KR102665511B1 - 췌장암의 판정용 마커 - Google Patents
췌장암의 판정용 마커 Download PDFInfo
- Publication number
- KR102665511B1 KR102665511B1 KR1020207036018A KR20207036018A KR102665511B1 KR 102665511 B1 KR102665511 B1 KR 102665511B1 KR 1020207036018 A KR1020207036018 A KR 1020207036018A KR 20207036018 A KR20207036018 A KR 20207036018A KR 102665511 B1 KR102665511 B1 KR 102665511B1
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- sugar chain
- represented
- present
- formula
- marker
- Prior art date
Links
- 239000003550 marker Substances 0.000 title claims abstract description 167
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 title claims abstract description 116
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 title claims abstract description 116
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 title claims abstract description 116
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 title claims abstract description 116
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 175
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 claims description 287
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 89
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 56
- 125000000613 asparagine group Chemical group N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)* 0.000 claims description 51
- 102100039460 Inter-alpha-trypsin inhibitor heavy chain H3 Human genes 0.000 claims description 49
- 101710083925 Inter-alpha-trypsin inhibitor heavy chain H3 Proteins 0.000 claims description 49
- 102100035987 Leucine-rich alpha-2-glycoprotein Human genes 0.000 claims description 44
- 101710083711 Leucine-rich alpha-2-glycoprotein Proteins 0.000 claims description 44
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 44
- 108010031318 Vitronectin Proteins 0.000 claims description 42
- 102100035140 Vitronectin Human genes 0.000 claims description 42
- 102100033772 Complement C4-A Human genes 0.000 claims description 40
- 108010077773 Complement C4a Proteins 0.000 claims description 40
- XUIIKFGFIJCVMT-UHFFFAOYSA-N thyroxine-binding globulin Natural products IC1=CC(CC([NH3+])C([O-])=O)=CC(I)=C1OC1=CC(I)=C(O)C(I)=C1 XUIIKFGFIJCVMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 39
- 102000002248 Thyroxine-Binding Globulin Human genes 0.000 claims description 37
- 108010000259 Thyroxine-Binding Globulin Proteins 0.000 claims description 37
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 9
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 9
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 9
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 claims description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 47
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 47
- 102000002068 Glycopeptides Human genes 0.000 description 43
- 108010015899 Glycopeptides Proteins 0.000 description 43
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 36
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 36
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 35
- DQJCDTNMLBYVAY-ZXXIYAEKSA-N (2S,5R,10R,13R)-16-{[(2R,3S,4R,5R)-3-{[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy}-5-(ethylamino)-6-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy}-5-(4-aminobutyl)-10-carbamoyl-2,13-dimethyl-4,7,12,15-tetraoxo-3,6,11,14-tetraazaheptadecan-1-oic acid Chemical compound NCCCC[C@H](C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)NC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@@H](C)NC(=O)C(C)O[C@@H]1[C@@H](NCC)C(O)O[C@H](CO)[C@H]1O[C@H]1[C@H](NC(C)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 DQJCDTNMLBYVAY-ZXXIYAEKSA-N 0.000 description 29
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 28
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 21
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 21
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 20
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 20
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 20
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 16
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 13
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 12
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N N-acelyl-D-glucosamine Natural products CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N N-acetylglucosamine Natural products CC(=O)N[C@@H](C=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N 0.000 description 10
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 10
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 9
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 9
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 9
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 9
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 9
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 9
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 8
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 8
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 8
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 description 8
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 8
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 8
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 8
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 description 8
- -1 oxyl group Chemical group 0.000 description 8
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 8
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 7
- SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N L-fucopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N 0.000 description 7
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 7
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 6
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 6
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 6
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 6
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 6
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 6
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 6
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 description 6
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 2-amino-4,6-dichloropyrimidine-5-carbaldehyde Chemical group NC1=NC(Cl)=C(C=O)C(Cl)=N1 GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 5
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 5
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 5
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 5
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 5
- PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N Fucose Natural products C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N 0.000 description 4
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 4
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 4
- 108010053229 Lysyl endopeptidase Proteins 0.000 description 4
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N beta-N-Acetyl-D-neuraminic acid Natural products CC(=O)NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 238000002414 normal-phase solid-phase extraction Methods 0.000 description 4
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 4
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010062580 Concanavalin A Proteins 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- SQVRNKJHWKZAKO-PFQGKNLYSA-N N-acetyl-beta-neuraminic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)O[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-PFQGKNLYSA-N 0.000 description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 3
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 238000012767 chemiluminescent enzyme immunoassay Methods 0.000 description 3
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 3
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 3
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 3
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 3
- 108010034897 lentil lectin Proteins 0.000 description 3
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 3
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 3
- 108010076805 snowdrop lectin Proteins 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 3
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 3
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- INZOTETZQBPBCE-NYLDSJSYSA-N 3-sialyl lewis Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@H]([C@H](O)CO)[C@@H]([C@@H](NC(C)=O)C=O)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@]2(O[C@H]([C@H](NC(C)=O)[C@@H](O)C2)[C@H](O)[C@H](O)CO)C(O)=O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 INZOTETZQBPBCE-NYLDSJSYSA-N 0.000 description 2
- HSHNITRMYYLLCV-UHFFFAOYSA-N 4-methylumbelliferone Chemical compound C1=C(O)C=CC2=C1OC(=O)C=C2C HSHNITRMYYLLCV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 2
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 2
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 2
- OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N Hydrazine Chemical compound NN OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OVRNDRQMDRJTHS-RTRLPJTCSA-N N-acetyl-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-RTRLPJTCSA-N 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 2
- MWPLVEDNUUSJAV-UHFFFAOYSA-N anthracene Chemical compound C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3C=C21 MWPLVEDNUUSJAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002391 anti-complement effect Effects 0.000 description 2
- 108010008730 anticomplement Proteins 0.000 description 2
- 238000000738 capillary electrophoresis-mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 2
- 238000013211 curve analysis Methods 0.000 description 2
- 238000011033 desalting Methods 0.000 description 2
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 2
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 2
- 238000002290 gas chromatography-mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 238000003317 immunochromatography Methods 0.000 description 2
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 2
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 2
- HWYHZTIRURJOHG-UHFFFAOYSA-N luminol Chemical compound O=C1NNC(=O)C2=C1C(N)=CC=C2 HWYHZTIRURJOHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 description 2
- 238000002170 nanoflow liquid chromatography-tandem mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- WLJVXDMOQOGPHL-UHFFFAOYSA-N phenylacetic acid Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC=C1 WLJVXDMOQOGPHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010025715 plants leukoagglutinins Proteins 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 2
- 239000012857 radioactive material Substances 0.000 description 2
- 238000005932 reductive alkylation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000000611 regression analysis Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 239000000439 tumor marker Substances 0.000 description 2
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 2
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 2
- BCHIXGBGRHLSBE-UHFFFAOYSA-N (4-methyl-2-oxochromen-7-yl) dihydrogen phosphate Chemical compound C1=C(OP(O)(O)=O)C=CC2=C1OC(=O)C=C2C BCHIXGBGRHLSBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 1,2-phenylenediamine Chemical compound NC1=CC=CC=C1N GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KJCVRFUGPWSIIH-UHFFFAOYSA-N 1-naphthol Chemical compound C1=CC=C2C(O)=CC=CC2=C1 KJCVRFUGPWSIIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 4-Nitrophenyl Phosphate Chemical compound OP(O)(=O)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(dimethylamino)phenyl]-n,n-dimethylaniline Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1C1=CC=C(N(C)C)C=C1 YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PCFGFYKGPMQDBX-FEKONODYSA-N 78355-50-7 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC(O)=CC=1)C1=CC=CC=C1 PCFGFYKGPMQDBX-FEKONODYSA-N 0.000 description 1
- 206010073363 Acinar cell carcinoma of pancreas Diseases 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 101710186708 Agglutinin Proteins 0.000 description 1
- SHYYAQLDNVHPFT-DLOVCJGASA-N Ala-Asn-Phe Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 SHYYAQLDNVHPFT-DLOVCJGASA-N 0.000 description 1
- 108010041181 Aleuria aurantia lectin Proteins 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- NXVGBGZQQFDUTM-XVYDVKMFSA-N Asn-Ala-His Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N NXVGBGZQQFDUTM-XVYDVKMFSA-N 0.000 description 1
- IARGXWMWRFOQPG-GCJQMDKQSA-N Asn-Ala-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O IARGXWMWRFOQPG-GCJQMDKQSA-N 0.000 description 1
- FTCGGKNCJZOPNB-WHFBIAKZSA-N Asn-Gly-Ser Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O FTCGGKNCJZOPNB-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- 101001089022 Axinella polypoides Lectin-2 Proteins 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- WAJDEKCJRKGRPG-CIUDSAMLSA-N Cys-His-Ser Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N WAJDEKCJRKGRPG-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- IGXWBGJHJZYPQS-SSDOTTSWSA-N D-Luciferin Chemical compound OC(=O)[C@H]1CSC(C=2SC3=CC=C(O)C=C3N=2)=N1 IGXWBGJHJZYPQS-SSDOTTSWSA-N 0.000 description 1
- XUIIKFGFIJCVMT-GFCCVEGCSA-N D-thyroxine Chemical compound IC1=CC(C[C@@H](N)C(O)=O)=CC(I)=C1OC1=CC(I)=C(O)C(I)=C1 XUIIKFGFIJCVMT-GFCCVEGCSA-N 0.000 description 1
- CYCGRDQQIOGCKX-UHFFFAOYSA-N Dehydro-luciferin Natural products OC(=O)C1=CSC(C=2SC3=CC(O)=CC=C3N=2)=N1 CYCGRDQQIOGCKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004435 EPR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- BJGNCJDXODQBOB-UHFFFAOYSA-N Fivefly Luciferin Natural products OC(=O)C1CSC(C=2SC3=CC(O)=CC=C3N=2)=N1 BJGNCJDXODQBOB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 1
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- SOEATRRYCIPEHA-BQBZGAKWSA-N Gly-Glu-Glu Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O SOEATRRYCIPEHA-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- IUZGUFAJDBHQQV-YUMQZZPRSA-N Gly-Leu-Asn Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O IUZGUFAJDBHQQV-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- UHPAZODVFFYEEL-QWRGUYRKSA-N Gly-Leu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CN UHPAZODVFFYEEL-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- 102000014702 Haptoglobin Human genes 0.000 description 1
- 108050005077 Haptoglobin Proteins 0.000 description 1
- 101710146024 Horcolin Proteins 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 208000022559 Inflammatory bowel disease Diseases 0.000 description 1
- SENJXOPIZNYLHU-UHFFFAOYSA-N L-leucyl-L-arginine Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCCN=C(N)N SENJXOPIZNYLHU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710189395 Lectin Proteins 0.000 description 1
- ZDBMWELMUCLUPL-QEJZJMRPSA-N Leu-Phe-Ala Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 ZDBMWELMUCLUPL-QEJZJMRPSA-N 0.000 description 1
- DPURXCQCHSQPAN-AVGNSLFASA-N Leu-Pro-Pro Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(O)=O)CCC1 DPURXCQCHSQPAN-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- ZJZNLRVCZWUONM-JXUBOQSCSA-N Leu-Thr-Ala Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O ZJZNLRVCZWUONM-JXUBOQSCSA-N 0.000 description 1
- BTEMNFBEAAOGBR-BZSNNMDCSA-N Leu-Tyr-Lys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N BTEMNFBEAAOGBR-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- DDWFXDSYGUXRAY-UHFFFAOYSA-N Luciferin Natural products CCc1c(C)c(CC2NC(=O)C(=C2C=C)C)[nH]c1Cc3[nH]c4C(=C5/NC(CC(=O)O)C(C)C5CC(=O)O)CC(=O)c4c3C DDWFXDSYGUXRAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZXEUFAVXODIPHC-GUBZILKMSA-N Lys-Glu-Asn Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O ZXEUFAVXODIPHC-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- 101001018085 Lysobacter enzymogenes Lysyl endopeptidase Proteins 0.000 description 1
- 241001521402 Maackia <angiosperm> Species 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 101710179758 Mannose-specific lectin Proteins 0.000 description 1
- 101710150763 Mannose-specific lectin 1 Proteins 0.000 description 1
- 101710150745 Mannose-specific lectin 2 Proteins 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-CBQIKETKSA-N N-Acetyl-D-Galactosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@@H](O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-CBQIKETKSA-N 0.000 description 1
- MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N N-acetyl-D-galactosamine Natural products CC(=O)NC(C=O)C(O)C(O)C(O)CO MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000002853 Nelumbo nucifera Species 0.000 description 1
- 235000006508 Nelumbo nucifera Nutrition 0.000 description 1
- 235000006510 Nelumbo pentapetala Nutrition 0.000 description 1
- 206010052399 Neuroendocrine tumour Diseases 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 241000282579 Pan Species 0.000 description 1
- 102000000447 Peptide-N4-(N-acetyl-beta-glucosaminyl) Asparagine Amidase Human genes 0.000 description 1
- 108010055817 Peptide-N4-(N-acetyl-beta-glucosaminyl) Asparagine Amidase Proteins 0.000 description 1
- 240000004713 Pisum sativum Species 0.000 description 1
- 235000010582 Pisum sativum Nutrition 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 108010026552 Proteome Proteins 0.000 description 1
- 240000006028 Sambucus nigra Species 0.000 description 1
- 235000003142 Sambucus nigra Nutrition 0.000 description 1
- BQWCDDAISCPDQV-XHNCKOQMSA-N Ser-Gln-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCC(=O)N)NC(=O)[C@H](CO)N)C(=O)O BQWCDDAISCPDQV-XHNCKOQMSA-N 0.000 description 1
- PYTKULIABVRXSC-BWBBJGPYSA-N Ser-Ser-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O PYTKULIABVRXSC-BWBBJGPYSA-N 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- MEJHFIOYJHTWMK-VOAKCMCISA-N Thr-Leu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)O MEJHFIOYJHTWMK-VOAKCMCISA-N 0.000 description 1
- CEKSLIVSNNGOKH-KZVJFYERSA-N Val-Thr-Ala Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N)O CEKSLIVSNNGOKH-KZVJFYERSA-N 0.000 description 1
- LCHZBEUVGAVMKS-RHYQMDGZSA-N Val-Thr-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C(C)C)[C@@H](C)O)C(O)=O LCHZBEUVGAVMKS-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 238000011481 absorbance measurement Methods 0.000 description 1
- XBJFCYDKBDVADW-UHFFFAOYSA-N acetonitrile;formic acid Chemical compound CC#N.OC=O XBJFCYDKBDVADW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000910 agglutinin Substances 0.000 description 1
- 210000004381 amniotic fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 1
- 210000001742 aqueous humor Anatomy 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NWCHELUCVWSRRS-UHFFFAOYSA-N atrolactic acid Chemical compound OC(=O)C(O)(C)C1=CC=CC=C1 NWCHELUCVWSRRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- FFBHFFJDDLITSX-UHFFFAOYSA-N benzyl N-[2-hydroxy-4-(3-oxomorpholin-4-yl)phenyl]carbamate Chemical compound OC1=C(NC(=O)OCC2=CC=CC=C2)C=CC(=C1)N1CCOCC1=O FFBHFFJDDLITSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 238000011325 biochemical measurement Methods 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- RICLFGYGYQXUFH-UHFFFAOYSA-N buspirone hydrochloride Chemical compound [H+].[Cl-].C1C(=O)N(CCCCN2CCN(CC2)C=2N=CC=CN=2)C(=O)CC21CCCC2 RICLFGYGYQXUFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 description 1
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 1
- 230000005465 channeling Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 239000003398 denaturant Substances 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000002651 drug therapy Methods 0.000 description 1
- 230000002124 endocrine Effects 0.000 description 1
- 235000008995 european elder Nutrition 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 1
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 108010026195 glycanase Proteins 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- PGLTVOMIXTUURA-UHFFFAOYSA-N iodoacetamide Chemical compound NC(=O)CI PGLTVOMIXTUURA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 108010073472 leucyl-prolyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 108010000761 leucylarginine Proteins 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 238000001294 liquid chromatography-tandem mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000007477 logistic regression Methods 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 208000022669 mucinous neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000000491 multivariate analysis Methods 0.000 description 1
- 238000005319 nano flow HPLC Methods 0.000 description 1
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 1
- 208000016065 neuroendocrine neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 201000011519 neuroendocrine tumor Diseases 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 201000010287 pancreatic acinar cell adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000030352 pancreatic acinar cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000000277 pancreatic duct Anatomy 0.000 description 1
- 108010069653 peptide E (adrenal medulla) Proteins 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 229960003424 phenylacetic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000003279 phenylacetic acid Substances 0.000 description 1
- 108010018625 phenylalanylarginine Proteins 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 1
- 210000004910 pleural fluid Anatomy 0.000 description 1
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 1
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 239000005020 polyethylene terephthalate Substances 0.000 description 1
- 229920000139 polyethylene terephthalate Polymers 0.000 description 1
- 229920000193 polymethacrylate Polymers 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 239000004800 polyvinyl chloride Substances 0.000 description 1
- 229920000915 polyvinyl chloride Polymers 0.000 description 1
- 229920002102 polyvinyl toluene Polymers 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 1
- 238000002731 protein assay Methods 0.000 description 1
- 238000000751 protein extraction Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000002096 quantum dot Substances 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011127 radiochemotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000002271 resection Methods 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003303 ruthenium Chemical class 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N sialic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)OC1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N 0.000 description 1
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 1
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 210000004243 sweat Anatomy 0.000 description 1
- 238000004885 tandem mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 210000001138 tear Anatomy 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 108010061238 threonyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 239000005495 thyroid hormone Substances 0.000 description 1
- 229940036555 thyroid hormone Drugs 0.000 description 1
- 229940034208 thyroxine Drugs 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000009772 tissue formation Effects 0.000 description 1
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 210000004127 vitreous body Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57407—Specifically defined cancers
- G01N33/57438—Specifically defined cancers of liver, pancreas or kidney
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
- G01N33/57488—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites involving compounds identifable in body fluids
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/66—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood sugars, e.g. galactose
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Oncology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
본 발명의 과제는, 확도(정확도·정밀도)가 높은, 췌장암의 판정용 마커를 제공하는 것에 있다.
본 발명은, 췌장암의 판정용 마커, 췌장암의 판정 방법, 췌장암의 판정을 행하기 위한 데이터를 얻는 방법, 췌장암의 판정용 키트 등에 관한 것이다.
본 발명은, 췌장암의 판정용 마커, 췌장암의 판정 방법, 췌장암의 판정을 행하기 위한 데이터를 얻는 방법, 췌장암의 판정용 키트 등에 관한 것이다.
Description
본 발명은, 췌장암의 판정용 마커에 관한 것이다.
당쇄란, 글루코스, 갈락토스, 마노스, 푸코스, 자일로스, N-아세틸글루코사민, N-아세틸갈락토사민, 사이알산 등의 단당 및 이들의 유도체가 글루코사이드 결합에 의하여 쇄상으로 결합한 분자의 총칭이다.
당쇄는, 생체 내에서는 단백질이나 지질과 결합한 복합 당질의 형태로 주로 세포 표면에 존재하고 있으며, 세포의 증식, 세균이나 바이러스의 감염, 신경의 신장, 염증, 면역 등의 생리 작용에 관여하고 있다.
한편, 당쇄는, 췌장암 등의 질환에 따라 그 구조가 변화하는 것도 알려져 있으며, 최근, 당쇄를 췌장암 등의 질환의 진단용 마커로서 이용하기 위한 연구가 행해지고 있다.
당쇄를 갖는 췌장암 등의 질환의 진단용 마커로서는, 예를 들면 CA19-9(carbohydrate antigen 19-9: 췌장암 마커), 합토글로빈(haptoglobin: 췌장암 마커) 등이 알려져 있다(특허문헌 1).
그러나, 이들 공지의 당쇄를 갖는 췌장암 마커는, 확도(정확도·정밀도)의 점에서 충분하지는 않았다.
본 발명은, 확도(정확도·정밀도)가 높은, 췌장암의 판정용 마커의 제공을 과제로 한다.
본 발명은, 상기 과제를 해결하는 목적으로 이루어진 것이며, 이하의 구성으로 이루어진다.
[1]
하기 (1)~(5)로부터 선택되는 당쇄를 포함하는, 췌장암의 판정용 마커:
(1) 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3에 존재하는, 하기 식 5로 나타나는 당쇄,
(2) 류신리치 알파 2글라이코프로테인에 존재하는, 하기 식 6으로 나타나는 당쇄,
(3) 비트로넥틴에 존재하는, 하기 식 1~3으로 나타나는 적어도 하나의 당쇄,
(4) 보체 C4-A에 존재하는, 하기 식 4로 나타나는 당쇄,
(5) 타이록신 결합 글로불린에 존재하는, 하기 식 3으로 나타나는 당쇄.
(식 1 중, m1은 0~2의 정수를 나타낸다)
(식 2 중, m2는 0 또는 1을 나타낸다)
(식 3 중, n1은 0 또는 1을 나타낸다)
(식 5 중, n2는 0 또는 1을 나타낸다)
[2]
상기 당쇄가, 하기 (1-1)~(5-1) 중 어느 하나로 나타나는 당쇄인, [1]에 기재된 마커:
(1-1) 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3의 아미노산 배열의 N말단으로부터 580번째의 아스파라진 잔기에 결합하고 있는 상기 식 5로 나타나는 당쇄,
(2-1) 류신리치 알파 2글라이코프로테인의 아미노산 배열의 N말단으로부터 186번째의 아스파라진 잔기에 결합하고 있는 상기 식 6으로 나타나는 당쇄,
(3-1) 비트로넥틴의 아미노산 배열의 N말단으로부터 169번째의 아스파라진 잔기에 결합하고 있는 상기 식 1~3으로 나타나는 적어도 하나의 당쇄,
(4-1) 보체 C4-A의 아미노산 배열의 N말단으로부터 1328번째의 아스파라진 잔기에 결합하고 있는 상기 식 4로 나타나는 당쇄,
(5-1) 타이록신 결합 글로불린의 아미노산 배열의 N말단으로부터 36번째의 아스파라진 잔기에 결합하고 있는 상기 식 3으로 나타나는 당쇄.
[3]
상기 당쇄가, 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3의 아미노산 배열의 N말단으로부터 580번째의 아스파라진 잔기에 결합하고 있는 상기 식 5로 나타나는 당쇄인, [1] 또는 [2]에 기재된 마커.
[4]
상기 당쇄가, 류신리치 알파 2글라이코프로테인의 아미노산 배열의 N말단으로부터 186번째의 아스파라진 잔기에 결합하고 있는 상기 식 6으로 나타나는 당쇄인, [1] 내지 [3] 중 어느 하나에 기재된 마커.
[5]
시료 중의, 하기 (1)~(5)로부터 선택되는 당쇄의 양을 측정하고, 얻어진 측정 결과에 근거하여 췌장암을 판정하는, 췌장암의 판정 방법:
(1) 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3에 존재하는, 하기 식 5로 나타나는 당쇄,
(2) 류신리치 알파 2글라이코프로테인에 존재하는, 하기 식 6으로 나타나는 당쇄,
(3) 비트로넥틴에 존재하는, 하기 식 1~3으로 나타나는 적어도 하나의 당쇄,
(4) 보체 C4-A에 존재하는, 하기 식 4로 나타나는 당쇄,
(5) 타이록신 결합 글로불린에 존재하는, 하기 식 3으로 나타나는 당쇄.
(식 1 중, m1은 0~2의 정수를 나타낸다)
(식 2 중, m2는 0 또는 1을 나타낸다)
(식 3 중, n1은 0 또는 1을 나타낸다)
(식 5 중, n2는 0 또는 1을 나타낸다)
[6]
상기 당쇄가, 하기 (1-1)~(5-1) 중 어느 하나로 나타나는 당쇄인, [5]에 기재된 판정 방법:
(1-1) 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3의 아미노산 배열의 N말단으로부터 580번째의 아스파라진 잔기에 결합하고 있는 상기 식 5로 나타나는 당쇄,
(2-1) 류신리치 알파 2글라이코프로테인의 아미노산 배열의 N말단으로부터 186번째의 아스파라진 잔기에 결합하고 있는 상기 식 6으로 나타나는 당쇄,
(3-1) 비트로넥틴의 아미노산 배열의 N말단으로부터 169번째의 아스파라진 잔기에 결합하고 있는 상기 식 1~3으로 나타나는 적어도 하나의 당쇄,
(4-1) 보체 C4-A의 아미노산 배열의 N말단으로부터 1328번째의 아스파라진 잔기에 결합하고 있는 상기 식 4로 나타나는 당쇄,
(5-1) 타이록신 결합 글로불린의 아미노산 배열의 N말단으로부터 36번째의 아스파라진 잔기에 결합하고 있는 상기 식 3으로 나타나는 당쇄.
[7]
상기 당쇄가, 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3의 아미노산 배열의 N말단으로부터 580번째의 아스파라진 잔기에 결합하고 있는 상기 식 5로 나타나는 당쇄인, [5] 또는 [6]에 기재된 판정 방법.
[8]
상기 당쇄가, 류신리치 알파 2글라이코프로테인의 아미노산 배열의 N말단으로부터 186번째의 아스파라진 잔기에 결합하고 있는 상기 식 6으로 나타나는 당쇄인, [5] 내지 [7] 중 어느 하나에 기재된 판정 방법.
[9]
상기 시료가, 전혈, 혈청 또는 혈장인, [5] 내지 [8] 중 어느 하나에 기재된 판정 방법.
[10]
시료 중의, 하기 (1)~(5)로부터 선택되는 당쇄의 양을 측정함으로써 이루어지는, 췌장암의 판정을 행하기 위한 데이터를 얻는 방법:
(1) 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3에 존재하는, 하기 식 5로 나타나는 당쇄,
(2) 류신리치 알파 2글라이코프로테인에 존재하는, 하기 식 6으로 나타나는 당쇄,
(3) 비트로넥틴에 존재하는, 하기 식 1~3으로 나타나는 적어도 하나의 당쇄,
(4) 보체 C4-A에 존재하는, 하기 식 4로 나타나는 당쇄,
(5) 타이록신 결합 글로불린에 존재하는, 하기 식 3으로 나타나는 당쇄.
(식 1 중, m1은 0~2의 정수를 나타낸다)
(식 2 중, m2는 0 또는 1을 나타낸다)
(식 3 중, n1은 0 또는 1을 나타낸다)
(식 5 중, n2는 0 또는 1을 나타낸다)
[11]
하기 (1)~(5)로부터 선택되는 당쇄에 친화성을 갖는 물질을 포함하는, 췌장암의 판정용 키트:
(1) 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3에 존재하는, 하기 식 5로 나타나는 당쇄,
(2) 류신리치 알파 2글라이코프로테인에 존재하는, 하기 식 6으로 나타나는 당쇄,
(3) 비트로넥틴에 존재하는, 하기 식 1~3으로 나타나는 적어도 하나의 당쇄,
(4) 보체 C4-A에 존재하는, 하기 식 4로 나타나는 당쇄,
(5) 타이록신 결합 글로불린에 존재하는, 하기 식 3으로 나타나는 당쇄.
(식 1 중, m1은 0~2의 정수를 나타낸다)
(식 2 중, m2는 0 또는 1을 나타낸다)
(식 3 중, n1은 0 또는 1을 나타낸다)
(식 5 중, n2는 0 또는 1을 나타낸다)
본 발명의 췌장암의 판정용 마커와 이것을 이용한 췌장암의 판정 방법, 및 췌장암의 판정을 행하기 위한 데이터를 얻는 방법에 의하면, 확도(정확도·정밀도)가 높은, 췌장암의 판정(진단, 검사)을 행할 수 있다.
도 1은 당펩타이드 A, B 및 C의 피크 면적값에 대하여, 정상인(11검체)의 평균값 및 췌장암 환자(10검체)의 평균값을 나타낸 도이다.
도 2는 당펩타이드 D 및 E의 피크 면적값에 대하여, 정상인(11검체)의 평균값 및 췌장암 환자(10검체)의 평균값을 나타낸 도이다.
도 3은 당펩타이드 F 및 G의 피크 면적값에 대하여, 정상인(11검체)의 평균값 및 췌장암 환자(10검체)의 평균값을 나타낸 도이다.
도 4는 당펩타이드 H의 피크 면적값에 대하여, 정상인(11검체)의 평균값 및 췌장암 환자(10검체)의 평균값을 나타낸 도이다.
도 5는 당펩타이드 I의 피크 면적값에 대하여, 정상인(11검체)의 평균값 및 췌장암 환자(10검체)의 평균값을 나타낸 도이다.
도 6은 당펩타이드 J의 피크 면적값에 대하여, 정상인(11검체)의 평균값 및 췌장암 환자(10검체)의 평균값을 나타낸 도이다.
도 7은 당펩타이드 K 및 L의 피크 면적값에 대하여, 정상인(11검체)의 평균값 및 췌장암 환자(10검체)의 평균값을 나타낸 도이다.
도 2는 당펩타이드 D 및 E의 피크 면적값에 대하여, 정상인(11검체)의 평균값 및 췌장암 환자(10검체)의 평균값을 나타낸 도이다.
도 3은 당펩타이드 F 및 G의 피크 면적값에 대하여, 정상인(11검체)의 평균값 및 췌장암 환자(10검체)의 평균값을 나타낸 도이다.
도 4는 당펩타이드 H의 피크 면적값에 대하여, 정상인(11검체)의 평균값 및 췌장암 환자(10검체)의 평균값을 나타낸 도이다.
도 5는 당펩타이드 I의 피크 면적값에 대하여, 정상인(11검체)의 평균값 및 췌장암 환자(10검체)의 평균값을 나타낸 도이다.
도 6은 당펩타이드 J의 피크 면적값에 대하여, 정상인(11검체)의 평균값 및 췌장암 환자(10검체)의 평균값을 나타낸 도이다.
도 7은 당펩타이드 K 및 L의 피크 면적값에 대하여, 정상인(11검체)의 평균값 및 췌장암 환자(10검체)의 평균값을 나타낸 도이다.
<본 발명의 췌장암의 판정용 마커>
본 발명의 췌장암의 판정용 마커(이하, 본 발명의 마커라고 약기하는 경우가 있음)는, 하기 (1)~(5)로부터 선택되는 당쇄를 포함하는 것이다.
(1) 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3에 존재하는, 상기 식 5로 나타나는 당쇄(이하, 본 발명의 마커 (1)이라고 약기하는 경우가 있음),
(2) 류신리치 알파 2글라이코프로테인에 존재하는, 상기 식 6으로 나타나는 당쇄(이하, 본 발명의 마커 (2)라고 약기하는 경우가 있음),
(3) 비트로넥틴에 존재하는, 상기 식 1~3으로 나타나는 적어도 하나의 당쇄(이하, 본 발명의 마커 (3)이라고 약기하는 경우가 있음),
(4) 보체 C4-A에 존재하는, 상기 식 4로 나타나는 당쇄(이하, 본 발명의 마커 (4)라고 약기하는 경우가 있음),
(5) 타이록신 결합 글로불린에 존재하는, 상기 식 3으로 나타나는 당쇄(이하, 본 발명의 마커 (5)라고 약기하는 경우가 있음).
또한, 본 발명의 마커는, 본 발명의 마커 (1)~(5) 중 어느 하나를 단독으로 포함하는 것이어도 되고, 혹은 복수 종을 포함하는 것이어도 된다.
이하에, 본 발명의 마커 (1)~(5)에 대하여 각각 설명한다.
[본 발명의 마커 (1)]
본 발명의 마커 (1)은, 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3에 존재하는, 하기 식 5로 나타나는 당쇄를 포함하는 것이다.
(식 5 중, n2는 0 또는 1을 나타낸다)
또한, 상기 식 5에 있어서의, NeuNAc는 N-아세틸뉴라민산, Gal은 갈락토스, GlcNAc는 N-아세틸글루코사민, Man은 마노스, Fuc는 푸코스를 나타낸다.
이하, 본 명세서에 있어서 동일한 의미를 나타낸다.
또한, 본 발명의 마커 (1)로서는, 상기 식 5로 나타나는 어느 하나의 당쇄를 단독으로 사용해도 되고, 복수 종을 조합하여 사용해도 된다.
본 발명의 마커 (1)에 관한 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3(Inter-alpha-trypsin inhibitor heavy chain H3)이란, 혈장 중에 존재하는 프로테아제 인히비터 패밀리의 하나이며, 그 기능은 명확하게 되어 있지는 않지만, 태아의 착상 등에 관여하고 있는 것이 보고되고 있다.
또, 그 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3의 아미노산 배열은, 예를 들면 Uniprot(액세션 번호: Q06033) 등의 데이터베이스에 등록되어 있다.
본 발명의 마커 (1)에 관한 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3은, 상기 데이터베이스에 등록되어 있는 것뿐만 아니라, 생체 내에서 발생할 수 있는 변이체 등도 포함한다. 예를 들면, 그 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3에 있어서 1~5개, 바람직하게는 1 또는 2개의 아미노산이 결실(缺失), 치환 또는/및 부가된 것이며 다형성이나 돌연변이 등에 의하여 발생하는 것이다.
단, 변이체 등이어도, 후술하는 본 발명의 마커 (1)에 있어서의 식 5로 나타나는 당쇄와 그 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3의 결합 부위인, 그 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3의 아미노산 배열의 N말단으로부터 580번째의 아미노산 잔기(아스파라진 잔기)가 보존되어 있는 것이 바람직하다.
본 발명의 마커 (1)에 있어서의 식 5로 나타나는 당쇄(말단의 N-아세틸글루코사민)는, 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3의 아미노산 배열의 N말단으로부터 580번째의 아미노산 잔기(아스파라진 잔기)에 결합(N-글루코사이드 결합)하고 있는 것이 바람직하다.
이하에, 본 발명의 마커 (1)에 있어서의 식 5로 나타나는 당쇄에 대하여 설명한다.
인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3에 존재하는 식 5로 나타나는 당쇄
(식 5 중, n2는 0 또는 1을 나타낸다)
상기 식 5에 있어서의 n2는, 0 또는 1을 나타내고, 식 5는 각각, n2가 0인 경우, 하기 식 5-1을 나타내며, n2가 1인 경우, 하기 식 5-2를 나타낸다.
상기 식 5로 나타나는 당쇄로서는, 하기 식 5-1로 나타나는 것, 또는 하기 식 5-1로 나타나는 것과 하기 식 5-2로 나타나는 것의 조합이 바람직하다.
또, 상기 식 5-1 및 5-2로 나타나는 당쇄로서는, 구체적으로는, 예를 들면 하기 식 5-1', 5-1'', 5-2', 5-2'' 등으로 나타나는 것을 들 수 있고, 하기 식 5-1'로 나타나는 것과 하기 식 5-1''로 나타나는 것의 조합 또는 하기 식 5-1'로 나타나는 것과, 하기 식 5-1''로 나타나는 것과, 하기 식 5-2'로 나타나는 것과, 하기 식 5-2''로 나타나는 것의 조합이 바람직하다.
본 발명의 마커 (1), 즉, 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3에 존재하는 식 5로 나타나는 당쇄를 포함하는, 마커로서는, (i) 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3에 존재하는(유래하는) 식 5로 나타나는 당쇄 그 자체, (ii) 식 5로 나타나는 당쇄가 결합한 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3, (iii) 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3의 일부분이며, 식 5로 나타나는 당쇄가 결합한 펩타이드 단편(斷片) 등을 들 수 있고, (ii) 또는 (iii)이 바람직하다.
또한, 상기 펩타이드 단편이란, 식 5로 나타나는 당쇄와 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3의 결합 부위인, 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3의 아미노산 배열의 N말단으로부터 580번째의 아미노산 잔기(아스파라진 잔기)를 적어도 갖는 임의의 단편인 것이 바람직하다. 그 펩타이드 단편으로서는, 구체적으로는, 예를 들면 생체 내에서 발생하는 것이나, 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3을 트립신, 리실엔드펩티다제, AspN 등의 프로테아제 처리를 행한 결과 발생하는 것을 들 수 있고, 보다 구체적으로는, 예를 들면 2~50개의 아미노산 잔기로 이루어지는 것 등을 들 수 있으며, 배열 번호 3(액세션 번호 Q06033: 572번~584번)으로 나타나는 것이 바람직하다.
[본 발명의 마커 (2)]
본 발명의 마커 (2)는, 류신리치 알파 2글라이코프로테인에 존재하는, 하기 식 6으로 나타나는 당쇄를 포함하는 것이다.
또한, 본 발명의 마커 (2)로서는, 상기 식 6으로 나타나는 어느 하나의 당쇄를 단독으로 사용해도 되고, 복수 종을 조합하여 사용해도 된다.
본 발명의 마커 (2)에 관한 류신리치 알파 2글라이코프로테인(Leucine-richalpha-2-glycoprotein)이란, 혈액에 포함되는 단백질이며, 염증성 장질환 등 다양한 질환에 관여하고 있는 것이 보고되고 있다. 또, 류신리치 알파 2글라이코프로테인의 아미노산 배열은, 예를 들면 Uniprot(액세션 번호: P02750) 등의 데이터베이스에 등록되어 있다.
본 발명의 마커 (2)에 관한 류신리치 알파 2글라이코프로테인은, 상기 데이터베이스에 등록되어 있는 것뿐만 아니라, 생체 내에서 발생할 수 있는 변이체 등도 포함한다. 예를 들면, 그 류신리치 알파 2글라이코프로테인에 있어서 1~5개, 바람직하게는 1 또는 2개의 아미노산이 결실, 치환 또는/및 부가된 것이며 다형성이나 돌연변이 등에 의하여 발생하는 것이다.
단, 변이체 등이어도, 후술하는 본 발명의 마커 (2)에 있어서의 식 6으로 나타나는 당쇄와 그 류신리치 알파 2글라이코프로테인의 결합 부위인, 그 류신리치 알파 2글라이코프로테인의 아미노산 배열의 N말단으로부터 186번째의 아미노산 잔기(아스파라진 잔기)가 보존되어 있는 것이 바람직하다.
본 발명의 마커 (2)에 있어서의 식 6으로 나타나는 당쇄(말단의 N-아세틸글루코사민)는, 류신리치 알파 2글라이코프로테인의 아미노산 배열의 N말단으로부터 186번째의 아미노산 잔기(아스파라진 잔기)에 결합(N-글루코사이드 결합)하고 있는 것이 바람직하다.
이하에, 본 발명의 마커 (2)에 있어서의 식 6으로 나타나는 당쇄에 대하여 설명한다.
류신리치 알파 2글라이코프로테인에 존재하는 식 6으로 나타나는 당쇄
또, 상기 식 6으로 나타나는 당쇄로서는 구체적으로는, 예를 들면 하기 식 6-1로 나타나는 것이 바람직하다.
본 발명의 마커 (2), 즉, 류신리치 알파 2글라이코프로테인에 존재하는 식 6으로 나타나는 당쇄를 포함하는, 마커로서는, (i) 류신리치 알파 2글라이코프로테인에 존재하는(유래하는) 식 6으로 나타나는 당쇄 그 자체, (ii) 식 6으로 나타나는 당쇄가 결합한 류신리치 알파 2글라이코프로테인, (iii) 류신리치 알파 2글라이코프로테인의 일부분이며, 식 6으로 나타나는 당쇄가 결합한 펩타이드 단편 등을 들 수 있고, (ii) 또는 (iii)이 바람직하다.
또한, 상기 펩타이드 단편이란, 식 6으로 나타나는 당쇄와 류신리치 알파 2글라이코프로테인의 결합 부위인, 류신리치 알파 2글라이코프로테인의 아미노산 배열의 N말단으로부터 186번째의 아미노산 잔기(아스파라진 잔기)를 적어도 갖는 임의의 단편이다. 그 펩타이드 단편으로서는, 구체적으로는, 예를 들면 생체 내에서 발생하는 것이나, 류신리치 알파 2글라이코프로테인을 트립신, 리실엔드펩티다제, AspN 등의 프로테아제 처리를 행한 결과 발생하는 것을 들 수 있고, 보다 구체적으로는, 예를 들면 2~50개의 아미노산 잔기로 이루어지는 것 등을 들 수 있으며, 배열 번호 4(액세션 번호 P02750: 179번~191번)로 나타나는 것이 바람직하다.
[본 발명의 마커 (3)]
본 발명의 마커 (3)은, 비트로넥틴에 존재하는, 하기 식 1~3으로 나타나는 적어도 하나의 당쇄를 포함하는 것이다.
(식 1 중, m1은 0~2의 정수를 나타낸다)
(식 2 중, m2는 0 또는 1을 나타낸다)
(식 3 중, n1은 0 또는 1을 나타낸다)
또한, 본 발명의 마커 (3)으로서는, 상기 식 1~3으로 나타나는 어느 하나의 당쇄를 단독으로 사용해도 되고, 복수 종을 조합하여 사용해도 된다. 조합하는 경우에는, 상기 식 1~3으로부터 조합해도 되고, 상기 식 1만의 조합, 상기 식 2만의 조합 또는 상기 식 3만의 조합이어도 된다.
본 발명의 마커 (3)에 관한 비트로넥틴(Vitronectin)이란, 혈액이나 세포외 매트릭스 등에 존재하는 당단백질이며, 조직 형성이나 신경 세포의 분화 등, 생체에 있어서 중요한 역할을 하고 있다. 또, 그 비트로넥틴의 아미노산 배열은, 예를 들면 Uniprot(액세션 번호: P04004) 등의 데이터베이스에 등록되어 있다.
본 발명의 마커 (3)에 관한 비트로넥틴은, 상기 데이터베이스에 등록되어 있는 것뿐만 아니라, 생체 내에서 발생할 수 있는 변이체 등도 포함한다. 예를 들면, 그 비트로넥틴에 있어서 1~5개, 바람직하게는 1 또는 2개의 아미노산이 결실, 치환 또는/및 부가된 것이며 다형성이나 돌연변이 등에 의하여 발생하는 것이다.
단, 변이체 등이어도 후술하는 본 발명의 마커 (3)에 있어서의 식 1~3으로 나타나는 당쇄와 그 비트로넥틴의 결합 부위인, 그 비트로넥틴의 아미노산 배열의 N말단으로부터 169번째의 아미노산 잔기(아스파라진 잔기)가 보존되어 있는 것이 바람직하다.
본 발명의 마커 (3)에 있어서의 식 1~3으로 나타나는 당쇄(말단의 N-아세틸글루코사민)는, 각각 비트로넥틴의 아미노산 배열의 N말단으로부터 169번째의 아미노산 잔기(아스파라진 잔기)에 결합(N-글루코사이드 결합)하고 있는 것이 바람직하고, 식 1로 나타나는 것이 보다 바람직하다.
이하에, 본 발명의 마커 (3)에 있어서의 식 1~3으로 나타나는 당쇄에 대하여 각각 설명한다.
비트로넥틴에 존재하는 식 1로 나타나는 당쇄
(식 1 중, m1은 0~2의 정수를 나타낸다)
상기 식 1에 있어서의 m1은, 0~2의 정수를 나타내고, 식 1은 각각, m1이 0인 경우, 하기 식 1-1을 나타내며, m1이 1인 경우, 하기 식 1-2를 나타내고, m1이 2인 경우, 하기 식 1-3을 나타낸다.
상기 식 1로 나타나는 당쇄로서는, m1이 0인 경우, 즉, 하기 식 1-1로 나타나는 것이 바람직하다.
또, 상기 식 1-1, 1-2 및 1-3으로 나타나는 당쇄로서는, 구체적으로는, 예를 들면 하기 식 1-1', 1-2', 1-3' 등으로 나타나는 것을 들 수 있고, 하기 식 1-1'로 나타나는 것이 바람직하다.
(식 1-1', 1-2' 및 1-3'중, α2-3/6은, α2-3 글루코사이드 결합 또는 α2-6 글루코사이드 결합을 나타낸다. 이하, 본 명세서에서 동일한 의미를 나타낸다)
비트로넥틴에 존재하는 식 2로 나타나는 당쇄
(식 2 중, m2는 0 또는 1을 나타낸다)
상기 식 2에 있어서의 m2는, 0 또는 1을 나타내고, 식 2는 각각, m2가 0인 경우, 하기 식 2-1을 나타내며, m2가 1인 경우, 하기 식 2-2를 나타낸다.
또, 상기 식 2-1 및 2-2로 나타나는 당쇄로서는, 구체적으로는, 예를 들면 하기 식 2-1', 2-1'', 2-2' 등으로 나타나는 것을 들 수 있고, 하기 식 2-1'로 나타나는 것 또는 식 2-1'로 나타나는 것과 식 2-1''로 나타나는 것의 조합이 바람직하다.
비트로넥틴에 존재하는 식 3으로 나타나는 당쇄
(식 3 중, n1은 0 또는 1을 나타낸다)
상기 식 3에 있어서의 n1은, 0 또는 1을 나타내고, 식 3은 각각, n1이 0인 경우, 하기 식 3-1을 나타내며, n1이 1인 경우, 하기 식 3-2를 나타낸다.
상기 식 3으로 나타나는 당쇄로서는, n1이 1인 경우, 즉, 하기 식 3-2로 나타나는 것이 바람직하다.
또, 상기 식 3-1 및 3-2로 나타나는 당쇄로서는, 구체적으로는, 예를 들면 하기 식 3-1', 3-2' 등으로 나타나는 것을 들 수 있고, 하기 식 3-2'로 나타나는 것이 바람직하다.
본 발명의 마커 (3), 즉, 비트로넥틴에 존재하는 식 1~3으로 나타나는 적어도 하나의 당쇄를 포함하는, 마커로서는, (i) 비트로넥틴에 존재하는(유래하는) 식 1~3으로 나타나는 적어도 하나의 당쇄 그 자체, (ii) 식 1~3으로 나타나는 적어도 하나의 당쇄가 결합한 비트로넥틴, (iii) 비트로넥틴의 일부분이며, 식 1~3으로 나타나는 적어도 하나의 당쇄가 결합한 펩타이드 단편 등을 들 수 있고, (ii) 또는 (iii)이 바람직하다.
또한, 상기 펩타이드 단편이란, 식 1~3으로 나타나는 당쇄와 비트로넥틴의 결합 부위인, 비트로넥틴의 아미노산 배열의 N말단으로부터 169번째의 아미노산 잔기(아스파라진 잔기)를 적어도 갖는 임의의 단편인 것이 바람직하다. 그 펩타이드 단편으로서는, 구체적으로는, 예를 들면 생체 내에서 발생하는 것이나, 비트로넥틴을 트립신, 리실엔드펩티다제, AspN 등의 프로테아제 처리를 행한 결과 발생하는 것을 들 수 있고, 보다 구체적으로는, 예를 들면 2~50개의 아미노산 잔기로 이루어지는 것 등을 들 수 있으며, 배열 번호 1(액세션 번호 P04004: 169번~176번)으로 나타나는 것이 바람직하다.
[본 발명의 마커 (4)]
본 발명의 마커 (4)는, 보체 C4-A에 존재하는, 하기 식 4로 나타나는 당쇄를 포함하는 것이다.
또한, 본 발명의 마커 (4)로서는, 상기 식 4로 나타나는 어느 하나의 당쇄를 단독으로 사용해도 되고, 복수 종을 조합하여 사용해도 된다.
본 발명의 마커 (4)에 관한 보체 C4-A(complement C4-A)란, 혈장 단백질의 하나이며, 간세포 등으로 생산되어, 세균 등의 감염 방어에 중요한 역할을 하고 있다. 또, 그 보체 C4-A의 아미노산 배열은, 예를 들면 Uniprot(액세션 번호: P0C0L4) 등의 데이터베이스에 등록되어 있다.
본 발명의 마커 (4)에 관한 보체 C4-A는, 상기 데이터베이스에 등록되어 있는 것뿐만 아니라, 생체 내에서 발생할 수 있는 변이체 등도 포함한다. 예를 들면, 그 보체 C4-A에 있어서 1~5개, 바람직하게는 1 또는 2개의 아미노산이 결실, 치환 또는/및 부가된 것이며 다형성이나 돌연변이 등에 의하여 발생하는 것이다.
단, 변이체 등이어도, 후술하는 본 발명의 마커 (4)에 있어서의 식 4로 나타나는 당쇄와 그 보체 C4-A의 결합 부위인, 그 보체 C4-A의 아미노산 배열의 N말단으로부터 1328번째의 아미노산 잔기(아스파라진 잔기)가 보존되어 있는 것이 바람직하다.
본 발명의 마커 (4)에 있어서의 식 4로 나타나는 당쇄(말단의 N-아세틸글루코사민)는, 보체 C4-A의 아미노산 배열의 N말단으로부터 1328번째의 아미노산 잔기(아스파라진 잔기)에 결합(N-글루코사이드 결합)하고 있는 것이 바람직하다.
이하에, 본 발명의 마커 (4)에 있어서의 식 4로 나타나는 당쇄에 대하여 설명한다.
보체 C4-A에 존재하는 식 4로 나타나는 당쇄
또, 상기 식 4로 나타나는 당쇄로서는, 구체적으로는, 예를 들면 하기 식 4-1로 나타나는 것이 바람직하다.
본 발명의 마커 (4), 즉, 보체 C4-A에 존재하는 식 4로 나타나는 당쇄를 포함하는, 마커로서는, (i) 보체 C4-A에 존재하는(유래하는) 식 4로 나타나는 당쇄 그 자체, (ii) 식 4로 나타나는 당쇄가 결합한 보체 C4-A, (iii) 보체 C4-A의 일부분이며, 식 4로 나타나는 당쇄가 결합한 펩타이드 단편 등을 들 수 있고, (ii) 또는 (iii)이 바람직하다.
또한, 상기 펩타이드 단편이란, 식 4로 나타나는 당쇄와 보체 C4-A의 결합 부위인, 보체 C4-A의 아미노산 배열의 N말단으로부터 1328번째의 아미노산 잔기(아스파라진 잔기)를 적어도 갖는 임의의 단편인 것이 바람직하다. 그 펩타이드 단편으로서는, 구체적으로는, 예를 들면 생체 내에서 발생하는 것이나, 보체 C4-A를 트립신, 리실엔드펩티다제, AspN 등의 프로테아제 처리를 행한 결과 발생하는 것을 들 수 있고, 보다 구체적으로는, 예를 들면 2~50개의 아미노산 잔기로 이루어지는 것 등을 들 수 있으며, 배열 번호 2(액세션 번호 P0C0L4: 1326번~1336번)로 나타나는 것이 바람직하다.
[본 발명의 마커 (5)]
본 발명의 마커 (5)는, 타이록신 결합 글로불린에 존재하는, 하기 식 3으로 나타나는 당쇄를 포함하는 것이다.
(식 3 중, n1은 0 또는 1을 나타낸다)
또한, 본 발명의 마커 (5)로서는, 상기 식 3으로 나타나는 어느 하나의 당쇄를 단독으로 사용해도 되고, 복수 종을 조합하여 사용해도 된다.
본 발명의 마커 (5)에 관한 타이록신 결합 글로불린(Thyroxine-binding globulin)이란, 타이록신에 결합하는 단백질이며, 갑상선 호르몬의 수송 등에 관여하고 있는 것이 보고되고 있다. 또, 타이록신 결합 글로불린의 아미노산 배열은, 예를 들면 Uniprot(액세션 번호: P05543) 등의 데이터베이스에 등록되어 있다.
본 발명의 마커 (5)에 관한 타이록신 결합 글로불린은, 상기 데이터베이스에 등록되어 있는 것뿐만 아니라, 생체 내에서 발생할 수 있는 변이체 등도 포함한다. 예를 들면, 그 타이록신 결합 글로불린에 있어서 1~5개, 바람직하게는 1 또는 2개의 아미노산이 결실, 치환 또는/및 부가된 것이며 다형성이나 돌연변이 등에 의하여 발생하는 것이다.
단, 변이체 등이어도 후술하는 본 발명의 마커 (5)에 있어서의 식 3으로 나타나는 당쇄와 그 타이록신 결합 글로불린의 결합 부위인, 그 타이록신 결합 글로불린의 아미노산 배열의 N말단으로부터 36번째의 아미노산 잔기(아스파라진 잔기)가 보존되어 있는 것이 바람직하다.
본 발명의 마커 (5)에 있어서의 식 3으로 나타나는 당쇄(말단의 N-아세틸글루코사민)는, 타이록신 결합 글로불린의 아미노산 배열의 N말단으로부터 36번째의 아미노산 잔기(아스파라진 잔기)에 결합(N-글루코사이드 결합)하고 있는 것이 바람직하다.
또한, 본 발명의 마커 (5)에 있어서의 식 3으로 나타나는 당쇄에 대해서는, 상술한 바와 같고, 그 구체예는 동일하지만 바람직한 예로서는, 식 상기 3-1로 나타나는 것을 들 수 있으며, 보다 바람직한 예로서는, 상기 식 3-1'로 나타나는 것을 들 수 있다.
본 발명의 마커 (5), 즉, 타이록신 결합 글로불린에 존재하는 식 3으로 나타나는 당쇄를 포함하는, 마커로서는, (i) 타이록신 결합 글로불린에 존재하는(유래하는) 식 3으로 나타나는 당쇄 그 자체, (ii) 식 3으로 나타나는 당쇄가 결합한 타이록신 결합 글로불린, (iii) 타이록신 결합 글로불린의 일부분이며, 식 3으로 나타나는 당쇄가 결합한 펩타이드 단편 등을 들 수 있고, (ii) 또는 (iii)이 바람직하다.
또한, 상기 펩타이드 단편이란, 식 3으로 나타나는 당쇄와 타이록신 결합 글로불린의 결합 부위인, 타이록신 결합 글로불린의 아미노산 배열의 N말단으로부터 36번째의 아미노산 잔기(아스파라진 잔기)를 적어도 갖는 임의의 단편인 것이 바람직하다. 그 펩타이드 단편으로서는, 구체적으로는, 예를 들면 생체 내에서 발생하는 것이나, 타이록신 결합 글로불린을 트립신, 리실엔드펩티다제, AspN 등의 프로테아제 처리를 행한 결과 발생하는 것을 들 수 있고, 보다 구체적으로는, 예를 들면 2~50개의 아미노산 잔기로 이루어지는 것을 들 수 있으며, 배열 번호 5(액세션 번호 P05543: 27번~41번)로 나타나는 것이 바람직하다.
본 발명의 마커로서는, (i) 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3에 존재하는, 식 5로 나타나는 당쇄 또는 (ii) 류신리치 알파 2글라이코프로테인에 존재하는, 식 6으로 나타나는 당쇄가 바람직하고, (iii) 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3에 존재하는, 식 5로 나타나는 당쇄가 보다 바람직하며, (iv) 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3의 아미노산 배열의 N말단으로부터 580번째의 아미노산 잔기(아스파라진 잔기)에 결합하고 있는 식 5로 나타나는 당쇄가 특히 바람직하다.
[본 발명에 관한 췌장암]
본 발명에 관한 췌장암이란, 췌장으로부터 발생한 암이다.
본 발명에 관한 췌장암에는, 구체적으로는, 예를 들면 침윤성 췌관암, 췌선방 세포암, 췌관 내 유두 점액성 종양 등의 외분비성 췌장암, 신경내분비 종양 등의 내분비성 췌장암 등이 포함된다.
<본 발명의 췌장암의 판정 방법>
본 발명의 췌장암의 판정 방법(이하, 본 발명의 판정 방법이라고 약기하는 경우가 있음)은, 시료 중의, 하기 (1)~(5)로부터 선택되는 당쇄의 양을 측정하고(이하, 본 발명에 관한 측정 공정이라고 약기하는 경우가 있음), 얻어진 측정 결과에 근거하여 췌장암을 판정함(이하, 본 발명에 관한 판정 공정이라고 약기하는 경우가 있음)으로써 이루어진다.
(1) 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3에 존재하는, 상기 식 5로 나타나는 당쇄(본 발명의 마커 (1)),
(2) 류신리치 알파 2글라이코프로테인에 존재하는, 상기 식 6으로 나타나는 당쇄(본 발명의 마커 (2)),
(3) 비트로넥틴에 존재하는, 상기 식 1~3으로 나타나는 적어도 하나의 당쇄(본 발명의 마커 (3)),
(4) 보체 C4-A에 존재하는, 상기 식 4로 나타나는 당쇄(본 발명의 마커 (4)),
(5) 타이록신 결합 글로불린에 존재하는, 상기 식 3으로 나타나는 당쇄(본 발명의 마커 (5))
또한, 본 발명의 판정 방법으로서는, 본 발명의 마커 (1)~(5) 중 어느 하나 단독을 이용하여 이루어져도 되고, 혹은 복수 종을 이용하여 이루어져도 된다.
[본 발명에 관한 시료]
본 발명에 관한 시료로서는, 실험 동물 유래의 것이면 되고, 예를 들면 혈청, 혈장, 전혈, 뇨, 타액, 뇌척수액, 조직액, 땀, 눈물, 양수, 골수액, 흉수, 복수, 간접액, 안방수, 유리체액 등의 생체 유래 시료를 들 수 있고, 혈청, 혈장, 전혈 등의 혈액 유래 시료가 바람직하며, 혈청이 보다 바람직하다.
상기 실험 동물로서는, 인간, 원숭이, 쥐, 래트, 개, 고양이, 돼지, 토끼, 침팬지 등의 포유 동물을 들 수 있고, 인간, 원숭이, 쥐 또는 래트가 바람직하며, 인간이 보다 바람직하다.
본 발명에 관한 시료를 실험 동물로부터 얻는(채취하는) 방법은, 특별히 한정되지 않고, 예를 들면 자체 공지의 방법에 근거하여, 그 실험 동물로부터 그 시료를 얻음(채취함)으로써 이루어지면 되며, 필요하면 자체 공지의 방법에 따라, 분리, 농축, 정제 등을 행해도 된다.
또한, 상기 시료는, 실험 동물로부터 얻어진(채취된) 직후의 것이어도 되고, 그 시료를 보존한 것이어도 된다. 시료를 보존하는 방법으로서는, 통상 이 분야에서 행해지고 있는 방법이면 어느 것이어도 된다.
[본 발명에 관한 측정 공정]
본 발명에 관한 측정 공정은, 하기 (1)~(5)로부터 선택되는 당쇄의 양을 측정함으로써 이루어진다.
(1) 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3에 존재하는, 상기 식 5로 나타나는 당쇄,
(2) 류신리치 알파 2글라이코프로테인에 존재하는, 상기 식 6으로 나타나는 당쇄,
(3) 비트로넥틴에 존재하는, 상기 식 1~3으로 나타나는 적어도 하나의 당쇄,
(4) 보체 C4-A에 존재하는, 상기 식 4로 나타나는 당쇄,
(5) 타이록신 결합 글로불린에 존재하는, 상기 식 3으로 나타나는 당쇄
또한, 본 발명에 관한 측정 공정으로서는, 본 발명의 마커 (1)~(5)의 어느 단독을 측정함으로써 이루어져도 되고, 혹은 복수 종을 측정함으로써 이루어져도 된다.
본 발명에 관한 측정 공정에 있어서의 상기 (1)~(5)로부터 선택되는 당쇄의 양의 측정이란, 본 발명의 마커 (1)~(5)로부터 선택되는 1개를 측정하는 것이며, 구체적으로는, 예를 들면 (i) 본 발명의 마커에 있어서의 단백질에 존재하는(유래하는) 당쇄 그 자체의 양의 측정, (ii) 본 발명의 마커에 있어서의 당쇄가 결합한 단백질의 양의 측정, (iii) 본 발명의 마커에 있어서의 단백질의 일부분이며, 당쇄가 결합한 펩타이드 단편의 양의 측정 등을 들 수 있고, (ii) 또는 (iii)이 바람직하다.
상기 본 발명의 마커에 있어서의 단백질이란, 본 발명의 마커에 있어서의 당쇄 이외의 부분을 의미하고, 본 발명의 마커 (1)이면, 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3을 의미하며, 본 발명의 마커 (2)이면, 류신리치 알파 2글라이코프로테인을 의미하고, 본 발명의 마커 (3)이면, 비트로넥틴을 의미하며, 본 발명의 마커 (4)이면, 보체 C4-A를 의미하고, 본 발명의 마커 (5)이면, 타이록신 결합 글로불린을 의미한다.
또한, 상기 "양"이란, 용량, 질량 등의 절댓값 또는 농도, 이온 강도, 흡광도, 형광 강도, 탁도, 피크 면적 등으로부터 산출된 값 등의 상댓값 중 어느 것이어도 된다.
본 발명에 관한 측정 공정에 있어서의 측정 방법으로서는, 통상 이 분야에서 행해지고 있는 것이면 어느 것이어도 되고, 구체적으로는, 예를 들면 (A) 본 발명의 마커에 대하여 친화성을 갖는 물질(예를 들면, 항체, 렉틴 등)을 이용하는 방법, (B) 질량 분석법을 이용하는 방법 등을 들 수 있고, (A)가 바람직하다.
이하에, 상기 (A) 및 (B)에 대하여 각각 구체적으로 설명한다.
(A) 본 발명의 마커에 대하여 친화성을 갖는 물질을 이용하는 방법
본 발명의 마커에 대하여 친화성을 갖는 물질을 이용하는 방법으로서는, 구체적으로는, 예를 들면 효소 결합 면역 흡착 측정법(ELISA법), 효소 면역 측정법(EIA법), 방사 면역 측정법(RIA법), 형광 면역 측정법(FIA법), 화학 발광 효소 면역 측정법(CLEIA법), 전기 화학 발광 면역 측정법(ECLEIA법), 면역 비탁법, 면역 비롱법(比朧法), 라텍스 응집법, 이뮤노 크로마토법, 웨스턴 블로트법, Luminescent Oxygen Channeling Immunoassay(LOCI법), Liquid-phase Binding Assay-ElectroKinetic Analyte Transport Assay(LBA-EATA법) 등의 면역학적 측정법에 준한 방법을 들 수 있다.
상기 면역학적 측정법에 준한 방법으로서는, 구체적으로는, 예를 들면 본 발명의 마커에 대하여 친화성을 갖는 물질과 본 발명의 마커를 접촉시켜, 본 발명의 마커에 대하여 친화성을 갖는 물질과 본 발명의 마커의 복합체를 형성시키고, 그 복합체의 양을 측정함으로써 이루어지면 된다.
상기 본 발명의 마커에 대하여 친화성을 갖는 물질이란, 본 발명의 마커에 있어서의 단백질(또는 펩타이드 단편)에 특이적으로 결합하는 항체나, 본 발명의 마커에 있어서의 당쇄에 특이적으로 결합하는 렉틴이나 항체 등을 들 수 있다.
상기 본 발명의 마커에 있어서의 단백질(또는 펩타이드 단편)에 특이적으로 결합하는 항체로서는, 구체적으로는, 예를 들면 본 발명의 마커 (1)이면, 항인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3 항체, 본 발명의 마커 (2)이면, 항류신리치 알파 2글라이코프로테인 항체, 본 발명의 마커 (3)이면, 항비트로넥틴 항체, 본 발명의 마커 (4)이면, 항보체 C4-A 항체, 본 발명의 마커 (5)이면, 항타이록신 결합 글로불린 항체 등을 들 수 있다.
상기 항체는, 폴리크로널 항체, 모노크로널 항체의 중 어느 것이어도 되고, 이들을 단독으로 혹은 조합하여 이용해도 된다.
상기 항체는, Fab, F(ab'2), Fv, sFv 등의 항체 프래그먼트나 디아보디, 트리아보디, 테트라보디 등의 합성 항체 등이어도 된다.
또, 상기 항체는, 시판 중인 항체를 이용해도 되고, 자체 공지의 방법에 따라 조제한 것을 이용해도 된다.
또한, 자체 공지의 방법에 따라, 상기 항체를 조제하는 경우에는, 예를 들면 "면역 측정법"(생물 화학적 측정 연구회 편집, 고단샤, 2014년) 등에 기재된 방법에 따라 이루어지면 된다.
또, 상기 항체는, 표지 물질로 표지된 것이어도 된다. 그 표지 물질로서는, 구체적으로는, 예를 들면 서양 고추냉이 퍼옥시다제(HRP), 소 소장 알칼리포스파타제, β-갈락토시다제 등의 효소, 99mTc, 131I, 125I, 14C, 3H, 32P, 35S 등의 방사성 동위 원소, 플루오레세인, 플루오레세인아이소싸이오사이아네이트(FITC), 4-메틸움벨리페론, 로다민 혹은 이들의 유도체 등의 형광성 물질, 루시페린, 루미놀, 루테늄 착체 등의 발광성 물질, 페놀, 나프톨, 안트라센 혹은 이들의 유도체 등의 자외부에 흡수를 갖는 물질, 4-아미노-2,2,6,-테트라메틸피페리딘-1-옥실 등의 옥실기를 갖는 화합물로 대표되는 스핀 라벨화제로서의 성질을 갖는 물질, HiLyte계 색소, Alexa계 색소, CyDye계 색소 등의 색소, 금 콜로이드, 양자 도트 등의 나노 입자 등을 들 수 있다.
또한, 상기 표지 물질을 항체에 결합시키는 방법으로서는, 자체 공지의 방법에 따라 이루어지면 된다.
상기 본 발명의 마커에 있어서의 당쇄에 특이적으로 결합하는 렉틴으로서는, 구체적으로는, 예를 들면 본 발명의 마커 (1)이면, 상기 식 5로 나타나는 당쇄의 GlcNAc(N-아세틸글루코사민)에 결합하는 Phaseolus vulgaris Leucoagglutinin(PHA-L) 등, 본 발명의 마커 (2)이면, 상기 식 6으로 나타나는 당쇄의 Man(마노스)에 결합하는 GNL, LCA, PSA, Con A 등, 본 발명의 마커 (3)이면, 상기 식 1로 나타나는 당쇄의 Man(마노스)에 결합하는 Galanthus nivalis Lectin(GNL), Lens culinaris Agglutinin(LCA), Pisum sativum Agglutinin(PSA), Concanavalin A(Con A) 등, 상기 식 2로 나타나는 당쇄의 Fuc(푸코스)에 결합하는 Aleuria aurantia Lectin(AAL), Lotus Tetragolonobus Lectin(LTL) 등, 상기 식 3으로 나타나는 당쇄의 NeuNAc(N-아세틸뉴라민산)에 결합하는 Sambucus Nigra Lectin(SNL), Maackia amrensis Lectin II(MAL II) 등, 본 발명의 마커 (4)이면, 상기 식 4로 나타나는 당쇄의 Fuc(푸코스)에 결합하는 AAL, LTL 등, 본 발명의 마커 (5)이면, 상기 식 3으로 나타나는 당쇄의 NeuNAc(N-아세틸뉴라민산)에 결합하는 MAL II 등을 들 수 있다.
상기 렉틴은, 표지 물질로 표지된 것이어도 되고, 그 표지 물질로서는, 상기 본 발명의 마커에 있어서의 단백질(또는 펩타이드 단편)에 특이적으로 결합하는 항체에서 설명한 바와 같으며, 구체예 등도 동일하다. 또, 상기 표지 물질을 렉틴에 결합시키는 방법으로서는, 자체 공지의 방법에 따라 이루어지면 된다.
상기 본 발명의 마커에 있어서의 당쇄에 특이적으로 결합하는 항체로서는, 구체적으로는, 예를 들면 본 발명의 마커 (1)이면, 상기 식 5로 나타나는 당쇄에 특이적으로 결합하는 항체, 본 발명의 마커 (2)이면, 상기 식 6으로 나타나는 당쇄에 특이적으로 결합하는 항체, 본 발명의 마커 (3)이면, 상기 식 1로 나타나는 당쇄에 특이적으로 결합하는 항체, 상기 식 2로 나타나는 당쇄에 특이적으로 결합하는 항체, 상기 식 3으로 나타나는 당쇄에 특이적으로 결합하는 항체, 본 발명의 마커 (4)이면, 상기 식 4로 나타나는 당쇄에 특이적으로 결합하는 항체, 본 발명의 마커 (5)이면, 상기 식 3으로 나타나는 당쇄에 특이적으로 결합하는 항체 등을 들 수 있다.
상기 항체는, 표지 물질로 표지된 것이어도 되고, 그 표지 물질로서는, 상기 본 발명의 마커에 있어서의 단백질(또는 펩타이드 단편)에 특이적으로 결합하는 항체에서 설명한 바와 같으며, 구체예 등도 동일하다.
또, 상기 표지 물질을 렉틴에 결합시키는 방법으로서는, 자체 공지의 방법에 따라 이루어지면 된다.
상기 본 발명의 마커에 대하여 친화성을 갖는 물질과 본 발명의 마커의 복합체의 양을 측정하는 방법으로서는, 그 복합체의 양을 측정할 수 있는 방법이면 어느 것이어도 되고, 구체적으로는, 예를 들면 본 발명의 마커에 대하여 친화성을 갖는 물질에 결합한 표지 물질에서 유래하는 시그널을 검출하는 방법, 본 발명의 마커에 대하여 친화성을 갖는 물질과 본 발명의 마커의 복합체에서 유래하는 성질을 이용하는 방법 등을 들 수 있으며, 본 발명의 마커에 대하여 친화성을 갖는 물질에 결합한 표지 물질에서 유래하는 시그널을 검출하는 방법이 바람직하다.
상기 본 발명의 마커에 대하여 친화성을 갖는 물질에 결합한 표지 물질에서 유래하는 시그널을 검출하는 방법으로서는, 구체적으로는, 예를 들면 본 발명의 마커에 대하여 친화성을 갖는 물질에 결합한 표지 물질에서 유래하는 시그널을 자체 공지의 방법에 의하여 검출함으로써 이루어지면 된다. 예를 들면, 표지 물질이 효소인 경우에는, 면역 측정법의 통상의 방법, 예를 들면 "효소 면역 측정법"(단백질 핵산 효소 별책 No. 31, 기타가와 쓰네히로·난바라 토시오·쓰지 아키오·이시카와 에이지 편집, 51~63, 교리쓰 슛판, 1987) 등에 기재된 방법에 준하여 측정을 행하면 되고, 표지 물질이 방사성 물질인 경우에는, 예를 들면 RIA로 행해지고 있는 통상의 방법에 따라, 그 방사성 물질이 내는 방사선의 종류 및 강도에 따라 액침형 GM 카운터, 액체 신틸레이션 카운터, 우물형 신틸레이션 카운터, HPLC용 카운터 등의 측정 기기를 적절히 선택하고 사용하여, 측정을 행하면 된다(예를 들면 의화학 실험 강좌, 제8권, 야마무라 유이치 감수, 제1판, 나카야마 쇼텐, 1971 등 참조). 또, 표지 물질이 형광 물질인 경우에는, 예를 들면 형광 광도계 등의 측정 기기를 이용하는 FIA로 행해지고 있는 통상의 방법, 예를 들면 "도설 형광 항체, 가와오이 아키라 저, 제1판, 소프트 사이언스사, 1983" 등에 기재된 방법에 준하여 측정을 행하면 되고, 표지 물질이 발광 물질인 경우에는 포토 카운터 등의 측정 기기를 이용하는 통상의 방법, 예를 들면 "효소 면역 측정법"(단백질 핵산 효소 별책 No. 31, 기타가와 쓰네히로·난바라 토시오·쓰지 아키오·이시카와 에이지 편집, 252~263, 교리쓰 슛판, 1987) 등에 기재된 방법에 준하여 측정을 행하면 된다. 또한, 표지 물질이 자외부에 흡수를 갖는 물질인 경우에는 분광 광도계 등의 측정 기기를 이용하는 통상의 방법에 따라 측정을 행하면 되고, 표지 물질이 스핀의 성질을 갖는 경우에는 전자 스핀 공명 장치를 이용하는 통상의 방법, 예를 들면 "효소 면역 측정법"(단백질 핵산 효소 별책 No. 31, 기타가와 쓰네히로·난바라 토시오·쓰지 아키오·이시카와 에이지 편집, 264~271, 교리쓰 슛판, 1987) 등에 기재된 방법에 준하여 각각 측정을 행하면 된다.
상기 본 발명의 마커에 대하여 친화성을 갖는 물질과 본 발명의 마커의 복합체에서 유래하는 성질을 이용하는 방법으로서는, 구체적으로는, 예를 들면 표면 플라즈몬 공명법 등의 호모지니어스 이뮤노어세이계 등의 방법 등을 들 수 있다.
또한, 상기 방법의 구체적인 수법에 대해서는, 자체 공지의 수법에 따라 이루어지면 된다.
이하에, (A) 본 발명의 마커에 대하여 친화성을 갖는 물질을 이용하는 방법에 대하여, 보다 구체적으로 설명한다.
또한, 하기 설명에 있어서, 본 발명의 마커에 있어서의 단백질(또는 펩타이드 단편)을 "표적 단백질(또는 표적 펩타이드 단편)", 본 발명의 마커에 있어서의 당쇄를 "표적 당쇄"라고 표기한다.
예를 들면, 본 발명의 마커 (1)을 측정하는 경우, 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3이 "표적 단백질(또는 표적 펩타이드 단편)"을, 식 5로 나타나는 당쇄가 "표적 당쇄"를 의미하고, 본 발명의 마커 (2)를 측정하는 경우, 류신리치 알파 2글라이코프로테인이 "표적 단백질(또는 표적 펩타이드 단편)"을, 식 6으로 나타나는 당쇄가 "표적 당쇄", 본 발명의 마커 (3)을 측정하는 경우, 비트로넥틴이 "표적 단백질(또는 표적 펩타이드 단편)", 식 1~3으로 나타나는 적어도 하나의 당쇄가 "표적 당쇄"를 의미하며, 본 발명의 마커 (4)를 측정하는 경우, 보체 C4-A가 "표적 단백질(또는 표적 펩타이드 단편)"을, 식 4로 나타나는 당쇄가 "표적 당쇄"를 의미하고, 본 발명의 마커 (5)를 측정하는 경우, 타이록신 결합 글로불린이 "표적 단백질(또는 표적 펩타이드 단편)"을, 식 3으로 나타나는 당쇄가 "표적 당쇄"를 의미한다.
상기 (A) 본 발명의 마커에 대하여 친화성을 갖는 물질을 이용하는 방법으로서는, 구체적으로는, 예를 들면 하기 공정 1 및 2를 포함하는 방법을 들 수 있다.
(공정 1) 시료로부터 표적 당쇄가 결합한 표적 단백질(본 발명의 마커)을 분리하는 공정,
(공정 2) 상기 공정 1에서 분리된 표적 당쇄가 결합한 표적 단백질의 양을 측정하는 공정
공정 1로서는, 시료로부터 표적 당쇄가 결합한 표적 단백질을 분리할 수 있는 방법이면 어느 것이어도 되고, 구체적으로는, 예를 들면 시료 중에 존재하는 표적 당쇄가 결합한 표적 단백질과 다른 성분을 분리하는 방법을 들 수 있다. 이와 같은 방법으로서는, 구체적으로는, 예를 들면 2종 이상의 친화성을 갖는 물질, 즉, 표적 당쇄에 특이적으로 결합하는 물질, 및 표적 단백질에 특이적으로 결합하는 물질을 이용하여, 표적 당쇄가 결합한 표적 단백질과 친화성을 갖는 물질의 복합체(표적 단백질에 특이적으로 결합하는 물질-본 발명의 마커-표적 당쇄에 특이적으로 결합하는 물질)를 형성시켜, 자체 공지의 방법에 의하여, 표적 당쇄가 결합한 표적 단백질을 분리하면 된다.
또한, 표지 물질로 표지된 친화성을 갖는 물질을 이용하는 경우에는, 표적 당쇄가 결합한 표적 단백질의 분리는, 표지 물질로 표지된 친화성을 갖는 물질과 본 발명의 마커의 복합체의 분리라고 환언해도 되고, 이 경우, 표지 물질로 표지된 친화성을 갖는 물질과 본 발명의 마커 이외의 성분의 복합체 또는/및 유리의 표지 물질로 표지된 친화성을 갖는 물질을 분리하면 된다. 표지 물질로 표지된 친화성을 갖는 물질을 구성 성분으로서 포함하지 않는 성분과의 분리는 불필요하다.
또, 상기 당쇄에 특이적으로 결합하는 친화성을 갖는 물질 및 단백질에 특이적으로 결합하는 친화성을 갖는 물질에 대해서는, 상술한 바와 같고, 구체예 등도 동일하다.
공정 2로서는, 상기 공정 1에서 분리된 표적 당쇄가 결합한 표적 단백질을 측정할 수 있는 방법이면 어느 것이어도 되고, 구체예 등은 상술한 바와 같다.
상기 방법에 있어서, 공정 1을 행하기 전에, 미리 시료 중의 전체 단백질(표적 단백질을 포함함)을 펩타이드 단편화하고, 공정 1에서 표적 당쇄가 결합한 표적 펩타이드 단편을 분리하여, 공정 2에서 그 표적 당쇄가 결합한 표적 펩타이드 단편을 측정해도 된다.
그 단편화 처리로서는, 구체적으로는, 예를 들면 공정 1을 행하기 전에, 시료에 트립신, 리실엔드펩티다제, AspN 등의 프로테아제를 첨가함으로써 이루어지면 되고, 공정 1에서 표적 당쇄에 결합하는 물질, 및 표적 펩타이드 단편에 결합하는 물질을 각각 이용하여, 표적 당쇄가 결합한 표적 펩타이드 단편과 친화성을 갖는 물질의 복합체(표적 펩타이드 단편에 특이적으로 결합하는 물질-본 발명의 마커-표적 당쇄에 특이적으로 결합하는 물질)를 형성시켜, 그 복합체를 상술한 바와 같이 분리한 후, 그 복합체의 양을 측정하면 된다.
또, 상기 전체 단백질의 단편화를 행한 경우, 그 단편화에 계속해서, 렉틴 칼럼 등의 칼럼에 의한 농축을 행해도 된다. 그 농축은 자체 공지의 방법에 따라 이루어지면 되고, 시판 중인 렉틴 칼럼 등의 칼럼을 이용하면 된다.
또한, 상기 방법에 있어서, 공정 2 대신, 공정 1에서 분리된 표적 당쇄가 결합한 표적 단백질로부터 표적 당쇄를 분리하여, 그 표적 당쇄만을 측정해도 된다.
구체적으로는, 예를 들면 공정 1에서 분리된 표적 당쇄가 결합한 표적 단백질을, 글리카나제, 하이드라진 등으로 처리함으로써 표적 당쇄를 분리한 후, 그 당쇄의 양만을 상술한 바와 같이 측정하면 된다.
(B) 질량 분석법을 이용하는 방법
질량 분석법을 이용하는 방법으로서는, 구체적으로는, 예를 들면 액체 크로마토그래피 질량 분석계(LC/MS), 캐필러리 전기 영동 질량 분석계(CE/MS), 가스 크로마토그래피 질량 분석계(GC/MS), 액체 크로마토그래피 탠덤형 질량 분석계(LC/MS/MS) 등을 이용하는 방법을 들 수 있다.
상기 방법으로서는, 구체적으로는, 예를 들면 액체 크로마토그래프 등의 크로마토그래프를 갖는 분리부에서, 시료 중의 성분을 분리하고, 분리된 다양한 성분을 질량 분석부에서 이온화시켜, 추가로 질량 전하비(m/z)마다 분리함으로써 이루어지면 된다.
또한, 상기 질량 분석법을 이용하는 방법에 있어서의 구체적인 수법은 자체 공지의 수법이나 WO2014/038524, WO2017/019588, WO2018/034346 등에 기재된 수법에 따라 이루어지면 된다.
상기 질량 분석법을 이용하는 방법에 있어서, 시료로부터 미리 전체 단백질을 추출해도 되고, 그 방법으로서는, 구체적으로는, 예를 들면 시료에, 아세톤, 메탄올, 에탄올, 트라이클로로아세트산, 염산 수용액 등의 용매를 첨가하여 전체 단백질을 침전시킴으로써 이루어지면 된다.
또, 필요에 따라 시료로부터 전체 단백질을 추출하기 전 또는 후에, 전체 단백질을 단편화해도 되고, 단편화를 행한 경우, 그 단편화에 계속해서, 렉틴 칼럼 등의 칼럼에 의한 농축을 행해도 된다. 그 단편화 및 농축에 대해서는, 상술한 바와 같다.
[바람직한 측정 공정]
본 발명에 관한 측정 공정에서는, (i) 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3에 존재하는, 식 5로 나타나는 당쇄의 양 또는 (ii) 류신리치 알파 2글라이코프로테인에 존재하는, 식 6으로 나타나는 당쇄의 양을 측정하는 것이 바람직하고, (iii) 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3에 존재하는, 식 5로 나타나는 당쇄의 양을 측정하는 것이 보다 바람직하며, (vi) 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3의 아미노산 배열의 N말단으로부터 580번째의 아미노산 잔기(아스파라진 잔기)에 결합하고 있는 식 5로 나타나는 당쇄의 양을 측정하는 것이 더 바람직하다.
또, 상기 측정을 행하는 경우에는, 본 발명의 마커에 대하여 친화성을 갖는 물질을 이용하는 방법이 바람직하고, ELISA법, EIA법, RIA법, FIA법, CLEIA법, ECLEIA법, 면역 비탁법, 면역 비롱법, 라텍스 응집법, 이뮤노 크로마토법, 웨스턴 블로트법, LOCI법, LBA-EATA법 등의 면역학적 측정법에 준한 방법이 보다 바람직하고, 본 발명의 마커에 대하여 친화성을 갖는 물질과 본 발명의 마커를 접촉시켜, 본 발명의 마커에 대하여 친화성을 갖는 물질과 본 발명의 마커의 복합체를 형성시키고, 그 복합체의 양을 측정하는 방법이 더 바람직하며, 본 발명의 마커에 대하여 친화성을 갖는 물질과 본 발명의 마커를 접촉시켜, 본 발명의 마커에 대하여 친화성을 갖는 물질과 본 발명의 마커의 복합체를 형성시키고, 그 복합체에 결합한 표지 물질에서 유래하는 시그널을 검출하는 방법이 특히 바람직하다.
[본 발명에 관한 판정 공정]
본 발명에 관한 판정 공정은, 본 발명에 관한 측정 공정에 의하여 얻어진 측정 결과에 근거하여 췌장암을 판정하는 공정이다.
본 발명에 관한 판정 공정은, 구체적으로는, 예를 들면 실험 동물 유래의 시료를 이용하여 본 발명에 관한 측정 공정에 의하여 얻어진 값(이하, 실험 동물 유래의 값이라고 약기하는 경우가 있음)과 미리 설정한 기준값(컷 오프값 등)을 이용하여 이루어진다.
즉, (i) 실험 동물 유래의 값이, 미리 설정한 기준값(컷 오프값 등) 이상인 경우, "실험 동물이 췌장암에 이환하고 있을 우려가 있거나, 혹은 실험 동물이 췌장암에 이환하고 있을 우려가 높음" 등의 판정을 내릴 수 있고, (ii) 실험 동물 유래의 값이, 미리 설정한 기준값(컷 오프값 등) 미만인 경우, "실험 동물이 췌장암에 이환하고 있을 우려는 없거나, 혹은 췌장암에 이환하고 있을 우려가 낮음" 등의 판정을 내릴 수 있다.
또, 다른 양태로서 (i) 실험 동물 유래의 값이, 미리 설정한 기준값(컷 오프값 등) 이하인 경우, "실험 동물이 췌장암에 이환하고 있을 우려가 있거나, 혹은 실험 동물이 췌장암에 이환하고 있을 우려가 높음" 등의 판정을 내릴 수 있고, (ii) 실험 동물 유래의 값이, 미리 설정한 기준값(컷 오프값 등) 초과인 경우, "실험 동물이 췌장암에 이환하고 있을 우려는 없거나, 혹은 췌장암에 이환하고 있을 우려가 낮음" 등의 판정을 내릴 수 있다.
또한, 상기 기준값(컷 오프값 등)은, 췌장암에 이환하고 있는 동물 유래의 시료를 이용하여 본 발명에 관한 측정 공정에 의하여 얻어진 측정값과 정상 동물 유래의 시료를 이용하여 본 발명에 관한 측정 공정에 의하여 얻어진 값(이하, 정상 동물 유래의 값이라고 약기하는 경우가 있음)을 이용하여 ROC(Receiver Operating Characteristic) 곡선 해석 등의 통계 해석에 근거하여 결정할 수 있다.
또, 상기 기준값(컷 오프값 등)의 감도 또는/및 특이도는, 예를 들면 60% 이상, 바람직하게는 70% 이상, 보다 바람직하게는 80% 이상, 더 바람직하게는 90% 이상이다.
다른 형태로서, 실험 동물 유래의 값과 정상 동물 유래의 값을 비교하여, (i) 실험 동물 유래의 값이, 정상 동물 유래의 값보다 높은 경우, "실험 동물이 췌장암에 이환하고 있을 우려가 있거나, 혹은 실험 동물이 췌장암에 이환하고 있을 우려가 높음" 등의 판정을 내릴 수 있고, (ii) 실험 동물 유래의 값과, 정상 동물 유래의 값의 사이에 현저한 차가 확인되지 않는 경우, "실험 동물이 췌장암에 이환하고 있을 우려는 없거나, 혹은 췌장암에 이환하고 있을 우려가 낮음" 등의 판정을 내릴 수 있다.
또 다른 형태로서, 동일한 실험 동물에 있어서, 어떤 시점에 있어서의 실험 동물 유래의 값과, 다른 시점에서의 실험 동물 유래의 값을 비교하여, 그 값의 유무 또는/및 증감의 정도를 평가함으로써, 췌장암의 진행도, 악성도의 진단, 수술 후의 예후 진단 등이 가능하다. 즉, (i)값의 증가가 확인된 경우, 췌장암에 병태(病態)가 진행됐거나(혹은 췌장암의 악성도가 증가했거나), 또는 췌장암에 대한 병태의 진행의 징조가 확인되는(혹은 췌장암의 악성도가 증가하는 징조가 확인되는) 등의 판정을 내릴 수 있고, (ii)값의 감소가 확인된 경우, 췌장암의 병태가 개선됐거나, 또는 췌장암의 병태의 개선의 징조가 확인되는 등의 판정을 내릴 수 있다.
또한, 본 발명에 관한 측정 공정에서 본 발명의 마커를 복수 종 측정한 경우는, 얻어진 복수의 값을 이용하여 상술한 바와 같이 본 발명에 관한 판정 공정을 행하면 되고, 보다 확도(정확도·정밀도)가 높은 판정이 가능해진다.
<본 발명의 췌장암의 판정을 행하기 위한 데이터를 얻는 방법>
본 발명의 췌장암의 판정을 행하기 위한 데이터를 얻는 방법(이하, 본 발명의 데이터를 얻는 방법이라고 약기하는 경우가 있음)은, 시료 중의 하기 (1)~(5)로부터 선택되는 당쇄의 양을 측정함으로써 이루어진다.
(1) 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3에 존재하는, 상기 식 5로 나타나는 당쇄,
(2) 류신리치 알파 2글라이코프로테인에 존재하는, 상기 식 6으로 나타나는 당쇄,
(3) 비트로넥틴에 존재하는, 상기 식 1~3으로 나타나는 적어도 하나의 당쇄,
(4) 보체 C4-A에 존재하는, 상기 식 4로 나타나는 당쇄,
(5) 타이록신 결합 글로불린에 존재하는, 상기 식 3으로 나타나는 당쇄
즉, 본 발명의 데이터를 얻는 방법은, 본 발명의 마커, 바꾸어 말하면, 본 발명의 마커 (1)~(5)로부터 선택되는 것을 측정함으로써 이루어진다.
또한, 본 발명의 데이터를 얻는 방법으로서는, 본 발명의 마커 (1)~(5) 중 어느 단독을 이용하여 이루어져도 되고, 혹은 복수 종을 이용하여 이루어져도 된다.
본 발명의 데이터를 얻는 방법에 있어서의 데이터로서는, (i) 본 발명의 데이터를 얻는 방법에 의하여 얻어진 본 발명의 마커의 양의 값, (ii) 그 값을 추가로 다중 로지스틱 회귀 분석, 판별 분석, 푸아송 회귀 분석, 중회귀 분석, 콕스의 비례 하자드 모델, 패스 해석 등의 다변량 해석을 행하여 얻어지는 값, (iii) 본 발명의 데이터를 얻는 방법에 의하여 얻어진 본 발명의 마커의 양의 값과 상술한 기준값(컷 오프값 등)의 대소 관계를 나타내는 데이터(비교 결과), (iv) 실험 동물이 췌장암에 이환하고 있을 우려가 있거나, 혹은 실험 동물이 췌장암에 이환하고 있을 우려가 높음 등을 시사하는 데이터 등을 들 수 있고, (i) 또는 (iii)이 바람직하며, (i)이 보다 바람직하다.
또한, 본 발명의 데이터를 얻는 방법에 있어서의, 본 발명의 마커, 그 마커의 측정, 췌장암 및 시료에 대해서는, <본 발명의 마커> 및 <본 발명의 판정 방법>에서 설명한 바와 같으며, 구체예, 바람직한 예 등도 동일하다.
<본 발명의 췌장암의 판정용 키트>
본 발명의 췌장암의 판정용 키트(이하, 본 발명의 키트라고 약기하는 경우가 있음)는, 하기 (1)~(5)로부터 선택되는 당쇄에 친화성을 갖는 물질을 포함하는 것이다.
(1) 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3에 존재하는, 상기 식 5로 나타나는 당쇄,
(2) 류신리치 알파 2글라이코프로테인에 존재하는, 상기 식 6으로 나타나는 당쇄,
(3) 비트로넥틴에 존재하는, 상기 식 1~3으로 나타나는 적어도 하나의 당쇄,
(4) 보체 C4-A에 존재하는, 상기 식 4로 나타나는 당쇄,
(5) 타이록신 결합 글로불린에 존재하는, 상기 식 3으로 나타나는 당쇄
본 발명의 키트는, 본 발명의 마커, 바꾸어 말하면, 본 발명의 마커 (1)~(5)에 각각 친화성을 갖는 물질을 포함하는 것이다.
또한, 본 발명의 키트에 있어서의, 본 발명의 마커 및 췌장암에 대해서는, <본 발명의 마커> 및 <본 발명의 판정 방법>에서 설명한 바와 같으며, 구체예, 바람직한 예 등도 동일하다.
상기 친화성을 갖는 물질이란, 본 발명의 마커에 있어서의 당쇄나 단백질(또는 펩타이드 단편)에 특이적으로 결합하는 것이며, 렉틴, 항체 등을 들 수 있다.
상기 친화성을 갖는 물질에 대해서는, <본 발명의 판정 방법>에서 설명한 바와 같으며, 구체예, 바람직한 예 등도 동일하다.
본 발명의 키트에는, 또한 통상 이 분야에서 이용되는 시약류, 예를 들면 트립신, 리실엔드펩티다제, AspN 등의 펩타이드 단편화용 시약, 렉틴 칼럼 등의 농축용 칼럼, 단백질 추출용 용매, 완충제, 세정제, 반응 촉진제, 당류, 단백질, 염류, 계면활성제 등의 안정화제, 방부제, 시료를 희석하기 위한 액, 렉틴 고정화 고상(固相), 항체 고정화 고상, 항원 고정화 고상 등의 고정화 고상, 표지 물질로 표지된 2차 항체 또는 그 2차 항체의 단편, 표지 물질 검출용 시약 등이며, 공존하는 시약 등의 안정성을 저해하지 않는 것이 포함되어 있어도 된다. 또, 그 농도, pH도 통상 이 분야에서 이용되고 있는 범위이면 된다.
상기 렉틴 고정화 고상, 항체 고정화 고상, 항원 고정화 고상 등의 고정화 고상으로서는, 자성 실리카 입자 등의 자성 입자, 폴리스타이렌, 폴리카보네이트, 폴리바이닐톨루엔, 폴리프로필렌, 폴리에틸렌, 폴리 염화 바이닐, 나일론, 폴리메타크릴레이트, 젤라틴, 아가로스, 셀룰로스, 폴리에틸렌테레프탈레이트, 유리, 세라믹 등의 소재에, 본 발명의 마커에 있어서의 단백질(또는 펩타이드 단편)이나 당쇄에 특이적으로 결합하는 친화성을 갖는 물질(렉틴, 항체 또는 그 항체의 단편 등)을 고상화한 것이면 어느 것이어도 된다.
또한, 상기 렉틴 고정화 고상, 항체 고정화 고상, 항원 고정화 고상 등의 고정화 고상에 있어서의 소재에 대해서는, 자체 공지의 방법에 의하여 제조된 것을 이용해도 되고, 시판 중인 것을 이용해도 된다. 예를 들면, 자체 공지의 방법에 의하여 상기 자성 실리카 입자 등의 자성 입자를 제조하는 경우, WO2012/173002에 기재된 방법에 의하여 제조할 수 있다.
상기 표지 물질로 표지된 2차 항체 또는 그 항체 단편이란, 상기 고상화된 친화성을 갖는 물질(렉틴, 항체 또는 그 항체의 단편 등)에 각각 결합하는 항체 또는 그 항체 단편이다.
또한, 상기 표지 물질로 표지된 2차 항체 또는 그 항체 단편에 있어서의, 표지 물질 및 표지 물질을 결합시키는 방법에 대해서는, <본 발명의 판정 방법>에서 설명한 바와 같으며, 바람직한 예, 구체예 등도 동일하다.
상기 표지 물질 검출용 시약이란, 렉틴, 항체 또는 그 항체의 단편 등의 친화성을 갖는 물질이 표지 물질로 표지되어 있는 경우, 표지 물질로 표지된 렉틴, 항체 또는 그 항체의 단편 등의 친화성을 갖는 물질 중의 표지 또는/및 상기 표지된 2차 항체 또는 그 2차 항체의 단편 중의 표지를 검출하는 것이며, 테트라메틸벤지딘, 오쏘페닐렌다이아민 등의 흡광도 측정용 기질, 하이드록시페닐프로피온산, 하이드록시페닐아세트산 등의 형광 기질, 루미놀 등의 발광 물질을 들 수 있고, 4-나이트로페닐포스페이트 등의 흡광도 측정용 시약, 4-메틸움벨리페릴포스페이트 등의 형광 기질 등을 들 수 있다.
또한, 본 발명의 키트에는, 본 발명의 판정 방법 또는/및 데이터를 얻는 방법을 행하기 위한 설명서 등이 포함되어 있어도 된다. 당해 "설명서"란, 본 발명의 판정 방법 또는/및 데이터를 얻는 방법의 특징, 원리, 조작 수순, 판정 수순 등이 문장 또는/및 도표에 의하여 실질적으로 기재되어 있는 본 발명에 관한 시약 취급 설명서, 첨부 문서, 팸플릿(리플릿) 등을 의미한다.
이와 같이 본 발명의 키트에 의하면, 본 발명의 판정 방법 또는/및 본 발명의 데이터를 얻는 방법을 간편하게, 단시간에 또한 양호한 정밀도로 행할 수 있다.
<본 발명에 관한 췌장암의 판정을 행하기 위한 장치>
본 발명에 관한 췌장암의 판정을 행하기 위한 장치(이하, 본 발명에 관한 판정 장치라고 약기하는 경우가 있음)는, 적어도 (1) 측정부를 구비하고 있다. 또한, (2) 판정부, (3) 출력부 및 (4) 입력부를 구비하고 있어도 된다.
본 발명에 관한 판정 장치에 있어서의 (1) 측정부는, 시료 중의 상기 본 발명의 마커 (1)~(5)로부터 선택되는 당쇄의 양을 측정하도록 구성되어 있다. 구체적으로는, 예를 들면 본 발명에 관한 측정 공정에서 이용되는 각종 질량 분석계, 면역학적 측정법에 준한 방법으로 이용되는 장치 등의 측정 장치를 들 수 있다.
또한, 필요하면 (1) 측정부에서는, 측정된 측정값에 근거하여, 상기 본 발명의 마커 (1)~(5)의 양을 산출하도록 구성되어 있어도 된다.
본 발명에 관한 판정 장치에 있어서의 (2) 판정부는, (1) 측정부에서 얻어지는 결과에 근거하여 췌장암을 판정하도록 구성되어 있다.
본 발명에 관한 판정 장치에 있어서의 (3) 출력부는, (1) 측정부에서 얻어지는 결과 또는/및 (2) 판정부에서 얻어지는 결과를 출력하도록 구성되어 있다.
본 발명에 관한 판정 장치에 있어서의 (4) 입력부는, 조작하는 사람의 조작을 받아, (1) 측정부로, 당해 (1) 측정부를 작동시키기 위한 신호를 보내도록 구성되어 있다.
또한, 상기 본 발명에 관한 판정 장치의 (1) 측정부 및 (2) 판정부에 의하여 이루어지는 측정, 판정 등에 대해서는, <본 발명의 판정 방법>에서 설명한 바와 같으며, 바람직한 예, 구체예 등도 동일하다.
상기 본 발명에 관한 판정 장치에 의하면, 본 발명의 판정 방법 또는/및 본 발명의 데이터를 얻는 방법을 간편하게, 단시간에 또한 양호한 정밀도로 행할 수 있다.
<본 발명에 관한 췌장암의 판정을 보조하는 방법>
본 발명에 관한 췌장암의 판정을 보조하는 방법(이하, 본 발명에 관한 보조 방법이라고 약기하는 경우가 있음)은, 시료 중의 상기 본 발명의 마커 (1)~(5)로부터 선택되는 당쇄의 양을 측정하고, 얻어진 측정 결과에 근거하여 췌장암의 판정을 보조함으로써 이루어진다.
본 발명에 관한 보조 방법은, 의사 등에 의한 췌장암의 진단을 보조하는 방법으로서 이용할 수 있다.
또한, 본 발명에 관한 보조 방법에 있어서의 시료, 마커, 측정, 판정 등에 대해서는, <본 발명의 판정 방법>에서 설명한 바와 같으며, 바람직한 예, 구체예 등도 동일하다.
<본 발명에 관한 췌장암을 판정하고, 치료하는 방법>
본 발명에 관한 췌장암을 판정하고, 치료하는 방법(이하, 본 발명에 관한 치료 방법이라고 약기하는 경우가 있음)은, 시료 중의 본 발명의 마커 (1)~(5)로부터 선택되는 당쇄의 양을 측정하고, 얻어진 측정 결과에 근거하여 췌장암을 판정하여, 그 판정 결과에 근거하여 췌장암의 우려가 있거나 또는 췌장암의 우려가 높다고 판정된 환자에게 적절한 치료를 실시함으로써 이루어진다.
또한, 본 발명에 관한 치료 방법에 있어서의 시료, 마커, 측정, 판정 등에 대해서는, <본 발명의 판정 방법>에서 설명한 바와 같으며, 바람직한 예, 구체예 등도 동일하다.
본 발명에 관한 치료 방법에 있어서의 적절한 치료로서는, 구체적으로는, 예를 들면 췌두 십이지장 절제술, 췌체부 미부 절제술, 전체 췌장 절제술, 바이패스 수술 등의 외과 요법, 화학 방사선 요법 등의 방사선 치료, UFT(상품명) 등의 약제를 투여함으로써 이루어지는 약물 요법 등을 들 수 있다.
이하, 실시예에 근거하여 본 발명을 보다 구체적으로 설명하지만, 본 발명은 실시예에 의하여 한정되는 것은 아니다.
실시예
실시예 1. 췌장암 마커의 선별
[(1) 검체(샘플)]
요코하마 시립 대학 센터 병원 및 요코하마 시립 대학 첨단 의과학 연구 센터 바이오 뱅크로부터 제공된, 췌장암 환자 유래의 혈청(10검체) 및 정상인 유래의 혈청(11검체)을 검체(샘플)로서 이용했다.
[(2) 당펩타이드의 조제]
상기 (1)의 췌장암 환자 유래의 혈청 및 정상인 유래의 혈청 10μL를, High-Select Top14 Abundant Protein Depletion Resin(ThermoFisher Scientific사제)에 각각 넣고, 25℃에서 10분간 인큐베이트함으로써, albumin, immunoglobulin 등의 혈청 중에 존재하는 협잡 단백질을 제거했다. 이어서, 아세톤 40μL를 각각 첨가하고, -20℃에서 16시간 인큐베이트한 후, 14000rpm으로 원심 분리했다. 상청을 제거 후, 침전물에 8M 요소 함유 50mM 트리스 염산 버퍼(pH 8.0) 50μL를 각각 첨가하고 용해하여, 프로테인 어세이 BCA 키트(후지필름 와코 준야쿠사제)에서 단백질 농도를 각각 측정했다. 측정 후, 단백질 시료 20μg에, 500mM 다이싸이오트레이톨 1μL를 각각 첨가하여, 37℃에서 30분간 인큐베이트했다. 이어서, 500mM 아이오도아세트아마이드 2.8μL를 각각 첨가하여, 37℃에서 30분간 인큐베이트함으로써, 환원 알킬화를 행했다(또한, 그 환원 알킬화는, 500mM 다이싸이오트레이톨 0.5μL를 첨가함으로써, 그 반응을 정지시켰다). 그 후, Zeba Spin Desalting column(0.5mL; ThermoFisher Scientific사제)에서 50mM 트리스 염산 버퍼(pH 8.0) 130μL에 용매 치환하여, 변성제 및 환원제를 각각 제거했다. 이어서, 단백질 시료 1μg에, Trypsin/Lys-C Mix(프로메가사제)를 각각 첨가하고, 37℃에서 16시간 인큐베이트했다. 그 후, Oasis PRiME HLB 고상 추출 칼럼(Waters사제)에서 탈염을 행하고, 원심 에바포레이터로 건고하여, 당펩타이드를 얻었다.
[(3) 당펩타이드의 농축]
상기 (2)에서 조제한 21검체분 (췌장암 환자: 10검체, 정상인: 11검체)의 각 당펩타이드 10μg에 대하여, 하기 수순에 따라, 농축했다.
(A) WO2017/0195887 기재의 당펩타이드 농축 칼럼에, 0.1% TFA 용액 100μL를 넣고, 200μL 칩 전용의 탁상 원심기에 세팅하여, 그 용액을 칼럼에 통과시키며, 폴리머성 폴리올층을 세정했다.
(B) 칼럼에, 80% 아세토나이트릴/0.1% TFA 용액 100μL를 넣고, 200μL 칩 전용의 탁상 원심기에 세팅하여, 그 용액을 칼럼에 통과시키며, 고상 추출 담체상을 세정했다.
(C) 칼럼에, 80% 아세토나이트릴/0.1% TFA 용액 100μL를 넣고, 200μL 칩 전용의 탁상 원심기에 세팅하여, 2초간 원심함으로써 칼럼 내의 공기를 제거했다.
(D) 칼럼 내의 80% 아세토나이트릴/0.1% TFA 용액에, 상기 (2)에서 조제한 당펩타이드 시료 10μg을 첨가하고, 200μL 칩 전용의 탁상 원심기에 세팅하여, 20초간 원심했다.
(E) 칼럼에, 80% 아세토나이트릴/0.1% TFA 용액 100μL를 첨가하고, 200μL 칩 전용의 탁상 원심기에 세팅하여, 20초간 원심하며, 협잡물을 제거했다.
(F) 상기 (E)를 추가로 2회 반복했다.
(G) 칼럼에, 0.1% TFA 100μL를 첨가하고, 200μL 칩 전용의 탁상 원심기에 세팅하여, 30초간 원심하며, 고상 추출 담체상에 당펩타이드를 농축시켰다.
(H) 칼럼에, 80% 아세토나이트릴/0.1% TFA 용액 100μL를 첨가하고, 어댑터 포함 시린지를 이용하여 1.5mL 튜브에 당펩타이드를 용출시킨 후, 원심 에바포레이터로 건조하여, 농축한 당펩타이드를 얻었다.
[(4) 탈당쇄 펩타이드의 조제]
상기 (3)에서 조제한 농축 당펩타이드 시료 5μg을, 50mM 인산 나트륨 완충액(pH 7.4) 10μL에 용해하고, 1U의 PNGase F(로슈사제) 1μL 첨가하여, 37℃에서 16시간 인큐베이트함으로써, N결합형 당쇄를 절단했다. 이어서, Oasis PRiME HLB 고상 추출 칼럼(Waters사제)에서 탈염한 후, 원심 에바포레이터로 건고하여, 탈당쇄 펩타이드를 얻었다.
[(5) 나노 액체 크로마토그래피 질량 분석(nanoLC/MS/MS)에 의한 해석]
상기 (3)에서 조제한 농축당펩타이드를, 0.1% 폼산 4μL에 2. 5μg/L가 되도록 각각 용해하여, 당펩타이드 시료로 했다. 또, 상기 (4)에서 조제한 탈당쇄 펩타이드를, 0.1% 폼산 4μL에 1.25μg/L가 되도록 각각 용해하여, 탈당쇄 펩타이드 시료로 했다.
상기 당펩타이드 시료 및 탈당쇄 펩타이드 시료에 대하여, 나노 액체 크로마토그래피 질량 분석(nanoLC/MS/MS)에 의한 해석(분리/분석)을 행했다.
구체적으로는, 분석 칼럼(Nano HPLC capillary column; 닛쿄 테크노사제)을 장착한 나노 액체 크로마토그래프(EASY-nLC1000; ThermoFisher Scientific사제)를, 하이브리드 사중극 오비트랩 질량 분석계(Q Exactive; ThermoFisher Scientific사제)에 접속하여, 상기 당펩타이드 시료 4μL를 분석 칼럼에 인젝션한 후, 유속 300 nL/min으로 해당 펩타이드 시료의 분리를 행했다.
또한, A 용매로서 0.1% 폼산 수용액, B 용매로서 0.1% 폼산 아세토나이트릴을 이용하고, 0분~70에서 B 용매 0%로부터 B 용매 35%의 리니어 그래디언트, 70분~75분에서 B 용매 35%로부터 B 용매 100%의 리니어 그래디언트를 이용했다. 또, 전체 측정 동안에, 포지티브 이온 모드(인가 전압: 1900V)로 했다.
상기 탈당쇄 펩타이드에 대해서는, 상기와 동일하게 하여 각각 분리한 후, Proteome Discoverer 1.4(ThermoFisher Scientific사제)를 이용하여 그 탈당쇄 펩타이드에 있어서의 당쇄 결합 부위를 동정했다.
또한, 상기 정보를 바탕으로, 당펩타이드의 질량과 유지 시간으로부터, 당펩타이드의 구조를 확인했다.
[(6) 결과]
상기 (1)~(5)에 의하여, 하기 표 1에 나타내는 바와 같이, 비트로넥틴, 보체 C4-A, 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3, 류신리치 알파 2글라이코프로테인 및 타이록신 결합 글로불린에 각각 유래하는 당펩타이드 A~L이 동정되었다.
또, 상기 당펩타이드 A~L의 피크 면적값에 대하여, 정상인(11검체)의 평균값 및 췌장암 환자(10검체)의 평균값을 도 1~7에 각각 나타낸다.
[표 1]
상기 표 1 및 도 1로부터, 비트로넥틴에서 유래하는, (i) 식 1-1'로 나타나는 당쇄를 갖는 당펩타이드 A(정상인 평균 피크 면적값: 7390723, 췌장암 환자 평균 피크 면적값: 18531358), (ii) 식 1-2'로 나타나는 당쇄를 갖는 당펩타이드 B(정상인 평균 피크 면적값: 14869167, 췌장암 환자 평균 피크 면적값: 32795940) 및 (iii) 식 1-3'으로 나타나는 당쇄를 갖는 당펩타이드 C(정상인 평균 피크 면적값: 3937759, 췌장암 환자 평균 피크 면적값: 8910019)의 발현량은, 정상인과 비교하여, 췌장암 환자에 있어서 현저하게 증가하고 있는 것을 알 수 있었다.
또, 상기 식 1-1', 식 1-2' 및 식 1-3'으로 나타나는 당쇄는, 비트로넥틴의 아미노산 배열의 N말단으로부터 169번째의 아스파라진 잔기에 각각 결합하고 있는 것을 확인했다.
상기 표 1 및 도 2로부터, 비트로넥틴에서 유래하는, (i) 식 2-1' 또는 식 2-1''로 나타나는 당쇄를 갖는 당펩타이드 D(정상인 평균 피크 면적값: 48626, 췌장암 환자 평균 피크 면적값: 657118 및 (ii) 식 2-2'로 나타나는 당쇄를 갖는 당펩타이드 E(정상인 평균 피크 면적값:0, 췌장암 환자 평균 피크 면적값: 634085)의 발현량은, 정상인과 비교하여, 췌장암 환자에 있어서 현저하게 증가하고 있는 것을 알 수 있었다. 특히, (ii) 식 2-2'로 나타나는 당쇄를 갖는 당펩타이드 E에 대해서는, 정상인에서는 전혀 발현하고 있지 않는 것을 알 수 있었다.
또, 상기 식 2-1', 식 2-1'' 및 식 2-2'로 나타나는 당쇄는, 비트로넥틴의 아미노산 배열의 N말단으로부터 169번째의 아스파라진 잔기에 각각 결합하고 있는 것을 확인했다.
상기 표 1 및 도 3으로부터, 비트로넥틴에서 유래하는, (i) 식 3-1'로 나타나는 당쇄를 갖는 당펩타이드 F(정상인 평균 피크 면적값: 4043373, 췌장암 환자 평균 피크 면적값: 13038720) 및 (ii) 식 3-2'로 나타나는 당쇄를 갖는 당펩타이드 G(정상인 평균 피크 면적값: 0, 췌장암 환자 평균 피크 면적값: 634085)의 발현량은, 정상인과 비교하여, 췌장암 환자에 있어서 현저하게 증가하고 있는 것을 알 수 있었다. 특히, (ii) 식 3-2'로 나타나는 당쇄를 갖는 당펩타이드 G에 대해서는, 정상인에서는 전혀 발현하고 있지 않는 것을 알 수 있었다.
또, 상기 식 3-1' 및 식 3-2'로 나타나는 당쇄는, 비트로넥틴의 아미노산 배열의 N말단으로부터 169번째의 아스파라진 잔기에 각각 결합하고 있는 것을 확인했다.
상기 표 1 및 도 4로부터, 보체 C4-A에서 유래하는, (i) 식 4-1로 나타나는 당쇄를 갖는 당펩타이드 H(정상인 평균 피크 면적값: 3075257, 췌장암 환자 평균 피크 면적값: 26703362)의 발현량은, 정상인과 비교하여, 췌장암 환자에 있어서 현저하게 증가하고 있는 것을 알 수 있었다.
또, 상기 식 4-1로 나타나는 당쇄는, 보체 C4-A의 아미노산 배열의 N말단으로부터 1328번째의 아스파라진 잔기에 각각 결합하고 있는 것을 확인했다.
상기 표 1 및 도 5로부터, 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3에서 유래하는, (i) 식 5-1', 식 5-1'', 식 5-2' 또는 식 5-2''로 나타나는 당쇄를 갖는 당펩타이드 I(정상인 평균 피크 면적값: 644343, 췌장암 환자 평균 피크 면적값: 9886996)의 발현량은, 정상인과 비교하여, 췌장암 환자에 있어서 현저하게 증가하고 있는 것을 알 수 있었다.
또, 상기 식 5-1', 식 5-1'', 식 5-2' 및 식 5-2''로 나타나는 당쇄는, 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3의 아미노산 배열의 N말단으로부터 580번째의 아스파라진 잔기에 각각 결합하고 있는 것을 확인했다.
상기 표 1 및 도 6으로부터, 류신리치 알파 2글라이코프로테인에서 유래하는, (i) 식 6-1로 나타나는 당쇄를 갖는 당펩타이드 J(정상인 평균 피크 면적값: 639693, 췌장암 환자 평균 피크 면적값: 17070316)의 발현량은, 정상인과 비교하여, 췌장암 환자에 있어서 현저하게 증가하고 있는 것을 알 수 있었다.
또, 상기 식 6-1로 나타나는 당쇄는, 류신리치 알파 2글라이코프로테인의 아미노산 배열의 N말단으로부터 186번째의 아스파라진 잔기에 결합하고 있는 것을 확인했다.
상기 표 1 및 도 7로부터, 타이록신 결합 글로불린에서 유래하는, (i) 식 3-1'로 나타나는 당쇄를 갖는 당펩타이드 K(정상인 평균 피크 면적값: 20923691, 췌장암 환자 평균 피크 면적값: 124825070) 및 (ii) 식 3-2'로 나타나는 당쇄를 갖는 당펩타이드 L(정상인 평균 피크 면적값: 0, 췌장암 환자 평균 피크 면적값: 4808134)의 발현량은, 정상인과 비교하여, 췌장암 환자에 있어서 현저하게 증가하고 있는 것을 알 수 있었다. 특히, 식 3-2'로 나타나는 당쇄를 갖는 당펩타이드 L에 대해서는, 정상인에서는 전혀 발현하고 있지 않는 것을 알 수 있었다.
또, 상기 식 3-1' 및 식 3-2'로 나타나는 당쇄는, 타이록신 결합 글로불린의 아미노산 배열의 N말단으로부터 36번째의 아스파라진 잔기에 각각 결합하고 있는 것을 확인했다.
또한, 상기 당펩타이드 A~L의 발현량에 대하여, ROC(Receiver Operating Characteristic) 곡선 해석에 의하여 AUC값(Area Underthe Curve: 곡선 면적값)을 산출했다.
그 결과를 하기 표 2에 나타낸다. 또한, AUC값에 대해서는, 0.75 이상이 바람직하고, 0.80 이상이 되면 매우 높은 판정능이 있다고 생각한다.
[표 2]
상기 표 2로부터, 상기 당펩타이드 A~L은, 모두 양호한 AUC값을 나타냈다.
이상으로부터, 상기 당펩타이드 A~L을 마커로서 이용함으로써, 검체(샘플)가 췌장암인지 여부가 판정 가능하다는 것을 알 수 있었다.
산업상 이용가능성
본 발명의 췌장암의 판정용 마커 및 이것을 이용한 췌장암의 판정 방법, 및 췌장암의 판정을 행하기 위한 데이터를 얻는 방법에 의하면, 확도(정확도·정밀도)가 높은, 췌장암의 판정(진단, 검사)을 행할 수 있다.
SEQUENCE LISTING
<110> FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation
Public University Corporation Yokohama City University
<120> A marker for determining pancreatic cancer
<130> 2093PCT
<150> 2018-120945
<151> 2018-06-26
<160> 5
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 8
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 1
Asn Gly Ser Leu Phe Ala Phe Arg
1 5
<210> 2
<211> 11
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 2
Gly Leu Asn Val Thr Leu Ser Ser Thr Gly Arg
1 5 10
<210> 3
<211> 13
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 3
Asn Ala His Gly Glu Glu Lys Glu Asn Leu Thr Ala Arg
1 5 10
<210> 4
<211> 13
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 4
Leu Pro Pro Gly Leu Leu Ala Asn Phe Thr Leu Leu Arg
1 5 10
<210> 5
<211> 15
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 5
Val Thr Ala Cys His Ser Ser Gln Pro Asn Ala Thr Leu Tyr Lys
1 5 10 15
Claims (11)
- 하기 (1)~(5)로부터 선택되는 당쇄를 포함하는, 췌장암의 판정용 마커:
(1) 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3에 존재하는, 하기 식 5로 나타나는 당쇄,
(2) 류신리치 알파 2글라이코프로테인에 존재하는, 하기 식 6으로 나타나는 당쇄,
(3) 비트로넥틴에 존재하는, 하기 식 1~3으로 나타나는 적어도 하나의 당쇄,
(4) 보체 C4-A에 존재하는, 하기 식 4로 나타나는 당쇄,
(5) 타이록신 결합 글로불린에 존재하는, 하기 식 3으로 나타나는 당쇄.
(식 1 중, m1은 0~2의 정수를 나타낸다)
(식 2 중, m2는 0 또는 1을 나타낸다)
(식 3 중, n1은 0 또는 1을 나타낸다)
(식 5 중, n2는 0 또는 1을 나타낸다)
- 청구항 1에 있어서,
상기 당쇄가, 하기 (1-1)~(5-1) 중 어느 하나로 나타나는 당쇄인, 마커:
(1-1) 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3의 아미노산 배열의 N말단으로부터 580번째의 아스파라진 잔기에 결합하고 있는 상기 식 5로 나타나는 당쇄,
(2-1) 류신리치 알파 2글라이코프로테인의 아미노산 배열의 N말단으로부터 186번째의 아스파라진 잔기에 결합하고 있는 상기 식 6으로 나타나는 당쇄,
(3-1) 비트로넥틴의 아미노산 배열의 N말단으로부터 169번째의 아스파라진 잔기에 결합하고 있는 상기 식 1~3으로 나타나는 적어도 하나의 당쇄,
(4-1) 보체 C4-A의 아미노산 배열의 N말단으로부터 1328번째의 아스파라진 잔기에 결합하고 있는 상기 식 4로 나타나는 당쇄,
(5-1) 타이록신 결합 글로불린의 아미노산 배열의 N말단으로부터 36번째의 아스파라진 잔기에 결합하고 있는 상기 식 3으로 나타나는 당쇄. - 청구항 1에 있어서,
상기 당쇄가, 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3의 아미노산 배열의 N말단으로부터 580번째의 아스파라진 잔기에 결합하고 있는 상기 식 5로 나타나는 당쇄인, 마커. - 청구항 1에 있어서,
상기 당쇄가, 류신리치 알파 2글라이코프로테인의 아미노산 배열의 N말단으로부터 186번째의 아스파라진 잔기에 결합하고 있는 상기 식 6으로 나타나는 당쇄인, 마커. - 혈액 유래 시료 중의, 하기 (1)~(5)로부터 선택되는 당쇄의 양을 측정하고, 얻어진 측정 결과에 근거하여 췌장암의 판정을 보조하는, 췌장암의 판정을 보조하는 방법:
(1) 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3에 존재하는, 하기 식 5로 나타나는 당쇄,
(2) 류신리치 알파 2글라이코프로테인에 존재하는, 하기 식 6으로 나타나는 당쇄,
(3) 비트로넥틴에 존재하는, 하기 식 1~3으로 나타나는 적어도 하나의 당쇄,
(4) 보체 C4-A에 존재하는, 하기 식 4로 나타나는 당쇄,
(5) 타이록신 결합 글로불린에 존재하는, 하기 식 3으로 나타나는 당쇄.
(식 1 중, m1은 0~2의 정수를 나타낸다)
(식 2 중, m2는 0 또는 1을 나타낸다)
(식 3 중, n1은 0 또는 1을 나타낸다)
(식 5 중, n2는 0 또는 1을 나타낸다)
- 청구항 5에 있어서,
상기 당쇄가, 하기 (1-1)~(5-1) 중 어느 하나로 나타나는 당쇄인, 판정을 보조하는 방법:
(1-1) 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3의 아미노산 배열의 N말단으로부터 580번째의 아스파라진 잔기에 결합하고 있는 상기 식 5로 나타나는 당쇄,
(2-1) 류신리치 알파 2글라이코프로테인의 아미노산 배열의 N말단으로부터 186번째의 아스파라진 잔기에 결합하고 있는 상기 식 6으로 나타나는 당쇄,
(3-1) 비트로넥틴의 아미노산 배열의 N말단으로부터 169번째의 아스파라진 잔기에 결합하고 있는 상기 식 1~3으로 나타나는 적어도 하나의 당쇄,
(4-1) 보체 C4-A의 아미노산 배열의 N말단으로부터 1328번째의 아스파라진 잔기에 결합하고 있는 상기 식 4로 나타나는 당쇄,
(5-1) 타이록신 결합 글로불린의 아미노산 배열의 N말단으로부터 36번째의 아스파라진 잔기에 결합하고 있는 상기 식 3으로 나타나는 당쇄. - 청구항 5에 있어서,
상기 당쇄가, 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3의 아미노산 배열의 N말단으로부터 580번째의 아스파라진 잔기에 결합하고 있는 상기 식 5로 나타나는 당쇄인, 판정을 보조하는 방법. - 청구항 5에 있어서,
상기 당쇄가, 류신리치 알파 2글라이코프로테인의 아미노산 배열의 N말단으로부터 186번째의 아스파라진 잔기에 결합하고 있는 상기 식 6으로 나타나는 당쇄인, 판정을 보조하는 방법. - 청구항 5에 있어서,
상기 시료가, 전혈, 혈청 또는 혈장인, 판정을 보조하는 방법. - 혈액 유래 시료 중의, 하기 (1)~(5)로부터 선택되는 당쇄의 양을 측정함으로써 이루어지는, 췌장암의 판정을 행하기 위한 데이터를 얻는 방법:
(1) 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3에 존재하는, 하기 식 5로 나타나는 당쇄,
(2) 류신리치 알파 2글라이코프로테인에 존재하는, 하기 식 6으로 나타나는 당쇄,
(3) 비트로넥틴에 존재하는, 하기 식 1~3으로 나타나는 적어도 하나의 당쇄,
(4) 보체 C4-A에 존재하는, 하기 식 4로 나타나는 당쇄,
(5) 타이록신 결합 글로불린에 존재하는, 하기 식 3으로 나타나는 당쇄.
(식 1 중, m1은 0~2의 정수를 나타낸다)
(식 2 중, m2는 0 또는 1을 나타낸다)
(식 3 중, n1은 0 또는 1을 나타낸다)
(식 5 중, n2는 0 또는 1을 나타낸다)
- 하기 (1)~(5)로부터 선택되는 당쇄에 친화성을 갖는 물질을 포함하는, 췌장암의 판정용 키트:
(1) 인터알파트립신 인히비터 중쇄 H3에 존재하는, 하기 식 5로 나타나는 당쇄,
(2) 류신리치 알파 2글라이코프로테인에 존재하는, 하기 식 6으로 나타나는 당쇄,
(3) 비트로넥틴에 존재하는, 하기 식 1~3으로 나타나는 적어도 하나의 당쇄,
(4) 보체 C4-A에 존재하는, 하기 식 4로 나타나는 당쇄,
(5) 타이록신 결합 글로불린에 존재하는, 하기 식 3으로 나타나는 당쇄.
(식 1 중, m1은 0~2의 정수를 나타낸다)
(식 2 중, m2는 0 또는 1을 나타낸다)
(식 3 중, n1은 0 또는 1을 나타낸다)
(식 5 중, n2는 0 또는 1을 나타낸다)
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JPJP-P-2018-120945 | 2018-06-26 | ||
JP2018120945 | 2018-06-26 | ||
PCT/JP2019/024634 WO2020004244A1 (ja) | 2018-06-26 | 2019-06-21 | 膵臓癌の判定用マーカー |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
KR20210024464A KR20210024464A (ko) | 2021-03-05 |
KR102665511B1 true KR102665511B1 (ko) | 2024-05-10 |
Family
ID=68986841
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
KR1020207036018A KR102665511B1 (ko) | 2018-06-26 | 2019-06-21 | 췌장암의 판정용 마커 |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20210123918A1 (ko) |
EP (1) | EP3816628B1 (ko) |
JP (1) | JP7425447B2 (ko) |
KR (1) | KR102665511B1 (ko) |
CN (1) | CN112543871B (ko) |
WO (1) | WO2020004244A1 (ko) |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR102661295B1 (ko) * | 2021-01-22 | 2024-04-30 | 기초과학연구원 | 탈당화된 lrg1 당단백질 및 lrg1 당단백질 변이체, 및 이의 용도 |
CN114593979A (zh) * | 2022-04-01 | 2022-06-07 | 清华大学 | 一种基于质谱检测体液样本里中低丰度蛋白的方法 |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2003004748A (ja) | 2001-06-26 | 2003-01-08 | Eisai Co Ltd | 膵臓癌診断用試薬 |
JP2008541060A (ja) | 2005-05-05 | 2008-11-20 | フィラデルフィア ヘルス アンド エデュケーション コーポレーション ディー/ビー/エー ドレクセル ユニバーシティー カレッジ オブ メディシン | タンパク質のグリコシル化の評価による肝臓病変の診断 |
WO2009136506A1 (ja) | 2008-05-09 | 2009-11-12 | 住友ベークライト株式会社 | N結合型糖鎖を利用した膵臓癌の診断方法 |
WO2011034182A1 (ja) | 2009-09-18 | 2011-03-24 | 三菱化学株式会社 | 肝細胞癌マーカー |
WO2013172105A1 (ja) | 2012-05-18 | 2013-11-21 | 日東紡績株式会社 | 膵臓癌を検出するためのマーカー |
Family Cites Families (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR100475642B1 (ko) * | 2001-12-29 | 2005-03-10 | 한국생명공학연구원 | 암 발생 및 전이에 관여하는 단백질의 당쇄 변화를측정하여 암을 진단하는 방법 및 이를 이용한 진단킷트 |
JP5358952B2 (ja) * | 2008-01-10 | 2013-12-04 | 和光純薬工業株式会社 | 膵臓癌マーカーおよび膵臓癌の検査方法 |
US9157911B2 (en) | 2011-06-15 | 2015-10-13 | Sanyo Chemical Industries, Ltd. | Assay method using magnetic silica particles and reagent for said assay method |
JP6343560B2 (ja) | 2012-09-05 | 2018-06-13 | 富士フイルム和光純薬株式会社 | 乳癌の判定方法 |
JP6244779B2 (ja) * | 2013-09-25 | 2017-12-13 | 東ソー株式会社 | 膵臓癌の病期を検出する方法及び検出用キット |
CN105092844A (zh) * | 2015-07-10 | 2015-11-25 | 深圳市贝沃德克生物技术研究院有限公司 | 胰腺癌蛋白生物标记物的检测试剂盒及检测系统 |
US20180216194A1 (en) | 2015-07-28 | 2018-08-02 | The Johns Hopkins University | Compositions and methods for detecting pancreatic cancer |
WO2017195887A1 (ja) | 2016-05-12 | 2017-11-16 | 公立大学法人横浜市立大学 | 糖鎖濃縮カラム及び糖鎖濃縮方法 |
JP6502534B2 (ja) | 2016-08-19 | 2019-04-17 | 公立大学法人横浜市立大学 | 糖タンパク質のn結合型糖鎖の解析方法及び解析システム |
-
2019
- 2019-06-21 KR KR1020207036018A patent/KR102665511B1/ko active IP Right Grant
- 2019-06-21 EP EP19827564.6A patent/EP3816628B1/en active Active
- 2019-06-21 WO PCT/JP2019/024634 patent/WO2020004244A1/ja unknown
- 2019-06-21 CN CN201980041127.9A patent/CN112543871B/zh active Active
- 2019-06-21 US US17/251,196 patent/US20210123918A1/en active Pending
- 2019-06-21 JP JP2020527470A patent/JP7425447B2/ja active Active
Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2003004748A (ja) | 2001-06-26 | 2003-01-08 | Eisai Co Ltd | 膵臓癌診断用試薬 |
JP2008541060A (ja) | 2005-05-05 | 2008-11-20 | フィラデルフィア ヘルス アンド エデュケーション コーポレーション ディー/ビー/エー ドレクセル ユニバーシティー カレッジ オブ メディシン | タンパク質のグリコシル化の評価による肝臓病変の診断 |
WO2009136506A1 (ja) | 2008-05-09 | 2009-11-12 | 住友ベークライト株式会社 | N結合型糖鎖を利用した膵臓癌の診断方法 |
WO2011034182A1 (ja) | 2009-09-18 | 2011-03-24 | 三菱化学株式会社 | 肝細胞癌マーカー |
WO2013172105A1 (ja) | 2012-05-18 | 2013-11-21 | 日東紡績株式会社 | 膵臓癌を検出するためのマーカー |
Non-Patent Citations (4)
Title |
---|
Daisuke Nakata et al, Scientific Reports (2014.10.22.), vol 4, pp 6715, XP05523202, DOI: 10.1038/srep06715. |
Liu XiaoHui et al, British Journal of Cancer (2017.11.09.), vol 117, no 12, pp 1846-1854, XP055882455. |
Miyako Nakano et al, International Journal of Cancer (2008.01.23.), vol 122, no 10, pp 2301-2309, XP071283687, ISSN: 0020-7136, DOI: 10.1002/IJC.23364. |
Song Nie et al, Journal of Proteome Research (2014.03.10.), vol 13, no 4, pp 1873-1884, XP055463005, ISSN: 1535-3893, DOI: 10.1021/pr400967x. |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP3816628A4 (en) | 2022-06-08 |
KR20210024464A (ko) | 2021-03-05 |
EP3816628A1 (en) | 2021-05-05 |
CN112543871B (zh) | 2024-07-23 |
CN112543871A (zh) | 2021-03-23 |
WO2020004244A1 (ja) | 2020-01-02 |
US20210123918A1 (en) | 2021-04-29 |
JPWO2020004244A1 (ja) | 2021-08-12 |
EP3816628B1 (en) | 2023-08-16 |
JP7425447B2 (ja) | 2024-01-31 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US8911951B2 (en) | Plasma kallikrein fragments as diagnostic biomarkers for lung cancers | |
US9796761B2 (en) | Glycan markers as measure of disease state of hepatic diseases | |
KR101559101B1 (ko) | 혈액유래 암 진단용 펩티드 마커 및 이를 이용한 암 진단방법 | |
KR20090108006A (ko) | 혈장-유래된 미세입자로부터 바이오마커를 확인 및 분석하는 방법 | |
KR20120082429A (ko) | 간세포암 마커 | |
KR102665511B1 (ko) | 췌장암의 판정용 마커 | |
US10156576B2 (en) | Method for enrichment and separation of spinal fluid glycoprotein, method for searching for marker for central nervous system diseases which utilizes the aforementioned method, and marker for central nervous system diseases | |
KR101207797B1 (ko) | 다중렉틴을 이용한 체액 유래 단백질 동정 방법 및 이 방법에 의하여 탐지된 간암 바이오마커 | |
US20150338412A1 (en) | Composition for diagnosis of lung cancer and diagnosis kit for lung cancer | |
US11029314B2 (en) | Methods for diagnosis, differentiation and monitoring using urine proteins as markers in IgA nephropathy | |
KR101527283B1 (ko) | 당단백질의 탈당화 검출을 통한 암 마커 스크리닝 방법 및 간세포암 마커 | |
WO2021095824A1 (ja) | 大腸癌の診断を補助する方法、キット及びバイオマーカー | |
EP2772759B1 (en) | Composition for diagnosis of lung cancer | |
KR101274835B1 (ko) | 만성 폐쇄성 폐질환의 급성 악화 진단용 바이오마커 조성물 및 바이오마커 검출 방법 | |
US20120214169A1 (en) | Differential levels of haptoglodin isoforms in small cell lung cancer | |
KR101819939B1 (ko) | 유방암 진단용 단백질 마커 베타-투 마이크로글로불린 및 이를 검출하는 방법 | |
Zhang | Sepsis Proteome Analysis by the Combination of Immunodepletion, Two-dimensional HPLC and nanoLC-MS/MS |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
N231 | Notification of change of applicant | ||
E902 | Notification of reason for refusal | ||
E701 | Decision to grant or registration of patent right | ||
GRNT | Written decision to grant |