트리클로로아세토니트릴(1.1 ml) 및 탄산세슘(72 mg)을 첨가하고, 이 혼합물을 1 시간 동안 교반하였다. 탄산세슘을 여과 분리하고, 여액은 농축시켰다. 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 1.57 g의 화합물 25를 얻었다.

TLC: Rf = 0.60, 톨루엔/에틸 아세테이트: 3/7, v/v

EFGH-사당 27의 합성(도식 4)

화합물 26

화합물 16(0.530 mg)과 화합물 25(0.598 mg)의 혼합물을 무수 톨루엔과 함께 증발시켜 건조시킨 후 8.2 ml의 무수 디클로로메탄에 용해시켰다. 분말형 분자체(4Å)를 첨가하고, 이 혼합물을 질소 대기 하에서 -20℃로 냉각시킨 후 30 분 동안 교반하였다. 생성된 현탁액에 트리메틸실릴 트리플루오로메탄설포네이트(화합물 25에 대해 15 몰%)를 첨가하였다. 10 분 동안 교반한 후, 탄산수소나트륨을 첨가하고, 이 혼합물을 여과하여 물과 디클로로메탄을 첨가하였다. 이어서 유기 층을 추출하고 농축시킨 후, 미정제 생성물을 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 0.62 g의 화합물 26을 얻었다.

TLC: Rf = 0.47, 톨루엔/에틸 아세테이트: 3/7, v/v

메틸- O -(벤질 2,4-디- O -디메틸-β-D-글루코피라노실우로네이트)-(1→4)- O -(3- O -아세틸-2- O -벤질-6- O -메틸-α-D-글루코피라노실)-(1→4)- O -(벤질 2,3-디- O -메틸-α-L-이도피라노실우로네이트)-(1→4)-2- O -벤질-3,6-디- O -메틸-α-D-글루코피라노시드 27

피리딘 중의 화합물 26(0.58 g) 용액에, 2.1 ml의 피리딘 중의 아세트산 2.76 ml과 히드라진 수화물 0.32 ml 혼합물을 첨가하였다. 9 분 후, 물 및 디클로로메탄을 첨가하고, 유기 층은 1N 염산 및 탄산수소나트륨 수용액으로 세척하였다. 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 화합물 27을 0.27 g 얻었다.

TLC: Rf = 0.45, 톨루엔/에틸 아세테이트: 3/7, v/v

DEFGH-오당 32의 합성(도식 4+5). 실시예 1

화합물 29

화합물 27(150 mg)과 76 mg의 화합물 28{ 문헌 [Bioorganic & Medicinal Chemistry,2권, 11호, 1267-1280, 1994] 참조}과의 혼합물을 무수 톨루엔과 함께 증발시켜 건조시킨 후 무수 디클로로메탄 7.5 ml에 용해시켰다. 질소 대기 하에 분말형 분자체(4Å)를 첨가하고, 이 혼합물을 -20℃로 냉각시켰다. 20 분 동안 교반한 후, 트리메틸실릴 트리플루오로메탄설포네이트(화합물 28을 기준으로 하여 15 몰%)를 첨가하였다. 30 분 동안 교반한 후, 탄산수소나트륨 수용액을 첨가하였다. 이 혼합물을 여과하고, 유기층을 물로 세척하였다. 용매를 농축시켜 미정제 생성물을 얻고, 이 생성물을 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 136 mg의 화합물 29를 얻었다.

TLC: Rf = 0.33, 톨루엔/에틸 아세테이트: 4/6, v/v

화합물 30

화합물 29를 t-부탄올(8 ml)과 물(1 ml)의 혼합물로 희석시키고, 이 용액에 목탄 상의 10% 팔라듐 122 mg을 첨가한 후, 이 혼합물을 수소 대기 하에서 밤새 교반하였다. 목탄 상의 팔라듐을 여과하고, 이 용액을 농축시켜 84.5 mg의 화합물 30을 얻었다.

TLC: Rf = 0.49, 에틸 아세테이트/피리딘/아세트산/물: 13/7/1.6/4, v/v

화합물 31

화합물 30(84.5 mg)을 0.3 N의 수산화나트륨 5 ml에 용해시키고 3 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0.5 N 염산으로 중화시키고 증발시켰다. 잔류물은 물/아세토니트릴(9/1, v/v)을 사용하여 세파덱스 G25 컬러 상에서 염을 제거하여 Dowex 50WX8H⁺형태의 짧은 칼럼에 통과시켰다. 이어서 증발시켜 화합물 31을 75.6 mg 얻었다.

TLC: Rf = 0.43, 에틸 아세테이트/피리딘/아세트산/물: 8/7/1.6/4, v/v

메틸 O -(2,3,4-트리- O -메틸-6- O -설포-α-D-글루코피라노실)-(1→4)- O -(2,3-디- O -메틸-β-D-글루코피라노실우론산)-(1→4)- O -(6- O -메틸 2,3-디- O -설포-α-D-글루코피라노실)-(1→4)- O -(2,3-디- O -메틸-α-L-이도피라노실우론산)-(1→4)-3,6-디- O -메틸-2- O -설포-α-D-글루코피라노시드, 헥사소듐염 32

화합물 31(30.6 mg)을 N,N-디메틸포름아미드(증류; 건조) 2.15 ml에 용해시킨 후 질소 대기 하에서 트리에틸아민 삼산화황 착물(120 mg)을 첨가하였다. 이 혼합물을 55℃에서 밤새 교반하였다. 탄산수소나트륨 수성 현탁액을 첨가하고, 이 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반한 후 용매를 증발시켰다. 잔류물은 물(2 ml)에 용해시키고 물/아세토니트릴(9/1, v/v)을 사용하여 세파덱스 G25-컬럼 상에서 염을 제거하였다. 분리된 생성물은 물을 사용하여 Dowex 50WX8Na⁺칼럼으로 용출시켜 42.5 mg의 오당 화합물 32를 얻었다.

[α]²⁰ _D= +56.8 (c=1, H₂O)

변칙적인 양자의 화학적 이동: 5.32, 5.22, 4.97, 4.89 및 4.24 ppm.

실시예 2의 제조 방법(화합물 38)

EFGH-사당 34의 합성(도식 4)

화합물 33

화합물 26의 제조 방법과 동일한 방법에 따라 화합물 25 및 화합물 20을 결합시켜 표제 화합물을 얻었다.

TLC: Rf = 0.47, 톨루엔/에틸 아세테이트: 3/7, v/v

메틸 O -(벤질 2,4-디- O -디메틸-β-D-글루코피라노실우로네이트)-(1→4)- O -(3- O -아세틸-2- O -벤질-6- O -메틸-α-D-글루코피라노실)-(1→4)- O -(벤질 2,3-디- O -메틸-α-L-이도피라노실우로네이트)-(1→4)-2,3-디- O -벤질-6- O -메틸-α-D-글루코피라노시드 34

화합물 27의 제조 방법과 동일한 방법에 따라 화합물 33을 표제 화합물로 전환시켰다.

TLC: Rf= 0.39, 헵탄/에틸 아세테이트: 3/7, v/v

DEFGH-오당 38의 합성(도식 4+5) (실시예 2)

화합물 35

화합물 29의 제조 방법과 동일한 방법에 따라 화합물 34와 화합물 28을 결합시켜 표제 화합물을 얻었다.

TLC: Rf = 0.60, 톨루엔/에틸 아세테이트: 3/7, v/v

화합물 36

화합물 30의 제조 방법과 동일한 방법에 따라 화합물 35를 표제 화합물로 전환시켰다.

TLC: Rf = 0.39, 에틸 아세테이트/피리딘/아세트산/물: 13/7/1.6/4, v/v

화합물 37

화합물 31의 제조 방법과 동일한 방법에 따라 화합물 36을 표제 화합물로 전환시켰다.

TLC: Rf = 0.32, 에틸 아세테이트/피리딘/아세트산/물: 13/7/1.6/4, v/v

메틸 O -(2,3,4-트리- O -메틸-6- O -설포-α-D-글루코피라노실)-(1→4)- O -(2,3-디- O -메틸-β-D-글루코피라노실우론산)-(1→4)- O -(6- O -메틸-2,3-디- O -설포-α-D-글루코피라노실)-(1→4)- O -(2,3-디- O -메틸-α-L-이도피라노실우론산)-(1→4)-6- O -메틸-2,3-디- O -설포-α-D-글루코피라노시드, 헵타소듐염 38

화합물 32의 제조 방법과 동일한 방법에 따라 화합물 37을 표제 화합물로 전환시켰다.

[α]²⁰ _D= +53.6 (c=1, H₂O)

변칙적인 양자의 화학적 이동: 5.32, 5.23, 4.99, 4.9 및 4.23 ppm.

실시예 3의 제조 방법(화합물 56)

GH-이당 50의 합성(도식 1+2)

화합물 39

화합물 11의 제조 방법과 동일한 방법에 따라 화합물 2를 표제 화합물로 전환시켰다.

TLC: Rf = 0.52, 디클로로메탄/아세톤: 98/2, v/v

화합물 40

화합물 39(32.0 g)를 메탄올(538 mg)에 용해시킨 후, p-톨루엔설폰산(1.57 g)을 첨가하고, 이 혼합물을 1.5 시간 동안 실온에서 교반하였다. 트리에틸아민으로 중화시킨 후, 이 혼합물을 농축시켰다. 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 11.9 g의 화합물 40을 얻었다.

TLC: Rf = 0.56, 디클로로메탄/메탄올: 9/1, v/v

화합물 41

화합물 5의 제조 방법과 동일한 방법에 따라 화합물 40을 표제 화합물로 전환시켰다.

TLC: Rf = 0.18, 톨루엔/에틸 아세테이트: 7/3, v/v

화합물 42

화합물 24의 제조 방법과 동일한 방법에 따라 화합물 6을 표제 화합물로 전환시켰다.

화합물 43

화합물 25의 제조 방법과 동일한 방법에 따라 화합물 42를 표제 화합물로 전환시켰다.

화합물 44

화합물 26의 제조 방법과 동일한 조건 하에서 화합물 43과 화합물 41의 결합 반응을 수행하였다.

TLC: Rf = 0.28, 톨루엔/에틸 아세테이트: 6/4, v/v

화합물 45

화합물 9의 제조 방법과 동일한 방법에 따라 화합물 44를 표제 화합물로 전환시켰다.

TLC: Rf = 0.09, 톨루엔/에틸 아세테이트: 3/7, v/v

화합물 46

화합물 10의 제조 방법과 동일한 방법에 따라 화합물 45를 표제 화합물로 전환시켰다.

TLC: Rf = 0.52, 에틸 아세테이트

화합물 47

질소 대기 하에서 화합물 46(10.4 g)을 피리딘(무수)(102 ml)에 용해시키고, 아세트산 무수물(34 ml)과 피리딘(무수)(102 ml)과 10 mg의 4-디메틸아미노피리딘의 혼합물을 첨가하였다. 1 시간 동안 실온에서 교반한 후, 반응 혼합물을 농축시키고 무수 톨루엔과 함께 증발시켜 11.9 g의 화합물 47을 얻었다.

TLC: Rf = 0.50, 톨루엔/에틸 아세테이트: 1/1, v/v

화합물 48

화합물 47(11.9 g)을 메탄올(90 ml)에 용해시킨 후, p-톨루엔설폰산 180 mg을 첨가하고, 이 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 이 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고 물로 2회 세척한 후 농축시켰다. 미정제 생성물을 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 화합물 48을 6.2 g 얻었다.

TLC: Rf = 0.28, 톨루엔/에틸 아세테이트: 3/7, v/v

화합물 49

화합물 15의 제조 방법과 동일한 방법에 따라 화합물 48을 표제 화합물로 전환시켰다.

TLC: Rf = 0.24, 디클로로메탄/메탄올: 9/1, v/v

메틸 O -(벤질 2- O -아세틸-3- O -메틸-α-L-이도피라노실우로네이트)-(1→4)-2- O -벤질-3,6-디- O -메틸-α-D-글루코피라노시드 50

화합물 16의 제조 방법과 동일한 방법에 따라 화합물 49를 표제 화합물로 전환시켰다.

TLC: Rf = 0.37, 디클로로메탄/메탄올: 9/1, v/v

EFGH-사당 52의 합성(도식 4)

화합물 51

화합물 26의 제조 방법과 동일한 방법에 따라 화합물 25 및 화합물 50을 결합시켜 표제 화합물을 얻었다.

TLC: Rf = 0.52, 디클로로메탄/아세톤: 98/2, v/v

메틸- O -(벤질 2,4-디- O -디메틸-β-D-글루코피라노실우로네이트)-(1→4)- O -(3- O -아세틸-2- O -벤질-6- O -메틸-α-D-글루코피라노실)-(1→4)- O -(벤질 2- O -아세틸-3- O -메틸-α-L-이도피라노실우로네이트)-(1→4)-2- O -벤질-3,6-디- O -메틸-α-D-글루코피라노시드 52

화합물 27의 제조 방법과 동일한 방법에 따라 화합물 51을 표제 화합물로 전환시켰다.

TLC: Rf = 0.26, 디클로로메탄/메탄올: 98/2, v/v

DEFGH-오당 56의 합성(도식 4+5) (실시예 3)

화합물 53

화합물 29의 제조 방법과 동일한 방법에 따라 화합물 28 및 화합물 52를 결합시켜 표제 화합물을 얻었다.

TLC: Rf = 0.63, 디클로로메탄/아세톤: 98/2, v/v

화합물 54

화합물 30의 제조 방법과 동일한 방법에 따라 화합물 53을 표제 화합물로 전환시켰다.

TLC: Rf = 0.51, 디클로로메탄/메탄올: 8/2, v/v

화합물 55

화합물 31의 제조 방법과 동일한 방법에 따라 화합물 54를 표제 화합물로 전환시켰다.

TLC: Rf = 0.32, 에틸 아세테이트/피리딘/아세트산/물: 10/7/1.6/4, v/v

메틸 O -(2,3,4-트리- O -메틸-6- O -설포-α-D-글루코피라노실)-(1→4)- O -(2,3-디- O -메틸-β-D-글루코피라노실우론산)-(1→4)- O -(6-O-메틸-2,3-디- O -설포-α-D-글루코피라노실)-(1→4)- O -(3- O -메틸-2- O -설포-α-L-이도피라노실우론산)-(1→4)-3,6-디- O -메틸-2- O -설포-α-D-글루코피라노시드, 헵타소듐염 56

화합물 32의 제조 방법과 동일한 방법에 따라 화합물 55를 표제 화합물로 전환시켰다.

[α]²⁰ _D= +50.2 (c=1.05, H₂O)

변칙적인 양자의 화학적 이동: 5.32, 5.29 및 4.89 ppm.

실시예 4의 제조 방법(화합물 80)

EF-이당 66의 합성(도식 6)

화합물 58

CH₂Cl₂(360 ml)중의 화합물 57(36.2 g, 0.128 몰) {페트로니 외 다수의 문헌 [Aust. J. Chem.1988, 41, 91-102] 참조} 용액에 Et₃N (43 ml, 0.3 몰), 4-디메틸아미노피리딘(156 mg, 1.3 mmol) 및 Ac₂O(23 ml, 0.29 몰)을 첨가하였다. 30 분 후, 이 혼합물을 5% KHSO₄수용액, 물, NaHCO₃포화 수용액, 물로 연속 세척하여 건조시켰다(Na₂SO₄). 이어서, 증발시켜 미정제 화합물 58을 얻었다: TLC,R _f0.41, 3:1 시클로헥산/EtOAc.

화합물 59

4℃에서 THF(220 ml) 중의 미정제 화합물 58(11.8 g, 32 mmol) 용액에 에탄올아민(4.9 ml, 80 mmol)을 첨가하였다. 4℃에서 16 시간 후 아르곤 하에서 상기 혼합물에 트리클로로아세토니트릴(65 ml, 644 mmol) 및 K₂CO₃(8.3 g, 64.4 mmol)을 첨가하였다. 실온에서 16 시간 후, 이 용액을 여과한 뒤 농축시켰다. 칼럼 크로마토그래피(4:1 시클로헥산/EtOAc)를 통해 화합물 59를 79%의 수율로 얻었다(TLC R_f0.49, 1:1 시클로헥산/EtOAc).

화합물 61

4Å 분말형 분자체를 함유한 CH₂Cl₂(190 ml) 중의 공여체 이미데이트 59(11.93 g, 25 mmol) 및 수용체 60(9.2 g, 19.8 mmol){피. 제이. 가레그, 에이치. 헐트버그의 문헌 [Carbohydr. Res. 1961, 93, C10] 참조}의 냉각 (-20℃) 용액에 트리메틸실릴 트리플레이트 용액(CH₂Cl₂중의 0.04 M; 96 ml, 3.8 mmol)을 아르곤 하에서 적가하였다. 30 분 후 고형 NaHCO₃를 첨가하고, 이 용액을 여과하여 물로 세척하고 건조시킨 후(Na₂SO₄) 농축시켰다. 잔류물은 Et₂O 중에 결정화시켜 화합물 61을 얻었다(수율 82%), mp: 138℃.

화합물 62

2:1 메탄올/CH₂Cl₂(ml)중의 화합물 61(1 g, 1.3 mmol) 용액에 나트륨(373 mg, 0.65 mmol)을 첨가하였다. 이 혼합물을 1 시간 동안 실온에서 교반한 후, Dowex 50H⁺수지로 중화시키고 여과한 뒤 농축시켜 미정제 화합물 62를 얻었다.

화합물 63

미정제 화합물 62(950 mg) 및 MeI(0.1 ml, 1.55 mmol)의 DMF(9 ml) 중의 냉각 용액(0℃)에 NaH(40.5 mg, 1.68 mmol)을 적가하였다. 실온에서 2 시간 후, MeOH를 첨가하고, 이 혼합물을 물에 부었다. 생성물을 EtOAc로 추출하고, 물로 세척하여 건조시킨 후(Na₂SO₄) 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피(3:1 시클로헥산/EtOAc) 처리하여 정제 화합물 63을 얻었다(화합물 62로부터의 수율 86%): mp 137℃(Et₂O).

화합물 64

1:3 H₂O/MeOH(40 ml) 중의 화합물 63(1.16 g, 1.56 mmol) 용액을p-톨루엔설폰산(230 mg, 1.56 mmol)의 존재 하에서 80℃로 가열하였다. 3 시간 후, 이 혼합물을 NaHCO₃로 중화시킨 후 농축시켰다. 잔류물은 칼럼 크로마토그래피(3:1 시클로헥산/아세톤)하여 화합물 64를 얻었다(수율 89%): TLCR _f0.28, 2:1 시클로헥산/아세톤.

메틸 O -(벤질 2,3-디- O -메틸-β-D-글루코피라노실우로네이트)-(1→4)-2,3,6-트리- O -벤질-α-D-글루코피라노시드 66.

CH₂Cl₂(4 ml) 중의 화합물 64(860 mg, 1.3 mmol) 용액에 2,2,6,6-테트라메틸-1-피페리디닐 옥시(2.3 mg), NaHCO₃포화 수용액(2.5 ml), KBr(13.5 mg) 및 테트라부틸염화암모늄(18 mg)을 첨가하였다. 상기 냉각 (0℃) 용액에 염화나트륨 포화 수용액(2.8 ml), NaHCO₃포화 수용액(1.4 ml)과 NaOCl(1.3 M, 3.2 ml)의 혼합물을 첨가하였다. 1 시간 후, 이 혼합물을 CH₂Cl₂로 추출하고 물로 세척하여 건조시킨 후(황산나트륨) 농축시켜 미정제 산 65를 얻었다.

DMF 중의 상기 미정제 산을 BnBr(1.6 ml, 13 mmol) 및 KHCO₃(650 mg, 6.5 mmol)로 처리하였다. 16 시간 후, 생성물을 EtOAc로 추출하고 물로 세척하여 건조시킨 후(황산나트륨) 농축시켜 화합물 66을 77%의 수율로 얻었다.

DEF-삼당 70의 합성(도식 7) 화합물 67

6-O-아세틸-2,3,4-트리-O-메틸-D-글루코피라노즈 트리클로로아세트이미데이트 28(290 mg, 0.711 mmol){피. 웨스터뒨 외 다수의 문헌 [Bioorg Med. Chem.1994, 2, 1267-83] 참조} 및 수용체 66(300 mg, 0.4 mmol)를 4Å 분말형 분자체를 함유한 CH₂Cl₂(20 ml)에 용해시킨 냉각(-20℃) 용액에 트리메틸실릴 트리플레이트 용액(CH₂Cl₂중의 0.04 M, 1.88 ml, 0.075 mmol)을 아르곤 하에서 적가하였다. 30 분 후 고형 NaHCO₃를 첨가하고, 이 용액을 여과한 후 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피(3:1 톨루엔/EtOAc)로 처리하여 정제 화합물 67을 얻었다(수율 56%): TLCR _f0.32, 3:2 톨루엔/EtOAc.

화합물 68

-20℃ 하의 아세트산 무수물(7.6 ml) 중의 화합물 67(201 mg, 0.20 mmol)용액에 아세트산 무수물(1.5 ml, 0.1:1 v/v) 중의 진한 황산 혼합물을 첨가하였다. 1 시간 동안 교반한 후 아세트산나트륨(780 mg)을 첨가하였다. 이 혼합물을 EtOAc로 희석하고, 물로 세척하여 건조시킨 후(황산나트륨) 농축시키고, 칼럼 크로마토그래피로 처리한 후 화합물 68을 얻었다(수율 82%): TLCR _f0.32, 1:1 톨루엔/EtOAc.

화합물 69

THF(5 ml) 중의 화합물 68(125.4 mg) 용액에 벤질아민(0.58 ml, 5.26 mmol)을 첨가하였다. 실온에서 7 시간 후, 용액을 1M 염산 수용액 및 물로 세척하고 건조시킨 후 농축시켰다. 칼럼 크로마토그래피(3:2 톨루엔/EtOAc)로 처리하여 정제 화합물 69를 얻었다(수율 75%): TLCR _f0.33, 2:3 톨루엔/EtOAc.

O-(6- O -아세틸-2,3,4-트리- O -메틸-α-D-글루코피라노실)-(1→4)- O -(벤질-2,3-디- O -메틸-β-D-글루코피라노실우로네이트)-(1→4)-3,6-디- O -아세틸-2- O -벤질-D-글루코피라노실 트리클로로아세트이미데이트 70

CH₂Cl₂(2 ml) 중의 화합물 69(89.2 mg, 0.112 mmol) 용액에 아르곤 하에서 트리클로로아세토니트릴(69 ㎕, 0.675 mmol) 및 탄산세슘(66 mg, 0.202 mmol)을 첨가하였다. 2 시간 후 상기 용액을 여과하고 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피(1:1 톨루엔/EtOAc)하여 화합물 70을 얻었다(수율 88%): TLCR _f0.44, 1:1 톨루엔/EtOAc.

GH-이당 76의 합성(도식 2)

화합물 72

1:1 메탄올/CH₂Cl₂(35 ml) 중의 화합물 71(2.5 g, 3.53 몰) {쁘띠또, 모리스 외 다수의 문헌 [J. Med. Chem. 1997, 40, 1600-1607] 참조} 용액에 메톡시화나트륨(570 mg, 106 mmol)을 첨가하였다. 2 시간 후, 중화될 때까지 Dowex 50H⁺수지를 첨가하고 여과하였다. 농축시킨 후, 잔류물을 칼럼 크로마토그래피(2:1 시클로헥산/EtOAc)로 처리하여 화합물 72를 얻었다(수율 100%): TLCR _f0.32, 2:1 시클로헥산/EtOAc.

화합물 73

THF(20 ml) 중의 화합물 72(2 g, 3.3 mmol) 및 NaH(0.12 g, 5 mmol) 용액에 0℃에서 MeI(0.41 ml, 6.61 mmol)를 첨가하였다. 2 시간 후 MeOH를 적가하고, 15 분 후 생성물을 CH₂Cl₂로 추출하였다. 이 용액을 물로 세척하고 건조시킨 후(황산나트륨) 농축시켰다. 칼럼 크로마토그래피(5:1 시클로헥산/EtOAc)로 처리하여 정제 화합물 73을 얻었다(수율 89%): [α]_D+ 12°(c1; CH₂Cl₂).

화합물 74

CH₂Cl₂(16 ml) 중의 화합물 73(1.76 g, 2.84 mmol) 용액에 수성 CF₃COOH(70%, 3.14 ml)을 첨가하였다. 실온에서 50 분 후, CH₂Cl₂로 희석하고 찬 NaHCO₃포화 수용액 및 H₂O로 세척하고 건조시켰다(황산나트륨). 농축시킨 후 잔류물을 칼럼 크로마토그래피(11:2 CH₂Cl₂/아세톤) 처리하여 88% 수율의 화합물 74를 얻었다: [α]_D+ 10°(c1; CH₂Cl₂).

메틸 O -(벤질 2,3-디- O -메틸-α-L-이도피라노실우로네이트)-(1→4)-2,6-디- O -벤질-3- O -메틸-α-D-글루코피라노시드 76.

THF(8 ml) 중의 화합물 74(1.39 g, 2.4 mmol) 용액에 2,2,6,6-테트라메틸-1-피페리디닐 옥시(37.4 mg), NaHCO₃포화 수용액(14.4 ml), KBr(120 mg) 및 테트라부틸염화암모늄(180 mg)을 첨가하였다. 이 냉각(0℃) 용액에 염화나트륨 포화 수용액(2.8 ml), NaHCO₃포화 수용액(1.4 ml)과 NaOCl(1.3 M, 3.2 ml)의 혼합물을 첨가하였다. 1 시간 후, 이 혼합물을 CH₂Cl₂로 추출하고, 물로 세척하여 건조시킨 후(황산나트륨) 농축시켜 미정제 산 75를 얻었다.

DMF(31 ml) 중의 상기 미정제 산 75를 BnBr(2.84 ml, 23.9 mmol) 및 KHCO₃(1.2 g, 12 mmol)로 처리하였다. 16 시간 후, 생성물을 EtOAc로 추출하고, 물로 세척하여 건조시켰다(황산나트륨). 농축시킨 후, 잔류물을 칼럼 크로마토그래피(3:2 시클로헥산/EtOAc)로 처리하여 화합물 76을 얻었다(화합물 74로부터의 수율 78%): [α]_D+ 7.3°(c1.1; CH₂Cl₂).

DEFGH-오당 80의 합성(도식 8) (실시예 4)

화합물 77

4Å의 분자체가 함유된 CH₂Cl₂(2 ml) 중의 이미데이트 70(91 mg, 0.097 mmol) 및 화합물 76(66.2 mg, 0.097 mmol)의 교반된 냉각(-20℃) 용액에 아르곤 하에서 트리메틸실릴 트리플레이트(170 ㎕, 0.0068 mmol)를 첨가하였다. 30 분 후, 고형 NaHCO₃(0.1 g)을 첨가하고 밤새 계속 교반하였다. 이 용액을 여과하고, 물로 세척하여 건조시킨 후 농축시켰다. 칼럼 크로마토그래피(2:1 시클로헥산/아세톤)로 처리하여 오당 77을 얻었다(수율 71.6 %): TLCR _f0.4, 2:1 시클로헥산/아세톤.

메틸 O-(2,3,4-트리-O-메틸-6-O-설포-α-D-글루코피라노실)-(1→4)-O-(2,3-디-O-메틸-β-D-글루코피라노실우론산)-(1→4)-O-(2,3,6-트리-O-설포-α-D-글루코피라노실)-(1→4)-O-(2,3-디-O-메틸-α-L-이도피라노실우론산)-(1→4)-3-O-메틸-2,6-디-O-설포-α-D-글루코피라노시드, 옥타소듐염 80

DMF(5 ml) 중의 화합물 77(50 mg, 0.032 mmol) 용액을 10% Pd/C 촉매(50 mg)의 존재 하에서 약한 H₂스트림 하에 16 시간 동안 교반하였다. 여과한 후, 용액을 농축시켜 화합물 78을 얻었다.

MeOH(26 ml) 중의 상기 미정제 화합물 용액에 NaOH 수용액(5 M, 0.46 ml) 수용액을 첨가하였다. 5 시간 후, pH가 중성이 될 때까지 Dowex 50 H⁺를 첨가하였다. 이 용액을 농축시키고, 잔류물은 물을 용출제로 사용하여 세파덱스 G 25 칼럼의 상면 상에 성층화시켰다. 분획을 수거하고 농축시켜 미정제 화합물 79를 얻었다.

DMF(6 ml) 중의 상기 화합물 용액에 Et₃N/SO₃착물(174 mg, 0.96 mmol)을 첨가하고, 이 용액을 20 시간 동안 55℃에서 가열하였다. 이어서, NaHCO₃(0.33 mg이 용해된 수용액)를 첨가하고, 이 용액을 0.2 M의 염화나트륨 중에 평형화된 세파덱스 G 25 칼럼(1.6 x 100 cm)의 상면 상에 성층화시켰다. 분획을 수거하고 농축시킨 후, 물 중에 평형화된 동일한 칼럼 상에서 염을 제거하였다. 이어서, 동결 건조시켜 오당 80(화합물 77로부터의 수율 95%)을 얻었다: [α]_D+ 49°(c1; H₂O).

실시예 5

항 Xa 계수 측정법에 의한 본 발명 화합물의 생물학적 특성 측정

활성화 계수 X(Xa)는 응고 단계 중의 계수이다. 본 발명의 화합물의 항 Xa 활성은, Xa에 의한 색소 생산성 기재 s-2222의 가수분해 속도를 분광 분석법으로 측정하여 결정하였다. 이러한 완충계 중의 항 Xa 활성 측정법을 사용하여 시험 화합물의 IC₅₀값을 측정하였다.

참고 화합물: 벤즈아미딘

시험 매질:트로메타민-NaCl-폴리에틸렌 글리콜 6000(TNP) 완충액

부형제:TNP 완충액

용해 과정은 최종 반응 혼합물 중의 농도가 1% 이하(DMSO인 경 우) 및 2.5% 이하(나머지 용매의 경우)인 상태에서 유해 영향을 미치지 않는 디메틸설폭시드, 메탄올, 에탄올, 아세토니트릴 또 는 t-부틸 알콜을 사용하여 보조할 수 있다.

기술 : 시약 ^＊

1. 트로메타민-NaCl(TN) 완충액

완충액의 조성:

트로메타민(트리스) 6.057 g (50 mmol)

NaCl 5.844 g (100 mmol)

물 적당량

----------------------------

총 1 ℓ

용액의 pH는 37℃ 하에 HCl (10 mmol/ℓ)을 사용하여 7.4로 조절하였다.

2. TNP 완충액

폴리에틸렌 글리콜 6000을 TN 완충액에 용해시켜 농도를 3g/ℓ로 하였다.

3. S-2222 용액

1개의 바이알 S-2222(15 mg; 스웨덴 소재의 카비 다이아그 노스티카 제공)를 물 10 ml에 용해시켜 농도를 1.5 mg/ml(2 mmol/ℓ)로 하였다.

4. Xa 용액

보빈 계수 Xa 휴먼(71 nKat/바이알, 카비 다이아그노스티 카 제공)을 TNP 완충액 10 ml에 용해시킨 후 30 ml의 TNP 완충액으로 더 희석시켜 농도를 1.77 nKat/ml로 하였다. 희석물은 새로 제조한 것이어야 한다.

＊ - 모든 사용 성분들은 분석 등급이다.

- 수용액에는 초정수(밀리-Q 품질)를 사용한다.

시험 화합물 용액 및 참고 화합물 용액의 제조

시험 화합물 및 참고 화합물을 밀리-Q 초정수에 용해시켜 10^-2몰/ℓ 농도의 원액을 제조하였다. 각 농도는 부형제를 사용하여 10^-3, 10^-4및 10^-5몰/ℓ의 농도로 단계별로 희석시켰다. 분석시에는 원액을 함유한 희석액을 사용한다(반응 혼합물 중의 최종 농도는 각각 3·10^-3, 10^-3,3·10^-4, 10^-4, 3·10^-5, 10^-5, 3·10^-6및 10^-6몰/ℓ임).

방법

실온에서 시험 화합물 또는 참고 화합물 용액 또는 부형제 0.075 ml 및 0.025 ml를 피펫을 사용하여 미량 역가 평판의 웰에 교대로 넣고, 이들 용액을 각각 0.115 ml 및 0.0165 ml의 TNP 완충액으로 희석하였다. 0.030 ml의 S-2222 용액 분획을 각 웰에 첨가하고, 평판을 예열한 후 항온기(애머샴)에서 10 분 동안 37℃ 하에 교반하면서 예비 항온 처리하였다. 예비 항온 처리 후, 각 웰에 트롬빈 용액을 0.030 ml 첨가하여 S-2222를 가수 분해시키기 시작하였다. 평판은 37℃에서 항온 처리하였다(30 초 동안 교반하면서). 1 분 동안 항온 처리한 후부터 90 분 동안 매 2 분마다 역학적 미량 역가 평판 판독기(트윈리더 플러스, 플로우 래보러토리즈 제공)를 사용하여 405 nm에서 각 샘플의 흡수율을 측정하였다.

모든 데이터는 LOTUS-MEASURE를 사용하여 IBM 퍼소날 컴퓨터에 입력시켰다. 각 화합물 농도(몰/ℓ의 반응 혼합물로 표시) 및 블랭크 하에서의 반응 시간(분)에 대한 흡수율로서 구성된다.

반응 평가

각 최종 농도에 있어 분석 구성으로부터 최대 흡수도를 산출하였다. 하프너 외 다수의 문헌 [Arzneim.-Forsch./Drug Res.1977; 27(II): 1871-3]에 따른 변칙 변환 분석법을 사용하여 IC₅₀값(블랭크의 최대 흡수율을 50% 억제하는 최종 농도, μmol/ℓ로 표시)을 계산하였다.

항 Xa 계수 활성
화합물(실시예 번호)	IC₅₀(㎍/ℓ)
32(1)	22
38(2)	12
56(3)	12
80(4)	< 2

본 발명의 화학식 1의 화합물은 항혈전 활성을 가지며, 혈전증의 치료 또는 예방용 및 연근육 세포의 증식 억제용으로 사용할 수 있다.

약어

Ph = 페닐, Me = 메틸, Ac = 아세틸, Im = 트리클로로아세트이미딜, Bn = 벤질, Bz = 벤조일, Mbn = 4-메톡시벤질, Lev = 레불리노일

Claims

하기 화학식 1의 탄수화물 유도체 또는 이것의 약학적으로 허용 가능한 염:

화학식 1

상기 식 중,

R¹은 C₁∼C₄의 알콕시이고,

R², R³및 R⁴는 각각 C₁∼C₄의 알콕시 또는 OSO₃ ^-이고,

황산염 기의 총 개수는 4 내지 6이며,

꺾인 선은 6원 고리면의 위 또는 아래로 결합된 결합을 나타낸다.
제1항에 있어서, 상기 화학식 1의 D 단위가 하기 화학식 2의 구조를 갖는 것이 특징인 탄수화물 유도체:

화학식 2

상기 식 중,

R¹은 메톡시이고,

R², R³및 R⁴는 각각 메톡시 또는 OSO₃ ^-이다.
제2항에 있어서, R²가 메톡시인 것이 특징인 탄수화물 유도체.
제3항에 있어서, R³가 메톡시인 것이 특징인 탄수화물 유도체.
제4항에 있어서, R⁴가 메톡시인 것이 특징인 탄수화물 유도체.
제1항 내지 제5항 중 어느 하나의 항의 탄수화물 유도체 및 약학적으로 적당한 보조제를 함유하는 것이 특징인 혈전증의 치료용이나 예방용 또는 연근육 세포의 증식 억제용 약학 조성물.