ES2939741T3 - Proceso para preparar fondaparinux sódico y productos intermedios útiles en la síntesis del mismo - Google Patents

Abstract

Se describen los procesos para la síntesis del anticoagulante Fondaparinux Factor Xa y compuestos relacionados. También se describen intermedios de pentasacáridos protegidos, así como procesos escalables y eficientes para la producción a escala industrial de fondaparinux sódico mediante la conversión de los intermedios de pentasacáridos protegidos a través de una secuencia de reacciones de desprotección y sulfonación. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Proceso para preparar fondaparinux sódico y productos intermedios útiles en la síntesis del mismo

Campo de la invención

La presente invención se refiere a procesos para la síntesis del anticoagulante del factor Xa fondaparinux y de compuestos relacionados. La invención también se refiere a los pentasacáridos intermedios protegidos y a un proceso eficaz y escalable para la producción a escala industrial de fondaparinux sódico mediante la conversión de los pentasacáridos intermedios protegidos a través de una secuencia de reacciones de desprotección y sulfonación.

Antecedentes de la invención

En la patente de EE. UU. n.° 7.468.358, se describe el fondaparinux sódico como el "único anticoagulante que se cree que está completamente exento del riesgo de inducir HIT-2". En The biochemical and pharmacologic rationale for the development of a heparin pentasaccharide en Thromb. Res., 86(1), 1-36, 1997 por Walenga et al., se citaba al pentasacárido sintético inhibidor del factor Xa fondaparinux sódico recientemente aprobado. El fondaparinux también se ha descrito en Walenga et al., Expert Opin. Investig. Drugs, vol. 11, 397-407, 2002 y Bauer, Best Practice & Research Clinical Hematology, Vol. 17, n.° 1, 89-104, 2004.

El fondaparinux sódico es una molécula de pentasacárido (oligosacárido con cinco unidades de monosacárido) lineal octasulfatado que tiene cinco ésteres de sulfato en el oxígeno (restos O-sulfatados) y tres sulfatos en un nitrógeno (restos N-sulfatados). Además, el fondaparinux contiene cinco grupos hidroxilo en la molécula que no están sulfatados y dos carboxilatos de sodio. De los cinco sacáridos, hay tres derivados de glucosamina, y uno glucurónico y un ácido L-idurónico. Los cinco sacáridos están conectados entre sí en enlaces glucosilados a y p alternos (véase la Figura 1).

Figura 1 Fondaparinux sodico

Na

Monosacando E ^{Monasacarido D} Monosacando C Monosacando B ^{Monosacando A} derivado de! ^{derivado de} derivado de derivado de ^{derivado de} Monomero E ^{Monomero D} Monomero C M onomero B1 ^{M onomero A2}

Fondaparinux sódico

El fondaparinux sódico es un derivado metoxi sintetizado químicamente de la secuencia de pentasacárido natural, que es el sitio activo de la heparina que actúa como mediadora en la interacción con la antitrombina (Casu et al., J. Biochem., 197, 59, 1981). Tiene un patrón complejo de O- y N-sulfatos, estereoquímica glucosídica específica y unidades repetitivas de glucosaminas y ácidos urónicos (Petitou et al., Progress in the Chemistry of Organic Natural Product, 60, 144-209, 1992).

Las unidades de monosacáridos que componen la molécula de fondaparinux están marcadas según la convención de la Figura 1, con la unidad de glucosamina a la derecha denominada monosacárido A y la siguiente, una unidad de ácido urónico a su izquierda como B, y las siguientes unidades, C, D y E, respectivamente. La síntesis química de fondaparinux comienza con monosacáridos de estructuras definidas que, a su vez, se denominan monómeros A2, B1, C, D y E, para diferenciarlos y por comodidad de uso, y se convierten en los monosacáridos correspondientes en el fondaparinux sódico.

Debido a esta mezcla compleja de grupos hidroxilo libres y sulfatados, y a la presencia de restos N-sulfatados, el diseño de una vía sintética de fondaparinux requiere una cuidadosa estrategia de protección y desprotección de los grupos funcionales reactivos durante la síntesis de la molécula. Todas las síntesis de fondaparinux descritas anteriormente adoptaron una estrategia similar para completar la síntesis de esta molécula. Esta estrategia puede concebirse en cuatro fases. La estrategia de la primera fase requiere la desprotección selectiva de cinco de los diez grupos hidroxilo. Durante la segunda fase, estos cinco hidroxilos se sulfonan selectivamente. La tercera fase del proceso implica la desprotección de los cinco grupos hidroxilo restantes. La cuarta fase del proceso es la sulfonación selectiva de los 3 grupos amino, en presencia de cinco grupos hidroxilo que no están sulfatados en la molécula final. Esta estrategia se puede visualizar a partir del siguiente pentasacárido totalmente protegido, también conocido como el producto intermedio de fase tardía.

En esta estrategia, todos los grupos hidroxilo que se van a sulfatar se protegen con un grupo protector acilo, por ejemplo, como acetatos (R = CH³) o benzoatos (R = arilo) (Fases 1 y 2). Todos los grupos hidroxilo que han de permanecer tal cual se protegen con el grupo bencilo como éteres bencílicos (Fase 3). El grupo amino, que posteriormente se sulfona, se enmascara como un resto azida (N³) (Fase 4). Normalmente, R1 y R2 son sodio en el compuesto farmacéutico activo (por ejemplo, fondaparinux sódico).

Esta estrategia permite preparar el producto final siguiendo las operaciones de síntesis que se describen a continuación:

a) Tratamiento del producto intermedio de fase tardía con base para hidrolizar (desproteger) los grupos éster de acilo a fin de exponer los cinco grupos hidroxilo. Los dos grupos éster de R1 y R2 también se hidrolizan en esta etapa.

b) Sulfonación de los grupos hidroxilo recién expuestos.

c) Hidrogenación del pentasacárido O-sulfatado para desbencilar los cinco hidroxilos protegidos con bencilo, y al mismo tiempo, desenmascarar las tres azidas a los grupos amino correspondientes.

d) En la última etapa de la operación, los grupos amino se sulfatan selectivamente a un pH alto, en presencia de los cinco hidroxilos libres, dando el fondaparinux (Figura 1).

Si bien la estrategia anterior ha demostrado ser viable, no está exenta de importantes inconvenientes. Un inconveniente radica en el procedimiento que conduce al pentasacárido completamente protegido (producto intermedio de fase tardía), especialmente durante el acoplamiento del ácido D-glucurónico al siguiente anillo de glucosa adyacente (el monómero D al monómero C en la nomenclatura EDCBA que se muestra en la Figura 1). Los oligómeros de azúcar u oligosacáridos, tales como el fondaparinux, se ensamblan mediante reacciones de acoplamiento, también conocidas como reacciones de glucosilación, para "enlazar" los monómeros de azúcar entre sí. La dificultad de esta etapa de unión surge debido a la relación estereoquímica requerida entre el azúcar D y el azúcar C, como se muestra a continuación:

La disposición estereoquímica ilustrada anteriormente en la Figura 2 se describe con una configuración p en el carbono anomérico del azúcar D (indicado por la flecha). El enlace entre las unidades D y C en el fondaparinux tiene esta estereoquímica específica. Hay, sin embargo, reacciones competitivas de glucosilación p y a.

Las dificultades de la reacción de glucosilación en la síntesis de fondaparinux son muy conocidas. En 1991, Sanofi informó sobre una preparación de un disacárido intermedio con un rendimiento del 51 % que tenía una proporción de 12/1 de estereoquímica p/a en la posición anomérica (Duchaussoy et al., Bioorg. & Med. Chem. Lett., 1(2), 99-102, 1991). En otra publicación (Sinay et al., Carbohydrate Research, 132, C5-C9, 1984) se informan rendimientos del orden del 50 % con tiempos de acoplamiento del orden de 6 días. La patente de EE. UU. n.° 4.818.816 (véase, por ejemplo, la columna 31, líneas 50-56) divulga un rendimiento del 50 % para la p-glucosilación.

La patente de EE. UU. n.° 7.541.445 de Alchemia es incluso menos específica en cuanto a los detalles de la síntesis de este producto intermedio sintético de fondaparinux de fase tardía. La patente 445 divulga varias estrategias para el ensamblaje del pentasacárido (1+4, 3+2 o 2+3) utilizando un azúcar D 2-acilado (específicamente 2-aliloxicarbonilo) para las reacciones de acoplamiento de glucosilación. Sin embargo, la estrategia de Alchemia implica pentasacáridos de fase tardía que tienen incorporado un azúcar D 2-bencilado. La transformación de acilo en bencilo se realiza en condiciones ácidas o básicas. Asimismo, estas transformaciones, en las que se utiliza bromuro de bencilo o tricloroacetimidato de bencilo, normalmente dan lugar a una descomposición extensa y el procedimiento adolece de bajos rendimientos. Por tanto, dichas transformaciones (a nivel de disacárido, trisacárido y pentasacárido) normalmente no son aceptables para la producción a escala industrial.

Se describen algunos ejemplos de pentasacáridos completamente protegidos en Duchaussoy et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 1 (2), 99-102, 1991; Petitou et al., Carbohydr. Res., 167, 67-75, 1987; Sinay et al., Carbohydr. Res., 132, C5-C9, 1984; Petitou et al., Carbohydr. Res., 1147, 221-236, 1986; Lei et al., Bioorg. Med. Chem., 6, 1337-1346, 1998; Ichikawa et al., Tet. Lett., 27(5), 611-614, 1986; Kovensky et al., Bioorg. Med. Chem., 1999, 7, 1567-1580, 1999. Estos pentasacáridos totalmente protegidos se pueden convertir en pentasacáridos O- y N-sulfatados mediante las cuatro etapas (descritas anteriormente) de: a) saponificación con LiOH/H²O²/NaOH, b) O-sulfatación mediante un complejo de Et3N-SO3; c) desbencilación y reducción de azida a través de la hidrogenación de H²/Pd; y d) N-sulfatación con un complejo de piridina-SO3.

Aunque se han preparado muchos análogos diferentes del pentasacárido completamente protegido, ninguno utiliza un grupo protector en la posición 2 de la unidad D que no sea un grupo bencilo. Asimismo, ninguno de los análogos del pentasacárido totalmente protegido ofrece un método práctico, escalable y económico para la reintroducción del resto bencilo en la posición 2 de la unidad D tras la eliminación de cualquier grupo participante que promueva la glucosilación □ .

Asimismo, el acoplamiento de azúcares protegidos con bencilo resulta ser un proceso lento, de bajo rendimiento y problemático, que normalmente da lugar a una descomposición sustancial del pentasacárido (preparado en más de 50 etapas sintéticas), haciendo, por tanto, que sea inadecuado para un proceso de producción a gran escala [en kilogramos].

Ref. 1. Slitay et al., Carbohydr. Res., 132, C5-C9, 1984.

Ref. 2. Petitou ef al., Carbohydr. Res., Í47, 221-236, 1986

En el campo de la química de los hidratos de carbono, ha sido una estrategia general utilizar un grupo protector de éster lábil a base en la posición 2 de la unidad D para construir un enlace glucosídico p eficaz y estereoselectivo. Para construir el enlace p, en la química de los hidratos de carbono, se cuenta previamente con grupos éster de acetato y benzoato, tal como se describe, por ejemplo, en la reseña de Poletti et al., Eur. J. Chem., 2999-3024, 2003.

El grupo éster de la posición 2 de D debe diferenciarse del acetato y de los benzoatos en otras posiciones del pentasacárido. Estos grupos éster se hidrolizan y sulfatan más adelante en el proceso y, a diferencia de estos grupos éster, el grupo 2-hidroxilo de la unidad D debe permanecer como grupo hidroxilo en el producto final, fondaparinux sódico.

Algunas de las opciones actuales de ésteres para los químicos sintéticos del campo incluyen metilcloroacetilo y clorometilacetato [MCA o CMA]. Los procedimientos suaves para la eliminación selectiva de estos grupos en presencia de acetatos y benzoatos los convierten en candidatos ideales. Sin embargo, se ha demostrado que los grupos MCA/CMA producen productos secundarios problemáticos y no deseados durante la glucosilación y, por lo tanto, no se prefieren en la síntesis de fondaparinux sódico y sus análogos. Para la formación de subproductos observada en derivados de acetato, véase Seeberger et al., J. Org. Chem., 2004, 69, 4081-93. También se observa una formación de subproductos similar mediante derivados de cloroacetato. Véase Orgueira et al., Eur. J. Chem., 9(1), 140-169, 2003.

Por lo tanto, como se apreciará, existen varias limitaciones en los procesos actuales utilizados para la síntesis de fondaparinux sódico. Por tanto, existe una necesidad en la técnica de nuevos procedimientos sintéticos que produzcan el fondaparinux y compuestos relacionados que tengan un alto rendimiento y una alta estereoselectividad. Los procesos de la presente invención abordan las limitaciones conocidas en la técnica y proporcionan una síntesis exclusiva, fiable y escalable de compuestos tales como el fondaparinux sódico.

Las ventajas adicionales se expondrán en parte en la siguiente descripción, y en parte serán evidentes a partir de la descripción, o podrán aprenderse mediante la práctica de los aspectos descritos a continuación. Las ventajas descritas más adelante se realizarán y conseguirán por medio de los elementos y combinaciones destacados particularmente en las reivindicaciones adjuntas. Debe entenderse que tanto la descripción general anterior como la descripción detallada siguiente son ejemplos y explicaciones únicamente y no son restrictivos.

Sumario de la invención

Los solicitantes han encontrado que, sorprendentemente, en la síntesis de fondaparinux, el uso de una metodología única de acoplamiento ácido 2-glucurónico protegido con levulinato-azúcar anhidro permite una reacción de glucosilación altamente eficaz, proporcionando así productos intermedios u oligosacáridos de fase tardía (y oligómeros relacionados con fondaparinux) con alto rendimiento y en proporciones altas de p/a □. En particular, la glucosilación del ácido glucurónico protegido con 2-levulinato puede ocurrir con altos rendimientos de acoplamiento (>65 %) del isómero p, rápidamente (por ejemplo, en una hora de tiempo de reacción), y sin isómero a detectable tras la purificación mediante cromatografía en columna. El grupo protector de levulinato se puede eliminar de forma eficaz y selectiva del producto glucosilado en presencia de posibles restos competidores (tales como dos grupos acetato y dos grupos benzoato) para generar un grupo 2-hidroxilo libre. El grupo hidroxilo recién generado puede volver a protegerse de manera eficaz y cuantitativa con un grupo tetrahidropirano (THP), proporcionando un pentasacárido que contiene 2-THP completamente protegido que puede ser O-sulfatado, hidrogenado y N-sulfatado de forma selectiva y consecuente, produciendo el pentasacárido deseado, tal como el fondaparinux, en excelentes rendimientos. Los inventores han encontrado que, sorprendentemente, el grupo THP permanece intacto y protegido durante todas las operaciones posteriores y se elimina de manera eficaz durante el procesamiento, después de la etapa final de N-sulfonación.

La presente invención incluye determinados productos intermedios identificados a continuación, incluidos los de Fórmula I.

Una realización de la invención es un proceso para preparar fondaparinux sódico mediante la conversión de al menos un compuesto seleccionado entre

Otra realización más es un método para preparar un oligosacárido que tiene un enlace glucosídico de p-glucosamina haciendo reaccionar un aceptor de 1,6-anhidro-glucopiranosilo (por ejemplo, 1,6-anhidro-p-D-glucopiranosa) que tiene un grupo funcional azida en C2 y un grupo hidroxilo en C4 con un donante de glucopiranosilo de ácido urónico que tiene un carbón anomérico activado, un grupo levulinato en C2 y un grupo ácido protegido en C5 para formar un oligosacárido que tiene un enlace p-glucosídico entre el grupo hidroxilo del aceptor de glucopiranosilo y el carbono anomérico del donante de glucopiranosilo.

Breve descripción de las figuras

La figura 1 es un espectro de RMN de 1H del trímero EDC.

La figura 2 es un espectro de RMN de 1H del trímero EDC-1.

La figura 3 es un espectro de RMN de 1H del trímero EDC-2.

La figura 4 es un espectro de RMN de 1H del trímero EDC-3.

La figura 5 es un espectro de RMN de 1H del pentámero EDCBA-1.

La figura 6 es un espectro de RMN de 1H del pentámero EDCBA-2.

La figura 7 es un espectro de RMN de 1H del pentámero EDCBA.

La figura 8 es un espectro de RMN de 1H del pentámero PA-2.

La figura 9 es un espectro de RMN de 1H del pentámero PA-3.

Descripción detallada de la invención

Los solicitantes han encontrado que, sorprendentemente, en la síntesis de fondaparinux, el uso de una metodología única de acoplamiento ácido 2-glucurónico protegido con levulinato-azúcar anhidro permite una reacción de glucosilación altamente eficaz, proporcionando así productos intermedios u oligosacáridos de fase tardía (y oligómeros relacionados con fondaparinux) con alto rendimiento y en proporciones altas de p/a. En particular, la glucosilación del ácido glucurónico protegido con 2-levulinato con un azúcar anhidro se produce rápidamente (por ejemplo, con un tiempo de reacción de aproximadamente una hora), con altos rendimientos de acoplamiento (> 65 %) del isómero p y con alta selectividad (por ejemplo, sin isómero a detectable tras la purificación mediante cromatografía en columna). El grupo protector de levulinato se puede eliminar de forma eficaz y selectiva del producto glucosilado en presencia de posibles restos competidores (tales como dos grupos acetato y dos grupos benzoato) para generar un grupo 2-hidroxilo libre. El grupo hidroxilo recién generado puede volver a protegerse de manera eficaz y cuantitativa con un grupo tetrahidropirano (THP), proporcionando un pentasacárido que contiene 2-THP completamente protegido que puede ser O-sulfatado, hidrogenado y N-sulfatado de forma selectiva y consecuente, produciendo el pentasacárido deseado, tal como el fondaparinux, en excelentes rendimientos. El grupo THP permanece intacto y protegido durante todas las operaciones posteriores y se elimina de manera eficaz durante el tratamiento, después de la etapa final de N-sulfonación.

El grupo levulinilo puede eliminarse rápida y casi cuantitativamente mediante tratamiento con hidrato de hidrazina como reactivo de desprotección, como se ilustra en el siguiente ejemplo. En las mismas condiciones de reacción, los ésteres de acetato y benzoato primarios y secundarios apenas se ven afectados por el hidrato de hidrazina. Véase, por ejemplo, Seeberger et al., J. Org. Chem., 69, 4081-4093, 2004.

La síntesis de fondaparinux sódico descrita en el presente documento aprovecha el grupo levulinilo de la construcción eficaz del trisacárido EDC con selectividad p mejorada para el acoplamiento en condiciones más suaves y con mayores rendimientos.

La sustitución del grupo protector bencilo con un resto THP le proporciona una mejor capacidad para incorporarse cuantitativamente a la posición 2 de la unidad D del pentasacárido. También, el grupo THP se comporta de manera similar a un éter bencílico en términos de función y estabilidad. En los procesos descritos en el presente documento, el grupo THP se incorpora a la posición 2 de la unidad D en esta última fase de la síntesis (es decir, después de que las unidades D y C se hayan acoplado a través de un enlace 1,2-frans-glucosídico (p)). El grupo protector THP normalmente no promueve una glucosilación p eficaz y, por lo tanto, se incorpora preferentemente a la molécula después de la construcción del enlace p.

El siguiente esquema ilustra algunos de los procesos de la presente invención divulgados en el presente documento.

El grupo protector tetrahidropiranMo (THP) y el grupo protector éter bencílico son grupos protectores de hidroxilo adecuados y pueden sobrevivir a las últimas cuatro etapas sintéticas (descritas anteriormente) en la síntesis de fondaparinux sódico, incluso en condiciones de reacción adversas. Otros determinados grupos protectores no sobreviven a las últimas cuatro etapas sintéticas con un alto rendimiento.

Por tanto, en un aspecto, la presente invención se refiere a un compuesto de Fórmula I:

R¹ es levulinilo (Lev);

R² es OAcetilo u -OBenzoílo;

R³ es bencilo;

R⁴ es N³ (azida)

R⁵ es metilo; y

R6 es CO²CH²C⁶H⁵; y

R⁷ es -CO²Me, o

Ri es tetrahidropirano (THP);

R² es -OAcetilo u -OBenzoílo;

R3 es bencilo;

R⁴ es N³ (azida);

R5 es metilo;

R6 es -CO²CH²C⁶H⁵; y

R⁷ es -CO²Me; o

Ri es tetrahidropirano (THP);

R² es -O' o una de sus sales;

R3 es bencilo;

R⁴ es N³ (azida);

R5 es metilo; y

R6 y R⁷ se seleccionan independientemente de -CO²' o una de sus sales, o

Ri es tetrahidropirano (THP);

R² es -OSO³' o una de sus sales;

R3 es bencilo;

R⁴ es N³ (azida);

R5 es metilo; y

R6 y R⁷ se seleccionan independientemente de -CO²' o una de sus sales, o

Ri es tetrahidropirano (THP);

R² es -OSO³' o una de sus sales;

R3 es H;

R⁴ es NH²;

R5 es metilo; y

R6 y R⁷ se seleccionan independientemente de -CO²' o una de sus sales, o

Ri es tetrahidropirano (THP);

R² es -OSO3Na;

R3 es H;

R⁴ es NHSO3Na;

R5 es metilo; y

R6 y R⁷ se seleccionan independientemente de -CO²Na, y

en donde dicho compuesto tiene estereoquímica alfa (a) en el carbono portador del grupo -OR⁵.

En otra realización adicional más, la presente invención se refiere a un compuesto de Fórmula I:

en donde Ri es H, R² es -OAcetilo u -OBenzoílo, R³ es bencilo, R⁴ es N³ (azida), R⁵ es metilo, R6 es -CO²CH²C⁶H⁵ y R⁷ es -CO²Me.

Procesos sintéticos

En otro aspecto, la presente invención se refiere a procesos para la preparación de fondaparinux. La invención también

i i

se refiere a procesos para la preparación de nuevos productos intermedios útiles en la síntesis de fondaparinux. Los procesos descritos en el presente documento se desarrollan de manera eficaz, proporcionando de este modo los compuestos deseados con un buen rendimiento y de una manera escalable y reproducible a escala industrial.

Estrategia de acoplamiento selectivo

La presente invención proporciona un procedimiento para la formación selectiva de un producto de anómero □ a partir de una reacción de acoplamiento de glucosilación. Sin desear quedar ligados a teoría alguna, los solicitantes creen que la proporción e a/p observada durante los procesos descritos en el presente documento se debe a la glucosilación dirigida por levulinato ilustrada a continuación:

Las reacciones de glucosilación mediadas por 2-levulinato descritas en el presente documento proporcionan una proporción de a/p sorprendentemente alta de los productos acoplados. En la presente invención, se obtiene una elevada selectividad p cuando se utiliza el presente anhidro aceptor C, restringido conformacionalmente. La alta selectividad p es inesperada y puede deberse a la anhidroglucosa bloqueada conformacionalmente.

Por tanto, en ciertos aspectos, la presente invención proporciona una estrategia de éster de levulinato/éter tetrahidropiranílico (Lev/THP) para la protección, desprotección y reprotección de la posición 2 de un sacárido glucurónico, que es útil para la síntesis de fondaparinux y compuestos relacionados.

En una realización, la presente invención se refiere a un proceso para preparar fondaparinux sódico:

(i) desproteger y luego proteger con THP un pentámero de levulinato de fórmula:

donde R² es Ac o Bz, obteniéndose un pentámero de THP de fórmula:

; y

(vi) N-sulfatar un pentámero hidrogenado de fórmula:

y

(b) opcionalmente, convertir el producto de la etapa (a) en fondaparinux sódico. Por ejemplo, el producto intermedio fondaparinux-THP que se muestra anteriormente se puede desproteger (es decir, se puede eliminar el grupo protector THP), obteniéndose fondaparinux.

En otro aspecto, la presente invención se refiere a un proceso para preparar un compuesto de Fórmula I:

en donde Ri es H, R² es -OSO³Na, R³ es H, R⁴ es NHSOaNa, R⁵ es metilo, y R6 y R⁷ son -CO²Na, incluyendo el proceso:

(a) desproteger un compuesto de Fórmula I, en donde Ri es levulinilo (Lev), R² es -OAcetilo u -Obenzoílo, R³ es bencilo, R⁴ es N³ (azida), R⁵ es metilo, R6 es -CO²CH²C⁶H⁵ y R⁷ es -CO²Me, proporcionando un compuesto de Fórmula I, en donde Ri es H, R² es -OAcetilo u -OBenzoílo, R³ es bencilo, R⁴ es N³ (azida), R⁵ es metilo, R6 es -CO²CH²C⁶H⁵ y R⁷ es -CO²Me;

(b) proteger el producto de la etapa (a), proporcionando un compuesto de Fórmula I, en donde Ri es tetrahidropirano (THP), R² es -OAcetilo u -OBenzoílo, R³ es bencilo, R⁴ es N³ (azida), R⁵ es metilo, R6 es -CO²CH²C⁶H⁵ y R⁷ es -CO²Me;

(c) hidrolizar el producto de la etapa (b), proporcionando un compuesto de Fórmula I, en donde Ri es tetrahidropirano (THP), R² es -O' o una de sus sales, R³ es bencilo, R⁴ es N³ (azida), R⁵ es metilo, y R6 y R⁷ son -CO²' o una de sus sales;

(d) sulfatar el producto de la etapa (c), proporcionando un compuesto de Fórmula I, en donde Ri es tetrahidropirano (THP), R² es -OSO3- o una de sus sales, R³ es bencilo, R⁴ es N³ (azida), R⁵ es metilo, y R6 y R⁷ son -CO²- o una de sus sales;

(e) hidrogenar el producto de la etapa (d), proporcionando un compuesto de Fórmula I, en donde Ri es tetrahidropirano (THP), R² es -OSO3- o una de sus sales, R³ es H, R⁴ es NH², R⁵ es metilo, y R6 y R⁷ son -CO²- o una de sus sales;

(f) sulfatar el producto de la etapa (e), proporcionando un compuesto de Fórmula I, en donde Ri es tetrahidropirano

i5

(THP), R² es -OSOaNa, R³ es H, R⁴ es NHSO³Na, R⁵ es metilo, y R6 y R⁷ son -CO²Na; y

(g) desproteger el producto de la etapa (f), proporcionando un compuesto de Fórmula I, en donde Ri es H, R² es -OSOaNa, R³ es H, R⁴ es NHSO3Na, R⁵ es metilo, y R6 y R⁷ son -CO²Na.

En una realización, la etapa de desprotección (a) incluye el tratamiento con un reactivo seleccionado de hidrazina, hidrato de hidrazina, acetato de hidrazina y R⁸NH-NH², donde R8 es arilo, heteroarilo o alquilo.

En una realización, la etapa de desprotección (a) incluye el tratamiento con hidrazina

En otra realización, la etapa de protección (b) incluye el tratamiento con dihidropirano o un derivado de dihidropirano y un ácido seleccionado de ácido alcanforsulfónico (CSA), ácido clorhídrico (HCI), ácido p-toluenosulfónico (pTsOH) y ácidos de Lewis.

En una realización, la etapa de protección (b) incluye el tratamiento con dihidropirano y un ácido seleccionado de ácido clorhídrico y ácido p-toluenosulfónico.

En otro aspecto, la presente invención se refiere a un proceso para preparar un pentámero de THP de fórmula:

en donde R² es Ac o Bz;

incluyendo el proceso la desprotección y, a continuación, la protección con THP de un compuesto de fórmula:

En otra realización de este aspecto, el proceso incluye además hidrolizar el pentámero de THP, produciéndose un pentámero hidrolizado de fórmula:

pentámero O-sulfatado de fórmula:

En otra realización de este aspecto, el proceso incluye además hidrogenar el pentámero O-sulfatado, obteniéndose un pentámero hidrogenado de fórmula:

En otra realización de este aspecto, el proceso incluye además N-sulfatar el pentámero hidrogenado, obteniéndose fondaparinux-THP de fórmula:

En otra realización de este aspecto, el proceso incluye además convertir el fondaparinux-THP en fondaparinux sódico. En una realización, la conversión incluye la desprotección de fondaparinux-THP.

En otro aspecto, la presente invención se refiere a un proceso para preparar un compuesto de Fórmula I:

en donde Ri es levulinilo (Lev), R² es -OAcetilo u -OBenzoílo, R³ es bencilo, R⁴ es N³ (azida), R⁵ es metilo, R6 es -CO²CH²C⁶H⁵ y R⁷ es -CO²Me;

incluyendo el proceso la unión de un compuesto de Fórmula EDC

en donde Ri es levulinilo (Lev), R² es -OAcetilo u -OBenzoílo, R³ es bencilo, R⁴ es N³ (azida) y R6 es -CO²CH²C⁶H⁵ ; con un compuesto de Fórmula BA

en donde R² es -OAcetilo u -OBenzoílo, R³ es bencilo, R⁴ es N³ (azida), R⁵ es metilo y R⁷ es -CO²Me.

En una realización de este aspecto, el proceso incluye además convertir el producto resultante en fondaparinux sódico. En otro aspecto más, la presente invención se refiere a un proceso para preparar un compuesto de Fórmula I:

Ri es H, levulinilo (Lev) o tetrahidropirano (THP);

R² es -O- o una de sus sales, -OH, -OAcilo u -OSO³", o una de sus sales;

R³ es H, bencilo o un grupo protector eliminable por hidrogenación;

R⁴ es N³ (azida), NH², grupo protector de NH o NHSO³', o una de sus sales;

R⁵ es alquilo C¹-C⁶; y

R6 y R⁷ se seleccionan independientemente de -CO²" o una de sus sales, -CO²H y -CO²Rx (donde Rx es un alquilo C¹-C⁶, arilo, alcoxi C1-C4(arilo), aril(alquilo C¹-C⁶) o alcoxi C1-C4(aril)(alquilo C¹-C⁶)); y

en donde dicho compuesto tiene estereoquímica alfa (a) en el carbono portador del grupo -OR⁵; comprendiendo dicho proceso unir un compuesto de Fórmula II:

con un compuesto de Fórmula III:

En otro aspecto mas, la presente invención se refiere a un proceso para preparar un compuesto de Fórmula I:

Ri es H, levulinilo (Lev) o tetrahidropirano (THP);

R² es -O- o una de sus sales, -OH, -OAcilo u -OSO³', o una de sus sales;

R³ es H, bencilo o un grupo protector eliminable por hidrogenación;

R⁴ es N³ (azida), NH² , grupo protector de NH o NHSO³", o una de sus sales;

R⁵ es alquilo C¹-C⁶; y

R6 y R⁷ se seleccionan independientemente de -CO²" o una de sus sales, -CO²H, -CO²Rx (donde Rx es un alquilo C¹-C⁶, arilo, alcoxi C1-C4(arilo), aril (alquilo C¹-C⁶) o alcoxi C1-C4(aril)(alquilo C¹-C⁶)),

en donde dicho compuesto tiene estereoquímica alfa (a) en el carbono portador del grupo -OR⁵ ; comprendiendo dicho proceso unir un compuesto de Fórmula IV:

con un compuesto de Fórmula V:

En otro aspecto, la presente invención se refiere a un proceso para preparar un compuesto de Fórmula I, en donde Ri es tetrahidropirano (THP), R² es -OAcetilo u -OBenzoílo, R³ es bencilo, R⁴ es N³ (azida), R⁵ es metilo, R6 es -CO²CH²C⁶H⁵ y R⁷ es -CO²Me, incluyendo el proceso:

(a) desproteger un compuesto de Fórmula I, en donde Ri es levulinilo (Lev), R² es -OAcetilo u -OBenzoílo, R³ es bencilo, R⁴ es N³ (azida), R⁵ es metilo, R6 es -CO²CH²C⁶H⁵ y R⁷ es -CO²Me, proporcionando un compuesto de Fórmula I, en donde Ri es H, R² es -OAcetilo u -OBenzoílo, R³ es bencilo, R⁴ es N³ (azida), R⁵ es metilo, R6 es -CO²CH²C⁶H⁵ y R⁷ es -CO²Me; y

(b) proteger con THP el producto de la etapa (a).

En una realización, la etapa de desprotección (a) incluye el tratamiento con un reactivo seleccionado de hidrazina, hidrato de hidrazina, acetato de hidrazina y R⁸NH-NH², donde R8 es arilo, heteroarilo o alquilo. En una realización, la etapa de desprotección (a) comprende el tratamiento con hidrazina.

En una realización, la etapa de protección (b) comprende el tratamiento con dihidropirano o un derivado de dihidropirano y un ácido seleccionado de ácido alcanforsulfónico (CSA), ácido clorhídrico (HCI), ácido ptoluenosulfónico (pTsOH) y ácidos de Lewis. En una realización, la etapa de protección (b) comprende el tratamiento con dihidropirano y un ácido seleccionado de ácido clorhídrico y ácido p-toluenosulfónico.

En otro aspecto, la presente invención se refiere a un proceso para preparar un compuesto de Fórmula I, en donde Ri es tetrahidropirano (THP), R² es -O' o una de sus sales, R³ es bencilo, R⁴ es N³ (azida), R⁵ es metilo, y R6 y R⁷ son -CO²' o una de sus sales, que comprende hidrolizar un compuesto de Fórmula I, en donde Ri es tetrahidropirano (THP),

R² es -OAcetilo u -OBenzoílo, R³ es bencilo, R⁴ es N³ (azida), R⁵ es metilo, R6 es -CO²CH²C⁶H⁵ y R⁷ es -CO²Me.

En otro aspecto, la presente invención se refiere a un proceso para preparar un compuesto de Fórmula I, en donde Ri es tetrahidropirano (THP), R² es -OSO3- o una de sus sales, R³ es bencilo, R⁴ es N³ (azida), R⁵ es metilo, y R6 y R⁷ son -CO²- o una de sus sales, que comprende sulfatar un compuesto de Fórmula I, en donde Ri es tetrahidropirano (THP), R² es -O‘ o una de sus sales, R³ es bencilo, R⁴ es N³ (azida), R⁵ es metilo, y R6 y R⁷ son -CO²- o una de sus sales.

En otro aspecto, la presente invención se refiere a un proceso para preparar un compuesto de Fórmula I, en donde Ri es tetrahidropirano (THP), R² es -OSO3- o una de sus sales, R³ es H, R⁴ es NH², R⁵ es metilo, y R6 y R⁷ son -CO²- o una de sus sales, que comprende la etapa de hidrogenar un compuesto de Fórmula I, en donde Ri es tetrahidropirano (THP), R² es -OSO3- o una de sus sales, R³ es bencilo, R⁴ es N³ (azida), R⁵ es metilo, y R6 y R⁷ sus sales.

En otro aspecto, la presente invención se refiere a un proceso para preparar un compuesto de Fórmula I, en donde Ri es tetrahidropirano (THP), R² es -OSO3Na, R³ es H, R⁴ es NHSO3Na, R⁵ es metilo, y R6 y R⁷ son -CO²Na, que comprende la etapa de sulfatar un compuesto de Fórmula I, en donde Ri es tetrahidropirano (THP), R² es -OSO3-, o una de sus sales, R³ es H, R⁴ es NH², R⁵ es metilo, y R6 y R⁷ son -CO²- o una de sus sales.

En un aspecto adicional, la presente invención se refiere a un proceso para preparar un compuesto de Fórmula I:

en donde Ri es H, R² es -OSO3Na, R³ es H, R⁴ es NHSO3Na, R⁵ es metilo, y R6 y R⁷ son -CO²Na;

incluyendo el proceso la desprotección de un compuesto de Fórmula I, en donde Ri es tetrahidropirano (THP), R² es -OSO3Na, R³ es H, R⁴ es NHSO3Na, R⁵ es metilo, y R6 y R⁷ son -CO²Na.

2i

En otro aspecto más, la presente invención se refiere a un proceso para preparar un compuesto de Fórmula 8:

que comprende hacer reaccionar un compuesto de Fórmula 9:

con un compuesto de Fórmula 10:

Fondaparinux sódico

En un aspecto adicional, la presente invención se refiere a fondaparinux, o una de sus sales (por ejemplo, fondaparinux sódico) que contiene un compuesto seleccionado de P2, P3, P4 y combinaciones de los mismos.

Compuesto P2 (nitrógeno metilado en el anillo E):

Compuesto P3 (nitrógeno metilado en el anillo A):

Compuesto P4 (grupo N-formilo en el anillo C):

En ciertas realizaciones, el fondaparinux, o una de sus sales (por ejemplo, fondaparinux sódico), o la composición contiene al menos el 90, 95, 98, 99 o 99,5 % de fondaparinux, o una de sus sales, basado en el peso total de fondaparinux o composición.

En ciertas realizaciones, el Compuesto P2 está presente en una cantidad superior al 0 % e inferior a aproximadamente el 0,5 %, tal como superior al 0 % e inferior a aproximadamente el 0,4 %, superior al 0 % e inferior a aproximadamente el 0,3 %, superior al 0 % e inferior a aproximadamente el 0,2 % y superior al 0 % e inferior a aproximadamente el 0,1 %, basado en el peso total de fondaparinux o composición.

En ciertas realizaciones, el Compuesto P3 está presente en una cantidad superior al 0 % e inferior a aproximadamente el 0,5 %, tal como superior al 0 % e inferior a aproximadamente el 0,4 %, superior al 0 % e inferior a aproximadamente el 0,3 %, superior al 0 % e inferior a aproximadamente el 0,2 % y superior al 0 % e inferior a aproximadamente el 0,1 %, basado en el peso total de fondaparinux o composición.

En ciertas realizaciones, el Compuesto P4 está presente en una cantidad superior al 0 % e inferior a aproximadamente el 0,5 %, tal como superior al 0 % e inferior a aproximadamente el 0,4 %, superior al 0 % e inferior a aproximadamente el 0,3 %, superior al 0 % e inferior a aproximadamente el 0,2 % y superior al 0 % e inferior a aproximadamente el 0,1 %, basado en el peso total de fondaparinux o composición.

En realizaciones adicionales, el fondaparinux, o una de sus sales (por ejemplo, fondaparinux sódico) (o una composición que incluye fondaparinux o una de sus sales (por ejemplo, fondaparinux sódico)) también puede contener el Compuesto P1 (además de contener un compuesto seleccionado de P2, P3, P4 y combinaciones de los mismos).

Compuesto P1 (anómero beta de fondaparinux sódico)

En ciertas realizaciones, el Compuesto P1 está presente en una cantidad superior al 0 % e inferior a aproximadamente el 0,5 %, tal como superior al 0 % e inferior a aproximadamente el 0,4 %, superior al 0 % e inferior a aproximadamente el 0,3 %, superior al 0 % e inferior a aproximadamente el 0,2 % y superior al 0 % e inferior a aproximadamente el 0,1 %, basado en el peso total de fondaparinux o composición.

En realizaciones adicionales, la presente invención se refiere a una composición (tal como una composición farmacéutica) que incluye fondaparinux o una de sus sales (por ejemplo, fondaparinux sódico) y uno o más pentasacáridos protegidos con tetrahidropirano. En realizaciones adicionales, el pentasacárido protegido con tetrahidropirano es cualquiera de los pentasacáridos protegidos con tetrahidropirano descritos en cualquiera de las realizaciones del presente documento.

En ciertas realizaciones, el pentasacárido protegido con tetrahidropirano está presente en una cantidad superior al 0 % e inferior a aproximadamente el 0,5 %, tal como superior al 0 % e inferior a aproximadamente el 0,4 %, superior al 0 % e inferior a aproximadamente el 0,3 %, superior al 0 % e inferior a aproximadamente el 0,2 %, superior al 0 % e inferior a aproximadamente el 0,1 %, basado en el peso total de fondaparinux o composición.

Cualquiera de las formas mencionadas de fondaparinux (o una de sus sales) o composiciones que contengan fondaparinux (o una de sus sales) se puede administrar (por ejemplo, 2,5 mg, 5 mg, 7,5 mg, 10 mg, solución inyectable) para la profilaxis de la trombosis venosa profunda (TVP) que puede provocar una embolia pulmonar (EP) en pacientes sometidos a (i) cirugía por fractura de cadera (incluida la profilaxis prolongada), (ii) cirugía de reemplazo de cadera, (iii) cirugía de reemplazo de rodilla y (iv) cirugía abdominal (quienes tienen riesgo de complicaciones tromboembólicas). Las formas y composiciones descritas en el presente documento también se pueden administrar junto con wafarina sódica para el tratamiento de la TVP y la EP agudas.

Definiciones

Los ejemplos de grupos alquilo que tienen de uno a seis átomos de carbono, son metilo, etilo, propilo, butilo, pentilo, hexilo, y todas las formas isoméricas, lineales y ramificadas de los mismos.

El término "acilo", a menos que se defina de otro modo, se refiere al grupo químico -C(O)R. R puede ser, por ejemplo, arilo (por ejemplo, fenilo) o alquilo (por ejemplo, alquilo C¹-C⁶).

El término "arilo" se refiere a un grupo aromático que tiene de 6 a 14 átomos de carbono, tal como, por ejemplo, fenilo, naftilo, tetrahidronaftilo, indanilo y bifenilo. El término "heteroarilo" se refiere a un grupo aromático que tiene de 5 a 14 átomos donde al menos uno de los carbonos ha sido reemplazado por N, O o S. Los ejemplos adecuados incluyen, por ejemplo, piridilo, quinolinilo, dihidroquinolinilo, isoquinolinilo, quinazolinilo, dihidroquinazolilo y tetrahidroquinazolilo.

Será evidente para los expertos en la materia que puede ser necesario proteger y desproteger los grupos funcionales sensibles durante la síntesis de un compuesto de la invención. Esto puede lograrse mediante métodos convencionales, por ejemplo, como se describe en "Protective Groups in Organic Synthesis" by Greene and Wuts, John Wiley & Sons Inc (1999) y en las referencias del mismo, que se pueden añadir o eliminar utilizando los procedimientos establecidos en el mismo. Los ejemplos de grupos hidroxilo protegidos (es decir, grupos protectores de hidroxilo) incluyen éteres de sililo como los obtenidos mediante la reacción de un grupo hidroxilo con un reactivo tal como, aunque no de forma limitativa, t-butildimetil-clorosilano, trimetilclorosilano, triisopropilclorosilano, trietilclorosilano; éteres metílicos y etílicos sustituidos tales como, aunque no de forma limitativa, éter metoximetílico, éter metiltiometílico, éter benciloximetílico, éter t-butoximetílico, éter 2-metoxietoximetílico, éteres de tetrahidropiranilo, éter 1-etoxietílico, éter alílico, éter bencílico; ésteres, tales como, aunque no de forma limitativa, benzoilformiato, formiato, acetato, tricloroacetato y trifluoroacetato. Los ejemplos de grupos amino protegidos (es decir, grupos protectores de amino) incluyen, pero sin limitación, amidas tales como, formamida, acetamida, trifluoroacetamida y benzamida; imidas, tales como ftalimida y ditiosuccinimida; y otras. Los ejemplos de grupos sulfhidrilo protegidos incluyen, pero sin limitación, tioéteres tales como tioéter S-bencílico y tioéter S-4-picolílico; derivados de S-metilo sustituidos tales como hemitio, acetales de ditio y aminotio; y similares.

Un grupo protector que se puede eliminar mediante hidrogenación es, a modo de ejemplo, bencilo o un grupo bencilo sustituido, por ejemplo, éteres de bencilo, acetales de bencilideno. Si bien el grupo bencilo en sí es un grupo protector de uso común que se puede eliminar mediante hidrogenación, un ejemplo de un grupo protector de bencilo sustituido es p-metoxibencilo.

Hay disponibles varias hidrazinas y derivados de hidrazina para la desprotección (eliminación) del grupo protector de tetrahidropirano (THP), incluyendo, aunque no de forma limitativa, hidrazina [NH²-NH²], hidrato de hidrazina [NH²-NH².H²O] y acetato de hidracina [NH²-NH².AcOH], y derivados alquílicos y arílicos de hidracina tales como R⁸NH-NH² , donde R8 es arilo, heteroarilo o alquilo.

Los ácidos de Lewis conocidos en la técnica incluyen, por ejemplo, cloruro de magnesio, cloruro de aluminio, cloruro de zinc, dimetileterato de trifluoruro de boro, cloruro de titanio (IV) y cloruro férrico.

A lo largo de toda la descripción y en las reivindicaciones de esta memoria descriptiva, la palabra "comprenden" y variaciones de la misma, tales como "que comprende" y "comprende", significan incluyendo aunque no limitándose a, y no se pretende que excluyan, por ejemplo, otros aditivos, componentes, números enteros o etapas.

Como se usa en la memoria descriptiva y en las reivindicaciones adjuntas, las formas en singular "un" o "una", "una" y "el/la" incluyen referencias en plural a menos que el contexto dicte claramente lo contrario. Por tanto, por ejemplo, la referencia a "un componente" incluye las mezclas de dos o más componentes.

Los intervalos se pueden expresar como desde "aproximadamente" un valor particular y /o hasta "aproximadamente" otro valor particular. Cuando se expresa un intervalo de este tipo, otro aspecto incluye desde el valor particular y/o hasta el otro valor particular. De modo similar, cuando los valores se expresan como aproximaciones, mediante el uso del antecedente "aproximadamente", se entenderá que el valor particular constituye otro aspecto. Se entenderá además que los valores extremos de cada uno de los intervalos son significativos en relación con el otro valor extremo, e independientemente del otro valor extremo. Se entiende también que en el presente documento se divulga un número de valores y que cada valor se divulga también en el presente documento como "aproximadamente" este valor particular además del valor mismo. Por ejemplo, si se divulga el valor "10", entonces se divulga también "aproximadamente 10". Se entiende también que cada unidad entre dos unidades particulares se divulga también. Por ejemplo, si se divulgan 10 y 15, entonces 11, 12, 13 y 14 se divulgan también.

A lo largo de la presente memoria descriptiva, se hace referencia a varias publicaciones. Las divulgaciones de estas publicaciones en su totalidad se incorporan en el presente documento por referencia en esta solicitud con el fin de describir más completamente el estado de la técnica a la que pertenece la materia divulgada. Las referencias divulgadas también se incorporan individual y específicamente por referencia en el presente documento para el material contenido en ellas que se analiza en la oración en donde se basa la referencia.

Los siguientes ejemplos son meramente ilustrativos de la presente invención y no deben interpretarse como limitativos del alcance de la invención de ninguna manera, ya que muchas variaciones y equivalentes que abarca la presente invención se harán evidentes para los expertos en la materia al leer la presente divulgación.

Ejemplos

En la síntesis de fondaparinux sódico, los monómeros A2, B1, C, D y E descritos en el presente documento se pueden preparar mediante procesos descritos en la técnica o, por ejemplo, en el caso del monómero D, mediante un proceso como el descrito en el presente documento. A continuación, los monómeros B1 y A2 pueden unirse para formar un disacárido, el dímero ^bA. Los monómeros E, D y C pueden unirse para formar un trisacárido, el trímero EDC. El trímero EDC se puede derivatizar para formar un producto intermedio adecuado para acoplarse con el dímero BA, formando así un pentámero de pentasacáridos (EDCBA). El pentámero EDCBA es un producto intermedio que se puede convertir mediante una serie de reacciones en el fondaparinux sódico. Esta estrategia descrita en el presente documento proporciona un método eficaz para la preparación de varios kilogramos de fondaparinux con altos rendimientos y alta estereoselectividad.

Procedimientos sintéticos

En el presente documento, se utilizan las siguientes abreviaturas: Ac es acetilo; ACN es acetonitrilo; TM son tamices moleculares; DMF es dimetilformamida; PMB es p-metoxibencilo; Bn es bencilo; DCM es diclorometano; THF es tetrahidrofurano; TFA es ácido trifluoroacético; CSA es ácido alcanforsulfónico; TEA es trietilamina; MeOH es metanol; DMAP es dimetilaminopiridina; TA es temperatura ambiente; CAN es nitrato de amonio cérico; AC²O es anhídrido acético; HBr es bromuro de hidrógeno; TEMPO es N-óxido de tetrametilpiperidina; TBACI es cloruro de tetrabutilamonio; EtOAc es acetato de etilo; HOBT es hidroxibenzotriazol; DCC es diciclohexilcarbodiimida; Lev es levunlinilo; TBDPS es difeniisililo terc-butílico; TCA es tricloroacetonitrilo; O-TCA es O-tricloroacetimidato; Lev²O es anhídrido levulínico; DIPEA es diisopropiletilamina; Bz es benzoílo; TBAF es fluoruro de tetrabutilamonio; DBU es diazabicicloundecano; BF³ Et²O es eterato de trifluoruro de boro; TMSI es yoduro de trimetilsililo; TBAI es yoduro de tetrabutilamonio; TES-Tf es trifluorometanosulfonato de trietilsililo (triflato de trietilsililo); DHP es dihidropirano; PTS es ácido p-toluenosulfónico.

Los monómeros utilizados en los procesos descritos en el presente documento se pueden preparar como se describe en la técnica, o se pueden preparar mediante los métodos descritos en el presente documento.

Monómero A-2

La síntesis del Monómero A-2 (Número de registro CAS 134221-42-4) se ha descrito en las siguientes referencias: Arndt et al., Organic Letters, 5(22), 4179-4182, 2003; Sakairi et al., Bulletin of the Chemical Society of Japan, 67(6), 1756-8, 1994; y Sakairi et al., Journal of the Chemical Society, Chemical Communications, (5), 289-90, 1991, y la bibliografía citada en las mismas, que se han incorporado como referencia en el presente documento en su totalidad.

Monómero C

El Monómero C (Número de registro CAS 87326-68-9) se puede sintetizar mediante los métodos descritos en las siguientes referencias: Ganguli et al., Tetrahedron: Asymmetry, 16(2), 411-424, 2005; Izumi et al., Journal of Organic Chemistry, 62(4), 992-998, 1997; Van Boeckel et al., Recopilación: Journal of the Royal Netherlands Chemical Society, 102(9), 415-16, 1983; Wessel et al., Helvetica Chimica Acta, 72(6), 1268-77, 1989; Petitou et al., Patente de EE. UU. n.° 4.818.816 y las referencias citadas en las mismas, que se han incorporado como referencia en el presente documento en su totalidad.

Monómero E

El Monómero E (Número de registro CAS 55682-48-9) se puede sintetizar mediante los métodos descritos en las siguientes referencias bibliográficas: Hawley et al., European Journal of Organic Chemistry, (12), 1925-1936, 2002; Dondoni et al., Journal of Organic Chemistry, 67(13), 4475-4486, 2002; Van der Klein et al., Tetrahedron, 48(22), 4649­ 58, 1992; Hori et al., Journal of Organic Chemistry, 54(6), 1346-53, 1989; Sakairi et al., Bulletin of the Chemical Society of Japan, 67(6), 1756-8, 1994; Tailler et al., Journal of the Chemical Society, Perkin Transactions 1: Organic and Bio-Organic Chemistry, (23), 3163-4, (1972-1999) (1992); Paulsen et al., Chemische Berichte, 111(6), 2334-47, 1978; Dasgupta et al., Synthesis, (8), 626-8, 1988; Paulsen et al., Angewandte Chemie, 87(15), 547-8, 1975; y las referencias citadas en las mismas, que se han incorporado como referencia en el presente documento en su totalidad.

Monómero B-1

El Monómero B-1 (Número de registro CAS 444118-44-9) se puede sintetizar mediante los métodos descritos en las siguientes referencias bibliográficas: Lohman et al., Journal of Organic Chemistry, 68(19), 7559-7561, 2003; Orgueira et al., Chemistry—A European Journal, 9(1), 140-169, 2003; Manabe et al., Journal of the American Chemical Society, 128(33), 10666-10667, 2006; Orgueira et al., Angewandte Chemie, Edición Internacional, 41(12), 2128-2131,2002; y las referencias citadas en las mismas, que se han incorporado como referencia en el presente documento en su totalidad.

Síntesis del Monómero D

El Monómero D se preparó en 8 etapas sintéticas a partir de pentaacetato de glucosa utilizando el siguiente procedimiento:

Síntesis del Monómero D

Reactivos: 1. 33 % de HBr AcOH, DCM, de 0 °C hasta TA, 3 h; 2. NaBH4, Bu4NI, TM, ACN, 40 °C, 16 h; 3. NaOMe, MeOH, 50 °C, 3 h, Resina 50wx; 4. PhC H (O M e)2, CSA, 50 °C, 2 h; 5. NaH, THF, BnBr, de 0 °C hasta TA, 2 h; 6.

TFA, THF, TA, 16 h; 7. TEM PO (N -óxido de 2,2 ,6,6-tetram etil-1-p iper¡dina), TBACI, NaBr, EtOAc, NaCIO, N a H C 03, TA, 16 h; 8. BnOH, HOBT, TEA, DCC, TA, 16 h.

Se sometió a bromación el pentaacetato SM-B en el carbono anomérico mediante HBr en ácido acético, dando el derivado de bromuro IntDI. Esta etapa se llevó a cabo utilizando los reactivos SM-B, 33 % de bromuro de hidrógeno, ácido acético y diclorometano, agitando en un baño de agua con hielo durante aproximadamente 3 horas y evaporando a temperatura ambiente. Se cicló reductivamente IntDI con borohidruro de sodio y yoduro de tetrabutilamonio en acetonitrilo mediante tamices moleculares de 3 A como agente deshidratante y agitando a 40 °C durante 16 horas, dando el derivado acetal, IntD2. Se hidrolizaron los tres grupos acetilo de IntD2 calentando con metóxido de sodio en metanol a 50 °C durante 3 horas y la mezcla de reacción se neutralizó usando resina Dowex 50WX8-100 (Aldrich) en forma ácida, dando el derivado trihidroxiacetal IntD3.

Los hidroxilos de C4 y C6 de IntD3 se protegieron mezclándolos con dimetilacetato de benzaldehído y ácido alcanforsulfónico a 50 °C durante 2 horas, dando el derivado de bencilideno-acetal IntD4. Se desprotonó el hidroxilo libre en la posición C3 de IntD4 con hidruro de sodio en THF como disolvente a 0 °C y se alquiló con bromuro de bencilo en THF, y se dejó calentar la mezcla de reacción hasta la temperatura ambiente con agitación, dando el éter bencílico IntD5. El resto bencilideno de IntD5 se desprotegió añadiendo ácido trifluoroacético en diclorometano a 0 °C y dejando que se calentara hasta la temperatura ambiente durante 16 horas, dando IntD6 con un grupo hidroxilo primario. A continuación, se oxidó IntD6 con TEMPO (N-óxido de 2,2,6,6-tetrametil-1-piperdina) en presencia de cloruro de tetrabutilamonio, bromuro de sodio, acetato de etilo, clorato de sodio y bicarbonato de sodio, con agitación a temperatura ambiente durante 16 horas para formar el derivado de ácido carboxílico IntD7. El ácido IntD7 se esterificó con alcohol bencílico y diciclohexilcarbodiimida (siendo los otros reactivos el hidroxibenzotriazol y la trietilamina) con agitación a temperatura ambiente durante 16 horas, dando el Monómero D.

Síntesis del dímero BA

El dímero BA se preparó en 12 etapas sintéticas a partir del Monómero B1 y el Monómero A2 mediante el siguiente procedimiento:

El hidroxilo de C4 de Monómero B-1 se levulinó con anhídrido levulínico y diisopropiletilamina (DIPEA) con mezcla a temperatura ambiente durante 16 horas, dando el éster de levulinato BModl, seguido de la hidrólisis del acetónido con 90 % de ácido trifluoroacético y mezclado a temperatura ambiente durante 4 horas, dando el diol BMod2. El hidroxilo de C1 del diol BMod2 se sililó con íerc-butildifenilsililcloruro mezclando a temperatura ambiente durante 3 horas, dando el derivado de sililo BMod3. A continuación, se benzoiló el hidroxilo de C2 con cloruro de benzoílo en piridina y se mezcló a temperatura ambiente durante 3 horas, dando el compuesto BMod4. Después, se desprotegió el grupo sililo de BMod4 con fluoruro de ferc-butilamonio y se mezcló a temperatura ambiente durante 3 horas, dando el C1-hidroilo BMod5. A continuación, se deja que el hidroxilo de C1 reaccione con tricloroacetonitrilo en presencia de diazobicicloundecano (DBU) y se mezcla a temperatura ambiente durante 2 horas, dando el derivado de tricloroacetamidato (TCA) BMod6, que es adecuado para el acoplamiento, por ejemplo, con el Monómero A-2.

El Monómero A-2 se preparó para el acoplamiento abriendo el resto anhidro con BF3Et2O, seguido de la acetilación de los grupos hidroxilo resultantes, dando el derivado de triacetato AModl.

El Monómero A2 se preparó para la reacción de acoplamiento abriendo el resto anhidro y acetilando los grupos hidroxilo resultantes, dando el derivado de triacetato AModl. Esta transformación se produce utilizando eterato de trifluoruro de boro, anhídrido acético y diclorometano, entre -20 °C y la temperatura ambiente durante 3 horas. A continuación, se hidroxiló el acetato de C1 de AModl y se metiló en dos etapas, dando el diacetato AMod3. Es decir, primero se hizo reaccionar AModl con yoduro de trimetilsililo y se mezcló a temperatura ambiente durante 2 horas, a continuación, se hizo reaccionar con yoduro de tetrabutilamonio. Esta mezcla se hizo reaccionar con diisoproiletilamina y metanol, y se agitó durante 16 horas a temperatura ambiente, formando así AMod3. Los acetatos de C4 y C6 de AMod3 se hidrolizan con metóxido de sodio, dando el diol Amod4. La mezcla de AMod3 también se sometió a mezclado a temperatura ambiente durante 3 horas con resina Dowex 50 Wx4X8-100 en forma ácida para la neutralización. Esto formó Amod4. A continuación, se benzoíla el hidroxilo de C6 de AMod4 tratando con cloruro de benzoílo en piridina a -40 °C y luego se deja calentar hasta -10 °C durante 2 horas, dando AMod5.

El acoplamiento del monómero AMod5 con el grupo hidroxilo de C4 libre de BMod6 se realizó en presencia de BF3Et2O y diclorometano con mezclado entre -20 °C y la temperatura ambiente durante 3 horas, proporcionando el disacárido BA1. A continuación, se hidrolizó el resto levulinilo de C4 del disacárido con hidrazina, dando el Dímero BA, que es adecuado para reacciones de acoplamiento posteriores.

Síntesis del Trímero EDC

El Trímero EDC se preparó en 10 etapas sintéticas a partir del Monómero E, Monómero D y Monómero C mediante el siguiente procedimiento:

Se preparó el Monómero E para el acoplamiento abriendo el resto anhidro con BF3Et2O, seguido de la acetilación de los grupos hidroxilo resultantes, dando diacetato EModl. Esto ocurre al añadir el Monómero E con eterato de trifluoruro de boro, anhídrido acético y diclorometano a -10 °C, y dejar que la reacción alcance la temperatura ambiente con agitación durante 3 horas. Después se hidroliza el acetato de C1 de EModl, dando el alcohol, EMod2. Esto ocurre al hacer reaccionar Emodl con acetato de hidrazina y dimetilformamida y mezclar a temperatura ambiente durante 3 horas. A continuación, se hace reaccionar el hidroxilo de C1 de Emod2 con tricloroacetonitrilo, dando el derivado de tricloroacetamidato (TCA) EMod3 adecuado para el acoplamiento, cuya reacción también emplea diazabicicloundecano y diclorometano y se mezcla a temperatura ambiente durante 2 horas.

El Monómero D, que tiene un grupo hidroxilo de C4 libre, se acopló con monómero EMod3 en presencia de triflato de trietilsililo mezclando a -40 °C durante 2 horas, dando el disacárido Dímero ED. El acetal del azúcar D del anillo del Dímero ED se hidroliza, dando el diol de C1,C2 ED1. Esto ocurre al hacer reaccionar el dímero ED con 90 % de ácido trifluoroacético y mezclar a temperatura ambiente durante 4 horas. Después, se sililó el resto hidroxilo de C1 de ED1 con cloruro de ferc-butildifenilsililo, dando el derivado de sililo ED2. Después, se dejó reaccionar el hidroxilo de C2 de ED2 con anhídrido levulínico en presencia de dimetilaminopiridina (DMAP) y dietilisopropilamina durante aproximadamente 16 horas, dando el éster de levulinato ED3. Después se desprotege el resto TBDPS mediante la eliminación con fluoruro de ferc-butilamonio en ácido acético mezclando a temperatura ambiente durante 3 horas, dando ED4 que tiene un hidroxilo de C1. A continuación, se dejó reaccionar el resto hidroxilo de C1 de ED4 con tricloroacetonitrilo, dando el derivado de TCA ED5, que es adecuado para el acoplamiento.

Después, se dejó reaccionar el resto hidroxilo de C1 de ED4 con tricloroacetonitrilo, dando el derivado de TCA ED5 adecuado para el acoplamiento mediante diazabicicloundecano y diclorometano, y mezclar a temperatura ambiente durante 2 horas. El Monómero C, que tiene un grupo hidroxilo de C4 libre, luego se combinó con el disacárido ED5 en presencia de triflato de trietilsililo y se mezcló a -20 °C durante 2 horas, dando el trisacárido Trímero EDC.

Síntesis del Pentámero EDCBA

El Pentámero EDCBA se preparó siguiendo el siguiente procedimiento:

Síntesis de pentámero EDCBA - Parte 1

La preparación del Pentámero EDCBA se realiza en dos partes de la siguiente manera. En la parte 1, se prepara el Trímero EDC, un producto intermedio de diacetato, para la reacción de acoplamiento con el Dímero BA, abriendo inicialmente el resto anhidro y acetilando los grupos hidroxilo resultantes, lo que da el derivado de tetraacetato EDC1.

Esto ocurre al hacer reaccionar el Trímero EDC con eterato de trifluoruro de boro, anhídrido acético y diclorometano, y agitar a entre -10 °C y la temperatura ambiente durante 3 horas. Después se hidroliza el acetato de C1 de EDC1, dando el alcohol, EDC2, haciendo reaccionar el EDC1 con bencilamina [BnNH²] y tetrahidrofurano, y mezclando a -10 °C durante 3 horas. A continuación el hidroxilo de C1 de EDC2 se hace reaccionar con tricloroacetonitrilo y diazabicicloundecano, con mezclado a temperatura ambiente durante 2 horas, dando el derivado de tricloroacetamidato (TCA) EDC3 adecuado para el acoplamiento.

Reactivos: 4. TES-Tf, DCM, de -15 a -20 °C, 3 h; 5. NH2NH2.Ac, NH2NH2.H20, MeOH, de -25 a -20 °C, 3 h; 6. DHP, CSA, DCE, de 10 a 15 °C a TA, 3 h

En la Parte 2 de la síntesis del Pentámetro EDCBA, el Dímero BA, que tiene un grupo hidroxilo de C4 libre, se acopla con el trisacárido EDC3 en presencia de trietilsililtriflato a -30 °C mezclando durante 2 horas, lo que da el pentasacárido EDCBA1. El éster levulínico de C2 del azúcar D de EDCBA1 se hidroliza con una mezcla de agentes desprotectores, hidrato de hidrazina y acetato de hidrazina, y agitando a temperatura ambiente durante 3 horas, dando el producto intermedio EDCBA2, que contiene el hidroxilo de C2. A continuación, se alquila el resto hidroxilo de C2 del azúcar D de EDCBA2 con dihidropirano (DHP) en presencia de ácido alcanforsulfónico (CSA) y tetrahidrofurano mezclando a temperatura ambiente durante 3 horas, dando el derivado de éter tetrahidropiranílico (THP), Pentámero EDCBA.

Síntesis de fondaparinux

El fondaparinux se preparó siguiendo el siguiente procedimiento:

FONDAPAR NUX SOD CO ^{Hi'irvUN el 1 nO}

Peso mo .: 1728.09

Reactivos: 4. NaOH, H202, LiOH, Dioxano, THF TA, de 34 h a 68 h; 2. Py.S03, DMF, Piridina, 50 °C, 2 h purificación con CG-161; 3. 10 % de Pd/C, H2, MeOH, H20, 60-65 °C, 60 h; 4. (a) Py.S03, NaOH, NH4OAc, TA, 12 h (b) intercambio lomeo de NH4OAc/NaCI HiQ, desalinizacion en Sephadex; (c) tratamiento con carbón vegetal y

(d) intercambio lomeo de NaCI HiQ, desalineación en Sephadex

Se hidrolizaron los restos éster del Pentámero EDCBA con hidróxido de sodio y litio en presencia de peróxido de hidrógeno en dioxano mezclando a temperatura ambiente durante 16 horas, dando el producto intermedio pentasacárido PA1. Se sulfataron los cinco restos hidroxilo del PA1 mediante un complejo de trióxido de azufre-piridina en dimetilformamida, mezclando a 60 °C durante 2 horas y, a continuación, purificando mediante cromatografía en columna (CG-161), dando el pentasacárido pentasulfatado PA2. A continuación, se hidrogenó el producto intermedio PA2 para reducir las tres azidas de los azúcares E, C y A en aminas y realizar la desprotección reductora de los cinco éteres bencílicos a sus correspondientes grupos hidroxilo a fin de formar el producto intermedio PA3. Esta transformación ocurre al hacer reaccionar PA2 con 10 % de catalizador de paladio/carbono con hidrógeno gaseoso durante 72 horas. A continuación, se sulfataron las tres aminas de PA3 mediante el complejo de trióxido de azufre piridina en hidróxido de sodio y acetato de amonio, dejando que la reacción prosiguiera durante 12 horas. El procedimiento de tratamiento ácido de la reacción elimina el grupo THP, proporcionando fondaparinux en bruto que se purifica y posteriormente se convierte en su forma de sal. La mezcla en bruto se purificó mediante una columna cromatográfica de intercambio iónico (resina HiQ) seguida de desalinización con una resina de exclusión por tamaño o filtración en gel (Biorad Sephadex G25), dando el PA final, fondaparinux sódico.

Procedimientos experimentales

Preparación de IntDI - Bromación de pentaacetato de glucosa

A un matraz de 500 ml, se añadieron 50 g de pentaacetato de glucosa (C⁶H²²O¹¹) y 80 ml de cloruro de metileno. La mezcla se agitó en un baño de agua con hielo durante 20 min. Se añadió HBr en HOAc (33 %, 50 ml) a la mezcla de reacción. Después de agitar durante 2,5 h, se añadieron a la mezcla otros 5 ml de HBr. Tras otros 30 minutos, se añadieron 600 ml de cloruro de metileno a la mezcla. Se lavó la mezcla orgánica con agua fría (200 ml x 2), solución saturada de NaHCO3(200 ml x 2), agua (200 ml) y salmuera (200 ml x 2). Se desecó la capa orgánica sobre Na2SO4 y la mezcla se evaporó a temperatura ambiente, dando un sólido blanco como producto final, derivado de bromuro, IntD1 (-95 % de rendimiento). C14H1gBrOg, Rf de la TLC = 0,49, SO ², 40 % de acetato de etilo/60 % de hexanos; Masa Exacta 410,02.

Preparación de IntD2 mediante ciclación reductiva

A una mezcla agitada de bromuro IntD1 (105 g), yoduro de tetrabutilamonio (60 g, 162 mmol) y tamices moleculares de 3 A activados en acetonitrilo anhidro (2 l), se añadió NaBH4 sólido (30 g, 793 mmol). La reacción se calentó a 40 °C durante una noche. A continuación, la mezcla se diluyó con diclorometano (2 l) y se filtró a través de Celite®. Después de la evaporación, el residuo se disolvió en 500 ml de acetato de etilo. Se filtró el sólido blanco (Bu4NI o Bu4NBr). La solución de acetato de etilo se evaporó y se purificó mediante cromatografía sobre gel de sílice usando acetato de etilo y hexano como eluyente, dando el triacetato de acetal IntD2 (-60-70 % de rendimiento). Rf de la TLC = 0,36, SiO² en 40 % de acetato de etilo/60 % de hexanos.

Preparación de IntD3 mediante desacetilación

A un matraz de 1000 ml, se añadió triacetato IntD2 (55 g) y 500 ml de metanol. Después de agitar 30 min, se añadió el reactivo NaOMe (2,7 g, 0,3 eq) y la reacción se agitó durante la noche. Se añadió más NaOMe (0,9 g) a la mezcla de reacción y se calentó hasta 50 °C durante 3 horas. La mezcla se neutralizó con resina catiónica Dowex 50W x 8, se filtró y se evaporó. El residuo se purificó mediante columna de gel de sílice, dando 24 g de trihidroxi-acetal lntD3.

Rf de la TLC = 0,36 en SO ², 10 % de metanol/90 % de acetato de etilo.

Preparación de IntD4 mediante la formación de bencilideno

A un matraz de 1000 ml, se añadió el compuesto trihidroxi IntD3 (76 g) y dimetilacetato de benzaldehído (73 g, 1,3 eq). La mezcla se agitó durante 10 min, tras lo que se añadió ácido D(+)-alcanforsulfónico (8,5 g, CSA). La mezcla se calentó a 50 °C durante dos horas. A continuación, se transfirió la mezcla de reacción a un embudo de decantación que contenía acetato de etilo (1,8 l) y solución de bicarbonato sódico (600 ml). Después de la separación, se lavó la capa orgánica con una segunda solución de bicarbonato de sodio (300 ml) y salmuera (800 ml). Se combinaron las dos soluciones de carbonato de sodio y se extrajeron con acetato de etilo (600 ml x 2). La mezcla orgánica se evaporó y se purificó en una columna de gel de sílice, dando el producto de bencilideno IntD4 (77 g, 71 % de rendimiento). Rf de la TLC = 0,47, SiO² en 40 % de acetato de etilo/60 % de hexanos.

Preparación de IntD5 mediante bencilación

A un matraz de 500 ml, se añadió compuesto de acetal de bencilideno IntD4 (21 g), en 70 ml de THF. A otro matraz (1000 ml), se añadió NaH (2 eq). A continuación, se transfirió la solución de IntD4 a la solución de NaH a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó durante 30 min, después se añadió bromuro de bencilo (16,1 ml, 1,9 eq) en 30 ml de THF. Después de agitar durante 30 min, se añadió DMF (90 ml) a la mezcla de reacción. El exceso de NaH se neutralizó mediante la adición cuidadosa de ácido acético (8 ml). La mezcla se evaporó y se purificó en una columna de gel de sílice, dando el derivado de bencilo IntD5. (23 g) Rf de la TLC = 0,69, SO ² en 40 % de acetato de etilo/60 % de hexanos.

Preparación de IntD6 mediante desprotección de bencilideno

A un matraz de 500 ml, se añadió el compuesto de bencilideno-acetal IntD5 (20 g) y 250 ml de diclorometano, se enfrió la mezcla de reacción hasta 0 °C mediante un baño de hielo, agua y sal. Se añadió solución acuosa de TFA (80 %, 34 ml) a la mezcla y se agitó durante la noche. La mezcla se evaporó y se purificó en una columna de gel de sílice, dando el derivado dihidroxilado IntD6. (8 g, 52 %). Rf de la TLC = 0,79, SO ² en 10 % de metanol/90 % de acetato de etilo.

Preparación de IntD7 mediante la oxidación de 6-hidroxilo

A un matraz de 5 l, se añadieron el compuesto dihidroxilado IntD6 (60 g), TEMPO (1,08 g), bromuro de sodio (4,2 g), cloruro de tetrabutilamonio (5,35 g), solución saturada de NaHCO3 (794 ml) y EtOAc (1338 ml). La mezcla se agitó en un baño de agua con hielo durante 30 min. A otro matraz, se añadió una solución de NaOCI (677 ml), solución saturada de NaHCO3 (485 ml) y salmuera (794 ml). Se añadió la segunda mezcla lentamente a la primera mezcla (durante aproximadamente dos horas). La mezcla resultante se agitó durante toda la noche. La mezcla se separó y la capa inorgánica se extrajo con EtOAc (800 ml x 2). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (800 ml). La evaporación de la capa orgánica dio 64 g de producto de ácido carboxílico en bruto IntD7, que se usó en la siguiente etapa sin purificación. Rf de la TLC = 0,04, SiO² en 10 % de metanol/90 % de acetato de etilo.

Preparación del Monómero D mediante la bencilación del ácido carboxílico

A una solución de derivado de ácido carboxílico IntD7 (64 g) en 600 ml de diclorometano, se añadieron alcohol bencílico (30 g) y N-hidroxibenzotriazol (80 g, HOBt). Después de agitar durante 10 min, se añadió lentamente trietilamina (60,2 g). Tras agitar otros 10 min, se añadió lentamente diciclohexilcarbodiimida (60,8 g, DCC) y la mezcla se agitó durante la noche. Se filtró la mezcla de reacción y el disolvente se eliminó a presión reducida, seguido de una cromatografía sobre gel de sílice, proporcionando 60,8 g (75 %, en dos etapas) de producto, Monómero D. Rf de la TLC = 0,51, SiO² en 40 % de acetato de etilo/60 % de hexanos.

Síntesis del Dímero BA - Etapa 1. Preparación de BMod1, levulinación del Monómero B1

Se cargó un reactor de 100 l con 7,207 kg de Monómero B1 (21,3 moles, 1 eq), y 20 l de tetrahidrofurano (THF) seco y se agitó hasta que se disolvieron. Cuando se volvió transparente, se purgó con nitrógeno, y se cargaron 260 g de dimetilaminopiridina (DMAP, 2,13 moles, 0,1 eq) y 11,05 l de diisopropiletilamina (DIPEA, 8,275 kg, 63,9 moles, 3 eq) en el reactor. Se enfrió el reactor hasta 10-15 °C y se transfirieron 13,7 kg de anhídrido levulínico (63,9 moles, 3 eq) al reactor. Una vez completada la adición, se calentó la reacción hasta la temperatura ambiente y se agitó durante toda la noche o de 12 a 16 horas. La finalización de la reacción se controló mediante TLC (acetato de etilo/hexano a 40:60) y HPLC. Una vez completada la reacción, se transfirieron 20 l de ácido cítrico al 10 %, 10 l de agua y 25 l de acetato de etilo al reactor. La mezcla se agitó durante 30 min y se separaron las capas. La capa orgánica (capa EtOAc) se extrajo con 20 l de agua, 20 l de solución de bicarbonato de sodio al 5 % y 20 l de solución de salmuera al 25 %. Se desecó la solución de acetato de etilo en 4-6 kg de sulfato de sodio anhidro. La solución se evaporó hasta obtenerse un jarabe (temp. del baño 40 °C) y se desecó durante la noche. El rendimiento del jarabe aislado de BMod1 fue del 100 %.

Síntesis del Dímero BA - Etapa 2. Preparación de BMod2, Hidrólisis de TFA de BMod1

Se cargó un reactor de 100 l con 9296 kg de Monómero B1 de 4-Lev (BMod1) (21,3 moles, 1 eq). Se puso el enfriador del reactor a < 5 °C y se inició la agitación, tras lo que se transfirieron 17,6 l de solución de TFA al 90 % (TFA, 213 moles, 10 eq) al reactor. Una vez completada la adición, la reacción se controló mediante TLC y HPLC. La reacción tardó aproximadamente 2-3 horas en completarse. Una vez completada la reacción, se enfrió el reactor y se transfirieron 26,72 l de trietilamina (TEA, 19,4 kg, 191,7 moles, 0,9 eq) al reactor. Se transfirieron al reactor 20 l más de agua y 20 l más de acetato de etilo. Esto se agitó durante 30 min y las capas se separaron. La capa orgánica se extrajo (capa de EtOAc) con 20 l de bicarbonato de sodio al 5 % y 20 l de soluciones de salmuera al 25 %. Se desecó la solución de acetato de etilo en 4-6 kg de sulfato de sodio anhidro. La solución se evaporó hasta obtenerse un jarabe (temp. del baño 40 °C). El producto en bruto se purificó en una columna de sílice de 200 l usando 140-200 l de cada uno de los siguientes perfiles de gradiente: 50:50, 80:20 (EtOAc/heptano), 100 % de EtOAc, 5:95, 10:90 (MeOH/EtOAc). Se combinaron las fracciones puras y se evaporaron hasta obtenerse un jarabe. El rendimiento del jarabe aislado, BMod2 fue del 90 %.

Síntesis del Dímero BA - Etapa 3. Preparación de BMod3, sililación de BMod2

Se cargó un reactor de 100 l con 6.755 kg de Monómero B1 de 4-Lev-1,2-DiOH (BMod2) (17,04 moles, 1 eq), 2328 g de imidazol (34,2 moles, 2 eq) y 30 l de diclorometano. El reactor se purgó con nitrógeno y se enfrió hasta -20 °C, a continuación, se transfirieron al reactor 5,22 l de ferc-butildifenilcloro-silano (TBDPS-CI, 5,607 kg, 20,4 mol, 1,2 eq). Una vez completada la adición, se apagó el enfriador y se dejó calentar la reacción hasta la temperatura ambiente. La reacción se controló mediante TLC (40 % de acetato de etilo/hexano) y HPLC. La reacción tardó aproximadamente 3 horas en completarse. Una vez completada la reacción, Se transfirieron 20 l de agua y 10 l de DCM al reactor y se agitó durante 30 min, tras lo que se separaron las capas. La capa orgánica (capa DCM) se extrajo con 20 l de agua y 20 l de soluciones de salmuera al 25 %. Se desecó la solución de diclorometano en 4-6 kg de sulfato de sodio anhidro. La solución se evaporó hasta obtenerse un jarabe (temp. del baño 40 °C). El rendimiento de BMod3 fue de aproximadamente el 80 %.

Síntesis del Dímero BA - Etapa 4. Preparación de BMod4, benzoilación

Se cargó un reactor de 100 l con 8,113 kg de Monómero B1 de 4-Lev-1-Si-2-OH (BMod3) (12,78 moles, 1 eq), 9 l de piridina y 30 l de diclorometano. El reactor se purgó con nitrógeno y se enfrió hasta -20 °C, tras lo que se transfirieron al reactor 1,78 l de cloruro de benzoílo (2155 g, 15,34 moles, 1,2 equivalentes). Una vez completada la adición, la reacción se dejó calentar hasta la temperatura ambiente. La reacción se controló mediante TLC (40 % de acetato de etilo/heptano) y HPLC. La reacción tardó aproximadamente 3 horas en completarse. Una vez completada la reacción, Se transfirieron 20 l de agua y 10 l de DCM al reactor y se agitó durante 30 min, tras lo que se separaron las capas. La capa orgánica (capa DCM) se extrajo con 20 l de agua y 20 l de soluciones de salmuera al 25 %. Se desecó la solución de DCM en 4-6 kg de sulfato de sodio anhidro. La solución se evaporó hasta obtenerse un jarabe (temp. del baño 40 °C). Se obtuvo BMod4 aislado en forma de jarabe con un rendimiento del 91 %.

Síntesis del Dímero BA - Etapa 5. Preparación de BMod5, desilación

Se cargó un reactor de 100 l con 8,601 kg de Monómero B1 de 4-Lev-1-Si-2-Bz (BMod4) (11,64 moles, 1 eq) en 30 l de tetrahidrofurano. El reactor se purgó con nitrógeno y se enfrió hasta 0 °C, tras lo que se transfirieron al reactor 5,49 kg de fluoruro de tetrabutilamonio (TBAF,17,4 moles, 1,5 eq) y 996 ml (1045 g, 17,4 moles, 1,5 eq) de ácido acético glacial. Una vez completada la adición, la reacción se agitó a temperatura ambiente. La reacción se controló mediante TLC (acetato de etilo/hexano a 40:60) y HPLC. La reacción tardó aproximadamente 6 horas en completarse. Una vez completada la reacción, Se transfirieron 20 l de agua y 10 l de DCM al reactor y se agitó durante 30 min, tras lo que se separaron las capas. La capa orgánica (capa DCM) se extrajo con 20 l de agua y 20 l de soluciones de salmuera al 25 %. Se desecó la solución de diclorometano en 4-6 kg de sulfato de sodio anhidro. La solución se evaporó hasta obtenerse un jarabe (temp. del baño 40 °C). El producto en bruto se purificó en una columna de sílice de 200 l usando 140-200 l de cada uno de los siguientes perfiles de gradiente: 10:90, 20:80, 30:70, 40:60, 50:50, 60:40, 70:30, 80:20 (EtOAc/heptano) y 200 l de EtOAc al 100 %. Se combinaron las fracciones puras y se evaporaron hasta obtenerse un jarabe. El producto intermedio BMod5 se aisló en forma de un jarabe con un rendimiento del 91 %.

Síntesis del Dímero BA - Etapa 6. Preparación de BMod6, formación de TCA

Se cargó un reactor de 100 l con 5,238 kg de Monómero B1 de 4-Lev-1-OH-2-Bz (BMod5) (10,44 moles, 1 eq) en 30 l de DCM. El reactor se purgó con nitrógeno y se enfrió hasta 10-15 °C, tras lo que se transfirieron 780 ml de diazabiciclo-undeceno (DBU, 795 g, 5,22 moles, 0,5 eq) y 10,47 l de tricloroacetonitrilo (TCA, 15,08 kg, 104,4 moles, 10 eq) al reactor. Se siguió agitando y la reacción se mantuvo en atmósfera de nitrógeno. Después de la adición del reactivo, la reacción se dejó calentar hasta la temperatura ambiente. La reacción se controló mediante HPLC y TLC (40:60 de acetato de etilo/heptano). La reacción tardó aproximadamente 2 horas en completarse. Una vez completada la reacción, Se transfirieron al reactor 20 l de agua y 10 l de diclorometano. Esto se agitó durante 30 min y las capas se separaron. La capa orgánica (capa de DCM) se separó con 20 l de agua y 20 l de soluciones de salmuera al 25 %. Se desecó la solución de diclorometano en 4-6 kg de sulfato de sodio anhidro. La solución se evaporó hasta obtenerse un jarabe (temp. del baño 40 °C). El producto en bruto se purificó en una columna de sílice de 200 l usando 140-200 l de cada uno de los siguientes perfiles de gradiente: 10:90, 20:80, 30:70, 40:60 y 50:50 (EtOAc/heptano). Se combinaron las fracciones puras y se evaporaron hasta obtenerse un jarabe. El rendimiento aislado de BMod6 fue del 73 %.

Síntesis del Dímero BA - Etapa 7. Preparación de AMod1, acetilación del monómero A2

Se cargó un reactor de 100 l con 6,772 kg de Monómero A2 (17,04 moles, 1 eq), 32,2 l (34,8 kg, 340,8 moles, 20 eq) de anhídrido acético y 32 l de diclorometano. El reactor se purgó con nitrógeno y se enfrió hasta -20 °C. Cuando la temperatura alcanzó los -20 °C, se transfirieron 3,24 l (3,63 kg, 25,68 moles, 1,5 eq) de eterato de trifluoruro de boro (BF3.Et2O) al reactor. Tras la adición completa de eterato de trifluoruro de boro, la reacción se dejó calentar hasta la temperatura ambiente. La finalización de la reacción se controló mediante HPLC y TLC (acetato de etilo/heptano a 30:70). La reacción tardó aproximadamente 3-5 horas en completarse. Una vez completada la reacción, se realizó la extracción con 3 x 15 l de bicarbonato de sodio al 10 % y 20 l de agua. La fase orgánica (DCM) se evaporó, obteniéndose un jarabe (temp. del baño 40 °C) y se dejó secar durante la noche. El jarabe se purificó en una columna de sílice de 200 l usando 140 l de cada uno de los siguientes perfiles de gradiente: 5:95, 10:90, 20:80, 30:70, 40:60 y 50:50 (EtOAc/heptano). Se combinaron las fracciones puras y se evaporaron hasta obtenerse un jarabe. El rendimiento aislado de AMod1 fue del 83 %.

Síntesis del Dímero BA - Etapa 8. Preparación de AMod3, 1 - Metilación de AMod1

Se cargó un reactor de 100 l con 5891 g de Monómero A2 de acetilo (AMod1) (13,98 moles, 1 eq) en 32 l de diclorometano. El reactor se purgó con nitrógeno y se enfrió hasta 0 °C, tras lo que se transfirieron 2598 ml de yoduro de trimetilsililo (TMSI, 3636 g, 18 moles, 1,3 eq) al reactor. Una vez completada la adición, la reacción se dejó calentar hasta la temperatura ambiente. La finalización de la reacción se controló mediante HPLC y TLC (acetato de etilo/heptano a 30:70). La reacción tardó aproximadamente 2-4 horas en completarse. Una vez completada la reacción, la mezcla se diluyó con 20 l de tolueno. La solución se evaporó hasta obtenerse un jarabe y se evaporó junto con 3 x 6 l de tolueno. El reactor se cargó con 36 l de diclorometano (DCM), 3,2 kg de Tamices Moleculares 4^a secos, 15505 g (42 moles, 3 eq) de yoduro de tetrabutilamonio (TBAI) y 9 l de metanol seco. Esto se agitó hasta que el TBAI se disolvió por completo, tras lo que se transfirieron 3630 ml de diisopropil-etilamina (DIPEA, 2712 g, 21 moles, 1,5 eq) al reactor en una porción. La finalización de la reacción se controló mediante HPLC y TLC (acetato de etilo/heptano a 30:70). La reacción tardó aproximadamente 16 horas en completarse. Una vez completada la reacción, se eliminaron los tamices moleculares por filtración. Se añadieron 20 l de EtOAc y se extrajeron con 4 x 20 l de tiosulfato de sodio al 25 % y 20 l de soluciones de NaCl al 10 %. La capa orgánica se separó y se desecó con 8-12 kg de sulfato sódico anhidro. La solución se evaporó hasta obtenerse un jarabe (temp. del baño 40 °C). El producto en bruto se purificó en una columna de sílice de 200 l usando 140-200 l de cada uno de los siguientes perfiles de gradiente: 5:95, 10:90, 20:80, 30:70 y 40:60 (EtOAc/heptano). Se combinaron las fracciones puras y se evaporaron, dando producto intermedio AMod3 en forma de un jarabe. El rendimiento aislado fue del 75 %.

Síntesis del Dímero BA - Etapa 9. Preparación de AMod4, desacetilación de AMod3

Se cargó un reactor de 100 l con 4128 g de Monómero A2 de 1-metil 4,6-diacetilo (AMod3) (10,5 moles, 1 eq) y 18 l de metanol seco y se disolvieron, tras lo que se transfirieron al reactor 113,4 g (2,1 moles, 0,2 eq) de metóxido de sodio. La reacción se agitó a temperatura ambiente y se controló mediante TLC (40 % de acetato de etilo/hexano) y HPLC. La reacción tardó aproximadamente 2-4 horas en completarse. Una vez completada la reacción, Se añadió resina catiónica Dowex 50W x 8 en pequeñas porciones hasta que el pH alcanzó 6-8. La resina Dowex 50W x 8 se filtró y la solución se evaporó hasta obtenerse un jarabe (temp. del baño 40 °C). El jarabe se diluyó con 10 l de acetato de etilo y se extrajo con 20 l de salmuera y 20 l de agua. Se desecó la solución de acetato de etilo en 4-6 kg de sulfato de sodio anhidro. La solución se evaporó hasta obtenerse un jarabe (temp. del baño 40 °C) y se desecó durante la noche a la misma temperatura. El rendimiento aislado del AMod4 en forma de jarabe fue de aproximadamente el 88 %.

Síntesis del Dímero BA - Etapa 10. Preparación de AMod5, 6-benzoilación

Se cargó un reactor de 100 l con 2858 g de Monómero A2 de Metil-4,6-diOH (AMod4) (9,24 moles, 1 eq) y se evaporó junto con 3 x 10 l de piridina. Cuando se completó la evaporación, se transfirieron 15 l de diclorometano y 6 l de piridina al reactor y se disolvieron. El reactor se purgó con nitrógeno y se enfrió hasta -40 °C. El reactor se cargó con 1044 ml (1299 g, 9,24 moles, 1 eq) de cloruro de benzoílo. Una vez completada la adición, la reacción se dejó calentar hasta -10 °C durante un período de 2 horas. La reacción se controló mediante TLC (acetato de etilo al 60 %/hexano). Una vez completada la reacción, la solución se evaporó hasta obtenerse un jarabe (temp. del baño 40 °C). Este se evaporó junto con 3 x 15 l de tolueno. El jarabe se diluyó con 40 l de acetato de etilo. La extracción se llevó a cabo con 20 l de agua y 20 l de solución de salmuera. Se desecó la solución de acetato de etilo en 4-6 kg de sulfato de sodio anhidro. La solución se evaporó hasta obtenerse un jarabe (temp. del baño 40 °C). El producto en bruto se purificó en una columna de sílice de 200 l usando 140-200 l de cada uno de los siguientes perfiles de gradiente: 5:95, 10:90, 20:80, 25:70 y 30:60 (EtOAc/heptano). Se combinaron las fracciones puras y se evaporaron hasta obtenerse un jarabe. El rendimiento aislado del producto intermedio AMod5 fue del 84 %.

Síntesis del Dímero BA - Etapa 11. Preparación de BA1, acoplamiento de Amod5 con BMod6

Se cargó un reactor de 100 l con 3054 g de Monómero A2 de metil-4-hidroxi (AMod5) de la etapa 10 (7,38 moles, 1 eq) y 4764 g de Monómero B1 de 4-Lev-1-TCA (BMod6) de la etapa 6 (7,38 moles, 1 eq). Los monómeros combinados se disolvieron en 20 l de tolueno y se evaporaron conjuntamente a 40 °C. La evaporación conjunta se repitió con 2 x 20 l más de tolueno, tras lo que se transfirieron 30 l de diclorometano (DCM) al reactor y se disolvieron. El reactor se purgó con nitrógeno y se enfrió por debajo de -20 °C. Cuando la temperatura estaba entre -20 °C y -40 °C, se transfirieron 1572 g (1404 ml, 11,12 moles, 1,5 eq) de eterato de trifluoruro de boro (BF3.Et2O) al reactor. Tras la adición completa de eterato de trifluoruro de boro, se dejó calentar la reacción hasta 0 °C y se siguió agitando. La finalización de la reacción se controló mediante HPLC y TLC (acetato de etilo/heptano a 40:70). La reacción tardó de 3 a 4 horas en completarse. Una vez completada la reacción, se transfirieron 926 ml (672 g, 6,64 moles, 0,9 eq) de trietilamina (TEA) a la mezcla y se agitó durante 30 minutos más, tras lo que se transfirieron al reactor 20 l de agua y 10 l de diclorometano. La solución se agitó durante 30 min y las capas se separaron. La capa orgánica (capa de DCM) se separó con 2 x 20 l de agua y 20 l de solución de cloruro de sodio/bicarbonato de sodio al 25 % 4:1. Se desecó la solución de diclorometano en 4-6 kg de sulfato de sodio anhidro. La solución se evaporó hasta obtenerse un jarabe (temp. del baño 40 °C) y se utilizó en la siguiente etapa. El rendimiento aislado del disacárido BA1 fue de aproximadamente el 72 %.

Síntesis del Dímero BA - Etapa 12, eliminación de levulinato (met¡l[(met¡l-2-Obenzo¡l-3-O-benc¡l-n-L-Idopiranosiluronato)-(1 n4)-2-az¡do-6-O-benzo¡l-3-O-benc¡l]-2-desox¡-n □ D-glucop¡ranós¡do)

Se cargó un reactor de 100 l con 4,104 kg de dímero BA de 4-Lev (BA1) (4,56 moles, 1 eq) en 20 l de THF. El reactor se purgó con nitrógeno y se enfrió hasta una temperatura de -20 a -25 °C, tras lo que se transfirieron al reactor 896 ml de hidrato de hidrazina (923 g, 18,24 moles, 4 equivalentes). Se siguió agitando y la reacción se controló mediante TLC (40 % de acetato de etilo/heptano) y HPLC. La reacción tardó aproximadamente 2-3 horas en completarse, tras lo que se transfirieron 20 l de ácido cítrico al 10 % al reactor 10 l de agua y 25 l de acetato de etilo. Esto se agitó durante 30 min y las capas se separaron. La capa orgánica (capa de ETOAc) se extrajo con 20 l de soluciones de salmuera al 25 %. Se desecó la solución de acetato de etilo en 4-6 kg de sulfato de sodio anhidro. La solución se evaporó hasta obtenerse un jarabe (temp. del baño 40 °C). El producto en bruto se purificó en una columna de sílice de 200 l usando 140-200 l de cada uno de los siguientes perfiles de gradiente: 10:90, 20:80, 30:70, 40:60 y 50:50 (EtOAc/heptano). Se combinaron las fracciones puras y se evaporaron hasta sequedad. El rendimiento aislado del Dímero BA fue del 82 %. Fórmula: C⁴²H⁴³N³O¹³; Peso mol.: 797,80.

Síntesis del Trímero EDC - Etapa 1. Preparación de EModl, acetilación

Se cargó un reactor de 100 l con 16533 g de Monómero E (45 moles, 1 eq), 21,25 l de anhídrido acético (225 moles, 5 eq) y 60 l de diclorometano. El reactor se purgó con nitrógeno y se enfrió hasta -10 °C. Cuando la temperatura llegó a -10 °C, se transfirieron 1,14 l (1277 g) de eterato de trifluoruro de boro (BF3.Et2O, 9,0 moles, 0,2 eq) al reactor. Una vez completada la adición de eterato de trifluoruro de boro, la reacción se dejó calentar hasta la temperatura ambiente. La finalización de la reacción se controló mediante TLC (acetato de etilo/heptano a 30:70) y HPLC. La reacción tardó aproximadamente 3-6 horas en completarse. Una vez completada la reacción, la mezcla se extrajo con 3 x 50 l de bicarbonato de sodio al 10 % y 50 l de agua. La fase orgánica (DCM) se evaporó, obteniéndose un jarabe (temp. del baño 40 °C) y se dejó secar durante la noche. El rendimiento aislado de EMod1 fue del 97 %.

Síntesis del Trímero EDC - Etapa 2. Preparación de EMod2, desacetilación de azidoglucosa

Se cargó un reactor de 100 l con 21016 g de Monómero E de 1,6-diacetilo (EMod1) (45 moles, 1 eq), 5434 g de acetato de hidrazina (NH²NH².HOAc, 24,75 moles, 0,55 eq) y 50 l de DMF (dimetilformamida). La solución se agitó a temperatura ambiente y la reacción se controló mediante TLC (30 % de acetato de etilo/hexano) y HPLC. La reacción tardó aproximadamente 2-4 horas en completarse. Una vez completada la reacción, se transfirieron al reactor 50 l de diclorometano y 40 l de agua. Se agitó durante 30 minutos y se separaron las capas. Esto se extrajo con 40 l más de agua y la fase orgánica se desecó en 6-8 kg de sulfato de sodio anhidro. La solución se evaporó hasta obtenerse un jarabe (temp. del baño 40 °C) y se desecó durante la noche a la misma temperatura. El jarabe se purificó en una columna de sílice de 200 l usando 140-200 l de cada uno de los siguientes perfiles de gradiente: 20:80, 30:70, 40:60 y 50:50 (EtOAc/heptano). Se combinaron las fracciones puras y se evaporaron hasta obtenerse un jarabe. El rendimiento aislado del producto intermedio EMod2 fue del 100 %.

Síntesis del Trímero EDC - Etapa 3. Preparación de EMod3, Formación de 1-TCA

Se cargó un reactor de 100 l con 12752 g de Monómero E de 1-hidroxi (EMod2) (30 moles, 1 eq) en 40 l de diclorometano. Se purgó el reactor con nitrógeno y se inició la agitación, tras lo que se transfirieron 2.25 l de DBU (15 moles, 0,5 eq) y 15,13 l de tricloroacetonitrilo (150,9 moles, 5,03 eq) al reactor. Se siguió agitando y la reacción se mantuvo bajo nitrógeno. Después de la adición del reactivo, la reacción se dejó calentar hasta la temperatura ambiente. La reacción se controló mediante TLC (acetato de etilo/heptano a 30:70) y HPLC. La reacción tardó aproximadamente 2-3 horas en completarse. Una vez completada la reacción, Se cargaron en el reactor 40 l de agua y 20 l de DCM. Esto se agitó durante 30 min y las capas se separaron. La capa orgánica (capa de DCM) se extrajo con 40 l de agua y la solución de DCM se desecó en 6-8 kg de sulfato de sodio anhidro. La solución se evaporó hasta obtenerse un jarabe (temp. del baño 40 °C). El producto en bruto se purificó en una columna de sílice de 200 l usando 140-200 l de cada uno de los siguientes perfiles de gradiente: 10:90 (DCM/EtOAc/heptano), 20:5:75 (DCM/EtOAc/heptano) y 20:10:70 (DCM/EtOAc/heptano). Se combinaron las fracciones puras y se evaporaron, dando el producto intermedio EMod3 en forma de un jarabe. El rendimiento aislado fue del 53 %.

Síntesis del Trímero EDC - Etapa 4. Preparación de Dímero ED, acoplamiento de E-TCA con Monómero D

Se cargó un reactor de 100 l con 10471 g de Monómero E de 6-Acetil-1-TCA (EMod3) (18,3 moles, 1 eq., FW: 571,8) y 6594 g de Monómero D (16,47 moles, 0,9 eq., FW: 400,4). Los monómeros combinados se disolvieron en 20 l de tolueno y se evaporaron conjuntamente a 40 °C. Esto se repitió con la evaporación junto con 2 x 20 l más de tolueno, tras lo que se transfirieron al reactor 60 l de diclorometano (DCM) y se disolvieron. El reactor se purgó con nitrógeno y se enfrió hasta -40 °C. Cuando la temperatura estaba entre -30 °C y -40 °C, se transfirieron al reactor 2423 g (2071 ml, 9,17 moles, 0,5 eq) de triflato de TES. Una vez completada la adición del triflato de TES, se dejó calentar la reacción y se siguió agitando. La finalización de la reacción se controló mediante HPLC y TLC (acetato de etilo/heptano a 35:65). La reacción tardó de 2 a 3 horas en completarse. Una vez completada la reacción, se transfirieron 2040 ml de trietilamina (TEA, 1481 g, 0,8 eq) al reactor y se agitó durante 30 minutos más. La capa orgánica (capa de DCM) se extrajo con 2 x 20 l de solución de cloruro de sodio/bicarbonato de sodio al 25 % (4:1). La solución de diclorometano se desecó en 6-8 kg de sulfato de sodio anhidro. El jarabe se purificó en una columna de sílice de 200 l usando 140­ 200 l de cada uno de los siguientes perfiles de gradiente: 15:85, 20:80, 25:75, 30:70 y 35:65 (EtOAc/heptano). Se combinaron las fracciones puras y se evaporaron hasta obtenerse un jarabe. El Dímero ED se obtuvo con un rendimiento aislado del 81 %.

Síntesis del Trímero EDC - Etapa 5. Preparación de TFA de ED1, hidrólisis del dímero ED

Se cargó un reactor de 100 l con 7,5 kg de dímero ED (9,26 moles, 1 eq). El reactor se enfrió hasta < 5 °C y se transfirieron 30,66 l de una solución de TFA al 90 % (TFA, 370,4 moles, 40 eq) al reactor. Una vez completada la adición, la reacción se dejó calentar hasta la temperatura ambiente. La reacción se controló mediante TLC (acetato de etilo/hexanos a 40:60) y HPLC. La reacción tardó aproximadamente 3-4 horas en completarse. Una vez completada la reacción, se enfrió y se transfirieron 51,6 l de trietilamina (TEA, 37,5 kg, 370,4 moles) al reactor, tras lo que se transfirieron al reactor 20 l de agua y 20 l de acetato de etilo. Esto se agitó durante 30 min y las capas se separaron. La capa orgánica (capa de EtOAc) se extrajo con 20 l de bicarbonato de sodio al 5 % y 20 l de soluciones de salmuera al 25 %. Se desecó la solución de acetato de etilo en 4-6 kg de sulfato de sodio anhidro. La solución se evaporó hasta obtenerse un jarabe (temp. del baño 40 °C). El producto en bruto se purificó en una columna de sílice de 200 l usando 140-200 l de cada uno de los siguientes perfiles de gradiente: 20:80, 30:70, 40:60, 50:50, 60:40 (EtOAc/heptano). Se combinaron las fracciones puras y se evaporaron hasta obtenerse un jarabe. El rendimiento aislado de ED1 fue de aproximadamente el 70 %.

Síntesis del Trímero EDC - Etapa 6. Preparación de ED2, sililación de ED1

Se cargó un reactor de 100 l con 11000 g de Dímero ED de 1,2-diOH (ED1) (14,03 moles, 1 eq), 1910,5 g de imidazol (28,06 moles, 2 eq) y 30 l de diclorometano. El reactor se purgó con nitrógeno y se enfrió hasta -20 °C, tras lo que se cargaron 3,53 l de butildifenilcloro-silano (TBDPS-Cl, 4,628 kg, 16,835 moles, 1,2 eq) en el reactor. Una vez completada la adición, se apagó el enfriador y se dejó calentar la reacción hasta la temperatura ambiente. La reacción se controló mediante TLC (50 % de acetato de etilo/hexano) y HPLC. La reacción tardó de 4 a 6 horas en completarse. Una vez completada la reacción, se transfirieron 20 l de agua y 10 l de diclorometano al reactor y se agitó durante 30 min y se separaron las capas. La capa orgánica (capa DCM) se extrajo con 20 l de agua y 20 l de soluciones de salmuera al 25 %. Se desecó la solución de diclorometano en 4-6 kg de sulfato de sodio anhidro. La solución se evaporó hasta obtenerse un jarabe (temp. del baño 40 °C). El producto intermedio ED2 se obtuvo con un rendimiento aislado del 75 %.

Síntesis del Trímero EDC - Etapa 7. Preparación de ED3, D-levulinación

Se cargó un reactor de 100 l con 19800 g de Dímero ED de 1-sililo (ED2) (19,37 moles, 1 eq) y 40 l de tetrahidrofurano seco (THF) y se agitó para que se disolvieran. El reactor se purgó con nitrógeno y se transfirieron 237 g de dimetilaminopiridina (DMAP, 1,937 moles, 0,1 eq) y 10,05 l de diisopropiletilamina (DIPEA, 63,9 moles, 3 eq) al reactor. El reactor se enfrió hasta 10-15 °C y se mantuvo bajo una atmósfera de nitrógeno, tras lo que se cargaron en el reactor 12,46 kg de anhídrido levulínico (58,11 moles, 3 eq). Una vez completada la adición, se calentó la reacción hasta la temperatura ambiente y se agitó durante toda la noche o de 12 a 16 horas. La finalización de la reacción se controló mediante TLC (acetato de etilo/hexano a 40:60) y mediante HPLC. se transfirieron 20 l de ácido cítrico al 10 %, 10 l de agua y 25 l de acetato de etilo al reactor. Esto se agitó durante 30 min y las capas se separaron. La capa orgánica (capa EtOAc) se extrajo con 20 l de agua, 20 l de solución de bicarbonato de sodio al 5 % y 20 l de solución de salmuera al 25 %. Se desecó la solución de acetato de etilo en 6-8 kg de sulfato de sodio anhidro. La solución se evaporó hasta obtenerse un jarabe (temp. del baño 40 °C). El rendimiento de ED3 fue del 95 %.

Síntesis del Trímero EDC - Etapa 8. Preparación de ED4, desililación de ED3

Se cargó un reactor de 100 l con 19720 g de Dímero ED de 1-Silil-2-Lev (ED3) (17,6 moles, 1 eq) en 40 l de THF. El reactor se enfrió hasta 0 °C, tras lo que se transfirieron 6903 g de fluoruro de tetrabutilamonio trihidratado (TBAF, 26,4 moles, 1,5 eq) y 1511 ml (26,4 moles, 1,5 eq) de ácido acético glacial al reactor. Una vez completada la adición, se agitó la reacción y se dejó calentar hasta la temperatura ambiente. La reacción se controló mediante TLC (acetato de etilo/hexano a 40:60) y HPLC. La reacción tardó 3 horas en completarse. Una vez completada la reacción, se transfirieron 20 l de agua y 10 l de diclorometano al reactor y se agitó durante 30 min y se separaron las capas. La capa orgánica (capa DCM) se extrajo con 20 l de agua y 20 l de soluciones de salmuera al 25 %. La solución de diclorometano se desecó en 6-8 kg de sulfato de sodio anhidro. La solución se evaporó hasta obtenerse un jarabe (temp. del baño 40 °C). El producto en bruto se purificó mediante una columna de sílice de 200 l usando 140-200 l de cada uno de los siguientes perfiles de gradiente: 10:90, 20:80, 30:70, 40:60, 50:50, 60:40, 70:30, 80:20 (EtOAc/heptano) y 200 l de EtOAc al 100 %. Se combinaron las fracciones puras y se evaporaron, obteniéndose un jarabe que se utilizó en el siguiente etapa. El rendimiento aislado de ED4 fue de aproximadamente el 92 %.

Síntesis del Trímero EDC - Etapa 9. Preparación de ED5, formación de TCA

Se cargó un reactor de 100 l con 14420 g de Dímero ED de 1-OH-2-Lev (ED4) (16,35 moles, 1 eq) en 30 l de diclorometano. Se purgó el reactor con nitrógeno y se comenzó a agitar, tras lo que se transfirieron 1222 ml de diazabicicloundeceno (DBU, 8,175 moles, 0,5 eq) y 23,61 kg de tricloroacetonitrilo (TCA, 163,5 moles, 10 eq) al reactor. Se siguió agitando y la reacción se mantuvo bajo nitrógeno. Después de la adición del reactivo, la reacción se dejó calentar hasta la temperatura ambiente. La reacción se controló mediante HPLC y TLC (40:60 de acetato de etilo/heptano). La reacción tardó aproximadamente 2 horas en completarse. Una vez completada la reacción, Se transfirieron 20 l de agua y 10 l de DCM al reactor y se agitó durante 30 min y se separaron las capas. La capa orgánica (capa DCM) se extrajo con 20 l de agua y 20 l de soluciones de salmuera al 25 %. La solución de diclorometano se desecó en 6-8 kg de sulfato de sodio anhidro. La solución se evaporó hasta obtenerse un jarabe (temp. del baño 40 °C). El producto en bruto se purificó mediante una columna de sílice de 200 l usando 140-200 l de cada uno de los siguientes perfiles de gradiente: 10:90, 20:80, 30:70, 40:60 y 50:50 (EtOAc/heptano). Se combinaron las fracciones puras y se evaporaron, obteniéndose un jarabe que se utilizó en el siguiente etapa. El rendimiento aislado del producto intermedio ED5 fue de aproximadamente el 70 %.

Síntesis del Trímero EDC - Etapa 10. Preparación del Trímero EDC, acoplamiento de ED5 con el Monómero C (6-O-acetil-2-azido-3,4-di-O-bencil-2-desoxi-a-D-glucopiranosil-(1^-4)-bencil(3-O-bencil-2-O-levulinoil)-p-D-glucopiranosiluronato-(1^4)-(3-O-acetil-1,6-anhidro-2-azido)-2-desoxi-a-D-glucopiranosa)

Se cargó un reactor de 100 l con 12780 g de Dímero ED de 2-Lev-1-TCA (ED5) (7,38 moles, 1eq., FW) y 4764 g de Monómero C (7,38 moles, 1 eq). Los monómeros combinados se disolvieron en 20 l de tolueno y se evaporaron conjuntamente a 40 °C. Se repitió la evaporación conjunta con 2 x 20 l más de tolueno, tras lo que se transfirieron 60 l de diclorometano (DCM) al reactor y se disolvieron. El reactor se purgó con nitrógeno y se enfrió hasta -20 °C. Cuando la temperatura estaba entre -20 y -10 °C, se transfirieron al reactor 2962 g (11,2 moles, 0,9 eq) de triflato de TES. Una vez completada la adición de triflato de TES, se dejó calentar la reacción hasta 5 °C y se siguió agitando. La finalización de la reacción se controló mediante HPLC y TLC (acetato de etilo/heptano a 35:65). La reacción tardó de 2 a 3 horas en completarse. Una vez completada la reacción, se transfirieron 1133 g de trietilamina (TEA, 0,9 eq) al reactor y se agitó durante 30 minutos más. La capa orgánica (capa de DCM) se extrajo con 2 x 20 l de solución de cloruro de sodio/bicarbonato de sodio al 25 % (4:1). Se desecó la solución de diclorometano en 6-8 kg de sulfato de sodio anhidro. El jarabe se purificó en una columna de sílice de 200 l usando 140-200 l de cada uno de los siguientes perfiles de gradiente: 15:85, 20:80, 25:75, 30:70 y 35:65 (EtOAc/heptano). Se combinaron las fracciones puras y se evaporaron hasta obtenerse un jarabe. El rendimiento aislado del Trímero EDC fue del 48 %. Fórmula: C⁵⁵H⁶⁰N⁶O¹⁸; Peso mol.: 1093,09. En la Figura 1, se muestra el espectro de RMN de 1H (d6-acetona) del trímero EDC.

Preparación de EDC1 - Etapa 1: apertura del anillo anhidro y acetilación:

6-O-acetil-2-azido-2-desoxi-3,4-di-O-bencil-a-D-glucopiranosil-(1^- 4)-O-(bencil-3-O-bencil-2-O-levulinoil-@-D-glucopiranosiluronato]-(1^4)-O-2-azido-2-desoxi-1,3,6-tri-O-acetil-a-D-glucopiranosa

Se disolvieron 7,0 kg (6,44 moles) de Trímero EDC en 18 l de diclorometano anhidro. Se añadieron 6,57 kg (64,4 moles, 10 eq) de anhídrido acético. La solución se enfrió de -45 a -35 °C y se añadieron lentamente 1,82 kg (12,9 moles, 2 eq) de eterato de trifluoruro de boro. Después de que se completara la adición, la mezcla se calentó hasta 0-10 °C y se mantuvo a esta temperatura durante 3 horas hasta que se completó la reacción mediante TLC y HPLC. La reacción se enfrió hasta -20 °C, se inactivó con cuidado y se extrajo con solución saturada de bicarbonato de sodio (3 x 20 l) mientras se mantenía la temperatura de la mezcla por debajo de 5 °C. La capa orgánica se extrajo con salmuera (1 x 20 l), se desecó sobre sulfato de sodio anhidro y se concentró al vacío, obteniéndose un jarabe. El jarabe resultante de EDC1 (6,74 kg) se utilizó para la etapa 2 sin purificación adicional. En la Figura 2, se muestra el espectro de RMN de 1H (d6-acetona) del trímero EDC-1.

Preparación de EDC2 - Etapa 2: desacetilación:

6-O-acetil-2-azido-2-desoxi-3,4-di-O-bencil-a-D-glucopiranosil-(1^- 4)-O-(bencil-3-O-bencil-2-O-levulinoil-@-D-glucopiranosiluronato]-(1^4)-O-2-azido-2-desoxi-3,6-di-Oacetil-a-D-glucopiranosa

El producto de EDC1 en bruto obtenido de la etapa 1 se disolvió en 27 l de tetrahidrofurano y se enfrió hasta 15-20 °C, tras lo que se añadieron lentamente 6 kg (55,8 moles) de bencilamina mientras se mantenía la temperatura de reacción por debajo de 25 °C. La mezcla de reacción se agitó durante 5-6 horas a 10-15 °C. Al finalizar, la mezcla se diluyó con acetato de etilo, se extrajo y se inactivó con solución de ácido cítrico al 10 % (2 x 20 l) mientras se mantenía la temperatura por debajo de 25 °C. La capa orgánica se extrajo con NaCl al 10 %/bicarbonato de sodio al 1 % (1 x 20 l). La extracción se repitió con agua (1 x 10 l), se desecó sobre sulfato de sodio anhidro y se evaporó al vacío, obteniéndose un jarabe. La separación cromatográfica en columna con gel de sílice produjo 4,21 kg (57 % de rendimiento en 2 etapas) de EDC2 [también conocido como Trímero EDC de 1-hidroxi-6-acetilo]. En la Figura 3, se muestra el espectro de RMN de 1H (d6-acetona) del trímero EDC-2.

Preparación de EDC3 - Etapa 3: formación del derivado de TCA:

6-O-acetil-2-azido-2-desoxi-3,4-di-O-bencil-a-D-glucopiranosil-(1^- 4) -O-(bencil-3-O-bencil-2-O-levulinoil-p-D-glucopiranosiluronato]-(1^-4)-O-2-azido-2-desoxi-3,6-di-O-acetil-1-O-tricloroacetimidoil-a-D-glucopiranosa

Se disolvieron 4,54 kg (3,94 moles) de EDC2 en 20 l de diclorometano. Se añadieron 11,4 kg (78,8 moles, 20 eq) de tricloroacetonitrilo. La solución se enfrió de -15 a -20 °C y se añadieron 300 g (1,97 moles, 0,5 eq) de diazabicicloundeceno. La reacción se dejó calentar hasta 0-10 °C y se agitó durante 2 horas o hasta que se completó la reacción. Tras finalizar, se añadió agua (20 l) y la reacción se extrajo con 10 l más de DCM. La capa orgánica se extrajo con salmuera (1 x 20 l), se desecó sobre sulfato de sodio anhidro y se concentró al vacío, obteniéndose un jarabe. La separación cromatográfica en columna mediante gel de sílice y un gradiente del 20-60 % de acetato de etilo/heptano produjo 3,67 kg (rendimiento del 72 %) del derivado de 1-TCA, EDC3. En la Figura 4, se muestra el espectro de RMN de 1H (d6-acetona) del trímero Ed C-3.

-

Metil-O-6-O-acetil-2-azido-2-desoxi-3,4-di-O-bencil-a-D-glucopiranosil)-(1—-4)-O-[bencil-3-O-bencil-2-O-levulinoil-@-D-glucopiranosiluronato]-(1—-4)-O-2-azido-2-desoxi-3,6-di-O-acetil-a-D-glucopiranosil-(1—4)-O-[metil-2-O-benzoil-3-O-bencil-a-L-lnosiluronato]-(1—-4)-2-azido-6-O-benzoil-3-O-bencil-2-desoxi-a-D-glucopiranósido

Se disolvieron 3,67 kg (2,83 moles) de EDC3 y 3,16 kg (3,96 moles, 1,4 eq) de dímero BA en 7-10 l de tolueno y se evaporaron hasta sequedad. El jarabe resultante se evaporó junto con tolueno (2 x 15 l) para eliminar el agua. El jarabe desecado se disolvió en 20 l de diclorometano anhidro, se transfirió al matraz de reacción y se enfrió hasta -15 a -20 °C. Se añadieron 898 g (3,4 moles, 1,2 eq) de triflato de trietilsililo mientras se mantenía la temperatura por debajo de -5 °C. Una vez completada la adición, se calentó la reacción de inmediato de -5 a 0 °C y se agitó durante 3 horas. La reacción se inactivó añadiendo lentamente 344 g (3,4 moles, 1,2 eq) de trietilamina. Se añadió agua (15 l) y la reacción se extrajo con 10 l más de DCM. La capa orgánica se extrajo con una solución del 25 % de cloruro de sodio/bicarbonato de sodio 4:1 (2 x 20 l), se desecó sobre sulfato de sodio anhidro y se evaporó al vacío, obteniéndose un jarabe. El jarabe resultante del pentasacárido, EDCBA1 se utilizó para la etapa 5 sin mayor purificación. En la Figura 5, se muestra el espectro de RMN de 1H (d6-acetona) del pentámero EDCBA-1.

Preparación de EDCBA2 - Etapa 5: Hidrólisis del resto levulinilo:

Metil-O-6-O-acetil-2-azido-2-desoxi-3,4-di-O-bencil-a-D-glucopiranosil)-(1—-4)-O-[bencil-3-O-bencil-3-D-glucopiranosiluronato]-(1—-4)-O-2-azido-2-desoxi-3,6-di-Oacetil-a-D-glucopiranosil)-(1—4)-O-[metil-2-O-benzoil-3-O-bencil--L-ldopiranosiluronato]-(1a4)-2-azido-6-O-benzoil-3-O-bencil-2-desoxi-D-glucopiranósido

Se disolvió el EDCBA1 en bruto de la etapa 4 en 15 l de tetrahidrofurano y se enfrió hasta -20 a -25 °C. Se añadió lentamente una solución que contenía 679 g (13,6 moles) de monohidrato de hidrazina y 171 g (1,94 moles) de acetato de hidrazina en 7 l de metanol mientras se mantenía la temperatura por debajo de -20 °C. Una vez completada la adición, se dejó calentar la mezcla de reacción hasta 0 - 10 °C y se agitó durante varias horas hasta que se completó la reacción, tras lo que se añadieron 20 l de acetato de etilo y la reacción se extrajo con10 % de ácido cítrico (2 x 12 l). La capa orgánica se lavó con agua (1 x 12 l), se desecó sobre sulfato sódico anhidro y se evaporó al vacío, obteniéndose un jarabe. La separación cromatográfica en columna mediante gel de sílice y un gradiente del 10-45 % de acetato de etilo/heptano produjo 2,47 kg (rendimiento del 47,5 % en 2 etapas) de EDCBA2. En la Figura 6, se muestra el espectro de RMN de 1H (d6-acetona) del pentámero EDCBA-2.

Preparación del Pentámero EDCBA - Etapa 6: formación de THP:

Metil-O-6-O-acelil-2-azido-2-desoxi-3,4-di-O-bencil-a-D-glucopiranosil-(1—4)-O-[bencil-3-O-bencil-2-O-tetrahidropiranil-@-D-glucopiranosiluronato]-(1—4)-O-2-azido-2-desoxi-3,6-di-O-acelil-a-D-glucopiranosil-(1—4)-O-[metil-2-O-benzoil-3-O-bencil-a-L-nosiluronato]-(1— — 4)-2-azido-6-O-benzoil-3-O-bencil-2-desoxi-a-D-glucopiranósido

Se disolvieron 2,47 kg (1,35 moles) de EDCBA2 en 23 l de dicloroetano y se enfriaron hasta 10-15 °C, tras lo que se añadieron 1,13 kg (13,5 moles, 10 eq) de dihidropirano y 31,3 g (0,135 moles, 0,1 eq) de ácido alcanforsulfónico. La reacción se dejó calentar hasta 20-25 °C y se agitó durante 4-6 horas hasta que se completó la reacción. Se añadió agua (15 l) y la reacción se extrajo con 10 l más de DCE. La capa orgánica se extrajo con una solución del 25 % de cloruro de sodio/bicarbonato de sodio 4:1 (2 x 20 l), se desecó sobre sulfato de sodio anhidro y se evaporó al vacío, obteniéndose un jarabe. La separación cromatográfica en columna mediante gel de sílice y un gradiente del 10-35 % de acetato de etilo/heptano produjo 2,28 kg (rendimiento del 88,5 %) de Pentámero EDCBA. En la Figura 7, se muestra el espectro de RMN de 1H (d6-acetona) del pentámero EDCBA.

Preparación de API1 - Etapa 1: saponificación:

Sal disódica de metil-O-2-azido-2-desoxi-3,4-di-O-bencil-a-D-glucopiranosil-(1—4)-O-3-O-bencil-2-O-tetrahidropiranil-¡3-D-glucopiranosiluronosil-(1—4)-O-2-azido-2-desoxi-a-D-glucopiranosil-(1—4)-O-3-O-bencil-a-L-Idopiranosiluronosil-(1— 4)-2-azido-3-O-bencil-2-desoxi-a-D-glucopiranósido

A una solución de 2,28 kg (1,19 moles) de Pentámero EDCBA en 27 l de dioxano y 41 l de tetrahidrofurano, se añadieron 45,5 l de solución de hidróxido de litio 0,7 M (31,88 moles, 27 eq) seguidos de 5,33 l de peróxido de hidrógeno al 30 %. La mezcla de reacción se agitó durante 10-20 horas para eliminar los grupos acetilo. A continuación, se añadieron 10 l de solución de hidróxido de sodio 4 N (40 moles, 34 eq). La reacción se dejó en agitación durante 24-48 horas más para hidrolizar completamente los ésteres de bencilo y metilo. Después, la reacción se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se extrajo con solución de salmuera y se desecó con sulfato sódico anhidro. La evaporación del disolvente al vacío dio un jarabe de PA1 [también conocido como EDCBA(OH)5] que se utilizó para la siguiente etapa sin mayor purificación.

Preparación de API2 - Etapa 2: O-sulfonación:

Metil-O-2-azido-2-desoxi-3,4-di-O-bencil-6-O-sulfo-a-D-glucopiranosil-(1—4)-O-3-O-bencil-2-O-tetrahidropiranil-@-D-glucopiranosiluronosil-(1—4)-O-2-azido-2-desoxi-3,6-di-O-sulfo-a-D-glucopiranosil-(1—4)-O-3-O-bencil-2-O-sulfo-a-L-idopiranuronosil-(1—-4) -2-azido-2-desoxi-6-O-sulfo-a-D-glucopiranósido, sal heptasódica

Se disolvió el producto en bruto de PA1 [también conocido como EDCBA (OH)5] obtenido en la etapa 1 en 10 l de dimetilformamida. A esto, se añadió una solución previamente preparada que contenía 10,5 kg (66 moles) de complejo de trióxido de azufre-piridina en 10 l de piridina y 25 l de dimetilformamida. La mezcla de reacción se calentó hasta 50 °C durante un período de 45 min. Después de agitar durante 1,5 horas a 50 °C, la reacción se enfrió hasta 20 °C y se inactivó en 60 l de solución de bicarbonato de sodio al 8 % que se mantuvo a 10 °C. El pH de la mezcla de inactivación se mantuvo a pH 7-9 mediante la adición de solución de bicarbonato de sodio. Una vez transferida toda la mezcla de reacción, se agitó la mezcla de inactivación durante 2 horas más y el pH se mantuvo a pH 7 o superior. Una vez estabilizado el pH de enfriamiento, se diluyó con agua y la mezcla resultante se purificó mediante una columna de HPLC preparativa empaquetada con Amberchrom CG161-M, y se eluyó con 90 %-10 % de solución de bicarbonato de sodio (5 %)/metanol durante 180 min. Las fracciones puras se concentraron al vacío y luego se desalinizaron mediante una resina de exclusión por tamaño o filtración en gel (Biorad) G25, dando 1581 g (rendimiento del 65,5 % en 2 etapas) de PA2 [también conocido como EDCBA(OSO3)5]. En la Figura 8, se muestra el espectro de RMN de 1H (d6-acetona) del pentámero PA-2.

Preparación de API3 - Etapa 3: hidrogenación:

Metil-O-2-amino-2-desoxi-6-O-sulfo-a-D-glucopiranosil-(1^-4)-O-2-O-tetrahidropiranil-@-D-glucopiranosiluronosil-(1^4)-O-2-amino-2-desoxi-3,6-di-O-sulfo-a-D-glucopiranosil-(1^-4)-O-2-O-sulfo-a-L-nuronosil-(1^-4)-2-amino-2-desoxi-6-O-sulfo-a-D-glucopiranósido, sal heptasódica

Se trató una solución de 1581 g (0,78 moles) de pentasacárido O-sulfatado PA2 en 38 l de metanol y 32 l de agua con 30 % en peso de paladio en carbón activo a 689,476 kPa (100 psi) de presión de hidrógeno a 60-65 °C durante 60 horas o hasta completarse la reacción. A continuación, la mezcla se filtró a través de cartuchos filtrantes de 1,0 pm y 0,2 pm, y el disolvente se evaporó al vacío, dando 942 g (80 % de rendimiento) de PA3 [también conocido como EDCBA(OSO3)5(NH2)3]. En la Figura 9, se muestra el espectro de RMN de 1H (d6-acetona) del pentámero PA-3.

Preparación de Fondaparinux Sódico - Etapa 4: N-sulfatación y eliminación de THP:

Metil-O-2-desoxi-6-O-sulfo-2-(sulfoamino)-a-D-glucopiranosil-(1^-4)-O-p-D-glucopiranuronosil-(1^4)-O-2-desoxi-3,6-di-O-sulfo-2-(sulfoamino)-a-D-glucopiranosil-(1^4)-O-2-O-sulfo-a-L-idopiranuronosil-(1^4)-2-desoxi-6-O-sulfo-2-(sulfoamino)-a-D-glucopiranósido, sal decasódica

A una solución de 942 g (0,63 moles) de PA3 en 46 l de agua, se añadieron lentamente 3,25 kg (20,4 moles, 32 eq) de complejo de trióxido de azufre-piridina, manteniendo el pH de la mezcla de reacción a pH 9-9,5 durante la adición mediante solución de hidróxido de sodio 2 N. La reacción se dejó en agitación durante 4-6 horas a pH 9,0-9,5. Una vez completada la reacción, se ajustó el pH a pH 7,0 mediante una solución de acetato de amonio 50 mM a pH 3,5. La mezcla de EDCBA(OSO3)5(NHsO3)3 N-sulfatado resultante se purificó utilizando una columna cromatográfica de intercambio iónico (columna HiQ de 15 cm preparativa de Varian) seguido de la desalinización mediante una resina de exclusión por tamaño o filtración en gel (Biorad G25). A continuación, se trató la mezcla resultante con carbón vegetal y se repitió la purificación mediante intercambio iónico y la desalinización, dando 516 g (47,6 % de rendimiento) de la forma purificada de fondaparinux sódico.

El análisis de fondaparinux sódico identificó la presencia de P1, P2, P3 y P4 en el fondaparinux. P1, P2, P3 y P4 se identificaron mediante métodos analíticos convencionales.

Claims (19)

REIVINDICACIONES

1. Un compuesto de Fórmula I

Ri es levulinilo (Lev);

R² es OAcetilo u -OBenzoílo;

R³ es bencilo;

R⁴ es N³ (azida);

R⁵ es metilo;

R6 es CO²CH²C⁶H⁵; y

R⁷ es -CO²Me, o

Ri es tetrahidropirano (THP);

R² es -OAcetilo u -OBenzoílo;

R3 es bencilo;

R⁴ es N³ (azida);

R5 es metilo;

R6 es -CO²CH²C⁶H⁵; y

R⁷ es -CO²Me; o

Ri es tetrahidropirano (THP);

R² es -O- o una de sus sales;

R3 es bencilo;

R⁴ es N³ (azida);

R5 es metilo; y

R6 y R⁷ se seleccionan independientemente de -CO²- o una de sus sales, o

Ri es tetrahidropirano (THP);

R² es -OSO³" o una de sus sales;

R3 es bencilo;

R⁴ es N³ (azida);

R5 es metilo; y

R6 y R⁷ se seleccionan independientemente de -CO²' o una de sus sales, o

Ri es tetrahidropirano (THP);

R² es -OSO³' o una de sus sales;

R3 es H;

R⁴ es NH²;

R5 es metilo; y

R6 y R⁷ se seleccionan independientemente de -CO²' o una de sus sales, o

Ri es tetrahidropirano (THP);

R² es -OSO3Na;

R3 es H;

R⁴ es NHSO3Na;

R5 es metilo; y

R6 y R⁷ se seleccionan independientemente de -CO²Na, y

en donde dicho compuesto tiene estereoquímica alfa (a) en el carbono portador del grupo -OR⁵.

2. Un compuesto de Fórmula I

en donde Ri es H, R² es -OAcetilo u -OBenzoílo, R³ es bencilo, R⁴ es N³ (azida), R⁵ es metilo, R6 es -CO²CH²C⁶H⁵ y R⁷ es -CO²Me.

3. Un proceso para preparar fondaparinux sódico que comprende convertir al menos un compuesto seleccionado de

donde R² es Ac o Bz,

donde R² es Ac o Bz,

donde R² es Ac o Bz,

obteniéndose fondaparinux sódico.

4. El proceso de la reivindicación 3, en donde el proceso comprende

(a) al menos uno de:

(i) desproteger y luego proteger con THP un pentámero de levulinato de fórmula:

donde R² es Ac o Bz, obteniéndose un pentámero de THP de fórmula:

(ii) hidrolizar un pentámero de THP de fórmula:

donde R² es Ac o Bz, obteniéndose un pentámero hidrolizado de fórmula:

(iii) sulfatar un pentámero hidrolizado de fórmula:

obteniéndose un pentámero O-sulfatado de fórmula:

(iv) hidrogenar un pentámero O-sulfatado de fórmula:

obteniéndose un pentámero hidrogenado de fórmula:

y

(vi) N-sulfatar un pentámero hidrogenado de fórmula:

obteniéndose fondaparinux-THP de fórmula:

y

(b) convertir el producto de la etapa (a) en fondaparinux sódico.

5. Un proceso para preparar un compuesto de Fórmula I

en donde Ri es H, R² es -OSO³Na, R³ es H, R⁴ es NHSOaNa, R⁵ es metilo, y R6 y R⁷ son -CO²Na, que comprende:

(a) desproteger un compuesto de Fórmula I, en donde Ri es levulinilo (Lev), R² es -OAcetilo u -Obenzoílo, R³ es bencilo, R⁴ es N³ (azida), R⁵ es metilo, R6 es - CO²CH²C⁶H⁵ y R⁷ es -CO²Me, proporcionando un compuesto de Fórmula I, en donde Ri es H, R² es -OAcetilo u -OBenzoílo, R³ es bencilo, R⁴ es N³ (azida), R⁵ es metilo, R6 es -CO²CH²C⁶H⁵ y R⁷ es -CO²Me;

(b) proteger el producto de la etapa (a), proporcionando un compuesto de Fórmula I, en donde Ri es tetrahidropirano (THP), R² es -OAcetilo u -OBenzoílo, R³ es bencilo, R⁴ es N³ (azida), R⁵ es metilo, R6 es -CO²CH²C⁶H⁵ y R⁷ es -CO²Me;

(c) hidrolizar el producto de la etapa (b), proporcionando un compuesto de Fórmula I, en donde Ri es tetrahidropirano (THP), R² es -O o una de sus sales, R³ es bencilo, R⁴ es N³ (azida), R⁵ es metilo, y R6 y R⁷ son -CO² o una de sus sales;

(d) sulfatar el producto de la etapa (c), proporcionando un compuesto de Fórmula I, en donde Ri es tetrahidropirano (THP), R² es -OSO³ o una de sus sales, R³ es bencilo, R⁴ es N³ (azida), R⁵ es metilo, y R6 y R⁷ son -CO² o una de sus sales;

(e) hidrogenar el producto de la etapa (d), proporcionando un compuesto de Fórmula I, en donde Ri es tetrahidropirano (THP), R² es -OSO³ o una de sus sales, R³ es H, R⁴ es NH², R⁵ es metilo, y R6 y R⁷ son -CO² o una de sus sales;

(f) sulfatar el producto de la etapa (e), proporcionando un compuesto de Fórmula I, en donde R¹ es tetrahidropirano (THP), R² es -OSO3Na, R³ es H, R⁴ es NHSO3Na, R⁵ es metilo, y R6 y R⁷ son -CO²Na; y

(g) desproteger el producto de la etapa (f), proporcionando un compuesto de Fórmula I, en donde R¹ es H, R² es -OSO3Na, R³ es H, R⁴ es NHSO3Na, R⁵ es metilo, y R6 y R⁷ son -CO²Na.

6. El proceso de la reivindicación 5, en donde la etapa de desprotección (a) comprende el tratamiento con un reactivo seleccionado de hidrazina, hidrato de hidrazina, acetato de hidrazina y R⁸NH-NH², donde R8 es arilo, heteroarilo o alquilo, o en donde la etapa de protección (b) comprende el tratamiento con dihidropirano o un derivado de dihidropirano y un ácido seleccionado de ácido alcanforsulfónico (CSA), ácido clorhídrico (HCl), ácido p-toluenosulfónico (pTsOH) y ácidos de Lewis.

7. Un proceso para preparar un pentámero de THP de fórmula:

que comprende desproteger y luego proteger con THP un compuesto de fórmula:

en donde R² es Ac o Bz.

8. El proceso de la reivindicación 7, que comprende además hidrolizar el pentámero de THP, produciéndose un pentámero hidrolizado de fórmula:

y que además comprende sulfatar el pentámero hidrolizado, obteniéndose un pentámero O-sulfatado de fórmula:

y que además comprende hidrogenar el pentámero O-sulfatado, obteniéndose un pentámero hidrogenado de fórmula:

y que además comprende N-sulfatar el pentámero hidrogenado, obteniéndose fondaparinux-THP de fórmula:

y que comprende además convertir el fondaparinux-THP en fondaparinux sódico.

9. Un proceso para fabricar un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, que comprende unir un compuesto de Fórmula EDC

en donde R¹ es levulinilo (Lev), R² es -OAcetilo u -OBenzoílo, R³ es bencilo, R⁴ es N³ (azida) y R6 es -CO²CH²C⁶H⁵ , con un compuesto de Fórmula BA

en donde R² es -OAcetilo u -OBenzoílo, R³ es bencilo, R⁴ es N³ (azida), R⁵ es metilo y R⁷ es -CO²Me.

10. El proceso de la reivindicación 9, que comprende además convertir el producto resultante en fondaparinux sódico.

11. Un proceso para preparar un compuesto de Fórmula I de acuerdo con las reivindicaciones 1 o 2, comprendiendo dicho proceso unir un compuesto de Fórmula II:

con un compuesto de Fórmula III:

12. Un proceso para preparar un compuesto de Fórmula I de acuerdo con las reivindicaciones 1 o 2, comprendiendo dicho proceso unir un compuesto de Fórmula IV:

con un compuesto de Fórmula V:

13. Un proceso para preparar un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en donde Ri es tetrahidropirano (THP),R² es -OAcetilo u -OBenzoílo, R³ es bencilo, R⁴ es N³ (azida), R⁵ es metilo, R6 es -CO²CH²C⁶H⁵ y R⁷ es -CO²Me, que comprende:

(a) desproteger el compuesto de la reivindicación 1, en donde R¹ es levulinilo (Lev), R² es -OAcetilo u -OBenzoílo, R³ es bencilo, R⁴ es N³ (azida), R⁵ es metilo, R6 es -CO²CH²C⁶H⁵ y R⁷ es -CO²Me,

(b) proteger con THP el compuesto de la etapa (a).

14. El proceso de la reivindicación 13, en donde la etapa de desprotección (a) comprende el tratamiento con un reactivo seleccionado de hidrazina, hidrato de hidrazina, acetato de hidrazina y R⁸NH-NH², donde R8 es arilo, heteroarilo o alquilo, y en donde la etapa de protección (b) comprende el tratamiento con dihidropirano o un derivado de dihidropirano y un ácido seleccionado de ácido alcanforsulfónico (CSA), ácido clorhídrico (HCl), ácido ptoluenosulfónico (pTsOH) y ácidos de Lewis.

15. Un proceso para preparar un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en donde R¹ es tetrahidropirano (THP), R² es -O' o una de sus sales, R³ es bencilo, R⁴ es N³ (azida), R⁵ es metilo, R6 es -CO²CH²C⁶H⁵ y R⁷ es -CO²' o una de sus sales, que comprende hidrolizar un compuesto de Fórmula I, en donde R¹ es tetrahidropirano (THP), R² es -OAcetilo u -OBenzoílo, R³ es bencilo, R⁴ es N³ (azida), R⁵ es metilo, R6 es-CO2CH2C6H5 y R⁷ es -CO²Me.

16. Un proceso para preparar un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en donde R¹ es tetrahidropirano (THP), R² es -OSO3- o una de sus sales, R³ es bencilo, R⁴ es N³ (azida), R⁵ es metilo, R6 y R⁷ son -CO²- o una de sus sales, que comprende sulfatar un compuesto de Fórmula I, en donde R¹ es tetrahidropirano (THP), R² es -O‘ o una de sus sales, R³ es bencilo, R⁴ es N³ (azida), R⁵ es metilo, y R6 y R⁷ son -CO²- o una de sus sales.

17. Un proceso para preparar un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en donde R¹ es tetrahidropirano (THP), R² es -OSO3- o una de sus sales, R³ es H, R⁴ es NH², R⁵ es metilo, R6 y R⁷ son -CO²- o una de sus sales, que comprende la etapa de hidrogenar un compuesto de Fórmula I, en donde R¹ es tetrahidropirano (THP), R² es -OSO³ o una de sus sales, R³ es bencilo, R⁴ es N³ (azida), R⁵ es metilo, y R6 y R⁷ son -CO² o una de sus sales.

18. Un proceso para preparar un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en donde R¹ es tetrahidropirano (THP), R² es -OSO3Na, R³ es H, R⁴ es NHSO3Na, R⁵ es metilo, R6 y R⁷ son -CO²Na o una de sus sales, que comprende la etapa de sulfatar un compuesto de Fórmula I, en donde R¹ es tetrahidropirano (THP), R² es - OSO³ o una de sus sales, R³ es H, R⁴ es NH², R⁵ es metilo, y R6 y R⁷ son -CO² o una de sus sales.

19. Un proceso para preparar un compuesto de Fórmula I:

en donde Ri es H, R² es -OSO3Na, R³ es H, R⁴ es NHSO3Na, R⁵ es metilo, y R6 y R⁷ son -CO²Na; comprendiendo el proceso desproteger un compuesto de Fórmula I, en donde Ri es tetrahidropirano (THP), R² es -OsO3Na, R³ es H, R⁴ es NHSO3Na, R⁵ es metilo, y R6 y R⁷ son -CO²Na.