KR102665511B1 - 췌장암의 판정용 마커 - Google Patents
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Abstract
본 발명의 과제는, 확도(정확도·정밀도)가 높은, 췌장암의 판정용 마커를 제공하는 것에 있다.
본 발명은, 췌장암의 판정용 마커, 췌장암의 판정 방법, 췌장암의 판정을 행하기 위한 데이터를 얻는 방법, 췌장암의 판정용 키트 등에 관한 것이다.
본 발명은, 췌장암의 판정용 마커, 췌장암의 판정 방법, 췌장암의 판정을 행하기 위한 데이터를 얻는 방법, 췌장암의 판정용 키트 등에 관한 것이다.
Description
본 발명은, 췌장암의 판정용 마커에 관한 것이다.
당쇄란, 글루코스, 갈락토스, 마노스, 푸코스, 자일로스, N-아세틸글루코사민, N-아세틸갈락토사민, 사이알산 등의 단당 및 이들의 유도체가 글루코사이드 결합에 의하여 쇄상으로 결합한 분자의 총칭이다.
당쇄는, 생체 내에서는 단백질이나 지질과 결합한 복합 당질의 형태로 주로 세포 표면에 존재하고 있으며, 세포의 증식, 세균이나 바이러스의 감염, 신경의 신장, 염증, 면역 등의 생리 작용에 관여하고 있다.
한편, 당쇄는, 췌장암 등의 질환에 따라 그 구조가 변화하는 것도 알려져 있으며, 최근, 당쇄를 췌장암 등의 질환의 진단용 마커로서 이용하기 위한 연구가 행해지고 있다.
당쇄를 갖는 췌장암 등의 질환의 진단용 마커로서는, 예를 들면 CA19-9(carbohydrate antigen 19-9: 췌장암 마커), 합토글로빈(haptoglobin: 췌장암 마커) 등이 알려져 있다(특허문헌 1).
그러나, 이들 공지의 당쇄를 갖는 췌장암 마커는, 확도(정확도·정밀도)의 점에서 충분하지는 않았다.
본 발명은, 확도(정확도·정밀도)가 높은, 췌장암의 판정용 마커의 제공을 과제로 한다.
본 발명은, 상기 과제를 해결하는 목적으로 이루어진 것이며, 이하의 구성으로 이루어진다.
[1]
하기 (1)~(5)로부터 선택되는 당쇄를 포함하는, 췌장암의 판정용 마커:
(1) 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3에 존재하는, 하기 식 5로 나타나는 당쇄,
(2) 류신리치 알파 2글라이코프로테인에 존재하는, 하기 식 6으로 나타나는 당쇄,
(3) 비트로넥틴에 존재하는, 하기 식 1~3으로 나타나는 적어도 하나의 당쇄,
(4) 보체 C4-A에 존재하는, 하기 식 4로 나타나는 당쇄,
(5) 타이록신 결합 글로불린에 존재하는, 하기 식 3으로 나타나는 당쇄.
(식 1 중, m1은 0~2의 정수를 나타낸다)
(식 2 중, m2는 0 또는 1을 나타낸다)
(식 3 중, n1은 0 또는 1을 나타낸다)
(식 5 중, n2는 0 또는 1을 나타낸다)
[2]
상기 당쇄가, 하기 (1-1)~(5-1) 중 어느 하나로 나타나는 당쇄인, [1]에 기재된 마커:
(1-1) 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3의 아미노산 배열의 N말단으로부터 580번째의 아스파라진 잔기에 결합하고 있는 상기 식 5로 나타나는 당쇄,
(2-1) 류신리치 알파 2글라이코프로테인의 아미노산 배열의 N말단으로부터 186번째의 아스파라진 잔기에 결합하고 있는 상기 식 6으로 나타나는 당쇄,
(3-1) 비트로넥틴의 아미노산 배열의 N말단으로부터 169번째의 아스파라진 잔기에 결합하고 있는 상기 식 1~3으로 나타나는 적어도 하나의 당쇄,
(4-1) 보체 C4-A의 아미노산 배열의 N말단으로부터 1328번째의 아스파라진 잔기에 결합하고 있는 상기 식 4로 나타나는 당쇄,
(5-1) 타이록신 결합 글로불린의 아미노산 배열의 N말단으로부터 36번째의 아스파라진 잔기에 결합하고 있는 상기 식 3으로 나타나는 당쇄.
[3]
상기 당쇄가, 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3의 아미노산 배열의 N말단으로부터 580번째의 아스파라진 잔기에 결합하고 있는 상기 식 5로 나타나는 당쇄인, [1] 또는 [2]에 기재된 마커.
[4]
상기 당쇄가, 류신리치 알파 2글라이코프로테인의 아미노산 배열의 N말단으로부터 186번째의 아스파라진 잔기에 결합하고 있는 상기 식 6으로 나타나는 당쇄인, [1] 내지 [3] 중 어느 하나에 기재된 마커.
[5]
시료 중의, 하기 (1)~(5)로부터 선택되는 당쇄의 양을 측정하고, 얻어진 측정 결과에 근거하여 췌장암을 판정하는, 췌장암의 판정 방법:
(1) 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3에 존재하는, 하기 식 5로 나타나는 당쇄,
(2) 류신리치 알파 2글라이코프로테인에 존재하는, 하기 식 6으로 나타나는 당쇄,
(3) 비트로넥틴에 존재하는, 하기 식 1~3으로 나타나는 적어도 하나의 당쇄,
(4) 보체 C4-A에 존재하는, 하기 식 4로 나타나는 당쇄,
(5) 타이록신 결합 글로불린에 존재하는, 하기 식 3으로 나타나는 당쇄.
(식 1 중, m1은 0~2의 정수를 나타낸다)
(식 2 중, m2는 0 또는 1을 나타낸다)
(식 3 중, n1은 0 또는 1을 나타낸다)
(식 5 중, n2는 0 또는 1을 나타낸다)
[6]
상기 당쇄가, 하기 (1-1)~(5-1) 중 어느 하나로 나타나는 당쇄인, [5]에 기재된 판정 방법:
(1-1) 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3의 아미노산 배열의 N말단으로부터 580번째의 아스파라진 잔기에 결합하고 있는 상기 식 5로 나타나는 당쇄,
(2-1) 류신리치 알파 2글라이코프로테인의 아미노산 배열의 N말단으로부터 186번째의 아스파라진 잔기에 결합하고 있는 상기 식 6으로 나타나는 당쇄,
(3-1) 비트로넥틴의 아미노산 배열의 N말단으로부터 169번째의 아스파라진 잔기에 결합하고 있는 상기 식 1~3으로 나타나는 적어도 하나의 당쇄,
(4-1) 보체 C4-A의 아미노산 배열의 N말단으로부터 1328번째의 아스파라진 잔기에 결합하고 있는 상기 식 4로 나타나는 당쇄,
(5-1) 타이록신 결합 글로불린의 아미노산 배열의 N말단으로부터 36번째의 아스파라진 잔기에 결합하고 있는 상기 식 3으로 나타나는 당쇄.
[7]
상기 당쇄가, 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3의 아미노산 배열의 N말단으로부터 580번째의 아스파라진 잔기에 결합하고 있는 상기 식 5로 나타나는 당쇄인, [5] 또는 [6]에 기재된 판정 방법.
[8]
상기 당쇄가, 류신리치 알파 2글라이코프로테인의 아미노산 배열의 N말단으로부터 186번째의 아스파라진 잔기에 결합하고 있는 상기 식 6으로 나타나는 당쇄인, [5] 내지 [7] 중 어느 하나에 기재된 판정 방법.
[9]
상기 시료가, 전혈, 혈청 또는 혈장인, [5] 내지 [8] 중 어느 하나에 기재된 판정 방법.
[10]
시료 중의, 하기 (1)~(5)로부터 선택되는 당쇄의 양을 측정함으로써 이루어지는, 췌장암의 판정을 행하기 위한 데이터를 얻는 방법:
(1) 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3에 존재하는, 하기 식 5로 나타나는 당쇄,
(2) 류신리치 알파 2글라이코프로테인에 존재하는, 하기 식 6으로 나타나는 당쇄,
(3) 비트로넥틴에 존재하는, 하기 식 1~3으로 나타나는 적어도 하나의 당쇄,
(4) 보체 C4-A에 존재하는, 하기 식 4로 나타나는 당쇄,
(5) 타이록신 결합 글로불린에 존재하는, 하기 식 3으로 나타나는 당쇄.
(식 1 중, m1은 0~2의 정수를 나타낸다)
(식 2 중, m2는 0 또는 1을 나타낸다)
(식 3 중, n1은 0 또는 1을 나타낸다)
(식 5 중, n2는 0 또는 1을 나타낸다)
[11]
하기 (1)~(5)로부터 선택되는 당쇄에 친화성을 갖는 물질을 포함하는, 췌장암의 판정용 키트:
(1) 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3에 존재하는, 하기 식 5로 나타나는 당쇄,
(2) 류신리치 알파 2글라이코프로테인에 존재하는, 하기 식 6으로 나타나는 당쇄,
(3) 비트로넥틴에 존재하는, 하기 식 1~3으로 나타나는 적어도 하나의 당쇄,
(4) 보체 C4-A에 존재하는, 하기 식 4로 나타나는 당쇄,
(5) 타이록신 결합 글로불린에 존재하는, 하기 식 3으로 나타나는 당쇄.
(식 1 중, m1은 0~2의 정수를 나타낸다)
(식 2 중, m2는 0 또는 1을 나타낸다)
(식 3 중, n1은 0 또는 1을 나타낸다)
(식 5 중, n2는 0 또는 1을 나타낸다)
본 발명의 췌장암의 판정용 마커와 이것을 이용한 췌장암의 판정 방법, 및 췌장암의 판정을 행하기 위한 데이터를 얻는 방법에 의하면, 확도(정확도·정밀도)가 높은, 췌장암의 판정(진단, 검사)을 행할 수 있다.
도 1은 당펩타이드 A, B 및 C의 피크 면적값에 대하여, 정상인(11검체)의 평균값 및 췌장암 환자(10검체)의 평균값을 나타낸 도이다.
도 2는 당펩타이드 D 및 E의 피크 면적값에 대하여, 정상인(11검체)의 평균값 및 췌장암 환자(10검체)의 평균값을 나타낸 도이다.
도 3은 당펩타이드 F 및 G의 피크 면적값에 대하여, 정상인(11검체)의 평균값 및 췌장암 환자(10검체)의 평균값을 나타낸 도이다.
도 4는 당펩타이드 H의 피크 면적값에 대하여, 정상인(11검체)의 평균값 및 췌장암 환자(10검체)의 평균값을 나타낸 도이다.
도 5는 당펩타이드 I의 피크 면적값에 대하여, 정상인(11검체)의 평균값 및 췌장암 환자(10검체)의 평균값을 나타낸 도이다.
도 6은 당펩타이드 J의 피크 면적값에 대하여, 정상인(11검체)의 평균값 및 췌장암 환자(10검체)의 평균값을 나타낸 도이다.
도 7은 당펩타이드 K 및 L의 피크 면적값에 대하여, 정상인(11검체)의 평균값 및 췌장암 환자(10검체)의 평균값을 나타낸 도이다.
도 2는 당펩타이드 D 및 E의 피크 면적값에 대하여, 정상인(11검체)의 평균값 및 췌장암 환자(10검체)의 평균값을 나타낸 도이다.
도 3은 당펩타이드 F 및 G의 피크 면적값에 대하여, 정상인(11검체)의 평균값 및 췌장암 환자(10검체)의 평균값을 나타낸 도이다.
도 4는 당펩타이드 H의 피크 면적값에 대하여, 정상인(11검체)의 평균값 및 췌장암 환자(10검체)의 평균값을 나타낸 도이다.
도 5는 당펩타이드 I의 피크 면적값에 대하여, 정상인(11검체)의 평균값 및 췌장암 환자(10검체)의 평균값을 나타낸 도이다.
도 6은 당펩타이드 J의 피크 면적값에 대하여, 정상인(11검체)의 평균값 및 췌장암 환자(10검체)의 평균값을 나타낸 도이다.
도 7은 당펩타이드 K 및 L의 피크 면적값에 대하여, 정상인(11검체)의 평균값 및 췌장암 환자(10검체)의 평균값을 나타낸 도이다.
<본 발명의 췌장암의 판정용 마커>
본 발명의 췌장암의 판정용 마커(이하, 본 발명의 마커라고 약기하는 경우가 있음)는, 하기 (1)~(5)로부터 선택되는 당쇄를 포함하는 것이다.
(1) 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3에 존재하는, 상기 식 5로 나타나는 당쇄(이하, 본 발명의 마커 (1)이라고 약기하는 경우가 있음),
(2) 류신리치 알파 2글라이코프로테인에 존재하는, 상기 식 6으로 나타나는 당쇄(이하, 본 발명의 마커 (2)라고 약기하는 경우가 있음),
(3) 비트로넥틴에 존재하는, 상기 식 1~3으로 나타나는 적어도 하나의 당쇄(이하, 본 발명의 마커 (3)이라고 약기하는 경우가 있음),
(4) 보체 C4-A에 존재하는, 상기 식 4로 나타나는 당쇄(이하, 본 발명의 마커 (4)라고 약기하는 경우가 있음),
(5) 타이록신 결합 글로불린에 존재하는, 상기 식 3으로 나타나는 당쇄(이하, 본 발명의 마커 (5)라고 약기하는 경우가 있음).
또한, 본 발명의 마커는, 본 발명의 마커 (1)~(5) 중 어느 하나를 단독으로 포함하는 것이어도 되고, 혹은 복수 종을 포함하는 것이어도 된다.
이하에, 본 발명의 마커 (1)~(5)에 대하여 각각 설명한다.
[본 발명의 마커 (1)]
본 발명의 마커 (1)은, 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3에 존재하는, 하기 식 5로 나타나는 당쇄를 포함하는 것이다.
(식 5 중, n2는 0 또는 1을 나타낸다)
또한, 상기 식 5에 있어서의, NeuNAc는 N-아세틸뉴라민산, Gal은 갈락토스, GlcNAc는 N-아세틸글루코사민, Man은 마노스, Fuc는 푸코스를 나타낸다.
이하, 본 명세서에 있어서 동일한 의미를 나타낸다.
또한, 본 발명의 마커 (1)로서는, 상기 식 5로 나타나는 어느 하나의 당쇄를 단독으로 사용해도 되고, 복수 종을 조합하여 사용해도 된다.
본 발명의 마커 (1)에 관한 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3(Inter-alpha-trypsin inhibitor heavy chain H3)이란, 혈장 중에 존재하는 프로테아제 인히비터 패밀리의 하나이며, 그 기능은 명확하게 되어 있지는 않지만, 태아의 착상 등에 관여하고 있는 것이 보고되고 있다.
또, 그 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3의 아미노산 배열은, 예를 들면 Uniprot(액세션 번호: Q06033) 등의 데이터베이스에 등록되어 있다.
본 발명의 마커 (1)에 관한 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3은, 상기 데이터베이스에 등록되어 있는 것뿐만 아니라, 생체 내에서 발생할 수 있는 변이체 등도 포함한다. 예를 들면, 그 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3에 있어서 1~5개, 바람직하게는 1 또는 2개의 아미노산이 결실(缺失), 치환 또는/및 부가된 것이며 다형성이나 돌연변이 등에 의하여 발생하는 것이다.
단, 변이체 등이어도, 후술하는 본 발명의 마커 (1)에 있어서의 식 5로 나타나는 당쇄와 그 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3의 결합 부위인, 그 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3의 아미노산 배열의 N말단으로부터 580번째의 아미노산 잔기(아스파라진 잔기)가 보존되어 있는 것이 바람직하다.
본 발명의 마커 (1)에 있어서의 식 5로 나타나는 당쇄(말단의 N-아세틸글루코사민)는, 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3의 아미노산 배열의 N말단으로부터 580번째의 아미노산 잔기(아스파라진 잔기)에 결합(N-글루코사이드 결합)하고 있는 것이 바람직하다.
이하에, 본 발명의 마커 (1)에 있어서의 식 5로 나타나는 당쇄에 대하여 설명한다.
인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3에 존재하는 식 5로 나타나는 당쇄
(식 5 중, n2는 0 또는 1을 나타낸다)
상기 식 5에 있어서의 n2는, 0 또는 1을 나타내고, 식 5는 각각, n2가 0인 경우, 하기 식 5-1을 나타내며, n2가 1인 경우, 하기 식 5-2를 나타낸다.
상기 식 5로 나타나는 당쇄로서는, 하기 식 5-1로 나타나는 것, 또는 하기 식 5-1로 나타나는 것과 하기 식 5-2로 나타나는 것의 조합이 바람직하다.
또, 상기 식 5-1 및 5-2로 나타나는 당쇄로서는, 구체적으로는, 예를 들면 하기 식 5-1＇, 5-1＇＇, 5-2＇, 5-2＇＇ 등으로 나타나는 것을 들 수 있고, 하기 식 5-1＇로 나타나는 것과 하기 식 5-1＇＇로 나타나는 것의 조합 또는 하기 식 5-1＇로 나타나는 것과, 하기 식 5-1＇＇로 나타나는 것과, 하기 식 5-2＇로 나타나는 것과, 하기 식 5-2＇＇로 나타나는 것의 조합이 바람직하다.
본 발명의 마커 (1), 즉, 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3에 존재하는 식 5로 나타나는 당쇄를 포함하는, 마커로서는, (i) 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3에 존재하는(유래하는) 식 5로 나타나는 당쇄 그 자체, (ii) 식 5로 나타나는 당쇄가 결합한 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3, (iii) 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3의 일부분이며, 식 5로 나타나는 당쇄가 결합한 펩타이드 단편(斷片) 등을 들 수 있고, (ii) 또는 (iii)이 바람직하다.
또한, 상기 펩타이드 단편이란, 식 5로 나타나는 당쇄와 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3의 결합 부위인, 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3의 아미노산 배열의 N말단으로부터 580번째의 아미노산 잔기(아스파라진 잔기)를 적어도 갖는 임의의 단편인 것이 바람직하다. 그 펩타이드 단편으로서는, 구체적으로는, 예를 들면 생체 내에서 발생하는 것이나, 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3을 트립신, 리실엔드펩티다제, AspN 등의 프로테아제 처리를 행한 결과 발생하는 것을 들 수 있고, 보다 구체적으로는, 예를 들면 2~50개의 아미노산 잔기로 이루어지는 것 등을 들 수 있으며, 배열 번호 3(액세션 번호 Q06033: 572번~584번)으로 나타나는 것이 바람직하다.
[본 발명의 마커 (2)]
본 발명의 마커 (2)는, 류신리치 알파 2글라이코프로테인에 존재하는, 하기 식 6으로 나타나는 당쇄를 포함하는 것이다.
또한, 본 발명의 마커 (2)로서는, 상기 식 6으로 나타나는 어느 하나의 당쇄를 단독으로 사용해도 되고, 복수 종을 조합하여 사용해도 된다.
본 발명의 마커 (2)에 관한 류신리치 알파 2글라이코프로테인(Leucine-richalpha-2-glycoprotein)이란, 혈액에 포함되는 단백질이며, 염증성 장질환 등 다양한 질환에 관여하고 있는 것이 보고되고 있다. 또, 류신리치 알파 2글라이코프로테인의 아미노산 배열은, 예를 들면 Uniprot(액세션 번호: P02750) 등의 데이터베이스에 등록되어 있다.
본 발명의 마커 (2)에 관한 류신리치 알파 2글라이코프로테인은, 상기 데이터베이스에 등록되어 있는 것뿐만 아니라, 생체 내에서 발생할 수 있는 변이체 등도 포함한다. 예를 들면, 그 류신리치 알파 2글라이코프로테인에 있어서 1~5개, 바람직하게는 1 또는 2개의 아미노산이 결실, 치환 또는/및 부가된 것이며 다형성이나 돌연변이 등에 의하여 발생하는 것이다.
단, 변이체 등이어도, 후술하는 본 발명의 마커 (2)에 있어서의 식 6으로 나타나는 당쇄와 그 류신리치 알파 2글라이코프로테인의 결합 부위인, 그 류신리치 알파 2글라이코프로테인의 아미노산 배열의 N말단으로부터 186번째의 아미노산 잔기(아스파라진 잔기)가 보존되어 있는 것이 바람직하다.
본 발명의 마커 (2)에 있어서의 식 6으로 나타나는 당쇄(말단의 N-아세틸글루코사민)는, 류신리치 알파 2글라이코프로테인의 아미노산 배열의 N말단으로부터 186번째의 아미노산 잔기(아스파라진 잔기)에 결합(N-글루코사이드 결합)하고 있는 것이 바람직하다.
이하에, 본 발명의 마커 (2)에 있어서의 식 6으로 나타나는 당쇄에 대하여 설명한다.
류신리치 알파 2글라이코프로테인에 존재하는 식 6으로 나타나는 당쇄
또, 상기 식 6으로 나타나는 당쇄로서는 구체적으로는, 예를 들면 하기 식 6-1로 나타나는 것이 바람직하다.
본 발명의 마커 (2), 즉, 류신리치 알파 2글라이코프로테인에 존재하는 식 6으로 나타나는 당쇄를 포함하는, 마커로서는, (i) 류신리치 알파 2글라이코프로테인에 존재하는(유래하는) 식 6으로 나타나는 당쇄 그 자체, (ii) 식 6으로 나타나는 당쇄가 결합한 류신리치 알파 2글라이코프로테인, (iii) 류신리치 알파 2글라이코프로테인의 일부분이며, 식 6으로 나타나는 당쇄가 결합한 펩타이드 단편 등을 들 수 있고, (ii) 또는 (iii)이 바람직하다.
또한, 상기 펩타이드 단편이란, 식 6으로 나타나는 당쇄와 류신리치 알파 2글라이코프로테인의 결합 부위인, 류신리치 알파 2글라이코프로테인의 아미노산 배열의 N말단으로부터 186번째의 아미노산 잔기(아스파라진 잔기)를 적어도 갖는 임의의 단편이다. 그 펩타이드 단편으로서는, 구체적으로는, 예를 들면 생체 내에서 발생하는 것이나, 류신리치 알파 2글라이코프로테인을 트립신, 리실엔드펩티다제, AspN 등의 프로테아제 처리를 행한 결과 발생하는 것을 들 수 있고, 보다 구체적으로는, 예를 들면 2~50개의 아미노산 잔기로 이루어지는 것 등을 들 수 있으며, 배열 번호 4(액세션 번호 P02750: 179번~191번)로 나타나는 것이 바람직하다.
[본 발명의 마커 (3)]
본 발명의 마커 (3)은, 비트로넥틴에 존재하는, 하기 식 1~3으로 나타나는 적어도 하나의 당쇄를 포함하는 것이다.
(식 1 중, m1은 0~2의 정수를 나타낸다)
(식 2 중, m2는 0 또는 1을 나타낸다)
(식 3 중, n1은 0 또는 1을 나타낸다)
또한, 본 발명의 마커 (3)으로서는, 상기 식 1~3으로 나타나는 어느 하나의 당쇄를 단독으로 사용해도 되고, 복수 종을 조합하여 사용해도 된다. 조합하는 경우에는, 상기 식 1~3으로부터 조합해도 되고, 상기 식 1만의 조합, 상기 식 2만의 조합 또는 상기 식 3만의 조합이어도 된다.
본 발명의 마커 (3)에 관한 비트로넥틴(Vitronectin)이란, 혈액이나 세포외 매트릭스 등에 존재하는 당단백질이며, 조직 형성이나 신경 세포의 분화 등, 생체에 있어서 중요한 역할을 하고 있다. 또, 그 비트로넥틴의 아미노산 배열은, 예를 들면 Uniprot(액세션 번호: P04004) 등의 데이터베이스에 등록되어 있다.
본 발명의 마커 (3)에 관한 비트로넥틴은, 상기 데이터베이스에 등록되어 있는 것뿐만 아니라, 생체 내에서 발생할 수 있는 변이체 등도 포함한다. 예를 들면, 그 비트로넥틴에 있어서 1~5개, 바람직하게는 1 또는 2개의 아미노산이 결실, 치환 또는/및 부가된 것이며 다형성이나 돌연변이 등에 의하여 발생하는 것이다.
단, 변이체 등이어도 후술하는 본 발명의 마커 (3)에 있어서의 식 1~3으로 나타나는 당쇄와 그 비트로넥틴의 결합 부위인, 그 비트로넥틴의 아미노산 배열의 N말단으로부터 169번째의 아미노산 잔기(아스파라진 잔기)가 보존되어 있는 것이 바람직하다.
본 발명의 마커 (3)에 있어서의 식 1~3으로 나타나는 당쇄(말단의 N-아세틸글루코사민)는, 각각 비트로넥틴의 아미노산 배열의 N말단으로부터 169번째의 아미노산 잔기(아스파라진 잔기)에 결합(N-글루코사이드 결합)하고 있는 것이 바람직하고, 식 1로 나타나는 것이 보다 바람직하다.
이하에, 본 발명의 마커 (3)에 있어서의 식 1~3으로 나타나는 당쇄에 대하여 각각 설명한다.
비트로넥틴에 존재하는 식 1로 나타나는 당쇄
(식 1 중, m1은 0~2의 정수를 나타낸다)
상기 식 1에 있어서의 m1은, 0~2의 정수를 나타내고, 식 1은 각각, m1이 0인 경우, 하기 식 1-1을 나타내며, m1이 1인 경우, 하기 식 1-2를 나타내고, m1이 2인 경우, 하기 식 1-3을 나타낸다.
상기 식 1로 나타나는 당쇄로서는, m1이 0인 경우, 즉, 하기 식 1-1로 나타나는 것이 바람직하다.
또, 상기 식 1-1, 1-2 및 1-3으로 나타나는 당쇄로서는, 구체적으로는, 예를 들면 하기 식 1-1＇, 1-2＇, 1-3＇ 등으로 나타나는 것을 들 수 있고, 하기 식 1-1＇로 나타나는 것이 바람직하다.
(식 1-1＇, 1-2＇ 및 1-3＇중, α2-3/6은, α2-3 글루코사이드 결합 또는 α2-6 글루코사이드 결합을 나타낸다. 이하, 본 명세서에서 동일한 의미를 나타낸다)
비트로넥틴에 존재하는 식 2로 나타나는 당쇄
(식 2 중, m2는 0 또는 1을 나타낸다)
상기 식 2에 있어서의 m2는, 0 또는 1을 나타내고, 식 2는 각각, m2가 0인 경우, 하기 식 2-1을 나타내며, m2가 1인 경우, 하기 식 2-2를 나타낸다.
또, 상기 식 2-1 및 2-2로 나타나는 당쇄로서는, 구체적으로는, 예를 들면 하기 식 2-1＇, 2-1＇＇, 2-2＇ 등으로 나타나는 것을 들 수 있고, 하기 식 2-1＇로 나타나는 것 또는 식 2-1＇로 나타나는 것과 식 2-1＇＇로 나타나는 것의 조합이 바람직하다.
비트로넥틴에 존재하는 식 3으로 나타나는 당쇄
(식 3 중, n1은 0 또는 1을 나타낸다)
상기 식 3에 있어서의 n1은, 0 또는 1을 나타내고, 식 3은 각각, n1이 0인 경우, 하기 식 3-1을 나타내며, n1이 1인 경우, 하기 식 3-2를 나타낸다.
상기 식 3으로 나타나는 당쇄로서는, n1이 1인 경우, 즉, 하기 식 3-2로 나타나는 것이 바람직하다.
또, 상기 식 3-1 및 3-2로 나타나는 당쇄로서는, 구체적으로는, 예를 들면 하기 식 3-1＇, 3-2＇ 등으로 나타나는 것을 들 수 있고, 하기 식 3-2＇로 나타나는 것이 바람직하다.
본 발명의 마커 (3), 즉, 비트로넥틴에 존재하는 식 1~3으로 나타나는 적어도 하나의 당쇄를 포함하는, 마커로서는, (i) 비트로넥틴에 존재하는(유래하는) 식 1~3으로 나타나는 적어도 하나의 당쇄 그 자체, (ii) 식 1~3으로 나타나는 적어도 하나의 당쇄가 결합한 비트로넥틴, (iii) 비트로넥틴의 일부분이며, 식 1~3으로 나타나는 적어도 하나의 당쇄가 결합한 펩타이드 단편 등을 들 수 있고, (ii) 또는 (iii)이 바람직하다.
또한, 상기 펩타이드 단편이란, 식 1~3으로 나타나는 당쇄와 비트로넥틴의 결합 부위인, 비트로넥틴의 아미노산 배열의 N말단으로부터 169번째의 아미노산 잔기(아스파라진 잔기)를 적어도 갖는 임의의 단편인 것이 바람직하다. 그 펩타이드 단편으로서는, 구체적으로는, 예를 들면 생체 내에서 발생하는 것이나, 비트로넥틴을 트립신, 리실엔드펩티다제, AspN 등의 프로테아제 처리를 행한 결과 발생하는 것을 들 수 있고, 보다 구체적으로는, 예를 들면 2~50개의 아미노산 잔기로 이루어지는 것 등을 들 수 있으며, 배열 번호 1(액세션 번호 P04004: 169번~176번)으로 나타나는 것이 바람직하다.
[본 발명의 마커 (4)]
본 발명의 마커 (4)는, 보체 C4-A에 존재하는, 하기 식 4로 나타나는 당쇄를 포함하는 것이다.
또한, 본 발명의 마커 (4)로서는, 상기 식 4로 나타나는 어느 하나의 당쇄를 단독으로 사용해도 되고, 복수 종을 조합하여 사용해도 된다.
본 발명의 마커 (4)에 관한 보체 C4-A(complement C4-A)란, 혈장 단백질의 하나이며, 간세포 등으로 생산되어, 세균 등의 감염 방어에 중요한 역할을 하고 있다. 또, 그 보체 C4-A의 아미노산 배열은, 예를 들면 Uniprot(액세션 번호: P0C0L4) 등의 데이터베이스에 등록되어 있다.
본 발명의 마커 (4)에 관한 보체 C4-A는, 상기 데이터베이스에 등록되어 있는 것뿐만 아니라, 생체 내에서 발생할 수 있는 변이체 등도 포함한다. 예를 들면, 그 보체 C4-A에 있어서 1~5개, 바람직하게는 1 또는 2개의 아미노산이 결실, 치환 또는/및 부가된 것이며 다형성이나 돌연변이 등에 의하여 발생하는 것이다.
단, 변이체 등이어도, 후술하는 본 발명의 마커 (4)에 있어서의 식 4로 나타나는 당쇄와 그 보체 C4-A의 결합 부위인, 그 보체 C4-A의 아미노산 배열의 N말단으로부터 1328번째의 아미노산 잔기(아스파라진 잔기)가 보존되어 있는 것이 바람직하다.
본 발명의 마커 (4)에 있어서의 식 4로 나타나는 당쇄(말단의 N-아세틸글루코사민)는, 보체 C4-A의 아미노산 배열의 N말단으로부터 1328번째의 아미노산 잔기(아스파라진 잔기)에 결합(N-글루코사이드 결합)하고 있는 것이 바람직하다.
이하에, 본 발명의 마커 (4)에 있어서의 식 4로 나타나는 당쇄에 대하여 설명한다.
보체 C4-A에 존재하는 식 4로 나타나는 당쇄
또, 상기 식 4로 나타나는 당쇄로서는, 구체적으로는, 예를 들면 하기 식 4-1로 나타나는 것이 바람직하다.
본 발명의 마커 (4), 즉, 보체 C4-A에 존재하는 식 4로 나타나는 당쇄를 포함하는, 마커로서는, (i) 보체 C4-A에 존재하는(유래하는) 식 4로 나타나는 당쇄 그 자체, (ii) 식 4로 나타나는 당쇄가 결합한 보체 C4-A, (iii) 보체 C4-A의 일부분이며, 식 4로 나타나는 당쇄가 결합한 펩타이드 단편 등을 들 수 있고, (ii) 또는 (iii)이 바람직하다.
또한, 상기 펩타이드 단편이란, 식 4로 나타나는 당쇄와 보체 C4-A의 결합 부위인, 보체 C4-A의 아미노산 배열의 N말단으로부터 1328번째의 아미노산 잔기(아스파라진 잔기)를 적어도 갖는 임의의 단편인 것이 바람직하다. 그 펩타이드 단편으로서는, 구체적으로는, 예를 들면 생체 내에서 발생하는 것이나, 보체 C4-A를 트립신, 리실엔드펩티다제, AspN 등의 프로테아제 처리를 행한 결과 발생하는 것을 들 수 있고, 보다 구체적으로는, 예를 들면 2~50개의 아미노산 잔기로 이루어지는 것 등을 들 수 있으며, 배열 번호 2(액세션 번호 P0C0L4: 1326번~1336번)로 나타나는 것이 바람직하다.
[본 발명의 마커 (5)]
본 발명의 마커 (5)는, 타이록신 결합 글로불린에 존재하는, 하기 식 3으로 나타나는 당쇄를 포함하는 것이다.
(식 3 중, n1은 0 또는 1을 나타낸다)
또한, 본 발명의 마커 (5)로서는, 상기 식 3으로 나타나는 어느 하나의 당쇄를 단독으로 사용해도 되고, 복수 종을 조합하여 사용해도 된다.
본 발명의 마커 (5)에 관한 타이록신 결합 글로불린(Thyroxine-binding globulin)이란, 타이록신에 결합하는 단백질이며, 갑상선 호르몬의 수송 등에 관여하고 있는 것이 보고되고 있다. 또, 타이록신 결합 글로불린의 아미노산 배열은, 예를 들면 Uniprot(액세션 번호: P05543) 등의 데이터베이스에 등록되어 있다.
본 발명의 마커 (5)에 관한 타이록신 결합 글로불린은, 상기 데이터베이스에 등록되어 있는 것뿐만 아니라, 생체 내에서 발생할 수 있는 변이체 등도 포함한다. 예를 들면, 그 타이록신 결합 글로불린에 있어서 1~5개, 바람직하게는 1 또는 2개의 아미노산이 결실, 치환 또는/및 부가된 것이며 다형성이나 돌연변이 등에 의하여 발생하는 것이다.
단, 변이체 등이어도 후술하는 본 발명의 마커 (5)에 있어서의 식 3으로 나타나는 당쇄와 그 타이록신 결합 글로불린의 결합 부위인, 그 타이록신 결합 글로불린의 아미노산 배열의 N말단으로부터 36번째의 아미노산 잔기(아스파라진 잔기)가 보존되어 있는 것이 바람직하다.
본 발명의 마커 (5)에 있어서의 식 3으로 나타나는 당쇄(말단의 N-아세틸글루코사민)는, 타이록신 결합 글로불린의 아미노산 배열의 N말단으로부터 36번째의 아미노산 잔기(아스파라진 잔기)에 결합(N-글루코사이드 결합)하고 있는 것이 바람직하다.
또한, 본 발명의 마커 (5)에 있어서의 식 3으로 나타나는 당쇄에 대해서는, 상술한 바와 같고, 그 구체예는 동일하지만 바람직한 예로서는, 식 상기 3-1로 나타나는 것을 들 수 있으며, 보다 바람직한 예로서는, 상기 식 3-1＇로 나타나는 것을 들 수 있다.
본 발명의 마커 (5), 즉, 타이록신 결합 글로불린에 존재하는 식 3으로 나타나는 당쇄를 포함하는, 마커로서는, (i) 타이록신 결합 글로불린에 존재하는(유래하는) 식 3으로 나타나는 당쇄 그 자체, (ii) 식 3으로 나타나는 당쇄가 결합한 타이록신 결합 글로불린, (iii) 타이록신 결합 글로불린의 일부분이며, 식 3으로 나타나는 당쇄가 결합한 펩타이드 단편 등을 들 수 있고, (ii) 또는 (iii)이 바람직하다.
또한, 상기 펩타이드 단편이란, 식 3으로 나타나는 당쇄와 타이록신 결합 글로불린의 결합 부위인, 타이록신 결합 글로불린의 아미노산 배열의 N말단으로부터 36번째의 아미노산 잔기(아스파라진 잔기)를 적어도 갖는 임의의 단편인 것이 바람직하다. 그 펩타이드 단편으로서는, 구체적으로는, 예를 들면 생체 내에서 발생하는 것이나, 타이록신 결합 글로불린을 트립신, 리실엔드펩티다제, AspN 등의 프로테아제 처리를 행한 결과 발생하는 것을 들 수 있고, 보다 구체적으로는, 예를 들면 2~50개의 아미노산 잔기로 이루어지는 것을 들 수 있으며, 배열 번호 5(액세션 번호 P05543: 27번~41번)로 나타나는 것이 바람직하다.
본 발명의 마커로서는, (i) 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3에 존재하는, 식 5로 나타나는 당쇄 또는 (ii) 류신리치 알파 2글라이코프로테인에 존재하는, 식 6으로 나타나는 당쇄가 바람직하고, (iii) 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3에 존재하는, 식 5로 나타나는 당쇄가 보다 바람직하며, (iv) 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3의 아미노산 배열의 N말단으로부터 580번째의 아미노산 잔기(아스파라진 잔기)에 결합하고 있는 식 5로 나타나는 당쇄가 특히 바람직하다.
[본 발명에 관한 췌장암]
본 발명에 관한 췌장암이란, 췌장으로부터 발생한 암이다.
본 발명에 관한 췌장암에는, 구체적으로는, 예를 들면 침윤성 췌관암, 췌선방 세포암, 췌관 내 유두 점액성 종양 등의 외분비성 췌장암, 신경내분비 종양 등의 내분비성 췌장암 등이 포함된다.
<본 발명의 췌장암의 판정 방법>
본 발명의 췌장암의 판정 방법(이하, 본 발명의 판정 방법이라고 약기하는 경우가 있음)은, 시료 중의, 하기 (1)~(5)로부터 선택되는 당쇄의 양을 측정하고(이하, 본 발명에 관한 측정 공정이라고 약기하는 경우가 있음), 얻어진 측정 결과에 근거하여 췌장암을 판정함(이하, 본 발명에 관한 판정 공정이라고 약기하는 경우가 있음)으로써 이루어진다.
(1) 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3에 존재하는, 상기 식 5로 나타나는 당쇄(본 발명의 마커 (1)),
(2) 류신리치 알파 2글라이코프로테인에 존재하는, 상기 식 6으로 나타나는 당쇄(본 발명의 마커 (2)),
(3) 비트로넥틴에 존재하는, 상기 식 1~3으로 나타나는 적어도 하나의 당쇄(본 발명의 마커 (3)),
(4) 보체 C4-A에 존재하는, 상기 식 4로 나타나는 당쇄(본 발명의 마커 (4)),
(5) 타이록신 결합 글로불린에 존재하는, 상기 식 3으로 나타나는 당쇄(본 발명의 마커 (5))
또한, 본 발명의 판정 방법으로서는, 본 발명의 마커 (1)~(5) 중 어느 하나 단독을 이용하여 이루어져도 되고, 혹은 복수 종을 이용하여 이루어져도 된다.
[본 발명에 관한 시료]
본 발명에 관한 시료로서는, 실험 동물 유래의 것이면 되고, 예를 들면 혈청, 혈장, 전혈, 뇨, 타액, 뇌척수액, 조직액, 땀, 눈물, 양수, 골수액, 흉수, 복수, 간접액, 안방수, 유리체액 등의 생체 유래 시료를 들 수 있고, 혈청, 혈장, 전혈 등의 혈액 유래 시료가 바람직하며, 혈청이 보다 바람직하다.
상기 실험 동물로서는, 인간, 원숭이, 쥐, 래트, 개, 고양이, 돼지, 토끼, 침팬지 등의 포유 동물을 들 수 있고, 인간, 원숭이, 쥐 또는 래트가 바람직하며, 인간이 보다 바람직하다.
본 발명에 관한 시료를 실험 동물로부터 얻는(채취하는) 방법은, 특별히 한정되지 않고, 예를 들면 자체 공지의 방법에 근거하여, 그 실험 동물로부터 그 시료를 얻음(채취함)으로써 이루어지면 되며, 필요하면 자체 공지의 방법에 따라, 분리, 농축, 정제 등을 행해도 된다.
또한, 상기 시료는, 실험 동물로부터 얻어진(채취된) 직후의 것이어도 되고, 그 시료를 보존한 것이어도 된다. 시료를 보존하는 방법으로서는, 통상 이 분야에서 행해지고 있는 방법이면 어느 것이어도 된다.
[본 발명에 관한 측정 공정]
본 발명에 관한 측정 공정은, 하기 (1)~(5)로부터 선택되는 당쇄의 양을 측정함으로써 이루어진다.
(1) 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3에 존재하는, 상기 식 5로 나타나는 당쇄,
(2) 류신리치 알파 2글라이코프로테인에 존재하는, 상기 식 6으로 나타나는 당쇄,
(3) 비트로넥틴에 존재하는, 상기 식 1~3으로 나타나는 적어도 하나의 당쇄,
(4) 보체 C4-A에 존재하는, 상기 식 4로 나타나는 당쇄,
(5) 타이록신 결합 글로불린에 존재하는, 상기 식 3으로 나타나는 당쇄
또한, 본 발명에 관한 측정 공정으로서는, 본 발명의 마커 (1)~(5)의 어느 단독을 측정함으로써 이루어져도 되고, 혹은 복수 종을 측정함으로써 이루어져도 된다.
본 발명에 관한 측정 공정에 있어서의 상기 (1)~(5)로부터 선택되는 당쇄의 양의 측정이란, 본 발명의 마커 (1)~(5)로부터 선택되는 1개를 측정하는 것이며, 구체적으로는, 예를 들면 (i) 본 발명의 마커에 있어서의 단백질에 존재하는(유래하는) 당쇄 그 자체의 양의 측정, (ii) 본 발명의 마커에 있어서의 당쇄가 결합한 단백질의 양의 측정, (iii) 본 발명의 마커에 있어서의 단백질의 일부분이며, 당쇄가 결합한 펩타이드 단편의 양의 측정 등을 들 수 있고, (ii) 또는 (iii)이 바람직하다.
상기 본 발명의 마커에 있어서의 단백질이란, 본 발명의 마커에 있어서의 당쇄 이외의 부분을 의미하고, 본 발명의 마커 (1)이면, 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3을 의미하며, 본 발명의 마커 (2)이면, 류신리치 알파 2글라이코프로테인을 의미하고, 본 발명의 마커 (3)이면, 비트로넥틴을 의미하며, 본 발명의 마커 (4)이면, 보체 C4-A를 의미하고, 본 발명의 마커 (5)이면, 타이록신 결합 글로불린을 의미한다.
또한, 상기 "양"이란, 용량, 질량 등의 절댓값 또는 농도, 이온 강도, 흡광도, 형광 강도, 탁도, 피크 면적 등으로부터 산출된 값 등의 상댓값 중 어느 것이어도 된다.
본 발명에 관한 측정 공정에 있어서의 측정 방법으로서는, 통상 이 분야에서 행해지고 있는 것이면 어느 것이어도 되고, 구체적으로는, 예를 들면 (A) 본 발명의 마커에 대하여 친화성을 갖는 물질(예를 들면, 항체, 렉틴 등)을 이용하는 방법, (B) 질량 분석법을 이용하는 방법 등을 들 수 있고, (A)가 바람직하다.
이하에, 상기 (A) 및 (B)에 대하여 각각 구체적으로 설명한다.
(A) 본 발명의 마커에 대하여 친화성을 갖는 물질을 이용하는 방법
본 발명의 마커에 대하여 친화성을 갖는 물질을 이용하는 방법으로서는, 구체적으로는, 예를 들면 효소 결합 면역 흡착 측정법(ELISA법), 효소 면역 측정법(EIA법), 방사 면역 측정법(RIA법), 형광 면역 측정법(FIA법), 화학 발광 효소 면역 측정법(CLEIA법), 전기 화학 발광 면역 측정법(ECLEIA법), 면역 비탁법, 면역 비롱법(比朧法), 라텍스 응집법, 이뮤노 크로마토법, 웨스턴 블로트법, Luminescent Oxygen Channeling Immunoassay(LOCI법), Liquid-phase Binding Assay-ElectroKinetic Analyte Transport Assay(LBA-EATA법) 등의 면역학적 측정법에 준한 방법을 들 수 있다.
상기 면역학적 측정법에 준한 방법으로서는, 구체적으로는, 예를 들면 본 발명의 마커에 대하여 친화성을 갖는 물질과 본 발명의 마커를 접촉시켜, 본 발명의 마커에 대하여 친화성을 갖는 물질과 본 발명의 마커의 복합체를 형성시키고, 그 복합체의 양을 측정함으로써 이루어지면 된다.
상기 본 발명의 마커에 대하여 친화성을 갖는 물질이란, 본 발명의 마커에 있어서의 단백질(또는 펩타이드 단편)에 특이적으로 결합하는 항체나, 본 발명의 마커에 있어서의 당쇄에 특이적으로 결합하는 렉틴이나 항체 등을 들 수 있다.
상기 본 발명의 마커에 있어서의 단백질(또는 펩타이드 단편)에 특이적으로 결합하는 항체로서는, 구체적으로는, 예를 들면 본 발명의 마커 (1)이면, 항인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3 항체, 본 발명의 마커 (2)이면, 항류신리치 알파 2글라이코프로테인 항체, 본 발명의 마커 (3)이면, 항비트로넥틴 항체, 본 발명의 마커 (4)이면, 항보체 C4-A 항체, 본 발명의 마커 (5)이면, 항타이록신 결합 글로불린 항체 등을 들 수 있다.
상기 항체는, 폴리크로널 항체, 모노크로널 항체의 중 어느 것이어도 되고, 이들을 단독으로 혹은 조합하여 이용해도 된다.
상기 항체는, Fab, F(ab＇2), Fv, sFv 등의 항체 프래그먼트나 디아보디, 트리아보디, 테트라보디 등의 합성 항체 등이어도 된다.
또, 상기 항체는, 시판 중인 항체를 이용해도 되고, 자체 공지의 방법에 따라 조제한 것을 이용해도 된다.
또한, 자체 공지의 방법에 따라, 상기 항체를 조제하는 경우에는, 예를 들면 "면역 측정법"(생물 화학적 측정 연구회 편집, 고단샤, 2014년) 등에 기재된 방법에 따라 이루어지면 된다.
또, 상기 항체는, 표지 물질로 표지된 것이어도 된다. 그 표지 물질로서는, 구체적으로는, 예를 들면 서양 고추냉이 퍼옥시다제(HRP), 소 소장 알칼리포스파타제, β-갈락토시다제 등의 효소, 99mTc, 131I, 125I, 14C, 3H, 32P, 35S 등의 방사성 동위 원소, 플루오레세인, 플루오레세인아이소싸이오사이아네이트(FITC), 4-메틸움벨리페론, 로다민 혹은 이들의 유도체 등의 형광성 물질, 루시페린, 루미놀, 루테늄 착체 등의 발광성 물질, 페놀, 나프톨, 안트라센 혹은 이들의 유도체 등의 자외부에 흡수를 갖는 물질, 4-아미노-2,2,6,-테트라메틸피페리딘-1-옥실 등의 옥실기를 갖는 화합물로 대표되는 스핀 라벨화제로서의 성질을 갖는 물질, HiLyte계 색소, Alexa계 색소, CyDye계 색소 등의 색소, 금 콜로이드, 양자 도트 등의 나노 입자 등을 들 수 있다.
또한, 상기 표지 물질을 항체에 결합시키는 방법으로서는, 자체 공지의 방법에 따라 이루어지면 된다.
상기 본 발명의 마커에 있어서의 당쇄에 특이적으로 결합하는 렉틴으로서는, 구체적으로는, 예를 들면 본 발명의 마커 (1)이면, 상기 식 5로 나타나는 당쇄의 GlcNAc(N-아세틸글루코사민)에 결합하는 Phaseolus vulgaris Leucoagglutinin(PHA-L) 등, 본 발명의 마커 (2)이면, 상기 식 6으로 나타나는 당쇄의 Man(마노스)에 결합하는 GNL, LCA, PSA, Con A 등, 본 발명의 마커 (3)이면, 상기 식 1로 나타나는 당쇄의 Man(마노스)에 결합하는 Galanthus nivalis Lectin(GNL), Lens culinaris Agglutinin(LCA), Pisum sativum Agglutinin(PSA), Concanavalin A(Con A) 등, 상기 식 2로 나타나는 당쇄의 Fuc(푸코스)에 결합하는 Aleuria aurantia Lectin(AAL), Lotus Tetragolonobus Lectin(LTL) 등, 상기 식 3으로 나타나는 당쇄의 NeuNAc(N-아세틸뉴라민산)에 결합하는 Sambucus Nigra Lectin(SNL), Maackia amrensis Lectin II(MAL II) 등, 본 발명의 마커 (4)이면, 상기 식 4로 나타나는 당쇄의 Fuc(푸코스)에 결합하는 AAL, LTL 등, 본 발명의 마커 (5)이면, 상기 식 3으로 나타나는 당쇄의 NeuNAc(N-아세틸뉴라민산)에 결합하는 MAL II 등을 들 수 있다.
상기 렉틴은, 표지 물질로 표지된 것이어도 되고, 그 표지 물질로서는, 상기 본 발명의 마커에 있어서의 단백질(또는 펩타이드 단편)에 특이적으로 결합하는 항체에서 설명한 바와 같으며, 구체예 등도 동일하다. 또, 상기 표지 물질을 렉틴에 결합시키는 방법으로서는, 자체 공지의 방법에 따라 이루어지면 된다.
상기 본 발명의 마커에 있어서의 당쇄에 특이적으로 결합하는 항체로서는, 구체적으로는, 예를 들면 본 발명의 마커 (1)이면, 상기 식 5로 나타나는 당쇄에 특이적으로 결합하는 항체, 본 발명의 마커 (2)이면, 상기 식 6으로 나타나는 당쇄에 특이적으로 결합하는 항체, 본 발명의 마커 (3)이면, 상기 식 1로 나타나는 당쇄에 특이적으로 결합하는 항체, 상기 식 2로 나타나는 당쇄에 특이적으로 결합하는 항체, 상기 식 3으로 나타나는 당쇄에 특이적으로 결합하는 항체, 본 발명의 마커 (4)이면, 상기 식 4로 나타나는 당쇄에 특이적으로 결합하는 항체, 본 발명의 마커 (5)이면, 상기 식 3으로 나타나는 당쇄에 특이적으로 결합하는 항체 등을 들 수 있다.
상기 항체는, 표지 물질로 표지된 것이어도 되고, 그 표지 물질로서는, 상기 본 발명의 마커에 있어서의 단백질(또는 펩타이드 단편)에 특이적으로 결합하는 항체에서 설명한 바와 같으며, 구체예 등도 동일하다.
또, 상기 표지 물질을 렉틴에 결합시키는 방법으로서는, 자체 공지의 방법에 따라 이루어지면 된다.
상기 본 발명의 마커에 대하여 친화성을 갖는 물질과 본 발명의 마커의 복합체의 양을 측정하는 방법으로서는, 그 복합체의 양을 측정할 수 있는 방법이면 어느 것이어도 되고, 구체적으로는, 예를 들면 본 발명의 마커에 대하여 친화성을 갖는 물질에 결합한 표지 물질에서 유래하는 시그널을 검출하는 방법, 본 발명의 마커에 대하여 친화성을 갖는 물질과 본 발명의 마커의 복합체에서 유래하는 성질을 이용하는 방법 등을 들 수 있으며, 본 발명의 마커에 대하여 친화성을 갖는 물질에 결합한 표지 물질에서 유래하는 시그널을 검출하는 방법이 바람직하다.
상기 본 발명의 마커에 대하여 친화성을 갖는 물질에 결합한 표지 물질에서 유래하는 시그널을 검출하는 방법으로서는, 구체적으로는, 예를 들면 본 발명의 마커에 대하여 친화성을 갖는 물질에 결합한 표지 물질에서 유래하는 시그널을 자체 공지의 방법에 의하여 검출함으로써 이루어지면 된다. 예를 들면, 표지 물질이 효소인 경우에는, 면역 측정법의 통상의 방법, 예를 들면 "효소 면역 측정법"(단백질 핵산 효소 별책 No. 31, 기타가와 쓰네히로·난바라 토시오·쓰지 아키오·이시카와 에이지 편집, 51~63, 교리쓰 슛판, 1987) 등에 기재된 방법에 준하여 측정을 행하면 되고, 표지 물질이 방사성 물질인 경우에는, 예를 들면 RIA로 행해지고 있는 통상의 방법에 따라, 그 방사성 물질이 내는 방사선의 종류 및 강도에 따라 액침형 GM 카운터, 액체 신틸레이션 카운터, 우물형 신틸레이션 카운터, HPLC용 카운터 등의 측정 기기를 적절히 선택하고 사용하여, 측정을 행하면 된다(예를 들면 의화학 실험 강좌, 제8권, 야마무라 유이치 감수, 제1판, 나카야마 쇼텐, 1971 등 참조). 또, 표지 물질이 형광 물질인 경우에는, 예를 들면 형광 광도계 등의 측정 기기를 이용하는 FIA로 행해지고 있는 통상의 방법, 예를 들면 "도설 형광 항체, 가와오이 아키라 저, 제1판, 소프트 사이언스사, 1983" 등에 기재된 방법에 준하여 측정을 행하면 되고, 표지 물질이 발광 물질인 경우에는 포토 카운터 등의 측정 기기를 이용하는 통상의 방법, 예를 들면 "효소 면역 측정법"(단백질 핵산 효소 별책 No. 31, 기타가와 쓰네히로·난바라 토시오·쓰지 아키오·이시카와 에이지 편집, 252~263, 교리쓰 슛판, 1987) 등에 기재된 방법에 준하여 측정을 행하면 된다. 또한, 표지 물질이 자외부에 흡수를 갖는 물질인 경우에는 분광 광도계 등의 측정 기기를 이용하는 통상의 방법에 따라 측정을 행하면 되고, 표지 물질이 스핀의 성질을 갖는 경우에는 전자 스핀 공명 장치를 이용하는 통상의 방법, 예를 들면 "효소 면역 측정법"(단백질 핵산 효소 별책 No. 31, 기타가와 쓰네히로·난바라 토시오·쓰지 아키오·이시카와 에이지 편집, 264~271, 교리쓰 슛판, 1987) 등에 기재된 방법에 준하여 각각 측정을 행하면 된다.
상기 본 발명의 마커에 대하여 친화성을 갖는 물질과 본 발명의 마커의 복합체에서 유래하는 성질을 이용하는 방법으로서는, 구체적으로는, 예를 들면 표면 플라즈몬 공명법 등의 호모지니어스 이뮤노어세이계 등의 방법 등을 들 수 있다.
또한, 상기 방법의 구체적인 수법에 대해서는, 자체 공지의 수법에 따라 이루어지면 된다.
이하에, (A) 본 발명의 마커에 대하여 친화성을 갖는 물질을 이용하는 방법에 대하여, 보다 구체적으로 설명한다.
또한, 하기 설명에 있어서, 본 발명의 마커에 있어서의 단백질(또는 펩타이드 단편)을 "표적 단백질(또는 표적 펩타이드 단편)", 본 발명의 마커에 있어서의 당쇄를 "표적 당쇄"라고 표기한다.
예를 들면, 본 발명의 마커 (1)을 측정하는 경우, 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3이 "표적 단백질(또는 표적 펩타이드 단편)"을, 식 5로 나타나는 당쇄가 "표적 당쇄"를 의미하고, 본 발명의 마커 (2)를 측정하는 경우, 류신리치 알파 2글라이코프로테인이 "표적 단백질(또는 표적 펩타이드 단편)"을, 식 6으로 나타나는 당쇄가 "표적 당쇄", 본 발명의 마커 (3)을 측정하는 경우, 비트로넥틴이 "표적 단백질(또는 표적 펩타이드 단편)", 식 1~3으로 나타나는 적어도 하나의 당쇄가 "표적 당쇄"를 의미하며, 본 발명의 마커 (4)를 측정하는 경우, 보체 C4-A가 "표적 단백질(또는 표적 펩타이드 단편)"을, 식 4로 나타나는 당쇄가 "표적 당쇄"를 의미하고, 본 발명의 마커 (5)를 측정하는 경우, 타이록신 결합 글로불린이 "표적 단백질(또는 표적 펩타이드 단편)"을, 식 3으로 나타나는 당쇄가 "표적 당쇄"를 의미한다.
상기 (A) 본 발명의 마커에 대하여 친화성을 갖는 물질을 이용하는 방법으로서는, 구체적으로는, 예를 들면 하기 공정 1 및 2를 포함하는 방법을 들 수 있다.
(공정 1) 시료로부터 표적 당쇄가 결합한 표적 단백질(본 발명의 마커)을 분리하는 공정,
(공정 2) 상기 공정 1에서 분리된 표적 당쇄가 결합한 표적 단백질의 양을 측정하는 공정
공정 1로서는, 시료로부터 표적 당쇄가 결합한 표적 단백질을 분리할 수 있는 방법이면 어느 것이어도 되고, 구체적으로는, 예를 들면 시료 중에 존재하는 표적 당쇄가 결합한 표적 단백질과 다른 성분을 분리하는 방법을 들 수 있다. 이와 같은 방법으로서는, 구체적으로는, 예를 들면 2종 이상의 친화성을 갖는 물질, 즉, 표적 당쇄에 특이적으로 결합하는 물질, 및 표적 단백질에 특이적으로 결합하는 물질을 이용하여, 표적 당쇄가 결합한 표적 단백질과 친화성을 갖는 물질의 복합체(표적 단백질에 특이적으로 결합하는 물질-본 발명의 마커-표적 당쇄에 특이적으로 결합하는 물질)를 형성시켜, 자체 공지의 방법에 의하여, 표적 당쇄가 결합한 표적 단백질을 분리하면 된다.
또한, 표지 물질로 표지된 친화성을 갖는 물질을 이용하는 경우에는, 표적 당쇄가 결합한 표적 단백질의 분리는, 표지 물질로 표지된 친화성을 갖는 물질과 본 발명의 마커의 복합체의 분리라고 환언해도 되고, 이 경우, 표지 물질로 표지된 친화성을 갖는 물질과 본 발명의 마커 이외의 성분의 복합체 또는/및 유리의 표지 물질로 표지된 친화성을 갖는 물질을 분리하면 된다. 표지 물질로 표지된 친화성을 갖는 물질을 구성 성분으로서 포함하지 않는 성분과의 분리는 불필요하다.
또, 상기 당쇄에 특이적으로 결합하는 친화성을 갖는 물질 및 단백질에 특이적으로 결합하는 친화성을 갖는 물질에 대해서는, 상술한 바와 같고, 구체예 등도 동일하다.
공정 2로서는, 상기 공정 1에서 분리된 표적 당쇄가 결합한 표적 단백질을 측정할 수 있는 방법이면 어느 것이어도 되고, 구체예 등은 상술한 바와 같다.
상기 방법에 있어서, 공정 1을 행하기 전에, 미리 시료 중의 전체 단백질(표적 단백질을 포함함)을 펩타이드 단편화하고, 공정 1에서 표적 당쇄가 결합한 표적 펩타이드 단편을 분리하여, 공정 2에서 그 표적 당쇄가 결합한 표적 펩타이드 단편을 측정해도 된다.
그 단편화 처리로서는, 구체적으로는, 예를 들면 공정 1을 행하기 전에, 시료에 트립신, 리실엔드펩티다제, AspN 등의 프로테아제를 첨가함으로써 이루어지면 되고, 공정 1에서 표적 당쇄에 결합하는 물질, 및 표적 펩타이드 단편에 결합하는 물질을 각각 이용하여, 표적 당쇄가 결합한 표적 펩타이드 단편과 친화성을 갖는 물질의 복합체(표적 펩타이드 단편에 특이적으로 결합하는 물질-본 발명의 마커-표적 당쇄에 특이적으로 결합하는 물질)를 형성시켜, 그 복합체를 상술한 바와 같이 분리한 후, 그 복합체의 양을 측정하면 된다.
또, 상기 전체 단백질의 단편화를 행한 경우, 그 단편화에 계속해서, 렉틴 칼럼 등의 칼럼에 의한 농축을 행해도 된다. 그 농축은 자체 공지의 방법에 따라 이루어지면 되고, 시판 중인 렉틴 칼럼 등의 칼럼을 이용하면 된다.
또한, 상기 방법에 있어서, 공정 2 대신, 공정 1에서 분리된 표적 당쇄가 결합한 표적 단백질로부터 표적 당쇄를 분리하여, 그 표적 당쇄만을 측정해도 된다.
구체적으로는, 예를 들면 공정 1에서 분리된 표적 당쇄가 결합한 표적 단백질을, 글리카나제, 하이드라진 등으로 처리함으로써 표적 당쇄를 분리한 후, 그 당쇄의 양만을 상술한 바와 같이 측정하면 된다.
(B) 질량 분석법을 이용하는 방법
질량 분석법을 이용하는 방법으로서는, 구체적으로는, 예를 들면 액체 크로마토그래피 질량 분석계(LC/MS), 캐필러리 전기 영동 질량 분석계(CE/MS), 가스 크로마토그래피 질량 분석계(GC/MS), 액체 크로마토그래피 탠덤형 질량 분석계(LC/MS/MS) 등을 이용하는 방법을 들 수 있다.
상기 방법으로서는, 구체적으로는, 예를 들면 액체 크로마토그래프 등의 크로마토그래프를 갖는 분리부에서, 시료 중의 성분을 분리하고, 분리된 다양한 성분을 질량 분석부에서 이온화시켜, 추가로 질량 전하비(m/z)마다 분리함으로써 이루어지면 된다.
또한, 상기 질량 분석법을 이용하는 방법에 있어서의 구체적인 수법은 자체 공지의 수법이나 WO2014/038524, WO2017/019588, WO2018/034346 등에 기재된 수법에 따라 이루어지면 된다.
상기 질량 분석법을 이용하는 방법에 있어서, 시료로부터 미리 전체 단백질을 추출해도 되고, 그 방법으로서는, 구체적으로는, 예를 들면 시료에, 아세톤, 메탄올, 에탄올, 트라이클로로아세트산, 염산 수용액 등의 용매를 첨가하여 전체 단백질을 침전시킴으로써 이루어지면 된다.
또, 필요에 따라 시료로부터 전체 단백질을 추출하기 전 또는 후에, 전체 단백질을 단편화해도 되고, 단편화를 행한 경우, 그 단편화에 계속해서, 렉틴 칼럼 등의 칼럼에 의한 농축을 행해도 된다. 그 단편화 및 농축에 대해서는, 상술한 바와 같다.
[바람직한 측정 공정]
본 발명에 관한 측정 공정에서는, (i) 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3에 존재하는, 식 5로 나타나는 당쇄의 양 또는 (ii) 류신리치 알파 2글라이코프로테인에 존재하는, 식 6으로 나타나는 당쇄의 양을 측정하는 것이 바람직하고, (iii) 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3에 존재하는, 식 5로 나타나는 당쇄의 양을 측정하는 것이 보다 바람직하며, (vi) 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3의 아미노산 배열의 N말단으로부터 580번째의 아미노산 잔기(아스파라진 잔기)에 결합하고 있는 식 5로 나타나는 당쇄의 양을 측정하는 것이 더 바람직하다.
또, 상기 측정을 행하는 경우에는, 본 발명의 마커에 대하여 친화성을 갖는 물질을 이용하는 방법이 바람직하고, ELISA법, EIA법, RIA법, FIA법, CLEIA법, ECLEIA법, 면역 비탁법, 면역 비롱법, 라텍스 응집법, 이뮤노 크로마토법, 웨스턴 블로트법, LOCI법, LBA-EATA법 등의 면역학적 측정법에 준한 방법이 보다 바람직하고, 본 발명의 마커에 대하여 친화성을 갖는 물질과 본 발명의 마커를 접촉시켜, 본 발명의 마커에 대하여 친화성을 갖는 물질과 본 발명의 마커의 복합체를 형성시키고, 그 복합체의 양을 측정하는 방법이 더 바람직하며, 본 발명의 마커에 대하여 친화성을 갖는 물질과 본 발명의 마커를 접촉시켜, 본 발명의 마커에 대하여 친화성을 갖는 물질과 본 발명의 마커의 복합체를 형성시키고, 그 복합체에 결합한 표지 물질에서 유래하는 시그널을 검출하는 방법이 특히 바람직하다.
[본 발명에 관한 판정 공정]
본 발명에 관한 판정 공정은, 본 발명에 관한 측정 공정에 의하여 얻어진 측정 결과에 근거하여 췌장암을 판정하는 공정이다.
본 발명에 관한 판정 공정은, 구체적으로는, 예를 들면 실험 동물 유래의 시료를 이용하여 본 발명에 관한 측정 공정에 의하여 얻어진 값(이하, 실험 동물 유래의 값이라고 약기하는 경우가 있음)과 미리 설정한 기준값(컷 오프값 등)을 이용하여 이루어진다.
즉, (i) 실험 동물 유래의 값이, 미리 설정한 기준값(컷 오프값 등) 이상인 경우, "실험 동물이 췌장암에 이환하고 있을 우려가 있거나, 혹은 실험 동물이 췌장암에 이환하고 있을 우려가 높음" 등의 판정을 내릴 수 있고, (ii) 실험 동물 유래의 값이, 미리 설정한 기준값(컷 오프값 등) 미만인 경우, "실험 동물이 췌장암에 이환하고 있을 우려는 없거나, 혹은 췌장암에 이환하고 있을 우려가 낮음" 등의 판정을 내릴 수 있다.
또, 다른 양태로서 (i) 실험 동물 유래의 값이, 미리 설정한 기준값(컷 오프값 등) 이하인 경우, "실험 동물이 췌장암에 이환하고 있을 우려가 있거나, 혹은 실험 동물이 췌장암에 이환하고 있을 우려가 높음" 등의 판정을 내릴 수 있고, (ii) 실험 동물 유래의 값이, 미리 설정한 기준값(컷 오프값 등) 초과인 경우, "실험 동물이 췌장암에 이환하고 있을 우려는 없거나, 혹은 췌장암에 이환하고 있을 우려가 낮음" 등의 판정을 내릴 수 있다.
또한, 상기 기준값(컷 오프값 등)은, 췌장암에 이환하고 있는 동물 유래의 시료를 이용하여 본 발명에 관한 측정 공정에 의하여 얻어진 측정값과 정상 동물 유래의 시료를 이용하여 본 발명에 관한 측정 공정에 의하여 얻어진 값(이하, 정상 동물 유래의 값이라고 약기하는 경우가 있음)을 이용하여 ROC(Receiver Operating Characteristic) 곡선 해석 등의 통계 해석에 근거하여 결정할 수 있다.
또, 상기 기준값(컷 오프값 등)의 감도 또는/및 특이도는, 예를 들면 60% 이상, 바람직하게는 70% 이상, 보다 바람직하게는 80% 이상, 더 바람직하게는 90% 이상이다.
다른 형태로서, 실험 동물 유래의 값과 정상 동물 유래의 값을 비교하여, (i) 실험 동물 유래의 값이, 정상 동물 유래의 값보다 높은 경우, "실험 동물이 췌장암에 이환하고 있을 우려가 있거나, 혹은 실험 동물이 췌장암에 이환하고 있을 우려가 높음" 등의 판정을 내릴 수 있고, (ii) 실험 동물 유래의 값과, 정상 동물 유래의 값의 사이에 현저한 차가 확인되지 않는 경우, "실험 동물이 췌장암에 이환하고 있을 우려는 없거나, 혹은 췌장암에 이환하고 있을 우려가 낮음" 등의 판정을 내릴 수 있다.
또 다른 형태로서, 동일한 실험 동물에 있어서, 어떤 시점에 있어서의 실험 동물 유래의 값과, 다른 시점에서의 실험 동물 유래의 값을 비교하여, 그 값의 유무 또는/및 증감의 정도를 평가함으로써, 췌장암의 진행도, 악성도의 진단, 수술 후의 예후 진단 등이 가능하다. 즉, (i)값의 증가가 확인된 경우, 췌장암에 병태(病態)가 진행됐거나(혹은 췌장암의 악성도가 증가했거나), 또는 췌장암에 대한 병태의 진행의 징조가 확인되는(혹은 췌장암의 악성도가 증가하는 징조가 확인되는) 등의 판정을 내릴 수 있고, (ii)값의 감소가 확인된 경우, 췌장암의 병태가 개선됐거나, 또는 췌장암의 병태의 개선의 징조가 확인되는 등의 판정을 내릴 수 있다.
또한, 본 발명에 관한 측정 공정에서 본 발명의 마커를 복수 종 측정한 경우는, 얻어진 복수의 값을 이용하여 상술한 바와 같이 본 발명에 관한 판정 공정을 행하면 되고, 보다 확도(정확도·정밀도)가 높은 판정이 가능해진다.
<본 발명의 췌장암의 판정을 행하기 위한 데이터를 얻는 방법>
본 발명의 췌장암의 판정을 행하기 위한 데이터를 얻는 방법(이하, 본 발명의 데이터를 얻는 방법이라고 약기하는 경우가 있음)은, 시료 중의 하기 (1)~(5)로부터 선택되는 당쇄의 양을 측정함으로써 이루어진다.
(1) 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3에 존재하는, 상기 식 5로 나타나는 당쇄,
(2) 류신리치 알파 2글라이코프로테인에 존재하는, 상기 식 6으로 나타나는 당쇄,
(3) 비트로넥틴에 존재하는, 상기 식 1~3으로 나타나는 적어도 하나의 당쇄,
(4) 보체 C4-A에 존재하는, 상기 식 4로 나타나는 당쇄,
(5) 타이록신 결합 글로불린에 존재하는, 상기 식 3으로 나타나는 당쇄
즉, 본 발명의 데이터를 얻는 방법은, 본 발명의 마커, 바꾸어 말하면, 본 발명의 마커 (1)~(5)로부터 선택되는 것을 측정함으로써 이루어진다.
또한, 본 발명의 데이터를 얻는 방법으로서는, 본 발명의 마커 (1)~(5) 중 어느 단독을 이용하여 이루어져도 되고, 혹은 복수 종을 이용하여 이루어져도 된다.
본 발명의 데이터를 얻는 방법에 있어서의 데이터로서는, (i) 본 발명의 데이터를 얻는 방법에 의하여 얻어진 본 발명의 마커의 양의 값, (ii) 그 값을 추가로 다중 로지스틱 회귀 분석, 판별 분석, 푸아송 회귀 분석, 중회귀 분석, 콕스의 비례 하자드 모델, 패스 해석 등의 다변량 해석을 행하여 얻어지는 값, (iii) 본 발명의 데이터를 얻는 방법에 의하여 얻어진 본 발명의 마커의 양의 값과 상술한 기준값(컷 오프값 등)의 대소 관계를 나타내는 데이터(비교 결과), (iv) 실험 동물이 췌장암에 이환하고 있을 우려가 있거나, 혹은 실험 동물이 췌장암에 이환하고 있을 우려가 높음 등을 시사하는 데이터 등을 들 수 있고, (i) 또는 (iii)이 바람직하며, (i)이 보다 바람직하다.
또한, 본 발명의 데이터를 얻는 방법에 있어서의, 본 발명의 마커, 그 마커의 측정, 췌장암 및 시료에 대해서는, <본 발명의 마커> 및 <본 발명의 판정 방법>에서 설명한 바와 같으며, 구체예, 바람직한 예 등도 동일하다.
<본 발명의 췌장암의 판정용 키트>
본 발명의 췌장암의 판정용 키트(이하, 본 발명의 키트라고 약기하는 경우가 있음)는, 하기 (1)~(5)로부터 선택되는 당쇄에 친화성을 갖는 물질을 포함하는 것이다.
(1) 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3에 존재하는, 상기 식 5로 나타나는 당쇄,
(2) 류신리치 알파 2글라이코프로테인에 존재하는, 상기 식 6으로 나타나는 당쇄,
(3) 비트로넥틴에 존재하는, 상기 식 1~3으로 나타나는 적어도 하나의 당쇄,
(4) 보체 C4-A에 존재하는, 상기 식 4로 나타나는 당쇄,
(5) 타이록신 결합 글로불린에 존재하는, 상기 식 3으로 나타나는 당쇄
본 발명의 키트는, 본 발명의 마커, 바꾸어 말하면, 본 발명의 마커 (1)~(5)에 각각 친화성을 갖는 물질을 포함하는 것이다.
또한, 본 발명의 키트에 있어서의, 본 발명의 마커 및 췌장암에 대해서는, <본 발명의 마커> 및 <본 발명의 판정 방법>에서 설명한 바와 같으며, 구체예, 바람직한 예 등도 동일하다.
상기 친화성을 갖는 물질이란, 본 발명의 마커에 있어서의 당쇄나 단백질(또는 펩타이드 단편)에 특이적으로 결합하는 것이며, 렉틴, 항체 등을 들 수 있다.
상기 친화성을 갖는 물질에 대해서는, <본 발명의 판정 방법>에서 설명한 바와 같으며, 구체예, 바람직한 예 등도 동일하다.
본 발명의 키트에는, 또한 통상 이 분야에서 이용되는 시약류, 예를 들면 트립신, 리실엔드펩티다제, AspN 등의 펩타이드 단편화용 시약, 렉틴 칼럼 등의 농축용 칼럼, 단백질 추출용 용매, 완충제, 세정제, 반응 촉진제, 당류, 단백질, 염류, 계면활성제 등의 안정화제, 방부제, 시료를 희석하기 위한 액, 렉틴 고정화 고상(固相), 항체 고정화 고상, 항원 고정화 고상 등의 고정화 고상, 표지 물질로 표지된 2차 항체 또는 그 2차 항체의 단편, 표지 물질 검출용 시약 등이며, 공존하는 시약 등의 안정성을 저해하지 않는 것이 포함되어 있어도 된다. 또, 그 농도, pH도 통상 이 분야에서 이용되고 있는 범위이면 된다.
상기 렉틴 고정화 고상, 항체 고정화 고상, 항원 고정화 고상 등의 고정화 고상으로서는, 자성 실리카 입자 등의 자성 입자, 폴리스타이렌, 폴리카보네이트, 폴리바이닐톨루엔, 폴리프로필렌, 폴리에틸렌, 폴리 염화 바이닐, 나일론, 폴리메타크릴레이트, 젤라틴, 아가로스, 셀룰로스, 폴리에틸렌테레프탈레이트, 유리, 세라믹 등의 소재에, 본 발명의 마커에 있어서의 단백질(또는 펩타이드 단편)이나 당쇄에 특이적으로 결합하는 친화성을 갖는 물질(렉틴, 항체 또는 그 항체의 단편 등)을 고상화한 것이면 어느 것이어도 된다.
또한, 상기 렉틴 고정화 고상, 항체 고정화 고상, 항원 고정화 고상 등의 고정화 고상에 있어서의 소재에 대해서는, 자체 공지의 방법에 의하여 제조된 것을 이용해도 되고, 시판 중인 것을 이용해도 된다. 예를 들면, 자체 공지의 방법에 의하여 상기 자성 실리카 입자 등의 자성 입자를 제조하는 경우, WO2012/173002에 기재된 방법에 의하여 제조할 수 있다.
상기 표지 물질로 표지된 2차 항체 또는 그 항체 단편이란, 상기 고상화된 친화성을 갖는 물질(렉틴, 항체 또는 그 항체의 단편 등)에 각각 결합하는 항체 또는 그 항체 단편이다.
또한, 상기 표지 물질로 표지된 2차 항체 또는 그 항체 단편에 있어서의, 표지 물질 및 표지 물질을 결합시키는 방법에 대해서는, <본 발명의 판정 방법>에서 설명한 바와 같으며, 바람직한 예, 구체예 등도 동일하다.
상기 표지 물질 검출용 시약이란, 렉틴, 항체 또는 그 항체의 단편 등의 친화성을 갖는 물질이 표지 물질로 표지되어 있는 경우, 표지 물질로 표지된 렉틴, 항체 또는 그 항체의 단편 등의 친화성을 갖는 물질 중의 표지 또는/및 상기 표지된 2차 항체 또는 그 2차 항체의 단편 중의 표지를 검출하는 것이며, 테트라메틸벤지딘, 오쏘페닐렌다이아민 등의 흡광도 측정용 기질, 하이드록시페닐프로피온산, 하이드록시페닐아세트산 등의 형광 기질, 루미놀 등의 발광 물질을 들 수 있고, 4-나이트로페닐포스페이트 등의 흡광도 측정용 시약, 4-메틸움벨리페릴포스페이트 등의 형광 기질 등을 들 수 있다.
또한, 본 발명의 키트에는, 본 발명의 판정 방법 또는/및 데이터를 얻는 방법을 행하기 위한 설명서 등이 포함되어 있어도 된다. 당해 "설명서"란, 본 발명의 판정 방법 또는/및 데이터를 얻는 방법의 특징, 원리, 조작 수순, 판정 수순 등이 문장 또는/및 도표에 의하여 실질적으로 기재되어 있는 본 발명에 관한 시약 취급 설명서, 첨부 문서, 팸플릿(리플릿) 등을 의미한다.
이와 같이 본 발명의 키트에 의하면, 본 발명의 판정 방법 또는/및 본 발명의 데이터를 얻는 방법을 간편하게, 단시간에 또한 양호한 정밀도로 행할 수 있다.
<본 발명에 관한 췌장암의 판정을 행하기 위한 장치>
본 발명에 관한 췌장암의 판정을 행하기 위한 장치(이하, 본 발명에 관한 판정 장치라고 약기하는 경우가 있음)는, 적어도 (1) 측정부를 구비하고 있다. 또한, (2) 판정부, (3) 출력부 및 (4) 입력부를 구비하고 있어도 된다.
본 발명에 관한 판정 장치에 있어서의 (1) 측정부는, 시료 중의 상기 본 발명의 마커 (1)~(5)로부터 선택되는 당쇄의 양을 측정하도록 구성되어 있다. 구체적으로는, 예를 들면 본 발명에 관한 측정 공정에서 이용되는 각종 질량 분석계, 면역학적 측정법에 준한 방법으로 이용되는 장치 등의 측정 장치를 들 수 있다.
또한, 필요하면 (1) 측정부에서는, 측정된 측정값에 근거하여, 상기 본 발명의 마커 (1)~(5)의 양을 산출하도록 구성되어 있어도 된다.
본 발명에 관한 판정 장치에 있어서의 (2) 판정부는, (1) 측정부에서 얻어지는 결과에 근거하여 췌장암을 판정하도록 구성되어 있다.
본 발명에 관한 판정 장치에 있어서의 (3) 출력부는, (1) 측정부에서 얻어지는 결과 또는/및 (2) 판정부에서 얻어지는 결과를 출력하도록 구성되어 있다.
본 발명에 관한 판정 장치에 있어서의 (4) 입력부는, 조작하는 사람의 조작을 받아, (1) 측정부로, 당해 (1) 측정부를 작동시키기 위한 신호를 보내도록 구성되어 있다.
또한, 상기 본 발명에 관한 판정 장치의 (1) 측정부 및 (2) 판정부에 의하여 이루어지는 측정, 판정 등에 대해서는, <본 발명의 판정 방법>에서 설명한 바와 같으며, 바람직한 예, 구체예 등도 동일하다.
상기 본 발명에 관한 판정 장치에 의하면, 본 발명의 판정 방법 또는/및 본 발명의 데이터를 얻는 방법을 간편하게, 단시간에 또한 양호한 정밀도로 행할 수 있다.
<본 발명에 관한 췌장암의 판정을 보조하는 방법>
본 발명에 관한 췌장암의 판정을 보조하는 방법(이하, 본 발명에 관한 보조 방법이라고 약기하는 경우가 있음)은, 시료 중의 상기 본 발명의 마커 (1)~(5)로부터 선택되는 당쇄의 양을 측정하고, 얻어진 측정 결과에 근거하여 췌장암의 판정을 보조함으로써 이루어진다.
본 발명에 관한 보조 방법은, 의사 등에 의한 췌장암의 진단을 보조하는 방법으로서 이용할 수 있다.
또한, 본 발명에 관한 보조 방법에 있어서의 시료, 마커, 측정, 판정 등에 대해서는, <본 발명의 판정 방법>에서 설명한 바와 같으며, 바람직한 예, 구체예 등도 동일하다.
<본 발명에 관한 췌장암을 판정하고, 치료하는 방법>
본 발명에 관한 췌장암을 판정하고, 치료하는 방법(이하, 본 발명에 관한 치료 방법이라고 약기하는 경우가 있음)은, 시료 중의 본 발명의 마커 (1)~(5)로부터 선택되는 당쇄의 양을 측정하고, 얻어진 측정 결과에 근거하여 췌장암을 판정하여, 그 판정 결과에 근거하여 췌장암의 우려가 있거나 또는 췌장암의 우려가 높다고 판정된 환자에게 적절한 치료를 실시함으로써 이루어진다.
또한, 본 발명에 관한 치료 방법에 있어서의 시료, 마커, 측정, 판정 등에 대해서는, <본 발명의 판정 방법>에서 설명한 바와 같으며, 바람직한 예, 구체예 등도 동일하다.
본 발명에 관한 치료 방법에 있어서의 적절한 치료로서는, 구체적으로는, 예를 들면 췌두 십이지장 절제술, 췌체부 미부 절제술, 전체 췌장 절제술, 바이패스 수술 등의 외과 요법, 화학 방사선 요법 등의 방사선 치료, UFT(상품명) 등의 약제를 투여함으로써 이루어지는 약물 요법 등을 들 수 있다.
이하, 실시예에 근거하여 본 발명을 보다 구체적으로 설명하지만, 본 발명은 실시예에 의하여 한정되는 것은 아니다.
실시예
실시예 1. 췌장암 마커의 선별
[(1) 검체(샘플)]
요코하마 시립 대학 센터 병원 및 요코하마 시립 대학 첨단 의과학 연구 센터 바이오 뱅크로부터 제공된, 췌장암 환자 유래의 혈청(10검체) 및 정상인 유래의 혈청(11검체)을 검체(샘플)로서 이용했다.
[(2) 당펩타이드의 조제]
상기 (1)의 췌장암 환자 유래의 혈청 및 정상인 유래의 혈청 10μL를, High-Select Top14 Abundant Protein Depletion Resin(ThermoFisher Scientific사제)에 각각 넣고, 25℃에서 10분간 인큐베이트함으로써, albumin, immunoglobulin 등의 혈청 중에 존재하는 협잡 단백질을 제거했다. 이어서, 아세톤 40μL를 각각 첨가하고, -20℃에서 16시간 인큐베이트한 후, 14000rpm으로 원심 분리했다. 상청을 제거 후, 침전물에 8M 요소 함유 50mM 트리스 염산 버퍼(pH 8.0) 50μL를 각각 첨가하고 용해하여, 프로테인 어세이 BCA 키트(후지필름 와코 준야쿠사제)에서 단백질 농도를 각각 측정했다. 측정 후, 단백질 시료 20μg에, 500mM 다이싸이오트레이톨 1μL를 각각 첨가하여, 37℃에서 30분간 인큐베이트했다. 이어서, 500mM 아이오도아세트아마이드 2.8μL를 각각 첨가하여, 37℃에서 30분간 인큐베이트함으로써, 환원 알킬화를 행했다(또한, 그 환원 알킬화는, 500mM 다이싸이오트레이톨 0.5μL를 첨가함으로써, 그 반응을 정지시켰다). 그 후, Zeba Spin Desalting column(0.5mL; ThermoFisher Scientific사제)에서 50mM 트리스 염산 버퍼(pH 8.0) 130μL에 용매 치환하여, 변성제 및 환원제를 각각 제거했다. 이어서, 단백질 시료 1μg에, Trypsin/Lys-C Mix(프로메가사제)를 각각 첨가하고, 37℃에서 16시간 인큐베이트했다. 그 후, Oasis PRiME HLB 고상 추출 칼럼(Waters사제)에서 탈염을 행하고, 원심 에바포레이터로 건고하여, 당펩타이드를 얻었다.
[(3) 당펩타이드의 농축]
상기 (2)에서 조제한 21검체분 (췌장암 환자: 10검체, 정상인: 11검체)의 각 당펩타이드 10μg에 대하여, 하기 수순에 따라, 농축했다.
(A) WO2017/0195887 기재의 당펩타이드 농축 칼럼에, 0.1% TFA 용액 100μL를 넣고, 200μL 칩 전용의 탁상 원심기에 세팅하여, 그 용액을 칼럼에 통과시키며, 폴리머성 폴리올층을 세정했다.
(B) 칼럼에, 80% 아세토나이트릴/0.1% TFA 용액 100μL를 넣고, 200μL 칩 전용의 탁상 원심기에 세팅하여, 그 용액을 칼럼에 통과시키며, 고상 추출 담체상을 세정했다.
(C) 칼럼에, 80% 아세토나이트릴/0.1% TFA 용액 100μL를 넣고, 200μL 칩 전용의 탁상 원심기에 세팅하여, 2초간 원심함으로써 칼럼 내의 공기를 제거했다.
(D) 칼럼 내의 80% 아세토나이트릴/0.1% TFA 용액에, 상기 (2)에서 조제한 당펩타이드 시료 10μg을 첨가하고, 200μL 칩 전용의 탁상 원심기에 세팅하여, 20초간 원심했다.
(E) 칼럼에, 80% 아세토나이트릴/0.1% TFA 용액 100μL를 첨가하고, 200μL 칩 전용의 탁상 원심기에 세팅하여, 20초간 원심하며, 협잡물을 제거했다.
(F) 상기 (E)를 추가로 2회 반복했다.
(G) 칼럼에, 0.1% TFA 100μL를 첨가하고, 200μL 칩 전용의 탁상 원심기에 세팅하여, 30초간 원심하며, 고상 추출 담체상에 당펩타이드를 농축시켰다.
(H) 칼럼에, 80% 아세토나이트릴/0.1% TFA 용액 100μL를 첨가하고, 어댑터 포함 시린지를 이용하여 1.5mL 튜브에 당펩타이드를 용출시킨 후, 원심 에바포레이터로 건조하여, 농축한 당펩타이드를 얻었다.
[(4) 탈당쇄 펩타이드의 조제]
상기 (3)에서 조제한 농축 당펩타이드 시료 5μg을, 50mM 인산 나트륨 완충액(pH 7.4) 10μL에 용해하고, 1U의 PNGase F(로슈사제) 1μL 첨가하여, 37℃에서 16시간 인큐베이트함으로써, N결합형 당쇄를 절단했다. 이어서, Oasis PRiME HLB 고상 추출 칼럼(Waters사제)에서 탈염한 후, 원심 에바포레이터로 건고하여, 탈당쇄 펩타이드를 얻었다.
[(5) 나노 액체 크로마토그래피 질량 분석(nanoLC/MS/MS)에 의한 해석]
상기 (3)에서 조제한 농축당펩타이드를, 0.1% 폼산 4μL에 2. 5μg/L가 되도록 각각 용해하여, 당펩타이드 시료로 했다. 또, 상기 (4)에서 조제한 탈당쇄 펩타이드를, 0.1% 폼산 4μL에 1.25μg/L가 되도록 각각 용해하여, 탈당쇄 펩타이드 시료로 했다.
상기 당펩타이드 시료 및 탈당쇄 펩타이드 시료에 대하여, 나노 액체 크로마토그래피 질량 분석(nanoLC/MS/MS)에 의한 해석(분리/분석)을 행했다.
구체적으로는, 분석 칼럼(Nano HPLC capillary column; 닛쿄 테크노사제)을 장착한 나노 액체 크로마토그래프(EASY-nLC1000; ThermoFisher Scientific사제)를, 하이브리드 사중극 오비트랩 질량 분석계(Q Exactive; ThermoFisher Scientific사제)에 접속하여, 상기 당펩타이드 시료 4μL를 분석 칼럼에 인젝션한 후, 유속 300 nL/min으로 해당 펩타이드 시료의 분리를 행했다.
또한, A 용매로서 0.1% 폼산 수용액, B 용매로서 0.1% 폼산 아세토나이트릴을 이용하고, 0분~70에서 B 용매 0%로부터 B 용매 35%의 리니어 그래디언트, 70분~75분에서 B 용매 35%로부터 B 용매 100%의 리니어 그래디언트를 이용했다. 또, 전체 측정 동안에, 포지티브 이온 모드(인가 전압: 1900V)로 했다.
상기 탈당쇄 펩타이드에 대해서는, 상기와 동일하게 하여 각각 분리한 후, Proteome Discoverer 1.4(ThermoFisher Scientific사제)를 이용하여 그 탈당쇄 펩타이드에 있어서의 당쇄 결합 부위를 동정했다.
또한, 상기 정보를 바탕으로, 당펩타이드의 질량과 유지 시간으로부터, 당펩타이드의 구조를 확인했다.
[(6) 결과]
상기 (1)~(5)에 의하여, 하기 표 1에 나타내는 바와 같이, 비트로넥틴, 보체 C4-A, 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3, 류신리치 알파 2글라이코프로테인 및 타이록신 결합 글로불린에 각각 유래하는 당펩타이드 A~L이 동정되었다.
또, 상기 당펩타이드 A~L의 피크 면적값에 대하여, 정상인(11검체)의 평균값 및 췌장암 환자(10검체)의 평균값을 도 1~7에 각각 나타낸다.
[표 1]
상기 표 1 및 도 1로부터, 비트로넥틴에서 유래하는, (i) 식 1-1＇로 나타나는 당쇄를 갖는 당펩타이드 A(정상인 평균 피크 면적값: 7390723, 췌장암 환자 평균 피크 면적값: 18531358), (ii) 식 1-2＇로 나타나는 당쇄를 갖는 당펩타이드 B(정상인 평균 피크 면적값: 14869167, 췌장암 환자 평균 피크 면적값: 32795940) 및 (iii) 식 1-3＇으로 나타나는 당쇄를 갖는 당펩타이드 C(정상인 평균 피크 면적값: 3937759, 췌장암 환자 평균 피크 면적값: 8910019)의 발현량은, 정상인과 비교하여, 췌장암 환자에 있어서 현저하게 증가하고 있는 것을 알 수 있었다.
또, 상기 식 1-1＇, 식 1-2＇ 및 식 1-3＇으로 나타나는 당쇄는, 비트로넥틴의 아미노산 배열의 N말단으로부터 169번째의 아스파라진 잔기에 각각 결합하고 있는 것을 확인했다.
상기 표 1 및 도 2로부터, 비트로넥틴에서 유래하는, (i) 식 2-1＇ 또는 식 2-1＇＇로 나타나는 당쇄를 갖는 당펩타이드 D(정상인 평균 피크 면적값: 48626, 췌장암 환자 평균 피크 면적값: 657118 및 (ii) 식 2-2＇로 나타나는 당쇄를 갖는 당펩타이드 E(정상인 평균 피크 면적값:0, 췌장암 환자 평균 피크 면적값: 634085)의 발현량은, 정상인과 비교하여, 췌장암 환자에 있어서 현저하게 증가하고 있는 것을 알 수 있었다. 특히, (ii) 식 2-2＇로 나타나는 당쇄를 갖는 당펩타이드 E에 대해서는, 정상인에서는 전혀 발현하고 있지 않는 것을 알 수 있었다.
또, 상기 식 2-1＇, 식 2-1＇＇ 및 식 2-2＇로 나타나는 당쇄는, 비트로넥틴의 아미노산 배열의 N말단으로부터 169번째의 아스파라진 잔기에 각각 결합하고 있는 것을 확인했다.
상기 표 1 및 도 3으로부터, 비트로넥틴에서 유래하는, (i) 식 3-1＇로 나타나는 당쇄를 갖는 당펩타이드 F(정상인 평균 피크 면적값: 4043373, 췌장암 환자 평균 피크 면적값: 13038720) 및 (ii) 식 3-2＇로 나타나는 당쇄를 갖는 당펩타이드 G(정상인 평균 피크 면적값: 0, 췌장암 환자 평균 피크 면적값: 634085)의 발현량은, 정상인과 비교하여, 췌장암 환자에 있어서 현저하게 증가하고 있는 것을 알 수 있었다. 특히, (ii) 식 3-2＇로 나타나는 당쇄를 갖는 당펩타이드 G에 대해서는, 정상인에서는 전혀 발현하고 있지 않는 것을 알 수 있었다.
또, 상기 식 3-1＇ 및 식 3-2＇로 나타나는 당쇄는, 비트로넥틴의 아미노산 배열의 N말단으로부터 169번째의 아스파라진 잔기에 각각 결합하고 있는 것을 확인했다.
상기 표 1 및 도 4로부터, 보체 C4-A에서 유래하는, (i) 식 4-1로 나타나는 당쇄를 갖는 당펩타이드 H(정상인 평균 피크 면적값: 3075257, 췌장암 환자 평균 피크 면적값: 26703362)의 발현량은, 정상인과 비교하여, 췌장암 환자에 있어서 현저하게 증가하고 있는 것을 알 수 있었다.
또, 상기 식 4-1로 나타나는 당쇄는, 보체 C4-A의 아미노산 배열의 N말단으로부터 1328번째의 아스파라진 잔기에 각각 결합하고 있는 것을 확인했다.
상기 표 1 및 도 5로부터, 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3에서 유래하는, (i) 식 5-1＇, 식 5-1＇＇, 식 5-2＇ 또는 식 5-2＇＇로 나타나는 당쇄를 갖는 당펩타이드 I(정상인 평균 피크 면적값: 644343, 췌장암 환자 평균 피크 면적값: 9886996)의 발현량은, 정상인과 비교하여, 췌장암 환자에 있어서 현저하게 증가하고 있는 것을 알 수 있었다.
또, 상기 식 5-1＇, 식 5-1＇＇, 식 5-2＇ 및 식 5-2＇＇로 나타나는 당쇄는, 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3의 아미노산 배열의 N말단으로부터 580번째의 아스파라진 잔기에 각각 결합하고 있는 것을 확인했다.
상기 표 1 및 도 6으로부터, 류신리치 알파 2글라이코프로테인에서 유래하는, (i) 식 6-1로 나타나는 당쇄를 갖는 당펩타이드 J(정상인 평균 피크 면적값: 639693, 췌장암 환자 평균 피크 면적값: 17070316)의 발현량은, 정상인과 비교하여, 췌장암 환자에 있어서 현저하게 증가하고 있는 것을 알 수 있었다.
또, 상기 식 6-1로 나타나는 당쇄는, 류신리치 알파 2글라이코프로테인의 아미노산 배열의 N말단으로부터 186번째의 아스파라진 잔기에 결합하고 있는 것을 확인했다.
상기 표 1 및 도 7로부터, 타이록신 결합 글로불린에서 유래하는, (i) 식 3-1＇로 나타나는 당쇄를 갖는 당펩타이드 K(정상인 평균 피크 면적값: 20923691, 췌장암 환자 평균 피크 면적값: 124825070) 및 (ii) 식 3-2＇로 나타나는 당쇄를 갖는 당펩타이드 L(정상인 평균 피크 면적값: 0, 췌장암 환자 평균 피크 면적값: 4808134)의 발현량은, 정상인과 비교하여, 췌장암 환자에 있어서 현저하게 증가하고 있는 것을 알 수 있었다. 특히, 식 3-2＇로 나타나는 당쇄를 갖는 당펩타이드 L에 대해서는, 정상인에서는 전혀 발현하고 있지 않는 것을 알 수 있었다.
또, 상기 식 3-1＇ 및 식 3-2＇로 나타나는 당쇄는, 타이록신 결합 글로불린의 아미노산 배열의 N말단으로부터 36번째의 아스파라진 잔기에 각각 결합하고 있는 것을 확인했다.
또한, 상기 당펩타이드 A~L의 발현량에 대하여, ROC(Receiver Operating Characteristic) 곡선 해석에 의하여 AUC값(Area Underthe Curve: 곡선 면적값)을 산출했다.
그 결과를 하기 표 2에 나타낸다. 또한, AUC값에 대해서는, 0.75 이상이 바람직하고, 0.80 이상이 되면 매우 높은 판정능이 있다고 생각한다.
[표 2]
상기 표 2로부터, 상기 당펩타이드 A~L은, 모두 양호한 AUC값을 나타냈다.
이상으로부터, 상기 당펩타이드 A~L을 마커로서 이용함으로써, 검체(샘플)가 췌장암인지 여부가 판정 가능하다는 것을 알 수 있었다.
산업상 이용가능성
본 발명의 췌장암의 판정용 마커 및 이것을 이용한 췌장암의 판정 방법, 및 췌장암의 판정을 행하기 위한 데이터를 얻는 방법에 의하면, 확도(정확도·정밀도)가 높은, 췌장암의 판정(진단, 검사)을 행할 수 있다.
SEQUENCE LISTING
<110> FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation
Public University Corporation Yokohama City University
<120> A marker for determining pancreatic cancer
<130> 2093PCT
<150> 2018-120945
<151> 2018-06-26
<160> 5
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 8
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 1
Asn Gly Ser Leu Phe Ala Phe Arg
1 5
<210> 2
<211> 11
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 2
Gly Leu Asn Val Thr Leu Ser Ser Thr Gly Arg
1 5 10
<210> 3
<211> 13
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 3
Asn Ala His Gly Glu Glu Lys Glu Asn Leu Thr Ala Arg
1 5 10
<210> 4
<211> 13
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 4
Leu Pro Pro Gly Leu Leu Ala Asn Phe Thr Leu Leu Arg
1 5 10
<210> 5
<211> 15
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 5
Val Thr Ala Cys His Ser Ser Gln Pro Asn Ala Thr Leu Tyr Lys
1 5 10 15
Claims (11)
- 하기 (1)~(5)로부터 선택되는 당쇄를 포함하는, 췌장암의 판정용 마커:
(1) 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3에 존재하는, 하기 식 5로 나타나는 당쇄,
(2) 류신리치 알파 2글라이코프로테인에 존재하는, 하기 식 6으로 나타나는 당쇄,
(3) 비트로넥틴에 존재하는, 하기 식 1~3으로 나타나는 적어도 하나의 당쇄,
(4) 보체 C4-A에 존재하는, 하기 식 4로 나타나는 당쇄,
(5) 타이록신 결합 글로불린에 존재하는, 하기 식 3으로 나타나는 당쇄.
(식 1 중, m1은 0~2의 정수를 나타낸다)
(식 2 중, m2는 0 또는 1을 나타낸다)
(식 3 중, n1은 0 또는 1을 나타낸다)
(식 5 중, n2는 0 또는 1을 나타낸다)
- 청구항 1에 있어서,
상기 당쇄가, 하기 (1-1)~(5-1) 중 어느 하나로 나타나는 당쇄인, 마커:
(1-1) 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3의 아미노산 배열의 N말단으로부터 580번째의 아스파라진 잔기에 결합하고 있는 상기 식 5로 나타나는 당쇄,
(2-1) 류신리치 알파 2글라이코프로테인의 아미노산 배열의 N말단으로부터 186번째의 아스파라진 잔기에 결합하고 있는 상기 식 6으로 나타나는 당쇄,
(3-1) 비트로넥틴의 아미노산 배열의 N말단으로부터 169번째의 아스파라진 잔기에 결합하고 있는 상기 식 1~3으로 나타나는 적어도 하나의 당쇄,
(4-1) 보체 C4-A의 아미노산 배열의 N말단으로부터 1328번째의 아스파라진 잔기에 결합하고 있는 상기 식 4로 나타나는 당쇄,
(5-1) 타이록신 결합 글로불린의 아미노산 배열의 N말단으로부터 36번째의 아스파라진 잔기에 결합하고 있는 상기 식 3으로 나타나는 당쇄. - 청구항 1에 있어서,
상기 당쇄가, 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3의 아미노산 배열의 N말단으로부터 580번째의 아스파라진 잔기에 결합하고 있는 상기 식 5로 나타나는 당쇄인, 마커. - 청구항 1에 있어서,
상기 당쇄가, 류신리치 알파 2글라이코프로테인의 아미노산 배열의 N말단으로부터 186번째의 아스파라진 잔기에 결합하고 있는 상기 식 6으로 나타나는 당쇄인, 마커. - 혈액 유래 시료 중의, 하기 (1)~(5)로부터 선택되는 당쇄의 양을 측정하고, 얻어진 측정 결과에 근거하여 췌장암의 판정을 보조하는, 췌장암의 판정을 보조하는 방법:
(1) 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3에 존재하는, 하기 식 5로 나타나는 당쇄,
(2) 류신리치 알파 2글라이코프로테인에 존재하는, 하기 식 6으로 나타나는 당쇄,
(3) 비트로넥틴에 존재하는, 하기 식 1~3으로 나타나는 적어도 하나의 당쇄,
(4) 보체 C4-A에 존재하는, 하기 식 4로 나타나는 당쇄,
(5) 타이록신 결합 글로불린에 존재하는, 하기 식 3으로 나타나는 당쇄.
(식 1 중, m1은 0~2의 정수를 나타낸다)
(식 2 중, m2는 0 또는 1을 나타낸다)
(식 3 중, n1은 0 또는 1을 나타낸다)
(식 5 중, n2는 0 또는 1을 나타낸다)
- 청구항 5에 있어서,
상기 당쇄가, 하기 (1-1)~(5-1) 중 어느 하나로 나타나는 당쇄인, 판정을 보조하는 방법:
(1-1) 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3의 아미노산 배열의 N말단으로부터 580번째의 아스파라진 잔기에 결합하고 있는 상기 식 5로 나타나는 당쇄,
(2-1) 류신리치 알파 2글라이코프로테인의 아미노산 배열의 N말단으로부터 186번째의 아스파라진 잔기에 결합하고 있는 상기 식 6으로 나타나는 당쇄,
(3-1) 비트로넥틴의 아미노산 배열의 N말단으로부터 169번째의 아스파라진 잔기에 결합하고 있는 상기 식 1~3으로 나타나는 적어도 하나의 당쇄,
(4-1) 보체 C4-A의 아미노산 배열의 N말단으로부터 1328번째의 아스파라진 잔기에 결합하고 있는 상기 식 4로 나타나는 당쇄,
(5-1) 타이록신 결합 글로불린의 아미노산 배열의 N말단으로부터 36번째의 아스파라진 잔기에 결합하고 있는 상기 식 3으로 나타나는 당쇄. - 청구항 5에 있어서,
상기 당쇄가, 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3의 아미노산 배열의 N말단으로부터 580번째의 아스파라진 잔기에 결합하고 있는 상기 식 5로 나타나는 당쇄인, 판정을 보조하는 방법. - 청구항 5에 있어서,
상기 당쇄가, 류신리치 알파 2글라이코프로테인의 아미노산 배열의 N말단으로부터 186번째의 아스파라진 잔기에 결합하고 있는 상기 식 6으로 나타나는 당쇄인, 판정을 보조하는 방법. - 청구항 5에 있어서,
상기 시료가, 전혈, 혈청 또는 혈장인, 판정을 보조하는 방법. - 혈액 유래 시료 중의, 하기 (1)~(5)로부터 선택되는 당쇄의 양을 측정함으로써 이루어지는, 췌장암의 판정을 행하기 위한 데이터를 얻는 방법:
(1) 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3에 존재하는, 하기 식 5로 나타나는 당쇄,
(2) 류신리치 알파 2글라이코프로테인에 존재하는, 하기 식 6으로 나타나는 당쇄,
(3) 비트로넥틴에 존재하는, 하기 식 1~3으로 나타나는 적어도 하나의 당쇄,
(4) 보체 C4-A에 존재하는, 하기 식 4로 나타나는 당쇄,
(5) 타이록신 결합 글로불린에 존재하는, 하기 식 3으로 나타나는 당쇄.
(식 1 중, m1은 0~2의 정수를 나타낸다)
(식 2 중, m2는 0 또는 1을 나타낸다)
(식 3 중, n1은 0 또는 1을 나타낸다)
(식 5 중, n2는 0 또는 1을 나타낸다)
- 하기 (1)~(5)로부터 선택되는 당쇄에 친화성을 갖는 물질을 포함하는, 췌장암의 판정용 키트:
(1) 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3에 존재하는, 하기 식 5로 나타나는 당쇄,
(2) 류신리치 알파 2글라이코프로테인에 존재하는, 하기 식 6으로 나타나는 당쇄,
(3) 비트로넥틴에 존재하는, 하기 식 1~3으로 나타나는 적어도 하나의 당쇄,
(4) 보체 C4-A에 존재하는, 하기 식 4로 나타나는 당쇄,
(5) 타이록신 결합 글로불린에 존재하는, 하기 식 3으로 나타나는 당쇄.
(식 1 중, m1은 0~2의 정수를 나타낸다)
(식 2 중, m2는 0 또는 1을 나타낸다)
(식 3 중, n1은 0 또는 1을 나타낸다)
(식 5 중, n2는 0 또는 1을 나타낸다)
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