ES2870348T3 - Material para la eliminación de complejos de leucocitos activados-plaquetas activadas - Google Patents

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Abstract

Un material para la eliminación de un complejo de leucocitos activados-plaquetas activadas, siendo el material un vehículo insoluble en agua a cuya superficie está o están unidos un compuesto o compuestos que tienen un grupo o unos grupos funcionales cargados, en donde una relación de longitud a extensión de dicha superficie es de 4 a 7; en donde la rugosidad media de la línea central de dicha superficie es de 2 a 10 μm; y en donde una raíz de la media cuadrática del ángulo de inclinación de dicha superficie es de 50 a 85°; midiéndose la relación de longitud a extensión, la rugosidad media de la línea central y la raíz de la media cuadrática del ángulo de inclinación mediante los métodos de la descripción.

Description

DESCRIPCIÓN
Material para la eliminación de complejos de leucocitos activados-plaquetas activadas
Campo técnico
La presente invención se refiere a un material para la eliminación de un complejo de leucocitos activados-plaquetas activadas.
Antecedentes de la técnica
Los factores humorales tales como las citocinas inflamatorias están profundamente implicados en la etiología de enfermedades inflamatorias tales como lupus eritematoso sistémico, artritis reumatoide, esclerosis múltiple, colitis ulcerosa y enfermedad de Crohn, y se ha intentado tratar las enfermedades inflamatorias inactivando estos factores humorales utilizando productos farmacéuticos de bajo peso molecular, productos biofarmacéuticos tales como anticuerpos o similares. Sin embargo, estos factores humorales no actúan sobre un sitio inflamado por sí mismos, sino que actúan una pluralidad de factores humorales de manera sinérgica para hacer que aparezcan y progresen las enfermedades inflamatorias. Por tanto, el interés reciente se ha centrado en una terapia de circulación extracorpórea utilizando un material que pueda eliminar no solamente los factores humorales sino también las células mismas, tales como plaquetas o leucocitos activados, que son fuentes de los factores humorales de un organismo vivo.
En los últimos años, como nueva sustancia causante de enfermedades inflamatorias, está llamando la atención un complejo de leucocitos activados-plaquetas activadas. Se informa que el complejo de leucocitos activados-plaquetas activadas tiene una mayor actividad quimiotáctica en los tejidos que presentan una reacción inflamatoria y libera más sustancias histotóxicas en comparación con una actividad de leucocitos solos, y que la interacción entre una plaqueta activada y un leucocito activado potencia la liberación de sustancias histotóxicas por el leucocito activado (documento no de patente 1).
Como material que tiene afinidad por las citocinas inflamatorias, el Documento de Patente 1 divulga un vehículo para la eliminación, en el que un grupo funcional que incluye un enlace urea y un grupo amino está inmovilizado en la superficie de un transportador insoluble en agua. El documento de patente 2 divulga un vehículo multifuncional para la eliminación, en el que la forma del vehículo son fibras que tienen un determinado intervalo de diámetro de fibra o similares, que permite al vehículo eliminar los leucocitos activados además de las citocinas inflamatorias de la sangre.
El documento de patente 3 divulga una membrana de purificación de sangre en forma de fibra hueca que puede eliminar leucocitos activados y plaquetas activadas.
En cuanto a la forma material de un sustrato, que se utiliza con frecuencia además de las fibras, se conocen partículas (perlas). Los documentos de patente 4 y 5 describen un material para la eliminación de granulocitos, leucocitos activados y plaquetas activadas de la sangre proporcionando convexidad-concavidad en un área determinada de la superficie de las partículas. Mientras tanto, el documento de patente 6 describe un material para producir citocinas a partir de leucocitos inmovilizando un compuesto en la superficie de partículas que tienen convexidad-concavidad. Adicionalmente, se divulga un material para la eliminación de citocinas y leucocitos inmovilizando polisacáridos en la superficie de partículas (documento de patente 7) o inmovilizando polivinilpirrolidona o similares en la superficie de partículas que tienen poros (documento de patente 8).
El documento no de patente 2 divulga un material de tela no tejida de poliéster que puede eliminar complejos de leucocitos activados-plaquetas activadas.
Documentos de la técnica anterior
Documentos de patente
Documento de patente 1: JP H10-147518 A
Documento de patente 2: JP 2006-312804 A
Documento de patente 3: JP 2011-000145 A
Documento de patente 4: JP H05-168706 A
Documento de patente 5: JP 2009-254695 A
Documento de patente 6: JP 2003-201251 A
Documento de patente 7: JP 2014-507517 A
Documento de patente 8: WO12/033522 A1
Documentos no de patente
Documento no de patente 1: J. Clin. Invest., 116, 3211-9
Documento no de patente 2: Sáez-González Esteban et al., Digestive Diseases and Sciences, Vol. 62, N.° 6, 14171425
Problema a resolver mediante la invención
Sin embargo, aunque el vehículo para la eliminación descrito en el documento de patente 1 inmoviliza grupos funcionales sobre la superficie del vehículo insoluble en agua para eliminar citocinas inflamatorias, no se menciona una relación entre el vehículo para la eliminación y un complejo de leucocitos activados-plaquetas activadas, mucho menos técnicas para la eliminación del complejo. La citocina inflamatoria que tiene un tamaño de escala nanométrico es una proteína secretada por las células, y sus propiedades físicas y bioactividades son diferentes de las del complejo de leucocitos activados-plaquetas activadas que tiene un tamaño de escala micrométrico y es un complejo de células. Por lo tanto, la relación entre las citocinas inflamatorias y el complejo de leucocitos activados-plaquetas activadas no se ha reconocido como una diana a eliminar hasta ahora.
Aunque el vehículo para la eliminación descrito en el documento de patente 2 especifica la propiedad física (potencial zeta) de la superficie del vehículo para la eliminación una sustancia diana a eliminar de manera eficaz, tal como citocinas y leucocitos, no se menciona una relación entre el vehículo para la eliminación y un complejo de leucocitos activados-plaquetas activadas, mucho menos técnicas para la eliminación del complejo. Debido a que los tipos de proteínas que se expresan en la superficie celular, el tamaño de las células y las bioactividades son diferentes entre un leucocito y un complejo de leucocitos activados-plaquetas activadas, se considera que los mecanismos no son idénticos entre el caso de eliminación de leucocitos y el caso de eliminación del complejo de leucocitos activadosplaquetas activadas.
Aunque la membrana de purificación de sangre con forma de fibra hueca descrita en el documento de patente 3 especifica la rugosidad media de la línea central y la rugosidad promedio de diez puntos de la superficie de las fibras huecas en contacto con la sangre para la eliminación leucocitos y/o plaquetas activados, no se menciona una relación entre la membrana de purificación de sangre en forma de fibra hueca y un complejo de leucocitos activados-plaquetas activadas, mucho menos técnicas para la eliminación del complejo. Debido a que los tipos de proteínas que se expresan en la superficie celular, el tamaño de las células y las bioactividades son diferentes entre los leucocitos o plaquetas activados y un complejo de leucocitos activados-plaquetas activadas, se considera que los mecanismos no son idénticos entre el caso de eliminación de leucocitos o plaquetas activados y el caso de eliminación del complejo de leucocitos activados-plaquetas activadas.
Aunque los materiales descritos en los documentos de patente 4 y 5 pueden eliminar granulocitos, leucocitos activados y plaquetas activadas de la sangre especificando una rugosidad media de la línea central de la superficie del material y que tenga convexidad-concavidad en un área determinada, no se menciona una relación entre el material anterior y un complejo de leucocitos activados-plaquetas activadas, mucho menos técnicas para la eliminación del complejo. Asimismo, debido a que los tipos de proteínas que se expresan en la superficie celular, el tamaño de las células y las bioactividades son diferentes entre los granulocitos y un complejo de leucocitos activados-plaquetas activadas, se considera que los mecanismos no son idénticos entre el caso de eliminación de granulocitos y el caso de eliminación del complejo de leucocitos activados-plaquetas activadas. Los documentos de patente 4 y 5 no dicen nada sobre la relación carga de la superficie del material y longitud de extensión de la superficie del material.
Un material descrito en el documento de patente 6 es uno que evoca una actividad in vivo de las citocinas al inmovilizar el micelio, componentes del micelio, péptidos, ácidos nucleicos, proteínas, o componentes de azúcares, lípidos o similares en la superficie de un material insoluble en agua. Estas sustancias inmovilizantes no son para la eliminación de citocinas sino para producirlas, y no se menciona una relación entre el material anterior y un complejo de leucocitos activados-plaquetas activadas, mucho menos técnicas para la eliminación del complejo.
Las invenciones descritas en los documentos de patente 7 y 8 se refieren a un material (especialmente perlas) para la eliminación de citocinas y leucocitos, pero no hay una descripción sobre una forma de la superficie del material, y no se menciona una relación entre el material anterior y un complejo de leucocitos activados-plaquetas activadas, mucho menos técnicas para la eliminación del complejo.
Por lo tanto, se demanda de manera importante un material que pueda eliminar los complejos de leucocitos activadosplaquetas activadas.
En vista de esto, un objetivo de la presente invención es proporcionar un material para la eliminación de un complejo de leucocitos activados-plaquetas activadas, que pueda eliminar el complejo de leucocitos activados-plaquetas activadas con alta eficacia.
Medios para resolver los problemas
Como resultado de un estudio intensivo para resolver los problemas descritos anteriormente, los presentes inventores encontraron que el complejo de leucocitos activados-plaquetas activadas se puede eliminar con alta eficacia usando un vehículo insoluble en agua a cuya superficie se une o unen un compuesto o compuestos que tienen un o unos grupos funcionales cargados y estableciendo una relación de longitud a extensión de la superficie a un determinado intervalo.
Es decir, la presente invención proporciona los siguientes puntos (1) a (7):
(1) Un material para la eliminación de un complejo de leucocitos activados-plaquetas activadas, siendo el material un vehículo insoluble en agua a cuya superficie se une un compuesto o compuestos que tienen un grupo o unos grupos funcionales cargados, en donde una relación de longitud a extensión de la superficie es de 4 a 7; en donde la rugosidad media de la línea central de la superficie es de 2 a 10 pm; y en donde una raíz de la media cuadrática del ángulo de inclinación de la superficie es de 50 a 85°.
(2) El material para la eliminación, de acuerdo con (1), en donde el valor absoluto de la cantidad de carga del grupo o grupos funcionales es de 0,3 a 3,0 mmol por 1 g de peso seco del vehículo insoluble en agua.
(3) El material para la eliminación, de acuerdo con (1) o (2), en donde el grupo funcional cargado es un grupo amino.
(4) El material para la eliminación, de acuerdo con uno cualquiera de (1) a (3), en donde el vehículo insoluble en agua está en forma de fibras, y la fibra tiene un diámetro de fibra de 1 a 100 pm.
(5) El material para la eliminación, de acuerdo con uno cualquiera de (1) a (4), en donde el vehículo insoluble en agua comprende uno o más polímeros seleccionados del grupo que consiste en poliestireno, polisulfona y polietersulfona.
(6) El material para la eliminación, de acuerdo con uno cualquiera de (1) a (5), en donde el material adsorbe y elimina un leucocito activado, IL-6, IL-8 o HMGB-1.
(7) Una columna para purificación de sangre, comprendiendo la columna el material para la eliminación, de acuerdo con uno cualquiera de(1) a (6).
Efecto de la invención
El material para la eliminación de la presente invención puede eliminar un complejo de leucocitos activados-plaquetas activadas con alta eficacia y puede ejercer un efecto terapéutico contra enfermedades respiratorias utilizando el material para una columna de circulación extracorpórea.
Breve descripción de los dibujos
La figura 1 es una vista que explica la forma de determinar la relación de longitud a extensión.
La figura 2 es una vista que explica la forma de la rugosidad media de la línea central.
La figura 3 es una vista que explica la forma de determinar el raíz de la media cuadrática del ángulo de inclinación. La figura 4 es una vista que explica la forma de analizar la rugosidad de la línea.
Modo para realizar la invención
La presente invención se describirá en detalle a continuación.
Un material para la eliminación de un complejo de leucocitos activados-plaquetas activadas de la presente invención se caracteriza por un vehículo insoluble en agua a cuya superficie se une un compuesto o compuestos que tienen un grupo o grupos funcionales cargados, en donde una relación de longitud a extensión de dicha superficie es de 4 a 7.
El "material para la eliminación" significa un material que puede eliminar objetos a eliminar. La forma del material no está limitada en particular, y los ejemplos del mismo incluyen la forma de películas, partículas y fibras. Considerando el uso en el tratamiento a través de circulación extracorpórea, se prefiere la forma de fibras, en particular, la forma de fibras de tipo "islas en el mar" porque tiene un área superficial específica alta y una naturaleza deformable flexible para distinguirse en usabilidad. También considerando la homogeneidad del empaquetamiento del material para la eliminación y el paso de flujo de líquido cuando se usa, se prefieren la forma de materiales textiles tejidos, materiales textiles sin tejer o tejidos de punto entre las formas de fibras. El material para la eliminación de un complejo de leucocitos activados-plaquetas activadas puede ser cualquiera que incluya, al menos en parte, un vehículo insoluble en agua, y el material puede ser un vehículo insoluble en agua solo o puede ser uno en el que un material de refuerzo adecuado esté inmovilizado o mezclado con el vehículo insoluble en agua. La operación de inmovilización o mezcla se puede realizar antes o después de que el material se procese en la forma. Ejemplos del método de eliminación incluyen un método en el que el objeto a eliminar se elimina por adsorción o filtración.
En los casos en que el vehículo insoluble en agua esté en forma de fibras, la fibra tiene preferentemente un diámetro de fibra de no menos de 1 pm, en vista de asegurar un paso de flujo en el que puedan pasar las células sanguíneas, más preferentemente no menos de 3 pm, aún más preferentemente no menos de 5 pm, aún más preferentemente no menos de 10 pm, aún más preferentemente no menos de 15 pm. en vista de asegurar una superficie específica para la adsorción, la fibra tiene preferentemente un diámetro de fibra de 100 pm o menos, más preferentemente 50 pm o menos, aún más preferentemente 30 pm o menos. Es decir, un diámetro de fibra de la fibra es preferentemente de 1 a 100 pm, más preferentemente de 3 a 100 pm, aún más preferentemente de 5 a 100 pm, aún más preferentemente de 10 a 100 pm, aún más preferentemente de 15 a 100 pm, aún más preferentemente de 15 a 50 pm, aún más preferentemente de 15 a 30 pm. Cualquier límite inferior preferido puede combinarse con cualquier límite superior preferido.
El "diámetro de la fibra" se refiere a un promedio de valores que se obtienen recogiendo al azar 10 piezas pequeñas de muestras de fibras que forman los materiales textiles tejidos, materiales textiles sin tejer o tejidos de punto por los que está constituido el vehículo insoluble en agua, capturando imágenes de cada muestra utilizando un microscopio electrónico de barrido y midiendo el diámetro de la fibra en 10 puntos por imagen (100 puntos en total). El aumento de observación en este momento se establece en el aumento en el que se muestra el diámetro de la fibra en el intervalo del 30 al 80 % de la longitud del lado largo de la imagen. En los casos en que la fibra tenga forma de multifilamentos que sean haces de una pluralidad de fibras, el diámetro del hilo sencillo que constituye los multifilamentos se utiliza como diámetro de la fibra.
El "vehículo insoluble en agua" significa un vehículo que es insoluble en agua. El hecho de ser insoluble en agua significa, en el presente documento, que el cambio de peso seco del vehículo insoluble en agua entre antes y después de que el vehículo se ponga en agua es del 1 % en peso o menos. El cambio de peso seco es una relación del peso seco del contenido sólido restante con respecto al peso seco de un vehículo insoluble en agua antes de sumergirlo en agua, cuyo peso seco del contenido sólido restante se obtiene sumergiendo el vehículo insoluble en agua, durante una hora, en agua a 37 °C cuya cantidad es nueve veces mayor que el peso seco del vehículo insoluble en agua, extrayendo después el vehículo usando pinzas o similares, y secando en agua al vacío que se encuentra en el vehículo insoluble en agua a 50 °C o menos hasta alcanzar una masa constante. Un vehículo que no está insolubilizado en agua tiene el riesgo de aumentar la cantidad de eluato del vehículo cuando se usa realmente, lo que no es lo preferido desde un punto de vista de seguridad.
Ejemplos de un material para el vehículo insoluble en agua incluyen un material polimérico que tiene, en las estructuras de repetición, un grupo funcional reactivo con un carbocatión, tal como un grupo arilo o un grupo hidroxilo, p. ej., polímeros sintéticos, tal como compuesto de vinilo poliaromático, poliéster, polisulfona, polietersulfona, poliestireno o alcohol polivinílico; o polímeros de origen natural, tales como celulosa, colágeno, quitina, quitosano o dextrano. Estos polímeros se pueden usar como homopolímeros o copolímeros, o se pueden mezclar o mezclar para su uso. En particular para la purificación de sangre, el material incluye preferentemente uno o más polímeros seleccionados del grupo que consiste en compuesto de vinilo poliaromático), tereftalato de polietileno), politereftalato de butileno, poliestireno, polisulfona y polietersulfona, que son materiales poliméricos sin grupos hidroxilo, más preferentemente uno o más polímeros seleccionados del grupo que consiste en poliestireno, polisulfona y polietersulfona. Entre ellos, el material que incluye poliestireno se prefiere particularmente porque tiene un gran número de anillos aromáticos por unidad de peso, y diversos grupos funcionales o grupos funcionales reactivos se introducen fácilmente mediante reacción de Friedel-Crafts o similares. En particular, en el caso de fibras de tipo "islas en el mar", los componentes del mar que entran en contacto con los objetos a eliminar incluyen preferentemente poliestireno. Los materiales poliméricos usados para estos vehículos insolubles en agua se pueden adquirir comúnmente o se pueden producir mediante un método conocido.
El "compuesto o los compuestos que tienen un o unos grupos funcionales cargados" significa un compuesto o compuestos que tienen un o unos grupos funcionales que tienen una carga o cargas positivas o carga o cargas negativas y no están limitados particularmente siempre que los compuestos puedan interactuar con el complejo de leucocitos activados-plaquetas activadas. Ejemplos de su estructura química incluyen un compuesto que tiene un grupo amino que es un grupo funcional con una carga positiva (grupo funcional catiónico), o un compuesto que tiene un grupo sulfónico o un grupo carboxilo que es un grupo funcional con una carga negativa (grupo funcional aniónico). Como grupo funcional cargado, se prefiere un grupo amino, y como compuesto o compuestos que tienen el grupo o grupos funcionales cargados, se prefiere un compuesto o compuestos que incluyen un grupo o grupos amino. El grupo funcional puede usarse combinando una pluralidad de grupos funcionales iguales o diferentes. El compuesto o compuestos que tienen el grupo o grupos funcionales cargados pueden incluir además un grupo o grupos funcionales no cargados siempre que incluya el grupo o grupos funcionales cargados anteriores. Por ejemplo, el compuesto en el que un grupo alquilo tal como metilo o etilo, o un grupo arilo como un grupo fenilo, un grupo fenilo sustituido por alquilo (p. ej., para(p)-metilfenilo, meta(m)-metilfenilo, orto(o)-metilfenilo, para(p)-etilfenilo, meta(m)-etilfenilo u orto(o)-etilfenilo), o un grupo fenilo sustituido por un átomo de halógeno (p. ej., para(p)-fluorofenilo, meta(m)-fluorofenilo, orto(o)-fluorofenilo, para(p)-clorofenilo, meta(m)-clorofenilo u orto(o)-clorofenilo) se une al compuesto que tiene el grupo funcional cargado (por ejemplo, tetraetilenpentamina a la que se une para(p)-clorofenilo), está incluido en el compuesto que tiene el grupo o grupos funcionales cargados. En este caso, el grupo funcional no cargado y el compuesto que tiene el grupo o grupos funcionales cargados pueden unirse directamente, o pueden unirse mediante un espaciador (un espaciador implicado en tal unión también se denomina espaciador 1). Ejemplos del espaciador 1 incluyen enlaces de urea, enlaces amida y enlaces uretano.
Se considera que para un valor absoluto de la cantidad de carga del grupo funcional cargado, si es demasiado bajo, no se puede lograr una interacción suficiente con las sustancias a eliminar, mientras que si es demasiado alto, el grado de libertad de configuración del grupo funcional se reduce y no se puede lograr una interacción adecuada con las sustancias a eliminar. Por tanto, el valor absoluto es preferentemente de 0,3 a 3,0 mmol por 1 g de peso seco del vehículo insoluble en agua, más preferentemente de 0,4 a 2,9 mmol, aún más preferentemente de 0,5 a 2,7 mmol. Cualquier límite inferior preferido puede combinarse con cualquier límite superior preferido.
Ejemplos del "grupo amino" incluyen grupos amino derivados de aminas primarias, tales como metilamina, etilamina, propilamina, butilamina, pentilamina, hexilamina, heptilamina, octilamina o dodecilamina; grupos amino derivados de aminas secundarias, tales como metilhexilamina, difenilmetilamina, dimetilamina; grupos amino derivados de aminas que tienen cadena de alquilo insaturada, tal como alilamina; grupos amino derivados de aminas terciarias, tales como trimetilamina, trietilamina, dimetiletilamina, fenildimetilamina, dimetilhexilamina; grupos amino derivados de aminas que tienen anillos aromáticos, tales como 1-(3-aminopropil)imidazol, piridin-2-amina, 3-sulfoanilina; o grupos amino derivados de compuestos en los que dos o más grupos amino están unidos a cadenas de alquilo, compuestos aromáticos, compuestos heterocíclicos, compuestos homocíclicos o similares (a continuación, en el presente documento, "poliamina"), tales como tris(2-aminoetil)amina, etilendiamina, dietilentriamina, trietilentetramina, tetraetilenpentamina, dipropilenotriamina, polietilenimina, W-metil-2,2'-diaminodietilamina, W-acetil-etilendiamina, 1,2-bis(2-aminoetoxietano). El grupo amino es preferentemente grupos amino derivados de poliamina, en particular, preferentemente grupos amino derivados de etilendiamina, dietilentriamina, trietilentetramina o tetraetilenpentamina, más preferentemente, grupos amino derivados de tetraetilenpentamina. Además, los grupos amino son más preferentemente grupos amino derivados de aminas primarias o aminas secundarias.
El compuesto que incluye un grupo sulfónico puede ser cualquiera siempre que tenga al menos un grupo sulfónico, y ejemplos del grupo sulfónico incluyen un grupo de ácido sulfónico derivado de ácidos sulfónicos alifáticos, tales como el ácido sulfónico, ácido metanosulfónico; un grupo de ácido sulfónico derivado de ácidos sulfónicos aromáticos, tales como ácido bencenosulfónico, ácido p-fenolsulfónico, ácido 4-metilbencenosulfónico; o, un grupo de ácido sulfónico derivado de ácidos halosulfónicos, tales como ácido fluorosulfónico y ácido clorosulfónico.
El compuesto que incluye un grupo carboxilo puede ser cualquiera siempre que tenga al menos un grupo carboxilo, y ejemplos del grupo carboxilo incluyen un grupo carboxilo derivado de grupos carboxilo alifáticos, tales como ácido acético y ácido propiónico; o un grupo carboxilo derivado de grupos carboxilo aromáticos, tal como el grupo bencenocarboxilo.
El vehículo insoluble en agua y el compuesto que tiene el o los grupos funcionales cargados pueden unirse directamente, o pueden unirse a través de un espaciador derivado de grupos funcionales reactivos entre el vehículo insoluble en agua y el compuesto que tiene el o los grupos funcionales cargados. (un espaciador implicado en dicha unión también se conoce como espaciador 2). El espaciador 2 puede ser cualquiera que tenga un enlace químico eléctricamente neutro, tales como enlaces de urea, enlaces amida, enlaces éter, enlaces éster o enlaces uretano, y preferentemente uno que tenga enlaces amida o enlaces de urea.
Ejemplos de los grupos funcionales reactivos que median la unión entre el vehículo insoluble en agua y el compuesto que tiene el o los grupos funcionales cargados incluyen grupos halógenos activados, tales como grupos halometilo, grupos haloacetilo, grupos haloacetamidametilo o grupos haluro de alquilo; grupos epóxido, grupos carboxilo, grupos de ácido isociánico, grupos de ácido tioisociánico o grupos de ácido anhídrido. En vista de tener una reactividad adecuada, el grupo funcional reactivo es preferentemente un grupo halógeno activado, más preferentemente grupo haloacetamidametilo. Ejemplos específicos de materiales poliméricos en los que se introduce el grupo funcional reactivo incluyen un poliestireno al que se añade un grupo cloroacetamidametilo; y polisulfona a la que se añade un grupo cloroacetamidametilo.
El grupo funcional reactivo puede unirse al vehículo insoluble en agua haciéndolo reaccionar con el vehículo insoluble en agua y un reactivo adecuado anteriormente. Por ejemplo, en los casos en que el vehículo insoluble en agua sea poliestireno y el grupo funcional reactivo sea un grupo cloroacetamidametilo, el poliestireno y el W-metilol-acloroacetamida se pueden hacer reaccionar para obtener un poliestireno al que se une el grupo cloroacetamidametilo. Al poliestireno al que se une el grupo cloroacetamidametilo, por ejemplo, se hace reaccionar on tetraetilenpentamina que tiene un grupo amino, obteniendo así un poliestireno al que se une tetraetilenpentamina a través de un grupo acetamidametilo. En este caso, el grupo acetamidametilo corresponde al espaciador 2, y la tetraetilenpentamina corresponde al compuesto que tiene el o los grupos funcionales cargados. Los materiales del vehículo insoluble en agua, los espaciadores (espaciador 1 y espaciador 2), y el compuesto que tiene el o los grupos funcionales cargados se pueden combinar opcionalmente. Ejemplos del vehículo insoluble en agua a cuya superficie se une un compuesto o compuestos que tienen un grupo o grupos funcionales cargados incluyen un poliestireno al que se une un compuesto que incluye grupos amino derivados de etilendiamina, dietilentriamina, trietilentetramina o tetraetilenpentamina a través de un grupo acetamidametilo; una polisulfona a la que se une un compuesto que incluye grupos amino derivados de etilendiamina, dietilentriamina, trietilentetramina o tetraetilenpentamina a través de un grupo acetamidametilo; y una polietersulfona a la que un se une un compuesto que incluye grupos amino derivados de etilendiamina, dietilentriamina, trietilentetramina o tetraetilenpentamina a través de un grupo acetamidametilo. Los materiales de partida y los reactivos usados para producir el material para la eliminación de un complejo de leucocitos activados-plaquetas activadas se pueden adquirir comúnmente o se pueden producir mediante un método conocido.
Debido a que es necesario que el compuesto que tiene el o los grupos funcionales cargados interactúe con sustancias a eliminar en la sangre, es necesario que el compuesto se una al menos a un lado que entre en contacto con la sangre, de la superficie del vehículo insoluble en agua. En el caso de fibras de tipo "islas en el mar", es necesario que el compuesto que tiene el o los grupos funcionales cargados esté unido al menos a una superficie que entra en contacto con la sangre, de los componentes del mar. La superficie, en el presente documento, significa una superficie del vehículo insoluble en agua, y cuando la superficie del vehículo insoluble en agua tiene la forma que tiene convexidadconcavidad, la parte de la capa más externa a lo largo de la concavidad-convexidad se incluye en la superficie además de la superficie del vehículo insoluble en agua. Asimismo, cuando el interior del vehículo insoluble en agua tiene agujeros pasantes, la superficie incluye no solamente la parte de la capa más exterior del vehículo insoluble en agua, sino también las capas exteriores de los agujeros pasantes dentro del vehículo insoluble en agua.
La "relación de longitud a extensión (Rlr)" se refiere a una relación de una longitud a extensión (Rlo (|-im)) y una longitud de muestreo (1 (pm)). Específicamente, utilizando una función de análisis para la rugosidad de la línea (p. ej., aplicación de análisis de forma VK-H1A1/VK-H2A1, fabricada por KEYENCE Corp.) y utilizando un microscopio láser (p. ej., microscopio de medición dimensional 3D de color de gran profundidad VK-9710, fabricado por KEYENCE Corp.), se obtienen imágenes de la superficie de un material a medir, la longitud a extensión (Rlo) se calcula a partir de la imagen obtenida, y se calcula la relación entre la longitud a extensión resultante (Rlo) y una longitud de muestreo (1) que se dibuja desde un perfil hasta la dirección de la línea media. Como se muestra en la fig. 1, la longitud a extensión (Rlo) es un valor que indica una longitud real de una parte extraída que se obtiene extrayendo el perfil por la longitud de muestreo (1) en su dirección de línea media. Por lo tanto, la longitud a extensión (Rlo) representa una longitud de casos donde el concavidad-convexidad del perfil de la superficie del material se estira en una línea recta. Asimismo, la relación de longitud a extensión se calcula a partir de la siguiente ecuación 1, donde Rlo representa una longitud a extensión, Rlr representa una relación de longitud a extensión y 1 representa una longitud de muestreo. Dichas operaciones se realizan en nueve campos de visión cualesquiera para calcular un valor promedio de ellos, obteniendo así la relación de longitud a extensión.
Aunque se desconoce el mecanismo detallado, en el caso de la eliminación del complejo de leucocitos activadosplaquetas activadas, si la relación de longitud a extensión de la superficie del vehículo insoluble en agua es demasiado baja, el área que se puede utilizar para la eliminación se vuelve más estrecha. Por tanto, es necesario que la relación de longitud a extensión no sea inferior a 4. Por otro lado, si la relación de longitud a extensión de la superficie del vehículo insoluble en agua es demasiado alta, la superficie se ensancha, pero la superficie tiene una estructura plegada. Por tanto, las células no pueden entrar en dicha superficie y el área a la que las células pueden fijarse se vuelve más pequeña. Por lo tanto, es necesario que la relación de longitud a extensión sea siete o menos. Es decir, es necesario que la relación de longitud a extensión de la superficie del vehículo insoluble en agua sea de 4 a 7. La relación de longitud a extensión de la superficie del vehículo insoluble en agua es preferentemente de 4,2 a 6,5, más preferentemente de 4,2 a 6. Cualquier límite inferior preferido puede combinarse con cualquier límite superior preferido.
Rlr = Rlo/l Ecuación 1
La "rugosidad media de la línea central (Ra (pm))" significa un índice para cuantificar la suavidad de la superficie, que está estandarizado en JIS B 0601: 2001, y se refiere al estado de convexo-concavidad de una superficie de material que entra en contacto con componentes sanguíneos. Específicamente, utilizando una función de análisis para la rugosidad de la línea (p. ej., aplicación de análisis de forma VK-H1A1/VK-H2A1, fabricada por KEYENCE Corp.) y utilizando un microscopio láser (p. ej., microscopio de medición dimensional 3D de color de gran profundidad VK-9710, fabricado por KEYENCE Corp.), se obtienen imágenes de la superficie de un material a medir, la rugosidad media de la línea central se puede calcular a partir de la imagen obtenida. Como se muestra en la fig. 2, la rugosidad media de la línea central es un valor que se obtiene extrayendo el perfil por la longitud de muestreo 1 (pm) en la dirección de la línea media, sumando después, los valores absolutos (pm) de las desviaciones de la línea media a la curva medida de las partes extraídas, y calculando el promedio de los valores obtenidos. El método de cálculo es como se muestra en la ecuación 2 a continuación, donde Ra representa una rugosidad media de la línea central, y f(x) representa una función que representa la forma convexa-cóncava de la superficie en cualquier posición x en la imagen del microscopio láser.
Figure imgf000007_0001
Ecuación 2
La rugosidad media de la línea central de la superficie del vehículo insoluble en agua es de 2 a 10 pm, más preferentemente de 2,1 a 7 pm, más preferentemente de 2,2 a 6 pm, aún más preferentemente de 2,2 a 3,5 pm. Cualquier límite inferior preferido puede combinarse con cualquier límite superior preferido.
La "raíz de la media cuadrática del ángulo de inclinación (°)" indica un ángulo de inclinación de un pico en una longitud de muestreo (l) del material. Específicamente, la raíz de la media cuadrática del ángulo de inclinación es un valor obtenido al capturar, utilizando una función de análisis para la rugosidad de la línea (p. ej., aplicación de análisis de forma VK-H1A1/VK-H2A1, fabricada por KEYENCE Corp.) y utilizando un microscopio láser (p. ej., microscopio de medición dimensional 3D de color de gran profundidad VK-9710, fabricado por KEYENCE Corp.), imágenes de la superficie de un material a medir, dividiendo el perfil por un determinado intervalo Ax en una dirección horizontal de la imagen obtenida como se muestra en la fig. 3 y después determinar un cuadrado medio de una pendiente (ángulo) de un segmento que une los puntos final e inicial del perfil en cada de los intervalos para representar una raíz cuadrada del valor obtenido. Este análisis obtiene valores que se obtienen aplicando el cuadrado medio a los ángulos formados por una línea que une dos puntos contiguos y una línea paralela, en todos los intervalos. La raíz de la media cuadrática del ángulo de inclinación se calcula a partir de la siguiente ecuación 3.
Figure imgf000008_0001
Ecuación 3
La raíz de la media cuadrática del ángulo de inclinación en la ecuación 3 se abrevia ocasionalmente como RAq.
En el caso de la eliminación del complejo de leucocitos activados-plaquetas activadas, si la raíz de la media cuadrática del ángulo de inclinación de la superficie del vehículo insoluble en agua es demasiado pequeña, la propiedad adhesiva entre los materiales y las células se reduce. Por tanto, es necesario que la raíz de la media cuadrática del ángulo de inclinación no sea inferior a 50°. Asimismo, si la raíz de la media cuadrática del ángulo de inclinación de la superficie del vehículo insoluble en agua es demasiado grande, las frecuencias para que las células reconozcan los materiales se vuelven altas, pero como una parte local de los mismos tiene una estructura inclinada, la propiedad adhesiva de las células a los materiales se debilita. Por tanto, es necesario que el ángulo de pendiente sea de 85° o menos. Es decir, es necesario que la raíz de la media cuadrática del ángulo de inclinación de la superficie del vehículo insoluble en agua sea de 50 a 85°, más preferentemente de 65 a 75°. Cualquier límite inferior preferido puede combinarse con cualquier límite superior preferido. Los intervalos preferidos de la relación de longitud a extensión anterior, la rugosidad media de la línea central y la raíz de la media cuadrática del ángulo de inclinación se pueden combinar opcionalmente. Por ejemplo, la relación de longitud a extensión de la superficie del vehículo insoluble en agua es de 4 a 7, y la rugosidad media de la línea central de la superficie del vehículo insoluble en agua es de 2,1 a 7 pm.
El perfil significa una línea curva, como se muestra en la fig. 4, obtenida siguiendo el contorno de la superficie del material en el momento de capturar imágenes de la superficie del material a medir con el microscopio láser, y en la presente solicitud, se refiere a una curva seccional medida del material. El perfil es una línea curva diferente de una curva seccional obtenida aplicando un filtro de paso bajo del tipo de compensación de fase cuyo valor de corte es As a la curva seccional medida; una curva de rugosidad obtenida registrando solamente componentes de alta frecuencia en la curva seccional a través de un filtro de paso alto del tipo de compensación de fase (valor de corte Ac); y, una curva de ondulación obtenida aplicando un filtro de tipo compensación de fase cuyos valores de corte son Af y Ac a la curva seccional.
La línea media se refiere a una línea en la que el perfil se convierte en una línea recta mediante el método de mínimos cuadrados, como se define en JIS B 0601: 1994. El pico se refiere a cada una de las partes que están por encima de la línea media y son partes con patrón de rayas en la fig. 4. El valle se refiere a cada una de las partes que están por debajo de la línea media y son partes con patrón de celosía en la fig. 4. La longitud de muestreo se obtiene de una parte que se extrae mediante una determinada longitud del perfil, y se refiere a dicha longitud a extraer.
Debido a que los valores medidos de la relación de longitud a extensión anterior, la rugosidad media de la línea central y la raíz de la media cuadrática del ángulo de inclinación pueden variar de acuerdo con las condiciones para capturar imágenes del microscopio láser, las condiciones para capturar imágenes se establecen como se describe a continuación. El material se coloca en un portaobjetos de manera que se moje el material con agua destilada y se pueda observar la superficie que entra en contacto con la sangre, y se cubre el material con un cubreobjetos (espesor: 0,12 a 0,17 mm) desde arriba. En este caso, el material se coloca entre el cubreobjetos y el portaobjetos para que el grosor del material sea de 50 pm o menos. Por ejemplo, en los casos en que el material sea fibras, perlas o fibras huecas, si el diámetro de las fibras, el diámetro de las perlas o el diámetro exterior de las fibras huecas no es inferior a 50 pm, el material se corta en 50 pm o menos de modo que se pueda observar la superficie que entra en contacto con la sangre. Especialmente en el caso de las fibras huecas, el material se corta de manera que se pueda observar la superficie que entra en contacto con la sangre. Adicionalmente, el material se inserta entre el cubreobjetos y el portaobjetos de manera que ambos estén paralelos entre sí, y el exceso de agua destilada que se desborda del cubreobjetos se retira para llenar con agua de manera uniforme el espacio entre ellos. Las imágenes se capturan desde la parte superior del cubreobjetos. EL aumento de la lente del objetivo se establece en 20 veces, se establece un zoom óptico en una sola vez y no se utiliza un filtro neutro. Debido a que la relación de longitud a extensión, la rugosidad media de la línea central y la raíz de la media cuadrática del ángulo de inclinación pueden variar de acuerdo con las condiciones de análisis, las condiciones de análisis se establecen como se describe a continuación. Para el análisis, se utiliza un análisis de rugosidad de línea y una longitud de muestreo 1 es de 50 pm, y el análisis de la imagen se realiza sin correcciones de ondulación y sin ajustes para los valores de corte de los filtros. Se capturan de manera aleatoria imágenes en tres posiciones por material, y el análisis de la imagen se realiza en tres campos de visión para cada imagen capturada, realizando así el análisis de imágenes para un total de nueve campos de visión. Se calcula la rugosidad de la superficie para cada campo de visión y el valor medio de las mismas se emplea como la rugosidad de la superficie del material. En el caso de fibras o fibras huecas, como la longitud de muestreo en el momento del análisis de imágenes, se selecciona una parte en la que la fibra es paralela a la dirección longitudinal de las fibras y cuya superficie es uniforme en altura.
Las configuraciones de la superficie del material (relación de longitud a extensión, rugosidad media de la línea central y raíz de la media cuadrática del ángulo de inclinación) se pueden regular mediante las condiciones de producción del vehículo insoluble en agua, por ejemplo, concentración de paraformaldehído y tiempo de reacción cuando se produce un tejido de punto cloroacetamidametilado. Al introducir el grupo cloroacetamidametilo en el vehículo insoluble en agua, a medida que avanza la disolución de la superficie del material, la relación de longitud a extensión tiende a ser más larga, la rugosidad media de la línea central tiende a ser mayor y la raíz de la media cuadrática del ángulo de inclinación tiende a ser mayor. En este caso, debido a que a medida que aumenta la concentración de paraformaldehído a añadir, se favorece la reticulación del vehículo insoluble en agua para inhibir la disolución de la superficie del vehículo, la relación de longitud a extensión tiende a ser más corta, la rugosidad media de la línea central tiende a ser menor y la raíz de la media cuadrática del ángulo de inclinación tiende a ser menor. En los casos en que la concentración de paraformaldehído a añadir es constante y el grado de reticulación es constante, a medida que se alarga el tiempo de reacción al introducir el grupo cloroacetamidametilo en el vehículo insoluble en agua, la relación de longitud a extensión tiende a ser más larga, la rugosidad media de la línea central tiende a ser mayor y la raíz de la media cuadrática del ángulo de inclinación tiende a ser mayor, porque se favorece la disolución de la superficie del vehículo. Por ejemplo, en cuanto al vehículo insoluble en agua descrito en el documento de patente 2, la concentración de paraformaldehído cuando se produce un tejido de punto cloroacetamidametilado es 0,2 % en peso, que es menor que la del ejemplo 7. Por tanto, se considera que la relación de longitud en extensión y la rugosidad media de la línea central son mayores que las del ejemplo 7.
Las configuraciones de la superficie del material (relación de longitud a extensión, rugosidad media de la línea central y raíz de la media cuadrática del ángulo de inclinación) se pueden regular adicionalmente mediante la concentración de tetraetilenpentamina y el tiempo de reacción cuando se produce un tejido de punto tetraetilenpentaminapclorofenilado. Al introducir la tetraetilenpentamina en el vehículo insoluble en agua, a medida que aumenta la concentración de tetraetilenpentamina a añadir, avanza el hinchamiento de la superficie del material, la relación de longitud a extensión tiende a ser más corta, la rugosidad media de la línea central tiende a ser mayor y la raíz de la media cuadrática del ángulo de inclinación tiende a ser mayor. Asimismo, debido a que a medida que aumenta el tiempo de reacción al introducir la tetraetilenpentamina en el vehículo insoluble en agua, se favorece el hinchamiento de la superficie del material, la relación de longitud a extensión tiende a ser más corta, la rugosidad media de la línea central tiende a ser mayor y la raíz de la media cuadrática del ángulo de inclinación tiende a ser mayor.
La cantidad de carga del grupo funcional cargado se puede medir mediante una titulación ácido-base usando ácido clorhídrico o hidróxido de sodio acuoso.
La "sangre" se refiere a un líquido que incluye proteínas, lípidos, componentes de células sanguíneas y similares. Específicamente, el líquido incluye uno en el que las proteínas, lípidos, componentes de células sanguíneas y similares se añaden en tampón; fluido corporal, sangre, plasma o suero. El componente sanguíneo se refiere a un componente que constituye la sangre, y ejemplos del mismo incluyen componentes de células sanguíneas tales como eritrocitos, leucocitos o plaquetas, o factores humorales tales como citocinas. En el caso de que el fin sea tratar enfermedades inflamatorias, entre los componentes anteriores, se eliminan preferentemente leucocitos (especialmente, leucocitos activados) o citocinas (especialmente, citocinas inflamatorias tal como interleucina-6, interleucina-8, la proteína 1 del grupo de alta movilidad).
Los "leucocitos" se refieren a componentes de inmunocitos que se encuentran en la sangre, y específicamente los ejemplos de los mismos incluyen granulocitos, monocitos y linfocitos, y también incluyen granulocitos activados, monocitos activados y linfocitos activados que son los componentes activados de los mismos.
Las "citocinas" se refieren a proteínas secretadas por las células, que transfieren información a células específicas, y ejemplos de las mismas incluyen interleucinas, factor de necrosis tumoral a, factor de crecimiento transformante p (en lo sucesivo, en el presente documento, TGF-p), interferón-y (en lo sucesivo, en el presente documento, INF-y), proteína-1 del grupo de alta movilidad (en lo sucesivo, en el presente documento, HMGB-1), factor de crecimiento angiogénico y/o proteína ácida inmunosupresora. Entre ellos, una citocina que está implicada en la inflamación se denomina citocina inflamatoria y, en el caso de que el fin sea tratar enfermedades inflamatorias, se eliminan preferentemente estas citocinas inflamatorias de la interleucina y/o HMGB-1.
Las "interleucinas" se refieren a citocinas secretadas por leucocitos, que funcionan en la regulación del sistema inmunitario, y ejemplos de las mismas incluyen interleucina-1 (en lo sucesivo, en el presente documento, IL-1), interleucina-6 (en lo sucesivo, en el presente documento, IL-6), interleucina-8 (en lo sucesivo, en el presente documento, IL-8), interleucina-10 (en lo sucesivo, en el presente documento, IL-10), interleucina-17 (en lo sucesivo, en el presente documento, IL-17). En el caso de que el fin sea tratar enfermedades inflamatorias, preferentemente, se eliminan IL-6 y/o IL-8.
Los "leucocitos activados" significan leucocitos que liberan citocinas inflamatorias, oxígeno activo o similares mediante citocinas, lipopolisacárido (LPS) que es una endotoxina, o similares, y ejemplos de los mismos incluyen granulocitos activados y monocitos activados. El grado de activación puede determinarse midiendo la cantidad de oxígeno activado liberado por los leucocitos activados o midiendo la expresión de antígenos de superficie mediante citometría de flujo o similares.
Las "plaquetas activadas" significan que las plaquetas liberan citocinas inflamatorias, oxígeno activo o similares mediante citocinas, lipopolisacárido (LPS) que es una endotoxina, o similares.
Los "complejos de leucocitos activados-plaquetas activadas" no están limitados particularmente siempre que sean complejos en los que se unen un leucocito activado y una plaqueta activada, y ejemplos de los mismos incluyen complejos de granulocitos activados-plaquetas activadas y complejos de monocitos activados-plaquetas activada. Para pacientes con una enfermedad inflamatoria, especialmente para pacientes con una enfermedad respiratoria, se cree que los complejos leucocitos activados-plaquetas activadas están directamente implicados en la patología a través de la fagocitosis en los tejidos propios y la liberación de citocinas inflamatorias, y se considera que la eliminación de los complejos leucocitos activados-plaquetas activadas es necesaria para el tratamiento de la enfermedad.
La "enfermedad inflamatoria" puede ser una enfermedad inflamatoria que se puede diagnosticar en el campo médico y no se limita a una en particular. Específicamente, ejemplos de las mismas incluyen lesión pulmonar aguda (LPA), síndrome de dificultad respiratoria aguda (SDRA), neumonía, insuficiencia respiratoria aguda, síndrome inflamatorio sistémico, septicemia, choque séptico, síndrome de choque tóxico, insuficiencia multiorgánica, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, caquexia, infección, enfermedad parasitaria, artritis reumatoide, osteoartritis, artritis juvenil crónica, artritis de Lyme, artritis psoriásica, artritis reactiva, espondilartropatía, lupus eritematoso sistémico, enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, enfermedad inflamatoria intestinal, diabetes mellitus insulinodependiente, tiroiditis, asma, enfermedad alérgica, psoriasis, dermatitis por esclerodermia, enfermedad de injerto contra hospedador, rechazo de trasplante de órganos, enfermedad inmunitaria aguda o crónica acompañada de trasplante de órganos, sarcoidosis, ateroesclerosis, síndrome de coagulación intravascular diseminada, enfermedad de Kawasaki, enfermedad de Grave, síndrome nefrótico, síndrome de fatiga crónica, granulomatosis de Wegener, púrpura anafilactoide, vasculitis microscópica de los riñones, hepatitis activa crónica, uveítis, síndrome de inmunodeficiencia adquirida, mielitis transversal aguda, corea de Huntington, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Alzheimer, síncope, cirrosis biliar primaria, anemia hemolítica, enfermedad maligna, insuficiencia cardíaca, infarto cardíaco, enfermedad de Addison, enfermedad esporádica, hipofunción de glándulas de secreción múltiple de tipo I e hipofunción de glándulas de secreción múltiple de tipo II, síndrome de Schmidt, alopecia, alopecia areata, artropatía seronegativa, artropatía, enfermedad de Reiter, artropatía psoriásica, artropatía ulcerosa del cóndilo, sinovitis intestinal, Chlamydia, artropatía asociada a Yersinia y Salmonella, espondiloartropatía, enfermedad de ateroma/arteriosclerosis, atopia, enfermedad ampollosa autoinmunitaria, pénfigo vulgar, pénfigo filiar, penfigoide, enfermedad de IgA, anemia hemolítica autoinmunitaria, anemia hemolítica positiva de Kuhn, anemia perniciosa adquirida, anemia perniciosa juvenil, encefalitis miálgica/enfermedad de Royalfree, candidiasis mucocutánea crónica, arteritis de células gigantes, hepatitis aguda, hepatitis esclerótica primaria, hepatitis autoinmunitaria criptogénica, síndrome de la enfermedad de inmunodeficiencia adquirida, enfermedad asociada a inmunodeficiencia adquirida, hepatitis C, inmunodeficiencia inclasificable (hipogammaglobulinemia inclasificable), miocardiopatía dilatada, esterilidad femenina, insuficiencia ovárica, insuficiencia ovárica prematura, fibrosis pulmonar idiopática, enfermedad pulmonar fibrótica, alveolitis fibrosante criptogénica, enfermedad pulmonar intersticial postinflamatoria, neumonía espacial, enfermedad pulmonar intersticial acompañada de enfermedad del tejido conectivo, enfermedad pulmonar acompañada de enfermedad mixta del tejido conectivo, enfermedad pulmonar intersticial acompañada de esclerosis sistémica, enfermedad pulmonar intersticial acompañada de artritis reumatoide, enfermedad pulmonar acompañada de lupus eritematoso sistémico, enfermedad pulmonar acompañada de dermatomiositis/polimiositis, enfermedad pulmonar acompañada de enfermedad de Sjogren, enfermedad pulmonar acompañada de espondilitis anquilosante, enfermedad pulmonar difusa vascular, enfermedad pulmonar acompañada de hemosiderosis, enfermedad pulmonar intersticial inducida por fármacos, fibrosis por radiación, bronquiolitis obliterante, neumonía eosinófila crónica, enfermedad pulmonar infiltrante de linfocitos, enfermedad pulmonar intersticial posterior a infección, urartritis, hepatitis autoinmunitaria, hepatitis autoinmunitaria de tipo 1 (hepatitis autoinmunitaria o lupoide clásica), hepatitis autoinmunitaria de tipo 2 (hepatitis por anticuerpos anti-LKM), hipoglucemia autoinmunitaria, resistencia a la insulina de tipo B acompañada de acantosis nigricans, hipoparatiroidismo, enfermedad inmunitaria aguda acompañada de trasplante de órganos, enfermedad inmunitaria crónica acompañada de trasplante de órganos, esteoartrosis, colangitis esclerosante primaria, psoriasis de tipo 1, psoriasis de tipo 2, leucopenia idiopática, neutropenia autoinmunitaria, enfermedad renal NOS, glomerulonefritis, angiítis microscópica de los riñones, enfermedad de Lyme, lupus eritematoso discoide, esterilidad masculina agnogénica o NOS, autoinmunización de espermatozoides, esclerosis diseminada (todos los subtipos), oftalmia simpática, hipertensión pulmonar de ósmosis auxiliar de enfermedad del tejido conectivo, síndrome de Goodpasture, expresión pulmonar de poliarteritis nudosa, reumatismo agudo, espondilitis anquilosante, enfermedad de Still, esclerosis sistémica, síndrome de Sjogren, enfermedad/arteritis de Takayasu, trombocitopenia autoinmunitaria, trombocitopenia idiopática, enfermedad de tiroides autoinmunitaria, hipertiroidismo, hipertiroidismo autoinmunitario del bocio (enfermedad de Hashimoto), hipotiroidismo autoinmunitario atrófico, mixedema primario, uveítis facogénica, angiítis primaria o vitíligo.
La "enfermedad respiratoria" puede ser cualquier enfermedad respiratoria que pueda diagnosticarse en el campo médico, y no se limita a una en particular. Específicamente, ejemplos de las mismas incluyen lesión pulmonar aguda (LPA), síndrome de dificultad respiratoria aguda (SDRA), neumonía, insuficiencia respiratoria aguda, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, fibrosis pulmonar idiopática, enfermedad pulmonar fibrótica, alveolitis fibrosante criptogénica, enfermedad pulmonar intersticial postinflamatoria, neumonía intersticial, enfermedad pulmonar intersticial acompañada de enfermedad del tejido conectivo, enfermedad pulmonar acompañada de enfermedad mixta del tejido conectivo, enfermedad pulmonar intersticial acompañada de esclerosis sistémica, enfermedad pulmonar intersticial acompañada de artritis reumatoide, enfermedad pulmonar acompañada de lupus eritematoso sistémico, enfermedad pulmonar acompañada de dermatomiositis/polimiositis, enfermedad pulmonar acompañada de enfermedad de Sjogren, enfermedad pulmonar acompañada de espondilitis anquilosante, enfermedad pulmonar difusa vascular, enfermedad pulmonar acompañada de hemosiderosis, enfermedad pulmonar intersticial inducida por fármacos, fibrosis por radiación, bronquiolitis obliterante, neumonía eosinófila crónica, enfermedad pulmonar infiltrante de linfocitos, enfermedad pulmonar intersticial posterior a infección o similares. El material anterior para la eliminación del complejo de leucocitos activados-plaquetas activadas se usa preferentemente para tratar lesión pulmonar aguda (LPA), síndrome de dificultad respiratoria aguda (SDRA) entre las enfermedades respiratorias.
La concentración de un complejo de leucocitos activados-plaquetas activadas se puede medir, por ejemplo, de tal manera que un reactivo de detección de activación que ese una específicamente a una plaqueta activada (un reactivo de unión a plaquetas activadas) y un reactivo de detección de activación que se une específicamente a un leucocito activado (un reactivo de detección de leucocitos activados/un reactivo de detección de granulocitos activados/un reactivo de detección de monocitos activados) se hacen reaccionar con la fracción de leucocitos derivada de sangre periférica, y, a continuación, se mide la fracción de las células sanguíneas unida a ambos reactivos.
El reactivo de detección de plaquetas activadas no se une a un leucocito desactivado ni a un leucocito activado y tiene la capacidad de unirse con una plaqueta activada, y la plaqueta activada se detecta usando CD62P (ficha técnica del anticuerpo anti-CD62P humano (P-selectina), BioLegend.) conocido como un marcador de superficie celular específico para una plaqueta activada. El reactivo de detección de leucocitos activados no se une a una plaqueta desactivada ni a una plaqueta activada y tiene la capacidad de unirse con un leucocito activado, y ejemplos del mismo incluyen un anticuerpo específico para un componente leucocitario deseado y un anticuerpo contra un marcador de superficie celular común a un componente leucocitario deseado. Como reactivo de detección para un granulocito activado y un monocito activado, por ejemplo, puede usarse un anticuerpo anti-CD11b. Entre estos, mediante el uso de un anticuerpo anti-CD11b activado que puede detectar específicamente una conformación activada, el granulocito activado y el monocito activado se pueden detectar específicamente (hoja de datos del anticuerpo anti-CD11b humano (activado), BioLegend). Puede usarse un anticuerpo anti-CD45 para detectar leucocitos, puede usarse un anticuerpo anti-CD66b en una célula CD45 positiva para detectar granulocitos, y puede usarse un anticuerpo anti-CD 14 en una célula CD45 positiva para detectar monocitos. Para detectar linfocitos, se pueden utilizar un anticuerpo anti-CD4 y un anticuerpo anti-CD8, y también es posible que una población celular obtenida restando células CD66b positivas y células CD14 positivas de células CD45 positivas se considere como linfocitos.
Los reactivos de detección anteriores tienen preferentemente un índice para verificar la unión. Se puede seleccionar cualquier índice de acuerdo con un método de detección adoptado. Se utiliza un citómetro de flujo para la medición en vista de su fácil funcionamiento o cuantitatividad, en cuyo caso el reactivo de detección está marcado con fluorescencia. El marcador fluorescente no se limita a uno en particular y, por ejemplo, se puede adoptar el marcado con un FITC (isotiocianato de fluoresceína) o un PE (R-ficoeritrina). El reactivo de detección de leucocitos activados y el reactivo de detección de plaquetas activadas están marcados con diferentes sustancias fluorescentes. Estos reactivos de detección marcados se pueden producir mediante un método convencional, y también están disponibles comercialmente.
La reacción entre una fracción de leucocitos y el reactivo de detección anterior se ajusta de forma adecuada de acuerdo con el reactivo de detección adoptado. Cuando el reactivo de detección es un anticuerpo, la reacción solamente tiene que someterse a una inmunorreacción habitual. El complejo de leucocitos activados-plaquetas activadas y el líquido de reacción del reactivo de detección no se limitan a unos en particular y, si se desea, pueden contener azida de sodio o formaldehído en una cantidad eficaz para inhibir la activación de los componentes celulares durante la reacción de detección. La temperatura de reacción no está limitada en particular y es preferentemente de aproximadamente 4 °C con el fin de inhibir la activación de los componentes celulares.
Para una enfermedad inflamatoria tal como una enfermedad respiratoria, se prefiere eliminar los leucocitos activados y las citocinas inflamatorias que están implicados en las inflamaciones agudas y crónicas, especialmente los leucocitos activados, IL-6, IL-8 o HMGB-1, además de la eliminación del complejo de leucocitos activados-plaquetas activadas. Las citocinas inflamatorias son generalmente una proteína que tiene entre unos pocos miles a decenas de miles de peso molecular, y en las citocinas inflamatorias, hay un residuo hidrófobo y un residuo de electrificación. Debido a que, por lo tanto, se considera que la eliminación mediante interacción hidrófoba o interacción electrostática es eficaz para la eliminación las citocinas inflamatorias, se prefiere que uno o ambos del grupo funcional hidrófobo o del grupo funcional cargado estén presentes en la superficie del vehículo insoluble en agua. Específicamente, el grupo funcional hidrófobo es preferentemente alquilo tal como metilo o etilo; o arilo tal como fenilo; y el grupo funcional cargado es preferentemente grupos amino, sulfónico o carboxilo, pero sin limitación a los mismos.
Ejemplos de métodos para calcular una tasa de eliminación de un granulocito activado, un monocito activado, un complejo de leucocitos activados-plaquetas activadas y un complejo de monocitos activados-plaquetas activadas, por ejemplo, un método en el que el material a eliminar se empaqueta dentro de una columna (recipiente) que tiene una entrada y una salida, un líquido que incluye un granulocito activado, un monocito activado, un complejo de granulocitos activados-plaquetas activadas, y un complejo de monocitos activados-plaquetas activadas se deja pasar a través del recipiente, y la tasa de eliminación se calcula a partir de un cambio entre la concentración de los mismos en la entrada y en la salida. El material para la eliminación de un complejo de leucocitos activados-plaquetas activadas se refiere, en el presente documento, a un material cuya tasa de eliminación calculada a partir del cambio de concentración en la entrada y salida es un valor positivo. Como otro método, en los casos en que una tasa de eliminación obtenida de una columna (columna vacía) que no está empaquetada con el material para la eliminación dentro de la misma como control para un sistema de evaluación, se considere como una para calcular la razón de interés, el material para la eliminación se refiere a un material que indica una relación superior a uno (relación > 1).
Ejemplos de un método de cálculo de la tasa de eliminación de citocinas incluyen un método en el que el material para la eliminación se añade a un líquido que incluye citocinas durante un cierto tiempo, y la tasa de eliminación se calcula a partir del cambio de concentración entre antes y después de la adición del material para la eliminación. El material para la eliminación de citocinas descrito en la presente solicitud se refiere a un material que tiene una tasa de eliminación de no menos del 10 %.
Ejemplos de un método de evaluación de la inhibición de la función pulmonar (valor P/F) incluyen un método en el que, como para un modelo animal de aparición del SDRA producido por la administración intratraqueal de ácido clorhídrico (Hcl) y LPS (Referencia: Japan Geriatrics Society Journal, Vol. 30, 1032-1038 (1993)), la sangre del mismo se hace pasar por una columna (recipiente) que tiene entrada y salida y dentro de la cual se empaqueta el material para la eliminación, y se realiza una circulación extracorpórea para evaluar los efectos inhibidores de la función pulmonar (valor P/F) antes y después de la circulación.
La presente invención proporciona una columna para purificación de sangre, que comprende el material anterior para la eliminación un complejo de leucocitos activados-plaquetas activadas.
La configuración del recipiente de la columna empaquetada con el material para la eliminación de un complejo de leucocitos activados-plaquetas activadas puede tener cualquier configuración siempre que el recipiente tenga una entrada de sangre y salida de sangre y el material para la eliminación de un complejo de leucocitos activados-plaquetas activadas pueda empaquetarse dentro del recipiente. Una realización es un recipiente en cuyo interior se puede envasar un cuerpo cilíndrico formado por el enrollamiento del material para la eliminación de un complejo de leucocitos activados-plaquetas activadas alrededor de un tubo cuyo lado tiene poros en forma cilíndrica (en lo sucesivo, en el presente documento, cilindro), y ejemplos del recipiente incluyen un recipiente en el que la sangre entra en el cilindro desde su circunferencia para fluir hacia el interior del cilindro, y luego la sangre se descarga del recipiente a través del tubo; o un recipiente en el que la sangre ingresa al interior del cilindro a través del tubo para fluir hacia el exterior del cilindro, y luego la sangre se descarga del recipiente. En vista de la eficacia de la producción o la inhibición de la derivación del líquido tratado, el recipiente tiene preferentemente una estructura en la que el material para la eliminación del complejo de leucocitos activados-plaquetas activadas se enrolla alrededor del tubo cuyo lado tiene poros. Específicamente, ejemplos del mismo incluyen un recipiente de tipo de flujo radial que incluye un tubo central que tiene poros en su lado longitudinal, cuyos poros se proporcionan para que fluya la sangre; el material para la eliminación de un complejo de leucocitos activados-plaquetas activadas que está empaquetado alrededor del tubo central y elimina el complejo de leucocitos activados-plaquetas activadas que se encuentra en la sangre; una placa que se comunica con el extremo aguas arriba del tubo central de manera que la sangre pase por el interior del tubo central, y que esté dispuesta de manera que se evite que el líquido no pase por el tubo central para entrar en contacto con el vehículo para la eliminación; una placa que bloquea el extremo aguas abajo del tubo central, y que está dispuesta de modo que inmovilice el vehículo para la eliminación a un espacio alrededor del tubo central. Ejemplos de la forma del recipiente incluyen cilindro o prisma tales como prisma triangular, prisma cuadrangular, prisma hexagonal o prisma octagonal, pero sin limitación a tales estructuras. Como otra realización, hay un recipiente que tiene un espacio cilíndrico en su interior en el que el material para la eliminación del complejo de leucocitos activados-plaquetas activadas, que está recortado en forma circular, se puede empaquetar y tiene una entrada y salida de sangre. Específicamente, ejemplos del mismo incluyen un recipiente que comprende en su interior una placa que comprende una entrada de sangre prevista para hacer fluir la sangre suministrada hacia fuera; una placa que comprende una salida de sangre prevista para descargar la sangre suministrada; y un espacio cilíndrico en el que el material para la eliminación del complejo de leucocitos activados-plaquetas activadas, que está recortado en forma circular, esta empaquetado; cuyo recipiente tiene una entrada de sangre y una salida de sangre. En este caso, la forma del material para la eliminación del complejo de leucocitos activados-plaquetas activadas no se limita a la forma circular, y puede cambiarse adecuadamente a cualquier otra forma de óvalo; polígono tal como triángulo o rectángulo, trapezoide, o similares de acuerdo con la configuración del recipiente de la columna.
Ejemplos de materiales de la columna (recipiente) que se envasarán con el material para la eliminación de un complejo de leucocitos activados-plaquetas activadas incluyen vidrio, plásticos o resina, acero inoxidable o similares. El tamaño de la columna se selecciona adecuadamente de acuerdo con el uso previsto de la misma y no se limita a uno en particular. En vista de la operatividad en sitios clínicos o ubicaciones de medición o la facilidad de eliminación, el material está hecho preferentemente de plástico o resina y preferentemente tiene un tamaño fácil de agarrar. Por tanto, se prefiere que la longitud longitudinal de toda la columna sea de 1 a 30 cm, el diámetro externo sea de 2 a 10 cm y el volumen interno sea de 200 cm3 o menos.
El material para la eliminación de un complejo de leucocitos activados-plaquetas activadas se empaqueta preferentemente apilándolos entre sí en la columna (recipiente). El apilamiento, en el presente documento, significa apilar juntos dos o más de los materiales para la eliminación de un complejo de leucocitos activados-plaquetas activadas. Ejemplos de métodos para empaquetarlos apilándolos incluyen un método en el que una pluralidad de materiales para la eliminación de un complejo de leucocitos activados-plaquetas activadas, que se procesan en forma de lámina, se apilan como una columna de flujo axial; y un método en el que el material para la eliminación de un complejo de leucocitos activados-plaquetas activadas, que se procesa en forma de lámina, se enrolla alrededor del tubo cuyo lado tiene poros, como una columna de flujo radial.
La columna para purificación de sangre se puede utilizar para tratar enfermedades respiratorias de mamíferos (p. ej., conejo, ser humano, oveja, mono, caballo, vaca, cerdo, perro, gato), especialmente se puede utilizar de forma adecuada para el tratamiento de la lesión pulmonar aguda (LPA) y del síndrome de dificultad respiratoria aguda (SDRA).
Asimismo, se proporciona un método de purificación de sangre caracterizado por hacer pasar la sangre de pacientes con enfermedad respiratoria a través de la columna para purificación de sangre descrita anteriormente. En otras palabras, se proporciona un método para tratar la enfermedad respiratoria del paciente con enfermedad respiratoria mediante el uso de la columna para purificación de sangre descrita anteriormente. El método de purificación de sangre se puede proporcionar solo y también se puede proporcionar en combinación con terapia de ventilación o tratamiento de diálisis.
Ejemplos
Las realizaciones de la presente invención se describirán ahora específicamente con referencia a los ejemplos experimentales y los ejemplos comparativos. Entre los compuestos utilizados para la producción de cada tejido de punto, para compuestos cuyos métodos de síntesis no se describen, se utilizaron compuestos disponibles comercialmente. En los ejemplos, % en peso significa porcentaje en peso, y mM significa número de milimoles del componente que se encuentra en 1 L de solución (por ejemplo, cuando 10 mmol del componente se encuentran en 1 L de solución, se representa como 10 mM).
(Hilado)
Usando los siguientes componentes y en una condición de hilado de velocidad de hilado de 1250 m/minuto, se agruparon 36 filamentos de fibra de tipo islas en el mar de 704-islas por un filamento (diámetro de la fibra: 3 dtex.
20 |jm) para obtener una fibra.
Componente de isla: polipropileno
Componente de mar: poliestireno
Relación de compuesto (relación en peso): Isla:Mar = 50:50
(Producción de tejido de punto)
La fibra obtenida se utilizó para producir un tejido de punto mediante tejido de trama. Usando una máquina de tejer tubo (nombre de la máquina: máquina de punto circular MR-1, Maruzen Sangyo Co., Ltd.), se produjo el tejido de punto.
(Producción de tejido de punto cloroacetamidametilado)
Se preparó una solución de reacción mezclando, agitando y disolviendo el 46 % en peso de nitrobenceno, 46 % en peso de ácido sulfúrico, 1 % en peso de paraformaldehído y 7 % en peso de W-metilol-a-cloroacetamida (en lo sucesivo, en el presente documento NMCA) a 10 °C o menos (en lo sucesivo, en el presente documento, solución de reacción para la NMCA-ación). La solución de reacción para la NMCA-ación se enfrió a 5 °C y se añadieron 40 ml de la solución de reacción enfriada para la NMCA-ación a 1 g del tejido de punto, seguido de reacción durante dos horas en un baño maría mientras se mantiene la solución de reacción a 5 °C. A continuación, se sacó el tejido de punto de la solución de reacción, se sumergió y se lavó con la misma cantidad de nitrobenceno que la solución de reacción con NMCA. A continuación, se sacó el tejido de punto, se sumergió y se lavó con metanol para obtener un tejido de punto cloroacetamidametilado para el ejemplo 1. Para un tejido de punto cloroacetamidametilado del ejemplo 4, un tejido de punto cloroacetamidametilado para el ejemplo 5, un tejido de punto cloroacetamidametilado para el ejemplo 6, y un tejido de punto cloroacetamidametilado para el ejemplo 7, se obtuvieron esos tejidos de punto realizando cada uno las mismas operaciones que el tejido de punto cloroacetamidametilado del ejemplo 1, excepto que la concentración de paraformaldehído se cambió a 0,85 % en peso, 0,9 % en peso, 0,95 % en peso, 0,60 % en peso, respectivamente. En el presente documento, el grupo cloroacetamidametilo corresponde al grupo funcional reactivo. Para un tejido de punto cloroacetamidametilado del ejemplo comparativo 1, un tejido de punto cloroacetamidametilado para el ejemplo comparativo 3, y un tejido de punto cloroacetamidametilado para el ejemplo comparativo 4, se obtuvieron esos tejidos de punto realizando cada uno las mismas operaciones que el tejido de punto cloroacetamidametilado del ejemplo 1, excepto que la concentración de paraformaldehído se cambió al 4 % en peso, 0,5 % en peso, 3 % en peso, respectivamente.
(Producción de tejido de punto tetraetilenpentamina-p-clorofenilado)
En 500 ml de dimetilsulfóxido (en lo sucesivo, en el presente documento, DMSO), se disolvieron tetraetilenpentamina (en lo sucesivo, en el presente documento, TEPA) y trietilamina de modo que la concentración de TEPA fuera 20 mM y la concentración de trietilamina fuera 473 mM respectivamente, y se sumergieron, en la solución disuelta, 10 g del tejido de punto cloroacetamidametilado para el ejemplo 1 anterior y la solución resultante se hizo reaccionar a 40 °C durante tres horas. El tejido de punto se lavó tres veces con DMSO, después se sumergió en una solución en la que se disolvió isocianato de p-clorofenilo en 500 ml de DMSO, de manera que su concentración fuera de 20 mM, y la solución resultante se hizo reaccionar a 30 °C durante una hora. A continuación, se sacó el tejido de punto de la solución de reacción y se sumergió el tejido y se lavó con la misma cantidad de DMSO que la de la solución de reacción, después se sumergió y se lavó con metanol, y después se sumergió y se lavó con agua para obtener el tejido de punto tetraetilenpentamina-p-clorofenilado para el ejemplo 1.
Se obtuvo un tejido de punto tetraetilenpentamina-p-clorofenilado para el ejemplo 2 realizando la misma operación que la del tejido de punto tetraetilenpentamina-p-clorofenilado para el ejemplo 1, excepto que la concentración de TEPA se cambió de 20 mM a 40 mM. Se obtuvo un tejido de punto tetraetilenpentamina-p-clorofenilado para el ejemplo 3 se obtuvo realizando la misma operación que la del tejido de punto tetraetilenpentamina-p-clorofenilado para el ejemplo 1, excepto que la concentración de TEPA se cambió de 20 mM a 10 mM. Se obtuvo cada uno de los tejidos de punto tetraetilenpentamina-p-clorofenilados para los ejemplos 4 a 6 utilizando tejidos de punto cloroacetamidametilados para los ejemplos 4 a 6, respectivamente, en lugar del tejido de punto cloroacetamidametilado para el ejemplo 1, y realizando la misma operación que la del tejido de punto tetraetilenpentamina-p-clorofenilado para el ejemplo 1, excepto que la concentración de TEPA se cambió de 20 mM a 10 mM. Se obtuvo un tejido de punto tetraetilenpentamina-p-clorofenilado para el ejemplo 7 usando un tejido de punto cloroacetamidametilado para el ejemplo 7, en lugar del tejido de punto cloroacetamidametilado para el ejemplo 1, y realizando la misma operación que la del tejido de punto tetraetilenpentamina-p-clorofenilado para el ejemplo 1, excepto que la concentración de TEPA se cambió de 20 mM a 40 mM.
También se obtuvo un tejido de punto tetraetilenpentamina-p-clorofenilado para el ejemplo comparativo 1 usando un tejido de punto cloroacetamidametilado para el ejemplo comparativo 1, y llevando a cabo la misma operación que la del tejido de punto tetraetilenpentamina-p-clorofenilado para el ejemplo 1, excepto que la concentración de TEPa se cambió de 20 mM a 40 mM. Se obtuvo un tejido de punto tetraetilenpentamina-p-clorofenilado para el ejemplo comparativo 2 usando un tejido de punto cloroacetamidametilado para el ejemplo comparativo 1, y llevando a cabo la misma operación que la del tejido de punto tetraetilenpentamina-p-clorofenilado para el ejemplo 1, excepto que la concentración de TEPA se cambió de 20 mM a 10 mM. Se obtuvo un tejido de punto tetraetilenpentamina-pclorofenilado para el ejemplo comparativo 3 usando un tejido de punto cloroacetamidametilado para el ejemplo comparativo 3, y llevando a cabo la misma operación que la del tejido de punto tetraetilenpentamina-p-clorofenilado para el ejemplo 1, excepto que la concentración de TEPA se cambió de 20 mM a 5 mM. Se obtuvo un tejido de punto tetraetilenpentamina-p-clorofenilado para el ejemplo comparativo 4 usando un tejido de punto cloroacetamidametilado para el ejemplo comparativo 4, y llevando a cabo la misma operación que la del tejido de punto tetraetilenpentamina-p-clorofenilado para el ejemplo 1, excepto que la concentración de TEPA se cambió de 20 mM a 0 mM.
(1) Medición de la relación de longitud a extensión (Rlr)
(Ejemplos 1 a 7)
Para el tejido de punto tetraetilenpentamina-p-clorofenilado para el ejemplo 1 producido anteriormente, las imágenes se capturaron utilizando el microscopio láser (microscopio de medición dimensional 3D de color de gran profundidad VK-9710, fabricado por KEYENCE Corp.), se extrae un perfil en la imagen obtenida mediante la longitud de muestreo de 50 |jm (correspondiente a 1) en su dirección de línea media, y el perfil extraído se analizó utilizando un programa informático de análisis cargado con el VK-9710 en un modo de rugosidad de línea para calcular la relación de longitud a extensión (Rlr). Como condición para capturar las imágenes para el microscopio láser, la lente del objetivo se ajustó a 20 veces. El tejido de punto anterior se colocó en un portaobjetos con el tejido mojado con agua destilada, la tela se cubrió con un cubreobjetos (espesor: 0,12 a 0,17 mm) desde arriba, se eliminó el exceso de agua destilada y después se capturaron imágenes desde la parte superior del cubreobjetos. La Tabla 2 muestra el valor promedio de los resultados en nueve campos de visión. Para los tejidos de punto tetraetilenpentamina-p-clorofenilados para los ejemplos 2 a 7, se llevaron a cabo las mismas operaciones. Los resultados se muestran en la tabla 2.
(Ejemplos Comparativos 1 a 4)
Para el tejido de punto tetraetilenpentamina-p-clorofenilado para el ejemplo comparativo 1 producido anteriormente, las imágenes se capturaron utilizando el microscopio láser (microscopio de medición dimensional 3D de color de gran profundidad VK-9710, fabricado por KEYENCE Corp.), se extrajo un perfil en la imagen obtenida mediante la longitud de muestreo de 50 |jm (correspondiente a 1) en su dirección de línea media para calcular la relación de longitud a extensión (Rlr) de la misma manera que en el ejemplo 1. La Tabla 2 muestra el valor promedio de los resultados en nueve campos de visión. Para los tejidos de punto tetraetilenpentamina-p-clorofenilados para los ejemplos comparativos 2 y 3, y para el tejido de punto de control con tetraetilenpentamina-p-clorofenilo para el ejemplo comparativo 4, se llevaron a cabo las mismas operaciones. Los resultados se muestran en la tabla 2.
(Ejemplo comparativo 5)
Para sepXiris® (Baxter Limited, Medical Equipment Approval No. 22500BZX00401000) aprobado como un hemofiltro continuo lento con una membrana de fibra hueca, se expuso la superficie interior de una fibra hueca (en lo sucesivo, en el presente documento, fibra hueca del ejemplo comparativo 5) rasgando la fibra hueca en la dirección longitudinal de la fibra, las imágenes de la superficie interior se capturaron utilizando el microscopio láser (microscopio de medición dimensional 3D de color de gran profundidad VK-9710, fabricado por KEYENCE Corp.), se extrajo un perfil en la imagen obtenida mediante la longitud de muestreo de 50 jm (correspondiente a 1) en su dirección de línea media para calcular la relación de longitud a extensión (Rlr) de la misma manera que en el ejemplo 1. La Tabla 2 muestra el valor promedio de los resultados en nueve campos de visión.
(Ejemplo comparativo 6)
Para CytoSorb® (CytoSorbents Corporation) disponible comercialmente en el extranjero como una columna de adsorción de hemoperfusión que comprende perlas de poliestireno recubiertas con polímero biocompatible, la perla (en lo sucesivo, perlas del ejemplo comparativo 6) se dividió y las imágenes de la superficie de la perla se capturaron utilizando el microscopio láser (microscopio de medición dimensional 3D de color de gran profundidad VK-9710, fabricado por KEYENCE Corp.), y se extrajo un perfil en la imagen obtenida mediante la longitud de muestreo de 50 jm (correspondiente a 1) en su dirección de línea media para calcular la relación de longitud a extensión (Rlr) de la misma manera que en el ejemplo 1. La Tabla 2 muestra el valor promedio de los resultados en nueve campos de visión.
(Ejemplo comparativo 7)
Para Adacolumn® (JIMRO Co., Ltd., Medical Equipment Approval No. 21100BZZ00687000) disponible comercialmente como una columna de adsorción de hemoperfusión que comprende perlas de acetato de celulosa, la perla (en lo sucesivo, perlas del ejemplo comparativo 7) se dividió y las imágenes de la superficie de la perla se capturaron utilizando el microscopio láser (microscopio de medición dimensional 3D de color de gran profundidad VK-9710, fabricado por KEYENCE Corp.), y se extrajo un perfil en la imagen obtenida mediante la longitud de muestreo de 50 jm (correspondiente a 1) en su dirección de línea media para calcular la relación de longitud a extensión (Rlr) de la misma manera que en el ejemplo 1. La Tabla 2 muestra el valor promedio de los resultados en nueve campos de visión.
(2) Medición de la rugosidad media de la línea central (Ra) (jm )
(Ejemplos 1 a 7)
Para el tejido de punto tetraetilenpentamina-p-clorofenilado para el ejemplo 1 producido anteriormente, las imágenes se capturaron utilizando el microscopio láser (microscopio de medición dimensional 3D de color de gran profundidad VK-9710, fabricado por KEYENCE Corp.), se extrajo un perfil en la imagen obtenida mediante la longitud de muestreo de 50 jm (correspondiente a 1) en su dirección de línea media, el perfil extraído se analizó utilizando un programa informático de análisis cargado con el VK-9710 en un modo de rugosidad de línea para calcular la rugosidad media de la línea central (Ra). Como condición para capturar imágenes del microscopio láser, la lente del objetivo se ajustó a 20 veces. El tejido de punto anterior se colocó en un portaobjetos con el tejido mojado con agua destilada, la tela se cubrió con un cubreobjetos (espesor: 0,12 a 0,17 mm) desde arriba, se eliminó el exceso de agua destilada y después se capturaron imágenes desde la parte superior del cubreobjetos. La Tabla 2 muestra el valor promedio de los resultados en nueve campos de visión. Para los tejidos de punto tetraetilenpentamina-p-clorofenilados para los ejemplos 2 a 7, se llevaron a cabo las mismas operaciones. Los resultados se muestran en la tabla 2.
(Ejemplos Comparativos 1 a 4)
Para el tejido de punto tetraetilenpentamina-p-clorofenilado para el ejemplo comparativo 1 producido anteriormente, las imágenes se capturaron utilizando el microscopio láser (microscopio de medición dimensional 3D de color de gran profundidad VK-9710, fabricado por KEYENCE Corp.), se extrajo un perfil en la imagen obtenida mediante la longitud de muestreo de 50 jm (correspondiente a 1) en su dirección de línea media para calcular la rugosidad media de la línea central (Ra) de la misma manera que en el ejemplo 1. La Tabla 2 muestra el valor promedio de los resultados en nueve campos de visión. Para los tejidos de punto tetraetilenpentamina-p-clorofenilados para los ejemplos comparativos 2 y 3, y para el tejido de punto de control con tetraetilenpentamina-p-clorofenilo para el ejemplo comparativo 4, se llevaron a cabo las mismas operaciones. Los resultados se muestran en la tabla 2.
(Ejemplo comparativo 5)
Para la fibra hueca del ejemplo comparativo 5, después de exponer su superficie interior rasgando la fibra hueca en la dirección longitudinal de la fibra, las imágenes de la superficie interior se capturaron utilizando el microscopio láser (microscopio de medición dimensional 3D de color de gran profundidad VK-9710, fabricado por KEYENCE Corp.), se extrajo un perfil en la imagen obtenida mediante la longitud de muestreo de 50 pm (correspondiente a 1) en su dirección de línea media para calcular la rugosidad media de la línea central (Ra) de la misma manera que en el ejemplo 1. La Tabla 2 muestra el valor promedio de los resultados en nueve campos de visión.
(Ejemplo comparativo 6)
Para las perlas del ejemplo comparativo 6, después de dividir una cuenta, las imágenes de la superficie de la perla se capturaron utilizando el microscopio láser (microscopio de medición dimensional 3D de color de gran profundidad VK-9710, fabricado por KEYENCE Corp.), se extrajo un perfil en la imagen obtenida mediante la longitud de muestreo de 50 pm (correspondiente a 1) en su dirección de línea media para calcular la rugosidad media de la línea central (Ra) de la misma manera que en el ejemplo 1. La Tabla 2 muestra el valor promedio de los resultados en nueve campos de visión.
(Ejemplo comparativo 7)
Para las perlas del ejemplo comparativo 7, después de dividir una cuenta, las imágenes de la superficie de la perla se capturaron utilizando el microscopio láser (microscopio de medición dimensional 3D de color de gran profundidad VK-9710, fabricado por KEYENCE Corp.), y se extrajo un perfil en la imagen obtenida mediante la longitud de muestreo de 50 pm (correspondiente a 1) en la dirección de la línea media para calcular la rugosidad media de la línea central (Ra) de la misma manera que en el ejemplo 1. La Tabla 2 muestra el valor promedio de los resultados en nueve campos de visión.
(3) Medición de la raíz de la media cuadrática del ángulo de inclinación (°)
(Ejemplos 1 a 7)
Para el tejido de punto tetraetilenpentamina-p-clorofenilado para el ejemplo 1 producido anteriormente, las imágenes se capturaron utilizando el microscopio láser (microscopio de medición dimensional 3D de color de gran profundidad VK-9710, fabricado por KEYENCE Corp.), se extrajo un perfil en la imagen obtenida mediante la longitud de muestreo de 50 pm (correspondiente a 1) en su dirección de línea media, y el perfil extraído se analizó utilizando un programa informático de análisis cargado con el VK-9710 en un modo de rugosidad de línea para calcular la raíz de la media cuadrática del ángulo de inclinación. Como condición para capturar las imágenes para el microscopio láser, la lente del objetivo se ajustó a 20 veces. El tejido de punto anterior se colocó en un portaobjetos con el tejido mojado con agua destilada, la tela se cubrió con un cubreobjetos (espesor: 0,12 a 0,17 mm) desde arriba, se eliminó el exceso de agua destilada y después se capturaron imágenes desde la parte superior del cubreobjetos. La Tabla 2 muestra el valor promedio de los resultados en nueve campos de visión. Para los tejidos de punto tetraetilenpentamina-pclorofenilados para los ejemplos 2 a 7, se llevaron a cabo las mismas operaciones. Los resultados se muestran en la tabla 2.
(Ejemplos Comparativos 1 a 4)
Para el tejido de punto tetraetilenpentamina-p-clorofenilado para el ejemplo comparativo 1 producido anteriormente, las imágenes se capturaron utilizando el microscopio láser (microscopio de medición dimensional 3D de color de gran profundidad VK-9710, fabricado por KEYENCE Corp.), y se extrajo un perfil en la imagen obtenida mediante la longitud de muestreo de 50 pm (correspondiente a 1) en la dirección de la línea media para calcular la raíz de la media cuadrática del ángulo de inclinación de la misma manera que en el ejemplo 1. La Tabla 2 muestra el valor promedio de los resultados en nueve campos de visión. Para los tejidos de punto tetraetilenpentamina-p-clorofenilados para los ejemplos comparativos 2 y 3, y para el tejido de punto de control con tetraetilenpentamina-p-clorofenilo para el ejemplo comparativo 4, se llevaron a cabo las mismas operaciones. Los resultados se muestran en la tabla 2.
(Ejemplo comparativo 5)
Para la fibra hueca del ejemplo comparativo 5, después de exponer su superficie interior rasgando la fibra hueca en la dirección longitudinal de la fibra, las imágenes de la superficie interior se capturaron utilizando el microscopio láser (microscopio de medición dimensional 3D de color de gran profundidad VK-9710, fabricado por KEYENCE Corp.), y se extrajo un perfil en la imagen obtenida mediante la longitud de muestreo de 50 pm (correspondiente a 1) en la dirección de la línea media para calcular la raíz de la media cuadrática del ángulo de inclinación de la misma manera que en el ejemplo 1. La Tabla 2 muestra el valor promedio de los resultados en nueve campos de visión.
(Ejemplo comparativo 6)
Para las perlas del ejemplo comparativo 6, después de dividir una cuenta, las imágenes de la superficie de la perla se capturaron utilizando el microscopio láser (microscopio de medición dimensional 3D de color de gran profundidad VK-9710, fabricado por KEYENCE Corp.), y se extrajo un perfil en la imagen obtenida mediante la longitud de muestreo de 50 |jm (correspondiente a 1) en la dirección de la línea media para calcular la raíz de la media cuadrática del ángulo de inclinación de la misma manera que en el ejemplo 1. La Tabla 2 muestra el valor promedio de los resultados en nueve campos de visión.
(Ejemplo comparativo 7)
Para las perlas del ejemplo comparativo 7, después de dividir una cuenta, las imágenes de la superficie de la perla se capturaron utilizando el microscopio láser (microscopio de medición dimensional 3D de color de gran profundidad VK-9710, fabricado por KEYENCE Corp.), y se extrajo un perfil en la imagen obtenida mediante la longitud de muestreo de 50 jm (correspondiente a 1) en la dirección de la línea media para calcular la raíz de la media cuadrática del ángulo de inclinación central de la misma manera que en el ejemplo 1. La Tabla 2 muestra el valor promedio de los resultados en nueve campos de visión.
(4) Medición de la cantidad de carga positiva
(Ejemplos 1 a 7. Ejemplos Comparativos 1 a 7)
Se determinó una cantidad de carga positiva incluida en el tejido de punto tetraetilenpentamina-p-clorofenilado para el Ejemplo 1 mediante titulación por retroceso ácido-base. En un matraz de recuperación de 200 ml, se añadió el tejido de punto tetraetilenpentamina-p-clorofenilado del ejemplo 1 con 50 ml de hidróxido de sodio acuoso 6 M y la solución resultante se agitó durante 30 minutos. El tejido de punto se filtró a través de un papel de filtro. A continuación, el tejido de punto filtrado se añadió a 50 ml de agua de intercambio iónico, y la solución resultante se agitó durante 30 minutos y se filtró a través de un papel de filtro. La adición del tejido de punto al agua de intercambio iónico y la filtración del tejido de punto se repitieron hasta que el pH del agua de intercambio de iones alcanzó 7,0 para obtener el tejido de punto desalado. Después de que el tejido de punto desalado se dejara reposar a 80 °C en condiciones de presión normal durante 48 horas, se añadieron 1,0 g de tejido de punto seco y 30 ml de ácido clorhídrico 0,1 M a un recipiente de polipropileno y la solución resultante se agitó durante 10 minutos.
Después de la agitación, se extrajeron 5 ml de la solución sola y se transfirieron a un recipiente de polipropileno. A continuación, a la solución obtenida, se le añadieron gota a gota 0,1 ml de una solución acuosa 0,1 M de hidróxido de sodio. Después de la adición gota a gota, la solución resultante se agitó durante 10 minutos, y se midió el pH de la solución. La operación de adición gota a gota de 0,1 ml de la solución acuosa de hidróxido de sodio 0,1 M seguida de agitación durante 10 minutos y medición del pH, se repitió 100 veces de la misma manera. La cantidad de solución acuosa de hidróxido de sodio 0,1 M añadida gota a gota cuando el pH de la solución excedía de 8,5 se consideró como un título por 1,0 g. Usando el título por 1.0 g y la siguiente ecuación 4, se calculó la cantidad de carga positiva del tejido de punto tetraetilenpentamina-p-clorofenilado para el ejemplo 1. Los resultados se muestran en la tabla 2.
Contenido de carga positiva por 1 g de peso seco (mmol/g) = {cantidad de líquido de ácido clorhídrico 0,1 M añadida (30 ml)/cantidad de líquido de ácido clorhídrico extraída (5 ml)} x Título por 1,0 g (ml/g) x concentración de solución acuosa de hidróxido de sodio (0,1 M) ecuación 4
Para los tejidos de punto tetraetilenpentamina-p-clorofenilados para los ejemplos 2 a 7, los tejidos de punto tetraetilenpentamina-p-clorofenilados para los ejemplos comparativos 1 a 3, el tejido de punto de control con tetraetilenpentamina-p-clorofenilo para el ejemplo comparativo 4, la fibra hueca del ejemplo comparativo 5, las perlas del ejemplo comparativo 6 y las perlas del ejemplo comparativo 7, se llevaron a cabo las mismas operaciones. Los resultados se muestran en la tabla 2.
(5) Medición de la tasa de eliminación del complejo de granulocitos activados-plaquetas activadas, del complejo de monocitos activados-plaquetas activadas, de granulocitos activados y de monocitos activados
(Ejemplos 1 a 7)
Los discos, de 1 cm de diámetro, recortados de los tejidos de punto tetraetilenpentamina-p-clorofenilados para el ejemplo 1 se empaquetaron apilándolos en una columna cilíndrica que tenía una entrada de solución y una salida de solución en la parte superior e inferior (1 cm de diámetro interno x 1,2 cm de altura, 0,94 cm3 de volumen interno, 2 cm de diámetro externo, hecha de policarbonato), para producir de ese modo la columna que incluye lo tejidos de punto tetraetilenpentamina-p-clorofenilados para el ejemplo 1. Se añadió LPS a la sangre de un voluntario humano sano para alcanzar 70 EU/ml, la sangre resultante se agitó y se activó en las condiciones de 65 rpm, a 37 °C. durante 30 minutos en un baño maría, se dejó que la sangre activada pasara a través de la columna a un caudal de 0,63 ml/min utilizando una bomba y se tomaron muestras de sangre en la entrada y salida de la columna. La muestra de la entrada de la columna se tomó de la sangre que se sumergió en el baño maría. Suponiendo que el momento en que la sangre fluyó hacia la columna era en un punto temporal de 0 minutos, la muestra de sangre de la salida de la columna se tomó de la sangre que había pasado por la columna durante 3,5 a 6,5 minutos. Los antígenos de la superficie celular de las muestras obtenidas después de dejar pasar la sangre a través de la columna se tiñeron con un anticuerpo marcado con fluorescencia mostrado en la tabla 1, y a continuación las muestras se sometieron a hemólisis usando VersaLyse, se dejaron en reposo, después se enfriaron en hielo y se almacenaron en un lugar oscuro, seguido de la medición inmediata del número de células que se encontraban en cada muestra. A este respecto, se usó la solución de tinción de viabilidad 7-AAD (Biolegend) para discriminar las células vivas, y se usó el recuento de flujo (BECKMAN COULTER) para contar el número de células. Para la medición, se usó citometría de flujo (BD Cytometer Setup y Tracking Beads (Becton, Dickinson and Company)). Para el análisis, se utilizó el programa informático BD FACS Diva Versión 6.1.3 (Becton, Dickinson and Company) o FLOWJO (Tomy Digital Biology Co., Ltd.). Se calcularon las concentraciones de un complejo granulocitos activados-plaquetas activadas, un complejo de monocitos activadosplaquetas activadas, un granulocito activado, y un monocito activado, seguido del cálculo de las tasas de eliminación correspondientes antes de la entrada y después de la salida de la columna, utilizando las siguientes ecuación 5 a ecuación 8. La columna creada sin el tejido de punto se usó como una columna vacía, y se realizó la misma prueba de paso de sangre que la descrita anteriormente para obtener cada tasa de eliminación, que se usó como la tasa de eliminación para cada componente en la columna vacía, y se calculó una relación de capacidad de eliminación con respecto a la columna vacía de acuerdo con las siguientes ecuación 9 a ecuación 12. Los resultados se muestran en la tabla 3.
Tasa de eliminación del complejo de granulocitos activados-plaquetas activadas (%) = {(concentración del complejo de granulocitos activados-plaquetas activadas en el lado de entrada de la columna) -(concentración del complejo de granulocitos activados-plaquetas activadas en el lado de salida de la columna)}/(concentración del complejo de granulocitos activados-plaquetas activadas en el lado de entrada de la columna) x 100 ecuación 5
Tasa de eliminación del complejo de monocitos activados-plaquetas activadas (%) = {(concentración del complejo de monocitos activados-plaquetas activadas en el lado de entrada de la columna) -(concentración del complejo de monocitos activados-plaquetas activadas en el lado de salida de la columna)}/(concentración del complejo de monocitos activados-plaquetas activadas en el lado de entrada de la columna) x 100 ecuación 6
Tasa de eliminación de granulocitos activados (%) = {(concentración de granulocitos activados en el lado de entrada de la columna) - (concentración de granulocitos activados en el lado de salida de la columna)}/(concentración de granulocitos activados en el lado de entrada de la columna) x 100 ecuación 7
Intersticial
Tasa de eliminación de monocitos activados (%) = {(concentración de monocitos activados en el lado de entrada de la columna) -(concentración de monocitos activados en el lado de salida de la columna)}/(concentración de monocitos activados en el lado de entrada de la columna) x 100 ecuación 8
Capacidad de eliminación del complejo de granulocitos activados-plaquetas activadas (relación a la columna vacía) = tasa de eliminación del complejo de granulocitos activados-plaquetas activadas en cada ejemplo (%)/tasa de eliminación del complejo de granulocitos activados-plaquetas activadas en la columna vacía (%) ecuación 9
Capacidad de eliminación del complejo de monocitos activados-plaquetas activadas (relación a columna vacía) = tasa de eliminación del complejo de monocitos activados-plaquetas activadas en cada ejemplo (%)/tasa de eliminación del complejo de monocitos activados-plaquetas activadas en columna vacía (%) ecuación 10
Capacidad de eliminación de granulocitos activados (relación a columna vacía) = tasa de eliminación de granulocitos activados en cada ejemplo (%)/ tasa de eliminación de granulocitos activados en columna vacía (%) ecuación 11
Capacidad de eliminación de monocitos activados (relación a columna vacía) = tasa de eliminación de monocitos activados en cada ejemplo (%)/ tasa de eliminación de monocitos activados en columna vacía (%) ecuación 12
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(continuación)
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Para los tejidos de punto tetraetilenpentamina-p-clorofenilados para los ejemplos 2 a 7, se llevaron a cabo las mismas operaciones. Los resultados se muestran en la tabla 3.
(Ejemplos Comparativos 1 a 4)
Los discos, de 1 cm de diámetro, recortados de los tejidos de punto tetraetilenpentamina-p-clorofenilados para el ejemplo comparativo 1 se empaquetaron apilándolos en una columna cilíndrica que tenía una entrada de solución y una salida de solución en la parte superior e inferior (1 cm de diámetro interno x 1,2 cm de altura, 0,94 cm3 de volumen interno, 2 cm de diámetro externo, hecha de policarbonato), para producir de ese modo la columna que incluye lo tejidos de punto tetraetilenpentamina-p-clorofenilados para el ejemplo comparativo 1. Se calcularon las concentraciones de un complejo de granulocitos activados-plaquetas activadas, un complejo de monocitos activadosplaquetas activadas, un granulocito activado y un monocito activado de la misma manera que en el ejemplo 1, seguido del cálculo de una relación de cada capacidad de eliminación en relación con la columna vacía, usando la ecuación 5 a la ecuación 12 anterior. Para los tejidos de punto tetraetilenpentamina-p-clorofenilados para los ejemplos comparativos 2 y 3, y para el tejido de punto de control con tetraetilenpentamina-p-clorofenilo para el ejemplo comparativo 4, se llevaron a cabo las mismas operaciones. Los resultados se muestran en la tabla 3.
(Ejemplo comparativo 5)
Para sepXiris®, la fibra hueca del ejemplo comparativo 5 se cortó a 10 cm x 157 fibras para producir un mini módulo. Se calcularon las concentraciones de un complejo de granulocitos activados-plaquetas activadas, un complejo de monocitos activados-plaquetas activadas, un granulocito activado y un monocito activado de la misma manera que en el ejemplo 1, seguido del cálculo de una relación de cada capacidad de eliminación en relación con la columna vacía, usando la ecuación 5 a la ecuación 12 anterior. Los resultados se muestran en la tabla 3.
(Ejemplo comparativo 6)
Para CytoSorb®, se extrajeron 1,13 ml de las perlas del ejemplo comparativo 6 para producir un módulo pequeño. Se calcularon las concentraciones de un complejo de granulocitos activados-plaquetas activadas, un complejo de monocitos activados-plaquetas activadas, un granulocito activado y un monocito activado de la misma manera que en el ejemplo 1, seguido del cálculo de una relación de cada capacidad de eliminación en relación con la columna vacía, usando la ecuación 5 a la ecuación 12 anterior. Los resultados se muestran en la tabla 3.
(Ejemplo comparativo 7)
Para Adacolumn®, se extrajeron 1,63 g de las perlas del ejemplo comparativo 7 para producir un módulo pequeño. Se calcularon las concentraciones de un complejo de granulocitos activados-plaquetas activadas, un complejo de monocitos activados-plaquetas activadas, un granulocito activado y un monocito activado de la misma manera que en el ejemplo 1, seguido del cálculo de una relación de cada capacidad de eliminación en relación con la columna vacía, usando la ecuación 5 a la ecuación 12 anterior. Los resultados se muestran en la tabla 3.
(6) Medición de la tasa de eliminación de IL-6
(Ejemplos 1 a 7)
El tejido de punto tetraetilenpentamina-p-clorofenilado para el Ejemplo 1 se recortó en discos que tenían un diámetro de 6 mm, cuatro de los cuales se colocaron en un recipiente de polipropileno. Al recipiente, se añadió 1 ml de suero fetal bovino (en lo sucesivo, en el presente documento, FBS) que se preparó de manera que la concentración de IL-6 fuera 2000 pg/ml, la mezcla resultante se mezcló por inversión durante dos horas en una incubadora a 37 °C, y después se midió la concentración restante de IL-6 mediante ELISA, calculando así la tasa de eliminación de IL-6 utilizando la siguiente ecuación 13. Los resultados se muestran en la tabla 4.
Tasa de eliminación de IL-6 (%) = {(concentración de IL-6 antes de mezclar por inversión) - (concentración de IL-6 después de mezclar por inversión)}/(concentración de IL-6 antes de mezclar por inversión) x 100 ecuación 13
Para los tejidos de punto tetraetilenpentamina-p-clorofenilados para los ejemplos 2 a 7, se llevaron a cabo las mismas operaciones. Los resultados se muestran en la tabla 4.
(Ejemplos Comparativos 1 a 4)
El tejido de punto tetraetilenpentamina-p-clorofenilado para el ejemplo comparativo 1 se recortó en discos que tenían un diámetro de 6 mm, cuatro de los cuales se colocaron en un recipiente de polipropileno. Al recipiente, se añadió 1 ml de FBS que se preparó de manera que la concentración de IL-6 fuera 2000 pg/ml de manera similar, la mezcla resultante se mezcló por inversión durante dos horas en una incubadora a 37 °C, y después se midió una concentración restante de IL-6 mediante ELISA, calculando así la tasa de eliminación de IL-6 utilizando la ecuación 13 anterior. Los resultados se muestran en la tabla 4. Para los tejidos de punto tetraetilenpentamina-p-clorofenilados para los ejemplos comparativos 2 y 3, y para el tejido de punto de control con tetraetilenpentamina-p-clorofenilo para el ejemplo comparativo 4, se llevaron a cabo las mismas operaciones. Los resultados se muestran en la tabla 4. (Ejemplo comparativo 5)
Para sepXiris®, la fibra hueca del ejemplo comparativo 5 se recortó a 50 cm de longitud y la fibra cortada se colocó en un recipiente de polipropileno. Al recipiente, se añadió 1 ml de FBS que se preparó de manera que la concentración de IL-6 fuera 2000 pg/ml de manera similar, la solución resultante se mezcló por inversión durante dos horas en una incubadora a 37 °C, y después se midió la concentración restante de IL-6 en el interior mediante ELISA, calculando así la tasa de eliminación de IL-6 utilizando la ecuación 13 anterior. Los resultados se muestran en la tabla 4.
(Ejemplo comparativo 6)
Para CytoSorb®, se extrajeron 50 pl de las perlas del ejemplo comparativo 6 en un recipiente de polipropileno. Al recipiente, se añadió 1 ml de FBS que se preparó de manera que la concentración de IL-6 fuera 2000 pg/ml de manera similar, la solución resultante se mezcló por inversión durante dos horas en una incubadora a 37 °C, y después se midió la concentración restante de IL-6 en el interior mediante ELISA, calculando así la tasa de eliminación de IL-6 utilizando la ecuación 13 anterior. Los resultados se muestran en la tabla 4.
(Ejemplo comparativo 7)
Para Adacolumn®, se extrajeron 75 mg de las perlas del ejemplo comparativo 7 en un recipiente de polipropileno. Al recipiente, se añadió 1 ml de FBS que se preparó de manera que la concentración de IL-6 fuera 2000 pg/ml de manera similar, la solución resultante se mezcló por inversión durante dos horas en una incubadora a 37 °C, y después se midió la concentración restante de IL-6 en el interior mediante ELISA, calculando así la tasa de eliminación de IL-6 utilizando la ecuación 13 anterior. Los resultados se muestran en la tabla 4.
(7) Medición de la tasa de eliminación de IL-8
(Ejemplos 1 a 7)
El tejido de punto tetraetilenpentamina-p-clorofenilado para el Ejemplo 1 se recortó en discos que tenían un diámetro de 6 mm, cuatro de los cuales se colocaron en un recipiente de polipropileno. Al recipiente, se añadió 1 ml de suero fetal bovino (en lo sucesivo, en el presente documento, FBS) que se preparó de manera que la concentración de IL-8 fuera 2000 pg/ml, la solución resultante se mezcló por inversión durante una hora en una incubadora a 37 °C, y después se midió la concentración restante de IL-6 mediante ELISA, calculando así la tasa de eliminación de IL-8 utilizando la siguiente ecuación 14. Los resultados se muestran en la tabla 4.
Tasa de eliminación de IL-8 (%) = {(concentración de IL-8 antes de mezclar por inversión) - (concentración de IL-8 después de mezclar por inversión)}/(concentración de IL-8 antes de mezclar por inversión) x 100 ecuación 14
Para los tejidos de punto tetraetilenpentamina-p-clorofenilados para los ejemplos 2 a 6, se llevaron a cabo las mismas operaciones. Los resultados se muestran en la tabla 4.
(Ejemplos Comparativos 1 a 4)
El tejido de punto tetraetilenpentamina-p-clorofenilado para el ejemplo comparativo 1 se recortó en discos que tenían un diámetro de 6 mm, cuatro de los cuales se colocaron en un recipiente de polipropileno. Al recipiente, se añadió 1 ml de FBS que se preparó de manera que la concentración de IL-8 fuera 2000 pg/ml de manera similar, la solución resultante se mezcló por inversión durante una hora en una incubadora a 37 °C, y después se midió la concentración restante de IL-8 mediante ELISA, calculando así la tasa de eliminación de IL-8 utilizando la ecuación 14 anterior. Los resultados se muestran en la tabla 4. Para los tejidos de punto tetraetilenpentamina-p-clorofenilados para los ejemplos comparativos 2 y 3, y para el tejido de punto de control con tetraetilenpentamina-p-clorofenilo para el ejemplo comparativo 4, se llevaron a cabo las mismas operaciones. Los resultados se muestran en la tabla 4.
(Ejemplo comparativo 5)
Para sepXiris®, la fibra hueca del ejemplo comparativo 5 se recortó a 50 cm de longitud, la fibra cortada se puso en un recipiente de polipropileno. Al recipiente, se añadió 1 ml de FBS que se preparó de manera que la concentración de IL-8 fuera 2000 pg/ml de manera similar, la solución resultante se mezcló por inversión durante una hora en una incubadora a 37 °C, y después se midió la concentración restante de IL-8 mediante ELISA, calculando así la tasa de eliminación de IL-8 utilizando la ecuación 14 anterior. Los resultados se muestran en la tabla 4.
(Ejemplo comparativo 6)
Para CytoSorb®, se extrajeron 50 pl de las perlas del ejemplo comparativo 6 en un recipiente de polipropileno. Al recipiente, se añadió 1 ml de FBS que se preparó de manera que la concentración de IL-8 fuera 2000 pg/ml de manera similar, la solución resultante se mezcló por inversión durante una hora en una incubadora a 37 °C, y después se midió la concentración restante de IL-8 mediante ELISA, calculando así la tasa de eliminación de IL-8 utilizando la ecuación 14 anterior. Los resultados se muestran en la tabla 4.
(Ejemplo comparativo 7)
Para Adacolumn®, se extrajeron 75 mg de las perlas del ejemplo comparativo 7 en un recipiente de polipropileno. Al recipiente, se añadió 1 ml de FBS que se preparó de manera que la concentración de IL-8 fuera 2000 pg/ml de manera similar, la solución resultante se mezcló por inversión durante dos horas en una incubadora a 37 °C, y después se midió la concentración restante de IL-8 mediante ELISA, calculando así la tasa de eliminación de IL-8 utilizando la ecuación 14 anterior. Los resultados se muestran en la tabla 4.
(8) Medición de la tasa de eliminación de HMGB-1
(Ejemplos 1 a 7)
El tejido de punto tetraetilenpentamina-p-clorofenilado para el Ejemplo 1 se recortó en discos que tenían un diámetro de 6 mm, cuatro de los cuales se colocaron en un recipiente de polipropileno. Al recipiente, se añadió 1 ml de suero fetal bovino (en lo sucesivo, en el presente documento, FBS) que se preparó de manera que la concentración de HMGB-1 fuera 100 ng/ml, la solución resultante se mezcló por inversión durante una hora en una incubadora a 37 °C, y después se midió la concentración restante de IL-6 mediante ELISA, calculando así la tasa de eliminación de HMGB-1 utilizando la siguiente ecuación 15. Los resultados se muestran en la tabla 4.
Tasa de eliminación de HMGB-1 (%) = {(concentración de HMGB-1 antes de mezclar por inversión) -(concentración de HMGB-1 después de mezclar por inversión)}/(concentración de HMGB-1 antes de mezclar por inversión) x 100 ecuación 15
Para los tejidos de punto tetraetilenpentamina-p-clorofenilados para los ejemplos 2 a 6, se llevaron a cabo las mismas operaciones. Los resultados se muestran en la tabla 4.
(Ejemplos Comparativos 1 a 4)
El tejido de punto tetraetilenpentamina-p-clorofenilado para el ejemplo comparativo 1 se recortó en discos que tenían un diámetro de 6 mm, cuatro de los cuales se colocaron en un recipiente de polipropileno. Al recipiente, se añadió 1 ml de FBS que se preparó de manera que la concentración de HMGB-1 fuera 100 ng/ml de manera similar, la solución resultante se mezcló por inversión durante una hora en una incubadora a 37 °C, y después se midió la concentración restante de HMGB-1 mediante ELISA, calculando así la tasa de eliminación de HMGB-1 utilizando la ecuación 15 anterior. Los resultados se muestran en la tabla 4. Para los tejidos de punto tetraetilenpentamina-p-clorofenilados para los ejemplos comparativos 2 y 3, y para el tejido de punto de control con tetraetilenpentamina-p-clorofenilo para el ejemplo comparativo 4, se llevaron a cabo las mismas operaciones. Los resultados se muestran en la tabla 4.
(Ejemplo comparativo 5)
Para sepXiris®, la fibra hueca del ejemplo comparativo 5 se recortó a 50 cm de longitud, la fibra cortada se puso en un recipiente de polipropileno. Al recipiente, se añadió 1 ml de FBS que se preparó de manera que la concentración de HMGB-1 fuera 100 ng/ml de manera similar, la solución resultante se mezcló por inversión durante una hora en una incubadora a 37 °C, y después se midió la concentración restante de HMGB-1 mediante ELISA, calculando así la tasa de eliminación de HMGB-1 utilizando la ecuación 15 anterior. Los resultados se muestran en la tabla 4.
(Ejemplo comparativo 6)
Para CytoSorb®, se extrajeron 50 j l de las perlas del ejemplo comparativo 6 en un recipiente de polipropileno. Al recipiente, se añadió 1 ml de FBS que se preparó de manera que la concentración de HMGB-1 fuera 100 ng/ml de manera similar, la solución resultante se mezcló por inversión durante una hora en una incubadora a 37 °C, y después se midió la concentración restante de HMGB-1 mediante ELISA, calculando así la tasa de eliminación de HMGB-1 utilizando la ecuación 15 anterior. Los resultados se muestran en la tabla 4.
(Ejemplo comparativo 7)
Para Adacolumn®, se extrajeron 75 mg de las perlas del ejemplo comparativo 7 en un recipiente de polipropileno. Al recipiente, se añadió 1 ml de FBS que se preparó de manera que la concentración de HMGB-1 fuera 100 ng/ml de manera similar, la solución resultante se mezcló por inversión durante dos horas en una incubadora a 37 °C, y después se midió la concentración restante de HMGB-1 mediante ELISA, calculando así la tasa de eliminación de HMGB-1 utilizando la ecuación 15 anterior. Los resultados se muestran en la tabla 4.
(9) Evaluación de la inhibición del deterioro de la función pulmonar (P/F)
(Ejemplos I a 6, ejemplos comparativos 1 a 7)
Se evaluó el efecto inhibidor del deterioro de la función pulmonar (P/F), usando un conejo, a través del modelo SDRA producido por la administración intratraqueal de HCl y LPS (Referencia: Japan Geriatrics Society Journal, Vol. 30, 1032-1038 (1993)). En primer lugar, después de la inducción de la anestesia mediante la administración intravenosa de 30 mg/kg de pentobarbital sódico (25 mg/ml, NACALAI TESQUE, INC.), un conejo NZW macho (peso corporal: 3 a 3,5 kg) se afeitó en el cuello y el abdomen. Después de la inyección subcutánea de lidocaína (inyección de xilocaína al 0,5 %, AstraZeneca KK), la tráquea quedó expuesta desde el cuello. Se intubó e inmovilizó una cánula traqueal (16Fr, Terumo Corporation) en la tráquea. Se utilizó un respirador (EVITA 300, Draeger Medical Japan LTD.) para realizar la ventilación. Las condiciones de la ventilación se regularon midiendo los parámetros de gasometría de sangre extraída de una arteria carótida con PEEP aplicada a través de i-STAT (cartucho CG4+, ABBOTT JAPAN CO., LTD.) y cambiando el número de ventilación de modo que las mediciones (valores corregidos a la temperatura corporal) antes de la administración de HCl y LPS estuvieran dentro del intervalo de pCO2 de 35 a 45 mmHg. Se estableció una concentración de oxígeno inspirado al 100% y, una vez establecidas las condiciones de ventilación, se inició la evaluación del equipo a probar. Durante la evaluación, las condiciones de ventilación no se modificaron. Se administró una infusión de 0,06 mg/kg/h de vecuronio disuelto en solución salina normal (VECURONIO 4 mg para inyección intravenosa: Fuji Pharma, Co., Ltd., solución salina normal: Otsuka Pharmaceutical Factory, Inc.) mediante infusión continua de 2 ml/kg/h. La infusión se conectó además a una bomba de infusión (55-1111, HARVARD APPARATUS, INC.) a través de una llave de tres vías para lograr una vía de anestesia de mantenimiento. Como anestesia de mantenimiento, se administró pentobarbital (12,5 mg/ml, NACALAI TESQUE, INC.) mediante infusión continua de 2 a 8 mg/kg/h (disminuida o aumentada de acuerdo con el estado del animal). El SDRA se indujo mediante la administración intratraqueal de 2 ml/kg de HCl 0,04 N y mediante la administración intratraqueal de 3 ml/kg de 0,05 mg/kg de LPS 30 minutos después de la administración de HCl. Suponiendo que el punto temporal en el que se administró LPS se consideró como el tiempo 0 horas, el efecto inhibidor del deterioro de la función pulmonar (P/F) se evaluó a partir de P/F 6 horas después de la administración. Para los ejemplos 1 a 6 y ejemplos comparativos 1 a 4), los tejidos de punto tetraetilenpentamina-p-clorofenilados para los ejemplos 1 a 6 y los ejemplos comparativos 1 a 3 y el tejido de punto de control tetraetilenpentamina-pclorofenilado para el ejemplo comparativo 4 producidos por los procedimientos anteriores se empaquetó en cada columna pequeña cilíndrica que tenía un volumen de empaquetamiento de 11 cm.3 (altura de empaquetamiento: 4,7 cm, diámetro del empaquetamiento: 1,9 cm) para producir columnas para el tratamiento del SDRA en animales modelo. Para el ejemplo comparativo 5, se utilizó sepXiris® para producir una mini columna con un área de membrana de 750 cm2 (longitud eficaz: 10 cm). Para el ejemplo comparativo 6, se utilizó CytoSorb® para producir una columna pequeña que tiene una cantidad de empaquetamiento de perlas de 13,5 ml (altura de empaquetamiento: 4,7 cm, diámetro del empaquetamiento: 1,9 cm). Para el ejemplo comparativo 7, se utilizó Adacolumn® para producir una columna pequeña que tiene una cantidad de empaquetamiento de perlas de 19,6 g (altura de empaquetamiento: 4,7 cm, diámetro del empaquetamiento: 1,9 cm). Cada columna se lavó con solución salina normal y, después de sensibilizar con heparina, cada columna se ejecutó a un caudal de 5 ml/min al conejo inducido con SDRA inmediatamente después de la administración intratraqueal de LPS, y se evaluó la función pulmonar (P/F) 6 horas después de la administración. Los resultados de la evaluación se muestran en la tabla 4. Como evaluación de la eficacia, cuando el valor P/F es superior a 300, la columna se definió como eficaz y cuando el valor P/F es 300 o menos, la columna se definió como sin efecto porque el valor se encontraba dentro de los criterios del SDRA (valor normalizado del SDRA según la definición de Berlín, Referencia: JAMA. 2012; 307 (23): 2526-2533).
T l 21
Figure imgf000023_0001
T l 1
Figure imgf000023_0002
(continuación)
Figure imgf000024_0001
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Basándose en los resultados de los experimentos anteriores, se encuentra que los productos existentes (por ejemplo, sepXiris®) que solo eliminan las citocinas inflamatorias no tienen ningún efecto para el tratamiento de enfermedades respiratorias, y el material para la eliminación de un complejo de leucocitos activados-plaquetas activadas de la presente invención puede eliminar el complejo de leucocitos activados-plaquetas activadas con alta eficacia y es eficaz para el tratamiento de enfermedades respiratorias, especialmente para el tratamiento del SDRA.
Aplicabilidad industrial
La columna para la eliminación de componentes sanguíneos de la presente invención tiene la capacidad de eliminar los complejos de leucocitos activados-plaquetas activadas y, por lo tanto, puede utilizarse como columna de circulación extracorpórea para el tratamiento de enfermedades respiratorias, particularmente para el tratamiento del SDRA.

Claims (7)

REIVINDICACIONES
1. Un material para la eliminación de un complejo de leucocitos activados-plaquetas activadas, siendo el material un vehículo insoluble en agua a cuya superficie está o están unidos un compuesto o compuestos que tienen un grupo o unos grupos funcionales cargados,
en donde una relación de longitud a extensión de dicha superficie es de 4 a 7;
en donde la rugosidad media de la línea central de dicha superficie es de 2 a 10 pm; y
en donde una raíz de la media cuadrática del ángulo de inclinación de dicha superficie es de 50 a 85°;
midiéndose la relación de longitud a extensión, la rugosidad media de la línea central y la raíz de la media cuadrática del ángulo de inclinación mediante los métodos de la descripción.
2. El material para la eliminación, de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el valor absoluto de la cantidad de carga del grupo o grupos funcionales es de 0,3 a 3,0 mmol por 1 g de peso seco de dicho vehículo insoluble en agua.
3. El material para la eliminación, de acuerdo con las reivindicaciones 1 o 2, en donde dicho grupo funcional cargado es un grupo amino.
4. El material para la eliminación, de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde dicho vehículo insoluble en agua está en forma de fibras, y la fibra tiene un diámetro de fibra de 1 a 100 pm.
5. El material para la eliminación, de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde dicho vehículo insoluble en agua comprende uno o más polímeros seleccionados del grupo que consiste en poliestireno, polisulfona y polietersulfona.
6. El material para la eliminación, de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en donde el material adsorbe y elimina un leucocito activado, IL-6, IL-8 o HMGB-1.
7. Una columna para la purificación de sangre, comprendiendo la columna el material para la eliminación, de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6.
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