JPH01222779A - 新規酵素およびゲンチオオリゴ糖高含有シラップの製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 「産業上の利用分野」 本発明は、β−グルコシダーゼ活性の他にセルラーゼ活
性をも併有する新規酵素と、この新規酵素を用いたゲン
チオオリゴ糖高含有シラップの製造方法に関する。

「従来の技術」 従来より、グルコースがβ−１，６−結合したゲンチオ
ビオースやゲンチオトリオースなどのゲンチオオリゴ糖
が存在することが知られている。これらのゲンチオオリ
ゴ糖のうち、ゲンチオビオースは、ゲンチアン根茎から
の分離、グルコースを原料とした酵素的合成、アミグダ
リンの還元、酸によるグルコースからの逆合成反応など
の方法によって調製できることが知られている［１．　
Ｊ。

Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ　＆　Ｉｆ、　Ｊ、　ｌ１ｈｅｌａ
ｎ、　Ｍｅｔｈｏｄｓ　１ｎＣａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ
　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、Ｖｏｌ　ｒ　（１９６２１゜Ａ
ｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ参照］。

参照的合成の場合、いわゆるβ−グルコシダーゼ（例え
ばアンズエムルシン）を用いたグルコースの縮合反応を
利用してゲンチオビオースを調製できることが知られて
いる。しかし、この方法では、ゲンチオビオース（β−
１，６−グルコビオース）の他に、ソホロース（β−１
，２−グルコビオース）、ラミナリビオース（β−１，
３−グルコビオース）、セロビオース（β−１，４−グ
ルコビオース）など全てのβ−グルコ２１１１類が比較
的低濃度で非特異的に合成されるため、ゲンチオビオー
スを収率良く得ることは困難であった。

また、ゲンチオオリゴ糖は、木質部樹液やプスツラン（
ｐｕｓｔｕｌａｎｌ　、　　ルテオース　（ｌｕｔｅｏ
ｓｅｔ、酵母グルカン、アランのラミナランの部分加水
分解物から得られることも知られている（図解糖質化学
便覧、ｐ、７１．水野卓、西沢−俊共著、共立出版、参
照）、シかし、これらの方法は、せいぜいラボスケール
で採用されているのみであり、原料の供給およびゲンチ
オオリゴ糖の収率から考慮して、工業的製造方法として
は実用性に乏しいものであった。

一方、β−１，４−グルコシド結合に作用する酵素とし
では、主としてセルラーゼ、β−グルコシダーゼなどが
知られている。セルラーゼは、セルロースのβ−１，４
−グルコシド結合を加水分解して主としてセロビオース
を生成する作用があるが、セロオリゴ糖以外のβ−グル
コオリゴ糖に対しては作用しない、これに対して、β−
グルコシダーゼは、β−グルコシド結合をしている各種
のグルコオリゴ糖を加水分解してグルコースを生成する
作用を有しているが、セルロースなどの高分子には作用
しない、いずれにしても、ゲンチオオリゴ糖を特異的に
生成する酵素は、これまでに知られていなかった。

「発明が解決しようとする課題」 本発明は、上記従来技術の問題点に鑑みてなされたもの
であり、その目的は、ゲンチオオリゴ糖を特異的に生成
する酵素を提供し、この酵素を用いることによりゲンチ
オオリゴ糖を多量に含むシラップの製造方法゛を提供す
ることにある。

「課題を解決するための手段」 本発明者らは、各種微生物起源のセルラーゼ系およびβ
−グルコシダーゼ系の各種の酵素について研究した結果
、公知のセルラーゼの作用とも異なり、公知のβ−グル
コシダーゼの作用とも異なる新しい酵素を見出し、この
酵素のグルコースに対する縮合反応においては、ゲンチ
オビオース、ゲンチオトリオースなどのβ−１，６−グ
ルコシド結合からなるオリゴ糖が特異的に生成されるこ
とを見出し、これらの事実に基づいて本発明を完成する
に至った。

すなわち、本発明の第１は、下記の理化学的性質を有す
ることを特徴とする新規酵素である。

■作用および基質特異性 セルロース、ゼロデキストリン、各種セロオリゴ糖、セ
ロビオース、ソホロース、ラミナリビオース、ゲンチオ
ビオースなどを基質とし、これらのβ−１，４−グルコ
シド結合、β−１，２−グルコシド結合、β−１，３−
グルコシド結合、β−１，６−グルコシド結合を加水分
解して、グルコースを生成する。

高濃度のグルコースを基質として、これを縮合反応させ
、主としてβ−１，６−グルコシド結合からなるゲンチ
オビオース、ゲンチオトリオースなどのゲンチオオリゴ
糖を生成する。

■至適ｐＨおよび安定ｐｔｔ範囲 至適ｐＨは５．０であり、安定ｐＨ範囲は４℃、２４時
間の処理条件で４．２〜８．０　、４５℃、２時間の処
理条件で４．５〜７．０である。

■至適温度 至適温度（作用適温）は７０℃である。

■温度安定性 １００％の活性を保持するための温度は５５℃以下であ
る。

■等電点（ｐ’）　　５．３０ ■分子量（ＳＯＳ電気泳動法）　約８５．０００■アミ
ノ酸組成（モル比％） アルギニン　　　　　３．４３ リジン　　　　　　　３．３４ ヒスチジン　　　　　１．２６ フェニルアラニン　　２．８６ チロシン　　　　　　３．５０ ロイシン　　　　　　６．９４ イソロイシン　　　　５．ｌＯ メチオニン　　　　　０．８８ バリン　　　　　　８．２５ アラニン　　　　　　１０．３９ グリシン　　　　　　１１１２ プロリン　　　　　　５．６８ グルタミン酸　　　　６．８３ セリン　　　　　　７．５１ スレオニン　　　　　７．１３ アスパラギン酸　　　１２．７７ トリプトフアン　　　１．９２ シスチン　　　　　　１．０８ また１本発明の第２は、高濃度グルコース溶液に上記の
新規酵素を作用させることを特徴とするゲンチオオリゴ
糖高含有シラップの製造方法である。

さらに、本発明の第３は、高濃度グルコース溶液に上記
の新規酵素を作用させ、反応液よりグルコースを除去す
ることを特徴とするゲンチオオリゴ糖高含有シラップの
製造方法である。

さらにまた、本発明の第４は、上記の製造方法において
、グルコース純度が６０％（Ｗ／Ｗ）以上であり、かつ
、固形分濃度が３０％（Ｗ／Ｖ１以上であるグルコース
溶液を用いるゲンチオオリゴ糖高含有シラップの製造方
法である。

「作用」 本発明の新規酵素は、各種の８−グルコオリゴ糖を加水
分解するβ−グルコシダーゼ活性の他に、脱脂綿、アビ
セル、濾紙、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）、
ゼロデキストリン、セロオリゴ糖などを加水分解するセ
ルラーゼ活性をも併有している。すなわち、この酵素は
、β−１，４−グルコシド結合からなる高分子から低分
子に至る各種の化合物を加水分解してグルコースのみを
生成する作用を有しており、このような作用を有する酵
素は、これまでに知られていないので、新規な酵素とい
える。

また、この酵素は、その縮合反応において、これまでに
知られているβ−グルコシダーゼとけ異なる反応をする
ことがわかった。すなわち、この酵素を用い、高濃度グ
ルコースを基質として縮合反応を行なわせると、β−１
，６−グルコシド結合からなるゲンチオビオース、ゲン
チオトリオースなどのゲンチオオリゴ糖が特異的にかつ
優先的に合成され、ソホロース、ラミナリビ才−ス、セ
ロビオースなどの他のβ−グルコ２糖類はほとんど合成
されないことである。

なお、この酵素は、例えばトリコデルマ・リーセイ（Ｔ
ｒｉｃｈｏｄｅｒ＋ｗａ　ｒｅｅｓｅｉ）起源のセルラ
ーゼ粗酵素や、トリコデルマ・ビリデ　（Ｔｒｉｃｈｏ
ｄｅｒｍａｖｉｒｉｄｅｌ起源のセルラーゼ粗酵素など
から、各種クロマトグラフィー、電気泳動などの手段に
よって分離精製することができる。この分離精製方法の
具体例は、後述する実施例に示す。

また１本発明において、この酵素の力価の測定は、パラ
ニトロフェニルβ−グルコシド（β−ＰＮＰＧ）を基質
として、ｐＨ５，０、温度３０℃で反応を行ない、１分
間にＩｇｏ＋ｏｌのグルコースを遊離する酵素量を１単
位とした。

次に１本発明のゲンチオオリゴ糖高含有シラップの製造
方法は、上記酵素の縮合反応における特異性を利用した
ものであり、高濃度グルコースな基質として上記酵素を
作用させることにより。

β−１，６−グルコシド結合からなるゲンチオビオース
、ゲンチオトリオースなどのゲンチオオリゴ糖を特異的
かつ優先的に合成させて、ゲンチオオリゴ糖を高含有率
で含むシラップを製造する方法である。このように、酵
素の特異性を利用してゲンチオオリゴ糖を選択的に合成
することができるので、従来のβ−グルコシダーゼを用
いた方法に比べてゲンチオオリゴ糖の含有率の高いシラ
ップを容易に製造することができる。

こうして、グルコースを基質として本発明の酵素を作用
させると、主としてゲンチオビオース、ゲンチオトリオ
ースなどのゲンチオオリゴ糖が生成され、それ以外はほ
とんどがグルコースである反応液が得られる０本発明で
は、この反応液に必要に応じて活性炭による脱色、イオ
ン交換樹脂による脱イオンなどの処理を施し、濃縮して
シラップとすることができる。

また、酵素反応の後１反応液より残存するグルコースを
除去することにより、ゲンチオオリゴ糖をより高純度で
含有するシラップを得ることができる。この場合、グル
コースの除去は、カーボンカラムクロマトグラフィー、
カチオン交換樹脂カラムクロマトグラフィーなどの各種
クロマト分離や、膜分離、晶析法などによって行なうこ
とができる。

また、酵素反応条イヤについて述べると、基質となるグ
ルコース溶液としては、グルコース純度が６０％（ｗ／
ｗ１以上、より好ましくは７０％（ｗ／ｗ１以上で、か
つ、固形分濃度が３０％（ｗ／ｖ）以上、より好ましく
は４０％（Ｗ／Ｖ）以上であるグルコース溶液を用いる
ことが好ましく、これによってゲンチオオリゴ糖を高収
率で合成することができる。

反応液のｐＨは、４．０〜８．０が好ましく、４．５〜
７．５がさらに好ましい、また、反応温度は、３５〜７
５℃が好ましく、４０〜７０℃がさらに好ましい、さら
に１本発明の酵素の添加量は、基質ｌＩＩＩｇあたり０
．１単位以上が好ましく、０．２単位以上がさらに好ま
しい、この場合の酵素の力価は、前述のようにして測定
したものである。

そして、酵素反応の方法は、本発明の酵素をそのまま添
加して回分式で行なってもよく、あるいはこの酵素を適
宜担体に吸着させて固定化酵素とし、この固定化酵素を
用いて連続式で行なってもよい、固定化酵素を得るため
の担体としては、例えば［ダイヤイオン１−ＩＰ樹脂」
　（商品名、三菱化成工業■製）や、「デュオライトＳ
−７６１，７６２Ｊ（商品名、ダイヤモンド・ジャムロ
ック■製）などの吸着樹脂、あるいは［キトバールＢＣ
Ｗ　３００５．３５０５Ｊ　（商品名、富士紡績■製）
などのキトサンビーズなどが好ましく使用できる。

こうして合成されたゲンチオオリゴ糖は、従来の糖質に
見られない苦味を有するのが大きな特徴である。また、
ゲンチオオリゴ糖は、β−１，６−グルコシド結合のみ
からなるので、１１消化性、抗う触性糖質として、また
、腸内のビヒダス菌の増殖因子としての効果が期待され
る。さらに、ゲンチオオリゴ糖は、吸湿性を有している
ので１食品の保湿剤としての効果も期待される。したが
って、本発明で得られたゲンチオオリゴ糖高含有シラッ
プは、ダイエツト甘味料として、味覚改善用糖質として
、物性改良剤として、幅広い用途に利用することができ
る。

「実施例」。

実施例１ トリコデルマ・ビリデ　（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｎ＋ａ　
ｖｉｒｉｄｅｌ起源の粗セルラーゼ製剤「メイセラーゼ
」　（商品名、明治製菓■製）５ｇを２００ｗＩ２の０
．２Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ３，５）に溶解し、アンバーラ
イトＣＧ−５０のカラムクロマトグラフィーにかけ、セ
ルラーゼ成分の混合物であるＰｅａｋ　１１画分、およ
び本発明の酵素を含むＰｅａｋｎ１画分を得た。第１図
はこの結果を示し１図において−ムーはアミラーゼ活性
、−〇−はアビセル糖化活性、−・−はＣＭＣ糖化活性
、−×−はβ−グルコシダーゼ活性、−・−は蛋白質量
を示している。このように、本発明の酵素を含むＰｅａ
ｋｌＩＩ画分は１強いＢ−グルコシダーゼ活性を有して
いる。

このＰｅａｋｌｌ１画分を集め、さらにＢｌｏ−Ｇｅ１
　Ｐ−６０によるゲル濾過クロマトグラフィーにかけ、
８−グルコシダーゼ活性を有する両分を集めた。第２図
はこの結果を示し１図において一〇−はアビセル糖化活
性、−・−はβ−グルコシダーゼ活性、−ム−はＣＭＣ
ａ化活性、−・−は蛋白質量を示している。

次に、上記活性画分をＬ　Ｋ　Ｂ　１１０ｍ１２カラム
を用いた等電点電気泳動にかけ、活性画分を集めて最終
精製酵素標品を得た。第３図はこの結果を示し１図にお
いて一〇−はアビセル糖化活性、−・−はβ−グルコシ
ダーゼ活性、−ム一はＣＭＣ糖化活性、−・−は蛋白質
量を示している。なお、等電点電気泳動は、使用キャリ
アーアンフオライン：ｐＨ４−６，泳動条件：５ｇ＊Ａ
、６００Ｖ（スタート時）　−１Ｊ　ｔａＡ、　！５０
０　Ｖ　（終了時）で行なった。

こうして得られた精製酵素は、ポリアクリルアミドゲル
電気泳動（ＰＡＧＥ）および５ＤＳ−ＰＡＧＨにより、
それぞれ単一の蛋白質染色バンドを与えることが確認さ
れた。そして、この酵素は、第３図に示すように、β−
グルコシダーゼ活性と共に、アビセル糖化活性、ＣＭＣ
糖化活性をも併有しており、これまでに報告されたこと
のない新規な酵素であることがわかる。

この酵素の理化学的性質は、前述した通りである。なお
、前記理化学的性質において、アミノ酸組成は、常法に
より試料に６規定の塩酸を添加して減圧、封かんし、１
１０℃、２２時間分解した後。

アミノ酸自動分析計（日立製作所製、ＫＬＡ−３Ｂ型）
を使用して行なった。

また、前述した力価の測定法により測定した精製酵素の
比活性は、　２９．０単位／ｍｇ蛋白質であった。

さらに、各種基質溶液にこの精製酵素を作用ささせたと
きの結果を第１表に示す、活性は、終濃度４　ａ＋Ｍの
各種基質溶液を用いて、温度３０℃、ｐＨ５，０で反応
を行ない、１分間に１μｍｏｌのグルコースを生成する
初速度で示した。

第１表 実施例２ ０−グルコース３００　ｍｇに、５００μｇの酵素液を
添加し、ｐｎ　ｓ、ｏ、温度６０℃で１〜４日間反応を
行なった。使用した酵素は、実施例１で得られた最終精
製酵素ｉｎ　ｍｇ（２９０単位）（以下Ａとする）、部
分精製酵素７５　ｍｇ（３６８単位）（実施例１の第１
図におけるＰｅａｋｌｌ１画分、以下Ｂとする）、部分
精製酵素２０−ｇ（９８単位、ＰｅａｋｌＩＩ画分、以
下Ｃとする）の３種類である１反応終了後、反応混液を
３分間加熱処理（１００℃）して反応を停止させ、３５
００　ｒｐｍ、２０分間遠心分離して上清を分離し、こ
の上清液をペーパークロマトグラフィーにかけて分析し
た。

この結果を第４図に示す６図において、Ｓｌは標準物質
としてグルコース、七ロビオース、セロトリオース混合
液を展開した結果、Ｓ２は標準物質としてゲンチオビオ
ース、ゲンチオトリオースを展開した結果、Ａは上記酵
素Ａを用いた反応液の結果、Ｂは上記酵素Ｂを用いた反
応液の結果、Ｃは上記酵素Ｃを用いた反応液の結果であ
る。

第４図に示されるように、上記の各酵素反応によって多
量のゲンチオビオースおよびゲンチオトリオースが合成
されており、それ以外のオリゴ糖はほとんど合成されて
いないことがわかる。

実施例３ Ｄ−グルコース：１０１１　ｌａｇに、５０Ｏｕβの酵
素液を添加し、ｐ１１５、ロ、温度６０℃で３日間反応
を行なった。使用した酵素は、実施例１で得られた最終
精製酵Ｊ１３　ｍｇ（３７７単位）である０反応終了後
、沸騰温浴中で５分間処理して反応を停止させ、反応液
の全量をｌｌｈａｔｍａｎ　３ＭＭ濾紙３枚（１６ｘ　
５７　ｃｍｌに添着し、叩−ブタノール：ビリジン：Ｈ
ａＯ＝６：４　：　３　（ｖ／ｖｌの展開溶媒を用いて
下降法で３０時間室温展開した。展開後の濾紙は、その
ガイドストリップをアセトン−硝酸銀法で発色させた。

未発色のセンターパネルからゲンチオビオースおよびゲ
ンチオトリオースと思われる２糖および３糖を水で分離
溶出し、それぞれをロータリーエバポレータで濃縮した
。

次に、ゲンチオビオースと思われる部分から溶出させた
水抽出液に、実施例１で得られた最終精製酵素と、キャ
ンディダ・トロピカリス［Ｃａｎｄｉｄａｉｔ由来の公
知のα−グルコシダーゼとをそれぞれ作用させ、得られ
たそれぞれの反応液をペーパークロマトグラフィで展開
した。なお。

比較のため、標準物質としてグルコース、セロビオース
、ゲンチオビオース、セロトリオースの混合液と、ゲン
チオビオースと思われる部分から溶出した水抽出液とを
、同様にしてペーパークロマトグラフィで展開した。

この結果を第５図に示す１図において、Ｓは標準物質の
混合液、ｌは水抽出液、２は水抽出液を実施例１で得ら
れた最終精製酵素で処理した反応液、３は水抽出液をα
−グルコシダーゼで処理した反応液の結果である。■で
はゲンチオビオースの移動位置に一致する物質が存在し
、２ではゲンチオビオースの移動位置に一致する物質の
他にグルコースの移動位置に一致する物質が生成されて
おり、３ではゲンチオビオースの移動位置に一致する物
質のみが存在する。このことから、上記水抽出液中に含
まれる物質は、ゲンチオビオースと同じ展開位置にあっ
て、本発明の酵素によってグルコースに分解されるが、
α−グルコシダーゼでは全く作用を受けないことがわか
る。したがって、水抽出液中に含まれる物質はゲンチオ
ビオースであると同定した。また、この水抽出液中に含
まれる物質を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）
にかけたところ、オーセンティックなゲンチオビオース
のリテンションタイムと一致した。

次に、ゲンチオトリオースと思われる部分から溶出させ
た水抽出液を用いて、上記と同様な実験を行なった。こ
の結果を第６図に示す。図において、Ｓは標準物質の混
合液、■は水抽出液、２は水抽出液を実施例１で得られ
た最終精製酵素で処理した反応液、３は水抽出液をα−
グルコシダーゼで処理した反応液の結果である。１はセ
ロトリオースの移動位置とは異なっており、２ではゲン
チオビオースの移動位置に一致する物質とグルコースの
移動位置に一致する物質とが生成されており、３では水
抽出液と同じ物質のみが存在している。これらのことか
ら、水抽出液中に含まれる物質は、本発明の酵素によっ
てゲンチオビオースとグルコースとに分解され、α−グ
ルコシダーゼによって全く作用を受けないことがわかり
、この結果から、水抽出液中に含まれる物質は、ゲンチ
オトリオースであると同定した。

実施例４ Ｄ−グルコース３００ｇに、実施例１で得られた精製酵
素５．８Ｘ１０’単位を含む酵素液５００ｍｇを添加し
くグルコース約６０％（ｗ／Ｖｌ　）、ｐｎｓ、ｏ、温
度６０℃で４８時間反応を行なった０反応終了後１反応
混液を３分間加熱処理（１００℃）して反応を停止させ
、３５００　ｒｐｍ、　２０分間遠心分離して上清を分
離した。

この上清液を高速液体クロマトグラフィーにかけて糖組
成を分析した。この結果を第７図および第２表（後記）
に示す、なお、高速液体クロマトグラフィーの分析条件
は、下記の通りである。

カラム：島津製作所製、Ｓｈｉｍａｄｚｕ　Ｓ（：Ｒ−
１０１検出器：示差屈折計 カラム温度＝５５℃ カラム流速：　０．８ａ＋Ｉ２／ｗｉｎ第７図において
、ビークａはグルコース、ビークｂはゲンチオビオース
、ビークＣはゲンチオトリオース、ビークｄはゲンチオ
テトラオースを示している。

実施例５ 実施例４と同様にして酵素反応を行ない、得られた反応
液を純水で４０％に希釈した後、活性炭による脱色、イ
オン交換樹脂による脱イオン処理を行ない、次いでエバ
ポレータにより濃度８０％［１／ｍｌ　まで濃縮した。

シードとして固形分あたり　０．５％の結晶グルコース
を添加し、ｌＩ２容ジャケット付攪拌式品析装置を用い
て晶析温度を４５℃から２０℃まで徐々に低下させ、グ
ルコース結晶を晶出させた。その後、バスケット型遠心
分離機（濾布８０メツシユ）により結晶を分離した０分
離液の糖組成を実施例４と同じ高速液体クロマトグラフ
ィーにより分析した。この結果を第２表（後記）に示す
。

実施例６ 実施例４と同様にして酵素反応を行ない、得られた反応
液を純水で４０％に希釈した後、活性炭による脱色、イ
オン交換樹脂による脱イオン処理を行ない、次いでエバ
ポレータにより濃度６０％ｆｗ／ｗｌ　まで濃縮した８
次に、内径２ｃｍ、長さ１２０ＣＯ＋のジャケット付カ
ラムにカチオン交換樹脂Ｄｏｗｅｘ　９９（Ｎａ＋型、
ダウケミカル社製）を充填した後、樹脂量当り５〜７％
（Ｗ／Ｖｌの固形分量となるように上記濃縮液を負荷し
、温度７５℃、空間速度ｆｓＶ、　ｈｒ−’）０．３５
で分画し、ゲンチオオリゴ糖画分を集めた。この糖組成
を第２表（後記）に示す。

実施例７ 固定化用担体として「キトバールＢＣＷ３５０５Ｊ　（
商品名、富士紡績■製）を用い、２０　ｆｆ１Ｍの酢酸
緩衝液（ｐｎ　５．０１で充分に平衡化した後、実施例
１で得られた精製酵素を同上緩衝液に溶解させて、担体
Ｉｇあたり１０００単位添加し、室温で１時間往復振と
うして担体に酵素を吸着させた。その後、濾紙で濾過し
、得られた固定化酵素を上記緩衝液で蛋白質が溶出しな
くなるまで洗浄した。

こうして得られた固定化酵素１０ｍβをガラスカラム（
１，５φＸｌＯｃｍ）に充填した０次に、結晶グルコー
ス（純度９９．８％）を濃度６０％（ｗ／ｗｌになるよ
うに水道水にて加熱溶解し、ｐＨを５．０に調整した後
、上記カラムに温度６０℃、空間速度（ＳＶ。

ｈｒ”１０．２〜０．３の条件で連続通液した。７日間
連続通液した後の反応液の糖組成を第２表（後記）に示
す。

また、３０日間連続通液し、固定化酵素の半減期を算出
した結果、約２８日であった。

（以下、余白） 第２表 「発明の効果」 以上説明したように１本発明の新規酵素は、高濃度グル
コースを基質として縮合反応を行なわせたとき、β−１
，６−グルコシド結合からなるゲンチオオリゴ糖を特異
的かつ優先的に合成する作用を有している。したがって
、この酵素を用いた本発明のシラップの製造方法では、
ゲンチオオリゴ糖を選択的に高収率かつ高純度で生成さ
せることができ、ゲンチオオリゴ糖を高濃度で含むシラ
ップの工業的生産が可能となる。こうして得られたシラ
ップは、ゲンチオオリゴ糖を含むことから１例えば難消
化性、抗う触性のダイエツト甘味料として、味覚改善用
糖質として、腸内のビヒダス菌の増殖因子として、さら
には食品の保湿剤として幅広い用途に使用することがで
きる。

【図面の簡単な説明】

第１図はセルラーゼ粗酵素をアンバーライトＣＧ−５０
カラムクロマトグラフィーにかけたときの溶出パターン
を示す図、第２図は上記の活性画分をＢｌｏ−Ｇｅ１　
Ｐ−６０を用いたゲル濾過クロマトグラフィーにかけた
ときの溶出パターンを示す図、第３図は上記の活性画分
をＬＫ８１１０　ｍｌカラムを用いて等電点電気泳動を
行なったときの溶出パターンを示す図、第４図は本発明
の酵素を用いてグルコースを基質として反応させた反応
生成物のペーパークロマトグラム、第５図は反応生成物
中に含まれる２糖類を水抽出し、この水抽出液に本発明
の酵素とα−グルコシダーゼとを作用させて得られた反
応生成物のペーパークロマトグラム、第６図は反応生成
物中に含まれる３糖類を水抽出し、この水抽出液に本発
明の酵素とα−グルコシダーゼとを作用させて得られた
反応生成物のペーパークロマトグラム、第７図は反応生
成物の高速液体クロマトグラムである。 特許出願人　　　日本食品化工株式会社代理人　　　　
弁理士　松井　茂 第４図 −ｉｎビオース ・ ・　　　　　　　　　−ｔｏｔ’ｌｔ−ス・　・・・　
−１”″′＋朴′ＪオースＳ１５２　Ａ　Ｂ　Ｃ 第　５　図 第６図 Ｓ　　　１　　２　　３

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. （１）下記の理化学的性質を有することを特徴とする新
   規酵素。 ［１］作用および基質特異性 セルロース、ゼロデキストリン、各種セロオリゴ糖、セ
   ロビオース、ソホロース、ラミナリビオース、ゲンチオ
   ビオースなどを基質とし、これらのβ−１，４−グルコ
   シド結合、β−１，２−グルコシド結合、β−１，３−
   グルコシド結合、β−１，６−グルコシド結合を加水分
   解して、グルコースを生成する。 グルコースを基質として、これを縮合反応させ、主とし
   てβ−１，６−結合からなるゲンチオビオース、ゲンチ
   オトリオースなどのゲンチオオリゴ糖を生成する。 ［２］至適ｐＨおよび安定ｐＨ範囲 至適ｐＨは５．０であり、安定ｐＨ範囲は４℃、２４時
   間の処理条件で４．２〜８．０、４５℃、２時間の処理
   条件で４．５〜７．０である。 ［３］至適温度 至適温度（作用適温）は７０℃である。 ［４］温度安定性 １００％の活性を保持するための温度は５５℃以下であ
   る。 ［５］等電点（ｐ＾Ｉ）５．３０ ［６］分子量（ＳＤＳ電気泳動法）約８５，０００［７
   ］アミノ酸組成（モル比％） アルギニン：３．４３ リジン：３．３４ ヒスチジン：１．２６ フェニルアラニン：２．８６ チロシン：３．５０ ロイシン：６．９４ イソロイシン：５．１０ メチオニン：０．８８ バリン：８．２５ アラニン：１０．３９ グリシン：１１．１２ プロリン：５．６８ グルタミン酸：６．８３ セリン：７．５１ スレオニン：７．１３ アスパラギン酸：１２．７７ トリプトファン：１．９２ シスチン：１．０８
2. （２）高濃度グルコース溶液に請求項１記載の新規酵素
   を作用させることを特徴とするゲンチオオリゴ糖高含有
   シラップの製造方法。
3. （３）高濃度グルコース溶液に請求項１記載の新規酵素
   を作用させ、反応液よりグルコースを除去することを特
   徴とするゲンチオオリゴ糖高含有シラップの製造方法。
4. （４）グルコース純度が６０％（ｗ／ｗ）以上であり、
   かつ、固形分濃度が３０％（ｗ／ｖ）以上であるグルコ
   ース溶液を用いる請求項２または３記載のゲンチオオリ
   ゴ糖高含有シラップの製造方法。