JP2003201251A - サイトカイン誘導材料及びサイトカイン誘導用具 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 血液または血液成分などと接触されることに
よりサイトカインをより一層効果的に誘導することを可
能とするサイトカイン誘導材料、及び該サイトカイン誘
導材料を用いて構成されたサイトカイン誘導用具を提供
する。 【解決手段】 サイトカイン誘導剤と、水に不溶性の誘
導増強剤とを含む、サイトカイン誘導材料、並びに容器
と、容器内に収納された上記サイトカイン誘導材料とを
有し、サイトカイン誘導材料が血液または血液成分と接
触される、サイトカイン誘導用具。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、サイトカイン誘導
療法などに用いられるサイトカイン誘導材料及び誘導用
具に関し、特に、サイトカインを効果的に誘導し得るサ
イトカイン誘導材料及び誘導用具に関する。

【０００２】

【従来の技術】サイトカインは、多種多様な細胞間情報
伝達因子の総称である。サイトカインとしては、例え
ば、インターフェロンα、インターフェロンβ、インタ
ーフェロンγ（ＩＦＮ−γ）、インターロイキン１〜イ
ンターロイキン１８、腫瘍壊死因子−α（Tumor Necros
is Factor−α、ＴＮＦ−α）、腫瘍壊死因子−β（Tum
orNecrosis Factor−β）、トランスフォーミング増殖
因子−α（Transforming Growth Factor−α）、トラン
スフォーミング増殖因子−β（Transforming Growth Fa
ctor−β、ＴＧＦ−β）、及び各種細胞増殖因子などが
挙げられる（非特許文献１、非特許文献２）。

【０００３】サイトカインは生体内で様々な活性を有
し、様々な疾患に関与していることが知られている。こ
のようなサイトカインの活性を生体内で惹起して疾患の
治療を行う、サイトカイン誘導療法が従来より行われて
きている。サイトカイン誘導療法では、患者に、サイト
カイン誘導剤を投与し、生体内においてサイトカインの
誘導を引き起こす。このようなサイトカイン誘導療法に
用いられるサイトカイン誘導物質として、様々な物質が
知られている。例えば、微生物由来のＯＫ−４３２、Ｂ
ＣＧ 、ベスタチン、丸山ワクチン、またはロムリチド
などが知られており、担子菌類由来のサイトカイン誘導
物質として、クレスチン、レンチナン、またはシゾフィ
ランなどが知られている。

【０００４】例えば、ＯＫ−４３２やＢＣＧなどは血液
などからインターロイキン１やインターフェロン−γな
どのサイトカインを誘導することが知られている（非特
許文献３、非特許文献４）。

【０００５】上述したサイトカイン誘導療法では、生体
内でサイトカインを誘導することはできるが充分量のサ
イトカインを誘導することが困難であり、強い効力を発
揮させ難いという問題があった。また、サイトカインを
効果的に誘導するために、サイトカイン誘導剤の投与量
が多くなり、副作用が大きくなり、治療を有効に行い得
ないという問題もあった。

【０００６】下記特許文献１には不溶性担体に刺激剤が
共有結合されている悪性腫瘍治療用白血球刺激材が記載
されている。また、下記特許文献２にはインターロイキ
ン１、ＯＫ−４３２、遺伝子組み換えインターロイキン
２、またはγ−インターフェロンを不溶性担体に共有結
合で結合してなる癌治療用白血球刺激材が示されてい
る。これらは腫瘍障害性細胞を誘導するものであり、こ
れらの先行技術ではサイトカイン誘導については全く述
べられていない。

【０００７】

【非特許文献１】臨床免疫第２７巻特別増刊号１９９５
年「サイトカインのすべて」科学評論社

【非特許文献２】臨床免疫第３６巻 ３９−４４、２０
０１年

【非特許文献３】岐阜大医紀４３：１６６−１７７，１
９９５年

【非特許文献４】Molecular medicine Vol.36，臨時増
刊号，２２０−２２９，１９９９年

【特許文献１】特開昭６０−１２０８２１号

【特許文献２】特開昭６１−２７７６２８号

【０００８】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、上述
した従来技術の現状に鑑み、従来のサイトカイン誘導療
法に比べてより有効なサイトカイン誘導療法を実現する
ことを可能とする新規なサイトカイン誘導材料及びサイ
トカイン誘導用具を提供することにある。

【０００９】

【課題を解決するための手段】本発明のサイトカイン誘
導材料は、サイトカイン誘導剤と水に不溶性の誘導増強
剤とを含む。

【００１０】本願発明者らは、サイトカイン誘導剤とと
もに水に不溶性の誘導増強剤を含むサイトカイン誘導材
料、またはサイトカイン誘導剤が固定化された不溶性誘
導増強剤からなるサイトカイン誘導材料が、著しく高い
サイトカイン誘導量を示すことを見いだし、本発明を完
成した。

【００１１】本発明のサイトカイン誘導用具は、容器
と、容器内に収納された本発明に従って構成されたサイ
トカイン誘導材料とを有するサイトカイン誘導用具であ
る。以下、本発明の詳細を説明する。

【００１２】本発明において、上記誘導増強剤は、特に
限定されるわけではないが、水に不溶性である、金属、
有機物または無機物などにより構成され、好ましくは有
機物材料、より好ましくは高分子材料からなる。

【００１３】上記金属からなる誘導増強剤としては、金
もしくは金合金、銀もしくは銀合金、チタンもしくはチ
タン合金、またはステンレスなどの金属が挙げられる。
上記無機物からなる誘導増強剤としては、活性炭、ガラ
スあるいはガラスの誘導体、シリカ系組成物、アルミ
ナ、ヒドロキシアパタイトなどが挙げられる。

【００１４】上記有機物及び高分子材料からなる誘導増
強剤としては、セルロース系、アガロース系、デキスト
ラン系、ポリスチレン系、アクリルエステル系、ポリエ
チレンテレフタレート系、ナイロン系、ポリビニルアル
コール系、ポリスルホン系、ポリアミド系、ポリアクリ
ロニトリル系、ポリエチレン系、ポリウレタン系、ポリ
プロピレン系、ポリエステル系などが挙げられる。

【００１５】ポリスチレン系材料としてはジビニルベン
ゼン−スチレン共重合体、アクリルエステル系としては
ポリメチルメタクリレートもしくはポリヒドロキシエチ
ルメタクリレートなどが挙げられる。特にポリスチレン
系、アクリルエステル系、ナイロン系、ポリエステル
系、セルロース系、ポリビニルアルコール系の高分子材
料が好ましい。

【００１６】誘導増強剤は無極性であり、疎水性であっ
てもよく、この場合、誘導増強剤としては、ポリスチレ
ン系高分子材料などを用いることができる。また、これ
らの誘導増強剤には表面修飾や表面コーティングなどに
より、表面に親水性を付与することもできる。

【００１７】上記誘導増強剤としての形状としては、特
に限定されないが、繊維状、不織布状、スポンジ状、粒
子状、膜状、中空糸状などの公知の形状を用いることが
できる。

【００１８】誘導増強剤の大きさとしては、粒子状では
５０μｍ以上２ｍｍ以下であることが好ましく、繊維状
では繊維径が１０μｍ以下、特に５μｍ以下であること
が好ましい。あるいは繊維状の場合は不織布からなる誘
導増強剤が好ましく、特に繊維径が３μｍ以下であるこ
とが好ましい。

【００１９】特に、誘導増強剤は、白血球を吸着する材
料であることが好ましく、白血球吸着材料として、ポリ
スチレン系、アクリルエステル系、ポリエステル系、ナ
イロン系、ポリビニルアルコール系、または酢酸セルロ
ースなどのセルロース系材料からなる高分子材料やガラ
ス系の材料などを用いることができる。

【００２０】また、誘導増強剤として表面粗さを付与さ
れた材料を用いることが好ましく、その中心線平均粗さ
Ｒａ値が０．２μｍ〜１０μｍであり、かつ凹凸平均間
隔Ｓｍ値が５μｍ〜２００μｍの範囲にある凹凸を表面
に有する材料であることが好ましい。

【００２１】なお、上記Ｒａ値とはＪＩＳ Ｂ０６０１
−１９８２における中心線平均粗さである。また、上記
凸凹平均間隔Ｓｍ値は、以下のようにして定義される値
である。

【００２２】でこぼこ平均間隔Ｓｍ値 現在のＪＩＳ規格では、表面粗さの高さ方向の情報につ
いては規定されているが、面方向の情報に関しては規定
されていない。しかしながら、本発明における凸凹は、
凸凹の面方向における間隔によっても後述の実施例から
明らかなように限界付けられるものである。そこで、本
発明では、でこぼこ平均間隔Ｓｍ値を用いることにより
凸凹の面方向の範囲を規定した。

【００２３】上記でこぼこの平均間隔Ｓｍ値は、以下の
ようにして求められる。まず、図１に示す粗さ曲線Ａの
中心線Ｂに対して、それぞれ、一定の高さ及び深さの位
置に上側カウントレベルＣ及び下側カウントレベルＤを
引く。次に、下側のカウントレベルＤと粗さ曲線Ａとが
交差する２点間において、上側カウントレベルと粗さ曲
線とが交差する点が一回以上存在するときに、一つの山
として「山」を定義する。

【００２４】そして、でこぼこ平均間隔Ｓｍ値は、図２
に示すように、基準長さＬの間にある山の間隔をＳｍｉ
としたときに、下記の式で定義される値である。

【００２５】

【数１】

【００２６】すなわち、でこぼこ平均間隔Ｓｍ値とは、
基準長さＬの間にある山同士の間隔の平均値を示す。こ
のようにして、でこぼこの平均間隔Ｓｍ値により、凸凹
の面方向の条件が定義される。

【００２７】表面粗さは多孔性などに由来するものであ
っても良い。誘導増強剤として好ましい多孔性高分子材
料としては、ポリスチレン系、アクリルエステル系、ポ
リエステル系、ナイロン系、セルロース系、ポリビニル
アルコール系などが挙げられる。

【００２８】表面粗さは繊維形状から由来するものであ
っても良く、繊維状もしくは不織布状材料が誘導増強剤
として好ましい。特に繊維状・不織布状高分子材料など
が誘導増強剤として好ましく、ポリスチレン系、アクリ
ルエステル系、ポリエステル系、ナイロン系、セルロー
ス系、ポリビニルアルコール系などの繊維状・不織布状
高分子材料が挙げられる。

【００２９】誘導増強剤の表面にＲａ値が０．２μｍ以
上の粗さを付与することにより、著しくサイトカインの
誘導が増強されることと、白血球の大きさが１０μｍ〜
２０μｍであることを考えると、上記誘導増強剤のＲａ
値が０．２μｍ〜１０μｍであることが好ましい。ま
た、この表面粗さのサイトカイン誘導増強作用は、白血
球に比べて上記Ｒａ値が非常に小さいため、単なる接触
表面積の増大によるものでないと考えられる。

【００３０】上記サイトカイン誘導剤としては、例え
ば、ＢＣＧ、ＢＣＧ−ＣＷＳ、ＰＰＤ、Ｎｏｃａｒｄｉ
ａ−ＣＷＳ、ＯＫ−４３２、Ｍｕｒａｍｙｌｄｉｐｅｐ
ｔｉｄｅなどの細菌類やその成分；ＰＳＫ、レンチナ
ン、シゾフィランなどの多糖類；あるいはポリＩ：Ｃ、
ポリＡ：Ｕなどのポリマー；あるいはＬｅｖａｍｉｓｏ
ｌｅ、ＤＮＣＢ、Ａｚｉｍｅｘｏｎ、Ｔｉｌｏｒｏｎ
ｅ、Ｂｅｓｔａｔｉｎなどの化学物質が挙げられる。ま
た、上記のような生理活性物質に限らず、菌体、菌体成
分、ペプチド類、核酸類、蛋白質、糖成分、脂質などの
様々な物質もサイトカイン誘導剤として用いられ得る。

【００３１】これらサイトカイン誘導剤の中でも、菌体
及びその菌体由来成分がサイトカイン誘導剤として好ま
しい。また、抗酸菌と抗酸菌由来成分がサイトカイン誘
導剤として好ましく、その中でも結核菌や結核菌由来成
分がサイトカイン誘導剤として特に好ましい。牛型結核
菌弱毒株であるＢＣＧとその由来成分も特に好ましい。

【００３２】また、サイトカイン誘導剤としては溶連菌
と溶連菌由来成分が好ましい。また、サイトカイン誘導
剤としては放線菌と放線菌由来成分が好ましい。また、
上記サイトカイン誘導剤のみではサイトカイン誘導能を
十分に発揮し得ないものであっても、上記不溶性の誘導
増強剤と組み合わせて用いることにより、サイトカイン
誘導活性を発揮させることもでき、従って、本発明にお
けるサイトカイン誘導剤としては、従来より用いられて
いるサイトカイン誘導物質の他、様々な物質を用いるこ
とができる。

【００３３】サイトカイン誘導剤を誘導増強剤の表面に
固定化する場合は、物理吸着、共有結合、イオン結合な
どの公知の方法を用いることができる。また、共有結合
などの場合には必要に応じて、サイトカイン誘導剤と誘
導増強剤の結合部に任意の長さをもつスペーサーを導入
することが好ましい。

【００３４】菌体などからなるサイトカイン誘導剤は必
要に応じて、固定化する前に菌体の洗浄操作や破砕操
作、成分分画操作などのさまざまな前処理を施されても
よい。また、生菌などのサイトカイン誘導剤は必要に応
じて、固定化する前、固定化と同時、固定化の後のいず
れの時にも、加熱処理・薬品処理・放射線処理・ガス滅
菌処理などのさまざまな方法により死菌化されることも
できる。加熱処理としてはオートクレーブ処理が、薬品
処理としてはグルタルアルデヒド処理、ホルマリン処
理、またはエタノール処理が、放射線処理としてはγ線
処理が、ガス滅菌処理にはエチレンオキサイドガス処理
などが挙げられる。

【００３５】また、ＢＣＧのような微生物からなるサイ
トカイン誘導剤を誘導増強剤に固定化する場合には、菌
体表面外壁成分のアミノ酸や糖成分などを介して、誘導
増強剤のカルボキシル基、アミノ基及び／またはエポキ
シ基などの官能基に結合させることができる。この時、
必要に応じてさまざまな鎖長や構造のスペーサーを導入
することもできる。

【００３６】ＢＣＧのような微生物の菌体外層が脂質な
どにより覆われている場合には、必要に応じて脂質を洗
浄除去した後、結合することもできる。また、固定化法
としては、物理吸着法が好ましい。サイトカイン誘導剤
を物理吸着法によって誘導増強剤に固定化することもで
きる。特に疎水性表面を有する誘導増強剤にＢＣＧのよ
うなサイトカイン誘導剤を物理吸着作用によって固定化
することができる。あるいは、サイトカイン誘導剤が微
生物やその成分からなる場合などは、その表面が電荷を
帯びている場合にも、その対極電荷を表面に有する誘導
増強剤に物理吸着作用によって固定化することができ
る。

【００３７】また、上記誘導増強剤の使用割合は特に限
定されないが、通常、粒子状の誘導増強剤として用いる
場合には、血液容積に対する誘導増強剤のかさ体積量と
して、０．０２％〜８０％程度とされ、好ましくは０．
１％〜５０％程度である。

【００３８】また、上記サイトカイン誘導剤の使用割合
は特に限定されないが、例えばＢＣＧの場合は、血液に
添加される濃度として、乾燥重量で０．００１ｍｇ〜１
０ｍｇ/ｍＬが好ましい。また、例えばＯＫ−４３２の
場合は、血液に添加される濃度として、０．０００１Ｋ
Ｅ〜１０ＫＥ/ｍＬが好ましい。

【００３９】本発明に係るサイトカイン誘導用具では、
上記誘導増強剤とサイトカイン誘導剤とを含むサイトカ
イン誘導材料が、容器内にて血液または血液成分などと
接触され、それによって血液または血液成分などの中に
おいてサイトカインが効果的に誘導される。この場合、
接触温度を１５〜４２℃の範囲とすることが好ましく、
それによって、サイトカインの誘導をより効果的に引き
起こすことができる。

【００４０】なお、上記誘導増強剤及びサイトカイン誘
導剤は、予め混合されて血液と接触されてもよく、ある
いは個別に血液または血液成分などと接触されてもよ
い。また、本発明では、サイトカイン誘導材料を収納し
ている容器の構造は特に限定されないが、図３に模式的
に示すように、血液などの導入部１と、サイトカイン誘
導材料と接触された血液４などを容器外に導く導出部２
とが備えられている容器３が好ましい。

【００４１】サイトカイン誘導材料を収納してなる容器
としては、カラム状の容器や血液バッグ状の容器などが
特に好ましい。このサイトカイン誘導用具には、サイト
カイン誘導材料と接触させた血液などを容器外に導く場
合に、サイトカイン誘導材料が血液に混入しないよう
な、サイトカイン誘導材料流出防止機構が備えられてい
ることがより好ましい。

【００４２】図３に模式的に示すように、サイトカイン
誘導材料流出防止機構５は、サイトカイン誘導材料があ
らかじめ脱離しないように、収納容器内部に固定化され
ていても良いし、流出防止用の分離膜や分離フィルター
が備えられていても良い。また、遠心操作などによって
血液と分離しても良い。

【００４３】また、必要によっては、サイトカイン誘導
材料と接触させた血液などから血漿や血清成分などを分
離して治療などに用いることができる。具体的な構成と
して、導入部と導出部を有する血液バッグに粒子状・繊
維状・不織布状などの誘導増強剤を含むサイトカイン誘
導材料を充填し、ここに血液または血液成分などを導入
する。必要に応じて、サイトカインを誘導した血液また
は血液成分などを導出部から取り出し利用することがで
きる。これらの血液バッグの容量としては５０ｍＬ〜１
０００ｍＬ、特に１００ｍＬ〜４００ｍＬが好ましい。
これらの血液バッグは粒子状や繊維状、不織布状のサイ
トカイン誘導材料を収納するサイトカイン誘導用具であ
ることが好ましい。

【００４４】上記のサイトカインとして特に重要なもの
として、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）、インタ
ーロイキン−２（ＩＬ−２）、インターロイキン-１０
（ＩＬ−１０）、インターロイキン-１２（ＩＬ−１
２）、腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）、トランスフォ
ーミング増殖因子−β（ＴＧＦ−β）が挙げられる。例
えば、ＩＦＮ−γはリウマチなどの免疫疾患、炎症性疾
患、アレルギー性疾患、癌などのさまざまな疾患におい
て非常に重要な役割を担っているサイトカインであり、
これらの疾患に対する治療効果が期待できる。

【００４５】また、上記サイトカイン誘導材料及びサイ
トカイン誘導用具は、血液または血液成分等に限らず、
骨髄系細胞、表皮細胞、繊維芽細胞、肝細胞、骨芽細
胞、血液幹細胞、胚性幹細胞などの組織から採取した細
胞や培養細胞、株化細胞など、サイトカインを産生する
様々な細胞からもサイトカインを誘導することができ
る。

【００４６】

【発明の実施の形態】以下、本発明の非限定的な実施例
を説明することにより、本発明をより具体的に説明す
る。なお、本発明は以下の実施例に限定されるものでは
ない。

【００４７】なお、ヒト及びラット血漿中のＩＦＮ−
γ、ＴＮＦ−α、ＩＬ−２、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２の
測定は、R&D Systems社製ELISAキット、ENDOGEN社製EL
ISAキット、ジェンザイム・テクネ社製ELISAキットにて
行った。ヒト血漿中のＴＧＦ−βの測定はプロメガ社製
ELISAキットにて行った。

【００４８】（実施例１）誘導増強剤１（芳香族系合成
吸着剤、三菱化学社製、商品名：ダイヤイオンＨＰ−５
０）を精製水（大塚製薬社製）にてデカンテーションに
より洗浄し、しかる後メタノール（和光純薬社製、ＨＰ
ＬＣ用）にてデカンテーションすることにより洗浄し
た。次に、注射用生理食塩水（大塚製薬社製）にて誘導
増強剤１をデカンテーションにより洗浄し、粒子かさ体
積で５０μＬの誘導増強剤１を滅菌済みチューブ（ダイ
アヤトロン社製、エッペンドルフチューブ１．５ｍｌ
用）に充填した。

【００４９】健常人から採血し、ヘパリン１５ＩＵ/ｍ
Ｌ含有静脈血を得た。血液に１ｍｇ／ｍＬの濃度となる
ように、ＢＣＧ（日本ＢＣＧ製造社製）を添加した。な
お、ＢＣＧは生理食塩水で調製した。この時、生理食塩
水の体積が血液に対して１．２５％となるようにした。

【００５０】上記ＢＣＧが添加された血液約１．４５ｍ
Ｌを前記の誘導増強剤１を充填したチューブに添加し
た。次に、チューブを転倒混和して血液を撹拌し、ロー
タリーミキサー（ＴＡＩＴＥＣ社製）に取り付け、６ｒ
ｐｍで転倒混和させつつ、３７℃にて２４時間恒温槽中
でインキュベートした。インキュベート後の血液を４℃
で３５００ｒｐｍ（トミー精工社製、微量高速遠心機Ｍ
ＲＸ−１５０）で１５分間遠心し、しかる後血漿を採取
し、−２０℃で該血漿を凍結保存した。次に、保存され
た血漿を、融解し、Ｈｕｍａｎ ＩＦＮ−γ ＥＬＩＳ
Ａキット（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍ社製あるいはENDOGEN
社製）にて血漿中のＩＦＮ−γ誘導量を測定した。結果
を下記の表１に示す。

【００５１】（比較例１）誘導増強剤１を用いずに、実
施例１と同様にしてＢＣＧを添加した血液１．５ｍＬを
用い、以下実施例１と同様にして血漿を採取し、ＩＦＮ
−γ誘導量を測定した。結果を下記の表１に示す。

【００５２】（比較例２）ＢＣＧを血液に添加しなかっ
たことを除いては、実施例１と同様にしてＩＮＦ−γ誘
導量を測定した。結果を下記の表１に示す。

【００５３】

【表１】

【００５４】（実施例２）３７℃でインキュベートする
時間を２４時間から４時間に変更したことを除いては実
施例１と同様にして、凍結保存された血漿を得た。次
に、保存された血漿を融解し、Ｈｕｍａｎ ＴＮＦ−α
ＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍ社製）にて
血漿中のＴＮＦ−α誘導量を測定した。結果を下記の表
２に示す。

【００５５】（比較例３）誘導増強剤１を用いなかった
こととＢＣＧ添加血液を１．５ｍＬ用いたことを除いて
は、実施例２と同様にしてＴＮＦ−α誘導量を測定し
た。結果を下記の表２に示す。

【００５６】（比較例４）ＢＣＧを血液に添加しなかっ
たことを除いては、実施例２と同様にして、ＴＮＦ−α
誘導量を測定した。結果を下記の表２に示す。

【００５７】

【表２】

【００５８】（実施例３）誘導増強剤１のかさ体積を５
０μＬから５μＬに変更し、血液の添加量を１．４９５
ｍＬとしたことを除いては、実施例１と同様にして、血
漿中のＩＮＦ−γを測定した。結果を下記の表３に示
す。

【００５９】（実施例４）誘導増強剤１のかさ体積を５
０μＬから１０μＬに変更し、血液の添加量を１．４９
ｍＬとしたことを除いては、実施例１と同様にして血漿
中のＩＮＦ−γを測定した。結果を下記の表３に示す。

【００６０】（実施例５）誘導増強剤１のかさ体積を５
０μＬから２０μＬに変更し、血液の添加量を１．４８
ｍＬとしたことを除いては、実施例１と同様にして血漿
中のＩＮＦ−γを測定した。結果を下記の表３に示す。

【００６１】（実施例６）実施例１と同様にして血漿中
のＩＮＦ−γを測定した。結果を下記の表３に示す。

【００６２】（実施例７）誘導増強剤１のかさ体積を５
０μＬから２００μＬに変更し、血液の添加量を１．３
ｍＬとしたことを除いては、実施例１と同様にして血漿
中のＩＮＦ−γを測定した。結果を下記の表３に示す。

【００６３】（比較例５）誘導増強剤１を用いなかった
こととＢＣＧ添加血液を１．５ｍＬ用いたことを除いて
は、実施例３と同様にして、ＩＦＮ−γ誘導量を測定し
た。結果を下記の表３に示す。

【００６４】（比較例６）ＢＣＧを血液に添加しなかっ
たことを除いては、実施例３と同様にして、ＩＮＦ−γ
の誘導量を測定した。結果を下記の表３に示す。

【００６５】（比較例７）ＢＣＧを血液に添加しなかっ
たことを除いては、実施例４と同様にして、ＩＮＦ−γ
の誘導量を測定した。結果を下記の表３に示す。

【００６６】（比較例８）ＢＣＧを血液に添加しなかっ
たことを除いては、実施例５と同様にして、ＩＮＦ−γ
の誘導量を測定した。結果を下記の表３に示す。

【００６７】（比較例９）ＢＣＧを血液に添加しなかっ
たことを除いては、実施例６と同様にして、ＩＮＦ−γ
の誘導量を測定した。結果を下記の表３に示す。

【００６８】（比較例１０）ＢＣＧを血液に添加しなか
ったことを除いては、実施例７と同様にして、ＩＮＦ−
γの誘導量を測定した。結果を下記の表３に示す。

【００６９】

【表３】

【００７０】（実施例８）実施例１と同様にして、但し
誘導増強剤１がかさ体積で２０μＬ充填されたチューブ
を用意した。

【００７１】ＢＣＧに替えて、ピシバニール（中外製薬
社製、ＯＫ−４３２）を、０．１ＫＥ／ｍＬの濃度とな
るように各血液に添加した。なお、ＯＫ−４３２は、Ｒ
ＰＭＩ培地で調製されたものであり、ＲＰＭＩ培地が血
液に対して２０％となるように調製した。ＯＫ−４３２
が添加された血液を、誘導増強剤１がかさ体積で２０μ
Ｌ充填された上記チューブに、チューブの目盛りが１．
５ｍＬとなるように添加した。すなわち、血液を約１．
４８ｍＬ添加した。以下、実施例１と同様にして、ＩＦ
Ｎ−γ誘導量を測定した。結果を下記の表４に示す。

【００７２】（実施例９）誘導増強剤１のかさ体積を５
０μＬとしたこと、及びＯＫ−４３２添加血液を１．４
５ｍＬ用いたことを除いては、実施例８と同様にしてＩ
ＦＮ−γ誘導量を測定した。結果を下記の表４に示す。

【００７３】（実施例１０）誘導増強剤１のかさ体積を
１００μＬとしたこと、及びＯＫ−４３２添加血液を
１．４０ｍＬ用いたことを除いては、実施例８と同様に
してＩＦＮ−γ誘導量を測定した。結果を下記の表４に
示す。

【００７４】（比較例１１）誘導増強剤１を用いなかっ
たこと、及びＯＫ−４３２添加血液を１．５ｍＬ用いた
ことを除いては、実施例８と同様にしてＩＮＦ−γの誘
導量を測定した。結果を下記の表４に示す。

【００７５】（比較例１２）ピシバニール（ＯＫ−４３
２）を添加しなかったことを除いては、実施例８と同様
にして、ＩＦＮ−γ誘導量を測定した。結果を下記の表
４に示す。

【００７６】（比較例１３）ピシバニール（ＯＫ−４３
２）を添加しなかったことを除いては、実施例９と同様
にして、ＩＦＮ−γ誘導量を測定した。結果を下記の表
４に示す。

【００７７】（比較例１４）ピシバニール（ＯＫ−４３
２）を添加しなかったことを除いては、実施例１０と同
様にして、ＩＦＮ−γ誘導量を測定した。結果を下記の
表４に示す。

【００７８】

【表４】

【００７９】（実施例１１）誘導増強剤１に替えて、誘
導増強剤２（アクリルエステル系合成樹脂、オルガノ社
製、品番：アンバーライトＸＡＤ−７）を用いたことを
除いては、実施例１と同様にして、血漿中のＩＦＮ−γ
誘導量を測定した。結果を下記の表５に示す。

【００８０】（実施例１２）誘導増強剤２のかさ体積の
使用量を５０μＬから２００μＬに変更したこと及びＢ
ＣＧ添加血液を１．３ｍＬ用いたことを除いては、実施
例１１と同様にして、ＩＦＮ−γ誘導量を測定した。結
果を下記の表５に示す。

【００８１】（比較例１５）誘導増強剤２を用いなかっ
たこと、及びＢＣＧ添加血液を１．５ｍＬ用いたことを
除いては、実施例１１と同様にして、ＩＦＮ−γの誘導
量を測定した。結果を下記の表５に示す。

【００８２】（比較例１６）ＢＣＧを血液に添加しなか
ったことを除いては、実施例１１と同様にして、ＩＦＮ
−γ誘導量を測定した。結果を下記の表５に示す。

【００８３】（比較例１７）ＢＣＧを血液に添加しなか
ったことを除いては、実施例１２と同様にして、ＩＦＮ
−γ誘導量を測定した。結果を下記の表５に示す。

【００８４】

【表５】

【００８５】次に、ラット血液におけるサイトカイン誘
導についての実施例及び比較例を説明する。

【００８６】（実施例１３）実施例１と同様にして、か
さ体積５０μＬの誘導増強剤１を充填した滅菌済みチュ
ーブを得た。ウィスターラット（７週齢、雄、日本ＳＬ
Ｃ社より購入）よりヘパリン１５ＩＵ／ｍＬ含有静脈血
を採取した。この血液に、０．１ＫＥ／ｍＬ濃度となる
ように、ピシバニール（中外製薬社製、ＯＫ−４３２）
を添加した。なお、ＯＫ−４３２はＲＰＭＩ培地で調製
されたものであり、ＲＰＭＩ培地が血液に対して２０％
となるように調製した。ＯＫ−４３２が添加された血液
を上記誘導増強剤１が充填されたチューブに、目盛りが
１．５ｍＬとなるように添加した。

【００８７】以下、実施例１と同様にして血漿を採取
し、ラット ＩＦＮ−γ定量キット（ジェンザイム・テ
クネ社製）を用いてＩＦＮ−γ誘導量を測定した。結果
を下記の表６に示す。

【００８８】（実施例１４）誘導増強剤１のかさ体積の
量を５００μＬとしたこと、及びＯＫ−４３２添加血液
の量を１．０ｍＬとしたことを除いては、実施例１３と
同様にして、ＩＦＮ−γ誘導量を測定した。結果を下記
の表６に示す。

【００８９】（比較例１８）誘導増強剤１を用いなかっ
たこと、及びＯＫ−４３２添加血液を１．５ｍＬ用いた
ことを除いては、実施例１３と同様にして、ＩＦＮ−γ
誘導量を測定した。結果を下記の表６に示す。

【００９０】（比較例１９）ＯＫ−４３２を血液に添加
しなかったことを除いては、実施例１３と同様にして、
ＩＦＮ−γ誘導量を測定した。結果を下記の表６に示
す。

【００９１】（比較例２０）ＯＫ−４３２を血液に添加
しなかったことを除いては、実施例１４と同様にして、
ＩＦＮ−γ誘導量を測定した。結果を下記の表６に示
す。

【００９２】

【表６】

【００９３】（実施例１５）実施例１と同様にして、か
さ体積５０μＬの誘導増強剤１を充填した滅菌済みチュ
ーブを得た。

【００９４】ウィスターラット（７週齢、雄、日本ＳＬ
Ｃ社より購入）から採血し、ヘパリン１５ＩＵ／ｍＬ含
有静脈血を得た。このラットの血液に、１ｍｇ／ｍＬの
濃度となるようにＢＣＧを添加した。ＢＣＧは生理食塩
水で調製した。この時、生理食塩水の体積が血液に対し
て１．２５％となるようにした。ＢＣＧが添加された血
液を上記の誘導増強剤１が充填されたチューブに１．４
５ｍＬ添加した。

【００９５】以下、実施例１と同様にして血漿を採取
し、ラットＩＦＮ−γ 定量キット（ジュンザイム・テ
クネ社製）を用いて、ＩＦＮ−γ誘導量を測定した。結
果を下記の表７に示す。

【００９６】（実施例１６）誘導増強剤１の使用かさ体
積量を５０μＬから５００μＬに変更したこと、及びＢ
ＣＧ添加血液を１．０ｍＬ用いたことを除いては、実施
例１５と同様にして、ＩＦＮ−γ誘導量を測定した。結
果を下記の表７に示す。

【００９７】（比較例２１）誘導増強剤１を用いなかっ
たこと、及びＢＣＧ添加血液を１．５ｍＬ用いたことを
除いては、実施例１５と同様にしてＩＦＮ−γ誘導量を
測定した。結果を下記の表７に示す。

【００９８】（比較例２２）血液にＢＣＧを添加しなか
ったことを除いては、実施例１５と同様にしてＩＦＮ−
γ誘導量を測定した。結果を下記の表７に示す。

【００９９】（比較例２３）血液にＢＣＧを添加しなか
ったことを除いては、実施例１６と同様にしてＩＮＦ−
γ誘導量を測定した。結果を下記の表７に示す。

【０１００】

【表７】

【０１０１】（実施例１７）３７℃でインキュベートす
る時間を２４時間から４時間に変更したことを除いて
は、実施例１５と同様にして血漿を採取し、ラット腫瘍
壊死因子−α定量キット（ジェンザイム・テクネ社製）
キットを用い、ＴＮＦ−α誘導量を測定した。結果を下
記の表８に示す。

【０１０２】（比較例２４）誘導増強剤１を用いなかっ
たこととＢＣＧ添加血液を１．５ｍＬ用いたことを除い
ては、実施例１７と同様にして血漿を採取し、ＴＮＦ−
α誘導量を実施例１７と同様にして測定した。結果を下
記の表８に示す。

【０１０３】（比較例２５）ＢＣＧを血液に添加しなか
ったことを除いては、実施例１７と同様にしてＴＮＦ−
α誘導量を測定した。結果を下記の表８に示す。

【０１０４】

【表８】

【０１０５】（実施例１８〜２３） 誘導増強剤３：ＣＡフィルム（アートプラス社製、酢酸
セルロースフィルム、商品名：アセチフィルムＶＲ−
Ｒ）を用い、フィルム表面をメチルアルコールで２４時
間、ソックスレー抽出を行って可塑剤を抽出し、フィル
ムを取り出した後、１５時間風乾後、さらに８０℃で５
時間乾燥した。その後、ストルアス社（デンマーク）製
自動研磨機（商品名：プラノボールペデマックス）に、
２２０、５００，１２００、２４００，及び４０００メ
ッシュのサンドペーパーを取り付けたものを用いて、上
記ＣＡフィルムを研磨し、両側の表面に表面粗さを持つ
研磨ずみＣＡフィルムを作製した。このフィルムをメチ
ルアルコールで洗浄後、２．５ｍｍ×２．５ｍｍの大き
さに細片化し、かさ体積で約２００μＬとなるようには
かり取った。これらの細片を注射用生理食塩水で洗浄
後、１．５ｍＬ用滅菌済みチューブに充填した。

【０１０６】健常人から採血し、ヘパリン１５ＩＵ/ｍ
Ｌ含有静脈血を得た。血液に１ｍｇ／ｍＬの濃度となる
ように、ＢＣＧ（日本ＢＣＧ製造社製）を添加し、血液
約１．３ｍＬを前記充填チューブに添加し、実施例１と
同様にしてＩＦＮ−γ誘導量を測定した。結果を下記の
表９に示す。

【０１０７】

【表９】

【０１０８】（実施例２４〜２９） 誘導増強剤４：ＰＥＴフィルム（ユニチカ社製、ポリエ
チレンテレフタレートフィルム、商品名：エンブレット
Ｓ−７５）を用い、フィルム表面をメチルアルコールで
洗浄した。しかる後、ストルアス社（デンマーク）製自
動研磨機（商品名：プラノボールペデマックス）に、２
２０、５００，１２００、２４００，及び４０００メッ
シュのサンドペーパーを取り付けたものを用いて、ＰＥ
Ｔフィルムを研磨し、両側の表面に表面粗さを持つ研磨
ずみＰＥＴフィルムを作製した。このフィルムをメチル
アルコールで洗浄後、２．５ｍｍ×２．５ｍｍの大きさ
に細片化し、かさ体積で約２００μＬとなるようにはか
り取った。これらの細片を注射用生理食塩水で洗浄後、
１．５ｍＬ用滅菌済みチューブに充填した。健常人から
採血し、ヘパリン１５ＩＵ/ｍＬ含有静脈血を得た。血
液に１ｍｇ／ｍＬの濃度となるように、ＢＣＧ（日本Ｂ
ＣＧ製造社製）を添加し、血液約１．３ｍＬを前記充填
チューブに添加し、実施例１と同様にしてＩＦＮ−γ誘
導量を測定した。結果を下記の表１０に示す。

【０１０９】

【表１０】

【０１１０】（実施例３０〜３５） 誘導増強剤５：ポリスチレンフィルム（三菱モンサント
社製、商品名：サントクリア）を用い、フィルム表面を
精製水で洗浄した。しかる後、ストルアス社（デンマー
ク）製自動研磨機（商品名：プラノボールペデマック
ス）に、２２０、５００，１２００、２４００，及び４
０００メッシュのサンドペーパーを取り付けたものを用
いて、ポリスチレンフィルムを研磨し、両側の表面に表
面粗さを持つ研磨ずみポリスチレンフィルムを作製し
た。このフィルムを精製水で洗浄後、２．５ｍｍ×２．
５ｍｍの大きさに細片化し、かさ体積で約２００μＬと
なるようにはかり取った。これらの細片を注射用生理食
塩水で洗浄後、１．５ｍＬ用滅菌済みチューブに充填し
た。健常人から採血し、ヘパリン１５ＩＵ/ｍＬ含有静
脈血を得た。血液に１ｍｇ／ｍＬの濃度となるように、
ＢＣＧ（日本ＢＣＧ製造社製）を添加し、血液約１．３
ｍＬを前記充填チューブに添加し、実施例１と同様にし
てＩＦＮ−γ誘導量を測定した。結果を下記の表１１に
示す。

【０１１１】

【表１１】

【０１１２】（実施例３６）酢酸セルロースペレット
（アートプラス社製、可塑剤としてアセチルクエン酸ト
リエチル３０％含有）を射出成形し、直径２．５ｍｍの
球状ビーズを作製した。このビーズ５０ｇをメタノール
３００ｍＬにより、５０℃で２４時間ソックスレー抽出
し、可塑剤を抽出した。しかる後、可塑剤が抽出された
ビーズをステンレス製バットに取り出し、１５時間風乾
した後、さらに８０℃で５時間乾燥させた。

【０１１３】ポットミル（東洋エンジニアリング社製、
商品名；５１−セラミックポットミルＢＰ−５）に、上
記ビーズ２００ｍＬ及び同容量の研磨剤；ＷＨＩＴＥ
ＡＢＲＡＸ（ＷＡ）＃３４（日本研磨材工業社製）を投
入し、さらにセラミックポットミル用ボール（東洋エン
ジニアリング社製、商品名；ＢＢ−１３）数個を投入
し、ボール研磨機（日陶科学社製ポットミル、商品名；
ＡＮ−３Ｓ）により５時間研磨した。このようにして、
Ｒａ値１．３６μｍ及びＳｍ値９７．２μｍのビーズを
得た（誘導増強剤６）。

【０１１４】得られたビーズをメタノールで３回洗浄し
て、注射用生理食塩水で５回洗浄した。その後、かさ体
積で４００μＬを実施例１と同様にして滅菌済み１．５
ｍＬ用チューブに入れ、血液を１．１ｍＬ添加したこと
以外は実施例１と同様にして、ＩＦＮ−γ誘導量を測定
した。結果を下記の表１２に示す。

【０１１５】（実施例３７）実施例３６と同様にして、
但し、非研磨のＲａ値０．１８６μｍ、Ｓｍ値２９８．
７μｍの誘導増強剤６を作製した。実施例３６と同様
に、血液と接触させた。結果を下記の表１２に示す。

【０１１６】（比較例２６）誘導増強剤６を用いなかっ
たこととＢＣＧ添加血液を１．５ｍＬ用いたことを除い
ては、実施例３６と同様にして、ＩＦＮ−γ誘導量を測
定した。結果を下記の表１２に示す。

【０１１７】

【表１２】

【０１１８】（実施例３８〜４２） 誘導増強剤１（芳香族系合成吸着剤、三菱化学社製、商
品名：ダイヤイオンＨＰ−５０）、誘導増強剤２（アク
リルエステル系合成樹脂、オルガノ社製、品番：アンバ
ーライトＸＡＤ−７）、誘導増強剤７（芳香族系合成樹
脂、オルガノ社製、品番：アンバーライトＸＡＤ−
２）、誘導増強剤８（芳香族系合成樹脂、オルガノ社
製、品番：アンバーライトＸＡＤ−４）、または誘導増
強剤９（芳香族系合成樹脂、オルガノ社製、品番：アン
バーライトＸＡＤ−１６ＨＰ）を用いて、実施例１と同
様に行った。結果を下記の表１３に示す。

【０１１９】（比較例２７）誘導増強剤を用いなかった
こととＢＣＧ添加血液１．５ｍＬを用いたことを除いて
は実施例３８と同様に行った。結果を下記の表１３に示
す。

【０１２０】

【表１３】

【０１２１】（実施例４３）ＢＣＧを生理食塩水に懸濁
して、リン酸緩衝液にて希釈し、４０００ＲＰＭにて１
５分間遠心操作を行った。上清を捨て、再びリン酸緩衝
液にて懸濁し、４０００ＲＰＭにて１５分間遠心操作を
行った。これを３回行い、次に５０％エタノール含有リ
ン酸緩衝液にて懸濁し、４０００ＲＰＭ（トミー精工社
製、微量高速遠心機ＭＲＸ−１５０）にて１５分間遠心
操作を行った。次にエタノールにて懸濁し、４０００Ｒ
ＰＭにて１５分間遠心操作を行った。これを２回行い、
再びリン酸緩衝液での洗浄を３回行った。この処理済み
ＢＣＧ２ｍｇをカルボキシル基を導入した誘導増強剤１
（かさ体積１ｍＬ）にカルボジイミド法にて共有結合を
行った。残った反応基をエタノールアミンにて反応さ
せ、リン酸緩衝液にて洗浄後、リン酸緩衝液に懸濁し
た。このようにして得られた誘導増強剤１００μＬを滅
菌済みチューブに充填した。

【０１２２】ＢＣＧのみの添加がないこと、血液添加量
を１．４ｍＬにしたことを除いては実施例１と同様な操
作を行い、ＩＦＮ−γの誘導量を測定した。結果を表１
４に示す。

【０１２３】（比較例２８）処理済みＢＣＧを共有結合
しなかったことを除いては、実施例４３と同様な操作を
行い、ＩＦＮ−γの誘導量を測定した。結果を表１４に
示す。

【０１２４】（比較例２９）誘導増強剤の添加がないこ
ととＢＣＧ添加（１ｍｇ／ｍＬ）血液を１．５ｍＬ用い
たことを除いては実施例４３と同様な操作を行い、ＩＦ
Ｎ−γの誘導量を測定した。結果を表１４に示す。

【０１２５】

【表１４】

【０１２６】（実施例４４）ポリスチレン−ジビニルベ
ンゼン共重合体の誘導増強剤８（オルガノ社製、アンバ
ーライトＸＡＤ−４）かさ体積１ｍＬとＢＣＧ（１０ｍ
ｇ／ｍＬ）を１ｍＬ生理食塩中で３７℃にて２０時間混
和し、ＢＣＧを粒子表面に物理吸着させた。混和後、こ
の粒子を生理食塩水にて十分洗浄し、再び生理食塩水に
懸濁した。このようにして得られた、かさ体積１００μ
Ｌ誘導増強剤を滅菌済みチューブに充填した。

【０１２７】以下、ＢＣＧのみの添加がないこと、及び
血液を１．４ｍＬ添加したことを除いては実施例１と同
様な操作を行い、健常人２名の血液によりＩＦＮ−γの
誘導量を測定した。結果を表１５に示す。

【０１２８】（比較例３０）ＢＣＧを添加しないで実施
例４４と同様の操作をして作製した粒子を得て、実施例
４４と同様にしてＩＦＮ−γの誘導量を測定した。結果
を表１５に示す。

【０１２９】（比較例３１）誘導増強剤の添加がないこ
ととＢＣＧ添加（１ｍｇ／ｍＬ）血液を１．５ｍＬ用い
たこととを除いては、実施例４４と同様にしてＩＦＮ−
γを測定した。結果を表１５に示す。

【０１３０】

【表１５】

【０１３１】（実施例４５）ポリスチレン-ジビニルベ
ンゼン共重合体の誘導増強剤８かさ体積１ｍＬとＢＣＧ
（１０ｍｇ／ｍＬ）を１ｍＬの１％ホルマリン液（中性
緩衝ホルマリン液、和光純薬工業社製）含有生理食塩中
で４℃にて２０時間混和し、ＢＣＧを粒子表面に物理吸
着させた。混和後、この粒子を生理食塩水にて十分洗浄
した後、かさ体積で１００μＬを滅菌済みチューブ（ダ
イアヤトロン社製、１．５ｍＬ用）に充填した。

【０１３２】ＢＣＧのみの添加がないこと、及び血液を
１．４ｍＬ添加したことを除いては実施例１と同様な操
作を行い、ＩＦＮ−γの誘導量を測定した。結果を表１
６に示す。

【０１３３】（比較例３２）ＢＣＧを添加しないで、実
施例４５と同様にしてＩＦＮ−γの誘導量を測定した。
結果を表１６に示す。

【０１３４】（比較例３３）誘導増強剤８を用いなかっ
たこととＢＣＧ添加（１ｍｇ／ｍＬ）血液を１．５ｍＬ
用いたことを除いては実施例４５と同様にしてＩＦＮ−
γを測定した。結果を表１６に示す。

【０１３５】

【表１６】

【０１３６】（実施例４６）実施例４５と同様に作製し
たＢＣＧを粒子表面に物理吸着させた誘導増強剤８をか
さ体積で４ｍＬを血液バッグ（テルモ社製、分離バッグ
２００ｍＬ用）に充填した。健常人から採血して得たヘ
パリン１５ＩＵ/ｍＬ含有の静脈血５０ｍＬをこの血液
バッグに導入した。この血液バッグを３７℃で２４時
間、穏やかに攪拌しながらインキュベートした。この血
液中のＩＦＮ−γを実施例１と同様に測定した。結果を
表１７に示す。

【０１３７】（比較例３４）ＢＣＧを物理吸着処理をし
ていない誘導増強剤８を使用したこと以外は実施例４６
と同様にして行った。結果を表１７に示す。

【０１３８】（比較例３５）誘導増強剤８を用いなかっ
たこと、及びＢＣＧの１ｍｇ／ｍＬ添加血液５０ｍＬを
用いたことを除いては実施例４６と同様にしてＩＦＮ−
γを測定した。結果を表１７に示す。

【０１３９】

【表１７】

【０１４０】（実施例４７）血液中のインターロイキン
２、インターロイキン１２を測定した以外は、実施例１
と同様に行った。結果を表１８に示す。

【０１４１】（比較例３６）ＢＣＧを添加しなかったこ
とを除いては実施例４７と同様に行った。結果を表１８
に示す。

【０１４２】（比較例３７）誘導増強剤１を添加しなか
ったこと、及びＢＣＧ添加血液１．５ｍＬを用いたこと
を除いては、実施例４７と同様に行った。結果を表１８
に示す。

【０１４３】

【表１８】

【０１４４】（実施例４８）ＢＣＧの濃度を０．１ｍｇ
／ｍＬにし、血液中のＴＧＦ−βを測定した以外は実施
例１と同様に行った。結果を表１９に示す。

【０１４５】（比較例３８）誘導増強剤１を添加しなか
ったこと、及びＢＣＧ添加血漿１．５ｍＬを用いたこと
を除いては、実施例４８と同様に行った。結果を表１９
に示す。

【０１４６】

【表１９】

【０１４７】（実施例４９）ＢＣＧの替わりにＯＫ−４
３２を０．１ＫＥ／ｍＬで用いた以外は実施例４８と同
様に行った。結果を表２０に示す。

【０１４８】（比較例３９）誘導増強剤１を添加しなか
ったこと、及びＯＫ−４３２添加血液１．５ｍＬを用い
たことを除いては、実施例４９と同様に行った。結果を
表２０に示す。

【０１４９】

【表２０】

【０１５０】（実施例５０）ＢＣＧの替わりにＯＫ−４
３２を０．０１ＫＥ／ｍＬで用いたこと、及びＩＬ−１
０を測定したこと以外は実施例１と同様に行った。結果
を表２１に示す。

【０１５１】（比較例４０）誘導増強剤１を添加しなか
ったこと、及びＯＫ−４３２添加血液１．５ｍＬを用い
たことを除いては実施例５０と同様に行った。結果を表
２１に示す。

【０１５２】

【表２１】

【０１５３】（実施例５１、５２）ＢＣＧの濃度を０．
１ｍｇ／ｍＬ及び１ｍｇ／ｍＬの２用量にした以外は実
施例１と同様に行った。結果を表２２に示す。

【０１５４】（比較例４１）ＢＣＧを添加しなかったこ
とを除いては実施例５１と同様に行った。結果を表２２
に示す。

【０１５５】（比較例４２）誘導増強剤１を添加しなか
ったこと、及びＢＣＧ添加（０．１ｍｇ／ｍＬ）血液を
１．５ｍＬ用いたことを除いては実施例５１と同様に行
った。結果を表２２に示す。

【０１５６】（比較例４３）誘導増強剤１を添加しなか
ったこと、及びＢＣＧ添加（１ｍｇ/ｍＬ）血液を１．
５ｍＬ用いたことを除いては実施例５２と同様に行っ
た。結果を表２２に示す。

【０１５７】

【表２２】

【０１５８】（実施例５３，５４）ＢＣＧの替わりにＯ
Ｋ−４３２の濃度を０．０１ＫＥ／ｍＬ及び０．１ＫＥ
／ｍＬの２用量にした以外は実施例１と同様に行った。
結果を表２３に示す。

【０１５９】（比較例４４）ＯＫ−４３２を添加しなか
ったことを除いては実施例５３と同様に行った。結果を
表２３に示す。

【０１６０】（比較例４５）誘導増強剤１を添加しなか
ったことと、ＯＫ−４３２添加（０．０１ＫＥ/ｍＬ）
血液を１．５ｍＬ用いたことを除いては実施例５３と同
様に行った。結果を表２３に示す。

【０１６１】（比較例４６）誘導増強剤１を添加しなか
ったことと、ＯＫ−４３２添加（０．１ＫＥ/ｍＬ）血
液１．５ｍＬ用いたことを除いては実施例５４と同様に
行った。結果を表２３に示す。

【０１６２】

【表２３】

【０１６３】（実施例５５）誘導増強剤１０としてナイ
ロンウール（和光純薬工業社製）を０．０４ｇ（１．５
ｍＬチューブに充填したかさ体積として約３００μＬ）
用いたこと、及びＢＣＧ添加血液を１．２ｍＬ添加した
ことを除いては実施例１と同様にした。結果を表２４に
示す。

【０１６４】（実施例５６）誘導増強剤１１としてポリ
エステル不織布（日本バイリーン社製、品名：ＥＬ−５
６００）を０．０４ｇ（１ｃｍ×３ｃｍ、かさ体積とし
て約３００μＬ）を用いたこと、及びＢＣＧ添加血液を
１．２ｍＬ添加したことを除いては実施例１と同様にし
た。結果を表２４に示す。

【０１６５】（実施例５７）誘導増強剤１２としてポリ
エステル不織布（日本バイリーン社製、品名：ＥＷ−７
１８０）を０．０４ｇ（１ｃｍ×３ｃｍ、かさ体積とし
て約２２０μＬ）を用いたこと、及びＢＣＧ添加血液を
１．２８ｍＬ添加したことを除いては実施例１と同様に
した。結果を表２４に示す。

【０１６６】（比較例４７）ＢＣＧを用いなかったこと
を除いて実施例５５と同様に行った。結果を表２４に示
す。

【０１６７】（比較例４８）ＢＣＧを用いなかったこと
を除いて実施例５６と同様に行った。結果を表２４に示
す。

【０１６８】（比較例４９）ＢＣＧを用いなかったこと
を除いて実施例５７と同様に行った。結果を表２４に示
す。

【０１６９】（比較例５０）誘導増強剤を用いなかった
こと、及びＢＣＧ添加血液を１．５/ｍＬ用いたことを
除いて実施例５５と同様に行った。結果を表２４に示
す。

【０１７０】

【表２４】

【０１７１】（実施例５８）理化学研究所から入手した
放線菌S.ノビリス（ＪＣＭ４２７４）を、酵母エキス
０．２％添加澱粉・アンモニウム培地１００ｍＬ中で３
０℃で４０時間振盪培養し、菌体を得た。ＢＣＧの替わ
りに、この菌体を乾燥重量で１ｍｇ／ｍＬとなるように
血液に添加し、実施例１と同様にして、ＩＦＮ−γを測
定した。結果を表２５に示す。

【０１７２】（比較例５１）放線菌菌体を用いなかった
ことを除いて実施例５８と同様に行った。結果を表２５
に示す。

【０１７３】（比較例５２）誘導増強剤１を用いなかっ
たこと、及び放線菌添加血液１．５ｍＬを用いたことを
除いて実施例５８と同様に行った。結果を表２５に示
す。

【０１７４】

【表２５】

【０１７５】（実施例５９）誘導増強剤１３（ポリビニ
ルアルコールゲル粒子、粒子径約1ｍｍ）として、横井
弘「ＰＶＡ及びＰＡＡの錯体ゲル」（高分子加工Vol.40、
No.11、1991年）に従い、ポリビニルアルコール−Ｆｅ
（III）錯体ゲル粒子を作製した。誘導増強剤１３を生
理食塩水に懸濁し、かさ体積で３００μＬのポリビニル
アルコール−Ｆｅ（III）錯体ゲル粒子を１．５ｍＬ用
滅菌チューブに充填した。血液１．２ｍＬを添加したこ
とを除いて、実施例１と同様に行った。結果を表２６に
示す。

【０１７６】（比較例５３）ＢＣＧを添加しないことを
除いて実施例５８と同様に行った。結果を表２６に示
す。

【０１７７】（比較例５４）誘導増強剤１３を用いない
こと、及びＢＣＧ添加血液を１．５ｍＬ添加したことを
除いて、実施例５８と同様に行った。結果を表２６に示
す。

【０１７８】

【表２６】

【０１７９】

【発明の効果】本発明に係るサイトカイン誘導材料を用
いれば、従来のサイトカイン誘導剤に比べて、サイトカ
インをより効果的に誘導することができる。従って、本
発明のサイトカイン誘導材料を例えば血液または血液成
分と接触させることにより、サイトカインを効果的に誘
導することができるので、本発明に係るサイトカイン誘
導材料及び誘導用具は、サイトカインの誘導が有効であ
る様々な疾患の治療に好適に用いられる。

【図面の簡単な説明】

【図１】表面粗さを説明するための模式図であり、でこ
ぼこの「山」を説明するための図。

【図２】表面粗さにおけるでこぼこ平均間隔Ｓｍ値を説
明するための図。

【図３】本発明に係るサイトカイン誘導用具の一例を示
す模式的断面図。

【符号の説明】

１…導入部 ２…導出部 ３…容器 ４…サイトカイン誘導材料と接触された血液 ５…サイトカイン誘導材料流出防止機構

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 43/00 １１１ Ａ６１Ｐ 43/00 １１１ (72)発明者 栗山 澄 大阪府三島郡島本町百山２−１ 積水化学 工業株式会社内 Ｆターム(参考） 4C084 AA06 BA44 DA01 NA05 ZC022

Claims (13)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 サイトカイン誘導剤と水に不溶性の誘導
   増強剤とを含むことを特徴とする、サイトカイン誘導材
   料。
2. 【請求項２】 前記サイトカイン誘導剤が前記誘導増強
   剤に固定化されている、請求項１に記載のサイトカイン
   誘導材料。
3. 【請求項３】 前記サイトカイン誘導剤が物理吸着で前
   記誘導増強剤に固定化されている、請求項２に記載のサ
   イトカイン誘導材料。
4. 【請求項４】 前記誘導増強剤が高分子材料からなる、
   請求項１〜３のいずれかに記載のサイトカイン誘導材
   料。
5. 【請求項５】 前記誘導増強剤が中心線平均粗さ０．２
   〜１０μｍの表面を有する、請求項１〜４のいずれかに
   記載のサイトカイン誘導材料。
6. 【請求項６】 前記誘導増強剤がポリスチレン系、アク
   リルエステル系、ポリエステル系、ナイロン系、セルロ
   ース系、及びポリビニルアルコール系の各高分子材料か
   らなる群から選択された少なくとも１種の高分子材料か
   らなる、請求項１〜５のいずれかに記載のサイトカイン
   誘導材料。
7. 【請求項７】 前記サイトカイン誘導剤が菌体及び菌体
   由来成分である、請求項１〜６のいずれかに記載のサイ
   トカイン誘導材料。
8. 【請求項８】 前記サイトカイン誘導剤が抗酸菌及び抗
   酸菌由来成分である、請求項７に記載のサイトカイン誘
   導材料。
9. 【請求項９】 前記サイトカイン誘導剤が溶連菌及び溶
   連菌由来成分である、請求項７に記載のサイトカイン誘
   導材料。
10. 【請求項１０】 前記サイトカイン誘導剤が放線菌及び
    放線菌由来成分である、請求項７に記載のサイトカイン
    誘導材料。
11. 【請求項１１】 前記サイトカインがインターフェロン
    -γ、インターロイキン−２、インターロイキン−１
    ０、インターロイキン−１２、腫瘍壊死因子−α、及び
    トランスフォーミング増殖因子−βからなる群から選択
    された少なくとも１種のサイトカインである、請求項１
    〜１０のいずれかに記載のサイトカイン誘導材料。
12. 【請求項１２】 容器と、容器内に収納された請求項１
    〜１１のいずれかに記載のサイトカイン誘導材料とを有
    することを特徴とする、サイトカイン誘導用具。
13. 【請求項１３】 容器内に収納されたサイトカイン誘導
    材料が血液または血液成分と接触されることを特徴とす
    る、請求項１２に記載のサイトカイン誘導用具。