CN103360439B - 制备肝素五糖的新中间体及其制备方法 - Google Patents

制备肝素五糖的新中间体及其制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN103360439B
CN103360439B CN201210102415.0A CN201210102415A CN103360439B CN 103360439 B CN103360439 B CN 103360439B CN 201210102415 A CN201210102415 A CN 201210102415A CN 103360439 B CN103360439 B CN 103360439B
Authority
CN
China
Prior art keywords
formula
compound
group
benzyl
alkyl
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
CN201210102415.0A
Other languages
English (en)
Other versions
CN103360439A (zh
Inventor
丁毅力
郭阳辉
白骅
吴迎秋
白灵卫
杨仕保
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Zhejiang Hisun Pharmaceutical Co Ltd
Original Assignee
Zhejiang Hisun Pharmaceutical Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Zhejiang Hisun Pharmaceutical Co Ltd filed Critical Zhejiang Hisun Pharmaceutical Co Ltd
Priority to CN201210102415.0A priority Critical patent/CN103360439B/zh
Priority to JP2015503738A priority patent/JP2015514098A/ja
Priority to US14/389,806 priority patent/US9624315B2/en
Priority to EP13772346.6A priority patent/EP2837635B1/en
Priority to PCT/CN2013/073601 priority patent/WO2013149576A1/zh
Priority to IN9026DEN2014 priority patent/IN2014DN09026A/en
Publication of CN103360439A publication Critical patent/CN103360439A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN103360439B publication Critical patent/CN103360439B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
    • C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
    • C08B37/0075—Heparin; Heparan sulfate; Derivatives thereof, e.g. heparosan; Purification or extraction methods thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H1/00—Processes for the preparation of sugar derivatives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H11/00—Compounds containing saccharide radicals esterified by inorganic acids; Metal salts thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H15/02—Acyclic radicals, not substituted by cyclic structures
    • C07H15/04—Acyclic radicals, not substituted by cyclic structures attached to an oxygen atom of the saccharide radical
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H15/18—Acyclic radicals, substituted by carbocyclic rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H5/00—Compounds containing saccharide radicals in which the hetero bonds to oxygen have been replaced by the same number of hetero bonds to halogen, nitrogen, sulfur, selenium, or tellurium
    • C07H5/04—Compounds containing saccharide radicals in which the hetero bonds to oxygen have been replaced by the same number of hetero bonds to halogen, nitrogen, sulfur, selenium, or tellurium to nitrogen
    • C07H5/06—Aminosugars
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof

Abstract

本发明涉及一种化学合成药物的工艺，特别涉及一种肝素五糖的新中间体及其制备方法，该工艺反应效率高，反应操作简单，反应中间体易纯化，适合工业化生产。

Description

制备肝素五糖的新中间体及其制备方法
技术领域
本发明涉及化学合成领域，具体涉及全保护的肝素五糖前体转化为肝素五糖的制备方法。
背景技术
肝素是1916年由约翰霍普金斯大学的Jay McLean最先从动物肝脏中分离得到，并鉴定出其是抗凝血的有效成份(a：Chem.Ind.1991，2，45-50；b：Bull.Johns HopkinsHosp.1928，42，199)，它是糖胺聚糖(glycosaminoglycan，GAG)家族中结构最复杂的一种。肝素应用于临床治疗抗血栓及心血管疾病已有近六十年历史，其抗凝活性是其诸多生理活性中得到最深入研究和阐明的，并促成低分子量肝素(LMWH)从90年代开始成为通用的抗血栓剂，取代传统上临床使用的抗血栓剂(Blood，1992，79，1-17)。血液凝固过程是血浆中一系列的凝结因子依次活化的结果，最终将无活性的凝血酶转化为有活性的凝血酶，将可溶性的纤维蛋白原发生部分蛋白水解，释放出不溶性的纤维蛋白而引起血液凝固。抗凝血酶III(ATIII)是血凝过程中丝氨酸蛋白酶，尤其是凝血酶II a及Xa的抑制剂。抗凝血酶III与凝血酶的反应速度较慢，但在肝素存在的条件下，反应速度增加几千倍，能够有效地抑制凝血过程。天然来源的肝素，主要是从动物内脏中提取，是一个由不同活性多糖组成的复杂混合物，因此在使用过程中难以控制其有效剂量，引发危险的副反应，如出血、血小板减少等。同时，肝素分子也会与血浆蛋白发生非特异性结合，导致更复杂的并发症。在20世纪八十年代末，低分子肝素(LMWH)的出现使得抗血栓治疗的效果得以提高。低分子肝素是将完整肝素通过化学降解、酶降解和伽马射线照射降解的方法得到。但是令人不安的是，由于肝素和低分子肝素的动物源性，会有交叉物种病毒感染的潜在危险，这使得其应用存在很大的风险。避免交叉物种污染的最有效手段就是通过化学合成方法制备肝素。
磺达肝癸钠(Fondaparinux sodium)是一种肝素五糖类药物，于2001年作为抗凝血药物上市销售，化学名称为：甲基O-(2-脱氧-6-O-磺酸基-2-磺酰胺基-α-D-吡喃葡萄糖)-(1→4)-O-(β-D-吡喃葡萄糖醛酸)-(1→4)-O-(2-脱氧-3，6-O-二磺酸基-2-磺酰胺基-α-D-吡喃葡萄糖)-(1→4)-O-(2-O-磺酸基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸)-(1→4)-2-脱氧-6-O-磺酸基-2-磺酰胺基-α-D-吡喃葡萄糖苷十钠盐，化学结构如下式10所示：
在上世纪八十年代中期，Sinay等人(Carbohydr.Res.1984，132，C5-C9，Carbohydr.Res.1986，147，221-236)和Boeckel等人(J.Carbohydr.Chem.1985，4，293-321.)先后完成了没有甲基封端的抗凝五糖的全合成工作。全保护的五糖经过如下式1至式5所示的反应式转化得到最终的产物五糖，反应步骤包括：1.酯基的皂化，2.羟基的硫酸化，3.Pd/C氢化还原叠氮基或苄氧羰基保护的氨基成裸露氨基并脱除羟基上的苄基保护，4.氨基的选择性硫酸化。
上述五糖的转化过程中，由叠氮还原成氨基的反应非常迅速，而且容易与五糖的半缩醛互变异构体还原端醛基继续发生副反应生成稳定的二聚体或三聚体导致反应效率非常低下。
在解决这个问题的过程中发现用甲基封端的五糖可避免合成过程中还原反应时二聚体或三聚体生成的问题(Carbohydr.Res.1987.167.67-75)，这样氢化还原反应就可以接近定量的产率进行，具体反应过程如下式6至式10所示。其合成策略与使用未封端的五糖为原料的合成策略基本一致，包括以下四个步骤：1.全保护五糖经过酯基皂化反应，裸露出需要硫酸化的五个羟基；2.羟基进行硫酸化反应；3.用Pd/C氢化还原叠氮或苄氧羰基保护的氨基成裸露氨基并脱除羟基的保护；4.选择性的使氨基硫酸化，得到产物磺达肝癸钠。
WO2003022860和WO2010040880中也都采用了以上类似的方法。
经过生物活性测试表明，还原端用甲基保护对肝素五糖的生物活性没有影响，所以采用甲基封端的保护策略也成为现在肝素类寡聚分子合成的常规策略。
现有技术中的方法需要同时将苄基保护的羟基和叠氮(或苄氧羰基保护的氨基)通过氢化的方法转化为裸露的羟基和氨基，中间体稳定性较差，难以纯化；而且最后一步反应中需要在六个裸露的羟基和三个裸露的氨基中选择性的将三个氨基全部硫酸化，反应选择性低，导致反应的产率很低，而且终产物的纯化非常困难。
本发明的方法在脱除全保护五糖的酯基后，采用高效率的还原方法先将叠氮基还原为裸露的氨基，该中间体粗品纯度较高，无需纯化即可进行下一步反应。而后将裸露的所有羟基和氨基全部硫酸化，效率较高，而且保留的苄基使得该中间体的纯化相对容易，最后通过氢化反应脱除所有苄基，得到终产物。
发明内容
本发明提供一种用于将全保护的肝素五糖中间体转化为肝素五糖的方法，还提供了新的中间体。
本发明的目的之一在于提供了一种具有如下结构式的式I化合物，可作为用于制备肝素五糖的中间体，
其中，单糖单元的构型以及各单糖之间连接键的立体化学为D-葡萄糖-α-1，4-D-葡萄糖醛酸-β-1，4-D-葡萄糖-α-1，4-L-艾杜糖醛酸-α-1，4-D-葡萄糖，各取代基的定义如下：
R代表C1-C20烷基或取代烷基，其中烷基可以是直链烷基，也可以是支链或环状烷基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基或环己基等，取代烷基可以是苄基、烯丙基、甲氧基甲基或2-甲氧基乙基等，优选R为甲基。
R4代表苄基或取代苄基，取代苄基可以是对甲氧基苄基、三苯基甲基等，同一分子式中的R4可以代表相同的基团，也可以代表不同的基团。
R5代表氢离子或钠离子。
本发明的另一目的在于提供了一种具有如下结构所示的式II化合物，可作为用于制备肝素五糖的中间体：
其中，单糖单元的构型以及各单糖之间连接键的立体化学为D-葡萄糖-α-1，4-D-葡萄糖醛酸-β-1，4-D-葡萄糖-α-1，4-L-艾杜糖醛酸-α-1，4-D-葡萄糖，各取代基的定义如下：
R代表C1-C20烷基或取代烷基，其中烷基可以是直链烷基，也可以是支链或环状烷基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基、或环己基等，取代烷基可以是苄基、烯丙基、甲氧基甲基或2-甲氧基乙基等，优选R为甲基。
R4代表苄基或取代苄基，取代苄基可以是对甲氧基苄基、三苯基甲基等，同一分子式中的R4可以代表相同的基团，也可以代表不同的基团。
本发明式II化合物除可以是钠盐形式外，还可以是其他药学上可接受的盐，例如钾盐，钙盐等。
本发明的又一目的在于提供了一种制备上述式I化合物的方法，其中包括以下几个步骤：
a).先用氢氧化钠处理如下所示式III全保护五糖化合物，
使得式III化合物进行酯水解反应，得到如下所示R5为钠离子的式IV化合物，或者水解后再经过酸中和可得到的R5为氢离子的式IV化合物，
其中，R代表C1-C20烷基或取代烷基，其中烷基可以是直链烷基，也可以是支链或环状烷基，取代烷基可以是苄基、烯丙基、甲氧基甲基或2-甲氧基乙基等；R1代表C1-C20烷基、取代烷基、氢离子、钠离子，其中烷基可以是直链烷基，也可以是支链或环状烷基，取代烷基可以是苄基、烯丙基、甲氧基甲基或2-甲氧基乙基等，同一分子式中的R1可以代表相同的基团，也可以代表不同的基团；R2代表直链或支链脂肪族酰基或芳香基酰基，例如乙酰基、4-氧代戊酰基、苯甲酰基等，同一分子式中的R2可以代表相同的基团，也可以代表不同的基团；R3代表叠氮基；R4代表苄基或取代苄基，取代苄基可以是对甲氧基苄基、三苯基甲基等，同一分子式中的R4可以代表相同的基团，也可以代表不同的基团；R5选自氢离子、钠离子；其中所述的酸优选盐酸。
b).然后用还原剂处理式IV化合物，即将R3基团还原成氨基，得到式I化合物。
其中上述制备式I化合物的所述的式IV化合物可以分离纯化后进行还原反应；或直接将反应得到的式IV化合物不经分离纯化一锅法进行还原反应。
本发明的又一目的在于提供了另一种制备上述式I化合物的方法，包括以下步骤：a).先用还原剂处理式III全保护五糖化合物，即将R3基团还原成氨基得到如下所示的式V化合物；
其中，R代表C1-C20烷基或取代烷基，其中烷基可以是直链烷基，也可以是支链或环状烷基，取代烷基可以是苄基、烯丙基、甲氧基甲基或2-甲氧基乙基等；R1代表C1-C20烷基、取代烷基、氢离子、钠离子，其中烷基可以是直链烷基，也可以是支链或环状烷基，取代烷基可以是苄基、烯丙基、甲氧基甲基或2-甲氧基乙基等，同一分子式中的R1可以代表相同的基团，也可以代表不同的基团；R2代表直链或支链脂肪族酰基或芳香基酰基，例如乙酰基、4-氧代戊酰基、苯甲酰基等，同一分子式中的R2可以代表相同的基团，也可以代表不同的基团；R4代表苄基或取代苄基，取代苄基可以是对甲氧基苄基、三苯基甲基等，同一分子式中的R4可以代表相同的基团，也可以代表不同的基团；
b).然后用氢氧化钠处理式V化合物，使得式V化合物进行酯水解反应，得到R5为钠离子的式I化合物，或者酯水解后进一步用酸中和可得到R5为氢离子的式I化合物。
上述制备方法中所使用的还原剂可选自三甲基膦、三乙基膦、三丁基膦、三苯基膦或硫化氢。其中所述的酸优选盐酸。
本发明还提供了一种制备式II化合物的方法，用硫酸化试剂处理式I化合物，然后粗产物经过钠离子交换树脂处理，得到式II化合物；其中所述硫酸化反应可一步进行，也可分步进行。其中一步法硫酸化反应在硫酸化试剂、吡啶和三乙胺存在下进行。也可采用分步法进行硫酸化反应，即先用硫酸化试剂和N，N-二甲基甲酰胺(DMF)在一定温度条件下进行反应，使大部分羟基硫酸化，再用少量的硫酸化试剂/吡啶/三乙胺处理，使得氨基和少量未反应完的羟基硫酸化。优选的温度为50℃。其中，硫酸化试剂选自三氧化硫吡啶络合物、三氧化硫三甲胺络合物、三氧化硫三乙胺络合物或三氧化硫气体。
本发明还提供了了一种制备肝素五糖的方法：用氢氧化钯、钯碳等催化剂在氢气条件下处理式II化合物，使得式II化合物脱除所有R4基团，得到肝素五糖。
本发明制备肝素五糖的具体方法包括以下步骤：
1，在氢氧化钠存在的条件下对式III化合物进行酯水解反应，得到式IV化合物；
2，将式IV化合物的R3基团还原成氨基，得到式I化合物；
3，将式I化合物中步骤1，2中产生的裸露羟基和氨基进行硫酸化，得到式II化合物；
4，对式II化合物进行催化氢化反应，脱除R4基团，得到肝素五糖式VI化合物。转化过程如下所示：
本发明制备肝素五糖的具体方法还可采用以下步骤：
1，将式III化合物的R3基团还原成氨基，得到式V化合物。
2，式V化合物未经分离纯化，在氢氧化钠条件下对式V化合物进行酯水解反应，得到式I化合物。
3，将式I化合物中步骤1，2中产生的裸露羟基和氨基进行硫酸化，得到式II化合物
4，对式II化合物进行催化氢化反应，脱除R4基团，得到肝素五糖式VI化合物。
转化过程如下所示：
本发明的工艺具有以下优点和积极效果：
1.本发明采用高效率的还原方法将叠氮基还原为裸露的氨基，中间体粗品纯度较高，无需纯化即可进行下一步反应，简化了操作。
2.本发明的硫酸化反应可将所有裸露的羟基和氨基全部硫酸化，效率较高；尤其选择分步硫酸化法，可减少硫酸化试剂用量，简化后处理过程，效果更佳。
3.本发明中保留到后期的苄基保护策略使得一系列中间体的纯化相对容易，适于工业化生产。
4.本发明最后通过催化氢化反应脱除苄基保护，终产物纯化容易，适于工业化生产。
附图说明
图1由实施例五的方法制备得到的式II-1化合物的核磁共振氢谱。
图2由实施例五的方法制备得到的式II-1化合物的核磁共振异核单量子相关谱(HSQCNMR)。
图3由实施例七制备得到的磺达肝癸钠的核磁共振氢谱。
具体实施方式
实施例一：甲基O-(2-叠氮基-3，4-二-O-苄基-2-脱氧-α-D-吡喃葡萄糖)-(1→4)-O-(2，3-二-O-苄基-β-D-吡喃葡萄糖醛酸)-(1→4)-O-(2-叠氮基-2-脱氧-α-D-吡喃葡萄糖)-(1→4)-O-(3-O-苄基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸)-(1→4)-2-叠氮基-3-O-苄基-2-脱氧-α-D-吡喃葡萄糖苷(IV-1)的制备
将全保护五糖III-1化合物(10g，5.4mmol)溶解于四氢呋喃(220mL)中，滴加氢氧化钠水溶液(110mL，1.0M，20eq，110mmol)，滴加完毕后室温搅拌过夜，直至反应完全。用1M的盐酸中和至中性，加入乙酸乙酯萃取，合并有机相，有机相依次用水、10％柠檬酸、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩除去溶剂得泡沫状固体IV-1化合物8.0克。
ESMS：m/z＝1486[M+1]+，1484[M-1]-。
实施例二：甲基O-(2-氨基-3，4-二-O-苄基-2-脱氧-α-D-吡喃葡萄糖)-(1→4)-O-(2，3-二-O-苄基-β-D-吡喃葡萄糖醛酸)-(1→4)-O-(2-氨基-2-脱氧-α-D-吡喃葡萄糖)-(1→4)-O-(3-O-苄基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸)-(1→4)-2-氨基-3-O-苄基-2-脱氧-α-D-吡喃葡萄糖苷(I-1)的制备
在氮气保护下，将五糖IV-1化合物(8.0g)溶于四氢呋喃(400mL)，加入氢氧化钠水溶液(32mL，1.0M)，冰水浴下，滴入三甲基膦的四氢呋喃溶液(54mL，1M)，后缓慢升温至室温，搅拌过夜，直至反应完全，滴加稀盐酸中和至PH约为7，减压浓缩除去溶剂得泡沫状固体I-1化合物8.8克。粗产品未进一步纯化直接投下一步反应。
HPLC纯度：90％。
ESMS：m/z 1408[M+1]+，1406[M-1]-。
实施例三：甲基O-(2-氨基-3，4-二-O-苄基-2-脱氧-α-D-吡喃葡萄糖)-(1→4)-O-(2，3-二-O-苄基-β-D-吡喃葡萄糖醛酸)-(1→4)-O-(2-氨基-2-脱氧-α-D-吡喃葡萄糖)-(1→4)-O-(3-O-苄基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸)-(1→4)-2-氨基-3-O-苄基-2-脱氧-α-D-吡喃葡萄糖苷(I-1)的制备
在氮气保护下，将五糖IV-1化合物(4.0g)溶于四氢呋喃(200mL)，加入氢氧化钠水溶液(16mL，1.0M)，冰水浴下，加入三苯基膦(7.1g)，后缓慢升温至室温，搅拌过夜，直至反应完全，滴加稀盐酸中和至PH约为7，减压浓缩除去溶剂得泡沫状固体I-1化合物的粗品11.4克。粗产品未进一步纯化直接投下一步反应。
ESMS：m/z 1408[M+1]+，1406[M-1]-。
实施例四：甲基O-(2-氨基-3，4-二-O-苄基-2-脱氧-α-D-吡喃葡萄糖)-(1→4)-O-(2，3-二-O-苄基-β-D-吡喃葡萄糖醛酸)-(1→4)-O-(2-氨基-2-脱氧-α-D-吡喃葡萄糖)-(1→4)-O-(3-O-苄基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸)-(1→4)-2-氨基-3-O-苄基-2-脱氧-α-D-吡喃葡萄糖苷(I-1)的制备
在氮气保护下，将五糖III-1化合物(5.0g，2.7mmol)溶于四氢呋喃(200mL)，加入水(20mL)，冰水浴下，滴入三甲基膦的四氢呋喃溶液(27mL，1M)，后缓慢升温至室温，搅拌过夜，直至反应完全，滴加氢氧化钠水溶液(55mL，1.0M)，室温搅拌直至反应完全，滴加稀盐酸中和至PH约为7，减压浓缩除去溶剂得泡沫状固体I-1化合物的粗产品8.4克。粗产品未进一步纯化直接投下一步反应。
HPLC纯度：87％。
ESMS：m/z 1408[M+1]+，1406[M-1]-。
实施例五：甲基O-(3，4-二-O-苄基-2-脱氧-6-O-磺酸基-2-磺酰胺基-α-D-吡喃葡萄糖)-(1→4)-O-(2，3-二-O-苄基-β-D-吡喃葡萄糖醛酸)-(1→4)-O-(2-脱氧-3，6-O-二磺酸基-2-磺酰胺基-α-D-吡喃葡萄糖)-(1→4)-O-(3-O-苄基-2-O-磺酸基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸)-(1→4)-3-O-苄基-2-脱氧-6-O-磺酸基-2-磺酰胺基-α-D-吡喃葡萄糖苷十钠盐(II-1)的制备
在氮气保护下，将五糖I-1化合物(8.8g)溶解于吡啶(50mL)和三乙胺(10mL)的混合溶剂之中，加入三氧化硫吡啶络合物(10g，63mmol)，室温搅拌过夜，直至反应完全，加入碳酸氢钠饱和水溶液淬灭反应，减压浓缩除去溶剂得红褐色油状物，依次用离子交换柱和sephadex LH-20柱层析纯化，合并后减压浓缩除去溶剂，干燥得泡沫状固体II-1化合物8.2克。其核磁共振氢谱如图1所示，核磁共振异核单量子相关谱(HSQC)如图2所示。
ESMS：m/z＝1055.5[M-7Na+5H]2-/2，688.9[M-9Na+6H]3-/3。
1H NMR(400MHz，D2O)：(selected for anomeric H)δ5.59(d，J＝2.8Hz，1H)，5.37(s，1H)，5.27(d，J＝7.6Hz，1H)，4.93(according to HSQC NMR)，4.72(according to HSQCNMR).
实施例六：甲基O-(3，4-二-O-苄基-2-脱氧-6-O-磺酸基-2-磺酰胺基-α-D-吡喃葡萄糖)-(1→4)-O-(2，3-二-O-苄基-β-D-吡喃葡萄糖醛酸)-(1→4)-O-(2-脱氧-3，6-O-二磺酸基-2-磺酰胺基-α-D-吡喃葡萄糖)-(1→4)-O-(3-O-苄基-2-O-磺酸基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸)-(1→4)-3-O-苄基-2-脱氧-6-O-磺酸基-2-磺酰胺基-α-D-吡喃葡萄糖苷十钠盐(II-1)的制备
在氮气保护下，将五糖I-1化合物(3.0g)溶解于N，N-二甲基甲酰胺(100mL)之中，加入三氧化硫三甲胺络合物(7.2g)，加热至50℃，直至反应完全，加入碳酸氢钠饱和水溶液淬灭反应，减压浓缩除去溶剂得红褐色油状物，依次用离子交换柱和sephadex LH-20柱层析纯化，合并含糖部分后减压浓缩除去溶剂，干燥得泡沫状固体2.7克，将该泡沫状固体溶解于吡啶(50mL)和三乙胺(10mL)的混合溶剂之中，加入三氧化硫吡啶络合物(5.1g)，室温搅拌过夜，直至反应完全，加入碳酸氢钠饱和水溶液淬灭反应，减压浓缩除去溶剂得红褐色油状物，依次用离子交换柱和sephadex LH-20柱层析纯化，收集合格样品，合并后减压浓缩除去溶剂，干燥得泡沫状固体II-1化合物2.6克。
实施例七：甲基O-(2-脱氧-6-O-磺酸基-2-磺酰胺基-α-D-吡喃葡萄糖)-(1→4)-O-(β-D-吡喃葡萄糖醛酸)-(1→4)-O-(2-脱氧-3，6-O-二磺酸基-2-磺酰胺基-α-D-吡喃葡萄糖)-(1→4)-O-(2-O-磺酸基-α-L-吡喃艾杜糖醛酸)-(1→4)-2-脱氧-6-O-磺酸基-2-磺酰胺基-α-D-吡喃葡萄糖苷十钠盐(VI-1，磺达肝癸钠)的制备
将8.2克五糖II-1化合物溶解于150毫升甲醇和水的混合溶剂中(1∶1，v/v)，加入3克10％的钯碳，在70psi氢气压力条件下反应，直至反应完全。过滤除去钯碳催化剂，减压浓缩除去溶剂，依次用阴离子交换柱和Sephadex G25纯化得到终产物6.4克。其核磁共振氢谱如图3所示。
ESMS：m/z＝1727.7[M+1]+，1749.7[M+Na]+。
1H NMR(400MHz，D2O)：(selected for anomeric H)δ5.61(d，J＝3.2Hz，1H)，5.51(d，J＝2.4Hz，1H)，5.19(d，J＝2.4Hz，1H)，5.02(d，J＝3.2Hz，1H)，4.62(d，J＝7.6Hz，1H)。

Claims (16)

1.具有如下结构式的式I化合物，可作为制备肝素五糖的中间体：
其中，单糖单元的构型以及各单糖之间连接键的立体化学为D-葡萄糖-α-1，4-D-葡萄糖醛酸-β-1，4-D-葡萄糖-α-1，4-L-艾杜糖醛酸-α-1，4-D-葡萄糖，各取代基的定义如下：
R代表C1-C20烷基，其中烷基可以是直链烷基，也可以是支链或环状烷基；
R4代表苄基或取代苄基，同一分子式中的R4可以代表相同的基团，也可以代表不同的基团，其中所述取代苄基为对甲氧基苄基或三苯基甲基；
R5代表氢离子、钠离子。
2.根据权利要求1所述化合物，其特征在于，R选自甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基、苄基或环己基。
3.根据权利要求1所述化合物，其特征在于，R选自甲基；R4选自苄基或取代苄基，其中所述取代苄基为对甲氧基苄基或三苯基甲基；R5选自氢离子、钠离子。
4.具有如下结构所示的式II化合物，可作为制备肝素五糖的中间体：
其中，单糖单元的构型以及各单糖之间连接键的立体化学为D-葡萄糖-α-1，4-D-葡萄糖醛酸-β-1，4-D-葡萄糖-α-1，4-L-艾杜糖醛酸-α-1，4-D-葡萄糖，各取代基的定义如下：
R代表C1-C20烷基，其中烷基可以是直链烷基，也可以是支链或环状烷基；
R4代表苄基或取代苄基，其中所述取代苄基为对甲氧基苄基或三苯基甲基，同一分子式中的R4可以代表相同的基团，也可以代表不同的基团。
5.根据权利要求4所述化合物，其特征在于，R选自甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基、苄基或环己基。
6.根据权利要求4所述化合物，其特征在于，R选自甲基；R4选自苄基或取代苄基，其中所述取代苄基为对甲氧基苄基或三苯基甲基。
7.一种制备如权利要求1所述式I化合物的方法，其特征在于，其包括以下几个步骤：
a).先用氢氧化钠处理如下式III所示的全保护五糖化合物，
使得式III化合物进行酯水解反应，得到如下所示的R5为钠离子的式IV化合物，或者水解后再经过酸中和而得到的R5为氢离子的式IV化合物，
其中，R代表C1-C20烷基，其中烷基可以是直链烷基，也可以是支链或环状烷基；R1代表C1-C20烷基、取代烷基、氢离子、钠离子，其中烷基可以是直链烷基，也可以是支链或环状烷基，同一分子式中的R1可以代表相同的基团，也可以代表不同的基团；R2代表直链或支链脂肪族酰基，芳香基酰基，同一分子式中的R2可以代表相同的基团，也可以代表不同的基团；R3代表叠氮基；R4代表苄基或取代苄基，其中所述取代苄基为对甲氧基苄基或三苯基甲基，同一分子式中的R4可以代表相同的基团，也可以代表不同的基团；R5选自氢离子、钠离子；
b).然后用还原剂处理式IV化合物，即将R3基团还原成氨基，得到式I化合物。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，式III化合物中的R2选自乙酰基、4-氧代戊酰基、苯甲酰基；其中所述的酸优选盐酸。
9.根据权利要求7所述的方法，其中所述的式IV化合物可以分离纯化后进行还原反应；或直接将反应得到的式IV化合物不经分离纯化一锅法进行还原反应。
10.一种制备如权利要求1所述的式I化合物的方法，其特征在于，其包括以下步骤：
a).先用还原剂处理式III全保护五糖化合物
即将R3基团还原成氨基得到如下所示的式V化合物，
其中，R代表C1-C20烷基，其中烷基可以是直链烷基，也可以是支链或环状烷基；R1代表C1-C20烷基、取代烷基、氢离子、钠离子，其中烷基可以是直链烷基，也可以是支链或环状烷基，同一分子式中的R1可以代表相同的基团，也可以代表不同的基团；R2代表直链或支链脂肪族酰基，芳香基酰基，同一分子式中的R2可以代表相同的基团，也可以代表不同的基团；R3代表叠氮基；R4代表苄基或取代苄基，其中所述取代苄基为对甲氧基苄基或三苯基甲基，同一分子式中的R4可以代表相同的基团，也可以代表不同的基团；
b).然后用氢氧化钠处理式V化合物，使得式V化合物进行酯水解，得到R5为钠离子的式I化合物，或者水解后再经过酸中和而得到的R5为氢离子的式I化合物。
11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，式V化合物中的R2选自乙酰基、4-氧代戊酰基、苯甲酰基；其中所述的酸优选盐酸。
12.根据权利要求7-11中任意一项所述的方法，其特征在于，还原剂选自三甲基膦、三乙基膦、三丁基膦、三苯基膦或硫化氢。
13.一种制备如权利要求4所述的式II化合物的方法，其特征在于，用硫酸化试剂处理权利要求1所述的式I化合物，然后粗产物经过钠离子交换树脂处理，得到式II化合物；其中所述硫酸化反应可一步进行，也可分步进行。
14.如权利要求13所述的方法，其特征在于硫酸化试剂选自三氧化硫吡啶络合物、三氧化硫三甲胺络合物、三氧化硫三乙胺络合物或三氧化硫气体。
15.一种制备如下所示的肝素五糖式VI化合物的方法，其特征在于用氢氧化钯或钯碳催化剂在氢气条件下处理权利要求4所述的式II化合物，使得式II化合物脱除所有R4基团，得到肝素五糖式VI化合物，
16.权利要求1和4所述的式I化合物和式II化合物在制备磺达肝癸钠中的应用。
CN201210102415.0A 2012-04-02 2012-04-02 制备肝素五糖的新中间体及其制备方法 Expired - Fee Related CN103360439B (zh)

Priority Applications (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201210102415.0A CN103360439B (zh) 2012-04-02 2012-04-02 制备肝素五糖的新中间体及其制备方法
JP2015503738A JP2015514098A (ja) 2012-04-02 2013-04-02 ヘパリン五糖の新規中間体の調製およびその調製方法
US14/389,806 US9624315B2 (en) 2012-04-02 2013-04-02 Preparation of new intermediate of heparin pentasaccharide and preparation method thereof
EP13772346.6A EP2837635B1 (en) 2012-04-02 2013-04-02 New intermediates for the preparation of heparin pentasaccharide and preparation methods thereof
PCT/CN2013/073601 WO2013149576A1 (zh) 2012-04-02 2013-04-02 制备肝素五糖的新中间体及其制备方法
IN9026DEN2014 IN2014DN09026A (zh) 2012-04-02 2013-04-02

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201210102415.0A CN103360439B (zh) 2012-04-02 2012-04-02 制备肝素五糖的新中间体及其制备方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN103360439A CN103360439A (zh) 2013-10-23
CN103360439B true CN103360439B (zh) 2017-12-15

Family

ID=49299997

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201210102415.0A Expired - Fee Related CN103360439B (zh) 2012-04-02 2012-04-02 制备肝素五糖的新中间体及其制备方法

Country Status (6)

Country Link
US (1) US9624315B2 (zh)
EP (1) EP2837635B1 (zh)
JP (1) JP2015514098A (zh)
CN (1) CN103360439B (zh)
IN (1) IN2014DN09026A (zh)
WO (1) WO2013149576A1 (zh)

Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102718808A (zh) * 2012-06-04 2012-10-10 浙江星月药物科技股份有限公司 一类多糖衍生物及其中间体的制备方法
CN103570774B (zh) * 2012-08-07 2017-08-25 博瑞生物医药（苏州）股份有限公司 一种戊糖化合物的纯化方法
CN103992364B (zh) * 2014-03-25 2016-08-10 南京天翔医药科技有限公司 一种磺达肝癸钠的分离提取方法
CN103965269B (zh) * 2014-04-16 2018-05-04 杭州华东医药集团新药研究院有限公司 低水分高纯度的磺达肝癸钠及其制备方法
CN104098618A (zh) * 2014-07-25 2014-10-15 河北常山生化药业股份有限公司 磺达肝癸钠中间体及其中间体和磺达肝癸钠的制备方法
CN105037452B (zh) * 2015-06-19 2018-10-09 天津红日药业股份有限公司 一种快速制备高纯度磺达肝癸钠的精制方法
JP6741277B2 (ja) * 2015-12-30 2020-08-19 シェンツェン ヘパリンク ファーマスーティカル グループ カンパニー リミテッドＳｈｅｎｚｈｅｎ Ｈｅｐａｌｉｎｋ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｇｒｏｕｐ Ｃｏ．， Ｌｔｄ． 硫酸化ヘパリン由来オリゴ糖及びその調製法と施用
CN108148101B (zh) * 2016-12-03 2021-12-24 烟台东诚药业集团股份有限公司 一种制备磺达肝癸钠的新工艺方法
CN115057896A (zh) * 2022-07-28 2022-09-16 苏州柯默拓医药科技有限公司 一种磺达肝癸钠的合成方法

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4818816A (en) * 1981-04-28 1989-04-04 Choay, S.A. Process for the organic synthesis of oligosaccharides and derivatives thereof
CN1558911A (zh) * 2001-09-07 2004-12-29 合成肝素五糖
US20110003980A1 (en) * 2009-03-10 2011-01-06 The University Of Tokyo Oligo-Aminosaccharide compound
WO2011014793A2 (en) * 2009-07-31 2011-02-03 Reliable Biopharmaceutical Corporation Process for preparing fondaparinux sodium and intermediates useful in the synthesis thereof
US20110306757A1 (en) * 2008-10-08 2011-12-15 Laboratorios Farmaceuticos Rovi, S.A. Process for the synthesis of unprotected pentasaccharides from a protected pentasaccharide precursor

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0300099A1 (en) 1987-07-20 1989-01-25 Akzo N.V. New pentasaccharides
EP2421877A4 (en) * 2008-10-03 2013-03-20 Glycan Biosciences Llc ANIONIC CONJUGATES OF GLYCOSYLATED BACTERIAL METABOLITE
CN102718808A (zh) * 2012-06-04 2012-10-10 浙江星月药物科技股份有限公司 一类多糖衍生物及其中间体的制备方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4818816A (en) * 1981-04-28 1989-04-04 Choay, S.A. Process for the organic synthesis of oligosaccharides and derivatives thereof
CN1558911A (zh) * 2001-09-07 2004-12-29 合成肝素五糖
US20110306757A1 (en) * 2008-10-08 2011-12-15 Laboratorios Farmaceuticos Rovi, S.A. Process for the synthesis of unprotected pentasaccharides from a protected pentasaccharide precursor
US20110003980A1 (en) * 2009-03-10 2011-01-06 The University Of Tokyo Oligo-Aminosaccharide compound
WO2011014793A2 (en) * 2009-07-31 2011-02-03 Reliable Biopharmaceutical Corporation Process for preparing fondaparinux sodium and intermediates useful in the synthesis thereof

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Synthesis of a tetrasaccharide substrate of heparanase;Jianfang Chen，等;《Carbohydrate Research》;20080618;第343卷;Fig1、Scheme4 *

Also Published As

Publication number Publication date
US9624315B2 (en) 2017-04-18
EP2837635A4 (en) 2015-05-27
CN103360439A (zh) 2013-10-23
JP2015514098A (ja) 2015-05-18
IN2014DN09026A (zh) 2015-05-22
WO2013149576A1 (zh) 2013-10-10
EP2837635A1 (en) 2015-02-18
EP2837635B1 (en) 2017-10-18
US20150299340A1 (en) 2015-10-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN103360439B (zh) 制备肝素五糖的新中间体及其制备方法
DK175970B1 (da) Fremgangsmåde til organisk syntese af oligosaccharider indeholdende galactosamin-uronsyre-mönstre, ved fremgangsmåden opnåede oligosaccharider og biologisk anvendelse af sådanne oligosaccharider
Li et al. Low-molecular-weight fucosylated glycosaminoglycan and its oligosaccharides from sea cucumber as novel anticoagulants: A review
WO2013003001A1 (en) Process for preparing heparinoids and intermediates useful in the synthesis thereof
CN103601765B (zh) 磺达肝癸钠及其中间体、以及制备方法
Palmacci et al. Automated synthesis of oligosaccharides
CN107501224A (zh) 一种沸石分子筛催化水解银杏黄酮糖苷生产黄酮苷元的方法
Wang et al. Assembly of a β-(1→ 3)-glucan laminarihexaose on ionic liquid support
EP0165134A2 (fr) Nouveaux oligosaccharides, leur préparation par voie de synthèse et leurs applications biologiques
Kohout et al. Automated solution-phase syntheses of alpha 1→ 2, 1→ 3 type rhamnans and rhamnan sulfate fragments
WO2024046048A1 (zh) 一种抗凝血肝素寡糖苯联二聚体及其制备方法与应用
CN105037586A (zh) 一种抗凝血医用材料及其制备方法
CN106399428A (zh) 一种高效分离制备单一分子量透明质酸寡糖的方法
CN110038524A (zh) 一种用于分离纯化壳聚糖酶的亲和层析介质的制备方法
CN108892740B (zh) 一种3,6位支化葡聚六糖的合成方法
CN108715875B (zh) 酶化学法合成结构明确的硫酸肝素寡糖的方法
CN104098618A (zh) 磺达肝癸钠中间体及其中间体和磺达肝癸钠的制备方法
JP3939592B2 (ja) オリゴ糖（塩）の製造方法
JP2003171328A5 (zh)
DK174348B1 (da) Pentasaccharider, tetrasaccharider og mellemprodukter i form af pentasaccharider, tetrasaccharider og disaccharider til fremstilling af pentasaccharider, samt fremgangsmåde til fremstilling af pentasaccharider
CN105622678A (zh) 新工艺制备磺达肝癸钠中间体的双糖片段
Ma et al. Synthesis of two oligosaccharides, the GPI anchor glycans from S. cerevesiae and A. fumigatus
CN1138783C (zh) 1位为羟基、6或5位为乙酰基的苯甲酰化单糖的合成
CN103467420A (zh) 一种3-o-烷基抗坏血酸的制备方法
CN110698522B (zh) 一种软骨素奇数寡糖单体及其制备方法和应用

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20171215

Termination date: 20190402

CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee