KR19990007911A - 디-판토텐산 칼슘의 제조 방법 - Google Patents

디-판토텐산 칼슘의 제조 방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 디-판토텐산 칼슘의 제조 방법에 관한 것으로서, 미생물 발효에 의해 직접 생성된 디-판토텐산을 함유하는 용액을 활성 탄소와 접촉시켜 디-판토텐산을 활성 탄소에 흡착시키는 단계, 친수성 유기 용매로써 디-판토텐산을 용리시키는 단계, 칼슘을 함유하는 알칼리제로써 용리액을 중화시켜 디-판토텐산 칼슘을 침전시키는 단계, 그리고 디-판토텐산 칼슘을 모으는 단계를 포함함을 특징으로 한다.

Description

디-판토텐산 칼슘의 제조 방법
판토텐산 칼슘을 제조하기 위한 종래의 방법들은 대체로 화학적 합성법과 직접 발효법으로 분류될 수가 있다. 공업적 제조에 널리 이용되는 화학적 합성법은 출발 화합물인 이소부틸알데히드로부터 합성된 디, 엘-판톨락톤(D, L-pantolactone)을 화학적 혹은 효소에 의한 방법에 의해 광학 분할시키는 단계와 그 결과로서 생기는 디-판톨락톤을 베타-알라딘 칼슘과 축합시켜 디-판토텐산 칼슘을 얻는 단계로 구성되어 있다. 직접 발효법으로서는 JP-A 6-261772호에서 사카리드와 베타-알라닌으로부터 미생물에 의해 디-판토텐산을 직접 제조하는 새로운 방법이 최근 개시되었다. 특히, 그것은 디-판토텐산의 직접 발효 브로스로부터 디-판토텐산 칼슘을 제조하는 방법을 개시한 것으로서, 발효 브로스를 이온-교환 크로마토그라피에 의해 탈염(脫鹽)시킨 다음에 중화시켜 디-판토텐산을 칼슘염의 형태로 농축시키는 단계, 그리고 메틸 알코올(메틸 알코올 농도 : 83v/v%)을 첨가하여 디-판토텐산 칼슘의 결정들을 침전시키는 단계로 구성되어 있다.
직접 발효법은 광학 분할 등을 필요로 하지 아니하기 때문에 화학적 합성법보다 더욱 효율적이다. 그러나, 발효 브로스에는 디-판토텐산 이외에도, 미생물 세포 등의 불용성 물질들과 단당류, 올리고당류, 유기산들, 단백질들, 무기염들(양이온들, 음이온들) 등의 각종의 가용성 불순물들이 포함되어 있다. 그러므로 가장 중요한 문제는 발효 브로스로부터 디-판토텐산 칼슘을 어떻게 효율적으로 높은 수율 및 순도로 분리, 정제하는가 하는 것이었다. 상기한 바와 같이, JP-A 6-261772호는 디-판토텐산의 직접 발효 브로스로부터 디-판토텐산 칼슘을 제조하는 방법을 개시한 것이며, 발효 브로스를 이온-교환 크로마토그라피에 의해 탈염시킨 다음에 중화시켜 디-판토텐산을 칼슘염의 형태로 농축시키는 단계, 그리고 메틸알코올(메틸 알코올 농도 : 83v/v%)을 첨가하여 디-판토텐산 칼슘의 결정들을 침전시키는 단계로 구성되어 있다. 그러나, 이 방법에는 다음의 결점들이 있다. (ⅰ) 이온-교환 수지에 의해 처리로 발효 브로스에 포함되어 있는 단당류나 올리고당류들이 제거될 수가 없고, 결정화 원액에는 그것들이 판토텐산을 기준으로 하여 약 10%의 양이 포함되어 있다. 이들 남아있는 단당류나 올리고당류들은 이온-교환 수지 처리 용액의 농축시에 열에 의한 착색의 원인이 되거나 또는 결정화시에 결정화 수율의 저하의 원인이 된다. (ⅱ) 높은 결정화 수율을 얻기 위하여는, 결정화 원액 중의 디-판토텐산 칼슘의 농도가 7w/v%보다 더 적지 않게 그리고 메틸 알코올 농도는 약 90v/v%가 되게 되도록 메틸 알코올의 첨가 전에 이온-교환 수지로써 처리된 용액을 농축시켜야만 높은 농도(약 50%)의 디-판토텐산 칼슘을 얻을 수가 있다. 상기 농도의 디-판토텐산 칼슘 용액은 매우 높은 점성도를 가지며, 이는 용액의 농축을 어렵게 하는 것이다.
본 발명은 미생물에 의해 직접 생성된 디-판토텐산의 발효 브로스로부터 디-판토텐산 칼슘을 제조하는 방법에 관한 것이다. 디-판토텐산 칼슘은 의약물, 식품, 사료 등의 비타민으로서 널리 사용되어 있다.
본 발명의 미생물 발효에 의해 직접 생성된 디-판토텐산을 함유하는 용액은 JP-A 6-261772호에 개시된 바와 같이 디-판토텐산 칼슘을 내놓을 수가 있는 미생물, 이를 테면 장(腸)박테리아 균주 에셔리키아 콜리 814/pFV 31(IFO 15374, FERM BP-4401) 등을 글루코오스 등의 당류원(源)을 함유하는 배지에서 배앙하고, 이 박테리아 균주를 베타-알라닌과 접촉시켜 줌으로써 얻어질 수가 있다. 이 때, 디-판토텐산은 생성량은 40g/L인 것이 보통이다. 이 용액으로부터 종래의 액체 중 불용성 물질들을 제거하기 위한 방법들, 이를 테면 원심분리법, 여과법 등에 의해 박테리아 세포 등의 불용성 고형물들을 제거하여 주는 것이 활성 탄소에 의한 나중의 처리시의 탄소의 오염을 막고 탄소 등의 수명을 연장시키기 위한 목적에서 바람직하다.
박테리아 세포 등의 불용성 물질들이 제거되었던, 디-판토텐산을 함유하는 용액은 염산, 황산 등의 무기산으로 일반적으로 pH 1 내지 5, 바람직하게는 pH 2 내지 4로 맞추어 주는 것이 좋다. pH가 1 미만일 경우, 디-판토텐산은 쉽게 분해되고, 그것의 수율은 감소된다. pH가 5를 초과하는 경우, 활성 탄소에 흡착되는 디-판토텐산의 양이 감소되고, 당류의 그것은 증가되며 당류의 분리도는 감소된다.
본 발명에 사용되는 활성 탄소는 특별리 한정된 것은 아니다. 액체상 분리에 사용되는 활성 탄소라면 어떠한 시판 제품이라도 사용될 수가 있다. 활성 탄소의 바람직한 예로는 300Å 이하의 직경을 가진 미세구멍들의 총 미세구멍 체적(이하 미세구멍 체적이라고 부름)이 0.4cc/g 이상이고 300Å 이하의 직경을 가진 미세구멍들의 평균 미세구멍 직경(이하 평균 미세구멍 직경이라고 부름)이 17Å 이상인 활성 탄소 등이 있다. 상기의 미세구멍 특성을 갖는 활성 탄소들은, 예를 들면, 1) 나무 조각들, 코코넛 껍질 등의 나무 재료를 염화 아연, 인산, 염화 칼슘 등의 화학물질에 담근 다음에 약 600 내지 700℃에서 소결(燒結)하고, 이 화학물질을 염산 등의 산으로 씻어 줌으로써, 또는 2) 석탄, 석유 피치 등의 미네랄 재료를 알칼리로써 처리한 다음에 750 내지 900℃의 스팀, 이산화탄소 가스 등에 의해 활성화시켜 줌으로써 얻어질 수가 있다. 활성 탄소는 분말 또는 과립 형태로 존재할 수 있다. 그러나, 사용하고자 하는 칼럼들에 채워넣는 경우, 그것은 칼럼 압력 조절의 관점에서 과립 형태인 것이 좋다. 활성 탄소의 예에는 과립형 시라사기 KLH(다께다 야꾸힝 고오교 가부시끼가이샤 제조, 미세구멍 체적 : 1.09cc/g, 평균 미세구멍 직경 : 32Å), 과립형 시라사기 W(다께다 야꾸힝 고오교 가부시끼가이샤 제조, 미세구멍 체적 : 0.49cc/g, 평균 미세구멍 직경 : 18Å), 과립형 시라사기 LH2C(다께다 야꾸힝 고요교 가부시끼가이샤 제조, 미세구멍 체적 : 0.74cc/g, 평균 미세구멍 직경 : 19Å), CAL[캘곤 코포레이션(Calgon Corporation) 제조, 미세구멍 체적 : 0.55cc/g, 평균 미세구멍 직경 : 21Å], 과립형 활성 탄소 다이아호트 008(미쓰비시 가가꾸 가부시끼가이샤 제조, 미세구멍 체적 : 0.61cc/g, 평균 미세구멍 직경 : 20Å) 등이 있다.
처리하고자 하는 액체는 그것을 칼럼에 채워져 있는 활성 탄소에 통과시키는 고정층 흡착법에 의해 활성 탄소와 접촉시켜 주는 것이 좋다. 이 방법은 불순물들의 크로마토 분리를 가능케하며 친수성 유기 용매에 의한 디-판토텐산의 용리액의 분별을 용이하게 해준다. 실제 사용을 위한 바람직한 방법은 소위 연속 흡착법(series adsorption)으로서, 처리하고자 하는 액체를 활성 탄소가 채워져 있는 연속한 적어도 두 개의 칼럼들에 통과시켜 디-판토텐산을 활성 탄소에 흡착시키는 것이다.
두 개의 칼럼들을 이용하는 흡착 처리는 아래의 실시예로서 설명된다. 도 1에 나타나 있는 바와 같이, 활성 탄소로 채워넣은 칼럼 A와 B는 연속하여 연결되어 있고, 처리하고자 하는 액체는 다음의 순서로 칼럼들에 통과시킨다 : (ⅰ)→(ⅱ)→(ⅳ)→(ⅴ)→(ⅵ). 흐름은 A의 출구에서의 판토텐산의 농도가 칼럼 A의 입구에서의 그것과 같게 될 때까지 계속된다. 일단 출구와 입구에서의 농도가 같게 되면, 칼럼 A와 B를 서로 분리시키고, 흐름을 칼럼 B로 전환시키며, 또 하나의 활성 탄소 칼럼을 칼럼 B에 연속하여 연결시킨다. 흐름은 칼럼 B의 출구 및 입구에서의 판토텐산의 농도들이 같게 될 때까지 계속된다.
도 2는 미리 박테리아 세포 분리시켜, 활성 탄소로써 탈색시키고 염산으로 pH 3에 맞추어 준, 직접 발효 브로스를 LH2C 탄소 칼럼에 통과시켰을 때의 디-판토텐산과 당류의 누출 곡선들을 보여준 것이다. 칼럼 A의 출구 및 입구에서의 판토텐산의 농도들이 같게 되는 지점은 포화 흡착점(b)이다. 포화 흡착점(b)에서는, 디-판토텐산은 판토텐산이 전혀 누출되지 않는 누출 흡착점(a)에서의 양의 약 1.5배의 양으로(약 200g/L-LH2C) 흡착된다. 누출 흡착점 이후에 누출된 디-판토텐산은 그 다음의 칼럼에서 흡착된다. 처리하고자 하는 액체에 공존하는 당류 또는 그 밖의 불순물들은 디-판토텐산에 대하여 보다 낮은 흡착성을 가지며 그러므로 디-판토텐산에 의해 용리될 수 밖에 없게 되고, 당류 또는 그 밖의 다른 불순물들의 누출비는 250%에 이르게 된다. 포화 흡착점에 이를 때까지 처리를 계속하는 경우, 처리하고자 하는 액체 중에 있는 당류의 적어도 90%가 분리, 제거될 수가 있음이 밝혀졌다. 이는 본 발명분야에 익숙한 당업자에게는 예기치 않은 새로운 발견사실이다. 처리하고자 하는 액체에 함유된 무기염들은 활성 탄소에 흡착되지 않기 때문에, 그것들은 흡착 폐수로 흘러 나간다. 무기염들은 따라서 분리, 제거될 수가 있다.
그 다음에, 친수성 유기 용매를 디-판토텐산이 포화상태로 흡착된 활성 탄소칼럼에 통과시켜 디-판토텐산을 용리시킨다. 친수성 유기 용매의 바람직한 예에는 1 내지 5개의 탄소 원자를 가지는 저급 알코올들, 이를 테면 메틸 알코올, 에틸 알코올, 이소프로필 알코올 등이 있다. 특히, 메틸 알코올이 나중의 결정화단계를 위해 바람직하다. 즉, 디-판토텐산 칼슘의 결정들은 다형체(多形體)이며 용매 환경에 따라 α, β 또는 γ 결정, 메틸 알코올(MeOH) 4분자와 물 1분자를 갖는 결정(4MeOH·1H2O 결정) 혹은 비결정질의 형태로 존재하다. 과립상 4MeOH·1H2O 결정들은 메틸 알코올을 결정화 용매로서 사용할 때 결정화 원액으로부터 결정화되고, 분리도는 매우 높다. 용리 온도는 10 내지 30℃, 바람직하게는 20 내지 30℃가 좋다.
메틸 알코올을 사용하는 활성 탄소 칼럼으로부터의 디-판토텐산의 용리는, 예를 들면, 실시예 1의 용리 곡선들을 보여주는 도 3 등을 언급하는 것으로 아래에 설명한다.
제1분획물(LH2C 탄소 부피에 대하여 0.7부피)은 칼럼에 고정되어 용리된 물을 함유하였다. 이 분획물 중의 디-판토텐산의 농도는 불과 0.4w/v%에 지나지 않았다. 제2분획물(1.5 부피)은 디-판토텐산 8.7w/v%와 물 7.5w/v%를 함유하였다. 처리하고자 하는 액체 중의 디-판토텐산의 농도가 2.6w/v%였기 때문에, 이 분획물에서 디-판토텐산은 3.4배 농축되었다. 마지막 분획물(0.8부피)은 디-판토텐산 0.9w/v%와 물 0.05w/v%를 함유하였다. 세 분획물들에서의 디-판토텐산의 회수율은 각각 2%, 90%, 및 4%였다.
나중의 결정화에서의 결정화 효율을 고려하여, 용리액 중의 친수성 유기 용매의 농도는 보통 80 내지 98v/v%, 바람직하게는 85 내지 95%, 더욱 바람직하게는 90 내지 92%인 것이 좋으며, 디-판토텐산의 농도는 7w/v% 이상인 것이 좋다. 그러므로 상기 1.5 부피의 용리 분획물을 중화시켜 결정화 원액을 얻을 수가 있다.
그 다음에, 용리액을 칼슘을 함유하는 알칼리제로 중화시킨다. 알칼리제는 용리액에 함유된 디-판토텐산을 중화시킬 수 있는 충분한 양의 칼슘을 함유하는 것이라면 어떤 것도 사용될 수가 있다. 특히, 수산화 칼슘이 바람직하다. 더욱 실제적인 사용에서는 ,디-판토텐산과 거의 같은 물의 분말형 수산화칼슘을 용리액에 첨가한다. 반응하지 않은 수산화칼슘 미세분말이 남아있는 경우에는, 그것을 걸러내는 것이 좋다. 중화시의 액체 온도는 디-판토텐산 칼슘의 결정화를 피하기 위해 15℃ 이상으로 유지되는 것이 좋다.
그리하여 준비된 결정화 원액을 10℃ 이하, 바람직하게는 5℃ 이하까지 냉각시킨 후, 종자 결정을 디-판토텐산 칼슘을 기준으로 약 0.5w/v%의 양으로 첨가하고, 이 혼합물을 0 내지 5℃에서 교반하에 10시간 이상 동안 그대로 두어 높은 수율의 디-판토텐산 칼슘의 결정을 얻는다. 이 결정화 슬러리를 통상의 원심 탈수장치로 원심분리시키거나 혹은 필터 프레스로 여과시켜 습(濕)결정을 얻는다.
용리제로서 메틸 알코올을 사용하는 경우, 습결정은 약 25v/v%의 메틸 알코올과 약 5v/v%의 물을 함유한다. 이 습결정을 70 내지 80℃에서 감압하 건조시켜 수분 함량을 약 0.5%까지 감소시킬 수가 있다. 필요하다면, 이 습결정을 수분 함량을 약 2%로 조절하기 위하여 습도-조절 공기(80℃, RH 20%)를 사용하여 건조시킬 수가 있다. 이렇게 하면, 실질적으로 메틸 알코올을 함유하지 않은 디-판토텐산 칼슘 분말이 얻어질 수가 있다. 이와 달리로는, 습결정을 물에 녹이고, 그 결과로서 얻어지는 용액을 디-판토텐산 칼슘의 농도가 50w/v%가 되도록 용매를 증발시켜 농축사며, 통상의 스프레이 드라이어로 분무-건조시켜 디-판토텐산 칼슘 분말을 얻는다. 건조 생성물의 결정 형태들은 모두 비결정질의 형태로 전환되었다.
상기한 바와 같이, 본 발명의 방법은 디-판토텐산 칼슘을 높은 수율로 제조하는 매우 효율적인 방법이다. 이 방법에 있어, 디-판토텐산을 함유하는 용액은 활성 탄소 칼럼을 통과하여, 디-판토텐산이 활성 탄소에 포화 흡착됨과 동시에 무기 이온 및 당류가 효과적으로 분리, 제거되며, 디-판토텐산은 알코올 등의 친수성 유기 용매로 용리된다. 용매 농도와 디-판토텐산 농도를 고려하여 적합한 용리 분획물이 선택되는 경우, 이 분획물은 그 자체로서 중화 및 결정화 단계들에 적합한 출발 원액으로 사용될 수가 있다. 더욱이, 디-판토텐산 칼슘은 결정화 이후에 쉽게 분리, 수집될 수가 있다.
도 1은 활성 탄소로 채워져 있는 칼럼 A와 B가 직렬로 연결된 고정층의 도식이다.
도 2은 처리하고자 하는 액체를 LH2C 탄소 칼럼에 통과시켰을 때 얻어진 누출(break-through) 곡선들을 보여준다. 가는 실선 A는 디-판토텐산의 누출 곡선을 나타낸다. 굵은 실선 B는 당류의 누출 곡선을 나타낸다. (a)는 디-판토텐산의 누출 흡착점이다. (b)는 디-판토텐산의 포화 흡착점이다.
도 3은 용리제로 메틸 앝코올을 사용하는 LH2C 탄소 칼럼으로부터의 용리에서 얻어진 용리 곡선들을 보여준다. 가는 실선 A, 굵은 실선 B, 그리고 점선 C는 각각, 디-판토텐산, 물, 그리고 당류의 용리 곡선을 나탄내다.
발명의 요약
본 발명자들은 직접 발효법에 의해 얻어지는, 디-판토텐산 이외에도, 당류 등을 포함하는 배양액으로부터 양질의 디-판토텐산 칼슘을 높은 수율로 효율적으로 제조하는 방법을 얻기 위해 집중적으로 연구하였다. 그 결과로서, 본 발명이 완성되었다.
본 발명은 미생물 발효에 의해 직접 생성된 디-판토텐산을 함유하는 용액을 활성 탄소와 접촉시켜 디-판토텐산을 활성 탄소에 흡착시키는 단계, 친수성 유기용매로써 디-판토텐산을 용리시키는 단계, 칼슘을 함유하는 알칼리제로써 용리액을 중화시켜 디-판토텐산 칼슘을 침전시키는 단계, 그리고 디-판토텐산 칼슘을 모으는 단계를 포함하는, 디-판토텐산 칼슘의 제조 방법을 제공한다.
아래에 상세히 기술되는 바와 같이, 디-판토텐산을 함유하는 용액은 불용성 물질들이 제거된 발효액인 것이 좋다. 디-판토텐산을 함유하는 용액의 pH는 1 내지 5인 것이 좋다. 바람직하게는, 디-판토텐산을 함유하는 용액을 직렬 연결된 적어도 두 개의 칼럼들에 채워져 있는 활성 탄소와 포화 흡착점에 이를 때까지 계속 접촉시켜 준 것이 좋다. 친수성 유기 용매는 1 내지 5개의 탄소 원자를 갖는 저급 알코올, 더욱 바람직하게는 메틸 알코올인 것이 좋다. 칼슘을 함유하는 알칼리제는 수산화 칼슘인 것이 좋다. 바람직하게는, 친수성 유기 용매가 메틸 알코올이고, 칼슘을 함유하는 알칼리제는 수산화 칼슘이며, 디-판토텐산 칼슘은 메틸 알코올 4분자와 물 1분자를 함유하는 결정들로서 수집된 것이 좋다.
다음의 실시예들은 본 발명을 상세하게 더욱 구체적으로 설명하는 것이나 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 아니된다.
실시예
5리터 짜리의 병 발효조(jar fermentor)에서 탄소원으로 글루코오스를 함유하는 매질에서 에셔리키아 콜리 IFO 814/pFV 31 균주를 통상의 방법으로 배양하여 디-판토텐산 직접 발효 브로스(2.5L)를 얻었다. 이 발효 브로스를 40℃에서 미세구멍 직경 0.1μ의 세라믹 필터(도시바 세라믹사 제조)에 여과시켜 박테리아 세포 등의 불용성 고형물들이 제거된 여과액(1.67L)을 얻었다. 이 여과액은 디-판토텐산(38.5㎎/㎖(64.3g)), 당류(페놀-황산법에 의해 측정되는 총량 : 10.3㎎/㎖(디-판토텐산을 기준으로 하여 약 27%)를 함유하였다. 이 여과액을 탈색용 활성 탄소 K-1(다께다 야꾸힝 고요교 가부시끼가이샤 제조, 미세구멍 용량 : 1.12cc/g, 평균 미세구멍 직경 : 32Å)이 채워진 칼럼(내부 직경 : 70㎜, 높이 : 130㎜, 충전 용량 : 500㎖)에 통과시켜 세척용의 물을 함유하는 액체(24L)(탈색 비율 : 99.5%)를 얻었다. 이 액체에 진한 염산(56㎖)을 첨가하여 pH를 3.0으로 맞추었고, 그 액체를 직렬 연결된 그리고 액체상 분리용의 활성 탄소(LH2C 탄소, 과립상, 증기-활성화 탄소, 다께다 야꾸힝 고요교 가부시끼가이샤 제조)가 채워진 두 개의 칼럼들(칼럼 A와 B, 내부 직경 : 50㎜, 높이 : 100㎜, 충전 용량 : 200㎖)에 연속 통과시켰다. 포화 흡착점에 이를 때까지 칼럼 A를 통과한 원액의 양은 2.2L였다. 이러한 조작에 의해 칼럼 A는 29g(145g/L-LH2C 탄소)의 디-판토텐산을 흡수하였다. 포화 흡착점 이후, 칼럼 A를 칼럼 B와 분리시켰고, 남아있는 액체를 칼럼 B에 통과시켰다. 칼럼 A를 600㎖의 물로 씻어 준 다음, 디-판토텐산을 메틸 알코올로 용리시켰다. 처음의 0.7부피(140㎖)를 버렸고, 두 번째 1.5부피(300㎖)를 더 나중의 결정화 단계에 사용하였다. 마지막 0.8부피(160㎖)를 다음 칼럼의 용리제로 사용하여 디-판토텐산을 회수하였다.
제2분획물의 디-판토텐산, 총 당류, 메틸 알코올의 농도는 각각 8.7w/v%(26.3g), 0.43w/v%(1.3g) 및 92.5v/v%였다. 이 분획물에 수산화칼슘 분말(4.8g)을 첨가하였고, 이 혼합물을 잘 휘저어 주었다. 그리하여, 디-판토텐산이 중화되어 칼슘염(디-판토텐산 칼슘 : 28.6%)이 얻어졌다. 이 액체를 규조토로 미리 코팅되어 있는 넛취(Nutsche) 깔때기에 여과시켰다. 이와 같은 조작들은 20 내지 25℃에서 수행되었다. 그 여과액을 결정화 원액으로 사용하였다. 이 결정화 원액을 교반기가 달린 둥근-바닥 플라스크에 옮겨넣고, 5℃까지 냉각시켰다. 종자 결정(디-판토텐산 칼슘을 기준으로 하여 0.2w/w%)을 첨가하였고, 이 혼합물을 2℃까지 냉각시켜 같은 온도에서 15시간 동안 유지시켜 주었다. 이렇게 하여, 결정화가 수행되었다. 결정화 슬러리를 3G 유리 필터에 여과시켰고, 세척을 위해 5℃의 메틸 알코올을 스프레이하였으며 그 결과, MeOH 4분자(MeOH 함량 : 26%)와 H2O(수분 함량 : 4%) 한 분자를 함유하는 습결정(36.6g)(디-판토텐산 칼슘 : 34.4%g, 결정화 수율 : 90%)이 얻어졌다. 이 습결정을 통상의 80℃의 감압하 건조처리 및 습도-조절 공기(80℃, RH 20%)에 의한 건조처리하여 디-판토텐산 칼슘의 건조 분말(26.1g, 수분 함량 : 2.4%)을 얻었다. 이 생성물은 투명도, 색깔, 칼슘 함량, 질소 함량, 비선광도(比旋光度), 결정 형태 등에 대하여 일본, 미국 및 영국의 기준을 충족시킨다.
상기한 바와 같이, 본 발명의 방법은 미생물 발효에 의해 직접 생성된 디-판토텐산을 함유하는 용액을 활성 탄소와 접촉시켜 디-판토텐산을 활성 탄소에 포화흡착시켜 줌으로써 불순물들, 특히 당류를 효과적으로 제거할 수가 있다. 이후의 메틸 알코올 등의 친수성 유기 용매에 의한 용리 및 그 다음의 결정화에 의해 발효 여과액으로부터 양질의 디-판토텐산 칼슘을 높은 수율로, 매우 효율적으로 얻을 수가 있다.

Claims (8)

  1. 디-판토텐산 칼슘의 제조 방법에 있어서, 미생물 발효에 의해 직접 생성된 디-판토텐산을 함유하는 용액을 활성 탄소와 접촉시켜 디-판토텐산을 활성 탄소에 흡착시키는 단계, 친수성 유기용매로써 디-판토텐산을 용리시키는 단계, 칼슘을 함유하는 알칼리제로써 용리액을 중화시켜 디-판토텐산 칼슘을 침전시키는 단계, 그리고 디-판토텐산 칼슘을 모으는 단계를 포함함을 특징으로 하는 방법.
  2. 제1항에 있어서, 디-판토텐산을 함유하는 용액은 불용성 물질들이 제거된 발효 용액임을 특징으로 하는 방법.
  3. 제1항에 있어서, 디-판토텐산을 함유하는 용액의 pH는 1 내지 5임을 특징으로 하는 방법.
  4. 제1항에 있어서, 디-판토텐산을 함유하는 용액을 직렬 연결된 적어도 두개의 칼럼들에 채워져 있는 활성 탄소와 포화 흡착점에 이를 때까지 계속 접촉시킴을 특징으로 하는 방법.
  5. 제1항에 있어서, 친수성 유기 용매는 1 내지 5개의 탄소 원자를 가지는 저급 알코올임을 특징으로 하는 방법.
  6. 제5항에 있어서, 저급 알코올은 메틸 알코올임을 특징으로 하는 방법.
  7. 제1항에 있어서, 칼슘을 함유하는 알칼리제는 수산화 칼슘임을 특징으로 하는 방법.
  8. 제1항에 있어서, 친수성 유기 용매는 메틸 알코올이고, 칼슘을 함유하는 알칼리제는 수산화 칼슘이며, 디-판토텐산 칼슘은 메틸 알코올 4분자와 물 1분자를 함유하는 결정들로서 수집된 것임을 특징으로 하는 방법.
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