KR102572488B1

KR102572488B1 - 활성화 백혈구-활성화 혈소판 복합체의 제거 재료

Info

Publication number: KR102572488B1
Application number: KR1020197032616A
Authority: KR
Inventors: 나오토시 토미타; 카오루 시마다; 히로시 타카하시
Original assignee: 도레이 카부시키가이샤
Priority date: 2017-06-06
Filing date: 2018-06-06
Publication date: 2023-08-30
Also published as: US20210086166A1; MX2019012337A; EP3636297A4; KR20200015470A; US20200197594A1; EP3636297B1; CN110650758A; PH12019502450A1; RU2019139380A; EP3636297A1; US10888840B2; CA3060197C; JP6699731B2; CA3060197A1; WO2018225764A1; RU2019139380A3; BR112019020220A2; US11660383B2; MY196606A; CN110650758B

Abstract

본 발명은 활성화 백혈구-활성화 혈소판 복합체를 고효율로 제거하는 것이 가능한 재료를 제공하는 것을 목적으로 하고 있다. 본 발명은 표면에 하전을 갖는 관능기를 포함하는 화합물이 결합한 수불용성 담체이며, 상기 표면의 전개 길이비는 4~7인 활성화 백혈구-활성화 혈소판 복합체의 제거 재료를 제공한다.

Description

활성화 백혈구-활성화 혈소판 복합체의 제거 재료

본 발명은 활성화 백혈구-활성화 혈소판 복합체의 제거 재료에 관한 것이다.

염증성 사이토카인 등의 액성 인자는 전신성 에리테마토데스, 관절 류머티즘, 다발성 경화증, 궤양성 대장염, 클론병 등의 염증성 질환의 병인에 깊게 관여하고 있으며, 저분자 의약품이나 항체 등의 생물 제제로 이들의 액성 인자를 불활성화함으로써 염증성 질환을 치료하는 시도가 이루어져 있다. 그러나, 이들의 액성 인자는 단독으로 염증 부위에 작용하는 것이 아니고 복수의 액성 인자가 상승적으로 작용해서 염증성 질환을 발증 및 진행시키기 때문에 최근에는 액성 인자뿐만아니라 액성 인자의 공급원인 활성화한 백혈구나 혈소판 등의 세포 자체도 생체 내로부터 제거가능한 재료를 사용한 체외 순환 요법에 주목이 집중되어 있다.

최근, 염증성 질환의 새로운 원인 물질로서 활성화 백혈구-활성화 혈소판 복합체(activated leukocyte-activated platelet complex)가 주목받고 있다. 활성화 백혈구-활성화 혈소판 복합체는 활성화 백혈구 단독과 비교해서 염증 반응을 보이고 있는 조직에의 유주능이 높고, 또한 조직 상해성 물질의 방출도 많은 것이나, 활성화 혈소판과 활성화 백혈구의 상호작용에 의해 활성화 백혈구의 조직 상해성 물질의 방출이 증강하는 것이 보고되어 있다(비특허문헌 1).

염증성 사이토카인과 친화성을 갖는 재료로서 특허문헌 1에는 요소 결합과 아미노기 등을 포함하는 관능기를 수불용성 담체의 표면에 고정화한 제거용 담체가 개시되어 있다. 또한, 특허문헌 2에는 담체의 형상을 일정 범위의 섬유 지름 등을 갖는 섬유로 함으로써 염증성 사이토카인에 추가하여 활성화 백혈구를 혈액 중으로부터 제거하는 것을 가능하게 한 다기능의 제거용 담체가 개시되어 있다.

특허문헌 3에는 활성화 백혈구나 활성화 혈소판의 제거가 가능한 중공사 형상 혈액 정화막이 개시되어 있다.

기재의 재료 형태로서는 섬유 이외에 많이 사용되고 있는 것으로서 입자(비즈)가 알려져 있으며, 특허문헌 4 및 5에는 입자 표면에 일정 범위의 요철을 갖게 함으로써 과립구나 활성화 백혈구, 활성화 혈소판을 혈액 중으로부터 제거하는 재료가 개시되어 있다. 한편, 특허문헌 6에는 요철을 가진 입자 표면에 화합물을 고정화함으로써 백혈구로부터 사이토카인을 산생시키는 재료가 개시되어 있다. 또한, 입자 표면에 다당류를 고정함으로써(특허문헌 7), 또는 세공을 가진 입자 표면에 폴리비닐피롤리돈 등을 고정화함으로써 사이토카인 및 백혈구를 제거시키는 재료(특허문헌 8)가 개시되어 있다.

일본특허공개 평10-147518호 공보 일본특허공개 2006-312804호 공보 일본특허공개 2011-000145호 공보 일본특허공개 평05-168706호 공보 일본특허공개 2009-254695공보 일본특허공개 2003-201251호 공보 일본특허공표 2014-507517호 공보 국제공개 제12/033522호 팸플릿

J. Clin. Invest. 116:3211-9

그러나, 특허문헌 1에 기재된 제거용 담체는 염증성 사이토카인의 제거를 위해 수불용성 담체 표면에 관능기를 고정하고 있지만, 상기 제거용 담체와 활성화 백혈구-활성화 혈소판 복합체의 관계, 하물며 상기 복합체의 제거에 관한 기술에 대해서 일절 언급하고 있지 않다. 나노미터 오더의 크기인 염증성 사이토카인은 세포로부터 분비되는 단백질이며, 마이크로미터 오더의 크기이며, 세포의 복합체인 활성화 백혈구-활성화 혈소판 복합체와는 물리적 성질이나 생리 활성이 상이하다. 그 때문에 염증성 사이토카인과 활성화 백혈구-활성화 혈소판 복합체에는 지금까지 제거 대상으로서의 관련성은 확인되지 않는다.

특허문헌 2에 기재된 제거용 담체는 사이토카인이나 백혈구 등의 제거 대상 물질을 효율 좋게 제거하기 위해서 담체 표면의 물리 특성(제타 전위)을 규정하고 있지만, 상기 제거용 담체와 활성화 백혈구-활성화 혈소판 복합체의 관계, 하물며 상기 복합체의 제거에 관한 기술에 대해서 일절 언급하고 있지 않다. 백혈구와 활성화 백혈구-활성화 혈소판 복합체에서는 세포 표면에 발현되어 있는 단백질의 종류, 세포의 크기, 생리 활성이 상이하기 때문에 백혈구를 제거하는 경우와 활성화 백혈구-활성화 혈소판 복합체를 제거하는 경우에서 그 메커니즘은 동일하지 않다고 생각된다.

특허문헌 3에 기재된 중공사 형상 혈액 정화막은 활성화한 백혈구나 혈소판을 제거하기 위해서 중공사의 혈액 접촉 표면의 중심선 평균 거칠기와 10점 평균 거칠기를 규정하고 있지만, 상기 중공사 형상 혈액 정화막과 활성화 백혈구-활성화 혈소판 복합체의 관계, 하물며 상기 복합체의 제거에 관한 기술에 대해서 일절 언급하고 있지 않다. 활성화한 백혈구나 혈소판과 활성화 백혈구-활성화 혈소판 복합체에서는 세포 표면에 발현되어 있는 단백질의 종류, 세포의 크기, 생리 활성이 상이하기 때문에 활성화한 백혈구나 혈소판을 제거하는 경우와 활성화 백혈구-활성화 혈소판 복합체를 제거하는 경우에서 그 메커니즘은 동일하지 않다고 생각된다.

특허문헌 4 및 5에 기재된 재료는 재료 표면의 중심선 평균 거칠기 등을 규정하여 일정 범위의 요철을 갖게 함으로써 과립구, 활성화 백혈구나 활성화 혈소판을 혈액 중으로부터 제거하지만, 상기 재료와 활성화 백혈구-활성화 혈소판 복합체의 관계, 하물며 상기 복합체의 제거에 관한 기술에 대해서 일절 언급하고 있지 않다. 또한, 과립구와 활성화 백혈구-활성화 혈소판 복합체에서는 세포 표면에 발현되어 있는 단백질의 종류, 세포의 크기, 생리 활성이 상이하기 때문에 과립구를 제거하는 경우와 활성화 백혈구-활성화 혈소판 복합체를 제거하는 경우에서 그 메커니즘은 동일하지 않다고 생각된다. 또한, 특허문헌 4 및 5는 재료 표면의 하전이나 재료 표면의 전개 길이비에 대해서 일절 언급하고 있지 않다.

특허문헌 6에 기재된 재료는 수불용성의 재료 표면 상에 균체, 균체 성분, 펩티드류, 핵산류, 단백질, 당 성분, 지질 등을 고정화함으로써 사이토카인의 활성을 생체 내에서 야기하는 재료이며, 이들의 고정화 물질은 사이토카인을 제거하는 것이 아니라 산생시키는 목적이며, 상기 재료와 활성화 백혈구-활성화 혈소판 복합체의 관계, 하물며 상기 복합체의 제거에 관한 기술에 대해서 일절 언급하고 있지 않다.

특허문헌 7 및 8에 기재된 발명은 사이토카인 및 백혈구를 제거하는 재료 (특히 비즈)이지만 재료 표면 형상에 관한 기술은 없고, 상기 재료와 활성화 백혈구-활성화 혈소판 복합체의 관계, 하물며 상기 복합체의 제거에 관한 기술에 대해서 일절 언급하고 있지 않다.

그 때문에 활성화 백혈구-활성화 혈소판 복합체를 제거가능한 재료가 갈망되어 있다.

그래서, 본 발명은 활성화 백혈구-활성화 혈소판 복합체를 고효율로 제거하는 것이 가능한 활성화 백혈구-활성화 혈소판 복합체의 제거 재료를 제공하는 것을 목적으로 한다.

본 발명자들은 상기 과제를 해결하기 위해 예의 검토를 진행한 결과, 표면에 하전을 갖는 관능기를 포함하는 화합물이 결합한 수불용성 담체이며, 상기 표면의 전개 길이비를 특정 범위로 함으로써 활성화 백혈구-활성화 혈소판 복합체를 고효율로 제거하는 것을 찾아냈다.

즉, 본 발명은 이하의 (1)~(9)를 제공한다.

(1) 표면에 하전을 갖는 관능기를 포함하는 화합물이 결합한 수불용성 담체이며, 상기 표면의 전개 길이비는 4~7인 활성화 백혈구-활성화 혈소판 복합체의 제거 재료.

(2) (1)에 있어서, 상기 표면의 중심선 평균 거칠기는 2~10㎛인 제거 재료.

(3) (1) 또는 (2)에 있어서, 상기 관능기의 하전량의 절대값은 상기 수불용성 담체의 건조 중량 1g당 0.3~3.0mmol인 제거 재료.

(4) (1) 내지 (3) 중 어느 한 항에 있어서, 상기 하전을 갖는 관능기는 아미노기인 제거 재료.

(5) (1) 내지 (4) 중 어느 한 항에 있어서, 상기 수불용성 담체의 형상이 섬유이며, 상기 섬유의 섬유 지름은 1~100㎛인 제거 재료.

(6) (1) 내지 (5) 중 어느 한 항에 있어서, 상기 수불용성 담체는 폴리스티렌, 폴리술폰 및 폴리에테르술폰으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 폴리머를 포함하는 제거 재료.

(7) (1) 내지 (6) 중 어느 한 항에 있어서, 활성화 백혈구, IL-6, IL-8 또는 HMGB-1을 흡착 제거하는 제거 재료.

(8) (1) 내지 (7) 중 어느 한 항에 기재된 제거 재료를 구비하는 혈액 정화 컬럼.

(9) (1) 내지 (7) 중 어느 한 항에 기재된 제거 재료를 구비하는 호흡기 질환의 치료용 혈액 정화 컬럼.

본 발명의 제거 재료는 활성화 백혈구-활성화 혈소판 복합체를 고효율로 제거하는 것이 가능하며, 상기 재료를 체외 순환 컬럼에 사용함으로써 호흡기 질환에 대하여 치료 효과를 발휘할 수 있다.

도 1은 전개 길이비를 구하는 방법을 설명하는 도면이다.
도 2는 중심선 평균 거칠기를 구하는 방법을 설명하는 도면이다.
도 3은 제곱 평균 평방근 경사각을 구하는 방법을 설명하는 도면이다.
도 4는 선 거칠기의 해석 방법을 설명하는 도면이다.

이하, 본 발명에 대해서 상세히 설명한다. 본 명세서의 전체에 걸쳐 단수형의 표현은 특별히 언급하지 않는 한, 그 복수형의 개념도 포함하는 것이 이해되어야 할 것이다. 따라서, 단수형의 관사(예를 들면, 영어의 경우는 「a」, 「an」, 「the」 등)는 특별히 언급하지 않는 한, 그 복수형의 개념도 포함하는 것이 이해되어야 할 것이다.

본 발명의 활성화 백혈구-활성화 혈소판 복합체의 제거 재료는 표면에 하전을 갖는 관능기를 포함하는 화합물이 결합한 수불용성 담체이며, 상기 표면의 전개 길이비는 4~7인 것을 특징으로 하고 있다.

「제거 재료」란 제거 대상물을 제거하는 것이 가능한 재료를 의미하고, 그 형상에 특별히 한정은 없지만, 예를 들면, 필름 형상, 입자 형상, 섬유 형상을 들 수 있고, 체외 순환의 치료에서 사용하는 것을 고려하면 비표면적이 크고, 유연하게 변형가능하며 취급성이 우수한 점에서 섬유 형상, 특히 해도 섬유 형상이 바람직하다. 또한, 사용할 때의 제거 재료의 충전이나 액체의 유로의 균일성을 고려하면 섬유 형상 중에서도 직물, 부직포나 편지(編地) 형상이 바람직하다. 활성화 백혈구-활성화 혈소판 복합체의 제거 재료는 적어도 일부에 수불용성 담체를 포함하는 것이면 좋고, 수불용성 담체 단독이어도 좋고, 수불용성 담체에 적당한 보강재를 고정화한 것 또는 혼합한 것이어도 좋다. 고정화 또는 혼합의 조작은 형상으로 가공하기 전에 행해도 좋고, 가공한 후에 행해도 좋다. 제거의 방법으로서는 예를 들면, 흡착이나 여과에 의해 제거 대상물을 제거하는 방법을 들 수 있다.

수불용성 담체의 형상이 섬유인 경우는 상기 섬유의 섬유 지름으로서는 1㎛ 이상이 바람직하고, 혈구가 통과할 수 있는 유로의 확보라는 관점으로부터는 3㎛ 이상이 보다 바람직하고, 5㎛ 이상이 더욱 바람직하고, 10㎛ 이상이 더욱 바람직하고, 15㎛ 이상이 더욱 바람직하다. 또한, 흡착을 위한 비표면적의 확보라는 관점으로부터는 100㎛ 이하가 바람직하고, 50㎛ 이하가 보다 바람직하고, 30㎛ 이하가 보다 바람직하다. 즉, 상기 섬유의 섬유 지름으로서는 1~100㎛가 바람직하고, 3~100㎛가 보다 바람직하고, 5~100㎛가 더욱 바람직하고, 10~100㎛가 더욱 바람직하고, 15~100㎛가 더욱 바람직하고, 15~50㎛가 더욱 바람직하고, 15~30㎛가 더욱 바람직하다. 어느 바람직한 하한값도 어느 바람직한 상한값과 조합할 수 있다.

「섬유 지름」이란 수불용성 담체를 구성하고 있는 직물, 부직포 또는 편지를 형성하는 섬유의 소편 샘플 10개를 랜덤하게 채취하여 주사형 전자 현미경을 사용하여 사진을 각각 촬영하고, 각 사진당 10개소(계 100개소)의 섬유의 직경을 측정한 값의 평균값을 말한다. 이 때의 관찰 배율은 섬유 지름이 사진 장변의 길이의 30~80%의 범위가 되는 배율로 한다. 또한, 복수 섬유가 다발로 되어 있는 멀티필라멘트의 경우는 멀티필라멘트를 구성하는 단사의 직경을 섬유 지름으로 한다.

「수불용성 담체」란 물에 불용인 담체이다. 여기서, 물에 불용이란 수불용성 담체를 물에 넣기 전후의 건조 중량 변화가 1중량% 이하인 것을 의미한다. 이 건조 중량 변화는 수불용성 담체를 수불용성 담체의 건조 중량의 9배량의 37℃의 물에 1시간 침지한 후에 상기 수불용성 담체를 핀셋 등으로 끌어올리고, 수불용성 담체 중에 포함되는 물을 50℃ 이하에서 항량이 될 때까지 진공 건조시킨 후에 남은 고형분의 건조 중량의 침지 전의 수불용성 담체의 건조 중량에 대한 비율이다. 물에의 불용화가 되어 있지 않은 담체는 실제로 사용하는 경우에 담체로부터의 용출물이 많아질 위험성이 있어 안전상 바람직하지 않다.

수불용성 담체의 재질로서는 예를 들면, 아릴기나 수산기 등의 탄소 양이온과의 반응성을 갖는 관능기를 반복하여 구조 중에 포함하는 고분자 재료, 예를 들면, 폴리(방향족 비닐 화합물), 폴리에스테르, 폴리술폰, 폴리에테르술폰, 폴리스티렌 또는 폴리비닐알코올 등의 합성 고분자 또는 셀룰로오스, 콜라겐, 키틴, 키토산 또는 덱스트란 등의 천연 고분자를 들 수 있다. 이들의 고분자는 단독 중합체 또는 공중합체, 블렌드, 또는 알로이화해서 사용해도 좋다. 특히 혈액 정화용에는 수산기를 갖지 않는 고분자 재료인 폴리(방향족 비닐 화합물), 폴리에틸렌테레프탈레이트, 폴리부틸렌테레프탈레이트, 폴리스티렌, 폴리술폰 및 폴리에테르술폰으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 폴리머를 포함하는 것이 바람직하고, 폴리스티렌, 폴리술폰 및 폴리에테르술폰으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상이 폴리머를 포함하는 것이 보다 바람직하다. 그 중에서도 단위중량당 방향환의 수가 많고, 프리델 크라프츠 반응 등으로 각종 관능기나 반응성 관능기를 도입하기 쉬운 점에서 폴리스티렌을 포함하는 것이 특히 바람직하다. 특히 해도 섬유의 경우는 제거 대상물과 접촉하는 해 성분에 폴리스티렌을 포함하는 것이 바람직하다. 또한, 이들 수불용성 담체에 사용하는 고분자 재료는 일반적으로 구입할 수 있거나 또는 공지의 방법으로 제조할 수 있다.

「하전을 갖는 관능기를 포함하는 화합물」이란 양성 하전 또는 음성 하전을 갖는 관능기를 포함하는 화합물을 의미하고, 활성화 백혈구-활성화 혈소판 복합체와 상호작용가능하면 특별히 한정은 없고, 그 화학 구조로서는 예를 들면, 양성 하전을 갖는 관능기(양이온성 관능기)인 아미노기를 포함하는 화합물 또는 음성 하전을 갖는 관능기(음이온성 관능기)인 술폰산기 또는 카르복실기를 포함하는 화합물을 들 수 있다. 하전을 갖는 관능기로서 아미노기가 바람직하고, 하전을 갖는 관능기를 포함하는 화합물로서 아미노기를 포함하는 화합물이 바람직하다. 또한, 상기 관능기는 동일 또는 상이한 관능기를 복수 조합하고 있어도 좋다. 또한, 하전을 갖는 관능기를 포함하는 화합물은 상기 하전을 갖는 관능기를 포함하고 있으면 추가로 하전을 갖지 않는 관능기를 갖고 있어도 좋고, 예를 들면, 메틸기 또는 에틸기 등의 알킬기 또는 페닐기, 알킬기로 치환된 페닐기(예를 들면, 파라(p)-메틸페닐기, 메타(m)-메틸페닐기, 오쏘(o)-메틸페닐기, 파라(p)-에틸페닐기, 메타(m)-에틸페닐기 또는 오쏘(o)-에틸페닐기 등) 또는 할로겐 원자로 치환된 페닐기(예를 들면, 파라(p)-플루오로페닐기, 메타(m)-플루오로페닐기, 오쏘(o)-플루오로페닐기, 파라(p)-클로로페닐기, 메타(m)-클로로페닐기 또는 오쏘(o)-클로로페닐기 등) 등의 아릴기가 하전을 갖는 관능기를 포함하는 화합물에 결합한 화합물(예: 파라(p)-클로로페닐기가 결합한 테트라에틸렌펜타민)은 하전을 갖는 관능기를 포함하는 화합물에 포함된다. 그 때, 하전을 갖지 않는 관능기와 하전을 갖는 관능기를 포함하는 화합물은 직접 결합하고 있어도, 스페이서를 통해 결합하고 있어도 좋다(상기 결합에 관여하는 스페이서를 스페이서 1이라고도 칭함). 상기 스페이서 1로서는 예를 들면, 요소 결합, 아미드 결합, 우레탄 결합을 들 수 있다.

상기 하전을 갖는 관능기의 하전량의 절대값은 지나치게 적으면 제거 대상 물질과 충분한 상호작용을 할 수 없고, 한편 지나치게 많으면 관능기의 입체 배치의 자유도가 감소하기 때문에 제거 대상 물질과 적절한 상호작용을 할 수 없게 된다고 생각되기 때문에 수불용성 담체의 건조 중량 1g당 0.3~3.0mmol인 것이 바람직하고, 0.4~2.9mmol인 것이 보다 바람직하고, 0.5~2.7mmol인 것이 더욱 바람직하다. 어느 바람직한 하한값도 어느 바람직한 상한값과 조합할 수 있다.

「아미노기」란 예를 들면, 메틸아민, 에틸아민, 프로필아민, 부틸아민, 펜틸아민, 헥실아민, 헵틸아민, 옥틸아민 또는 도데실아민 등의 1급 아민 유래의 아미노기, 메틸헥실아민, 디페닐메틸아민, 디메틸아민 등의 2급 아민 유래의 아미노기, 알릴아민 등의 불포화 알킬쇄를 갖는 아민 유래의 아미노기, 트리메틸아민, 트리에틸아민, 디메틸에틸아민, 페닐디메틸아민, 디메틸헥실아민 등의 3급 아민 유래의 아미노기, 1-(3-아미노프로필)이미다졸, 피리딘-2-아민, 3-술포아닐린 등의 방향환을 갖는 아민 유래의 아미노기 또는 트리스(2-아미노에틸)아민, 에틸렌디아민, 디에틸렌트리아민, 트리에틸렌테트라민, 테트라에틸렌펜타민, 디프로필렌트리아민, 폴리에틸렌이민, N-메틸-2,2'-디아미노디에틸아민, N-아세틸에틸렌디아민, 1,2-비스(2-아미노에톡시에탄) 등의 알킬쇄, 방향족 화합물, 복소환식 화합물이나 단소환식 화합물 등으로 아미노기를 2개 이상 결합시킨 화합물(이하, 「폴리아민」)유래의 아미노기를 들 수 있지만, 폴리아민 유래의 아미노기인 것이 바람직하고, 특히 에틸렌디아민, 디에틸렌트리아민, 트리에틸렌테트라민 또는 테트라에틸렌펜타민 유래의 아미노기인 것이 바람직하고, 테트라에틸렌펜타민 유래의 아미노기가 보다 바람직하다. 또한, 아미노기는 1급 아민 또는 2급 아민 유래의 아미노기인 것이 보다 바람직하다.

술폰산기를 포함하는 화합물로서는 적어도 하나의 술폰산기를 갖는 화합물이면 어떤 것이어도 좋고, 예를 들면, 술폰산, 메탄술폰산 등의 지방족 술폰산 유래의 술폰산기, 벤젠술폰산, p-페놀술폰산, 4-메틸벤젠술폰산 등의 방향족 술폰산 유래의 술폰산기 또는 플루오로술폰산, 클로로술폰산 등의 할로술폰산 유래의 술폰산기를 들 수 있다.

카르복실기를 포함하는 화합물로서는 적어도 하나의 카르복실기를 갖는 화합물이면 어떤 것이어도 좋고, 예를 들면, 아세트산, 프로피온산 등의 지방족 카르복실기 유래의 카르복실기, 벤젠카르복실기 등의 방향족 카르복실기 유래의 카르복실기를 들 수 있다.

수불용성 담체와 하전을 갖는 관능기를 포함하는 화합물은 직접 결합해도 좋고, 수불용성 담체와 하전을 갖는 관능기를 포함하는 화합물 사이에 반응성 관능기유래의 스페이서를 통해도 좋다(상기 결합에 관여하는 스페이서를 스페이서 2라고도 칭함). 상기 스페이서 2로서는 요소 결합, 아미드 결합, 에테르 결합, 에스테르 결합, 우레탄 결합 등의 전기적으로 중성의 화학 결합을 갖고 있는 것이면 좋고, 아미드 결합 또는 요소 결합을 갖고 있는 것이 바람직하다.

상기 수불용성 담체와 상기 하전을 갖는 관능기를 포함하는 화합물의 결합을 매개하는 반응성 관능기로서는 예를 들면, 할로메틸기, 할로아세틸기, 할로아세트아미드메틸기 또는 할로겐화 알킬기 등의 활성 할로겐기, 에폭사이드기, 카르복실기, 이소시안산기, 티오이소시안산기 또는 산 무수물기를 들 수 있지만, 적당한 반응성을 갖는 관점으로부터 활성 할로겐기가 바람직하고, 할로아세트아미드메틸기가 보다 바람직하다. 반응성 관능기를 도입한 고분자 재료의 구체적인 예로서는 클로로아세트아미드메틸기를 부가한 폴리스티렌, 클로로아세트아미드메틸기를 부가한 폴리술폰을 들 수 있다.

반응성 관능기는 미리 수불용성 담체와 적당한 시약을 반응시킴으로써 수불용성 담체에 결합시킬 수 있다. 예를 들면, 수불용성 담체가 폴리스티렌이며, 반응성 관능기가 클로로아세트아미드메틸기인 경우는 폴리스티렌과 N-메틸올-α-클로로아세트아미드를 반응시킴으로써 클로로아세트아미드메틸기가 결합한 폴리스티렌을 얻을 수 있다. 클로로아세트아미드메틸기가 결합한 폴리스티렌에 대하여 예를 들면, 아미노기를 갖는 테트라에틸렌펜타민을 반응시킴으로써 테트라에틸렌펜타민이 아세트아미드메틸기를 통해 결합한 폴리스티렌이 얻어진다. 이 경우, 아세트아미드메틸기는 스페이서 2에 상당하고, 테트라에틸렌펜타민은 하전을 갖는 관능기를 포함하는 화합물에 상당한다. 수불용성 담체의 재질, 스페이서(스페이서 1 및 스페이서 2), 하전을 갖는 관능기를 포함하는 화합물은 임의로 조합할 수 있다. 표면에 하전을 갖는 관능기를 갖는 화합물이 결합한 수불용성 담체의 예로서는 에틸렌디아민, 디에틸렌트리아민, 트리에틸렌테트라민 또는 테트라에틸렌펜타민 유래의 아미노기를 포함하는 화합물이 아세트아미드메틸기를 통해 결합한 폴리스티렌이나 에틸렌디아민, 디에틸렌트리아민, 트리에틸렌테트라민 또는 테트라에틸렌펜타민 유래의 아미노기를 포함하는 화합물이 아세트아미드메틸기를 통해 결합한 폴리술폰이나 에틸렌디아민, 디에틸렌트리아민, 트리에틸렌테트라민 또는 테트라에틸렌펜타민 유래의 아미노기를 포함하는 화합물이 아세트아미드메틸기를 통해 결합한 폴리에테르술폰을 들 수 있다. 또한, 활성화 백혈구-활성화 혈소판 복합체의 제거 재료의 제조에 사용하는 출발 물질과 시약은 일반적으로 구입할 수 있거나 또는 공지의 방법으로 제조할 수 있다.

하전을 갖는 관능기를 포함하는 화합물은 혈액 중의 제거 대상 물질과 상호작용할 필요가 있기 때문에 수불용성 담체의 표면 중 적어도 혈액과 접촉하는 측에 결합하고 있을 필요가 있다. 해도 섬유의 경우는 적어도 혈액과 접촉하는 해 성분의 표면에 하전을 갖는 관능기를 포함하는 화합물이 결합하고 있을 필요가 있다. 여기서 표면이란 수불용성 담체의 표면을 의미하고, 수불용성 담체의 표면이 요철을 갖는 형상인 경우는 수불용성 담체의 표면에 추가하여 돌출을 따른 최외층 부분도 표면에 포함된다. 또한, 수불용성 담체의 내부에 관통공을 갖는 경우는 상기 수불용성 담체의 최외층 부분뿐만 아니라 상기 수불용성 담체의 내부의 관통공의 외층도 표면에 포함된다.

「전개 길이비(Rlr)」란 전개 길이(Rlo(㎛))와 기준 길이(l(㎛))의 비를 나타낸 것이다. 구체적으로는 선 거칠기 해석 기능(예: 형상 해석 어플리케이션 VK-H1A1/VK-H2A1, KEYENCE CORPORATION제)을 사용하고, 레이저 현미경(예: 초심도 컬러 3D 형상 측정 현미경 VK-9710, KEYENCE CORPORATION제)을 사용하여 측정 대상이 되는 재료의 표면의 화상을 캡처하고, 얻어진 상기 화상으로부터 전개 길이(Rlo)를 산출하고, 그 전개 길이(Rlo)와 윤곽 곡선으로부터 그 평균선의 방향으로 그은 기준 길이(l)의 비가 산출된다. 전개 길이(Rlo)는 도 1에 나타내는 바와 같이 윤곽 곡선으로부터 그 평균선의 방향으로 기준 길이(l)만큼 빼내고, 이 빼낸 부분의 진정한 길이를 나타낸 값이다. 따라서, 전개 길이(Rlo)는 재료 표면의 윤곽 곡선의 요철을 연장시켜서 1개의 직선으로 했을 때의 길이를 나타낸 것이다. 또한, 전개 길이비는 하기 식 1로부터 산출된다. 여기서, Rlo는 전개 길이이며, Rlr은 전개 길이비이며, l은 기준 길이이다. 이 조작을 임의의 9 시야에서 행하고, 평균값을 산출하여 전개 길이비로 한다.

상세한 메커니즘에 대해서는 불분명하지만, 활성화 백혈구-활성화 혈소판 복합체를 제거하는 경우, 수불용성 담체의 표면의 전개 길이비가 지나치게 작으면 제거에 활용할 수 있는 면적이 작아지기 때문에 4 이상일 필요가 있다. 한편, 수불용성 담체의 표면의 전개 길이비가 지나치게 길면 표면적은 커지지만 표면은 접힌 구조가 되기 때문에 세포가 들어갈 수 없게 되고, 실제로 세포를 접착할 수 있는 면적이 작아져버리기 때문에 7 이하일 필요가 있다. 즉, 수불용성 담체의 표면의 전개 길이비는 4~7일 필요가 있다. 수불용성 담체의 표면의 전개 길이비는 바람직하게는 4.2~6.5이며, 보다 바람직하게는 4.2~6이다. 어느 바람직한 하한값도 어느 바람직한 상한값과 조합할 수 있다.

「중심선 평균 거칠기(Ra(㎛))」란 JIS B 0601:2001에 규격되어 있는 표면의 평활성을 정량화하는 지표이며, 재료의 혈액 성분 접촉면의 요철 상태의 것을 가리킨다. 구체적으로는 선 거칠기 해석 기능(예: 형상 해석 어플리케이션 VK-H1A1/VK-H2A1, KEYENCE CORPORATION제)을 사용하고, 레이저 현미경(예: 초심도 컬러 3D 형상 측정 현미경 VK-9710, KEYENCE CORPORATION제)을 사용하여 측정 대상이 되는 재료의 표면의 화상을 캡처하여 얻어진 상기 화상으로부터 산출할 수 있다. 도 2에 나타내는 바와 같이 윤곽 곡선으로부터 그 평균선의 방향으로 기준 길이(l)(㎛)만큼 빼내고, 이 빼낸 부분의 평균선으로부터 측정 곡선까지의 편차의 절대값(㎛)을 합계하고, 평균한 값이 중심선 평균 거칠기이며, 그 산출 방법은 하기 식 2와 같다. 여기서, Ra는 중심선 평균 거칠기이며, f(x)는 레이저 현미경 화상에 있어서의 임의의 위치 x에 있어서의 표면 요철 형상을 나타내는 함수이다.

상기 수불용성 담체의 표면의 중심선 평균 거칠기는 2~10㎛인 것이 바람직하고, 2.1~7㎛가 보다 바람직하고, 2.2~6㎛가 보다 바람직하고, 2.2~3.5㎛가 더욱 바람직하다. 어느 바람직한 하한값도 어느 바람직한 상한값과 조합할 수 있다.

「제곱 평균 평방근 경사각(°)」이란 재료의 기준 길이(l)에 있어서의 피크(peak)의 경사 각도를 나타낸 것이다. 구체적으로는 선 거칠기 해석 기능(예: 형상해석 어플리케이션 VK-H1A1/VK-H2A1, KEYENCE CORPORATION제)을 사용하고, 레이저 현미경(예: 초심도 컬러 3D 형상 측정 현미경 VK-9710, KEYENCE CORPORATION제) 을 사용하여 측정 대상이 되는 재료의 표면의 화상을 캡처하여 얻어진 상기 화상으로부터 도 3에 나타내는 바와 같이 윤곽 곡선을 일정 간격(Δx)으로 가로방향으로 구획하고, 각 구간에 있어서의 윤곽 곡선의 종시점을 연결하는 선분의 경사(각도)의 제곱 평균을 구하고, 그 값의 평방근을 나타낸 것이다. 본 해석에서는 이웃하는 2점 간을 연결하는 선과 평행선으로 가능한 각도를 전체 구간에 걸쳐 제곱 평균한 값을 구한다. 제곱 평균 평방근 경사각은 하기 식 3으로부터 산출된다.

활성화 백혈구-활성화 혈소판 복합체를 제거하는 경우, 수불용성 담체의 표면의 제곱 평균 평방근 경사각이 지나치게 작으면 재료와 세포의 접착성이 낮아지기 때문에 50°이상일 필요가 있다. 또한, 수불용성 담체의 표면의 제곱 평균 평방근 경사각이 지나치게 크면 세포가 재료를 인식하는 빈도는 높아지지만, 국부가 급경사가 되는 구조를 취하기 때문에 세포의 재료에의 접착성이 약해져버리기 때문에 85°이하일 필요가 있다. 즉, 수불용성 담체의 표면의 제곱 평균 평방근 경사각은 50~85°일 필요가 있다. 보다 바람직하게는 65~75°이다. 어느 바람직한 하한값도 어느 바람직한 상한값과 조합할 수 있다. 상기 전개 길이비, 상기 중심선 평균 거칠기 및 상기 제곱 평균 평방근 경사각의 바람직한 범위는 임의로 조합할 수 있다. 예를 들면, 수불용성 담체의 표면의 전개 길이비가 4~7이며, 수불용성 담체의 표면의 중심선 평균 거칠기가 2.1~7㎛이다.

윤곽 곡선이란 도 4에 나타내는 바와 같이 레이저 현미경을 사용하여 측정 대상이 되는 재료의 표면의 화상을 캡처했을 때의 재료 표면의 윤곽을 모방한 곡선의 것이며, 본원에서는 측정 단면 곡선을 나타낸다. 측정 단면 곡선에 컷오프값 λs의 위상 보상형 저역 필터를 적용한 단면 곡선, 위상 보상형 고역 필터(컷오프값 λc)를 통해서 단면 곡선의 높은 주파수 성분만을 기록한 거칠기 곡선, 단면 곡선에 컷오프값 λf와 λc의 위상 보상형 필터를 적용한 파형 곡선과는 상이한 곡선이다.

평균선이란 JIS B 0601:1994에서 규정되어 있는 바와 같이 윤곽 곡선을 최소 제곱법에 의해 직선으로 치환한 선을 가리킨다. 피크(peak)란 평균선보다 위에 있는 부분을 가리키고, 도 4에 있어서 세로줄로 나타내어진 부분이 된다. 밸리(valley)란 평균선보다 아래에 있는 부분을 가리키고, 도 4에 있어서 격자무늬로 나타내어진 부분이 된다. 기준 길이란 윤곽 곡선으로부터 일정 길이를 빼낸 부분으로부터 구하고, 이 빼낸 길이를 가리킨다.

상기 전개 길이비, 상기 중심선 평균 거칠기 및 상기 제곱 평균 평방근 경사각의 계측값은 모두 레이저 현미경의 화상 캡처 조건에 의해 변동될 가능성이 있기 때문에 화상의 캡처 조건은 하기와 같이 한다. 재료는 슬라이드 글라스 상에 증류수를 습윤시킨 상태에서 혈액에 접하는 표면이 관찰될 수 있도록 두고, 그 위로부터 커버 글라스(두께: 0.12~0.17mm)로 끼워 넣는다. 그 때, 상기 재료의 두께는 50㎛ 이하가 되도록 상기 커버 글라스와 상기 슬라이드 글라스 사이에 세팅한다. 예를 들면, 상기 재료가 섬유, 비즈 또는 중공사의 경우에 있어서 섬유의 직경, 비즈의 직경 또는 중공사의 외경이 50㎛ 이상인 재료의 경우는 혈액이 접하는 표면이 관찰될 수 있도록 50㎛ 이하로 슬라이스한다. 특히 중공사의 경우는 혈액이 접촉하는 표면이 관찰될 수 있도록 슬라이스한다. 또한, 재료는 커버 글라스와 슬라이드 글라스가 평행해지도록 끼워 넣고, 그 간극에는 물이 균등하게 충전되도록 커버 글라스로부터 밀려 나온 여분의 증류수를 제거한다. 화상은 커버 글라스 상의 화상을 캡처한다. 대물 렌즈의 배율은 20배로 하고, 광학 줌은 1배로 하고, 감광 필터는 사용하지 않는다. 또한, 전개 길이비, 중심선 평균 거칠기 및 제곱 평균 평방근 경사각은 해석 조건에 따라서도 변동될 가능성이 있기 때문에 해석 조건은 이하와 같이 한다. 해석에는 선 거칠기 해석을 사용하고, 기준 길이(l)는 50㎛로 하고, 파형 보정, 필터의 컷오프값의 설정을 일절 실시하지 않고 화상 해석을 실시한다. 1개의 재료에 대해 랜덤하게 3개소의 화상을 캡처하고, 캡처한 1개의 화상에 대해 3 시야를 화상 해석함으로써 합계 9 시야의 화상 해석을 행하고, 각 시야의 표면 거칠기를 각각 산출하여 그들의 평균값을 상기 재료의 표면 거칠기로서 채용한다. 화상 해석 시의 기준 길이의 선택은 섬유, 중공사의 경우, 섬유의 길이방향에 평행하고 또한 표면의 높이가 고른 부분으로 한다.

재료 표면의 형상(전개 길이비, 중심선 평균 거칠기 및 제곱 평균 평방근 경사각)은 수불용성 담체의 제조 조건, 예를 들면, 클로로아세트아미드메틸화 편지의 제작 시의 파라포름알데히드 농도나 반응 시간으로 조정하는 것이 가능해진다. 클로로아세트아미드메틸기를 수불용성 담체에 도입할 때에 재료 표면의 용해가 진행됨에 따라 전개 길이비는 길어지고, 중심선 평균 거칠기는 높아지고, 제곱 평균 평방근 경사각은 높아지는 경향이 있다. 그 때에 첨가하는 파라포름알데히드 농도가 높아짐에 따라 수불용성 담체의 가교가 촉진되고, 담체 표면의 용해를 저해하기 때문에 전개 길이비는 짧고, 중심선 평균 거칠기는 낮고, 제곱 평균 평방근 경사각은 작아지는 경향이 있다. 또한, 첨가하는 파라포름알데히드 농도가 일정하며 가교의 정도가 일정한 경우, 클로로아세트아미드메틸기를 수불용성 담체에 도입할 때의 반응 시간이 길어짐에 따라 담체 표면의 용해를 촉진하기 때문에 전개 길이비는 길고, 중심선 평균 거칠기는 높고, 제곱 평균 평방근 경사각은 높아지는 경향이 있다. 예를 들면, 특허문헌 2에 기재된 수불용성 담체는 클로로아세트아미드메틸화 편지의 제작 시의 파라포름알데히드 농도가 0.2wt%이기 때문에 후술의 실시예 7보다 파라포름알데히드 농도가 낮기 때문에 전개 길이비나 중심선 평균 거칠기는 실시예 7보다 크다고 생각된다.

재료 표면의 형상(전개 길이비, 중심선 평균 거칠기 및 제곱 평균 평방근 경사각)은 추가로 테트라에틸렌펜타민-파라클로로페닐화 편지의 제작 시의 테트라에틸렌펜타민의 농도나 반응 시간으로 조정하는 것이 가능해진다. 테트라에틸렌펜타민을 수불용성 담체에 도입할 때에 첨가하는 테트라에틸렌펜타민의 농도가 높아짐에 따라 재료 표면의 팽윤이 진행되고, 전개 길이비는 짧아지고, 중심선 평균 거칠기는 높아지고, 제곱 평균 평방근 경사각은 높아지는 경향이 있다. 또한, 테트라에틸렌펜타민을 수불용성 담체에 도입할 때의 반응 시간이 길어짐에 따라 담체 표면의 팽윤을 촉진하기 때문에 전개 길이비는 짧아지고, 중심선 평균 거칠기는 높아지고, 제곱 평균 평방근 경사각은 높아지는 경향이 있다.

하전을 갖는 관능기의 하전량은 염산 또는 수산화나트륨 수용액을 사용한 산 염기 적정법에 의해 측정할 수 있다.

「혈액」이란 단백질, 지질 및 혈구 성분 등을 포함하는 액체의 것이다. 구체적으로는 버퍼 중에 단백질, 지질 및 혈구 성분 등을 첨가한 것, 체액, 혈액, 혈장 또는 혈청 등을 들 수 있다. 혈액 성분이란 혈액을 구성하는 성분의 것을 말하고, 예를 들면, 적혈구, 백혈구 또는 혈소판 등의 혈구 성분 또는 사이토카인 등의 액성 인자를 들 수 있다. 그 중에서도 염증성 질환의 치료를 목적으로 하는 경우에는 백혈구(특히, 활성화 백혈구) 또는 사이토카인(특히, 인터류킨-6, 인터류킨-8, 하이모빌리트 그룹 단백-1 등의 염증성 사이토카인)이 제거되는 것이 바람직하다.

「백혈구」란 혈액 중에 포함되는 면역 세포 성분이며, 구체적으로는 과립구, 단구, 림프구 등을 들 수 있고, 그들이 활성화한 것인 활성화 과립구, 활성화 단구, 활성화 림프구도 들 수 있다.

「사이토카인」이란 특정 세포에 정보를 전달하는 세포로부터 분비되는 단백질을 말하고, 예를 들면, 인터류킨, 종양 괴사 인자-α, 트랜스포밍 증식 인자-β(이하, TGF-β), 인터페론-γ(이하, INF-γ), 하이모빌리티 그룹 단백-1(이하, HMGB-1), 혈관 신생 증식 인자 및 또는 면역 억제 산성 단백을 들 수 있고, 그 중에서도 염증에 관여하고 있는 사이토카인은 염증성 사이토카인이라고 불리고 있으며, 염증성 질환의 치료를 목적으로 하는 경우에는 이들 염증성 사이토카인인 인터류킨 및/또는 HMGB-1이 제거되는 것이 바람직하다.

「인터류킨」이란 백혈구가 분비되고, 면역계의 조절에 기능하는 사이토카인의 것을 말하고, 예를 들면, 인터류킨-1(이하, IL-1), 인터류킨-6(이하, IL-6), 인터류킨-8(이하, IL-8), 인터류킨-10(이하, IL-10), 인터류킨-17(이하, IL-17)을 들 수 있고, 염증성 질환의 치료를 목적으로 하는 경우에는 IL-6 및/또는 IL-8이 제거되는 것이 바람직하다.

「활성화 백혈구」란 사이토카인이나 내독소인 lipopolysaccharide(LPS) 등에 의해 염증성 사이토카인 또는 활성 산소 등을 방출하는 백혈구를 의미하고, 예를 들면, 활성화 과립구나 활성화 단구를 들 수 있다. 활성화의 정도는 활성화 백혈구가 방출하는 활성화 산소량의 측정 또는 표면 항원의 발현을 플로우 사이토메트리 등으로 측정함으로써 판별할 수 있다.

「활성화 혈소판」이란 사이토카인이나 내독소인 lipopolysaccharide(LPS) 등에 의해 염증성 사이토카인 또는 활성 산소 등을 방출하는 혈소판을 의미한다.

「활성화 백혈구-활성화 혈소판 복합체」란 활성화 백혈구와 활성화 혈소판이 결합한 복합체이면 특별히 한정되지 않지만, 예를 들면, 활성화 과립구-활성화 혈소판 복합체나 활성화 단구-활성화 혈소판 복합체를 들 수 있다. 염증성 질환 환자, 특히 호흡기 질환 환자에게 있어서는 자기 조직에의 탐식 및 염증성 사이토카인을 방출해서 병태에 직접 관여하고 있다고 생각되는 활성화 백혈구-활성화 혈소판 복합체를 제거하는 것이 그 치료에 필요하다고 생각된다.

「염증성 질환」은 의료 분야에서 진단될 수 있는 염증성 질환이면 좋고, 특별히 한정되지 않는다. 구체적으로는 급성 폐장해(acute lung injury; ALI), 급성 호흡 궁박 증후군(acute respiratory distress syndrome; ARDS, 급성 호흡 촉박 증후군, 급성 호흡 촉진 증후군이라고도 표기됨), 폐렴, 급성 호흡 부전, 전신 염증성 증후군, 패혈증, 패혈증성 쇼크, 독성 쇼크 증후군, 다발성 장기 부전, 만성 폐색성 폐질환, 악액질, 감염증, 기생충병, 만성 관절 류머티즘, 변형성 관절증, 약년성 만성 관절염, 라임 관절염, 건선성 관절염, 재활성화 관절염, 척추 관절증, 전신성 에리테마토데스, 클론병, 궤양성 대장염, 염증성 장질환, 인슐린 의존성 당뇨병, 갑상선염, 천식, 알레르기 질환, 건선, 강피성 피부염, 대숙주성 이식편병, 장기 이식 거절 반응, 장기 이식에 따르는 급성 또는 만성 면역 질환, 사르코이드시스, 아테로마 경화증, 범발성 혈관 내 응고 증후군, 가와사키병, 그레이브스병, 네프로제 증후군, 만성 피로 증후군, 베게너 육아종증, 헤노흐-쇤라인 자반병, 신장의 현미경적 혈관염, 만성 활동성 간염, 포도막염, 후천성 면역 부전 증후군, 급성 횡단성 척수염, 헌팅톤 무답병, 파킨슨병, 알츠하이머병, 발작, 원발성 담즙성 간경변, 용혈성 빈혈, 악성 질환, 심부전, 심근경색, 애디슨병, 산발성 질환, I형 다분비선 기능 저하 및 II형 다분비선 기능 저하, 슈미트 증후군, 탈모증, 원형 탈모증, 혈청 음성 관절증, 관절증, 라이터병, 건선성 관절증, 궤양성 구관절증, 장성 활막염, 클라미디아, 예르시니아 및 살모넬라에 관련되는 관절증, 척추 관절증, 아테로마성 질환/동맥 경화증, 아토피, 자기 면역성 수포성 질환, 심상성 천포창, 낙엽상 천포창, 유천포창, IgA 질환, 자기 면역성 용혈성 빈혈, 쿤 양성 용혈성 빈혈, 후천성 악성 빈혈, 약년성 악성 빈혈, 근육통 뇌염/로얄프리병, 만성 점막 피부 칸디다증, 거세포성 동맥염, 급성 간염, 원발성 경화성 간염, 원인 불명의 자기 면역성 간염, 후천성 면역 부전 질환 증후군, 후천성 면역 부전에 관련되는 질병, C형 간염, 분류 불능형 면역 부전(분류 불능형 저감마글로불린혈증), 확장형 심근증, 여성의 불임증, 난소 부전, 조발성 난소 부전, 특발성 폐섬유증, 섬유성 폐질환, 원인 불명의 섬유화 폐포염, 포스트염증성 간질성 폐질환, 간극성 폐렴, 결합 조직병에 따르는 간질성 폐질환, 혼합 결합 조직병에 따르는 폐질환, 전신성 경화증에 따르는 간질성 폐질환, 만성 관절 류머티즘에 따르는 간질성 폐질환, 전신성 에리테마토데스에 따르는 폐질환, 피부근염/다발성 근염에 따르는 폐질환, 쇼그렌병에 따르는 폐질환, 강직성 척추염에 따르는 폐질환, 맥관성 미만성 폐질환, 헤모시데린 침착증에 따르는 폐질환, 약물 유발성의 간질성 폐질환, 방사선 섬유증, 폐색성 세기관지염, 만성 호산구성 폐렴, 림프구 침윤성 폐질환, 감염 후 간질성 폐질환, 통풍성 관절염, 자기 면역성 간염, 1형 자기 면역성 간염(고전적인 자기 면역성 또는 루포이드 간염), 2형 자기 면역성 간염(항LKM 항체 간염), 자기 면역 매개형 저혈당증, 흑색 표피증을 따르는 B형 인슐린 저항성, 상피 소체 저하증, 장기 이식에 따르는 급성 면역 질환, 장기 이식에 따르는 만성 면역 질환, 변형성 관절증, 원발성 경화성 담관염, 1형 건선, 2형 건선, 특발성 백혈구 감소증, 자기 면역성 호중구 감소증, 신장 질환 NOS, 사구체신염, 신장의 현미경적 맥관염, 라임병, 디스코이드 에리테마토데스, 특발성 또는 NOS의 남성 불임증, 정자 자기 면역, 다발성 경화증(모든 서브타입), 교감성 안염, 결합 조직 질환의 2차적인 폐고혈증, 굿파스쳐 증후군, 결절성 다발성 동맥염의 폐발현, 급성 류머티스열, 류머티스양 척추염, 스틸병, 전신성 경화증, 쇼그렌 증후군, 타카야스병/동맥염, 자기 면역성 혈소판 감소증, 특발성 혈소판 감소증, 자기 면역성 갑상 질환, 갑상선 기능 항진, 갑상선종 자기 면역성 갑상선 기능 항진(하시모토병), 위축성 자기 면역성 갑상선기능 저하증, 원발성 점액수종, 수정체 기인성 포도막염, 원발성 맥관염 또는 백반 등이 있다.

「호흡기 질환」이란 의료 분야에서 진단될 수 있는 호흡기 질환이면 좋고, 특별히 한정되지 않는다. 구체적으로는 급성 폐장해(acute lung injury; ALI), 급성 호흡 궁박 증후군(acute respiratory distress syndrome; ARDS, 급성 호흡 촉박 증후군, 급성 호흡 촉진 증후군이라고도 표기됨), 폐렴, 급성 호흡 부전, 만성 폐색성 폐질환, 특발성 폐섬유증, 섬유성 폐질환, 원인 불명의 섬유화 폐포염, 포스트 염증성 간질성 폐질환, 간질성 폐렴, 결합 조직병에 따르는 간질성 폐질환, 혼합 결합 조직병에 따르는 폐질환, 전신성 경화증에 따르는 간질성 폐질환, 만성 관절 류머티즘에 따르는 간질성 폐질환, 전신성 에리테마토데스에 따르는 폐질환, 피부근염/다발성 근염에 따르는 폐질환, 쇼그렌병에 따르는 폐질환, 강직성 척추염에 따르는 폐질환, 맥관성 미만성 폐질환, 헤모시데린 침착증에 따르는 폐질환, 약물 유발성의 간질성 폐질환, 방사선 섬유증, 폐색성 세기관지염, 만성 호산구성 폐렴, 림프구 침윤성 폐질환, 감염후 간질성 폐질환 등이 있다. 상기 활성화 백혈구-활성화 혈소판 복합체의 제거 재료는 호흡기 질환 중에서도 급성 폐장해(acute lung injury; ALI), 급성 호흡 궁박 증후군(acute respiratory distress syndrome; ARDS, 급성 호흡 촉박 증후군, 급성 호흡 촉진 증후군이라고도 표기됨)의 치료에 사용하는 것이 바람직하다.

활성화 백혈구-활성화 혈소판 복합체의 농도의 측정은 예를 들면, 말초혈 유래의 백혈구 분획에 활성화 혈소판과 특이적으로 결합하는 활성화 검출 시약(활성화 혈소판 결합 시약)과, 활성화 백혈구와 특이적으로 결합하는 활성화 검출 시약(활성화 백혈구 검출 시약/활성화 과립구 검출 시약/활성화 단구 검출 시약)을 반응시키고, 양쪽의 시약과 결합한 혈구 분획을 측정함으로써 행해진다.

활성화 혈소판 검출 시약은 비활성화 백혈구 및 활성화 백혈구와 결합하지 않고, 활성화 혈소판과 결합성을 갖는 것이며, 활성화 혈소판 특이적인 세포 표면 마커로서 알려져 있는 CD62P(Anti-human CD62P(P-Selectin) Antibody Data Sheet, BioLegend.)를 사용함으로써 검출된다. 또한, 활성화 백혈구 검출 시약은 비활성화 혈소판 및 활성화 혈소판과 결합하지 않고, 활성화 백혈구와 결합성을 갖는 것이며, 소망의 백혈구 성분에 특이적인 또는 공통인 세포 표면 마커의 항체를 들 수 있고, 활성화 과립구 및 활성화 단구의 검출 시약으로서는 예를 들면, 항CD11b 항체를 사용할 수 있다. 그 중에서도 활성화한 컨포메이션을 특이적으로 검출할 수 있는 activated 항CD11b 항체를 사용함으로써 활성화 과립구 및 활성화 단구를 특이적으로 검출하는 것이 가능해진다(Anti-human CD11b(activated) Antibody Data Sheet, BioLegend.). 또한, 백혈구의 검출에는 항CD45 항체를 사용하고, 과립구의 검출에는 CD45 양성 세포 중의 항CD66b 항체를 사용하고, 단구의 검출에는 CD45 양성 세포 중의 항CD14 항체를 사용할 수 있다. 림프구의 검출에는 항CD4 항체나 항CD8 항체를 사용할 수도 있지만, CD45 양성 세포로부터 CD66b 양성 세포와 CD14 양성 세포를 뺀 세포 집단을 림프구로 하는 것도 가능하다.

상기 검출 시약에는 결합의 확인을 위한 지표가 부착되어 있는 것이 바람직하다. 상기 지표는 채용하는 검출 방법에 따라 임의로 선택된다. 조작의 간편함이나 정량성으로부터 플로우 사이토미터에 의한 측정을 사용하지만, 이 경우에 검출 시약은 형광 표지된다. 형광 표지도 특별히 한정은 없고, 예를 들면, FITC(fluorescein isothiocyanate)나 PE(R-phycoerythrin)에 의한 표지를 채용할 수 있다. 활성화 백혈구 검출 시약과 활성화 혈소판 검출 시약은 상이한 형광 물질로 표지된다. 이들의 표지된 검출 시약은 상법에 따라 제조할 수 있지만, 시판품으로서도 입수할 수 있다.

백혈구 분획과 상기 검출 시약의 반응은 채용하는 검출 시약에 따라 적당히 설정된다. 상기 검출 시약이 항체인 경우는 통상의 면역 반응에 따르면 좋다. 활성화 백혈구-활성화 혈소판 복합체와 검출 시약 반응액은 특별히 한정되지 않지만, 소망에 의해 검출 반응 중의 세포 성분의 활성화를 억제하는 데 유효량의 아지드화 나트륨이나 포름알데히드를 포함시켜도 좋다. 또한, 반응 온도는 특별히 한정되지 않지만, 세포 성분의 활성화를 억제함에 있어서 4℃ 정도로 행하는 것이 바람직하다.

또한, 호흡기 질환 등의 염증성 질환에 있어서는 활성화 백혈구-활성화 혈소판 복합체의 제거에 추가하여 급성 및 만성 염증에 관여하고 있는 활성화 백혈구나 염증성 사이토카인, 특히 활성화 백혈구, IL-6, IL-8 또는 HMGB-1을 제거하는 것이 바람직하다. 염증성 사이토카인은 일반적으로 분자량 수천~수만 정도의 단백질이며, 상기 염증성 사이토카인에는 소수성 부분과 대전성 부분이 존재하고 있다. 따라서, 염증성 사이토카인 제거에는 소수성 상호작용 또는 정전 상호작용에 의해 제거하는 것이 유효하다고 생각되기 때문에 소수성 관능기 또는 하전을 갖는 관능기 중 어느 쪽 또는 양자가 수불용성 담체의 표면에 존재하는 것이 바람직하다. 구체적으로는 소수성 관능기로서는 메틸기 또는 에틸기 등의 알킬기 또는 페닐기 등의 아릴기, 하전을 갖는 관능기로서는 아미노기, 술폰산기 또는 카르복실기 등이 바람직하지만, 이들에 한정되는 일은 없다.

활성화 과립구, 활성화 단구, 활성화 과립구-활성화 혈소판 복합체 및 활성화 단구-활성화 혈소판 복합체의 제거율의 산출 방법으로서는 예를 들면, 입구 및 출구를 갖는 컬럼(용기) 내에 제거 재료를 충전하고, 활성화 과립구, 활성화 단구, 활성화 과립구-활성화 혈소판 복합체 및 활성화 단구-활성화 혈소판 복합체를 포함하는 액체를 통액시켜서 입구 및 출구에서의 그들의 농도의 변화로부터 그들의 제거율을 각각 산출하는 방법을 들 수 있다. 여기서 말하는 활성화 백혈구-활성화 혈소판 복합체의 제거 재료란 입구 및 출구의 농도 변화로부터 산출되는 제거율이 플러스가 되는 것을 말한다. 또한, 다른 방법으로서 평가계의 컨트롤로서 제거 재료를 내부에 충전하지 않은 컬럼(공(空)컬럼)으로부터 얻어지는 제거율을 1이라고 했을 때의 비율을 산출하고, 비율이 1보다 큰 값(비율>1)을 나타낸 재료를 말한다.

사이토카인의 제거율의 산출 방법으로서는 예를 들면, 사이토카인을 포함하는 액체에 일정 시간 제거 재료를 추가해서 제거 재료를 추가하기 전후에서의 농도 변화로부터 그 제거율을 산출하는 방법을 들 수 있다. 본원에서 나타내는 사이토카인 제거 재료란 상기 제거율이 10% 이상인 재료를 말한다.

폐기능(P/F값) 저하 억제의 평가 방법으로서는 예를 들면, 염산(HCl) 및 LPS를 기관 내 투여함으로써 제작되는 ARDS 발증 동물 모델(참고 문헌: The Japan Geriatrics Society 잡지, 1993년, 제30권, 1032-1038)에 대하여 제거 재료를 내부에 충전한 입구 및 출구를 갖는 컬럼(용기)에 혈액을 통액시켜서 체외 순환시킴으로써 순환 전과 순환 후의 폐기능(P/F값)으로부터 억제 효과를 평가하는 방법을 들 수 있다.

또한, 본 발명은 상기 활성화 백혈구-활성화 혈소판 복합체의 제거 재료를 구비하는 혈액 정화 컬럼을 제공한다.

활성화 백혈구-활성화 혈소판 복합체의 제거 재료를 충전하는 컬럼의 용기 형상으로서는 혈액 도입구 및 혈액 배출구를 갖는 용기이며, 상기 용기 내에 활성화 백혈구-활성화 혈소판 복합체의 제거 재료를 충전할 수 있는 형상이면 좋다. 하나의 실시형태로서는 활성화 백혈구-활성화 혈소판 복합체의 제거 재료를 측면에 구멍을 갖는 파이프에 둘러 감아 원통 형상으로 한 것(이하, 원통)을 내부에 충전할 수 있는 용기이며, 혈액이 원통의 외주로부터 들어가 원통의 내측으로 흐른 후에 파이프를 경유해서 상기 혈액이 용기 밖으로 나오는 용기 또는 혈액이 파이프를 경유해서 원통의 내측으로부터 들어가 원통의 외측으로 흐른 후에 상기 혈액이 용기 밖으로 나오는 용기를 들 수 있다. 제조 효율이나 처리액의 쇼트 패스 억제의 관점으로부터는 측면에 구멍을 갖는 파이프에 대하여 활성화 백혈구-활성화 혈소판 복합체의 제거 재료가 둘러 감겨 있는 구조가 바람직하고, 구체적으로는 공급된 혈액을 유출하기 위해서 형성된 구멍을 길이방향의 측면에 구비하는 중심 파이프와, 상기 중심 파이프의 주위에 충전되어 상기 혈액에 포함되는 활성화 백혈구-활성화 혈소판 복합체를 제거시키는 활성화 백혈구-활성화 혈소판 복합체의 제거 재료와, 유입되어 온 상기 혈액이 상기 중심 파이프의 내측을 통과하도록 상기 중심 파이프의 상류단에 연통되어 상기 액체가 상기 중심 파이프를 통과하지 않고 상기 제거 담체와 접촉하는 것을 방지하도록 배치된 플레이트와, 상기 중심 파이프의 하류단을 봉쇄하고, 상기 제거 담체를 상기 중심 파이프 주위의 공간에 고정하도록 배치된 플레이트를 구비하는 래디얼 플로우형의 용기를 들 수 있고, 또한 용기의 형상은 원기둥 형상 또는 삼각 기둥 형상, 사각 기둥 형상, 육각 기둥 형상 또는 팔각 기둥 형상 등의 각기둥 형상을 들 수 있지만, 이 구조에 한정되는 것은 아니다. 또한, 다른 실시형태로서는 활성화 백혈구-활성화 혈소판 복합체의 제거 재료를 원형으로 잘라낸 것을 충전가능한 원통 형상의 공간을 내부에 갖는 용기이며, 혈액 도입구 및 혈액 배출구를 가진 용기가 고려된다. 구체적으로는 공급된 혈액을 유출하기 위해서 설치된 혈액 도입구를 구비하는 플레이트와, 공급된 혈액을 배출하기 위해서 설치된 혈액 배출구를 구비하는 플레이트와, 활성화 백혈구-활성화 혈소판 복합체의 제거 재료를 원형으로 잘라낸 것이 충전된 원통 형상의 공간을 내부에 갖고, 혈액 도입구 및 혈액 배출구를 가진 용기를 들 수 있다. 또한, 이 경우 활성화 백혈구-활성화 혈소판 복합체의 제거 재료의 형태는 원형에 한정되지 않고, 컬럼의 용기 형상에 맞춰 타원형, 삼각형이나 사각형 등의 다각형, 사다리꼴 등 임의의 형상으로 적당히 변경할 수 있다.

활성화 백혈구-활성화 혈소판 복합체의 제거 재료를 충전하는 컬럼(용기)의 재질로서는 예를 들면, 유리제, 플라스틱·수지제, 스테인리스제 등을 들 수 있고, 상기 컬럼의 사이즈는 사용 목적에 따라 적당히 선택되고, 특별히 한정은 없지만, 임상 현장이나 측정 장소에서의 조작성이나 폐기의 용이함을 고려하면 재질로서는 플라스틱·수지제가 바람직하고, 사이즈는 손에 쥐기 쉬운 크기가 바람직하기 때문에 전체의 컬럼의 길이방향의 길이는 1~30㎝, 외경은 2~10㎝, 내용적은 200㎤ 이하인 것이 바람직하다.

활성화 백혈구-활성화 혈소판 복합체의 제거 재료는 컬럼(용기) 내에 적층되어서 충전되어 있는 것이 바람직하다. 여기서, 적층이란 활성화 백혈구-활성화 혈소판 복합체의 제거 재료를 2매 이상 밀착시켜서 중첩시키는 것을 의미하고, 적층시켜서 충전하는 방법으로서는 예를 들면, 액시얼 플로우 컬럼과 같이 시트 형태로 가공한 활성화 백혈구-활성화 혈소판 복합체의 제거 재료를 복수매 중첩시켜 가는 방법이나, 래디얼 플로우 컬럼과 같이 측면에 구멍을 갖는 파이프에 시트 형태로 가공한 활성화 백혈구-활성화 혈소판 복합체의 제거 재료를 둘러 감아 가는 방법을 들 수 있다.

상기 혈액 정화 컬럼은 포유동물(예를 들면, 토끼, 인간, 양, 원숭이, 말, 소, 돼지, 개, 고양이)의 호흡기 질환의 치료에 사용할 수 있고, 특히 급성 폐장해(acute lung injury; ALI), 급성 호흡 궁박 증후군(acute respiratory distress syndrome; ARDS, 급성 호흡 촉박 증후군, 급성 호흡 촉진 증후군이라고도 표기됨)의 치료에 적합하게 사용할 수 있다.

또한, 상기 혈액 정화 컬럼에 호흡기 질환의 환자의 혈액을 통액시키는 것을 특징으로 하는 혈액 정화 방법을 제공한다. 바꿔 말하면, 상기 혈액 정화 컬럼을 사용한 호흡기 질환의 환자가 앓는 호흡기 질환의 치료 방법을 제공한다. 또한, 상기 혈액 정화 방법은 단독으로 제공하는 것도 가능하지만, 인공 호흡기 요법, 인공 투석 요법과 병용해서 제공을 하는 것도 가능하다.

(실시예)

이하, 실험예, 비교예에 의해 본 발명을 구체적으로 설명하지만, 본 발명은 이들에 의해 한정되는 것은 아니다. 또한, 각 편지의 제작에 사용되는 화합물에서 합성법의 기재가 없는 것에 대해서는 시판의 화합물을 사용했다. 실시예 중 wt%는 중량%를 의미하고, mM은 용액 1L 중에 포함되는 상기 성분의 밀리몰수를 의미한다(예를 들면, 용액 1L 중에 10mmol의 상기 성분을 포함시키면 10mM이 됨).

(방사)

이하의 성분을 사용하여 방사 속도 1250m/분의 제사 조건에서 1 필라멘트당 704도(島)의 해도 섬유(섬유 지름; 3dtex, 20㎛)를 36 필라멘트 묶은 섬유를 얻었다.

도 성분: 폴리프로필렌

해 성분: 폴리스티렌

복합 비율(중량 비율): 도:해=50:50

(편지의 제작)

얻어진 섬유를 사용하여 횡편에 의해 편지를 제작했다. 통편기(기종명: 환편기 MR-1, Mruzen Sangyo Co., Ltd.)를 사용하여 편지를 제작했다.

(클로로아세트아미드메틸화 편지의 제작)

니트로벤젠 46wt%, 황산 46wt%, 파라포름알데히드 1wt%, N-메틸올-α-클로로아세트아미드(이하, NMCA) 7wt%를 10℃ 이하에서 혼합, 교반, 용해시킨 반응액(이하, NMCA화 반응액)을 조제했다. 이 NMCA화 반응액을 5℃로 냉각하고, 1g의 상기 편지에 대하여 40mL의 NMCA화 반응액을 첨가하고, 수욕 중에서 반응액을 5℃로 유지한 채 2시간 반응시켰다. 그 후, 반응액으로부터 편지를 인출하고, NMCA 반응액과 동량의 니트로벤젠에 침지하여 세정했다. 계속해서 편지를 인출하고, 메탄올에 침지해서 세정을 행하여 실시예 1용의 클로로아세트아미드메틸화 편지를 얻었다. 또한, 파라포름알데히드의 농도를 0.85wt%, 0.9wt%, 0.95wt%, 0.60wt%로 변경한 이외는 실시예 1용의 클로로아세트아미드메틸화 편지와 동 조작을 행한 것을 각각 실시예 4용의 클로로아세트아미드메틸화 편지, 실시예 5용의 클로로아세트아미드메틸화 편지, 실시예 6용의 클로로아세트아미드메틸화 편지, 실시예 7용의 클로로아세트아미드메틸화 편지로 했다. 여기서, 클로로아세트아미드메틸기는 반응성 관능기에 상당한다. 또한, 파라포름알데히드의 농도를 4wt%, 0.5wt%, 3wt%로 변경한 이외는 실시예 1용의 클로로아세트아미드메틸화 편지와 동 조작을 행한 것을 각각 비교예 1용의 클로로아세트아미드메틸화 편지, 비교예 3용의 클로로아세트아미드메틸화 편지, 비교예 4용의 클로로아세트아미드메틸화 편지로 했다.

(테트라에틸렌펜타민-파라클로로페닐화 편지의 제작)

테트라에틸렌펜타민(이하, TEPA)의 농도가 20mM, 트리에틸아민의 농도가 473mM이 되도록 각각을 500mL의 디메틸술폭시드(이하, DMSO)에 용해한 액에 10g의 상기 실시예 1용의 클로로아세트아미드메틸화 편지를 담가 40℃에서 3시간 반응시켰다. 편지를 DMSO로 3회 세정한 후, 파라클로로페닐이소시아네이트의 농도가 20mM이 되도록 500mL의 DMSO에 용해한 액에 담가 30℃에서 1시간 반응시켰다. 그 후, 반응액으로부터 편지를 인출하고, 반응액과 동량의 DMSO에 침지해서 세정하고, 이어서 메탄올에 침지해서 세정하고, 이어서 물에 침지해서 세정하여 실시예 1용의 테트라에틸렌펜타민-파라클로로페닐화 편지를 얻었다.

TEPA 농도를 20mM로부터 40mM으로 변경한 이외는 실시예 1용의 테트라에틸렌펜타민-파라클로로페닐화 편지와 마찬가지의 조작에 의해 실시예 2용의 테트라에틸렌펜타민-파라클로로페닐화 편지를 얻었다. TEPA 농도를 20mM으로부터 10mM으로 변경한 이외는 실시예 1용의 테트라에틸렌펜타민-파라클로로페닐화 편지와 마찬가지의 조작에 의해 실시예 3용의 테트라에틸렌펜타민-파라클로로페닐화 편지를 얻었다. 실시예 1용의 클로로아세트아미드메틸화 편지 대신에 실시예 4~6용의 클로로아세트아미드메틸화 편지를 각각 사용하여 TEPA 농도를 20mM로부터 10mM으로 변경한 이외는 실시예 1용의 테트라에틸렌펜타민-파라클로로페닐화 편지와 마찬가지의 조작에 의해 각각 실시예 4~6용의 테트라에틸렌펜타민-파라클로로페닐화 편지를 얻었다. 실시예 1용의 클로로아세트아미드메틸화 편지 대신에 실시예 7용의 클로로아세트아미드메틸화 편지를 사용하여 TEPA 농도를 20mM으로부터 40mM으로 변경한 이외는 실시예 1용의 테트라에틸렌펜타민-파라클로로페닐화 편지와 마찬가지의 조작에 의해 실시예 7용의 테트라에틸렌펜타민-파라클로로페닐화 편지를 얻었다.

또한, 비교예 1용의 클로로아세트아미드메틸화 편지를 사용하여 TEPA 농도를 20mM으로부터 40mM으로 변경한 이외는 실시예 1용의 테트라에틸렌펜타민-파라클로로페닐화 편지와 마찬가지의 조작에 의해 비교예 1용의 테트라에틸렌펜타민-파라클로로페닐화 편지를 얻었다. 비교예 1용의 클로로아세트아미드메틸화 편지를 사용하여 TEPA 농도를 20mM으로부터 10mM으로 변경한 이외는 실시예 1용의 테트라에틸렌펜타민-파라클로로페닐화 편지와 마찬가지의 조작에 의해 비교예 2용의 테트라에틸렌펜타민-파라클로로페닐화 편지를 얻었다. 비교예 3용의 클로로아세트아미드메틸화 편지를 사용하여 TEPA 농도를 20mM으로부터 5mM으로 변경한 이외는 실시예 1용의 테트라에틸렌펜타민-파라클로로페닐화 편지와 마찬가지의 조작에 의해 비교예 3용의 테트라에틸렌펜타민-파라클로로페닐화 편지를 얻었다. 비교예 4용의 클로로아세트아미드메틸화 편지를 사용하여 TEPA 농도를 20mM으로부터 0mM으로 변경한 이외는 실시예 1용의 테트라에틸렌펜타민-파라클로로페닐화 편지와 마찬가지의 조작에 의해 비교예 4용의 테트라에틸렌펜타민-파라클로로페닐 컨트롤 편지를 얻었다.

(1) 전개 길이비(Rlr)의 측정

(실시예 1~7)

상기에서 제작한 실시예 1용의 테트라에틸렌펜타민-파라클로로페닐화 편지에 대해서 레이저 현미경(초심도 컬러 3D 형상 측정 현미경 VK-9710, KEYENCE CORPORATION제)을 사용하여 화상을 촬영하고, 얻어진 화상의 윤곽 곡선으로부터 그 평균선의 방향으로 기준 길이 50㎛(l에 상당)만큼 빼내고, VK-9710 탑재의 해석 소프트웨어를 사용하여 선 거칠기 모드에 의해 해석하여 전개 길이비(Rlr)를 산출했다. 레이저 현미경의 화상 캡처 조건은 대물 렌즈를 20배로 설정했다. 슬라이드 글라스 상에 상기 편지에 증류수를 습윤시킨 상태로 두고, 그 위로부터 커버 글라스(두께: 0.12~0.17mm)로 상기 편지를 끼워 넣고, 여분의 증류수를 제거한 후에 커버 글라스 상의 화상을 캡처했다. 결과에 대해서 9 시야의 평균값을 표 2에 나타낸다. 마찬가지의 조작을 실시예 2~7용의 테트라에틸렌펜타민-파라클로로페닐화 편지에 의해 행했다. 결과를 표 2에 나타낸다.

(비교예 1~4)

상기에서 제작한 비교예 1용의 테트라에틸렌펜타민-파라클로로페닐화 편지에 대해서 레이저 현미경(초심도 컬러 3D 형상 측정 현미경 VK-9710, KEYENCE CORPORATION제)을 사용하여 화상을 촬영하고, 얻어진 화상의 윤곽 곡선으로부터 그 평균선의 방향으로 기준 길이 50㎛(l에 상당)만큼 빼내고, 실시예 1과 마찬가지의 방법으로 전개 길이비(Rlr)를 산출했다. 결과에 대해서 9 시야의 평균값을 표 2에 나타낸다. 마찬가지의 조작을 비교예 2 및 3용의 테트라에틸렌펜타민-파라클로로페닐화 편지 및 비교예 4용의 테트라에틸렌펜타민-파라클로로페닐 컨트롤 편지에 의해 행했다. 결과를 표 2에 나타낸다.

(비교예 5)

중공사 막을 구비하는 지속 완서식 혈액 여과기로서 승인이 얻어져 있는 sepXiris(등록상표)(Baxter Limited, 의료 기기 승인 번호: 22500BZX00401000)에 대해서 중공사(이하, 비교예 5의 중공사)를 실 길이방향으로 나눔으로써 내표면을 노출시키고, 내표면에 대해서 레이저 현미경(초심도 컬러 3D 형상 측정 현미경 VK-9710, KEYENCE CORPORATION제)을 사용하여 화상을 촬영하고, 얻어진 화상의 윤곽 곡선으로부터 그 평균선의 방향으로 기준 길이 50㎛(l에 상당)만큼 빼내고, 실시예 1과 마찬가지의 방법으로 전개 길이비(Rlr)를 산출했다. 결과에 대해서 9 시야의 평균값을 표 2에 나타냈다.

(비교예 6)

폴리스티렌 비즈를 생체 적합성 폴리머로 코팅한 비즈를 구비하는 흡착형 혈액 정화기로서 해외에서 판매되고 있는 Cytosorb(등록상표)(CytoSorbents사)에 대해서 상기 비즈(이하, 비교예 6의 비즈)를 커팅하고 비즈 표면에 대해서 레이저 현미경(초심도 컬러 3D 형상 측정 현미경 VK-9710, KEYENCE CORPORATION제)을 사용하여 화상을 촬영하고, 얻어진 화상의 윤곽 곡선으로부터 그 평균선의 방향으로 기준 길이 50㎛(l에 상당)만큼 빼내고, 실시예 1과 마찬가지의 방법으로 전개 길이비(Rlr)를 산출했다. 결과에 대해서 9 시야의 평균값을 표 2에 나타냈다.

(비교예 7)

아세트산셀룰로오스 비즈를 구비하는 흡착형 혈액 정화기로서 판매되고 있는 Adacolumn(등록상표)(JIMRO Co., Ltd., 승인 번호: 21100BZZ00687000)에 대해서 상기 비즈(이하, 비교예 7의 비즈)를 커팅하고 비즈 표면에 대해서 레이저 현미경(초심도 컬러 3D 형상 측정 현미경 VK-9710, KEYENCE CORPORATION제)을 사용하여 화상을 촬영하고, 얻어진 화상의 윤곽 곡선으로부터 그 평균선의 방향으로 기준 길이 50㎛(l에 상당)만큼 빼내고, 실시예 1과 마찬가지의 방법으로 전개 길이비(Rlr)를 산출했다. 결과에 대해서 9 시야의 평균값을 표 2에 나타냈다.

(2) 중심선 평균 거칠기(Ra)(㎛)의 측정

(실시예 1~7)

상기에서 제작한 실시예 1용 테트라에틸렌펜타민-파라클로로페닐화 편지에 대해서 레이저 현미경(초심도 컬러 3D 형상 측정 현미경 VK-9710, KEYENCE CORPORATION제)을 사용하여 화상을 촬영하고, 얻어진 화상의 윤곽 곡선으로부터 그 평균선의 방향으로 기준 길이 50㎛(l에 상당)만큼 빼내고, VK-9710 탑재의 해석 소프트웨어를 사용하여 선 거칠기 모드에 의해 해석하여 중심선 평균 거칠기(Ra)를 산출했다. 레이저 현미경의 화상 캡처 조건은 대물 렌즈를 20배로 설정했다. 슬라이드 글라스 상에 상기 편지에 증류수를 습윤시킨 상태로 두고, 그 위로부터 커버 글라스(두께: 0.12~0.17mm)로 상기 편지를 끼워 넣고, 여분의 증류수를 제거한 후에 커버 글라스 상의 화상을 캡처했다. 결과에 대해서 9 시야의 평균값을 표 2에 나타낸다. 마찬가지의 조작을 실시예 2~7용의 테트라에틸렌펜타민-파라클로로페닐화 편지에 의해 행했다. 결과를 표 2에 나타낸다.

(비교예 1~4)

상기에서 제작한 비교예 1용 테트라에틸렌펜타민-파라클로로페닐화 편지에 대해서 레이저 현미경(초심도 컬러 3D 형상 측정 현미경 VK-9710, KEYENCE CORPORATION제)을 사용하여 화상을 촬영하고, 얻어진 화상의 윤곽 곡선으로부터 그 평균선의 방향으로 기준 길이 50㎛(l에 상당)만큼 빼내고, 실시예 1과 마찬가지의 방법으로 중심선 평균 거칠기(Ra)를 산출했다. 결과에 대해서 9 시야의 평균값을 표 2에 나타낸다. 마찬가지의 조작을 비교예 2 및 3용의 테트라에틸렌펜타민-파라클로로페닐화 편지 및 비교예 4용의 테트라에틸렌펜타민-파라클로로페닐 컨트롤 편지에 의해 행했다. 결과를 표 2에 나타낸다.

(비교예 5)

비교예 5의 중공사를 실 길이방향으로 나눔으로써 내표면을 노출시키고, 내표면에 대해서 레이저 현미경(초심도 컬러 3D 형상 측정 현미경 VK-9710, KEYENCE CORPORATION제)을 사용하여 화상을 촬영하고, 얻어진 화상으로부터 윤곽 곡선으로부터 그 평균선의 방향으로 기준 길이 50㎛(l에 상당)만큼 빼내고, 실시예 1과 마찬가지의 방법으로 중심선 평균 거칠기(Ra)를 산출했다. 결과에 대해서 9 시야의 평균값을 표 2에 나타낸다.

(비교예 6)

비교예 6의 비즈를 커팅하여 비즈 표면에 대해서 레이저 현미경(초심도 컬러 3D 형상 측정 현미경 VK-9710, KEYENCE CORPORATION제)을 사용하여 화상을 촬영하고, 얻어진 화상의 윤곽 곡선으로부터 그 평균선의 방향으로 기준 길이 50㎛(l에 상당)만큼 빼내고, 실시예 1과 마찬가지의 방법으로 중심선 평균 거칠기(Ra)를 산출했다. 결과에 대해서 9 시야의 평균값을 표 2에 나타낸다.

(비교예 7)

비교예 7의 비즈를 커팅하여 비즈 표면에 대해서 레이저 현미경(초심도 컬러 3D 형상 측정 현미경 VK-9710, KEYENCE CORPORATION제)을 사용하여 화상을 촬영하고, 얻어진 화상의 윤곽 곡선으로부터 그 평균선의 방향으로 기준 길이 50㎛(l에 상당)만큼 빼내고, 실시예 1과 마찬가지의 방법으로 중심선 평균 거칠기(Ra)를 산출했다. 결과에 대해서 9 시야의 평균값을 표 2에 나타낸다.

(3) 제곱 평균 평방근 경사각(°)의 측정

(실시예 1~7)

상기에서 제작한 실시예 1용 테트라에틸렌펜타민-파라클로로페닐화 편지에 대해서 레이저 현미경(초심도 컬러 3D 형상 측정 현미경 VK-9710, KEYENCE CORPORATION제)을 사용하여 화상을 촬영하고, 얻어진 화상의 윤곽 곡선으로부터 그 평균선의 방향으로 기준 길이 50㎛(l에 상당)만큼 빼내고, VK-9710 탑재의 해석 소프트웨어를 사용하여 선 거칠기 모드에 의해 해석하여 제곱 평균 평방근 경사각을 산출했다. 레이저 현미경의 화상 캡처 조건은 대물 렌즈를 20배로 설정했다. 슬라이드 글라스 상에 상기 편지에 증류수를 습윤시킨 상태로 두고, 그 위로부터 커버 글라스(두께: 0.12~0.17mm)로 상기 편지를 끼워 넣고, 여분의 증류수를 제거한 후에 커버 글라스 상의 화상을 캡처했다. 결과에 대해서 9 시야의 평균값을 표 2에 나타낸다. 마찬가지의 조작을 실시예 2~7용의 테트라에틸렌펜타민-파라클로로페닐화 편지에 의해 행했다. 결과를 표 2에 나타낸다.

(비교예 1~4)

상기에서 제작한 비교예 1용 테트라에틸렌펜타민-파라클로로페닐화 편지에 대해서 레이저 현미경(초심도 컬러 3D 형상 측정 현미경 VK-9710, KEYENCE CORPORATION제)을 사용하여 화상을 촬영하고, 얻어진 화상의 윤곽 곡선으로부터 그 평균선의 방향으로 기준 길이 50㎛(l에 상당)만큼 빼내고, 실시예 1과 마찬가지의 방법으로 제곱 평균 평방근 경사각을 산출했다. 결과에 대해서 9 시야의 평균값을 표 2에 나타낸다. 마찬가지의 조작을 비교예 2 및 3용의 테트라에틸렌펜타민-파라클로로페닐화 편지 및 비교예 4용의 테트라에틸렌펜타민-파라클로로페닐 컨트롤 편지에 의해 행했다. 결과를 표 2에 나타낸다.

(비교예 5)

비교예 5의 중공사를 실 길이방향으로 나눔으로써 내표면을 노출시키고, 내표면에 대해서 레이저 현미경(초심도 컬러 3D 형상 측정 현미경 VK-9710, KEYENCE CORPORATION제)을 사용하여 화상을 촬영하고, 얻어진 화상으로부터 윤곽 곡선으로부터 그 평균선의 방향으로 기준 길이 50㎛(l에 상당)만큼 빼내고, 실시예 1과 마찬가지의 방법으로 제곱 평균 평방근 경사각을 산출했다. 결과에 대해서 9 시야의 평균값을 표 2에 나타낸다.

(비교예 6)

비교예 6의 비즈를 커팅하여 비즈 표면에 대해서 레이저 현미경(초심도 컬러 3D 형상 측정 현미경 VK-9710, KEYENCE CORPORATION제)을 사용하여 화상을 촬영하고, 얻어진 화상의 윤곽 곡선으로부터 그 평균선의 방향으로 기준 길이 50㎛(l에 상당)만큼 빼내고, 실시예 1과 마찬가지의 방법으로 제곱 평균 평방근 경사각을 산출했다. 결과에 대해서 9 시야의 평균값을 표 2에 나타낸다.

(비교예 7)

비교예 7의 비즈를 커팅하여 비즈 표면에 대해서 레이저 현미경(초심도 컬러 3D 형상 측정 현미경 VK-9710, KEYENCE CORPORATION제)을 사용하여 화상을 촬영하고, 얻어진 화상의 윤곽 곡선으로부터 그 평균선의 방향으로 기준 길이 50㎛(l에 상당)만큼 빼내고, 실시예 1과 마찬가지의 방법으로 중심 제곱 평균 평방근 경사각을 산출했다. 결과에 대해서 9 시야의 평균값을 표 2에 나타낸다.

(4) 양성 하전량 측정

(실시예 1~7, 비교예 1~7)

실시예 1용의 테트라에틸렌펜타민-파라클로로페닐화 편지에 포함되는 양성 하전량은 산 염기 역적정함으로써 결정했다. 200mL 가지 플라스크에 실시예 1용의 테트라에틸렌펜타민-파라클로로페닐화 편지를 6M 수산화나트륨 수용액 50mL를 첨가하여 30분 교반하고, 여과지를 사용하여 편지를 여과했다. 이어서 이온 교환수 50mL에 여과한 편지를 첨가해서 30분간 교반하고, 여과지를 사용하여 여과했다. 편지를 첨가한 이온 교환수의 pH가 7.0이 될 때까지 이온 교환수에 첨가하고, 여과를 반복함으로써 탈염 후의 편지를 얻었다. 탈염 후의 편지를 80℃ 상압 조건에서 48시간 정치한 후, 폴리프로필렌제 용기에 상기 건조 편지를 1.0g과 0.1M 염산을 30mL 첨가하여 10분간 교반했다. 교반 후, 용액만을 5mL 빼내어 폴리프로필렌제 용기에 옮겼다. 이어서, 얻어진 용액에 대하여 0.1M 수산화나트륨 수용액을 0.1mL 적하했다. 적하 후 10분간 교반하고, 용액의 pH를 측정했다. 0.1M 수산화나트륨 수용액을 0.1mL 적하 후 10분간의 교반, pH의 측정을 마찬가지로 100회 반복했다. 용액의 pH가 8.5를 초과했을 때의 0.1M 수산화나트륨 수용액의 적하량을 1.0g당 적정량으로 했다. 1.0g당 적정량과 이하의 식 4를 이용하여 실시예 1용의 테트라에틸렌펜타민-파라클로로페닐화 편지의 건조 중량 1.0g당 양성 하전량을 산출했다. 결과를 표 2에 나타낸다.

건조 중량 1g당 양성 하전량(mmol/g)={첨가한 0.1M 염산의 액량(30mL)/빼낸 염산의 액량(5mL)}×1.0g당 적정량(mL/g)×수산화나트륨 수용액 농도(0.1M)····식 4

마찬가지의 조작을 실시예 2~7용의 테트라에틸렌펜타민-파라클로로페닐화 편지, 비교예 1~3용의 테트라에틸렌펜타민-파라클로로페닐화 편지, 비교예 4용의 테트라에틸렌펜타민-파라클로로페닐 컨트롤 편지, 비교예 5의 중공사, 비교예 6의 비즈 및 비교예 7의 비즈에 의해 행했다. 결과를 표 2에 나타낸다.

(5) 활성화 과립구-활성화 혈소판 복합체, 활성화 단구-활성화 혈소판 복합체, 활성화 과립구 및 활성화 단구의 제거율 측정

(실시예 1~7)

상하에 용액의 출입구가 있는 원통 형상 컬럼(내경 1㎝×높이 1.2㎝, 내용적 0.94㎤, 외경 2㎝, 폴리카보네이트제)에 직경 1㎝의 원판 형상으로 오려낸 실시예 1용의 테트라에틸렌펜타민-파라클로로페닐화 편지를 적층해서 충전함으로써 실시예 1용의 테트라에틸렌펜타민-파라클로로페닐화 편지를 구비하는 컬럼을 제작했다. LPS를 70EU/mL가 되도록 첨가한 건상인 볼런티어 혈액을 37℃, 30분간, 65rpm의 조건에서 탕욕 내에서 흔들어 활성화시켜서 혈액을 펌프를 사용하여 상기 컬럼에 유량 0.63mL/min으로 통액시켜 컬럼 입구 및 출구에서 혈액의 샘플 채취를 행했다. 컬럼 입구의 샘플은 탕욕에 침지하고 있는 혈액을 채취했다. 컬럼 출구의 샘플은 컬럼 내에 혈액이 유입한 시점을 0분으로 해서 3.5분부터 6.5분간 통액한 것을 채취했다. 통액 후 얻어진 샘플을 세포의 표면 항원을 표 1에 나타낸 형광 표지 항체로 염색 후에 VersaLyse를 사용하여 용혈 처리를 하고, 정치 후는 수냉하고, 어두운 곳에 보관하여 신속히 각 샘플에 포함되는 세포수를 측정했다. 또한, 생세포의 판정에는 7-AAD Viability Staining Solution(BioLegend)을, 세포수의 카운트에는 Flow Count(BECKMAN COULTER)를 사용했다. 측정에는 플로우 사이토메트리(BD Cytometer Setup and Tracking Beads(Becton, Dickinson and Company)를 사용했다. 해석에는 BD FACS Diva 소프트웨어 Version 6.1.3(Becton, Dickinson and Company) 또는 FLOWJO(TOMY DIGITAL BIOLOGY CO., LTD.)를 사용했다. 활성화 과립구-활성화 혈소판 복합체, 활성화 단구-활성화 혈소판 복합체, 활성화 과립구 및 활성화 단구의 농도를 산출하고, 이하의 식 5~식 8에 의해 컬럼 입출 전후에서의 제거율을 각각 산출했다. 또한, 편지를 넣지 않고 작성한 컬럼을 공컬럼으로 하고, 상기와 마찬가지의 혈액 통액 실험을 행하여 얻은 각 제거율을 공컬럼에서의 각 성분의 제거율로 해서 하기 식 9~식 12에 따라 제거 성능의 공컬럼비를 산출했다. 결과를 표 3에 나타낸다.

활성화 과립구-활성화 혈소판 복합체 제거율(%)={(컬럼 입구측의 활성화 과립구-활성화 혈소판 복합체 농도)-(컬럼 출구측의 활성화 과립구-활성화 혈소판 복합체 농도)}/(컬럼 입구측의 활성화 과립구-활성화 혈소판 복합체 농도)×100····식 5

활성화 단구-활성화 혈소판 복합체 제거율(%)={(컬럼 입구측의 활성화 단구-활성화 혈소판 복합체 농도)-(컬럼 출구측의 활성화 단구-활성화 혈소판 복합체 농도)}/(컬럼 입구측의 활성화 단구-활성화 혈소판 복합체 농도)×100····식 6

활성화 과립구 제거율(%)={(컬럼 입구측의 활성화 과립구 농도)-(컬럼 출구측의 활성화 과립구 농도)}/(컬럼 입구측의 활성화 과립구 농도)×100····식 7

간질성

활성화 단구 제거율(%)={(컬럼 입구측의 활성화 단구 농도)-(컬럼 출구측의 활성화 단구 농도)}/(컬럼 입구측의 활성화 단구 농도)×100····식 8

활성화 과립구-활성화 혈소판 복합체 제거 성능(공컬럼비)=각 실시예에 있어서의 활성화 과립구-활성화 혈소판 복합체 제거율(%)/공컬럼에서의 활성화 과립구-활성화 혈소판 복합체 제거율(%)····식 9

활성화 단구-활성화 혈소판 복합체 제거 성능(공컬럼비)=각 실시예에 있어서의 활성화 단구-활성화 혈소판 복합체 제거율(%)/공컬럼에서의 활성화 단구-활성화 혈소판 복합체 제거율(%)····식 10

활성화 과립구 제거 성능(공컬럼비)=각 실시예에 있어서의 활성화 과립구 제거율(%)/공컬럼에서의 과립구 제거율(%)····식 11

활성화 단구 제거 성능(공컬럼비)=각 실시예에 있어서의 활성화 단구 제거율(%)/공컬럼에서의 단구 제거율(%)····식 12

마찬가지의 조작을 실시예 2~7용의 테트라에틸렌펜타민-파라클로로페닐화 편지에 의해 행했다. 결과를 표 3에 나타낸다.

(비교예 1~4)

상하에 용액의 출입구가 있는 원통 형상 컬럼(내경 1㎝×높이 1.2㎝, 내용적 0.94㎤, 외경 2㎝, 폴리카보네이트제)에 직경 1㎝의 원판 형상으로 오려낸 비교예 1용의 테트라에틸렌펜타민-파라클로로페닐화 편지를 적층해서 충전함으로써 비교예 1용의 테트라에틸렌펜타민-파라클로로페닐화 편지를 구비하는 컬럼을 제작했다. 실시예 1과 마찬가지의 방법으로 활성화 과립구-활성화 혈소판 복합체, 활성화 단구-활성화 혈소판 복합체, 활성화 과립구 및 활성화 단구의 농도를 산출하고, 상기 식 5~식 12에 의해 각 제거 성능의 공컬럼비를 산출했다. 마찬가지의 조작을 비교예 2 및 3용의 테트라에틸렌펜타민-파라클로로페닐화 편지 및 비교예 4용의 테트라에틸렌펜타민-파라클로로페닐 컨트롤 편지에 의해 행했다. 결과를 표 3에 나타낸다.

(비교예 5)

sepXiris(등록상표)에 대해서 비교예 5의 중공사를 10㎝×157개 잘라내어 미니 모듈을 제작했다. 실시예 1과 마찬가지의 방법으로 활성화 과립구-활성화 혈소판 복합체, 활성화 단구-활성화 혈소판 복합체, 활성화 과립구 및 활성화 단구의 농도를 산출하고, 상기 식 5~식 12에 의해 각 제거 성능의 공컬럼비를 산출했다. 결과를 표 3에 나타낸다.

(비교예 6)

Cytosorb(등록상표)에 대해서 비교예 6의 비즈 1.13mL를 인출하여 미니 모듈을 제작했다. 실시예 1과 마찬가지의 방법으로 활성화 과립구-활성화 혈소판 복합체, 활성화 단구-활성화 혈소판 복합체, 활성화 과립구 및 활성화 단구의 농도를 산출하고, 상기 식 5~식 12에 의해 각 제거 성능의 공컬럼비를 산출했다. 결과를 표 3에 나타낸다.

(비교예 7)

Adacolumn(등록상표)에 대해서 비교예 7의 비즈 1.63g을 인출하여 미니 모듈을 제작했다. 실시예 1과 마찬가지의 방법으로 활성화 과립구-활성화 혈소판 복합체, 활성화 단구-활성화 혈소판 복합체, 활성화 과립구 및 활성화 단구의 농도를 산출하고, 상기 식 5~식 12에 의해 각 제거 성능의 공컬럼비를 산출했다. 결과를 표 3에 나타낸다.

(6) IL-6 제거율 측정

(실시예 1~7)

실시예 1용의 테트라에틸렌펜타민-파라클로로페닐화 편지를 직경 6mm의 원판 형상으로 오려낸 후, 이것을 4매씩 폴리프로필렌제의 용기에 넣었다. 이 용기에 IL-6의 농도가 2000pg/mL 되도록 조제한 소태아혈청(이하, FBS)을 1mL 첨가하고, 37℃의 인큐베이터 내에서 2시간 전도 혼화하고 나서 ELISA법으로 IL-6의 잔농도를 측정하고, 이하의 식 13에 의해 IL-6 제거율을 산출했다. 결과를 표 4에 나타낸다.

IL-6 제거율(%)={(전도 혼화 전의 IL-6 농도)-(전도 혼화 후의 IL-6 농도)}/(전도 혼화 전의 IL-6 농도)×100····식 13

마찬가지의 조작을 실시예 2~7용의 테트라에틸렌펜타민-파라클로로페닐화 편지에 의해 행했다. 결과를 표 4에 나타낸다.

(비교예 1~4)

비교예 1용의 테트라에틸렌펜타민-파라클로로페닐화 편지를 직경 6mm의 원판 형상으로 오려낸 후, 이것을 4매씩 폴리프로필렌제의 용기에 넣었다. 이 용기에 IL-6의 농도가 모두 2000pg/mL 되도록 조제한 FBS를 1mL 첨가하고, 37℃의 인큐베이터 내에서 2시간 전도 혼화하고 나서 ELISA법으로 IL-6의 잔농도를 측정하고, 상기 식 13에 의해 IL-6 제거율을 산출했다. 결과를 표 4에 나타낸다. 마찬가지의 조작을 비교예 2 및 3용의 테트라에틸렌펜타민-파라클로로페닐화 편지 및 비교예 4용의 테트라에틸렌펜타민-파라클로로페닐 컨트롤 편지에 의해 행했다. 결과를 표 4에 나타낸다.

(비교예 5)

sepXiris(등록상표)에 대해서 비교예 5의 중공사를 50㎝분 잘라내어 폴리프로필렌제의 용기에 넣었다. 이 용기에 IL-6의 농도가 모두 2000pg/mL 되도록 조제한 FBS를 1mL 첨가하고, 37℃의 인큐베이터 내에서 2시간 전도 혼화하고 나서 ELISA법으로 IL-6의 잔농도를 측정하고, 상기 식 13에 의해 IL-6 제거율을 산출했다. 결과를 표 4에 나타낸다.

(비교예 6)

Cytosorb(등록상표)에 대해서 비교예 6의 비즈를 50μL 인출하여 폴리프로필렌제의 용기에 넣었다. 이 용기에 IL-6의 농도가 모두 2000pg/mL 되도록 조제한 FBS를 1mL 첨가하고, 37℃의 인큐베이터 내에서 2시간 전도 혼화하고 나서 ELISA법으로 IL-6의 잔농도를 측정하고, 상기 식 13에 의해 IL-6 제거율을 산출했다. 결과를 표 4에 나타낸다.

(비교예 7)

Adacolumn(등록상표)에 대해서 비교예 7의 비즈를 75mg 인출하여 폴리프로필렌제의 용기에 넣었다. 이 용기에 IL-6의 농도가 모두 2000pg/mL 되도록 조제한 FBS를 1mL 첨가하고, 37℃의 인큐베이터 내에서 2시간 전도 혼화하고 나서 ELISA법으로 IL-6의 잔농도를 측정하고, 상기 식 13에 의해 IL-6 제거율을 산출했다. 결과를 표 4에 나타낸다.

(7) IL-8 제거율 측정

(실시예 1~7)

실시예 1용의 테트라에틸렌펜타민-파라클로로페닐화 편지를 직경 6mm 원판 형상으로 오려낸 후, 이것을 4매씩 폴리프로필렌제의 용기에 넣었다. 이 용기에 IL-8의 농도가 2000pg/mL 되도록 조제한 소태아혈청(이하, FBS)을 1mL 첨가하고, 37℃의 인큐베이터 내에서 1시간 전도 혼화하고 나서 ELISA법으로 IL-6의 잔농도를 측정하고, 이하의 식 14에 의해 IL-8 제거율을 산출했다. 결과를 표 4에 나타낸다.

IL-8 제거율(%)={(전도 혼화 전의 IL-8 농도)-(전도 혼화 후의 IL-8 농도)}/(전도 혼화 전의 IL-8 농도)×100······식 14

마찬가지의 조작을 실시예 2~6용의 테트라에틸렌펜타민-파라클로로페닐화 편지에 의해 행했다. 결과를 표 4에 나타낸다.

(비교예 1~4)

비교예 1용의 테트라에틸렌펜타민-파라클로로페닐화 편지를 직경 6mm의 원판 형상으로 오려낸 후, 이것을 4매씩 폴리프로필렌제의 용기에 넣었다. 이 용기에 IL-8의 농도가 모두 2000pg/mL 되도록 조제한 FBS를 1mL 첨가하고, 37℃의 인큐베이터 내에서 1시간 전도 혼화하고 나서 ELISA법으로 IL-8의 잔농도를 측정하고, 상기 식 14에 의해 IL-8 제거율을 산출했다. 결과를 표 4에 나타낸다. 마찬가지의 조작을 비교예 2 및 3용의 테트라에틸렌펜타민-파라클로로페닐화 편지 및 비교예 4용의 테트라에틸렌펜타민-파라클로로페닐 컨트롤 편지에 의해 행했다. 결과를 표 4에 나타낸다.

(비교예 5)

sepXiris(등록상표)에 대해서 비교예 5의 중공사를 50㎝분 잘라내어 폴리프로필렌제의 용기에 넣었다. 이 용기에 IL-8의 농도가 모두 2000pg/mL 되도록 조제한 FBS를 1mL 첨가하고, 37℃의 인큐베이터 내에서 1시간 전도 혼화하고 나서 ELISA법으로 IL-8의 잔농도를 측정하고, 상기 식 14에 의해 IL-8 제거율을 산출했다. 결과를 표 4에 나타낸다.

(비교예 6)

Cytosorb(등록상표)에 대해서 비교예 6의 비즈를 50μL 인출하여 폴리프로필렌제의 용기에 넣었다. 이 용기에 IL-8의 농도가 모두 2000pg/mL 되도록 조제한 FBS를 1mL 첨가하고, 37℃의 인큐베이터 내에서 1시간 전도 혼화하고 나서 ELISA법으로 IL-8의 잔농도를 측정하고, 상기 식 14에 의해 IL-8 제거율을 산출했다. 결과를 표 4에 나타낸다.

(비교예 7)

Adacolumn(등록상표)에 대해서 비교예 7의 비즈를 75mg 인출하여 폴리프로필렌제의 용기에 넣었다. 이 용기에 IL-8의 농도가 모두 2000pg/mL 되도록 조제한 FBS를 1mL 첨가하고, 37℃의 인큐베이터 내에서 2시간 전도 혼화하고 나서 ELISA법으로 IL-8의 잔농도를 측정하고, 상기 식 14에 의해 IL-8 제거율을 산출했다. 결과를 표 4에 나타낸다.

(8) HMGB-1 제거율 측정

(실시예 1~7)

실시예 1용의 테트라에틸렌펜타민-파라클로로페닐화 편지를 직경 6mm의 원판 형상으로 오려낸 후, 이것을 4매씩 폴리프로필렌제의 용기에 넣었다. 이 용기에 HMGB-1의 농도가 100ng/mL 되도록 조제한 소태아혈청(이하, FBS)을 1mL 첨가하고, 37℃의 인큐베이터 내에서 1시간 전도 혼화하고 나서 ELISA법으로 IL-6의 잔농도를 측정하고, 이하의 식 15에 의해 HMGB-1 제거율을 산출했다. 결과를 표 4에 나타낸다.

HMGB-1 제거율(%)={(전도 혼화 전의 HMGB-1 농도)-(전도 혼화 후의 HMGB-1 농도)}/(전도 혼화 전의 HMGB-1 농도)×100····식 15

(비교예 1~4)

비교예 1용의 테트라에틸렌펜타민-파라클로로페닐화 편지를 직경 6mm 원판 형상으로 오려낸 후, 이것을 4매씩 폴리프로필렌제의 용기에 넣었다. 이 용기에 HMGB-1의 농도가 모두 100ng/mL 되도록 조제한 FBS를 1mL 첨가하고, 37℃의 인큐베이터 내에서 1시간 전도 혼화하고 나서 ELISA법으로 HMGB-1의 잔농도를 측정하고, 상기 식 15에 의해 HMGB-1 제거율을 산출했다. 결과를 표 4에 나타낸다. 마찬가지의 조작을 비교예 2 및 3용의 테트라에틸렌펜타민-파라클로로페닐화 편지 및 비교예 4용의 테트라에틸렌펜타민-파라클로로페닐 컨트롤 편지에 의해 행했다. 결과를 표 4에 나타낸다.

(비교예 5)

sepXiris(등록상표)에 대해서 비교예 5의 중공사를 50㎝분 잘라내어 폴리프로필렌제의 용기에 넣었다. 이 용기에 HMGB-1의 농도가 모두 100ng/mL 되도록 조제한 FBS를 1mL 첨가하고, 37℃의 인큐베이터 내에서 1시간 전도 혼화하고 나서 ELISA법으로 HMGB-1의 잔농도를 측정하고, 상기 식 15에 의해 HMGB-1 제거율을 산출했다. 결과를 표 4에 나타낸다.

(비교예 6)

Cytosorb(등록상표)에 대해서 비교예 6의 비즈를 50μL 인출하여 폴리프로필렌제의 용기에 넣었다. 이 용기에 HMGB-1의 농도가 모두 100ng/mL 되도록 조제한 FBS를 1mL 첨가하고, 37℃의 인큐베이터 내에서 1시간 전도 혼화하고 나서 ELISA법으로 HMGB-1의 잔농도를 측정하고, 상기 식 15에 의해 HMGB-1 제거율을 산출했다. 결과를 표 4에 나타낸다.

(비교예 7)

Adacolumn(등록상표)에 대해서 비교예 7의 비즈를 75mg 인출하여 폴리프로필렌제의 용기에 넣었다. 이 용기에 HMGB-1의 농도가 모두 100ng/mL 되도록 조제한 FBS를 1mL 첨가하고, 37℃의 인큐베이터 내에서 2시간 전도 혼화하고 나서 ELISA법으로 HMGB-1의 잔농도를 측정하고, 상기 식 15에 의해 HMGB-1 제거율을 산출했다. 결과를 표 4에 나타낸다.

(9) 폐기능(P/F)의 저하 억제 평가

(실시예 1~6, 비교예 1~7)

폐기능(P/F)의 저하 억제 효과는 토끼를 이용하여 HCl 및 LPS를 기관 내 투여함으로써 제작되는 ARDS 모델에 의해 평가했다(참고 문헌: The Japan Geriatrics Society 잡지, 1993년, 제30권, 1032-1038). 우선, NZW계 수컷 토끼(체중: 3~3.5kg)을 펜토바르비탈나트륨(25mg/mL, NACALAI TESQUE, INC.)을 30mg/kg 정맥 내 투여에 의해 도입 마취한 후, 경부 및 복부를 털깎기했다. 리도카인(크실로카인 주사액 「0.5%」, AstraZeneca K.K.)을 피하 투여한 후, 경부로부터 기관을 노출시킨다. 기관용 캐뉼라(16Fr, Terumo Corporation)를 삽관, 고정했다. 환기는 인공 호흡기(EVITA300, Draeger Medical Japan사)에 의해 실시했다. 환기 조건은 PEEP를 가한 상태에서 경동맥으로부터 채취한 혈액을 i-STAT(카트리지 CG4+, Abbott Japan사)에 의해 혈액 가스 파라미터를 측정하고, HCl 및 LPS의 투여 전의 측정값(체온 보정값)이 pCO₂: 35~45mmHg의 범위 내가 되도록 환기 횟수를 변경함으로써 조절했다. 흡기 산소 농도는 100%로 하고, 환기 조건을 설정한 후에 피검 기기의 평가를 개시하고, 평가 중에 환기 조건 변경은 행하지 않았다. 수액은 0.06mg/kg/hr로 베크로늄 첨가 생리식염액(베크로늄 정맥 주사용 4mg: Fuji Pharma Co., Ltd., 생리식염액: Otsuka Pharmaceutical Factory, Inc.)을 2mL/kg/hr로 지속 주입했다. 또한, 삼방활전을 개재하여 인퓨전 펌프(55-1111, HARVARD사)에 접속하여 유지 마취 경로로 했다. 유지 마취는 펜토바르비탈(12.5mg/mL, NACALAI TESQUE, INC.)을 2~8mg/kg/hr로 지속 주입(상태에 따라 증감시킴)했다. HCl은 0.04N, 2mL/kg을, LPS는 HCl 투여 후 30분 후에 0.05mg/kg, 3mL/kg을 기관 내 투여하고, ARDS를 유발시켰다. 폐기능(P/F)의 저하 억제 효과는 LPS를 투여한 시점을 0으로 해서 6시간째의 P/F로 평가를 했다. 실시예 1~6 및 비교예 1~4에 대해서는 상기 방법으로 제작한 실시예 1~6 및 비교예 1~3용의 테트라에틸렌펜타민-파라클로로페닐화 편지 및 비교예 4용의 테트라에틸렌펜타민-파라클로로페닐 컨트롤 편지를 각각 충전 체적 11㎤(충전 높이: 4.7㎝, 충전 직경 1.9㎝)의 원통 형상의 미니 컬럼에 충전하여 모델 동물용 ARDS 치료 컬럼을 제작했다. 비교예 5에 대해서는 sepXiris(등록상표)를 사용하여 막 면적 750㎠의 미니 컬럼(유효 길이: 10㎝)을 제작했다. 비교예 6에 대해서는 Cytosorb(등록상표)를 사용하여 비즈 충전량 13.5mL의 미니 컬럼(충전 높이: 4.7㎝, 충전 직경 1.9㎝), 비교예 7에 대해서는 Adacolumn(등록상표)을 사용하여 비즈 충전량 19.6g의 미니 컬럼(충전 높이: 4.7㎝, 충전 직경 1.9㎝)을 제작했다. 각 컬럼은 생리식염액으로 세정하고, 헤파린을 프라이밍한 후에 5mL/min의 유속으로 LPS 기관 내 투여 직후에 ARDS 토끼에 시행하고, 6시간째의 폐기능(P/F)을 평가했다. 평가 결과를 표 4에 나타냈다. 유효성의 평가는 P/F값이 300을 초과하면 효과 있음, 300 이하에서는 ARDS의 기준(Berlin 정의에 의한 ARDS의 기준값, 참고 문헌: JAMA. 2012;307(23):2526-2533)에 해당하여 효과 없음으로 판정했다.

상기 실험 결과로부터 염증성 사이토카인이 제거되는 것뿐인 기존품(예: sepXiris(등록상표))에서는 호흡기 질환의 치료에는 효과는 없지만, 본 발명의 활성화 백혈구-활성화 혈소판 복합체의 제거 재료는 활성화 백혈구-활성화 혈소판 복합체를 고효율로 제거하는 것이 가능하며, 호흡기 질환의 치료, 특히 ARDS의 치료에 유효한 것이 밝혀졌다.

본 발명의 혈액 성분 제거 컬럼은 활성화 백혈구-활성화 혈소판 복합체 제거 성능을 갖기 때문에 호흡기 질환 치료, 특히 ARDS의 치료용의 체외 순환 컬럼으로서 이용할 수 있다.

Claims

표면에 하전을 갖는 관능기를 포함하는 화합물이 결합한 수불용성 담체이며,
상기 표면의 전개 길이비는 4~7이고, 상기 표면의 중심선 평균 거칠기는 2~10㎛이고, 상기 표면의 제곱 평균 평방근 경사각이 50~85°인 활성화 백혈구-활성화 혈소판 복합체의 제거 재료.
삭제
제 1 항에 있어서,
상기 관능기의 하전량의 절대값은 상기 수불용성 담체의 건조 중량 1g당 0.3~3.0mmol인 제거 재료.
제 1 항에 있어서,
상기 하전을 갖는 관능기는 아미노기인 제거 재료.
제 1 항에 있어서,
상기 수불용성 담체의 형상이 섬유이며, 상기 섬유의 섬유 지름은 1~100㎛인 제거 재료.
제 1 항에 있어서,
상기 수불용성 담체는 폴리스티렌, 폴리술폰 및 폴리에테르술폰으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 폴리머를 포함하는 제거 재료.
제 1 항에 있어서,
활성화 백혈구, IL-6, IL-8 또는 HMGB-1을 흡착 제거하는 제거 재료.
제 1 항에 기재된 제거 재료를 구비하는 혈액 정화 컬럼.
제 1 항에 기재된 제거 재료를 구비하는 호흡기 질환의 치료용의 혈액 정화 컬럼.