KR102671639B1 - 울릉국화, 은행잎 유래 엑소좀을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물 - Google Patents
울릉국화, 은행잎 유래 엑소좀을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물 Download PDFInfo
- Publication number
- KR102671639B1 KR102671639B1 KR1020230157326A KR20230157326A KR102671639B1 KR 102671639 B1 KR102671639 B1 KR 102671639B1 KR 1020230157326 A KR1020230157326 A KR 1020230157326A KR 20230157326 A KR20230157326 A KR 20230157326A KR 102671639 B1 KR102671639 B1 KR 102671639B1
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- exosomes
- ulleung chrysanthemum
- cosmetic composition
- freeze
- ginkgo
- Prior art date
Links
- 210000001808 exosome Anatomy 0.000 title claims abstract description 189
- 244000194101 Ginkgo biloba Species 0.000 title claims abstract description 100
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 47
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 title claims abstract description 34
- 241001331134 Chrysanthemum zawadskii Species 0.000 title description 2
- 235000014475 Chrysanthemum zawadskii subsp zawadskii Nutrition 0.000 title description 2
- 241000723353 Chrysanthemum Species 0.000 claims abstract description 131
- 235000007516 Chrysanthemum Nutrition 0.000 claims abstract description 131
- 235000008100 Ginkgo biloba Nutrition 0.000 claims abstract description 108
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 35
- 230000008591 skin barrier function Effects 0.000 claims abstract description 21
- 230000037303 wrinkles Effects 0.000 claims abstract description 17
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 claims abstract description 15
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 claims abstract description 15
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims abstract description 13
- 235000011201 Ginkgo Nutrition 0.000 claims description 54
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 23
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 18
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 18
- 238000010257 thawing Methods 0.000 claims description 18
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 17
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 claims description 12
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims description 11
- 230000008014 freezing Effects 0.000 claims description 11
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 claims description 11
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 8
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 5
- 241000218628 Ginkgo Species 0.000 claims 9
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims 2
- 230000008018 melting Effects 0.000 claims 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 30
- 230000006872 improvement Effects 0.000 abstract description 23
- 238000005728 strengthening Methods 0.000 abstract description 17
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 29
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 22
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 21
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 20
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 18
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 17
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 16
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 16
- 239000009429 Ginkgo biloba extract Substances 0.000 description 15
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 14
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 11
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 10
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 9
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 9
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 8
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 8
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 8
- 101710088660 Filaggrin Proteins 0.000 description 7
- 108010016113 Matrix Metalloproteinase 1 Proteins 0.000 description 7
- 229940068052 ginkgo biloba extract Drugs 0.000 description 7
- 235000020686 ginkgo biloba extract Nutrition 0.000 description 7
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 7
- 102100028314 Filaggrin Human genes 0.000 description 6
- 102100031784 Loricrin Human genes 0.000 description 6
- 102000000380 Matrix Metalloproteinase 1 Human genes 0.000 description 6
- 108010079309 loricrin Proteins 0.000 description 6
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 6
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 6
- 238000004627 transmission electron microscopy Methods 0.000 description 6
- 102100033601 Collagen alpha-1(I) chain Human genes 0.000 description 5
- 108010029483 alpha 1 Chain Collagen Type I Proteins 0.000 description 5
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 5
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 5
- 230000008859 change Effects 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 5
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 5
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102100031181 Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 4
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N Nitric oxide Chemical compound O=[N] MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 4
- 102000046299 Transforming Growth Factor beta1 Human genes 0.000 description 4
- 101800002279 Transforming growth factor beta-1 Proteins 0.000 description 4
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 4
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 4
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 4
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 4
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 4
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 4
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 4
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 4
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 4
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 4
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 description 4
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 4
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 4
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 4
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 4
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 4
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 4
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 4
- 231100000002 MTT assay Toxicity 0.000 description 3
- 238000000134 MTT assay Methods 0.000 description 3
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 3
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 3
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 3
- KAQKFAOMNZTLHT-OZUDYXHBSA-N prostaglandin I2 Chemical compound O1\C(=C/CCCC(O)=O)C[C@@H]2[C@@H](/C=C/[C@@H](O)CCCCC)[C@H](O)C[C@@H]21 KAQKFAOMNZTLHT-OZUDYXHBSA-N 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 230000009759 skin aging Effects 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 2
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 2
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- 238000002123 RNA extraction Methods 0.000 description 2
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 2
- 238000010818 SYBR green PCR Master Mix Methods 0.000 description 2
- 238000003917 TEM image Methods 0.000 description 2
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 239000007640 basal medium Substances 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 2
- 229960001123 epoprostenol Drugs 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 229930003935 flavonoid Natural products 0.000 description 2
- 235000017173 flavonoids Nutrition 0.000 description 2
- 150000002215 flavonoids Chemical class 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 231100001231 less toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 238000010309 melting process Methods 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 235000001968 nicotinic acid Nutrition 0.000 description 2
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 2
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 2
- PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N squalane Chemical compound CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 2
- 238000003828 vacuum filtration Methods 0.000 description 2
- PUPZLCDOIYMWBV-UHFFFAOYSA-N (+/-)-1,3-Butanediol Chemical compound CC(O)CCO PUPZLCDOIYMWBV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JNYAEWCLZODPBN-JGWLITMVSA-N (2r,3r,4s)-2-[(1r)-1,2-dihydroxyethyl]oxolane-3,4-diol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1O JNYAEWCLZODPBN-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 229940015975 1,2-hexanediol Drugs 0.000 description 1
- RZRNAYUHWVFMIP-KTKRTIGZSA-N 1-oleoylglycerol Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(O)CO RZRNAYUHWVFMIP-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 1
- CWVRJTMFETXNAD-FWCWNIRPSA-N 3-O-Caffeoylquinic acid Natural products O[C@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)C[C@H]1OC(=O)\C=C\C1=CC=C(O)C(O)=C1 CWVRJTMFETXNAD-FWCWNIRPSA-N 0.000 description 1
- YFVGIJBUXMQFOF-PJOVQGMDSA-N 5-hydroxy-2-(4-methoxyphenyl)-7-[(2s,3r,4s,5s,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-[[(2r,3r,4r,5r,6s)-3,4,5-trihydroxy-6-methyloxan-2-yl]oxymethyl]oxan-2-yl]oxychromen-4-one Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1C(OC1=C2)=CC(=O)C1=C(O)C=C2O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@H]2[C@@H]([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O2)O)O1 YFVGIJBUXMQFOF-PJOVQGMDSA-N 0.000 description 1
- TVEXGJYMHHTVKP-UHFFFAOYSA-N 6-oxabicyclo[3.2.1]oct-3-en-7-one Chemical compound C1C2C(=O)OC1C=CC2 TVEXGJYMHHTVKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KMOUJOKENFFTPU-UHFFFAOYSA-N Apigenin-7-glucosid Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1=CC(O)=C2C(=O)C=C(C=3C=CC(O)=CC=3)OC2=C1 KMOUJOKENFFTPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- MOLPUWBMSBJXER-YDGSQGCISA-N Bilobalide Natural products O([C@H]1OC2=O)C(=O)[C@H](O)[C@@]11[C@@](C(C)(C)C)(O)C[C@H]3[C@@]21CC(=O)O3 MOLPUWBMSBJXER-YDGSQGCISA-N 0.000 description 1
- 101150008656 COL1A1 gene Proteins 0.000 description 1
- PZIRUHCJZBGLDY-UHFFFAOYSA-N Caffeoylquinic acid Natural products CC(CCC(=O)C(C)C1C(=O)CC2C3CC(O)C4CC(O)CCC4(C)C3CCC12C)C(=O)O PZIRUHCJZBGLDY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 1
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 101000862089 Clarkia lewisii Glucose-6-phosphate isomerase, cytosolic 1A Proteins 0.000 description 1
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 1
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 1
- 241000218631 Coniferophyta Species 0.000 description 1
- ACBOFPQSBWBAQR-UHFFFAOYSA-N Cosmosiin Natural products OCC1OC(Oc2cc(O)c3C(=O)C=C(Oc3c2)c4cccc(O)c4)C(O)C(O)C1O ACBOFPQSBWBAQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- ZAKOWWREFLAJOT-CEFNRUSXSA-N D-alpha-tocopherylacetate Chemical compound CC(=O)OC1=C(C)C(C)=C2O[C@@](CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C ZAKOWWREFLAJOT-CEFNRUSXSA-N 0.000 description 1
- SNPLKNRPJHDVJA-ZETCQYMHSA-N D-panthenol Chemical compound OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCCO SNPLKNRPJHDVJA-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- 206010012289 Dementia Diseases 0.000 description 1
- 239000003109 Disodium ethylene diamine tetraacetate Substances 0.000 description 1
- IUMSDRXLFWAGNT-UHFFFAOYSA-N Dodecamethylcyclohexasiloxane Chemical compound C[Si]1(C)O[Si](C)(C)O[Si](C)(C)O[Si](C)(C)O[Si](C)(C)O[Si](C)(C)O1 IUMSDRXLFWAGNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L EDTA disodium salt (anhydrous) Chemical compound [Na+].[Na+].OC(=O)CN(CC([O-])=O)CCN(CC(O)=O)CC([O-])=O ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 241000721662 Juniperus Species 0.000 description 1
- 101150116870 LORICRIN gene Proteins 0.000 description 1
- YFVGIJBUXMQFOF-SAXLCNSLSA-N Linarin Natural products O(C[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@H](Oc2cc(O)c3C(=O)C=C(c4ccc(OC)cc4)Oc3c2)O1)[C@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O1 YFVGIJBUXMQFOF-SAXLCNSLSA-N 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 208000037093 Menstruation Disturbances Diseases 0.000 description 1
- AFCARXCZXQIEQB-UHFFFAOYSA-N N-[3-oxo-3-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)propyl]-2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound O=C(CCNC(=O)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F)N1CC2=C(CC1)NN=N2 AFCARXCZXQIEQB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CWVRJTMFETXNAD-KLZCAUPSSA-N Neochlorogenin-saeure Natural products O[C@H]1C[C@@](O)(C[C@@H](OC(=O)C=Cc2ccc(O)c(O)c2)[C@@H]1O)C(=O)O CWVRJTMFETXNAD-KLZCAUPSSA-N 0.000 description 1
- YBGZDTIWKVFICR-JLHYYAGUSA-N Octyl 4-methoxycinnamic acid Chemical compound CCCCC(CC)COC(=O)\C=C\C1=CC=C(OC)C=C1 YBGZDTIWKVFICR-JLHYYAGUSA-N 0.000 description 1
- WJHSRFQBVYHKKL-UHFFFAOYSA-N Oroboside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1=CC(O)=C2C(=O)C(C=3C=C(O)C(O)=CC=3)=COC2=C1 WJHSRFQBVYHKKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 244000170916 Paeonia officinalis Species 0.000 description 1
- 235000006484 Paeonia officinalis Nutrition 0.000 description 1
- 241000218657 Picea Species 0.000 description 1
- 235000008331 Pinus X rigitaeda Nutrition 0.000 description 1
- 241000018646 Pinus brutia Species 0.000 description 1
- 235000011613 Pinus brutia Nutrition 0.000 description 1
- 206010040880 Skin irritation Diseases 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- PHYFQTYBJUILEZ-UHFFFAOYSA-N Trioleoylglycerol Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC)COC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC PHYFQTYBJUILEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FHKPLLOSJHHKNU-INIZCTEOSA-N [(3S)-3-[8-(1-ethyl-5-methylpyrazol-4-yl)-9-methylpurin-6-yl]oxypyrrolidin-1-yl]-(oxan-4-yl)methanone Chemical compound C(C)N1N=CC(=C1C)C=1N(C2=NC=NC(=C2N=1)O[C@@H]1CN(CC1)C(=O)C1CCOCC1)C FHKPLLOSJHHKNU-INIZCTEOSA-N 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 230000001153 anti-wrinkle effect Effects 0.000 description 1
- KMOUJOKENFFTPU-QNDFHXLGSA-N apigenin 7-O-beta-D-glucoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC(O)=C2C(=O)C=C(C=3C=CC(O)=CC=3)OC2=C1 KMOUJOKENFFTPU-QNDFHXLGSA-N 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 235000013871 bee wax Nutrition 0.000 description 1
- 239000012166 beeswax Substances 0.000 description 1
- 125000002511 behenyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 1
- 239000004067 bulking agent Substances 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000009087 cell motility Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 229940074393 chlorogenic acid Drugs 0.000 description 1
- FFQSDFBBSXGVKF-KHSQJDLVSA-N chlorogenic acid Natural products O[C@@H]1C[C@](O)(C[C@@H](CC(=O)C=Cc2ccc(O)c(O)c2)[C@@H]1O)C(=O)O FFQSDFBBSXGVKF-KHSQJDLVSA-N 0.000 description 1
- CWVRJTMFETXNAD-JUHZACGLSA-N chlorogenic acid Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)C[C@H]1OC(=O)\C=C\C1=CC=C(O)C(O)=C1 CWVRJTMFETXNAD-JUHZACGLSA-N 0.000 description 1
- 235000001368 chlorogenic acid Nutrition 0.000 description 1
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol group Chemical group [C@@H]1(CC[C@H]2[C@@H]3CC=C4C[C@@H](O)CC[C@]4(C)[C@H]3CC[C@]12C)[C@H](C)CCCC(C)C HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 1
- BMRSEYFENKXDIS-KLZCAUPSSA-N cis-3-O-p-coumaroylquinic acid Natural products O[C@H]1C[C@@](O)(C[C@@H](OC(=O)C=Cc2ccc(O)cc2)[C@@H]1O)C(=O)O BMRSEYFENKXDIS-KLZCAUPSSA-N 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 230000003749 cleanliness Effects 0.000 description 1
- 230000003930 cognitive ability Effects 0.000 description 1
- 230000037319 collagen production Effects 0.000 description 1
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 1
- ZAKOWWREFLAJOT-UHFFFAOYSA-N d-alpha-Tocopheryl acetate Natural products CC(=O)OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C ZAKOWWREFLAJOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 229940008099 dimethicone Drugs 0.000 description 1
- 239000004205 dimethyl polysiloxane Substances 0.000 description 1
- 235000013870 dimethyl polysiloxane Nutrition 0.000 description 1
- 235000019301 disodium ethylene diamine tetraacetate Nutrition 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 201000006549 dyspepsia Diseases 0.000 description 1
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 1
- 239000003344 environmental pollutant Substances 0.000 description 1
- 230000006353 environmental stress Effects 0.000 description 1
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 1
- FOYKKGHVWRFIBD-UHFFFAOYSA-N gamma-tocopherol acetate Natural products CC(=O)OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1 FOYKKGHVWRFIBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930184727 ginkgolide Natural products 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000036074 healthy skin Effects 0.000 description 1
- XJNUECKWDBNFJV-UHFFFAOYSA-N hexadecyl 2-ethylhexanoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCOC(=O)C(CC)CCCC XJNUECKWDBNFJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FHKSXSQHXQEMOK-UHFFFAOYSA-N hexane-1,2-diol Chemical compound CCCCC(O)CO FHKSXSQHXQEMOK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 208000000509 infertility Diseases 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 231100000535 infertility Toxicity 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- PEFNSGRTCBGNAN-QNDFHXLGSA-N luteolin 7-O-beta-D-glucoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC(O)=C2C(=O)C=C(C=3C=C(O)C(O)=CC=3)OC2=C1 PEFNSGRTCBGNAN-QNDFHXLGSA-N 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 230000003446 memory effect Effects 0.000 description 1
- 231100000544 menstrual irregularity Toxicity 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N n'-amino-n-iminomethanimidamide Chemical compound N\N=C\N=N VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N 0.000 description 1
- JXTPJDDICSTXJX-UHFFFAOYSA-N n-Triacontane Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC JXTPJDDICSTXJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920005615 natural polymer Polymers 0.000 description 1
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 1
- 231100001083 no cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N octanoic acid Chemical compound CCCCCCCC(O)=O WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940101267 panthenol Drugs 0.000 description 1
- 235000020957 pantothenol Nutrition 0.000 description 1
- 239000011619 pantothenol Substances 0.000 description 1
- 238000005192 partition Methods 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 150000002978 peroxides Chemical class 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 231100000719 pollutant Toxicity 0.000 description 1
- 229920000435 poly(dimethylsiloxane) Polymers 0.000 description 1
- 150000008442 polyphenolic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 235000013824 polyphenols Nutrition 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000007790 scraping Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 210000004927 skin cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000036620 skin dryness Effects 0.000 description 1
- 230000036556 skin irritation Effects 0.000 description 1
- 231100000475 skin irritation Toxicity 0.000 description 1
- 230000036560 skin regeneration Effects 0.000 description 1
- 239000000344 soap Substances 0.000 description 1
- 208000010110 spontaneous platelet aggregation Diseases 0.000 description 1
- 229940032094 squalane Drugs 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 1
- 150000003505 terpenes Chemical class 0.000 description 1
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 1
- LADGBHLMCUINGV-UHFFFAOYSA-N tricaprin Chemical compound CCCCCCCCCC(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCCCC)COC(=O)CCCCCCCCC LADGBHLMCUINGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
- A61K8/97—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from algae, fungi, lichens or plants; from derivatives thereof
- A61K8/9783—Angiosperms [Magnoliophyta]
- A61K8/9789—Magnoliopsida [dicotyledons]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
- A61K8/97—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from algae, fungi, lichens or plants; from derivatives thereof
- A61K8/9771—Ginkgophyta, e.g. Ginkgoaceae [Ginkgo family]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
- A61Q19/08—Anti-ageing preparations
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/04—Plant cells or tissues
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
- A61K2800/74—Biological properties of particular ingredients
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
- A61K2800/80—Process related aspects concerning the preparation of the cosmetic composition or the storage or application thereof
- A61K2800/81—Preparation or application process involves irradiation
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
- A61K2800/80—Process related aspects concerning the preparation of the cosmetic composition or the storage or application thereof
- A61K2800/84—Products or compounds obtained by lyophilisation, freeze-drying
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Botany (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Birds (AREA)
- Zoology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Gerontology & Geriatric Medicine (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
본 발명은 울릉국화, 은행잎 엑소좀을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 구체적으로는 동결 융해 처리 및 UV 전처리와 수성 2상 시스템을 이용하여 정제된 울릉국화 엑소좀 및/또는 은행잎 엑소좀을 유효성분으로 함유하여 주름 개선, 세포 재생, 피부장벽 강화 효과가 우수한 화장료 조성물에 관한 것이다.
Description
본 발명은 울릉국화, 은행잎 유래 엑소좀을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 구체적으로는 동결융해 처리 및 UV 전처리와 수성 2상 시스템을 이용하여 정제된 울릉국화 엑소좀 및/또는 은행잎 엑소좀을 유효성분으로 함유하여 주름개선, 세포재생, 피부장벽강화 효과가 우수한 화장료 조성물에 관한 것이다.
본 발명은 과학기술정보통신부와 연구개발특구진흥재단이 지원하는 과학벨트 지원사업으로 수행된 연구결과입니다.(과제번호: 2023-SB-SB-0010-01)
화장품의 기능은 청결과 단순한 메이크업을 지나, 공해 물질, 스트레스, 자외선, 활성산소, 과산화물 등의 피부 노화 원인을 제거하거나 억제하는 것으로 확장되어 왔다. 전 세계적으로 고령화 사회로 진입함에 따라 피부 노화 방지를 위한 화장품의 시장이 지속적으로 증가하고 있으며 현대 여성들에게 깨끗하고 건강한 피부를 갖고자 하는 것이 큰 관심사가 되어 주름 개선 효과가 있는 원료들과 이를 이용한 화장품의 수요가 계속해서 증가하고 있다. 또한 피부 노화에는 수분공급 및 유지와도 밀접한 관련이 있다. 피부 건조는 수분 손실에 따른 각질세포의 응집력 저하, 즉 피부 장벽의 기능 이상에서 비롯된다.
최근 안전한 천연물을 소재로 하여 주름 개선과 피부장벽 강화 효과가 우수한 화장료 개발이 활발하게 이루어지고 있다. 본 발명자들은 피부 자극을 유발하지 않고 주름 개선, 세포재생, 피부장벽 강화 등의 효과가 있는 원료에 대하여 연구하여 본 발명을 완성하였다.
본 발명에서 "엑소좀(Exosome)"이란 다양한 세포들로부터 분비되는 막 구조의 작은 소낭을 의미하며, 세포밖 소포체(Extracellular Vesicles, EVs)의 한 종류로 정의된다. 모든 세포들은 다른 세포들 또는 외부 환경과 정보 교환을 하며 이를 위해 세포밖 소포체를 분비한다. 엑소좀은 50~200 nm 정도의 크기를 가지며 단백질, 지질, 핵산 등 생리활성 물질을 포함한다. 엑소좀은 포유류, 박테리아, 식물 등 다양한 세포에 존재하며 기원하는 세포들의 상태를 반영하고 있어 진단 및 치료에 활용할 수 있다. 엑소좀은 이중인지질막 구조체로 세포내 침투가 용이하고, 면역 반응, 신호전달과 같은 다양한 생리적, 병리적 기능을 수행한다.
최근에 식물에서 유래한 엑소좀의 다양한 효능에 관한 연구가 이루어지고 있다. 식물 유래 엑소좀은 식물 세포 자체가 분비하는 생리활성 및 신호전달물질이 들어있어 세포간의 이동과 흡수에 도움을 주는 천연 나노입자이며, 식물에서 정제한 엑소좀은 포유류 유래 엑소좀에 비해 독성이 없다고 알려져 있다.
이러한 엑소좀은 다양한 장점 및 활성으로 인해 의약품, 화장품, 식품 등의 분야에서 활용이 가능한 소재이나 인지질이중막으로 구성되어 있는 구조적인 특징으로 인해 분산력이 낮고 응집하려는 성질이 있다. 또한 고온에서 불안정하고, 화장품 제형을 제조하는 과정에서 쉽게 깨질 수 있으며, 이러한 성질은 제형 내 엑소좀의 안정성을 저하시키고 침전을 일으킬 수 있다. 따라서 지속적인 활성 유지를 위해 수용액 내의 엑소좀의 용해도 및 분산성을 높여 제형 내 안정성을 높일 필요가 있다.
본 발명자들은 다양한 방법을 적용하여 우수한 피부 상태 개선 활성을 나타내는 식물 유래 엑소좀을 제조하고 이를 화장료로 이용하기 위해 노력하였으며, 그 결과 특정한 조건에서의 동결융해 처리 및 UV 전처리와 수성 2상 시스템을 이용하여 정제된 울릉국화 엑소좀 및/또는 은행잎 엑소좀이 우수한 피부 개선 효능을 나타낸다는 것을 확인하여 본 발명을 완성하였다.
본 발명은 울릉국화 엑소좀, 은행잎 엑소좀 또는 그 혼합 엑소좀을 유효성분으로 함유하여 안정성이 우수하며 주름개선, 세포재생, 피부장벽강화 효과가 우수한 화장료 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
또한, 본 발명은 울릉국화 엑소좀 또는 은행잎 엑소좀의 정제방법을 제공하는 것을 다른 목적으로 한다.
상기 목적을 달성하기 위하여 본 발명에 따르면, 울릉국화 엑소좀, 은행잎 엑소좀 또는 그 혼합 엑소좀을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물이 제공된다.
상기 혼합 엑소좀은 울릉국화 엑소좀과 은행잎 엑소좀이 각각 1~3:1~3의 중량비율로 혼합되어 이루어진다.
상기 유효성분으로서의 울릉국화 엑소좀과 은행잎 엑소좀은,
(A) 울릉국화 또는 은행잎에 용매를 가하고 동결 및 융해를 반복하여 추출하는 단계; (B) 동결융해 전처리를 한 울릉국화 또는 은행잎에 UV-A를 1~6시간 처리하는 단계; (C) UV 처리한 울릉국화 또는 은행잎을 착즙하는 단계; (D) 상기 착즙액을 1,000xg~10,000xg에서 원심분리하여 상층액을 수득하는 단계; (E)엑소좀이 존재하는 상기 상층액을 동결건조하는 단계; (F)상기 동결건조물에 PEG(Polyethylene glycol)/Dextran을 사용하여 수성 2상계를 형성하는 단계; 및 (G)상기 수성 2상계 중 엑소좀이 농축된 하층액을 수득하는 단계를 포함하는 방법에 의하여 정제된 것이다.
더욱 바람직하게는 (A)단계에서의 동결 융해 전처리는 울릉국화 또는 은행잎에 물을 가하고 -80 ~ -70℃의 온도 조건에서 15~20시간 동안 동결시킨 후, 40~50℃의 온도 조건에서 8~10시간 동안 융해시키는 공정을 2~5회 반복하는 것으로 이루어지는 것임을 특징으로 한다. 바람직하게는 상기 (B) 단계에서의 UV 처리는 340~380nm 파장의 UV-A로 4~6시간, 더욱 바람직하게는 365nm 파장의 UV-A로 6시간 동안 수행하는 것임을 특징으로 한다.
유효성분으로서의 상기 울릉국화 엑소좀, 은행잎 엑소좀 또는 그 혼합 엑소좀은 조성물 전체중량에 대하여 0.0001 ~ 30.0%(w/w) 함유된다.
상기 화장료 조성물은 주름개선용, 세포재생용 또는 피부장벽강화용임을 특징으로 한다.
상기 다른 목적을 달성하기 위하여 본 발명에 따르면,
(A) 울릉국화 또는 은행잎에 용매를 가하고 동결 및 융해를 반복하여 추출하는 단계;
(B) 동결융해 전처리를 한 울릉국화 또는 은행잎에 UV-A를 1~6시간 처리하는 단계;
(C) UV 처리한 울릉국화 또는 은행잎을 착즙하는 단계;
(D)상기 착즙액을 1,000xg~10,000xg에서 원심분리하여 상층액을 수득하는 단계;
(E)엑소좀이 존재하는 상기 상층액을 동결건조하는 단계;
(F)상기 동결건조물에 PEG(Polyethylene glycol)/Dextran을 사용하여 수성 2상계를 형성하는 단계; 및
(G)상기 수성 2상계 중 엑소좀이 농축된 하층액을 수득하는 단계를 포함하는 울릉국화 또는 은행잎 엑소좀의 정제방법이 제공된다.
더욱 바람직하게는 상기 (A)단계에서의 동결 융해 처리는 -80 ~ -70℃의 온도 조건에서 15~20시간 동안 동결시킨 후, 40~50℃의 온도 조건에서 8~10시간 동안 융해시키는 공정을 2~5회 반복하는 것을 특징으로 하며, 상기 (B) 단계에서 UV 처리는 340~380nm 파장의 UV-A로 4~6시간, 더욱 바람직하게는 365nm 파장의 UV-A로 6시간 동안 수행하는 것임을 특징으로 한다.
동결융해 처리 및 UV 전처리와 수성 2상 시스템을 이용하여 정제된 본 발명의 울릉국화 엑소좀, 은행잎 엑소좀 또는 그 혼합 엑소좀은 안정성이 우수하며, 우수한 주름개선 효과, 세포재생 효과 및 피부장벽강화 효과를 나타내므로 피부개선용 화장료로 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 본 발명의 일 실시예에 따라 정제된 울릉국화 유래 엑소좀의 TEM 이미지이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따라 정제된 은행잎 유래 엑소좀의 TEM 이미지이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 따라 정제된 울릉국화 유래 엑소좀 입자의 크기 분포와 입자수를 확인하기 위한 NTA 분석 결과를 나타낸 그래프이다.
도 4는 본 발명의 일 실시예에 따라 정제된 은행잎 유래 엑소좀 입자의 크기 분포와 입자수를 확인하기 위한 NTA 분석 결과를 나타낸 그래프이다.
도 5는 본 발명에 의해 정제된 울릉국화, 은행잎 유래 엑소좀의 세포 독성을 MTT assay로 평가한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 6은 본 발명에 의해 정제된 울릉국화, 은행잎 유래 엑소좀의 주름개선 효능을 COL1A1 발현으로 평가한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 7은 본 발명에 의해 정제된 울릉국화, 은행잎 유래 엑소좀의 주름개선 효능을 MMP-1 발현 억제로 평가한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 8은 본 발명에 의해 정제된 울릉국화, 은행잎 유래 엑소좀의 피부장벽강화 효능을 Filaggrin 발현으로 평가한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 9는 본 발명에 의해 정제된 울릉국화, 은행잎 유래 엑소좀의 피부장벽강화 효능을 Loricrin 발현으로 평가한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 10은 본 발명에 의해 정제된 울릉국화, 은행잎 유래 엑소좀의 세포재생 효능을 wound healing assay로 평가한 결과를 나타낸 이미지이다.
도 11은 본 발명에 의해 정제된 울릉국화, 은행잎 유래 엑소좀의 세포재생 효능을 wound area 면적율로 평가한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따라 정제된 은행잎 유래 엑소좀의 TEM 이미지이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 따라 정제된 울릉국화 유래 엑소좀 입자의 크기 분포와 입자수를 확인하기 위한 NTA 분석 결과를 나타낸 그래프이다.
도 4는 본 발명의 일 실시예에 따라 정제된 은행잎 유래 엑소좀 입자의 크기 분포와 입자수를 확인하기 위한 NTA 분석 결과를 나타낸 그래프이다.
도 5는 본 발명에 의해 정제된 울릉국화, 은행잎 유래 엑소좀의 세포 독성을 MTT assay로 평가한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 6은 본 발명에 의해 정제된 울릉국화, 은행잎 유래 엑소좀의 주름개선 효능을 COL1A1 발현으로 평가한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 7은 본 발명에 의해 정제된 울릉국화, 은행잎 유래 엑소좀의 주름개선 효능을 MMP-1 발현 억제로 평가한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 8은 본 발명에 의해 정제된 울릉국화, 은행잎 유래 엑소좀의 피부장벽강화 효능을 Filaggrin 발현으로 평가한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 9는 본 발명에 의해 정제된 울릉국화, 은행잎 유래 엑소좀의 피부장벽강화 효능을 Loricrin 발현으로 평가한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 10은 본 발명에 의해 정제된 울릉국화, 은행잎 유래 엑소좀의 세포재생 효능을 wound healing assay로 평가한 결과를 나타낸 이미지이다.
도 11은 본 발명에 의해 정제된 울릉국화, 은행잎 유래 엑소좀의 세포재생 효능을 wound area 면적율로 평가한 결과를 나타낸 그래프이다.
이하, 본 발명을 더욱 구체적으로 설명한다.
식물 유래 엑소좀은 식물 세포 자체가 분비하는 생리활성 및 신호전달물질을 함유하고 있으며, 포유류 유래 엑소좀에 비해 독성이 없다고 알려져 있다. 이러한 장점으로 인해 의약품, 화장품, 식품 등의 분야에서 활용이 가능한 소재이나 인지질 이중막으로 구성되어 있는 구조적인 특징으로 인해 분산력이 낮고 응집하려는 성질이 있어, 제형 내에서 그 활성을 지속적으로 유지하기 어렵다는 문제점을 가진다. 본 발명은 동결융해 처리 및 UV 전처리를 통하여 울릉국화, 은행잎으로부터 피부 개선활성이 우수한 엑소좀을 고순도로 분리 정제하여, 이를 화장료로 이용하는 것을 기술적 특징으로 한다.
울릉국화(Dendranthema zawadskii var. lucidum (Nakai))는 경상북도 울릉도 성인봉의 산지에 난다. 잎은 깊게 비교적 가늘게 갈라지고 갈래는 피침형으로 두껍고 광채가 나며 잎자루가 있는 특징이 있다. 구절초와 비슷하게 생겼으나 잎의 갈래가 더 많이 갈라진 특징을 가지고 있는 산림청 지정 희귀 및 멸종위기 식물 중의 하나이다. 일본인인 나카이(Nakai)가 처음 발견하여 일본의 학회에 보고하였으며, 그 후 계속된 연구를 통하여 우리나라 울릉도에만 살고 있는 특산식물로 밝혀졌다. 많은 사람들이 무분별하게 채취하여 자생지가 점차 사라지고 있으며 나리분지에서 생육하고 있는 지역을 천연기념물로 지정 보호하고 있다. 온중, 조경, 소화 등에 효능이 있으며 월경불순, 자궁냉증, 불임증, 위냉, 소화불량을 치료하는 약재로 사용하였다. 울릉국화에는 chlorogenic acid, luteoloside, cosmosiin, linarin 등이 함유되어 있으며, 총 플라보노이드, 폴리페놀 함량이 풍부하여 항산화 활성이 우수하다.
소나무, 향나무, 가문비나무, 전나무 등 대부분의 겉씨식물의 잎이 침상(針狀)인 것과 달리, 은행잎(Ginkgo biloba Leaf)은 부채꼴로 중간부위가 갈라진다. 은행잎은 긴 가지에서는 어긋나며 짧은 가지에서는 3~5개씩 조밀하고 어긋나게 달려 마치 한곳에서 자라난 것처럼 보인다. 또 긴 가지의 잎은 깊이 갈라지며 짧은 가지의 잎은 가장자리가 밋밋한 것이 많다. 봄에 새잎이 돋고 가을에 노랗게 단풍이 물든 후 낙엽을 떨군다. 은행잎에는 플라보노이드 외에 ginkgolides, bilobalides, terpenoids 등이 유효성분으로 함유되어 있으며, 우리 몸에 유해한 활성산소를 제거하는 항산화 효과가 우수하다. 또한 일산화질소(NO)와 프로스타글란딘I2(PGI2, prostacyclin)를 활성화함으로써 혈소판 응집 억제와 혈관 이완 유도를 통해 혈행을 개선한다고 알려져 있다. 그 외에 기억력 효과와 치매(dementia)에서 인지 능력을 향상시킬 수 있다고도 알려져 있다.
본 발명 화장료 조성물의 유효성분으로서의 울릉국화, 은행잎 유래 엑소좀은 다음과 같은 방법으로 정제된다.
(A) 울릉국화 또는 은행잎에 용매를 가하고 동결 및 융해를 반복하여 추출하는 단계; (B) 동결융해 전처리를 한 울릉국화 또는 은행잎에 UV-A를 1~6시간 처리하는 단계; (C) UV 처리한 울릉국화 또는 은행잎을 착즙하는 단계; (D) 상기 착즙액을 1,000xg~10,000xg에서 원심분리하여 상층액을 수득하는 단계; (E)엑소좀이 존재하는 상기 상층액을 동결건조하는 단계; (F)상기 동결건조물에 PEG(Polyethylene glycol)/Dextran을 사용하여 수성 2상계를 형성하는 단계; 및 (G)상기 수성 2상계 중 엑소좀이 농축된 하층액을 수득하는 단계를 포함하는 방법에 의하여 정제된다.
본 발명에서는 피부개선활성이 우수한 울릉국화, 은행잎 유래 엑소좀을 제조하기 위하여 먼저 원물에 물을 가하고 동결융해 처리 및 UV 전처리를 수행한다.
식물의 경우 환경적인 요인에 의해 엑소좀의 분비특성이 달라질 수 있으며 특히 식물이 스트레스를 받았을 때 엑소좀의 분비량에 영향을 줄 수 있다. 따라서 식물이 엑소좀을 분비하는 최적의 조건을 확인하기 위해 다양한 전처리를 통해 그 수율과 피부개선활성을 확인하였으며, 울릉국화, 은행잎은 전처리로서 동결융해 처리 및 UV 전처리를 수행하는 경우에 엑소좀의 분비가 증가하며, 피부개선활성이 증가한다는 것을 확인하였다.
본 발명의 바람직한 일 구체예에 따르면, 상기 (A)단계에서의 동결 융해 처리는 -80 ~ -70℃의 온도 조건에서 15~20시간 동안 동결시킨 후, 40~50℃의 온도 조건에서 8~10시간 동안 융해시키는 공정을 2~5회 반복한다. 이어서 340~380nm 파장의 UV-A로 4~6시간 조사 처리한다((B) 단계).
UV 처리는 식물 엑소좀을 UV 처리하였을 때 엑소좀의 크기 및 농도에 변화가 없음을 확인 후 수행하였다.
상기 (C) 단계에서 착즙하는 공정에 사용되는 스크류는 교반 속도가 20~50 rpm인 것을 사용하는 것이 바람직하다.
상기 (D) 단계에서 사용되는 원심분리법은 크기, 모양, 밀도, 점성, 로터 속도에 따른 원심력을 이용하여 용액의 입자를 분리해내는 방법을 의미한다. 순차적으로 rpm을 조절하여 큰 오염 물질 제거가 필요하며 수성 2상계를 형성하기 위한 최종 용액을 얻기 위해서는 10,000xg에서 수행하는 것이 더욱 바람직하다.
상기 (E) 단계에서 사용되는 동결건조는 용기의 온도를 급격하게 낮추어 건조시키고자 하는 물질을 얼린 다음 용기 내부의 압력을 진공에 가깝게 하여 재료에 포함된 고체화된 용매를 바로 수증기로 승화시켜 건조하는 방법이다. -50 ~ -80℃에서 15~24시간동안 동결하고, 동결건조기에서 진공상태로 72~120시간동안 건조한다. 이때 진공상태는 통상 동결건조기의 압력 상태를 의미한다.
엑소좀을 효율적으로 분리 정제하기 위하여 본 발명에서는 상호간에 잘 용해되지 않은 2종류의 수용액으로 2층을 만들어 각층으로의 친화성 차이를 이용한 분리법의 하나인 수성 2상분배법(aqueous two phase partition method)을 사용하였다.
수성 2상계를 형성하는 방법에는 일반적으로 PEG/염(염으로는 sulfate, phosphate, citrate 등)도 사용할 수 있으나, 본 발명의 목적을 달성하기 위해서는 PEG/Dextran을 사용하는 것이 바람직하다. Dextran은 박테리아 작용에 의해 얻은 천연 고분자로 화장품 제형에서 점증제, 결합제, 벌킹제로 사용한다.
상기 (F) 단계에서 수성 2상계의 형성에 있어서 PEG는 분자량이 10,000~35,000인 것을 1~15중량%, 바람직하게는 2~5중량% 사용하고 Dextran은 분자량이 300,000~650,000인 것을 1~8 중량%, 바람직하게는 1~3중량% 사용하는 것을 특징으로 한다. 상기 PEG와 Dextran이 3.3중량%: 1.7중량%의 농도비율로 사용되는 경우에 엑소좀의 수율이 가장 높고, 안정성이 가장 우수하므로 더욱 바람직하다.
엑소좀의 순도를 높이기 위해, 상기 (G)단계에 이어서 동일한 농도의 수성 2상계 용액을 사용하여 수성 2상계를 형성하고 하층액을 수득하는 과정을 2~3회 수행하는 공정을 추가적으로 수행할 수 있다.
이와 같은 방법에 의하여 제조된 울릉국화 엑소좀, 은행잎 엑소좀 및 그 혼합 엑소좀은 일반 울릉국화 추출물, 은행잎 추출물과 비교하여, 우수한 주름개선효과(시험예 7, 시험예 8), 세포재생 효과(시험예 11), 피부장벽강화 효과(시험예 9, 시험예 10)를 나타내었다.
그러므로 상기 울릉국화, 은행잎 유래 엑소좀은 주름개선용, 세포재생용, 피부장벽강화용 화장료 조성물에 사용될 수 있다. 이때 상기 유효성분으로서의 울릉국화, 은행잎 유래 엑소좀 또는 그 혼합엑소좀은 화장료 조성물 전체 중량에 대하여 0.0001 내지 30.0%(w/w) 함유될 수 있다. 상기 혼합 엑소좀은 울릉국화 엑소좀과 은행잎 엑소좀이 각각 1~3:1~3의 중량비율로 혼합되어 이루어진다.
상기 화장료 조성물은 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 가능하며 예를 들면, 스킨로션, 스킨토너, 팩, 영양크림, 수분 크림, 에센스, 바디크림, 바디로션, 바디오일, 클렌징폼, 클렌징로션, 비누, 패치, 파운데이션, 립스틱, 메이크업 베이스, 립스틱 등으로 제조될 수 있다.
[실시예]
이하, 본 발명을 하기의 실시예 및 시험예에 의거하여 좀 더 상세하게 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐, 본 발명이 하기 실시예에 의해 한정되는 것이 아니고, 본 발명의 기술적 사상을 벗어나지 않는 범위 내에서 치환 및 균등한 타 실시예로 변경할 수 있음은 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 명백할 것이다.
실시예 1: 울릉국화 엑소좀의 제조
울릉국화 동결 융해 전처리
울릉국화 100g에 정제수를 가하고 -80℃의 온도 조건에서 18시간 동안 동결시킨 후, 40℃의 온도 조건에서 8시간 동안 융해시켰다. 해당 과정을 총 3번 반복하여 엑소좀 추출이 용이한 상태를 만들어주었다.
울릉국화 UV-A 처리
동결 융해 전처리한 울릉국화에 365nm 파장의 UV-A를 6시간동안 처리하였다.
울릉국화 착즙
UV 처리한 울릉국화를 일반 착즙기를 사용하여 30 rpm의 저속 스크류로 착즙을 수행하였으며 수득한 울릉국화 착즙액은 메쉬망에 걸러 부유물을 제거하였다. 회수한 울릉국화 착즙액은 정제를 진행하기 전까지 -80℃에서 보관하였다.
엑소좀 정제를 위한 상층액 회수
울릉국화 착즙액은 엑소좀 정제를 위해 큰 오염 물질 제거가 필요하기 때문에 10,000xg에서 10분동안 4℃에서 원심분리를 수행하였다. 원심분리를 수행 후 수성 2상계를 형성하기 위해 상층액을 회수하였다.
상층액 동결건조
엑소좀의 대량생산을 위해 상층액의 부피를 줄이는 목적으로 동결건조를 수행하였다. -80℃에서 20시간동안 동결하고, 동결건조기에서 진공상태로 100시간동안 건조하였다. 이때 진공상태는 통상 동결건조기의 압력 상태를 의미하며 동결 및 건조 시간은 용액의 부피에 따라 달라질 수 있다.
수성 2상계 형성
동결건조한 상층액에 정제수를 추가하고 PEG(Polyethylene glycol)/Dextran을 사용하여 수성 2상계를 형성하였다. PEG(Sigma Aldrich에서 구매)는 분자량이 10,000~35,000인 것을 3.3 중량% 사용하고 Dextran(Sigma Aldrich에서 구매)은 분자량이 300,000~650,000인 것을 1.7 중량% 사용하여 수성 2상 시스템을 형성하였다.
울릉국화 엑소좀의 회수
상층액과 PEG/Dextran 용액을 혼합한 후 1,000xg에서 10분동안 4℃에서 원심분리를 수행하였다. 원심분리 후 상층액을 제거하여 엑소좀을 회수하였다.
추가 세척 공정
순도를 높이기 위해 회수된 하층액에 동일한 농도의 상기 수성 2상계 용액을 넣어 추가 세척 공정을 수행하였다. 3회 반복 처리 후 최종 엑소좀이 농축된 하층액을 회수하였다.
실시예 2: 은행잎 엑소좀의 제조
상기 실시예 1과 동일하게 하여 은행잎 유래 엑소좀을 정제하였다.
실시예 3: 울릉국화, 은행잎 혼합 엑소좀의 제조
상기 실시예 1, 2에서 제조한 울릉국화 엑소좀과 은행잎 엑소좀을 동일 중량비율로 혼합하여 혼합 엑소좀을 제조하였다.
실시예 4~9: 울릉국화, 은행잎 엑소좀의 제조
식물의 경우 환경적인 요인에 의해 엑소좀의 분비특성이 달라질 수 있다. 식물이 엑소좀을 분비하는 최적의 조건이 모두 다르기 때문에 동결 융해 처리 및 UV 처리 여부 등 환경 스트레스에 의한 엑소좀의 수율 비교를 통해 최적의 조건을 확립하기 위해 울릉국화와 은행잎의 동결 융해 처리 및 UV 처리 여부 조건을 달리하여 엑소좀을 정제하였다. 최적 조건을 확인하기 위해 해당 조건들만을 달리하고 상기 실시예 1과 동일하게 엑소좀을 정제하였으며, 조건은 하기의 표 1에 나타내었다. 실시예 4와 실시예 7은 울릉국화와 은행잎을 동결 융해 처리 및 UV 전처리 없이 정제수를 가한 후 착즙하여 수성 2상 시스템을 적용하여 정제하였다.
| 원물 | 동결 융해 처리 여부 | UV 처리 여부 | |
| 실시예 4 | 울릉국화 | X | X |
| 실시예 5 | 울릉국화 | ○ | X |
| 실시예 6 | 울릉국화 | X | ○ |
| 실시예 7 | 은행잎 | X | X |
| 실시예 8 | 은행잎 | ○ | X |
| 실시예 9 | 은행잎 | X | ○ |
비교예 1: 울릉국화 추출물 제조
울릉국화 건조물 10g을 정제수 100g에 넣고 80℃에서 3시간동안 추출하였다. 추출 후 감압여과를 수행하여 울릉국화 추출물을 얻은 후 회전증발농축기를 사용하여 증류하여 파우더 형태로 샘플을 수득하였다.
비교예 2: 은행잎 추출물 제조
은행잎 건조물 10g을 정제수 100g에 넣고 80℃에서 3시간동안 추출하였다. 추출 후 감압여과를 수행하여 은행잎 추출물을 얻은 후 회전증발농축기를 사용하여 증류하여 파우더 형태로 샘플을 수득하였다.
시험예 1: 울릉국화 유래 엑소좀의 특성 분석: TEM 분석
정제한 울릉국화 유래 엑소좀의 모양을 확인하기 위해 투과 전자 현미경(TEM)으로 분석하였다. 도 1은 상기 실시예 1에 따라서 정제된 울릉국화 유래 엑소좀의 TEM 분석 이미지이다. 분석 결과, 구형의 인지질 이중층 구조로 된 약 150nm의 입자의 존재를 확인하였다.
시험예 2: 은행잎 유래 엑소좀의 특성 분석: TEM 분석
정제한 은행잎 유래 엑소좀의 모양을 확인하기 위해 투과 전자 현미경(TEM)으로 분석하였다. 도 2는 상기 실시예 2에 따라서 정제된 은행잎 유래 엑소좀의 TEM 분석 이미지이다. 분석 결과, 구형의 인지질 이중층 구조로 된 약 150nm의 입자의 존재를 확인하였다.
시험예 3: 울릉국화 유래 엑소좀의 특성 분석: NTA 분석
정제한 울릉국화 유래 엑소좀의 입자 크기 분포와 단위 부피당 입자 수를 확인하기 위해 나노입자추적분석(Nanoparticle Tracking Analysis, NTA)으로 분석하였다.
도 3은 상기 실시예 1에 따라서 정제된 울릉국화 유래 엑소좀의 NTA 분석 결과를 나타낸 그래프이며 분석 결과, 입자들의 평균 크기 150.1nm와 1 mL의 단위 부피당 3.3E+10 개의 농도를 확인하였다.
시험예 4: 은행잎 유래 엑소좀의 특성 분석: NTA 분석
정제한 은행잎 유래 엑소좀의 입자 크기 분포와 단위 부피당 입자 수를 확인하기 위해 나노입자추적분석(Nanoparticle Tracking Analysis, NTA)으로 분석하였다.
도 4는 상기 실시예 2에 따라서 정제된 은행잎 유래 엑소좀의 NTA 분석 결과를 나타낸 그래프이며 분석 결과, 입자들의 평균 크기 178.5nm와 1 mL의 단위 부피당 5.0E+10 개의 농도를 확인하였다.
시험예 5: 울릉국화, 은행잎 유래 엑소좀의 수율 비교
동결 융해 처리 및 UV 처리의 최적 조건을 확인하기 위해 상기 실시예 1, 2 및 4~9에 따라 정제한 울릉국화, 은행잎 유래 엑소좀의 수율을 비교하였다. 하기 표 2는 수율 비교를 나노입자추적분석(NTA) 결과로 나타낸 표이다.
| 번호 | Particle Number (Particles/ml) |
Particle Size (nm) |
| 실시예 1 | 3.3E+10 | 150.1 |
| 실시예 2 | 5.0E+10 | 178.5 |
| 실시예 4 | 6.2E+08 | 148.7 |
| 실시예 5 | 3.1E+09 | 143.2 |
| 실시예 6 | 2.7E+09 | 147.3 |
| 실시예 7 | 8.0E+08 | 176.3 |
| 실시예 8 | 5.2E+09 | 170.6 |
| 실시예 9 | 6.4E+09 | 173.7 |
상기 표 2에서 확인되는 바와 같이 동결 융해 처리 및 UV 전처리를 한 조건인 실시예 1, 2에서 엑소좀의 수율이 가장 높았다. 실시예 4와 실시예 7의 결과로 보았을 때 동결 융해 처리 및 UV 전처리를 수행하지 않은 엑소좀의 경우 가장 낮은 수율을 보였다. 이는 전처리 조건이 엑소좀의 수율에 큰 영향을 주는 것으로 나타내며, 가장 최적의 조건은 동결 융해 처리 및 UV 전처리를 수행한 것임을 확인하였다.
시험예 6: 세포독성 평가
울릉국화 엑소좀(실시예 1), 은행잎 엑소좀(실시예 2) 및 그 혼합엑소좀(실시예 3)과 울릉국화 추출물(비교예 1), 은행잎 추출물(비교예 2)의 세포독성을 확인하기 위해 MTT assay 평가를 진행하였다. 96well 플레이트에 Human Keratinocyte(HaCaT) 세포를 1×105 cells/mL의 농도로 접종 후 37℃로 18시간동안 5% CO2 하에 배양하였다. 배양 후, 배지를 제거하고 PBS buffer로 세척한 후 새로운 배지에 울릉국화 엑소좀, 은행잎 엑소좀, 그 혼합 엑소좀 및 울릉국화 추출물, 은행잎 추출물을 농도 별로 투여하고 다시 24시간동안 배양하였다. 세포의 생존율을 측정하기 위해 MTT solution (5mg/mL)을 첨가한 후 4시간 동안 형성된 formazan을 Dimethyl sulfoxide(DMSO)로 용해하고 ELISA reader를 이용하여 570nm에서 흡광도를 측정하였다.
도 5는 상기 시료들의 세포독성을 MTT assay로 평가한 결과를 나타낸 그래프이다. 시험 결과, 울릉국화 엑소좀, 은행잎 엑소좀, 울릉국화와 은행잎 혼합 엑소좀 및 울릉국화 추출물, 은행잎 추출물을 처리하였을 때 모든 농도에서 세포독성이 나타나지 않았다.
시험예 7: 울릉국화, 은행잎 엑소좀의 주름개선 효능 평가(COL1A1 발현)
울릉국화, 은행잎 유래 엑소좀의 주름개선 효능을 확인하기 위해 추출물과 비교하여 COL1A1 발현에 미치는 영향을 평가하였다. 사람의 섬유아세포 세포주(human dermal fibroblast, HDFa)를 접종 후 100 IU/mL penicillin, 100 μg/mL streptomycin을 첨가한 Fibroblast Basal Medium(Medium 106) 배양 배지에서 37℃로 24시간동안 5% CO2 하에 배양하였다. 각 웰의 배지를 제거하고 새로운 무혈청배지로 교체하였다. 각 웰에 울릉국화 엑소좀, 은행잎 엑소좀 및 울릉국화 추출물, 은행잎 추출물을 농도 별로 투여하여 4시간 전처리를 수행하였다. 각 well plate에 UVB 조사장치(vilber loumet, France)에 의해 20mJ/cm2 UVB를 조사하였다. 시료를 희석한 무혈청배지를 처리한 후 24시간 동안 추가 배양하였다. 이때 음성 대조군으로는 PBS를 처리하였으며 양성 대조군으로는 TGF-β1 10nM 처리하였다. Ribo Ex TM Total RNA Isolation Solution(GeneAll Biotechnology, Korea)와 scraper를 이용하여 세포배양이 끝난 세포를 용해한 다음 0.2mL 클로로포름(Sigma-Aldrich, USA)을 첨가하여 원심 분리(12,000 rpm, 4℃, 30분)한다. RNA가 있는 상층액을 분리하여 아이소프로판올(Merck-Millipore, Germany)을 상층액과 동량 넣어 inverting 후 원심 분리(12,000 rpm, 4℃, 30분)한다. RNA를 침전시켜 침전물을 제외한 상층액은 버린 후 남아있는 침전물에 ethanol(Merck-Millipore, Germany) 70%를 넣어 원심 분리(12,000 rpm, 4℃, 10분)하여 세척한다. Ethanol을 제거하고 상온에서 건조시킨 후, Nuclease-Free Water(Affymetrix, USA)로 용해하여 total RNA를 추출하였다. MaestroNano® Micro-volume Spectrophotometer(MN-913, Maestrogen, USA)를 이용하여 A260/A280 파장에서 RNA의 순도와 농도를 측정한 뒤, 260 nm와 280 nm의 비가 2.0-2.2 범위에 해당함을 확인하였다. cDNA는 PCR tube에 1μg RNA와 Oligo dT (Bionics, Korea) dNTP (Takara, Korea), nuclease free water를 total 13μL로 제조한 다음 65℃에서 5분 반응시킨 후, M-MLV Reverse Transcriptase(Invitrogen, Thermo Fisher Scientific, Waltham, Massachusetts, USA)를 이용하여 37℃에서 50분 반응시켜 합성하였다. 시료에 의한 각 세포 내에서 일어나는 유전자 발현 패턴을 정량적으로 분석하기 위하여 qRT-PCR을 실행하였다. qRT-PCR은 PCR tube에 primer, cDNA, 2X SYBR green PCR Master Mix(Applied Biosystems, USA), HPLC(J. T baker, USA)를 total 20μL로 혼합하여 반응액을 만들어 StepOnePlus Real-Time PCR System (Applied Biosystems, USA)을 사용하여 PCR을 진행하였다.
COL1A1 유전자의 PCR primer 서열은 아래 표 3에 나타내었으며, 도 6은 상기 실시예에 따라서 정제된 울릉국화, 은행잎 유래 엑소좀의 주름개선 효능을 COL1A1 mRNA 발현으로 평가한 결과를 나타낸 그래프이다. 시험 결과, 울릉국화, 엑소좀, 은행잎 엑소좀과 울릉국화 추출물, 은행잎 추출물을 처리하였을 때 농도 의존적으로 콜라겐생성 인자인 COLA1A mRNA가 증가하였으며 추출물 대비 엑소좀 처리 농도 범위에서 발현율이 훨씬 더 증가됨을 확인하였다. 이때 양성 대조군인 TGF-β1 10nM을 처리하였을 때는 fold change 값이 2.998로 확인되었다.
| 유전자 | Forward primer (5'→3') | Reverse primer (5'→3') |
| COL1A1 | 5'-GAG AGC ATG ACC GAT GGA TT-3' | 5'-CCT TCT TGA GGT TGC CAG TC-3' |
| GAPDH | 5'-GTC TCC TCT GAC TTC AAC AGC G-3' | 5'-ACC ACC CTG TTG CTG TAG CCA A-3' |
시험예 8: 울릉국화, 은행잎 엑소좀의 주름개선 효능 평가(MMP-1 발현 억제)
울릉국화, 은행잎 유래 엑소좀의 주름개선 효능을 확인하기 위해 추출물과 비교하여 MMP-1 발현에 미치는 영향을 확인하였다. 실험 방법은 위 시험예 7과 동일하며 MMP-1 유전자의 PCR primer 서열을 아래 표 4에 나타내었다. 도 7은 상기 실시예에 따라서 정제된 울릉국화, 은행잎 유래 엑소좀의 주름개선 효능을 MMP-1 mRNA 발현 억제로 평가한 결과를 나타낸 그래프이다. 시험 결과, 울릉국화 엑소좀, 은행잎 엑소좀과 울릉국화 추출물, 은행잎 추출물을 처리하였을 때 농도 의존적으로 콜라겐분해효소인자인 MMP-1 mRNA가 감소하였으며 추출물 대비 엑소좀 처리 농도 범위에서 억제율이 훨씬 더 증가됨을 확인하였다. 이때 양성 대조군인 TGF-β1 10nM을 처리하였을 때는 fold change 값이 2.680으로 확인되었다.
| 유전자 | Forward primer (5'→3') | Reverse primer (5'→3') |
| MMP-1 | 5'-GGG CTT GAA GCT GCT TAC GA-3' | 5'-ACA GCC CAG TAC TTA TTC CCT TTG-3' |
| GAPDH | 5'-GTC TCC TCT GAC TTC AAC AGC G-3' | 5'-ACC ACC CTG TTG CTG TAG CCA A-3' |
시험예 9: 울릉국화, 은행잎 엑소좀의 피부장벽강화 효능 평가(filaggrin 발현)
울릉국화, 은행잎 유래 엑소좀의 피부장벽강화 효능을 확인하기 위해 추출물과 비교하여 Filaggrin 발현에 미치는 영향을 평가하였다. Human Keratinocyte(HaCaT) 세포주를 접종 후 100 IU/mL penicillin, 100 μg/mL streptomycin을 첨가한 Fibroblast Basal Medium(Medium 106) 배양 배지에서 37℃로 24시간동안 5% CO2 하에 배양하였다. 각 웰의 배지를 제거하고 새로운 무혈청배지로 교체하였다. 각 웰에 울릉국화 엑소좀, 은행잎 엑소좀 및 울릉국화 추출물, 은행잎 추출물을 농도 별로 투여하여 4시간 전처리를 수행하였다. 각 well plate에 UVB 조사장치(vilber loumet, France)에 의해 20mJ/cm2 UVB를 조사하였다. 시료를 희석한 무혈청배지를 처리한 후 24시간 동안 추가 배양하였다. 이때 음성 대조군으로는 PBS를 처리하였으며 양성 대조군으로는 CaCl2 100nM을 처리하였다. Ribo Ex TM Total RNA Isolation Solution(GeneAll Biotechnology, Korea)와 scraper를 이용하여 세포배양이 끝난 세포를 용해한 다음 0.2mL 클로로포름(Sigma-Aldrich, USA)을 첨가하여 원심 분리(12,000 rpm, 4℃, 30분)한다. RNA가 있는 상층액을 분리하여 아이소프로판올(Merck-Millipore, Germany)을 상층액과 동량 넣어 inverting 후 원심 분리(12,000 rpm, 4℃, 30분)한다. RNA를 침전시켜 침전물을 제외한 상층액은 버린 후 남아있는 침전물에 ethanol(Merck-Millipore, Germany) 70%를 넣어 원심 분리(12,000 rpm, 4℃, 10분)하여 세척한다. Ethanol을 제거하고 상온에서 건조시킨 후, Nuclease-Free Water(Affymetrix, USA)로 용해하여 total RNA를 추출하였다. MaestroNano® Micro-volume Spectrophotometer(MN-913, Maestrogen, USA)를 이용하여 A260/A280 파장에서 RNA의 순도와 농도를 측정한 뒤, 260 nm와 280 nm의 비가 2.0-2.2 범위에 해당함을 확인하였다. cDNA는 PCR tube에 1μg RNA와 Oligo dT (Bionics, Korea) dNTP(Takara, Korea), nuclease free water를 total 13μL로 제조한 다음 65℃에서 5분 반응시킨 후, M-MLV Reverse Transcriptase(Invitrogen, Thermo Fisher Scientific, Waltham, Massachusetts, USA)를 이용하여 37℃에서 50분 반응시켜 합성하였다. 시료에 의한 각 세포 내에서 일어나는 유전자 발현 패턴을 정량적으로 분석하기 위하여 qRT-PCR을 실행하였다. qRT-PCR은 PCR tube에 primer, cDNA, 2X SYBR green PCR Master Mix(Applied Biosystems, USA), HPLC(J. T baker, USA)를 total 20μL로 혼합하여 반응액을 만들어 StepOnePlus Real-Time PCR System (Applied Biosystems, USA)을 사용하여 PCR을 진행하였다.
Filaggrin 유전자의 PCR primer 서열은 아래 표 5에 나타내었으며, 도 8은 상기 실시예에 따라서 정제된 울릉국화, 은행잎 유래 엑소좀의 피부장벽강화 효능을 Filaggrin mRNA 발현으로 평가한 결과를 나타낸 그래프이다. 시험 결과, 울릉국화 엑소좀, 은행잎 엑소좀과 울릉국화 추출물, 은행잎 추출물을 처리하였을 때 농도 의존적으로 피부장벽 단백질인 Filaggrin mRNA가 증가하였으며 추출물 대비 엑소좀 처리 농도 범위에서 발현이 훨씬 더 증가됨을 확인하였다. 이때 양성 대조군인 CaCl2 100nM을 처리하였을 때는 fold change 값이 2.620으로 확인되었다.
| 유전자 | Forward primer (5'→3') | Reverse primer (5'→3') |
| Filaggrin | 5'-GCT GAA GGA ACT TCT GGA AAA GG-3' | 5'-GTT GTG GTC TAT ATC CAA GTG ATC-3' |
| GAPDH | 5'-GTC TCC TCT GAC TTC AAC AGC G-3' | 5'-ACC ACC CTG TTG CTG TAG CCA A-3' |
시험예 10: 울릉국화, 은행잎 엑소좀의 피부장벽강화 효능 평가(Loricrin 발현)
울릉국화, 은행잎 유래 엑소좀의 피부장벽강화 효능을 확인하기 위해 추출물과 비교하여 Loricrin 발현에 미치는 영향을 확인하였다. 실험 방법은 위 시험예 9과 동일하며 Loricrin 유전자의 PCR primer 서열을 아래 표 6에 나타내었다. 도 9는 상기 실시예에 따라서 정제된 울릉국화, 은행잎 유래 엑소좀의 피부장벽강화 효능을 Loricrin mRNA 발현으로 평가한 결과를 나타낸 그래프이다. 시험 결과, 울릉국화 엑소좀, 은행잎 엑소좀과 울릉국화 추출물, 은행잎 추출물을 처리하였을 때 농도 의존적으로 피부장벽 단백질인 Loricrin mRNA가 증가하였으며 추출물 대비 엑소좀 처리 농도 범위에서 발현이 훨씬 더 증가됨을 확인하였다. 이때 양성 대조군인 CaCl2 100nM을 처리하였을 때는 fold change 값이 2.600으로 확인되었다.
| 유전자 | Forward primer (5'→3') | Reverse primer (5'→3') |
| Loricrin | 5'- GTC TGC GGA GGT GGT TCC TCT-3' | 5'- TGC TGG GTC TGG TGG CAG ATC-3' |
| GAPDH | 5'-GTC TCC TCT GAC TTC AAC AGC G-3' | 5'-ACC ACC CTG TTG CTG TAG CCA A-3' |
시험예 11: 천궁, 작약 유래 엑소좀의 세포재생 효능 평가(Wound healing assay)
울릉국화, 은행잎 유래 엑소좀의 세포재생 효능을 확인하기 위해 wound healing assay 평가를 진행하였다. 세포는 화학적 및 물리적 자극에 의해 손상을 받게 되면 다양한 케모카인(chemokine)과 사이토카인(cytokine)을 분비함과 동시에 피부 손상 부위로 이동해 세포의 증식을 유도한다. 따라서 피부 세포의 성장 및 이동을 시험하는 wound healing assay를 통해 시료에 의한 세포 재생 유도 효과를 확인하였다. 각질형성세포(HaCaT)를 6well 플레이트에 접종 후 37℃로 24시간동안 5% CO2 하에 배양하였다. 배양 후, 200 ㎕ 파이펫 팁을 이용하여 세포를 긁어 내었다. 긁어낸 후 떨어져나간 세포들은 PBS buffer로 반복해서 세척하고 1.5% 소혈청이 포함된 DMEM 배지로 교체한 후 울릉국화 엑소좀, 은행잎 엑소좀 및 울릉국화 추출물, 은행잎 추출물을 처리하고 양성대조군으로는 TGF-β1 10ng/mL를 처리하였다. 그 후 18시간 동안 배양하였으며 상처가 생긴 후 0시간과 18시간에 같은 위치를 현미경으로 촬영하여 18시간 동안 줄어든 면적을 Image J(National Institutes of Health, USA)로 측정하여 평균값을 계산하였다. 도 10은 상기 실시예에 따라서 정제된 울릉국화, 은행잎 유래 엑소좀의 피부재생 효능을 wound healing assay로 평가한 결과를 나타낸 이미지이며, 울릉국화, 은행잎 엑소좀을 1.0E+08 particles/mL을 처리하고 울릉국화, 은행잎 추출물을 20% 처리하였을 때의 결과를 나타내었다. 도 11은 wound area 면적율에 대한 그래프 결과를 나타내었다. 시험 결과, 울릉국화 유래 엑소좀, 은행잎 유래 엑소좀을 처리하였을 때 wound area 면적이 감소하였으며 울릉국화, 은행잎 혼합 엑소좀을 처리하였을 때 더 높은 면적 감소율을 보였다. 이로 인해 세포의 성장 및 이동이 증가하여 세포재생에 효과가 있음을 확인하였다. 이 때 양성 대조군인 TGF-β1 10ng/mL를 처리하였을 때는 37.05% 면적율을 보였다.
제형예 1~3: 크림의 제조
하기 표 7의 조성으로 상기 실시예에 따라서 정제된 울릉국화 엑소좀, 은행잎 엑소좀을 포함하는 크림을 통상의 방법으로 제조하였다. 비교예 1의 울릉국화 추출물을 함유하는 크림을 비교 제형예 1로 하고, 비교예 2의 은행잎 추출물을 함유하는 크림을 비교 제형예 2로 하였다.
| 성분 | 제형예 1 | 제형예 2 | 제형예 3 | 비교제형예 1 | 비교제형예 2 |
| 함량(중량 %) | |||||
| 울릉국화 엑소좀(실시예 1) | 5 | - | - | - | - |
| 은행잎 엑소좀(실시예 2) | - | 5 | - | - | - |
| 울릉국화+은행잎 엑소좀(실시예 3) | - | - | 5 | - | - |
| 울릉국화 추출물(비교예 1) | - | - | - | 5 | - |
| 은행잎 추출물(비교예 2) | - | - | - | - | 5 |
| 글리세린 | 10 | 10 | 10 | 10 | 10 |
| 부틸렌글라이콜 | 5 | 5 | 5 | 5 | 5 |
| 글리세릴올리에이트 | 1.8 | 1.8 | 1.8 | 1.8 | 1.8 |
| 세테아릴올리베이트 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
| 솔비탄올리베이트 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
| 카프릴릭/카프릭트리글리세라이드 | 5.0 | 5.0 | 5.0 | 5.0 | 5.0 |
| 세틸에틸헥사노에이트 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 |
| 비즈왁스 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
| 스쿠알란 | 0.2 | 0.2 | 0.2 | 0.2 | 0.2 |
| 1,2-헥산다이올 | 0.2 | 0.2 | 0.2 | 0.2 | 0.2 |
| 콜레스테릴/베헤닐/옥틸도데실라우로일글루타메이트 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 |
| 디메치콘 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
| 사이클로펜타실론삭/사이클로헥사실록산 | 2.0 | 2.0 | 2.0 | 2.0 | 2.0 |
| 세티아릴알코올 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 |
| 미네랄 오일 | 2.5 | 2.5 | 2.5 | 2.5 | 2.5 |
| 디소듐이디티에이 | 0.02 | 0.02 | 0.02 | 0.02 | 0.02 |
| 비에이치티 | 0.05 | 0.05 | 0.05 | 0.05 | 0.05 |
| 토코페릴아세테이트 | 0.3 | 0.3 | 0.3 | 0.3 | 0.3 |
| 판테놀 | 0.2 | 0.2 | 0.2 | 0.2 | 0.2 |
| 에칠헥실메톡시신나메이트 | 0.2 | 0.2 | 0.2 | 0.2 | 0.2 |
| 향 | 0.01 | 0.01 | 0.01 | 0.01 | 0.01 |
| 정제수 | 잔량 | 잔량 | 잔량 | 잔량 | 잔량 |
시험예 12: 울릉국화, 은행잎 유래 엑소좀의 주름개선 평가
울릉국화 엑소좀(실시예 1), 은행잎 엑소좀(실시예 2) 및 그 혼합 엑소좀(실시예 3)의 주름 개선 효능을 확인하기 위해 30 ~ 50대의 성인 여성 20명을 대상으로 상기 제형예에서 제조된 크림을 얼굴 양쪽면에 바르고, LED 광원장치로 633nm의 적색광을 6주간 누적 시간 24시간 조사한 후, 주름 개선 효과를 실제 사용 테스트를 통하여 평가하였다.
표 8은 상기 실시예에 따라서 정제된 울릉국화, 은행잎 유래 엑소좀의 주름개선 효과를 실제 사용 테스트를 통하여 평가한 결과를 나타낸 표이다.
| 주름개선효과 | |||
| 우수 | 약간 | 없음 | |
| 제형예 1 | 6 | 10 | 4 |
| 제형예 2 | 8 | 8 | 4 |
| 제형예 3 | 12 | 7 | 1 |
| 비교제형예 1 | 2 | 4 | 14 |
| 비교제형예 2 | 3 | 4 | 13 |
상기 표 8의 결과에서도 알 수 있듯이, 본 발명의 울릉국화 엑소좀, 은행잎 엑소좀과 울릉국화, 은행잎 혼합 엑소좀이 포함된 크림에서 우수한 피부 주름개선 효과를 나타내었다.
Claims (10)
- 울릉국화 엑소좀, 은행잎 엑소좀 또는 그 혼합 엑소좀을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물에 있어서,
상기 유효성분으로서의 울릉국화 엑소좀과 은행잎 엑소좀은,
(A)울릉국화 또는 은행잎에 용매를 가하고 동결 및 융해를 반복하여 추출하는 단계; (B)동결융해 전처리를 한 울릉국화 또는 은행잎에 UV-A를 1~6시간 처리하는 단계; (C)UV 처리한 울릉국화 또는 은행잎을 착즙하는 단계; (D)상기 착즙액을 1,000xg~10,000xg에서 원심분리하여 상층액을 수득하는 단계; (E)엑소좀이 존재하는 상기 상층액을 동결건조하는 단계; (F)상기 동결건조물에 PEG(Polyethylene glycol)/Dextran을 사용하여 수성 2상계를 형성하는 단계; 및 (G)상기 수성 2상계 중 엑소좀이 농축된 하층액을 수득하는 단계를 포함하는 방법에 의하여 정제된 것임을 특징으로 하는 화장료 조성물. - 삭제
- 제1항에 있어서, 상기 (A) 단계에서의 동결 융해 처리는 -80 ~ -70℃의 온도 조건에서 15~20시간 동안 동결시킨 후, 40~50℃의 온도 조건에서 8~10시간 동안 융해시키는 공정을 2~5회 반복하는 것임을 특징으로 하는 화장료 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 (B) 단계에서의 UV 처리는 340~380nm 파장의 UV-A로 4~6시간 동안 수행하는 것임을 특징으로 하는 화장료 조성물.
- 제1항에 있어서, 울릉국화 엑소좀, 은행잎 엑소좀 또는 그 혼합 엑소좀은 조성물 전체중량에 대하여 0.0001~30.0%(w/w) 함유되는 것임을 특징으로 하는 화장료 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 주름개선용임을 특징으로 하는 화장료 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 세포재생용임을 특징으로 하는 화장료 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 피부장벽강화용임을 특징으로 하는 화장료 조성물.
- (A)울릉국화 또는 은행잎에 용매를 가하고 -80 ~ -70℃의 온도 조건에서 15~20시간 동안 동결시킨 후, 40~50℃의 온도 조건에서 8~10시간 동안 융해시키는 공정을 2~5회 반복하여 추출하는 단계;
(B)동결융해 전처리를 한 울릉국화 또는 은행잎에 340~380nm 파장의 UV-A로 4~6시간 동안 처리하는 단계;
(C)UV 처리한 울릉국화 또는 은행잎을 착즙하는 단계;
(D)상기 착즙액을 1,000xg~10,000xg에서 원심분리하여 상층액을 수득하는 단계;
(E)엑소좀이 존재하는 상기 상층액을 동결건조하는 단계;
(F)상기 동결건조물에 PEG(Polyethylene glycol)/Dextran을 사용하여 수성 2상계를 형성하는 단계; 및
(G)상기 수성 2상계 중 엑소좀이 농축된 하층액을 수득하는 단계를 포함하는 울릉국화 또는 은행잎 엑소좀의 정제방법. - 삭제
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020230157326A KR102671639B1 (ko) | 2023-11-14 | 2023-11-14 | 울릉국화, 은행잎 유래 엑소좀을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020230157326A KR102671639B1 (ko) | 2023-11-14 | 2023-11-14 | 울릉국화, 은행잎 유래 엑소좀을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR102671639B1 true KR102671639B1 (ko) | 2024-06-03 |
Family
ID=91496484
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020230157326A KR102671639B1 (ko) | 2023-11-14 | 2023-11-14 | 울릉국화, 은행잎 유래 엑소좀을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR102671639B1 (ko) |
Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20070013622A (ko) * | 2005-07-26 | 2007-01-31 | 에스케이케미칼주식회사 | 피부노화 방지용 화장료 조성물 |
| KR20170112294A (ko) * | 2016-03-31 | 2017-10-12 | (주)아모레퍼시픽 | 울릉국화 추출물을 유효성분으로 함유하는 항노화용 피부 외용제 조성물 |
| KR101860352B1 (ko) * | 2017-06-01 | 2018-05-24 | (주)진셀팜 | 청호 복합 추출물을 유효성분으로 포함하는 모낭충 제거용 화장료 조성물 |
| KR102125567B1 (ko) | 2019-07-02 | 2020-06-22 | 한양대학교 에리카산학협력단 | 식물 엑소좀의 대량 생산 방법 |
| KR102265811B1 (ko) | 2021-04-09 | 2021-06-16 | 주식회사 에이바이오머티리얼즈 | 분산성 및 안정성이 우수한 병풀 유래 엑소좀의 정제방법 및 이를 함유하는 화장료 조성물 |
| KR20220122577A (ko) | 2020-09-22 | 2022-09-02 | 주식회사 바이오솔루션 | 식물 유래 세포 외 소포체를 포함하는 피부 상태 개선용 조성물 및 이의 제조방법 |
| KR102523523B1 (ko) * | 2022-11-14 | 2023-04-19 | 주식회사 에이바이오머티리얼즈 | 개박하, 시금치 유래 엑소좀을 유효성분으로 함유하는 피부 및 모발 상태개선용 화장료 조성물 |
| KR102523528B1 (ko) * | 2022-10-04 | 2023-04-19 | 주식회사 에이바이오머티리얼즈 | 자몽, 동백꽃 유래 엑소좀을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물 |
-
2023
- 2023-11-14 KR KR1020230157326A patent/KR102671639B1/ko active IP Right Grant
Patent Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20070013622A (ko) * | 2005-07-26 | 2007-01-31 | 에스케이케미칼주식회사 | 피부노화 방지용 화장료 조성물 |
| KR20170112294A (ko) * | 2016-03-31 | 2017-10-12 | (주)아모레퍼시픽 | 울릉국화 추출물을 유효성분으로 함유하는 항노화용 피부 외용제 조성물 |
| KR101860352B1 (ko) * | 2017-06-01 | 2018-05-24 | (주)진셀팜 | 청호 복합 추출물을 유효성분으로 포함하는 모낭충 제거용 화장료 조성물 |
| KR102125567B1 (ko) | 2019-07-02 | 2020-06-22 | 한양대학교 에리카산학협력단 | 식물 엑소좀의 대량 생산 방법 |
| KR20220122577A (ko) | 2020-09-22 | 2022-09-02 | 주식회사 바이오솔루션 | 식물 유래 세포 외 소포체를 포함하는 피부 상태 개선용 조성물 및 이의 제조방법 |
| KR102265811B1 (ko) | 2021-04-09 | 2021-06-16 | 주식회사 에이바이오머티리얼즈 | 분산성 및 안정성이 우수한 병풀 유래 엑소좀의 정제방법 및 이를 함유하는 화장료 조성물 |
| KR102523528B1 (ko) * | 2022-10-04 | 2023-04-19 | 주식회사 에이바이오머티리얼즈 | 자몽, 동백꽃 유래 엑소좀을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물 |
| KR102523523B1 (ko) * | 2022-11-14 | 2023-04-19 | 주식회사 에이바이오머티리얼즈 | 개박하, 시금치 유래 엑소좀을 유효성분으로 함유하는 피부 및 모발 상태개선용 화장료 조성물 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR102265811B1 (ko) | 분산성 및 안정성이 우수한 병풀 유래 엑소좀의 정제방법 및 이를 함유하는 화장료 조성물 | |
| KR102413205B1 (ko) | 자소엽, 유칼립투스 유래 엑소좀을 유효성분으로 함유하는 보습, 피부진정, 항염, 세포재생 및 주름개선용 화장료 조성물 | |
| KR102391636B1 (ko) | 황금, 약모밀 유래 엑소좀을 유효성분으로 함유하는 피부 및 모발 상태개선용 화장료 조성물 | |
| IT201900003639A1 (it) | Composizioni di vescicole extracellulari (EV) derivate da piante e loro usi | |
| KR102413200B1 (ko) | 로즈마리, 연꽃잎 유래 엑소좀을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물 | |
| KR102348510B1 (ko) | 붓꽃 구근 유래 엑소좀을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물 | |
| CN109152724B (zh) | 掌状红皮藻和茉莉的协同提取物、包含该协同提取物的组合物及其用途 | |
| KR102534797B1 (ko) | 지모추출물, pdrn 및 항산화 활성을 갖는 수용성 생리활성물질을 포함하는 나노 입자의 제조방법 및 이를 함유하는 화장료 조성물 | |
| KR102329247B1 (ko) | 분산성 및 안정성이 우수한 쇠비름 유래 엑소좀의 정제방법 및 이를 함유하는 화장료 조성물 | |
| KR102523528B1 (ko) | 자몽, 동백꽃 유래 엑소좀을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물 | |
| US20240024224A1 (en) | Anti-aging and antioxidant cosmetic composition containing broccoli exosomes as active ingredient and functional cosmetics comprising same | |
| KR102376516B1 (ko) | 수득률이 향상된 미생물 유래 세포 외 소포체의 제조 방법 및 이의 방법으로 제조된 세포 외 소포체를 포함하는 피부 상태 개선용 조성물 | |
| KR102432749B1 (ko) | 고사리 유래 엑소좀을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물 | |
| KR102523523B1 (ko) | 개박하, 시금치 유래 엑소좀을 유효성분으로 함유하는 피부 및 모발 상태개선용 화장료 조성물 | |
| WO2022004669A1 (ja) | Ｃｃｎ１及びｃｃｎ２の発現を増加させるための皮膚適用用組成物 | |
| KR102502664B1 (ko) | 토마토, 브로콜리 유래 엑소좀을 유효성분으로 함유하는 피부 및 모발 상태개선용 화장료 조성물 | |
| KR102671639B1 (ko) | 울릉국화, 은행잎 유래 엑소좀을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물 | |
| KR102165525B1 (ko) | 여드름 피부 개선용 조성물 | |
| KR102450862B1 (ko) | 천궁, 작약 유래 엑소좀을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물 | |
| KR102391645B1 (ko) | 무화과 유래 엑소좀을 유효성분으로 함유하는 모발 화장료 조성물 | |
| KR102635022B1 (ko) | 자소엽 및 유칼립투스 혼합 엑소좀, 아줄렌, 아줄렌 유도체 또는 이들의 염을 함유하는 탄성 리포좀 및 펩타이드 혼합물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물 | |
| KR102485314B1 (ko) | 유산균 발효 시어버터와 유산균 발효 시어버터 배양액 유래 엑소좀의 복합물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물 | |
| JP2010024211A (ja) | 細胞増殖促進剤 | |
| KR100551989B1 (ko) | 진세노사이드 성분을 함유한 자기 회합성 고분자 나노입자및 이를 함유한 화장료 조성물 | |
| CN116437817A (zh) | 用于增进和/或改善皮肤健康状态的组合物及其制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| E701 | Decision to grant or registration of patent right | ||
| GRNT | Written decision to grant |